CN104284653A - 透明颤菌属细菌培养裂解物在预防和/或治疗头皮的超级皮脂溢状况中的应用 - Google Patents

透明颤菌属细菌培养裂解物在预防和/或治疗头皮的超级皮脂溢状况中的应用 Download PDF

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Abstract

本发明涉及属于透明颤菌(Vitreoscillasp.)属的一种或多种细菌(特别是线状透明颤菌(Vitreoscilla filiformis)种)在完全发酵培养基中的裂解物的化妆品用途，所述在完全发酵培养基中的裂解物作为用来预防和/或治疗与头皮皮屑状况无关的超级皮脂溢状况的活性剂。

Description

透明颤菌属细菌培养裂解物在预防和/或治疗头皮的超级皮脂溢状况中的应用
这个发明涉及来源于属于透明颤菌(Vitreoscillasp.)属微生物(特别是线状透明颤菌(Vitreoscilla filiformis)种)的一种活性剂作为用于预防和/或治疗与头皮皮屑问题无关的超级皮脂溢状况的化妆品用途，该超级皮脂溢状况包括与头皮皮屑问题无关的中度到重度的超级皮脂溢状况。
皮肤是一种细胞相连在一起并彼此整体地结合的组织，皮肤组织形成了一个外层，包括皮脂腺、汗腺和毛囊。头皮像其他皮肤组织一样，进行着持续不断的表皮更新，在此处毛发本身斜向地插入到称为毛囊的更深的上皮凹陷处。
头皮上含有丰富的皮脂腺，皮脂腺由毛囊和毛囊皮脂腺囊形成。
皮脂腺是一种全分泌的外分泌腺，分泌一种油性物质，称为皮脂，其来源于充满脂质的腺细胞破裂。这种物质含有细胞碎片和脂质，并且包含大约58％的甘油三酯、25％的蜡质、12％的角鲨烯和5％的胆固醇，这种物质直接流入毛囊皮脂腺囊。
皮脂分泌是一种正常现象，对皮肤和头发都是有益的。皮脂保护头皮，通过润滑外皮而使头发有光泽。
既然头皮富含多种皮脂腺，过度的皮脂分泌，或者超级皮脂溢，导致了中度到重度的超级皮脂溢状况的外观，这可能与麻烦、不适感、美观问题，甚至一种病理性皮肤状况有关。
头皮的超级皮脂溢能导致头发出现油腻、暗淡和脏污的外观，使头发失去其自然的外观。另外，头发上皮脂的过度存在会使头发细长。细长的头发被证明难于造型，因此表现出美学上的缺点。同样地，油腻的头发有一种使之更容易变脏的趋向，因为它很容易吸引和留住大气中悬浮的灰尘颗粒。
油腻的头皮代表着头发最常遇到的问题之一，其他常见的问题是由干燥的头发引起的。
因此，皮脂分泌过多或超级皮脂溢可能导致麻烦、不适感、美观问题，甚至病理性皮肤状况的感觉。正如已经指出的，皮脂过量分泌可能导致油腻，甚至头皮痤疮。
在引起超级皮脂溢的原因中，可以提到的涉及荷尔蒙不平衡，这在生命中任何年龄都会遇到，包括在青春期和绝经期的期间。众所周知，由压力引起的荷尔蒙不平衡，这可发生在所有年龄的人身上。
与头皮的超级皮脂溢有关的麻烦可能由于头皮上某些特定的细菌或真菌菌株的存在而加剧。特定的细菌和真菌菌株，如痤疮丙酸杆菌(Propionibacterium acnes)、表皮葡萄球菌(Staphylococcus epidermis)、球型马拉色菌(Malassezia globosa)、限制性马色拉菌(Malassezia restricta)和颗粒丙酸杆菌(Propionibacterium granulosum)，在头皮上产生了胞外的脂肪酶。在这些脂肪酶的作用下，皮脂甘油三酯被水解成甘油和脂肪酸。
当皮脂中的甘油三酯的浓度减少，例如由于由细菌脂肪酶对所述甘油三酯的水解，皮脂液化，然后沿着毛发更自由地流动，使头发在外观上更容易表现出油腻、暗淡和脏污。
头皮上皮脂的过度分泌也能提高脱发的可能性。特别是头皮的超级皮脂溢可导致毛囊周围和内部皮脂堵塞的形成。皮脂堵塞覆盖了头发下部负责毛发再生和生长的毛球，并且有时可能会导致其窒息和产生脱发。头皮的超级皮脂溢可能导致脱发，易于进一步增加了个体在美观上的麻烦。
另外，某些个体在一定条件下，头皮的超级皮脂溢状况可以至少瞬时伴有头皮皮屑问题。
在现有的技术中，人们已经提出各种解决方案用于减少对头皮的皮脂分泌过多或缓解其产生的后果，特别是用于缓解与其相关的麻烦、不适感或美观问题。因此，与皮脂分泌过多相关的现象的对症治疗的许多补救措施已经被提出来了，无论是局部治疗或全身治疗。
特别地，清洁剂，例如摩擦剂、收敛剂、香波和皂类已被使用。然而，这些组合物实质上具有瞬时去除表面的脂质的效果。这些组合物可以专门起到减少头皮油腻外观的作用，但对超级皮脂溢情况没有效果。
局部的干燥剂，如硫磺、间苯二酚和水杨酸，也已经被使用。然而，这些药剂的效力主要是作用于头皮产生的红斑和脱屑问题，而不作用于超级皮脂溢情况。
上述现有的组合物的效果很短暂且通常造成头发干燥，甚至使头发发脆易损，从而引起不适感和美观问题。
根据某些研究，已经寻求通过提供外源性甘油三酯来补充头皮内源性甘油三酯的缺乏，从而使头皮上保持一个恒定的甘油三酯浓度。例如，基于甘油三酯的化妆品组合物的常规应用在已有专利(特别参见美国专利号US 4172149)中被描述。然而，这些化妆品组合物的局部应用表现出一些缺点，由于事实上该活性剂仅能非常慢地扩散到皮脂腺。
其他现有的研究旨在限制脂质在腺细胞中的形成，以减缓细胞的充血和防止所述细胞的断裂，并因此降低皮脂的形成。酸、酯、醇以及含硫衍生物的应用也特别被提出，如乙酰丙酸(特别参见日本专利No.JP 59 164 712)、乳酸(特别参见比利时专利BE 893 182)、3,4二羟基苯丙氨酸、锌视黄(特别参见欧洲专利EP 38 246)或二甲噻蒽(特别参见欧洲专利EP 19 720)。
最近，已建议在经常使用的香波中应用，例如基于天然产物如香茅、茶树油、桉树油、甘菊、迷迭香精华、霍霍巴油等。
仍需要开发新颖的活性剂或新的用于预防和/或治疗头皮的超级皮脂溢状况的治疗方法。
仍需要一种针对超级皮脂溢状况的不影响头皮生态菌群的美容处理方法，甚至可以加强健康生态菌群的出现。
需要针对超级皮脂溢状况的能用于维持，甚至加强头皮屏障性质的美容处理方法。
还需要一种针对超级皮脂溢状况进行美容处理而不引起炎症的方法。
本发明的目的就是为了满足这些需求。
因此，本发明的目的特别是提供一种新颖的活性剂，它满足了上述的要求，特别表现出了对于不存在头皮皮屑的具有头皮功能障碍的超级皮脂溢病症的功效，其中包括不存在头皮皮屑的中度到重度头皮功能性障碍的超级皮脂溢病症。
正如下文所进行的详细描述，本发明的新型活性剂的优势在于用在头皮超级皮脂溢问题的美容处理过程中，其中包括不受头皮皮屑影响的中度到重度的超级皮脂溢个体。
更具体地，本发明涉及属于透明颤菌(Vitreoscilla)(特别是线状透明颤菌Vitreoscilla filiformis种)的一种或多种细菌在一个完全发酵培养基中裂解物的化妆品用途，其作为活性剂，用于预防和/或治疗不存在头皮皮屑状况的超级皮脂溢状况，其中包括不存在头皮皮屑问题的中度到重度的超级皮脂溢状况。
对于本发明的目的，表述“在完全发酵培养基中的裂解物”是指该裂解物被用于和存在于化妆品或皮肤病用组合物中，以下文所限定的原始的完全培养基形式配制在所述组合物中，完全培养基是将细菌培养到微生物生长阶段，开始利用培养基中最初的营养底物的一种培养基。
对于本发明的目的，表述“完全发酵培养基”旨在表示从培养过程得到的已被用于微生物生长和细胞裂解的介质，所述介质不需要额外地进行分离和/或除去其所有或部分非水组分的操作。
对于本发明的目的而言，术语“预防”是指完全消除或部分降低一个给定现象的表现风险，即：在本发明中，这种没有头皮皮屑问题的超级皮脂溢状况的表现，其中包括中度到重度的没有头皮皮屑问题的超级皮脂溢状况。“部分降低”意味着风险仍然存在，但比实施本发明之前存在较小的风险。
术语头皮的“皮屑问题”意思是，根据本发明，头皮角质层的细胞的异常或不规则脱落，从而导致肉眼可见的大而厚的细胞团块的形成，被称为“头皮屑”。
在某些实施方案中，本发明专门用来预防个体的不受头皮皮屑问题影响的头皮超级皮脂溢状况。
在某些实施方案中，本发明专门用于治疗与头皮皮屑状况无关的头皮超级皮脂溢状况。
一种含本发明活性剂的组合物可以局部给药。
不希望受下文所束缚，本发明的活性剂的效果可能是细菌成分及其组分之间协同作用的结果，细菌成分通常彼此分离，例如在发酵培养基中增殖的过程中所产生的水溶性代谢物，通常以水性上清液存在；组分如由培养基中的生物质的全部或部分构成的非水溶性细胞膜或细胞膜碎片，或者甚至其分离的裂解物。
因此，实施例已经表明包含本发明的活性剂(属于透明颤菌属的细菌在完全发酵培养基中的裂解物)的化妆品组合物具有减少无头皮屑问题个体的头皮超级皮脂溢状况的特性，这包括没有头皮皮屑问题的中度到重度的头皮超级皮脂溢状况。
实施例中也已表明包含本发明的活性剂的化妆品组分的效果是持久的，即使使用量很小。
属于透明颤菌属的细菌在完全发酵培养基中的裂解物作为化妆品的用途，目的在于预防、或减轻、或消除在没有头皮皮屑问题情况下由于头皮过度分泌皮脂引起的不适感和美观难题。这种不适感包括头皮上皮脂的堆积引起的搔痒。美观难题包括油腻的头皮，以及油腻的头发难以造型。
本发明还涉及一种美容方法，其用于预防和/或治疗无头皮屑问题的头皮超级皮脂溢状况，其中包括无头皮皮屑问题的中度到重度的头皮超级皮脂溢状况，该方法包括至少一步给予(特别是口服)所述个体有效剂量的至少一种是属于透明颤菌属(特别是线状透明颤菌种)的细菌在完全发酵培养基中的裂解物。
对于本发明的目的，术语“有效剂量”是指在考虑到获得预期效果的情况下，化合物所需要达到的充分必要的数量。这样的量可以通过现有技术中本领域技术人员所知的方法来确定，比如通过预先试验测试来确定。
根据其另一个方面，本发明涉及洗去型或保留型的化妆品和/或皮肤病用组合物，其含有生理学上可接受的介质，属于透明颤菌属(特别是线状透明颤菌种)的微生物在完全发酵培养基中产生的至少一种裂解物。
完全发酵培养基
如前所述，表述“完全发酵培养基”旨在表示一种发酵培养基或其他具有相同组成的培养基，至少非水组分相同，或者甚至组分完全相同，作为发酵培养基，其中依次进行发酵和专门用于形成根据本发明所需要的裂解物的微生物的细胞裂解。
换句话说，该培养基已经发生(undergone)，而且，不进行旨在分离和/或除去其全部或部分的非水组分的二次操作。
更具体地，根据本发明所考虑的活性剂是由从微生物的裂解物形成的，从量的方面来说，所述活性剂是由用于所述细菌发酵的培养基的全部或部分形成，细胞裂解是在培养基中连续进行的(即完全发酵培养基)。
从前述的观点来看，本发明所指的活性剂是由裂解物和“完全”发酵培养基形成，其含有细胞质、细胞溶质组分、细胞壁片段和所述微生物在细胞裂解期间形成和/或释放出的代谢物，在细菌发酵过程中由细菌自发地产生和释放并因此在所述细菌的细胞裂解前已经存在于发酵培养基中的所有生物实体。
因此，本发明所指的活性剂，即由属于透明颤菌(特别是线状透明颤菌种)的细菌在本发明中的完全发酵培养基中的裂解物形成，该活性剂明显不同于由属于透明颤菌(特别是线状透明颤菌种)的细菌的发酵培养基的上清液。
的确，本发明所考虑的活性剂，相对于上清液，含有由裂解物所代表的所述细菌的细胞碎片。
本发明所指的活性剂，即由属于透明颤菌(特别是线状透明颤菌种)的细菌在本发明中的完全发酵培养基中的裂解物形成，该活性剂也不同于从属于透明颤菌(特别是线状透明颤菌种)细菌的发酵培养基中分离出来的生物质或生物质级分，或者甚至裂解物或裂解物的级分。
的确，相对于所述生物质，或生物质级分，或裂解物，或裂解物级分，本发明所考虑的活性剂含有大量的水可溶性的代谢物，在所述细菌的增殖过程中自然地释放到培养基中。
对于本发明的目的，表述“非水组分”意味着作为常规发酵培养基的主要成分的水不是必须保留下来的部分，即本发明中所指的等量完全培养基。
因此，表述“完全培养基”也被理解为一种浓缩的完全培养基形式，所述浓缩的完全培养基是由于构成发酵培养基中的水在局部蒸发后得到的，在发酵培养基中，相应微生物的培养和细胞裂解连续进行。当然，此蒸发是在操作条件调节的情况下进行的，以便不损害形成完全培养基中的非水组分的完整性。
发酵培养基的组成
根据定义，发酵培养基或其他培养基是能使培养，因此，在适当情况下，使细胞、细菌和酵母生长的支撑物。原则上，这些细胞发现在该培养基中有他们大量快速繁殖的必需成分，但也有些元素，可能更有利于特定细菌属或特定家族的生长，如：透明颤菌属细菌(特别线状透明颤菌种)。
因此其成分必须满足所考虑的微生物的营养需求和增值的必要。
更具体地说，这种培养基的成分必须：
-含有需要的矿物离子和生长因子，并提供碳源和能量源；
-pH值接近最优pH；并且
-具有最佳离子强度(该培养基可以是等渗的，但这不是必需的)。
因此，适用于本发明的发酵培养基的成分至少包括：
-碳源和能量源，通常由一个糖并优选由葡萄糖表示；
-钾和磷源，例如:K2HPO4；
-氮和硫源，以(NH4)2SO4为代表的化合物；
-镁源，例如:MgCl2；
-钙源，例如:CaCl2；
-铁源，更具体地说，柠檬酸铁，柠檬酸盐起到使铁溶解在溶液中的作用；
-少量的元素的来源特别选自含铜、锌、钴、镍、硼、钛的盐；
-水的来源，一般无菌，所有生命形式必不可少的；
-以KH2PO4为代表的pH缓冲液。
如果这些组分中缺少任意一个时，细菌都不会生长，因为它们自身不能弥补所缺的成分。
通过举例说明了适合于本发明微生物生长的发酵培养基，特别被提及的是下文实施例1中所制成的培养基。
本发明所考虑的微生物的有效量被引入其中，整个混合物置于适于所述微生物增殖的条件下。
为了在完全发酵培养基中得到属于透明颤菌属细菌的裂解物，根据包括所述细菌的一步培养的方法，本领域的技术人员可以特别参见实施例1。
有利地，为了获得本发明的活性剂，即在完全发酵培养基中得到属于透明颤菌属的细菌裂解物，该生物质(生长阶段后的细菌细胞，存在于培养其生长的培养基中)被冷冻，例如放在-20℃的温度，然后进行灭菌，优选通过加热，特别是使先前冷冻的生物质在高于100℃的温度下加热。通过说明的方式中，生物质的灭菌可以通过高压灭菌进行，例如在121℃的温度下进行。
如前面所述，在所述微生物培养的后期，微生物在用于培养其的发酵培养基中直接转化为裂解物形式。
裂解细菌以获得根据本发明的活性剂
裂解物通常是指生物细胞通过已知的细胞裂解现象破坏或溶解后获得的物质，从而引起所考虑的生物细胞的细胞内和细胞间生物成分自然地释放。
对于本发明的目的，术语“裂解物”是指所有有关的微生物裂解获得的裂解物，即属于透明颤菌属(特别是线状透明颤菌种)的细菌的裂解获得的裂解物。
所用的裂解物是由所有其细胞内生物成分形成的，特别是其代谢物和其细胞裂解过程中产生的细胞壁和细胞膜的成分。
对于本发明的目的，术语“代谢物”是指本发明所考虑的微生物代谢产生的任何物质。
这种细胞裂解可通过各种技术来完成，例如：渗透压休克、热休克、超声波处理，或者在离心式的机械压力下。
更具体地，本裂解物可以根据在美国专利US 4464362中描述的技术获得，并且尤其是根据以下方案。
发酵培养基被用来培养所考虑的微生物，因此，为了释放其中的胞质、细胞溶质组分、细胞壁片段和该微生物代谢的产物，使用超声波将含有所述微生物破碎。然后，所有这些组分都以稳定的形式自然分布保存在“完全”发酵培养基中。
因此，本发明所考虑的活性剂可通过包括以下方法得到：
-至少一种属于透明颤菌属(特别是线状透明颤菌种)的细菌在适合于所述细菌增殖的条件下的发酵培养基中培养。并
-所述的细菌的细胞裂解在所述发酵培养基中。
属于透明颤菌属的细菌(特别是线状透明颤菌种)
如上述说明，按照伯杰氏系统细菌学手册(Bergey’s manual of systematicbacteriology)的定义(第3卷，第22和第23节，第9版，1989年)，本发明所考虑以裂解物的形式存在的微生物是一种非合成的丝状细菌，属于透明颤菌属(特别是线状透明颤菌种)。
如下文给出的例子，发明人意外地发现，这种在本发明的完全发酵培养基中以其裂解物形式使用的细菌，在有效性方面，比从相同的发酵培养基中获得的那些生物量具有更多的性能。
更具体地说，它是属于贝格阿托氏菌属,透明颤菌属,柔发菌属(Flexithrix)或是亮发菌属(Leucothrix)的细菌。
在可以使用的细菌中，比如可以提及的是线状透明颤菌(ATCC 15551)。
本发明的一个优选的变体，它是线状透明颤菌这种细菌。
应用
正如前面所指出的那样，本发明所考虑的活性剂从它的效力方面看，对于与头皮皮屑问题无关的头皮超级皮脂溢情况相关的某些美容紊乱(cosmetic disorders)有特别的优势。
本发明的活性剂有利地用于治疗和/或预防超级皮脂溢状况和头皮的相关病症，不能有利用于与头皮皮屑问题相关的超级皮脂溢状况；所述超级皮脂溢状况和头皮的相关病症包括中度至重度超级皮脂溢状况和头皮的相关病症，其和与头皮皮屑问题相关的超级皮脂溢状况无关。
在头皮超级皮脂溢情况下，皮肤屏障不平衡，其完整性和保湿性受损。头皮的皮肤可能会过敏、瘙痒，以及脆弱，并可能表现出缺乏滋润的。
如下文的实施例，本发明优势之处在于可以使用一种新颖的活性剂，该活性剂用于减少或阻断不受头皮皮屑问题影响，头皮超级皮脂溢状况的皮脂过度分泌个体特别有效。
不希望受到任何理论的束缚，申请人认为，由于本发明的活性剂，皮脂分泌的抑制，能够调节这个分泌以阻止超级皮脂溢状况，不会阻塞皮脂分泌本身，而是再次稳定在一定水平，使得它能够保护头皮和保持头发光泽的效果。
有益地，本发明的活性剂能减少发生副作用的风险。
本发明所考虑的活性剂另一个优势在于，能够恢复头皮健康，使内环境完美稳定，并重新建立没有头皮的皮屑问题的个体的生态菌群平衡。
因此，本发明的化妆品的用途，美容方法和组合物证明对那些没有头皮皮屑问题的个体特别有效，特别用于以下情况：
-预防和/或治疗头皮的超级皮脂溢状况；
-重新建立头皮超级皮脂溢状况的生态菌群平衡，和/或；
-预防和/或治疗与头皮超级皮脂溢状况有关的瘙痒。
一般地，本发明是针对一种组合物，其包括仅作为活性剂的属于透明颤菌属的一种细菌或多种细菌在完全发酵培养基中的裂解物，所述活性剂用于与头皮皮屑问题无关的病症，该病症包括与头皮皮屑问题无关的中度到重度的头皮超级皮脂溢状况。
在一个具体实施方案中，化妆品组合物可能包含额外的活性剂，该额外的活性剂有助于与属于透明颤菌属的一种细菌或多种细菌在完全发酵培养基中的裂解物一起解决本发明的技术问题。
有益地，这种额外的化妆品活性剂可以用来发挥其在头皮的化妆品护理或卫生的效果，甚至可以用来增强与超级皮脂溢状况个体相关的头皮的皮肤屏障作用，这些个体不受头皮皮屑问题影响。
它可以特别涉及益生微生物，和/或它们的碎片，和/或其代谢物，它会不同于本发明所考虑的在活性剂中的所述细菌，和/或不同于这个微生物所用的完全培养基。
为实现本发明的目的，术语“益生微生物”意思是活的微生物，在适量使用时，对宿主健康具有一个积极的作用(粮农组织/世卫组织专家咨询评价包括奶粉活乳酸菌在内的益生菌在食品卫生和营养特性(FAO/WHO expert consultation on evaluation ofHealth and Nutritional Properties of Probiotic in Food Including Powder Milk with LiveLactic Acid Bacteria)，2001年10月6日)，特别是可以改善肠道微生物平衡。
根据一种实施方式，适用于本发明的益生微生物可能选自乳酸杆菌(Lactobacillussp.)、双歧杆菌(Bifidobacterium sp.)、球菌、酵母和孢子菌，及其混合体。
根据一种实施方式，适用于本发明的益生微生物优选自:
-(i)乳酸菌:发酵糖产生乳酸。根据它们的形态，分为两类:
乳杆菌属的种类：嗜酸乳杆菌(Lactobacillus acidophilus)、食淀粉乳杆菌(amylovorus)、干酪乳杆菌(casei)、鼠李糖乳杆菌(rhamnosus)、短乳杆菌(brevis)、卷曲乳杆菌(crispatus)、德氏乳杆菌(delbrueckii)(德氏乳杆菌保加利亚亚种(subspbulgaricus)、德氏乳杆菌乳亚种(lactis))、发酵乳杆菌(fermentum)、瑞士乳杆菌(helveticus)、鸡乳杆菌(gallinarum)、格氏乳杆菌(gasseri)、约氏乳杆菌(johnsonii)、植物乳杆菌(plantarum)、罗伊氏乳杆菌(reuteri)、唾液乳杆菌(salivarius)、消化乳杆菌(alimentarius)、弯曲乳杆菌(curvatus)、干酪乳杆菌干酪亚种(casei subsp.casei)、清酒乳杆菌(sake)，和
球菌：肠球菌(Enterococcus)(粪肠球菌(faecalis)、屎肠球菌(faecium))、乳酸乳球菌(Lactococcus lactis)(乳酸乳球菌乳酸亚种subsp.lactis或乳酸乳球菌乳脂亚种cremoris)、肠膜状明串珠菌葡聚糖亚种(Leuconostocmesenteroides subsp.dextranicum)、乳酸片球菌(Pediococcusacidilactici)、菊糖芽胞乳杆菌(Sporolactobacillusinulinus)、唾液链球菌嗜热亚种(Streptococcus salvarius subsp.thermophilus)、嗜热链球菌(Streptococcusthermophilus)、肉葡萄球菌(Staphylococccuscarnosus)、木糖葡萄球菌(Staphylococcusxylosus)
-(ii)双歧杆菌属(Bifidobacterium):青春双歧杆菌(Bifidobacterium adolescentis)、动物双歧杆菌(animalis)、两歧双歧杆菌(bifidum)、短双歧杆菌(breve)、乳双歧杆菌(lactis)、长双歧杆菌(longum)、婴儿双歧杆菌(infantis)、假链双歧杆菌(pseudocatenulatum)
-(iii)酵母:酿酒酵母(Saccharomyces cerevisiae)或布拉迪酵母(boulardii)
-(iv)其他的孢子菌:芽胞杆菌属(Bacillus)(蜡样芽胞杆菌(cereus vartoyo)或枯草芽胞杆菌(subtilis)、凝结芽胞杆菌(Bacillus coagulans)、地衣芽胞杆菌(Bacilluslicheniformis)、大肠杆菌尼氏菌株(Escherichia coli strainnissle)、费氏丙酸菌(Propionibacterium freudenreichi)
-(v)和它们的混合物。
适合本发明的微生物可以特别选自子囊菌，比如：酵母菌(Saccharomyces)、耶氏酵母菌(Yarrowia)、克鲁维酵母(Kluyveromyces)、有孢圆酵母属(Torulaspora)、粟酒裂殖酵母(Schizosaccharomycespombe)、德巴利酵母属(Debaromyces)、假丝酵母(Candida)、毕赤酵母(Pichia)、曲霉菌属(Aspergillus)和青霉菌属(Penicillium)，双歧杆菌(Bifidobacterium)、拟杆菌(Bacteroides)、梭杆菌(Fusobacterium)、蜜蜂球菌属(Melissococcus)、丙酸菌属(Propionibacterium)、肠球菌(Enterococcus)、乳球菌属(Lactococcus)、葡萄球菌属(Staphylococcus)、消化链球菌属(Peptostrepococcus)、芽胞杆菌属(Bacillus)、片球菌属(Pediococcus)、微球菌属(Micrococcus)、明串珠菌属(Leuconostoc)、魏斯氏菌属(Weissella)、气球菌属(Aerococcus)、酒球菌属(Oenococcus)和乳杆菌属(Lactobacillus genera)、和它们的混合物。
作为适合本发明的益生菌的其他实例，可能提及的是青春双歧杆菌(Bifidobacteriumadolescentis)、动物双歧杆菌(Bifidobacterium animalis)、两岐双岐杆菌(Bifidobacterium bifidum)、短双岐杆菌(Bifidobacterium breve)、乳酸双歧杆菌(Bifidobacterium lactis)、长双歧杆菌(Bifidobacterium longum)、婴儿双歧杆菌(Bifidobacterium infantis)、假小链双歧杆菌(Bifidobacterium pseudocatenulatum)、嗜酸乳杆菌(Lactobacillus acidophilus)NCFB 1748；食淀粉乳杆菌(Lactobacillus amylovorus)、干酪乳酸杆菌(Lactobacillus casei)(代田菌(Shirota))、鼠李糖乳杆菌(Lactobacillusrhamnosus)GG株、短乳酸杆菌(Lactobacillus brevis)、卷曲乳杆菌(Lactobacilluscrispatus)、保加利亚乳杆菌(bulgaricus)、德氏乳酸杆菌乳酸亚种(Lactobacillusdelbrueckii subsp.lactis)、发酵乳杆菌(Lactobacillus fermentum)、瑞士乳杆菌(Lactobacillushelveticus)、鸡乳酸杆菌(Lactobacillus gallinarum)、格氏乳酸杆菌(Lactobacillus gasseri)、约氏乳杆菌(Lactobacillus johnsonii)CNCM I-1225、植物乳酸杆菌(Lactobacillusplantarum)、罗伊氏乳杆菌(Lactobacillus reuteri)、唾液乳杆菌(Lactobacillus salivarius)、食品乳杆菌(Lactobacillus alimentarius)、弯曲乳杆菌(Lactobacillus curvatus)、干酪乳酸杆菌干酪亚种(Lactobacillus casei subsp.casei)、清酒乳杆菌(Lactobacillus sake)、乳酸乳球菌(Lactococcuslactis)、粪肠球菌(Enterococcus faecalis)、屎肠球菌(Enterococcusfaecium)、乳酸乳球菌乳酸亚种(Lactococcuslactis subsp.lactis)、乳酸乳球菌乳脂亚种(Lactococcuslactis subsp.cremoris)、肠膜状明串珠菌葡聚糖亚种(Leuconostocmesenteroides subsp.dextranicum)、乳酸片球菌(Pediococcusacidilactici)、菊糖芽胞乳杆菌(Sporolactobacillusinulinus)、唾液链球菌嗜热亚种(Streptococcus salvariussubsp.thermophilus)、嗜热链球菌(Streptococcus thermophilus)、肉葡萄球菌(Staphylococccuscarnosus)、木糖葡萄球菌(Staphylococcus xylosus)、酿酒酵母(Saccharomyces cerevisiae)、布拉氏酵母菌(Saccharomyces boulardii)、蜡样芽胞杆菌(Bacillus cereus vartoyo)、枯草芽胞杆菌(Bacillus cereus var.subtilis)、凝结芽胞杆菌(Bacillus coagulans)、地衣芽胞杆菌(Bacillus licheniformis)、大肠杆菌尼氏菌株(Escherichia coli strain nissle)和费氏丙酸菌(Propionibacterium freudenreichii)，以及它们的混合物。
更特别地，益生菌微生物也可以选自乳酸杆菌属(Lactobacillus sp.)、芽胞乳杆菌属(Sporolactobacillus sp.)、肠球菌属(Enterococcus sp.)、乳球菌属(Lactococcus sp.)、芽胞杆菌属(Bacillus sp.)、链球菌属(Streptococcus sp.)、片球菌属(Pediococcus sp.)、明串珠菌属(Leuconostoc sp.)和双歧杆菌属(Bifidobacterium sp.)，特别选自乳酸杆菌属(Lactobacillus sp.)和双歧杆菌属(Bifidobacterium sp.)，以及它们的混合物。
作为这些益生菌微生物的说明，可能更加特别地提到约氏乳杆菌(Lactobacillusjohnsonii)、罗伊氏乳杆菌(Lactobacillus reuteri)、鼠李糖乳杆菌(Lactobacillus rhamnosus)、副干酪乳杆菌(Lactobacillus paracasei)、干酪乳杆菌(Lactobacillus casei)、两岐双岐杆菌(Bifidobacterium bifidum)、短双岐杆菌(Bifidobacterium breve)、长双岐杆菌(Bifidobacterium longum)、动物双歧杆菌(Bifidobacterium animalis)、乳双歧杆菌(Bifidobacterium lactis)、婴儿双歧杆菌(Bifidobacterium infantis)、青春双岐杆菌(Bifidobacterium adolescentis)和假小链双歧杆菌(Bifidobacterium pseudocatenulatum)，及其它们的混合物。
最合适的菌株是约氏乳杆菌(Lactobacillus johnsonii)、副干酪乳杆菌(Lactobacillusparacasei)、青春双岐杆菌(Bifidobacterium adolescentis)和长双歧杆菌(Bifidobacteriumlongum)，根据布达佩斯条约，这些菌株分别以下列名称CNCM I-1225,CNCM I-2116,CNCM I-2168和CNCM I-2170，乳酸双歧杆菌(Bifidobacterium lactis)(Bb 12)(ATCC27536)或长双歧杆菌(Bifidobacterium longum)(BB536)保存在巴斯德研究所(28rue du Docteur Roux,F-75024 Paris cedex 15)。乳酸双歧杆菌(Bifidobacterium lactis)(ATCC27536)从Hansen获得(Chr.Hansen A/S,10-12 BoegeAlle,P.O.Box 407,DK-2970Hoersholm,Denmark)。
有益地，适用于本发明的用作额外的活性剂微生物可以是乳酸益生菌微生物。
根据一个优选实施方式，特别适用于本发明的益生微生物可以是乳酸菌属的微生物。
优选地，适合于本发明的乳酸菌属的微生物可以选自约氏乳杆菌(Lactobacillusjohnsonii)、罗伊氏乳杆菌(Lactobacillus reuteri)、副干酪乳杆菌(Lactobacillus paracasei)、干酪乳杆菌(Lactobacillus casei)，及其混合物。
根据一个优选实施方式，适合本发明的微生物可以是副干酪乳杆菌(Lactobacillusparacasei)。
特别适合本发明的微生物可以是副干酪乳杆菌ST11，根据布达佩斯条约，该菌株以名称CNCM I-2116于1999年1月12日保存在巴斯德研究所(28 rue du Docteur Roux,F-75024 Paris cedex 15)，和/或它们的碎片和/或它们的代谢物。
根据另一个优选实施方式，特别适合适用于本发明的另一个益生微生物可以是双歧杆菌属的微生物，特别是长双歧杆菌(Bifidobacterium longum)，尤其是长双歧杆菌BB536。
相对于组合物的总重量，以干重计，配至在所述组合物中的这种微生物至少达到0.0001％的比例，特别是比例在0.0001％到20％之间，再特别是比例在0.001％到15％之间，再特别是在0.01％到10％之间，尤其特别是在0.1％到2％之间。
盖仑制剂
含有本发明的活性剂的组合物可以口服或局部外用。
本发明的组合物包括一定量的属于透明颤菌的一种或多种细菌在完全发酵培养基中的裂解物，相对于所述组合物干提取物的总重量，在完全发酵培养基中的裂解物的含量在0.001％到10％之间。在某些实施例中，本发明的组合物包括一定量的属于透明颤菌的一种或多种细菌在完全培养基中的裂解物，相对于所述组合物干提取物的总重量，在完全发酵培养基中的裂解物的含量在0.01％到5％之间。在其他实施方式中，本发明的组合物包括一定量的属于透明颤菌的一种或多种细菌在完全培养基中的裂解物，相对于所述组合物干提取物的总重量，在完全发酵培养基中的裂解物的含量在0.1％到1％之间。
因此，对于通常现有的既定而言，它可以是通常可用于选择的用药模式的任何形式的盖仑制剂。
取决于所考虑的组合物的类型，支持物可以是多种性质。
尤其是把该组合物进行外部局部用药，它们可能是水溶液，水-酒精混合液或油性溶液，溶液或乳液或浆液类型分散体系，液态乳剂或半液态的一致性乳液，通过在一个水相中分散脂肪层(油/水)或相反(水/油)，或悬浮液或乳液，柔软的半固态或固体一致性，乳膏的类型，水或无水凝胶，微乳剂，微胶囊，微粒子，或离子和/或非离子类型的囊泡分散体。
这些组合物根据常规的方法进行准备。
特别是这些组合物可能构成清洗、保护、药用或护理霜，头皮护理乳液，凝胶或泡沫剂，例如头皮清洁或消毒乳液。
它们可能以溶液、霜、凝胶、乳剂或泡沫剂的形式被用于头皮，或者以包含加压推进剂的气溶胶的形式的组合物。
适用本发明局部用药的组合物可以有利地以任何盖仑形式配制，适用于头发的护理，特别是以生发水的形式、洗发水、护发素、拉直膏(disentangler)、发膏或凝胶、定型发胶、头发定型药水(hair setting lotion)、治疗乳液、任选的着色洗发水形式的染料组合物(尤其是氧化染色)、修复头发乳液、烫发组合物、防治脱发的乳液或凝胶、抗寄生物的洗发水、药用洗发水、特别是抗皮脂溢洗发水、或头皮护理产品，特别是抗刺激、抗衰老或重组、或激活血液循环。
本发明的化妆品组合物排除了用于治疗头皮皮屑的问题。
本发明的组合物是乳液时，相对于组合物的总重量，脂相的重量比例可以为5％到80％，优选为10％到50％。用作乳液形式的组合物中的油、乳化剂和共乳化剂选自于化妆品和/或皮肤病领域中通常使用的那些。相对于组合物的总重量，在组合物中存在的乳化剂和共乳化剂的重量比可以为0.3％到30％，优选为0.5％到20％。
当发明的组合物是一种油性溶液或凝胶时，脂相可以占组合物总重量的90％以上。
以一个已知的方式，局部用药的盖仑制剂也可以包含佐剂，其在化妆品、制药和/或皮肤病领域、如亲水或亲脂性的胶凝剂、亲水或亲脂性的活性剂、保鲜剂、抗氧化剂、溶剂、香水、填料、掩蔽剂、气味吸收剂和着色剂中惯用的。这些不同佐剂的数量是正在研究领域的传统使用量，例如占组合物总重量的0.01％到20％。根据他们的性质，这些佐剂可能被引入脂相和/或进入水相。
作为脂肪物质可能用于本发明，可以提及的是矿物油，例如氢化聚异丁烯和液体凡士林；植物油，例如乳木果的液体部分、向日葵油、杏仁油；动物油，例如角鲨烷、合成油，特别是鸭子尾脂腺油(purcellin oil)、十四烷酸异丙酯和棕榈酸异辛酯；不饱和脂肪酸和氟油，例如全氟聚醚。还可以使用脂肪酸醇、脂肪酸，例如硬脂酸，例如蜡，特别是石蜡、巴西棕榈蜡和蜂蜡。还可以使用硅酮，例如硅油，再如环甲硅油、聚二甲聚硅氧烷(dimethicone)、硅酮蜡、树脂和树胶。
作为乳化剂可用于本发明，可以提及的是，例如：甘油硬脂酸酯；聚山梨醇酯60；棕榈醇/用33mol环氧乙烷氧乙烯化(oxyethylenated)的棕榈醇的混合物，商品名称为汉高公司(henkel)提供的SinnowaxPEG-6/PEG-32/乙二醇硬脂酸酯的混合物，商品名称为Gattefosse公司提供的PPG-3十四烷基醚、硅酮乳化剂，例如：鲸蜡基二甲基硅氧烷共聚醇(Cetyl dimethicone copolyol)、单硬脂酸山梨糖醇酐酯或三硬酯酸山梨糖醇酐酯、PEG-40硬脂酸酯和聚氧乙烯山梨糖醇酐单硬脂酸酯(20EO)。
作为溶剂可用于本发明，可以提及的是，较低级的醇，特别是乙醇、异丙醇和丙二醇。
本发明的组合物的优势还在于包含泉水和/或矿泉水，尤其是选择维特尔(Vittel)水、维希盆地(Vichy basin)水和理肤泉(la roche Posay)水。
亲水胶凝剂可以提及的包括羧基聚合物，如卡波姆；丙烯酸共聚物，例如丙烯酸酯/烷基丙烯酸酯共聚物；聚丙烯酰胺，特别是聚丙烯酰胺的混合物；C13-14异链烷烃和月桂醇聚醚-7(laureth-7)，其由公司SEPPIC提供的商品名称为Sepigel多糖，例如纤维素衍生物，如羟烷基纤维，并特别是羟丙基纤维素和羟乙基纤维素；天然树胶，如瓜尔豆胶、槐豆胶、黄原胶和粘土。
亲脂性的胶凝剂，可以提及的包括改性粘土，例如本顿(bentone)；脂肪酸金属盐，例如硬脂酸铝和疏水性二氧化硅，或者乙基纤维素和聚乙烯。
美容处理方法
正如前面指出的，本发明的方法可局部实施，特别是在头皮上使用至少一种属于透明颤菌属(特别是线状透明颤菌种)的细菌在完全发酵培养基中的裂解物，作为活性剂预防和/或治疗与头皮的皮屑问题无关的头皮状况，尤其是如前所定义的化妆品组合物。
优势之处在于，本发明的方法通过局部用药的方式包括给予本发明的组合物，例如清洁霜的形式、头皮治疗或护理乳液或凝胶、头皮护理凝胶或泡沫剂，例如清洗或消毒乳液，或洗发水。根据一种实施变型，本发明的方法可包括在头皮局部给予至少一种本发明的活性剂，例如洗发水、凝胶、浆液或乳液的形式。
本发明的局部美容方法可以每天进行，例如：以每天一次或一天两次的频率使用，例如早晨一次，晚上一次。
本发明的局部美容方法可以隔一定的时间周期进行一次，这一时间周期可以从一个星期到几个星期，甚至几个月，而且在没有使用的几个周期后重复该周期几个月或甚至几年。
例如，本发明的化合物的局部用药可以是重复进行，例如：每天2～3次或更多，通常在一个长时期内，至少4周，或甚至4～15周，在适当情况下，中间可中断一个或多个周期。
根据以下的描述和实施例，除非另有说明，比例表示按重量的百分比，在“…和…之间”表述的范围包括上下极限。
在下文中的实施例用作非限制性说明书本发明的范围。
实施例
实施例1 本发明中活性剂的制备
完全发酵培养基由按照培养线形透明颤菌菌株的完全培养基制备的。
完全发酵培养基是按在下表1中记载的初始培养基获得的。
表1
化学名 含量
酵母自溶提取物 4克/升
木瓜酶水解的大豆蛋白胨F 3克/升
葡萄糖–:D-无水葡萄糖 3克/升
磷酸二氢钾 0.088克/升
氯化钙 0.050克/升
5水硫酸铜 60微克/升
1水硫酸锰 152微克/升
碘化钾 20微克/升
7水硫酸锌 200微克/升
6水氯化铝 100微克/升
反渗透纯水 补充到1升
为获得本发明的化妆品活性剂，也就是在本实施例中，获得线形透明颤菌在完全发酵培养基中的裂解物，按照如下方法进行：
线形透明颤菌菌株是从美国菌种保藏中心(ATCC)获得的(菌株编号15551)。该菌株是在特定的培养基-2BHG2培养基上培养的，该培养基的组分在已在上述部分给出。
通过在3000升工作容量的生物反应器中连续培养获得生物质。在连续生产过程中，记录增长率达到大约70％的最大增长率μmax(μ＝0.12H-1)。从此步起，控制培养液的pH值(7.00)、温度(26℃)和溶解氧(0/5％)(0～5或0.5％)。细胞的提取和分离是通过离心完成(10000g，20分钟)。生物质冷冻在-20℃，然后包装成小袋(破坏无菌)，并经过121℃30分钟的杀菌使之稳定。此时的生物质则称为Vfe。
生物质的规范分析如下：
-固定残渣在105℃(克/100克)：4.0％～4.5％
-相对于AM的总氮含量：10.0％～14.0％
-微生物：0个微生物/克
-3-羟基丁酸含量：2～10克/升(<10克/升)
-溶液的pH值：4～5
发酵培养基是经过连续发酵过程而获得的完全培养。正如在初始时由蛋白胨和酵母提取物提供的各种其他营养元素一样，初始培养基中的葡萄糖是通过微生物(通过碳源进行微控)被消耗的。发酵培养基的实时检测是直接从发酵罐中进行的，然后经过灭菌方案。
FM是未浓缩完整培养物(占DM的0.7％～0.9％)，高压灭菌(121℃，30分钟)，当它作为裂解物时(占DM的4.0％至4.5％)。
以下的实施例中，本发明的活性剂(线状透明颤菌的细菌在完全发酵培养基中的裂解物，也表示为“FM”)，并且也是比较活性剂的分离的细菌裂解物在不存在完整的发酵培养基的组成是临床受试者化验超级皮脂溢情况。
发明的活性剂(线状透明颤菌的细菌的裂解物在完全发酵培养基，也表示为“FM”)，相对活性剂，进行超级皮脂溢状况(包括中度到重度的头皮超级皮脂溢状况)临床试验，与参考洗发水配方进行比较；所述从相对活性剂是由从完全的发酵培养基中分离出的细菌裂解物构成。
实施例2
在实施例2中，分别比较了(i)洗发水A的配方和(ii)参考中性洗发水B的配方对于没有头皮皮屑问题的超级皮脂溢状况(其包括没有头皮皮屑问题的中度到重度的超级皮脂溢状况)的效果，其中(i)洗发水A的配方含有本发明的一种活性剂(线状透明颤菌在完全发酵培养基中的裂解物。
*qs意思是″足量″
**qs for意思是″补足至″
*qs意思是″足量″
**qs for意思是″补足至″
实施例1中获得了在完全发酵培养基中细菌的裂解物(根据本发明，活性剂用于治疗没有头皮皮屑问题的超级皮脂溢状况)，因此，作为活性剂以洗发水的形式用于治疗超级皮脂溢状况。
方案
本研究是在一个的独立研究中心进行的，按照个体的超级皮脂溢状况进行了临床评估，确定了24位健康的成人志愿者，包括中度至重度的超级皮脂溢状况，并根据头皮上皮脂测量的客观结果。
用中性洗发水清洗1周后，对个体治疗2周，每周使用包含所述活性剂的洗发水两次。
每周在头皮上使用测量仪器对洗头后20分钟、6小时、24小时和72小时头皮皮脂进行客观测量。
根据以下方案按照常规方法对头皮皮脂测量:
-半透明的测试带应用于头皮上，然后
-使用皮脂测量设备测量测试带的透光率性能。
通过这种仪器将测量出来的皮脂透光率值转换成脂质数量值。这里的脂质数量值表示在每平方厘米的头皮表面上脂质的微克数(μg/cm2)。
结果见图1和图2。
图1显示，与传统中性洗发水相比，用包含要求保护的活性剂的洗发水清洗能更大程度地减少皮脂的量(p<0.001)。
图2显示，与传统中性洗发水相比，用包含要求保护的活性剂的洗发水清洗后的头皮再次出现油脂动力学更慢(p<0.001)。
实施例2的结果显示，化妆品的活性剂(按照实施例1进行准备，在完全发酵培养基中透明颤菌的裂解物)对个体头皮超级皮脂溢状况的皮脂过度分泌的效果(图1)。特别地，根据与中性洗发水配方的结果比较，结果表明，皮脂过度分泌的抑制确实是由这种化妆品活性剂产生的，而不是由洗发水配方中其他成分起的作用。
实施例2中的结果还表明，化妆品活性剂对皮脂过度分泌的抑制作用是持久的，因为这种抑制效应是非常显著的，从最后一次洗头后甚至可以超过三天(>72小时)(图2)。
同样地，图2的结果表明，只要用含有化妆品活性剂的洗发水洗头发和头皮两次后，对皮脂过度分泌的抑制作用已经达到最佳状况了。如果使用含有化妆品活性剂的洗发水洗头发和头皮两次以上，过多的皮脂分泌的抑制作用可以进一步增强。

Claims (10)

1.属于透明颤菌属的一种或多种细菌在完全发酵培养基中的裂解物的化妆品用途，所述在完全发酵培养基中的裂解物作为一种活性剂用来预防和/或治疗与头皮皮屑问题无关的超级皮脂溢状况，所述透明颤菌属特别是线状透明颤菌种。
2.根据权利要求1所述的用途，其中，所述完全发酵培养基在数量方面是用于所述细菌发酵所使用的发酵培养基的全部或一部分，细胞裂解在其中连续进行。
3.根据前面任何一个权利要求所述的用途，其中所述裂解物和完全发酵培养基混合包含细胞质部分，细胞壁部分和所述细菌在细胞裂解期间形成和/或释放的代谢物，发酵过程中细菌自发生成并释放的水溶性代谢物。
4.根据前面任一个权利要求所述的用途，其中所述的细菌是线状透明颤菌菌株。
5.根据前面任一个权利要求所述的用途，其中所述的细菌是线状透明颤菌ATCC 15551菌株。
6.化妆品和/或皮肤病用组合物，其包括在生理上可接受的媒介，至少一种属于透明颤菌属的细菌在完全培养基中的裂解物，特别是线状透明颤菌种或贝日阿托氏透明颤菌种。
7.如权利要求6所述的组合物，其中，所述组合物以生发水、洗发水或护发素的形式存在。
8.用于预防和/或治疗个体的与头皮皮屑问题无关的头皮超级皮脂溢状况的美容方法，该方法包括至少一步给予所述个体至少一种属于透明颤菌属的细菌在完全培养基中的裂解物的步骤，特别是线状透明颤菌种。
9.根据前面所述的权利要求所述的方法，所述细菌被定义在权利要求4和5中。
10.根据权利要求8或9所述的方法，所述方法为局部实施。
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