JP2017144731A - 複合材料をバイオファブリケートするための方法 - Google Patents
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Abstract
【解決手段】本発明は、バイオファブリケーテッド材料および二次構成要素を含む複合材料を製造するための方法を対象とする。二次構成要素は、多孔質材料、例えば、バイオファブリケーテッド材料でコーティングされている、またはそうでなければ、接触されている紙、セルロース、または布のシートであってもよい。バイオファブリケーテッド材料は、架橋コラーゲンフィブリルの一様なネットワークを含み、複合材料に対して強度、弾性および美的外観を与える。
【選択図】なし
Description
本出願は、2016年2月15日に出願された米国仮出願第62/295,435号に対する優先権を主張し、これはその全体が参照により組み込まれている。本出願は、「操作レザーおよびその製造方法(ENGINEERED LEATHER AND METHODS OF MANUFACTURE THEREOF)」と表題され、2013年3月28日に出願された米国特許出願第13/853,001号;「操作レザーおよびその製造方法(ENGINEERED LEATHER AND METHODS OF MANUFACTURE THEREOF)」と表題され、2015年12月11日に出願された米国特許出願第14/967,173号;および「強化された操作生体材料およびその製造方法(REINFORCED ENGINEERED BIOMATERIALS AND METHODS OF MANUFACTRUING THEREOF)」と表題され、2015年11月3日に出願されたPCT特許出願第PCT/US2015/058794号に関連する。
本発明は、従来のレザー製品と比較して優れた強度、非異方性、および一様性を示すが、天然レザーの外観、感触およびその他の美的特性を有する、非束(unbundled)およびランダム配向三量体コラーゲンフィブリルから構成されるバイオファブリケーテッド(biofabricated)レザー材料に関する。プラスチック樹脂から構成される合成レザー製品とは違って、本発明のバイオファブリケーテッドレザーは、レザーの天然構成要素である、コラーゲンをベースとする。
レザー。レザーは、家具、室内装飾品、衣類、靴、旅行かばん、ハンドバッグおよびアクセサリーを含む膨大な用途ならびに自動車用途で使用されている。レザーの推定世界貿易額は、およそ1年当たり1000億米ドルであり(Future Trends in the World Leather Products Industry and Trade, United Nations Industrial Development Organization, Vienna, 2010)、レザー製品に対する継続して、増加する需要がある。この需要を満たすための新しい方法が、レザーの製造の経済的、環境的および社会的コストの観点で必要とされる。技術的および美的トレンドに遅れないために、レザー製品の製造者および使用者は、優れた強度、一様性、加工性、および天然構成要素を取り込む流行の魅力的な美的特性を示す新しい材料を求めている。
コラーゲンおよびコラーゲン様タンパク質の組換え発現は、公知であり、Bell、欧州特許第1232182号明細書、Bovine collagen and method for producing recombinant gelatin;Olsenら、米国特許第6,428,978号明細書、Methods for the production of gelatin and full−length triple helical collagen in recombinant cells;VanHeerdeら、米国特許第8,188,230号明細書、Method for recombinant microorganism expression and isolation of collagen−like polypeptidesへの参照により組み込まれている。このような組換えコラーゲンは、レザーを製造するために使用されてこなかった。
複合材料における使用のためにコラーゲンからバイオファブリケーテッド材料構成要素を形成する方法は、任意の順序でフィブリル化、架橋、脱水(dehydrating/dewatering)および潤滑のステップを含む。例えば、コラーゲン溶液が、フィブリル化されてもよく、フィブリルは、グルタルアルデヒドなどの作用物質で架橋され、次いで、亜硫酸化油などの潤滑剤でコーティングされ、次いで、濾過により脱水されて、フィブリル化コラーゲンレザーを形成してもよい。しかしながら、作製方法は、ステップのこの特定の順序に限定されない。
複合材
本発明は、限定されないが、以下に記載される特徴を有するバイオファブリケーテッド材料構成要素を含む。本発明の複合材は、(i)1種もしくは複数の二次構成要素、例えば、粒子、ワイヤ、布、もしくは三次元物体が、コラーゲンフィブリルのネットワークに組み込まれもしくは包埋されているもの、(ii)バイオファブリケーテッド材料が、織布もしくは不織布、例えば、布、紙もしくは再生セルロースなどの1種もしくは複数の二次構成要素の片側に、例えば、濾過によって、コーティングまたは堆積されているもの、(iii)バイオファブリケーテッド構成要素が、上側および下側、もしくは内側および外側を有する1種もしくは複数の二次材料の両側にコーティングもしくは堆積されているもの、または(iv)バイオファブリケーテッド材料構成要素および1種もしくは複数の二次構成要素が、例えば、接着剤でもしくはそれなしで直接積層によって、互いに接着、付着もしくは積層されているものを含む。
(i)少なくとも1種の多孔質、透過性、または吸収性二次構成要素、および非ヒトコラーゲンフィブリルのネットワークを含む少なくとも1種のバイオファブリケーテッド材料であって、材料中のコラーゲンフィブリルの10重量%未満は、5μm以上の直径を有するコラーゲン線維の形態で、それらの長さの100μm以上に対して整列されたフィブリルの形態で、またはその両方であり;前記材料は、40重量%以下の水を含み;かつ前記材料は少なくとも1%の潤滑剤を含む、二次構成要素およびバイオファブリケーテッド材料;または
(i)少なくとも1種の多孔質、透過性、または吸収性二次構成要素、および組換え非ヒトコラーゲンフィブリルのネットワークを含む少なくとも1種のバイオファブリケーテッド材料であって、コラーゲンは、実質的に3−ヒドロキシプロリンおよび任意選択で、実質的にヒドロキシリシンを含まず;前記材料は、25重量%以下の水を含み;かつ前記材料は、少なくとも1%の潤滑剤を含む、二次構成要素およびバイオファブリケーテッド材料;または
(ii)二次構成要素の少なくとも1つの層、および非ヒトコラーゲンフィブリルのネットワークを含むバイオファブリケーテッド材料の少なくとも1つの層であって、材料中のコラーゲンフィブリルの10重量%未満は、5μm以上の直径を有するコラーゲン線維の形態で、それらの長さの100μm以上に対して整列されたフィブリルの形態で、またはその両方であり;前記材料は、40重量%以下の水を含み;かつ前記材料は少なくとも1%の潤滑剤を含む、二次構成要素の少なくとも1つの層およびバイオファブリケーテッド材料の少なくとも1つの層;または
(iii)二次構成要素の少なくとも1つの層、および組換え非ヒトコラーゲンフィブリルのネットワークを含む少なくとも1種のバイオファブリケーテッド材料であって、コラーゲンは、実質的に3−ヒドロキシプロリンおよび任意選択で、実質的にヒドロキシリシンを含まず;前記材料は、25重量%以下の水を含み;かつ前記材料は、少なくとも1%の潤滑剤を含む、二次構成要素の少なくとも1つの層およびバイオファブリケーテッド材料;または
(iv)二次構成要素の少なくとも1つの層、ならびに非ヒトコラーゲンフィブリルのネットワークを含み、上面および下面、もしくは内面および外面を有する少なくとも1種のバイオファブリケーテッド材料の少なくとも2つの外層であって、材料中のコラーゲンフィブリルの10重量%未満は、5μm以上の直径を有するコラーゲン線維の形態で、それらの長さの100μm以上に対して整列されたフィブリルの形態で、またはその両方であり;前記材料は、40重量%以下の水を含み;かつ前記材料は少なくとも1%の潤滑剤を含む、二次構成要素の少なくとも1つの層およびバイオファブリケーテッド材料の少なくとも2つの外層;または
(v)二次構成要素の少なくとも1つの層、ならびに組換え非ヒトコラーゲンフィブリルのネットワークを含み、上面および下面、もしくは内面および外面を有する少なくとも1種のバイオファブリケーテッド材料の少なくとも2つの外層であって、コラーゲンは、実質的に3−ヒドロキシプロリンおよび任意選択で、実質的にヒドロキシリシンを含まず;前記材料は、25重量%以下の水を含み;かつ前記材料は、少なくとも1%の潤滑剤を含む、二次構成要素の少なくとも1つの層およびバイオファブリケーテッド材料の少なくとも2つの外層
を含む複合材料。
2.二次構成要素が、上面および下面、または内面および外面を有する、(i)または(ii)である、実施形態1に記載の複合材。
3.バイオファブリケーテッド材料が、上面、下面、内面または外面の1つの上にあるだけ、またはその中に組み込まれるだけである、実施形態2に記載の複合材。
4.バイオファブリケーテッド材料が、上面および下面の両方、または内面もしくは外面の両方の上または中に組み込まれる、実施形態2に記載の複合材。
5.二次構成要素が、紙、再生セルロース、布、または他の不織もしくは織り繊維状材料である、実施形態2に記載の複合材。
6.二次構成要素が、少なくとも1種の樹脂、ポリマー、またはプラスチックを含む、実施形態1に記載の複合材。
7.二次構成要素が、少なくとも1種の繊維、ビーズ、ワイヤ、粒子、メッシュ、織布、または不織布を含む、実施形態1に記載の複合材。
8.バイオファブリケーテッド材料が、1重量%未満のアクチン、ケラチン、エラスチン、フィブリン、アルブミン、グロブリン、ムチン、ムチン様物、非コラーゲン構造タンパク質、および/または非コラーゲン非構造タンパク質を含む、実施形態1に記載の複合材。
9.バイオファブリケーテッド材料が、少なくとも1%の少なくとも1種の架橋剤を含む、実施形態1に記載の複合材。
10.バイオファブリケーテッド材料中のフィブリルの直径が、材料中のフィブリルの直径の少なくとも70%が直径の単一峰の周囲に分布する、実質的に単峰性分布を示す、実施形態1に記載の複合材。
11.バイオファブリケーテッド材料が、少なくとも1種の脂肪、生物油、鉱油もしくは合成油、スルホン化油、ポリマー、およびオルガノ官能性シロキサンからなる群から選択される少なくとも1種の潤滑剤を含む、実施形態1に記載の複合材。
12.バイオファブリケーテッド材料が、100kPa〜1,000MPaの弾性率を有し、弾性率は、材料の同一長さで交差した直角で測定される場合に20%以下変化し、かつ1MPa〜100MPaの範囲の引張り強度を有し、引張り強度は、材料の同一長さで交差した直角で測定される場合に20%以下変化する、実施形態1に記載の複合材。
13.バイオファブリケーテッド材料が、表面コーティング材または表面仕上げ材をさらに含み;表面コーティング材または表面仕上げ材は、材料全体にわたって一様に分布しており、その結果、材料の同一単位体積中または上のその重量濃度は、20%以下変化する、実施形態1に記載の複合材。
14.バイオファブリケーテッド材料が、染料、ステイン、樹脂、ポリマー、顔料または塗料をさらに含み、染料、ステイン、樹脂、顔料または塗料は、材料全体にわたって一様に分布しており、その結果、材料の同一単位体積中または上のその重量濃度は、20%以下変化する、実施形態1に記載の複合材。
15.バイオファブリケーテッド材料が、少なくとも1種の充填剤をさらに含み、充填剤は、材料全体にわたって一様に分布しており、その結果、材料の同一単位体積中または上のその重量濃度は、20%以下変化する、実施形態1に記載の複合材。
本発明による複合材を作製する方法の具体的な実施形態には、限定なしで、以下が含まれる。
1.
(i)少なくとも1種のバイオファブリケーテッド材料を、少なくとも1種の多孔質、透過性、または吸収性二次構成要素の中または上に分散させ、封入し、組み込み、堆積させ、またはそうでなければ、導入するステップであって、少なくとも1種のバイオファブリケーテッド材料は、非ヒトコラーゲンフィブリルのネットワークを含み、材料中のコラーゲンフィブリルの10重量%未満は、5μm以上の直径を有するコラーゲン線維の形態で、それらの長さの100μm以上に対して整列されたフィブリルの形態で、またはその両方であり;前記材料は、40重量%以下の水を含み;かつ前記材料は少なくとも1%の潤滑剤を含む、ステップ;または
(ii)少なくとも1種のバイオファブリケーテッド材料を、少なくとも1種の多孔質、透過性、または吸収性二次構成要素の中または上に分散させ、封入し、組み込み、堆積させ、またはそうでなければ、導入するステップであって、前記および少なくとも1種のバイオファブリケーテッド材料は、組換え非ヒトコラーゲンフィブリルのネットワークを含み、コラーゲンは、実質的に3−ヒドロキシプロリンおよび任意選択で、実質的にヒドロキシリシンを含まず;前記材料は、25重量%以下の水を含み;かつ前記材料は、少なくとも1%の潤滑剤を含む、ステップ;または
(iii)上面および下面、または内面および外面を有する少なくとも1種の二次構成要素を、非ヒトコラーゲンフィブリルのネットワークを含む少なくとも1種のバイオファブリケーテッド材料と層状化し、積層し、堆積させ、コーティングし、またはそうでなければ、接触させるステップであって、材料中のコラーゲンフィブリルの10重量%未満は、5μm以上の直径を有するコラーゲン線維の形態で、それらの長さの100μm以上に対して整列されたフィブリルの形態で、またはその両方であり;前記材料は、40重量%以下の水を含み;かつ前記材料は少なくとも1%の潤滑剤を含む、ステップ;または
(iv)上面および下面、または内面および外面を有する少なくとも1種の二次構成要素を、非ヒトコラーゲンフィブリルのネットワークを含む少なくとも1種のバイオファブリケーテッド材料と層状化し、積層し、堆積させ、コーティングし、またはそうでなければ、接触させるステップであって、コラーゲンは、実質的に3−ヒドロキシプロリンおよび任意選択で、実質的にヒドロキシリシンを含まず;前記材料は、25重量%以下の水を含み;かつ前記材料は、少なくとも1%の潤滑剤を含む、ステップ;または
(v)少なくとも1種の二次構成要素の上面および下面、または内面および外面を、非ヒトコラーゲンフィブリルのネットワークを含む少なくとも1種のバイオファブリケーテッド材料で、サンドイッチ状にはさみ、層状化し、積層し、コーティングし、またはそうでなければ、被覆するステップであって、材料中のコラーゲンフィブリルの10重量%未満は、5μm以上の直径を有するコラーゲン線維の形態で、それらの長さの100μm以上に対して整列されたフィブリルの形態で、またはその両方であり;前記材料は、40重量%以下の水を含み;かつ前記材料は少なくとも1%の潤滑剤を含む、ステップ;または
(vi)少なくとも1種の二次構成要素の上面および下面、または内面および外面を、非ヒトコラーゲンフィブリルのネットワークを含む少なくとも1種のバイオファブリケーテッド材料で、サンドイッチ状にはさみ、層状化し、積層し、コーティングし、またはそうでなければ、被覆するステップであって、コラーゲンは、実質的に3−ヒドロキシプロリンおよび任意選択で、実質的にヒドロキシリシンを含まず;前記材料は、25重量%以下の水を含み;かつ前記材料は、少なくとも1%の潤滑剤を含む、ステップ
を含む、複合材料を作製するための方法。
2.前記方法が(i)であり、かつ少なくとも1種のバイオファブリケーテッド材料が、任意の順序で、
非ヒトコラーゲン分子の水溶液または懸濁液をコラーゲンフィブリルにフィブリル化するステップ、
前記コラーゲンフィブリルを、それらを少なくとも1種の架橋剤と接触させることによって架橋するステップ、
架橋コラーゲンフィブリルを、それらが40重量%未満の水を含むように脱水するステップ、
少なくとも1重量%の少なくとも1種の潤滑剤を前記材料中に組み込むことによって潤滑するステップ、
を含むプロセスによって製造される、実施形態1に記載の方法。
3.前記バイオファブリケーテッド材料が、組換えコラーゲンをフィブリル化することによって製造される、実施形態2に記載の方法。
4.前記方法が(ii)であり、かつ少なくとも1種のバイオファブリケーテッド材料が、任意の順序で、
非ヒトコラーゲン分子の水溶液または懸濁液をコラーゲンフィブリルにフィブリル化するステップ、
前記コラーゲンフィブリルを、それらを少なくとも1種の架橋剤と接触させることによって架橋するステップ、
架橋コラーゲンフィブリルを、それらが25重量%未満の水を含むように脱水するステップ、
少なくとも1重量%の少なくとも1種の潤滑剤を前記材料中に組み込むことによって潤滑するステップ、
を含むプロセスによって製造される、実施形態1に記載の方法。
5.前記フィブリル化するステップ、架橋するステップ、脱水するステップおよび/または潤滑するステップが、バイオファブリケーテッド材料中コラーゲンフィブリルの10重量%未満を、5μm以上の直径を有するコラーゲン線維の形態で、それらの長さの100μm以上に対して整列されたフィブリルの形態で、またはその両方でもたらす時間および条件下で行われる、実施形態4に記載の方法。
6.前記方法が、(i)または(ii)であり、かつバイオファブリケーテッド材料が、少なくとも1種の多孔質、透過性、または吸収性二次構成要素の中または上に組み込まれる、実施形態1に記載の方法。
7.二次構成要素が、少なくも1種の樹脂、ポリマー、またはプラスチックを含む、実施形態1に記載の方法。
8.二次構成要素が、少なくとも1種の繊維、ビーズ、ワイヤ、粒子、メッシュ、織布、または不織布を含む、実施形態1に記載の方法。
9.二次構成要素が、少なくとも1種の導電性材料、磁気材料、フルオレッセント材料、バイオルミネッセント材料、フォスフォレッセント材料、またはそれらの組合せを含む、実施形態1に記載の方法。
10.バイオファブリケーテッド材料が、非ヒトコラーゲン分子を含有する水溶液の塩濃度を調整すること、またはそのpHを調整することの少なくとも1つによって、前記コラーゲン分子をフィブリル化して、フィブリルをもたらすことによって製造される、実施形態1に記載の方法。
11.バイオファブリケーテッド材料が、コラーゲンフィブリルを、アミン、カルボン酸、硫酸塩、亜硫酸塩、スルホン酸塩、アルデヒド、ヒドラジド、スルフィドリル、ジアジリン、アリール、アジド、アクリレート、エポキシド、フェノール、クロム化合物、植物性タンニン、およびシンタンからなる群から選択される少なくとも1種の化合物と接触させることによって、コラーゲンフィブリルを架橋することによって製造される、実施形態1に記載の方法。
12.バイオファブリケーテッド材料が、コラーゲンフィブリルを、コラーゲンから結合水を除去する作用物質と接触させることによりコラーゲンフィブリルのネットワークを脱水することによって製造される、実施形態1に記載の方法。
13.コラーゲンフィブリルを、脂肪、生物油、鉱油もしくは合成油、タラ油、スルホン化油、ポリマー、およびオルガノ官能性シロキサンからなる群から選択される少なくとも1種の潤滑剤からなる群から選択される少なくとも1種の潤滑剤で潤滑することを含む、実施形態1に記載の方法。
14.バイオファブリケーテッド材料が、材料の同一単位体積中の潤滑剤の濃度が20%以下変化するように、潤滑剤をバイオファブリケーテッド材料上に、またはその全体にわたって一様に分布させることによって製造される、実施形態1に記載の方法。
15.バイオファブリケーテッド材料が、その中または上に、染料、ステイン、顔料、樹脂、ポリマー、または塗料を一様に分布させることによって製造され、バイオファブリケーテッド材料の同一単位体積中の染料、ステイン、顔料、樹脂、ポリマー、または塗料の濃度は、20%以下変化する、実施形態1に記載の方法。
16.バイオファブリケーテッド材料が、それの中に少なくとも1種の充填剤を組み込むことによって製造される、実施形態1に記載の方法。
17.バイオファブリケーテッド材料を、二次構成要素の上面もしくは下面、または内面および外面の中または上に導入することを含む、請求項1に記載の方法。
18.一旦導入されたバイオファブリケーテッド材料を架橋することをさらに含む、請求項17に記載の方法。
19.一旦導入されたバイオファブリケーテッド材料を脱水することをさらに含む、請求項17に記載の方法。
20.一旦導入されたバイオファブリケーテッド材料を潤滑することをさらに含む、請求項17に記載の方法。
21.バイオファブリケーテッド材料を二次構成要素の中または上に、濾過、ディッピング、噴霧またはコーティングによって導入することを含む、請求項17に記載の方法。
22.バイオファブリケーテッド材料を、二次構成要素の片側だけに適用することを含む、請求項17に記載の方法。
23.バイオファブリケーテッド材料を、二次構成要素の両側に適用することを含む、請求項17に記載の方法。
24.バイオファブリケーテッド材料を、二次構成要素の2つの層間に層状化することを含む、請求項17に記載の方法。
25.二次構成要素が、繊維、織布もしくは不織布、または他の繊維状材料を含む、請求項17に記載の方法。
26.少なくとも1種の二次構成要素を、バイオファブリケーテッド材料の中にまたはそれと一緒に包埋または混合することを含む、請求項1に記載の方法。
1つの実施形態において、バイオファブリケーテッド材料構成要素は、コラーゲン線維のネットワーク、例えば、
(i)非ヒトコラーゲンフィブリルのネットワークであって、
材料中のコラーゲンフィブリルの5重量%未満、10重量%未満、15重量%未満、20重量%未満、25重量%未満、30重量%未満、35重量%未満、または40重量%未満は、1、2、3、4、5、6、7、8、9、または10μmもしくはそれ以上の直径を有するコラーゲン線維の形態であり、および/あるいは100μmまたはそれ以上のそれらの長さに対して整列されたフィブリルの形態であり;前記材料は、10、20、30、40、50、または60重量%以下の水を含み;;前記材料は、少なくとも1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、20、30、または40重量%の潤滑剤を含み;かつ任意選択で、材料は、上面および下面、または内面および外面を含む、非ヒトコラーゲンフィブリルのネットワークを含む;あるいは
(ii)組換え非ヒトコラーゲンフィブリルのネットワークであって、コラーゲンは、実質的に3−ヒドロキシプロリンおよび任意選択で、実質的にヒドロキシリシンを含まず;前記材料は、5、10、15、25、30、35、40、45、50、55、または60重量%以下の水を含み;材料は、少なくとも1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、20、30、または40重量%の潤滑剤を含み;かつ任意選択で、材料は、上面および下面、または内面および外面を含む、組換え非ヒトコラーゲンフィブリルのネットワークを含む、バイオファブリケーテッド材料またはバイオファブリケーテッドレザーを含む。この材料中の水含有量は、好ましくは25〜40%以下である。潤滑剤含有量は、潤滑剤に対するバイオファブリケーテッド材料の吸収能に適合し、またはそれを超えないように選択されてもよい。このような材料は、哺乳動物コラーゲン、例えば、ウシI型またはIII型コラーゲンを含んでもよい。好ましくは、それは、それが含むコラーゲン分子を自然的に発現する動物の毛、毛包(単数もしくは複数)、または脂肪(単数もしくは複数)を含まない。例えば、それは、従来のレザーに見出されるアクチン、ケラチン、エラスチン、フィブリン、アルブミン、グロブリン、ムチン、ムチン様物、非コラーゲン構造タンパク質、および/または非コラーゲン非構造タンパク質を1重量%未満、2重量%未満、3重量%未満、4重量%未満、5重量%未満、6重量%未満、7重量%未満、8重量%未満、9重量%未満、または10重量%未満含んでもよい。それは、バイオファブリケーテッド材料中のコラーゲン分子を自然に発現する動物のように、従来のレザーに見出される他のコラーゲン性タンパク質、炭水化物、核酸、もしくは脂質、または免疫原、抗原、もしくはアレルゲンを実質的に含まなくてもよい。代わりの実施形態は、従来のレザーに見出されるアクチン、ケラチン、エラスチン、フィブリン、アルブミン、グロブリン、ムチン、ムチン様物、非コラーゲン構造タンパク質、および/または非コラーゲン非構造タンパク質の1種または複数を1、2、3、4、5、6、7、8、9、または10%組み込んでもよい。
本発明による方法は、限定されないが、バイオファブリケーテッド材料構成要素を作製するための方法の以下の実施形態を含む。
(ii)任意の順序で、非ヒトコラーゲン分子の水溶液または懸濁液をコラーゲンフィブリルにフィブリル化し、前記コラーゲンフィブリルをそれらを少なくとも1種の架橋剤を接触させることによって架橋し、架橋コラーゲンフィブリルをそれらが5、10、15、20または25重量%以下の水を含むように脱水し、少なくとも1、2、3、4、5、10、15、20、30、40または50重量%の少なくとも1種の潤滑剤を前記材料中に組み込み、および任意選択で、上面および下面、または内面および外面を含む前記材料を注型し、成形し、またはそうでなければ形成することを含む、組換え非ヒトコラーゲンフィブリルのネットワークを含むバイオファブリケーテッド材料構成要素であって、コラーゲンは実質的に3−ヒドロキシプロリン、および任意選択で、実質的にヒドロキシリシンを含まず;前記材料は、10、15、20、25、30、35、40、45、50、55または60重量%以下の水を含み;かつ前記材料は少なくとも1%の潤滑剤を含む、バイオファブリケーテッド材料構成要素
を作製するための方法。
複合材で使用されるバイオファブリケーテッド材料の厚さは、コラーゲン含有量を調整することによって制御してもよい。抽出ウシI型コラーゲンのヒドロゲルを、異なるコラーゲン濃度および体積で形成して、異なる厚さの乾燥コラーゲン材料を製造した。コラーゲンを5g/Lまたは9g/Lのいずれかで0.01N HClに溶解させ、次いで、1部の10×PBSを9部の溶解コラーゲンに添加して、コラーゲンフィブリル化およびゲル形成を誘導した。
本明細書に記載される複合材のバイオファブリケーテッド構成要素は、I型コラーゲンから製造してもよい。
本明細書に記載される複合材のバイオファブリケーテッド構成要素は、III型コラーゲンを使用して製造してもよい。
確認した。
本明細書に記載される複合材のバイオファブリケーテッド構成要素は、II型コラーゲンを使用して製造してもよい。
ウシ腱から酸処理によって単離され、続いて、ペプシンにより消化され、サイズ排除クロマトグラフィーにより精製され、凍結および凍結乾燥された、I型ウシコラーゲンを、Wuxi Biot Bio−technology co.,Ltd.から購入した(Medical Collagen Sponge)。
I型ウシコラーゲンをWuxi Biot Bio−technology co.,Ltd.から購入した(Medical Collagen Sponge)。このコラーゲン供給源は、ウシ腱から酸処理により単離され、続いて、ペプシンにより消化され、サイズ排除クロマトグラフィーにより精製され、凍結および凍結乾燥されたI型コラーゲンである。凍結乾燥タンパク質(10グラム)を、オーバーヘッドミキサーを使用して1Lの0.01N HCl、pH2に溶解させた。溶液中固体コラーゲンスポンジの欠如により証明されるとおりに、コラーゲンを適切に溶解させた後(1,600rpmで少なくとも1時間の混合)、111.1mlの200ミリモルリン酸ナトリウム(pHを水酸化ナトリウムで11.2に調整した)を添加して、コラーゲン溶液のpHを7.2に上げた。得られたコラーゲン溶液を10分間撹拌し、コラーゲンの重量に対して2%である、架橋剤溶液としての0.1mlの20%Relugan GTW(BASF)。
ウシコラーゲンはWuxi Biot Bio−technology Company,Ltd.から購入した(Medical Collagen Sponge)。このコラーゲン供給源は、酸処理によりウシ腱から単離され、続いて、ペプシンにより消化され、サイズ排除クロマトグラフィーにより精製され、凍結および凍結乾燥されたI型コラーゲンである。
ウシコラーゲンは、Wuxi Biot Bio−technology co.,Ltd.から購入した(Medical Collagen Sponge)。このコラーゲン供給源は、ウシ腱から酸処理により単離され、続いて、ペプシンにより消化され、サイズ排除クロマトグラフィーにより精製され、凍結および凍結乾燥されたI型コラーゲンである。凍結乾燥タンパク質(4.1グラム)を、オーバーヘッドミキサーを使用して733mLの0.01N HCl、pH2に溶解させた。溶液中の固体コラーゲンスポンジの欠如により証明されるとおりに、コラーゲンを適切に溶解させた後(1600rpmで少なくとも1時間混合して)、この溶液に82uLのなめし剤Relugan GTW、続いて、81mLの10×PBS、pH11.2を添加して、溶液のpHを7.2に上げた。この溶液を3分間混合し、次いで、0.25インチのチョップド炭素繊維の二次材料が入っている型に注いだ。炭素繊維は、Fibre Glast Development Corp.から購入した。炭素繊維をコラーゲン溶液中で混合して、コラーゲンマトリックス全体にわたって繊維を分散させた。このコラーゲン溶液をシリコン型中25℃で2時間インキュベートして、コラーゲンを粘弾性ヒドロゲルにフィブリル化させ、炭素繊維を封入した。
ウシコラーゲンを実施例8におけるとおりに溶解させた。溶液中固体コラーゲンスポンジの欠如により証明されるとおりに、一旦コラーゲンが溶解させると(1600rpmで少なくとも1時間混合して)、この撹拌コラーゲン溶液に、5mLのDI水に溶解させた0.2gのLowepel酸性黒色染料を滴下添加した。染料を1600rpmで1時間混合して、コラーゲンへの染料固定を可能にした。次いで、この溶液に82uLのなめし剤Relugan GTW、続いて、81mLの10×PBS、pH11.2を添加して、溶液のpHを7.2に上昇させた。この溶液を3分間混合し、真空技術を使用して羊毛不織フェルトの二次材料と一体化させた。羊毛フェルトは、USフェルトから購入し、1Mヒドロキシルアミン、1g/Lのトリトンn−57界面活性剤、pH8を用いて50℃で終夜処理して、表面脂質を除去し、羊毛繊維の湿潤性および反応性を増加させた。60mLのコラーゲン前駆体溶液をハウスバキューム下で羊毛フェルトに引き入れた。染料の勾配が、フェルトの上面から下面まで目に見えた。コラーゲン溶液の一体化に続いて、羊毛フェルトを新鮮なキャストコラーゲン前駆体溶液の上に逆さまに置いた。コラーゲンおよび羊毛フェルトを25℃で2時間インキュベートして、フィブリル化させた。フィブリル化後、この材料を脱水機中37℃で乾燥させた。乾燥材料を、羊毛裏付けを有する軟らかく、レザー様材料にへらがけした。
一級アミンで官能化されたQdotおよびPEGスペーサーをSigmaから購入した。Qdotを、氷上で冷やしたコラーゲン前駆体溶液(5重量%I型コラーゲン、1×PBS、0.02μLのGTW/1mgコラーゲン)に1:10に希釈した。次いで、Qdot/コラーゲン溶液を「M」の形状に絹不織布の二次材料の上にスクリーン印刷した。次いで、Qdot/コラーゲンスクリーン印刷布を室温で1時間インキュベートし、その後、その布をコラーゲンゲルに封入した。実施例2におけるとおりに、コラーゲン前駆体溶液(5mg/mLのI型コラーゲン、1×PBS、0.02μLのGTW/1mgのコラーゲン)を、PBSを添加して3分後にシリコン型に注型し、布をコラーゲン溶液の中央に置いた。この溶液を25℃で1時間インキュベートしてフィブリル化させ、次いで、封入布を有するゲルを一連のアセトン中で脱水し、続いて、タラ油/アセトン中で加脂し、乾燥させた。乾燥およびへらがけ後、この材料をUV光源に曝して、包埋Qdot「M」に光を当てた。
一級アミンで官能化されたQdotおよびPEGスペーサーをSigmaから購入した。Qdotを、Slygard184ポリジメチルシロキサン(PDMS)塩基中で1:10に希釈し、続いて、Qdot/塩基10:1を硬化剤と混合した。混合後、Qdot/塩基/硬化剤溶液を、「M」の形状の型中に注型した。PDMS「M」を40℃で終夜硬化させ、次いで、型から取り出して、エラストマー性およびフォトルミネッセント「M」を製造した。実施例2におけるとおりに、コラーゲン前駆体溶液(5mg/mLのI型コラーゲン、1×PBS、0.02μLのGTW/1mgのコラーゲン)を、PBSを添加して3分後にシリコン型中に注型し、PDMS「M」をコラーゲン溶液の中央に置いた。この溶液を25℃で1時間インキュベートしてフィブリル化させ、次いで、封入布を有するゲルを一連のアセトン中で脱水し、続いて、タラ油/アセトン中で加脂し、乾燥させた(詳細については実施例2を参照)。乾燥およびへらがけ後、封入三次元「M」は、「M」の形状でバイオフィブリケーテッドレザーの表面上に触感パターンをもたらした。加えて、この材料をUV光源に曝して、PDMS「M」中包埋Qdotに光を当てた。
実施例9のプロセスを、羊毛フェルトおよび実施例6のコラーゲン前駆体溶液で繰り返した。複合レザーが形成される。
実施例2のレザーの3インチ×3インチ試料に、3インチ×3インチポリエステル−ポリウレタンコポリマーフェルト(Lycra(登録商標))をホットメルト接着剤によって50℃で積層する。レザー−二次材料裏付け複合材が形成される。
以下の実施例14〜実施例20により示されるとおりに、本発明のバイオファブリケーテッド材料は、二次構成要素に成功裏に適用され、または一体化されて、強いレザー様複合材をもたらすことができる。
ウシコラーゲンは、Wuxi Biot Bio−technology co.,Ltd.から購入した(Medical Collagen Sponge)。このコラーゲン供給源は、酸処理によりウシ腱から単離され、続いて、ペプシンにより消化され、サイズ排除クロマトグラフィーにより精製され、凍結および凍結乾燥されたI型コラーゲンである。凍結乾燥タンパク質(10グラム)を、オーバーヘッドミキサーを使用して1リットルの0.01N HCl、pH2に溶解させた。
ウシコラーゲンは、Wuxi Biot Bio−technology co.,Ltd.から購入した(Medical Collagen Sponge)。このコラーゲン供給源は、酸処理によりウシ腱から単離され、続いて、ペプシンにより消化され、サイズ排除クロマトグラフィーにより精製され、凍結および凍結乾燥されたI型コラーゲンである。凍結乾燥タンパク質(10グラム)を、オーバーヘッドミキサーを使用して1リットルの0.01N HCl、pH2に溶解させた。
100%ポリエステルテクニカルテキスタイルを材料の片側に積層する追加のステップとともに、実施例3の手順を繰り返した。
ウシコラーゲンは、Wuxi Biot Bio−technology co.,Ltd.から購入した(Medical Collagen Sponge)。このコラーゲン供給源は、酸処理によりウシ腱から単離され、続いて、ペプシンにより消化され、サイズ排除クロマトグラフィーにより精製され、凍結および凍結乾燥されたI型コラーゲンである。凍結乾燥タンパク質(10グラム)を、オーバーヘッドミキサーを使用して1リットルの0.01N HCl、pH2に溶解させた。
ウシコラーゲンは、Wuxi Biot Bio−technology co.,Ltd.から購入した(Medical Collagen Sponge)。このコラーゲン供給源は、酸処理によりウシ腱から単離され、続いて、ペプシンにより消化され、サイズ排除クロマトグラフィーにより精製され、凍結および凍結乾燥されたI型コラーゲンである。凍結乾燥タンパク質(10グラム)を、オーバーヘッドミキサーを使用して1リットルの0.01N HCl、pH2に溶解させた。溶液中固体コラーゲンスポンジの欠如により証明されるとおりに(1,600rpmで少なくとも1時間の混合)、コラーゲンを適切に溶解させた後、111.1ミリリットルの200ミリモルリン酸ナトリウム(pHを水酸化ナトリウムで11.2に調整した)を添加して、コラーゲン溶液のpHを7.2に上げた。
ウシコラーゲンは、Wuxi Biot Bio−technology co.,Ltd.から購入した(Medical Collagen Sponge)。このコラーゲン供給源は、酸処理によりウシ腱から単離され、続いて、ペプシンにより消化され、サイズ排除クロマトグラフィーにより精製され、凍結および凍結乾燥されたI型コラーゲンである。凍結乾燥タンパク質(4.1グラム)を、オーバーヘッドミキサーを使用して733mLの0.01N HCl、pH2に溶解させた。
本明細書で使用される用語は、特定の実施形態を説明する目的のためだけであり、本発明の限定であることは意図されない。例えば、本明細書で使用される場合、文脈により別に明らかに指示されない限り、単数形「1つ(a)」、「1つ(an)」および「その(the)」は、複数形を同様に含むことが意図される。本明細書で使用される場合の用語「含む(comprises)」および/または「含むこと(comprising)」は、記載された特徴、ステップ、操作、要素、および/または構成要素の存在を明示するが、1つもしくは複数の他の特徴、ステップ、操作、要素、構成要素、および/またはそれらの群の存在または付加を排除しないことがさらに理解される。本明細書で使用される場合、用語「および/または」は、関連する列挙項目の1つまたは複数の組合せのすべてを含み、「/」と省略されてもよい。
Claims (15)
- (i)少なくとも1種のバイオファブリケーテッド材料を、少なくとも1種の多孔質、透過性、または吸収性二次構成要素の中または上に分散させ、封入し、組み込み、堆積させ、またはそうでなければ、導入するステップであって、前記少なくとも1種のバイオファブリケーテッド材料は、非ヒトコラーゲンフィブリルのネットワークを含み、前記材料中の前記コラーゲンフィブリルの10重量%未満は、5μm以上の直径を有するコラーゲン線維の形態、それらの長さの100μm以上に対して整列されたフィブリルの形態、またはその両方の形態であり;前記材料は、40重量%以下の水を含み;かつ前記材料は少なくとも1%の潤滑剤を含む、ステップ;または
(ii)少なくとも1種のバイオファブリケーテッド材料を、少なくとも1種の多孔質、透過性、または吸収性二次構成要素の中または上に分散させ、封入し、組み込み、堆積させ、またはそうでなければ、導入するステップであって、前記および少なくとも1種のバイオファブリケーテッド材料は、組換え非ヒトコラーゲンフィブリルのネットワークを含み、前記コラーゲンは、実質的に3−ヒドロキシプロリンおよび任意選択で、実質的にヒドロキシリシンを含まず;前記材料は、25重量%以下の水を含み;かつ前記材料は、少なくとも1%の潤滑剤を含む、ステップ;または
(iii)上面および下面、または内面および外面を有する少なくとも1種の二次構成要素を、非ヒトコラーゲンフィブリルのネットワークを含む少なくとも1種のバイオファブリケーテッド材料と層状化し、積層し、堆積させ、コーティングし、またはそうでなければ、接触させるステップであって、前記材料中の前記コラーゲンフィブリルの10重量%未満は、5μm以上の直径を有するコラーゲン線維の形態、それらの長さの100μm以上に対して整列されたフィブリルの形態、またはその両方の形態であり;前記材料は、40重量%以下の水を含み;かつ前記材料は少なくとも1%の潤滑剤を含む、ステップ;または
(iv)上面および下面、または内面および外面を有する少なくとも1種の二次構成要素を、組換え非ヒトコラーゲンフィブリルのネットワークを含む少なくとも1種のバイオファブリケーテッド材料と層状化し、積層し、堆積させ、コーティングし、またはそうでなければ、接触させるステップであって、前記コラーゲンは、実質的に3−ヒドロキシプロリンおよび任意選択で、実質的にヒドロキシリシンを含まず;前記材料は、25重量%以下の水を含み;かつ前記材料は、少なくとも1%の潤滑剤を含む、ステップ;または
(v)少なくとも1種の二次構成要素の上面および下面、または内面および外面を、非ヒトコラーゲンフィブリルのネットワークを含む少なくとも1種のバイオファブリケーテッド材料で、サンドイッチ状にはさみ、層状化し、積層し、コーティングし、またはそうでなければ、被覆するステップであって、前記材料中の前記コラーゲンフィブリルの10重量%未満は、5μm以上の直径を有するコラーゲン線維の形態、それらの長さの100μm以上に対して整列されたフィブリルの形態、またはその両方の形態であり;前記材料は、40重量%以下の水を含み;かつ前記材料は少なくとも1%の潤滑剤を含む、ステップ;または
(vi)少なくとも1種の二次構成要素の上面および下面、または内面および外面を、組換え非ヒトコラーゲンフィブリルのネットワークを含む少なくとも1種のバイオファブリケーテッド材料で、サンドイッチ状にはさみ、層状化し、積層し、コーティングし、またはそうでなければ、被覆するステップであって、前記コラーゲンは、実質的に3−ヒドロキシプロリンを含まず;前記材料は、25重量%以下の水を含み;かつ前記材料は、少なくとも1%の潤滑剤を含む、ステップ
を含む、複合材料を作製するための方法。 - 前記方法が(i)であり、かつ前記少なくとも1種のバイオファブリケーテッド材料が、任意の順序で、
非ヒトコラーゲン分子の水溶液または懸濁液をコラーゲンフィブリルにフィブリル化するステップ、
前記コラーゲンフィブリルを、それらを少なくとも1種の架橋剤と接触させることによって架橋するステップ、
前記架橋コラーゲンフィブリルを、それらが40重量%未満の水を含むように脱水するステップ、
少なくとも1重量%の少なくとも1種の潤滑剤を前記材料中に組み込むことによって潤滑するステップ、
を含むプロセスによって製造される、請求項1に記載の方法。 - 前記バイオファブリケーテッド材料が、組換えコラーゲンをフィブリル化することによって製造される、請求項2に記載の方法。
- 前記方法が(ii)であり、かつ前記少なくとも1種のバイオファブリケーテッド材料が、任意の順序で、
組換え非ヒトコラーゲン分子の水溶液または懸濁液をコラーゲンフィブリルにフィブリル化するステップ、
前記コラーゲンフィブリルを、それらを少なくとも1種の架橋剤と接触させることによって架橋するステップ、
前記架橋コラーゲンフィブリルを、それらが25重量%未満の水を含むように脱水するステップ、
少なくとも1重量%の少なくとも1種の潤滑剤を前記材料中に組み込むことによって潤滑するステップ、
を含むプロセスによって製造される、請求項1に記載の方法。 - 前記フィブリル化するステップ、架橋するステップ、脱水するステップおよび/または潤滑するステップが、前記バイオファブリケーテッド材料中前記コラーゲンフィブリルの10重量%未満を、5μm以上の直径を有するコラーゲン線維の形態、それらの長さの100μm以上に対して整列されたフィブリルの形態、またはその両方の形態でもたらす時間および条件下で行われる、請求項4に記載の方法。
- 前記バイオファブリケーテッド材料を、前記二次構成要素の上面もしくは下面、または内面および外面の中または上に導入するステップを含む、請求項1に記載の方法。
- 一旦導入された前記バイオファブリケーテッド材料を架橋するステップをさらに含む、請求項6に記載の方法。
- 一旦導入された前記バイオファブリケーテッド材料を脱水するステップをさらに含む、請求項6に記載の方法。
- 一旦導入された前記バイオファブリケーテッド材料を潤滑するステップをさらに含む、請求項6に記載の方法。
- 前記バイオファブリケーテッド材料を、前記二次構成要素の中または上に、濾過、ディッピング、噴霧またはコーティングによって導入するステップを含む、請求項6に記載の方法。
- 前記バイオファブリケーテッド材料を、前記二次構成要素の片側だけに適用するステップを含む、請求項6に記載の方法。
- 前記バイオファブリケーテッド材料を、前記二次構成要素の両側に適用するステップを含む、請求項6に記載の方法。
- 前記バイオファブリケーテッド材料を、前記二次構成要素の2つの層間に層状化するステップを含む、請求項6に記載の方法。
- 前記二次構成要素が、繊維、織布もしくは不織布、または他の繊維状材料を含む、請求項6に記載の方法。
- 前記少なくとも1種の二次構成要素を、前記バイオファブリケーテッド材料の中にまたはそれと一緒に包埋または混合するステップを含む、請求項1に記載の方法。
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