CN114561331B - 一株副干酪乳杆菌及其应用 - Google Patents

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Abstract

本发明涉及微生物技术领域，尤其涉及一株副干酪乳杆菌及其应用。本发明提供了保藏编号为CCTCC NO:M 20211347的副干酪乳杆菌，本发明提供的副干酪乳杆菌可以调节人体皮肤、肠道、口腔等微生物菌群，促进表皮细胞增殖及修复，同时具有抗炎、抗氧化的功效，副干酪乳杆菌SEUNEU‑105在医药品、食品、保养品或化妆品中的应用。

Description

一株副干酪乳杆菌及其应用
技术领域
本发明涉及微生物技术领域，尤其涉及一株副干酪乳杆菌及其在制备除臭和/或护理皮肤的产品中的应用。
背景技术
皮肤作为人体最大的器官生活着广泛的微生物，在过去的十年中，新技术的使用促进了皮肤微生物群的分类学分析，皮肤微生物群的细菌总数可达到约1010种，属于超过25个门的微生物，其中最具代表性的是放放线菌门、厚壁菌门和变形菌门。
研究表明，多种皮肤疾病都与皮肤微生物组的改变有关。例如，对于痤疮，痤疮丙酸杆菌被认为是主要与其相关的细菌，当发生痤疮时皮肤表面痤疮丙酸杆菌数量明显增高。有体臭症状的人群，皮肤表面的溶血葡萄球菌和人葡萄球菌数量明显增高，研究表明，葡萄球菌属发酵所产生的异戊酸就是足臭的主要气味来源。而相反的患有特异性皮炎的病人，皮肤表面的菌群副干酪乳杆菌丰度降低，金黄色葡萄球菌丰度显着升高。
现有技术中往往使用抗菌剂达到消除病原菌的目的，但除消除有益细菌外，抗生素还具有消除有益菌、致敏的风险和潜在的不良事件，特别是在长期使用广谱抗生素的情况下，会导致皮肤菌群的失衡，并且很难进行重建。并且，由于近年来抗生素的滥用，导致多种致病菌产生耐药性，使抗生素的使用范围越来越窄，并且需要不断地更新换代来抵抗新的耐药菌株，从而产生更多新的耐药菌株。但如何在抑制有害菌同时保护有益菌，从而改善皮肤环境尚是本领域亟待解决的问题。
发明内容
有鉴于此，本发明要解决的技术问题在于提供一株副干酪乳杆菌及其在制备除臭和/或护理皮肤的产品中的应用。
本发明提供了保藏编号为CCTCC NO: M 20211347的副干酪乳杆菌（Lactobacillus paracasei）。
本发明还提供了所述副干酪乳杆菌在制备除臭和/或护理皮肤的产品中的应用。
本发明中，所述除臭包括抑制体臭相关病原菌和/或降低体臭相关病原菌的产异戊酸能力。
本发明中，所述的体臭包括人体皮肤、肠道、口腔等部位的异味。其中，人体皮肤部位的异味包括腋下、脚部、腹股沟、外因、会阴等部位。
一些实施例中，所述体臭相关病原菌包括：金黄色葡萄球菌、表皮葡萄球菌、人葡萄球菌、溶血葡萄球菌中至少一种。
本发明中，所述护理皮肤包括：抗菌、抗炎、抗氧化、修复皮肤屏障和/或保湿。
一些实施例中，所述抗菌包括抑制金黄色葡萄球菌、变异链球菌、铜绿假单胞菌中至少一种。
一些实施例中，所述抗炎是抗由LPS诱导的炎症。具体的，是抗由LPS诱导的表皮细胞的炎症。所述表皮细胞为角质形成细胞。一些具体实施例中，所述抗炎包括降低NO释放量和/或下调炎症因子水平。所述炎症因子包括IL-8、COX-2中至少一种。
一些实施例中，所述抗氧化包括：清除羟自由基和/或ABTS自由基。所述抗氧化还包括提高总抗氧化能力。
一些实施例中，所述修复皮肤屏障包括修复皮肤细胞和/或上调屏障修复相关基因水平。
一些具体实施例中，所述屏障修复相关基因包括FLG、IVL、LOR、OVOL1、OCLN中至少一种。所述屏障修复相关基因为表皮细胞的屏障修复相关基因。所述表皮细胞为角质形成细胞。
一些具体实施例中，所述修复皮肤细胞包括在SDS诱导条件下保护皮肤细胞的存活率。一些实施例中，所述皮肤细胞为角质形成细胞。
一些实施例中，所述保湿包括上调保湿相关基因水平，所述保湿相关基因包括AQP3和/或GBA。具体的，所述保湿基因为表皮细胞的保湿相关基因。所述表皮细胞为角质形成细胞。
本发明还提供了一种除臭和/或护理皮肤的产品，其原料包括本发明所述的副干酪乳杆菌。
本发明中，所述护肤的产品为化妆品或药物。
本发明中，所述产品的为外用制剂。
一些实施例中，本发明所述产品中包括如下i）~iv）中至少一种：
i）、保藏编号为CCTCC NO:M 20211347的副干酪乳杆菌的活菌；
ii）、灭活的保藏编号为CCTCC NO:M 20211347的副干酪乳杆菌；
iii）、保藏编号为CCTCC NO:M 20211347的副干酪乳杆菌的培养物；
iv）、保藏编号为CCTCC NO:M 20211347的副干酪乳杆菌的提取物。
本发明中，所述培养物包括培养获得的培养液，或者所述培养液经分离获得的上清液或菌体，或培养液经细胞破碎后获得的悬浮液。
本发明中，所述的提取物包括对培养物提取获得的多糖、蛋白或其他次生代谢产物。
本发明还提供了一种去除体臭和/或护理皮肤的方法，其为给予本发明所述的护肤的产品。
本发明中，所述护肤方法中，所述给予的方式包括喷雾、涂抹、贴敷和/或导入。
本发明提供了保藏编号为CCTCC NO: M 20211347的副干酪乳杆菌，本发明提供的副干酪乳杆菌可以调节人体皮肤、肠道、口腔等微生物菌群，促进表皮细胞增殖及修复，同时具有抗炎、抗氧化的功效，副干酪乳杆菌SEUNEU-105在医药品、食品、保养品或化妆品中的应用。
生物保藏证明
副干酪乳杆菌SEUNEU-105 Lactobacillus paracasei SEUNEU-105，于2021年11月01日保藏在中国典型培养物保藏中心，地址为:中国，武汉，武汉大学，保藏编号为CCTCCNO: M 20211347。
附图说明
图1示SEUNEU-105体臭相关病原菌抑菌率；
图2示SEUNEU-105金黄色葡萄球菌等病原菌抑菌率；
图3示SEUNEU-105降低金黄色葡萄球菌诱导的HaCaT炎性因子表达量；
图4示SEUNEU-105 降低Raw264.7细胞NO释放量；
图5示SEUNEU-105促进HaCaT细胞损伤修复；
图6示SEUNEU-105上清液上调屏障修护相关基因表达；
图7示SEUNEU-105灭活菌体上调屏障修护相关基因表达；
图8示SEUNEU-105上清液上调保湿相关基因的表达；
图9示SEUNEU-105灭活菌体上调保湿相关基因的表达；
图10示SEUNEU-105清除自由基能力。
具体实施方式
本发明提供了一株副干酪乳杆菌及其应用，本领域技术人员可以借鉴本文内容，适当改进工艺参数实现。特别需要指出的是，所有类似的替换和改动对本领域技术人员来说是显而易见的，它们都被视为包括在本发明。本发明的方法及应用已经通过较佳实施例进行了描述，相关人员明显能在不脱离本发明内容、精神和范围内对本文的方法和应用进行改动或适当变更与组合，来实现和应用本发明技术。
本发明从5岁龄健康男童鼻腔分离出一株副干酪乳杆菌（Lactobacillus paracasei），记为SEUNEU-105，该菌株革兰氏阳性，显微镜下呈短杆状，无芽孢，无鞭毛；在MRS平板上生长，可形成表面光滑圆润的小菌落，乳白色，边缘整齐；在MRS液体培养基中呈均匀浑浊生长，久置菌体呈白色沉淀。最适生长温度35～38℃，适宜pH为3.0～7.0。将其保藏于中国典型培养物保藏中心，保藏号为CCTCC NO:M20211347。
研究表明，本发明提供的副干酪乳杆菌可以调节人体皮肤、肠道、口腔等微生物菌群，促进表皮细胞增殖及修复，同时具有抗炎、抗氧化的功效，副干酪乳杆菌SEUNEU-105在医药品、食品、保养品或化妆品中的应用。
进一步的，本发明提供的保藏编号为CCTCC NO: M 20211347的副干酪乳杆菌应用中的存在形式为存活的或灭活的，或为裂解物和/或提取物的形式，或为细菌产物的形式，或为上清液形式，或衍生物形式。所述衍生物形式包括但不限于：代谢产物、代谢生物产物、益生素、细胞壁或其相关成分、胞外多糖、或含有免疫原性成分的化合物。本发明实施例中，以保藏编号为CCTCC NO: M 20211347的副干酪乳杆菌的培养上清液、菌体或灭活菌体为受试物进行实验验证。
体外抑菌试验表明，本发明的副干酪乳杆菌SEUNEU-105对金黄色葡萄球菌、变异链球菌、人葡萄球菌、溶血葡萄球菌、铜绿假单胞菌等病原菌均具有较强的抑制作用，抑菌率均大于25%，最高可达70%。
体外细胞实验表明，本发明的副干酪乳杆菌SEUNEU-105具有抗炎作用，能够降低LPS诱导的Raw264.7细胞NO释放量，与对照组比可降低13%-30%；能够降低金黄色葡萄球菌诱导的HaCaT细胞炎症相关基因IL-8、COX-2的表达，抑制率22-31%。
体外细胞实验表明，本发明的副干酪乳杆菌SEUNEU-105具有促进表皮细胞修复的作用，SEUNEU-105提升SDS损伤的HaCaT细胞存活率，与对照比增加了5%-32%。
体外细胞实验表明，本发明的副干酪乳杆菌SEUNEU-105具有修复皮肤屏障的作用，SEUNEU-105可上调屏障修复相关丝聚合蛋白（filaggrin) FLG、外皮蛋白（Involucrin）IVL、人紧密连接蛋白(Human Occludin) OCLN、兜甲蛋白(loricrin) LOR、Ovo样转录因子1（Ovo Like Transcriptional Repressor 1）OVOL1的表达，可上调1.2~3.4倍。
体外细胞实验表明，本发明的副干酪乳杆菌SEUNEU-105具有上调保湿因子水通道蛋白3（Aquaporin 3）AQP3、保湿因子β-葡糖脑苷脂酶(β-glucocerebrosidase) GBA基因表达量的作用，上调表达1.2~3.7倍。
体外细胞实验表明，本发明的副干酪乳杆菌SEUNEU-105具有清除羟自由基、ABTS自由基的作用，与对照比，羟自由基清除率18%-25%、ABTS自由基清除率25%~32%，总抗氧化能力提高30%。
体外实验表明，本发明的副干酪乳杆菌SEUNEU-105具有降低葡萄球菌产异戊酸（即体臭的主要来源物质）含量的作用，与对照比，异戊酸降低率57%。
本发明中，所述药物为外用制剂，其剂型包括溶液剂、洗剂、乳剂、粉剂、软膏、糊剂。其中，所述洗剂包括水粉剂或混悬剂。
本发明中，所述化妆品可分为：清洁类化妆品、护理类化妆品及美容/修饰类化妆品。所述清洁类化妆品是指以涂抹、喷洒或其他类似方法，施于人体表面(如表皮、毛发、指甲、口唇等)，起到清洁卫生作用或消除不良气味的化妆品。所述护理类化妆品是指以涂抹、喷洒或其他类似方法，施于人体表面(如表皮、毛发、指甲、口唇等)，起到保养作用的化妆品。所述美容/修饰类化妆品是指以涂抹、喷洒或其他类似方法，施于人体表面(如表皮、毛发、指甲、口唇等)，起到美容、修饰、增加人体魅力作用的化妆品。
皮肤适用的清洁类化妆品包括：洗面奶、卸妆水(乳)、清洁霜(蜜)、面膜、花露水、痒子粉、爽身粉或浴液；皮肤适用的护理类化妆品包括护肤膏霜、乳液或化妆水；皮肤适用的美容/修饰类化妆品包括：粉饼、胭脂、眼影、眼线笔(液)、眉笔、香水或古龙水；毛发适用清洁类化妆品包括洗发液、洗发膏或剃须膏；毛发适用的护理类化妆品包括护发素、发乳、发油/发蜡或焗油膏；毛发适用的美容/修饰类化妆品包括：定型摩丝/发胶、染发剂、烫发剂、睫毛液(膏)、生发剂或脱毛剂；指甲适用的清洁类化妆品包括洗甲液；指甲适用的护理类化妆品包括护甲水（霜）、指甲硬化剂；指甲适用的美容/修饰类化妆品包括指甲油；口唇适用的清洁类化妆品包括唇部卸妆液；口唇适用的护理类化妆品包括润唇膏；口唇适用的及美容/修饰类化妆品包括：唇膏、唇彩或唇线笔。
本发明采用的试材皆为普通市售品，皆可于市场购得。下面结合实施例，进一步阐述本发明：
实施例1 菌株的分离
MC琼脂培养基：大豆蛋白胨5g，牛肉浸膏5g，酵母浸膏5g，葡萄糖20g，乳糖20g，碳酸钙10g，琼脂15g，1%中性红溶液5ml，蒸馏水1000ml,pH值6，121℃灭菌15min。
MRS液体培养基：蛋白胨10g，牛肉膏10g，酵母膏5g，柠檬酸氢二铵2g，葡萄糖20g，吐温-80 l ml，乙酸钠5g，磷酸氢二钾2g，硫酸镁0.58g，硫酸锰0.25g，蒸馏水1000ml，pH值6.2～6.4，121℃灭菌15min。
样品来源于5岁龄健康男童志愿者鼻腔。无菌采样于盛有5ml甘油的灭菌取样管中，取回后-20℃冷冻。分离时，将样品回溶，取1g于9ml生理盐水中震荡混匀，取上清划线于MC平板，37℃恒温培养24～48h后，挑取红色有溶钙圈的菌落，反复接种筛选，直至得到均匀的单个菌落，命名为SEUNEU-105。
革兰氏染色镜检：菌株SEUNEU-105为G+，显微镜下呈短杆状，无芽孢，无鞭毛；在MC平板上生长，可形成粉色、表面光滑圆润的针尖状小菌落，边缘整齐，有溶钙圈；在MRS液体培养基中呈均匀浑浊生长，久置菌体呈白色沉淀。
实施例2 菌株的核酸鉴定
1、引物：
根据GenBank中登录的乳酸菌16S rRNA的基因序列，设计引物：
F 5’-TCGGCTCGTAAAACTCTG-3’；
R 5’-GGACTTAACCCAACATCTCA-3’。
引物由上海生物工程有限公司合成，扩增片段为V3-V7，长682bp。
2、16s rRNA基因序列分析：
挑取单菌落置MRS离心管中，37℃培养过夜后，离心收集菌体，按照DNA提取试剂盒步骤进行操作。PCR扩增体系为50μL体系，95℃预变性10min；93℃ 1min，55℃ 1min，72℃1min，35个循环；72℃延伸7min。
3、结果
用1.2%琼脂糖凝胶电泳分析PCR产物，在682 bp处出现特异性目的条带，与预期大小相符合，测序结果与GenBank中已发表的标准序列进行同源性比较后得出SEUNEU-105菌株为副干酪乳杆菌（Lactobacillus paracasei）。
实施例3 SEUNEU-105抑制体臭相关病原菌实验
1、副干酪乳杆菌SEUNEU-105菌液制备：
将活化的副干酪乳杆菌SEUNEU-105菌液以MRS液体培养基培养于37℃培养箱静置培养16-18h，检测并调整OD600=2.0，121℃，30min灭活，离心取上清液，0.22μm滤膜过滤，得待测样品。
2、体臭相关病原菌菌液制备：
将2种体臭相关病原菌：人葡萄球菌CGMCC No.1.493、溶血葡萄球菌CGMCCNo.1.540、以BHI培养基37℃培养18h，检测OD600测定菌数，调整病原菌菌液浓度为1×108cells/mL。
3、抑制病原菌实验
将灭活上清液以10%体积分数加入病原菌培养基中，37℃培养2h，以菌液浓度（OD600）降低百分比评价对病原菌生长影响。
4、结果如表1：
Figure 185314DEST_PATH_IMAGE001
反应24h，SEUNEU-105对人葡萄球菌、溶血葡萄球菌等体臭相关病原菌均具有较强的抑制作用，可用于体臭的相关治疗。SEUNEU-105 体臭相关病原菌抑菌率结果见图1。
实施例4 SEUNEU-105菌株抑制金黄色葡萄球菌等致病菌抑菌实验-菌液浓度变化
1、副干酪乳杆菌SEUNEU-105菌液制备：
将活化的副干酪乳杆菌SEUNEU-105菌液以MRS液体培养基培养于37℃培养箱静置培养16-18h，检测并调整OD600=2.0，121℃，30min灭活，离心取上清液，0.22μm滤膜过滤，得待测样品。
2、病原菌菌液制备：
将3种病原菌：金黄色葡萄球菌金黄亚种CGMCC 1.8721、变异链球菌 CGMCCNo.1.2499、铜绿假单胞菌CGMCC No. 1.1783以BHI培养基37℃培养18h，检测OD600测定菌数，调整病原菌菌液浓度为1×108 cells/mL。
3、抑制病原菌实验
将灭活上清液以10%体积分数加入病原菌培养基中，37℃培养2h，以菌液浓度（OD600）降低百分比评价对病原菌生长影响。
4、结果如表2所示：
Figure 164772DEST_PATH_IMAGE002
结果显示SEUNEU-105对金黄色葡萄球菌、变异链球菌、铜绿假单胞菌均具有抑制作用。SEUNEU-105 抑制金黄色葡萄球菌等致病菌抑菌率结果见图2。
实施例5 SEUNEU-105菌株下调金黄色葡萄球菌诱导的HaCaT细胞炎性因子表达量
1、副干酪乳杆菌样品制备
将副干酪乳杆菌SEUNEU-105用MRS培养基培养过夜，检测OD600，调整菌液浓度至1×108cell/ml，离心后，菌体121℃高压灭菌30min得菌体，离心沉淀用PBS回溶，调整菌液浓度至1×108 cell/ml得灭活菌体。
2、细胞制备
将HaCaT细胞消化后以4×105 cell/孔 接种至24孔板，5%二氧化碳培养箱37℃培养过夜。
3、金黄色葡萄球菌制备及添加
金黄色葡萄球菌接入肉汤培养基，37℃摇床培养过夜，用MEM无血清培养基调整菌液浓度至3×109 cell/ml，每孔100μl添加入培养过夜的HaCaT细胞中，刺激细胞产生炎症因子，3h后弃去细胞培养基，PBS清洗5次，每孔重新加入1ml MEM无血清培养基。
4、副干酪乳杆菌添加
将SEUNEU-105灭活菌体以10%体积分数加入金黄色葡萄球菌刺激过的HaCaT细胞中，每组3个复孔，培养过夜。
5、检测炎性因子表达量
将上述细胞弃去培养基后，用RNA提取试剂盒提取RNA，检测RNA浓度及纯度，将所有样品RNA总量调整至1000 ng进行反转录及qPCR。
公式：F=2-ΔΔCT
结果如表3：
Figure 23137DEST_PATH_IMAGE004
SEUNEU-105灭活菌体能够下调金黄色葡萄球菌诱导的HaCaT炎性因子IL-8、COX-2表达量，因此本发明的副干酪乳杆菌具有抗炎作用。SEUNEU-105灭活菌体下调炎症相关因子的表达结果见图3。
实施例6 SEUNEU-105降低LPS诱导的Raw264.7细胞NO释放量
1、副干酪乳杆菌样品制备
将副干酪乳杆菌SEUNEU-105用MRS培养过夜，检测OD600，调整OD600=0.2，121℃高压灭菌30min，离心后，离心上清用0.22μm滤膜过滤得上清液，沉淀用1 ml PBS回溶得灭活菌体。
2、细胞制备
将Raw264.7细胞消化后以2×105cell/孔接种至24孔板，5%二氧化碳培养箱37℃培养过夜。
3、SEUNEU-105添加及LPS刺激
受试组1：受试细胞中添加SEUNEU-105上清液5%（体积分数）；
受试组2：受试细胞中添加SEUNEU-105灭活菌体10%（质量分数）。
将上述两组受试物加入培养过夜的Raw264.7细胞中，2h后以200ng LPS诱导Raw264.7细胞发炎，20h后取细胞培养上清用NO含量检测试剂盒进行NO含量检测，共进行三批实验，每次3个复孔。实验以不添加受试物的经LPS诱导Raw264.7细胞发炎模型为对照，计算受试组1和受试组2对NO生成量的抑制率。
结果如表4：
Figure 887188DEST_PATH_IMAGE005
与LPS对照组相比， SEUNEU-105发酵清液NO抑制率15.87%；灭活菌体NO抑制率21.96%，SEUNEU-105对LPS诱导Raw264.7释放的NO均具有抑制作用。SEUNEU-105降低Raw264.7细胞 NO生成量见图4。
实施例7 SEUNEU-105菌株促进HaCaT细胞损伤修复实验
接种HaCaT细胞（5×105cell/孔）至96孔板，过夜培养至细胞贴壁。配制50μg/mlSDS，每孔加入100μl，孵育8h，
实验分为三组：
对照组不添加含有SEUNEU-105的成分；
受试组1加入5%（体积分数） SEUNEU-105的灭活上清液；
受试组2加入10%（质量分数） SEUNEU-105的灭活菌体。
然后各组继续孵育24h。加入10μl CCK-8溶液，孵育4h，检测450nm处吸光值。
细胞存活率=（A实验组-A空白对照组）/（A阴性对照组-A空白对照组）。
结果如表5：
Figure 295036DEST_PATH_IMAGE006
SEUNEU-105上清液SDS损伤修复细胞存活率为114.52%，与对照比增加了14.52%；灭活菌体SDS损伤修复细胞存活率为116.59%，与对照比增加了16.59%，SEUNEU-105上清液及灭活菌体均对SDS损伤的HaCaT细胞有修复作用。SEUNEU-105 促进HaCaT细胞修复结果见图5。
实施例8 SEUNEU-105上调HaCaT屏障修复相关基因表达实验
接种人永生化角质形成细胞HaCaT细胞（5×105cell/孔）至6孔板，过夜培养至细胞贴壁。实验分为三组，control的孔中不加入受试物，受试组1的细胞中加入SEUNEU-105上清液5%（体积分数），受试组2加入灭活菌体10%（质量分数）。各组分别培养24h后，加入裂解液，提取细胞总RNA，检测提取RNA纯度及浓度，将所有样品RNA总量调整至1000 ng，反转录为cDNA，进行qPCR检测FLG、IVL、LOR、OVOL1的表达。根据公式进行计算表达变化倍数。
公式：F=2-ΔΔCT
结果如表6~7：
Figure 320761DEST_PATH_IMAGE007
Figure 164958DEST_PATH_IMAGE008
结果显示：加入SEUNEU-105上清液、灭活菌体孵育后，FLG、IVL、LOR、OVOL1、OCLN五个基因表达均上调，因此SEUNEU-105具有促进皮肤屏障修护的作用。SEUNEU-105上调HaCaT屏障修复相关基因表达结果见图6、图7。
实施例9 SEUNEU-105上调HaCaT保湿相关基因表达实验
接种人永生化角质形成细胞HaCaT（5×105 cells/孔）至6孔板，过夜培养至细胞贴壁。实验分为三组，control的孔中不加入受试物，受试组1的细胞中加入菌株上清液5%（体积分数），受试组2加入灭活菌体10%（质量分数）。各组分别培养24h后，加入裂解液，提取细胞总RNA，检测RNA浓度及纯度，将所有样品RNA总量调整至1000 ng，并反转录为cDNA，进行qPCR检测保湿相关基因AQP3、GBA的表达。根据公式进行计算表达变化倍数。
公式：F=2-ΔΔCT
结果如表8~9：
Figure 957333DEST_PATH_IMAGE009
Figure 95053DEST_PATH_IMAGE010
结果显示加入SEUNEU-105上清液、灭活菌体孵育后，保湿相关基因AQP3、GBA基因表达上调，因此SEUNEU-105具有保湿的作用。
SEUNEU-105上调保湿基因表达结果见图8、图9。
实施例10 SEUNEU-105菌株的总抗氧化能力检测
1、副干酪乳杆菌SEUNEU-105上清的制备：将活化的副干酪乳杆菌SEUNEU-105菌液以MRS培养于37℃培养箱静置培养16-18小时，使用分光亮度计OD600nm测定菌数，调整副干酪乳杆菌液浓度度为1×109 cells/mL，离心取上清高压灭活并过0.22μm的滤膜得到灭菌上清。
2、准备总抗氧化能力（T-AOC）检测试剂盒
3、使用96孔板200μL体系按照试剂盒说明加入试剂和SEUNEU-105上清液，反应10min后用酶标仪在593nm下测定吸光值。根据吸光值带入标椎曲线计算得到X值。
4、总抗氧化能力（μmol/mL）=X×V反总÷V样= X×34
V反总：反应总体积，1.02mL；V样：反应中样本体积，0.03mL。
5、结果如表10：
Figure 432625DEST_PATH_IMAGE011
按照总抗氧化能力检测试剂盒测定的副干酪乳杆菌SEUNEU-105的上清的总抗氧化能力为1.43μmol/mL，与对照比提高30%。
实施例11 SEUNEU-105自由基清除能力检测
1、副干酪乳杆菌SEUNEU-105菌液制备：
将活化的副干酪乳杆菌SEUNEU-105菌液以MRS液体培养基培养于37℃培养箱静置培养16-18h，检测并调整OD600=2.0，121℃，30min灭活，离心取上清液，0.22μm滤膜过滤获得待测样品。
2、羟自由基清除能力检测
试剂配制和检测方法按照索莱宝羟自由基清除能力检测试剂盒说明书进行。测定各样品536nm吸亮度，求平均值并计算各样品清除率，公式如下：
羟自由基清除率 D%=[（A测定-A对照）÷（A空白-A对照）]×100%
3、ABTS自由基清除能力检测
试剂配制和检测方法按照索莱宝羟自由基清除能力检测试剂盒说明书进行。测定各样品405nm吸亮度，求平均值并计算各样品清除率，公式如下：
ABTS自由基清除率 D%=[A空白-（A测定-A对照）]÷A空白×100%
结果如表11：
Figure 390217DEST_PATH_IMAGE012
结果显示，SEUNEU-105对羟自由基、ABTS自由基均具有清除作用，因此SEUNEU-105具有抗氧化的功效。SEUNEU-105 清除自由基结果见图10。
实施例12 SEUNEU-105降低异戊酸能力检测
1、副干酪乳杆菌SEUNEU-105菌液制备：
将活化的副干酪乳杆菌SEUNEU-105菌液以MRS液体培养基培养于37℃培养箱静置培养16-18h，检测并调整OD600=2.0，121℃，30min灭活，离心取上清液，0.22μm滤膜过滤获得待测样品。
2、体臭相关病原菌菌液制备：
将4种体臭相关病原菌：金黄色葡萄球菌CGMCC No. 1.8721、表皮葡萄球菌CGMCCNo. 1.426、人葡萄球菌CGMCC No. 1.493、溶血葡萄球菌CGMCC No.1.540以BHI培养基37℃培养18h，检测OD600测定菌数，调整病原菌菌液浓度为1×108 cells/mL，等体积混合。
3、异戊酸含量降低检测
将灭活上清液以10%加入病原菌培养基中，37℃培养2h，用气相色谱检测菌液异戊酸含量，计算与对照（用MRS培养基代替上清液）相比的异戊酸含量降低百分比。
4、结果如表12：
Figure DEST_PATH_IMAGE013
SEUNEU-105能够显著降低葡萄球菌产生的体臭来源物质异戊酸，可用于体臭的相关治疗。
以上仅是本发明的优选实施方式，应当指出，对于本技术领域的普通技术人员来说，在不脱离本发明原理的前提下，还可以做出若干改进和润饰，这些改进和润饰也应视为本发明的保护范围。

Claims (9)

1.保藏编号为CCTCC NO: M 20211347的副干酪乳杆菌（Lactobacillus paracasei）。
2.权利要求1所述的副干酪乳杆菌在制备护理皮肤的产品中的应用。
3.根据权利要求2所述的应用，其特征在于，所述护理皮肤包括：抗炎、抗氧化、修复皮肤屏障和/或保湿。
4.根据权利要求3所述的应用，其特征在于，所述抗炎包括降低NO释放量和/或下调炎症因子水平，所述炎症因子包括IL-8、COX-2中至少一种。
5.根据权利要求3所述的应用，其特征在于，所述抗氧化包括：清除羟自由基和/或ABTS自由基。
6.根据权利要求3所述的应用，其特征在于，所述保湿包括上调保湿相关基因水平，所述保湿相关基因包括AQP3和/或GBA。
7.根据权利要求3所述的应用，其特征在于，所述修复皮肤屏障包括修复皮肤细胞和/或上调屏障修复相关基因水平。
8.根据权利要求7所述的应用，其特征在于，所述屏障修复相关基因包括FLG、IVL、LOR、 OVOL1、OCLN中至少一种。
9.一种护理皮肤的产品，其特征在于，其原料包括权利要求1所述的副干酪乳杆菌。
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