CN115058373A - 清酒乳杆菌及其应用 - Google Patents

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Abstract

本发明涉及微生物技术领域，尤其涉及清酒乳杆菌及其应用。本发明提供了清酒乳杆菌（Lactobacillus sakei），其保藏于中国典型培养物保藏中心，保藏编号为CCTCC NO：M 2022369。实验表明，本发明提供的清酒乳杆菌具有维持及修护皮肤屏障、保湿、抗衰老、促细胞增殖、抗炎抗自由基、治疗痤疮及改善敏感肌的功能，可用于制备药品、化妆品等。

Description

清酒乳杆菌及其应用
技术领域
本发明涉及微生物技术领域，尤其涉及清酒乳杆菌及其应用。
背景技术
皮肤是人体内最大的器官，总重量大约占个体体重的16%，一方面维持机体稳定，另一方面也是抵御外界不良因素侵扰的第一道防线。有研究表明，如果外界环境导致皮肤屏障中的相关基因异常，就会诱发皮肤疾病。
皮肤屏障是由角质层的表皮形成细胞和角质间的脂质形成的结构性的屏障。皮肤屏障防止人体过多水分释放，并防止如化学物质或微生物的有害物质进入我们的身体。组成死亡的角质细胞的表面的角质细胞外皮在细胞间脂质的稳定性中起重要作用。皮肤屏障受损将引起皮肤干燥， 皮肤老化、色素沉着异位性皮炎、湿疹、银屑病、鱼鳞病、日旋光性皮炎等皮肤敏感、刺激性皮炎、激素依赖性皮炎等皮肤油腻， 皮脂溢出性疾病， 如痤疮、酒糟鼻、脂溢性皮炎。
角质间结构性脂质神经酰胺，在基底层向角质分化过程中含量逐渐增加，到达角质层排至细胞间隙，构成防止水分丢失的屏障。角质细胞内含水量高，随着细胞向上代谢分化，角质细胞形状会逐渐变成扁平状，且细胞核及胞器开始退化萎缩，并在角质层形成不具细胞核与胞器的死细胞。角质层本身的亲水、屏障功能，以及角质层中所含有的天然保湿因子即氨基酸类，乳酸盐及糖类等作用，使得角质层通常含有10~30%的水分，这种环境成为了皮肤自身微生物菌落生长的摇篮。但随着年龄的增长，角质层的含水量会逐渐减少，当水分含量低于10%的时候，就会引起皮肤的各种问题。
皮肤衰老，包括由空气污染、吸烟、营养不良和紫外线（UV）等环境因素引起的外在衰老和由时间变化引起的内在衰老。其典型特征是皮肤变薄、产生细纹，这可能是由于细胞增殖减少以及随着年龄增长引起的真皮成分发生显着变化导致的。细胞外基质成分（胶原蛋白、弹性蛋白、糖胺聚糖等）随着皮肤衰老而显着减少。此外，伴随增龄，多种因素如线粒体损伤、炎症反应等产生的活性氧增加，同时，与年龄相关的细胞修复能力下降，使得氧化应激增加，老化受损细胞无法及时清除，从而导致了皮肤衰老。
益生菌用在化妆品上，可显着抑制皮肤病原菌增殖，平衡皮肤表皮菌群，修复皮肤屏障。同时上调保湿基因的表达，抵御皮肤衰老，有效增加肌肤对营养物质的吸收，增强免疫力。
痤疮是一种常见的慢性炎症性皮肤疾病，主要与皮脂分泌过多、毛囊皮脂腺导管堵塞、细菌感染和炎症反应等因素密切相关。研究表明，痤疮丙酸杆菌（Propionibacterium acne）被认为引发痤疮的主要病原菌，它可以诱导和活化痤疮炎症的起始环节，并将甘油转换为脂肪酸，导致炎症反应；同时产生蛋白酶、透明质酸酶及趋化因子，使毛囊过度角化，形成痤疮。另一方面，皮肤常驻的表皮葡萄球菌与痤疮丙酸杆菌能够相互拮抗竞争，增加表皮葡萄球菌的数量能够抑制痤疮丙酸杆菌增殖。因此，降低痤疮丙酸杆菌/表皮葡萄球菌的菌群比例，可以有效缓解痤疮炎症，从而通过调节皮肤微生态平衡来维持皮肤健康。
敏感肌通常是由于皮肤细胞受损而使皮肤免疫力下降，角质层变薄导致皮肤滋润度不够，最终导致肌肤的屏障功能过于薄弱，无法抵御外界刺激，从而易于产生泛红，发热，瘙痒、刺痛等不适现象的产生。而皮肤屏障的受损，则会进一步导致金黄色葡萄球菌（Staphylococcus aureus）的定植增殖，导致发炎红肿。皮肤常驻的表皮葡萄球菌（Staphylococcus epidermidis）与金黄色葡萄球菌相互拮抗，能够降低后者的增殖。因此降低金黄色葡萄球菌/表皮葡萄球菌的菌群比例，有助于建立皮肤菌群的平衡分布，从而改善敏感肌。
益生菌可作为一种微生态制剂用于调整皮肤菌群比例，维持菌群动态平衡，建立有效、稳定的、健康的皮肤菌群屏障。因此，提供一种利用微生态技术开发的益生菌相关产品，具有重要的现实意义。
发明内容
有鉴于此，本发明要解决的技术问题在于提供清酒乳杆菌及其应用。
本发明提供了保藏编号为 CCTCC NO：M 2022369的清酒乳杆菌（Lactobacillus sakei）。
进一步的，本发明提供了所述的清酒乳杆菌在制备肌肤状态改善产品中的应用。
更进一步的，所述的肌肤状态改善包括、修护皮肤屏障、保湿、抗衰老、抗炎、抗自由基、促细胞增殖、抑制皮肤病原菌、调节皮肤微生物菌群的比例中的至少一种。所述的调节皮肤微生物菌群的比例包括抑制金黄色葡萄球菌和/或痤疮丙酸杆菌的生长，和/或不影响表皮葡萄球菌的生长。
本发明中，所述的修护皮肤屏障包括修复SDS诱导的细胞损伤和/或上调屏障修护相关基因的表达；所述屏障修护相关基因包括FLG、IVL、OVOL1和LOR中的至少一种。进一步的，本发明以HaCaT细胞为受试对象，对所述的清酒乳杆菌的SDS损伤修复能力进行了研究，结果表明，所述的清酒乳杆菌可修复SDS引起的细胞损伤，提高细胞存活率，并上调非损伤细胞的屏障修护相关基因的表达。
本发明中，所述的保湿包括但不限于上调保湿相关基因的表达，所述的保湿相关基因包括但不限于AQP3和/或GBA。本发明以HaCaT细胞为受试对象，研究所述的清酒乳杆菌对皮肤的保湿效果，结果显示，所述的清酒乳杆菌可上调保湿相关基因AQP3和/或GBA的表达，促进皮肤细胞保湿。
本发明中，所述抗衰老包括如下a）~e）所示的至少一种：
a）、上调细胞外基质合成相关基因的表达，所述细胞外基质合成相关基因包括LN、MKX、SMAD3、TIMP1、COL1A1中的至少一种；
b）、上调细胞自噬相关基因LC3B的表达；
c）、上调细胞抗氧化相关基因NRF2和/或SIRT-1的表达；
d）、下调细胞炎症因子相关基因TNF-α表达；
e）、下调细胞凋亡相关基因的表达；所述细胞凋亡相关基因包括BAX和/或Caspase家族中的至少一个；
f）、下调降解细胞外基质相关基因的表达；所述降解细胞外基质相关基因包括MMP家族中的至少一种。
为了探究所述的清酒乳杆菌的抗衰老效果，本发明对细胞衰老相关的指标进行了测定，所述的指标包括细胞外基质合成、细胞外基质降解、细胞抗氧化、细胞凋亡及细胞自噬中的至少一个。
本发明以HaCaT角质细胞为受试对象，研究所述的清酒乳杆菌对HaCaT角质细胞细胞外基质合成相关基因和降解相关基因的影响。结果表明，所述的清酒乳杆菌可上调细胞外基质合成相关基因LN、MKX、SMAD3、TIMP1、COL1A1的表达，促进细胞外基质的合成，下调降解细胞外基质相关基因MMP1的表达，抑制细胞外基质的降解。
本发明以HaCaT角质细胞为受试对象，研究所述的清酒乳杆菌对HaCaT角质细胞抗氧化相关基因的表达的影响。结果表明，所述的清酒乳杆菌可上调抗氧化相关基因NRF2和/或SIRT-1的表达，增强细胞的抗氧化能力。
本发明以HFF细胞为受试对象，研究所述的清酒乳杆菌对HFF细胞凋亡的影响。结果表明，所述的清酒乳杆菌可下调细胞凋亡相关基因BAX、Caspase3、Caspase8、Caspase9的表达，抑制细胞凋亡。
本发明以HaCaT角质细胞为受试对象，研究所述的清酒乳杆菌对HaCaT角质细胞细胞自噬的影响。结果表明，所述的清酒乳杆菌可上调细胞自噬相关基因LC3B的表达，促进细胞自噬以清除老化细胞。
本发明中，所述促细胞增殖包括促进皮肤角质细胞和/或成纤维细胞的增殖。本发明以HFF细胞为受试对象，对所述的清酒乳杆菌的促进细胞增殖效果进行研究。结果表明，所述的清酒乳杆菌可促进HFF细胞，促进增殖率为 28.30~43.40%。
在本发明中，所述抗炎包括：下调细胞炎症相关因子基因的表达，和/或降低NO的释放水平；所述细胞炎症相关因子基因包括TNF-α、IL-6、COX2、IL-8和TRPV1中的至少一种。
本发明中，细胞NO的释放水平与细胞炎症密切相关。进一步的，本发明以Raw264.7细胞为受试对象，研究所述的清酒乳杆菌对Raw264.7细胞NO的的释放的影响，结果表明，所述的清酒乳杆菌可降低LPS刺激引起的NO升高。
更进一步的，本发明以HaCaT细胞为受试对象，研究所述的清酒乳杆菌对HaCaT细胞炎症因子相关基因表达的影响，结果表明，所述的清酒乳杆菌可下调细胞炎症因子相关基因IL-8、COX-2、IL-6和TRPV1的表达，具有抗炎的功效。
本发明所述抗自由基包括对羟自由基和/或ABTS自由基的清除作用。进一步的，本发明利用羟自由基清除能力试剂盒和ABTS自由基清除能力试剂盒对其自由基清除能力进行测定。结果表明，所述的清酒如杆菌具有清除羟自由基和ABTS自由基的作用，自由基清除率22.22%~30.33%。
本发明中，所述的抑制皮肤病原菌包括但不限于抑制人葡萄球菌、溶血葡萄球菌、铜绿假单胞菌和干瘪棒杆菌中至少一种，本发明对此不做限定。本发明以人葡萄球菌、溶血葡萄球菌、铜绿假单胞菌为受试对象，利用清酒乳杆菌灭火上清及菌体，探究其抑菌效果。结果表明，所述的清酒乳杆菌具有抑制皮肤病原菌人葡萄球菌、溶血葡萄球菌、铜绿假单胞菌和干瘪棒杆菌增殖的作用，抑制率29.73%~48.08%。
本发明中，所述的调节皮肤微生物菌群的比例为：抑制金黄色葡萄球菌和/或痤疮丙酸杆菌的生长，和/或不影响表皮葡萄球菌的生长。痤疮丙酸杆菌的比例过高，则会破坏皮肤内环境稳态遭到破坏。本发明以痤疮丙酸杆菌和表皮葡萄球菌的比例为表征来研究所述的清酒乳杆菌的维持皮肤菌群稳态的作用。结果表明，本发明所述的清酒乳杆菌对痤疮丙酸杆菌有显着抑制作用，而不影响表皮葡萄球菌，可维持皮肤菌群平衡并抑制潜在皮肤痤疮发生的可能性。
本发明提供了一种改善皮肤状况的产品，其原料包括本发明所述的清酒乳杆菌。
进一步的，所述的产品还包括所述的清酒乳杆菌或其裂解物、提取物、代谢产物，本发明对此不做限定。
更进一步的，本发明的产品还包括含有所述清酒乳杆菌的菌群。
更进一步的，本发明所述的产品还包括含有所述清酒乳杆菌及其裂解物、提取物、代谢产物制成的菌剂，或者含有所述的清酒乳杆菌的菌群制成的菌剂，本发明对此不做限定。
更进一步的，本发明所述的产品的剂型包括但不限于膏霜类、乳液类、油剂类、水剂类、凝胶类、粉剂类、冻干类中的至少一种，本发明对此不做限定。
本发明还提供了一种改善肌肤状态的方法，其包括使用本发明所述从产品。所述使用的方法包括涂抹、外敷、熏蒸或注射，本发明对此不做限定。
本发明提供了清酒乳杆菌（Lactobacillus sakei），其保藏于中国典型培养物保藏中心，保藏编号为 CCTCC NO：M 2022369。实验表明，本发明提供的清酒乳杆菌具有维持及修护皮肤屏障、保湿、抗衰老、促细胞增殖、抗炎抗自由基、治疗痤疮及改善敏感肌的功能，可用于制备药品、化妆品等。
生物保藏说明
清酒乳杆菌SEUNEU-112（Lactobacillus sakei SEUNEU-112），于2022年4月1日保藏在中国典型培养物保藏中心，地址为：中国，武汉，武汉大学，保藏编号为CCTCC NO：M2022369。
具体实施方式
本发明提供了清酒乳杆菌及其应用，本领域技术人员可以借鉴本文内容，适当改进工艺参数实现。特别需要指出的是，所有类似的替换和改动对本领域技术人员来说是显而易见的，它们都被视为包括在本发明。本发明的方法及应用已经通过较佳实施例进行了描述，相关人员明显能在不脱离本发明内容、精神和范围内对本文的方法和应用进行改动或适当变更与组合，来实现和应用本发明技术。
本发明采用的试材皆为普通市售品，皆可于市场购得。
下面结合实施例，进一步阐述本发明：
实施例1 SEUNEU-112的分离
于朝鲜族发酵苏子叶中采样。将样品适当处理后于生理盐水中震荡混匀，取上清划线于MRS固体平板，37℃恒温培养48h后，挑取白色菌落反复接种筛选，直至得到均匀的单个菌落，命名为SEUNEU-112。
革兰氏染色镜检：菌株SEUNEU-112为革兰氏染色阳性，显微镜下呈杆状；在MRS平板上生长，可形成白色、表面光滑圆润不透明圆形小菌落，边缘整齐；在MRS液体培养基中呈均匀浑浊生长，久置菌体呈白色沉淀。
实施例2 SEUNEU-112的核酸鉴定
1、16S rDNA基因序列分析：
挑取单菌落置MRS液体培养基中，37℃培养过夜后，12000转离心1min收集菌体，按照DNA提取试剂盒步骤进行操作。引物采用细菌通用引物27F，1492R，PCR扩增体系为50μL体系，95℃预变性5min；94℃ 15s，57℃ 15s，72℃ 40s，35个循环；72℃延伸10min。
2、结果
PCR产物测序结果与GenBank中已发表的标准序列进行同源性比较（BLASTN）后得出SEUNEU-112菌株为清酒乳杆菌（Lactobacillus sakei）。
实施例3 SEUNEU-112促进SDS诱导的HaCaT细胞损伤修复实验
1、SEUNEU-112上清液和灭活菌体制备：
挑取清酒乳杆菌SEUNEU-112单菌落于MRS液体培养基，37℃培养箱静置培养16~18h，酶标仪检测并以PBS稀释调整OD600=0.2，121℃，30min高压灭活，12000转离心2min，经0.22μm滤膜过滤为上清液。离心沉淀以适量PBS重悬，稀释调整OD600=0.2，为灭活菌体。
2、促进HaCaT细胞修复实验
接种HaCaT细胞（5×104cell/孔）至96孔板，过夜培养至细胞贴壁。配制50μg/mlSDS，每孔加入100μl，5%二氧化碳培养箱37℃培养8h。各孔分别添加5%（V/V）上清液，10%（V/V）灭活菌体（对照组分别以等体积PBS替代上清液/灭活菌体）培养24h。向每孔加入10μl的CCK-8溶液，培养4h，检测450nm处吸亮度A。
细胞存活率计算公式及结果如表1：
Figure 437802DEST_PATH_IMAGE001
上表结果可知，SEUNEU-112上清液及灭活菌体均对HaCaT细胞SDS损伤具有修复作用，细胞存活率105.14%~148.02%。
实施例4 SEUNEU-112促进HaCaT屏障修护相关基因表达实验
1、SEUNEU-112上清液和灭活菌体制备：
制备方法参照实施例3。
2、促进HaCaT屏障修护相关基因表达实验
接种人永生化角质形成细胞HaCaT（2ml/孔，内含5×105细胞）至6孔板，5%二氧化碳培养箱37℃过夜培养至细胞贴壁。分别加入上清液5%（V/V）()，灭活菌体10%（V/V）（对照组分别以等体积PBS替代上清液/灭活菌体），培养24h后，加入裂解液，提取细胞总RNA，检测RNA浓度及纯度后反转录为cDNA，以GAPDH为内参基因，采用实时qPCR检测FLG、IVL 、OVOL1和LOR基因的表达。分别以添加等体积PBS处理组为对照（基因相对表达倍数F=1），利用2-ΔΔCT法计算各样品F值。
公式：F=2-ΔΔCT，其中：
△CT实验=CT实验-CT内参（实验）；
△CT对照=CT对照-CT内参（对照）；
△△CT=△CT实验-△CT对照。
结果见表2和表3：
Figure 948417DEST_PATH_IMAGE002
Figure 26357DEST_PATH_IMAGE003
体外细胞实验表明，本发明的清酒乳杆菌SEUNEU-112上清液和灭活菌体具有上调皮肤屏障修护相关因子丝聚合蛋白基因FLG、外皮蛋白基因IVL、OVO样转录因子1基因OVOL1和兜甲蛋白基因LOR表达的作用，基因表达量上调1.16~1.97倍。表明SEUNEU-112具有促进皮肤屏障修护的作用。
实施例5 SEUNEU-112上调HaCaT保湿相关基因表达实验
1、SEUNEU-112上清液制备：
制备方法参照实施例3。
2、上调HaCaT保湿相关基因表达实验
接种人永生化角质形成细胞HaCaT（2ml/孔，内含5×105细胞）至6孔板，5%二氧化碳培养箱37℃过夜培养至细胞贴壁。加入上清液5%（V/V）（对照组以等体积PBS替代），培养24h后，加入裂解液，提取细胞总RNA，检测RNA浓度及纯度后反转录为cDNA，以GAPDH为内参基因，采用实时qPCR检测AQP3和GBA基因的表达。以等体积PBS处理组为对照（基因相对表达倍数F=1），利用2-ΔΔCT法计算各样品F值。
结果见表4：
Figure 890408DEST_PATH_IMAGE004
体外细胞实验表明，本发明的清酒乳杆菌SEUNEU-112具有上调保湿相关的水通道蛋白3基因AQP3和葡萄糖脑苷脂酶基因GBA表达的作用，基因表达量上调1.27~2.00倍。表明SEUNEU-112具有促进皮肤保湿的作用。
实施例6 SEUNEU-112调节光老化HaCaT角质细胞外基质/细胞自噬/抗氧化相关基因表达实验
1、SEUNEU-112上清液及灭活菌体制备：
制备方法参照实施例3。
2、HaCaT细胞制备及紫外线损伤
将HaCaT细胞消化后以0.5ml/孔（内含2×105细胞）接种至24孔板，5%二氧化碳培养箱37℃培养过夜。对孔内细胞进行总剂量为2J/cm2的紫外线UVB照射损伤。
3、SEUNEU-112添加
将上清液5%（V/V）、灭活菌体10%（V/V）分别加入刺激过的HaCaT细胞（对照组分别以等体积PBS替代上清液/灭活菌体）。每组3平行，37℃培养过夜。
4、qPCR法检测细胞外基质/细胞自噬/抗氧化相关基因相对表达倍数
将上述细胞弃去培养基后，加入裂解液，提取细胞总RNA，检测RNA浓度及纯度后反转录为cDNA，以GAPDH为内参基因，采用实时qPCR检测细胞外基质相关基因TIMP1、COL1A1和SMAD3，细胞外基质降解相关基因MMP1，细胞自噬相关基因LC3B，抗氧化相关基因NRF2以及炎症因子TNF-α的表达。以对照组基因相对表达倍数F=1，利用2-ΔΔCT法计算各样品F值。
上清液上调细胞外基质基因TIMP1以及下调细胞外基质降解基因MMP1结果见表5：
Figure 298255DEST_PATH_IMAGE005
灭活菌体上调细胞外基质基因COL1A1和SMAD3、细胞自噬基因LC3B、抗氧化基因NRF2和下调炎症因子TNF-α结果见表6：
Figure 71783DEST_PATH_IMAGE006
体外细胞实验表明，本发明的清酒乳杆菌SEUNEU-112具有上调HaCaT角质细胞外基质相关的组织金属蛋白酶抑制物1基因TIMP1、Smad蛋白3基因 SMAD3以及Ⅰ型胶原α1链基因COL1A1，细胞自噬相关基因微管相关蛋白1轻链3β基因LC3B，抗氧化相关基因核因子E2相关因子2 NRF2基因表达的作用，基因相对表达量上调1.21~1.82倍；具有下调降解细胞外基质相关的基质金属蛋白酶家族基因MMP1以及炎症因子TNF-α，基因相对表达量下调0.58~0.87倍。表明，SEUNEU-112具有促进HaCaT角质细胞外基质合成、减少细胞外基质降解、促进细胞自噬以清除老化细胞、增加抗氧化能力以及降低炎症的抗衰老作用。
实施例7 SEUNEU-112促进HFF细胞的增殖
1、SEUNEU-112上清液及灭活菌体制备：
制备方法参照实施例3。
2、HFF细胞制备及SEUNEU-112添加
将DMEM培养的HFF细胞消化后以0.5ml/孔（每孔含1.5×105细胞）接种至24孔板，5%二氧化碳培养箱37℃培养过夜。将10%（V/V）上清液和灭活菌体分别加入HFF细胞（对照组以等体积PBS替代）。每组3平行，37℃培养过夜。
3、HFF细胞转接及染色计数
将24孔板内的HFF细胞计数后适当稀释，以2ml/孔（每孔含2.0×103细胞）转接6孔板，每组3平行，5%二氧化碳培养箱37℃培养7~10天。对孔内细胞用多聚甲醛固定后结晶紫染色计数。根据公式计算细胞增殖率。
计算公式及结果如表7：
Figure 260188DEST_PATH_IMAGE007
体外细胞实验表明，本发明的清酒乳杆菌SEUNEU-112上清液及灭活菌体具有促进HFF人成纤维细胞增殖的作用，增殖率 28.30~43.40%。表明SEUNEU-112具有促进HFF细胞增殖的作用。
实施例8 SEUNEU-112调节氧化损伤人成纤维细胞外基质/细胞凋亡/细胞自噬/抗氧化相关基因表达实验
1、SEUNEU-112上清液及灭活菌体制备：
制备方法参照实施例3。
2、HFF人成纤维细胞制备及H2O2诱导氧化损伤
将DMEM培养的HFF细胞消化后以0.5ml/孔（内含2×105细胞）接种至24孔板，5%二氧化碳培养箱37℃培养过夜。每孔加入终浓度为200μM的H2O2进行刺激，37℃静置1h。
3、SEUNEU-112添加
将上清液5%（V/V）、灭活菌体10%（V/V）分别加入刺激过的HFF细胞（对照组分别以等体积PBS替代上清液/灭活菌体）。每组3平行，37℃培养过夜。
4、qPCR法检测细胞外基质/细胞凋亡/细胞自噬/抗氧化相关基因相对表达倍数
将上述细胞弃去培养基后，加入裂解液，提取细胞总RNA，检测RNA浓度及纯度后反转录为cDNA，以GAPDH为内参基因，采用实时qPCR检测细胞外基质、抗氧化、细胞外基质降解、细胞凋亡和细胞自噬相关基因的表达。以对照组基因相对表达倍数F=1，利用2-ΔΔCT法计算各样品F值。
上清液调节HFF人成纤维细胞相关基因结果见表8：
Figure 927929DEST_PATH_IMAGE008
灭活菌体调节HFF人成纤维细胞相关基因结果见表9：
Figure 691748DEST_PATH_IMAGE009
体外细胞实验表明，本发明的清酒乳杆菌SEUNEU-112的上清液及菌体具有上调HFF人成纤维细胞外基质相关的层粘连蛋白基因LN和莫霍克蛋白基因MKX，抗氧化相关的去乙酰化蛋白1基因SIRT-1，以及细胞自噬相关基因微管相关蛋白1轻链3β基因LC3B表达的作用，基因相对表达量上调1.10~3.10倍；具有下调降解细胞外基质相关的基质金属蛋白酶家族基因MMP，细胞凋亡相关的BCL2-Associated X蛋白基因BAX和半胱氨酸蛋白酶家族基因Caspase的表达，基因相对表达量下调0.36~0.92倍。表明SEUNEU-112具有促进HFF人成纤维细胞外基质合成、减少细胞外基质降解、减少细胞凋亡、促进细胞自噬以清除老化细胞以及增加抗氧化能力的抗衰老作用。
实施例9 SEUNEU-112降低Raw264.7细胞NO生成量
1、SEUNEU-112上清液及灭活菌体制备：
制备方法参照实施例3。
2、Raw264.7细胞制备
将Raw264.7细胞消化后以0.5ml/孔（内含2×105细胞）接种至24孔板，5%二氧化碳培养箱37℃培养过夜。
3、SEUNEU-112添加及LPS刺激
将上清液5%（V/V）、灭活菌体10%（V/V）分不同组加入培养过夜的Raw264.7细胞中（对照组分别以等体积PBS替代上清液/灭活菌体），2h后添加0.5ml浓度为0.2μg/ml的LPS溶液，诱导Raw264.7细胞发炎，20h后取细胞培养上清液，按照碧云天NO检测试剂盒所述方法进行标准曲线绘制，计算样品中NO的浓度及抑制率。
计算公式及结果如表10：
Figure 419533DEST_PATH_IMAGE010
结果显示SEUNEU-112具有抗炎作用，能够降低LPS诱导的Raw264.7细胞NO生成量，与LPS对照组相比降低18.75%~31.10%。
实施例10 SEUNEU-112下调HaCaT细胞炎症因子相关基因的表达
1、SEUNEU-112上清液制备：
制备方法参照实施例3。
2、HaCaT细胞制备
将Raw264.7细胞消化后以0.5ml/孔（内含2×105细胞）接种至24孔板，5%二氧化碳培养箱37℃培养过夜。
3、金黄色葡萄球菌制备及添加
金黄色葡萄球菌接入营养肉汤培养基，37℃摇床培养过夜，用MEM无血清培养基调整菌液浓度至OD600=6.0，每孔100μl添加入培养过夜的HaCaT细胞中，刺激细胞产生炎症因子，3h后弃去细胞培养基，PBS清洗5次，每孔重新加入1ml的MEM无血清培养基。
4、SEUNEU-112上清液添加
将SEUNEU-112上清液以5%（V/V）加入金黄色葡萄球菌刺激过的HaCaT细胞培养液中，每组3平行，37℃培养过夜。
5、qPCR法检测细胞炎症因子基因相对表达倍数
将上述细胞弃去培养基后，加入裂解液，提取细胞总RNA，检测RNA浓度及纯度后反转录为cDNA，以GAPDH为内参基因，采用实时qPCR检测IL-8、COX-2、IL-6和TRPV1基因的表达。以添加等体积PBS处理组为对照（基因相对表达倍数F=1），利用2-ΔΔCT法计算各样品F值。
结果见表11：
Figure 767338DEST_PATH_IMAGE011
体外细胞实验表明，本发明的清酒乳杆菌SEUNEU-112具有下调金黄色葡萄球菌诱导的HaCaT细胞炎症相关因子白介素8基因IL-8、环氧化酶-2基因COX-2、白介素6基因IL-6和香草酸瞬时受体亚型1基因TRPV1表达的作用，基因表达量下调0.27~0.72倍。表明，SEUNEU-112具有抗炎作用。
实施例11 SEUNEU-112清除自由基的作用
1、SEUNEU-112上清液制备：
挑取清酒乳杆菌SEUNEU-112单菌落于MRS液体培养基，37℃培养箱静置培养16~18h，酶标仪检测并以MRS液体培养基稀释调整OD600=2.0，121℃，30min高压灭活，12000转离心2min，上清液经0.22μm滤膜过滤为上清液。
2、SEUNEU-112上清液羟自由基清除能力检测
试剂配制和检测方法按照索莱宝羟自由基清除能力检测试剂盒说明书进行。测定各样品536nm吸亮度，求平均值并计算各样品清除率。
计算公式及结果如表12：
Figure 301087DEST_PATH_IMAGE012
3、SEUNEU-112上清液ABTS自由基清除能力检测
试剂配制和检测方法按照索莱宝ABTS自由基清除能力检测试剂盒说明书进行。测定各样品405nm吸亮度，求平均值并计算各样品清除率。
计算公式及结果如表13：
Figure 558893DEST_PATH_IMAGE013
结果显示SEUNEU-112具有清除羟自由基和ABTS自由基的作用，自由基清除率22.22%~30.33%。
实施例12 SEUNEU-112抑制皮肤病原菌的作用
1、SEUNEU-112上清液制备：
制备方法参照实施例11。
2、病原菌菌液制备：
将4种病原菌：人葡萄球菌（Staphylococcus hominis CGMCC 1.493）、溶血葡萄球菌（Staphylococcus haemolyticus CGMCC 1.540）、干瘪棒杆菌（Corynebacterium xerosis CGMCC 1.1919），铜绿假单胞菌（Pseudomonas aeruginosa CGMCC 1.1785），分别挑取单菌落于BHI液体培养基，37℃培养箱静置培养过夜，检测并以BHI液体培养基稀释调整OD600=0.2。
3、抑制病原菌实验
将灭活上清液以添加量10%（V/V）加入病原菌菌液中，以添加等体积MRS液体培养基为对照，37℃培养3h，检测菌液浓度（OD600）并计算病原菌抑制率。计算公式及结果如表14：
Figure 582213DEST_PATH_IMAGE014
体外实验表明，清酒乳杆菌SEUNEU-112具有抑制皮肤病原菌人葡萄球菌、溶血葡萄球菌、铜绿假单胞菌和干瘪棒杆菌增殖的作用，抑制率29.73%~48.08%。
实施例13 SEUNEU-112改变菌群比例治疗痤疮的作用
1、SEUNEU-112上清液制备：
制备方法参照实施例11。
2、痤疮相关菌群菌液制备：
将痤疮丙酸杆菌（Propionibacterium acnes CGMCC 1.5003）和表皮葡萄球菌（Staphylococcus epidermidis CGMCC 1.4260）分别挑取单菌落于BHI液体培养基，37℃培养箱静置培养过夜，检测并以BHI液体培养基稀释调整OD600=0.2。
3、添加上清液影响痤疮相关菌群生长实验
将上清液以10%添加量分别加入两种皮肤菌群菌液中，以添加等体积MRS液体培养基为对照，37℃培养16h，以两种菌液相对浓度比值评价对痤疮相关菌群生长影响。计算公式及结果如表15：
Figure 292680DEST_PATH_IMAGE015
结果显示SEUNEU-112对痤疮丙酸杆菌有显着抑制作用，而不影响表皮葡萄球菌。SEUNEU-112能够改变痤疮相关菌群比例，从而达到治疗痤疮的目的。
实施例14 SEUNEU-112改变菌群比例改善敏感肌的作用
1、SEUNEU-112上清液制备：
制备方法参照实施例11。
2、敏感肌相关菌群菌液制备：
将金黄色葡萄球菌金黄亚种（Staphylococcus aureus subsp.aureus CGMCC1.8721）和表皮葡萄球菌（Staphylococcus epidermidis CGMCC 1.4260）分别挑取单菌落于BHI液体培养基，37℃培养箱静置培养过夜，检测并以BHI液体培养基稀释调整OD600=0.2。
3、添加上清液影响敏感肌相关菌群生长实验
将上清液以10%（V/V）添加量分别加入两种皮肤菌群菌液中，以添加等体积MRS液体培养基为对照，37℃培养16h，以两种菌液相对浓度（OD600）比值评价对敏感肌相关菌群生长影响。计算公式及结果如下表16：
Figure 886514DEST_PATH_IMAGE016
结果显示SEUNEU-112对金黄色葡萄球菌有显着抑制作用，而不影响表皮葡萄球菌。SEUNEU-112能够改变菌群比例，从而有效改善敏感肌。
实施例15 SEUNEU-112提高HFF细胞β-内啡肽生成量
1、SEUNEU-112上清液及灭活菌体制备：
挑取SEUNEU-112单菌落于MRS液体培养基，37℃培养箱静置培养16~18h，酶标仪检测并以PBS稀释调整OD600=0.2，121℃，30min高压灭活，12000转离心2min，经0.22μm滤膜过滤为上清液。离心沉淀以适量PBS重悬，稀释调整OD600=1.0，为灭活菌体。
2、HFF细胞制备及H2O2诱导氧化损伤
将DMEM培养的HFF细胞消化后以2ml/孔（内含5×105细胞）接种至6孔板，5%二氧化碳培养箱37℃培养过夜。每孔加入终浓度为200μM的H2O2进行刺激，37℃静置1h。
4、SEUNEU-112添加
将5%（V/V）上清液和灭活菌体分别加入刺激过的HFF细胞（对照组以等体积PBS替代）。每组3平行，37℃培养过夜。
5、测定β-内啡肽表达量
收集细胞培养液，按照江莱生物人β-内啡肽（β-EP）酶联免疫吸附测定试剂盒所述方法建立标准曲线，计算样品中β-内啡肽生成量及提高率。标准曲线公式及测定结果如表17：
Figure 123460DEST_PATH_IMAGE017
结果显示SEUNEU-112具有提高HFF细胞β-内啡肽生成量的抗衰老作用，提高HFF细胞β-内啡肽生成量8.88%~21.65%。
以上仅是本发明的优选实施方式，应当指出，对于本技术领域的普通技术人员来说，在不脱离本发明原理的前提下，还可以做出若干改进和润饰，这些改进和润饰也应视为本发明的保护范围。

Claims (10)

1.清酒乳杆菌（Lactobacillus sakei），其保藏编号为 CCTCC NO：M 2022369。
2.权利要求1所述的清酒乳杆菌在制备肌肤状态改善产品中的应用；所述的肌肤状态改善包括修护皮肤屏障、保湿、抗衰老、促细胞增殖、抗炎、抗自由基、抑制皮肤病原菌、调节皮肤微生物菌群的比例中的至少一种；所述的调节皮肤微生物菌群的比例包括抑制金黄色葡萄球菌和/或痤疮丙酸杆菌的生长，和/或不影响表皮葡萄球菌的生长。
3.根据权利要求2所述的应用，其特征在于，所述修复皮肤屏障包括恢复细胞活力和/或上调屏障修护相关基因的表达；所述屏障修护相关基因包括FLG、IVL、OVOL1和LOR中的至少一种。
4.根据权利要求2所述的应用，其特征在于，所述保湿包括上调保湿相关基因AQP3和/或GBA的表达。
5.根据权利要求2所述的应用，其特征在于，所述抗衰老包括如下a）~f）所示至少一种：
a）、上调细胞外基质合成相关基因的表达，所述细胞外基质合成相关基因包括LN、MKX、SMAD3、TIMP1、COL1A1中的至少一种；
b）、上调细胞自噬相关基因LC3B的表达；
c）、上调细胞抗氧化相关基因NRF2和/或SIRT-1的表达；
d）、下调细胞炎症因子相关基因TNF-α表达；
e）、下调细胞凋亡相关基因的表达；所述细胞凋亡相关基因包括BAX和/或Caspase家族中的至少一个；
f）、下调降解细胞外基质相关基因的表达；所述降解细胞外基质相关基因包括MMP家族中的至少一种。
6.根据权利要求2所述的应用，其特征在于，所述促细胞增殖包括促进成纤维细胞的增殖。
7.根据权利要求2所述的应用，其特征在于，所述抗炎包括降低NO的释放水平，和/或下调细胞炎症相关因子的表达，所述细胞炎症相关因子包括IL-6、COX2、IL-8和TRPV1中的至少一种。
8.根据权利要求2所述的应用，其特征在于，所述抗自由基包括对羟自由基和/或ABTS自由基的清除。
9.根据权利要求2所述的应用，其特征在于，所述抑制皮肤病原菌包括抑制人葡萄球菌、溶血葡萄球菌、铜绿假单胞菌和干瘪棒杆菌中至少一种。
10.一种改善皮肤状况的产品，其特征在于，其原料包括权利要求1所述清酒乳杆菌。
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* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN115404189A (zh) * 2022-11-01 2022-11-29 山东锦鲤生物工程有限公司 棒状乳杆菌及其应用

Citations (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN104284653A (zh) * 2012-03-27 2015-01-14 欧莱雅 透明颤菌属细菌培养裂解物在预防和/或治疗头皮的超级皮脂溢状况中的应用
US20200330526A1 (en) * 2015-11-30 2020-10-22 Joseph E. Kovarik Method for Reducing the Likelihood of Developing Cancer in an Individual Human Being

Patent Citations (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN104284653A (zh) * 2012-03-27 2015-01-14 欧莱雅 透明颤菌属细菌培养裂解物在预防和/或治疗头皮的超级皮脂溢状况中的应用
US20200330526A1 (en) * 2015-11-30 2020-10-22 Joseph E. Kovarik Method for Reducing the Likelihood of Developing Cancer in an Individual Human Being

Non-Patent Citations (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
段昊: "益生菌在我国保健食品中的应用进展", 《食品工业科技》 *

Cited By (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN115404189A (zh) * 2022-11-01 2022-11-29 山东锦鲤生物工程有限公司 棒状乳杆菌及其应用
CN115404189B (zh) * 2022-11-01 2023-01-13 山东锦鲤生物工程有限公司 棒状乳杆菌及其应用

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