HU224345B1 - Növekedési hormont felszabadító tulajdonságú peptidek, ezeket hatóanyagként tartalmazó gyógyszerkészítmények és alkalmazásuk - Google Patents

Növekedési hormont felszabadító tulajdonságú peptidek, ezeket hatóanyagként tartalmazó gyógyszerkészítmények és alkalmazásuk Download PDF

Info

Publication number
HU224345B1
HU224345B1 HU9501947A HU9501947A HU224345B1 HU 224345 B1 HU224345 B1 HU 224345B1 HU 9501947 A HU9501947 A HU 9501947A HU 9501947 A HU9501947 A HU 9501947A HU 224345 B1 HU224345 B1 HU 224345B1
Authority
HU
Hungary
Prior art keywords
2nal
phe
lys
ala
aib
Prior art date
Application number
HU9501947A
Other languages
English (en)
Other versions
HU9501947D0 (en
HUT73497A (en
Inventor
Bernd Peschke
Nils Langeland Johansen
Kjeld Madsen
Behrend Friedrich Lundt
Henning Thogersen
Birgit Sehested Hansen
Jesper Lau
Original Assignee
Novo Nordisk A/S.
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Priority claimed from DK143993A external-priority patent/DK143993D0/da
Application filed by Novo Nordisk A/S. filed Critical Novo Nordisk A/S.
Publication of HU9501947D0 publication Critical patent/HU9501947D0/hu
Publication of HUT73497A publication Critical patent/HUT73497A/hu
Publication of HU224345B1 publication Critical patent/HU224345B1/hu

Links

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K5/00—Peptides containing up to four amino acids in a fully defined sequence; Derivatives thereof
    • C07K5/04—Peptides containing up to four amino acids in a fully defined sequence; Derivatives thereof containing only normal peptide links
    • C07K5/10—Tetrapeptides
    • C07K5/1024—Tetrapeptides with the first amino acid being heterocyclic
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P25/00—Drugs for disorders of the nervous system
    • A61P25/28—Drugs for disorders of the nervous system for treating neurodegenerative disorders of the central nervous system, e.g. nootropic agents, cognition enhancers, drugs for treating Alzheimer's disease or other forms of dementia
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P3/00—Drugs for disorders of the metabolism
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
    • A61P31/12—Antivirals
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P35/00—Antineoplastic agents
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P43/00—Drugs for specific purposes, not provided for in groups A61P1/00-A61P41/00
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P5/00—Drugs for disorders of the endocrine system
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P5/00—Drugs for disorders of the endocrine system
    • A61P5/02—Drugs for disorders of the endocrine system of the hypothalamic hormones, e.g. TRH, GnRH, CRH, GRH, somatostatin
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P5/00—Drugs for disorders of the endocrine system
    • A61P5/06—Drugs for disorders of the endocrine system of the anterior pituitary hormones, e.g. TSH, ACTH, FSH, LH, PRL, GH
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P5/00—Drugs for disorders of the endocrine system
    • A61P5/10—Drugs for disorders of the endocrine system of the posterior pituitary hormones, e.g. oxytocin, ADH
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
    • C07K14/435—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
    • C07K14/575—Hormones
    • C07K14/60—Growth hormone-releasing factor [GH-RF], i.e. somatoliberin
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K5/00—Peptides containing up to four amino acids in a fully defined sequence; Derivatives thereof
    • C07K5/04—Peptides containing up to four amino acids in a fully defined sequence; Derivatives thereof containing only normal peptide links
    • C07K5/08—Tripeptides
    • C07K5/0802—Tripeptides with the first amino acid being neutral
    • C07K5/0812—Tripeptides with the first amino acid being neutral and aromatic or cycloaliphatic
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Endocrinology (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • Biophysics (AREA)
  • Diabetes (AREA)
  • Neurology (AREA)
  • Neurosurgery (AREA)
  • Gastroenterology & Hepatology (AREA)
  • Biomedical Technology (AREA)
  • Zoology (AREA)
  • Toxicology (AREA)
  • Hospice & Palliative Care (AREA)
  • Psychiatry (AREA)
  • Virology (AREA)
  • Oncology (AREA)
  • Communicable Diseases (AREA)
  • Hematology (AREA)
  • Obesity (AREA)
  • Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
  • Peptides Or Proteins (AREA)
  • Organic Low-Molecular-Weight Compounds And Preparation Thereof (AREA)

Abstract

A találmány tárgyát az A–B–Z–D(E)p képletű vegyületek és sóik,valamint az azokat tartalmazó növekedési hormon hipofízisből valófelszabadulásának stimulálására alkalmas készítmények képezik. Aképletben A hidrogénatom vagy R1–(CH2)q–(X)r–(CH2)s–CO– képletűacilcsoport, B (G)t–(H)u képletű aminosavszekvencia, Z valamely D-aminosav, D egy D-aminosav vagy más pontosan meghatározott szervescsoport, E primer vagy szekunder aminocsoport, és p 0 vagy 1.

Description

A találmány új peptidszármazékokkal, az ezeket tartalmazó készítményekkel és a növekedésihormon-hiányból eredő orvosi rendellenességek kezelésével kapcsolatos.
A növekedési hormon olyan hormon, mely az összes növekedésre képes szövet növekedését stimulálja. Ezenkívül, ismert, hogy a növekedési hormonnak számos hatása van az anyagcsere-folyamatokra, például stimulálja a proteinszintézist és a szabad zsírsav mobilizációt, valamint elmozdulást okoz a szénhidrát-zsírsav energia metabolizmusában. A növekedési hormon hiánya számos komoly orvosi rendellenességet, például törpeséget okoz.
A növekedési hormon a hipofízisből szabadul föl. A felszabadulás számos hormon és neurotranszmitter akár közvetlen, akár közvetett szoros szabályozása alatt áll. A növekedésihormon-felszabadítás növekedési hormont felszabadító hormonnal (GHRH) stimulálható és szomatosztatinnal gátolható. Mindkét esetben a hormonok a hipotalamuszból szabadulnak föl, és működésüket elsősorban a hipofízisben levő specifikus receptorok közvetítik. Más vegyületeket is leírtak már, melyek a növekedési hormon hipofízisből való felszabadítását stimulálják. Például az arginin, az L-3,4-dihidroxi-fenil-alanin (L-Dopa), a glukagon, a vazopresszin, a PACAP (hipofízis adenilil-cikláz aktiváló peptid), a muszkarinreceptor-agonisták és egy szintetikus hexapeptid, GHRP (növekedésihormon-felszabadító peptid) felszabadító endogén növekedési hormon vagy közvetlenül a hipofízisre hatva, vagy a hipotalamuszból a GHRH és/vagy szomatosztatin felszabadulását befolyásolva.
Az olyan rendellenességekben vagy körülmények között, ahol a növekedési hormon megnövekedett szintjei kívánatosak, a növekedésihormon-protein tulajdonsága lehetetlenné teszi a parenterális adagolást. Továbbá, más közvetlenül ható természetes kiválasztást fokozó vegyület, például a GHRH és a PACAP hosszabb polipeptidek, melynek következtében ezek orális alkalmazása nem lehetséges.
A növekedési hormon szintjeinek emlősökben való növeléséhez rövidebb peptidek használatát már korábban is javasolták, például a 18 072, 83 864 számú EP szabadalmakban, a 89/07110, 89/01711, 89/10933, 88/9780, 83/02272, 91/18016, 92/01711 és
93/04081 számú WO szabadalmakban.
A növekedési hormont felszabadító peptidek vagy peptidszármazékok összetétele fontos a növekedési hormont felszabadító hatékonyságukhoz, valamint biológiai elérhetőségük szempontjából. Ezért a találmány tárgya olyan peptidek biztosítása, melyek olyan növekedési hormont felszabadító tulajdonsággal rendelkeznek, melyek fejlesztett tulajdonságokkal rendelkeznek az ilyen típusú ismert peptidekhez képest.
Tehát, a találmány az
A-B-Z-D(-E)p (I) általános képletű vegyületre vonatkozik, ahol p jelentése 0 vagy 1;
A jelentése egy hidrogénatom, vagy
R1-(CH2)q-(X)r-(CH2)s-CO- csoport, ahol q jelentése 0 vagy 1 és 5 közötti egész szám; r jelentése 0 vagy 1;
s jelentése 0 vagy 1 és 5 közötti egész szám;
R1 jelentése hidrogénatom, imidazolil- vagy
-N(R2)-R3 képletű csoport, ahol
R2 és R3 egymástól függetlenül hidrogénatom vagy kis szénatomszámú alkilcsoport, mely adott esetben helyettesítve lehet egy vagy több hidroxil-, piridil- vagy furanilcsoporttal, és
X jelentése -(CH2)-, -CH=CH- vagy (1) képletű csoport, ahol R16 és R17 egymástól függetlenül hidrogénatom vagy kis szénatomszámú alkilcsoport,
B jelentése (G)t-(H)U- képletű csoport, ahol t értéke 0 vagy 1, u értéke 0 vagy 1,
G és H jelentése egymástól függetlenül L- vagy D-Ala, -His, -Phe, -Tyr, -Thr természetes aminosavmaradék, vagy szintetikus aminosavak, így 1,4-diamino-izovajsav, 4-amino-fenil-alanin, 3-piridil-alanin, N-metil-antranilsav, antranilsav, N-benzil-glicin, 3-amino-metil-benzoesav, 3-amino-3-metil-butánsav, nipekotinsav vagy izonipekotinsav maradéka, és ahol, ha t és u értéke egyaránt 1, a G és H közötti amidkötés adott esetben -Y-N(R18)- csoporttal helyettesítve lehet, ahol Y jelentése =CO vagy =CH2 csoport és R18 jelentése hidrogénatom, kis szénatomszámú alkil- vagy benzilcsoport,
Z jelentése NH-CH[(CH2)W-R4)]-CO- képletű D-aminosav maradéka, ahol w értéke 0, 1 vagy 2,
R4 vagy ha jelentése (2a), (2b) vagy (2d) képletű csoport,
D jelentése, ha p=1, egy NH-CH[(CH2)k-R5)]-CO- általános képletű D-aminosav maradéka, vagy ha p=0, akkor D jelentése NH-CH[(CH2)r-R5)]-CH2-R6 vagy NH-CH[(CH2)m-R5)]-CH2-R6 általános képletű aminosav maradéka, ahol k értéke 0, 1 vagy 2,
I értéke 0, 1 vagy 2, m értéke 0, 1 vagy 2,
R5 jelentése (2a), (2b), (2d) vagy (2e) képletű csoport, melyek mindegyike adott esetben halogénatommal vagy kis szénatomszámú alkoxicsoporttal lehet helyettesítve, és
R6 jelentése -N(R7)-R8 képletű csoport, ahol az R7 és R8 egymástól függetlenül hidrogénatom vagy kis szénatomszámú alkilcsoport,
E jelentése -NH-CH(R1°)-(CH2)V-R9 általános képletű csoport, ahol v értéke 0 vagy 1 és 8 közötti egész szám,
R9 jelentése hidrogénatom vagy (3) általános képletű csoport, ahol n értéke 1 vagy 2, és
R19 jelentése hidrogénatom, kis szénatomszámú alkilcsoport, (4) általános képletű csoport - ahol o értéke 1 és 3 közötti egész szám -, N(R11)-R12 általános képletű csoport - ahol R11 és R12 egymástól függetlenül hidrogén2
HU 224 345 Β1 atom vagy kis szénatomszámú alkilcsoport vagy (2a) vagy (2c) képletű csoport,
R10 jelentése hidrogénatom, -CH2-R13, -CO-R13 vagy -CH2OH csoport, ahol R13 jelentése -OH vagy -N(R14)-R15 csoport, ahol R14 és R15 egymástól függetlenül hidrogénatom;
és a 6 és Z közötti kötés, továbbá ha t és u értéke egyaránt 0, akkor az A és Z közötti amidkötés adott esetben -Y-N(R18) csoporttal lehet helyettesítve - ahol Y és R18 jelentése a fenti -;
valamint ezek gyógyszerészetileg elfogadható sói.
A proteolitikus lebontással szembeni fokozott rezisztenciától a találmány peptidszármazékainak csökkentett méretével kombinálva azt várjuk, hogy javítja a biológiai elérhetőséget a korábbi irodalomban javasolt peptidekhez viszonyítva.
A jelen szövegösszefüggésben a „kis szénatomszámú alkil” fogalmával olyan alkilcsoportokat szándékoztunk jelölni, melyek 1-4 szénatomból állnak, különösen a metil-, etil-, propil-, izopropil- vagy butilcsoportokat. A „halogén” fogalmával a klór-, fluor-, bróm- és jódatomokat szándékoztuk jelölni. A „kis szénatomszámú alkoxi” és a „kis szénatomszámú alkil-amino” kifejezésekben a kis szénatomszámú alkilegység jelentése ugyanaz, mint amit fent jeleztünk.
Az (I) általános képletű vegyület egy előnyös megvalósításában p=1. Az (I) képlettel rendelkező vegyület egy másik előnyben részesített megvalósulásában A egy hidrogénatom, vagy másik lehetőségként R1-(CH2)q-(X)r(CH2)s-CO-, ahol R1 3-imidazolil, q=2, r=0 és s=0; vagy ahol R1 NH2, q=1, r=1, X egy kettős helyettesítésű benzén, mely előnyösen az 1. és a 3. pozíciókban helyettesített; s=0; vagy ahol R1 NH2, q=1, r=1, X egy kettős helyettesítésű tiofén, mely előnyösen a 3. és a 2. pozícióban helyettesített és s=0. Ha t=1, az l-es képlettel rendelkező vegyületben a G előnyösen Alá, Gly, Aib, szarkozin, nipekotinsav vagy izonipekotinsav. Ha u=1, H előnyösen His, Phe, Tic, Phe(4-NH2), 3-Pyal, Gly, Alá, Sár, Pro, Tyr, Arg, Orn, 3-aminometil-benzoesav vagy D-Phe. Az (I) képlettel rendelkező vegyületben a C előnyösen D-2-naftil-alanin (D-2Nal), D-1 -naftil-alanin (D-1Nal), D-Phe vagy D-Trp. Az (I) képlettel rendelkező vegyületben a D előnyösen D-Phe, D-1Nal, D-2Nal, D-Trp, 3-Pyal, D-Phe(4F), D-Tyr vagy Phe-NH2.
Az (I) általános képletű vegyületben E előnyösen Lys-NH2, NH-(2-(1-piperazino)-etil), NH-(2-(1-morfolino)-propil), NH-(2-amino-etil), NH-(4-amino-metilbenzil), NH-(benzil), Lys-OH, NH-(1-hidroxi-6-amíno-2S-hexil), NH-(2-(1-metil-2-pirrolidinil)-etil) vagy a (6) jelöléssel rendelkező csoport.
Az (I) általános képletű vegyületben az R4 előnyösen 2-naftil. R5 előnyösen fenil, v előnyösen 2-6 és R9 NH2, morfolino-etil, morfolino-propil vagy (1-metil-pirrolidinil)-etil. R10 előnyösen -COOH csoport, -CH2-OH csoport, hidrogénatom, -CONH2 csoport vagy -CON(CH3)2.
A találmány specifikus vegyületeire példák a következők:
H-Ala-His-pszi(CH2NH)-D-2Nal-D-Phe-Lys-NH2
H-Ala-Ala-D-2Nal-D-Phe-Lys-NH2
H-His-D-2Nal-D-Phe-Lys-NH2 (3-(4-imidazolil)-propionil)-D-2Nal-D-Phe-Lys-NH2
H-D-Lys-D-2Nal-D-Phe-Lys-NH2
H-5Apent-His-D-2Nal-D-Phe-Lys-NH2
H-D-Ala-D-2Nal-D-Phe-Lys-NH2
H-5Apent-D-2Nal-D-Phe-Lys-NH2 (n-propil)-His-D-2Nal-D-Phe-Lys-NH2
H-Ala-3Pyal-D-2Nal-D-Phe-Lys-NH2
H-Ala-Phe-(4-NH2)-D-2Nal-D-Phe-Lys-NH2
H-D-Ala-His-D-2Nal-D-Phe-Lys-NH2 (2-(4-imidazolil)-acetil)-D-2Nal-D-Phe-Lys-NH2 (3-(4-imidazolil)-akriloil)-D-2Nal-D-Phe-Lys-NH2 (3-amino-metil-benzoil)-D-2Nal-D-Phe-Lys-NH2 (3-amino-fenil-acetil)-D-2Nal-D-Phe-Lys-NH2 (4-amino-fenil-acetil)-D-2Nal-D-Phe-Lys-NH2 (3-amino-krotonoíl)-D-2Nal-D-Phe-Lys-NH2 (4-piperidino-karboxil)-D-2Nal-D-Phe-Lys-NH2
H-Ala-His-D-2Nal-D-Phe-Lys-NH2 (H-Ala-His-D-2Nal-D-Phe-Lys-NH)-hexán
6-(H-Ala-His-D-2Nal-D-Phe-Lys-NH)-hexil-amin
5-(H-Ala-His-D-2Nal-D-Phe-Lys-NH)-pentil-alanin
H-Ala-His-D-2Nal-D-Phe-pszi(CH2NH)-Lys-NH2
H-Ala-His-D-2Nal-D-Phe-Lys-OH (2S)-(H-Ala-His-D-2Nal-D-Phe-NH)-6-amino-hexanol (2-(H-Ala-His-D-2Nal-D-Phe-NH)-etil)-benzén
2- (H-Ala-His-D-2Nal-D-Phe-NH)-etil-amin 4-((H-Ala-His-D-2Nal-D-Phe-NH)-metil)benzil-amin
H-Ala-His-D-2Nal-D-Phe-Lys-(maltozil)-NH2
H-Ala-His-D-2Nal-D-Phe-Phe-NH2
H-Ala-His-D-2Nal-D-Phe-D-Phe-NH2
H-Ala-His-D-Phe-D-Phe-Lys-NH2
H-Ala-His-D-T rp-D-Phe-Lys-NH2
H-His-D-2Nal-D-Trp-Lys-NH2
H-Ala-His-D-1 Nal-D-Phe-Lys-NH2
H-Ala-His-D-2Nal-D-T rp-Lys-NH2
H-Ala-His-D-1 Nal-D-Phe-Lys-NH2
H-Ala-Phe-D-2Nal-D-Phe-Lys-NH2
H-Ala-His-D-2Nal-D-Phe-Lys-(maltozil)-NH2 (2R)-(H-Ala-His-D-2Nal-D-Phe-Lys-NH)-3-fenil-propil-amin
H-Ala-N-Me-(2-amino-benzoil)-D-2Nal-D-PheLys-NH2 (3-(metil-amino-metil)-benzoil)-D-2Nal-D-PheLys-NH2 (4-(amino-metil)-benzoil)-D-2Nal-D-Phe-Lys-NH2
H-His-Ala-D-2Nal-D-Phe-Lys-NH2
4-(H-Ala-His-D-2Nal-D-Phe-NH)-butil-amin
3- (H-Ala-His-D-2Nal-D-Phe-NH)-propil-amin (3-(dimetil-amino-metil)-benzoil)-D-2Nal-DPhe-Lys-NH2 (3-amino-3-metil-butanoil)-D-2Nal-D-Phe-Lys-NH2 (3-amino-metil-benzoil)-D-hPhe-Lys-NH2 (3-amino-metil-benzoil)pszi(CH2NH)-D-2Nal-D-Phe-Lys-NH2 (3-amino-metil-benzoil)-D-2Nal-D-hPhe-Lys-NH2 (3-amino-3-metil-butanoil)-His-D-2Nal-D-PheLys-NH2
HU 224 345 Β1 (3-amino-metil-benzoil)-D-2Nal-N-Bzl-Gly-Lys-NH2 (2S)-(3-amino-metil-benzoil)-pszi(CH2NH)D-2Nal-D-Phe-NH)-6-amino-hexanol (2S)-((3-amino-metil-benzoil)-D-2Nal-D-PheNH)-6-amino-hexanol (3-amino-metil-benzoil)-D-2Nal-D-Thial-Lys-NH2 (2S)-(H-Aib-His-pszi(CH2NH)-D-2Nal-D-Phe-NH)6-amino-hexanol (3-amino-metil-benzoil)-D-2Nal-D-3Pyal-Lys-NH2 (3-amino-metil-benzoil)-D-2Nal-D-Phe(4-F)Lys-NH2 (3-amino-metil-benzoil)-D-2Nal-D-Phe(4-OMe)Lys-NH2 (2-amino-metil-fenil-acetil)-D-2Nal-D-Phe-Lys-NH2 (2-amino-metil-benzoil)-D-2Nal-D-Phe-Lys-NH2
2-(H-Aib-His-D-2Nal-D-Phe-NH)-(4-piridil)-etán
H-Aib-Phe-D-2Nal-D-Phe-Lys-NH2
2-(H-Aib-His-D-2Nal-D-Phe-NH)-(1-metil-2-pirrolidinil)-etán
2-(H-Aib-His-D-2Nal-D-Phe-NH)-(4-piridil)-etán
H-Aib-His-pszi(CH2H)-D-2Nal-D-Phe-Lys-OH (3-amino-metil-benzoil)-D-2Nal-N-Me-D-Phe-LysNH2
H-Aib-His-D-2Nal-D-Phe-Gly-NH2
H-Aib-His-D-2Nal-D-Phe-Ala-NH2
H-Aib-His-D-2Nal-D-Phe-Orn-NH2 (5-amino-metil-tienil-2-karbonil)-D-2Nal-D-PheLys-NH2
H-Aib-His-D-2Nal-D-Phe-D-Lys-NH2
H-Aib-His-D-2Nal-D-Phe-Dab-NH2
H-Aib-His-D-2Nal-D-Phe-pszi(CH2NH)-Lys-NH2
H-Aib-His-N-Me-D-2Nal-D-Phe-Lys-NH2
H-Aib-His-D-2Nal-D-Phe-N-Me-Lys-NH2 (3-amino-metil-tienil-2-karbonil)-D-2Nal-D-PheLys-NH2
H-Aib-His-D-2Nal-N-Me-D-Phe-Lys-NH2
H-Aib-His-D-2Nal-D-Phe-Gly-N(Me)2 (3R)-piperidin-karbonil-D-2Nal-D-Phe-Lys-NH2 (3S)-piperidin-karbonil-D-2Nal-D-Phe-Lys-NH2 (3-amino-metil-benzoil)-D-1Nal-D-Phe-Lys-NH2
H-Aib-His-D-2Nal-D-trp-Lys-NH2 (furfuril)-Aib-His-D-2Nal-D-Phe-Lys-NH2 (2-piridil-metil)-Aib-His-D-2Nal-D-Phe-Lys-NH2
H-Aib-(3-amino-metil-benzoil)-D-2Nal-D-PheLys-NH2
H-Aib-3Pyal-D-2Nal-D-Phe-Lys-NH2 (3S)-piperidin-karbonil-D-2Nal-D-Phe-Lys-NH2 (3R)-piperidin-karbonil-D-2Nal-D-Phe-Lys-NH2 (2-(H-Aib-His-D-2Nal-NH)-etil)-benzol
N,N-di(2R-hidroxi-propil)-(3-amino-metilbenzoil)-D-2Nal-D-Phe-Lys-NH2 (2R-hidroxi-propil)-Aib-His-D-2Nal-D-Phe-Lys-NH2 (3-amino-metil-benzoil)-D-2Nal-D-Phepszi(CH2NH)-Lys-NH2 (3-amino-metil-benzoil)-N-Me-D-2Nal-DPhe-Lys-NH2 (3-amino-metil-benzoil)-D-2Nal-D-Phe-N-MeLys-NH2
H-D-Thr-His-D-2Nal-D-Phe-Lys-NH2
H-Aib-His-D-2Nal-N-(fenetil)-Gly-Lys-NH2 (3-amino-metil-benzoil)-D-2Nal-N-(fenetil)-Gly-Lys-NH2
H-Hyp-His-D-2Nal-D-Phe-Lys-NH2
H-Aib-His-N-me-D-2Nal-N-(fenetil)-Gly-Lys-NH2
H-Aib-His-N-Me-D-2Nal-N-Me-D-Phe-Lys-NH2
H-Aib-His-D-2Nal-D-Phe-pszi(CH2N(Me))-Lys-NH2
3-(H-Aib-His-D-2Nal-N-Me-D-Phe-NH)-morfolino-propán
3-(H-Aib-His-D-2Nal-N-Me-D-Phe-NH)-(1-metil-2-pirrolidinil)-etán (3R)-piperidin-karbonil-N-Me-D2Nal-N-Me-D-Phe-Lys-NH2
3-((amino-metil-benzoil)-D-2nal-NMe-D-Phe-NH)-morfolino-propán
2-(H-Aib-His-N-Me-D-2Nal-N-Me-D-Phe-NH)-(1-metil-2-pirrolidinil)-etán
2-(3R)-piperidin-karbonil-N-Me-D2Nal-N-Me-D-Phe-NH)-(1-metil-2-pirrolidinil)-etán
2- (3-amino-metil-benzoil)-N-Me-D2Nal-N-Me-D-Phe-NH)-(1-metil-2-pirrolidinil)-etán
3- (H-Aib-His-N-Me-D-2Nal-N-Me-D-Phe-NH)-morfolino-propán
3-(H-Aib-His-N-Me-D-2Nal-N-Me-D-Phe-NH)-morfolino-propán
3-((3R)-piperidin-karbonil-N-Me-D2Nal-N-Me-D-Phe-NH)-morfolino-propán
3- ((3-amino-metil-benzoil)-N-Me-D-2NalN-me-D-Phe-NH)-morfolino-propán
H-Aib-His-D-2Nal-N-Me-D-Phe-Hyp-NH2
2-((3-amino-metil-benzoil)-D-2Nal-NMe-D-Phe-NH)-(1-metil-2-pirrolidinil)-etán
2-((3R)-piperidin-karbonil-D-2Nal-NMe-D-Phe-NH)-(1-metil-2-pirrolidinil)-etán
A rövidítések jelentése a következő
D-2Nal=D-2-naftil-alanin
5Apent=5-amino-pentanonsav
3Pyal=3-piridil-alanin
Aib=H-amino-izovajsav
Thial=tienil-alanin hPhe=homo-fenil-alanin
N-Bzl-Gly=N-benzil-glicin
4- F=4-fluor
4-OMe=4-metoxi
Orn=ornitin
Dab=2,4-diamino-butánsav
Hyp=hidroxi-prolin
Tic=1,2,3,4-tetrahidrokinolin-3-karbonsav
Az (I) általános képletű vegyületek előállíthatok az oldott vagy szilárd fázisú peptidszintézis hagyományos módszereivel. Például a szilárd fázisú szintézis elvégezhető alapjában véve a Stewart és Young által leírtak szerint (Solid Phase Peptide Synthesis, 2nd ed., Rockford, Illinois, USA, 1976). Az oldott peptidszintézis például a Bodansky és munkatársai által leírtakkal alapjában véve egyező módon végezhető el (Peptide Synthesis, 2nd Ed., New York, New York, USA, 1976).
Amidkötés helyettesítéseként az amino-metilén bejuttatható az Y. Sasaki és D. H. Coy által leírt módszer szerint [Peptides 8(1), 1987, pp. 119—121]. A monovagy dihexapiranózeredetű aminocsoportot tartalmazó
HU 224 345 Β1 peptidszármazékok előállíthatok Amadori-újrarendezéssel is, alapjában véve az R. Albert és munkatársai által leírtakkal egyezően (Life Science, 53, 1993, pp. 517-525). A megfelelő mono- vagy dihexapiranózokra példák a glükóz, galaktóz, maltóz, laktóz vagy a cellobióz. A szintézisben kiindulási anyagként használt származékok lehetnek a kereskedelemből beszerezhetők és ha kívánatos, biztosíthatók megfelelő védőcsoportokkal, vagy az (I) általános képlettel rendelkező vegyületben az „A egység előállításához a kiindulási anyagok előállíthatok jól ismert módszerekkel és tetszőlegesen védett csoportokkal per se ismert módon.
Az (I) általános képletű vegyület gyógyszerészeti szempontból elfogadható savaddíciós sói közé azok tartoznak, melyeket a peptid egy szervetlen vagy szerves savval, mint például hidroklorid-, hidrobromid-, kénes-, ecet-, foszfor-, tej-, malein-, ftál-, citrom-, glutár-, glükon-, metánszulfon-, szalicil-, szukcinil-, tartarát-, toluolszulfon-, trifluor-ecet-, szulfamát- és fumársavakkal való reagáltatásával állítunk elő, ismert módon.
Egy másik megközelítésben a találmány egy gyógyszerészeti készítménnyel kapcsolatos, mely aktív alkotórészként egy, az (I) általános képlettel rendelkező vegyületet vagy annak egy gyógyszerészeti szempontból elfogadható sóját tartalmazza egy gyógyszerészeti szempontból elfogadható hordozóval vagy diluenssel együtt.
A jelen találmány egy vegyületét tartalmazó gyógyszerészeti készítmény előállítható hagyományos technikákkal, például ahogy azt a Remington's Pharmaceutical Sciences, 1985, leírja. A készítményt elő lehet állítani hagyományos formákban, például kapszulákban, tablettákban, aeroszolokban, oldatokban, szuszpenziókban vagy topikális alkalmazásokban.
Az alkalmazott gyógyszerészeti hordozó vagy diluens lehet hagyományos szilárd vagy folyékony hordozó. A szilárd hordozókra példa a laktóz, a terra alba, a szacharóz, a ciklodextrin, a talkum, a zselatin, az agar, a pektin, az akácia, a magnézium-sztearát, a sztearátsav vagy a cellulóz kis szénatomszámú alkil-éterei. A folyékony hordozókra példák a szirup, a földimogyoró-olaj, az olívaolaj, a foszfolipidek, a zsírsavak, a zsírsav-aminok, a poli(oxi-etilén) és a víz.
Hasonlóképpen, a hordozó vagy a diluens magában foglalhat bármilyen a tudomány számára ismert hosszan tartó felszabadulású anyagot, mint a gliceril-monosztearát vagy a gliceril-disztearát, egyedül vagy egy viasszal keverve.
Ha szilárd hordozót használunk orális alkalmazáshoz, a készítmény tablettázható, keményzselatin-kapszulába helyezhető por vagy pellet alakban, vagy lehet pirula vagy cukorka formában. A szilárd hordozó mennyisége széleskörűen változhat, de általában kb. 25 mg-1 g mennyiség között van.
Egy tipikus tabletta, mely hagyományos tablettázótechnikákkal állítható elő, a következőket tartalmazza:
Mag:
Aktív alkotórész (szabad vegyületként vagy annak sójaként) 100 mg
Kolloidális szilícium-dioxid (aerosil) 1,5 mg
Cellulóz, mikrokristályos (Avicel) 70 mg
Módosított cellulózgumi (Ac-Di-Sol) 7,5 mg
Magnézium-sztearát
Burkolóanyag:
HPMC megközelítően 9 mg
‘Mywacett 9-40 T megközelítően 0,9 mg
* acilezett monoglicerid a filmes burkoláshoz lágyítóként használjuk
Ha folyékony hordozót használunk, a készítmény lehet szirup, emulzió, lágyzselatin-kapszula vagy steril injektálható folyadék formájában, mint egy vizes vagy nemvizes folyékony szuszpenzió vagy oldat formájában.
A nazális alkalmazásokhoz a készítmény tartalmazhatja az (I) képlettel rendelkező vegyület oldott vagy szuszpendált formáját egy folyékony hordozóban, különösen vizes hordozóban, aeroszolos alkalmazáshoz. A hordozó tartalmazhat olyan adalékokat, mint szolubilizálóanyagokat, például propilénglikolt, felületaktív anyagokat, mint például epesavsókat vagy poli(oxi-etilén) nagyobb szénatomszámú étereit, abszorpciós fokozókat, mint például lecitint (foszfatidil-kolint) vagy ciklodextrint, vagy tartósítókat, mint például parabéneket.
Általában a találmány vegyületeit egységdózis formában alkalmazzuk, melyek 0,0001-100 mg aktív alkotórészt tartalmaznak egy gyógyszerészetileg elfogadható hordozóval együtt egységdózisonként.
A találmány szerint a vegyületek dózisa megfelelő 1-500 mg/nap, például kb. 100 mg/dózis mennyiségben a betegeknek, például embereknek gyógyszerként való alkalmazáskor.
Kimutattuk, hogy az (I) általános képlettel rendelkező vegyületek endogén növekedési hormon in vivő felszabadítására képesek. így a vegyületeket tartalmazó gyógyszerek olyan betegségállapotok kezelésére használhatók, melyek esetében megnövekedett plazma növekedésihormon-szintekre van szükség, mint például a növekedésihormon-hiányos emberek vagy idősebb betegek vagy háziállatok esetében.
így egy speciális megközelítésben a találmány a hipofízisből való növekedési hormon felszabadításának stimulálására szolgáló gyógyszerészeti készítménnyel kapcsolatos, a készítmény aktív alkotórészként az (I) általános képlettel rendelkező vegyületet vagy annak egy gyógyszerészetileg elfogadható sóját tartalmazza egy gyógyszerészetileg elfogadható hordozóval vagy diluenssel együtt.
Egy további megvalósulásban a találmány a hipofízisből való növekedésihormon-felszabadítás stimulálására szolgáló gyógyszer alkalmazásával kapcsolatos, a módszer az (I) általános képlettel rendelkező vegyület vagy annak egy gyógyszerészetileg elfogadható sójának hatékony mennyiségét igénylő betegnek ezen vegyületet tartalmazó gyógyszer alkalmazását jelenti.
Egy megint másik megvalósulásban a találmány az (I) általános képlettel rendelkező vegyület vagy ennek egy gyógyszerészetileg elfogadható sójának használatával kapcsolatos. Ezen alkalmazás a hipofízisből való növekedésihormon-felszabadítás stimulálásra való gyógyszerészeti készítmény előállítására szolgál.
HU 224 345 Β1
A tudomány e területén képzett szakember számára jól ismert, hogy a növekedési hormon jelenlegi és lehetséges - emberekben való - alkalmazása sokféle. Az (I) képlettel rendelkező vegyületek a hipofízisből való növekedésihormon-felszabadítás stimulálása céljából alkalmazhatók, és ugyanaz a hatásuk, ugyanaz az alkalmazásuk, mint magának a növekedési hormonnak. A növekedési hormon alkalmazását a következők szerint foglalhatjuk össze: a növekedésihormon-felszabadítás stimulálása idősebb személyek esetében; a glükokortikoidok, az osteoporosiskezelés, az immunrendszer stimulálása, a sérülések gyógyításának felgyorsítása, a csonttörés gyógyulásának felgyorsítása, a növekedés-visszamaradás kezelése, vese-működésképtelenség vagy -elégtelenség kezelése - mely a növekedés-visszamaradás következménye -, fiziológiás rövid termet kezelése - ideértve a növekedésihormon-hiányos gyerekeket és a rövid termettel kapcsolatos krónikus betegségeket -, az elhízottság és a növekedés-visszamaradással kapcsolatos elhízottság kezelése, a Prader-Willi-szindrómával és a Turner-féle szindrómával kapcsolatos növekedési visszamaradás kezelése katabolikus mellékhatásának kivédése; az égési sérüléses betegek felépülésének meggyorsítása és a kórházban töltött idő csökkentése; az intrauterin növekedési visszamaradás, csontvázdysplasia, hiperkortizolizmus és a Cushing-féle szindróma kezelése; a pulzáló növekedésihormon-felszabadulás indukciója; stresszelt betegekben a növekedési hormon pótlása, az osteochondrodysplasia, a Noonan-féle szindróma, skizofrénia, depresszió, az Alzheimer-kór kezelése, késleltetett seb gyógyulási és pszichoszociális nélkülözés kezelése, a pulmonáriás diszfunkció és a ventilátorfüggőség kezelése, nagyobb sebészeti beavatkozás után a protein katabolikus válaszok csökkentése, krónikus betegség, mint például rák vagy AIDS következtében fellépő cachexia és proteinveszteség csökkentése; hiperinzulinémia - ideértve anezidioblasztózist - kezelése, hatásjavító kezelés az ovuláció indukálására; a tímuszfejlődés stimulálása és a korfüggő tímuszfunkció csökkenésének megakadályozása, immunoszuppresszált betegek kezelése, az izomerősség, mobilitás a bőrvastagság fenntartásának, a metabolikus homeosztázis, gyenge idősebb egyénekben a vesehomeosztázis javítása, az oszteoblasztok stimulálása, a csont-újramodellezés és a porcnövekedés stimulálása, állatok immunrendszerének stimulálása és az öregedéssel kapcsolatos rendellenességek kezelése állatokban, növekedési promoter háziállatokban és a gyapjú növekedésének stimulálása birkák esetében.
A fentiekhez a dózisok az alkalmazott (I) képlettel rendelkező vegyülettől, az alkalmazás módjától és a kívánt terápiától függően változnak. Azonban, általában a dózisszintek 0,0001 és 100 mg/kg testtömeg/nap között alkalmazhatók beteg emberek és állatok esetében ahhoz, hogy az endogén növekedési hormon hatékony felszabadulását kapjuk. Általában az orális vagy nazális alkalmazáshoz megfelelő dózisformák kb. 0,0001 mg-100 mg mennyiséget jelentenek, előnyösen kb. 0,001-kb. 50 mg mennyiséget tartalmaznak az (I) képlettel rendelkező vegyületből, egy gyógyszerészetileg elfogadható hordozóval vagy diluenssel vegyítve.
Az (I) képlettel rendelkező vegyület gyógyszerészetileg elfogadható savaddíciós só formájában is adható, vagy ahol megfelelő, alkálifém vagy alkáliföldfém vagy alacsonyabb szénatomszámú alkil-ammónium-só formájában. Az ilyen só formákról úgy véljük, megközelítően ugyanolyan aktivitási szintekkel rendelkeznek, mint a szabad bázisú formák.
Tetszőlegesen, a találmány gyógyszerészeti készítménye tartalmazhatja az (I) képlettel rendelkező vegyületet egy vagy több olyan vegyülettel együtt, melyek különböző aktivitással rendelkeznek, például antibiotikus vagy más gyógyszerészeti szempontból aktív anyagot; szinergizmus fellépése nélkül.
Ez egy másik secretagogum lehet, mint például a GHRP (1 vagy 6) vagy a GHRH, vagy ezek egy analógja, növekedési hormon vagy ennek egy analógja vagy egy szomatomedin, mint például az IGF-1 vagy az IGF-2.
Az alkalmazás módja bármely olyan mód lehet, mely hatékonyan szállítja az aktív vegyületet a megfelelő vagy kívánt aktivitási helyre, mint például az orális, nazális vagy parenterális mód, az orális módot részesítjük előnyben.
Az (I) képlettel rendelkező vegyületek gyógyszerészeti alkalmazásán kívül ezek hasznosak lehetnek in vitro eszközökként is a növekedésihormon-felszabadulás szabályozásának vizsgálatában.
Az (I) képlettel rendelkező vegyületek hasznos eszközök lehetnek a hipofízis növekedésihormon-felszabadító képességének felmérésében. Például az ezen vegyületek embereknek való adása előtt és után vett szérumminták vizsgálhatók növekedési hormonra. Az egyes szérummintákban a növekedési hormon mennyiségének összehasonlítása közvetlenül meghatározná a beteg hipofízisének növekedésihormon-felszabadító képességét.
Az (I) képlettel rendelkező vegyületek kereskedelmi szempontból fontos állatoknak is adhatók növekedési sebességük és mértékük fokozása céljából, valamint a tejtermelés fokozása céljából.
Gyógyszerészeti módszerek
Az (I) képlettel rendelkező vegyületek in vitro értékelhetők a növekedésihormon-felszabadítási hatékonyságukra és erejükre elsődleges patkányszomatotrófokban.
Az elsődleges patkányszomatotrófok alapjában véve a korábban leírtakkal megegyező módon állíthatók elő (Chen et al., Endocrinology 1991, 129, 3337-3342 és Chen et al., Endocrinology 1989, 124, 2791-2798). Röviden, a patkányokat dekapitálással elpusztítjuk. A hipofízist gyorsan eltávolítjuk. A hipofíziseket Hanks-féle egyensúlyi sóoldatban levő 0,2%-os kollagenázzal és 0,2%-os hialuronidázzal emésztjük. A sejteket 0,37% NaHCO3-ot, 10% lószérumot, 2,5% magzati borjúszérumot, 1 % nem esszenciális aminosavakat, 1% glutamint és 1% penicillin/sztreptomicint tartalmazó Dulbecco-féle módosított Eagle-tápközegben reszuszpendáljuk, és 1,5*105 sejt/ml értékre állítjuk.
HU 224 345 Β1
Ezen szuszpenzió 1 ml mennyiségét 24 üregű lemezek üregeibe helyezzük, és 2-3 napig így hagyjuk a felszabadulási kísérletek elvégzése előtt.
A kísérletek napján a sejteket kétszer mossuk a fenti 25 mM HEPES-t (pH=7,4) tartalmazó tápközegben. A növekedési hormon felszabadulást a 25 mM HEPES-t és a tesztvegyületet tartalmazó tápközeg hozzáadásával indítjuk. Az inkubálás 15 percig tart 37 °C hőmérsékleten. Inkubálás után a tápközegbe felszabadított növekedési hormont standard RIA-val mérjük.
Az (I) képlettel rendelkező vegyületek in vivő növekedésihormon-felszabadításra kifejtett hatásukra értékelhetők pentobarbitállal altatott nőstény patkányokkal a korábban leírtak szerint (Bercu et al., Endocrinology, 1991, 129, 2592-2598). Röviden, felnőtt hím Sprague-Dawley-patkányokat altatunk el pentobarbitállal (50 mg/kg ip.) Miután a patkányokat teljesen elaltattuk, a patkányokba tracheális katétert ültetünk be a carotid artériában és a juguláris vénában. Tizenöt perces várakozás után a 0 időpontban vérmintát veszünk. A hipofízissecretagogumot hozzáadjuk, és az artériás vérmintákat jégre tesszük 15 percre, majd 2 percig 12 000*g-n centrifugáljuk. A szérumot dekantáljuk, és a növekedési hormon mennyiségét standard RIA-t használva meghatározzuk.
A találmányt a továbbiakban a következő példákkal illusztráljuk, melyekkel semmilyen mértékben nem kívánjuk korlátozni a találmány körét, ahogy azt az igénypontokban megadjuk.
A találmányban és a példákban használt rövidíté15 sek a következő szerkezeteket jelentik.
A nem természetes aminosavmaradékok rövidítései:
3Pyal
Phe(4-F)
A peptidkötés helyettesítésére használt rövidítések:
-N-MeO ch3
Y(CH2NH) xCH2z
NH ?(CH2N(Me))
N
CH3
A következő példákban használt vegyületeket trifluor-ecetsav (TFA) sóiként izoláltuk.
1. példa
H-Ala-His-D-2Nal-D-Trp-Lys-NH2 A címben szereplő peptidet az Fmoc stratégiának megfelelően szintetizáljuk egy Applied Biosystems 431A peptidszintetizálóban 0,22 mmol léptékben a gyártó által biztosított FastMoc UV-protokollokat használva, melyben az NMP-ben (N-metil-pirrolidon) HBTU (2-(1-H-benzotriazol-1-il)-1,1,3,3-tetrametil-uronium-he50 xafluoro-foszfát) által közvetített párosításokat alkalmazunk, és az Fmoc védőcsoportok lehasításának UV nyomon követését. A szintézishez használt kiindulási gyanta 0,39 mmol/g szubsztitúciós kapacitással rendelkező 559 mg 4-((2’,4'-dimetoxi-fenil)-(Fmoc-amino)-metil)-fenoxi-gyanta (Novabíochem, Bad Sódén, Germany. cat #: 01-64-0013). A használt védett aminosavszármazékok: Fmoc-Lys(Boc)-OH, Fmoc-D-Trp-OH, Fmoc2Nal-OH, Fmoc-His(Trt) és Fmoc-Ala-OH.
A peptidet a peptidgyanta 434 mg-jától 180 percig szobahőmérsékleten tartó 4 ml TFA (trifluoroecetsav),
HU 224 345 Β1
300 mg fenol, 100 μΙ etánditiol, 200 μΙ tioanizol és 200 μΙ H2O elegyében való kevertetéssel hasítjuk le. A hasítási elegyet szűrjük, és a szűrletet 1 ml mennyiségre koncentráljuk nitrogénáramoltatással. A nyers pepiidet ebből az olajból kicsapatjuk 45 ml dietil-éterrel, és háromszor mossuk 50 ml dietil-éterben.
A nyers peptidet megszárítjuk és szemipreparatív HPLC-vel tisztítjuk egy 20 mm*250 mm oszlopon, melyre 7 μ C-18 szilikát helyeztünk, melyet előekvilibráltunk 15% CH3CN-nel [0,05 M (NH4)2SO4-ban], a pH-értéket 4 M H2SO4-tal 2,5-re igazítjuk. A nyers peptidet ezután feloldjuk 2 ml H2O-ban levő 70% CH3CN/0,1% TFA elegyében és H2O-dal 100 ml mennyiségre hígítjuk.
Ezt az oldatot két egyenlő részre osztjuk, és mindegyiket az oszlopra injektáljuk két elkülönített futtatásban. Az oszlopot 0,05 M (NH4)2SO4-ban (pH=2,5) levő 15%-25% CH3CN gradiensével eluáljuk 10 ml/perc sebességgel 47 percig 40 °C hőmérsékleten. A peptidet tartalmazó frakciókat összegyűjtjük, 3 térfogat H2O-dal hígítjuk és egy Sep-Pak C18 kazettába (Waters part. #: 51910) helyezzük, melyet 0,1% TFA-val ekvilibráltunk. A peptidet a Sep-Pak kazettából 70% CH3CN és 0,1% TFA elegyével eluáljuk, és az eluátumból liofilezéssel izoláljuk, H2O-dal való hígítás után 19,0 mg mennyiséget nyerünk.
A kapott végső terméket analitikai RP-HPLC-vel (RT=retenciós idő), valamint plazma deszorpciós tömegspektrometriával (molekulatömeg) jellemezzük. A tömegspektrometria megegyezik a várt szerkezettel a módszer kísérleti hibáján belül (tömegspektrometria ±0,9 amu).
Az RP-HPLC analízist UV-detektálást alkalmazva 214 nm hullámhosszon és Vydac 218TP54 4.6 mm*250 mm 5 μ C-18 szilikaoszlopot (The Separations Group, Hesperia) használva végezzük, az oszlopot 1 ml/perc sebességgel 42 °C hőmérsékleten eluáltuk. A két eltérő eluálási körülmény a következő:
A1:Az oszlopot 0,1 M (NH4)2SO4-ot tartalmazó pufferben levő 5% CH3CN-nel ekvilibráljuk, a pH-értéket 2,5-re igazítjuk, 4 M H2SO4-tal és ugyanezen pufferben levő 5%-60% CH3CN gradiensével eluáljuk 50 percig.
BT. Az oszlopot 5% CH3CN/0,1 TFA/H2O elegyével ekvilibráljuk, és 5% CH3CN/0,1% TFA/H2O 60% CH3CN/0,1% TFA/H2O gradiensével eluáljuk 50 percen keresztül.
Az A1 és B1 körülményeket használva a retenciós időt sorrendben 17,88 és 20,15 percnek találtuk.
2. példa
H-Ala-His-D-2Nal-D-Phe-Lys-OH A címben szereplő peptidet az 1. példában leírt eljáráshoz hasonlóan szintetizáljuk, azzal az eltéréssel, hogy kiindulási gyantaként 0,49 mmol/g szubsztitúciós kapacitással rendelkező 450 mg Fmoc-Lys(Boc)-Wang gyantát (Novabiochem, Bad Sódén, Germany, cat. # 04-12-2014) használunk. Az 560 mg peptidgyanta lehasítása, valamint a kapott nyerstermék felének az 1.
példában leírt módon való tisztítása után 25,9 mg hozamot nyertünk.
A végterméket az 1. példában leírt módon jellemezzük. Az A1 és B1 elúciós körülményeket használva a retenciós idő sorrendben 18,30 és 20,15 perc volt.
3. példa
5-(H-Ala-His-D-2Nal-D-Phe-NH)-amino-pentán
A H-Ala-His(Trt)-D-2Nal-D-Phe-Sasrin peptidgyantát az 1. példában leírt eljáráshoz hasonlóan állítjuk elő, azzal az eltéréssel, hogy egy 0,96 mmol/g szubsztitúciós kapacitással rendelkező 262 mg Sasrin gyantát (2-metoxi-4-alkoxi-benzil-alkohol-gyanta) (Bachem, Bubendorf, Switzerland cat. #: D-1295) használunk, és az első aminosavmaradék gyantához való párosításához egy, az előképződött szimmetrikus anhidrid 4-dimetil-amino-piridin által katalizált párosítását használjuk, melyet a gyantán levő maradék OH csoportok benzoesavanhidriddel való lefedése követ.
Az 5-(H-Ala-His-D-2Nal-D-Phe-NH )-amino-pentán részlegesen védett peptidet a H-Ala-His(Trt)-D-2NalD-Phe-Sasrin gyanta 56 mg-járól 20 óráig szobahőmérsékleten 0,5 ml 1,5-diamino-pentánnal való keveréssel hasítjuk. A használt gyantát kiszűrjük és 1 ml DMF-fel extraháljuk. A vegyített szűrletet és extraktumot lassan hozzáadjuk 2,5 ml CH3CN és 10 ml 1 M sósav elegyéhez keverés mellett, és 25% CH3CN-nel való 50 ml-re való hígítás után az elegyet 4 °C hőmérsékleten tároljuk 100 órán keresztül (a hisztidinen levő tritilvédelem lehasítása céljából). Az elegyet ezután 200 ml mennyiségre hígítjuk H2O-dal és szűrjük.
A nyers peptidet szemiszeparatív HPLC-vel tisztítjuk ezen szűrlet felének közvetlenül az oszlopra való injektálásával az 1. példában leírt eljáráshoz hasonlóan. A hozam 4,5 mg volt.
A végterméket az 1. példában leírtak szerint jellemezzük. Az A1 és B1 elúciós körülményeket használva a retenciós idő sorrendben 18,43 és 20,75 perc volt.
4. példa (2S)-(H-Ala-His-His-D-2Nal-D-Phe-NH)-6-amino-hexanol
A peptidgyanta H-Ala-His(Trt)-D-2Nal-D-PheLys(Boc)-Sasrin gyantát a 3. példában leírt eljáráshoz hasonlóképpen szintetizáljuk egy 0,96 mmol/g szubsztitúciós kapacitású Sasrin gyantából.
A részlegesen védett peptid (2S)-(H-Ala-His-HisD-2Nal-D-Phe-NH)-6-amino-hexanolt a H-AlaHis(Trt)-D-2Nal-D-Phe-Lys(Boc)-Sasrin gyanta 200 mg mennyiségétől a peptidgyanta 20 órán szobahőmérsékleten 1,2 ml TFA (tetrahidrofurán), 0,2 ml etanol, 23 mg LiBr és 10 mg NaBH4 elegyében való keveréssel hasítjuk le. Ezután 200 μΙ H2O-ot, 200 μΙ ecetsavat és 4 ml etanolt adunk hozzá. A gyantagyöngyöket szűréssel eltávolítjuk, 50 ml H2O-dal hígítjuk és liofilezzük. A kapott port TFA-hasításnak és az 1. példában leírt tisztításnak vetjük alá. A tisztítást meg kell ismételni a megfelelő tisztaságú termék kinyeréséhez. 5,8 mg hozamot kaptunk.
HU 224 345 Β1
A végterméket az 1. példában leírt módon jellemezzük. Az A1 és B1 elúciós körülményeket használva a retenciós idő sorrendben 17,82 és 20,02 perc volt.
5. példa
H-Ala-His-pszi(CH2NH)-D-2Nal-D-Phe-Lys-NH2
A peptidgyanta H-D-2Nal-D-Phe-Lys(Boc)-gyantát az 1. példában leírt eljáráshoz hasonló módon szintetizáljuk 0,34 mmol/g szubsztitúciós kapacitással rendelkező 556 mg 4-((2’,4’-dimetoxi-fenil)-(Fmoc-amino)metil)-fenoxi-gyantát (Novabiochem AG, Switzerland, cat. #: 01-64-0013) használva kiindulásként. A következő védett aminosavszármazékokat használjuk: Fmoc-Lys(Boc)-OH, Fmoc-D-Phe-OH és Fmoc2Nal-OH.
A -CH2NH- peptidkötés izosztert Sasaki, Y. és Coy, D. H. szerint juttatjuk be [Peptides 8(1) 119-121, 1987],
Az Fmoc-His(Trt)-aldehidet a megfelelő N,O-dimetil-hidroxamát 820 mg mennyiségéből állítjuk elő Fehrentz, J.-A. és Castro, B. szerint (Syntesis, 676-678, 1983). A nyers aldehidet feloldjuk 8 ml DMF-ben és két részre osztjuk. Az első részt hozzáadjuk 10 ml DMFben levő 1% ecetsavas H-D-2Nal-D-Phe-Lys-gyanta 610 mg kevert iszapjához szobahőmérsékleten. Ezután 57 mg NaCNBH3-at (85% tiszta) feloldunk 1 ml DMF-ben, és a keverést 60 percig folytatjuk. Ezután a peptidgyantát szűréssel izoláljuk és DMF-ben levő 1% ecetsavban mossuk. Ezután a peptidgyantát ismét szuszpendáljuk DMF-ben levő 10 ml 1%-os ecetsavban, és az Fmoc-His(Trt)-aldehid másik részét hozzáadjuk. Egy ml DMF-ben feloldott 57 mg NaCNBH3-at (85% tiszta) hozzáadunk szobahőmérsékleten, és az elegyet 18 óráig keverjük.
Ez után a redukciós alkilezési lépés után a peptidgyantát szűréssel izoláljuk és DMF-ben levő 1 % ecetsavval mossuk, és a láncmeghosszabbítást a peptidszintetizálót használva tesszük teljessé a fent leírt eljárásnak megfelelően a védett Fmoc-Ala-OH aminosavszármazékot használva.
A peptidet a peptidgyanta 550 mg mennyiségétől lehasítjuk, és a nyers peptidet szemiszeparatív HPLC-vel tisztítjuk az 1. példában leírt eljáráshoz hasonló módon. 11,3 mg hozamot nyertünk.
A végterméket az 1. példában leírtak szerint jellemezzük. Az A1 és B1 elúciós körülményeket használva a retenciós idő sorrendben 13,35 és 17,38 perc volt.
6. példa (n-Propil)-His-D-2Nal-D-Phe-Lys-NH2 és (n-propil)2-His-D-2Nal-D-Phe-Lys-NH2 A peptidgyanta H-His(Trt)-D-2Nal-D-PheLys(Boc)-gyantát az 1. példában leírt eljáráshoz hasonló módon szintetizáljuk a 0,34 mmol/g szubsztitúciós kapacitással rendelkező 4-((2',4’-dimetoxi-fenil)(Fmoc-amino)-metil)-fenoxi-gyantát (Novabiochem AG Switzerland, kát. #: 01-64-0013) használva kiindulásként. A használt védett aminosavszármazékok a következők: Fmoc-Lys(Boc)-OH, Fmoc-D-Phe-OH, Fmoc2Nal-OH és Fmoc-His(Trt)-OH.
μΙ n-propanalt adunk DMF-ben levő 3,3 ml% ecetsavban levő H-His(Trt)-D-2Nal-D-Phe-Lys-gyanta 150 mg mennyiségének kevert iszapjához szobahőmérsékleten. Ezután 16,8 mg NaCNBH3-at (85% tiszta) feloldunk 0,5 ml DMF-ben, és a keverést 6 órán keresztül folytatjuk. Ez után az alkilezési lépés után a peptidgyantát izoláljuk és szűrőtölcséren DMF-fel és CH2CI2-nal mossuk, majd vákuum alatt megszárítjuk.
A kapott két peptidgyantát elegyítjük, és a nem alkilezett elegyet, a mono-n-propilt és a di-n-propilt lehasítjuk a kapott 300 mg peptidgyantáról. A peptideket szeparáljuk és szemipreparatív HPLC-vel tisztítjuk az 1. példában leírt eljáráshoz hasonlóan. 6,54 mg n-propil-His-D-2Nal-D-Phe-Lys-NH2-t és 5,59 mg (n-propil)2-His-D-2Nal-D-Phe-Lys-NH2-t nyertünk.
A végterméket az 1. példában leírtak szerint jellemezzük. Az (n-propil)-His-D-2Nal-D-Phe-Lys-NH2 esetében az A1 és B1 elúciós körülményeket használva a retenciós időt sorrendben 16,45 és 19,92 percnek találtuk.
7. példa
H-Ala-Tic-D-2Nal-D-Phe-Lys-NH2
0,75 mmol/g szubsztitúciós kapacitással rendelkező 4-metil-BHA-gyanta (Bissendorf Biochemicals, Hannover, Germany, kát. #: RMIS50) 620 mg mennyiségéből kiindulva a peptidet a Boc-stratégiának megfelelően szintetizáljuk egy Applied Biosystems 430A peptidszintetizálóban gyártók által biztosított 0,5 mmol léptékű egyszeri párosítási eljárást használva, melyben egyszeri párosítást végzünk el a DMF-ben levő előképződött szimmetrikus anhidridekkel. Az eljárást 60 perces párosítási időre igazítottuk. Egy kétszeres párosítást használunk 2*60 perces párosítási idővel az N-terminális Ala-hoz. A szintézishez használt védett aminosavmaradékok a következők: Boc-Lys(2-kiór-Z)-OH, Boc-D-Phe-OH, Boc-D-2Nal-OH, Boc-Tic-OH és Boc-Ala-OH.
A peptidet a peptidgyanta 486 mg mennyiségétől 75 percig tartó keveréssel hasítjuk le 0 °C hőmérsékleten egy 4,5 ml HF és 500 μΙ m-krezol elegyével. A HF-et evaporáttatjuk 0 °C hőmérsékleten nitrogénárammal. A peptidet a fennmaradó olajból és a használt gyantából kicsapatjuk 50 ml dietil-éterrel, és kétszer mossuk 50 ml dietil-éterrel. Szárítás után a peptidet extrahálással kicsapjuk 10 ml 4 csepp ecetsavat tartalmazó H2O-dal. Az extraktumot 100 ml H2O-ban hígítjuk.
A nyers peptidet kitisztítjuk a 2*18 ml hígított extraktumból szemipreparatív HPLC két menetét használva az 1. példában leírtakhoz hasonló eljárással. A hozam 17,3 mg volt.
A végterméket az 1. példában leírtak szerint jellemezzük.
Az A1 és B1 körülményeket használó RP-HPLC analízis sorrendben 27,37 és 29,50 perc retenciós időket eredményezett.
8. példa (2R)-(H-Ala-His-D-2Nal-NH)-3-fenil-propil-amin
Az Fmoc-csoportot 20 percig tartó NMP-ben levő 20% piperidinnel való kezeléssel távolítjuk el, a
HU 224 345 Β1
0,43 mmol/g szubsztitúciós kapacitással rendelkező 580 mg 4-((2’,4’-dimetoxi-fenil)-(Fmoc-amino)-metil)fenoxi-gyantából (Novabiochem AAG Switzerland, kát. #: 01-64-0013). A gyantát DMF-fel, CH2CI2-nal mossuk, és az 5. példában leírt Fmoc-D-Phe-aldehid- 5 dél alkilezzük redukciós alkilezési eljárást használva.
Ezután a peptidgyantát szűréssel izoláljuk és DMF-ben levő 1%-os ecetsavval mossuk szűrőtölcséren, és a láncmeghosszabbítást az 1. példában leírt peptidszintetizálót használva tesszük teljessé az 10
Fmoc-D-2Nal-OH, Fmoc-His(Trt)-OH és Fmoc-Ala-OH védett aminosavszármazékokat használva.
A peptidet a peptidgyanta 301 mg mennyiségétől lehasítjuk, és a nyers peptidet szemiszeparatív HPLC-vel tisztítjuk az 1. példában leírt eljáráshoz hasonló módon. A hozam 23,92 mg volt.
A végterméket az 1. példában leírtak szerint jellemezzük. Az A1 és B1 elúciós körülményeket használva a retenciós időket sorrendben 19,33 és 21,77 percnek találtuk.
9-54. példák
Példa Peptid A B C
9. H-Ala-His-D-Phe-D-Phe-Lys-NH2 1 12,53 15,43
10. H-Ala-Phe-D-2Nal-D-Phe-Lys-NH2 1 28,13 29,62
11. H-His-D-2Nal-D-Phe-Lys-NH2 1 18,02 20,15
12. H-Ala-His-D-2Nal-D-Phe-Phe-NH2 1 28,48 29,48
13. H-Ala-His-D-2Nal-D-Phe-D-Phe-NH2 1 26,65 27,75
14. H-Ala-His-D-2Nal-Phe-Lys-NH2 1 21,85 23,12
15. (3-(4-imidazolil)-propionil)-D-2Nal-D-Phe-Lys-NH2 1 20,7 -
16. (Propionil)-His-D-2Nal-D-Phe-Lys-NH2 1 22,2 23,77
17. H-Ala-His-D-2Nal-D-Phe-NH2 1 21,7 23,08
18. (H-Ala-His-D-2Nal-D-Phe-NH)-hexán 3 34,11 35,78
19. H-Ala-His-D-T rp-D-Phe-Lys-NHz 1 14,52 16,7
20. H-Ala-Ala-D-2Nal-D-Phe-Lys-NH2 1 21,97 23,23
21. ((Propionil)-His-D-2Nal-D-Phe-NH)-hexán 3 37,17 39,47
22. 6-(H-Ala-His-D-2Nal-D-Phe-NH)-hexil-amin 3 19,3 21,57
23. H-D-2Nal-D-Phe-Lys-NH2 1 15,88 18,25
24. (5-amino-pentanoil)-His-D-2Nal-D-Phe-Lys-NH2 1 17,8 19,98
25. H-D-Lys-D-2Nal-D-Phe-Lys-N H2 1 17,07 19,62
26. H-Ala-His-D-2Nal-D-Tic-Lys-NH2 1 19,12 20,78
27. H-D-Lys-Phe-2Nal-D-His-D-Ala-NH2 1 18,15 20,48
28. (5-amino-pentanoil)-D-2Nal-D-Phe-Lys-NH2 1 20,67 22,45
29. H-D-His-D-2Nal-D-Phe-Lys-NH2 1 19,57 21,53
30. (Propionil)-D-2Nal-D-Phe-Lys-NH2 1 26,7 27,92
31. H-D-Ala-His-D-2Nal-D-Phe-Lys-NHz 1 17,83 20,3
32. H-Ala-3-Pyal-D-2Nal-D-Phe-Lys-NH2 1 18,15 20,18
33. (n-butil)-Ala-His-D-2Nal-D-Phe-Lys-NH2 6 19,55 -
34. (n-octil)-Ala-His-D-2Nal-D-Phe-Lys-NH2 6 27,88 24,52
35. H-Ala-His-D-2Nal-D-Phe-pszi(CH2NH)-Lys-NH2 5 17,97 20,83
36. (3-amino-metil-benzoil)-D-2Nal-D-Phe-Lys-NH2 1 22,42 24,13
37. (2-amino-fenil-acetil)-D-2Nal-D-Phe-Lys-NH2 1 23,62 23,97
38. ((4-imidazolil)-acetil)-D-2Nal-D-Phe-Lys-NHz 1 20,42 22,22
39. (3-(4-imidazolil)-akriloil)-D-2Nal-D-Phe-Lys-NH2 1 21,25 23,32
40. (4-amino-fenil-acetil)-D-2Nal-D-Phe-Lys-NH2 1 22,45 -
41. (transz-4-amino-metil-ciklo-hexanoil)-D-2Nal-D-Phe-Lys-NH2 1 22,07 23,67
42. 2-(H-Ala-His-D-2Nal-D-Phe-NH)-etil-amin 3 18,6 20,25
43. (2-(H-Ala-His-D-2Nal-D-Phe-NH)-etil)-benzén 3 30,18 32,18
44. 4-((H-Ala-His-D-2Nal-D-Phe-NH)-metil)-benzil-amin 3 19,63 21,55
HU 224 345 Β1
Táblázat (folytatás)
Példa Peptid A B C
45. (2R)-(H-Ala-His-D-2Nal-NH)-3-fenil-propil-amin 4 21,55 23,57
46. 2-(H-Ala-His-D-2Nal-NH)-etil-amin 3 25,52
47. H-D-Phe-Ala-D-2Nal-D-Phe-Lys-NH2 1 27,82 29,43
48. H-Ala-D-Phe-D-2Nal-D-Phe-Lys-NH2 1 25,62 27,22
49. H-Ala-(2-amino-benzoil)-D-2Nal-D-Phe-Lys-NH2 7 26,42 24,93
50. H-Aib-His-D-2Nal-D-Phe-Lys-NH2 1 17,42 20,13
51. H-Ala-His-D-1 Nal-D-Phe-Lys-NH2 1 17,55 19,8
52. H-Tyr-Ala-His-D-2Nal-D-Phe-Lys-NH2 1 19,9 21,22
53. (Piperidin-4-karbonil)-D-2Nal-D-Phe-Lys-NH2 1 20,4 22,32
54. H-Ala-Phe-(4-NH2)-D-2Nal-D-Phe-Lys-NH2 1 19,20
55. példa [(Propionil)-D-2Nal-D-Phe-NH]-hexán
A peptidgyantát [(propionil)-D-2Nal-D-Phe-Sasrin gyanta] a 3. példában leírtakhoz hasonló módon szintetizáljuk a 0,96 mmol/g szubsztitúciós kapacitással rendelkező Sasrin gyantából.
A kapott peptidgyanta 105 mg mennyiségét ammonolízisnek vetjük alá.
A peptid ((propionil)-D-2Nal-D-Phe-NH)-hexánt a propionil-D-2Nal-D-Phe-Sasrin gyanta 105 mg mennyiségétől 20 óráig szobahőmérsékleten tartó keveréssel hasítjuk le 1 ml n-hexil-aminnal. A használt gyantát leszűrjük és 1 ml DMF-fel extraháljuk.
Az elegyített szűrletet és extraktumot lassan hozzáadjuk 8 ml 1 M sósavhoz keverés mellett. A kapott csapadékot újra oldjuk kb. 70 ml CH3CN hozzáadásával, majd újra kicsapatjuk 20 ml H2O hozzáadásával. A csapadékot leszűrjük, vízzel mossuk és megszárítjuk. A hozam 12 mg volt.
A terméket az 1. példában leírtak szerint jellemezzük, azzal az eltéréssel, hogy csak egy HPLC analízises menetet használunk a B1 körülményekhez hasonló körülményeket alkalmazva, azzal az eltéréssel, hogy 50 percig tartó 0,1% TFA/H2O - 90% CH3CN/0,1% TFA/H2O gradiensét használjuk. A retenciós időt 35,73-nak találtuk.
56. példa (3-Metil-amino-metil-benzoil)-D-2Nal-D-PheLys-NH2
A peptidgyantát [(3-amino-metil-benzoil)-D-2NalD-Phe-Lys(CI-Z)-MBHA-gyantát] a 7. példában leírtakhoz hasonló eljárást használva szintetizáljuk egy 0,72 mmol/g szubsztitúciós kapacitással rendelkező MBHA-gyantából. A kapott peptidgyantát Kaljuste, K. és Undén, A. (Int. J. Peptide Protein Rés. 42:118-124, 1993) módszerének megfelelően metilezzük. 300 mg gyantát keverünk 2 órán keresztül 8 ml DCM, 150 μΙ DIEA (dietil-izopropil-amin) és 39 mg 4,4’-dimetoxi-ditil-klorid (DOD-CI) elegyében, majd szűréssel izoláljuk és DCM-mel és DOD-vel mossuk. Ezután a DOD-vel védett peptidgyantát 18 ml DMF-ben levő 3,7% formaldehidoldattal keverjük, majd 0,18 ml ecetsavat és 180 mg NaCNBH3-at adunk hozzá, és 18 órán keresztül folytatjuk a keverést. A gyantát szűréssel izoláljuk, és DMF-fel és DCM-mel mossuk. Ezután a DOD-védőcsoportot eltávolítjuk 2*3 ml DCM/TFA 1:1 arányú elegyével sorrendben 5 percig+30 percig tartó kezeléssel, majd a peptidgyantát DCM-mel mossuk és vákuum alatt megszárítjuk.
A kapott N-metilezett peptidet lehasítjuk a kapott gyanta 370 mg mennyiségével a 7. példában leírt eljáráshoz hasonló módon, majd tisztítjuk, és az 1. példában leírtak szerint jellemezzük. A hozam 17,3 mg.
Az A1 és B1 elúciós körülményeket használó RP-HPLC analízis sorrendben 22,83 és 24,60 perces retenciós időket adott.
57. példa (3-Dimetil-amino-metil-benzoil)-D-2Nal-D-PheLys-NH2
A peptidgyantát [(3-amino-metil-benzoil)-D2Nal-D-Phe-Lys(CI-Z)-MBHA-gyantát] a 7. példában leírt eljáráshoz hasonló módon szintetizáljuk egy 0,72 mmol/g szubsztitúciós kapacitással rendelkező MBHA-gyantából.
A kapott peptidgyanta 650 mg mennyiségét DMFben levő 20 ml 1% ecetsavas DMF-ben levő 45 μΙ 3,7% formaldehidoldattal keverjük. Ezután 55 mg NaCNBH3-at (85%) adunk hozzá, és a keverést 18 órán át folytatjuk. A gyantát szűréssel izoláljuk, és DMF, DCM/MeOH 6:4 arányú elegyével és DCM-mel mossuk.
A kapott Ν,Ν-dimetilezett peptidelegyet lehasítjuk a kapott gyanta 631 mg mennyiségéről a 7. példában leírt eljáráshoz hasonló módon, majd az 1. példában leírtak szerint tisztítjuk és jellemezzük. A hozam 8,58 mg.
Az A1 és B1 körülményeket használó RP-HPLC analízis sorrendben 31,58 és 33,00 perces retenciós időket adott.
58. példa (3-Amino-3-metil-butanoil)-D-2Nal-D-Phe-Lys-NH2
A peptidgyantát [H-D-2Nal-D-Phe-Lys(Boc)-Rink gyantát] az 1. példában leírt eljáráshoz hasonlóan szin12
HU 224 345 Β1 tetizáljuk 2 g 0,39 mmol/g szubsztitúciós kapacitással rendelkező 4-[(2’,4’-dimetoxi-fenil)-(Fmoc-amino)-metil]-fenoxi-gyantából (Rink gyanta) (Novabiochem, Bad Sódén, Germany Kát. #: 01-64-0013).
A kapott peptidgyanta 500 mg mennyiségét (0,15 mmol) 4 ml DCM/MeOH 1:1 arányú elegyében szuszpendáljuk. 42 μΙ trietil-amint (0,3 mmol) adunk hozzá, majd 0 °C hőmérsékletre való hűtés után 31 mg (0,158 mmol) 2,2-dimetoxi-4-oxo-acetidin-1-szulfonil-kloridot adunk hozzá keverés mellett. A keverést 20 percig 0 °C hőmérsékleten, majd 90 percig szobahőmérsékleten folytatjuk. A gyanta DCM/MeOH 6:4 arányú elegyével való mosás és vákuum alatti szárítás után a nyers peptidet lehasítjuk a gyantáról, és az 1. példában leírt eljárásokhoz hasonlóan tisztítjuk. A hozam 41,81 mg volt.
Az A1 és B1 körülményeket használó RP-HPLC analízis sorrendben 21,35 és 22,95 perces retenciós időket adott.
59. példa (2S)-((3-Amino-metil-benzoil)-pszi(CH2NH)D-2Nal-D-Phe-NH)-6-amino-hexanol
A peptidgyantát [H-D-2Nal-D-Phe-Lys(Boc)-Sasrin gyantát] a 3. példában leírt eljárásokhoz hasonló módon szintetizáljuk 0,87 mmol/g szubsztitúciós kapacitással rendelkező Sasrin gyanta 980 mg mennyiségéből.
Ezen gyanta 1,4 g mennyiségét reduktíven alkilezzük Boc-3-amino-metil-benzaldehiddel, és a peptidet a kapott gyanta 1 g mennyiségétől lehasítjuk, és a nyerstermék felét az 5. példában leírt eljárásokhoz hasonló módon tisztítjuk. A hozam 18,46 mg.
Az A1 és B1 körülményeket használó RP-HPLC analízis sorrendben 14,78 és 17,40 perces retenciós időket adott.
60. példa (2-Amino-metil-benzoil)-D-2Nal-D-Phe-Lys-NH2
A peptidgyantát [H-D-2Nal-D-Phe-Lys(Boc)-Rink gyantát] az 1. példában leírt eljárásokhoz hasonló módon szintetizáljuk 0,39 mmol/g szubsztitúciós kapacitással rendelkező 2 g 4-((2’,4’-dimetoxi-fenil)-(Fmocamino)-metil)-fenoxi-gyantából (Rink gyanta) (Novabiochem, Bad Sódén, Germany, kát. #: 01-64-0013).
A kapott peptidgyanta 300 mg mennyiségét (0,096 mmol) 18 órán keresztül keverjük 10 ml DMFben 54 mg ftaloil-2-amino-metil-benzoesavval (0,192 mmol), 182 mg HBTU-val (0,480 mmol) és 164 μΙ DlEA-val (0 96 mmol).
A gyanta DMF, DCM/MeOH 6:4 arányú elegyével és DCM-mel való mosása és vákuumban való szárítása után a (ftaloil-2-amino-metil-benzoil)-D-2Nal-PheLys-NH2-t lehasítjuk a peptidgyanta 290 mg mennyiségéről 180 percig szobahőmérsékleten 3 ml TFA, 225 mg fenol, 75 μΙ etánditiol, 150 μΙ tioanizol és 150 μΙ H2O elegyével való keveréssel. A hasítási elegyet szűrjük, a maradék gyantát 1 ml TFA-ban mossuk, és a szűrletet megközelítően 1 ml mennyiségre koncentráljuk nitrogénáramoltatással. A nyers peptidet kicsapatjuk ebből az olajból 50 ml dietil-étert használva, és háromszor mossuk 50 ml dietil-éterrel. Ezután a csapadékot feloldjuk 50 ml H2O-ban és liofilezzük. A kapott port ml etanolban levő 0,5 ml hidrazin-hidráttal keverjük órán keresztül 70 °C hőmérsékleten, majd 50 ml H2O-dal hígítjuk és liofilezzük.
A liofilezett terméket feloldjuk 2 ml ecetsav, 2 ml etanol és 100 ml H2O hozzáadásával, és az 1. példában leírt eljárásokhoz hasonló módon tisztítjuk. A hozam 9,43 mg.
Az A1 és B1 körülményeket használó RP-HPLC analízis sorrendben 23,22 és 25,05 perces retenciós időket adott.
61. példa
H-Aib-His-pszi(CH2NH)-D-2Nal-D-Phe-Lys-OH
A peptidet az 5. példában leírt eljárásokhoz hasonló módon szintetizáljuk, azzal az eltéréssel, hogy egy 0,87 mmol/g szubsztitúciós kapacitással rendelkező Sasrin gyanta (2-metoxi-4-alkoxi-benzil-alkohol-gyanta) (Bachem, Bubendorf, Switzerland, kát. #: D-1295) 1050 mg mennyiségét használjuk és az első aminosavmaradék gyantához való párosításához használt eljárás egy 4-dimetil-amino-piridin által katalizált párosítási eljárása az elvégzett szimmetrikus anhidrid eljárásnak, melyet a gyantán levő maradék OH csoportok benzoesavanhidriddel való fedése követ. A 752 mg peptidgyanta hasítása során és a kapott nyerstermék 7/10-ének 1. példában leírt módon való tisztítása során 36,76 mg hozamot nyertünk.
A végterméket az 1. példában leírtaknak megfelelően jellemezzük. Az A1 és B1 elúciós körülményeket alkalmazva a retenciós idő sorrendben 13,90 és 17,42 perc volt.
62. példa
H-Aib-His-N-Me-D-2Nal-D-Phe-Lys-NH2
A peptidgyantát [H-N-Me-D-2Nal-D-Phe-Lys(CI-Z)MBHA-gyantát] az 56. példában leírt eljárásokhoz hasonló módon szintetizáljuk 0,72 mmol/g szubsztitúciós kapacitással rendelkező MBHA-gyantából.
Ezen gyanta 458 mg mennyiségét használjuk H-Aib-His(Bom)-N-Me-D-2Nal-D-Phe-Lys(CI-Z)-MBHA szintézisére a Boc-His(Bom)-OH-dal és Boc-AibOH-dal való párosítással. Ezután az N-metilezett peptidet lehasítjuk a kapott gyanta 469 mg mennyiségéről, és a nyers peptid felét a 7. példában leírtak szerint tisztítjuk és jellemezzük. A hozam 23,5 mg.
Az A1 és B1 körülményeket használva az RP-HPLC analízis sorrendben 17,62 és 19,95 perces retenciós időket adott.
63. példa (Furfuril)-Aib-His-D-2Nal-D-Phe-Lys-NH2
A peptidgyantát [H-Aib-His(Trt)-D-2Nal-D-PheLys(Boc)-Rink gyantát] az 1. példában leírt eljárásokhoz hasonló módon szintetizáljuk 0,43 mmol/g szubsztitúciós kapacitással rendelkező 4-[(2’,4'-dimetoxi-fenil)(Fmoc-amino)-metil]-fenoxi-gyantából (Rink gyanta) (Novabiochem, Bad Sódén, Germany, kát. #: 01-64-0013).
Ezután ezen peptidgyanta 300 mg mennyiségét 5 ml 1% DMF-ben levő ecetsavban és 410 μΙ
HU 224 345 Β1 furfurán-2-aldehidben keverjük. 231 mg NaCNBH3-at (85%) adunk hozzá 15 perc és 180 perc után. A keverést 18 órán keresztül folytatjuk. A gyantát szűréssel izoláljuk, és DMF-fel, DCM/MeOH 6:4 elegyével és DCM-mel mossuk. 5
Az N-alkilezett peptidet lehasítjuk a kapott peptid 319 mg mennyiségéről, és az 1. példában leírtak szerint tisztítjuk és jellemezzük. A hozam 44,8 mg.
Az A1 és B1 körülményeket használó RP-HPLC analízis sorrendben 19,45 és 22,23 perces retenciós időket adott.
64. példa
N,N-di(2R-Hidroxi-propil)-(3-amino-metil-benzoil)D-2Nal-D-Phe-Lys-NH2
A peptidgyantát [(3-amino-metil-benzoil)-D-2NalD-Phe-Lys(CI-Z)-MBHA-gyantát) a 7. példában leírt el10 járásokhoz hasonló módon szintetizáljuk 0,72 mmol/g szubsztitúciós kapacitással rendelkező 4-metilbenzhidril-amin (MBHA)-gyantából (Bissendorf Biochemicals, Hannover, Germany, kát. #: RMIS50).
A kapott peptidgyanta 500 mg mennyiségét DMFben levő 12,5 ml 5 ecetsavban és 410 μΙ 2(R)-(tetrahidropirán-2(R,S)-il-oxi)-propanallal keverjük. 5 perc után 213 mg NaCNBH3-at (85%) adunk hozzá. A keverést 18 órán keresztül folytatjuk. A gyantát szűréssel izoláljuk, és DMF-fel, DCM/MeOH 6:4 elegyével és DCM-mel mossuk.
Az Ν,Ν-dialkilezett peptidet a kapott gyanta 490 mg mennyiségéről lehasítjuk, és a 7. példában leírtak szerint tisztítjuk és jellemezzük. A hozam 20,72 mg.
Az A1 és B1 körülményeket használó RP-HPLC analízis sorrendben 23,40 és 25,33 perces retenciós időket adott.
65-110. példák
Példa Peptid A B c
65. H-Ala-N-Me-(2-amino-benzoil)-D-2Nal-D-Phe-Lys-NH2 7 24,47 26,27
66. (4-amino-metil-benzoil)-D-2Nal-D-Phe-Lys-NH2 1 22,22 23,5
67. H-His-Ala-D-2Nal-D-Phe-Lys-NH2 1 19,90 21,45
68. (2S)-(H-Ala-His-D-2Nal-D-Phe-NH)-1,6-diamino-hexán 8 17,05 19,07
69. 4-(H-Ala-His-D-2Nal-D-Phe-NH)-butil-amin 3 18,65 20,08
70. 3-(H-Ala-His-D-2Nal-D-Phe-NH)-propil-amin 3 18,42 19,80
71. (3-amino-metil-benzoil)-D-hPhe-D-Phe-Lys-NH2 7 20,33 21,95
72. (3-amino-metil-benzoil)-pszi(CH2NH)-D-2Nal-D-Phe-Lys-NH2 5 14,17 17,23
73. (3-amino-metil-benzoil)-D-2Nal-D-hPhe-Lys-NH2 7 25,30 26,58
74. (3-amino-3-metil-butanoil)-His-2Nal-D-Phe-Lys-NH2 58 18,12 20,20
75. (3-amino-metil-benzoil)-D-2Nal-N-Bzl-Gly-Lys-NH2 7 25,33 26,70
76. (2S)-((3-amino-metil-benzoil)-D-2Nal-D-Phe-NH)-6-amino-hexanol 4 22,95 24,32
77. (3-amino-metil-benzoil)-D-2Nal-D-Thial-Lys-NH2 7 22,13 23,23
78. (2S)-(H-Aib-His-pszi(CH2NH)-D-2Nal-D-Phe-NH)-6-amino-hexanol 59 12,83 17,27
79. (3-amino-metil-benzoil)-D-2Nal-D-3Pyal-Lys-NH2 1 15,10 16,87
80. (3-amino-metil-benzoil)-D-2Nal-D-Phe-(4-F)-Lys-NH2 7 23,40 24,63
81. (3-amino-metil-benzoil)-D-2Nal-D-Phe(4-OMe)-Lys-NH2 7 22,50 23,90
82. 2-(H-Aib-His-D-2Nal-D-Phe-NH)-etán 3 18,30 20,47
83. H-Aib-Phe-D-2Nal-D-Phe-Lys-N H2 1 29,25 30,55
84. 2-(H-Aib-His-D-2Nal-D-Phe-NH)-(1-metil-2-pirrolidinil)-etán 3 18,70 20,80 |
85. 2-(H-Aib-His-D-2Nal-D-Phe-NH)-(2-piridil)-etán 3 19,20 20,83
86. (3-amino-metil-benzoil)-D-2Nal-N-Me-D-Phe-Lys-NH2 1 26,78 27,88 |
87. H-Aib-His-D-2Nal-D-Phe-Gly-NH2 1 20,48 22,23
88. H-Aib-His-D-2Nal-D-Phe-Ala-NH2 1 21,65 23,38 I
89. H-Aib-His-D-2Nal-D-Phe-Orn-NH2 1 18,43 20,05
90. (5-amino-metil-tienil-2-karbonil)-D-2Nal-D-Phe-Lys-NH2 1 22,32 23,65
91. H-Aib-His-D-2Nal-D-Phe-D-Lys-NH2 1 18,50 20,00
92. H-Aib-His-D-2Nal-D-Phe-Dab-NH2 1 17,75 19,48
93. H-Aib-His-D-2Nal-D-Phe-pszi(CH2NH)-Lys-NH2 5 18,57 20,62
94. H-Aib-His-D-2Nal-D-Phe-N-Me-Lys-NH2 62 18,03 20,60
HU 224 345 Β1
Táblázat (folytatás)
Példa Peptid A B C
95. (3-amino-metil-tienil-2-karbonil)-D-2Nal-D-Phe-Lys-NH2 1 23,23 24,78
96. H-Aib-His-D-2Nal-N-Me-Phe-Lys-NH2 1 21,78 23,53
97. H-Aib-His-D-2Nal-D-Phe-Lys-N(Me)2 3 18,70 21,07
98. (3-amino-metil-benzoil)-D-1Nal-D-p-Lys-NH2 1 22,67 24,23
99. H-Aib-His-D-2Nal-D-Trp-Lys-NH2 1 18,17 20,40
100. (2-piridil-metil)-Aib-His-D-2Nal-D-Phe-Lys-NH2 63 19,07 21,73
101. H-Aib-(3-amino-metil-benzoil)-D-2Nal-D-Phe-Lys-NH2 7 23,95 25,38
102. H-Aib-3-Pyal-D-2Nal-D-Phe-Lys-NH2 1 18,53 20,38
103. ((3R)-piperidin-karbonil)-D-2Nal-D-Phe-Lys-NH2 1 21,52 22,97
104. (2-(H-Aib-His-D-2Nal-NH)-etil)-benzol 3 25,55 27,85
105. (2R-hidroxi-propil)-Aib-His-D-2Nal-D-Phe-Lys-NH2 64 18,15 20,28
106. (3-amino-metil-benzoil)-D-2Nal-D-Phe-pszi(CH2NH)-Lys-NH2 5 22,00 23,95
107. (3-amino-metil-benzoil)-N-Me-D-2Nal-D-Phe-Lys-NH2 62 23,27 24,72
108. (3-amino-metil-benzoil)-D-2Nal-D-Phe-N-Me-Lys-NH2 67 22,60 23,98 |
109. H-D-Thr-His-D-2Nal-D-Phe-Lys-NH2 7 17,75 19,83
110. H-Hyp-His-D-2Nal-D-Phe-Lys-NHz 7 17,58 19,37
A reprezentatív peptidek szerkezeteit az alábbiakban mutatjuk be.
N,N-di(2R-Hidroxí-propil)-(3-amino-metil-benzoil)-D-2Nal-D-Phe-Lys-NH2
HU 224 345 Β1
H-Ala-3Pyal-D-2Nal-D-Phe-Lys-NH2
(Transz-4-amino-metil-ciklohexanoil)-D-2Nal-D-Phe-Lys-NH2
HU 224 345 Β1
(2S)-(H-Aib-His-pszi(CH2NH)D-2Nal-D-Phe-NH)-6-amino-hexanol
2-(H-Aib-His-D-2Nal-D-Phe-NH)-(1-metil-2-pirrolidinil)-etán
(5-Amino-metil-tienil-2-karbonil)-D-2Nal-D-Phe-Lys-NH2
HU 224 345 Β1 (3-Amino-metil-tienil-2karbonil)-D-2Nal-D-Phe-Lys-NH2
116. példa
Egy patkány-hipofízissejteket használó in vitro vizsgálatot végzünk el a különböző GH- (növekedési hormon) secretagogumok hatásának tanulmányozásához. A kevert hipofízissejt-tenyészetet hím patkányok enteriőr hipofíziséből izoláljuk és 3 napig tenyésztjük. Mosás után a sejteket 15 percig stimuláljuk, és a szekretált növekedési hormon mennyiségét megmérjük a tenyészet felülúszójában.
A patkány-hipofízissejtek izolálását O. Sartor és munkatársai (Endocrinology 116, 1985, pp. 952-957) módosítása szerint végezzük el. A hipofíziseket dekapitálás után 250 g-os hím patkányokból szerezzük. A neurointermediate-lebenyeket eltávolítjuk, és a maradékot 0,25% glükózzal, 2*nem esszenciális aminosavval és 1 % BSA-val kiegészített Grey-féle tápközegbe (izolálási puffer) helyezzük. A mirigyeket kis darabokra vágjuk és 3 ml izolálási puffért és 11,5 mg tripszint és 1000 pg DN-ázt tartalmazó lombikba helyezzük, és 35 percig 37 °C hőmérsékleten 95% O2 mellett és 70 rotáció/perc mellett inkubáljuk. A fragmenseket háromszor mossuk az izolálási pufferben és egyedüli sejtekké alakítjuk Pasteur-pipetta segítségével. Diszpergálás után a sejteket egy nejlonszűrőn (160 pm) szűrjük a nem emésztett szövet eltávolítása céljából.
A sejteket háromszor mossuk a tripszininhibitorral (0,75 mg/ml) kiegészített izolálási pufferben, és a tenyésztápközegben (25 mM HEPES-sel, 4 mM glutaminnal, 0,75% nátrium-bikarbonáttal, 2,5% FCS-sel,
3% lószérummal, 10% patkányszérummal, 1 nM T3-mal és 40 pg/l dexamatasonnal kiegészített DMEM) reszuszpendáljuk 2*105 sejt/ml sűrűségig. A sejteket mikrotiterlemezekre oltjuk, 200 μΙ/üreg mennyiségben és 3 napig tenyésztjük 37 °C hőmérsékleten és 8%
CO2 mellett.
A tenyésztési periódus után a sejteket kétszer mossuk a stimulációs pufferrel (1% BSA-val, 0,25% D-glükózzal, és 25 mM HEPES-sel kiegészített HBSS) és 1 órán keresztül előinkubáljuk. Ezután a puffért eltávo50 lítjuk, és új, a peptidet tartalmazó stimulációs puffért adunk hozzá, és a lemezeket 15 percig 37 °C hőmérsékleten és 5% CO2 mellett inkubáljuk. A tápközeget összegyűjtjük és a patkánynövekedésihormon(rGH=rat Growth Hormoné) tartalomra analizáljuk szcintillációs proximitási vizsgálatban (SPA) a következők szerint [SPA, alapjában véve a 4 568 649 számú US-szabadalomban, Hart and Greenwalt közleményében (Mól. Immunoi. 16, 1979, pp. 265-269, vagy Udenfriend et al., közleményében (Proc. Natl. Acad.
Sci USA 82 1985, pp. 8672-8676-ban került leírásra)].
HU 224 345 Β1
Az rGH-vizsgálatot OptiPlatesben (96 üregű) végezzük el, mely megfelelő a Packards TopCountban (β-szcintillációs számláló) való közvetlen számoláshoz.
Vizsgálati eljárás μΙ puffer 5 μΙ minta (inkubált stimulációs puffer) μΙ 125l-rGH μΙ nyúl anti-rGH μΙ SPA reagens (antinyúl antitest)
A lemezeket lezárjuk és egy lemezrázó készülékre 10 helyezzük 30 percre, melyet 10 óráig tartó inkubálás követ, és 10-15 °C hőmérsékleten való ülepítés és számlálás.
Az SPA-ban egy, az anti-rGH nyúl antitesthez (elsődleges antitest) kötött rGH-t reagáltatunk egy második, fluomikroszférákhoz (SPA ll-es típusú RIA, az Amershamtól szerezhető be) kötött antitesttel. Az elsődleges antitesthez kötött bármely radioaktív izotóppal jelzett rGH immobilizálódik a fluomikroszférákon, melyek ezután fényt állítanak elő. Egy β-szcintíllációs számlálóban való mérés lehetővé teszi a radioaktív izotóppal jelzett rGH mennyiségének kiszámítását. A fluomikroszférákhoz kötött radioaktív izotóppal jelzett rGH mennyisége csökken a mintában levő rGH-tartalom növekedésével.
Példa száma Vegyület ECso (nM) Emax. (aGHRP6%-a) |
3. H-Ala-His-D-2Nal-DPhe-NH-(CH2)5NH2 20 100
10. H-Ala-Phe-D-2Nal-D-Phe-Lys-NH2 2 90
51. H-Ala-His-D-1 Nal-D-Phe-Lys-NH2 10 85
76. (2S)-((3-amino-metil-benzoil)-D-2Nal-D-Phe-NH)-6-amino-hexanol 26 65
83. H-Aib-Phe-D-2Nal-D-Phe-Lys-NH2 8 75
88. H-Aib-His-D-2Nal-D-Phe-Ala-NHz 11 80
104. (2-(H-Aib-His-D-2Nal-NH)-etil)-benzol 58 85
SZABADALMI IGÉNYPONTOK

Claims (16)

1. A-B-Z-D(-E)P (I) 35 általános képletű vegyület, ahol p értéke 0 vagy 1
A jelentése hidrogénatom, vagy
R1-(CH2)q-(X)r(CH2)s-CO-csoport, ahol q értéke 0 vagy 1 és 8 közötti egész szám, 40 r értéke 0 vagy 1, s értéke 0 vagy 1 és 5 közötti egész szám;
R1 jelentése hidrogénatom, imidazolil- vagy
-N(R2)-R3 képletű csoport, ahol
R2 és R3 egymástól függetlenül hidrogénatom 45 vagy kis szénatomszámú alkilcsoport, mely adott esetben helyettesítve lehet egy vagy több hidroxil-, piridil- vagy furanilcsoporttal, és
X jelentése -(CH2)-, -CH=CH- vagy (1) képletű csoport, ahol R16 és R17 egymástól függetlenül 50 hidrogénatom vagy kis szénatomszámú alkilcsoport, β jelentése (G)t—(H)u— képletű csoport, ahol t értéke 0 vagy 1, u értéke 0 vagy 1, 55
G és H jelentése egymástól függetlenül L- vagy D-Ala, -His, -Phe, -Tyr, -Thr természetes aminosavmaradék, vagy szintetikus aminosavak, így 1,4-diamino-izovajsav, 4-amino-fenil-alanin, 3-piridil-alanin, N-metil-antranilsav, antranilsav, N-benzil-glicin, 60
3-amino-metil-benzoesav, 3-amino-3-metil-butánsav, nipekotinsav vagy izonipekotinsav maradéka, és ahol, ha t és u értéke egyaránt 1, a G és H közötti amidkötés adott esetben -Y-N(R18)- csoporttal helyettesítve lehet, ahol Y jelentése =CO vagy =CH2 csoport és
R18 jelentése hidrogénatom, kis szénatomszámú alkil- vagy benzilcsoport,
Z jelentése NH-CH[(CH2)W-R4)J-CO- képletű D-aminosav maradéka, ahol w értéke 0,1 vagy 2,
R4 vagy ha jelentése (2a), (2b) vagy (2d) képletű csoport,
D jelentése, ha p=1, egy NH-CH[(CH2)k-R5)]-CO- általános képletű D-aminosav maradéka, vagy ha p=0, akkor D jelentése NH-CH[(CH2)1-R5)]-CH2-R6 vagy NH-CH[(CH2)m-R5)]-CH2-R6 általános képletű aminosav maradéka, ahol k értéke 0, 1 vagy 2,
I értéke 0, 1 vagy 2, m értéke 0, 1 vagy 2,
R5 jelentése (2a), (2b), (2d) vagy (2e) képletű csoport, melyek mindegyike adott esetben halogénatommal vagy kis szénatomszámú alkoxicsoporttal lehet helyettesítve, és
R6 jelentése -N(R7)-R8 képletű csoport, ahol az R7 és R8 egymástól függetlenül hidrogénatom vagy kis szénatomszámú alkilcsoport,
HU 224 345 Β1
E jelentése -NH-CH(R10)-(CH2)v-R9 általános képletű csoport, ahol v értéke 0 vagy 1 és 8 közötti egész szám,
R9 jelentése hidrogénatom vagy (3) általános képletű csoport, ahol n értéke 1 vagy 2, és
R19 jelentése hidrogénatom, kis szénatomszámú alkilcsoport, (4) általános képletű csoport - ahol o értéke 1 és 3 közötti egész szám -, N(R11)-R12 általános képletű csoport- ahol R11 és R12 egymástól függetlenül hidrogénatom vagy kis szénatomszámú alkilcsoport -, vagy (2a) vagy (2c) képletű csoport,
R10 jelentése hidrogénatom, -CH2-R13, -CO-R13 vagy -CH2OH csoport, ahol R13 jelentése -OH vagy -N(R14)-R15 csoport, ahol R14 és R15 egymástól függetlenül hidrogénatom;
és a 6 és Z közötti kötés, továbbá ha t és u értéke egyaránt 0, akkor az A és Z közötti amidkötés adott esetben -Y-N(R18) csoporttal lehet helyettesítve - ahol Y és R18 jelentése a fenti -;
valamint ezek gyógyszerészetileg elfogadható sói.
2. Az 1. igénypont szerinti vegyület, ahol p 1-et jelent.
3. Az 1. igénypont szerinti vegyület, ahol A hidrogénatomot jelent.
4. Az 1. igénypont szerinti vegyület, ahol A R1-(CH2)q-(X)r(CH2)s-CO- általános képletű csoport, ahol R1 jelentése 3-imidazolilcsoport, q jelentése 2, r jelentése 0 és s jelentése 0; vagy R1 NH2 csoport, q jelentése 1, r jelentése 1; vagy ahol R1 jelentése NH csoport, q jelentése 1, r jelentése 1.
5. Az 1. igénypont szerinti vegyület, ahol t=1, G Ala-t, Gly-t, Aib-et, nipekotinsavat vagy izonipekotinsavat jelent.
6. Az 1. igénypont szerinti vegyület, ahol, ha u=1, H jelentése His, Phe, Tic, 3Pyal, Gly, Alá, Phe(4-NH2), 3-amino-metil-benzoesav vagy D-Phe.
7. Az 1. igénypont szerinti vegyület, ahol R4 2-naftílcsoportot jelent.
8. Az 1. igénypont szerinti vegyület, ahol R5 fenilcsoportot jelent.
9. A 2. igénypont szerinti vegyület, ahol v 2-6, és R9 -NH2 csoportot jelent.
10. A 2. igénypont szerinti vegyület, ahol R10 -COOH csoportot vagy CONH2 csoportot jelent.
11. Az alábbi 1. igénypont szerinti vegyületek:
H-Ala-His-pszi(CH2NH)-D-2Nal-D-Phe-Lys-NH2
H-Ala-Ala-D-2Nal-D-Phe-Lys-NH2
H-His-D-2Nal-D-Phe-Lys-NH2 [3-(4-imidazolil)-propionil]-D-2Nal-D-Phe-Lys-NH2
H-D-Lys-D-2Nal-D-Phe-Lys-NH2
H-D-Ala-D-2Nal-D-Phe-Lys-NH2 (n-propil)-His-D-2Nal-D-Phe-Lys-NH2
H-Ala-3Pyal-D-2Nal-D-Phe-Lys-NH2
H-Ala-Phe-(4-NH2)-D-2Nal-D-Phe-Lys-NH2
H-D-Ala-His-D-2Nal-D-Phe-Lys-NH2 [2-(4-imidazolil)-acetil]-D-2Nal-D-Phe-Lys-NH2 [3-(4-imidazolil)-akriloil]-D-2Nal-D-Phe-Lys-NH2 (3-amino-metil-benzoil)-D-2Nal-D-Phe-Lys-NH2 (3-amino-fenil-acetil)-D-2Nal-D-Phe-Lys-NH2 (4-amino-fenil-acetil)-D-2Nal-D-Phe-Lys-NH2 (3-amino-krotonoil)-D-2Nal-D-Phe-Lys-NH2
H-Ala-His-D-2Nal-D-Phe-Lys-NH2 (H-Ala-His-D-2Nal-D-Phe-Lys-NH)-hexán
6-(H-Ala-His-D-2Nal-D-Phe-Lys-NH)-hexil-amin
5-(H-Ala-His-D-2Nal-D-Phe-Lys-NH)-pentil-alanin
H-Ala-His-D-2Nal-D-Phe-pszi(CH2-NH)-Lys-NH2 (2S)-(H-Ala-His-D-2Nal-D-Phe-NH)-6-amino-hexanol
2- (H-Ala-His-D-2Nal-D-Phe-NH)-etil-amin 4-[(H-Ala-His-D-2Nal-D-Phe-NH)-metil]-benzil-amin H-Ala-His-D-Phe-D-Phe-Lys-NH2
H-Ala-His-D-T rp-D-Phe-Lys-NH2
H-Ala-His-D-2Nal-D-Trp-Lys-NH2
H-Ala-His-D-2Nal-D-Phe-Lys-NH2
H-Ala-Phe-D-2Nal-D-Phe-Lys-NH2
H-Ala-His-D-2Nal-D-Phe-Lys-(maltozil)-NH2 [3-(metil-amino-metil)-benzoil]-D-2NalD-Phe-Lys-NH2 [4-(amino-metil)-benzoil]-D-2Nal-D-Phe-Lys-NH2
H-His-Ala-D-2Nal-D-Phe-Lys-NH2
4-(H-Ala-His-D-2Nal-D-Phe-NH)-butil-amin
3- (H-Ala-His-D-2Nal-D-Phe-NH)-propil-amin (3-amino-3-metil-butanoil)-D-2Nal-D-Phe-Lys-NH2 (3-amino-metil-benzoil)-D-hPhe-Lys-NH2 (3-amino-metil-benzoil)-pszi(CH2NH)D-2Nal-D-Phe-Lys-NH2 (3-amino-metil-benzoil)-D-2Nal-D-hPhe-Lys-NH2 (3-amino-metil-butanoil)-His-D-2Nal-DPhe-Lys-NH2 (2S)-(3-amino-metil-benzoil)-pszi(CH2NH)-D-2Nal-D-Phe-NH)-6-amino-hexanol (2S)-[(3-amino-metil-benzoil)-D-2Nal-DPhe-NH]-6-amino-hexanol (3-amino-metil-benzoil)-D-2Nal-D-Thial-Lys-NH2 (2S)-(H-Aib-His-pszi(CH2-NH)-D-2Nal-D-Phe-NH)6-amino-hexanol (3-amino-metil-benzoil)-D-2Nal-D-3Pyal-Lys-NH2 (3-amino-metil-benzoil)-D-2Nal-DPhe(4-F)-Lys-NH2 (3-amino-metil-benzoil)-D-2Nal-DPhe(4-OMe)-Lys-NH2 (2-amino-metil-fenil-acetil)-D-2Nal-D-Phe-Lys-NH2 (2-amino-metil-benzoil)-D-2Nal-D-Phe-Lys-NH2 2-(H-Aib-His-D-2Nal-D-Phe-NH)-(4-piridil)-etán H-Aib-Phe-D-2Nal-D-Phe-Lys-N H2 2-(H-Aib-His-D-2Nal-D-Phe-NH)-(1-metil-2-pirrolidinil)-etán
2-(H-Aib-His-D-2Nal-D-Phe-NH)-(4-piridil)-etán
H-Aib-His-pszi(CH2NH)-D-2Nal-D-Phe-Lys-OH (3-amino-metil-benzoil)-D-2Nal-N-Me-DPhe-Lys-NH2
H-Aib-His-D-2Nal-D-Phe-Gly-NH2 H-Aib-His-D-2Nal-D-Phe-Orn-N H2 (5-amino-metil-tienil-2-karbonil)-D-2Nal-D-PheLys-NH2
H-Aib-His-D-2Nal-D-Phe-D-Lys-NH2
H-Aib-His-D-2Nal-D-Phe-Dab-NH2
H-Aib-His-D-2Nal-D-Phe-pszi(CH2-NH)-Lys-NH2
HU 224 345 Β1
H-Aib-His-N-Me-D-2Nal-D-Phe-Lys-NH2
H-Aib-His-D-2Nal-D-Phe-N-Me-Lys-NH2 (3-amino-metil-tienil-2-karbonil)-D-2Nal-D-PheLys-NH2
H-Aib-His-D-2Nal-N-Me-D-Phe-Lys-NH2
H-Aib-His-D-2Nal-D-Phe-Gly-N(Me)2 (3R)-piperidin-karbonil-D-2Nal-D-Phe-Lys-NH2 (3-amino-metil-benzoil)-D-1Nal-D-Phe-Lys-NH2
H-Aib-His-D-2Nal-D-Trp-Lys-NH2 (furfuril)-Aib-His-D-2Nal-D-Phe-Lys-NH2 (2-piridil-metil)-Aib-His-D-2Nal-D-Phe-Lys-NH2
H-Aib-(3-amino-metil-benzoil)-D-2Nal-D-PheLys-NH2
H-Aib-3Pyal-D-2Nal-D-Phe-Lys-NH2 [2-(H-Aib-His-D-2Nal-NH)-etil]-benzol
N,N-di(2R-hidroxi-propil)-(3-amino-metilbenzoil)-D-2Nal-D-Phe-Lys-NH2 (2R-hidroxi-propil)-Aib-His-D-2Nal-D-Phe-Lys-NH2 (3-amino-metil-benzoil)-D-2Nal-D-Phepszi(CH2NH)-Lys-NH2 (3-amino-metil-benzoil)-N-Me-D-2NalD-Phe-Lys-NH2 (3-amino-metil-benzoil)-D-2Nal-D-PheN-Me-Lys-NH2
H-D-Thr-His-D-2Nal-D-Phe-Lys-NH2
2-[(3-amino-metil-benzoil)-D-2Nal-N-Me-DPhe-NH]-(1-metil-2-pirrolidinil)-etán
2-[(3R)-piperidin-karbonil-D-2Nal-NMe-D-Phe-NH]-(1-metil-2-pirrolidinil)-etán.
12. Gyógyszerkészítmény, mely hatóanyagként az 1. igénypontban meghatározott helyettesítőket tartalmazó (I) általános képletű vegyületet vagy ezek gyógyszerészetileg elfogadható sóit gyógyszerészetileg elfogadható hordozóval vagy hígítószerrel együtt tartalmazza.
13. A 12. igénypont szerinti egységdózis formában levő készítmény, mely az (I) általános képletű vegyületből vagy ennek sójából mintegy 10 és 200 mg közötti mennyiséget tartalmaz.
14. A 12. igénypont szerinti készítmény, mely növekedési hormon felszabadítását stimuláló hatású (I) általános képletű vegyületet tartalmaz.
15. (I) általános képletű vegyület - ahol a szubsztituensek jelentése az 1. igénypontban megadott -, valamint ezek gyógyszerészetileg elfogadható sói alkalmazása növekedési hormon hipofízisből való felszabadításának stimulálására szolgáló gyógyszerkészítmény előállítására.
16. A 15. igénypont szerinti alkalmazás, melynek során olyan gyógyszerkészítményt állítunk elő, ahol az (I) általános képletű vegyület vagy gyógyszerészetileg elfogadható sójának 0,0001-100 mg/kg testtömeg/nap közötti dózishatároknak, előnyösen 0,001-50 mg/kg testtömeg/nap közötti dózishatároknak megfelelő mennyiséget tartalmaz a készítmény.
HU9501947A 1993-12-23 1994-12-22 Növekedési hormont felszabadító tulajdonságú peptidek, ezeket hatóanyagként tartalmazó gyógyszerkészítmények és alkalmazásuk HU224345B1 (hu)

Applications Claiming Priority (4)

Application Number Priority Date Filing Date Title
DK143993A DK143993D0 (hu) 1993-12-23 1993-12-23
DK12194 1994-01-28
DK119194 1994-10-14
PCT/DK1994/000485 WO1995017423A1 (en) 1993-12-23 1994-12-22 Compounds with growth hormone releasing properties

Publications (3)

Publication Number Publication Date
HU9501947D0 HU9501947D0 (en) 1995-11-28
HUT73497A HUT73497A (en) 1996-08-28
HU224345B1 true HU224345B1 (hu) 2005-08-29

Family

ID=27220421

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
HU9501947A HU224345B1 (hu) 1993-12-23 1994-12-22 Növekedési hormont felszabadító tulajdonságú peptidek, ezeket hatóanyagként tartalmazó gyógyszerkészítmények és alkalmazásuk

Country Status (27)

Country Link
US (1) US5767085A (hu)
EP (1) EP0736039B1 (hu)
JP (1) JP3181918B2 (hu)
KR (1) KR100354897B1 (hu)
CN (1) CN1052731C (hu)
AT (1) ATE197158T1 (hu)
AU (1) AU689181B2 (hu)
BR (1) BR9408377A (hu)
CA (1) CA2179597A1 (hu)
CZ (1) CZ293113B6 (hu)
DE (1) DE69426206T2 (hu)
DK (1) DK0736039T3 (hu)
ES (1) ES2153469T3 (hu)
FI (1) FI962584A0 (hu)
GR (1) GR3035150T3 (hu)
HU (1) HU224345B1 (hu)
IL (1) IL112112A (hu)
MX (1) MX9500072A (hu)
NO (1) NO315561B1 (hu)
NZ (1) NZ277486A (hu)
PL (1) PL181280B1 (hu)
PT (1) PT736039E (hu)
RO (1) RO115635B1 (hu)
SG (1) SG55069A1 (hu)
SK (1) SK281963B6 (hu)
UA (1) UA42747C2 (hu)
WO (1) WO1995017423A1 (hu)

Families Citing this family (56)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
EP0730578A4 (en) * 1993-11-24 1997-10-08 Merck & Co Inc COMPOUNDS CONTAINING AN INDOLYL GROUP AND THEIR USE FOR PROMOTING THE RELEASE OF GROWTH HORMONES
CN1052730C (zh) * 1993-12-23 2000-05-24 诺沃挪第克公司 具有生长激素释放特性的化合物
US5798337A (en) * 1994-11-16 1998-08-25 Genentech, Inc. Low molecular weight peptidomimetic growth hormone secretagogues
US20020111461A1 (en) 1999-05-21 2002-08-15 Todd C. Somers Low molecular weight peptidomimetic growth hormone secretagogues
DE69633003T2 (de) 1995-01-27 2005-08-18 Novo Nordisk A/S Verbindungen mit wachstumshormon-freisetzenden eigenschaften
KR19990028303A (ko) * 1995-06-22 1999-04-15 한센 핀 베네드, 안네 제헤르 성장호르몬 방출 특성을 가지는 화합물
WO1997022004A1 (en) 1995-12-13 1997-06-19 Merck & Co., Inc. Assays for growth hormone secretagogue receptors
US6531314B1 (en) 1996-12-10 2003-03-11 Merck & Co., Inc. Growth hormone secretagogue receptor family
GB2308362A (en) * 1995-12-19 1997-06-25 Lilly Industries Ltd Pharmaceutical indole derivatives
ATE424412T1 (de) * 1995-12-22 2009-03-15 Novo Nordisk As Verbindungen mit wachstumshormon-freisetzenden eigenschaften
US6451970B1 (en) 1996-02-21 2002-09-17 Novo Nordisk A/S Peptide derivatives
CN1127488C (zh) * 1996-04-24 2003-11-12 诺沃挪第克公司 具有生长激素释放特性的化合物
US5919777A (en) * 1996-04-24 1999-07-06 Novo Nordisk A/S Compounds with growth hormone releasing properties
US5922770A (en) * 1996-07-22 1999-07-13 Novo Nordisk A/S Compounds with growth hormone releasing properties
WO1998008492A1 (en) * 1996-08-29 1998-03-05 Novo Nordisk A/S Transdermal delivery of peptides
US6420518B1 (en) 1997-04-04 2002-07-16 Genetech, Inc. Insulin-like growth factor agonist molecules
US6121416A (en) 1997-04-04 2000-09-19 Genentech, Inc. Insulin-like growth factor agonist molecules
WO1998058950A1 (en) 1997-06-20 1998-12-30 Novo Nordisk A/S Compounds with growth hormone releasing properties
US6127341A (en) * 1997-06-20 2000-10-03 Novo Nordisk A/S Compounds with growth hormone releasing properties
DE69921611T2 (de) 1998-01-16 2005-11-03 Novo Nordisk A/S Verbindungen mit wachstumshormon-freisetzenden eigenschaften
US6919315B1 (en) 1998-06-30 2005-07-19 Novo Nordisk A/S Compounds with growth hormone releasing properties
US6682908B1 (en) 1998-07-10 2004-01-27 Merck & Co., Inc. Mouse growth hormone secretagogue receptor
EP1097170A1 (en) 1998-07-13 2001-05-09 Merck & Co., Inc. Growth hormone secretagogue related receptors and nucleic acids
WO2000009538A2 (en) 1998-08-10 2000-02-24 Merck & Co., Inc. Canine growth hormone secretagogue receptor
US6696063B1 (en) 1998-12-30 2004-02-24 Applied Research Systems Ars Holding N.V. Treatment of HIV-associated dysmorphia/dysmetabolic syndrome (HADDS) with or without lipodystrophy
AU762351B2 (en) 1999-01-06 2003-06-26 Genentech Inc. Insulin-like growth factor (IGF) I mutant variants
AU759022B2 (en) * 1999-02-18 2003-04-03 Kaken Pharmaceutical Co., Ltd. Novel amide derivatives as growth hormone secretagogues
WO2000074702A1 (en) * 1999-06-04 2000-12-14 Novo Nordisk A/S Compositions for the treatment of the catabolic state of prolonged critical illness
WO2001087323A2 (en) 2000-05-16 2001-11-22 Genentech, Inc. Method for treating cartilage disorders
EP1159964B1 (en) 2000-05-31 2009-10-28 Pfizer Products Inc. Use of growth hormone secretagogues for stimulating gastrointestinal motility
TWI331922B (en) 2002-08-09 2010-10-21 Ipsen Pharma Sas Growth hormone releasing peptides
KR20060012008A (ko) * 2003-05-19 2006-02-06 워너-램버트 캄파니 엘엘씨 제어된 입자 크기를 갖는 산화 티타늄을 함유하는 경질젤라틴 캡슐 및 그의 제조방법
US7476653B2 (en) 2003-06-18 2009-01-13 Tranzyme Pharma, Inc. Macrocyclic modulators of the ghrelin receptor
PL2274978T3 (pl) 2003-09-12 2015-11-30 Ipsen Biopharmaceuticals Inc Sposoby leczenia niedoboru insulinopodobnego czynnika wzrostu 1 (IGF-1)
WO2005027913A1 (en) * 2003-09-19 2005-03-31 Pfizer Products Inc. Pharmaceutical compositions and methods comprising combinations of 2-alkylidene-19-nor-vitamin d derivatives and a growth hormone secretagogue
WO2005097261A1 (en) * 2004-03-30 2005-10-20 Sapphire Therapeutics, Inc. Method of reducing c-reactive protein using growth hormone secretagogues
UA87854C2 (en) 2004-06-07 2009-08-25 Мерк Энд Ко., Инк. N-(2-benzyl)-2-phenylbutanamides as androgen receptor modulators
US20070191283A1 (en) * 2004-08-12 2007-08-16 Rejuvenon Corporation Method of stimulating the motility of the gastrointestinal system using growth hormone secretagogues
CU23558A1 (es) 2006-02-28 2010-07-20 Ct Ingenieria Genetica Biotech Compuestos análogos a los secretagogos peptidicos de la hormona de crecimiento
US8536120B2 (en) * 2006-04-28 2013-09-17 The Administrators Of The Tulane Educational Fund Ghrelin/growth hormone releasing peptide/growth hormone secretatogue receptor antagonists and uses thereof
EA200901077A1 (ru) 2007-02-09 2010-04-30 Транзим Фарма, Инк. Макроциклические модуляторы грелинового рецептора и их применение
JP2010518158A (ja) * 2007-02-13 2010-05-27 ヘルシン セラピューティクス（ユー．エス．），インコーポレイティド 成長ホルモン分泌促進物質を用いた細胞増殖性障害の治療方法
TWI429436B (zh) * 2007-04-10 2014-03-11 Helsinn Therapeutics Us Inc 使用生長激素促泌素治療或預防嘔吐之方法
EP2155769B1 (en) 2007-05-04 2012-06-27 Katholieke Universiteit Leuven KU Leuven Research & Development Tissue degeneration protection
WO2009079797A1 (en) 2007-12-26 2009-07-02 Critical Outcome Technologies, Inc. Compounds and method for treatment of cancer
CA2730890C (en) 2008-07-17 2018-05-15 Critical Outcome Technologies Inc. Thiosemicarbazone inhibitor compounds and cancer treatment methods
UA105657C2 (uk) * 2009-02-27 2014-06-10 Хелсінн Терапьютікс (Ю.Ес.), Інк. Поліпшені способи лікування мігрені на основі анамореліну
US9724381B2 (en) 2009-05-12 2017-08-08 The Administrators Of The Tulane Educational Fund Methods of inhibiting the ghrelin/growth hormone secretatogue receptor pathway and uses thereof
UA104762C2 (ru) 2009-06-12 2014-03-11 ХЕЛСИНН ТЕРАПЬЮТИКС (Ю.Эс.), ИНК. Раствор для инъекции или инфузии ипаморелина диацетата
CA2999435A1 (en) 2010-04-01 2011-10-06 Critical Outcome Technologies Inc. Compounds and method for treatment of hiv
WO2013190520A2 (en) 2012-06-22 2013-12-27 The General Hospital Corporation Gh-releasing agents in the treatment of vascular stenosis and associated conditions
US9119832B2 (en) 2014-02-05 2015-09-01 The Regents Of The University Of California Methods of treating mild brain injury
KR20160147007A (ko) 2014-05-30 2016-12-21 화이자 인코포레이티드 선택적인 안드로겐 수용체 조절제로서의 카보니트릴 유도체
US20170121385A1 (en) 2015-10-28 2017-05-04 Oxeia Biopharmaceuticals, Inc. Methods of treating neurodegenerative conditions
EP3601245A1 (en) 2017-03-28 2020-02-05 The Regents of The University of Michigan Small molecule dcn1 inhibitors and therapeutic methods using the same
WO2023275715A1 (en) 2021-06-30 2023-01-05 Pfizer Inc. Metabolites of selective androgen receptor modulators

Family Cites Families (10)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US4223020A (en) * 1979-03-30 1980-09-16 Beckman Instruments, Inc. Synthetic peptides having pituitary growth hormone releasing activity
US4223019A (en) * 1979-03-30 1980-09-16 Beckman Instruments, Inc. Synthetic peptides having pituitary growth hormone releasing activity
US4228156A (en) * 1979-03-30 1980-10-14 Beckman Instruments, Inc. Synthetic peptides having pituitary growth hormone releasing activity
US4410512A (en) * 1981-12-28 1983-10-18 Beckman Instruments, Inc. Combinations having synergistic pituitary growth hormone releasing activity
JPS58501861A (ja) * 1981-12-28 1983-11-04 ベツクマン・インストルメンツ・インコ−ポレ−テツド 下垂体成長ホルモン放出活性を有する合成ペプチド
US4803261A (en) * 1986-06-27 1989-02-07 The Administrators Of The Tulane Educational Fund Method for synthesizing a peptide containing a non-peptide
IL98910A0 (en) * 1990-07-24 1992-07-15 Polygen Holding Corp Polypeptide compounds having growth hormone releasing activity and pharmaceutical compositions containing them
US5663146A (en) * 1991-08-22 1997-09-02 Administrators Of The Tulane Educational Fund Polypeptide analogues having growth hormone releasing activity
EP0663834A4 (en) * 1992-09-25 1996-01-24 Smithkline Beecham Corp GROWTH HORMONE RELEASING PEPTIDES.
EP0730578A4 (en) * 1993-11-24 1997-10-08 Merck & Co Inc COMPOUNDS CONTAINING AN INDOLYL GROUP AND THEIR USE FOR PROMOTING THE RELEASE OF GROWTH HORMONES

Also Published As

Publication number Publication date
PL181280B1 (pl) 2001-07-31
NO962665D0 (no) 1996-06-21
CN1138335A (zh) 1996-12-18
FI962584A (fi) 1996-06-20
EP0736039A1 (en) 1996-10-09
JP3181918B2 (ja) 2001-07-03
NO962665L (no) 1996-08-23
KR100354897B1 (ko) 2003-01-06
FI962584A0 (fi) 1996-06-20
PT736039E (pt) 2001-04-30
BR9408377A (pt) 1997-08-19
ATE197158T1 (de) 2000-11-15
AU1272495A (en) 1995-07-10
CN1052731C (zh) 2000-05-24
AU689181B2 (en) 1998-03-26
JPH09507217A (ja) 1997-07-22
DE69426206D1 (de) 2000-11-30
MX9500072A (es) 1997-05-31
HU9501947D0 (en) 1995-11-28
IL112112A (en) 2000-06-29
IL112112A0 (en) 1995-03-15
ES2153469T3 (es) 2001-03-01
RO115635B1 (ro) 2000-04-28
CZ183496A3 (en) 1997-02-12
SK82096A3 (en) 1997-01-08
SG55069A1 (en) 1998-12-21
EP0736039B1 (en) 2000-10-25
CZ293113B6 (cs) 2004-02-18
SK281963B6 (sk) 2001-09-11
WO1995017423A1 (en) 1995-06-29
US5767085A (en) 1998-06-16
PL315113A1 (en) 1996-10-14
UA42747C2 (uk) 2001-11-15
NZ277486A (en) 1997-03-24
HUT73497A (en) 1996-08-28
NO315561B1 (no) 2003-09-22
DE69426206T2 (de) 2001-05-17
DK0736039T3 (da) 2001-02-12
CA2179597A1 (en) 1995-06-29
GR3035150T3 (en) 2001-04-30

Similar Documents

Publication Publication Date Title
HU224345B1 (hu) Növekedési hormont felszabadító tulajdonságú peptidek, ezeket hatóanyagként tartalmazó gyógyszerkészítmények és alkalmazásuk
JP3759748B2 (ja) 成長ホルモン放出性を有する化合物
AU711104B2 (en) Compounds with growth hormone releasing properties
EP0820296A1 (en) Analogs of growth hormone-releasing factor
US5990084A (en) Compounds with growth hormone releasing properties
EP0910579A1 (en) Compounds with growth hormone releasing properties
WO1996041814A1 (fr) Peptide, bronchodilatateur et agent facilitant l'ecoulement sanguin
JP4173541B6 (ja) 成長ホルモン放出特性を有する化合物
JP2513440B2 (ja) 新規ペプチド

Legal Events

Date Code Title Description
HFG4 Patent granted, date of granting

Effective date: 20050617

HMM4 Cancellation of final prot. due to non-payment of fee