HUT75162A

HUT75162A - Vesicles with controlled release of actives

Info

Publication number: HUT75162A
Application number: HU9601316A
Authority: HU
Inventors: Sinil Kim; Mantripragada Sankaram
Original assignee: Depotech Corp
Priority date: 1993-11-16
Filing date: 1994-11-10
Publication date: 1997-04-28
Also published as: ZA949063B; US6132766A; EP0729351A1; BG100596A; IL111628A0; AU686277B2; FI115823B; GR3034954T3; DE69425901D1; EP0729351B1; PL314485A1; BR9408072A; CA2176712A1; DK0729351T3; JP3002702B2; IL111628A; ATE196248T1; NO962024D0; BG63146B1; RU2160093C2

Description

KÖZZÉTÉTELI

PÉLDÁNY

SZABÁLYZOTT HATÓANYAGLEADÁSÚ VEZIKULUMOK

A találmány gyógyszerszállító rendszerként használható, szintetikus membránrészecskékből (membránvezikulumokból) álló készítményekre és az előállításukra szolgáló eljárásokra vonatkozik.

A multivezikuláris liposzóma egyike a három fő liposzóma típusnak, melyet először Kim és mts., (Biochim. Biophys. Acta 782, 339-348, 1983) állítottak elő. Egyedülálló módon különbözik a többi lipidalapú gyógyszerszállító rendszertől, így az egyrétegű (Huang, Biochemistry 8, 334-352,

1969; Kim és mts., Biochim. Biophys. Acta 646.1 -10. 1981) és többrétegű (Bangham és mts., J.Mol. Bioi., 13, 238-252) liposzómáktól. Az egyrétegű liposzómákkal ellentétben a több multivezikuláris részecskék mindegyike sok részből álló, vízzel telt kamrákat tartalmaz. A többrétegű liposzómákkal ellentétben a multivezikuláris részecskékben a vízzel telt kamrák nem koncentrikusan helyezkednek el.

Az irodalomban számos módszer ismeretes egyrétegű és többrétegű liposzómák előállítására, például a 4 522 803, 4 310 506, 4 235 871,

224 179, 4 078 052, 4 394 372, 4 308 166, 4 485 054 és 4 508 703 számú amerikai egyesült államokbeli szabadalmi leírásokat. Ezenkívül az irodalom ismertet még módszereket multivezikuláris liposzómák előállítására, melyek bomlékonynak bizonyultak biológiai folyadékokban (Kim és mts., Biochim. Biophys. Acta 728, 339-348, 1983). Az egyrétegű és többrétegű liposzómák előállítási módszereit Szoka és mts. ismertetik átfogó összefoglalójukban (Ann. Rév. Biophys. Bioeng. 9, 465-508, 1980).

Kim és mts. módszerében (Biochim. Biophys. Acta 728, 339-348,

1983) a kis molekulák - így a citozin-arabinozid - kapszulázódási hatékonysága csekély és biológiai folyadékokban gyorsan felszabadul. Későbbi vizsgálatokban (Kim és mts., Cancer Treatment Reports 71. 705-711, 1987) ki83770-2444 TF/SM ····· ·· ·· ·· • · · · · · · • ·· ·· · ···· • ······ · · · · · ·· · ·· · · · t mutatták, hogy a bezárt molekulák gyors felszabadulása biológiai folyadékokban fokozható, ha a kapszulázást egy hidroklorid jelenlétében végzik.

Számos gyógyszeres kezelés akkor optimális, ha hosszú ideig megfelelő gyógyszerszint biztosítható. így például a sejtciklus-specifikus antimetabolitokkal végzett rákellenes kezelés akkor optimális, ha hosszú ideig kielégítő a citotoxikus gyógyszer szintje. A cytarabine egy ilyen adagolási menetrendtől erősen függő rákellenes gyógyszer. Mivel a gyógyszer csak akkor öli meg a sejteket, mikor azok DNS-t replikáló fázisban vannak, az optimális sejtpusztulás eléréséhez hosszú ideig biztosítani kell a terápiás gyógyszerkoncentrációt. Sajnálatos módon az intravénás vagy szubkután dózis beadása után a cytarabine felezési ideje igen rövid, 1-2 óra nagyságrendű. Ahhoz, hogy egy sejtciklus-specifikus gyógyszerrel - például cytarabinnal - optimális ráksejtpusztulást lehessen elérni, két fő követelményt kell teljesíteni; először a daganatnak nagy gyógyszer-koncentrációval kell érintkezni anélkül, hogy a gazdasejtek irreverzibilis károsodást szenvednének, másodszor a daganatot hosszú ideig kell a gyógyszer hatásának kitenni úgy, hogy ezalatt az összes vagy a legtöbb rákos sejt megkísérelje a DNS szintézist cytarabine jelenlétében.

Eddig a gyógyszer-felszabadulás sebességének szabályzása rugalmatlan volt és a felszabadulást módosító szerek elsősorban hidrohalidokra korlátozódtak. Gyógyszerszállító rendszerek esetén igen előnyös, ha rugalmasan szabályozható a bezárt (kapszulázott) anyagok felszabadulása és a felszabadulás sebességét módosító szerek széles választéka áll rendelkezésre.

A találmány tárgyát képezi tehát egy lassú hatóanyag-leadású depó készítmény, mely lehetővé teszi, hogy szabályzott felszabadulás mellett elhúzódó, hosszú és tartós érintkezés jöjjön létre a biológiailag aktív anyag terápiás koncentrációjával.

A találmány tárgya továbbá eljárás ilyen depó készítmények előállítására.

A találmány további tárgyai, jellemzői és előnyei a találmány részét képezik és a leírásban valamint az igénypontokban találhatók.

A találmány szerinti készítmények szintetikus membránrészecskéket tartalmaznak, vagyis nem koncentrikus rétegek által határolt, vízzel telt, többszörös belső kamrákat tartalmazó, lipid vezikulumokat, ahol a kamrák egy vagy több hatóanyag-leadási sebességet módosító szert tartalmaznak, melyek hatékonyan lassítani tudják a bezárt biológiai hatóanyag leadását. A találmány tárgyát képezik továbbá az eljárások ilyen készítmények előállítására.

A találmány szerinti szintetikus membránrészecskéket tartalmazó készítményeknek nagy a kapszulázási hatékonysága, szabályzott a bezárt anyag leadása, jól meghatározott, reprodukálható szemcseeloszlású, gömbalakú, átlagos mérete beállítható - könnyen növelhető vagy csökkenthető - és szabályozható a belső kamra mérete és száma is.

A találmány szerinti szintetikus membránrészecskéket tartalmazó készítmények előállítására szolgáló eljárásban (1) egy vagy több illékony szerves oldószert összekeverünk a lipid komponenssel, mely legalább egy semleges lipidet és legalább egy, egy vagy több nettó negatív töltéssel rendelkező amfipatikus lipidet tartalmaz; (2) a szerves oldószerhez hozzáadjuk az első nem elegyedő vizes komponenst, mely egy vagy több bezárandó biológiailag aktív anyagot tartalmaz; (3) hozzáadjuk akár a szerves oldószerhez, akár az első vizes komponenshez vagy mindkettőhöz a leadás sebességét módosító szert, mely hatásosan csökkenteni tudja a bezárt biológiailag aktív anyagok leadását; (4) olajban-víz emulziót képezünk a két nem elegyedő komponensből; (5) beleöntjük az olajban-víz emulziót a második nem elegyedő vizes komponensbe; (6) diszpergáljuk az olajban-víz emulziót, mikoris oldószergyöngyök képződnek, melyek az első vizes fázis több cseppjét tartalmazzák és (7) az oldószergyöngyökből eltávolítjuk - például elpárologtatással - a szerves oldószereket, mikoris visszamaradnak a szintetikus membránrészecskék. Egy vagy több hatóanyagleadást módosító szer hozzáadása - mely biológiailag aktív folyadékban és in vivő csökkenteni tudja a bezárt biológiailag aktív anyagok felszabadulásának sebességét alapvetően fontos.

A leírásban és igénypontokban szereplő szintetikus membránrészecske ember által készített, mikroszkopikus lipid vezikulumot jelent, mely kétréteges lipid membránból áll és több nem koncentrikus vizes kamrát zár magába. Ezzel ellentétben az egyrétegű liposzómákban egyetlen vizes kamra található, a többrétegű liposzómákban pedig több hagyma elrendezésű, koncentrikus membrán és közöttük helyezkednek el - héjszerűen - a koncentrikus vizes kamrák.

Az oldószergyöngy a leírásban és igénypontokban mikroszkopikus, gömbalakú szerves oldószercseppet jelent, ezen belül található a vizes oldat több apróbb cseppje. Az oldószergyöngyöket szuszpendáljuk és az egészet beleöntjük a második vizes oldatba.

A semleges lipid kifejezés olyan olajokat vagy zsírokat jelent, melyek önmagukban alkalmatlanok a membránképzésre és nincs hidrofil fejet képviselő csoportjuk.

Az amfipatikus lipid olyan molekula, melynek hidrofil fejet és hidrofób lábat képviselő csoportja, valamint membránalkotó képessége van.

A hatóanyagleadást módosító szer olyan molekula - kivéve a hidrohalidokat - mely a szintetikus membránrészecskék előállítása vagy gyártása során beadagolva, hatékonyan tudja lassítani vagy gyorsítani a bezárt biológiailag aktív vegyületek felszabadulását a szintetikus membránrészecske készítményből.

Röviden, a találmány szerinti eljárásban olajban-víz emulziót állítunk elő, oly módon, hogy (1) a lipid komponens elkészítésére feloldjuk az

amfipatikus lipideket egy vagy több illékony, szerves oldószerben; (2) a lipid komponenshez hozzáadagoljuk az első nem elegyedő, vizes komponenst, valamint a bezárandó biológiailag aktív anyagot és (3) a szerves oldószerhez vagy az első vizes komponenshez, vagy mindkettőhöz hozzáadjuk a hatóanyagleadást módosító szert, mely hatékonyan csökkenteni tudja a bezárt biológiailag aktív anyag leadásának sebességét a szintetikus membránrészecskékből, majd mechanikus úton emulgeáljuk a keveréket.

Az emulzióban a szerves oldószerben szuszpendált vízcseppek képezik a belső vizes kamrákat és a vizes kamrákat kibélelő egyrétegű amfipatikus lipidekből alakul ki a végtermékben a kétréteges membrán egyik rétege. Az emulziót ezután beleöntjük a második vizes komponensbe, mely egy vagy több nem-ionos, ozmotikus szert és kis ionerősségü savsemlegesítő szert - így egy protonakceptort - tartalmaz, mely előnyösen bázis formában levő lizin vagy hisztidin vagy kettőjük kombinációja. Az emulziót ezt követően kevertetjük mechanikus úton, ultrahanggal fuvókás atomizálással, egyéb úton vagy ezek kombinációjával, melynek során a második vizes komponensben szuszpendált oldószergyöngyök képződnek.

Az oldószergyöngy több vízcseppet tartalmaz, melyben oldva van a bezárandó anyag. A szerves oldószert eltávolítjuk a gyöngyökből, előnyösen az illékony oldószer elpárologtatásával, például úgy, hogy gázáramot vezetünk a szuszpenzió fölé. Ha az oldószer teljesen eltávozott, a gyöngyök átalakulnak szintetikus membránrészecskékké. Az oldószer kielégítő eltávolítására használható tipikus gáz a nitrogén, hélium, argon, oxigén, hidrogén és szén-dioxid.

A hatóanyag-leadás sebességét módosító anyag lehet bármely molekula, mely biológiai folyadékokban és in vivő hatékonyan lassítani tudja a bezárt biológiailag aktív vegyület kiszabadulását a szintetikus membránrészecskékből, vagyis a hatóanyagok leadásának sebessége kisebb lesz, mint az olyan szintetikus membránrészecske esetén, melyet ilyen leadási sebes6 séget módosító anyag nélkül készítettek. Ilyen hatóanyag-leadási sebességet módosító anyagok - nem korlátozó jelleggel - a következők: perklórsav, salétromsav, hangyasav, ecetsav, trifluór-ecetsav, triklór-ecetsav, kénsav, foszforsav és kombinációik. A leadás sebességét módosító anyag mennyisége olyan, hogy hosszas, tartós és szabályzott felszabadulással tudjon a bezárt biológiailag aktív anyagból terápiás szintet biztosítani. Például a szerves oldószerben vagy az első vizes komponensben a hatóanyag-leadás sebességét módosító anyag koncentrációja 0,1 mmol/l - 0,5 mol/l, előnyösen 10 mmol/l - 200 mmol/l.

Különböző illékony, hidrofób oldószerek használhatók a lipid fázis oldószereiként, így éterek, szénhidrogének, halogénezett szénhidrogének vagy freonok. Például dietil-éter, izopropil-éter és más éterek, kloroform, tetrahidrofurán, halogénezett éterek észterek és kombinációik.

Az oldószergyöngyök egymáshoz vagy a készülék falához való tapadásának megakadályozására célszerű legalább 1 mólszázalék mennyiségben, összességében negatív töltésű amfipatikus lipidet tenni a gyöngyökbe, igen kis ionerősségű második vizes oldatot használni a szuszpendáláshoz és - sav használata esetén - olyan savsemlegesítőt adni a második vizes oldathoz, hogy annak koncentrációja 0,1 mmol/l -0,5 mol/l legyen, annak megakadályozására, hogy az oldószergyöngyök kezelhetetlen habbá álljanak össze. Ezenkívül, adott esetben alkalmazható még a szuszpendáló vizes oldatban egy vagy több nem-ionos ozmotikus szer - így trehalóz, glükóz vagy szaccharóz - mellyel a membránrészecskékon belül és kívül egyensúlyban tartható az ozmotikus nyomás.

A szintetikus membránrészecske készítéséhez különböző típusú lipidek használhatók, két feltétel mellett: egy összességében negatív töltésű amfipatikus lipidet és egy semleges lipidet kell használni. Ilyen semleges lipid a trióiéin, trioktanoin és növényi olajok, mint a szójaolaj, sertészsír, marhazsír, tocopherol valamint kombinációik, és ilyen összességében nega-

tív töltésű amfipatikus lipid a cardiolipin, foszfatidil-szerinek, foszfatidilglicerinek és foszfatidil-savak.

A második vizes komponens vizes oldat, mely kis ionerősségű oldott anyagot tartalmaz, mint a szénhidrátok - így a glükóz, szaccharóz valamint laktóz - vagy aminosavak - így a lizin, szabad bázisú hisztidin, valamint kombinációik.

A legkülönbözőbb biológiai anyagok és terápiás szerek zárhatók be kapszulázással a szintetikus membránrészecskékbe.

A találmány szerinti készítményekben terápiás szer lehet - korlátozás nélkül - gyógyszer, radioizotóp és immunmodulátor. Hasonló anyagok ismertek és könnyen felderíthetők a szakmában jártas szakember számára. Lehetnek bizonyos terápiás szer - szintetikus membránrészecske-típus kombinációk, melyek kompatibilisebbek, mint más párosítások. Például lehet, hogy a szintetikus membránrészecske előállítási módja nem összeegyeztethető a fehérje jellegű terápiás szer tartós biológiai aktivitásával. Mivel azonban jól ismertek vagy könnyen felderíthetők a körülmények, melyek összeférhetetlen párosítást eredményeznének egy adott terápiás szer és adott emulgeáló rendszer esetén, gyakorlat kérdése, hogy ilyen probléma elkerülhető legyen.

Terápiás szerként a diszpergáló rendszerbe beépíthető mind nemfehérje jellegű, mind fehérje jellegű gyógyszer. Nem-fehérje jellegűek az olyan hagyományos gyógyszerek, mint a mitomycin C, daunorubicin, vinblastine, AZT és a hormonok. Különösen fontosak a daganatellenes, sejtciklus-specifikus gyógyszerek, mint a cytarabine, methotrexate,

5- fluor-uracil (5-FU), floxuridine (FUDR), bleomycin,

6- merkapto-purin, 6-tioguanin, fludarabine-foszfát, vincristine és vinblastine.

A szintetikus membránrészecskébe bezárható fehérjejellegű anyagok a következők: a DNS, RNS, különböző típusú fehérjék, emberben hatásos, rekombináns technológiával előállított fehérje hormonok, hematopoieticus növekedési faktorok, monokinek, lymphokinek, tumor necrosis faktor, inhibin, alfa- és béta-tumor növekedési faktor, Muller-inhibitor, ideg-növekedési faktor, fibroblast növekedési faktor, vérlemezkéből származó növekedési faktor, hypophysis hormonok - így a LH és egyéb felszabadító hormonok calcitonin, immunogén fehérjék vakcinálási célra, valamint DNS- és RNSszekvenciák.

Az alábbi 1. táblázatban felsoroltuk azokat a jellegzetes, biológiailag aktív, emberben hatásos vegyületeket és mezőgazdaságban használható biológiailag aktív anyagokat, melyek a találmány szerinti, hatóanyagleadást módosító anyag jelenlétében bezárhatok a szintetikus membránrészecskékbe.

···· · • · ···· · · « · · ·· · ·· *

Asztmaellenes szerek metaproterenol aminophylline theophylline terbutaline norepinephrine ephedrine isoproterenol adrenalin

Szívglikozidok digitális digitoxin lanatoside C digoxin

Vérnyomáscsökkentők apresoline atenolol chlorpheniramine captopril reserpine

Parazitaellenes szerek

1. táblázat

Antiarrhvthmiás szerek	Nvuatatók
propranolol	chlorpromazine
atenolol	benzodiazepin
verapamil	butirofenonok hidroxizinek
Anginaellenes szer	mepobramate
isosorbide-dinitrát	fenti azi nők tioxantének
Hormonok	Szteroidok
tiroxin	prednisone
kortikoszteroidok	triamcinolone
tesztoszteron	hydrocortisone
ösztrogén	dexamethasone
progeszteron	betamethasone
mineralokortikoid	prednisolone
Antidiabetikumok	Antihisztaminok
Diabenese	pyribenzamine
inzulin	diphenhydramine

Antineoplasztikus szerek Nyugtatok, fájdalomcsillapítók

praziquantel	azathioprine	morfin
metronidazole	bleomycin	dilaudid
pentamidine	cyclophosphamide	kodein
ivermectin	vincristine	kodein-szerű
szintetikus szerek	methotrexate	demerol
Nukleinsavak, analóqok	6-TG	oxymorphone
DNS	6-MP	phenobarbital
RNS	vinblastine	barbiturátok
metilfoszfonátok és	VP-16
analógok antisense nukleinsavak	VM-26	fentanyl
	ciszplatin	ketorolac
Antibiotikumok	5-FU FUDR fludarabine-phosphate Immunmodulátorok	Vasooressorok
penicillin	interferon	dopamin
tetracycline	interleukin-2	dextroamphetamine
amikacin	gammaglobulin
erythromycin	monoklonális antitestek
cephalothin imipenem	Gombaellenes szerek	Vírusellenes szerek
cefotaxime	amphotericin B	acyclovir és
carbenicilline	clotrimazole	származékai Gancyclovir és
ceftazidime	ketoconazole	foszfátok Winthrop-51711

kanamycin	fluconazole	ribavirin
tobramycin	itraconazole	rimantadine/amanta diné
ampicillin	myconazole	azidothymidine és származékok
gentamycin	muramil-dipeptid	adenin-arabinozid
cefoxitin		amidin típusú

proteáz inhibitorok cefadroxil cefazolin egyéb aminoglikozidok amoxicillin moxalactam piperacillin vancomycin ciprofloxacin egyéb kinolonok

Vakcinák

Egyéb rekombináns, leölt és élő vakcinák, valamint vakcinaként használatos antigén anyag antigén anyag allergiák kezelésére influenza légzőszervi syncytiális vírus

HÍV vakcina

Hemophilus inlfuenza vakcinák

Hepatitis A, B, C vakcinák mumpsz

• · · · · • · · · · · • ······ ·· ·· · ·· · «· · · · rubeola kanyaró tetanusz malária vakcinák herpesz rák vakcinák

Anti-leu-3a vakcina

Monoklonális antitestek (humán, egér, egyéb speciesből származó és/vagy rekombináns és/vagy fúziós és/vagy ezek fragmensei)

OKT3

OKT4

HA-1A

Anti-Carcino-Embryo antigén antitestek

Anti-gangliozid-antitestek: Anti GD2, Anti GM2, Anti GD3, Anti GM3 Húgyúttal kapcsolatos antigénszerű antitestek Anti-IL-2 receptor

Anti-Leu-2 kiméra

Anti-IL-2 receptor

Anti-Leu-2

Anti-Leu-3a kiméra

L6 kiméra

MAb-L6

Radiojelzett L6

Centrorex

Centoxin

Panorex

Anti-LPS

Immunotoxin

• · · · · · · • ·· · · · ···· • ······ ·· ·· · ·· · ·· · ··

Antitumor necrosis faktor

Anti-pseudomonas

OncoRad 103

OncoScint CR103

OncoScint OV103

OncoScint PR356

OncoTher130

KS 1/4-DAVLB

ADCC szer

Egér monoklonális antitestek humán B-sejtű lymphomákkal szemben (antiidiotípusok)

Egér monoklonális antitestek (IMelpgl) (anti-idiotípus) melanomával kapcsolatos antigénnel szemben Anti-B4-blokkolt ricin Anti My9-blokkolt ricin ImmuRaid-CEA

Mab vastagbél-végbél-, petefészek- és tüdőrák ellen

Rhenium-186 Mab

Orthoclone OKT®

E5™

LYM-1

TNT

XomaZyme® -791

XomaZyme® -CD5 Plus

XomaZyme® -CD7 Plus

XomaZyme® -Mel

Gyomirtó szerek (herbicidek)

Triazine klór-acetamid cyanazine bentazone

Roundup

Rodeo butachlor

CNP chlomethoxynil simetryne

Atrazine

Alachlor

Cyanazine metolachlor metribuzin fenoxi-gyomirtó szerek: 2,4-D [(2,4-diklór-fenoxi)ecetsav], 2,4-D-amin [(2,4-diklór-fenoxi)ecetsav-dimetilamin], 2,4-D-izooktil [(2,4-diklór-fenoxi)ecetsav -izooktil-észter],

2,4,5-T-amin [(2,4,5-triklór-fenoxi)ecetsav-trimetilamin] egyéb triazin gyomirtó szerek egyéb klór-acetamid gyomirtó szerek egyéb fenoxisav gyomirtó szerek

Rovarirtó szerek (peszticidek)

Abamectin egyéb avermectinek atrazine lindane dichlorvos dimethoate warfarin ρ,ρ'-DDD ρ,ρ'-DDE

HCH

DMDT aldrin dieldrin

Aldicarb

EDB

DCP

DBCP simazine cyanazine

Bacillus thuringiensis toxin

Bacillus thuringiensis var. kurstaki bisz(tri-n-butil-ón)oxid (TBTO) egyéb szerves klór rovarirtó szerek

Fehérjék és glikoproteinek lymphokinek interleukin -1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11 cytokinek

GM-CSF

M-CSF

G-CSF tumor necrosis faktor inhibin tumor növekedési faktor

Muller inhibitorok, szubsztancia • · · · · · • ·····« ·· ·· · ·· ideg-növekedési faktor fibroblast növekedési faktor vérlemezkéből származó növekedési faktor koagulációs faktorok (Vili, IX, VII) inzulin szöveti plazminogén aktívátor histocompatibilitási antigén onkogén termékek myelin bázisfehérje kollagén fibronectin laminin egyéb rekombináns DNS technológiával készült fehérjék erythropoietin

IL-3/GM-CSF fúziós fehérjék monoklonális antitestek poliklonális antitestek antitest-toxin fúziós fehérje antitest-radionuklid konjugátum interferonok fragmensek és peptid analógok; fehérjefragmens analógok peptidek és glikoproteinek epidermális növekedési faktor

CD4 receptor és egyéb rekombináns receptorok egyéb természetből izolált fehérjék antidiuretikus hormon oxytocin adrenokortikotropin hormon calcitonin tüszőstimuláló hormon luteinizáló hormont felszabadító hormon luteinizáló hormon gonadotropin átalakító növekedési hormonok streptokinase emberi növekedési hormon somatotropinok más speciesek számára ideértve - korlátozás nélkül - a következőket:

1. sertés

2. marha

3. csirke

4. juh

5. hal növekedési hormont felszabadító hormonok emberek és különböző állatfajták számára glükagon desmopressin thyroid felszabadító hormon thyroid hormon secretin magaininek integrinek adhéziós peptidek, beleértve, de korlátozás nélkül azokat, melyek szekvenciája:

arginin-glutamin-asparaginsav superoxid dismutase defensinek T-sejt receptorok

• · · bradykinin antagonisták pentigetide peptid T antiinflamminok fő histocompatibilitási (MHC) komplex komponensek és peptidek MHC céllal proteáz inhibitorok lypressin buserelin leuprolide nafarelin deslorelin goserelin historelin triptorelin

LHRH antagonisták

HOE-2013 detirelix

Org-30850

ORF-21243 angiotensint átalakító enzimet gátló peptid renin inhibitor peptidek ebiratide (HOE-427)

DGAVP

Opiát receptor agonisták és antagonisták, ideértve - korlátozás nélkül - a következőket;

1. enkephalinok és

2. endorphinok E-2078

DPDPE érre ható bélrendszeri peptidek pitvari nátriuretikus peptid agyi nátriuretikus peptid pitvari peptid clearance inhibitorok hirudin onkogén inhibitorok egyéb stimuláló faktorok

Neurotranszmitterek	Radionuklidok	Röntgen kontrasztanyagok
dopamine	technecium	gadolinium kelátok
epinephrine	indium	iohexol
norepinephrine	yttrium	ethiodol
acetil-kolin gamma-ami no-vajsav Eqvebek sejtfelületi receptor blokkolók	gallium	iodexinol

Terápiásán hatásos az a találmány szerinti készítmény, ahol a hatóanyag a részecskén belül levő vizes fázisban olyan koncentrációban van jelen, mely elegendő ahhoz, hogy kifejtse az előirányzott gyógyhatást. Például, a kívánt gyógyhatás lehet - nem korlátozó jelleggel - kemoterápia, antibiotikum terápia és anyagcsereszabályzás. A pontos dózis olyan tényezőktől függ, mint a gyógyszer jellege és a kívánt gyógyhatás, valamint a betegtől függő szempontok, mint a kor, nem, általános erőnlét és egyéb tényezők. A szakmában jártas szakember könnyen mérlegelni tudja ezeket a szemponto• · kát és felhasználásukkal - felesleges kísérletezgetés nélkül - be tudja állítani a hatásos terápiás koncentrációkat.

Általában azonban a humán alkalmazásnál használatos dózistartomány 0,1-6000 mg/m² testfelület. Egyes adagolásoknál, így szubkután beadásnál, a kívánt dózis egész alacsony, míg egyéb, pl. intraperitoneális beadásnál a dózis igen nagy lehet. Bár használható dózis a fenti tartományon kívül is, ez a dózistartomány felöleli gyakorlatilag az összes biológiailag aktív vegyületet.

Terápiás célra a szintetikus membránrészecskék bármely kívánt úton beadhatók, például intramuszkulárisan, intratekálisan, intraperitoneálisan, szubkután, intravénásán, intralimfatikusan, perorálisan és szubmukozálisan, a legkülönbözőbb epitheliumok, így bronchiális, gastrointestinális, urogenitalis epitheliumok vagy a test különböző nyálkahártyái alá.

Ezenkívül a szintetikus membránrészecskék hasznosíthatók mezőgazdasági célra, műtrágyák, rovarirtók és hasonló anyagok kapszulázására. Mezőgazdasági felhasználásnál a szintetikus membránrészecskéket kipermetezik vagy kiterítik a növénytermesztési földterületre, ahol a részecskékben levő, mezőgazdaságilag hatásos vegyület eső és öntözés hatására felszabadul. Egy további változat szerint a nyújtott hatóanyag-leadású részecskéket az öntözővízbe keverve juttatják a növényekre és az ültetvényre. Gyakorlott szakember könnyen ki tudja választani a mezőgazdaságban hasznosítható vegyület hatásos mennyiségét, mellyel elérhető a kívánt cél, a rovarölés, tápanyagbevitel, stb.

A szintetikus membránrészecskét módosítva, majd célzott szállítórendszerbe beépítve, a szintetikus membránrészecskéknak szerv- vagy sejtspecificitást kölcsönözhetünk. Az ilyen módosításnak különösen akkor van jelentősége, ha a találmány szerinti szintetikus membránrészecskéket olyan gyógyszerek - például taxol - adagolására használjuk, melyek igen toxikusak vagy súlyos mellékhatást okoznak.

A szintetikus membránrészecske irányítása anatómiai vagy mechanikus alapú. Anatómiai irányítás esetén a szintetikus membránrészecskét a szervezet meghatározott helyére irányítjuk, így beszélhetünk szervspecifikus, sejt-specifikus és organella-specifikus célról. Mechanikus irányításnál különbséget tehetünk passzív és aktív irányítás között. A passzív irányításnál kihasználjuk a találmány szerinti szintetikus membránrészecske azon természetes hajlamát, hogy a reticula-endotheliális rendszer (RÉS) sejtjeiben terjed szét, sinusoid kapillárisokat tartalmazó szervekben. Az aktív irányításnál viszont a szintetikus membrán mikrokapszulát irányított szállítórendszerbe építjük be úgy, hogy specifikus ligandumhoz kapcsoljuk - például monoklonális antitesthez, cukorhoz, glikolipidhez, vagy fehérjéhez - vagy megváltoztatjuk a szintetikus membránrészecske összetételét vagy méretét, hogy a lokalizáció természetes helyétől eltérő szerveket és sejttípusokat lehessen célba venni (például Remington's Pharmaceutical Sciences,

Gannaro, A. R., kiadó, Mack Publishing, 18. kiadás 1691-1693, 1990).

Általában a szintetikus membránrészecske felületéhez kötött vegyületek olyan ligandumok és receptorok, melyek lehetővé teszik, hogy a diszperziós rendszer aktívan célba tudja venni a kívánt szövetet. A ligandum lehet bármely aktuális vegyület, mely specifikusan kötődik egy másik vegyülethez - melyet receptornak nevezünk - úgy, hogy a ligandum és a receptor homológ párt képez.

Az irányított szállítórendszer felületét a legkülönbözőbb módon módosíthatjuk. Például lipidcsoportokat építhetünk be a szintetikus membránrészecske kettős lipid rétegébe, hogy az irányító ligandumot stabil kapcsolatban tartsuk a kettős lipid réteggel. Számos csoport használható a lipid láncok és az irányító ligandum összekapcsolására (Mannino és mts., Bio TechniquesQ(7), 682, 1988). A szintetikus membránrészecske felületéhez kapcsolt vegyületek a 125-200 molekulatömegű hapténektől a 6000-es molekulatömegű antigénekig változhatnak, molekulatömegük azonban általá• ···· ·

bán kisebb, mint egy millió. Különleges jelentősége van a fehérje jellegű ligandumoknak és receptoroknak.

Általában azokat a membrán felületén levő fehérjéket, melyek specifikus hatóanyag molekulákat képesek megkötni, receptoroknak nevezzük. A találmányban az előnyös receptorok antitestek. Ezek az antitestek lehetnek monoklonálisak és poliklonálisak vagy ezek fragmensei, így a Fab F(ab j₂, és F_v, melyek kötődni tudnak egy epitóp determinánshoz. Jól ismertek a módszerek, mellyel a fehérjék, így az antitestek is, a szintetikus membrán mikrokapszulához kapcsolhatók (4 806 466 és 4 857 735 számú egyesült államokbeli szabadalmi leírások).

Antitestek használhatók arra, hogy a szintetikus membránrészecskét specifikus sejtfelületi ligandumhoz irányítsuk. Például meghatározott, a daganatsejteken specifikusan expresszált antigének - melyeket tumorhoz aszszociált antigénnek (TAA) nevezünk - felhasználhatunk arra, hogy az antitestet tartalmazó szintetikus membránrészecskét közvetlenül a rosszindulatú daganathoz irányítsuk. Mivel a szintetikus membránrészecskébe beépített készítmény válogatás nélkül hat bármely sejttípusra, az irányított szintetikus membránrészecskék jelentős haladást jelentenek a találomra befecskendezett, nem-specifikus szintetikus membrán mikrokapszulával szemben. Számos eljárás alkalmazható akár a poliklonális, akár a monoklonális antitestek és a szintetikus membránrészecske kettős rétegének kovalens összekapcsolására. Antitesttel irányított szintetikus membránrészecskék tartalmazhatnak monoklonális vagy poliklonális antitesteket vagy ezek fragmenseit, Fab-t vagy F(ab')₂4. amennyiben hatékonyan kötődni tudnak a megcélzott sejtek antigén epitópjaihoz. A szintetikus membránrészecskéket olyan sejtek felé is irányíthatjuk, melyek hormon- vagy egyéb szérumfaktor-receptorokat expresszálnak (Malone és mts., Proc. Nat'l. Acad. Sci., USA. 86. 6077, 1989 és Gregoriadis, Immunology Today H,(3), 89, 1990).

A találmányt - nem korlátozó jelleggel - a következő példákon mutatjuk be.

1. példa

1) lépés.Tiszta üveghengerbe (belső átmérő 2,5 cm, magasság 10,0 cm) 5 ml kloroformos oldatot adagoltunk, mely 46,5 pmol dioleoil-foszfatidil-kolint, 10,5 pmol dipalmitoil-foszfatidil-glicerint, 75 pmól koleszterint és 9,0 pmol trioleint tartalmazott (lipid fázis).

2) lépés. A lipid fázist tartalmazó fenti üveghengerbe 5 ml vizes fázist, 0,136 mol/l-es perklórsavban - egy hatóanyag-leadási sebességet módosító szerben - feloldott cytarabint (20 mg/ml) adtunk. A vizes oldat ozmolaritása 274 ± 20 mOs/kg volt. A többi hatóanyagleadási sebességet módosító szer salétromsav, hangyasav, kénsav, foszforsav, ecetsav, triklór-ecetsav és trifluór-ecetsav - esetében 20 mg/ml-es cytarabin oldatot készítettünk ezekkel a szerekkel, úgy, hogy a vizes oldatok közel izotóniásak legyenek a végső tárolási közeg, t.i. sóoldat (0,9 % nátrium-klorid) vonatkozásában.

3) lépés. Az olajban-víz emulzió készítésére a keveréket homogenizátorban (AutoHomoMixer, Model M, Tokushu Kika, Osaka, Japán) kevertettük 8 percig 9000 fordulat/perc mellett.

4) lépés. A vízben szuszpendált kloroform gyöngyök készítésére 4 % dextrózt és 40 mmol/l lizint tartalmazó oldat 20 ml-ét rárétegeztük az olajban víz emulzió tetejére, majd a kloroform gyöngyök előállítása céljából 60 másodpercig kevertettük 4000 fordulat/perc mellett.

5) lépés. Az üveghengerben levő kloroformos gyöngyszuszpenziót beöntöttük egy 1000 ml-es Erlenmeyer lombik aljába, mely 30 ml vizet, glükózt (3,5 g/100 ml) és szabad bázisú lizint (40 mmol) tartalmazott. 7 l/perc sebességgel nitrogéngázt áramoltattunk a lombikon keresztül, mely 37 C°-on 20 perc alatt lassan elpárologtatta a kloroformot. Ekkor 60 ml sóoldatot (0,9 %) adagoltunk a lombikba, majd 10 percig 600 g-n centrifugálva izoláltuk a

szintetikus membránrészecskéket. A felülúszót dekantáltuk és a pelleteket újraszuszpendáltuk 50 ml sóoldatban (0,9 %). A pelleteket újra felszuszpendáltuk a sóoldatban úgy, hogy a szuszpenzióban a végső koncentráció 10 mg/ml cytarabine legyen.

A kapott szintetikus membránrészecske szemcsék hosszúsággal súlyozott átlag átmérője a 12-16 mikrométeres tartományban volt. A százalékos cytarabine megkötést a 2. táblázatban adtuk meg.

A különböző hatóanyag-leadást módosító szerek alkalmazása jelentős hatással volt az emberi plazmában inkubált szintetikus membránrészecskékből történő cytarabine felszabadulás sebességére. Az 1. ábra mutatja be a 37 C°-on emberi plazmában inkubált szintetikus membránrészecskékben visszatartott százalékos cytarabine mennyiségét az inkubációs idő függvényében, különböző savak esetén. A 2. táblázat mutatja a gyógyszerleadás felezési idejét az 1. ábra adataira számítva - egyféle exponenciális modellt feltételezve. A 2. táblázat adatai három kísérlet átlagát és szórását jelentik.

2. táblázat

Sav	Cytarabine bezá- rás %	Cytarabine felszabadulás felezési ideje napban	Jelzés az 1. ábrán

Sósav	49 ±5	65,7 ± 4,4	♦
Perklórsav	45 ±5	37,2 ±8,0	▼
Salétromsav	44 ±3	54,5 ± 5,7
Foszforsav	72 ± 1	6,5 ±0,2	A
Savmentes	46 ±2	5,3 ±0,5	•
Hangyasav	37 ±2	5,6 ± 0,2	0
Triklór-ecetsav	29 ± 1	5,5 ± 0,6	V
Ecetsav	30 ±2	4,8 ± 0,5	□
Trifluór-ecetsav	35 ±1	3,4 ± 0,4	Δ
Kénsav	57 ±4	1,6 ±0,5	O

Meglepő és váratlan, hogy milyen jelentős hatást gyakorolt a sav jellege az emberi plazmában a cytarabine leadás sebességére. Egyértékű szervetlen savak, mint a sósav, salétromsav és perklórsav eredményezték a legkisebb cytarabine leadási sebességet, míg a két- és háromértékű savak, mint a kénsav és foszforsav, a leggyorsabb leadást. Szerves savak - a hangyasav, ecetsav, trifluór-ecetsav és triklór-ecetsav - szintén gyors hatóanyagleadást eredményeztek.

Tehát a találmány tárgyát képezik széleskörűen alkalmazható és hasznosítható depó készítmények, melyek viszonylag nagy mennyiségben tartalmaznak bezárt biológiailag aktív anyagokat és amelyek az optimális hatás elérése céljából tartós érintkezést vagy odaszállítást tudnak biztosítani ezen anyagok terápiás koncentrációinak és amelyekben az anyagok leadásának sebessége a formulációban alkalmazott sav típusával szabályozható.

A találmány jól adaptálható és alkalmas ezen célok biztosítására és a benne felsorolt előnyökkel és jellegzetességekkel rendelkezik.

A találmány előnyös kivitelezési formáit a találmányi bejelentés céljára adtuk meg ugyan, de a találmány szellemében, az igénypontok oltalmi körén belül változtatások eszközölhetők.

Claims

Szabadalmi igénypontok

1. Szintetikus membránrészecskéket tartalmazó készítmény, mely számos kétréteges lipid membránok közé zárt nem koncentrikus, vizes kamrákból áll, melyek egy vagy több biológiailag aktív anyagot és egy vagy több nem hidrogén-halogenid típusú hatóanyag-leadási sebességet módosító szert zárnak magukba.
2. Az 1. igénypont szerinti készítmény, melyben a hatóanyagleadási sebességet módosító szer salétromsav, perklórsav, hangyasav, kénsav, foszforsav, ecetsav, triklór-ecetsav és trifluór-ecetsav, valamint ezek sói vagy kombinációi.
3. Az 1. igénypont szerinti készítmény, melyben a hatóanyagleadási sebességet módosító szer egy egyértékű szervetlen sav.
4. A 2. igénypont szerinti készítmény, melyben a savakat protonakceptorral semlegesítjük.
5. Az 1. igénypont szerinti készítmény, melyben a biológiailag aktív anyag gyógyszer.
6. Az 1. igénypont szerinti készítmény, melyben a biológiailag aktív anyag antibiotikum, vakcina, vírus-, gomba- vagy daganatellenes gyógyszer, fehérje vagy glikoprotein.
7. A 6. igénypont szerinti készítmény, melyben a daganatellenes gyógyszer cytarabine.
8. Az 1. igénypont szerinti készítmény, melyben a biológiailag aktív anyag gyomirtó- vagy rovarirtószer.
9. Irányított szállítórendszer, mely olyan 1. igénypont szerinti készítményt tartalmaz, melyhez irányító ligandum van kapcsolva.
10. A 9. igénypont szerinti irányított szállítórendszer, melyben az irányító ligandum antitest vagy annak fragmense.

• · · · · • · · ·· * • · ···· · · · «· · ·· ·♦· »·
11. A 9. igénypont szerinti irányított szállítórendszer, melyben az antitest egy monoklonális antitest.
12. A 9. igénypont szerinti irányított szállítórendszer, melyben a lipid csoport a szintetikus membránrészecske kettős lipid rétegébe van beépítve.
13. Az 1. igénypont szerinti készítmény, melyben a szintetikus membránrészecske anatómiailag irányított.
14. Az 1. igénypont szerinti készítmény, melyben a szintetikus membránrészecske mechanikusan irányított.
15. Az 1. igénypont szerinti készítmény, melyben a szintetikus membránrészecske passzívan irányított.
16. Az 1. igénypont szerinti készítmény, melyben a szintetikus membránrészecske aktívan irányított.
17. Az 16. igénypont szerinti készítmény, melyben a szintetikus membránrészecske aktívan irányított olymódon, hogy egy cukorral, glikolipiddel vagy fehérjével van összekapcsolva.
18. Az 1. igénypont szerinti szintetikus membránrészecske, melyet a következő módszerrel állítunk elő:

a) olajban-víz emulziót képezünk két nem elegyedő komponensből, melyek legalább egy szerves oldószert, vizet, legalább egy biológiailag aktív anyagot és legalább egy nem hidrogén-halogenid típusú hatóanyag-leadási sebességet módosító szert tartalmaznak,

b) oldószergyöngyök képzésére az olajban-víz emulziót diszpergáljuk egy vizes komponensben, és

c) a szintetikus membránrészecske előállítására eltávolítjuk a szerves oldószert az oldószergyöngyökből.
19. Eljárás szintetikus membránrészecske előállítására, azzal jellemezve, hogy

a) olajban-víz emulziót képezünk két nem elegyedő komponensből, melyek legalább egy szerves oldószert, vizet, legalább egy biológiailag aktív • · • · · ·« · ···· • ······ ·· ·· s· · ·· · ·* anyagot és legalább egy hatóanyag-leadási sebességet módosító, nem hidrogén-halogenid típusú szert tartalmaznak,

b) oldőszergyöngyök képzésére az olajban-víz emulziót diszpergáljuk egy vizes komponensben, és

c) a vízcseppeket és benne oldva a biológiailag aktív anyagot és a hatóanyagleadási sebességet módosító szert tartalmazó a szintetikus membránrészecske előállítására eltávolítjuk a szerves oldószert az oldószergyöngyökből.
20. A 19. igénypont szerinti eljárás, azzal jellemezve, hogy a nem hidrogén-halogenid típusú hatóanyag-leadási sebességet módosító szert kb.

0,1 és 0,5 mmol/l koncentrációban alkalmazzuk.
21. A 19. igénypont szerinti eljárás, azzal jellemezve, hogy a b) lépésben beadagolt savsemlegesítő szert kb. 0,1 mmol/l - 0,5 mol/l koncentrációban alkalmazzuk.
22. A 19. igénypont szerinti eljárás, azzal jellemezve, hogy olyan szerves oldószert alkalmazunk, mely oldott lipid komponenst tartalmaz, mely legalább egy amfipatikus, összességében negatív töltésű lipidet és legalább egy semleges lipidet tartalmaz.
23. A 22. igénypont szerinti eljárás, azzal jellemezve, hogy a lipid komponensként egy foszfolipidet vagy foszfolipidek keverékét alkalmazzuk.
24. A 23. igénypont szerinti eljárás, azzal jellemezve, hogy a foszfolipidet a következők közül választjuk: foszfatidil-kolin, cardiolipin, foszfatidil-etanol-amin, sphyngomyelin, lizo-foszfatidil-kolin, foszfatidil-szerin, foszfatidil-inozit, foszfatidil-glicerin vagy foszfatidilsav.
25. A 24. igénypont szerinti eljárás, azzal jellemezve, hogy olyan foszfatidil-lipideket alkalmazzuk, melyek közül legalább egynek 1 nettó negatív töltése van.
26. A 24. igénypont szerinti eljárás, azzal jellemezve, hogy a foszfolipidet a koleszterinhez keverve adagoljuk.

• · tr *
27. A 24. igénypont szerinti eljárás, azzal jellemezve, hogy a foszfolipidet a sztearil-aminhoz keverve adagoljuk.
28. A 22. igénypont szerinti eljárás, azzal jellemezve, hogy a lipofil, biológiailag aktív anyagot a lipid komponenshez keverve adagoljuk.
29. A 22. igénypont szerinti eljárás, azzal jellemezve, hogy a semleges lipidet a következők közül választjuk: trióiéin, trioctanoin, növényi olaj, sertészsír, marhazsír, tocopherol vagy ezek keveréke.
30. A 19. igénypont szerinti eljárás, azzal jellemezve, hogy a szerves oldószert a következők közül választjuk: éter, szénhidrogén, halogénezett szénhidrogén, halogénezett éter, észter vagy ezek keveréke.
31. A 19. igénypont szerinti eljárás, azzal jellemezve, hogy a biológiailag aktív anyagként hidrofil anyagot alkalmazunk.
32. A 19. igénypont szerinti eljárás, azzal jellemezve, hogy az emulziót mechanikus vagy ultrahangos keveréssel vagy fuvókás atomizálással képezzük.
33. A 32. igénypont szerinti eljárás, azzal jellemezve, hogy a szintetikus membránrészecske átlagos méretét és az általa bezárt vizes kamrák számát a választott emulgeálási módszer típusa, intenzitása és időtartama alapján határozzuk meg.
34. A 19. igénypont szerinti eljárás, azzal jellemezve, hogy hatóanyag-leadás sebességét módosító szerként egy egyértékű szervetlen savat alkalmauzunk, és olyan vizes komponenst alkalmazunk, mely legalább egy semlegesítő szert tartalmaz.
35. A 34. igénypont szerinti eljárás, azzal jellemezve, hogy a semlegesítő szerként szabad bázisú lizint, szabad bázisú hisztidint, vagy ezek kombinációját alkalmazzuk.
36. A 34. igénypont szerinti eljárás, azzal jellemezve, hogy a vizes komponensként egy szénhidrátokat vagy aminosavakat tartalmazó vizes oldatot alkalmazunk.

• · · · · · • · · • · · « t ······ ?
37. A 34. igénypont szerinti eljárás, azzal jellemezve, hogy a vizes komponenst a következők közül választjuk ki: glükóz, szaccharóz, laktóz, szabad bázisú lizin, szabad bázisú hisztidin vizes oldata vagy ezek kombinációja.
38. A 19. igénypont szerinti eljárás, azzal jellemezve, hogy az oldószergyöngyöket mechanikus vagy ultrahangos keveréssel, fuvókás atomizálással vagy ezek kombinációjával állítjuk elő.
39. A 38. igénypont szerinti eljárás, azzal jellemezve, hogy a szintetikus membránrészecske átlagméretét az alkalmazott keverés típusa, intenzitása és ideje alapján határozzuk meg.
40. A 19. igénypont szerinti eljárás, azzal jellemezve, hogy a szerves oldószert a vizes komponens fölé áramoltatott gáz segítségével távolítjuk el.
41. A 19. igénypont szerinti eljárás, azzal jellemezve, hogy a biológiailag aktív anyagot a következők közül választjuk: asztma ellenes szer, szivglikozid, vérnyomáscsökkentő szer, parazitaellenes szer, nukleinsav és analógjai, antibiotikum, vakcina, antiarrythmiás szer, antianginás szer, hormon, antidiabetikum, antineoplasztikus szer, immunmodulátor, gombaellenes szer, csillapítószer, szteroid, nyugtató- és fájdalomcsillapító szer, vasopressor, vírusellenes szer, monoklonális antitest, gyomirtó, rovarirtó, fehérje és glikoprotein, neurotransmitter, radionuclid, radiokontraszt anyag vagy ezek kombinációja.