JP2004506738A5 - - Google Patents

Claims (38)

1. チオール含有メイタンシノイドの製造方法であって、
   (1)水素化リチウムトリメトキシアルミニウム（LiAl(OMe)₃H）、水素化リチウムトリエトキシアルミニウム（LiAl(OEt)₃H）および水素化リチウムトリプロポキシアルミニウム（LiAl(OPr)₃H）からなる群から選択される還元剤でメイタンシノイドC-3エステルの還元的加水分解を行って、メイタンシノールを得る工程；
   (2)前記メイタンシノールを精製して、副生成物が存在する場合にはそれを除去する工程；
   (3)前記精製メイタンシノールをカルボン酸でエステル化して、メイタンシノールのL-およびD-アミノアシルエステルの反応混合物を得る工程；
   (4)メイタンシノールの前記L-アミノアシルエステルを(3)で得られた反応混合物から分離する工程；
   (5)メイタンシノールの前記L-アミノアシルエステルを還元して、チオール含有メイタンシノイドを得る工程；ならびに
   (6)前記チオール含有メイタンシノイドを精製する工程
   を含む、製造方法。
2. (1)での前記還元剤が、水素化リチウムトリメトキシアルミニウムである請求項１に記載の方法。
3. (1)での前記還元剤を、メイタンシノイドC-3エステル１モル当たり約5〜100当量の濃度で使用する請求項１に記載の方法。
4. (1)での前記還元剤を、メイタンシノイドC-3エステル１モル当たり約7.5〜30当量の濃度で使用する請求項１に記載の方法。
5. (1)での前記還元剤を、メイタンシノイドC-3エステル１モル当たり約10〜20当量の濃度で使用する請求項１に記載の方法。
6. (1)での前記還元的加水分解を、約-80℃〜0℃の温度で行う請求項１に記載の方法。
7. (1)での前記還元的加水分解を、約-45℃〜-27.5℃の温度で行う請求項１に記載の方法。
8. (1)での前記還元的加水分解を、約-35℃〜30℃の温度で行う請求項１に記載の方法。
9. (1)での前記還元剤を、約5〜40分間かけて加える請求項１に記載の方法。
10. (1)での前記還元剤を、約7〜20分間かけて加える請求項１に記載の方法。
11. (1)での前記還元剤を、約8〜12分間かけて加える請求項１に記載の方法。
12. (2)において前記メイタンシノールを、クロマトグラフィーによって精製する請求項１に記載の方法。
13. 前記クロマトグラフィーが、シリカゲルカラムクロマトグラフィー、シリカゲルでの分取薄層クロマトグラフィーまたはシアノ結合シリカHPLCカラムクロマトグラフィーである請求項１２に記載の方法。
14. 前記クロマトグラフィーが、シリカゲルカラムクロマトグラフィーである請求項１２に記載の方法。
15. 前記精製を周囲温度で行う請求項１２に記載の方法。
16. 前記メイタンシノールを約95％の純度まで精製する請求項１２に記載の方法。
17. (3)における前記カルボン酸が、N-メチル-N-メチルジチオアセチル-L-アラニン、N-メチル-N-(3-メチルジチオ-プロパノイル)-L-アラニン、N-メチル-N-(3-メチルジチオ-ブタノイル)-L-アラニン、N-メチル-N-(4-メチルジチオ-ブタノイル)-L-アラニン、N-メチル-N-(5-メチルジチオ-ペンタノイル)-L-アラニン、N-メチル-N-(3-フェニルジチオ-プロパノイル)-L-アラニン、N-メチル-N-(3-(4-ニトロフェニルジチオ)-プロパノイル)L-アラニン、N-アセチル-N-メチル-メチルジチオシステインおよびN-アセチル-N-メチル-メチルジチオホモシステインからなる群から選択される請求項１に記載の方法。
18. (3)での前記カルボン酸が、N-メチル-N-(3-メチルジチオ-プロパノイル)-L-アラニンである請求項１に記載の方法。
19. (3)での前記エステル化を周囲温度で行う請求項１に記載の方法。
20. (3)での前記エステル化が、ジシクロヘキシルカルボジイミドおよび塩化亜鉛の使用をさらに含む請求項１に記載の方法。
21. (4)での前記分離を、シアノ結合シリカHPLCカラムに前記反応混合物を通すことで行う請求項１に記載の方法。
22. (4)での前記分離を約25℃で行う請求項１に記載の方法。
23. (5)での前記還元で、前記還元剤としてジチオトレイトールを用いる請求項１に記載の方法。
24. (5)での前記還元を、酢酸エチル−メタノール−緩衝水溶液の混合物であって、緩衝塩、ジチオトレイトール、未還元メイタンシノイド類および還元メイタンシノイド類を溶液の状態に維持できる混合物中で行う請求項１に記載の方法。
25. 前記酢酸エチル−メタノール−緩衝水溶液の混合物の酢酸エチル：メタノール：緩衝水溶液の体積比が、１：1.5：1である請求項２４に記載の方法。
26. 前記チオール含有メイタンシノイドの濃度を、そのチオール含有メイタンシノイドが酢酸エチル−メタノール−緩衝水溶液中に溶解した状態のままであるようなものとする請求項２４に記載の方法。
27. 前記チオール含有メイタンシノイドの濃度が約4g/Lである請求項２６に記載の方法。
28. (5)での前記還元を、酸素を含まない雰囲気下で行う請求項１に記載の方法。
29. (5)での前記還元を約25℃で行う請求項１に記載の方法。
30. (6)での前記チオール含有メイタンシノイドの前記精製を、クロマトグラフィーによって行う請求項１に記載の方法。
31. (6)での前記チオール含有メイタンシノイドの前記精製を、シアノ結合HPLCカラムクロマトグラフィーによって行う請求項３０に記載の方法。
32. 前記クロマトグラフィーを、有機溶媒で平衡とし、その溶媒で溶離するシアノ結合HPLCカラムによって行う請求項３１に記載の方法。
33. 前記有機溶媒が、ヘキサン：2-プロパノール：酢酸エチルの混合物である請求項３２に記載の方法。
34. 前記有機溶媒のヘキサン：2-プロパノール：酢酸エチルの体積比が78.0：5.5：16.5である請求項３３に記載の方法。
35. メイタンシノイドエステルの還元的加水分解で得られた混合物から、シアノ結合シリカカラムを用いた順相高速液体クロマトグラフィーによりメイタンシノールを分離することでメイタンシノールを製造する方法。
36. メイタンシノイドエステルがメイタンシノイドC-3エステルである、請求項３５に記載の方法。
37. 請求項３５に記載の方法により製造されたメイタンシノール。
38. 請求項３５に記載の方法により製造されたメイタンシノールを、細胞結合剤−メイタンシノイド複合体に変換することで製造された、細胞結合剤−メイタンシノイド複合体。