FI57781B - Foerfarande foer framstaellning av c-076-foereningar med antihelmintisk verkan - Google Patents
Foerfarande foer framstaellning av c-076-foereningar med antihelmintisk verkan Download PDFInfo
- Publication number
- FI57781B FI57781B FI771124A FI771124A FI57781B FI 57781 B FI57781 B FI 57781B FI 771124 A FI771124 A FI 771124A FI 771124 A FI771124 A FI 771124A FI 57781 B FI57781 B FI 57781B
- Authority
- FI
- Finland
- Prior art keywords
- compounds
- fractions
- medium
- methylene chloride
- liters
- Prior art date
Links
- 230000000384 rearing effect Effects 0.000 title 1
- 150000001875 compounds Chemical class 0.000 claims description 101
- 238000000855 fermentation Methods 0.000 claims description 26
- 230000004151 fermentation Effects 0.000 claims description 26
- 241001468227 Streptomyces avermitilis Species 0.000 claims description 24
- 238000000034 method Methods 0.000 claims description 12
- 239000003960 organic solvent Substances 0.000 claims description 12
- OKTJSMMVPCPJKN-UHFFFAOYSA-N Carbon Chemical compound [C] OKTJSMMVPCPJKN-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 11
- 235000015097 nutrients Nutrition 0.000 claims description 11
- IJGRMHOSHXDMSA-UHFFFAOYSA-N Atomic nitrogen Chemical compound N#N IJGRMHOSHXDMSA-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 10
- 125000000484 butyl group Chemical group [H]C([*])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])[H] 0.000 claims description 10
- 229910052799 carbon Inorganic materials 0.000 claims description 10
- 125000001436 propyl group Chemical group [H]C([*])([H])C([H])([H])C([H])([H])[H] 0.000 claims description 10
- 238000000605 extraction Methods 0.000 claims description 9
- 230000000507 anthelmentic effect Effects 0.000 claims description 8
- 150000003839 salts Chemical class 0.000 claims description 7
- 238000001914 filtration Methods 0.000 claims description 6
- 125000002887 hydroxy group Chemical group [H]O* 0.000 claims description 6
- 229910052757 nitrogen Inorganic materials 0.000 claims description 5
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 claims description 5
- 238000001704 evaporation Methods 0.000 claims description 4
- 230000008020 evaporation Effects 0.000 claims description 4
- 125000000956 methoxy group Chemical group [H]C([H])([H])O* 0.000 claims description 3
- 239000005660 Abamectin Substances 0.000 claims 1
- YMWUJEATGCHHMB-UHFFFAOYSA-N Dichloromethane Chemical compound ClCCl YMWUJEATGCHHMB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 120
- OKKJLVBELUTLKV-UHFFFAOYSA-N Methanol Chemical compound OC OKKJLVBELUTLKV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 78
- 239000002609 medium Substances 0.000 description 58
- HEDRZPFGACZZDS-UHFFFAOYSA-N Chloroform Chemical compound ClC(Cl)Cl HEDRZPFGACZZDS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 46
- VLKZOEOYAKHREP-UHFFFAOYSA-N n-Hexane Chemical compound CCCCCC VLKZOEOYAKHREP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 39
- KFZMGEQAYNKOFK-UHFFFAOYSA-N Isopropanol Chemical compound CC(C)O KFZMGEQAYNKOFK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 38
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Chemical compound O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 33
- RTZKZFJDLAIYFH-UHFFFAOYSA-N Diethyl ether Chemical compound CCOCC RTZKZFJDLAIYFH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 32
- CSCPPACGZOOCGX-UHFFFAOYSA-N Acetone Chemical compound CC(C)=O CSCPPACGZOOCGX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 30
- 239000000203 mixture Substances 0.000 description 30
- LYCAIKOWRPUZTN-UHFFFAOYSA-N Ethylene glycol Chemical compound OCCO LYCAIKOWRPUZTN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 27
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 23
- VYPSYNLAJGMNEJ-UHFFFAOYSA-N Silicium dioxide Chemical compound O=[Si]=O VYPSYNLAJGMNEJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 22
- 230000009105 vegetative growth Effects 0.000 description 20
- 235000010633 broth Nutrition 0.000 description 19
- 239000000049 pigment Substances 0.000 description 19
- 239000002904 solvent Substances 0.000 description 19
- 239000000741 silica gel Substances 0.000 description 18
- 229910002027 silica gel Inorganic materials 0.000 description 18
- 239000000284 extract Substances 0.000 description 17
- UHOVQNZJYSORNB-UHFFFAOYSA-N Benzene Chemical compound C1=CC=CC=C1 UHOVQNZJYSORNB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 15
- 239000012153 distilled water Substances 0.000 description 15
- 229920001817 Agar Polymers 0.000 description 13
- 240000004808 Saccharomyces cerevisiae Species 0.000 description 13
- 239000008272 agar Substances 0.000 description 13
- 239000000523 sample Substances 0.000 description 11
- 239000007787 solid Substances 0.000 description 10
- 238000003756 stirring Methods 0.000 description 10
- LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N Ethanol Chemical compound CCO LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 9
- YXFVVABEGXRONW-UHFFFAOYSA-N Toluene Chemical compound CC1=CC=CC=C1 YXFVVABEGXRONW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 9
- WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N Glucose Natural products OC[C@H]1OC(O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N 0.000 description 8
- 238000010521 absorption reaction Methods 0.000 description 8
- 239000008121 dextrose Substances 0.000 description 8
- 238000010828 elution Methods 0.000 description 8
- 239000002054 inoculum Substances 0.000 description 8
- 239000000463 material Substances 0.000 description 8
- 244000005700 microbiome Species 0.000 description 8
- 239000000126 substance Substances 0.000 description 8
- 238000004809 thin layer chromatography Methods 0.000 description 8
- 241000243780 Heligmosomoides polygyrus Species 0.000 description 7
- 229920002472 Starch Polymers 0.000 description 7
- 239000012065 filter cake Substances 0.000 description 7
- 208000015181 infectious disease Diseases 0.000 description 7
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M Sodium chloride Chemical compound [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 6
- 241000187747 Streptomyces Species 0.000 description 6
- 239000012141 concentrate Substances 0.000 description 6
- 239000000706 filtrate Substances 0.000 description 6
- 238000004128 high performance liquid chromatography Methods 0.000 description 6
- 235000019698 starch Nutrition 0.000 description 6
- 239000008107 starch Substances 0.000 description 6
- VEXZGXHMUGYJMC-UHFFFAOYSA-N Hydrochloric acid Chemical compound Cl VEXZGXHMUGYJMC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 5
- GUBGYTABKSRVRQ-QKKXKWKRSA-N Lactose Natural products OC[C@H]1O[C@@H](O[C@H]2[C@H](O)[C@@H](O)C(O)O[C@@H]2CO)[C@H](O)[C@@H](O)[C@H]1O GUBGYTABKSRVRQ-QKKXKWKRSA-N 0.000 description 5
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 description 5
- 241000699666 Mus <mouse, genus> Species 0.000 description 5
- 240000008042 Zea mays Species 0.000 description 5
- 235000005824 Zea mays ssp. parviglumis Nutrition 0.000 description 5
- 235000002017 Zea mays subsp mays Nutrition 0.000 description 5
- 235000005822 corn Nutrition 0.000 description 5
- 238000002329 infrared spectrum Methods 0.000 description 5
- 239000008101 lactose Substances 0.000 description 5
- 235000013372 meat Nutrition 0.000 description 5
- XELZGAJCZANUQH-UHFFFAOYSA-N methyl 1-acetylthieno[3,2-c]pyrazole-5-carboxylate Chemical compound CC(=O)N1N=CC2=C1C=C(C(=O)OC)S2 XELZGAJCZANUQH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 5
- 238000000655 nuclear magnetic resonance spectrum Methods 0.000 description 5
- 239000003921 oil Substances 0.000 description 5
- 235000019198 oils Nutrition 0.000 description 5
- 244000045947 parasite Species 0.000 description 5
- 230000003595 spectral effect Effects 0.000 description 5
- 238000001228 spectrum Methods 0.000 description 5
- 229910001220 stainless steel Inorganic materials 0.000 description 5
- 239000010935 stainless steel Substances 0.000 description 5
- 235000015113 tomato pastes and purées Nutrition 0.000 description 5
- 241000238876 Acari Species 0.000 description 4
- SRBFZHDQGSBBOR-IOVATXLUSA-N D-xylopyranose Chemical compound O[C@@H]1COC(O)[C@H](O)[C@H]1O SRBFZHDQGSBBOR-IOVATXLUSA-N 0.000 description 4
- 208000006968 Helminthiasis Diseases 0.000 description 4
- IMNFDUFMRHMDMM-UHFFFAOYSA-N N-Heptane Chemical compound CCCCCCC IMNFDUFMRHMDMM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 229930006000 Sucrose Natural products 0.000 description 4
- CZMRCDWAGMRECN-UGDNZRGBSA-N Sucrose Chemical compound O[C@H]1[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@@]1(CO)O[C@@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O1 CZMRCDWAGMRECN-UGDNZRGBSA-N 0.000 description 4
- 241000607479 Yersinia pestis Species 0.000 description 4
- 235000013339 cereals Nutrition 0.000 description 4
- 239000002026 chloroform extract Substances 0.000 description 4
- 238000004587 chromatography analysis Methods 0.000 description 4
- 239000013078 crystal Substances 0.000 description 4
- 239000003480 eluent Substances 0.000 description 4
- 230000012010 growth Effects 0.000 description 4
- -1 inosifol Chemical compound 0.000 description 4
- 208000014837 parasitic helminthiasis infectious disease Diseases 0.000 description 4
- 229920000151 polyglycol Polymers 0.000 description 4
- 239000010695 polyglycol Substances 0.000 description 4
- 238000000926 separation method Methods 0.000 description 4
- 241000894007 species Species 0.000 description 4
- 230000001954 sterilising effect Effects 0.000 description 4
- 238000004659 sterilization and disinfection Methods 0.000 description 4
- 239000005720 sucrose Substances 0.000 description 4
- 238000005406 washing Methods 0.000 description 4
- OWEGMIWEEQEYGQ-UHFFFAOYSA-N 100676-05-9 Natural products OC1C(O)C(O)C(CO)OC1OCC1C(O)C(O)C(O)C(OC2C(OC(O)C(O)C2O)CO)O1 OWEGMIWEEQEYGQ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- ZWEHNKRNPOVVGH-UHFFFAOYSA-N 2-Butanone Chemical compound CCC(C)=O ZWEHNKRNPOVVGH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 241000283690 Bos taurus Species 0.000 description 3
- 241000283086 Equidae Species 0.000 description 3
- XEKOWRVHYACXOJ-UHFFFAOYSA-N Ethyl acetate Chemical compound CCOC(C)=O XEKOWRVHYACXOJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 108010010803 Gelatin Proteins 0.000 description 3
- PEDCQBHIVMGVHV-UHFFFAOYSA-N Glycerine Chemical compound OCC(O)CO PEDCQBHIVMGVHV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 244000285963 Kluyveromyces fragilis Species 0.000 description 3
- 235000014663 Kluyveromyces fragilis Nutrition 0.000 description 3
- GUBGYTABKSRVRQ-PICCSMPSSA-N Maltose Natural products O[C@@H]1[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@@H]1O[C@@H]1[C@@H](CO)OC(O)[C@H](O)[C@H]1O GUBGYTABKSRVRQ-PICCSMPSSA-N 0.000 description 3
- 229920000881 Modified starch Polymers 0.000 description 3
- 239000004368 Modified starch Substances 0.000 description 3
- 241000699670 Mus sp. Species 0.000 description 3
- 241000244206 Nematoda Species 0.000 description 3
- 208000030852 Parasitic disease Diseases 0.000 description 3
- 241000813917 Streptomyces naganishii Species 0.000 description 3
- PYMYPHUHKUWMLA-UHFFFAOYSA-N arabinose Natural products OCC(O)C(O)C(O)C=O PYMYPHUHKUWMLA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- SRBFZHDQGSBBOR-UHFFFAOYSA-N beta-D-Pyranose-Lyxose Natural products OC1COC(O)C(O)C1O SRBFZHDQGSBBOR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 238000011161 development Methods 0.000 description 3
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 3
- 235000013312 flour Nutrition 0.000 description 3
- 239000008273 gelatin Substances 0.000 description 3
- 229920000159 gelatin Polymers 0.000 description 3
- 235000019322 gelatine Nutrition 0.000 description 3
- 235000011852 gelatine desserts Nutrition 0.000 description 3
- WRUGWIBCXHJTDG-UHFFFAOYSA-L magnesium sulfate heptahydrate Chemical compound O.O.O.O.O.O.O.[Mg+2].[O-]S([O-])(=O)=O WRUGWIBCXHJTDG-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 3
- 235000013336 milk Nutrition 0.000 description 3
- 239000008267 milk Substances 0.000 description 3
- 210000004080 milk Anatomy 0.000 description 3
- 235000019426 modified starch Nutrition 0.000 description 3
- 229910000402 monopotassium phosphate Inorganic materials 0.000 description 3
- 210000000056 organ Anatomy 0.000 description 3
- 238000011084 recovery Methods 0.000 description 3
- 239000011780 sodium chloride Substances 0.000 description 3
- CZDYPVPMEAXLPK-UHFFFAOYSA-N tetramethylsilane Chemical compound C[Si](C)(C)C CZDYPVPMEAXLPK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 210000001519 tissue Anatomy 0.000 description 3
- 239000011573 trace mineral Substances 0.000 description 3
- 235000013619 trace mineral Nutrition 0.000 description 3
- 238000012546 transfer Methods 0.000 description 3
- GUBGYTABKSRVRQ-XLOQQCSPSA-N Alpha-Lactose Chemical compound O[C@@H]1[C@@H](O)[C@@H](O)[C@@H](CO)O[C@H]1O[C@@H]1[C@@H](CO)O[C@H](O)[C@H](O)[C@H]1O GUBGYTABKSRVRQ-XLOQQCSPSA-N 0.000 description 2
- 241001147657 Ancylostoma Species 0.000 description 2
- 241000244186 Ascaris Species 0.000 description 2
- 241000253350 Capillaria Species 0.000 description 2
- FBPFZTCFMRRESA-KVTDHHQDSA-N D-Mannitol Chemical compound OC[C@@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@H](O)CO FBPFZTCFMRRESA-KVTDHHQDSA-N 0.000 description 2
- WQZGKKKJIJFFOK-QTVWNMPRSA-N D-mannopyranose Chemical compound OC[C@H]1OC(O)[C@@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-QTVWNMPRSA-N 0.000 description 2
- 229930091371 Fructose Natural products 0.000 description 2
- 239000005715 Fructose Substances 0.000 description 2
- RFSUNEUAIZKAJO-ARQDHWQXSA-N Fructose Chemical compound OC[C@H]1O[C@](O)(CO)[C@@H](O)[C@@H]1O RFSUNEUAIZKAJO-ARQDHWQXSA-N 0.000 description 2
- 241001660203 Gasterophilus Species 0.000 description 2
- 241000238631 Hexapoda Species 0.000 description 2
- 241000282412 Homo Species 0.000 description 2
- XEEYBQQBJWHFJM-UHFFFAOYSA-N Iron Chemical compound [Fe] XEEYBQQBJWHFJM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 239000007836 KH2PO4 Substances 0.000 description 2
- 229930195725 Mannitol Natural products 0.000 description 2
- XUMBMVFBXHLACL-UHFFFAOYSA-N Melanin Chemical compound O=C1C(=O)C(C2=CNC3=C(C(C(=O)C4=C32)=O)C)=C2C4=CNC2=C1C XUMBMVFBXHLACL-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 238000005481 NMR spectroscopy Methods 0.000 description 2
- 241000510960 Oesophagostomum Species 0.000 description 2
- 241000243795 Ostertagia Species 0.000 description 2
- 108010058846 Ovalbumin Proteins 0.000 description 2
- 241001494479 Pecora Species 0.000 description 2
- 239000001888 Peptone Substances 0.000 description 2
- 108010080698 Peptones Proteins 0.000 description 2
- 108010009736 Protein Hydrolysates Proteins 0.000 description 2
- MUPFEKGTMRGPLJ-RMMQSMQOSA-N Raffinose Natural products O(C[C@H]1[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H](O[C@@]2(CO)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H](CO)O2)O1)[C@@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H](O)[C@@H](CO)O1 MUPFEKGTMRGPLJ-RMMQSMQOSA-N 0.000 description 2
- 229920005654 Sephadex Polymers 0.000 description 2
- 235000019764 Soybean Meal Nutrition 0.000 description 2
- 241000315804 Streptomyces avermitilis MA-4680 = NBRC 14893 Species 0.000 description 2
- 241000187393 Streptomyces griseosporeus Species 0.000 description 2
- 241000970916 Streptomyces luteogriseus Species 0.000 description 2
- 241000187134 Streptomyces olivochromogenes Species 0.000 description 2
- 241000243774 Trichinella Species 0.000 description 2
- HEDRZPFGACZZDS-MICDWDOJSA-N Trichloro(2H)methane Chemical compound [2H]C(Cl)(Cl)Cl HEDRZPFGACZZDS-MICDWDOJSA-N 0.000 description 2
- MUPFEKGTMRGPLJ-UHFFFAOYSA-N UNPD196149 Natural products OC1C(O)C(CO)OC1(CO)OC1C(O)C(O)C(O)C(COC2C(C(O)C(O)C(CO)O2)O)O1 MUPFEKGTMRGPLJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- PNEYBMLMFCGWSK-UHFFFAOYSA-N aluminium oxide Inorganic materials [O-2].[O-2].[O-2].[Al+3].[Al+3] PNEYBMLMFCGWSK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 239000003242 anti bacterial agent Substances 0.000 description 2
- WQZGKKKJIJFFOK-VFUOTHLCSA-N beta-D-glucose Chemical compound OC[C@H]1O[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-VFUOTHLCSA-N 0.000 description 2
- GUBGYTABKSRVRQ-QUYVBRFLSA-N beta-maltose Chemical compound OC[C@H]1O[C@H](O[C@H]2[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)O[C@@H]2CO)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O GUBGYTABKSRVRQ-QUYVBRFLSA-N 0.000 description 2
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 2
- 150000001720 carbohydrates Chemical class 0.000 description 2
- 235000014633 carbohydrates Nutrition 0.000 description 2
- 239000005018 casein Substances 0.000 description 2
- BECPQYXYKAMYBN-UHFFFAOYSA-N casein, tech. Chemical compound NCCCCC(C(O)=O)N=C(O)C(CC(O)=O)N=C(O)C(CCC(O)=N)N=C(O)C(CC(C)C)N=C(O)C(CCC(O)=O)N=C(O)C(CC(O)=O)N=C(O)C(CCC(O)=O)N=C(O)C(C(C)O)N=C(O)C(CCC(O)=N)N=C(O)C(CCC(O)=N)N=C(O)C(CCC(O)=N)N=C(O)C(CCC(O)=O)N=C(O)C(CCC(O)=O)N=C(O)C(COP(O)(O)=O)N=C(O)C(CCC(O)=N)N=C(O)C(N)CC1=CC=CC=C1 BECPQYXYKAMYBN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 235000021240 caseins Nutrition 0.000 description 2
- 238000000354 decomposition reaction Methods 0.000 description 2
- BNIILDVGGAEEIG-UHFFFAOYSA-L disodium hydrogen phosphate Chemical compound [Na+].[Na+].OP([O-])([O-])=O BNIILDVGGAEEIG-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 2
- 229910000397 disodium phosphate Inorganic materials 0.000 description 2
- 235000019800 disodium phosphate Nutrition 0.000 description 2
- 238000004821 distillation Methods 0.000 description 2
- 235000013601 eggs Nutrition 0.000 description 2
- 235000013305 food Nutrition 0.000 description 2
- 210000001035 gastrointestinal tract Anatomy 0.000 description 2
- 239000008103 glucose Substances 0.000 description 2
- 230000007062 hydrolysis Effects 0.000 description 2
- 238000006460 hydrolysis reaction Methods 0.000 description 2
- 238000002347 injection Methods 0.000 description 2
- 239000007924 injection Substances 0.000 description 2
- 239000000594 mannitol Substances 0.000 description 2
- 235000010355 mannitol Nutrition 0.000 description 2
- 238000001819 mass spectrum Methods 0.000 description 2
- 229910052751 metal Inorganic materials 0.000 description 2
- 239000002184 metal Substances 0.000 description 2
- 239000000401 methanolic extract Substances 0.000 description 2
- 125000002496 methyl group Chemical group [H]C([H])([H])* 0.000 description 2
- 235000019796 monopotassium phosphate Nutrition 0.000 description 2
- 235000016709 nutrition Nutrition 0.000 description 2
- 235000019319 peptone Nutrition 0.000 description 2
- GNSKLFRGEWLPPA-UHFFFAOYSA-M potassium dihydrogen phosphate Chemical compound [K+].OP(O)([O-])=O GNSKLFRGEWLPPA-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 2
- 239000000047 product Substances 0.000 description 2
- 238000000746 purification Methods 0.000 description 2
- MUPFEKGTMRGPLJ-ZQSKZDJDSA-N raffinose Chemical compound O[C@H]1[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@@]1(CO)O[C@@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO[C@@H]2[C@@H]([C@@H](O)[C@@H](O)[C@@H](CO)O2)O)O1 MUPFEKGTMRGPLJ-ZQSKZDJDSA-N 0.000 description 2
- 239000011347 resin Substances 0.000 description 2
- 229920005989 resin Polymers 0.000 description 2
- 235000012239 silicon dioxide Nutrition 0.000 description 2
- 239000011734 sodium Substances 0.000 description 2
- 238000000638 solvent extraction Methods 0.000 description 2
- 239000011877 solvent mixture Substances 0.000 description 2
- 239000004455 soybean meal Substances 0.000 description 2
- VZGDMQKNWNREIO-UHFFFAOYSA-N tetrachloromethane Chemical compound ClC(Cl)(Cl)Cl VZGDMQKNWNREIO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 238000005303 weighing Methods 0.000 description 2
- 239000002023 wood Substances 0.000 description 2
- 239000012138 yeast extract Substances 0.000 description 2
- UQZSVIGPZAULMV-DKWTVANSSA-N (2s)-2,4-diamino-4-oxobutanoic acid;propane-1,2,3-triol Chemical compound OCC(O)CO.OC(=O)[C@@H](N)CC(N)=O UQZSVIGPZAULMV-DKWTVANSSA-N 0.000 description 1
- 241000208140 Acer Species 0.000 description 1
- 241000254032 Acrididae Species 0.000 description 1
- TWCMVXMQHSVIOJ-UHFFFAOYSA-N Aglycone of yadanzioside D Natural products COC(=O)C12OCC34C(CC5C(=CC(O)C(O)C5(C)C3C(O)C1O)C)OC(=O)C(OC(=O)C)C24 TWCMVXMQHSVIOJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- QGZKDVFQNNGYKY-UHFFFAOYSA-O Ammonium Chemical compound [NH4+] QGZKDVFQNNGYKY-UHFFFAOYSA-O 0.000 description 1
- 241000238421 Arthropoda Species 0.000 description 1
- 241000204727 Ascaridia Species 0.000 description 1
- PLMKQQMDOMTZGG-UHFFFAOYSA-N Astrantiagenin E-methylester Natural products CC12CCC(O)C(C)(CO)C1CCC1(C)C2CC=C2C3CC(C)(C)CCC3(C(=O)OC)CCC21C PLMKQQMDOMTZGG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 241000131286 Attagenus Species 0.000 description 1
- 241000131281 Attagenus pellio Species 0.000 description 1
- 241000271566 Aves Species 0.000 description 1
- 241000237519 Bivalvia Species 0.000 description 1
- 241000238658 Blattella Species 0.000 description 1
- 241001674044 Blattodea Species 0.000 description 1
- 241000244036 Brugia Species 0.000 description 1
- 241000931178 Bunostomum Species 0.000 description 1
- 101100283604 Caenorhabditis elegans pigk-1 gene Proteins 0.000 description 1
- OYPRJOBELJOOCE-UHFFFAOYSA-N Calcium Chemical compound [Ca] OYPRJOBELJOOCE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 241000282465 Canis Species 0.000 description 1
- 241000282472 Canis lupus familiaris Species 0.000 description 1
- 241000283707 Capra Species 0.000 description 1
- BVKZGUZCCUSVTD-UHFFFAOYSA-L Carbonate Chemical compound [O-]C([O-])=O BVKZGUZCCUSVTD-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- VEXZGXHMUGYJMC-UHFFFAOYSA-M Chloride anion Chemical compound [Cl-] VEXZGXHMUGYJMC-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 241001126268 Cooperia Species 0.000 description 1
- 229910021591 Copper(I) chloride Inorganic materials 0.000 description 1
- 229920002261 Corn starch Polymers 0.000 description 1
- 229920000742 Cotton Polymers 0.000 description 1
- 241000692095 Cuterebra Species 0.000 description 1
- SHZGCJCMOBCMKK-UHFFFAOYSA-N D-mannomethylose Natural products CC1OC(O)C(O)C(O)C1O SHZGCJCMOBCMKK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229920002307 Dextran Polymers 0.000 description 1
- 241001147667 Dictyocaulus Species 0.000 description 1
- 241000255925 Diptera Species 0.000 description 1
- 241000196324 Embryophyta Species 0.000 description 1
- 241000498256 Enterobius Species 0.000 description 1
- 241000282326 Felis catus Species 0.000 description 1
- 235000010469 Glycine max Nutrition 0.000 description 1
- 206010061201 Helminthic infection Diseases 0.000 description 1
- SQUHHTBVTRBESD-UHFFFAOYSA-N Hexa-Ac-myo-Inositol Natural products CC(=O)OC1C(OC(C)=O)C(OC(C)=O)C(OC(C)=O)C(OC(C)=O)C1OC(C)=O SQUHHTBVTRBESD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 241000257176 Hypoderma <fly> Species 0.000 description 1
- DGAQECJNVWCQMB-PUAWFVPOSA-M Ilexoside XXIX Chemical compound C[C@@H]1CC[C@@]2(CC[C@@]3(C(=CC[C@H]4[C@]3(CC[C@@H]5[C@@]4(CC[C@@H](C5(C)C)OS(=O)(=O)[O-])C)C)[C@@H]2[C@]1(C)O)C)C(=O)O[C@H]6[C@@H]([C@H]([C@@H]([C@H](O6)CO)O)O)O.[Na+] DGAQECJNVWCQMB-PUAWFVPOSA-M 0.000 description 1
- SHZGCJCMOBCMKK-JFNONXLTSA-N L-rhamnopyranose Chemical compound C[C@@H]1OC(O)[C@H](O)[C@H](O)[C@H]1O SHZGCJCMOBCMKK-JFNONXLTSA-N 0.000 description 1
- PNNNRSAQSRJVSB-UHFFFAOYSA-N L-rhamnose Natural products CC(O)C(O)C(O)C(O)C=O PNNNRSAQSRJVSB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 241000257162 Lucilia <blowfly> Species 0.000 description 1
- FYYHWMGAXLPEAU-UHFFFAOYSA-N Magnesium Chemical compound [Mg] FYYHWMGAXLPEAU-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 208000002720 Malnutrition Diseases 0.000 description 1
- 241000544912 Melanoides Species 0.000 description 1
- 241001143352 Meloidogyne Species 0.000 description 1
- NTIZESTWPVYFNL-UHFFFAOYSA-N Methyl isobutyl ketone Chemical compound CC(C)CC(C)=O NTIZESTWPVYFNL-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- UIHCLUNTQKBZGK-UHFFFAOYSA-N Methyl isobutyl ketone Natural products CCC(C)C(C)=O UIHCLUNTQKBZGK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 241000257226 Muscidae Species 0.000 description 1
- 229910002651 NO3 Inorganic materials 0.000 description 1
- 241001137882 Nematodirus Species 0.000 description 1
- NHNBFGGVMKEFGY-UHFFFAOYSA-N Nitrate Chemical compound [O-][N+]([O-])=O NHNBFGGVMKEFGY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 241001670273 Ooia Species 0.000 description 1
- 241000238814 Orthoptera Species 0.000 description 1
- 241000904715 Oxyuris Species 0.000 description 1
- 229910019142 PO4 Inorganic materials 0.000 description 1
- 241000244187 Parascaris Species 0.000 description 1
- 241000364057 Peoria Species 0.000 description 1
- ZLMJMSJWJFRBEC-UHFFFAOYSA-N Potassium Chemical compound [K] ZLMJMSJWJFRBEC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 241000283984 Rodentia Species 0.000 description 1
- 239000012507 Sephadex™ Substances 0.000 description 1
- PMZURENOXWZQFD-UHFFFAOYSA-L Sodium Sulfate Chemical compound [Na+].[Na+].[O-]S([O-])(=O)=O PMZURENOXWZQFD-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- 244000061456 Solanum tuberosum Species 0.000 description 1
- 235000002595 Solanum tuberosum Nutrition 0.000 description 1
- 241000142917 Streptomyces bottropensis Species 0.000 description 1
- 241000145545 Streptomyces collinus Species 0.000 description 1
- 241000142915 Streptomyces diastatochromogenes Species 0.000 description 1
- 241000142898 Streptomyces neyagawaensis Species 0.000 description 1
- 241000946782 Streptomyces resistomycificus Species 0.000 description 1
- 241000244174 Strongyloides Species 0.000 description 1
- 241000122932 Strongylus Species 0.000 description 1
- 241000282887 Suidae Species 0.000 description 1
- QAOWNCQODCNURD-UHFFFAOYSA-L Sulfate Chemical compound [O-]S([O-])(=O)=O QAOWNCQODCNURD-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- 241000254105 Tenebrio Species 0.000 description 1
- 241001454294 Tetranychus Species 0.000 description 1
- 241000333689 Tineola Species 0.000 description 1
- 241000607216 Toxascaris Species 0.000 description 1
- 241000244031 Toxocara Species 0.000 description 1
- 241001489151 Trichuris Species 0.000 description 1
- 241000571986 Uncinaria Species 0.000 description 1
- 230000000895 acaricidal effect Effects 0.000 description 1
- 239000000642 acaricide Substances 0.000 description 1
- 238000005273 aeration Methods 0.000 description 1
- 238000010564 aerobic fermentation Methods 0.000 description 1
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 1
- 208000007502 anemia Diseases 0.000 description 1
- 239000000921 anthelmintic agent Substances 0.000 description 1
- 229940124339 anthelmintic agent Drugs 0.000 description 1
- 230000003110 anti-inflammatory effect Effects 0.000 description 1
- 229940088710 antibiotic agent Drugs 0.000 description 1
- 239000012736 aqueous medium Substances 0.000 description 1
- 239000007864 aqueous solution Substances 0.000 description 1
- PYMYPHUHKUWMLA-WDCZJNDASA-N arabinose Chemical compound OC[C@@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)C=O PYMYPHUHKUWMLA-WDCZJNDASA-N 0.000 description 1
- 229960001230 asparagine Drugs 0.000 description 1
- QVGXLLKOCUKJST-UHFFFAOYSA-N atomic oxygen Chemical compound [O] QVGXLLKOCUKJST-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000003115 biocidal effect Effects 0.000 description 1
- 210000004369 blood Anatomy 0.000 description 1
- 239000008280 blood Substances 0.000 description 1
- 210000004204 blood vessel Anatomy 0.000 description 1
- 238000007664 blowing Methods 0.000 description 1
- 239000011575 calcium Substances 0.000 description 1
- 229910052791 calcium Inorganic materials 0.000 description 1
- LLSDKQJKOVVTOJ-UHFFFAOYSA-L calcium chloride dihydrate Chemical compound O.O.[Cl-].[Cl-].[Ca+2] LLSDKQJKOVVTOJ-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- 229940041514 candida albicans extract Drugs 0.000 description 1
- 150000001721 carbon Chemical group 0.000 description 1
- 230000035425 carbon utilization Effects 0.000 description 1
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 description 1
- 238000004113 cell culture Methods 0.000 description 1
- 230000010261 cell growth Effects 0.000 description 1
- 239000001913 cellulose Substances 0.000 description 1
- 229920002678 cellulose Polymers 0.000 description 1
- 238000005119 centrifugation Methods 0.000 description 1
- 150000001793 charged compounds Chemical class 0.000 description 1
- 235000020639 clam Nutrition 0.000 description 1
- 238000005345 coagulation Methods 0.000 description 1
- 230000015271 coagulation Effects 0.000 description 1
- 239000010941 cobalt Substances 0.000 description 1
- 229910017052 cobalt Inorganic materials 0.000 description 1
- GUTLYIVDDKVIGB-UHFFFAOYSA-N cobalt atom Chemical compound [Co] GUTLYIVDDKVIGB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000004440 column chromatography Methods 0.000 description 1
- OXBLHERUFWYNTN-UHFFFAOYSA-M copper(I) chloride Chemical compound [Cu]Cl OXBLHERUFWYNTN-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 239000008120 corn starch Substances 0.000 description 1
- 238000002425 crystallisation Methods 0.000 description 1
- 230000008025 crystallization Effects 0.000 description 1
- 238000012258 culturing Methods 0.000 description 1
- 239000006787 czapek-dox agar Substances 0.000 description 1
- 230000003247 decreasing effect Effects 0.000 description 1
- 239000008367 deionised water Substances 0.000 description 1
- 229910021641 deionized water Inorganic materials 0.000 description 1
- BLEBFDYUDVZRFG-UHFFFAOYSA-N dichloromethane;propan-2-ol Chemical compound ClCCl.CC(C)O BLEBFDYUDVZRFG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- AIUDWMLXCFRVDR-UHFFFAOYSA-N dimethyl 2-(3-ethyl-3-methylpentyl)propanedioate Chemical class CCC(C)(CC)CCC(C(=O)OC)C(=O)OC AIUDWMLXCFRVDR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229910000396 dipotassium phosphate Inorganic materials 0.000 description 1
- 150000002016 disaccharides Chemical group 0.000 description 1
- 201000010099 disease Diseases 0.000 description 1
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 description 1
- 238000004090 dissolution Methods 0.000 description 1
- 239000003814 drug Substances 0.000 description 1
- 244000078703 ectoparasite Species 0.000 description 1
- 239000000839 emulsion Substances 0.000 description 1
- NGPZWOOKVNRELB-UHFFFAOYSA-N ethane-1,2-diol;methanol Chemical compound OC.OCCO NGPZWOOKVNRELB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 125000001495 ethyl group Chemical group [H]C([H])([H])C([H])([H])* 0.000 description 1
- 210000003608 fece Anatomy 0.000 description 1
- 239000012847 fine chemical Substances 0.000 description 1
- 210000002196 fr. b Anatomy 0.000 description 1
- 210000003918 fraction a Anatomy 0.000 description 1
- 208000035474 group of disease Diseases 0.000 description 1
- 239000001963 growth medium Substances 0.000 description 1
- RXQUEQRASWSQJI-UHFFFAOYSA-N hexane;2-phenylethanol Chemical compound CCCCCC.OCCC1=CC=CC=C1 RXQUEQRASWSQJI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000004896 high resolution mass spectrometry Methods 0.000 description 1
- PFOARMALXZGCHY-UHFFFAOYSA-N homoegonol Natural products C1=C(OC)C(OC)=CC=C1C1=CC2=CC(CCCO)=CC(OC)=C2O1 PFOARMALXZGCHY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000011534 incubation Methods 0.000 description 1
- 238000011081 inoculation Methods 0.000 description 1
- CDAISMWEOUEBRE-GPIVLXJGSA-N inositol Chemical compound O[C@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@H](O)[C@@H]1O CDAISMWEOUEBRE-GPIVLXJGSA-N 0.000 description 1
- 229960000367 inositol Drugs 0.000 description 1
- 239000002917 insecticide Substances 0.000 description 1
- 230000002452 interceptive effect Effects 0.000 description 1
- 230000000968 intestinal effect Effects 0.000 description 1
- 210000000936 intestine Anatomy 0.000 description 1
- 229910052742 iron Inorganic materials 0.000 description 1
- SURQXAFEQWPFPV-UHFFFAOYSA-L iron(2+) sulfate heptahydrate Chemical compound O.O.O.O.O.O.O.[Fe+2].[O-]S([O-])(=O)=O SURQXAFEQWPFPV-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- FZWBNHMXJMCXLU-BLAUPYHCSA-N isomaltotriose Chemical compound O[C@@H]1[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@@H]1OC[C@@H]1[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H](OC[C@@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](O)C=O)O1 FZWBNHMXJMCXLU-BLAUPYHCSA-N 0.000 description 1
- 210000004072 lung Anatomy 0.000 description 1
- 210000002751 lymph Anatomy 0.000 description 1
- 239000011777 magnesium Substances 0.000 description 1
- 229910052749 magnesium Inorganic materials 0.000 description 1
- 230000001071 malnutrition Effects 0.000 description 1
- 235000000824 malnutrition Nutrition 0.000 description 1
- WPBNNNQJVZRUHP-UHFFFAOYSA-L manganese(2+);methyl n-[[2-(methoxycarbonylcarbamothioylamino)phenyl]carbamothioyl]carbamate;n-[2-(sulfidocarbothioylamino)ethyl]carbamodithioate Chemical compound [Mn+2].[S-]C(=S)NCCNC([S-])=S.COC(=O)NC(=S)NC1=CC=CC=C1NC(=S)NC(=O)OC WPBNNNQJVZRUHP-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- 238000004949 mass spectrometry Methods 0.000 description 1
- 238000005259 measurement Methods 0.000 description 1
- 239000013028 medium composition Substances 0.000 description 1
- COTNUBDHGSIOTA-UHFFFAOYSA-N meoh methanol Chemical compound OC.OC COTNUBDHGSIOTA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 150000002739 metals Chemical class 0.000 description 1
- 238000001000 micrograph Methods 0.000 description 1
- 230000001617 migratory effect Effects 0.000 description 1
- 230000000877 morphologic effect Effects 0.000 description 1
- ZJQHPWUVQPJPQT-UHFFFAOYSA-N muscimol Chemical compound NCC1=CC(=O)NO1 ZJQHPWUVQPJPQT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000013642 negative control Substances 0.000 description 1
- 239000005645 nematicide Substances 0.000 description 1
- 230000007935 neutral effect Effects 0.000 description 1
- 208000015380 nutritional deficiency disease Diseases 0.000 description 1
- 239000006877 oatmeal agar Substances 0.000 description 1
- 230000003287 optical effect Effects 0.000 description 1
- 239000012074 organic phase Substances 0.000 description 1
- 229910052760 oxygen Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000001301 oxygen Substances 0.000 description 1
- 238000010979 pH adjustment Methods 0.000 description 1
- 230000003071 parasitic effect Effects 0.000 description 1
- 229940066779 peptones Drugs 0.000 description 1
- 239000012071 phase Substances 0.000 description 1
- NBIIXXVUZAFLBC-UHFFFAOYSA-K phosphate Chemical compound [O-]P([O-])([O-])=O NBIIXXVUZAFLBC-UHFFFAOYSA-K 0.000 description 1
- 239000010452 phosphate Substances 0.000 description 1
- 239000011591 potassium Substances 0.000 description 1
- 229910052700 potassium Inorganic materials 0.000 description 1
- 244000144977 poultry Species 0.000 description 1
- 239000000843 powder Substances 0.000 description 1
- 230000002265 prevention Effects 0.000 description 1
- 239000013587 production medium Substances 0.000 description 1
- 239000010453 quartz Substances 0.000 description 1
- 238000011160 research Methods 0.000 description 1
- 239000012488 sample solution Substances 0.000 description 1
- CDAISMWEOUEBRE-UHFFFAOYSA-N scyllo-inosotol Natural products OC1C(O)C(O)C(O)C(O)C1O CDAISMWEOUEBRE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 210000002966 serum Anatomy 0.000 description 1
- RMAQACBXLXPBSY-UHFFFAOYSA-N silicic acid Chemical compound O[Si](O)(O)O RMAQACBXLXPBSY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 235000020183 skimmed milk Nutrition 0.000 description 1
- 210000000813 small intestine Anatomy 0.000 description 1
- 229910052708 sodium Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000001509 sodium citrate Substances 0.000 description 1
- NLJMYIDDQXHKNR-UHFFFAOYSA-K sodium citrate Chemical compound O.O.[Na+].[Na+].[Na+].[O-]C(=O)CC(O)(CC([O-])=O)C([O-])=O NLJMYIDDQXHKNR-UHFFFAOYSA-K 0.000 description 1
- 229910052938 sodium sulfate Inorganic materials 0.000 description 1
- 235000011152 sodium sulphate Nutrition 0.000 description 1
- 239000002689 soil Substances 0.000 description 1
- 235000014347 soups Nutrition 0.000 description 1
- 235000012424 soybean oil Nutrition 0.000 description 1
- 239000003549 soybean oil Substances 0.000 description 1
- 239000007921 spray Substances 0.000 description 1
- 238000010561 standard procedure Methods 0.000 description 1
- 210000002784 stomach Anatomy 0.000 description 1
- 238000003860 storage Methods 0.000 description 1
- 238000007920 subcutaneous administration Methods 0.000 description 1
- 235000000346 sugar Nutrition 0.000 description 1
- 150000008163 sugars Chemical class 0.000 description 1
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 1
- 239000012485 toluene extract Substances 0.000 description 1
- OUYCCCASQSFEME-UHFFFAOYSA-N tyrosine Natural products OC(=O)C(N)CC1=CC=C(O)C=C1 OUYCCCASQSFEME-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 125000001493 tyrosinyl group Chemical group [H]OC1=C([H])C([H])=C(C([H])=C1[H])C([H])([H])C([H])(N([H])[H])C(*)=O 0.000 description 1
- 238000009281 ultraviolet germicidal irradiation Methods 0.000 description 1
- 238000002211 ultraviolet spectrum Methods 0.000 description 1
- 239000003643 water by type Substances 0.000 description 1
- 230000004580 weight loss Effects 0.000 description 1
- RZLVQBNCHSJZPX-UHFFFAOYSA-L zinc sulfate heptahydrate Chemical compound O.O.O.O.O.O.O.[Zn+2].[O-]S([O-])(=O)=O RZLVQBNCHSJZPX-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07H—SUGARS; DERIVATIVES THEREOF; NUCLEOSIDES; NUCLEOTIDES; NUCLEIC ACIDS
- C07H19/00—Compounds containing a hetero ring sharing one ring hetero atom with a saccharide radical; Nucleosides; Mononucleotides; Anhydro-derivatives thereof
- C07H19/01—Compounds containing a hetero ring sharing one ring hetero atom with a saccharide radical; Nucleosides; Mononucleotides; Anhydro-derivatives thereof sharing oxygen
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P33/00—Antiparasitic agents
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P33/00—Antiparasitic agents
- A61P33/02—Antiprotozoals, e.g. for leishmaniasis, trichomoniasis, toxoplasmosis
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P33/00—Antiparasitic agents
- A61P33/10—Anthelmintics
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12P—FERMENTATION OR ENZYME-USING PROCESSES TO SYNTHESISE A DESIRED CHEMICAL COMPOUND OR COMPOSITION OR TO SEPARATE OPTICAL ISOMERS FROM A RACEMIC MIXTURE
- C12P19/00—Preparation of compounds containing saccharide radicals
- C12P19/44—Preparation of O-glycosides, e.g. glucosides
- C12P19/60—Preparation of O-glycosides, e.g. glucosides having an oxygen of the saccharide radical directly bound to a non-saccharide heterocyclic ring or a condensed ring system containing a non-saccharide heterocyclic ring, e.g. coumermycin, novobiocin
- C12P19/62—Preparation of O-glycosides, e.g. glucosides having an oxygen of the saccharide radical directly bound to a non-saccharide heterocyclic ring or a condensed ring system containing a non-saccharide heterocyclic ring, e.g. coumermycin, novobiocin the hetero ring having eight or more ring members and only oxygen as ring hetero atoms, e.g. erythromycin, spiramycin, nystatin
- C12P19/623—Avermectin; Milbemycin; Ivermectin; C-076
-
- Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
- Y10—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC
- Y10S—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
- Y10S435/00—Chemistry: molecular biology and microbiology
- Y10S435/8215—Microorganisms
- Y10S435/822—Microorganisms using bacteria or actinomycetales
- Y10S435/886—Streptomyces
Landscapes
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Veterinary Medicine (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- General Chemical & Material Sciences (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Zoology (AREA)
- Wood Science & Technology (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
- Public Health (AREA)
- Tropical Medicine & Parasitology (AREA)
- Animal Behavior & Ethology (AREA)
- Pharmacology & Pharmacy (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- General Engineering & Computer Science (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)
- Heterocyclic Carbon Compounds Containing A Hetero Ring Having Oxygen Or Sulfur (AREA)
- Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
- Agricultural Chemicals And Associated Chemicals (AREA)
- Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
- Saccharide Compounds (AREA)
Description
I56r71 M (1i)KUUf.yTUSjULKAISU c-7781
l J ' ' UTLAGGNINGSSKIMFT O / / 0 I
C (45) Patentti myönnetty 10 10 1' '0 ^ 'r“^ (S1) Kv.ik?/tnt.a.3 C 12 P 19/12, C 07 D 493/22 SUOMI —FINLAND (2.1) Pttu«ttn»eki*hi| 771121+ (22) Hakwnteptlv·-. Anteknlnf^ai 07 · OU. 77 ' (23) AlkvpUvft—GUtlghMadai 07.OU. 77 (41) Tullut Julktektl — BlIvK offmcllg 20.10.77
Ntantt). J· reklatarihaRltut .Mu»,
Patani- oeh raflstantyrelaen ' AnMa» utkgd och uti^krtfun publicurad 30.06.80 (32)(33)(31) Pyr^etty itueiiMUi—fegird priorit« 19.0I1.76 USA(US) 678328 (71) Merck & Co., Inc., 126 E. Lincoln Avenue, Rahway, New Jersey, USA(US) (72) Georg Albers-Schonberg, Princeton, New Jersey, Richard William Burg, Murray Hill, New Jersey, Thomas William Miller, Carteret, New Jersey, Robert Eugene Ormond, Edison, New Jersey, Hyman Wallick, Springfield,
New Jersey, USA(US) (lk) Oy Kolster Ab (54) Menetelmä antihelminttisesti vaikuttavien C-076-yhdisteiden valmistamiseksi - Förfarande för framställning av C-076-foreningar med antihelmin-tisk verkan
Keksinnön kohteena on menetelmä antihelminttisesti vaikuttavien C-076-yhdisteiden valmistamiseksi/ joilla on kaava ' 0Ho I 3 p —ch
" L. vJ
PfS . .
0--CH3 R3 57781 jossa R on ^-L-oleandrosyyli Vl-L-oleandrosyylirybirä, jolla on kaava CH CH, 3y~0 CHjO^ CHjO^ katkoviiva esittää yksinkertaista tai kaksoissidosta; on hydroksi, joka on läsnä vain silloin, kun katkoviiva tarkoittaa yksinkertaista sidosta, R£ on prqpyyli tai butyyli ja R^ on metoksi tai hydroksi.
Keksinnön mukaan C-076-yhdisteitä valmistetaan siten, että viljellään aerobisesti C-076-yhdisteitä tuottavaa Streptanyces avermitilis-kantaa ATCC 31267 ATCC 31271 tai ATCC 31272 vesipitoisessa ravintoväliaineessa, joka sisältää hiilen ja typen assimUoituvia lähteitä ja epäorgaanisia suoloja, lämpö-tilavälillä noin 20-40°C ja pH-arvossa noin 5,0-9,0, C-076-yhdisteet otetaan talteen, edullisesti suodattamalla fermentointiväliaine, uuttamalla huovasto veden kanssa sekoittuvalla orgaanisella liuottimellä, haihduttamalla orgaaninen liuotin ja uuttamalla jäännös veden kanssa sekoittumattanalla orgaanisella liuottimena.
Streptanyces avemitilis tuottaa vähintään kahdeksaa erilaista lähisukuista uutta yhdistettä. Niitä nimitetään tässä seuraavasti: C-076 Ala, Alb, A2a, A2b, Bla, Blb, B2a ja B2b. Kaikilla on selvä antihelminttinen aktiviteetti. Niitä voidaan valmistaa ferroentoimalla, ja ne saadaan talteen olennaisesti puhtaina kuten alla kuvataan.
US-patenttijulkaisusta 3,950,260 on jo tunnettu antibiootin aglykoni-runko. Keksinnön mukaisesti valmistetut yhdisteet eroavat kuitenkin olennaisesti mainitussa patenttijulkaisussa kuvatuista yhdisteistä. Niinpä keksinnön mukaisesti valmistetuissa yhdisteissä on disakkaridisivuketju ja niissä on jäljellä 13-hydroksiryhmä, jotka puuttuvat tunnetuista yhdisteistä. Lisäksi niissä on joko 22,23-kaksoissidos tai 23-hydroksiryhmä, jotka myös puuttuvat tunnetuista yhdisteistä. Edelleen niissä on 25-asemassa butyyli- tai propyyli-ryhmä, kun taas tunnetuissa yhdisteissä on tässä asemassa metyyli- tai etyyli-ryhmä.
3 57781
Taksometristen tutkimusten perusteella näitä C-076-yhdisteitä tuottamaan pystyvät mikro-organismit kuuluvat Streptomyces-suvun uuteen lajiin, jota nimitetään Streptomyces avermitilis. Yksi tällainen maaperästä eristetty viljelmä on merkillä MA-468O firman Merck $ Co., Inc., Rahway, New Hersey, viljelmäkokoelmassa. Tämän viljelmän C-076-yhdisteitä tuottava näyte on talletettu laitoksen Fermentation Section of the Northern Utiliza-tio Research Branch, U.S. Department of Agriculture at Peoria, Illinois, pysyvään viljelmäkokoelmaan numerolla NERL 8I65. NRRL 8165 näyte on myös talletettu laitoksen American Type Culture Collection, 12J01 Parklawn Drive, Rockville, Maryland 20852, pysyvään viljelmäkokoelmaan, jossa sillä on ^ numero ATCC 51,267, ja josta se on vapaasti saatavana.
Streptomyces avermitilis'in viljelytunnukset esitetään seuraavassa: Morfologia: sporoforit muodostavat ilmahuovaston sivuhaaroina spiraaleja. Spiraalit ovat kiinteitä, mutta avautuvat viljelmän vanhetessa.
Itiöt ovat yli 15 itiön ketjuina ja muodoltaan 970-kertaisella suurennuksella tarkasteltaessa tavallisesti pyöreästä soikeanmuotoiseen. Itiönmuo-dostusta havaitaan kaurajauhoagarilla, glyseroli-asparagiiniagarilla, epäorgaaniset suolat-tärkkelysagarilla ja muna-albumiiniagarilla. Itiön pinta on elektronimikroskooppi-kuvassa sileä.
Kaura.i auhoagar:
Vegetatiivinen kasvu: käänteinen -erittäin tummanruskea Ilmahuovasto: jauhemainen, ruskehtavanharmaa (41i)xx, jossa seassa valkeata.
Liukoinen pigmentti: ruskea Czapek-Dox-agar (sakkaroosi-nltraattiagar)
Vegetatiivinen kasvu: heikko, väritön Ilmahuovasto: niukka, harmahtava
Liukoinen pigmentti: vaaleanharmahtavan nahanruskea Muna-albumllnlagar:
Vegetatiivinen kasvu: nahanruskea
Ilmahuovasto: kohtuullinen, vaaleanharmahtavankeltaisenruskea (3ge)XX* jossa seassa valkeata
Liukoinen pigmentti: vaaleankellertävän nahanruskea Glyseroli-asuaragiiniagar:
Vegetatiivinen kasvu: käänteinen - kellertävänruskea Ilmahuovasto: jauhemainen, ruskehtavanharmaa (41i)XX» jossa seassa valkeata 4 57781
Liukoinen pigmentti: vaalea, kellertävänruskea Epäorgaaniset suolat-tärkkelvBaaar:
Vegetatiivinen kasvu: käänteinen - harmahtavan kellertävänruskea Ilmahuovasto: jauhemainen, vaaleanruekehtavanharmaa (41g)XX, kärjissä tummempaa ruskehtavanharmaata (41i)XX Liukoinen pigmentti: vaalean kellertävänruskea Hlivauute-dekstroosi -- suolat-agar:
Vegetatiivinen kasvu: käänteinen - tummanruskea Ilmahuovasto: kohtuullinen, ruskehtavanvalkea Liukoinen pigmentti: ruskea Hiivauute-mallasuuteagar:
Vegetatiivinen kasvu: käänteinen - tummanruskea
Ilmahuovasto: kohtuullinen, ruskehtavanvalkea ~
Liukoinen pigmentti: ruskea
Peptoni-rauta-hiivauuteagar:
Vegetatiivinen kasvu: tummanruskea Ilmahuovasto: ei ole
Liukoinen pigmentti: tummanruskeasta mustaan Melaniini: positiivinen HgS-tuotto: positiivinen Ravintoagar:
Vegetatiivinen kasvu: nahanruskea Ilmahuovasto: niukka, harmahtava Liukoinen pigmentti: vaaleanruskea Ravintotärkkelysagar:
Vegetatiivinen kasvu: nahanruskea Ilmahuovasto: niukka,harmahtavanvalkea Liukoinen pigmentti: vaaleanruskea Tärkkelyksen hydrolyysit hyvä Perunatulppa:
Vegetatiivinen kasvu: nahanruskea
Ilmahuovasto: ruskea, jonka seassa harmahtavanvalkeatä Liukoinen pigmentti: harmahtavanruskea Loeffler'in veriseerumi:
Vegetatiivinen kasvu: harmahtavan nahanruskea Ilmahuovasto: ei ole
Liukoinen pigmentti: kasvualusta muuttuu hieman ruskehtavaksi
Nesteytyminen: ei esiinny
Ravintotyrosiiniagar:
Vegetatiivinen kasvu: käänteinen - tummanruskeasta mustaan 5 57781
Ilmahuovasto: niukka, harmahtava Liukoinen pigmentti: tummanruskea Tyrosiinin hajaantuminen: ei esiinny Hiilen hyväksikäyttö:
Pridham-Gottlieti-perusväliaine + 1 $ hiilenlähdettä; + = kasvaa; - ei kasvua negatiiviseen kontrolliin (ilman hiili-lähdettä) verrattuna.
Glukoosi +
Arahinoosi + "" Selluloosa
Fruktoosi +
Inositoli +
Laktoosi +
Maltoosi +
Mannitoli +
Mannoosi +
Raffinoosi +
Ramnoosi +
Sakkaroosi +
Ksyloosi *·
Ravintogelatlinlagar:
Ve&etatiivinen kasvu: nahanruskea Ilmahuovasto: niukka, harmahtavanvalkea Liukoinen pigmentti: vaaleanruskea Gelatiinin nesteytyminen: hyvä Gelatiinipistoymppäys:
Vegetatiivinen kasvu: ruskea rengas Ilmahuovasto: ei ole Liukoinen pigmentti: vihertävänruskea Gelatiinin nesteytyminen: täydellinen Rasvatonmaitoagar:
Vegetatiivinen kasvu: tummanruskea Ilmahuovasto: ei ole Liuokoinen pigmentti: tummanruskea Kaseiinin hydrolyysi: hyvä Lakmusmaito:
Vegetatiivinen kasvu: tummanruskea kasvurengas Ilmahuovasto: ei ole Väri: tummanruskea 6 57781
Koaguloituminen ja/tai peptonisoituminen: täydellinen peptonisoituminen; alkaa muuttua alkaliseksi (pH 8,1)
Rasvaton maito:
Vegetatiivinen kasvu: tummanruskea kasvurengas
Ilmahuovasto: ei ole
Liukoinen pigmentti: tummanruskea
Goaguloituminen ja/tai peptonisoituminen: täydellinen peptonisoituminen: alkaa muuttua alkaliseksi (pH 8,0) Lämpötila-alue: (hiivauute-dekstroosi + epäorgaaniset suolat-agarilla) 28°C - hyvä vegetatiivinen kasvu ja ilmahuovasto 37°C - hyvä vegetatiivinen kasvu ja ilmahuovasto ~ 50°C - ei kasvua
Hapentarve: (pistoviljelmä hiivauute-dekstroosi + epäorgaaniset suolat- agarilla) aerotinen -
Kaikki koetulokset on saatu 3 viikon viljelyn jälkeen 28°C:ssa, jollei muuta ilmoiteta. Kaikkien väliaineiden pH oli noin neutraali (6,8-7,2).
Värinumero (xx) viittaa teokseen Color Harmony Manual, 1958, h. painos,
Container Corporation of America, Chicago, Illinois.
Streptomyces avermitilis kannan vertailu tunnettuihin Streptomyces kantoihin Streptomyces avertimilis kannan tärkeimmät viljelytunnukset ovat seuraavat: ilmahuovasto ruskehtavanharmaa; itiöketjut spiraalimaisia; itiöt sileäpintaisia; tuottaa melanoidipigmenttejä; kykenee standardiolosuhteissa käyttämään hyväkseen hiilipitoisia yhdisteitä, kuten glukoosia, arabinoosia, fruktoosia, inosifolia, laktoosia, maltoosia, mannitolia, mannoosia, raffinoosia, ramnoosia, sakkaroosia ja ksyloosia; ei muodosta punaisia voimakkaan keltaisia, purppuranpunaisia tai sinisiä liukoisia pigmenttejä tai vegetatiivista kasvua.
Verrattaessa Streptomyces avermitilis kantaa kirjallisuudesta tunnettuihin Streptomyces kantoihin, havaitaan, että yhdeksällä kannalla on samat yleiset piirteet kuin Streptomyces avermitilis kannalla. Näiden kantojen kirjallisia kuvauksia ja sporoforien morfologisia kuvia tutkittiin lähemmin seuraavien julkaisujen avulla: Bergey's Manual of Determinative Bacteriology, 8. painos, toimittajat R. E.
Buchanan ja N. E. Gibbons, 197*+> Williams & Wilkins Company, Baltimore, Md.;
Shirling, E. B. ja David Gottlieb, Cooperative description of type cultures of Streptomyces, Part II, Int. J. Syst. Bacteriol. j8^: 69-189 (1968), Part III,
Int. J. Syst. Bacteriol. Jj3: 279-392 (1968), Part IV, Int. J. Syst. Bacteriol.
19: 391-512 (1969), Part V, Int. J. Syst. Bacteriol. 22: 265-39*+ (1972).
7 57781
Kantojen Streptomyces collinus, bottropensis, diastatochromogenes, luteogriseus, griseosporeus, naganishii, neyagawaensis, olivochromogenus ja resistomycificus morfologia oli spiraalimainen, mutta poikkesi selvästi Streptomyces avermitilis kaunan morfologiasta. Streptomyces avermitilis kannan itiöketjut ovat pitkiä, tiiviitä kierukoita, kun taas edellä esitettyjen kantojen itiöketjut olivat lyhyitä ja niissä oli useita huonosti kehittyneitä spiraaleja, koukkuja, silmukoita, kierukoita, epätäydellisiä spiraaleja tai silmukoita, avoimia spiraaleja ja usein kiemuraisia itiöketjuja, joissa ei ollut spiraaleja.
Tietyissä elatusaineissa, joissa Streptomyces avermitilis kannan itiönmuo-dostus oli runsasta, kantojen Streptomyces naganishii ja olivochromogenus ition-^ muodostus oli huonoa. Kantojen Streptomyces griseosporeus, luteogriseus ja naganishii ilmahuovasto oli vaaleanpunertavanharmaata, kellertävänharmaata tai harmahtavan valkoista kun taas Streptomyces avermitilis kannan ilmahuovasto on tummanruskehtavanharmaata.
Streptomyces avermitilis kanta erosi yhden tai useamman tärkeän piirteen osalta kaikista niistä yhdeksästä kannasta, jotka muistuttivat sitä eniten, joten viljelmäämme voidaan pitää uutena Streptomyces kantana.
Vertaamalla edellä esitettyjä tuloksia teoksessa Bergey’s Manual of Determinative Bacteriology (8. painos) esitettyihin tunnettuihin mikro-organismeihin havaitaan merkitseviä eroja, jotka osoittavat, että keksinnön mukainen mikro-organismi on luokiteltava uudeksi lajiksi. Tähän perustuen sille on annettu nimi Streptomyces avermitilis.
Yllä oleva kuvaus esittää Streptomyces avermitilis-kannan, jota voidaan käyttää C-076-yhdisteiden tuottamiseen. Esimerkkinä yllä kuvatun mikro-organismin mutantista on Streptomyces avermitilis MA i+8l+8-kanta, joka eristettiin Streptomyces avermitilis MA i4Ö80-kannasta UV-säteilytyksen jälkeen. Tämä viljelmä on sekä lyo-filisoituna että jäädytettynä talletettu laitoksen American Type Culture Collection pysyvään viljelmäkokoelmaan, jossa niille on vastaavasti annettu numerot 31272 ja 31271. Käytettäessä tätä jäädytettyä mikro-organismiymppiä on saatu jonkin ^ verran korkeampia C-076:n fermentointisaantoja, C-076~yhdisteitä tuotetaan aerobisessa fermentoinnissa sopivassa 8 57781 vesipitoisissa ravintoväliaineissa alempana kuvatuissa olosuhteissa sitä tuottavalla Streptomyces avermitilis-kannalla. Tässä prosessissa C-076;n valmistamiseksi sopivat käytettäviksi useiden antibioottien valmistuksessa käytetyt vesipitoiset väliaineet.
Tällaiset ravintoväliaineet sisältävät sellaisia hiilen ja typen lähteitä, joita mikro-organismi pystyy yhteyttämään, ja tavallisesti pieniä määriä epäorgaanisia suoloja. Lisäksi fermentointiväliaine saattaa sisältää sellaisia metallihivenaineita, joita mikro-organismit tarvitsevat kasvaakseen. Näitä on tavallisesti riittävässä määrin ravintolähteenä käytetyissä hiilen ja typen lähteissä, mutta niitä voidaan myös haluttaessa _ lisätä erikseen ravintoväliaineeseen.
Yhteytettävän hiilen lähteeksi ravintoväliaineisiin sopivat yleensä hiilihydraatit, kuten sokerit, esimerkiksi dekstroosi, sakkaroosi, maltoosi, _ laktoosi, dekstraani, sereloosi tms., ja tärkkelykset. Tarkka hiilen läh-käyttömäärä väliaineessa riippuu osaksi muista väliaineen aineosista, kuitenkin yleensä hiilihydraattimäärä noin 0,5-5 paino-^ väliaineessa on todettu sopivaksi. Näitä hiilen lähteitä voidaan käyttää yksinään, tai niitä voidaan yhdistää useampia samaan väliaineeseen.
Streptomyces avermitilis pystyy helposti käyttämään hyväksi C-076:n yhdisteiden tuottamiseksi erilaisia typen lähteitä, kuten hiivahydrolysaat-teja, hiiva-autolysaatteja, soijajauhoa, kaseiinihydrolysaatteja, hiiva-uutteita, maiesinliuotusliemiä, tislaamon liukenevia aineita, puuvillasie-menjauhoa, lihauutetta jne. Eri typen lähteitä voidaan käyttää yksinään tai yhdistelminä noin 0,2-6 paino-$:n määrinä väliaineesta.
Viljelyväliaineeseen sisällytetyt epäorgaaniset ravintosuolat ovat sellaisia tavallisesti käytettyjä suoloja, joista saadaan natrium-, kalium-, magnesium-, ammonium-, kalsium-, fosfaatti-, sulfaatti-, kloridi-, karbonaatti-ioneja ym. Käytetään myös hivenmetalleja, kuten kobolttia, mangaania, rautaa jne. _______ __ __________ _____ -
Seuraavasea on esimerkkejä Streptomyces avermitilis-kantojen kasvatukseen sopivista väliaineista C-076-yhdisteiden tuottamiseksi.
Väliaine A
Maissijauho 20,0 g
Tislaamon liukeneva aine 10,0 g
Soijajauho 15,0 g 9 57781
Natriumsitraatti 4»O g
CaCl22H20 0,5 g
Polyglykoli P 2000 2,5 g
MgSO .7^0 0,1 g
CoC12.6H20 0,01 g
FeS04.7H20 0,01 g
Tislattu vesi 1000 ml pH 6,5 Väliaine B:
Liukoinen tärkkelys 20,0 g
Maissin liuotuslieml 15»0 g
Sereloosi 5»0 g ^ Soijajauho 4,0 g (im4)2so4 4,o g
Maissijauho 1,0 g
Soijaöljy 2,5 ml
kh2po4 0,3 S
CaCOj 6,0 g
Tislattu vesi 1000 ml pH 6,7 Väliaine C;
Tomaattitahna 40,0 g
Kaurajauho 15,0 g
Tislattu vesi 1000 ml ___ pH 6,0 Väliaine D?
Kaurajauho 20,0 g
Tomaattitahna 20,0 g
Tislattu vesi 1000 ml pH 5,5 Väliaine E:
Dekstroosi 10,0 g
Peptoni (Difoo Laboratories
Detroit, Michigan) 5,0 g
Hi iva-autolysaatti (Ardamine pH, Yeast Products Inc.,
Paterson, New Jersey) 3,0 g
NaCl 12,7 g KC1 0,72 g 0,035 g 10 57781
MgCl2.6H20 5,32 g
CaCl2.2H20 Of73 g
Tislattu vesi 1000 ml pH 7,4
Fermentointi käyttäen C-076-yhdisteitä tuottavia mikro-organismeja voidaan suorittaa lämpötila-alueella noin 20° - noin 40¾. Parhaiden tulosten saavuttamiseksi se suoritetaan tavallisesti noin 24° - noin 30°Csssa. Edullisin lämpötila on 27-28°C. Ravintoväliaineen pH C-076-yhdisteiden tuottamiseksi voi vaihdella noin 5,0:sta 9,Osaan, edullisesti pH on noin 6,5-7,5.
Pienessä mittakaavassa fermentointi suoritetaan tavallisesti viemällä sopiva määrä ravintoväliainetta pulloon noudattaen tällöin tunnettua steriilitekniikkaa,ymppäämällä pulloon joko C-076-yhdisteitä tuottavan -
Streptomyces avermitilis-kannan itiöitä tai vegetatiivista solukasvustoa, sulkemalla pullo löysästi vanutukolla ja antamalla fermentaation jatkua tasaisessa huoneen lämpötilassa noin 28°C:ssa pyörivässä ravistimessa noin 3-10 vrk. Suuremmassa mittakaavassa fermentointi suoritetaan edullisesti sopivissa, sekoittamilla ja ilmanjohtolaitteilla varustetuissa tankeissa. Ravintoväliaine valmistetaan tankissa,ja steriloinnin jälkeen siihen ympätään sopivan C-076-yhdisteitä tuottavan Streptomyces avermitilis-kannan vegetatiivista solukasvustoa. Fermentaatio saa jatkua noin 24-37°C:ssa 1-8 vrk. jolloin ravintoväliainetta sekoitetaan ja/tai ilmastetaan. Ilmastuksen aste riippuu useista eri tekijöistä, kuten fermenttorin koosta, sekoitus-nopeudesta jne. Yleensä suuressa mittakaavassa suoritetuissa fermentoinneissa sekoitetaan noin 95-150 kierr./min., ja ilmaa johdetaan noin 0,06-0,57 mV min.
Keksinnön mukaisesti saatuja yhdisteitä, joista käytetään yleisnimitystä C-076, esiintyy Streptomyces avermitilis-fermentaation päätyttyä pääasiassa huovastossa, josta ne voidaan ottaa talteen ja erottaa eri yhdis- ' teiksi alla kuvatulla tavalla. Streptomyces avermitilis'in tuottamista 0-076-yhdisteistä on eristetty 4 suuremmassa määrin ja 4 vähäisemmässä määrin esiintyvää komponenttia. Nämä 8 eri komponenttia on nimitetty seuraavasti: C-076 Ala, Alb, A2a, A2b, Bla, Blb, B2a ja B2b. Pääkomponenteilla on identifioin-tinimityksessä liite "a" ja vähäisemmillä komponenteilla liite "b". Rakenteellisen eron "a"- ja "b"-yhdisteiden välillä uskotaan olevan sama jokaisella neljällä parilla.
Odotetusti ei pääasiallisia C-076-yhdisteitäkään kaikkia muodostu tässä kuvatussa fermentaatiossa yhtä suuria määriä. Yleisesti on havaittu, 11 57781 että Al-yhdisteiden osuus on noin 20-30 paino-$ koko tuotetusta C-076-kompleksista, A2-yhdisteiden osuus on noin 1-20 i» ja Bl- ja B2-yhdis-teiden osuus on kummankin noin 25-55 #· 'V-sarjan yhdisteiden ja '^"-sarjan yhdisteiden painosuhde on noin 85:15 - 99:1· C-076-sarjan yhdisteiden erottaminen fermentaatioliemestä ja yksittäisten komponenttien erotus suoritetaan liuotinuutolla ja kromatografia-fraktionnilla erilaisia kromatografiamenetelmiä ja liuotinsysteemejä käyttäen.
C-076-yhdisteet ovat huonosti liukenevia veteen ja hyvin liukenevia ^ orgaanisiin liuottimiin. Tätä ominaisuutta voidaan sopivasti käyttää hyväk si niiden talteenottamiseksi fermentaatioliemestä. Eräässä talteenottomene-telmässä koko fermentaatioliemi suodatetaan, ja vesipitoinen suodos hyljä-— tään. Märkä huovastokakku uutetaan sitten sopivalla orgaanisella liuottimel le. Mikä tahansa orgaaninen liuotin sopii käytettäväksi, kuitenkin on edullista käyttää veden kanssa sekoittuvaa orgaanista liuotinta, kuten asetonia, metanolia, etanolia tms. Yleensä mahdollisimman suuren saannon kannalta on edullista suorittaa useampia uuttoja. Liuotin poistaa huovas-toeta aktiiviset C-076-yhdisteet sekä myös muita aineita, joilta puuttuu C-O76:n antdhelminttinen aktiviteetti. Jos liuotin on veden kanssa sekoittuva, se poistaa märästä huovastosta myös veden. Uutetut huovastot voidaan hyljätä. Liuotinuutteet haihdutetaan orgaanisen liuottimen poistamiseksi ja uutetaan useita kertoja toisella liuottimena. Kun ensimmäisessä uutossa käytetään veden kanssa sekoittuvaa liuotinta, niin toisessa uutossa käytetään edullisesti veden kanssa sekoittumatonta liuotinta, kuten kloroformia, metyleenikloridia, hiilitetrakloridia, etyyliasetaattia, metyylietyyliketo-" nia, metyyli-isobutyyliketonia tms. Viimeksi saadut uutteet kuivataan ja väkevöidään tunnetulla tavalla,jolloin saadaan jäännös, joka sisältää C-076-yhdisteitä sekoittuneina muiden aineiden kanssa. Tämä fraktio sopivim-min kromatografoidaan sitten aktiivisten C-076-yhdisteiden erottamiseksi muusta aineksesta ja myös eri C-076-yhdistiden erottamiseksi toisistaan. C-076-yhdisteiden kromatografiseen puhdistukseen käytetyt menetelmät ovat alalla yleisesti tunnettuja. Esimerkkejä tällaisista kromatografiamenetel-mistä ovat pylväskromatografia, jossa käytetään esim. piihappogeeliä, alu-miniumoksidia, dekstraanigeelejä tms., ja eluointiin erilaisia liuottimia ja/tai kahden tai useamman liuottimen yhdistelmiä vaihtelevissa suhteissa. Nestekromatografiaa käytetään C-076-yhdisteiden toteamiseen, ja korkea-painenestekromatografiaa voidaan käyttää sellaisten puhtaiden fraktioiden eristämiseen, jotka sisältävät yhtä tai useampaa näistä yhdisteistä.
12 57781
Samoin ohutkerroskromatografiaa voidaan käyttää erillisten C-076-yhdisteiden toteamiseen ja eristämiseen. Käyttämällä yllä mainittuja menetelmiä sekä muita alan ammattimiehelle tunnettuja menetelmiä saadaan C-076-yhdisteiden puhdistettuja yhdistelmiä sekä myös erillisiä C-076-yhdisteitä. Aktiivisten C-076-yhdisteiden läsnäolo todetaan analysoimalla eri kromatografiafraktioi-den antiheMLnttLnen aktiviteetti sekä yhdisteiden spektri tunnuksista (kuten UV- ja IR-spektrit), kuten alla kuvataan.
Eri C-076-yhdisteiden spektri- ja muut fysikaaliskemialliset tunnusluvut on esitetty seuraavassa taulukossa I. Nämä yhdisteet ovat erittäin hyvin liukenevia useimpiin tavallisiin orgaanisiin liuottimiin ja huonosti veteenliukenevia.
Taulukossa I esitetyt ultraviolettispektriluvut saatiin metanoli-liuoksesta 1 cm kvartsiselleissä laitteella Cary Model 15 Ultraviolet _
Spectrometer. Yhdisteen väkevyys oli noin 25 yUg/ml. Vaikka UV-absorptio on esitetty määrätylle "a”-sarjan yhdisteelle, se on tosiasiassa sellaisen "a"-sarjan yhdisteen absorptio, joka sisältää vähäisen määrän "b^-sarjan yhdistettä, "a"- ja "b"-sarjat eroavat toisistaan ainoastaan alempialkyyli-substituentissa olevan -CHg-ryhmän suhteen, joka ero ei liity kromoforiin. Ultravioletti absorptio ilmaisee lähinnä kyseessä olevan yhdisteen tyydytty-mättömyyden asteen ja luonteen. Optinen kääntökyky määritettiin standardi-menetelmällä käyttäen Karl Zeiss polarimetriä. Konsentraatiotekijä (c) on ilmoitettu yhdisteen ^-pitoisuutena kyseisessä liuottimessa.
13 57781
LTV
o no ,ο oj ¢- OJ f- ao
cq K
t— -ί ο
LAJ O
--V .»> ·· ·" O +l c— o o o CÖ -i 0 CO O f-CO'-'OOON^-'CMMO-'-'
cm c— oo " on ooia—aj-iamolaciCM
CQK " O CO C\1 " Aj- CM " 00 CM " O
CO 00 II C— At 0-3- O OO
At OO O CM" 00 " CM" ** 0 + — At --- -3" —' At
At o~
rO O OO
I—I C~- LA
—-' PQ « OO
C—
At
O
At o '— OJ ·" ·» ·"
O 4· I MO O O O
CM O O CM t—CM'— OOLA'-'CM'-’^-' CÖ 1--0- " C— 00"- -tAtOOOOLALA»-~
I—I W " »- OO CM " MO CM " O CM "CO
pqoolaii on At *- la o At
At LA O CM" 00" CM" 0+^ —-At "--At — At
M
O LA
3 o'"'
3 pD At O
H CM C— ON
3 < w 0O
«3 CO
Eh at a LA ο r- CM . ·· ·"
O +1-3· O O LA
CÖ LO O MO At C-O—'POAt'-^CMCM'-'
CM 0— CO " O 00 OO ON At C— t- LA -t O
<tC " -- ON CM "IACM " O CM " —
Os CO II 00 At *-> LA OOO
At At U CM " OO " CM " O + — — At — At — At
At o~
CM CM
H t- C— <q K co ao
At o
At o (β "-CM --- ·" ·" ·"
r—I O + 1 t— O LA O
At o c- M3 E- LA " 00 OO C— OO -i* CM LA LA CM 0— W "O OO CM"IACM"OVCM"0
On CO II 00 At — At O OO .
At NO O CM" OO" CM" O + — — At '—Hi — At
•H
>} I — P
X β} -rl -P
>> LO P Λ Λί w cn ω CÖ to O <Ö O Ph i> P ^ S B m «i tÖ £J 00 ·Η ·Η o CÖ !CÖ H CÖ ϊ>> Ρ ·Η * ' ' '
Ai :cÖ O ΡιΡΡ P
•H AiW-H+JOPniT^
H O r-l O Ö k — tiO
S ö — j^-pOOMO
>» <1) !>>·Η p tn cö H
A! Ö t- AiP-p^g CU ·Η CM Q 0) !CÖ A! CÖ L ·" H -P N. H !S) (I) I «A. i.i
O Ph ^ J O Β P > W
s o mi ® b — 11* 57781
Alla olevassa taulukossa II on esitetty C-076-yhdisteiden Ala, A2a, Bla ja B2a 1JC NMH-spektri-luvut. Spektrit on saatu laitteella Varian Nuclear Magnetic Spectrometer Model CFT-20 deuteroidussa kloroformiliuok-sessa käyttäen sisäisenä standardina tetrametyylisilaania. Kussakin tapauksessa on ilmoitettu näytteen liuoksen tilavuus ja väkevyys ja sen jälkeen kemialliset siirrot tetrametyylisilaanin suhteen kullekin yhdisteelle miljoonasosina (ppm). Kemialliset siirrot on ilmoitettu yhdelle hiiliatomille, jollei muuta ilmoiteta kemiallisen siirron perässä suluissa.
Taulukko II
12.0, 13,0, 15,1, 10,4. 17,7, 18,1, 13,5, 20,3,:7,3, 30.0, 34,3 (30, 33,2, 30,0, 39.7, 40.3, 43,7, 30,4 (20, 57,7, 07,3, 08,2 (20, G3,4 (20 , 74,0, 70,1, 77.0, 77,3, 78,3, 79,4, 00,G (20 , 02,0, 93.0, 93,0, 98,5, 118,4 (20 , 119,7, 124,9, 127,3, 133,2, 130,0, 130.1, 137,0, 139,9, 173,0.
11,8, 12,4, 13,8, 15,1, 17,7, 18,4, 19,9, 20,3, 27,3, 34.3 (30 , 35,2, 33.8, 30,5, 39.8, 40,8, 41,2, 43,7, 50.4 (20 , 37,7, 07,3, 67,7, 00,2 (30 , 09,9, 70,0, 70.1, 77,0, 77,0, 70,3, 79,4, 80,0 (20 , 01,8, 94,9, 98,0, 99,7, 117,7, 118,4, 119,7, 124,9, 135,7, 130,1, 137,6, 140,0, 173,7.
15 57781
Taulukko II (.jatkoa) P1 (0,3 ml. lC"a)_ 12.0, 12,9, 15,1, 10,4,17,7, 1U,4, 19,9, 20,2, 27,5, 30,6, 34,3 (3C), 35,2, 36,0, 39,8, 40,5, 45,7, 50,4 (20 , 67,3, 67,8, G8,2 (20, 63,4 (20 , 75,0, 76,1, 78,3, 79.4 (2C), 80,5 (20, 82,0, 95,0, 95,8, 98,5, 118,1, 118,4, 120,4 , 124 ,C, 127,9, 135,2, 130,2, 137,9 (20 , 139.7, 173,6.
D2 (0,6 ml. 16¾)__'_ 11.8, 12,4, 13,8, 15,1, 17,7, 18,4, 19,9, 20,2, 27,3, 34.4 (3C), 35,2, 35,8, 36,5, 39,8, 40,8, 41,2, 45,8, 56.4 (2C), 67,3, 67,7 (2C0, 68,3 (30 , 69,9, 70,9, 76.1, 73,3, 79,4 (20, 80,5 (20, 81,8, 94,9, 98,6, 99.7, 117,7, 118,0, 120,4, 124,8, 135,7, 138,0 (20, 139.8, 173,5.
Kahdeksan C-076-yhdisteen tyypilliset massaspektripiikit on esi-tetty taulukossa III. Ensimmäisellä rivillä on kunkin yhdisteen molekyyli-ionin massan suhde varaukseen (m/e), ja muut luvut ilmoittavat kunkin yh-" disteen pääasiallisten osien massavarauesuhteen. Samalla vaakarivillä ole vat masea-varaussuhteet osoittavat kunkin yhdisteen analogisten osien mas-sa-varauesuhdetta. Massavaraussuhteet, jotka on ilmoitettu kokonaislukuina, - saatiin laitteella T-iTR Mass Speotrometer Model LKB-9000. Masea-varaussuhteet, jotka on ilmoitettu neljän desimaalin tarkkuudella, saatiin laitteella High Resolution Yarian Mass Speotrometer Model MAT-731» 16 57781 ,Ptociocicici.~<.Hpi.ipcic>i.ippno p« dpnpLiTronoinrioctpTnciPot eo fflaJPU1in'VPiriddClr-l,Hr4rH^^4,-| HJOVO^tOtOP1t.1^PCI»-ieiClinpprlin p dCttcootoindOtOLiririoip^cid^HCt co cacoptninvnndciddr-ii-ir-ir-t-i·* .Q O TT Cl tT d rH ·ΗΡΡ01ΟΐΛΐ.1ΡΡηι.1 p ,h tn «-I in m <r et iOinOPCii.iTrid^c»eo β 00 P UI O ti d MddPrH,-l^rM,Hr4 H C\ n m
*H
m «n • · 43 rfl o< ο νώ cd vo o i-Hr^^HmcvCNc^r^p^no r*· •H *h r* 01 vj. «? u"i p ο λί 01 c\ o o ci rsi cv cd
^ CQCOr^Oin^pn OlOiOirHi-H^Hi-H-HfHrH
•H ♦H
ft .....- ............- — — -------- ' - -
•H
£ O fM
M ,* o in H Φ S £ MP, ra J o to ci n et >~i m p m p et et ei p p n o p O aS deitroointroctpincieictp^nciruet co M to <eor*tntn4rn(MC4mpiMM^r4,-4c4r4 M co P d M S —--
P
C0 -P
Eh <d m ρ h o
DJ Oi Π ON O
-4 Oi Ο VO O
^ O* pH r-i *—l
Tl <airocoiotonuiinpet.-ieteii.ippneip dotoototndoptnm.-ictptrrid.-icteo Γ* <ClpL.1U1t|-cimdiNddr-<>-trH.-l.-l^-l _ if ___
Irt OI o VO VO 04 04 Φ *r
m pH rH
• · # .Q d 00 o tr d .—1 m p p o et ti m ρ p rt - m p m p d tn m «r ci Pinopcttnvmci^et a < 00 ρ m m » d ddd<-iP.-i.-irH.-(,-t ci et tn to o o ddPp-4toptrtTtr p d o ci co d eteodcoodtOLi\.ioo*r
O d ^ ι-l CO rH dclUlUlr-ldCOCIPOClT
ti tr n n ci n μη·-ι<-ι-ι^ιοοοο«γ^- *··»·· O o (0 to ci o o to m m p «h o et et ei p p m i-ieotpcoirino peidctcitoirnd.-4eip
< 00 p 1.1 O ti cl ddd<—l^H»—IClCO
57781 π
Liitteenä olevat kuviot 1-8 ovat tarkkoja jäljennöksiä neljän C-076-yh<li9teen IR- ja NMR-spektreistä. Kuvioissa 1-4 on C-076-yhdistei-den Ala, A2a, Bla ja B2a IR-spektrit. Kuvioissa 5-8 on C-076-yhdisteiden Ala, A2a, Bla ja B2a NMR-spektrit. IR-spektrit saatiin laitteella Perkin Elmer Spectrometer Model 421 kloroformiliuoksessa. NMR-spektrit saatiin de-uteroiduesa kloroformissa laitteella Varian Nuclear Magnetic Resonance Specktrometer Model HA-100, ja spektreissä näkyvät kemialliset siirrot ovat miljoonasosina (ppm), jolloin sisäisenä standardina on käytetty tetrametyyli-silaania.
Koetulosten,mukaanlukien tässä kuvatut tutkimukset ja mittaukset, perusteella C-076-yhdisteillä uskotaan tasossa esitettynä olevan seuraava rak enn ekaava: l1 · i“3 Λ R‘° Λ/γΑ/·1'! CH3 \
L o J I 0H
ί—^/J-ch3 R3 jossa R on a-L-oleandrosyyli-a-Ii-oloaadroayjrlirjrlmt, jolla oa kaarat !V\_ HO <_/— 0 -O" CHjO^ CH20~ ja jossa katkoviiva esittää yksinkertaista tai kaksoissidosta; R^ on hydrok-si, joka on läsnä vain silloin, kun katkoviiva tarkoittaa yksinkertaista sidosta; R,, on propyyli tai butyyli ja R^ on metoksi tai hydroksi.
ia 57781
Taulukossa IT on esitetty eri yhdisteiden rakennekaavat edellä olevaan perus-tnen· Taulukko IT
R1 R2 E1
Ala kaksoissidos butyyli -OCH^ jtu kaksoissidos propyyli AXa -OCH^ A2a -Oli butyyli -OCIIj A2b -OH propyyli -OCII^ kaksoissidos butyyli
Blb kaksoissidos propyyli -0Il
B2a -OH butyyli _0H
B2b -OH propyyli -OH
Kuten voidaan odottaa, sellaiset keksinnön mukaiset yhdisteet, joissa &2 on butyyli ("a-sarjan" yhdisteet) ja vastaavat yhdisteet, joissa on propyyli ("b-sarjan" yhdisteet) käyttäytyvät samalla tavoin useimmissa talteenottovaiheissa, kuten liuotinuutossa. Kuseakin "a"- ja "V’-ylidieteparissa '^"-yhdistettä on suurempi määrä, joka on tavallisesti noin 85-99 $ "a"- ja "b"-yhdisteiden seoksen määrästä. Propyyliyhdisteet on osoitettu yhdisteiden maesaspektreillä, joissa massapiikeillä, jotka edustavat butyyliryhmän sisältäviä osia, on seuranaan piikit, joiden massa on 14 yksikköä (eli yksi CHg-ryhmä) alempi. Lisäksi Alb-komponent-tien yhdisteiden erottamiseen Ala-komponenteista on käytetty korkeapainenes-tekromatografiaa, ja näin saadaan Alb-yhdisteen massaspektri on varmistettu korkearesoluutiomassaspektrometrisesti (katso taulukko III).
Keksinnön mukaisilla uusilla yhdisteillä on merkitsevä antihelminttinen teho, ja niitä voidaan käyttää ihmis- ja eläinlääketieteessä sekä maanviljelyssä antihelmintteinä, insektisideinä ja akarisideina.
Tauti tai tautiryhmä, jota yleisesti nimitetään helmintiaasiksi, johtuu isäntäeläimen saamasta loiematotartunnasta,eIi helmintti-tartunnasta. Helmintiaasi muodostaa vallitsevan ja vakavan taloudellisen ongelman koti-eläinhoidossa, kuten sikojen, lampaiden, hevosten, nautakarjan, vuohien, koirien, kissojen ja siipikarjan hoidossa. Helminteistä matojen ryhmään kuuluvat nematodit aiheuttavat usein laajalti levinneitä ja vakavia infektioita eri eläinlajeissa. Yllä mainituissa eläimissä yleisimmin esiintyviä nematodisukuja ovat* 19 57781
Haemonchu8f Triohostrongylus,
Ostertagia, Uematodirus, Cooparia, Ascaris, Bunostomum, Oesophagostomum, Chabortia, Trichuris, Strongylus,
Trichoncma,Dictyocaulus. Capillaria, Hcterakis,
Toxocara, Ascaridia, Oxyuris, Ancylostoma, Uncinaria,
Toxascaris Parascaris.
- Jotkut näistä, kuten Nematodirus, Cooperia Ja Oesophagostomum, esiintyvät lähinnä suolistossa, kun taas toiset, kuten Haemonchue Ja Ostertagia esiintyvät pääasiassa mahalaukussa, Ja toiset, kuten Dictyoeaulus, esiintyvät keuhkoissa. Lisäksi Jotkut loiset pesiytyvät kehon muihin kudoksiin Ja elimiin, kuten sydämeen Ja verisuoniin, ihonalaisiin Ja lymfakudoksiin. Helmintiaasin nimellä tunnetut loistartunnat Johtavat isäntäeläimen anemiaan, aliravistemukseen, heikkouteen, painohäviöön, suolistoalueen Ja muiden kudosten Ja elimien seinämien vakavaan vaurioitumiseen Ja saattavat hoitamattomina Johtaa kuolemaan. Keksinnön mukaisilla C-076-yhdisteillä on yllättäen korkea teho näitä loisia vastaan, lisäksi ne ovat aktiivisia koirien Difofilaria-tartuntaa jyrsijöiden Nematospiroides-, Syphaoia, Aspiouluris-tartuntaa, lintujen Ja muiden eläinten artropodi-ektoparasiittoja, kuten puutäitä, punkkeja, täitä, kirppuja, lihakärpäsiä, lampaiden Lucilia-lajia, purevia hyönteisiä Ja sellaisia sisääntunkeutuvia kaksisiipisten toukkia vastaan, kuin Hypoderma-lajia nautakarjalla Ja Gastrophilus-lajia hevosilla Ja Cuterebra-kjia nautakarjalla Ja Gastrophilus-lajia hevosilla Ja Cutereb-ra-lajia jyrsijöillä.
Keksinnön yhdisteet ovat tehokkaita myös ihmisillä esiintyviä loisia vastaan. Mahasuolistoalueen tavallisimmat loislajit ihmisillä ovat: Ancylostoma, Neoator, Ascaris, Strongyloides, Trichinella, Capillaria, Triohuris Ja Enterobius. Muita lääketieteellisesti tärkeitä mahasuolistoalueen ulkopuolella esiintyviä loissukuja, Jotka esiintyvät veressä tai muissa kudoksissa Ja elimissä ovat rihmamadot, kuten Vuohereria, Brugia, Onohocerca, Loa, Braounoulus Ja sisälmysmatojen Strogyloides Ja Trichinella eri kehitysvaiheet. Yhdisteillä on arvoa myös ihmisellä esiintyviä artropo-dilolsia vastaan, ihmistä häiritseviä purevia Ja muita kaksisiipisiä hyönteisiä vastaan.
Yhdisteet tehoavat myös kotiloisiin, kuten torakoihin, Blatella-lajiin, vaatekoihin, Tineola-lajiin, turkiskuoriaisiin, Attagenus-lajiin Ja huonekärpäseen (Musoa domestioa).
20 57781
Yhdisteet tehoavat myös varastoidussa viljassa esiintyviin tuholaisiin, kuten Trilobium-lajiin, Tenebrio-lajiin, ja viljakasveilla esiintyviin tuholaisiin, kuten lehtipunkkeihin (Tetranychus-laji), lehtitäihin (Acyrthiosiphon-laji), vaeltaviin suorasiipisiin, kuten heinäsirkkoihin, ja kasvisolukossa eläviin hyönteisten eri kehitysasteisiin. Yhdisteitä voidaan käyttää nematosideina maaperän nematodeja ja kasviloisia, kuten Meloidogyne-lajia vastaan, millä saattaa olla merkitystä maanviljelyksessä.
Keksinnön yhdisteitä käytettäessä C-076-yhdisteet voidaan eristää ja puhdistaa ja käyttää sellaisina. Voidaan myös käyttää yhden tai useamman eri C-076-yhdisteen seosta. Ei ole tarpeen täysin erottaa eri C-076-yhdisteitä, jotka on saatu fermentointilie-mestä puhdistamalla. Yleensä saadaan seos, joka sisältää kahta tai useampaa C-076-yhdistettä, mutta josta muut ei-lähisukuiset yhdisteet on poistettu. Tällaista seosta voidaan käyttää tässä kuvatulla tavalla loistautien ehkäisyyn ja käsittelyyn. Tällainen seos sisältää tavallisesti C-076-yhdisteitä epätasasuhteissa, mutta kaikkien yhdisteiden ollessa antihelminttisesti aktiivisia seoksen anti-' takninttinen aktiviteetti voidaan tarkalleen määrittää. Varsinkin saattaa olla tarpeetonta erottaa "b"-yhdisteitä läheisistä "a"-yhdisteistä. Näiden yhdisteiden erona on ainoastaan 25-kohdassa olevan sivuketjun pituus. Näiden lähisukuisten yhdisteiden erotusta ei tavallisesti suoriteta, koska "b"-yhdistettä on läsnä vain sangen pieni %-määrä.
21 57781
Keksinnön mukaisia C-076-yhdisteitä voidaan käyttää myös sellaisia maanviljelytuholaisia vastaan, jotka aiheuttavat vahinkoa viljalle viljelyn tai varastoinnin aikana. Yhdisteitä käytetään tunnetulla tavalla ruiskutuksina, pölytyksinä, emulsioina yms., kasvavalle tai varastoidulle viljalle tämän suojaamiseksi tuholaisia vastaan.
C-076-yhdisteiden antihelminttivaikutus voidaan määrittää antamalla oraalisti ravinnon mukana erillisen C-076-yhdisteen, C-076-yhdisteseoksen, väkevöidyn uutteen tms. näyte hiirelle, joka 3 päivää aikaisemmin oli tartutettu Nematospiroides dubius-loisella. 11, 12 ja 13 päivää lääkityksen alusta tutkitaan hiiren ulostetta N.dubius-munien löytämiseksi, ja seu-raavana päivänä hiiri tapetaan ja ohutsuolessa oleva likimääräinen matojen lukumäärä lasketaan. Yhdiste on aktiivinen, kun munien ja matojen luku-, määrä on selvästi laskenut infektoituun, lääkitsemättömään kontrolliin ver rattuna.
Seuraavien esimerkkien tarkoituksena on valaista keksintöä sen paremmaksi ymmärtämiseksi.
Väliainekoostumukset? Väliaine 1 .
Dekstroosi 20 g
Peptoni 5 g
Lihauute 5 g
Primaarihiiva 3 g
NaCl 5 g
CaC0_ (pH-eäädön jälkeen) 3 g j
Tislattu vesi 1000 ml pH 7,0 Väliaine 2
Tomaattitahna 20 g
Modifioitu tärkkelys (CPC) 20 g
Primaarihiiva 10 g
CoCl2.6H20 0,005 g
Tislattu vesi 1000 ml pH 7,2-7,4 Esimerkki 1
Lyofiliepitu Streptomyces avermitilis MA-468O putki avataan aseptisesti ja sisältö suspendoidaan tulpallisessa 250 ml Erlenmeyer-pullossa olevaan 50 mlsaan väliainetta 1. Pulloa ravistellaan 3 päivää 28°C:ssa pyörivässä ravistuskoneessa 220 kierr./minuutissa kiertoradan läpimitan ollessa 5 cm. 0,2 ml tätä ymppiväliainetta käytetään väliaineen 3 vinoviljelmän 22 57781 ymppinä. Ympättyä vinoviljelmää inkuboidaan 28°C:sBa 10 päivää ja säilytetään sitten 4°C:ssa, kunnes sitä käytetään vielä neljän väliaine 3:n vi-noviljelmän ymppinä. Näitä viljelmiä inkuboidaan pimeässä 8 päivää. Yhtä niistä käytetään J:ssa 250 ml:n Erlenmeyer-pullossa olevan 50 ml:n ymppi-väliaineen n:o 4 ymppäämiseen. Ymppipulloja ravistellaan 2 päivää 27-28°C: eea pyörivässä ravistuskoneessa 220 kierr./minuutissa kiertoradan läpimitan ollessa 5 cm. Pullojen sisällöt yhdistetään» ja yhdistettyä lientä käytetään ymppäämään (5 ^ ymppiä) tulpilla varustetuissa 250 ml;n Erlen-meyer-pulloissa olevat erilaiset tuotantoväliaineet (40 ml kutakin). Väliainetta 2, 5 ja 6 sisältäviä pulloja inkuboidaan 4 päivää 28°C:ssa ravistellen pyörivässä ravistuskoneessa 220 kierr./minuutissa kiertoradan läpimitan ollessa 5 cm. Saatu C-076-pitoinen liemi otetaan talteen,ja siitä määritetään antiielndnttinen aktiviteetti. Kaikissa tapauksissa 6,2 ml täys-lientä ja linkoamalla 25 ml:eta täyslientä saatu kiinteä aine olivat täysin aktiivisia hiiren N.dubius-helmintti-infektiossa.
Väliaine 5 (vinovll.ielmäväliaine)
Dekstroosi 10,0 g
Bacto-asparagiini 0,5 g k2hpo4 0,5 g
Bacto-agar 15,0 g
Tislattu vesi 1000 ml pH 7,0 Väliaine 4 (ymppivällalne)
Liukeneva tärkkelys 10,0 g
Ardamine pH 5,0 g NZ Amine E 5,0 g lihauute 3,0 g
MgS04.7H20 0,5 g
Sereloosi lt0 g
Na2HP04 0,190 g KH2P04 0,182 g
CaCOj 0,5 g
Tislattu vesi 1000 ml pH 7,0-7,2 Väliaine 5
Tomaattitahna 40,0 g
Kaurajauho 10,0 g
Sereloosi 10,0 g 23 57781
Maissinliotusliemi 5*0 &
Hivenaineseos 10,0 g
Tislattu vesi 1000 ml pH 6,8
Hivenaineseos
FeS0,.7H„0 1000 mg 4 2
MnSO..4H-0 1000 mg 4 2
CuC12.2H20 25,0 mg
CaCl2 100,0 mg
HgBOj 56,0 mg (NH4)2Mo04.4H20 19,0 mg
ZnS04.7H20 200,0 mg
Tislattu vesi 1000 ml
pH
Väliaine 6 CPC teollinen modifioitu tärkkelys (tuottaja CPV Corp.) 40,'0 g
Tislaamon liukeneva aine 7,0 g
Autolysoitu hiiva (Ardamine pH, tuottaja: Yeast Products Inc.) 5,0 g
CoCl2.6H20 50,0 mg
Tislattu vesi 1000 ml pH 7,5
Esimerkki 2 0,5 x 1,0 cm suuruinen silmukallinen yhtä esimerkissä 2 väliaineesta 5 valmistettua vinoviljelmää käytetään ymppäämään 250 ml:n tulpallisessa Erlenmeyer-pullossa oleva 50 ml ymppiväliainetta n:o 4. Ymppipulloa ravistellaan 1 päivä 27-28°C:ssa pyörivässä ravistuskojeessa kierrosluvulla 220 kierr./min. kiertoradan läpimitan ollessa 5 cm. Ymppipulloa säilytetään sitten 4°C:ssa, kunnes sitä käytetään. Pullon sisältöä käytetään ymppäämään (5 i° ymppiä) 20:ssä 250 ml:n tulpattomassa Erlenmeyer-pullossa oleva 40 ml väliainetta n:o 2. 4 päivän inkuboinnin jälkeen 28°C:ssa pyörivässä ravistuskoneesea 220 kierr./minuutissa kiertoradan ollessa 5 cm, 19 pullon sisältö yhdistetään. Yhdistetty, C-076-pitoinen ferementaatioliemi suodatetaan, jolloin saadaan 500 ml suodosta ja 84 g huovastoa. 78 g huovastoa uutetaan 150 ml:11a asetonia sekoittaen 0,5 tunnin ajan, sitten suodatetaan. Suodatinkakku pestään 50 ml:11a asetonia,ja suodoe ja pesunesteet yhdistetään ja väkevöidään 46,5 ml:ksi. 50 ml:aan väkevöitettä lisätään laimeata kloorivetyhappoa pH:n säätämiseksi 4:ään, ja sitten uutetaan 3 kertaa 50 ml:11a kloroformia. Uutteet kuivataan suodattamalla kuivan sh 57781
Infusorial Earth-kerroksen (Super-Cel) lävitse, yhdistetään ja haihdutetaan kuiviin tyhjössä. Öljymäinen C-076-jäännös, joka painaa 91,4 mg, liuotetaan kloroformiin niin, että saadaan 5 ml liuosta, joka vastaa 1 ia viljelyliemen tilavuudesta. Tällä talteenottomenetelmällä saatu C-076 on täysin aktiivinen hiirien N.dubius-infektiota vastaan. Lisäksi kloroformiuutolla saadaan täysliemen 70-kertainen C-076-yhdieteen puhdis-tustulos.
Esimerkki 3 Vaihe A
250 ml:n tulpalliseen Erlenmeyer-pulloon, joka sisältää 50 ml väliainetta 7, ympätään Streptomyces avermitilis MA-4680:a jäädytetystä pullosta. Inkuboidaan 24 tuntia 28°0sssa pyörivässä ravistuskoneessa kierrosnopeudella 160 kierr./minuutissa kiertoradan läpimitan ollessa 5 cm.
Väliaine 7
Dekstroosi 1 g CPC teollinen modifioitu tärkkelys 10 g
Lihauute 3 g HZ Amine E 5 g
Autolysoitu hiiva (Ardamine pH) 5 g
MgS04.7H20 0,05 g
Na2HP04 0,19 g KS2P04 0,182 g
CaCOj 0,5 g
Tislattu vesi 1000 ml
pH 7,0-7,2 Valhe B
Kahteen 2 litran tulpalliseen Erlenmeyer-pulloon, jotka kumpikin sisältävät 500 ml väliainetta 7, ympätään 10 ml vaiheen A pullon sisältöä. Väliaineita inkuboidaan 24 tuntia 20oCsesa pyörivässä ravistuskoneessa kierrosnopeudella 160 kierr./minuutissa kiertoradan läpimitan ollessa 5 om.
Vaihe C
756 litran ruostumattomasta teräksestä valmistettuun fermenttoriin, joka sisältää 467 litraa väliainetta 8, lisätään 1 litra vaiheen B fermen-tointiväliainetta sellaisenaan. Fermenttoria sekoitetaan 96 tuntia 28°C:ssa kierrosnopeudella I50 kierr./minuutissa samalla johtaen ilmaa 28 l/min.
57781 25 Väliaine 8
Tomaattitahna 20 g/l
Primaarihiiva N.F. 10 g/l Tärkkelys, modifioitu, CPC 20 g/l
CoClg.öEgO 5 mg/l
Polyglykoli 2000 0,321 ml/l
Tislattu vesi q.s.
pH 7,2-7,4 Tämän ajan kuluttua 15,5 1 kasvatuslientä suodatetaan ja C-076-pi-toinen huovasto pestään vedellä. Märän huovaston (2,268 g) uuttamiseksi sitä sekoitetaan yhdessä asetonin kanssa (3 l). Seos suodatetaan, euodos väkevöidään 1550 ml:ksi, ja pH säädetään laimealla HClsllä 4,0:ksi. Tämä liuos uutetaan 3 kertaa saman suuruisilla tilavuuksilla kloroformia. Kloro-formiuutteet kuivataan suodattamalla Infusorial Earth-kerroksen (Super-Cel) lävitse, ne yhdistetään ja haihdutetaan kuiviin tyhjössä. Jäännöksenä saatu C-076-öljy painaa 5,12 g 3,3 mg on täysin aktiivista hiirien N.dubius-infektiota vastaan.
4,69 g tätä öljyä liuotetaan 142 ml:aan kloroformia ja kromatogra-foidaan pylväällä, joka sisältää 90 g kloroformin kanssa pakattua pii-happogeeliä. Pylvään kehitys suoritetaan 1400 ml:11a kloroformia. Pylväs eluoidaan sitten kloroformi/etanoliseoksella (49:l), ja 5 ml:n fraktioita kerätään 145· Sitten pylväs eluoidaan kloroformi/etanoliseoksella (19*1), ja kerätään fraktiot 146-226, 5 ml kukin. Fraktiot 49-72 yhdistetään ja haihdutetaan kuiviin, jolloin saadaan 200 mg öljyä (A). Fraktiot 79-194 yhdistetään ja haihdutetaan kuiviin, jolloin saadaan 291 mg öljyä (B).
400 yug kumpaakin fraktiota on täysin aktiivinen hiiren N.dubius-infaktiota vastaan. Nämä kaksi fraktiota (A ja B) analysoidaan erikseen piihappo-geelillä ohutkerroskromatografialevyillä (Quanta/Gram QIF-levyt, saatavana firmasta Quanta/Gram Inc., Fairfield, New Jersey). Levyt kehitetään kloroformi/metanoliseoksella (l9*l). Täplien ultraviolettiaktiivisuus analysoidaan, ja kummankin fraktion yhdellä täplällä on C-076-yhdisteiden tyypillinen UV-absorptio (katso taulukko I). Fraktion A täplällä, jonka Rf on 0,83, ja fraktion B täplällä, jonka Rf on 0,57, on tällainen absorptio. Edellinen vastaa C-076 A-yhdisteitä ja jälkimmäinen C-076-B-yhdisieitä.
199 mg yllä saatua öljyä (A) kromatografoidaan kloroformipakatulla piihappogeelillä (80 g), eluoidaan kloroformia/metanoliseoksella (l99*l)> kunnes on koottu 520 ml, sitten kloroformi/metanoliseoksella (99*l), jolloin kootaan aina 10 ml:n fraktioita. Fraktioista 630-720 ml saadaan 30,4 mg, 26 57781 fraktioista 730-950 ml 78,4 mg ja fraktioista 950-1040 ml 20 mg öljy-mäistä ainetta. Fraktiot 1 ja 2 sisälsivät C-076-A-komponentteja ja ne olivat täysin aktiivisia tasoilla 1,0, 0,5 ja 0,25 mg niitä kokeiltaessa hiirien N.dubius-infektiossa.
Esimerkki 4 Vaihe A
250 ml:n tulpalliseen Erlenmeyer-pulloon, joka sisältää 50 ml väliainetta 8, ympätään jäädytetty pullollinen Streptomyces avermitilis MA 4680. Inkuboidaan 28°C:esa 24 tuntia pyörivässä ravistuskoneessa kier-rosnopeudella 160 kierr./minuutissa kiertoradan läpimitan ollessa 5 om.
Vaihe B
2 litran tulpalliseen Erlenmeyer-pulloon, joka sisältää 500 ml väliainetta 8, ympätään 10 ml vaiheen A pullon sisältöä. Väliainetta inkuboidaan 2S°Cisea 24 tuntia pyörivässä ravistuskoneessa kierrosnopeudella 160 kierr./minuutissa kiertoradan läpimitan ollessa 5 cm.
Valhe C
189 litran ruostumattomasta teräksestä valmistettuun Fermenttoriin, joka sisältää 160 litraa väliainetta 9, lisätään 500 ml vaiheesta B saatua ymppiä. Fermenttoria inkuboidaan 24 tuntia 28°C:ssa sekoittaen 150 kierr./ minuutissa ja johtaen ilmaa 85 l/min.
Väliaine 9
Dekstroosi 1 g/l
Maissitärkkelys 10 g/l
Lihauute 3 g/l
Autolysoitu hiiva (Ardamine pH) 5 g/l MgS04.7H20 0,05 g/l
Na2HP04 0,10 g/l KH2P04 0,182 g/l
CaCOj 0,5 g/l
Tislattu vesi q.s.
pH 7,0-7,2 <
Vaihe D
756 litran ruostumattomasta teräksestä valmistettuun fermenttoriin, joka sisältää 467 1 väliainetta 6, lisätään 43 1 vaiheesta C saatua ymppiä. Fermenttoria inkuboidaan 144 tuntia 280Ctssa sekoittaen 130 kierr./min. Valhe E
Tämän ajan kuluttua koko liemi suodatetaan, C-076-pitoinen suo-datinkakku pestään vedellä. Suodatinkakku lietetään 120 litraan asetonia, v 57781 sekoitetaan JO minuuttia, sitten suodatetaan ja kiinteä aine pestään 30 litralla asetonia. Asetonipesunesteet yhdistetään ja haihdutetaan alennetussa paineessa 40 litraksi. Väkevöitteen pH säädetään laimealla kloo-rivetyhapolla 4»0:ksl. Väkevöite uutetaan 3 kertaa·samankokoisilla kloroformit ilavuuksilla. Kloroformiuutteet kuivataan suodattamalla kuivan Infusorial Earth-kerroksen (Super-Cel) lävitse. Uutteiden mentyä Super-Cel-kerroksen lävitse ne yhdistetään. Yhdistetyt uutteet väkevöidään alennetussa paineessa 4 litraksi. Kloroformiväkevöite suodatetaan ja eluoidaan kloroformilla 2,4 kg piihappogeeliä kloroformissa sisältävässä pylväässä, jolToin Kootaan 8 3,5 "litran fraktiota. Sitten pylväs eluoidaan klo-roformi/metanoliseoksella (49?l)* jolloin kootaan jälleen 8 3,5 litran fraktiota (fraktiot 9-16). Fraktio nro 3 haihdutetaan kuiviin, jolloin saadaan 76 g öljymäistä ainetta, joka eislltää huomattavan määrän C-076-yhdis-teitä.
97 $ tätä ainetta liuotetaan 685 ml:aan metyleenikloridia ja kro-matografoidaan 800 g:lla piihappoa (Mallinckrodt Chemical Co., 100 mesh, seulottu uudelleen 80 meshin seulalla). Pylväs (läpimitta 7»62 om, korkeus 36 cm) kehitetään noin 7,5 litralla metyleenikloridi/benteeeniseosta (7*3) ja senjälkeen 2,25 litralla 5 $ isopropanolia sisältävää metyleeniklo-ridi/bentseeniseosta (7*3)· 5 # isopropanolia sisältävällä metyleeniklo-ridi/bentseeniseoksella eluoitu fraktio, joka sisältää vahvasti värillisen vyöhykkeen, sisältää olennaisesti kaiken C-076-materiaalin, kuten ohut-kerro skromatografiän avulla (esimerkissä 5 kuvatulla tavalla) määritettiin. Tämä fraktio (500 ml) haihdutetaan ja kromatografoidaan uudelleen 105 g: 11a piihappogeeliä metyleenikloridissa (pylvään läpimitta 3*7 om, korkeus 18 cm). Pylväs kehitetään 100 ml:n annoksilla metyleenikloridia, jotka sisältävät 5, 10 ja 20 $ eetteriä. Eluoimalla edelleen 20 ^ eetteriä sisältävällä me-tyleenikloridilla saadaan 2 värillistä vyöhykettä. Näiden vyöhykkeiden välillä olevat fraktiot sisältävät käytännöllisesti katsoen kaiken C-076-materiaalin, kuten ohutkerroskromatografiällä voidaan todeta.
C-076-pitoinen fraktio kromatografoidaan uudelleen 59 g*Ha piihappogeeliä (pylvään läpimitta 5,7 cm ja korkeus 11 cm) metyleenikloridissa. Pylväs kehitetään 10 ^ eetteriä sisältävällä metyleenikloridilla. Ensimmäisen aineksen alettua eluoitua kerätään JO ml:n fraktio ja senjälkeen 26 kpl 5-6 mlsn fraktioita. Fraktiot 3-26 yhdistetään, jolloin saadaan 1,35 g materiaalia, joka analysoidaan ohutkerroskromatografiällä (piihappogeelilevyt, Analtech GF 254» kehitys 5 i° isopropanolia sisältävällä metyleenikloridilla). Yhdiste, jonka Rf on tässä systeemissä 0,28, on C-O76 AI.
28 57781
Pylväs eluoidaan sitten 20 $ eetteriä sisältävällä metylee-nikloridilla (200 ml) ja sen jälkeen 50 i eetteriä sisältävällä metylee-nikloridilla (800 ml). Tällöin eluoituu pieni määrä C-076 Al/A2-seosta ja sitten kaikki C-076 A2. C-076 A2-fraktion kokona!shaihdutusjäännös on 800 mg.
Edelleen eluoimalla 5 i isopropanolia sisältävällä metyleeniklo-ridilla saadaan C-076 Bl-ahsorption perusteella. C-076 Bl:llä ja A2:lla on sangen samanlaiset Bf-arvot ohutkerroskromatografiässä piihappogeelillä (Analtech GP 254) 5 $> isopropanolia sisältävää metyleenikloridia käytettäessä. Nämä komponentit voidaan kuitenkin selvästi erottaa käytettäessä samoilla levyillä kehittämiseen 15 i isopropanolia sisältävää heksaania.
Koko C-076 Al-fraktio viedään 14slie piihappogeelilevylle (Analtech HF 254. 20 x 20 cm. kerrospaksuus 500 ju). Levyt kehitetään 10 i isopropanolia sisältävällä heksaanilla. Vyöhyke, joka sisältää C-076 Al:n, poistetaan levyistä, uutetaan eetterillä, haihdutetaan ja viedään jälleen 6 levylle ja kehitetään 5 kertaa 5 i isopropanolia sisältävällä heksaanilla. C-076 AI poistetaan jälleen levyiltä ja kromatografoidaan uudelleen, kehitetään puhtaalla eetterillä, jolloin saadaan olennaisen puhdasta C-076-AI. Tämän näytteen IE- ja NMR-spektrit on esitetty kuvioissa 1 ja 5 sekä taulukossa II.
C-076 A2-fraktio kromatografoidaan 10;llä piihappogeelilevyllä (Analteoh HE 254), kehitetään 5 kertaa 15 i isopropanolia sisältävällä heksaanilla, jolloin saadaan olennaisen puhdasta C-076 A2-yhdistettä.
Tämän näytteen IE- ja NME-spektrit on esitetty kuvioissa 2 ja 6 sekä taulukossa II.
C-076 Bl-fraktio kromatografoidaan 2 levyllä (samat kuin yllä) 15 i isopropanolia sisältävällä heksaanilla, jolloin saadaan 55 mg olennaisen puhdasta C-076 Bl-yhdistettä. Tämän näytteen NMB-spektri on esitetty kuviossa 7 ja taulukossa II.
Esimerkki 5
Esimerkissä 4 kuvattu fermentointi toistetaan kahdesti, ja ela-tusliemet yhdistetään kokonaisuudessaan. Yhdistetyn liemen käsittely suoritetaan esimerkissä 4 kuvatulla tavalla, jolloin saadaan 5,3 1 kloroformi-uutetta, joka sisältää 60 mg/ml kuiva-ainetta, ja jonka C-076-pitoisuus on ohutkerroskromatografian mukaan 0,5 i· 3 litraa tätä kloroformiuutetta kromatografoidaan 2400 g:11a pii-happogeeliä (Davidson Grade 62) kloroformissa. Pylväs 9,5 x 122 cm) kehitetään 8illa 3800 ml:n annoksella kloroformia (fraktiot 1-8) ja sitten 7 t 29 577 81 8:11a 3800 ml:n annoksella kloroformi/raetanoliseosta (49s1* fraktiot 9-16). Yksittäiset fraktiot analysoidaan ohutkerroskromatografiällä (piihappo-geelilevyt, Quanta/Gram QIF), kehitys kloroformi/metanolilla 19:1. Fraktiot 9-H» 12-13 Ja 14 haihdutetaan kukin kuiviin, Jolloin saadaan fraktioista 9-11 6,63 kiinteätä ainetta, Joka sisältää C-0J6 A-komponentteJa, fraktioista 12-13 24,91 g kiinteätä ainetta, Joka sisältää C-076 B-kompo-nentteja, Ja fraktiosta 14 4,71 g kiinteätä ainetta, Joka sisältää C-076 B-komponentteJa.
„ Fraktioiden 12-14 materiaali (29,62 g) yhdistetään, liuotetaan 100 ml saan metyleenikloridia Ja kromatografoidaan 400 g:11a piihappogeeliä (Davidson Grade 62) metyleenikloridissa. Pylväs eluoidaan 1500 ml:11a mety-leenikloridi/2-propanoliseosta (99:1), 1500 mlslla metyleenikloridi/2-pro-panolia (49sl), 2000 mlslla metyleenikloridi/2-propanolia (19:1) Ja 1000 millä metyleenikloridi/2-propanolia (9»l)· Eluenttitilavuuksista 5500-6000 ml (2,56 g) Ja 6ΟΟΟ-65ΟΟ ml (5,03 g) saadut haihdutusJäännökset lihotetaan 25 mlsaan metyleenikloridia Ja kromatografoidaan 60 g:11a piihappogeeliä hekeaanissa. Esiajot suoritetaan 70 mlslla heksaania Ja 100 mlslla hek-saani/dietyylieetteriseosta (4*l) Ja pylväs kehitetään sitten 600 mlslla hekeaani/dietyylieetteriseosta keräten 200 mlsn fraktioita, Ja lopuksi eluoidaan 700 mlslla eetteriä keräten 100 mlsn fraktioita. Eluenttitilavuuksista 400-600 ml saadaan 2,035 g C-076 Bl-pitoista kiinteätä ainetta, tilavuuksista 600-1100 saadaan 0,881 g C-076 Bl/B2-komponentteJa sisältävää kiinteätä ainetta, Ja tilavuuksista IIOO-I5OO ml saadaan 0,381 g C-076 B2-pitois-ta kiinteätä ainetta.
C-076 Bl/B2-komponentti8eos liuotetaan sitten 4,2 mlsaan metanoli/ veeieeoeta (4*l) Ja kromatografoidaan C18 Poraeil-pylväällä (Bondapak-37-75 mikronia) samassa liuottimessa. Käytetty käänteiefaasikorkeapainepylväs (polaarisemmat komponentit eluoituvat ensin) on 1,2 m korkea Ja 16 mm läpimittainen, Ja eluointi suoritetaan nopeudella 800 ml/tunti keräten 21,3 mlsn fraktioita. C-076-yhdisteet havaitaan monitorin avulla fraktioiden UV-ab-sorptiosta. C-076 B2 saadaan fraktioista 24-37 Ja C-076 Bl-fraktioista 51-70, Jolloin saadun B2:n määrä on 195,4 mg Ja Blsn määrä 137 mg.
Kumpikin näyte kromatografoidaan sitten erikseen 4 g:11a piihappogeeliä (Davidson Grade 62) metyleenikloridissa. Pylväät eluoidaan 35 mlslla metyleenikloridi/metanolieeosta (9*1)· Kummastakin pylväästä saadut eluentln viimeiset 20 ml kootaan Ja haihdutetaan kuiviin, Jolloin saadaan vastaavasti 155,3 mg C-076 B2-yhdistettä Ja 90 mg C-076 Bl-yhdistettä.
30 57781
Sitten 50 mg C-076 Bl-komponenttia ja 100 mg C-076 B2-komponenttia kromatografoidaan preparatiivisilla piihappogeelilevyillä (Analtech HF 254), kehitetään 12 $ isopropanolia sisältävällä heksaanilla ja sitten eetterillä, jolloin saadaan olennaisen puhtaat C-076 Bl- ja C-076-B2-komponentit. Häin saatujen C-076 Bl:n ja C-076 B2:n IR-spektrit on esitetty kuvioissa 3 ja 4· Saadun C-076 B2»n NMR-spektri on esitetty kuviossa Θ.
Esimerkki 6 25Ο ml:n tulpalliseen Erlenmeyer-pulloon, joka sisältää 50 ml seu-raavaa väliainetta
Laktoosi 2,0 $
Tislaamon liukeneva aine 1,5 9^
Autolysoitu hiiva, Ardamine pH 0,5 pH ennen sterilointia 7>0 ympätään Streptomyces avermitilis MA 4848-kantaa sisältävä jäädytetty pullollisella ja inkuboidaan pyörivässä ravietuskoneessa kierrosnopeudella I50 kierr./minuutissa 28°Ctssa 24 tuntia.
10 ml yllä saatua fermentointiväliainetta käytetään ymppäämään 500 ml samaa väliainetta 2 litran tulpallisessa Erlenmeyer-pullossa. Fermentointiväliainetta inkuboidaan sitten pyörivässä ravietuskoneessa kierrosnopeudella 150 kierr./minuutissa 28°C»ssa 24 tuntia.
Kaikki edellä saatu väliaine käytetään ymppäämään 467 litraa väliainetta 756 litran ruostumattomasta teräksestä valmistetussa fermenttorissa. Väliaineen koostumus:
Laktoosi 2,0 $
Tislaamon liukeneva aine 1,5
Autolysoitu hiiva, Ardamine pH 0,5 $
Polyglykoli 2000 0,52 ml/l pH ennen sterilointia 7*0
Fermentointiväliainetta inkuboidaan 28°C:ssa 40 tuntia johtaen ilmaa 283 l/min. ja sekoittaen nopeudella 130 kierr./min.
23Ο 1 yllä saatua väliainetta käytetään ymppäämän 4310 1 väliainetta 5670 litran ruostumattomasta teräksestä valmistetussa fermenttorissa. Väliaineen koostumus on seuraava:
Dektroosi 4,5 $
Peptonisoitu maito 2,4 ^
Autolysoitu hiiva, Ardamine pH 0,25
Polyglykoli 2000 2,5 ml/l pH ennen sterilointia 7*0 31 57781
Fermentointia jatketaan 144 tuntia 26°C:ssa puhaltaen ilmaa 1,5 mV min. ja sekoittamalla kierrosnopeudella 120 kierr./min.
Fermentointiliemi suodatetaan, ja suodatinkakku pestään nojin 550 litralla vettä, suodos ja pesunesteet hyljätään. Suodatinkakku sekoitetaan noin 1500 litraan asetonia, ja noin tunnin sekoituksen jälkeen suodatetaan. Suodatinkakku pestään noin 150 litralla asetonia ja 40 litralla deionoitua vettä, jolloin saadaan noin 2000 litraa uutetta.
Edellä oleva fermentointi ja uutto toistetaan samassa mittakaavassa, jolloin saadaan uusi 2000 l:n erä asetoniuutetta, joka yhdistetään ensim- *r' maisen uutteen kanssa, ja yhdistetty uute haihdutetaan noin 800 litraksi. Väkevöitteen pH säädetään väkevällä kloorivetyhapolla noin 4,7*ään, ja siihen lisätään noin 800 1 metyleenikloridia. Yhdistettyjä liuottimia sekoitetaan noin 4 tuntia, sitten ne erotetaan. Vesikerrokseen lisätään jälleen 800 1 metyleenikloridia,ja sekoitetaan noin 4 tuntia. Kerrokset erotetaan, ja kumpaakin metyleenikloridiuutetta käsitellään erikseen 10 kg:11a Super-Celiä ja suodatetaan. Kumpikin uute haihdutetaan yhteistilavuuteen noin 60 1.
Esimerkki 7
Edellisestä esimerkistä saatu 60 1 C-076-pitoista metyleenikloridi-liuosta haihdutetaan kuiviin tyhjössä, jäännökseen lisätään 60 1 metanolia ja sitten haihdutetaan kuiviin. Tämä suoritetaan 5 kertaa kaiken metyleeni-kloridin poistamiseksi. Lopullisen metanoliväkevöitteen tilavuus on noin 36 1. Metanoliliuos saa seistä yön yli, ja sitten se suodatetaan. Suodatinkakku pestään 40 litralla uutta metanolia ja metanolisuodokset ja pesunesteet yhdistetään. Metanoliliuokseen viedään 95 1 etyleeniglykolia ja 130 1 heptaania. 2-kerroksista liuosta sekoitetaan,'5 minuuttia, ja alempi kerros (etyleeniglykoli ja metanoli) erotetaan. Heptaaniliuos pestään seoksella, jossa on 20 1 etyleeniglykolia ja 6,3 1 metanolia. 5 minuutin sekoittamisen jälkeen alempi kerros erotetaan ja yhdistetään ensimmäiseen etyleeniglykoli-metanoliuutteeseen. Etyleeniglykoli/metanoliuutteeseen lisätään samansuuruinen vesimäärä (noin 150 l), joka sisältää 79 g HaOl/l. Tämä liuos uutetaan I50 litralla etyylieetteriä sekoittaen 5 minuuttia. Eetterikerros pestään 75 litralla vettä (l/2 tilavuutta) ja sekoitetaan 5 minuuttia, minkä jälkeen kerrokset erotetaan. Tämä toimenpide toistetaan vielä 2 kertaa (loppu-vesi sisältää 20 g NaCl/l), jolloin saadaan 110 litran lopullinen eetteri-kerrostllavuus. Eetterikerros väkevöidään tyhjössä mahdollisimman pieneen tilavuuteen, jolloin väkevöinnin aikana lämpötila pidetään 25°C:n alapuolella. Jäännökseen lisätään 40 1 metyleenikloridia, ja liuos haihdutetaan kuiviin.
32 57781 Tämä toistetaan, ja lopullinen jäännös haihdutetaan tyhjössä 50°C:ssa kuiviin.
Esimerkki 8 50 cm läpimittaiseen pylvääseen viedään metyleenikloridissa 34 kg:n kerros aktivoitua aluminiumoksidia ja sitten 34 kg:n kerros aktiivihiiltä. Edellisestä esimerkistä saatu jäännös liuotetaan metyleenikloridiin 34 litraksi, ja liuos viedään pylvääseen ja eluoidaan 54 litralla metyleeniklo-ridia. Nämä fraktiot hyljätään. Sitten pylväälle viedään 3 $> isopropanolia sisältävä metyleenikloridi (20,8 1 isopropanolia ja 660 1 metyleenikloridia) ja eluoidaan noin 200 litran fraktioita. Yhdistetyt isopropanoli-metyleeni-kloridifraktiot haihdutetaan tyhjössä noin 20 litran tilavuuteen haude-lämpötilan ollessa 60°C. Hauteen lämpötila lasketaan noin 45°C:seen, ja uute haihdutetaan kuiviin tyhjössä. Jäännös liuotetaan seokseen, jossa on 10 osaa metyleenikloridia, 10 osaa heksaania ja 1 osa metanolia, 15 litran kokonaistilavuudeksi. Tämä liuos viedään suoraan Sephadex LH-20-pylvääseen seuraavassa esimerkissä.
Esimerkki 9 50 cm läpimittaiseen pylvääseen viedään metanolisea 56 kg Sephadex LH-20 (saatavana firmasta Pharmacia Fine Chemicals, 800 Centennial Avenue, Piscataway, New Jersey 08854)» ja pylväs pestään liuottimena, jossa on 10 osaa metyleenikloridia,,10 osaa heksaania ja 1 osa metanolia. Esimerkin 8 C-076-liuoksen 1/4 viedään pylvääseen ja pylväs eluoidaan nopeudella 250 ml/min. Kaksi 20 litran esifraktiota kerätään ja hylätään, sitten kerätään 20 2 litran C-076-yhdisteitä sisältävää fraktiota ja sitten vielä yksi 20 litran jälkifraktio, joka hyljätään. Fraktioissa 1-8 on C-076 A-yhdisteitä ja fraktioissa 9-20 C-076 B-yhdisteitä.
Esimerkki 10
Esimerkin 9 menetelmä toistetaan samassa mittakaavassa vielä 3 kertaa, ja kaikki C-076 B-pitoiset fraktiot (fraktiot 9-20) yhdistetään ja haihdutetaan kuiviin, jolloin saadaan 818 g raakaa C-O76 B-komponentti-seosta. Näytteessä on 55 i» C-076 Bl- ja 39 $ C-076 B2-yhdietettä. 680,5 g tätä näytettä liuotetaan 2 litraan metyleenikloridia, ja liuos pannaan 22 litran kolmikaulapyöröpohjakolviin, ja siihen lisätään 13,6 1 metanolia. Metyleenikloridi poistetaan tislaamalla. Lisätään 13,6 1 etyleeniglykolia samalla kun metanoli tislataan pois alennetussa paineessa. Tislausnopeus pidetään sellaisena, että liuoksen lämpötila ei alita 65°C:ta. Kun etylee-niglykolin lisäys on päättynyt, liuos jäähdytetään 5°C:seen ja pidetään siinä 16 tuntia. Kiteet suodatetaan ja pestään 1 litralla kylmää etyleeni- 33 5 7 7 81 glykolia. Kiteet liuotetaan sitten jälleen 2 litraan metyleenikloridia, ja liuos pannaan 22 litran kolmikaulapyöröpohjakolviin. Yllä kuvattu menettely toistetaan kaksi kertaa. Ensimmäisellä kerralla käytetään sekä meta-nolia että etyleeniglykolia 12,5 1 kumpaakin ja toisella kerralla kumpaakin 15,6 1. Lopuksi saadut kiteet pestään 1 litralla kylmää etyleeniglykolia ja 1 litralla vettä. Kiteet liuotetaan 4 litraan bentseeniä ja kuivataan suodattamalla natriumsulfaattikerroksen lävitse. Bentseeniliuos väkevöi-dään 2 litraksi ja lyofilisoidaan, jolloin saadaan 24,1 g valkeata jauhetta, joka sisältää 98 $ C-076 Bl- ja 1 ^ C-076 B2-komponenttia.
Kahdesta ensimmäisestä kiteytyksestä saadut emäliuokset (22 l) yhdistetään ja laimennetaan 22 litralla vettä. Vesiliuokset uutetaan 60 litralla tolueenia ja sitten jälleen 15 litralla tolueenia. Tolueeniuutteet pestään 48 litralla vettä. Orgaaninen faasi suodatetaan Super-Cel-kerroksen lävitse jäännösveden poistamiseksi ja haihdutetaan, jolloin saadaan 556 g kiinteätä ainetta, joka sisältää 79 # C-076 B2- ja 16 $ C-076 Bl-yhdistettä.
Esimerkki 11
Esimerkin 9 neljästä Sephadex LH-20-pylväästä saadut fraktiot 1-8, jotka sisältävät C-076 A-yhdisteitä, yhdistetään. Seoksen korkeapaine-nestekromatografia-analyysillä saadaan selville, että seos sisältää 252 g C-076 A2a, 16 g A2b, 94 g Ala ja 24 g Alb-yhdistettä. Materiaali liuotetaan liuotinsysteemiin heksaanistolueenitmetaroli (6:l:l), ja liuos viedään Sephadex LH-20-pylvääseen, jolla on samat mitat kuin esimerkissä 9· Fraktioita kootaan 25Ο ml/min., 20 litran esifraktio hylätään. Edelleen eluoimalla saadaan vielä 2 20 litran esifraktiota, jotka myös hylätään 50 4 litran C-076-pitoista fraktiota. Fraktiot 3-8 sisältävät pääasiassa C-076 Al-komponentteja (40,2 g Ala ja 6,7 g Alb), ja fraktiot 29-36 sisältävät C-076 A2-yhdisteitä (117,2 g A2a ja 7,35 g A2b). Fraktiot 9-28 sisältävät C-076 AI- ja A2-yhdisteiden seosta.
Esimerkki 12 150 g:n C-O76 Bl-näyte esimerkistä 10 liuotetaan 3 litraan liuotin-seosta heksaani:tolueeni:metanoli (3:l:l). Liuos viedään yllä olevassa seoksessa Sephadex LE-20-pylvääseen (pylvään dimensiot ovat samat kuin esimerkissä 9), ja fraktioita kootaan 250 ml/min. Aluksi kootaan 2 20 litran annosta liuotinseosta, jotka hylätään sitten 10 litran esifraktio, joka hylätään* Tämän jälkeen saadaan 30 2 litran fraktiota, jotka sisältävät C-076-yhdisteitä. Fraktiot 1-13 ja 25-30 hylätään. Fraktiot 14-16 yhdistetään, ja ne sisältävät 80 g C-076-yhdistettä pääasiassa Blasta. Fraktiot 22-24 yhdistetään ja ne (6,7 g) sisältävät pääasiassa C-076 Blbitä. Fraktiot 17-21 sisältävät CO76 31a:n ja Blb:n seosta.
3,1 57781
Yllä saadut fraktiot 17-21 yhdistetään, väkevöidään ja viedään sitten Sephadex LH-20-pylvääseen samassa liuotinsysteemissä kuin yllä. Otetaan 3 20 litran esifraktiota, jotka hyljätään. Sitten kerätään C-076-pitoisia fraktiota seuraavasti 5 2 litran fraktiota (fraktiot 1-5), 20 1 litran fraktiota (fraktiot 6-25) ,1a 10 2 litran fraktiota (fraktiot 26-35)· Fraktiot 1-15 hyljätään, fraktiot 16-21 sisältävät 13,5 g C-076 Blarta ja 0,4 g C-076 Blb:tä, fraktiot 22-26 sisältävät 44 g C-076 Bla:ta ja 0,13 g C-076 Blh:tä. Fraktiot 27-30 sisältävät 10,2 g C-076 Blarta ja 0,8 g C-076 Blbitä.
Esimerkki 13
Kaikkien kahdeksan C-076-komponentin seos kromatografoidaan kor-keapainenestekromatografiapylväällä (4 mm x 30 cm), joka on täytetty 10 ^u:n Bondapak C^g piihappogeelillä (Waters Assosiates Inc., Maple Street, Milford, Massachusetts 01757)· Eluointi suoritetaan vakiolämpötilassa 40°C metanoli/vesiseoksella 85;15 (v/v). Virtausnopeudella 1,2 ml/min. saadaan kaikki 8 yhdistettä erilleen, ja eluutiotilavuudet, jotka mainituissa vakio-olosuhteissa ovat yhdisteille tyypilliset, ovat seuraavat:
Eluutiotilavuus (Ve) ml C-07G U2b 5,90 C-076 B2a 6,52 C-076 A2b 7,12 C-076 A2a 7,00 C-076 Bjb 0,36 C-076 B^a 9,60 C-076 10,24
C-076 Aa 11,CG
C-076 "b"-komponenttien erotue vastaavista "a"-komponenteista suoritetaan käyttäen esim. korkeapainenestekromatografiaa. C-076 Ala:n ja Albsn seos, jossa arvion mukaan on 30 jug C-076 Alb:tä, liuotetaan 30 yul:aan absoluuttista metanolia, ja liuos viedään 3 x 250 ra® suuruiseen 35 57781 korkeapainenestekromatografiapylvääseen, joka sisältää Spherisorb 5 mieron ODS-hartsia (Speotra Physics). Pylväs eluoidaan metanoli/vesiseoksella 85s 15 0,15 ml/min. Eluutiota seurataan mittaamalla eluentin UV-absorptio, ja eri komponentit kootaan UV-monitorin poistoaukon kautta. Saadaan JO yug C-O76 Alb-komponenttia, joka analysoidaan massaspektrometrillä. Tämän näytteen massaspektri on esitetty taulukon III toisessa sarakkeessa.
Claims (2)
- 36 57781 Patenttivaatimus: Menetelmä antihelminttisesti vaikuttavien C-076-yhdisteiden "avermectins" valmistamiseksi, joilla on kaava H,’ ch·* R-0 I is 2h °n3 CH3 L yX °h T
- 0 X^—CH3 R3 jossa R on c<-L-oleandrosyyli-of-L-oleandrosyyliryhmä, jolla on kaava CH-,. CH y- ch3o ch3ct katkoviiva esittää yksinkertaista tai kaksoissidostaj R1 on hydroksi, joka on läsnä vain silloin, kun katkoviiva tarkoittaa yksinkertaista sidosta, R^ on propyy-li tai butyyli ja R3 on metoksi tai hydroksi, tunnettu siitä, että viljellään aerobisesti C-076-yhdisteitä tuottavaa Streptomyces avermitilis-kantaa ATCC 31267 ATCC 31271 tai ATCC 31272 vesipitoisessa ravintoväliaineessa, joka sisältää hiilen ja typen assimiloituvia lähteitä ja epäorgaanisia suoloja, lämpötila-välillä noin 20-4cPc japftarvossa noin 5,0-9,0, C-076-yhdisteet otetaan talteen, edullisesti suodattamalla fermentointiväliaine, uuttamalla huovasto veden kanssa sekoittuvalla orgaanisella liuottimena, haihduttamalla orgaaninen liuotin ja uuttamalla jäännös veden kanssa sekoittumattoraalla orgaanisella liuottimella.
Applications Claiming Priority (2)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| US67832876A | 1976-04-19 | 1976-04-19 | |
| US67832876 | 1976-04-19 |
Publications (3)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| FI771124A7 FI771124A7 (fi) | 1977-10-20 |
| FI57781B true FI57781B (fi) | 1980-06-30 |
| FI57781C FI57781C (fi) | 1980-10-10 |
Family
ID=24722350
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| FI771124A FI57781C (fi) | 1976-04-19 | 1977-04-07 | Foerfarande foer framstaellning av c-076-foereningar med antihelmintisk verkan |
Country Status (40)
| Country | Link |
|---|---|
| US (1) | US4310519A (fi) |
| JP (1) | JPS52151197A (fi) |
| AR (1) | AR215000A1 (fi) |
| AT (1) | AT357503B (fi) |
| AU (1) | AU513641B2 (fi) |
| BE (1) | BE853702A (fi) |
| BG (1) | BG35900A3 (fi) |
| CA (1) | CA1098063A (fi) |
| CH (1) | CH639422A5 (fi) |
| CS (1) | CS207397B2 (fi) |
| CY (1) | CY1114A (fi) |
| DD (1) | DD137727A5 (fi) |
| DE (1) | DE2717040C2 (fi) |
| DK (1) | DK146514C (fi) |
| ES (1) | ES457932A1 (fi) |
| FI (1) | FI57781C (fi) |
| FR (1) | FR2348970A1 (fi) |
| GB (1) | GB1573955A (fi) |
| GR (1) | GR63128B (fi) |
| GT (1) | GT197746150A (fi) |
| HK (1) | HK38481A (fi) |
| HU (1) | HU179041B (fi) |
| IE (1) | IE44822B1 (fi) |
| IL (1) | IL51854A (fi) |
| IT (1) | IT1106424B (fi) |
| KE (1) | KE3141A (fi) |
| LU (1) | LU77152A1 (fi) |
| MY (1) | MY8200087A (fi) |
| NL (3) | NL188859C (fi) |
| NO (1) | NO148856C (fi) |
| NZ (1) | NZ183847A (fi) |
| OA (1) | OA05638A (fi) |
| PL (1) | PL108004B1 (fi) |
| PT (1) | PT66445B (fi) |
| RO (1) | RO71785A (fi) |
| SE (1) | SE434277B (fi) |
| SU (1) | SU716524A3 (fi) |
| YU (1) | YU40814B (fi) |
| ZA (1) | ZA772345B (fi) |
| ZM (1) | ZM3677A1 (fi) |
Families Citing this family (271)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US4093629A (en) * | 1977-04-11 | 1978-06-06 | Merck & Co., Inc. | Derivatives of antibiotic substance milbemycin and processes therefor |
| NZ186851A (en) * | 1977-04-11 | 1984-12-14 | Merck & Co Inc | Glycosyloxy derivatives of milbemycin and parasiticidal compositions |
| US4206205A (en) * | 1977-10-03 | 1980-06-03 | Merck & Co., Inc. | Monosaccharide and aglycone derivatives of C-076 |
| PH15982A (en) | 1977-10-03 | 1983-05-18 | Merck & Co Inc | Selective hydrogenation producta of c-076 compounds and derivatives thereof |
| NZ188459A (en) * | 1977-10-03 | 1982-09-07 | Merck & Co Inc | Derivatives of c-076 compounds and pesticidal compositions |
| PH16612A (en) * | 1977-12-19 | 1983-11-28 | Merck & Co Inc | 13-halo and 13-deoxy derivatives of c-076 compounds |
| US4203976A (en) * | 1978-08-02 | 1980-05-20 | Merck & Co., Inc. | Sugar derivatives of C-076 compounds |
| US4200581A (en) * | 1978-08-04 | 1980-04-29 | Merck & Co., Inc. | Alkyl derivatives of C-076 compounds |
| US4263168A (en) * | 1979-01-10 | 1981-04-21 | Imperial Chemical Industries Limited | Olefine polymerization catalyst |
| US4550160A (en) * | 1979-08-13 | 1985-10-29 | Merck & Co., Inc. | Processes for the interconversion of C-076 compounds |
| JPS5632481A (en) * | 1979-08-23 | 1981-04-01 | Sankyo Co Ltd | Antibiotic b-41d, its preparation, and acaricide and anthelminthic agent and repellent containing the same as active constituent |
| US4289760A (en) * | 1980-05-02 | 1981-09-15 | Merck & Co., Inc. | 23-Keto derivatives of C-076 compounds |
| US4285963A (en) * | 1980-08-07 | 1981-08-25 | Merck & Co., Inc. | Novel derivatives of C-076 compounds |
| US4385065A (en) | 1980-10-23 | 1983-05-24 | Merck & Co., Inc. | Novel substances and process for their production |
| US4378353A (en) | 1981-02-17 | 1983-03-29 | Merck & Co., Inc. | Novel C-076 compounds |
| US4333925A (en) | 1981-05-11 | 1982-06-08 | Merck & Co., Inc. | Derivatives of C-076 compounds |
| US4399274A (en) | 1981-07-02 | 1983-08-16 | Merck & Co., Inc. | Isolation of non-ionic lipophilic materials on macroreticular polymeric absorbents |
| US4412991A (en) | 1981-08-28 | 1983-11-01 | Merck & Co., Inc. | 22-Hydroxy derivatives of C-076 compounds, pharmaceutical compositions and method of use |
| US4457920A (en) * | 1981-09-03 | 1984-07-03 | Merck & Co., Inc. | 4a-Substituted avermectin compounds |
| NZ201681A (en) * | 1981-09-03 | 1985-11-08 | Merck & Co Inc | Avermectin derivatives and parasiticidal compositions |
| US4423211A (en) * | 1981-12-21 | 1983-12-27 | Merck & Co., Inc. | Process for the whole broth extraction of avermectin |
| US4423209A (en) * | 1982-02-26 | 1983-12-27 | Merck & Co., Inc. | Processes for the interconversion of avermectin compounds |
| US4427663A (en) | 1982-03-16 | 1984-01-24 | Merck & Co., Inc. | 4"-Keto-and 4"-amino-4"-deoxy avermectin compounds and substituted amino derivatives thereof |
| NZ204074A (en) * | 1982-05-10 | 1986-05-09 | Merck & Co Inc | Synergistic compositions containing avermectins |
| US4430329A (en) | 1982-05-17 | 1984-02-07 | Merck & Co., Inc. | Synergistic treatment of adult canine heartworm with thiacetarsamide and ivermectin |
| EP0102702B1 (en) * | 1982-07-22 | 1987-07-29 | Imperial Chemical Industries Plc | Methods and compositions of combating pests |
| US4469682A (en) * | 1983-01-28 | 1984-09-04 | Merck & Co., Inc. | Avermectin and milbemycin phosphate esters, pharmaceutical compositions, and method of use |
| EP0125155A1 (en) * | 1983-04-07 | 1984-11-14 | Merck & Co. Inc. | Novel synergistic agricultural insecticidal, pesticidal and acaricidal combinations |
| NZ207655A (en) * | 1983-04-07 | 1986-09-10 | Merck & Co Inc | Synergistic veterinary compositions containing an avermectin compound and clorsulon |
| US4530921A (en) * | 1983-10-03 | 1985-07-23 | Merck & Co., Inc. | Avermectin epoxide derivatives and method of use |
| US4560677A (en) * | 1984-01-31 | 1985-12-24 | Merck & Co., Inc. | Synergistic avermectin combination for treating plant pests |
| US5169956A (en) * | 1984-06-05 | 1992-12-08 | American Cyanamid Company | Macrolide antibiotic compounds |
| US4579864A (en) * | 1984-06-11 | 1986-04-01 | Merck & Co., Inc. | Avermectin and milbemycin 13-keto, 13-imino and 13-amino derivatives |
| US5182207A (en) * | 1984-09-14 | 1993-01-26 | American Cyanamid Company | Strains of streptomyces thermoarchaensis |
| GR852232B (fi) * | 1984-09-14 | 1986-01-14 | American Cyanamid Co | |
| US4587247A (en) * | 1985-02-25 | 1986-05-06 | Merck & Co., Inc. | Substituted and unsubstituted 13-(alkoxy)methoxy derivatives of the avermectin aglycones, compositions and use |
| US4666937A (en) * | 1985-03-04 | 1987-05-19 | Merck & Co., Inc. | Avermectin bioconversion products |
| US4789684A (en) * | 1985-05-02 | 1988-12-06 | Merck & Co., Inc. | Anthelmintic fermentation products of microorganisms |
| NZ215917A (en) | 1985-05-02 | 1989-10-27 | Merck & Co Inc | 22-oh milbemycin derivatives and parasiticidal compositions |
| US4678774A (en) * | 1985-06-06 | 1987-07-07 | Merck & Co., Inc. | Novel synergistic compositions |
| ES8800986A1 (es) * | 1985-07-27 | 1987-12-01 | Pfizer | Un procedimiento para la produccion de un nuevo derivado de avermectina |
| US4668696A (en) * | 1985-07-29 | 1987-05-26 | Merck & Co., Inc. | Novel averonectin fermentation product of a microorganism with anthelmintic activity |
| US4766112A (en) * | 1985-07-29 | 1988-08-23 | Merck & Co. Inc. | Anthelmintic fermentation products of a microorganism |
| NZ216908A (en) | 1985-07-29 | 1989-06-28 | Merck & Co Inc | Avermectin derivatives |
| US4622313A (en) * | 1985-08-01 | 1986-11-11 | Merck & Co., Inc. | O-sulfate derivatives of avermectins and milbemycins having improved water solubility |
| ES8605582A1 (es) * | 1985-12-11 | 1986-03-16 | Antibioticos Sa | Un procedimiento para la preparacion de avermectinas |
| GB8606116D0 (en) * | 1986-03-12 | 1986-04-16 | Glaxo Group Ltd | Process |
| GB8606120D0 (en) * | 1986-03-12 | 1986-04-16 | Glaxo Group Ltd | Process |
| EP0240274A3 (en) * | 1986-04-03 | 1990-03-14 | Merck & Co. Inc. | Avermectins as growth promotant agents |
| US5840704A (en) * | 1986-07-16 | 1998-11-24 | Pfizer Inc. | Antiparasitic agents and process for their preparation |
| DE3750495T2 (de) * | 1986-07-24 | 1995-02-23 | Beecham Group Plc | Milbemycin-Derivate mit parasitenabtötender Aktivität, ein Verfahren zu ihrer Herstellung und die sie enthaltenden Zusammensetzungen. |
| US4833168A (en) * | 1986-10-03 | 1989-05-23 | Merck & Co., Inc. | Avermectin reformatsky adducts |
| US5077398A (en) * | 1986-11-18 | 1991-12-31 | Merck & Co., Inc. | Process for isolation of avermectin B1 components with improved purity and subsequent isolaton of B2 components |
| EP0284176B1 (en) * | 1987-01-23 | 1993-08-25 | Pfizer Inc. | Process for production of avermectins and cultures therefor |
| US5238848A (en) * | 1987-01-23 | 1993-08-24 | Pfizer Inc | Cultures for production of avermectins |
| US5234831A (en) * | 1987-01-23 | 1993-08-10 | Pfizer Inc | Cultures for production of B avermectins |
| IN167980B (fi) * | 1987-01-23 | 1991-01-19 | Pfizer | |
| US5077278A (en) * | 1987-01-23 | 1991-12-31 | Pfizer Inc. | Non-natural demethylavermectins compositions and method of use |
| US5525506A (en) * | 1987-01-23 | 1996-06-11 | Pfizer Inc. | Process for production of avermectins and cultures therefor |
| US4806527A (en) * | 1987-03-16 | 1989-02-21 | Merck & Co., Inc. | Avermectin derivatives |
| US4831017A (en) * | 1987-06-29 | 1989-05-16 | Merck & Co., Inc. | Increased litter size in monogastric domestic animals after treatment in mid-gestation of gravid female with avermectin or milbemycin compound |
| US4847243A (en) * | 1987-10-08 | 1989-07-11 | Merck & Co., Inc. | Treatment for fescue toxicosis in grazing animals |
| US5240850A (en) * | 1987-10-23 | 1993-08-31 | Pfizer Inc. | Cultures for production of avermectin aglycones |
| EP0313297B1 (en) * | 1987-10-23 | 1993-05-19 | Pfizer Inc. | Process for production of avermectin aglycones and cultures therefor |
| PT88952B (pt) * | 1987-11-09 | 1993-02-26 | Pfizer | Processo para a preparacao de avermectinas etiladas |
| US4963667A (en) * | 1987-11-10 | 1990-10-16 | Merck & Co., Inc. | Ivermectin derivative compounds and process for preparing the same |
| GB8726730D0 (en) * | 1987-11-14 | 1987-12-16 | Pfizer Ltd | Antiparasitic agents |
| US4895837A (en) * | 1988-01-29 | 1990-01-23 | Merck & Co., Inc. | Avermectin derivatives |
| GB8804440D0 (en) * | 1988-02-25 | 1988-03-23 | Pfizer Ltd | Antiparasitic agents |
| US4918097A (en) * | 1988-03-11 | 1990-04-17 | Ciba-Geigy Corporation | Insecticides and parasiticides |
| GB8815967D0 (en) * | 1988-07-05 | 1988-08-10 | Pfizer Ltd | Antiparasitic agents |
| US5015662A (en) * | 1988-10-18 | 1991-05-14 | Merck & Co., Inc. | Anthelmintic bioconversion products |
| US5120646A (en) * | 1988-10-18 | 1992-06-09 | Chen Shieh Shung T | Process for the preparation of anthelmintive bioconversion products |
| US5015630A (en) * | 1989-01-19 | 1991-05-14 | Merck & Co., Inc. | 5-oxime avermectin derivatives |
| US4897383A (en) * | 1989-02-13 | 1990-01-30 | Merck & Co., Inc. | Avermectin derivatives |
| NZ232422A (en) * | 1989-02-16 | 1992-11-25 | Merck & Co Inc | 13-ketal milbemycin derivatives and parasiticides |
| NZ233116A (en) | 1989-03-31 | 1994-09-27 | Merck & Co Inc | Cloning genes from steptomyces avermitilis for avermectin biosynthesis |
| US5030622A (en) * | 1989-06-02 | 1991-07-09 | Merck & Co., Inc. | Avermectin derivatives |
| US5023241A (en) * | 1989-07-31 | 1991-06-11 | Merck & Co., Inc. | Avermectin derivatives |
| US5830875A (en) * | 1989-10-30 | 1998-11-03 | Merck & Co., Inc. | 24-and 25-substituted avermectin and milbemycin derivatives |
| US5055454A (en) * | 1989-10-30 | 1991-10-08 | Merck & Co., Inc. | 13-epi-avermectin derivatives useful as antiparasitic agents |
| JP2888586B2 (ja) * | 1990-03-05 | 1999-05-10 | 社団法人北里研究所 | エバーメクチンの特定成分を選択生産するための微生物およびその選択的製造法 |
| US5114930A (en) * | 1990-05-14 | 1992-05-19 | Merck & Co., Inc. | Avermectin derivatives with a spacer inserted between the disaccharide and the aglycone useful as antiparasitic agents |
| US5188944A (en) * | 1990-06-22 | 1993-02-23 | Merck & Co., Inc. | Process for the glycosylation of avermectin agylcones |
| US5070015A (en) * | 1990-10-15 | 1991-12-03 | Merck & Co., Inc. | Novel avermectins are produced from known microorganisms |
| US5192546A (en) * | 1991-01-15 | 1993-03-09 | Mycogen Corporation | Synergistic pesticidal compositions |
| US5346698A (en) * | 1991-01-15 | 1994-09-13 | Mycogen Corporation | Synergistic pesticidal compositions |
| US5177063A (en) * | 1991-03-11 | 1993-01-05 | Merck & Co., Inc. | Avermectin compounds with a 6,5-spiroketal ring system |
| US5208222A (en) * | 1991-03-28 | 1993-05-04 | Merck & Co., Inc. | 4"-and 4'-alkylthio avermectin derivatives |
| US5189026A (en) * | 1991-06-07 | 1993-02-23 | Fractal Laboratories, Inc. | Treatment of human diseases involving dysregulation or dysfunction of the nervous system |
| US5262400A (en) * | 1991-06-20 | 1993-11-16 | Merck & Co., Inc. | 4α-substituted avermectin derivatives |
| US5192671A (en) * | 1991-06-26 | 1993-03-09 | Merck & Co., Inc. | Process for the glycosylation of avermectin compounds |
| EP0524686A1 (en) * | 1991-07-23 | 1993-01-27 | Merck & Co. Inc. | A process for the 14a-hydroxylation of avermectin compounds |
| EP0524687A1 (en) * | 1991-07-23 | 1993-01-27 | Merck & Co. Inc. | A process for the glycosylation of avermectin compounds at the 14a-position |
| US5240915A (en) * | 1991-10-15 | 1993-08-31 | Merck & Co., Inc. | Avermectin derivatives |
| US5171742A (en) * | 1991-10-15 | 1992-12-15 | Merck & Co., Inc. | Avermectin compounds with a 6,5-spiroketal ring system ad a 23-acyl substituent |
| US5248669A (en) * | 1991-12-17 | 1993-09-28 | Samir Amer | Inhibition of anoxia or hypoxia-induced, endothelium-mediated vasospasm with avermectins |
| GB9205007D0 (en) * | 1992-03-07 | 1992-04-22 | Pfizer Ltd | Antiparasitic agents |
| US5244879A (en) * | 1992-03-18 | 1993-09-14 | Merck & Co., Inc. | 23-nor-23-oxa avermectin analogs are active anthelmintic agents |
| US5162363A (en) * | 1992-03-18 | 1992-11-10 | Merck & Co., Inc. | 23-nor-23-thia avermectin analogs are active anthelmintic agents |
| US5312753A (en) * | 1992-03-23 | 1994-05-17 | Merck & Co., Inc. | Strain of streptomyces avermitilis capable of glycosylating avermectin compounds at the 13- and 14A positions |
| PT637244E (pt) * | 1992-03-23 | 2001-04-30 | Merck & Co Inc | Estirpe de spretomyces avermitilis glicosilante de compostos de avermectina |
| US5229415A (en) * | 1992-03-24 | 1993-07-20 | Merck & Co., Inc. | Alkylthio alkyl avermectins are active antiparasitic agents |
| US6103504A (en) * | 1992-03-25 | 2000-08-15 | Pfizer Inc. | Process for production of avermectins and cultures therefor |
| IT1255135B (it) * | 1992-05-05 | 1995-10-20 | Principio attivo a base di avermectine, ceppo e procedimento per la sua preparazione e composizione veterinaria che lo contiene. | |
| US5248678A (en) * | 1992-06-30 | 1993-09-28 | Fractal Laboratories, Inc. | Methods for increasing arousal and alertness and for the amelioration of comatose states |
| US5241083A (en) * | 1992-07-01 | 1993-08-31 | Merck & Co., Inc. | Process for converting the 13-α-hydroxy group of avermectin aglycones |
| US6162825A (en) * | 1992-10-22 | 2000-12-19 | The Clorox Company | High fructose insecticide bait compositions |
| US5547955A (en) * | 1992-10-22 | 1996-08-20 | The Clorox Company | High fructose insecticide bait compositions |
| US5292647A (en) * | 1992-11-30 | 1994-03-08 | Eli Lilly And Company | Strain of streptomyces for producing avermectins and processes therewith |
| US5411946A (en) * | 1993-02-24 | 1995-05-02 | Merck & Co., Inc. | Avermectin derivatives |
| US5602107A (en) * | 1993-05-10 | 1997-02-11 | Merck & Co., Inc. | Pour-on formulations consisting of gylcols, glycerides and avermectin compounds |
| PL174488B1 (pl) * | 1993-05-10 | 1998-08-31 | Merck & Co Inc | Preparat do zwalczania pasożytów zwierząt oraz sposób wytwarzania preparatu do zwalczania pasożytów zwierząt |
| ATE175240T1 (de) * | 1993-07-23 | 1999-01-15 | Pfizer | Verfahren zur ausfällung von natürlichen avermectinen, sowie fermentationsverfahren zur herstellung derselben |
| PT714400E (pt) * | 1993-08-19 | 2000-05-31 | Merck & Co Inc | Forma cristalina termodinamicamente estavel do sal de acido benzoico de 4"-desoxi-4"-epimetilamino-avermectina b1a/b1b e processos para a sua preparacao |
| US5478929A (en) * | 1993-09-15 | 1995-12-26 | Merck & Co., Inc. | Bioconversion products of 27-hydroxy avermectin |
| US5380838A (en) * | 1993-10-08 | 1995-01-10 | Merck & Co. Inc. | Stable solvates of avermectin compounds |
| US5399582A (en) * | 1993-11-01 | 1995-03-21 | Merck & Co., Inc. | Antiparasitic agents |
| TW327125B (en) * | 1994-02-07 | 1998-02-21 | Merck & Co Inc | Composition and method for protecting against pine exhausted |
| GB9402916D0 (en) * | 1994-02-16 | 1994-04-06 | Pfizer Ltd | Antiparasitic agents |
| US5578581A (en) * | 1994-04-26 | 1996-11-26 | Merck & Co., Inc. | Active avermectin analogue |
| US5550153A (en) * | 1994-11-14 | 1996-08-27 | Kerz; Phillip D. | Method for treating heartworm-infected canines |
| WO1996025852A1 (en) * | 1995-02-24 | 1996-08-29 | Novartis Ag | Composition for controlling parasites |
| KR100418823B1 (ko) * | 1995-03-20 | 2004-07-05 | 머크 앤드 캄파니 인코포레이티드 | 노듈리스포르산유도체 |
| DE19520275A1 (de) * | 1995-06-02 | 1996-12-05 | Bayer Ag | Endoparasitizide Mittel |
| US6124359A (en) * | 1995-10-20 | 2000-09-26 | Mycogen Corporation | Materials and methods for killing nematodes and nematode eggs |
| US5674897A (en) * | 1995-10-20 | 1997-10-07 | Mycogen Corporation | Materials and methods for controlling nematodes |
| DE19613972A1 (de) * | 1996-04-09 | 1997-10-16 | Bayer Ag | Injektionsformulierungen von Avermectinen und Milbemycinen auf Basis von Rizinusöl |
| AUPN933396A0 (en) * | 1996-04-17 | 1996-05-09 | Pfizer Pty Limited | Non-aqueuos oral-drench compositions containing avermectin compounds |
| ATE252316T1 (de) | 1996-06-05 | 2003-11-15 | Ashmont Holdings Ltd | Injizierbare zusammensetzungen |
| US6403308B1 (en) | 1997-04-30 | 2002-06-11 | Mcgill University | Methods for detecting and reversing resistance to macrocyclic lactone compounds |
| US6114376A (en) * | 1997-04-30 | 2000-09-05 | Mcgill University | Methods for using macrocyclic lactone compounds as multidrug resistance reversing agents in tumor and other cells |
| KR100499438B1 (ko) * | 1997-12-03 | 2005-07-07 | 머크 앤드 캄파니 인코포레이티드 | 수소화 피마자유를 함유하는 지속성 주사제 |
| AU752343C (en) * | 1998-02-13 | 2005-11-03 | Pfizer Products Inc. | Streptomyces avermitilis gene directing the ratio of B2:B1 avermectins |
| US6733767B2 (en) * | 1998-03-19 | 2004-05-11 | Merck & Co., Inc. | Liquid polymeric compositions for controlled release of bioactive substances |
| GB9825402D0 (en) * | 1998-11-19 | 1999-01-13 | Pfizer Ltd | Antiparasitic formulations |
| US6787342B2 (en) | 2000-02-16 | 2004-09-07 | Merial Limited | Paste formulations |
| DE10013914A1 (de) | 2000-03-21 | 2001-09-27 | Bayer Ag | Wirkstoffkombinationen mit insektiziden und akariziden Eigenschaften |
| US7897559B2 (en) * | 2000-06-29 | 2011-03-01 | Parks L Dean | Dermatological composition and kit containing avermectin compound for treating dermatological conditions |
| US6399651B1 (en) * | 2000-06-29 | 2002-06-04 | L. Dean Parks | Method of treating dermatoses using avermectin compound |
| DE10055941A1 (de) | 2000-11-10 | 2002-05-23 | Bayer Ag | Wirkstoffkombinationen mit insektiziden und akariziden Eigenschaften |
| DE10059606A1 (de) * | 2000-12-01 | 2002-06-06 | Bayer Ag | Wirkstoffkombinationen |
| AR036872A1 (es) | 2001-08-13 | 2004-10-13 | Du Pont | Compuesto de antranilamida, composicion que lo comprende y metodo para controlar una plaga de invertebrados |
| DE10203688A1 (de) * | 2002-01-31 | 2003-08-07 | Bayer Cropscience Ag | Synergistische insektizide Mischungen |
| ES2321827T3 (es) | 2002-02-12 | 2009-06-12 | Pfizer Products Inc. | Gen de streptomyces avermitilis que rige la relacion de avermectinas b2-b1. |
| DE10207241A1 (de) * | 2002-02-21 | 2003-09-04 | Bayer Cropscience Ag | Synergistische insektizide Mischungen |
| GB2386066A (en) * | 2002-02-28 | 2003-09-10 | Norbrook Lab Ltd | Long-acting parasiticidal composition with improved bioavailability comprising a salicylanilide, a further anti-parasitic compound & a polymeric species |
| US7001889B2 (en) * | 2002-06-21 | 2006-02-21 | Merial Limited | Anthelmintic oral homogeneous veterinary pastes |
| US20060205681A1 (en) * | 2002-06-21 | 2006-09-14 | Maryam Moaddeb | Homogenous paste formulations |
| US6764999B2 (en) | 2002-07-11 | 2004-07-20 | Stephen E. Bachman | Nasal delivery of parasiticides |
| US20040077703A1 (en) * | 2002-10-02 | 2004-04-22 | Soll Mark D. | Nodulisporic acid derivative spot-on formulations for combating parasites |
| DE10248257A1 (de) * | 2002-10-16 | 2004-04-29 | Bayer Cropscience Ag | Wirkstoffkombinationen im insektiziden und akariziden Eigenschaften |
| GB0229804D0 (en) * | 2002-12-20 | 2003-01-29 | Syngenta Participations Ag | Avermection b1 and avermectin b1 monosaccharide derivatives having an alkoxymethyl substituent in the 4"- or 4'-position |
| GB0316377D0 (en) | 2003-07-12 | 2003-08-13 | Norbrook Lab Ltd | Parasiticidal composition |
| DE10353281A1 (de) | 2003-11-14 | 2005-06-16 | Bayer Cropscience Ag | Wirkstoffkombination mit insektiziden und akariziden Eigenschaften |
| US7531186B2 (en) * | 2003-12-17 | 2009-05-12 | Merial Limited | Topical formulations comprising 1-N-arylpyrazole derivatives and amitraz |
| US7671034B2 (en) * | 2003-12-19 | 2010-03-02 | Merial Limited | Stabilized formulation of ivermectin feed premix with an extended shelf life |
| US7666444B2 (en) | 2004-02-02 | 2010-02-23 | Wyeth | Antiparasitic composition |
| US7493609B2 (en) * | 2004-08-30 | 2009-02-17 | International Business Machines Corporation | Method and apparatus for automatic second-order predictive commoning |
| US7312248B2 (en) | 2004-09-23 | 2007-12-25 | Schering-Plough Animal Health Corporation | Control of parasites in animals by the use of novel trifluoromethanesulfonanilide oxime ether derivatives |
| DE102004053964A1 (de) * | 2004-11-09 | 2006-05-11 | Bayer Healthcare Ag | Mittel gegen Demodikose |
| MX2007006072A (es) * | 2004-11-19 | 2007-07-11 | Schering Plough Ltd | Control de parasitos en animales mediante el uso de derivados del parasiticida 2-fenil-3-(1h-pirrol-2-il)acrilonitrilo. |
| GB0501220D0 (en) * | 2005-01-21 | 2005-03-02 | Norbrook Lab Ltd | Anthelmintic composition |
| US8362086B2 (en) | 2005-08-19 | 2013-01-29 | Merial Limited | Long acting injectable formulations |
| US20080027011A1 (en) * | 2005-12-20 | 2008-01-31 | Hassan Nached | Homogeneous paste and gel formulations |
| US8119667B2 (en) * | 2005-12-29 | 2012-02-21 | Schering-Plough Animal Health Corporation | Carbonates of fenicol antibiotics |
| EP1849363A1 (en) * | 2006-03-09 | 2007-10-31 | Cheminova A/S | Synergistic combination of glutamate- and GABA-gated chloride agonist pesticide and at least one of Vitamin E or Niacin |
| US20070238700A1 (en) * | 2006-04-10 | 2007-10-11 | Winzenberg Kevin N | N-phenyl-1,1,1-trifluoromethanesulfonamide hydrazone derivative compounds and their usage in controlling parasites |
| TWI422328B (zh) | 2006-06-19 | 2014-01-11 | Univ California | 結合有殺線蟲之種子塗覆物的生物控制劑 |
| KR101437704B1 (ko) | 2006-07-05 | 2014-09-04 | 아벤티스 애그리컬쳐 | 1-아릴-5-알킬 피라졸 유도체 화합물, 이의 제조 방법 및 이의 사용 방법 |
| DE102007007750A1 (de) * | 2006-08-17 | 2008-02-21 | Bayer Cropscience Ag | Avermectinderivate |
| FR2906468B1 (fr) * | 2006-09-28 | 2012-09-21 | Galderma Sa | Utilisation de composes de la famille des avermectines pour le traitement de desordres dermatologiques |
| EP2102154A1 (en) * | 2006-12-13 | 2009-09-23 | Schering-Plough Ltd. | Water-soluble prodrugs of chloramphenicol, thiamphenicol, and analogs thereof |
| WO2008076259A1 (en) * | 2006-12-13 | 2008-06-26 | Schering-Plough Ltd. | Water-soluble prodrugs of florfenicol and its analogs |
| US8901163B2 (en) | 2007-01-03 | 2014-12-02 | Galderma S.A. | Method of treating hyperesthesia, paresthesia, dolor, and pruritus caused by insect stings or noxious weeds or plants using avermectin compound |
| SI2155699T1 (sl) | 2007-05-15 | 2015-12-31 | Merial, Inc. | Ariloazol-2-il cianoetilamino spojine, postopek njihove izdelave in postopek njihove uporabe |
| TWI430995B (zh) | 2007-06-26 | 2014-03-21 | Du Pont | 萘異唑啉無脊椎有害動物控制劑 |
| LT2957284T (lt) | 2007-06-27 | 2018-04-10 | E. I. Du Pont De Nemours And Company | Kovos su gyvūnų kenkėjais būdas |
| US8425925B2 (en) * | 2007-06-29 | 2013-04-23 | Y-Tex Corporation | Pesticidal tag |
| EP2173164A4 (en) | 2007-06-29 | 2012-07-04 | Y Tex Corp | PESTICIDE EAR LABEL |
| EP2008517A1 (de) | 2007-06-29 | 2008-12-31 | Bayer CropScience AG | Akarizide Wirkstoffkombinationen |
| TWI556741B (zh) | 2007-08-17 | 2016-11-11 | 英特威特國際股份有限公司 | 異唑啉組成物及其作為抗寄生蟲藥上的應用 |
| EP2039248A1 (de) * | 2007-09-21 | 2009-03-25 | Bayer CropScience AG | Wirkstoffkombinationen mit insektiziden und akariziden Eigenschaften |
| DE102007045922A1 (de) | 2007-09-26 | 2009-04-02 | Bayer Cropscience Ag | Wirkstoffkombinationen mit insektiziden und akariziden Eigenschaften |
| NZ585499A (en) | 2007-11-26 | 2011-12-22 | Merial Ltd | Solvent systems for pour-on formulations for combating parasites |
| AU2008340434B2 (en) | 2007-12-21 | 2014-02-06 | Boehringer Ingelheim Animal Health USA Inc. | The use of 6-halogeno-[1,2,4]-triazolo-[1,5-a]-pyrimidine compounds for combating pests in and on animals |
| TWI468407B (zh) | 2008-02-06 | 2015-01-11 | Du Pont | 中離子農藥 |
| EP2127522A1 (de) | 2008-05-29 | 2009-12-02 | Bayer CropScience AG | Wirkstoffkombinationen mit insektiziden und akariziden Eigenschaften |
| AU2009271299B2 (en) * | 2008-06-24 | 2014-09-11 | Boehringer Ingelheim Animal Health USA Inc. | Anthelminthic formulations |
| CN102131772B (zh) * | 2008-07-30 | 2015-03-11 | 英特威国际有限公司 | 用作氟苯尼考的中间体的*唑啉-保护的氨基二醇化合物的制备方法 |
| US20100120652A1 (en) * | 2008-08-08 | 2010-05-13 | Corrado Michael L | Treatment of bed mite and bed bug infestations |
| MY153715A (en) | 2008-11-14 | 2015-03-13 | Merial Ltd | Enantiomerically enriched aryloazol-2-yl cyanoethylamino compounds, method of making and method of using thereof |
| US8683346B2 (en) * | 2008-11-17 | 2014-03-25 | Sap Portals Israel Ltd. | Client integration of information from a supplemental server into a portal |
| EP2364147A2 (en) * | 2008-11-19 | 2011-09-14 | Merial Limited | Compositions comprising 1-arylpyrazole alone or in combination with formamidine for the treatment of parasitic infection |
| US9173728B2 (en) | 2008-11-19 | 2015-11-03 | Merial Inc. | Multi-cavity container having offset indentures for dispensing fluids |
| CN102282154B (zh) | 2008-12-04 | 2015-07-01 | 梅瑞尔公司 | 二聚的阿佛菌素和米尔倍霉素衍生物 |
| EP2227951A1 (de) | 2009-01-23 | 2010-09-15 | Bayer CropScience AG | Verwendung von Enaminocarbonylverbindungen zur Bekämpfung von durch Insekten übertragenen Viren |
| AR075846A1 (es) | 2009-03-17 | 2011-04-27 | Organon Nv | Sistema de administracion de farmaco de lactona macrociclica.uso. metodo de tratamiento |
| MX350867B (es) | 2009-03-25 | 2017-09-19 | Bayer Cropscience Ag | Combinaciones de principios activos nematicidas, insecticidas y acaricidas que comprenden piridiletilbenzamida e insecticidas. |
| EP2459569B1 (en) | 2009-07-30 | 2015-07-22 | Merial, Inc. | Insecticidal 4-amino-thieno[2,3-d]-pyrimidine compounds and methods of their use |
| BR112012002519A2 (pt) | 2009-08-05 | 2019-09-24 | Du Pont | "pesticidas mesoiônicos" |
| UA110924C2 (uk) | 2009-08-05 | 2016-03-10 | Е. І. Дю Пон Де Немур Енд Компані | Мезоіонні пестициди |
| WO2011017347A2 (en) | 2009-08-05 | 2011-02-10 | E. I. Du Pont De Nemours And Company | Mesoionic pesticides |
| UA107804C2 (en) | 2009-08-05 | 2015-02-25 | Du Pont | Mixtures of pesticides mezoionnyh |
| AU2010303741A1 (en) * | 2009-10-07 | 2012-04-19 | Zoetis W Llc | Compositions comprising adjuvant, macrolide and proteinaceous antigen and methods of use thereof |
| EP2327410A1 (en) | 2009-10-28 | 2011-06-01 | Consiglio Nazionale Delle Ricerche - Infm Istituto Nazionale Per La Fisica Della Materia | Avermectins and milbemycins for the treatment of flavivirus infections |
| CA2782902C (en) | 2009-12-04 | 2017-10-17 | Merial Limited | Pesticidal bis-organosulfur compounds |
| EP2513104B1 (en) | 2009-12-17 | 2016-03-16 | Merial, Inc. | Antiparasitic dihydroazole compounds and compositions comprising same |
| WO2011075592A1 (en) | 2009-12-17 | 2011-06-23 | Merial Limited | Compositions comprising macrocyclic lactone compounds and spirodioxepinoindoles |
| CN102811617A (zh) | 2010-01-22 | 2012-12-05 | 拜耳知识产权有限责任公司 | 杀螨和/或杀虫活性物质结合物 |
| UY33282A (es) | 2010-03-25 | 2011-09-30 | Novartis Ag | Composiciones endoparasiticidas |
| UA108641C2 (uk) | 2010-04-02 | 2015-05-25 | Паразитицидна композиція, яка містить чотири активних агенти, та спосіб її застосування | |
| EP2382865A1 (de) | 2010-04-28 | 2011-11-02 | Bayer CropScience AG | Synergistische Wirkstoffkombinationen |
| AR081187A1 (es) | 2010-05-12 | 2012-07-04 | Merial Ltd | Formulaciones inyectables parasiticidas de levamisol y lactonas macrociclicas. metodo de preparacion. metodo de tratamiento. |
| EP2576523B1 (en) | 2010-05-27 | 2016-01-13 | E. I. du Pont de Nemours and Company | Crystalline form of 4-[5 - [3 -chloro-5 -(trifluoromethyl)phenyl] -4,5 -dihydro-5 -(trifluoromethyl)-3 - isoxazolyl]-n-[2-oxo-2-[(2,2,2-trifluoroethyl)amino]ethyl]-1- naphthalenecarboxamide |
| AR081970A1 (es) | 2010-06-24 | 2012-10-31 | Intervet Int Bv | Formulacion inyectable de una lactona macrociclica y levamisol, formulacion y uso veterinario |
| WO2012001083A2 (en) | 2010-06-29 | 2012-01-05 | Ceva Sante Animale Sa | Novel eprinomectin injectable compositions |
| EP2629772B1 (en) | 2010-10-20 | 2016-05-18 | Galderma S.A. | Ivermectin for use in the treatment of hemorrhoids |
| CA2811926A1 (en) | 2010-10-20 | 2012-04-26 | Galderma S.A. | Method of treating otitis externa using macrocyclic lactone compound |
| DK2640728T3 (en) | 2010-11-16 | 2016-11-28 | Merial Inc | NEW MONENSINDERIVATER FOR TREATMENT AND PREVENTION OF protozoal INFECTIONS |
| AU2011338573B2 (en) | 2010-12-07 | 2016-07-28 | Boehringer Ingelheim Animal Health USA Inc. | Topical combination formulations of macrocyclic lactones with synthetic pyrethroids |
| WO2012087630A1 (en) | 2010-12-20 | 2012-06-28 | E.I. Du Pont De Nemours And Company | Pyridine and pyrimidine compounds for controlling invertebrate |
| GB201021836D0 (en) | 2010-12-21 | 2011-02-02 | Norbrook Lab Ltd | Topical Composition |
| CA2832710C (en) | 2011-04-15 | 2021-05-04 | Palle Pedersen | Method for controlling nematode pests |
| WO2013003168A1 (en) | 2011-06-27 | 2013-01-03 | Merial Limited | Novel insect-repellent coumarin derivatives, syntheses, and methods of use |
| AU2012275435B2 (en) | 2011-06-27 | 2016-07-21 | Boehringer Ingelheim Animal Health USA Inc. | Amido-pyridyl ether compounds and compositions and their use against parasites |
| CN102356769A (zh) * | 2011-09-02 | 2012-02-22 | 魏振东 | 一种含有机质的可湿性粉剂农药 |
| PH12014500537A1 (en) | 2011-09-12 | 2014-04-21 | Merial Inc | Parasiticidal compositions comprising an isoxazoline active agent, methods and uses thereof |
| WO2013044118A2 (en) | 2011-09-23 | 2013-03-28 | Merial Limited | Indirect modeling of new repellent molecules active against insects, acarids, and other arthropods |
| CN104023720B (zh) | 2011-11-17 | 2016-10-26 | 梅里亚有限公司 | 包含芳基吡唑和取代咪唑的组合物，其方法和用途 |
| EP2785719B1 (en) | 2011-12-02 | 2017-11-08 | Merial, Inc. | Long-acting injectable moxidectin formulations and novel moxidectin crystal forms |
| SG11201404595TA (en) | 2012-02-06 | 2014-09-26 | Merial Ltd | Parasiticidal oral veterinary compositions comprising systemically-acting active agents, methods and uses thereof |
| JO3626B1 (ar) | 2012-02-23 | 2020-08-27 | Merial Inc | تركيبات موضعية تحتوي على فيبرونيل و بيرميثرين و طرق استخدامها |
| WO2013158422A1 (en) | 2012-04-17 | 2013-10-24 | E. I. Du Pont De Nemours And Company | Heterocyclic compounds for controlling invertebrate pests |
| CN105884693B (zh) | 2012-04-20 | 2019-11-01 | 梅里亚有限公司 | 包含苯并咪唑衍生物的杀寄生物的组合物，其方法和用途 |
| HRP20181448T1 (hr) | 2012-11-20 | 2018-11-02 | Merial, Inc. | Antihelmintski spojevi i sastavi te postupak za njihovu uporabu |
| MX367952B (es) | 2013-01-31 | 2019-09-12 | Boehringer Ingelheim Animal Health Usa Inc | Método para tratar y curar leishmaniosis usando fexinidazol. |
| ES2846820T3 (es) | 2013-04-12 | 2021-07-29 | Zoetis Services Llc | Composición de lactonas macrocíclicas, levamisol, un aminoazúcar y un agente antiparasitario adicional |
| AP2016009184A0 (en) | 2013-11-01 | 2016-04-30 | Merial Ltd | Antiparisitic and pesticidal isoxazoline compounds |
| EP2886640A1 (en) | 2013-12-18 | 2015-06-24 | Riga Technical University | Process for isolation of milbemycins A3 and A4 |
| AU2015247463B2 (en) | 2014-04-17 | 2018-03-29 | Basf, Se | Use of malononitrile compounds for protecting animals from parasites |
| WO2015179414A1 (en) | 2014-05-19 | 2015-11-26 | Merial, Inc. | Anthelmintic compounds |
| ES2723969T3 (es) | 2014-06-19 | 2019-09-04 | Merial Inc | Composiciones parasiticidas que comprenden derivados de indol, procedimientos y usos de las mismas |
| EP3211998B1 (en) | 2014-10-31 | 2021-04-07 | Boehringer Ingelheim Animal Health USA Inc. | Parasiticidal composition comprising fipronil |
| EP3023092A1 (en) | 2014-11-20 | 2016-05-25 | Ceva Sante Animale | Eprinomectin parenteral compositions |
| UY36570A (es) | 2015-02-26 | 2016-10-31 | Merial Inc | Formulaciones inyectables de acción prolongada que comprenden un agente activo isoxazolina, métodos y usos de las mismas |
| EA036272B1 (ru) | 2015-04-08 | 2020-10-21 | БЁРИНГЕР ИНГЕЛЬХАЙМ ЭНИМАЛ ХЕЛТ ЮЭсЭй ИНК. | Инъецируемые препараты замедленного высвобождения, содержащие изоксазолиновое действующее вещество, способы и применение |
| HRP20211041T1 (hr) | 2015-05-20 | 2021-10-01 | Boehringer Ingelheim Animal Health USA Inc. | Anthelmintski depsipeptidni spojevi |
| WO2016191389A2 (en) | 2015-05-27 | 2016-12-01 | Merial, Inc. | Compositions containing antimicrobial igy antibodies, for treatment and prevention of disorders and diseases caused by oral health compromising (ohc) microorganisms |
| KR101687973B1 (ko) | 2015-12-08 | 2016-12-21 | 주식회사 씨티씨바이오 | 마이크로필름 코팅을 이용한 동물 사료용 프리믹스 제조방법 |
| UY37137A (es) | 2016-02-24 | 2017-09-29 | Merial Inc | Compuestos antiparasitarios de isoxazolina, formulaciones inyectables de acción prolongada que los comprenden, métodos y usos de los mismos |
| RU2630316C1 (ru) * | 2016-06-24 | 2017-09-07 | Карина Микаилевна Мирзаева | Препарат для борьбы с насекомыми-кератофагами |
| WO2018039508A1 (en) | 2016-08-25 | 2018-03-01 | Merial, Inc. | Method for reducing unwanted effects in parasiticidal treatments |
| CA3036450A1 (en) | 2016-09-22 | 2018-03-29 | Syngenta Participations Ag | Use of a pesticidal mixture comprising abamectin and cyantraniliprole to control potato psyllid |
| CA3040278A1 (en) | 2016-10-14 | 2018-04-19 | Boehringer Ingelheim Animal Health USA Inc. | Pesticidal and parasiticidal vinyl isoxazoline compounds |
| JP2020504710A (ja) | 2016-11-16 | 2020-02-13 | ベーリンガー インゲルハイム アニマル ヘルス ユーエスエイ インコーポレイテッド | 駆虫性デプシペプチド化合物 |
| WO2019005700A1 (en) | 2017-06-26 | 2019-01-03 | Merial, Inc. | DOUBLE-ACTING PARASITICIDE GRANULATE COMPOSITIONS, METHODS AND USES THEREOF |
| ES2944616T3 (es) | 2017-08-14 | 2023-06-22 | Boehringer Ingelheim Animal Health Usa Inc | Compuestos de pirazol-isoxazolina plaguicidas y parasiticidas |
| US20210137960A1 (en) | 2018-02-01 | 2021-05-13 | Yale University | Compositions and methods for inhibition of nuclear-penetrating antibodies |
| US11583545B2 (en) | 2018-02-08 | 2023-02-21 | Boehringer Ingelheim Animal Health USA Inc. | Parasiticidal compositions comprising eprinomectin and praziquantel, methods and uses thereof |
| WO2020014068A1 (en) | 2018-07-09 | 2020-01-16 | Boehringer Ingelheim Animal Health USA Inc. | Anthelminthic heterocyclic compounds |
| US11773066B2 (en) | 2018-11-20 | 2023-10-03 | Boehringer Ingelheim Animal Health USA Inc. | Indazolylcyanoethylamino compound, compositions of same, method of making, and methods of using thereof |
| WO2020150032A1 (en) | 2019-01-16 | 2020-07-23 | Boehringer Ingelheim Animal Health USA Inc. | Topical compositions comprising a neonicotinoid and a macrocyclic lactone, methods and uses thereof |
| US20220202835A1 (en) | 2019-03-01 | 2022-06-30 | Boehringer Ingelheim Animal Health USA Inc. | Injectable clorsulon compositions, methods and uses thereof |
| CA3133100A1 (en) | 2019-03-19 | 2020-09-24 | Boehringer Ingelheim Animal Health USA Inc. | Anthelmintic aza-benzothiophene and aza-benzofuran compounds |
| BR112022000982A2 (pt) | 2019-07-22 | 2022-03-08 | Intervet Int Bv | Forma de dosagem veterinária mastigável macia |
| AU2021278889A1 (en) | 2020-05-29 | 2023-02-02 | Boehringer Ingelheim Pharma Gmbh & Co. Kg | Anthelmintic heterocyclic compounds |
| WO2022034226A1 (en) | 2020-08-14 | 2022-02-17 | Universidad De Navarra | Avermectin and milbemycin compositions for inhalation |
| WO2022140728A1 (en) | 2020-12-21 | 2022-06-30 | Boehringer Ingelheim Animam Health Usa Inc. | Parasiticidal collar comprising isoxazoline compounds |
| WO2023094286A1 (en) | 2021-11-25 | 2023-06-01 | Syngenta Crop Protection Ag | Pesticidal compositions |
| WO2025257633A1 (en) | 2024-06-12 | 2025-12-18 | Boehringer Ingelheim Vetmedica Gmbh | Long-acting castor oil-containing injectable formulations and methods of use thereof |
Family Cites Families (7)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US3950360A (en) * | 1972-06-08 | 1976-04-13 | Sankyo Company Limited | Antibiotic substances |
| JPS4914624A (fi) * | 1972-06-08 | 1974-02-08 | ||
| US4134973A (en) * | 1977-04-11 | 1979-01-16 | Merck & Co., Inc. | Carbohydrate derivatives of milbemycin and processes therefor |
| US4161583A (en) * | 1977-10-03 | 1979-07-17 | Merck & Co., Inc. | Method for the separation and purification of antibiotic macrolides |
| US4160083A (en) * | 1977-10-03 | 1979-07-03 | Merck & Co., Inc. | Process for the separation of antibiotic macrolides |
| US4160861A (en) * | 1977-10-03 | 1979-07-10 | Merck & Co., Inc. | Method for the separation of antibiotic macrolides |
| US4160084A (en) * | 1977-10-11 | 1979-07-03 | Merck & Co., Inc. | Method for the separation of antibiotic macrolides |
-
1977
- 1977-03-29 SE SE7703592A patent/SE434277B/xx not_active IP Right Cessation
- 1977-04-04 DK DK149077A patent/DK146514C/da active Protection Beyond IP Right Term
- 1977-04-05 NO NO771211A patent/NO148856C/no unknown
- 1977-04-06 NL NLAANVRAGE7703810,A patent/NL188859C/xx active Protection Beyond IP Right Term
- 1977-04-07 FI FI771124A patent/FI57781C/fi not_active IP Right Cessation
- 1977-04-11 IL IL51854A patent/IL51854A/xx unknown
- 1977-04-13 CA CA276,126A patent/CA1098063A/en not_active Expired
- 1977-04-13 GB GB15402/77A patent/GB1573955A/en not_active Expired
- 1977-04-13 CY CY1114A patent/CY1114A/xx unknown
- 1977-04-13 NZ NZ183847A patent/NZ183847A/xx unknown
- 1977-04-13 AU AU24220/77A patent/AU513641B2/en not_active Expired
- 1977-04-14 RO RO7790023A patent/RO71785A/ro unknown
- 1977-04-14 CS CS772465A patent/CS207397B2/cs unknown
- 1977-04-15 AR AR267229A patent/AR215000A1/es active
- 1977-04-15 DD DD77198421A patent/DD137727A5/xx unknown
- 1977-04-15 FR FR7711432A patent/FR2348970A1/fr active Granted
- 1977-04-15 IE IE785/77A patent/IE44822B1/en not_active IP Right Cessation
- 1977-04-15 AT AT266277A patent/AT357503B/de not_active IP Right Cessation
- 1977-04-15 YU YU1001/77A patent/YU40814B/xx unknown
- 1977-04-15 GR GR53219A patent/GR63128B/el unknown
- 1977-04-15 IT IT48991/77A patent/IT1106424B/it active
- 1977-04-15 PT PT66445A patent/PT66445B/pt unknown
- 1977-04-16 PL PL1977197448A patent/PL108004B1/pl unknown
- 1977-04-18 SU SU772474802A patent/SU716524A3/ru active
- 1977-04-18 BG BG036028A patent/BG35900A3/xx unknown
- 1977-04-18 DE DE2717040A patent/DE2717040C2/de not_active Expired
- 1977-04-18 GT GT197746150A patent/GT197746150A/es unknown
- 1977-04-18 LU LU77152A patent/LU77152A1/xx unknown
- 1977-04-18 BE BE176805A patent/BE853702A/xx not_active IP Right Cessation
- 1977-04-18 HU HU77ME2059A patent/HU179041B/hu unknown
- 1977-04-18 OA OA56144A patent/OA05638A/xx unknown
- 1977-04-18 ES ES457932A patent/ES457932A1/es not_active Expired
- 1977-04-18 ZM ZM7736A patent/ZM3677A1/xx unknown
- 1977-04-18 CH CH477177A patent/CH639422A5/de not_active IP Right Cessation
- 1977-04-18 ZA ZA00772345A patent/ZA772345B/xx unknown
- 1977-04-19 JP JP4416977A patent/JPS52151197A/ja active Granted
-
1978
- 1978-09-08 US US05/940,682 patent/US4310519A/en not_active Expired - Lifetime
-
1981
- 1981-07-09 KE KE3141A patent/KE3141A/xx unknown
- 1981-07-30 HK HK384/81A patent/HK38481A/en unknown
-
1982
- 1982-12-30 MY MY87/82A patent/MY8200087A/xx unknown
-
1995
- 1995-04-21 NL NL950005C patent/NL950005I2/nl unknown
-
1997
- 1997-03-03 NL NL971001C patent/NL971001I2/nl unknown
Also Published As
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| FI57781B (fi) | Foerfarande foer framstaellning av c-076-foereningar med antihelmintisk verkan | |
| US4429042A (en) | Strain of Streptomyces for producing antiparasitic compounds | |
| KR940004098B1 (ko) | 신규 항생제 화합물의 제조 방법 | |
| CA2021894C (en) | Antiparasitic agent | |
| AU611926B2 (en) | Paraherquamide and dihydroparaherquamide as antiparasitic agents | |
| EP0204421B1 (en) | Antihelmintic macrocyclic lactones and their production by fermentation | |
| NZ227005A (en) | Polycyclic compounds, derivatives of paraherquamide, from fermentation of penicillium charlesii mf 5123; pesticidal compositions | |
| US5164389A (en) | Anthelmintic bioconversion products | |
| AU632508B2 (en) | Anthelmintic bioconversion products | |
| AU618136B2 (en) | Anthelmintic bioconversion products | |
| JPS61257989A (ja) | 微生物の新規な駆虫性発酵生産物 | |
| AU642295B2 (en) | 28-hydroxy ivermectin aglycone | |
| JPS6229589A (ja) | 微生物から得られる新規な駆虫性醗酵生成物 | |
| RU2029783C1 (ru) | Способ получения антибиотика | |
| JPH0776224B2 (ja) | 新規微生物の新規な駆虫性ミルベマイシン類似体 | |
| JPS63227590A (ja) | 抗生物質ミルベマイシン化合物およびその製造法 | |
| US5120646A (en) | Process for the preparation of anthelmintive bioconversion products | |
| EP0293787B1 (en) | Antibiotic 6270B, processes for its production, and its use as an anticoccidiosis agent and a feed additive | |
| KR820001203B1 (ko) | 데옥시나라신 항생제의 제조방법 | |
| EP0050964A2 (en) | Macrocyclic lactones, their production and parasiticidal uses, compositions containing them, and a biological culture suitable for producing them | |
| JPS643878B2 (fi) | ||
| JPS62155281A (ja) | 抗生物質ミルベマイシン化合物 |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| MA | Patent expired | ||
| MA | Patent expired |
Owner name: MERCK & CO., INC. |