JP2019505216A5 - - Google Patents

Description

本明細書で使用される場合、「約」及び「およそ」という用語は同意義として使用される。約／およその有無に関わらず、本明細書で使用される任意の数字は、当業者によって理解される任意の正常変動を網羅することが意図される。
特定の実施形態では、例えば、以下が提供される：
（項目１）
そのゲノムが内因性部分及びヒト部分を含む統合Ａｎｇｐｔｌ８遺伝子を含む齧歯類であって、前記内因性及びヒト部分が齧歯類またはヒトＡｎｇｐｔｌ８調節エレメントと動作可能に連結した、齧歯類。
（項目２）
前記齧歯類Ａｎｇｐｔｌ８調節エレメントが、齧歯類Ａｎｇｐｔｌ８プロモーターを含む、項目１に記載の齧歯類。
（項目３）
前記齧歯類Ａｎｇｐｔｌ８プロモーターが、内因性齧歯類Ａｎｇｐｔｌ８プロモーターである、項目２に記載の齧歯類。
（項目４）
前記Ａｎｇｐｔｌ８遺伝子の前記内因性部分が、内因性５’及び／または３’非翻訳領域（ＵＴＲ）を含む、項目１〜３のいずれか一項に記載の齧歯類。
（項目５）
前記ヒトＡｎｇｐｔｌ８調節エレメントが、ヒトＡｎｇｐｔｌ８プロモーターを含む、項目１に記載の齧歯類。
（項目６）
前記内因性Ａｎｇｐｔｌ８遺伝子の前記５’及び３’ＵＴＲはそれぞれが、齧歯類 Ａｎｇｐｔｌ８遺伝子に存在する、対応する５’及び３’ＵＴＲに対し、実質的に同一、または同一の配列を有する、項目４に記載の齧歯類。
（項目７）
前記Ａｎｇｐｔｌ８遺伝子が、配列番号６に対して少なくとも９５％同一である配列を有するポリペプチドをコードする、項目１〜６のいずれか一項に記載の齧歯類。
（項目８）
前記ヒト部分が、ヒトＡＮＧＰＴＬ８遺伝子のエクソン１〜４の全部または一部を含む、項目１〜７のいずれか一項に記載の齧歯類。
（項目９）
ヒトＡＮＧＰＴＬ８遺伝子のエクソン１〜４の全部または一部は、配列番号５のヒトＡＮＧＰＴＬ８ｍＲＮＡ配列に存在する、対応するエクソン１〜４の全部または一部に対して少なくとも９５％同一である、項目８に記載の齧歯類。
（項目１０）
前記ヒト部分が、前記齧歯類における発現のためにコドン最適化された配列を含む、項目８に記載の齧歯類。
（項目１１）
齧歯類Ａｎｇｐｔｌ８調節エレメントの制御下で、ヒトＡＮＧＰＴＬ８ポリペプチドを発現する齧歯類。
（項目１２）
前記齧歯類Ａｎｇｐｔｌ８調節エレメントが、齧歯類Ａｎｇｐｔｌ８プロモーターを含む、項目１１に記載の齧歯類。
（項目１３）
前記齧歯類Ａｎｇｐｔｌ８プロモーターが、内因性齧歯類 Ａｎｇｐｔｌ８プロモーターである、項目１２に記載の齧歯類。
（項目１４）
前記ヒトＡＮＧＰＴＬ８ポリペプチドが、配列番号６のアミノ酸残基２２〜１９８に対して少なくとも９５％同一であるアミノ酸配列を含む、項目１１〜１３のいずれか一項に記載の齧歯類。
（項目１５）
前記ヒトＡＮＧＰＴＬ８ポリペプチドが、配列番号９に対して少なくとも９５％同一である配列によってコードされる、項目１１〜１４のいずれか一項に記載の齧歯類。
（項目１６）
前記ヒトＡＮＧＰＴＬ８ポリペプチドが、コドン最適化された配列によってコードされる、項目１１〜１４のいずれか一項に記載の齧歯類。
（項目１７）
前記ヒトＡＮＧＰＴＬ８ポリペプチドが、バリアントヒトＡＮＧＰＴＬ８ポリペプチドである、項目１１〜１４のいずれか一項に記載の齧歯類。
（項目１８）
前記バリアントヒトＡＮＧＰＴＬ８ポリペプチドが、Ｒ５９Ｗアミノ酸置換によって特徴づけられる、項目１７に記載の齧歯類。
（項目１９）
前記バリアントヒトＡＮＧＰＴＬ８ポリペプチドが、Ｑ１２１Ｘアミノ酸置換によって特徴づけられる、項目１７に記載の齧歯類。
（項目２０）
前記ヒトＡＮＧＰＴＬ８ポリペプチドが、内因性Ａｎｇｐｔｌ８座位に配置された核酸配列によりコードされる、項目７〜１９のいずれか一項に記載の齧歯類。
（項目２１）
前記齧歯類がラットまたはマウスである、項目１〜２０のいずれか一項に記載の齧歯類。
（項目２２）
そのゲノムが内因性部分及びヒト部分を含むＡｎｇｐｔｌ８遺伝子を含む単離された齧歯類細胞または組織であって、前記内因性及びヒト部分が齧歯類Ａｎｇｐｔｌ８調節エレメントと動作可能に連結した、単離された齧歯類細胞または組織。
（項目２３）
そのゲノムが内因性部分及びヒト部分を含むＡｎｇｐｔｌ８遺伝子を含む齧歯類胚性幹細胞であって、前記内因性及びヒト部分が齧歯類Ａｎｇｐｔｌ８調節エレメントと動作可能に連結した、齧歯類胚性幹細胞。
（項目２４）
項目２３に記載の胚性幹細胞から生成される齧歯類胚。
（項目２５）
内因性Ａｎｇｐｔｌ８遺伝子からヒトＡＮＧＰＴＬ８ポリペプチドを発現する、齧歯類の作製方法であって、
（ａ） 齧歯類胚性幹細胞の内因性Ａｎｇｐｔｌ８遺伝子にゲノム断片を配置することであって、前記ゲノム断片が、ヒトＡＮＧＰＴＬ８ポリペプチドの全部または一部をコードするヌクレオチド配列を含む、配置することと、
（ｂ） （ａ）で生成された齧歯類胚性幹細胞を得ることと、
（ｃ） （ｂ）の齧歯類胚性幹細胞を使用して齧歯類を作製すること、とを含む、方法。
（項目２６）
前記ヒトＡＮＧＰＴＬ８ポリペプチドが、配列番号６のアミノ酸残基２２〜１９８に対して少なくとも９５％同一である配列を含む、項目２５に記載の方法。
（項目２７）
前記ヌクレオチド配列が、ヒトＡＮＧＰＴＬ８遺伝子のエクソン１〜４の全部または一部を含む、項目２５または２６に記載の方法。
（項目２８）
前記ヌクレオチド配列が、ヒトＡＮＧＰＴＬ８遺伝子の３’ＵＴＲをさらに含む、項目２７に記載の方法。
（項目２９）
前記ヌクレオチド配列が、一つ以上の選択マーカーを含む、項目２５〜２８のいずれか一項に記載の方法。
（項目３０）
前記ヌクレオチド配列が、一つ以上の部位特異的組み換え部位を含む、項目２５〜２
９のいずれか一項に記載の方法。
（項目３１）
前記核酸配列が、リコンビナーゼ認識部位に隣接したリコンビナーゼ遺伝子と選択マーカーを含み、前記リコンビナーゼ認識部位は、除去を誘導するよう方向づけられる、項目３０に記載の方法。
（項目３２）
前記リコンビナーゼ遺伝子が、分化細胞において前記リコンビナーゼ遺伝子の発現を誘導するが、未分化細胞では前記リコンビナーゼ遺伝子の発現を誘導しないプロモーターに動作可能に連結される、項目３１に記載の方法。
（項目３３）
前記リコンビナーゼ遺伝子は、転写によって能力を有し、発生的に制御されるプロモーターに動作可能に連結される、項目３１に記載の方法。
（項目３４）
前記プロモーターが、配列番号１２、配列番号１３、または配列番号１４であるか、またはこれを含む、項目３２または３３に記載の方法。
（項目３５）
前記プロモーターが、配列番号１２であるか、またはこれを含む、項目３４に記載の方法。
（項目３６）
前記ヌクレオチド配列が、齧歯類において発現するためにコドン最適化された１つ以上の配列を含む、項目２５〜３５のいずれか一項に記載の方法。
（項目３７）
前記方法は、（ｃ）で生成された前記齧歯類を交配させるステップをさらに含み、これにより内因性Ａｎｇｐｔｌ８遺伝子からヒトＡＮＧＰＴＬ８ポリペプチドを発現するためのホモ接合性齧歯類が作製される、項目２５〜３６のいずれか一項に記載の方法。
（項目３８）
そのゲノムが、ヒトＡＮＧＰＴＬ８ポリペプチドをコードするＡｎｇｐｔｌ８遺伝子を含む齧歯類の作製方法であって、齧歯類Ａｎｇｐｔｌ８調節配列の制御下で、ヒトＡＮＧＰＴＬ８ポリペプチドをコードするＡｎｇｐｔｌ８遺伝子を含むように、齧歯類のゲノムを改変することを含み、これにより前記齧歯類を作製することを含む、方法。
（項目３９）
前記齧歯類Ａｎｇｐｔｌ８調節配列が、齧歯類Ａｎｇｐｔｌ８プロモーターを含む、項目３８に記載の齧歯類。
（項目４０）
前記齧歯類Ａｎｇｐｔｌ８プロモーターが、内因性齧歯類Ａｎｇｐｔｌ８プロモーターである、項目３９に記載の方法。
（項目４１）
前記ヒトＡＮＧＰＴＬ８ポリペプチドが、配列番号６のアミノ酸残基２２〜１９８に対して少なくとも９５％同一である配列を含む、項目３８〜４０のいずれか一項に記載の方法。
（項目４２）
前記ヒトＡＮＧＰＴＬ８ポリペプチドが、バリアントヒトＡＮＧＰＴＬ８ポリペプチドである、項目３８〜４０のいずれか一項に記載の方法。
（項目４３）
前記バリアントヒトＡＮＧＰＴＬ８ポリペプチドが、Ｒ５９Ｗアミノ酸置換によって特徴づけられる、項目４２に記載の齧歯類。
（項目４４）
前記バリアントヒトＡＮＧＰＴＬ８ポリペプチドが、Ｑ１２１Ｘアミノ酸置換によって特徴づけられる、項目４２に記載の齧歯類。
（項目４５）
前記Ａｎｇｐｔｌ８遺伝子が、ヒトＡＮＧＰＴＬ８遺伝子のエクソン１〜４の全部または一部を含むように改変される、項目３８〜４４のいずれか一項に記載の方法。
（項目４６）
前記Ａｎｇｐｔｌ８遺伝子が、ヒトＡＮＧＰＴＬ８遺伝子の３’ＵＴＲをさらに含むよう改変される、項目４５に記載の方法。
（項目４７）
前記齧歯類がマウスまたはラットである、項目２５〜４６のいずれか一項に記載の方法。
（項目４８）
項目２５〜４７のいずれか一項に記載の方法から得られる齧歯類。
（項目４９）
ヒトＡＮＧＰＴＬ８を標的とする薬剤のトリグリセリド低減有効性を評価する方法であって、前記方法が、
そのゲノムが内因性部分及びヒト部分を含むＡｎｇｐｔｌ８遺伝子を含む齧歯類に、前記薬剤を投与するステップであって、前記内因性部分及びヒト部分は齧歯類Ａｎｇｐｔｌ８調節エレメントに動作可能に連結する、投与するステップと、
ヒトＡＮＧＰＴＬ８を標的とする前記薬剤の１つ以上のトリグリセリド低減特性を決定するアッセイを実施するステップと、を含む、方法。
（項目５０）
ヒトＡＮＧＰＴＬ８を標的とする薬剤の薬物動態特性を評価する方法であって、前記方法が、
そのゲノムが内因性部分及びヒト部分を含むＡｎｇｐｔｌ８遺伝子を含む齧歯類に、前記薬剤を投与するステップであって、前記内因性部分及びヒト部分は齧歯類Ａｎｇｐｔｌ８調節エレメントに動作可能に連結する、投与するステップと、
ヒトＡＮＧＰＴＬ８を標的とする前記薬剤の一つ以上の薬物動態特性を決定するためにアッセイを実施するステップと、を含む、方法。
（項目５１）
前記ヒト部分が、ヒトＡＮＧＰＴＬ８遺伝子のエクソン１〜４の全部または一部を含む、項目４９または５０に記載の方法。
（項目５２）
前記ヒト部分が、ヒトＡＮＧＰＴＬ８遺伝子の３’ＵＴＲをさらに含む、項目５１に記載の方法。
（項目５３）
ヒトＡＮＧＰＴＬ８を標的とする前記薬剤がＡＮＧＰＴＬ８拮抗薬である、項目４９〜５２のいずれか一項に記載の方法。
（項目５４）
ヒトＡＮＧＰＴＬ８を標的とする前記薬剤が、ＡＮＧＰＴＬ８作動薬である、項目５０〜５２のいずれか一項に記載の方法。
（項目５５）
ヒトＡＮＧＰＴＬ８を標的とする前記薬剤が抗ＡＮＧＰＴＬ８抗体である、項目４９〜５２のいずれか一項に記載の方法。
（項目５６）
ヒトＡＮＧＰＴＬ８を標的とする前記薬剤が、前記齧歯類に静脈内投与される、項目４９〜５５のいずれか一項に記載の方法。
（項目５７）
ヒトＡＮＧＰＴＬ８を標的とする前記薬剤が、前記齧歯類に腹腔内投与される、項目４９〜５５のいずれか一項に記載の方法。
（項目５８）
ヒトＡＮＧＰＴＬ８を標的とする前記薬剤が、前記齧歯類に皮下投与される、項目４９〜５５のいずれか一項に記載の方法。
（項目５９）
前記齧歯類Ａｎｇｐｔｌ８調節エレメントが、齧歯類Ａｎｇｐｔｌ８プロモーターを含む、項目４９〜５８のいずれか一項に記載の方法。
（項目６０）
前記齧歯類Ａｎｇｐｔｌ８プロモーターが、内因性齧歯類Ａｎｇｐｔｌ８プロモーターである、項目５９に記載の方法。
（項目６１）
前記齧歯類がマウスまたはラットである、項目４９〜６０のいずれか一項に記載の方法。
（項目６２）
そのゲノムが、Ａｎｇｐｔｌ８遺伝子を含む齧歯類であって、前記遺伝子が、
内因性Ａｎｇｐｔｌ８遺伝子の５’及び３’ＵＴＲを含む内因性部分と、
ヒトＡＮＧＰＴＬ８遺伝子のエクソン１〜４の全部または一部を含むヒト部分と、を含み、
前記ヒト部分は、内因性齧歯類Ａｎｇｐｔｌ８プロモーターに動作可能に連結し、前記齧歯類はその血清内にヒトＡＮＧＰＴＬ８ポリペプチドを発現する、齧歯類。
（項目６３）
前記齧歯類により発現されるヒトＡＮＧＰＴＬ８ポリペプチドが、配列番号６に存在するアミノ酸残基２２〜１９８に対して少なくとも９５％同一であるアミノ酸配列を含む、項目６２に記載の齧歯類。
（項目６４）
前記ヒトＡＮＧＰＴＬ８ポリペプチドが、バリアントヒトＡＮＧＰＴＬ８ポリペプチドである、項目６２または６３に記載の方法。
（項目６５）
前記バリアントヒトＡＮＧＰＴＬ８ポリペプチドが、Ｒ５９Ｗアミノ酸置換によって特徴づけられる、項目６４に記載の齧歯類。
（項目６６）
前記バリアントヒトＡＮＧＰＴＬ８ポリペプチドが、Ｑ１２１Ｘアミノ酸置換によって特徴づけられる、項目６４に記載の齧歯類。
（項目６７）
前記ヒト部分が、前記齧歯類における発現のためにコドン最適化された配列を含む、項目６２〜６６のいずれか一項に記載の齧歯類。
（項目６８）
前記齧歯類が、マウスまたはラットである、項目６２〜６７のいずれか一項に記載の齧歯類。

Claims (13)

1. そのゲノムが内因性Ａｎｇｐｔｌ８座位に操作されたＡｎｇｐｔｌ８遺伝子を含む齧歯類であって、
   前記操作されたＡｎｇｐｔｌ８遺伝子は、前記内因性齧歯類Ａｎｇｐｔｌ８遺伝子の５’非翻訳領域、ヒトＡＮＧＰＴＬ８遺伝子のエクソン１のコード部分、及び前記ヒトＡＮＧＰＴＬ８遺伝子のエクソン２〜４を含み、かつ前記内因性Ａｎｇｐｔｌ８座位で内因性齧歯類Ａｎｇｐｔｌ８プロモーターに動作可能に連結しており、
   前記齧歯類は、野生型齧歯類と比較して増加したトリグリセリドレベルを示す、齧歯類。
2. 前記操作されたＡｎｇｐｔｌ８遺伝子の前記内因性部分が、内因性３’非翻訳領域（ＵＴＲ）を含む、請求項１に記載の齧歯類。
3. 前記操作されたＡｎｇｐｔｌ８遺伝子が、配列番号６の配列を有するポリペプチドまたは配列番号６のアミノ酸残基２２〜１９８を含むポリペプチドをコードする、請求項１または２に記載の齧歯類。
4. 前記齧歯類がラットまたはマウスである、請求項１〜３のいずれか一項に記載の齧歯類。
5. そのゲノムが内因性Ａｎｇｐｔｌ８座位に操作されたＡｎｇｐｔｌ８遺伝子を含む単離された齧歯類細胞または組織であって、
   前記操作されたＡｎｇｐｔｌ８遺伝子は、前記内因性齧歯類Ａｎｇｐｔｌ８遺伝子の５’非翻訳領域、ヒトＡＮＧＰＴＬ８遺伝子のエクソン１のコード部分、及び前記ヒトＡＮＧＰＴＬ８遺伝子のエクソン２〜４を含み、かつ前記内因性Ａｎｇｐｔｌ８座位で内因性齧歯類Ａｎｇｐｔｌ８プロモーターに動作可能に連結しており、
   前記齧歯類細胞または組織は、野生型齧歯類と比較して増大したトリグリセリドレベルを示す齧歯類由来である、単離された齧歯類細胞または組織。
6. そのゲノムが内因性Ａｎｇｐｔｌ８座位に操作されたＡｎｇｐｔｌ８遺伝子を含む齧歯類胚性幹細胞であって、
   前記操作されたＡｎｇｐｔｌ８遺伝子は、前記内因性齧歯類Ａｎｇｐｔｌ８遺伝子の５’非翻訳領域、ヒトＡＮＧＰＴＬ８遺伝子のエクソン１のコード部分、及び前記ヒトＡＮＧＰＴＬ８遺伝子のエクソン２〜４を含み、かつ前記内因性Ａｎｇｐｔｌ８座位で内因性齧歯類Ａｎｇｐｔｌ８プロモーターに動作可能に連結した、齧歯類胚性幹細胞。
7. 前記齧歯類胚性幹細胞がマウスまたはラットの胚性幹細胞である、請求項６に記載の齧歯類胚性幹細胞。
8. 請求項６または７に記載の胚性幹細胞から生成される齧歯類胚。
9. そのゲノムが、ヒトＡＮＧＰＴＬ８ポリペプチドをコードする操作されたＡｎｇｐｔｌ８遺伝子を含む齧歯類の作製方法であって、改変されたゲノムが、内因性Ａｎｇｐｔｌ８座位に操作されたＡｎｇｐｔｌ８遺伝子を含むように、齧歯類ゲノムを改変することを含み、これにより前記齧歯類を作製することを含み、
   前記操作されたＡｎｇｐｔｌ８遺伝子は、前記内因性齧歯類Ａｎｇｐｔｌ８遺伝子の５’非翻訳領域、ヒトＡＮＧＰＴＬ８遺伝子のエクソン１のコード部分、及びヒトＡＮＧＰＴＬ８遺伝子のエクソン２〜４を含み、かつ前記内因性Ａｎｇｐｔｌ８座位で内因性齧歯類Ａｎｇｐｔｌ８プロモーターの制御下にあり、
   前記齧歯類は、野生型齧歯類と比較して増大したトリグリセリドレベルを示す、方法。
10. 前記齧歯類ゲノムを改変することが、
    （ａ） 齧歯類胚性幹細胞の内因性Ａｎｇｐｔｌ８遺伝子にゲノム断片を配置することであって、前記ゲノム断片が、ヒトＡＮＧＰＴＬ８ポリペプチドの全部または一部をコードするヌクレオチド配列を含む、配置することと、
    （ｂ） （ａ）で生成された齧歯類胚性幹細胞を得ることと、
    （ｃ） （ｂ）の齧歯類胚性幹細胞を使用して齧歯類を作製すること、とを含む、請求項９に記載の方法。
11. 前記ヒトＡＮＧＰＴＬ８ポリペプチドが、配列番号６のアミノ酸残基２２〜１９８を含む、請求項９または１０に記載の方法。
12. 前記齧歯類がマウスまたはラットである、請求項９〜１１のいずれか一項に記載の方法。
13. ヒトＡＮＧＰＴＬ８を標的とする薬剤のトリグリセリド低減有効性または薬物動態特性を評価する方法であって、前記方法が、
    請求項１〜４のいずれか一項に記載の齧歯類に、前記薬剤を投与するステップと、
    ヒトＡＮＧＰＴＬ８を標的とする前記薬剤の、１つ以上のトリグリセリド低減特性または１つ以上の薬物動態特性を決定するアッセイを実施するステップと、を含み、
    必要に応じて、ヒトＡＮＧＰＴＬ８を標的とする前記薬剤が抗ＡＮＧＰＴＬ８抗体である、方法。