KR101578908B1 - 항노화 및 주름개선에 활성을 갖는 대추붉은덕다리버섯 발효액 및 이를 유효성분으로 함유하는 의약품 및 향장 원료 - Google Patents

항노화 및 주름개선에 활성을 갖는 대추붉은덕다리버섯 발효액 및 이를 유효성분으로 함유하는 의약품 및 향장 원료 Download PDF

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Abstract

본 발명은 C. elegans에서 생명연장효능과 열스트레스와 산화적스트레스에 대해 저항성을 가지며, 콜라겐 생합성 효능이 있는 대추 붉은 덕다리버섯 발효액과 이를 유효성분으로 함유하는 주름개선 및 항노화 약물 및 향장원료에 관한 것이다. 본 발명의 대추 붉은 덕다리버섯 발효액은 C. elegans 노화를 억제하여 수명을 연장시키고, 열스트레스와 산화적스트레스에 대해 저항성을 가져 항노화 활성이 뛰어나며, 콜라겐 합성을 높여줌으로써 노화에 따른 주름의 진행을 억제, 주름개선에 유용하게 사용될 수 있다.

Description

항노화 및 주름개선에 활성을 갖는 대추붉은덕다리버섯 발효액 및 이를 유효성분으로 함유하는 의약품 및 향장 원료 {Extract of fermentative Zizyphus jujuba Fructus by Laetiporus sulphureus having lifespan extention of C. elegans via stress response and increasing collegen synthesis, and its cosmetic and therapeutic agent for wrinkle containing the same}
본 발명은 발효 대추추출물을 유효성분으로 함유하는 화장료 조성물에 관한 것으로, 좀더 구체적으로는 붉은덕다리버섯 균사체를 접종하고 발효시킴에 따라 항노화 및 주름개선용 화장료 조성물에 관한 것이다.
세포의 노화가 개체(인간, 동물)의 노화에 어느 정도 적용되는지 아직 정확히 알려진 바 없다. 단지 염색체 말단부분의 텔로미어(telomere)가 세포분열을 할 때 마다 단축되고 한계에 도달하면 세포가 죽는다는 설이 잘 알려져 있다. 최근에는 세포 간질의 주성분인 콜라겐이 80대가 되면 20대의 65%로 감소하여 노화에 관여한다는 연구가 있다. 그리고 세포내 소포체 스트레스에 의한 이상단백질 축적이 노화에 관여한다는 연구도 있다.
피부노화는 결합조직의 3대성분인 콜라겐, proteoglycan이 분자간 교차결합이나 측쇄 수식에 의해 경화하여 세포-세포외기질 상호작용에 변화를 초래한다. 또한 유극세포의 감소, 표피세포의 회전율(turn over, 보통 28일)은 70대에서 30대의 약 40%로 감소하여 피부 잡티를 유발한다. 그리고 콜라겐, ceramide의 감소는 노화에 따른 피부 주름의 주된 원인이 된다. 에스트로젠의 투여는 피부의 콜라겐증가 뿐만 아니라 히아루론산 합성을 높여 보습성을 향상시킨다는 보고가 있다.(EL-Domyati M et al: Exp Dermatol 11, 2002)
산화적 스트레스는 노화의 중요한 원인으로 알려져 있다. 세포스트레스 유발인자로는 과산화물, 히드록시 라디칼, 과산화수소 등 reactive oxygen species (ROS)라 불리우는 활성산소종이 있다. 그리고 산화질소, 페록시나이트 라이트 등 RNS(reactive nitrogen species)가 알려져 있으며, 이외에도 지질과산화물도 산화 스트레스 유발인자로 알려져 있다. 이러한 산화물들은 DNA염기인 guanine에 결합하여 돌연변이를 유발하여 피부노화나 암 등을 유발하는 것으로 알려져 있다. 그리고 arachidonic acid cascade 에 관여하여 혈관수축, 혈소판응집등을 유발하여 동맥경화나 알츠하이머병의 위험인자로 발전한다는 보고가 있다. 산화적 손상을 억제할 수 있는 활성물질로는 수용성으로 vitamin C와 B12등이 알려져 있고 지용성으로는 천연성분인 lycopene, beta-carotene등이 잘 알려져 있다.
그러나 현재 천연물을 이용한 노화조절물질 연구보고가 거의 이루어지지 않고 있다. 따라서 칼로리 제한의 downstream인 daf-16-activating natural molecules을 후보물질로 도출하여 천연물 신약을 개발한다면 노화억제를 비롯하여 대사성 질환, 면역기능향상과, 스트레스 저항성 향상 등 삶의 질 향상에도 크게 기여할 것으로 사료된다.
대한민국 특허공개번호 제10-1027111호(등록일자: 2011.03.29)에는, 피부 자극 완화 및 염증 방지 효과가 뛰어난 화장품에 관한 것으로서, 대추잎 추출물을 발효하여 얻은 발효 대추잎 추출물을 유효성분으로 함유하는 것을 특징으로 하는 화장품이 기재되어 있다.
본 발명자들은 피부 화장료에 적용이 가능하고 인체에 무해하여 안전성이 매우 뛰어난 천연 추출물 및 이를 유효성분으로 함유하는 화장료 조성물을 제공하는 것을 목적으로 한다.
또한, 본 발명은 주름개선 효과 및 보습 효과가 매우 뛰어난 천연추출물 및 이를 유효성분으로 함유하는 화장료 조성물을 제공하는 것을 목적으로 한다.
또한, 본 발명은 대추추출물을 붉은덕다리버섯으로 발효하여 열 스트레스와 산화적 스트레스에 대한 저항성을 가지며 항노화용 일 수 있다.
본 발명은 대추 분쇄물을 붉은덕다리버섯으로 발효시켜 수득된 발효물 또는 그것의 추출물을 유효성분으로 포함하는 것을 특징으로 하는 화장료 조성물을 제공한다.
한편, 본 발명의 화장료 조성물에 있어서, 화장료 조성물은 항노화용일 수 있다.
한편, 본 발명의 화장료 조성물에 있어서, 화장료 조성물은, 열노화 억제용일 수 있다.
한편, 본 발명의 화장료 조성물에 있어서, 화장료 조성물은, 피부 주름개선용일 수 있다.
한편, 본 발명의 화장료 조성물에 있어서, 화장료 조성물은, 피부 보습용일 수 있다.
한편, 본 발명의 화장료 조성물에 있어서, 추출물은, 물, 탄소수 1~4개의 무수 또는 함수 저급 알코올, 아세톤, 에틸아세테이트, 부틸아세테이트 및 1,3-부틸렌 글리콜로 구성된 군으로부터 선택되는 어느 하나의 추출 용매를 사용하여 추출된 것일 수 있다.
한편, 본 발명의 화장료 조성물에 있어서, 발효물 또는 그것의 추출물은, 화장료 조성물 총 중량에 대해 0.0001~30.0 중량% 첨가되는 것일 수 있다.
한편, 본 발명의 화장료 조성물에 있어서, 화장료 조성물은, 용액, 현탁액, 유탁액, 페이스트, 겔, 크림, 로션, 파우더, 비누, 계면활성제-함유 클렌징, 오일, 분말 파운데이션, 유탁액 파운데이션, 왁스 파운데이션 및 스프레이로 구성된 군으로부터 선택되는 어느 하나의 제형을 갖는 것일 수 있다.
본 발명은 피부 화장료에 적용이 가능하고 인체에 무해하여 안전성이 매우 뛰어난 천연 추출물 및 이를 유효성분으로 함유하는 화장료 조성물을 제공할 수 있다.
또한, 본 발명은 항노화, 열노화 억제, 주름개선 효과 및 보습 효과가 매우 뛰어난 천연추출물 및 이를 유효성분으로 함유하는 화장료 조성물을 제공할 수 있다.
도 1은 대추붉은덕다리버섯 발효액의 콜라겐 생성 효과를 보여준다.
도 2는 대추붉은덕다리버섯 발효액의 생명 연장 효과를 보여준다.
도 3은 대추붉은덕다리버섯 발효액의 열 스트레스 저항성 효과를 보여준다.
도 4는 대추붉은덕다리버섯 발효액의 산화적 스트레스 저항성 효과를 보여준다.
본 발명자들은 다수의 천연물을 원료로 하여 다양한 추출방법으로 추출물을 제조하였고, 항노화 효과, 주름개선 효과 등의 효과가 우수한 물질을 선별하는 연구를 수행하였다. 그 결과, 대추의 추출물에 붉은덕다리버섯으로 배양하여 제조된 추출물이 상술한 본 발명의 목적에 가장 부합된다는 사실을 발견하게 되었다.
대추나무(紅棗, jujube, Chinese date.)는 식물분류학적으로 갈매나무과 대추나무속에 속하는 교목 성 과수로서 중국계 대추(학명: Zizyphus jujuba Miller., 영명: Chinese jujube)와 인도계 대추(학명: Zizyphus mauritiana L A M., 영명: Indian jujube) 등이 있고. 가을에 익은 열매를 따서 햇볕에 말리고 표면은 적갈색이며 타원형이고 길이 1.5㎝ 내지 2.5㎝에 달하며 빨갛게 익히면 단맛이 있다. 대추잎은 호생하며 좁은 난형으로서 둔한 거치가 있고 기부에서 3개의 큰 맥이 발달한다. 취산화서로서 2-3개가 달리며 양성으로서 꽃은 6월에 핀다. 대추에는 노화를 활성화시키게 하는 활성화 산소를 줄여주는 효과가 있는 베타카로틴 성분이 있다. 또한, 대추는 몸의 불필요한 수분을 배출시켜 주고, 혈액순환에 도움을 준다.
현재까지 대추의 추출물은 다른 용도로 많이 사용되고 있다. 하지만, 본 발명에서와 같이 발효 형태, 즉 대추붉은덕다리버섯 발효액은 상기 추출물 단독으로 사용할 때보다 현저히 높은 항노화, 주름개선, 보습 효과가 있는지에 대해서는 알려지지 않았다.
본 발명의 대추의 추출물을 붉은덕다리버섯(Ｌａｅｔｉｐｏｒｕｓ ｓｕｌｐｈｕｒｅｕｓ) ＣＳ0218 (ＫＦＣＣ 11494Ｐ)으로 발효시켜 구성된 혼합물을 유효성분으로 포함하는 화장료 조성물은 뛰어난 항노화 효과를 통해 피부주름을 개선하여 우수한 피부노화 방지 효과를 나타낸다.
본 발명의 화장료 조성물의 유효성분인 대추의 추출물에서, 추출물은 당업계에 공지된 통상의 방법에 따라, 즉, 통상적인 온도와 압력의 조건하에서, 통상적인 용매를 사용하여 제조될 수 있다. 즉, 본 발명의 조성물의 유효성분인 대추의 추출물은 물, 탄소수 1~4개의 무수 또는 함수 저급 알코올, 아세톤, 에틸아세테이트, 부틸아세테이트 및 1,3-부틸렌 글리콜로 구성된 군으로부터 선택되는 용매를 사용하여 추출하거나 대추를 상기 용매를 이용하여 추출한 후, 이를 혼합하여 제조할 수 있다.
상기 용매 중 바람직하게는 알코올이 좋으며, 더욱 바람직하게는 에탄올이 좋다. 이때, 상기 에탄올은 바람직하게 70% 에탄올인 것이 좋다. 상기 추출 용매의 적합한 양은 대추 건조 중량의 1~15 배이며, 더욱 바람직하게는 5~10배이며, 가장 바람직하게는 7배이다.
한편, 본 발명의 대추붉은덕다리버섯 발효액은 상술한 추출법에 의한 추출물뿐만 아니라, 통상적인 정제 과정을 거친 추출물도 포함한다. 예컨대, 일정한 분자량 컷-오프 값을 갖는 한외 여과막을 이용한 분리, 다양한 크로마토그래피 (크기, 전하, 소수성 또는 친화성에 따른 분리를 위해 제작된 것)에 의한 분리 등, 추가적으로 실시된 다양한 정제 방법을 통해 얻어진 분획도 본 발명의 대추붉은덕다리버섯 발효액에 포함된다고 해석된다.
또한, 본 발명의 대추붉은덕다리버섯 발효액은 감압 증류 및 동결 건조 또는 분무 건조 등과 같은 추가적인 과정에 의해 분말 상태로 제조될 수도 있다.
본 발명의 바람직한 구현예에 따르면, 화장료 조성물에 첨가되는 대추붉은덕다리버섯발효액의 함량은 화장료 조성물 총 중량에 대하여 0.0001~30.0 중량%이며, 바람직하게는 0.001~15.0 중량%이며, 가장 바람직하게는 0.1~10.0 중량%이다. 상기 대추붉은덕다리버섯 발효액의 함량이 0.0001 중량% 미만인 경우에는 항노화 및 주름개선 효과가 미미하고 30%를 초과한 경우에는 함량증가에 따른 효능이 증가하지 못하며 경제적이지도 못하다.
한편, 본 발명의 화장료 조성물은 유효 성분으로서 상기 대추붉은덕다리버섯 발효액 이외에 화장료 조성물에 통상적으로 이용되는 성분들을 포함할 수 있으며, 예컨대 항산화제, 안정화제, 용해화제, 비타민, 안료 및 향료와 같은 통상적인 보조제, 그리고 담체를 포함할 수 있다.
한편, 본 발명의 화장료 조성물은 당업계에서 통상적으로 제조되는 어떠한 제형으로도 제조될 수 있으며, 예를 들어, 용액, 현탁액, 유탁액, 페이스트, 겔, 크림, 로션, 파우더, 비누, 계면활성제-함유 클린싱, 오일, 분말 파운데이션, 유탁액 파운데이션, 왁스 파운데이션 및 스프레이 등으로 제형화될 수 있다. 다만, 이에 반드시 한정되는 것은 아니다. 더욱 상세하게는, 유연 화장수, 수렴 화장수, 영양 화장수, 영양 크림, 마사지 크림, 에센스, 아이 크림, 클렌징 크림, 클렌징 포옴, 클렌징 워터, 팩, 스프레이 또는 파우더의 제형으로 제조될 수 있다.
본 발명의 화장료 조성물의 제형이 페이스트, 크림 또는 겔인 경우에는 담체 성분으로서 동물성유, 식물성유, 왁스, 파라핀, 전분, 트라칸트, 셀룰로오스 유도체, 폴리에틸렌 글리콜, 실리콘, 벤토나이트, 실리카, 탈크 또는 산화아연 등이 이용될 수 있다.
또한, 본 발명의 화장료 조성물의 제형이 파우더 또는 스프레이인 경우에는 담체 성분으로서 락토스, 탈크, 실리카, 알루미늄 히드록시드, 칼슘 실리케이트 또는 폴리아미드 파우더가 이용될 수 있고, 특히 스프레이인 경우에는 추가적으로 클로로플루오로히드로카본,프로판/부탄 또는 디메틸 에테르와 같은 추진체를 포함할 수 있다.
또한, 본 발명의 화장료 조성물의 제형이 용액 또는 유탁액인 경우에는 담체 성분으로서 용매, 용해화제 또는 유탁화제가 이용되고, 예컨대 물, 에탄올, 이소프로판올, 에틸 카보네이트, 에틸 아세테이트, 벤질 알코올, 벤질 벤조에이트, 프로필렌 글리콜, 1,3-부틸글리콜오일, 글리세롤 지방족 에스테르, 폴리에틸렌 글리콜 또는 소르비탄의 지방산 에스테르가 있다.
또한, 본 발명의 화장료 조성물의 제형이 현탁액인 경우에는 담체 성분으로서 물, 에탄올 또는 프로필렌 글리콜과 같은 액상의 희석제, 에톡실화이소스테아릴 알코올, 폴리옥시에틸렌 소르비톨 에스테르 및 폴리옥시에틸렌 소르비탄 에스테르와 같은 현탁제, 미소결정성 셀룰로오스, 알루미늄 메타히드록시드, 벤토나이트, 아가 또는 트라칸트 등이 이용될 수 있다.
또한, 본 발명의 화장료 조성물의 제형이 계면-활성제 함유 클린징인 경우에는 담체 성분으로서 지방족 알코올 설페이트, 지방족 알코올 에테르설페이트, 설포숙신산 모노에스테르, 이세티오네이트, 이미다졸리늄 유도체, 메틸타우레이트, 사르코시네이트, 지방산 아미드 에테르 설페이트, 알킬아미도베타인, 지방족 알코올, 지방산 글리세리드, 지방산 디에탄올아미드, 식물성 유, 라놀린유도체 또는 에톡실화 글리세롤 지방산 에스테르 등이 이용될 수 있다.
한편, 본 발명의 대추붉은덕다리버섯 발효액은 항노화 효과(참조: 실험예 3, 실험예 5), 열노화억제 효과(참조: 실험예 4), 주름개선 효과(참조: 실험예 2)를 나타낸다. 또한, 이러한 효과를 갖는 대추붉은덕다리버섯을 유효성분으로 함유하여 제조한 화장료 조성물의 경우, 피부 보습 개선 효과가 뛰어난 것으로 나타났다.(참조: 실험예 6)
이하, 본 발명의 내용을 하기 제조예를 통하여 더욱 상세히 설명하고자 한다. 다만, 하기 제조예는 본 발명을 보다 구체적으로 설명하기 위한 것으로서, 본 발명의 권리범위가 하기 제조예에만 한정되는 것은 아니다.
[ 제조예 1: 대추붉은덕다리버섯 발효액의 제조]
대추를 정제수로 세척하고 건조한 다음 모두 분쇄한 후 100메시의 체를 이용하여 미세하게 만들었다. 이것을 100g/L되게 정제수에 대추 분쇄물을 섞어주고, 붉은덕다리버섯(Ｌａｅｔｉｐｏｒｕｓ ｓｕｌｐｈｕｒｅｕｓ) ＣＳ0218 (ＫＦＣＣ 11494Ｐ) 균주 배양액에 첨가하였다. 여기에 탄소원으로 포도당 1~4%를 첨가하였으며, 펩톤 0.2~0.5%를 추가로 첨가하여 배양하였다. 배양은 5L 발효조를 이용하여 7, 14일간, 37℃, pH 5-7로 유지하며 배양하였다. 배양 후 배양액을 원심분리하여 배양균을 1차 제거하였다.
발효 후 배양균을 1차 제거한 대추 발효물을 최종 70%(V/V) 에탄올 수용액이 되도록 에탄올을 첨가하여 5시간씩 3회 환류추출하고 냉침한 후, 와트만(whatman) #10 여과지로 여과하였다. 이렇게 얻은 여과액을 다시 0.25uM의 여과기를 이용하여 최종 여과하였다. 여과가 완료되면 상기 추출단계에서 얻어진 추출액을 농축조로 이송하여 50℃ 이하에서 감압농축 또는 동결 건조하였다. 감압농축물 또는 동결건조물이 0.001~70.0 중량% 함유되게 정제수, 에탄올, 부틸렌글리콜, 프로필렌글리콜 중에서 선택된 1종 이상의 용매를 사용하여 혼합추출물을 제조하였다.
[비교 제조예 1: 대추 추출물의 제조]
상기 제조예 1과 동일한 대추를 정제수로 세척하고 건조한 다음 모두 분쇄한 후 100메시의 체를 이용하여 미세하게 만들었다. 대추 분쇄물을 100g/L가 되도록 70% 에탄올을 첨가하여 5시간씩 3회 환류추출하고 냉침한 후, 와트만(whatman) #10 여과지로 여과하였다. 이렇게 얻은 여과액을 다시 0.25uM의 여과기를 이용하여 최종 여과하였다. 여과된 추출물을 50℃ 이하에서 감압농축 및 동결 건조하였다. 감압농축물 및 동결건조물이 0.001~70.0 중량% 함유되게 정제수, 에탄올, 부틸렌글리콜, 프로필렌글리콜 중에서 선택된 1종 이상의 용매를 사용하여 혼합추출물을 제조하였다.
[ 실험예 1: 대추붉은덕다리버섯 발효액의 세포 생존율 평가]
상기 제조예 1 및 비교 제조예 1, 2에서 수득한 발효 대추 추출물과 대추 추출물이 세포에 미치는 독성을 측정하기 위해 실시되었다.
세포 독성은 3-(4,5-dimethylthiazol-2-yl)-2-5-diphenyltetrazolium bromide(MTT) 시약을 이용하여 세포 생존율을 측정하는 Mosmann의 방법을 변형하여 실시하였다.
HDF를 96-well plate에 1 × 105 cells/well의 농도로 분주하여 37 ℃, 5 % CO2 에서 24 h 동안 배양하였다. 배양 배지를 제거하고 시료를 농도별로 처리한 배지에 24 h 동안 배양한 후 배지를 제거하고 PBS (Phosphate buffered saline) 두 번씩 세척하였다. MTT 를 300 μg/mL 로 PBS에 녹여 100 μL 첨가하고 37 ℃, 5 %의 CO2 에서 4 h 동안 배양하였다. DMSO를 한 well 당 150 μL 넣고 30 min 동안 교반한 후 570 nm에서 흡광도를 측정하였다.
측정 결과 각 시료의 모든 농도에서 세포 독성은 나타나지 않았다. 이로부터 본 발명의 발효 대추잎 추출물은 인체에 무해하며 안전성이 매우 우수함을 확인할 수 있었다.
[ 실험예 2: 대추붉은덕다리버섯 발효액의 콜라겐 생성 효과 평가]
콜라겐 합성능 평가는 콜라겐 전구체(PIP, Procollagen Type 1 C-peptide)의 C-말단을 인식하는 항체 이용법을 활용하였다. 대추추출물과, 대추추출물 발효7일, 발효 14일 추출물을 100ug/mL 200ug/mL을 각각 세포에 처치하여 배양한 후 배양액을 모아서 콜라겐 전구체의 C-말단의 양을 측정하였다.
도 1의 결과에 따르면, 대추추출물(zjf-100, -200)에서는 콜라겐 생성량이 대조군과 차이가 없었으며, 대추추출물의 붉은 덕다리버섯으로 발효 7일째 액의 100ug/mL도 변화를 관찰할 수 없었다. 발효 7일째 F7-100(100ug/mL)과 F7-200(200ug/mL) 군과 발효 14일째(F14-200) 200ug/mL 농도에서 통계적으로 유의한 활성이 나타났다.
따라서, 본 발명의 대추붉은덕다리버섯 배양액이 주름개선용으로서 매우 뛰어난 효과를 갖는 것을 확인할 수 있었다.
[ 실험예 3: 대추붉은덕다리버섯 발효액의 생명 연장 효과 평가]
야생형 N2 C. elegans (Caenorhabditis Genetics Center, University of Minnesota, Minneapolis, MN, USA)를 활용하여 생명연장효과를 실험을 실시하였다. 실험은 20℃와 25℃에서 약물처치한 그룹과 처치하지 않은 그룹으로 나누어 실시하였으며, egg에서 adult가 된 worm을 새로운 plate로 옮기면서 dead worm을 count 하였다.
도 2의 결과에 따르면, 대추추출물(zjf-200ug/mL)에서는 20℃와 25℃에서 모두 생명연장효과가 나타나지 않았다. 대추추출물 발효 7일액(F7-zjf-200ug/mL)을 처리한 군은 20℃에서 배양한 군에서는 생명연장효과가 나타나지 않았으나, 25℃로 스트레스를 유도한 상황에서는 약물처리군이 대조군에 비해 통계적으로 유의한 수명연장 효과를 나타내었다. 대추추출물 발효 14일액(F14-zjf-200ug/mL)을 처리한 군은 20℃에서 배양한 군에서는 생명연장효과가 나타나지 않았으나, 25℃로 스트레스를 유도한 상황에서는 약물처리군이 대조군에 비해 통계적으로 유의한 수명연장 효과를 나타내었다.
따라서, 본 발명의 대추붉은덕다리버섯 배양액이 꼬마선충을 이용한 생명연장에 매우 뛰어난 효과를 갖는 것을 확인할 수 있었다.
[ 실험예 4: 대추붉은덕다리버섯 발효액의 열 스트레스 저항성 효과 평가]
Syncronized L1 stage의 예쁜 꼬마선충 100 마리 정도를 NGM agar plate 옮겨서 72시간 동안 배양하여 L4 stage Lavae가 되도록 하였다. 10마리의 adult worm을 약물이 처리된 6cm plate와 약물이 처리되지 않은 plate에 각각 옮겨 3시간정도 egg laying을 하고 plate에서 adult worm을 제거하였다. Reproductive 기간 동안에 매일 약물이 처리된 새로운 배지로 옮겨주고 6일째 되는 날 35℃ 인큐베이터에서 8시간 동안 Thermal stress를 주었다. 그리고 죽은 꼬마선충의 수를 세어 대조군과 비교하였다.
도 3의 결과에 따르면, 대추추출물 발효 7일액 200ug/mL 처리군이 대조군에 비해 12% 정도 생존율이 높아 열 스트레스저항성에 유의적(t=4.017) 활성이 있는 것으로 나타났다. 발효 기간에 따른 약물의 효능변화가 있는지 알아보기 위하여 Jonckheere-Terpstra검정을 실시하였으나 발효기간에 따른 약물의 효능이 증가되거나 감소되는 경향은 보이지 않았다.
따라서, 본 발명의 대추붉은덕다리버섯 배양액이 열 스트레스 저항성에 매우 뛰어난 효과를 갖는 것을 확인할 수 있었다.
[ 실험예 5: 대추붉은덕다리버섯 발효액의 산화적 스트레스 저항성 효과 평가]
C. elegans 는 노화에 따라 H2O2 관련 ROS level이 증가되는 경향이 있음이 알려져 있다. 약물투여군의 산화적스트레스 저항성과 노화억제와의 관련성을 밝히기 위해 H2O2에서의 생존력 실험을 실시하였다. Syncronized L1 stage의 예쁜 꼬마선충 100 마리 정도를 NGM agar plate 옮겨서 65시간 동안 배양하여 L4 stage Lavae가 되도록 하였다. Syncronized L4 stage의 선충을 10-15마리 씩 약물이 처리된 6cm plate와 약물이 처리되지 않은 plate에 각각 옮겨 3시간정도 egg laying을 하고 plate에서 adult worm을 제거하였다. Reproductive 기간 동안에 매일 약물이 처리된 새로운 배지로 옮겨주고 6일째 되는 날 0.8mM hydrogen peroxide 가 포함된 M9 buffer에 옮겨 8시간 동안 처치하여 산화적 스트레스를 측정하였다.
도 4의 결과에 따르면, 발효 7일액의 200ug/mL 처리군과 발효 14일액 100ug/mL이 대조군에 비해 생존율이 높아 산화적 스트레스 저항성에 유의적 활성이 있는 것으로 나타났다. 발효시간에 따른 약물의 효과가 변하는 지 확인하기 위하여 Jonckheere-Terpstra test를 실시하였다. 분석결과 발효일에 따라 효과의 크기가 변하지 않는 것을 통계적으로 확인하였다.
따라서, 본 발명의 대추붉은덕다리버섯 배양액이 산화적 스트레스 저항성에 매우 뛰어난 효과를 갖는 것을 확인할 수 있었다.
[ 제조예 2: 대추붉은덕다리버섯 발효액을 함유하는 화장료의 제조]
제조예 1의 대추붉은덕다리버섯 7일 발효액을 10.0 중량%가 포함된 화장료 조성물을 하기 표 4의 조성으로 제조하여 이를 처방예 1이라 하고, 네바네바컴플랙스가 포함되지 않은 화장료 조성물을 제조하여 비교처방예 2 라 하였다.
성분 처방예 1
함량(중량%)		 비교처방예 1
함량(중량%)
제조예 1 10.0 -
비교제조예 1 - 10.0
1,3-BG 10.0 10.0
글리세린 5.1 5.1
프로필렌글리콜 4.2 4.2
토코페릴아세테이트 3.0 3.0
유동파라핀 4.6 4.6
트리에탄올아민 1.0 1.0
스쿠알란 3.1 3.1
마카다미아너트오일 2.5 2.5
폴리솔베이트60 1.6 1.6
솔비탄세스퀴롤레이트 1.6 1.6
프로필파라벤 0.6 0.6
카르복실비닐폴리머 1.5 1.5
향 미량 미량
방부제 미량 미량
정제수 잔량 잔량
계 100 100
[ 실험예 6: 대추붉은덕다리버섯 발효액의 피부 보습력 개선효과]
본 발명의 대추붉은덕다리버섯 발효액을 함유하는 화장료의 피부 보습력 개선효과를 알아보기 위하여 다음과 같이 실험을 실시하였다. 피부 질환이 없는 20~40대 25명을 대상으로 1조 당 20명 씩 2개조로 나누고, 각 조별로 상기 제조예 1에서 제조한 처방예 1 및 비교처방예 1~2의 크림의 영양크림을 매일 2회씩 1개월간 얼굴 및 전박부에 도포하게 하였다. 미리 도포 시작 전 항온, 항습 조건(24℃, 습도 40%)에서 corneometer(CM820 courage Khazaka electronic GmbH, Germany)를 이용하여 피부 전도도를 측정하여 기본 값을 삼고, 1주, 2주, 4주 경과 후의 피부 전도도 증가율(%)을 측정하여 그 증가율을 평가하였다. 그 결과를 하기 표 1에 나타내었다.
시료 1 주 후 2 주 후 4 주 후
처방예 1 55 61 66
비교처방예 1 23 31 38
상기 표 1의 결과에서 보는 바와 같이, 본 발명의 대추붉은덕다리버섯 7일 발효액을 함유하는 화장료인 처방예 1의 경우, 비교처방예 1~2에 비하여 피부 전도도 증가율이 매우 우수하였다. 일반적으로 피부 전도도는 피부 수분량에 비례하므로, 상기의 결과는 대추붉은덕다리버섯을 함유하는 화장료가 그렇지 않은 화장료에 비해 피부 수분 함량도 높게 유지한다는 것을 확인시켜 준 것이다. 또한 발효기간을 7일로 설정하였을 때와 14일로 설정하였을 때의 피부 수분 함량도가 거의 차이가 나지 않는 것으로 보아 발효기간에 따른 효과의 차이는 없는 것을 확인시켜 준 것이다.

Claims (8)

  1. 대추 분쇄물을 붉은덕다리버섯으로 발효시켜 수득된 발효물 또는 그것의 추출물을 유효성분으로 포함하는 것을 특징으로 하는 피부노화방지, 열노화억제, 피부주름개선 및 피부보습용 화장료 조성물.
  2. 삭제
  3. 삭제
  4. 삭제
  5. 삭제
  6. 제1항에 있어서,
    상기 추출물은,
    물, 탄소수 1~4개의 무수 또는 함수 저급 알코올, 아세톤, 에틸아세테이트, 부틸아세테이트 및 1,3-부틸렌 글리콜로 구성된 군으로부터 선택되는 어느 하나의 추출 용매를 사용하여 추출된 것을 특징으로 하는 화장료 조성물.
  7. 제1항에 있어서,
    상기 발효물 또는 그것의 추출물은,
    화장료 조성물 총 중량에 대해 0.0001~30.0 중량% 첨가되는 것을 특징으로 하는 화장료 조성물.
  8. 제1항에 있어서,
    상기 화장료 조성물은,
    용액, 현탁액, 유탁액, 페이스트, 겔, 크림, 로션, 파우더, 비누, 계면활성제-함유 클렌징, 오일, 분말 파운데이션, 유탁액 파운데이션, 왁스 파운데이션 및 스프레이로 구성된 군으로부터 선택되는 어느 하나의 제형을 갖는 것을 특징으로 하는 화장료 조성물.
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