JP2003194809A - 幹細胞因子の産生・放出の抑制による掻痒、肌荒れ、敏感肌及び美白用薬剤 - Google Patents

幹細胞因子の産生・放出の抑制による掻痒、肌荒れ、敏感肌及び美白用薬剤

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Abstract

(57)【要約】 【課題】 本発明は皮膚掻痒、肌荒れや敏感肌を改善す
る、又は美白効果を発揮する有効成分のスクリーニング
方法及びかかる有効成分を含む各種薬剤の提供を課題と
する。 【解決手段】 幹細胞因子（ＳＣＦ）の産生及び／又は
放出を抑制することにより皮膚掻痒、肌荒れや敏感肌を
改善する、又は美白効果を発揮する生薬有効成分を含ん
で成る、ＳＣＦ産生及び／又は抑制皮膚外用剤の提供。

Description

【発明の詳細な説明】
【０００１】
【発明の属する技術分野】本発明は幹細胞因子（以下
「ＳＣＦ」）の産生及び／又は放出を抑制することによ
り皮膚掻痒、肌荒れや敏感肌を改善する、又は美白効果
を発揮する有効成分のスクリーニング方法、並びにかか
る有効成分を含む掻痒、肌荒れ、敏感肌及び／又は美白
用薬剤に関する。
【０００２】
【従来の技術】従来より、皮膚掻痒、肌荒れ、敏感肌の
改善効果や美白効果を有するものとして種々の治療薬、
皮膚外用剤、化粧料等が使用されている。皮膚掻痒、肌
荒れ、敏感肌の改善効果を発揮する従来の薬剤や化粧料
等においては、有効成分として消炎剤やアミノ酸、多
糖、脂質等のほか、抗炎症作用、あるいは高い保湿作用
を有する各種動植物エキスが皮膚の痒み、炎症、角質層
の水分の消失を防ぐ能力に優れているために用いられて
きた。また、美白効果を発揮する従来の薬剤や化粧料等
においては、有効成分としてＬ−アスコルビン酸、グル
タチオン、コウジ酸、システイン、ハイドロキノン、胎
盤抽出物等がメラニンの生成を抑制してしみ、そばかす
等を防ぐのに優れているために用いられてきた。しかし
ながら、いずれにおいてもその効果は必ずしも十分では
なく、より優れた薬剤の開発が所望されている。
【０００３】ＳＣＦ（別名：kit ligand [KL]又はmast
cell growth factor[MCF]）がしみ部位等において発現
が亢進していること、紫外線照射によりＳＣＦの発現が
亢進することは知られている（L. H. Kligman et al.,
Photochem. Photobiol. Vol.63, No.2 (1996) pp.123-1
27）。ＳＣＦは角化細胞、線維芽細胞、血管内皮細胞等
において産生されるタンパク質である。ＳＣＦの作用と
しては、未分化造血幹細胞の増殖、生殖細胞の分化促
進、肥満細胞の増殖促進、色素細胞の増殖促進作用等が
ある（Bio Science 用語ライブラリー サイトイカイン
・増殖因子 羊土社(1995) 宮園浩平、菅村和夫編）。
ＳＣＦには膜結合型（ＳＣＦ−２）と、タンパク質分解
酵素の作用により切断された膜から遊離する分泌型（Ｓ
ＣＦ−１）があることが知られている。ＳＣＦ−２は角
化細胞などに結合したまま色素細胞のＳＣＦレセプター
に結合して色素細胞の増殖を活性化し、またＳＣＦ−１
はその切断部位において切断されて細胞膜から遊離し、
色素細胞や肥満細胞のＳＣＦレセプターに結合し、色素
細胞の増殖を活性化し、また肥満細胞の増殖活性化及び
脱顆粒化をもたらす（T. Kunisada et al., J. Exp. Me
d., Vol.187, No.10,(1998) pp.1565-1573)。ＳＣＦの
異常産生は色素細胞の異常増殖につながり、メラニン産
生を亢進させ、しみ、そばかす、くすみ等の原因とな
る。また、肥満細胞の異常増殖、異常脱顆粒化にもつな
がり、ヒスタミン、セロトニン、ＬＴＢ４等のケミカル
メディエーターの遊離を亢進させ（J. Grabbe et el.,
Arch Dermatol Res (1984) 287:78-84)、掻痒、肌荒
れ、敏感肌等の原因となる。
【０００４】
【発明が解決しようとする課題】従って、このような掻
痒、肌荒れ、敏感肌、しみ、そばかす等の直接的な原因
と考えられるＳＣＦの産生、放出を効果的に抑制できれ
ば、従来にない全く新たな、且つ一段と有効な掻痒、肌
荒れ、敏感肌及び／又は美白用薬剤の提供に結びつくと
考えられる。しかしながら、従来技術において、このよ
うなＳＣＦ産生、放出の抑制活性をもつ物質又は生薬
も、そのような物質又は生薬の効果的なスクリーニグ方
法も知られていない。T. Kunisada et al（前掲）はト
ランスジェニックマウスを利用した動物実験により肥満
細胞及び色素細胞に対するＳＣＦの作用を検討してい
る。しかしながら、そのような動物実験の利用は時間及
び費用がかさむため、多種多様な生薬、薬剤のスクリー
ニングには適さず、より簡便且つ廉価にＳＣＦ産生、放
出の抑制活性をもつ有効成分又は生薬をスクリーニング
できる方法が所望されていた。
【０００５】驚くべきことに、本発明者は、ヒト表皮角
化細胞に乾燥等の刺激を与えることでＳＣＦの産生又は
遊離を促進させることができることを見出し、その結果
ＳＣＦの産生及び／又は放出を効果的に抑制することが
できる有効成分を効率的にスクリーニングすることに成
功した。
【０００６】
【課題を解決するための手段】すなわち本発明は、第一
の態様において、ＳＣＦの産生及び／又は放出を抑制す
ることにより掻痒、肌荒れもしくは敏感肌の改善効果又
は美白効果を発揮する有効成分をスクリーニングする方
法であって、ＳＣＦを発現する細胞を被験成分と接触さ
せ、当該細胞が産生及び／又は放出するＳＣＦの量を測
定してＳＣＦの産生及び／又は放出量を減少させる被験
成分を前記有効成分として選定する方法の際、当該ＳＣ
Ｆ発現細胞に刺激を与えてＳＣＦの産生及び／又は放出
を促進させることを特徴とする方法を提供する。一の観
点において、前記刺激は乾燥刺激、紫外線照射刺激又は
薬剤刺激、好ましくは乾燥刺激である。別の観点におい
て、前記スクリーニング方法は、前記ＳＣＦ発現細胞を
前記被験成分と接触させ、次いで当該細胞に刺激を与
え、しかる後に当該細胞が産生及び／又は放出するＳＣ
Ｆの量を測定して前記有効成分を選定する方法である。
【０００７】第二の態様において、本発明はバラエキス
ローズ水、チャエキス、ホップエキス、サンザシエキ
ス、アズキ末、シラカバエキス、ケイヒエキス、チョウ
ジエキス、アルニカエキス、ボタンエキス、ボダイジ
ュ、クロレラエキス、ローマカミツレエキス、紅茶エキ
ス、ユーカリエキス、ソウジュツエキス末、ビャクジュ
ツエキス末、ウーロン茶エキス末、オノニスエキス、ア
センヤクエキス、ブドウ葉エキス、ボウフウエキス、ク
ワエキス、パリエタリアエキス、アンソッコウエキス、
ステビアエキス、ヒノキ、ショウブ根エキス、ダイズエ
キス、カギカズラ、サボンソウエキス、アルテアエキ
ス、オトギリソウエキス及びヨモギエキスから成る群か
ら選ばれる１又は複数を含んで成る、ＳＣＦ産生及び／
又は抑制皮膚外用剤を提供する。
【０００８】第三の態様において、本発明はＳＣＦの産
生及び／又は放出を抑制する成分を掻痒改善有効成分と
して含有する掻痒用皮膚外用剤を提供する。一の観点に
おいて、前記掻痒改善有効成分は、ホップエキス、サン
ザシエキス、アズキ末、チョウジエキス、ローマカミツ
レエキス、紅茶エキス、ユーカリエキス、ソウジュツエ
キス末、ビャクジュツエキス末、ウーロン茶エキス末、
オノニスエキス、ボウフウエキス、パリエタリアエキ
ス、アンソッコウエキス、ステビアエキス、ショウブ根
エキス、カギカズラ、サボンソウエキス、アルテアエキ
ス及びオトギリソウエキスから成る群から選ばれる１又
は複数である。
【０００９】第四の態様において、本発明はＳＣＦの産
生及び／又は放出を抑制する成分を肌荒れ防止有効成分
として含有する肌荒れ防止用皮膚外用剤を提供する。一
の観点において、前記肌荒れ防止有効成分はサンザシエ
キス、ソウジュツエキス末、ビャクジュツエキス末、オ
ノニスエキス、クワエキス、パリエタリアエキス、アン
ソッコウエキス、ステビアエキス、ヒノキ、ショウブ根
エキス、カギカズラ、サボンソウエキス及びアルテアエ
キスから成る群から選ばれる１又は複数である。
【００１０】第五の態様において、本発明はＳＣＦの産
生及び／又は放出を抑制する成分を敏感肌改善有効成分
として含有する敏感肌用皮膚外用剤を提供する。一の観
点において、前記敏感肌改善有効成分はバラエキスロー
ズ水、チャエキス、ホップエキス、サンザシエキス、ア
ズキ末、シラカバエキス、ケイヒエキス、チョウジエキ
ス、クロレラエキス、紅茶エキス、ユーカリエキス、ソ
ウジュツエキス末、ビャクジュツエキス末、ウーロン茶
エキス末、オノニスエキス、アセンヤクエキス、ブドウ
葉エキス、ボウフウエキス、クワエキス、パリエタリア
エキス、アンソッコウエキス、ステビアエキス、ヒノ
キ、ショウブ根エキス、ダイズエキス、カギカズラ、サ
ボンソウエキス、アルテアエキス、オトギリソウエキス
及びヨモギエキスから成る群から選ばれる１又は複数で
ある。
【００１１】第六の態様において、本発明はＳＣＦの産
生及び／又は放出を抑制する成分を美白有効成分として
含有する美白用皮膚外用剤を提供する。一の観点におい
て、前記美白有効成分はバラエキスローズ水、オノニス
エキス、アセンヤクエキス、パリエタリアエキス、アン
ソッコウエキス、サボンソウエキス、クロレラエキス及
びユーカリエキスから成る群から選ばれる１又は複数で
ある。
【００１２】第七の態様において、本発明はＳＣＦの産
生及び／又は放出を抑制することにより掻痒、肌荒れも
しくは敏感肌の改善効果又は美白効果を発揮する有効成
分をヒト又は哺乳動物の表皮に塗布することを含んで成
る、掻痒、肌荒れもしくは敏感肌の改善又は美白方法を
提供する。
【００１３】第八の態様において、本発明は紫外線刺激
により角化細胞内又は細胞膜上に発現するＳＣＦを抑制
する成分を含有する薬剤を提供する。一の観点におい
て、前記成分はバラエキスローズ水、チャエキス、ホッ
プエキス、サンザシエキス、アズキ末、シラカバエキ
ス、ケイヒエキス、チョウジエキス、アルニカエキス、
ボタンエキス、ボダイジュ、クロレラエキス、ローマカ
ミツレエキス、紅茶エキス、ユーカリエキス、ソウジュ
ツエキス末、ビャクジュツエキス末、ウーロン茶エキス
末、オノニスエキス、アセンヤクエキス、ブドウ葉エキ
ス、ボウフウエキス、クワエキス、パリエタリアエキ
ス、アンソッコウエキス、ステビアエキス、ヒノキ、シ
ョウブ根エキス、ダイズエキス、カギカズラ、サボンソ
ウエキス、アルテアエキス、オトギリソウエキス及びヨ
モギエキスから成る群から選ばれる１又は複数である。
別の観点において、前記成分はアズキ末、アルニカエキ
ス、オノニスエキス又はアンソッコウエキスである。
【００１４】
【発明の実施の形態】本発明を以下に詳細に説明する。
【００１５】本願発明は、ＳＣＦの産生及び／又は放出
を抑制することにより掻痒、肌荒れもしくは敏感肌の改
善効果又は美白効果を発揮する有効成分をスクリーニン
グする方法を提供する。このスクリーニング方法は、Ｓ
ＣＦを発現する細胞を被験成分と接触させ、当該細胞が
産生及び／又は放出するＳＣＦの量を測定してＳＣＦの
産生及び／又は放出量を減少させる被験成分を前記有効
成分として選定することを含んで成るが、その際、当該
ＳＣＦ発現細胞に刺激を与えてＳＣＦの産生及び／又は
放出を促進させることを特徴とする。
【００１６】本発明者はヒト角化細胞のような皮膚細胞
に乾燥等の刺激を与えると細胞のＳＣＦの産生及び／又
は放出が促進されることを見出した。従って、細胞にこ
のような刺激を与えることで、掻痒、肌荒れ、敏感肌や
しみ、そばかす等の発症に結びつくＳＣＦの異常発現を
細胞に対し誘導させることができる。このことを利用
し、本発明者はＳＣＦの産生及び／又は放出を抑制する
被験成分を細胞に作用させる際、ＳＣＦの産生及び／又
は放出を促進させる刺激を与えておくことでＳＣＦの発
現を亢進させ、ＳＣＦの産生及び／又は放出を効果的に
抑制できる有効成分を効率的にスクリーニングすること
に成功した。このような刺激としては、乾燥刺激の他、
紫外線照射刺激、熱刺激（加熱及び冷却）、薬剤刺激
（例えば、フォルスコリン、テオフィリン）、浸透圧刺
激、酸化刺激等のストレスが挙げられる。
【００１７】本発明に係るスクリーニング方法における
細胞の刺激は、細胞に被験成分を作用させる前、同時、
又は後であってよい。好ましくは、細胞に被験成分を作
用させた後に細胞に刺激を与える。
【００１８】詳しくは、当該スクリーニング方法は、例
えば下記のようにして実施することができる。 (1) ＳＣＦ産生細胞を適当な培養液を用いて培養する
（例えば、約25〜37℃、好ましくは約37℃にて数時間〜
数日、好ましくは約72時間）。 (2) 被験成分を適当な細胞培養液により所定の濃度
（例えば0.0001%-0.01%）に希釈する。 (3) (1)の細胞培養液を上記希釈被験成分と交換し、イ
ンキュベーションする（例えば、約25〜37℃、好ましく
は約37℃にて数時間〜数日、好ましくは約24時間）。そ
の際、任意的に、コントロールとして、上記被験成分を
含まない媒体を同様に作用させた細胞も用意しておく。 (4) 次に、上記被験成分の作用された細胞に刺激を与
える。刺激が乾燥刺激の場合、上記細胞培養液の上清液
を除去し、乾燥条件下でインキュベーションする。その
際、任意的に、コントロールとして、上記刺激を与えな
い細胞も用意しておく。 (5) 上記刺激を与えた細胞に培地を添加し、インキュ
ベーションする（例えば、約25〜37℃、好ましくは約37
℃にて約30分〜４時間、好ましくは約２時間）。 (6) 上記細胞の上清液を回収し、ＳＣＦの量を測定
し、ＳＣＦの産生及び／又は放出を抑制する成分を選定
する。
【００１９】ＳＣＦの産生・放出量の抑制は、媒体のみ
を添加した場合を100％として、被験成分を加えたとき
にＳＣＦ産生量が25％程度の低下したときをもって、抑
制とする。ただし、顕著な細胞毒性（例えば、75％程度
までの呼吸活性の低下等）の起きない濃度範囲で被験成
分を添加するものとする。
【００２０】使用するＳＣＦ産生細胞としては、例えば
ヒト又はその他の哺乳動物、例えばラット、マウス、ウ
サギ、等に由来する角化細胞、線維芽細胞、血管内皮細
胞等であってよい。好ましくは、ヒト角化細胞を使用す
る。
【００２１】上述の通り、刺激には、乾燥刺激、紫外線
照射刺激、熱刺激（加熱及び冷却）、薬剤刺激（例え
ば、フォルスコリン、テオフィリン）、浸透圧刺激、酸
化刺激等のストレスが挙げられる。乾燥刺激の場合、例
えば細胞をＣＯ2インキュベーター内でＣＯ2約１〜５
％、湿度約０〜100％、温度25〜37℃の雰囲気下で培地
を除去して適当な時間、例えば約15分〜６時間、好まし
くは約１時間放置することで細胞に乾燥刺激を与えてよ
い。紫外線照射刺激の場合、例えば細胞に約290〜320n
m、10〜60 mJ/cm2で紫外線照射することで細胞に刺激を
与えてよい。熱刺激の場合、例えば細胞をＣＯ2インキ
ュベーター内でＣＯ2約１〜５％、湿度約０〜100％、温
度４〜25℃又は37〜42℃で適当な時間、例えば約５分〜
６時間、好ましくは約１時間放置することで細胞に刺激
を与えてよい。
【００２２】本発明のスクリーニング方法は好ましくは
in vitroで行なわれるが、in vivoで実施することもで
きる。
【００２３】ＳＣＦの測定 本発明において、ＳＣＦ発現細胞が産生及び／又は放出
するＳＣＦの測定は、好ましくは細胞がその培養液の中
に放出するＳＣＦ又は破砕した細胞や細胞の膜画分に含
まれるＳＣＦを定性又は定量測定することにより実施す
る。測定するＳＣＦは、細胞膜から遊離して細胞培養液
に放出される分泌型（ＳＣＦ−１）でも、細胞の膜画分
に含まれる膜結合型（ＳＣＦ−２）でもよい。ＳＣＦの
測定は当業界周知の方法、例えば、免疫測定方法、例え
ば酵素ラベルを利用するＥＬＩＳＡ法、放射性ラベルを
利用するＲＩＡ法、抗体と抗原との反応で生ずる濁りの
吸光度の変化から抗原量を定量する免疫比濁法、抗原と
抗体感作ラテックスビーズもしくは抗体感作赤血球との
反応によって生ずる凝集反応の度合いから抗原量を測定
するラテックス凝集法や赤血球凝集法等、様々な方法が
挙げられる。免疫測定法の方式には競合法やサンドイッ
チ法が挙げられる。他に、電気泳動法、等電点電気泳動
法、クロマトグラフィー法、例えばゲル濾過クロマトグ
ラフィー法、イオン交換クロマトグラフィー法、逆相ク
ロマトグラフィー法、高速液体クロマトグラフィー法、
ウェスタンブロット法、等により実施することができ
る。本発明において、好ましくはＳＣＦの測定はＥＬＩ
ＳＡにより実施する。
【００２４】上記免疫測定方法において使用するＳＦＣ
に特異的な抗体はモノクローナル抗体でもポリクローナ
ル抗体でもよい。モノクローナル抗体が特に好ましい。
モノクローナル抗体やポリクローナル抗体の作成は当業
者に周知である。
【００２５】本発明者は本発明に係るスクリーニング方
法に従い、以下の生薬がＳＣＦ産生細胞由来のＳＣＦの
量を減少させることができることを見出した：バラエキ
スローズ水、チャエキス、ホップエキス、サンザシエキ
ス、アズキ末、シラカバエキス、ケイヒエキス、チョウ
ジエキス、アルニカエキス、ボタンエキス、ボダイジ
ュ、クロレラエキス、ローマカミツレエキス、紅茶エキ
ス、ユーカリエキス、ソウジュツエキス末、ビャクジュ
ツエキス末、ウーロン茶エキス末、オノニスエキス、ア
センヤクエキス、ブドウ葉エキス、ボウフウエキス、ク
ワエキス、パリエタリアエキス、アンソッコウエキス、
ステビアエキス、ヒノキ、ショウブ根エキス、ダイズエ
キス、カギカズラ、サボンソウエキス、アルテアエキ
ス、オトギリソウエキス、ヨモギエキス。かかる生薬の
詳細については、日本汎用化粧品原料集第４版（薬事日
報）を参照されたい。
【００２６】上記生薬エキスは、常法により原料植物か
ら抽出されたもので、抽出法には制限されず、例えば、
チョウジエキスであれば、日本薬局方チョウジを乾燥
し、細切したもの10kgに、50 v/v % のエタノール（化
粧品原料基準、無水エタノール及び同精製水にて調製）
を加えて24時間浸漬し、圧搾分離してエキスを得ること
により獲得できる。
【００２７】本発明における掻痒、肌荒れ、敏感肌は、
細胞により放出されたＳＣＦが肥満細胞のＳＣＦレセプ
ターに結合することで誘導されたものをいう。掻痒とは
広義における皮膚、頭皮の痒みを意味し、例えば乾燥、
アトピー性皮膚炎、老人性乾皮症による掻痒等が挙げら
れる。肌荒れとは広義における肌の劣化した状態を意味
し、掻痒による掻破やアトピー性皮膚炎の悪化劣化の結
果引き起こされる肌荒れ、乾燥による肌荒れ等が挙げら
れる。敏感肌とは、被刺激性が亢進した状態の肌を意味
し、外界からの非特異的な物理化学的刺激、例えば掻
破、温熱、発汗、日光、衣服、付着物等、また精神的ス
トレス刺激に対して過敏に反応する肌の状態を指す。本
発明における美白効果とは、日焼け、乾燥その他の原因
により細胞により放出されたＳＣＦが色素細胞のＳＣＦ
レセプターに結合することで誘導されるメラニンの過剰
生産により引き起こされるしみ、そばかす、くすみ等を
改善することを意味する。
【００２８】本発明の掻痒、肌荒れ、敏感肌及び美白用
薬剤は、通常、上記ＳＣＦ産生・放出抑制有効成分を水
やエタノール等の水性溶媒に含有させて用いられる。本
発明のＳＣＦ生産・放出抑制成分の配合量は特に限定さ
れないが、固形分換算で0.00001〜0.01重量％、特に0.0
001〜0.005重量％程度の範囲が好ましい。尚、本発明に
係る薬剤を入浴剤として調製する場合、使用時に通常10
0〜1000倍程度に希釈されるので、配合はそれを加味し
た高濃度で処方されるのが好ましい。上記水性溶媒とし
ては、低級アルコールが好ましく、低級アルコールの含
有量は、本発明の薬剤中に、20〜80重量％、さらに好ま
しくは40〜60重量％である。
【００２９】また、本発明の掻痒、肌荒れ、敏感肌及び
美白用薬剤には、上記必須成分以外に、通常化粧品や医
薬品等の皮膚外用剤に用いられる成分、例えば、その他
の美白剤、保湿剤、酸化防止剤、油性成分、紫外線吸収
剤、界面活性剤、増粘剤、アルコール類、粉末成分、色
剤、水性成分、水、各種皮膚栄養剤等を必要に応じて適
宜配合することができる。
【００３０】その他、薬剤の用途に合わせ、エデト酸二
ナトリウム、エデト酸三ナトリウム、クエン酸ナトリウ
ム、ポリリン酸ナトリウム、メタリン酸ナトリウム、グ
ルコン酸等の金属封鎖剤、カフェイン、タンニン、ベラ
パミル、トラネキサム酸およびその誘導体、甘草抽出
物、グラブリジン、カリンの果実の熱水抽出物、各種生
薬、酢酸トコフェロール、グリチルリチン酸およびその
誘導体またはその塩等の薬剤、ビタミンＣ、アスコルビ
ン酸リン酸マグネシウム、アスコルビン酸グルコシド、
アルブチン、コウジ酸等の他の美白剤、グルコース、フ
ルクトース、マンノース、ショ糖、トレハロース等の糖
類、レチノイン酸、レチノール、酢酸レチノール、パル
ミチン酸レチノール等のビタミンＡ類なども適宜配合す
ることができる。
【００３１】本発明の掻痒、肌荒れ、敏感肌及び美白用
薬剤は、その用途に合わせ、例えば化粧料、医薬品、医
薬部外品等の外用剤、例えば化粧水、クリーム、乳液、
ローション、パック、浴用剤、軟膏、ヘアーローショ
ン、ヘアートニック、ヘアーリキッド、シャンプー、リ
ンス、養毛・育毛剤等、従来皮膚外用剤に用いるもので
あればいずれでもよく、剤型は特に問わない。
【００３２】
【実施例】次に実施例によって本発明をさらに詳細に説
明する。
【００３３】実験例１ 乾燥刺激により角化細胞膜から放出されるSCFの測定と
抑制薬剤のスクリーニング 市販のヒト表皮角化細胞（新生児;Cryo NHEK-Neo,三光
純薬）を、市販の無血清培地（Defined Keratinocyte-S
FM,GIBCO社）を用いて培養した。１２穴マイクロプレー
トに1x105 cells/mLで細胞をまいて、コンフルエントに
なるまで約37℃で約72時間培養した。水またはエタノー
ルで抽出した図１及び２に示す各生薬エキスを2% w/v
となるように70%エタノールに溶解した。培養液中に終
濃度が0.005% w/vとなるように被験生薬エキスを加え、
37℃で24時間インキュベートした。コントロールとし
て、エタノール(EtOH)のみを加えたものもインキュベー
トした。最後の２時間は細胞の活性を検討するため、即
ち被験生薬エキスの細胞障害作用による影響を調べるた
め、 alamarBlue TM（バイオソース・インターナショナ
ル）を10％となるように添加し、上清の蛍光強度(excit
ation 560nm, emission 590nm)を測定した。乾燥刺激と
して、上清を完全に除去したのちCO2インキュベータ内
に１時間放置した。次いで培地を添加し、その２時間後
に上清を回収した。上清中SCF量を市販のELISA法による
測定キット（R&D Systems社）で定量した。乾燥刺激を
加えなかったものを対照として、被験生薬エキスのSCF
量抑制作用を評価した。同時に被験生薬エキスの持つ細
胞傷害性をalamarBlue TMの還元量を指標に評価した。
【００３４】その結果を図１及び２に示す。図１及び２
の(a)は各生薬エキスを添加した場合のalamarBlue TMの
還元量を示し、(b)は各生薬エキスを添加し、乾燥刺激
を与えた細胞の培地中の遊離ＳＣＦの量から、各生薬エ
キスを添加し、乾燥刺激を与えなかった細胞の培地中の
遊離ＳＣＦを差し引いた値を示す。図１及び２の結果か
ら明らかな通り、各種生薬エキスはエタノールと比較し
て培養液中のＳＣＦの量を有意に減少させ、従ってＳＣ
Ｆの産生及び／又は放出を効果的に抑制できることがわ
かった。
【００３５】実験例２ 各種刺激による角化細胞膜上でのSCFの発現の亢進 10cmプレートに150万個の角化細胞を播種し、72時間培
養した後に、(1)培地をPBS(-)に交換し、UVBを20mJ/cm2
で照射し直ちにPBS(-)を培地に交換するか、(2)フォル
スコリンを添加する又は(3)テオフォリンを添加して、
細胞に刺激を与えた。24時間培養後細胞を回収し、50mM
リン酸緩衝液(pH7.8)＋プロテアーゼ阻害剤溶液200μl
に細胞を拡散した後、超音波破砕機により30秒5回4℃で
細胞を破砕した。これを10,000g、20分、4℃で遠心分離
し、上清を更に100,000g、60分4℃で遠心分離した。得
られたペレットを25mMリン酸緩衝液(pH6.8)＋0.1%Trito
n-X100溶液100μlに溶かして、膜画分タンパク抽出液と
した。この溶液のタンパク量を定法により測定し、さら
にSCF量を測定して、SCF量／タンパク量の値を得た。
【００３６】その結果を図３及び４に示す。図の結果か
ら明らかな通り、細胞に紫外線刺激、又はフォルスコリ
ンやテオフィリン等の薬剤刺激を与えると、細胞内又は
細胞膜上でのＳＣＦの発現が亢進されることが明らかと
なった。
【００３７】実験例３ 紫外線刺激により角化細胞膜上に発現するSCFの測定と
抑制薬剤のスクリーニング 10cmプレートに150万個の角化細胞を播種し、72時間培
養した後に、培地をPBS(-)に交換、UVBを20mJ/cm2で照
射し、直ちにPBS(-)を培地に交換する。そこにスクリー
ニング対象生薬を添加し、24時間培養後細胞を回収し、
50mMリン酸緩衝液(pH7.8)＋プロテアーゼ阻害剤溶液200
μlに細胞を拡散した後、超音波破砕機により30秒5回4
℃で細胞を破砕した。これを10,000g、20分、4℃で遠心
分離し、上清を更に100,000g、60分4℃で遠心分離し
た。得られたペレットを25mMリン酸緩衝液(pH6.8)＋0.1
%Triton-X100溶液100μlに溶かして、膜画分タンパク抽
出液とした。この溶液のタンパク量を定法により測定
し、さらにSCF量を測定して、SCF量／タンパク量の値を
得た。この値について、対象薬剤添加群のうち、溶媒の
みを添加した群と比べて25%以下に低下せしめる候補生
薬を、上記抑制薬剤とする。
【００３８】その結果を図５に示す。図５の結果から明
らかな通り、各種生薬エキスで処理された細胞は、紫外
線照射のみで処理した細胞と比較してＳＣＦの発現が有
意に抑制されたことがわかった。
【００３９】以下に、種々の剤型の本発明による生薬エ
キス含有薬剤の処方例を列挙する。 実施例１ ボディー用クリーム 配合量（重量部） ──────────────────────────────────── メチルポリシロキサン 3 デカメチルシクロペンタシロキサン 13 オクタメチルシクロテトラシロキサン 12 ポリオキシエチレン・メチルポリシロキサン共重合体 1 エタノール 2 イソプロパノール 1 グリセリン 3 ジプロピレングリコール 5 ポリエチレングリコール6000 5 メタリン酸ナトリウム 0.05 DL-α-トコフェロール 2-L-アスコルビン酸リン酸 ジエステルカリウム 0.1 酢酸DL-α-トコフェロール 0.1 カフェイン 0.1 ウイキョウエキス 0.1 ハマメリスエキス 0.1 人参エキス 0.1 ソウジュツエキス末 0.005 Ｌ−メントール 適量 パラオキシ安息香酸エステル 適量 エデト酸３ナトリウム 0.05 ジモルホリノピリダジン 0.01 トリメトキシ桂皮酸メチルビス（トリメチルシロキシ） シリルイソペンチル 0.1 黄酸化鉄 適量 チタン酸コバルト 適量 ジメチルジステアリルアンモニウムヘクトライト 1.5 ポリビニルアルコール 0.1 ヒドロキシエチルセルロース 0.1 精製水 残余 トリメチルシロキシケイ酸 2 香料 適量
【００４０】 実施例２ 乳液 配合量（重量部） ──────────────────────────────────── メチルポリシロキサン 2 ベヘニルアルコール 1 キシリトール 1 バチルアルコール 0.5 グリセリン 5 １，３−ブチレングリコール 7 エリスリトール 2 硬化油 3 スクワラン 6 テトラ２−エチルヘキサン酸ペンタエリスリット 2 イソステアリン酸ポリオキシエチレングリセリル 1 モノステアリン酸ポリオキシエチレングリセリン 1 アンソウッコウエキス 0.001 水酸化カリウム 適量 ヘキサメタリン酸ナトリウム 0.05 フェノキシエタノール 適量 カルボキシビニルポリマー 0.11 精製水 残余
【００４１】 実施例３ 化粧水 配合量（重量部） ──────────────────────────────────── グリセリン 2 １，３−ブチレングリコール 4 エリスリトール 1 ポリオキシエチレンメチルグルコシド 1 ポリオキシエチレン硬化ヒマシ油 0.5 クエン酸 0.02 クエン酸ナトリウム 0.08 フェノキシエタノール 0.25 Ｎ−ヤシ油脂肪酸アシルＬ−アルギニンエチル・ＤＬ− ピロリドンカルボン酸 0.1 カギカズラ 0.0001 精製水 残余
【００４２】 実施例４ 美白化粧水 配合量（重量部） ──────────────────────────────────── エチルアルコール 10 ジプロピレングリコール 1 ポリエチレングリコール１０００ 1 ポリオキシエチレンメチルグルコシド 1 ホホバ油 0.01 トリ２−エチルヘキサン酸グリセリル 0.1 ポリオキシエチレン硬化ヒマシ油 0.2 ジイソステアリン酸ポリグリセリル 0.15 Ｎ−ステアロイル−Ｌ−グルタミン酸ナトリウム 0.1 クエン酸 0.04 クエン酸ナトリウム 0.18 水酸化カリウム 0.4 グリチルリチン酸ジカリウム 0.1 塩酸アルギニン 0.1 Ｌ−アスコルビン酸 ２−グルコシド 2 黄金エキス 0.1 雪ノ下エキス 0.1 パラベン 0.12 踊子草エキス 0.1 ジブチルヒドロキシトルエン 0.01 エデト酸３ナトリウム 0.05 パラメトキシ桂皮酸２−エチルヘキシル 0.01 サボンソウエキス 0.005 精製水 残余 ミネラル水 3 香料 適量
【００４３】 実施例５ トリートメント マスク 配合量（重量部） ──────────────────────────────────── エタノール 10 １，３−ブチレングリコール 6 ポリエチレングリコール４０００ 2 オリーブ油 1 マカデミアナッツ油 1 ヒドロキシステアリン酸フィトステリル 0.05 乳酸 0.05 乳酸ナトリウム液(50%) 0.2 Ｌ−アスコルビン酸硫酸エステル２ナトリウム 0.1 DL-α-トコフェロール ２−Ｌ−アスコルビン酸リン酸 ジエステルカリウム 0.1 ビタミンＥアセテート 0.1 魚コラーゲン 0.1 コンドロイチン硫酸トリウム 0.1 パラオキシ安息香酸エステル 0.1 カルボキシメチルセルロースナトリウム 0.2 ポリビニルアルコール 12.5 トラネキサム酸 1 ビャクジュツエキス末 0.001 精製水 残余 香料 適量
【００４４】 実施例６ 美白エッセンス 配合量（重量部） ──────────────────────────────────── ワセリン 2 メチルポリシロキサン 2 エチルアルコール 5 ベヘニルアルコール 0.5 バチルアルコール 0.2 グリセリン 7 １，３−ブチレングリコール 5 ポリエチレングリコール２００００ 0.5 ホホバ油 3 スクワラン 2 ヒドロキシステアリン酸コレステリル 0.5 テトラ２−エチルヘキサン酸ペンタエリスリット 1 ポリオキシエチレン硬化ヒマシ油 1 水酸化カリウム 0.1 ピロ亜硫酸ナトリウム 0.01 ヘキサメタリン酸ナトリウム 0.05 グリチルレチン酸ステアリル 0.1 パントテニルエチルエーテル 0.1 アルブチン 7 酢酸トコフェロール 0.1 ヒアルロン酸ナトリウム 0.05 ユーカリエキス 0.001 パラオキシ安息香酸エステル 適量 エデト酸３ナトリウム 0.05 ４−ｔ−ブチル−４'−メトキシジベンゾイルメタン 0.1 ジパラメトキシ桂皮酸モノ−２−エチルヘキサン酸グリセリル 0.1 黄酸化鉄 適量 キサンタンガム 0.1 カルボキシビニルポリマー 0.2 精製水 残余
【００４５】 実施例７ 掻痒用入浴剤 配合量（重量部） ──────────────────────────────────── 流動パラフィン 35 ポリエチレングリコール 20 スクワラン 5 ２−エチルヘキサン酸セチル 5 ポリオキシエチレン硬化ヒマシ油 5 クエン酸 0.1 クエン酸ナトリウム 0.2 グリシン 0.5 ヒアルロン酸ナトリウム 0.3 フェノキシエタノール 0.5 パリエタリアエキス 1 精製水 残余 香料 適量
【００４６】
【発明の効果】本発明に従って、ＳＣＦの産生・放出を
生薬を効率的にスクリーニングすることができた。
【図面の簡単な説明】
【図１】乾燥刺激を与えた細胞に対する各種生薬エキス
によるＳＣＦの抑制。
【図２】乾燥刺激を与えた細胞に対する各種生薬エキス
によるＳＣＦの抑制。
【図３】紫外線刺激による細胞のＳＣＦ発現の亢進。
【図４】薬剤刺激による細胞のＳＣＦ発現の亢進。
【図５】紫外線刺激を与えた細胞に対する各種生薬エキ
スによるＳＣＦの抑制。
───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (51)Int.Cl.7 識別記号 ＦＩ テーマコート゛(参考） Ａ６１Ｋ 35/78 Ａ６１Ｋ 35/78 Ｄ Ｈ Ｊ Ｔ 35/80 35/80 Ａ Ａ６１Ｐ 17/04 Ａ６１Ｐ 17/04 17/16 17/16 Ｇ０１Ｎ 33/15 Ｇ０１Ｎ 33/15 Ｚ 33/566 33/566 (72)発明者 青木 宏文 神奈川県横浜市都筑区早渕２−２−１ 株 式会社資生堂リサーチセンター（新横浜) 内 (72)発明者 藤原 留美子 神奈川県横浜市都筑区早渕２−２−１ 株 式会社資生堂リサーチセンター（新横浜) 内 Ｆターム(参考） 2G045 AA40 CB01 GC30 4C083 AA111 AA112 AA122 AB032 AB232 AB242 AB282 AB352 AB372 AB432 AC012 AC022 AC072 AC102 AC122 AC132 AC172 AC302 AC422 AC432 AC442 AC482 AC532 AC582 AC612 AC622 AC662 AC852 AD042 AD112 AD162 AD172 AD272 AD282 AD332 AD342 AD432 AD532 AD642 AD662 CC04 CC05 CC07 CC25 DD23 DD31 EE12 EE16 EE41 4C088 AA16 AB03 AB12 AB13 AB14 AB25 AB26 AB29 AB33 AB34 AB40 AB45 AB51 AB56 AB57 AB58 AB59 AB61 AB80 BA08 MA63 NA14 ZA89

Claims (16)

    【特許請求の範囲】
  1. 【請求項１】 幹細胞因子（以下「ＳＣＦ」）の産生及
    び／又は放出を抑制することにより掻痒、肌荒れもしく
    は敏感肌の改善効果又は美白効果を発揮する有効成分を
    スクリーニングする方法であって、ＳＣＦを発現する細
    胞を被験成分と接触させ、当該細胞が産生及び／又は放
    出するＳＣＦの量を測定してＳＣＦの産生及び／又は放
    出量を減少させる被験成分を前記有効成分として選定す
    る際、当該ＳＣＦ発現細胞に刺激を与えてＳＣＦの産生
    及び／又は放出を促進させることを特徴とする方法。
  2. 【請求項２】 前記刺激が乾燥刺激、紫外線照射刺激又
    は薬剤刺激である、請求項１記載のスクリーニング方
    法。
  3. 【請求項３】 前記ＳＣＦ発現細胞を前記被験成分と接
    触させ、次いで当該細胞に刺激を与え、しかる後に当該
    細胞が産生及び／又は放出するＳＣＦの量を測定して前
    記有効成分を選定する、請求項１又は２記載のスクリー
    ニング方法。
  4. 【請求項４】 バラエキスローズ水、チャエキス、ホッ
    プエキス、サンザシエキス、アズキ末、シラカバエキ
    ス、ケイヒエキス、チョウジエキス、アルニカエキス、
    ボタンエキス、ボダイジュ、クロレラエキス、ローマカ
    ミツレエキス、紅茶エキス、ユーカリエキス、ソウジュ
    ツエキス末、ビャクジュツエキス末、ウーロン茶エキス
    末、オノニスエキス、アセンヤクエキス、ブドウ葉エキ
    ス、ボウフウエキス、クワエキス、パリエタリアエキ
    ス、アンソッコウエキス、ステビアエキス、ヒノキ、シ
    ョウブ根エキス、ダイズエキス、カギカズラ、サボンソ
    ウエキス、アルテアエキス、オトギリソウエキス及びヨ
    モギエキスから成る群から選ばれる１又は複数を含んで
    成る、ＳＣＦ産生及び／又は抑制皮膚外用剤。
  5. 【請求項５】 ＳＣＦの産生及び／又は放出を抑制する
    成分を掻痒改善有効成分として含有する掻痒用皮膚外用
    剤。
  6. 【請求項６】 前記掻痒改善有効成分が、ホップエキ
    ス、サンザシエキス、アズキ末、チョウジエキス、ロー
    マカミツレエキス、紅茶エキス、ユーカリエキス、ソウ
    ジュツエキス末、ビャクジュツエキス末、ウーロン茶エ
    キス末、オノニスエキス、ボウフウエキス、パリエタリ
    アエキス、アンソッコウエキス、ステビアエキス、ショ
    ウブ根エキス、カギカズラ、サボンソウエキス、アルテ
    アエキス及びオトギリソウエキスから成る群から選ばれ
    る１又は複数を含んで成る、請求項６記載の掻痒用皮膚
    外用剤。
  7. 【請求項７】 ＳＣＦの産生及び／又は放出を抑制する
    成分を肌荒れ防止有効成分として含有する肌荒れ防止用
    皮膚外用剤。
  8. 【請求項８】 前記肌荒れ防止有効成分が、サンザシエ
    キス、ソウジュツエキス末、ビャクジュツエキス末、オ
    ノニスエキス、クワエキス、パリエタリアエキス、アン
    ソッコウエキス、ステビアエキス、ヒノキ、ショウブ根
    エキス、カギカズラ、サボンソウエキス及びアルテアエ
    キスから成る群から選ばれる１又は複数を含んで成る、
    請求項７記載の肌荒れ防止用皮膚外用剤。
  9. 【請求項９】 ＳＣＦの産生及び／又は放出を抑制する
    成分を敏感肌改善有効成分として含有する敏感肌用皮膚
    外用剤。
  10. 【請求項１０】 前記敏感肌改善有効成分が、バラエキ
    スローズ水、チャエキス、ホップエキス、サンザシエキ
    ス、アズキ末、シラカバエキス、ケイヒエキス、チョウ
    ジエキス、クロレラエキス、紅茶エキス、ユーカリエキ
    ス、ソウジュツエキス末、ビャクジュツエキス末、ウー
    ロン茶エキス末、オノニスエキス、アセンヤクエキス、
    ブドウ葉エキス、ボウフウエキス、クワエキス、パリエ
    タリアエキス、アンソッコウエキス、ステビアエキス、
    ヒノキ、ショウブ根エキス、ダイズエキス、カギカズ
    ラ、サボンソウエキス、アルテアエキス、オトギリソウ
    エキス及びヨモギエキスから成る群から選ばれる１又は
    複数を含んで成る、請求項９記載の敏感肌用皮膚外用
    剤。
  11. 【請求項１１】 ＳＣＦの産生及び／又は放出を抑制す
    る成分を美白有効成分として含有する美白用皮膚外用
    剤。
  12. 【請求項１２】 前記美白有効成分が、バラエキスロー
    ズ水、オノニスエキス、アセンヤクエキス、パリエタリ
    アエキス、アンソッコウエキス、サボンソウエキス、ク
    ロレラエキス及びユーカリエキスから成る群から選ばれ
    る１又は複数を含んで成る、請求項１１記載の美白用皮
    膚外用剤。
  13. 【請求項１３】 ＳＣＦの産生及び／又は放出を抑制す
    ることにより掻痒、肌荒れもしくは敏感肌の改善効果又
    は美白効果を発揮する有効成分をヒト又は哺乳動物の表
    皮に塗布することを含んで成る、掻痒、肌荒れもしくは
    敏感肌の改善又は美白方法。
  14. 【請求項１４】 紫外線刺激により角化細胞内又は細胞
    膜上に発現するＳＣＦを抑制する成分を含有する薬剤。
  15. 【請求項１５】 前記成分がバラエキスローズ水、チャ
    エキス、ホップエキス、サンザシエキス、アズキ末、シ
    ラカバエキス、ケイヒエキス、チョウジエキス、アルニ
    カエキス、ボタンエキス、ボダイジュ、クロレラエキ
    ス、ローマカミツレエキス、紅茶エキス、ユーカリエキ
    ス、ソウジュツエキス末、ビャクジュツエキス末、ウー
    ロン茶エキス末、オノニスエキス、アセンヤクエキス、
    ブドウ葉エキス、ボウフウエキス、クワエキス、パリエ
    タリアエキス、アンソッコウエキス、ステビアエキス、
    ヒノキ、ショウブ根エキス、ダイズエキス、カギカズ
    ラ、サボンソウエキス、アルテアエキス、オトギリソウ
    エキス及びヨモギエキスから成る群から選ばれる１又は
    複数である、請求項１４記載の薬剤。
  16. 【請求項１６】 前記成分がアズキ末、アルニカエキ
    ス、オノニスエキス又はアンソッコウエキスである、請
    求項１４記載の薬剤。
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