CN109350557A - 包含nadh和神经酰胺的抗衰老组合物、护肤品及其制备方法与应用 - Google Patents
包含nadh和神经酰胺的抗衰老组合物、护肤品及其制备方法与应用 Download PDFInfo
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Abstract
本发明公开了一种包含NADH和神经酰胺的抗衰老组合物、护肤品及制备方法与应用，涉及护肤品领域，该组合物包含主要组分：1‑100重量份NADH、1‑50重量份神经酰胺。本发明的包含NADH和神经酰胺抗衰老组合物，各个组分协同发挥作用，全方位、多环节地实现抗衰老抗自由基效果。采用上述抗衰老组合物的护肤品，制备工艺简单、无副产物，既安全有效又生产成本低。
Description
技术领域
本发明涉及护肤品领域，尤其涉及一种包含NADH和神经酰胺的抗衰老组合物和应用该组合物的护肤品及制备方法与应用。
背景技术
护肤是全球美容以及个人护理行业中重要的细分市场，而抗衰老护肤品在其中备受关注。自古以来，人类一直致力于寻找具有抗衰老作用的活性物质。皮肤老化是由自然因素或非自然因素造成的皮肤衰老现象。人出生后皮肤组织日益发达，功能逐渐活跃，当到达某种年龄就会开始退化，这种退化往往在人们不知不觉中慢慢进行。皮肤组织的成长期一般结束于25岁左右，有人称此期为“皮肤的弯角”，自此后生长与老化同时进行，皮肤弹力纤维渐渐变粗。人们特别是女性十分注重保持肌肤健美。然而皮肤状况却总是受到多种因素，例如湿度、紫外线、化妆品组合物、年龄、疾病、紧张以及饮食习惯的影响。其结果是，皮肤出现许多麻烦，例如皮肤的多种功能减退及皮肤衰老。
皮肤衰老是由内源性因素和外源性因素共同作用的结果。其中在机体代谢过程中产生的具有高度化学活性的自由基是衰老的重要启动因素。自由基是一种因失去一个电子而成的不对称、不稳定的原子或分子，具有很大的能量，可攻击细胞组织中的脂质、蛋白质、糖类和DNA等物质，企图夺取一个电子以求得重新平衡，这就造成了脂质和糖类的氧化、蛋白质的变性、酶的失活、DNA结构的切断、碱基变化等等，从而导致细胞膜、遗传因子等的损伤，进而诱发各种疾病、癌变、机体老化等。长期受紫外线照射、环境污染以及香烟烟雾等外源性因素也都会产生大量自由基，导致皮肤衰老。
迄今为止，已经提出许多组合物和方法用于预防或治疗衰老效应，然而，目前市面上的产品仍然无法全面满足人们的需求。目前市面上宣称具有抗衰老作用的产品很多，但是存在夸大宣称功效的问题，实际上很难达到明显的抗衰老作用，相反，添加过多的化学成分的产品会刺激皮肤，加速肌肤的衰老，达不到护肤的目的。甚至很多抗衰老化妆品有的为了达到很好的抗衰老效果使用了抗氧化性强的工业成分、短时见效快，但是长时间使用对人体危害极大；有的抗衰老化妆品添加维生素类抗氧化剂，但是这类抗氧化剂稳定性差。将有抗衰老功效的天然植物提取物制成稳定性好的成分添加到化妆品中，赋予产品良好的抗衰老功效，是抗衰老产品的一个趋势。
发明内容
本发明的目的在于提供一种延缓衰老、安全无毒副作用的护肤品，已解决现有抗衰老护肤品的不足。为了实现上述目的，本发明提供如下技术方案：一种包含NADH和神经酰胺的抗衰老组合物，包含下述组分：1-100重量份NADH、1-50重量份神经酰胺。
优选地，还包括下述组分：1-30重量份燕窝酸、2-40重量份人参皂苷、4-20重量份淫羊藿苷、5-10重量份宝藿苷I、2-20重量份s-腺苷蛋氨酸、3-40重量份磷脂酰丝氨酸、2-10重量份NMN、2-100重量份PPD。
一种抗衰老护肤品，包含上述包含NADH和神经酰胺的抗衰老组合物。
优选地，还包含辅料1-100重量份甘油、1-100重量份去离子水、1-50重量份透明质酸。
优选地，还包含辅料1-100重量份表面活性剂、1-100重量份pH调节剂、1-100重量份抗氧化剂。
优选地，还包含1-100重量份植物精油。
优选地，所述植物精油包括螺旋藻精华、天竺葵精油、葡萄柚精油、玫瑰精油中至少一种。
优选地，还包含1-100重量份蜂蜜。
一种上述抗衰老护肤品的制备方法，其特征在于，包括步骤：
(4)将含NADH和神经酰胺的抗衰老组合物各组分作为原料，原料以及辅料各组分过30-80目筛，保持干燥，将筛选好的原料进行配比称重，加入相关辅料，混合均匀；
(5)加水在25-40℃环境下搅拌均匀后，升温至40-50℃下继续搅拌1-2小时；
(6)加入植物精油后，在40-50℃下搅拌2-3小时后，降至35-40℃加入蜂蜜搅拌均匀，自然冷却。
一种上述包含NADH和神经酰胺的抗衰老组合物在制备抗衰老药物和保健品中应用。
本发明的包含NADH和神经酰胺抗衰老组合物，各个组分采用适宜的配伍比例，协同发挥作用，全方位、多环节地实现抗衰老抗自由基效果。采用上述抗衰老组合物的护肤品，制备工艺简单、无副产物，既安全有效又生产成本低。
附图说明
图1、本发明试验例中，30天总细纹面积变化图；
图2、本发明试验例中，30天平均细纹长度变化图；
图3、本发明试验例中，30天平均皱纹深度变化图；
图4、本发明试验例中，30天内皮肤弹性Ue值变化图。
具体实施方式
为使技术人员更好地理解本发明，下面参照附图对本发明的实施例进行清楚、详细的说明，但不作为对本发明的限定。显然，所描述的实施例仅仅是本发明的一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本发明中的实施例，本领域普通技术人员在没有作出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都属于本发明保护的范围。
本发明首先公开包含NADH和神经酰胺的抗衰老组合物，该组合物包含下述重量份组分：1-100重量份NADH、1-50重量份神经酰胺。
其中，神经酰胺是细胞间基质的主要部分，在保持角质层水分的平衡中起着重要作用。皮肤在衰老过程中，脂质合成下降，角质层中神经酰胺含量减少。皮肤衰老特征表现为皮肤干燥、失去光泽、皮肤角质层变薄、皱纹增多、弹性下降。使用神经酰胺能使表皮角质层中神经酰胺含量增高，可改善皮肤干燥、脱屑、粗糙等状况；同时能增加表皮角质层厚度，提高皮肤持水能力，减少皱纹，增强皮肤弹性，延缓皮肤衰老。
其中，NADH即烟酰胺腺嘌呤二核苷酸(reduced nicotinamide adeninedinucleotide)也称还原型辅酶I，化学式为C21H27N7O14P2，分子量为663.43。其氧化形式为烟酰胺腺嘌呤二核苷酸(oxidized nicotinamide adenine dinucleotide,缩写成NAD),在生物氧化中起到传递氢和电子的作用，对维持细胞生长、分化和能量代谢起重要作用。它参与机体细胞的代谢、节律、病变、衰老和凋亡等生命过程。目前NADH制备方法包括如下步骤：提取烟酰胺核苷腺苷酰转移酶的粗提物或其纯酶；固定化重组烟酰胺核苷腺苷酰转移酶的粗提物或其纯酶；用固定化重组烟酰胺核苷腺苷酰转移酶催化，以烟酰胺核苷酸和三磷酸腺苷二钠(ATP)为底物制备烟酰胺腺嘌呤二核苷酸。具体地，NADH的制备方法如下：
(1)将含烟酰胺核苷腺苷酰转移酶基因的质粒pRSET-bmj转化感受态细菌细胞E.coliHB101，在Luriabroth(LB)平板(含100mg/L卡那霉素)上37℃培养24小时。接种单个克隆于5毫升LB液体培养基(含100mg/L卡那霉素)中于30℃培养20-24小时。离心收集菌体，并悬浮于1毫升100mM Tris盐酸缓冲液(pH7.5)中。然后用超声波裂解细菌细胞。离心(10℃，17,800g，10分钟)并收集上清液，即为粗提蛋白(或称粗提物)。重组的烟酰胺核苷腺苷酰转移酶粗提蛋白经70℃热处理10分钟，离心(10℃，17,800g，10分钟)并收集上清液，即为部分纯化的蛋白。
(2)烟酰胺核苷腺苷酰转移酶固定化：取烟酰胺核苷腺苷酰转移酶粗提蛋白或部分纯化的蛋白，用洗酶缓冲液(0.02MTris-HCl/0.001MEDTA，pH7.0溶液)稀释至蛋白含量5-10mg/ml。将酶稀释液与PB溶液(2.0mol/L磷酸二氢钾，pH7.5)等体积混合，加入环氧型固定化酶载体LX-3000(10毫克酶/克载体)，于摇床(转速100rpm)中25℃反应20小时。反应完成后用滤袋过滤，用洗酶缓冲液清洗5-6次，得到固定化烟酰胺核苷腺苷酰转移酶。
(3)用固定化烟酰胺核苷腺苷酰转移酶制备烟酰胺腺嘌呤二核苷酸：
配制底物溶液为含5mM的烟酰胺核苷酸、10mM的三磷酸腺苷二钠(ATP)、100mMTris盐酸缓冲液和终浓度为10mM之MgCl2，调pH至7.5。取底物溶液1毫升，然后加入0.05克固定化烟酰胺核苷腺苷酰转移酶，于37℃进行反应2-20小时。离心(10℃，17,800g，15分钟)并收集上清液。通过高压液相色谱(HPLC)测定所得上清液中烟酰胺腺嘌呤二核苷酸的含量。结果烟酰胺核苷酸转化为烟酰胺腺嘌呤二核苷酸的转化率超过80％。
本发明的包含NADH和神经酰胺的抗衰老组合物还包括下述组分：1-30重量份燕窝酸、2-40重量份人参皂苷、4-20重量份淫羊藿苷、5-10重量份宝藿苷I、2-20重量份s-腺苷蛋氨酸、3-40重量份磷脂酰丝氨酸、2-10重量份NMN、2-100重量份PPD。
其中宝藿苷I由淫羊藿苷为原料制备而成，具体地，以淫羊藿苷为原料，直接采用β-葡萄糖苷酶酶解淫羊藿苷制备宝藿苷Ⅰ，切断淫羊藿苷C-7位的β-D-葡萄糖，制备高纯度的宝藿苷Ⅰ，其反应式如下：
其中，所述NMN的制备方法如下：
(1)以烟酰胺、ATP和木糖为原料，在烟酰胺磷酸核糖转移酶、核糖磷酸焦磷酸激酶、核糖-5-磷酸异构酶、核酮糖-3-磷酸异构酶、木酮糖激酶以及木糖异构酶的催化作用下发生反应，制得烟酰胺单核苷酸。
(2)向反应釜中加入底物溶液，含30mM的ATP、30mM的木糖、20mM的MgCl 2、10mM的KC1以及lOOmM的Tris-HCl缓冲液，调pH至7.5-8.0。然后加入以下催化用酶：核糖磷酸焦磷酸激酶6g/L底物溶液，核糖-5-磷酸异构酶10g/L底物溶液，核酮糖-3-磷酸异构酶l lg/L底物溶液，木酮糖激酶10g/L底物溶液，木糖异构酶10g/L底物溶液。搅拌均匀后进行反应，反应过程中持续搅拌(搅拌速度50rpm)，控制反应温度为35℃，维持pH值为7.5-8.0。
(3)待上述反应进行4h后，分离出反应液，并将反应液送入另一反应釜中，再向反应液中加入60mM的烟酰胺、30mM的ZnCl 2、lOOmM的Tris-HCl缓冲液以及烟酰胺磷酸核糖转移酶15g/L底物溶液，搅拌均匀后继续反应，反应过程中持续搅拌(搅拌速度50rpm)，控制反应温度为35℃，维持pH值为7.5-8.0，再反应4h后即得烟酰胺单核苷酸粗产品溶液(含NMN12mM)，再经过滤、纯化、干燥后即得烟酰胺单核苷酸成品。
本发明的抗衰老组合物，各个组分采用适宜的配伍比例，协同发挥作用，成为能够全方位针对多个环节的抗衰老抗自由基组合物。具体地，本组合物能穿透皮肤表皮细胞，直接被吸收利用，能快速为衰老的肌肤细胞补充能量，延长细胞的寿命。本组合物中的有效成分能提高细胞中抗氧化酶的生物活性，可以促进SOD和GSH-PX酶的合成，有效清除自由基，同时还能抑制脂质过氧化和血小板的聚集，调节免疫力，改善皮肤毛细血管的血液循环。不仅如此，本组合物能给皮肤从内到外依次补充角质细胞间脂质固有成分，提升神经肽氨含量，改善皮肤脱屑、粗糙等状况，同时能增加角质层厚度，提高皮肤持水能力，维持皮肤屏障功能，并且能减少皱纹，增强皮肤弹性，延缓皮肤细胞衰老，从而达到皮肤抗衰老目的。
本发明还公开了一种包含上述抗衰老组合物的护肤品，该护肤品除了上述组合物以外还包含辅料：甘油、去离子水、透明质酸、表面活性剂、pH调节剂、抗氧化剂。同时，本发明的抗衰老护肤品还包含植物精油和蜂蜜，其中植物精油包括螺旋藻精华、天竺葵精油、葡萄柚精油、玫瑰精油。上述抗衰老护肤品的组分及制备方法见下文具体示例：
实施例1
(1)原料：50重量份NADH、25重量份神经酰胺、15重量份燕窝酸、30重量份人参皂苷、15重量份淫羊藿苷、7重量份宝藿苷I、10重量份s-腺苷蛋氨酸、20重量份磷脂酰丝氨酸、5重量份NMN、50重量份PPD。
(2)辅料：50重量份甘油、50重量份去离子水、25重量份透明质酸以及50重量份表面活性剂、50重量份pH调节剂、50重量份抗氧化剂。
(3)制备方法，包括如下步骤：
(a)、将原料以及辅料各组分过30-80目筛，使颗粒度分布均匀，流动性更好,保持干燥，将筛选好的原料进行配比称重，加入相关辅料，混合均匀；
(b)、加水在25-40℃环境下搅拌均匀后，升温至50℃下继续搅拌1小时；
(c)、加入螺旋藻精华、天竺葵精油后，在50℃下搅拌2小时后，降至35℃加入50重量份蜂蜜搅拌均匀，自然冷却制得该护肤品。
实施例2
(1)原料：1重量份NADH、4重量份神经酰胺、1重量份燕窝酸、5重量份人参皂苷、4重量份淫羊藿苷、6重量份宝藿苷I、2重量份s-腺苷蛋氨酸、8重量份磷脂酰丝氨酸、2重量份NMN、40重量份PPD。
(2)辅料：1重量份甘油、3重量份去离子水、1重量份透明质酸以及适量的1重量份表面活性剂、1重量份pH调节剂、1重量份抗氧化剂。
(3)制备方法：
a、将原料以及辅料各组分过30-80目筛，使颗粒度分布均匀，流动性更好,保持干燥，将筛选好的原料进行配比称重，加入相关辅料，混合均匀；
b、加水在25-40℃环境下搅拌均匀后，升温至50℃下继续搅拌2小时；
c、加入总重量份为1的葡萄柚精油、玫瑰精油后，在50℃下搅拌2小时后，降至35℃加入1重量份蜂蜜搅拌均匀，自然冷却制得该护肤品。
实施例3
(1)原料：100重量份NADH、40重量份神经酰胺、30重量份燕窝酸、35重量份人参皂苷、20重量份淫羊藿苷、10重量份宝藿苷I、20重量份s-腺苷蛋氨酸、10重量份磷脂酰丝氨酸、10重量份NMN、90重量份PPD。
(2)辅料：100重量份甘油、100重量份去离子水、50重量份透明质酸以及100重量份表面活性剂、100重量份pH调节剂、100重量份抗氧化剂。
(3)制备方法：
A、将原料以及辅料各组分过30-80目筛，使颗粒度分布均匀，流动性更好,保持干燥，将筛选好的原料进行配比称重，加入相关辅料，混合均匀；
B、加水在25-40℃环境下搅拌均匀后，升温至50℃下继续搅拌2小时；
C、加入100重量份植物精油后，在50℃下搅拌2小时后，降至35℃加入100重量份蜂蜜搅拌均匀，自然冷却制得该护肤品。
实施例4
(1)原料：5重量份NADH、1重量份神经酰胺、4重量份燕窝酸、2重量份人参皂苷、5重量份淫羊藿苷、5重量份宝藿苷I、6重量份s-腺苷蛋氨酸、3重量份磷脂酰丝氨酸、5重量份NMN、2重量份PPD
(2)辅料：10重量份甘油、10重量份去离子水、10重量份透明质酸以及5重量份表面活性剂、5重量份pH调节剂、5重量份抗氧化剂。
(3)制备方法：
I、将原料以及辅料各组分过30-80目筛，使颗粒度分布均匀，流动性更好,保持干燥，将筛选好的原料进行配比称重，加入相关辅料，混合均匀；
II、加水在25-40℃环境下搅拌均匀后，升温至50℃下继续搅拌2小时；
III、加入50重量份植物精油后，在50℃下搅拌2小时后，降至35℃加入5重量份蜂蜜搅拌均匀，自然冷却制得该护肤品。
实施例5
(1)原料：60重量份NADH、50重量份神经酰胺、20重量份燕窝酸、40重量份人参皂苷、15重量份淫羊藿苷、10重量份宝藿苷I、15重量份s-腺苷蛋氨酸、40重量份磷脂酰丝氨酸、8重量份NMN、100重量份PPD。
(2)辅料：10重量份甘油、10重量份去离子水、10重量份透明质酸以及50重量份表面活性剂、50重量份pH调节剂、50重量份抗氧化剂。
(3)制备方法：
(I)、将原料以及辅料各组分过30-80目筛，使颗粒度分布均匀，流动性更好,保持干燥，将筛选好的原料进行配比称重，加入相关辅料，混合均匀；
(II)、加水在25-40℃环境下搅拌均匀后，升温至50℃下继续搅拌2小时；
(III)、加入植物精油后，在50℃下搅拌2小时后，降至35℃加入50重量份蜂蜜搅拌均匀，自然冷却制得该护肤品。
将本发明实施例应用于临床实验，以检测其效果：
试验例1
皮肤粗糙度试验：
(1)试验样品：分别取实施例1中获得的抗衰老护肤品用作试验样品1-10，对照样品11-20使用现有市面上的抗衰老护肤品。
(2)试验方法：随机选取同一地区的25-55岁的健康人群案例200名作为志愿者，志愿者无严重系统疾病、无免疫缺陷或自身免疫性疾病、无活动性过敏性疾病，对护肤类化妆品无严重过敏史、近1个月内未曾使用激素类药物或免疫抑制剂、未参加其他临床试验，未涂抹任何化妆品等外用制剂，志愿者的面部肌肤粗糙程度等症状相近。随机分成20组，每组10人。第1-19组志愿者分别使用试验样品1-10和对照样品11-20。
使用方法：涂抹，早晚各一次。记录受试者使用前和使用一个月后的皮肤粗糙度的数据，计算皮肤粗糙度的情况。
(3)试验结果：实验结果可见，试验组1-10的使用者，皮肤相对于对照组更为细腻。
试验例2
皱纹数量实验
(1)试验样品：分别取实施例2中获得的抗衰老护肤品作为试验样品1-10，采用市面上的抗衰老护肤品作为对照样品11-20。
(2)试验方法：随机选取同一地区的30-40岁的健康人群案例190名作为志愿者参加其他临床试验，未服用任何抗衰老的保健品，志愿者的眼周肌肤存在细纹或者皱纹等症状，随机分成20组，每组10人。
第1-19组志愿者分别使用试验样品1-10和对照样品11-20，使用方法：涂抹，早晚各一次。记录受试者使用前和使用一个月后的眼角细纹的数量，计算眼角细纹的情况，每组取平均值。
(3)试验结果：1-10实验组在使用试验样品1-10后，协同增效，眼角细纹明显减少，显著提升祛皱效果。具体如图1、图2、图3所示，其中三角形标志为使用试验样品组，其余为对照组，较之对照组，明显地，试验组的总细纹面积、平均细纹长度、平均皱纹深度均明显降低。
试验例3
皮肤色素变化试验：
(1)试验样品：分别取实施例3中获得的抗衰老护肤品作为试验样品1-10，采用市面上的抗衰老组合物作为对照样品11-20。
(2)试验方法：使用赛维肤色测量仪与分光光度计Chromameter CM2600D进行测试，采用《化妆品安全技术规范》2015年版第七章第2节人体皮肤斑贴试验中规定的方法，对试验样品1-10对照样品11-20进行测试，对面部、颈部、手背共3个部位进行3次重复检测，每次测量间隔5天。记录涂抹样品部位检测结果。
(3)试验结果：试验样品1-10随着使用时间增加，皮肤色度变浅，说明本申请中的抗衰老护肤品对人体皮亮肤和淡化色素作用。
试验例4
皮肤弹性试验：
(1)试验样品：分别取实施例3、4、5中获得的抗衰老护肤品作为试验样品1-10、11-20、21-30，采用市面上的抗衰老护肤品作为对照样品31-40。
(2)试验方法：采用德国CK公司皮肤弹性测试仪MPA580进行弹性测试评价，在被测试的皮肤表面产生一个负压将皮肤吸进一个特定测试探头内，皮肤被吸进测试探头内的深度是通过一个非接触式的光学测试系统测得的。测试探头内包括光的发射器和接收器，光的比率(发射光和接收光之比)同被吸入皮肤的深度成正比，这样就得到了一条皮肤被拉伸的长度和时间的关系曲线，然后通过MPA软件分析来确定皮肤的弹性性能(Uf：皮肤最大拉伸量；Ue：恒定负压加到皮肤上后，0.1秒钟时皮肤的拉伸量，定位弹性部分拉伸量)。对于皮肤而言，越是年青的皮肤，弹性好的皮肤，Ue的数值就越高。
随机选取同一地区的40-55岁的健康人群案例400名作为志愿者参加其他临床试验，未服用任何抗衰老的保健品，随机分成40组，每组10人。其中第1-40组志愿者分别使用试验样品1-30和对照样品31-40，使用方法：涂抹，早晚各一次，记录其Ue值。
(3)试验结果：如图4所示，其中棱形标记为对照组，正方形标记为使用试验样品1-10的试验组、三角形标记为使用试验样品11-20的试验组、叉形符号标记为使用试验样品21-30的试验组。明显可见，较之对照组，试验组的皮肤弹性Ue值明显升高，对于皮肤而言，越是年青的皮肤，弹性好的皮肤，Ue的数值就越高，说明本申请中的抗衰老护肤品对人体皮肤有恢复弹性功效。
以上所述仅为本发明的优选实施例，并非因此限制本发明的专利范围，凡是在本发明的发明构思下，利用本发明说明及附图内容所作的技术延伸或再创造均包括在本发明的专利保护范围内。
Claims (10)
1.一种包含NADH和神经酰胺的抗衰老组合物，其特征在于，包含下述组分：1-100重量份NADH、1-50重量份神经酰胺。
2.根据权利要求1所述的包含NADH和神经酰胺的抗衰老组合物，其特征在于，还包括下述组分：1-30重量份燕窝酸、2-40重量份人参皂苷、4-20重量份淫羊藿苷、5-10重量份宝藿苷I、2-20重量份s-腺苷蛋氨酸、3-40重量份磷脂酰丝氨酸、2-10重量份NMN、2-100重量份PPD。
3.一种抗衰老护肤品，其特征在于，包含权利要求2所述的包含NADH和神经酰胺的抗衰老组合物。
4.根据权利要求3所述的抗衰老护肤品，其特征在于，还包含辅料1-100重量份甘油、1-100重量份去离子水、1-50重量份透明质酸。
5.根据权利要求4所述的抗衰老护肤品，其特征在于，还包含辅料1-100重量份表面活性剂、1-100重量份pH调节剂、1-100重量份抗氧化剂。
6.根据权利要求5所述的抗衰老护肤品，其特征在于，还包含1-100重量份植物精油。
7.根据权利要求6所述的抗衰老护肤品，其特征在于，所述植物精油包括螺旋藻精华、天竺葵精油、葡萄柚精油、玫瑰精油中至少一种。
8.根据权利要求6所述的抗衰老护肤品，其特征在于，还包含1-100重量份蜂蜜。
9.一种如权利要求3-8任一所述的抗衰老护肤品的制备方法，其特征在于，包括步骤：
(1)将含NADH和神经酰胺的抗衰老组合物各组分作为原料，原料以及辅料各组分过30-80目筛，保持干燥，将筛选好的原料进行配比称重，加入相关辅料，混合均匀；
(2)加水在25-40℃环境下搅拌均匀后，升温至40-50℃下继续搅拌1-2小时；
(3)加入植物精油后，在40-50℃下搅拌2-3小时后，降至35-40℃加入蜂蜜搅拌均匀，自然冷却。
10.一种如权利要求1-2任一所述包含NADH和神经酰胺的抗衰老组合物在制备抗衰老药物和保健品中应用。
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