JP2009184955A - IV型コラーゲン産生促進剤、トランスグルタミナーゼ−1産生促進剤、セリンパルミトイルトランスフェラーゼ産生促進剤、アクアポリン3産生促進剤、インボルクリン産生促進剤、HMG−CoA還元酵素産生促進剤、及び、アデノシン三リン酸産生促進剤。 - Google Patents
IV型コラーゲン産生促進剤、トランスグルタミナーゼ−1産生促進剤、セリンパルミトイルトランスフェラーゼ産生促進剤、アクアポリン3産生促進剤、インボルクリン産生促進剤、HMG−CoA還元酵素産生促進剤、及び、アデノシン三リン酸産生促進剤。 Download PDFInfo
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Abstract
【解決手段】ローヤルゼリー抽出物を有効成分として含有することを特徴とするIV型コラーゲン産生促進剤、トランスグルタミナーゼ−1産生促進剤、セリンパルミトイルトランスフェラーゼ(SPT)産生促進剤、アクアポリン3(AQP3)産生促進剤、インボルクリン産生促進剤、HMG−CoA還元酵素(HMGCR)産生促進剤、及び、アデノシン三リン酸(ATP)産生促進剤である。
【選択図】なし
Description
しかし、様々な要因で表皮におけるトランスグルタミナーゼ−1或いはインボルクリンの産生量が減少すると、コーニファイドエンベロープ(CE)形成が不完全な状態となり、角化が正常に行われなくなる。その結果、角質バリア機能及び皮膚の保湿機能が低下し、肌荒れや乾燥肌等の皮膚症状を呈するようになると考えられる。
このようなことから、角化細胞の表皮におけるインボルクリンやトランスグルタミナーゼ−1の産生を高め、コーニファイドエンベロープの形成を促進して角化を正常化することによれば、乾燥や紫外線等の外部刺激に伴う皮膚バリア機能の低下を抑制し、肌の乾燥や肌荒れなど、様々な皮膚症状を予防・改善することができると考えられる。
最近の研究において、加齢、或いはバリア障害として知られるアトピー性皮膚炎患者で、この細胞間脂質の減少や組成変化が報告されており(非特許文献1参照)、バリア機能の維持、改善にセラミドやコレステロールが重要であることが広く認識されるようになった。例えば、バリア機能を改善する方法として、セラミドを外部から補う方法(非特許文献2参照)や、皮膚内部においてセラミド産生能を高める方法(非特許文献3参照)などが種々検討されている。
このようなことから、セラミド合成の律速酵素として知られるセリンパルミトイルトランスフェラーゼや、コレステロールの律速酵素として知られるHMG−CoA還元酵素の産生を促進することによれば、細胞間脂質の構成成分であるセラミドやコレステロールの産生能を高め、皮膚のバリア機能や水分保持機能を向上させ、乾燥肌、肌荒れ、小じわ、アトピー性皮膚炎など、様々な皮膚症状を予防・改善することができると考えられる。
また、アクアポリン3(AQP3)は、表皮細胞における水の通り道として知られる膜タンパク質である。アクアポリン3の産生を高めることによれば、水分の通り道をケアすることにより、肌の潤いを高め、皮膚のバリア機能の強化を図ることができると考えられる。
また、アデノシン3リン酸(ATP)は、生体内で用いられるエネルギー成分である。ATPの産生を高めることによれば、肌細胞に活力を与え、結果的にくすんだ肌や疲れた肌の改善など、様々な皮膚症状の予防・改善に繋がると考えられる。
また、本発明は、第二に、優れたトランスグルタミナーゼ−1産生促進作用を有し、かつ安全性の高いトランスグルタミナーゼ−1産生促進剤を提供することを目的とする。
また、本発明は、第三に、優れたセリンパルミトイルトランスフェラーゼ産生促進作用を有し、かつ安全性の高いセリンパルミトイルトランスフェラーゼ産生促進剤を提供することを目的とする。
また、本発明は、第四に、優れたアクアポリン3産生促進作用を有し、かつ安全性の高いアクアポリン3産生促進剤を提供することを目的とする。
また、本発明は、第五に、優れたインボルクリン産生促進作用を有し、かつ安全性の高いインボルクリン産生促進剤を提供することを目的とする。
また、本発明は、第六に、優れたHMG−CoA還元酵素産生促進作用を有し、かつ安全性の高いHMG−CoA還元酵素産生促進剤を提供することを目的とする。
また、本発明は、第七に、優れたアデノシン三リン酸産生促進作用を有し、かつ安全性の高いアデノシン三リン酸産生促進剤を提供することを目的とする。
ローヤルゼリーは、更年期障害の改善、老化防止、免疫力向上等の目的で、従来から栄養補助食品等に配合され、使用されているが、従来の技術においては、ローヤルゼリーがどのような作用を介してそれらの効果を発揮するかについて、何ら解明がなされていなかった。本発明は、ローヤルゼリー抽出物が、前記したような具体的な各作用を有していることを見出したことに基づくものであり、これにより、各作用に基づくローヤルゼリー抽出物の、新たな利用の可能性をも提供することができる。
<1> ローヤルゼリー抽出物を有効成分として含有することを特徴とするIV型コラーゲン産生促進剤である。
<2> ローヤルゼリー抽出物を有効成分として含有することを特徴とするトランスグルタミナーゼ−1産生促進剤である。
<3> ローヤルゼリー抽出物を有効成分として含有することを特徴とするセリンパルミトイルトランスフェラーゼ産生促進剤である。
<4> ローヤルゼリー抽出物を有効成分として含有することを特徴とするアクアポリン3産生促進剤である。
<5> ローヤルゼリー抽出物を有効成分として含有することを特徴とするインボルクリン産生促進剤である。
<6> ローヤルゼリー抽出物を有効成分として含有することを特徴とするHMG−CoA還元酵素産生促進剤である。
<7> ローヤルゼリー抽出物を有効成分として含有することを特徴とするアデノシン三リン酸産生促進剤である。
即ち、本発明によると、第一に、優れたIV型コラーゲン産生促進作用を有し、かつ安全性の高いIV型コラーゲン産生促進剤を提供することができる。
また、本発明によると、第二に、優れたトランスグルタミナーゼ−1産生促進作用を有し、かつ安全性の高いトランスグルタミナーゼ−1産生促進剤を提供することができる。
また、本発明によると、第三に、優れたセリンパルミトイルトランスフェラーゼ産生促進作用を有し、かつ安全性の高いセリンパルミトイルトランスフェラーゼ産生促進剤を提供することができる。
また、本発明によると、第四に、優れたアクアポリン3産生促進作用を有し、かつ安全性の高いアクアポリン3産生促進剤を提供することができる。
また、本発明によると、第五に、優れたインボルクリン産生促進作用を有し、かつ安全性の高いインボルクリン産生促進剤を提供することができる。
また、本発明によると、第六に、優れたHMG−CoA還元酵素産生促進作用を有し、かつ安全性の高いHMG−CoA還元酵素産生促進剤を提供することができる。
また、本発明によると、第七に、優れたアデノシン三リン酸産生促進作用を有し、かつ安全性の高いアデノシン三リン酸産生促進剤を提供することができる。
本発明のIV型コラーゲン産生促進剤、トランスグルタミナーゼ−1産生促進剤、セリンパルミトイルトランスフェラーゼ(以下、SPT)産生促進剤、アクアポリン3(以下、AQP3)産生促進剤、インボルクリン産生促進剤、HMG−CoA還元酵素(以下、HMGCR)産生促進剤、及び、アデノシン三リン酸(以下、ATP)産生促進剤は、ローヤルゼリー抽出物を含有してなり、更に必要に応じてその他の成分を含有してなる。
前記ローヤルゼリー抽出物が含有する、前記各作用(IV型コラーゲン産生促進作用、トランスグルタミナーゼ−1産生促進作用、SPT産生促進作用、AQP3産生促進作用、インボルクリン産生促進作用、HMGCR産生促進作用、及び、ATP産生促進作用)を発揮する物質の詳細については不明であるが、前記ローヤルゼリー抽出物がこのような優れた作用を有することは、従来には知られておらず、本発明者らによる新たな知見である。
具体的には、抽出溶媒を満たした処理槽内に、前記抽出原料を投入し、更に必要に応じて時々攪拌しながら、30分〜4時間静置して可溶性成分を溶出した後、ろ過して固形物を除去し、得られた抽出液から抽出溶媒を留去し、乾燥することにより抽出物を得ることができる。抽出溶媒量は通常、抽出原料の5〜15倍量(質量比)である。抽出条件は、抽出溶媒として水を用いた場合には、通常50〜95℃にて1〜4時間程度である。また、抽出溶媒として水とエタノールとの混合溶媒を用いた場合には、通常40〜80℃にて30分間〜4時間程度である。なお、溶媒で抽出することにより得られる抽出液は、抽出溶媒が安全性の高いものであれば、そのまま本発明のIV型コラーゲン産生促進剤、トランスグルタミナーゼ−1産生促進剤、SPT産生促進剤、AQP3産生促進剤、インボルクリン産生促進剤、HMGCR産生促進剤、及び、ATP産生促進剤の有効成分として用いることができる。
前記トランスグルタミナーゼ−1産生促進剤は、有効成分として含有されるローヤルゼリー抽出物の作用により、トランスグルタミナーゼ−1産生促進作用を発揮する。
前記SPT産生促進剤は、有効成分として含有されるローヤルゼリー抽出物の作用により、SPT産生促進作用を発揮する。
前記AQP3産生促進剤は、有効成分として含有されるローヤルゼリー抽出物の作用により、AQP3産生促進作用を発揮する。
前記インボルクリン産生促進剤は、有効成分として含有されるローヤルゼリー抽出物の作用により、インボルクリン産生促進作用を発揮する。
前記HMGCR産生促進剤は、有効成分として含有されるローヤルゼリー抽出物の作用により、HMGCR産生促進作用を発揮する。
前記ATP産生促進剤は、有効成分として含有されるローヤルゼリー抽出物の作用により、ATP産生促進作用を発揮する。
ヨーロッパミツバチ(Apis melifica L.)の咽頭部から分泌されるローヤルゼリー(生の状態のもの)1kgに50v/v%エタノール9.5Lを加えて、10℃にて5時間撹拌した。これを5000rpmで30分間遠心分離し、得られた上澄液を集め、冷所にて1ヶ月間放置した。これをろ過し、ろ液に50v/v%エタノールを追加し、全量を10Lとした。
ヨーロッパミツバチ(Apis melifica L.)の咽頭部から分泌されるローヤルゼリー(乾燥させた状態のもの)1kgに50v/v%エタノール9.5Lを加えて、10℃にて5時間撹拌した。これを5000rpmで30分間遠心分離し、得られた上澄液を集め、冷所にて1ヶ月間放置した。これをろ過し、ろ液に50v/v%エタノールを追加し、全量を10Lとした。
ヨーロッパミツバチ(Apis melifica L.)の咽頭部から分泌されるローヤルゼリー(生の状態のもの)1kgに50v/v%エタノール9.5Lを加えて、10℃にて5時間撹拌した。これを5000rpmで30分間遠心分離し、得られた上澄液を集め、冷所にて1ヶ月間放置した。これをろ過し、ろ液に50v/v%エタノールを追加し、全量を10Lとした。これを真空凍結乾燥し、凍結乾燥物を得た。
ヨーロッパミツバチ(Apis melifica L.)の咽頭部から分泌されるローヤルゼリー(乾燥させた状態のもの)1kgに50v/v%エタノール9.5Lを加えて、10℃にて5時間撹拌した。これを5000rpmで30分間遠心分離し、得られた上澄液を集め、冷所にて1ヶ月間放置した。これをろ過し、ろ液に50v/v%エタノールを追加し、全量を10Lとした。これを真空凍結乾燥し、凍結乾燥物を得た。
前記製造例3のローヤルゼリー抽出物を被験試料として用い、下記の試験方法によりIV型コラーゲン産生促進作用を試験した。
IV型コラーゲン産生促進作用の計算方法は以下のとおりである。
IV型コラーゲン産生促進率(%)=A/B×100
A:被験試料添加時のIV型コラーゲン量
B:被験試料無添加時のIV型コラーゲン量
前記製造例3のローヤルゼリー抽出物を被験試料として用い、下記の試験方法によりトランスグルタミナーゼ−1産生促進作用を試験した。
トランスグルタミナーゼ−1産生促進作用の計算方法は以下のとおりである。
トランスグルタミナーゼ−1産生促進率(%)=A/B×100
A:被験試料添加時の波長405nmにおける吸光度
B:被験試料無添加時(コントロール)の波長405nmにおける吸光度
前記製造例3のローヤルゼリー抽出物を被験試料として用い、下記の試験方法によりセリンパルミトイルトランスフェラーゼ(SPT)産生促進作用を試験した。
EpiLife−KG2を用いて35mmシャーレ(FALCON)に40×104cells/2mL/シャーレずつ播き、37℃、5%CO2下で一晩培養した。24時間後に培養液を捨て、EpiLife−KG2で必要濃度に溶解した被験試料を各シャーレに2mLずつ添加し、37℃、5%CO2下で24時間(製造例1〜2のローヤルゼリー抽出物を被験試料とした場合)、又は、48時間(製造例3〜4のローヤルゼリー抽出物を被験試料とした場合)培養した。培養後、培養液を捨て、ISOGEN(NIPPON GENE;Cat.no.311−02501)にてtotal RNAを抽出し、それぞれのRNA量を分光光度計にて測定し、200ng/μLになるようにtotalRNAを調製した。
このtotalRNAを鋳型とし、SPT及び内部標準であるGAPDHのmRNAの発現量を測定した。検出はリアルタイムPCR装置Smart Cycler(登録商標)(Cepheid社)を用いて、TaKaRa SYBR(登録商標)PrimeScriptTM RT−PCR Kit(Perfect Real Time)(code No.RR063A)によるリアルタイム2 Step RT−PCR反応により行った。SPTの発現量は、被験試料無添加、被験試料添加でそれぞれ培養した細胞から調製した総RNA標品を基にして、GAPDHの値で補正値を求め、さらに被験試料無添加の補正値を100とした時の被験試料添加の補正値を算出した。結果を表3に示す。
SPTmRNA発現促進作用の計算方法は以下の通りである。
SPTmRNA発現促進率(%)=A/B×100
A:被験試料添加時の補正値
B:被験試料無添加時の補正値
前記製造例3のローヤルゼリー抽出物を被験試料として用い、下記の試験方法によりアクアポリン3(AQP3)産生促進作用を試験した。
EpiLife−KG2を用いて35mmシャーレ(FALCON)に40×104cells/2mL/シャーレずつ播き、37℃、5%CO2下で一晩培養した。24時間後に培養液を捨て、EpiLife−KG2で必要濃度に溶解した被験試料を各シャーレに2mLずつ添加し、37℃、5%CO2下で24時間(製造例1〜2のローヤルゼリー抽出物を被験試料とした場合)、又は、48時間(製造例3〜4のローヤルゼリー抽出物を被験試料とした場合)培養した。培養後、培養液を捨て、ISOGEN(NIPPON GENE;Cat.no.311−02501)にてtotalRNAを抽出し、それぞれのRNA量を分光光度計にて測定し、200ng/μLになるようにtotalRNAを調製した。
このtotalRNAを鋳型とし、AQP3及び内部標準であるGAPDHのmRNAの発現量を測定した。検出はリアルタイムPCR装置Smart Cycler(登録商標)(Cepheid社)を用いて、TaKaRa SYBR(登録商標)PrimeScriptTM RT−PCR Kit(Perfect Real Time)(code No.RR063A)によるリアルタイム2 Step RT−PCR反応により行った。AQP3の発現量は、被験試料無添加、被験試料添加でそれぞれ培養した細胞から調製した総RNA標品を基にして、GAPDHの値で補正値を求め、さらに被験試料無添加の補正値を100とした時の被験試料添加の補正値を算出した。結果を表4に示す。
AQP3mRNA発現促進作用の計算方法は以下の通りである。
AQP3mRNA発現促進率(%)=A/B×100
A:被験試料添加時の補正値
B:被験試料無添加時の補正値
前記製造例3のローヤルゼリー抽出物を被験試料として用い、下記の試験方法によりインボルクリン産生促進作用を試験した。
インボルクリン産生促進作用の計算方法は以下のとおりである。
インボルクリン産生促進率(%)=A/B×100
A:被験試料添加時の波長405nmにおける吸光度
B:被験試料無添加時(コントロール)の波長405nmにおける吸光度
前記製造例3のローヤルゼリー抽出物を被験試料として用い、下記の試験方法によりHMG−CoA還元酵素(HMGCR)産生促進作用を試験した。
EpiLife−KG2を用いて35mmシャーレ(FALCON)に40×104cells/2mL/シャーレずつ播き、37℃、5%CO2下で一晩培養した。24時間後に培養液を捨て、EpiLife−KG2で必要濃度に溶解した被験試料を各シャーレに2mLずつ添加し、37℃、5%CO2下で24時間培養した。培養後、培養液を捨て、ISOGEN(NIPPON GENE;Cat.no.311−02501)にてtotalRNAを抽出し、それぞれのRNA量を分光光度計にて測定し、200ng/μLになるようにtotalRNAを調製した。
このtotalRNAを鋳型とし、HMGCR及び内部標準であるGAPDHのmRNAの発現量を測定した。検出はリアルタイムPCR装置Smart Cycler(登録商標)(Cepheid社)を用いて、TaKaRa SYBR(登録商標)PrimeScriptTM RT−PCR Kit(Perfect Real Time)(code No.RR063A)によるリアルタイム2 Step RT−PCR反応により行った。HMGCRの発現量は、被験試料無添加、被験試料添加でそれぞれ培養した細胞から調製した総RNA標品を基にして、GAPDHの値で補正値を求め、さらに被験試料無添加の補正値を100とした時の被験試料添加の補正値を算出した。結果を表6に示す。
HMGCRmRNA発現促進作用の計算方法は以下の通りである。
HMGCRmRNA発現促進率(%)=A/B×100
A:被験試料添加時の補正値
B:被験試料無添加時の補正値
前記製造例3のローヤルゼリー抽出物を被験試料として用い、下記の試験方法によりアデノシン三リン酸(ATP)産生促進作用を試験した。
ATP産生促進作用の計算方法は以下のとおりである。
ATP産生促進率(%)=A/B×100
A:被験試料を添加した細胞での化学発光量
B:被験試料を添加しない細胞での化学発光量
Claims (7)
- ローヤルゼリー抽出物を有効成分として含有することを特徴とするIV型コラーゲン産生促進剤。
- ローヤルゼリー抽出物を有効成分として含有することを特徴とするトランスグルタミナーゼ−1産生促進剤。
- ローヤルゼリー抽出物を有効成分として含有することを特徴とするセリンパルミトイルトランスフェラーゼ産生促進剤。
- ローヤルゼリー抽出物を有効成分として含有することを特徴とするアクアポリン3産生促進剤。
- ローヤルゼリー抽出物を有効成分として含有することを特徴とするインボルクリン産生促進剤。
- ローヤルゼリー抽出物を有効成分として含有することを特徴とするHMG−CoA還元酵素産生促進剤。
- ローヤルゼリー抽出物を有効成分として含有することを特徴とするアデノシン三リン酸産生促進剤。
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