CN115486539A - 具有抗衰老及端粒延长的草药提取物仿生膜及其制备方法 - Google Patents
具有抗衰老及端粒延长的草药提取物仿生膜及其制备方法 Download PDFInfo
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Abstract
本发明公开一种具有抗衰老及端粒延长的草药提取物仿生膜及其制备方法，该具有抗衰老及端粒延长的草药提取物仿生膜包括以下质量百分比的原料：端粒体提取物95～85%、仿生膜0.5～2.5%，其中所述仿生膜为采用如下制备方法制备得到，该制备方法包括一混合步骤，将一膜料加入至一进料装置进行混合，一芯料加入至一进料装置进行混合；一加热步骤，完成该混合步骤后，将该膜料输送至一进料装置，并桶槽装置内进行抽真空及加热，该芯料输送至一进料装置内进行抽真空及加热，藉以去除该膜料及该芯料中残留的空气并进行加热，一融合步骤，完成该加热步骤后，在加热环境下将该膜料与芯料在桶槽装置。
Description
技术领域
本发明属于食品加工技术领域，具体涉及一种具有抗衰老及端粒延长的草药提取物仿生膜及其制备方法。
背景技术
现代人很在乎是否饮食失衡，怕吃得不够营养或过度营养；其实，体内有许多重要机能更需要取得平衡。根据调查，都市人身体机能处在不平衡状态中，导致身体6大系统－内分泌、端粒延长力、新陈代谢、自律神经、消化功能及血液循环紊乱。端粒延长系统的主要功能是保护身体免受于感染，当人体的端粒延长系统出现不平衡或混乱时，人体就会变的相当脆弱，引发疾病的机会就会大增。医学研究显示，人体90％的疾病与端粒延长系统失调有关。端粒延长系统的成员很多，除了白血球以外，T细胞(淋巴球)、B细胞(淋巴球)、自然杀手细胞、巨噬细胞等都是端粒延长系统的重要成员。近年来，随着我国经济的发展，我国居民的膳食组成和构成比也有较大变化，如何选择安全、营养的食品，使老化营养缺乏人群合理的摄入营养，满足端粒延长缺乏人群生长营养需求，变得尤为重要。由于一般仿生膜所用的组成的氧化问题是食品工业中影响产品质量的关键问题，脂肪酸的氧化直接导致端粒延长缺乏人群配方产品品质的下降，对端粒延长缺乏人群的生长和发育将产生严重危害。而仿生膜化草药提取物，使得空气隔离，可以保证端粒延长缺乏人群配方产品的营养质量和食用安全。
端粒(Telomere)是位于细胞染色体末端的结构，是由许多重复核酸片段(在人类为TTAGGG)组成的DNA序列，可避免染色体末端的基因受到破坏或接上其他染色体或基因序列。当端粒短到某种程度后就无法继续保护染色体，细胞也就会进入休眠状态而不再复制。研究人员更发现氧化物质、心理真空度、和破坏核酸的外来因素(如长期曝晒紫外线、抽烟、酗酒等)也会造成端粒缩短，进而加速老化过程。粒线体在肿瘤细胞与正常细胞代谢上的差异性，使靶向粒线体成为目前抗肿瘤药物研究的新热点。以粒线体为靶点的抗肿瘤作用机制，目前主要集中在粒线体中的肿瘤代谢物、粒线体生物合成、粒线体信号通路以及OXPHOS途径等。虽然现阶段已有不少特异性靶向粒线体的小分子化合物被报导，其中很多具有抗肿瘤活性。
端粒体提取物的空间结构主要由小分子成份构成，因此体内分布通常与未结合的抗体相似。端粒体提取物给药后初期的分布主要局限在血管内，中央室的分布容积与血浆容积相似(～50mL·kg-1)，之后扩展到组织间隙中，分布体积约为150～200mL·kg-1。端粒体提取物难以穿过血管上皮细胞，组织分布程度较低，扩散缓慢，在血流量大的组织，如肝、肾、肺、脾和心脏中的分布程度更高。端粒体提取物的分布也同样会受到靶抗原表达和内化速率的影响，通过抗原的非特异性或特异性结合将单一抗体分布到非靶标组织上通常不具有药理作用，但在端粒体提取物中，由于后续会释放小分子物质或其类似物，因此在相同组织中的分布和积累可能会产生具有临床药理作用。
抗体主要通过标靶介质(HER2、Trop-2、ROR1等明显标靶，以及靶向锌离子转运蛋白LIV-1、靶向组织因子TF、靶向叶酸受体FRα、靶向钠依赖性磷酸盐转运蛋白2b(NaPi2b)为目前产品方向)和非特异性摄取进入细胞，并通过蛋白水解从体内清除。与单一抗体不同，ADC的代谢存有独特点，可通过两种不同的途径(解偶联和分解代谢)释放细胞毒性代谢产物。①解偶联:连接符裂解，释放出游离的小分子化疗药物，并保留抗体骨架；②分解代谢:端粒体提取物中的抗体部分蛋白水解为多肽/氨基酸，同时产生游离小分子端粒体提取物，或带有连接符的小分子端粒体提取物，或带有氨基酸－连接符的小分子类似物。对于具有易被酶或化学裂解连接的连接符(如二硫键)的端粒体提取物，通过解偶联过程释放有效成分可能是主要的途径。若以非裂解型连接符，体内代谢途径可能以分解代谢释放游离小分子及其结构类似物为主。例如，采用非裂解型偶联子的单抗，体内代谢会形成带有氨基酸残基和/或连结子的效应分子，血浆中浓度Cmax值远高于游离的端粒体提取物。由端粒体提取物代谢产生的游离小分子化疗药物及其结构类似物在体内会继续进行代谢和生物转化(如通过细胞色素P450酶代谢)进而影响端粒体提取物分解代谢物或其它合并用药的血药浓度，但鉴于端粒体提取物在体内循环系统中缓慢释放出的小分子药物浓度较低，达到缓效释放增长血药浓度及功效。
细胞膜仿生技术是一种仿生复制细胞膜特性的方法，将天然细胞膜特性与人工内芯材料的特性结合起来，从而大大提高生物兼容性，同时在体内实现长效循环和靶向递送。尽管细胞膜包裹的纳米粒具有明显的优势，但在其应用于临床之前还有很多工作要探索。生物膜包括细胞膜、细胞器膜等多种膜类型，仿生膜也是利用生物膜的生物安全性结合其他修饰，将特定的药物包裹后，将药物靶向递送到特定组织，并通过胞吞等作用高效实现药物的胞内递送。将天然细胞膜易位到合成纳米粒子表面的方法可以整合细胞膜表面分子蛋白的各种优点和膜材料的化学特性于一体，赋予仿生纳米载体良好的生物兼容性；将纳米颗粒伪装成自体成分，从而减少免疫系统的的清除，降低免疫源性；延长纳米颗粒在血液系统中的循环时间，这对于提高渗透和保留是十分重要的，即增强被动靶向作用；更重要的一点是各种不同来源的细胞膜具有不同病灶的同源靶向能力，这大大增强了纳米颗粒在肿瘤灶的富集，从而提高治疗效率，降低毒副作用。
现代细胞膜是由磷脂分子发生双分子层自组装而形成的，因此，磷脂类分子普遍被认为是模拟原始细胞膜的最佳模型。模拟细胞膜动态形成过程，利用各种化学反应去原位生成这些膜分子，然后通过自发自组装形成囊泡去模拟原始细胞膜的形成。目前为止，主要的策略分为以下两种：一种是仿生催化两个分子的偶联反应驱动磷脂膜的自发形成。然而，化学催化剂和金属的配体的加入不仅使反应体系复杂化，而且对其生物兼容性有很大影响；另一种是利用无催化剂化学偶联反应生成磷脂分子引发磷脂膜的形成。这个反应过程是自发的，缺乏控制，这与细胞膜通过促发酶催化合成磷脂机制存在本质上的不同。
现今许多保健品产业使用植物萃取物进行仿生膜，由于植物萃取物为粉体需进行溶解萃取纯化，才能达有效功能。因此，需要透过仿生膜装置使植物萃取物溶出，释放及包覆活性成分。一般仿生膜装置多半是利用减压或剪切的方式进行搅拌混合，透过液体加压并瞬间降压而产生的真空度差，使悬浮态液体中混合均匀及包埋。因此，如何设计能均匀且充分地对液态样品仿生膜的装置成为重要的课题。
仿生膜的装置是一种已被广泛接受的工艺,仿生膜的装置技术的主要特点：(1)生产过程简化、操作控制方便。(2)产品具有良好的分散性、流动性和溶解性。(3)仿生膜装置在密闭的容器中进行，能避免生产过程中造成的粉尘飞扬，避免了环境污染。(4)仿生膜装置可以连续操作，完全适应了工业化大规模生产的要求。
在化学成分方面，发现端粒体含有多种特殊的机能活性成分，然而亦存在具促进端粒延长及抗肿瘤功能的多醣与蛋白物质。初步的安全性试验，发现端粒体提取物对多种细胞及小鼠不具毒性，而端粒体提取物可提升端粒延长调节、抗肿瘤或是其他生理活性。端粒体提取物之抗病毒活性及端粒延长功能评估，端粒体提取物具有强的抗病毒活性，及在有激素的处理下，端粒体提取物可促进淋巴球增生及刺激脾脏细胞产生细胞激素。端粒体提取物可与细胞上的特定醣基结合，而造成细胞凝集；有些则可刺激细胞分裂，并造成特定细胞激素的分泌，而具有影响生物端粒延长反应的功能。
由于草药提取物可活化体内多种端粒延长细胞、提高巨噬细胞与自然杀手细胞的吞噬能力、刺激端粒延长细胞分泌抑制肿瘤细胞的多种干扰素与细胞激素，生物体即可藉由端粒延长系统的活化杀灭癌细胞或抑制肿瘤生长，因此端粒体提取物的抗肿瘤能力与其促进端粒延长的功能有直接相关性。
发明内容
因此，本发明所要解决的是现有技术中缺乏能均匀充分对业态样品仿生膜的制备方法及装置的研究的问题。
为了实现上述目的，本发明还提供一种仿生膜的制备方法，所述制备方法包括如下步骤：
一混合步骤，将一膜料加入至一进料装置进行混合，一芯料加入至一进料装置进行混合；
一加热步骤，完成该混合步骤后，将该膜料输送至一进料装置，并桶槽装置内进行抽真空及加热，该芯料输送至一进料装置内进行抽真空及加热，藉以去除该膜料及该芯料中残留的空气并进行加热；
一融合步骤，完成该加热步骤后，在加热环境下将该膜料与芯料在桶槽装置，启动高剪切组件，经由第一螺旋片、第二螺旋片与网状套桶组件进行融合，以完成融合反应获得仿生膜；
其中该膜料包括神经酰胺及磷脂酰丝胺酸；
其中该芯料包括一二苯乙烯、烟酰胺核苷酸或亚精胺及多烯苯醌。
为了实现上述目的，本发明还提供一种仿生膜装置，所述仿生膜装置包括：
桶槽，其被配置为用于容纳固液混合物，所述固液混合物至少包括需被快速混匀的固态物质和萃取液；所述桶槽的壁上设有第一开口和第二开口，所述第一开口所在的位置低于第二开口所在的位置；
真空管组件，其连接于第二开口；
高剪切组件，其被配置为用于在仿生膜组件内对所述固液混合物施加高频剪切；
真空泵，其被配置为用于将固液混合物经由第一开口抽入高剪切管组件，并流经真空管组件后经由第二开口送返至桶槽内。
优选地，在所述仿生膜装置中，所述桶槽内设有搅拌叶片和/或真空度检测及温度调控组件。
优选地，在所述仿生膜装置中，所述真空管组件上设有启闭阀。
优选地，在所述仿生膜装置中，所述高剪切组件施加转速为5krpm～7krpm。
优选地，在所述仿生膜装置中，所述真空管组件包括：
进料管，其一端与所述第一开口连接；
真空管，其一端与所述第二开口连接；
进料管，其下端与桶槽端连接，其下端插设于所述桶槽内并靠近所述高剪切组件的底端。
优选地，在所述仿生膜装置中，所述高剪切组件在靠近进料管的位置而设于真空桶槽内。
优选地，在所述仿生膜装置中，所述高剪切组件呈圆柱型，所述高剪切组件的管壁靠近第一旋转叶片其距离小于转轴端直径的一半。
优选地，在所述仿生膜装置中，所述高剪切组件的快速混合第一旋转叶片高度为网状套桶组件3/4～2/3。
优选地，在所述仿生膜装置中，所述高剪切组件的快速混合第二旋转叶片高度为网状套桶组件1/4～1/5。
优选地，在所述仿生膜装置中，所述高剪切组件的底端与进料管底端之间具有3～9cm的间距。
优选地，在所述仿生膜装置中，所述进料管上设有用以检测融合包覆状态的检测组件。
优选地，在所述仿生膜装置中，所述高剪切组件的直径略小于缩口管的底端直径。
为了实现上述目的，本发明还提供一种具有抗衰老及端粒延长的草药提取物仿生膜，包括以下质量百分比的原料：端粒体提取物95～85％、仿生膜0.5～2.5％，其中所述仿生膜为采用权利要求1所述的仿生膜的制备方法制备得到。
优选地，在所述具有抗衰老及端粒延长的草药提取物仿生膜中，所述端粒体提取物，按照质量百分比包括：二苯乙烯16～20％、烟酰胺核苷酸或亚精胺32～40％、多烯苯醌35～52％。
优选地，在所述具有抗衰老及端粒延长的草药提取物仿生膜中，所述端粒体提取物中，多烯苯醌重量百分数：二苯乙烯的重量百分数：烟酰胺核苷酸或亚精胺的重量百分数＝1：1.5～2.0：4.9～5.7。
优选地，在所述具有抗衰老及端粒延长的草药提取物仿生膜中，所述膜料包括神经酰胺和磷脂酰丝胺酸，其质量百分比为0.1～2.5。
优选地，在所述具有抗衰老及端粒延长的草药提取物仿生膜中，所述仿生膜为神经酰胺和磷脂酰丝胺酸中的至少一种。
为了实现上述目的，本发明还提供一种上述具有抗衰老及端粒延长的草药提取物仿生膜的制备方法，包括以下步骤：
(1)称取第一预设比例的草药提取物与仿生膜混合，加热至60～75℃溶解，搅拌均匀，制得芯材溶液；
(2)称取第二预设比例的膜料混合后，并加热至35～55℃，搅拌至充分溶解，制得固形物含量为0.5～2.5％的膜料溶液；
(3)将芯材溶液和膜料溶液混合后，在60～75℃下搅拌均匀，形成稳定乳状液后，用减压高剪切机2～4次，真空度8～20mmHg，制得乳液；
(4)将制备好的乳液进行仿生膜装置，温度70～90℃，制得具有抗衰老及端粒延长的草药提取物仿生膜。
本发明提供的技术方案，具有以下优点：
(1)本发明的具有抗衰老及端粒延长的草药提取物仿生膜芯材由二苯乙烯、烟酰胺核苷酸或亚精胺及多烯苯醌高品质原料植物萃取物组成，在本发明组成中增进端粒延长的功能方面，多种萃取物均可提高端粒延长细胞的活性，并促进细胞激素与干扰素的生成，以及恢复经辐射照射后，提升端粒延长功能低下之小鼠端粒延长能力。分别具有促进淋巴球细胞增殖，活化B细胞并增加血清中抗体含量，提高巨噬细胞、自然杀手细胞的吞噬，抵抗端粒延长抑制剂的抑制作用，以及促进激素诱导的小鼠脾脏淋巴细胞增生反应，同种异型抗原刺激的淋巴细胞之转化作用；
(2)本发明的具有抗衰老及端粒延长的草药提取物中添加仿生膜，进一步提高了成品的稳定性；
(3)本发明的具有抗衰老及端粒延长的草药提取物仿生膜，选用仿生膜装置法，生产过程简单，操作方便，且可以连续操作，完全适应了工业化大规模生产的要求，易于推广和普及，产业化前景广阔。
附图说明
为了更清楚地说明本发明具体实施方式或现有技术中的技术方案，下面将对具体实施方式或现有技术描述中所需要使用的附图作简单地介绍，显而易见，下面描述中的附图是本发明的一些实施方式，对于本领域普通技术人员来讲，在不付出创造性劳动的前提下，还可以根据这些附图获得其他的附图。
图1为本发明提供仿生膜装置的一实施例的示意图；
图2为图1中在区域201处的放大示意图。
10A植物萃取物；10B仿生膜液体；10混合液；100仿生膜装置；110桶槽；112A进料管；112B进料装置；113真空管；114真空泵；116网状套桶组件；118搅拌叶片；120高剪切组件；120-1第一螺旋片；120-2第二螺旋片；121转轴端；122真空侦测器；124温度调控器。
本发明目的的实现、功能特点及优点将结合实施例，参照附图做进一步说明。
具体实施方式
本发明实施例中术语“和/或”，描述关联对象的关联关系，表示可以存在三种关系，例如，A和/或B，可以表示：单独存在A，同时存在A和B，单独存在B这三种情况。字符“/”一般表示前后关联对象是一种“或”的关系。
需要说明的是，本发明的说明书和权利要求书及上述附图中的术语“第一”、“第二”等是用于区别类似的对象，而不必用于描述特定的顺序或先后次序。
本发明实施例中术语“多个”是指两个或两个以上，其它量词与之类似。
为使本发明实施例的目的、技术方案和优点更加清楚，下面将结合附图对本发明的各实施例进行详细的阐述。然而，本领域的普通技术人员可以理解，在本发明各实施例中，为了使读者更好地理解本发明而提出了许多技术细节。但是，即使没有这些技术细节和基于以下各实施例的种种变化和修改，也可以实现本发明所要求保护的技术方案。以下各个实施例的划分是为了描述方便，不应对本发明的具体实现方式构成任何限定，各个实施例在不矛盾的前提下可以相互结合相互引用。
图1示意出的是仿生膜装置的一实施例的示意图。请参阅图1，仿生膜装置100包括桶槽110及真空管113，其中桶槽110的侧边配置搅拌叶片118，且真空管113具有真空侦测器122及真空泵114，高剪切组件120靠近进料管112A连接进料装置112B。如第1图所示，在一些实施例中，真空管113的真空侦测器122及真空泵114分别与桶槽110的侧壁之顶部连接。根据一些实施例，在进料管112A中配置进料装置112B，并且在高剪切组件120内设置网状套桶组件116，其中高剪切组件120的下端靠近于进料装置112A。根据一些实施例，植物萃取物10A和仿生膜液体10B可从桶槽110的下方进料装置112B由真空泵114产生减压，直接吸入桶槽110的内部空间，形成含有植物萃取物10A和仿生膜液体10B的混合液10。根据另一些实施例，植物萃取物10A和仿生膜液体10B可经由进料管112A加入桶槽110的内部空间，形成含有植物萃取物10A和仿生膜液体10B的混合液10。根据又另一些实施例，可先形成含有植物萃取物10A和仿生膜液体10B的混合液10，再经由进料管输送至桶槽110的内部空间。根据一些实施例，仿生膜液体10B为水、仿生膜、高分子覆型剂及胶体。
之后，利用位于桶槽110侧边的搅拌叶片118将混合液10中的植物萃取物10A打散，并使植物萃取物10A和仿生膜液体10B混合均匀，以促进混合功能。根据一些实施例，搅拌叶片118可由单一搅拌器组成。根据另一些实施例，搅拌叶片118可由复数个搅拌器组成。在一些实施例中，搅拌器可皆配置于桶槽110的侧边。在另一些实施例中，可在桶槽110的底部配置一个搅拌器，再配置其他搅拌器于此搅拌器上，亦即堆栈多个搅拌器以组成垂直于桶槽110的底部表面的长条状搅拌叶片118。
接着，利用搅拌叶片118，将混合均匀的混合液10从桶槽110的底部靠近高剪切组件120，混合液10流过网状套桶组件116产生强烈混合。根据一些实施例，高剪切组件120与进料管112A为一体成形的构造。根据另一些实施例，高剪切组件120与进料管112A可分别形成后，再整合在一起。之后，利用减压高剪切组件120产生减压高剪切，对经过高剪切组件120而减少体积的混合液10中的植物萃取物10A进行融合包覆。
根据一些实施例，减压高剪切组件120产生的减压高剪切的转速为约5k rpm到约7k rpm之间。由于转速越小，产生的融合包覆力量越强，当转速小于5k rpm时，因为融合包覆力量太强，导致整个装置的使用寿命减少，因此增加生产成本。相反地，当转速大于7krpm时，因为融合包覆力量太弱，以致于融合包覆效果不彰。
减压高剪切组件116利用电能转换成机械动，产生搅拌混合。此减压高剪切组件116不仅可使混合液10中的植物萃取物10A的细胞之间彼此撞击，还可使仿生膜液体10B的分子撞击植物萃取物10A的细胞，而达到更佳的融合包覆效果。
请参阅图2，高剪切组件120具有第一螺旋片120-1及相反的第二螺旋片120-2，且第一螺旋片120-1及第二螺旋片120-2分别具有第一高度h1和第二高度h2，其中第二高度h2小于第一高度h1。在一些实施例中，第二高度低于为第一高度h1的1/4至1/5之间，或低于为第一高度h1的1/2至1/4之间。根据一些实施例，高剪切组件120可为圆柱状。根据一些实施例，高剪切组件120的第二螺旋片120-2位于第一螺旋片120-1之上，网状套桶组件116之上，且第二螺旋片120-2和减压高剪切组件116隔开一距离d1。在一些实施例中，距离d1为约0.5公分至约3公分之间，或约2公分至约8公分之间。
请再参阅图1，混合液10的植物萃取物10A经过减压高剪切组件116的作用后，混合液10经由搅拌叶片118输送回桶槽110的底部空间，再重复前述之过程，让混合液10在端粒体仿生膜装置100内循环流动，使减压高剪切组件116对混合液10中的植物萃取物10A反复进行融合包覆，并且在混合液10循环流动的过程中，将植物萃取物10A中的活性成分萃取至仿生膜液体10B中。
根据一些实施例，真空管113可与真空侦测器122连接，利用真空侦测器122侦测真空管113中的混合液10的植物萃取物10A的融合包覆状况。
根据一些实施例，进料管112A和真空管112C分别具有门阀，可打开或关闭进料管112A与桶槽110之间的通道及真空管113与桶槽110之的通道。当不需再进行融合包覆时，则关闭门阀，使混合液10留在桶槽110的内部空间，使植物萃取物10A中的活性成分能充分地萃取至仿生膜液体10B。
根据一些实施例，桶槽110可与温度调控器124连接，以调控混合液10的温度，可根据实际融合包覆或萃取所需的温度进行调控。
综上所述，本发明提供植物仿生膜装置，其藉由真空组件、减压高剪切组件以及桶槽底部的搅拌叶片，使得混合液在植物仿生膜装置内流动的过程中，可产生搅拌、撞击以及剪切等作用，不断地使机能成分粒子分散融合，并且使小分子物质因反复破裂融合，产生仿生膜。因此，相较于传统乳化装置，本发明提供的植物仿生膜装置可对液态样品进行均匀搅拌混合，且能同时进行仿生膜。
再者，由于混合液不断在真空管与桶槽之间循环流动，因此混合液中的植物萃取物可以反复受到减压高剪切组件的剪切，而能更充分地对植物复方萃取物进行包覆作用。
此外，由于缩口组件的第二端之第二直径大抵上等于减压高剪切组件的直径，且靠近减压高剪切组件，因此当混合液流过缩口组件时，可紧贴减压高剪切组件而受其剪切，进一步避免液态样品包覆不均的现象发生。
将芯材溶液和膜料溶液混合后，在65℃下搅拌均匀，形成稳定乳状液后，用减压高剪切机4次，真空真空度20mmHg，制得乳液；
将制备好的乳液进行仿生膜装置，温度75℃，即可制得具有抗衰老及端粒延长的草药提取物仿生膜。
虽然本发明的实施例及其优点已揭露如上，但应该了解的是，任何本发明所属技术领域中具有通常知识者，在不脱离本发明之精神和范围内，当可作更动、替代与润饰。此外，本发明之保护范围并未局限于说明书内所述特定实施例中的制程、机器、制造、物质组成、装置、方法及步骤，任何本发明所属技术领域中具有通常知识者可从本发明揭示内容中理解，现行或未来所发展出的制程、机器、制造、物质组成、装置、方法及步骤皆可根据本发明使用，只要可以与本文所述实施例具有大抵相同功能或获得大抵相同结果。因此，本发明之保护范围包括上述制程、机器、制造、物质组成、装置、方法及步骤。另外，每一申请专利范围构成个别的实施例，且本发明之保护范围也包括各个申请专利范围及实施例的组合。
表1A为各个实施例的膜料中各项材料的浓度，其中膜料包括的磷脂酰丝胺酸、神经酰胺，浓度单位皆以重量百分浓度(简称：wt％)表示。
表1A各实施例中膜料的成分
| 实施例 | 磷脂酰丝胺酸(wt％) | 神经酰胺(wt％) |
| 1 | 2.9 | 1.5 |
| 2 | 0.5 | 0.5 |
| 3 | 1.5 | 1.5 |
| 4 | 0.5 | 2.5 |
| 5 | 1.5 | 1.5 |
| 6 | 1.5 | 0.1 |
| 7 | 1.5 | 1.5 |
| 8 | 1.5 | 1.5 |
| 9 | 0.1 | 1.5 |
| 10 | 2.5 | 2.5 |
表1B各个实施例的芯料中各项材料的浓度，其中芯料包括的机能物质、成形材料及多醣体，浓度单位皆以重量百分浓度(简称：wt％)表示。二苯乙烯16～20％、烟酰胺核苷酸或亚精胺32～40％、多烯苯醌35～52％。
表1B各个实施例中芯料的成分
表2A为各个实施例进行混合步骤的各项参数条件，包括桶槽装置内的温度(单位：℃)，以及桶槽内进行混合的时间(单位：分钟)。
表2A各实施例中混合步骤的参数
| 实施例 | 桶槽装置内的温度(℃) | 时间(分钟) |
| 1 | 60 | 30 |
| 2 | 75 | 20 |
| 3 | 90 | 15 |
| 4 | 60 | 30 |
| 5 | 75 | 20 |
| 6 | 90 | 15 |
| 7 | 60 | 30 |
| 8 | 75 | 20 |
| 9 | 90 | 15 |
| 10 | 85 | 15 |
表2B各个实施例进行加热及融合步骤的各项参数条件，包括桶槽装置的真空度(单位：毫米汞柱)、加热环境温度(单位：℃)，以及融合步骤的时间(单位：分钟)。
表2B各实施例中加热及融合步骤的各项参数
| 实施例 | 真空度(毫米汞柱) | 加热环境温度(℃) | 时间(分钟) |
| 1 | 12 | 75 | 37.5 |
| 2 | 12 | 75 | 75.3 |
| 3 | 3.4 | 90 | 60 |
| 4 | 12 | 49.8 | 37.5 |
| 5 | 20.6 | 60 | 60 |
| 6 | 12 | 75 | 37.5 |
| 7 | 12 | 75 | 37.5 |
| 8 | 26.5 | 75 | 37.5 |
| 9 | 20.6 | 60 | 15 |
| 10 | 3.4 | 60 | 15 |
请参阅表3，表3为各个实施例制备获得的抗衰老抑炎仿生膜的分析结果，分析项目包括磷脂酰丝胺酸的厚度(单位：毫米)、黏度(单位：cps)、抑制肿瘤细胞凋亡率(单位：％)及端粒增长率(单位：％)，其中抗衰老抑炎仿生膜的厚度指磷脂酰丝胺酸的胶体壁的平均厚度，其中抗衰老抑炎仿生膜的黏度以旋转式黏度计进行黏度测定，将测定样品放置25℃环境进行5分钟黏度的测定；其中抗衰老抑炎仿生膜包覆率的计算方式分别以包括机能物质的芯料及包括机能物质的芯料依据前述磷脂酰丝胺酸的制备方法中，混合步骤至融合步骤的步骤制备复数磷脂酰丝胺酸，经由液相层析仪确认抗衰老抑炎仿生膜中包括的机能物质浓度，其中以包括机能物质的芯料制备的抗衰老抑炎仿生膜中的机能物质浓度为B，其中以包括机能物质的芯料制备的抗衰老抑炎仿生膜中的机能物质浓度为A。
本发明细胞凋亡测定：
在细胞周期进行时，DNA含量会随着细胞进入不同周期而有增减，利用荧光对细胞进行相对DNA含量测定，可以分析细胞各个周期的百分比。
细胞凋亡测定：
细胞凋亡又称为程序性细胞死亡，在细胞接收到血液或组织液中特定的讯号因子时，会触发一连串连续性的细胞变化，最后导致细胞死亡，但这样的细胞死亡行事不会影响周围健康的细胞，是一种细胞自然的淘汰机制。细胞凋亡最常使用的是Annexin V-PE染色，可以快速分析早期细胞凋亡。细胞凋亡早期会有膜磷脂酰丝氨酸phosphatidylserine(PS)由细胞脂膜内侧翻向外侧的现象，Annexin V会结合到磷脂蛋白上的钙离子，接上PE呈色，可被波长488nm左右激发，另外以PI染色细胞核可以分辨早期凋亡与死细胞。JC-1(5,5′,6,6′-Tetrachloro-1,1′,3,3′-tetraethyl-imidacarbocyanine iodide)是用于检测线粒体膜电位(mitochondrial membrane potential)△Ψm的荧光探针。可以检测细胞、组织或纯化的线粒体膜电位。在线粒体膜电位较高时，JC-1聚集在线粒体的基质(matrix)中，形成聚合物(J-aggregates)，可以产生红色荧光(FL-2通道)；在线粒体膜电位较低时，JC-1不能聚集在线粒体的基质中，此时JC-1为单体(monomer)，可以产生绿色荧光(FL-1通道)。这样就可以非常方便地通过荧光颜色的转变来检测线粒体膜电位的变化。常用红绿荧光的相对比例来衡量线粒体去极化的比例。线粒体膜电位的下降是细胞凋亡早期的一个标志性事件。通过JC-1从红色荧光到绿色荧光的转变可以很容易地检测到细胞膜电位的下降，同时也可以用JC-1从红色荧光到绿色荧光的转变作为细胞凋亡早期的一个检测指标。JC-1单体的最大激发波长为514nm，最大发射波长为527nm；JC-1聚合物(J-aggregates)的最大激发波长为585nm，最大发射波长为590nm。
细胞型态测定：
前散射光(FSC)可以分析细胞大小、测散色光(SSC)可以分析细胞的颗粒性，利用此特性可以分别细胞是否健康；正在凋亡程序中的细胞FSC会变小，SSC是先增加后减少，利用此原理可以定性细胞。
本发明端粒长度测定：
荧光原位杂交(FISH)探针是亚原子细胞遗传学技术，使用荧光探针来显示遗传物质。该探针是一种分子，当它与特定的DNA/RNA序列结合时，会吸收并发射特定波长的光。它用于识别染色体的结构和数量异常，监测治疗剂，并识别罕见的遗传疾病。FISH探针包括基因座特异性探针、alfoid/着丝粒重复探针和全染色体探针是常用的。这些探针在识别感兴趣的序列方面灵敏而准确，可以直接应用于元面染色体和间期细胞核，并在单细胞水平上提供杂交信号的准确可视化。Q-FISH使用PNA端粒(FITC-绿色)和着丝粒探针(TAMRA-红色)在活检中用荧光DNA染料TOTO-3(蓝色)复染。结果显示，依各个实施例参数条件，进行本发明提供的抗衰老抑炎仿生膜的制备方法，其中各个实施例中抗衰老抑炎仿生膜的厚度分布在0.04-0.12微米，黏度分布在110-282分泊(centipoises,cps)，抑制肿瘤细胞凋亡率在64-82％，端粒增长率皆大于等于90％，显示本案获得的第二抗衰老抑炎仿生膜不仅具有良好的抑制肿瘤细胞凋亡率及端粒增长率，并且黏度范围代表获得的第二抗衰老抑炎仿生膜具有良好的成形型态。
表3各个实施例制备的抗衰老抑炎仿生膜的分析结果
综上所述，本发明提供一种抗衰老抑炎仿生膜的制备方法，可以解决习知技术须使用溶剂进行制备、生产设备复杂且效率低下的问题，并且通过本发明提供的一种抗衰老抑炎仿生膜的制备方法，可以获得端粒增长率的仿生膜。
显然，上述所描述的实施例仅仅是本发明一部分的实施例，而不是全部的实施例。基于本发明中的实施例，本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动前提下，可以做出其它不同形式的变化或变动，都应当属于本发明保护的范围。
Claims (10)
1.一种仿生膜的制备方法，其特征在于，所述制备方法包括如下步骤：
一混合步骤，将一膜料加入至一进料装置进行混合，一芯料加入至一进料装置进行混合；
一加热步骤，完成该混合步骤后，将该膜料输送至一进料装置，并桶槽装置内进行抽真空及加热，该芯料输送至一进料装置内进行抽真空及加热，藉以去除该膜料及该芯料中残留的空气并进行加热；
一融合步骤，完成该加热步骤后，在加热环境下将该膜料与芯料在桶槽装置，启动高剪切组件，经由第一螺旋片、第二螺旋片与网状套桶组件进行融合，以完成融合反应获得仿生膜；
其中该膜料包括神经酰胺及磷脂酰丝胺酸；
其中该芯料包括一二苯乙烯、烟酰胺核苷酸或亚精胺及多烯苯醌。
2.一种仿生膜装置，其特征在于，包括：
桶槽，其被配置为用于容纳固液混合物，所述固液混合物至少包括需被快速混匀的固态物质和萃取液；所述桶槽的壁上设有第一开口和第二开口，所述第一开口所在的位置低于第二开口所在的位置；
真空管组件，其连接于第二开口；
高剪切组件，其被配置为用于在仿生膜组件内对所述固液混合物施加高频剪切；
真空泵，其被配置为用于将固液混合物经由第一开口抽入高剪切管组件，并流经真空管组件后经由第二开口送返至桶槽内。
3.如权利要求2所述的仿生膜装置，其特征在于，所述真空管组件包括：
进料管，其一端与所述第一开口连接；
真空管，其一端与所述第二开口连接；
进料管，其下端与桶槽端连接，其下端插设于所述桶槽内并靠近所述高剪切组件的底端。
4.如权利要求3所述的仿生膜装置，其特征在于，所述高剪切组件在靠近进料管的位置而设于真空桶槽内。
5.一种具有抗衰老及端粒延长的草药提取物仿生膜，其特征在于，包括以下质量百分比的原料：端粒体提取物95～85％、仿生膜0.5～2.5％，其中所述仿生膜为采用权利要求1所述的仿生膜的制备方法制备得到。
6.如权利要求5所述的具有抗衰老及端粒延长的草药提取物仿生膜，其特征在于，所述端粒体提取物，按照质量百分比包括：二苯乙烯16～20％、烟酰胺核苷酸或亚精胺32～40％、多烯苯醌35～52％。
7.如权利要求5所述的具有抗衰老及端粒延长的草药提取物仿生膜其特征在于，所述端粒体提取物中，多烯苯醌重量百分数：二苯乙烯的重量百分数：烟酰胺核苷酸或亚精胺的重量百分数＝1：1.5～2.0：4.9～5.7。
8.如权利要求5所述具有抗衰老及端粒延长的草药提取物仿生膜，其特征在于，所述膜料包括神经酰胺和磷脂酰丝胺酸，其质量百分比为0.1～2.5。
9.如权利要求5所述具有抗衰老及端粒延长的草药提取物仿生膜，其特征在于，所述仿生膜为神经酰胺和磷脂酰丝胺酸中的至少一种。
10.一种如权利要求5-9所述具有抗衰老及端粒延长的草药提取物仿生膜的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：
(1)称取第一预设比例的草药提取物与仿生膜混合，加热至60～75℃溶解，搅拌均匀，制得芯材溶液；
(2)称取第二预设比例的膜料混合后，并加热至35～55℃，搅拌至充分溶解，制得固形物含量为0.5～2.5％的膜料溶液；
(3)将芯材溶液和膜料溶液混合后，在60～75℃下搅拌均匀，形成稳定乳状液后，用减压高剪切机2～4次，真空度8～20mmHg，制得乳液；
(4)将制备好的乳液进行仿生膜装置，温度70～90℃，制得具有抗衰老及端粒延长的草药提取物仿生膜。
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