FI90088B - Foerfarande foer framstaellning av b-avermektiner och vid foerfarandet anvaendbar odling - Google Patents
Foerfarande foer framstaellning av b-avermektiner och vid foerfarandet anvaendbar odling Download PDFInfo
- Publication number
- FI90088B FI90088B FI880281A FI880281A FI90088B FI 90088 B FI90088 B FI 90088B FI 880281 A FI880281 A FI 880281A FI 880281 A FI880281 A FI 880281A FI 90088 B FI90088 B FI 90088B
- Authority
- FI
- Finland
- Prior art keywords
- branched
- avermectin
- avermectins
- acid
- avermitilis
- Prior art date
Links
- 239000005660 Abamectin Substances 0.000 claims description 100
- 241001468227 Streptomyces avermitilis Species 0.000 claims description 51
- 230000000694 effects Effects 0.000 claims description 41
- RRZXIRBKKLTSOM-XPNPUAGNSA-N avermectin B1a Chemical compound C1=C[C@H](C)[C@@H]([C@@H](C)CC)O[C@]11O[C@H](C\C=C(C)\[C@@H](O[C@@H]2O[C@@H](C)[C@H](O[C@@H]3O[C@@H](C)[C@H](O)[C@@H](OC)C3)[C@@H](OC)C2)[C@@H](C)\C=C\C=C/2[C@]3([C@H](C(=O)O4)C=C(C)[C@@H](O)[C@H]3OC\2)O)C[C@H]4C1 RRZXIRBKKLTSOM-XPNPUAGNSA-N 0.000 claims description 32
- 238000000034 method Methods 0.000 claims description 30
- 101710088194 Dehydrogenase Proteins 0.000 claims description 29
- 101710116650 FAD-dependent monooxygenase Proteins 0.000 claims description 20
- 101710128228 O-methyltransferase Proteins 0.000 claims description 20
- 125000001449 isopropyl group Chemical group [H]C([H])([H])C([H])(*)C([H])([H])[H] 0.000 claims description 20
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 claims description 16
- 239000002253 acid Substances 0.000 claims description 13
- IJGRMHOSHXDMSA-UHFFFAOYSA-N Atomic nitrogen Chemical compound N#N IJGRMHOSHXDMSA-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 8
- 125000002887 hydroxy group Chemical group [H]O* 0.000 claims description 8
- 150000003839 salts Chemical class 0.000 claims description 8
- 125000000217 alkyl group Chemical group 0.000 claims description 7
- 125000001511 cyclopentyl group Chemical group [H]C1([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])(*)C1([H])[H] 0.000 claims description 7
- OKTJSMMVPCPJKN-UHFFFAOYSA-N Carbon Chemical compound [C] OKTJSMMVPCPJKN-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 6
- 229910052799 carbon Inorganic materials 0.000 claims description 5
- 229910052739 hydrogen Inorganic materials 0.000 claims description 4
- 239000001257 hydrogen Substances 0.000 claims description 4
- 229910052757 nitrogen Inorganic materials 0.000 claims description 4
- NINIDFKCEFEMDL-UHFFFAOYSA-N Sulfur Chemical compound [S] NINIDFKCEFEMDL-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 3
- 239000012736 aqueous medium Substances 0.000 claims description 3
- 125000000623 heterocyclic group Chemical group 0.000 claims description 3
- 229910052717 sulfur Inorganic materials 0.000 claims description 3
- 239000011593 sulfur Substances 0.000 claims description 3
- 125000006552 (C3-C8) cycloalkyl group Chemical group 0.000 claims description 2
- 125000000081 (C5-C8) cycloalkenyl group Chemical group 0.000 claims description 2
- 125000003342 alkenyl group Chemical group 0.000 claims description 2
- 125000004183 alkoxy alkyl group Chemical group 0.000 claims description 2
- 125000006350 alkyl thio alkyl group Chemical group 0.000 claims description 2
- 125000001316 cycloalkyl alkyl group Chemical group 0.000 claims description 2
- 125000005843 halogen group Chemical group 0.000 claims description 2
- 125000000325 methylidene group Chemical group [H]C([H])=* 0.000 claims description 2
- 229920006395 saturated elastomer Polymers 0.000 claims description 2
- 125000000304 alkynyl group Chemical group 0.000 claims 1
- 125000000113 cyclohexyl group Chemical group [H]C1([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])(*)C([H])([H])C1([H])[H] 0.000 claims 1
- 125000004435 hydrogen atom Chemical group [H]* 0.000 claims 1
- 125000001544 thienyl group Chemical group 0.000 claims 1
- 150000001875 compounds Chemical class 0.000 description 48
- 238000000855 fermentation Methods 0.000 description 26
- 230000004151 fermentation Effects 0.000 description 25
- 239000002609 medium Substances 0.000 description 25
- OKKJLVBELUTLKV-UHFFFAOYSA-N Methanol Chemical compound OC OKKJLVBELUTLKV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 24
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 description 17
- 239000000203 mixture Substances 0.000 description 17
- -1 (S) -sec-butyl (1-methylpropyl) Chemical group 0.000 description 16
- YXFVVABEGXRONW-UHFFFAOYSA-N Toluene Chemical compound CC1=CC=CC=C1 YXFVVABEGXRONW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 15
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 15
- 235000002639 sodium chloride Nutrition 0.000 description 15
- KZSNJWFQEVHDMF-BYPYZUCNSA-N L-valine Chemical compound CC(C)[C@H](N)C(O)=O KZSNJWFQEVHDMF-BYPYZUCNSA-N 0.000 description 14
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M Sodium chloride Chemical compound [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 14
- 239000000047 product Substances 0.000 description 13
- WEVYAHXRMPXWCK-UHFFFAOYSA-N Acetonitrile Chemical compound CC#N WEVYAHXRMPXWCK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 12
- 238000004128 high performance liquid chromatography Methods 0.000 description 12
- WLAMNBDJUVNPJU-UHFFFAOYSA-N 2-methylbutyric acid Chemical compound CCC(C)C(O)=O WLAMNBDJUVNPJU-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 9
- CSCPPACGZOOCGX-UHFFFAOYSA-N Acetone Chemical compound CC(C)=O CSCPPACGZOOCGX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 9
- HEMHJVSKTPXQMS-UHFFFAOYSA-M Sodium hydroxide Chemical compound [OH-].[Na+] HEMHJVSKTPXQMS-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 9
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 9
- 125000001424 substituent group Chemical group 0.000 description 9
- ROHFNLRQFUQHCH-YFKPBYRVSA-N L-leucine Chemical compound CC(C)C[C@H](N)C(O)=O ROHFNLRQFUQHCH-YFKPBYRVSA-N 0.000 description 8
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 description 8
- 125000002496 methyl group Chemical group [H]C([H])([H])* 0.000 description 8
- 239000011780 sodium chloride Substances 0.000 description 8
- 239000007858 starting material Substances 0.000 description 8
- AGPKZVBTJJNPAG-WHFBIAKZSA-N L-isoleucine Chemical compound CC[C@H](C)[C@H](N)C(O)=O AGPKZVBTJJNPAG-WHFBIAKZSA-N 0.000 description 7
- 238000011534 incubation Methods 0.000 description 7
- 230000014759 maintenance of location Effects 0.000 description 7
- 239000000725 suspension Substances 0.000 description 7
- 229960004295 valine Drugs 0.000 description 7
- 229920001817 Agar Polymers 0.000 description 6
- LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N Ethanol Chemical compound CCO LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- XEKOWRVHYACXOJ-UHFFFAOYSA-N Ethyl acetate Chemical compound CCOC(C)=O XEKOWRVHYACXOJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- LYCAIKOWRPUZTN-UHFFFAOYSA-N Ethylene glycol Chemical compound OCCO LYCAIKOWRPUZTN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- 239000008272 agar Substances 0.000 description 6
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 description 6
- 230000035772 mutation Effects 0.000 description 6
- 238000012216 screening Methods 0.000 description 6
- LMXOHSDXUQEUSF-YECHIGJVSA-N sinefungin Chemical compound O[C@@H]1[C@H](O)[C@@H](C[C@H](CC[C@H](N)C(O)=O)N)O[C@H]1N1C2=NC=NC(N)=C2N=C1 LMXOHSDXUQEUSF-YECHIGJVSA-N 0.000 description 6
- 239000000126 substance Substances 0.000 description 6
- YMWUJEATGCHHMB-UHFFFAOYSA-N Dichloromethane Chemical compound ClCCl YMWUJEATGCHHMB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 5
- 229930182844 L-isoleucine Natural products 0.000 description 5
- VZUNGTLZRAYYDE-UHFFFAOYSA-N N-methyl-N'-nitro-N-nitrosoguanidine Chemical compound O=NN(C)C(=N)N[N+]([O-])=O VZUNGTLZRAYYDE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 5
- 229920002472 Starch Polymers 0.000 description 5
- 239000000872 buffer Substances 0.000 description 5
- 238000004587 chromatography analysis Methods 0.000 description 5
- 229960000310 isoleucine Drugs 0.000 description 5
- 229960003136 leucine Drugs 0.000 description 5
- 239000007788 liquid Substances 0.000 description 5
- 238000002703 mutagenesis Methods 0.000 description 5
- 231100000350 mutagenesis Toxicity 0.000 description 5
- 239000002243 precursor Substances 0.000 description 5
- 239000008107 starch Substances 0.000 description 5
- 235000019698 starch Nutrition 0.000 description 5
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 5
- UAXOELSVPTZZQG-UHFFFAOYSA-N tiglic acid Natural products CC(C)=C(C)C(O)=O UAXOELSVPTZZQG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 5
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 5
- MNULEGDCPYONBU-UIXCWHRQSA-N (1R,4E,5'S,6S,6'S,7R,8S,10R,11R,12S,14R,15S,16R,18Z,20Z,22R,25S,27R,28S,29R)-22-ethyl-7,11,14,15-tetrahydroxy-6'-[(2R)-2-hydroxypropyl]-5',6,8,10,12,14,16,28,29-nonamethylspiro[2,26-dioxabicyclo[23.3.1]nonacosa-4,18,20-triene-27,2'-oxane]-3,9,13-trione Polymers CC[C@@H]1CC[C@@H]2O[C@]3(CC[C@H](C)[C@H](C[C@@H](C)O)O3)[C@@H](C)[C@H](OC(=O)\C=C\[C@H](C)[C@@H](O)[C@H](C)C(=O)[C@H](C)[C@@H](O)[C@H](C)C(=O)[C@](C)(O)[C@@H](O)[C@H](C)C\C=C/C=C\1)[C@@H]2C MNULEGDCPYONBU-UIXCWHRQSA-N 0.000 description 4
- MNULEGDCPYONBU-CBLVMMTCSA-N (1R,4Z,5'S,6S,6'S,7R,8S,10R,11R,12S,14R,15S,16R,18Z,20Z,22R,25S,27R,28S,29R)-22-ethyl-7,11,14,15-tetrahydroxy-6'-[(2R)-2-hydroxypropyl]-5',6,8,10,12,14,16,28,29-nonamethylspiro[2,26-dioxabicyclo[23.3.1]nonacosa-4,18,20-triene-27,2'-oxane]-3,9,13-trione Polymers CC[C@@H]1CC[C@@H]2O[C@]3(CC[C@H](C)[C@H](C[C@@H](C)O)O3)[C@@H](C)[C@H](OC(=O)\C=C/[C@H](C)[C@@H](O)[C@H](C)C(=O)[C@H](C)[C@@H](O)[C@H](C)C(=O)[C@](C)(O)[C@@H](O)[C@H](C)C\C=C/C=C\1)[C@@H]2C MNULEGDCPYONBU-CBLVMMTCSA-N 0.000 description 4
- MNULEGDCPYONBU-WABYXMGOSA-N (1S,4E,5'R,6R,6'R,7S,8R,10S,11S,12R,14S,15R,16S,18E,22S,25R,27S,28R,29S)-22-ethyl-7,11,14,15-tetrahydroxy-6'-(2-hydroxypropyl)-5',6,8,10,12,14,16,28,29-nonamethylspiro[2,26-dioxabicyclo[23.3.1]nonacosa-4,18,20-triene-27,2'-oxane]-3,9,13-trione Polymers CC[C@H]1CC[C@H]2O[C@@]3(CC[C@@H](C)[C@@H](CC(C)O)O3)[C@H](C)[C@@H](OC(=O)\C=C\[C@@H](C)[C@H](O)[C@@H](C)C(=O)[C@@H](C)[C@H](O)[C@@H](C)C(=O)[C@@](C)(O)[C@H](O)[C@@H](C)C\C=C\C=C1)[C@H]2C MNULEGDCPYONBU-WABYXMGOSA-N 0.000 description 4
- MNULEGDCPYONBU-QECWTJOCSA-N (1r,4s,5e,5'r,6'r,7e,10s,11r,12s,14r,15s,16s,18r,19s,20r,21e,25s,26r,27s,29s)-4-ethyl-11,12,15,19-tetrahydroxy-6'-(2-hydroxypropyl)-5',10,12,14,16,18,20,26,29-nonamethylspiro[24,28-dioxabicyclo[23.3.1]nonacosa-5,7,21-triene-27,2'-oxane]-13,17,23-trione Polymers O([C@@H]1CC[C@@H](/C=C/C=C/C[C@H](C)[C@@H](O)[C@](C)(O)C(=O)[C@H](C)[C@@H](O)[C@H](C)C(=O)[C@H](C)[C@@H](O)[C@H](C)/C=C/C(=O)O[C@H]([C@H]2C)[C@H]1C)CC)[C@]12CC[C@@H](C)[C@@H](CC(C)O)O1 MNULEGDCPYONBU-QECWTJOCSA-N 0.000 description 4
- MNULEGDCPYONBU-WMBHJXFZSA-N (1r,4s,5e,5'r,6'r,7e,10s,11r,12s,14r,15s,16s,18r,19s,20r,21e,25s,26r,27s,29s)-4-ethyl-11,12,15,19-tetrahydroxy-6'-[(2s)-2-hydroxypropyl]-5',10,12,14,16,18,20,26,29-nonamethylspiro[24,28-dioxabicyclo[23.3.1]nonacosa-5,7,21-triene-27,2'-oxane]-13,17,23-trio Polymers O([C@@H]1CC[C@@H](/C=C/C=C/C[C@H](C)[C@@H](O)[C@](C)(O)C(=O)[C@H](C)[C@@H](O)[C@H](C)C(=O)[C@H](C)[C@@H](O)[C@H](C)/C=C/C(=O)O[C@H]([C@H]2C)[C@H]1C)CC)[C@]12CC[C@@H](C)[C@@H](C[C@H](C)O)O1 MNULEGDCPYONBU-WMBHJXFZSA-N 0.000 description 4
- MNULEGDCPYONBU-BOXGPLBDSA-N (1r,4s,5e,5'r,6'r,7e,10s,11s,12s,14r,15s,16s,18r,19s,20r,21e,25s,26r,27s,29s)-4-ethyl-11,12,15,19-tetrahydroxy-6'-[(2s)-2-hydroxypropyl]-5',10,12,14,16,18,20,26,29-nonamethylspiro[24,28-dioxabicyclo[23.3.1]nonacosa-5,7,21-triene-27,2'-oxane]-13,17,23-trio Polymers O([C@@H]1CC[C@@H](/C=C/C=C/C[C@H](C)[C@H](O)[C@](C)(O)C(=O)[C@H](C)[C@@H](O)[C@H](C)C(=O)[C@H](C)[C@@H](O)[C@H](C)/C=C/C(=O)O[C@H]([C@H]2C)[C@H]1C)CC)[C@]12CC[C@@H](C)[C@@H](C[C@H](C)O)O1 MNULEGDCPYONBU-BOXGPLBDSA-N 0.000 description 4
- MNULEGDCPYONBU-YOKYSHDFSA-N (5'R,10S,11R,12S,14S,15R,16R,18R,19S,20R,26R,29S)-4-ethyl-11,12,15,19-tetrahydroxy-6'-[(2S)-2-hydroxypropyl]-5',10,12,14,16,18,20,26,29-nonamethylspiro[24,28-dioxabicyclo[23.3.1]nonacosa-5,7,21-triene-27,2'-oxane]-13,17,23-trione Polymers C([C@H](C)[C@@H](O)[C@](C)(O)C(=O)[C@@H](C)[C@H](O)[C@@H](C)C(=O)[C@H](C)[C@@H](O)[C@H](C)C=CC(=O)OC([C@H]1C)[C@H]2C)C=CC=CC(CC)CCC2OC21CC[C@@H](C)C(C[C@H](C)O)O2 MNULEGDCPYONBU-YOKYSHDFSA-N 0.000 description 4
- MNULEGDCPYONBU-VVXVDZGXSA-N (5e,5'r,7e,10s,11r,12s,14s,15r,16r,18r,19s,20r,21e,26r,29s)-4-ethyl-11,12,15,19-tetrahydroxy-6'-[(2s)-2-hydroxypropyl]-5',10,12,14,16,18,20,26,29-nonamethylspiro[24,28-dioxabicyclo[23.3.1]nonacosa-5,7,21-triene-27,2'-oxane]-13,17,23-trione Polymers C([C@H](C)[C@@H](O)[C@](C)(O)C(=O)[C@@H](C)[C@H](O)[C@@H](C)C(=O)[C@H](C)[C@@H](O)[C@H](C)/C=C/C(=O)OC([C@H]1C)[C@H]2C)\C=C\C=C\C(CC)CCC2OC21CC[C@@H](C)C(C[C@H](C)O)O2 MNULEGDCPYONBU-VVXVDZGXSA-N 0.000 description 4
- TWCMVXMQHSVIOJ-UHFFFAOYSA-N Aglycone of yadanzioside D Natural products COC(=O)C12OCC34C(CC5C(=CC(O)C(O)C5(C)C3C(O)C1O)C)OC(=O)C(OC(=O)C)C24 TWCMVXMQHSVIOJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- PLMKQQMDOMTZGG-UHFFFAOYSA-N Astrantiagenin E-methylester Natural products CC12CCC(O)C(C)(CO)C1CCC1(C)C2CC=C2C3CC(C)(C)CCC3(C(=O)OC)CCC21C PLMKQQMDOMTZGG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- MNULEGDCPYONBU-MQLHLVDXSA-N CC[C@@H]1CC[C@@H]2O[C@]3(CC[C@H](C)[C@H](C[C@@H](C)O)O3)[C@@H](C)[C@H](OC(=O)\C=C\[C@H](C)[C@@H](O)[C@H](C)C(=O)[C@H](C)[C@@H](O)[C@H](C)C(=O)[C@](C)(O)[C@@H](O)[C@H](C)C\C=C\C=C\1)C2C Polymers CC[C@@H]1CC[C@@H]2O[C@]3(CC[C@H](C)[C@H](C[C@@H](C)O)O3)[C@@H](C)[C@H](OC(=O)\C=C\[C@H](C)[C@@H](O)[C@H](C)C(=O)[C@H](C)[C@@H](O)[C@H](C)C(=O)[C@](C)(O)[C@@H](O)[C@H](C)C\C=C\C=C\1)C2C MNULEGDCPYONBU-MQLHLVDXSA-N 0.000 description 4
- VTYYLEPIZMXCLO-UHFFFAOYSA-L Calcium carbonate Chemical compound [Ca+2].[O-]C([O-])=O VTYYLEPIZMXCLO-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 4
- WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N Glucose Natural products OC[C@H]1OC(O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N 0.000 description 4
- WQZGKKKJIJFFOK-VFUOTHLCSA-N beta-D-glucose Chemical compound OC[C@H]1O[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-VFUOTHLCSA-N 0.000 description 4
- NZNMSOFKMUBTKW-UHFFFAOYSA-N cyclohexanecarboxylic acid Chemical compound OC(=O)C1CCCCC1 NZNMSOFKMUBTKW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 238000009472 formulation Methods 0.000 description 4
- PFOARMALXZGCHY-UHFFFAOYSA-N homoegonol Natural products C1=C(OC)C(OC)=CC=C1C1=CC2=CC(CCCO)=CC(OC)=C2O1 PFOARMALXZGCHY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- KQNPFQTWMSNSAP-UHFFFAOYSA-N isobutyric acid Chemical compound CC(C)C(O)=O KQNPFQTWMSNSAP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- GWYFCOCPABKNJV-UHFFFAOYSA-N isovaleric acid Chemical compound CC(C)CC(O)=O GWYFCOCPABKNJV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- MNULEGDCPYONBU-AWJDAWNUSA-N oligomycin A Polymers O([C@H]1CC[C@H](/C=C/C=C/C[C@@H](C)[C@H](O)[C@@](C)(O)C(=O)[C@@H](C)[C@H](O)[C@@H](C)C(=O)[C@@H](C)[C@H](O)[C@@H](C)/C=C/C(=O)O[C@@H]([C@@H]2C)[C@@H]1C)CC)[C@@]12CC[C@H](C)[C@H](C[C@@H](C)O)O1 MNULEGDCPYONBU-AWJDAWNUSA-N 0.000 description 4
- MNULEGDCPYONBU-UHFFFAOYSA-N oligomycin A Natural products CC1C(C2C)OC(=O)C=CC(C)C(O)C(C)C(=O)C(C)C(O)C(C)C(=O)C(C)(O)C(O)C(C)CC=CC=CC(CC)CCC2OC21CCC(C)C(CC(C)O)O2 MNULEGDCPYONBU-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 241000894007 species Species 0.000 description 4
- 238000011282 treatment Methods 0.000 description 4
- 108700028369 Alleles Proteins 0.000 description 3
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 description 3
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 description 3
- 239000004395 L-leucine Substances 0.000 description 3
- 235000019454 L-leucine Nutrition 0.000 description 3
- 239000004480 active ingredient Substances 0.000 description 3
- 238000010564 aerobic fermentation Methods 0.000 description 3
- 230000000507 anthelmentic effect Effects 0.000 description 3
- 239000004599 antimicrobial Substances 0.000 description 3
- QVGXLLKOCUKJST-UHFFFAOYSA-N atomic oxygen Chemical compound [O] QVGXLLKOCUKJST-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 238000002512 chemotherapy Methods 0.000 description 3
- 201000010099 disease Diseases 0.000 description 3
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 description 3
- 229940088598 enzyme Drugs 0.000 description 3
- 239000000284 extract Substances 0.000 description 3
- 235000013305 food Nutrition 0.000 description 3
- 230000004927 fusion Effects 0.000 description 3
- 239000008103 glucose Substances 0.000 description 3
- 239000001963 growth medium Substances 0.000 description 3
- 239000002917 insecticide Substances 0.000 description 3
- 229910052760 oxygen Inorganic materials 0.000 description 3
- 239000001301 oxygen Substances 0.000 description 3
- 244000045947 parasite Species 0.000 description 3
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 description 3
- 210000001938 protoplast Anatomy 0.000 description 3
- 229950008974 sinefungin Drugs 0.000 description 3
- 239000002904 solvent Substances 0.000 description 3
- 239000011573 trace mineral Substances 0.000 description 3
- 235000013619 trace mineral Nutrition 0.000 description 3
- MTCFGRXMJLQNBG-REOHCLBHSA-N (2S)-2-Amino-3-hydroxypropansäure Chemical compound OC[C@H](N)C(O)=O MTCFGRXMJLQNBG-REOHCLBHSA-N 0.000 description 2
- UBQZUBPODLPCFG-PIBDHAAFSA-N (2S)-2-amino-4-[[(2S,3S,4R,5R)-5-(6-aminopurin-9-yl)-3,4-dihydroxyoxolan-2-yl]methyl-ethylsulfonio]butanoate Chemical compound CC[S+](CC[C@@H](C([O-])=O)N)C[C@H]([C@H]([C@H]1O)O)O[C@H]1N1C2=NC=NC(N)=C2N=C1 UBQZUBPODLPCFG-PIBDHAAFSA-N 0.000 description 2
- SWWQQSDRUYSMAR-UHFFFAOYSA-N 1-[(4-hydroxyphenyl)methyl]-1,2,3,4-tetrahydroisoquinoline-6,7-diol;hydrochloride Chemical group Cl.C1=CC(O)=CC=C1CC1C2=CC(O)=C(O)C=C2CCN1 SWWQQSDRUYSMAR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- XYHKNCXZYYTLRG-UHFFFAOYSA-N 1h-imidazole-2-carbaldehyde Chemical compound O=CC1=NC=CN1 XYHKNCXZYYTLRG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- GWYFCOCPABKNJV-UHFFFAOYSA-M 3-Methylbutanoic acid Natural products CC(C)CC([O-])=O GWYFCOCPABKNJV-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 2
- IHCCAYCGZOLTEU-UHFFFAOYSA-N 3-furoic acid Chemical compound OC(=O)C=1C=COC=1 IHCCAYCGZOLTEU-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- CWGATOJEFAKFBK-UHFFFAOYSA-N Ac-(E)-8-Tridecen-1-ol Natural products C1C(O)C(C)C(C(C)CC)OC11OC(CC=C(C)C(OC2OC(C)C(OC3OC(C)C(O)C(OC)C3)C(OC)C2)C(C)C=CC=C2C3(C(C(=O)O4)C=C(C)C(O)C3OC2)O)CC4C1 CWGATOJEFAKFBK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 241000238876 Acari Species 0.000 description 2
- CIWBSHSKHKDKBQ-JLAZNSOCSA-N Ascorbic acid Chemical compound OC[C@H](O)[C@H]1OC(=O)C(O)=C1O CIWBSHSKHKDKBQ-JLAZNSOCSA-N 0.000 description 2
- HEDRZPFGACZZDS-UHFFFAOYSA-N Chloroform Chemical compound ClC(Cl)Cl HEDRZPFGACZZDS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- RGJOEKWQDUBAIZ-IBOSZNHHSA-N CoASH Chemical compound O[C@@H]1[C@H](OP(O)(O)=O)[C@@H](COP(O)(=O)OP(O)(=O)OCC(C)(C)[C@@H](O)C(=O)NCCC(=O)NCCS)O[C@H]1N1C2=NC=NC(N)=C2N=C1 RGJOEKWQDUBAIZ-IBOSZNHHSA-N 0.000 description 2
- DHMQDGOQFOQNFH-UHFFFAOYSA-N Glycine Chemical compound NCC(O)=O DHMQDGOQFOQNFH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 241000238631 Hexapoda Species 0.000 description 2
- UFHFLCQGNIYNRP-UHFFFAOYSA-N Hydrogen Chemical compound [H][H] UFHFLCQGNIYNRP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- XUJNEKJLAYXESH-REOHCLBHSA-N L-Cysteine Chemical compound SC[C@H](N)C(O)=O XUJNEKJLAYXESH-REOHCLBHSA-N 0.000 description 2
- WHUUTDBJXJRKMK-VKHMYHEASA-N L-glutamic acid Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CCC(O)=O WHUUTDBJXJRKMK-VKHMYHEASA-N 0.000 description 2
- HNDVDQJCIGZPNO-YFKPBYRVSA-N L-histidine Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CC1=CN=CN1 HNDVDQJCIGZPNO-YFKPBYRVSA-N 0.000 description 2
- KDXKERNSBIXSRK-YFKPBYRVSA-N L-lysine Chemical compound NCCCC[C@H](N)C(O)=O KDXKERNSBIXSRK-YFKPBYRVSA-N 0.000 description 2
- COLNVLDHVKWLRT-QMMMGPOBSA-N L-phenylalanine Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CC1=CC=CC=C1 COLNVLDHVKWLRT-QMMMGPOBSA-N 0.000 description 2
- AYFVYJQAPQTCCC-GBXIJSLDSA-N L-threonine Chemical compound C[C@@H](O)[C@H](N)C(O)=O AYFVYJQAPQTCCC-GBXIJSLDSA-N 0.000 description 2
- QIVBCDIJIAJPQS-VIFPVBQESA-N L-tryptophane Chemical compound C1=CC=C2C(C[C@H](N)C(O)=O)=CNC2=C1 QIVBCDIJIAJPQS-VIFPVBQESA-N 0.000 description 2
- OUYCCCASQSFEME-QMMMGPOBSA-N L-tyrosine Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CC1=CC=C(O)C=C1 OUYCCCASQSFEME-QMMMGPOBSA-N 0.000 description 2
- ROHFNLRQFUQHCH-UHFFFAOYSA-N Leucine Natural products CC(C)CC(N)C(O)=O ROHFNLRQFUQHCH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- LRHPLDYGYMQRHN-UHFFFAOYSA-N N-Butanol Chemical compound CCCCO LRHPLDYGYMQRHN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 241000244206 Nematoda Species 0.000 description 2
- GRYLNZFGIOXLOG-UHFFFAOYSA-N Nitric acid Chemical compound O[N+]([O-])=O GRYLNZFGIOXLOG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 241001674048 Phthiraptera Species 0.000 description 2
- 241000244174 Strongyloides Species 0.000 description 2
- QAOWNCQODCNURD-UHFFFAOYSA-N Sulfuric acid Chemical compound OS(O)(=O)=O QAOWNCQODCNURD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 241000607479 Yersinia pestis Species 0.000 description 2
- 238000009825 accumulation Methods 0.000 description 2
- ZSLZBFCDCINBPY-ZSJPKINUSA-N acetyl-CoA Chemical compound O[C@@H]1[C@H](OP(O)(O)=O)[C@@H](COP(O)(=O)OP(O)(=O)OCC(C)(C)[C@@H](O)C(=O)NCCC(=O)NCCSC(=O)C)O[C@H]1N1C2=NC=NC(N)=C2N=C1 ZSLZBFCDCINBPY-ZSJPKINUSA-N 0.000 description 2
- 150000007513 acids Chemical class 0.000 description 2
- 239000003096 antiparasitic agent Substances 0.000 description 2
- 229940125687 antiparasitic agent Drugs 0.000 description 2
- 239000008280 blood Substances 0.000 description 2
- 210000004369 blood Anatomy 0.000 description 2
- 235000010216 calcium carbonate Nutrition 0.000 description 2
- 229910000019 calcium carbonate Inorganic materials 0.000 description 2
- 239000002775 capsule Substances 0.000 description 2
- 230000015556 catabolic process Effects 0.000 description 2
- RGJOEKWQDUBAIZ-UHFFFAOYSA-N coenzime A Natural products OC1C(OP(O)(O)=O)C(COP(O)(=O)OP(O)(=O)OCC(C)(C)C(O)C(=O)NCCC(=O)NCCS)OC1N1C2=NC=NC(N)=C2N=C1 RGJOEKWQDUBAIZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 239000005516 coenzyme A Substances 0.000 description 2
- 229940093530 coenzyme a Drugs 0.000 description 2
- 239000012141 concentrate Substances 0.000 description 2
- VZFUCHSFHOYXIS-UHFFFAOYSA-N cycloheptane carboxylic acid Natural products OC(=O)C1CCCCCC1 VZFUCHSFHOYXIS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- JBDSSBMEKXHSJF-UHFFFAOYSA-N cyclopentanecarboxylic acid Chemical compound OC(=O)C1CCCC1 JBDSSBMEKXHSJF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 238000000354 decomposition reaction Methods 0.000 description 2
- 238000006731 degradation reaction Methods 0.000 description 2
- KDTSHFARGAKYJN-UHFFFAOYSA-N dephosphocoenzyme A Natural products OC1C(O)C(COP(O)(=O)OP(O)(=O)OCC(C)(C)C(O)C(=O)NCCC(=O)NCCS)OC1N1C2=NC=NC(N)=C2N=C1 KDTSHFARGAKYJN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 235000014113 dietary fatty acids Nutrition 0.000 description 2
- 239000003085 diluting agent Substances 0.000 description 2
- ZPWVASYFFYYZEW-UHFFFAOYSA-L dipotassium hydrogen phosphate Chemical compound [K+].[K+].OP([O-])([O-])=O ZPWVASYFFYYZEW-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 2
- 235000019797 dipotassium phosphate Nutrition 0.000 description 2
- 229910000396 dipotassium phosphate Inorganic materials 0.000 description 2
- VHJLVAABSRFDPM-QWWZWVQMSA-N dithiothreitol Chemical compound SC[C@@H](O)[C@H](O)CS VHJLVAABSRFDPM-QWWZWVQMSA-N 0.000 description 2
- 239000000194 fatty acid Substances 0.000 description 2
- 229930195729 fatty acid Natural products 0.000 description 2
- 150000004665 fatty acids Chemical class 0.000 description 2
- 239000012530 fluid Substances 0.000 description 2
- 208000015181 infectious disease Diseases 0.000 description 2
- 239000004615 ingredient Substances 0.000 description 2
- 230000005764 inhibitory process Effects 0.000 description 2
- HQKMJHAJHXVSDF-UHFFFAOYSA-L magnesium stearate Chemical compound [Mg+2].CCCCCCCCCCCCCCCCCC([O-])=O.CCCCCCCCCCCCCCCCCC([O-])=O HQKMJHAJHXVSDF-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 2
- 244000005700 microbiome Species 0.000 description 2
- 229910017604 nitric acid Inorganic materials 0.000 description 2
- 239000003960 organic solvent Substances 0.000 description 2
- 230000003071 parasitic effect Effects 0.000 description 2
- 239000008188 pellet Substances 0.000 description 2
- 230000000717 retained effect Effects 0.000 description 2
- 238000000926 separation method Methods 0.000 description 2
- 239000011734 sodium Substances 0.000 description 2
- 238000003756 stirring Methods 0.000 description 2
- 239000011550 stock solution Substances 0.000 description 2
- 239000000758 substrate Substances 0.000 description 2
- 238000003786 synthesis reaction Methods 0.000 description 2
- 229960002363 thiamine pyrophosphate Drugs 0.000 description 2
- 235000008170 thiamine pyrophosphate Nutrition 0.000 description 2
- 239000011678 thiamine pyrophosphate Substances 0.000 description 2
- YXVCLPJQTZXJLH-UHFFFAOYSA-N thiamine(1+) diphosphate chloride Chemical compound [Cl-].CC1=C(CCOP(O)(=O)OP(O)(O)=O)SC=[N+]1CC1=CN=C(C)N=C1N YXVCLPJQTZXJLH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 238000004809 thin layer chromatography Methods 0.000 description 2
- 235000015192 vegetable juice Nutrition 0.000 description 2
- 125000004178 (C1-C4) alkyl group Chemical group 0.000 description 1
- RELMFMZEBKVZJC-UHFFFAOYSA-N 1,2,3-trichlorobenzene Chemical compound ClC1=CC=CC(Cl)=C1Cl RELMFMZEBKVZJC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- QKNYBSVHEMOAJP-UHFFFAOYSA-N 2-amino-2-(hydroxymethyl)propane-1,3-diol;hydron;chloride Chemical compound Cl.OCC(N)(CO)CO QKNYBSVHEMOAJP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- AMOJMSPUYHSMKI-UHFFFAOYSA-N 2-cyclopropylpropanoic acid Chemical compound OC(=O)C(C)C1CC1 AMOJMSPUYHSMKI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 125000003682 3-furyl group Chemical group O1C([H])=C([*])C([H])=C1[H] 0.000 description 1
- HTIVBCJHQPSZID-UHFFFAOYSA-N 3-methylcyclohexane-1-carboxylic acid;4-methylidenecyclohexane-1-carboxylic acid Chemical compound CC1CCCC(C(O)=O)C1.OC(=O)C1CCC(=C)CC1 HTIVBCJHQPSZID-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 125000001541 3-thienyl group Chemical group S1C([H])=C([*])C([H])=C1[H] 0.000 description 1
- 241000254032 Acrididae Species 0.000 description 1
- 241000186361 Actinobacteria <class> Species 0.000 description 1
- 241001147657 Ancylostoma Species 0.000 description 1
- 241001124076 Aphididae Species 0.000 description 1
- 240000007087 Apium graveolens Species 0.000 description 1
- 235000015849 Apium graveolens Dulce Group Nutrition 0.000 description 1
- 235000010591 Appio Nutrition 0.000 description 1
- 241000238421 Arthropoda Species 0.000 description 1
- 241000244186 Ascaris Species 0.000 description 1
- 241000131281 Attagenus pellio Species 0.000 description 1
- JVGWUGTWQIAGHJ-DFAYUBCLSA-N Avermectin A2a Chemical compound C1[C@H](O)[C@H](C)[C@@H](C(C)CC)O[C@]11O[C@H](C\C=C(C)\[C@@H](O[C@@H]2O[C@@H](C)[C@H](O[C@@H]3O[C@@H](C)[C@H](O)[C@@H](OC)C3)[C@@H](OC)C2)[C@@H](C)\C=C\C=C/2[C@]3([C@H](C(=O)O4)C=C(C)[C@@H](OC)[C@H]3OC\2)O)C[C@H]4C1 JVGWUGTWQIAGHJ-DFAYUBCLSA-N 0.000 description 1
- 241000193830 Bacillus <bacterium> Species 0.000 description 1
- 244000063299 Bacillus subtilis Species 0.000 description 1
- 235000014469 Bacillus subtilis Nutrition 0.000 description 1
- 108010023063 Bacto-peptone Proteins 0.000 description 1
- 241000219310 Beta vulgaris subsp. vulgaris Species 0.000 description 1
- 241001674044 Blattodea Species 0.000 description 1
- KZMNIEWJDQOJRD-UHFFFAOYSA-N CCCC(C)C(O)=S.OC(=O)C1CC(=C)C1.OC(=O)C1CCSCC1 Chemical compound CCCC(C)C(O)=S.OC(=O)C1CC(=C)C1.OC(=O)C1CCSCC1 KZMNIEWJDQOJRD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 101100283604 Caenorhabditis elegans pigk-1 gene Proteins 0.000 description 1
- UXVMQQNJUSDDNG-UHFFFAOYSA-L Calcium chloride Chemical compound [Cl-].[Cl-].[Ca+2] UXVMQQNJUSDDNG-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- 241000282472 Canis lupus familiaris Species 0.000 description 1
- 241000253350 Capillaria Species 0.000 description 1
- 241001466804 Carnivora Species 0.000 description 1
- 241000242722 Cestoda Species 0.000 description 1
- CKLJMWTZIZZHCS-UHFFFAOYSA-N D-OH-Asp Natural products OC(=O)C(N)CC(O)=O CKLJMWTZIZZHCS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- QNAYBMKLOCPYGJ-UHFFFAOYSA-N D-alpha-Ala Natural products CC([NH3+])C([O-])=O QNAYBMKLOCPYGJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 244000000626 Daucus carota Species 0.000 description 1
- 235000002767 Daucus carota Nutrition 0.000 description 1
- 229920002245 Dextrose equivalent Polymers 0.000 description 1
- 241000255925 Diptera Species 0.000 description 1
- 241000243990 Dirofilaria Species 0.000 description 1
- 241000498256 Enterobius Species 0.000 description 1
- 241000283073 Equus caballus Species 0.000 description 1
- PLUBXMRUUVWRLT-UHFFFAOYSA-N Ethyl methanesulfonate Chemical compound CCOS(C)(=O)=O PLUBXMRUUVWRLT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 241000233866 Fungi Species 0.000 description 1
- YLQBMQCUIZJEEH-UHFFFAOYSA-N Furan Chemical group C=1C=COC=1 YLQBMQCUIZJEEH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000004471 Glycine Substances 0.000 description 1
- 238000010268 HPLC based assay Methods 0.000 description 1
- 108010020056 Hydrogenase Proteins 0.000 description 1
- DGAQECJNVWCQMB-PUAWFVPOSA-M Ilexoside XXIX Chemical compound C[C@@H]1CC[C@@]2(CC[C@@]3(C(=CC[C@H]4[C@]3(CC[C@@H]5[C@@]4(CC[C@@H](C5(C)C)OS(=O)(=O)[O-])C)C)[C@@H]2[C@]1(C)O)C)C(=O)O[C@H]6[C@@H]([C@H]([C@@H]([C@H](O6)CO)O)O)O.[Na+] DGAQECJNVWCQMB-PUAWFVPOSA-M 0.000 description 1
- 229910021578 Iron(III) chloride Inorganic materials 0.000 description 1
- QNAYBMKLOCPYGJ-UWTATZPHSA-N L-Alanine Natural products C[C@@H](N)C(O)=O QNAYBMKLOCPYGJ-UWTATZPHSA-N 0.000 description 1
- CKLJMWTZIZZHCS-UWTATZPHSA-N L-Aspartic acid Natural products OC(=O)[C@H](N)CC(O)=O CKLJMWTZIZZHCS-UWTATZPHSA-N 0.000 description 1
- 235000019766 L-Lysine Nutrition 0.000 description 1
- FFEARJCKVFRZRR-UHFFFAOYSA-N L-Methionine Natural products CSCCC(N)C(O)=O FFEARJCKVFRZRR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- ONIBWKKTOPOVIA-BYPYZUCNSA-N L-Proline Chemical compound OC(=O)[C@@H]1CCCN1 ONIBWKKTOPOVIA-BYPYZUCNSA-N 0.000 description 1
- QNAYBMKLOCPYGJ-REOHCLBHSA-N L-alanine Chemical compound C[C@H](N)C(O)=O QNAYBMKLOCPYGJ-REOHCLBHSA-N 0.000 description 1
- 150000008575 L-amino acids Chemical class 0.000 description 1
- ODKSFYDXXFIFQN-BYPYZUCNSA-N L-arginine Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CCCN=C(N)N ODKSFYDXXFIFQN-BYPYZUCNSA-N 0.000 description 1
- 229930064664 L-arginine Natural products 0.000 description 1
- 235000014852 L-arginine Nutrition 0.000 description 1
- CKLJMWTZIZZHCS-REOHCLBHSA-N L-aspartic acid Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CC(O)=O CKLJMWTZIZZHCS-REOHCLBHSA-N 0.000 description 1
- 239000004201 L-cysteine Substances 0.000 description 1
- 235000013878 L-cysteine Nutrition 0.000 description 1
- FFEARJCKVFRZRR-BYPYZUCNSA-N L-methionine Chemical compound CSCC[C@H](N)C(O)=O FFEARJCKVFRZRR-BYPYZUCNSA-N 0.000 description 1
- 229930195722 L-methionine Natural products 0.000 description 1
- 229930182821 L-proline Natural products 0.000 description 1
- GUBGYTABKSRVRQ-QKKXKWKRSA-N Lactose Natural products OC[C@H]1O[C@@H](O[C@H]2[C@H](O)[C@@H](O)C(O)O[C@@H]2CO)[C@H](O)[C@@H](O)[C@H]1O GUBGYTABKSRVRQ-QKKXKWKRSA-N 0.000 description 1
- 240000008415 Lactuca sativa Species 0.000 description 1
- 235000003228 Lactuca sativa Nutrition 0.000 description 1
- WHXSMMKQMYFTQS-UHFFFAOYSA-N Lithium Chemical compound [Li] WHXSMMKQMYFTQS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 235000007688 Lycopersicon esculentum Nutrition 0.000 description 1
- 239000004472 Lysine Substances 0.000 description 1
- NTIZESTWPVYFNL-UHFFFAOYSA-N Methyl isobutyl ketone Chemical compound CC(C)CC(C)=O NTIZESTWPVYFNL-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- UIHCLUNTQKBZGK-UHFFFAOYSA-N Methyl isobutyl ketone Natural products CCC(C)C(C)=O UIHCLUNTQKBZGK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229940123379 Methyltransferase inhibitor Drugs 0.000 description 1
- 241000257226 Muscidae Species 0.000 description 1
- CAUBWLYZCDDYEF-UHFFFAOYSA-N N-Nitroso-N-methylurethane Chemical compound CCOC(=O)N(C)N=O CAUBWLYZCDDYEF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- BAWFJGJZGIEFAR-NNYOXOHSSA-N NAD zwitterion Chemical compound NC(=O)C1=CC=C[N+]([C@H]2[C@@H]([C@H](O)[C@@H](COP([O-])(=O)OP(O)(=O)OC[C@@H]3[C@H]([C@@H](O)[C@@H](O3)N3C4=NC=NC(N)=C4N=C3)O)O2)O)=C1 BAWFJGJZGIEFAR-NNYOXOHSSA-N 0.000 description 1
- OJQHWWHKSRTXRT-HHWRGAEVSA-N NC1=NC=NC2=C1N=CN2[C@@H]([C@@H]1O)O[C@H](C[S+]2C=CC=CC=CC=C2)[C@H]1O Chemical compound NC1=NC=NC2=C1N=CN2[C@@H]([C@@H]1O)O[C@H](C[S+]2C=CC=CC=CC=C2)[C@H]1O OJQHWWHKSRTXRT-HHWRGAEVSA-N 0.000 description 1
- 235000017879 Nasturtium officinale Nutrition 0.000 description 1
- 240000005407 Nasturtium officinale Species 0.000 description 1
- 241000498271 Necator Species 0.000 description 1
- DILTYZGDTLZNNN-UHFFFAOYSA-N OCC1CC=CC1.C1(CCC1)C(=O)OCC Chemical compound OCC1CC=CC1.C1(CCC1)C(=O)OCC DILTYZGDTLZNNN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 241001494479 Pecora Species 0.000 description 1
- 240000009164 Petroselinum crispum Species 0.000 description 1
- XBDQKXXYIPTUBI-UHFFFAOYSA-N Propionic acid Chemical class CCC(O)=O XBDQKXXYIPTUBI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 102000055026 Protein O-Methyltransferase Human genes 0.000 description 1
- 108700040119 Protein O-Methyltransferase Proteins 0.000 description 1
- 241000589776 Pseudomonas putida Species 0.000 description 1
- MUPFEKGTMRGPLJ-RMMQSMQOSA-N Raffinose Natural products O(C[C@H]1[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H](O[C@@]2(CO)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H](CO)O2)O1)[C@@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H](O)[C@@H](CO)O1 MUPFEKGTMRGPLJ-RMMQSMQOSA-N 0.000 description 1
- ZJUKTBDSGOFHSH-WFMPWKQPSA-N S-Adenosylhomocysteine Chemical compound O[C@@H]1[C@H](O)[C@@H](CSCC[C@H](N)C(O)=O)O[C@H]1N1C2=NC=NC(N)=C2N=C1 ZJUKTBDSGOFHSH-WFMPWKQPSA-N 0.000 description 1
- 240000004808 Saccharomyces cerevisiae Species 0.000 description 1
- VYPSYNLAJGMNEJ-UHFFFAOYSA-N Silicium dioxide Chemical compound O=[Si]=O VYPSYNLAJGMNEJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- VMHLLURERBWHNL-UHFFFAOYSA-M Sodium acetate Chemical compound [Na+].CC([O-])=O VMHLLURERBWHNL-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 240000003768 Solanum lycopersicum Species 0.000 description 1
- 241000187747 Streptomyces Species 0.000 description 1
- 229930006000 Sucrose Natural products 0.000 description 1
- CZMRCDWAGMRECN-UGDNZRGBSA-N Sucrose Chemical compound O[C@H]1[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@@]1(CO)O[C@@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O1 CZMRCDWAGMRECN-UGDNZRGBSA-N 0.000 description 1
- 235000021536 Sugar beet Nutrition 0.000 description 1
- 241000282898 Sus scrofa Species 0.000 description 1
- 239000004473 Threonine Substances 0.000 description 1
- 102000004357 Transferases Human genes 0.000 description 1
- 108090000992 Transferases Proteins 0.000 description 1
- 241000243774 Trichinella Species 0.000 description 1
- 241001489151 Trichuris Species 0.000 description 1
- MUPFEKGTMRGPLJ-UHFFFAOYSA-N UNPD196149 Natural products OC1C(O)C(CO)OC1(CO)OC1C(O)C(O)C(O)C(COC2C(C(O)C(O)C(CO)O2)O)O1 MUPFEKGTMRGPLJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 150000001242 acetic acid derivatives Chemical class 0.000 description 1
- 229960003767 alanine Drugs 0.000 description 1
- 150000001298 alcohols Chemical class 0.000 description 1
- 108090000637 alpha-Amylases Proteins 0.000 description 1
- 102000004139 alpha-Amylases Human genes 0.000 description 1
- 229940024171 alpha-amylase Drugs 0.000 description 1
- 150000003863 ammonium salts Chemical class 0.000 description 1
- 239000000921 anthelmintic agent Substances 0.000 description 1
- 229940124339 anthelmintic agent Drugs 0.000 description 1
- 239000002518 antifoaming agent Substances 0.000 description 1
- 235000010323 ascorbic acid Nutrition 0.000 description 1
- 229960005070 ascorbic acid Drugs 0.000 description 1
- 239000011668 ascorbic acid Substances 0.000 description 1
- 229960005261 aspartic acid Drugs 0.000 description 1
- 238000000211 autoradiogram Methods 0.000 description 1
- 238000000376 autoradiography Methods 0.000 description 1
- JVGWUGTWQIAGHJ-UHFFFAOYSA-N avermectin A2a Natural products C1C(O)C(C)C(C(C)CC)OC11OC(CC=C(C)C(OC2OC(C)C(OC3OC(C)C(O)C(OC)C3)C(OC)C2)C(C)C=CC=C2C3(C(C(=O)O4)C=C(C)C(OC)C3OC2)O)CC4C1 JVGWUGTWQIAGHJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000001580 bacterial effect Effects 0.000 description 1
- MJAMCTLGWXIKOT-UHFFFAOYSA-M benzyl-dimethyl-[2-[2-[2-methyl-4-(2,4,4-trimethylpentan-2-yl)phenoxy]ethoxy]ethyl]azanium;hydroxide Chemical compound [OH-].CC1=CC(C(C)(C)CC(C)(C)C)=CC=C1OCCOCC[N+](C)(C)CC1=CC=CC=C1 MJAMCTLGWXIKOT-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 239000011230 binding agent Substances 0.000 description 1
- 238000010256 biochemical assay Methods 0.000 description 1
- 230000006696 biosynthetic metabolic pathway Effects 0.000 description 1
- 230000037396 body weight Effects 0.000 description 1
- 238000009835 boiling Methods 0.000 description 1
- KGBXLFKZBHKPEV-UHFFFAOYSA-N boric acid Chemical compound OB(O)O KGBXLFKZBHKPEV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000012267 brine Substances 0.000 description 1
- 239000006227 byproduct Substances 0.000 description 1
- 239000001110 calcium chloride Substances 0.000 description 1
- 235000011148 calcium chloride Nutrition 0.000 description 1
- 229910001628 calcium chloride Inorganic materials 0.000 description 1
- 229940041514 candida albicans extract Drugs 0.000 description 1
- 150000001721 carbon Chemical class 0.000 description 1
- 125000003178 carboxy group Chemical group [H]OC(*)=O 0.000 description 1
- 150000001732 carboxylic acid derivatives Chemical class 0.000 description 1
- 150000001735 carboxylic acids Chemical class 0.000 description 1
- 239000003054 catalyst Substances 0.000 description 1
- 238000009903 catalytic hydrogenation reaction Methods 0.000 description 1
- 235000013339 cereals Nutrition 0.000 description 1
- 239000002962 chemical mutagen Substances 0.000 description 1
- 239000007795 chemical reaction product Substances 0.000 description 1
- 239000003153 chemical reaction reagent Substances 0.000 description 1
- 239000003795 chemical substances by application Substances 0.000 description 1
- 210000000349 chromosome Anatomy 0.000 description 1
- 235000015165 citric acid Nutrition 0.000 description 1
- KRKNYBCHXYNGOX-UHFFFAOYSA-N citric acid group Chemical class C(CC(O)(C(=O)O)CC(=O)O)(=O)O KRKNYBCHXYNGOX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000005515 coenzyme Substances 0.000 description 1
- 238000007906 compression Methods 0.000 description 1
- 230000006835 compression Effects 0.000 description 1
- 238000007796 conventional method Methods 0.000 description 1
- 239000012043 crude product Substances 0.000 description 1
- 238000012258 culturing Methods 0.000 description 1
- 125000000392 cycloalkenyl group Chemical group 0.000 description 1
- 125000000753 cycloalkyl group Chemical group 0.000 description 1
- 238000006114 decarboxylation reaction Methods 0.000 description 1
- 230000007812 deficiency Effects 0.000 description 1
- 230000003413 degradative effect Effects 0.000 description 1
- 230000018044 dehydration Effects 0.000 description 1
- 238000006297 dehydration reaction Methods 0.000 description 1
- 238000001514 detection method Methods 0.000 description 1
- 239000008121 dextrose Substances 0.000 description 1
- 239000002270 dispersing agent Substances 0.000 description 1
- 239000006185 dispersion Substances 0.000 description 1
- 239000012153 distilled water Substances 0.000 description 1
- 229940079593 drug Drugs 0.000 description 1
- 239000003814 drug Substances 0.000 description 1
- 239000000428 dust Substances 0.000 description 1
- 244000078703 ectoparasite Species 0.000 description 1
- 239000000839 emulsion Substances 0.000 description 1
- FPIQZBQZKBKLEI-UHFFFAOYSA-N ethyl 1-[[2-chloroethyl(nitroso)carbamoyl]amino]cyclohexane-1-carboxylate Chemical compound ClCCN(N=O)C(=O)NC1(C(=O)OCC)CCCCC1 FPIQZBQZKBKLEI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 125000004494 ethyl ester group Chemical group 0.000 description 1
- 125000001495 ethyl group Chemical group [H]C([H])([H])C([H])([H])* 0.000 description 1
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 1
- 150000002185 fatty acyl-CoAs Chemical class 0.000 description 1
- 238000001914 filtration Methods 0.000 description 1
- 239000000796 flavoring agent Substances 0.000 description 1
- 235000019634 flavors Nutrition 0.000 description 1
- 229960002989 glutamic acid Drugs 0.000 description 1
- 229960002885 histidine Drugs 0.000 description 1
- 230000007062 hydrolysis Effects 0.000 description 1
- 238000006460 hydrolysis reaction Methods 0.000 description 1
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-M hydroxide Chemical compound [OH-] XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 230000002401 inhibitory effect Effects 0.000 description 1
- 239000007972 injectable composition Substances 0.000 description 1
- 239000007924 injection Substances 0.000 description 1
- 238000002347 injection Methods 0.000 description 1
- 238000011081 inoculation Methods 0.000 description 1
- 244000000053 intestinal parasite Species 0.000 description 1
- RBTARNINKXHZNM-UHFFFAOYSA-K iron trichloride Chemical compound Cl[Fe](Cl)Cl RBTARNINKXHZNM-UHFFFAOYSA-K 0.000 description 1
- 125000000468 ketone group Chemical group 0.000 description 1
- 150000002596 lactones Chemical group 0.000 description 1
- 239000008101 lactose Substances 0.000 description 1
- 231100000518 lethal Toxicity 0.000 description 1
- 230000001665 lethal effect Effects 0.000 description 1
- 238000005567 liquid scintillation counting Methods 0.000 description 1
- 229910052744 lithium Inorganic materials 0.000 description 1
- ACVGOFBEJAANDA-UHFFFAOYSA-M lithium;3-methylcyclobutane-1-carboxylate Chemical compound [Li+].CC1CC(C([O-])=O)C1 ACVGOFBEJAANDA-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 244000144972 livestock Species 0.000 description 1
- 239000003120 macrolide antibiotic agent Substances 0.000 description 1
- 235000019359 magnesium stearate Nutrition 0.000 description 1
- 239000011976 maleic acid Substances 0.000 description 1
- HAWPXGHAZFHHAD-UHFFFAOYSA-N mechlorethamine Chemical compound ClCCN(C)CCCl HAWPXGHAZFHHAD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000012528 membrane Substances 0.000 description 1
- 230000004060 metabolic process Effects 0.000 description 1
- 229960004452 methionine Drugs 0.000 description 1
- 125000000956 methoxy group Chemical group [H]C([H])([H])O* 0.000 description 1
- 230000011987 methylation Effects 0.000 description 1
- 238000007069 methylation reaction Methods 0.000 description 1
- 239000003697 methyltransferase inhibitor Substances 0.000 description 1
- 238000002156 mixing Methods 0.000 description 1
- 238000012544 monitoring process Methods 0.000 description 1
- 150000002772 monosaccharides Chemical group 0.000 description 1
- 239000003471 mutagenic agent Substances 0.000 description 1
- 231100000707 mutagenic chemical Toxicity 0.000 description 1
- 229940101270 nicotinamide adenine dinucleotide (nad) Drugs 0.000 description 1
- UNCAXIZUVRKBMN-UHFFFAOYSA-N o-(4-methylphenyl) chloromethanethioate Chemical compound CC1=CC=C(OC(Cl)=S)C=C1 UNCAXIZUVRKBMN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000009304 pastoral farming Methods 0.000 description 1
- 230000037361 pathway Effects 0.000 description 1
- 235000011197 perejil Nutrition 0.000 description 1
- 239000000575 pesticide Substances 0.000 description 1
- 229960005190 phenylalanine Drugs 0.000 description 1
- 239000002574 poison Substances 0.000 description 1
- 231100000614 poison Toxicity 0.000 description 1
- 230000003389 potentiating effect Effects 0.000 description 1
- 229960002429 proline Drugs 0.000 description 1
- QAQREVBBADEHPA-IEXPHMLFSA-N propionyl-CoA Chemical compound O[C@@H]1[C@H](OP(O)(O)=O)[C@@H](COP(O)(=O)OP(O)(=O)OCC(C)(C)[C@@H](O)C(=O)NCCC(=O)NCCSC(=O)CC)O[C@H]1N1C2=NC=NC(N)=C2N=C1 QAQREVBBADEHPA-IEXPHMLFSA-N 0.000 description 1
- 235000018102 proteins Nutrition 0.000 description 1
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 description 1
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 description 1
- MUPFEKGTMRGPLJ-ZQSKZDJDSA-N raffinose Chemical compound O[C@H]1[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@@]1(CO)O[C@@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO[C@@H]2[C@@H]([C@@H](O)[C@@H](O)[C@@H](CO)O2)O)O1 MUPFEKGTMRGPLJ-ZQSKZDJDSA-N 0.000 description 1
- 239000005871 repellent Substances 0.000 description 1
- 230000002940 repellent Effects 0.000 description 1
- 238000011160 research Methods 0.000 description 1
- 238000004007 reversed phase HPLC Methods 0.000 description 1
- QBERHIJABFXGRZ-UHFFFAOYSA-M rhodium;triphenylphosphane;chloride Chemical compound [Cl-].[Rh].C1=CC=CC=C1P(C=1C=CC=CC=1)C1=CC=CC=C1.C1=CC=CC=C1P(C=1C=CC=CC=1)C1=CC=CC=C1.C1=CC=CC=C1P(C=1C=CC=CC=1)C1=CC=CC=C1 QBERHIJABFXGRZ-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 239000012898 sample dilution Substances 0.000 description 1
- 238000005070 sampling Methods 0.000 description 1
- 125000002914 sec-butyl group Chemical group [H]C([H])([H])C([H])([H])C([H])(*)C([H])([H])[H] 0.000 description 1
- 229960001153 serine Drugs 0.000 description 1
- 239000000741 silica gel Substances 0.000 description 1
- 229910002027 silica gel Inorganic materials 0.000 description 1
- 229910052708 sodium Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000001632 sodium acetate Substances 0.000 description 1
- 235000017281 sodium acetate Nutrition 0.000 description 1
- HPALAKNZSZLMCH-UHFFFAOYSA-M sodium;chloride;hydrate Chemical compound O.[Na+].[Cl-] HPALAKNZSZLMCH-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 239000007787 solid Substances 0.000 description 1
- 235000014347 soups Nutrition 0.000 description 1
- 239000007921 spray Substances 0.000 description 1
- 239000008174 sterile solution Substances 0.000 description 1
- 239000005720 sucrose Substances 0.000 description 1
- 239000006228 supernatant Substances 0.000 description 1
- 239000000454 talc Substances 0.000 description 1
- 229910052623 talc Inorganic materials 0.000 description 1
- 108010075550 termamyl Proteins 0.000 description 1
- 229960002898 threonine Drugs 0.000 description 1
- 210000001519 tissue Anatomy 0.000 description 1
- XREXPQGDOPQPAH-QKUPJAQQSA-K trisodium;[(z)-18-[1,3-bis[[(z)-12-sulfonatooxyoctadec-9-enoyl]oxy]propan-2-yloxy]-18-oxooctadec-9-en-7-yl] sulfate Chemical compound [Na+].[Na+].[Na+].CCCCCCC(OS([O-])(=O)=O)C\C=C/CCCCCCCC(=O)OCC(OC(=O)CCCCCCC\C=C/CC(CCCCCC)OS([O-])(=O)=O)COC(=O)CCCCCCC\C=C/CC(CCCCCC)OS([O-])(=O)=O XREXPQGDOPQPAH-QKUPJAQQSA-K 0.000 description 1
- 229960004799 tryptophan Drugs 0.000 description 1
- 229960004441 tyrosine Drugs 0.000 description 1
- 238000000825 ultraviolet detection Methods 0.000 description 1
- 238000009281 ultraviolet germicidal irradiation Methods 0.000 description 1
- MWOOGOJBHIARFG-UHFFFAOYSA-N vanillin Chemical compound COC1=CC(C=O)=CC=C1O MWOOGOJBHIARFG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- FGQOOHJZONJGDT-UHFFFAOYSA-N vanillin Natural products COC1=CC(O)=CC(C=O)=C1 FGQOOHJZONJGDT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 235000012141 vanillin Nutrition 0.000 description 1
- 239000000080 wetting agent Substances 0.000 description 1
- 239000012224 working solution Substances 0.000 description 1
- 239000012138 yeast extract Substances 0.000 description 1
- 239000007222 ypd medium Substances 0.000 description 1
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
- C07D493/00—Heterocyclic compounds containing oxygen atoms as the only ring hetero atoms in the condensed system
- C07D493/22—Heterocyclic compounds containing oxygen atoms as the only ring hetero atoms in the condensed system in which the condensed system contains four or more hetero rings
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07H—SUGARS; DERIVATIVES THEREOF; NUCLEOSIDES; NUCLEOTIDES; NUCLEIC ACIDS
- C07H19/00—Compounds containing a hetero ring sharing one ring hetero atom with a saccharide radical; Nucleosides; Mononucleotides; Anhydro-derivatives thereof
- C07H19/01—Compounds containing a hetero ring sharing one ring hetero atom with a saccharide radical; Nucleosides; Mononucleotides; Anhydro-derivatives thereof sharing oxygen
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A01—AGRICULTURE; FORESTRY; ANIMAL HUSBANDRY; HUNTING; TRAPPING; FISHING
- A01N—PRESERVATION OF BODIES OF HUMANS OR ANIMALS OR PLANTS OR PARTS THEREOF; BIOCIDES, e.g. AS DISINFECTANTS, AS PESTICIDES OR AS HERBICIDES; PEST REPELLANTS OR ATTRACTANTS; PLANT GROWTH REGULATORS
- A01N43/00—Biocides, pest repellants or attractants, or plant growth regulators containing heterocyclic compounds
- A01N43/90—Biocides, pest repellants or attractants, or plant growth regulators containing heterocyclic compounds having two or more relevant hetero rings, condensed among themselves or with a common carbocyclic ring system
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P33/00—Antiparasitic agents
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P33/00—Antiparasitic agents
- A61P33/10—Anthelmintics
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07H—SUGARS; DERIVATIVES THEREOF; NUCLEOSIDES; NUCLEOTIDES; NUCLEIC ACIDS
- C07H19/00—Compounds containing a hetero ring sharing one ring hetero atom with a saccharide radical; Nucleosides; Mononucleotides; Anhydro-derivatives thereof
- C07H19/02—Compounds containing a hetero ring sharing one ring hetero atom with a saccharide radical; Nucleosides; Mononucleotides; Anhydro-derivatives thereof sharing nitrogen
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N1/00—Microorganisms, e.g. protozoa; Compositions thereof; Processes of propagating, maintaining or preserving microorganisms or compositions thereof; Processes of preparing or isolating a composition containing a microorganism; Culture media therefor
- C12N1/20—Bacteria; Culture media therefor
- C12N1/205—Bacterial isolates
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12P—FERMENTATION OR ENZYME-USING PROCESSES TO SYNTHESISE A DESIRED CHEMICAL COMPOUND OR COMPOSITION OR TO SEPARATE OPTICAL ISOMERS FROM A RACEMIC MIXTURE
- C12P19/00—Preparation of compounds containing saccharide radicals
- C12P19/44—Preparation of O-glycosides, e.g. glucosides
- C12P19/60—Preparation of O-glycosides, e.g. glucosides having an oxygen of the saccharide radical directly bound to a non-saccharide heterocyclic ring or a condensed ring system containing a non-saccharide heterocyclic ring, e.g. coumermycin, novobiocin
- C12P19/62—Preparation of O-glycosides, e.g. glucosides having an oxygen of the saccharide radical directly bound to a non-saccharide heterocyclic ring or a condensed ring system containing a non-saccharide heterocyclic ring, e.g. coumermycin, novobiocin the hetero ring having eight or more ring members and only oxygen as ring hetero atoms, e.g. erythromycin, spiramycin, nystatin
- C12P19/623—Avermectin; Milbemycin; Ivermectin; C-076
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12R—INDEXING SCHEME ASSOCIATED WITH SUBCLASSES C12C - C12Q, RELATING TO MICROORGANISMS
- C12R2001/00—Microorganisms ; Processes using microorganisms
- C12R2001/01—Bacteria or Actinomycetales ; using bacteria or Actinomycetales
- C12R2001/465—Streptomyces
Landscapes
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Zoology (AREA)
- Wood Science & Technology (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Veterinary Medicine (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- General Chemical & Material Sciences (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- Tropical Medicine & Parasitology (AREA)
- Public Health (AREA)
- Animal Behavior & Ethology (AREA)
- Pharmacology & Pharmacy (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
- General Engineering & Computer Science (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Environmental Sciences (AREA)
- Plant Pathology (AREA)
- Dentistry (AREA)
- Pest Control & Pesticides (AREA)
- Agronomy & Crop Science (AREA)
- Virology (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
- Saccharide Compounds (AREA)
- Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
- Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)
- Heterocyclic Carbon Compounds Containing A Hetero Ring Having Oxygen Or Sulfur (AREA)
- Agricultural Chemicals And Associated Chemicals (AREA)
- Fodder In General (AREA)
- Enzymes And Modification Thereof (AREA)
- Steroid Compounds (AREA)
Description
1 90088
Menetelmä B-avermektiinien valmistamiseksi ja menetelmässä käyttökelpoinen viljelmä Tämä keksintö koskee Streptomyces avermitilis 5 -kantoja, joilta puuttuu avermektiini-B:n O-metyylitrans-feraasiaktiivisuus ja haarautuneen 2-oksihapon dehydro-genaasiaktiivisuus, sekä menetelmää luonnollisten ja ei-luonnollisten B-avermektiinien valmistamiseksi S. avermitilis -kantojen avulla.
10 US-patenttijulkaisuissa 4 310 519 ja 4 429 042 ku vataan avermektiinejä, tehokkaiden parasiittien vastaisten aineiden kokonaisuutta sekä näiden tuottamista Streptomyces avermitilis -kantojen, so. S. avermitilis ATCC 31267, 31271 ja 31272, aerobisen fermentoinnin avulla. Viimeksi 15 mainitut kaksi kantaa edustavat pakastettua putkea ja vastaavasti lyofilisoitua putkea ja kummatkin on aikaansaatu ultraviolettisäteilyttämällä S. avermitilis -kantaa ATCC 31267.
Heinäkuun 16. päivänä 1986 jätettyä US-patenttiha-20 kemusta 886 867 vastaavassa EP-julkaisussa 214 731, julkaistu maaliskuun 18. päivänä 1987, esitetään useita luonnollisten tai tunnettujen avermektiinien sukulaisyhdis-teitä (tästedes ei-luonnolliset avermektiinit), joissa on . . uusi ryhmä asemassa 25 sekä menetelmää näiden tuottamisek- .25 si fermentoimalla avermektiinia tuottavaa organismia tiettyjen, spesifioitujen karboksyylihappojen tai näiden johdannaisten tai prekursoreiden läsnäollessa. Kyseisten uusien C-25-substituoitujen avermektiinien tuottamiseksi käytetyt S. avermitilis -organismit ovat S. avermitilis 30 ATCC 31267, 31271, 31272 ja NCIB 12121. Viimeksi mainittu, EP-julkaisussa 214 731 kuvattu organismi on peräisin kannasta S. avermitilis ATCC 31271. Se antaa parannetun saannon uusia C-25-substituoituja avermektiinejä, kun sitä viljellään puolisynteettisellä alustalla. Sekä ATCC 31267, . ' 35 31271, 31272 että NCIB 12121 voivat uuden C-25-substitioi- 2 90088 dun johdannaisen lisäksi tuottaa myös vaihtelevia määriä tunnettuja tai luonnollisia avermektiinejä, joissa 25-ryh-mä on isopropyyli tai (S )-sek-butyyli (1-metyylipropyyli).
Avermektiinien hiilirunko (esitetty kaavassa I myö-5 hemmin) on peräisin asetaateista ja propionaateista ja luonnollisten avermektiinien C-25-substituentti L-isoleu-siinista [R = (S)-sek-butyyli] tai L-valiinista (R = isopropyyli) [Fisher ja Mrozik, "Macrolide Antibiotics", Academic Press (1984) luku 14].
10 "Tunnetuilla" tai "luonnollisilla" avermektiineillä tarkoitetaan S. avermitilis -kantojen ATCC 31267, ATCC 31271 ja ATCC 31272 tuottamia avermektiinejä, joissa subs-tituenttiryhmä 25-asemassa on joko isopropyyli tai (S)-sek-butyyli (1-metyylipropyyli). Avermektiinejä, joissa 15 25-aseman substituentti on muu kuin isopropyyli tai (S)-sek-butyyli, kutsutaan tästedes uusiksi tai ei-luonnolli-siksi avermektiineiksi.
Yllä mainituissa US-patenteissa esitetyt S. avermitilis -kannat tuottavat ryhmän aineita, jota niissä kut-20 sutaan yleisnimellä C-076. Tässä ryhmässä on kahdeksan erillistä, mutta läheisesti toisiinsa liittyvää yhdistettä, C-076 Ala, Alb, A2a, A2b, Bla, Blb, B2a ja B2b. Yhdisteiden "a"-sarjat viittaavat luonnollisiin avermektiinei-hin, joissa 25-substituentti on (S)-sek-butyyli ja "b"-. 25 sarjat viittaavat avermektiineihin, joissa 25-substituentti on isopropyyli. Merkinnät "A" ja "B" tarkoittavat avermektiinejä, joissa 5-substituentti on metoksi tai vastaavasti hydroksi. Lopuksi numero "1" tarkoittaa avermektiinejä, joissa 22 - 23-asemassa on kaksoissidos, ja nume-30 ro "2" avermektiinejä, joissa 22-asemassa on vety ja 23-asemassa hydroksi.
Tässä selitysosassa ei käytetä tämänkaltaisia tunnisteita ei-luonnollisten avermektiinien 25-substituentin suhteen. Tunnisteet Ai, A2, B1 ja B2 on säilytetty viit-35 taamaan ei-luonnollisiin avermektiineihin, joilla on yllä 3 90088 mainittuja luonnollisia avermektiinejä vastaavat rakenteelliset ominaisuudet.
Bacillus subtilisille [Willecke ja Pardee, J. Biol. Chem. 246 (1971) 5264 - 5272] ja Pseudomonas putidalle 5 [Martin et ai., J. Bacteriology 115 (1973) 198 - 204] on raportoitu mutanttien muodostumista, joilta haarautuneen 2-oksihapon dehydrogenaasiaktiivisuus puuttuu, muttei Streptomycesi1le.
Schulman et ai., J. Antibiot. 38(11) (1985) 1494 -10 1498, on esittänyt mutanttikannan S. avermitilis Agly-1, joka tuottaa käytännöllisesti katsoen vain aglykoniaver-mektiinejä Ala ja A2a. On myös esitetty S. avermitilis Agly-1 -kannan fermentointi sinefungiinin läsnäollessa, joka aiheutti aglykoniavermektiini B -yhdisteiden tuotan-15 non lisääntymisen. Samaten runsaasti avermektiinejä tuottavan S. avermitilis 08 -kannan fermentointi O-metyyli-transferaasien inhibiittorin, sinefungiinin, läsnäollessa aiheutti avermektiinien tuoton, joista O-metyyliryhmät puuttuivat aglykonien C-5-asemasta ja oleandroosin disak-20 karidiosasta.
US-patentti 4 378 353 kuvaa C-076:n sukulaisyhdis-
teitä sekä näiden valmistamista viljelemällä S. avermitilis ATCC 31272 -kannan mutanttikantaa MA-5218, joka saatiin säteilyttämällä UV-valolla. Mutanttia kutsutaan ATCC
25 31780:ksi. Kyseisen mutanttikannan tuottamista C-076:n sukulaisyhdisteistä puuttuu C-076:n furaanirengas. Lisäksi tietyistä esitetyistä yhdisteistä joko toinen tai molemmat oleandroosisokeriosat on poistettu, kun taas toisissa 5-aseman ryhmä on hapetettu ketoryhmäksi.
30 Ruby et ai. , 6th International Symposium on the "Biology of Actinomycetes", Debrecen, Unkari, elokuun 26.-30. (1985), ja Schulman et ai., Antimicrobial Agents and Chemotherapy 31 (1987) 744 - 747 ovat esittäneet kolme ryhmää S. avermitilis -kannan O-metyylitransferaasimu-.35 tantteja, jotka tuottavat avermektiinejä, joista 0-metyy- 4 90088 liryhmät puuttuvat. Ensimmäinen ryhmä tuottaa pääosin B avermektiinejä, koska ne eivät pysty metyloimaan makro-syklisen laktonirenkaan C-5-hydroksyyliä. Toinen ryhmä tuottaa 3'-0,3"-O-bis-demetyyliavermektiinejä (avermek-5 tiinejä, joiden kummastakin oleandroosimonosakkaridijäännöksestä puuttuu O-metyylisubstituentti 3-asemasta), joita kutsutaan demetyyliavermektiineiksi. Kolmas ryhmä ei pysty metyloimaan missään asemassa.
Julkaisussa Schulman et ai.. Fed. Proc. 44 (1985) 10 931, esitetään parannettu B-avermektiinituotanto fermen- toimalla S. avermitilis -kantaa sinefungiinin, S-adenosyy-litioniinin ja S-adenosyylihomokysteiinin kaltaisten yhdisteiden läsnäollessa, jotka inhiboivat avermektiini-B:n O-metyylitransferaasientsyymin aiheuttamaa aglykoni-15 ryhmän C-5-hydroksiryhmän metylointia. Streptomyces avermitilis -mutantteja, joilta O-metyylitransferaasiaktiivi-suus puuttuu ja jotka tuottavat kohonneita määriä avermek-tiini B-yhdisteitä, on myös esitetty julkaisussa Schulman et ai., Antimicrobial Agents and Chemotherapy 29 (1986) 20 620 - 624.
Myös julkaisuissa Chemical Abstracts, voi. 105 (1986) 21350r, FI-A-863 065 ja FI-C-55 781 kuvataan luonnollisten avermektiinien ja avermektiinijohdannaisten valmistusmenetelmiä.
25 Mutageneesin avulla saadaan S. avermitilis -mutant teja, joilta puuttuu haarautuneen 2-oksihapon dehydroge-naasiaktiivisuus. Näillä mutanteilla ei enää ole kykyä tuottaa huomattavia määriä luonnollisia avermektiinejä lisätyn RCOOH-yhdisteen, jossa R on isopropyyli tai (S)-30 sek-butyyli, tai fermentointiprosessin aikana RCOOH-yhdis- teeksi muuttuvan yhdisteen puuttuessa. Yllättävästi ja odottamattomasta on kuitenkin todettu, että nämä mutantit tuottavat luonnollisia ja ei-luonnollisia avermektiinejä, jos fermentointi suoritetaan lisätyn RCOOH-yhdisteen, jos-35 sa R on isopropyyli tai (S)-sek-butyyli, tai muun tässä 5 90088 esitetyn ryhmän tai kyseisen RCOOH-yhdisteen prekursorin läsnäollessa. On vielä yllättävämpää, että esitetyt mutan-tit, joilta puuttuu vain haarautuneen 2-oksihapon dehydro-genaasiaktiivisuus ja jotka eivät pysty hajottamaan L-iso-5 leusiinia, L-leusiinia tai L-valiinia, pystyvät assimiloimaan laajan joukon yhdisteitä avermektiinien biosynteesi-reitille muodostaen luonnollisia avermektiineja sisältämättömiä ei-luonnollisia avermektiinejä.
Mutagenisoimalla täten tuotettuja, yksittäisblokat-10 tuja mutantteja saadaan keksinnön mukaisia mutantteja, joilta puuttuu sekä haarautuneen 2-oksihapon dehydroge-naasiaktiivisuus että avermektiini-B:n O-metyylitransfe-raasiaktiivisuus. Kyseiset kaksoisblokatut mutantit tuottavat yllättävästi ja odottamattomasti oleellisesti vain 15 luonnollisia ja ei-luonnollisia B-avermektiinejä, kun niitä viljellään lisätyn RCOOH-yhdisteen, jossa R on yllä mainittu, läsnäollessa.
Luonnolliset avermektiinit tuotetaan, kuten on mainittu, kompleksisena kahdeksan erillisen mutta läheisesti 20 toisiinsa liittyvän yhdisteen seoksena; kaava I, R on iso-propyyli ja (S)-sek-butyyli. Vaikka niitä onkin saatu talteen pääosin puhtaissa muodoissa (katso US-patentti 4 429 042), tämä menetelmä on parhaimmillaankin työläs. B-aver-mektiineillä on yleensä suurempi matolääkeaktiivisuus kuin 25 vastaavilla A-avermektiineillä. Ei-luonnollisten avermektiinien (A- ja B-komponenttien) tuottaminen EP-julkaisun 214 731 mukaista menetelmää käyttäen voi myös, mikä johtuu joidenkin luonnollisten avermektiinien muodostumiseen vaihtelevina määrinä johtuen haarautuneen 2-oksihapon de-30 hydrogenaasin ja L-valiinin ja L-isoleusiinin läsnäolosta tuotannossa käytettyjen S. avermitilis -mikro-organismien soluissa ja kasvualustoissa.
Mahdollisuus tuottaa vain joko luonnollisten tai ei-luonnollisten avermektiinien bioselektiivisempiä B-kom-'35 ponentteja, minimoida tuotteiden määrä ja kompleksisuus ja 6 90088 täten nostaa valitun avermektiinin puhtautta ja näin yksinkertaistaa erotusmenetelmiä on haluttu päämäärä.
S. avermitilis -kantoja, joilta puuttuu haarautuneen 2-oksihapon dehydrogenaasiaktiivisuus, tuotetaan mu-5 tatoimalla avermektiiniä tuottavia S. avermitilis -kantoja ja erityisesti mutatoimalla S. avermitilis -kantoja ATCC 31267, ATCC 31271, ATCC 31272 tai NCIB 12121. Mutantit eivät pysty syntetisoimaan luonnollisia avermektiinejä, paitsi jos fermentointialustaan lisätään rasvahappoa tai 10 sen prekursoria, jossa on isopropyyli tai (S)-sek-butyy- li. Ne pystyvät tuottamaan luonnollisia ja ei-luonnollisia avermektiinejä, jos niitä fermentoidaan aerobisissa olosuhteissa vesipohjaisessa viljelyalustassa, jossa on asianomainen lähtöhappo tai fermentointiprosessissa täksi 15 muuttuva yhdiste.
Mutantit, joille haarautuneen 2-oksihapon dehydro-genaasiaktiivisuuden puute on tunnusomaista, eristetään mutagenoiduista pesäkkeistä 14C02-menetelmää käyttäen. Tässä menetelmässä 14C02:n muodostumisen puute permeabilisoiduissa 20 soluissa substraatin ollessa (14C-1)-2-oksi-isokapronihap-po tai (14C-1)-2-oksi-3-metyylivaleriaanahappo tai (14C-1)-2-oksi-3-metyylivoihappo on osoitus haarautuneen 2-oksihapon dehydrogenaasiaktiivisuuden puutteesta.
Yllättävää ja odottamatonta oli, että esitetyt mu-25 tantit, joilta haarautuneen 2-oksihapon dehydrogenaasi aktiivisuus puuttui, säilyttivät kyvyn tuottaa avermektiinejä, erityisesti ei-luonnollisia avermektiinejä. Mutant-tien kyvyttömyys tuottaa luonnollisia rasva-asyylikoent-syymi-A-johdannaisia, kun niitä viljellään tavanomaisilla 30 alustoilla, olisi voinut olla letaali mutaatio mikäli mem-braanien koskemattomuus olisi riippuvainen sanotuista johdannaisista tai jos mutaation aiheuttama 2-oksihapon akku-muloituminen johtaisi sytotoksisuuteen. Ei myöskään ollut odotettavissa, että mutantit olisivat pystyneet synteti-.35 soimaan asetyyli-CoA:ta ja propionyyli-CoA:ta L-isoleu- 7 90083 siinin ja L-valiinin degradatiivisesta metaboliasta, koska tämä vaatii entsyymiaktiivisuuksia, jotka mutanteilta puuttuvat. Näiden asyyli-CoA-johdannaisten yllä mainittu tarve avermektiinibiosynteesissä johti siihen olettamukseen, 5 että mutantit olisivat pahasti toimintakyvyttömiä ei-luon-nollisten avermektiinien tuotannossa, mikä yllättävästi ei kuitenkaan pitänyt paikkaansa.
Mutanttien haarautuneen 2-oksihapon dehydrogenaasi-aktiivisuuden puute johtaa haarautuneen rasva-asyyli CoA:n 10 synteesin estymiseen L-isoleusiinin, L-leusiinin ja L-valiinin hajotuksesta ja sen kautta myös luonnollisten avermektiinien synteesi estyy, paitsi jos fermentointialustaan lisätään RCOOH-happoa (jossa R on (S)-sek-butyyli tai iso-propyyli) tai sen prekursoria.
15 Mutatoimalla edelleen mutantteja, joilta puuttuu haarautuneen 2-oksihapon dehydrogenaasiaktiivisuus, saadaan keksinnössä käyttökelpoisia mutantteja, joilta puuttuu lisäksi avermektiini-B:n O-metyylitransferaasiaktiivi-suus. Mutantit, joilta puuttuu avermektiini-B:n O-metyyli-20 transferaasiaktiivisuus, ovat kykenemättömiä metyloimaan avermektiinien aglykoniryhmän C-5-happea. Mutantit, joilta tällainen aktiivisuus puuttuu, tuottavat oleellisesti vain B-avermektiinejä estämällä A-avermektiinien valmistuksen.
Esillä olevan keksinnön kohteena on tällainen mu-25 tantti Streptomyces avermitilis, ATCC 53692, jolta puuttuu haarautuneen 2-oksihapon dehydrogenaasiaktiivisuus ja avermektiini B:n O-metyylitransferaasiaktiivisuus.
Käsitteet "avermektiini" tai "avermektiinit" tässä käytettyinä tarkoittavat alla olevan kaavan I mukaisia 30 yhdisteitä, joissa 25-substituentti (R) voi olla jäljempänä määritelty ryhmä, jota esillä olevan keksinnön mukainen S. avermitilis voi assimiloida sanotussa asemassa.
Esillä olevan keksinnön mukaiset mutantit ovat hyvin arvokkaita ei-luonnollisten B-avermektiinien tuottami-35 sessa käyttäen tässä esitettyjä ja kuvattuja menetelmiä.
8 90083
Ne ovat erityisen arvokkaita, kun tuotetaan haluttuja avermektiinejä, s.o. yhdisteitä, joissa C-25-substituentti on valinnaisesti C1.4-alkyyliryhmällä substituoitu C4_6-syk-loalkyyli tai sykloalkenyyli, 1-metyylitioetyyli tai 5-5 tai 6-atominen happea tai rikkiä sisältävä heterosyklinen ryhmä, erityisesti 3-tienyyli tai 3-furyyli.
Streptomyces avermitilis -lajiin kuuluvan, avermek-tiiniä tuottavan organismin mutaatio suoritetaan tunnettujen menetelmien mukaisesti käyttäen mitä tahansa useista 10 mahdollisista mutaation aiheuttajista, kuten UV-säteily- tys, röntgensäteilytys, N-metyyli-N'-nitro-N-nitrosoguani-diini, etyylimetaanisulfonaatti, typpihapoke ja typpisina-pit, kuten N-metyyli-bis-(2-kloorietyyli)amiini, tai vastaavia käsittelyjä. Mutageneesi voidaan suorittaa käyttäen 15 itiöitä tai vegetatiivisia S. avermitilis -viljelmiä, jotka pystyvät tuottamaan luonnollisia avermektiinejä, esim. S. avermitilisia ATCC 31272.
Käyttäen menetelmiä, jotka alan asiantuntijat tuntevat, mutagenisoidut pesäkkeet valikoidaan haarautuneen 20 2-oksihappodehydrogenaasin puutteen perusteella käyttäen biokemiallista testimenetelmää, joka mahdollistaa suuren, sattumanvaraisesti mutagenisoidun bakteeripesäkemäärän seulonnan valikoiduista haarautuneista (14C-1 )-2-oksiha-poista peräisin olevan 14C02-tuotannon suhteen [Tabor et 25 ai., J. Bact. 128 (1976) 485 - 486].
Menetelmässä mutanttipesäkkeitä viljellään mikro-tiitterilevyn kuopissa sopivassa ravintoalustassa, solut permeabilisoidaan tolueenilla, minkä jälkeen lisätään (14C-1)-2-oksihappoa (esim. 2-oksi-isokapronihappoa) jokai-30 seen kuoppaan ja tarkistetaan mahdollinen 14C02:n fermen-tointi. Vaihtoehtoisesti voidaan käyttää (l4C-l)-2-oksi- 3-metyylivaleriaanahappoa tai (14C-1 )-2-oksi-3-metyyli-voihappoa (14C-1 )-2-oksi-isokapronihapon tilalla. 14C02:n muodostuminen voidaan yksinkertaisesti tarkistaa sijoitta-35 maila kostea, Ba(0H)2:lla kyllästetty suodatinpaperi jokai- 9 9 Π 0 8 8 sen kuopan yläpuolelle, jotta mahdollisesti vapautunut 14C02 jää sen alle ja mahdollinen Ba14C03 detektoidaan autoradio-grafian avulla. Mutantit, joilta haarautuneen 2-oksihapon dehydrogenaasiaktiivisuus puuttuu, antavat tyhjäkontrolle-5 ja vastaavat autoradiogrammit (ei inokuloituja), s.o. mutantit eivät tuota Ba14C03:a.
Täten saadut mutantit alistetaan toiseen mutage-neesiin käyttäen mitä tahansa yllä mainittua mutaation aiheuttajaa. Mutatoiduista pesäkkeistä testataan avermek-10 tiini-B:n O-metyylitransferaasiaktiivisuuden puuttuminen kromatografiällä (ohutkerros- tai korkean erotuskyvyn omaava nestekromatografia) lisätyn prekursorin (esim. 2-metyylivoihappo) läsnäollessa tehdyn fermentaation jälkeen. Avermektiini-A-yhdisteet oleellisesti puuttuvat täl-15 laisten mutanttien fermentaatioalustoista.
Protoplastifuusio mahdollistaa mutageneesin avulla haluttujen, määrätyn mikro-organismilajin alleelien tuottamisen lisäksi sen, että toisessa lajissa tuotetut/tun-nistetut alleelit voidaan viedä toisen lajin kromosomiin. 20 Esimerkiksi haarautuneen 2-oksihapon dehydrogenaasin ja avermektiini-B:n O-metyylitransferaasin suhteen negatiivisesta S. avermitilis -kannasta voidaan protoplastifuusion avulla toisen, yllä mainittuja aktiivisuuksia omaavan S. avermitilis -kannan kanssa muodostaa S. avermitilis 25 -kanta, josta puuttuu vain avermektiini-B:n 0-metyyli- transferaasiaktiivisuus. Kuten alan asiantuntijat tietävät, protoplastifuusiotekniikka mahdollistaa eri selek-tiolinjojen edullisten alleelien yhdistelyn yhteen kantaan.
30 Esillä olevan keksinnön mukaisten mutanttien morfo logia ja viljelyominaisuudet ovat yleisesti ottaen kuten US-patentissa 4 429 042 on esitetty. Esillä olevan keksinnön mukaisten mutanttien tunnusomainen ominaisuus on haarautuneen 2-oksihapon dehydrogenaasiaktiivisuuden ja aver-• 35 mektiini-B:n O-metyylitransferaasiaktiivisuuden puuttumi- 10 90088 nen, jotka ominaisuudet määritetään kuten tässä on esitetty. Kyseisten aktiivisuuksien puuttuminen johtaa siihen, etteivät mutantit pysty tuottamaan luonnollisia B-avermek-tiinejä, kun niitä viljellään määrätyllä alustalla, josta 5 pääosiltaan puuttuu RCHOOH-rasvahapot, joissa R on iso-propyyli tai (S)-sek-butyyli. American Type Culture Collection -talletuslaitoksen suorittama taksonominen tutkimus vahvisti, että yllä mainitun 14C02-testin avulla valikoitu mutanttikanta 1-3 on erittäin läheistä sukua alkupe-10 räiselle, US-patentissa 4 429 042 esitetylle ATCC 31272 -kannalle mutta tietyillä eroavuuksilla. Täten mutanttikanta 1-3 (ATCC 53567) muodostaa merkittävästi vähemmän itiöketjuja kuin ATCC 31272. Keksinnön tekijöiden suorittamissa kokeissa raffinoosin ei havaittu ylläpitävän 15 1-3:n kasvua. Päinvastoin kuin US-patentissa 4 429 042 ATCC 31272:n suhteen esitettiin, mutanttien tai ATCC 31272:n kasvua ei ole todettu käytettäessä sakkaroosia ainoana hiilenlähteenä. Mutantilta 1-3 puuttuu haarautuneen 2-oksihapon dehydrogenaasiaktiivisuus. Tämän keksin-20 nön mukaisella kaksoisnegatiivisella mutantilla S. avermi-tilis 7881, jolta puuttuu haarautuneen 2-oksihapon dehydrogenaasiaktiivisuus ja avermektiini-B:n O-metyylitransfe-raasiaktiivisuus ja joka on tuotettu edelleen mutagenisoi-malla mutanttia 1-3 (ATCC 53567), on samanlainen taksono-25 minen suhde ATCC 31272 -kantaan kuin mutanttikannalla 1-3.
Streptomyces avermitilis -kannat 1-3 ja 7881 on tallennettu Budapestin sopimuksen mukaisesti American Type Culture Collection -talletuslaitokseen, Rockville, Mary-• 30 land, USA, tunnettuun talletuslaitokseen, jossa tallennet tujen kantojen pysyvyys on taattu ja josta ne ovat yleisesti saatavina, mikäli tämän hakemuksen perusteella myönnetään patenttisuoja. Niille annettiin tunnisteet Streptomyces avermitilis ATCC 53567 ja ATCC 53692 yllä esitettyä -35 järjestystä noudattaen.
11 90 083
Jokainen S. avermitilis -kanta ATCC 31267, ATCC 31271, ATCC 31272 ja NCIB 12121 tuottaa luonnollisia aver-mektiinejä, joilla on kaava 5 CH3 22-<i\r-CH3
R
10 CH,"^ 3 1 ° I (I)
S V
' OH
15 OR3 jossa katkoviiva 22 - 23-asemassa edustaa valinnaista kak-20 soissidosta; R1 on hydroksi ja läsnä vain, jos kaksoissidosta ei ole ; R2 on kaavan 4'-(α-L-oleandrosyyli)-a-L-olean-drosyylioksi, jolla on kaava 25 0H« pii
30 CH30 CHjO S
R3 on vety tai metyyli; ja R on isopropyyli tai (S)-sek-butyyli. US-patentissa 4 285 963 esitetään kaavan I mukainen avermektiini, jossa 35 25-asemassa on metyyli- ja etyyliryhmä, R1 on hydroksi ja R3 on metyyli.
12 9 0 0 8 8
Ei-luonnollisissa avermektiineissä, joihin tässä viitataan, R on muu substituentti kuin isopropyyli tai (S)-sek-butyyli alla esitetyn määritelmän mukaisesti.
Esillä oleva keksintö koskee menetelmää B-avermek-5 tiinien valmistamiseksi, jolla on kaava R1 CH3 22^1sCH3 I25
10 ^0^""R
\ °^° (I) 'oh 15 <Ui CH3 OR3 jossa 20 katkoviiva asemassa 22 - 23 edustaa mahdollista kaksoissidosta; R1 on hydroksi ja on läsnä vain, jos kaksoissidosta ei ole; R2 on 41 -(α-L-oleandrosyyli)-α-L-oleandrosyylioksi, : 25 jolla on kaava C^3 CH3 °\ V° 30 H°~\ / 0 CH3° CH30 R3 on vety; ja R on α-haarautunut C3_8-alkyyli, -alkenyyli, -al-35 kynyyli, -alkoksialkyyli tai -alkyylitioalkyyliryhmä; C5.8-sykloalkyylialkyyliryhmä, jossa alkyyliryhmä on a-haa- i3 90088 rautunut C2_5-alkyyliryhmä; C3.8-sykloalkyyli- tai C5_8-syk-loalkenyyliryhmä, joista kumpi tahansa voi mahdollisesti olla substituoitu metyleenillä tai yhdellä tai useammalla halogeeniatomilla; tai 3 - 6-jäseninen, happea tai rikkiä 5 sisältävä heterosyklinen rengas, joka voi olla tyydytetty tai täysin tai osittain tyydyttymätön, jolloin menetelmälle! on tunnusomaista, että fermentoidaan aerobisesti Streptomyces avermitilis -kantaa, jolta puuttuu haarautuneen 2-oksihapon dehydrogenaasiaktiivisuus ja avermek-10 tiini B:n O-metyylitransferaasiaktiivisuus, vesipohjaisessa ravintoalustassa, joka sisältää assimiloitavaa typen, hiilen ja epäorgaanisten suolojen lähdettä sekä kaavan RCOOH mukaista happoa, jolloin R on edellä määritelty.
Kaavan I mukaisten yhdisteiden biosynteesissä tar-15 vittavat yhdisteet ovat olemassa S. avermitilis solussa ja alustassa. Nämä yhdisteet syntyvät L-valiinin ja L-iso-leusiinin hajoamisesta tai niitä vastaavien 2-oksihappojen haarautuneen 2-oksihapon dehydrogenaasin katalysoiman de-karboksyloinnin kautta, jolloin tuote liitetään koentsyymi 20 A:hän. Niiden läsnäolo vastaa kaavan I mukaisten isopro-pyyli- ja (S)-sek-butyyli-yhdisteiden samanaikaisesta muodostumisesta. Tämä aiheuttaa tietenkin ongelmia isopropyy-lijohdannaisten erottamisessa (S)-sek-butyylijohdannaisista.
25 Kun esillä olevassa keksinnössä käytettäviä mutant- teja fermentoidaan asianmukaista lähtöyhdistettä sisältävällä ravintoalustalla, ne tuottavat kaavan I avulla määriteltyä, uutta yhdistettä tai, kuten useimmiten on asianlaita ne muodostavat seosta, joka sisältää kahta tällaista 30 yhdistettä, jossa R vastaa käytettyä lähtöyhdistettä. Täten voidaan tuottaa jopa kahta lopputuotetta, joita tarkoituksenmukaisesti ja yksinkertaisesti kutsutaan R-aver-mektiineiksi B1 ja B2 US-patentin 4 429 042 mukaista kuvausta käyttäen. "R"-ryhmä viittaa tietenkin C-25 substi-35 tuenttiin. Esimerkiksi kun R on syklopentyyli, mahdolliset kaksi avermektiiniä ovat: i4 90083
Trlviaaliniml R1 syklopentyyli-
avermektiini B1 kaksoissidos H
5 syklopentyyli-
avermektiini B2 hydroksi H
Ei-luonnollisissa avermektiineissä kaavan (I) mukainen C-25 substituentti "R" on muu kuin isopropyyli tai 10 (S)-sek-butyyli.
Kaavan I mukaisia yhdisteitä, joissa on kaksoissidos ja OH-ryhmä puuttuu, voitaisiin vaihtoehtoisesti valmistaa dehydratoimalla vastaavaa kaavan I mukaista yhdistettä, jossa R3 on OH ja josta kaksoissidos puuttuu. 15 Reaktio suoritetaan siten, että asemissa 5 ja 4" olevat hydroksiryhmät ensin suojataan selektiivisesti, esim. t-butyyli-dimetyylisilyylioksiasetyylijohdannaisina, minkä jälkeen annetaan reagoida substituoidun tiokarbonyyli-halidin, kuten (4-metyylifenoksi)tiokarbonyylikloridin, 20 kanssa ja suoritetaan dehydratointi kuumentamalla liuotti- messa, jonka kiehumispiste on korkea, esim. triklooribent-seenissä. Lopuksi tuotteesta poistetaan suojaus, jolloin saadaan tyydyttymätön yhdiste. Nämä vaiheet ja siihen soveltuvat reagenssit ja reaktio-olosuhteet on kuvattu US-25 patentissa 4 328 335.
Kaavan I mukaisia yhdisteitä, joissa R1 on H ja kaksoissidos puuttuu, voidaan valmistaa vastaavasta kaksois-sidoksen omaavasta yhdisteestä, josta R1 puuttuu, selektiivisen katalyyttisen hydrogenoinnin avulla käyttäen sopivaa 30 katalyyttiä. Pelkistys voidaan esimerkiksi suorittaa käyttäen tris-(trifenyylifosfiini)rodium(I)kloridia, kuten EP-patenttijulkaisussa 0 001 689 ja sitä vastaavassa huhtikuun 22. päivänä 1980 myönnetyssä US-patentissa 4 199 569 on esitetty.
35 is 9 0 08 8
Keksinnön mukaisessa menetelmässä käytettävät S. avermitilis -kannat pystyvät siis hyödyntämään luonnollisten tai ei-luonnollisten avermektiinien biosynteesissä yhdisteitä, joilla on kaava 5 R-COOH (II-A), sekä yhdisteitä, joita voidaan muuttaa II-A-yhdisteiksi fermentointiprosessin aikana. Kyseisiä yhdisteitä kutsutaan tässä "lähtöyhdisteiksi".
10 Esillä oleva keksintö käsittää myös kaavan II-A
mukaisten yhdisteiden isomeerimuotoja.
Esillä olevan keksinnön mukainen menetelmä suoritetaan fermentoimalla aerobisesti S. anvermitilis -kantaa, jolta puuttuu haarautuneen 2-oksihapon dehydrogenaasiak-15 tiivisuus ja avermektiini-B:n O-metyylitransferaasiaktii- visuus, vesipohjaisessa ravintoalustassa, joka sisältää assimiloitavaa typpeä, hiiltä, epäorgaanisia suoloja ja kaavan RCOOH mukaista yhdistettä. Happo lisätään fermen-tointiin joko inokuloinnin yhteydessä tai määräajoin fer-20 mentoinnin aikana. Avermektiiniyhdisteiden muodostumista voidaan seurata ottamalla näytteitä fermentoinnista, uuttamalla orgaaniseen liuottimeen ja seuraamalla tuotteen ilmentymistä kromatografiän avulla, esimerkiksi käyttäen korkeapainenestekromatografiaa. Inkubointia jatketaan, 25 kunnes tuotteen saanto on maksimoitu, yleensä 4 -15 vuorokautta .
Lähtöyhdisteitä (karboksyylihappoa) lisätään joka kerta mieluummin noin 0,05 - 3,0 g litraa kohden. Lähtöyh-distettä voidaan lisätä fermentointiin jatkuvasti, jaksot-30 tain tai kaikki kerrallaan. Happoa (RCOOH) lisätään sellaisenaan tai suolana, kuten natrium-, litium- tai am-moniumsuolana. Jos happo on kiinteässä muodossa, se mieluummin liuotetaan sopivaan liuottimeen, kuten veteen tai C^-alkoholeihin.
... 35 i6 90088
Fermentoinnissa käytetty alusta voi olla tavanomainen alusta, jossa on assimiloitavaa hiiltä, typpeä ja hivenaineita, erityisesti kun C-25-substituentti on isopro-pyyli tai (S)-sek-butyyli. Kun C-25-substituentin tulee 5 olla ei-luonnollinen ryhmä, s.o. kun se ei ole isopropyyli tai (S)-sek-butyyli, fermentointialustan on oltava sellainen, että valitut aineosat eivät sisällä ollenkaan tai sisältävät vain vähäisiä määriä lähtöyhdisteitä, joissa R-ryhmä on isopropyyli tai (S)-sek-butyyli.
10 Kun fermentointia on jatkettu useita vuorokau sia lämpötilassa, joka mieluummin on suuruusluokkaa 24 -33 °C, fermentointiliuos sentrifugoidaan tai suodatetaan ja myseelikakku uutetaan mieluummin asetonilla tai me-tanolilla. Liuotinuutos väkevöidään ja haluttu tuote uute-15 taan tämän jälkeen veteen sekoittumattomaan orgaaniseen liuottimeen, kuten metyleenikloridiin, etyyliasetaattiin, kloroformiin, butanoliin tai metyyli-isobutyyliketoniin. Liuotinuutos väkevöidään ja raakatuote puhdistetaan vielä tarvittaessa kromatografiän avulla, esimerkiksi prepara-20 tiivisella käänteisfaasi-HPLC-kromatografiällä.
Tuote saadaan yleensä seoksena, jossa on kaavan I avulla määriteltyjä yhdisteitä, joissa R2 on 4'-(a-L-ole-androsyyli)-α-L-oleandrosyylioksi, R1 on OH ja kaksoissidos puuttuu tai R1 puuttuu ja kaksoissidos esiintyy.
25 R-ryhmän lähteet eivät ole kriittisiä avermektii- nien muodostumiselle. Esillä olevan keksinnön mukaisen menetelmän kriittinen vaatimus niiden muodostumiselle on se, että haluttu R-ryhmä on fermentointiprosessin aikana esillä olevan keksinnön mukaisen S. avermitilis -kannan 30 saatavilla.
Sopivia yhdisteitä ovat: .·. 2,3-dimetyylivoihappo 2-metyyliheksaanihappo 2-metyylipent-4-eenihappo "35 2-syklopropyylipropionihappo n 90088 4-metyleenisykloheksaanikarboksyylihappo 3-metyylisykloheksaanikarboksyylihappo (cis/trans) 1-syklopenteenikarboksyylihappo 1- syklohekseenikarboksyylihappo 5 tetrahydropyraani-4-karboksyylihappo tiofeeni-2-karboksyylihappo 3-furaanihappo syklobutaanikarboksyy1ihappo syklopentaanikarboksyylihappo 10 sykloheksaanikarboksyylihappo sykloheptaanikarboksyylihappo 2- metyylisyklopropaanikarboksyylihappo 3- syklohekseeni-l-karboksyylihappo 2- metyylitiopropionihappo 15 2-metyyli-4-metoksivoihappo tiofeeni-3-karboksyylihappo hydroksimetyylisyklopentaani 3- tiofeenikarboksialdehydi 3-sykloheksyylipropionihappo 20 3-syklopentyylipropionihappo hydroks imetyy1i syklobutaani tetrahydrotiofeeni-3-karboksyylihappo 3-metyylisyklobutaanikarboksyylihapon litiumsuola 3- metyleenisyklobutaanikarboksyylihapon litiumsuola 25 2-metyyli-4-metyylitiovoihappo tetrahydrotiopyraani-4-karboksyylihappo syklobutyylimetyyliamiini etyylisyklobutaanikarboksylaatti 4- hydroksimetyylisyklopenteeni 30 2-( 3-tiofeenikarbonyyli )propionihapon etyyliesteri (S)-2-metyylipentaanihappo .· - (R)-2-metyylipentaanihappo ..* Kolme luokkaa O-metyylitransferaasimutantteja voi daan saada tässä esitetyistä haarautuneen 2-oksihapon de-; '-· 35 hydrogenaasinegatiivisista mutanteista. Mutantit, joissa ie 90088 on mutaatio aktiivisen, haarautuneen 2-oksihapon dehydro-genaasiaktiivisuudessa, yhdistetään yhteen tai useampaan O-metyylitransferaasimutaatioon, jolloin saadaan S. aver-mitilis -kantoja, jotka tuottavat pääosiltaan B-avermek-5 tiinejä, demetyyliavermektiinejä tai avermektiinejä, joita ei ole ollenkaan metyloitu, kun niille syötetään RCOOH-yhdisteitä fermentointiprosessin aikana. Kyseiset mutantit saadaan mutagenoimalla mutantteja, joilta puuttuu haarautuneen 2-oksihapon dehydrogenaasiaktiivisuus käyttäen UV-10 valoa ja/tai kemiallisia mutageeneja, kuten N-metyyli-N-nitrosouretaania, nitrosoguanidiinia tai muuta yllä esitettyä ainetta. Vaihtoehtoisesti haarautuneen 2-oksihapon dehydrogenaasipositiivisia mutantteja, joilta puuttuu yksi tai useampi O-metyylitransferääsi, voidaan mutatoida UV-15 valokäsittelyllä tai mutagenoivalla aineella, jolloin saadaan haarautuneen 2-oksihapon dehydrogenaasinegatiivisia mutantteja.
Tämän kaltaisten mutanttien tuottamia ei-luonnolli-sia avermektiinejä karakterisoi se, että niillä on hydrok-20 siryhmiä aglykoniosan C-5-asemassa ja/tai oleandroosiosien C-3'- ja/tai C-3"-asemissa.
Yllä kuvatut mutantit tunnistetaan julkaisussa Schulman et ai.. Antimicrobial Agents and Chemotherapy, 29 (1986) 620 - 624 esitetyn menetelmän mukaisesti. Ne ovat 25 käyttökelpoisia samoihin tarkoituksiin ja samalla tavalla kuin tunnetut avermektiinit.
·: Vaihtoehtoisesti kohonneita määriä B-avermektiine- jä, myöskin niistä, joista metyyliryhmät puuttuvat oleand-roosidisakkaridiosasta, tuotetaan fermentoimalla esillä 30 olevan keksinnön mukaisia, aktiivisen haarautuneen 2-oksihapon dehydrogenaasin suhteen negatiivisia mutantteja si-nefungiinin, S-adenosyylietioniinin tai S-adenosyylihomo--·_ kysteiinin kaltaisen O-metyylitransferaasiaktiivisuutta inhiboivan aineen läsnäollessa.
'-· 35 i9 90088
Esillä olevan keksinnön mukaiset yhdisteet ovat hyvin aktiivisia parasiittien vastaisia aineita, joiden käyttökelpoisuus on erityisen hyvä matolääkkeinä, ulko-loisten myrkkyinä, hyönteismyrkkyinä ja punkkien tuhoai-5 neina.
Täten yhdisteet ovat tehokkaita hoidettaessa erinäisiä sisäloisten aiheuttamia tauteja, kuten erityisesti matotautia, jota yleensä aiheuttaa ryhmä parasiittisia sukkulamatoja ja joka voi aiheuttaa suuria taloudellisia 10 tappioita sika-, lammas-, hevos- ja karjataloudessa sekä voi myös aiheuttaa tauteja kotieläimille ja linnuille. Yhdisteet ovat myös tehokkaita muita sukkulamatoja vastaan, jotka tartuttavat eri eläinlajeja, kuten esimerkiksi DirofIlaria koirilla, ja eräät ihmisiä tartuttavat para-15 siitit, kuten suolistoparasiitit Ancylostoma, Necator,
Ascaris, Strongyloides, Trinchinella, Capillaria, Tric-huris, Enterobius ja verestä ja muista kudoksista löytyvät parasiitit, kuten rihmamadot ja suolistonulkoiset Strongyloides ja Trichinella-muodot.
20 Yhdisteet ovat myös arvokkaita ulkoloisten aiheut tamien infektioiden hoidossa, erityisesti eläinten ja lintujen niveljalkaisia ulkoloisia, kuten puutiaisia, punkkeja, täitä, kärpäsiä, raatokärpäsiä, purevia hyönteisiä sekä karjaa ja hevosia tartuttavia liikkuvia kärpästoukkia 25 vastaan.
Yhdisteet ovat myös aktiivisia hyönteismyrkkyjä ko-: titalouksien tuhoeläimiä, kuten torakkaa, koita, turkis- : kuoriaista ja huonekärpästä vastaan ja niitä voidaan käyt- *. : tää varastoidun viljan ja viljelykasvien tuholaisia, kuten 30 kirvoja, lehtitäitä, toukkia ja liikkuvia suorasiipisiä, kuten heinäsirkkoja, vastaan.
Kaavan I mukaisia yhdisteitä annetaan määrättyyn ... käyttötarkoitukseen ja määrätylle hoidettavalle isäntä- eläinlajille tai kyseessä olevalle loiselle tai hyöntei--- 35 selle soveltuvana formulaationa. Matolääkkeenä yhdisteet 20 9 0 0 8 8 voidaan antaa oraalisesti kapselina, boluksena, tablettina tai nestemäisenä pakkolääkityksenä tai ne voidaan vaihtoehtoisesti antaa ruiskeena tai siirrännäisenä. Tämänkaltaiset formulaatiot valmistetaan käyttäen tavanomaisia 5 menetelmiä tavanomaista eläinlääketieteellistä käytäntöä noudattaen. Täten kapselit, bolukset tai tabletit voidaan valmistaa sekoittamalla aktiivinen aineosa sopivaan hienojakoiseen laimentavaan aineeseen tai kantajaan, joka lisäksi sisältää hajottavaa ja/tai sitovaa ainetta, kuten 10 tärkkelystä, laktoosia, talkkia, magnesiumstearaattia, jne. Nestemäinen pakkolääkitysformulaatio voidaan valmistaa dispergoimalla aktiivinen aineosa vesipohjaiseen liuokseen yhdessä dispersoivan tai kosteuttavan aineen jne. kanssa ja injisoitavat formulaatiot voidaan valmistaa 15 steriileinä liuoksina, joissa voi olla muitakin aineita, kuten esimerkiksi tarpeellinen määrä suoloja tai glukoosia, jotta liuoksesta tulee isotoninen vereen nähden. Nämä formulaatiot vaihtelevat aktiivisen aineosan painon suhteen riippuen hoidettavasta isäntäeläinlajista, infektion 20 voimakkuudesta ja tyypistä sekä isäntäorganismin ruumiin painosta. Oraalisesti annettuna noin 0,001 - 10 mg/kg eläimen painoa yksittäisannoksena tai jaettuina annoksina noin 1-5 vuorokauden aikana on yleensä tyydyttävä annos, mutta tietenkin voi esiintyä tilanteita, joissa korkeammat 25 tai matalammat annosrajat ovat tarpeellisia.
Vaihtoehtoisesti yhdisteet voidaan antaa sekoitettuna eläimen ruokaan ja tätä tarkoitusta varten voidaan valmistaa ruokaan lisättävä tiiviste tai ns. premix, joka sekoitetaan eläimen normaaliin ruokaan. Hyönteismyrkkynä 30 tai maataloustuholaismyrkkynä yhdisteitä käytetään sumu tuksena, pölynä, emulsiona tai vastaavana tavanomaista maataloudellista käytäntöä noudattaen.
2i 90080 S. avermitilis -kannan 1-3 (ATCC 53567) tuottaminen
Vaihe 1. S. avermitilis ATCC 31272 kasvatettiin yhtenäiseksi matoksi New Patch Agar -alustalla 12 vuorokautta 30 °C:ssa. Alustan koostumus oli: 5 V-8 vihannesmehu* 200 ml
CaC03 3 g
Agar 15 g H2D ad 1000 ml ravintoliemi 1,0 g/1 10 natriumasetaatti·3H20 1,4 g/1 isovaleriaanahappo 50 mg/1 isovoihappo 50 mg/1 metyylivoihappo 50 mg/1 isoleusiini 250 mg/1 15 leusiini 250 mg/1 väliini 250 mg/1 hivenaineliuos** 1 ml/1 * Kahdeksan vihannesmehun seos (tomaatti, porkkana, selleri, sokerijuurikas, persilja, salaatti, vesikrassi ja pi-20 naatti) + suolaa, askorbiinihappoa ja sitruunahappoja ja luonnollisia makuaineita. Saatavana Campbell Soup Company -yhtiöstä, Camden, NJ.
** Hivenaineliuoksen koostumus:
FeCl3*6H20 2,7 g 25 MnSO.·Ηο0 4,2 4 2
CuS04*5H20 0,5
CaCl2 11,0 H3B03 0,62
CoC12«6H20 0,24 30 ZnCl2 0,68
NaoMo0. 0,24 2 4
Yllä olevat aineet liuotetaan 1 litraan 0,1 N HC1.
Kolmelta tällaiselta maljalta kerättiin itiöitä, jotka suspendoitiin 20 mlraan 0,5 M tris-maleiinihappo-35 puskuria, pH 9,0.
22 90 0 83
Vaihe 2, 10 ml itiösuspensiota lisättiin putkeen, jossa oli 10 mg N-metyyli-N'-nitro-N-nitrosoguanidiinia (NTG). Putkea inkuboitiin ja ravisteltiin 28 °C:ssa 60 min, ja itiöt pestiin runsaassa l-%:isessa NaCl-liuokses-5 sa.
Vaihe 3. Pestyt itiöt suspendoitiin l-%:iseen NaCl:iin ja sekoitettiin samaan tilavuuteen 80-%:ista ety-leeniglykolia. Tätä suspensiota säilytettiin -20 °C:ssa ja käytettiin solulähteenä, kun mutantit seulottiin. Idätet-10 täessä saatiin noin 104 pesäkettä/ml.
Itiökanta levitettiin YPD-maljoille siten, että saatiin noin 100 pesäkettä maljaa kohden (YPD-alusta sisältää 10 g/1 hiivauutetta, Bacto-peptonia* ja dekstroo-sia; sekä 15 g/1 Bacto-agaria*, pH säädettiin arvoon 6,9 15 ennen autoklavointia). Tähdellä merkityt aineosat ovat kaupallisesti saatavina: Difco Laboratories -yhtiöstä,
Detroit, Michigan 48238.
Vaihe 4. Yksittäisiä pesäkkeitä poimittiin maljoilta 2 - 3 viikon kasvatuksen jälkeen 28 °C:ssa ja siirret-20 tiin omiin kuoppiin tavanomaiselle 96-kuoppaiselle mikro-tiitterilevylle. Pieni osa jokaista pesäkettä siirrettiin myös tuoreelle agar-alustalle käytettäväksi solulähteenä, kun mutantteja tunnistettiin.
Vaihe 5. Jokaiseen kuoppaan lisättiin noin 75 mik-25 rolitraa nestemäistä M9-suola-alustaa, joka sisälsi 1 % glukoosia, 0,1 % kasaminohappoja 0,01 % sekä isovaleri-aanahappoa, isovoihappoa ja 2-metyylivoihappoa. Inkuboitiin useita vuorokausia 28 °C:ssa, minkä jälkeen solut testattiin haarautuneen 2-oksihapon dehydrogenaasin läsnä-30 olon suhteen. (M9-suola-alusta sisälsi 6 g Na2HP04:a, 3 g KH2P04:a, 0,5 g NaCl: a ja 1 g NH4C1: a litraa kohden. Alusta autoklavoitiin ja 1 ml steriloitua 1 M MgS04:a ja 1 ml steriloitua 0,1 M CaCl2:a lisättiin aseptisesti.
Vaihe 6. Valmistettiin 5-%:inen tolueenin mik-35 rosuspensio M9-suola-alustassa sonikoimalla sekoittuma- 23 Ί ο G 8 8 tonta seosta nopeasti. 25 ml:aan tätä suspensiota lisättiin 1,2 ml (14C-1)-2-oksi-isokapronihappoa, 2,5 pCi/ml ja 10,0 pCi/pmol, sisältävää liuosta. 50 mikrolitraa tätä liuosta lisättiin jokaiseen mikrotiitterilevyn kuoppaan, 5 jossa testattavat solut olivat.
Vaihe 7. Jokaisessa kuopassa muodostunut 14C02 suljettiin talteen ja visualisoitiin julkaisussa Tabor et ai., J. Bacteriol., 128 (1976) 485 - 486, "Convenient Method for Detecting 14C02 in Multiple Samples: Application to 10 Rapid Screening for Mutants", esitettyä menetelmää käyttäen. Mutantit, joilta aktiivinen haarautuneen 2-oksiha-pon dehydrogenaasi puuttuu, eivät tuota Ba14C03 sen enempää kuin kontrollitkaan.
Kehittyneempi menetelmä, joka parantaa autoradio-15 grammissa Ba14C03:n muodostumisesta johtuvana tummana läikkänä näkyvän 14C02-positiivisen testin ja negatiivisen testin, jossa ei näy läikkää tai näkyy erittäin heikko läikkä, välistä kontrastia, sisältää seuraavan modifioidun seulonnan.
20 Yksittäisiä pesäkkeitä (katso vaihe 4 yllä) poimit tiin 7-14 vuorokauden kasvatuksen jälkeen (ei 2 - 3 viikon kasvatuksen jälkeen kuten yllä ja ne testattiin suoraan kuten vaiheissa 6 ja 7 yllä). Yllä olevan menetelmän vaihe 5 jätettiin pois.
25 Vieläkin kehittyneempi menetelmä, joka on luonteel taan kvantitatiivinen vapautuneen 14C02:n suhteen, sisältää yllä esitetyssä seulonnassa tunnistettujen mutanttien kas-vatuksen sopivalla alustalla, joka koostui M9-suola-alus-tasta, johon oli lisätty 1 % glukoosia ja 0,1 % "Syncasa-30 bcaa" -tuotetta (synteettinen L-aminohapposeos, jonka koostumus vastaa kaupallisesti saatavia kasaminohappoja, mutta L-valiini, L-isoleusiini ja L-leusiini puuttuvat, katso alla).
Kasvatettiin suureen solutiheyteen, minkä jälkeen 35 solut pestiin M9-suola-alustalla ja suspendoitiin uuteen 24 9 G O 8 3 kylmään, 1 % tolueenia sisältävään M9-suola-alustaan, jota oli sonikoitu, kunnes saatiin maidonvalkea tolueenidisper-sio. Solu/puskuri/tolueeni-suspensiota inkuboitiin 40 min 30 eC:ssa, jotta solut tulivat läpäiseviksi. Permeabili-5 soidut solut pestiin tämän jälkeen M9-suola-alustalla ja resuspendoitiin lopuksi viidesosaan alkuperäistä tilavuutta olevaan M9-alustapuskuria. Testiä kohden käytettiin 180 mikrolitraa tätä puskuria.
300 μ1:η reaktiotilavuus sisälsi toluenisoidut so-10 lut, 0,4 mM tiamiinipyrofosfaattia (TPP); 0,11 mM koent-syymi A:ta (CoA); 0,68 mM nikotiiniamidiadeniinidinukleo-tidia (NAD); 2,6 mM ditiotreitolia (DTT); 4,1 mM MgCl2:ta; 60 mM Tris-HCl:a, pH 7,5; ja (14C-1)-2-oksi-isokaproaattia, 6000 cmp, pCi/pmol. Laskennan tehokkuus oli 73 %. Reaktio 15 suoritettiin 15 ml:n nestetuikelaskentaputkissa, joiden kierrekorkkeihin oli painettu 2x2 cm:n Whatman nro 4 -paperineliöitä. Paperissa oli 30 mikrolitraa 1 M hyamii-nihydroksidia (1 M metyylibentsetoniumhydroksidia metano-lissa; saatavana Sigma Chemical Co -yhtiöltä. St. Louis, 20 MO 63178), joka sitoo reaktiossa vapautuvan 14C02:n. Inkuboitiin kaksi tuntia, minkä jälkeen paperit upotettiin 10 ml:aan Beckman Aquasol II -nestettä (yleistuikeneste), jota on saatavissa kaupallisesti (New England Nuclear Research Products, Boston, MA 02118) ja annettiin tasapai-25 nottua neljän tai useamman tunnin ajan tässä nesteessä, minkä jälkeen radioaktiivisuus määritettiin nestetuikelas-kijassa. Tyhjäkontrollireaktio (s.o. ei soluja) antaa noin 50 - 300 cpm.
Mutantti 1-3 ja muut vastaavat antoivat cpm-luke-30 mia, jotka olivat pienempiä tai samaa suuruusluokkaa kuin tyhjäkontrolli, kun taas alkuperäiskannan arvot olivat useita kertoja korkeampia kuin tyhjäkontrolliarvot.
25 :)0083 "Svncasa-bcaa":n koostumus. 100 kertainen väkevyys g/litra L-alaniini 3 L-arginiini 4 5 L-asparagiinihappo 6 L-kysteiini 1 L-glutamiinihappo 20 glysiini 1 L-histidiini 2 10 L-lysiini 7 L-metioniini 3 L-fenyylialaniini 6 L-proliini 10 L-seriini 6 15 L-treoniini 4 L-tyrosiini 4 L-tryptofaani 1
Seoksen pH säädetään arvoon 7 ja steriilisuodate-taan. Yksi tilavuus tiivistettä lisätään 99 tilavuuteen 20 kasvatusliuosta, jolloin saadaan tavanomainen käyttöväke-vyys.
Haarautuneen 2-oksihapon dehydroqenaasia ia aver-mektilni-B:n O-metyylitransferaasia sisältämättömän, kak-soisblokatun S. avermitilis 7881 (ATCC 53692) -mutantin 25 tuottaminen : Vaihe_1. S. avermitilisia ATCC 53567 kasvatettiin yhtenäiseksi matoksi New Patch Agar -alustalla 12 vuorokautta 30 °C:ssa.
Kolmelta tällaiselta maljalta kerättiin itiöitä ja 30 suspendoitiin 20 ml:aan 0,05 M tris-maleiinihappopuskuria, pH 9,0.
Vaihe 2. 10 ml itiösuspensiota lisättiin putkeen, jossa oli 10 mg N-metyyli-N'-nitro-N-nitrosoguanidiinia (NTG). Putkea inkuboitiin ja ravisteltiin 28 °C:ssa 60 mi-: 35 nuuttia, ja itiöt pestiin runsaassa l-%:isessa NaCl-liuok-sessa.
26 > 8 ϋ 8 8
Vaihe 3. Pestyt itiöt suspendoitiin l-%:iseen NaCl:iin ja sekoitettiin samaan tilavuuteen 80-%:ista ety-leeniglykolia. Tätä suspensiota säilytettiin -20 °C:ssa ja käytettiin solulähteenä, kun mutantit seulottiin.
5 Tämä itiökanta levitettiin YPD-maljoille siten, että saatiin noin 100 pesäkettä/malja. Mutagenisoidun (nitrosoguanidiinikäsiteltyjä) Streptomyces avermitilis -kannan populaation pesäkkeitä poimittiin ja levitettiin täpliksi agar-alustalle, joka valmistettiin seuraavasti 10 (grammoja/litra): ohennettu tärkkelys, 80; K2HP04, 1;
MgS04*7H20, 1; ardamiini pH 5; CaC03, 5; P-2000, 1 ml;
FeS04· 7H20, 0,01; MnCl2*4H20, 0,001; ZnS04*7H20, 0,001; Bacto-agaria, 17; tislattua vettä ad 980 ml. pH säädettiin NaOHrlla 7:ksi ennen autoklavointia 121 °C:ssa 20 minuut-15 tia. Autoklavoinnin jälkeen lisättiin 20 ml:aa steriiliä (±)-2-metyylivoihapon 5-%:ista kantaliuosta, pH 7,0.
Agarviljelmiä kasvatettiin 8-12 vuorokautta 28 °C:ssa. Solut (myseelit) poistetaan agarilta ja laitetaan 250 mikrolitraan asetonia. Kaksikymmentäviisi (25) 20 mikrolitraa asetoniuutteita pipetoitiin esivaletuille
Analtech Silica Gel GF -ohutkerroskromatografialevyille. Kromatogrammia ajettiin 30 - 40 minuuttia etyyliasetaatti-liuoksessa, kuivattiin ja suihkutettiin 3-%:isella vanil-liinilla etanolissa. Levyt asetettiin 100-°C:iseen uuniin .25 1-3 minuutiksi, suihkutettiin 3-%:isella rikkihapolla etanolissa ja asetettiin uudestaan 100 °C uuniin 10 - 15 minuutiksi. Avermektiini-B:n O-metyylitransferaasia sisältämättömät mutantit tunnistettiin kromatografiakuvion muutoksena, s.o. avermektiini B-komponentteja vastaavat täp-30 Iät (Rf noin 0,54 ja 0,42 Bl:lle ja vastaavasti B2:lle) ovat edelleen jäljellä, mutta avermektiini-A komponentteja vastaavat täplät (Rf noin 0,69 ja 0,58 Alille ja vastaavasti A2:lle) puuttuvat.
27 JO O 83
Yleisiä korkeapainenestekromatoqrafia (HPLC) menetelmiä
Liikkuva faasi: 150 ml vettä 5 70 ml asetonitriiliä tilavuus säädetään 1 litraksi metanolilla.
Pylväs:
Ultrasphere ODS 25 cm (Beckman Instruments, Fullerton, CA 92634-3100) 10 nopeus: 0,75 ml/min detektio: UV, 240 nm vaimennus: melkein 6 Näytelaimennusliuos (D): 35 ml asetonitriiliä + 390 ml metanolia 15 Standardit: 1. punnittiin 0,5 mg avermektiini A2a:ta 10 ml:n pulloon ja säädettiin tilavuus metanolilla 2. punnittiin 0,5 mg testituotetta 10 ml pulloon ja säädettiin tilavuus metanolilla 20 1 ja 2 ovat standardikantaliuoksia; standardikäyttöliuok- sia varten: otettiin 100 μΐ (1):tä ja 100 μΐ (2):ta putkeen ja lisättiin 800 μΐ liikkuvaa faasia Näytteet: : 25 1. otetaan 1 ml hyvin ravisteltua lientä; sentrifu- goidaan 2. poistetaan mahdollisimman paljon supernatanttia sekoittamatta pellettiä 3. lisätään 100 μΐ HPLC-vettä pellettiin ja disper- 30 goidaan sekoittaen vortex-laitteella 4. lisätään 2 ml laimenninta (D) ja sekoitetaan hyvin 5. suodatetaan ja ajetaan HPLC.
Luonnolliset ja ei-luonnolliset avermektiinit alis-35 tettiin tähän HPLC-kromatografiamenetelmään ja yksittäis- 28 9 Q G 8 8 ten avermektiinihuippujen retentioajat jaettiin oligomy-siini A:n retentioajalla, joka toimi sisäisenä standardina jokaisessa HPLC-määrityksessä. Oligomysiini A esiintyy melkein aina HPLC:ssä S. avermitilis -fermentointien 5 sivutuotteena ja on ainoa HPLC:ssä näkyvä tässä esitettyjen mutanttien tuote, kun niitä viljellään RCOOH-vapaassa alustassa, jolloin R on kuten tässä määritelty. Tavallisesti oligomysiini A:n retentioaika on 12,5 - 14 min. Re-tentioaikojen (RT) suhde antaa paremman pohjan avermektii-10 nituotteiden luonteen ja saannon vertaamiselle. Yleensä avermektiinituotteet esiintyvät HPLC:ssä järjestyksessä B2, A2, B1 ja AI.
Luonnollinen RT/RT (oligo- avermektiini mysiini A) 15 B2 0,70 B2a 0,84 A2b 0,90 A2a 1,09
Blb 1,40 20 Bla 1,83
Alb 1,83
Ala 2,42
Huomaa, että Bla:ta ja Albrtä ei voi erottaa toisistaan.
' 25 Ei-luonnollinen RT/RT (oligo- -: avermektiini mysiini A) syklopentyyli B2 0,94 syklopentyyli A2 1,23 syklopentyyli B1 1,99 30 syklopentyyli AI 2,62
Retentioajat vaihtelevat 1-2 min päivästä toiseen, jolloin oligomysiini A yleensä esiintyy noin 12,5 -14 min kohdalla.
Seuraavissa esimerkeissä avermektiinit määritettiin 35 yllä esitettyä HPLC-menetelmää käyttäen, paitsi jos erikseen mainittu.
29 90 088
Seuraavissa esimerkeissä käytettyjen alustojen koostumukset on esitetty alla.
AS-7-alusta g/i 5 ohennettu tärkkelys 20
Ardamine pH*3 5 c
Pharmamedia 15
CaC03 2
Valmistetaan hydrolysoimalla tärkkelystä Bacillus 10 licheniformis alfa-amylaasilla (saatavana kaupalli sesti Nove Enzymes-yhtiöltä, Wilton, CT, kauppanimellä "Termamyl") dekstroosi-ekvivalenttiin 40 % -+ 5 %. a Yeast Products, Inc., Clifton, NJ 07012.
rj
Traders Protein, Memphis, TN 38108.
15 pH säädettiin arvoon 7,2 NaOH:lla.
AP-5-alusta g/i ohennettu tärkkelys 80
Ardamine pH 5 20 K2HP04 1
MgS04-7H20 1
NaCl 1
CaC03 7
FeS04*H20 0,01 V. 25 MnCl2-H20 0,001
ZnS02-H20 0,001 P-2000 (vaahdonesto)a 1 ml/1 a The Dow Chemical Co., Midland, Michigan 48640. pH säädetään arvoon 6,9 25-%:isella NaOHrlla.
30 Esimerkit 1-4 ; Avermektiinien tuotto Streptomvces avermitilis 1-3 (ATCC 53567) -kannasta S. avermitilis 1-3 (ATCC 53567) inokuloitiin itiöi-vältä V-8 maljalta 80 mlraan AS-7-alustaa 500 ml:n väli-35 seinällisessä pullossa. Pulloa inkuboitiin pyörivällä ra- 30 0 8 3 vistelijalla 200 kierrosta minuutissa 28 - 30 °C:ssa. 24 tunnin inkubaation jälkeen 1 ml lientä inokuloitiin 300 ml:n pulloon, jossa oli 40 ml AP-5-alustaa. Rinnakkaisfer-mentaatiot suoritettiin 28 - 30 °C:ssa, kun läsnä oli 400 5 ppm:ää 24 tunnin kuluttua inkubaation aloituksesta lisättyjä alla mainittuja lähtöyhdisteitä.
312 tunnin kuluttua 2 ml:n näytteet sekoitettiin 8 ml:aan metanoli:asetonitriili-seosta (390:35). Suodatuksen jälkeen 50 μ1:η näytteet injektoitiin Beckman Ultrasp-10 here ODS -pylvääseen (3,9 x 250 mm). Pylväs eluoitiin metanoli :asetonitriili:vesi-seoksella (89:14:7) nopeudella 0,8 ml/min ja eluaattia mitattiin UV-detektiolla aallonpituudella 240 nm. Uusien avermektiinien retentioajat on esitetty alla.
15 Avermektiinin retentioaika (minuutteja) Lähtövhdiste ^ Aj A^ 1) ±2-metyylivoihappo *11,60 *14,75 23,1 29,82 12,40 16,10 2) syklopentaani- 20 karboksyylihappo 12,32 15,86 25,28 32,96 3) sykloheksaani- karboksyylihappo 14,84 19,26 31,46 41,14 4) +2-metyylivoihappo 11,60 14,75 23,1 29,82 25 * Sekä +metyylivoihappo että -metyylivoihappo inkorporoi- tuvat avermektiineihin. Käytetyissä kromatografiaolosuh-teissa resoluutio + ja - avermektiinien välillä saavutetaan vain B2:lla ja A2:lla.
Esimerkki 5 30 Svkloheksvvliavermektiinien tuotto Streptomyces avermitilis 7881 (ATCC 53692) -kannasta Jäädytetty putki S. avermitilis 7881 (ATCC 53692) -kantaa inokuloitiin 100 ml:aan AS-7-alustaa 500 ml:n väliseinällisessä pullossa. Pulloa inkuboitiin pyörivällä 35 ravistelijalla 200 kierrosta minuutissa 28 - 30 °C:ssa. 28 3i y 0 0 88 tunnin inkubaation jälkeen 5 ml lientä inokuloitiin toiseen 100 ml AS-7-alustaa sisältävään 500 ml:n väliseinäl-liseen pulloon. Pulloa inkuboitiin jälleen pyörivällä ra-vistelijalla 200 kierrosta minuutissa 28 - 30 °C:ssa. 24 5 tunnin inkubaation jälkeen 1 ml lientä inokuloitiin 300 ml:n pulloon, jossa oli 40 ml AP-5-alustaa. Pulloja inkuboitiin 200 kierroksella minuutissa 28 - 30 °C:ssa. 24 tunnin kuluttua lisättiin 400 ppm:ää sykloheksaanikarbok-syylihappoa, 312 tunnin kuluttua otettiin 2 ml:n näytteet 10 ja ajettiin korkean erotuskyvyn omaava nestekromatogra- fia, kuten esimerkissä 1 on kuvattu. Näissä olosuhteissa ainoat fermentaatiossa detektoitavat avermektiinikomponen-tit eluoituvat ajoilla 14,84 (54,9 mg/1) ja 31,46 (32,1 mg/1) minuuttia vastaten sykloheksyyli-B2:ta ja vastaavas-15 ti -Bl:tä.
Esimerkki 6
Sek-butvvliavermektiinien tuotto Streptomyces avermitilis 7881 (ATCC 53692) -kannasta
Esimerkin 5 menetelmä toistettiin käyttäen 400 20 ppm:ää ±2-metyylivoihappoa sykloheksaanikarboksyylihapon tilalla, kaikki muut olosuhteet olivat samoja kuin esimerkissä 2. Ainoastaan sek-butyyliavermektiini B2 (11,60, 12,40 minuuttia, 63,5, 42,4 mg/1) ja sek-butyyli-avermek-tiini B1 (23,1 minuuttia, 105,5 mg/1) detektoitiin fer-25 mentaatiossa.
Claims (5)
1. Streptomyces avermitilis, ATCC 53692, jolta puuttuu haarautuneen 2-oksihapon dehydrogenaasiaktiivisuus 5 ja avermektiini B:n O-metyylitransferaasiaktiivisuus.
2. Menetelmä B-avermektiinin tuottamiseksi, jolla on kaava H1
10 CH3 22^1\^CH3 T R ϋ jo (n 15 \ ’ Ol·^ ai o·—k A I ch3 20 jossa katkoviiva asemassa 22 - 23 edustaa mahdollista kaksoissidosta; R1 on hydroksi ja on läsnä vain, jos kaksoissidosta 25 ei ole; R2 on 4'-(a-L-oleandrosyyli)-α-L-oleandrosyylioksi, jolla on kaava CH3 CHj 30 /~°\ f—0 —yj_0 CH30 CH^f)
35 R3 on vety; ja
33. O n S 3 R on α-haarautunut C3.8-alkyyli, -alkenyyli, -al-kynyyli, -alkoksialkyyli tai -alkyylitioalkyyliryhmä; * C5_8-sykloalkyylialkyyliryhmä, jossa alkyyliryhmä on a-haa- rautunut C2_5-alkyyliryhmä; C3_8-sykloalkyyli- tai C5.8-syk-5 loalkenyyliryhmä, joista kumpi tahansa voi mahdollisesti olla substituoitu metyleenillä tai yhdellä tai useammalla halogeeniatomilla; tai 3 - 6-jäseninen, happea tai rikkiä sisältävä heterosyklinen rengas, joka voi olla tyydytetty tai täysin tai osittain tyydyttymätön, tunnettu 10 siitä, että fermentoidaan aerobisesti Streptomyces aver-mitilis -kantaa, jolta puuttuu haarautuneen 2-oksihapon dehydrogenaasiaktiivisuus ja avermektiini B:n 0-metyyli-transferaasiaktiivisuus, vesipohjaisessa ravintoalustassa, joka sisältää assimiloitavaa typen, hiilen ja epäorgaanis-15 ten suolojen lähdettä sekä kaavan RCOOH mukaista happoa, jolloin R on edellä määritelty.
3. Patenttivaatimuksen 2 mukainen menetelmä, tunnettu siitä, että R on syklopentyyli, syklohek-syyli tai tienyyli.
4. Patenttivaatimuksen 2 mukainen menetelmä, tunnettu siitä, että kun R on α-haarautunut C3_a-alkyyliryhmä, se ei ole isopropyyli eikä (S)-sek-butyyli.
5. Patenttivaatimuksen 2 mukainen menetelmä, tunnettu siitä, että S. avermitilis -kanta on S. 25 avermitilis ATCC 53692. 34 '.I O 8 8
Applications Claiming Priority (2)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| US651287A | 1987-01-23 | 1987-01-23 | |
| US651287 | 1987-01-23 |
Publications (4)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| FI880281A0 FI880281A0 (fi) | 1988-01-22 |
| FI880281A FI880281A (fi) | 1988-07-24 |
| FI90088B true FI90088B (fi) | 1993-09-15 |
| FI90088C FI90088C (fi) | 1993-12-27 |
Family
ID=21721247
Family Applications (2)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| FI880280A FI90091C (fi) | 1987-01-23 | 1988-01-22 | Foerfarande foer producering av icke-naturliga demetylavermektiner |
| FI880281A FI90088C (fi) | 1987-01-23 | 1988-01-22 | Foerfarande foer framstaellning av b-avermektiner och vid foerfarandet anvaendbar odling |
Family Applications Before (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| FI880280A FI90091C (fi) | 1987-01-23 | 1988-01-22 | Foerfarande foer producering av icke-naturliga demetylavermektiner |
Country Status (30)
| Country | Link |
|---|---|
| EP (2) | EP0276103B1 (fi) |
| JP (2) | JPH0681757B2 (fi) |
| KR (2) | KR900004419B1 (fi) |
| CN (1) | CN1056883C (fi) |
| AR (1) | AR241798A1 (fi) |
| AT (2) | ATE96174T1 (fi) |
| AU (2) | AU595673B2 (fi) |
| BG (1) | BG51051A3 (fi) |
| BR (1) | BR8800271A (fi) |
| CZ (1) | CZ279782B6 (fi) |
| DD (2) | DD290214A5 (fi) |
| DE (2) | DE3884973T2 (fi) |
| DK (2) | DK28988A (fi) |
| EG (1) | EG18797A (fi) |
| ES (2) | ES2059498T3 (fi) |
| FI (2) | FI90091C (fi) |
| GR (1) | GR3007586T3 (fi) |
| HU (2) | HU201973B (fi) |
| IE (2) | IE61066B1 (fi) |
| IL (2) | IL85118A (fi) |
| IN (1) | IN167980B (fi) |
| MA (1) | MA21160A1 (fi) |
| MY (1) | MY103514A (fi) |
| NZ (2) | NZ223271A (fi) |
| PL (2) | PL156763B1 (fi) |
| PT (2) | PT86583B (fi) |
| RU (1) | RU1806198C (fi) |
| SK (1) | SK279351B6 (fi) |
| YU (1) | YU47878B (fi) |
| ZA (3) | ZA88448B (fi) |
Families Citing this family (32)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US4806527A (en) * | 1987-03-16 | 1989-02-21 | Merck & Co., Inc. | Avermectin derivatives |
| US4874749A (en) * | 1987-07-31 | 1989-10-17 | Merck & Co., Inc. | 4"-Deoxy-4-N-methylamino avermectin Bla/Blb |
| EP0313297B1 (en) * | 1987-10-23 | 1993-05-19 | Pfizer Inc. | Process for production of avermectin aglycones and cultures therefor |
| GB8807280D0 (en) * | 1988-03-26 | 1988-04-27 | Pfizer Ltd | Antiparasitic agents |
| GB8811036D0 (en) * | 1988-05-10 | 1988-06-15 | Glaxo Group Ltd | Chemical compounds |
| GB8813760D0 (en) * | 1988-06-10 | 1988-07-13 | American Cyanamid Co | Chemical process |
| GB8815967D0 (en) * | 1988-07-05 | 1988-08-10 | Pfizer Ltd | Antiparasitic agents |
| NZ231772A (en) * | 1988-12-23 | 1992-11-25 | Merck & Co Inc | Avermectin derivatives, preparation and parasiticidal compositions thereof |
| NZ231773A (en) * | 1988-12-23 | 1992-09-25 | Merck & Co Inc | Avermectin derivatives, preparation and parasiticidal pharmaceutical compositions thereof |
| US5015630A (en) * | 1989-01-19 | 1991-05-14 | Merck & Co., Inc. | 5-oxime avermectin derivatives |
| US4897383A (en) * | 1989-02-13 | 1990-01-30 | Merck & Co., Inc. | Avermectin derivatives |
| US5252474A (en) * | 1989-03-31 | 1993-10-12 | Merck & Co., Inc. | Cloning genes from Streptomyces avermitilis for avermectin biosynthesis and the methods for their use |
| US5030622A (en) * | 1989-06-02 | 1991-07-09 | Merck & Co., Inc. | Avermectin derivatives |
| US5057499A (en) * | 1989-06-02 | 1991-10-15 | Merck & Co. Inc. | Avermectin derivatives |
| US5023241A (en) * | 1989-07-31 | 1991-06-11 | Merck & Co., Inc. | Avermectin derivatives |
| US5830875A (en) * | 1989-10-30 | 1998-11-03 | Merck & Co., Inc. | 24-and 25-substituted avermectin and milbemycin derivatives |
| JP2888586B2 (ja) * | 1990-03-05 | 1999-05-10 | 社団法人北里研究所 | エバーメクチンの特定成分を選択生産するための微生物およびその選択的製造法 |
| US5169839A (en) * | 1990-05-11 | 1992-12-08 | Merck & Co., Inc. | Derivatives of 3'- and 3"-o-desmethyl avermectin compounds, compositions and methods of treating melmintic and parasitic infections |
| US5208222A (en) * | 1991-03-28 | 1993-05-04 | Merck & Co., Inc. | 4"-and 4'-alkylthio avermectin derivatives |
| US5240915A (en) * | 1991-10-15 | 1993-08-31 | Merck & Co., Inc. | Avermectin derivatives |
| US6103504A (en) * | 1992-03-25 | 2000-08-15 | Pfizer Inc. | Process for production of avermectins and cultures therefor |
| US5292647A (en) * | 1992-11-30 | 1994-03-08 | Eli Lilly And Company | Strain of streptomyces for producing avermectins and processes therewith |
| CN1038330C (zh) * | 1993-07-05 | 1998-05-13 | 塞泰克斯公司 | 阿弗麦菌素的生产与分离 |
| EP0711349B1 (en) * | 1993-07-30 | 2003-09-03 | Pfizer Inc. | Genes encoding branched-chain alpha-ketoacid dehydrogenase complex from streptomyces avermitilis |
| JP2761296B2 (ja) * | 1993-10-05 | 1998-06-04 | フアイザー・インコーポレイテツド | ドラメクチンの製造方法および駆虫性中間体 |
| FI942725A (fi) * | 1993-12-16 | 1995-06-17 | Pfizer | Haaraketjuista alfaketohappodenydrogenaasikompleksia koodaavia geenejä Streptomyces avermitiliksesta |
| US5701591A (en) * | 1995-04-07 | 1997-12-23 | Telecommunications Equipment Corporation | Multi-function interactive communications system with circularly/elliptically polarized signal transmission and reception |
| CN1297485A (zh) * | 1998-02-13 | 2001-05-30 | 辉瑞产品公司 | 介导除虫菌素b2:b1比例的除虫链霉菌基因 |
| IL147563A0 (en) * | 1999-08-12 | 2002-08-14 | Pfizer Prod Inc | Streptomyces avermitilis gene directing the ratio of b2:b1 avermectins |
| KR100415395B1 (ko) * | 2000-08-02 | 2004-01-16 | 한국생명공학연구원 | 에버멕틴 ｂｃ-5-ｏ-메칠트랜스퍼라제의 유전자가 파괴된 스트렙토마이세스 에버미티리스 변이균주 및 그의 제조 방법 |
| ES2373629T3 (es) | 2002-02-12 | 2012-02-07 | Pfizer Products Inc. | Gen de streptomyces avemitilis que dirige la proporción de avermectinas b2:b1. |
| WO2023203038A1 (en) | 2022-04-19 | 2023-10-26 | Syngenta Crop Protection Ag | Insect, acarina and nematode pest control |
Family Cites Families (5)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| SE434277B (sv) | 1976-04-19 | 1984-07-16 | Merck & Co Inc | Sett att framstella nya antihelmintiskt verkande foreningar genom odling av streptomyces avermitilis |
| NZ188459A (en) * | 1977-10-03 | 1982-09-07 | Merck & Co Inc | Derivatives of c-076 compounds and pesticidal compositions |
| US4429042A (en) | 1978-09-08 | 1984-01-31 | Merck & Co., Inc. | Strain of Streptomyces for producing antiparasitic compounds |
| ES8800986A1 (es) * | 1985-07-27 | 1987-12-01 | Pfizer | Un procedimiento para la produccion de un nuevo derivado de avermectina |
| GB8606120D0 (en) * | 1986-03-12 | 1986-04-16 | Glaxo Group Ltd | Process |
-
1987
- 1987-12-10 IN IN1059/DEL/87A patent/IN167980B/en unknown
-
1988
- 1988-01-18 BG BG082657A patent/BG51051A3/xx unknown
- 1988-01-18 EP EP88300354A patent/EP0276103B1/en not_active Expired - Lifetime
- 1988-01-18 ES ES88300354T patent/ES2059498T3/es not_active Expired - Lifetime
- 1988-01-18 AT AT88300354T patent/ATE96174T1/de not_active IP Right Cessation
- 1988-01-18 IL IL85118A patent/IL85118A/xx not_active IP Right Cessation
- 1988-01-18 DE DE88300354T patent/DE3884973T2/de not_active Expired - Lifetime
- 1988-01-19 MA MA21397A patent/MA21160A1/fr unknown
- 1988-01-19 MY MYPI88000037A patent/MY103514A/en unknown
- 1988-01-20 ES ES88300426T patent/ES2053719T3/es not_active Expired - Lifetime
- 1988-01-20 AT AT88300426T patent/ATE87927T1/de not_active IP Right Cessation
- 1988-01-20 EP EP88300426A patent/EP0276131B1/en not_active Expired - Lifetime
- 1988-01-20 DE DE8888300426T patent/DE3879975T2/de not_active Expired - Lifetime
- 1988-01-21 SK SK407-88A patent/SK279351B6/sk unknown
- 1988-01-21 EG EG3588A patent/EG18797A/xx active
- 1988-01-21 PT PT86583A patent/PT86583B/pt unknown
- 1988-01-21 PT PT86584A patent/PT86584B/pt unknown
- 1988-01-21 PL PL1988270238A patent/PL156763B1/pl unknown
- 1988-01-21 CZ CS88407A patent/CZ279782B6/cs unknown
- 1988-01-21 PL PL1988270239A patent/PL156764B1/pl unknown
- 1988-01-21 IL IL85165A patent/IL85165A/xx not_active IP Right Cessation
- 1988-01-22 YU YU11988A patent/YU47878B/sh unknown
- 1988-01-22 ZA ZA88448A patent/ZA88448B/xx unknown
- 1988-01-22 CN CN88100649A patent/CN1056883C/zh not_active Expired - Lifetime
- 1988-01-22 IE IE16188A patent/IE61066B1/en not_active IP Right Cessation
- 1988-01-22 HU HU88260D patent/HU201973B/hu unknown
- 1988-01-22 FI FI880280A patent/FI90091C/fi not_active IP Right Cessation
- 1988-01-22 DD DD88312393A patent/DD290214A5/de unknown
- 1988-01-22 JP JP63012462A patent/JPH0681757B2/ja not_active Expired - Lifetime
- 1988-01-22 DK DK028988A patent/DK28988A/da not_active Application Discontinuation
- 1988-01-22 AR AR88309888A patent/AR241798A1/es active
- 1988-01-22 HU HU88261A patent/HU200487B/hu unknown
- 1988-01-22 ZA ZA88449A patent/ZA88449B/xx unknown
- 1988-01-22 ZA ZA88447A patent/ZA88447B/xx unknown
- 1988-01-22 DK DK198800290A patent/DK175720B1/da not_active IP Right Cessation
- 1988-01-22 IE IE16088A patent/IE61483B1/en not_active IP Right Cessation
- 1988-01-22 NZ NZ223271A patent/NZ223271A/en unknown
- 1988-01-22 DD DD88312394A patent/DD267512A5/de unknown
- 1988-01-22 NZ NZ223272A patent/NZ223272A/xx unknown
- 1988-01-22 FI FI880281A patent/FI90088C/fi not_active IP Right Cessation
- 1988-01-22 RU SU884355079A patent/RU1806198C/ru active
- 1988-01-22 AU AU10696/88A patent/AU595673B2/en not_active Expired
- 1988-01-22 KR KR1019880000470A patent/KR900004419B1/ko not_active IP Right Cessation
- 1988-01-23 KR KR1019880000506A patent/KR910002225B1/ko not_active IP Right Cessation
- 1988-01-23 JP JP63011881A patent/JPH0817693B2/ja not_active Expired - Lifetime
- 1988-01-25 BR BRPI8800271-3A patent/BR8800271A/pt not_active IP Right Cessation
-
1991
- 1991-02-15 AU AU71110/91A patent/AU631298B2/en not_active Expired
-
1993
- 1993-04-08 GR GR930400638T patent/GR3007586T3/el unknown
Also Published As
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| FI90088B (fi) | Foerfarande foer framstaellning av b-avermektiner och vid foerfarandet anvaendbar odling | |
| US5077278A (en) | Non-natural demethylavermectins compositions and method of use | |
| FI90087C (fi) | Foerfarande foer framstaellning av avermektiner samt vid detta foerfarande anvaendbara streptomyces avermitilis -stammar | |
| US5565359A (en) | Cultures for production of B avermectins | |
| US5238848A (en) | Cultures for production of avermectins | |
| EP0313297B1 (en) | Process for production of avermectin aglycones and cultures therefor | |
| US5240850A (en) | Cultures for production of avermectin aglycones | |
| US5387509A (en) | Ethylated avermectins | |
| US5525506A (en) | Process for production of avermectins and cultures therefor | |
| US6103504A (en) | Process for production of avermectins and cultures therefor | |
| AP64A (en) | "Process for production of B avermectins and cultures therefor". |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| FG | Patent granted |
Owner name: PFIZER INC. |
|
| BB | Publication of examined application | ||
| FG | Patent granted |
Owner name: PFIZER INC. |
|
| MA | Patent expired |