FI115823B - Menetelmä synteettisten membraanivesikkelien valmistamiseksi - Google Patents

Description

115823

Menetelmä synteettisten membraanivesikkelien valmistamiseksi

Keksinnön tausta 5 1. Keksinnön ala Tämä keksintö liittyy synteettisten membraani-vesikkeleiden valmistukseen. Näitä membraanivesikkeleitä sisältävät koostumukset ovat käyttökelpoisia lääkeaineen annostelujärj estelminä.

10 2. Keksinnön tausta

Monirakkulaiset liposomit ovat yksi kolmesta li-posomien päätyypistä, ja niitä valmistivat ensimmäisen kerran Kim, et ai. [Biochim. Biophys. Acta 782 (1983) 339 - 348] ja ne eroavat ainutlaatuisella tavalla muista lipidi-15 pohjaisista lääkeaineannostelujärjestelmistä, kuten yksikerroksisista [Huang, Biochemistry 8 (1969) 334 - 352; Kim, et ai., Biochim. Biophys. Acta, 646 (1981) 1 - 10] ja monikerroksisista [Bangham, et ai., J. Mol. Bio. 13 (1965) 238 - 252] liposomeista. Toisin kuin yksikerroksiset li- 20 posomit, monirakkulaiset partikkelit sisältävät useita vesipitoisia kammioita partikkelia kohti. Monikerroksisista ,*.·* liposomeista poiketen monirakkulaisten partikkeleiden monet vesipitoiset kammiot eivät ole samankeskeisiä. i * * *; Tällä alalla on aikaisemmin kuvattu monia menetelmiä j 25 yksikerroksisten ja monikerroksisten liposomien valmistami- , ,·. seksi; esimerkiksi Lenkin US-patenttijulkaisu 4 522 803; ♦ * · •# Baldeschwielerin US-patenttijulkaisu 4 310 506; Papahadjo- poulosin US-patenttijulkaisu 4 235 871; Schneiderin US-patentti julkaisu 4 224 179; Papahadjopoulosin US- :: 30 patenttijulkaisu 4 078 052; Taylorin US-patenttijulkaisu ..* 4 394 372; Marchettin US-patentti julkaisu 4 308 166; Mezein ; US-patentti julkaisu 4 485 054; ja Redziniakin US- patenttijulkaisu 4 508 703. Tällä alalla on aikaisemmin kuvattu myös menetelmiä sellaisten monirakkulaisten li-• " 35 posomien valmistamiseksi, jotka ovat osoittautuneet epästa- 115823 2 biileiksi biologisissa nesteissä [Kim, et ai., Biochim. Biophys. Acta 782 (1983) 339 - 348]. Kattava katsaus monista erilaisista yksikerroksisten ja monikerroksisten li-posomien valmistusmenetelmistä on esitetty julkaisussa 5 Szoka, et ai., Ann. Rev. Biophys. Bioeng. 9 (1980) 465 - 508 .

Kim, et ai. [Biochim. Biophys. Acta 782 (1983) 339 -348] menetelmässä pienten molekyylien, kuten sytosiiniara-binosidin, kapselointitehokkuus oli huono ja ne saivat ai-10 kaan nopean vapautumisen biologisissa nesteissä. Myöhemmin tehdyissä tutkimuksissa [Kim, et ai.. Cancer Treat. Rep. 71 (1987) 705 - 711] osoitettiin, että kapseloitujen molekyy lien suurta vapautumisnopeutta biologisissa nesteissä voidaan korjata haluttuun suuntaan kapseloimalla molekyylit 15 vetykloridin läsnä ollessa.

Monien lääkeaineiden yhteydessä optimaaliseen lääkehoitoon vaaditaan pitkän aikaa muuttumattomana pysyvä in vivo lääkeainepitoisuus. Esimerkiksi, kun syöpää hoidetaan optimaalisti solusyklispesifisellä antimetaboliitilla, täy-20 tyy sytotoksisen lääkeainepitoisuuden pysyä veressä muuttumattomana pitkän aikaa. Sytarabiini on syöpälääke, jonka yhteydessä oikealla annostusaikataululla on suuri merkitys, h* Koska tämä lääkeaine tuhoaa soluja vain niiden DNA:n repii- koituessa, niin solujen tuhoamiseksi optimaalisesti vaadi-25 taan solujen pitkäaikaista altistamista terapeuttisel- . le lääkeainekonsentraatiolle. Valitettavasti sytarabiinin * · puoliintumisaika laskimonsisäisen (IV) tai ihonalaisen (SC) annoksen jälkeen on erittäin lyhyt, puoliintumisajan ollessa muutaman tunnin luokkaa. Jotta solysyklifaasispesifisel-: : 30 lä lääkeaineella, kuten sytarabiinilla, saavutettaisiin op timaalinen syöpäsoluja tuhoava vaikutus, on järjestelmän : ; täytettävä kaksi pääehtoa: ensinnäkin syöpäkasvainta täytyy .saada käsiteltyä suurella lääkeainekonsentraatiolla isäntää 1 i palautumattomattomasti vahingoittamatta ja toiseksi kas-> “ 35 vainta on voitava käsitellä pitkän aikaa, jotta kaikki syö- 115823 3 päsolut tai suurin osa niistä on pyrkinyt syntetoimaan DNA:ta sytarabiinin läsnä ollessa.

Tähän päivämäärään mennessä ei vapautumisnopeutta ole kyetty säännöstelemään joustavasti ja vapautumisnopeut-5 ta muuttavien aineiden valikoima on rajoittunut lähinnä hydrohalogenideihin. Lääkeaineen annostelujärjestelmän kyseessä ollessa on erittäin edullista, että kapseloitujen aineiden vapautumisnopeutta saadaan säännösteltyä joustavasti ja että tarjolla on laaja valikoima vapautumisnopeut-10 ta muuttavia aineita.

Edellä kuvatun mukaisesti tämän keksinnön kohteena on saattaa käyttöön menetelmä lääkeainetta hitaasti vapauttavan depot-valmisteen valmistamiseksi, josta elimistöön tulee pitkän aikaa ja suuren pitoisuuden jatkuvasti säilyt-15 täen biologisesti aktiivista ainetta terapeuttisessa kon-sentraatiossa säännöstellyllä vapautumisnopeudella.

Keksinnön mukaisella menetelmällä vesikkeleihin kapseloitu biologisesti aktiivinen yhdiste on käyttökelpoinen farmaseuttisen koostumuksen valmistamiseksi.

20 Tämän keksinnön muut sekä yksityiskohtaisemmat koh teet, piirteet ja edut ovat tälle keksinnölle ominaisia ja *',·.· niitä käsitellään patenttiselityksessä sekä patenttivaati- muksissa.

Keksinnön yhteenveto • « · 25 Keksinnön kohteena on menetelmä synteettisten mem- * » , ,*, braanivesikkeleiden valmistamiseksi. Menetelmälle on tun- * * i nusomaista, että menetelmä käsittää vaiheet, joissa: (a) muodostetaan kahdesta toisiinsa sekoittamattomasta komponentista vesi-öljy-emulsio, joka sisältää vähin- · * 30 tään yhtä orgaanista liuotinta, vettä, vähintään yhtä bio- logisesti aktiivista ainetta ja vähintään yhtä hydrohalo-genideihin kuulumatonta vapautumisnopeutta muuttavaa ainet- * » * ta; * » (b) dispergoidaan vesi-öljy-emulsio vesipitoiseen " 35 komponenttiin, jolloin muodostuu liuotinpallosia; ja 115823 4 (c) poistetaan liuotinpallosista orgaaninen liuotin, jolloin muodostuu synteettisiä membraanivesikkeleitä, jotka sisältävät vesipitoisia pisaroita, joihin on liuenneena biologisesti aktiivista ainetta ja vapautumisnopeutta muut-5 tavaa ainetta.

Tämän keksinnön mukaisesti valmistetut synteettiset membraanivesikkelit käsittävät sellaisia lipidirakkuloita, joiden sisällä on monia epäkeskisistä kerroksista muodostuneita vesipitoisia kammioita ja joissa kammiot sisältävät 10 yhtä tai useampaa hydrohalogenideihin kuuluvamatonta vapautumisnopeutta muuttavaa ainetta, joiden vaikutuksesta kapseloitujen biologisesti aktiivisten aineiden vapautumisno-peus pienenee.

Tämän keksinnön mukaistesti saatujen synteettisten 15 membraanivesikkelikoostumusten kapselointikapasiteetti on suuri, ne vapauttavat kapseloitua ainetta pitkän ajan kuluessa, niiden kokojakauma on selvärajainen ja toistettavasta aikaansaatavissa, ne ovat muodoltaan pallomaisia, niiden keskimääräinen koko säännösteltävissä ja sitä voidaan hel-20 posti suurentaa tai pienentää ja niiden sisäisten kammioiden koko ja lukumäärä on säädettävissä.

: Piirustuksen kuvaus

Kuvio 1 on kuvaaja, jossa on esitetty lääkeaineen vapautumisnopeus 37 °C:ssa humaaniplasmaan suspendoiduista : 25 synteettisistä membraanivesikkeleistä. Kuviossa käytetyt • » , ,·. symbolit tarkoittavat käytettyä vapautumisnopeutta säätele- * * · vää ainetta, jotka on identifioitu taulukossa 2.

’ ’ Edullisen suoritusmuodon kuvaus

Termi "synteettiset membraanivesikkelit" tarkoittaa • - 30 kaikkialla tässä patenttiselityksessä ja patenttivaatimuk- sissa keinotekoisia mikroskooppisia lipidivesikkeleitä, k t • · 115823 5 jotka sisältävät monia epäkeskisiä vesipitoisia kammioita. Tästä poiketen yksikerroksiset liposomit sisältävät yhden vesipitoisen kammion; ja monikerroksisissa liposomeissa on useita "sipulinkuori"-tyyppisiä samankeskeisiä membraaneja, 5 joiden väliin jää kuorimaisia samankeskeisiä vesipitoisia osastoj a.

Termi "liuotinpallonen" tarkoittaa kaikkialla tässä patenttiselityksessä ja patenttivaatimuksissa orgaanisesta liuottimesta muodostunutta mikroskooppista pallomaista pi-10 saraa, jonka sisällä on useita sitä pienempiä vesipitoisesta liuoksesta muodostuneita pisaroita. Liuotinpalloset ovat suspedoituna toiseen vesipitoiseen liuokseen ja ne ovat kokonaan sen ympäröimiä.

Termi "neutraali lipidi" tarkoittaa öljyjä tai ras-15 voja, joilla ei itsessään ole kykyä muodostaa membraania ja joista puuttuu hydrofiilisen "pään" muodostava ryhmä.

Termi "amfipaattiset lipidit" tarkoittaa sellaisia molekyylejä, joissa on hydrofiilisen "pään" muodostava ryhmä jä hydrofobisen "hännän" muodostava ryhmä ja jotka kyke-20 nevät muodostamaan membraanin.

Termi "vapautumisnopeutta muuttava aine" tarkoittaa : hydrohalogenideja lukuun ottamatta molekyylejä, joita lisä- ·;· tään synteettisiä membraanivesikkeleitä muodostettaessa tai valmistettaessa ja joiden vaikutuksesta kapseloitujen bio- * i * ,·, : 25 logisesti aktiivisten aineiden vapautumisnopeus synteetti- * I t t>[ sistä membraanivesikkeleistä joko pienenee tai suurenee.

• * · ;;; Yksityiskohtiin puuttumatta tämän keksinnön mukainen » * * > · · * menetelmä käsittää "vesi-öljy"-emulsion valmistamisen siten, että (1) liuotetaan amfipaattisia lipidejä yhteen tai I * : : 30 useampaan lipidikomponentille soveltuvaan haihtuvaan or- ,,,* gaaniseen liuottimeen, (2) lisätään lipidikomponenttiin en- ,*. simmäistä siihen sekoittumatonta vesipitoista komponenttia » · ' ! * · ,··>, ja kapseloitavaa biologisesti aktiivista ainetta ja (3) li- sätään joko orgaaniseen liuottimeen tai ensimmäiseen vesi- i » : 35 pitoiseen komponenttiin tai näihin kumpaankin vapautumisno- peutta muuttavaa ainetta, jonka vaikutuksesta kapseloitujen 115823 6 biologisesti aktiivisten aineiden vapautumisnopeus synteettisistä membraanivesikkeleistä pienenee, ja emulgoidaan seos sitten mekaanisesti.

Orgaaniseen liuottimeen suspendoidut vesipisarat 5 muodostavat emulsiossa vesipitoisia sisäkammioita ja vesipitoisia kammioita reunustavien amfipaattisten lipidien muodostamasta yksinkertaisesta kerroksesta tulee lopullisen tuotteen kaksikerrosmembraanin toinen kerros. Emulsio saatetaan sitten kokonaan sellaisen toisen vesipitoisen kom-10 ponentin ympäröimäksi, joka sisältää yhtä tai useampaa io-nittumatonta osmoottista ainetta ja ionivahvuudeltaan heikkoa happoja neutraloivaa ainetta, kuten protoniakseptoria, joka voi edullisesti olla vapaa lysiiniemäs, vapaa histi-diiniemäs tai jokin näiden yhdistelmä. Tätä emulsiota se-15 koitetaan sitten joko mekaanisesti, ultraäänienergian avulla, sumuttamalla suuttimesta tai jollakin näitä muistuttavalla menetelmällä tai jollakin näiden menetelmien yhdistelmällä toiseen vesipitoiseen komponenttiin suspendoitu-neiksi jäävien liuotinpallosten muodostamiseksi.

20 Liuotinpalloset sisältävät useita vesipitoisia pisa roita, joissa aine, joka on määrä kapseloida, on niihin i ! ; : liuenneessa muodossa. Orgaaninen liuotin poistetaan pal- '·· losista edullisesti haihduttamalla haihtuva liuotin esimer- kiksi johtamalla kaasuvirtaa suspension ylitse. Kun liuotin t I * ,·, : 25 on poistettu kokonaan, niin palloset muuttuvat synteetti- ( i < > siksi membraanivesikkeleiksi. Liuottimen haihdutuksessa * ♦ * » i · !!! käytettäviä vaatimuksia vastaavia kaasuja ovat esimerkiksi * i < < * · typpi, helium, argon, happi, vety ja hiilidioksidi.

Vapautumisnopeutta muuttava aine on mikä tahansa mo- * * ! ; 30 lekyyli, jonka vaikutuksesta kapseloitujen biologisesti ak- ,,· tiivisten aineiden vapautumisnopeus synteettisistä membraa- nivesikkeleistä biologisissa nesteissä ja in vivo ,···, -olosuhteissa hidastuu, mikä johtaa siihen, että aineiden ‘1 vapautumisnopeus on pienempi kuin vapautumisnopeus synteet- : ’* 35 tisistä membraanivesikkeleistä, jotka on valmistettu ilman '0 > tällaista vapautumisnopeutta muuttavaa ainetta. Vapautumis- 115823 7 nopeutta muuttavia aineita ovat, mainittuihin kuitenkaan rajoittumatta, perkloorihappo, typpihappo, muurahaishappo, etikkahappo, trifluorietikkahappo, trikloorietikkahappo, rikkihappo, fosforihappo tai näiden yhdistelmät. Käytettä-5 vät vapautumisnopeutta muuttavien aineiden määrät ovat sellaisia, että ne tuottavat sen vaikutuksen, että ne saavat kapseloidut biologisesti aktiiviset aineet vapautumaan pitkän ajan kuluessa pitoisuuden jatkuvasti suurena säilyttäen sekä säännöstellyllä vapautumisnopeudella näiden terapeutit) tisissa pitoisuuksissa. Vapautumisnopeutta muuttavan aineen konsentraatio esimerkiksi siinä orgaanisessa liuottimessa tai ensimmäisessä vesipitoisessa komponentissa, johon se on lisätty, on noin 0,1 mM - noin 0,5 M ja edullisesti noin 10 mM - noin 200 mM.

15 Lipidifaasin liuottimina voidaan käyttää monia eri tyyppisiä haihtuvia hydrofobisia liuottimia, kuten eette-reitä, hiilivetyjä, halogenoituja hiilivetyjä tai freoneja. Sopivia aineita ovat esimerkiksi dietyylieetteri, isopro-pyylieetteri ja muut eetterit, kloroformi, tetrahydrofuraa-2 0 ni, halogenoidut eetterit, esterit ja näiden aineiden yhdistelmät .

Jotta liuotinpallosten tarttuminen toisiinsa ja as-!* tian seinämiin saataisiin estettyä, on edullista, että pal- » * i t losiin lisätään vähintään 1-prosenttisessa moolisuhteessa .·. 25 nettovaraukseltaan negatiivista amfipaattista lipidiä, että « * .,·, toisen vesipitoisen suspendointiliuoksen ionivahvuus on erittäin pieni ja että happoa käytettäessä toiseen vesipitoiseen liuokseen lisätään sellainen määrä happoa neutraloivaa ainetta, että sen konsentraatioksi tulee noin ί 30 0,1 mM - 0,5 M, minkä tarkoituksena on estää liuotinpallos- ten yhteensulautuminen, mikä synnyttäisi järjestäytymätöntä ‘ vaahtoa. Vesipitoisessa suspendointiliuoksessa voidaan vaihtoehtoisesti käyttää lisäksi yhtä tai useampaa ionittu-• matonta osmoottista ainetta, kuten trehaloosia, glukoosia : '* 35 tai sakkaroosia, minkä tarkoituksena on pitää membraani- 115823 8 vesikkelien sisäinen ja ulkoinen osmoottinen paine tasapainossa .

Synteettisten membraanivesikkeleiden valmistukseen voidaan käyttää monia erityyppisiä lipidejä ja ainoat kaksi 5 vaatimusta ovat, että käytetään yhtä nettovaraukseltaan negatiivista amfipaattista lipidiä sekä neutraalia lipidiä. Neutraaleja lipidejä ovat esimerkiksi trioleiini, triok-tanoiini, kasviöljy, kuten soijaöljy, sianihra, naudanras-va, tokoferoli tai näiden aineiden yhdistelmät. Nettovara-10 ukseltaan negatiivisia amfipaattisia lipidejä ovat esimerkiksi kardiolipiini, fosfatidyyliseriinit, fosfatidyyligly-serolit ja fosfatidiinihapot.

Toinen vesipitoinen komponentti on vesipitoinen liuos, johon on liuenneena pieni-ionivahvuuksisia aineita, 15 kuten hiilihydraatteja, kuten glukoosia, sakkaroosia, laktoosia ja aminohappoja, kuten lysiiniä, vapaata histi-diiniemästä tai näiden aineiden yhdistelmiä.

Synteettisiin membraanivesikkeleihin voidaan kapseloimalla lisätä useita sekä luonteeltaan erilaisia biologi-20 siä aineita ja terapeuttisia aineita.

Termi "terapeuttinen aine" tarkoittaa tässä keksin-V,: nössä sen mukaisten koostumusten kyseessä ollessa sitä kui- ·!* tenkaan rajoittamatta lääkeaineita, radioaktiivisia iso- tooppeja ja immunomodulaattoreita. Näitä vastaavat aineet j 25 ovat tunnettuja tai niiden laatu on tämän alan ammattikoke-.,·. muksen perusteella vaikeuksitta tunnistettavissa. Voi 1 t · _·!’ esiintyä tiettyjä terapeuttisen aineen ja tietyntyyppisen synteettisen membraanivesikkelin yhdistelmiä, jotka ovat muita paremmin yhteensopivia keskenään. Synteettisten mem-:· 30 braanivesikkelien valmistusmenetelmä esimerkiksi saattaa ,,· olla epäyhteensopiva sen suhteen, että proteiinipitoinen terapeuttinen aine pysyisi jatkuvasti biologisesti aktiivi- 1 » * sena. Koska olosuhteet, jotka tekevät tietyn terapeuttisen • i aineen ja tietyn dispersiojärjestelmän yhdistelmän yhteen-'> “ 35 sopimattomaksi tai jotka voidaan vaivatta selvittää, ovat 1 1 5823 9 tunnettuja, niin tällaiset ongelmat voidaan välttää jokapäiväisten toimenpiteiden avulla.

Lääkeaineisiin, joita voidaan lisätä dispersiojär-jestelmään terapeuttisina aineina, kuuluvat ei-proteii-5 nipitoiset ja proteiinipitoiset lääkeaineet. Termi "ei-proteiinipitoiset lääkeaineet" tarkoittaa yhdisteitä, joita perinteisesti nimitetään lääkeaineiksi ja joita ovat mito-mysiini C, daunorubisiini, vinblastiini, AZT ja hormonit. Erityisen kiinnostuksen kohteina ovat solusyklispesifiset 10 antitumoraaliset lääkeaineet, kuten sytarabiini, metotrek-saatti, 5 - fluorourasiili (5-FU), floksuridiini (FUDR), bleomysiini, 6-merkaptopuriini, 6-tioguaniini, fludara-biinifosfaatti, vinkristiini ja vinblastiini.

Synteettisiin membraanivesikkeleihin liitettäviä 15 proteiinipitoisia materiaaleja ovat DNA, RNA, erityyppiset proteiinit, ihmisissä tehokkaat yhdistelmä-DNA-menetelmillä valmistetut proteiinihormonit, hematopoieettiset kasvutekijät, monokiinit, lymfokiinit, tuumorinekroositekijä, inhi-biini, tuumorikasvutekijä alfa ja -beeta, Mullerin tiehyitä 20 surkastuttava peptidi, hermokasvutekijä, fibroblastikasvu-tekijä, verihiutalekasvutekijä, aivolisäkkeen ja hypofyysin hormonit, kuten LH, ja muut vapauttajahormonit, kalsitonii-*!* ni, rokotteessa immunogeeneinä toimivat proteiinit ja DNA- sekä RNA-sekvenssit.

: 25 Seuraavaksi esitetyssä taulukossa 1 on esitetty ,,·. luettelo edustavista ihmisillä vaikuttavista biologisesti ‘ t aktiivisista aineista, joita voidaan kapseloida synteetti-siin membraanivesikkeleihin tämän keksinnön mukaisen vapau-tumisnopeutta muuttavan aineen läsnä ollessa, ja siinä on ; '· 30 esitetty myös luettelo maatalouskäytössä vaikuttavista bio- logisesti aktiivisista aineista.

I j t 10 1 1 5823

Taulukko 1 5

Astmalääkkeet Rytmihäiriölääkkeet Rauhoittavat lääkkeet metaproterenoli propanololi klorpromatsiim aminofylliim atenololi bentsodiatsepiini teofylliini verapamil li butyrofenonit 10 terbutaliini hydroksitsiinit norepinefriini Rintakipulääkkeet meprobamaatti efedriini isosorbidi di nitraatti fentiatsiinit isoproterenol 1 tioksanteenit adrenaliini 15

Sydänglykosidit Hormonit Steroidit digitalis tyroksiini prednisoni digitoksiim kortikosteroidit triamkinoloni lanatosidi C testosteroni hydrokortisoni 2 0 digoksiim estrogeeni deksametasom progesteroni betametasom mi neralokortikoi di t predni soioni

Verenpainelääkkeet Diabeteslääkkeet Antihistamiinit apresoliim klorpropanioli pyribentsamiini atenololi insuliini difenhydramiini klorfem rämiini 25 kaptopriili reserpnm

Loislääkkeet Syöpälääkkeet pratsikvanteli atsatiopriini Sedatiivit ja kipulääkkeet metronidatsoli bleomysiini morfiini 30 pentamidiim syklofosfamidi hydromorfini ivermektiini vinkristiini kodeiini , J. synteettiset aineet metotreksaatti kodeiinin kaltaiset aineet ...I 6-TG meperidiini

Nukleiinihapot ja niiden analogit 6-MP oksimorfom 3 5 DNA vinblastiini fenobarbitaali J RNA VP-16 barbituraatit '1 metyylifosfonaatit ja niiden analogit VM-26 fentanyyli , Antisense-nukleiinihapot kisplatiini ketorolaakki

5-FU

, ‘ . FUDR

’ fludarabnm fosfaatti 115823 11

Antibiootit Immunomodulaattorit Vasopressorit penisilliini interferoni dopamiini tetrasykliini interleukiim-2 dekstroamfetamiini ani kasiini gammaglobuliini 5 erytromysiini monoklonaaliset vasta-aineet Viruslääkkeet kefalotiini asikloviiri ja sen johdannaiset imipeneemi Sienilääkkeet gansikloviiri ja sen fosfaatit kefotaksi i mi amfoterisnm B dioksaril karbenisilliini mykonatsoli ribaviriini 10 keftatsidiimi muramyyli di peptidi rimantadiini/amantadiini kanamysiim klotrimatsoli atsidotymidiim ja sen johdannaiset tobramysiini ketokonotsoli adeniiniarabinosidi ampisilliini flukonatsoli amidiini-tyyppiset proteaasi-inhi- gentamysiini itrakonatsoli biittorit 15 kefoksitiini kefadroksiili kefatsoliini 20 muut aminoglykosidit amoksi silliini moksalaktaami piperäsi 11i i ni 25 vankomysiini siprofloksasiini muut kinolonit

Rokotteet 3 0 rokotteina käyttävät muut yhdistelmärokotteet, tapetut ja elävät rokotteet ja antigeeniset mate riaalit allergioiden hoitoon tarkoitettu antigeeninen materiaali influenssa respiratory syncytial -virus 35 HIV-rokote

Hemophilus influenza -rokotteet hepatiitti-A,B,C -rokotteet sikotauti vihurirokko ,4 0 tuhkarokko •'·’ tetanus malariarokotteet ,.,; herpes ,., syöpärokotteet I 4 5 anti-leu-3a-rokote ·’· · Monoklonaaliset vasta-aineet (humaani- ja muriinivasta-aineet sekä muista lajeista peräisin olevat ’· '1 vasta-aineet ja/tai yhdistelmä-vasta-aineet ja/tai näiden fuusiot ja/tai fragmentit) , · OKT3 ·,; · 50 0KT4

.!I HA-IA

I ; ; Karsinoembryonaalista antigeeniä vastaan suunnatut vasta-aineet ’ Gangliosidejä vastaan suunnatut vasta-aineet: Anti-GD2, anti-GM2, anti-GD3, anti-GM3

Virtsateihin liittyvää antigeeniä vastaan suunnatut vasta-aineet 55 anti-Il-2-reseptori ; · kimeerinen anti-Leu-2 ! I anti-Leu-2 kimeerinen anti-Leu-3a ; ; kimeerinen L6 '«’ 6 0 Mab-L6 , \ radioaktiivisella leimalla varustettu L6 ; ;’· Centorex ·· · Centoxin ,'·*, Panorex®

65 anti-LPS

. immunotoksiini anti-tuumorinekroositeki jä ; *· anti-pseudomonas , anti-tuumorinekroositekijä 12 1 1 5 823

OncoRad 103®

OncoScint CR103®

OncoScint OV103®

OncoScint PR356® 5 OncoTher 130® KS 1/4-DAVLB ADCC agent humaani -B-soluLymfoomia vastaan suunnatut hi iren monoklonaaliset (anti - idiotyyppiset) vasta-aineet 10 monoklonaalinen muriinivasta vasta-aine (anti-idiotyyppinen vasta-aine)(lMelpgl), joka on suunnat tu melanoomaan liittyvää antigeeniä vastaan suunnattua muninivasta-ainetta vastaan

anti-B4-estetty-risiini anti-My9-estetty-risi ini 15 ImmuRaid-CEA

kolorektaali-, munasarja- ja keuhkosyöpiä vastaan suunnatut MAb:t rhenium-186-Mab

Orthoclone OKT® E 5 7™ 2 0 LYM-1

TNT

XomaZyme®-791 XomaZyme®-CD5 Plus XomaZyme®-CD7 Plus 2 5 XomaZyme®-Mel

Herbisidit triatsi ini klooriasetamidi 3 0 syanatsiini bentatsoni

Roundup®

Rodeo® butakloori 3 5 cnp klometoksini ili simetri ini at ratsi ini alakloori 4 0 syanatsiini metolakloori metributsi ini fenoksiherbisidi t: 2,4-D[(2,4-dikloori fenoksi)etikkahappo], 2,4-D-ami ini(2,4-dikloorifenoksietik-kahappodimetyyliami ini), 2,4-D-iso-oktyyli(2,4-dikloori fenoksi etikkahappoiso-oktyyliesteri), 45 2,4,5-T-ami ini(2,4,5-tri kloori fenoksi etikkahappotrimetyyliami ini) ,· · muut triatsiiniherbisidit ·_·_· muut klooriasetamidiherbisidit muut fenoksihappoherbisidit **·· 50 Pestisidit abamektiini muut avermektiinit * . atratsiini *'.! lindaani t* 5 5 diklorvossi ; ;’j dimetoaatti ··* uarferiini

ρ,ρ'-DDD Ρ,Ρ'-DDE 6 0 HCH

DMDT aldriini dieldri ini • l aldicarb

'* 6 5 EDB

' DCP

' DBCP

simatsiini J · ...

. ,; j syanatsi im ,,,* 70 Bacillus thuringiensis -toksiini ; ; Bacillus thuringiensis var. kurstaki '·* bis(tri-n-butyylitina)oksidi (ΤΒΤ0) muut orgaanisia klooriyhdisteitä sisältävät pestisidit : 75 i3 1 1 5 8 23

Proteiinit ja glykoproteiinit lymfokiinit

interleukins - 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11. sytoki init 5 GH-CSF

M-CSF G-CSF

tuumori nekroos i teki j ä inhibi ini 10 tuumorikasvutekijä

Miillerin tiehyitä surkastuttava peptidi hermokasvutekijä fibroblastikasvuteki jä verihiutalekasvuteki jä 15 hyytymistekijät (esimerkiksi VIII, IX, VII) insuli ini kudosplasminogeeni akti vaattor i h i stokonpat ibili teetti ant i geeni onkogeeni tuotteet 20 emäksinen myeli ini proteiini koilageeni fibronekti ini lamini ini muut yhdistelmä-DNA-menetelmillä valmistetut proteiinit 2 5 eryt ropo i et i i n i IL-3/GM-CSF -fuusioproteiinit monoklonaaliset vasta-aineet polyktonaaliset vasta-aineet vasta-aine - toksiini-fuusioproteiinit 3 0 vasta-aine - radionuklide-konjugaatti interferonit fragmentit ja peptidianalogit, ja proteiinien, peptidien ja glykoproteiinien fragmenttien analogit.

epidermikasvuteki jä 3 5 CD4-reseptori ja muut yhdistelmä-reseptorit muut luonnosta eristetyt proteiinit antidiureettinen hormoni oksitosi ini adrenokortikotropi inihormoni 4 0 kaisi töniini follikkelia stimuloiva hormoni luteinisoivaa hormonia vapauttava hormoni luteinisoiva hormoni gonadotropi i ni 4 5 transformoivat kasvutekijät • streptokinaasi . . I ihmisen kasvuhormoni | muiden lajien, mukaan luettuna: ·· 1. sian, ·’** 50 2. naudan, ,* *‘. 3. kanan, 4. lampaan, . . 5. kalan, somatotropiinit, mainittuihin kuitenkaan rajoittumatta ! ihmisen ja monien erilaisten eläinlajien kasvuhormonia vapauttavat hormonit 1 ’ 55 glukagoni ; ;’· desmopressiini ' ·ί." tyroksiinia vapauttava hormone , '; tyroksi ini * · sekretiini 60 magainiinit integri ini t adheesiopeptidit, mukaan luettuna, mainittuihin kuitenkaan rajoittumatta, peptidit, joissa on arginiini-glutamiini-asparagiinihapposekvuenssi I 1 superoksididismutaasi 65 defensiinit T-solureseptorit bradykiniiniantagonistit • pentigeti di * 1 T-peptidi j.'.* 70 anti-inf lammi init ; ; MHC:n (Major Histocompatibility complex) komponentit ja MHC:tä vastaan suunnatut peptidit ·>· proteaasi-inhibiittorit .lypressiini ; · busereliinii • “ 75 leuprolidi 14 1 1 582 3 nafareliini, desloreli ini gosereli ini historeliini 5 triptoreliini LHRH-antagonistit, HOE-2013 Detirelix 0rg-30850 10 0RF-21243 angiotensiinikonvertaasia inhiboiva peptidi reniiniä inhiboivat peptidit ebiratidi (HOE-427)

OGAVP

15 opiaattireseptorin agonistit ja antagonistit, mukaan luettuna, mainittuihin kuitenkaan rajoittu matta: 1. enkefaliinit 2. endorfiinit E-2078

2 0 DPDPE

vasoaktiivinen intestinaa linen peptidi sydänperäinen natriureettinen hormoni aivoperäinen natriureettinen peptidi sydänpeptidin puhdistumaa inhiboivat aineet 25 hirudiini onkogeeni-inhibi i ttorit muut pesäkkeitä stimuloivat tekijät

Hermoston välittäjäaineet Radionuklidit Röntgenvarjoaineet 3 0 Dopamiini teknetium gadoliniumkelaatit adrenaliini noradrenalliini indium ioheksoli asetyylikoliini yttrium etiodoli gamma-aminovoihappo gallium iodeksinoli 3 5 Muut solun pinnan reseptorien estäjät

Termi "terapeuttisesti tehokas" tarkoittaa tämän keksinnön mukaisten koostumusten yhteydessä sitä, että te-40 rapeuttista ainetta on vesikkeleiden sisällä olevassa ve- sipitoisessa faasissa riittävän suurena pitoisuutena, jot-ta saadaan aikaan se tietty lääketieteellinen vaikutus, a johon terapeuttinen aine on tarkoitettu. Haluttuja saavu-tettavia lääketieteellisiä vaikutuksia ovat tätä keksintöä 1 » t '* ’ 45 rajoittamatta esimerkiksi kemoterapia, antibioottiterapia '.f ja aineenvaihdunnan säätely. Tarkat annokset vaihtelevat V · sellaisten tekijöiden, kuten tietyn terapeuttisen aineen ja halutun lääketieteellisen vaikutuksen mukaan, sekä potilaasta riippuvaisten tekijöiden, kuten iän, sukupuolen, 50 yleiskunnon ja näitä vastaavien seikkojen mukaan. Alan ammattikokemuksen perusteella nämä tekijät voidaan vaivatta ottaa huomioon ja niiden perusteella voidaan selvittää te-···* hokkaat terapeuttiset pitoisuudet turhiin kokeiluihin tur- vautumatta.

115823 15

Yleensä ihmiselle soveltuvassa käytössä annos kuitenkin vaihtelee välillä 0,1 - 6 000 mg ruumiin pinta-alan neliömetriä kohti. Joissakin sovellutuksissa, kuten ihonalaisessa annostelussa, tarvittava annos saattaa olla 5 melko pieni, mutta toisissa sovelluksissa, kuten intraperi-toneaalisessa annostelussa, käytettäväksi haluttu annos saattaa olle erittäin suuri. Vaikka onkin mahdollista antaa edellä esitetystä annosvälistä poikkeavia annoksia, niin käytännöllisesti katsoen kaikkien biologisesti aktiivisten 10 aineiden käyttöannokset kuuluvat tälle alueelle.

Synteettisiä membraanivesikkeleitä voidaan annostella terapeuttisissa sovellutuksissa minkä tahansa halutun annostelutien kautta; esimerkiksi intramuskulaarisesti, in-tratekaalisesti, intraperitoneaalisesti, subkutaanisti, 15 suonensisäisesti, intralymfaattisesti, oraalisesti ja lima-kalvonalaisesti, monien erityyppisten epiteelien alle, mukaan luettuna bronkialaarinen epiteeli, gastrointestinaali-nen epiteeli, urogenitaaliepiteeli ja monet erilaiset elimistön limakalvot.

20 Tämän keksinnön mukaisesti saatuja synteettisiä mem braanivesikkeleitä voidaan lisäksi käyttää maataloussovel-V/ lutuksissa käyttökelpoisten yhdisteiden, kuten lannoittei- ··· den, tuholaismyrkyjen ja näitä vastaavien aineiden, kapse- » * ♦ * loimiseen. Maataloudessa käytettynä synteettiset membraani- : 25 vesikkelit voidaan sumuttaa tai levittää sille maaperän • « · > · . ,·. alueelle, jolle kasvit kasvavat, ja vesikkelien sisältämä * » .ji maataloudessa tehokas yhdiste vapautuu sateen ja keinokas- teluveden vaikutuksesta. Hitaasti vapauttavat vesikkelit voidaan vaihtoehtoisesti sekoittaa kasveille ja viljalle : *· 30 levitettävään keinokasteluveteen. Alan ammattikokemuksen .,· perusteella on mahdollista valita tehokas määrä maatalous- sovellutuksessa käyttökelpoista yhdistettä tietyn halutun päämäärän, kuten tuholaisten tappamisen, kasvien hoitamisen • ja niin edelleen, saavuttamiseksi.

5 * 115823 16

Synteettisiä membraanivesikkeleitä voidaan muuttaa siten, että niistä saadaan kohde-elimelle tai -solulle spesifisiä esimerkiksi liittämällä ne täsmäannostelujärjestelmään. Tällaiset modifikaatiot saattavat olla erityi-5 sen merkittäviä, silloin kun tämän keksinnön mukaisia synteettisiä membraanivesikkelejä käytetään erittäin toksisten lääkeaineiden annosteluun tai sellaisten lääkeaineiden, kuten taksolin, annosteluun, jotka voivat aiheuttaa vakavia sivuvaikutuksia.

10 Synteettisten membraanivesikkelien ohjaamista koh teeseensa luokitellaan anatomisten ja mekanististen tekijöiden perusteella. Anatomisessa kohdentamisessa synteettinen membraanivesikkeli ohjataan kulkeutumaan spesifiseen elimistön kohtaan esimerkiksi elinspesifisessä, soluspesi-15 fisessä tai organellispesifisessä kohdentamisessa. Meka nistinen kohdennus voidaan jaotella sen perusteella, onko se passiivista vai aktiivista. Passiivisessa kohdentamisessa käytetään hyväksi tämän keksinnön mukaisten synteettisten membraanivesikkelien luonnollista taipumusta jakau-20 tua retikuloendoteliaalisen järjestelmän (RES) soluihin elimissä, joissa on kapillaarisinuksia. Toisaalta aktiivi-sessa kohdennuksessa synteettinen membraanivesikkeli lii-tetään kohdennettuun jakelujärjestelmään kytkemällä se ’.'il spesifiseen ligandiin, kuten monoklonaaliseen vasta-ainee- ;·** 25 seen, sokeriin, glykolipidiin tai proteiiniin, tai muutta- * * t ’* ’*· maila synteettisten membraanivesikkelien koostumusta tai V.' kokoa, minkä tarkoituksena on saada ne kohdentumaan muihin V ’ elimiin tai solutyyppeihin kuin mihin ne luonnollisesti paikantuisivat [tätä on käsitelty esimerkiksi teoksessa 30 Remington's Pharmaceutical Sciences, Gannaro, A.R., toim., * »

Mack Publishing, 18. Edition (1990) s. 1692 - 1693] .

Yleensä synteettisten membraanivesikkelien pintaan kiinnitettävät yhdisteet ovat ligandeja ja reseptoreja, **·’ jotka mahdollistavat sen, että dispersiojärjestelmä pystyy 35 aktiivisesti "hakeutumaan" haluttuun kudokseen. Ligandi * * 17 11££23 voi olla mikä tahansa haluttu toiseen reseptoriksi nimitettyyn yhdisteeseen spesifisesti sillä tavoin sitoutuva yhdiste, että ligandi ja reseptori muodostavat homologisen parin.

5 Kohdennetun annostelujärjestelmän pintaa voidaan muuntaa useilla eri tavoilla. Synteettisten membraani-vesikkelien lipidikaksoiskerrokseen voidaan esimerkiksi liittää lipidiryhmiä, minkä tarkoituksena on pitää kohdentava ligandi assosioituneena stabiilisti lipidikaksoisker-10 rokseen. Lipidiketjujen liittämiseen kohdentavaan ligan-diin voidaan käyttää monia erilaisia liitosryhmiä [Manni-no, et ai., Bio Techniques 6(7) (1988) 682], Synteettisten membraanivesikkelien pinnalle kiinnitetyt yhdisteet voivat vaihdella pienistä hapteeneista, joiden molekyylipaino on 15 noin 125 - 200 Daltonia, paljon näitä suurempiin antigee-neihin, joiden molekyylipainot ovat vähintään 6000 Daltonia mutta ne ovat molekyylipainoltaan yleensä alle 1 miljoona Daltonia. Erityisen kiinnostuksen kohteena ovat pro-teiinipitoiset ligandit ja reseptorit.

20 Spesifisiin efektorimolekyyleihin sitoutuvia pinta- membraaniproteiineja nimitetään yleensä reseptoreiksi.

. . Tässä keksinnössä edulliset reseptorit ovat vasta-aineita.

) Nämä vasta-aineet voivat olla monoklonaalisia tai polyklo- » ♦ t ') J naalisia ja ne voivat olla niiden fragmentteja, kuten Fab, ‘ 25 F(ab')2 ja Fv, jotka kykenevät sitoutumaan epitooppideter- > · * * · *. minanttiin. Menetelmät proteiinien, kuten vasta-aineiden, kiinnittämiseksi synteettisiin membraanivesikkeleihin ovat > : hyvin tunnettuja (tätä on käsitelty esimerkiksi julkai suissa US 4 806 466 ja US 4 857 735, jotka on liitetty tä-·'; 30 hän keksintöön siihen oikeuttavien säännösten nojalla) .

”, Vasta-aineita voidaan käyttää synteettisten memb- » raanivesikkelien kohdentamiseen spesifisiin solun pinnan 5 : ligandeihin. Esimerkiksi tiettyjä spesifisesti tuumoriso- ,,,* lujen pinnalla ilmentyviä antigeenejä, joita nimitetään t *. ( 35 tuumoreihin liittyviksi antigeeneiksi (TAA-molekyyleiksi), 115823 18 voidaan käyttää hyväksi vasta-aineita sisältävien synteettisten membraanivesikkelien kohdentamiseksi suoraan malig-neja tuumoreita vastaan. Koska synteettisiin membraanive-sikkeleihin liitetty koostumus ei mahdollisesti kykene 5 erottelemaan toimiessaan eri solutyyppejä, tarjoavat kohdennetut synteettiset membraanivesikkelit käyttöön merkittävän parannuksen verrattuna siihen, että satunnaisesti injektoidaan epäspesifisiä synteettisiä membraanivesikke-leitä. Polyklonaaliset tai monoklonaaliset vasta-aineet 10 voidaan kiinnittää kovalenttisesti synteettisten membraanivesikkelien kaksoiskerrokseen monilla menetelmillä. Vasta-aineilla kohdennetut synteettiset membraanivesikkelit voivat sisältää monoklonaalisia tai polyklonaalisia vasta-aineita tai niiden fragmentteja, kuten Fab tai F(ab')2, 15 kunhan ne sitoutuvat tehokkaasti kohdesolujen antigeeniseen epitooppiin. Synteettiset membraanivesikkelit voidaan myös kohdentaa soluihin, jotka ilmentävät hormonien tai muiden seerumitekijöiden reseptoreita [Malone, et ai., Proc. Nat'1. Acad. Sei USA 86 (1989) 6077; Gregoriadis, 20 Immunology Today 11(3) (1990) 89; kumpikin julkaisu on liitetty tähän keksintöön siihen oikeuttavien säännösten .V. nojalla] .

Seuraavissa esimerkeissä on valaistu tämän keksin-non käyttötapaa. On kuitenkin selvää, että nämä esimerkit * * 25 on tarkoitettu ainoastaan tätä keksintöä valaiseviksi eikä * * · ‘ _· tämän keksinnön ole katsottava rajoittuvan mihinkään nils'll*' sä mainittuihin spesifisiin materiaaleihin tai olosuhtei- V · siin.

Esimerkki 1 :,· ; 30 Vaihe 1) Puhtaaseen lasisylinteriin (sisäläpimitta ; 2,5 cm, korkeus 10,0 cm) pipetoitiin 5 ml liuosta, jonka . \ koostumus oli 46,5 μιηοΐ dioleyylifosfatidyylikoliinia, \\V 10,5 μχηοΐ dipalmitoyylifosfatidyyliglyserolia, 75 μτηοΐ ko- lesterolia, 9,0 μιηοΐ trioleiinia ja joka oli tehty kloro-: 35 formiin (lipidifaasi) .

115823 19

Vaihe 2) Edellä mainittuun lipidifaasin sisältävään lasisylinteriin lisätään viisi millilitraa vesifaasia, joka sisältää sytarabiinia (20 mg/ml) liuotettuna 0,136 N perkloorihappoon, joka on vapautumisnopeutta muuttava ai-5 ne. Vesipitoisen liuoksen osmolaarisuus on noin 274 ± 20 mOs/kg. Muiden vapautumisnopeutta muuttavien aineiden, nimittäin typpihapon, muurahaishapon, rikkihapon, fosforiha-pon, etikkahapon, trikloorietikkahapon ja trifluorietikka-hapon, kyseessä ollessa valmistettiin 20 mg/ml sytarabii-10 nia sisältäviä liuoksia, mistä saatiin vesipitoisia liuoksia, jotka ovat lähes isotonisia lopullisen varastointi-liuoksen, nimittäin tavallisen fysiologisen suolaliuoksen (0,9-%:inen natriumkloridi), kanssa.

Vaihe 3) Vesi-öljy-emulsion valmistamiseen käytet-15 tiin homogenisaattoria (AutoHomoMixer, Model M, Tokushu Kika, Osaka, Japan) sekoittamalla 8 minuutin ajan nopeudella 9 000 kierrosta minuutissa.

Vaihe 4) Veteen suspendoitujen kloroformipallosten valmistamiseksi kerrostettiin vesi-öljy-emulsion pinnalle 20 20 ml liuosta, joka sisälsi 4 % glukoosia ja 40 mM lysii- niä, minkä jälkeen seosta sekoitettiin kloroformipallosten muodostamiseksi nopeudella 4 000 kierrosta minuutissa.

Vaihe 5) Lasisylinterissä oleva kloroformipallo- * suspensio johdettiin sellaisen 1 000 ml:n Erlenmeyer-pul-25 lon pohjalle, joka sisälsi 30 ml vettä, glukoosia (3,5 g/ ’· ’* 100 ml) ja vapaata lysiiniemästä (40 mM) . Pullon läpi joh- dettiin hitaasti typpikaasuvirta virtausnopeudella 7 1/min V * kloroformin haihduttamiseksi hitaasti 20 minuutin aikana 37 °C:ssa. Pulloon lisättiin 60 ml tavallista fysiologista i : 30 suolaliuosta (0,9-%:ista natriumkloridia) . Tämän jälkeen synteettiset membraanivesikkelit eristettiin sentrifugoi-. \ maila 600 x g:n voimalla 10 minuutin ajan. Supernatantti dekantoitiin ja nappi suspendoitiin 50 ml:aan tavallista **··* fysiologista suolaliuosta. Nappi suspendoitiin uudelleen 35 fysiologiseen suolaliuokseen, mistä lopulliseksi konsent- 20 1 1 5823 raatioksi saatiin 10 mg sytarabiinia ml:ssa suspensiota.

Tästä saatujen synteettisten membraanivesikkelipar-tikkelien keskimääräinen pituudella painotettu keskiläpi-mitta vaihtelee välillä 12 - 16 /xm. Vesikkeleihin jääneen 5 sytarabiinin osuus on esitetty taulukossa 2. Erilaisten vapautumisnopeutta muuttavien aineiden käyttö vaikutti huomattavasti sytarabiinin vapautumisnopeuteen humaani-plasmassa inkuboiduista synteettisistä membraanivesikke-leistä. Kuviossa 1 on esitetty humaaniplasmassa 37 °C:ssa 10 suoritetun inkuboinnin jälkeen synteettisiin membraani-vesikkeleihin jääneen sytarabiinin osuus inkubaatioajan funktiona. Taulukossa 2 on esitetty lääkeaineen vapautumisen puoliintumisaika, joka on laskettu olettaen, että kuviossa 1 esitettyjä koetuloksia voidaan kuvata yksiekspo-15 nenttisella mallilla. Taulukossa 2 esitetyt koetulokset ovat kolmesta kokeesta saatuja keskiarvoja ja standardi-poikkeamia .

1 1 5823 21

Taulukko 2

Sytarabiinin

Sytarabii- vapautumisen Kuviossa 1 nin pidät- puoliintumis- käytetty

Happo tymis-% aika päivinä symboli 5 Suolahappo 49+5 65,7±4,4 ♦

Perkloorihappo 45±5 37,2+8,0 ▼

Typpihappo 44+3 54,5±5,7

Fosforihappo 72 ±1 6,5±0,2 ▲

Muurahaishappo 37+2 5,6±0,2 0 jLo Trikloori- 29 ±1 5,5 + 0,6 v etikkahappo

Et ikkahappo 30±2 4,8±0,5 □

Trifluori- 35+1 3,4+0,4 δ etikkahappo

^5 Rikkihappo 57 ±4 1,6 ± 0,5 O

Oli yllättävää ja odottamatonta, että hapon luonne vaikutti niin paljon sytarabiinin vapautumisnopeuksiin hu-20 maaniplasmassa. Yhdenarvoisia epäorgaanisia happoja, ni-*·'.* mittäin suolahappoa, typpihappoa ja perkloorihappoa, käyt- tämällä saatiin pienin sytarabiinin vapautumisnopeus. Kah-' : denarvoisilla ja kolmenarvoisilla hapoilla, eli rikkiha- polla ja fosforihapolla, saatiin suuret vapautumisnopeu-; 25 det. Orgaanisilla hapoilla, muurahaishapolla, etikkahapol- la, trifluorietikkahapolla ja trikloorietikkahapolla, saa- * · i tiin myös suuret vapautumisnopeudet.

Tästä patenttiselityksestä saadaan siis käyttöön « * "depot"-valmisteita, joilla on paljon sovellutuksia ja ;·’ 30 käyttökohteita ja joihin on kapseloitu biologisesti aktii- : : visia aineita suhteellisen suuria määriä, joiden avulla kohde on käsiteltävissä tai annostelu on suoritettavissa pitkän ajan kuluessa näiden aineiden terapeuttisilla pi- 22 1Ί ES23 pitkän ajan kuluessa näiden aineiden terapeuttisilla pitoisuuksilla optimaalisten tulosten aikaansaamiseksi ja aineen vapautumisnopeutta säännöstellään muuttamalla for-mulaatiossa käytetyn hapon tyyppiä.

5 Tästä syystä tämä keksintö sopii hyvin näiden pää määrien ja tavoitteiden saavuttamiseen ja sitä voidaan muokata näihin tarkoituksiin ja se on ominaisuuksiltaan ja eduiltaan tässä keksinnössä esitettyjen seikkojen sekä muiden sille ominaisten piirteiden mukainen.

10 Vaikka tämän keksinnön kuvaamiseksi on esitetty sen tämänhetkisiä edullisia sovellutusmuotoja, niin niihin voidaan tehdä muutoksia, jotka ovat tämän keksinnön hengen mukaisia ja jotka kuuluvat liitteenä olevien patenttivaatimusten rajoittamaan suojapiiriin.

Claims (18)

115823

1. Menetelmä synteettisten membraanivesikkelien valmistamiseksi, tunnettu siitä, että menetelmä kä- 5 sittää vaiheet, joissa: (a) muodostetaan kahdesta toisiinsa sekoittumatto-masta komponentista vesi-öljy-emulsio, joka sisältää vähintään yhtä orgaanista liuotinta, vettä, vähintään yhtä biologisesti aktiivista ainetta ja vähintään yhtä hydrohalo- 10 genideihin kuulumatonta vapautumisnopeutta muuttavaa ainetta; (b) dispergoidaan vesi-öljy-emulsio vesipitoiseen komponenttiin, jolloin muodostuu liuotinpallosia; ja (c) poistetaan liuotinpallosista orgaaninen liuotin, 15 jolloin muodostuu synteettisiä membraanivesikkeleitä, jotka sisältävät vesipitoisia pisaroita, joihin on liuenneena biologisesti aktiivista ainetta ja vapautumisnopeutta muuttavaa ainetta.

2. Patenttivaatimuksen 1 mukainen menetelmä, 20 tunnettu siitä, että hydrohalogenideihin kuulumattoman vapautumisnopeutta muuttavan aineen konsentraatio on .* : : noin 0,1 mM - 0,5 M. t y

*;· 3. Patenttivaatimuksen 1 mukainen menetelmä, tunnettu siitä, että vaiheen (b) aikana lisätään ,*, : 25 sellainen määrä happoa neutraloivaa ainetta, että sen pi- . ’ toisuudeksi tulee noin 0,1 mM - 0,5 M.

4. Patenttivaatimuksen 1 mukainen menetelmä, » i · ’ tunnettu siitä, että orgaaninen liuotin sisältää siihen liuotettua lipidikomponenttia, joka sisältää vähin- .; 3 0 tään yhtä nettovaraukseltaan negatiivista, amf ipaattista .lipidiä ja vähintään yhtä neutraalia lipidiä.

.·, 5. Patenttivaatimuksen 4 mukainen menetelmä, tunnettu siitä, että lipidikomponentti on fosfoli- > t pidi, kuten fosfatidyylikoliini, kardiolipiini, fosfatidyy- ; ’>· 35 lietanoliamiini, sfingomyeliini, lysofosfatidyylikoliini, 11E823 fosfatidyyliseriini, fosfatidyyli-inositoli, fosfatidyyli-glyseroli tai fosfatidihappo tai fosfolipidien seos.

6. Patenttivaatimuksen 5 mukainen menetelmä, tunnettu siitä, että vähintään yhdellä fosfolipi- 5 deistä on vähintään yksi negatiivinen nettovaraus.

7. Patenttivaatimuksen 5 mukainen menetelmä, tunnettu siitä, että fosfolipidi lisätään kolesterolin tai stearyyliamiinin kanssa valmistettuna seoksena.

8. Patenttivaatimuksen 4 mukainen menetelmä, 10 tunnettu siitä, että lipofiilinen, biologisesti aktiivinen materiaali lisätään lipidikomponentin kanssa valmistettuna seoksena.

9. Patenttivaatimuksen 4 mukainen menetelmä, tunnettu siitä, että neutraali lipidi on trioleii- 15 ni, trioktanoiini, kasviöljy, sianihra, naudanrasva, toko-feroli tai näiden aineiden yhdistelmä.

10. Patenttivaatimuksen 1 mukainen menetelmä, tunnettu siitä, että orgaaninen liuotin on eetteri, hiilivety, halogenoitu hiilivety, halogenoitu eetteri, es- 20 teri tai näiden yhdistelmä.

11. Patenttivaatimuksen 1 mukainen menetelmä, ,V: tunnettu siitä, että biologisesti aktiivinen aine on hydrofiilinen.

,···. 12. Patenttivaatimuksen 1 mukainen menetelmä, 25 tunnettu siitä, että emulsio muodostetaan menetelmällä, joka on mekaaninen sekoittaminen, ultraäänienergian ;;; käyttö ja suutinsumutus, jolloin synteettisten membraani- ’ vesikkelien keskimääräinen koko ja niiden sisältämien vesi pitoisten kammioiden määrä määräytyvät valitun emulgointi- · 30 menetelmän tyypin, vaikutuksen voimakkuuden ja keston mu- : kaan. ’•f

13. Patenttivaatimuksen 1 mukainen menetelmä, tunnettu siitä, että vapautumisnopeutta muuttava aine on monoproottinen, epäorgaaninen happo ja vesipitoinen i '· 35 komponentti sisältää vähintään yhtä neutraloivaa ainetta. 11E823

14. Patenttivaatimuksen 13 mukainen menetelmä, tunnettu siitä, että neutraloiva aine on vapaa ly-siiniemäs, vapaa histidiiniemäs tai näiden yhdistelmä.

15. Patenttivaatimuksen 13 mukainen menetelmä, 5 tunnettu siitä, että vesipitoinen komponentti on vesipitoinen liuos, joka sisältää liuenneita aineita, jotka ovat hiilihydraatteja, kuten glukoosi, sakkaroosi ja laktoosi, tai aminohappoja, kuten vapaa lysiiniemäs, vapaa histidiiniemäs tai näiden yhdistelmä.

16. Patenttivaatimuksen 1 mukainen menetelmä, tunnettu siitä, että liuotinpalloset muodostetaan menetelmällä, joka on mekaaninen sekoittaminen, ultraääni-energian käyttö, suutinsumutus tai näiden yhdistelmä, jolloin synteettisten membraanivesikkelien keskimääräinen koko 15 määräytyy käytetyn energian tyypin, vaikutusvoimakkuuden ja keston mukaan.

17. Patenttivaatimuksen 1 mukainen menetelmä, tunnettu siitä, että orgaaninen liuotin poistetaan johtamalla kaasua vesipitoisen komponentin ylitse.

18. Patenttivaatimuksen 1 mukainen menetelmä, tunnettu siitä, että biologisesti aktiivinen aine • ' ·' on astmalääke, sydänglykosidi, verenpainelääke, loislääke, ·;· nukleiinihappo tai sen analogi, antibiootti, rokote, rytmi- häiriölääke, rintakipulääke, hormoni, diabeteslääke, syöpä-: 25 lääke, immunomodulaattori, sienilääke, rauhoittava lääke, steroidi, sedatiivi tai kipulääke, vasopressori, viruslää- i · ke, monoklonaalinen vasta-aine, herbisidi, pestisidi, pro- » * teiini tai glykoproteiini, hermoston välittäjäaine, ra-dionuklidi, röntgenvarjoaine tai näiden yhdistelmä. : : 30 » t * 26 1 1 5823