JP2017514501A5

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Publication number: JP2017514501A5
Application number: JP2016566656A
Authority: JP
Filing date: 2015-05-07
Publication date: 2018-05-24
Anticipated expiration: 2035-05-07

Description

実施形態または態様の状況から明示的に、あるいは明らかに、除外されない限り、本明細書に記載される態様および実施形態の各々を一緒に使用できる。
特定の実施形態では、例えば以下が提供される：
（項目１）
内因性齧歯類ＩＬ−４Ｒ遺伝子のヒト化を含む齧歯類であって、前記ヒト化が、改変されたＩＬ−４遺伝子を形成するための、内因性齧歯類ＩＬ−４遺伝子座における、ヒトＩＬ−４遺伝子の少なくとも１つのエクソンを含む核酸配列によるＩＬ−４遺伝子のエクソンを含む齧歯類核酸の置換を含み、前記改変されたＩＬ−４遺伝子の発現が、前記内因性齧歯類ＩＬ−４遺伝子座の齧歯類調節エレメントの制御下にある、齧歯類。
（項目２）
前記齧歯類がマウスまたはラットである、項目１に記載の齧歯類。
（項目３）
前記改変されたＩＬ−４遺伝子が、ヒトまたはヒト化ＩＬ−４タンパク質をコードし、前記ヒトＩＬ−４遺伝子のＡＴＧ開始コドンから開始するエクソン１からエクソン４までを含む、項目１に記載の齧歯類。
（項目４）
前記齧歯類が、マウスＩＬ−４タンパク質を発現する能力を有しないマウスである、項目１に記載の齧歯類。
（項目５）
前記齧歯類が、内因性マウスＩＬ−４Ｒα遺伝子によってコードされたマウスＩＬ−４Ｒαタンパク質を発現するマウスである、項目１に記載の齧歯類。
（項目６）
前記齧歯類が、ヒトまたはヒト化ＩＬ−４Ｒαタンパク質を発現するマウスである、項目１に記載の齧歯類。
（項目７）
前記ヒト化ＩＬ−４Ｒαタンパク質が、前記ヒトＩＬ−４Ｒαタンパク質の細胞外ドメインを含む、項目６に記載のマウス。
（項目８）
前記ヒト化ＩＬ−４Ｒαタンパク質が、前記マウスＩＬ−４Ｒαタンパク質の膜貫通ドメインおよび細胞質ドメインを含む、項目７に記載のマウス。
（項目９）
前記マウスが、改変されたＩＬ−４Ｒα遺伝子を形成するための、内因性マウスＩＬ−４Ｒα遺伝子座における、ヒトＩＬ−４Ｒα遺伝子の少なくとも１つのエクソンをコードする核酸配列によるマウスＩＬ−４Ｒα遺伝子のエクソンを含むマウス核酸の置換を含み、前記改変されたＩＬ−４Ｒα遺伝子の発現が、前記内因性マウスＩＬ−４Ｒα遺伝子座のマウス調節エレメントの制御下にある、項目６に記載のマウス。
（項目１０）
前記齧歯類がマウスであり、マウスＩＬ−４のＡＴＧ開始コドンから開始するエクソン１からエクソン４までを含むマウスＩＬ−４配列の連続ゲノム断片が、ヒトＩＬ−４のＡＴＧ開始コドンから開始するエクソン１からエクソン４までを含むヒトＩＬ−４配列の連続ゲノム断片で置換されている、項目１に記載の齧歯類。
（項目１１）
前記齧歯類が、機能性内因性マウスＩＬ−４タンパク質を発現するが前記置換を含まない同齢のマウスの血清中に存在するマウスＩＬ−４タンパク質のレベルの少なくとも約１０％、２０％、３０％、４０％、５０％、６０％、７０％、８０％、９０％、１００％、１１０％、１２０％、１３０％、１４０％、１５０％、１６０％、１７０％、１８０％、１９０％、または２００％の濃度にてヒトまたはヒト化ＩＬ−４タンパク質を血清中に発現するマウスである、項目１に記載の齧歯類。
（項目１２）
前記齧歯類が、機能性内因性マウスＩＬ−４タンパク質を発現するが前記置換を含まない同齢のマウスの血清中に存在するマウスＩＬ−４タンパク質のレベルの約１０％〜約２００％、約２０％〜約１５０％、または約３０％〜約１００％の濃度にてヒトＩＬ−４タ
ンパク質を血清中に発現するマウスである、項目１に記載の齧歯類。
（項目１３）
内因性齧歯類ＩＬ−４Ｒα遺伝子のヒト化を含む齧歯類であって、前記ヒト化が、ヒト化ＩＬ−４Ｒα遺伝子を形成するための、内因性齧歯類ＩＬ−４Ｒα遺伝子座における、ヒトＩＬ−４Ｒα遺伝子の少なくとも１つのエクソンを含む核酸配列による齧歯類ＩＬ−４Ｒα遺伝子のエクソンを含む齧歯類核酸の置換を含み、前記ヒト化ＩＬ−４Ｒα遺伝子の発現が、前記内因性齧歯類ＩＬ−４Ｒα遺伝子座の齧歯類調節エレメントの制御下にある、齧歯類。
（項目１４）
前記齧歯類がマウスまたはラットである、項目１３に記載の齧歯類。
（項目１５）
前記ヒト化ＩＬ−４Ｒα遺伝子が、ヒトまたはヒト化ＩＬ−４Ｒαタンパク質をコードし、前記ヒトＩＬ−４Ｒα遺伝子のＡＴＧ開始コドンから開始するエクソン１からエクソン５までを含む、項目１３に記載の齧歯類。
（項目１６）
前記齧歯類が、マウスＩＬ−４Ｒαタンパク質を発現する能力を有しないマウスである、項目１３に記載の齧歯類。
（項目１７）
前記齧歯類が、内因性マウスＩＬ−４遺伝子によってコードされたマウスＩＬ−４タンパク質を発現するマウスである、項目１３に記載の齧歯類。
（項目１８）
前記齧歯類が、ヒトまたはヒト化ＩＬ−４タンパク質を発現するマウスである、項目１７に記載のマウス。
（項目１９）
前記マウスが、改変されたＩＬ−４遺伝子を形成するための、内因性マウスＩＬ−４遺伝子座における、ヒトＩＬ−４遺伝子の少なくとも１つのエクソンを含む核酸配列によるマウスＩＬ−４遺伝子のエクソンを含むマウス核酸の置換を含み、前記改変されたＩＬ−４遺伝子の発現が、前記内因性マウスＩＬ−４遺伝子座のマウス調節エレメントの制御下にある、項目１８に記載のマウス。
（項目２０）
前記齧歯類がマウスであり、マウスＩＬ−４ＲαのＡＴＧ開始コドンから開始するエクソン１からエクソン５までを含むマウスＩＬ−４Ｒα配列の連続ゲノム断片が、ヒトＩＬ−４ＲαのＡＴＧ開始コドンから開始するエクソン１からエクソン５までを含むヒトＩＬ−４Ｒα配列の連続ゲノム断片で置換されている、項目１３に記載の齧歯類。
（項目２１）
前記齧歯類が、機能性内因性マウスＩＬ−４Ｒαタンパク質を発現するが前記置換を含まない同齢のマウスのＢ細胞および／またはＴ細胞のいずれかの免疫細胞上に存在するマウスＩＬ−４Ｒαタンパク質のレベルの少なくとも約１０％、２０％、３０％、４０％、５０％、６０％、７０％、８０％、９０％、１００％、１１０％、１２０％、１３０％、１４０％、１５０％、１６０％、１７０％、１８０％、１９０％、または２００％の量にて、Ｂ細胞および／またはＴ細胞のいずれかの免疫細胞上にヒトまたはヒト化ＩＬ−４Ｒαタンパク質を発現するマウスである、項目１３に記載の齧歯類。
（項目２２）
前記齧歯類が、機能性内因性マウスＩＬ−４Ｒαタンパク質を発現するが前記置換を含まない同齢のマウスのＢ細胞および／またはＴ細胞のいずれかの免疫細胞上に存在するマウスＩＬ−４Ｒαタンパク質のレベルの約１０％〜約２００％、約２０％〜約１５０％、または約３０％〜約１００％の量にて、Ｂ細胞および／またはＴ細胞のいずれかの免疫細胞上にヒトまたはヒト化ＩＬ−４Ｒαタンパク質を発現するマウスである、項目１３に記載の齧歯類。
（項目２３）
ヒト化した齧歯類を作製するための方法であって、ヒトまたはヒト化ＩＬ−４タンパク質をコードする改変されたＩＬ−４遺伝子を形成するために、ヒトＩＬ−４遺伝子の１つ以上のエクソンを含むヒトＩＬ−４核酸配列で齧歯類ＩＬ−４核酸配列を置換することを含み、前記置換が、内因性齧歯類ＩＬ−４遺伝子座にあり、ヒトＩＬ−４遺伝子配列の１つ以上のエクソンを含む前記改変されたＩＬ−４遺伝子配列が、内因性齧歯類ＩＬ−４遺伝子座の齧歯類調節エレメントまたは配列に作動可能に連結される、方法。
（項目２４）
前記齧歯類がマウスまたはラットである、項目２３に記載の方法。
（項目２５）
前記齧歯類調節エレメントまたは配列がマウスまたはラットに由来する、項目２３に記載の方法。
（項目２６）
前記齧歯類調節エレメントまたは配列が、前記齧歯類ＩＬ−４遺伝子座の内因性齧歯類調節エレメントまたは配列である、項目２３に記載の方法。
（項目２７）
前記齧歯類ＩＬ−４核酸配列と置き換わる前記ヒトＩＬ−４核酸配列が、前記ヒトＩＬ−４遺伝子配列の少なくとも１つのエクソンを含む、項目２３に記載の方法。
（項目２８）
前記齧歯類ＩＬ−４核酸配列と置き換わる前記ヒトＩＬ−４核酸配列が、前記ヒトＩＬ−４遺伝子配列の少なくとも２つまたは少なくとも３つのエクソンを含む、項目２７に記載の方法。
（項目２９）
前記齧歯類ＩＬ−４核酸配列と置き換わる前記ヒトＩＬ−４核酸配列が、前記ヒトＩＬ−４遺伝子配列の４つのエクソンを全て含む、項目２８に記載の方法。
（項目３０）
前記置換が内因性齧歯類ＩＬ−４遺伝子座にあり、前記ヒトＩＬ−４遺伝子配列の１つ以上のエクソンを含む前記ヒトＩＬ−４核酸配列が、前記内因性齧歯類ＩＬ−４遺伝子座の内因性齧歯類調節エレメントまたは配列に作動可能に連結される、項目２３に記載の方法。
（項目３１）
ヒト化ＩＬ−４マウスを作製するための方法であって、ヒトまたはヒト化ＩＬ−４タンパク質をコードする改変されたＩＬ−４遺伝子を形成するために、マウスＩＬ−４核酸配列をヒトＩＬ−４核酸で置換することを含む、方法。
（項目３２）
前記置換が内因性マウスＩＬ−４遺伝子座にあり、ヒトまたはヒト化ＩＬ−４タンパク質をコードする前記改変された遺伝子が、内因性マウス調節配列に作動可能に連結される、項目３１に記載の方法。
（項目３３）
前記置換が内因性マウスＩＬ−４遺伝子座にあり、ヒトまたはヒト化ＩＬ−４タンパク質をコードする前記改変された遺伝子が、内因性マウス調節配列に作動可能に連結される、項目３１に記載の方法。
（項目３４）
ヒト化した齧歯類を作製するための方法であって、ヒトまたはヒト化ＩＬ−４Ｒαタンパク質をコードする改変されたＩＬ−４Ｒα遺伝子を形成するために、ヒトＩＬ−４Ｒα遺伝子配列の１つ以上のエクソンを含むヒトＩＬ−４Ｒα核酸配列で齧歯類ＩＬ−４Ｒα核酸配列を置換することを含み、前記置換が、内因性齧歯類ＩＬ−４Ｒα遺伝子座にあり、ヒトまたはヒト化ＩＬ−４Ｒαタンパク質をコードする前記改変されたＩＬ−４Ｒα遺伝子が、前記内因性齧歯類ＩＬ−４Ｒα遺伝子座の齧歯類調節エレメントまたは配列に作動可能に連結される、方法。
（項目３５）
前記齧歯類がマウスまたはラットである、項目３４に記載の方法。
（項目３６）
前記齧歯類調節エレメントまたは配列がマウスまたはラットに由来する、項目３４に記載の方法。
（項目３７）
前記齧歯類調節エレメントまたは配列が、前記齧歯類ＩＬ−４Ｒα遺伝子座の内因性齧歯類調節エレメントまたは配列である、項目３４に記載の方法。
（項目３８）
前記齧歯類ＩＬ−４Ｒα遺伝子配列と置き換わる前記ヒトＩＬ−４Ｒα遺伝子配列が、前記ヒトＩＬ−４Ｒα遺伝子配列の少なくとも１つのエクソンを含む、項目３７に記載の方法。
（項目３９）
前記齧歯類ＩＬ−４Ｒα核酸配列と置き換わる前記ヒトＩＬ−４Ｒα核酸配列が、前記ヒトＩＬ−４Ｒα遺伝子配列の少なくとも２つ、３つ、４つ、５つ、６つ、７つ、または８つのエクソンを含む、項目３８に記載の方法。
（項目４０）
前記齧歯類ＩＬ−４Ｒα核酸配列と置き換わる前記ヒトＩＬ−４Ｒα核酸配列が、前記ヒトＩＬ−４Ｒα遺伝子配列の９つのエクソンを全て含む、項目３９に記載の方法。
（項目４１）
前記置換が内因性齧歯類ＩＬ−４Ｒα遺伝子座にあり、ヒトまたはヒト化ＩＬ−４Ｒαタンパク質をコードする前記改変されたＩＬ−４Ｒα遺伝子が、前記内因性齧歯類ＩＬ−４Ｒα遺伝子座の内因性齧歯類調節エレメントまたは配列に作動可能に連結される、項目３４に記載の方法。
（項目４２）
ヒト化したマウスを作製するための方法であって、ヒト化ＩＬ−４Ｒα遺伝子を形成するために、ヒトＩＬ−４Ｒαの細胞外ドメインをコードするヒトゲノム断片によりマウスＩＬ−４Ｒαの細胞外ドメインをコードするマウスエクソンを置換することを含む、方法。
（項目４３）
前記置換が内因性マウスＩＬ−４Ｒα遺伝子座にあり、前記ヒト化ＩＬ−４Ｒα遺伝子がマウス調節配列に作動可能に連結される、項目４２に記載の方法。
（項目４４）
前記置換が内因性マウスＩＬ−４Ｒα遺伝子座にあり、前記ヒト化ＩＬ−４Ｒα遺伝子が内因性マウス調節配列に作動可能に連結される、項目４２に記載の方法。
（項目４５）
ヒト化ＩＬ−４Ｒα遺伝子およびヒト化ＩＬ−４遺伝子を含む齧歯類であって、前記ヒト化ＩＬ−４Ｒα遺伝子は、ヒトＩＬ−４Ｒα細胞外ドメインをコードする配列による齧歯類ＩＬ−４Ｒα細胞外ドメインをコードする配列の置換から結果として得られ、前記ヒト化ＩＬ−４Ｒα遺伝子は、齧歯類ＩＬ−４Ｒα膜貫通ドメインをコードする配列と齧歯類ＩＬ−４Ｒα細胞質ドメインをコードする配列とを含み、前記ヒト化ＩＬ−４Ｒα遺伝子は、内因性齧歯類ＩＬ−４Ｒα遺伝子座の内因性齧歯類ＩＬ−４Ｒα調節エレメントの制御下にあり、前記ヒト化ＩＬ−４遺伝子は、ヒトまたはヒト化ＩＬ−４タンパク質をコードし、前記ヒト化ＩＬ−４遺伝子は、内因性齧歯類ＩＬ−４Ｒ遺伝子座の内因性齧歯類ＩＬ−４調節エレメントの制御下にある、齧歯類。
（項目４６）
前記齧歯類がマウスまたはラットである、項目４５に記載の齧歯類。
（項目４７）
前記齧歯類が、マウスＩＬ−４タンパク質を発現する能力を有しないマウスであってマウスＩＬ−４Ｒαタンパク質を発現する能力を有しないマウスである、項目４５に記載の齧歯類。
（項目４８）
前記内因性齧歯類ＩＬ−４遺伝子座および／または内因性齧歯類ＩＬ−４Ｒα遺伝子座の前記齧歯類調節エレメントまたは配列が、マウスまたはラット由来である、項目４５に記載の齧歯類。
（項目４９）
前記齧歯類調節エレメントまたは配列が、前記齧歯類ＩＬ−４遺伝子座および／または齧歯類ＩＬ−４Ｒα遺伝子座の内因性齧歯類調節エレメントまたは配列である、項目４５に記載の齧歯類。
（項目５０）
ヒト特異的なＩＬ−４またはＩＬ−４Ｒα拮抗薬をスクリーニングする方法であって、
二重にヒト化したＩＬ−４およびＩＬ−４Ｒαマウスを提供することと、
前記マウスにおいて肺の炎症を誘発することと、
薬剤を前記マウスに投与することと、
前記薬剤によって肺の炎症が低減するかどうかを判定することと、
前記薬剤を、肺の炎症を低減するその能力に基づいてヒト特異的なＩＬ−４またはＩＬ−４Ｒα拮抗薬として同定することと、
を含む方法。
（項目５１）
気道内の粘液貯留、気管支肺胞洗浄液中の好酸球性浸潤細胞、および／または総循環ＩｇＥを測定することによって肺の炎症の程度が判定される、項目５０に記載の方法。
（項目５２）
ヒト特異的なＩＬ−４またはＩＬ−４Ｒα拮抗薬をスクリーニングする方法であって、
二重にヒト化したＩＬ−４およびＩＬ−４Ｒαマウスを提供することと、
前記マウスにおいて皮膚炎症を誘発することと、
薬剤を前記マウスに投与することと、
前記薬剤によって皮膚炎症が低減するかどうかを判定することと、
前記薬剤を、皮膚炎症を低減するその能力に基づいてヒト特異的なＩＬ−４またはＩＬ−４Ｒα拮抗薬として同定することと、
を含む方法。
（項目５３）
ヒト化ＩＬ−４Ｒα遺伝子が、ヒトＩＬ−４Ｒα細胞外ドメインをコードする配列によるネズミのＩＬ−４Ｒα細胞外ドメインをコードする配列の置換から結果として得られ、前記ヒト化ＩＬ−４Ｒα遺伝子が内因性のネズミのＩＬ−４Ｒα遺伝子座の内因性のネズミのＩＬ−４Ｒα調節エレメントの制御下にあり、ヒト化ＩＬ−４遺伝子がヒトまたはヒト化ＩＬ−４タンパク質をコードし、前記ヒト化ＩＬ−４遺伝子は、内因性齧歯類ＩＬ−４Ｒ遺伝子座の内因性齧歯類ＩＬ−４調節エレメントの制御下にある、項目５０または５２に記載の方法。

Claims

ゲノムに、改変されたＩＬ−４遺伝子を形成するための、内因性齧歯類ＩＬ−４遺伝子座における、ヒトＩＬ−４遺伝子のゲノムＤＮＡによる齧歯類ＩＬ−４遺伝子のゲノムＤＮＡの置換を含む遺伝子改変齧歯類であって、前記改変されたＩＬ−４遺伝子は、ヒトＩＬ−４タンパク質をコードし、前記ヒトＩＬ−４遺伝子のＡＴＧ開始コドンから開始するエクソン１からエクソン４までを含み、前記改変されたＩＬ−４遺伝子の発現が、前記内因性齧歯類ＩＬ−４遺伝子座の齧歯類調節エレメントの制御下にあり、前記齧歯類がマウスまたはラットである、遺伝子改変齧歯類。
前記齧歯類がマウスである、請求項１に記載の遺伝子改変齧歯類。
前記置換が、前記ヒトＩＬ−４遺伝子のＡＴＧ開始コドンから開始するエクソン１からエクソン４までを含むゲノムＤＮＡによるマウスＩＬ−４遺伝子のＡＴＧ開始コドンから開始するエクソン１からエクソン４までを含むゲノムＤＮＡの置換である、請求項２に記載の遺伝子改変齧歯類。
ヒト化ＩＬ−４Ｒαタンパク質をコードする改変されたＩＬ−４Ｒα遺伝子を形成するための、内因性齧歯類ＩＬ−４Ｒα遺伝子座における、ヒトＩＬ−４Ｒα遺伝子の少なくとも１つのエクソンを含むゲノムＤＮＡによる齧歯類ＩＬ−４Ｒα遺伝子のエクソンを含む齧歯類ゲノムＤＮＡの置換をさらに含み、前記改変されたＩＬ−４Ｒα遺伝子の発現が、前記内因性齧歯類ＩＬ−４Ｒα遺伝子座の齧歯類調節エレメントの制御下にある、請求項１に記載の遺伝子改変齧歯類。
前記ヒト化ＩＬ−４Ｒαタンパク質が、ヒトＩＬ−４Ｒαタンパク質の細胞外ドメインを含む、請求項４に記載の遺伝子改変齧歯類。
前記ヒト化ＩＬ−４Ｒαタンパク質が、前記内因性齧歯類ＩＬ−４Ｒαタンパク質の膜貫通ドメインおよび細胞質ドメインを含む、請求項５に記載の遺伝子改変齧歯類。
前記内因性齧歯類ＩＬ−４Ｒα遺伝子座における前記置換が、前記ヒトＩＬ−４Ｒα遺伝子のエクソン１のＡＴＧ開始コドンからエクソン５まで、および前記齧歯類ＩＬ−４Ｒα遺伝子のエクソン６〜９を含む改変されたＩＬ−４Ｒα遺伝子を形成するための、ヒトＩＬ４−Ｒα遺伝子のゲノム断片による、齧歯類ＩＬ−４Ｒα遺伝子のゲノム断片の置換であり、前記齧歯類ＩＬ−４Ｒα遺伝子の前記ゲノム断片は、前記齧歯類ＩＬ−４Ｒα遺伝子のエクソン１のＡＴＧ開始コドンからエクソン５までを含み、前記ヒトＩＬ−４Ｒα遺伝子の前記ゲノム断片は、前記ヒトＩＬ−４Ｒα遺伝子のエクソン１のＡＴＧ開始コドンからエクソン５までを含み、前記改変されたＩＬ−４Ｒα遺伝子の発現は、前記内因性齧歯類ＩＬ−４Ｒα遺伝子座の齧歯類ＩＬ−４Ｒα調節エレメントの制御下にある、請求項４に記載の遺伝子改変齧歯類。
前記齧歯類がマウスである、請求項４〜７のいずれか一項に記載の遺伝子改変齧歯類。
遺伝子改変齧歯類を作製する方法であって、改変されたＩＬ−４遺伝子を形成するために、内因性齧歯類ＩＬ−４遺伝子座において、ヒトＩＬ−４遺伝子のゲノムＤＮＡによって齧歯類ＩＬ−４遺伝子のゲノムＤＮＡを置換することを含み、前記改変されたＩＬ−４遺伝子が、ヒトＩＬ−４タンパク質をコードし、前記ヒトＩＬ−４遺伝子のＡＴＧ開始コドンから開始するエクソン１からエクソン４までを含み、前記改変されたＩＬ−４遺伝子の発現が、前記内因性齧歯類ＩＬ−４遺伝子座の齧歯類調節エレメントの制御下にあり、前記齧歯類が、マウスまたはラットである、方法。
前記齧歯類がマウスである、請求項９に記載の方法。
前記置換が、マウス胚性幹（ＥＳ）細胞中で達成され、該細胞が後に、前記遺伝子改変マウスを作製するために使用される、請求項１０に記載の方法。
ゲノムが、ヒトＩＬ−４Ｒα遺伝子のエクソン１のＡＴＧ開始コドンからエクソン５まで、および齧歯類ＩＬ−４Ｒα遺伝子のエクソン６〜９を含む改変されたＩＬ−４Ｒα遺伝子を形成するための、内因性齧歯類ＩＬ−４Ｒα遺伝子座における、ヒトＩＬ４−Ｒα遺伝子のゲノム断片による齧歯類ＩＬ−４Ｒα遺伝子のゲノム断片の置換を含む、遺伝子改変齧歯類であって、前記齧歯類ＩＬ−４Ｒα遺伝子の前記ゲノム断片が、前記齧歯類ＩＬ−４Ｒα遺伝子のエクソン１のＡＴＧ開始コドンからエクソン５までを含み、前記ヒトＩＬ−４Ｒα遺伝子の前記ゲノム断片が、前記ヒトＩＬ−４Ｒα遺伝子のエクソン１のＡＴＧ開始コドンからエクソン５までを含み、前記改変されたＩＬ−４Ｒα遺伝子の発現が、前記内因性齧歯類ＩＬ−４Ｒα遺伝子座の齧歯類ＩＬ−４Ｒα調節エレメントの制御下にあり、前記齧歯類が、マウスまたはラットである、遺伝子改変齧歯類。
前記齧歯類が、改変されたＩＬ−４遺伝子を形成するための、内因性齧歯類ＩＬ−４遺伝子座における、ヒトＩＬ−４遺伝子のゲノム断片による齧歯類ＩＬ−４遺伝子のゲノム断片の置換を含み、前記齧歯類ＩＬ−４遺伝子の前記ゲノム断片が、前記齧歯類ＩＬ−４遺伝子のエクソン１のＡＴＧ開始コドンからエクソン４までを含み、前記ヒトＩＬ−４遺伝子の前記ゲノム断片が、前記ヒトＩＬ−４遺伝子のエクソン１のＡＴＧ開始コドンからエクソン４までを含み、前記改変されたＩＬ−４遺伝子の発現が、前記内因性齧歯類ＩＬ−４遺伝子座の齧歯類ＩＬ−４調節エレメントの制御下にある、請求項１２に記載の遺伝子改変齧歯類。
前記齧歯類が、マウスである、請求項１２または請求項１３に記載の遺伝子改変齧歯類。
遺伝子改変齧歯類を作製するための方法であって、ヒトＩＬ−４Ｒα遺伝子のエクソン１のＡＴＧ開始コドンからエクソン５まで、および齧歯類ＩＬ−４Ｒα遺伝子のエクソン６〜９を含む改変されたＩＬ−４Ｒα遺伝子を形成するために、内因性齧歯類ＩＬ−４Ｒα遺伝子座において、齧歯類ＩＬ−４Ｒα遺伝子のゲノム断片を、ヒトＩＬ−４Ｒα遺伝子のゲノム断片で置換することを含み、前記齧歯類ＩＬ−４Ｒα遺伝子の前記ゲノム断片が、前記齧歯類ＩＬ−４Ｒα遺伝子のエクソン１のＡＴＧ開始コドンからエクソン５までを含み、前記ヒトＩＬ−４Ｒα遺伝子の前記ゲノム断片が、前記ヒトＩＬ−４Ｒα遺伝子のエクソン１のＡＴＧ開始コドンからエクソン５までを含み、前記改変されたＩＬ−４Ｒα遺伝子が、前記内因性齧歯類ＩＬ−４Ｒα遺伝子座の齧歯類ＩＬ−４Ｒα調節エレメントに作動可能に連結され、前記齧歯類が、マウスまたはラットである、方法。
前記齧歯類が、マウスである、請求項１５に記載の方法。
前記置換が、マウスＥＳ細胞において達成され、前記細胞が後に、前記遺伝子改変マウスを作製するために使用される、請求項１６に記載の方法。
改変されたＩＬ−４遺伝子を形成するための、内因性齧歯類ＩＬ−４遺伝子座における、ヒトＩＬ−４遺伝子のゲノム断片による齧歯類ＩＬ−４遺伝子のゲノム断片の置換を含む、遺伝子改変齧歯類胚性幹（ＥＳ）細胞であって、前記齧歯類ＩＬ−４遺伝子の前記ゲノム断片が、前記齧歯類ＩＬ−４遺伝子のエクソン１のＡＴＧ開始コドンからエクソン４までを含み、前記ヒトＩＬ−４遺伝子の前記ゲノム断片が、前記ヒトＩＬ−４遺伝子のエクソン１のＡＴＧ開始コドンからエクソン４までを含み、前記改変されたＩＬ−４遺伝子の発現が、前記内因性齧歯類ＩＬ−４遺伝子座の齧歯類ＩＬ−４調節エレメントの制御下にあり；前記齧歯類ＥＳ細胞が、マウスＥＳ細胞またはラットＥＳ細胞である、遺伝子改変齧歯類胚性幹（ＥＳ）細胞。
改変されたＩＬ−４遺伝子を形成するための、内因性齧歯類ＩＬ−４遺伝子座における、ヒトＩＬ−４遺伝子のゲノム断片による齧歯類ＩＬ−４遺伝子のゲノム断片の置換を含む、遺伝子改変齧歯類ＥＳ細胞であって、前記齧歯類ＩＬ−４遺伝子の前記ゲノム断片が、前記齧歯類ＩＬ−４遺伝子のエクソン１のＡＴＧ開始コドンからエクソン４までを含み、前記ヒトＩＬ−４遺伝子の前記ゲノム断片が、前記ヒトＩＬ−４遺伝子のエクソン１のＡＴＧ開始コドンからエクソン４までを含み、前記改変されたＩＬ−４遺伝子の発現が、前記内因性齧歯類ＩＬ−４遺伝子座の齧歯類ＩＬ−４調節エレメントの制御下にあり；前記齧歯類ＥＳ細胞が、マウスＥＳ細胞またはラットＥＳ細胞である、遺伝子改変齧歯類ＥＳ細胞。
請求項１８または１９に記載の遺伝子改変齧歯類ＥＳ細胞を含む、齧歯類胚。
ヒト特異的なＩＬ−４またはＩＬ−４Ｒα拮抗薬をスクリーニングする方法であって、
二重にヒト化したＩＬ−４およびＩＬ−４Ｒα齧歯類を提供することであって、前記齧歯類のゲノムが、
（ｉ）前記ヒトＩＬ−４Ｒα遺伝子のエクソン１のＡＴＧ開始コドンからエクソン５まで、および前記齧歯類ＩＬ−４Ｒα遺伝子のエクソン６〜９を含む、改変されたＩＬ−４Ｒα遺伝子を形成するための、内因性齧歯類ＩＬ−４Ｒα遺伝子座における、ヒトＩＬ４−Ｒα遺伝子のゲノム断片による齧歯類ＩＬ−４Ｒα遺伝子のゲノム断片の置換であって、前記齧歯類ＩＬ−４Ｒα遺伝子の前記ゲノム断片が、前記齧歯類ＩＬ−４Ｒα遺伝子のエクソン１のＡＴＧ開始コドンからエクソン５までを含み、前記ヒトＩＬ−４Ｒα遺伝子の前記ゲノム断片が、前記ヒトＩＬ−４Ｒα遺伝子のエクソン１のＡＴＧ開始コドンからエクソン５までを含み、前記改変されたＩＬ−４Ｒα遺伝子の発現が、前記内因性齧歯類ＩＬ−４Ｒα遺伝子座の齧歯類ＩＬ−４Ｒα調節エレメントの制御下にある、置換；および
（ｉｉ）改変されたＩＬ−４遺伝子を形成するための、内因性齧歯類ＩＬ−４遺伝子座における、ヒトＩＬ−４遺伝子のゲノム断片による齧歯類ＩＬ−４遺伝子のゲノム断片の置換であって、前記齧歯類ＩＬ−４遺伝子の前記ゲノム断片が、前記齧歯類ＩＬ−４遺伝子のエクソン１のＡＴＧ開始コドンからエクソン４までを含み、前記ヒトＩＬ−４遺伝子の前記ゲノム断片が、前記ヒトＩＬ−４遺伝子のエクソン１のＡＴＧ開始コドンからエクソン４までを含み、前記改変されたＩＬ−４遺伝子の発現が、前記内因性齧歯類ＩＬ−４遺伝子座の齧歯類ＩＬ−４調節エレメントの制御下にある、置換
を含み、
前記齧歯類がマウスまたはラットである、ことと、
前記齧歯類において肺の炎症を誘発することと、
薬剤を前記齧歯類に投与することと、
前記薬剤によって肺の炎症が低減するかどうかを判定することと、
前記薬剤を、肺の炎症を低減するその能力に基づいてヒト特異的なＩＬ−４またはＩＬ−４Ｒα拮抗薬として同定することと、
を含む方法。
ヒト特異的なＩＬ−４またはＩＬ−４Ｒα拮抗薬をスクリーニングする方法であって、
二重にヒト化したＩＬ−４およびＩＬ−４Ｒα齧歯類を提供することであって、前記齧歯類のゲノムが、
（ｉ）前記ヒトＩＬ−４Ｒα遺伝子のエクソン１のＡＴＧ開始コドンからエクソン５まで、および前記齧歯類ＩＬ−４Ｒα遺伝子のエクソン６〜９を含む、改変されたＩＬ−４Ｒα遺伝子を形成するための、内因性齧歯類ＩＬ−４Ｒα遺伝子座における、ヒトＩＬ４−Ｒα遺伝子のゲノム断片による齧歯類ＩＬ−４Ｒα遺伝子のゲノム断片の置換であって、前記齧歯類ＩＬ−４Ｒα遺伝子の前記ゲノム断片が、前記齧歯類ＩＬ−４Ｒα遺伝子のエクソン１のＡＴＧ開始コドンからエクソン５までを含み、前記ヒトＩＬ−４Ｒα遺伝子の前記ゲノム断片が前記ヒトＩＬ−４Ｒα遺伝子のエクソン１のＡＴＧ開始コドンからエクソン５までを含み、前記改変されたＩＬ−４Ｒα遺伝子の発現が、前記内因性齧歯類ＩＬ−４Ｒα遺伝子座の齧歯類ＩＬ−４Ｒα調節エレメントの制御下にある、置換；および
（ｉｉ）改変されたＩＬ−４遺伝子を形成するための、内因性齧歯類ＩＬ−４遺伝子座における、ヒトＩＬ−４遺伝子のゲノム断片による齧歯類ＩＬ−４遺伝子のゲノム断片の置換であって、前記齧歯類ＩＬ−４遺伝子の前記ゲノム断片が、前記齧歯類ＩＬ−４遺伝子のエクソン１のＡＴＧ開始コドンからエクソン４までを含み、前記ヒトＩＬ−４遺伝子の前記ゲノム断片が、前記ヒトＩＬ−４遺伝子のエクソン１のＡＴＧ開始コドンからエクソン４までを含み、前記改変されたＩＬ−４遺伝子の発現が、前記内因性齧歯類ＩＬ−４遺伝子座の齧歯類ＩＬ−４調節エレメントの制御下にあり；前記齧歯類が、マウスまたはラットである、置換
を含む、ことと、
前記齧歯類において皮膚炎症を誘発することと、
薬剤を前記齧歯類に投与することと、
前記薬剤によって皮膚炎症が低減するかどうかを判定することと、
前記薬剤を、皮膚炎症を低減するその能力に基づいてヒト特異的なＩＬ−４またはＩＬ−４Ｒα拮抗薬として同定することと、
を含む方法。
前記齧歯類が、マウスである、請求項２１または２２に記載の方法。
薬剤が、ヒトＩＬ−４またはヒトＩＬ−４Ｒαに特異的な抗体である、請求項２１〜２３のいずれか一項に記載の方法。