CN101711668B

CN101711668B - 生物节律信息获取方法

Info

Publication number: CN101711668B
Application number: CN2009101794290A
Authority: CN
Inventors: 早川智广; 山本拓郎; 中川和博; 相马温彦; 山下志功; 王凡; 安田章夫
Original assignee: Sony Corp
Current assignee: Sony Corp
Priority date: 2008-10-07
Filing date: 2009-10-09
Publication date: 2012-03-14
Anticipated expiration: 2029-10-09
Also published as: EP2180047B1; EP2180047A1; JP4626700B2; CN101711668A; JP2010091359A; US20100112620A1

Abstract

这里公开了一种生物节律信息获取方法，其基于眼泪和/或唾液中的生理活性物质的量随着时间的变化而获取有关生物节律的信息，其中生理活性物质是分泌型免疫球蛋白A抗体，并且基于眼泪和/或唾液中的分泌型免疫球蛋白A抗体的量随时间的变化而获取所述信息，并且其中，还使用溶菌酶作为生理活性物质，并且基于眼泪和/或唾液中的分泌型免疫球蛋白A抗体量与溶菌酶量的比率(分泌型免疫球蛋白A抗体量/溶菌酶量)随着时间的变化而获取所述信息。

Description

生物节律信息获取方法

技术领域

本发明涉及一种获取有关生物个体的生物节律的信息的方法。更具体地说，本发明涉及一种基于眼泪和唾液中的生理活性物质的量随着时间的变化而获取有关昼夜节律的信息的方法。

背景技术

已知的是，生物个体中的各种生物现象各自呈现自立地摆动的“周期节律”。周期节律被称为“生物节律”。特别地，具有大约一天周期的“昼夜节律”普遍地控制在生物现象中所观察到的节律，例如，睡眠-觉醒节律以及体温、血压和所分泌荷尔蒙量的每日变化节律。另外，已知的是，昼夜节律与脑力和体力活动的程度、运动能力、药物过敏性等等有关。

生物节律受被称为“时钟基因”的基因组控制。时钟基因(在下文中也可以被称为“时钟分子”)通过自主地、周期性地改变(摆动)其表达、活性、局部呈现等等来用作“生物时钟”。

生物节律受被称为“时钟基因”的基因组控制。时钟基因(在下文中也可以被称为“时钟分子”) 此外，已开始通过利用生物节律来最大化药物疗法的效果的尝试。由于作为药物目标的分子(药物目标分子)的表达量和使药物新陈代谢的酶(药物新陈代谢酶)的活性的昼夜节律，药物的治疗效果也被认为呈现每日变化。考虑这点，提出了一种被称为“时间治疗”的思考方式，其中通过确定每个药物的最佳药物治疗时间来设法达到治疗效果的最大化。

已清楚的是，时钟分子的基因多态性和基因突变将是癌症、糖尿病、血管疾病、神经病变等的关键性原因。此外，近年来，已指出的是，时钟分子的基因多态性或突变还与诸如躁狂抑郁病和忧郁症的精神疾病的危象有关。为了治疗这些疾病，已经尝试了通过使用光的照射来复位由于时钟分子的基因多态性或突变而发生紊乱的生物时钟。

另一方面，生物节律不仅受生物时钟自主地控制，还受社会生活的限制。例如，关于睡眠-觉醒节律，每日生活中的就寝时间或起床时间的变化可能导致“实际生活中的就寝和起床周期”与“基于生物时钟的睡眠-觉醒节律”之间的节律偏移(位相偏移)。这种生物节律上的偏移被认为是诱发所谓的“时差症”或睡眠障碍以及进一步导致上述精神疾病。

此外，已开始通过利用生物节律来最大化药物疗法的效果的尝试。由于作为药物目标的分子(药物目标分子)的表达量和使药物新陈代谢的酶(药物新陈代谢酶)的活性的昼夜节律，药物的治疗效果也被认为呈现每日变化。考虑这点，提出了一种被称为“时间治疗”的思考方式，其中通过确定每个药物的最佳药物治疗时间来设法达到治疗效果的最大化。

此外，在更熟悉的例子中，已开始利用脑力和体力活动以及运动能力的昼夜节律来研究使个人的学习或训练能力达到最佳的作用时间以及使人难以(或易于)发胖的进餐时间。

根据前述，可以认为，对于防止各种疾病、改善诸如时差症的欠佳身体条件、实现时间治疗、表现个人能力、节食等等，准确地了解基于生物时钟的生物节律是非常有用的。

PCT专利公布No.WO 2004/012128(在下文中被称为专利文献1)至少公开了一种用于基于从生物个体收集到的标准标本的基因表达产物量测量数据而估计生物时钟的方法。在该生物时钟估计方法中，基于基因表达产物(具体地，mRNA(信使核糖核酸))的表达量而形成用于估计生物时钟的分子时钟表。顺便提及，专利文献1没有描述要收集的特定组织(或细胞)或者要测量的特定基因。

日本专利公开No.Hei 6-189914(在下文中被称为专利文献2)描述了一种用于从人的深部体温的测量值测量生物节律曲线的生物节律曲线测量设备。在该生物节律曲线测量设备中，进行了使得可以通过消除干扰的影响(外部影响)来测量真正的生物节律曲线的设计。顺便提及，专利文献2示出直肠温度或鼓室温度作为深部体温的特定示例，并且描述了尤其是直肠温度更好。

发明内容

在专利文献1中公开的生物时钟估计方法是一种基于作为从生物个体收集的标准标本的mRNA的表达量的方法。虽然专利文献1没有描述要收集的特定组织(或细胞)或者要测量的特定基因，但是检查白血球中的时钟基因的表达的方法作为简单方法已经被广泛地采用。然而，根据该方法，汲取血液是必不可少的，由此该方法伴随对象的肉体疼痛。

此外，对于测量人员需要进行从所汲取的血液分离白血球的操作、从白血球提取mRNA的操作、分析时钟基因mRNA的表达等等，这些都是执行该方法花费很多时间和劳力的原因。一般而言，为了从生物体标本提取mRNA并且确定mRNA，要求复杂的操作以防止mRNA被分解。特别地，如果在处理非常小量的生物体标本时发生mRNA的分解，则将不可能获得稳定的测量结果。

在专利文献2中公开的生物节律曲线测量设备是一种用于特别是测量直肠温度的设备。然而，在直肠中测量体温在对象上施加精神或肉体的痛苦，并且由此测量人员也感到负担。

因此，需要一种简单且侵入性最小的用于获取有关生物个体的生物节律的信息的方法。

根据本发明的实施例，提供了一种基于眼泪和/或唾液中的生理活性物质的量随着时间的变化而获取有关生物节律的信息的方法，其中在该方法中，生理活性物质可以是分泌型IgA(免疫球蛋白A)抗体，并且可以基于眼泪和/或唾液中的分泌型IgA抗体的量随着时间的变化而获取所述信息，并且其中，优选地，在该方法中，还使用溶菌酶作为生理活性物质，并且基于眼泪和/或唾液中的分泌型IgA抗体量与溶菌酶量的比率((分泌型IgA抗体量)/(溶菌酶量))随着时间的变化而获取所述信息。

在该方法中，生物节律的偏移，特别地，昼夜节律中的睡眠-觉醒节律与实际生活中的就寝和起床周期之间的偏移可以基于以下变化曲线之间的位相偏移来检测：表示眼泪中的分泌型IgA抗体量与眼泪中的溶菌酶量的比率随时间变化的变化曲线；以及表示唾液中的分泌型IgA抗体量与唾液中的溶菌酶量的比率随时间变化的变化曲线。

优选地，在该方法中，使用表示随时间变化的变化曲线作为用于估计生物节律的分子时刻表。

因此，根据本发明的实施例，可以提供一种简单且侵入性最小的用于获取有关生物个体的生物节律的信息的方法。

附图说明

图1是用于图示sIgA/溶菌酶随着时间的变化的示例的图；

图2A和2B是用于图示sIgA/溶菌酶变化曲线的位相变化的图；

图3A到3F是示出在就寝时间和起床时间保持一致的条件下，眼泪和唾液中的sIgA/溶菌酶的每日变化的测量结果的图，其中图3A示出五个对象的平均值，并且图3B到3F示出对象各自的测量，并且其中在横坐标轴上表示时间且在纵坐标轴上表示sIgA/溶菌酶；以及

图4A到4F是示出在通过改变就寝时间和起床时间(就寝和起床周期)来产生人为的“时差症”状态的条件下，眼泪和唾液中的sIgA/溶菌酶的每日变化的测量结果的图，其中图4A示出五个对象的平均值，并且图4B到4F示出对象各自的测量，并且其中在横坐标轴上表示时间且在纵坐标轴上表示sIgA/溶菌酶。

具体实施方式

1.生物节律信息获取方法

为了确立一种用于简单地且以侵入性最小的方式获取有关生物个体的生物节律的信息的方法，本发明人注意到眼泪和唾液，其是能够以侵入性极其小的方式收集的生物样本。已知的是，眼泪中包含60或更多种生理活性物质。该生理活性物质包括：诸如乳铁传递蛋白、溶菌酶、分泌型IgA(sIgA)等蛋白质，其用作对传染病的抵抗力；以及诸如维生素A的TSP(眼泪特有的前清蛋白)，其用作脂溶性物质的载体。此外，唾液包含各种生理活性物质，例如，诸如淀粉酶等的消化酶，诸如乳铁传递蛋白、粘蛋白等的糖蛋白类、脂类以及维生素。

本发明人分析了包含在眼泪或唾液中的这些生理活性物质的分泌量的变化。作为分析结果，分泌型IgA抗体被指定为分泌量呈现每日变化的生理活性物质。此外，已经发现，在眼泪和唾液中分泌的分泌型IgA抗体量的每日变化呈现非常一致的昼夜节律。

因此，本发明的实施例提供了一种基于眼泪或唾液中的分泌型IgA抗体量随着时间的变化而获取有关昼夜节律的信息的方法。在生物节律信息获取方法中，要处理的生物个体不仅包括人类，还普遍包括诸如小鼠、大鼠和猴子的实验动物。

更具体地提及分泌型IgA抗体，浆细胞中产生的IgA抗体被结合到泪腺或唾腺的腺细胞或排泄管细胞中产生的分泌块，从而形成被分泌到眼泪或唾液中的分泌型IgA抗体。在关于本实施例的生物节律信息获取方法中，从生物个体收集眼泪或唾液，并且测量眼泪或唾液中的分泌型IgA抗体的量，从而估计生物个体的生物节律。

2.眼泪和唾液的收集

(1)眼泪的收集

例如，可以通过收集在反射性分泌(受刺激分泌)时下眼睑(眼泪弯液面)处累积的眼泪来进行眼泪的收集。例如，可以通过由于保持眼睛打开的刺激或者通过以药签等刺激鼻粘膜来诱发反射性分泌。

眼泪的收集可以通过收集在基础分泌或反射分泌时累积的眼泪的方法或者通过眼睛冲洗方法来实现。然而，在通过基础分泌提供眼泪的情况下，收集量大约小到1至2μl，并且收集费时间。此外，收集通过反射分泌提供的眼泪伴随对象的沉重负担。眼睛冲洗方法是这样的方法，其将固定量的生理盐水等作为洗眼水施加到对象的眼睛并且此后连同生理盐水等一起收集眼泪。虽然在眼睛冲洗方法中眼泪被生理盐水等稀释，但是该方法的优点在于可以迅速地收集眼泪成分并且对象的负担轻。在本发明中，如后所述，分泌型IgA抗体是按照其的量与溶菌酶量的比率而确定的。因此，眼泪的稀释基本上是没有关系的。因此，眼睛冲洗方法适合用作本发明中的眼泪收集方法。

通过使用微吸管等以不接触眼球的方式收集累积在眼泪弯液面处的经稀释的眼泪。对于微吸管，可以使用经消毒的一次性芯片(chip)。具体地说，期望使用这样的一次性芯片，其中软硅胶管被附连到其的渐尖的尖端并且其通常用于将样本装入到电泳凝胶体。

可以通过使用滤纸来收集累积在眼泪弯液面处的经稀释的眼泪。然而，在使用滤纸的情况下，收集眼泪费时间，并且需要在收集之后从滤纸提取生理活性物质的工作。因此，使用微吸管等的方法是理想的，因为该方法使得能够迅速且容易地收集眼泪。

通过将预设量的生理盐水作为洗眼水施加到对象的眼睛来收集眼泪。在收集眼泪之后不立即进行生理活性物质的确定的情况下，期望通过低温贮藏来保存所收集的眼泪。

(2)收集唾液

可以通过以唾液浸透棉花、将棉花放置在试管内、以及放置其中带有棉花的试管以进行离心分离来收集唾液。该操作可以通过使用可购得的唾液收集工具或唾液收集试管来实现。

3.生理活性物质的确定

可以通过这样的公知方法来进行生理活性物质的确定，其例如使用可购得的ELISA工具包或由Agilent Technolgies生产的生物分析器(参见 “Tear analysis and lens-tear interactions.Part I.Protein fingerprintingwith microfluidic technology.”Contact Lens&Anterior Eye，2007，Vol.30，No.163)。对于生理活性物质的确定，理想的是使用在收集或解冻后通过离心过滤除去了杂质和粘蛋白的眼泪或唾液的上清液。

这里，本发明人发现，通过还同时确定作为包含在眼泪和唾液中的生理活性物质之一的溶菌酶(参见“Protein levels in nonstimulated andstimulated tears of normal human subjects.”，InvestigativeOphthalmology&Visual Science，1990，Vol.31，No.1119)，可以更准确地估计生物节律。

眼泪和唾液中的生理活性物质的浓度受收集眼泪和唾液时的技术因素的影响。具体地说，例如，在收集通过基础分泌提供的眼泪的情况下，收集量大约小到1至2μl，从而眼泪中的生理活性物质的浓度可能由于在收集操作期间眼泪成分的轻微蒸发而极大地改变。此外，在通过眼睛冲洗方法收集眼泪时，由此收集到的眼泪中的生理活性物质的浓度可能依赖于作为洗眼水施加到对象眼睛的生理盐水等的量而改变。

这种由于技术因素而引起的生理活性物质浓度的变化导致生理活性物质量的测量值的误差。因此，为了避免由于技术因素引起生理活性物质浓度的变化，期望采用以稳定不变的固定量包含在眼泪和唾液中的生理活性物质作为指标，并且补偿在收集眼泪期间眼泪的蒸发、生理盐水对眼泪的稀释等影响。

本发明人在其分析包含在眼泪和唾液中的这些生理活性物质的分泌量的变化期间，识别到溶菌酶是以稳定不变的固定量包含在眼泪和唾液中的物质。这种以稳定不变的固定量包含在样本中的物质通常被称为“内在标准”并且用于测量误差的校正。

具体地说，在关于本实施例的生物节律信息获取方法中，测量包含在眼泪和唾液中的分泌型IgA抗体和溶菌酶的量，并且基于溶菌酶量而对分泌型IgA抗体量进行校正，从而获取有关生物节律的信息。更具体地说，将分泌型IgA抗体量的测量值除以溶菌酶量的测量值，从而按照分泌型IgA抗体量与溶菌酶量的比率而确定分泌型IgA抗体量随着时间的变化。这使得可以避免在收集眼泪时眼泪的蒸发和生理盐水对眼泪的稀释等影响，对由于技术因素引起的生理活性物质量的测量误差进行校正，并且准确地估计生物节律。

以这种方式，与根据相关技术领域的方法比较，在关于本实施例的生物节律信息获取方法中，使用易于收集到的眼泪和/或唾液，从而可以使得对象的精神和肉体负担非常轻。另外，由于采用比mRNA更稳定的蛋白质作为要测量的物质，因此可以容易地估计生物节律而无需复杂的操作。

4.用于估计生物节律的分子时刻表

图1是示出通过将包含在眼泪或唾液中的分泌型IgA抗体量除以包含在眼泪或唾液中的溶菌酶量来获得的值(在下文中将该值描述为“sIgA/溶菌酶”)随着时间变化的图。图1示出通过在一天中的预定时间按上述方法测量sIgA/溶菌酶并且对测量值进行绘制来获得的变化曲线的示例。在图中，在横坐标轴上表示时间并且在纵坐标轴上表示sIgA/溶菌酶。图1示出在0:00测量到sIgA/溶菌酶的最小值(l)并且在12:00测量到sIgA/溶菌酶的最大值(h)的情况。

通过检查，可以从在一天中的每个时间所测量到的sIgA/溶菌酶的标绘来获得变化曲线。此外，为了获得准确的变化曲线，可以使用周期计算方法，例如，自相关方法(相关图)、功率谱方法、余弦方法和周期图方法。

比率sIgA/溶菌酶经历每日变化，并且呈现如图1所示的昼夜节律。因此，可以基于sIgA/溶菌酶随着时间的变化而获得有关对象的生物节律的信息。然后，通过利用sIgA/溶菌酶的变化曲线作为“分子时刻表”，可以估计对象的生物节律。

具体地说，例如，关于已知具有图1所示的变化曲线(在下文中，将该术语用作与“分子时刻表”相同的含义)的对象，假定在预定时间测量到的sIgA/溶菌酶是h。在该情况下，基于图1中的变化曲线(分子时刻表)，可以估计对象的昼夜节律处于12:00。此外，在sIgA/溶菌酶为l的情况下，可以估计对象的昼夜节律处于0:00，并且在sIgA/溶菌酶为m的情况下，可以估计对象的昼夜节律处于6:00或18:00。

另外，关于同一对象，例如假定以三小时的时间间隔两次测量的sIgA/溶菌酶的值分别为p和q。在该实例中，其中q高于p(p＜q)，可以估计对象的昼夜节律处于与sIgA/溶菌酶的上升阶段对应的上午(0:00到12:00)。相反，其中q低于p(q＜p)，可以估计对象的昼夜节律处于下午(12:00到24:00)。此外，通过获得p和q的变化系数(q/p)并且将其与变化曲线的切线的倾斜度对照，可以更准确地估计昼夜节律的时间。

现在，下面将描述基于变化曲线的变化而检测对象的生物节律中的偏移的方法。

变化曲线可以在形状上通过以下参数来决定：其的最大值(或最小值)、观察到最大值(或最小值)的时间、曲线从最大值到最小值(或从最小值到最大值)的倾斜度等等。在本发明中，变化曲线的形状被称作“位相”。此外，由变化曲线(分子时刻表)指定的对象的昼夜节律的形状也被称为“位相”。

具体地说，图1所示的变化曲线(分子时刻表)具有由最小值l、最大值h、最小值观察时间0:00和最大值观察时间12:00决定的形状或“位相”。

图2A和2B是示出变化曲线的位相变化的图。在图2A中，由虚线表示的变化曲线是图1所示的曲线(在下文中，该曲线也可以被称为“分子时刻表1”)，并且实线表示在另一测量日期通过与图1相同的测量所获得的变化曲线的示例(在下文中，该曲线也可以被称为“分子时刻表2”)。在图中，在横坐标轴上表示时间并且在纵坐标轴上表示sIgA/溶菌酶。

分子时刻表1具有这样的位相，其中最小值(l)的观察时间是0:00且最大值(h)的观察时间是12:00。相反，在分子时刻表2中，位相被改变成最小值(l)的观察时间是6:00且最大值(h)的观察时间是18:00。

可以估计对象的变化曲线在形成分子时刻表1的时间与形成分子时刻表2的时间之间发生位相偏移。具体地说，对象在形成分子时刻表2时的生物节律比形成分子时刻表1时滞后六小时(或超前18小时)。

以这种方式，对于同一对象，多次形成分子时刻表，并且将由此形成的分子时刻表相互比较，从而可以检测对象的生物节律的位相偏移。

另外，还可以考虑下面的方法作为另一种用于检测生物节律中的位相偏移的方法。

图2B是通过从图2A将分子时刻表1(也参见图1)从虚线变为实线且将分子时刻表2从实线变为虚线而获得的图。

如上所述，关于已知具有图1所示的变化曲线(分子时刻表)的对象，在预定时间测量到的sIgA/溶菌酶是m的情况下，可以估计对象的昼夜节律处于6:00或18:00。

这里，对于同一对象，假定通过在另一测量日的6:00测量所获得的sIgA/溶菌酶的值从m变为l(参见图2B的圆形标记)。在该情况下，可以估计对象的昼夜节律由于比最初滞后六小时(或超前18小时)而变为分子时刻表2所示的昼夜节律。

以这种方式，将在预定时间的sIgA/溶菌酶与预先准备的分子时刻表比较，从而可以更容易地检测对象的生物节律的位相偏移。

因此，根据关于本实施例的生物节律信息获取方法，利用呈现在眼泪或唾液中的sIgA/溶菌酶随时间变化的变化曲线作为分子时刻表，从而可以估计对象内在的生物节律并且检测生物节律的位相偏移。

这里，如同下面的示例将示出的那样，本发明人发现在眼泪和唾液中的sIgA/溶菌酶的每日变化呈现非常一致的昼夜节律。因此，在关于本实施例的生物节律信息获取方法中，可以基于眼泪和唾液中的任一个内的sIgA/溶菌酶随着时间的变化而获取如上所述的有关生物节律的信息。另外，可以基于眼泪和唾液两者中的sIgA/溶菌酶的值间的时间变化而获取更准确的信息。此外，还可以通过基于示出眼泪和唾液两者中的sIgA/溶菌酶的时间变化的变化曲线而检测到的位相偏移来获得有关生物节律的详细信息。

5.检测睡眠-觉醒节律与就寝和起床周期之间的偏移

具体地说，在关于本实施例的生物节律信息获取方法中，可以基于示出眼泪中的sIga/溶菌酶随时间变化的变化曲线与示出唾液中的sIgA/溶菌酶随时间变化的变化曲线之间的位相偏移而检测昼夜节律中的“睡眠-觉醒节律”与实际生活中的“就寝和起床周期”之间的偏移。

如上所述，昼夜节律中的“睡眠-觉醒节律”不仅受生物时钟自主地控制，还经受社会生活的限制。因此，由于每日生活中的就寝时间和起床时间的变化，在实际生活中的“就寝和起床周期”与按生物时钟的“睡眠-觉醒节律”之间可能发生节律偏移(位相偏移)。

本发明人发现在假定就寝和起床周期的变化如同下面示例所示时，明显地响应于就寝和起床周期的变化，眼泪中的sIgA/溶菌酶的变化曲线同相地改变。此外，另一方面，由本发明人阐明的是，在就寝和起床周期变化时，唾液中的sIgA/溶菌酶的变化曲线不会立即同相地改变，而是经过几天之后同相地改变，从而其位相与眼泪中的sIgA/溶菌酶的变化曲线的位相逐渐一致。

该事实可以被理解成显现了表示眼泪中的sIgA/溶菌酶随时间变化的变化曲线与表示唾液中的sIgA/溶菌酶随时间变化的变化曲线之间的位相偏移表示实际生活中的“就寝和起床周期”与昼夜节律内在的“睡眠-觉醒节律”之间发生的偏移。另外，通过按照生物时钟的“睡眠-觉醒节律”逐渐地适应改变后的新“就寝和起床周期”的过程，由于唾液中的sIgA/溶菌酶的变化曲线的位相与在先同相改变的眼泪中的sIgA/溶菌酶的变化曲线的位相逐渐一致而认为在“就寝和起床周期”与“睡眠-觉醒节律”之间的这种偏移被消除。

因此，可以认为，可以基于在表示眼泪中的sIgA/溶菌酶随时间变化的变化曲线与表示唾液中的sIgA/溶菌酶随时间变化的变化曲线之间的位相偏移而检测在昼夜节律中的“睡眠-觉醒节律”与实际生活中的“就寝和起床周期”之间发生的偏移。

示例

在下面的条件下，测量了眼泪和唾液中的sIgA/溶菌酶的每日变化，并且尝试估计生物节律以及检测在睡眠-觉醒节律与就寝和起床周期之间的偏移。

(1)对象

从年龄为33到41的五个男性对象取得眼泪和唾液的样本。以固定时间间隔执行采样，并且通过短暂地唤醒对象来实现对象睡眠期间的采样。在两种模式下，具体地说，在实验期间就寝时间和起床时间保持一致的条件下和在实验期间就寝时间和起床时间发生改变的条件下，进行采样。顺便提及，在实验期间，使对象禁止饮用会影响其自主神经活动的咖啡、酒等等。

(2)眼泪和唾液收集方法

通过眼睛冲洗方法来进行眼泪的收集。具体地说，首先，将30μl的生理盐水(室温)作为洗眼水施加到每个对象的眼睛。洗眼水的施加通过使用可购得的滴眼液器皿来进行，并且抵达眼球的中央。通过使用微芯片(microchip)即刻收集在施加洗眼水时累积于下眼睑(眼泪弯液面)处的经稀释眼泪，其中微芯片通常用于将样本装入到电泳凝胶体。具有渐尖尖端且已消毒的微芯片与附连到其尖端的软硅胶管一起使用。将由此收集到的经稀释眼泪放入1.5ml的Eppendrof试管，并且将其保存在-30℃的冷冻器中直至确定分泌型IgA。此外，通过使用作为唾液收集工具的唾液采集管(salivette)(由Sarstedt AG&Co.生产)来进行唾液的收集。

(3)分泌型IgA抗体量的测量

通过使用生物分析器(由Agilent Technologies Inc.生产)来确定眼泪和唾液中的分泌型IgA抗体和溶菌酶的量。通过使用专用微孔道芯片(蛋白质230)，从4μl的眼泪或唾液获得蛋白质的电泳图谱(层析图)。通过使用附连到分析器的软件(Expert 2100)，确定作为所获得层析图中的峰值而检测到的每种蛋白质的量。

1.基于眼泪和唾液中的sIgA/溶菌酶随时间的变化而估计生物节律

图3A到3F示出在就寝时间和起床时间保持一致的条件下眼泪和唾液中的sIgA/溶菌酶的每日变化的测量结果。这些图示出一天中sIgA/溶菌酶的测量结果(在每个图中沿横坐标轴的粗线表示睡眠时间区域)。图3A示出五个对象的平均值，并且图3B到3F分别示出对象的测量值。在图中，在横坐标轴上表示时间并且在纵坐标轴上表示sIgA/溶菌酶。

在图3A到3F的每个中，由连接圆形标绘的虚线表示的眼泪中的sIgA/溶菌酶、以及由连接正方形标绘的虚线表示的唾液中的sIgA/溶菌酶示出周期性的每日变化，并且证实了每日变化各自示出昼夜节律。此外，从通过使这些标绘拟合具有24小时周期的余弦函数而获得的变化曲线(参见每个图中的实线)中可以清楚，眼泪和唾液中的sIgA/溶菌酶的每日变化呈现非常一致的昼夜节律。

2.检测在睡眠-觉醒节律与就寝和起床周期之间的偏移

图4A到4F示出在通过改变就寝时间和起床时间(就寝和起床周期)来产生人为的“时差症”状态的条件下，眼泪和唾液中的sIgA/溶菌酶的每日变化的测量结果。该图示出在改变就寝时间和起床时间之前的那天、以及通过整晚熬夜而将就寝时间延后11个小时的两天进行的sIgA/溶菌酶的测量结果(在图中，沿横坐标轴的粗线表示睡眠时间区域)。图4A示出五个对象的平均值，并且图4B到4F分别示出对象的测量值。顺便提及，在横坐标轴上表示时间(其中由粗线表示睡眠时间区域)，并且在纵坐标轴上表示sIgA/溶菌酶。

在改变就寝时间和起床时间之前的那天，眼泪和唾液中的sIgA/溶菌酶的每日变化彼此非常一致。在通过具有24小时周期的余弦曲线的拟合来估算峰值时间时，观察到五个对象中的每个的最大值(峰值)大约在睡眠时间区域(23:00到7:30)中的4:30处。

此后，当通过整晚熬夜而将就寝时间延后11个小时使得睡眠时间区域(从就寝时间到起床时间)将为10:00到17:30并且将产生人为的“时差症”状态时，以与改变就寝时间和起床时间之前相同的方式，唾液中的sIgA/溶菌酶(正方形标绘的虚线)在最初睡眠时间区域(23:00到7:30，在每个图中由断折线包围的时间区域)中的大约3到5点钟处呈现最大值(峰值)。另一方面，响应于就寝时间和起床时间的变化，眼泪中的sIgA/溶菌酶(圆形标绘的虚线)在新睡眠时间区域(10:00到17:30)中的大约13:30到17:30处呈现最大值(峰值)。

这些结果示出在通过产生人为“时差症”状态而在昼夜节律内在的“睡眠-觉醒节律”与实际生活中的“就寝和起床周期”之间产生偏移时，可能会在眼泪中的sIgA/溶菌酶的每日变化与唾液中的sIgA/溶菌酶的每日变化之间产生位相偏移。

另外，在眼泪中的sIgA/溶菌酶的每日变化与唾液中的sIgA/溶菌酶的每日变化之间的位相偏移逐渐减小，因此在从改变就寝时间和起床时间的那天开始的第5天，唾液中的sIgA/溶菌酶也开始在新睡眠时间区域(10:00到17:30)中的大约13:30到17:30处呈现最大值(峰值)。

根据这些结果，可以认为，在眼泪中的sIgA/溶菌酶的每日变化与唾液中的sIgA/溶菌酶的每日变化之间的位相偏移可以用作在实际生活中的“就寝和起床周期”与生物节律内在的“睡眠-觉醒节律”之间产生“时差症”状态的指标。

根据关于本实施例的生物节律信息获取方法，利用表示sIgA/溶菌酶随时间变化的变化曲线作为分子时刻表，从而可以容易地且以侵入性最小的方式估计每个对象内在的生物节律。这使得每个人可以知道他或她自己内在的生物节律，并且使得可以设置最佳药物治疗时间、最佳作用时间和最佳进餐时间。因此，关于本实施例的生物节律信息获取方法可以有效地用于实现时间治疗、用于表现个人自身的能力以及用于饮食。

此外，根据关于本实施例的生物节律信息获取方法，可以容易地且以侵入性最小的方式检测生物节律中的位相偏移。因此，生物节律信息获取方法可以有效地用于防止可能由于生物节律的偏移引起的各种疾病并且用于改善诸如时差症的欠佳身体条件。

本申请包含与2008年10月7日向日本专利局提交的日本优先权专利申请JP 2008-260430中公开的主题内容相关的主题内容，在此通过引用将其全文合并于此。

本领域的技术人员应当理解，可以在所附权利要求或其等价物的范围内根据设计要求或其它因素进行各种修改、组合、子组合和变更。

Claims

1.一种方法，其基于眼泪和/或唾液中的生理活性物质的量随着时间的变化而获取有关生物节律的信息，

其中所述生理活性物质是分泌型免疫球蛋白A抗体，并且基于所述眼泪和/或所述唾液中的所述分泌型免疫球蛋白A抗体的量随时间的变化而获取所述信息，

并且其中，还使用溶菌酶作为所述生理活性物质，并且基于所述眼泪和/或所述唾液中的分泌型免疫球蛋白A抗体量与所述溶菌酶量的比率(分泌型免疫球蛋白A抗体量/溶菌酶量)随着时间的变化而获取所述信息。

2.根据权利要求1所述的方法，其中基于以下变化曲线之间的位相偏移来检测所述生物节律的偏移：示出所述眼泪中的所述分泌型免疫球蛋白A抗体量与所述眼泪中的所述溶菌酶量的比率随时间变化的变化曲线；以及示出所述唾液中的所述分泌型免疫球蛋白A抗体量与所述唾液中的所述溶菌酶量的比率随时间变化的变化曲线。

3.根据权利要求2所述的方法，其中检测在昼夜节律中的睡眠-觉醒节律与实际生活中的就寝和起床周期之间的偏移作为所述生物节律的偏移。

4.根据权利要求1所述的方法，其中使用示出所述随时间变化的变化曲线作为用于估计所述生物节律的分子时刻表。