HU229870B1 - Targeted cytotoxic anthracycline analogs - Google Patents

Targeted cytotoxic anthracycline analogs Download PDF

Info

Publication number
HU229870B1
HU229870B1 HU9903771A HUP9903771A HU229870B1 HU 229870 B1 HU229870 B1 HU 229870B1 HU 9903771 A HU9903771 A HU 9903771A HU P9903771 A HUP9903771 A HU P9903771A HU 229870 B1 HU229870 B1 HU 229870B1
Authority
HU
Hungary
Prior art keywords
compound
group
trp
formula
aaa
Prior art date
Application number
HU9903771A
Other languages
English (en)
Inventor
Ren-Zhi New Orleans Cai
Attila A New Orleans Nagy
Andrew V New Orleans Schally
Original Assignee
Univ Tulane
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Family has litigation
First worldwide family litigation filed litigation Critical https://patents.darts-ip.com/?family=24247176&utm_source=google_patent&utm_medium=platform_link&utm_campaign=public_patent_search&patent=HU229870(B1) "Global patent litigation dataset” by Darts-ip is licensed under a Creative Commons Attribution 4.0 International License.
Application filed by Univ Tulane filed Critical Univ Tulane
Publication of HUP9903771A2 publication Critical patent/HUP9903771A2/hu
Publication of HUP9903771A3 publication Critical patent/HUP9903771A3/hu
Publication of HU229870B1 publication Critical patent/HU229870B1/hu

Links

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K7/00—Peptides having 5 to 20 amino acids in a fully defined sequence; Derivatives thereof
    • C07K7/04—Linear peptides containing only normal peptide links
    • C07K7/23—Luteinising hormone-releasing hormone [LHRH]; Related peptides
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/50—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/50—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates
    • A61K47/51—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent
    • A61K47/62—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being a protein, peptide or polyamino acid
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P35/00—Antineoplastic agents
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P35/00—Antineoplastic agents
    • A61P35/04—Antineoplastic agents specific for metastasis
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • Epidemiology (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Endocrinology (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • Biophysics (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • Oncology (AREA)
  • Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)
  • Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
  • Peptides Or Proteins (AREA)
  • Heterocyclic Carbon Compounds Containing A Hetero Ring Having Nitrogen And Oxygen As The Only Ring Hetero Atoms (AREA)
  • Organic Low-Molecular-Weight Compounds And Preparation Thereof (AREA)
  • Saccharide Compounds (AREA)
  • Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
  • Medicinal Preparation (AREA)
  • Medicines Containing Material From Animals Or Micro-Organisms (AREA)
  • Plural Heterocyclic Compounds (AREA)
  • Acyclic And Carbocyclic Compounds In Medicinal Compositions (AREA)
  • Nitrogen Condensed Heterocyclic Rings (AREA)

Description

Célzottan cíiotöxilms antraciklln-szérffiazékok lalálmánytínk tárgyát a rákellenes antraeikiin-származékok célzottá tételének kémiája képezi. Részletesebben, a találmány tárgyai a óoxornticin CICI vagy daunozami.ana:l. módosított származéka (DM-DGX) kovalens kapcsolása peptídhormonok — mist amilyen az LH-Rü, bombezin és szomatosztatin — analógjaihoz... Szék a kovalens ken j ágér tnmek cé lzo tt an al kalás zba tok kniöo.bozo t náoro k· ellen,, amelyek a pentidhormon-analógok receptorai fc hordozzák.
a hatos helyzetben cltotoxlkus csoportokat feondozó LH-Rn analógokat az EE-C 450.461 Bl számú szabadalmi iratban írtak le.
a dO 9Ö/99799 szánó szabadalmi iratban gonadotrop hormonokat semlegesi hé CnRH iLB~RH> analógokat írnak le, Ebben a találmányban IH-nh analógokhoz kapcsolt hexánokat — mint amilyen a ricin
.....: alkalmaznak a gonaÓQtrop hormonok semlegesítésére és ezáltal a szexhormonokhől függő rosszindnlató daganatok kezelése. Említik áz LB-RH dob©lüb3..cln:-s<z:ánmn-zéRá;t Is anélkül:,, hogy pontosan megadnák a kapcsolás kémiáját.
Ci tót oxi ks zamatos z tat in analógok vannak leírva az 96 98/070.946 száma szabadalmi iratban.
összefoglaló: közleményében. R.v, Sehally részletesen leírja a küldnbönő hámorok sejtmembránján található LB-RR, bombezin- vagy szomatoaztatln-analog receptorokat (áni .c-lanoer Rrags, g, 115139 ilRRájl.
* ί :
** <?
S. Weckbeofcer számos hivatkozást sorol fel összefoglaló közlenényében, amelyek a szomatoaxtatin és a szómatosztat in-aralogo k rooept o r a1n ak é s re ce ptor-a 11ipu s a1nak j: e1»:1érét 1g a zο1iák számos n orma fis és tumorszövetben iparosé. 7her„ 66, 245-261
U9S3) } ..
A bőmbezin típusú pepiidekkel és a bom£;ezl.s/GRP receptorok jelenlétével a normális és trmbrstövetekben töglaikozik A. Boabet t Llb Get Begtideso Bioobemist.ry ana Physiolögy, 423-445; eás. J, oaish és G.ü. Dookray, haver Press, bev? York, 1994} és E. Spindell (la Recent Progreas in hormoné Research, 48; öcademic Press, 1993} ..
Ez idő szerint a doxorubroin a legszélesebb körben használt,, igen hatásos rákellenes hatóanyag. Azonban szaros tumor egyáltaIán nem reagál, rá, és alkalmazását korlátozza s többszörös gyögyszerreriszteno:la fmultibrug resistance, MER}, a kardiotoxicitás és a neutroípánia is, amelyek a tartós kezelés következményei.. Annak, érdekében., hogy ezeket a hátrányokat kiküszöböljék és tovább fokozzák az antraciklin antibiotikamok. szerkőzetében jelen levő, rendkívüli dagsnatsejt-pusztito képességét, szintetikus származékok ezreit írták le, köztük a célzottá tett analógokat is, amelyeket különböző hordozó makromolekulákhoz kapcsoltat .
A DOX és analógjai történetének nagy részét D.Rh Henry írta meg ú, Adri árnyéin , ÁCS Symp. Ser. bo. 3c., car.oer Chemotberapy, hm, Chem. loc. 15-17 {1975} es ,, Roxorubicín, Asz. Press,
1931} .
A nagy aktivitású, aikiiező, keresztrezzszterólát nem okozó 3’‘' -dezamrno-3' - (A-oiano-i-mórfo 1 ind. 1} -POX-or és származékait, valamint tumoréi lenes hatásukat az US 4.464.. 52 9 számú szabadalmi * * * r
% ι,:.
iratban írták le. á v egy tietek szintézisét és biológiai vizsgálatát szintén leírták dáoshor és munkatársai, X dac. (tea, 27, 122-625 (1994};.
Gac és munkatársai., leírták egy bbs-szekvenoia. tormaidebidközvetitésö sitii esését egy tantorubicin-szármasékkal (aroo. ka U. Acad. Sói. öiá, 25, 2926-462? (1391)}.
Látens alkilezd szubsztítuenssket hordozó autrsoikiin~ans~ lógok vannak leírva a a. Módi Crec. 35, 3266-3212 (1.932) közleményben. .
Sgy, a OOX dac nos ami n-ni.tregén jenek alkilezésére hasznai! a, m-dijcő-vegyuiot és egy áj merfall.rl. 1 -OOX származék előállítása van leírva az E? llt.liy nmámá szabadalmi iratban.
Az US 4,299.822' számé szabadalmi iratban az ö~ (trlflccr-aeetii.) -adrra.micini^-O-valerát · AD-32 ) fokozottan vi zoldékony -berni gitt arát és -bemi.adipát analógjai vannak leírva.
horton és áriéba kaiönbözö antracrkl.it analógok számos 14-0-észterét Írták le, és tóm találták lényeges változást a tumorellenes hatásban a 14-OR anyavegytiefhoz kémest iái ántibiorica, XXXV!, 1211-1215} .
Ahhoz, hogy célzott kemoterápiás hatóanyagokat tervezzünk, a kővetkező szempontokat keli figyelembe venni:
1. a hordozó molekula és a kemoterápiás hatóanyag közötti kötés a célpont eléréséig stabil legyen;
2. a hordozó molekula őrizze meg biológiai, tulajdonságait a konjugaromban, igy tartsa meg kötődőképosságét;
3. a kemoterápiás hatóanyag őrizze mse; farmakoiógiai aktivitását a kon)ugaromon beiéi, így tartsa meg oitotozikus aktivitását; es
1. a konjugálás eredményeként a származékok aktivrt.ása rokozot’ - » » χ V «r * Ά 2*JL *** *** *** * * V * Λ φ *··* * :** »* tabb és/vagy általános toxieitáse kisebb legyen, aint. a nem kor3 eg ált c s op o r t o ké »
Az ŐS 4.263,273 számú szabadairsi iratban .leírták a ©OX konysgáeását a datnozaeíngeoport nábriem-per j-odátos oxídá.iááán kérészről, amit a bordáié moiekniS: agy primer amincsáporriáVai. ue'--'!y, jek.kiP’ a,k^_ezos kever, á, daunezamin :n.itrogénafe.oeda. egy iáisb-akex.íík.sav stasasö kő ebei k tat é sava I, pn- ér z a kény köbé s sel kapcsolna tő tna krcwol ekniás hordozókhoz íSioeáor?. Bíopltys- áss, C'ownuri. 102, 1048-1Ö54 tliél} 1 , lkáig© és mo.nkáéárssi<, észter- és 0--->-k©bések kialakítását í’3< a a 1 i--0-,73-00 a a© rvK r, n ts fefot’cb vaay pmaminosava < körött rAuítí©riz 11, ©21--124 (11811 és Sir, 17 őanoer Ilin. bárói. 27, 121-421 713«}), üarfQ.li.nö-DQX-”©b: ja SSé egy erősen akbiv, a dan'noeami:n-re οροί; tón módosított analógba.) keni ágálták, a obit estekbe z egy hidro·^ lizáihato ílizoszomotrop, pH-érzékenyi hidrazon-kötéssel, a ©ibolaxikba hatóanyag :o~l2 oboásogortjár igénybe véve táls©©rIngébe Cbemlstry,· 1, yS) 121-231 (1330} } .
Sí kérésén használták .fel. egy lenetncsoport karboxramid-kötésének érzékenységét az enzimes lebontással eremben azokban a ©ÖX-kenjngábneokban, amelyek egy „tavtartő pepiidet, előnyösen Aia~Íeo-Ala--j7ey~t tartalma znak, ahol a karbont 1~ terminális len aciiezi a darnozamin nitrogénatomját a DOX-ban, ás az amino-tar-minális él a kapcsolódik a horóozohoe egy dikarbonsav közbeiktatásával (Froo. Xatl, Arad, ©ei, 77.7,- ?§y 826-22S f. 1382} ) .
A ©OX daanoramin nirrogonatooját gintársavval aoiiezve és így kapcsolva 1H-RH analógokhoz.,- a citót©síkas akti vitás súlyos veszteséget szenved {Proc. .háti, Acad- lei. dSAz SS, 972-517
További közlemények, amelyek a találmány szerinti vegyület kuiönhoaő humán tumorok kezelésére történő alkalmazását tárgyalják , az a1á hb iak;
1. Fohaily és munkatársai* in Treatment vith enhfi ánaiogs; Conzrcverzi.es and Perspectives; tds. SÍ. Fi.l.itcri ás Ct Fismioni (Far the non, Cárntoréh* ü.37, 1986)
•p » lány és mi un ka társai* Rroc. Táti.. átad. Tói, 7F.9, 93* 72 69-
727 3 (19963
.3. Fano és tm unka társai, áros. Fáéi, .átad. Fez . JFR, 91, 799(1-
70 90 (19308
0 . Re k a s i és 9 \ munka társai, andocricol egy, 2.2.2 ' (55 199) 1-2900
k n. 3“ . c. ·> / Okra iövre és munkatársai, Canoer Reá. 50 , :801-180 6 (lí 190)
6 . Emcns és munkatársai, Center Rés. 53* 54 38 - O0: 0 6 (1993)
7. Rmons és munkatársai, Journal oá C. ? γ yj Redocrizr, , and
dezacoi:.. 77* (67 Ti oh (1993)
8. é.v. Schally, Cancar Tea. 08, 6O'?7-6965 (1988;
9,. Schally és munkatársai, Jntsvcational <.Tv;.rnal oá Rsncreaáoiogy, 16, 277-280 (1990) ¢9- Srkarov.le és mun Tat ár sah, oi Ciin... Fadotrinoi. Measrt. 79* (35 51.)-Ili (:.900)
11, Radulövic és munkatársai, Ca.noer Fez tere* 62, 263-271 (1592;
„ QA.n és munkatársai* int , dl Cancer* 60, 600-700 (1993)
13. Raouicvie és munkatársai * P.F.. F.F.F1 200, 390-001 (19923 lé, Radulövic és munkatársai* éoáa öre.oicaácaz 33*· (6) 693-701 (d. 990)
15. Pinaki és munkatársai, Canoer letiers* 71, 189-196 (1993)
16. 0' Byrne és munkatársai, Far. dl Cancar, 2Oá, (11) 1,682-1687 « * > * » χ.
*
1.8. Pina ki és Etánkat ár esi,
19.
0 ,
09913
1'?. Pinski és munkatársai, Sr- 21 Canoer, 70; 826-892 (1994) Canoer Kés. 54,, 5995-5901 (1994)
Pinski és munkatársai, int. 91 Carcer, 95, 870-874: (19993 Banks és munkatársai, ánticaooex; Prugs, 3, 519-523 (1932)
2:1. Reutu ás Kvol.s, ártér Pest 52, 9074-8078 (3 ? 1. >
22. Halmos és munkatársai, Oa.ncer Pes. 55, 220-287 (12953
23. Halmos és munkatársai, Center lettors, 35, 111-213 (19943 22. Qin és munkatársai, 21 Canoor Pes, Cián. Cntel. <20, 513-523 (1299:3
25. Qin és munkatársai, Cártar üss. 54, 103:5-1091 (1994)
26. □itt ép máj akatársái,, lök.: P. Csüngi:, 95, 257- -282: (1995)
27 , Per le: és munkatársai, The áros taté, 25, 23- 33 (1 999)
28. Pinski és munkatársai. Int. J. Caooer, 57, 574-5 80: (1984:3
29. Paátlovi o és munkatársai, P. C, E..S .M. 2:00, 3 99-0 1 (19:92)
30, < 0 O C áüdul.övio és munkatársai, ázás Oncologias, ráz (6) 893-701
V .L d·' d) :3:.1 . P.i.nskí és műn ka há z sál.. Center let tors, 71, 39-4,9 9 (19933
7 9 Pinski, és munkatársai, 3rt J, Caooer, 70, 8 86-892 (1294)
33. Pinski és munkatáras1, Caooer Pes. 54, 5895 - 53 Ö l: (19843 .
Λ találmány szerinti vegyületek áj, célzóttan citotoxikus
peptidhormonok, amelyek egy antrgciklin citotoxi.kus hatóanyagot, például DOX-öt vagy Dk-DOX-ot tartalmasnak egy pop ti duó rmon, például m 143-0.2, oomhezrn és szomatosxtátin analógjaival komángálva, Ezeket a eitoeoxikus peptidHormon konjugátnmokat olyan tumorok kezelésére tervez tök, amelyek a konjugátumra spéci alkus receptorokat hordoznak., mint amilyenen as emlőrák, petefészekrák, a Híéhnyáikahártys rákja, a prosztatarák, a hasnyálmirigy rákja, a vastagbaarák, a gyomorrák és a tüdőrák. Etek kozni szá* -* mos (nem konjogált) citotoxikus sntraci kiin hatéanyag, amelyet itt , fh’ t\ r .. c m v, azonban toxicitásuk túl nagy ahhoz, hogy koniogáiahlan formában ns alralcazhatök lennének.
A. találmányunkban bemutat ott, a dauwz'a.ffiin--cs-oporton módos-ltot t DOX~szároazékokat egy olyan kutatási program során fedeztük tel, amelynek célja űj, nagy aktivitásé, keresztre^rsztentiát nem keltő, hordozö pepiidekkel kovalens k?'\ „ca:v w '< keozoseze a 1 κ a 1 m a a DO X - s z á r m a z é ko k e i δ á 111 s á a a v o 1 r..
A stabil, kovalens kötéssel összekapcsolt Kong ugátumok — amelyekben az alkotórészek teljes mértékig negőrzik biológiai aktivitásukat — képzését egy drkarbonsav (mint amilyen a gintarsav) összekötő csoport alkalmazásával értük el. Az összekötő egyik karboxilosoportia egy észterkötést képez a OCX vagy ufe-DOX ri-hidretil-csoportjavai, míg a másik karbont lesöpörtja egy karbevarrd, ö kötést képez a horöozo peptid. egy jól regvél asz tolt, szabad aminocsoportjévei.
A találmány szerinti vegyületek a qí4...„ó—r—p m általános képlettel irhatok le, aoelyoen jelentése az alábbi általános képletű csoport
afeeiynek: a tu CSO'pOX feá jelentése egy olyan 1 általános képi le-es:-hely tetben agy Gidailánca van;
jelentése egyse kötés vsay egy ----0(0}.....(CHy)p-C<0) általános képletű csoport, amelyben n értéke 1, 1, 2, 3, 2, 5, 6 vagy 7 lehat; fe jelentése attaocsoport vagy agy aromás., telített vagy réstlegesan telített., öt- vagy hatésgá betsaociklas, amelynek'
s.r 2:t- ^2a “S egy nitrogénatofe van, é-s adott esetben, van agy batsdlén-cooportja, amely a gyáré két: stomstédos aréna tófej é:hnt kéoeeelédvé. agy élal.kluaes réhösaert 'képet.;
fe jelentése hidrogénatom vagy egy gégéidé songét,, alkalmasan egy LR-RH-, botbetin- vagy stometosrtatin-enalög, de nincs kitárva más, élettanilag aktív peptid sec..
kfelönéden kívánatosak attak ar ld-~feS---snalégek:, amelyek afri--;
Oltással hlrnak s, rossslndalatü daganat sej tek receptorai iránt, különösen pedig ások at analógok, amelyekben egy D-Lys csoport van: a: hatos: helyréében, valamint, a megkentltot! s romát Oísrtat Ines hofebe:ehn---anslbg<gh. Mindemellett áöbhfesr:, amennyiben fe jelentése aminccsöpört, agy jelentése hidrogénatomtól eltérő, .kmenryloem a és 1 jelentése hidrogénatom, ágy fe jelentése amiao őseget t tol el téro,
Munkánk során egy áj stiniérisreakcldé fedettünk re!, bem csak art találtak, hegy a dorerublcin és s tárna te kai egy dikarbórsav .csepetéph. keresetni:, a lé-ér helyréénél kapósa ina tok· fej, farmakolégiáilag hatásos konjagatúrokká, de egy áj utat la talál tant rést legesen telített, heterónikiadós csoportok előállítására vicinális vagy dlsrjanké isset ο,β- vagy e, y-hiferoxt-( yrivér aminofcből, lalálmányrnk egy különös aiksltatása a 2'' -pirrolinil~ és az fej, fe-tesrshidropirrdil-csoportok kialakítása •o. xci/sa w* *,* « fc * fc* fcfcfc * > fc
A* «fc * ♦ Μ * fc fcfcfcfc »♦ « ♦ *X «
4« « dannozaml.t cvtorcsoportou. E< reakció alkaimazhatósáya azonban szélesebb bóra. öt- vagy hattagú, részlegesen telített, heterociklusos csoportok állíthatók elő ágy- hogy egy vicinális vagy diszjunkt hídroxi -amint egy olyat, halogénét ómmal azubsztituáit aldehiddel reagá: 1 táróink, arteiyben kettő vagy három csoport van az aldehid-szénatom és a halogénatomot hordozó szénatom között. Etek a csoportok lehetnek mind metiléncsoportok, vagy egy heterootom, például oxigénatom lehat közöttük, k reakoio három lépésben vi belezhető k.l. először a halogénezett, aldehid rgen nagy feleslegét reagálhattok: a. hidroxi-amzn savas sójával, alkalmasan egy ínért, poláros, vizmentes., szerves oldószerben. Ekkor keletkezik egy öttagú oxazoildzngyürű (vagy egy hattagú 1,3-tetrahídrooxazin-cyürű) az aldehidcsoport és a hidroxiiesoport, valamint az aminesoport kondenzációjával, hot a terméket egy szerves bázissal, alkalmasat egy tercier aminnal reagáitatjuk, mire egy hidogét-halogenű.d lép ki a korábbi halogénezett aldehid halogénatomja és az oxazoltdit- vagy I, 3-tetrahidrooxazín-gyűrő szekunder ami.tocsoportja között, és kialakul egy fúziónál! gyűrűszerkezet az öt- vagy hattagú gyűrűhöz kapcsolódva. A oázist egy gyenge savval, alkalmasan egy szerves savval., példáéi jégeeetfcei közömbösítjök. Ezután egy vizes savval, alkalmsat egy szerves savval reagáltatvs felnyitjuk: a fuzionált gyűrűs szerkezet Guszolid.it- vagy 1, 3-takrahidroouazin-részét - A szakemberek számra nyilvánvaló, hogy a kiindulási aidehiotöi függően a keletkezett, tidrogénatomot tartalmazó gyűrű legalább egy további betereátömet tartalmazhat, amint azt már említettük, az általános reakciővázlat. a kővetkező;
** « X φ φ >' φ
V X Φ
(nagy felesleg) vízmentes, aprntikus oldószerben * φ » φ « * «χχ*
C ········ 2 C
ΟΗ
ΠΗ>
ΝΗΖ α
Ο
X <Χ €
C— Ζ —C........
i«
C — <CK2 αχ • 1
W
W
X’ bázis (vízmentes tercier amin) (IV) cI o
z ~~c r---CH, víz a sav
P - Z· tó·
C~~ Z ÓH
C (VI) z \
HC CK, •w jelentése naiogénaterfp alkalmasan kgéra- vag-y jédatoag előnyösen ρ oda r om;
jelentése métáién-, jseéilén-cxr- - A?y ·;a: cr.cs 'om .- es j elen céa a s emmi vágy met iIén c sορ o rt.
Ha. X jelen lése semeif akkor ao a.ioehidkői egy öttagú cxarolisin.....gyorri keletkezik a reakció első lépésében. Ha X jelentése ceiiiencscpcrt f akkor ao aldehid egy hattagú I,3-tetra~ hiérooxazin-győrűt képes, Bar az ilyen gyűröképzőbések jól isseriek, esek koséi nácinja a halogénéként atkán oloailánc gyűrőoáró hatáséval bázikus közegben - mint amilyen sgy tercier arain egy vizrentes oidosocrber — új és meglepő reakció.
*9
Áss ábrák rövid leírása
1, ábra. Az ösztrogén-füögetlsn MÁT egér émlőfümor cRS-29) térfogatának változásai a találmány szerinti vegyülőtok és a DOX különböző dózisainak hatására (a dőlt számok az otoisé mérés időpontjában még élő állatok száma).
2,. ábra. Az osztrogén-független TXT egér omlötumor (17-71: térfogatának változásai néhány találmány szerinti vegyület, egy korábbi vegyület és a DOX különböző dózisainak tatáséra fváiogst o t1 c s ο ρ o r t o k) ,
1. ábra. héhány eitotoxikas Üi-RH analóg hatása ösztrogén-fügyetlen MXT egér emiőtamores egerek tölelésére .
é. ábra, A patkány prosztata-karcinőma (Dunnlng χ-3327-R) térfocistának változásai t.bn Copenhagen patkányokban egy korábbi agonistávai és néhány találmány szerinti vegyülettei végzett kezelés hatására.
5. ábra. A patkány pr osztata-xaromóma iDnnning R-3327-H} térfoi -.-, 1 i r = n-η ό < t lett zot'.t c jlettel és egy megfelelt, ezzotoxikts tn~RR anaióggai végzett kezelés hatására.
á, ábra. A patkány prosztata-kareínömáh (Donning R-3327-X) hordozó Copenhagen patkányok festtömegének változásai néhány talál' ·· k ~ 4 vx i t - '?s v < i< \ citotoxikns Lh~RR analóggal végzett kezelés hatására.
7. ábra. Az QV 10-63 humán petefeszek-tenor térfogatának változásai meztelen egérben néhány találmány szerinti vegyül ette! és oexorotioinnoi (Cg} végzett kezelés hatására 7MTD :::: tolerált dózis).
maximális
>z előnyös megvalósítások leírása
A Q csoportot ···· ha R1 helyen előnyös csoportok állnak -- Qy Qn alcsoportoknak, nevezzük, amelyek közül Qy ~ Qg áj, cltotorik n s cső ρ o r tok.
Ö előnyös jelentései, amelyek a zárójelben feltüntetett Qx alcsoportokat eredményezik, a kővetkezők: amino- ίζη), pirroli.din-i-il- (Qy} , izolnőolin-2-il- IQyi , 3-pirrolln-l-áldd} , S-pirroiidon-l-il·- tied 2-pirrolin-.1.-11- CQr) , 3-piperídon-l-il~ (öyl vagy 1,3~tetrsöidropiridin~1-11- RQní csoport.
így tehát ha R-P jelentése hidrogénatom és Rt jelentése sminocsoport, akkor Q- a doxornbioln; ha. A--P jelentése hidrogénatom és Rt jelentése pirroiidin-l-il-osoport, akkor Qy a 3' -dezsgd.pe—K - Rprr rolidin'-l-il }-dozörnbioin; ha F-R? Iriöregénatom és Rt jelentése 1 zoindolln-2-ii-csoport, akkor Qg a h -zezr.rr-? - ytzotndoizn-2'-rl;-doxorobtcin; ha R-P jelentése· hidrogénatom és Ft jelentése 3-pirroiin-l-il~csoport, akkor Qr a 3' -dezaminc-3' - ti -pzrroiin-i'-iiö -doxorobicin; ha R-R jelentése hidrogénatom. és Rt jelentése 3-pirroliöon-l-l1-csoport, akkor Qy a h -dezamino-3'' - (3 -pirrolidon-1 -11} -öoxorubicin; na R-P jelentése hidrogénatom és ?t jelentése 2~pirrolón~r-íl-csoport, akkor Qy a 3' -de zárni no ~3? - ;2-pzrrniin-V?-11)-donoruhlcrn; ha R-P jelentése, hidrogénatom és F? (elöntése 3^piperidon-l-ii-csoport, akkor Qy a 3' -oezaml.no-3’ - {3f/ ~pipeti.őon~l~ii} -donor ubicin ; és ha. R-P jelentése hidrogénatom és F' jelentése 1,3-tetrahidropiridis-l-iicsoport, akkor Qg a d ~dezamino~3? - Olt, 3 - tetrahidropiridin-l -11} -doxörerdőin, áros a vegyületek, amelyekben a daunozamdn nitrogénatomja egy öttagú, alkilezö toiajdenságá gyűrűbe van foglalva, IS - 5Sazer hatásosabbaA in vitro, piát homológ ellenpár jaek., amelyekβ ben a óaonoramln nitrogénatomj a. egy hattagú gyűrűbe van foglalta (ilyen párok a Qy és ló, valamint a Qr és Qg) ..
lólélmáryenk előnybe vfegvéldéitéeálba-n, a: qPíí?---G:--p.-'P áltálénos képletü vegyűletben p;„p jelentése hidrogénatomtól eltérő. Ahol e jelentése hidrogénatomtól elférd, tton a'n-. m P; vagy Po, ott Py egy IH-nH agonrsta hordozó, egy LH-P.H anfagonista hozom zfn vagy egy meg kor ti tóét Ih-Pn analóg bőrön ed, Pg egy megkertitett szomatosztatin-analög és Po egy bomheoin-antagonisiaρ p a. lkai ita sas léi éaa-Pbh-űb d~ Ser-lye-lmh y a (Íny 1 -leu-Arg· Pr t -Doh: általános kép leél oeyhld, amelyben
XAn jelentése hidrogénatom: vagy egy dl ami no:~ s zabé étit ven: s;, példa ni AgSu vagy AyPr, és ahol ha
Aaa jelentése Gin, akkor Sbb jelentése Sis, Cos jelentése Ing és bed jel érit ése oly-Ady;
Aaa jel ént ése Ao-o-bel (Íj , Ao-P-Phe vagy Ao- d-Phe íé-dl-}, akkor phb jelentése P-Phsjé-Gi) vagy d-Phe, Geo jelentése b-Pal (ii vagy G-lrp, és Sód j elen.Οόοο d-Ala-hHyy és ha
Aaa-Sbb-Goe jelentése A.e, akkor Idd jelentése: egy -Ihl·-Cég-CHy o söpört r
:.............. .............................I
P 2 egy A a a -€ y s - Bbh- D - Irt- L y s - C eo - C y s -dód. - ílHg általános képlet! pepiid, amelyben ha
Aaa jelentése P-Phe, akkor Itt jelentése Tyr, Geo jelentése bal és dód jéiehrééé Pór vagy Izpr és ha
Aaa jelentése D-drp, akkor Seb jelentése Phe, Geo és Ddd j elentése· ihrr es
P 3 egy Aaa-G1n-lrp-AIa-Pal-A1y~His-dea-Bbd-hHy áltálános képie™ sammt/yn ts peptid, amatyóén
Aaa jelentése sermt, D-Tel vagy i-Pne, és Bob jelentése (GBy-kH}Len, (Cho-bB)éhe.
(CBy-bh)Trp, ;CΒ ρ~h}lac vagy (CHy-b)CbTac.
A találmány ti vegyi letek közé tartozó Lh---B.B analógok esetében a eitotoxikts Q csoport az AB-kH analógok D~lys~ jének oidaliáneához, vagy sz ahhoz kapcsolt (Xx?n csoporthoz kapcsolódik egy dikarbonsav összekötőn keresztül a (VII) általáét s· képlet szerint:
Aa a - Bbb-C c c-S e t -lyr- D - lys {Xxx} m (jó 4__q—p) n~ Len -Arg - Pro- Dö ö ( V 11} amely képletben m értéke 1 vagy 0, és n értéke 1 vagy x, azzal a kikötéssel, hogy ha m érteke I, azaz (Xnx) jelentése AgBt vagy Agár, akkor n értéke 1 vagy 1, és ha m értéke 0, azaz (Xxx) jelentése Aid rögén átért, akkor n értéke 1.
A találmány szerinti, ót vegyületek kézé tartózó szonazosztatin-analögok esetében a citotoxikus C csoport a szomazosxtatin-analögok soai no-termináliséhoz: kapcsolódik egy dikarbonsav összekötőn keresztel a (Vili) általános képlet szerint:
QiÍJ —O—R - Aa a - G y s - bob - D- Ír p - lg s - C ο o - C y s - Ddd - kép (Vili)
A találmány szerinti, út vegyületek közé tartozó bomhezin-antagonisták esetében a cltotoxikns Q csoport a hombezin-anragóniaták ami.no-terminál isátoz kapcsolódik a. (IX) általános képlet szerint:
Q · ό Aa a -Gi n ~y rp~ Ai a ~VaI -Ö1y-η1 s -len -bbb-kdy ( 1a;
Találmáeynok különöséé előnyöd oeynalcsitásaj. azok a peplidkenü egén nmek, amelyek citotoaikoö csopor ekénk Qy- ;;noy öp-t tartaimaznak és glntársav In - 3) bennük a diksrbeasav összekötő, amely egy 14-G-észz.erkenést képes a Qy-gyel (öoxeroP/.oin) vagy Qy~tai {k-pirreline-doxornbicin? , és egy xareoxasrdd-közést a kordoné pepiiddel,
Találmaaycck. legelőnyösebb magva les i tésai aa alábbi ellőt c ni k n s L d - R d ars a logo k:
I, Glp-lbs - Top- bet-r y r-Ö-bys (Gr1 -G-göl.) -ben -A r g - kre-üly-Rég;
. GLo-dis-Trp-Ser-Üy:: “ö--d.ys íQgL4-g-git) -beíí-Árg-Pzo-Gi y-Rdy;
az alábbi eizotoxikns eaemaiosztatdo-analogoK:
ό'''.................. ...............~~j
3. Q: --0 ~ g 1 t - D -· Rk e - Cy s - T y r - ö - T rp -1. y s - V a 1 - C y s -i n r - RH y;
i............... ............... ...............
, Q g a * - 0 - g 11 - o - F n e - C y s - T y r - D - ϊ r p - L y s - V a 1 ~ C y s - i h r - Η H y ;
í................ ................-.........?
5, py - -0 -g 11 - D ~ 1 rp ~ e y s - Fka - D~ T rp~ t y s - Tör - Cys - T k r -kH g;
Γ............ .............-.........Ί . QR '! -O-g:.:. -C-Trp-Cys-Fke-O-Trp-Lys-Tnr-Cya-Tcr-ikig;
i ................. .................... i . Qy -''s~á-010-0-1110-005-150-D-örp-üys-vaz-Cys-lrp-kkg; es { ............. ............. i b, Q y-i: - v - g 11 - D~ F ne - C y s -i y r - b- T r p ~ k y s - b a 1 - C y s - i r p - d H y;
es as alábbi eltetoxikns bősbezin-a.ötayonista aaalőgok;
. Q g 1 9 -0 - g 11 - G l η - T rp -A 1 a - Va 1 - GI y - H i s - ke a (C H y - d a) L e n - k H y;
. Q£5 4 ...g...gy y -gy n-Trc-Ala~Vai -Gly-Ris-ken LCdg-drb ken-döy;
II. Gy1 -b-'gl t'-b-ipi.-GIn-Trp-Aia-Cal.-Giy-bis-ke« (Cdy~b«í kea-kbyy * φ * φ φ ο
φ*φ ♦·«*
12, égŐé»Q...gÍh-g~ygr^
A részleges: telitett keterccrxlesős gyűrő kialakításának éj eljárásában, ahol egy vicinális vagy diszjunkt, az-az α,β- vagy m,y~hidroxi-amin nitrogénsbsmóát casználjuk fel, a reakció első lépését egy inért, vizmentes, szerves, poláros, apoiáros (hidrorí lesepertet nem tartalmasét oddőszerben , alkalmasan dimetil~ t or romádb an pejé jak végre,, a haíoyéoesett. aldehidet seámoftevő (alkalmasan 3ö—szoros) ieiesiegken használva; különösen hatásos aldehidek a 4-jód-bntiraldehid és az .5-jód-vaderaldehid- Találmányunk azonban nem korlátozódik ezekre, a jód helyett faré® is használható. Est a reakciót, és a következő lépéseket is szobahőmérsékleten végestük.
é bázison kezelést egy szerves bázis feleslegébe;';, alkalmasan 2-4-szeres feleslegében hajtőnk végre, Erre a célra tercier aminek, példátd tricikli-aminek a megfelelőek.
éz igy kialaknit biciklnsos gyűrűt a vicinális vagy deszjnnkt hidr oxi lesepert f el szabadé tá savai nyitják fel. egy szerves savval, váz jelenlétében végzett kezeléssel. Hígított, vizes trifInor-eeetsavat használhatónk, alkalmasan egy inért, szerves oldószerben, példán! acetonitrilfoen, A terméket az illékony vegyedetek váknnmban való eltávolításával tisztitick, a haiogénvegylüet feleslegét hexánnal extranáijek és a maradékot HPmC-val tisztitjók.
&öv.idxbés«gk b oa iá imán y szerinte peptrdek és származékaik le Írásánál az aminosavak pontidkémiában általánosan elfogadott rövidítéseit használjak a lüPbC-IdB Commisslon on Biochemfead. Bomenclatnre ajánlása szerint ínnro áh Hioekem. 138, 9-87 (1984)0 .
$ « χ *.
** ** *χ
S * ♦ « *♦· «·* ♦«
Az egyes ami sósavak .rövid! lése az aminosavak triviális nevén alapszik, azaz Gíp pirogittaminsavaé* Sie tisztidibt, Trp őrigtóiért jelent* és a többi. A. rövidítések az aminosavak t-izoderjét jelentik — hacsak másként nem adjak meg ....., assz Ser i-szerent, mig te kys D~leziht telebΙΑ nem. szokványos ami sósava k taeáimányvnkban használt rövidítéséé a következők:
D-ö a1i 25 D-3- (2-na r ti1) -a 1a nin, ö-Bal;3) D-3-(3-piríöil)-alanin* és
D-shed 0 -Cl) D- í 4-klór™lórii) -alanin .
A péptid-szekveneiákat a szokásos módon írjak, azat aa X-termiaális aminosav áll a bal oldalon és a C-termzráiea ami nana v a jobb oldalon, például Cip-Bis-Trp.
A beméCAg-bd)ren-bkg képlet egy reönkárt geytldkötást jelené ogy leneie es egy .teöeénaméa kötött egy papáid™ szék vendig C-termi na lesénél.
További használt rövidítések;
A g Sv: diamiη o - va j s a v
AgPrtiiamire ··prop ionsav
BN: nembemin
BOB-reagens: benzo-triazoe-l-ii-oxi-Írisz elemezii-aminc;-lösztön i um - hess fi nor - fos z lát
D1BSA ; d, b-de ezogropii -etil -amin bM-DCX: danroramib-csoporton mödositott PCX ötéa o : 5, 5 -oemetel-tisztáidin- 4 -karbonsav
DOX: domorubicin tmoo : 9-11. norerii-metil - oxi-karbon ii y 11: giat ar i 1- —C (C) -<éo“éB2-~CB2-':C Öl) — il. s -0 ; dl btársavaahedtid ke avar; ess
HOSt:
-- h.i dr ex i -bent o -tria tol nt-gt-Oh;
ár sav
h- hi dr ©xl - s rakná ad mid tH-dh
HALÓ::
in tel árrá ló: IsSaBb féisoaoadito hormon nagy te:I les i tmén.y S f ο 1 y a.dék-- k r oma togr á f la t r1fiaor- ' m' v a v há g zo lIbin-Ί-karbgnsav
3, é,9~tétrabtere-1H-píridd 3, 4-öl indol-3-karbonsav
A kémiai reakciók követésére es a találmány szerinti vegyi·letek tisztaságának ellenőrzésére egy Bookman analitikai HPLCrendszert használunk egy kodéi 163 diőaasor-detektorral és System Gold (Seokman) kromatográfiás szoftverrel felszerelve. Az oszlop Oynemax C~i8, 250 x 4,6 mm, porasméret 3ö: nm, szemesomé~ rét 12 hm. Az oldószer-rendszer két komponensből állt: (i) ö,X tömeg % TFA vrzoen, es fii) ö, 1 tömeg % TEA 70 %-os, vizes acetonr.trlsen; lineáris gradienst használ tank a kémiai reakciók nyomon követésére ágy, hogy a fii i koncentrációját percenként 1 h-kal növeltük, h tisztaság ellenőrzésére a rendszert izokratikos üzemmódban hasznai tor.
A találmány szerinti vegyület izolálására és tisztítására egy iél-preparativ, Beckman 342 hPlC-rendszert tasznáitunk. áz oszlop ágaapere Omtyi, 250 x 11 mm, pórüsmérst 30 nm, szemesemérét 15 μη. Az oldószer-rendszer azonos volt az analitikus -HPLCá boxörahicin-származékok szerkezetének azonosítására egy Bróker AAkJöo HMB-ssektrométért ClöO MHz IH-frekvencia, 25 MHz i3C-frekvencia> és egy rh.nnigan-MAi TSO'laöO siskát ooszörásos tömegspektrométert használtank, ϊ
* φ **φφ
il
ΦΦ *' * φ ΧΦΦ φ»χ· φφ
A találmány szerinti paptidekét gyakran alkalmazzák gyógyszsrészetlleg elfogadható, nem toxikus sók, paládul savadoloiös sók formájában, Az ilyen savaddiciós sókra példaként ersiitgük a hidroklorldokat, hiárobromidókao szulfátokat, fossd átokarr, fukaratokat,· glíhonátokat, kannátokat, maieá. t okát, aoetátokat, arifroor-aeetátokat, taksátokat, oer.soátckaz, ssokoinátokat, alginétokat, pamoátokat, maiatokat, sszsorbánokat, tarsarákokat és hasonlókat, Ba a hatóanyagot tahiatka formában alkalmazzák, a tabletták tartaimazhatnsk gyógyszerészetiieg elfogadható torzóanyagokat, amelyek kösd tartoznak a kötőanyagok, mint amilyen a trsgakant-mézga, őskorioaketnényltő vagy zselatin, agy oszlatószart, mint amilyen az aiginsav, és egy császtatót, mint amolyan a ma g ·rre z i. sm- s z t ssr át.
Ha az alkalmazás folyadék formában a kívánatos, ágy éoesltő és/vagy Ízesítőszereket használhatónk a gyógyszerészeti1eg elfogadhasd higltoszer részeként, őrig intravénás alkalmazáshoz /során i ás szórásiét, fősziétpuffer-olnatokát vagy hasonlókat használhatónk,
A gyógyszerkészítmények a peptideket szokásosan egy hagyományos, gyógynzerésaetiieg el f ogadható bordosóval együtt tarta imassák, A peptidek dózisa szokásosan körülbelül 1 ··· löö ug/kq testtömeg intravénás alkalmazás esetén; az orális dózisnak magasabbnak keli lennie. Általában a betegek kezelése ezekkel a peptidekkei azonos módon történik, mint az l,H-hH és a szórnafosstatin más analógjaival és a donorobicin-analógokkal végzett klinikai kezeléssel.
Ezek a peptidek az emlősöknek intravénásán, szubkután, intramuszkulári san, orálisan, intranazáli.san vagy intravaginálisar adhatok ba, hogy kiváltsák a biológiai hermenhatást a speo.;.fikas *« * * ♦ 3>
«*» « ·* .* *’ ** receptorhoz való kötődésen keresztdi. Az 1H-R3 analógok eseteden ezen hatások közé tartozik az ivarmirígyek aktivitásának rovetzibliis szupresszi.oja, a ©tornatesztatín esetében pedig gesztreíntosstináíís funkciók gátlása. A hatásos dózis az alkalmazás módjáról es a karéit emhösrajtói idegien változik:. Így tipikus alkalmazási -torta egy rizigleylás sootóst, amely a peptidst oldott alakban tartalmazza, és az adagolást kötúióeidl Ö/l — 2,5 •tg/kg testtömeg dózisban biztosítja. A pepiidet orális alkalmazása történhet szilárd vagy folyékony formában,
A találmány szerinti hordozó peptioek szintézise a szakterületen ismert bármely peptidkémiaí technikával megoldható. Az ilyen technikás összefoglalását megtaláljak Ah Bodanszky; „Brtnoiples of tanti se Synthesis (Soringer-bering, Heideiberg, 1384) cimd könyvében. A szilárd fázisú peptídszintézis technikáit dlkh Stemart és J.b. Young „Soiid Phase léptédé Synthesis (Pierce Chem. Co., Rookrord, el,1124} című kézikönyvben, valamint: éh Sarabb mogrelelő összefog lale: közleményében őrré:. 11 lep fi he ard Protszr sec, 80, 705-239 11187}} találjak meg.
a találmányunkban hasznait LB-RH analóg hordozók szintézise részletesen az bS 5.258.492 számú szabadalmi iratban, valamint Bajusz és munkatársai hPrco. háti, Avas. Por. őrá, 35, 1637-1641 (1383); 81, 1313-6322 (1889)), és ú'anaky és munkatársai (Írót.
hali. Acah. Sói- ISA, 83, 1023-1022 és 972-876 (1992)) közleményeiben van leírva.
A találmányunkban használt szomatoszfafcin-analög httidzez szintézise részletesen az US 4.150.782 számú szabadalmi iratban van leírva. A szintézis egy leírását meg talál ha tg ek még Cai és munka társai köz lemén veiben is iPrvo. heti. Arad. Sói, CS.A, .83, 1891-1900 -:1881} és 34, 2501-2506 (1937}) .
; ** «* *« ’ν ,ρ ♦ ρ .
Λ talál', uuy, nrran használt bcmbezin-anragcnrsta imraozók szintézise részletesen Coy és munkatársai (v. élei, Cherre 263, 5056-5060 (1988) és 264, 14691-14697 01989)), valamint. Cal és munka társai (Pepiebes 13, 267-271 (1992) és áros. dali, Átad. kin, 6.99, 91, 12664-12688 (1899)) köt reményei ben van leírva.
A taiál.mányunkban hasznait doxorubioin-származékok. szintézisét és a különböze hordozó peplidekkel. képezett konjugátumok ki elakifásat az alábbi példákban írjük le részletesen, amelyeket bemé tatásnak szénánk és non találmányunk kőrise: Szására .
1. példa. Az ^“FmocmSOX^^-O-hamigletaráfc előállítása. és izolálása ke) oldunk 50 mg (86 pmöi) zXiX-HCI sőt 1 ml dinét). 1-tprmamid.bán, hozzáadunk 30 mg (90 umöi) Emoc-OSu-t, majd. 31 μΐ (180 umol) DiáSA-t. A reazc .1 oeiegyet 3 órán át keveri ük, a reakció befejeződését analitikai WbC-vsl ál, lepi tjük meg.. Az: elegyet bpeed dac vákbneieg az lóban szárazra, gá.eöl juk és a ia rabé két 0, X é~oe 1FAban :tl bort só ive ki kristályosít jak. A kristályokat átérjük es hideg dietil-éterrel mocsok, hogy e.1 távolítsuk az Emoc-OSu nyomait. Szárítás után. 62 mg, 98 %-os tiszt, sságá X-Fmoc-DOX-Ot kapunk; a kitermelés 94 1.
Ezt . -·. /' itt ti eket egy éjszakán át reagál tat jak 11,9 mg (100 pmöz) GltgO-vai 1 ml vízmentes d.imetii~íormami.dban, 26,1 μΐ () 59- gmál) űlaEA jelenlétében. Az oldószert vákuumban eltávolítjuk, és a visszamaradt olajat 0,1 térik-os, vizes TEA-tan szilárd anyaggá dörzsöljük. Az így kapott nyers anyag 70 % X-Fmot:902^5-9-0001003.0 tar át öt, 29 8 el nem reagált b— Ernőt-txöX-ot. és IS % más szennyeződést tartalmaz ez: analitikai Ha 1.6 szerint. Ezt a nyers terméket további. Ír.szír lás nélkül haaználgnk fel a pepiid* * * φ
Φ * χ **·φ ΦΦ* φ φ * ** 44
Dö.H kon j ugátumok előállításához, Ha ezt a nyers anyagot 10 ml, n,l 1 TFA-ab tartalmazó, vizes aoetonitrilbeu feloldjuk ős féipreparativ BAbC-vai tisztitjók, 45,7 mg, 03 %-os tisztaságé h:~Fmec-lÍ3b--^-ii’he;figiU:tar:át végterméket kapónk; Mtermelőt oi á .
2. példa . Á 3' -de zárni no-3'' - (pirrolxdia-lj'-il):mdoxorubicin TFA sójának (Q2) és 14-O~hemi.glutarátja <AN-1.§35 TFA sójának előállítása
Feloldunk 58 mg (ŐS gmőlj 00Χ--·30ΐ. sók 1 ed. áimétil-fo-rmaádő:··han és 171 pi (1,3 mmól, 15-szÖrős felesleg;: 1,4-dijőd-batánt, majd 45 μΐ (360: prcői, 3-szoros felesleg} DlFHá-t adunk hozza, A reakcíóelegyet egy éjszakán át keverjük scobaáővérsékieleo. -v analitikai üFTó szerint a reakció 16 óra alatt teljesen végbemegy. áz oldószert vákramban eltávolítjuk, a maradék olajat 3 ml 0,1 %-os, vizes TFA-oid&tban feloldjuk és díetii-éterrel extrahál juk, hogy eitávoiitsuk az 1,4-di jőd-bután. feleslegét . A vizes extrakfumoói HPLC-val izolálva 41,6 mg '13 %-os tisztaságé SOXszármazékot kapunk; a kitermelés 66 3.
Az igy kapott 41,6 mg (56: pmól): 3;í-^dezaminovó^ “:(|pír:rolidá.nv: -b'-il}-doxorubioin IFA sémát 1,2 egyenerték Gltvö-val reagálhatjuk vízmentes dimetil-formamidben, az l, példában teirt módon. 16, 5 mg, 36 5~os tisztaságú terméket kapunk; a kzterme5.es
3.
3. példa .1 3‘ -desamúno- 3; - (isoiodol in~2 ·' - χ 1.) -doxorubioin
TFA sójának (Q3) előállítása. és Izolálása 'FeiO:ldánk 53 mg (56 (pmóil Wk-'Fól sőt 1 ml diméf 11-formamldbán és 226 mg (1,3 mmól, 15-azórós felesleg} «,«.'-diklőr-ortoeziioit, majd 43 ul (266 gmól, 3~szcros felesleg} DiFFA-t és tv. und ·*.** ·«·♦♦ * ο *·*· ·♦·♦ * katalitikus mennyiségű nátrium-jodídot adunk hozzá. Tizenhat éra máivá az. oldószert vákuumban eltávolítjuk, és a maradékot i ml lg 1 é;s. vizes IFA-nihatban feloldjuk és 3 ml dietil“éterrel exfraháljuk, hegy eltávolitsuk a halogénvegyúiet feleslegét. Az Így kapott nyers anyagot kFLC-val tisztítjuk. A tisztítás után 33 mg, 98 kos tisztaságú végterméket kapunk; a kitermelés 5 5 %.
4. példa, A 3t “deKamino-S'™ (pirroli»-!'!!}-doxoxu&icin TFA séjénak (£5¾) éldéllifcása és ixolálssa
Feloldunk ii mg (8u gmól? 19X-HC1 sót 1 ml dimetii-fermamidban és 138x8 μ.Ι. íi,3 mmél , .; 5-szoros teles légi ousz-1, i-dlklőr-k-buténbx majd 45 μΐ. (255 urnái, 3—szo.res felesleg; DlPEA-t adunk hozzá. Tizenhat óra múlva az oldószert vákuumban eltávolítjuk és a maradékéi 3 ml bénámnál ex t rákéi juk/ hogy oltáséi itsuk a halógénvegyölet feleslegét. Az igy kapott nyers anyagot HtLC-vei tisztítjuk, A tisztítás után 22,5 mg, 93 %-os tisztaságú végterméket kapunk; a kitermelés 3? %.
5, példa, A 4“bzóm-l-klór-2“feufcanoA és a« S-bróm-l-klér-2-pentánon előállításé és izolálása
158,3 μΐ (1 mmdlj 1 - bt ám-grog ion is -ki esi dót: reagál tatunk diszo-metan feleslegével dietii-éterben, Sgy óra múlva az éreres oldatot elváljuk és vékonyréreg-kromatográfiaval (TLC 5 vizsgáljuk,. A TEC-hoz derek ko, 5554 jelzésű, sziiikagéiisi. 850 F25i) bevont aluminium-lemezt használunk álló fázisként és kloroform/metanol 95 ; 5 térfogata.:: ányi elegyet mozgó fázisként. Az előhívást 2, 4~dinitro~fenli-hldrazin reagenssel végezzük {Vegei: „A vextbcok of Practioal Organie Chemistry, Xoucmaus, lem York, 3. kiadás). Az igy keletkező diázo-metil-keton származék sárga
* * * * * ** X foltét mutat Ff === 0.3-néi . Szatén az éteres oldatot vízmentes hidrogén-klóríddel reagálta!jók eteti!-éterben, hogy a ötazo-meti 1-ketont a kívánt végtermékké, 4-.brem-l-kiér---2-butarenná alakítsuk . Sz a termék az οκο-vegy tietekre jellemző sárga foltot mutatja Rf - 0, 8~nei a fent leirt oldoszer-rendszerrei es reagenssel vizsgálva. St oldösser elpárologta zása után a nyersterméket egy sziiikagél oszlopra (15 g sziiikagél, Marok 3385, 230 ~ 4-0 ö vesd, port sméret 6 re) visszük lel. A ,.····< . , ----- .. χαt.-.s tészta kloroform. A kívánt végterméket tartalmazó frakciókat La fent leírt ThC-val kiválasztva; összekeverjak éa szárazra pároljak.: 1,5 g tiszta, olajat kapunk; a kitermelés -80 %.
Az S-brőm-l-klőr-2-pentanont 4-bróm-ottirti-xxor.röból állítjuk ele pontosan ugyanolyan módon, mint ahogy azt a 4-bróm~i~ •-klór-z-pentanon: előállításánál ioirt.uk, azzal, az eltéréssel,hogy 4 - brém-Out1 r 11 - k 1 o r 1 d o t ü a s z n á 1 u n k 3- brön · -ρ r opleniI- ktorid helyett:. 1,0 g tiszta olajat kapunk; a kitermelés dd %,
6, példa. A 3' ~-dezajax-no-“3f - <3- ~-plr roll din ~1 ?'~11) -ddáorubxcin
TFA-sógáo&k (Qg) előállítása és izolálása
Feloldunk 50 mg (86 pmói) 5-1X-HC1 sót 1 Sir díszét 11-formámrabán és 241 mg (1,1 mmoi, 15-szörae felesleg; 4-orér-i-klö-r-2-butanont, majd: 45 μ.ΐ (260 űrnél, 3-szo-ios felesleg; Dxkö.á-t adunk hozzá. Tizenhat óra múlva az oldószert vákuumban eltávolítják és a maradékot 3 mi hexánnal extrahált ak, hogy eltarol ittuk a halogénvegyaiet feleslegét. Az igy kapott nyers anyagot tkiC-vai tisztítjuk. A tisztítás után 20,6 mg, 93 k-os tisztaságú végterméket kapintk; a kitermelés 33 %, á 3? -de z ara no ~ 3 ·' - (3 · -pr per időn- X xl.} -doxo rabi cin fc
IFA sójának (Qm) előállítása és izolálása
Feloldunk 50 mg (86 gmői) OGX-Hdi sót 1 ml dimetil-f orinani?i~ bán és 260 uv 11,3 mól, 15-szöros felesleg) 5-bröín~l--k.lér~2“
-pantanont, maid 4 5 ul. (2S0 űrnél, k-storos felesleg; OlFFA-t adnák hozzá, Tizenhat ere múlva az oldószert vákuumban eltávolát luk és: a maradékot 3 mi hexárv.al eztraháljak, hogy aitavoizfsuk a halogénvegyület feleslegét. Az Így kapott nyers anyagot. üEll-vai tisztítjuk. A tlsotitéa után. la mg, 55 %~os tisztaságú végterméket kapunk; a kitermelés 2S i.
8. példa. A 4-jód-butiraldáhid és az 5-jód~valera.Idehid előállítása és izolálása
Feloldunk 1,3 mi <10 maiéi) 2~ (ü-kiör-propil;~1, Ő-dloxoIánt pé-kibr-btitiraigehid-afilén-aoetált) 200 mi acebonban, ami 30 g (200 «él, 20~szoros felesleg) nátrium~itúldót tartalmaz. Az oldatot 24 érán át vissz a csepegd hűtő alatt far tál iák, majd szárazra pároljak. A szarvas anyagot 100 ml dietii-éterrei excrahéijuk a szervetlen, szilárd maradékból. Az éteres oldatot 50 ml vízzel, 50 mi 5 %-os, vizes nátrrnm-tzosznlíát-cláacüal és miég bázomezer 00 mi vízzel, mbéduk:. Az étert vákuumban el tivoli tg dk és a maradék olajat 1 ml Sö l~os, vizes eoafsavban feloldjuk. Az oldathoz 1 éra múlva 100 ml csati 1 -étert adunk e.s az eoetsavet, valamint az et 1 ,lén-gl1kelt 50 níl vízzel háromszor mosva eltávolítjuk. A főtermék áLC-val, tiszta kloroformban futtatva Rt :=== 0,3-ei mutat. Az eldohidősöpört kimutatására ugyanazt a reagenst használjuk, mint a ketonokhoz (5. példa). Ezután a diétái-étert eltávolítjuk és a fekete olajat agy oszlopra visszük <15 cm hosszú, 2,5 cm átmérőjű}, ami 15 g merek S305 szil lka gél. lel van töltve fizu -- évé mean,: & nmt porusméret) . A folyékony, mobil Ιόν, un ;o.
«
/. S.Í., *»
Λ» «*« zis kloroform, A kívánt végterméket tartóImazó frakciókat összekeverjük és szárazra, pároljak, 1,6 g olajat kapónk; a kitermelés öv 1,
Az 5-jőd.-valeraldehidet porcosán ugyanilyen módón állítják eic 2- (4~klór~bstii)-i,3-dioxolánbdi Indáivá, 1,65 g sárga olajat kapónk; a kitermelés 5 0
9, példa . A 3' ~dezaxaxno-3z - (2'ν~·ρ1χηο11η-!ίΖ”Ί1} -doxorubie.in Tíé. sójának (Qg) előállítása és izolálása keioldfepk 11 mg Oá mmol) IBb-ECI sót 1 ml dimet!ö-tormamibban és 515 mg 12,6 mmol, 3>-szoros teles légi A-jód- bakira lés bibét, majd 45 pl (260 pmől, 5-szoros felesleg) EIPEA-t adunk hozza. A reakciöelegyhez 1 óra múlva 160 ul jégecetet adnak, majd noczáosepegtetünk 5 mi 0,1 %-os lEA-at W %-os, vizes aoetonlον élben (a HALC-rendszer (ii; oldószere), Ezt az oldatot 2 ml 0,1 1-os TFA-oldattal feibigitjak, majd az aoetonitrllt vákuumban eltávolít jak. A. kapott oldatot hexánnal eztraháljnk a tslogenvegyulát feleslegének eltávolítása céljából, áz így kapott anyagot hábC-völ tisztítjuk. A tisztítás után 52 mg, 98 1-os tisztaságú \ 'Kem v , a kitermelés 85 %, lö , példa. A 3f -dezamino-3' - (i'v , 3?z-fce:tps.ki4xopiridin”l'z-il) -4oxor5ifoxclé TF& sójának (Qg) előállítása és izolálása
Feloldunk Sö mg (86 gmól) ólX-HCÍ sót 1 mi dimetil-formamidbán és 552 mg (2,6 mmol, Aö-szozos felesleg) S-möd-vaieraidehidet, .majd 4 5 ul (26ö μηόΐ, 3-szoros felesleg; Dl IFA-1 adunk, hozzá. A reakolóeiegybez 1 óra múlva 100 pi jégecetet adunk, majd hozzácsepegtet int 5 ml 6,1 %-os TFA-st 7ö %-os, vizes acetonitriibea (a avaC-readszer (ii) Glóbusért: .. Ezt az oldatot 2 mi »**♦ * ·» * * * * * X u, I 'y-os TFA-cidsttal felhigítjuk, majd az aceconltriit vákuumban eltávolítjuk. A kopott oldatot hexánnal extránáljak a harcgenvegyúiet feleslegének eltávolítása céljától, ke Igy kopott anyagot hánC-val tisztítjuk. A tisztítás étén 46 ny 95 1-os tisztaságú végterméket kapunk; a kitermelés 75 %.
11. példa. DöX-ofc tartalss&zó, citotoxikus LK-RK analóg, a [D-Lyső(DOX14-0-glt}]L»~RH, QxI4gL előállítása ée izolálása
Feloldunk 60 t»g (oly 5 úrnői; [ D-lysús 12(-RH-t és 12 mg (64 %~ os tisztaságú, 37,5 úrnői; h-Fmoe-F2X —-0-n.emigi usarátor {lásd .1, példát) 1 tol almot11-iormamrobau és horráadunk 22 mg (52 úrnői ( BOF-reegensf ; 13,5 tg il&O gmól, H2fír~t, és 52 μΐ (350: umó.1;
faPSA~t. t r^r·,'· v yj <t -y y > > a d* o oi a 'sm c ·» \ »tu. J ?-~ sen végbemegy. Az ©Időséért elpárologtatjuk, a maradék olajat 3 ml etil-aoetátban kikristályosítjuk, majd az anyagot kétszer 3 ml etil-acetáttal mossuk. A 38 mg nyers, szilárd anyagot 3 ml dlmet11-formamtdban feloldjak és hoz ráadunk 300 μΐ sípos leint. Öt perc múlva a reakcióéi egyet jég fartőké tesszük és megsavanyíjuk 300 ni TFá, '11 pl piridin és 2 ml dimetil-formamíd keverékével. As ölhessem elpárologtatjak, a maradékot etil-acetáttal ki.kristáiy:ű:eit,j:ök. Az így kapót,! nyara, exi..táfö anyagot 1 mi vő k~oe, vizes, 0,1 % TFA-at tartalmazó aoetoni t.x ilben iil feloldjuk, 3 ml 2,1 á-os, v.tzas FF A-o Ida.t tál (ii; hiyitjak és féipreyaraiiv HérC-val tisztítjuk. 40 mg (14,8 poci;, 9S j-cs tisztaságú végterméket kapunk; a kitermelés 48 %.
12. példa. 2-Rixrolinc-DOX-ot tartalmazó, citotoxikus AH-AB analóg, a [D“X»ys&(S-pixrolíno-DÖX^-Ö-gltH Qg^gi előállítása és izolálása
Feloldunk 11,2 mg (3 pmőlj jd-'igf-t (lásd 11. példát; 222 p,l *·* * * dimetil-fei.maítiotan, és 30 rag (ISO μηοΐ, 31-szoros fölösleg} 4yod.-dntiraldeniaat :(8.. gdlos·, majd 3 μ.'. (17 nmői} 61PPA-1. adtok fossa. Egy éra múlva a roaksió befed ezddlk (lásd 9, példái, ek~
- -'Γ te ul zzeos’-te oa..uk a reakcíoeiegyfez, majd fozsáosemegfetönk 1 mi 8,1 %-os TEA-af 70 %~os, vizes aoetonitrilbeo, Est az oldatot fsibigitjsk 1 ml 0,1 %-os, vizes TFÁ^oldattal, majd az aoetenitriit váksnmban eltávolít juk. 1 visszamaradó vizes oldatot 1 síi hezárrnai extraháltak és KPLC-val megtisztít jak. 7,6 mg. Pl l-es tisztaságú végterméket kaptak; a kitermelés 15 1.
13, példa. DOX-ot tartalmad, cxtotoxikus sxomteaatatia analóg, a DOX14-0~grt-öte8hs-Cys~Tyr~D~7rp~I,ys -Val-Cys-Thr-NHg, Qy-^gS előállítása és izolálása
Pelei átok kö: mg 114,5 gmdi} o-?úe-Cys~Tyr--il··Trp-Lys (Emec) -l'ai-ly s-Thr-NKg-^ isset. dali. Arat. Pete APA, 118 5-1090 (19861} és IC mg (61 %-os tisztaságú, 11,5 prolii Ι-Ά.αΆΧ^-Ιbemigltbarátét (1. példa} 151 uy óimetl1-formamsetan, és foszásáról 8,8 mg (10 nmei} SOP-reagenst, 5,1 mg (10 uroii KDSb-t és 17 el (18© gmol,}: diPEA-f.. A reakció 1 dia kévetéé alatt szfbahdmérsekietet teljesen végbemegy, Az oldószert vákuumban eitávolitjak, a maradékot efil-acetátbsn. kíkrlstályosifegok. Est a szilárd. anyagot feioldbuk 1 mi dimebrl-formamióban és 160 μΐ gr tetetettem. adtok fossá. Hét perc múlva a reakcideiegyet jégfürdóee tesszük és megsavanyit j tk 100 ti TEA, 388 μΐ piridin és 2 ml dimeti 1-formámig keverékével.. Az oldószert elpárologtatjtk és a visszamaradó olajat etil-ecetatban kikristályositgtk. Az Így kapott nyers, szilárd anyagot 1 mi 70 1-os, vizes, 0,1 1 TFA~ab Sattatmú.td áééfoblfrilbep: (ii fejglgjnk, 3 ml 8,1 %-os,- vizes **** * * *
2$
IFé-oldattal Iii í felhígít jak, és félpreparaslv HFic-vgi tispti. s jak. 9,7 reg ;5,1 μ.οοί ; , 95 %-os f mm aságú végé érmékét kapunk; a kitermelés 35 %.
14. példa. 2-Glxnoilno-OGk-ot tartalmazó, cxbotoxitus szórna tesz tátin. analóg, a j
2-pí rrölinQ-DQX^~C>-~glfc”D~Phe-Cys~Tyr--5-Trp~Lys~Val--Cys--Thr--NB2, Qg-^gS előállítása és izolálása
Feloldunk S,9 mg íé gmol) P“Fhe'--Gge~Fyr~F-Trp-Lye-vai-Cys” -Th.r-455u-f IM pl őimetii-iormamidban, és 4,1 mg (5 pmél; 2~ -plrrolieo-^ .magé 1,4 mg jlé gmoll BGF-rea gensi,, löö pmől HO.Bt-t és 51 pmöl 51FFX-t adunk hassá. A reakcióelegyet 2 érán át keverjék szobabémérsék 1 siet, majd 30 ul AuOHvsl megaaranyitjuk és felhígítjuk ütő pl 13 %-os, vizes, 0,1 illat tartalmazó acetonitrilééi és 700: μΐ 5, 1 1-os, vizes TFAeídattal, magé BPLC-vai megtisztítjuk. 3,9 mg, 33 %-os tisztáségé végterméket kapunk; a kitermelés 4u %,
A 2-pimollno-íkOXi^-ö-hemígiutarátot úgy állítjak elő·, hogy Fáké.y -é -hamigu- oiar át o h reggé Itatunk 4 - j oé-ka 1 zaaldeb id.de 1 a 3. géléében 1el r t módén.
A DOX-·^ --ö--hsun.g Itaarátos az l-5ooc--DOXé1:-O-hemigiutaráébol állítják elő az Fmoo védocsoport lehssltásával a 11. példában leért s.ééon (a kitermelés 4 0 %g .
15. példa. GGX-ot tarfeaiasazó, oítotoxikus bor&bazina n tagon i s é a (DÖ.X ·*· - O - g I1 - Gin - Txp-Al a - Va. X - Gly - H is - Le u (CH n -UH 5 Len ♦ «·«-* * ♦ * * * <
Φ» χ előállítása ás Izolálása
Feioidtnr 2ő mg (IS,8 pmőt.) Ólri-Trp-Aáa-Val-óiy-Prs-Leu Olö,''' -EH) Εοη-ΕΗρ-Ί (Int. .7. Pépeidé Protein Per. 38, 593-605 (155135 és 23 mg (64 %~os tisztaságig 15,5 pmői? E-Ea?oc“DGXx4-0-Pemi· glntarétot <1. példa? 205 pi dimetil-formamrdfcar, és 8,5 mg (25 úrnői? ECP-reagenst, 5,4 mg (40 úrnői.) HöBt-t és 17 pl 1105 pmői)
DIPEA-t adunk bozzá. A reakció 1 éra alatt szobahőmérsékletet, teljesen, végbemegy. Az oldószert. vákuumban eltávozjtjuk és a maredéket etii-acetáttan kitzistáiyotit jük.. Est a szilárd anyagot 1 ml. d.mnetii-iormáuldtan feloldjuk és hozzáadunk 105 pl piperecím.. öt pete: máivá a rea/kclőé:legyet jégfiitdbbs tesszük és lö: pi 3F«, 305 ui piridín és 2 ml dimetil--tormámra keverékével megsamanyitjuk. Az oldószer eipároicgtatása után visszamaradt olajat éti1-acetálkán kikrlatálmosát jak, As igy kapott nyers, szilárd anyagot fel&ldju.fe: 1 mi 75 i-os, vizes. 0,1 3 TFé-at tartalmazó aóeteóitriilaan (i) és: fclfelgitluk 3 el 0,5 %~os PEA-oldattai (ii) , majd ieiprsparativ HPLb-val megtisztít juk.. 13,5 mg (5,1 pmé i? , 98 %-os tisztaságú végterméket kapunk; a kitermelés 45 %.
IS. példa. á-Edrrolloo-böX-ot tarfealsiazo, cltöfeoxlkus bőmbe®In antagonlsta (2-pirrollno-DOX^^~Ö-glt“GIn-Trp-Ala~VaI~ -Gly-His-Lauleu-éffig, ög^gB) előállítása és Izolálása
Feloldunk 9,5 mg (5 gmól) Ocg^gS-t (15. példa) 205 pl dómétii-fermamidőar és 30 mg 0-50 peől, 30:-szeroe felesleg) i~ jőd-buti.::aldehidet (3, példa? , majd 3 pl (17 pmél.) OIFSA-t adunk Pózzá. Egy óra alatt a reakció befejeződik (3. példa), akkor nozzáedznk lö pi jégecetet és a reakoioelegyet 1 ml, 0,1 1 TFP-at tartalmaző, vizes acstonitriifoe csepegtetjük. Ezt az oldatot 1 ;si 5, 1 7-os, vizes T Fé~ oldat tat febógótjuk es az aoetorm trilt
* ♦ *
»« χ*
X *:·»:
·*·* vákuumban eltávolít jak, A visszamaradó vizes oldatét 1 mi hexánnal extránál. juk és H.KhC-vai megtisztitjuh, 6 uo, 93 i-os tisztaságé végterméket kapunk; a kitermelés 60 %.
Az ars vikrc ozfcotoxikus aktivitás megkatározasa
Az Akt észtrogén-független egér eml akar clnoma sejtvonalat G. bernhardt (Universrty of Eegensburg, ESEK) botsajtóttá rendelkezésünkre., A találmány szerinti vegyületek sejtszaporodást gátié aktivitásának meghatározására használt összes többi se j tvooaiat: az: American. Type Cultur Collec tton-bél (.ATCC; szereztük be.
A származékok aktivitásának meghatározására egy fcoiorimetriás oltotoxioitás-mérést végeztünk cukrot ikráié lemezekben; a mérés a kristályába igával festődé sejtek biomasszájának megtakaró-
zásán alapszik és igen jé körrelác. rét mutat a sejt szám méghatá-
rozásávál (Kei ie és írnunk a tá a saá Arai.. El cehem:. 137, 262-267
(19905; éornnardf és munkatársai, dk caroer Ess. Clzc,. ér col.
118^ 3:9-92 (19921 ; Spruss és munkatársai, c. éancer Esc. Ciin,.
dacol . Ii 1, 439^443 «19911? Gzllies és munkatársai, Anai. A jerkém, 19 9, 109-113 (19365? Kueng és munkatársai, Anai, Sicchem. 182, 16-19 (19895} ,
A vizsgálat menete
Egy vagy két nappal azután, hogy a sejteket a 96 lukas lemezekbe tesszük, a. tápfoiyadékot. friss, a. vizsgáit vegyűletet tartalmazó tápfolyadékra, vagy a kontroli sejttenyészet esetében csak friss tapfciyaoérra. cseréljük. Különböző időtartamú inkubáiás: után a sejteket gintárdiaidehiddei fixáljuk és magzati borjüszérom (ABS) alatt, 4 hőmérsékleten tároljuk a kísérlet vé« * $2 géíg, Λ sejteket kristály ibolyával festjük és^ a megkötött festéket 70 %~os, vi.zea atanobial extraháijuk. Az oldat optikai deszórását so Elé. teaser (Bio-lek Instruments; vagy Boomer lövő leves fotométerrel mérjük rendre 590 és Síi nm-nel. Ar egyes adatpontok 3 luktenyészet átlagát jelentik. A T/C értékeket az alábbi képlettel számítjuk ki:
- 00
T/ü - .............................. x ICO ahol — 00
T a kezelt tenyészet optikai denzitása,
O a kontrol tenyészet optikai denzitása,
CO a tenyészet optikai oenzitása az inkubálás kezdetekor (t:::ű) , , példa. & TO3£ á&unos&mriem módosított s-stárjsaazékainak ia vsára citotoxikus aktivitása
A 17-1. táblázatban a dcxorubicrnnek és dann.czamimen módosított e zárttá tékái rák. batáta láthat ó a dte-v humán emlokaroindma sej tvonalra.
Azok a eitofozikus csoportok, amelyekben a daunozamin nitrogénatomja egy reaktív csoportot hordozó, öttagú gyűrűbe van beépitve, 5 - 50-szer aktívabbak, mint a hattagú gyűrűs, homológ párjuk, mint például a 3-pirxolidooo-DOX (Or) és 3-piperrdino-BCX (yyh, és a a-pirtolinn-Bök (Qyi és I, Ó-teirahidropiridíno-OCX (Qnj .
A sejteket 5 t Hl-DCC-EBS-t (hővel inaktivált dextránnai bevont faszén, magzati botjűszerummai kezelve) tartalmazó IdEh tágról vadakban ináubáljuk Só lukas lemezekben, A relatív sejtszámot a kezeit és kontroll lemezokben kristályibolyáé festéssel határózzuk meg és a l/Ő értékekben adjuk meg. Az alacsonyain Ívd értékek a ráksejtek szaporodásának csökkenését jelzik a kezeié® hatására. így? például '75 azt jelenti, hogy c kontrolihoz (löt %) képest 75 % szaporodó sejt van a. tenyészessen, and 25 t-ss gátlást jelent,
17-1, táblázat. A dózernélcin és dau ne zaminon m 6ács! főtt származékai hat á s a az MFC-? humán emlő karc inómasejt vonalra Ír
vf fe rs.
Veovüiet Inasnácios 77C érték koldnó· O Z. 0
idő (óra) konoent rác. lóknál (mól í
5.x! 0“K: 10“ 4 3x10' -9 1.0-« Oxitri ) lö~7
éoáoretd o én 72 23 32 54
dódé Ízt 35 Se 33
Pirroliáíno-· 70 ée 25 -26
-fo qqg 121 94 17 —lé
Piperldf.no- 72 124 70 4
-ok ádO-lS3; ize léé:: 07 0
Isozodcld no- 72 112 3 3 -11
-tok (Q3í 12 0 léé 77 -2 9
3-Pirrolino- 70 10 f: ? o -3
-70X éo 12® 37 3 3 -5
3™P i r re1idono- 70 37 33 -28
-fék légi 120 07 2 2 -iÓ:
3 - Pipa r .1 d ono- 70: át 32 33
-1OX 1QP 12 Ö 37 70 ér
2-Pírrólino- 70 Sé -3 -13
-DOX iQpi lét 2© 2 -é
ín. nsíoe;:
«**; * «» «» »» • » » » t X »
- X hí» 444 444 444 ** * ** ** >4.
1ί 3-Tet r ah i dro ~ ~P1ridi no~ ÓOX
Ί&
Idd
3 3
9 62
18. példa, & DÖX .íjs vitro cltotoxikus aktivitásának t©lj:«s: fokú megmaradása a Gi^gA, és a ssupsraktxv d-pIrroIino-ÖOk-é
ÍQg) & £g'~^gL LB-RH agonista péptid-konjágétűdben
A 18-1. táblázatban a doxorubicin és dannozarinon mónosizott származéké, a 2-pirrolino-doxorublcxn (Qgj hatása látható a ( D~ -Lyséj 1B-BB agonista analóggal képzett konpangtusaikhoz (Qfeégy és QíbfeL; képest az TFC-d barnán emlőkor tinóra sajtvenalra és az MXT ösztroaén---íüggetlen egér emlőkarcinóma sejr, vonalra ir? alázó.
áz MFC-7 sejteket 5 % hl ··dCC-FBS- t tartalmazó 1MEM sápiéivádákban, 96 lakos lemezekben inknbáijuk. az MXT sej teket 0, 6 g/1 h-glutarlnt és 10 % FSS-~t tartalmazó nádi 1630 táploiyadókban Inkábóljuk.
XX * Χ· :
***
18-1. tábláza t
begyület Inkába elé (orz) T/C érték a z MC2--7 sejtvoralen, kilőni sez a a!7
©xit kenten árát laknál, (mbll
37 ia-17 lx3.n37 iSl axlCV'A 1Q-1 Sj.sO-1
Soxo- 7© 53 82 54
zablaín* 12© 9 5 6 6 J.J
2y74gh 7© 1.11 88 63
12© 7 8 SS 7: ’7
71 ab -.3 -18
... ..
zz© *”b 'H
he14lb 78 71 28 -24
12© 60 1 6 -14
begyül, et Inka- 271 1 érték . az AZT sejtvonalon, különböző
bánié k a no a n t r a n 1 1 k n á .1 (vő 1 ·
(óra ? 3x17'-· ila i <!' I ü 3x1 €:-72 yg-2 y@~ó .Mit'® tü”'·
Doxo- 1 8 3 80 58
táblái n SS 74 ó© 4 3
Öy^yb .2 6 87 81 7 7
5© 21 39 s©
A6 28 á© 78 5 6
8 5 52 6 -13
bg14ab 28 81 78 64
62 15 ts :~12.
* leghatárézva mint. a 17-1,, táblán ?abhan,
19. példa.
A 19-1. táblázatos?·; látható, hogy a DGX-ot tartalmazó szórnatosatatin-analógok teljen mértékben megőrzik in vit.ro ettotoztk s a k ti vitásakat.
* * ,, .<
«' « « »♦ »·♦ ♦».* »«<
19-1, táblázat, Λ doxorubitint tartalmazó, eltet őrikés azcmatosztatln-analőeck hatása, az M1IA PaCa-2 humán hasnyál• X— . ..................................................................................................Λ —' mi rxgyrák ze jtvonalra in va t:ro.
Inkubációs Ί/C érték különböző
Idő (éra? koncentrációknál (mól) ia~*· ttr7 ír·'δ
Dlx’^-C-gj i~ 3-98* (Q x14gS'9'8}· 28 21 92 103 95 11 —-' <·< ~ 3
he h be zé aha 1 be 21 - 91
s-99* / 6 98
y>XÍ4-0-elt- 2S 12 35
5-521' ' (Qg14gSi2lÍ 19 97 19 ~á
hordozó ábsiöy 28 - - 71
5-121-- W — “· 96
Dózerebicin 21 93 14 -28
71 71 iö „7
A sejteket ló % FBó-t tartalmazó .-.22 5 5. 6sö táptóly adókban
lukas lemezekben iηkubaijuk ) í
9-2 re - C y s - aha - D- Tr ρ -1 y s -- Thr - C y s - Tb r ~ .2 H y;
; íi * «-ike-Cvs-Wr-D~^
2G. példa. & doxorubleimt tartalmazó, eitotoxikus bomfeealnantagonista analógok hatása a CFPAC-I humán hasnyáimirigysák sejtvonalra ia vitro.
A 29-5, táblázatban látható, hegy a 'DOX-ot tartalmazd, ba«·*·>-» φ *<frx
XJ. χ« (>(· ΑΧ
Iáimsny szerinti bombezi.n. antagoniata analógok teljes mértekben megérzik in ntro citotoxikus aktivitásokat.
2tiltÁin. a;n
vegyülsz Inkubációs iáé (óra) T/C érték különböző
kon< mlO~* zentrési óknál (moll -7 I9~b
19”? 2x1:0-
ICX'^-ö-git 69 95 31 93 9
B-34 ég 95 57 28 4
Wi°gW 137 93 28 19 0
B---94* 66 99 196 :IS9 100:
25 27 39 99 96
137 93 38 190 39
B0a14-ti-gl t-ó-50 96 109 78 39 5
35 37 £ s? -.· 29 -1
137 92 38 19 „8> <8
B - :S 0 * * 66 100: 83 99 93
95 23 100 102 98
137 97 23 99 38
iCX 66 68 fi.··? 13 ...·?
95 73 32 19 -9
133 4 3 20 7 -4
á se j t e k e i 19 1 53S-Z tartalmazó IMDé táp( G.i '*/·&< (ókban inda
kálóok >4 lukas: lemezekben.
* si n -lep- Al a- be l ~ G ly ~ H l s - les ~ g (6 big-b) -Len-23g
'**o-phe-Gln-Trp- éia-vai-GlyHis- Len ·~ψ (7 Hg-b) -Tac· -bog
A hormonézármazékok kö tői lesi tu( Lajdonságe inak megőrzése
21, példa . A citotoxikus LH-BH á gonista as Qt^^gL és
Qgáágp hormonális aktivitása és reoeptorkötödési képessége a (D-Lysfe1LH-RH hordozó pepiidhez viszonyítva
21-1. táblázat ?s hagyóintek 4 <gó í D~ óy 0¾ hh~s.il·
Η ο ·; m ο η á 1 ί s a k fc i v i fc á s * (hü-válasz az Lh~kiBi válasz hoz képest '} ilyn-örték* * patkány agyalapi mirigy receptörökhöz (nmél)
ICoo-erték** emlőrák r e c epf oro kho z (nmó15
7,24
6, lö é, BS ház Ltí-választ öiszpergáit patkány agyalapi mirigysejtek szoperiúzoos rendszerén, Vigh és ochaiiy módszerévei mérjük (ieptioes 5, 241-247 (Ildin **az analógok kötődési aktivitását a patkány agyalapi mirigy LH-RB reoeptoraihoz és a honán emlőrák receptorokhoz konpelifciv kötődési ki séri sóé kdén mérjük i^-h-dai jelzett: ( S~ltpé) hh-Rh radioiigandnmöfc használva: (Szőke és munkatársai, PoptldoSz lö, 35Ü--B&Ö (1224) n á kötődési affinitást az. ICvg-értékke 1 adjuk meg, azaz a nem jelzett analóg azon koncentráció javai, amely Sü ü-han gátolja a rádióifganöom specifikus kötődését.
á szomatosztatin-analógok gátolják a növekedési hormon (ShI kiválasztását a perrundált patkány agyalapi mjrigyfcöi (Garlson és munkatársai, hndoorino.lagp, 24, 1709 (19745 1. Ezt a módszert használjuk a találmány szerinti citotoxikus szomatosztat'.n-analógok hormonbafásénak vizsgálatára a kongngáiatlan horóctő molekólákhoz képest,
B humán növekedési hormon elválasztást serkentő^ hormon (bóh♦ X *< 5 φ φ
Φ χ Φ Φ *
Φ
Χβ»
RH(1-29)bég) által kiváltott növekedési hormon kiválasztás gátlása patkány agyalapi mitigyaeilek szuperfúziós rendszeren az 3-93-1
O-lrp-Cys -1 ne -D - Trp-Ly s-Thr ~ Cy a - Th r - húg; és az S-121
S-th. o - Cy s T y r --S 'Trp- tg s - t ál~Gy s -Th r -hű g ;
surctoeztatin-anslógok által a megfelelő cikotorikue származé~ keikhez ílg-· 7 :-;g93-b a«. zOggazzg képest.
A patkány agyalapi mirigy szuperfurics rendszerben a szórnat gsz tátim-eret. egokat 3 percen át adagoljak: 1 epéi. dózisban, együtt a hGÜ-kH(1-23}tag-vei. a szovatosztazzn-analógok infúzióját további 6 percen át végezzük. A GE-vátaszt az 1 rázol hGH-EH (1-29) NHg 3 perces adagolására a szomatosztatún—analögok perfúziója alatt (ö, perc} és az adagolás vége utáni 30., 60. és 90. percben határozzuk meg. Az adatok a 22-1, táblázatban láthatók ,
22-d . táblázat
s ζ o ma tor ζ n a. t i n ~ G3-kiválás ztás**
arra! egok Öt 33 . 60 , 90i. pév
S-93-1 2,9 91, ? I tt, 6
Üt 4Iqgss 0 90 öl, 7 -
3-121 7,3 62,2 57, 3 72, 9
^lA^Itl 3,8 33, 5 54,2 67,7
Az 1 nmői nGH-EB(1-29)PHg 3 perces infúziója által kiváltott, a szomatosztafin-analógok adagolása előtti GH-felszabadulás ·<··· á ba n ki f e j e z.ve .
23. példa. Receptorkötődési vizsgálatok cltotoxlkus *
»·«·.» :* « « ♦ » * ♦·»
Χ«Φ # ♦
X* bombaζ in-&ηtagonísdákkal
A ( Tyr'b Bb radioaktív jődizotópos jelölését egy Bio-Rad knzynobeaö Rádió Iodinatl.cn készlettel, a ( --t-bcik izolálát:3'. - z ->s és munkatársai leírása szerint végezzük (Canoer
Lecters, 35, Χ11-Ϊ18 (1 974)}. A jelzett f Tyr;C eb kötődését és a citotönikus bombezin-artagon:sta analóg, a lyi-'C?i általi kiszorítását kontinens Suiss 3T3 sejteken (az ATCC-töi} vizsgáljak a Cél és munkatársai (kroc, Pari., Arad. Col. C3A, 91, 12661--12663 (d.édá}} által mádonibott, orda és munkatársai ÍCC. Bioi, Cdenc 2C2, 11245-11220 (19371} módszerével. A telepítés után 3 - 5 nappal a kontinens sejteket kétszer mossuk HBSS.....tai (Ranks-téle kiegyenlített adóidat} és 30 percen át inkuháljuk 37 C nömérsékleten, 50 pmői ( i<-:-d-lyr'C BR-uel a jelöletlen kompét: tor töífe-gB: vagy Bh} kulönbözd kcncentraoröinsk jelenlétében vagy hiányában:, összesen v,o ni térxbgatö pútierben (ilhÉH 30 máéi SBRBB-sei., 0,1 á BBA-vai, 3 wtsl magnézium-klerídöal: és 10:1( gykml. has: tracinnai.; pH =- 7, 4} . A nem specifikus kötődést 1 nmöl jelöletlen iiganöum jelenlétében határozzuk meg. Miután háromszor mossuk jéghideg, 0,1 2 ESA-t tartalmazó SBSS-tal (pH - 7,4}, a sejteket 0,05 á trlpszin/0,53 mmől BőTA oldattal szaszpenziőba visszük és kémcsövekbe töltjük át. A radioaktivitást egy gammaszámié lóval mérjük Cíicromeó Systems:, rne., Rantsvilie,· Al,} . A kötődési adatokat hckhoison rádióirgandum analízis programjával értékeljük (C. .Pöarmaeo. áéthods, 14, 213-225 (1985}}. A 23-1.
táblázatban bemutatott io-értekeket Cbeng és árusait képletével számoljak ivrit, Anarma;zo.i. 22, 3099-3108 (1973)}.
3-1, táblázat' A oltstczíkns bnnóezln-antagonrsta Qp-^gB (2:~plrrol 1 r·o-DOXJ- z;-O~gi t~GIn~Trp~Al.a~Vai-G1 y~Η1 s-teu-JOH?-M} -keu-NH2' specif1kos kötődése a Sw1sa 313 sejtvonal bowzinreceptoraihoz a dombosinhez képest-,
Wgyű lei pl í néi
Booőezsz 1,2
A hormookonjugátumok és a szabad citotoxikus csoportok hatásénak és toxloztásanak összehasonlítása
24, példa, As össtrogán-fággatlen MkT egér emlőkarclnóísa (RS-49) kezelése 2-pirreXino~DQX~szal (Qg), a exfcotoxxkns AH-RH agonlsta analóg Qg^gL-Iei (ÍD-Lys^lLH-RH a Qg^^-Ö-hemlglataráf” hoz kapcsolva) és bOX-szal
A eitotoxikus donor vbl ott--szármáz ék Qs, ennek cél 2 ott oitctoxj-kus pepiid-konjogatorna (Qp-^qio , valamint a jól ismert rákellenes szer, a úOX tumorgázió hatásának ösazshaaonXitása., és az aoagolán optimális módjának, valamint a nem toxikus dózisok meghatározása érdekében LH-kK receptort hordozó dXX (1,2) tumordarabkákat (I mm-) rmpiantálunk szubkután nőstény Bpigt'l egerekbe. Egy nappal a transzulantálás ntán az egereket véletlenszerűen Ötbe csoportokba osztjuk és megkezdjük a kezelésűket, A vegYbleteket ő, X %-os trifloor-eoetsavban (ph - 2; feloldjuk és intraperitoneáliaan adjuk be. A csoportokat, kezeléseket, a kísérlet lefolyását oa a dózisokat, valamint az átlagos túlélési időt a 24-1, táblázatban főutat jók be, Az eredményeket a 24--2. táblázatban, és az 1, ábrán foglaljuk össze.
st .szein
ΑΧ Φ η
*:»: ΦΦ *:*:
X φ Φ X Φ
ΦΧ* φφΦφΦφ
X Φ « φ·
Φ* ΑΧ *:♦:
Α 24-2. táblázatban látható a Qg-tai és a cit.otoxik.us LH-EB analóg Οη^'ϋΐ-Ιοί végzett kezelés hatása a tumor térfogatára és az ösztragén-rleget ion emlörákos egerek túlélésére. Amint az a 24-2. táblázatban iárhato, 1,25 rabi Q§ az 1., 2., 7., 8., 14.
ás 15.. napokon adva (2. csoport; erős taxi cl tás t matatott; az átlagos tűiérési idő 17,4 nap, ami jelentősen rövidebb, mint a kezeletlen kontroli csoporté. Ezzel szemben az ugyanígy adagolt yü. íg. csöbört) átlagos túlélési ideje 30, & nap, amely szignifikánsan hosszabb, mint a kezeletlen kontroll csoporté. A QrJ-ZigL nagyobb hatásosságát a Qy-hoz képest a két csoport átla·.. s r... ' , a;.' < ; ’ - a csoport: üti mmd a 16. napon;
5, csoport;: 853 né a 31. napon) Összehasonlítása is brzonyitja.
Hasonló következ te tésekre juthatunk a Qy és a Qy-^yk osszahasor.ll tásáva) más kezelési, program esetén ís, ahol 3,5 nmei hatóanyagot adagolunk öt napon át egy héten, három héten kérészen 1
A döxorublcin toxikus dózisa (reijes mennyiség 1560 nmei, átlagos túlélési idő 20 nap) nem tudta felszámolni. a tumort, még a deÁ 4gk nem: toxikus dózisával ; tel jes mennyiség 7 omol, átlagos túlélési idő >31 nap) végzett kezelés eredményeként az öt állat . két áll atban, nem fej lődd tt ki a tűnőt..
«ίψχ A φ* Χ« * « φ ««« φχ* *»» φ: φ :·«»:♦.»: χ Φ <
* χ Φ Φ Φ χ λ φΦ
24-1. táblázat
port s;toPs Kese- les tézis / in). létéi.) Dóris/ iel, ipp) χοχχ Oet Xspss ·; r> ί 1 Késelés Peték telkes kopott tiéne y , át Le ges tálé lés: lnne)
I. Kontrol1 2 2
·> >·.. , lg Ί '3'.' :J. / ZZ 1,33 /3 :C 3 1,5 33,5
d 3, 5 9,3? § 2 9 ··,· :< .· / Z X3,s
4. 9, 3 5x 3,15 3 •y j 5 X i, ó
5 ., lé 2 9,15 5 ·.> 3 33 lapé
ék ági4pX 1, 35 3, 3 3 9 •s 7 A .5 0, 5
7 ., 1, 5 X, XX s 2 z 7,5 Mj
a. 3, SIÓ 3,33 3 ·; 3: 9, X Oj 4
ti 5, 35 5 .< 3 31 13, 5
10 3, 5 0 y 1.4 X. 5 •r >31
ti. 4 5?. z c: X e y. 3
13. 5 XX, t X: s 2: XS 13,4
13. 05 X 53! 339 1. él 3 ..ésS díjé
*A 2 - 12. napokon a dózist 2,5 rotál- ra nmeitök, A 9 - 12. rapó
kon a dózist 5,0 noci-ra emeltük.
fc X fc«X fcfcfc * * « x fc fcX ·ν> $ * fc X β fcfcfc fcfcfc
A. ©só $»;:t e ZíÚksí Ke;:i- 3 is tll/ili ön) <3 Iné > hát inlői; 24-2. táblásat lelj: 215© ίίϊίΚΒ SS
;fe/5c:l la) - liléit Késéit© Kezek
í ., Köfeti'oili.
7 lg 5,55 3: 5 3 3, '1
6. 1 '2 5< '? •λ, t. :<. 5 3 3 •y 5
3 v * v 3,3 S :2 3 7 5:
'? A ir-’M 5,5 3 •7 % ·'' > c:
ti?,: ι34<ό· .3,5 3 5 2 Ί·'.
12: . ir-bgt S,5ö 1 6· '2 ö?9
13. t:3X 123/ 1 í< isit
24-2 , táblázás (folytatás)
A í'l’l Ks.se- légii íssö/fe- bírás áböazífes; 11® 133:5551 115512
5S/55 25s léi/lsia i Π6φ j: a: ansles sild 5 25Iliiéi
S 2:lsl fevsfe; isatii 7 >1 .·.·:«-· . 33.. sasén
3 ... Koí’ít Ilii 3 5323 25 .2 2,6:±3, 6 5 5
·'; ;'· .«ja 33 55 5 5 5 3,45.5 ,2 5 6
1. yyl45L· g 55 33 3/9/, 555,4* * 2: 5
fe Öv 2333 12 5 3,636,3 5 5
·] Ο§1;59?3 3/9:33 32 26,/633, 6* * 1 3
2.5. 665 35 :: /•33* * 4 7
'1. 5 /55 15,4 5 3
33.. 35X 3/5:6/5 23 16 ö. 0
Λ X ,φ * Φ *ΧΛ *Φ * ί« * φ φ φ Φ φ ♦ «-> φ. V Φ φ ♦ *· X- Φ ** φ·» ' * A túlélés szignifikánsan hosszabb vagy rövidebb (ρ<0,01 vagy P<1,Cl; Dunnán-próba;
25. példa. A DOX-sza.1, a T-1Ö7 citotovikus LH-RH analóggal és a Qy^gL-Xel végaatfc kaaalés bahasa az; és ahrogén-faggat lan
MXT egér emlöksrciftómáre (XS-55}
A vizsgáit vegyületek;
rgi égi; doxíorubd/oin-lé-S-heníigl.ufarát ( b-bys^ tii-Bö-hoz kt;n jógáivá
T-107; h-gi ut a ri I -dovorobicin ( D-hys^l LH-BH-noz kon jogéivá í B ro ·.;;. ha ti, Ac a o. Bt1. USA, 89, 972 -97 6 (19925 5
ÜŐX: doxorubicxn
A kísérlet lefolytatása a következő.
A maximális tolerált dózis megáiiapitása és a hatások osszehasonlítása ér de kében KJ (3.2; tuhbcöé<rabkák.at (1 tóm} lmp tantálunk szubkután nőstény BgEgFl egerekbe. Egy nappal a beültetés után aa állatokat ötös csoportokra osztjuk és egyetlen ip. injekcióval kezeljük. A csoportok és dózisok a 25-1, táblázatban láthatok. A táblázatban féltőntettük azon egerek számát is, amely, akton tamor volt a tumorok térfogatának mérésekor, és az átlagos túlélési időt az egyes csoportokban, A tamortérfogat változásai a 2 , ábrán láthatok, á vegy illet eket Cji fFA-ban oldjuk fel (pH ~ 2,0). A tömöttértogatot. a iö., 13., 17. és 2C. napon mérjük.
Amint az a 25-1. tábláz; áu-n és a 2. ábrán Látható, a X-1C7 <{ D-hysbj hh-RH b-glutarli-DüX-ssag. konjugálval teljesen hatástalan a tumor növekedésére 350 nmcl/Sö g egér dözrzoan. Ezzel szemtan a Qy -L^gL (; ö-LysM 1B-RH 14-O~gie.rar 11-DöX-sza.l konjugálva; erős: tumor.növekedést gátlód hatást mutat (ábrái a nem tóul* * *·* * φ * «χ xx *♦ χ Φ * X ΦΦ* -X X X Χ*Φ * * « χχ φφ φ* kts,: 350 nmól/20 g egér dózisban. A OCX önmagában erősen toxikus
(átlagos túlélési idő láb 6 nap) egyetlen^ 550 néei/W g egér dó-
zásban., és s ’z £ Crni. ,S lkánsár kevés né hatásos, mint a On/'* gú (2. áh-
Λ. Cl ί o 25-1. zabla zat
Csoport özls Tumo ro s e g<a re k / .Átlagos
/túlélő egerek túlélés
hméll eg/ goéi/ 10. 13. 17, 2 öt (hap)
/20 g /20 g /kg napodon
i, bontroli 3/3 S/á 5/5 5/5 21,215,3
r, bgWú 68 0 1520 34 1/4 2/4 2/4 3/4 28, Oz/;//
5,3125**
3. /ptol 710 1537 13,5 2/4 3/4 3/4 3/4 26,02663
2,0134*
4. Cgi'-gp 765 16 38 3 δ 3/5 4/5 4/3 sio. cin.
5,. 10X 55ö 417 32,5 3/3 2/2 1/1 1/1 13, 612 5
E. 0CX 700: 4 Eb 35 2/3 2/3 2/2 15,2124
7 . PO X 756·' 493 37;5 1/1 7,éli,3
3. 7-107 710 1676 Alá 5/5 5/5 5/5 4/4 21,3105
9 , 1-1S ~ §55 1100 44,4 5/5 5/5 5/5 4/4 21,5167
oly; elpttt' ti tva
*A túlélés szignifikánsan (ρ<0, 64b révidebb, mint a kontrolié
>:t·. túlélés szi g η1fi kársán ho sszabb )p<0,0l; vagy (p<5, 05) a
kontrolihoz viszonyítva (egy~egy egér elpusztult a 2 , napon,
ezért ezeket k i hág yt uk a két csoportnál),
26. példa. A el bo toxikus LH--RH analógok hatása aa osmogénfaggafcXea *30 agár «flórákra (KS-47)
A kezeléshez használt vágyé letek a következek..
Egy korábbi kísérlet szerint a Qg 20 nőéi napi ögzisban, 11 napon át adva csak mérsékelt tnmornövekedést gatlö katá.st mutat, és 40 nmei dózisban toxikus (az átlagos túlélési zen 14,6 nap}.
et/Sía/íi *
4?
* * ♦ * # < ·♦·♦.♦. «·** # * * « » ** »9 * « Μ
9 ♦ «» ** X*
Ezért, ebben a kísérletben 80 nméi~os dózist választottunk, amit a ggüyL :g a | D-lys^j lh-8H-hcz konj ugálvs; , a Qg {pirrcildinc~öoxorubzcin} , a í ő-fysk LE-EH és a [ ő-Lys^} LH-RH a gy keverék hatásával és toxicitásával hasonlítunk Össze.
AXT <3.2} tumorbarabiakat (1 mn-1 implan tálunk szubkután BgDyFl nőstény egerekbe. A kezelést egy nappal az implantáció után kezdjük és 12 napon át folytatjuk napi egy rp. Injekcióval. Az összes csoport ekvimolárls mennyiséget kapott a vegy tietekből, amint az a Itt. táblazátban látható. A tumorokat a 10.,
14. és IS. napon bérjói és kiszámítjuk a térfogainkat. Az adatok a 26~i. te'·' -t .teán. ;v _k uti<o tt'.b.x.
A: Őt iímólinap: dózist, daunozaminon módosítóik doncrubiclnanalöggal (Qy, pirroiidino-DOX} végzett kezelés erős tumor·növekedést gátié hatást eredményezett (tumortérfogat 144 mit- a 14. napon, szemben a kontroli csoport 1391 mm^-es átlagával}, de az állatok súlyos mérgezésben elhullottak a kísérlet vége előtt (átlagos túlélési idő 1'?, 9 nap} . Hasonló módén, a Qg és a [ n-Lysl LH-'RH keveréke turzcrgátiő hatást mutatott (tumor tér fogat 81 mmd a 14. napon}, de az átlagos tóiérési idő (18,6 nap} ©zignifIkánsan rbvibebb, mint a kezeletlen kontroli csoporté (23,1 nap}. A Qg-^gl-lal végzett kezelés eredményeként két állat hullott ei csak, az egyik a 16., a másik a 26. napon, A 8 thiélö állatból csak egyben fejlődött ki a tumor a 18., utolsó mérésnapra, és mind égészségesnsk látszottak, bár később mindben megindult a tumor növekedése. E csoport átlagos túlélési ideje szrgnifikánsan hosszabb volt (26,3 nap·, mint a kontroli csoporté. A [ D~Lys'b Fh-RH-vai önmagában végzett kezelés nem. befolyásolta a tumoráévekedést.
Ez a kísérlet azt bizonyltja, begy a Qgi^gl nagyobb haté*x ♦·♦ » * 9
X * ** **
konyságe és alacsonyabb átlagos toxlcitása a Qy eitotoxlkus csőporthoz képest, a ciéotoxíkas csoportnak a célzott hordozóhoz, az XH-xH analóghoz kovalens kötéssel történő kapcsolásának eredménye ..
26-1, táblázat. A oitot.oxl.kus LH-RA analógok, hatása az ös z t regé n - függő t1 en AKT egét emlőrák növekedésére és a tumoros
egerek túlélésére
Kezelés Dózis Egerek Átlagos tumor- Átlagos fúl-
pg. / n ap s z ác a térfogat imm-g élés a be-
lö, 14, 13. ültetés után
napokon (napokban)
1 . Kontrol1 15 233 1391 4794 2 3,1
2, gyWgh és, 7 ID 3 3 lé 23 23,3*
3 < Oá 21,3 10: 1S3 144 137 17, 9
4-, f b-bys'íb bH~RA 0,2 12 l.é'S lkáé 4 2á3 to, 5
5. í. C-Lys6] LH-RH 43,5- 10 121 SÖ 27 13,5
+ Oá 21, 3
Az összes napi dózis 3c; nmól-nak megfelelő mennyiség volt.
* S: z i g n i f i k án s a n hess a abc, mint a kon t rol lé (ρ < 0,01, Don c an próba!
27. példa. A 2-pirrolinö-DÖ3£ (Qg) és & dtofedscikws LH-AH agonista analóg Qg^gt (Qg^-O-hemiglut&ráfct&X konjugéiw) hatása az aadrogénfüggd Sonning R-3327-H patkány p rosztata-karcinéma nove kodé s e re.
A hormonttggő tömbre K-3327-H orosz tata-karcinerát horeozc, him Copenhagen out m.nyokat Cb-fezb-iel, a iutelnizálő hormont felszabadító hormon ÍLK-Rh) egy át, cátotoxikus analógjával ·amely az agonista { i-ípt LK-RH-hoz kapcsolt 2-pirrolino-doxoru*« χ* Φ« '· * ♦ Φ * φφφ «♦« φ * χ· ”ί ί picin - kezelünk. Az első ktserletbec a 2“p!rra,tno-duxortbioznt 50 nmől/kg dőztsbat hatóanyagként (Qg) ős a í Ö:-l«ys·0} ŐH-RA hordozó vai nem kenj ng árva, keverékként, valamint a r.oroczőva! koniugálva (Qg^gld adtuk be- Az ezt követő második, 50 nmői/kg-os doz.ss hatáséra a Qg-ot önmagában és a keveréket kapott csoport Összes állata általános mérgezés tünetei között elpusztult, ®i;g a titofoxixus LK-Ak konjagátumot kapott állatok, mind életben maradtak. Az összesen 150 nmöi/kg Qg1^oL-lel végzett kezelés 5 hetit után a tumor az eredeti, 8,35 ± 1,7 emm-es térfogatnőd 4,47 ± 0,8 cm«~ne ősökként, míg a kontroli csoportban tovább növekedve, a kísérlet végére 1.7,84 t 2,2 om--es térfogatot ért el. A Qgá-ebes kezelés a tumor tömegét és kiterjedését is csökkentette, A. ΐΛ.-.nl rí s-Ί letoen, sm^’tnvk célja a ez és ögJ'4gb hatásosságának és toxioizásának összehasoniifása volt, a terápia 25 nmcl/kg dg és 50 pmó!/kg Qg-^^gt háromszori leadása volt, A kezeién kezdetén a tömör térfogata minőén csoportban. 3,2 - 4,5 esd volt. A kezelés 5 hete után. az 50 nmöi/kg Qg-^gf-lei kezelt patkányokban a tumor térfogata 2,3 ± 0,51 om;:-re ősökként, míg a 25 nmol/kg Qg még mindig toxikus; volt és csak 6,70 ± 1,4 cmi-re cs dkken tette: a végső tnmortérfogatot, hasonlóan a 25 nmöi/kg Ίη^οΐ-ηοζ fő, 74 ± 1 cm-l, szemben a kezelőt len állatokban mért 15,6 ± 2,2 ov--rel, & r -· - ’ ' <d la n , 5 v o , r ' -G i ->' +, -> . , i r 'csökkenését egyedi! a ön--lel kezelt csoportban mutatta ki. A kezeletlen benning tömör®infákban nagy kötő kapacitású IH-Rü receptorokat lehetett kamutatni a sejthártyákon, de a kezelés után mar nem találtunk kötőhelyeket, A tumor növekedés gátlása Ad-2111-gyei. és ögj-^gL-lel az EGA-receptorok kötökepesséyének szignifikáns csökkenésével is jár. Amint az a 4 - 6. ábrákon látható, a Qíb^gL célzottan oitofoxikus rd-Hh analóg egy hatásos
SS. SS; / SS:
* * *« * » * y * * * ♦ * « * * » * * * * «*»· »#♦ *Φ* * X ♦*«* » * X
50: ·· » »· ’» «* tumoréi. lenes natóatyagu amely a ilunniny' R-3327-H patkány présttata-karoinőma vi.sszafejludasét okozza. Azt is kimutattuk, hogy a citotoxükun LH-hu analóg Qyó4gb sokkal kevésbé toxikus, mist a tumorellenes hatású, heleép.tfett ág csoport, . íuooo,. ..·,? jobban gátolja a tumornövefcebést,
Magyarázatok a 27. példa ábráihoz.
4. ábra, 1. Kisérletu a Dunni.ng R-3327-h patkány orosztana~kar~ oiuőmát hordozó, hím Copenhagen patkányok tumorának térfogata a kezelés során, amely 50 nmei/kg· agonista } ó-l.ys't lö-RK és 50 nmöl/kg uitozoxrkus kh-Eü analóg dg-igl háromszori adagolásából állt, A függőleges vonalak ,v u hu: hibáját tüntetik fel. *p<O,öS; **ρ<ό,05 a kootrollhoz képest, hatóan-próbával vizsgálva, A. kezeléseket nyilak jelzik az 1.., 5. és 22. napokon. A kereszt az elhullott, állatokat jelzi a 2, héten, a Qu-tal vagy a konjogálatlan keverékkel végzett kezelés hatására. Ebben a két csoportban a tumor térfogatát a 8, napon határoztuk meg.
1. ábra. 11. kísérlet: 25 nmöl/kg 2-pirrellno-donorubicín (dg), nmői/kg· és bő nmei/kg oá te toxi kos ha-RE analóg y.gf-gi hatása a Dnnning 8-3327-0: patkány prosztata-karoinéma térfogatára. A függőleges vonalak az átlag hibáját jelzik, *p<0,05 és y*p<O,öl a kontrolihoz képest. A kezeléseket nyilak jelzik at I,5. és 2 3. napokon .
. ábra, 11, Kísérlet: 25 nmói/kg 2-pirroiino-őoxerubicln (Qg; , nmól/kg és Su nmói/kg citotoxikus 1.2-8E analóg Qzá^ge hatása a Dnnning E-3327-R patkány orosztana-karóinótát noroozo állatok testtbmegére:, A függőleges vonalak az átlag hibáját jelzik. *p<O,Oő és **p<O,őI a kontrolihoz képest. A xezeioseket nyilak jelzik az 1., 8, és 22. napokon.
* ♦·♦·» * ·»« X? »» * ♦ * * * * * * » ♦ *KS **« Χ«Φ * χ *.*»* « * <fr * *♦ ¢- ♦* «♦ «#
A DOX és a célzottan citotoxikus LRARB analóg hatásának bsszehasonlitö vizsgálata az OV-löő3 humán. pebsfóazak-kaxcinóma növekedésébe csapass egérhee
As 0V-I283 humán, epiteiiái.i.s petefészekrák sej tusnál egy 57 éves nő petefészkének áttételes, paprilárrs tisztaáeno-karcinőmetánéi eres (horovitz es munkatárséi, Oncclogy, 42, 332-337 (13854;. áz OV-10S3 lö millió sejtjét injekciózzuk szubkután hárem csupasz egérbe, hegy kiváltsuk a tsmornővekeöást. Egy mm--es tumordzrabkákat imp taxit álunk 14 állatba az in vifro növekedésgátlás vizsgálatához. A kisériet célja annak, bemutatása, hegy az nk-Rü receptorok jelenlétének következtében az öt-lCd sejteken a cl tetőzi kus L.H-R.H konjugátum hatásosabb és kevésbe toxikus, mint a DOX, a hordozott citotoxikus csoport. így tehát a ci.tohoalkus L«~RR konjugátum hatásét a DOk-éhoz, a EOX és a hordozó molekula keverékéhez, a htreozóéhoz és a kezeletlen kontroll csoporthoz hasonlítjuk. Az összes kezelést ip. injekciévai végezzük. A vegyudetefc 3,5 tömeg %-os fiátrium-klorid-oldatban oldjuk fel .
A körülbelül 15 ima- átlagos térfogatú tumorokat hordozó egereket hat csoportba osztjuk egyenként 3 állattal, amelyek a következő kezeléseket lápját az implantáció utáni csoport' fiziológiás sóddal; 2. csoport; t'dt testtömeg; 1, csoport; Qdtgh, 413 nmói/20 g testtömeg (a DOX maximális eltűrt dózisa, KTDj j 4. csoport; Itt, Ili nmöl/21 g testtömeg iMTDj; 5. csoport: 7(ti nmói/20 g DOX és 70Q nmei/23 g testtömeg [ D-tyső i2h-Ae keveréke; 6. csoport; ( D-Lyső EH-Rm hordozó agonista analóg, 720 nmed 120 g testtömeg· dóéi ab an.
Az 0:V-100:3 recept órainak vizsgálata kimutatta az uü-EH nagy afiini táeh köhöhdveit.
t napon; 1. 30 nmől./20 g
Ψ4»·».* β « X > * * * * « * W **♦ ««« ·«** χ * ««:«» « «γ « « ς·} ** ♦ X* 9 9 *βί
Amint az a 7, ábrán látható, a tumor növekedésének eres gátlását értük ei a im^zt 413 árnál/ 20 g testtömeg dóméban végzett kezeléssel ni. csoport}. Az állatok nem matattak súlyos mérgezési tüneteket. Kezei szerűben a DOX 413 zmöl/20 g-es dózisa (12: mg/kg, MID, 4 . eaopert} sem eredményeze t1 sz1goif1kans tnmereövekedés-gátlást a három állatban, -'hv' ' a < a kísérlet végét. Három állat az 5. és 1 a 5. napon pusztult ei mérgezés következtésen, A erre sa;/' hozásban (7üá nmól/rö g, 2. stopért; a vg 4^gb Ígér erét tűmet; neve kedést gátié: hatást: mutatott ('7. ábra; . A 9 állatból kettő mérgezésben, egy pedig balesetben pusztult el. A hat túlélő állat felépült a körülbelül 20 1-os tömegesökkenésból a kisér let végére. A 0. csoportban a 700 nmc.l/lú g DOX és 700 nmál/2ú g j b-éúss®! áh-Rá 'keve rért el, a osepert minden állata mérgezésbe;'; hullott el.
Következtetésünk szerint kísérleteink világosan foizenyitették, begy az 1H~AH receptoroknak az OV-löül· epiteliáiis: petefészekrák sejtjein való ieienléte következtében a célzottan oltstozikns AR-RH kongugátum (ζρ-^οΑΙ kevésbé toxikus és hatásosabb sutitumor hatóanyag, mint a donorabicin iQo1, a konúugátumban lévő eitotoxikus csoport.

Claims (5)

1., Egy (1) általános képietű vegyüíet, (lj amely képletben
Q jelentése a Cili általános képietű csoport
E jelentése egyes kötés vagy egy -€ (0) - iCH2I) a· bános képleté csoport ? amelyben ama— n értébe 0, 1, 2, 3, 4, d, 6 vagy 7 lehet;
E’ jelentése sminocsoport., vagy egy aromás vagy telített étvágy hattagú heterooiklns, amelynek gyűrűjében legalább egy nitrogénatom van és adott esetben van egy butadién-csoportja, amely a gyűrű két Szomszédos szénatomjához kapcsolódva egy bíciklusos rendszert képez; és
E jelentése hidrogénatom vagy egy paptidesoport, azzal a megszorítással, hogy anennyihen E' jelentése aminocsoport, ügy
E~P jelentése hidrogénatomtól eltérd és amennyiben
E-P jelentése hidrogénatom, úgy E? jelentése aminocsoporttci eltérd v
2. az I, igénypont szerinti vegyüíet, azzal jellemezve, hogy R·' jelentése a következő csoportok egyike; smlno-, plrroizd_n~ *·*'. * χ * .#·*« **« * * *« ** te Jt **# ♦ * <«i
-· I. ~ 1 1 ~, 1 ζ ο i n do 1 in- 2 - i 1 ~, 3 ~ ρ 1 r ro 1 in-1 ~ 1 1 - , 3 - p i r r o l i dón -1 II™, 2-pi rrolin-l-il 3~piperidon~I~ii~ vagy 1,3-tétrahidroprridiη-1-il-csoport, és jelentése py, Pg vagy Pg, adni £’i egy Aas-Bbb-Coc-Ser-Tyr-D-bys CXxx} -Leo-Arg-Bro·-- Ddd általános képletű LH-PH analóg, aataiy képletben Xxx jelentése hidrogénatom, dramino-vajsav vagy diasfino-propronsav., ás ahol da Aaa jelentése Glp, akkor Bbb jelentése kis, Coc jelentése Trp és Bdd jelentése Gly-dHg;
Aaa jelentése Pc-D-dal(2j, hc-D-Phe vagy Ao-C-Bneíl-Cl), akkor Bob jelentése P-Pde(i-ti} vagy D-Pne, Itt jelentése D--Palé3) vagy B-ley, és ódé. jelentése C-Aia-bHg;
ás da áas-Bbb-Crc jelentése As, akkor Edd jelentése egy -dfí-CHp-CHg csoport?
ahol a i-:'--l-3 csoport egy karfooxaeid-kötést létesít a t-igs szabad aminocaoportjával, vagy a oiamino-vaj sávvá gy o i am;. η ο- ρ rop .1 on s a v s zabad ami no o s opo z t j adnak lég ~ alább egyikével, ba az Xxx csoportként jelen vannak;
Po ‘-dk éaa-Cys-Bbb-O-Trp-tys-Cco-Cys-Sdd-dHg általános képleté sroestosztatis-analóg, amely képletben na.
Aaa jelentése O-Pbe, akkor Bob jelentése Tyr, Coc jelentése Val és Dód jelentése Thr vagy Pro? és ha éaa jelentése C-Trp, akkor Sbb jelentése Pde, Coc és
Bdd jelentése Thr?
ahol a á - e 1 ’3?μ·ι; Λ?.:?'’ az
Aaa csoport terminális aminocsoportjavai;
?y egy éaa-él n-irp-éia-éal-Gly-iíis-neu-Bhb-bHg áltaianos kép I e t ü bőmbe zi n -an tagon 1 s t a ana 1 óg, ase 1 y képi ötben Aaa jelentése semmi, D-Tpi vagy D~Phe, és
3bb jelentése (Cár-bÜ)Len, (Ghy-kü éhe, (Cuy-ha 5Trg, (PSp-lPTao vagy bíb'-iWac?
ahol a Q-^-O-R csoport: egy karfooxamid-kötést létesít az Aaa csoport terminális aminoesoportiával, ha Aaa jelen van,· vágy a Gén téétónália áré nőén épért jávái, he: éaa hiány ti k.
3 , A 2 . igénypont szerinti vegyület, ástál jet. lemet ve, hogy n értéke 3. 4.. A 4. igénypont ; szerinti vegyület, azzal jellemetve, hogy 1b jelentése aminocsopta 11. s. a 3. i génypönt ; szerinti vegyület, azzal j e ileme zve,. hogy kz ielöntése .M' r “-pírról in- é~il-csoport. 6 . A 4 . igénypont szerinti vegyelet, azzal iellemezve, — hogy P jelentése él> 7 . ét 5 . igénypont s zarInti vegy ület, azzal j e 1 reme zve, hogy P jelentése 8l- 1. é éh tgénypont szerinti vegyület, azzal. t elreme zve, hogy P jelentése pé V rí 9, Az 5 . igénypont szerinti vegyület, azzal jeli eres zve, hogy P jelentése Pr - e- lé. A 4. •η: üt y Ό ín i·· rt:- £· igénypont n·.-, szerinti vegyület, aszal jellemezve. hogy 1 11. ér 3 r * . igénypont szerinti vegyület, azzal jellemezve, hogy A jelentése 71.
:>.G b .·: j,pi.
12. Az 1. igénypont szerinti vegyület, azzal jellemezve, hogy ha
R~P jelentése egyaránt 'hidrogénatom* akkor 7 jelentése amin orsómért tar. eltere,
13. 7 12, igénypont szerinti vegyület, azzal jellemezve, hogy 7 jelen t e s e g r r r o: i i d i η -1 - í i ··· c s op ott,
17. A Ízt igénypont szerinti vegyület, ázzál jellemezve* hogy 7 j elenzés e i zed prolin -2 - i 1 -seeeoz i IS* A 12. igénypont szerinti vegyület* ázzál jeilapezve* hogy 7 je ierzésá 3 -pár roh i n.- 1-11~cszport..
lé. A 12, igénypont szelt hál vegyület.., .azzal jel len® zve.,, hogy 7 j elán t a se ü - p Írrel idő n -1~ i 1- c. roprrrt.
17. 7 17. igénypozZ ezer inti vegyület, azzal lelievezve* hogy 7 jele rt e se 2 -pl. r r el in -1. ~ il ~ e seper e.
18. A. 12. igénypont zzerihti vegyület* azzal jellemezve* hogy 7: jelentése 3~piperidon-l-i,l-oarport.
le. 7 12.. igénypont szer inti. vegyület* azzal jel leráz ve* hogy 1 jelentése 1*l-tetr&hidropirrdin-1-ii-osöpört.
21. Az 1, igénypont szerinti*
Slp-üls “Irp ~ Ser ~Tyr-tj-iyz 77 -1---7---gitj ---700-100---110---13. y ~7üy képletü vegyület, azzal jellemezve* hogy Qy®® jelentése donotu--él c in ~ 1A -11 -eztgoiz..
21. áz 1. .igénypont szerinti* aip~ö i s ~trp~ Sar~lyr ~z® itt Üg re -,ρ- gy y -yen-Arg- 2te-é.i y ~ü hg képiéin vegyület.* azzal jellemezve,· hegy lg14 jajeetége 7 ~1©ζanlno-S7 - <2 ~pirroiin~i'---il) ---donoron! cin-17-ti -csoport..
22. Az 1. igénypont ezer inti*.
* í...................................................... ......i yy l -p-glt~ü:-Ahe—üys-lyr—n-lrp-lye-yai—t.ys- tár—hág
-étit; '-o/lr, azzal jellemezve* hogy Qpi4 jelentése doxcto♦.·» «φ φ ** *Φ Φ··φ * * * Φ Φ χ φ * * * ***· ΦΦ* Φ*«
Φ. « Χ*ΦΦ Κ φ Φ X ν ίζ·-; '** φ. ΦΦ Φ* bioiη-14-11-ο sοpert.
23. Az 1, igénypont szerinti,
........................................................................1:
Qr^^-O-git-'D-'Ene-Cys-Tyr-o-Trp-Lys-'Voi-Cys-Ttr-bn^ képlete vegyület, azzal jellemezve, begy jelentése 3' -deza zni η o ~ 3' -.(A -pi r r o i i η -1 '· ~ il, - de χ o r ab i e i η -14 ~ i 1 - o a op o r t.
24. Az 1. igénypont szerinti,
I............ ............................ I
0 y 19... g - g χ y - ρ - m r p - C y s - é r. e - o - T r p - k y s - Tn r - C y s - in r - bég képletű vegyület, azzal jellemezve, begy ζη-ζϊ jelentése doxorublein-I
4-11-eaegot'fc23. az 1,. idédyponi szerinti,
5 ............................. ...................ii
Qy n 7 -S-gi t - P ~Trp -ilyo - bha:~b~Tkp-by o - i a z~dye -Ah m-teo képletű vegyület, azzal jellemezve, begy Qg-^ jelentése 3f -dezamino-3? - (2 -pirrelűn-l -ii) -üoxortdici η-14-i I-csoport..
26. Az i, igénypont szerinti, ι ..................... .....................=
Q: £ z s ...g _ g : ·ί· _ g.... p·;·, „ C y S ~ 1Vt ~ 0-7 r p -.... V S ~ A .. A y í ~ ’lr p~ Üli 2 képlett vegyület, azzal jellemezve, begy Qgj·'* jelentése donortbio i n-14-i1-o s eper t,
27, Az 1. igénypont szerinti,
;........................... .......................~s g g 71 -o -g 11 - D- 2 he - C y s - i y r - b - 2 rp - Lys- V a I - C y s - T t o- b 2 y képletű vegyület, azzal jellemezve, hogy QA·1* jelentése 3?-dezamino-3' - í 2f? ~pzrro A.r- A -il) -doxortioicin-l4- ii-csoport.
28.. Az 1. igénypont szerinti,
g., ti ..<....yit-Gin-7Ap-Aia-Val-Ό y-Hie-Let Ak-mü Len-NHy képletű vegyület, azzal jellemezre, hogy űii<3 jelentése donort··· bioin-14-11-csoport,
29, Az í. igénypont szerinti,
0?4-O-glt-Gin-Trp-Aia-Val-Giy-Hls-leu : C?b~kö} Leu-KK·?
képletű vegyölet, azzal jellemezve, hogy a jé jelentése 3fdezamíno-37-(l^-pítrolldín-l-!!s-doKorubicín-iá-il-csoport.
30, Az 1, igénypont, szerinti
Qé’-ö-git-D-Tpí-Gin-lrp-Aia-val-Gly-dis-Lea > CHg-hHj -Leu-NH?;
képlete vegyölet, ezzel jellemezve. Hogy Qy^ jelentése donorobic iη-1«- í1-csoport,
31, Az 1. igénypont szerinti,
Qg'-Q-glt-D-Tpí-Gin-'Trp-Ala-Val-Gly-Hís-éenioig-dHlLeg-ÖIb képletű vegyület, azzal jellemezve, hogy Qi14 jelentése donor né 1oiη-14-11-cseppr t.
32, Gyógyszerészeti készítmény, azzal jellemezve, hogy egy 1, igénypont szerinti vegyületet és gyógyszerészetHeg elfogadható vívöanyagot tartalmaz.
33, Az 1, igénypont szerinti vegyöletek alkalmazása emlősök r á k. be t eg s é géné k kezelésére szolgáló gyógys zer készi tmény élőéi ütés ára,
34, A 20, és 21, Igénypont szerinti vegyületek alkalmazása LHEH receptorokkal rendelkező humán tumorok, így az emlő-, petefészek-, mébnyáikádártya~, prosztatahasnyálmirigy' és vas t a gfoélrá k ke ze1é söre szolgálö gydg y s z e r ké s z í tmén y előállítására .·
35, A 22-27, igénypontok szerinti, vegyöletek alkalmazása szemetesztatin-analóg receptorokkal rendelkező humán tumorok, így az emlő-, gyomor-, vastag- és véghél- vagy prosztatarák, az aprósejtes és nem apröaejfces tüdőkarcínöma, a vesekarcin óma, csonté zár kóma·, és az. agy tumorok kezelésére szolgáló gyógysserké s z ítmény előállítására.
3β. .« 28-31. igénypontok szerinti vegyüietek alkalmazása GRP és bőmbe2in-típusú peptidreceptorOkknl rendelkező humán tumorok, igy az emlő-, gyomor-, hasnyálmirigy-, vastag- és végbél- vagy prosztatarák, az aprésejtes és nem; aprósejtes tüóőkarolnőma, a vese karc! nőma és az agytumorok kezelésére s z ο 1 g á 1 b g y ó g y s z e r ké s sí ítmény e I óé 11 i t és ára , é méghata ima sótt:
HU9903771A 1995-11-27 1996-11-14 Targeted cytotoxic anthracycline analogs HU229870B1 (en)

Applications Claiming Priority (2)

Application Number Priority Date Filing Date Title
US08/562,652 US5843903A (en) 1995-11-27 1995-11-27 Targeted cytotoxic anthracycline analogs
PCT/EP1996/005029 WO1997019954A1 (en) 1995-11-27 1996-11-14 Targeted cytotoxic anthracycline analogs

Publications (3)

Publication Number Publication Date
HUP9903771A2 HUP9903771A2 (hu) 2000-02-28
HUP9903771A3 HUP9903771A3 (en) 2000-07-28
HU229870B1 true HU229870B1 (en) 2014-10-28

Family

ID=24247176

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
HU9903771A HU229870B1 (en) 1995-11-27 1996-11-14 Targeted cytotoxic anthracycline analogs

Country Status (27)

Country Link
US (2) US5843903A (hu)
EP (2) EP0863917B1 (hu)
JP (2) JP3987575B2 (hu)
KR (2) KR100445754B1 (hu)
CN (2) CN1137136C (hu)
AT (2) ATE401305T1 (hu)
AU (1) AU709539B2 (hu)
BR (1) BR9611647B1 (hu)
CA (2) CA2238574C (hu)
CZ (1) CZ297297B6 (hu)
DE (2) DE69630233T2 (hu)
DK (2) DK1384710T3 (hu)
EA (1) EA001372B1 (hu)
ES (2) ES2310222T3 (hu)
HK (2) HK1017363A1 (hu)
HU (1) HU229870B1 (hu)
IL (3) IL134685A (hu)
IS (2) IS2178B (hu)
MX (1) MX9804119A (hu)
NO (2) NO324035B1 (hu)
NZ (1) NZ322054A (hu)
PL (3) PL188786B1 (hu)
PT (2) PT863917E (hu)
SK (2) SK284392B6 (hu)
UA (1) UA67722C2 (hu)
WO (1) WO1997019954A1 (hu)
ZA (1) ZA969709B (hu)

Families Citing this family (48)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US6576239B1 (en) 1996-09-10 2003-06-10 The Burnham Institute Angiogenic homing molecules and conjugates derived therefrom
US6180084B1 (en) 1998-08-25 2001-01-30 The Burnham Institute NGR receptor and methods of identifying tumor homing molecules that home to angiogenic vasculature using same
GB9814527D0 (en) * 1998-07-03 1998-09-02 Cyclacel Ltd Delivery system
JP2002530059A (ja) 1998-11-13 2002-09-17 サイクラセル・リミテッド 輸送ベクター
FR2786397B1 (fr) * 1998-11-30 2003-01-10 Synt Em Vecteurs peptidiques de substances a travers la barriere hematoencephalique pour etre utilises dans le diagnostic ou la therapie d'une affection du snc
FR2786398B1 (fr) * 1998-11-30 2002-12-27 Synt Em Composition pharmaceutique anti-cancereuse et anti-chimioresistance comprenant un agent anticancereux et au moins un peptide
US6833373B1 (en) 1998-12-23 2004-12-21 G.D. Searle & Co. Method of using an integrin antagonist and one or more antineoplastic agents as a combination therapy in the treatment of neoplasia
US6528481B1 (en) 1999-02-16 2003-03-04 The Burnam Institute NG2/HM proteoglycan-binding peptides that home to angiogenic vasculature and related methods
US6380161B1 (en) 1999-06-21 2002-04-30 Inkine Pharmaceutical Company, Inc. Compositions for treating chemotherapy-resistant tumor cells and targeted chemotherapy compositions
JP2003513756A (ja) * 1999-11-12 2003-04-15 アンジオテック ファーマシューティカルズ，インコーポレイテッド 放射性治療と細胞周期インヒビターとの組合せの組成物
WO2001049698A1 (en) 1999-12-29 2001-07-12 Immunogen, Inc. Cytotoxic agents comprising modified doxorubicins and daunorubicins and their therapeutic use
AU4267700A (en) * 2000-01-13 2001-07-19 Academia Sinica Application of somatostatin analogs to specific delivery of anti-tumor drugs into tumor cells
JP2004517034A (ja) * 2000-04-26 2004-06-10 バイオシンセマ インコーポレーテッド （神経）ペプチド結合ｒｇｄ（ａｒｇ−ｇｌｙ−ａｓｐ）
US7452964B2 (en) 2001-09-07 2008-11-18 Board Of Regents, The University Of Texas System Compositions and methods of use of targeting peptides against placenta and adipose tissues
US7420030B2 (en) 2000-09-08 2008-09-02 The Board Of Regents Of The University Of Texas System Aminopeptidase A (APA) targeting peptides for the treatment of cancer
US20040170955A1 (en) 2000-09-08 2004-09-02 Wadih Arap Human and mouse targeting peptides identified by phage display
KR100420007B1 (ko) * 2001-04-25 2004-03-02 노영쇠 안트라사이클린 유도체 및 이를 포함하는 항암제
PL369336A1 (en) 2001-09-21 2005-04-18 The Administrators Of The Tulane Educational Fund Diagnostic or therapeutic somatostatin or bombesin analog conjugates and uses thereof
EP1531846A4 (en) * 2002-02-27 2006-04-19 Us Gov Health & Human Serv CONJUGATES OF LIGAND, LINK AND CYTOTOXIC AGENS, AND RELATED COMPOSITIONS AND USE PROCESSES
WO2003074551A2 (en) 2002-03-01 2003-09-12 The Administrators Of The Tulane Educational Fund Conjugates of therapeutic or cytotoxic agents and biologically active peptides
US7544767B2 (en) 2002-04-05 2009-06-09 Burnham Institute For Medical Research HMGN2 peptides and related molecules that selectively home to tumor blood vessels and tumor cells
JP5000848B2 (ja) * 2002-05-21 2012-08-15 第一三共株式会社 グレリン含有医薬組成物
US8313760B2 (en) 2002-05-24 2012-11-20 Angiotech International Ag Compositions and methods for coating medical implants
PT1509256E (pt) 2002-05-24 2009-10-15 Angiotech Int Ag Composições e métodos de revestimento de implantes médicos
CA2497349C (en) 2002-09-26 2008-07-08 Angiotech International Ag Perivascular wraps
US20040225077A1 (en) 2002-12-30 2004-11-11 Angiotech International Ag Drug delivery from rapid gelling polymer composition
US20040202666A1 (en) * 2003-01-24 2004-10-14 Immunomedics, Inc. Anti-cancer anthracycline drug-antibody conjugates
US20050043215A1 (en) 2003-02-19 2005-02-24 Tamara Minko Complex drug delivery composition and method for treating cancer
AU2007221964B2 (en) * 2003-04-22 2008-12-11 Ipsen Pharma S.A.S. Peptide vectors
CN1777439A (zh) * 2003-04-22 2006-05-24 研究及应用科学协会股份有限公司 生长抑素的载体
US7097993B2 (en) 2003-06-25 2006-08-29 Wisconsin Alumni Research Foundation Method for identifying an agent that modulates type 1 phosphatidylinositol phosphate kinase isoform β661 activity
US20080132458A1 (en) * 2004-03-10 2008-06-05 Threshold Pharmaceuticals, Inc. Hypoxia-Activated Anti-Cancer Agents
US20070060534A1 (en) * 2005-06-30 2007-03-15 Threshold Pharmaceuticals, Inc. Anthracycline analogs
JP5340155B2 (ja) * 2006-09-06 2013-11-13 エテルナ ツェンタリス ゲゼルシャフト ミット ベシュレンクテル ハフツング 細胞結合分子を有するジソラゾールのコンジュゲート及びそれらの誘導体、新規ジソラゾール誘導体、それらの製法ならびに使用
EP1900742A1 (en) 2006-09-07 2008-03-19 AEterna Zentaris GmbH Conjugates of disorazoles and their derivatives with cell-binding molecules, novel disorazole derivatives, processes of manufacturing and uses thereof
WO2008100591A2 (en) * 2007-02-14 2008-08-21 The General Hospital Corporation Modulation of nitric oxide signaling to normalize tumor vasculature
US8742076B2 (en) * 2008-02-01 2014-06-03 Genentech, Inc. Nemorubicin metabolite and analog reagents, antibody-drug conjugates and methods
CA2721140C (en) * 2008-04-11 2016-02-09 Tianjin Hemay Bio-Tech Co. Ltd. Tetracyclic anthraquinone antibiotic derivatives with high activity, process for preparing the same and use thereof
JP5647971B2 (ja) * 2008-04-11 2015-01-07 天津和美生物技▲術▼有限公司Ｔｉａｎｊｉｎ Ｈｅｍａｙ Ｂｉｏ−Ｔｅｃｈ Ｃｏ．Ｌｔｄ 高活性アントラサイクリン系抗生物質の誘導体、該誘導体の製造及び応用
JP6067222B2 (ja) * 2008-07-15 2017-01-25 ジェネンテック， インコーポレイテッド アントラサイクリン誘導体コンジュゲート、その調製方法及び抗腫瘍化合物としてのその用途
BRPI1008039A2 (pt) 2009-02-20 2016-10-04 Ipsen Pharma Sas composto, mistura, composição farmacêutica, e, uso de um coposto, de uma mistura ou de uma composição farmacêutica
CN102050856B (zh) * 2009-11-03 2014-04-30 天津和美生物技术有限公司 具有高活性的表阿霉素的衍生物及其制备和应用
MX2013005972A (es) 2010-12-02 2013-08-09 Nerviano Medical Sciences Srl Proceso para la preparacion de derivados de morfolinil antraciclina.
CN105198966B (zh) * 2014-06-26 2019-06-21 中国人民解放军军事医学科学院毒物药物研究所 GnRH类似物-细胞毒分子缀合物、其制备方法及用途
EP3160518A4 (en) 2014-06-30 2018-05-23 Tarveda Therapeutics, Inc. Targeted conjugates and particles and formulations thereof
EP3045540A1 (en) 2015-01-19 2016-07-20 Æterna Zentaris GmbH Enzymatic process for the regioselective manufacturing of N-Fmoc-doxorubicin-14-O-dicarboxylic acid mono esters
AU2016343817B2 (en) 2015-10-28 2021-05-27 Tva (Abc), Llc SSTR-targeted conjugates and particles and formulations thereof
US10450340B2 (en) 2017-02-16 2019-10-22 Monopar Therapeutics Inc. 3′-deamino-3′-(2″-pyrroline-1″-yl)-5-imino-13-deoxyanthracyclines and methods of preparation

Family Cites Families (11)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US3725350A (en) * 1972-04-26 1973-04-03 Commercial Soluents Corp Polymeric substances comprising the reaction product of melamine, aldehyde and oxazolidines
US4299822A (en) * 1980-06-09 1981-11-10 Sidney Farber Cancer Institute, Inc. N-Trifluoroacetyladriamycin-14-O-hemiglutarate and -hemiadipate and therapeutic compositions containing same
US4464529A (en) * 1982-07-20 1984-08-07 Sri International Analogues of morpholinyl daunorubicin and morpholinyl doxorubicin
FI102355B1 (fi) * 1988-02-11 1998-11-30 Bristol Myers Squibb Co Menetelmä yhdistävän välikappaleen omaavien antrasykliini-immunokonjugaattien valmistamiseksi
US5217955A (en) * 1989-09-15 1993-06-08 Biomeasure, Inc. Treatment of cancer with peptide analog of bombesin, grp, litorin or neuromedin
US5304687A (en) * 1989-12-19 1994-04-19 Farmitalia Carlo Erba S.R.L. Morpholinyl derivatives of doxorubicin and process for their preparation
EP0434960B1 (en) * 1989-12-19 1996-09-18 PHARMACIA S.p.A. Chiral 1,5-diiodo-2-methoxy or benzyloxy intermediates
EP0450480B1 (en) * 1990-04-06 1995-06-21 The Administrators of The Tulane Educational Fund Somatostatin Analogues
DK0450461T3 (da) * 1990-04-06 1995-10-23 Univ Tulane LHRH-analoger
JP3169425B2 (ja) * 1992-03-27 2001-05-28 三共株式会社 アジドペンタンサイクリトール
US6214345B1 (en) * 1993-05-14 2001-04-10 Bristol-Myers Squibb Co. Lysosomal enzyme-cleavable antitumor drug conjugates

Also Published As

Publication number Publication date
HK1052920A1 (en) 2003-10-03
KR100467899B1 (ko) 2005-01-24
MX9804119A (es) 1998-09-30
JP3987575B2 (ja) 2007-10-10
EP0863917B1 (en) 2003-10-01
EA199800492A1 (ru) 1998-12-24
HK1017363A1 (en) 1999-11-19
PT863917E (pt) 2004-02-27
DE69637604D1 (de) 2008-08-28
SK62898A3 (en) 1999-06-11
US5843903A (en) 1998-12-01
CN1202903A (zh) 1998-12-23
CN1166597C (zh) 2004-09-15
PT1384710E (pt) 2008-10-08
IS8567A (is) 2006-11-09
CZ297297B6 (cs) 2006-11-15
IL134685A0 (en) 2001-04-30
DE69630233D1 (de) 2003-11-06
EP0863917A1 (en) 1998-09-16
CZ135798A3 (cs) 1998-10-14
HK1052920B (zh) 2005-03-04
KR20040037176A (ko) 2004-05-04
EP1384710A1 (en) 2004-01-28
CN1137136C (zh) 2004-02-04
IS2178B (is) 2006-12-15
SK284672B6 (sk) 2005-08-04
NO324035B1 (no) 2007-07-30
UA67722C2 (en) 2004-07-15
DK0863917T3 (da) 2004-01-19
ES2205067T3 (es) 2004-05-01
CA2238574A1 (en) 1997-06-05
ATE251179T1 (de) 2003-10-15
AU7572296A (en) 1997-06-19
IS4734A (is) 1998-05-05
CA2238574C (en) 2004-10-19
NO982252D0 (no) 1998-05-15
EA001372B1 (ru) 2001-02-26
EP1384710B1 (en) 2008-07-16
PL187230B1 (pl) 2004-06-30
IL119691A0 (en) 1997-02-18
PL188786B1 (pl) 2005-04-29
CA2471775A1 (en) 1997-06-05
ES2310222T3 (es) 2009-01-01
BR9611647A (pt) 1999-02-23
JP4778405B2 (ja) 2011-09-21
BR9611647B1 (pt) 2010-03-09
AU709539B2 (en) 1999-09-02
ATE401305T1 (de) 2008-08-15
PL191781B1 (pl) 2006-07-31
JP2007045845A (ja) 2007-02-22
PL326865A1 (en) 1998-10-26
WO1997019954A1 (en) 1997-06-05
NZ322054A (en) 1999-04-29
HUP9903771A2 (hu) 2000-02-28
KR19990071672A (ko) 1999-09-27
DE69630233T2 (de) 2004-08-05
HUP9903771A3 (en) 2000-07-28
SK284392B6 (sk) 2005-03-04
US6184374B1 (en) 2001-02-06
CA2471775C (en) 2008-01-29
CN1405127A (zh) 2003-03-26
DK1384710T3 (da) 2008-11-17
JP2000502055A (ja) 2000-02-22
ZA969709B (en) 1997-08-25
IL119691A (en) 2002-02-10
IS2634B (is) 2010-06-15
NO20051111L (no) 2005-03-01
KR100445754B1 (ko) 2004-12-08
IL134685A (en) 2002-12-01
NO982252L (no) 1998-05-15

Similar Documents

Publication Publication Date Title
HU229870B1 (en) Targeted cytotoxic anthracycline analogs
TWI253932B (en) Steroidal glycosides having appetite suppressant activity and the pharmaceutical compositions thereof
US7271160B2 (en) Methods and compositions for degradation and/or inhibition of HER-family tyrosine kinases
HU230380B1 (hu) N-Védett amino-hidroxi-adamantán-karbonsav és eljárás az előálllítására
CZ293113B6 (cs) Peptidový derivát
KR20230023059A (ko) 인슐린 저항성에 대한 개선된 펩티드 제약
UA45962C2 (uk) Похідні пептидів, фармацевтична композиція,спосіб стимулювання секреції гормону росту з гіпофізу
US6271342B1 (en) Sugar-modified cytostatics
JPH11512707A (ja) ソマトスタチンの環状ペプチド類似体
JP2020515547A (ja) 環境汚染物質に対する細胞保護効果を有するペプチド及びその用途
CN112237634A (zh) 抗体药物偶联物、其中间体、制备方法及应用
PT85881B (pt) Processo para preparacao de analogos da gonadoliberina com melhor solubilidade e de composicoes farmaceuticas que os contem
KR20230068832A (ko) 트리아진 유도체 및 이의 용도
AU748507B2 (en) Novel synthetic reaction and targeted cytotoxic anthracycline analogs obtained thereby
UA76474C2 (en) Method for conversion of nitrogen of primary aminogroup - or --hydroxy of primary amine into nitrogen of monounsaturated compound
CZ200132A3 (cs) Podávači systém
KR20070047576A (ko) 고나도트로핀 방출 호르몬 ｉｉ 작용억제제 및 이의유사체의 용도