ES2253371T3 - Procedimiento para la preparacion y la purificacion de maitansinoides que contienen tiol. - Google Patents
Procedimiento para la preparacion y la purificacion de maitansinoides que contienen tiol.Info
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Abstract
Procedimiento para la preparación de un maitansinoide que contiene tiol que comprende las etapas siguientes: (1) llevar a cabo una hidrólisis reductora de un éster C-3 maitansinoide con un agente reductor seleccionado de entre el grupo constituido por hidruro de trimetoxialuminio litio (LiAl(OMe)3H), hidruro de trietoxialuminio litio (LiAl(OEt)3H) e hidruro de tripropoxialuminio litio (LiAl(OPr)3H), para proporcionar un maitansinol; (2) purificar el maitansinol para eliminar los productos secundarios cuando estén presentes; (3) esterificar el maitansinol purificado con un ácido carboxílico para proporcionar una mezcla de reacción de un éster L- y D-aminoacilo de maitansinol; (4) separar el éster L-aminoacilo de maitansinol de la mezcla de reacción en (3); (5) reducir el éster L-aminoacilo de maitansinol para proporcionar un maitansinoide que contiene un tiol; y (6) purificar el maitansinoide que contiene tiol.
Description
Procedimiento para la preparación y la
purificación de maitansinoides que contienen tiol.
La presente invención se refiere a un
procedimiento para la preparación y purificación de agentes
citotóxicos. Más específicamente, la presente invención se refiere a
un procedimiento para la preparación y purificación de agentes
citotóxicos que comprenden maitansinoides que contienen tiol. Estos
agentes citotóxicos se pueden utilizar como agentes terapéuticos
uniéndolos a un agente de unión celular, mediante el grupo tiol, y
administrándolos a continuación a una población celular específica
de una manera objetiva.
En los últimos años, han aparecido una miríada de
informes para tratar de responder al objetivo específico de células
tumorales con conjugados fármaco-anticuerpo
monoclonal (R.V.J. Chari., 31 Adv. Drug Deliv. Res.,
89-104 (1998); G.A. Pietersz y K. Krauer, 2
J. Drug Targeting 183-215 (1994); Sela
et al., en Immunoconjugates 189-216
(C. Vogel, ed.1987); Ghose et al., en Targeted Drugs
1-22 (E. Goldberg, ed. 1983); Diener et al.,
en Antibody mediated delivery systems 1-23
(J. Rodwell, ed. 1988); Pietersz et al., en Antibody
mediated delivery systems 25-53 (J. Rodwell,
ed.1988); Bumol et al., en Antibody mediated delivery
system 55-79 (J. Rodwell, ed.1988). Los fármacos
citotóxicos tales como metotrexato, daunorrubicina, doxorrubicina,
vincristina, vinblastina, melfalán, mitomicina C y clorambucilo se
han conjugado con una diversidad de anticuerpos monoclonales de
murino. En algunos casos, las moléculas de fármaco se unieron a
moléculas de anticuerpos mediante una molécula vehículo
intermediaria tal como la albúmina de suero (Garnett et al.,
46 Cancer Res. 2407-2412 (1986); Ohkawa et
al., 23 Cancer Immunol. Immunother. 81-86
(1986); Endo et al., 47 Cancer Res.
1076-1080 (1980)), dextrán (Hurwitz et al., 2
Appl. Biochem. 25-35 (1980); Manabi et
al., 34 Biochem. Pharmacol. 289-291
(1985); Dillman et al., 46 Cancer Res.
4886-4891 (1986); Shoval et al., 85 Proc.
Natl.Acad . Sci. 8276-8280 (1988)), o
ácido poliglutámico (Tsukada et al., 73 J. Natl. Canc.
Inst. 721-729 (1984); Kato et al., 27
J. Med. Chem. 1602-1607 (1984); Tsukada et
al., 52 Br. J. Cancer 111-116
(1985)).
Se ha utilizado un amplio conjunto de tecnologías
de unión para la preparación de tales inmunoconjugados y se han
investigado tanto ligantes escindibles como no escindibles. En la
mayoría de los casos, el potencial citotóxico completo de los
fármacos solo se pudo observar, sin embargo, si las moléculas de
fármaco podían liberarse de los conjugados en forma no modificada
en un sitio objetivo.
Uno de los ligantes escindibles que se ha
utilizado para la preparación de conjugados
fármaco-anticuerpo es un ligante lábil a los ácidos
basado en ácido cis-aconítico que aprovecha el
entorno ácido de diferentes compartimentos intracelulares tales
como los endosomas que se encuentran durante la endocitosis mediada
por receptor y los lisosomas. Shen y Riser introdujeron este
procedimiento para la preparación de conjugados de daunorrubicina
con vehículos macromoleculares (102 Biochem. Biophys. Res.
Commun. 1048-1054 (1981)). Yang y Reisfeld
utilizaron la misma técnica para conjugar daunorrubicina con un
anticuerpo de antimelanoma (80 J. Natl. Canc. Inst.
1154-1159 (1988)). Dillman et al., utilizaron
asimismo un ligante lábil a los ácidos de manera similar para
preparar conjugados de daunorrubicina con un anticuerpo celular
anti-T (48 Cancer Res.
6097-6102 (1988)). Trail et al., unieron
daunorrubicina a los anticuerpos vía un enlace de hidrazona lábil a
los ácidos (52 Cancer Res. 5693-5700
(1992)).
Una aproximación alternativa, explorada por
Trouet et al., involucraba la unión de daunorrubicina a un
anticuerpo vía un brazo espaciador de péptido (79 Proc. Natl.
Acad. Sci. 626-629 (1982)). Esto se llevó a
cabo bajo la premisa de que el fármaco libre podía liberarse de tal
conjugado mediante la acción de peptidasas lisosomiales.
En los ensayos de citotoxicidad in vitro,
sin embargo, se ha revelado que los conjugados
anticuerpo-fármaco consiguieron raramente la misma
potencia de citotoxicidad que los fármacos libres no conjugados.
Esto sugirió que los mecanismos por los cuales las moléculas de
fármaco se liberan de los anticuerpos son muy ineficientes. En el
área de las inmunotoxinas, se mostró que los conjugados formados vía
puentes de disulfuro entre anticuerpos monoclonales y toxinas de
proteína activas catalíticamente que eran más citotóxicos que los
conjugados que contienen otros ligantes. Ver, Lambert et
al., 260 J. Biol.Chem. 12035-12041
(1985); Lambert et al., en Immunotoxins
175-209 (A. Frankel, ed. 1988); Ghetie et
al., 48 Cancer Res. 2610-2617 (1988).
Esto se atribuyó a una concentración intracelular elevada de
glutatión que contribuye a la eficacia de escisión del enlace
disulfuro entre una molécula de anticuerpo y una toxina. A pesar de
esto, existen sólo pocos ejemplos publicados de la utilización de
puentes de disulfuro para la preparación de conjugados entre
fármacos y macromoléculas. Shen et al., describió la
conversión de metotrexato en un derivado de mercaptoetilamida
seguido de una conjugación con
poli-D-lisina vía un enlace
disulfuro (260 J. Biol. Chem. 10905-10908
(1985)). Un informe reciente describió la preparación de un
conjugado del fármaco caliqueamicina tóxico que contenía trisulfuro
con un anticuerpo (L. M. Hinman et al., 53 Cancer Res.
3336-3342 (1993); E. L. Sievers et al., 93
Blood 3678-3684 (1999).
Una razón para la falta de conjugados
fármaco-anticuerpo unidos por disulfuro es la no
disponibilidad de fármacos citotóxicos que posean una mitad que
contenga un átomo de azufre que se pueda utilizar fácilmente para
unir el fármaco a un anticuerpo vía un puente de disulfuro. Además,
la modificación química de fármacos existentes es difícil sin la
disminución de su potencial citotóxico.
Otra desventaja muy importante con los conjugados
anticuerpo-fármaco existentes es su incapacidad para
administrar una concentración suficiente de fármaco al sitio
objetivo a causa de un número limitado de antígenos objetivo y de
la citotoxicidad relativamente moderada de fármacos cancerostáticos
como metotrexato, daunorrubicina y vincristina. Por ejemplo, se
evaluó un conjugado de anticuerpo de doxorrubicina en pruebas
clínicas humanas y se descubrió que era ineficaz (Tolcher
et al., 17 J. Clinical Oncol.
478-484 (1999)). Para conseguir una citotoxicidad
significativa, se hace necesaria la unión de un gran número de
moléculas de fármaco bien directamente a un anticuerpo o bien
mediante una molécula vehículo polimérica. Sin embargo, tales
anticuerpos modificados profundamente muestran a menudo uniones con
el antígeno objetivo dañadas y se depuran rápidamente de la
corriente sanguínea in vivo.
Los maitansinoides son fármacos elevadamente
citotóxicos. La maitansina se aisló por primera vez por Kupchan
et al., del arbusto de África del este Maytenus
serrata y demostró ser de 100 a 1000 veces más citotóxica
que los agentes quimioterapéuticos de cáncer convencionales tales
como metotrexato, daunorrubicina y vincristina (patente US nº
3.896.111). Posteriormente se descubrió que algunos microbios
producen asimismo maitansinoides, tales como maitansinol y ésteres
C-3 de maitansinol (patente US nº 4.151.042). Se han
publicado asimismo los ésteres C-3 sintéticos de
maitansinol y los análogos de maitansinol (Kupchan et al.,
21 J. Med. Chem. 31-37 (1978);
Higashide et al., 270 Nature 721-722
(1977); Kawai et al., 32 Chem. Pharm. Bull.
3441-3451 (1984)). Ejemplos de análogos de
maitansinol a partir de los cuales se han preparado los ésteres
C-3 incluyen maitansinol con modificaciones del
anillo aromático (p. ej. descloro) o en el C-9,
C-14 (p. ej., grupo hidroximetilado),
C-15, C-18, C-20 y
C-4,5.
Los ésteres C-3 que aparecen en
la naturaleza y los sintéticos se pueden clasificar en dos
grupos:
- (a)
- ésteres C-3 con ácidos carboxílicos simples (patentes US nº 4.248.870; nº 4.265.814; nº 4.308.268; nº 4.308.269; nº 4.309.428; nº 4.317.821; nº 4.322.348; nº 4.331.598), y
- (b)
- ésteres C-3 con derivados de N-metil-L-alanina (patentes US nº 4.137.230; nº 4.260.608; nº 5.208.020; nº 5.416.064; y 12 Chem. Pharm. Bull. 3441 (1984)).
Se descubrió que los ésteres del grupo (b) eran
más citotóxicos que los ésteres del grupo (a).
La maitansina es un inhibidor mitótico. Se ha
publicado que el tratamiento de las células L1210 in vivo
resulta en un 67% de las células acumuladas en la mitosis. Las
células de control sin tratar se publicaron para demostrar un
índice mitótico que está en un intervalo de entre 3,2 y 5,8% (Sieber
et al., 43 Comparative Leukemia Research 1975,
Bibl. Haemat. 495-500 (1976)). Los
experimentos con huevos de erizo marino y huevos de almeja han
sugerido que la maitansina inhibe la mitosis interfiriendo con la
formación de microtúbulos mediante la inhibición de la
polimerización de la proteína de microtúbulo, tubulina (Remillard
et al., 189 Science 1002-1005
(1975)).
Se ha descubierto que las suspensiones de células
leucémicas de murina P388, L1210 y LY5178 in vitro se
inhiben mediante la maitansina a dosis de 10^{-3} a 10^{-1}
microgramos/ml, siendo la línea P388 la más sensible. La maitansina
ha demostrado asimismo ser una inhibidora activa del crecimiento
in vitro de las células de carcinoma nasofaringeal humano.
Se describió que la línea de leucemia linfoblástica aguda humana
C.E.M. se inhibía con concentraciones tan bajas como 10^{-7}
microgramos/ml (Wolpert-DeFillippes et al.,
24 Biochem. Pharmacol. 1735-1738
(1975)).
(1975)).
La maitansina ha demostrado asimismo ser activa
in vivo. El crecimiento tumoral en el sistema de leucemia
linfocítico P388 demostró que se inhibía más de 50 a 100 veces el
intervalo de dosificación lo que sugirió un índice terapéutico
elevado; se pudo demostrar asimismo la actividad inhibidora
significativa con el sistema de leucemia de ratón L1210, el sistema
de carcinoma de pulmón Lewis humano y el sistema de melanocarcinoma
B-16 humano. (Kupchan, 33 Ped. Proc.
2288-2295 (1974)).
Debido a que los maitansinoides son elevadamente
citotóxicos, se esperaba que fuesen de utilidad en el tratamiento
de muchas enfermedades como el cáncer. Esta expectativa todavía no
se ha cumplido. Las pruebas clínicas con maitansina no fueron
favorables debido a un número de efectos secundarios (Issel et
al., 5 Can. Trtmnt. Rev. 199-207
(1978)). Los efectos adversos al sistema nervioso central y los
síntomas gastrointestinales fueron responsables de que algunos
pacientes rehusaran la terapia adicional (Issel en 204) y resultó
que la maitansina se asoció con la neuropatía periférica que se
podría acumular (Issel en 207).
Sin embargo, se han descrito las formas de
maitansinoide que son elevadamente citotóxicas, pero que se pueden
utilizar eficazmente en el tratamiento de muchas enfermedades
(patentes US nº 5.208.020 y nº 5.416.064; Chari et al., 52
Cancer Res. 127-131 (1992); Liu et
al., 93 Proc. Natl. Acad. Sci 8618-8623
(1996)).
Una desventaja adicional de la utilización
terapéutica de los maitansinoides, de interés en la presente
memoria, es que el procedimiento para la preparación y purificación
de maitansinoides que contienen tiol implica diferentes etapas
cromatográficas ineficientes que son engorrosas, no son escalables
fácilmente y resultan sólo en rendimientos moderados.
Las patentes US nº 5.208.020 y nº 5.416.064
describen que un maitansinoide que contiene un tiol se puede
producir en primer lugar la conversión de maitansinoide que
contiene un grupo éster en el maitansinol, esterificando a
continuación el maitansinoide que resulta con derivados de
N-metil-L-alanina o N-metil-L-cisteína
para proporcionar maitansinoides que contienen disulfuro, seguido de
una escisión del grupo disulfuro con ditiotreitol a los
maitansinoides que contienen tiol. Sin embargo, este procedimiento
implica distintas etapas ineficaces que son engorrosas y resultan
sólo en rendimientos moderados.
Más específicamente, en primer lugar se derivó el
maitansinol de maitansina o de otros ésteres de maitansinol por
reducción, tal como con hidruro de aluminio y litio. (Kupchan, S. M.
et al., 21 J. Med. Chem. 31-37
(1978); patente US nº 4.360.462). Es posible asimismo aislar el
maitansinol del microorganismo Nocardia (ver Higashide et
al., patente US nº 4.151.042). En un ejemplo específico, se
describió en la patente US nº 4.162.940 la conversión de
ansamitocina P-3 en maitansinol mediante hidrólisis
reductora con hidruro de aluminio y litio en tetrahidrofurano
a
-5ºC. Sin embargo, la reacción con hidruro de aluminio y litio resulta en la formación de diversos productos secundarios que se pueden eliminar solo mediante una cuidadosa cromatografía de capa fina preparativa sobre gel de sílice. De este modo, este procedimiento no está disponible para su utilización a escala industrial.
-5ºC. Sin embargo, la reacción con hidruro de aluminio y litio resulta en la formación de diversos productos secundarios que se pueden eliminar solo mediante una cuidadosa cromatografía de capa fina preparativa sobre gel de sílice. De este modo, este procedimiento no está disponible para su utilización a escala industrial.
La etapa siguiente en el procedimiento es la
conversión de maitansinol a diferentes derivados de éster utilizando
derivados de N-metil-L-alanina o
N-metil-L-cisteína, y agentes adecuados tales como
diciclohexilcarbodiimida (DCC) y cantidades catalíticas de cloruro
de zinc (ver patente US nº 4.137.230; Kawai et al., 32
Chem. Pharm. Bull. 3441-3951 (1984); patente
US nº 4.260.609). Los dos productos diastereoisoméricos contienen
las cadenas laterales de D- y L-aminoacilo, como
hace una porción pequeña de maitansinol sin reaccionar. Mientras el
maitansinol sin reaccionar se separa fácilmente de sus ésteres
mediante cromatografía de columna sobre gel de sílice, los ésteres
de maitansinoide diastereoisomérico son raramente separables. En el
procedimiento descrito anteriormente (Kupchan, S. M. 21 J. Med.
Chem. 31-37 (1978); patente US nº 4.360.462), se
obtiene el éster L-aminoacilo deseado después de la
purificación sobre dos columnas de gel de sílice seguida de una
purificación adicional mediante purificación con cromatografía de
capa fina preparativa sobre gel de sílice. De este modo, este
procedimiento no está asimismo disponible para su utilización a
escala industrial.
La última etapa en el procedimiento, la reducción
de maitansinoides que contienen disulfuro al maitansinoide que
contiene tiol correspondiente, se consigue mediante tratamiento con
ditiotreitol (DTT), purificación mediante HPLC utilizando una
columna C-18 y eluyendo con un gradiente lineal de
55% a 80% de acetonitrilo en H_{2}O. Sin embargo, esta etapa
resulta en bajos rendimientos y no está asimismo disponible para su
utilización a escala industrial. Los maitansinoides que contienen
tiol no son muy solubles en la mezcla de disolventes etanol/agua
utilizada en la reacción. Además, la purificación mediante HPLC en
una columna C-18 de fase inversa utilizando
acetonitrilo/agua como fase móvil resulta en una recuperación pobre
y puede resultar en la dimerización de algún
producto.
producto.
En consecuencia, es enormemente necesario un
procedimiento mejorado para la preparación y purificación de
maitansinoides que contienen tiol, que reduzca la complejidad del
procedimiento, permita el escalado e incremente el rendimiento.
De este modo, el objetivo de la presente
invención es proporcionar un procedimiento mejorado para la
preparación y purificación de maitansinoides que contienen tiol que
reduce la complejidad del procedimiento, permite el escalado y
mejora el rendimiento.
Se han conseguido este y otros objetivos
proporcionando un procedimiento mejorado para la preparación y
purificación de maitansinoides que contienen tiol.
En una forma de realización, la presente
invención proporciona un procedimiento para la preparación de un
maitansinoide que contiene tiol que comprende las etapas de:
- (1)
- llevar a cabo una hidrólisis reductora de un éster C-3 de maitansinoide con un agente reductor seleccionado de entre el grupo constituido por hidruro de trimetoxialuminio litio (LiAl(OMe_{3})H), hidruro de trietoxialuminio litio (LiAl(OEt)_{3}H), hidruro de tripropoxialuminio litio (LiAl(OPr)_{3}H), hidruro de sodio y trimetoxialuminio (NaAl(OMe)_{3}H), hidruro de trietoxialuminio sodio (NaAl(OEt)_{3}H) e hidruro de tripropoxialuminio sodio (NaAl(OPr)_{3}H), para proporcionar un maitansinol;
- (2)
- purificar el maitansinol para eliminar los productos secundarios cuando estén presentes;
- (3)
- esterificar el maitansinol purificado con un ácido carboxílico para proporcionar una mezcla de reacción de un éster L- y D-aminoacilo de maitansinol;
- (4)
- separar el éster L-aminoacilo de maitansinol de la mezcla de reacción en (3);
- (5)
- reducir el éster L-aminoacilo de maitansinol para proporcionar un maitansinoide que contiene tiol; y
- (6)
- purificar el maitansinoide que contiene tiol.
Preferentemente, el agente reductor en (1) es
hidruro de trimetoxialuminio litio.
Preferentemente asimismo, el agente reductor en
(1) se utiliza en una concentración de aproximadamente 5 a 100
equivalentes por mol del éster C-3 de maitansinoide.
Más preferentemente, el agente reductor en (1) se utiliza en una
concentración de aproximadamente 7,5 a 30 equivalentes por mol del
éster C-3 del maitansinoide. Más preferentemente,
el agente reductor en (1) se utiliza en una concentración de
aproximadamente 10 a 20 equivalentes por mol del éster
C-3 del maitansinoide.
Preferentemente, la hidrólisis reductora en (1)
se lleva a cabo a una temperatura de aproximadamente -80ºC a 0ºC.
Más preferentemente, la hidrólisis reductora en (1) se lleva a cabo
a una temperatura de aproximadamente -45ºC a -27,5ºC. Más
preferentemente, la hidrólisis reductora en (1) se lleva a cabo a
una temperatura de aproximadamente -35ºC a -30ºC.
Preferentemente, el agente reductor en (1) se
añade durante un periodo de aproximadamente 5 a 40 minutos. Más
preferentemente, el agente reductor en (1) se añade durante un
periodo de aproximadamente 7 a 20 minutos. Más preferentemente, el
agente reductor en (1) se añade durante un periodo de
aproximadamente 8 a 12 minutos.
Preferentemente, el maitansinol se purifica en
(2) mediante cromatografía. Más preferentemente, el maitansinol se
purifica en (2) mediante cromatografía en la que la cromatografía es
cromatografía de columna de gel de sílice, cromatografía de capa
fina preparativa sobre gel de sílice o cromatografía de columna de
HPLC de sílice unida a ciano. Más preferentemente, el maitansinol se
purifica en (2) mediante cromatografía en la que la cromatografía es
cromatografía de columna de gel de sílice.
Preferentemente, la purificación en (2) se lleva
a cabo a temperatura ambiente.
Preferentemente, el maitansinol en (2) se
purifica hasta una pureza de aproximadamente 95%.
Preferentemente, el ácido carboxílico en (3) se
selecciona de entre el grupo constituido por
N-metil-N-metilditio-
acetil-L-alanina, N-metil-N-(3-metilditiopropanoíl)-L-alanina, N-metil-N-(3-metilditiobutanoíl)-L-alanina, N-metil-N-(4-metilditiobutanoíl)-L-alanina, N-metil-N-(5-metilditiopentanoíl)-L-alanina, N-metil-N-(3-fenilditiopropanoíl)-L-
alanina, N-metil-N-[3-(4-nitrofenilditio)-propanoíl]-L-alanina, N-acetil-N-metil-metil-ditiocisteína y N-acetil-N-metil-metilditiohomocisteína. Más preferentemente, el ácido carboxílico en (3) es N-metil-N-(3-metilditiopropanoíl)-L-alanina.
acetil-L-alanina, N-metil-N-(3-metilditiopropanoíl)-L-alanina, N-metil-N-(3-metilditiobutanoíl)-L-alanina, N-metil-N-(4-metilditiobutanoíl)-L-alanina, N-metil-N-(5-metilditiopentanoíl)-L-alanina, N-metil-N-(3-fenilditiopropanoíl)-L-
alanina, N-metil-N-[3-(4-nitrofenilditio)-propanoíl]-L-alanina, N-acetil-N-metil-metil-ditiocisteína y N-acetil-N-metil-metilditiohomocisteína. Más preferentemente, el ácido carboxílico en (3) es N-metil-N-(3-metilditiopropanoíl)-L-alanina.
Preferentemente, la esterificación en (3) se
lleva a cabo a temperatura ambiente.
Preferentemente, la esterificación en (3)
comprende adicionalmente la utilización de diciclohexilcarbodiimida
y cloruro de zinc.
Preferentemente, la separación en (4) se lleva a
cabo pasando la mezcla de reacción a través de una columna de HPLC
de sílice unida a ciano.
Preferentemente, la separación en (4) se lleva a
cabo aproximadamente a 25ºC.
Preferentemente, la reducción en (5) utiliza
ditiotreitol como agente reductor.
Preferentemente, la reducción en (5) se lleva a
cabo en una mezcla de acetato de
etilo-metanol-tampón acuoso que es
capaz de mantener las sales de tampón, ditiotreitol, maitansinoides
no reducidos y maitansinoides reducidos en solución. Más
preferentemente, la mezcla de acetato de
etilo-metanol-tampón acuoso es
1:1,5:1, v/v/v, acetato de etilo: metanol: tampón acuoso.
Preferentemente, la concentración de
maitansinoide que contiene tiol es tal que el maitansinoide que
contiene tiol permanece soluble en acetato de
etilo-metanol-tampón acuoso.
Preferentemente, la concentración del maitansinoide que contiene
tiol es aproximadamente 4 g/l.
Preferentemente, la reducción en (5) se lleva a
cabo en una atmósfera libre de oxígeno.
Preferentemente, la reducción en (5) se lleva a
cabo a aproximadamente 25ºC.
Preferentemente, la purificación del
maitansinoide que contiene tiol en (6) se lleva a cabo mediante
cromatografía. Más preferentemente, la cromatografía se lleva a cabo
mediante columna de HPLC de ciano. Más preferentemente, la
cromatografía se lleva a cabo mediante columna de HPLC unida a ciano
equilibrada y eluída con un disolvente orgánico. Preferentemente, el
disolvente orgánico es una mezcla de hexano:
2-propanol:acetato de etilo, más preferentemente el
disolvente es una mezcla de
hexano:2-propanol:acetato de etilo 78,0:5,5:16,5,
v/v/v.
\newpage
La Fig. 1 muestra la reducción de ansamitocinas
1a-e para proporcionar maitansinol (2).
La Fig. 2a muestra la conversión de los ácidos
\omega-mercaptocarboxílicos 3a-e a
los respectivos derivados metilditio 4a-e.
La Fig. 2b muestra la conversión del ácido
\omega-mercaptocarboxílico 3b a los respectivos
derivados arilditio 5a-b.
La Fig. 2c muestra la conversión de los derivados
metilditio 4a-e y de los derivados arilditio
5a-b a derivados de N-metil-L-alanina
6a-g que contienen un grupo disulfuro.
La Fig. 3a muestra la conversión de
N-metilcisteína y N-metilhomocisteína
(7a-b) a los derivados de disulfuro respectivos
8a-b.
La Fig. 3b muestra la acilación de los derivados
de disulfuro 8a-b a los derivados de
N-metil-L-cisteína 9a-b que contienen
un grupo disulfuro.
La Fig. 4 muestra la esterificación de
maitansinol (2) con los derivados de N-metil-L-alanina
6a-g que contienen un grupo disulfuro para
proporcionar los esteroisómeros de maitansinoide que contienen
disulfuro 10, a partir de los cuales se separan los isómeros L por
medio de cromatografía para proporcionar los isómeros L de
maitansinoide que contienen disulfuro 10a-g, los
cuales a su vez se reducen para proporcionar los maitansinoides que
contienen tiol 11a-g.
La Fig. 5 muestra la esterificación de
maitansinol (2) con los derivados de
N-metil-L-cisteína 9a-b que contienen
un grupo disulfuro para proporcionar los esteroisómeros de
maitansinoide que contienen disulfuro 12, a partir de los cuales se
separan los isómeros L por medio de cromatografía para proporcionar
los isómeros L de maitansinoide que contienen disulfuro
12a-b, los cuales a su vez se reducen para
proporcionar los maitansinoides que contienen tiol
13a-b.
La presente invención se basa en la síntesis de
derivados de maitansinoide que contienen tiol que retienen una
citotoxicidad elevada y que se pueden unir eficazmente a los agentes
de unión celulares. Esta técnica revela que los procedimientos
existentes para producir los maitansinoides que contienen tiol son
complejos, no escalables y producen un rendimiento de producto bajo.
La presente invención supera estos problemas describiendo un
procedimiento nuevo para producir maitansinoides que contienen tiol
que reduce la complejidad del procedimiento, permite el escalado y
mejora el rendimiento de producto.
De este modo, la presente invención proporciona
un procedimiento nuevo para la producción de maitansinoides que
contienen tiol, agentes útiles para la eliminación de células
enfermas o anormales que se van a destruir o lisar, tales como
células tumorales (particularmente células de tumores sólidas),
células infectadas de virus, células infectadas de microorganismos,
células infectadas de parásitos, células autoinmunes (células que
producen autoanticuerpos), células activadas (las implicadas en el
rechazo de transplante o transplante versus enfermedades del
huésped), o cualquier otro tipo de células enfermas o anormales,
mientras muestran un mínimo de efectos secundarios.
Estos maitansinoides que contienen tiol se pueden
unir químicamente a un agente de unión celular mientras se mantiene
una citotoxicidad elevada en la forma unida o en la forma liberada o
en ambos casos. La citotoxicidad elevada se define como que muestra
una toxicidad que posee un IC_{50} -la concentración inhibidora de
una sustancia tóxica que deja una fracción superviviente de 0,5- de
aproximadamente 10^{-8} M o menos cuando se mide in vitro
con células KB tras 24 h del tiempo de exposición al fármaco.
La eficacia de los compuestos de la presente
invención como agentes terapéuticos depende de la selección
cuidadosa de un agente de unión celular apropiado. Los agentes de
unión celular pueden ser de cualquier clase conocida actualmente, o
que lleguen a conocerse e incluyen péptidos y no péptidos. Por lo
general, estos pueden ser anticuerpos (especialmente anticuerpos
monoclonales), linfocinas, hormonas, factores de crecimiento,
moléculas de transporte de nutrientes (tales como transferrina), o
cualquier otra molécula de unión celular o sustancia.
Existen un número de descripciones que muestran
la producción de maitansinoides y derivados de maitansinoides que
se pueden utilizar como un agente citotóxico. Ejemplos de
maitansinoides adecuados incluyen maitansinol y análogos de
maitansinol. Ejemplos de análogos de maitansinol adecuados incluyen
los que poseen un anillo aromático modificado y los que poseen
modificaciones en otras posiciones.
Ejemplos específicos de análogos adecuados de
maitansinol que poseen un anillo aromático modificado, y el
procedimiento para su producción, incluyen:
- (1)
- C-19-descloro (patente US nº 4.256.746) (preparado mediante reducción con hidruro de litio y aluminio de ansamitocina P-2);
- (2)
- C-20-hidroxi (o C-20-desmetil +/-C-19-descloro (patentes US nº 4.361.650 y nº 4.307.016) (preparado mediante desmetilación utilizando Streptomyces o Actinomyces o descloración utilizando LAH); y
- (3)
- C-20-desmetoxi, C-20-aciloxi (-OCOR), +/-descloro (patente US nº 4.294.757) (preparado mediante acilación utilizando cloruros de acilo).
Ejemplos específicos de análogos de maitansinol
adecuados que poseen modificaciones de otras posiciones
incluyen:
- (1)
- C-9-SH (patente US nº 4.424.219) (preparado mediante la reacción de maitansinol con H_{2}S o P_{2}S_{5});
- (2)
- C-14-alcoximetil (desmetoxi/CH_{2}OR) (patente US nº 4.331.598);
- (3)
- C-14-hidroximetil o aciloximetil (CH_{2}OH o CH_{2}OAc) (patente US nº 4.450.254) (preparado a partir de Nocardia);
- (4)
- C-15-hidroxi/aciloxi (patente US nº 4.364.866) (preparado mediante la conversión de maitansinol mediante Streptomyces);
- (5)
- C-15-metoxi (patente US nº 4.313.946 y nº 4.315.929) (aislado a partir de Trewia nudiflora);
- (6)
- C-18-N-desmetil (patente US nº 4.362.663 y nº 4.322.348) (preparado a partir de la desmetilación de maitansinol mediante Streptomyces); y
- (7)
- 4,5-deoxi (patente US nº 4.371.533) (preparado mediante reducción de maitansinol con tricloruro de titanio/LAH).
Para unir el maitansinoide al agente de unión
celular, se utiliza un grupo ligante.
Los grupos ligantes adecuados son bien conocidos
en la técnica e incluyen grupos disulfuro, grupos tioéter, grupos
hábiles a los ácidos, grupos fotolábiles, grupos lábiles a la
peptidasa y grupos lábiles a la estearasa. Los grupos disulfuro y
los grupos tioéter son los preferidos.
Según la presente invención el grupo ligante, es
parte de una mitad química que se une covalentemente al
maitansinoide mediante los procedimientos descritos. En una forma
de realización preferida, la mitad química se une covalentemente al
maitansinoide vía una unión éster.
Se espera que sean útiles muchas posiciones de
maitansinoides como la posición ligante, dependiendo del tipo de
unión. Por ejemplo, para formar una unión éster, se espera que sean
útiles la posición C-3 que posee un grupo hidroxilo,
la posición C-14 que está modificada con
hidroximetilo, la posición C-15 que está modificada
con hidroxi y la posición C-20 que posee un grupo
hidroxilo. Sin embargo, se prefiere la posición C-3
y se prefiere especialmente la posición C-3 de
maitansinol.
Asimismo preferidos son el éster
C-3 de maitansinol que contiene
N-metil-L-alanina y un éster C-3 de
maitansinol que contiene N-metil-L-cisteína o sus
análogos.
La presente invención describe un procedimiento
para la preparación y purificación de un maitansinoide que contiene
tiol que coloca el grupo ligante en el C-3 de
maitansinol.
Etapa
1
La primera etapa en la preparación y purificación
de maitansinoides que contienen tiol implica la hidrólisis reductora
de un éster C-3 de maitansinoide a maitansinol
(2).
- A)
- Se disuelve un éster C-3 de maitansinoide en un disolvente anhidro, a continuación se coloca bajo una atmósfera de gas inerte y se enfría.
Preferentemente, el éster C-3 de
maitansinoide es maitansina o ansamitocina P-3 (1c).
Se puede asimismo utilizar cualquier ansamitocina
(1a-e), tal como las ansamitocinas
P-4, P-3, P-2 y
P-1 (descritas en Asai et al.,
Tetrahedron 1079-1085 (1979): patente US nº
4.450.234; Hatano et al., 48 Agric. Biol. Chem.
1721-1729 (1984)), más preferentemente la
ansamitocina P-3 (1c). La maitansina se puede
obtener según se describe en Kupchan et al., 42 J. Org.
Chem. 2349-2357 (1977). La preparación
microbiológica de ansamitocina P-3 (1c) se describe
en la patente US nº 4.450.234 y en Hatano et al., 48
Agric. Biol. Chem. 1721-1729 (1984).
Preferentemente, el disolvente anhidro es
tetrahidrofurano (THF), éter de 2-metoxietilo,
dioxano o éter de dietilo, aunque se pueden utilizar otros
disolventes. Más preferentemente, el disolvente anhidro es
tetrahidrofurano. Preferentemente, se utilizan de 20 a 30 ml de
disolvente anhidro por gramo de éster, más preferentemente 25 ml/g.
Preferentemente, el gas inerte es argón, nitrógeno o helio, aunque
se pueden utilizar otros gases. Más preferentemente, el gas inerte
es argón. Preferentemente, la solución se mantiene entre
aproximadamente 0 y -80ºC, más preferentemente entre
aproximadamente -30 y -50ºC, más preferentemente entre
aproximadamente -35 y -45ºC, en un baño seco de hielo y
acetona.
- B)
- se enfría asimismo un agente reductor, y a continuación se transfiere a una solución enfriada del éster C-3 del maitansinoide. La reacción se mantiene bajo una atmósfera de gas inerte, a una temperatura baja, agitándose.
Preferentemente, el agente reductor es hidruro de
trimetoxialuminio litio (LiAl(OMe)_{3}H), hidruro de
trietoxialuminio litio (LiAl(OEt)_{3}H), hidruro de
tripropoxialuminio litio (LiAl(OPr)_{3}H), hidruro
de sodio y trimetoxialuminio (NaAl(OMe)_{3}H),
hidruro de trietoxialuminio sodio (NaAl(OEt)_{3}H) o
hidruro de tripropoxialuminio sodio (NaAl
(OPr)_{3}H). Más preferentemente, el agente reductor es hidruro de trimetoxialuminio litio (LiAl(OMe)_{3}H). Preferentemente, el agente reductor se enfría de aproximadamente -30 a -40ºC en un baño seco de hielo y acetona. Preferentemente, el agente reductor enfriado se transfiere a una solución enfriada del éster C-3 del maitansinoide vía una cánula. Preferentemente, el gas inerte es argón, nitrógeno o helio, aunque se pueden utilizar otros gases. Más preferentemente, el gas inerte es argón.
(OPr)_{3}H). Más preferentemente, el agente reductor es hidruro de trimetoxialuminio litio (LiAl(OMe)_{3}H). Preferentemente, el agente reductor se enfría de aproximadamente -30 a -40ºC en un baño seco de hielo y acetona. Preferentemente, el agente reductor enfriado se transfiere a una solución enfriada del éster C-3 del maitansinoide vía una cánula. Preferentemente, el gas inerte es argón, nitrógeno o helio, aunque se pueden utilizar otros gases. Más preferentemente, el gas inerte es argón.
Preferentemente, el agente reductor se utiliza en
una concentración de aproximadamente 5 a 100 equivalentes por mol
del éster C-3 del maitansinoide, más preferentemente
de aproximadamente 7,5 a 30 equivalentes por mol, más
preferentemente de aproximadamente 10 a 20 equivalentes por mol. Un
experto ordinario en la materia entenderá que la utilización de
agente reductor en cantidades mayores de aproximadamente 100
equivalentes por mol del éster C-3 de maitansinoide
puede resultar en productos secundarios no deseados.
Preferentemente, el agente reductor se añade a la solución enfriada
del éster C-3 de maitansinoide durante un periodo de
tiempo que está en el intervalo de aproximadamente 5 a 40 minutos,
más preferentemente de aproximadamente 7 a 20 minutos, más
preferentemente de aproximadamente 8 a 12 minutos. Preferentemente,
la reacción se mantiene bajo una atmósfera de gas inerte en un
intervalo de temperatura de aproximadamente -25ºC a -80ºC, más
preferentemente de aproximadamente -27ºC a -45ºC, más
preferentemente de aproximadamente -30ºC a -35ºC. Preferentemente,
la reacción se agita entre aproximadamente 30 min y tres horas, más
preferentemente durante aproximadamente tres horas.
Un experto en la materia entenderá que la
cantidad de agente reductor utilizado, la temperatura mantenida
durante la reacción, la duración del periodo de tiempo durante el
cual se añade el agente reductor y el tiempo de reacción son cada
uno dependientes del otro. Por ejemplo, cuanto más baja sea la
cantidad de agente reductor, más largo será el tiempo de reacción.
Similarmente, cuanto más baja sea la temperatura, más grande será el
exceso de agente reductor requerido y más largo será el tiempo
requerido para acabar la reacción. Además, cuanto más lenta sea la
velocidad a la que se añade el agente reductor, más largo será el
tiempo de reacción requerido para acabar la reacción.
- C)
- La reacción se enfría, se extrae, se seca y se filtra. El disolvente se evapora bajo presión reducida para proporcionar maitansinol crudo.
Preferentemente, la reacción se enfría mediante
la adición de solución saturada de cloruro de sodio, agua o
solución de cloruro de amonio, más preferentemente mediante la
adición de solución saturada de cloruro de sodio. Preferentemente,
la reacción se enfría utilizando entre aproximadamente 20 y 40 ml de
la solución por gramo de éster de maitansinoide utilizado.
Preferentemente, la reacción se extrae con acetato de etilo,
diclorometano, tolueno, cloroformo o éter, más preferentemente con
acetato de etilo. Preferentemente, la reacción se extrae a una
velocidad de entre aproximadamente 4 x 80 y 4 x 200 ml/g del éster
de maitansinoide utilizado. Preferentemente, los extractos de
acetato de etilo combinados se secan sobre sulfato de sodio o
sulfato de magnesio, más preferentemente sulfato de sodio y se
filtran.
- D)
- El maitansinol crudo (2) se puede purificar, si se requiere, mediante cromatografía.
En una forma de realización preferida, el
maitansinol crudo (2) se puede purificar disolviéndolo en un
volumen mínimo de acetato de etilo, diclorometano, éter, cloroformo
o tolueno, más preferentemente acetato de etilo, y purificarlo vía
cromatografía de columna de gel de sílice utilizando diclorometano,
cloroformo, acetato de etilo o tolueno, más preferentemente
diclorometano. Preferentemente, el maitansinol (2) se eluye con una
etapa de gradiente que se inicia con diclorometano o acetato de
etilo, o una mezcla de diclorometano:acetato de etilo:alcohol,
cloroformo:acetato de etilo o tolueno:acetato de etilo,
preferentemente 77:23:0, v/v/v, diclorometano:acetato de
etilo:alcohol. La concentración de alcohol se incrementa lentamente
desde 0 a aproximadamente 20%, preferentemente de 0 a
aproximadamente 10%. Las fracciones que contienen el producto
deseado se agrupan y se evaporan bajo presión reducida para
proporcionar maitansinol puro (2) como un sólido blanco. La
purificación se puede llevar a cabo a temperatura ambiente,
Preferentemente, la purificación se lleva a cabo a una temperatura
de aproximadamente 20ºC a 25ºC. Preferentemente, el alcohol es
metanol, etanol, n-propanol, isopropanol, n-, iso-,
sec- o terc-butanol, más preferentemente
metanol.
En otra forma de realización preferida, el
maitansinol crudo (2) se puede purificar utilizando una columna de
HPLC de sílice unida a ciano que eluye en fase normal, utilizando
disolventes orgánicos en la fase móvil. El maitansinol crudo (2) se
disuelve en acetato de etilo, acetato de etilo:isopropanol:hexano
(fase móvil) o en acetato de etilo-isopropanol,
preferentemente acetato de etilo, inyectado en la columna, y se
recoge el pico apropiado. Preferentemente la columna de HPLC de
ciano que se utiliza para la separación es una que posee grupos
cianopropilo y cianodiisopropilo unidos de forma estable al
esqueleto de sílice. Tales columnas están disponibles bajo las
denominaciones comerciales Diazem™, Zorbax™, Monochrom™, y
Kromasil™, por nombrar unas pocas. Preferentemente, el disolvente
orgánico utilizado en la fase móvil es
hexano:2-propanol:diclorometano:acetato de etilo.
Preferentemente, la concentración de cada constituyente del
disolvente orgánico está en el intervalo de
65-75:2-4:15-20:5-10,
v/v/v, respectivamente. Más preferentemente, la concentración de
cada elemento del disolvente orgánico es 72:3:18:7, v/v/v/v.
Preferentemente, el maitansinol (2) purificado
mediante este procedimiento es por lo menos 90% puro, más
preferentemente por lo menos 95% puro. Un experto ordinario en la
materia entenderá que si el maitansinol (2) de menos del 90% de
pureza se utiliza en las etapas siguientes, se pueden requerir
etapas de purificación adicional.
Un experto en la materia entenderá que la
reacción de reducción puede proporcionar pequeñas cantidades de
productos secundarios no deseados, además del maitansinol (2). De
este modo, se puede requerir la purificación para eliminar los
contaminantes. Sin embargo, si no se generan los productos
secundarios, tales como los que establecen los tiempos,
temperaturas, y cantidades exactos, no se requiere a continuación la
etapa de purificación.
Etapa
2
El maitansinol (2) de la Etapa 1 se esterifica a
continuación con derivados de N-metil-L-alanina que
contienen disulfuros 6a-g o derivados de
N-metil-L-cisteína 9a-b, en presencia
de diciclohexilcarbodiimida (DCC) y cloruro de zinc, para
proporcionar ésteres L- y D-aminoacilo de
maitansinol 10a-g y 12a-b, que
contienen un grupo ligante disulfuro. A continuación se separan los
estereoisómeros y se recoge el éster L-aminoacilo.
Ya que la reacción de esterificación resulta en alguna epimerización
en el centro quiral de los derivados de aminoácidos
6a-g y 9a-b, un experto en la
materia entenderá que las versiones racémicas de
6a-g y 9a-b (es decir, una mezcla D
y L) se pueden utilizar en la Etapa 2, en lugar de los
estereoisómeros.
- A)
- En una forma de realización, los derivados de N-metil-L-alanina 6a-g que contienen un grupo disulfuro se producen mediante la conversión de ácidos \omega-mercaptocarboxílicos 3a-e de longitudes de cadena diferentes en su respectivo metilditio, p. ej., 4a-e (en el que n = 1 a 4, incluyendo alifáticos ramificados y cíclicos), o arilditio, p. ej., 5a-b, derivados mediante la reacción con metanotiosulfonato de metilo o disulfuros de arilo, tales como disulfuro de difenilo y disulfuros de difenilo sustituidos en el anillo y disulfuros heterocíclicos, tales como 2,2'-ditiopiridina. Estos ácidos carboxílicos se hacen reaccionar a continuación con N-metil-L-alanina para formar los derivados de N-metil-L-alanina deseados que contienen un grupo disulfuro 6a-g que se condensarán con maitansinol (2) para formar maitansinoides que contienen grupos ligantes de disulfuro 10a-g.
Se puede preparar N-metil-L-alanina
según se describe en la literatura (ver, Fu, S. J. & Birnbaum,
S. M., 75 J. Amer. Chem. Soc. 918 (1953)), o se puede
obtener comercialmente (Sigma Chemical Company).
Preferentemente, los derivados de
N-metil-L-alanina que contienen un grupo disulfuro son
N-metil-N-metilditio-
acetil-L-alanina, N-metil-N-(3-metilditiopropanoíl)-L-alanina, N-metil-N-(4-metilditiobutanoíl)-L-alanina, N-metil-N-(3-metilditiobutanoíl)-L-alanina, N-metil-N-(5-metilditiopentanoíl)-L-alanina, N-metil-N-(3-fenilditiopropanoíl)-L-
alanina y N-metil-N-[3-(4-nitrofenilditio)-propanoíl]-L-alanina.
acetil-L-alanina, N-metil-N-(3-metilditiopropanoíl)-L-alanina, N-metil-N-(4-metilditiobutanoíl)-L-alanina, N-metil-N-(3-metilditiobutanoíl)-L-alanina, N-metil-N-(5-metilditiopentanoíl)-L-alanina, N-metil-N-(3-fenilditiopropanoíl)-L-
alanina y N-metil-N-[3-(4-nitrofenilditio)-propanoíl]-L-alanina.
- B)
- En otra forma de realización, la N-metil-L-cisteína (7a) o N-metil-L-homocisteína (7b) se puede convertir a los derivados de disulfuro respectivos 8a-b (n = 1 y 2, respectivamente), que a continuación se acilan para proporcionar los derivados de N-metil-L-cisteína o N-metil-L-homocisteína deseados que contienen un grupo disulfuro 9a-b (n = 1 y 2 respectivamente). Estos derivados que contienen sulfuro 9a-b condensarán con maitansinol (2) para formar maitansinoides que contienen grupos ligantes disulfuro 12a-b.
La N-metil-L-cisteína se puede
preparar según se describe en Undheim y Eidem, 23 Acta Chem.
Scand. 3129-3133 (1970).
Preferentemente, los derivados de
N-metil-L-cisteína que contienen un grupo disulfuro
son
N-acetil-N-metil-metilditiocisteína
(9a) y
N-acetil-N-metil-metilditiohomocisteína
(9b).
- C)
- Se esterifica el maitansinol (2) con un derivado de N-metil-L-alanina o de N-metil-L-cisteína que contiene un grupo disulfuro (6a-g y 9a-b) preparando en primer lugar una solución de derivado que contiene disulfuro. Esta solución se agita bajo una atmósfera de gas inerte, y se trata secuencialmente con soluciones de (a) DCC o EDC (hidrocloruro de [3-(dimetilamino)propil]-3-etilcarbodiimida), preferentemente DCC, (b) ZnCl_{2} y (c) maitansinol. La mezcla se agita hasta que se acaba la reacción. Después de que la reacción se acabe, se filtra y se evapora el filtrado bajo presión reducida proporcionando una mezcla de los ésteres L- y D-aminoacilo 10 y 12 de maitansinol.
Como se ha indicado anteriormente, ya que la
reacción de esterificación resulta en alguna epimerización en el
centro quiral de los derivados de aminoácido 6a-g y
9a-b, un experto en la materia entenderá que las
versiones racémicas de 6a-g y 9a-b
(es decir, una mezcla D y L) se pueden utilizar en lugar de los
estereoisómeros.
Preferentemente, el derivado de
N-metil-L-alanina o el derivado de
N-metil-L-cisteína que contiene un grupo disulfuro es
N-metil-N-(metilditiopropanoíl)-L-alanina (6b)
y N-acetil-N-metil-metilditiocisteína
(9a), respectivamente. Preferentemente, la solución del derivado que
contiene disulfuro comprende el cloruro de metileno seco,
tetrahidrofurano, o éter, preferentemente cloruro de metileno seco,
utilizando entre aproximadamente 10 y 50 ml/gramo de maitansinol,
preferentemente 20 ml/gramo. Preferentemente, el gas inerte es
argón, nitrógeno o helio, aunque se pueden utilizar otros gases. Más
preferentemente, el gas inerte es argón.
Preferentemente, el DCC o EDC está en cloruro de
metileno, tetrahidrofurano o éter, preferentemente cloruro de
metileno, utilizando aproximadamente de 10 a 15 ml por gramo de DCC
o de EDC, preferentemente 12 ml/g. Preferentemente, la solución de
DCC o de EDC se añade a una velocidad de aproximadamente 5 a 7
moles/mol de maitansinol. Preferentemente, ZnCl_{2} es
aproximadamente 1 M, y se utiliza entre aproximadamente 1,2 a 1,5
moles/mol de maitansinol, preferentemente 1,25 moles, en éter o
cloruro de metileno, preferentemente éter. Preferentemente, el
maitansinol está en cloruro de metileno, tetrahidrofurano o éter,
más preferentemente cloruro de metileno, utilizando aproximadamente
de 10 a 120 ml de disolvente por gramo de maitansinol,
preferentemente 100 ml/g. La mezcla de reacción se agita entre 4 y
30ºC, preferentemente a temperatura ambiente, durante 1 a 24 horas,
preferentemente tres horas. Un experto ordinario en la materia
entenderá que la duración del tiempo en el que la reacción requiere
agitación depende de la temperatura, resultando un tiempo de
reacción más largo con temperaturas inferiores.
- D)
- La separación de los ésteres L- y D-aminoacilo de maitansinol 10a-g y 12a-b se lleva a cabo vía una columna de HPLC de sílice unida a ciano que eluye en fase normal, utilizando disolventes orgánicos en la fase móvil. Se inyecta en la columna una solución de la mezcla de ésteres L- y D-aminoacilo de maitansinol, disuelta en acetato de etilo o en hexano:2-propanol:acetato de etilo. La fase móvil se puede ajustar para obtener una separación en los tiempos de retención de los dos isómeros que exceda los 10 minutos.
Alternativamente, la separación se puede llevar a
cabo utilizando cromatografía de gel de sílice, pero el
procedimiento no se convierte a escala industrial de forma fácil. La
separación se puede llevar a cabo a través de otros, menos
deseables, medios tales como HPLC que utiliza columnas quirales o
columnas de sílice.
Preferentemente, las columnas de HPLC de ciano
que se utilizan para la separación son las que poseen grupos
cianopropilo y cianodiisopropilo unidos de forma estable al
esqueleto de sílice. Tales columnas están disponibles bajo las
denominaciones comerciales de Diazem™, Zorbax™, Monochrom™ y
Kromasil™, entre otras. Preferentemente, el disolvente orgánico
utilizado en la fase móvil es
hexano:2-propanol:acetato de etilo. Preferentemente,
el rendimiento de la separación es superior a aproximadamente 90% y
el producto es por lo menos aproximadamente 95% puro, más
preferentemente, ópticamente puro. Bajo las condiciones mencionadas
anteriormente, el isómero L deseado posee un tiempo de retención de
aproximadamente 36 a 46 min, preferentemente 42 min, mientras el
isómero D eluye de aproximadamente 50 a 60 minutos, preferentemente
56 min. Preferentemente, la esterificación se lleva a cabo a
aproximadamente 25ºC.
Etapa
3
Para obtener los maitansinoides que contienen
tiol 11a-g y 13a-b, los ésteres
L-aminoacilo de maitansinol obtenidos a partir de
la Etapa 2 se disuelven en una solución que comprende un disolvente
y un alcohol. Esta mezcla se agita bajo una atmósfera de gas inerte
y se trata con una solución de ditiotreitol o ditioeritritol, en un
tampón, y que contiene ácido etilendiamintetraacético (EDTA). El
progreso de la reacción se puede monitorizar mediante HPLC y se
completa generalmente en 3 h, aunque se pueda variar entre 1 y 24
h. La reacción acabada se trata con una solución tampón que contiene
EDTA y se extrae a continuación. Las fases orgánicas se combinan,
se lavan y se secan. La evaporación del disolvente deja un residuo
de maitansinoide que contiene tiol crudo 11a-g y
13a-b, que se puede purificar utilizando una columna
de HPLC de sílice unida a ciano. Las fracciones que contienen el
producto se pueden evaporar para proporcionar maitansinoide puro que
contiene tiol como un sólido blanco.
Preferentemente, el disolvente en el que se
disuelven los ésteres L-aminoacilo de maitansinol
obtenidos en la Etapa 2 es acetato de etilo, diclorometano o éter,
más preferentemente acetato de etilo, utilizando aproximadamente de
60 a 80 ml de disolvente por gramo de maitansinoide, preferentemente
72 ml/g. Preferentemente, el alcohol en que se disuelven los
ésteres L-aminoacilo de maitansinol obtenidos en la
Etapa 2 es metanol o etanol, más preferentemente metanol, utilizando
aproximadamente de 90 a 120 ml de alcohol por gramo de
maitansinoide, preferentemente 108 ml/g. Preferentemente, la
reacción entre ésteres L-aminoacilo de maitansinol y
ditiotreitol está en una mezcla de acetato de etilo:metanol:tampón
acuoso que es capaz de mantener las sales tampón, ditiotreitol y
maitansinoides (formas reducidas y no reducidas) en solución. Más
preferentemente, la reacción entre ésteres
L-aminoacilo de maitansinol y ditiotreitol está en
una mezcla de 1:5:1 de acetato de etilo:metanol:tampón acuoso.
Preferentemente, la concentración de ésteres
L-aminoacilo de maitansinol utilizados en la Etapa 3
es menor de aproximadamente 4 g/l de forma que los ésteres
L-aminoacilo de maitansinol permanecen
solubilizados.
Preferentemente, la reacción de reducción se
lleva a cabo en una atmósfera libre de oxígeno. Preferentemente, el
gas inerte es argón, nitrógeno o helio, aunque se puedan utilizar
otros gases. Más preferentemente, el gas inerte es argón.
Preferentemente, la reacción de reducción se
lleva a cabo entre 4 y 30ºC, más preferentemente a temperatura
ambiente. Un experto en la materia entenderá que la reacción se
puede llevar a cabo a temperaturas inferiores, sin embargo, el
tiempo requerido para acabar la reacción aumenta.
Preferentemente, la solución que contiene los
ésteres L-aminoacilo de maitansinol se trata con
ditiotreitol, ditioeritritol o un reactivo de fosfina tal como
tris(2-carboxietil)fosfina (TCEP), más
preferentemente ditiotreitol, utilizando aproximadamente de 2 a 3
moles de agente reductor por mol de maitansinoide, preferentemente
2,5 moles/mol, en tampón de fosfato de potasio, tampón de fosfato de
sodio o tampón de trietanolamina, preferentemente tampón de fosfato
de potasio, el tampón a una concentración de entre aproximadamente
20 y 100 mM, preferentemente 50 mM, utilizando de 60 a 80 ml del
tampón DTT por gramo de maitansinoide, preferentemente 72 ml/g, y
que contiene aproximadamente 1 a 10 mM, preferentemente 2 mM de
ácido etilendiamintetraacético (EDTA).
Preferentemente, la reacción acabada se trata con
una solución de tampón de fosfato de potasio 0,2 M, tampón de
fosfato de sodio o tampón de trietanolamina, más preferentemente
tampón de fosfato de potasio, utilizando aproximadamente de 120 a
160 ml de tampón por gramo de maitansinoide, preferentemente 144
ml/g y que contiene aproximadamente 1 a 10 mM, preferentemente 2 mM
de EDTA. Preferentemente, la extracción se lleva a cabo con acetato
de etilo, diclorometano, o éter, más preferentemente acetato de
etilo, utilizando de 200 a 500 ml por gramo de maitansinoide,
preferentemente 300 ml/g, repetida tres veces. Preferentemente, las
fases orgánicas combinadas se lavan con una solución saturada de
cloruro de sodio, agua o una solución saturada de cloruro de amonio,
más preferentemente una solución saturada de cloruro de sodio,
utilizando de 40 a 100 ml por gramo de maitansinoide,
preferentemente 50 ml/g y a continuación se seca sobre sulfato de
sodio o sulfato de magnesio, preferentemente sulfato de sodio.
Preferentemente, las columnas de HPLC de ciano
que se utilizan para la separación son las que poseen grupos
cianopropilo y grupos cianodiisopropilo unidos de forma estable al
esqueleto de sílice. Tales columnas están disponibles bajo las
denominaciones comerciales de Diazem™, Zorbax™, Monochrom™ y
Kromasil™, por nombrar unas pocas. Más preferentemente, se utiliza
una columna CN preparativa Diazem (250 mm x 50 mm, tamaño de
partícula de 10 micrones). Preferentemente, el disolvente orgánico
utilizado en la fase móvil es
hexano:2-propanol:acetato de etilo. Más
preferentemente, el disolvente orgánico utilizado en la fase móvil
es una mezcla de hexano:2-propanol:acetato de etilo
70,0:5,5:16,5 (v/v/v). Preferentemente, la velocidad de flujo es 150
ml/min. Preferentemente, el rendimiento de la separación es superior
al 75%, y el producto es por lo menos aproximadamente 90% puro, más
preferentemente, por lo menos aproximadamente 95% puro.
Preferentemente, los maitansinoides que contienen tiol deseados
11a-d y 13a-b poseen un tiempo de
retención de 16 min, dentro de un intervalo de aproximadamente 14 a
18
min.
min.
Los ejemplos específicos de
N-metil-L-alanina que contienen derivados de
maitansinoide descritos en la presente invención se representan por
las fórmulas (I)-(IV):
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip1.000000\baselineskip
en la que: Z representa H o SR, en
la que R representa un grupo metilo, alquilo lineal, alquilo
ramificado, alquilo cíclico, arilo simple o sustituido o
heterociclo; / representa un entero de 1 a 10; y may
representa un
maitansinoide.
en la que: R_{1} y R_{2}, que
puede ser la misma o diferente, representa H, CH_{3} o
CH_{2}CH_{3}; Z representa H o SR, en la que R representa un
grupo metilo, alquilo lineal, alquilo ramificado, alquilo cíclico,
arilo simple o sustituido o heterociclo; m representa 0, 1, 2
ó 3; y may representa un
maitansinoide.
en la que: Z representa H o SR, en
la que R representa un grupo metilo, alquilo lineal, alquilo
ramificado, alquilo cíclico, arilo simple o sustituido o
heterociclo; p representa un entero de 3 a 8; y may
representa un
maitansinoide.
en la que: Z representa H o SR, en
la que R representa un grupo metilo, alquilo lineal, alquilo
ramificado, alquilo cíclico, arilo simple o sustituido o
heterociclo; q representa un entero de 1 a 10; Y representa
Cl o H; y X representa H o
CH_{3}.
Ejemplos específicos de derivados de
maitansinoide que contienen N-metil-L-cisteína útiles
en la presente invención se representan por las fórmulas (V) y
(VI):
en la que: Z representa H o SR, en
la que R representa un grupo metilo, alquilo lineal, alquilo
ramificado, alquilo cíclico, arilo simple o sustituido o
heterociclo; o representa 1 ó 2; q representa 0 o un
entero de 1 a 10; y may representa un
maitansinoide.
en la que: Z representa H o SR, en
la que R representa un grupo metilo, alquilo lineal, alquilo
ramificado, alquilo cíclico, arilo simple o sustituido o
heterociclo; o representa 1 ó 2; q representa 0 o un
entero de 1 a 10; Y representa Cl o H; y X representa H o
CH_{3}.
Ejemplos de alquilos lineales incluyen metilo,
etilo, propilo, butilo, pentilo y hexilo.
Ejemplos de alquilos ramificados incluyen
isopropilo, isobutilo, sec-butilo,
terc-butilo, isopentilo y
1-etilpropilo.
Ejemplos de alquilos cíclicos incluyen
ciclopropilo, ciclobutilo, ciclopentilo y ciclohexilo.
Ejemplos de arilos simples incluyen fenilo y
naftilo.
Ejemplos de arilos sustituidos incluyen arilos
tales como los descritos anteriormente sustituidos con grupos
alquilos, con halógenos, tales como Cl, Br, F, grupos nitro, grupos
amino, grupos ácido sulfónico, grupos ácido carboxílico, grupos
hidroxi y grupos alcoxi.
Ejemplos de heterociclos son compuestos en los
que los heteroátomos se seleccionan de entre el grupo que comprende
O, N y S, e incluyen pirrolilo, piridilo, furilo y tiofeno.
Según se ha utilizado en la presente memoria, los
términos "temperatura de habitación" y "temperatura
ambiente" significan temperatura ambiental o temperatura no
controlada. El término "pureza óptica" significa que la pureza
excede un 98%. Cuando se especifican los intervalos en la presente
memoria, p. ej., temperatura, tiempo, concentración, etc. el
intervalo incluye todos los valores específicos dentro del
intervalo, además de subintervalos que están dentro del intervalo
general. Cuando los valores se señalan que son
"aproximadamente" un valor específico, o un intervalo de
valores, se entiende que se incluyen en estos valores además las
variaciones estadísticamente insignificantes.
La presente invención se ilustrará ahora haciendo
referencia a los ejemplos no limitativos. A menos que se
especifique lo contrario, todos los porcentajes, proporciones,
partes, etc., están expresados en peso.
Los puntos de fusión se determinaron en un
aparato de punto de fusión electrotérmico. Los espectros de la
resonancia magnética de protón (^{1}H RMN) se obtuvieron en un
espectrómetro de Varian™ EM360 a 60 MHz o en un aparato Brucker™
AM300 a 300 MHz. Los cambios químicos se describen en valores
\delta relativos a un estándar de tetrametilsilano interno (TMS).
Los espectros UV se grabaron en un espectrofotómetro Perkin Elmer™
\lambda4A. Las rotaciones ópticas se determinaron utilizando un
polarímetro de Perkin Elmer™ modelo 241. Se utilizó para un
análisis de HPLC y purificación un instrumento equipado con longitud
de onda o detector UV de ordenación de diodos Rainin™ HP, Hewlett
Packard™ o Hitachi™ y una columna C-18 Radialpack
Waters™ o una columna ciano Diazem™ o una columna ciano Kromasil™.
Los análisis elementales se llevaron a cabo en Atlantic Microlabs,
Atlanta, Ga.
El ácido 2-mercaptoacético (3a),
el ácido mercaptopropanoico (3b) y el ácido
4-mercaptobutanoico (3c) están disponibles
comercialmente.
Ácido 5-mercaptopentanoico (3d).
El ácido 5-mercaptopentanoico (3d) se preparó
mediante una modificación de un procedimiento de la literatura
(Khim et al., 37 J. Org . Chem.
2714-2720 (1972)). Se añadió tiourea (0,761 g, 0,01
mol) a una solución agitada de ácido
5-bromopentanoico (1,80 g, 0,01 mol) en etanol
absoluto (25 ml) y se hizo reflujo a la mezcla de reacción durante 6
horas. A continuación se añadió una solución de NaOH acuoso al 50%
(20 ml) y se hizo el reflujo de la mezcla durante dos horas
adicionales. A continuación la mezcla se diluyó con agua (100 ml),
se acidificó (HCl acuoso) y se extrajo con acetato de etilo (4 x 50
ml). Las fases orgánicas combinadas se secaron sobre sulfato de
sodio y se evaporaron a presión reducida. El residuo se
cromatografió sobre gel de sílice eluyendo con cloruro de
metileno/acetato de etilo para dar 0,885 g (66%) de un líquido
incoloro. ^{1}H RMN (CDCl_{3}) \delta 1,3 (1H, t), 1,6 (4H,
m), 2,4 (4H, m), 11,5 (1H, s).
Ácido 3-mercaptobutanoico (3e).
Se añadió una solución de \beta-butirolactona
disponible comercialmente (3,0 g, 35,0 mmol) en tetrahidrofurano (20
ml) a diisopropiletilamina (10,0 g, 77,5 mmol). La mezcla de
reacción se agitó bajo una atmósfera de argón y se trató con ácido
tioacético (3,0 g, 39,0 mmol). La mezcla de reacción se agitó a
temperatura ambiente durante 6 h. El disolvente se evaporó a
continuación y el producto se purificó mediante cromatografía de
columna sobre gel de sílice, eluyendo con etilo:hexano (3:1, v/v)
que contenía 3% de ácido acético. El derivado de tioacetato de 3e se
obtuvo como un aceite incoloro (2,0 g, 35% rendimiento). ^{1}H RMN
(CDCl_{3}): \delta 1,5 (3H, d), 2,3 (3H, s), 2,8 (2H, d), 4,0
(1H, m) y 11,3 (1H, s). El tioacetato se convirtió en el tiol 3e por
hidrólisis básica. Una solución de tioacetato (1,5 g, 9,3 mmol) en
metanol (6 ml) se trató con una solución de hidróxido de sodio en
agua 3,3 M (10 ml). La reacción se agitó bajo una atmósfera de
argón. El progreso de la reacción se monitorizó mediante TLC y se
juzgó completo en 3 h. La mezcla de reacción se acidificó mediante
la adición de ácido clorhídrico 1 M (40 ml) y se extrajo con acetato
de etilo (70 ml). El extracto orgánico se secó sobre sulfato de
sodio, se filtró y se evaporó bajo presión reducida para dar ácido
3-mercaptobutanoico (3e), que se utilizó para la
síntesis de 4e sin purificación adicional.
Ácido metilditioacético (4a). Se añadió
metanotiosulfonato de metilo (4,52 g, 0,036 mol) en etanol absoluto
(40 ml) a una solución agitada de ácido mercaptoacético (3a) (3,0 g,
0,0326 mmol) en agua (100 ml), enfriada en un baño con hielo. La
mezcla de reacción se dejó calentar hasta temperatura ambiente y se
agitó toda la noche. La mezcla de reacción se diluyó a continuación
con NaCl acuoso, saturado (300 ml) y se extrajo con éter de dietilo
(3 x 100 ml). La fase orgánica combinada se lavó con cloruro de
sodio saturado (100 ml) y se secó sobre Na_{2}SO_{4} y se
filtró. El filtrado se evaporó bajo presión reducida y el residuo se
destiló al vacío para proporcionar 4a como un aceite incoloro (2,90
g, 64% de rendimiento) p.eb._{1 mm} = 100ºC. ^{1}H RMN: \delta
2,4 (3H, s), 3,5 (3H, s), 10,2 (1H, s).
Ácido 3-metilditiopropanoico
(4b). Se añadió metanotiosulfonato de metilo (6,54 g, 0,052 mol) en
etanol absoluto (75 ml) a una solución agitada de ácido
3-mercaptopropanoico (3b) (5,00 g, 0,047 mol) en
agua (150 ml), enfriada en un baño con hielo. La mezcla de reacción
se agitó toda la noche a temperatura ambiente. La mezcla de reacción
se diluyó a continuación con NaCl acuoso, saturado (400 ml) y se
extrajo con éter (3 x 150 ml). Los extractos de éter combinados se
lavaron con NaCl saturado, se secaron sobre Na_{2}SO_{4} y se
concentraron. El residuo se destiló para proporcionar un líquido
incoloro (6,47 g, 90% de rendimiento) p.eb._{1,0} = 105ºC. ^{1}H
RMN (CDCl_{3}): \delta 2,3 (3H, s), 2,8 (4H, m), 11,2 (1H,
s).
Ácido 4-metilditiobutanoico (4c).
Se añadió una solución de ditiotreitol (0,647 g, 4,20 mmol) en
H_{2}O (20 ml) a una solución agitada de
bis-(3-carboxipropil)-disulfuro
(1,00 g, 4,20 mmol) en metanol (20 ml). A continuación se añadió una
solución de NaOH 10 M (0,842 ml, 8,42 mmol) y se dejó la mezcla
agitando a temperatura ambiente durante toda la noche para efectuar
la reducción completa. Se añadió el metanotiosulfonato de metilo
(1,17 g, 9,24 mmol) y se dejó agitando la mezcla de reacción durante
otras tres horas. La mezcla se diluyó a continuación con NaCl
acuoso, saturado (150 ml), se acidificó (HCl acuoso) y se extrajo
con éter de etilo (3 x 100 ml). Las fases orgánicas combinadas se
lavaron con NaCl saturado, se secaron (Na_{2}SO_{4}) y se
concentraron y el concentrado se cromatografió sobre gel de sílice
eluyendo con cloruro de metileno/acetato de etilo para dar 0,867 g
(56%) de un líquido claro. ^{1}H RMN (CDCl_{3}): \delta 2,1
(2H, m), 2,4 (3H, s), 2,4 (2H, m), 2,7 (2H, m), 11,1 (1H, s).
Ácido 5-metilditiopentanoico
(4d). Se añadió una solución de metanotiosulfonato de metilo (0,517
g, 4,10 mmol) en etanol absoluto (5 ml) a una solución agitada de
ácido 5-mercaptopentanoico (3d) (0,500 g, 3,73
mmol) en agua (20 ml) y la mezcla se agitó a temperatura ambiente
durante 3 horas. La mezcla se diluyó a continuación con NaCl
saturado, acuoso (100 ml) y se extrajo con éter de etilo (3 x 100
ml). Las fases orgánicas combinadas se lavaron con NaCl saturado,
se secaron (Na_{2}SO_{4}), se evaporaron bajo presión educida y
el concentrado se cromatografió sobre sílice eluyendo con cloruro de
metileno/acetato de etilo para dar 0,602 g (90%) de cristales
blancos: p.f. 42-44ºC. ^{1}H RMN (CDCl_{3}):
\delta 1,7(4H, m), 2,4 (3H, s), 2,4 (2H, m), 2,7 (2H, m),
11,1 (1H, s).
Ácido 3-metilditiobutanoico (4e).
Una solución de 3e (1,1 g, 9,3 mmol) en acetato de etilo (10 ml) se
trató secuencialmente con diisopropiletilamina (3,4 g, 27 mmol) y
con una solución de metanotiosulfonato de metilo (1,5 g, 12,0 mmol)
en etanol absoluto (8 ml). La mezcla de reacción se agitó a
temperatura ambiente bajo argón durante 3 h. A continuación el
disolvente se evaporó y el residuo se trató con ácido clorhídrico 3
M (15 ml) y se extrajo con acetato de etilo (40 ml). La fase
orgánica se separó, se secó sobre sulfato de sodio, se filtró y se
evaporó. El residuo se purificó mediante cromatografía de columna
sobre gel de sílice, eluyendo con acetato de etilo:hexano (3:1, v/v)
que contenía 3% de ácido acético. El producto 4e se obtuvo como un
aceite incoloro (0,61 g, 40% de rendimiento). ^{1}H RMN
(CDCl_{3}): \delta 1,4 (3H, d), 2,3 (3H, s), 2,8 (2H, d), 3,9
(1H, m) y 11,5 (1H, s).
Ácido 3-fenilditiopropanoico
(5a). Se añadió una solución de ácido
3-mercaptopropanoico (3b) (0,49 g, 4,6 mmol) en
éter (5 ml) a una solución agitada de disulfuro de difenilo (3,0 g,
13,8 mmol) en una mezcla de éter (10 ml) y metanol (20 ml) bajo una
atmósfera de nitrógeno, a temperatura ambiente, seguida de una
solución de NaOH 10 M (0,46 ml, 4,6 mmol). La mezcla de reacción se
agitó a temperatura ambiente durante 20 horas, a continuación se
destilaron los disolventes bajo presión reducida. El producto se
purificó mediante cromatografía de columna sobre gel de sílice
eluyendo con acetato de etilo/hexano. El producto se obtuvo como un
sólido blanco (0,56 g, 56,6%), p.f. 57-59ºC. ^{1}H
RMN (CDCl_{3}, TMS): \delta 2,6-3,0 (4H, m),
7,1-7,6 (5H, m), 10,6 (1H, s).
Ácido
3-(4-nitrofenilditio)-propanoico
(5b). Se añadió ácido 3-mercaptopropanoico (3b)
(0,688 g, 6,49 mmol) a una solución agitada de
bis-(4-nitrofenil)-disulfuro (3,00
g, 9,73 mmol) disuelto en una mezcla de THF (200 ml) y metanol (50
ml). A continuación se añadió una gota de una solución de NaOH 10 M
a la mezcla y la reacción se agitó durante una hora. La mezcla de
reacción se diluyó a continuación con NaCl saturado (100 ml) y se
extrajo con acetato de etilo (3 x 75 ml). Las fases orgánicas
combinadas se secaron sobre sulfato de sodio, se evaporaron a
presión reducida y el producto se cromatografió sobre gel de sílice
eluyendo con cloruro de metileno/acetato de etilo para proporcionar
0,885 g (53%) de un sólido amarillo claro; p.f.
98-100ºC. 1H RMN (CDCOCD_{3}): \delta 2,8 (2H,
m), 3,1 (2H, m), 7,8 (2H, d), 8,2 (2H, d).
N-metil-N-metilditioacetoíl-L-alanina
(6a). Se añadió una solución de ácido metilditioacético (Singh
et al., 104 Anal. Biochem.
51-58 (1980) (4a) (1,66 g, 12,0 mmol) en
CH_{2}Cl_{2} seco (20 ml) a 0ºC a una solución agitada de
hidrocloruro de
1-(3-dimetilaminopropil)-3-etilcarbodiimida
(2,99 g, 15,6 mmol) y trietilamina (1,58 g, 15,6 mmol) en
CH_{2}Cl_{2} seco (40 ml). Se añadió una solución de
4-dimetilaminopiridina (0,073 g, 0,60 mmol) en
CH_{2}Cl_{2} seco (2 ml) y la mezcla se agitó durante 45 min. a
0ºC. A continuación se añadió una mezcla de
N-metil-L-alanina (0,619 g, 6,00 mmol) y trietilamina
(0,607 g, 6,00 mmol) en DMF seca (30 ml) y la mezcla se agitó a 0ºC
durante dos horas. La mezcla de reacción se diluyó con agua (100
ml), se agitó durante otros treinta minutos, se acidificó a
continuación (HCl acuoso) y se extrajo con acetato de etilo (4 x 75
ml). Las fases orgánicas combinadas se lavaron diversas veces con
agua, se secaron sobre Na_{2}SO_{4} y se evaporaron bajo presión
reducida. El residuo se cromatografió sobre gel de sílice eluyendo
con cloruro de metileno:acetato de etilo para proporcionar 0,25 g
(19%) de un aceite amarillo pálido. ^{1}H RMN (CDCl_{3}):
\delta 1,4 (3H, d), 2,4 (3H, s), 2,9, 3,0 (total 3H, 2s), 3,6
(2H, s), 4,7, 5,2 (total 1H, 2q), 9,8 (1H, s).
N-metil-N-(3-metilditiopropanoíl)-L-alanina
(6b). Se añadió cloroformiato de isobutilo (0,897 g, 6,57 mmol) y
trietilamina (0,665 g, 6,57 mmol) a una solución agitada de ácido
3-metilditiopropanoico (4b) (1,00 g, 6,57 mmol) en
THF seco (20 ml) a -10ºC bajo argón y la mezcla de reacción se agitó
durante 15 minutos. Se añadió una mezcla de
N-metil-L-alanina (0,677 g, 6,57 mmol) y trietilamina
(1,33 g, 13,14 mmol) en agua (10 ml) y la mezcla de reacción se
agitó a temperatura ambiente durante toda la noche. A continuación
la mezcla se diluyó con agua (50 ml), se acidificó (HCl acuoso) y se
extrajo con acetato de etilo (4 x 50 ml). Las fases orgánicas
combinadas se secaron sobre sulfato de sodio, se evaporó el
disolvente bajo presión reducida y se cromatografió el residuo
sobre gel de sílice eluyendo con cloruro de metileno/acetato de
etilo para proporcionar 0,556 g (34%) de cristales blancos: p.f.
98-100ºC. ^{1}H RMN (CDCl_{3}): \delta 1,3
(3H, d), 2,2 (3H, s), 2,7 (4H, m), 4,5 (1H, q), 10,7 (1H, s). Anál.
calculado para C_{8} H_{15} NO_{3}S_{2}: C, 40,49; H, 6,37;
N, 5,90; peso mol. 237,33. Encontrado C, 40,42; H, 6,41; N,
5,93.
N-metil-N-(4-metilditiobutanoíl)-L-alanina
(6c). Se añadió cloroformiato de isobutilo (0,164 g, 1,20 mmol) y
trietilamina (0,121 g, 1,20 mmol) a una solución agitada de ácido
4-metilditiobutanoico (4c) (0,200 g, 1,20 mmol) en
THF seco (10 ml) a -20ºC bajo argón y la mezcla se agitó durante
veinte minutos. A continuación se añadió una mezcla de
N-metil-L-alanina (0,124 g, 1,20 mmol) y trietilamina
(0,243 g, 2,40 mmol) en agua (5 ml) y la mezcla de reacción se agitó
a temperatura ambiente durante cinco horas. La mezcla de reacción se
trató a continuación según se ha descrito anteriormente para 6b
proporcionando el compuesto del título como cristales blancos
(0,135 g, 44%): p.f. 92-93ºC. ^{1}H RMN
(CDCl_{3}): \delta 1,4 (3H, d), 2,0 (2H, m), 2,3 (3H, s), 2,7
(4H, m), 2,9 (3H, s), 5,1 (1H, q), 10,5 (1H, s).
N-metil-N-(5-metilditiopentanoíl)-L-alanina
(6d). Se añadió cloroformiato de isobutilo (0,153 g, 1,12 mmol) y
trietilamina (0,113 g, 1,12 mmol) a una solución agitada de ácido
5-metilditiopentanoico (4d) (0,202 g, 1,12 mmol) en
THF seco (15 ml) a -40ºC bajo argón y la mezcla de reacción se agitó
durante 20 minutos a -10ºC. A continuación se añadió una solución
de N-metil-L-alanina (0,116 g, 1,12 mmol) y
trietilamina (0,227 g, 2,24 mmol) en agua (5 ml) y la mezcla se
agitó a 0ºC durante cinco horas. La mezcla de reacción se trató a
continuación según se ha descrito anteriormente para 6b
proporcionando el compuesto del título como cristales blancos (0,196
g, 66%): p.f. 84ºC. ^{1}H RMN (CDCl_{3}): \delta 1,4 (3H, d),
1,8 (4H, m), 2,4 (3H, s), 2,7 (4H, m), 3,0 (3H, s), 5,2 (1H, q),
10,7 (1H,
s).
s).
N-metil-N-(3-fenilditiopropanoíl)-L-alanina
(6e). Se agitó vigorosamente bajo una atmósfera de nitrógeno una
solución de ácido 3-fenilditiopropanoico (5a) (1,8
g, 8,4 mmol) en THF seco y se enfrió a -15ºC. Se añadieron
cloroformiato de isobutilo (1,2 ml, 9,25 mmol) y trietilamina (1,29
ml, 9,25 mmol) y la mezcla de reacción se agitó a esta temperatura
durante diez minutos. A continuación se añadió una solución de
N-metil-L-alanina (0,87 g, 8,4 mmol) y trietilamina
(1,29 ml, 9,25 mmol) en agua (10 ml) y la mezcla de reacción se
agitó durante quince minutos a -15ºC y a continuación se calentó a
temperatura ambiente y se agitó durante un periodo adicional de 2,5
horas. Se añadió HCl 1 M (10 ml) y se extrajo la mezcla de reacción
con acetato de etilo (4 x 50 ml). Las fases orgánicas combinadas se
secaron con Na_{2}SO_{4}, se filtraron y se evaporaron bajo
presión reducida. La mezcla cruda se purificó mediante cromatografía
de columna sobre gel de sílice eluyendo con acetato de etilo/hexano
que contenía 2% de ácido acético para proporcionar un sólido blanco
6e (1,5 g, 60%); p.f. 96-97ºC. ^{1}H RMN
(CDCl_{3}/TMS): \delta 1,4 (2H, d), 2,7-3,0 (7H,
m), 5,2 (1H, q), 7,2-7,6 (5H, m).
N-metil-N-[3-(4-nitrofenilditio)-propanoíl]-L-alanina
(6f). Se añadieron cloroformiato de isobutilo (0,053 g, 0,386 mmol)
y trietilamina (0,039 g, 0,38 mmol) a una solución agitada de ácido
3-(4-nitrofenilditio)-propanoico
(5b) (0,100 g, 0,386 mmol) en THF seco (10 ml) a -40ºC bajo argón y
la reacción se agitó a 0ºC durante una hora. A continuación se
añadió una solución acuosa de N-metil-L-alanina (5 ml)
(0,040 g, 0,386 mmol) y trietilamina (0,039 g, 0,386 mmol) y la
mezcla se agitó a 0ºC durante cinco horas. La mezcla se diluyó con
agua (50 ml), se acidificó (HCl acuoso) y se extrajo con éter de
etilo (3 x 25 ml). Las fases orgánicas combinadas se secaron
(Na_{2}SO_{4}) y se evaporó el disolvente bajo presión reducida.
El residuo se cromatografió sobre gel de sílice eluyendo con cloruro
de metileno/acetato de etilo para proporcionar 0,048 g (36%) de
cristales amarillos: p.f. 74-77ºC. ^{1}H RMN
(CDCl_{3}): \delta 1,4 (3H, d), 2,6-3,4 (4H, m),
2,9 (3H, s), 5,1 (1H, q), 7,6-8,3 (4H, 2d).
N-metil-N-(3-metilditiobutanoíl)-L-alanina
(6g). Se enfrió a -20ºC una solución de 4e (3,52 g, 21,2 mmol) en
tetrahidrofurano (20 ml) y se agitó bajo un atmósfera de argón. A
continuación se añadieron cloroformiato de isobutilo (3,48 ml, 21,2
mmol) y trietilamina (3,7 ml, 25,4 mmol). La mezcla de reacción se
agitó a -20ºC durante 15 min. Se añadió una solución de
N-metil-L-alanina (2,74 g, 26,6 mmol) en agua (5 ml) y
trietilamina (7,4 ml, 50,8 mmol) y la reacción se calentó a
temperatura ambiente y se agitó durante 2 h. La mezcla de reacción
se diluyó con agua (100 ml) y se acidificó hasta pH de 2 mediante la
adición de HCl 1 M. El producto se extrajo con acetato de etilo (5
x 50 ml). La fase orgánica combinada se secó sobre sulfato de sodio,
se filtró y se evaporó. El residuo se purificó mediante
cromatografía de columna sobre gel de sílice eluyendo con acetato de
etilo:hexano (1:1, v/v) para proporcionar 6g puro como un sólido
blanco (0,69 g, 12% de rendimiento). ^{1}H RMN (CDCl_{3}):
\delta 1,3 (3H, d), 1,5 (3H, d), 2,41 (3H, s), 2,8 (2H, m), 3,0
(3H, s), 3,5 (1H, m) y 5,3 (1H, m).
Metilditio-N-metilcisteína (8a). Se agitó
a temperatura ambiente, bajo una atmósfera de argón, una solución de
N-metilcisteína (7a) (Undhein, K.,& Eidem, A., 23 Acta
Chem. Scandinavica 3129-3133 (1970)) (1,5
g, 11,1 mmol) en H_{2}O (20 ml) y se trató con una solución de
metanotiosulfonato de metilo (3,0 ml, 29,2 mmol) en etanol (10 ml).
La mezcla de reacción se agitó a esta temperatura durante dos horas
y se diluyó a continuación con H_{2}O (100 ml) y se lavó con éter
(4 x 40 ml). La fase acuosa se acidificó hasta pH 2 y se pasó a
través de una columna Amberlita IRA-93 (forma –OH).
La columna se lavó con agua y el eluyente se recogió y se evaporó a
sequedad bajo presión reducida para proporcionar un sólido blanco
(1,2 g, 60%), p.f. 194-195ºC. 1H RMN (D_{2}O,
estándar ext. TMS): \delta 2,2 (3H, s), 2,5 (3H, s), 3,2 (2H, d),
3,71 (1H, q).
Metilditio-N-metilhomocisteína (8b). Un
experto ordinario en la materia entendería como preparar
metilditio-N-metilhomocisteína (8b) basándose en el
procedimiento para preparar metilditio-N-metilcisteína
(8a).
N-metilhomocisteína (7b) se puede preparar
mediante el procedimento descrito anteriormente para
N-metilcisteína (Undhein, K.,& Eidem, A., 23 Acta
Chem. Scandinavica 3129-3133 (1970)).
N-acetil-N-metil-metilditiocisteína
(9a). Se añadieron con agitación, bajo una atmósfera de N_{2},
cloroformiato de isobutilo (0,57 ml, 4,4 mmol) y trietilamina (0,61
ml, 4,4 mmol) a una solución de ácido acético glacial (0,25 ml, 4,4
mmol) en THF (4 ml), a -20ºC. La mezcla de reacción se agitó a esta
temperatura durante 20 minutos y a continuación se trató con una
solución de metilditio-N-metilcisteína (8a) (0,4 g, 2,2 mmol)
y trietilamina (0,45 ml, 3,3 mmol) en H_{2}O y se dejó agitando
durante toda la noche. A continuación la mezcla se diluyó con agua
(25 ml) y se acidificó hasta pH 2 con HCl y se extrajo con acetato
de etilo (4 x 50 ml). La fase orgánica combinada se secó con sulfato
de sodio y se evaporó el disolvente bajo presión reducida para
proporcionar el producto como un sólido amarillo pálido (0,2 g,
55%), p.f.137-138ºC. 1H RMN (CDCl_{3}): \delta
2,1 (3H, s), 2,3 (3H, s), 3,0 (3H, s), 3,2 (2H, d) y 4,8 (1H,
q).
N-acetil-N-metil-metilditiohomocisteína
(9b). Un experto ordinario en la materia entenderá como preparar
N-acetil-N-metil-metilditiohomocisteína
(8b) basándose en el procedimiento para la preparación de
N-acetil-N-metil-metilditiocisteína
(9a).
Etapa
1
Se convirtió ansamitocina P-3
(1c) a maitansinol (2) mediante hidrólisis reductora. Se disolvió
ansamitocina P-3 (1c) (3,2 g, 5,0 mmol) en THF
anhidro (80 ml) y se colocó la solución bajo una atmósfera de argón
y se enfrió en un baño de hielo seco y acetona a -40ºC.
Se añadió una solución de hidruro de litio y
aluminio (75 mmol, 75 ml de una solución 1,0 M en THF) en un matraz
separado. Se colocó la solución bajo una atmósfera de argón y se
enfrió a -40ºC. Se añadió gota a gota utilizando un embudo de
adición una solución de metanol anhidro (9,1 ml, 225 mmol) en THF
(40 ml). La temperatura se mantuvo entre -30 y -40ºC, y, después de
que se acabase la adición, la mezcla de reacción se agitó durante
un periodo adicional de 10 min. La solución que resultó de hidruro
de trimetoxialuminio litio (LiAlH(OMe)_{3}H) se
transfirió vía cánula durante 10 min. a la solución enfriada de
ansamitocina P-3 (1c). La temperatura de reacción se
mantuvo entre -30 y -35ºC bajo argón y se agitó durante 1 h. La
reacción se enfrió mediante la adición de una solución saturada de
cloruro de sodio (100 ml) y se extrajo con acetato de etilo (4 x 400
ml). Los extractos combinados de acetato de etilo se secaron sobre
sulfato de sodio y se filtraron. El disolvente se evaporó bajo
presión reducida para proporcionar maitansinol crudo (2).
El producto crudo se disolvió en acetato de etilo
y se cargó en una columna de gel de sílice empaquetada en
diclorometano. La columna se eluyó con un gradiente de etapas
empezando por una mezcla de diclorometano:acetato de etilo:metanol
(77:23:0), v/v/v) e incrementando lentamente la concentración de
metanol de 0% a 10%. Las fracciones que contienen el producto
deseado se agruparon y se evaporaron a presión reducida para
proporcionar maitansinol puro (71% de rendimiento) como sólido
blanco.
El maitansinol se purificó adicionalmente
mediante HPLC como sigue. Se equilibró una columna de HPLC
preparativa de ciano Kromasil™ (250 mm x 50 mm, tamaño de partícula
10 micras) en una mezcla de
hexano:2-propanol:diclorometano:acetato de etilo
(72:3:18:7, v/v/v) con una velocidad de flujo de 150 ml/min. Se
inyectó en la columna una solución de maitansinol. Bajo estas
condiciones, el maitansinol posee un tiempo de retención de 22 min y
una pureza de >98%.
Etapa
2
Se agitó bajo una atmósfera de argón una solución
de N-metil-N-metilditioacetoíl-L-alanina (6a)
(4,2 mg, 0,017 mmol) en diclorometano (0,1 ml) y se trató
secuencialmente con una solución de maitansinol (2 mg, 0,0035 mmol)
en diclorometano (0,2 ml), DCC (4,4 mg) en diclorometano (0,2 ml) y
cloruro de zinc 1 M (0,0035 mmol) en éter. La reacción se agitó
durante 75 min. A continuación la mezcla de reacción se filtró y se
evaporó el disolvente. El residuo se purificó mediante TLC
preparativa sobre gel de sílice, utilizando 6% de metanol en
cloroformo para proporcionar el éster de L-maitansinoide 10a
deseado.
El compuesto del título 10a se puede purificar
más eficazmente utilizando una columna de HPLC de ciano Diazem™ (250
mm x 10 mm, tamaño de partícula 10 micras) equilibrada con una
mezcla de hexano:2-propanol:acetato de etilo
(17:2:6, v/v/v) a una velocidad de flujo de 4,7 ml/min. ^{1}H RMN
(CDCl_{3}) isómero L-aminoacilo (10a): \delta 80,90 (3H,
s), 1,3 (6H, d,d), 1,46-1,52 (1H, m), 1,60 (3H, s),
2,30 (1H, d), 2,50 (3H, s), 2,7 (1H, dd), 2,90 (1H, m), 3,15 (3H,
s), 3,28 (3H, s), 3,3 (1H, d), 3,35 (3H, s), 3,50 (1H, m), 3,65 (2H,
d), 3,77 (1H, d), 4,02 (3H, s), 4,30 (1H, t), 4,82 (1H, dd), 5,15
(1H, q, J = 7 Hz), 5,90 (1H, dd), 6,25 (1H, s), 6,47 (1H, dd), 6,60
(1H, d), 6,75 (1H, d), 6,85 (1H, d).
Se agitó bajo una atmósfera de argón una solución
de
N-metil-N-(3-metilditio-propanoíl)-L-alanina
(6b) (5,0 g, 21,5 mmol) en cloruro de metileno seco (80 ml) y se
trató secuencialmente con soluciones de DCC (4,58 g, 22,2 mmol) en
cloruro de metileno (54 ml), ZnCl_{2} 1 M en éter (4,4 mmol) y
maitansinol (2) (2,0 g, 3,5 mmol) en cloruro de metileno (80 ml). La
mezcla de reacción se agitó a temperatura ambiente durante cuatro
\hbox{horas y a continuación se filtró.}
Se equilibró una columna de HPLC preparativa de
ciano Diazem™ (250 mm x 50 mm, tamaño de partícula 10 micras) en una
mezcla de hexano:2-propanol:acetato de etilo
(17:2:6, v/v/v) a una velocidad de flujo de 150 ml/min. Se inyectó
en la columna una solución de la mezcla de éster L- y
D-aminoacilo 10 de maitansinol (1 g en 25 ml de
acetato de etilo). Bajo estas condiciones, el isómero L deseado
(10b) posee un tiempo de retención de 42 min, mientras el isómero D
eluye a 56 min. El producto puro ópticamente se obtiene por este
procedimiento y la recuperación es > 90%.
^{1}H RMN (CDCl_{3}) isómero
L-aminoacilo (10b): \delta 0,84 (3H, s),
1,11-1,23 (1H, m), 1,31 (3H, d, J = 6 Hz), 1,35 (3H,
d, J = 7 Hz), 1,46-1,52 (1H, m), 1,68 (3H, s), 1,97
(1H, d, J = 9 Hz), 2,24 (1H, dd, J = 12 Hz y 15 Hz), 2,30 (3H, s),
2,65 (1H, dd, J = 12 Hz y 15 Hz), 2,73-2,86 (2H, m),
2,90 (3H, s), 2,92-3,03 (2H, m), 3,08 (1H, d, J = 9
Hz), 3,14 (1H, d, J = 12 Hz), 3,28 (3H, s), 3,39 (3H, s), 3,54 (1H,
d, J = 9 Hz), 3,72 (1H, d, J = 13 Hz), 4,02 (3H, s), 4,31 (1H, t, J
= 11 Hz), 4,82 (1H, dd, J = 3 Hz y 12 Hz), 5,45 (1H, q, J = 7 Hz),
5,69 (1H, dd, J = 9 Hz y 15 Hz), 6,25 (1H, s), 6,47 (1H, dd, J = 11
Hz y 15 Hz), 6,67 (1H, d, J = 1,5 Hz), 6,77 (1H, d, J = 11 Hz), 6,85
(1H, d, J = 1,5 Hz),
Se agitó bajo una atmósfera de argón una solución
de N-metil-N-(metilditiobutanoíl)-L-alanina
(6c) (8,9 mg, 35,5 \mumol) en cloruro de metileno seco (0,15 ml) y
se trató secuencialmente con soluciones de DCC (8,8 mg, 42,6
\mumol) en cloruro de metileno, ZnCl_{2} 1 M (7,1 \mumol) en
éter y maitansinol (2) (4,0 mg, 7,1 \mumol) en cloruro de
metileno. La mezcla de reacción se agitó a temperatura ambiente
durante tres horas y a continuación se filtró y se evaporó el
filtrado bajo presión reducida, proporcionando una mezcla de ésteres
L y D-aminoacilo de maitansinol. Este material se
puede purificar adicionalmente utilizando una columna de HPLC
preparativa de ciano Diazem™ (250 mm x 50 mm, tamaño de partícula de
10 micras) equilibrada con una mezcla de
hexano:2-propanol:acetato de etilo (17:2:6, v/v/v) a
una velocidad de flujo de 150 ml/min según se ha descrito
anteriormente para 10b.
Se agitó bajo argón una solución de
N-metil-N-(fenilditiopropanoíl)-L-alanina (6e)
(31,5 mg, 105 \mumol) en cloruro de metileno (0,4 ml) y se trató
secuencialmente con soluciones de DCC (26 mg, 126 \mumol) en
cloruro de metileno, ZnCl_{2} 1 M (17,7 \mumol) en éter y
maitansinol (2) (10 mg, 17,7 \mumol) en cloruro de metileno (0,2
ml). La mezcla de reacción se agitó a temperatura ambiente durante
tres horas. Se eliminó el precipitado mediante filtración y se
concentró el filtrado bajo presión reducida.
La mezcla se puede purificar adicionalmente
utilizando una columna de HPLC preparativa de ciano Diazem™ (250 mm
x 50 mm, tamaño de partícula 10 micras), equilibrada con una mezcla
de hexano:2-propanol:acetato de etilo (17:2:6,
v/v/v) a una velocidad de flujo de 150 ml/min según se ha descrito
anteriormente para (10b).
^{1}H RMN (CDCl_{3}) isómero
L-aminoacilo (10e): \delta 0,82 (3H, s),
1,11-1,25 (1H, m), 1,33 (3H, d, J = 3 Hz), 1,61 (3H,
s), 1,63 (3H, d, J = 14 Hz), 2,19 (1H, dd, J = 13 Hz y 15 Hz), 2,61
(1H, dd, J = 12 Hz y 15 Hz), 2,78 (3H, s), 2,68-3,03
(2H, m), 3,07 (1H, d, J = 9 Hz), 3,20 (3H, s), 3,38 (3H, s), 3,53
(1H, d, J = 9 Hz), 3,63 (1H, d, J = 13 Hz), 3,68 (3H, s), 4,01 (3H,
s), 4,30 (1H, t, J = 11 Hz), 4,79 (1H, dd, J = 3 Hz y 8 Hz), 5,43
(1H, q, J = 7 Hz), 5,68 (1H, dd, J = 9 Hz y 15 Hz), 6,23 (1H, s),
6,45 (1H, dd, J = 12 Hz y 15 Hz), 6,60 (1H, d, J = 1,5 Hz), 6,75
(1H, d, J = 12 Hz), 6,77 (1H, d, J = 1,5 Hz),
7,22-7,40 (5H, m).
Se agitó bajo una atmósfera de argón, una
solución de
N-metil-N-(3-metilditiobutanoíl)-L-alanina
(6g) (23,2 mg, 0,088 mmol) en diclorometano (0,2 ml) y se trató
secuencialmente con una solución de maitansinol (5 mg, 0,0088 mmol)
en diclorometano (0,2 ml), DCC (20,6 mg) en diclorometano (0,2 ml) y
cloruro de zinc 1 M (0,0088 mmol) en éter. La reacción se dejó en
agitación durante toda la noche a temperatura ambiente. La mezcla de
reacción se filtró a continuación y se evaporó el disolvente. Se
purificó el residuo mediante TLC preparativa sobre gel de sílice,
utilizando metanol al 6% en cloroformo para proporcionar el éster
L-maitansinoide deseado 10g. El producto 10g se
puede purificar más eficazmente utilizando una columna de HPLC
preparativa de ciano Diazem™ (250 mm x 10 mm, tamaño de partícula 10
micras) equilibrada con una mezcla de
hexano:2-propanol:acetato de etilo (17:2:6, v/v/v) a
una velocidad de flujo de 4,70 ml/min según se ha descrito
anteriormente para (10b).
Se agitó a temperatura ambiente bajo una
atmósfera de argón una solución de
N-acetil-N-metil-metilditiocisteína
(9a) (15,6 mg, 0,07 mmol) en cloruro de metileno seco (0,45 ml) y se
trató secuencialmente con soluciones de ZnCl_{2} 1 M en éter de
etilo (0,028 mmol), DCC (17,3 mg, 0,084 mmol) en cloruro de metileno
(0,2 ml) y maitansinol (2) (4,0 mg, 0,007 mmol) en cloruro de
metileno (0,1 ml). La mezcla de reacción se agitó durante tres horas
y a continuación se filtró y se evaporó el filtrado bajo presión
reducida.
El residuo se puede purificar adicionalmente
utilizando una columna de HPLC preparativa de ciano Diazem™ (250 mm
x 50 mm, tamaño de partícula 10 micras) equilibrada con una mezcla
de hexano:2-propanol:acetato de etilo (17:2:6,
v/v/v) a una velocidad de flujo de 150 ml/min según se ha descrito
anteriormente para (10b).
Etapa
3
Se agitó a temperatura ambiente bajo una
atmósfera de argón una solución del éster
L-aminoacilo que contiene disulfuro de maitansinol
10b (1,95 g, 2,5 mmol) en una mezcla de acetato de etilo (140 ml) y
metanol (210 ml) y se trató con una solución de ditiotreitol (0,95
g, 6,2 mmol) en tampón de fosfato de potasio 0,05 M (140 ml), pH
7,5, que contiene ácido etilendiamintetraacético 2 mM (EDTA). El
progreso de la reacción se monitorizó mediante HPLC y se completó en
tres horas.
La mezcla de reacción acabada se trató con una
solución de tampón de fosfato de potasio 0,2 M (250 ml), pH 6,0, que
contenía EDTA 2 mM, y se extrajo a continuación el acetato de etilo
(3 x 600 ml). Las fases orgánicas se combinaron, se lavaron con
salmuera (100 ml) y a continuación se secaron con sulfato de sodio.
La evaporación del disolvente proporcionó un residuo de
maitansinoide que contiene tiol crudo 11b.
El maitansinoide que contiene tiol crudo 11b se
purificó mediante una columna de HPLC preparativa de ciano Diazem™
(250 mm x 50 mm, tamaño de partícula 10 micras) equilibrada con una
mezcla de hexano:2-propanol: acetato de etilo
(78,0:5,5:16,5, v/v/v) y que funcionó a una velocidad de flujo de
150 ml/min. El maitansinoide que contiene tiol 11b se eluyó como un
pico centrado a 16 min. Se evaporaron las fracciones que contienen
el producto para dar maitansinoide puro que contiene tiol 11b como
un sólido blanco (76% de rendimiento con una pureza del 99%).
La presencia de un mol de grupo sulfhidrilo/mol
de producto se confirmó utilizando el ensayo Ellman. El producto se
caracterizó adicionalmente mediante espectroscopia de RMN. 1H RMN
(CDCl_{3}): \delta 0,84 (3H, s), 1,33 (3H, d, J = 5 Hz), 1,35
(3H, d, J = 5 Hz), 1,60 (3H, s), 1,68 (3H, s), 2,22 (1H, dd, J = 3
Hz y 14 Hz), 2,60-2,82 (2H, m), 2,88 (3H, s),
3,08-3,20 (2H, m), 3,25 (3H, s), 3,39 (3H, s), 3,55
(1H, d, J = 9 Hz), 3,71 (1H, d, J = 12 Hz), 4,02 (3H, s), 4,32 (1H,
t, J = 10 Hz), 4,81 (1H, dd, J = 3 Hz y 12 Hz), 5,45 (1H, q, J = 7
Hz), 5,67 (1H, dd, J = 9 Hz y 15 Hz), 6,25 (1H, s), 6,47 (1H, dd, J
= 11 Hz y 15 Hz), 6,70 (1H, d, J = 1,5 Hz), 6,75 (1H, d, J = 11 Hz),
6,86 (1H, d, J = 1,5 Hz).
Mientras la presente invención se ha descrito en
detalle y haciendo referencia a las formas de realización
específicas de la misma, será evidente para un experto en la materia
que se pueden realizar diversos cambios y modificaciones sin
apartarse del espíritu y alcance de la misma.
Claims (38)
1. Procedimiento para la preparación de un
maitansinoide que contiene tiol que comprende las etapas
siguientes:
- (1)
- llevar a cabo una hidrólisis reductora de un éster C-3 maitansinoide con un agente reductor seleccionado de entre el grupo constituido por hidruro de trimetoxialuminio litio (LiAl(OMe)_{3}H), hidruro de trietoxialuminio litio (LiAl(OEt)_{3}H) e hidruro de tripropoxialuminio litio (LiAl(OPr)_{3}H), para proporcionar un maitansinol;
- (2)
- purificar el maitansinol para eliminar los productos secundarios cuando estén presentes;
- (3)
- esterificar el maitansinol purificado con un ácido carboxílico para proporcionar una mezcla de reacción de un éster L- y D-aminoacilo de maitansinol;
- (4)
- separar el éster L-aminoacilo de maitansinol de la mezcla de reacción en (3);
- (5)
- reducir el éster L-aminoacilo de maitansinol para proporcionar un maitansinoide que contiene un tiol; y
- (6)
- purificar el maitansinoide que contiene tiol.
2. Procedimiento según la reivindicación 1, en el
que el agente reductor en (1) es hidruro de trimetoxialuminio
litio.
3. Procedimiento según la reivindicación 1 ó 2,
en el que el agente reductor en (1) se utiliza en una concentración
de aproximadamente 5 a 100 equivalentes por mol del éster
C-3 de maitansinoide.
4. Procedimiento según la reivindicación 1 ó 2,
en el que el agente reductor en (1) se utiliza en una concentración
de aproximadamente 7,5 a 30 equivalentes por mol del éster
C-3 de maitansinoide.
5. Procedimiento según la reivindicación 1 ó 2,
en el que el agente reductor en (1) se utiliza en una concentración
de aproximadamente 10 a 20 equivalentes por mol del éster
C-3 de maitansinoide.
6. Procedimiento según cualquiera de las
reivindicaciones 1 a 5, en el que la hidrólisis reductora en (1) se
lleva a cabo a una temperatura de aproximadamente -80ºC a 0ºC.
7. Procedimiento según cualquiera de las
reivindicaciones 1 a 5, en el que la hidrólisis reductora en (1) se
lleva a cabo a una temperatura de aproximadamente -45ºC a
-27,5ºC.
8. Procedimiento según cualquiera de las
reivindicaciones 1 a 5, en el que la hidrólisis reductora en (1) se
lleva a cabo a una temperatura de aproximadamente -35ºC a -30ºC.
9. Procedimiento según cualquiera de las
reivindicaciones 1 a 8, en el que el agente reductor en (1) se añade
durante un periodo de aproximadamente 5 a 40 minutos.
10. Procedimiento según cualquiera de las
reivindicaciones 1 a 8, en el que el agente reductor en (1) se añade
durante un periodo de aproximadamente 7 a 20 minutos.
11. Procedimiento según cualquiera de las
reivindicaciones 1 a 8, en el que el agente reductor en (1) se añade
durante un periodo de aproximadamente 8 a 12 minutos.
12. Procedimiento según cualquiera de las
reivindicaciones 1 a 11, en el que el maitansinol se purifica en (2)
mediante cromatografía.
13. Procedimiento según la reivindicación 12, en
el que la cromatografía es cromatografía de columna de gel de
sílice, cromatografía preparativa de capa fina sobre gel de sílice o
cromatografía de columna de HPLC de sílice unida a ciano.
14. Procedimiento según la reivindicación 12, en
el que la cromatografía es cromatografía de columna de gel de
sílice.
15. Procedimiento según cualquiera de las
reivindicaciones 1 a 12, en el que la purificación se lleva a cabo a
temperatura ambiente.
16. Procedimiento según cualquiera de las
reivindicaciones 1 a 12, en el que el maitansinol se purifica hasta
una pureza de aproximadamente 95%.
17. Procedimiento según cualquiera de las
reivindicaciones 1 a 16, en el que el ácido carboxílico en (3) se
selecciona de entre el grupo constituido por
N-metil-N-metilditioacetil-L-alanina,
N-metil-N-(3-metilditiopropanoíl)-L-alanina,
N-metil-N-(3-metil-ditiobutanoíl)-L-alanina,
N-metil-N-(4-metilditiobutanoíl)-L-alanina,
N-metil-N-(5-metil-
ditiopentanoíl)-L-alanina, N-metil-N-(3-fenilditiopropanoíl)-L-alanina, N-metil-N-(3-(4-nitrofenilditio)propanoíl)-L-
alanina, N-acetil-N-metil-metilditiocisteína y N-acetil-N-metil-metilditiohomocisteína.
ditiopentanoíl)-L-alanina, N-metil-N-(3-fenilditiopropanoíl)-L-alanina, N-metil-N-(3-(4-nitrofenilditio)propanoíl)-L-
alanina, N-acetil-N-metil-metilditiocisteína y N-acetil-N-metil-metilditiohomocisteína.
18. Procedimiento según cualquiera de las
reivindicaciones 1 a 16, en el que el ácido carboxílico en (3) es
N-metil-N-(3-metilditiopropanoíl)-L-alanina.
19. Procedimiento según cualquiera de las
reivindicaciones 1 a 18, en el que la esterificación en (3) se lleva
a cabo a temperatura ambiente.
20. Procedimiento según cualquiera de las
reivindicaciones 1 a 19, en el que la esterificación en (3)
comprende además la utilización de diciclohexilcarbodiimida y
cloruro de zinc.
21. Procedimiento según cualquiera de las
reivindicaciones 1 a 20, en el que la separación en (4) se lleva a
cabo haciendo pasar la mezcla de reacción por una columna de HPLC de
sílice unida a ciano.
22. Procedimiento según cualquiera de las
reivindicaciones 1 a 21, en el que la separación en (4) se lleva a
cabo a aproximadamente 25ºC.
23. Procedimiento según cualquiera de las
reivindicaciones 1 a 22, en el que la reducción en (5) utiliza
ditiotreitol como agente reductor.
24. Procedimiento según cualquiera de las
reivindicaciones 1 a 23, en el que la reducción en (5) se lleva a
cabo en una mezcla de acetato de
etilo-metanol-tampón acuoso que es
capaz de mantener las sales tampón, el ditiotreitol, los
maitansinoides no reducidos y los maitansinoides reducidos en
solución.
25. Procedimiento según la reivindicación 24, en
el que la mezcla de acetato de etilo-metanol tampón
acuoso es 1:1,5:1, v/v/v, acetato de etilo:metanol:tampón
acuoso.
26. Procedimiento según la reivindicación 24 ó
25, en el que la concentración de maitansinoide que contiene tiol es
tal que el maitansinoide que contiene tiol permanece soluble en
acetato de etilo-metanol-tampón
acuoso.
27. Procedimiento según la reivindicación 26, en
el que la concentración del maitansinoide que contiene tiol es
aproximadamente 4 g/l.
28. Procedimiento según cualquiera de las
reivindicaciones 1 a 27, en el que la reducción en (5) se lleva a
cabo en una atmósfera libre de oxígeno.
29. Procedimiento según cualquiera de las
reivindicaciones 1 a 28, en el que la reducción en (5) se lleva a
cabo a aproximadamente 25ºC.
30. Procedimiento según cualquiera de las
reivindicaciones 1 a 29, en el que la purificación del maitansinoide
que contiene tiol en (6) se lleva a cabo mediante cromatografía.
31. Procedimiento según la reivindicación 30, en
el que la purificación del maitansinoide que contiene tiol en (6) se
lleva a cabo mediante cromatografía de columna de HPLC unida a
ciano.
32. Procedimiento según la reivindicación 31, en
el que la cromatografía se lleva a cabo mediante columna de HPLC
unida a ciano equilibrada y eluída en un disolvente orgánico.
33. Procedimiento según la reivindicación 32, en
el que el disolvente orgánico es una mezcla de
hexano:2-propanol:acetato de etilo.
34. Procedimiento según la reivindicación 33, en
el que el disolvente orgánico es una mezcla de
hexano:2-propanol:acetato de etilo 78,0:5,5:16,5,
v/v/v.
35. Procedimiento para la purificación de
maitansinol a partir de maitansinol crudo mediante cromatografía de
columna de HPLC de sílice modificada químicamente.
36. Procedimiento según la reivindicación 35, en
el que la sílice modificada químicamente es sílice unida a
ciano.
37. Procedimiento según la reivindicación 35 ó
36, que utiliza una columna que se eluye en fase normal.
38. Procedimiento según la reivindicación 37, que
utiliza disolventes orgánicos en la fase móvil.
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AR030612A1 (es) * | 2000-09-12 | 2003-08-27 | Smithkline Beecham Corp | Procedimiento e intermedios |
US20020156274A1 (en) * | 2001-03-16 | 2002-10-24 | Terfloth Gerald J. | Process for preparing maytansinol |
AUPR395801A0 (en) * | 2001-03-26 | 2001-04-26 | Austin Research Institute, The | Antibodies against cancer |
US20090123470A1 (en) * | 2001-03-26 | 2009-05-14 | The Macfarlane Burnet Istitute For Medical Research And Public Health Ltd. | Antibodies Against Cancer |
PT1390389E (pt) | 2001-04-26 | 2009-04-03 | Biogen Idec Inc | Anticorpos que bloqueiam o cripto e as utilizações dos mesmos |
US7582299B2 (en) * | 2001-04-26 | 2009-09-01 | Biogen Idec Ma Inc. | Cripto-specific antibodies |
US20100056762A1 (en) | 2001-05-11 | 2010-03-04 | Old Lloyd J | Specific binding proteins and uses thereof |
ATE446317T1 (de) | 2001-05-11 | 2009-11-15 | Ludwig Inst For Cancer Res Ltd | Spezifische bindungsproteine und ihre verwendung |
US6441163B1 (en) * | 2001-05-31 | 2002-08-27 | Immunogen, Inc. | Methods for preparation of cytotoxic conjugates of maytansinoids and cell binding agents |
WO2002098897A2 (en) | 2001-06-01 | 2002-12-12 | Cornell Research Foundation, Inc. | Modified antibodies to prostate-specific membrane antigen and uses thereof |
EP1459761A4 (en) * | 2001-06-08 | 2005-04-13 | Fourth Military Medical Univ | PHARMACEUTICAL SET WITH ANTI-HUMAN SPERM PLASMAPROTEIN SINGLE CHAIN ANTIBODY / HUMAN CARBOXYPEPTIDASE FUSION PROTEIN AND PRODRUG |
ES2372321T3 (es) * | 2001-06-20 | 2012-01-18 | Genentech, Inc. | Composiciones y métodos para el diagnóstico y tratamiento de un tumor de pulmón. |
US20090297531A1 (en) * | 2001-06-20 | 2009-12-03 | Genentech, Inc. | Compositions and methods for the diagnosis and treatment of tumor |
US7803915B2 (en) * | 2001-06-20 | 2010-09-28 | Genentech, Inc. | Antibody compositions for the diagnosis and treatment of tumor |
DE10215336A1 (de) * | 2002-03-28 | 2003-10-23 | Schering Ag | N-Methyl-Homocysteine und ihre Verwendung sowie Verfahren zu ihrer Herstellung |
AU2003228998A1 (en) * | 2002-05-13 | 2003-12-02 | Smithkline Beecham Corporation | Process for preparing maytansinol |
US7767803B2 (en) | 2002-06-18 | 2010-08-03 | Archemix Corp. | Stabilized aptamers to PSMA and their use as prostate cancer therapeutics |
US20040249130A1 (en) * | 2002-06-18 | 2004-12-09 | Martin Stanton | Aptamer-toxin molecules and methods for using same |
CA2487809A1 (en) * | 2002-06-18 | 2003-12-24 | Archemix Corp. | Aptamer-toxin molecules and methods for using same |
JP2006502110A (ja) * | 2002-07-03 | 2006-01-19 | イミュノジェン・インコーポレーテッド | 非放出Muc1およびMuc16に対する抗体、およびその使用 |
US8853376B2 (en) | 2002-11-21 | 2014-10-07 | Archemix Llc | Stabilized aptamers to platelet derived growth factor and their use as oncology therapeutics |
US7432088B2 (en) | 2003-05-08 | 2008-10-07 | Immunogen Inc. | Methods for the production of ansamitocins |
CN102940889A (zh) * | 2003-05-14 | 2013-02-27 | 伊缪诺金公司 | 药物缀合物组合物 |
US8088387B2 (en) | 2003-10-10 | 2012-01-03 | Immunogen Inc. | Method of targeting specific cell populations using cell-binding agent maytansinoid conjugates linked via a non-cleavable linker, said conjugates, and methods of making said conjugates |
US7276497B2 (en) | 2003-05-20 | 2007-10-02 | Immunogen Inc. | Cytotoxic agents comprising new maytansinoids |
SI1651162T1 (sl) * | 2003-05-20 | 2016-02-29 | Immunogen, Inc. | Izboljšani citotoksični agenti, ki vsebujejo nove majtanzinoide |
AU2004289172A1 (en) * | 2003-06-27 | 2005-05-26 | Diadexus, Inc. | Pro 104 antibody compositions and methods of use |
EA014640B1 (ru) * | 2003-07-21 | 2010-12-30 | Иммьюноджен, Инк. | Антитело или его эпитоп-связывающий фрагмент, которые связываются с гликотопом са6, и способы их применения |
US7834155B2 (en) | 2003-07-21 | 2010-11-16 | Immunogen Inc. | CA6 antigen-specific cytotoxic conjugate and methods of using the same |
CA2535337A1 (en) * | 2003-08-14 | 2005-03-03 | Merck & Co., Inc. | Macrocyclic beta-secretase inhibitors for the treatment of alzheimer's disease |
US6890962B1 (en) * | 2003-11-25 | 2005-05-10 | Chevron U.S.A. Inc. | Gas-to-liquid CO2 reduction by use of H2 as a fuel |
AU2005249490B2 (en) * | 2004-06-01 | 2010-07-29 | Genentech, Inc. | Antibody drug conjugates and methods |
US7541330B2 (en) * | 2004-06-15 | 2009-06-02 | Kosan Biosciences Incorporated | Conjugates with reduced adverse systemic effects |
AU2004224925C1 (en) * | 2004-08-30 | 2011-07-21 | Biotest Ag | Immunoconjugates targeting syndecan-1 expressing cells and use thereof |
AU2005306701A1 (en) * | 2004-11-17 | 2006-05-26 | Merck & Co., Inc. | Macrocyclic tertiary amine beta-secretase inhibitors for the treatment of Alzheimer's disease |
AU2005309708A1 (en) * | 2004-11-23 | 2006-06-01 | Merck & Co., Inc. | Macrocyclic aminopyridyl beta-secretase inhibitors for the treatment of Alzheimer's disease |
EP1838736B1 (en) | 2005-01-05 | 2013-03-06 | Biogen Idec MA Inc. | Cripto binding molecules |
US7301019B2 (en) * | 2005-01-21 | 2007-11-27 | Immunogen, Inc. | Method for the preparation of maytansinoid esters |
US20060182750A1 (en) * | 2005-02-11 | 2006-08-17 | Immunogen, Inc. | Process for preparing stable drug conjugates |
WO2006096754A2 (en) * | 2005-03-07 | 2006-09-14 | Archemix Corp. | Stabilized aptamers to psma and their use as prostate cancer therapeutics |
WO2006104677A2 (en) | 2005-03-24 | 2006-10-05 | Millennium Pharmaceuticals, Inc. | Antibodies that bind ov064 and methods of use therefor |
BRPI0614100A2 (pt) * | 2005-08-03 | 2011-03-09 | Immunogen Inc | formulações de imunoconjugado lìquidas |
ATE535529T1 (de) * | 2005-08-09 | 2011-12-15 | Millennium Pharm Inc | Verfahren zur acylierung von maytansinol mit chiralen aminosäuren |
CA2620343C (en) | 2005-08-24 | 2013-01-08 | Immunogen, Inc. | Process for preparing antibody maytansinoid conjugates |
JP5117390B2 (ja) * | 2005-11-08 | 2013-01-16 | イミュノジェン・インコーポレーテッド | メイタンシノールの調製法 |
EP1806365A1 (en) | 2006-01-05 | 2007-07-11 | Boehringer Ingelheim International GmbH | Antibody molecules specific for fibroblast activation protein and immunoconjugates containing them |
AU2007274738B2 (en) | 2006-07-18 | 2013-11-28 | Sanofi-Aventis | Antagonist antibody against EphA2 for the treatment of cancer |
EP1914242A1 (en) * | 2006-10-19 | 2008-04-23 | Sanofi-Aventis | Novel anti-CD38 antibodies for the treatment of cancer |
EP2727936B1 (en) | 2006-11-22 | 2016-09-07 | Bristol-Myers Squibb Company | Targeted therapeutics based on engineered proteins for tyrosine kinases receptors, including IGF-IR |
WO2008091701A2 (en) | 2007-01-25 | 2008-07-31 | Dana-Farber Cancer Institute | Use of anti-egfr antibodies in treatment of egfr mutant mediated disease |
US20100144599A1 (en) | 2007-02-02 | 2010-06-10 | Bristol-Myers Squibb Company | Vegf pathway blockade |
JP5618549B2 (ja) | 2007-03-15 | 2014-11-05 | ルードヴィッヒ インスティテュート フォー キャンサーリサーチ リミテッド | Egfr抗体及びsrc阻害剤を用いる治療方法及び関連製剤 |
KR101540822B1 (ko) | 2007-03-27 | 2015-07-30 | 씨 레인 바이오테크놀로지스, 엘엘씨 | 항체 대용물 경쇄 서열을 포함하는 구축물 및 라이브러리 |
US20090011060A1 (en) * | 2007-07-06 | 2009-01-08 | Peter Koepke | Campsiandra angustifolia extract and methods of extracting and using such extract |
US20090017140A1 (en) * | 2007-07-09 | 2009-01-15 | Peter Koepke | Maytenus abenfolia extract and methods of extracting and using such extract |
JP2010533495A (ja) | 2007-07-16 | 2010-10-28 | ジェネンテック, インコーポレイテッド | ヒト化CD79b抗体およびイムノコンジュゲートならびにそれらの使用 |
PT2176296E (pt) | 2007-07-16 | 2012-05-14 | Genentech Inc | Anticorpos e imunoconjugados anti-cd79b e métodos de utilização |
US20090035395A1 (en) * | 2007-08-01 | 2009-02-05 | Peter Koepke | Spondias mombin l. extract and methods of extracting and using such extract |
JP5532486B2 (ja) | 2007-08-14 | 2014-06-25 | ルードヴィッヒ インスティテュート フォー キャンサー リサーチ | Egf受容体を標的とするモノクローナル抗体175ならびにその誘導体および用途 |
UA117446C2 (uk) | 2007-08-29 | 2018-08-10 | Санофі-Авентіс | Гуманізоване антитіло до cxcr5 |
US7879369B2 (en) * | 2007-09-18 | 2011-02-01 | Selvamedica, Llc | Combretum laurifolium Mart. extract and methods of extracting and using such extract |
EP2050764A1 (en) | 2007-10-15 | 2009-04-22 | sanofi-aventis | Novel polyvalent bispecific antibody format and uses thereof |
AR069978A1 (es) * | 2007-12-26 | 2010-03-03 | Dana Farber Cancer Inst Inc | Metodos y agentes para mejorar el reconocimiento de celulas de tumor que expresan cd 138 |
JP5817034B2 (ja) * | 2007-12-26 | 2015-11-18 | バイオテスト・アクチエンゲゼルシヤフト | Cd138を標的とする免疫複合体及びその使用 |
EP2238168B8 (en) | 2007-12-26 | 2014-07-23 | Biotest AG | Agents targeting cd138 and uses thereof |
JP2011507933A (ja) * | 2007-12-26 | 2011-03-10 | バイオテスト・アクチエンゲゼルシヤフト | 免疫複合体の細胞傷害性副作用の低減及び有効性の改善方法 |
MY157403A (en) | 2008-01-31 | 2016-06-15 | Genentech Inc | Anti-cd79b antibodies and immunoconjugates and methods of use |
ES2545977T3 (es) | 2008-03-18 | 2015-09-17 | Genentech, Inc. | Combinaciones de un conjugado de anticuerpo-fármaco anti-HER2 y agentes quimioterapéuticos, y métodos de uso |
SG189811A1 (en) | 2008-04-30 | 2013-05-31 | Immunogen Inc | Cross-linkers and their uses |
AR071874A1 (es) | 2008-05-22 | 2010-07-21 | Bristol Myers Squibb Co | Proteinas de dominio de armazon basadas en fibronectina multivalentes |
US8163497B2 (en) | 2008-09-07 | 2012-04-24 | Glyconex Inc. | Anti-extended type I glycosphingolipid antibody, derivatives thereof and use |
JP6132548B2 (ja) | 2009-04-01 | 2017-05-24 | ジェネンテック, インコーポレイテッド | 抗FcRH5抗体および免疫接合体および使用方法 |
AR076284A1 (es) | 2009-04-29 | 2011-06-01 | Bayer Schering Pharma Ag | Inmunoconjugados de antimesotelina y usos de los mismos |
US8481694B2 (en) | 2009-04-29 | 2013-07-09 | Bio-Rad Laboratories, Inc. | Purification of immunoconjugates |
US8617554B2 (en) | 2009-05-13 | 2013-12-31 | Genzyme Corporation | Anti-human CD52 immunoglobulins |
CA2761681A1 (en) | 2009-05-13 | 2010-11-18 | Sea Lane Biotechnologies, Llc | Neutralizing molecules to influenza viruses |
TR201907573T4 (tr) | 2009-06-03 | 2019-06-21 | Immunogen Inc | Konjugasyon yöntemleri̇ |
US9493578B2 (en) | 2009-09-02 | 2016-11-15 | Xencor, Inc. | Compositions and methods for simultaneous bivalent and monovalent co-engagement of antigens |
UY32914A (es) | 2009-10-02 | 2011-04-29 | Sanofi Aventis | Anticuerpos que se usan específicamente al receptor epha2 |
UY32913A (es) | 2009-10-02 | 2011-04-29 | Sanofi Aventis | Nuevos maitansinoides y el uso de dichos maitansinoides para preparar conjugados con un anticuero |
CN102596922A (zh) | 2009-10-06 | 2012-07-18 | 免疫基因公司 | 有效的缀合物和亲水性连接体 |
AU2010303166A1 (en) | 2009-10-10 | 2012-05-24 | Eleven Biotherapeutics, Inc. | IL-17 family cytokine compositions and uses |
NZ623607A (en) | 2009-10-23 | 2016-07-29 | Millennium Pharm Inc | Anti-gcc antibody molecules and related compositions and methods |
AR079256A1 (es) | 2009-12-04 | 2012-01-04 | Genentech Inc | Metodo para el tratamiento del cancer de mama metastasico con trastuzumab-mcc-dm1 |
MX341687B (es) | 2010-02-10 | 2016-08-30 | Immunogen Inc | "anticuerpos cd20 y su utilización". |
EP3196212B1 (en) | 2010-02-24 | 2020-06-03 | ImmunoGen, Inc. | Immunoconjugates comprising a folate receptor 1 antibody |
HUE045487T2 (hu) | 2010-03-04 | 2019-12-30 | Macrogenics Inc | B7-H3-ra reaktív antitestek, immunológiailag aktív fragmenseik és alkalmazásaik |
RS59389B1 (sr) | 2010-03-12 | 2019-11-29 | Debiopharm Int Sa | Cd37-vezujući molekuli i njihovi imunokonjugati |
CA3188287A1 (en) | 2010-03-26 | 2011-09-29 | Memorial Sloan-Kettering Cancer Center | Antibodies to muc16 and methods of use thereof |
US9133239B2 (en) | 2010-04-20 | 2015-09-15 | The Research Foundation For The State University Of New York | Compositions and methods for inhibiting matrix metalloproteinase (MMP)-mediated cell migration |
WO2012016227A2 (en) | 2010-07-29 | 2012-02-02 | Xencor, Inc. | Antibodies with modified isoelectric points |
WO2012019024A2 (en) | 2010-08-04 | 2012-02-09 | Immunogen, Inc. | Her3-binding molecules and immunoconjugates thereof |
EP3828205A1 (en) | 2010-10-01 | 2021-06-02 | Oxford BioTherapeutics Ltd | Anti-ror1 antibodies |
ES2931477T3 (es) | 2010-10-29 | 2022-12-29 | Perseus Proteomics Inc | Anticuerpo anti-CDH3 que tiene alta capacidad de internalización |
BR112013010569A2 (pt) | 2010-10-29 | 2017-07-04 | Immunogen Inc | moléculas de ligação de egfr não antagonísticas e imunoconjugados das mesma |
EA201390472A1 (ru) | 2010-10-29 | 2014-02-28 | Иммьюноджен, Инк. | Новые молекулы, связывающиеся с egfr, и их иммуноконъюгаты |
CA2816426A1 (en) | 2010-11-17 | 2012-06-07 | Genentech, Inc. | Alaninyl maytansinol antibody conjugates |
US20120148559A1 (en) | 2010-12-01 | 2012-06-14 | Board Of Regents The University Of Texas System | Compositions and method for deimmunization of proteins |
JOP20210044A1 (ar) | 2010-12-30 | 2017-06-16 | Takeda Pharmaceuticals Co | الأجسام المضادة لـ cd38 |
WO2012106368A2 (en) | 2011-01-31 | 2012-08-09 | The Regents Of The University Of California | Methods for inhibiting prostate cancer |
EP3235508B1 (en) | 2011-03-16 | 2020-12-30 | Sanofi | Compositions comprising a dual v region antibody-like protein |
RS58367B1 (sr) | 2011-03-29 | 2019-03-29 | Immunogen Inc | Priprema konjugata antitela i majtanzinoida jednostepenim postupkom |
SG193997A1 (en) | 2011-03-29 | 2013-11-29 | Immunogen Inc | Process for manufacturing conjugates of improved homogeneity |
BR122016016837A2 (pt) | 2011-05-21 | 2019-08-27 | Macrogenics Inc | moléculas de ligação a cd3; anticorpos de ligação a cd3; composições farmacêuticas; e usos da molécula de ligação a cd3 |
CN106110332B (zh) | 2011-06-10 | 2018-11-30 | 梅尔莎纳医疗公司 | 蛋白质-聚合物-药物共轭物 |
BR112013032928A2 (pt) | 2011-06-21 | 2017-01-24 | Immunogen Inc | "derivados de maitansinoide com ligante de peptídeo e conjugados dos mesmos, composição farmacêutica que os compreende e uso dos mesmos" |
WO2013012733A1 (en) | 2011-07-15 | 2013-01-24 | Biogen Idec Ma Inc. | Heterodimeric fc regions, binding molecules comprising same, and methods relating thereto |
CA2842860A1 (en) | 2011-07-28 | 2013-01-31 | Sea Lane Biotechnologies, Llc | Sur-binding proteins |
WO2013022855A1 (en) | 2011-08-05 | 2013-02-14 | Xencor, Inc. | Antibodies with modified isoelectric points and immunofiltering |
KR102007055B1 (ko) | 2011-09-22 | 2019-08-02 | 암젠 인크 | Cd27l 항원 결합 단백질 |
EP2766392B1 (en) | 2011-10-10 | 2019-07-17 | Xencor, Inc. | A method for purifying antibodies |
US10851178B2 (en) | 2011-10-10 | 2020-12-01 | Xencor, Inc. | Heterodimeric human IgG1 polypeptides with isoelectric point modifications |
AU2012340686A1 (en) | 2011-11-21 | 2014-06-19 | Immunogen, Inc. | Method of treatment of tumors that are resistant to EGFR therapies by EGFR antibody cytotoxic agent conjugate |
KR20140100571A (ko) | 2011-12-08 | 2014-08-14 | 바이오테스트 아게 | Cd138을 타겟팅하는 면역접합체의 용도 |
WO2013096828A1 (en) | 2011-12-22 | 2013-06-27 | Sea Lane Biotechnologies, Llc | Surrogate binding proteins |
AU2013209512B2 (en) | 2012-01-20 | 2017-08-03 | I2 Pharmaceuticals, Inc. | Surrobody cojugates |
US9592289B2 (en) | 2012-03-26 | 2017-03-14 | Sanofi | Stable IgG4 based binding agent formulations |
AR090549A1 (es) | 2012-03-30 | 2014-11-19 | Genentech Inc | Anticuerpos anti-lgr5 e inmunoconjugados |
KR20150003251A (ko) | 2012-04-04 | 2015-01-08 | 가부시키가이샤 페르세우스 프로테오믹스 | 항 cdh3(p-카드헤린) 항체의 약물 콘쥬게이트 |
US9156915B2 (en) | 2012-04-26 | 2015-10-13 | Thomas Jefferson University | Anti-GCC antibody molecules |
CN104470544B (zh) | 2012-05-01 | 2018-01-12 | 基因泰克公司 | 抗pmel17抗体和免疫缀合物 |
UY34813A (es) | 2012-05-18 | 2013-11-29 | Amgen Inc | Proteínas de unión a antígeno dirigidas contra el receptor st2 |
WO2014074186A2 (en) | 2012-08-09 | 2014-05-15 | The Board Of Trustees Of The Leland Stanford Junior University | Superkines and synthekines: repurposed cytokines with new and enhanced signaling activities |
RU2018122734A (ru) | 2012-10-04 | 2018-07-24 | Иммуноджен, Инк. | Использование пвдф-мембраны для очистки конъюгатов клеточно-связывающий агент-цитотоксический агент |
RS60043B1 (sr) | 2012-11-20 | 2020-04-30 | Sanofi Sa | Anti-ceacam5 antitela i njihova primena |
EP2922818B1 (en) | 2012-11-24 | 2018-09-05 | Hangzhou Dac Biotech Co., Ltd | Hydrophilic linkers and their uses for conjugation of drugs to cell binding molecules |
TW201425336A (zh) | 2012-12-07 | 2014-07-01 | Amgen Inc | Bcma抗原結合蛋白質 |
WO2014093379A1 (en) | 2012-12-10 | 2014-06-19 | Mersana Therapeutics, Inc. | Auristatin compounds and conjugates thereof |
WO2014093394A1 (en) | 2012-12-10 | 2014-06-19 | Mersana Therapeutics, Inc. | Protein-polymer-drug conjugates |
US9872918B2 (en) | 2012-12-12 | 2018-01-23 | Mersana Therapeutics, Inc. | Hydroxyl-polymer-drug-protein conjugates |
CN103333246B (zh) | 2012-12-21 | 2015-09-16 | 百奥泰生物科技(广州)有限公司 | 一种抗egfr受体的肿瘤生长抑制剂及其制备方法和用途 |
CN104650113A (zh) | 2012-12-21 | 2015-05-27 | 百奥泰生物科技(广州)有限公司 | 类美登素衍生物及其制备方法和用途 |
CN104530235A (zh) | 2012-12-21 | 2015-04-22 | 百奥泰生物科技(广州)有限公司 | 一种抑制肿瘤生长的抗体药物衍生物及其制备方法和用途 |
CN103254213B (zh) | 2012-12-21 | 2015-02-25 | 百奥泰生物科技(广州)有限公司 | 类美登素酯的制备方法及用于所述方法的组合物 |
ES2871816T3 (es) | 2012-12-27 | 2021-11-02 | Sanofi Sa | Anticuerpos anti-LAMP1 y conjugados anticuerpo-fármaco, y usos de los mismos |
US9605084B2 (en) | 2013-03-15 | 2017-03-28 | Xencor, Inc. | Heterodimeric proteins |
US10131710B2 (en) | 2013-01-14 | 2018-11-20 | Xencor, Inc. | Optimized antibody variable regions |
US10487155B2 (en) | 2013-01-14 | 2019-11-26 | Xencor, Inc. | Heterodimeric proteins |
US10968276B2 (en) | 2013-03-12 | 2021-04-06 | Xencor, Inc. | Optimized anti-CD3 variable regions |
US9701759B2 (en) | 2013-01-14 | 2017-07-11 | Xencor, Inc. | Heterodimeric proteins |
US11053316B2 (en) | 2013-01-14 | 2021-07-06 | Xencor, Inc. | Optimized antibody variable regions |
EP2943511B1 (en) | 2013-01-14 | 2019-08-07 | Xencor, Inc. | Novel heterodimeric proteins |
WO2014113510A1 (en) | 2013-01-15 | 2014-07-24 | Xencor, Inc. | Rapid clearance of antigen complexes using novel antibodies |
ES2728936T3 (es) | 2013-01-25 | 2019-10-29 | Amgen Inc | Anticuerpos dirigidos contra CDH19 para melanoma |
BR112015019328A2 (pt) | 2013-02-15 | 2017-08-22 | Perseus Proteomics Inc | Anticorpo anti-cdh3 humanizado, conjugado do fármaco do anticorpo anti-cdh3 humanizado, e seu uso |
BR112015022019A2 (pt) | 2013-03-14 | 2017-08-29 | Genentech Inc | Anticorpos isolados, ácido nucleico, célula hospedeira, método de produção de anticorpos, imunoconjugado, formulação farmacêutica, métodos de tratamento de indivíduos, de inibição da proliferação de células, de detecção de b7-h4 humano e de detecção de câncer |
US9562099B2 (en) | 2013-03-14 | 2017-02-07 | Genentech, Inc. | Anti-B7-H4 antibodies and immunoconjugates |
AR095199A1 (es) | 2013-03-15 | 2015-09-30 | Genzyme Corp | Anticuerpos anti-cd52 |
US10519242B2 (en) | 2013-03-15 | 2019-12-31 | Xencor, Inc. | Targeting regulatory T cells with heterodimeric proteins |
US10858417B2 (en) | 2013-03-15 | 2020-12-08 | Xencor, Inc. | Heterodimeric proteins |
WO2014145907A1 (en) | 2013-03-15 | 2014-09-18 | Xencor, Inc. | Targeting t cells with heterodimeric proteins |
ES2885696T3 (es) | 2013-03-15 | 2021-12-15 | Xencor Inc | Proteínas heterodiméricas |
US10106624B2 (en) | 2013-03-15 | 2018-10-23 | Xencor, Inc. | Heterodimeric proteins |
US9862690B2 (en) | 2013-05-10 | 2018-01-09 | University of Pittsburgh—of the Commonwealth System of Higher Education | Treatment of pulmonary and other conditions |
SG11201508829QA (en) | 2013-05-30 | 2015-12-30 | Biogen Ma Inc | Oncostatin m receptor antigen binding proteins |
AR097685A1 (es) | 2013-09-17 | 2016-04-06 | Genentech Inc | Métodos de uso de anticuerpos anti-lgr5 |
KR102115217B1 (ko) | 2013-10-08 | 2020-05-26 | 이뮤노젠 아이엔씨 | 항-folr1 면역접합체 투여 레지멘 |
CN105979970B (zh) | 2013-10-11 | 2019-09-10 | 梅尔莎纳医疗公司 | 蛋白质-聚合物-药物共轭物 |
CN105813655B (zh) | 2013-10-11 | 2022-03-15 | 阿萨纳生物科技有限责任公司 | 蛋白-聚合物-药物缀合物 |
US10081682B2 (en) | 2013-10-11 | 2018-09-25 | Oxford Bio Therapeutics Ltd. | Conjugated antibodies against LY75 for the treatment of cancer |
KR20160098328A (ko) | 2013-12-13 | 2016-08-18 | 제넨테크, 인크. | 항-cd33 항체 및 면역접합체 |
CA2933557A1 (en) | 2013-12-16 | 2015-06-25 | Genentech, Inc. | Peptidomimetic compounds and antibody-drug conjugates thereof |
TWI541022B (zh) | 2013-12-18 | 2016-07-11 | 應克隆公司 | 針對纖維母細胞生長因子受體-3(fgfr3)之化合物及治療方法 |
US9943606B2 (en) | 2014-01-15 | 2018-04-17 | Rutgers, The State University Of New Jersey | Dendritic polypeptide-based nanocarriers for the delivery of therapeutic agents |
JP2017505305A (ja) | 2014-01-24 | 2017-02-16 | ジェネンテック, インコーポレイテッド | 抗steap1抗体及びイムノコンジュゲートを使用する方法 |
BR112016018754A2 (pt) | 2014-02-14 | 2017-10-10 | S Chi Andrew | método de tratamento de um câncer com vascularização |
ES2960619T3 (es) | 2014-02-28 | 2024-03-05 | Hangzhou Dac Biotech Co Ltd | Enlazadores cargados y sus usos para la conjugación |
NZ724904A (en) | 2014-03-14 | 2023-04-28 | Biomolecular Holdings Llc | Hybrid immunoglobulin containing non-peptidyl linkage |
JP6775422B2 (ja) | 2014-03-28 | 2020-10-28 | ゼンコー・インコーポレイテッドXencor、 Inc. | Cd38及びcd3に結合する二重特異性抗体 |
BR112016027222A2 (pt) | 2014-05-22 | 2018-01-30 | Genentech Inc | anticorpos isolados, ácido nucleico isolado, célula hospedeira, método de produção de um anticorpo, imunoconjugado, formulação farmacêutica, métodos de tratamento de um indivíduo com um câncer, de inibição da proliferação de uma célula, de detecção de gpc3 humano e de detecção de um câncer |
WO2016014984A1 (en) | 2014-07-24 | 2016-01-28 | Xencor, Inc. | Rapid clearance of antigen complexes using novel antibodies |
KR20170040249A (ko) | 2014-08-12 | 2017-04-12 | 노파르티스 아게 | 항-cdh6 항체 약물 접합체 |
CA2959141A1 (en) | 2014-08-28 | 2016-03-03 | Bioatla, Llc | Conditionally active chimeric antigen receptors for modified t-cells |
SG11201701328XA (en) | 2014-09-02 | 2017-03-30 | Immunogen Inc | Methods for formulating antibody drug conjugate compositions |
CA2958479A1 (en) | 2014-09-12 | 2016-03-17 | Genentech, Inc. | Anti-cll-1 antibodies and immunoconjugates |
CN113698488A (zh) | 2014-09-12 | 2021-11-26 | 基因泰克公司 | 抗-b7-h4抗体及免疫缀合物 |
CA3069221C (en) | 2014-09-23 | 2023-04-04 | Genentech, Inc. | Methods of using anti-cd79b immunoconjugates |
CN105585579A (zh) * | 2014-10-24 | 2016-05-18 | 南京联宁生物制药有限公司 | 一种化合物及其制备方法以及美登素dm1的制备方法 |
JP6831783B2 (ja) | 2014-11-14 | 2021-02-17 | ノバルティス アーゲー | 抗体薬物コンジュゲート |
KR20170088905A (ko) | 2014-11-19 | 2017-08-02 | 이뮤노젠 아이엔씨 | 세포 결합 작용제-세포독성 작용제 접합체를 제조하기 위한 공정 |
MA41019A (fr) | 2014-11-26 | 2021-05-05 | Xencor Inc | Anticorps hétérodimériques se liant aux antigènes cd3 et cd38 |
US10259887B2 (en) | 2014-11-26 | 2019-04-16 | Xencor, Inc. | Heterodimeric antibodies that bind CD3 and tumor antigens |
EP3223845B1 (en) | 2014-11-26 | 2021-05-19 | Xencor, Inc. | Heterodimeric antibodies that bind cd3 and cd20 |
SG11201704487XA (en) | 2014-12-04 | 2017-06-29 | Celgene Corp | Biomolecule conjugates |
EP3237449A2 (en) | 2014-12-22 | 2017-11-01 | Xencor, Inc. | Trispecific antibodies |
US10227411B2 (en) | 2015-03-05 | 2019-03-12 | Xencor, Inc. | Modulation of T cells with bispecific antibodies and FC fusions |
IL296062A (en) | 2015-03-17 | 2022-10-01 | Memorial Sloan Kettering Cancer Center | Antibodies against muc16 and their uses |
US10722523B2 (en) | 2015-03-17 | 2020-07-28 | The Regents Of The University Of California | Chemoimmunotherapy for epithelial cancer |
CN107750247A (zh) | 2015-03-17 | 2018-03-02 | 里珍纳龙药品有限公司 | 氨基酸酰化试剂及其使用方法 |
TW201711702A (zh) | 2015-06-04 | 2017-04-01 | 應克隆公司 | 使用針對纖維母細胞生長因子受體3(fgfr3)之化合物的療法 |
CA2986437A1 (en) | 2015-06-08 | 2016-12-15 | Debiopharm International, S.A. | Anti-cd37 immunoconjugate and anti-cd20 antibody combinations |
AU2015242213A1 (en) | 2015-07-12 | 2018-03-08 | Hangzhou Dac Biotech Co., Ltd | Bridge linkers for conjugation of cell-binding molecules |
US9839687B2 (en) | 2015-07-15 | 2017-12-12 | Suzhou M-Conj Biotech Co., Ltd. | Acetylenedicarboxyl linkers and their uses in specific conjugation of a cell-binding molecule |
WO2017025458A1 (en) | 2015-08-07 | 2017-02-16 | Gamamabs Pharma | Antibodies, antibody drug conjugates and methods of use |
AU2016323968B2 (en) | 2015-09-17 | 2023-07-06 | Immunogen, Inc. | Therapeutic combinations comprising anti-FOLR1 immunoconjugates |
CA3007030A1 (en) | 2015-12-07 | 2017-06-15 | Xencor, Inc. | Heterodimeric antibodies that bind cd3 and psma |
RU2018130108A (ru) | 2016-02-05 | 2020-03-06 | Иммуноджен, Инк. | Эффективный способ получения конъюгатов связывающийся с клеткой агент цитотоксический агент |
CA3021086C (en) | 2016-04-15 | 2023-10-17 | Bioatla, Llc | Anti-axl antibodies, antibody fragments and their immunoconjugates and uses thereof |
WO2017194568A1 (en) | 2016-05-11 | 2017-11-16 | Sanofi | Treatment regimen using anti-muc1 maytansinoid immunoconjugate antibody for the treatment of tumors |
TW202208441A (zh) | 2016-05-13 | 2022-03-01 | 美商拜奧亞特拉公司 | 抗-ror2抗體、抗體片段、其免疫結合物及其用途 |
CN109313200B (zh) | 2016-05-27 | 2022-10-04 | 豪夫迈·罗氏有限公司 | 用于表征位点特异性抗体-药物缀合物的生物分析性方法 |
RU2022104399A (ru) | 2016-06-14 | 2022-05-05 | Ксенкор, Инк. | Биспецифические антитела-ингибиторы контрольных точек |
WO2018004338A1 (en) | 2016-06-27 | 2018-01-04 | Tagworks Pharmaceuticals B.V. | Cleavable tetrazine used in bio-orthogonal drug activation |
CN116063545A (zh) | 2016-06-28 | 2023-05-05 | Xencor股份有限公司 | 结合生长抑素受体2的异源二聚抗体 |
US10793632B2 (en) | 2016-08-30 | 2020-10-06 | Xencor, Inc. | Bispecific immunomodulatory antibodies that bind costimulatory and checkpoint receptors |
KR102649972B1 (ko) | 2016-10-14 | 2024-03-22 | 젠코어 인코포레이티드 | IL15/IL15Rα 이종이량체 Fc-융합 단백질 |
EP3535297B1 (en) | 2016-11-02 | 2022-08-10 | Debiopharm International, S.A. | Methods for improving anti-cd37 immunoconjugate therapy |
CN110099682B (zh) | 2016-11-14 | 2023-03-31 | 杭州多禧生物科技有限公司 | 偶联连接体,含有此连接体的细胞结合分子-药物偶联物及其制备和应用 |
EP4015532A1 (en) | 2016-11-21 | 2022-06-22 | cureab GmbH | Anti-gp73 antibodies and immunoconjugates |
US11135307B2 (en) | 2016-11-23 | 2021-10-05 | Mersana Therapeutics, Inc. | Peptide-containing linkers for antibody-drug conjugates |
GB201703876D0 (en) | 2017-03-10 | 2017-04-26 | Berlin-Chemie Ag | Pharmaceutical combinations |
JP7320458B2 (ja) | 2017-06-22 | 2023-08-03 | メルサナ セラピューティクス インコーポレイテッド | 薬物担持ポリマースキャフォールドおよびタンパク質-ポリマー-薬物コンジュゲートを製造する方法 |
CA3067603A1 (en) | 2017-06-30 | 2019-01-03 | Xencor, Inc. | Targeted heterodimeric fc fusion proteins containing il-15/il-15ra and antigen binding domains |
CN111225688A (zh) | 2017-08-22 | 2020-06-02 | 普渡研究基金会 | 靶向碳酸酐酶阳性癌症的基于fbsa的治疗和放射性成像缀合物 |
US10981992B2 (en) | 2017-11-08 | 2021-04-20 | Xencor, Inc. | Bispecific immunomodulatory antibodies that bind costimulatory and checkpoint receptors |
AU2018366199A1 (en) | 2017-11-08 | 2020-05-28 | Xencor, Inc. | Bispecific and monospecific antibodies using novel anti-PD-1 sequences |
CA3086199A1 (en) | 2017-12-19 | 2019-06-27 | Xencor, Inc. | Engineered il-2 fc fusion proteins |
AU2019223076A1 (en) | 2018-02-21 | 2020-10-08 | Celgene Corporation | BCMA-binding antibodies and uses thereof |
US10982006B2 (en) | 2018-04-04 | 2021-04-20 | Xencor, Inc. | Heterodimeric antibodies that bind fibroblast activation protein |
CA3097741A1 (en) | 2018-04-18 | 2019-10-24 | Xencor, Inc. | Tim-3 targeted heterodimeric fusion proteins containing il-15/il-15ra fc-fusion proteins and tim-3 antigen binding domains |
EP3781599A1 (en) | 2018-04-18 | 2021-02-24 | Xencor, Inc. | Pd-1 targeted heterodimeric fusion proteins containing il-15/il-15ra fc-fusion proteins and pd-1 antigen binding domains and uses thereof |
US20210299286A1 (en) | 2018-05-04 | 2021-09-30 | Tagworks Pharmaceuticals B.V. | Tetrazines for high click conjugation yield in vivo and high click release yield |
US20210308207A1 (en) | 2018-05-04 | 2021-10-07 | Tagworks Pharmaceuticals B.V. | Compounds comprising a linker for increasing transcyclooctene stability |
BR112020024040A2 (pt) | 2018-05-30 | 2021-04-06 | Debiopharm International, S.A. | Regimes de dosagem de imunoconjugado anti-cd37 |
GB201809746D0 (en) | 2018-06-14 | 2018-08-01 | Berlin Chemie Ag | Pharmaceutical combinations |
WO2020010079A2 (en) | 2018-07-02 | 2020-01-09 | Amgen Inc. | Anti-steap1 antigen-binding protein |
CN112739340A (zh) | 2018-07-23 | 2021-04-30 | 美真达治疗公司 | 抗cd5抗体药物缀合物(adc)在同种异体细胞疗法中的用途 |
WO2020072821A2 (en) | 2018-10-03 | 2020-04-09 | Xencor, Inc. | Il-12 heterodimeric fc-fusion proteins |
EA202191175A1 (ru) | 2018-10-29 | 2021-09-08 | Мерсана Терапьютикс, Инк. | Сконструированные с цистеином конъюгаты антитело-лекарственное средство, содержащие пептидсодержащие линкеры |
MX2021009514A (es) | 2019-02-07 | 2021-11-04 | Sanofi Sa | Uso de inmunoconjugados anti-ceacam5 para el tratamiento del cancer de pulmon. |
EP3693023A1 (en) | 2019-02-11 | 2020-08-12 | Sanofi | Use of anti-ceacam5 immunoconjugates for treating lung cancer |
MX2021010390A (es) | 2019-03-01 | 2021-11-17 | Xencor Inc | Anticuerpos heterodimericos que se unen a enpp3 y cd3. |
ES2949511T3 (es) | 2019-03-01 | 2023-09-29 | Celgene Corp | Preparación de maitansinol |
EP3956332B1 (en) | 2019-04-18 | 2023-02-22 | Indena S.p.A. | Diasteroselective process for the preparation of thiol- or disulfide-containing maytansinoid esters and intermediates thereof |
KR20220007136A (ko) | 2019-05-14 | 2022-01-18 | 제넨테크, 인크. | 소포 림프종을 치료하기 위한 항-CD79b 면역접합체의 사용 방법 |
CA3143925A1 (en) | 2019-06-17 | 2020-12-24 | Tagworks Pharmaceuticals B.V. | Compounds for fast and efficient click release |
IL289094A (en) | 2019-06-17 | 2022-02-01 | Tagworks Pharmaceuticals B V | Tetrazines for increasing the speed and yield of the "click release" reaction |
EP4045090A1 (en) | 2019-10-18 | 2022-08-24 | Genentech, Inc. | Methods of using anti-cd79b immunoconjugates to treat diffuse large b-cell lymphoma |
US20230030526A1 (en) | 2019-11-29 | 2023-02-02 | Microbiopharm Japan Co., Ltd. | Method for enzymatically producing maytansinol |
WO2021142199A1 (en) | 2020-01-09 | 2021-07-15 | Mersana Therapeutics, Inc. | Site specific antibody-drug conjugates with peptide-containing linkers |
MX2022013402A (es) | 2020-04-24 | 2022-11-14 | Sanofi Sa | Combinaciones antitumorales que contienen productos conjugados de anticuerpos anti-ceacam5 y folfiri. |
WO2021214227A1 (en) | 2020-04-24 | 2021-10-28 | Sanofi | Antitumor combinations containing anti-ceacam5 antibody conjugates and cetuximab |
CA3181002A1 (en) | 2020-04-24 | 2021-10-28 | Sanofi | Antitumor combinations containing anti-ceacam5 antibody conjugates, trifluridine and tipiracil |
WO2021214223A1 (en) | 2020-04-24 | 2021-10-28 | Sanofi | Antitumor combinations containing anti-ceacam5 antibody conjugates and folfox |
US11919956B2 (en) | 2020-05-14 | 2024-03-05 | Xencor, Inc. | Heterodimeric antibodies that bind prostate specific membrane antigen (PSMA) and CD3 |
WO2022010797A2 (en) | 2020-07-07 | 2022-01-13 | Bionecure Therapeutics, Inc. | Novel maytansinoids as adc payloads and their use for the treatment of cancer |
AU2021329378A1 (en) | 2020-08-19 | 2023-03-23 | Xencor, Inc. | Anti-CD28 compositions |
AU2022232375A1 (en) | 2021-03-09 | 2023-09-21 | Xencor, Inc. | Heterodimeric antibodies that bind cd3 and cldn6 |
US11859012B2 (en) | 2021-03-10 | 2024-01-02 | Xencor, Inc. | Heterodimeric antibodies that bind CD3 and GPC3 |
CA3230774A1 (en) | 2021-09-06 | 2023-03-09 | Veraxa Biotech Gmbh | Novel aminoacyl-trna synthetase variants for genetic code expansion in eukaryotes |
WO2023079057A1 (en) | 2021-11-05 | 2023-05-11 | Sanofi | Antitumor combinations containing anti-ceacam5 antibody-drug conjugates and anti-vegfr-2 antibodies |
WO2023089314A1 (en) | 2021-11-18 | 2023-05-25 | Oxford Biotherapeutics Limited | Pharmaceutical combinations |
EP4186529A1 (en) | 2021-11-25 | 2023-05-31 | Veraxa Biotech GmbH | Improved antibody-payload conjugates (apcs) prepared by site-specific conjugation utilizing genetic code expansion |
CA3238627A1 (en) | 2021-11-25 | 2023-06-01 | Christine Kohler | Improved antibody-payload conjugates (apcs) prepared by site-specific conjugation utilizing genetic code expansion |
TW202339804A (zh) | 2021-12-02 | 2023-10-16 | 法商賽諾菲公司 | 在癌症療法中用於患者選擇的cea測定 |
TW202340241A (zh) | 2021-12-02 | 2023-10-16 | 法商賽諾菲公司 | Ceacam5 adc-抗pd1/pd-l1組合療法 |
CA3239713A1 (en) | 2021-12-08 | 2023-06-15 | Edward A. LEMKE | Hydrophilic tetrazine-functionalized payloads for preparation of targeting conjugates |
EP4314031B1 (en) | 2022-02-15 | 2024-03-13 | Tagworks Pharmaceuticals B.V. | Masked il12 protein |
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JPS53124692A (en) | 1977-04-01 | 1978-10-31 | Takeda Chem Ind Ltd | Preparation of maytansinol, maytansine, and maytansinol, propionate |
US4151042A (en) | 1977-03-31 | 1979-04-24 | Takeda Chemical Industries, Ltd. | Method for producing maytansinol and its derivatives |
US4162940A (en) * | 1977-03-31 | 1979-07-31 | Takeda Chemical Industries, Ltd. | Method for producing Antibiotic C-15003 by culturing nocardia |
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US4145345A (en) * | 1977-12-07 | 1979-03-20 | Research Corporation | Chromatographic purification of maytansine |
JPS5529972A (en) | 1978-08-24 | 1980-03-03 | Takeda Chem Ind Ltd | Preparation of maytansinol |
JPS5566586A (en) * | 1978-11-14 | 1980-05-20 | Takeda Chem Ind Ltd | Novel maytansinoid compound and its preparation |
JPS5645483A (en) | 1979-09-19 | 1981-04-25 | Takeda Chem Ind Ltd | C-15003phm and its preparation |
JPS57192389A (en) * | 1981-05-20 | 1982-11-26 | Takeda Chem Ind Ltd | Novel maytansinoid |
CA2006408A1 (en) | 1988-12-27 | 1990-06-27 | Susumu Iwasa | Bispecific monoclonal antibody, its production and use |
CA2026147C (en) * | 1989-10-25 | 2006-02-07 | Ravi J. Chari | Cytotoxic agents comprising maytansinoids and their therapeutic use |
US5208020A (en) * | 1989-10-25 | 1993-05-04 | Immunogen Inc. | Cytotoxic agents comprising maytansinoids and their therapeutic use |
EP2289549A3 (en) * | 1999-10-01 | 2011-06-15 | Immunogen, Inc. | Immunoconjugates for treating cancer |
DE10012120A1 (de) | 2000-03-13 | 2001-09-27 | Ktb Tumorforschungs Gmbh | Therapeutische und diagnostische Ligandensysteme mit Transportmolekülbindenden Eigenschaften und diese enthaltende Arzneimittel |
US6573074B2 (en) | 2000-04-12 | 2003-06-03 | Smithkline Beecham Plc | Methods for ansamitocin production |
CA2413149A1 (en) | 2000-06-14 | 2001-12-20 | Medarex, Inc. | Prodrug compounds with isoleucine |
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