JP2002017342A - エシェリヒア・コリのアルギニン生産菌及びそれを用いたｌ−アルギニンの製造法 - Google Patents
エシェリヒア・コリのアルギニン生産菌及びそれを用いたｌ−アルギニンの製造法Info
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- Y10S435/822—Microorganisms using bacteria or actinomycetales
- Y10S435/848—Escherichia
- Y10S435/849—Escherichia coli
Abstract
(57)【要約】
【課題】 酢酸資化能を有するエシェリヒア・コリのア
ルギニン生産菌、及び同菌株を用いてアルギニンを生産
する方法を提供する。 【解決手段】 アルギニン生産能及び酢酸資化能を有す
るエシェリヒア・コリ菌株を創製し、同菌株を培地に培
養し、培地中にアルギニンを生成蓄積せしめ、該培地か
らアミノ酸を採取することによりアルギニンを製造す
る。
ルギニン生産菌、及び同菌株を用いてアルギニンを生産
する方法を提供する。 【解決手段】 アルギニン生産能及び酢酸資化能を有す
るエシェリヒア・コリ菌株を創製し、同菌株を培地に培
養し、培地中にアルギニンを生成蓄積せしめ、該培地か
らアミノ酸を採取することによりアルギニンを製造す
る。
Description
【０００１】
【発明の属する技術分野】本発明は、エシェリヒア・コ
リのアルギニン生産菌及びそれを用いた発酵法によるア
ルギニンの製造法に関する。アルギニンは、肝機能促進
薬、アミノ酸輸液及び総合アミノ酸製剤等の成分とし
て、産業上有用なアミノ酸である。
リのアルギニン生産菌及びそれを用いた発酵法によるア
ルギニンの製造法に関する。アルギニンは、肝機能促進
薬、アミノ酸輸液及び総合アミノ酸製剤等の成分とし
て、産業上有用なアミノ酸である。
【０００２】
【従来の技術】アルギニン及びピリミジンのアナログに
耐性なエシェリヒア・コリの変異株のいくつかが、アル
ギニンを製造することが知られている（Pierard A. and
Glansdorf N., Mol. Gen. Genet., 118, 235, 1972. a
nd Glansdorf N., Biosynthesis of arginine and poly
amines. In "E. coli and Salm. thyphimurium, 199
6)）。また、他の薬剤に耐性を有するエシェリヒア・コ
リ変異株（特開昭５６−１０６５９８号公報参照）ある
いは、アルギニン生合成系酵素遺伝子が導入されたエシ
ェリヒア・コリ組換え株（特開昭５７−５６９３号）を
用いてアルギニンを製造する方法が知られている。
耐性なエシェリヒア・コリの変異株のいくつかが、アル
ギニンを製造することが知られている（Pierard A. and
Glansdorf N., Mol. Gen. Genet., 118, 235, 1972. a
nd Glansdorf N., Biosynthesis of arginine and poly
amines. In "E. coli and Salm. thyphimurium, 199
6)）。また、他の薬剤に耐性を有するエシェリヒア・コ
リ変異株（特開昭５６−１０６５９８号公報参照）ある
いは、アルギニン生合成系酵素遺伝子が導入されたエシ
ェリヒア・コリ組換え株（特開昭５７−５６９３号）を
用いてアルギニンを製造する方法が知られている。
【０００３】エシェリヒア・コリ K12株のアルギニン生
合成経路においては、１モルのアルギニンを生成するの
に、１モルのアセチル−ＣｏＡが消費され、１モルの酢
酸が放出される（図１）。酢酸の副生の結果、炭素源の
かなりの部分が浪費される。その上、酢酸の蓄積は、ア
ルギニン生産菌の培養における生育を悪化させる。
合成経路においては、１モルのアルギニンを生成するの
に、１モルのアセチル−ＣｏＡが消費され、１モルの酢
酸が放出される（図１）。酢酸の副生の結果、炭素源の
かなりの部分が浪費される。その上、酢酸の蓄積は、ア
ルギニン生産菌の培養における生育を悪化させる。
【０００４】一方、エシェリヒア・コリは、炭素源とし
て酢酸を有効に資化できないことが知られている。
て酢酸を有効に資化できないことが知られている。
【０００５】
【発明が解決しようとする課題】本発明は、酢酸資化能
を有するエシェリヒア・コリのアルギニン生産菌、及び
同菌株を用いてアルギニンを生産する方法を提供するこ
とを課題とする。
を有するエシェリヒア・コリのアルギニン生産菌、及び
同菌株を用いてアルギニンを生産する方法を提供するこ
とを課題とする。
【０００６】
【課題を解決するための手段】本発明者らは、上記観点
から、アルギニン生産菌が酢酸を再利用する能力を有し
ていれば、アルギニンの生産性は高まると考えた。そこ
で、本発明者らは、エシェリヒア・コリのアルギニン生
産菌の酢酸資化変異株を作製し、同変異株のアルギニン
生産能を向上させることに成功し、本発明を完成するに
至った。
から、アルギニン生産菌が酢酸を再利用する能力を有し
ていれば、アルギニンの生産性は高まると考えた。そこ
で、本発明者らは、エシェリヒア・コリのアルギニン生
産菌の酢酸資化変異株を作製し、同変異株のアルギニン
生産能を向上させることに成功し、本発明を完成するに
至った。
【０００７】すなわち本発明は、アルギニン生産能及び
酢酸資化能を有するエシェリヒア・コリである。本発明
はまた、アルギニン生産能及び酢酸資化能を有するエシ
ェリヒア・コリを培地に培養し、培地中にアルギニンを
生成蓄積せしめ、該培地からアミノ酸を採取することを
特徴とするアルギニンの製造法を提供する。本発明にお
いて、アミノ酸はＬ−アミノ酸である。
酢酸資化能を有するエシェリヒア・コリである。本発明
はまた、アルギニン生産能及び酢酸資化能を有するエシ
ェリヒア・コリを培地に培養し、培地中にアルギニンを
生成蓄積せしめ、該培地からアミノ酸を採取することを
特徴とするアルギニンの製造法を提供する。本発明にお
いて、アミノ酸はＬ−アミノ酸である。
【０００８】
【発明の実施の形態】以下、本発明を詳細に説明する。
本発明のエシェリヒア・コリは、アルギニン生産能及び
酢酸資化能を有する。アルギニン生産能及び酢酸資化能
を有するエシェリヒア・コリは、アルギニン生産能を有
するエシェリヒア・コリに酢酸資化能を付与することに
よって、又は、酢酸資化能を有するエシェリヒア・コリ
にアルギニン生産能を付与することによって、取得する
ことができる。
本発明のエシェリヒア・コリは、アルギニン生産能及び
酢酸資化能を有する。アルギニン生産能及び酢酸資化能
を有するエシェリヒア・コリは、アルギニン生産能を有
するエシェリヒア・コリに酢酸資化能を付与することに
よって、又は、酢酸資化能を有するエシェリヒア・コリ
にアルギニン生産能を付与することによって、取得する
ことができる。
【０００９】本発明において、アルギニン生産能とは、
エシェリヒア・コリを好適な培地で培養したときに、培
地中にアルギニンを生成、蓄積することができる能力を
いう。また、酢酸資化能とは、酢酸又は酢酸塩を親株よ
りも効率良く代謝することができる能力をいい、具体的
には、例えば、酢酸又は酢酸塩を唯一の炭素源として含
む培地で培養したときに親株よりも速く生育できる能力
をいう。より具体的には、適切な条件下で、酢酸又は酢
酸塩を唯一の炭素源及び窒素源として含む培地、例えば
酢酸アンモニウムを５ｇ／Ｌ含む液体最少培地Ａ（後述
する）において培養したときに、親株よりも速く生育す
るエシェリヒア・コリは、酢酸資化能を有するといえ
る。さらに具体的には、適切な条件下で、酢酸又は酢酸
塩を唯一の炭素源及び窒素源として含む寒天培地、例え
ば酢酸アンモニウムを５ｇ／Ｌ含む最少培地Ａ（後述す
る）において培養したときに、３７℃で２日以内にコロ
ニーを形成するエシェリヒア・コリは、酢酸資化能を有
するといえる。適切な条件とは、培養されるエシェリヒ
ア・コリにとって至適な温度、ｐＨ、給気量、必要に応
じて必須栄養素を含むこと等をいう。
エシェリヒア・コリを好適な培地で培養したときに、培
地中にアルギニンを生成、蓄積することができる能力を
いう。また、酢酸資化能とは、酢酸又は酢酸塩を親株よ
りも効率良く代謝することができる能力をいい、具体的
には、例えば、酢酸又は酢酸塩を唯一の炭素源として含
む培地で培養したときに親株よりも速く生育できる能力
をいう。より具体的には、適切な条件下で、酢酸又は酢
酸塩を唯一の炭素源及び窒素源として含む培地、例えば
酢酸アンモニウムを５ｇ／Ｌ含む液体最少培地Ａ（後述
する）において培養したときに、親株よりも速く生育す
るエシェリヒア・コリは、酢酸資化能を有するといえ
る。さらに具体的には、適切な条件下で、酢酸又は酢酸
塩を唯一の炭素源及び窒素源として含む寒天培地、例え
ば酢酸アンモニウムを５ｇ／Ｌ含む最少培地Ａ（後述す
る）において培養したときに、３７℃で２日以内にコロ
ニーを形成するエシェリヒア・コリは、酢酸資化能を有
するといえる。適切な条件とは、培養されるエシェリヒ
ア・コリにとって至適な温度、ｐＨ、給気量、必要に応
じて必須栄養素を含むこと等をいう。
【００１０】以下に、本発明のエシェリヒア・コリを取
得する方法の一例として、アルギニン生産能を有するエ
シェリヒア・コリから酢酸資化能を有する変異株を誘導
する方法を説明する。
得する方法の一例として、アルギニン生産能を有するエ
シェリヒア・コリから酢酸資化能を有する変異株を誘導
する方法を説明する。
【００１１】アルギニン生産能を有するエシェリヒア・
コリとしては、酢酸資化能を付与しうるものであれば特
に制限されないが、例えば、エシェリヒア・コリＫ−１
２株、Ｂ株又はＣ株又はそれらの誘導株から育種された
アルギニン生産株が挙げられる。
コリとしては、酢酸資化能を付与しうるものであれば特
に制限されないが、例えば、エシェリヒア・コリＫ−１
２株、Ｂ株又はＣ株又はそれらの誘導株から育種された
アルギニン生産株が挙げられる。
【００１２】アルギニン生産能を有するエシェリヒア・
コリとして具体的には、α−メチルメチオニン、ｐ−フ
ルオロフェニルアラニン、Ｄ−アルギニン、アルギニン
ヒドロキサム酸、Ｓ−（２−アミノエチル）−システイ
ン、α−メチルセリン、β−２−チエニルアラニン、又
はスルファグアニジンに耐性を有する変異株（特開昭５
６−１０６５９８号公報参照）、及び、Ｎ−アセチルグ
ルタミン酸合成酵素をコードするargA遺伝子を導入され
たアルギニン生産株（特開昭５７−５６９３号）等が挙
げられる。また、後記実施例に記載したエシェリヒア・
コリ２３７株も、好適なアルギニン生産株である。同株
は、2000年４月10日にRussian NationalCollection of
Industrial Microorganisms（VKPM）にVKPM B-7925の番
号で寄託され、2001年５月18日にブダペスト条約に基づ
く国際寄託に移管された。
コリとして具体的には、α−メチルメチオニン、ｐ−フ
ルオロフェニルアラニン、Ｄ−アルギニン、アルギニン
ヒドロキサム酸、Ｓ−（２−アミノエチル）−システイ
ン、α−メチルセリン、β−２−チエニルアラニン、又
はスルファグアニジンに耐性を有する変異株（特開昭５
６−１０６５９８号公報参照）、及び、Ｎ−アセチルグ
ルタミン酸合成酵素をコードするargA遺伝子を導入され
たアルギニン生産株（特開昭５７−５６９３号）等が挙
げられる。また、後記実施例に記載したエシェリヒア・
コリ２３７株も、好適なアルギニン生産株である。同株
は、2000年４月10日にRussian NationalCollection of
Industrial Microorganisms（VKPM）にVKPM B-7925の番
号で寄託され、2001年５月18日にブダペスト条約に基づ
く国際寄託に移管された。
【００１３】上記のようなアルギニン生産能を有するエ
シェリヒア・コリ菌株から酢酸資化能を有する変異株を
得るには、例えば、同菌株を突然変異処理し、酢酸又は
酢酸塩を唯一の炭素源とする最少培地で良く生育できる
菌株を選択すればよい。変異処理は、例えば、エシェリ
ヒア・コリを、紫外線照射または１−メチル−３−ニト
ロ−１−ニトロソグアニジン（NTG）もしくは亜硝酸等
の通常変異処理に用いられている変異剤によって処理す
ることによって行うことができる。変異処理と、酢酸資
化能を有する変異株の選択は、複数回繰り返してもよ
い。
シェリヒア・コリ菌株から酢酸資化能を有する変異株を
得るには、例えば、同菌株を突然変異処理し、酢酸又は
酢酸塩を唯一の炭素源とする最少培地で良く生育できる
菌株を選択すればよい。変異処理は、例えば、エシェリ
ヒア・コリを、紫外線照射または１−メチル−３−ニト
ロ−１−ニトロソグアニジン（NTG）もしくは亜硝酸等
の通常変異処理に用いられている変異剤によって処理す
ることによって行うことができる。変異処理と、酢酸資
化能を有する変異株の選択は、複数回繰り返してもよ
い。
【００１４】上記のような酢酸資化能を有するエシェリ
ヒア・コリであってアルギニン生産能を有するものを好
適な培地で培養し、該培地中にアルギニンを生成蓄積せ
しめ、該培地からアルギニンを採取することにより、ア
ルギニンを効率よく製造することができる。
ヒア・コリであってアルギニン生産能を有するものを好
適な培地で培養し、該培地中にアルギニンを生成蓄積せ
しめ、該培地からアルギニンを採取することにより、ア
ルギニンを効率よく製造することができる。
【００１５】アルギニンの生合成において、グルタミン
酸からＮ−アセチルグルタミン酸へのアセチル化、及
び、Ｎ−アセチルオルニチンからオルニチンへの脱アセ
チル化は、コリネ型細菌では同一の酵素（オルニチンア
セチルトランスフェラーゼ）によって触媒されている。
一方、エシェリヒア・コリでは、アルギニン生合成にお
けるアセチル化及び脱アセチル化は、別々の酵素、Ｎ−
アセチルグルタミン酸シンターゼ、及びＮ−アセチルオ
ルニチナーゼによって各々触媒されている。したがっ
て、仮に副生する酢酸を資化したとしても、アルギニン
の生産量への影響は、予想されていなかった。
酸からＮ−アセチルグルタミン酸へのアセチル化、及
び、Ｎ−アセチルオルニチンからオルニチンへの脱アセ
チル化は、コリネ型細菌では同一の酵素（オルニチンア
セチルトランスフェラーゼ）によって触媒されている。
一方、エシェリヒア・コリでは、アルギニン生合成にお
けるアセチル化及び脱アセチル化は、別々の酵素、Ｎ−
アセチルグルタミン酸シンターゼ、及びＮ−アセチルオ
ルニチナーゼによって各々触媒されている。したがっ
て、仮に副生する酢酸を資化したとしても、アルギニン
の生産量への影響は、予想されていなかった。
【００１６】本発明のアルギニンの製造法におけるエシ
ェリヒア・コリの培養および培養液からのアルギニンの
採取、精製等は、従来のエシェリヒア・コリを用いた発
酵法によるアルギニンの製造法と同様にして行えばよ
い。
ェリヒア・コリの培養および培養液からのアルギニンの
採取、精製等は、従来のエシェリヒア・コリを用いた発
酵法によるアルギニンの製造法と同様にして行えばよ
い。
【００１７】炭素源としては、グルコース、ラクトー
ス、ガラクトース、フラクトースもしくはでんぷんの加
水分解物などの糖類、グリセロールもしくはソルビトー
ルなどのアルコール類、または酢酸、フマール酸、クエ
ン酸もしくはコハク酸等の有機酸類を用いることができ
る。
ス、ガラクトース、フラクトースもしくはでんぷんの加
水分解物などの糖類、グリセロールもしくはソルビトー
ルなどのアルコール類、または酢酸、フマール酸、クエ
ン酸もしくはコハク酸等の有機酸類を用いることができ
る。
【００１８】窒素源としては、硫酸アンモニウム、塩化
アンモニウムもしくはリン酸アンモニウム等の無機アン
モニウム塩、大豆加水分解物などの有機窒素、アンモニ
アガス、またはアンモニア水等を用いることができる。
アンモニウムもしくはリン酸アンモニウム等の無機アン
モニウム塩、大豆加水分解物などの有機窒素、アンモニ
アガス、またはアンモニア水等を用いることができる。
【００１９】有機微量栄養源としては、ビタミンＢ1、
Ｌ−イソロイシンなどの要求物質または酵母エキス等を
適量含有させることが望ましい。これらの他に、必要に
応じて、リン酸カリウム、硫酸マグネシウム、鉄イオ
ン、マンガンイオン等が少量添加される。
Ｌ−イソロイシンなどの要求物質または酵母エキス等を
適量含有させることが望ましい。これらの他に、必要に
応じて、リン酸カリウム、硫酸マグネシウム、鉄イオ
ン、マンガンイオン等が少量添加される。
【００２０】培養は、好気的条件下で１６〜７２時間実
施するのがよく、培養温度は２５℃〜４５℃に、培養中
ｐＨは５〜８に制御する。尚、ｐＨ調整には無機あるい
は有機の酸性あるいはアルカリ性物質、更にアンモニア
ガス等を使用することができる。
施するのがよく、培養温度は２５℃〜４５℃に、培養中
ｐＨは５〜８に制御する。尚、ｐＨ調整には無機あるい
は有機の酸性あるいはアルカリ性物質、更にアンモニア
ガス等を使用することができる。
【００２１】発酵液からのＬ−アルギニンの採取は、通
常イオン交換樹脂法その他の公知の方法を組み合わせる
ことにより実施できる。
常イオン交換樹脂法その他の公知の方法を組み合わせる
ことにより実施できる。
【００２２】
【実施例】以下、本発明を実施例によりさらに具体的に
説明する。
説明する。
【００２３】
【実施例１】酢酸資化性変異株の誘導 アルギニン生産性変異株であるエシェリヒア・コリ２３
７株から、炭素源及び窒素源として酢酸アンモニウム
（5mg/ml）を含むＭ９寒天培地上で良く生育する変異株
を誘導した。２３７株は、エシェリヒア・コリK12 ilv
A::Tn5から１−メチル−３−ニトロ−１−ニトロソグア
ニジンにより誘導された、ピリミジンアナログである６
−アザウラシルに耐性な変異株である。２３７株は、酢
酸アンモニウムを炭素源及び窒素源として含むＭ９寒天
培地上で十分に生育しない。２３７株は、2000年４月10
日にRussian National Collection of Industrial Micr
oorganisms（VKPM）にVKPM B-7925の番号で寄託され、2
001年５月18日にブダペスト条約に基づく国際寄託に移
管された
７株から、炭素源及び窒素源として酢酸アンモニウム
（5mg/ml）を含むＭ９寒天培地上で良く生育する変異株
を誘導した。２３７株は、エシェリヒア・コリK12 ilv
A::Tn5から１−メチル−３−ニトロ−１−ニトロソグア
ニジンにより誘導された、ピリミジンアナログである６
−アザウラシルに耐性な変異株である。２３７株は、酢
酸アンモニウムを炭素源及び窒素源として含むＭ９寒天
培地上で十分に生育しない。２３７株は、2000年４月10
日にRussian National Collection of Industrial Micr
oorganisms（VKPM）にVKPM B-7925の番号で寄託され、2
001年５月18日にブダペスト条約に基づく国際寄託に移
管された
【００２４】２３７株の細胞を、Ｌ−ブロスを入れた試
験管中、３７℃で一夜振盪下で生育させ、遠心分離によ
り集菌した。次に、細胞を、０．１ｍｇ／ｍｌの１−メ
チル−３−ニトロ−１−ニトロソグアニジン（ＮＴＧ）
を含む生理的食塩水（０．８％）に懸濁させた。ＮＴＧ
処理を３７℃で３０分間行った後、細胞を遠心分離し、
生理的食塩水で２回洗滌し、最少寒天培地Ａ（１Ｌ中、
酢酸アンモニウム５ｇ、Ｎａ2ＨＰＯ4 ６ｇ、ＫＨ2ＰＯ
4 ３ｇ、ＮａＣｌ ０．５ｇ、チアミンＯ．１ｍｇ、Ｌ
−イソロイシン Ｏ．１ｇ、寒天１５ｇを含む。(ｐＨ
７．０)）にまいた。
験管中、３７℃で一夜振盪下で生育させ、遠心分離によ
り集菌した。次に、細胞を、０．１ｍｇ／ｍｌの１−メ
チル−３−ニトロ−１−ニトロソグアニジン（ＮＴＧ）
を含む生理的食塩水（０．８％）に懸濁させた。ＮＴＧ
処理を３７℃で３０分間行った後、細胞を遠心分離し、
生理的食塩水で２回洗滌し、最少寒天培地Ａ（１Ｌ中、
酢酸アンモニウム５ｇ、Ｎａ2ＨＰＯ4 ６ｇ、ＫＨ2ＰＯ
4 ３ｇ、ＮａＣｌ ０．５ｇ、チアミンＯ．１ｍｇ、Ｌ
−イソロイシン Ｏ．１ｇ、寒天１５ｇを含む。(ｐＨ
７．０)）にまいた。
【００２５】培地プレートを、３７℃で５日間インキュ
ベートした。２日以内にプレート上に出現したコロニー
を釣り上げ、同じ組成の寒天プレートにストリークし、
純化した。親株である２３７株は、５日培養後でなけれ
ばコロニーを形成しなかった。単離された７０株につい
て、アルギニン生産性を調べた。誘導された変異株の約
１／４は、親株である２３７株よりもアルギニン生産性
が向上していた。それらのうち、最も高いアルギニン生
産能を有する株は３８２株であった。３８２株は、2000
年４月10日にRussian National Collection of Industr
ial Microorganisms（VKPM）にVKPM B-7926の番号で寄
託され、2001年５月18日にブダペスト条約に基づく国際
寄託に移管された。
ベートした。２日以内にプレート上に出現したコロニー
を釣り上げ、同じ組成の寒天プレートにストリークし、
純化した。親株である２３７株は、５日培養後でなけれ
ばコロニーを形成しなかった。単離された７０株につい
て、アルギニン生産性を調べた。誘導された変異株の約
１／４は、親株である２３７株よりもアルギニン生産性
が向上していた。それらのうち、最も高いアルギニン生
産能を有する株は３８２株であった。３８２株は、2000
年４月10日にRussian National Collection of Industr
ial Microorganisms（VKPM）にVKPM B-7926の番号で寄
託され、2001年５月18日にブダペスト条約に基づく国際
寄託に移管された。
【００２６】
【実施例２】新規変異株の酢酸による生育 炭素源として、酢酸アンモニウム又はグルコースのいず
れかを５ｇ／Ｌ含む液体最少培地Ａ（寒天は添加しな
い）を、２ｍｌずつ試験管に入れ、新規菌株３８２株、
他のアルギニン生産性変異株の一例として３８３株及び
それらの親株である２３７株を一白金耳接種し、３２℃
で１６時間、振盪培養した。５４０ｎｍでの吸光度測定
により、生育を調べた。尚、培養開始時の培地の吸光度
は、約０．０５であった。結果を表１に示す。
れかを５ｇ／Ｌ含む液体最少培地Ａ（寒天は添加しな
い）を、２ｍｌずつ試験管に入れ、新規菌株３８２株、
他のアルギニン生産性変異株の一例として３８３株及び
それらの親株である２３７株を一白金耳接種し、３２℃
で１６時間、振盪培養した。５４０ｎｍでの吸光度測定
により、生育を調べた。尚、培養開始時の培地の吸光度
は、約０．０５であった。結果を表１に示す。
【００２７】
【表１】
【００２８】
【実施例３】新規アルギニン生産変異株による試験管内
発酵におけるアルギニンの生産 新規菌株３８２株、３８３株及びそれらの親株である２
３７株を発酵培地で培養した。発酵培地は、水道水１Ｌ
中に、グルコース６０ｇ、硫酸アンモニウム２５ｇ、Ｋ
Ｈ2Ｐ０4 ２ｇ、ＭｇＳ０4・７Ｈ2Ｏ １ｇ、チアミン
Ｏ．１ｍｇ、イーストエキストラクト（Ｄｉｆｃｏ）５
ｇ、炭酸カルシウム ２５ｇを含む（ｐＨ７．２）。グ
ルコース及び炭酸カルシウムは、別殺菌した。この培地
を２ｍｌずつ試験管に入れ、被検微生物を一白金耳接種
し、３２℃で３日時間、振盪培養した。培地中に蓄積さ
れたアルギニンの量を表２に示す。
発酵におけるアルギニンの生産 新規菌株３８２株、３８３株及びそれらの親株である２
３７株を発酵培地で培養した。発酵培地は、水道水１Ｌ
中に、グルコース６０ｇ、硫酸アンモニウム２５ｇ、Ｋ
Ｈ2Ｐ０4 ２ｇ、ＭｇＳ０4・７Ｈ2Ｏ １ｇ、チアミン
Ｏ．１ｍｇ、イーストエキストラクト（Ｄｉｆｃｏ）５
ｇ、炭酸カルシウム ２５ｇを含む（ｐＨ７．２）。グ
ルコース及び炭酸カルシウムは、別殺菌した。この培地
を２ｍｌずつ試験管に入れ、被検微生物を一白金耳接種
し、３２℃で３日時間、振盪培養した。培地中に蓄積さ
れたアルギニンの量を表２に示す。
【００２９】
【表２】
【００３０】
【実施例４】新規アルギニン生産変異菌によるジャーフ
ァーメンターにおけるアルギニンの生産 新規菌株３８２株及びその親株である２３７株を、Ｌ−
ブロス中で、３２℃で８時間培養した。次いで、それら
の種培養液６０ｍｌを、０．５Ｌの発酵培地を入れたジ
ャーファーメンターに接種し、７０ｒｐｍで攪拌しなが
ら３２℃、０．５Ｌ／分の通気量で培養した。発酵培地
は、水道水１Ｌ中に、グルコース１００ｇ、硫酸アンモ
ニウム９ｇ、ＫＨ2Ｐ０4 １ｇ、ＭｇＳ０4・７Ｈ2Ｏ
０．４ｇ、ＦｅＳ０4・７Ｈ2Ｏ ０．０２ｇ、ＭｎＳＯ4
・７Ｈ2０ ０．０２ｇ、総窒素として０．２ｇのダイズ
加水分解物、イソロイシン０．３ｇ、チアミン Ｏ．４
ｍｇを含む（ｐＨ７．０）。培養中、ｐＨを７．０に調
整し、かつ、窒素源を供給するために、アンモニア溶液
（４．７Ｍ）を加えた。培養は、４２時間行った。培養
後に培地に蓄積されたアルギニンの量、及び、グルコー
スからの収率を、表３に示す。
ァーメンターにおけるアルギニンの生産 新規菌株３８２株及びその親株である２３７株を、Ｌ−
ブロス中で、３２℃で８時間培養した。次いで、それら
の種培養液６０ｍｌを、０．５Ｌの発酵培地を入れたジ
ャーファーメンターに接種し、７０ｒｐｍで攪拌しなが
ら３２℃、０．５Ｌ／分の通気量で培養した。発酵培地
は、水道水１Ｌ中に、グルコース１００ｇ、硫酸アンモ
ニウム９ｇ、ＫＨ2Ｐ０4 １ｇ、ＭｇＳ０4・７Ｈ2Ｏ
０．４ｇ、ＦｅＳ０4・７Ｈ2Ｏ ０．０２ｇ、ＭｎＳＯ4
・７Ｈ2０ ０．０２ｇ、総窒素として０．２ｇのダイズ
加水分解物、イソロイシン０．３ｇ、チアミン Ｏ．４
ｍｇを含む（ｐＨ７．０）。培養中、ｐＨを７．０に調
整し、かつ、窒素源を供給するために、アンモニア溶液
（４．７Ｍ）を加えた。培養は、４２時間行った。培養
後に培地に蓄積されたアルギニンの量、及び、グルコー
スからの収率を、表３に示す。
【００３１】
【表３】 酢酸資化変異株は、親株よりも高いアルギニン生産性を
示した。
示した。
【００３２】
【発明の効果】本発明により、酢酸資化能及びアルギニ
ン生産能を有するエシェリヒア・コリを用いて、アルギ
ニンを効率よく生産することができる。
ン生産能を有するエシェリヒア・コリを用いて、アルギ
ニンを効率よく生産することができる。
【図１】 エシェリヒア・コリのアルギニン生合成経路
の概略を示す図。
の概略を示す図。
───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (72)発明者 レオニド ロマノヴィッチ プチツィン ロシア連邦、115404、モスクワ市、リペツ カヤ通り10番地、２号棟、188号室 (72)発明者 タチヤナ アブラモヴナ ヤンポリスカヤ ロシア連邦、123364、モスクワ市、ロドチ ナヤ通り31番地、５号棟、77号室 Ｆターム(参考） 4B064 AE24 CA02 CC03 CD07 CD12 DA01 4B065 AA26X AA26Y AC20 BA18 BB07 BB13 CA17 CA44
Claims (4)
- 【請求項１】 アルギニン生産能及び酢酸資化能を有す
るエシェリヒア・コリ。 - 【請求項２】 酢酸又は酢酸塩を唯一の炭素源として含
む寒天培地において培養したときに、３７℃で２日以内
にコロニーを形成する請求項１記載のエシェリヒア・コ
リ。 - 【請求項３】 前記エシェリヒア・コリが、エシェリヒ
ア・コリＫ１２株の誘導体である請求項１記載のエシェ
リヒア・コリ。 - 【請求項４】 請求項１〜３のいずれか一項に記載のエ
シェリヒア・コリを培地に培養し、培地中にアルギニン
を生成蓄積せしめ、該培地からアミノ酸を採取すること
を特徴とするアルギニンの製造法。
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| JP2002017342A5 JP2002017342A5 (ja) | 2007-07-12 |
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| DE (1) | DE60133973D1 (ja) |
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| RU (1) | RU2208640C2 (ja) |
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