JP2003034636A

JP2003034636A - 脂質代謝改善剤

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Publication number: JP2003034636A
Application number: JP2001219687A
Authority: JP
Inventors: Takatoshi Murase; 孝利村瀬; Tomohito Mizuno; 智仁水野; Tadashi Hase; 正長谷; Ichiro Tokimitsu; 一郎時光; Mamoru Nakamura; 守中村
Original assignee: Kao Corp
Current assignee: Kao Corp
Priority date: 2001-07-19
Filing date: 2001-07-19
Publication date: 2003-02-07
Anticipated expiration: 2021-07-19
Also published as: JP4179765B2

Abstract

(57)【要約】【解決手段】クロロゲン酸類からなる血糖値上昇抑制
剤。【効果】本発明のクロロゲン酸類は優れたPPAR依存的
遺伝子転写活性化作用を有し、遺伝子の転写調節領域に
PPAR responsive element (PPRE)を有する遺伝子を活性
化することにより、特に脂質代謝を活性化し、それによ
り種々の生活習慣病に対する効果を有する。特に、クロ
ロゲン酸を摂取することにより肥満の予防・改善、血糖
上昇抑制あるいは血糖低下、高レプチン血症予防・改
善、高インスリン血症予防・改善効果が得られ、その結
果、糖尿病の予防・改善効果が得られる。また、クロロ
ゲン酸類は長年にわたり日常的に食品として摂取してい
るものであり安全性も高いので、飲食品又は薬剤として
摂取しても副作用の心配は少ない。

Description

【発明の詳細な説明】

【０００１】

【発明の属する技術分野】本発明は、血糖値上昇抑制
剤、高レプチン血症予防・改善剤、高インスリン血症予
防・改善剤、ペルオキシソーム増殖剤活性化受容体(PPA
R:Peroxisome Proliferator Activated Receptor)依存
的遺伝子転写活性化剤、脂肪代謝促進剤に関する。

【０００２】

【従来の技術】日本人の糖尿病患者は近年増加の一途を
たどっており、大きな社会問題となってきている。糖尿
病の９０％以上を占める２型糖尿病は、膵β細胞からの
インスリンの分泌低下とインスリン標的臓器である骨格
筋、肝臓、脂肪組織でのインスリン感受性の低下（イン
スリン抵抗性）が様々な程度合わさってインスリン作用
の低下が起こり、高血糖をきたした状態と言える。イン
スリン分泌低下は主に遺伝的に規定されている可能性が
高く、インスリン抵抗性には遺伝素因と共に過食、高脂
肪食、運動不足などの環境因子に起因する肥満、特に内
臓に脂肪が多く蓄積した内臓脂肪型肥満が大きく関与す
ると考えられている。肥満に伴うインスリン抵抗性の存
在は、その代償として高インスリン血症を招くことにな
る。生体は肥満によって生じるインスリン抵抗性に対し
てインスリンを過剰分泌することにより対応するが、イ
ンスリン抵抗性が持続すると膵β細胞が疲弊し、インス
リン分泌能が徐々に低下し、糖尿病状態に進行する。高
血糖状態が持続すると、ブドウ糖自身が膵β細胞のイン
スリン分泌、末梢でのインスリン抵抗性を増大させ、ブ
ドウ糖毒性が発揮される。ここに悪循環が形成され、障
害の程度が更に悪化する。従って、インスリン抵抗性を
改善する薬剤は糖尿病の治療薬として極めて有用である
と考えられる（生化学：７１巻１１号，pp1281-1298, 1
999、化学と生物：３７巻２号，pp120-125、臨床検査：
４２巻４号，pp395-403, 1998、Mebio別冊：Multiple r
isk factor syndrome 2, 1999）。一方、レプチンは脂
肪細胞から分泌されるペプチドホルモンで、食欲調節や
エネルギー代謝に深く関与する事が明らかになりつつあ
る。ヒトでは一般に肥満者ほど血中レプチン値が高く、
体格指数(Body mass index; BMI)や体脂肪率と正の相関
を示す。従って、ヒトにおける肥満の病態はレプチンの
分泌不全ではなく、中枢あるいは末梢におけるレプチン
感受性の低下（レプチン抵抗性）であり、それにより代
償的に血中レプチン濃度が上昇するものと考えられてい
る（Diabetes& Metabolism,23,16-24,1997、別冊医学の
歩み：脂肪細胞：49-53, 1999）。

【０００３】PPAR(Peroxisome Proliferator Activated
Receptor：ペルオキシソーム増殖剤活性化受容体)は核
内受容体の１種であり、1990年に脂肪分解に関与する細
胞内小器官であるペルオキシソームを増加させる作用を
仲介する蛋白として同定され、ペルオキシソーム増殖剤
により活性化を受けるレセプターという意味でPeroxiso
me Proliferator Activated Receptorα(ペルオキシソ
ーム増殖剤活性化受容体:PPARα)と名付けられた。その
後α型と構造上類似したアイソフォーム遺伝子としてβ
／δ型及びγ型が同定され、合計３つのサブタイプから
成ることが知られている。ヒトとマウスのγ型遺伝子に
は２つのプロモーターが存在するため、スプライシング
の違いによってＮ末端の異なるPPARγ1とPPARγ2の２種
類の蛋白質がある。PPARの各サブタイプはリガンド依存
的に活性化され、９−シスレチノイン酸をリガンドとす
るRXR(Retinoid X Receptor)とヘテロ２量体を形成する
ことで、プロモーター領域（転写制御領域）にPPAR応答
配列(PPAR responsive element; PPRE)を有する種々の
遺伝子の発現を制御している。近年PPARは非常に多くの
生理、病理現象に関わっていることが明らかになってき
た。中でもPPARαの機能は脂肪酸の合成・輸送・分泌、
脂肪消費臓器におけるATP産生、細胞周期の調節等幅広
く生体のエネルギー代謝や恒常性の維持に関わるものと
考えられている。特にβ-酸化など脂肪酸代謝に重要な
酵素(Acyl-CoA oxidase, HMG-CoA synthase, Acyl-CoA
synthase, Medium chain acyl dehydrogenase, Fatty a
cid binding protein, Lipoprotein lipase等)の遺伝子
発現はPPARの活性化に強く依存していることが明らかに
なってきている。言い換えれば、PPAR活性化剤は生体の
脂質代謝を活性化する作用を有することが明らかになっ
てきている。生体脂質代謝の活性化は高脂血症の改善や
抗肥満にもつながる有用な作用である。また、PPARγ、
特にPPARγ2は脂肪細胞に比較的強い特異性を持って発
現しており、脂肪細胞分化の中心的役割を果たしている
ことが明らかになっている。（細胞：31(6), 218-234,
1999、J.Lipid Res. 37,907-925, 1996、Curr.Opin.Lip
idol. 10, 151-159, 1999）

【０００４】高脂血症治療薬であるフィブラート系化合
物がPPARαのアゴニストであること、糖尿病治療薬とし
て知られるチアゾリジン誘導体がPPARγのアゴニストで
あることが明らかにされて以来、これらの化合物に続く
PPARアゴニストの探索が進められ、高脂血症やインスリ
ン抵抗性、糖尿病の改善薬として開発が試みられてい
る。そしてこれまでにPPARアゴニストとして、チアゾリ
ジン誘導体、フィブラート系化合物の他、脂肪酸、ロイ
コトリエンＢ４、インドメタシン、イブプロフェン、フ
ェノプロフェン、15-deoxy-Δ-12,14-PGJ2 など(Cell.8
3,813-819,1995、J.Biol.Chem. 272(6),3406-3410, 199
7、Proc.Natl.Acad.Sci.USA. 94,4321-,1997、J.Biol.C
hem. 274(10),6718-6725,1999、Mebio別冊;Multiple Ri
sk Factor Syndrome 2,88-96, 1999)が報告されてい
る。

【０００５】

【発明を解決しようとする課題】しかしこれらの化合物
には長期摂取による副作用などの問題がある。上記のよ
うな状況に鑑み、抗糖尿病、抗インスリン抵抗性薬剤の
探索が進められ、これまでにトログリタゾンやピオグリ
タゾンなどのいわゆるチアゾリジン系薬剤が開発され、
その有効性が確認されている。その一方で、死亡例を伴
う重篤な肝障害も報告されており、安全性に優れた薬剤
の開発が望まれている。水溶性物質の抗肥満効果に関し
ては、カワラヨモギ、ヤマヨモギからの抽出物およびそ
の中に含まれるカフェ酸、クロロゲン酸、3,5-ジカフェ
オイルキナ酸、4,5-ジカフェオイルキナ酸、クロロゲニ
ン酸メチルについて、抗肥満効果および脂質代謝に関す
る効果が報告されている（特開昭61-40763）しかしなが
ら、味、臭いの関係から、ヨモギ由来のものを連用する
ことは難しい。

【０００６】本発明の目的は、一度に大量の摂取が可能
で、日常的に摂取しても負担にならず、かつ安全性に優
れ、より高い血糖値上昇抑制効果、高レプチン血症予防
・改善効果、高インスリン血症予防・改善効果、脂質代
謝改善効果を有する薬剤、食品等を提供することにあ
る。

【０００７】

【課題を解決するための手段】本発明者は、クロロゲン
酸類を食餌依存的に肥満・２型糖尿病を発症するＣ５７
Ｂｌ／６Ｊマウスに投与すると、肥満を抑制し、血糖値
の上昇を抑制して糖尿病の予防・改善に有効であって、
更に血中インスリン及びレプチン量の増加抑制作用を有
することを見出した。また、本発明者は、クロロゲン酸
類はPPAR依存的遺伝子転写活性化作用、脂質代謝関連遺
伝子転写活性作用を有し、特定物質と併用すると優れた
脂質代謝促進効果が得られることを見出した。

【０００８】本発明は、クロロゲン酸類からなる血糖値
上昇抑制剤、高レプチン血症予防・改善剤、高インスリ
ン血症予防・改善剤、PPAR依存的遺伝子転写活性化剤を
提供するものである。また、本発明は、モノカフェオイ
ルキナ酸／ジカフェオイルキナ酸の重量比が１２０／１
〜１／１であるクロロゲン酸類からなる脂質代謝促進剤
を提供するものである。更に、本発明は、クロロゲン酸
類及びカフェインからなりクロロゲン酸類／カフェイン
の重量比が４／１〜２／５である脂質代謝促進剤を提供
するものである。

【０００９】

【発明の実施の形態】本発明で使用するクロロゲン酸類
としては、３−カフェオイルキナ酸（ネオクロロゲン
酸）、４−カフェオイルキナ酸（クリプトクロロゲン
酸）、５−カフェオイルキナ酸、３，４−ジカフェオイ
ルキナ酸、３，５−ジカフェオイルキナ酸、４，５−ジ
カフェオイルキナ酸、３−フェルロイルキナ酸、４−フ
ェルロイルキナ酸、５−フェルロイルキナ酸、３−フェ
ルロイル−４−カフェオイルキナ酸等が挙げられる。

【００１０】また、他の植物体からの抽出されるこれら
の物質及びそれら誘導体を使用してもよく、その抽出物
として、カフェ酸ジメチルエーテル、２−Ｏ−カフェオ
イル−アルブチン、カフェオイル−カレリヤニン、３−
Ｏ−カフェオイル−シキミ酸、カフェ酸ドコサノールエ
ステル、カフェ酸エイコサノールエステル、カフェ酸ヘ
ネイコサノールエステル、カフェ酸トリコサノールエス
テル、カフェ酸テトラコサノールエステル、カフェ酸ペ
ンタコサノールエステル、カフェ酸ヘキサコサノールエ
ステル、フェルラ酸ドコサノールエステル、フェルラ酸
エイコサノールエステル、フェルラ酸ヘネイコサノール
エステル、フェルラ酸トリコサノールエステル、フェル
ラ酸テトラコサノールエステル、フェルラ酸ペンタコサ
ノールエステル、フェルラ酸ヘキサコサノールエステ
ル、エイコシル−フェルラ酸エステル、フキノール酸、
エキナコシド（Echinacoside）、１，３−ジカフェオイ
ルキナ酸、シコリック酸（Cichoric acid）、コニフェ
リルアルコール、クルクミン、リグナン類、リグニン等
が挙げられる。

【００１１】これらを含有する植物抽出物としては、例
えば、コーヒー、リンゴ、ブドウ、タマネギ、ダイコ
ン、レモン、センキュウ、トウキ、マツ、オウレン、ウ
コン、アギ、カンショ、ヒマワリの葉、ヒマワリの種
子、モロヘイヤ、トウモロコシ、大麦、小麦、コメ等が
好ましく、特にコメが好ましい。ここで、コメとは、イ
ネ科イネ（Oryza sativa LINNE）の種実等の生又は乾燥
物を意味する。特に、コーヒー生豆、南天の葉、リンゴ
未熟果などのクロロゲン酸を多く含む植物体から抽出し
たものでもよく、例えば、アカネ科コーヒー（Coffea a
rabica LINNE）の種子より、温時アスコルビン酸又はク
エン酸酸性水溶液で抽出して得られる生コーヒー豆の抽
出物をこれらに置き換えて利用することができる。植物
抽出液中、好ましいものとしては、コーヒー、リンゴ、
ブドウ、タマネギ、ダイコン、レモン、センキュウ、ト
ウキ、マツ、オウレン、ウコン、アギ、カンショ、ヒマ
ワリの葉、ヒマワリの種子、モロヘイヤ、トウモロコ
シ、大麦、小麦、コメ等が好ましく、特にコメが好まし
い。ここで、コメとは、イネ科イネ（Oryza sativa LIN
NE）の種実等の生又は乾燥物が挙げられ、更に好ましく
は、コーヒー、リンゴ、ブドウが挙げられる。

【００１２】クロロゲン酸類の骨格であるフェルラ酸
は、上記工程より得られたフェルラ酸エステルを加圧下
熱時硫酸で加水分解し、精製して得るか、又は細菌（Ps
eudomonas）を、フトモモ科チョウジノキ（Syzygium ar
omaticum MERRILL et PERRY）のつぼみ及び葉より水蒸
気蒸留で得られた丁子油、又は丁子油から精製して得ら
れたオイゲノールを含む培養液で培養し、その培養液
を、分離、精製して得ることができる。また、化学合成
によってフェルラ酸を調製する場合は、例えば、バニリ
ンとマロン酸との縮合反応による方法を挙げることがで
きる（Journal of American Chemical Society,74,534
6,1952）。なお、フェルラ酸等には立体異性体が存在す
るがいずれの異性体も使用することができ、また異性体
の混合物であってもよい。

【００１３】本発明で使用するクロロゲン酸類は、その
カルボキシル基が遊離のものの他に、ナトリウム塩、カ
リウム塩なような塩の状態の物及びその混合物でも良
い。このような塩の塩形成用の塩基物質としては、例え
ば、水酸化リチウム、水酸化ナトリウム、水酸化カリウ
ム等のアルカリ金属の水酸化物；水酸化マグネシウム、
水酸化カルシウム等のアルカリ土類金属の水酸化物；水
酸化アンモニウム等の無機塩基、アルギニン、リジン、
ヒスチジン、オルニチン等の塩基性アミノ酸；モノエタ
ノールアミン、ジエタノールアミン、トリエタノールア
ミン等の有機塩基が用いられるが、特にアルカリ金属又
はアルカリ土類金属の水酸化物が好ましい。

【００１４】更にクロロゲン酸類を血糖値上昇抑制剤、
高レプチン血症予防・改善剤、高インスリン血症予防・
改善剤、PPAR依存的遺伝子転写活性剤として使用する場
合、クロロゲン酸類中の、モノカフェオイルキナ酸とジ
カフェオイルキナ酸の含有重量比率モノカフェオイルキ
ナ酸／ジカフェオイルキナ酸が１２０／１〜１／１であ
ることが好ましい。更に、好ましくは１００／１〜２／
１、特に好ましくは１００／１〜５／１である。モノカ
フェオイルキナ酸としては、３−カフェオイルキナ酸、
４−カフェオイルキナ酸、５−カフェオイルキナ酸ま
た、ジカフェオイルキナ酸としては、３，４−ジカフェ
オイルキナ酸、３，５−ジカフェオイルキナ酸、４，５
−ジカフェオイルキナ酸、３−フェルロイルキナ酸、４
−フェルロイルキナ酸、５−フェルロイルキナ酸、３−
フェルロイル−４−カフェオイルキナ酸が挙げられる。

【００１５】クロロゲン酸類中のモノカフェオイルキナ
酸とジカフェオイルキナ酸の含有量の重量比モノカフェ
オイルキナ酸／ジカフェオイルキナ酸が１２０／１〜１
／１の範囲で摂取すると脂質代謝促進効果が優れ好まし
い。またこのモノカフェオイルキナ酸／ジカフェオイル
キナ酸の重量比は、更に好ましくは２５／１〜１／１、
特に２５／１〜２／１が好ましい。

【００１６】また、クロロゲン酸類は、一定量比でカフ
ェインと組み合せて摂取すると優れた脂質代謝改質効果
が得られる。クロロゲン酸類とカフェインの含有量の重
量比率クロロゲン酸類／カフェインが２０／１〜１／１
０、更に好ましくは１０／１〜２／５、特に４／１〜２
／５が好ましい。この場合のクロロゲン酸類中のモノカ
フェオイルキナ酸とジカフェオイルキナ酸の含有量の重
量比率は、モノカフェオイルキナ酸／ジカフェオイルキ
ナ酸が１２０／１〜１／１、更に好ましくは１００／１
〜２／１、特に２５／１〜２／１であるのが好ましい。

【００１７】本発明のクロロゲン酸類は賦形剤及びその
他の添加剤とともに任意の形態に製剤化される。かかる
賦形剤、添加剤の例として、固形状のものとしては乳
糖、カオリン、ショ糖、結晶セルロース、コーンスター
チ、タルク、寒天、ペクチン、ステアリン酸、ステアリ
ン酸マグネシウム、レシチン、塩化ナトリウム等が挙げ
られ、液状のものとしてはグリセリン、落花生油、ポリ
ビニルピロリドン、オリーブ油、エタノール、ベンジル
アルコール、プロピレングリコール、水等が挙げられ
る。

【００１８】本発明のクロロゲン酸及びそれを含有する
組成物は、その剤型に応じて経口、経腸、注射、経粘
膜、経皮等いずれの経路によってもヒトに投与あるいは
摂取することができる。またその量は、年齢、体重、性
別、投与方法等の種々の要因によって異なるが、経口投
与の場合は通常大人１人当たり１回に１００〜５０００
mgが望ましい。血糖値上昇抑制剤として使用する場合に
は、３００〜５０００mg、特に４００〜１０００mgの範
囲を１日１回〜数回に分けて投与することが好ましい。
また、高レプチン血症予防・改善剤、高インスリン血症
予防・改善剤として使用する場合には、３００〜５００
０mg、特に４００〜１０００mgの範囲を１日１回〜数回
に分けて投与することが好ましい。PPAR依存的遺伝子転
写活性剤として、使用する場合にも、３００〜５０００
mg、特に４００〜１０００mgの範囲を１日１回〜数回に
分けて投与することが好ましい。脂肪代謝促進剤とし
て、使用する場合には、３００〜５０００mg、特に４０
０〜１０００mgの範囲を１日１回〜数回に分けて投与す
ることが好ましい。

【００１９】本発明の剤型としては、例えば錠剤、散
剤、顆粒剤、カプセル剤、トローチ剤、シロップ剤、乳
液、軟ゼラチンカプセル、ゲル、ペースト、注射剤、ク
リーム、ジェル、ローション、貼付剤等が挙げられる。
また、種々の形態の飲料、スナック類、乳製品、調味
料、でんぷん加工製品、加工肉製品等あらゆる食品に適
宜配合することができる。特に脂質代謝促進剤として使
用する場合は、容器詰飲料とするのが好ましい。

【００２０】本発明のクロロゲン酸類は、摂取、投与の
しやすさから通常製剤中０．０１〜１００重量％である
のが好ましく、特に好ましくは、０．０５〜９５重量
％、更に好ましくは、０．１〜９０重量％である。

【００２１】

【実施例】実施例１食餌誘導性肥満・２型糖尿病モデルであるＣ５７ＢＬ／
６Ｊ系マウスを使用した肥満、血糖、血中インスリン、
血中レプチンに対する効果試験７週齢のＣ５７ＢＬ／６Ｊ系雄性マウスを各群５匹ずつ
３群に分け、表１記載の組成の各食餌で飼育する。４ヶ
月後体重を測定するとともに、１２時間絶食後エーテル
麻酔下で腹部大動脈より採血を行い空腹時血清グルコー
ス、インスリン、レプチン値を測定する。結果を表２に
示す。

【００２２】

【表１】

【００２３】

【表２】

【００２４】第２群では第１群に比較し、有意な体重の
上昇が認められたのに対して、第３群においては第１群
に対して体重の上昇は少なく、また第２群に対して体重
は低値を示した。本発明のクロロゲン酸は抗肥満効果が
優れていた。第２群では第１群に比較し、有意な血糖値
（グルコース）の上昇が認められたのに対して、第３群
においては第１群に対しての血糖値上昇は少なく、また
第２群に対して血糖値は低値を示した。本発明のクロロ
ゲン酸は、血糖値上昇抑制効果に優れ、更に糖尿病に有
効であった。第２群では第１群に比較し、有意なインス
リン値の上昇が認められたのに対して、第３群において
は第１群に対してのインスリン値の上昇は少なく、また
第２群に対してインスリン値は低値を示した。本発明の
クロロゲン酸は、血中インスリン値上昇抑制に優れ、更
にインスリン抵抗性に有効であった。第２群では第１群
に比較し、有意なレプチン値の上昇が認められたのに対
して、第３群においては第１群に対してのレプチン値の
上昇は少なく、また第２群に対してレプチン値は低値を
示した。本発明のクロロゲン酸は、血中レプチン値上昇
抑制に優れ、更にレプチン抵抗性に有効であった。

【００２５】実施例２ PPAR依存的遺伝子転写活性化試験小腸上皮細胞株IEC-6を12well plateにまき、DMEM(1%FC
S)中で１日培養する。PPAR応答配列（下線）(AACgTgACC
TTTgTCCTggTC AACgTgACCTTTgTCCTggTC AACgTgACCTTTgTC
CTggTC)を含むDNA鎖、SV40プロモター遺伝子、蛍ルシフ
ェラーゼ遺伝子を含むPPARレポータープラスミド(PPAR-
Luc)及び、ウミシイタケルシフェラーゼ遺伝子の上流に
チミジンキナーゼプロモーター遺伝子を連結したコント
ロールプラスミド(TK-Luc:Promega)を同時に各々0.5μg
/wellとなるようトランスフェクション試薬(Superfect
transfection reagent; QIAGEN)を用いて導入した。そ
の後培養液を被験物質を含むDMEM(-FCS)培地に交換し、
さらに24時間培養した。PBSにて洗浄後デュアルルシフ
ェラーゼアッセイシステム(Promega)を用いて細胞を溶
解、溶解液にルシフェリンを含む基質溶液を加え、ルミ
ノメーターにて蛍及びウミシイタケルシフェラーゼ活性
を各々測定した。本実験系でPPAR依存的な遺伝子の転写
活性（ルシフェラーゼ活性１）を測定することにより、
PPAR活性能の評価を行った。尚、PPAR依存的な遺伝子の
転写活性（ルシフェラーゼ活性１）は以下のように定義
した。

【００２６】PPAR依存的な遺伝子の転写活性（ルシフェ
ラーゼ活性１）＝（PPAR-Lucによる蛍ルシフェラーゼ活
性）／（TK-Lucによるウミシイタケルシフェラーゼ活
性）

【００２７】IEC-6細胞における各被験物質によるPPAR
活性化能を表３に示す。尚、コントロールにおけるPPAR
依存的転写活性を100とし、それに対する相対値を示
す。

【００２８】

【表３】

【００２９】クロロゲン及びクロロゲン酸を含有するコ
ーヒー抽出物はPPAR依存的遺伝子転写活性化に優れてい
た。

【００３０】実施例３ HMG-CoA synthase遺伝子活性化試験小腸上皮細胞株IEC-6を12well plateにまき、DMEM(1%FC
S)中で１日培養する。ラットHMG-CoA synthase遺伝子の
転写制御領域(-1081/+21)、SV40プロモター遺伝子、蛍
ルシフェラーゼ遺伝子を含むPPARレポータープラスミド
(HMGS-Luc)及び、ウミシイタケルシフェラーゼ遺伝子の
上流にチミジンキナーゼプロモーター遺伝子を連結した
コントロールプラスミド(TK-Luc:Promega)を同時に各々
0.5μg/wellとなるようトランスフェクション試薬(Supe
rfect transfection reagent; QIAGEN)を用いて導入し
た。その後培養液を被験物質を含むDMEM(-FCS)培地に交
換し、さらに24時間培養した。PBSにて洗浄後デュアル
ルシフェラーゼアッセイシステム(Promega)を用いて細
胞を溶解、溶解液にルシフェリンを含む基質溶液を加
え、ルミノメーターにて蛍及びウミシイタケルシフェラ
ーゼ活性を各々測定した。本実験系でHMG-CoA synthase
の転写活性（ルシフェラーゼ活性２）を測定することに
より、脂質代謝遺伝子活性能の評価を行った。尚、遺伝
子の転写活性（ルシフェラーゼ活性２）は以下のように
定義した。

【００３１】遺伝子の転写活性（ルシフェラーゼ活性
２）＝（HMGS-Lucによる蛍ルシフェラーゼ活性）／（TK
-Lucによるウミシイタケルシフェラーゼ活性）

【００３２】IEC-6細胞における各被験物質によるHMG-C
oA synthase遺伝子活性化能を表４に示す。尚、コント
ロールにおける転写活性を100とし、それに対する相対
値を示す。

【００３３】

【表４】

【００３４】クロロゲンは脂質代謝酵素遺伝子の転写活
性化が優れていた。

【００３５】実施例４食餌誘導性肥満マウスを用いた体重及び内蔵脂肪に対す
る抗肥満効果試験／クロロゲン酸＋カフェイン７週齢のＣ５７ＢＬ／６Ｊ系雄性マウスを各群５匹ずつ
６群に分け、表５記載の組成の各食餌で飼育する。１ヶ
月後体重を測定するとともに、内臓脂肪量（副睾丸脂
肪、腸間膜脂肪、後腹膜脂肪および腎周囲脂肪）を測定
した。

【００３６】

【表５】

【００３７】

【表６】

【００３８】

【表７】

【００３９】第２群では第１群に比し、有意な体重の上
昇及び内臓脂肪量増加が認められたのに対して、第３群
では第２群に比し、体重増加量及び全内臓脂肪量は有意
な低減を示した。さらに第４群では第３群に比し、クロ
ロゲン酸単独よりもカフェインを添加することにより、
クロロゲン酸の効力が増加し、体重増加抑制効果及び内
臓脂肪量増加抑制効果は強くなった。

【００４０】実施例５食餌誘導性肥満マウスを用いた体重及び内蔵脂肪に対す
る抗肥満効果試験／クロロゲン酸単独とコーヒー豆抽出
物の抗肥満効果試験７週齢のＣ５７ＢＬ／６Ｊ系雄性マウスを各群５匹ずつ
４群に分け、表８記載の組成の各食餌で飼育する。５週
間後体重を測定するとともに、内臓脂肪量（副睾丸脂
肪、腸間膜脂肪、後腹膜脂肪および腎周囲脂肪）を測定
した。

【００４１】

【表８】

【００４２】

【表９】

【００４３】

【表１０】

【００４４】第２群では第１群に比し、有意な体重の上
昇及び内臓脂肪量増加が認められたのに対して、第３群
及び第４群では第２群に比し、体重増加量及び全内臓脂
肪量は低下した。

【００４５】実施例６生活習慣病予防・改善用カプセル剤カプセル化剤中に下記組成物（４００mg）を封入した。クロロゲン酸６８重量％コーンスターチ１０セルロース１０トコフェロール２乳糖１０

【００４６】実施例７次法によりコーヒー豆抽出物水を用いて容器詰飲料を製
造し、その飲料中のモノカフェオイルキナ酸、ジカフェ
オイルキナ酸、クロロゲン酸類及びカフェインの分析を
行った。・モノカフェオイルキナ酸及びジカフェオイルキナ酸の
分析＜分析機器＞ＨＰＬＣ（日立製作所製）を使用した。装
置の構成ユニットの型番は次の通り。プロッター：Ｄ−２５００ディテクター：Ｌ−４２００
ポンプ：Ｌ−７１００オートサンプラー：Ｌ−７２００
カラム：lnertsil ODS-2、内径２．１mm×長さ２５０mm ＜分析条件＞サンプル注入量：１０μＬ流量：０．３mL／min 紫外部吸光光度計検出波長：３２５nm 溶離液Ａ：０．０５Ｍ酢酸３％アセトニトリル溶液溶離液Ｂ：０．０５Ｍ酢酸１００％アセトニトリル溶液濃度勾配条件時間溶離液Ａ溶離液Ｂ０分１００％０％５分１００％０％２０分８０％２０％３５分８０％２０％４５分０％１００％６０分０％１００％７０分１００％０％１２０分１００％０％＜モノカフェオイルキナ酸及びジカフェオイルキナ酸のリテンションタイム＞（単位：分）モノカフェオイルキナ酸：１９．７、２２．４、２３．５の計３点ジカフェオイルキナ酸：３２．２、３２．８の計２点ここで求めたエリア％の合計値を求め、モノ体とジ体の
比率を算出した。

【００４７】・クロロゲン酸類の分析分析機器、分析条件はモノ体及びジ体の場合と同様であ
る。＜クロロゲン酸類のリテンションタイム＞（単位：分）モノカフェオイルキナ酸：１９．７、２２．４、２３．５の計３点ジカフェオイルキナ酸：３２．２、３２．８の計２点フェルラキナ酸：２６．４、２７．１の計２点ここで求めたエリア％から５位のカフェオイルキナ酸を
標準物質とし、重量％を求めた。

【００４８】・カフェイン分析方法及び定義＜分析機器＞モノ及びジカフェオイルキナ酸の分析の場
合と同じ機器を用いた。＜分析条件＞サンプル注入量：１０μＬ流量：１．０mL／min 紫外部吸光光度計検出波長：２８０nm 溶離液Ａ：０．１Ｍ酢酸水溶液溶離液Ｂ：０．１Ｍ酢酸アセトニトリル溶液濃度勾配条件（％は体積％）時間溶離液Ａ溶離液Ｂ０分９７％３％５分９７％３％３７分８０％２０％４３分８０％２０％４３．５分０％１００％４８．５分０％１００％４９分９７％３％６２分９７％３％＜カフェインのリテンションタイム＞（単位：分）カフェイン：２７．２の計１点ここで求めたエリア％から標準物質により、重量％を求
めた。

【００４９】容器詰飲料の製造：（１）製造例１タンザニアＡＡ（ユニカフェ社製、Ｌ値２６）のコーヒ
ー豆２００ｇに対し、抽出液２００ｇを加え抽出液を得
た。この時抽出液のブリックス値は９．９５であった。
表１１の組成の容器詰飲料を製造した。なお、飲料は１
９０mLスチール缶に充填後、レトルト殺菌試験機（日阪
製作所製）を用いて、１２３．５℃で２５分間保持し、
Ｆ値（殺菌指標）４３となるような条件で熱処理を行っ
た。Ｆ値３．１でボツリヌス菌を死滅できるレベルとな
る。（２）製造例２タンザニアＡＡ（ユニカフェ社製、Ｌ値２６）のコーヒ
ー豆２００ｇに対し、抽出液２０００ｇを加えたのち、
更に２００ｇを加えた最後の２００ｇのみを採取し抽出
液を得た。この時抽出液のブリックス値は０．３８であ
った。表１１の組成の容器詰飲料を製造した。なお、飲
料は１９０mLスチール缶に充填後、レトルト殺菌試験機
（日阪製作所製）を用いて、１２１．５℃で１０分間保
持し、Ｆ値（殺菌指標）１０となるような条件で熱処理
を行った。尚、Ｆ値３．１でボツリヌス菌を死滅できる
レベルとなる。

【００５０】０．０５Ｍ酢酸を用いて、滅菌後容器詰飲
料の飲料濃度を１５重量％に希釈した。次いで１０００
０r／minで５分間、遠心分離機（久保田商事（株）ＫＲ
−１５００）にかけ、上澄液を採取し、注入量１０μＬ
でＨＰＬＣで分析を行った。結果を表１１に示す。

【００５１】

【表１１】

【００５２】製造例１、２の飲料を飲用した結果、良好
な味と共に脂質代謝が促進された。

【００５３】

【発明の効果】本発明のクロロゲン酸類は優れたPPAR依
存的遺伝子転写活性化作用を有し、遺伝子の転写調節領
域にPPAR responsive element (PPRE)を有する遺伝子を
活性化することにより、特に脂質代謝を活性化し、それ
により種々の生活習慣病に対する効果を有する。特に、
クロロゲン酸を摂取することにより肥満の予防・改善、
血糖上昇抑制あるいは血糖低下、高レプチン血症予防・
改善、高インスリン血症予防・改善効果が得られ、その
結果、糖尿病の予防・改善効果が得られる。また、クロ
ロゲン酸類は長年にわたり日常的に食品として摂取して
いるものであり安全性も高いので、飲食品又は薬剤とし
て摂取しても副作用の心配は少ない。

───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (51)Int.Cl.⁷ 識別記号ＦＩテーマコート゛(参考）Ａ６１Ｐ 5/48 Ａ６１Ｐ 43/00 １０５ 43/00 １０５Ａ２３Ｌ 2/00 Ｆ (72)発明者長谷正栃木県芳賀郡市貝町赤羽2606 花王株式会社研究所内 (72)発明者時光一郎栃木県芳賀郡市貝町赤羽2606 花王株式会社研究所内 (72)発明者中村守東京都墨田区文花２−１−３花王株式会社研究所内Ｆターム(参考） 4B017 LC03 LE10 LK06 4C086 AA01 AA02 CB07 MA01 MA02 MA04 MA52 NA05 ZB21 ZC02 ZC33 ZC35 4C206 AA01 AA02 DB20 DB45 MA01 MA02 MA04 MA72 NA05 ZB21 ZC02 ZC33 ZC35

Claims

【特許請求の範囲】

【請求項１】クロロゲン酸類からなる血糖値上昇抑制
剤。
【請求項２】クロロゲン酸類からなる高レプチン血症
予防・改善剤。
【請求項３】クロロゲン酸からなる高インスリン血症
予防・改善剤。
【請求項４】クロロゲン酸類からなるペルオキシソー
ム増殖剤活性化受容体依存的遺伝子転写活性化剤。
【請求項５】モノカフェオイルキナ酸／ジカフェオイ
ルキナ酸の重量比が１２０／１〜１／１であるクロロゲ
ン酸類からなる脂質代謝促進剤。
【請求項６】クロロゲン酸類及びカフェインからな
り、クロロゲン酸類／カフェインの重量比が４／１〜２
／５である脂質代謝促進剤。
【請求項７】請求項５又は６項記載の脂質代謝促進剤
を含有する容器詰飲料。