CZ293113B6 - Peptidový derivát - Google Patents

Peptidový derivát Download PDF

Info

Publication number
CZ293113B6
CZ293113B6 CZ19961834A CZ183496A CZ293113B6 CZ 293113 B6 CZ293113 B6 CZ 293113B6 CZ 19961834 A CZ19961834 A CZ 19961834A CZ 183496 A CZ183496 A CZ 183496A CZ 293113 B6 CZ293113 B6 CZ 293113B6
Authority
CZ
Czechia
Prior art keywords
phe
2nal
lys
ala
aib
Prior art date
Application number
CZ19961834A
Other languages
English (en)
Other versions
CZ183496A3 (en
Inventor
Nils Langeland Johansen
Jesper Lau
Kjeld Madsen
Behrend Friedrich Lundt
Henning Thogersen
Birgit Sehested Hansen
Bernd Peschke
Original Assignee
Novo Nordisk A/S
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Priority claimed from DK143993A external-priority patent/DK143993D0/da
Application filed by Novo Nordisk A/S filed Critical Novo Nordisk A/S
Publication of CZ183496A3 publication Critical patent/CZ183496A3/cs
Publication of CZ293113B6 publication Critical patent/CZ293113B6/cs

Links

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K5/00—Peptides containing up to four amino acids in a fully defined sequence; Derivatives thereof
    • C07K5/04—Peptides containing up to four amino acids in a fully defined sequence; Derivatives thereof containing only normal peptide links
    • C07K5/10—Tetrapeptides
    • C07K5/1024—Tetrapeptides with the first amino acid being heterocyclic
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P25/00—Drugs for disorders of the nervous system
    • A61P25/28—Drugs for disorders of the nervous system for treating neurodegenerative disorders of the central nervous system, e.g. nootropic agents, cognition enhancers, drugs for treating Alzheimer's disease or other forms of dementia
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P3/00—Drugs for disorders of the metabolism
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
    • A61P31/12—Antivirals
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P35/00—Antineoplastic agents
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P43/00—Drugs for specific purposes, not provided for in groups A61P1/00-A61P41/00
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P5/00—Drugs for disorders of the endocrine system
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P5/00—Drugs for disorders of the endocrine system
    • A61P5/02—Drugs for disorders of the endocrine system of the hypothalamic hormones, e.g. TRH, GnRH, CRH, GRH, somatostatin
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P5/00—Drugs for disorders of the endocrine system
    • A61P5/06—Drugs for disorders of the endocrine system of the anterior pituitary hormones, e.g. TSH, ACTH, FSH, LH, PRL, GH
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P5/00—Drugs for disorders of the endocrine system
    • A61P5/10—Drugs for disorders of the endocrine system of the posterior pituitary hormones, e.g. oxytocin, ADH
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
    • C07K14/435—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
    • C07K14/575—Hormones
    • C07K14/60—Growth hormone-releasing factor [GH-RF], i.e. somatoliberin
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K5/00—Peptides containing up to four amino acids in a fully defined sequence; Derivatives thereof
    • C07K5/04—Peptides containing up to four amino acids in a fully defined sequence; Derivatives thereof containing only normal peptide links
    • C07K5/08—Tripeptides
    • C07K5/0802—Tripeptides with the first amino acid being neutral
    • C07K5/0812—Tripeptides with the first amino acid being neutral and aromatic or cycloaliphatic
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Endocrinology (AREA)
  • Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • Biophysics (AREA)
  • Diabetes (AREA)
  • Biomedical Technology (AREA)
  • Neurosurgery (AREA)
  • Neurology (AREA)
  • Toxicology (AREA)
  • Zoology (AREA)
  • Gastroenterology & Hepatology (AREA)
  • Oncology (AREA)
  • Hospice & Palliative Care (AREA)
  • Psychiatry (AREA)
  • Communicable Diseases (AREA)
  • Virology (AREA)
  • Hematology (AREA)
  • Obesity (AREA)
  • Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
  • Peptides Or Proteins (AREA)
  • Organic Low-Molecular-Weight Compounds And Preparation Thereof (AREA)

Abstract

Popsány jsou syntetické peptidy se zvýšenou rezistencí vůči enzymatické proteolytické degradaci, která je způsobena přítomností sousedních D-aminokyselin v peptidické sekvenci, případně substitucí amidické vazby (-CO-NH-), např. aminomethylenem (-CH.sub.2.n.-NH-) a/nebo modifikováním N- nebo C- konce peptidu. Peptidické deriváty stimulují uvolňování růstového hormonu z hypofýzy. Farmaceutický prostředek obsahující jako účinnou složku peptidové deriváty nebo jejich farmaceuticky přijatelnou sůl.ŕ

Description

Oblast techniky
Předkládaný vynález se týká nových peptidických derivátů, přípravků, které je obsahují, a jejich použití při léčbě zdravotních poruch vyplývajících z nedostatku růstového hormonu.
Dosavadní stav techniky
Růstový hormon je hormon stimulující růst všech tkání schopných růstu. Růstový hormon má řadu účinků na metabolické procesy, např. stimuluje proteosyntézu a mobilizaci mastných kyselin a přepíná energetický metabolismus mezi metabolismy uhlovodíků a tuků. Nedostatek růstového hormonu může způsobovat řadu těžkých zdravotních poruch, např. trpaslictví.
Růstový hormon je uvolňován hypoíýzou. Jeho uvolňování podléhá přísnému řízení hormony a neurotransmitery, přímou i nepřímou cestou. Uvolňování růstového hormonu je stimulováno faktorem stimulujícím uvolňování růstového hormonu (growth hormone releasing hormone - GHRH) a inhibováno somatostatinem. Oba tyto faktory jsou vylučovány hypotalamem, jejich účinek je primárně zprostředkováván specifickými receptoiy hypofýzy. Byly popsány i další sloučeniny stimulující uvolňování růstového hormonu z hypofýzy. Například arginin, L-3,4dihydroxyfenylalanin (L-Dopa), glukagon, vasopresin, PACAP (peptid aktivující hypofyzámí adenylylcyklázu), antagonisté muskarinového receptorů a syntetický hexapeptid GHRP (peptid stimulující uvolňování růstového hormonu), který působí na uvolňování endogenního růstového hormonu buď přímým působením na hypofyzu, nebo působením na uvolňování GHRH a/nebo somatostatinu z hypotalamu.
Při poruchách nebo zdravotních stavech, které vyžadují zvýšené hladiny růstového hormonu, proteinová podstata růstového hormonu vylučuje jakékoli jiné podávání než parenterální. Ani jiné přímo působící přirozené sekrety, např. GHRH a PACAP nelze jako delší polypeptidy podávat perorálně.
Již dříve bylo navrženo použití kratších peptidů, které by u savců zvyšovaly hladiny růstového hormonu, např. EP 18 072, EP 82 864, WO 89/07110, WO 89/01711, WO 89/10933, WO 88/9780, WO 82/02272, WO 91/18016, WO 92/01711 a WO 93/04081.
Složení peptidů stimulujících uvolňování růstového hormonu nebo jejich derivátů je důležité z hlediska jejich schopnosti uvolňovat růstový hormon i z hlediska jejich biologické dostupnosti. Předmětem předkládaného vynálezu jsou proto peptidy, které stimulují uvolňování růstového hormonu a které mají výhodnější vlastnosti, než dosud známé peptidy tohoto typu.
Podstata vynálezu:
Vynález se týká peptidových derivátů vybraných z následujících sloučenin:
H~Ala-Hisv|/(CH2NH)D~-2Nal-D-Phe-Lys-NH2
H-Ala-Ala-D-2Nal-D-Phe-Lys-NH2
H-His-D-2Nal-D-Phe-Lys-NH2 (3-(4-Imidazolyl)propionyl)-D-2Nal-D-Phe-Lys-NH2) H-D-Lys-D-2Nal-D-Phe-Lys-NH2
H-5Apent-his-D-2Nal-D-Phe-Lys-NH2
-1 CZ 293113 B6
H-IKAla-D-2Nal-D-Phe-Lys-NH2
H-5Apent-D-2Nal-D-Phe-Lys-NH2 (n-Propyl)-His-D-2Nal-D-Phe-Lys-NH2 H-Ala-3Pya-D-2Nal-D-Phe-Lys-NH2 H-Ala-Phe(4-NH2)-D-2Nal-D-Phe-Lys-NH2 H-D-Ala-His-D-2Nal-D-Phe-Lys-NH2 (2-<4-Imidazolyl)acetyl>D-2Nal-D-Phe-Lys-NH2 (3-(4-Imidazolyl)akiyloyl)-D-2Nal-D-Phe-Lys-NH2 (3-Aminomethylbenzoyl)-D-2Nal-D-Phe-Lys-NH2 (3-Aminofenylacetyl)-D-2Nal-D-Phe-Lys-NH2 (4-Aminofenylacetyl)-D-2Nal-D-Phe-Lys-NH2 (3-Aminokrotonoyl)-D-2Nal-D-Phe-Lys-NH2 (4-Piperidino-karboxyl)-D-2Nal-I>-Phe-Lys-NH2 H-Ala-His-D-2Nal-D-Phe-NH2 (H-Ala-His-D-2Nal-D-Phe-NH)hexan 6-(H-Ala-His-D-2Nal-D-Phe-NH)hexylamin 5-(H-Ala-His-D-2Nal-D-Phe-NH)pentylamin Η-Α13-Ηί8-ϋ-2Ν31-Ι)-ΡΗβψ(€Η2ΝΗ)Εγ8-ΝΗ2 H-Ala-His-D-2Nal-D-Phe-Lys-OH (2SHH-Ala-His-D-2Nal-D-Phe-NH)-6-aminohexanol (2-(H-Ala-His-D-2Nal-D-Phe-NH)ethyl)benzen
2- (H-Ala-His-D-2Nal-D-Phe-NH)etoylamin 4-((H-Ala-His-D-2Nal-D-Phe-NH)methyl)benzylamin H-Ala-His-D-2Nal-D-Phe-Lys(mantosyl)-NH2 H-Ala-His-D-2Nal-D-Phe-Phe-NH2 H-Ala-His-D-2Nal-D-Phe-D-Phe-NH2 H-Ala-His-D-Phe-D-Phe-Lys-NH2 H-Ala-His-D-Trp-D-Phe-Lys-NH2 H-His-D-2Nal-D-Trp-Lys-NH2 H-Ala-His-D-lNal-D-Phe-Lys-NH2 H-Ala-Phe-D-2Nal-D-Phe-Lys-NH2 H-Ala-His-D-2Nal-D-Phe-Lys(maltosyl)-NH2 (2R)-(H-Ala-His-D-2Nal-D-Phe-Lys-NH)-3-fenylpropylamm H-Ala-N-Me-(2-aminobeiizoyl)-D-Nal-D-Phe-Lys-NH2 (3-Metoylaminomethylbenzoyl)-D-2Nal-D-Phe--Lys-NH2 (4-Aminoniethylbenzoyl)-D-2Nal-D-Phe-Lys-NH2 H-His-Ala-D-2Nal-D-Phe-Lys-NH2 4-(H-Ala-His-D-2Nal-D-Phe-NH)butylamm
3- (H-Ala-His-D-2Nal-D-Phe-NH)propylamin (3-Dimethylaminomethylbenzoyl)-D-2NaI-I>-Phe-Lys-NH2 (3-Amino-3-methylbutanoyl)-D-2Nal-D-Phe-Lys-NH2 (3-Aminomethylbenzoyl)iy(CH2NH)D-2Nal-D-Phe-Lys-NH2
-2CZ 293113 B6 (3-Aminomethylbenzoyl)-D-2Nal-D-hPhe-Lys-NH2 (3-Amino-3-methylbutanoyI)-His-D-2Nal-D-Phe-Lys-NH2 (3-Ammomethylbenzoyl)-D-2Nal-N-Bzl-Gly-Lys-NH2 (2S)J3-aminomethylbenzoyl^(CH2NH)I)-2Nal-D-Phe-NH)-6-aminohexanol (3-Aminomethylbenzoyl)-D-2Nal-D-3Pyal-Lys-NH2 (3-Aminomethylbenzoyl)-D-2Nal-D-Phe(4-F)-Lys-NH2 (3-Aminomethylbenzoyl)-D-2Nal-D-Phe(4-OMe)-Lys-NH2 (2-Aminomethylfenylacetyl)-D-2Nal-D-Phe-Lys-NH2 (2-Aminomethylbenzoyl)-D-2Nal-D-Phe-Lys-NH2 2-(H-Aib-His-D-2Nal-D-Phe-NH)-(4-pyridyl)ethan H-Aib-Phe-D-2Nal-D-Phe-Lys-NH2 2-(H-Aib-His-D-2Nal-D-Phe-NH)-(l-methyl-2-pyrrolidinyl)ethan 2-(H-Aib-His-D-2Nal-D-Phe-NH)-(4-pyridyl)ethan H-Aib-Hisv(CH2NH)-D-2Nal-D-Phe-Lys-OH (3-Ammomethylbenzoyl)-D-2Nal-N-Me-D-Phe-Lys-NH2 H-Aib-His-D-2Nal-D-Phe-Gly-NH2 H-Aib-His-D-2Nal-D-Phe-Ala-NH2 H-Aib-His-D-2Nal-D-Phe-Om-NH2 (5-Aminomethylthienyl-2-karbonyl)-D-2Nal-D-Phe-Lys-NH2 H-Aib-His-D-2Nal-D-Phe-D-Lys-NH2 H-Aib-His-D-2Nal-D-Phe-Dab-NH2 Η-ΑίΙ>-ΗΪ8-Ε)-2Ν31-Ο-ΡΗ6ψ(€Η2ΝΗ)-Εγ3-ΝΗ2 H-Aib-His-D-Me-D-2Nal-D-Phe-Lys-NH2 H-Aib-His-D-2Nal-D-Phe-N-Me-Lys-NH2 (3-Aminomethylthienyl-2-karbonyl)-D-2Nal-D-Phe-Lys-NH2 H-Aib-His-D-2Nal-N-Me-D-Phe-Lys-NH2 H-Aib-His-D-2Nal-D-Phe-Lys-N(Me)2 (3R)-Piperidinkarbonyl-D-2Nal-D-Phe-Lys-NH2 (3S)-Piperidinkarbonyl-D-2Nal-D-Phe-Lys-NH2 (3-Aminomethylbenzoyl)-D-lNal-D-Phe-Lys-NH2 H-Aib-his-D-2Nal-D-Trp-Lys-NH2 (Furfuryl)-Aib-His-D-2Nal-D-Phe-Lys-NH2 (2-Pyridylmethyl)-Aib-His-D-2Nal-D-Phe-Lys-NH2 H-Aib-(3-aminomethylbenzoyl)-I>-2Nal-D-Phe-Lys-NH2 H-Aib-3-Pyal-D-2Nal-D-Phe-Lys-NH2 (3S)-Piperidinkarbonyl-D-2Nal-D-Phe-Lys-NH2 (3R)-Piperidinkarbonyl-D-2Nal-D-Phe-Lys-NH2 (2-(H-Aib-his-D-Nal-NH)-ethyl)benzen N,N-di(2R-Hydroxypropyl)-(3-aminomethylbenzoyl)-D-2Nal-D-Phe-Lys-NH2 (2R-Hydroxypropyl)-Aib-His-D-2Nal-D-Phe-Lys-NH2 (3-Απιϊηοηΐ6ΐΗγΛβηζογ1)-Ε)-2Ν3ΐ-Ι)-ΡΗβψ(€Η2ΝΗ)-Εγ8-ΝΗ2 (3-Aminomethylbenzoyl)-N-Me-D-2Nal-D-Phe-Lys-NH2
-3CZ 293113 B6 (3-Aminomethylbenzoyl)-D-2Nal-D-Phe-N-Me-Lys-NH2
H-D-Thr-His-D-2Nal-D-Phe-Lys-NH2
H-Aib-His-D-2Nal-N-(fenethyl)-Gly-Lys-NH2 (3-Aminomethylbenzoyl)-D-2Nal-N-(fenethyl)-Gly-Lys-NH2 H-Hyp-His-D-2Nal-D-Phe-Lys-NH2
H-Aib-His-N-Me-D-2Nal-N-(fenethyl)-Gly-Lys-NH2
H-Aib-His-N-Me-D-2Nal-N-Me-D-Phe-Lys-NH2
H-Aib-His-D-2Nal-D-Phei|;(CH2N(Me))-Lys-NH2
3-(H-Aib-His-D-2Nal-Me-D-Phe-NH)morfolinopropan
2- (H-Aib-His-D-2Nal-N-Me-D-Phe-NH)-(l-methyl-2-pyrrolidinyl)ethan (3R)-Piperidinkarbonyl-N-Me-D-2Nal-N-Me-D-Phe-Lys-NH2
3- ((Aminomethylbenzoyl)-D-2Nal-N-Me-D-Phe-NH)morfolinopropan 2-(H-Aib-His-N-Me-E)-2Nal-N-Me-D-Phe-NH)-(l-methyl-2-pyrrolidinyl)ethan 2-((3R)-Piperidinkarbonyl-N-Me-D-2Nal-N-Me-D-Phe-NH)-(l-methyl-2-pynOlidinyl)ethan)
2- ((3-Ammomethylbenzoyl)-N-Me-D-2Nal-N-Me-D-Phe-NH)-(l-methyl-2-pyrrolidinyl)ethan
3- (H-Aib-His-N-Me-D-2Nal-N-Me-D-Phe-NH)morfolinopropan 3-((3R)-Piperidinkarbonyl-N-Me-D-2Nal-N-Me-D-Phe-NH)morfolinopropan 3-((3-Aminomethylbenzoyl)-N-Me-D-2Nal-N-Me-D-Phe-NH)morfolinopropan
H-Aib-His-D-2Nal-N-Me-D-Phe-Hyp-NH2 2-((3-Aminomethylbenzoyl)-I>-2Nal-N-Me-D-Phe-NH)-(l-methyl-2-pyrrolidinyl)ethan 2-((3R)-Piperidinkarbonyl-D-2Nal-N-Me-D-Phe-NH)-(l-methyl-2-pyrroIidinyl)ethan
Zkratky:
D-2Nal D-2-naftylalanin
5Apant kys. 5-aminopentanová
3Pyal = 3-pyridylalanin
Aib = kys. H.-aminoisomáselná = Kys. iminoizobutanová
Thial = thienylalanin
hPhe = homo-fenylalanin
N-Bzl-Gly = N-benzylglycin
4-F = 4-Fluor
4-OMe = 4-methoxy
Om - omitin
Dab = kys. 2,4-diaminomáselná
Hyp = hydroxyprolin
Tic = 1,2,3,4-tetrahydroisochinolin-3-karboxylová kys.
Uvedené sloučeniny lze připravit běžnými postupy syntézy peptidů v roztoku i na pevné fázi. Syntézu na pevné fázi lze například provést podle Stewart and Young, Solid, Phase Peptide Synthesis, Td. Ed., Rockford, Illinois, USA, 1976. Syntézu u roztoku lze například provést podle Bodansky et al., Peptide Synthesis, 2(d.,Ed, New York, New York, USA, 1976.
Aminometylenovou substituci amidické vazby lze provést podle Y. Sasaki and D. H. Coy, Peptides 8(1), 1987, pp. 119-121. Peptidické deriváty obsahující amino skupinu derivatizovanou mono- nebo di-hexapyranózou lze připravit Amidoriho přesmykem podle R Albert et al., Life
-4CZ 293113 B6
Sciences 53, 1993, pp 517-525. Vhodnými mono- nebo di-hexapyranózami jsou např. glukóza, galaktóza, maltóza, laktóza nebo celobióza.
Deriváty používané jako výchozí látky pro syntézu jsou komerčně dostupné, nebo, pokud jsou k dispozici vhodné chránící skupiny a výchozí materiály, lze tyto deriváty připravit podle známých postupů syntézy a zavádění chránících skupin.
Farmaceuticky přijatelné adiční soli kyselin s uvedenými peptidovými deriváty jsou látky připravené reakcí peptidů s anorganickými nebo organickými kyselinami, jako jsou např. kys. chlorovodíková, bromovodíková, sírová, octová, fosforečná, mléčná, maleinová, fialová, citrónová, glutanová, glukonová, metansulfonová, salicylová, jantarová, tartarová, toluensulfonová, trifluoroctová, amidosulfonová a fumarová.
Předkládaný vynález rovněž zahrnuje farmaceutické přípravky obsahující jako aktivní složku uvedený peptidový derivát nebo jeho farmaceuticky přijatelnou sůl, a farmaceuticky přijatelný nosič nebo ředidlo.
Farmaceutické přípravky obsahující sloučeninu předkládaného vynálezu lze připravit běžnými postupy jako je např. uvedeno v práci Remingtonů Pharmaceutical Sciences, 1985. Přípravky jsou připravovány v obvyklých lékových formách, tj. jako kapsle, tablety, aerosoly, roztoky, suspenze nebo jako přípravky pro povrchovou aplikaci.
Jako farmaceutický nosič nebo ředidlo lze použít běžný pevný nebo kapalný nosič. Příkladem pevných nosičů jsou laktóza, terra alba, sacharóza, cyklodextrin, talek, želatina, agar, pektin, arabská guma, magnézium stearát, kys. stearová nebo Cl-6 alkylethery celulózy. Příkladem kapalných nosičů jsou sirup, arašídový olej, olivový olej, fosfolipidy, mastné kyseliny, aminy mastných kyselin, polyoxyetylen a voda.
Podobně nosič nebo ředidlo mohou zahrnovat libovolné látky vedoucí k protrahovanému uvolňování léčiva, známé v příslušné oblasti techniky. Jde o látky jako glyceryl- monostearát, nebo glyceryldistearát, které lze použít samotné nebo ve směsi s voskem.
Pokud je pro perorální podávání použit pevný nosič, lze přípravek tabletovat, uzavřít jako prášek nebo granule do tvrdých želatinových kapslí, nebo použit formu troche nebo pastilek. Množství pevného nosiče je proměnlivé, ale nejčastěji se pohybuje v rozmezí 25 mg až 1 g.
Typická tableta připravená běžným tabletovacím postupem obsahuje:
Jádro:
Účinná složka (jako volná sloučenina nebo její sůl) 100 mg
Koloidní oxid křemičitý (Aerosil) 1,5 mg
Celulóza, mikrokryst. (Avicel) 70 mg
Modifikovaná celulózová pryskyřice (Ac-Di-Sol) 7,5 mg
Magnézium stearát
Potah:
HPMC průměrně 9 mg * Mywacett 9-40 T průměrně 0,9 mg * Acylovaný monoglycerid vhodný jako plastifikátor při potahování filmem.
Pokud je pro podávání léku použit kapalný nosič, lze přípravek připravit jako sirup, emulzi, měkké želatinové kapsle nebo jako sterilní injekční roztoky, tj. vodné nebo ne-vodné kapalné suspenze nebo roztoky.
-5CZ 293113 B6
Přípravek určený na aerosolovou aplikaci do nosu, obsahuje roztok nebo suspenzi peptidového derivátu v kapalném nosiči, nejčastěji ve vodném nosiči. Nosič dále případně obsahuje další přísady jako jsou solubilizační činidla, např. propylenglykol, povrchově aktivní látky, např. soli kyseliny žlučové, nebo ethery polyoxyetylenu s vyššími alkoholy, látky zvyšující absorpci, např. lecithin (fosfatidylcholin) nebo cyklodextrin, nebo konzervační činidla např. parabeny.
Sloučeniny předkládaného vynálezu jsou obsaženy v jednotkové dávkové formě v množství 0,0001 až 100 mg účinné složky spolu s farmaceuticky přijatelným nosičem.
Vhodné dávkové množství sloučeniny předkládaného vynálezu je 1 až 500 mg/den, např. léčivo podávané lidem obsahuje 100 mg účinné složky na dávku.
Bylo ukázáno, že uvedené peptidové deriváty stimulují uvolňování endogenního růstového hormonu in vivo. Tyto sloučeniny lze proto použít při léčbě stavů, které vyžadují vyšší hladinu hormonu v plazmě, jako např. u lidí trpících deficiencí růstového hormonu, u starších pacientů nebo u hospodářských zvířat.
Předkládaný vynález se dále týká farmaceutických přípravků stimulujících uvolňování růstového hormonu z hypofyzy, přípravků, které jako aktivní složku obsahují uvedený peptidový derivát nebo jeho farmaceuticky přijatelnou sůl a farmaceuticky přijatelný nosič nebo ředidlo.
Předkládaný vynález se dále týká způsobu stimulace uvolňování růstového hormonu z hypofyzy, který spočívá v podávání účinného množství uvedeného peptidového derivátu nebo jeho farmaceuticky přijatelné soli pacientům.
Předkládaný vynález se dále týká použití uvedeného peptidového derivátu nebo jeho farmaceuticky přijatelné soli pro přípravu léčiva určeného na stimulaci uvolňování růstového hormonu z hypofyzy.
Odborníkům v oboru je dobře známo, že v současné době rozšířené podávání růstového hormonu lidem je velmi mnohostranné. Lze očekávat, že uvedené peptidové deriváty, podávány pro stimulaci uvolňování růstového hormonu z hypofyzy, budou vykazovat podobné účinky a mít podobné využití jako samotný růstový hormon. Použití růstového hormonu lze shrnout do následujících skupin: stimulace uvolňování růstového hormonu ve stáří; prevence vedlejších účinků katabolismu glukokortikoidů; léčba osteoporézy; stimulace imunitního systému; urychlení hojení ran; urychlení reparace fraktur; léčba retardovaného růstu; léčba selhání ledvin nebo nedostatečnosti vyplývající z retardace růstu; léčba fyziologicky krátké postavy zahrnující léčbu dětí s deficiencí růstového hormonu a léčba krátké postavy související s chronickým onemocněním; léčba obezity a retardace růstu souvisejícího s obezitou; léčba retardace růstu souvisejícího s Prader-Williho syndromem a Turnérovým syndromem; urychlení uzdravování a zkrácení hospitalizace pacientů s popáleninami; léčba nitroděložní retardace růstu, kosterní dysplazie, hyperkortisolismu a Cushingova syndromu; indukce pulsatilního uvolňování růstového hormonu; náhrada růstového hormonu u pacientů trpících stresem; léčba osteochondrodysplazie, Noonanova syndromu, schizofrenie, depresí, Alzheimerovy choroby, pomalého hojení ran a psychosociální deprivace; léčba plicní nedostatečnosti a závislosti na ventilátoru; oslabení odpovědí katabolismu proteinů na velké chirurgické zákroky; snížení kachexie a ztráty proteinů v souvislosti s chronickým onemocněním jako je rakovina nebo AIDS; léčba hyperinsulinemie včetně nesidioblastózy, podpůrná léčba při indukci ovulace; stimulace vývoje thymu a prevence snížení činnosti thymu závisle na věku; léčba imunosuprimovaných pacientů; posilování svalů, pohyblivosti; udržování pevnosti pokožky, metabolické homeostáze, ledvinné homeostáze u slabých starších pacientů; stimulace osteoblastů přestavby kostí a růstu chrupavek; stimulace imunitního systému u zvířat žijících ve společenstvech a léčba poruch souvisejících se stárnutím u těchto zvířat; podporování růstu u hospodářských zvířat a stimulace růstu vlny u ovcí.
-6CZ 293113 B6
Doporučené dávky léčiva pro výše uvedená použití závisí na konkrétním použitém peptidovém derivátu, cestě podání a požadované terapii. Obecně lze však pro účinné uvolňování endogenního růstového hormonu doporučit dávkové množství 0,0001 až 100 mg na 1 kg tělesné hmotnosti pacienta denně. Obvykle dávkové formy vhodné pro perorální nebo nosní podávání obsahuje 0,001 až 100 mg, výhodně 0,001 až 50 mg, uvedeného peptidového derivátu ve směsi s farmaceuticky přijatelným nosičem nebo ředidlem.
Uvedené peptidové deriváty lze podávat ve formě farmaceuticky přijatelné adiční soli s kyselinou, nebo je-li to žádoucí jako sůl alkalického kovu, kovu alkalické zeminy nebo Cl-6 alkylamonnou sůl. Soli vykazují v průběhu stejnou aktivitu jako volné báze.
Farmaceutické přípravky předkládaného vynálezu mohou vedle uvedeného peptidového derivátu obsahovat ještě další sloučeniny, nebo několik sloučenin s jinými účinky, např. antibiotika nebo jinak farmakologicky účinné látky. Těmito látkami mohou být jiné sekrety, jako GHRP (1 nebo 6), nebo GHRH nebo jeho analog, růstový hormon nebo jeho analog, nebo somatomedin jako je IGF-1 nebo IGF-2.
Jako cestu podávání léčiva lze volit jakoukoliv cestu, která zajistí efektivní transport účinné látky do příslušného nebo požadovaného místa účinku, například podávání léčiva perorálně, do nosu nebo parenterálně, výhodně je podávání perorální.
Uvedené peptidové deriváty lze kromě farmaceutického použití použít jako nástroje pro výzkum regulace uvolňování růstového hormonu in vitro.
Uvedené peptidové deriváty lze rovněž použít in vivo, při hodnocení schopnosti hypofyzy uvolňovat růstový hormon. Například lze sledovat množství růstového hormonu ve vzorcích séra odebraných před a po podání studovaných sloučenin pacientům. Porovnání množství růstového hormonu v jednotlivých vzorcích séra přímo udává schopnost pacientovy hypofyzy uvolňovat růstový hormon.
Uvedené peptidové deriváty lze podávat komerčně významným zvířatům pro zvyšování rychlosti a rozsahu vzrůstu, či pro zvyšování produkce mléka.
Farmakologické postupy
Uvedené peptidové deriváty lze testovat in vitro z hlediska účinnosti a rozsahu účinnosti na uvolňování růstového hormonu v primárních krysích somatotropech.
Primární krysí somatotropy byly připraveny dle Chem et al., Endocrinology 1991, 129, 3337-3342 a Chen et al., Endocrinology, 1989, 124, 2791-2798. Stručně, krysy byly usmrceny dekapitací. Hypofyzy byly rychle odstraněny a natráveny 0,2% kolagenázou a 0,2% hyalurinidázou ve vyváženém Hanksově fyziologickém roztoku. Buňky byly dále resuspendovány vDulbeccově modifikaci eagleova média obsahujícího 0,37 % NaHCO3, 10% koňského séra,
2,5 % fetálního telecího séra, 1 % neesenciálních aminokyselin, 1 % glutaminu a 1 % penicilinu/streptomycinu a adjustovaného na 1,5 x 105 buněk/ml. Takto připravená suspenze byla vnesena po 1 ml do všech jamek 24-ti jamkové destičky a ponechána 2 až 3 dny v klidu před prováděním testů uvolňování hormonu.
V prvém dnu experimentu byly buňky dvakrát promyty výše popsaným médiem obsahujícím 25 mmolT1 HEPES, pH 7,4. Uvolňování růstového hormonu bylo iniciováno přidáním média obsahujícího 25 mmol.l'1 EÍEPES a testovanou sloučeninu. Inkubace byla prováděna 15 minut při 37 °C. Po inkubaci bylo množství růstového hormonu uvolněného do média stanoveno standardním postupem RIA.
-7CZ 293113 B6
Uvedené peptidové deriváty byly testovány in vivo z hlediska jejich účinnosti na uvolňování růstového hormonu na krysích samicích pod pentobarbitalovou narkózou, podle Bercu et al., Endocrinilogy 1991, 129, 2592-2598. Stručně, dospělí krysí samci Sprague-Dawley byli narkotizováni pentobarbitalem 50 mg/kg i.p. Zcela uspaným krysám byla do krční tepny 5 ahugulámí žíly implantována tracheální kanyl a katétr. Po 15 min rekonvalescenci byl odebrán vzorek krve v čase 0. Poté byly intravenózně podány hypofyzámí sekrety a krevní vzorky odebrané zarterie byly na 15 min uloženy k ledu a poté centrifugovány 2 min při 12 000 x g. Sérum bylo dekantováno a množství růstového hormonu stanoveno standardním postupem RIA.
ío Vynález je dále ilustrován několika příklady, které však v žádném směru neomezují jeho rozsah, jak je nárokován.
Zkratky používané v popisu i příkladech představují následující struktury:
-8CZ 293113 B6
Zkratky používané pro nepřirozené aminokyselinové zbytky:
3PyaI
Phe(4OMe)
Phe^NHj)
Phe(4-F)
N-(phenethyI)-Gly
N-Bzl-Gly
Aib
-9CZ 293113 B6
5Apent
Zkratky používané pro substituované peptidické vazby:
-N-MeO
X čh3
Y(CH2NH)
NH
Y(CH2N(Me)) /Cft2 X N
CH3
Zkratky používané pro chránící skupiny:
Sloučeniny připravené v následujících příkladech byly izolovány jako soli kys. trifluroctové /TFA/.
-10CZ 293113 B6
Příklady provedení vynálezu
Příklad 1
H-Ala-His-D-2-naftylalanin-D-Trp-Lys-NH2
Titulní peptid byl syntetizován Fmoc strategií na peptidovém syntetizátoru Applied Biosysterms 431A v 0,22 mmol měřítku podle protokolu FastMoc UV dodaného výrobcem, který zahrnuje syntézu zprostředkovanou HBTu (2-(lH-Benzo-triazol-l-yl)-l,l,3,3-tetrametyluronium hexafluorfosfát) v NMP (N-metylpyrrolidon) v UV monitorování deprotekce chránící skupiny Fmoc. Jako výchozí nosič pro syntézu byl použit 4-((2',4'-dimethoxyfenyl)-(Fmoc-amino)metyl-fenoxy nosič (559 mg) (Novabiochem, Bad Soden, Německo; katalogové číslo: 01-64-0013) o substituční kapacitě 0,39mmol/g. Jako chráněné deriváty aminokyselin byly použity FmocLys(Boc)-OH, Fmoc-D-Trp-OH, Fmoc-2-naftylalanin-OH, Fmoc-His(Trt) a Fmoc-Ala-OH.
Odštěpením peptidů z nosiče (434 mg) bylo provedeno směsí 4 ml TFA (kys. trifluoroctové), 300 mg fenolu, 100 μΐ etandithiolu, 200 μΐ thioanisolu a 200 μΐ vody, za stálého míchání 180 min, při laboratorní teplotě. Směs po štěpení byla zfiltrována a zahuštěna v proudu dusíku na 1 ml. Ze vzniklého oleje byl dietyletherem (45 ml) vysrážen surový peptid a promyt dietyletherem (3 x 50 ml).
Surový peptid byl sušen a purifikován semipreparativní HPLC na koloně 20 x 250 mm s náplní 7 pm C-l 8 silikagelu, po ekvilibraci 15 % CH3CN v 0,05 mol.l1 (NLLESC^ adjustovaným na pH
2,5 4 mol.F1 H2SO4. Surový peptid byl rozpuštěn ve 2 ml 70% CH3CN/0,l% vodná TFA a zředěn vodou na 100 ml. Tento roztok byl rozdělen na dvě stejné části, obě postupně naneseny na chromatografickou kolonu a provedeny dvě separace. Eluce byla prováděna gradientem 15 až 25 % 15 % CH3CN v 0,05 mol.F1 (NHtESO», pH 2,5, při rychlosti 10 ml/min, 47 min, při 40 °C. Frakce obsahující peptid byly spojeny, zředěny třemi objemy vody a naneseny na Sep-Par1* C-l 8 kolonky (cartrige, Waters part.; katalogové číslo: 51910) ekvilibrované 0,1 % TFA. Peptid byl z kolonky SepPakR eluován 70% CH3CN v 0,1 % TFA a zeluátu izolován po zředění vodou lyofilizací. Peptid byl připraven s výtěžkem 19 mg.
Výsledný produkt byl charakterizován analytickým RP-HPLC (retenční čas) a plazmatickou desorpční hmotností spektrometrií (molekulová hmotnost). Hmotnostní spektrum bylo v rámci experimentální chyby (hmotností spektrum ± 0,9 amu) v souladu s očekávanou strukturou.
RP-HPLC analýza byla prováděna UV detekcí při 214 nm na koloně Vydac 218TP54, 4,6x250 mm, s náplní 5 pm C-l8 silikagelu (The Separation Group, Hesperia), při rychlosti eluce 1 ml/min, při 42 °C. Byly použity dva rozdílné programy eluce:
Al: Kolona byla ekvilibrována 5 % CH3CN vpufru 0,1 mol.l’1 (NH4)2SO4 adjustovaným na pH
2,5 4 mol.F1 H2SO4 a eluce provedena gradientem 5 až 60 % CH3CN v uvedeném pufru, 50 min.
Bl: Kolona byla ekvilibrována 5 % CH3CN/0,l % TFA/H2O a eluce proveden gradientem 5 % CH3CN/0,l % TFA/H2O až 60 % CH3CN/0,l % TFA/H2O, 50 min.
RP-HPLC analýzou velučních podmínkách Al a Bl byly zjištěny retenční časy 17,88 min, respektive 20,15 min.
-11 CZ 293113 B6
Příklad 2
H-Ala-His-D-2-naftylalanin-D-Phe-Lys-OH
Titulní peptid byl připraven postupem popsaným v příkladu 1, s tím rozdílem, že byl jako nosič použit 450 mg Fmoc-Lys(Boc)-Wang (Novabiochem, Bad Soden, Německo; katalogové číslo 04-12-2014) o substituční kapacitě 0,49mmol/g. Po odštěpení produktu z 560 mg nosiče apurifikaci 1/2 surového produktu postupem popsaným v příkladu 1 bylo získáno 25,9 mg výsledného peptidu.
Výsledný produkt byl charakterizován jako v příkladu 1. RP-HPLC analýzou v elučních podmínkách Al a B1 byly zjištěny retenční časy 18,30 min, respektive 20,15 min.
Příklad 3
5-(H-Ala-His-D-2-naftylalanin-D-Phe-NH)aminopentan
Nosič speptidem, H-Ala-His(Trt)-D-2-naftylalnin-D-Phe-Sasrinový nosič, byl připraven postupem popsaným v příkladu 1, s tím rozdílem, že byl jako výchozí nosič použit 262 mg Sasrinový nosič (nosič funkcionalizovaný 2-methoxy-4-alkoxybenzylalkoholem)(Bachem, Bubendorf, Švýcarsko; katalogové číslo D-1295) o substituční kapacitě 0,96 mmol/g a postup navázání první aminokyseliny k nosiči zahrnoval syntézu katalyzovanou 4-dimetylaminopyridinem vycházející z předem připraveného symetrického anhydridu, následovanou benzoylací zbylých volných -OH skupin nosiče anhydridem kys. benzoové.
Částečně chráněný peptid 5-(H-Ala-His(Trt)-D-2-naftylalanin-D-Phe-NH)aminopentan byl odštěpen z 56 mg H-Ala-His(Trt)-D-2-naftylalanin-D-Phe-Sasrinového nosiče mícháním suspenze nosiče v 0,5 ml 1,5-diaminopentanu při laboratorní teplotě 20 h. Nosič po odštěpení peptidu byl odfiltrován, extrahován 1 ml DMF, filtrát a extrakt spojeny. Ke kapalné fázi byla za stálého míchání pomalu přidána směs 2,5 ml CH3CN a 10 ml 1 mol.l1 HC1 a výsledný roztok zředěn na 50 ml 25% CH3CN; výsledná směs byl ponechána 100 h při 4 °C (odštěpení tritylové chránící skupiny z histidinu). Poté byla směs zředěna vodou na 200 ml a přefiltrována.
Surový peptid byl purifikován semipreparativní HPLC přímým nanesením 1/2 připraveného filtrátu na kolonu, za použití stejných preparačních podmínek jako v příkladu 1. Výtěžek 4,5 mg.
Výsledný produkt byl charakterizován jako v příkladu 1. RP-HPLC analýzou v elučních podmínkách Al a B1 byly zjištěny retenční časy 18,43 min, respektive 20,75 min.
Příklad 4 (2S)-(H-Ala-His-D-2-naftylalanin-D-Phe-NH)-6-aminohexanol
Nosič s peptidem, H-Ala-His(Trt)-D-2-naftylalanin-D-Phe-Lys(Boc)-Sasrinový nosič, byl připraven postupem popsaným v příkladu 3, jako výchozí nosič použit Sasrinový nosič o substituční kapacitě 0,96 mmol/g.
Částečně chráněný peptit (2S)-(H-Ala-His(Trt)-D-2-naftylalanin-D-Phe-NH)-6-aminohexanol byl odštěpen z 200 mg H-Ala-His(Trt)-D-2-naftylalanin-D-Phe-Lys(Boc)-Sasrinového nosiče mícháním suspenze nosiče ve směsi 1,2 THF (tetrahydrofuran), 0,2 ml etanolu, 23 mg, LiBr a 10 mg NaBHt při laboratorní teplotě 20 h. Poté bylo přidáno 200 μΐ vody, 200 μΐ kys. octové a 4 ml etanolu. Nosič po odštěpení peptidu byl odfiltrován, filtrát zředěn 50 ml vody a lyofilizován. Získaný prášek byl štěpen TFA a purifikován postupem uvedeným v příkladu 1.
-12CZ 293113 B6
Kvůli získání dostatečně čistého výsledného produktu byla purifíkace opakována. Celkový výtěžek přípravy byl 5,8 mg.
Výsledný produkt byl charakterizován jako v příkladu 1. RP-HPLC analýzou v elučních podmínkách Al a Bl byly zjištěny retenční časy 17,82 min, respektive 20,02 min.
Příklad 5
H-Ala-Hisv(CH2NH)D-2-naftylalanin-D-Phe-Lys-NH2
Nosič s peptidem, H-D-2-naftylalanin-I>-Phe-Lys(Boc)-nosič, byl připraven postupem popsaným v příkladu 1, na 556 mg 4-((2',4'-dimethoxyfenyl)-(Fmoc-amino)methyl-fenoxy nosiče (Novabiochem AG, Švýcarsko; katalogové číslo: 01-64-0013) o substituční kapacitě 0,34 mmol/g. Jako chráněné deriváty aminokyselin byly použity Fmoc-Lys(Boc)-OH, Fmoc-DPhe-OH a Fmoc-2-naftylalanin-OH.
Skupina -CH2NH-, isostemí peptidická vazba, byla do peptidu zavedena dle Sasaki Y. and Coy, D.H., Peptides 8(1) 119-121, 1987.
Fmoc-His(Trt)-aldehyd byl připraven z 820 mg odpovídajícího Ν,Ο-dimetylhydroxamátu podle Fehrentz, J.-A. and Castro, B., Synthesis 676-678, 1983. Surový aldehyd byl rozpuštěn v 8 ml DMF a rozdělen na dvě části. První část byla přidána k husté suspenzi 610 mg, H-D-2-naftylalanin-D-Phe-Lys-nosiče v 10 ml 1% kys. octové v DMF při laboratorní teplotě. Poté bylo rozpuštěno 57 mg NaCNBH3 (85 %) v 1 ml DMF a roztok přidán k suspenzi, míchání pokračovalo dalších 60 min. Poté byl nosič s navázaným peptidem odfiltrován a promyt 1% kys. octovou v DMF. Nosič s peptidem byl znovu suspendován v 10 ml 1% kys. octové v DMF a byla přidána druhá část Fmoc-his(Trt)-aldehydu. Opět bylo rozpuštěno 57 mg NaCNBH3 (85 %) v 1 ml DMF, roztok přidán k suspenzi a míchání pokračovalo při laboratorní teplotě dalších 18 h.
Po kroku redukční alkylace byl nosič s navázaným peptidem odfiltrován a promyt 1 % kys. octovou v DMF. Další prodloužení peptidového řetězce bylo provedeno výše uvedeným postupem s použitím chráněné aminokyseliny Fmoc-Ala-OH.
Výsledný peptid byl odštěpen z 550 mg nosiče a surový produkt byl purifikován semipreparativní HPLC ve stejných preparačních podmínkách jako v příkladu 1.
Výtěžek 11,3 mg.
Výsledný produkt byl charakterizován jako v příkladu 1. RPHPLC analýzou v elučních podmínkách Al a Bl byly zjištěny retenční časy 13,35 min, respektive 17,38 min.
Příklad 6 (n-Propyl)-His-D-2-naftylalanin-D-Phe-Lys-NH2 a (n-propyl)r-His-D-2-naftylalanin-DPhe-Lys-NH2
Nosič s peptidem, H-His(Trt)-D-2-naftylalanin-D-Phe-Lys(Boc)- nosič, byl připraven postupem popsaným v příkladu 1, na 4-((2',4'-dimethoxyfenyl)-(Fmoc-amino)metyl-fenoxy nosiči (Novabiochem AG, Švýcarsko; katalogové číslo: 01-64-0013) o substituční kapacitě 0,34 mmol/g. Jako chráněné deriváty aminokyselin byly použity Fmoc-Lys(Boc)-OH, Fmoc-DPhe-OH, Fmoc-2-naftylalanin-OH a Fmoc-His(Trt)-OH.
-13CZ 293113 B6
K husté suspenzi 150 mg H-his(Trt)-D-2-naftylalanin-D-Phe-Lys-nosiče v 3,3 ml 1% kys. octové v DMF bylo přidáno 13 μΐ n-propanolu při laboratorní teplotě. Poté byl přidán roztok 16,8 mg NaCNBH3 (85 %) v 0,5 ml DMF a míchání pokračovalo dalších 6 h. Po kroku redukční alkylace byla nosič s navázaným peptidem odfiltrován, promyt DMF a CH2CI a vysušen ve vakuu.
Dva výsledné nosiče s peptidem byly smíchány a z celkového množství 300 mg odštěpena směs nealkylovaného, mono-n-propylovaného a di-n-propylovaného peptidů. Peptidy byly izolovány a purifikovány semipreparativní HPLC ve stejných preparačních podmínkách jako v příkladu 1. Peptidy byly připraveny s výtěžkem 6,54 mg pro (n-propyl)-His-D-2-naftylalanin-D-PheLys-NH2 a 5,59 mg pro (n-propyl)2-His-D-2-naftylalanin-D-Phe-Lys-NH2.
Výsledné produkty byly charakterizovány jako v příkladu 1. Pro (n-propyl)-His-D-2-naftylalanin-D-Phe-Lys-NH2 byly zjištěny retenční časy v podmínkách Al a B1 16,45 min, respektive 19,92 min.
Příklad 7
H-Ala-Tic-D-2-naftylalanin-D-Phe-Lys-NH2
Titulní peptid byl syntetizován na 620 mg 4-metyl BHA nosiče (Bissendorf Biochemiocals, Hannover, Německo, katalogové číslo: RMIS50) o substituční kapacitě 0,72 mmol/g, syntetickou strategií Boc na peptidovém syntetizátoru Aplied Biosystems 430A v 0,5 mmol měřítku s využitím protokolu dodaného výrobcem pro jednotlivé syntetické stupně. Syntetické protokoly využívají syntetický postup z předem připravených symetrických anhydridů v DMF s dobou kondenzace 60 min. Pro navázání N-koncového Ala byla použita dvojnásobná doba kondenzace (2 x 60 min.) Jako chráněné deriváty aminokyselin byly při syntéze použity Boc-Lys(2-chlorZ)-OH, Boc-D-Phe-OH, Boc-D-2-naftylalanin-OH, Boc-Tic-OH a Boc-Ala-OH.
Peptid byl odštěpen z nosiče reakcí s 4,5 ml HF v 500 μΐ kresolu, 75 min, za stálého míchání při 0 °C. HF byl odpařen při 0 °C v proudu dusíku. Peptid byl vysrážen z výsledného oleje obsahujícího i nosič dietyletherem (50 ml), sraženina promyta dietyletherem (2 x 50 ml). Po vysušení byl peptid extrahován 10 ml vody s 4 kapkami kyseliny octové. Extrakt byl zředěn vodou na 100 ml.
Surový peptid byl purifíkován semipreparativní HPLC ve dvou preparačních cyklech z 2 x 18 ml zředěného extraktu, ve stejných podmínkách jako v příkladu 1.
Výtěžek 17,3 mg.
Výsledný produkt byl charakterizován jako v příkladu 1. RP-HPLC analýzou v elučních podmínkách Al a B1 byly zjištěny retenční časy 27,37 min, respektive 29,50 min.
Příklad 8 (2R)-(H-Ala-His-D-2-naftylalanin-NH)-3-fenylpropylamin
Skupina Fmoc byla odštěpena reakcí s 20% piperidinem v NMP, 20 min, z 580 mg, 4-((2',4'-dimethoxyfenyl)-(Fmoc-ammo)methyl-fenoxy-nosiče (Novabiochem AG, Švýcarsko; katalogové číslo: 01-64-0013) o substituční kapacitě 0,43 mmol/g. Nosič byl promyt DMF a CH2CI2 a alkylován Fmoc-D-Ple-aldehydem postupem redukční alkylace popsaným v příkladu 5. Poté byl nosič s peptidem odfiltrován, promyt 1% kys. octovou v DMF a další prodloužení peptidového řetězce bylo provedeno na peptidovém syntetizátoru postupem uvedeným v příkladu 1.
-14CZ 293113 B6
Jako chráněné deriváty aminokyselin byly použity D-2-naftylalanin-0H, Fmoc-His(Trt)-OH a Fmoc-Ala-OH.
Výsledný peptid byl odštěpen z 301 mg nosiče a surový produkt byl purifikován semipreparativní 5 HPLC ve stejných preparačních podmínkách jako v příkladu 1.
Výtěžek 23,92 mg.
Výsledný produkt byl charakterizován jako v příkladu 1. RP-HPLC analýzou v elučních podmínit) kách AI a B1 byly zjištěny retenční časy 19,33 min, respektive 21,77 min.
Př. č. Peptid Připraveno dle Př. č. RP-HPLC ret. časy pro AI /Př. 1/ RP-HPLC ret. časy pro B1 ZPř.l/
9 H-Ala-His-D-Phe-D-Phe-Lys-NH2 1 12,53 15,43
10 H-Ala-Phe-D-2Nal-D-Phe-Lys-NH2 1 28,13 29,62
11 H-His-D-2Nal-D-Phe-Lys-NH2 1 18,02 20,15
12 H-Ala-His-D-2Nal-D-Phe-Phe-NH2 1 28,48 29,48
13 H-Ala-His-D-2Nal-D-Phe-D-Phe-NH2 1 26,65 27,75
14 H-Ala-his-D-2Nal-Phe-Lys-NH2 1 21,85 23,12
15 (3-(4-Imidazolyl)propionyl)-D-2Nal-D-Phe- Lys-NH2 2 20,7
16 (Propionyl)-His-D-2Nal-D-Phe-Lys-NH2 1 22,2 23,77
17 H-Ala-His-D-2Nal-D-Phe-NH2 1 21,7 23,08
18 (H-Ala-His—D—2Nal-D—Phe—NH)hexan 3 34,11 35,78
19 H-Ala-His-D-Trp-D-Phe-Lys-NH2 1 14,52 16,7
20 H-Ala-Ala-D-2Nal-D-Phe-Lys-NH2 1 21,97 23,23
21 ((Propionyl)-His-D-2Nal-D-Phe-NH)hexan 3 37,17 39,47
22 6-(H-Ala-His-D-2Nal-D-Phe-NH)hexylamin 3 19,3 21,57
23 H-D-2Nal-D-Phe-Lys-NH2 1 15,88 18,25
24 (5-Aminopentanoyl)-His-D-2Nal-D-Phe-LysNH2 1 17,8 19,98
25 H-D-Lys-D-2Nal-D-Phe-Lys-NH2 1 17,07 19,62
26 H-Ala-His-D-2Nal-D-Tic-Lys-NH2 1 19,12 20,78
27 H-D-Lys-Phe-2Nal-D-His-D-Ala-NH2 1 18,15 20,48
28 (5-Aminopentanoyl)-D-2Nal-D-Phe-Lys-NH2 1 20,67 22,45
29 H-D-Ala-D-2Nal-D-Phe-Lys-NH2 1 19,57 21,53
30 (Propionyl)-D-2Nal-D-Phe-Lys-NH2 1 26,7 27,92
31 H-D-Ala-His-D-2Nal-D-Phe-Lys-NH2 1 17,83 20,3
32 H-Ala-3-Pyal-D-2Nal-D-Phe-Lys-NH2 1 18,15 20,18
33 (n-Butyl)-Ala-His-D-2Nal-D-Phe-Lys-NH2 6 19,55 -
34 (n-Octyl)-Ala-His-D-2Nal-D-Phe-Lys-NH2 6 27,88 24,52
35 H-Ala-His-D-2Nal-D-Phe\|/(CH2NH)Lys-NH2 5 17,97 20,83
36 (3-Aminomethylbenzoyl)-D-2Nal-D-Phe-Lys- nh2 1 22,42 24,13
37 (3-Aminofenylacetyl)-D-2Nal-D-Phe-Lys- NH2 1 23,62 23,97
38 ((4-Imidazolyl)acetyl)-D-2Nal-D-Phe-Lys- NH2 1 20,42 22,22
39 (3-(4-Imidazolyl)alayloyl)-D-2Nal-D-Phe- Lys-NH2 1 21,25 23,32
40 (4-Aminofenylacetyl)-D-2Nal-D-Phe-Lysnh2 1 22,45 —
- 15CZ 293113 B6
41 (Trans-4-aminomethylcyklohexanoyl)-D-2NalD-Phe-Lys-NH2 1 22,07 23,67
42 2-(H-Ala-His-D-2Nal-D-Phe-NH)ethylamin 3 18,6 20,25
43 (2-(H-Ala-His-D-2Nal-D-PheNH)ethyl)benzen 3 30,18 32,18
44 4-((H-Ala-His-D-2Nal-D-PheNH)methyl)benzylamin 3 19,63 21,55
45 (2R)-(H-Ala-His-D-2Nal-NH)-3fenylpropylamin 4 21,55 23,57
46 2-(H-Ala-His-D-2Nal-NH)ethylamin 3 25,52 —
47 H-D-Phe-Ala-2Nal-D-Phe-Lys-NH2 1 27,82 29,43
48 H-Ala-D-Phe-D-2Nal-D-Phe-Lys-NH2 1 25,62 27,22
49 H-Ala-(2-aminobenzoyl)-D-2Nal-D-Phe-Lysnh2 7 26,42 24,93
50 H-Aib-His-D-2Nal-D-Phe-Lys-NH2 1 17,42 20,13
51 H-Ala-His-D-lNal-D-Phe-Lys-NH2 1 17,55 19,8
52 H-Tyr-Ala-His-D-2Nal-D-Phe-Lys-NH2 1 19,9 21,22
53 (Piperidin-4-karbonyl)-D-2Nal-D-Phe-Lys- NH2 1 20,4 22,32
54 H-Ala-Phe(4-NH2)-D-2Nal-D-Phe-Lys-NH2 1 19,20 -
Příklad 55 ((Propionyl)D-2-naftylalanin-D-Phe-NH)hexan
Nosič s peptidem, (propionyl)D-2-naftylalanin-D-Phe-Sasrinový nosič, byl syntetizován postupem popsaným v příkladu 3 na Sasrinovém nosič o substituční kapacitě 0,96 mmol/g.
105 mg výsledného nosiče bylo amonolyzováno.
Peptid ((propionyl)D-2-naftylalanin-D-Phe-NH)hexan byl odštěpen ze 105 mg (propionyl)D2-naftylalanin-D-Phe-Sasrinového nosiče 20 h mícháním při laboratorní teplotě v 1 ml nhexylaminu. Nosič po štěpení byl odfiltrován a extrahován 1 ml DMF. Filtrát a extrakty byly spojeny a za míchání pomalu přidány k 8 ml 1 mol.l1 kys. chlorovodíkové. Vzniklá sraženina byla rozpuštěna přidáním 70 ml CH3CN a znovu sražena přídavkem 20 ml vody. Sraženina byla odfiltrována, promyta vodou a sušena. Výtěžek 12 mg.
Výsledný produkt byl charakterizován jako v příkladu 1, byla však provedena jen jedna HPLC analýza v podmínkách Bl, použitý gradient 0,1 % TFA/H2O až 90 % CH3CN/0,l % TFA/H2O, během 50 min. Zjištěný retenční čas 35,73 min.
Příklad 56 (3-Metylaminometylbenzoyl)-D-2-naftylalanin-D-Phe-Lys-NH2
Nosič s peptidem, (3-aminometylbenzoyl)-D-2-naftylalanin-D-Phe-Lys-(Cl-Z)-MBHAnosič, byl syntetizován postupem popsaným v příkladu 7 na MBHA-nosič o substituční kapacitě 0,72 mmol/g.
Výsledný nosič s peptidem byl metylován podle Kaljuste, K. Undén, A. Int. J. peptide Protein, Res. 42, 118-124, 1993. Nosič (300 mg) byl míchán 2 h ve směsi obsahující 8 ml DCM, 150 μΐ DIEA (dietyl-isopropylamin) a 39 mg, 4,4'-dimetoxyditylchloridu (DOD-C1). Poté byl nosič
-16CZ 293113 B6 odfiltrován, promyt DCM a DMF. Nosič s peptidem chráněným DOD skupinou byl dále míchán v 18 ml roztoku 3,7% formaldehydu v DMF, dále bylo přidáno 0,18 ml kys. octové a 180 mg NaCNBH3 a míchání pokračovalo dalších 18 n. Poté byl nosič odfiltrován a promyt DCM a DMF. DOD chránící skupina byla odštěpena reakcí s 2 x 3 DCM/TFA (1:1), reakční doba 5 min + 30 min, nosič promyt DMC a sušen ve vakuu.
Výsledný N-metylovaný peptid byl odštěpen s 370 mg nosiče postupem uvedeným v příkladu 7 a purifíkován a charakterizován jako v příkladu 1. Výtěžek 17,3 mg.
RP-HPLC analýzou velučních podmínkách Al a Bl byly zjištěny retenční časy 22,83 min, respektive 24,60 min.
Příklad 57 (3-Dimetylaminometylbenzoyl)-D-2-naftylalanin-D-Phe-Lys-NH2
Nosič s peptidem, (3-aminometylbenzoyl)-D-2-naftylalanin-D-Phe-Lys-(Cl-Z)-MBHA nosič, byl syntetizován postupem popsaným v příkladu 7 na MBHA-nosič o substituční kapacitě 0,72 mmol/g.
300 mg výsledného nosiče s peptidem bylo mícháno v 20 ml 1% kys. octové v DMF a 45 μΐ roztoku 3,7% formaldehydu v DMF; dále bylo přidáno 55 mg NaCNBH3 a míchání pokračovalo dalších 18 h. Poté byl nosič odfiltrován a promyt DMF, DCM/MeOH (6:4) a DCM.
Výsledná směs Ν,Ν-dimetylovaných peptidů byla odštěpena z 631 mg výsledného nosiče postupem uvedeným v příkladu 7 a purifikována a charakterizována jako v příkladu 1. Výtěžek 8,58 mg.
RP-HPLC analýzou velučních podmínkách Al a Bl byly zjištěny retenční časy 31,58min, respektive 33,00 min.
Příklad 58 (3-Amino-3-metylbutanoyl)-D-2-naftylalanin-D-Phe-Lys-NH2
Nosič s peptidem, H-D-2-nafitylalanin-D-Phe-Lys-(Boc)-Rink nosič byl syntetizován postupem popsaným v příkladu 1 na 2 g 4-((2',4'-dimethoxyfenyl)-(Fmoc-amino)metyl-fenoxynosiče (Rink nosič) (Novabiochem, Bad Soden, Německo; katalogové číslo 01-64-0013) o substituční kapacitě 0,39 mmol/lg.
500 mg výsledného nosiče s peptidem (0,15 mmol) bylo suspendováno v 4 ml DCM/MeOH(l:l). Ke směsi byl přidán trietylamin (42 μΐ, 0,3 mmol) a po ochlazení na 0 °C a stálého míchání 2,2-dimetyl-4-oxo-azetidin-l-sulfonyl-chlorid (31 mg; 0,158 mmol). Míchání pokračovalo ještě 20 min při 0 °C a dalších 90 min při laboratorní teplotě. Poté byl nosič odfiltrován, promyt DCM/MeOH (6:4) a sušen ve vakuu. Surový peptid byl odštěpen z nosiče a purifíkován postupem popsaným v příkladu 1. Výtěžek 41,81 mg.
RP-HPLC analýzou velučních podmínkách Al a Bl byly zjištěny retenční časy 22,35 min, respektive 22,95 min.
-17CZ 293113 B6
Příklad 59 (2S)-((3-Aminometylbenzoyl)\|/(CH2NH)D-2-naftylanin-D-Phe-NH)-6-aminohexanol
Nosič s peptidem, H-D-2-naftylalanin-D-Phe-Lys(Boc)-Sasrinový nosič, byl připraven postupem popsaným v příkladu 3 a 980 mg, Sasrinového nosiče o substituční kapacitě 0,87 mmol/g.
Nosič s peptidem (1,4 g) byl redukčně alkylován Boc-3-aminomethylbenzaldehydem a peptid byl odštěpen z 1,0 g výsledného nosiče. Polovina surové směsi produktu byla purifikována postupem popsaným v příkladu 5. Výtěžek 18,46 mg.
RP-HPLC analýzou velučních podmínkách AI a B1 byly zjištěny retenční časy 14,78 min, respektive 17,40 min.
Příklad 60 (2-Aminometylbenzoyl)-D-2-naftylalanin-D-Phe-Lys-NH2
Nosič s peptidem, H-D-2-naftylalanin-D-Phe-Lys-(Boc)-Rink nosič, byl syntetizován postupem popsaným v příkladu 1 na 2 g 4-((2',4'-dimethoxyfenyl)-(Fmoc-amino)metyl-fenoxynosiče (Rink nosič) (Novabiochem, Bad Soden, Německo; katalogové číslo 01-64-0013) o substituční kapacitě 0,39 mmol/g.
500 mg výsledného nosiče s peptidem (0,096 mmol) bylo mícháno 18 ve směsi obsahující 10 ml DMF, 54 mg, ftaloyl-2-aminometyl-benzoové kyseliny (0,192 mmol), 182 mg, HBTU (0,480 mmol) a 164 μΐ DIEA (0,96 mmol). Poté byl nosič promyt DMF, DCM/meOH (6:4) a DCM a sušen ve vakuu. (Ftaloyl-2-aminometylbenzoyl)-D-2-naftylalanin-D-Phe-Lys--NH2 byl odštěpen z 290 mg nosiče směsí obsahující 3 ml TFA, 225 mg fenolu, 75 μΐ etandithiolu, 150 μΐ thioanisolu a 150 μΐ vody, za stálého míchání, 180 min. Směs po štěpení byla odfiltrována, nosič promyt 1 ml TFA a filtrát zahuštěn v proudu dusíku na 1 ml. Z výsledného oleje byl surový peptid vysrážen dietyletherem (50 ml) a promyt dietyletherem (3 x 50 ml). Sraženina byla rozpouštěna ve vodě (50 ml) a lyofílizována. Výsledný prášek byl pídí míchán s 0,5 ml hydrátu hydrazinu v 5 ml etanolu, 6 h při 70 °C, pak zředěn vodou (50 ml) a lyofilizován.
Lyofilizát byl rozpuštěn ve směsi obsahující 2 ml kys. octové, 2 ml etanolu a 100 ml vody, a purifíkován postupem popsaným v příkladu 1. Výtěžek 9,43 mg.
RP-HPLC analýzou velučních podmínkách AI a B1 byly zjištěny retenční časy 23,22min, respektive 25,05 min.
Příklad 61
H-Aib-Hisψ(CH2NH)D-2-naftylalanm-D-Phe-Lys-OH
Peptid byl syntetizován postupem popsaným v příkladu 5, s tím rozdílem, že byl použit Sasrinový nosič (1 050 mg) (nosič funkcionalizovaný 2-methoxy-4-alkoxybenzylalkoholem (Bachem, Budendorf, Švýcarsko; katalogové číslo D-1295) o substituční kapacitě 0,87 mmol/g. První aminokyselina byla navázána k nosiči reakcí katalyzovanou 4-dimetylamino-pyridinem vycházející z předem připraveného symetrického anhydridu, zbylé volné -OH skupiny na nosiči byly benzoylovány (anhydridem kys. benzoové). Po odštěpení peptidů z 752 mg nosiče a purifikaci 7/10 surové směsi produktu postupem popsaným v příkladu 1, bylo získáno 36,76 mg výsledného produktu.
-18CZ 293113 B6
Výsledný produkt byl charakterizován jako v příkladu 1. RP-HPLC analýzou velučních podmínkách Al a B1 byly zjištěny retenční časy 13,90 min, respektive 17,42 min.
Příklad 62
H-Aib-His-N-Me-D-2-naftylalnin-D-Phe-Lys-NH2
Nosič speptidem, H-N-Me-D-2-naftylalanin-D-Phe-Lys-(Cl-Z)-MBHA-nosič, byl syntetizován postupem popsaným v příkladu 56 na MBHA-nosiči o substituční kapacitě 0,72 mmol/g.
458 mg připraveného nosiče s peptidem bylo dále použito pro syntézu Η-Kyselina aminoizobutanová-His(Bom)-N-Me-D-2-naftylalanin-D-Phe-Lys-(Cl-Z)-MBHA-nosiče kondenzací s Boc-His(Bom)-OH a BOC-Aib-OH. N-metylovaný peptid byl odštěpen z 469 mg výsledného nosiče. Polovina surové směsi produktů byla purifikována a charakterizována postupem popsaným v příkladu 7.
Výtěžek 23,5 mg.
RP-HPLC analýzou velučních podmínkách Al a B1 byly zjištěni retenční časy 17,62 min, respektive 19,95 min.
Příklad 63 (Furfuryl)-Aib-His-D-2-nartylalanin-D-Phe-Lys-NH2
Nosič s peptidem, H-Aib-His(Trt)-D-2-naftylalanin-D-Phe-Lys(Boc)-Rink nosič, byl syntetizován postupem popsaným v příkladu 1 a 4-((2',4'-dimethoxyfenyl)-(Fmoc-amino)metylfenoxy-nosiči (Rinl nosič) (Novabiochem, ad Soden, Německo; katalogové číslo 01-64-0013) o substituční kapacitě 0,43 mmol/g. 300 mg výsledného nosiče s peptidem bylo mícháno ve směsi 5 ml 1% kys. octové vDMF a 410 μΐ furan-2-aldehydu. Dále bylo přidáno 231 mg, NaCNBH3 (85 %) po 15 min a po 180 min. Míchání pokračovalo dalších 18 h. Poté byl nosič odfiltrován a promyt DMF, DCM/MeOH (6:4) a DCM.
N-alkylovaný peptid byl odštěpen z 319 mg výsledného nosiče, purifikován a charakterizován postupem uvedeným v příkladu 1. Výtěžek 44,8 mg.
RP-HPLC analýzou velučních podmínkách Al a B1 byly zjištěny retenční časy 19,45 min, respektive 22,23 min.
Příklad 64
N,N-di(2R-Hydroxypropyl)-3-aminometylbenzoyl)-D-2-nafiyIalanin-D-Phe-Lys-NH2
Nosič s peptidem, (3-aminometylbenzoyl)-D-2-naftylalanin-D-Phe-Lys-(Cl-Z)-MBHA nosič, byl syntetizován postupem popsaným v příkladu 7 na 4-metylbenzydiylaminovém nosiči (MBHA) (Bissendorf Biochemicals, Hannover, Německo, katalogové číslo: RMIS50) o substituční kapacitě 0,72 mmol/g.
500 mg výsledného nosiče s peptidem bylo mícháno ve směsi obsahující 12,5 ml 1% kys. octové v DMF a 410 μΐ 2(R)-(tetrahydropyran-2(R,S)-yloxy)propanolu. Dále bylo přidáno 213 mg
-19CZ 293113 B6
NáCNBH3 (85 %) po 5 min. Míchání pokračovalo dalších 18 h. Poté byl nosič odfiltrován a promyt DMF, DCM/MeOH (6:4) a DCM.
Ν,Ν-dialkylovaný peptid byl odštěpen z 490 mg výsledného nosiče, purifikován a charakterizo5 ván postupem popsaným v příkladu 7. Výtěžek 20,72 mg.
RP-HPLC analýzou velučních podmínkách Al a B1 byly zjištěny retenční časy 23,40 min, respektive 25,33 min.
Příklady 65-110
Př. č. Peptid Připraveno dle př. č. RP-HPLC ret. časy pro Al /př.l/ RP-HPLC ret. časy pro B1 /př.l/
65 H-Ala-N-Me-(2-aminobenzoyl)-D-2Nal-D- Phe-Lys-NH2 7 24,47 26,27
66 (4-Aminomethylbenzoyl)-D-2Nal-D-Phe-Lysnh2 1 22,22 23,5
67 H-His-Alka-D-2Nal-D-Phe-Lys-NH2 1 19,90 21,45
68 (2S)-(H-Ala-His-D-2Nal-D-Phe-NH)-l ,6diaminohexan 8 17,05 19,07
69 4-(H-Ala-His-D-2Nal-D-Phe-NH)butylamin 3 18,65 20,08
70 3-(H-Ala-His-D-2Nal-D-Phe-NH)propylamin 3 18,42 19,80
71 (3-Aminomethylbenzoyl)-D-hPhe-D-Phe-Lysnh2 7 20,33 21,95
72 (3-Aminomethylbenzoyl)\|/(CH2NH)D-2Nal-D- Phe-Lys-NH2 5 14,17 17,23
73 (3-Aminomethylbenzoyl)-D-2Nal-D-hPhe-Lysnh2 7 25,30 26,58
74 (3-Amino-3-methylbutanoyl)-His-D-2Nal-D- Phe-Lys-NH2 58 18,12 20,20
75 (3-aminomethylbenzoyl)-D-2Nal-N-Bzl-Gly- Lys-NH2 7 25,33 26,70
76 (2S)-((3-Aminoniethylbenzoyl)-D-2Nal-D-Phe- NH)-6-aminohexanol 4 22,95 24,32
77 (3-Amiomethylbenzoyl)-D-2Nal-D-Thial-Lysnh2 7 22,13 23,23
78 (2S)-(H-Aib-Hisv(CH2NH)D-2Nal-D-phe- NH)-6-aminohexanol 58 12,83 17,27
79 (3-aminomethylbenzoyl)-D-2Nal-D-3Pyal-Lys- nh2 1 15,10 16,87
80 (3-Aminomethylbenzoyl)-D-2Nal-D-Phe(4-F}Lys-NH2 7 23,40 24,63
81 (3-Aminomethylbenzoyl)-D-2Nal-D-Phe(4OMe)-Lys-NH2 7 22,50 23,90
82 2-(H-Aib-His-D-2Nal-D-Phe-NH)ethan 3 18,30 20,47
83 H-aib-Phe-D-2Nal-D-Phe-Lys-NH2 1 29,25 30,55
84 2-(H-Aib-His-D-2Nal-D-Phe-NH-(l-methyl- 2-pyrrolidinyl)ethan 3 18,70 20,80
-20CZ 293113 B6
85 2-(H-Aib-His-D-2Nal-D-Phe-NH-(l-methyl- 2-pyrrolidinyl)ethan 3 19,20 20,83
86 (3-aminomethylbenzoyl)-D-2Nal-N-Me-D-Phe- Lys-NH2 1 26,78 27,88
87 H-Aib-His-D-2Nal-D-Phe-Gly-NH2 1 20,48 22,23
88 H-Aib-His-D-2Nal-D-Phe-Ala-NH2 1 21,65 23,38
89 H-Aib-His-D-2Nal-D-Phe-Om-NH2 1 18,43 20,05
90 (5-Aminomethylthienyl-2-karbonyl)-D-2Nal-I>- Phe-Lys-NH2 1 22,32 23,65
91 H-Aib-His-D-2Nal-D-Phe-D-Lys-NH2 1 18,50 20,00
92 H-Aib-His-D-2Nal-D-Phe-Dab-NH2 1 17,75 19,48
93 H-Aib-His-D-2Nal-D-Phe\y(CH2NH)Lys--NH2 5 18,57 20,62
94 H-Aib-his-D-2Nal-D-Phe-N-Me-Lys-NH2 62 18,03 20,60
95 (3-aminomethylthienyl-2-karbonyl)-4-2Nal-D- Phe-Lys-NH2 1 23,23 24,78
96 H-Aib-His-D-2Nal-N-Me-D-Phe-Lys-NH2 1 21,78 23,53
97 H-Aib-His-D-2Nal-D-Phe-Lys-N(Me)2 3 18,70 21,07
98 (3-Aminomethylbenzoyl)-D-lNal-D-Phe-Lysnh2 1 22,67 24,23
99 H-Aib-His-D-2Nal-D-Trp-Lys-NH2 1 18,17 20,40
100 (2-Pyridylmethyl)-Aib-His-D-2Nal-D-Phe- Lys-NH2 63 19,07 21,73
101 H-Aib-(3-Ammomethylbenzoyl)-D-2Nal-D- Phe-Lys-NH2 7 23,95 25,38
102 H-Aib-3Pyal-D-2Nal-D-Phe-Lys-NH2 1 18,35 20,38
103 (3R)-Piperidinkarbonyl)-D-2Nal-D-Phe-LysNH2 1 21,52 22,97
104 (2-{H-Aib-His-D-2Nal-NH)ethyl)benzen 3 25,55 27,85
105 (2R-hydroxypropyl)-Aib-His-D-2Nal-D-Phe- Lys-NH2 64 18,15 20,28
106 (3-aminomethylbenzoyl)-D-2Nal-D- Phev|/(CH2NH)Lys-NH2= 5 22,00 23,95
107 (3-aminomethylbenzoyl)-N-Me-D-2Nal-D-Phe- Lys-NH2 62 23,27 24,72
108 (3-Aminomethylbenzoyl)-D-2Nal-D-Phe-N- Me-Lys-NH2 67 22,60 23,98
109 H-D-Thr-His-D-2Nal-D-Phe-Lys-NH2 7 17,75 19,83
110 H-Hyp-His-D-2Nal-D-Phe-Lys-NH2 7 17,58 19,37
Vzorové struktury sloučenin předkládaného vynálezu:
-21 CZ 293113 B6
N,N-Di-(2R-Hydroxypropyl)-(3“aminomethylbenzoyl)-D-2Nal-D-Phe-Lys-NH2
3-(4-Imidazolyl)propionyl)-D-2Nal-D-Phe-Lys-NH2
H-Ala-3Pyal-D-2Nal-D-Phe-Lys-NH2
-22CZ 293113 B6 (Traňs-4-aminomethylcyklohexaiioyl)-D-2Nal-D-Phe-Lys-NH2
H-Ala-(2-aminobenzoyl)-D-2Nal-D-Phe-Lys-NH2
(3R)-Piperidinkarbonyl-D-2Nal-D-Phe-Lys-NH2
-23CZ 293113 B6
H-Ala-N-Me-(2-aminobenzoyl)-D-2Nal-D-Phe-Lys-NH2
2-(H-Aib-His-D-2Nal-D-Phe-NH)(l-methyl-2-pyiTolidinyl)ethan
-24CZ 293113 B6 (5-Aminomethylthienyl-2-karbóriyl)-D-2Nal-D-Phe-Lys-NH2
(3-Aminomethyl-thienyl-2-karbonyl)-D-2Nal-D-Phe-Lys-NH2
(3-Aminomethylbenzoyl)-D-2Nal-N-(fenethyl)-Gly-Lys-NH2
Příklad 116
Zkoumání účinků různých sekretů růstového hormonu byl věnován test provedený in vitro na 10 krysích hypofyzámích buňkách. Směsné hypofyzální buněčné kultury byly izolovány z předního laloku hypofyzy krysích samců a kultivovány 3 dny. Po promytí byly buňky stimulovány 15 min a v kultivačním médiu stanovováno množství uvolněného růstového hormonu.
Hypofyzámí buňky byly izolovány modifikovaným postupem dle O. Sartor et al., Endocrinology 15 116, 1985, pp. 952-957. Samci krys o hmotnosti 250 g byly dekapitováni a byly odebrány hypofyzy. Neurointermediámí laloky byly odstraněny a zbytek byl suspendován v Grayově médiu doplněném 0,25 % glykózy, dvěma neesenciálními aminokyselinami a 1 % BSA (izolační pufr). Žlázy byly nařezány na malé kousky a přeneseny do nádoby obsahující 3 ml izolačního pufru, 11 mg trypsinu a 1 000 pg DNázy a směs byla inkubována při 37 °C, 35 min, 95 % O2,
-25CZ 293113 B6 ot/min. Fragmenty byly 3 x promyty sedimentací v izolačním pufru a buňky odsáty Pasterovou pipetou. Po dispergování byly buňky přefiltrovány přes nylonový filtr (160 pm) kvůli odstranění neztrávené tkáně. Buňky byly 3 x promyty izolačním pufrem doplněným o trypsinový inhibitor ((0,75 mg/g) a resuspendovány v kultivačním médiu (DMEM doplněný 25 mmol
HEPES, 4 mmol glutaminu, 0,75 % hydrogenuhličitanu sodného, 2,5 % FCS, 3 % koňského séra, nmol T3 a 40 pg/l dexametasonu) při koncentraci 2 x 105 buněk/ml. Buňky byly vneseny do mikrotitračních destiček, 200 μΐ/jamku a kultivovány 3 dny při 37 °C a 8 % CO2.
Po kultivaci byly buňky promyty 2 x stimulačním pufrem (HBSS doplněný 1 % BSA, 0,25 % io D-glukózy a 25 mmol HEPES) a preinkubovány 1 h. Poté byl starý pufr odstraněn a přidán nový stimulační pufr obsahující peptid, destičky byly inkubovány 15 min při 37 °C a 5% CO2.
V odebraném médiu bylo stanoveno množství krysího růstového hormonu scintilačním testem (scintillation proximity assay - SPA), jak je uvedeno dále (SPA, proveden podle US 4 568 649, Hart and Greenwalt, mol, Immunol., 16, 1979, pp. 265-269, nebo Udenfriend et al., Proč. Nati.
Acad. Sci. USA 82, 1985, pp. 8672-8676).
Stanovení krysího růstového hormonu bylo provedeno na Optiplates (96-ti jamkové destičky) vhodné pro přímé počítání na Pckards TopCount (β-scintilační počítadlo).
Provedení testu:
μΐ pufru μΐ vzorku (inkubovaného ve stimulačním pufr) μΐ l25I-rGH (krysí růstový hormon)
50 μΐ králičí anti-rGH μΐ SPA činidla (králičí anti-GH protilátka)
Destičky byly uzavřeny umístěny do třepačky na 30 min, po 10 h inkubace byly ponechány sedimentovat při 10 až 15 °C a proveden odečet.
V SPA, rGH navázaný na králičí anti-GH protilátku (primární protilátka) reaguje s další protilátkou navázanou na fluomikrosféry (SPA Typ Π RIA, Amersham). Veškerý radioizotopicky značený rGH vázaný na primární protilátku se naváže na fluomikrosféry a svítí. Odečet na β-scintilačním počítadle umožní stanovit množství radioizotopicky značeného rGH. Množství radioizotopicky značeného rGH navázaného na fluomikrosféry klesá se zvyšujícím se obsahem rGH ve vzorku.
Průmyslová využitelnost
Předkládaný vynález přináší nové peptidové deriváty, které stimulují uvolňování růstového hormonu. Jsou využitelné při léčbě řady zdravotních poruch souvisejících s nedostatkem růstového hormonu.

Claims (6)

1. Peptidový derivát vybraný ze skupiny zahrnující:
H-Ala-Hisψ(CH2NH)D-2Nal-D-Phe-Lys-NH2 H-Ala-Ala-D-2Nal-D-Phe-Lys-NH2 H-His-D-2Nal-D-Phe-Lys-NH2 (3-(4-Imidazolyl)propionyl)-D-2Nal-D-Phe-Lys-NH2) H-D-Lys-D-2Nal-D-Phe-Lys-NH2 H-5Apent-his-D-2Nal-D-Phe-Lys-NH2 H-D-Ala-D-2Nal-D-Phe-Lys-NH2 H-5Apent-D-2Nal-D-Phe-Lys-NH2 (n-Propyl)-His-D-2Nal-D-Phe-Lys-NH2 H-Ala-3Pya-D-2Nal-D-Phe-Lys-NH2 H-Ala-Phe(4-NH2)-D-2Nal-D-Phe-Lys-NH2 H-D-Ala-His-D-2Nal-D-Phe-Lys-NH2 (2-(4-Imidazolyl)acetyl)-D-2Nal-D-Phe-Lys-NH2 (3J4-Imidazolyl)akryloyl)-D-2Nal-D-Phe-Lys-NH2 (3-Aminomethylbenzoyl)-D-2Nal-D-Phe-Lys-NH2 (3-Aminofenylacetyl)-D-2Nal-D-Phe-Lys-NH2 (4-Aminofenylacetyl)-D-2Nal-D-Phe-Lys-NH2 (3-Aminokrotonoyl)-D-2Nal-D-Phe-Lys-NH2 (4-Piperidino-karboxyl)-D-2Nal-D-Phe-Lys-NH2 H-Ala-His-D-2Nal-D-Phe-NH2 (H-Ala-His-D-2Nal-D-Phe-NH)hexan 6-(H-Ala-His-D-2Nal-D-Phe-NH)hexylamin 5-(H-Ala-His-D-2Nal-D-Phe-NH)pentylamin H-Ala-His-D-2Nal-D-Phev(CH2NH)Lys-NH2 H-Ala-His-D-2Nal-D-Phe-Lys-OH (2S)-(H-Ala-His-D-2Nal-D-Phe-NH)-6-aminohexanol (2-(H-Ala-His-D-2Nal-D-Phe-NH)ethyl)benzen 2-(H-Ala-His-D-2Nal-D-Phe-NH)ethylamin 4-((H-Ala-His-D-2Nal-D-Phe-NH)methyl)benzylamin H-Ala-His-D-2Nal-D-Phe-Lys(mantosyl)-NH2 H-Ala-His-D-2Nal-D-Phe-Phe-NH2 H-Ala-His-D-2Nal-D-Phe-D-Phe-NH2 H-Ala-His-D-Phe-D-Phe-Lys-NH2 H-Ala-His-D-Trp-D-Phe-Lys-NH2 H-His-D-2Nal-D-Trp-Lys-NH2 H-Ala-His-D-lNal-D-Phe-Lys-NH2 H-Ala-Phe-D-2Nal-D-Phe-Lys-NH2 H-Ala-His-D-2Nal-D-Phe-Lys(maltosyl)-NH2
-27CZ 293113 B6 (2R)-\H-Ala-His-D-2Nal-D-Phé-Lys-NH)-3-fenylpropylamin
H-Ala-N-Me-(2-aminobenzoyl)-D-Nal-D-Phe-Lys-NH2 (3-MethylaminomethylbenzoyI)-D-2Nal-D-Phe-Lys-NH2 (4-Aminomethylbenzoyl)-D-2Nal-D-Phe-Lys-NH2
5 H-His-Ala-D-2Nal-D-Phe-Lys-NH2
4—(H-Ala-His-D-2Nal-D-Phe-NH)butylamin
3-(H-Ala-His-D-2Nal-D-Phe-NH)propylamin (3-Dimethylaminomethylbenzoyl)-D-2Nal-D-Phe-Lys-NH2 (3-Amino-3-methylbutanoyl)-D-hPhe-D-Phe-Lys-NH2
10 (3-Aminomethylbenzoyl)-D-2Nal-D-hPhe-Lys-NH2 (3-Aminomethylbenzoy^(CH2NH)D-2Nal-D-Phe-Lys-NH2 (3-Aminomethylbenzoyl)-D-2Nal-D-hPhe-Lys-NH2 (3-Amino-3-methylbutanoyl)-His-D-2Nal-D-Phe-Lys-NH2 (3-Aminomethylbenzoyl)-D-2Nal-N-Bzl-Gly-Lys-NH2
15 (2S)-(3-ammomethylbenzoyl)y(CH2NH)D-2Nal-D-Phe-NH)-6-aminohexanol (2S)-(3-aniinomethylbenzoyl)-D-2Nal-D-Phe-NH)-6-aminohexanol (3-Aminomethylbenzoyl)-D-2Nal-D-Thial-Lys-NH2 (2SHH-Aib-HisV(CH2NH)D-2Nal-D-Phe-NH)-6-aininohexanol (3-Aminomethylbenzoyl)-E>-2Nal-D-3Pyal-Lys-NH2
20 (3-Aminomethylbenzoyl)-D-2Nal-D-Phe(4-F)-Lys-NH2 (3-Aminomethylbenzoyl)-D-2Nal-D-Phe(4-OMe)-Lys-NH2 (2-Aminomethylfenylacetyl)-D-2Nal-D-Phe-Lys-NH2 (2-Aminomethylbenzoyl)-D-2Nal-D-Phe-Lys-NH2 2-(H-Aib-His-D-2Nal-D-Phe-NH)-(4-pyridyl)ethan
25 H-Aib-Phe-D-2Nal-D-Phe-Lys-NH2
2-(H-Aib-His-D-2Nal-D-Phe-NH)-(l-inethyl-2-pynOlidinyl)ethan 2-(H-Aib-His-E>-2Nal-D-Phe-NH)-(4-pyridyl)ethan Η-ΑίΕ-Ηί5ψ(€Η2ΝΗ)-Β-2Ν31-Β-ΡΗ6-Εγ5-ΟΗ (3-Aminomethylbenzoyl)-D-2Nal-N-Me-D-Phe-Lys-NH2
30 H-Aib-His-D-2Nal-D-Phe-Gly-NH2
H-Aib-His-D-2Nal-D-Phe-Ala-NH2
H-Aib-His-D-2Nal-D-Phe-Orn-NH2 (5-Aminomethylthienyl-2-karbonyl)-D-2Nal-D-Phe-Lys-NH2 H-Aib-His-D-2Nal-D-Phe-D-Lys-NH2
35 H-Aib-His-D-2Nal-D-Phe-Dab-NH2
H-Aib-His-D-2Nal-D-Phev(CH2NH)-Lys-NH2
H-Aib-His-D-Me-D-2Nal-D-Phe-Lys-NH2
H-Aib-His-D-2Nal-D-Phe-N-Me-Lys-NH2 (3-Ammomethylthienyl-2-karbonyl)-D-2Nal-D-Phe-Lys-NH2
40 H-Aib-His-D-2Nal-N-Me-D-Phe-Lys-NH2
H-Aib-His-D-2Nal-D-Phe-Lys-N(Me)2 (3R)-PiperidinkarbonyI-D-2Nal-D-Phe-Lys-NH2
-28CZ 293113 B6 (3S)-Piperidinkarbonyl-D-2Nal-jD-Phe-Lys-NH2 (3-Aminomethylbehzoyl)-D-lNal-D-Phe-Lys-NH2
H-Aib-his-D-2Nal-D-Trp-Lys-NH2 (Furfuryl)-Aib-His-D-2Nal-D-Phe-Lys-NH2
5 (2-Pyridylmethyl)-Aib-His-D-2Nal-D-Phe-Lys-NH2
H-Aib-(3-aminomethylbenzoyl)-D-2Nal-D-Phe-Lys-NH2
H-Aib-3-Pyal-D-2Nal-D-phe-Lys-NH2 (3S)-Piperidinkarbonyl-D-2Nal-D-Phe-Lys-NH2 (3R)-Piperidinkarbonyl-D-2Nal-D-Phe-Lys-NH2
10 (2-(H-Aib-his-D-Nal-NH)-ethyl)benzen
N,N-di(2R-Hydroxypropyl)-(3-aininomethylbenzoyl)-D-2Nal-D-Phe-Lys-NH2 (2R-Hydroxypropyl)-Aib-His-D-2Nal-D-Phe-Lys-NH2 (3-Aminomethylbenzoyl)-I>-2Nal-D-Phe\p(CH2NH)-Lys--NH2 (3-Aminomethylbenzoyl)-N-Me-D-2Nal-D-Phe-Lys-NH2
15 (3-Aminomethylbenzoyl)-D-2Nal-D-Phe-N-Me-Lys-NH2
H-D-Thr-His-D-2Nal-D-Phe-Lys-NH2
H-Aib-His-D-2Nal-N-(fenethyl)-Gly-Lys-NH2 (3-Aminomethylbenzoyl)-D-2Nal-N-(fenethyl)--Gly-Lys-NH2 H-Hyp-His-D-2Nal-D-Phe-Lys-NH2
20 H-Aib-His-N-Me-D-2Nal-N-(fenethyl>-Gly-Lys-NH2
H-Aib-His-N-Me-D-2Nal-N-Me-D-Phe-Lys-NH2
Η-ΑΐΙ>-Ηί3-Ε>-2Νη1-ϋ-ΡΗεψ(εΗ2Ν(Μ6)^3-ΝΗ2
3-(H-Aib-His-D-2Nal-Me-D-Phe-NH)morfolinopropan
2- (H-Aib-His-D-2Nal-N-Me-D-Phe-NH)-( 1 -methyl-2-pyrrolidinyl)ethan
25 (3R)-Piperidinkarbonyl-N-Me-D-2Nal-N-Me-D-Phe-Lys-NH2
3- ((Aminomethylbenzoyl)-D-2Nal-N-Me-D-Phe-NH)morfolinopropan 2-(H-Aib-His-N-Me-D-2Nal-N-Me-D-Phe-NH)-(l-methyl-2-pyiTolidinyl)ethan
2- ((3R)-Piperidinkarbonyl-N-Me-D-2Nal-N-Me-D-Phe-NH)-(l-methyl-2-pyrrolidinyl)ethan)
30 2-((3-Aminomethylbenzoyl)-N-Me-D-2Nal-N-Me-D-Phe-NH)-(l-niethyl-2-pyrrolidinyl)ethan
3- (H-Aib-His-N-Me-D-2Nal-N-Me-D-Phe-NH)morfolinopropan
3-((3R)-Piperidinkarbonyl-N-Me-D-2Nal-N-Me-D-Phe-NH)morfolinopropan
3-((3-Aminomethylbenzoyl)-N-Me-D-2Nal-N-Me-D-Phe-NH)morfolinopropan
35 H-Aib-His-D-2Nal-N-Me-D-Phe-Hyp-NH2
2-((3-Aminoinethylbenzoyl)-D-2Nal-N-Me-D-Phe-NH)-(l-methyl-2-pyrrolidinyl)ethan
2-((3R)-Piperidinkarbonyl-D-2Nal-N-Me-D-Phe-NH)-(l-methyl-2-pyrrolidmyl)ethan kde:
D-2Nal = D-2-naftylalanin 5Apant = kys. 5-aminopentanová 3Pyal = 3-pyridylalanin Aib = kys. H.-aminoisomáselná = Kys. iminoizobutanová Thial = thienylalanin
-29CZ 293113 B6 hPhe
N-Bzl-Gly
4-F
4-OMe
Om Dab Hyp Tic homo-fenylalanin
N-benzylglycin
4-fluor
4-methoxy omitin kys. 2,4-diaminomáselná hydroxyprolin
1,2,3,4-tetrahydroisochinolin-3-karboxylová kys.
2. Farmaceutický přípravek, vyznačující se tím, že jako účinnou složku obsahuje peptidový derivát podle nároku 1 nebo jeho farmaceuticky přijatelnou sůl spolu s farmaceuticky přijatelným nosičem nebo ředidlem.
3. Farmaceutický přípravek podle nároku 2, vyznačující se tím, že v jednotkové dávkové formě obsahuje 10 až 200 mg peptidového derivátu nebo jeho farmaceuticky přijatelné soli.
4. Farmaceutický přípravek stimulující uvolňování růstového hormonu z hypofýzy, vyznačující se tím, že jako účinnou složku obsahuje peptidový derivát podle nároku 1 nebo jeho farmaceuticky přijatelnou sůl spolu s farmaceuticky přijatelným nosičem nebo ředidlem.
5. Peptidový derivát podle nároku 1 pro použití jako léčivo pro léčení zdravotních poruch vyplývajících z nedostatku růstového hormonu.
6. Použití peptidového derivátu podle nároku 1 nebo jeho farmaceuticky přijatelné soli pro přípravu léčiva na stimulaci uvolňování růstového hormonu z hypofýzy.
CZ19961834A 1993-12-23 1994-12-22 Peptidový derivát CZ293113B6 (cs)

Applications Claiming Priority (3)

Application Number Priority Date Filing Date Title
DK143993A DK143993D0 (cs) 1993-12-23 1993-12-23
DK12194 1994-01-28
DK119194 1994-10-14

Publications (2)

Publication Number Publication Date
CZ183496A3 CZ183496A3 (en) 1997-02-12
CZ293113B6 true CZ293113B6 (cs) 2004-02-18

Family

ID=27220421

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
CZ19961834A CZ293113B6 (cs) 1993-12-23 1994-12-22 Peptidový derivát

Country Status (27)

Country Link
US (1) US5767085A (cs)
EP (1) EP0736039B1 (cs)
JP (1) JP3181918B2 (cs)
KR (1) KR100354897B1 (cs)
CN (1) CN1052731C (cs)
AT (1) ATE197158T1 (cs)
AU (1) AU689181B2 (cs)
BR (1) BR9408377A (cs)
CA (1) CA2179597A1 (cs)
CZ (1) CZ293113B6 (cs)
DE (1) DE69426206T2 (cs)
DK (1) DK0736039T3 (cs)
ES (1) ES2153469T3 (cs)
FI (1) FI962584A7 (cs)
GR (1) GR3035150T3 (cs)
HU (1) HU224345B1 (cs)
IL (1) IL112112A (cs)
MX (1) MX9500072A (cs)
NO (1) NO315561B1 (cs)
NZ (1) NZ277486A (cs)
PL (1) PL181280B1 (cs)
PT (1) PT736039E (cs)
RO (1) RO115635B1 (cs)
SG (1) SG55069A1 (cs)
SK (1) SK281963B6 (cs)
UA (1) UA42747C2 (cs)
WO (1) WO1995017423A1 (cs)

Families Citing this family (56)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CA2176140A1 (en) * 1993-11-24 1995-06-01 Meng Hsin Chen Indolyl group containing compounds and the use thereof to promote the release of growth hormone(s)
EP0736038B1 (en) * 1993-12-23 2001-07-04 Novo Nordisk A/S Compounds with growth hormone releasing properties
US20020111461A1 (en) 1999-05-21 2002-08-15 Todd C. Somers Low molecular weight peptidomimetic growth hormone secretagogues
US5798337A (en) * 1994-11-16 1998-08-25 Genentech, Inc. Low molecular weight peptidomimetic growth hormone secretagogues
CZ238197A3 (en) * 1995-01-27 1997-12-17 Novo Nordisk As Growth hormone formation stimulating compounds
BR9608909A (pt) * 1995-06-22 1999-03-02 Novo Nordisk As Composto composição farmacêutica processos para estimular a liberação do hormônio do crescimento da patuitária e aumentar a velocidade e extensão do crescimento dos animais para aumentar a produção de leite ou lã de animais ou para para doenças e uso do composto
US6531314B1 (en) 1996-12-10 2003-03-11 Merck & Co., Inc. Growth hormone secretagogue receptor family
EP0870199B1 (en) 1995-12-13 2006-07-26 Merck & Co., Inc. Assays for growth hormone secretagogue receptors
GB2308362A (en) * 1995-12-19 1997-06-25 Lilly Industries Ltd Pharmaceutical indole derivatives
DE69637855D1 (de) * 1995-12-22 2009-04-16 Novo Nordisk As Verbindungen mit wachstumshormon-freisetzenden eigenschaften
US6451970B1 (en) 1996-02-21 2002-09-17 Novo Nordisk A/S Peptide derivatives
IL126235A (en) * 1996-04-24 2003-02-12 Novo Nordisk As Compounds with growth hormone releasing properties, pharmaceutical compositions comprising them and their use
US5919777A (en) * 1996-04-24 1999-07-06 Novo Nordisk A/S Compounds with growth hormone releasing properties
WO1998003473A1 (en) * 1996-07-22 1998-01-29 Novo Nordisk A/S Compounds with growth hormone releasing properties
AU3938797A (en) * 1996-08-29 1998-03-19 Novo Nordisk A/S Transdermal delivery of peptides
US6420518B1 (en) 1997-04-04 2002-07-16 Genetech, Inc. Insulin-like growth factor agonist molecules
US6121416A (en) 1997-04-04 2000-09-19 Genentech, Inc. Insulin-like growth factor agonist molecules
EP1005484A1 (en) 1997-06-20 2000-06-07 Novo Nordisk A/S Compounds with growth hormone releasing properties
US6127341A (en) * 1997-06-20 2000-10-03 Novo Nordisk A/S Compounds with growth hormone releasing properties
JP4382279B2 (ja) 1998-01-16 2009-12-09 サファイア セラピューティクス，インコーポレイティド 成長ホルモン放出特性を有する化合物
US6919315B1 (en) 1998-06-30 2005-07-19 Novo Nordisk A/S Compounds with growth hormone releasing properties
US6682908B1 (en) 1998-07-10 2004-01-27 Merck & Co., Inc. Mouse growth hormone secretagogue receptor
WO2000002919A1 (en) 1998-07-13 2000-01-20 Merck & Co., Inc. Growth hormone secretagogue related receptors and nucleic acids
US6645726B1 (en) 1998-08-10 2003-11-11 Merck & Co., Inc. Canine growth hormone secretagogue receptor
US6696063B1 (en) * 1998-12-30 2004-02-24 Applied Research Systems Ars Holding N.V. Treatment of HIV-associated dysmorphia/dysmetabolic syndrome (HADDS) with or without lipodystrophy
DK1141014T3 (da) 1999-01-06 2005-04-11 Genentech Inc Insulinlignende vækstfaktor (IGF) i mutantvariant
CA2362290A1 (en) * 1999-02-18 2000-08-24 Kaken Pharmaceutical Co., Ltd. Novel amide derivatives as growth hormone secretagogues
CA2375148A1 (en) * 1999-06-04 2000-12-14 Novo Nordisk A/S Compositions for the treatment of the catabolic state of prolonged critical illness
ATE389416T1 (de) 2000-05-16 2008-04-15 Genentech Inc Behandlung von knorpelerkrankungen
DE60140285D1 (de) 2000-05-31 2009-12-10 Pfizer Prod Inc Verwendung von Wachstumshormonsekretagoga zur Förderung der Beweglichkeit des Verdauungstrakts
TWI331922B (en) 2002-08-09 2010-10-21 Ipsen Pharma Sas Growth hormone releasing peptides
EP1633331A1 (en) * 2003-05-19 2006-03-15 Warner-Lambert Company LLC Hard gelatin capsule containing titanium oxide with a controlled particle size and process for producing the same
US7476653B2 (en) 2003-06-18 2009-01-13 Tranzyme Pharma, Inc. Macrocyclic modulators of the ghrelin receptor
CA2538342C (en) 2003-09-12 2013-01-08 Tercica, Inc. Methods for treatment of insulin-like growth factor-1 (igf-1) deficiency
WO2005027913A1 (en) * 2003-09-19 2005-03-31 Pfizer Products Inc. Pharmaceutical compositions and methods comprising combinations of 2-alkylidene-19-nor-vitamin d derivatives and a growth hormone secretagogue
CA2565324A1 (en) * 2004-03-30 2005-10-20 Sapphire Therapeutics, Inc. Method of reducing c-reactive protein using growth hormone secretagogues
UA87854C2 (en) 2004-06-07 2009-08-25 Мерк Энд Ко., Инк. N-(2-benzyl)-2-phenylbutanamides as androgen receptor modulators
MX2007001477A (es) * 2004-08-12 2007-10-10 Sapphire Therapeutics Inc Metodo para la estimulacion de la motilidad del sistema gastrointenstinal, que usa secretagogos de la hormona del crecimiento.
CU23558A1 (es) 2006-02-28 2010-07-20 Ct Ingenieria Genetica Biotech Compuestos análogos a los secretagogos peptidicos de la hormona de crecimiento
WO2007127457A2 (en) * 2006-04-28 2007-11-08 The Administrators Of The Tulane Educational Fund Ghrelin/growth hormone releasing peptide/growth hormone secretatogue receptor antagonists and uses thereof
US8138191B2 (en) 2007-01-11 2012-03-20 Critical Outcome Technologies Inc. Inhibitor compounds and cancer treatment methods
MX2009008574A (es) 2007-02-09 2009-12-09 Tranzyme Pharma Inc Moduladores del receptor de grelina macrociclicos y metodos para usar el mismo.
EA200970764A1 (ru) * 2007-02-13 2010-04-30 ХЕЛСИНН ТЕРАПЬЮТИКС (Ю. Эс.), ИНК. Способ лечения расстройств, вызванных пролиферацией клеток, с применением стимуляторов секреции гормона роста
TWI429436B (zh) * 2007-04-10 2014-03-11 Helsinn Therapeutics Us Inc 使用生長激素促泌素治療或預防嘔吐之方法
US20100099640A1 (en) 2007-05-04 2010-04-22 Joannes Geuns Tissue degeneration protection
US8466151B2 (en) 2007-12-26 2013-06-18 Critical Outcome Technologies, Inc. Compounds and method for treatment of cancer
UA105657C2 (uk) 2009-02-27 2014-06-10 Хелсінн Терапьютікс (Ю.Ес.), Інк. Поліпшені способи лікування мігрені на основі анамореліну
US9724381B2 (en) 2009-05-12 2017-08-08 The Administrators Of The Tulane Educational Fund Methods of inhibiting the ghrelin/growth hormone secretatogue receptor pathway and uses thereof
MX2011013113A (es) * 2009-06-12 2012-02-21 Helsinn Therapeutics Us Inc Soluciones de inyeccion e infusion de diacetato de ipamorelin.
CA2999435A1 (en) 2010-04-01 2011-10-06 Critical Outcome Technologies Inc. Compounds and method for treatment of hiv
WO2013190520A2 (en) 2012-06-22 2013-12-27 The General Hospital Corporation Gh-releasing agents in the treatment of vascular stenosis and associated conditions
US9119832B2 (en) 2014-02-05 2015-09-01 The Regents Of The University Of California Methods of treating mild brain injury
CN106572997A (zh) 2014-05-30 2017-04-19 辉瑞公司 作为选择性雄激素受体调节剂的腈衍生物
US20170121385A1 (en) 2015-10-28 2017-05-04 Oxeia Biopharmaceuticals, Inc. Methods of treating neurodegenerative conditions
EP3601245A1 (en) * 2017-03-28 2020-02-05 The Regents of The University of Michigan Small molecule dcn1 inhibitors and therapeutic methods using the same
WO2023275715A1 (en) 2021-06-30 2023-01-05 Pfizer Inc. Metabolites of selective androgen receptor modulators

Family Cites Families (10)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US4223019A (en) * 1979-03-30 1980-09-16 Beckman Instruments, Inc. Synthetic peptides having pituitary growth hormone releasing activity
US4223020A (en) * 1979-03-30 1980-09-16 Beckman Instruments, Inc. Synthetic peptides having pituitary growth hormone releasing activity
US4228156A (en) * 1979-03-30 1980-10-14 Beckman Instruments, Inc. Synthetic peptides having pituitary growth hormone releasing activity
BR8208035A (pt) * 1981-12-28 1983-11-22 Beckman Instruments Inc Peptideos sinteticos tendo atividade liberadora de hormonio do crescimento da pituitaria
US4410512A (en) * 1981-12-28 1983-10-18 Beckman Instruments, Inc. Combinations having synergistic pituitary growth hormone releasing activity
US4803261A (en) * 1986-06-27 1989-02-07 The Administrators Of The Tulane Educational Fund Method for synthesizing a peptide containing a non-peptide
IL98910A0 (en) * 1990-07-24 1992-07-15 Polygen Holding Corp Polypeptide compounds having growth hormone releasing activity and pharmaceutical compositions containing them
US5663146A (en) * 1991-08-22 1997-09-02 Administrators Of The Tulane Educational Fund Polypeptide analogues having growth hormone releasing activity
JPH08502250A (ja) * 1992-09-25 1996-03-12 スミスクライン・ビーチャム・コーポレイション 成長ホルモン放出ペプチド
CA2176140A1 (en) * 1993-11-24 1995-06-01 Meng Hsin Chen Indolyl group containing compounds and the use thereof to promote the release of growth hormone(s)

Also Published As

Publication number Publication date
PL315113A1 (en) 1996-10-14
FI962584L (fi) 1996-06-20
IL112112A0 (en) 1995-03-15
ES2153469T3 (es) 2001-03-01
HU9501947D0 (en) 1995-11-28
HU224345B1 (hu) 2005-08-29
FI962584A0 (fi) 1996-06-20
MX9500072A (es) 1997-05-31
SK281963B6 (sk) 2001-09-11
CN1138335A (zh) 1996-12-18
HUT73497A (en) 1996-08-28
AU689181B2 (en) 1998-03-26
DE69426206D1 (de) 2000-11-30
WO1995017423A1 (en) 1995-06-29
RO115635B1 (ro) 2000-04-28
FI962584A7 (fi) 1996-06-20
JP3181918B2 (ja) 2001-07-03
NO962665L (no) 1996-08-23
UA42747C2 (uk) 2001-11-15
AU1272495A (en) 1995-07-10
CN1052731C (zh) 2000-05-24
SK82096A3 (en) 1997-01-08
IL112112A (en) 2000-06-29
EP0736039B1 (en) 2000-10-25
NZ277486A (en) 1997-03-24
JPH09507217A (ja) 1997-07-22
SG55069A1 (en) 1998-12-21
NO315561B1 (no) 2003-09-22
US5767085A (en) 1998-06-16
CZ183496A3 (en) 1997-02-12
CA2179597A1 (en) 1995-06-29
NO962665D0 (no) 1996-06-21
BR9408377A (pt) 1997-08-19
DE69426206T2 (de) 2001-05-17
DK0736039T3 (da) 2001-02-12
PL181280B1 (pl) 2001-07-31
KR100354897B1 (ko) 2003-01-06
PT736039E (pt) 2001-04-30
GR3035150T3 (en) 2001-04-30
ATE197158T1 (de) 2000-11-15
EP0736039A1 (en) 1996-10-09

Similar Documents

Publication Publication Date Title
CZ293113B6 (cs) Peptidový derivát
JP3759748B2 (ja) 成長ホルモン放出性を有する化合物
CZ408197A3 (cs) Peptidový derivát, farmaceutický prostředek ho obsahující, jejich použití, způsob stimulace uvolňování růstového hormonu a způsob zvýšení rychlosti a rozsahu růstu zvířat, zvýšení produkce mléka nebo vlny zvířat nebo léčení onemocnění
JPH06503090A (ja) ノナペプチドのボンベシン拮抗薬
US5990084A (en) Compounds with growth hormone releasing properties
TW438811B (en) Compounds with growth hormone releasing properties
JP4173541B6 (ja) 成長ホルモン放出特性を有する化合物

Legal Events

Date Code Title Description
PD00 Pending as of 2000-06-30 in czech republic
MM4A Patent lapsed due to non-payment of fee

Effective date: 19941222