CN114854649A - 一株抗痤疮的唾液乳杆菌 - Google Patents

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Abstract

本发明涉及微生物技术领域，尤其涉及一株抗痤疮的唾液乳杆菌。本发明提供了保藏编号为CCTCC NO:M 20211391的唾液乳杆菌，本发明提供的唾液乳杆菌可以调节人体皮肤微生物菌群，促进表皮细胞增殖及修复，同时具有抗炎、抗氧化的功效，唾液乳杆菌GforU‑1在医药品、食品、保养品或化妆品中的应用。

Description

一株抗痤疮的唾液乳杆菌
技术领域
本发明涉及微生物技术领域，尤其涉及一株抗痤疮的唾液乳杆菌。
背景技术
痤疮是毛囊皮脂腺单位的一种慢性炎症性皮肤病，临床表现以好发于面部的粉刺、丘疹、脓疱、结节等多形性皮损为特点。痤疮的发生主要与皮脂分泌过多、毛囊皮脂腺导管堵塞、细菌感染和炎症反应等因素密切相关。进入青春期后人体内雄激素特别是睾酮的水平迅速升高，促进皮脂腺发育并产生大量皮脂。同时毛囊皮脂腺导管的角化异常造成导管堵塞，皮脂排出障碍，形成角质栓即微粉刺。毛囊中多种微生物尤其是痤疮丙酸杆菌大量繁殖，痤疮丙酸杆菌产生的脂酶分解皮脂生成游离脂肪酸，同时趋化炎症细胞和介质，最终诱导并加重炎症反应。
痤疮治疗的常用方法包括局部外用药物、口服抗生素或异维A酸、抗雄激素治疗、口服糖皮质激素等，对于不能耐受或不愿接受药物治疗的患者，还可考虑物理治疗，如光动力疗法(PDT)、果酸疗法、激光治疗等。除此之外，近年来利用微生物或其相关产品来改善痤疮成为了研究的热点。但现有技术中开发出的产品，效果仍十分有限。
发明内容
有鉴于此，本发明要解决的技术问题在于提供一株抗痤疮的唾液乳杆菌。
本发明提供的唾液乳杆菌的保藏编号为CCTCC NO:M20211391。
本发明还提供了唾液乳杆菌CCTCC NO:M20211391在制备抗痤疮的产品中的应用。
本发明中，所述抗痤疮包括抗菌、抗炎、抗氧化、保湿和/或修复皮肤屏障。
本发明中，所述抗菌包括抑制金黄色葡萄球菌、铜绿假单胞菌、人葡萄球菌、溶血葡萄球菌、痤疮丙酸杆菌中至少一种。
本发明中，所述抗炎是抗由LPS诱导的炎症。具体的，是抗由LPS诱导的表皮细胞的炎症。所述表皮细胞为角质形成细胞。一些实施例中，所述抗炎包括降低NO释放量和/或下调炎症因子水平。一些具体实施例中，所述炎症因子包括IL-8和/或COX-2。
本发明中，所述抗氧化包括清除羟自由基和/或ABTS自由基、提高总抗氧化能力。
本发明中，所述保湿包括上调保湿相关基因水平，所述保湿相关基因包括AQP3和/或GBA。具体的，所述保湿基因为表皮细胞的保湿相关基因。所述表皮细胞为角质形成细胞。
本发明中，所述修复皮肤屏障包括修复皮肤细胞损伤、修复细胞划痕和/或上调屏障修复相关基因水平。
一些实施例中，所述屏障修复相关基因包括FLG、IVL、LOR、OVOL1中至少一种。所述屏障修复相关基因为表皮细胞的屏障修复相关基因。所述表皮细胞为角质形成细胞。
一些实施例中，所述修复皮肤细胞损伤包括在SDS诱导条件下保护皮肤细胞的存活率。一些实施例中，所述皮肤细胞为角质形成细胞。
一些实施例中，所述修复细胞划痕包括为修复皮肤细胞的划痕，所述皮肤细胞为角质形成细胞。
本发明还提供了一种抗痤疮的产品，其原料包括保藏编号为CCTCC NO:M20211391的唾液乳杆菌。
本发明中，所述产品为药品、食品或化妆品。
本发明中，所述产品的为外用制剂。
一些实施例中，本发明所述产品中包括如下i)～iv)中至少一种：
i)、保藏编号为CCTCC NO:M 20211391的唾液乳杆菌的活菌；
ii)、灭活的保藏编号为CCTCC NO:M 20211391的唾液乳杆菌；
iii)、保藏编号为CCTCC NO:M 20211391的唾液乳杆菌的培养物；
iv)、保藏编号为CCTCC NO:M 20211391的唾液乳杆菌的提取物。
本发明中，所述培养物包括培养获得的培养液，或者所述培养液经分离获得的上清液或菌体，或培养液经细胞破碎后获得的悬浮液。
本发明中，所述的提取物包括对培养物提取获得的多糖、蛋白或其他次生代谢产物。
本发明还提供了一种抗痤疮的方法，其为给予本发明所述的产品。
本发明中，所述抗痤疮的方法中，所述给予的方式包括喷雾、涂抹、贴敷和/或导入。
本发明提供了保藏编号为CCTCC NO:M 20211391的唾液乳杆菌，本发明提供的唾液乳杆菌可以调节人体皮肤微生物菌群，促进表皮细胞增殖及修复，同时具有抗炎、抗氧化的功效，唾液乳杆菌GforU-1在医药品、食品、保养品或化妆品中的应用。
生物保藏证明
唾液乳杆菌GforU-1Lactobacillus salivarius GforU-1，于2021年11月08日保藏在中国典型培养物保藏中心，地址为:中国，武汉，武汉大学，保藏编号为CCTCC NO:M20211391。
附图说明
图1示GforU-1抑制金黄色葡萄球菌-抑菌圈；
图2示GforU-1抑制金黄色葡萄球菌-菌液浓度；
图3示GforU-1病原菌抑菌率；
图4示GforU-1降低Raw264.7细胞NO释放量；
图5示GforU-1下调炎症相关因子的表达；
图6示GforU-1促进HaCaT细胞划痕愈合；
图7示GforU-1促进HaCaT细胞修复；
图8示GforU-1上清液上调修复相关基因的表达；
图9示GforU-1灭活菌体上调修复相关基因的表达；
图10示GforU-1上清液上调保湿相关基因的表达；
图11示GforU-1灭活菌体上调保湿相关基因的表达；
图12示GforU-1清除自由基能力。
具体实施方式
本发明提供了一株抗痤疮的唾液乳杆菌，本领域技术人员可以借鉴本文内容，适当改进工艺参数实现。特别需要指出的是，所有类似的替换和改动对本领域技术人员来说是显而易见的，它们都被视为包括在本发明。本发明的方法及应用已经通过较佳实施例进行了描述，相关人员明显能在不脱离本发明内容、精神和范围内对本文的方法和应用进行改动或适当变更与组合，来实现和应用本发明技术。
本发明从9岁龄健康女童鼻腔分离出一株唾液乳杆菌(Lactobacillussalivarius)，记为GforU-1，该菌株革兰氏阳性，显微镜下呈短杆状，无芽孢，无鞭毛；在MRS平板上生长，可形成粉色、表面光滑圆润的针尖状小菌落，边缘整齐，有溶钙圈；在MRS液体培养基中呈均匀浑浊生长，久置菌体呈白色沉淀。最适生长温度35～38℃，适宜pH为3.0～7.0。将其保藏于中国典型培养物保藏中心，保藏号为CCTCC NO:M20211391。
研究表明，本发明提供的唾液乳杆菌可以调节人体皮肤微生物菌群，促进表皮细胞增殖及修复，同时具有抗炎、抗氧化的功效，唾液乳杆菌GforU-1在医药品、食品、保养品或化妆品中的应用。
进一步的，本发明提供的保藏编号为CCTCC NO:M 20211391的唾液乳杆菌应用中的存在形式为存活的或灭活的，或为裂解物和/或提取物的形式，或为细菌产物的形式，或为上清液形式，或衍生物形式。所述衍生物形式包括但不限于：代谢产物、代谢生物产物、益生素、细胞壁或其相关成分、胞外多糖、或含有免疫原性成分的化合物。本发明实施例中，以保藏编号为CCTCC NO:M 20211391的唾液乳杆菌的培养上清液、菌体或灭活菌体为受试物进行实验验证。
体外抑菌试验表明,本发明的唾液乳杆菌GforU-1具有金黄色葡萄球菌的作用，抑菌圈可达14mm～28mm，抑菌能力25～95AU/ml；菌液浓度检测法GFORU-1抑制金黄色葡萄球菌的抑菌率高达65％～82％。
本发明的唾液乳杆菌GforU-1具有抑制铜绿假单胞菌、人葡萄球菌、溶血葡萄球菌、痤疮丙酸杆菌的功能，抑菌率10.1％～32％。
体外细胞实验表明，本发明的唾液乳杆菌GforU-1具有抗炎作用，能够降低LPS诱导的Raw264.7细胞NO释放量，与对照组比可降低15％～35％；能够降低金黄色葡萄球菌诱导的HaCaT炎症因子IL-8、COX-2的表达，与对照相比可下调22％～45％。
体外细胞实验表明，本发明的唾液乳杆菌GforU-1具有促进表皮细胞修复的作用，划痕愈合率40％～75％，与对照相比增加10％～22％；GforU-1提升SDS损伤的HaCaT细胞存活率，与对照比增加了5％～18％。
体外细胞实验表明，本发明的唾液乳杆菌GforU-1具有修复皮肤屏障的作用，GforU-1可上调屏障修复相关基因丝聚合蛋白(filaggrin)FLG、外皮蛋白(Involucrin)IVL、兜甲蛋白(loricrin)LOR、Ovo样转录因子1(Ovo Like Transcriptional Repressor1)OVOL1的表达，上调1.05～2.85倍，因此GforU-1具有促进皮肤屏障修护的作用。
体外细胞实验表明，本发明的表皮葡萄球菌GforU-1具有上调保湿因子水通道蛋白3(Aquaporin 3)AQP3、保湿因子β-葡糖脑苷脂酶(β-glucocerebrosidase)GBA基因表达量的作用，上调表达1.1～2.2倍.
体外细胞实验表明，本发明的唾液乳杆菌GforU-1具有清除自由基抗氧化的作用，与对照比，羟自由基清除率18％～22.4％、ABTS自由基清除率26％～33％，总抗氧化能力提高15％～25.6％
本发明采用的试材皆为普通市售品，皆可于市场购得。下面结合实施例，进一步阐述本发明：
实施例1菌株的分离
MC琼脂培养基：大豆蛋白胨5g，牛肉浸膏5g，酵母浸膏5g，葡萄糖20g，乳糖20g，碳酸钙10g，琼脂15g，1％中性红溶液5ml，蒸馏水1000ml,pH值6，121℃灭菌15min。
MRS液体培养基：蛋白胨10g，牛肉膏10g，酵母膏5g，柠檬酸氢二铵2g，葡萄糖20g，吐温-80lml，乙酸钠5g，磷酸氢二钾2g，硫酸镁0.58g，硫酸锰0.25g，蒸馏水1000ml，pH值6.2～6.4，121℃灭菌15min。
样品来源于9岁龄健康女童志愿者鼻腔。无菌采样于盛有5ml甘油的灭菌取样管中，取回后-20℃冷冻。分离时，将样品回溶，取1g于9ml生理盐水中震荡混匀，取上清划线于MC平板，37℃恒温培养24～48h后，挑取红色有溶钙圈的菌落，反复接种筛选，直至得到均匀的单个菌落，命名为GforU-1。
革兰氏染色镜检：菌株GforU-1为G+，显微镜下呈短杆状，无芽孢，无鞭毛；在MC平板上生长，可形成粉色、表面光滑圆润的针尖状小菌落，边缘整齐，有溶钙圈；在MRS液体培养基中呈均匀浑浊生长，久置菌体呈白色沉淀。
实施例2菌株的核酸鉴定
1、引物：
根据GenBank中登录的乳酸菌16S rRNA的基因序列，设计引物：
F5’-TCGGCTCGTAAAACTCTG-3’；
R5’-GGACTTAACCCAACATCTCA-3’。
引物由上海生物工程有限公司合成，扩增片段为V3-V7，长682bp。
2、16s rRNA基因序列分析：
挑取单菌落置MRS离心管中，37℃培养过夜后，离心收集菌体，按照DNA提取试剂盒步骤进行操作。PCR扩增体系为50μL体系，95℃预变性10min；93℃1min，55℃1min，72℃1min，35个循环；72℃延伸7min。
3、结果
用1.2％琼脂糖凝胶电泳分析PCR产物，在682bp处出现特异性目的条带，与预期大小相符合，测序结果与GenBank中已发表的标准序列进行同源性比较后得出GforU-1菌株为唾液乳杆菌(Lactobacillus salivarius)。
实施例3 GforU-1抑制金黄色葡萄球菌——抑菌圈实验
1.唾液乳杆菌GforU-1菌液制备：
将活化的唾液乳杆菌GforU-1菌液以MRS培养于37℃培养箱静置培养16-18小时，使用分光光度计OD600nm测定菌数，调整唾液乳杆菌液浓度为2×109cells/mL，为活菌液。活菌液离心取上清，得活菌液上清，30min沸水浴后得灭活菌液。
2、金黄色葡萄球菌菌液制备：
以肉汤培养基培养于摇床140r/min 37℃过夜，使用分光光度计OD600nm测定菌数，调整乳酸菌液浓度为2×107cells/mL。
3、抑菌盘试验
取100μl菌液浓度为2×107cells/mL的金黄色葡萄球菌菌液进行涂盘(肉汤琼脂培养基)；涂盘15min后，用9mm打孔器在菌盘上均匀打孔，去除孔内培养基，每孔加入待测菌液200μl。
抑菌能力计算方法
抑菌能力(AU/mL)＝(测试乳酸菌株量得抑菌圈直径-对照组量得抑菌圈直径)/添加盘中菌液体积
5、结果如表1
Figure BDA0003705496680000071
GforU-1菌株活菌液及灭活菌液均具有较强的抑制金黄色葡萄球菌的功效。GforU-1抑制金黄色葡萄球菌-抑菌圈实验结果见图1.
实施例4 GforU-1金黄色葡萄球菌抑菌实验-菌液浓度变化
1.唾液乳杆菌GforU-1菌液制备：
将活化的唾液乳杆菌GforU-1菌液以MRS培养于37℃培养箱静置培养16-18小时，使用分光光度计OD600nm测定菌数，调整唾液乳杆菌液浓度为2×109cells/mL，离心取上清，得活菌液上清；30min沸水浴后得灭活菌液。
2、金黄色葡萄球菌菌液制备：
以肉汤培养基培养于摇床140r/min 37℃过夜，使用分光光度计OD600nm测定菌数，调整乳酸菌液浓度为1×108cells/mL。
3、抑制金黄色葡萄球菌实验
分别将唾液乳杆菌活菌液和灭活菌液上清以5％加入金黄色葡萄球菌菌液，37℃静置4h，以菌液浓度(OD600)降低百分比评价GforU-1对金黄色葡萄球菌生长影响。
4、结果如表2
表2 GforU-1抑制金黄色葡萄球菌-菌液浓度
Figure BDA0003705496680000072
反应24h，唾液乳杆菌GforU-1具有抑制金黄色葡萄球菌的作用，活菌上清抑菌率77.5％，灭活上清抑菌率76.4％。GforU-1抑制金黄色葡萄球菌-菌液浓度结果见图2。
实施例5 GforU-1菌株病原菌抑菌实验-菌液浓度变化
1.唾液乳杆菌GforU-1菌液制备：
将活化的唾液乳杆菌GforU-1菌液以MRS培养于37℃培养箱静置培养16-18小时，检测并调整OD600＝2.0，121℃，30min灭活，离心取上清液，0.22μm滤膜过滤，得待测样品。
2、病原菌菌液制备：
将4种病原菌：人葡萄球菌CGMCC No.1.493、溶血葡萄球菌CGMCC No.1.540、痤疮丙酸杆菌CGMCC No.1.5003、铜绿假单孢菌CGMCC No.1.1783以BHI培养基37℃培养18h，检测OD600测定菌数，调整病原菌菌液浓度为1×108cells/mL。
3、抑制病原菌实验
将上述待测样品以5％体积分数分别加入病原菌中，37℃静置4h，以菌液浓度(OD600)降低百分比评价GforU-1对病原菌生长影响。
5、结果如表3
表3 GforU-1病原菌抑菌率
Figure BDA0003705496680000081
反应24h，GforU-1对铜绿假单胞菌、人葡萄球菌、溶血葡萄球菌、痤疮丙酸杆菌等病原菌均具有较强的抑制作用。GforU-1病原菌抑菌率结果见图3。
实施例6菌株降低LPS诱导的Raw264.7细胞NO释放量
1、唾液乳杆菌样品制备
将唾液乳杆菌GforU-1用MRS培养过夜，检测OD600，调整OD600＝0.2，121℃高压灭菌30min，离心后，离心上清用0.22μm滤膜过滤得上清液，沉淀用1ml PBS回溶得灭活菌体。
2、细胞制备
将Raw264.7细胞消化后以2×105cell/孔接种至24孔板，5％二氧化碳培养箱37℃培养过夜。
3、GforU-1添加及LPS刺激
受试组1：受试细胞中添加GforU-1上清液5％(体积分数)；
受试组2：受试细胞中添加GforU-1灭活菌体10％(质量分数)。
将上述两组受试物加入培养过夜的Raw264.7细胞中，2h后以200ngLPS诱导Raw264.7细胞发炎，20h后取细胞培养上清用NO含量检测试剂盒进行NO含量检测，共进行三批实验，每次3个复孔。实验以不添加受试物的经LPS诱导Raw264.7细胞发炎模型为对照，计算受试组1和受试组2对NO生成量的抑制率。
结果如表4：
表4 GforU-1降低Raw264.7细胞NO释放量
Figure BDA0003705496680000091
与LPS对照组相比，GforU-1上清液NO抑制率29.25％；灭活菌体NO抑制率26.3％，GforU-1菌株上清液和灭活菌体均对LPS诱导的Raw264.7细胞释放的NO有抑制作用。GforU-1降低Raw264.7细胞NO释放量结果见图4.
实施例7 GforU-1降低金黄色葡萄球菌诱导的HaCaT炎性因子表达量
1、唾液乳杆菌样品制备
将唾液乳杆菌GforU-1用MRS培养过夜，检测OD600，调整OD600＝0.2，121℃高压灭菌30min，离心取上清，用0.22μm滤膜过滤得上清液。
2、细胞制备
将HaCaT细胞消化后以2×105cell/孔接种至24孔板，5％二氧化碳培养箱37℃培养过夜。
3、金黄色葡萄球菌制备及添加
金黄色葡萄球菌接入肉汤培养基，37℃摇床培养过夜，用MEM无血清培养基调整菌液浓度至3×109cell/ml，每孔100μl添加入培养过夜的HaCaT细胞中，刺激细胞产生炎症因子，3h后弃去细胞培养基，PBS清洗5次，每孔重新加入1mlMEM无血清培养基。
4、唾液乳杆菌添加
将上清液5％体积分数加入金黄色葡萄球菌刺激过的HaCaT细胞中，每组3个复孔，培养过夜。
5、检测炎性因子表达量
将上述细胞弃去培养基后，用RNA提取试剂盒提取RNA，检测RNA浓度及纯度，将所有样品调整至1000ng进行反转录，对炎症相关基因进行qPCR，根据公式进行计算表达变化倍数。
公式：F＝2-ΔΔCT
结果如表5：
表5 GforU-1下调炎症相关因子的表达
Figure BDA0003705496680000101
GforU-1能够降低金黄色葡萄球菌诱导的HaCaT炎性因子IL-8、COX-2表达量下调42.63％、27.93％，因此GforU-1具有抗炎的作用。GforU-1下调炎症相关因子的表达结果见图5。
实施例8 GforU-1促进HaCaT细胞划痕实验
接种人永生化角质形成细胞HaCaT(5×105cell/孔)至6孔板，过夜培养至细胞贴壁，使用1ml枪头垂直于6孔板板底进行划线；
实验分为三组：
对照组不添加含有GforU-1的成分；
受试组1加入5vol％GforU-1的灭活上清液；
受试组2加入10wt％GforU-1的灭活菌体。
进行拍照，记为D1，并进行培养。隔天继续拍照，记为D2。使用image J进行数据处理，根据公式：愈合率＝(D1-D2)/D1。使用GraphPad对数据进行作图。
结果如表6：
表6 GforU-1促进HaCaT细胞划痕愈合率(％)
Figure BDA0003705496680000102
Figure BDA0003705496680000111
GforU-1菌株上清液液的划痕愈合率为66.1％，对照组为53.22％，增长了12.9％；GforU-1菌株灭活死菌的划痕愈合率为64.83％，对照组为51.04％，增加了13.8％，GforU-1上清液及灭活死菌均具有一定的修复作用。GforU-1促进HaCaT细胞划痕愈合率结果见图6。
实施例9 GforU-1促进HaCaT细胞损伤修复实验
接种HaCaT细胞(5×105cell/孔)至96孔板，过夜培养至细胞贴壁。配制50μg/mlSDS，每孔加入100μl，孵育8h，加入5％上清液液，孵育24h。加入10μlCCK-8溶液，孵育4h，检测450nm处吸光值。
细胞存活率＝(A实验组-A空白对照组)/(A阴性对照组-A空白对照组)。
结果如表7：
表7 GforU-1促进HaCaT细胞修复
Figure BDA0003705496680000112
GforU-1上清液SDS损伤修复细胞存活率为106.65％，与对照比增加了6.65％；灭火菌体SDS损伤修复细胞存活率为110.11％，与对照比增加了10.11％，GforU-1上清液及灭活菌体均对SDS损伤的HaCaT细胞有修复作用。GforU-1促进HaCaT细胞修复结果见图7。
实施例10 GforU-1上调HaCaT屏障修复相关基因表达实验
接种人永生化角质形成细胞HaCaT细胞(5×105cell/孔)至6孔板，过夜培养至细胞贴壁。实验分为三组，control的孔中不加入受试物，受试组1的细胞中加入GforU-1上清液5vol％，受试组2加入灭活菌体10wt％，各组分别培养24h后，加入裂解液，提取细胞总RNA，检测提取RNA纯度及浓度，将所有样品RNA总量调整至1000ng，反转录为cDNA，进行qPCR检测FLG、IVL、LOR、OVOL1的表达。根据公式进行计算表达变化倍数。
公式：F＝2-ΔΔCT
结果如表8～9：
表8 GforU-1上清液上调修复基因的表达
Figure BDA0003705496680000121
表9 GforU-1灭活菌体上调修复基因的表达
Figure BDA0003705496680000122
结果显示加入GforU-1上清液、灭活菌体孵育后，FLG、IVL、LOR、OVOL1四个基因表达均上调，因此GforU-1具有促进皮肤屏障修护的作用。GforU-1上调HaCaT屏障修复相关基因表达结果见图8、图9。
实施例11 GforU-1上调HaCaT保湿相关基因表达实验
接种人永生化角质形成细胞HaCaT(5×105cell/孔)至6孔板，过夜培养至细胞贴壁。实验分为三组，control的孔中不加入受试物，受试组1的细胞中加入菌株上清液5wt％，受试组2加入灭活菌体10wt％，各组分别培养24h后，加入裂解液，提取细胞总RNA，检测RNA浓度及纯度，将所有样品RNA总量调整至1000ng，并反转录为cDNA，进行qPCR检测保湿相关基因AQP3、GBA的表达。根据公式进行计算表达变化倍数。
公式：F＝2-ΔΔCT
结果如表10～表11：
表10 GforU-1上清液上调保湿相关基因的表达
Figure BDA0003705496680000131
表11 GforU-1灭活菌体上调保湿相关基因的表达
Figure BDA0003705496680000132
结果显示加入GforU-1上清液、灭活菌体孵育后，保湿相关基因AQP3、GBA基因表达上调，因此GforU-1具有保湿的作用。GforU-1上调保湿基因表达结果见图10、图11。
实施例12 GforU-1菌株的总抗氧化能力检测
1、唾液乳杆菌GforU-1上清的制备：将活化的唾液乳杆菌GforU-1菌液以MRS培养于37℃培养箱静置培养16-18小时，使用分光光度计OD600nm测定菌数，调整唾液乳杆菌液浓度度为1×109cells/mL，离心取上清高压灭活并过0.22μm的滤膜得到灭菌上清。
2、准备总抗氧化能力(T-AOC)检测试剂盒
3、使用96孔板200μL体系按照试剂盒说明加入试剂和GforU-1上清液，反应10min后用酶标仪在593nm下测定吸光值。根据吸光值带入标椎曲线计算得到X值。
4、总抗氧化能力(μmol/mL)＝X×V反总÷V样＝X×34
V反总：反应总体积，1.02mL；V样：反应中样本体积，0.03mL。
5、结果如表12：
表12 GforU-1总抗氧化能力(μmol/mL)
组别 平行1 平行2 平行3 平均值 对照 提高率(％)
总抗氧化能力 1.270 1.450 1.310 1.340 1.1 21.8
按照总抗氧化能力检测试剂盒测定的唾液乳杆菌GforU-1的上清的总抗氧化能力为1.310μmol/mL，与对照比提高21.8％。
实施例13 GforU-1自由基清除能力检测
1.唾液乳杆菌GforU-1菌液制备：
将活化的唾液乳杆菌GforU-1菌液以MRS液体培养基培养于37℃培养箱静置培养16-18h，检测并调整OD600＝2.0，121℃，30min灭活，离心取上清液，0.22μm滤膜过滤获得待测样品。
2.羟自由基清除能力检测
试剂配制和检测方法按照索莱宝羟自由基清除能力检测试剂盒说明书进行。测定各样品536nm吸光度，求平均值并计算各样品清除率，公式如下：
羟自由基清除率D％＝[(A测定-A对照)÷(A空白-A对照)]×100％
3.ABTS自由基清除能力检测
试剂配制和检测方法按照索莱宝羟自由基清除能力检测试剂盒说明书进行。测定各样品405nm吸光度，求平均值并计算各样品清除率，公式如下：
ABTS自由基清除率D％＝[A空白-(A测定-A对照)]÷A空白×100％
结果如表13：
表13 GforU-1自由基清除率(％)
组别 平行1 平行2 平行3 平均值 SD值
羟自由基 20.1 20.1 20 20.07 0.057735
ABTS自由基 27.93 31.15 30.46 29.85 1.695356
结果显示，GforU-1对羟自由基、ABTS自由基均具有清除作用，因此GFORU-1具有抗氧化的功效。GforU-1清除自由基结果见图12。
以上仅是本发明的优选实施方式，应当指出，对于本技术领域的普通技术人员来说，在不脱离本发明原理的前提下，还可以做出若干改进和润饰，这些改进和润饰也应视为本发明的保护范围。

Claims (10)

1.唾液乳杆菌，其保藏编号为CCTCC NO:M20211391。
2.权利要求1所述的唾液乳杆菌在制备抗痤疮的产品中的应用。
3.根据权利要求2所述的应用，其特征在于，所述抗痤疮包括抗菌、抗炎、抗氧化、保湿和/或修复皮肤屏障。
4.根据权利要求3所述的应用，其特征在于，所述抗菌包括抑制金黄色葡萄球菌、铜绿假单胞菌、人葡萄球菌、溶血葡萄球菌、痤疮丙酸杆菌中至少一种。
5.根据权利要求3所述的应用，其特征在于，所述抗炎包括降低NO释放量和/或下调炎症因子水平，所述炎症因子包括IL-8和/或COX-2。
6.根据权利要求3所述的应用，其特征在于，所述抗氧化包括清除羟自由基和/或ABTS自由基、提高总抗氧化能力。
7.根据权利要求3所述的应用，其特征在于，所述保湿包括上调保湿相关基因水平，所述保湿相关基因包括AQP3和/或GBA。
8.根据权利要求3所述的应用，其特征在于，所述修复皮肤屏障包括修复皮肤细胞损伤、修复细胞划痕和/或上调屏障修复相关基因水平。
9.根据权利要求8所述的应用，其特征在于，所述屏障修复相关基因包括FLG、IVL、LOR、OVOL1中至少一种。
10.一种抗痤疮的产品，其特征在于，其原料包括保藏编号为CCTCC NO:M20211391的唾液乳杆菌；所述产品为药品、食品或化妆品。
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