CN115505547A - 具有修护、抗老、保湿的嗜酸乳杆菌及其应用 - Google Patents
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Abstract
本发明涉及微生物技术领域，尤其涉及具有修护、抗老、保湿的嗜酸乳杆菌及其应用。本发明的嗜酸乳杆菌ProfMIC‑224保存于中国典型培养物保藏中心，其保藏编号为CCTCC NO:M 20221222。结果表明，本发明的嗜酸乳杆菌ProfMIC‑224具有促进细胞增殖、修护皮肤屏障、保湿和抗衰老、抑制皮肤病原菌的功能，可用于制备食品、药品、化妆品等。
Description
技术领域
本发明涉及微生物技术领域，尤其涉及具有修护、抗老、保湿的嗜酸乳杆菌及其应用。
背景技术
皮肤屏障是由角质层的表皮形成细胞和角质间的脂质形成的结构性的屏障。角质间结构性脂质神经酰胺，在基底层向角质分化过程中含量逐渐增加，到达角质层排至细胞间隙，构成防止水分丢失的屏障。角质层本身的亲水、屏障功能，以及角质层中所含有的天然保湿因子即氨基酸类，乳酸盐及糖类等作用，使得角质层具有保湿功能。但随着年龄的增长，角质层的含水量会逐渐减少，进而引起皮肤的各种问题。
光老化是皮肤外在老化最主要的形式，而导致皮肤光老化的主要原因就是紫外线辐射。皮肤在老化的过程中，细胞增殖降低，细胞凋亡增加，细胞外基质成分(胶原蛋白、弹性蛋白、糖胺聚糖等)随着皮肤衰老而显着减少。此外，多种因素如线粒体损伤、炎症反应等产生的活性氧增加，使得氧化应激增加，老化受损细胞无法及时清除，从而导致了皮肤衰老。
在衰老机制的研究中发现，细胞自噬能够延缓器官功能退化，清除细胞内受损的蛋白质和脂质，修复DNA，帮助细胞恢复代谢稳态，为光老化受损的皮肤提供保护作用。另外，减少细胞凋亡，降低细胞炎症，增加细胞外基质的合成以及减少其降解，提升细胞的抗氧化能力等都已被证实能够减缓皮肤细胞衰老，寻求多层次多维度的抗衰老物质是目前的研究热点。
皮肤微生物在皮肤免疫的成熟和稳态中发挥着重要作用，大多数生活在皮肤上的微生物在稳态条件下表现为共生或互利共生，最新的研究证明皮肤微生物群调节各种先天因子的表达。皮肤微生物分解磷脂、固醇类、角质蛋白也可使皮肤细胞吸收并促进细胞生长、延缓衰老和减少皱纹产生。当皮肤因为外部原因的侵害，例如空气污染、化妆品过度使用或使用了含激素的化妆品后，就可能导致皮肤表面菌群失调，从而造成各种肌肤问题。研究表明，皮肤微生态的变化与银屑病、特应性皮炎、痤疮和慢性伤口等多种炎症性和感染性疾病的发生和发展相关。当益生菌减少甚至消失时，皮肤会出现抵抗力降低、易发炎、感染、过敏、长痘、水油失衡等多种问题。因此，提供一种利用皮肤微生物技术开发的益生菌相关产品，具有重要的现实意义。
发明内容
有鉴于此，本发明要解决的技术问题在于提供具有修护、抗老、保湿的嗜酸乳杆菌及其应用。
本发明提供的嗜酸乳杆菌(Lactobacillus acidophilus)采集于5岁健康女童粪便中，将其命名为ProfMIC-224，MRS固体平板划线分离单菌落后经16S PCR测序鉴定该菌株为嗜酸乳杆菌，将其保藏于中国典型培养物保藏中心，其保藏编号为CCTCC NO:M20221222。
进一步的，所述的16S PCR的程序为：50μL体系，95℃预变性5min；94℃15s，57℃15s，72℃40s，35个循环；72℃延伸10min。
本发明提供了菌群，其包括本发明所述的嗜酸乳杆菌。
进一步的，所述的菌群包括与本发明所述的嗜酸乳杆菌不存在拮抗、竞争、寄生或捕食关系的任意菌株组成的菌群；所述的任意菌株与本发明所述的嗜酸乳杆菌在功能上协作或互补，用于增强本发明所述的嗜酸乳杆菌的护肤功能。所述的增强包括但不限于提高或增加。
本发明提供了菌剂，其包括本发明所述的嗜酸乳杆菌和/或本发明所述的菌群。
进一步的，所述的菌剂的剂型包括颗粒、液体或干粉，本发明对此不做限定。
本发明还提供了所述的嗜酸乳杆菌或其裂解物、提取物、代谢物，和/或所述的菌群，和/或所述的菌剂在制备改善肌肤状况的产品中的应用。
进一步的，所述的肌肤状态改善包括促进细胞增殖、修护皮肤屏障、保湿、抗衰老、抑制皮肤病原菌中的至少一种。
本发明中，所述的修护皮肤屏障包括修复SDS诱导的细胞损伤和/或上调屏障修护相关基因的表达；所述屏障修护相关基因包括FLG、IVL、OCLN和OVOL1中的至少一种。进一步的，本发明以HaCaT角质细胞为受试对象，对所述的嗜酸乳杆菌的SDS损伤修复能力进行了研究，结果表明，所述的嗜酸乳杆菌可修复SDS引起的细胞损伤，提高细胞增殖率，并上调非损伤细胞的屏障修护相关基因的表达，起到屏障修护的作用。
本发明中，所述的保湿包括但不限于上调保湿相关基因的表达，所述的保湿相关基因包括但不限于AQP3和/或GBA。本发明以HaCaT角质细胞为受试对象，研究所述的嗜酸乳杆菌对皮肤的保湿效果，结果显示，所述的嗜酸乳杆菌可上调保湿相关基因AQP3和/或GBA的表达，促进皮肤细胞保湿。
本发明中，所述抗衰老包括如下i)～vii)所示的至少一种：
i)、上调细胞外基质相关基因的表达；所述细胞外基质相关基因包括SPTSSA、LN、MKX、COL1A1和COL13A1中的至少一种；
ii)、下调降解细胞外基质相关基因的表达；所述降解细胞外基质相关基因包括MMP家族中的至少一种；
iii)、上调抑制细胞凋亡相关基因BCL-2的表达；
iv)、上调细胞自噬相关基因LC3B的表达；
v)、上调细胞抗氧化相关基因NRF2、PTEN和/或SIRT-1的表达；
vi)、上调免疫调节因子相关基因MOR的表达；
vii)、上调细胞生长因子相关基因FGF-2、FGF-21的表达。
为了探究所述的嗜酸乳杆菌的抗衰老效果，本发明对细胞衰老相关指标进行了测定，所述的指标包括细胞外基质合成、细胞外基质降解、细胞凋亡、细胞自噬、细胞抗氧化、免疫调节及细胞生长因子中的至少一个。
本发明中，所述促细胞增殖包括促进皮肤角质细胞和/或成纤维细胞的增殖。本发明以HaCaT角质细胞为受试对象，对所述的嗜酸乳杆菌的促进细胞增殖效果进行研究。结果表明，所述的嗜酸乳杆菌可修复SDS引起的HaCaT角质细胞损伤，促进细胞增殖，促进增殖率达116.33～121.28％。本发明以HFF细胞为受试对象，对所述的嗜酸乳杆菌的促进HFF细胞增殖效果进行研究。结果表明，所述的嗜酸乳杆菌可促进HFF成纤维细胞，促进增殖率达111.80～132.19％。
本发明所述的嗜酸乳杆菌具有促进细胞外基质合成和抑制细胞外基质降解的作用。本发明以HaCaT角质细胞为受试对象，研究所述的嗜酸乳杆菌对HaCaT角质细胞细胞外基质相关基因和降解细胞外基质相关基因的影响。结果表明，所述的嗜酸乳杆菌可上调细胞外基质相关基因COL1A1的表达，促进细胞外基质的合成，下调降解细胞外基质相关基因MMP1的表达，抑制细胞外基质的降解。本发明以HFF成纤维细胞为受试对象，研究所述的嗜酸乳杆菌对HFF细胞细胞外基质合成相关基因的影响。结果表明，所述的嗜酸乳杆菌可上调细胞外基质合成相关基因SPTSSA、LN、MKX和COL13A1的表达，促进细胞外基质的合成。
本发明所述的嗜酸乳杆菌可抑制细胞凋亡。本发明以HFF成纤维细胞为受试对象，研究所述的嗜酸乳杆菌对HFF抑制细胞凋亡的影响。结果表明，所述的嗜酸乳杆菌可上调抑制细胞凋亡相关基因BCL-2的表达，抑制细胞凋亡。
本发明所述的嗜酸乳杆菌可促进细胞自噬清除老化细胞。本发明以HaCaT角质细胞为受试对象，研究所述的嗜酸乳杆菌对HaCaT角质细胞自噬的影响。结果表明，所述的嗜酸乳杆菌可上调细胞自噬相关基因LC3B的表达，促进细胞自噬以清除老化细胞。
本发明所述的嗜酸乳杆菌可提高细胞抗氧化能力。本发明以HaCaT角质细胞为受试对象，研究所述的嗜酸乳杆菌对HaCaT角质细胞抗氧化相关基因的表达的影响。结果表明，所述的嗜酸乳杆菌可上调抗氧化相关基因NRF2的表达，增强细胞的抗氧化能力。本发明以HFF成纤维细胞为受试对象，研究所述的嗜酸乳杆菌对HFF成纤维细胞抗氧化相关基因的表达的影响。结果表明，本发明所述的嗜酸乳杆菌可上调抗氧化相关基因PTEN和SIRT-1的表达，增强细胞的抗氧化能力。
本发明所述的嗜酸乳杆菌可提高细胞免疫能力。本发明以HFF成纤维细胞为受试对象，研究所述的嗜酸乳杆菌对HFF成纤维细胞免疫调节因子相关基因的表达的影响。结果表明，所述的嗜酸乳杆菌可上调免疫调节因子相关基因MOR的表达，增强细胞的免疫调节能力。
本发明所述的嗜酸乳杆菌可促进细胞生长。本发明以HFF成纤维细胞为受试对象，研究所述的嗜酸乳杆菌对HFF成纤维细胞生长因子相关基因的表达的影响。结果表明，所述的嗜酸乳杆菌可上调成纤维细胞生长因子相关基因FGF2、FGF21的表达，促进细胞生长。
本发明所述的嗜酸乳杆菌可抑制皮肤病原菌。本发明以金黄色葡萄球菌和疮疱丙酸杆菌为受试对象，研究所述的嗜酸乳杆菌对金黄色葡萄球菌和疮疱丙酸杆菌生长的影响。结果表明，所述的嗜酸乳杆菌可明显抑制金黄色葡萄球菌和疮疱丙酸杆菌生长。
本发明提供了改善皮肤状况的产品，其原料包括本发明所述的嗜酸乳杆菌或其裂解物、提取物、代谢物，和/或本发明所述的菌群，和/或本发明所述的菌剂。
进一步的，本发明所述的产品包括食品、药品或化妆品，本发明对此不做限定。
进一步的，本发明所述的产品包括化妆品，所述的化妆品剂型包括：膏霜类、乳液类、水剂类、凝胶类、油剂类、粉剂类、泥类、气雾剂类、膜类、冻干类中的至少一种。
本发明还提供了一种改善肌肤状态的方法，其为使用本发明所述的产品。所述使用方法包括涂抹、熏蒸、外敷或注射，本发明对此不做限定。
本发明提供了嗜酸乳杆菌(Lactobacillus acidophilus)，其保藏于中国典型培养物保藏中心，保藏编号为CCTCC NO:M 20221222。实验表明，本发明提供的嗜酸乳杆菌具有促进细胞增殖、修护皮肤屏障、保湿、抗衰老、抑制皮肤病原菌的功能，可用于制备食品、药品、化妆品等。
生物保藏说明
嗜酸乳杆菌ProfMIC-224(Lactobacillus acidophilus ProfMIC-224)，于2022年8月3日保藏在中国典型培养物保藏中心，地址为：中国.武汉.武汉大学，保藏编号为CCTCCNO:M 20221222。
具体实施方式
本发明提供了具有修护、抗老、保湿的嗜酸乳杆菌及其应用，本领域技术人员可以借鉴本文内容，适当改进工艺参数实现。特别需要指出的是，所有类似的替换和改动对本领域技术人员来说是显而易见的，它们都被视为包括在本发明。本发明的方法及应用已经通过较佳实施例进行了描述，相关人员明显能在不脱离本发明内容、精神和范围内对本文的方法和应用进行改动或适当变更与组合，来实现和应用本发明技术。
本发明采用的试材皆为普通市售品，皆可于市场购得。
下面结合实施例，进一步阐述本发明：
实施例1 ProfMIC-224的分离
于5岁健康女童粪便中采样。将样品适当处理后于生理盐水中震荡混匀，取上清划线于MRS固体平板，37℃恒温培养48h后，挑取白色菌落反复接种筛选，直至得到均匀的单个菌落，命名为ProfMIC-224。
革兰氏染色镜检：菌株ProfMIC-224为革兰氏染色阳性，显微镜下呈杆状；在MRS平板上生长，可形成白色、表面光滑圆润不透明圆形小菌落，边缘整齐；在MRS液体培养基中呈均匀浑浊生长，久置菌体呈白色沉淀。
实施例2 ProfMIC-224的核酸鉴定
1、16S rDNA基因序列分析：
挑取单菌落置MRS液体培养基中，37℃培养过夜后，12000转离心1min收集菌体，按照DNA提取试剂盒步骤进行操作。引物采用细菌通用引物27F，1492R，PCR扩增体系为50μL体系，95℃预变性5min；94℃15s，57℃15s，72℃40s，35个循环；72℃延伸10min。
2、结果
PCR产物测序结果与GenBank中已发表的标准序列进行同源性比较(BLASTN)后得出ProfMIC-224菌株为嗜酸乳杆菌(Lactobacillus acidophilus)。
实施例3 ProfMIC-224促进SDS诱导的人永生化角质形成细胞HaCaT损伤修复实验
1、ProfMIC-224上清液制备：
挑取嗜酸乳杆菌ProfMIC-224单菌落于MRS液体培养基，37℃培养箱厌氧静置培养16～18h，酶标仪检测并以PBS稀释调整OD600＝0.2，121℃，30min高压灭活，12000转离心2min，经0.22μm滤膜过滤为上清液。
2、促进HaCaT细胞修复实验
接种HaCaT细胞(5×104cells/孔)至96孔板，过夜培养至细胞贴壁。配制50μg/mlSDS，每孔加入100μl，5％二氧化碳培养箱37℃培养8h。各孔添加5％上清液(对照组以等体积PBS替代上清液)培养24h。向每孔加入10μl的CCK-8溶液，培养4h，检测450nm处吸亮度A。细胞增殖率计算公式及结果如表1：
表1 ProfMIC-224促进HaCaT细胞增殖
上表结果可知，PROFMIC-224上清液可促进可修复SDS引起的HaCaT角质细胞损伤，提高细胞增殖率，促进增殖率达116.33～121.28％
实施例4 ProfMIC-224促进HaCaT屏障修护相关基因表达实验
1、ProfMIC-224上清液及灭活菌体制备：
上清液制备方法参照实施例3，灭活菌体制备方法如下：将嗜酸乳杆菌ProfMIC-224单菌落于MRS液体培养基，37℃培养箱厌氧静置培养16～18h，酶标仪检测并以PBS稀释调整OD600＝0.2，121℃，30min高压灭活，12000转离心2min，离心沉淀以适量PBS重悬，稀释调整OD600＝0.2，为灭活菌体。
2、促进HaCaT屏障修护相关基因表达实验
接种人永生化角质形成细胞HaCaT(2ml/孔，内含5×105细胞)至6孔板，5％二氧化碳培养箱37℃过夜培养至细胞贴壁。分别加入上清液5％(V/V)，灭活菌体10％(V/V)(对照组分别以等体积PBS替代上清液/灭活菌体)，培养24h后，加入裂解液，提取细胞总RNA，检测RNA浓度及纯度后反转录为cDNA，以GAPDH为内参基因，采用实时qPCR检测FLG、IVL、OVOL1和OCLN基因的表达。分别以添加等体积PBS处理组为对照(基因相对表达倍数F＝1)，利用2-ΔΔCT法计算各样品F值。
公式：F＝2-ΔΔCT，其中：
△CT实验＝CT实验-CT内参(实验)；
△CT对照＝CT对照-CT内参(对照)；
△△CT＝△CT实验-△CT对照。
结果见表2和表3：
表2 ProfMIC-224上清液上调修复基因的表达
表3 ProfMIC-224灭活菌体上调修复基因的表达
体外细胞实验表明，本发明的嗜酸乳杆菌ProfMIC-224上清液和灭活菌体具有上调皮肤屏障修护相关因子丝聚合蛋白基因FLG、内皮蛋白基因IVL、OVO样转录因子1基因OVOL1和紧密连接蛋白基因OCLN表达的作用，基因表达量上调1.26～3.43倍。表明ProfMIC-224具有促进皮肤屏障修护的作用。
实施例5 ProfMIC-224上调HaCaT保湿相关基因表达实验
1、ProfMIC-224灭活菌体制备：
制备方法参照实施例4。
2、上调HaCaT保湿相关基因表达实验
接种人永生化角质形成细胞HaCaT(2ml/孔，内含5×105细胞)至6孔板，5％二氧化碳培养箱37℃过夜培养至细胞贴壁。加入灭活菌体10％(V/V)(对照组以等体积PBS替代灭活菌体)，培养24h后，加入裂解液，提取细胞总RNA，检测RNA浓度及纯度后反转录为cDNA，以GAPDH为内参基因，采用实时qPCR检测AQP3和GBA基因的表达。以等体积PBS处理组为对照(基因相对表达倍数F＝1)，利用2-ΔΔCT法计算各样品F值。
结果见表4：
表4 ProfMIC-224灭活菌体上调保湿基因的表达
体外细胞实验表明，本发明的嗜酸乳杆菌ProfMIC-224具有上调保湿相关的水通道蛋白3基因AQP3和葡萄糖脑苷脂酶基因GBA表达的作用，基因表达量上调1.61～1.97倍。表明ProfMIC-224具有促进皮肤保湿的作用。
实施例6 ProfMIC-224调节光老化HaCaT细胞外基质/细胞自噬/抗氧化相关基因表达实验
1、ProfMIC-224上清液及灭活菌体制备：
制备方法参照实施例3和4。
2、HaCaT细胞制备及紫外线损伤
将HaCaT细胞消化后以0.5ml/孔(内含2×105细胞)接种至24孔板，5％二氧化碳培养箱37℃培养过夜。对孔内细胞进行总剂量为2J/cm2的紫外线UVB照射损伤。
3、ProfMIC-224添加
将上清液5％(V/V)、灭活菌体10％(V/V)分别加入刺激过的HaCaT细胞(对照组分别以等体积PBS替代上清液/灭活菌体)。每组3平行，37℃培养过夜。
4、qPCR法检测细胞外基质/细胞自噬/抗氧化相关基因相对表达倍数
将上述细胞弃去培养基后，加入裂解液，提取细胞总RNA，检测RNA浓度及纯度后反转录为cDNA，以GAPDH为内参基因，采用实时qPCR检测细胞外基质相关基因COL1A1，以及降解细胞外基质相关基因MMP1，细胞自噬相关基因LC3B，抗氧化相关基因NRF2的表达。以对照组基因相对表达倍数F＝1，利用2-ΔΔCT法计算各样品F值。上清液下调降解细胞外基质相关基因MMP1。结果见表5：
表5 ProfMIC-224上清液调节细胞衰老相关基因的表达
灭活菌体上调细胞外基质基因COL1A1，细胞自噬相关基因LC3B，抗氧化相关基因NRF2的表达，结果见表6：
表6 ProfMIC-224灭活菌体调节细胞衰老相关基因的表达
体外细胞实验表明，本发明的嗜酸乳杆菌ProfMIC-224具有上调HaCaT细胞外基质相关的I型胶原α1链基因COL1A1，自噬相关基因LC3B，抗氧化相关基因NRF2的表达的作用，基因相对表达倍数1.10～2.44；具有下调HaCaT细胞降解细胞外基质相关的基质金属蛋白酶家族基因MMP1的表达，相对表达倍数0.61～0.85。
实施例7 ProfMIC-224促进人成纤维细胞HFF的增殖
1、ProfMIC-224上清液及灭活菌体制备：
制备方法参照实施例3和4。
2、HFF细胞制备及ProfMIC-224添加
接种以DMEM培养的HFF细胞，以100μl/孔(每孔含3×104细胞)转接至96孔板，过夜培养至细胞贴壁。配制200μM H2O2，每孔加入100μl，5％二氧化碳培养箱37℃培养1h。弃掉原培养基，PBS清洗两次，加入100μl新培养基，各孔分别添加上清液5％(V/V)、灭活菌体10％(V/V)，(对照组分别以等体积PBS替代上清液/灭活菌体)。培养24h。向每孔加入10μl的CCK-8溶液，培养4h，检测450nm处吸亮度A。计算公式及结果如表7：
表7 ProfMIC-224促进HFF细胞增殖
体外细胞实验表明，本发明的嗜酸乳杆菌ProfMIC-224具有促进人成纤维细胞HFF增殖的作用，增殖率达111.80％～132.19％。
实施例8 ProfMIC-224调节氧化损伤HFF细胞外基质/细胞凋亡/抗氧化/免疫调节因子/细胞生长因子相关基因表达实验
1、ProfMIC-224上清液及灭活菌体制备：
制备方法参照实施例3和4。
2、HFF细胞制备及H2O2诱导氧化损伤
将DMEM培养的HFF细胞消化后以0.5ml/孔(内含2×105细胞)接种至24孔板，5％二氧化碳培养箱37℃培养过夜。每孔加入终浓度为200μM的H2O2进行刺激，37℃静置1h。
3、ProfMIC-224添加
将上清液5％(V/V)、灭活菌体10％(V/V)分别加入刺激过的HFF细胞(对照组分别以等体积PBS替代上清液/灭活菌体)。每组3平行，37℃培养过夜。
4、qPCR法检测细胞外基质/免疫调节因子/抗氧化/细胞凋亡/细胞生长因子相关基因相对表达倍数
将上述细胞弃去培养基后，加入裂解液，提取细胞总RNA，检测RNA浓度及纯度后反转录为cDNA，以GAPDH为内参基因，采用实时qPCR检测细胞外基质相关基因LN、MKX、SPTSSA和COL13A1，免疫调节因子相关基因MOR，抗氧化相关基因PTEN和SIRT-1，抑制细胞凋亡相关基因BCL-2，以及细胞生长因子相关基因FGF-2和FGF-21的表达。以对照组基因相对表达倍数F＝1，利用2-ΔΔCT法计算各样品F值。
上清液上调细胞外基质相关基因LN、MKX、SPTSSA和COL13A1，免疫调节因子相关基因MOR，抗氧化相关基因PTEN和SIRT-1，抑制细胞凋亡基因BCL-2以及成纤维细胞生长因子相关基因FGF-2和FGF-21的表达，结果见表8：
表8 ProfMIC-224上清液调节细胞外基质/免疫调节因子/抗氧化/细胞凋亡/细胞生长因子相关基因的表达
灭活菌体上调抑制细胞外基质相关基因COL13A1、LN、MKX、SPTSSA，抑制细胞凋亡相关基因BCL-2。结果见表9：
表9 ProfMIC-224灭活菌体调节降解细胞外基质/细胞凋亡相关基因的表达
体外细胞实验表明，本发明的嗜酸乳杆菌ProfMIC-224具有上调HFF细胞外基质相关的层粘连蛋白LN、莫霍克蛋白基因MKX、丝氨酸棕榈酰转移酶SPTSSA和XIII型胶原α1链基因COL13A1，免疫调节因子相关的β-内啡肽受体基因MOR，抗氧化相关的10号染色体缺失的磷酸酶及张力蛋白同源物基因PTEN、Sirtuins蛋白家族基因SIRT-1，抑制细胞凋亡相关的B淋巴细胞瘤-2基因BCL-2以及成纤维细胞生长因子相关基因FGF-2和FGF-21表达的作用，基因相对表达倍数1.08～3.13倍。
实施例9 ProfMIC-224抑制金黄色葡萄球菌的作用
1、ProfMIC-224上清液制备：
挑取嗜酸乳杆菌ProfMIC-224单菌落于MRS液体培养基，37℃厌氧培养16～18h，酶标仪检测OD600＝2，121℃，30min高压灭活，12000转离心2min，经0.22μm滤膜过滤为上清液。
2、金黄色葡萄球菌金黄亚种菌液制备：
将金黄色葡萄球菌金黄亚种(Staphylococcus aureus subsp.aureus)CGMCC1.8721挑取单菌落于BHI液体培养基，37℃培养箱静置培养过夜，检测并以BHI液体培养基稀释调整OD600＝0.2。
3、抑制金黄色葡萄球菌实验
将灭活上清液以添加量10％加入病原菌菌液中，以添加等体积MRS液体培养基为对照，37℃培养2h，检测菌液浓度(OD600)并计算病原菌抑制率。
计算公式及结果如表10：
表10 ProfMIC-224对金黄色葡萄球菌的抑制作用
实验表明，本发明的嗜酸乳杆菌ProfMIC-224具有抑制金黄色葡萄球菌生长的作用，抑制率40.82％～52.08％。
实施例10 ProfMIC-224抑制疮疱丙酸杆菌的作用
1、ProfMIC-224上清液制备：
制备方法参照实施例9。
2、疮疱丙酸杆菌菌液制备：
将疮疱丙酸杆菌(Propionibacterium acnes)CGMCC 1.5003挑取单菌落于BHI液体培养基，37℃培养箱静置厌氧培养24～30h，检测并以BHI液体培养基稀释调整OD600＝0.2。
3、抑制疮疱丙酸杆菌实验
将灭活上清液以添加量10％加入疮疱丙酸杆菌菌液中，以添加等体积MRS液体培养基为对照，37℃厌氧摇床培养16h，检测菌液浓度(OD600)并计算病原菌抑制率。
计算公式及结果如下表：
实验表明，本发明的嗜酸乳杆菌ProfMIC-224具有抑制疮疱丙酸杆菌生长的作用，抑制率31.43％～33.33％。
以上仅是本发明的优选实施方式，应当指出，对于本技术领域的普通技术人员来说，在不脱离本发明原理的前提下，还可以做出若干改进和润饰，这些改进和润饰也应视为本发明的保护范围。
Claims (11)
1.保藏编号为CCTCC NO:M 20221222的嗜酸乳杆菌(Lactobacillus acidophilus)。
2.菌群，其包括权利要求1所述的嗜酸乳杆菌。
3.菌剂，其原料包括权利要求1所述的嗜酸乳杆菌，和/或权利要求2所述的菌群。
4.权利要求1所述的嗜酸乳杆菌或其裂解物、提取物、代谢物，和/或权利要求2所述的菌群，和/或权利要求3所述的菌剂在制备改善肌肤状态产品中的应用。
5.根据权利要求4所述的应用，其特征在于，所述改善皮肤状况包括促进细胞增殖、修护皮肤屏障、保湿或抗衰老、抑制皮肤病原菌中的至少一种。
6.根据权利要求5所述的应用，其特征在于，所述促细胞增殖为促进角质细胞和/或成纤维细胞的增殖。
7.根据权利要求5所述的应用，其特征在于，所述修护皮肤屏障包括上调屏障修护相关基因的表达；所述屏障修护相关基因包括FLG、IVL、OCLN和OVOL1中的至少一种。
8.根据权利要求5所述的应用，其特征在于，所述保湿包括上调保湿相关基因AQP3和/或GBA的表达。
9.根据权利要求5所述的应用，其特征在于，所述抗衰老包括如下i)～vii)所示中的至少一种：
i)、上调细胞外基质相关基因的表达；所述细胞外基质相关基因包括SPTSSA、LN、MKX、COL1A1和COL13A1中的至少一种；
ii)、下调降解细胞外基质相关基因的表达；所述降解细胞外基质相关基因包括MMP家族中的至少一种；
iii)、上调抑制细胞凋亡相关基因的表达；所述的细胞凋亡相关基因包括BCL-2；
iv)、上调细胞自噬相关基因LC3B的表达；
v)、上调细胞抗氧化相关基因NRF2、PTEN和/或SIRT-1的表达；
vi)、上调免疫调节因子相关基因的表达；所述免疫调节因子相关基因包括MOR；
vii)、上调细胞生长因子相关基因FGF-2、FGF-21的表达。
10.根据权利要求5所述的应用，其特征在于，所述抑制皮肤病原菌包括抑制金黄色葡萄球菌和/或疮疱丙酸杆菌生长的作用。
11.改善肌肤状态的产品，其包括权利要求1所述的嗜酸乳杆菌或其裂解物、提取物、代谢物，和/或权利要求2所述的菌群，和/或权利要求3所述的菌剂。
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Citations (4)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| KR20000039570A (ko) * | 1998-12-12 | 2000-07-05 | 이세복 | 유산균 발효액 및 이를 함유하는 화장료 조성물 |
| KR20210067689A (ko) * | 2019-11-29 | 2021-06-08 | 주식회사 엘리샤코이 | 락토바실러스 아시도필루스 사균체를 유효성분으로 포함하는, 항노화용 화장료 조성물 |
| CN114276958A (zh) * | 2021-12-20 | 2022-04-05 | 无锡弘焕微生态科技有限公司 | 具有抗炎功效的三重益生菌发酵复合物的制备方法和应用 |
| CN114717136A (zh) * | 2021-11-24 | 2022-07-08 | 青岛蔚蓝生物集团有限公司 | 一株具有治疗痤疮作用的嗜酸乳杆菌及其应用 |
-
2022
- 2022-10-25 CN CN202211309694.8A patent/CN115505547A/zh active Pending
Patent Citations (4)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| KR20000039570A (ko) * | 1998-12-12 | 2000-07-05 | 이세복 | 유산균 발효액 및 이를 함유하는 화장료 조성물 |
| KR20210067689A (ko) * | 2019-11-29 | 2021-06-08 | 주식회사 엘리샤코이 | 락토바실러스 아시도필루스 사균체를 유효성분으로 포함하는, 항노화용 화장료 조성물 |
| CN114717136A (zh) * | 2021-11-24 | 2022-07-08 | 青岛蔚蓝生物集团有限公司 | 一株具有治疗痤疮作用的嗜酸乳杆菌及其应用 |
| CN114276958A (zh) * | 2021-12-20 | 2022-04-05 | 无锡弘焕微生态科技有限公司 | 具有抗炎功效的三重益生菌发酵复合物的制备方法和应用 |
Non-Patent Citations (3)
| Title |
|---|
| A-RANG IM等: "Potential for tyndalized Lactobacillus acidophilus as an effective component in moisturizing skin and anti‐wrinkle products", EXP THER MED, vol. 12, no. 2, pages 759 - 764 * |
| A‐RANG IM等: "Skin Moisturizing and Antiphotodamage Effects of Tyndallized Lactobacillus acidophilus IDCC 3302", J MED FOOD, vol. 21, no. 10, pages 1016 - 1023 * |
| LH YONG: "cosmeceutical activites of lactobacillus acidophillus HK-9 in the human skin" * |
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