TWI801746B - 特氏鹽芽抱桿菌ｔｃｉ６６２０７菌株之破菌液及破菌液之用途 - Google Patents
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Abstract
一種組合物，含有特氏鹽芽抱桿菌(Halobacillus trueperi)TCI66207菌株，且該特氏鹽芽抱桿菌TCI66207寄存於財團法人食品工業發展研究所且寄存編號為BCRC910961。
Description
本發明係關於一種特氏鹽芽抱桿菌，特別是關於一種特氏鹽芽抱桿菌TCI66207菌株及其破菌液及破菌液之用途。
皮膚是人體隔絕外界環境中的傷害，例如紫外線、病原體、摩擦力等，與防止水分流失的第一道防線。皮膚由外向內依序包含表皮層、主要由結締組織構成的真皮層、及皮下組織。表皮層是皮膚的最外層並且不斷更新。當皮膚細胞損傷時，或皮膚細胞增生的速度低時，容易發生水份流失，若皮膚的膠原網絡被破壞，更進而導致肌膚老化現象發生(如皺紋、鬆弛、暗沉、乾燥)。
表皮層與真皮層內含有膠原蛋白(collagen)、彈力蛋白(elastin)、及玻尿酸(hyaluronic acid)，其賦予支撐力量和肌膚彈性，然而當膠原蛋白、彈力蛋白、及玻尿酸隨年齡增加而減少，這些因素皆會降低皮膚飽滿度與彈性。
此外，角質層主要成分為角蛋白(keratin)，會分泌如玻尿酸等物質作為細胞間質，以維持表皮層皮膚屏障之結構完整，並吸收水分使皮膚保持濕潤，從而防止皮膚水分散失及形成完整防護。當皮膚因外在環境刺激，導致角質細胞無法維持正常的代謝循環時，皮膚保水能力下降，
並且皮膚表皮層屏障受損，讓皮膚產生粗糙、乾燥脫屑、脆弱易受刺激、敏感泛紅的狀況，因此角質層的健康與保水能力對於抵禦外來傷害著實非常重要。
有鑑於此，本發明提供一種一特氏鹽芽抱桿菌TCI66207菌株及其破菌液及破菌液之用途。
在一些實施例中，一種特氏鹽芽抱桿菌(Halobacillus trueperi)TCI66207菌株，其寄存於財團法人食品工業發展研究所(寄存編號為BCRC910961)。
在一些實施例中，一種組合物，含有特氏鹽芽抱桿菌TCI66207菌株之破菌液。
在一些實施例中，一種特氏鹽芽抱桿菌(Halobacillus trueperi)TCI66207菌株之破菌液用於製備維持皮膚角質層完整及/或增加玻尿酸生成的組合物之用途。
任一實施例的特氏鹽芽抱桿菌TCI66207菌株寄存於財團法人食品工業發展研究所(寄存編號為BCRC910961)。在一些實施例中，特氏鹽芽抱桿菌TCI66207菌株之破菌液具有增進皮膚細胞粒線體活性的功能。又在一些實施例中，特氏鹽芽抱桿菌TCI66207菌株之破菌液具有促進細胞增生的功能。又在一些實施例中，特氏鹽芽抱桿菌TCI66207菌株之破菌液具有維持皮膚角質層完整及/或增加玻尿酸生成的功能。又在一些實施例，特氏鹽芽抱桿菌TCI66207菌株之破菌液提高角質蛋白(Keratin14)及/或玻尿酸合成酶基因(HAS3)的表現。
因此，在一些實施例中，特氏鹽芽抱桿菌TCI66207菌株之破菌液可用於製備維持皮膚角質層完整及/或增加玻尿酸生成的組合物；又在一些實施例中，特氏鹽芽抱桿菌TCI66207菌株之破菌液用於製備增進皮膚細胞粒線體活性的組合物；又在一些實施例中，特氏鹽芽抱桿菌TCI66207菌株之破菌液用於製備促進細胞增生的組合物。
圖1係以螢光顯微鏡(購自ZEISS)觀察不同組別之人類皮膚纖維母細胞受損程度。
圖2顯示特氏鹽芽抱桿菌TCI66207菌株之破菌液提升皮膚細胞粒線體活性。
圖3顯示特氏鹽芽抱桿菌TCI66207菌株之破菌液能促進皮膚細胞增生。
圖4顯示人類原發性表皮角質形成細胞在有或無特氏鹽芽抱桿菌TCI66207菌株之破菌液處理的情況下，其KRT14與HAS3基因的相對表現量。
圖5為受試者臉部肌膚塗抹包安慰劑在第0週以檢測儀所拍攝的圖像。
圖6為受試者臉部肌膚塗抹包安慰劑在第4週以檢測儀所拍攝的圖像。
圖7為受試者臉部尚未肌於膚塗抹包含特氏鹽芽抱桿菌TCI66207菌株之破菌液的精華液，在第0週以檢測儀所拍攝的圖像。
圖8為受試者臉部肌膚塗抹包含特氏鹽芽抱桿菌TCI66207菌株之破菌液的精華液，在第4週以檢測儀所拍攝的圖像。
圖9顯示受試者肌膚在第0週與第4週塗抹安慰劑與含有TCI66207菌株之破菌液的精華液A的肌膚水分散失狀況。
圖10顯示受試者肌膚在第0週與第4週塗抹安慰劑與含有TCI66207菌株之破菌液的精華液A的肌膚皺紋的狀況。
圖11顯示受試者肌膚在第0週與第4週塗抹安慰劑與含有TCI66207菌株之破菌液的精華液A的肌膚鬆弛度狀況。
關於本文中所使用之濃度符號「wt%」通常是指重量百分濃度，而濃度符號「vol%」通常是指體積百分濃度。
圖式中「*」代表p值小於0.05，「**」代表p值小於0.01，以及「***」代表p值小於0.001。當「*」越多時，代表統計上的差異越顯著。
在一些實施例中，特氏鹽芽抱桿菌(Halobacillus trueperi)TCI66207菌株，是分離自台灣東岸太平洋海域深度662公尺之海水的菌株。特氏鹽芽抱桿菌TCI66207以寄存編號BCRC910961寄存於財團法人食品工業發展研究所。特氏鹽芽抱桿菌TCI66207為革蘭氏陽性桿菌，生長於高鹽濃度環境，且為異營生物。在此，特氏鹽芽抱桿菌TCI66207生長的溫度為25℃，並可於2.5%氯化鈉(NaCl)的鹽度下生存。
在一些實施例中，一種組合物，含有所述的特氏鹽芽抱桿菌TCI66207菌株之破菌液。
在一些實施例中，TCI66207菌株之破菌液具有增進皮膚細胞粒線體活性的功能。
在一些實施例中，TCI66207菌株之破菌液具有促進皮膚細胞增生的功能。
在一些實施例中，TCI66207菌株之破菌液具有維持皮膚角質層完整及/或增加玻尿酸生成的功能。
在一些實施例中，TCI66207菌株之破菌液提高角質蛋白(Keratin14)及/或玻尿酸合成酶基因(HAS3)的表現。
在一些實施例中，特氏鹽芽抱桿菌(Halobacillus trueperi)TCI66207菌株之破菌液用於製備維持皮膚角質層完整及/或增加玻尿酸生成的組合物之用途。
在一些實施例中，TCI66207菌株之破菌液提高角質蛋白(Keratin14)及/或玻尿酸合成酶基因(HAS3)的表現。
在一些實施例中，TCI66207菌株之破菌液用於製備增進皮膚細胞粒線體活性的組合物之用途。
在一些實施例中，TCI66207菌株之破菌液用於製備促進皮膚細胞增生的組合物之用途。
在一些實施例中，前述組合物可為粉末狀、顆粒狀、液狀、膠狀或膏狀皮膚塗抹等方式給予一個體。前述組合物可製成食品、飲品、營養補充劑、或醫藥品，藉由口服方式給予一個體。
菌種鑑定
特氏鹽芽抱桿菌TCI66207將分離自台灣東岸太平洋海域深度662m的海水的分離菌株以鹽芽抱桿菌16S核糖體基因(16SrDNA)進行菌種鑑定。透過聚合酶連鎖反應(PCR)得到此分離菌株的16S核醣體
基因(16SrDNA)序列(即SEQ ID NO：1)。接著，將SEQ ID NO：1序列以美國國家生物技術資訊中心(NCBI)網站與其他特氏鹽芽抱桿菌的亞種之16S核醣體基因(16SrDNA)進行序列比對後可知，特氏鹽芽抱桿菌TCI66207為特氏鹽芽抱桿菌種。
範例一：TCI66207破菌液的制備
將特氏鹽芽抱桿菌(Halobacillus trueperi)TCI66207菌株的冷凍保存管中取出，以10vol%接種於培養基，於25℃培養三天得到菌液。
其中，培養基包含10vol%酵母抽提物(購自BD Pharminge公司，型號BD BactoTM212750)、0.09vol%磷酸氫二鉀(K2HPO4)(購自Sigma-Aldrich公司，型號P5656)、0.43vol%硫酸鎂(MgSO4)(購自Sigma-Aldrich公司，型號63138)、0.2vol%葡萄糖(購自Sigma-Aldrich公司，型號G7021)與2.5vol%氯化鈉(購自Sigma-Aldrich公司，型號S7653)。
接著，將菌液以轉速5000rmp/分鐘離心15分鐘，除去上清液收取菌泥，加入菌泥9倍重量的水並將菌泥均勻懸浮，得到溶液A。
接下來，使用反覆凍融法進行破菌：將溶液A放在-80℃的環境20分鐘，再將溶液A放在95℃的環境5分鐘。反覆進行此步驟5次，得到溶液B。
接著，將溶液B以轉速5000rmp/分鐘離心15分鐘，取上層澄清破菌液作為樣品A。0.25mL的樣品A(澄清破菌液)與99.75mL的水混合，作為細胞實驗之樣品B，換言之，樣品B的濃度為0.25vol%。
範例二：細胞實驗-皮膚抗氧化螢光損傷染色
將人類皮膚纖維母細胞(CCD-966sk,BCRC No.60153)培養於24孔培養盤中，每孔添加細胞培養基為3mL，每孔種植2×104個人類皮膚纖維母細胞，於37℃恆溫培養箱培養過夜(24小時)培養。
細胞培養基為添加每升1.5g的碳酸氫鈉、1mM(毫莫耳每升)的丙酮酸鈉、10vol%的牛胎血清(fetal bovine serum，購自Gibco公司)之90vol%伊格爾最低限度必需培養基(Minimum Essential Medium Eagle)(配於厄爾平衡鹽溶液(Earle's Balanced Salt Solution,Earle's BSS))。
將上述培養後的人類皮膚纖維母細胞分成以下三組別：實驗組、對照組與控制組。實驗組：前述人類皮膚纖維母細胞於培養盤中依照每一毫升的細胞培養基中加入0.01mL的樣品B(TCI66207破菌液)培養24小時後，加入1mM(毫莫耳每升)的雙氧水(H2O2)培養30分鐘。對照組：前述人類皮膚纖維母細胞不加入樣品B培養24小時後，加入1mM(毫莫耳每升)的雙氧水(H2O2)培養30分鐘。控制組：前述人類皮膚纖維母細胞不加入樣品B與雙氧水，培養24小時又30分鐘。
Prodidium iodide(PI)試劑(購自BD Pharminge公司，型號Cat.51-66211E)購買取得後體積稀釋250倍以得到PI溶液，膜聯蛋白V(購自eBioscience公司，型號Cat.00-0055-43)購買取得後以膜聯蛋白V結合緩衝液(Annexin V binding buffer)(購自eBioscience，型號Cat.00-0055-43)將體積稀釋250倍以得到膜聯蛋白V溶液。於前述培養人類皮膚纖維母細胞步驟後，各組別以PI試劑，以及膜聯蛋白V溶液染色
15至30分鐘。
接下來，各組別以Hoechst 33342溶液將細胞染色3分鐘。接著，各組別以磷酸鹽緩衝液(PBS)(購自Gibo公司)清洗細胞兩次。在此，Hoechst 33342試劑(購自Thermo公司，型號Cat.62249)購買取得後體積稀釋20000倍以得到Hoechst溶液。
請參閱圖1所示，所得到之經染色的細胞以螢光顯微鏡(購自ZEISS)觀察。細胞凋亡早期，磷脂醯絲氨酸(Phosphatidylserine)由膜脂內側翻向外側。膜聯蛋白V是鈣離子依賴性磷脂結合蛋白，可與磷脂醯絲氨酸特異結合。而PI試劑為核酸染料。因此，被膜聯蛋白V溶液及PI溶液染色的細胞為受損細胞或死細胞，其中，綠色螢光代表被膜聯蛋白V溶液染色的細胞，藍色螢光代表被PI溶液染色的細胞。
由圖1之結果可知，受損之人類皮膚纖維母細胞經過樣品B(TCI66207破菌液)處理後，被膜聯蛋白V溶液及PI溶液染色的細胞數量小於沒有經過樣品B處理的細胞數量。也就是說，受損之人類皮膚纖維母細胞經過樣品B處理後，可降低受損程度。
範例三：細胞實驗-皮膚細胞粒線體活性實驗
粒線體是供給細胞能量的胞器，並且參與細胞的氧化還原恆定及養分代謝，其正常運作對維持細胞的活力與增殖能力至關重要。為探討特氏鹽芽抱桿菌TCI66207菌株之破菌液對皮膚細胞粒線體功能的影響，本實施例以流式細胞儀評估人類皮膚纖維母細胞CCD-966SK經鹽芽抱桿菌TCI66207菌株之破菌液處理後，其粒線體活性的變化。
首先，將人類皮膚纖維母(CCD-966sk,BCRC No.60153)
細胞培養於6孔培養盤中，每孔添加細胞培養基為0.01mL，每孔種植1×105個人類皮膚纖維母細胞，並於37℃恆溫培養箱培養過夜(24小時)。此範例的細胞培養基與前述範例二的細胞培養基相同，故於此不再贅述。
將上述培養後的人類皮膚纖維母細胞分成以下二組：實驗組與控制組。實驗組：人類纖維母細胞於培養盤中加入0.01mL樣品B(TCI66207破菌液)後培養24小時。控制組：細胞培養基不添加樣品B，並培養人類纖維母細胞24小時。
接著，以磷酸鹽緩衝液(1XPBS)(購自Gibo公司)清洗各組別的細胞兩次。各組別再添加200μ的胰蛋白酶(Trypsin)(購自友和公司)在室溫(25℃)下反應5分鐘，使細胞由培養盤上脫落，並將細胞收集至先前收集培養液之15mL試管，將試管以300g離心5分鐘後以形成上清液及細胞沉澱物，並移除上清液，於暗室中再以1mL的磷酸鹽緩衝液(1XPBS)重新回溶各組別細胞沉澱物以形成細胞懸浮液。
接下來，於各組別細胞懸浮液中添加BDTM MitoScreen(JC-1，型號Cat.551302)粒線體特異性試劑於進行染色15分鐘。接著再以磷酸鹽緩衝液(PBS)清洗各組別細胞二次。並以流式細胞儀(購自BD Pharmingen公司，型號BDTM Accuri C6 Plus)分析觀察細胞粒線體膜電位改變，進行粒線體活性分析。
由圖2之結果可知，實驗組有經過樣品B(TCI66207破菌液)處理後，其正膜電位細胞比例約為56.133%，而控制組其正膜電位細胞比例約為47.6%，換言之，與控制組相較之下，實驗組的人類皮膚纖維母細胞的粒線體活性有顯著提升。顯示本發明實施例之特氏鹽芽抱桿菌
TCI66207菌株之破菌液可提升皮膚細胞之粒線體活性，而達到提升皮膚細胞活性之效果。其中，圖示中*表示P值<0.05，**表示P值<0.01，***表示P值<0.001。
範例四：細胞實驗-細胞增生實驗
將人類皮膚纖維母細胞(CCD-966sk，ATCC®CRL-1881TM)培養於6孔培養盤中，每孔細胞培養基為3mL(購自Gibco公司)，其中，細胞培養基為最低限度培養基(Minimum essential medium)(購自Gibco公司)，包含10vol%的牛胎血清(FBS)(購自Gibco公司)，1vol%的青黴素/鏈黴素(購自Gibco公司)和相對細胞培養基1mM丙酮酸鈉(毫莫耳每升)(購自Gibco公司)，每孔種植1×105個人類皮膚纖維母細胞，於37℃恆溫培養箱培養過夜(24小時)培養。
將上述培養過的人類皮膚纖維母細胞分成以下三組別：實驗組、對照組與控制組。實驗組：前述人類皮膚纖維母細胞於培養盤中依照每一毫升的細胞培養基中加入0.01mL的樣品B(TCI66207破菌液)後，培養人類纖維母細胞24小時。對照組：前述人類皮膚纖維母細胞於加入10vol%的牛胎血清(FBS)(購自Gibco公司)後，培養人類纖維母細胞24小時。控制組：細胞培養基不添加樣品B及牛胎血清(FBS)，並培養人類纖維母細胞24小時。
接下來，後續是依據細胞增生套組(Cell proliferation assay kits,Click-iTTM Plus EdU Flow Cytometry Assay Kits-Alexa FluorTM 488 picolyl azide,50 tests)(購自Invitrogen公司，型號C10632)的標準流程進行進行細胞增生分析。於各組別加入相對培養基10μM的胸腺嘧啶脫
氧核苷類似物(5-ethynyl-2'-deoxyuridine，後稱EdU)後接續培養各組別細胞1至2個小時。
接著，移除細胞培養基，並添加0.5vol%的胰蛋白酶(Trypsin)(購自友和公司)，使細胞由培養盤上脫落，並收集細胞。再以含有1vol%的牛胎血清蛋白(BSA)的磷酸緩衝液(PBS)(購自友和公司)清洗各組別細胞一次。接著，各組別加入100μl的Click-iTTM fixative固定細胞，並放置於室溫(25℃)避光處理15分鐘。接著，再以含有1vol%牛胎血清蛋白(BSA)的磷酸緩衝液(PBS)(購自友和公司)清洗各組別細胞一次。接著，加入100μl的Click-iTTM saponin-based permeabilization and wash reagent，放置於室溫(25℃)，避光處理15分鐘。
接下來，依照Cell proliferation assay kits,Click-iTTM Plus EdU(購自InvitrogenTM公司，型號C10632)配置雞尾酒反應試劑(Click-iTTM Plus reaction cocktail)準備Click-iTTM反應。須注意的是，雞尾酒反應試劑配置後需於15分鐘內使用完畢。
各組別細胞加入配置好的雞尾酒反應試劑(Click-iTTM Plus reaction cocktail)，並放置室溫(25℃)並避光處理30分鐘。
接著，各組別細胞以Click-iTTMsaponin-based permeabilization溶液清洗細胞並去除上清液，並以500μL Click-iTTMsaponin-based permeabilization回溶。
接下來，以流式細胞儀(購自BD Pharmingen公司)，以激發光488nm及放射光530nm。量測出之數值以微軟EXCEL軟體，利用
Student-t檢定分析二數值間的統計顯著性，其結果如圖3所示。其中，實驗組與空白組相對照，*表示P值<0.05，**表示P值<0.01，***表示P值<0.001。
由圖3可見，有添加樣品B(TCI66207破菌液)的實驗組實驗組的相對EdU結合(relative EdU incorporation)倍數有顯著的增加。皮膚細胞增生百分比相較於控制組增加了24.9%，添加牛胎血清(FBS)對照組皮膚細胞增生百分比相較於控制組僅增加11.7%，因此可證明本發明的特氏鹽芽抱桿菌TCI66207菌株之破菌液的確有促進皮膚細胞增生的效果。
範例五：基因試驗
將人類原發性表皮角質形成細胞(human primary epidermal keratinocytes HPEK-50，購自CELLnTEC公司)培養於6孔培養盤中，每孔添加2mL細胞培養基(Keratinocyte-SFM 1X，購自Thermo公司)，並每孔種植1×105個人類原發性表皮角質形成細胞，於37℃恆溫培養箱培養過夜(24小時)培養。
細胞基因表現測試的組別分為2組別：實驗組與控制組。實驗組：依照每一毫升細胞培養基加入樣品B(TCI66207破菌液)0.01mL的比例，於37℃下與人類原發性表皮角質形成細胞於共同培養6小時後，再收取細胞內的RNA進行分析。控制組：不添加樣品B，於37℃下培養人類原發性表皮角質形成細胞6小時後，再收取細胞內的RNA進行分析。
各組別培養6小時後，去除含有樣品B(TCI66207破菌液)的培養基或純培養基，取下清洗後的細胞並以裂解液(購自友和公司)破
細胞後，再以RNA萃取試劑套組(購自Geneaid公司，台灣)萃取各組別細胞內的RNA，接著利用SuperScript®III反轉錄酶(購自Invitrogene公司)之萃取RNA為模板並以引子產生mRNA反轉錄之相應cDNA產物。以cDNA作為模版，並且使用用來擴增標的基因的引子對，引子對為KRT14、HAS3與TBP(作為內部對照組)之引子(列於下表一)。在StepOne Plus即時PCR系統(ABI)中利用KAPA CYBR FAST qPCR套組(2x)(KAPA Biosystems)來進行量即時反轉錄聚合酶連鎖反應(Quantitative real-time everse transcription polymerase chain reaction)試驗，以定量KRT14與HAS3基因之mRNA表現量。
標的基因的相對表現量是堆導自方程式2-△△ct，並利用TBP基因(作為內部對照組)及基準基因的循環域值及藉由標準差來計算相對倍數變化，其中△Ct=Ct目標基因/基準基因-CtTBP，△△Ct=△Ct目標基因-△Ct基準基因，倍數變化=2-△△ct 平均值。以對照組的標的基因表現量作為1的比較基準。個組織間的統計學顯著差異是藉由單尾史徒登氏t-檢定來決定。
需要特別說明的是，圖示中之基因相對表現量是將控制組的表現量視為1來計算各組別的表現量。，並且，各組之間的統計學顯著差異是藉由學生t-試驗(student t-test)來統計分析。圖式中「*」代表p值小於0.05，「**」代表p值小於0.01，以及「***」代表p值小於0.001。當「*」越多時，代表統計上的差異越顯著。
本實驗例的結果顯示於圖4，與對照組相較之下，實驗組KRT14和HAS3的基因表現量有顯著的提升。特氏鹽芽抱桿菌TCI66207菌株之破菌液可以提升KRT14基因的表現，詳細來說，當對照組的KRT14基因表現量為1時，實驗組的KRT14基因表現量為1.52倍，因此，特氏鹽芽抱桿菌TCI66207菌株之破菌液，能維持角質細胞排列，使皮膚角質組織完整，進而防止肌膚水分散失。
另一方面，特氏鹽芽抱桿菌TCI66207菌株之破菌液可以提升HAS3之基因的表現，詳細來說，當對照組的HAS3基因表現量為1時，實驗組的HAS3之基因表現量為1.34倍，因此，特氏鹽芽抱桿菌TCI66207菌株之破菌液能促進內生性玻尿酸生成，以維持肌膚的彈性及光澤。
範例六：人體實驗
8位受試者每日早晚清潔臉部後，將包含特氏鹽芽抱桿菌TCI66207菌株之破菌液的精華液(精華液A)與安慰劑分別塗抹於左右半臉，以指腹稍加按摩促進吸收，並持續4週。其中，精華液A成分主要是1vol%之樣品A與99vol%的空白精華液，其中空白精華液的成分包含93.5vol%的水、0.6vol%的馨鮮酮、0.vol%的己二醇、5vol%的1,3丁二酮、0.2vol%的三仙膠及0.1vol%的三乙醇胺。
並於開始使用之第0週(未塗抹過精華液A或安慰劑)，以及使用後之第4週(連續塗抹精華液A或安慰劑)，分別以儀器(DermaLab® Combo皮膚分析儀)進行檢測。
請參閱圖5及圖6，塗抹安慰劑的受試者，眼下皺紋於第4週(如圖6所示)相較於第0週(如圖5所示)的皺紋無明顯的減少或是變淺。請參閱圖7及圖8，塗抹精華液A的受試者，眼下的皺紋於第4週(如圖8所示)相較於第0週(如圖7所示)的皺紋較淺且稀疏。由此可知，相較於第0週時的皺紋狀態，在連續塗抹包含特氏鹽芽抱桿菌TCI66207菌株之破菌液的精華液後，受試者的皺紋減少，換言之，特氏鹽芽抱桿菌TCI66207菌株之破菌液具有改善皺紋的能力。
於儀器(DermaLab® Combo皮膚分析儀)檢測後，將第0週之肌膚狀況為基準(即第0週之相對肌膚狀況為100%)，計算第4週的相對肌膚狀況(%)。並且，第0週的相對肌膚狀況與第4週的相對肌膚狀況之間的統計學顯著差異是藉由學生t-試驗來統計分析，如圖9至圖11所示。在圖9至圖11中，「*」代表在與第0週比較下其p值小於0.05。
請參閱圖9，塗抹安慰劑的受試者，肌膚水分散失狀況於第4週相較於第0週上升了1.2%，然而塗抹精華液A的受試者，肌膚水分散失狀況第4週相較於第0週下降了4.9%，也就是在連續塗抹含有TCI66207菌株之破菌液的精華液後，受試者的肌膚具有較佳的保水度。
請參閱圖10，塗抹安慰劑的受試者，肌膚皺紋的狀況於第4週相較於第0週上升了14.8%，然而塗抹精華液A的受試者，肌膚皺紋的狀況第4週相較於第0週下降了19.1%，也就是在連續塗抹含有TCI66207菌
株之破菌液的精華液後，受試者的肌膚具的皺紋得到改善。
請參閱圖11，塗抹安慰劑的受試者，肌膚鬆弛度於第4週相較於第0週下降4.6%，然而塗抹精華液A的受試者，肌膚皺紋的狀況第4週相較於第0週下降了19.1%，也就是在連續塗抹含有TCI66207菌株之破菌液的精華液後，減緩受試者肌膚鬆弛狀況。
綜上所述，在一些實施例中，特氏鹽芽抱桿菌TCI66207菌株之破菌液具有皮膚細胞粒線體活性的功能。在一些實施例中，TCI66207菌株之破菌液具有促進皮膚細胞增生的功能。在一些實施例中，TCI66207菌株之破菌液能提高角質蛋白(Keratin14)基因的表現，因而具有維持皮膚角質層完整的功能。在一些實施例中，TCI66207菌株之破菌液能提高玻尿酸合成酶基因(HAS3)的表現，因而具有增加玻尿酸生成的功能。
雖然本發明的技術內容已經以較佳實施例揭露如上，然其並非用以限定本發明，任何熟習此技藝者，在不脫離本發明之精神所作些許之更動與潤飾，皆應涵蓋於本發明的範疇內，因此本發明之保護範圍當視後附之申請專利範圍所界定者為準。
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- 一種組合物，含有特氏鹽芽抱桿菌(Halobacillus trueperi)TCI66207菌株之破菌液，且該特氏鹽芽抱桿菌TCI66207菌株寄存於財團法人食品工業發展研究所且寄存編號為BCRC910961，其中該破菌液為將菌泥反覆凍融並離心而取得之上層澄清液。
- 如請求項1所述的組合物，其中該破菌液具有增進皮膚細胞粒線體活性的功能。
- 如請求項1所述的組合物，其中該破菌液具有促進皮膚細胞增生的功能。
- 如請求項1所述的組合物，其中該破菌液具有透過提高角質蛋白(Keratin14)基因的表現以維持皮膚角質層完整及/或透過提高玻尿酸合成酶基因(HAS3)基因的表現以增加玻尿酸生成的功能。
- 如請求項1所述的組合物，其中該組合物為醫藥組成物或化妝品組成物。
- 一種如請求項1所述的組合物，用於製備增進皮膚細胞粒線體活性的組合物之用途。
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