PL108004B1 - Method of producing new heterocyclic derivatives osposob wytwarzania nowych heterocyklicznych pochodf alpha-l-oleandrozylo-alpha-l-oleandroside with snych alfa-l-oleandrozylo-alfa-l-oleandrozydu o symbolu c/076 ymbol c/076 - Google Patents
Method of producing new heterocyclic derivatives osposob wytwarzania nowych heterocyklicznych pochodf alpha-l-oleandrozylo-alpha-l-oleandroside with snych alfa-l-oleandrozylo-alfa-l-oleandrozydu o symbolu c/076 ymbol c/076 Download PDFInfo
- Publication number
- PL108004B1 PL108004B1 PL1977197448A PL19744877A PL108004B1 PL 108004 B1 PL108004 B1 PL 108004B1 PL 1977197448 A PL1977197448 A PL 1977197448A PL 19744877 A PL19744877 A PL 19744877A PL 108004 B1 PL108004 B1 PL 108004B1
- Authority
- PL
- Poland
- Prior art keywords
- compounds
- fractions
- alpha
- mycelium
- fermentation
- Prior art date
Links
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07H—SUGARS; DERIVATIVES THEREOF; NUCLEOSIDES; NUCLEOTIDES; NUCLEIC ACIDS
- C07H19/00—Compounds containing a hetero ring sharing one ring hetero atom with a saccharide radical; Nucleosides; Mononucleotides; Anhydro-derivatives thereof
- C07H19/01—Compounds containing a hetero ring sharing one ring hetero atom with a saccharide radical; Nucleosides; Mononucleotides; Anhydro-derivatives thereof sharing oxygen
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P33/00—Antiparasitic agents
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P33/00—Antiparasitic agents
- A61P33/02—Antiprotozoals, e.g. for leishmaniasis, trichomoniasis, toxoplasmosis
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P33/00—Antiparasitic agents
- A61P33/10—Anthelmintics
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12P—FERMENTATION OR ENZYME-USING PROCESSES TO SYNTHESISE A DESIRED CHEMICAL COMPOUND OR COMPOSITION OR TO SEPARATE OPTICAL ISOMERS FROM A RACEMIC MIXTURE
- C12P19/00—Preparation of compounds containing saccharide radicals
- C12P19/44—Preparation of O-glycosides, e.g. glucosides
- C12P19/60—Preparation of O-glycosides, e.g. glucosides having an oxygen of the saccharide radical directly bound to a non-saccharide heterocyclic ring or a condensed ring system containing a non-saccharide heterocyclic ring, e.g. coumermycin, novobiocin
- C12P19/62—Preparation of O-glycosides, e.g. glucosides having an oxygen of the saccharide radical directly bound to a non-saccharide heterocyclic ring or a condensed ring system containing a non-saccharide heterocyclic ring, e.g. coumermycin, novobiocin the hetero ring having eight or more ring members and only oxygen as ring hetero atoms, e.g. erythromycin, spiramycin, nystatin
- C12P19/623—Avermectin; Milbemycin; Ivermectin; C-076
-
- Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
- Y10—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC
- Y10S—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
- Y10S435/00—Chemistry: molecular biology and microbiology
- Y10S435/8215—Microorganisms
- Y10S435/822—Microorganisms using bacteria or actinomycetales
- Y10S435/886—Streptomyces
Landscapes
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Veterinary Medicine (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- General Chemical & Material Sciences (AREA)
- Zoology (AREA)
- Wood Science & Technology (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Pharmacology & Pharmacy (AREA)
- Public Health (AREA)
- Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
- Animal Behavior & Ethology (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Tropical Medicine & Parasitology (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- General Engineering & Computer Science (AREA)
- Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)
- Heterocyclic Carbon Compounds Containing A Hetero Ring Having Oxygen Or Sulfur (AREA)
- Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
- Agricultural Chemicals And Associated Chemicals (AREA)
- Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
- Saccharide Compounds (AREA)
Description
Opis patentowy opublikowano: 15.11.1980 108004 Int. Cl.2 C12D 13/00 Twórca wynalazku: Uprawniony z patentu: Merck & Co., Inc., Rahway, N.J.(Stany Zjednoczone Ameryki) Sposób wytwarzania nowych heterocyklicznych pochodnych a-L-oleandrozylo-a-L-oleandrozydu o symbolu C-076 Wynalazek dotyczy sposobu wytwarzania nowych heterocyklicznych pochodnych oHL-oleandrozylo-a- -iL-«oleainjdrozyidiu o symbolu C-076, otrzymywanych metoda fermentacji pnzy uzyciiu sziczepu drobno¬ ustroju Streptomy-ces a,vermiitilis.Otrzymane sposobem wedlug wynalazku zwiazki wykazuja aktywnosc przeciwpasozytnicza o szero¬ kim zakresie dzialania. Substancje, oznaczone C- -076, otrzymuje sie metoda kontrolowanej fermen¬ tacji przy uzyciu nieopisanych dotad szczepów drobnoustrojów Streptomyces avermitiliis. Sposo¬ bem wedlug wynalazku oitrzymuje isie 8 róznych, choc bardzo zblizonych, nowych zwiazków, a mia¬ nowicie, Ala, Alb, A2a, A2b, Bla, Bib, BEa oraiz B2lb; Wszystkie one okreslone sa wspólna naizwa grupy C 4)716.Wszystkie opisane zwiazkli, wykazujace aktywnosc przeciwpasozytnicza, otrzymuje sie meitoda fer¬ mentacji zasadniczo w czystej formie.Na .podstawie badan taksonomicznych stwier¬ dzono, ze (drobnoustroje, zdolne do wytwarzania zwiazków C-07i6, sa nowym gatunkiem z rodzaju Strepitomyces, tótóry nazwano Streptomyces aver- mitilis.Hodowle szczepu wyizolowanego z gleby oznaczo¬ no symbolem MA-4G80 i znajduje sie w kolekcji kuilitur firmy Merck & Co.Inc., Rahway, New Jersey. Próbka hodowli szczepu, wytwarzajacego zwiaziki C-0i7i6, zostala zdeponowana w stalej ko¬ lekcji kultur w Fermentation Section of the Nort- 10 15 20 25 30 2 henn Utilization Research Branch, UJS. Department of Agiriculiture w Peorii, Illinois pod numerem rejestracyjnym NRRL 81IG5. Próbka NRRL 8ll65 zostala rówmiiez zdeponowana i jes/t dostepna bez ograniczen w American Type Culture Oolleotion w 12 301 Panklawn Drive, Rockville, Maryland 20 862 pod numerem ATCC 31 267.Charakterystyczne cechy .morfologiczne i hodow¬ lane Strepitomyces avermiltilis podano ponizej: Morfologia. Sporofory na grzybni powietrznej two¬ rza spirale jako boczne odgalezienia. Spirale sa zbite, ale wraz z wiekiem hodowli staja sie bar¬ dziej otwarte. Spory tworza lancuchy o wiecej niz 15 zarodnikach i w powiekszeniu X 970 uwidacz¬ nia sie ksztalt kulisty do owalnego. Sporulacja nastepuje na agarze z maka owsiana, agarze gli- cerolo-asparaglinowym, agarze z solami i skrobia oraz na agarze z bialkiem jajka. Ogladana pod mikroskopem elektronowym powierzchnia spor jest gladka.Agar z maka owsiana Grzybnia podstawowa: rewers — bardzo ciemno brazowy Grzybnia powietrzna: konsystencji proszku, bar¬ wy brazowo-szarej (41i) ** zmieszanej z. biala Rozpuszczalny pigment: brazowy Agar Czapek-Dioxa (agar z sacharoza i azotanem) Grzybnia podstawowa: uboga, bezbarwna Grzybnia powietrzna: skapa, szarawa 108004108004 3 Rozpuszczalny pigment: jjaismp szarawy brjunatny, Agar z bialkiem jajka Grzybnia podstawowa: brunaltna Grzybnia powietrzna: umiarkowana, jasno sza- rawo-zólto4razowa <3ge) ** zmieszana z bia¬ lym Rozpuszczalny pigment: jasno^zóllawo-brunatny Agar z glicerolem i asiparagina Grzybnia podstawowa: rewers — zóltawobrazo- .wy Grzybnia powietrzna: konsystencji proszku, bra- zowawo-szara (4M) ** zmieszana z bialym Rozpuszczalny pigment: jasmy, zólltawo4razowy Agar z solami nieorganicznymli i skrobia Grzyibnia podstawowa: rewers — szarawo-zólta- wo-brazowy Grzybnia powietrzna: konsystencji proszku, jas- no-brazowawo-szara (4ig) ** na brzegach ciem¬ niejsza brazowawo-szara ,(41i) ** Rozpuszczalny pigmenit: jasno-zóltawo^razowy Agar z ekstraktem drozdzowym, dekstroza i sola¬ mi Grzyfoniia podstawowa: rewers — ciemno-brazo- wy Grzybnia powietrzna: umiarkowana, brazowawo¬ niala Rozpuszczalny pigment: brazowy Agar z ekstraktem drozdzowym i ekstraktem slo¬ dowym Grzybnia podstawowa: rewers —* ciemno-brazo- wy Grzybnia powietrzna: umiarkowana., brazowawo- -/biala Rozpuszczalny pigment: brazowy Agar z peptonem, zelazem i ekstraktem drozdzo¬ wym Grzybnia podsltawowa: ciemnobrazowa Grzybnia .powietrzna: brak Rozpuszczalny pigment: ciemno-brazowy do czarnego Melanina: dodatnia Wytwarzanie siarkowodoru: dodatnie Agar odzywczy \ Grzybnia podstawowa: brunatna Grzybnia powietrzna: skajpa, szarawa Rozpuszczalny pigment: jasno-brazowy Agar odzywczy ze skrobia Gr;zybnia podstawowa: brunatna Grzybnia powietrzna: skapa, szarawo-biala Rozpuszczalny pigment: jasno4razowy Hydroliza skrobi: dobra Slupek ziemniaka* Grzybnia podstawowa: brunatna Grzybnia powietrzna: brazowa zmieszana z sza- (rawonbialym Rozpuszczalny pigmenit: szarawo-torazowy Surowica krwi Doefflera Grzyibnia podstawowa: szarobrunatna Grzybnia powietrzna: brak Rozpuszczaikiy pigment: nieco brazowiejacy w srodku Uplynnianie: brak Agar odzywczy z tyrozyna: Grzybnia podsltawowa: rewers wy do czarnego — ciemno-brazo- , Grzybnia powietrzna: skapa, szarawa Rozpuszczalny pigment: ciemnobrazowy Rozkladanie tyrozyny: brak Wykorzystywanie wegla 5 Podstawowa pozywka Fridham-Gottlieba + 1% zródlo wegla; + = wzrost; — = brak wzrostu w porównaniu do ujemnej kontroli (brak zródla I wegla).Glukoza + 10 Arabinoza + Celuloza — Fruktoza + Inozytol + Laktoza + 15 Maltoza + Mannitol + Mannoza + Rafinoza + Ramnoza + 20 ( Sacharoza + Ksyloza + Agar odzywczy z zelatyna Grzybnia podsltawowa: brunatna, Grzybnia powietrzna: skapa, szarawo-biala 25 Rozpuszczalny pigment: jasno-ibrazowy Uplynnianie zelatyny: dobre SJupki zelatyny Grzybnia podstawowa: w ksztalcie brazowego pierscienia 30 Grzybnia powietrzna: brak Rozpuszczalny pigment: zielonawo^brazowy Uplynnianie zelatyny: calkowite Agar z mlekiem odtluszczonym Grzyibnia podstawowa: ciemno-brazowa 35 Grzybnia powietrzna: brak Rozpuszczalny pigment: ciemno^brazowy Hydroliza kazeiny: dobra Mleko lakmusowe Grzyibnia podstawowa: ciemno-brazowa w ksztal- 40 cie pierscienia Grzybnia powietrzna: brak Zabarwieinie: ciernno^brazowe Koagulacja i/lub peptonizacja: peptonizuje cal¬ kowicie, przechodzi w odczyn alkaliczny 45 Mleko odtluszczone Grzybnia podsltawowa: ciemno4razowa w ksztal¬ cie pierscienia Grzyibnia powietrzna: brak 50 Rozpuszczalny pigment: ciemno-forazowy Koagulacja i/lub peptonizacja: peptonizuje cal¬ kowicie, przechodzi w odczyn alkaliczny Zasieg temperatur: agar z ekstraktem drozdzowym, 55 dekstroza i solami 28°C — dobry wzrost grzybni podstawoweij i grzybni powietrznej 37°C — dobry wzrost grzybni podstawowej i grzybni powietrznej 60 5Q°c — brak wzrostu Zapotrzebowanie na tlen: slupki hodowli na aga¬ rze z ekstraktem drozdzowym, dekstroza i sola¬ mi Hodowla tlenowa »s Wszystkich odczytów dokonywano po 3 tygodniach5 108004 6 hodowli w temperaturze 28°C, o ile nie zaznaczo¬ no inaczej. Wartosc pH wszystkich pozywek w przyblizeniu 6,8—7,2.Numer oznaczen barw (**) przyjeto z Color Har- mony Manual, 1058, 4-ite wydanie Container Cor- 5 poration of America, Chicago, Illinois.Dokladne badania porównawcze z opisanymi w Bergey's Manual of Determlinative Bacteriology (8 wydanie) znanymi drobnoustrojami wykazuja istotne róznice i na tej podstawie omawiany drób- 10 noustrój zaklasyfikowano jako nowy gatunek, oznaczony Streptomyces avermitilis.Powyzej opisany szczep Streptomyces avermi)ti- lis imózna stosowac w produkcji wymienionych zwiazków G-076. Niniejszy wynalazek obejmuje la równiez zastosowanie mutanta opisanego drobno¬ ustroju.Mutantem tym jest szczep Streptomyces aver- mitilis MA 4848, otrzymany ze Streptomyces aver- miitilis MA 46180 pod dzialaniem promieni nad- *' fioletowych, Liofilizat i zamrozona fiolke hodowli tego mutanta zdeponowano w stalej (kolekcji kul¬ tur w American Type Culture Oollection pod nu¬ merami rejestracyjnymi odpowiednio ATTC 31272 oraz 31271. Stopujac zamrozona hodowle jako ino- 25 kulum otrzymano nieco wyzsze wydajnosci pro¬ cesu fermen/tacji. Charakterystyczne cechy morfo¬ logiczne i hodowlane powyzszego mutanta sa iden¬ tyczne, jaik powyzqj podane dla szczepu zasadni¬ czego. 30 Zwiazki C-076 otrzymuje sie metoda fermentacji tllenowej na odpowiedniej wodnej pozywce przy uzyciu wyzej zdefiniowanego szczepu Streptomy¬ ces avermitilis lub jego mutanta. Odpowiednimi do otrzymywania zwiazków O076 sa wodne po- 35 zywki, stosowane w produkcji wielu antybioty¬ ków. Pozywki takie zawieraja przyswajalne przez drobnousitirój zródla wegla i azotu oraz male ilosci soli nieorganicznych. Pozywki fermentacyjne mo¬ ga dodatkowo zawierac, potrzebne dla wzrostu 40 drobnoustroju, metale w ilosciach sladowych.Zwykle ilosc ich'.jest wystarczajaca w kompleksie stosowanego zródla wegla i azotu, chociaz, jezeli zachodzi potrzeba, mozna wprowadzac do pozywki dodatkoweilosci. 4B iNa ogól odpowiednim zródlem przyswajalnego wegla sa weglowodany, tafcie jak cukry, na przy¬ klad dekstroza, sacharoza, maltoza, dekstran, cere- loza i inne oraz skrobia. Ilosc zródla wegla wy¬ korzystywanego* w pozywce zalezy czesciowo od w innych skladników pozywki i wynosi zwykle oko¬ lo 0^5 do Wt w przeliczeniu ha wage pozywki.Zródla wegla do pozywki mozna wprowadzac po¬ jedynczo lub kilka równoczesnie.Przyswajalne przez Streptomyces ayermitillis w w produfcji zwiazków C-07i6 sa rózne zródla azotu, takie jak hydrolizaty drozdzy, autolizaty drozdzy, maka .sojowa, hydrolizaty kazeiny, ekstrakty droz¬ dzowe, namok kukurydzy, pozostalosci po desty¬ lacji drozdzy browarnianych, maka z nasion ba- M welny, ekstrakt miesny i inne. Rózne zródla azo¬ tu mozna stosowac pojedynczo lulb w polaczeniu w ilosciach okolo 0,2 do (•/• w przeliczeniu na wage pozywki.Jalko sole nieorganiczne wprowadza sie do po- •• zywki zwykle stosowane sole, takie jak sodowe, potasowe, magnezowe, wapniowe, fosforanowe, siarczanowe, chlorki, weglany. Jako sladowe ilosci metali stosuje sie kobalt, magnez, zelazo i inne.Nalezy zaznaczyc, ze .opisane nizej pozywki oraz podane w przykladach sa tylko ilustracja ich zróznicowania i nie ograniczaja wynalazku.Nastepujace przyklady dotycza pozywek, odpo¬ wiednich dla wzrostu szczepów Streptomyces aver- mitilis, stosowanych w produkcji zwiazków C-076.Pozywka A Maka kukurydziana 20,0 g Pozostalosci po destylacji drozdzy browarnianych • 10,0 g Maka sojowa 15,0 g Cytrynian sodowy 4,0 g Caa2-'2H^O 0,5 g Poligiikol (P2000) 2,5 ml MgS04-7H^O 0,1 g GOCl2-i0HaO 0,01 g FaS04-7H*0 0,01 g Woda destylowana 1000 ml pH pozywki 6,5 Pozywka B Rozpuszczalna skrobia 20,0 g Namok kukurydziany 1'5,0 g iCereloza 5,0 g Maka sojowa ^ 4,0 g (,NH4)aS04 * 4,0 g Maka kukurydziana 1,0 g Olej sojowy 2,5 ml KH*P04 0,3 g CaCO, 6,0 g Woda destylowana 1000 ml pH pozywki 0,7 Pozywka C Pasta pomidorowa 40,0 g Makaowsiana 15,0 g Woda destylowana 1000 ml pH pozywki 6,0 Pozywka D Makaowsiana 20,0 g Pasta pomidorowa 20,0 g iWoda destylowana 1000 ml pH pozywki 5y5 Pozywka E Dekstroza 10,0 g Pepton (firmy Difco Laboratories, Detroit, Michigan) 5,0 @ Autolizat drozdzowy (Airdaimina pH firmy Yeast Products Inc., Peterson, New Jersey) 3,*0 g NaCl 12,7 g KC1 0,72 g PeSO*(NH4)jS04 •6H20 0,035 g MgCli •6H*0 5,32 g CaCli •2H*0 0,73 g Woda destylowana 1000 ml pH pozywki 7,4 Proces fermentacji przy uzyciu drobnoustrojów, wytwarzajacych zwiazki C^076, mozna prowadzic w temperaturze od okolo 20° do 40°C. Najaepsze wyniki otrzymuje sie przy fermentacji prowadzo¬ nej w temperaturze od okolo 24°—30°C, najko¬ rzystniej w temperaturze 27°—28°C. Wartosc pH0 7 pozywki, odpowiednia dla otrzymywania zwiazków C-076, wynosi od okolo 5,0, do 9,0, korzystnie 6,0—7,5.Do fermentacji w malej skali wygodne jest sto¬ sowanie koliby z odpowiednia iloscia pozywki, 5. wprowadzonej sterylnie, szczepienie zarodnikami lub grzyibnia podstawowa szczepu Streptomyces avermitilis, luzne zakorkowanie kolby wata i pro¬ wadzenie fermentacji w stalej temperaturze po¬ kojowej okolo 28°C na trzesawice obrotowej w 10 czasie 3 do 10 dni. Na wieksza skale fermentacje prowadzi sie w odpowiednich fermentorach, za¬ opatrzonych w mieszadlo z napowietrzaniem po¬ zywki. Pozywke .po wprowadzeniu do fenmentora i sterylizacji szczepi sie odpowiednia grzyibnia pod- 15 stawowa szczepu Streptomyces avermitilis. Proces fermentacji prowadzi sie 1—3 dni z równoczesnym mieszaniem i/lub napowietrzaniem pozywki w tem¬ peraturze od okolo 24°^37°C. Stopien napowie¬ trzania zalezy od kilku .czynników, takich jak wiel- 20 kosc fermentora, szybkosc mieszania i innych.Zwykle w takich fermenitorach mieszanie prowadzi sie od okolo 95 do 150 rpm i wprowadza powie¬ trze z .szybkoscia 56—1.13 dcnWminute.Nowe substancje, oznaczone jako C-076, wytwa- 25 rzane wedlug niniejszego wynalazku znajduja sie glównie w grzybni w koncowej fazie fermentacji.Izoluje sie je i rozdziela nizej opisanym sposobem.Izoluje sie 4 wystepujace w wiekszej i 4 w mniejszej ilosci skladniki C-076. Otrzymane . 8 30 róznych zwiazków zidentyfikowano jako C-076 Ala, Alb, A2a, A2b, Bla, Bib, B2a oraz B2b. Przy identyfikowaniu komponenty wystepujace w wiek¬ szej ilosci uzupelniono przyrostkiem „a", w mniej¬ szej — '„b". Róznice w budowie zwiazków „a" o- 35 raz „b" przyjmuje sie, ze sa te same dla kazdej z 4 par zwiazków.Nalezy oczekiwac, ze w trakcie fermentacji zwiazki C-076, wystepujace w wiekszej ilosci, nie beda wytwarzane w tych samych ilosciach. Na 40 ogól stwierdza sie, ze zwiazki Al stanowia okolo 20 do 30% w przeliczeniu na wage calego kom¬ pleksu C-076, natomiast A2 okolo 1 do 20% i BI oraz B2 po okolo 25 do 35% kazdy. Stosunek wa¬ gowy zwiazków serii „a" do serii „b" wynosi 85 : 15 *5} do 99 : 1.Izolowanie zwiazków C-i076 z calej brzeczki fer¬ mentacyjnej oraz wyodrebnianie poszczególnych skladników prowadzi sie metoda ekstrakcji roz¬ puszczalnikami i stosuje rozdzialy chromatpgra- 50. ficzne zarówno rózna technika chromatograficzna, jak i ukladami rozpuszczalników.Zwiazki C-076 sa slabo rozpuszczalne w wodzie; ale sa rozpuszczalne w organicznych rozpuszczal¬ nikach. Wlasciwosc te mozna wykorzystac przy 55 izolowaniu z brzeczki fermentacyjnej. Jedna z metod izolowania jest saczenie calej brzeczki i odrzucanie wodnego przesaczu. Mokra grzybnie ekstrahuje sie odpowiednim rozpuszczalnikiem or¬ ganicznym.- Korzystnie stosuje sie rozpuszczalnik 60 organiczny mieszajacy sie z woda, a wiec taki jak aceton, metanol, etanol i inne. Rozpuszczalnik ekstrahuje zarówno aktywne skladniki, jak i inne substancje nieaktywne przeciwpasozytniczo. Jezeli rozpuszczalnik miesza sie z woda, woda równiez fi5 8 usuwana jest z grzybni. Wyekstrahowana grzybnie mozna odrzucic. Ekstrakty odparowuje sie dla u- suniecia rozpuszczalnika organicznego i ekstrahu¬ je wielokrotnie drugim rozpuszczalnikiem. Gdy do pierwszej ekstrakcji stosuje .sie rozpuszczalnik mieszajacy sie z woda, to do drugiej korzystnie stosuje, sie rozpuszczalnik nie mieszajajcy sie, z woda, taki jak chloroform, chlorek metylenu, czte¬ rochlorek wegla, octan etylu, metyloetyloketon, metyloizcbutyloketon i inne. Te ostatnie ekstrakty suiszy sie i zageszcza znanymi -metodami dla u- zyskania pozostalosci, zawierajacej zwiazki C-076 z domieszka innych substancji. Frakcje te latwo chromatografuje sie w celu rozdzielenia zwiazków aktywnych C-076 od innych substancji oraz dla rozdzielenia i izolowania poszczególnych zwiazków C-076. Metody chromatograficzne, które mozna za¬ stopowac . dla oczyszczenia zwiazków C-076_, sa po¬ wszechnie znane.Przykladem jest chromatografia kolumnowa z zastosowaniem nosników: zelu krzemionkowego, tlenku glinu, zeli dekstranowych i innych, przy czym elucje prowadzi sie róznymi rozpuszczalni¬ kami i/ilub mieszaninami dwóch lub; wiejcej roz¬ puszczalników w róznych stosunkach. Chromato¬ grafie plynna stosuje sie do izolowania oczyszczo¬ nych frakcji, zawierajacych jeden lub wiecej zwiaz¬ ków C-076. Podobnie mozna stosowac chromato¬ grafie cienkowarstwowa zarówno dla stwierdzenia obecnosci, jak i izolowania pojedynczych zwiaz¬ ków . C-076. W kazdej z wymienionych metod o- czyszczono mieszaniny zwiazków C-076, jak i ich, pojedyncze skladniki. Na podstawie analizy róz¬ nych frakcji chromatograficznych, jak równiez da¬ nych spektralnych, takich jak widma w nadfio¬ lecie i podczerwieni, ponizej opisane zostana me¬ tody oznaczania obecnosci aktywnych zwiazków C-076 oraz ich aktywnosci przeciwpasozytnicze. r Dane dotyczace charakterystyki widm oraz wla¬ sciwosci fizykochemiczne poszczególnych zwiazków C-076 zestawione sa w tabel|i I. Zwiazki te sa dobrze rozpuszczalne w wiekszosci rozpuszczalni¬ ków organicznych i minimalnie rozpuszczalne w wodzie.Dane w tabeli r, dotyczace widm w nadfiolecie, otrzymano na spektrofotometrze Cary, Model 15 w roztworach metanolowych w kwarcowych kiu- wetach. pojemnosci 1 cm. Stezenie zwiazku wy¬ nosilo w przyblizeniu 25 ng/ml. Absorpcja w nad¬ fiolecie, zwiazku serii „a" odpowiada absorpcji zwiazku serii „a", który zawiera mniejsza ilosc zwiazku serii „b". Serie „a" i ^b" róznia sie tylko, obecnoscia .grupy —CH2— w podstawniku nizszego alkilu, która to róznica .nie jest zwiazana z chro- moforern. Absorpcje w nadfiolecie charakteryzuje glównie stopien i rodzaj nienasycenia poszczegól¬ nego zwiazku. Skrecalnosc optyczna oznaczano standardowa metoda na 'polarymetrze Karl Zeissa.Wspólczynnik stezenia (c) podano w procentach zwiazku w konkretnym rozpuszczalniku.Dane,,, dotyczace magnetycznego rezonansu ja¬ drowego C-13 dla zwiazków fc-076 Ala, A2a, Bla, Bi2a, sa zestawione w tabeli II. Widma otrzymano przy uzyciu spektrografu magnetycznego rezonan¬ su jadrowego firmy Varian, model CFT-20 wlt)8004 deuterowanym chloroformie z zastosowaniem czte- rometylosilanu jako wzorca wewnetrznego. Obje¬ tosc roizitiworu oraz stezenie próbki sa podane dla kazdego przypadku lacznie z wartosciami przesu- 10 niec chemicznych w odniesieniu do czterometylo- silanu w czesciach na milion (ppm). Chemiczne przesuniecia podane sa dla pojedynczych atomów wegla, o ile nie zaznaczono inaczej.Wzór sumaryczny Skrecalnosc optyczna [a]p27 (CH013) Ciezar czastecz¬ kowy (oznaczony me¬ toda spektro¬ grafii i masowej) Widmo w nad¬ fiolecie X-imax(mu) AJa C49H74O14 +68.5°+2° (C=o.77) 886 237 (28,700; 4.458) 243 ¦(32,275; 4.495) 252 (20,290; 4.307) Alb C48H72O14 872 Tabl A2a C49H76O15 +48.8°+2° (C=1.64) 904 237 (28,80€; 4.459) 243 (31,740; 4.501) 252 (20,425; 4.310) i c a I A2b C48H74O15 890 Bla C48H72O14 +55.7°±2° (C=1.06) • 872 237 (29,120; 4.464) 243 (3,1,850; 4.503) 252 (20,510; 4.431) Bib C47H70O14 858 B2a C48H74O15 +38.3°±i2° 890 237 <27,580; 4j441) 243 (30,590; 4.486) 252 (20,060; 4.302) B2b C47H72Ois 876 Tablica II Al (0,6 ml, 16%) 12,0, 13,0, 15,1, L6,4, 17,7, 18,4, 19,9, 20,3, 30,6, 34,3, (3C), 35,2, 36,6, 39,7, 40,5, 45,7, (2C), 57,7, 67,3, 68,2 (2C), 68,4 (2C), 74,9, 77,0, 77,5, 78,3, 79,4, 80,6 (2C), 82,0, 95,0, 98,5, 118,4 (2C), 119,7, 124,9, 127,8, 135,2, 136,1, 137,6, 139,9, 173,8. 27,5, 56,4, 76,1, 95,8, 136,0, A2 (0,6 ml, 16%) 11,8, 12,4, 13,8, 15,1, 17,7, 18,4, 19,9, 20,3, 34,3, (3C), 35,2, 35,8, 36,5, 39,8, 40,8, 41,2, 56,4 (2C), 57,7, 67,3, 67,7, 68,2 (3C), 69,9, 70,8 77,0, 77,6, 78,3, 79,4, 80,6 (2C), 81,8, 94,9, 98,6 117,7, 118,4, 119,7, 124,9, 135,7, 136,1, 137,6, 173,7. 27,3, 45,7, 76,1, 99,7, 140,0, BI (0,3 ml, 16%) 12,0, 12,9, 15,1, 16,4, 17,7, 18,4, 19,9, 20,2, 27,5, 30,6, 34,3 (3C), 35,2, 36,6, 39,8, 40,5, 45,7, 56,4 (2C), 67,3, 67,8, 68,2 (2C), 66,4 (2C), 75,0, 76yl, 78,3 (2C), 80,5 (2C), 82,0, 95,0, 95,8, 98,5, 118,1, 120,4, 124,8, 127,9, 135,2, 136,2, 137,9 (2C), 173,6. , 79,4 118,4, 139,7, | B2 (0,6 ml, 16%) | 11,8, 12,4, 13,8, 15,1, 17,7, 18,4, 19,9, 20,2, 34,4 (3C), 35,2, 35,8, 36,5, 39,8, 40,8, 41,2, 56,4 (2C), 67,3, 67,7 (2C), 68,3 (3C), 69,9, 70,9, 78,3, 79,4 (2C), 80,5 (2C), 81,8, 94,9, 98,6, 117,7, 118,0, 120,4, 124,8, 135,7, 138,0 (2C), 173,5. 27,3, | 45,8, 76,1, 99,7, 139,8, 35 40 45 50 55 Charakterystyke pilków widma masowego 8 zwiazków C-076 podano w tabeli III. * W pierw¬ szym rzedzie tabeli podano stosunek masy do la¬ dunku (M/e) dla jonu molekularnego dla kazdego zwiazku, natomiast pozostale liczby odnosza sie do podstawowych fragmentów kazdego zwiazku. Da¬ ne stosunku masy do ladunku, podane w tym samym poziomie, wskazuja na analogiczne frag¬ menty kazdego zwiazlku. Stosunek masy do la¬ dunku, który podano w tym samym rzedzie po¬ ziomym w liczbach calkowitych, otrzymano przy uzyciu spektrografu masowego, model LKB-900Ó.Dane stosunku masy do ladunku, podane do czwartego miejisca dziesietnego, otrzymano ze spe- ktrograifu masowego firmy Varian, model MAT-731 o wysokiej rozdzielczosci.Eig. 1—8 podaja widma w podczerwieni oraz widma magnetycznego rezonansu proitonowego czterech zwiazków C-076. Fig. 1—4 dotycza wid¬ ma w podczerwieni dla C-076 Ala, A2a, Bla oraz B2a, a fig. 5—8 podaja widma magnetycznego re¬ zonansu protonowego dla C-076 Ala, A2a, Bla o- raz B2a. Widma w podczerwieni otrzymano przy uzyciu Perkin-Blimer spektroskopu, model 421 w roztworze chloroformowym. Widma magnetyczne¬ go rezonansu protonowego otrzyrrlano przy uzyciu spektrografu magnetycznego rezonansu jadrowego firmy Varian, model HA-100, przy czym wartosci przesuniec chemicznych podano w ppm w odnie¬ sieniu do cziterometylosilanu jako wzorca wew¬ netrznego, ¦¦¦•¦•11 108004 Tablica IH Charakterystyka widma masowego 12 Ala 886.5072 742.4229 580.3406 548.3136 456.2886 305.2120 275.1292 257.1382 221.1527 193.1587 190.1101 169.1226 145.0867 137.0954 127.0754 1 113.0604 95.0496 87.0444 Alb 872 728 566.3265 534 442 291.1962 275 257 207 179.1429 199 155 145 137 127 113 95 87 A2a 904 760 598 566 456 323.2225 305 275 257 230.1637 211.1691 199 179.1976 145 137 127 113 95 87 A2b 890 746 564 552 442 309.2070 291 275 257 225 197.1542 199 179 145 137 127 113 95 87 Bla 872 728 566 548.3131 456 305 261.1139 257 221 193 199 169 145 137 127 113 95 87 Bib 858 714 552 534 442 291 261 257 207 179 199 155 145 137 127 113 95 87 B2a 890 746 584 566 456 323 305 261 257 239" 211 199 179 145 137 127 113 95 87 B2b 876 732 570 552 442 309 291 261 257 ; 225 197 : 199 179 i 145 j 137 i 127 i 113 95 87 \ Na podstawie danych doswiadczalnych, sposo¬ bem wedlug wynalazku otrzymano zwiazki C-076 o wzorze ogólnym 1, w którym R oznacza a-L-ole- amdrozylo-iaHL^oleandrozyd o wzorze 2, w którym linia lamana oznacza .pojedyncze lub podwójne wiazanie; Ri o'znacza grupe hydroksylowa i znaj¬ duje sie tylko wtedy, gdy wspomniana linia lama¬ na wskazuje na pojedyncze wiazanie, zas R2 ozna¬ cza gruipe propylowa lub butylowa, a R, oznacza grupe metoksylowa lub hydroksylowa.Poszczególne zwiazki o podanym wzorze struk¬ turalnym zestawiono w tabeli IV.Ala Alb A2a A2b Bla Bib B2a B2b Tabela Ri wiazanie podwójne wiazanie podwójne -OH -OH wiazanie podwójne wiazanie podwójne -OH -OH IV R* butyl propytt butyl propyil butyl propyl butyl propyl Rt -OCH, -OCH, -OCH, -OCH, -OH ¦OH -OH -OH Zwiazki, w których R2 oznacza grupe butylowa (serie „a" zwiazków)-i odpowiedni zwiazek, w którym R2 oznacza grupe propylowa (.serie „Ib") zachowuja sie podobnie w wiekszosci procesów izolacji, takich ja'k ekstraikcja rozpuszczalnikiem.Stwierdzono w kazdej parze zwiazków „a" i „b" ze zwiazek „a" wystepuje w wiekszej ilosci i na ogól stanowi okolo 85 do 99^/t mieszaniny zwiaz- 30 45 55 60 68 ków „a" i „b". Obecnosc grupy propylowej spraw¬ dza sie przy uzyciu spektrografii masowej, w któ¬ rej piki oznaczaja fragmenty, zawierajace grupe butylowa i maja piki towarzyszace o masie zmniejszonej o 14 jednostek (lulb jedna grupe —CH2). Ponadto w celu oddzielenia skladnika A1|d od Ala stosowano chromatografie plynna cisnie¬ niowa, a widmo masowe zwiazku Alb oznaczano przy uzyciu spektrografu masowego o wysokiej rozdzielczosci (tabela III).Nowe zwiazki, otrzymane sposobem wedlug wy¬ nalazku, wykazuja duza aktywnosc przeciw paso¬ zytom i moga byc stosowane do wytwarzania srodków przeciwrobaczycowych, do tepienia owa¬ dów i srodków przeciwglistnych, stosowanych u ludzi oraz zwierzat oraz srodków stosowanych w rolnictwie.Choroby, ogólnie zwane robaczycami, spowodo¬ wane sa infekcja pasozytniczych robaków zwie¬ rzecych, zwanych robakami jelitowymi. Robaczy^ ce stanowia problem ekonomiczny w odniesieniu do zwierzat domowych, takich jak swinie, owce, konie, bydlo, kozy, psy, koty i drób. Wsród roba- czyc grupa robaków, zwanych oblencami, wywo¬ luje szeroko rozpowszechniona i czesto powazna infekcje u róznych gatunków zwierzat. Najczes¬ ciej wystepujacymi rodzajami oblenców, którymi zakazone zostaja wspomniane zwierzeta sa: Hae- monchus, Trichostrongylus, Ostertagia, Nemato- disus, Cooperia, Ascaris, Bunostomuim, Oesophagio- stomum, Ghaberitia, Trichuris, Strongylus, Tricho- njema, Diictyocaulus, Capillaria, Heterakis, Toxo- cara, Ascaridia, Oxyuiris, Ancylostoma, Umcinaria, Ttoxascaris oraz Parasicaris. Niektóre z nich, jak na przyklad Nematodirus, Cooperia i Oesophago- stomum atakuja przewód jelitowy, podczas gdy inne, takie jak Haemonchus i Ostertagia wyste¬ puja w zoladku, a Jeszcze inne, takie jak Dictyo- caiulus, znagduija. 'sie w iplulcaich, Szereg pasozytów13 108004 14 atakuje równiez inne tkanki i organy, takie jak serce, naczynia krwionosne, tkanki podskórne oraz limfatyczne tkanki i inne. Zakazenia pasozytami, znane jako roibaczyce, prowadza do anemii, nie¬ dozywienia, oslabienia, utraity waigli, ostrego uszko¬ dzenia scianek przewodu jelitowego oraz innych tkanek i organów, a gdy nie sa leczone moga prowadizic do smierci zakazonego osobnika.Otrzyimane sposobem wedlug wynalazku zwiazki C-07/6 nieoczekiwanie wykazaly wysoka aktywnosc przeciw opisanym wyzej pasozytom, a ponadto sa równiez aktywne przeciw Dirofilaria u psów, Ne- matospiiroides, Syphacia, Aspicularis u gryzoni, czlonkonogom pasozytniczym, takim jaik kleszcze, roztocza, wszy, pchly, muchy plujki u zwierzat i ptaków, przeciw Lucilia sp. u -owiec, przeciw insektom kajsajacyim oraz wedrujacym dwuskrzy¬ dlowym larwom, takim jak Hypoderma sp. u by¬ dla, Gastrophilus u koni i Cuterebra u.gryzoni.Zwiaaki, wytwarzane sposobem wedlug wyna¬ lazku, maja zastosowanie równiez do wytwarza¬ nia srodków przeciw pasozytom ludzkim. Naj¬ czesciej wystepujacymi pasozytami przewodu zo- ladkowo-jelitowego czlowieka sa: Ancylositoma, Necaitor, Ascairis, Strongyloides, Trichinella, Ca- pillaria, Trichuris oraz Enterobius. Innymi wazny¬ mi w medycynie rodzajami pasozytów, które- znaj¬ duja sie we krwi lub w innych tkankach i orga¬ nach poza przewodem zoladkowo-jelitowym sa nit¬ kowce, takiie jak Wuchererigia, Brugia, Onchocer- ca i Doa, Dracunculus oraz pozajelitowe stadia robaków jelitowych Strongyioides i Trichlinella.Omawiane zwiazki wykazuja równiez dzialanie lecznicze przeciw czlonkonogom pasozytujacym u czlowieka, kajsajacyim insektom i iinnyim dwu¬ skrzydlowym owadom dokuczliwym dla czlowieka.Zwiazki te stosuje sde takze do wytwarzalnia srod¬ ków przeciw owadom domowym, takim jak kara¬ luchy Blatella sp., mole ubraniowe Tineola sp., chrzaszcze domowe Attagenus sp. oraz przeciw muchom Musca domestica, a ponadto do wytwa¬ rzania srodków przeciw'plagom insektów ataku¬ jacym przechowywane ziarno, takim jak Tiribo- liuim sp., Tenebrio sp. oraz przeciw molikom Te- tranychus sp., mszycom Acyrthtiosiphon sp. ataku¬ jacym rosliny hodowlanie; przeciw wedrownym owadom prostoskrzydlyim, jak szarancza i nie¬ dojrzalym stadiom insektów zyjacych na tkance roslinnej, oraz do wytwarzania srodków nicienio- bójczych w kontroli nicieni glebowych i pasozytów roslinnych, takich jak Mettaidogyne spp., które maja istotne znaczenie w rolnictwie.Srodki przeciwrobaczycowe dla ssaków, zawie- / rajace zwiazki wytwarzane wedlug wynalazku sto¬ suje sie doustnie w formfie kapsulek, pigulek, tab¬ letek alibo jako plynne dawki do wlewania do gardla. Dawkowanie tego rodzaju form zalezy od wagi dawki i zawartosci srodka przeciwpasozytnli- czego oraz pasozyta, ostrosci wystepowania i cha¬ rakteru zakazenia, jak równiez ciezaru zywiciela.Jezeli zwiazek wytwarzany sposobem wedlug wynalazku podaje sie z pasza zwierzeca to miesza slie dokladnie "z pozywieniem lub posypuje po wierzchu, ewentualnie w formie kulek, które moz¬ na dodawac przy koncu karmienia albo podawac oddzielnie. Zwiazki otrzymane sposobem, 'wedlug wynalazku mczna podawac zwierzetom pozajelito- wo, na przyklad wstrzykiwaniem dorzwacza, do¬ miesniowo, dotchawicowo lub podskórnie nawet • gdy aktywny skladnik jest rozpuszczony \vto roz¬ proszony w plynnym nosniku podloza. -; b "¦¦' Otrzymane wedlug wynalazku poszczególne skladniki C-07i6 mozna wyodrebniac* oczyszczac i stosowac pojedynczo, ewentualnie w,_ formie mie- w szaminy dwóch lub wiecej skladników. Nie ma potrzeby calkowitego rozdzielania róznych 'zwiaz¬ ków C-07/6, otrzymanych tpo oczyszczeniu z brzecz¬ ki fermentacyjnej. Zasadniczo otrzymuje na mie¬ szanine, zawierajaca dwa lub wdeoej zwiazków 18 C-07i6, jednakze dla zapobiegania i leczeniiar cho¬ rób pasozytniczych, mozna stosowac równiez w polaczeniu z innymi zwiazkami. Mieszajmy'takie na ogól zawieraja niejednakowe ?ttosed jzwiazków C-07i6, jakkolwiek wszystkie zwiazki c^ynine mie- 20 szaminy o a'ktywmosci przedwpasozytnic^j. mówia dokladnie okreslic. Mozfe tez nie zachodzU^r potrze¬ ba rozdzielania skladników „b" od; „a". Tego ro¬ dzaju zwiazki róznia sie tylko dlugosciaolanoucna bocznego w pozycji 25. W praktyce 'zwiazków 25 tych nie rozdziela sde, poniewaz zwdafcek „b" znajduje sie tylko w bardao malym procerjcie.Gdy zwiazki C-0716 dodaje sie. do; paszyp mozna do tego celu wykorzystywac osuszona^grzybnie zHbnze- ozki fermentacyjnej. : Grzybnia jest nawet bar- 30 dziej aktywna i poniewaz mozna ja oznaczyc, do¬ daje sie bezposrednio do paszy. r Zwiazki, otrzymane sposobem wedlug wynalaz¬ ku, stosuje sie równiez do zwalczania zarazy w rolniicitwie, która powoduje straty w obiorach lub 88 przy przechowywaniu. W tym przypadku stosuje sie rozpylanie, emulsje i inne dla zabezpieczenia przed szkodnikami.Aktywnosc przeciwirobaczycowaj zwiazków C-076 mozna oznaczac przez podawantie doustne z pisza 40 próbki pojedynczego zwiazku C-076,* miieiszaniny tych zwiazków, zageszczonego ekstraktu i milych form myszom, zakazonym 3 dni wczesniej Nema- tospiroides dubius. W 11, 12 i 1Q dni od zapo¬ czatkowania leczenia bada sie myisie odchody na 45 zawartosc jajeczek N.dubius,' po czym haistepnego fcmia mysz sie zabija i okresla ilosc ? ffefl5ak6w, znajdujacych sie w najblizej czesci malego jeli¬ ta. Alktywny zwiazek znajduje-' afe jeszcze po znacznym zmniejszeniu ilosci jajeczek i rotoalców 50 w pOlTÓwnainiu do zakazonych, niefeczonych grup kontrolnych.Nastepujace przyklady ilustruja 'dalsze szczegó¬ ly wynalazku, jednakze go nie ograniczajac; 55 60 Sklad pozywek Pozywka 1 Dekstroza Pepton Ekstrakt miesny Drozdze pierwszej generacji NaO CaCOj (po skorygowaniu pH) Woda destylowana Wartosc pH = 7,0 = ¦' ---¦ii . / 20 g 5 g 5 g 3 g 5 g 3 g 1000 ml108004 15 16 Pozywka 2 Pasta pomidorowa 20 g Skrobia zmodyfikowana (CPC) 20 g Drozdze pierwszej generacji 10 g CoGQ2-6HjO • 0,005 g Woda. delsitylowama' 1000 ml Wartosc pH = 7,2^-7,4 Praylklad L Zawartosc aseptycznie .otworzo¬ nego liofilizatu Streptomyces avermitilis MA-4680 zawieszono w 50 ifnd pozywki w kolbie Erlenmeye¬ ra z lamaiczem, pojemnosci 2«50 ml. Kolbe wyitrza- sano 3 drii w temperaturze 28°C na trzesawce obrotowe}! o 220 oibrotach/min i 5 cm miimosrodu.Do zaszczepienia skosu pozywki 3 uzyto 0,2 ml pozywki posiewowej i iinkubowano w temperatu¬ rze 2&QC w ciagu 10 dni, po czym przechowywano W temperaturze 4°C dla szczepienia 4 dalszych skosów pozywki. Skosy te inkubowano w cieniu w ciagu 8 dni. Jeden ze sikoisójw stosowano do szcz-epieittiia trzech kolb Brlennieyera z lamaczem, pojemnosci 250 ml; zawielrajaicych 50 ml pozywki posiewowej nr 4. Kolby wytrzasano w ciagu 2 dni w temperaurze 27° do 2i8°C na trzesawce obroto¬ wej o 220 obrotów/imin i mimosrodzie 5 cm. Za¬ wartosc-kolb i stosowano do szczepienia (5tyo imo- kulum) kofflb Erlenmeyera z lamaczem, pojemnosci 2i50 miy zawierajacych 40 ml róznych pozywek produkcyjnych;5 Kolby zawierajace pozywki 2, 5 i 6 inkubowano w ciagu 4 dni w tempejraturze 28° na trzesawce obrotowej o 220 obrotów/min i mimosrodzie 5 cm.Otrzymana brzeczke, zawierajajca zwiazki C-076, zbierano i badano na aktywnosc przeciwrobaczy- cowa. Z ^odwirowanej 25 ml calej brzeczki otrzy¬ mywano 6,2 ml brzeczki i czesci stalych w pelni < aktywnych wobec zakazen robaczycowych mysz, wywolanych przez N.dubius.Pozywka 3 (skos) DeKsitroza; ¦ ,Asparagina (Bacto) , K^HP04 Agar (Bacto) Woda destylowana Wartom pH = 7,0 . ¦ Pozywka 4 (posiewowa) Rozpuiszfozailna skrobia Autoliizat drozdzy (Ardamnina pH) ¦.NZ amina E Ekstrakt wolowy MgS04-7H20 Cerelo^a ( Na2HP04 KHaP04 CaCO, Woda destylowana Wartosc pH = 7,0—7,2 Pozywka 5 iPasta pomidorowa Maka owsiana Cereloza 1 Namok kukurydziany Mieszanina elementów sladowych ' Woda destylowana ^ Wartosc pH = 6,3 10,0 0,5 0,5 15,0 1000 10,0 5,0 5,0 3,0 0,5 1,0 0,190 0,1812 0,5 100 40,0 g g g g ml * g g g g g g g g g ml g . 10,0 g 10,0 g 5,0 g 10,0 ml 1000 ml 10 15 20 30 35 40 45 55 60 93 Mieszanina elementów sladowych FelS04-7H20 1000 ml MnS04-4HjyO 1000 mg CuCl2-2H20 25,0 mg CaCl2 100,0 mg H2BO3 96,0 mg (NH4)2Mo04-4H20 19,0 mg ZnS04-7H20 200,0 mg Woda destylowana 1000 ml Pozywka 6 Skrobia przemyslowa (CPC modyfikowana firmy CPC Corp.) 40,0 g Pozostalosci po destylacji drozdzy browarnianych 5,0 g CoCb-SHzO 50,0 mg Woda destylowana 1000 ml Wartosc pH = 7,3 Przyklad II. Skrawki 0,5X1,0 cm jednego z czterech sikosów pozywki 3, przygotowanej jak w przykladzie I, uzyto do zaszczepienia kolby Erlenmeyera z lamaczem o pojemnosci 250 ml, zawierajacej 50 mi pozywki posiewowej nr- 4.Calosc wytrzasano- w ciagu 1 dmia w temperaturze 27° do 28°C na trzesawce obrotowej o 220 obro¬ tów/min i mimosrodzie.5 cm. Kolbe z zawartoscia pozywiki posiewowej przechowywano statycznie w temperaturze 4°C do dalszego . uzycia. Zawartosc 'kolby sluzyla do szczepienia (£% iinokuliuim) 20 kolb Erlenmeyera, bez lamacza pojemnosci 250 ml, zawierajacych 40 ml pozywki nr 2. Po ^4 dniach inkubacji w temperaturze 28°C, na trze¬ sawce obrotowej o 220 obrotów/min i mi"mosro- dzie 5 cm, 19 kolb zlewano razem. Polaczone brzeczki fermentacyjne, zawierajace C-076, saczo¬ no uzyskujac 500 ml przesaczu i 84 g grzybni.' 78 g grzybni ekstrahowano 150 ml acetonu .1/2 go¬ dziny równoczesnie mieszajac, po czym miesza¬ nine saczono.Przesacz przemyto 50 ml acetonu, przesacz i pozostalosc z przemycia polaczono i zageszczono do objetosci 46,5 ml. 30 ml koncentratu doprowa¬ dzono do pH = 4,0 rozcienczonym kwasem solnym i nastepnie ekstrahowano trzykrotnie #chlorofor¬ mem po 30 ml. Ekstrakty suszono, saczac przez warstwe ziemi okrzemkowej (Super-Cel), laczono i zageszczano pod zmniejszonym cisnieniem. 9)1,4 mg pozostalosci olejowej zwiazków C-076 roz¬ puszczono w chloroformie az do otrzymania 3 ml roztworu, które stanowily 1% objetosci brzeczki.Otrzymane opisana metoda izolowania zwiazki wykazywaly pelna aktywnosc wobec zakazen N.Dubius u myszy. Ponadto ekstrakcja chlorofor¬ mowa prowadzila do 70-krotmego oczyszczenia zwiajzków C-076 z calej brzeczki.Przyklad III Stadium A Kolbe Erlenmeyera, z lamaczem, pojemnosci 260 ml, zawierajaca 50 ml pozywki nr 7, szczepiono zamrozona fiolka Streptomyces avermitiilis MA- -46)80. Kolbe inlkufoowano w temperaturze 2i8°C na trzesawce obrotowej o 160 obrotach/min i mimo¬ srodzie 5 cm w ciajgu 24 godzin,108004 17 18 Pozywka 7 Deksitroza Modyfikowana skrobia przemyslowa Ekstrakt miesny NZ amina E 1 g 10 g 3 g 5 g Auitoateait drozdzowy M@S04-7H20 0,05 g Na2HP04 0,19 g KHaF04 0,182 g CaCOg 0,5 g .Woda destylowana 1000 ml Wartosc pH = 7,0—7,2 ; Stadium B 2 dwulitrowe kolby Erlenmeyera, z lamaczem, zawierajace *po 500 ml pozywki 7, szczepiono 10 mH zawartosci kolby stadium A. Pozywki inku- bowano w temperaturze 28°C na trzejsawce obro¬ towej o 160 obrotach/min i mimo-srodzie 5 cm w ciagu 24 godzin.Stadium C Do fermentora ze stali nierdzewnej pojemnosci 75i6 1, zawierajacego 467 1 pozywki 8, dodano litr pozywki fermentacyjnej ze stadium B. Fermentor •mieszano z szybkoscia 130 obrotów/mim, w tempe¬ raturze 28°C w ciagu 9*6 godzin z napowietrza¬ nieim iprzy przeplywie powietrza 2(83 dicm3/minute.Pozywka 8 '•Pasta pomidorowa . 20 g/l Drozdze pierwszej generacji (NPC) 10 g/1 Skrobia modyfikowana (CPC) 20 g/l Co012*6H20 5 mg/l Poligliikol2000 0,321 ml/1 Woda destylowana qjs.Wartosc pH=,7;2—7,4 Po zakonczeniu procesu fermentacji 1(5,5 1 brze¬ czki przesaczono, a grzybnie, zabierajaca zwiazki C-076, przemyto wóda. 2,268 g grzybni ekstraho¬ wano 3 1 acetonu mieszajac. Mieszanine saczono i przesacz zageszczono do objetosci 1550 ml do¬ prowadzajac do wartosci pH = 4 rozcienczonym kjwasem solnym. Roztwór ten ekstrahowano trzy¬ krotnie równymi objejtosciami chloiroformu.Ekstrakty chloroformowe suszono saczeniem przez ziemie okrzemkowa (Super-Cel), laczono i zageszczano pod zmniejszonym cisnieniem. Otrzy¬ mano 5,12 g oleistej pozostalosci, zawierajacej zwiazki C-076. 3,3 mg byly aktywne wobec N.du- biuis u myszy. 4,69 g oleistej pozostalosci rozpuszczono w 142 ml chloroformu i chromatografowano na kolum¬ nie, wypelnionej 90 g zelu krzemionkowego w chloroforanie. Kolumne rozwijano 1400 ml chlo¬ roformu, po czym eluowano mieszanina chloro¬ formu i etanolu w stosunku 49: 1, zbierajac 145 porcji po 5 ml. Nastepnie kolumne eluowano mie^ szaniha chlbrofommu i etanolu (19 : 1), zbierajac frakcje 14)6^226 po 5 mil. Frakcje 49—7i2 laczono i odparowywano', uzyskujac 200 mg oleistej pozo¬ stalosci (A). Frakcje 70—H84 podidfonie laczono i odparowywano, uzyskujac 291 mg oleistej pozosta¬ losci (B). 400 \ig kazdej frakcji jest aktywne wo¬ bec NJdufoius u myszy. Frakcje A i B badano od¬ dzielnie charomatografia cienkowarstwowa na plyt¬ kach, pokrytych ielem ^nzemionkiowym (Plytki Quanta/Giraim QIF, firmy Quanta/Gram Inc., Fair- field, New Jersey). Chromatograim rozwd'jano mie¬ szanina chloiroformu i metanolu (19:1). Aktyw¬ nosc plam oznaczano w podczerwieni i pdaima z 5 kazdej frakcji wykazywala charakterystyczne pas¬ ma absorpcji w nadfiolecie dla zwiazków C^076 (tabela I). Rf frakcji A 0,83 i Rf frakcji B 0,57 wykazywaly te sama absorpcje. Plamy oznaczaly zwiazki C-076 A i C^076 B. 10 198 mg. oleistej pozostalosci (A) chromatografo- warno na kolumnie, wypelnionej 80 g zelu krze¬ mionkowego w chloroformie, eluujac mieszanina chloiroformu i metanolu (199: 1) az do zebrania 520 ml eluatu, po czym eluowano mieszanina 15 chloroformu i metanolu (99: 1), zbierajac frakcje po 10 ml. Z frakcji 630—7(20 ml uzyskano 30,4 mg, z frakcji 730^950 ml 78,4 mg i z frakcjli 950— 1040 ml uzyisikano 20 mg oleistej pozostalosci.Frakcje 1 i 2, zawlierajace skladniki C-076 A, M badane na myszach wobec NJdufoius po dawkach 1,0, 0,5 i 0,25 mg, wykazywaly pelna aktywnosc.Przyklad IV Stadium A Kolbe Erlenmeyera, z lamaczem, pojemnosci 250 25 ml, zawierajaca 50 ml pozywki 8, zaszczepiono zaimirozona fiolka Streptomyces avermitM(s MA 4680. Kolbe ' inkufoowano w temperaturze 28°C na trzesawce obrotowej o 160 obrotach/min i mimo- srodzie 5 cm w ciagu 24 godziin. 30 Stadium B 2 1 kolbe Erlenmeyera, z lamaczem, zawiera¬ jaca 500 ml pozywki 8, szczepiono 10 ml zawar¬ tosci kolby stadium A. Pozywke inkubowano w temperaturze 28°C na trzesawce obrotowej o 160 35 obrotach/min i mimosrodzie 5 cm w ciagu 24 go¬ dzin.Stadium C Do 189 1 fermentora ze stali nierdzewnej, za¬ wierajacego pozywke 9, dodano 500 ml materialu 40 iszczepiennego stadduim B i inkubowano w tempe¬ raturze 28°C z mieszaniem o 160 obrotach/min w ciagu 24 godzin i napowietirzandem w ilosci 85 dcm3/min powietrza.Pozywka 9 « Dakstrozia 1 g/l Skrobia zbozowa 10 g/1 Ekstrakt miesny 3 g/1 Autolizat drozdzowy (Ardaimina pH) 5 g/l MgS04-7H20 0,06 g/l W NaaHP04 0,10 g/1 KHiP04 0,182 g/1 CaCO3 0,6 g/l Woda destylowana q.s.Wartosc pH = 7,0—7,2 55 Stadium D Do 756 1 fermentora ze stali nierdzewnej, za¬ wierajacego pozywke 6, dodano 43 1 inokulum ze stadium C. Fermentor inkubowano mieszajac 130 obrotów/mlin w ciagu 144 godzin z napowietrza- 60 niem 283 dcm3/min.Stadium E Po zakonczeniu fermentacji stadiom D brzeczke saczono i , przesacz, zawierajacy zwiazki C-076, przemywano woda, a nastepnie oczyszczano w 65 120 1 acetonu w ciagu 30 .minut, po czym prze-108004 19 20 sacz i osad przemyto 30 1 acetonu. Pozostalosci z przemycia acetonem odparowano pod zmniej¬ szonym cisnieniem do- objetosci 40 1. Koncentrat doprowadzono do wartosci pH=i4,0 rozcienczo¬ nym .kwasem solnym i ekstrahowano trzykrotnie * równymi objetosciaini chloroformu. Ekstrakty chloroformowe saiczono przez sucna warstwe, zde- mi okrzemkowej (Super-Cel). Polaczone ekstrakty zageszczono pod zmniejszonym cisnieniem do ob¬ jetosci 4 1. .Koncentrat chloroformowy saczono i *« przepuszczono przez kolumne, wypelniona 2,4 kg zelu krzemionkowego w chloroformie. Kolumne eluowano * chloroformem, zbierajac 8 frakcji po 3,5 1, po czym ponownie eluowano mieszanina chloroformu i metanolu (49:1), zbierajac dodatko- 15 wo 8 frakcji (frakcje 9—16) po 3£ 1. Frakcje nr 3 zageszczono, uzyskujac 76 g oleSlstej pozostalosci, zawierajacej .gfcwnie zwiazki C-076* 97P/« tej pozostalosci rozpuszczono w 685 ml chlorku metylenu i chromatografowano na ko- * lumniie; wypelnionej 800 g kwasu krzemowego (Mallinckroat Co., 100 mesh zatrzymanego na ekranie 80 mesh). Kolumne o srednicy 7,62 cm i 36 cm dlugosci rozwijano okolo 7,5 1 mieszaniny chlorku metylenu i benzenu (7 : 3), ,a nastepnie *» 2,1215 1 5#/o dzopropanolu w miesizandnie chlorku me- tyierfu i benzenu (7:3). Ta ostatnia frakcja o sil¬ nie zabarwionym pasmie wedlug oznaczen chro¬ matografia cienkowarstwowa (przyklad V) zawie¬ rala wszystkie substancje C-076. Frakcje te 500 ml & odparowano i chromatografowano na kolumnie o srednicy 37 cm i 1<8 cm dlugosci, wypelniona kwasem krzemowym w cblocku metylenu.Kolumne rozwijano porcjami po 100 ml chlorku metylenu, zawierajacymi 5* 10 i 20*/t eteru. Przy 35 dalszej eluicji 29ty# eterem w chlorku metylenu tworzyly sie 2 zabarwione pasma. Chromatogra¬ fia cienkowarstwowa wykazala, ze frakcje mie¬ dzy dwoma pasmami zawieraly zasadniczo wszy¬ stkie substancjeC-076. 40 Frakcje, zawierajaca zwiajzki C-076, chromato- grafowano na .kolumnie o srednicy 3,7 cm i dlu¬ gosci 11 cm, wypelnionej 59 g kwasu krzemowego w chlorku metylenu. Kolumne rozwijano ltWt ete¬ rem w chloriku metylenu i po wyplywie pierw- 45 szego eluatu pobierano frakcje 70 ml, a nastepnie 26 frakcji po 5-^6 ml. Frakcje 3 do 26 laczono, zbierane 1,35 g substancji i badano chromatogra¬ fia cienkowarstwowa na plytkach, pokrytych ze¬ lem; krzemionkowym (Anaitech GF 254), rozwija- W jac 5C/e izopropanolem w chlorku metylenu.W ukladzie tym Rf 0,2i8 oznaczal skladnik C^076 Al. ¦:.;'..' Koloimne eluowano dalej 20*/* eterem w 20Q ml chlorku metylenu, a nastepnie E0P/t eterem, w 800 55 ml chlorku metylenu.* W: eluatach poczatkowych znajdowala, sie mala 'ilosc mieszaniny skladników C-076 A1/A2, w nastepnych cala ilosc C-076 A2.Calkowi/ta pozostalosc frakcji C-076 A2 wynosila 800mg. 60 Dalsza eluleje prowadzono 5Vt izopropanolem w chlorku metylenu, otrzymujac 135 mg skladnika C-076 BI. Rozdzielanie prowadzono, kontrolujac widma eluatu w nadifiiolecie. W chromatografii cienkowarstwowej na plytkach, pokrytych zelem as krzemionkowym (AnaKtech GF 254) w 5*/t izopro¬ panolu w chloriku metylenu, wartosci Rf zwiaz¬ ków C-076 BI i Al2 sa bardzo podobne, jakkol¬ wiek dwa skladniki wyraznie róznia sie na tych samych plytkach, rozwijanych 15P/t izopropanolem w heksanie.Cala fraikcje C-076 Al naniesiono na 14 plytek, pokrytych zelem krzemionkowym (Anaitech HF 254, 20X20 cm, grubosc 500 \i)< Ghromatogram rozwijano w lO^/o izopropanolu w heksanie i wy¬ cinano pasek, zawierajacy zwiazek C-076 Al, któ¬ ry ekstrahowano eterem, odparowano, po czym nanoszono na dalsze 6 plytek i" rozwijano piecio¬ krotnie 5Vo izopropanoieim w heksanie. Skladnik C-076 Al Usuwano z plytek i ponownie chroma- tografowano, rozwijajac czystym eterem. Otrzyma¬ no 270 mg zasadniczo czystego skladnika C-076 Al. Widma w podczerwieni i magnetycznego re¬ zonansu jadrowego dla tej próbki podano na fig. 1 i 5 i tabeli II.Frakcje C-076 A2 chromatografowano na 10 plytkach, pokrytych zelem krzemionkowym (Anai¬ tech HF 254), rozwijajac pieciokrotnie 15*/§ izo¬ propanolem w heksanie. Otrzymano 26E mg za¬ sadniczo czystego skladnika C-0TC6 A2. Wddma w podczerwieni i magnetycznego rezonansu jadro¬ wego dla tej próbki podano na fig. 2 i 6 i ta¬ beli H.Frakcje C-076 BI chromatografowano jak wyzej na 2 plytkach w l&h izopropanolu w heksanie otrzymujac 56 mg zasadniczo czystego skladnika C^076 BI. Widma magnetycznego rezonansu jadro¬ wego dla tej próbki podano na fig. 7 i w tabeli II.Przyklad V. Proces fermentacji, opisany w przykladzie VI, prowadzono dwukrotnie i pola¬ czone brzeczki przerabiano, jak w przykladzie VI, otrzymujac 3,3 1 poczatkowego ekstraktu chloro¬ formowego, który zawieral 60 mg/mj calkowitej ilosci osadu, co na podstawie analizy chromato¬ grafii cienkowarstwowej stanowilo 0,5ty§ zwiazków C-076. 3 1 roztworu chloroformowego chromatografo¬ wano na kolumnie, wypelnionej 2400 g zelu krze¬ mionkowego (Dav Kolumne, o srednicy 9,5 cm i dlugosci 122 cm, rozwijano osmiokrotnie porcjami po 3800 ml chlo¬ roformu (fraikcje 1—8), a nasitepnie osmiokrotnie porcjami po 3800 ml mieszaniny chloroformu i metanolu (49 :1, fraikcje 9—(16). Poszczególne frak¬ cje badano chromatografia cienkowarstwowa na plytkach,pokrytych zelem krzemionkowym (Quan- ta/Gram OIF) i rozwijano mieszanina chloroformu i. metanolu (19:1). Frakcje 9—11, 12—13 i 14 od¬ parowano do sucha, otrzymujac we frakcjach 9— 11, 6,63 g osadu skladników C-076 A, we frakcjach 12—13, 24,91 g osadu skladników C^076 B oraz we frakcji 14^-4,71 g osadu, zawierajacego sklad¬ nik C-076 B.Polaczone frakcje 12—14, w ilosci 29*62 g, roz¬ puszczono w 100 ml chlorku metylenu i chroma¬ tografowano na kolumnie, wypelnionej 4O0 g zelu krzemionkowego (Davidson Grade 62) w chlorku metylenu. Kolumne eluowano kolejno 1500 ml mieszaniny chlorku metylenu i 2-propanolu (99:1),108004 21 22 1500 ml mieszaniny chlorku metylenu i 2-ipropa- nolu (49: 1), 2000 ml chloiiku metylenu i 2-pro- panolu (19: 1) oraz 1000 ml chlorku metylenu i 2-propanoiu (9: 1). 2,56 g eluatu o objetosci 5500—6000 ml oraz 5,03 g eluatu o objetosci 13000:—6500 ml laczono w 25 ml chlorku metylenu i chromatograifowano na CO g zeloi krzemionko¬ wego w heksanie.Pobierano pierwszy eluat z 70 ml heksanu i 100 ml mieszajniny heksanu i eteru dwuetylowego (4:1), po czym kolumne rozwijano 600 ml mie¬ szaniny heksanu i eteru dwuetylowego (1:4), po¬ dajac w porcjach 200 ml. Dalej eluowano 700 ml eteru, podawanego w porcjach 100 ml. Eluat o objetosci 400 do 600 ml zawieral 2,035 g osadu zwiazków C^076 BI, objejtosca 600, do 1100 ml za¬ wieraly 0,881 g osadoi mieszaniny skladników C.^076. Bl/B-2; a objetosci 1100 do 1500 ml zawie¬ raly 0,381 ;g osadu zwiazków G-07i6 B2.Mieszaniny zwiaizków C-076 B1/B8 rozpuszczono w 4,2 ml mieszaniny alkoholu metylowego i wo¬ dy (4:1) i vC)iTomaito®ra^owano na Cli8 Poralsil ¦ (iBondaipajk-37^7'5 .p) w tym samyim^rozpuszczalni¬ ku. JKolumne wyisoitó^ z odwrócona fa¬ za ily2^m X Ifi mm (w której najpierw eluowano sklaidnAki bairdziej polarne) eluowano, pobierajac w porcjach po 800 ml/godzine frakcje 21$ ml.Obecnosc skladników C-076 oznaczano na podsta¬ wie, widma w nadfiolecie. Z frakcji 24 do 37 wy¬ odrebniono 1^5,4 mg skladnika C-076 B2, z frak¬ cji 51-7^76 h- 137 mg skladnika C-476 BI.Kazda- próbke chromatografowano na kolumnie oddzielnie. Kolumne wypelniono 4 g zelu krze¬ mionkowego (Davidson Girade 62) w chlorku me- .t^dlenu i eluowano 35 ml mieszaniny chlorku me¬ tylenu i metanoihi (9:1). Ostatnie 20 ml eiluatu zebranego z kazdej kolumny odparowano, uzyisku- jajc 1515,3 mg skladnika C-0716 B(2 i 90 ml C-076 Bil. 50 mg C-076 BI i 100 mg C^076 B2 chromaitogira- fowano na plytkach z preparatywnym zelem krzemionkowym (Analtech HF 264) i rozwijano ; lWo iizopropanolem w heksanie, a nastepnie ete¬ rem, otrzymujac skladniki C-076 BI i C-076 B2 w formie zasadniczo czystej. Widma w podczer- wiienit w ten sposób otrzymanych zwiazków po- dano na; fig- 3 i 4. Widima dla slkladnika C-076 B2 podano na fig. 8. iP r z y k l a d VI. 250 ml kolbe, z lamaczem, za¬ wierajaca t0. ml pozywki o nastepujacym skla- clizie: ¦ ¦.?...Lakitoza 2,0°/o Poftostialoscdi.po destylaicji c diroiJdzy brofwarniiczylch 1,5V§ Autolizat drozdzy (Airdamine pH) 0,5P/o ^Wartosc pH przed sterylizacja 7,0 szczepiono zawartoscia izamrozonej fiblki ze Strep- tomyices avermditillis MA 4848 i inkubowano na trzesawce obrotowej o 1&0 obrotach/min w tem¬ peraturze 28°C w ciagu 24 godzin-. 10 iml hodowli posiewowej, otrzymanej jak wy¬ zej, szcizepliono 500 ml tej samej pozywki w 2 1 kolbie Erlenimeyera z lamaczem. Hodowle posie- wowa inkubowano na trzesawce obrotowej o 150 -cfarotach/min w temperaiturze 28°C w ciagu 24 godzin, Obydwie hodowle posiewowe stosowano do 10 15 20 25 30 40 45 50 55 60 szczepienia fermentora ze stali nierdizewnej, po¬ jemnosci 766 1, zawierajacego 467 1 pozywki o skladzie: Laktoza 2,0*/o Pozostalosci po destylacji drozdzy browarniczych l,5P/o Autolizat drozdzy i(Ardamine pH) 0,5?/» Poliglikol2000 0,32 ml/l Wartosc pH przed sterylizacja 7,0 Hodowle produkcyjna inkubowano w tempera¬ turze 28°C w ciagu 40 godzin przy przeplywie po¬ wietrza 283 dcm3/min i mieszaniu z szybkoscia 130 obrotów/min. 230 1 powyzszej hodowli! posiewowej stosowano do szczepienia fernieintora ze stali nierdizewnej, zawierajacego 4310 1, pozywiki o skladzie: Dekstroza 4,5Vo Mleko peptonizowane 2,4f/» Autolizat drozdzy (Ardamine pH) 0,25P/o Wartosc pH przed sterylizacja 7,0 Fermentacje prowadzono 144' godziny w tempe¬ raturze 26°C przy przeplywie powietrza 1458 dcm3/ /min i mieszaniu z szybkoscia 120 obrotów/min.Brzeczke fermentacyjna saczono i grzybnie prze¬ mywano okolo 550 1 wody, po czym przesacz i pozostalosc z przemycia odrzucono. Pozostaly osad wytrzasano z okolo 1500 1 acetonu w ciagu go¬ dziny i saczono, a osad przemywano mieszanina 150 1 acetonu i 40 1 wody dejonizowanej, uzysku¬ jac okolo 2000 1 ekstraktu.Proces fermentacji i ekstrakcji powtórzono w tej samej skali, uzyskujac dalsze 2000 1 acetono¬ wego . ekstraktu, która polaczono z pierwszym i odparowano' do objetosci 800 1. Wartosc pH kon¬ centratu korygowano do okolo' 4,7 stezonym kwa¬ sem solnym i laczono z ókofo 800 1 chlorku me¬ tylenu. Calosc wytrzasano w ciagu 4 godzin i roz¬ dzielano. Warstwe wodna polaczono z dodatko¬ wymi 800 1 chlorku metylenu i wytrzasano w ciagu 4 godzin. Warsitwy rozdzielano, a kandy ekstrakt chlorku metylenu oddzielnie traktowano okolo 10 kg Super-Cel i saczono. Obydwa ekstrak¬ ty odparowano do lacznej objetosci okolo 60 1.Przyklad VII. 60 .1 roztworu w chlorku me¬ tylenu, z poprzedniego przykladu, zageszczono pod zmniejszonym olsnieniem i dodawano trzykrotnie porcjami po 60 1 metanolu, po czym odparowano dla usuniecia pozostalosci chflorfcu metylenu. Kon¬ cowa objetosc ekstraktu metanolowego wynosila okolo 36 1. Roztwór metanolowy pozostawiono na noc i saczono. Otrzymany po odisafozeniu osad prze¬ mywano 1-0 1 swiezo przygotowanego metanolu i roztwór metanolowy polaczono z pozostaloscia z przemycia.Do roztworu metanolowego dodano 95 1 etyle- ~noiglikofl wytrzasano w ' ciagu 5 minut i wartstwe dolna (igliikol etylenowy oraiz metanol) oddzielono. Roz¬ twór heptanowy przemyto mieszanina £0 1 glikolu etylenowego i 6,3 1 metanolu. Po 5 minutach wytrzasania warstwe nizsza oddzielono i polaczo¬ no z pierwszym ekstraktem. Do obydwu ekstrak¬ tów dodano równa objetosc wody (okolo 150 1), zawierajaca 79 g soli/l. Roztwór ekstrahowano1ÓSÓÓ4 23 24 150 1 eteru etylowego, wytrzasajac w ciagu 5 mi¬ nut.Warstwe eterowa przemyto 75 1 wody (1/2 o- bjetosci) i wytrzasano w ciagu 5; minut, po czym warstwy rozdzielono. Procedure te powtarzano jesz¬ cze dwukrotnie (przy czym koncowa woda zawie¬ rala 20 g soli/l), uzyskujac ostateczna warstwe e- terowa o objetosci 110 1. Warstwe te zageszczano pod zmniejszonym cisnieniem do minimum obje¬ tosci, utrzymujac temperature ponizej 25°C. Do pozostalosci dodano 40 1 chlorku metylenu i roz¬ twór odparowano do sucha. Procedure te powtó¬ rzono i koncowa pozostalosc zageszczono pod zmniejszonym cisnieniem w tempera/turze 50°C.Przyklad VIII. Kolumne srednicy 30 cni, wypelniono wainstwa 34 kg aktywnego glinu, a nastepnie 34 kg aktywowanego wegla w roztworze chlorku metylenu. Pozostalosc z przykladu VII, roz- puisziczona w chlorku metylenu do objetosci 34 1, podano na kolumne i eluowano 34 ^1 chlorku me¬ tylenu, a uzyskane frakcje odrzucono.Do kolumny wprowadzono 3*/o roztwór miesza¬ niny izopropanodu i.chlorku metylenu (20,8 1 izo- propanolu i 660 1 chlorku metylenu) i eluowano. otrzymujac okolo 200 1 frakcje. Polaczone frakcje odparowano pod zmniejszonym cisnieniem w tem¬ peraturze lazni okol 60°C do objetosci okolo 20 1.Nastepnie temperature lazni zmniejszono do 45°C i ekstrakt odparowano pod zmniejszonym cisnie¬ niem. Pozostalosc rozpuszczono w 10 czesciach ch(lorku metylenu, 10 .czesciach heksanu i 1 czesci metanolu do koncowej objetosci 15 1. Roztwór ten : przeniestiono bezposrednio na kolumne, wypelnio¬ na Sephadex LH-^20 i postepowano, jak w nastep¬ nym przykladzie.Przyklad IX. Kolumne o srednicy 30 cm wypelniono 36 kg Sephadex LH^20 (finmy Phar¬ macia Fine Chemicals, 800 Centennial Avenue, Piscataway, New Jersey 08854) w metanolu i przemyto rozpuszczalnikiem o skladzlie: 10 czesci chlorku metylenu, 10 czesci heksanu i 1 czesc metanolu. 1/4 roztworu z przykladu X podano na kolumne i eluowano z szybkoscia 250 ml/min.Zbierano 2 porcje po 20 1 i odrzucano, nastepnie zebrano 20 porcji po 2 1, zawierajace znaczne ilos¬ ci zwiazków C-0ty (zidentyfikowane jako frakcje 1—20) i ostateczmlie pojedyncza 20 1 poricje kon¬ cowa, która odrzucono. Frakcje 1—8 zawieraly zwiazki C-07;6A, a frakcja 9—^20 zwiazki C-07i6B.Przyklad X. W tej samej skali trzykrotnie powtórzono procedure z przykladu IX i wszystkie frakcje', zawierajace skladniki C-076 B (frakcje 9—i20), polaczono i odparowano, uzyskujac 818 g surowej mieszaniny skladników C-076 B. Piróbka zawierala 55*/o zw&azku C-076 Bil, 39°/o C-076 B2, 680,i5 g z tej próbki rozpuszczono w 2 1 chlorku metylenu, wprowadzono do 22 1 trójszyjmej kolby olkraglodennej i dodano 13,6 1 metanolu. Chlorek metylenu usrcuniiejbo metoda destyflacji, po czym gdy "metanol oddestylowano pod zmniejszonym cisnie¬ niem, dodano 13,6 1 glikolu etylenowego. Szybkosc destylacji prowadzono tak, aby temperatura nie byla nizsza od temperatury roztworu. Po zakon¬ czeniu dodawania glikolu etylenowego roztwór. po- zostawiono do ozieibienia w temperaturze 5°C na przeciag 16 godzin.Odsaczono substancje krystaliczne i przemyto litrem zimnego glikolu etylenowego. Nastepnie 5 krysztaly rozpuszczono w 2 1 chlorku metylenu i roztwór wlano do trójszyjnej kolby olkraglodennej pojemnosci 22 1. Procedure opisana powtórzono dwukrotnie. Najpierw stosowano p© 12^5 1, a na¬ stepnie po 13,6 1 roztworów metanolowychr i ^gli- 10 kolu etylenowego. Otrzymane krysztaly przemyto litrem zimnego glikolu etylenowego i litrem wo¬ dy. Krysztaly rozpuszczono w.'4'l wody i saczo¬ no przez siarczan sodowy* Roztwór (benzenowy za¬ geszczono do objetosci 2 1 i lioffillizo*vano uzyska- 15 ne 241^2 g bialego proszku, zawierajacego 98*/o skladnika C-0TOB1 i 1% C-07i6 B2. ; -"< .m.Plyny macierayste z pierwszych dwu opisanych wyzej krystalizacji polaczono i' rozcienczono 22 1 wody. Wodny roztwór ekstrahowano 60 1 toluenu 20 i ponownie 15 1 toluenu, po czyni ekstrakt prze¬ myto 48 1 wódy. Faze organiczna''saczono przez Super-Cel dla usuniejcfia reszty woldy i odparowa¬ no, otrzymujac substancje stala,. zawierajaca 79*/o dkladnika C-076 B2 oraz 16V© skladnika C-076 BI. 25 Przyklad XI. Z czterech koliimh, wypelnio¬ nych Sephadex IjH-80, postepujac -jak w przykla¬ dzie IX, polaczono frakcje 1—#, zawierajace zwiaz¬ ki C-076 A. Na podstawie chromatografii wysoko¬ cisnieniowej stwlierdzono zawartosc 252 g sklad- 30 nika C-076 AJ2a, 16 g A2b, 94 g Ala i 24 g Alfo.Calosc rozpuszczono w mieszaninie heksanu, to¬ luenu i meitanolu w stosunku 6:1: 1, podano' na kolumne o tych samych wymiarach, wypelniona Sephadex LH^20 w rozpuszczalniku, jak w przy- 35 kladzie IX. Zebrano frakicje po 250 ml/min ordz 20 1 porcje, które odrzucono. Z dalszej elueji ó- trzymamo 2 dodatkoiwe frakcje po 20 1, które równiez odrzucono, natomiast 50 frakcji po 4 1 zawlieraly znaczne ilosci zwiazlków C-076 A. F.rak- 40 cje 3—8 zawieraly glównie skladniki C-076 Al, w tym 30,2 g Ala i 6,7 g Alb, podczas gdy frakcje 29^36 zawieraly skladniki C-076 A'2, w tym 117,2 g A2A i 7,35 g A2ib. Fraikcje 9—&8 zawieraly mie¬ szanine zwiazków C-07& Al i A2. ¦ 45 Przyklad XII. 150 g próbke z przykladu X rozpuszczono w 3 1 mieszaniny heksanu, toluenu i metanolu w stosunku 3:1:1. Roztwór przepusz¬ czono przez kolumne, wypelniona Sephadex DHh20 (jak w przykladiziie IX) w tym samym rozpusz- 50 czalniku, pobierajac frakcje 250 mll/imin. 2 frakcje po 20 1 mieszaniny zbierano i odrzucano, frakcje 10 1 równiez odrzucono. Nastepnie zebrano 30 frakcji 2 1. Frakcje 1—ii3 i 25-^30 .odrzucono.Polaczone frakcje 14—16 zawieraly 80 g glównie 55 skladnika C-076 Bla. Polaczone frakcje 2i2^&4 za¬ wieraly 6,7 s glównie skladnika ,C^076 Bib,; nato¬ miast frakcje 17—21 stanowily glównie mieszani¬ ne skladników C-076 Bila oraz Bib. Polaczone frakcje 17—21 zageszczono, przepuszczajac przez 60 kolumne, wypelniona Sephadex LH^20, w opisa¬ nym wyzej ukladzie rozpuszczalników. 3 frakcje 20 1 odrzucono, po czym zebrano frakcje bogate w kolejnosci: 5 frakcji po 20 1 — frakcje 1^5, 20 frakcji po litrze — frakcje 6—25 oraz 10 frafc- r65 cji po 2 1 — frakcje. 26—^35. Frakcje 1—15 od-25 108004 26 rzucono, natomiast frakcje 16—<21 zawieraly 13,5 g skladnika C-076 Bla oraz 0,4 g skladnika C-076 Bib; frakcje 22—26 zawieraly 44 g C-076 Bla i 0,13 g C-076 Bib. Fraikcje 27-^30 zawieraly 10,2 g C-076 Bla i 0,8 g C-076Bib. 5 Przyklad XIII. Mieszanine wszystkich sklad¬ ników C-076 chromaitografowano wysokocisnienio¬ wa chromatografia plynna o wymiarach kolumny 4 mm X 30 cm, wypelnionej 10 \i Bondapak Ci8 zelem krzemionkowym (firmy Wateris Associates 10 Inc., Mapie Street, Millford, Massachusetts 01757)', eluujac mieszanina metanolu i wody w stosunku 85 : li5 (obj./obj.) w stalej temperaturze 40°C. Przy przeplywde 1,2 ml/min rozdzielono wszystkie 8 skladników i okreslono zawartosc poszczególnych 15 zwiazków w objeitosciach eluatów, otrzymanych w tych samych stalych warunkach.Objetosci eduafcu (Ve) w ml: C-076 B2b 5,90 C-076 B2a 6,52 20 C-076 Al2fo 7,12 C-076 A2a 7,88 C-076 Bib 8,36 C-076 Bla # 9,60 p --<'"" C-076 Ala 10,24 \ 25 C-076 Ala ll,8tf Rozdzielanie skladników C^076 „b" ud odpo¬ wiednich skladników „a" prowadzono- metoda wy¬ sokocisnieniowej chromatografii plynnej. Do ko¬ lumny o wymiiarach 3X[250 mm, wypelmlionej 30 Spheniso-nb 5 \i OOS (firmy Spectra Physics), wprowadzono 30 \d roztworu miesiaminy skladni- k6w C-076 Ala i Alb w metanolu absolutnym, zawierajacej 30 fig skladnika C-076 Alb. Kolumne eluowano mieszanina metanolu i wody w stosunku *$ 85 : 1(5 z szybkoscia 0,15 ml/imin. Bluent podawano na UV monitor i na podstawie wlidima w nadfiio-' lecie odbierano frakcje poszczególnych skladni- ków.Uzyskano 30 \ig C-076 Alb, który analizowano 40 na spektrometrze masowym. Widmo masowe tej pttjbki podano w drugiej kolumnie Tablicy III. PL PL PL
Claims (6)
1. Zastrzezenia patentowe L Sposób wytwarzania nowych heterocyklicz¬ nych pochodnych a^L-oleandrozyio^a-L-oieandro- zydu o symbolu C-076, znamienny tym, ze poddaje sie fermentacji! szczep Streptomyces averimtitilis NRRL 8165 (ATCC 31267) w wodnym srodowisku odzywczym, zawierajacym przyswajalne zródlo wegla, przyswajalne zródlo azotu oraz sode nie¬ organiczne, w warunkach aerofoowych, po czym odzyskuje sie tak otrzymane zwiazki C-076 z brzeczki fermentacyjnej.
2. Sposób wedlug zaistrz. 1, znamienny tym, ze fermentacje prowadzi sie w temperaturze od okolo 20°C do 40°C, w zakresie wartosci pH = 5,0^9,0. 3. Sposób wedlug zastnz. 2, znamienny tym, ze stosuje sie temperature 24—30°C i wartosc pH = 6,0—7,5; 4. Sposób wedlug zastrz. 1, znamienny tym, ze stosuje sfie srodowisko odzywcze, zawierajace 0,5— 56/o wagowych zródla wegla oraz Okolo 0,2—6P/o wagowych zródla azotu. 5. Sposób wedlug zastrz. 1, znamienny tym, ze fermentacje prowadzi sie w ciagu 1—8 dni. 6. Sposób wedlug zastrz. 1, znamienny tym, ze stosuje sie szczep Streptomyces avermitiilis NlRRL 8165 upnzednio naswietlony promieniami nadfiole¬ towymi (ATCC 31272). * 7. Sposób wedlug zastrz. 1, znamienny tym, ze srodowisko fermentacyjne poddaje sie filtracji, na¬ stepnie grzybnie ekstrahuje sie rozpuszczalniikiem organicznym, mieszajacym sie z woda, odparowuje rozpuszczalnik organiczny i pozostalosc ekstra¬ huje sie rozpuszczalnikiem organicznym, niemie- szaija/cym slie z woda. 8. Sposób wedlug zastrz. 1, znamienny tym, ze srodowisko fermentacyjne poddaje sie filtracji i wyodrebnia grzybnie, zawierajaca zwiazki C-076.108004 R—O CH3 HO ( cm(r" —0 _ / CH3 — 0 — CH30 WZÓR 2 a is. 20. 25. ?.r 0.0 0.? 04 0.6 OJ (.3 1.5 ¦
3. ^ » 4. r f. c. r 7. \ f ^ V 9. V w. !\ f H I 12. ^\ iS. r \/ 20. 1 15 4000 1500 3CJ0 ?500 OTC 1900 1000 fftC («W ICCO UdU tfOO 1200 HOO «U0 900 300 7OU 600 SM M cm-1108004 T !?.!. i «.0 \.2 U o.i 4.1) 1.5 i 1 "1 W
4. r / R 6. r 7 "\ tf. ^ \ 9. V u 40. Ar v\J 12. -f\/\f\ ^y \ 15. r \1 29. 25 ¦tWJ ^500 3000 2500 2000 J900 m f/JO IWO JJOO UOO JWO tfOO 0 C/W"' pi* TiclL. JU-J*U-W 6. 7. 6. "
5. LiLi^yj^' O PPM U1 8. 7.
6.108004 yic,.L T^-7- Drukarnia Narodowa, Zaklad Nr 6 zam. 284/80 Cena 45 zl PL PL PL
Applications Claiming Priority (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
US67832876A | 1976-04-19 | 1976-04-19 |
Publications (1)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
PL108004B1 true PL108004B1 (pl) | 1980-03-31 |
Family
ID=24722350
Family Applications (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
PL1977197448A PL108004B1 (pl) | 1976-04-19 | 1977-04-16 | Method of producing new heterocyclic derivatives osposob wytwarzania nowych heterocyklicznych pochodf alpha-l-oleandrozylo-alpha-l-oleandroside with snych alfa-l-oleandrozylo-alfa-l-oleandrozydu o symbolu c/076 ymbol c/076 |
Country Status (40)
Country | Link |
---|---|
US (1) | US4310519A (pl) |
JP (1) | JPS52151197A (pl) |
AR (1) | AR215000A1 (pl) |
AT (1) | AT357503B (pl) |
AU (1) | AU513641B2 (pl) |
BE (1) | BE853702A (pl) |
BG (1) | BG35900A3 (pl) |
CA (1) | CA1098063A (pl) |
CH (1) | CH639422A5 (pl) |
CS (1) | CS207397B2 (pl) |
CY (1) | CY1114A (pl) |
DD (1) | DD137727A5 (pl) |
DE (1) | DE2717040C2 (pl) |
DK (1) | DK146514C (pl) |
ES (1) | ES457932A1 (pl) |
FI (1) | FI57781C (pl) |
FR (1) | FR2348970A1 (pl) |
GB (1) | GB1573955A (pl) |
GR (1) | GR63128B (pl) |
GT (1) | GT197746150A (pl) |
HK (1) | HK38481A (pl) |
HU (1) | HU179041B (pl) |
IE (1) | IE44822B1 (pl) |
IL (1) | IL51854A (pl) |
IT (1) | IT1106424B (pl) |
KE (1) | KE3141A (pl) |
LU (1) | LU77152A1 (pl) |
MY (1) | MY8200087A (pl) |
NL (3) | NL188859C (pl) |
NO (1) | NO148856C (pl) |
NZ (1) | NZ183847A (pl) |
OA (1) | OA05638A (pl) |
PL (1) | PL108004B1 (pl) |
PT (1) | PT66445B (pl) |
RO (1) | RO71785A (pl) |
SE (1) | SE434277B (pl) |
SU (1) | SU716524A3 (pl) |
YU (1) | YU40814B (pl) |
ZA (1) | ZA772345B (pl) |
ZM (1) | ZM3677A1 (pl) |
Families Citing this family (269)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
NZ186851A (en) * | 1977-04-11 | 1984-12-14 | Merck & Co Inc | Glycosyloxy derivatives of milbemycin and parasiticidal compositions |
US4093629A (en) * | 1977-04-11 | 1978-06-06 | Merck & Co., Inc. | Derivatives of antibiotic substance milbemycin and processes therefor |
NZ188459A (en) * | 1977-10-03 | 1982-09-07 | Merck & Co Inc | Derivatives of c-076 compounds and pesticidal compositions |
PH15982A (en) | 1977-10-03 | 1983-05-18 | Merck & Co Inc | Selective hydrogenation producta of c-076 compounds and derivatives thereof |
US4206205A (en) * | 1977-10-03 | 1980-06-03 | Merck & Co., Inc. | Monosaccharide and aglycone derivatives of C-076 |
PH16612A (en) * | 1977-12-19 | 1983-11-28 | Merck & Co Inc | 13-halo and 13-deoxy derivatives of c-076 compounds |
US4203976A (en) * | 1978-08-02 | 1980-05-20 | Merck & Co., Inc. | Sugar derivatives of C-076 compounds |
US4200581A (en) * | 1978-08-04 | 1980-04-29 | Merck & Co., Inc. | Alkyl derivatives of C-076 compounds |
US4263168A (en) * | 1979-01-10 | 1981-04-21 | Imperial Chemical Industries Limited | Olefine polymerization catalyst |
US4550160A (en) * | 1979-08-13 | 1985-10-29 | Merck & Co., Inc. | Processes for the interconversion of C-076 compounds |
JPS5632481A (en) | 1979-08-23 | 1981-04-01 | Sankyo Co Ltd | Antibiotic b-41d, its preparation, and acaricide and anthelminthic agent and repellent containing the same as active constituent |
US4289760A (en) * | 1980-05-02 | 1981-09-15 | Merck & Co., Inc. | 23-Keto derivatives of C-076 compounds |
US4285963A (en) * | 1980-08-07 | 1981-08-25 | Merck & Co., Inc. | Novel derivatives of C-076 compounds |
US4385065A (en) | 1980-10-23 | 1983-05-24 | Merck & Co., Inc. | Novel substances and process for their production |
US4378353A (en) | 1981-02-17 | 1983-03-29 | Merck & Co., Inc. | Novel C-076 compounds |
US4333925A (en) | 1981-05-11 | 1982-06-08 | Merck & Co., Inc. | Derivatives of C-076 compounds |
US4399274A (en) | 1981-07-02 | 1983-08-16 | Merck & Co., Inc. | Isolation of non-ionic lipophilic materials on macroreticular polymeric absorbents |
US4412991A (en) | 1981-08-28 | 1983-11-01 | Merck & Co., Inc. | 22-Hydroxy derivatives of C-076 compounds, pharmaceutical compositions and method of use |
NZ201681A (en) * | 1981-09-03 | 1985-11-08 | Merck & Co Inc | Avermectin derivatives and parasiticidal compositions |
US4457920A (en) * | 1981-09-03 | 1984-07-03 | Merck & Co., Inc. | 4a-Substituted avermectin compounds |
US4423211A (en) * | 1981-12-21 | 1983-12-27 | Merck & Co., Inc. | Process for the whole broth extraction of avermectin |
US4423209A (en) * | 1982-02-26 | 1983-12-27 | Merck & Co., Inc. | Processes for the interconversion of avermectin compounds |
US4427663A (en) | 1982-03-16 | 1984-01-24 | Merck & Co., Inc. | 4"-Keto-and 4"-amino-4"-deoxy avermectin compounds and substituted amino derivatives thereof |
NZ204074A (en) * | 1982-05-10 | 1986-05-09 | Merck & Co Inc | Synergistic compositions containing avermectins |
US4430329A (en) | 1982-05-17 | 1984-02-07 | Merck & Co., Inc. | Synergistic treatment of adult canine heartworm with thiacetarsamide and ivermectin |
EP0102702B1 (en) * | 1982-07-22 | 1987-07-29 | Imperial Chemical Industries Plc | Methods and compositions of combating pests |
US4469682A (en) * | 1983-01-28 | 1984-09-04 | Merck & Co., Inc. | Avermectin and milbemycin phosphate esters, pharmaceutical compositions, and method of use |
EP0125155A1 (en) * | 1983-04-07 | 1984-11-14 | Merck & Co. Inc. | Novel synergistic agricultural insecticidal, pesticidal and acaricidal combinations |
NZ207655A (en) * | 1983-04-07 | 1986-09-10 | Merck & Co Inc | Synergistic veterinary compositions containing an avermectin compound and clorsulon |
US4530921A (en) * | 1983-10-03 | 1985-07-23 | Merck & Co., Inc. | Avermectin epoxide derivatives and method of use |
US4560677A (en) * | 1984-01-31 | 1985-12-24 | Merck & Co., Inc. | Synergistic avermectin combination for treating plant pests |
US5169956A (en) * | 1984-06-05 | 1992-12-08 | American Cyanamid Company | Macrolide antibiotic compounds |
US4579864A (en) * | 1984-06-11 | 1986-04-01 | Merck & Co., Inc. | Avermectin and milbemycin 13-keto, 13-imino and 13-amino derivatives |
GB2166436B (en) * | 1984-09-14 | 1989-05-24 | Glaxo Group Ltd | Antibiotic compounds and their preparation |
US5182207A (en) * | 1984-09-14 | 1993-01-26 | American Cyanamid Company | Strains of streptomyces thermoarchaensis |
US4587247A (en) * | 1985-02-25 | 1986-05-06 | Merck & Co., Inc. | Substituted and unsubstituted 13-(alkoxy)methoxy derivatives of the avermectin aglycones, compositions and use |
US4666937A (en) * | 1985-03-04 | 1987-05-19 | Merck & Co., Inc. | Avermectin bioconversion products |
NZ215917A (en) | 1985-05-02 | 1989-10-27 | Merck & Co Inc | 22-oh milbemycin derivatives and parasiticidal compositions |
US4789684A (en) * | 1985-05-02 | 1988-12-06 | Merck & Co., Inc. | Anthelmintic fermentation products of microorganisms |
US4678774A (en) * | 1985-06-06 | 1987-07-07 | Merck & Co., Inc. | Novel synergistic compositions |
ES8800986A1 (es) * | 1985-07-27 | 1987-12-01 | Pfizer | Un procedimiento para la produccion de un nuevo derivado de avermectina |
NZ216908A (en) | 1985-07-29 | 1989-06-28 | Merck & Co Inc | Avermectin derivatives |
US4668696A (en) * | 1985-07-29 | 1987-05-26 | Merck & Co., Inc. | Novel averonectin fermentation product of a microorganism with anthelmintic activity |
US4766112A (en) * | 1985-07-29 | 1988-08-23 | Merck & Co. Inc. | Anthelmintic fermentation products of a microorganism |
US4622313A (en) * | 1985-08-01 | 1986-11-11 | Merck & Co., Inc. | O-sulfate derivatives of avermectins and milbemycins having improved water solubility |
ES8605582A1 (es) * | 1985-12-11 | 1986-03-16 | Antibioticos Sa | Un procedimiento para la preparacion de avermectinas |
GB8606120D0 (en) * | 1986-03-12 | 1986-04-16 | Glaxo Group Ltd | Process |
GB8606116D0 (en) * | 1986-03-12 | 1986-04-16 | Glaxo Group Ltd | Process |
EP0240274A3 (en) * | 1986-04-03 | 1990-03-14 | Merck & Co. Inc. | Avermectins as growth promotant agents |
US5840704A (en) * | 1986-07-16 | 1998-11-24 | Pfizer Inc. | Antiparasitic agents and process for their preparation |
EP0254583B1 (en) * | 1986-07-24 | 1994-09-07 | Beecham Group Plc | Parasiticidal milbemycin derivatives, a process for their production, and compositions containing the same |
US4833168A (en) * | 1986-10-03 | 1989-05-23 | Merck & Co., Inc. | Avermectin reformatsky adducts |
US5077398A (en) * | 1986-11-18 | 1991-12-31 | Merck & Co., Inc. | Process for isolation of avermectin B1 components with improved purity and subsequent isolaton of B2 components |
US5234831A (en) * | 1987-01-23 | 1993-08-10 | Pfizer Inc | Cultures for production of B avermectins |
IN167980B (pl) * | 1987-01-23 | 1991-01-19 | Pfizer | |
US5077278A (en) * | 1987-01-23 | 1991-12-31 | Pfizer Inc. | Non-natural demethylavermectins compositions and method of use |
US5525506A (en) * | 1987-01-23 | 1996-06-11 | Pfizer Inc. | Process for production of avermectins and cultures therefor |
IL85119A (en) * | 1987-01-23 | 1993-01-14 | Pfizer | Streptomyces avermitilis strains, their preparation and use in production of avermectins |
US5238848A (en) * | 1987-01-23 | 1993-08-24 | Pfizer Inc | Cultures for production of avermectins |
US4806527A (en) * | 1987-03-16 | 1989-02-21 | Merck & Co., Inc. | Avermectin derivatives |
US4831017A (en) * | 1987-06-29 | 1989-05-16 | Merck & Co., Inc. | Increased litter size in monogastric domestic animals after treatment in mid-gestation of gravid female with avermectin or milbemycin compound |
US4847243A (en) * | 1987-10-08 | 1989-07-11 | Merck & Co., Inc. | Treatment for fescue toxicosis in grazing animals |
US5240850A (en) * | 1987-10-23 | 1993-08-31 | Pfizer Inc. | Cultures for production of avermectin aglycones |
DE3881147T2 (de) * | 1987-10-23 | 1993-09-02 | Pfizer | Verfahren zur herstellung von aglykonen von avermectin und sie enthaltende kulturen. |
PT88952B (pt) * | 1987-11-09 | 1993-02-26 | Pfizer | Processo para a preparacao de avermectinas etiladas |
US4963667A (en) * | 1987-11-10 | 1990-10-16 | Merck & Co., Inc. | Ivermectin derivative compounds and process for preparing the same |
GB8726730D0 (en) * | 1987-11-14 | 1987-12-16 | Pfizer Ltd | Antiparasitic agents |
US4895837A (en) * | 1988-01-29 | 1990-01-23 | Merck & Co., Inc. | Avermectin derivatives |
GB8804440D0 (en) * | 1988-02-25 | 1988-03-23 | Pfizer Ltd | Antiparasitic agents |
US4918097A (en) * | 1988-03-11 | 1990-04-17 | Ciba-Geigy Corporation | Insecticides and parasiticides |
GB8815967D0 (en) * | 1988-07-05 | 1988-08-10 | Pfizer Ltd | Antiparasitic agents |
US5120646A (en) * | 1988-10-18 | 1992-06-09 | Chen Shieh Shung T | Process for the preparation of anthelmintive bioconversion products |
US5015662A (en) * | 1988-10-18 | 1991-05-14 | Merck & Co., Inc. | Anthelmintic bioconversion products |
US5015630A (en) * | 1989-01-19 | 1991-05-14 | Merck & Co., Inc. | 5-oxime avermectin derivatives |
US4897383A (en) * | 1989-02-13 | 1990-01-30 | Merck & Co., Inc. | Avermectin derivatives |
NZ232422A (en) * | 1989-02-16 | 1992-11-25 | Merck & Co Inc | 13-ketal milbemycin derivatives and parasiticides |
DE69023036T2 (de) * | 1989-03-31 | 1996-06-13 | Merck & Co Inc | Klonierung von Streptomyces avermitilis Genen zur Biosynthese von Avermectin und Verfahren zu ihrer Verwendung. |
US5030622A (en) * | 1989-06-02 | 1991-07-09 | Merck & Co., Inc. | Avermectin derivatives |
US5023241A (en) * | 1989-07-31 | 1991-06-11 | Merck & Co., Inc. | Avermectin derivatives |
US5830875A (en) * | 1989-10-30 | 1998-11-03 | Merck & Co., Inc. | 24-and 25-substituted avermectin and milbemycin derivatives |
US5055454A (en) * | 1989-10-30 | 1991-10-08 | Merck & Co., Inc. | 13-epi-avermectin derivatives useful as antiparasitic agents |
JP2888586B2 (ja) * | 1990-03-05 | 1999-05-10 | 社団法人北里研究所 | エバーメクチンの特定成分を選択生産するための微生物およびその選択的製造法 |
US5114930A (en) * | 1990-05-14 | 1992-05-19 | Merck & Co., Inc. | Avermectin derivatives with a spacer inserted between the disaccharide and the aglycone useful as antiparasitic agents |
US5188944A (en) * | 1990-06-22 | 1993-02-23 | Merck & Co., Inc. | Process for the glycosylation of avermectin agylcones |
US5070015A (en) * | 1990-10-15 | 1991-12-03 | Merck & Co., Inc. | Novel avermectins are produced from known microorganisms |
US5192546A (en) | 1991-01-15 | 1993-03-09 | Mycogen Corporation | Synergistic pesticidal compositions |
US5346698A (en) * | 1991-01-15 | 1994-09-13 | Mycogen Corporation | Synergistic pesticidal compositions |
US5177063A (en) * | 1991-03-11 | 1993-01-05 | Merck & Co., Inc. | Avermectin compounds with a 6,5-spiroketal ring system |
US5208222A (en) * | 1991-03-28 | 1993-05-04 | Merck & Co., Inc. | 4"-and 4'-alkylthio avermectin derivatives |
US5189026A (en) * | 1991-06-07 | 1993-02-23 | Fractal Laboratories, Inc. | Treatment of human diseases involving dysregulation or dysfunction of the nervous system |
US5262400A (en) * | 1991-06-20 | 1993-11-16 | Merck & Co., Inc. | 4α-substituted avermectin derivatives |
US5192671A (en) * | 1991-06-26 | 1993-03-09 | Merck & Co., Inc. | Process for the glycosylation of avermectin compounds |
EP0524686A1 (en) * | 1991-07-23 | 1993-01-27 | Merck & Co. Inc. | A process for the 14a-hydroxylation of avermectin compounds |
EP0524687A1 (en) * | 1991-07-23 | 1993-01-27 | Merck & Co. Inc. | A process for the glycosylation of avermectin compounds at the 14a-position |
US5171742A (en) * | 1991-10-15 | 1992-12-15 | Merck & Co., Inc. | Avermectin compounds with a 6,5-spiroketal ring system ad a 23-acyl substituent |
US5240915A (en) * | 1991-10-15 | 1993-08-31 | Merck & Co., Inc. | Avermectin derivatives |
US5248669A (en) * | 1991-12-17 | 1993-09-28 | Samir Amer | Inhibition of anoxia or hypoxia-induced, endothelium-mediated vasospasm with avermectins |
GB9205007D0 (en) * | 1992-03-07 | 1992-04-22 | Pfizer Ltd | Antiparasitic agents |
US5162363A (en) * | 1992-03-18 | 1992-11-10 | Merck & Co., Inc. | 23-nor-23-thia avermectin analogs are active anthelmintic agents |
US5244879A (en) * | 1992-03-18 | 1993-09-14 | Merck & Co., Inc. | 23-nor-23-oxa avermectin analogs are active anthelmintic agents |
US5312753A (en) * | 1992-03-23 | 1994-05-17 | Merck & Co., Inc. | Strain of streptomyces avermitilis capable of glycosylating avermectin compounds at the 13- and 14A positions |
EP0637244B1 (en) * | 1992-03-23 | 2001-01-03 | Merck & Co. Inc. | A strain of streptomyces avermitilis glycosylates avermectin compounds |
US5229415A (en) * | 1992-03-24 | 1993-07-20 | Merck & Co., Inc. | Alkylthio alkyl avermectins are active antiparasitic agents |
US6103504A (en) * | 1992-03-25 | 2000-08-15 | Pfizer Inc. | Process for production of avermectins and cultures therefor |
IT1255135B (it) * | 1992-05-05 | 1995-10-20 | Principio attivo a base di avermectine, ceppo e procedimento per la sua preparazione e composizione veterinaria che lo contiene. | |
US5248678A (en) * | 1992-06-30 | 1993-09-28 | Fractal Laboratories, Inc. | Methods for increasing arousal and alertness and for the amelioration of comatose states |
US5241083A (en) * | 1992-07-01 | 1993-08-31 | Merck & Co., Inc. | Process for converting the 13-α-hydroxy group of avermectin aglycones |
US6162825A (en) * | 1992-10-22 | 2000-12-19 | The Clorox Company | High fructose insecticide bait compositions |
US5547955A (en) * | 1992-10-22 | 1996-08-20 | The Clorox Company | High fructose insecticide bait compositions |
US5292647A (en) * | 1992-11-30 | 1994-03-08 | Eli Lilly And Company | Strain of streptomyces for producing avermectins and processes therewith |
US5411946A (en) * | 1993-02-24 | 1995-05-02 | Merck & Co., Inc. | Avermectin derivatives |
PL174488B1 (pl) * | 1993-05-10 | 1998-08-31 | Merck & Co Inc | Preparat do zwalczania pasożytów zwierząt oraz sposób wytwarzania preparatu do zwalczania pasożytów zwierząt |
US5602107A (en) * | 1993-05-10 | 1997-02-11 | Merck & Co., Inc. | Pour-on formulations consisting of gylcols, glycerides and avermectin compounds |
BR9407141A (pt) * | 1993-07-23 | 1996-09-17 | Pfizer | Método para a precipatação de avermectinas naturais |
US5478929A (en) * | 1993-09-15 | 1995-12-26 | Merck & Co., Inc. | Bioconversion products of 27-hydroxy avermectin |
US5380838A (en) * | 1993-10-08 | 1995-01-10 | Merck & Co. Inc. | Stable solvates of avermectin compounds |
US5399582A (en) * | 1993-11-01 | 1995-03-21 | Merck & Co., Inc. | Antiparasitic agents |
TW327125B (en) * | 1994-02-07 | 1998-02-21 | Merck & Co Inc | Composition and method for protecting against pine exhausted |
US5578581A (en) * | 1994-04-26 | 1996-11-26 | Merck & Co., Inc. | Active avermectin analogue |
US5550153A (en) * | 1994-11-14 | 1996-08-27 | Kerz; Phillip D. | Method for treating heartworm-infected canines |
ATE199628T1 (de) | 1995-02-24 | 2001-03-15 | Novartis Erfind Verwalt Gmbh | Zusammensetzung zur bekämpfung von parasiten |
ATE435648T1 (de) * | 1995-03-20 | 2009-07-15 | Merck & Co Inc | Derivaten von nodulisporen säure |
DE19520275A1 (de) * | 1995-06-02 | 1996-12-05 | Bayer Ag | Endoparasitizide Mittel |
US5674897A (en) * | 1995-10-20 | 1997-10-07 | Mycogen Corporation | Materials and methods for controlling nematodes |
US6124359A (en) * | 1995-10-20 | 2000-09-26 | Mycogen Corporation | Materials and methods for killing nematodes and nematode eggs |
DE19613972A1 (de) * | 1996-04-09 | 1997-10-16 | Bayer Ag | Injektionsformulierungen von Avermectinen und Milbemycinen auf Basis von Rizinusöl |
AUPN933396A0 (en) * | 1996-04-17 | 1996-05-09 | Pfizer Pty Limited | Non-aqueuos oral-drench compositions containing avermectin compounds |
DE69725745D1 (de) | 1996-06-05 | 2003-11-27 | Ashmont Holdings Ltd | Injizierbare zusammensetzungen |
US6114376A (en) * | 1997-04-30 | 2000-09-05 | Mcgill University | Methods for using macrocyclic lactone compounds as multidrug resistance reversing agents in tumor and other cells |
US6403308B1 (en) | 1997-04-30 | 2002-06-11 | Mcgill University | Methods for detecting and reversing resistance to macrocyclic lactone compounds |
DE69818093T2 (de) * | 1997-12-03 | 2004-06-09 | Merck & Co., Inc. | Langwirkende, injizierbare, formulierungen enthaltend rizinusöl |
KR20040053390A (ko) * | 1998-02-13 | 2004-06-23 | 화이자 프로덕츠 인코포레이티드 | 아베르멕틴의 비2:비1의 비를 제어할 수 있는 스트렙토마이세스 아베르미틸리스 유전자 |
US6733767B2 (en) | 1998-03-19 | 2004-05-11 | Merck & Co., Inc. | Liquid polymeric compositions for controlled release of bioactive substances |
GB9825402D0 (en) | 1998-11-19 | 1999-01-13 | Pfizer Ltd | Antiparasitic formulations |
GB9926887D0 (en) * | 1999-11-12 | 2000-01-12 | Novartis Ag | Organic compounds |
US6787342B2 (en) | 2000-02-16 | 2004-09-07 | Merial Limited | Paste formulations |
DE10013914A1 (de) | 2000-03-21 | 2001-09-27 | Bayer Ag | Wirkstoffkombinationen mit insektiziden und akariziden Eigenschaften |
US6399651B1 (en) * | 2000-06-29 | 2002-06-04 | L. Dean Parks | Method of treating dermatoses using avermectin compound |
US7897559B2 (en) * | 2000-06-29 | 2011-03-01 | Parks L Dean | Dermatological composition and kit containing avermectin compound for treating dermatological conditions |
DE10055941A1 (de) | 2000-11-10 | 2002-05-23 | Bayer Ag | Wirkstoffkombinationen mit insektiziden und akariziden Eigenschaften |
DE10059606A1 (de) | 2000-12-01 | 2002-06-06 | Bayer Ag | Wirkstoffkombinationen |
AR036872A1 (es) | 2001-08-13 | 2004-10-13 | Du Pont | Compuesto de antranilamida, composicion que lo comprende y metodo para controlar una plaga de invertebrados |
DE10203688A1 (de) * | 2002-01-31 | 2003-08-07 | Bayer Cropscience Ag | Synergistische insektizide Mischungen |
ME00472B (me) | 2002-02-12 | 2011-10-10 | Zoetis Services Llc | Streptomyces avermitilis gen koji određuje odnos b2:b1 avermektina |
DE10207241A1 (de) * | 2002-02-21 | 2003-09-04 | Bayer Cropscience Ag | Synergistische insektizide Mischungen |
GB2386066A (en) * | 2002-02-28 | 2003-09-10 | Norbrook Lab Ltd | Long-acting parasiticidal composition with improved bioavailability comprising a salicylanilide, a further anti-parasitic compound & a polymeric species |
US7001889B2 (en) * | 2002-06-21 | 2006-02-21 | Merial Limited | Anthelmintic oral homogeneous veterinary pastes |
US20060205681A1 (en) * | 2002-06-21 | 2006-09-14 | Maryam Moaddeb | Homogenous paste formulations |
US6764999B2 (en) | 2002-07-11 | 2004-07-20 | Stephen E. Bachman | Nasal delivery of parasiticides |
US20040077703A1 (en) * | 2002-10-02 | 2004-04-22 | Soll Mark D. | Nodulisporic acid derivative spot-on formulations for combating parasites |
DE10248257A1 (de) * | 2002-10-16 | 2004-04-29 | Bayer Cropscience Ag | Wirkstoffkombinationen im insektiziden und akariziden Eigenschaften |
GB0229804D0 (en) * | 2002-12-20 | 2003-01-29 | Syngenta Participations Ag | Avermection b1 and avermectin b1 monosaccharide derivatives having an alkoxymethyl substituent in the 4"- or 4'-position |
GB0316377D0 (en) | 2003-07-12 | 2003-08-13 | Norbrook Lab Ltd | Parasiticidal composition |
DE10353281A1 (de) | 2003-11-14 | 2005-06-16 | Bayer Cropscience Ag | Wirkstoffkombination mit insektiziden und akariziden Eigenschaften |
US7531186B2 (en) | 2003-12-17 | 2009-05-12 | Merial Limited | Topical formulations comprising 1-N-arylpyrazole derivatives and amitraz |
US7671034B2 (en) | 2003-12-19 | 2010-03-02 | Merial Limited | Stabilized formulation of ivermectin feed premix with an extended shelf life |
US7666444B2 (en) | 2004-02-02 | 2010-02-23 | Wyeth | Antiparasitic composition |
US7493609B2 (en) * | 2004-08-30 | 2009-02-17 | International Business Machines Corporation | Method and apparatus for automatic second-order predictive commoning |
BRPI0515917A (pt) | 2004-09-23 | 2008-08-12 | Schering Plough Ltd | controle de parasitas em animais pelo uso de novos derivados de éter de oxima de trifluorometanossulfonanilida |
DE102004053964A1 (de) * | 2004-11-09 | 2006-05-11 | Bayer Healthcare Ag | Mittel gegen Demodikose |
JP4750126B2 (ja) * | 2004-11-19 | 2011-08-17 | シェーリング−プラウ・リミテッド | 殺寄生虫薬2−フェニル−3−(1h−ピロール−2−イル)アクリロニトリル誘導体の使用による動物における寄生虫の制御 |
GB0501220D0 (en) * | 2005-01-21 | 2005-03-02 | Norbrook Lab Ltd | Anthelmintic composition |
US8362086B2 (en) | 2005-08-19 | 2013-01-29 | Merial Limited | Long acting injectable formulations |
US20080027011A1 (en) * | 2005-12-20 | 2008-01-31 | Hassan Nached | Homogeneous paste and gel formulations |
US8119667B2 (en) * | 2005-12-29 | 2012-02-21 | Schering-Plough Animal Health Corporation | Carbonates of fenicol antibiotics |
EP1849363A1 (en) * | 2006-03-09 | 2007-10-31 | Cheminova A/S | Synergistic combination of glutamate- and GABA-gated chloride agonist pesticide and at least one of Vitamin E or Niacin |
US20070238700A1 (en) * | 2006-04-10 | 2007-10-11 | Winzenberg Kevin N | N-phenyl-1,1,1-trifluoromethanesulfonamide hydrazone derivative compounds and their usage in controlling parasites |
TWI422328B (zh) | 2006-06-19 | 2014-01-11 | Univ California | 結合有殺線蟲之種子塗覆物的生物控制劑 |
CA2656617C (en) | 2006-07-05 | 2014-10-14 | Aventis Agriculture | 1-aryl-5-alkyl pyrazole derivative compounds, processes of making and methods of using thereof |
DE102007007750A1 (de) * | 2006-08-17 | 2008-02-21 | Bayer Cropscience Ag | Avermectinderivate |
FR2906468B1 (fr) * | 2006-09-28 | 2012-09-21 | Galderma Sa | Utilisation de composes de la famille des avermectines pour le traitement de desordres dermatologiques |
MX2009006282A (es) * | 2006-12-13 | 2009-06-23 | Schering Plough Ltd | Profarmacos solubles en agua de florfenicol y sus analogos. |
US8044230B2 (en) * | 2006-12-13 | 2011-10-25 | Intervet Inc. | Water-soluble prodrugs of chloramphenicol, thiamphenicol, and analogs thereof |
US8901163B2 (en) | 2007-01-03 | 2014-12-02 | Galderma S.A. | Method of treating hyperesthesia, paresthesia, dolor, and pruritus caused by insect stings or noxious weeds or plants using avermectin compound |
ME03373B (me) | 2007-05-15 | 2020-01-20 | Merial Inc | Ariloazol-2-il cijanoetilamino jedinjenja, postupci dobijanja i postupci njihove primene |
TWI430995B (zh) | 2007-06-26 | 2014-03-21 | Du Pont | 萘異唑啉無脊椎有害動物控制劑 |
ES2666187T3 (es) | 2007-06-27 | 2018-05-03 | E. I. Du Pont De Nemours And Company | Procedimiento de control de plagas en animales |
MX2010000354A (es) | 2007-06-29 | 2010-06-01 | Y Tex Corp | Etiqueta de oreja plaguicida. |
US8425925B2 (en) * | 2007-06-29 | 2013-04-23 | Y-Tex Corporation | Pesticidal tag |
EP2008517A1 (de) | 2007-06-29 | 2008-12-31 | Bayer CropScience AG | Akarizide Wirkstoffkombinationen |
TWI556741B (zh) | 2007-08-17 | 2016-11-11 | 英特威特國際股份有限公司 | 異唑啉組成物及其作為抗寄生蟲藥上的應用 |
EP2039248A1 (de) * | 2007-09-21 | 2009-03-25 | Bayer CropScience AG | Wirkstoffkombinationen mit insektiziden und akariziden Eigenschaften |
DE102007045922A1 (de) | 2007-09-26 | 2009-04-02 | Bayer Cropscience Ag | Wirkstoffkombinationen mit insektiziden und akariziden Eigenschaften |
WO2009070687A1 (en) | 2007-11-26 | 2009-06-04 | Merial Limited | Solvent systems for pour-on formulations for combating parasites |
EP2237774B1 (en) | 2007-12-21 | 2016-06-22 | Merial Limited | THE USE OF 6-HALOGENO-(1,2,4)-TRIAZOLO-(1,5-a)-PYRIMIDINE COMPOUNDS FOR COMBATING PESTS IN AND ON ANIMALS |
TWI468407B (zh) | 2008-02-06 | 2015-01-11 | Du Pont | 中離子農藥 |
EP2127522A1 (de) | 2008-05-29 | 2009-12-02 | Bayer CropScience AG | Wirkstoffkombinationen mit insektiziden und akariziden Eigenschaften |
US20100022469A1 (en) * | 2008-06-24 | 2010-01-28 | Majid Razzak | Anthelminthic formulations |
EP2321269B1 (en) * | 2008-07-30 | 2018-09-19 | Intervet International B.V. | Process for preparing oxazoline-protected aminodiol compounds useful as intermediates to florfenicol |
US20100120652A1 (en) * | 2008-08-08 | 2010-05-13 | Corrado Michael L | Treatment of bed mite and bed bug infestations |
SI3050874T1 (sl) | 2008-11-14 | 2019-04-30 | Merial Inc. | Enantiomerno obogatene ariloazol-2-il cianoetilamino paraziticidne spojine |
US8683346B2 (en) * | 2008-11-17 | 2014-03-25 | Sap Portals Israel Ltd. | Client integration of information from a supplemental server into a portal |
US8450357B2 (en) | 2008-11-19 | 2013-05-28 | Merial Limited | Compositions comprising an aryl pyrazole and/or a formamidine, methods and uses thereof |
US9173728B2 (en) | 2008-11-19 | 2015-11-03 | Merial Inc. | Multi-cavity container having offset indentures for dispensing fluids |
MX2011005726A (es) | 2008-12-04 | 2011-07-29 | Merial Ltd | Derivados de avermectina y milbemicina dimericos. |
EP2227951A1 (de) | 2009-01-23 | 2010-09-15 | Bayer CropScience AG | Verwendung von Enaminocarbonylverbindungen zur Bekämpfung von durch Insekten übertragenen Viren |
WO2010106046A1 (en) | 2009-03-17 | 2010-09-23 | Intervet International B.V. | Macrocyclic lactone drug delivery system |
BR122021003831B1 (pt) | 2009-03-25 | 2021-05-04 | Bayer Cropscience Aktiengesellschaft | Combinações de ingredientes ativos fungicidas e/ou inseticidas e/ou acaricidas e/ou nematicidas sinérgicas, seus usos, composições inseticidas e/ou acaricidas e/ou nematicidas e seu processo de produção, semente resistente a pragas, e método para combate de pestes animais |
CA2769385C (en) | 2009-07-30 | 2017-10-17 | Merial Limited | Insecticidal 4-amino-thieno[2,3-d]-pyrimidine compounds and methods of their use |
AU2010279587A1 (en) | 2009-08-05 | 2012-02-09 | E. I. Du Pont De Nemours And Company | Mesoionic pesticides |
EP2461684A2 (en) | 2009-08-05 | 2012-06-13 | E. I. du Pont de Nemours and Company | Mesoionic pesticides |
UA110924C2 (uk) | 2009-08-05 | 2016-03-10 | Е. І. Дю Пон Де Немур Енд Компані | Мезоіонні пестициди |
UA107804C2 (en) | 2009-08-05 | 2015-02-25 | Du Pont | Mixtures of pesticides mezoionnyh |
BR112012008185A2 (pt) | 2009-10-07 | 2016-08-16 | Wyeth Llc | composições que compreendem adjuvante, macrolídeo e antígeno proteináceo, e métodos para uso dessas composições |
EP2327410A1 (en) | 2009-10-28 | 2011-06-01 | Consiglio Nazionale Delle Ricerche - Infm Istituto Nazionale Per La Fisica Della Materia | Avermectins and milbemycins for the treatment of flavivirus infections |
CA2782902C (en) | 2009-12-04 | 2017-10-17 | Merial Limited | Pesticidal bis-organosulfur compounds |
AP3106A (en) | 2009-12-17 | 2015-01-31 | Merial Ltd | Antiparisitic dihydroazole compounds and compositions comprising same |
AU2010330844B2 (en) | 2009-12-17 | 2014-11-27 | Boehringer Ingelheim Animal Health USA Inc. | Compositions comprising macrocyclic lactone compounds and spirodioxepinoindoles |
NZ601341A (en) | 2010-01-22 | 2014-02-28 | Bayer Ip Gmbh | Acaricide and/or insecticide active substance combinations |
UY33282A (es) | 2010-03-25 | 2011-09-30 | Novartis Ag | Composiciones endoparasiticidas |
UA108641C2 (uk) | 2010-04-02 | 2015-05-25 | Паразитицидна композиція, яка містить чотири активних агенти, та спосіб її застосування | |
EP2382865A1 (de) | 2010-04-28 | 2011-11-02 | Bayer CropScience AG | Synergistische Wirkstoffkombinationen |
DK2568980T3 (en) | 2010-05-12 | 2015-11-30 | Merial Inc | INJECTABLE PARASITICIDE FORMULATIONS OF LEVAMISOL AND MACROCYCLIC LACTONS |
MY156670A (en) | 2010-05-27 | 2016-03-15 | Du Pont | Crystalline form of 4-[5-[3-chloro-5-(trifluoromethly)phenyl]-4,5-dihydro-5-(trifluoromethyl)-3-isoxazolyl]-n-[2-oxo-2-[(2,2,2-trifluoroethyl) amino]ethyl]-1-naphthalenecarboxamide |
AR081970A1 (es) | 2010-06-24 | 2012-10-31 | Intervet Int Bv | Formulacion inyectable de una lactona macrociclica y levamisol, formulacion y uso veterinario |
RU2578036C2 (ru) | 2010-06-29 | 2016-03-20 | Сева Санте Анимале Са | Новые инъекционные композиции эприномектина |
WO2012054328A1 (en) | 2010-10-20 | 2012-04-26 | Galderma S.A. | Method of treating hemorrhoids using macrocyclic lactone compound |
WO2012054331A1 (en) | 2010-10-20 | 2012-04-26 | Galderma S.A. | Method of treating otitis externa using macrocyclic lactone compound |
DK2640728T3 (en) | 2010-11-16 | 2016-11-28 | Merial Inc | NEW MONENSINDERIVATER FOR TREATMENT AND PREVENTION OF protozoal INFECTIONS |
WO2012078605A1 (en) | 2010-12-07 | 2012-06-14 | Merial Limited | Topical combination formulations of macrocyclic lactones with synthetic pyrethroids |
WO2012087630A1 (en) | 2010-12-20 | 2012-06-28 | E.I. Du Pont De Nemours And Company | Pyridine and pyrimidine compounds for controlling invertebrate |
GB201021836D0 (en) | 2010-12-21 | 2011-02-02 | Norbrook Lab Ltd | Topical Composition |
BR112013024813A8 (pt) | 2011-04-15 | 2017-10-10 | Syngenta Participations Ag | Método para controle de pragas de nematódeos |
MX344911B (es) | 2011-06-27 | 2017-01-11 | Merial Inc | Compuestos de eter amido-piridilico y composiciones y su uso contra parasitos. |
US20120329832A1 (en) | 2011-06-27 | 2012-12-27 | Jean Delaveau | Novel Insect-Repellent Coumarin Derivatives, Syntheses, and Methods of Use |
CN102356769A (zh) * | 2011-09-02 | 2012-02-22 | 魏振东 | 一种含有机质的可湿性粉剂农药 |
DK2755473T3 (en) | 2011-09-12 | 2019-03-11 | Merial Inc | PARACITICIDE COMPOSITIONS CONTAINING AN ISOXAZOLINE ACTIVE SUBSTANCE, PROCEDURES AND APPLICATIONS THEREOF |
US20130079394A1 (en) | 2011-09-23 | 2013-03-28 | Cnrs (Centre National Recherche Scientifique) | Indirect modeling of new repellent molecules active against insects, acarids, and other arthropods |
ES2642715T3 (es) | 2011-11-17 | 2017-11-17 | Merial, Inc. | Composiciones que comprenden un aril pirazol y un imidazol sustituido, procedimientos y utilizaciones de las mismas |
CA2857958C (en) | 2011-12-02 | 2020-08-25 | Merial Limited | Long-acting injectable moxidectin formulations and moxidectin crystal forms |
DE112013000869T5 (de) | 2012-02-06 | 2014-10-16 | Merial Ltd. | Orale parasitizide Veterinärzusammensetzungen umfassend systemisch wirkende Wirkstoffe, Verfahren und Verwendun davon |
JO3626B1 (ar) | 2012-02-23 | 2020-08-27 | Merial Inc | تركيبات موضعية تحتوي على فيبرونيل و بيرميثرين و طرق استخدامها |
WO2013158422A1 (en) | 2012-04-17 | 2013-10-24 | E. I. Du Pont De Nemours And Company | Heterocyclic compounds for controlling invertebrate pests |
MX351636B (es) | 2012-04-20 | 2017-10-23 | Merial Ltd | Composiciones parasiticidas que comprenden derivados de benzimidazol, métodos y usos de los mismos. |
SG11201503959VA (en) | 2012-11-20 | 2015-06-29 | Merial Inc | Anthelmintic compounds and compositions and method of using thereof |
AU2014212217B2 (en) | 2013-01-31 | 2016-11-10 | Boehringer Ingelheim Animal Health USA Inc. | Method for treating and curing Leishmaniosis using fexinidazole |
ES2846820T3 (es) | 2013-04-12 | 2021-07-29 | Zoetis Services Llc | Composición de lactonas macrocíclicas, levamisol, un aminoazúcar y un agente antiparasitario adicional |
EA030935B1 (ru) | 2013-11-01 | 2018-10-31 | Мериал, Инк. | Антипаразитарные и пестицидные изоксазолиновые соединения |
EP2886640A1 (en) | 2013-12-18 | 2015-06-24 | Riga Technical University | Process for isolation of milbemycins A3 and A4 |
BR112016023898A8 (pt) | 2014-04-17 | 2021-03-30 | Basf Se | uso de compostos malononitrila para proteger animais de parasitas |
WO2015179414A1 (en) | 2014-05-19 | 2015-11-26 | Merial, Inc. | Anthelmintic compounds |
AU2015276941B2 (en) | 2014-06-19 | 2018-07-19 | Boehringer Ingelheim Animal Health USA Inc. | Parasiticidal compositions comprising indole derivatives, methods and uses thereof |
US10864193B2 (en) | 2014-10-31 | 2020-12-15 | Boehringer Ingelheim Animal Health USA Inc. | Parasiticidal compositions comprising fipronil at high concentrations |
EP3023092A1 (en) | 2014-11-20 | 2016-05-25 | Ceva Sante Animale | Eprinomectin parenteral compositions |
UY36570A (es) | 2015-02-26 | 2016-10-31 | Merial Inc | Formulaciones inyectables de acción prolongada que comprenden un agente activo isoxazolina, métodos y usos de las mismas |
KR102593069B1 (ko) | 2015-04-08 | 2023-10-23 | 뵈링거 잉겔하임 애니멀 헬스 유에스에이 인코포레이티드 | 이속사졸린 활성제를 포함하는 서방형 주사 제형, 이의 방법 및 용도 |
SG10202103403SA (en) | 2015-05-20 | 2021-05-28 | Boehringer Ingelheim Animal Health Usa Inc | Anthelmintic depsipeptide compounds |
WO2016191389A2 (en) | 2015-05-27 | 2016-12-01 | Merial, Inc. | Compositions containing antimicrobial igy antibodies, for treatment and prevention of disorders and diseases caused by oral health compromising (ohc) microorganisms |
KR101687973B1 (ko) | 2015-12-08 | 2016-12-21 | 주식회사 씨티씨바이오 | 마이크로필름 코팅을 이용한 동물 사료용 프리믹스 제조방법 |
UY37137A (es) | 2016-02-24 | 2017-09-29 | Merial Inc | Compuestos antiparasitarios de isoxazolina, formulaciones inyectables de acción prolongada que los comprenden, métodos y usos de los mismos |
RU2630316C1 (ru) * | 2016-06-24 | 2017-09-07 | Карина Микаилевна Мирзаева | Препарат для борьбы с насекомыми-кератофагами |
WO2018039508A1 (en) | 2016-08-25 | 2018-03-01 | Merial, Inc. | Method for reducing unwanted effects in parasiticidal treatments |
US11284618B2 (en) | 2016-09-22 | 2022-03-29 | Syngenta Participations Ag | Pesticidal mixtures |
WO2018071535A1 (en) | 2016-10-14 | 2018-04-19 | Merial, Inc. | Pesticidal and parasiticidal vinyl isoxazoline compounds |
EP3541789A1 (en) | 2016-11-16 | 2019-09-25 | Boehringer Ingelheim Animal Health USA Inc. | Anthelmintic depsipeptide compounds |
UY37780A (es) | 2017-06-26 | 2019-01-31 | Merial Inc | Composiciones de gránulos parasiticidas con doble principio activo, sus métodos y usos |
US11589586B2 (en) | 2017-08-14 | 2023-02-28 | Boehringer Ingelheim Animal Health USA Inc. | Pesticidal and parasiticidal pyrazole-isoxazoline compounds |
US20210137960A1 (en) | 2018-02-01 | 2021-05-13 | Yale University | Compositions and methods for inhibition of nuclear-penetrating antibodies |
EP3749096A1 (en) | 2018-02-08 | 2020-12-16 | Boehringer Ingelheim Animal Health USA Inc. | Parasiticidal compositions comprising eprinomectin and praziquantel, methods and uses thereof |
SG11202012922VA (en) | 2018-07-09 | 2021-01-28 | Boehringer Ingelheim Animal Health Usa Inc | Anthelminthic heterocyclic compounds |
EP3883648A1 (en) | 2018-11-20 | 2021-09-29 | Boehringer Ingelheim Animal Health USA Inc. | Indazolylcyanoethylamino compound, compositions of same, method of making, and methods of using thereof |
NZ776819A (en) | 2019-01-16 | 2023-04-28 | Boehringer Ingelheim Animal Health Usa Inc | Topical compositions comprising a neonicotinoid and a macrocyclic lactone, methods and uses thereof |
AR118215A1 (es) | 2019-03-01 | 2021-09-22 | Boehringer Ingelheim Animal Health Usa Inc | Composiciones inyectables de clorsulón, sus métodos y usos |
PE20220281A1 (es) | 2019-03-19 | 2022-02-25 | Boehringer Ingelheim Animal Health Usa Inc | Compuestos de aza-benzotiofeno y aza-benzofurano como antihelminticos |
AU2020316642A1 (en) | 2019-07-22 | 2022-01-27 | Intervet International B.V. | Soft chewable veterinary dosage form |
MX2022015038A (es) | 2020-05-29 | 2023-01-04 | Boehringer Ingelheim Animal Health Usa Inc | Compuestos heterociclicos como anthelminticos. |
WO2022034226A1 (en) | 2020-08-14 | 2022-02-17 | Universidad De Navarra | Avermectin and milbemycin compositions for inhalation |
EP4262789A1 (en) | 2020-12-21 | 2023-10-25 | Boehringer Ingelheim Vetmedica GmbH | Parasiticidal collar comprising isoxazoline compounds |
WO2023094286A1 (en) | 2021-11-25 | 2023-06-01 | Syngenta Crop Protection Ag | Pesticidal compositions |
Family Cites Families (7)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
US3950360A (en) * | 1972-06-08 | 1976-04-13 | Sankyo Company Limited | Antibiotic substances |
JPS4914624A (pl) * | 1972-06-08 | 1974-02-08 | ||
US4134973A (en) * | 1977-04-11 | 1979-01-16 | Merck & Co., Inc. | Carbohydrate derivatives of milbemycin and processes therefor |
US4160861A (en) * | 1977-10-03 | 1979-07-10 | Merck & Co., Inc. | Method for the separation of antibiotic macrolides |
US4160083A (en) * | 1977-10-03 | 1979-07-03 | Merck & Co., Inc. | Process for the separation of antibiotic macrolides |
US4161583A (en) * | 1977-10-03 | 1979-07-17 | Merck & Co., Inc. | Method for the separation and purification of antibiotic macrolides |
US4160084A (en) * | 1977-10-11 | 1979-07-03 | Merck & Co., Inc. | Method for the separation of antibiotic macrolides |
-
1977
- 1977-03-29 SE SE7703592A patent/SE434277B/xx not_active IP Right Cessation
- 1977-04-04 DK DK149077A patent/DK146514C/da active Protection Beyond IP Right Term
- 1977-04-05 NO NO771211A patent/NO148856C/no unknown
- 1977-04-06 NL NLAANVRAGE7703810,A patent/NL188859C/xx active Protection Beyond IP Right Term
- 1977-04-07 FI FI771124A patent/FI57781C/fi not_active IP Right Cessation
- 1977-04-11 IL IL51854A patent/IL51854A/xx unknown
- 1977-04-13 NZ NZ183847A patent/NZ183847A/xx unknown
- 1977-04-13 GB GB15402/77A patent/GB1573955A/en not_active Expired
- 1977-04-13 AU AU24220/77A patent/AU513641B2/en not_active Expired
- 1977-04-13 CY CY1114A patent/CY1114A/xx unknown
- 1977-04-13 CA CA276,126A patent/CA1098063A/en not_active Expired
- 1977-04-14 RO RO7790023A patent/RO71785A/ro unknown
- 1977-04-14 CS CS772465A patent/CS207397B2/cs unknown
- 1977-04-15 IT IT48991/77A patent/IT1106424B/it active
- 1977-04-15 YU YU1001/77A patent/YU40814B/xx unknown
- 1977-04-15 AR AR267229A patent/AR215000A1/es active
- 1977-04-15 GR GR53219A patent/GR63128B/el unknown
- 1977-04-15 AT AT266277A patent/AT357503B/de not_active IP Right Cessation
- 1977-04-15 FR FR7711432A patent/FR2348970A1/fr active Granted
- 1977-04-15 IE IE785/77A patent/IE44822B1/en not_active IP Right Cessation
- 1977-04-15 DD DD77198421A patent/DD137727A5/xx unknown
- 1977-04-15 PT PT66445A patent/PT66445B/pt unknown
- 1977-04-16 PL PL1977197448A patent/PL108004B1/pl unknown
- 1977-04-18 SU SU772474802A patent/SU716524A3/ru active
- 1977-04-18 ZM ZM7736A patent/ZM3677A1/xx unknown
- 1977-04-18 DE DE2717040A patent/DE2717040C2/de not_active Expired
- 1977-04-18 LU LU77152A patent/LU77152A1/xx unknown
- 1977-04-18 HU HU77ME2059A patent/HU179041B/hu unknown
- 1977-04-18 ES ES457932A patent/ES457932A1/es not_active Expired
- 1977-04-18 ZA ZA00772345A patent/ZA772345B/xx unknown
- 1977-04-18 GT GT197746150A patent/GT197746150A/es unknown
- 1977-04-18 OA OA56144A patent/OA05638A/xx unknown
- 1977-04-18 BG BG036028A patent/BG35900A3/xx unknown
- 1977-04-18 BE BE176805A patent/BE853702A/xx not_active IP Right Cessation
- 1977-04-18 CH CH477177A patent/CH639422A5/de not_active IP Right Cessation
- 1977-04-19 JP JP4416977A patent/JPS52151197A/ja active Granted
-
1978
- 1978-09-08 US US05/940,682 patent/US4310519A/en not_active Expired - Lifetime
-
1981
- 1981-07-09 KE KE3141A patent/KE3141A/xx unknown
- 1981-07-30 HK HK384/81A patent/HK38481A/xx unknown
-
1982
- 1982-12-30 MY MY87/82A patent/MY8200087A/xx unknown
-
1995
- 1995-04-21 NL NL950005C patent/NL950005I2/nl unknown
-
1997
- 1997-03-03 NL NL971001C patent/NL971001I2/nl unknown
Also Published As
Similar Documents
Publication | Publication Date | Title |
---|---|---|
PL108004B1 (pl) | Method of producing new heterocyclic derivatives osposob wytwarzania nowych heterocyklicznych pochodf alpha-l-oleandrozylo-alpha-l-oleandroside with snych alfa-l-oleandrozylo-alfa-l-oleandrozydu o symbolu c/076 ymbol c/076 | |
EP0170006B1 (en) | Method and compositions for helmintic, arthropod ectoparasitic and acaridal infections with novel agents | |
EP0688332B1 (en) | New a83543 compounds and process for production thereof | |
US4429042A (en) | Strain of Streptomyces for producing antiparasitic compounds | |
IE852263L (en) | Antibiotics from streptomyces | |
CA1041448A (en) | Antibiotic a-28086 complex from streptomyces aureofaciens | |
CA2021894C (en) | Antiparasitic agent | |
EP0204421B1 (en) | Antihelmintic macrocyclic lactones and their production by fermentation | |
US5317030A (en) | Method and compositions for helmintic, arthropod ectoparasitic and acaridal infections with novel agents | |
US4869901A (en) | Method and compositions for helmintic, arthropod ectoparasitic and acaridal infections with novel agents | |
AU632508B2 (en) | Anthelmintic bioconversion products | |
AU618136B2 (en) | Anthelmintic bioconversion products | |
US5198464A (en) | Method and compositions for helmintic, arthropod ectoparasitic and acaridal infections with novel agents | |
JPH07505280A (ja) | ストレプトマイセス アベルミチリス株によりグリコシル化されたアベルメクチン化合物 | |
CA1046965A (en) | Naphthyridinomycin antibiotics from streptomyces | |
EP0050964B1 (en) | Macrocyclic lactones, their production and parasiticidal uses, compositions containing them, and a biological culture suitable for producing them | |
US4385065A (en) | Novel substances and process for their production | |
JPH06179680A (ja) | 新規微生物の新規な駆虫性ミルベマイシン類似体 | |
RO106065B1 (ro) | Compusi macrolidici cu activitate insecticida si miticida si procedeu de preparare a lor | |
PH26844A (en) | Antibiotic compounds |