JP2006016337A - フィラグリン産生促進剤及び皮膚化粧料 - Google Patents

Abstract

【課題】 皮膚の保湿機能の向上に関与するフィラグリンの前駆体であるプロフィラグリンのｍＲＮＡ発現量を促進するフィラグリン産生促進剤及び該フィラグリン産生促進剤を含有する皮膚化粧料の提供。
【解決手段】 ワイルドタイム抽出物、チョウジ抽出物、サルビア抽出物、ローヤルゼリー抽出物、シイタケ抽出物、ジオウ抽出物、カミツレ抽出物、アルニカ抽出物、アロエ抽出物、オウゴン抽出物及びオウバク抽出物から選択される少なくとも１種を含有することを特徴とするフィラグリン産生促進剤である。該フィラグリン産生促進剤を含有してなる皮膚化粧料である。
【選択図】 なし

Description

本発明は、皮膚の保湿機能の向上に関与するフィラグリンの前駆体であるプロフィラグリンのｍＲＮＡ発現量を促進するフィラグリン産生促進剤及び該フィラグリン産生促進剤を含有する皮膚化粧料に関する。

天然保湿因子（Ｎａｔｕｒａｌ Ｍｏｉｓｔｕｒｉｚｉｎｇ Ｆａｃｔｏｒｓ；ＮＭＦ）の主成分であるアミノ酸は、ケラトヒアリン顆粒に由来するフィラグリンが角質層内で分解されて産生される。このフィラグリンは、角質層直下の顆粒層に存在する表皮ケラチノサイトでプロフィラグリンとして発現する。その後、直ちにリン酸化し、ケラトヒアリン顆粒に蓄積され、脱リン酸，加水分解を経てフィラグリンへと分解され、角質層に移行して、ケラチンフィラメントの凝集効率を高め、角質細胞の内部構築に関与することが報告されている（非特許文献１参照）。

近年、このフィラグリンが皮膚の水分保持に非常に重要かつ必要不可欠であること、及び乾燥などの条件によってフィラグリンの合成力が低下し、角質層におけるアミノ酸量が低下することが報告されている（非特許文献２参照）。
従って、表皮ケラチノサイトにおいてプロフィラグリンｍＲＮＡの発現促進を通じて、フィラグリンの合成を促進することによって角質層内のアミノ酸量を増大させ、角質層の水分環境を本質的に改善できることが期待される。
このため、フィラグリン合成促進剤としては、例えば、カンゾウ抽出物（特許文献１参照）、天然植物中に含まれるフラバノン配糖体として知られるリクイリチン（特許文献２参照）、プロフィラグリン及びフィラグリン蛋白産生促進剤の少なくともいずれかとして、Ｃｉｔｒｕｓ属に属する植物エキス又は酵母エキス（特許文献３参照）、などが提案されている。

しかしながら、高いプロフィラグリンｍＲＮＡ発現促進作用を有し、安価であり、安全性の高いフィラグリン合成促進剤に対する消費者の要望は強く、更なる新しいフィラグリン合成促進剤の開発及びその提供が強く求められているのが現状である。

特開２００２−３６３０５４公報 特開２００３−１４６８８６公報 特開２００１−２６１５６８公報 フレグランスジャーナル臨時増刊 Ｖｏｌ．１７、p１４−１９、２０００年発行 「Ａｒｃｈ． Ｄｅｒｍａｔｏｌ. Ｒｅｓ．」Ｖｏｌ．２８８、p.４４２−４４６、１９９６年発行

本発明は、前記従来における問題を解決し、以下の目的を達成することを課題とする、即ち、本発明は、皮膚の保湿機能の向上に関与するフィラグリンの前駆体であるプロフィラグリンのｍＲＮＡ発現量を促進するフィラグリン産生促進剤及び該フィラグリン産生促進剤を含有し、皮膚の保湿効果を発揮することができると共に、皮膚に適用した場合の使用感と安全性に優れた皮膚化粧料を提供することを目的とする。

前記課題を解決するため、本発明者らが鋭意検討を行った結果、ワイルドタイム抽出物、チョウジ抽出物、サルビア抽出物、ローヤルゼリー抽出物、シイタケ抽出物、ジオウ抽出物、カミツレ抽出物、アルニカ抽出物、アロエ抽出物、オウゴン抽出物及びオウバク抽出物から選択される少なくとも１種が、優れたプロフィラグリンｍＲＮＡ発現促進作用を有し、表皮細胞におけるプロフィラグリンｍＲＮＡ発現促進作用を通じてフィラグリンの産生を促進させて、乾燥肌、しわ、肌荒れ、アトピー性皮膚炎の改善及び予防ができることを知見した。

本発明は、本発明者らによる前記知見に基づくものであり、前記課題を解決するための手段としては、以下の通りである。即ち、
＜１＞ ワイルドタイム抽出物、チョウジ抽出物、サルビア抽出物、ローヤルゼリー抽出物、シイタケ抽出物、ジオウ抽出物、カミツレ抽出物、アルニカ抽出物、アロエ抽出物、オウゴン抽出物及びオウバク抽出物から選択される少なくとも１種を含有することを特徴とするフィラグリン産生促進剤である。
＜２＞ ワイルドタイム抽出物、チョウジ抽出物、サルビア抽出物及びローヤルゼリー抽出物から選択される少なくとも１種を含有する前記＜１＞に記載のフィラグリン産生促進剤である。
＜３＞ 前記＜１＞から＜２＞のいずれかに記載のフィラグリン産生促進剤を含有することを特徴とする皮膚化粧料である。

本発明によると、ワイルドタイム抽出物、チョウジ抽出物、サルビア抽出物、ローヤルゼリー抽出物、シイタケ抽出物、ジオウ抽出物、カミツレ抽出物、アルニカ抽出物、アロエ抽出物、オウゴン抽出物及びオウバク抽出物から選択される少なくとも１種を含有してなるフィラグリン産生促進剤が、優れたプロフィラグリンｍＲＮＡ発現促進作用を有し、皮膚の保湿効果を発揮すると共に、皮膚に適用した場合の使用感と安全性に優れているので、皮膚化粧料の配合成分として有用である。

（フィラグリン産生促進剤）
本発明のフィラグリン産生促進剤は、ワイルドタイム抽出物、チョウジ抽出物、サルビア抽出物、ローヤルゼリー抽出物、シイタケ抽出物、ジオウ抽出物、カミツレ抽出物、アルニカ抽出物、アロエ抽出物、オウゴン抽出物及びオウバク抽出物から選択される少なくとも１種を含有してなり、更に必要に応じてその他の成分を含有してなる。
この場合、ワイルドタイム抽出物、チョウジ抽出物、サルビア抽出物及びローヤルゼリー抽出物から選択される少なくとも１種が、特にプロフィラグリンｍＲＮＡ発現促進作用が高い点で好ましい。

前記ワイルドタイムは、シソ科（Ｌａｂｉａｔａｅ）の植物であり、学名はＴｈｙｍｕｓ ｓｅｒｐｙｌｌｕｍ Ｌ．である。抽出原料となる構成部位としては、特に制限はなく、目的に応じて適宜選定することができ、例えば、葉、茎、花、果実、果皮、果核、地上部、又はこれらの混合物が挙げられ、これらの中でも、地上部が特に好ましい。

前記チョウジは、フトモモ科（Ｍｙｒｔａｃｅａｅ）の植物であり、学名はＳｙｚｙｇｉｕｍ ａｒｏｍａｔｉｃｕｍ Ｍｅｒｒｉｌｌ ｅｔ Ｐｅｒｒｙである。抽出原料となる構成部位としては、特に制限はなく、目的に応じて適宜選定することができ、例えば、葉、茎、花、蕾、果実、果皮、果核、地上部又はこれらの混合物が挙げられ、これらの中でも、蕾が特に好ましい。

前記サルビアは、シソ科（Ｌａｂｉａｔａｅ）の植物であり、学名はＳａｌｖｉａ ｏｆｆｉｃｉｎａｌｉｓ Ｌ．である。抽出原料となる構成部位としては、特に制限はなく、目的に応じて適宜選定することができ、例えば、葉、茎、根、花、果実、果皮、果核、全草、又はこれらの混合物などが挙げられ、これらの中でも、葉が特に好ましい。

前記ローヤルゼリーは、ミツバチ科（Ａｐｉｄａｅ）のミツバチの咽頭分泌物であり、学名はヨーロッパミツバチ（Ａｐｉｓ ｍｅｌｉｆｉｃａ Ｌ．）である。ヨーロッパミツバチの咽頭部から分泌されるローヤルゼリーのエタノール抽出物が用いられる。

前記シイタケは、マツタケ科（Ａｇａｒｉｃａｃｅａｅ）に属し、学名はＣｏｒｔｉｎｅｌｌｕｓ ｓｈｉｉｔａｋｅ Ｐ．Ｈｅｎｎ．である。抽出原料となる構成部位としては、特に制限はなく、目的に応じて適宜選定することができ、これらの中でも、子実体が特に好ましい。

前記ジオウは、ゴマノハグサ科（Ｓｃｒｏｐｈｕｌａｒｉａｃｅａｅ）の植物であり、学名はＲｅｈｍａｎｎｉａ ｇｌｕｔｉｎｏｓａ Ｌｉｂｏｓｃｈｉｔｚｖａｒ．ｐｕｒｐｕｒｅａ Ｍａｋｉｎｏである。抽出原料となる構成部位としては、特に制限はなく、目的に応じて適宜選定することができ、例えば、葉、茎、根、花、果実、果皮、果核、全草、又はこれらの混合物が挙げられ、これらの中でも、根が特に好ましい。

前記カミツレは、キク科（Ｃｏｍｐｏｓｉｔａｅ）の植物であり、学名はＭａｔｒｉｃａｒｉａ ｃｈａｍｏｍｉｌｌａ Ｌ．である。抽出原料となる構成部位としては、特に制限はなく、目的に応じて適宜選定することができ、例えば、葉、茎、根、花、果実、果皮、果核、全草、又はこれらの混合物が挙げられ、これらの中でも、花が特に好ましい。

前記アルニカは、キク科（Ｃｏｍｐｏｓｉｔａｅ）の植物であり、学名はＡｒｎｉｃａ ｍｏｎｔａｎａ Ｌ．である。抽出原料となる構成部位としては、特に制限はなく、目的に応じて適宜選定することができ、例えば、葉、茎、根、花、果実、果皮、果核、全草、又はこれらの混合物が挙げられ、これらの中でも、花が特に好ましい。

前記アロエは、ユリ科（Ｌｉｌｉａｃｅａｅ）の植物であり、学名はＡｌｏｅ ｆｅｒｏｘ；ａｆｒｉｃａｎａ Ｍｉｌｌｅｒである。抽出原料となる構成部位としては、特に制限はなく、目的に応じて適宜選定することができ、例えば、葉、茎、根、花、果実、果皮、果核、全草、又はこれらの混合物が挙げられ、これらの中でも、葉が特に好ましい。

前記オウゴンは、シソ科（Ｌａｂｉａｔａｅ）の植物であり、学名はＳｃｕｔｅｌｌａｒｉａ ｂａｉｃａｌｅｎｓｉｓ Ｇｅｏｒｇｉである。抽出原料となる構成部位としては、特に制限はなく、目的に応じて適宜選定することができ、例えば、葉、茎、花、根、果実、果皮、果核、又はこれらの混合物が挙げられ、これらの中でも、根が特に好ましい。

前記オウバクは、ミカン科（Ｒｕｔａｃｅａｅ）の植物であり、学名はＰｈｅｌｌｏｄｅｎｄｒｏｎ ａｍｕｒｅｎｓｅ Ｒｕｐｒｅｃｈｔである。抽出原料となる構成部位としては、特に制限はなく、目的に応じて適宜選定することができ、例えば、葉、茎、花、根、樹皮、果実、果皮、果核、又はこれらの混合物が挙げられ、これらの中でも、樹皮が特に好ましい。

前記ワイルドタイム抽出物、チョウジ抽出物、サルビア抽出物、ローヤルゼリー抽出物、シイタケ抽出物、ジオウ抽出物、カミツレ抽出物、アルニカ抽出物、アロエ抽出物、オウゴン抽出物、又はオウバク抽出物が含有する有効成分であるプロフィラグリンｍＲＮＡ発現促進作用物質の詳細については不明であるが、これら有効成分は植物の抽出に一般に用いられている方法により抽出したものを使用してもよいし、市販品を使用してもよい。
前記抽出物には、抽出液、該抽出液の希釈液を乾燥して得られる乾燥物、又はこれらの粗精製物もしくは精製物のいずれもが含まれる。

前記抽出原料は、乾燥した後、そのまま又は粗砕機を用い粉砕して溶媒抽出に供することができる。乾燥は天日で行ってもよいし、通常使用される乾燥機を用いて行ってもよい。なお、前記抽出原料は、ヘキサン、ベンゼン等の非極性溶媒によって脱脂等の前処理を施してから抽出原料として使用してもよい。なお、脱脂等の前処理を行うことにより、抽出原料の極性溶媒による抽出処理を効率よく行うことができる。

前記抽出に用いる溶媒としては、水若しくは親水性有機溶媒又はこれらの混合液を室温又は溶媒の沸点以下の温度で用いることが好ましい。
前記抽出溶媒として使用し得る水としては、例えば、純水、水道水、井戸水、鉱泉水、鉱水、温泉水、湧水、淡水等の他、これらに各種処理を施したものが含まれる。水に施す処理としては、例えば、精製、加熱、殺菌、ろ過、イオン交換、浸透圧の調整、緩衝化等が含まれる。従って、本発明において抽出溶媒として使用し得る水には、精製水、熱水、イオン交換水、生理食塩水、リン酸緩衝液、リン酸緩衝生理食塩水等も含まれる。

前記親水性有機溶媒としては、例えば、メタノール、エタノール、プロピルアルコール、イソプロピルアルコール等の炭素数１〜５の低級アルコール；アセトン、メチルエチルケトン等の低級脂肪族ケトン；１，３−ブチレングリコール、プロピレングリコール、グリセリン等の炭素数２〜５の多価アルコールなどが挙げられ、これら親水性有機溶媒と水との混合溶媒などを用いることができる。
なお、前記水と親水性有機溶媒との混合溶媒を使用する場合には、低級アルコールの場合は水１０質量部に対して１〜９０質量部、低級脂肪族ケトンの場合は水１０質量部に対して１〜４０質量部添加することが好ましい。多価アルコールの場合は水１０質量部に対して１〜９０質量部添加することが好ましい。

本発明において、前記各抽出原料からプロフィラグリンｍＲＮＡ発現促進作用物質を抽出するにあたって特殊な抽出方法を採用する必要はなく、室温又は還流加熱下で、任意の装置を用いて抽出することができる。

具体的には、抽出溶媒を満たした処理槽に各抽出原料を投入し、更に必要に応じて時々攪拌しながら、３０分〜２時間静置して可溶性成分を溶出した後、ろ過して固形物を除去し、得られた抽出液から抽出溶媒を留去し、乾燥することにより抽出物が得られる。抽出溶媒量は通常、抽出原料の５〜１５倍量（質量比）である。抽出条件は、抽出溶媒として水を用いた場合には、通常５０〜９５℃にて１〜４時間程度である。また、抽出溶媒として水とエタノールとの混合溶媒を用いた場合には、通常４０〜８０℃にて３０分〜４時間程度である。なお、溶媒で抽出することにより得られる抽出液は、抽出溶媒が安全性の高いものであればそのまま配合して本発明のフィラグリン産生促進剤の有効成分として用いることができる。

得られた抽出液は、該抽出液の希釈液若しくは濃縮液、該抽出液の乾燥物、又はこれらの粗精製物若しくは精製物を得るために、常法に従って希釈、濃縮、乾燥、精製等の処理を施してもよい。

なお、得られた抽出液はそのままでもフィラグリン産生促進剤として使用することができるが、濃縮液又はその乾燥物としたものの方が利用しやすい。抽出液の乾燥物を得るにあたっては、吸湿性を改善するためにデキストリン、シクロデキストリン等のキャリアーを添加してもよい。また、各抽出原料は特有の匂いと味を有しているため、その生理活性の低下を招かない範囲で脱色、脱臭等を目的とする精製を行うことも可能であるが、化粧料に添加する場合には大量に使用するものではないから、未精製のままでも実用上支障はない。精製は、具体的には活性炭処理、吸着樹脂処理、イオン交換樹脂処理等によって行うことができる。

本発明のフィラグリン産生促進剤は、特に制限はなく、目的に応じて適宜選択することができるが、製剤化により粉末状、顆粒状、錠剤状等、任意の剤形とすることができる。
また、本発明のフィラグリン産生促進剤は、経皮的に吸収されて、プロフィラグリンｍＲＮＡの発現促進を通じて皮膚におけるフィラグリン産生を促進することができ、保湿効果を発揮することができるとともに、皮膚に適用した場合の使用感と安全性に優れているため、各種用途に用いることができるが、以下の本発明の皮膚化粧料に特に好適に用いることができる。

（皮膚化粧料）
本発明の皮膚化粧料は、本発明の前記フィラグリン産生促進剤を少なくとも含有してなり、更に必要に応じて適宜選択したその他の成分を含有してなる。

前記皮膚化粧料の用途としては、特に制限はなく、各種用途から適宜選択することができ、例えば、軟膏、クリーム、乳液、ローション、パック、ゼリー、リップクリーム、口紅、入浴剤、トニック、リンス、シャンプー、アストリンゼント、などが挙げられる。

前記皮膚化粧料におけるプロフィラグリンｍＲＮＡ発現促進剤の配合量は、皮膚化粧料の種類や各抽出物の生理活性等によって適宜調製することができるが、好適な配合率は固形分換算して０．００１〜５０質量％が好ましく、０．０１〜１０質量％がより好ましい。

本発明の皮膚化粧料には、プロフィラグリンｍＲＮＡ発現促進作用の妨げにならない限り特に制限はなく、皮膚化粧料の製造に通常使用される各種主剤及び助剤、その他任意の助剤を配合することができる。前記その他の成分としては、例えば、美白剤、収斂剤、殺菌・抗菌剤、紫外線吸収剤、細胞賦活剤、消炎・抗アレルギー剤、抗酸化・活性酸素除去剤、油脂類、ロウ類、炭化水素類、脂肪酸類、アルコール類、エステル類、界面活性剤、香料、などが挙げられる。これらの成分は、フィラグリン産生促進剤と共に併用した場合、相乗的に作用して、通常期待される以上の優れた使用効果をもたらすことがある。

なお、本発明のフィラグリン産生促進剤、及び皮膚化粧料は、ヒトに対して好適に適用されるものであるが、それぞれの作用効果が奏される限り、ヒト以外の動物に対して適用することもできる。

以下、本発明の実施例を説明するが、本発明は、これらの実施例に何ら限定されるものではない。

（製造例１）
−ワイルドタイム抽出物の製造−
ワイルドタイムの地上部の乾燥物を細切りしたもの２００ｇに対し５０質量％エタノール（水とエタノールとの質量比１：１）２０００ｍＬを加え、還流抽出器で８０℃にて２時間加熱抽出し、熱時濾過した。残渣について更に同様の抽出処理を行った。得られた抽出液を合わせて減圧下に濃縮し、乾燥してワイルドタイムの抽出物８．５ｇを得た。

（製造例２）
−チョウジ抽出物の製造−
チョウジの蕾の乾燥物を細切りしたもの２００ｇに対し５０質量％エタノール（水とエタノールとの質量比１：１）２０００ｍＬを加え、還流抽出器で８０℃にて２時間加熱抽出し、熱時濾過した。残渣について更に同様の抽出処理を行った。得られた抽出液を合わせて減圧下に濃縮し、乾燥してチョウジの抽出物１．０ｇを得た。

（製造例３）
−サルビア抽出物の製造−
サルビアの葉の乾燥物を細切りしたもの２００ｇに対し５０質量％エタノール（水とエタノールとの質量比１：１）２０００ｍＬを加え、還流抽出器で８０℃にて２時間加熱抽出し、熱時濾過した。残渣について更に同様の抽出処理を行った。得られた抽出液を合わせて減圧下に濃縮し、乾燥してサルビアの抽出物１０ｇを得た。

（製造例４）
−シイタケ抽出物の製造−
シイタケの子実体の乾燥物を細切りしたもの２００ｇに対し５０質量％エタノール（水とエタノールとの質量比１：１）２０００ｍＬを加え、還流抽出器で８０℃にて２時間加熱抽出し、熱時濾過した。残渣について更に同様の抽出処理を行った。得られた抽出液を合わせて減圧下に濃縮し、乾燥してシイタケの抽出物１５．５ｇを得た。

（製造例５）
−ジオウ抽出物の製造−
ジオウの根の乾燥物を細切りしたもの２００ｇに対し５０質量％エタノール（水とエタノールとの質量比１：１）２０００ｍＬを加え、還流抽出器で８０℃にて２時間加熱抽出し、熱時濾過した。残渣について更に同様の抽出処理を行った。得られた抽出液を合わせて減圧下に濃縮し、乾燥してジオウの抽出物３０ｇを得た。

（製造例６）
−カミツレ抽出物の製造−
カミツレの花の乾燥物を細切りしたもの２００ｇに対し５０質量％エタノール（水とエタノールとの質量比１：１）２０００ｍＬを加え、還流抽出器で８０℃にて２時間加熱抽出し、熱時濾過した。残渣について更に同様の抽出処理を行った。得られた抽出液を合わせて減圧下に濃縮し、乾燥してカミツレの抽出物１６．８ｇを得た。

（製造例７）
−アルニカ抽出物の製造−
アルニカの花の乾燥物を細切りしたもの２００ｇに対し５０質量％エタノール（水とエタノールとの質量比１：１）２０００ｍＬを加え、還流抽出器で８０℃にて２時間加熱抽出し、熱時濾過した。残渣について更に同様の抽出処理を行った。得られた抽出液を合わせて減圧下に濃縮し、乾燥してアルニカの抽出物１２ｇを得た。

（製造例８）
−アロエ抽出物の製造−
アロエの葉の乾燥物を細切りしたもの２００ｇに対し５０質量％エタノール（水とエタノールとの質量比１：１）２０００ｍＬを加え、還流抽出器で８０℃にて２時間加熱抽出し、熱時濾過した。残渣について更に同様の抽出処理を行った。得られた抽出液を合わせて減圧下に濃縮し、乾燥してアロエの抽出物５．６ｇを得た。

（製造例９）
−オウゴン抽出物の製造−
オウゴンの根の乾燥物を細切りしたもの２００ｇに対し５０質量％エタノール（水とエタノールとの質量比１：１）２０００ｍＬを加え、還流抽出器で８０℃にて２時間加熱抽出し、熱時濾過した。残渣について更に同様の抽出処理を行った。得られた抽出液を合わせて減圧下に濃縮し、乾燥してオウゴンの抽出物２０ｇを得た。

（製造例１０）
−オウバク抽出物の製造−
オウバクの樹皮の乾燥物を細切りしたもの２００ｇに対し５０質量％エタノール（水とエタノールとの質量比１：１）２０００ｍＬを加え、還流抽出器で８０℃にて２時間加熱抽出し、熱時濾過した。残渣について更に同様の抽出処理を行った。得られた抽出液を合わせて減圧下に濃縮し、乾燥してオウバクの抽出物１４ｇを得た。

（製造例１１）
−ローヤルゼリー抽出物の製造−
ヨーロッパミツバチ（Ａｐｉｓ ｍｅｌｉｆｉｃａ Ｌ．）の咽頭部から分泌されるローヤルゼリー１ｋｇに５０ｖ／ｖ％エタノール９．５Ｌを加えて、１０℃にて５時間撹拌した。これを５０００ｒｐｍで３０分間遠心分離し、得られた上澄液を集め、冷所にて１ヶ月間放置した。これをメンブランフィルター（２μｍ）で濾過し、ろ液に５０ｖ／ｖ％エタノールを追加し、全量を１０Ｌとした。これを真空凍結乾燥し、凍結乾燥物を得た。

（実施例１）
−プロフィラグリンｍＲＮＡ発現促進作用試験−
ヒト正常新生児表皮角化細胞（ＮＨＥＫ）をヒト正常新生児表皮角化細胞培地（ＫＧＭ）を用いて培養した後、トリプシン処理により細胞を回収した。回収した細胞を１×１０^５個／ｍＬの濃度になるようにＫＧＭで希釈した後、直径３５ｍｍシャーレに２ｍＬずつ播種し、一晩培養した。培養終了後、培地を抜き、ＫＧＭで溶解した所定濃度の各被験試料（製造例１〜１１の抽出物）を各シャーレに２ｍＬ添加して４８時間培養後、細胞を１ｍＬのＲＮＡ抽出用試薬（ＴＲＩｚｏｌ、インビトロジェン株式会社）で溶解し、クロロホルムを２００μＬ添加後、遠心（１２０００回転、４℃、１５分間）にて上層ＲＮＡ層を単離した。次いで、イソプロパノールで濃縮を行った。濃縮沈殿させた総ＲＮＡをＴＥ溶液（１０ｍＭ Ｔｒｉｓ−ＨＣｌ／１ｍＭ、ＥＤＴＡ、ｐＨ８．０）に溶解して、プロフィラグリンｍＲＮＡ発現量を測定するための定量的ＲＴ−ＰＣＲ法の鋳型に使用する総ＲＮＡ標品とした。
一方、対照として被験試料を無添加で培養した細胞について、上記同様にして総ＲＮＡを調製した。

次に、ＴａＫａＲａ社のＰＣＲ装置（ＴａＫａＲａ ＰＣＲ Ｔｈｅｒｍａｌ Ｃｙｃｌｅｒ ＭＰ）を用いて、一本鎖ＤＮＡを前記総ＲＮＡ標品５００ｎｇより合成した後、一本鎖ＤＮＡからプロフィラグリン遺伝子及び内部標準としてのＧ３ＰＤＨ遺伝子をそれぞれの遺伝子に特異的なプライマー（下記参照）を用いてＰＣＲ反応で増幅を行い、その増幅産物１０μＬを１．５％アガロースゲルにて電気泳動した。電気泳動後、エチジウムブロマイドで染色し、これをトランスイルミネーター下で、ＫＯＤＡＫ社のＤＣ１２０ ＺＯＯＭ Ｄｉｇｉｔａｌ ｃａｍｅｒａを用いて撮影後、ＫＯＤＡＫ １Ｄ Ｉｍａｇｅ Ａｎａｌｙｓｉｓ Ｓｏｆｔｗａｒｅ ＥＤＡＳ２９０ Ｖｅｒｓｉｏｎ３．５にてＲＴ−ＰＣＲ産物を定量的に測定した。なお、反応液の内容は、試薬（ＴａＫａＲａ ＰＣＲ Ｋｉｔ(ＡＭＶ) Ｖｅｒ２．１）添付資料に従った。

次に、被験試料無添加及び被験試料添加でそれぞれ培養した細胞から調製した総ＲＮＡ標品を基にして、ＲＴ−ＰＣＲ反応により増幅させたプロフィラグリンのバンド強度値をＧ３ＰＤＨのバンド強度値で除して補正値を求めた。そして、下記数式１からプロフィラグリンｍＲＮＡ発現促進率を求めた。結果を各被験試料ごとに表１〜表１１に示す。
＜数式１＞
プロフィラグリンｍＲＮＡ発現促進率（％）＝（Ａ／Ｂ）×１００
ただし、前記数式１中、Ａは被験試料添加時の補正値を表す。Ｂは被験試料無添加時（対照）の補正値を表す。

なお、プロフィラグリン遺伝子に対するセンスプライマー及びアンチセンスプライマーは、「Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ」Ｖｏｌ．２９（４０）、ｐ９４３２−９４４０、１９９０年発行に記載のプロフィラグリン遺伝子の塩基配列に基づき作製した。Ｇ３ＰＤＨ遺伝子に対するセンスプライマー及びアンチセンスプライマーは、「Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ．」Ｖｏｌ．４７（２１）、ｐ５６１６−５６１９、１９８７年発行に記載のＧ３ＰＤＨ遺伝子の塩基配列に基づき作製した。

表１〜表１１の結果から、ワイルドタイム抽出物、チョウジ抽出物、サルビア抽出物、ローヤルゼリー抽出物、シイタケ抽出物、ジオウ抽出物、カミツレ抽出物、アルニカ抽出物、アロエ抽出物、オウゴン抽出物、又はオウバク抽出物が、皮膚の保湿機能の向上に関与するフィラグリンの前駆体であるプロフィラグリンのｍＲＮＡ発現量を促進する作用を有することが確認できた。これらの中でも、ワイルドタイム抽出物、チョウジ抽出物、サルビア抽出物、及びローヤルゼリー抽出物が特に高いプロフィラグリンｍＲＮＡ発現作用を有することが認められる。

（配合実施例１） −乳液−
下記の組成の乳液を常法により製造した。
ホホバオイル ４．０ｇ
オリーブオイル ２．０ｇ
アロエエキス ２．０ｇ
パセリエキス ２．０ｇ
ヒアルロン酸ナトリウム ０．５ｇ
スクワラン ２．０ｇ
セタノール ２．０ｇ
モノステアリン酸グリセリル ２．０ｇ
ポリオキシエチレンセチルエーテル（２０Ｅ．０） ２．５ｇ
オレイン酸ポリオキシエチレンソルビタン（２０Ｅ．０） ２．０ｇ
３−ブチレングリコール ３．０ｇ
パラオキシ安息香酸メチル ０．１５ｇ
香料 ０．０５ｇ
ワイルドタイム抽出物（製造例１） １．０ｇ
精製水 残部
合計 １００．０ｇ

（配合実施例２） −乳液−
下記の組成の乳液を常法により製造した。
ホホバオイル ４．０ｇ
オリーブオイル ２．０ｇ
アロエエキス ２．０ｇ
パセリエキス ２．０ｇ
ヒアルロン酸ナトリウム ０．５ｇ
スクワラン ２．０ｇ
セタノール ２．０ｇ
モノステアリン酸グリセリル ２．０ｇ
ポリオキシエチレンセチルエーテル（２０Ｅ．０） ２．５ｇ
オレイン酸ポリオキシエチレンソルビタン（２０Ｅ．０） ２．０ｇ
３−ブチレングリコール ３．０ｇ
パラオキシ安息香酸メチル ０．１５ｇ
香料 ０．０５ｇ
シイタケ抽出物（製造例４） １．０ｇ
精製水 残部
合計 １００．０ｇ

（配合実施例３） −化粧水−
下記の組成の化粧水を常法により製造した。
グリセリン ３．０ｇ
３−ブチレングリコール ３．０ｇ
オレイン酸ポリオキシエチレンソルビタン（２０Ｅ．０） ０．５ｇ
パラオキシ安息香酸メチル ０．１５ｇ
クエン酸 ０．１ｇ
クエン酸ソーダ ０．１ｇ
ビタミンＥ ０．１ｇ
ハマメリスエキス １．０ｇ
香料 ０．０５ｇ
サルビア抽出物（製造例３） １．０ｇ
精製水 残部
合計 １００．０ｇ

（配合実施例４） −化粧水−
下記の組成の化粧水を常法により製造した。
グリセリン ３．０ｇ
３−ブチレングリコール ３．０ｇ
オレイン酸ポリオキシエチレンソルビタン（２０Ｅ.０) ０．５ｇ
パラオキシ安息香酸メチル ０．１５ｇ
クエン酸 ０．１ｇ
クエン酸ソーダ ０．１ｇ
ビタミンＥ ０．１ｇ
ハマメリスエキス １．０ｇ
香料 ０．０５ｇ
アロエ抽出物（製造例８） １．０ｇ
精製水 残部
合計 １００．０ｇ

（配合実施例５） −クリーム−
下記の組成のクリームを常法により製造した。
流動パラフィン ５．０ｇ
サラシミツロウ ４．０ｇ
セタノール ３．０ｇ
スクワラン １０．０ｇ
ラノリン ２．０ｇ
ステアリン酸 １．０ｇ
オレイン酸ポリオキシエチレンソルビタン（２０Ｅ.０) １．５ｇ
モノステアリン酸グリセリル ３．０ｇ
３−ブチレングリコール ６．０ｇ
パラオキシ安息香酸メチル １．５ｇ
アミノ酸・糖混合物 ０．５ｇ
酵母エキス ０．５ｇ
カロットエキス ０．５ｇ
α−ヒドロキシ脂肪酸 ０．５ｇ
香料 ０．１ｇ
ローヤルゼリー抽出物（製造例１１） １．０ｇ
精製水 残部
合計 １００．０ｇ

（配合実施例５） −クリーム−
下記の組成のクリームを常法により製造した。
流動パラフィン ５．０ｇ
サラシミツロウ ４．０ｇ
セタノール ３．０ｇ
スクワラン １０．０ｇ
ラノリン ２．０ｇ
ステアリン酸 １．０ｇ
オレイン酸ポリオキシエチレンソルビタン（２０Ｅ.０) １．５ｇ
モノステアリン酸グリセリル ３．０ｇ
３−ブチレングリコール ６．０ｇ
パラオキシ安息香酸メチル １．５ｇ
アミノ酸・糖混合物 ０．５ｇ
酵母エキス ０．５ｇ
カロットエキス ０．５ｇ
α−ヒドロキシ脂肪酸 ０．５ｇ
香料 ０．１ｇ
オウゴン抽出物（製造例９） １．０ｇ
精製水 残部
合計 １００．０ｇ

（配合実施例６） −パック−
下記の組成のパックを常法により製造した。
ポリビニルアルコール １５．０ｇ
ポリエチレングリコール ３．０ｇ
プロピレングリコール ７．０ｇ
エタノール １０．０ｇ
パラオキシ安息香酸エチル ０．０５ｇ
香料 ０．０５ｇ
グリチルリチン酸ジカリウム ０．１ｇ
Ｌ−アルギニン ０．５ｇ
カミツレ抽出物（製造例６） ５．０ｇ
精製水 残部
合計 １００．０ｇ

（配合実施例７） −パック−
下記の組成のパックを常法により製造した。
ポリビニルアルコール １５．０ｇ
ポリエチレングリコール ３．０ｇ
プロピレングリコール ７．０ｇ
エタノール １０．０ｇ
パラオキシ安息香酸エチル ０．０５ｇ
香料 ０．０５ｇ
グリチルリチン酸ジカリウム ０．１ｇ
Ｌ−アルギニン ０．５ｇ
オウバク抽出物（製造例１０） ５．０ｇ
精製水 残部
合計 １００．０ｇ

本発明のフィラグリン産生促進剤は、優れたプロフィラグリンｍＲＮＡ発現作用を有し、皮膚の保湿効果を発揮でき、安全性にも優れているので、軟膏、クリーム、乳液、ローション、パック、ゼリー、リップクリーム、口紅、入浴剤、トニック、リンス、シャンプー、アストリンゼント等の皮膚化粧料に幅広く用いられる。

Claims (3)

1. ワイルドタイム抽出物、チョウジ抽出物、サルビア抽出物、ローヤルゼリー抽出物、シイタケ抽出物、ジオウ抽出物、カミツレ抽出物、アルニカ抽出物、アロエ抽出物、オウゴン抽出物及びオウバク抽出物から選択される少なくとも１種を含有することを特徴とするフィラグリン産生促進剤。
2. ワイルドタイム抽出物、チョウジ抽出物、サルビア抽出物及びローヤルゼリー抽出物から選択される少なくとも１種を含有する請求項１に記載のフィラグリン産生促進剤。
3. 請求項１から２のいずれかに記載のフィラグリン産生促進剤を含有することを特徴とする皮膚化粧料。