ES2657014T9 - Péptidos citotóxicos y conjugados de fármaco anticuerpo de los mismos - Google Patents

Péptidos citotóxicos y conjugados de fármaco anticuerpo de los mismos Download PDF

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Description

d e s c r ip c io n
Peptidos citotoxicos y conjugados de farmaco anticuerpo de Ios mismos
Campo de la invencion
La presente invencion se dirige a nuevos compuestos a base de peptidos utiles como cargas utiles en Ios conjugados farmaco-anticuerpo (ADC) y compuestos utiles de carga util-engarce junto con Ios ADC. La presente invencion se refiere ademas a composiciones que incluyen las cargas utiles anteriormente mencionadas, a cargas utiles-engarces y ADC y a procedimientos para usar estas cargas utiles, cargas utiles-engarces y ADC, para tratar afecciones patologicas incluyendo cancer.
Antecedentes
La conjugacion de farmacos a anticuerpos, bien directamente o bien a traves de engarces, implica una consideracion de una diversidad de factores, incluyendo la identidad y la localizacion del grupo qmmico para la conjugacion del farmaco, el mecanismo de liberacion del farmaco, Ios elementos estructurales que proporcionan la liberacion del farmaco y la modificacion estructural al farmaco libre liberado. Ademas, si el farmaco ha de liberarse despues de la internalizacion de Ios anticuerpos, el mecanismo de liberacion del farmaco debe ser consonante con el trafico intracelular del conjugado.
Aunque se ha intentado un numero de diferentes clases de farmacos para el transporte a traves de Ios anticuerpos, solamente unas pocas clases de farmacos han demostrado ser efectivos como conjugados de farmaco anticuerpo, teniendo un perfil de toxicidad adecuado. Una de dichas clases son las auristatinas, derivados del producto natural dolastatina 10. Las auristatinas representativas incluyen (N-metilvalina-valina-dolaisoleucin-dolaproin-norefedrina) y (N-metilvalina-valina-dolaisoleucin-dolaproin-fenilalanina). Sin embargo, se mantiene una necesidad de auristatinas adicionales con propiedades mejoradas.
Sumario
La presente invencion se refiere a pentapeptidos citotoxicos y conjugados de anticuerpo farmaco de Ios mismos representados por la formula:
Figure imgf000002_0001
o una de sus sales o solvatos farmaceuticamente aceptables, en la que, independientemente cada vez que esta presente, W es
Figure imgf000002_0002
es un engarce o anticuerpo de engarce, tal como
Figure imgf000003_0001
Y es -alquileno C2-C20-, -heteroalquileno C2-C20-, carbociclo C3-C8-, -arileno-, -heterociclo C3-C8-, -alquilen C1-C10-arileno-, -arileno-alquileno C1-C10-, -alquilen C1-C10-(carbociclo C3-C8)-, -(carbociclo C3-C8)-alquileno C1-C10-, -alquilen C1-C10-(heterociclo C3-C8)- 0 -(heterociclo C3-C8)-alquileno C1-C10-;
Z es
Figure imgf000003_0002
G es halogeno, -OH, -SH 0 -S-alquilo C1-C6;
L es un anticuerpo;
R2 es hidrogeno, alquilo C1-C80 haloalquilo C1-C8;
r 3A y r 3B se definen como cualquiera de los siguientes:
(i) R3A es alquilo C1-C8, haloalquilo C1-C8, carbociclilo C3-C80 halogeno; y
R3B es alquilo C1-C8, haloalquilo C1-C8, carbociclilo C3-C80 halogeno; 0
(ii) R3A y R3B tomados Juntos son alquileno C2-C8, dicho alquileno C2-C8 cuando se toma Junto con el carbono al que esta enlazado, forma un anillo carbodclico saturado; 0 heteroalquileno C1-C8, dicho heteroalquileno C1-C8, Junto con el carbono al que esta enlazado, forma un anillo heterodclico saturado;
R5 es
Figure imgf000004_0001
heterociclilo Ci-Cio, carbociclilo C3-C8 y arilo C6-C14 opcionalmente sustituido con 1, 2, 3, 4 0 5 grupos seleccionados independientemente entre el grupo que consiste en -alquilo Ci-C8, -alquil Ci -C8-N(R')2, -alquil Ci -C8-C(O)R', -alquil Ci -C8-C(O)R' -0-(alquilo Ci -C8), -C(0)R', -0C(0)R', -C(0)0R', -C(O)N(R')2, -NHC(0)R', -S(0 )2R', -S(0)R', -Oh , halogeno, -N3, -N(R')2, -CN, -NHC(=NH)NH2, -NHCONH2, -S(=0 )2R' y -SR', en los que cada R' se selecciona independientemente entre el grupo que consiste en hidrogeno, alquilo C1-C8 y arilo no sustituido, 0 dos R' pueden, Junto con el nitrogeno al que estan unidos, forman un heterociclilo C1-C10; 0 R5 es
Figure imgf000004_0002
opcionalmente sustituido con 1, 2, 3, 4 0 5 grupos seleccionados independientemente entre el grupo que consiste en alquilo C1-C8, -alquil C1-C8-N(R')2, -alquil C1-C8-C(0 )R', -alquil C1-C8-C(O)0 R', -0-(alquilo C1-C8), -C(0)R', -0C(0)R', -C(0)0R', -C(0)N(R')2, -NHC(0)R', -S(0)2R', -S(0)R', -OH, halogeno, -N3, -N(R>, -CN, -NHc (=NH)n H2, -Nh Co NH2, -S(=0)2R', -Sr ' y arileno-R', en los que cada R' se selecciona independientemente entre el grupo que consiste en hidrogeno, alquilo C1-C8, heterociclilo C1-C8, alquilen C1-C10-heterociclilo C3-C8 y arilo, 0 dos R' pueden, Junto con el nitrogeno al que estan unidos, forman un heterociclilo C1-C10;
R6 es hidrogeno, -alquilo C1-C8, -alquenilo C2-C8, -alquinilo C2-C80 -haloalquilo C1-C8;
R12 es hidrogeno, alquilo C1-C4, heterociclilo C1-C100 arilo C6-C14;
R13 es heterociclilo C1-C10; y
R7 es F, Cl, I, Br, NO2, CN y CF3;
h es 1,2, 3, 405; y
X es O
La presente invencion se refiere a pentapeptidos citotoxicos y conjugados de anticuerpo farmaco de Ios mismos representados por la formula:
Figure imgf000005_0001
o una de sus sales o solvatos farmaceuticamente aceptables, en la que, independientemente cada vez que esta presente, W es
Figure imgf000005_0002
R1 es hidrogeno, alquilo C i-C 8 o haloalquilo C i -C8;
R2 es hidrogeno, alquilo C i-C 8 o haloalquilo C i -C8;
r 3A y r 3B se definen como cualquiera de Ios siguientes:
(i) R 3A es alquilo C i -C 8, haloalquilo C i-C 8, carbociclilo C3-C8, C i o halogeno; y
R3B es alquilo C i-C 8, haloalquilo C i-C 8, carbociclilo C3-C80 hidrogeno; 0
(ii) R3A y R3B tomados juntos son alquileno C2-C8, dicho alquileno C2-C8 cuando se toma junto con el carbono al que esta enlazado, forma un anillo carbodclico saturado; 0 heteroalquileno C i -C8, dicho heteroalquileno C i -C8, junto con el carbono al que esta enlazado, forma un anillo heterodclico saturado;
R5 es
Figure imgf000005_0003
opcionalmente sustituido con 1, 2, 3, 405 grupos seleccionados independientemente entre el grupo que consiste en alquilo C1-C8, -0-(alquilo C1-C8), -C(0)R', -0C(0)R', -C(0)0R', -C(0)NH2, -C(0)NHR', -C(0)N(R')2, -NHC(0)R', -S(0 )2R', -S(0)R', -OH, halogeno, -N3, -NH2, -NH(R'), -N(R')2, -CN, -NHC(=NH)NH2, -NHCONH2, -S(=0 )2R' y -SR', en Ios que cada R' se selecciona independientemente entre el grupo que consiste en hidrogeno, alquilo C1-C8 y arilo no sustituido;
R11 es hidrogeno, alquilo C i-C8, haloalquilo C i-C8 o R11 es un engarce o un anticuerpo de engarce, tal como
Figure imgf000006_0001
Y es alquileno C2-C20 0 heteroalquileno C2-C20; carbociclo C3-C8-, -arileno-, -heterociclo C3-C8-, -alquilen C1-C arileno-, -arileno-alquileno C1-C10-, -alquilen C1-C10-(carbociclo C3-C8)-, -(carbociclo C3-C8)-alquileno C1-C10-, -alquilen C1-C10-(heterociclo C3-C8)- 0 -(heterociclo C3-C8)-alquileno C1-C10-;
Z es
Figure imgf000006_0002
-NH20 -NHL;
G es halogeno, -OH, -SH 0 -S-alquilo C1-C6;
L es un anticuerpo;
R7 es F, Cl, I, Br, NO2, CN y CF3;
h es 1,2, 3, 405; y
X es O.
Otro aspecto de la invencion se refiere a composiciones farmaceuticas que incluyen una cantidad eficaz de uno cualquiera de los compuestos anteriormente mencionados y/o uno cualquiera de los conjugados farmaco anticuerpo anteriormente mencionados y un transportador 0 vehteulo farmaceuticamente aceptable.
Otro aspecto de la invencion se refiere a los compuestos anteriormente mencionados y/o uno cualquiera de los conjugados farmaco anticuerpo anteriormente mencionados para su uso en el tratamiento de cancer administrando a un paciente en necesidad de la misma una cantidad de dicho compuesto y/o conjugado.
Otro aspecto de la invencion se refiere a Ios compuestos anteriormente mencionados y/o uno cualquiera de Ios conjugados farmaco anticuerpo anteriormente mencionados para su uso en el tratamiento de cancer en el que dicho cancer incluye un tumor, metastasis u otra enfermedad o trastorno caracterizados por el crecimiento celular descontrolado en el que dicho cancer se selecciona del grupo que consiste en carcinomas de la vejiga, mama, cuello de utero, colon, gliomas, endometrio, rinon, pulmon, esofago, ovario, prostata, pancreas, melanoma, estomago y testfculos.
Breve descripcion de las fiauras
La Fiaura 1 representa un grafico de la actividad antitumoral de cuatro conjugados (cada uno administrado a 1 mg/kg, Q4dx4) representado como volumen tumoral en el tiempo.
La Fiaura 2 representa un grafico de la actividad antitumoral de seis conjugados (cada uno administrado a 1 mg/kg, Q4dx4) representado como volumen tumoral tratado con farmaco/volumen tumoral tratado con vedculo en el tiempo.
La Fiaura 3 representa Ios resultados del ensayo de H(C)-#D54 y H(C)-vcMMAE a 1 mg/kg s
Las fiauras 4A, 4B y 4C representan[A] Ios resultados del ensayo de H(C)-#D54 y H(K)-MCC-DM1 en un modelo de deteccion in vivo de xenoinjerto de raton MDA-MB-361-DYT2; [B] Ios resultados del ensayo de H(C)-vcMMAE y H(C)-iticMMAF en un modelo de deteccion in vivo de xenoinjerto de raton MDA-MB-361-DYT2; y [C] una comparacion de T/C calculado para Ios cuatro conjugados. Los ratones se trataron con q4dx4, empezando el d^ a 1.
Las fiauras 5A, 5B, 5C, 5D, 5E y 5F representan Ios resultados de respuesta a dosis del ensayo de [A ] H(C)-#D54, [B] H(C)-vcMMAE, [C] H(C)-itc m Ma F y [D] H(K)-MCC-DM1 en un modelo in vivo de xenoinjerto de raton N87; [E] una comparacion de H(C)-#D54 y H(C)-vcMMAE; y [F] una comparacion de T/C calculado para Ios cuatro conjugados. Los ratones se trataron con q4dx4, empezando el dfa 1.
La Fiaura 6 representa Ios resultados de respuesta a dosis del ensayo de H(C)-#A115 a 1 mpk, 3 mpk y 10 mpk, en un modelo in vivo de xenoinjerto de raton N87. Los ratones se trataron con q4dx4, empezando el dfa 1.
La Fiaura 7 muestra datos que comparan el anticuerpo hu08 humanizado conjugado a vc-0101 o mc-3377, ensayados en un modelo in vivo de xenoinjerto con celulas PC3MM2, una lmea celular de cancer de prostata humano que expresa el receptor IL-13Rci2.
Las Fiauras 8A a E muestran[A ] la efectividad de ADC anti-Notch quimericos de rata-humano dosificados a 5mg/kg en xenoinjertos de pulmon HCC2429; [B y C] la efectividad de ADC anti-Notch quimericos de ratahumano dosificados a 5mg/kg en xenoinjertos de mama MDA-MB-468; [D y E] la efectividad de ADC anti-Notch quimericos de rata-humano dosificados a 5mg/kg en xenoinjertos gastricos N87.
Descripcion detallada
La presente invencion se dirige a pentapeptidos citotoxicos, a conjugados de farmaco anticuerpo que comprenden dichos pentapeptidos citotoxicos y a procedimientos para el uso de Ios mismos para tratar cancer y otras afecciones patologicas. La invencion se refiere tambien a procedimientos para el uso de dichos compuestos y conjugados in vitro, in situ e in vivo para la deteccion, el diagnostico o el tratamiento de celulas de marnfferos, o afecciones patologicas asociadas.
Definiciones y abreviaturas
Salvo que se indique Io contrario, pueden usarse Ios siguientes terminos y frases en el presente documento y se destinan a tener Ios siguientes significados. Cuando se usan marcas comerciales en el presente documento, la marca comercial incluye la formulacion del producto, el farmaco generico y el principio o principios farmaceuticos activos del producto de la marca comercial, salvo que se indique Io contrario por contexto.
El termino "anticuerpo" (o "Ac") en el presente documento en el sentido mas amplio y espedficamente abarca anticuerpos monoclonales intactos, anticuerpos policlonales, anticuerpos monoespedficos, anticuerpos multiespedficos (por ejemplo, anticuerpos biespedficos) y fragmentos de anticuerpo que exhiben la actividad biologica deseada. Un anticuerpo intacto tiene principalmente dos regiones: una region variable y una region constante. La region variable se une a e interacciona con un antfgeno diana. La region variable incluye una region determinante de la complementariedad (CDR) que reconoce y se une a un sitio de union espedfico en un antfgeno particular. La region constante puede reconocerse por e interaccionar con el sistema inmune (vease, por ejemplo, Janeway y coI., 2001, Immuno. Biology, 5a Ed., Garland Publishing, Nueva York). Un anticuerpo puede ser de cualquier tipo o clase (por ejemplo, IgG, IgE, IgM, IgD e IgA) o subclase (por ejemplo, IgG, lgG2, lgG3, lgG4, IgAI e lgA2). El anticuerpo puede derivar de cualquier especie adecuada. En algunas realizaciones, el anticuerpo es de origen humano o murino. Un anticuerpo puede ser, por ejemplo, humano, humanizado o quimerico.
Las expresiones "se une espedficamente" y "union espedfica" se refieren a la union de un anticuerpo a un antfgeno predeterminado. Tfpicamente, el anticuerpo se une con una afinidad de al menos aproximadamente 1x107 M-1 y se une al antigeno predeterminado con una afinidad que es al menos dos veces mayor que su afinidad por la union a un antfgeno no espedfico (por ejemplo, BSA, casema) distinto del antigeno predeterminado o un antigeno estrechamente relacionado.
La expresion "anticuerpo monoclonal" como se usa en el presente documento se refiere a un anticuerpo obtenido a partir de una poblacion de anticuerpos sustancialmente homogeneos, es decir, los anticuerpos individuales que comprenden la poblacion son identicos excepto por posibles mutaciones de origen natural que pueden estar presentes en cantidades minoritarias. Los anticuerpos monoclonales son altamente espedficos, dirigiendose contra un unico sitio antigenico. El modificador "monoclonal" indica el caracter del anticuerpo obteniendose a partir de una poblacion sustancialmente homogenea de anticuerpos, y no ha de construirse requiriendo la produccion del anticuerpo por ningun procedimiento particular.
La expresion "anticuerpos monoclonales" incluye espedficamente anticuerpos "quimericos" en los que una porcion de la cadena pesada y/o ligera es identica a, u homologa a la secuencia correspondiente de anticuerpos derivados de una especie particular o que pertenecen a una clase o subclase de anticuerpo particular, mientras que lo que queda de la cadena o cadenas es identico a, u homologo a las secuencias correspondientes de anticuerpos derivados de otras especies o que pertenecen a otra clase o subclase de anticuerpos, asf como fragmentos de tales anticuerpos, siempre que exhiban la actividad biologica deseada.
Como se usa en el presente documento, "H(C)-" se refiere a trastuzumab (marca comercia1HERCEPTIN®) que es un anticuerpo monoclonal que interfiere con el receptor HER2/neu, unido a traves de una de sus cistemas al compuesto de la invencion. Como se usa en el presente documento, "H(K)-" se refiere a trastuzumab que es un anticuerpo monoclonal que interfiere con el receptor HER2/neu, unido a traves de una de sus lisinas al compuesto de la invencion.
Un "anticuerpo intacto" es uno que comprende una region variable de union a antfgeno asf como un dominio constante de cadena ligera (Ci) y dominios constantes de cadena pesada, Chi, Ch2, Ch3 y Ch4, segun sea apropiado para la clase de anticuerpo. Los dominios constantes pueden ser dominios constantes de secuencia nativa (por ejemplo, dominios constantes de secuencia nativa humana) o variantes de secuencias de aminoacidos de los mismos.
Un anticuerpo intacto puede tener una o mas "funciones efectoras", que se refiere a aquellas actividades biologicas atribuibles a la region Fc (por ejemplo, una region Fc de secuencia nativa o una region Fc variante de secuencia de aminoacidos) de un anticuerpo. Los ejemplos de las funciones efectoras de anticuerpos incluyen la citotoxicidad dependiente de complemento, la citotoxicidad mediada por celulas dependientes de anticuerpos (ADCC) y fagocitosis mediada por celulas dependiente de anticuerpo.
Un "fragmento de anticuerpo" comprende una porcion de un anticuerpo intacto, que comprende preferentemente la region de union a antfgeno o la variable del mismo. Los ejemplos de fragmentos de anticuerpo incluyen fragmentos Fab, Fab', F(ab')2 y Fv, diacuerpos, triacuerpos, tetracuerpos, anticuerpos lineales, molecula de anticuerpos de cadena simple, scFv, scFv-Fc, fragmentos de anticuerpo multiespedficos formados a partir de fragmento o fragmentos de anticuerpo, un fragmento o fragmentos producidos por una biblioteca de expresion de Fab o unos fragmentos de union a epftopo de cualquiera de los anteriores que se unen inmunoespedficamente a un antfgeno diana (por ejemplo, un antfgeno de celula cancerosa, un antfgeno vmco o un antfgeno microbiano).
El termino "variable" en el contexto de un anticuerpo se refiere a ciertas porciones de los dominios variables del anticuerpo que difieren extensamente en secuencia y se usan en la union y la especificidad de cada anticuerpo particular para su antfgeno particular. Esta variabilidad se concentra en tres segmentos denominados "regiones hipervariables" en los dominios variables de la cadena ligera y la cadena pesada. Las porciones mas altamente conservadas de dominios variables se denominan las regiones marco (FR, por sus siglas en ingles). Los dominios variables de las cadenas pesadas y ligeras nativas comprenden cada una cuatro FR conectadas por tres regiones hipervariables.
La frase "region hipervariable" cuando se usa en el presente documento se refiere a los restos de aminoacidos de un anticuerpo que son responsables de la union a antfgeno. La region hipervariable comprende generalmente restos de aminoacidos de una "region determinante de la complementariedad" o "CDR" (por ejemplo, los restos 24-34 (L1), 50­ 56 (L2) y 89-97 (L3) en el dominio variable de cadena ligera y 31-35 (H1), 50-65 (H2) y 95-102 (L3) en el dominio variable de cadena pesada; Kabat y col. (Sequences of Proteins of Immunological Interest, 5a Ed. Public Health Service, National Institutes of Health, Bethesda, Md. (1991)) y/o aquellos restos de un "bucle hipervariable" (por ejemplo, restos 26-32 (L1), 50-52 (L2) y 91-96 (L3) en el dominio variable de cadena ligera y 26-32 (H1), 53-55 (142) y 96-101 (H3) en el dominio variable de cadena pesada; Chothia y Lesk, 1987, J. Mol. Biol. 196:901-917). Los restos FR son aquellos restos de dominio variable distintos de los restos de la region hipervariable como se define en el presente documento.
Un fragmento de anticuerpo "Fv de cadena sencilla" o "scFv" comprende los dominios V.sub.H y V.sub.L de un anticuerpo, en el que estos dominios estan presentes en una unica cadena de polipeptido. ^picamente, el polipeptido Fv comprende ademas un engarce polipeptfdico entre Ios dominios V.sub.H y V.sub.L que permite que el scFv forme la estructura deseada para la union de antigeno. Para una revision de scFv, vease Pluckthun en The Pharmacology of Monoclonal Antibodies, voI. 113, Rosenburg y Moore eds., Springer-Verlag, Nueva York, pags.
269-315 (1994).
El termino "diacuerpo" se refiere a pequenos fragmentos de anticuerpo con dos sitios de union a antfgeno, cuyos fragmentos comprenden un dominio pesado variable (Vh) conectado a un dominio ligero variable (Vi) en la misma cadena de polipeptido. Usando un engarce que es demasiado corto para permitir el apareamiento entre los dos dominios en la misma cadena, los dominios se fuerzan a aparearse con los dominios complementarios de otra cadena y crean dos sitios de union a antigeno. Los diacuerpos se describen mas completamente en, por ejemplo, el documento EP 0404097; documento WO 93/11161; y Hollinger y coI., 1993, Proc. Natl. Acad. Sci. e E.UU. 90:6444­ 6448.
Las formas "humanizadas" de anticuerpos no humanos (por ejemplo, roedores) son anticuerpos quimericos que contienen una secuencia mmima derivada de inmunoglobulina no humana. Para la mayor parte, los anticuerpos humanizados son inmunoglobulinas humanas (anticuerpo receptor) en cuyos restos de una region hipervariable del receptor se reemplazan por restos de una region hipervariable de una especie no humana (anticuerpo donante) tales como raton, rata, conejo o primate no humano que tiene la especificidad, la afinidad y la capacidad deseadas. En algunos casos, los restos de la region marco (FR) de la inmunoglobulina humana se reemplazan por restos no humanos correspondientes. Por otro lado, los anticuerpos humanizados pueden comprender restos que no se encuentran en el anticuerpo receptor o en el anticuerpo donante. Estas modificaciones se realizan para refinar ademas el rendimiento del anticuerpo. En general, el anticuerpo humanizado comprendera sustancialmente todos de al menos uno y tipicamente dos, dominios variables, en los que todos o sustancialmente todos los bucles hipervariables corresponden a aquellos de una inmunoglobulina no humana y todas o sustancialmente todas las FR son aquellas de una secuencia de inmunoglobulina humana. El anticuerpo humanizado comprendera opcionalmente al menos una porcion de una region constante de inmunoglobulina (Fc), tfpicamente aquella de una inmunoglobulina humana. Para detalles adicionales, vease Jones y coI., 1986, Nature 321:522-525; Riechmann y coI., 1988, Nature 332:323-329; y Presta, 1992, Curr. Op. Struct. Biol. 2:593-596.
Como se usa en el presente documento, "aislado" significa separado de otros componentes de (a) una fuente natural, tales como una celula vegetal o animal o un cultivo celular, o (b) una mezcla de reaccion qmmica organica sintetica. Como se usa en el presente documento, "purificado" significa que cuando se afsla, el aislado contiene al menos un 95 % y en otro aspecto al menos un 98 %, de un compuesto (por ejemplo, un conjugado) en peso del aislado.
Un anticuerpo "aislado" es uno que se ha identificado y separado y/o recuperado de un componente de su medio natural. Los componentes contaminantes de su medio natural son materiales que interferinan con los usos diagnosticos o terapeuticos para el anticuerpo y pueden incluir enzimas, hormonas y otros solutos proteicos o no proteicos. En realizaciones preferidas, el anticuerpo se purificara (1) a mas del 95 % en peso de anticuerpo segun se determina por el procedimiento de Lowry y mas preferentemente mas del 99 % en peso, (2) a un grado suficiente para obtener al menos 15 restos de secuencia de aminoacidos W-terminales o internos mediante el uso de un secuenciador de copa de giro o (3) a homogeneidad por SDS-PAGE en condiciones reductoras o no reductoras usando azul Coomassie o, preferentemente, tincion de plata. El anticuerpo aislado incluye el anticuerpo in situ dentro de las celulas recombinantes ya que al menos un componente del ambiente natural del anticuerpo no estara presente. De forma ordinaria, sin embargo, el anticuerpo aislado se preparara por al menos una etapa de purificacion.
Un anticuerpo que "induce apoptosis" es uno que induce la muerte celular programada segun se determina por la union de la anexina V, la fragmentacion de ADN, la contraccion celular, la dilatacion del retfculo endoplasmatico, la fragmentacion y/o la formacion de las vesfculas de membrana (denominados cuerpos apoptoticos). La celula es una celula tumoral, por ejemplo, una celula de mama, de ovario, estomago, de endometrio, de glandula salival, de pulmon, de rinon, de colon, de tiroides, pancreatica o de vejiga. Diversos procedimientos estan disponibles para evaluar los eventos celulares asociados a la apoptosis. Por ejemplo, la traslocacion de fosfatidilserina (PS) puede medirse por la union de anexina; la fragmentacion de ADN puede evaluarse a traves de formacion de escalera de ADN; y la condensacion nuclear/de la cromatina junto con la fragmentacion del ADN puede evaluarse por cualquier aumento en las celulas hipodiploides.
La expresion "cantidad terapeuticamente eficaz" se refiere a una cantidad de un farmaco eficaz para tratar una enfermedad o trastorno en un mairnfero. En el caso del cancer, la cantidad terapeuticamente eficaz del farmaco puede reducir el numero de celulas cancerosas; reducir el tamano del tumor; inhibir (es decir, ralentizar en algun grado y preferentemente detener) la infiltracion de las celulas cancerosas en los organos perifericos; inhibir (es decir, ralentizar en algun grado y preferentemente detener) la metastasis tumoral; inhibir, en algun grado, el crecimiento tumoral; y/o aliviar en algun grado uno o mas de los smtomas asociados al cancer. Hasta el grado que el farmaco puede inhibir el crecimiento y/o matar las celulas cancerosas existentes, puede ser citostatico y/o citotoxico. Para la terapia contra el cancer, la efectividad puede, por ejemplo, medirse evaluando el tiempo para el avance de la enfermedad (TTP, por sus siglas en ingles) y determinar la tasa de respuesta (RR, por sus siglas en ingles).
La expresion "cantidad sustancial" se refiere a una mayona, es decir, mas del 50 % de una poblacion, de una mezcla o una muestra.
La expresion "metabolito intracelular" se refiere a un compuesto que resulta de un procedimiento metabolico o una reaccion dentro de una celula o un conjugado farmaco-anticuerpo (a DC). El procedimiento o la reaccion metabolicos pueden ser un procedimiento enzimatico tal como la escision proteolftica de un engarce peptidico del ADC. Los metabolites intracelulares incluyen, pero no se refieren a, anticuerpos y el farmaco libre que se han sometido a escision intracelular despues de la entrada, la difusion, la toma o el transporte en una celula.
Las expresiones "intracelularmente escindido" y "escision intracelular" se refiere a un procedimiento o una reaccion metabolicos dentro de una celula o un ADC o similares, por los que la fijacion covalente, por ejemplo, el engarce, entre el resto farmacologico y el anticuerpo se rompe, dando como resultado el farmaco libre u otro metabolito del conjugado disociado del anticuerpo dentro de la celula. Los restos escindidos del ADC son de esta manera metabolites intracelulares.
El termino "biodisponibilidad" se refiere a la disponibilidad sistemica (es decir, niveles de sangre/plasma) de una cantidad dada de un farmaco administrado a un paciente. La biodisponibilidad es un termino absolute que indica la medicion tanto del tiempo (velocidad) y la cantidad total (grado) de farmaco que alcanza la circulacion general de una forma de dosificacion administrada.
La expresion "actividad citotoxica" se refiere a un efecto de muerte celular, uno citostatico o uno anti-proliferativo de un ADC o un metabolito intracelular de dicho ADC. La actividad citotoxica puede expresarse como el valor CI50, que es la concentracion (molar 0 en masa) por volumen unitario en el que las celulas sobreviven.
Un "trastorno" es cualquier afeccion que se beneficiana del tratamiento con un farmaco 0 un conjugado farmacoanticuerpo. Esto incluye trastornos 0 enfermedades cronicos y agudos que incluyen aquellas afecciones patologicas que predisponen a un mairnfero al trastorno en cuestion. Los ejemplos no limitantes de trastornos a tratarse en el presente documento incluyen canceres benignos y mutantes; leucemia y malignancias linfoides, neuronales, gliales, astrocfticos, hipotalamicos y otros trastornos glandulares, macrofagicos, epiteliales, estromales y blastocelicos; y trastornos inflamatorios, angiogenicos e inmunogenicos.
Los terminos "cancer" y "canceroso" se refieren a 0 describen la afeccion 0 el trastorno fisiologicos en marnferos que se caracteriza tipicamente por el crecimiento celular sin regular. Un "tumor" comprende una 0 mas celulas cancerosas.
Los ejemplos de un "paciente" incluyen, pero no se refieren a, un ser humano, rata, raton, cobaya, mono, cerdo, cabra, vaca, caballo, perro, gato, ave y ave de corral. En una realizacion ejemplar, el paciente es un ser humano. Los terminos "tratar" 0 "tratamiento", salvo que se indique lo contrario por contexto, se refiere al tratamiento terapeutico y a medidas profilacticas para prevenir la recâ da, en el que el objeto es inhibir 0 ralentizar (disminuir) un cambio 0 trastorno fisiologico indeseado, tal como el desarrollo de la extension del cancer. Para los fines de la presente invencion, los beneficios 0 resultados clmicos deseados incluyen, pero no se limitan a, el alivio de smtomas, la disminucion de la extension de la enfermedad, el estado estabilizado (es decir, que no empeore) de la enfermedad, el retraso 0 la ralentizacion en la evolucion de la enfermedad, la mejora 0 el alivio del estado de la enfermedad y la remision (ya sea parcial 0 total), ya sea detectable 0 indetectable. "Tratamiento" tambien puede significar prolongar la supervivencia en comparacion con la supervivencia esperada si no se recibe tratamiento. Aquellos en necesidad de tratamiento incluyen aquellos que tienen la afeccion 0 el trastorno asf como aquellos propensos a tener la afeccion 0 el trastorno.
En el contexto del cancer, el termino "tratar" incluye cualquiera 0 todos de inhibir el crecimiento de las celulas tumorales, celulas cancerosas, 0 de un tumor; inhibir la replicacion de las celulas tumorales 0 las celulas cancerosas, disminuir la carga global del tumor 0 disminuir el numero de celulas cancerosas y mejorar uno 0 mas smtomas asociados a la enfermedad.
En el contexto de una enfermedad autoinmune, el termino "tratar" incluye cualquiera 0 todos de inhibir la replicacion de las celulas asociadas a un estado de la enfermedad autoinmune incluyendo, pero no limitado a, celulas que producen un anticuerpo autoinmune, disminuir la carga del anticuerpo autoinmune y mejorar uno 0 mas smtomas de una enfermedad autoinmune.
En el contexto de una enfermedad infecciosa, el termino "tratar" incluye cualquiera 0 todos de: inhibir el crecimiento, la multiplicacion 0 la replicacion del patogeno que provoca la enfermedad infecciosa y mejorar uno 0 mas smtomas de una enfermedad infecciosa.
El termino "prospecto" se usa para referirse a las instrucciones habitualmente incluidas en los envases comerciales de productos terapeuticos, que contienen informacion acerca de la indicacion 0 indicaciones, el uso, la dosificacion, la administracion, las contraindicaciones y/o las advertencias que conciernen al uso de dichos productos terapeuticos.
Como se usa en el presente documento, Los terminos "celula", "lmea celular", y "cultivo celular" se usan intercambiablemente y todas estas designaciones incluyen a la descendencia. Las palabras "transformantes" y "celulas transformadas" incluyen la celula del sujeto primaria y los cultivos o la descendencia derivados de la misma sin importar el numero de transferencias. Tambien se entiende que toda la descendencia no tiene por que ser precisamente identica en cuanto a contenido de ADN, debido a mutaciones deliberadas o inadvertidas. Se incluye la descendencia mutante que tiene la misma funcion o actividad biologica como se detecto en la celula originalmente transformada. Cuando se entiendan distintas designaciones, estaran claras a partir del contexto.
A menos que se indique lo contrario, el termino "alquilo" por s^ mismo o como parte de otro termino se refiere a un hidrocarburo de cadena lineal o ramificado, saturado que tiene el numero indicado de atomos de carbono (por ejemplo, alquilo "C i -C8" se refiere a un grupo alquilo que tiene de 1 a 8 atomos de carbono). Cuando el numero de atomos de carbono no esta indicado, el grupo alquilo tiene de 1 a 8 atomos de carbono. Los alquilos C i -C8 de cadena lineal representativos incluyen, pero sin limitacion, metilo, etilo, n-propilo, n-butilo, n-pentilo, n-hexilo, nheptilo y n-octilo; mientras que los alquilos C i -C8 ramificados incluyen, pero sin limitacion, -isopropilo, -sec-butilo, -isobutilo, -terc-butilo, -isopentilo y -2-metilbutilo; los alquilos C2-C8 insaturados incluyen, pero sin limitacion, vinilo, alilo, 1 -butenilo, 2-butenilo, isobutilenilo, 1-pentenilo, 2-pentenilo, 3-metil-1-butenilo, 2-metil-2-butenilo, 2,3-dimetil-2-butenilo, 1-hexilo, 2-hexilo, 3-hexilo, acetilenilo, propinilo, 1 -butinilo, 2-butinilo, 1 -pentinilo, 2-pentinilo y 3-metil-1-butinilo.
A menos que se indique lo contrario, "alquileno", por sf mismo 0 como parte de otro termino, se refiere a un radical hidrocarburo saturado, lineal 0 ramificado 0 dclico del numero indicado de atomos de carbono, tfpicamente 1-18 atomos de carbono, y que tiene dos centros de radical monovalente obtenidos mediante la retirada de dos atomos de hidrogeno del mismo atomo de carbono 0 de dos diferentes de un alcano precursor. Los radicales alquileno tipicos incluyen, pero sin limitacion: metileno (-CH2-), 1,2-etileno (-CH2CH2-), 1,3-propileno (-CH2CH2CH2-), 1,4-butileno (-CH2CH2CH2CH2-) y similares. Un alquileno "C1-C10" de cadena lineal es un grupo hidrocarburo saturado de cadena lineal de la formula -(C H 2)-m 0-. Los ejemplos de un alquileno C1-C10 incluyen metileno, etileno, propileno, butileno, pentileno, hexileno, heptileno, octileno, nonileno y decaleno.
A menos que se indique lo contrario, el termino "heteroalquilo", por s^ mismo 0 Junto con otro termino, significa, a menos que se indique otra cosa, un hidrocarburo de cadena lineal 0 ramificada estable 0 combinaciones de los mismos, totalmente saturado 0 que contiene de 1 a 3 grados de insaturacion, que consiste en el numero indicado de atomos de carbono y de uno a tres heteroatomos seleccionados entre el grupo que consiste en O, N, Si y S, y en el que los atomos de nitrogeno y azufre pueden estar opcionalmente oxidados y el heteroatomo de nitrogeno puede estar opcionalmente cuaternizado. El heteroatomo 0 heteroatomos O, N y S pueden estar situados en cualquier posicion interior del grupo heteroalquilo. El heteroatomo Si puede estar situado en cualquier posicion del grupo heteroalquilo, incluyendo la posicion en la que el grupo alquilo esta unido al resto de la molecula. Hasta dos heteroatomos pueden ser consecutivos.
A menos que se indique lo contrario, el termino "heteroalquileno", por sf mismo 0 como parte de otro sustituyente, significa un grupo divalente derivado de un heteroalquilo (como se ha descrito anteriormente). Para grupos heteroalquileno, los heteroatomos tambien pueden ocupar uno 0 ambos extremos de la cadena.
A menos que se indique lo contrario, "arilo", por sf mismo 0 como parte de otro termino, significa un radical hidrocarburo aromatico, carbodclico, monovalente, sustituido 0 no sustituido de 6-20, preferentemente de 6-14, atomos de carbono obtenidos mediante la retirada de un atomo de hidrogeno de un solo atomo de carbono de un sistema de anillo aromatico precursor. Los grupos arilo tipicos incluyen, pero sin limitacion, radicales derivados de benceno, benceno sustituido, naftaleno, antraceno, bifenilo y similares. Un grupo aromatico carbodclico sustituido (por ejemplo, un grupo arilo) puede estar sustituido con uno 0 mas, preferentemente de 1 a 5, de los siguientes grupos: alquilo C1-C8, -0-(alquilo C1-C8), -C(0)R', -0C(0)R', -C(0)0R', -C(0)NH2, -C(0)NHR', -C(0)N(R')2, -NHC(0)R', -S(0)2R', -S(0)R', -O h , halogeno, -N3, -NH2, -NH(R'), -N(R')2 y -CN; en los que cada R' se selecciona independientemente entre -H, alquilo C1-C8 y arilo no sustituido. En algunas realizaciones, un grupo aromatico carbodclico sustituido puede incluir adicionalmente uno 0 mas de: -NHC(=NH)NH2, -NHCONH2, -S(=0)2R' y -SR'. "Arileno" es el resto divalente correspondiente.
"Alquilo sustituido" significa un alquilo en el que uno 0 mas atomos de hidrogeno estan cada uno reemplazado independientemente con un sustituyente. Los sustituyentes tipicos incluyen, pero sin limitacion, -X, -R, -O-, -O r , -s r , -s -, - n r 2, -NR3, = n r , -CX3, -c n , -o c n , -s c n , - n =c =o , - n c s , - n o , - n o 2, =N2, -N3, - n r c (=o )r , -C(=0)NR2, -SO3-, -SO3H, -S(=0)2R, -0S(=0)20R, -S(=0)2NR, -S(=0)R, -0P(=0)(0R)2, -P(=0)(0R)2, -PO32', PO3H2, -ASO2H2, -C(=0)R, -C(=0)X, -C(=S)R, -CO2R, -CO2-, -C(=S)OR, -C(=0)SR, -C(=S)SR, -C(=0)NR2, -C(=S)NR20 -C(=NR)NR2, en los que cada X es independientemente un halogeno: -F, -Cl, -Br 0 -I; y cada R es independientemente -H, alquilo C1-C20, heteroalquilo C1-C20, arilo C6-C20, heterociclilo C1-C10, un grupo protector 0 un resto de profarmaco. Los grupos arilo, alquileno y heteroalquileno como se han descrito anteriormente tambien pueden estar sustituidos de forma similar.
A menos que se indique lo contrario, "aralquilo", por s^ mismo 0 como parte de otro termino, significa un grupo alquilo, como se ha definido anteriormente, sustituido con un grupo arilo, como se ha definido anteriormente.
A menos que se indique Io contrario, "heterociclilo C-i-C-io", por s^ mismo o como parte de otro termino, se refiere a un sistema de anillo monovalente, sustituido o no sustituido, aromatico o no aromatico, monodclico, bidclico o tric^clico que tiene de 1 a 10, preferentemente de 3 a 8, atomos de carbono (tambien denominados miembros de anillo) y de uno a cuatro miembros de anillo de heteroatomo seleccionados independientemente entre N, O, P o S, y obtenidos mediante la retirada de un atomo de hidrogeno de un atomo del anillo de un sistema de anillo precursor. Uno o mas atomos de N, C o S en el heterociclilo pueden estar oxidados. El anillo que incluye el heteroatomo puede ser aromatico o no aromatico. A menos que se indique otra cosa, el heterociclilo esta unido a su grupo pendiente en cualquier heteroatomo o atomo de carbono que de como resultado una estructura estable. Los ejemplos representativos de un heterociclilo Ci -Cio incluyen, pero sin limitacion, tetrahidrofuranilo, oxetanilo, piranilo, pirrolidinilo, piperidinilo, piperazinilo, benzofuranilo, benzotiofeno, benzotiazolilo, indolilo, benzopirazolilo, pirrolilo, tiofenilo (tiofeno), furanilo, tiazolilo, imidazolilo, pirazolilo, triazolilo, quinolinilo incluyendo restos, tales como 1,2,3,4-tetrahidro-quinolinilo, pirimidinilo, piridinilo, piridonilo, pirazinilo, piridazinilo, isotiazolilo, isoxazolilo, tetrazolilo, epoxido, oxetano y BODIPY (sustituido o no sustituido). Un heterociclilo C-i-C-io puede estar sustituido con hasta siete grupos incluyendo, pero sin limitacion, alquilo Ci-Cb, heteroalquilo Ci -Cb, -OR', arilo, -C(0)R', -0C(0)R', -C(0)0R', -C(0)NH2, -C(0)NHR', -C(0)N(R')2, -NHC(0)R', -S(=0)2R', -S(0)R', halogeno, -Nb, -NH2, -NH(R'), -N(R')2 y -CN; en Ios que cada R' se selecciona independientemente entre -H, alquilo Ci -Cb, heteroalquilo Ci-Cb y arilo. En algunas realizaciones, un heterociclilo sustituido tambien puede incluir uno o mas de: -NHC(=NH)NH2, -NHCONH2, -S(=0 )2R' y -SR'. "Heterociclo" "heterociclo C-i-C-io" es el resto divalente correspondiente.
A menos que se indique Io contrario, "heteroaralquilo", por sf mismo 0 como parte de otro termino, significa un grupo alquilo, como se ha definido anteriormente, sustituido con un grupo heterociclilo aromatico, como se ha definido anteriormente. Heteroaralquilo es el resto divalente correspondiente.
A menos que se indique Io contrario, "carbociclilo C3-Cb", por sf mismo 0 como parte de otro termino, es un anillo carbodclico, monodclico 0 bidclico, no aromatico, saturado 0 insaturado, sustituido 0 no sustituido, monovalente de 3, 4, 5, 6, 7 u 8 miembros obtenido mediante la retirada de un atomo de hidrogeno de un atomo de anillo de un sistema de anillo precursor. Los carbociclilos C3-Cb representativos incluyen, pero sin limitacion, ciclopropilo, ciclobutilo, ciclopentilo, ciclopentadienilo, ciclohexilo, ciclohexenilo, 1,3-ciclohexadienilo, 1,4-ciclohexadienilo, cicloheptilo, 1,3-cicloheptadienilo, 1,3,5-cicloheptatrienilo, ciclooctilo, ciclooctadienilo, biciclo(1,1,1)pentano y biciclo(2,2,2)octano. Un grupo carbociclilo C3-Cb puede estar sin sustituir 0 sustituido con hasta siete grupos incluyendo, pero sin limitacion, alquilo Ci-Cb, heteroalquilo Ci -Cb, -OR', arilo, -C(0)R', -0C(0)R', -C(0)0R', -C(0)NH2, -C(0)NHR', -C(0)N(R')2, -NHC(0)R', -S(=0)2R', -S(=0)R', -OH, -halogeno, -Nb, -NH2, -NH(R'), -N(R')2 y -CN; en Ios que cada R' se selecciona independientemente entre -H, alquilo Ci-Cb, heteroalquilo Ci -Cb y arilo. "carbocicio C3-Cb" es el resto divalente correspondiente.
El termino "quiral" se refiere a moleculas que tienen la propiedad de no superimposicion del companero de imagen especular, mientras que el termino "aquiral" se refiere a moleculas que son superponibles sobre sus companeros de imagen especular.
El termino "estereoisomeros" se refiere a compuestos que tienen una constitucion qmmica identica, pero se diferencian con respecto a la disposicion de Ios atomos 0 grupos en el espacio.
"Diastereomero" se refiere a un estereoisomero con dos 0 mas centros de quiralidad y cuyas moleculas no son imagenes especulares la una de la otra. Los diastereomeros tienen propiedades ffsicas diferentes, por ejemplo, puntos de fusion, puntos de ebullicion, propiedades espectrales y reactividades. Pueden separarse mezclas de diastereomeros en procedimientos analfticos de alta resolucion, tales como electroforesis y cromatograffa.
Las definiciones estereoqmmicas y convenciones usadas en el presente documento siguen generalmente S. P. Parker, Ed., McGraw-Hill Dictionary of Chemical Terms, McGraw-Hill Book Company, Nueva York (1984); y Eliel y Wilen, Stereochemistry of Organic Compounds, John Wiley & Sons, Inc., Nueva York (1994). Muchos compuestos organicos existen en formas opticamente activas, es decir, tienen la capacidad de rotar el piano de Iuz polarizada en el piano. En la descripcion de un compuesto opticamente activo, Ios prefijos D y L 0 R y S, se usan para indicar la configuracion absoluta de la molecula en torno a su centro 0 centros quirales. Los prefijos d y 10 (+) y (-) se emplean para designar el signo de la rotacion de la Iuz polarizada en el piano por el compuesto, significando (-) 01 que el compuesto es levogiro. Un compuesto con el prefijo (+) 0 d es dextrogiro. Para una estructura qmmica dada, estos estereoisomeros son identicos excepto porque son imagenes especulares el uno del otro. Un estereoisomero espedfico tambien puede denominarse como un enantiomero, y una mezcla de tales isomeros se llama frecuentemente una mezcla enantiomerica. Una mezcla 50:50 de enantiomeros se denomina como una mezcla racemica 0 un racemato, Io que puede suceder donde no ha habido estereoseleccion 0 estereoespecificidad en una reaccion 0 procedimiento qmmico. Las expresiones "mezcla racemica" y "racemato" se refieren a una mezcla equimolar de dos especies enantiomericas, sin actividad optica.
Un "derivado" de aminoacido incluye un aminoacido que tiene sustituciones 0 modificaciones mediante union covalente de un aminoacido precursor, tales como, por ejemplo, por alquilacion, glicosilacion, acetilacion, fosforilacion y similares. Se incluye adicionalmente dentro de la definicion de "derivado", por ejemplo, uno 0 mas analogos de un aminoacido con engarces sustituidos, as ^como otras modificaciones conocidas en la tecnica.
Un "aminoacido natural" se refiere a arginina, glutamina, fenilalanina, tirosina, triptofano, lisina, glicina, alanina, histidina, serina, prolina, acido glutamico, acido aspartico, treonina, cistema, metionina, leucina, asparagina, isoleucina y valina, a menos que se indique otra cosa por el contexto.
"Grupo protector" se refiere a un resto que cuando se une a un grupo reactivo en una molecula enmascara, reduce o previene esa reactividad. Pueden encontrarse ejemplos de grupos protectores en T. W. Greene y P. G. M. Wuts, Protective Groups in Organic Synthesis, 3a edicion, John Wiley & Sons, Nueva York, 1999, y Harrison and Harrison y coI., Compendium of Synthetic Organic Methods, V oIs . 1-8 (John Wiley and Sons, 1971-1996), que se incorporan en el presente documento por referenda en su totalidad. Los grupos protectores de hidroxi representativos incluyen grupos acilo, bencil y tritil eteres, tetrahidropiranil eteres, trialquilsilil eteres y alil eteres. Los grupos protectores de amino representativos incluyen, formilo, acetilo, trifluoroacetilo, bencilo, benciloxicarbonilo (CBZ), tercbutoxicarbonilo (B oc), trimetil sililo (TMS), 2-trimetilsilil-etanosulfonilo (SES), tritilo y grupos tritilo sustituidos, aliloxicarbonilo, 9-fluorenilmetiloxicarbonilo (FMOC), nitro-veratriloxicarbonilo (NVOC), y similares.
Los ejemplos de un "grupo protector de hidroxilo" incluyen, pero sin limitacion, metoximetil eter, 2-metoxietoximetil eter, tetrahidropiranil eter, bencil eter, p-metoxibencil eter, trimetilsilil eter, trietilsilil eter, triisopropil silil eter, tbutildimetil silil eter, trifenilmetil silil eter, ester de acetato, esteres de acetato sustituidos, pivaloato, benzoato, metanosulfonato y p-toluenosulfonato.
"Grupo saliente" se refiere a un grupo funcional que puede sustituirse por otro grupo funcional. Tales grupos salientes son bien conocidos en la materia, y Ios ejemplos incluyen, pero sin limitacion, un haluro (por ejemplo, cloruro, bromuro, yoduro), metanosulfonilo (mesilo), p-toluenosulfonilo (tosilo), trifluorometilsulfonilo (triflato) y trifluorometilsulfonato.
La expresion "sal farmaceuticamente aceptable", como se usa en el presente documento, se refiere a sales organicas o inorganicas farmaceuticamente aceptables de un compuesto. El compuesto tipicamente contiene al menos un grupo amino, y en consecuencia pueden formarse sales de adicion de acidos con este grupo amino. Las sales ejemplares incluyen, pero sin limitacion, las sales sulfato, citrato, acetato, oxalato, cloruro, bromuro, yoduro, nitrato, bisulfato, fosfato, fosfato de acido, isonicotinato, lactato, salicilato, citrato de acido, tartrato, oleato, tanato, pantotenato, bitartrato, ascorbato, succinato, maleato, malato, gentisinato, fumarato, gluconato, glucuronato, sacarato, formiato, benzoato, glutamato, metanosulfonato, etanosulfonato, bencenosulfonato, p-toluenosulfonato y pamoato (es decir, 1,1'-metileno-bis-(2-hidroxi-3-naftoato)). Una sal farmaceuticamente aceptable puede implicar la inclusion de otra molecula, tal como un ion de acetato, un ion de succinato u otro contraion. El contraion puede ser cualquier resto organico o inorganico que estabiliza la carga en el compuesto precursor. Por otro lado, una sal farmaceuticamente aceptable puede tener mas de un atomo cargado en su estructura. Algunos casos en Ios que atomos multiplemente cargados son parte de la sal farmaceuticamente aceptable pueden tener multiples contraiones. De este modo, una sal farmaceuticamente aceptable puede tener uno o mas atomos cargados y/o uno o mas contraiones.
"Solvato farmaceuticamente aceptable" o "solvato" se refiere a una asociacion de una o mas moleculas de disolvente y un compuesto o conjugado de la invencion. Los ejemplos de disolventes que forman solvatos farmaceuticamente aceptables incluyen, pero sin limitacion, agua, isopropanol, etanol, metanol, D m SO, acetato de etilo, acido acetico y etanolamina.
Las expresiones "carga" o "carga de farmaco" o "carga util" representan o se refieren al numero promedio de cargas utiles ("carga util" y "cargas utiles" se usan de forma intercambiable en el presente documento con "farmaco" y "farmacos") por anticuerpo en una molecula de ADC. La carga de farmaco puede variar de 1 a 20 farmacos por anticuerpo. Esto a veces se denomina la DAR o la relacion de farmaco a anticuerpo. Las composiciones de Ios ADC descritos en el presente documento tienen tfpicamente DAR de 1-20 y en determinadas realizaciones de 1-8, de 2-8, de 2-6, de 2-5 y de 2-4. Los valores de DAR tipicos son 2, 4, 6 y 8. El numero promedio de farmacos por anticuerpo, o valor DAR, puede caracterizarse por medios convencionales tales como espectroscop^a UV/visible, espectrometna de masas, ensayo ELISA y HPLC. El valor cuantitativo de DAR tambien puede determinarse. En algunos casos, la separacion, la purificacion y la caracterizacion de ADC homogeneos que tienen un valor DAR particular pueden lograrse por medios tales como HPLC de fase inversa o electroforesis. La DAR puede estar limitada por el numero de sitios de fijacion en el anticuerpo. Por ejemplo, donde la fijacion es un tiol de cistema, un anticuerpo puede tener solamente uno o varios grupos tiol de cistema, o pueden tener solamente uno o varios grupos tiol suficientemente reactivos a traves de Ios que puede fijarse una unidad conectora. En algunas realizaciones, el tiol de cistema es un grupo tiol de un resto de cistema que forma un enlace disulfuro intracatenario. En algunas realizaciones, el tiol de cistema es un grupo tiol de un resto de cistema que no forma un enlace disulfuro intracatenario. Tfpicamente, menos del maximo teorico de restos farmacologicos se conjugan a un anticuerpo durante una reaccion de conjugacion. Un anticuerpo puede contener, por ejemplo, muchos restos de lisina que no reaccionan con un engarce o un intermedio engarce. Solamente Ios grupos de lisina mas reactivos pueden reaccionar con un reactivo engarce reactivo.
Generalmente, Ios anticuerpos no contienen muchos, en caso de haberlos, grupos tiol de cistema libres y reactivos que pueden conectarse con un farmaco a traves de un engarce. La mayona de restos tiol de cistema en Ios anticuerpos existe como puentes disulfuro y debe reducirse con un agente reductor tales como ditiotreitol (DTT). El anticuerpo puede someterse a condiciones desnaturalizantes para revelar grupos nucleofilos reactivos tales como lisina y cistema. La carga (relacion farmaco/anticuerpo) de un ADC puede controlarse de varias diferentes maneras, incluyendo: (i) limitar el exceso molar de farmaco-engarce con respecto al anticuerpo, (ii) limitar el tiempo o la temperatura de la reaccion de conjugacion y (iii) condiciones reductoras parciales o limitantes para la modificacion de tiol de cistema. Cuando mas de un grupo nucleofilo reacciona con un farmaco-engarce despues el producto resultante es una mezcla de ADC con una distribucion de uno o mas restos farmacologicos por anticuerpo. El numero promedio de farmacos por anticuerpo puede calcularse a partir de la mezcla por, por ejemplo, ensayo ELISA de anticuerpo dual, espedfico para el anticuerpo y espedfico para el farmaco. Los ADC individuales pueden identificarse en la mezcla por espectroscopfa de masas y separarse por HPLC, por ejemplo, cromatograffa de interaccion hidrofoba.
A continuacion hay una lista de abreviaturas y definiciones que pueden no definirse de otra manera o describirse en la presente solicitud: DMSO (se refiere a dimetilsulfoxido), HRMS (se refiere a espectrometna de masas de alta resolucion), DAD (se refiere a deteccion de disposicion de diodos), TFA (se refiere a acido 2,2,2-trifluoroacetico o acido trifluoroacetico), TFF (se refiere a filtracion de flujo tangencial), EtOH (se refiere a etanol), MW (se refiere a peso molecular), HPLC (se refiere a cromatograffa ffquida de alto rendimiento), HPLC prep (se refiere a cromatograffa ffquida de alto rendimiento preparativa), etc. (se refiere a etcetera), tritilo (se refiere a 1,1',1''-etan-1,1,1 -triiltribenceno), THF (se refiere a tetrahidrofurano), NHS (se refiere a 1-hidroxi-2,5-pirrolidindiona), Cbz (se refiere a carboxibencilo), eq. (se refiere a equivalente), n-BuLi (se refiere a n-butillitio), O A c (se refiere a acetato), MeOH (se refiere a metanol), l-Pr (se refiere a isopropilo o propan-2-ilo), NMM (se refiere a 4-metilmorfolina) y "-" (en una tabla se refiere a datos no disponibles en este momento).
Compuestos y conjugados farmaco anticuerpo de Ios mismos
Un aspecto de la invencion se refiere a un compuesto de formula I:
Figure imgf000014_0001
o una de sus sales o solvatos farmaceuticamente aceptables, en la que, independientemente cada vez que esta presente, W es
Figure imgf000014_0002
R1 es hidrogeno, alquilo C1-C80 haloalquilo C1-C8;
R2 *es hidrogeno, alquilo C1-C80 haloalquilo C1-C8;
r 3A y r 3B son cualquiera de los siguientes:
(i) R3A es alquilo C1-C8, haloalquilo C1-C8, carbociclilo C3-C80 halogeno; y
R3B es alquilo C1-C8, haloalquilo C1-C8, carbociclilo C3-C80 halogeno; 0
(ii) R3A y R3B tomados juntos son alquileno C2-C8, dicho alquileno C2-C8 cuando se toma junto con el carbono al que esta enlazado, forma un anillo carbodclico saturado; 0 heteroalquileno C1-C8, dicho heteroalquileno C1-C8, junto con el carbono al que esta enlazado, forma un anillo heterodclico saturado;
R5 es
Figure imgf000015_0001
heterociclilo C-i-C-io, carbociclilo C3-C8 y arilo C6-C-m opcionalmente sustituido con 1, 2, 3, 4 0 5 grupos seleccionados independientemente entre el grupo que consiste en -alquilo Ci-C8, -alquil Ci -C8-N(R')2, -alquil Ci -C8-C(O)R', -alquil Ci -C8-C(O)OR' -0-(alquilo Ci-C8), -C(0)R', -0C(0)R', -C(0)0R', -C(O)N(R')2, -NHC(0)R', -S(0 )2R', -S(0)R', -Oh , halogeno, -N3, -N(R')2, -CN, -NHC(=NH)NH2, -NHCONH2, -S(=0 )2R' y -SR', en los que cada R' se selecciona independientemente entre el grupo que consiste en hidrogeno, alquilo C1-C8 y arilo no sustituido, 0 dos R' pueden, Junto con el nitrogeno al que estan unidos, forman un heterociclilo C1-C10;
0 R5 es
Figure imgf000015_0002
opcionalmente sustituido con 1, 2, 3, 4 0 5 grupos seleccionados independientemente entre el grupo que consiste en alquilo Ci -C8, -alquil Ci-C8-N(R')2, -alquil Ci -C8-C(O)R', -alquil Ci-C8-C(O)OR', -0-(alquilo Ci-C8), -c (O)R', -o c (O)R', -c (O)o r ', -c (O)N(R')2, -n h c (O)R', -s (O)2R', -s (O)R', -o h ,
halogeno, -N3, -N(R')2, -CN, -NHC(=NH)NH2, -NHCONH2, -S(=0)2R', -SR' y arileno-R', en los que cada R' se selecciona independientemente entre el grupo que consiste en hidrogeno, alquilo Ci -C8, heterociclilo Ci -C8, alquilen Ci-Cio-heterociclilo C3-C8 y arilo, 0 dos R' pueden, Junto con el nitrogeno al que estan unidos, formar un heterociclilo Ci -Cio;
R6 es hidrogeno, -alquilo Ci -C8, -alquenilo C2-C8, -alquinilo C2-C8, -alquinilo C2-C80 -haloalquilo Ci-C8;
R12 es hidrogeno, alquilo C1-C4, heterociclilo Ci -Cio 0 arilo C6-C14;
R13 es heterociclilo C1-C1o; y
X es O
Otro aspecto de la invencion se refiere un compuesto de formula Ma:
Figure imgf000016_0001
o una de sus sales o solvatos farmaceuticamente aceptables, en la que, independientemente cada vez que esta presente, W es
Figure imgf000016_0002
R1 es
Figure imgf000016_0003
Y es -alquileno C2-C20-, -heteroalquileno C2-C20-; -carbociclo C3-C8-, -arileno-, -heterociclo C3-C8-, -alquilen C i -Cio-arileno-, -arileno-alquileno C1-C10-, -alquilen Ci-Cio-(carbociclo C3-C8)-, -(carbociclo C3-C8)-alquileno C1-C10-, -alquilen C1-C10-(heterociclo C3-C8)- o -(heterociclo C3-C8)-alquileno C1-C10-;
Z es
Figure imgf000016_0004
o -NH2;
G es halogeno, -OH, -SH o -S-alquilo C i -C 8;
R2 es hidrogeno, alquilo C1-C8 o haloalquilo C1-C8;
r 3A y r 3B son cualquiera de los siguientes:
(i) R3A es alquilo Ci-C8, haloalquilo Ci-C8, carbociclilo C3-C80 halogeno; y
R3B es alquilo Ci-C8, haloalquilo Ci-C8, carbociclilo C3-C80 halogeno; 0
(ii) R3A y R3B tornados Juntos son alquileno C2-C8, dicho alquileno C2-C8 cuando se toma Junto con el carbono al que esta enlazado, forma un anillo carbodclico saturado; 0 heteroalquileno Ci -C8, dicho heteroalquileno Ci -C8, Junto con el carbono al que esta enlazado, forma un anillo heterodclico saturado;
R5 es
Figure imgf000017_0001
heterociclilo C1-C10, carbociclilo C3-C8 y arilo C6-C14 opcionalmente sustituido con 1, 2, 3, 4 0 5 grupos seleccionados independientemente entre el grupo que consiste en -alquilo Ci -C8, -alquil Ci -C8-N(R')2, -alquil Ci -C8-C(0)R', -alquil Ci-C8-C(O)OR' -0-(alquilo Ci-C8), -C(0)R', -0C(0)R', -C(0)0R', -C(O)N(R')2, -NHC(0)R', -S(0 )2R', -S(0)R', -Oh , halogeno, -N3, -N(R')2, -CN, -NHC(=NH)NH2, -NHCONH2, -S(=0 )2R' y -SR', en los que cada R' se selecciona independientemente entre el grupo que consiste en hidrogeno, alquilo C-i-C8 y arilo no sustituido, 0 dos R' pueden, Junto con el nitrogeno al que estan unidos, forman un heterociclilo C1-C10;
0 R5 es
Figure imgf000017_0002
opcionalmente sustituido con 1, 2, 3, 405 grupos seleccionados independientemente entre el grupo que consiste en alquilo Ci-C8, -alquil Ci-C8-N(R')2, -alquil Ci -C8-C(O)R', -alquil Ci -C8-C(O)OR', -0-(alquilo Ci -C8), -C(0)R', -o c (O)R', -c (O)o r ', -c (O)N(R')2, -n h c (O)R', -s (O)2R', -s (O)R', -o h ,
halogeno, -N s, -N(R')2, -CN, -NHC(=NH)NH2, -NHCONH2, -S(=0)2R', -SR' y arileno-R', en Ios que cada R' se selecciona independientemente entre el grupo que consiste en hidrogeno, alquilo C i -C 8, heterociclilo C i -C8, alquilen Ci-Cio-heterociclilo C3-C8 y arilo, 0 dos R' pueden, Junto con el nitrogeno al que estan unidos, formar un heterociclilo Ci-Cio;
R6 es hidrogeno, -alquilo C i -C 8, -alquenilo C2-C8, -alquinilo C2-C80 -haloalquilo C i -C 8;
R12 es hidrogeno, alquilo C1-C4, heterociclilo C1-C 1o 0 arilo C6-C 14;
R713 es heterociclilo C1-C10; y J
R se selecciona independientemente cada vez que aparece entre el grupo que consiste en F, Cl, I, Br, NO2, CN y CFs;
R es hidrogeno, -alquilo C1-C10, -carbociclilo C3-C8, arilo, -heteroalquilo C1-C10, -heterocicio C3-C8, -alquilen C1-C10-arilo, -arileno-alquilo C1-C10, -alquileno C1-C10-(carbociclo C3-C8), -(carbociclo C3-C8)-alquilo C1-C10, -alquilen C1-C10-(heterociclo C3-C8) y -(heterocicio C3-C8)-alquilo C1-C10, en Ios que el arilo en Ios R10 que comprenden arilo esta opcionalmente sustituido con [R7K
h es 1, 2, 3, 405; y
X es O
Otro aspecto de la invencion se refiere un compuesto de formula INa:
Figure imgf000018_0001
0 una de sus sales 0 solvatos farmaceuticamente aceptables, en la que, independientemente cada vez que esta presente,
W es
Figure imgf000018_0002
R1 es hidrogeno, alquilo C1-C80 haloalquilo C1-C8;
R2 es hidrogeno, alquilo C1-C80 haloalquilo C1-C8;
r3A y r3B son cualquiera de Ios siguientes:
(i) R 3A es alquilo C1-C8, haloalquilo C1-C8, carbociclilo C3-C80 halogeno; y
RsB es alquilo C1-C8, haloalquilo C1-C8, carbociclilo C3-C80 halogeno; 0
(ii) RsA y R3B tornados Juntos son alquileno C2-C8, dicho alquileno C2-C8 cuando se toma Junto con el carbono al que esta enlazado, forma un anillo carbodclico saturado; 0 heteroalquileno C1-C8, dicho heteroalquileno C1-C8, Junto con el carbono al que esta enlazado, forma un anillo heterodclico saturado;
R5 es
Figure imgf000019_0001
opcionalmente sustituido con 1, 2, 3, 4 o 5 grupos seleccionados independientemente entre el grupo que consiste en alquilo C i -C 8, -0-(alquilo C i -C8), -C(0)R', -0C(0)R', -C(0)0R', -C(0)NH2, -C(0)NHR', -C(0)N(R')2, -NHC(0)R', -S(0)2R', -S(0)R', -OH, halogeno, -N s, -NH2, -NH(R'), -N(R')2, -CN, -NHC(=NH)NH2, -NHCONH2, -S(=0)2R' y -s R', en los que cada R' se selecciona independientemente entre el grupo que consiste en hidrogeno, alquilo C i-C 8 y arilo no sustituido;
R11 es
Figure imgf000019_0002
Y es -alquileno C2-C20-, -heteroalquileno C2-C20-, carbociclo C3-C8-, -arileno-, -heterocicio C3-C8-, -alquilen Ci -Cio-arileno-, -arileno-alquileno Ci-Cio-, -alquilen Ci-Cio-(carbociclo C3-C8)-, -(carbociclo C3-C8)-alquileno Ci-Cio-, -alquilen Ci-Cio-(heterociclo C3-C8)- 0 -(heterocicio C3-C8)-alquileno Ci-Cio-;
Z es
Figure imgf000019_0003
G es halogeno, -OH, -SH 0 -S-alquilo Ci -C6;
R7 se selecciona independientemente cada vez que aparece entre el grupo que consiste en F, Cl, I, Br, NO2, CN y CFs;
h es 1,2, 3, 4 o 5; y
X es O.
Otro aspecto de la invencion se refiere un compuesto de formula Mb:
Figure imgf000020_0001
o una de sus sales o solvatos farmaceuticamente aceptables, en la que, independientemente cada vez que esta presente,
W es
Figure imgf000020_0002
R1 es
Figure imgf000020_0003
Y es -alquileno C2-C20-, -heteroalquileno C2-C20-, -carbociclo C3-C8-, -arileno-, -heterociclo C3-C8-, -alquilen Ci -Cio-arileno-, -arileno-alquileno C1-C10-, -alquilen Ci-Cio-(carbociclo C3-C8)-, -(carbociclo C3-C8)-alquileno C1-C10-, -alquilen Ci-Cio-(heterociclo C3-C8)- 0 -(heterociclo C3-C8)-alquileno C1-C10-;
Z es
Figure imgf000020_0004
Figure imgf000021_0001
L es un anticuerpo;
R2 es hidrogeno, alquilo C i -C8 o haloalquilo C i -C 8;
r 3A y r 3B son cualquiera de los siguientes:
(i) R3A es alquilo C i -C 8, haloalquilo C i -C 8, carbociclilo C3-C80 halogeno; y
R3B es alquilo C i -C8, haloalquilo C i -C8, carbociclilo C3-C80 halogeno; 0
(ii) R3A y R3B tornados Juntos son alquileno C2-C8, dicho alquileno C2-C8 cuando se toma Junto con el carbono al que esta enlazado, forma un anillo carbodclico saturado; 0 heteroalquileno C i -C8, dicho heteroalquileno C i -C8, Junto con el carbono al que esta enlazado, forma un anillo heterodclico saturado;
(ii)
R5 es
Figure imgf000021_0002
heterociclilo C1-C10, carbociclilo C3-C8 y arilo C6-C14 opcionalmente sustituido con 1, 2, 3, 4 0 5 grupos seleccionados independientemente entre el grupo que consiste en -alquilo Ci-C8, -alquil Ci -C8-N(R')2, -alquil Ci -C8-C(O)R', -alquil Ci -C8-C(O)OR' -0-(alquilo Ci-C8), -C(0)R', -0C(0)R', -C(0)0R', -C(O)N(R')2, -NHC(0)R', -S(0 )2R', -S(0)R', -Oh , halogeno, -N3, -N(R')2, -CN, -NHC(=NH)NH2, -NHCONH2, -S(=0 )2R' y -SR', en los que cada R' se selecciona independientemente entre el grupo que consiste en hidrogeno, alquilo Ct C8 y arilo no sustituido, 0 dos R' pueden, Junto con el nitrogeno al que estan unidos, forman un heterociclilo C1-C10;
0 R5 es
Figure imgf000022_0001
opcionalmente sustituido con 1, 2, 3, 4 o 5 grupos seleccionados independientemente entre el grupo que consiste en alquilo Ci -C8, -alquil Ci-C8-N(R')2, -alquil Ci -C8-C(O)R', -alquil Ci-C8-C(O)OR', -0-(alquilo Ci-C8), -c (O)R', -o c (O)R', -c (O)o r ', -c (O)N(R')2, -n h c (O)R', -s (O)2R', -s (O)R', -o h ,
halogeno, -Ns, -N(R')2, -CN, -NHC(=NH)NH2, -NHCONH2, -S(=0)2R', -SR' y arileno-R', en los que cada R' se selecciona independientemente entre el grupo que consiste en hidrogeno, alquilo Ci -C8, heterociclilo Ci -C8, alquilen Ci-Cio-heterociclilo C3-C8 y arilo, 0 dos R' pueden, Junto con el nitrogeno al que estan unidos, formar un heterociclilo C1-C10;
R6 es hidrogeno, -alquilo C1-C8, -alquenilo C2-C8, -alquinilo C2-C80 -haloalquilo C1-C8;
R12 es hidrogeno, alquilo C1-C4, heterociclilo C1-C100 arilo C6-C14;
R13 es heterociclilo C1-C10; y
X es O
Otro aspecto de la invencion se refiere un compuesto de formula IMb:
Figure imgf000022_0002
0 una de sus sales 0 solvatos farmaceuticamente aceptables, en la que, independientemente cada vez que esta presente,
W es
Figure imgf000022_0003
R1 es hidrogeno, alquilo C1-C80 haloalquilo C1-C8;
R2 es hidrogeno, alquilo C1-C80 haloalquilo C1-C8;
r3A y r3B son cualquiera de los siguientes:
(i) RsA es alquilo C1-C8, haloalquilo C1-C8, carbociclilo C3-C80 halogeno; y
RsB es alquilo C1-C8, haloalquilo C1-C8, carbociclilo C3-C80 halogeno; 0
(ii) RsA y R3B tomados Juntos son alquileno C2-C8, dicho alquileno C2-C8 cuando se toma Junto con el carbono al que esta enlazado, forma un anillo carbodclico saturado; 0 heteroalquileno C1-C8, dicho heteroalquileno C1-C8, Junto con el carbono al que esta enlazado, forma un anillo heterodclico saturado;
R es
Figure imgf000023_0001
opcionalmente sustituido con 1, 2, 3, 4 o 5 grupos seleccionados independientemente entre el grupo que consiste en alquilo Ci -C8, -0-(alquilo Ci -C8), -C(0)R', -0C(0)R', -C(0)0R', -C(O)NH2, -C(0)NHR', -c (O)N(R')2, -n h c (O)R', -s (O)2R', -s (O)R', -o h ,
halogeno, -Ns, -NH2, -NH(R'), -N(R')2, -CN, -NHC(=NH)NH2, -NHCONH2, -S(=0)2R' y -SR, en los que cada R' se selecciona independientemente entre el grupo que consiste en hidrogeno, alquilo Ci-C8 y arilo no sustituido;
R11 es
Figure imgf000023_0002
Y es -alquileno C2-C20-, -heteroalquileno C2-C20-, -carbociclo C3-C8-, -arileno-, -heterociclo C3-C8-, -alquilen C1-C10-arileno-, -arileno-alquileno C1-C10-, -alquilen C1-C10-(carbociclo C3-C8)-, -(carbociclo C3-C8)-alquileno C1-C10-, -alquilen C1-C10-(heterociclo C3-C8)- 0 -(heterociclo C3-C8)-alquileno C1-C10-;
Z es
Figure imgf000024_0001
L es un anticuerpo;
X es O.
Otro aspecto de la invencion se refiere un compuesto de formula IIc :
Figure imgf000024_0002
o una de sus sales o solvatos farmaceuticamente aceptables, en la que, independientemente cada vez que esta presente, R1' es
Figure imgf000024_0003
Y es -alquileno C2-C20-, -heteroalquileno C2-C20-, -carbociclo C3-C8-, -arileno-, -heterocicio C3-C8-, -alquilen Ci -Cio-arileno-, -arileno-alquileno C1-C10-, -alquilen Ci-Cio-(carbociclo C3-C8)-, -(carbociclo C3-C8)-alquileno C1-C10-, -alquilen Ci-Cio-(heterociclo C3-C8)- 0 -(heterocicio C3-C8)-alquileno C1-C10-; Z' es
Figure imgf000025_0001
L es un anticuerpo;
D esta ausente;
R2' es hidrogeno, alquilo C i -C 8, haloalquilo C i -C 8, o esta ausente si
Figure imgf000025_0002
esta presente;
R3A' y R3B' son cualquiera de los siguientes:
(i) R3A' es alquilo Ci -C8, haloalquilo Ci -C8, carbociclilo C3-C80 halogeno; y R3B' es alquilo Ci -C8, haloalquilo Ci -C8, carbociclilo C3-C8, 0 halogeno, 0 R3B' es alquileno C2-C4 y forma un anillo saturado de 5 a 6 miembros como se indica mediante
Figure imgf000025_0003
0
(ii) R3A' y R3B' tomados Juntos son alquileno C2-C8, dicho alquileno C2-C8 cuando se toma Junto con el carbono al que esta enlazado, forma un anillo carbodclico saturado; 0 heteroalquileno Ci -C8, dicho heteroalquileno Ci -C8, Junto con el carbono al que esta enlazado, forma un anillo heterodclico saturado; (i)
(ii) R5 es
Figure imgf000026_0001
heterociclilo Ci-Cio, carbociclilo C3-C8 y arilo C6-C14 opcionalmente sustituido con 1, 2, 3, 4 0 5 grupos seleccionados independientemente entre el grupo que consiste en -alquilo Ci-C8, -alquil Ci -C8-N(R')2, -alquil Ci -C8-C(O)R', -alquil Ci -C8-C(O)OR' -0-(alquilo Ci-C8), -C(0)R', -0C(0)R', -C(0)0R', -C(O)N(R')2, -NHC(0)R', -S(0 )2R', -S(0)R', -Oh , halogeno, -N3, -N(R')2, -CN, -NHC(=NH)NH2, -NHCONH2, -S(=0 )2R' y -SR', en los que cada R' se selecciona independientemente entre el grupo que consiste en hidrogeno, alquilo C1-C8 y arilo no sustituido, 0 dos R' pueden, Junto con el nitrogeno al que estan unidos, forman un heterociclilo Ci -Cio; 0 R5 es
Figure imgf000026_0002
opcionalmente sustituido con 1, 2, 3, 4 0 5 grupos seleccionados independientemente entre el grupo que consiste en alquilo Ci -C8, -alquil Ci -C8-N(R')2, -alquil Ci -C8-C(O)R', -alquil Ci -C8-C(O)OR', -0-(alquilo Ci -C8), -c (O)R', -o c (O)R', -c (O)o r ', -c (O)N(R')2, -n h c (O)R', -s (O)2R', -s (O)R', -o h ,
halogeno, -N3, -N(R')2, -CN, -NHC(=NH)NH2, -NHCONH2, -S(=0)2R', -SR' y arileno-R', en los que cada R' se selecciona independientemente entre el grupo que consiste en hidrogeno, alquilo Ci -C8, heterociclilo Ci -C8, alquilen Ci-Cio-heterociclilo C3-C8 y arilo, 0 dos R' pueden, Junto con el nitrogeno al que estan unidos, formar un heterociclilo Ci -Cio;
R6 es hidrogeno, -alquilo Ci -C8, -alquenilo C2-C8, -alquinilo C2-C80 -haloalquilo Ci -C8;
R12 es hidrogeno, alquilo C1-C4, heterociclilo Ci -Cio 0 arilo C6-C14;
R13 es heterociclilo Ci-Cio; y
X es O
Otro aspecto de la invencion se refiere un compuesto de formula IIIc :
Figure imgf000026_0003
0 una de sus sales 0 solvatos farmaceuticamente aceptables, en la que, independientemente cada vez que esta presente,
W es
Figure imgf000027_0001
R1 es hidrogeno, alquilo C i -C 8 o haloalquilo C i -C8;
R2 es hidrogeno, alquilo C i -C 8 o haloalquilo C i -C8;
r 3A y r 3B son cualquiera de los siguientes:
(i) R3A es alquilo C i -C8, haloalquilo C i -C8, carbociclilo C3-C80 halogeno; y
R3B es alquilo C i -C8, haloalquilo C i -C8, carbociclilo C3-C80 halogeno; 0
(i) R3A y R3B tornados Juntos son alquileno C2-C8, dicho alquileno C2-C8 cuando se toma Junto con el carbono al que esta enlazado, forma un anillo carbodclico saturado; 0 heteroalquileno C i -C8, dicho heteroalquileno C i -C8, Junto con el carbono al que esta enlazado, forma un anillo heterodclico saturado;
(ii) R5 es
Figure imgf000027_0002
opcionalmente sustituido con 1, 2, 3, 4 0 5 grupos seleccionados independientemente entre el grupo que consiste en alquilo Ci -C8, -0-(alquilo Ci-C8), -C(0)R', -0C(0)R', -C(0)0R', -C(0)NH2, -C(0)NHR', -C(0 )N(R')2, -NHC(0)R', -S(0 )2R', -S(0)R', -OH, halogeno, -N3, -NH2, -NH(R'), -N(R')2, -CN, -NHC(=NH)NH2, -NHCONH2, -S(=0 )2R' y -SR', en los que cada R' se selecciona independientemente entre el grupo que consiste en hidrogeno, alquilo C1-C8 y arilo no sustituido;
R11' es
Figure imgf000028_0001
Y es -alquileno C2-C20-, -heteroalquileno C2-C20-, -carbociclo C3-C8-, -arileno-, -heterociclo C3-C8-, -alquilen C i -Cio-arileno-, -arileno-alquileno C1-C10-, -alquilen Ci-Ci0-(carbociclo C3-C s)-, -(carbociclo C3-Cs)-alquileno C1-C10-, -alquilen C1-C10-(heterociclo C3-C s)- o -(heterociclo C3-Cs)-alquileno C1-C10-; Z' es
Figure imgf000028_0002
o -NH-;
L es un anticuerpo;
X es O.
Otro aspecto de la invencion se refiere un compuesto de formula lid :
Figure imgf000028_0003
o una de sus sales 0 solvatos farmaceuticamente aceptables, en la que, independientemente cada vez que esta presente,
L es un anticuerpo;
[engarce] es un engarce divalente;
D esta ausente;
R2 es hidrogeno, alquilo C-i-Cs, haloalquilo Ci-Cs 0 esta ausente si ~'n esta presente ;
R3A' y R3B' son cualquiera de los siguientes: (i)
(i) R3A' es alquilo C 1-C s, haloalquilo C 1-C s, carbociclilo C3-C s o halogeno; y
R3B' es alquilo C 1-C s, haloalquilo C1-C s, carbociclilo C3-C s 0 halogeno, 0 R3B' es alquileno C2-C4 y forma un anillo saturado de 5 a 6 miembros segun se indica mediante ''■»; o
(ii) R3A' y R3B' tornados Juntos son alquileno C2-C8, dicho alquileno C2-C8 cuando se toma Junto con el carbono al que esta enlazado, forma un anillo carbodclico saturado; 0 heteroalquileno Ci -C8, dicho heteroalquileno Ci -C8, Junto con el carbono al que esta enlazado, forma un anillo heterodclico saturado;
(ii)
R5 es
Figure imgf000029_0001
heterociclilo C1-C1o, carbociclilo C3-C8 y arilo C6-C14 opcionalmente sustituido con 1, 2, 3, 4 0 5 grupos seleccionados independientemente entre el grupo que consiste en -alquilo C1-C8, -alquil C1-C8-N(R')2, -alquil C1-C8-C(0)R', -alquil C1-C8-C(0)0R' -O-(alquil0 C1-C8), -C(0)R', -0C(0)R', -C(0)0R', -C(0)N(R')2, -NHC(0)R', -S(0 )2R', -S(0)R', -Oh , halogeno, -N3, -N(R')2, -CN, -NHC(=NH)NH2, -NHCONH2, -S(=0 )2R' y -SR', en los que cada R' se selecciona independientemente entre el grupo que consiste en hidrogeno, alquilo C1-C8 y arilo no sustituido, 0 dos R' pueden, Junto con el nitrogeno al que estan unidos, forman un heterociclilo C1-C10;
0 R5 es
Figure imgf000029_0002
opcionalmente sustituido con 1, 2, 3, 4 0 5 grupos seleccionados independientemente entre el grupo que consiste en alquilo C1-C8, -alquil C1-C8-N(R')2, -alquil C1-C8-C(0 )R', -alquil C1-C8-C(O)0 R', -O-(alquil0 C1-C8), -c (O)R', -o c (O)R', -c (O)o r ', -c (O)N(R')2, -n h c (O)R', -s (O)2R', -s (O)R', -o h ,
halogeno, -N3, -N(R')2, -CN, -NHC(=NH)NH2, -NHCONH2, -S(=0)2R', -SR' y arileno-R', en Ios que cada R' se selecciona independientemente entre el grupo que consiste en hidrogeno, alquilo C i -C 8, heterociclilo C i -C8, alquileno Ci-Cio-heterociclilo C3-C8 y arilo, o dos R' pueden, Junto con el nitrogeno al que estan unidos, formar un heterociclilo Ci-Cio;
R6 es hidrogeno, -alquilo C i -C8, -alquenilo C2-C8, -alquinilo C2-C8 o -haloalquilo C i -C8;
R12 es hidrogeno, alquilo C1-C4, heterociclilo Ci-Cio o arilo C6-C14;
R13 es heterociclilo C1-C10; y
X es O
Otro aspecto de la invencion se refiere un compuesto de formula Mid:
Figure imgf000030_0001
o una de sus sales o solvatos farmaceuticamente aceptables, en la que, independientemente cada vez que esta presente,
W es
Figure imgf000030_0002
R1 es hidrogeno, alquilo Ci-C8 o haloalquilo Ci -C8;
R2 es hidrogeno, alquilo Ci-C8 o haloalquilo Ci -C8;
R3A y R3B son cualquiera de los siguientes:
(i) R3A es alquilo Ci-C8, haloalquilo Ci-C8, carbociclilo C3-C8 o halogeno; y
R3B es alquilo Ci-C8, haloalquilo Ci-C8, carbociclilo C3-C8 o halogeno; o
(ii) R3A y R3B tomados Juntos son alquileno C2-C8, dicho alquileno C2-C8 cuando se toma Junto con el carbono al que esta enlazado, forma un anillo carbodclico saturado; o heteroalquileno Ci -C8, dicho heteroalquileno Ci -C8, Junto con el carbono al que esta enlazado, forma un anillo heterodclico saturado;
(i) R5 es
Figure imgf000031_0001
opcionalmente sustituido con 1, 2, 3, 4 o 5 grupos seleccionados independientemente entre el grupo que consiste en alquilo Ci -C8, -0-(alquilo Ci-C8), -C(0)R', -0C(0)R', -C(0)0R', -C(O)NH2, -C(0)NHR', -C(0)N(R')2, -NHC(0)R', -S(0)2R', -S(0)R', -OH, halogeno, -Ns, -NH2, -NH(R'), -N(R')2, -CN, -NHC(=NH)NH2, -NHCONH2, -S(=0)2R' y -Sr , en los que cada R' se selecciona independientemente entre el grupo que consiste en hidrogeno, alquilo Ci -C8 y arilo no sustituido;
[engarce] es un engarce divalente;
L es un anticuerpo;
X es O.
En determinadas realizaciones, la presente invencion se refiere a cualquiera de los compuestos mencionados anteriormente y las definiciones correspondientes, en los que el compuesto esta representado por
Figure imgf000031_0002
En determinadas realizaciones, la presente invencion se refiere a cualquiera de los compuestos mencionados anteriormente y las definiciones correspondientes, en los que W es
Figure imgf000031_0003
En determinadas realizaciones, la presente invencion se refiere a cualquiera de los compuestos mencionados anteriormente y las definiciones correspondientes, en los que W es
Figure imgf000032_0001
En determinadas realizaciones, la presente invencion se refiere a cualquiera de Ios compuestos mencionados anteriormente y las definiciones correspondientes, en Ios que R1 es hidrogeno.
En determinadas realizaciones, la presente invencion se refiere a cualquiera de Ios compuestos mencionados anteriormente y las definiciones correspondientes, en Ios que R1 es alquilo C i -C8.
En determinadas realizaciones, la presente invencion se refiere a cualquiera de Ios compuestos mencionados anteriormente y las definiciones correspondientes, en Ios que R1 es metilo.
En determinadas realizaciones, la presente invencion se refiere a cualquiera de Ios compuestos mencionados anteriormente y las definiciones correspondientes, en Ios que R2 es hidrogeno.
En determinadas realizaciones, la presente invencion se refiere a cualquiera de Ios compuestos mencionados anteriormente y las definiciones correspondientes, en Ios que R2 es alquilo C1-C8.
En determinadas realizaciones, la presente invencion se refiere a cualquiera de Ios compuestos mencionados anteriormente y las definiciones correspondientes, en Ios que R2 es metilo.
En determinadas realizaciones, la presente invencion se refiere a cualquiera de Ios compuestos mencionados anteriormente y las definiciones correspondientes, en Ios que R1 es hidrogeno; y R2 es metilo.
En determinadas realizaciones, la presente invencion se refiere a cualquiera de Ios compuestos mencionados anteriormente y las definiciones correspondientes, en Ios que R1 es metilo; y R2 es metilo.
En determinadas realizaciones, la presente invencion se refiere a cualquiera de Ios compuestos mencionados anteriormente y las definiciones correspondientes, en Ios que R3A es alquilo C1-C8, haloalquilo C1-C80 carbociclilo C3-C8, ; y R3B es alquilo C1-C8, haloalquilo C1-C8, carbociclilo C3-C80 halogeno.
En determinadas realizaciones, la presente invencion se refiere a cualquiera de Ios compuestos mencionados anteriormente y las definiciones correspondientes, en Ios que R3A es hidrogeno, alquilo C1-C8, haloalquilo C1-C8, carbociclilo C3-C8; y R3B es alquilo C1-C8, haloalquilo C1-C8, carbociclilo C3-C80 halogeno.
En determinadas realizaciones, la presente invencion se refiere a cualquiera de Ios compuestos mencionados anteriormente y las definiciones correspondientes, en las que R3A es halogeno.
En determinadas realizaciones, la presente invencion se refiere a cualquiera de Ios compuestos mencionados anteriormente y las definiciones correspondientes, en Ios que R3A es alquilo C1-C8.
En determinadas realizaciones, la presente invencion se refiere a cualquiera de Ios compuestos mencionados anteriormente y las definiciones correspondientes, en Ios que R3A es metilo.
En determinadas realizaciones, la presente invencion se refiere a cualquiera de Ios compuestos mencionados anteriormente y las definiciones correspondientes, en Ios que R3B es alquilo C1-C8.
En determinadas realizaciones, la presente invencion se refiere a cualquiera de Ios compuestos mencionados anteriormente y las definiciones correspondientes, en Ios que R3B es metilo.
En determinadas realizaciones, la presente invencion se refiere a cualquiera de Ios compuestos mencionados anteriormente y las definiciones correspondientes, en Ios que R3B es isopropilo.
En determinadas realizaciones, la presente invencion se refiere a cualquiera de Ios compuestos mencionados anteriormente y las definiciones correspondientes, en Ios que R3B es carbociclilo C3-C8.
En determinadas realizaciones, la presente invencion se refiere a cualquiera de Ios compuestos mencionados anteriormente y las definiciones correspondientes, en Ios que R3B es ciclohexilo.
En determinadas realizaciones, la presente invencion se refiere a cualquiera de Ios compuestos mencionados anteriormente y las definiciones correspondientes, en Ios que R3A es alquilo C1-C8; y R3B es alquilo C1-C8.
En determinadas realizaciones, la presente invencion se refiere a cualquiera de Ios compuestos mencionados anteriormente y las definiciones correspondientes, en Ios que R3A es metilo; y R3B es metilo.
En determinadas realizaciones, la presente invencion se refiere a cualquiera de Ios compuestos mencionados anteriormente y las definiciones correspondientes, en Ios que R3A y R3B tornados Juntos son alquileno C2-C80 heteroalquileno C i -C8.
En determinadas realizaciones, la presente invencion se refiere a cualquiera de Ios compuestos mencionados anteriormente y las definiciones correspondientes, en Ios que R3Ay R3B tornados Juntos son alquileno C2-C8.
En determinadas realizaciones, la presente invencion se refiere a cualquiera de Ios compuestos mencionados anteriormente y las definiciones correspondientes, en Ios que R3Ay R3B tornados Juntos son -CH2CH2-.
En determinadas realizaciones, la presente invencion se refiere a cualquiera de Ios compuestos mencionados anteriormente y las definiciones correspondientes, en Ios que R3Ay R3B tornados Juntos son -CH2CH2CH2-.
En determinadas realizaciones, la presente invencion se refiere a cualquiera de Ios compuestos mencionados anteriormente y las definiciones correspondientes, en Ios que R3Ay R3B tornados Juntos son -CH2CH2CH2CH2-. En determinadas realizaciones, la presente invencion se refiere a cualquiera de Ios compuestos mencionados anteriormente y las definiciones correspondientes, en Ios que R3Ay R3B tornados Juntos son heteroalquileno C i -C8. En determinadas realizaciones, la presente invencion se refiere a cualquiera de Ios compuestos mencionados anteriormente y las definiciones correspondientes, en Ios que R3Ay R3B tornados Juntos son -CH2OCH2-.
En determinadas realizaciones, la presente invencion se refiere a cualquiera de Ios compuestos mencionados anteriormente y las definiciones correspondientes, en Ios que R5 es
Figure imgf000033_0001
En determinadas realizaciones, la presente invencion se refiere a cualquiera de Ios compuestos mencionados anteriormente y las definiciones correspondientes, en Ios que R5 es
Figure imgf000033_0002
En determinadas realizaciones, la presente invencion se refiere a cualquiera de Ios compuestos mencionados anteriormente y las definiciones correspondientes, en Ios que R5 es
Figure imgf000033_0003
En determinadas realizaciones, la presente invencion se refiere a cualquiera de Ios compuestos mencionados anteriormente y las definiciones correspondientes, en Ios que R5 es
Figure imgf000034_0001
En determinadas realizaciones, la presente invencion se refiere a cualquiera de Ios compuestos mencionados anteriormente y las definiciones correspondientes, en los que R5 es
Figure imgf000034_0002
En determinadas realizaciones, la presente invencion se refiere a cualquiera de los compuestos mencionados anteriormente y las definiciones correspondientes, en los que R5 es
Figure imgf000034_0003
En determinadas realizaciones, la presente invencion se refiere a cualquiera de los compuestos mencionados anteriormente y las definiciones correspondientes, en los que R5 es 10
Figure imgf000034_0004
En determinadas realizaciones, la presente invencion se refiere a cualquiera de los compuestos mencionados anteriormente y las definiciones correspondientes, en los que R5 es
Figure imgf000034_0005
En determinadas realizaciones, la presente invencion se refiere a cualquiera de los compuestos mencionados anteriormente y las definiciones correspondientes, en los que R5 es
Figure imgf000034_0006
En determinadas realizaciones, la presente invencion se refiere a cualquiera de los compuestos mencionados anteriormente y las definiciones correspondientes, en los que R5 es
Figure imgf000034_0007
En determinadas realizaciones, la presente invencion se refiere a cualquiera de los compuestos mencionados anteriormente y las definiciones correspondientes, en los que R5 es
Figure imgf000035_0001
En determinadas realizaciones, la presente invencion se refiere a cualquiera de Ios compuestos mencionados anteriormente y las definiciones correspondientes, en los que R5 es
Figure imgf000035_0002
En determinadas realizaciones, la presente invencion se refiere a cualquiera de los compuestos mencionados anteriormente y las definiciones correspondientes, en los que R5 es
Figure imgf000035_0003
En determinadas realizaciones, la presente invencion se refiere a cualquiera de los compuestos mencionados anteriormente y las definiciones correspondientes, en los que R5 es 10
Figure imgf000035_0004
En determinadas realizaciones, la presente invencion se refiere a cualquiera de los compuestos mencionados anteriormente y las definiciones correspondientes, en los que R5 es
Figure imgf000035_0005
En determinadas realizaciones, la presente invencion se refiere a cualquiera de los compuestos mencionados anteriormente y las definiciones correspondientes, en los que R5 es
Figure imgf000035_0006
En determinadas realizaciones, la presente invencion se refiere a cualquiera de los compuestos mencionados anteriormente y las definiciones correspondientes, en los que R5 es
Figure imgf000036_0001
En determinadas realizaciones, la presente invencion se refiere a cualquiera de Ios compuestos mencionados anteriormente y las definiciones correspondientes, en Ios que R6 es hidrogeno.
En determinadas realizaciones, la presente invencion se refiere a cualquiera de Ios compuestos mencionados anteriormente y las definiciones correspondientes, en Ios que R6 es alquilo C i -C8.
En determinadas realizaciones, la presente invencion se refiere a cualquiera de Ios compuestos mencionados anteriormente y las definiciones correspondientes, en Ios que R6 es metilo.
En determinadas realizaciones, la presente invencion se refiere a cualquiera de Ios compuestos mencionados anteriormente y las definiciones correspondientes, en Ios que X es O.
En determinadas realizaciones, la presente invencion se refiere a cualquiera de Ios compuestos mencionados anteriormente, o una sal farmaceuticamente aceptable o solvato de Ios mismos, y las definiciones correspondientes, en Ios que el compuesto se selecciona entre el grupo que consiste en:
W2-[(1-Aminociclopentil)carbonil]-W-[(3R,4S,5S)-3-metoxi-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-1-metoxi-2-metil-3-{[(1S)-2-feniM-(1,3-tiazol-2-il)etil]amino}-3-tioxopropil]pirrolidin-1-il}-5-metiM-oxoheptan-4-il]-W-metil-L-valinamida;
2-Metilalanil-A/-[(3R,4S,5S)-3-metoxM-{(2S)-2-[(1R,2R)-1-metoxi-2-metil-3-{[(1S)-2-feniM-(1,3-tiazol-2-il)etil]amino}-3-tioxopropil]pirrolidin-1-il}-5-metiM-oxoheptan-4-il]-A/-metil-L-valinamida;
2-Metilalanil-A/-[(3R,4S,5S)-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-3-{[(1S)-1-carboxi-2-feniletil] amino}-1-metoxi-2-metil-3-tioxopropil]pirrolidin-1-il}-3-metoxi-5-metil-1-oxoheptan-4-il] -W-metil-L-valinamida;
2-Metilalanil-A/-[(3R,4S,5S)-3-metoxi-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-1-metoxi-3-{[(2S)-1-metoxM-oxo-3-fenilpropan-2-il]amino}-2-metil-3-tioxopropil]pirrolidin-1-il}-5-metiM-oxoheptan-4-il]-W-metil-L-valinamida;
W2-[(1-Aminociclopentil)carbonil]-W-[(3R,4S,5S)-3-metoxM-{(2S)-2-[(1R,2R)-1-metoxi-2-metil-3-oxo-3-{[(1S)-2-feniM-(1,3-tiazol-2-il)etil]amino}propil]pirrolidin-1-il}-5-metil-1-oxoheptan-4-il]-A/-metil-L-valinamida;
W2-[(1-Aminociclopropil)carbonil]-N-[(3R,4S,5S)-3-metoxM-{(2S)-2-[(1R,2R)-1-metoxi-2-metN-3-oxo-3-{[(1S)-2-feniM-(1,3-tiazol-2-il)etil]amino}propil]pirrolidin-1-il}-5-metiM-oxoheptan-4-il]-A/-metil-L-valinamida;
1- Amino-N-[(2S)-1-{[(3R,4S,5S)-3-metoxi-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-1-metoxi-2-metil-3-oxo-3-{[(1S)-2-feniM-(1,3-tiazol-2- il)etil]amino}propil]pirrolidin-1-il}-5-metil-1-oxoheptan-4-il](metil)amino}-3-metil-1-oxobutan-2-il]ciclohexanocarboxamida;
2-Metilalanil-A/-[(3R,4S,5S)-3-metoxM-{(2S)-2-[(1R,2R)-1-metoxi-2-metil-3-oxo-3-{[(1S)-2-feniM-(1,3-tiazol-2-il)etil]amino}propil]pirrolidin-1-il}-5-metiM-oxoheptan-4-il]-W-metil-L-valinamida;
2-Metilalanil-W-{(3R,4S,5S)-3-metoxi-1-[(2S)-2-{(1R,2R)-1-metoxi-2-metil-3-oxo-3-[(2-feniletil)amino]propil}pirrolidin-1-il]-5-metiM-oxoheptan-4-il}-W-metil-L-valinamida;
2-Metilalanil-W-[(3R,4S,5S)-3-metoxi-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-1-metoxi-2-metil-3-oxo-3-{[(1-fenilciclopropil)metil]amino}propil]pirrolidin-1 -il}-5-metil-1 -oxoheptan-4-il] -W-metil-L-valinamida;
2-Metilalanil-W-[(3R,4S,5S)-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-3-{[2-(ciclohepta-2,4,6-trien-1-il)etil]amino}-1-metoxi-2-metil-3-oxopropil]pirrolidin-1-il}-3-metoxi-5-metil-1-oxoheptan-4-il]-W-metil-L-valinamida;
2-Metilalanil-W-[(3R,4S,5S)-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-3-{[(1S)-1-carboxi-2-feniletil]amino}-1-metoxi-2-metil-3-oxopropil]pirrolidin-1-il}-3-metoxi-5-metil-1-oxoheptan-4-il]-W-metil-L-valinamida;
2-Metilalanil-W-[(3R,4S,5S)-3-metoxi-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-1-metoxi-3-{[(2S)-1-metoxi-1-oxo-3-fenilpropan-2-il]amino}-2-metil-3-oxopropil]pirrolidin-1-il}-5-metil-1-oxoheptan-4-il]-W-metil-L-valinamida;
W2-[(3-Aminooxetan-3-N)carbonN]-W-{(3R,4S,5S)-3-metoxi-1-[(2S)-2-{(1R,2R)-1-metoxi-2-metil-3-oxo-3-[(2-feniletil)amino]propil}pirrolidin-1-il]-5-metiM-oxoheptan-4-il}-W-metil-L-valinamida;
N,2-Dimetilalanil-W-[(3R,4S,5S)-3-metoxi-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-1-metoxi-3-{[(2S)-1-metoxi-1-oxo-3-fenN-propan-2-il]amino}-2-metil-3-tioxopropil]pirrolidin-1-il}-5-metil-1-oxoheptan-4-il]-W-metil-L-valinamida; N,2-dimetilalanil-N-[(3R,4S,5S)-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-3-{[(1S)-1-carboxi-2-feniletil]amino}-1-metoxi-2-metil-3-tioxopropil]pirrolidin-1-il}-3-metoxi-5-metil-1-oxoheptan-4-il]-N-metil-L-valinamida;
N,2-Dimetilalanil-N-[(3R,4S,5S)-3-metoxM{(2S)-2-[(1R,2R)-1-metoxi-2-metil-3-{[(1S)-2-fenil-1-(1,3-tiazol-2-il)etil]amino}-3-tioxopropil]pirrolidin-1-il}-5-metil-1-oxoheptan-4-il]-N-metil-L-valinamida;
N,2-Dimetilalanil-N-[(3R,4S,5S)-3-metoxi-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-1-metoxi-2-metil-3-oxo-3-{[(1S)-2-fenil-1-(1,3-tiazol-2-il)etil]amino}propil]pirrolidin-1-il}-5-metil-1-oxoheptan-4-il]-N-metil-L-valinamida;
2-Metil-L-prolil-N-[(3R,4S,5S)-3-metoxi-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-1-metoxi-2-metil-3-oxo-3-{[(1S)-2-fenil-1-(1,3-tiazol-2-il)etil]amino}propil]pirrolidin-1-il}-5-metil-1-oxoheptan-4-il]-N-metil-L-valinamida;
2-Metilalanil-N-[(3R,4S,5S)-1-(2S)-2-[(1R,2R)-3-{[1-(biddo[4,2,0]octa-1,3,5-trien-7-il)-2-metoxi-2-oxoetil] amino}-1- metoxi-2-metil-3-oxopropil]pirrolidin-1-il}-3-metoxi-5-metiM-oxoheptan-4-il]-N-metil-L-valinamida;
2- Metilalanil-N-[(3R,4S,5S)-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-3-{[biddo [4,2,0]octa-1,3,5-trien-7-il(carboxi)metil]amino}-1-metoxi-2-metil-3-oxopropil]pirrolidin-1-il}-3-metoxi-5-metil-1-oxoheptan-4-il]-N-metil-L-valinamida;
2-Metilalanil-N-[(3R,4S,5S)-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-3-{[(1S,2R)-1-hidroxi-1-fenilpropan-2-il]amino}-1-metoxi-2-metil-3-oxopropil]pirrolidin-1-il}-3-metoxi-5-metil-1-oxoheptan-4-il]-N-metil-L-valinamida;
N,2-dimetilalanil-N-{(1S,2R)-4-{(2S)-2-[(1R,2R)-3-{[(1S)-1-carboxi-2-feniletil]amino}-1-metoxi-2-metil-3-oxopropil]pirrolidin-1-il}-2-metoxi-1-[(lS)-1-metilpropil]-4-oxobutil}-N-metil-L-valinamida;
2-metil-L-prolil-N-[(3R,4S,5S)-3-metoxi-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-1-metoxi-3-{[(2S)-1-metoxi-1-oxo-3-fenilpropan-2-il]amino}-2-metil-3 oxopropil]pirrolidin-1-il}-5-metil-1-oxoheptan-4-il]-N-metil-L-valinamida;
2-metil-L-prolil-N-[(3R,4S,5S)-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-3-{[(1S)-1-carboxi-2-feniletil]amino}-1-metoxi-2-metil-3-oxopropil]pirrolidin-1-il}-3-metoxi-5-metil-1-oxoheptan-4-il]-N-metil-L-valinamida;
2-metilalanil-N-[(3R,4S,5S)-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-3-{[(2S)-1-ferc-butoxi-1-oxo-3-fenilpropan-2-il]amino}-1-metoxi-2-metil-3-oxopropil]pirrolidin-1-il}-3-metoxi-5-metil-1-oxoheptan-4-il]-N-metil-L-valinamida;
N,2-dimetilalanil-N-[(3R,4S,5S)-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-3-{[(2S)-1-ferc-butoxi-1-oxo-3-fenilpropan-2-il]amino}-1-metoxi-2-metil-3-oxopropil]pirrolidin-1-il}-3-metoxi-5-metil-1-oxoheptan-4-il]-N-metil-L-valinamida;
2-metil-D-prolil-N-[(3R,4S,5S)-3-metoxi-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-1-metoxi-3-{[(2S)-1-metoxi-1-oxo-3-fenil-propan-2-il]amino}-2-metil-3-oxopropil]pirrolidin-1-il}-5-metil-1-oxoheptan-4-il]-N-metil-L-valinamida;
2- metil-L-prolil-N-[(3R,4S,5S)-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-3-{[(1S,2R)-1-hidroxM-fenilpropan-2-il]amino}-1-metoxi-2-metil-3- oxopropil]pirrolidin-1-il}-3-metoxi-5-metil-1-oxoheptan-4-il]-N-metil-L-valinamida;
N,2-dimetilalanil-N-{(1S,2R)-4-{(2S)-2-[(1R,2R)-3-{[(1S)-1-bendl-2-(metilamino)-2-oxoetil] amino}-1-metoxi-2-metil-3-oxopropil]pirrolidin-1-il}-2-metoxi-1-[(1S)-1-metilpropil]-4-oxobutil}-N-metil-L-valinamida;
N,2-dimetilalanil-N-{(1S,2R)-4-{(2S)-2-[(1R,2R)-3-{[(1S)-2-amino-1-bendl-2-oxoetil]amino}-1-metoxi-2-metil-3-oxopropil]pirrolidin-1-il}-2-metoxi-1-[(lS)-1-metilpropil]-4-oxobutil}-N-metil-L-valinamida;
N,2-dimetilalanil-N-{(1S,2R)-4-{(2S)-2-[(1R,2R)-3-{[(1S)-1-bendl-2-oxo-2-(propilamino)etil]amino}-1-metoxi-2-metil-3-oxopropil]pirrolidin-1-il}-2-metoxi-1-[(1S)-1-metilpropil]-4-oxobutil}-N-metil-L-valinamida;
N,2-dimetilalanil-N-{(1S,2R)-4-{(2S)-2-[(1R,2R)-3-{[(1S)-1-bendl-2-(dietilamino)-2-oxoetil] amino}-1-metoxi-2-metil-3-oxopropil]pirrolidin-1-il}-2-metoxi-1-[(1S)-1-metilpropil]-4-oxobutil}-N-metil-L-valinamida;
N,2-dimetilalanil-N-{(1S,2R)-4-{(2S)-2-[(1R,2R)-3-{[(1S)-1-bendl-2-(ferc-butilamino)-2-oxoetil] amino}-1-metoxi-2-metil-3-oxopropil]pirrolidin-1-il}-2-metoxi-1-[(1S)-1-metilpropil]-4-oxobutil}-N-metil-L-valinamida;
N,2-dimetilalanil-N-[(3R,4S,5S)-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-3-{[(1S,2R)-1-hidroxi-1-fenilpropan-2-il]amino}-1-metoxi-2-metil-3-oxopropil]pirrolidin-1-il}-3-metoxi-5-metil-1-oxoheptan-4-il]-N-metil-L-valinamida;
3-metil-D-isovalil-N-{(1S,2R)-4-{(2S)-2-[(1R,2R)-3-{[(1S)-1-bendl-2-metoxi-2-oxoetil]amino}-1-metoxi-2-metil-3-oxopropil]pirrolidin-1-il}-2-metoxi-1-[(1S)-1-metilpropil]-4-oxobutil}-N-metil-L-valinamida;
3-metil-L-isovalil-N-{(1S,2R)-4-{(2S)-2-[(1R,2R)-3-{[(1S)-1-bendl-2-metoxi-2-oxoetil]amino}-1-metoxi-2-metil-3-oxopropil]pirrolidin-1-il}-2-metoxi-1-[(1S)-1-metilpropil]-4-oxobutil}-N-metil-L-valinamida;
L-isovalil-N-{(1S,2R)-4-{(2S)-2-[(1R,2R)-3-{[(1S)-1-bendl-2-metoxi-2-oxoetil]amino}-1-metoxi-2-metil-3-oxopropil]pirrolidin-1-il}-2-metoxi-1-[(1S)-1-metilpropil]-4-oxobutil}-N-metil-L-valinamida;
D-isovalil-N-{(1S,2R)-4-{(2S)-2-[(1R,2R)-3-{[(1S)-1-bendl-2-metoxi-2-oxoetil]amino}-1-metoxi-2-metil-3oxopropil]pirrolidin-1-il}-2-metoxi-1-[(1S)-1-metilpropil]-4-oxobutil}-N-metil-L-valinamida;
1.2- dimetil-L-prolil-N-{(1S,2R)-4-{(2S)-2-[(1R,2R)-3-{[(1S)-1-carboxi-2-feniletil]amino}-1-metoxi-2-metil-3-oxopropil]pirrolidin-1-il}-2-metoxi-1-[(1S)-1-metilpropil]-4-oxobutil}-N-metil-L-valinamida;
1.2- dimetil-D-prolil-N-{(1S,2R)-4-{(2S)-2-[(1R,2R)-3-{[(1S)-1-carboxi-2-feniletil]amino}-1-metoxi-2-metil-3-oxopropil]pirrolidin-1-il}-2-metoxi-1-[(1S)-1-metilpropil]-4-oxobutil}-N-metil-L-valinamida;
N-{(2R,3R)-3-Metoxi-3-[(2S)-1-{(3R,4S,5S)-3-metoxi-5-metil-4-[metil(N-{[(2S)-2-metilpiperidin-2-il]carbonil}-L-valil)amino]heptanoil}pirrolidin-2-il]-2-metilpropanoil}-L-fenilalaninato de metilo;
N-{(2R,3R)-3-Metoxi-3-[(2S)-1-{(3R,4S,5S)-3-metoxi-5-metil-4-[metil(N-{[(2R)-2-metilpiperidin-2-il]carbonil}-L-valil)amino]heptanoil}pirrolidin-2-il]-2-metilpropanoil}-L-fenilalaninato de metilo;
N-{(2R,3R)-3-metoxi-3-[(2S)-1-{(3R,4S,5S)-3-metoxi-5-metil-4-[metil(N-{[(2S)-2-metilpiperidin-2-il]carbonil}-L-valil)amino]heptanoil}pirrolidin-2-il]-2-metilpropanoil}-L-fenilalanina;
N-{(2R,3R)-3-metoxi-3-[(2S)-1-{(3R,4S,5S)-3-metoxi-5-metil-4-[metil(N-{[(2R)-2-metilpiperidin-2-il]carbonil}-L-valil)amino]heptanoil}pirrolidin-2-il]-2-metilpropanoil}-L-fenilalanina;
(2S)-N-[(2S)-1-{[(3R,4S,5S)-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-3-{[2-(ddohepta-2,4,6-trien-1-il)etil]amino}-1-metoxi-2-metil-3-oxopropil]pirrolidin-1-il}-3-metoxi-5-metil-1-oxoheptan-4-il](metil)amino}-3-metil-1-oxobutan-2-il]-2-metilpiperidin-2-carboxamida;
(2R)-N-[(2S)-H[(3R,4S,5S)-1-(2S)-2-[(1R,2R)-3-{[2-(ddohepta-2,4,6-trien-1-il)etil]amino}-1-metoxi-2-metil-3-oxopropil]pirrolidin-1-il}-3-metoxi-5-metiM-oxoheptan-4-il](metil)amino}-3-metiM-oxobutan-2-il]-2-metilpiperidin-2-carboxamida;
2-metil-L-prolil-N-[(3R,4S,5S)-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-3-{[2-(ddohepta-2,4,6-trien-1-il)etil]amino}-1-metoxi-2-metil-3-oxopropil]pirrolidin-1-il}-3-metoxi-5-metiM-oxoheptan-4-il]-N-metil-L-valinamida;
(2S)-N-[(2S)-{[(3R,4S,5S)-3-metoxM-{2S)-2-[(1R,2R)-1-metoxi-2-metil-3-oxo-3-{[(1S)-2-feniM-(1,3-tiazol-2-il)etil]amino}propil]pirrolidin-1-il}-5-metil-1-oxoheptan-4-il](metil)amino}-3-metil-1-oxobutan-2-il]-2-metilpiperidin-2-carboxamida;
(2R)-N-[(2S)-1-{[(3R,4S,5S)-3-metoxi-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-1-metoxi-2-metil-3-oxo-3-{[(1S)-2-feniM-(1,3-tiazol-2-il)etil]amino}propil]pirrolidin-1-il}-5-metil-1-oxoheptan-4-il](metil)amino}-3-metil-1-oxobutan-2-il]-2-metilpiperidin-2-carboxamida;
1.2- dimetil-D-prolil-N-[(3R,4S,5S)-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-3-{[(2S)-3-(4-aminofenil)-1-metoxi-1-oxopropan-2-il]amino}-1-metoxi-2-metil-3-oxopropil]pirrolidin-1-il}-3-metoxi-5-metil-1-oxoheptan-4-il]-N-metil-L-valinamida;
1.2- dimetil-D-prolil-N-[(3R,4S,5S)-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-3-{[(2S)-3-(4-aminofenil)-1-metoxi-1-oxopropan-2-il]amino}-1- metoxi-2-metil-3-oxopropil]pirrolidin-1-il}-3-metoxi-5-metil-1-oxoheptan-4-il]-N-metil-L-valinamida;
1.2- dimetil-L-prolil-N-[(3R,4S,5S)-3-metoxi-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-1-metoxi-3-{[(2S)-1-metoxi-1-oxo-3-(1,2,3,4-tetrahidroquinolin-6-il)propan-2-il]amino}-2-metil-3-oxopropil]pirrolidin-1-il}-5-metil-1-oxoheptan-4-il]-N-metil-L-valinamida;
1.2- dimetil-L-prolil-N-[(3R,4S,5S)-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-3-{[(2S)-3-(4-aminofenil)-1-metoxM-oxopropan-2-il]amino}-1-metoxi-2-metil-3-oxopropil]pirrolidin-1-il}-3-metoxi-5-metil-1-oxoheptan-4-il]-N-metil-L-valinamida;
1.2- dimetil-L-prolil-N-[(3R,4S,5S)-3-metoxi-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-1-metoxi-3-{[(2S)-1-metoxi-1-oxo-3-fenilpropan-2-il]amino}-2-metil-3-oxopropil]pirrolidin-1-il}-5-metil-1-oxoheptan-4-il]-N-metil-L-valinamida;
2- metilalanil-N-[(3R,4S,5S)-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-3-{[(2R,4S)-4-carboxi-1-fenilpentan-2-il]amino}-1-metoxi-2-metil-3-oxopropil]pirrolidin-1-il}-3-metoxi-5-metil-1-oxoheptan-4-il]-N-metil-L-valinamida;
2-metilalanil-N-[(3R,4S,5S)-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-3-(biddo[1,1,1]pent-1-ilamino)-1-metoxi-2-metil-3-oxopropil]pirrolidin-1-il}-3-metoxi-5-metil-1-oxoheptan-4-il]-N-metil-L-valinamida;
2-metilalanil-N-[(3R,4S,5S)-3-metoxM-{(2S)-2-[(1R,2R)-1-metoxi-3-{[(1R)-2-metoxi-2-oxo-1-(1-fenilddopropil)etil]amino}-2-metil-3-oxopropil]pirrolidin-1-il}-5-metil-1-oxoheptan-4-il]-N-metil-L-valinamida;
2-metilalanil-N-[(3R,4S,5S)-3-metoxM-{(2S)-2-[(1R,2R)-1-metoxi-3-{[(1S)-2-metoxi-2-oxo-1-(1-fenilddopropil)etil]amino}-2-metil-3-oxopropil]pirrolidin-1-il}-5-metil-1-oxoheptan-4-il]-N-metil-L-valinamida;
2-metilalanil-N-[(3R,4S,5S)-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-3-({(1R)-1-[(7R)-biddo[4,2,0]octa- 1,3,5-trien-7-il]-2-metoxi-2-oxoetil}amino)-1-metoxi-2-metil-3-oxopropil]pirrolidin-1-il}-3-metoxi-5-metil-1-oxoheptan-4-il]-N-metil-L-valinamida; 2-metilalanil-N-[(3R,4S,5S)-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-3-({(1S)-1-[(7S)-biddo[4,2,0]oda-1,3,5-trien-7-il]-2-metoxi-2-oxoetil}amino)-1-metoxi-2-metil-3-oxopropil]pirrolidin-1-il}-3-metoxi-5-metiM-oxoheptan-4-il]-N-metil-L-valinamida; N,2-dimetilalanil-N-[(3R,4S,5S)-3-metoxi-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-1-metoxi-3-{[(2S)-1-metoxM-oxo-3-fenil-propan-2-il]amino}-2-metil-3-oxopropil]pirrolidin-1-il}-5-metiM-oxoheptan-4-il]-N-metil-L-valinamida;
2-metilalanil-N-[(3R,4S,5S)-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-3-({(1S)-1-[(7R)-biddo[4,2,0]oda-1,3,5-trien-7-il]-2-metoxi-2-oxoetil}amino)-1-metoxi-2-metil-3-oxopropil]pirrolidin-1-il}-3-metoxi-5-metiM-oxoheptan-4-il]-N-metil-L-valinamida; N, N,2-trimetilalanil-N-[(3R,4S,5S)-3-metoxi-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-1-metoxi-3-{[(2S)-1-metoxM-oxo-3-fenilpropan-2-il]amino}-2-metil-3-oxopropil]pirrolidin-1-il}-5-metil-1-oxoheptan-4-il] -N-metil-L-valinamida;
N, N,2-trimetilalanil-N-[(3R,4S,5S)-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-3-{[(1S)-1-carboxi-2-feniletil]amino}-1-metoxi-2-metil-3-oxopropil]pirrolidin-1-il}-3-metoxi-5-metil-1-oxoheptan-4-il]-N-metil-L-valinamida;
2-metilalanil-N-[(3R,4S,5S)-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-3-{[(R)-carboxi(1-fenilddopropil)metil]amino}-1-metoxi-2-metil-3-oxopropil]pirrolidin-1-il}-3-metoxi-5-metil-1-oxoheptan-4-il]-N-metil-L-valinamida;
difluoro{2-metilalanil-N-[(3R,4S,5S)-1-{(2S)-2-[(3R,4R,7S)-7-bendl-15-{2-[(3,5-dimetil-1H-pirrol-2-il-kappaN)metilideno]-2H-pirrol-5-il-kappaN}-4-metil-5,8,13-trioxo-2-oxa-6,9,12-triazapentadecan-3-il]pirrolidin-1-il}-3-metoxi-5-metil-1-oxoheptan-4-il]-N-metil-L-valinamidato}boro;
2-metil-D-prolil-N-[(3R,4S,5S)-3-metoxi-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-1-metoxi-2-metil-3-oxo-3-{[(1S)-2-feniM-(1,3-tiazol-2-il)etil]amino}propiljpirrolidin-1-il}-5-metiM-oxoheptan-4-il]-N-metil-L-valinamida;
N-{(2R,3R)-3-[(2S)-1-{(3R,4S,5S)-4-[{N-[(3-aminooxetan-3-il)carbonil]-L-valil}(metil)amino]-3-metoxi-5-metilheptanoil}pirrolidin-2-il]-3-metoxi-2-metilpropanoil}-L-fenilalaninato de metilo;
2-metilalanil-N-{(3R,4S,5S)-1-[(2S)-2-{(3R,4R,7S,12S)-7-bendM4-[3-doro-4-(propan-2-iloxi)fenil]-4-metiM2-[4-(8-metilimidazo[1,2-a]piridin-2-il)bendl]-5,8,14-trioxo-2,9-dioxa-6,13-diazatetradecan-3-il}pirrolidin-1-il]-3-metoxi-5-metil-1-oxoheptan-4-il}-N-metil-L-valinamida;
2-metilalanil-N-[(3R,4S,5S)-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-3-{[(2S)-1-{[4-(5-fluoro-1,3-benzotiazol-2-il)-2-metilfenil]amino}-1-oxo-3-fenilpropan-2-il]amino}-1-metoxi-2-metil-3-oxopropil]pirrolidin-1-il}-3-metoxi-5-metil-1-oxoheptan-4-il]-N-metil-L-valinamida;
1.2- dimetil-D-prolil-N-[(3R,4S,5S)-3-metoxi-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-1-metoxi-3-{[(2S)-1-metoxi-1-oxo-3-fenilpropan-2-il]amino}-2-metil-3-oxopropil]pirrolidin-1-il}-5-metil-1-oxoheptan-4-il] -N-metil-L-valinamida;
N,2-dimetilalanil-N-[(3R,4S,5S)-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-3-{[(2S)-3-(1H-indol-3-il)-1-metoxi-1-oxopropan-2-il]amino}-1-metoxi-2-metil-3-oxopropil}-3-metoxi-5-metil-1-oxoheptan-4-il]-N-metil-L-valinamida;
N,2-dimetilalanil-N-[(3R,4S,5S)-3-metoxM-{(2S)-2-[(1R,2R)-1-metoxi-2-metil-3-oxo-3-{[(2S)-1-oxo-3-feniM-(prop-2-en-1-iloxi)propan-2-il]amino}propil]pirrolidin-1-il}-5-metil-1-oxoheptan-4-il]-N-metil-L-valinamida;
2-metil-L-prolil-N-[(3R,4S,5S)-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-3-{[(2S)-1-terc-butoxi-1-oxo-3-fenilpropan-2-il]amino}-1-metoxi-2-metil-3-oxopropil]pirrolidin-1-il}-3-metoxi-5-metil-1-oxoheptan-4-il]-N-metil-L-valinamida;
N,2-dimetilalanil-N-[(3R,4S,5S)-3-metoxi-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-1-metoxi-2-metil-3-oxo-3-({(2S)-1-oxo-3-feniM-[(1H-1,2,3-triazol-4-ilmetil)amino]propan-2-il}amino)propil]pirrolidin-1-il}-5-metil-1-oxoheptan-4-il]-N-metil-L-valinamida; N,2-dimetilalanil-N-[(3R,4S,5S)-3-metoxM-{(2S)-2-[(1R,2R)-1-metoxi-2-metil-3-oxo-3-{[(2S)-1-oxo-3-feniM-(prop-2- in-1-ilamino)propan-2-il]amino}propil]pirrolidin-1-il}-5-metiM-oxoheptan-4-il]-N-metil-L-valinamida;
N,2-dimetilalanil-N-[(3R,4S,5S)-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-3-{[(2S)-3-(1H-imidazol-4-il)-1-metoxi-1-oxopropan-2-il]amino}-1-metoxi-2-metil-3-oxopropil}-3-metoxi-5-metil-1-oxoheptan-4-il]-N-metil-L-valinamida;
N,2-dimetilalanil-N-[(3R,4S,5S)-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-3-{[(2S)-3-(4-hidroxifenil)-1-metoxM-oxopropan-2-il]amino}-1-metoxi-2-metil-3-oxopropil}-3-metoxi-5-metil-1-oxoheptan-4-il]-N-metil-L-valinamida;
N,2-dimetilalanil-N-[(3R,4S,5S)-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-3-{[(1R)-1-carboxi-2-feniletil]amino}-1-metoxi-2-metil-3-oxopropil]pirrolidin-1-il}-3-metoxi-5-metil-1-oxoheptan-4-il]-N-metil-L-valinamida;
1.2- dimetil-L-prolil-N-[(3R,4S,5S)-3-metoxi-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-1-metoxi-2-metil-3-oxo-3-{[(2S)-1-oxo-3-feniM-(piperazin-1-il)propan-2-il]amino}propil]pirrolidin-1-il}-5-metil-1-oxoheptan-4-il]-N-metil-L-valinamida;
1.2- dimetil-L-prolil-N-[(3R,4S,5S)-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-3-{[(2S)-1-amino-3-fenilpropan-2-il]amino}-1-metoxi-2-metil-3- oxopropil]pirrolidin-1-il}-3-metoxi-5-metil-1-oxoheptan-4-il] -N-metil-L-valinamida; y
2-metil-D-prolil-W-[(3R,4S,5S)-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-3-{[2-(ciclohepta-2,4,6-trien-1-il)etil]amino}-1-metoxi-2-metil-3-oxopropil]pirrolidin-1-il}-3-metoxi-5-metil-1-oxoheptan-4-il] -W-metil-L-valinamida.
En determinadas realizaciones, la presente invencion se refiere a cualquiera de los compuestos mencionados anteriormente y las definiciones correspondientes, en los que R1 es
Figure imgf000040_0001
En determinadas realizaciones, la presente invencion se refiere a cualquiera de los compuestos mencionados anteriormente y las definiciones correspondientes, en los que R1 es
Figure imgf000040_0002
En determinadas realizaciones, la presente invencion se refiere a cualquiera de los compuestos mencionados anteriormente y las definiciones correspondientes, en los que R1 es
Figure imgf000040_0003
En determinadas realizaciones, la presente invencion se refiere a cualquiera de los compuestos mencionados anteriormente y las definiciones correspondientes, en los que Y es alquileno C2-C20.
En determinadas realizaciones, la presente invencion se refiere a cualquiera de los compuestos mencionados anteriormente y las definiciones correspondientes, en los que Y es -(CH2)p-; y p es 1-10.
En determinadas realizaciones, la presente invencion se refiere a cualquiera de los compuestos mencionados anteriormente y las definiciones correspondientes, en los que p es 1. En determinadas realizaciones, la presente invencion se refiere a cualquiera de los compuestos mencionados anteriormente y las definiciones correspondientes, en los que p es 2. En determinadas realizaciones, la presente invencion se refiere a cualquiera de los compuestos mencionados anteriormente y las definiciones correspondientes, en los que p es 3. En determinadas realizaciones, la presente invencion se refiere a cualquiera de los compuestos mencionados anteriormente y las definiciones correspondientes, en los que p es 4. En determinadas realizaciones, la presente invencion se refiere a cualquiera de los compuestos mencionados anteriormente y las definiciones correspondientes, en los que p es 5. En determinadas realizaciones, la presente invencion se refiere a cualquiera de los compuestos mencionados anteriormente y las definiciones correspondientes, en los que p es 6. En determinadas realizaciones, la presente invencion se refiere a cualquiera de los compuestos mencionados anteriormente y las definiciones correspondientes, en los que p es 7. En determinadas realizaciones, la presente invencion se refiere a cualquiera de los compuestos mencionados anteriormente y las definiciones correspondientes, en los que p es 8. En determinadas realizaciones, la presente invencion se refiere a cualquiera de los compuestos mencionados anteriormente y las definiciones correspondientes, en los que p es 9. En determinadas realizaciones, la presente invencion se refiere a cualquiera de los compuestos mencionados anteriormente y las definiciones correspondientes, en los que p es 10.
En determinadas realizaciones, la presente invencion se refiere a cualquiera de los compuestos mencionados anteriormente y las definiciones correspondientes, en los que Y es heteroalquileno C2-C20.
En determinadas realizaciones, la presente invencion se refiere a cualquiera de los compuestos mencionados anteriormente y las definiciones correspondientes, en los que Y es -(CH2CH2O)qCH2CH2-; y q es 1-10.
En determinadas realizaciones, la presente invencion se refiere a cualquiera de los compuestos mencionados anteriormente y las definiciones correspondientes, en los que q es 1. En determinadas realizaciones, la presente invencion se refiere a cualquiera de Ios compuestos mencionados anteriormente y las definiciones correspondientes, en Ios que q es 2. En determinadas realizaciones, la presente invencion se refiere a cualquiera de Ios compuestos mencionados anteriormente y las definiciones correspondientes, en Ios que q es 3. En determinadas realizaciones, la presente invencion se refiere a cualquiera de Ios compuestos mencionados anteriormente y las definiciones correspondientes, en Ios que q es 4. En determinadas realizaciones, la presente invencion se refiere a cualquiera de Ios compuestos mencionados anteriormente y las definiciones correspondientes, en Ios que q es 5. En determinadas realizaciones, la presente invencion se refiere a cualquiera de Ios compuestos mencionados anteriormente y las definiciones correspondientes, en Ios que q es 6. En determinadas realizaciones, la presente invencion se refiere a cualquiera de Ios compuestos mencionados anteriormente y las definiciones correspondientes, en Ios que q es 7. En determinadas realizaciones, la presente invencion se refiere a cualquiera de Ios compuestos mencionados anteriormente y las definiciones correspondientes, en Ios que q es 8. En determinadas realizaciones, la presente invencion se refiere a cualquiera de Ios compuestos mencionados anteriormente y las definiciones correspondientes, en Ios que q es 9. En determinadas realizaciones, la presente invencion se refiere a cualquiera de Ios compuestos mencionados anteriormente y las definiciones correspondientes, en Ios que q es 10.
En determinadas realizaciones, la presente invencion se refiere a cualquiera de Ios compuestos mencionados anteriormente y las definiciones correspondientes, en Ios que Z es
Figure imgf000041_0001
En determinadas realizaciones, la presente invencion se refiere a cualquiera de Ios compuestos mencionados anteriormente y las definiciones correspondientes, en Ios que Z es
Figure imgf000041_0002
En determinadas realizaciones, la presente invencion se refiere a cualquiera de Ios compuestos mencionados anteriormente y las definiciones correspondientes, en Ios que Z es
Figure imgf000041_0003
En determinadas realizaciones, la presente invencion se refiere a cualquiera de Ios compuestos mencionados anteriormente y las definiciones correspondientes, en Ios que Z es
Figure imgf000041_0004
En determinadas realizaciones, la presente invencion se refiere a cualquiera de Ios compuestos mencionados anteriormente y las definiciones correspondientes, en Ios que Z es
Figure imgf000041_0005
En determinadas realizaciones, la presente invencion se refiere a cualquiera de Ios compuestos mencionados anteriormente y las definiciones correspondientes, en Ios que Z es
Figure imgf000042_0001
En determinadas realizaciones, la presente invencion se refiere a cualquiera de Ios compuestos mencionados anteriormente y las definiciones correspondientes, en los que R7 es F o Cl; y h es 4 o 5.
En determinadas realizaciones, la presente invencion se refiere a cualquiera de los compuestos mencionados anteriormente y las definiciones correspondientes, en los que R7 es F; y h es 3, 4 o 5.
En determinadas realizaciones, la presente invencion se refiere a cualquiera de los compuestos mencionados anteriormente y las definiciones correspondientes, en los que R7 es F; y h es 5.
En determinadas realizaciones, la presente invencion se refiere a cualquiera de los compuestos mencionados anteriormente y las definiciones correspondientes, en los que Z es -NH2.
En determinadas realizaciones, la presente invencion se refiere a cualquiera de los compuestos mencionados anteriormente y las definiciones correspondientes, en los que G es Cl. En determinadas realizaciones, la presente invencion se refiere a cualquiera de los compuestos mencionados anteriormente y las definiciones correspondientes, en los que G es Br. En determinadas realizaciones, la presente invencion se refiere a cualquiera de los compuestos mencionados anteriormente y las definiciones correspondientes, en los que G es I.
En determinadas realizaciones, la presente invencion se refiere a cualquiera de los compuestos mencionados anteriormente y las definiciones correspondientes, en los que el compuesto se selecciona entre el grupo que consiste en los compuestos de la Tabla 18B.
En determinadas realizaciones, la presente invencion se refiere a cualquiera de los compuestos mencionados anteriormente y las definiciones correspondientes, en los que el compuesto se selecciona entre el grupo que consiste en:
Figure imgf000042_0002
y
Figure imgf000043_0001
En determinadas realizaciones, la presente invencion se refiere a cualquiera de Ios compuestos mencionados anteriormente y las definiciones correspondientes, en Ios que Z es
Figure imgf000043_0002
En determinadas realizaciones, la presente invencion se refiere a cualquiera de Ios compuestos mencionados anteriormente y las definiciones correspondientes, en Ios que Z es
Figure imgf000043_0003
En determinadas realizaciones, la presente invencion se refiere a cualquiera de Ios compuestos mencionados anteriormente y las definiciones correspondientes, en Ios que Z es
Figure imgf000043_0004
En determinadas realizaciones, la presente invencion se refiere a cualquiera de Ios compuestos mencionados anteriormente y las definiciones correspondientes, en Ios que Z es -NHL.
En determinadas realizaciones, la presente invencion se refiere a cualquiera de Ios compuestos mencionados anteriormente y las definiciones correspondientes, en Ios que Z es
Figure imgf000043_0005
En determinadas realizaciones, la presente invencion se refiere a cualquiera de Ios compuestos mencionados anteriormente y las definiciones correspondientes, en Ios que Z es
Figure imgf000043_0006
En determinadas realizaciones, la presente invencion se refiere a cualquiera de Ios compuestos mencionados anteriormente y las definiciones correspondientes, en Ios que L es H(C)-.
En determinadas realizaciones, la presente invencion se refiere a cualquiera de Ios compuestos anteriormente mencionados y definiciones adjuntas, en las que L es un anticuerpo seleccionado de un anticuerpo murino para el tratamiento de cancer de ovarios tales como oregovomab (o Va REX®); un anticuerpo lgG2a murino para el tratamiento de cancer colorrectal tales como edrecolomab (PANOREX®); un anticuerpo quimerico IgG anti-EGFR para el tratamiento de canceres positivos de factor de crecimiento epidermico, tales como cancer de cabeza y cuello, por ejemplo cetuximab (ERBITUX®); un anticuerpo humanizado para el tratamiento de sarcoma, tales como el Antlcuerpo Monoclonal Humanizado al Receptor de Vitronectina (civp3) como Vitaxin®; un anticuerpo IgGi humanizado para el tratamiento de leucemia linfocftica cronica (CLL) tales como alemtuzumab (CAMPATH l/H®); SMART lD10 que es un anticuerpo anti-HLA-DR humanizado para el tratamiento de linfoma no hodkiniano; 1311 Lym-1 (ONCOLy M®) que es un anticuerpo anti-HLA-DrIO murino radiomarcado para el tratamiento de linfoma no hodkiniano; un anti-CDl mAb humanizado para el tratamiento de Enfermedad de Hodgkin o un linfoma no hodgkiniano tal como ALLOMUNE®; labetuzumab (CEAClDE®) que es un anticuerpo anti-CEA humanizado para el cancer colorrectal; bevacizumab (AVASTIN®) que es un mAb anti-VEGF-A humanizado para el tratamiento de cancer de cerebro, de colon, de rinon o de pulmon; Tiuxetano de ibritumomab (ZEVALIN®) que es un anticuerpo monoclonal anti-CD20 para el tratamiento de linfoma no hodkiniano; ofatumumab (ARZEr RA®) que es un anticuerpo monoclonal anti-CD20 humano para el tratamiento de leucemia linfocftica cronica; panitumumab (VECTIBiX®) que es un anticuerpo monoclonal anti-EGFR humano para el tratamiento de cancer de colon; rituximab (RITUXAN®) que es un anticuerpo monoclonal quimerico anti-CD20 para el tratamiento de leucemia linfocftica cronica y linfoma no hodkiniano; tositumomab (BEXXAR®) que es un anticuerpo monoclonal anti-CD20 para el tratamiento de linfoma no hodkiniano; trastuzumab (HERCEPTiN®) que es un anticuerpo monoclonal anti-receptor HER2 para el tratamiento de cancer de mama y de estomago; ipilimumab (YERVOY®) que es un anticuerpo monoclonal humano anti-CTLA4 para el tratamiento de melanoma; gemtuzumab y ozogamicina inotuzumab.
En otra realizacion espedfica, L incluye anticuerpos seleccionados de anticuerpos anti-1-13, incluyendo anticuerpos anti-l-13 usados en el tratamiento de cancer, por ejemplo anticuerpos anti-lL-13Ra2.
En todavfa otra realizacion espedfica, L incluye anticuerpos seleccionados de anticuerpos anti-Notch, incluyendo anticuerpos anti-Notch usados en el tratamiento de cancer.
En determinadas realizaciones, el anticuerpo L se une al engarce a traves de un enlace sulfuro o a traves de un enlace sulfuro-sulfuro.
Otro aspecto de la invencion se refiere a un conjugado farmaco anticuerpo que comprende cualquiera de los compuestos anteriormente mencionados.
Otro aspecto de la invencion se refiere a un conjugado farmaco anticuerpo que comprende un anticuerpo y uno cualquiera de los compuestos anteriormente mencionados.
En determinadas realizaciones, la presente invencion se refiere a cualquiera de los conjugados farmaco anticuerpo anteriormente mencionados y definiciones adjuntas, en los que el compuesto se une covalentemente al anticuerpo.
En determinadas realizaciones, la presente invencion se refiere a cualquiera de los conjugados anticuerpo farmaco anteriormente mencionados y definiciones adjuntas, en los que en dicho conjugado farmaco anticuerpo se selecciona del grupo que consiste en los compuestos de la Tabla 18B
Figure imgf000044_0001
y
Figure imgf000045_0001
En determinadas realizaciones, la presente invencion se refiere a cualquiera de Ios conjugados anticuerpo farmaco anteriormente mencionados y definiciones adjuntas, en los que el conjugado farmaco anticuerpo comprende entre 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 o 10 compuestos de la invencion.
En determinadas realizaciones, la presente invencion se refiere a cualquiera de los conjugados farmaco anticuerpo anteriormente mencionados y definiciones adjuntas, en los que el conjugado farmaco anticuerpo comprende 3 o 4 compuestos de la invencion.
La unidad de anticuerpo (Ac)
Como se ha indicado anteriormente, el termino "anticuerpo" (o "A c") en el presente documento se usa en el sentido mas amplio y espedficamente abarca anticuerpos monoclonales intactos, anticuerpos policlonales, anticuerpos monoesped ficos, anticuerpos multiesped ficos (por ejemplo, anticuerpos biesped ficos) y fragmentos de anticuerpo que exhiben la actividad biologica deseada. Ademas, aunque ciertos aspectos de la invencion descritos en el presente documento se refieren a conjugados farmaco anticuerpo, se preve ademas que la porcion del anticuerpo del conjugado pueda reemplazarse por cualquier cosa que se una esped ficamente o se asocie reactivamente o se compleje con un receptor, un antigeno u otro resto receptivo asociado a una poblacion celular diana dada. Por ejemplo, en lugar de contener un anticuerpo un conjugado de la invencion podna contener una molecula que marque como diana que se une a, compleja con o reacciona con un receptor, un antfgeno u otro resto receptor de una poblacion buscado ser terapeuticamente o de otra forma biologicamente modificado. Los ejemplos de tales moleculas incluyen protemas de menor peso molecular, polipeptidos o peptidos, lectinas, glucoprotemas, distintos de peptidos, vitaminas, moleculas transportadoras de nutrientes (tales como, pero no limitadas a, transferrina) o cualquier otra molecula o sustancias de union a celulas. En ciertos aspectos, el anticuerpo u otra de dichas moleculas de marcaje como diana actuan transportando un farmaco a la poblacion de celulas diana particular con la que interactua el anticuerpo u otra molecula de marcaje como diana.
Los heteroatomos que pueden estar presentes en una unidad de anticuerpo incluyen azufre (en una realizacion, de un grupo sulfhidrilo de un anticuerpo), oxfgeno (en una realizacion, de un grupo carbonilo, carboxilo o hidroxilo de un anticuerpo) y nitrogeno (en una realizacion, de un grupo amino primario o secundario de un anticuerpo). Estos heteroatomos pueden estar presentes en el anticuerpo en el estado natural del anticuerpo, por ejemplo un anticuerpo de origen natural, o puede introducirse en el anticuerpo a traves de modificacion qm mica.
En una realizacion, una unidad de anticuerpo tiene un grupo sulfhidrilo y la unidad de anticuerpo se une a traves del atomo de azufre del grupo sulfhidrilo.
En otra realizacion, el anticuerpo tiene restos de lisina que pueden reaccionar con esteres activados (dichos esteres incluyen, pero no se limitan a, esteres de W-hidrosuccinimida, de pentafluorofenilo y de p-nitrofenilo) y de esta manera forman un enlace amida que consiste en el atomo de nitrogeno de la unidad de anticuerpo y un carbonilo. En otro aspecto mas, la unidad de anticuerpo tiene uno o mas restos de lisina que pueden modificarse qm micamente para introducir uno o mas grupos sulfhidrilo. Los reactivos que pueden usarse para modificar lisinas incluyen, pero no se limitan a, S-acetiltioacetato de W-succinimidilo (SATA) y clorhidrato de 2-iminotiolano (Reactivo de Traut). En otra realizacion, la unidad de anticuerpo puede tener uno o mas grupos carbohidrato que pueden modificarse qm micamente para tener uno o mas grupos sulfhidrilo.
En otra realizacion mas, la unidad de anticuerpo puede tener uno o mas grupos carbohidrato que pueden oxidarse para proporcionar un grupo alded do (vease, por ejemplo, Laguzza, y coI., 1989, J. Med. Chem. 32(3):548-55). El aldehfdo correspondiente puede formar un enlace con un sitio reactivo tal como, por ejemplo, hidrazina e hidroxilamina. Otros protocolos para la modificacion de protemas para la fijacion o asociacion de farmacos se describen en Coligan y coI., Current Protocols in Protein Science, vo I. 2, John Wiley & Sons (2002) (incorporado en el presente documento por referenda).
Cuando los conjugados comprenden protemas no inmunorreactivas, polipeptidos o unidades peptidicas en lugar de un anticuerpo, las protemas no inmunorreactivas, los polipeptidos o unidades peptfdicas utiles incluyen, pero no se limitan a, transferrina, factores de crecimiento epidermico ("EGF"), bombesina, gastrina, peptido liberador de gastrina, factor de crecimiento derivado de plaquetas, IL-2, IL-6, factores de crecimiento transformante ("TOP"), tales como TGF-a y TGF-p, factor de crecimiento de vaccinia ("VGF"), factores de crecimiento de insulina y tipo insulina I y II, somatostatina, lectinas y apoprotema de lipoprotema de baja densidad.
Los anticuerpos policlonales utiles son poblaciones heterogeneas de moleculas de anticuerpo derivadas de los sueros de animales inmunizados. Los anticuerpos monoclonales utiles son poblaciones homogeneas de anticuerpos para un determinante antigenico particular (por ejemplo, un antfgeno de celula cancerosa, un antigeno vmco, un antfgeno microbiano, una protema, un peptido, un carbohidrato, un qmmico, un acido nucleico, o fragmentos de Ios mismos). Un anticuerpo monoclonal (mAc) para un antfgeno de interes puede prepararse usando cualquier tecnica conocida en la tecnica que proporcione la produccion de moleculas de anticuerpo por Imeas celulares continuas en cultivo.
Los anticuerpos monoclonales utiles incluyen, pero no se limitan a, anticuerpos monoclonales humanos, anticuerpos monoclonales humanizados, fragmentos de anticuerpo o anticuerpos monoclonales quimericos. Los anticuerpos monoclonales humanos pueden fabricarse por cualquiera de numerosas tecnicas conocidas en la materia (por ejemplo, Teng y coI., 1983, Proc. Natl. Acad. Sci. e E.UU. 80:7308-7312; Kozbor y coI., 1983, Immunology Today 4:72-79; y Olsson y coI., 1982, Meth. Enzymol. 92:3-16).
El anticuerpo tambien puede ser un anticuerpo espedfico. Los procedimientos para fabricar anticuerpos biespedficos se conocen en la tecnica se analizan a continuacion.
El anticuerpo puede ser un fragmento funcionalmente activo, un derivado o analogo de un anticuerpo que se une inmunoespedficamente a celulas diana (por ejemplo, antigenos de celulas cancerosas, antigenos vmcos o antigenos antimicrobianos) u otros anticuerpos que se unen a las celulas tumorales o a la matriz. A este respecto, "funcionalmente activo" significa que el fragmento, el derivado el analogo es capaz de provocar anticuerpos anti-antiidiotipo que reconocen el mismo antfgeno que el anticuerpo del que el fragmento, el derivado o el analogo se reconoce derivado. Espedficamente, en una realizacion ejemplar la antigenicidad del idiotipo de la molecula de inmunoglobulina puede potenciarse por la eliminacion de las secuencias marco y CDR que son C-terminales a la secuencia CDR que reconoce espedficamente el antigeno. Para determinar que secuencias CDR se unen al antfgeno, pueden usarse peptidos sinteticos que contienen secuencias CDR en ensayos de union con el antfgeno por cualquier procedimiento de ensayo de union conocido en la tecnica (por ejemplo, el ensayo BIA core) (para la localizacion de las secuencias CDR vease, por ejemplo, Kabat y coI., 1991, Sequences of Proteins of Immunological Interest, Quinta edicion, National Institutes of Health, Bethesda, Md. Kabat E y coI., 1980, J. Immunology 125(3):961-969).
Otros anticuerpos utiles incluyen fragmentos de anticuerpos tales como, pero no limitado a, fragmentos F(ab')2, fragmentos Fab, Fv, anticuerpos monocatenarios, diacuerpos, triacuerpos, tetracuerpos, scFv, scFv-Fv o cualquier otra molecula con la misma especificidad que el anticuerpo.
Ademas, anticuerpos recombinantes, tales como anticuerpos monoclonales quimericos y humanizados, que comprenden porciones tanto humanas como no humanas, que pueden fabricarse usando tecnicas de ADN recombinante convencionales, son anticuerpos utiles. Un anticuerpo quimerico es una molecula en la que diferentes porciones derivan de diferentes especies animales, tales como por ejemplo, aquellos que tienen una region variable derivada de regiones constantes de una inmunoglobulina monoclonal murina y una humana. (Vease, por ejemplo, la patente de e E.UU. n.04.816.567; y la patente de e E.UU. n.04.816.397, que se incorporan en el presente documento por referenda en su totalidad). Los anticuerpos humanizados son moleculas de anticuerpo de especies no humanas que tienen una o mas regiones determinantes de la complementariedad (CDR) de la especie no humana y una region marco de una molecula de inmunoglobulina humana. (Vease, por ejemplo, la patente de EE.u U. n.o 5.585.089, que se incorpora en el presente documento por referenda en su totalidad). Dichos anticuerpos monoclonales quimericos y humanizados pueden producirse por tecnicas de ADN recombinante conocidas en la tecnica, por ejemplo usando procedimientos descritos en la Publicacion Internacional n.o WO 87/02671; la Publicacion de Patente Europea n.o 0184 187; la Publicacion de Patente Europea n.o 0171 496; la Publicacion de Patente Europea n.o 0173494; la Publicacion Internacional n.o WO 86/01533; la patente de e E.UU. n.o 4.816.567; la Publicacion de Patente Europea n.o 012023; Berter y coI., 1988, Science 240:104i -1043; Liu y coI., 1987, Proc. Natl. Acad. Sci. e E.UU. 84:3439-3443; Liu y coI., 1987, j . Immunol. 139:3521-3526; Sun y coI., 1987, Proc. Natl. Acad. Sci. e E.UU. 84:214-218; Nishimura y coI., 1987, Cancer. Res. 47:999-1005; Wood y coI., 1985, Nature 314:446-449; y Shaw y coI., 1988, j . Natl. Cancer Inst. 80:1553-1559; Morrison, 1985, Science 229:1202-1207; Oi y coI., 1986, BioTechniques 4:214; la patente de e E.UU. n.o 5.225.539; Jones y coI., 1986, Nature 321:552-525; Verhoeyan y coI., 1988, Science 239:1534; y Beidler y coI., 1988, j . Immunol. 141:4o53-4060; cada uno de Ios cuales se incorpora en el presente documento por referenda en su totalidad.
Los anticuerpos completamente humanos son particularmente deseables y pueden producirse usando ratones transgenicos que son incapaces de expresar genes de cadenas pesada y ligera de inmunoglobulinas endogenas, pero que pueden expresar genes de cadenas pesada y ligera humanas. Los ratones transgenicos se inmunizan de forma normal con un antfgeno seleccionado, por ejemplo, todos o una porcion de un polipeptido de la invencion. Los anticuerpos monoclonales dirigidos contra el antigeno pueden obtenerse usando tecnolog â de hibridoma convencional. Los transgenes de inmunoglobulina humana albergados por Ios ratones transgenicos se redisponen durante la diferenciacion de Ios linfocitos B y posteriormente se someten a cambio de clase y mutacion somatica. Por Io tanto, usando dicha tecnica, es posible producir anticuerpos IgG, IgA, IgM e IgE terapeuticamente utiles. Para una vision global de esta tecnologfa para anticuerpos humanos, vease Lonberg y Huszar, 1995, Int. Rev. Immunol.
13:65-93. Para una discusion detallada de esta tecnolog^a para producir anticuerpos humanos y anticuerpos monoclonales humanos y protocolos para producir dichos anticuerpos, vease, por ejemplo, las patentes de e E.UU. n.o 5.625.126; 5.633.425; 5.569.825; 5.661.016; 5.545.806; cada uno de Ios cuales se incorpora en el presente documento por referenda en su totalidad. Otros anticuerpos humanos pueden obtenerse en el mercado de, por ejemplo, Abgenix, Inc. (now Amgen, Freemont, Calif.) y Medarex (Princeton, N.J.).
Los anticuerpos completamente humanos que reconocen un epftopo seleccionado pueden generarse usando una tecnica denominada "seleccion guiada". En este enfoque un anticuerpo monoclonal no humano seleccionado, por ejemplo, un anticuerpo de raton, se use para guiar la seleccion de un anticuerpo completamente humano que reconoce el mismo epftopo. (Vease, por ejemplo, Jespers y coI., 1994, Biotechnology 12:899-903). Los anticuerpos humanos pueden producirse usando diversas tecnicas conocidas en la tecnica, incluyendo bibliotecas de visualizacion de fagos (vease, por ejemplo, Hoogenboom y Winter, 1991, J. MoI. Biol. 227:381; Marks y coI., 1991, J. MoI. Biol. 222:581; Quan y Carter, 2002, The rise of monoclonal antibodies as therapeutics, en Anti-lgE and Allergic Disease, Jardieu y Fick, eds., Marcel Dekker, Nueva York, N.Y., Capttulo 20, pags. 427-469).
En otras realizaciones, el anticuerpo es una protema de fusion de un anticuerpo o un fragmento funcionalmente activo del mismo, por ejemplo en el que el anticuerpo se condensa a traves de un enlace covalente (por ejemplo un enlace peptfdico), bien en el W-terminal o el C-terminal de una secuencia de aminoacidos de otra protema (o una porcion de la misma, preferentemente al menos una porcion de 10, 20 o 50 aminoacidos de la protema) que no es de un anticuerpo. Preferentemente, el anticuerpo o el fragmento del mismo se une covalentemente a la otra protema en el W-terminal del dominio constante.
Los anticuerpos incluyen analogos y derivados que estan ya sea modificados, es decir, por la fijacion covalente de cualquier tipo de molecula siempre que tal fijacion covalente permita que el anticuerpo retenga su inmunoespecificidad de union a antigeno. Por ejemplo, pero no a modo de limitacion, Ios derivados y analogos de Ios anticuerpos incluyen aquellos que se han modificado adicionalmente, por ejemplo, por glucosilacion, acetilacion, pegilacion, fosforilacion, amidacion, derivatiazion por grupos protectores/bloqueantes conocidos, escision proteolftica, union a una unidad de anticuerpo celular u otra protema, etc. Cualquiera de numerosas modificaciones qmmicas puede llevarse a cabo por tecnicas conocidas incluyendo, pero no limitado a, escision qmmica espedfica, acetilacion, formilacion, smtesis metabolica en presencia de tunicamicina, etc. Adicionalmente, el analogo o el derivado puede contener uno o mas aminoacidos no naturales.
Los anticuerpos pueden tener modificaciones (por ejemplo, sustituciones, eliminaciones o adiciones) en restos de aminoacidos que interactuan con receptores Fc. En particular, Ios anticuerpos pueden tener modificaciones en Ios restos de aminoacidos identificados como implicados en la interaccion entre el dominio anti-Fc y el receptor FcRn (vease, por ejemplo, la Publicacion Internacional n.0WO 97/34631, que se incorpora en el presente documento por referenda en su totalidad).
Los anticuerpos inrnunoespedficos para un antfgeno de celula cancerosa pueden obtenerse en el mercado o producirse por cualquier procedimiento conocido por un experto en la materia tales como, por ejemplo, smtesis qmmica o tecnicas de expresion recombinante. La secuencia de nucleotidos que codifica anticuerpos inmunoespedficos para un antfgeno de celula cancerosa puede obtenerse, por ejemplo, de la base de datos GenBank o una base de datos como ella, publicaciones de bibliograffa o por clonacion y secuenciacion rutinarias.
En una realizacion espedfica, pueden usarse anticuerpos conocidos para el tratamiento de cancer. Los anticuerpos inrnunoespedficos para un antfgeno de celula cancengena pueden obtenerse en el mercado o producirse por cualquier procedimiento conocido por un experto en la materia tales como, por ejemplo, tecnicas de expresion recombinante. La secuencia de nucleotidos que codifica anticuerpos inrnunoespedficos para un antfgeno de celula cancengena puede obtenerse, por ejemplo, de la base de datos GenBank o una base de datos como ella, publicaciones de bibliograffa o por clonacion y secuenciacion rutinarias. Los ejemplos de anticuerpos disponibles para el tratamiento del cancer incluyen, pero no se limitan a, OVAREX® que es un anticuerpo murino para el tratamiento de cancer de ovarios; pAnOREX® (Glaxo Wellcome, NC) que es un anticuerpo lgG2a murino para el tratamiento de cancer colorrectal; Cetuximab ERBITUX® (Imclone Systems Inc., NY) que es un anticuerpo quimerico IgG anti-EGFR para el tratamiento de canceres positivos de factor de crecimiento epidermico, tales como cancer de cabeza y cuello; Vitaxin® (Medlmmune, Inc., MD) que es un anticuerpo humanizado para el tratamiento de sarcoma; CAMPATH l/H® (Leukosite, MA) que es un anticuerpo lgG1 humanizado para el tratamiento de leucemia linfodtica cronica (CLL); SMART ID10 (Protein Design Labs, Inc., CA) que es un anticuerpo anti-HLA-DR humanizado para el tratamiento de linfoma no hodkiniano; ONCOLYM® (Techniclone, Inc., CA) que es un anticuerpo anti-HLA-Dr10 murino radiomarcado para el tratamiento de linfoma no hodkiniano; ALLOMUNE® (BioTrasplant, CA) que es un anti-CD1 mAb humanizado para el tratamiento de Enfermedad de Hodgkin o un linfoma no hodgkiniano; CEAClDE® (Immunomedics, NJ) que es un anticuerpo anti-CEA humanizado para el cancer colorrectal; AVASTIN® (Genentech/Roche, CA) que es un mAb anti-VEGF-A humanizado para el tratamiento de cancer de cerebro, de colon, de rinon o de pulmon; ZEVALIN® (Spectrum Pharmaceuticals, NV) que es un anticuerpo monoclonal anti-CD20 para el tratamiento de linfoma no hodkiniano; ARZERRA® (GSK, UK) que es un anticuerpo monoclonal anti-CD20 humano para el tratamiento de leucemia linfodtica cronica; VECTIBIX® (Amgen, CA) que es un anticuerpo monoclonal anti-EGFR humano para el tratamiento de cancer de colon; RITUXAN® (Genentech/BioGen, CA) que es un anticuerpo monoclonal quimerico anti-CD20 para el tratamiento de leucemia linfodtica cronica y linfoma no hodkiniano; BEXXAR® (GSK, UK) que es un anticuerpo monoclonal anti-CD20 para el tratamiento de linfoma no hodkiniano; HERCEPTIN® (Genentech, CA) que es un anticuerpo monoclonal anti-receptor HER2 para el tratamiento de cancer de mama y de estomago; YERVOY® (BMS, Nj ) que es un anticuerpo monoclonal humano anti-CTLA4 para el tratamiento de melanoma; MYLOTARG® (Wyeth/Pfizer, NY) que es un anticuerpo monoclonal humanizado anti-CD33 conjugado a calicheamicina para el tratamiento de leucemia mielogena aguda; y inotuzumab ozogamicin (Wyeth/Pfizer, NY) que es un anticuerpo monoclonal humanizado anti-CD22 conjugado a calicheamicina para el tratamiento de leucemia linfodtica cronica y linfoma no hodkiniano.
En otra realizacion espedfica, pueden usarse anticuerpos anti-IL13, incluyendo anticuerpos anti-IL13 usados en el tratamiento de cancer.
En otra realizacion espedfica, pueden usarse anticuerpos anti-Notch, incluyendo anticuerpos anti-Notch usados en el tratamiento de cancer.
En intentos para descubrir dianas celulares eficaces para terapia y diagnostico del cancer, los investigadores han tratado de identificar los polipeptidos transmembrana o asociados con tumores que se expresan espedficamente en la superficie de uno o mas tipos particulares de celulas cancerosas en comparacion con una o mas celulas no cancerosas normales. A menudo, estos polipeptidos asociados a tumores se expresan mas abundantemente en la superficie de las celulas cancerosas que en la superficie de las celulas no cancerosas. La identificacion de tales antfgenos polipeptidos de superficie celular asociados a tumores ha dado lugar a la capacidad de dirigirse espedficamente a las celulas cancerosas para su destruccion mediante terapias basadas en anticuerpos.
Smtesis de compuestos y conjugados de anticuerpo farmaco de Ios mismos
Los compuestos y conjugados de la invencion pueden prepararse usando los procedimientos sinteticos indicados mas adelante en los Ejemplos.
Como se describe con mayor detalle mas adelante, los compuestos y conjugados de la invencion pueden prepararse usando una seccion de una unidad de engarce que tiene un sitio reactivo para union al compuesto.
Engarce
Un engarce (denominado algunas veces en el presente documento como "[engarce]") es un compuesto bifuncional que puede usarse para conectar un farmaco y un anticuerpo para formar un conjugado de anticuerpo farmaco (ADC). Tales conjugados son utiles, por ejemplo, en la formacion de inmunoconjugados dirigidos contra antfgenos tumorales asociados. Tales conjugados permiten la entrega selectiva de farmacos citotoxicos a las celulas tumorales.
En una realizacion, el engarce tiene la formula: es
Figure imgf000048_0001
en la que
Y es alquileno C2-C20 0 heteroalquileno C2-C20; carbociclo C3-C8-, -arileno-, -heterocicio C3-C8-, -alquilen arileno-, -arileno-alquileno C1-C10-, -alquilen Ci-Ci0-(carbocicio C3-C8)-, -(carbociclo C3-C8)-alquileno C1-C10-, -alquilen C1-C10-(heterociclo C3-C8)- 0 -(heterocicio C3-C8)-alquileno C1-C10-;
Z es
Figure imgf000049_0001
o -NH2;
R7 se selecciona independientemente cada vez que aparece entre el grupo que consiste en F, Cl, I, Br, NO2, CN y CFs;
R es hidrogeno, -alquilo C1-C10, -carbociclo C3-C8, arilo, -heteroalquilo C1-C10, -heterociclo C3-C8, -alquilen Ci -Cio-arilo, -arileno-alquilo C1-C10, -alquileno Ci-Ci0-(carbociclo C3-C8), -(carbociclo C3-C8)-alquilo C1-C10, -alquilen Ci-Ci0-(heterociclo C3-C8) y -(heterociclo C3-C8)-alquilo Ci -Ci 0, en los que el arilo en los Ri0 que comprenden arilo esta opcionalmente sustituido con [R7K y
h es i, 2, 3, 405.
En un ADC el engarce sirve para unir la carga util al anticuerpo.
En un aspecto, se introduce una segunda seccion de unidad de engarce que tiene un segundo sitio reactivo, por ejemplo, un grupo electrofilo que es reactivo a un grupo nueleofilo presente en una unidad de anticuerpo (por ejemplo, un anticuerpo). Los grupos nucleofilos utiles en un anticuerpo incluyen, pero sin limitacion, grupos sulfhidrilo, hidroxilo y amino. El heteroatomo del grupo nucleofilo de un anticuerpo es reactivo a un grupo electrofilo en una unidad de engarce y forma un enlace covalente a una unidad de engarce. Los grupos electrofilos utiles incluyen, pero sin limitacion, grupos maleimida y haloacetamida. El grupo electrofilo proporciona un sitio conveniente para la union de anticuerpo.
En otra realizacion, una unidad de engarce tiene un sitio reactivo que tiene un grupo nucleofilo que es reactivo a un grupo electrofilo presente en un anticuerpo. Los grupos electrofilos utiles en un anticuerpo incluyen, pero sin limitacion, grupos aldehfdo y cetona carbonilo. El heteroatomo de un grupo nucleofilo de una unidad de engarce puede reaccionar con un grupo electrofilo en un anticuerpo y forma un enlace covalente al anticuerpo. Los grupos nucleofilos utiles en una unidad de engarce incluyen, pero sin limitacion, hidrazida, oxima, amino, hidrazina, tiosemicarbazona, carboxilato de hidrazina y arilhidrazida. El grupo electrofilo en un anticuerpo proporciona un sitio conveniente para la union a una unidad de engarce.
Los grupos funcionales amino tambien son sitios reactivos utiles para una unidad de engarce puesto que pueden reaccionar con aeido carboxflico, 0 esteres activados de un compuesto para formar un engarce de amida. Tfpicamente, Los compuestos basados en peptidos de la invencion pueden prepararse formando un enlace de peptidos entre dos 0 mas fragmentos de aminoaeidos y/o peptidos. Tales enlaces de peptidos pueden prepararse, por ejemplo, de acuerdo con el procedimiento de smtesis en fase Uquida (vease, por ejemplo, Schroder y Lubke, "The Peptides", volumen i, pags. 76-136, 1965, Academic Press) que es bien conocido en el campo de la qrnmiea de peptidos.
Como se describe con mayor detalle mas adelante, los conjugados pueden prepararse usando una seccion del engarce que tiene un sitio reactivo para union a un compuesto de la invencion e introduciendo otra seccion de la unidad de engarce que tiene un sitio reactivo para un anticuerpo. En un aspecto, una unidad de engarce tiene un sitio reactivo que tiene un grupo electrofilo que es reactivo con un grupo nucleofilo presente en una unidad de anticuerpo, tal como un anticuerpo. El grupo electrofilo proporciona un sitio conveniente para la union de anticuerpo. Los grupos nucleofilos utiles en un anticuerpo incluyen, pero sin limitacion, grupos sulfhidrilo, hidroxilo y amino. El heteroatomo del grupo nucleofilo de un anticuerpo es reactivo a un grupo electrofilo en una unidad de Engarce y forma un enlace covalente a una unidad de engarce. Los grupos electrofilos utiles incluyen, pero sin limitacion, grupos maleimida y haloacetamida.
En otra realizacion, una unidad de engarce tiene un sitio reactivo que tiene un grupo nucleofilo que es reactivo con un grupo electrofilo presente en una unidad de anticuerpo. El grupo electrofilo en un anticuerpo proporciona un sitio conveniente para la union a una unidad de engarce. Los grupos electrofilos utiles en un anticuerpo incluyen, pero sin limitacion, grupos aldehfdo y cetona carbonilo. El heteroatomo de un grupo nucleofilo de una unidad de engarce puede reaccionar con un grupo electrofilo en un anticuerpo y forma un enlace covalente al anticuerpo. Los grupos nucleofilos utiles en una unidad de engarce incluyen, pero sin limitacion, hidrazida, oxima, amino, hidrazina, tiosemicarbazona, carboxilato de hidrazina y arilhidrazida.
Como se usa en el presente documento, "me-" conocido previamente como "MalC-" se refiere a
Figure imgf000050_0001
Como se usa en el presente documento, "mcValCitPABC-" conocido previamente como "MalCValCitPABC-" se refiere a
Figure imgf000050_0002
Como se usa en el presente documento, "Ma!PegXC2-" se refiere a
Figure imgf000050_0003
Como se usa en el presente documento, "AmPegXC2-" se refiere a
Figure imgf000050_0004
Como se usa en el presente documento, "mcValCitPABCAmPegXC2-"se refiere a
Figure imgf000050_0005
Como se usa en el presente documento, "MalPegXC2ValCitPABC-" se refiere a
Figure imgf000050_0006
Como se usa en el presente documento, "2BrAcPegXC2" se refiere a
Figure imgf000050_0007
Como se usa en el presente documento, "mv-" se refiere a
Figure imgf000050_0008
Como se usa en el presente documento, "mb-" se refiere a
Figure imgf000051_0001
Como se usa en el presente documento, "me-" se refiere a
Figure imgf000051_0002
Como se usa en el presente documento, "MalC6-" se refiere a
Figure imgf000051_0003
Como se usa en el presente documento, "PFPCOPegXC2ValCitPABC-" se refiere a
Figure imgf000051_0004
Como se usa en el presente documento, "PFPCOPegXC2AmPegYC2-" se refiere a
Figure imgf000051_0005
Como se usa en el presente documento, "PFPCOPegXC2AlaAlaAsnPABC-" se refiere a
Figure imgf000051_0006
Como se usa en el presente documento, "PFPCOPegXC2-" se refiere a
Figure imgf000051_0007
Como se usa en el presente documento, "PFPCOPegXC2AmPegYC2PABC-" se refiere a
Figure imgf000051_0008
Como se usa en el presente documento, "rncGly-" se refiere a
Figure imgf000052_0001
Como se usa en el presente documento, "AzCOC2Ph4AmCOPeg2C2-" se refiere a
Figure imgf000052_0002
Como se usa en el presente documento, "AzCOC2Ph4AmPeg1C1-" se refiere a
Figure imgf000052_0003
Como se usa en el presente documento, "AcLysValCitPABC-" se refiere a
Figure imgf000052_0004
Conjugacion con Transglutaminasa
En determinadas realizaciones, un compuesto de la invencion puede reticularse covalentemente a un polipeptido que contiene Fc o que contiene Fab disenado por ingeniena genetica con una etiqueta que contiene glutamina donadora (por ejemplo, etiquetas peptfdicas que contienen Gln o etiquetas Q) o una glutamina endogena hecha reactiva (es decir, la capacidad de formar un enlace covalente como un donador acilo en presencia de una amina y una transglutaminasa) por ingeniena genetica de polipeptidos (por ejemplo, a traves de eliminacion, sustitucion, mutacion de aminoacidos o cualquier combinacion de los mismos en el polipeptido), en presencia de transglutaminasa, con la condicion de que el compuesto de la invencion comprende un agente donador de amina (por ejemplo, una molecula pequena que comprende o esta fijada a una amina reactiva), formando por lo tanto una poblacion estable y homogenea de un conjugado polipeptidico que contiene Fc disenado por ingeniena genetica con el agente donador de amina estando espedficamente conjugado en sitio al polipeptido que contiene Fc o que contiene Fab a traves de la etiqueta que contiene glutamina donadora de acetilo o la glutamina endogena expuesta/accesible/reactiva. Por ejemplo, los compuestos de la invencion pueden conjugarse como se describe en la Solicitud de Patente Internacional n.0 de serie PCT/IB2011/054899, cuyos contenidos completos se incorporan en el presente documento por referenda. En determinadas realizaciones, para facilitar la conjugacion del compuesto de la invencion y el polipeptido que contiene Fc o que contiene Fab disenado por ingeniena con una etiqueta que contiene glutamina donadora de acilo o una glutamina endogena hecha reactiva por diseno por ingeniena de polipeptido en presencia de transglutaminasa, Z es NR2.
Conjugacion a la region constante del dominio kappa de cadena ligera humana
En determinadas realizaciones, un compuesto de la invencion puede estar covalentemente unido al lado de la cadena de K188 de la region constante del dominio kappa de cadena ligera humana (CLk) (numeracion de cadena de longitud completa de acuerdo con Kabat). K188 tambien puede denominarse CLk K80, cuando se cuenta solamente la region constante kappa humana, por ejemplo, de SEQ ID NO: 1,2, 3 y 4).
Por ejemplo, los compuestos de la invencion pueden conjugarse como se describe en la Solicitud de Patente de EE.UU. con Numero de Serie 13/180.204 o el documento W02012/007896 cuyos contenidos completos se incorporan en el presente documento por referenda. En determinadas realizaciones, para facilitar la conjugacion a K188 CLk (CLk-K80), Z es
Figure imgf000052_0005
cada R7 se selecciona independientemente cada vez que esta presente del grupo que consiste en F, Cl, I, Br, NO2, CN y CFs; y h es 1, 2, 3, 405.
En determinadas realizaciones, para facilitar la conjugacion a K188 CLk (CLk-K80), Z es
Figure imgf000053_0001
La presente invencion proporciona ademas conjugados farmaco anticuerpo que comprende un anticuerpo, 0 porciones de union a antigeno de los mismos, que comprenden un dominio kappa constante conjugado covalentemente a una toxina de la invencion, caracterizado porque al menos una toxina de la invencion se conjuga covalentemente a K80 de SEQ ID NO: 1, SEQ ID NO:2, SEC ID NO: 3 0 SEC ID NO: 4 (tabla 1). En algunos aspectos, el numero de toxinas de la invencion conjugadas covalentemente a la K80 puede ser un intervalo cuyo Kmite inferior se selecciona del grupo que consiste en aproximadamente 1,5, aproximadamente 1,6, aproximadamente 1,7, aproximadamente 1,8, aproximadamente 1,9 y aproximadamente 2,0 y cuyo Ifmite superior se selecciona del grupo que consiste en aproximadamente 2,0, aproximadamente 2,1, aproximadamente 2,2, aproximadamente 2,3, aproximadamente 2,4, aproximadamente 2,5. En algunos aspectos, p es aproximadamente 2. La conjugacion de la toxina con el dominio ligero constante de un anticuerpo es particularmente deseable para minimizar 0 prevenir, cualquier interferencia con la union de la porcion Fc del anticuerpo a los receptores Fc (tales como FcyR y FcRn) 0 la union del anticuerpo a su diana respectiva. A la inversa, la conjugacion de la toxina respectiva a la porcion Fc de un anticuerpo puede disminuir la vida media in vivo del anticuerpo y/o su capacidad para interactuar con el sistema inmune (funcion efectora). La conjugacion de la toxina en la region de la cadena pesada variable (VH) 0 de la cadena ligera variable (VL) del anticuerpo lleva un riesgo de disminuir la union del antfgeno del anticuerpo a su cognato.
Adicionalmente, mientras que la conjugacion a CLk-K80 es confiable y robusta, la conjugacion a otras lisinas de la superficie del anticuerpo, cada una de reactividad y pi ligeramente diferentes pueden dar como resultado una muestra heterogenea de anticuerpos conjugados que pueden liberar moleculas conjugadas a tiempos inoportunos 0 irregulares, tales como durante la circulacion y antes del transporte del Resto Efector a la diana por el reconocimiento del anticuerpo.
Ademas, la presente invencion proporciona polimorfismos conocidos de la cadena kappa V/A en la posicion 45 y A/L en la posicion 83 (dando los 3 polimorfismos kappa constantes humanos conocidos Kiti(1):V45/L83 (SEQ ID NO:2), Km (1,2): A45/L83 (SEQ ID NO:3) y Km(3) A45/V83 (SEQ ID NO:4)). La variabilidad de los restos en las posiciones 45 y 83 en SEQ ID NO:1 puede seleccionarse de tal manera que solamente proporcione uno cualquiera, dos 0 los tres de los polimorfismos Km(1), Km(1,2) y Km(3).
Tabla 1
Figure imgf000053_0002
continuacion
Figure imgf000054_0002
En los que x en la posicion 45 es A o V y x en la posicion 83 es L o V.
En determinadas realizaciones, la invencion proporciona una composicion que comprende un compuesto de la invencion conjugado covalentemente a un anticuerpo (o una porcion de union a anttgeno del mismo), en el que al menos aproximadamente el 50 % o al menos aproximadamente el 60 % o al menos aproximadamente el 70 % o al menos aproximadamente el 80 % o al menos aproximadamente el 90 % del compuesto de la invencion en la composicion se conjuga al anticuerpo o a la porcion de union a antfgeno del mismo en K188 CLk.
En determinadas realizaciones, los compuestos de la invencion
Figure imgf000054_0001
pueden conjugarse al sitio de combinacion de un anticuerpo catalftico, tales como anticuerpos de aldolasa o una porcion de union a antfgeno de los mismos. Los anticuerpos de aldolasa contienen porciones de sitios de combinacion que, cuando no tienen cargas (por ejemplo por conjugacion), catalizan una reaccion de adicion de aldol entre un donador de cetona alifatica y un aceptor de aldehfdo. Los contenidos de la Publicacion de Solicitud de Patente de EE.UU. n.0 US 2006/205670 se incorporan en el presente documento por referenda, en particular las paginas 78-118 que describen engarces y los parrafos [0153]-[0233] que describen anticuerpos, fragmentos utiles, variantes y modificaciones de los mismos, h38C2, sitios de combinacion y regiones determinantes de complementariedad (CDR) y tecnolog^a de anticuerpos relacionados (Tabla 2 y los compuestos ejemplares a continuacion):
Figure imgf000055_0001
La expresion "sitio de combinacion" incluye las CDR y Ios restos marco adyacentes que estan implicados en la union a antfgeno.
Tabla 2
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eontinuaeion
Figure imgf000056_0002
ConiuaaciOn con enaarces aue comprenden succinimidas. incluvendo versiones de anillo abierto
En determinadas realizaciones, la presente inveneion incluye un compuesto de la inveneion conjugado mediante un engarce basado en succinimida o un engarce basado en succinimida de anillo abierto. La estabilidad del engarce de sueeinimida-eistema se ha vuelto un area de interes creciente. Las succinimidas pueden transferirse tanto in vitro como in vivo a nueleofilos de tiol exogenos, presumiblemente a traves de una reaccion de retro-Michael, dando como resultado una maleimida que posteriormente se une mediante un tiol. Se cree que la hidrolisis del anillo da como resultado una especie que es resistente a reaccion de retro-Michael. Esto hace que el conjugado resultante sea mas estable y potencialmente mas eficaz. Las condiciones pueden ser optimizadas para abrir a la fuerza el anillo succinimida en el conjugado. Las condiciones basieas resultaron en una sencilla hidrolisis del anillo. Por ejemplo, los engarces que contienen una cadena de polietilenglicol (PEG) pueden hidrolizarse a pH 9,2 a 370C en aproximadamente 12h, y los engarces que contienen una cadena de alquilo, tal como "me" pueden requerir una temperatura mas alta y un tiempo de reaccion mas largo para llevar a finalizaeion la apertura de anillo.
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Ejemplo de hidrolisis forzada de conjuaados basados en maleimida
Para asegurar la estabilidad de estos eonjugados y priorizar las muestras para evaluaeion in vivo, se desarrollo un ensayo que impliea el tratamiento de los eonjugados unidos a maleimida eon exeeso de glutationa aeuosa (GSH) o plasma. Se analizaron aheuotas de la mezela de reaccion en diversos momentos de tiempo para determinar la earga del conjugado, usando la metodolog^a deserita anteriormente. Los resultados (Tabla 24) indiean que el engarce de farmaeo-antieuerpo se eseinde lentamente de una manera dependiente de GSH. Como era de esperar, la tasa de escision depende en gran medida de la hidrolisis del anlllo succlnlmlda. De forma Imporfante, estos resultados parecen traducirse en una exposicion a PK mejorada, segun se midio por un aumento en el area bajo la curva (ABC) del conjugado y por un aumento en la tasa de exposicion a conjugado/Ab.
Procedimiento para evaluar la estabilidad de ADC
La muestra de ADC (30 pg) en PBS se mezcla con una solucion de glutationa (GSH) para producir una concentracion final de GSH de 0,5 mM y una concentracion de protema de 3 mg/ml. Una mezcla de control (sin GSH) se preparo del mismo modo a partir de 30 pg de ADC diluido a 3 mg/ml en PBS. La muestra de ADC tratada con GSH y la muestra de ADC de control se incubaron a 370C y se tomaron muestras a los 0, 3 y 6 d^as. Se redujeron akcuotas con exceso de TCEP, se acidificaron anadiendo una solucion al 0,1 % de acido formico con acetonitrilo al 10 % y se analizo su carga por CL/EM como se describe a continuacion.
Analisis de muestra: El analisis se realizo usando una HPLC capilar Agilent 1100 acoplada con un espectrometro de masas Xevo G2 Q-TOF de Waters. Los analitos se cargaron en una columna Poroshell 300SB C8 de Zorbax (0,5 mm x 75 mm, mantenida a 80 oc) con acido formico al 0,1 % y se eluyeron usando un gradiente de 20-40 % de tampon B (acetonitrilo al 80 %, 1-propanol al 18 %, agua al 2 % con acido formico al 0,1 %) a un caudal de 20 pl/min durante 5,5 minutos. La deteccion de espectrometna de masas se realizo en modo de sensibilidad positivo con una tension capital ajustada a 3,3 kV. El analisis de datos se realizo con la funcion MaxEnt 1 en MassLynx y las intensidades se usaron para el calculo de carga basado en la formula descrita anteriormente.
Composiciones y procedimientos de administracion
En otras realizaciones, otro aspecto de la invencion se refiere a composiciones farmaceuticas que incluyen una cantidad eficaz de un compuesto de la invencion y/o un conjugado farmaco anticuerpo del mismo y un transportador o vetnculo farmaceuticamente aceptable. En determinadas realizaciones, las composiciones son adecuadas para la administracion veterinaria o humana.
Las presentes composiciones farmaceuticas pueden estar en cualquier forma que permita que la composicion se administre a un paciente. Por ejemplo, la composicion puede estar en forma de un solido o un Kquido. Las v^as tfpicas de administracion incluyen, sin limitacion, parenteral, ocular e intra-tumoral. La administracion parenteral incluye inyecciones subcutaneas, inyeccion intravenosa, intramuscular o intraesternal o tecnicas de infusion. En un aspecto, las composiciones se administran parenteralmente. En una realizacion espedfica, las composiciones se administran intravenosamente.
Las composiciones farmaceuticas pueden formularse de tal manera que permitan que un compuesto de la invencion y/o un conjugado farmaco anticuerpo del mismo esten biodisponibles tras la administracion de la composicion a un paciente. Las composiciones pueden tomar la forma de una o mas unidades de dosificacion, donde por ejemplo, un comprimido puede ser una unidad de dosificacion unitaria y un envase de un compuesto de la invencion y/o un conjugado farmaco anticuerpo del mismo en forma Ifquida puede mantener una pluralidad de unidades de dosificacion.
Los materiales usados en la preparacion de las composiciones farmaceuticas pueden ser no toxicos en las composiciones usadas. Sera evidente para aquellos expertos ordinarios en la materia que la dosificacion optima del principio o principios activos en la composicion farmaceutica dependera de una diversidad de factores. Los factores relevantes incluyen, sin limitacion, el tipo de animal (por ejemplo, ser humano), la forma particular de un compuesto de la invencion y/o el conjugado farmaco anticuerpo del mismo, la manera de la administracion y la composicion empleada.
El trasportador o vetnculo farmaceuticamente aceptables pueden ser solidos o particulados, de tal manera que las composiciones estan, por ejemplo, en forma de comprimido o en polvo. El vetnculo o vetnculos pueden ser Ifquidos. Ademas, el vetnculo o vetnculos pueden ser particulados.
La composicion puede estar en forma de un solido o un Ifquido, por ejemplo, una solucion, emulsion o suspension. En una composicion para la administracion por inyeccion, tambien pueden incluirse uno o mas de un tensioactivo, un conservante, un agente humectante, un agente dispersante, un agente de suspension, un tampon, un estabilizante y un agente isotonico.
Las composiciones Ifquidas, ya sean soluciones, suspensiones o formas similares distintas, tambien pueden incluir uno o mas de los siguientes: diluyentes esteriles tales como agua para inyeccion, solucion salina, preferentemente solucion salina fisiologica, solucion de Ringer, cloruro sodico isotonico, aceites fijados tales como mono o digliceridos sinteticos que pueden servir como medio disolvente o de suspension, polietilenglicoles, glicerina, ciclodextrina, propilenglicol u otros disolventes; agentes antibacterianos tales como alcohol bendlico o metilparabeno; antioxidantes tales como acido ascorbico o bisulfito sodico; agentes quelantes tales como acido etilendiaminotetraacetico; tampones tales como acetatos, citratos, fosfatos o aminoacidos y agentes para el ajuste de la tonicidad tales como cloruro sodico o dextrosa. Una composicion parenteral se puede encerrar en ampollas, una jeringa desechable o un vial de dosis multiples hecho de vidrio, plastico u otro material. La solucion salina fisiologica es un adyuvante ejemplar. Una composicion inyectable es preferentemente esteril.
La cantidad de un compuesto de la invencion y/o un conjugado farmaco anticuerpo del mlsmo que es eflcaz en el tratamlento de un trastorno o afeccion particular dependera de la naturaleza del trastorno o afeccion y puede determinarse por tecnicas clmicas convencionales. Ademas, los ensayos in vitro o in vivo pueden emplearse opcionalmente para ayudar a identificar intervalos de dosificacion optimos. La dosis precisa a emplearse en las composiciones dependera tambien de la via de administracion y la gravedad de la enfermedad o trastorno y debe decidirse de acuerdo con el juicio del medico y las circunstancias de cada paciente.
Las composiciones comprenden una cantidad eficaz de un compuesto de la invencion y/o un conjugado farmaco anticuerpo del mismo de tal manera que se obtendra una dosificacion adecuada. Tfpicamente, esta cantidad es al menos aproximadamente un 0,01 % de una composicion de la invencion y/o un conjugado farmaco anticuerpo del mismo en peso de la composicion. En una realizacion ejemplar, las composiciones farmaceuticas se preparan de tal manera que una unidad de dosificacion parenteral contenga de aproximadamente el 0,01 % a aproximadamente el 2 % en peso de la cantidad de un compuesto de la invencion y/o un conjugado farmaco anticuerpo del mismo.
Para la administracion intravenosa, la composicion puede comprender de aproximadamente 0,01 a aproximadamente 100 mg de un compuesto de la invencion y/o un conjugado farmaco anticuerpo del mismo por kg del peso corporal del paciente. En un aspecto, la composicion puede incluir de aproximadamente 1 a aproximadamente 100 mg de un compuesto de la invencion y/o un conjugado farmaco anticuerpo del mismo por kg del peso corporal del paciente. En otro aspecto, la cantidad administrada estara en el intervalo de aproximadamente 0,1 a aproximadamente 25 mg/kg de peso corporal de un compuesto de la invencion y/o un conjugado farmaco anticuerpo del mismo.
Generalmente, la dosificacion de un compuesto de la invencion y/o un conjugado farmaco anticuerpo del miso administrada a un paciente es tfpicamente aproximadamente 0,01 mg/kg a aproximadamente 20 mg/kg del peso corporal del paciente. En un aspecto, la dosificacion administrada a un paciente esta entre aproximadamente 0,01 mg/kg y aproximadamente 10 mg/kg del peso corporal del paciente. En otro aspecto, la dosificacion administrada a un paciente esta entre aproximadamente 0,1 mg/kg y aproximadamente 10 mg/kg del peso corporal del paciente. En otro aspecto mas, la dosificacion administrada a un paciente esta entre aproximadamente 0,1 mg/kg y aproximadamente 5 mg/kg del peso corporal del paciente. En otro aspecto mas la dosificacion administrada esta entre aproximadamente 0,1 mg/kg y aproximadamente 3 mg/kg del peso corporal del paciente. En otro aspecto mas, la dosificacion administrada esta entre aproximadamente 1 mg/kg y aproximadamente 3 mg/kg del peso corporal del paciente.
Un compuesto de la invencion y/o un conjugado farmaco anticuerpo del mismo pueden administrarse por cualquier via conveniente, por ejemplo por infusion o inyeccion de bolo. La administracion puede ser sistemica o local. Se conocen diversos sistemas de administracion, por ejemplo, encapsulacion en liposomas, micropartfculas, microcapsulas, capsulas, etc. y pueden usarse para administrar un compuesto de la invencion y/o el conjugado farmaco anticuerpo del mismo. En determinadas realizaciones, se administra mas de un compuesto de la invencion y/o el conjugado farmaco anticuerpo del mismo a un paciente.
En realizaciones esped ficas, puede ser deseable administrar uno o mas compuestos de la invencion y/o conjugados farmaco anticuerpo de los mismos localmente al area en necesidad de tratamiento. Esto se puede lograr, por ejemplo y no a modo de limitacion, por infusion local durante la cirugfa; aplicacion topica, por ejemplo, junto con un aposito para heridas despues de la cirugfa; por inyeccion; por medio de un cateter; o por medio de un implante, siendo el implante de un material poroso, no poroso o gelatinoso, incluyendo membranas, tales como membranas silasticas o fibras. En una realizacion, la administracion puede ser por inyeccion directa en el sitio (o el primer sitio) de un cancer, un tumor o un tejido neoplasico o pre-neoplasico. En otra realizacion, la administracion puede ser por inyeccion directa en el sitio (o el primer sitio) de una manifestacion de una enfermedad autoinmune.
En otra realizacion mas, el compuesto de la invencion y/o un conjugado farmaco anticuerpo del mismo pueden administrarse en un sistema de liberacion controlada, tal como pero no limitado a, pueden usarse una bomba o diversos materiales polimericos. En otra realizacion mas, puede colocarse un sistema de liberacion controlada en la proximidad de la diana del compuesto de la invencion y/o el conjugado farmaco anticuerpo del mismo, por ejemplo, el hngado, requiriendo de esta manera solamente una fraccion de la dosis sistemica (vease, por ejemplo, Goodson, en Medical Applications of Controlled Release, citada anteriormente, vo I. 2, pags. 115-138 (1984)). Pueden usarse otros sistemas de liberacion controlada analizados anteriormente en la revision de Langer (Science 249:1527-1533 (1990)).
El termino "ved culo" se refiere a un diluyente, un adyuvante o un excipiente, con el que se administra un compuesto o un conjugado farmaco anticuerpo del mismo. Dichos vehfculos farmaceuticos pueden ser Ifquidos, tales como agua y aceites, incluyendo aquellos cuyo origen es petroleo, animal, vegetal o sintetico. Los ved culos pueden ser solucion salina y similares. Ademas, pueden usarse agentes auxiliares, estabilizantes y otros. En una realizacion, cuando se administran a un paciente, el compuesto o el conjugado y Ios vehfculos farmaceuticamente aceptables son esteriles. El agua es un vehfculo ejemplar cuando el compuesto o el conjugado se administran por via intravenosa. Tambien pueden emplearse soluciones salinas y soluciones acuosas de dextrosa y glicerol como vehfculos Kquidos, particularmente para soluciones inyectables. Las presentes composiciones, si se desea, tambien puede contener cantidades menores de agentes humectantes o emulsionantes, o agentes tamponantes del pH.
Las preserves composiciones pueden tomar la forma de soluciones, granulos, polvos, formulaciones de liberacion sostenida o cualquier otra forma adecuada para su uso. Otros ejemplos de vehmulos farmaceuticos adecuados se describen en "Remington's Pharmaceutical Sciences" de E. W. Martin.
En una realizacion, el compuesto de la invencion y/o el conjugado farmaco anticuerpo del mismo se formulan de acuerdo con los procedimientos rutinarios como una composicion farmaceutica adaptada para la administracion intravenosa para animales, particularmente seres humanos. ^picamente, los transportadores o vehmulos para la administracion intravenosa son soluciones tampon acuosas isotonicas esteriles. En caso necesario, las composiciones pueden incluir tambien un agente solubilizante. Las composiciones para la administracion intravenosa pueden comprender opcionalmente un anestesico local tal como lignocama para aliviar el dolor en el sitio de la inyeccion. Generalmente, los ingredientes se suministran bien separadamente o bien mezclados juntos en una forma de dosificacion unitaria, por ejemplo, como un polvo liofilizado seco o un concentrado libre de agua en un recipiente hermeticamente sellado tal como una ampolla o un saquito que indica la cantidad de principio activo. Cuando un compuesto de la invencion y/o un conjugado farmaco anticuerpo del mismo ha de administrarse por infusion, puede dispensarse, por ejemplo, con una botella de infusion que contiene agua de grado farmaceutico esteril o solucion salina. Cuando el compuesto de la invencion y/o el conjugado farmaco anticuerpo del mismo ha de administrarse por inyeccion, puede proporcionarse una ampolla de agua esteril para inyeccion o solucion salina de tal manera que los ingredientes puedan mezclarse antes de la administracion.
La composicion puede incluir diversos materiales que modifican la forma ffsica de una unidad de dosificacion solida o Ifquida. Por ejemplo, la composicion puede incluir materiales que forman una capa de revestimiento alrededor de Ios principios activos. Los materiales que forman la capa de revestimiento son tfpicamente inertes y pueden seleccionarse de, por ejemplo, azucar, goma laca y otros agentes de revestimiento enterico. Como alternativa, los principios activos pueden encerrarse en una capsula de gelatina.
Ya sea en forma solida o Ifquida, las presentes composiciones pueden incluir un agente farmacologico usado en el tratamiento del cancer.
Usos terapeuticos de compuestos y conjugados farmaco anticuerpo de Ios mismos
Otro aspecto de la invencion se refiere a los compuestos de la invencion y los conjugados farmaco anticuerpo de los mismos para tratar cancer.
Los compuestos de la invencion y/o los conjugados farmaco anticuerpo de los mismos son utiles para inhibir la multiplicacion de una celula tumoral o una celula cancerosa, provocando la apoptosis en un tumor o una celula cancerosa, o para tratar cancer en un paciente. Los compuestos de la invencion y/o los conjugados farmaco anticuerpo de los mismos pueden usarse en consecuencia en una diversidad de ajustes para el tratamiento de canceres animales. Dichos conjugados pueden usarse para transportar un compuesto de la invencion a una celula tumoral o una celula cancerosa. Sin quedar ligado a teona alguna, en una realizacion, el anticuerpo del conjugado se une a o se asocia al antfgeno asociado a celula cancerosa o a celula tumoral y el conjugado puede captarse (internalizarse) dentro de una celula tumoral o una celula cancerosa a traves de endocitosis mediada por receptor u otro mecanismo de internalizacion. El antfgeno puede fijarse a una celula tumoral o una celula cancerosa o puede ser una protema de la matriz extracelular asociada a la celula tumoral o a la celula cancerosa. En determinadas realizaciones, una vez dentro de la celula, una o mas secuencias peptidicas espedficas se escinden enzimatica o hidrolfticamente por una o mas proteasas asociadas a la celula tumoral o a la celula cancerosa, dando como resultado la liberacion de un compuesto de la invencion a partir del conjugado. El compuesto liberado de la invencion es entonces libre para migrar dentro de la celula e inducir actividades citotoxicas o citostaticas. El conjugado tambien puede escindirse por una proteasa intracelular para liberar un compuesto de la invencion. En una realizacion alternativa, el compuesto de la invencion se escinde desde el conjugado fuera de la celula tumoral o la celula cancerosa y el compuesto de la invencion posteriormente penetra en la celula.
En determinadas realizaciones, los conjugados proporcionan marcaje como diana del farmaco de conjugacion esped fica de tumor o de cancer, reduciendo de esta manera la toxicidad general de los compuestos de la invencion. En otra realizacion, la unidad de anticuerpo se une a la celula tumoral o la celula cancerosa.
En otra realizacion, la unidad de anticuerpo se une a un antfgeno de celula tumoral o de celula cancerosa que esta en la superficie de la celula tumoral o la celula cancerosa.
En otra realizacion, la unidad del anticuerpo se une a un antfgeno de celula tumoral o de celula cancerosa que es una protema de la matriz extracelular asociada a la celula tumoral o a la celula cancerosa.
La especificidad de la unidad de anticuerpo para una celula tumoral o una celula cancerosa particulares puede ser importante para determinar aquellos tumores o canceres que se tratan mas eficazmente.
Los tipos particulares de canceres que pueden tratarse con un compuesto de la invencion y/o el conjugado farmaco anticuerpo del mismo, incluyen pero no se limitan a, carcinomas de la vejiga, de mama, de cuello de utero, de colon, de endometrio, de rinon, de pulmon, de esofago, de ovario, de prostata, de pancreas, de piel, de estomago y de testiculos; y canceres nacidos en la sangre incluyendo pero no limitados a leucemias y linfomas.
Terapia multimodal para el cancer. Los canceres, incluyendo, pero no limitados a, un tumor, una metastasis u otra enfermedad o trastorno caracterizados por el crecimiento celular incontrolado, pueden tratarse o inhibirse mediante la administracion de un compuesto de la invencion y/o el conjugado farmaco anticuerpo del mismo.
En otras realizaciones, se proporcionan procedimientos para tratar cancer, incluyendo administrar a un paciente en necesidad de la misma una cantidad eficaz de un compuesto de la invencion y/o un conjugado farmaco anticuerpo del mismo y un agente quimioterapeutico. En una realizacion el agente quimioterapeutico es aquel con el que el tratamiento del cancer no se ha encontrado ser refractario. En otra realizacion, el agente quimioterapeutico es aquel con el que se ha descubierto que el tratamiento del cancer es refractario. Un compuesto de la invencion y/o el conjugado farmaco anticuerpo del mismo pueden administrarse a un paciente que se ha sometido ademas a cirugfa como tratamiento para el cancer.
En algunas realizaciones, el paciente tambien recibe un tratamiento adicional, tal como terapia de radiacion. En una realizacion espedfica, el compuesto de la invencion y/o el conjugado farmaco anticuerpo del mismo se administra concurrentemente con el agente quimioterapeutico o con terapia de radiacion. En otra realizacion espedfica, el agente quimioterapeutico o la terapia de radiacion se administra antes de o posteriormente a la administracion de un compuesto de la invencion y/o un conjugado farmaco anticuerpo del mismo.
Un agente quimioterapeutico puede administrarse durante una serie de sesiones. Puede administrarse uno cualquiera o una combinacion de los agentes quimioterapeuticos, tales como un patron de agente o agentes quimioterapeuticos para el cuidado.
Ademas, se proporcionan procedimientos de tratamiento de cancer con un compuesto de la invencion y/o un conjugado farmaco anticuerpo del mismo como una alternativa a la quimioterapia o la terapia de radiacion donde la quimioterapia o la terapia de radiacion ha demostrado o puede demostrar ser demasiado toxica, por ejemplo, resulta en efectos secundarios inaceptables o que no son llevables, para el sujeto a tratar. El paciente a tratar puede, opcionalmente, tratarse con otro tratamiento para el cancer tal como cirugfa, terapia de radiacion o quimioterapia, dependiendo de que tratamiento se encuentra ser aceptable o llevable.
Los compuestos de la invencion y/o los conjugados farmaco anticuerpo de los mismos pueden usarse tambien de una manera in vitro o ex vivo, tal como para el tratamiento de ciertos canceres, incluyendo, pero no limitado a leucemias y linfomas, implicando dicho tratamiento trasplantes de celulas madre autologas. Esto puede implicar un procedimiento multi-etapa en el que las celulas madre hematopoyeticas autologas del animal se cosechan y se purgan de todas las celulas cancerosas, despues la poblacion celular de la medula osea que queda en el animal se erradica a traves de la administracion de una alta dosis de un compuesto de la invencion y/o un conjugado farmaco anticuerpo del mismo con o sin terapia de radiacion de dosis alta acompanante y el injerto de celulas madre se infunde de nuevo al animal. Despues se proporciona cuidado de soporte mientras que la funcion de la medula osea se restaura y el paciente se recupera.
Especies liberadas
Las realizaciones adicionales de la invencion incluyen la especie qmmica liberada, dentro de o en la vecindad de la celula cancerosa o la celula tumoral por la que se cree que se escindira enzimatica y/o hidrolfticamente por una o mas proteasas asociadas a celulas cancerosas o celulas tumorales. Dichos compuestos incluyen las especies descritas en el presente documento y tambien incluyen compuestos tales como aquellos descritos en la estructura:
Figure imgf000060_0001
o una de sus sales o solvatos farmaceuticamente aceptables, en la que, independientemente cada vez que esta presente,
W es
Figure imgf000061_0001
Y es alquileno C2-C20 0 heteroalquileno C2-C20; carbociclo C3-C8-, -arileno-, -heterociclo C3-C8-, -alquilen arileno- -arileno-alquileno C1-C10-, -alquilen Ci-Cio-(carbociclo C3-C8)-, -(carbociclo C3-C8)-alquileno C1-C10-, -alquilen Ci-Cio-(heterociclo C3-C8)- 0 -(heterociclo C3-C8)-alquileno C1-C10-;
Z" es
Figure imgf000061_0002
0 -NHZ"
Z'" es
Figure imgf000061_0003
G es halogeno, -OH, -SH 0 -S-alquilo C1-C6;
R2 es hidrogeno, alquilo C1-C80 haloalquilo C1-C8;
r 3A y r 3B se definen como cualquiera de los siguientes:
(i) R3A es alquilo C i -C 8, haloalquilo C i -C 8, carbociclilo C3-C80 halogeno; y R3B es alquilo C i -C 8, haloalquilo
C i -C 8, carbociclilo C3-C80 halogeno; 0
(ii) R3A y R3B tomados Juntos son alquileno C2-C8, dicho alquileno C2-C8 cuando se toma Junto con el carbono al que esta enlazado, forma un anillo carbodclico saturado; 0 heteroalquileno C i -C 8, dicho heteroalquileno
C i -C 8, Junto con el carbono al que esta enlazado, forma un anillo heterodclico saturado;
R5 es
Figure imgf000062_0001
heterociclilo Ci-Cio, carbociclilo C3-C8 y arilo C6-C14 opcionalmente sustituido con 1, 2, 3, 4 0 5 grupos seleccionados independientemente entre el grupo que consiste en -alquilo Ci-C8, -alquil Ci-C8-N(R')2, -alquil C1-C8-C(0)R', -alquil C1-C8-C(0)0R' -0-(alquilo Ci-C8), -C(0)R', -0C(0)R', -C(0)0R', -C(0)N(R')2, -NHC(0)R', -S(0 )2R', -S(0)R', -OH, halogeno, -N3, -N(R')2, -CN, -NHC(=NH)NH2, -NHCONH2, -S(=0 )2R' y -SR', en los que cada R' se selecciona independientemente entre el grupo que consiste en hidrogeno, alquilo Ci -C8 y arilo no sustituido, 0 dos R' pueden, Junto con el nitrogeno al que estan unidos, forman un heterociclilo C1-C10;
0 R5 es
Figure imgf000062_0002
opcionalmente sustituido con 1, 2, 3, 405 grupos seleccionados independientemente entre el grupo que consiste en alquilo Ci -C8, -alquil Ci-C8-N(R')2, -alquil Ci -C8-C(O)R', -alquil Ci -C8-C(O)OR', -0-(alquilo Ci -C8), -C(0)R', -o c (O)R', -c (O)o r ', -c (O)N(R')2, -n h c (O)R', -s (O)2R', -s (O)R', -o h ,
halogeno, -N3, -N(R')2, -CN, -NHC(=NH)NH2, -NHCONH2, -S(=0)2R', -SR' y arileno-R', en los que cada R' se selecciona independientemente entre el grupo que consiste en hidrogeno, alquilo Ci -C8, heterociclilo Ci-C8, alquilen Ci-Cio-heterociclilo C3-C8 y arilo, 0 dos R' pueden, Junto con el nitrogeno al que estan unidos, formar un heterociclilo Ci -Cio;
R6 es hidrogeno, -alquilo Ci -C8, -alquenilo C2-C8, -alquinilo C2-C80 -haloalquilo Ci -C8;
R12 es hidrogeno, alquilo C1-C4, heterociclilo C1-C100 arilo C6-C14;
R13 es heterociclilo C1-C10; y
R7 se selecciona independientemente cada vez que aparece entre el grupo que consiste en F, Cl, I, Br, NO2, CN y CF3;
R 10 es hidrogeno, -alquilo C1-C10, -carbociclo C3-C8, arilo, -heteroalquilo C1-C10, -heterocicio C3-C8, -alquilen C1-C10-arilo, -arileno-alquilo C1-C10, -alquileno C1-C10-(carbociclo C3-C8), -(carbociclo C3-C8)-alquilo C1-C10, -alquilen C1-C1o-(heterociclo C3-C8) y -(heterocicio C3-C8)-alquilo C1-C10, en los que el arilo en los R10 que comprenden arilo esta opcionalmente sustituido con [R7K
h es 1, 2, 3, 405; y
X es O.
Son de interes particular compuestos de formula IV que tienen las estructuras:
Figure imgf000063_0001
La invencion se describe adicionalmente en los siguientes ejemplos, que no estan destinados a limitar al ambito de la invencion.
Ejemplos
Los experimentos se llevaron a cabo de forma general en una atmosfera inerte (nitrogeno 0 argon), especialmente en los casos en los que se emplearon reactivos 0 intermedios sensibles al oxfgeno 0 a la humedad. Generalmente se usaron disolventes y reactivos comerciales sin purificacion adicional, que incluyen disolventes anhidros donde sea apropiado (generalmente productos Sure-Seal™ de la Aldrich Chemical Company, Milwaukee, Wisconsin). De forma general, los productos se secaron al vado antes de iniciar reacciones posteriores, 0 enviarse para ensayos biologicos. Los datos de espectrometna de masas se indican tanto para la cromatograffa Kquida-espectrometna de masas (CLEM), la ionizacion qmmica a presion atmosferica (APCI) 0 el instrumento de cromatograffa de gasesespectrometna de masas (C G E m ). Los desplazamientos qmmicos en los datos de resonancia magnetica nuclear (RMN) se expresan en partes por millon (ppm, 6) referidos a los picos residuales de los disolventes deuterados utilizados.
Para las smtesis que hagan referenda a los procedimientos de otros Ejemplos 0 Procedimientos, el protocolo de reaccion (duracion de la reaccion y la temperatura) puede variar. En general, las reacciones fueron seguidas por cromatograffa en capa fina (TLC) 0 espectrometna de masas, y se sometieron a tratamiento cuando fue adecuado. Las purificaciones pueden variar entre experimentos: por lo general, los disolventes y las proporciones de disolventes usadas para los eluyentes/gradientes se seleccionaron para proporcionar RfS 0 tiempos de retencion adecuados.
Se realizaron rotaciones opticas en un polanmetro 343 de Perkin-Elmer (Numero de serie 9506).
Se realizaron HRMS en un Agilent 6220 TOF CL/EM.
Los nombres de compuestos se generaron con software de ACD Labs.
Condiciones de HPLC y CL-EM usadas para analisis
Protocolo A: Columna: Phenomenex Luna C18 (2), 150 x 3,0 mm, 5 pm; Fase movil A: acido formico al 0,1 % en agua (v/v ); Fase movil B: acido formico al 0,1 % en acetonitrilo (v/v ); Gradiente: B al 5 % durante 1,5 minutos, 5 % a 100 % de B durante 8,5 minutos, despues B al 100 % durante 1 minuto; Caudal: 0,75 ml/minuto. Temperatura: 250C; Deteccion: DAD 215 nm, 254 nm; intercalo de EM (+) 150-2000 daltons; Volumen de inyeccion: 10 pl; Instrumento: Agilent 1200 LCMS.
Protocolo B: Columna: Phenomenex Luna C18 (2), 150 x 3,0 mm, 5 pm; Fase movil A: acido formico al 0,1 % en agua (v/v ); Fase movil B: acido formico al 0,1 % en acetonitrilo (v/v ); Gradiente: B al 50 % durante 1,5 minutos, 50 % a 100% de B durante 6,5 minutos, despues B al 100% durante 3 minutos; Caudal: 0,75 ml/minuto. Temperatura: 250C; Deteccion: DAD 215 nm; intercalo de EM (+) 150-2000 daltons; Volumen de inyeccion: 10 pl; Instrumento: Agilent 1200 LCMS.
Protocolo C: Columna: Phenomenex Luna C18 (2), 150 x 3,0 mm, 5 pm; Fase movil A: acido trifluoroacetico al 0,02 % en agua (v/v ); Fase movil B: acido trifluoroacetico al 0,02 % en metanol (v/v ); Gradiente: B del 50 % al 100 % durante 10 minutos; Caudal: 0,75 ml/minuto. Temperatura: no controlada; Deteccion: DAD 215 nm, 254 nm; Volumen de inyeccion: 10 pl; Instrumento: Agilent 1100 HPLC.
Protocolo D: Columna: Phenomenex Luna C18 (2), 150 x 3,0 mm, 5 pm; Fase movil A: acido trifluoroacetico al 0,02 % en agua (v/v ); Fase movil B: acido trifluoroacetico al 0,02 % en metanol (v/v ); Gradiente: B del 5 % al 100 % durante 8 minutos; Caudal: 0,75 ml/minuto. Temperatura: no controlada; Deteccion: DAD 215 nm, 254 nm; Volumen de inyeccion: 10 pl; Instrumento: Agilent 1100 HPLC.
Protocolo E: Columna: Phenomenex Lux Amylose-2, 250 x 4,6 mm, 5 pm; Fase movil A: heptano; Fase movil B: etanol (desnaturalizado); Gradiente: B del 5 % al 100 % durante 10 minutos; Caudal: 1,5 ml/minuto. Temperatura: no controlada; Deteccion: DAD 215 nm, 254 nm; intercalo de EM (+) 150-1500 daltons; Volumen de inyeccion: 10 pl; Instrumento: Agilent 1100 LCMS.
Protocolo F: Columna: Waters Acquity UPLC BEH, C18, 2,1 x 50 mm, 1,7 pm; Fase movil A: : acido formico al 0,1 % en agua (v/v ); Fase movil B: acido formico al 0,1 % en acetonitrilo (v/v ); Gradiente: 5 % de B durante 0,1 minutos, 5 % a 95 % de B durante 0,7 minutos, 95 % de B durante 0,1 minutos; Caudal: 1,25 ml/minuto. Temperatura: 60 oC; Deteccion: 200-450 nm; intercalo de EM (+) 100-1200 daltons; Volumen de inyeccion: 5 pl; Instrumento: Waters Acquity.
Protocolo G: Columna: Phenomenex Luna C18 (2), 150 x 3,0 mm, 5 pm; Fase movil A: acido trifluoroacetico al 0,02 % en agua (v/v ); Fase movil B: acido trifluoroacetico al 0,02 % en acetonitrilo (v/v ); Gradiente: B del 0 % al 100 % durante 8,5 minutos; Caudal: 1,5 ml/minuto. Temperatura: no controlada; Deteccion: DAD 210 nm; Volumen de inyeccion: 10 pl; Instrumento: Agilent 1100 HPLC.
Protocolo H: Columna: Phenomenex Gemini-NX, C18, 4,6 x 50 mm, 3 pm, 110 A; Fase movil A: acido formico al 0,1 % en agua (v/v ); Fase movil B: acido formico al 0,1 % en acetonitrilo (v/v ); Gradiente: 0 % a 100 % de B durante 4,10 minutos, lineal despues 100% de B durante 0,4 minutos; Caudal: 1,5 ml/minuto. Temperatura: 60 oC; Deteccion: DAD 200-450 nm; intercalo de EM (+) 100-2000 daltons; Volumen de inyeccion: 5 pl; Instrumento: Agilent.
Protocolo I: Columna: Atlantis T3, 75 x 3,0 mm, 3 pm; Fase movil A: acido trifluoroacetico al 0,05 % en agua (v/v ); Fase movil B: acetonitrilo; Gradiente: B del 5 % al 95 % durante 5,75 minutos; Caudal: 1,2 ml/minuto. Temperatura: 45 oC; Deteccion: DAD 215 nm, 230 nm, 254 nm; intervalo de EM (+): 150-1200 daltons; Volumen de inyeccion: 5 pl; Instrumento: Agilent 1100 LCMS.
Protocolo J: Columna: Phenomenex Luna Fenil-Hexilo, 150 x 3,0 mm, 5 pm; Fase movil A: acido formico al 0,1 % en agua (v/v ); Fase movil B: acido formico al 0,1 % en acetonitrilo (v/v ); Gradiente: B al 5 % durante 1,5 minutos, 5 % a 100% de B durante 8,5 minutos, despues 100% de B durante 1 minuto; Caudal: 0,75 ml/minuto. Temperatura: 25 oC; Deteccion: DAD 215 nm, 254 nm; intercalo de EM (+) 150-2000 daltons; Volumen de inyeccion: 10 pl; Instrumento: Agilent 1200 LCMS.
Protocolo K: Columna: Symmetry-C18, 50 x 2,1 mm, 3,5 pm; Fase movil A: acido formico al 0,1 % en agua (v/v ); Fase movil B: acido formico al 0,1 % en metanol (v/v ); Gradiente: B del 10 % al 90 % durante 6,5 minutos; Caudal: 0,7 ml/minuto. Temperatura: temperatura ambiente; Deteccion: DAD 215 nm; intercalo de EM (+) 100-1500 daltons; Volumen de inyeccion: 3 pl; Instrumento: Waters 996 PDA.
Protocolo L: Columna: XBridge C-18, 150 x 4,6 mm, 3,5 pm; Fase movil A: solucion acuosa 5 mM de acetato amonico; Fase movil B: acetonitrilo; Gradiente: 10 % de B durante 3 minutos despues de 10 % a 80 % de B durante 14 minutos; Caudal: 0,7 ml/minuto. Temperatura: temperatura ambiente; Deteccion: DAD 215 nm; intercalo de EM (+) 100-1500 daltons; Volumen de inyeccion: 3 pl; Instrumento: Waters 996 PDA.
Protocolo M: Columna: Phenomenex Luna, 150 x 3,0 mm, 5 pm; Fase movil A: acido formico al 0,1 % en agua (v/v ); Fase movil B: acido formico al 0,1 % en metanol (v/v ); Gradiente: B al 50 % durante 1,5 minutos, 50 % a 80 % de B durante 8,5 minutos, despues B al 80 % durante 10 minutos; Caudal: 0,75 ml/minuto. Temperatura: 450C; Deteccion: DAD 215 nm, 254 nm; intercalo de EM (+) 90-2000 daltons; Volumen de inyeccion: 10 pl; Instrumento: Agilent 1200 LCMS.
Protocolo N: Columna: Phenomenex Luna C18 (2), 150 x 3,0 mm, 5 pm; Fase movil A: acido trifluoroacetico al 0,02 % en agua (v/v ); Fase movil B: acido trifluoroacetico al 0,02 % en acetonitrilo (v/v ); Gradiente: B del 0 % al 100 % durante 23,5 minutos; Caudal: 1,5 ml/minuto. Temperatura: no controlada; Deteccion: DAD 210 nm; Volumen de inyeccion: 10 pl; Instrumento: Agilent 1100 HPLC
Protocolo O: Columna: Columna: Agilent Poroshell 300SB-C8, 75 x 2,1 mm, 2,6 pm; Fase movil A: acido formico al 0,1 % en agua (v/v ); Fase movil B: acido formico al 0,1 % en acetonitrilo (v/v ); Gradiente: de 20 % de B a 45 % de B durante 4 minutos; Caudal: 1,0 ml/minuto. Temperatura: 60 oC; Deteccion: 220 nm; intervalo de EM (+) 400-2000 Da; Volumen de inyeccion: 10 pl; Instrumento: Agilent 1100 LC, Waters Micromass ZQ MS. La desconvolucion se realizo usando MaxEntl.
Protocolo P: Columna: Columna: TSK-gel G 3000SW x I, 300 x 7,8 mm, 10 pm; Fase movil: Solucion salina tamponada con fosfato (PBS, IX), pH 7,4 con acetonitrilo al 2 %; Isocratico; Caudal: 1 ml/minuto. Temperatura: temperatura ambiente; Volumen de inyeccion: 5 pl; Instrumento: Agilent 1100 HPLC.
Protocolo Q: Columna: Waters Acquity UPLC HSS T3, C18, 2,1 x 50 mm, 1,7 pm; Fase movil A: acido formico al 0,1 % en agua (v/v ); Fase movil B: acido formico al 0,1 % en acetonitrilo (v/v ); Gradiente: 5% de B durante 0,1 minutos, 5% a 95% de B durante 2,5 minutos, 95% de B durante 0,35 minutos; Caudal: 1,25 ml/minuto. Temperatura: 60 oC; Deteccion: 200-450 nm; intercalo de EM (+) 100-2000 daltons; Volumen de inyeccion: 5 pl; Instrumento: Waters Acquity.
Protocolo Q1: Columna: Waters Acquity UPLC HSS T3, C18, 2,1 x 50 mm, 1,7 pm; Fase movil A: acido formico al 0,1 % en agua (v/v ); Fase movil B: acido formico al 0,1 % en acetonitrilo (v/v ); Gradiente: 5% de B durante 0,1 minutos, 5% a 95% de B durante 1,5 minutos, 95% de B durante 0,35 minutos; Caudal: 1,25 ml/minuto. Temperatura: 60 oC; Deteccion: 200-450 nm; intercalo de EM (+) 100-2000 daltons; Volumen de inyeccion: 5 pl; Instrumento: Waters Acquity.
Protocolo Q2: Columna: Xtimate C18, 2,1 x 30 mm, 3 pm; Fase movil A: acido trifluoroacetico al 0,1 % en agua (v/v ); Fase movil B: acido trifluoroacetico al 0,1 % en acetonitrilo (v/v ); Gradiente: 10 % a 80 % de B durante 0,9 minutos, 80 % de B durante 0,6 minutos; 100 % de B durante 0,5 minutos; Caudal: 1,2 ml/minuto. Deteccion: DAD 220 nM; Temperatura: 25 oC; Volumen de inyeccion: 1 pl; Instrumento: Agilent.
Protocolo Q3: Columna: Xtimate C18, 2,1 x 30 mm, 3 pm; Fase movil A: acido trifluoroacetico al 0,1 % en agua (v/v ); Fase movil B: acido trifluoroacetico al 0,1 % en acetonitrilo (v/v ); Gradiente de 0 % a 60 % de B durante 0,9 minutos, 60 % de B durante 0,6 minutos; 100 % de B durante 0,5 minutos; Caudal: 1,2 ml/minuto. Deteccion: DAD 220 nM; Temperatura: 25 oC; Volumen de inyeccion: 1 pl; Instrumento: Agilent.
Protocolo R: Columna: Phenomenex Luna, 150 x 3,0 mm, 5 pm; Fase movil A: acido formico al 0,1 % en agua (v/v ); Fase movil B: acido formico al 0,1 % en metanol (v/v ); Gradiente: B al 5 % durante 1,5 minutos, 5 % a 100 % de B durante 8,5 minutos, despues 100 % de B durante 1 minuto; Caudal: 0,75 ml/minuto. Temperatura: 45 oC; Deteccion: DAD 215 nm, 254 nm; intercalo de EM (+) 150-2000 daltons; Volumen de inyeccion: 10 pl; Instrumento: 305 RP Agilent 1200 LCMS.
Protocolo S: Columna: Phenomenex Luna, 150 x 3,0 mm, 5 pm; Fase movil A: acido trifluoroacetico al 0,1 % en agua (v/v ); Fase movil B: trifluoroacetico al 0,1 % en acetonitrilo (v/v ); Gradiente: B al 5 % durante 1,5 minutos, 5 % a 95 % de B durante 8,5 minutos, despues 100% de B durante 1 minuto; Caudal: 1,0 ml/minuto. Temperatura: no controlada; Deteccion: DAD 210 nm; intercalo de EM (+) 150-2000 daltons; Volumen de inyeccion: 10 pl; Instrumento: 305 RP Agilent 1100 HPLC.
Protocolo T: Columna: Atlantis dC18, 50 x 4,6 mm, 5 pm; Fase movil A: acido trifluoroacetico al 0,05 % en agua (v/v ); Fase movil B: acido trifluoroacetico al 0,05 % en acetonitrilo (v/v ); Gradiente: B del 5 % al 95 % durante 4,0 minutos; despues parada a 95 % de B durante 1 minuto; Caudal: 2 ml/minuto. Temperatura: temperatura ambiente; Deteccion: DAD 215 nm; intervalo de EM (+) 160 -1000 daltons; Volumen de inyeccion: 3 pl; Instrumento: Waters 996 PDA.
Protocolo U: Columna: Phenomenex Luna C18 (2), 150 x 3,0 mm, 5 pm; Fase movil A: acido formico al 0,1 % en agua (v/v ); Fase movil B: acido formico al 0,1 % en acetonitrilo (v/v ); Gradiente: B al 5 % durante 1,5 minutos, 5 % a 100 % de B durante 8,5 minutos, despues B al 100 % durante 1 minuto; Caudal: 0,75 ml/minuto. Temperatura: 45 oC; Deteccion: DAD 215 nm, 254 nm; intercalo de EM (+) 150-2000 daltons; Volumen de inyeccion: 10 pl; Instrumento: Agilent 1200 LCMS.
Protocolo V: Columna: HPLC-V Ultimate XB-C18, 50 x 3,0 mm, 3 pm; Fase movil A: acido trifluoroacetico al 0,225 % en agua (v/v ); Fase movil B: acido trifluoroacetico al 0,225 % en acetonitrilo (v/v ); Gradiente: B del 30 % al 90 % durante 6 minutos; Caudal: 1,2 ml/minuto. Temperatura: 400C; Deteccion: DAD 220 nm; Volumen de inyeccion: 1 pl; Instrumento: SHIMADZU.
Protocolo 'W: Columna: HPLC-V Ultimate XB-C18, 50 x 3,0 mm, 3 pm; Fase movil A: acido trifluoroacetico al 0,1 % en agua (v/v ); Fase movil B: acido trifluoroacetico al 0,1 % en acetonitrilo (v/v ); Gradiente: B del 10% al 80 % durante 6 minutos; Caudal: 1,2 ml/minuto. Temperatura: 40 oC; Deteccion: DAD 220 nm; Volumen de inyeccion: 3 pl; Instrumento: SHIMADZU.
Protocolo X: Columna: YMC-pack ODS-A, 150 x 4,6 mm, 5 pm; Fase movil A: acido trifluoroacetico al 0,1 % en agua (v/v ); Fase movil B: acido trifluoroacetico al 0,1 % en acetonitrilo (v/v ); Gradiente: B del 10% al 80 % durante 6 minutos; Caudal: 1,2 ml/minuto. Deteccion: DAD 220 nm. Temperatura: 40 oC; Volumen de inyeccion: 3 pl; Instrumento: SHIMADZU.
Protocolo Y: Columna: YMC-pack ODS-A, 150 x 4,6 mm, 5 pm; Fase movil A: acido trifluoroacetico al 0,1 % en agua (v/v ); Fase movil B: acido trifluoroacetico al 0,1 % en acetonitrilo (v/v ); Gradiente: 0% a 95% de B durante 10 minutos, despues 95% de B durante 5 minutos; Caudal: 1,5 ml/minuto; Deteccion: DAD 220 nm; Instrumento: Agilent 1100.
Protocolo Z: Columna: Xtimate C18, 2,1 x 30 pm, 3 pm; Fase movil A: acido trifluoroacetico al 0,1 % en agua (v/v ); Fase movil B: acido trifluoroacetico al 0,1 % en acetonitrilo (v/v ); Gradiente: B del 0 % al 60 % durante 2 minutos; Caudal: 1,2 ml/min. Temperatura: 50 oC; Deteccion: 220 nm, intervalo de EM (+) 100 -1000 daltons; Volumen de inyeccion: 1 pl; Instrumento: SHIMADZU.
Protocolo AB: Columna: Phenomenex Luna C18 (2), 150 x 2,0 mm, 5 pm; Fase movil A: acido formico al 0,1 % en agua (v/v ); Fase movil B: acido formico al 0,1 % en acetonitrilo (v/v ); Gradiente: 5% a 100% de B durante 10 minutos, despues B al 100 % durante 2 minuto; Caudal: 0,5 ml/minuto. Temperatura: 25 oC; Deteccion: DAD 210 nm, 254 nm; intercalo de EM (+) 150-2000 daltons; Volumen de inyeccion: 5 pl; Instrumento: Agilent 1100 LCMS.
Protocolo BB: Columna: Phenomenex Luna C18 (2), 150 x 2,0 mm, 5 pm; Fase movil A: acido formico al 0,1 % en agua (v/v ); Fase movil B: acido formico al 0,1 % en acetonitrilo (v/v ); Gradiente: B al 5 % durante 2,0 minutos, de 5 % a 100 % de B durante 12 minutos y 100 % de B durante 2 minutos, despues de 100 % a 5 % de B durante 1,5 min; Caudal: 0,75 ml/minuto. Temperatura: 25 oC; Deteccion: DAD 215 nm, 254 nm; intercalo de EM (+) 150-2000 daltons; Volumen de inyeccion: 5 pl; Instrumento: Agilent.
Protocolo CB: Columna: Waters XBridge C18, 4,6 x 50 mm, 5 pm; Fase movil A: hidroxido de amonio al 0,03 % en agua (v/v ); Fase movil B: hidroxido de amonio al 0,03 % en acetonitrilo (v/v ); Gradiente: 5 % a 95 % de B durante 4,0 minutos, despues B al 95% durante 1 minuto; Caudal: 2 ml/minuto. Temperatura: 25 oC; Deteccion: DAD 215 nm, intercalo de E m (+) 160-1000 daltons; Volumen de inyeccion: 4 pl; Instrumento: Waters ZQ/Alliance 2795 HPLC. Protocolo DB: Columna: Waters Atlantis dC18, 4,6 x 50 mm, 5 pm; Fase movil A: acido trifluoroacetico al 0,05 % en agua (v/v ); Fase movil B: acido trifluoroacetico al 0,05 % en acetonitrilo (v/v ); Gradiente: de 5,0 % a 95 % de B durante 4,0 minutos, despues 95 % de B durante 1 minuto. Caudal: 2 ml/minuto. Temperatura: 25 oC; Deteccion: DAD 215 nm, intercalo de EM (+) 160-1000 daltons; Volumen de inyeccion: 4 pl; Instrumento: Waters ZQ/Alliance 2795 HPLC.
Protocolo EB: Columna: XBridge RP18, 2,1 x 50 mm, 5 pm; Fase movil A: hidroxido de amonio al 0,02 % en agua (v/v ); Fase movil B: hidroxido de amonio al 0,02 % en acetonitrilo (v/v ); Gradiente de 10 % a 80 % de B% durante 6 minutos, despues 80 % durante 2 minutos; Caudal: 1,2 ml/minuto. Deteccion: DAD 220 nm.; Temperatura: 50 oc. Protocolo FB: Columna: Phenomenex Luna C18 (2), 150 x 2,0 mm, 5 pm; Fase movil A: acido formico al 0,1 % en agua (v/v ); Fase movil B: acido formico al 0,1 % en acetonitrilo (v/v ); Gradiente: B al 5 % durante 2,0 minutos, de 5 % a 100% de B durante 10 minutos y B al 100% durante 2 minutos; Caudal: 0,50 ml/minuto. Temperatura: 25 oc; Deteccion: DAD 215 nm, 254 nm; intercalo de EM (+) 150-2000 daltons; Volumen de inyeccion: 5 pl; Instrumento: Agilent 1200 LCMS.
En algunos casos se hicieron algunas alteraciones menores para analisis CL-EM y HPLC, tales como, pero sin limitacion, un cambio en el gradiente o caudal que se indica mediante el sfmbolo *
Condiciones de HPLC usadas para purificacion
Procedimiento A: Columna: Phenomenex Lux Amylose-2, 250 x 21,2 mm, 5 pm; Fase movil A: Heptano; Fase movil B: Etanol (desnaturalizado); Gradiente: de 5 % a 100 % de B durante 6 min; Caudal: 27 ml/minuto; Deteccion: DAD 210-360 nm; intercalo de EM (+) 150-2000 daltons; Instrumento: Waters FractionLynx.
Procedimiento B: Columna: Phenomenex Luna C18(2), 150 x 21,2 mm, 5 pm; Fase movil A: acido acetico al 0,02 % en agua; Fase movil B: acido acetico al 0,02 % en acetonitrilo; Gradiente: B al 5 % durante 1,5 minutos, B del 5 % al 45% durante 8,5 minutos; Caudal: 27 ml/minuto; Deteccion: DAD 215 nm, 254 nm; intercalo de EM (+) 150-2000 daltons; Instrumento: Waters FractionLynx.
Procedimiento C: Columna: Phenomenex Luna C18, 100 x 30 mm, 10 pm; Fase movil A: acido trifluoroacetico al 0,02 % en agua (v/v ); Fase movil B: acido trifluoroacetico al 0,02 % en metanol (v/v ); Gradiente: B del 10 % al 90 % durante 20 minutos; Caudal: 20 ml/minuto. Temperatura: no controlada; Deteccion: DAD 210 nm, 254 nm; Volumen de inyeccion: variable; Instrumento: Gilson.
Procedimiento D: Columna: Phenomenex Synergi Max-RP, 150 x 21,2 mm, 4 pm; Fase movil A: acido formico al 0,1 % en agua; Fase movil B: acido formico al 0,1 % en acetonitrilo; Gradiente: 30 % de B durante 1,5 minutos, 30 % a 60 % de B durante 8,5 minutos, de 60 a 100 % de B durante 0,5 minutos despues 100 % de B durante 2 minutos; Caudal: 27 ml/minuto; Deteccion: DAD 210-360 nm; intercalo de EM (+) 150-2000 daltons; Instrumento: Waters FractionLynx.
Procedimiento E l: Columna: Phenomenex Luna C18(2), 150 x 21,2 mm, 5 pm; Fase movil A: acido formico al 0,1 % en agua; Fase movil B: acido formico al 0,1 % en acetonitrilo; Gradiente: 40 % de B durante 1,5 minutos, 40 % a 80 % de B durante 8,5 minutos, de 80 a 100 % de B durante 0,5 minutos despues 100 % de B durante 2 minutos; Caudal: 27 ml/minuto; Deteccion: Deteccion: DAD 210-360 nm; intercalo de e M (+) 150-2000 daltons; Instrumento: Waters FractionLynx LCMS.
Procedimiento E2: Columna: Phenomenex Luna Fenil-hexilo, 150 x 21,2 mm, 5 pm. El resto de los protocolos son identicos a los descritos para el Procedimiento El.
Procedimiento F: Columna: Phenomenex Synergi Max-RP, 150 x 21,2 mm, 4 pm; Fase movil A: acido formico al 0,1 % en agua; Fase movil B: acido formico al 0,1 % en metanol; Gradiente: 44 % de B durante 1,5 minutos, 44 % a 77 % de B durante 8,5 minutos, despues B al 77 % durante 10 minutos; Caudal: 27 ml/minuto; Deteccion: DAD 210­ 360 nm; intercalo de EM (+) 150-2000 daltons; Instrumento: Waters FractionLynx LCMS.
Procedimiento G: Columna: PrincetonSFC 2-etilpiridina, 250 x 21,2 mm, 5 pm; Fase movil A: heptano; Fase movil B: etanol (desnaturalizado); Gradiente: 1 % de B durante 1,5 minutos, B del 1 % al 50 % durante 8,5 minutos; Caudal: 27 ml/minuto; Deteccion: DAD 210-360 nm; intercalo de EM (+) 150-2000 daltons; Instrumento: Waters FractionLynx l c m s .
Procedimiento H: Columna: Phenomenex Luna C18(2), 150 x 21,2 mm, 5 pm; Fase movil A: acido acetico al 0,02 % en agua; Fase movil B: acido acetico al 0,02 % en acetonitrilo; Gradiente: B al 20 % durante 1,5 minutos, B del 20 % al 60 % durante 10,5 minutos; Caudal: 27 ml/minuto; Deteccion: DAD 210-360 nm; intercalo de EM (+) 150-2000 daltons; Instrumento: Waters FractionLynx LCMS.
Procedimiento I: Columna: Phenomenex Luna C18(2), 150 x 21,2 mm, 5 pm; Fase movil A: acido formico al 0,1 % en agua; Fase movil B: acido formico al 0,1 % en metanol; Gradiente: B al 40 % durante 1,5 minutos, de 40 % a 70 % de B durante 8,5 minutos despues 70 % de B durante 10 minutos; Caudal: 27 ml/minuto; Deteccion: DAD 210-360 nm; intercalo de EM (+) 150-20o0 daltons; Instrumento: Waters FractionLynx LCMS.
Procedimiento J: Columna: Phenomenex Luna C18, 100 x 30 mm, 5 pm; Fase movil A: acido trifluoroacetico al 0,02 % en agua (v/v ); Fase movil B: acido trifluoroacetico al 0,02 % en acetonitrilo (v/v ); Gradiente: B del 10 % al 90 % durante 20 minutos; Caudal: 20 ml/minuto. Temperatura: no controlada; Deteccion: DAD 210 nm, 254 nm; Volumen de inyeccion: variable; Instrumento: Gilson.
Procedimiento K: Columna: Phenomenex Luna C18(2), 150 x 21,2 mm, 5 pm; Fase movil A: acido formico al 0,1 % en agua; Fase movil B: acido formico al 0,1 % en acetonitrilo; Gradiente: 20 % de B durante 1,5 minutos, 20 % a 50 % de B durante 8,5 minutos, de 50 a 100 % de B durante 0,5 minutos despues 100 % de B durante 2 minutos; Caudal: 27 ml/minuto; Deteccion: Deteccion: DAD 210-360 nm; intercalo de e M (+) 150-2000 daltons; Instrumento: Waters Fraction Lynx LCMS.
Procedimiento L: Columna: Phenomenex Luna C18(2), 150 x 21,2 mm, 5 pm; Fase movil A: acido formico al 0,1 % en agua; Fase movil B: acido formico al 0,1 % en acetonitrilo; Gradiente: 30 % de B durante 1,5 minutos, 30 % a 50 % de B durante 8,5 minutos, de 50 a 100 % de B durante 0,5 minutos despues 100 % de B durante 2 minutos; Caudal: 27 ml/minuto; Deteccion: Deteccion: DAD 210-360 nm; intercalo de e M (+) 150-2000 daltons; Instrumento: Waters Fraction Lynx LCMS.
Procedimiento M: Columna: Waters Sunfire, C18, 19 x 100 mm, 5 pm; Fase movil A: acido trifluoroacetico al 0,05 % en agua (v/v ); Fase movil B: acido trifluoroacetico al 0,05 % en acetonitrilo (v/v ); Gradiente: de 0 a 100 % durante 8,5 minutos. Caudal 25 ml/minuto. Deteccion: DAD 215 nm; intervalo de EM (+) 160-1000 daltons; Instrumento: Waters FractionLynx.
Procedimiento N: Columna: Waters Sunfire, C18, 19 x 100 mm, 5 pm; Fase movil A: acido formico al 0,05 % en agua (v/v ); Fase movil B: acido formico al 0,05 % en acetonitrilo (v/v ); Gradiente: de 0 a 100% durante 8,5 minutos. Caudal 25 ml/minuto. Deteccion: DAD 215 nm; intervalo de EM (+) 160-1000 daltons; Instrumento: Waters FractionLynx.
Procedimiento O: Columna: Phenomenex Luna C18, 21,2 x 150 mm, 5 pm; Fase movil A: acido formico al 0,1 % en agua (v/v ) acido en agua (v/v ); Fase movil B: acido formico al 0,1 % en acetonitrilo (v/v ); Gradiente (v/v ); Gradiente 20 % de B durante 1,5 minutos, 20 % a 40 % de B durante 8,5 minutos, de 40 a lOo % de B durante 0,5 minutos, despues parada a 1OO % de B durante 1,5 minutos. Caudal: 27 ml/minuto. Deteccion: DAD 21O-36O nm; intercalo de EM (+) i 50-2000 daltons; Instrumento: Waters FractionLynx.
Procedimiento P: Columna: Phenomenex Gemini C18, 21,2 x 25O mm, 5 pm; Fase movil A: hidroxido de amonio al 0,225 % en agua (pH 10) (v/v ); Fase movil B: hidroxido de amonio al 0,225 % en acetonitrilo (v/v ); Gradiente: de 45 % a 85 % de B durante 10 minutos. Caudal 35 ml/minuto. Deteccion: DAD 22O nm; intervalo de EM (+) 1OO-12OO daltons; Instrumento: Shimadzu MS Trigger.
Procedimiento Q: Columna: Columna: Phenomenex Synergi C18, 50 x 25O mm, 10 pm; Fase movil A: acido trifluoroacetico al 0,1 % en agua (v/v ); Fase movil B: Acetonitrilo; Gradiente de 10% a 40 % de B durante 25 minutos. Caudal 1OO ml/minuto. Deteccion: UV/Vis 22O nm; Instrumento: Shimadzu LC-8A.
Procedimiento R: Columna: Phenomenex Luna C18 (2), 25O x 21,2 mm, 5 pm; Fase movil A: TFA al 0,1 % en agua (v/v ); Fase movil B: TFA al 0,1 % en acetonitrilo (v/v ); Gradiente: del 10% al 100% durante 30 minutos; Caudal variable. Temperatura: 250C; Deteccion: DAD 215 nm, 254 nm; intervalo de EM (+) 15O - 2OOO daltons; Volumen de inyeccion: 1,8 ml: Instrumento: Agilent 11OO Prep HPLC.
En algunos casos se hicieron algunas alteraciones menores para las condiciones de purificacion, tales como, pero sin limitacion, un cambio en el gradiente o caudal que se indica mediante el s^bolo *.
Procedimientos generales
Procedimiento General A: Retirada de Fmoc usando dietilamina o piperidina. A una solucion del compuesto que contem a Fmoc en diclorometano o A/,W-dimetilformamida (tambien denominada DMF), se anadio un volumen igual de dietilamina o piperidina. El progreso de la reaccion se controlo por CL-EM (o HPLC o TLC). Los disolventes se retiraron al vado y en algunos casos el residuo se destilo azeotropicamente de una a cuatro veces con heptano. Normalmente, el residuo se diluyo con diclorometano y una pequena cantidad de metanol antes de reducirse sobre s l^ice y se purifico por cromatograffa sobre gel de sflice, eluyendo con metanol en diclorometano (u otra mezcla de disolventes adecuada) para proporcionar el material deseado (o se uso el material en bruto segun estaba).
Procedimiento General B: Retirada de Boc o escision de t-Bu ester usando acido trifluoroacetico. A una solucion del compuesto que contem a Boc o el compuesto que contem a terc-butil ester en diclorometano a O oc (o a temperatura ambiente) se anadio acido trifluoroacetico, para proporcionar una relacion 1:4 de acido trifluoroacetico:diclorometano. El progreso de la reaccion se controlo por CL-EM (o HPLC o TLC). Los disolventes se retiraron al vado. El residuo se destilo azeotropicamente tres veces con heptano para proporcionar el material deseado.
Procedimiento General C: Retirada de Boc o escision de terc-butil ester (tambien se refiere a T-B u ester) usando acido clorlmdrico en dioxano. A una solucion del compuesto que contema Boc o compuesto que contema terc-butil ester en dioxano (o en algunos casos sin solucion, u otro disolvente pertinente) se anadio una solucion 4 M de acido clorlmdrico en dioxano. El progreso de la reaccion se controlo por CL-EM (o HPLC o TLC). La reaccion se concentro al vado y en algunos casos se destilo azeotropicamente de una a cuatro veces con heptanos.
Procedimiento General D: Acoplamiento con hexafluorofosfato de 0-(7-azabenzotriazol-1-il)-W,W,W',W-tetrametiluronio (HATU). A una solucion en agitacion de la amina (1,0 equiv.) y acido (1,O-2,O equiv.) en diclorometano, W,A/-dimetilformamida (tambien denominada DMF), o una mezcla de ambas, se anadio HATU (1,0­ 2,0 equiv.) seguido de trietilamina (2,O-4,O equiv.) o diisopropiletilamina (2,O-4,O equiv., tambien denominada base de Hunig). El progreso de la reaccion se controlo por CL-EM (o HPLC o TLC); la reaccion se completo normalmente en tres horas. Los disolventes se retiraron al vad o. El residuo se purifico por gel de sflice o cromatograffa de fase inversa o en algunos casos se destilo azeotropicamente tres veces con heptanos, se diluyo con una pequena cantidad de acetato de etilo antes de reducirse sobre sflice o sflice enlazado C18 y se purifico mediante gel de sflice o cromatograffa de fase inversa.
Procedimiento General E: Acoplamiento con A/-[6-(2,5-dioxo-2,5-dihidro-1H-pirrol-1-il)hexanoil]-L-valil-N5-carbamoil-W-[4-({[(4-nitrofenoxi)carbonil]oxi}metil)fenil]-L-ornitinamida (MalcValCitPABC-PNP). A una mezcla de la carga util amina (1 equiv.) y W-[6-(2,5-dioxo-2,5-dihidro-1H-pirrol-1-il)hexanoil]-L-valil-N5-carbamoil-W-[4-({[(4-nitrofenoxi)carbonil]oxi}metil)fenil]-L-ornitinamida (MalcValCitPABC-PNP, Solicitud de patente europea (1994), EP624377, 1,O-2,O equiv.) en W,W-dimetilformamida o dimetilacetamida (tambien denominada DMA), se anadieron piridina (O,O-4,O equiv.), diisopropiletilamina (O,O-4,O equiv.), 2,6-dimetilpiridina (O,O-4,O equiv., tambien denominada 2,6-Luditina) e hidrato de 1-hidroxibenzotriazol (0,01-1,1 equiv. tambien denominado HOBT) o 3H-[1,2,3]triazolo[4,5-b]piridin-3-ol (0,01-1,1 equiv., tambien denominado HOAT). Despues de agitar a 40 oC-50 oc durante 1-48 horas, la mezcla de reaccion se concentro al vado y se destilo azeotropicamente tres veces con heptano. El material en bruto se purifico por cromatograffa de fase inversa de acuerdo el procedimiento especificado para proporcionar el material deseado.
Procedimiento general F: Conjugacion de anticuerpo HERCEPTIN® comercial con carga util de engarce mediante disulfuros internos. Se dializo anticuerpo HERCEPTiN® disponible en el mercado (Genentech Inc) en solucion salina tamponada con fosfato de Dulbecco (DPBS, Lonza). El anticuerpo dializado se redujo con la adicion de x equivalentes de clorhidrato de tris(2-carboxietil)fosfina (TCEP, 5 mM en agua destilada) y se diluyo a una concentracion de anticuerpo final de 15 mg/ml usando DPBS, acido 2,2',2” ,2'”-(etano-1,2-diildinitrilo)tetraacetico 5 mM (EDTA), pH 7,0-7,4 (Tampon A). La reaccion se incubo a 370C durante 1-2 horas y despues se enfrio a temperatura ambiente. La conjugacion se realizo mediante la adicion de y equivalentes de carga util de engarce (5­ 10 mM en dimetilacetamida (DmA)). Se anadio DMA para alcanzar un 10-20 % (v/v) de componente de disolvente organico total en la mezcla de reaccion final, y se anadio el Tampon A para alcanzar una concentracion de anticuerpo final de 10 mg/ml. La reaccion se incubo durante 1-2 horas a temperatura ambiente. Despues, se cambio el tampon de la mezcla de reaccion en DPBS (pH 7,4) usando columnas de intercambio de tampon GE Healthcare Sephadex G-25 M segun las instrucciones del fabricante. El material en bruto se purifico por cromatograffa de exclusion de tamano (SEC) usando un sistema GE AKTA Explorer con una columna GE Superdex y eluyente de PBS (pH 7,4).
Procedimiento general G: Las reacciones de conjugacion se realizaron en la porcion superior de un dispositivo de ultrafiltracion centrifugo, tal como filtros Amicon Ultra 50k Ultracel (n° de pieza UFC805096, GE). Se preparo una solucion madre 132 mM de L-cistema en PBS que contema EDTA 50 mM. Esta solucion (50 pl) se anadio a una mezcla del anticuerpo mutante respectivo (5 mg) en 950 pl de PBS que contema EDTA de 50 mM. La concentracion de cistema final en la mezcla de reaccion fue 6,6 mM. Despues de permitir que la reaccion reposara a temperatura ambiente (aproximadamente 23 oc) durante 1,5 horas, el tubo de reaccion se centrifugo para concentrar el material a aproximadamente 100 pl. La mezcla se diluyo a 1 ml con PBS que contema EDTA 50 mM. Este procedimiento se repitio 4 veces para retirar todo el reductor de cistema. El material resultante se diluyo a 1 ml en PBS que contema EDTA 50 mM y se trato con 16 pl de una solucion 5 mM de la carga util de engarce de maleimida (de la Tabla 18A) en dimetil acetamida (DMA) (aproximadamente 5 equivalentes). Despues de reposar a temperatura ambiente (aproximadamente 23 oc) durante 1,5 horas, el tubo de reaccion se centrifugo para concentrar el material a aproximadamente 100 pl. La mezcla se diluyo a 1 ml con PBS. Este procedimiento se repitio 2 veces para retirar el exceso de reactivo de maleimida. Los conjugados de anticuerpo se purificaron generalmente cromatograffa de exclusion de tamano (SEC) usando un sistema GE AKTA Explorer con una columna GE Superdex200 y un eluyente de PBS (pH 7,4). La carga del farmaco en el sitio de conjugacion pretendido se determino usando una diversidad de procedimiento, incluyendo espectrometria de masas (EM), HPLC de fase inversa y cromatograffa de interaccion hidrofoba (HIC), como se describe en cualquier otra parte. El valor indicado (en las Tablas 19A y 19B) se obtiene generalmente por CL-EM en condiciones de reduccion.
Procedimiento general H: Una solucion 20 mM de TCEP (generalmente de 50 a 100 equivalentes molares) se anadio al anticuerpo (ripicamente 5 mg) de manera que la concentracion final de anticuerpo fue 5 mg/ml en PBS que contema EDTA 5o mM. Despues de dejar que la reaccion reposara a 37 oc durante 1,5 horas, se cambio el tampon del anticuerpo en PBS que contema EDTA 50 mM usando un dispositivo de concentracion por centrifugacion de separacion a 50 kD MW (lavados de 3 x 3 ml, 10 x concentracion por ciclo). En circunstancias particulares, tambien son utiles procedimientos alternativos, tales como TFF o dialisis. El anticuerpo resultante se resuspendio en 1 ml de PBS que contema EDTA 50 mM y se trato con una solucion 50 mM recien preparada de DHA (deshidroascorbato) en 1:1 de PBS/EtOH (la concentracion final de DHA es ripicamente 1 mM) y se dejo reposar a 4 oc durante una noche. Se cambio el tampon de la mezcla de anticuerpo/DHA en PBS que contema EDTA 50 mM usando un dispositivo de concentracion por centrifugacion de separacion a 50 kD MW (lavados de 3 x 3 ml, 10 x concentracion por ciclo). El anticuerpo resultante se resuspendio en 1 ml de PBS que contema EDTA 50 mM y se trato con carga util de engarce de maleimida 10 mM en DmA (ripicamente 5-10 equivalentes). Despues de reposar durante 1,5 horas, se cambio del tampon del material (como anteriormente) en 1 ml de PBS (lavados de 3 x 3 ml, 10x concentracion por ciclo). La purificacion por SEC (como se ha descrito previamente) se realizo segun se necesito para retirar cualquier material agregado.
Procedimiento general I: La conjugacion inicial de la carga util de engarce se realizo usando el procedimiento descrito previamente (Procedimiento General F). Se cambio el tampon del conjugado de anticuerpo-farmaco resultante en un tampon borato 50 mM (pH 9,2) usando un dispositivo de ultrafiltracion (separacion 50 kd MW). La solucion resultante se calento a 37 oc durante 24 horas (para los engarces de maleimida-Peg) o a 45 oc durante 48 horas (para los engarces de maleimida-caprcrilo). La solucion resultante se enfrio, se cambio su tampon a PBS y se purifico por SEC (como se ha descrito previamente) para retirar cualquier material agregado. El analisis de CLEM del material indico que el anillo de succinimida se habfa abierto por completo (90 % o mas). Observese que en los ejemplos en los que un ester merilico esta presente en la carga util, el ester se hidroliza en el acido carboxflico en las condiciones descritas.
Procedimiento general J: Los esteres de pentafluorofenilo se conjugaron con el anticuerpo mostrado siguiendo el procedimiento indicado previamente en el documento W02012007896 A l.
Procedimiento general K: La conjugacion de engarces de amino-alquilo son completo mediante una ligadura mediada por enzima como se describe en el documento WO2012059882 A2.
Procedimiento General L. Se acoplo N-[(9H-fluoren-9-ilmetoxi)carbonil]-2-metilalanil-N-[(3R,4S,5S)-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-2-carboxi-1-metoxipropil]pirrolidin-1-il}-3-metoxi-5-metil-1-oxoheptan-4-il]-N-metil-L-valinamida (preparada de la misma manera que el n.0136) al resto de amina o aminoacido pertinente usando HATU (1,0-2,0 equiv.) en presencia de base de Hunig (1-5,0 equiv.) en una solucion de DMF, diclorometano, o en algunos casos una solucion de ambos (o una solucion de uno o mas disolventes). La reaccion se controlo por CL-EM (o TLC o HPLC). La reaccion se concentro al vad o y se purifico normalmente mediante cromatograffa de sflice o por HPLC prep. Despues, se retiro la proteccion de Fmoc como se ha descrito en el procedimiento general A, seguido de concentracion al vad o y se purifico por cromatograffa de s l^ice o por HPLC prep.
Procedimiento General M. El n.0151 se acoplo a la amina pertinente usando HATU (1,0-2,0 equiv., u otro reactivo de acoplamiento adecuado) en presencia de base de Hunig (1,0-5,0 equiv.) en una solucion de D m F, diclorometano, o en algunos casos una solucion de ambos (o una solucion de uno o mas disolventes). La reaccion se controlo por CL­ EM (o TLC o HPLC). La reaccion se concentro al vado. Despues, se realizo la desproteccion de Boc como se ha descrito en el procedimiento general B, se concentro al vado y se purifico por cromatograffa de sflice o por HPLC prep.
Procedimiento General N. Se acoplo acido 1-(9H-fluoren-9-il)-3-oxo-2,7,10,13,16,19,22-heptaoxa-4-azapentacosan-25-oico (u otro Fmoc-AmPegXC2-COOH adecuado) al pentapeptido citotoxico pertinente (o el pentapeptido citotoxico que contiene un grupo protector en un resto reactivo distinto del termino N) usando HATU (1,0-2,0 equiv., u otro reactivo de acoplamiento adecuado) en presencia de base de Hunig (1,0-5,0 equiv. u otra base adecuada) en una solucion de DMF, diclorometano, o en algunos casos una solucion de ambos (o una solucion de uno o mas disolventes). La reaccion se controlo por CL-EM (o TLC o HPLC). La reaccion se concentro al vad o. La desproteccion de Fmoc se realizo de acuerdo con procedimiento general A. En algunos casos se realizo una segunda desproteccion para retirar a grupo protector en un resto reactivo en el pentapeptido citotoxico usando el procedimiento general B (u otro procedimiento pertinente conocido en las referencias basado en el grupo protector). La reaccion se concentro al vad o y se purifico por cromatograffa de sflice o por HPLC prep.
Procedimiento General O. El Fmoc-AmPegXC2-COOH adecuado se acopla al pentapeptido citotoxico pertinente (o el pentapeptido citotoxico que contiene un grupo protector en un resto reactivo distinto del termino N) y la desproteccion de Fmoc se realiza de acuerdo con el procedimiento general N. La reaccion se concentra al vad o y despues se purifica por cromatograffa de sflice o h P l C prep. (o el material en bruto puede usarse segun esta). Despues, se instala la secuencia de PABC adecuada (tal como mcValCitPABC, o un derivado) de acuerdo con el procedimiento general E. En algunos casos, si esta presente un grupo protector en una porcion de pentapeptido citotoxico de la molecula, se realiza despues la desproteccion usando el procedimiento general A o el procedimiento general B (u otro procedimiento pertinente conocido en las referencias basado en el grupo protector). La reaccion se concentra al vad o y se purifica por cromatograffa de sflice o por HPLC prep.
Procedimiento General P. Se siguio el procedimiento general E reemplazado mcValCitPABC-PNP, con MalPeg3C2ValCitPABC-PNP (preparado de una manera similar a mcValCitPABC-PNP).
Procedimiento General Q. El Fmoc-AmPegXC2-COOH adecuado se acopla al pentapeptido citotoxico pertinente (o el pentapeptido citotoxico que contiene un grupo protector en un resto reactivo distinto del termino N) y la desproteccion de Fmoc se realiza como se describe en el procedimiento general N. La reaccion se concentra al vad o y despues se purifica por cromatograffa de sflice o h P l C prep. (o el material en bruto puede usarse segun esta). A una solucion en agitacion de este residuo en DMF a 0 oc (o una temperatura ligeramente mayor en algunos casos) se anadio acido bromoacetico (1,0-2,0 equiv.), seguido de base de Hunig (1,0-5,0 equiv.) y HATU (1,0-2,0 equiv.) La reaccion se dejo calentar a temperatura ambiente y en agitacion a temperatura ambiente mientras se controlaba por CL-EM (o TLC o HPLC). La reaccion se concentro al vad o y se purifico por HPLC prep.
Procedimiento General R. Se siguio el procedimiento general E reemplazando mcValCitPABC-PNP, con N-(6-{[(9H-fluoren-9-ilmetoxi)carbonil]amino}hexanoil)-L-valil-N~5~-carbamoil-N-[4-({[(4-nitrofenoxi)carbonil]oxi}metil)fenil]-L-ornitinamida (preparada de una manera similar a mcValCitPABC-PNP). Despues, se realizo la desproteccion de Fmoc (procedimiento general B), seguido de purificacion de HPLC prep.
Procedimiento General S. A una solucion en agitacion de 6-(2,5-dioxo-2,5-dihidro-1H-pirrol-1-il)hexanal (1,0-3,0 equiv.) en metanol se anadio el pentapeptido citotoxico pertinente (1,0 equiv.), seguido de acido formico. La reaccion se dejo en agitacion a temperatura ambiente durante 1-40 minutos, seguido de la adicion de (cianokappaC)(trihidrido)borato sodico (1-) (3,0-6,0 equiv., tambien denominado cianborohidruro sodico). La reaccion se controlo por CL-EM (o TLC o HPLC). En algunos casos se anadio mas cantidad de 6-(2,5- dioxo-2,5-dihidro-1H-pirrol-1 -il)hexanal (1,0-3,0 equiv.). La reaccion se concentro al vado seguido de purificacion usando HPLC prep. Procedimiento general T. Se prepara 4-[3-oxo-3-(2-oxoazetidin-1-il)propil]anilinio segun se describe en las referencias (Bioorganic and Medicinal Chemistry Letters. 2012, vo I.22, n.o 13, 4249 - 4253) que despues se acopla a 3,3'-[etano-1,2-diilbis(oxi)]dipropanoato de bis(pentafluorofenilo) usando HATU en diclorometano, seguido de acoplamiento al pentapeptido citotoxico deseado. Despues, el material se purifica por HPLC prep.
Procedimiento general U. Se acopla Fmoc-ValCitPABC-PNP al pentapeptido citotoxico deseado siguiendo el procedimiento general E y despues se retira el Fmoc siguiendo el procedimiento general A. Despues, este residuo se acopla a acido [2-oxo-2-({4-[3-oxo-3-(2-oxoazetidin-1-il)propil]fenil}amino) etoxi]acetico (que se prepara por acoplando 4-[3-oxo-3-(2-oxoazetidin-1-il)propil]anilinio con 1,4-dioxano-2,6-diona, siguiendo el procedimiento general D). Despues, el material se purifica por HPLC prep.
Procedimiento general V. Se acopla 3,3'-[etano-1,2-diilbis(oxi)]dipropanoato de bis(pentafluorofenilo) o 4,7,10,13,16-pentaoxanonadecano-1,19-dioato de bis(pentafluorofenilo) al pentapeptido citotoxico deseado (o en algunos casos se acopla al pentapeptido citotoxico deseado que contiene un grupo protector en un resto reactivo distinto del termino N), siguiendo el procedimiento general D. Si hay presente un grupo protector, se retira entonces el grupo protector (usando los procedimientos pertinentes descritos en las referencias). Despues, el material se purifica por HPLC prep.
Procedimiento general W . S e acopla 1-(9H-fluoren-9-il)-3-oxo-2,7,10-trioxa-4-azatridecan-13-oato de 4-({[(4-nitrofenoxi)carbonil]oxi}metil)fenilo al pentapeptido citotoxico deseado, siguiendo el procedimiento general E. Se retira Fmoc siguiendo el procedimiento general A. Se acopla 3,3'-[etano-1,2-diilbis(oxi)]dipropanoato de bis(pentafluorofenilo) a este residuo, siguiendo el procedimiento general D. Despues, el material se purifica por HPLC prep.
Procedimiento general X I. Se acopla N-[(9H-fluoren-9-ilmetoxi)carbonil]-L-alanil-L-alanil-N~1~-[4-({[(4-nitrofenoxi)carbonil]oxi}metil)fenil]-N~4tritil-L-aspartamida al pentapeptido citotoxico, siguiendo el procedimiento general E. Se retira Fmoc siguiendo el procedimiento general A y se retira el grupo protector de tritilo siguiendo el procedimiento general B. Se acopla 3,3'-[etano-1,2-diilbis(oxi)]dipropanoato de Bis(pentafluorofenilo) a este residuo siguiendo el procedimiento general D. El material se purifica por H p Lc prep.
Procedimiento general X2. Se acopla N-{3-[2-(3-etoxi-3-oxopropoxi)etoxi]propanoil}-L-valil-N~5~-carbamoil-N-[4-({[(4-nitrofenoxi)carbonil]oxi}metil)fenil]-L-ornitinamida al pentapeptido citotoxico deseado siguiendo el procedimiento general E. Se retira ester etilico usando hidroxido de litio en THF y agua. Despues se forma ester de NHS acoplando el residuo con 1-hidroxipirrolidin-2,5-diona usando N,N’-diciclohexilcarbodiimida en THF. El material se purifica por HPLC prep.
Procedimiento general X3. Se acopla N-[(9H-fluoren-9-ilmetoxi)carbonil]-D-valil-N~5~-carbamoil-N-[4-({[(2-carboxipropan-2-il)carbamoil]oxi}metil)fenil]-L-ornitinamida se acopla al n.050 siguiendo el procedimiento general D en DMSO y acetonitrilo. Se retira Fmoc siguiendo el procedimiento general A, seguido de acoplamiento con 3,3'-[etano-1,2-diilbis(oxi)]dipropanoato de bis(pentafluorofenilo) usando base de Hunig en acetonitrilo. El material se purifica por HPLC prep.
Procedimiento general X4. Se acopla N-[1-(9H-fluoren-9-il)-3,5,12-trioxo-2,7,10-trioxa-4-azadodecan-12-il]-2-metilalanina al n.0 250 siguiendo el procedimiento general D en acetonitrilo. Se retira Fmoc siguiendo el procedimiento general A, seguido de acoplamiento con 3,3'-[etano-1,2-diilbis(oxi)]dipropanoato de bis(pentafluorofenilo) usando base de Hunig en acetonitrilo. El material se purifica por HPLC prep.
Procedimiento general X5. Se acopla L-valil-N~5~-carbamoil-N-[4-(hidroximetil)fenil]-L-ornitinamida a N~2~-acetil-N~6~-(terc-butoxicarbonil)-L-lisina siguiendo el procedimiento general D. Este residuo resultante se acopla con bis(4-nitrofenil)carbonato con base de Hunig en DMF, seguido de acoplamiento con el pentapeptido citotoxico deseado siguiendo el procedimiento general E. Despues, se realiza la desproteccion de Boc siguiendo el procedimiento general B en acetonitrilo. El residuo se purifica por HPLC prep.
En algunos casos, se hicieron alteraciones menores a las condiciones de reaccion, tales como, pero sin limitacion, el orden de la adicion del reactivo y el disolvente y/o la cantidad de reactivo o reactante, que se indica mediante el s^bolo *. Por otro lado, estos procedimientos generales se proporcionan unicamente como ejemplares y son no limitantes.
Ademas de los Procedimientos Generales proporcionados anteriormente, las referencias de auristatina y dolastatina pertinentes incluyen las siguientes: Petit y col. J. Am. Chem. S oc. 1989, 111,5463; Petit y col. AntiCancer Drug Design 1998, 13, 243 y referencias citadas en ese documento; Petit y col. j . Nat. Prod. 2011, 74, 962; documento WO 96/33212; documento WO 95/09864; documento EP 0695758; documento WO 07/8848; documento WO 01/18032; documento WO 09/48967; documento WO 09/48967; documento WO 09/117531; documento WO 08/8603; documento US 7.750.116; documento US 5.985.837; y documento US 2005/9751.
Analisis de EM y preparacion de la muestra
Las muestras se prepararon para analisis de CL-EM combinando aproximadamente 20 |jl de muestra (aproximadamente 1 mg/ml de ADC en PBS) con 20 j l de ditiotreitol 20 mM (DTT). Despues de dejar reposar la mezcla a temperatura ambiente durante 5 minutos, las muestras se analizaron de acuerdo con el protocolo O.
Se realizo el siguiente calculo para establecer la carga total (DAR) del conjugado:
Carga = 2 x [LCl/(LCl+LC0)]+2 x [HC1/(HC0+HC1+HC2+HC3)]+ 4 x [HC2/(HC0+HCl+HC2+HC3)]+6 x [HC3/(HC0+HC1+HC2+HC3)] Donde las variables indicadas son la abundancia relatlva de: LCO = cadena llgera descargada, LC1 = cadena llgera con carga unica, HCO = cadena pesada descargada, HC1 = cadena pesada con carga unica, HC2 = cadena pesada de doble carga y HC3 = cadena pesada de triple carga.
Las condiciones de CL-EM usadas son el Protocolo F para un tiempo de retencion por debajo de un minuto y el Protocolo H para el resto de los experimentos, a menos que se indique otra cosa.
Preparacion de W-[(9H-Fluoren-9-ilmetoxi)carbonil]-W-metil-L-valil-W-[(2R,3S,4S)-1-carboxi-2-metoxi-4-metilhexan-3-il]-W-metil-L-valinamida (n.08)
Figure imgf000072_0001
Etapa 1. Smtesis de [(2S,3S)-1-hidroxi-3-metilpentan-2-il]metilcarbamato de bencilo (n.o 1). a una solucion de N-[(benciloxi)carbonil]-N-metil-L-isoleucina (52,37 g, 187,5 mmol, 1 equiv.) en tetrahidrofurano (524 ml, 0,35 M) se anadio complejo de borano-tetrahidrofurano (1 M en tetrahidrofurano, 375 ml, 375 mmol, 2 equiv.) lentamente durante 1 hora y la reaccion se dejo en agitacion durante 18 horas a temperatura ambiente. La reaccion se enfrio a 0 0C y se anadio agua (30 ml) durante 30 minutos. La mezcla de reaccion se diluyo con una solucion acuosa 1 M de carbonato sodico (100 ml) y terc-butil metil eter (250 ml). La fase acuosa se extrajo de nuevo con terc-butil metil eter (100 ml). Las fases organicas combinadas se lavaron con una solucion acuosa 1 M de carbonato sodico (100 ml), se lavaron con salmuera (200 ml), se secaron sobre sulfato de magnesio, se filtraron y se concentraron al vacm para proporcionar n.o 1 (48,44 g, rendimiento del 97%) en forma de un aceite de color amarillo palido, que se uso en la siguiente etapa sin purificacion adicional. RMN 1H (400 MHz , DMSO-d6), se presume que es una mezcla de rotameros: 67,26-7,41 (m, 5H), [5,06 (AB cuadruplete, Jab = 12,9 Hz , Avar = 22,8 Hz ) y 5,06 (AB cuadruplete, Jab = 9,0 Hz , Avar = 9,0 Hz), total 2H], [4,65 (t, J = 5,3 Hz) y 4,59 (t, J = 5,4 Hz), total 1H], 3,67-3,80 (m, 1H), 3,51-3,60 (m, 1H), 3,41-3,51 (m, 1H), 2,75 y 2,71 (2 s, total 3H), 1,49-1,64 (m a, 1H), 1,24-1,37 (m a, 1H), 0,90-1,02 (m a, 1H), 0,74-0,87 (m, 6H).
Etapa 2. Smtesis de metil[(2S,3S)-3-metil-1-oxopentan-2-il]carbamato de bencilo (n.o 2). A una solucion de n.o 1 (8,27 g, 31,2 mmol, 1 equiv.) en dimetilsulfoxido (41,35 ml, 0,75 M), se anadio trietilamina (8,70 ml, 64,0 mmol, 2,05 equiv.) y la mezcla se enfrio a 0 oc. Despues, se anadio en porciones complejo de trioxido de azufre y piridina (10,18 g, 63,96 mmol, 2,05 equiv.), mientras se mantema la temperatura interna por debajo de 8 oc. Se dejo que la reaccion alcanzara temperatura ambiente y se agito durante 18 horas. La reaccion se vertio en agua (100 ml) y terc-butil metil eter (100 ml). La fase acuosa se extrajo de nuevo con terc-butil metil eter (50 ml) y las fases organicas combinadas se lavaron con salmuera (100 ml), se secaron sobre sulfato de magnesio, se filtraron y se concentraron al vacm, y se purificaron por cromatograffa sobre gel de silice (Gradiente: de 10 % a 60 % de acetato de etilo en heptano) para proporcionar n.o 2 (7,14 g, 87 %) en forma de un aceite incoloro. RMN 1H (400 MHz , DMSO-d6), presuntamente una mezcla de rotameros, senales caractensticas: 69,61 (s, 1H), 7,26-7,42 (m, 5H), 5,01-5,13 (m, 2H), 4,04-4,12 (m, 1H), 2,86 y 2,82 (2 s, total 3H), 1,94-2,11 (m a, 1H), 1,26-1,42 (m a, 1H).
Etapa 3. Smtesis de (3R,4S,5S)-4-{[(benciloxi)carbonil](metil)amino}-3-hidroxi-5-metilheptanoato de Terc-butilo (n.o 3). Se preparo diisopropilamina de litio se preparo anadiendo n-butillitio (solucion 2,5 M en tetrahidrofurano, 35,9 ml, 89,8 mmol, 1,4 equiv.) a una solucion de diisopropilamina (13,8 ml, 96,3 mmol, 1,5 equiv.) en tetrahidrofurano (50 ml, 1,3 M) a -78 oc. Despues de 1 hora, se anadio gota a gota acetato de terc-butilo (15,7 ml, 116 mmol, 1,8 equiv.) y la mezcla de reaccion se agito durante 1,5 horas mas mientras se dejaba que se calentara lentamente a -200C. La mezcla de reaccion se enfrio de nuevo a -78 oc y se anadio una solucion del aldetffdo n.02 (16,9 g, 64,2 mmol, 1 equiv.) en tetrahidrofurano (10 ml). La mezcla de reaccion se agito durante 1,5 horas y despues se inactivo mediante la adicion de agua (100 ml). Despues de la extraccion con eter diefflico (2 x 100 ml), las fases organicas combinadas se secaron sobre sulfato sodico, se filtraron y se concentraron al vado y se purificaron por cromatograffa sobre gel de sflice (Gradiente: de 0 % a 20 % de acetona en heptano) para proporcionar n.o 3 (8,4 g, 34 %) en forma de un aceite incoloro. CL-EM: m/z 402,4 [M+Na+], tiempo de retencion = 3,91 minutos; RMN 1H (400 MHz , DMSO-d6), se presume que es una mezcla de rotameros: 67,27-7,39 (m, 5H), 5,01-5,12 (m, 2H), [4,93 (d, J = 7,2 Hz ) y 4,98 (d a, J = 7,2 Hz ), total 1H], 4,03-4,15 (m a, 1H), 3,68-3,85 (m a, 1H), 2,65 y 2,72 (2 s a, total 3H), 2,28-2,37 (m, 1H), 2,09­ 2,17 (m, 1H), 1,74-1,90 (m a, 1H), 1,41-1,51 (m, 1H), 1,39 (s, 9H), 0,92-1,01 (m, 1H), 0,77-0,92 (m, 6H).
Etapa 4. Smtesis de (3R,4S,5S)-4-{[(benciloxi)carbonil](metil)amino}-3-metoxi-5-metilheptanoato de ferc-butilo (n.o@2). A una solucion de n.o 3 (8,4 g, 22 mmol, 1 equiv.) en 1,2-dicloroetano (25 ml, 0,88 M) se anadieron tamices moleculares (4 A, 0,7 g) y Proton Sponge (1,8-bis(dimetilamino)naftaleno) (13,4 g, 59,2 mmol, 2,7 equiv.), seguido de tetrafluoroborato de trimetiloxonio (9,10 g, 61,6 mmol, 2,8 equiv.). Despues de agitar durante una noche, la mezcla de reaccion se filtro a traves de Celite. El filtrado se concentro al vado y el residuo se purifico por cromatograffa sobre gel de s l^ice (Gradiente: de 0 % a 40 % de 1:1 de acetona:acetato de etilo en heptano) para dar n.o @2 (8,7 g, 68 %) en forma de un aceite incoloro. RMN 1H (400 MHz , DMSO-cfe), se presume que es una mezcla de rotameros: 6 7,28-7,40 (m, 5H), 5,01-5,13 (m, 2H), 3,89-4,08 (m a, 1H), 3,70-3,82 (m, 1H), 3,18 y 3,26 (2 s, total 3H), 2,66 y 2,71 (2 s a, total 3H), 2,44-2,53 (m, 1H, asumido; parcialmente oscurecido por pico de disolvente), 2,17-2,24 (m, 1H), 1,71-1,86 (m a, 1H), 1,39 y 1,39 (2 s, total 9H), 1,31-1,40 (m, 1H), 0,94-1,08 (m, 1H), 0,76-0,91 (m, 6H).
Etapa 5. Smtesis de (3R,4S,5S)-3-metoxi-5-metil-4-(metilamino)heptanoato de ferc-butilo, sal clorhidrato (n.o 4). A una solucion de n.o@2 (13,37 g, 33,98 mmol, 1 equiv.) en metanol (134 ml, 0,1 M) y acido clortffdrico concentrado (3,1 ml, 37,4 mmol, 1,1 equiv.) se anadio paladio al 10 % sobre carbono (50 % humedo) (0,1 % en peso; 1,34 g, 3,40 mmol). La mezcla se hidrogeno a 0,34 MPa (45 psi) durante 3 horas, despues se purgo con nitrogeno, se filtro a traves de Celite y se concentro al vado para proporcionar n.o 4 (9,20 g, 92 %) en forma de un solido de color bianco. RMN 1H (400 MHz , CDCIs) 69,65 (s a, 1H), 8,97 (s a, 1H), 3,98-4,04 (m, 1H), 3,40 (s, 3H), 3,06-3,13 (m a, 1H), 2,82 (dd a, J = 6, 5 Hz , 3H), 2,74-2,80 (m, 1H), 2,68 (dd, mitad del patron ABX, J = 16,3, 4,2 Hz , 1H), 2,00-2,10 (m a, 1H), 1,73-1,84 (m, 1H), 1,46 (s, 9H), 1,38-1,45 (m, 1H), 1,13 (d, J = 7,0 Hz , 3H), 0,99 (t, J = 7,4 Hz , 3 H).
Etapa 6. Smtesis de (3R,4S,5S)-4-[{N-[(9H-fluoren-9-ilmetoxi)carbonil]-L-valil}(metil)amino]-3-metoxi-5-metilheptanoato de ferc-butilo (n.o 5). A una mezcla de W-[(9H-fluoren-9-ilrnetoxi)carbonil]-L-valina (18,53 g, 54,60 mmol, 1,3 equiv.) y 2-cloro-4,6-dimetoxi-1,3,5-triazina (c DMT) (9,58 g, 54,6 mmol, 1,3 equiv.) en 2-metiltetrahidrofurano (118,00 ml, 0,34 M) se anadio W-metilmorfolina (6,52 ml, 59,1 mmol, 1,5 equiv.) seguido de n.o 4 (11,80 g, 39,9 mmol, 1 equiv.). Despues de 3 horas, la reaccion se interrumpio con agua (50 ml) y se agito durante 15 minutos. La fase acuosa se separo y se extrajo de nuevo con 2-metiltetrahidrofurano (50 ml). Las fases organicas combinadas se lavaron con una solucion acuosa saturada de bicarbonato sodico (50 ml), se secaron sobre sulfato de magnesio, se filtraron y se concentraron para dar un aceite incoloro, que se purifico por cromatograffa sobre gel de sflice (Gradiente: de 5 % a 40 % de acetato de etilo en heptano) para dar n.o 5 (26,2 g, 91 %) en forma de una espuma incolora. CL-EM (Protocolo I) m/z 581,3 [M+H+] 604,3 [M+Na+], tiempo de retencion = 4,993 minutos; RMN 1H (400 MHz , DMSO-d6), posiblemente una mezcla de rotameros, senales caracteristicas principales: 67,88 (d, J = 7,4 Hz, 2H), 7,71 (d, J = 7,4 Hz , 2H), 7,62 (d, J = 8,6 Hz , 1H), 7,41 (dd, J = 7,4, 7,4 Hz , 2H), 7,27-7,34 (m, 2H), 4,13­ 4,32 (m, 4H), 3,70-3,82 (m a, 1H), 3,24 (s, 3H), 2,92 (s a, 3H), 2,54 (dd, J = 15,7, 2,4 Hz , 1H), 2,17 (dd, J = 15,4, 9,4 Hz , 1H), 1,95-2,07 (m, 1H), 1,70-1,83 (m a, 1H), 1,40 (s, 9H), 0,83-0,94 (m, 9H), 0,69 (t, J = 7,2 Hz , 3 H).
Etapa 7A. Smtesis de (3R,4S,5S)-3-metoxi-5-metil-4-[metil(L-valil)amino]heptanoato de ferc-butilo (n.o 6). A una solucion de n.o 5 (26 g, 42 mmol, 1 equiv.) en tetrahidrofurano (260 ml, 0,16 M) se anadio dietilamina (22 ml) durante 30 minutos. La reaccion se agito durante aproximadamente 6 horas y despues, la suspension se filtro a traves de Celite y se lavo con mas cantidad de tetrahidrofurano (25 ml). El filtrado se concentro al vado para proporcionar un aceite de color amarillo palido, que se disolvio de nuevo en 2-metiltetrahidrofurano (50 ml) y se concentro de nuevo para asegurar la retirada completa de la dietilamina. El aceite en bruto de n.o 6 (>15,25 g) se recogio en la siguiente etapa sin purificacion adicional.
Etapa 7B. Smtesis de acido (3R,4S,5S)-4-[{N-[(9H-fluoren-9-ilmetoxi)carbonil]-L-valil} (metil) amino]-3-metoxi-5-metilheptanoico (n.o@5). De acuerdo con procedimiento general B, a partir de n.o 5 (1,62 g, 2,79 mmol, 1 equiv.), diclorometano (10 ml, 0,3 M) y acido trifluoroacetico (3 ml) se sintetizo n.o@5 (1,42 g, 97 %) en forma de un solido que se uso sin purificacion adicional. CL-EM m/z 525,3 [M+H+] 547,3 [M+Na+]; tiempo de retencion = 0,95 minutos; RMN 1H (400 MHz , DMSO-d6), senales caracteristicas: 67,89 (d, J = 7,6 Hz , 2H), 7,71 (d, J = 7,4 Hz , 2H), 7,59 (d, J = 8,8 Hz , 1H), 7,41 (dd, J = 7,6, 7,4 Hz , 2H), 7,28-7,34 (m, 2H), 4,14-4,32 (m, 4H), 3,24 (s, 3H), 2,92 (s a, 3H), 2,51­ 2,57 (m, 1H, supuesto; parcialmente oscurecido por pico de disolvente), 2,20 (dd, J = 15,9, 9,5 Hz , 1H), 1,95-2,06 (m, 1H), 1,70-1,83 (m a, 1H), 1,22-1,36 (m a, 1H), 0,84-0,93 (m, 9H), 0,70 (t, J = 7,3 Hz , 3 H).
Etapa 8. Smtesis de W-[(9H-fluoren-9-ilmetoxi)carbonil]-W-metil-L-valil-W-[(3R,4S,5S)-1-ferc-butoxi-3-metoxi-5-metil-1-oxoheptan-4-il]-A/-metil-L-valinamida (n.o 7). A una mezcla de W-[(9H-fluoren-9-ilmetoxi)carbonil]-W-metil-L-valina (19,54 g, 55,29 mmol, 1,3 equiv.) y n.o 6 ( i 5,25 g, 42,54 mmol, 1 equiv.) en 2-metiltetrahidrofurano (152 ml, 0,28 M) se anadio 2-cloro-4,6-dimetoxi-1,3,5-triazina (CDMT) (9,71 g, 55,3 mmol, 1,3 equiv.). Despues de 10 minutos, se anadio lentamente W-metilmorfolina (6,6 ml, 60 mmol, 1,4 equlv.), mlentras se mantema la temperatura Interna por debajo de 250C. La reaccion se agito durante 4 horas y despues se interrumpio mediante la adicion de agua (50 ml). Despues de agitar durante 15 minutos, la fase acuosa se separo y se extrajo de nuevo con 2-metiltetrahidrofurano (50 ml). Las fases organicas combinadas se lavaron con una solucion acuosa saturada de bicarbonato sodico (100 ml), despues se secaron sobre sulfato de magnesio, se filtraron y se concentraron al vad o. La espuma de color amarillo resultante se purifico por cromatograffa sobre gel de silice (Gradiente: de 5 % a 35 % de acetato de etilo en heptano) para dar n.07 (32 g, 97%). RMN 1H (400 MHz, DMSO-d6), presuntamente una mezcla de rotameros, senales caractensticas: 67,89 (d, J = 7,4 Hz , 2H), 7,62 (d, J = 7,4 Hz , 2H), 7,41 (dd a, J = 7,4, 7,4 Hz , 2H), 7,29-7,34 (m, 2H), 4,52-4,69 (m a, 1H), 3,70-3,82 (m a, 1H), 3,22 y 3,25 (2 s a, total 3H), 2,94 y 2,96 (2 s a, total 3H), 2,78 y 2,81 (2 s a, total 3H), 2,11-2,23 (m, 1H), 1,90-2,10 (m, 2H), 1,68-1,83 (m a, 1H), 1,40 (s, 9H), 1,21-1,33 (m a, 1H).
Etapa 9. Smtesis de W-[(9H-fIuoren-9-iImetoxi)carboniI]-W-metiI-L-vaIiI-W-[(2R,3S,4S)-1-carboxi-2-metoxi-4-metiIhexan-3-iI]-W-metiI-L-vaIinamida (n.o 8). A n.o 7 (32 g, 46 mmol, 1 equiv.) en diclorometano (160 ml, 0,29 M) se anadio gota a gota durante 10 minutos acido trifluoroacetico (17,4 ml, 231 mmol, 5 equiv.). Despues de 6 horas, se anadio la misma cantidad de acido trifluoroacetico y la reaccion se continuo durante 18 horas. La mezcla de reaccion se diluyo con tolueno (320 ml) y se concentro al vad o para proporcionar n.o 8 (35,8 g, 97 %) en forma de un aceite de color rosaceo, que se uso en la siguiente etapa sin purificacion adicional. RMN 1H (400 MHz , DMSO-d6), presuntamente una mezcla de rotameros, senales caractensticas: 67,90 (d, J = 7,0 Hz , 2H), 7,62 (d, J = 7,4 Hz , 2H), 7,41 (dd a, J = 7,4, 7,0 Hz , 2H), 7,29-7,35 (m, 2H), 4,54-4,68 (m a, 1H), [4,09 (d, J = 11 Hz) y 4,22 (d, J = 10,9 Hz), total 1H], 3,74-3,84 (m a, 1H), 3,22 y 3,24 (2 s a, total 3H), 2,94 y 2,96 (2 s a, total 3H), 2,78 y 2,80 (2 s a, total 3H), 2,13-2,24 (m, 1H), 1,89-2,10 (m a, 2H), 1,70-1,81 (m a, 1H).
Preparacion de acido (2R,3R)-3-[(2S)-1-(ferc-butoxicarbonil)pirrolidin-2-il]-3-metoxi-2-metilpropanoico (n.o 11; "Boc-Dap-acido")
Figure imgf000074_0001
Etapa 1. Smtesis de (2S)-2-[(1R,2S)-1-hidroxi-2-metilbut-3-en-1-il]pirrolidin-1-carboxilato de terc-butilo (n.o 9). A una solucion de (2S)-2-formilpirrolidin-1-carboxilato de terc-butilo (10 g, 50 mmol, 1 equiv.) en diclorometano (120 ml, 0,42 M) se anadio (2Z)-2-buten-1-iltrifluoroborato potasico (9,76 g, 60,2 mmol, 1,2 equiv.), seguido de bromuro de tetra-n-butilamonio (3,24 g, 5,02 mmol, 0,1 equiv.) y agua (60 ml). Despues de 13 horas, la reaccion se diluyo con diclorometano (150 ml) y agua (150 ml). La fase acuosa se separo y se extrajo de nuevo con diclorometano (lOo ml). Las fases organicas combinadas se lavaron con una solucion acuosa de cloruro sodico (5 % en peso, 2OO ml), se lavaron con agua (2OO ml) y se concentraron al vad o para proporcionar n.o 9 (~13 g) en forma de un aceite de color naranja, que se uso sin purificacion adicional. RMN 1H (4OO MHz , CDCI3) 65,61-5,86 (m a, 1H), 4,97-5,09 (m, 2H), 3,80-3,98 (m a, 2H), 3,45-3,67 (m a, 1H), 3,21-3,29 (m, 1H), 2,14-2,26 (m, 1H), 1,80-2,04 (m, 3H), 1,65-1,76 (m, 1H), 1,47 (s, 9H), 1,12 (d, J = 6,6 Hz , 3H).
Etapa 2. Smtesis de (2S)-2-[(1R,2S)-1-metoxi-2-metiIbut-3-en-1-iI]pirroIidin-1-carboxiIato de terc-butilo (n.o 10). Se combino hidruro sodico (al 60 % en aceite mineral, 3,38 g, 84,4 mmol, 1,1 equiv.) con hexano (40 ml) y la mezcla se sometio agitacion mecanica rapida durante 5 minutos. Se dejo que los solidos se asentaran y el hexano se retiro. Este procedimiento se repitio dos veces para retirar aceite mineral. Se anadio W,W-dimetiIformamida (59 ml,1,3 M) y la mezcla se enfrio a O oC; despues se anadio gota a gota yoduro de metilo (5 ml; 81 mmol, 1,05 equiv.), seguido de la adicion gota a gota de una solucion de n.o 9 (19,6 g, 76,8 mmol, 1 equiv.) en W,W-dimetiIformamida (59 ml) durante 5 minutos, mientras se mantema la temperatura entre O oc y 5 oc. La reaccion se agito a O oc durante 2 horas. La reaccion se interrumpio con una solucion acuosa saturada de cloruro de amonio (15O ml), se vertio en una solucion acuosa de cloruro sodico (5 % en peso, 3OO ml) y la mezcla se extrajo con acetato de etilo (3 x 50 ml). Las fases organicas combinadas se lavaron con una solucion acuosa al 10% de cloruro sodico (2 x 3OO ml), se lavaron con agua (2OO ml) y se concentraron al vado. El aceite humedecido con agua resultante se concentro de nuevo en acetato de etilo (15O ml) y se purifico por cromatograffa sobre gel de silice (Gradiente: de 2 % a 1O % de acetato de etilo en heptano) para proporcionar n.o 10 (15,0 g, 73 %) en forma de un aceite incoloro. RMN 1H (4OO MHz , CDCI3), presuntamente una mezcla de rotameros: 65,60-5,83 (m, 1H), 4,91-5,06 (m, 2H), 3,81-3,95 (m a, 1H), 3,43 (s, 3h ), 3,36-3,61 (m, 2H), 3,19-3,31 (m, 1H), 2,09-2,21 (m, 1H), 1,86-2,02 (m a, 2H), 1,62-1,85 (m a, 2H), 1,47 y 1,49 (2 s, total 9H), 1,09 (d, J = 6,6 Hz , 3H).
Etapa 3. Smtesis de acido (2R,3R)-3-[(2S)-1-(terc-butoxicarboniI)pirroIidin-2-iI]-3-metoxi-2-metiIpropanoico (n.o 11). a n.o 10 (25,0 g, 92,8 mmol, 1 equiv.) en terc-butanol (1OO ml, 0,93 M) se anadio inmediatamente agua (3O,OO ml) seguido de W-oxido de W-metilmorfolina (25,97 g, 192,1 mmol, 2,07 equiv.) y tetraoxido de osmio (235,93 mg, 928,04 pmol, O,O1 equiv.) Despues de 12 horas, la mezcla se concentro al vad o usando agua (20 ml) para retirar azeotropicamente el terc-butanol residual. El residuo se repariio entre acetato de etilo (5OO ml) y agua (5OO ml) mas salmuera (15O ml). La fase acuosa se extrajo de nuevo con acetato de etilo (25O ml). Las fases organicas combinadas se lavaron con una solucion acuosa de cloruro sodico (10 % en peso, 200 ml), se lavaron con agua (150 ml) y se concentraron al vado para proporcionar un aceite de color pardo palido humedecido con agua que se concentro de nuevo en acetato de etilo (100 ml) para retirar cualquier agua restante. El diol en bruto (34,76 g) se uso sin purificacion adicional.
Al diol en bruto (34,76 g, <92,8 mmol, 1 equiv.) en acetonitrilo (347 ml, 0,1 M) y agua (174 ml) se anadio permanganato sodico (2,03 g, 5,73 mmol, 0,05 equiv.). La mezcla se enfrio a 00C y se anadio en porciones peryodato sodico (51,46 g, 240,6 mmol, 2,1 equiv.) durante 30 minutos, mientras se mantema la temperatura interna por debajo de 5 oc. La reaccion se agito a 0 oC durante 4 horas y despues se vertio en una solucion de pentahidrato de tiosulfato sodico (65,40 g, 263,5 mmol, 2,3 equiv.) en agua (100 ml). La mezcla se filtro a traves de Celite y el filtrado se concentro al vado. El residuo se repartio entre acetato de etilo (200 ml) y agua (200 ml). La fase acuosa se extrajo de nuevo con acetato de etilo (250 ml), y las fases organicas combinadas se lavaron con una solucion acuosa al 10% de acido dtrico. Como el producto deseado era muy soluble en agua, todas las fases acuosas se combinaron, se trataron con Celite (100 g) y se concentraron al vado para producir una pasta de color blanquecino. Se anadio acetato de etilo (150 ml) y la mezcla se concentro de nuevo para retirar cualquier agua residual; esta operacion se repitio una vez mas. La pasta se trato con acetato de etilo (150 ml) y se puso al vado a 50 oc durante 10 minutos y se filtro (repetido dos veces). Los filtrados se combinaron con la fase organica previa (del lavado de acido dtrico), se concentraron, se diluyeron con acetato de etilo (200 ml) y se filtraron a traves de Celite para retirar los solidos. Finalmente, este filtrado se concentro para producir n.011 (22,9 g, 69 % en dos etapas) en forma de una espuma de color amarillento/pardo. CLEM (Protocolo I): m/z 310,1 [M+Na+], 232,1 [(M -2-metilprop-1-eno)^H"], 188,1 [(M - Boc)+H+], tiempo de retencion = 3,268 minutos; RMN 1H (400 MHz , DMSO-d6), senales caractensticas: 63,61­ 3,85 (m a, 2H), 3,20-3,45 (m a, 4H), 3,03-3,17 (m a, 1H), 1,59-1,93 (m a, 4H), 1,40 (s a, 9H), 1,02-1,18 (m a, 3H).
Preparacion de (2R,3R)-3-metoxi-2-metil-W-[(1S)-2-fenil-1-(1,3-tiazol-2-il)etM]-3-[(2S)-pirroMdin-2-il]propanamida, sal de acido trifluoroacetico (n.o 19) y (2R,3R)-3-metoxi-2-metil-W-[(1S)-2-fenil-1-(1,3-tiazol-2-il)etil]-3-[(2S)-pirrolidin-2-il]propanotioamida, sal de acido trifluoroacetico (n.o 18)
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Etapa 1. Smtesis de Na-(terc-butoxicarbonil)-L-fenilalaninamida (n.o 12). A una solucion de Boc-Phe-OH (30,1 g, 113 mmol, 1 equiv.) en tetrahidrofurano (378 ml, 0,3 M) enfriada a -10 oc se anadieron W-metilmorfolina (13,6 ml, 124 mmol, 1,09 equiv.) y cloroformiato de etilo (11,8 ml, 124 mmol, 1,09 equiv.). Despues de 20 minutos, se anadio una solucion acuosa al 30 % de hidroxido de amonio (45 ml, 350 mmol, 3,1 equiv.). La mezcla se agito a temperatura ambiente durante 18 horas antes de concentrarse al vado. El residuo se diluyo con acetato de etilo y se lavo secuencialmente con una solucion acuosa 1 N de bisulfato potasico, agua y salmuera. Despues, la fase organica se seco sobre sulfato sodico, se filtro y se concentro al vado. El solido de color bianco se disolvio (esto requirio calentamiento con agitacion) en acetato de etilo (aproximadamente 400 ml); despues, la solucion se dejo enfriar a temperatura ambiente antes de anadir hexano (~1000 ml). Despues de unos pocos minutos, comenzo a precipitar un material de color bianco de la mezcla de reaccion. El solido se recogio por filtracion, se lavo con heptano (2 x -150 ml) y se seco al vado durante 18 horas para dar n.o 12 (24,50 g, 82 %) en forma de un solido. CL-EM: m/z 263,2 [M-H+], 309,2 [M+HCO2"], tiempo de retencion = 1,85 minutos; RMN 1H (400 MHz , DMSO-d6), presuntamente una mezcla de rotameros, rotamero principal: 67,35 (s a, 1H), 7,22-7,30 (m, 5 h ), 7,00 (s a, 1H), 6,78 (d, J = 8,6 Hz , 1H), 4,09 (ddd, J =10, 9, 4,5 Hz , 1H), 2,95 (dd, J = 13,8, 4,4 Hz , 1H), 2,72 (dd, J = 13,7, 10,1 Hz , 1H), 1,30 (s, 9H).
Etapa 2. Smtesis de [(2S)-1-amino-3-fenil-1-tioxopropan-2-N]carbamato de terc-butilo (n.o 13). A una solucion de n.o 12 (14,060 g, 53,192 mmol, 1 equiv.) en tetrahidrofurano (180 ml, 0,296 M), se anadio 2,4-bis(4-metoxifenil)-1,3,2,4-ditiadifosfetano-2,4-ditiona (reactivo de Lawesson) (12,70 g, 31,40 mmol, 0,59 equiv.) y la reaccion se calento a reflujo durante 90 minutos. La reaccion se enfrio a temperatura ambiente y se interrumpio mediante la adicion de una solucion acuosa saturada de bicarbonato sodico. La mezcla se extrajo dos veces con acetato de etilo y las fases organicas combinadas se secaron sobre sulfato sodico, se filtraron y se concentraron al vado. El residuo se disolvio en acetato de etilo, se concentro al vado sobre s l^ice y se purifico por cromatograffa sobre gel de sflice (Gradiente: de 0 % a 100 % de acetato de etilo en heptano), proporcionando n.013 (11,50 g, 77 %) en forma de un solido de color bianco. CL-EM: m/z 279,4 [M-H+], 225,2 [(M -2-metilprop-1-eno)+H+], 181,2 [(M - Boc)+H+]; RMN 1H (400 MHz , DMSO-d6), presuntamente una mezcla de rotameros, rotamero principal: d 9,60 (s a, 1H), 9,19 (s a, 1H), 7,23-7,32 (m, 5H), 6,82 (d, J = 8,8 Hz , 1H), 4,44 (ddd, J =9,4, 9,1, 4,4 Hz , 1H), 3,00 (dd, J = 13,7, 4,5 Hz , 1H), 2,79 (dd, J = 13,6, 9,9 Hz , 1H), 1,29 (s, 9H).
Etapa 3. Smtesis de [(1S)-2-fenil-1-(1,3-tiazol-2-il)etil]carbamato de ferc-butilo (n.o 14). A una mezcla de n.o 13 (5,65 g, 2o,2 mmol, 1 equiv.) en acetona (101 ml, 0,2 M) se anadio bromoacetaldelddo dietil acetal (8,76 ml, 58,2 mmol, 2,89 equiv.) y 2 gotas de acido clorhffdrico 4 M en dioxano. La mezcla se desgasifico tres veces con nitrogeno antes de calentarse a reflujo. Despues de 2 horas, la reaccion se enfrio a temperatura ambiente y se concentro al vado. El residuo se disolvio en acetato de etilo, se lavo con una solucion acuosa saturada de bicarbonato sodico y se lavo con salmuera. La fase organica se seco sobre sulfato sodico, se filtro y se concentro al vado. El aceite en bruto de color naranja resultante se diluyo con acetato de etilo antes de concentrarse al vado sobre sflice y se purifico por cromatograffa sobre gel de sflice (Gradiente: de 0 % a 35 % de acetato de etilo en heptano) y despues por cromatograffa de fase inversa (Procedimiento A) para dar n.o 14 (625 mg, 10%); HPLC (Protocolo E): m/z 304,5 [M+H+], 248,9 [(M -2-metilprop-1-eno)+H+], tiempo de retencion = 7,416 minutos; RMN 1H (400 MHz , DMSO-d6), presuntamente una mezcla de rotameros, rotamero principal: 67,75 (d, J = 3,3 Hz , 1H), 7,75 (d a, J = 8,6 Hz , 1H), 7,61 (d a, J = 3,1 Hz , 1H), 7,25-7,30 (m, 5H), 4,99 (ddd, J =10,5, 8,9, 4,5 Hz , 1H), 3,29-3,36 (m, 1H, supuesto; parcialmente oscurecido por senal de agua), 2,98 (dd, J = 13,8, 10,6 Hz , 1H), 1,31 (s, 9H).
Etapa 4. Smtesis de (1S)-2-fenil-1-(1,3-tiazol-2-il)etanamina, sal clorhidrato (n.o 15). De acuerdo con procedimiento general C, a partir de n.o 14 (1,010 g, 3,318 mmol, 1 equiv.), dioxano (10 ml, 0,33 M) y una solucion 4 M de acido clorhffdrico en dioxano (20 ml, 80 mmol, 20 equiv.) se sintetizo n.o 15 (775 mg, 97 %). RMN 1H (400 MHz , DMSO-d6) 6 8,95-9,07 (m a, 3H), 7,86 (d, J = 3,2 Hz , 1H), 7,73 (d, J = 3,2 Hz , 1H), 7,18-7,28 (m, 3H), 7,10-7,15 (m, 2H), 4,98­ 5,07 (m, 1H), 3,49 (dd, J = 13,3, 4,9 Hz, 1H), 3,18 (dd, J =13,4, 10,2 Hz , 1H).
Etapa 5. Smtesis de (2S)-2-[(1R,2R)-1-metoxi-2-metil-3-oxo-3-{[(1S)-2-feml-1-(1,3-tiazol-2-il)etil]amino}propil]pirrolidin-1 -carboxilato de ferc-butilo (n.o 16). A una solucion de n.o 11 (280 mg, 0,974 mmol, 1 equiv.) y n.o 15 (460 mg, 1,44 mmol, 1,48 equiv.) en W,W-dimetilformamida (3 ml, 0,32 M) a 00C se anadio cianuro de dietilfosforilo (DEPC) (pureza del 93%, 212 pi, 1,30 mmol, 1,34 equiv.), seguido de trietilamina (367 pi, 2,63 mmol, 2,7 equiv.). Despues de 2 horas a 0 oc, la mezcla de reaccion se calento a temperatura ambiente durante 18 horas. Despues, la mezcla de reaccion se diluyo con acetato de etilo:tolueno (2:1, 30 ml) y se lavo sucesivamente con una solucion acuosa 1 M de bisulfato sodico (35 ml) y una solucion acuosa al 50 % saturada de bicarbonato sodico (4 x 25 ml). La fase organica se seco sobre sulfato sodico, se filtro, se concentro al vado y se purifico por cromatograffa sobre gel de sflice (de 12 % a 100 % de acetato de etilo en heptano) para dar n.o 16 en forma de un aceite de color ambar claro (374 mg, 81 %). CL-EM: m/z 474,4 [M+H+], 374,4 [(M -2-metilprop-1-eno)+H+]; tiempo de retencion = 3,63 minutos; r Mn 1H (400 m Hz , DMSO-d6), senales caractensticas: 68,66 (d, J = 8,5 Hz , 1H), 7,78 (d, J = 3,3 Hz , 1H), 7,64 (d, J = 3,3 Hz , 1H), 7,21-7,31 (m, 4H), 7,14-7,20 (m, 1H), 5,40 (ddd, J =11,4, 8,5, 4,0 Hz , 1H), 3,23 (s a, 3H), 2,18 (dc, J = 9,7, 6,7 Hz , 1H), 1,06 (d, J = 6,6 Hz , 3H).
Etapa 6A. Smtesis de (2S)-2-[(1R,2R)-1-metoxi-2-metil-3-{[(1S)-2-fenil-1-(1,3-tiazol-2-il)etil]amino}-3-tioxopropil]pirrolidin-1 -carboxilato de ferc-butilo (n.o 17). Una mezcla de n.o 16 (350 mg, 0,739 mmol, 1 equiv.) y 2,4-bis(4-metoxifenil)-1,3,2,4-ditiadifosfetano-2,4-ditiona (reactivo de Lawesson) (324 mg, 0,776 mmol, 1,05 equiv.) en tolueno (6 ml, 0,1 M) se calento a 100 oc. Despues de 10 minutos, la mezcla se enfrio a temperatura ambiente. El material insoluble se retiro por filtracion y el filtrado se concentro al vado. El residuo se purifico por cromatograffa sobre gel de sflice (Gradiente: de 12 % a 80 % de acetato de etilo en heptano) y despues por cromatograffa de fase inversa (Procedimiento E2) para dar n.o 17 (120 mg, 33%); HPLC (Protocolo J): m/z 490,2 [M+H+], tiempo de retencion = 10,069 minutos; [ci]20d -110 (c 0,24, MeOH); RMN 1H (400 Mhz , CD3OD), senales caractensticas: 67,78 (d, J = 3,3 Hz , 1H), 7,51 (d, J = 3,3 Hz , 1H), 7,32-7,37 (m, 2H), 7,24-7,30 (m, 2H), 7,17-7,23 (m, 1H), 6,52-6,61 (m a, 1H), 3,62 (dd a, J = 15, 4 Hz , 1H), 3,37 (s, 3H), 2,98-3,09 (m a, 1H), 2,53-2,64 (m a, 1H), 1,60-1,78 (m, 2H), 1,49 (s, 9H), 1,27 (d, J = 6,5 Hz , 3H).
Etapa 6B. Smtesis de (2R,3R)-3-metoxi-2-metil-A/-[(1S)-2-fenil-1-(1,3-tiazol-2-il)etil]-3-[(2S)-pirrolidin-2-il]propanotioamida, sal de acido trifluoroacetico (n.o 18). De acuerdo con procedimiento general B, a partir de n.o 17 (198 mg, 0,404 mmol, 1 equiv.), diclorometano (6 ml, 0,07 M) y acido trifluoroacetico (2 ml) se sintetizo n.o 18 (185 mg, 91 %), que se uso sin purificacion adicional. CL-EM: m/z 390,1 [M+H+], tiempo de retencion = 0,57 minutos; RMN 1H (400 MHz , DMSO-d6) 610,91 (d, J = 8,2 Hz , 1H), 9,07-9,20 (m a, 1H), 7,86-8,00 (m a, 1H), 7,83 (d, J = 3,2 Hz , 1H), 7,69 (d, J = 3,3 Hz , 1H), 7,27-7,36 (m, 4H), 7,21-7,26 (m, 1H), 6,33 (ddd, J =11,3, 8,3, 4,4 Hz , 1H), 3,76­ 3,82 (m, 1H), 3,56 (dd, J = 14,6, 4,3 Hz , 1H), 3,45 (s, 3H), 3,28 (dd, J = 14,6, 11,3 Hz , 1H), 3,02-3,12 (m a, 1H), 2,89­ 3,00 (m a, 1H), 2,72-2,89 (m, 2H), 1,69-1,83 (m a, 1H), 1,43-1,58 (m, 2H), 1,20-1,33 (m, 1H), 1,22 (d, J = 6,6 Hz, 3H).
Etapa 7. Smtesis de (2R,3R)-3-metoxi-2-metil-W-[(1S)-2-fenil-1-(1,3-tiazol-2-il)etil]-3-[(2S)-pirrolidin-2-il]propanamida, sal de acido trifluoroacetico (n.o 19). De acuerdo con procedimiento general B, a partir de n.o 16 (607 mg, 1,28 mmol, 1 equiv.), diclorometano (10 ml, 0,13 M) y acido trifluoroacetico (2 ml) se sintetizo n.o 19 (640 mg, cuantitativo), que se uso en la siguiente etapa sin purificacion adicional. RMN 1H (400 Mhz , DMSO-d6) 68,96-9,07 (m a, 1H), 8,89 (d, J = 8,8 Hz , 1H), 7,87-8,00 (m a, 1H), 7,80 (d, J = 3,2 Hz , 1H), 7,66 (d, J = 3,3 Hz , 1H), 7,28-7,34 (m, 4H), 7,20-7,27 (m, 1H), 5,43 (ddd, J =11,3, 8,6, 4,2 Hz , 1H), 3,42-3,50 (m, 2H), 3,36 (s , 3H), 3,04-3,14 (m a, 1H), 2,99 (dd, J = 14,2, 11,5 Hz , 1H), 2,92-3,02 (m, 1H), 2,78-2,88 (m a, 1H), 2,34-2,42 (m, 1H), 1,73-1,84 (m a, 1H), 1,55-1,68 (m, 1H), 1,38-1,53 (m, 2H), 1,15 (d, J = 6,9 Hz , 3H).
Preparacion de (2R,3R)-3-Metoxi-2-metil-W-(2-feniletil)-3-[(2S)-pirrolidin-2-il]propanotioamida, sal clorhidrato (n.023) y (2R,3R)-3-metoxi-2-metil-W-(2-feniletil)-3-[(2S)-pirrolidin-2-il]propanamida, sal clorhidrato (n.024)
Figure imgf000077_0001
Etapa 1A. Smtesis de (2S)-2-[(1R,2R)-1-metoxi-2-metil-3-oxo-3-[(2-feniletil) amino]propil}pirrolidin-1-carboxilato de terc-butilo (n.o 20). Al n.o 11 (22 g, 77 mmol, 1 equiv.) en diclorometano (383 ml, 0,2 m ) y A/,W-dimetilformamida (30 ml) se anadieron diisopropiletilamina (26,9 ml, 153 mmol, 2 equiv.), 2-feniletilamina (11,6 ml, 91,9 mmol, 1,2 equiv.) y HATU (39,0 g, 99,5 mmol, 1,3 equiv.). La reaccion se agito durante 18 horas y despues se concentro al vado. El residuo se recogio en acetato de etilo (700 ml) y se lavo secuencialmente con una solucion acuosa 1 M de acido dorhffdrico (2 x 200 ml) y salmuera. La fase organica se seco sobre sulfato sodico, se filtro y se evaporo al vado. El material en bruto se recogio en diclorometano y se filtro. El filtrado se purifico por cromatograffa sobre gel de silice (Gradiente: de 0 % a 100 % de acetato de etilo en heptano) para dar n.o 20 (24 g, 80 %) en forma de un solido de color blanquecino. CL-EM: m/z 392,2 [M+2H+], 291,1 [(M - Boc)+H+], tiempo de retencion = 0,88 minutos; RMN 1H (400 MHz , DMSO-d6), presuntamente una mezcla de rotameros: 67,80-7,89 (m a, 1H), 7,23-7,29 (m, 2H), 7,15-7,23 (m, 3H), 3,72-3,82 y 3,55-3,62 (2 m a, total 1H), 3,45-3,55 (m a, 1H), 3,31-3,44 (m a, 2H), 3,29 (s, 3H), 3,12-3,25 (m a, 1H), 2,98-3,12 (m a, 1H), 2,71 (t, J = 7,1 Hz , 2H), 2,09-2,19 (m, 1H), 1,71-1,83 (m a, 2H), 1,60-1,70 (m a, 1H), 1,49-1,60 (m a, 1H), 1,41 (s, 9H), 1,03 (d, J = 6,8 Hz, 3H).
Etapa IB. Smtesis de pentatiodifosfonato de dipiridinio-1-ilo (n.o 21). Se anadio pentasulfuro fosforoso (4,45 g, 2,19 ml, 20 mmol, 1 equiv.) a piridina (56 ml, 0,36 M) a 800C y la mezcla se calento a reflujo (1150C) durante 1 hora. La mezcla se enfrio a temperatura ambiente y el producto se recogio por filtracion para dar n.o 21 en forma de un solido de color amarillo (4,57 g, 60 %); pf: 165-167 oc (descomposicion); RMN 1H (400 MHz , DMSO-d6) 68,78-8,84 (m, 4H), 8,22-8,30 (m, 2H), 7,76-7,83 (m, 4H).
Etapa 2A. Smtesis de (2S)-2-{(1R,2R)~1-metoxi-2-metil-3-[(2-feniletil)amino]-3-tioxopropil}pirrolidin-1-carboxilato de terc-butilo (n.o 22). Una mezcla de n.o 20 (1,200 g, 3,073 mmol, 1 equiv.) y n.o 21 (1,40 g, 3,69 mmol, 1,2 equiv.) en acetonitrilo (15 ml, 0,20 M) se sometio a radiacion de microondas a 100 oC durante 30 minutos. Despues, la mezcla de reaccion se enfrio a temperatura ambiente, se diluyo con acetato de etilo (150 ml) y se lavo secuencialmente con una solucion acuosa 0,5 M de acido clorhffdrico (100 ml) y salmuera (2 x 50 ml). La fase organica se seco sobre sulfato de magnesio, se filtro y se concentro al vado. El residuo se purifico por cromatograffa sobre gel de sflice (Gradiente: de 20 % a 80 % de acetato de etilo en heptano) para dar n.o 22 (670 mg, 54 %) en forma de un solido de color bianco similar a una cera; pf: 107-109 oc; CL-EM: m/z 407,4 [M+H+], 351,3 [(M -2-metilprop-1-eno)+H+], 307,3 [(M - Boc)+H+], tiempo de retencion = 0,99 minutos; RMN 1H (400 MHz , CD3CN), presuntamente una mezcla de rotameros: 68,28 (s a, 1H), 7,19-7,33 (m, 5H), 3,81-4,05 (m a, 2H), 3,60-3,81 (m a, 2H), 3,38-3,51 (m a, 1H), 3,36 (s, 3H), 3,02-3,17 (m a, 1H), 2,89-3,02 (m, 2H), 2,50-2,62 (m a, 1H), 1,71-1,85 (m a, 2H), 1,53-1,66 (m a, 2H), 1,45 (s a, 9H), 1,23 (d, J = 6,7 Hz , 3H).
Etapa 3. Smtesis de (2R,3R)-3-metoxi-2-metil-W-(2-feniletil)-3-[(2S)-pirrolidin-2-il]propanotioamida, sal clorhidrato (n.o 23) . De acuerdo con el procedimiento C, a partir de n.o 22 (325 mg, 0,799 mmol, 1 equiv.), dioxano (5 ml, 0,2 M) y una solucion 4 M de acido dorhffdrico en dioxano (4 ml, 16 mmol, 20 equiv.) se sintetizo n.o 23 (274 mg, cuantitativo) en forma de una espuma de color bianco; CL-EM: 308,2 [M+H+], tiempo de retencion = 0,55 minutos.
Etapa 2B. Smtesis de (2R,3R)-3-metoxi-2-metil-W-(2-feniletil)-3-[(2S)-pirrolidin-2-il] propanamida, sal clorhidrato (n.o 24) . Al n.o 20 (7,00 g, 17,9 mmol, 1 equiv.) en dioxano (50 ml, 0,36 M) y metanol (2 ml) se anadio una solucion 4 M de acido clorhffdrico en dioxano (20 ml, 80 mmol, 4,4 equiv.). Despues de agitar durante 18 horas, la mezcla se concentro para proporcionar n.o 24 (5,86 g, cuantitativo) en forma de una goma, que se uso sin purificacion adicional; CL-EM: 292,2 [M+H+], tiempo de retencion = 0,47 minutes.
Preparacion de Ejemplo de Referenda de W-Metil-L-valil-W-[(3R,4S,5S)-3-metoxM-{(2S)-2-[(1R,2R)-1-metoxi-2-metil-3-{[(1S)-2-feniM-(1,3-tiazol-2-il)etil]amino}-3-tioxopropil]pirrolidin-1-M}-5-metiM-oxoheptan-4-M]-W-metil-L-valinamida (n.° 26)
Figure imgf000078_0001
Etapa 1. Smtesis de W-[(9H-fluoren-9-ilmetoxi)carbonil]-W-metil-L-valil-W-[(3R,4S,5S)-3-metoxi-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-1-metoxi-2-metil-3-{[(1S)-2-fenil-1-(1,3-tiazol-2-il)etil]amino}-3-tioxopropil]pirrolidin-1-il}-5-metil-1-oxoheptan-4-il]-A/-metil-L-valinamida (n.°25)
De acuerdo con procedimiento general D, a partir de n.° 8 (480 mg, 0,753 mmol, 1 equiv.), diclorometano (10 ml, 0,07 M), W,A/-dimetilformamida (2 ml), la amina n.° 18 (401 mg, 0,941 mmol, 1,25 equiv.), HATU (372 mg, 0,979 mmol, 1,3 equiv.) y trietilamina (367 pl, 2,64 mmol, 3,5 equiv.) se sintetizo el material en bruto deseado, que se purifico por cromatograffa sobre gel de sflice (Gradiente: de 0 % a 30 % de acetona en heptano) para proporcionar n.° 25 (711 mg, 75 %) en forma de un solido. C l -EM: m/z 1009,7 [M+H+], tiempo de retencion = 1,15 minutos; HPLC (Protocolo B): m/z 505,3 [M+2H+]/2, tiempo de retencion = 10,138 minutos; RMN 1H (400 MHz , DMSO-da), presuntamente una mezcla de rotameros, senales caractensticas: 6 [10,54 (d a, J = 8 Hz ) y 10,81 (d a, J = 8 Hz ), total 1H], 7,89 (d a, J = 7 Hz , 2H), [7,80 (d, J = 3,3 Hz ) y 7,83 (d, J = 3,2 Hz ), total 1H], [7,64 (d, J = 3,2 Hz ) y 7,69 (d, J = 3,2 Hz ), total 1H], 7,62 (d a, J = 7 Hz , 2H), 7,37-7,44 (m, 2H), 7,28-7,35 (m, 4H), 7,20-7,27 (m, 2H), 7,12-7,18 (m, 1H), 6,27-6,35 y 6,40-6,48 (2 m, total 1H), [1,14 (d, J = 6,4 Hz ) y 1,17 (d, J = 6,3 Hz ), total 3H].
Etapa 2. Smtesis de N-metil-L-valil-N-[(3R,4S,5S)-3-metoxi-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-1-metoxi-2-metil-3-{[(1S)-2-fenil-1-(1,3-tiazol-2-il)etil]amino}-3-tioxopropil]pirrolidin-1-il}-5-metil-1-oxoheptan-4-il]-W-metil-L-valinamida (n.° 26). De acuerdo con procedimiento general A, a partir de n.° 25 (701 mg, 0,694 mmol) en diclorometano (10 ml, 0,07 M) y dietilamina (10 ml) se sintetizo el material en bruto deseado, que se purifico por cromatograffa sobre gel de sflice (Gradiente: de 0% a 10% de metanol en diclorometano) para dar un solido similar al vidrio. Se anadieron eter dietilico y heptano y la mezcla se concentro al vacte, produciendo n.° 26 (501 mg, 92 %) en forma de un solido de color blanco. HPLC (Protocolo A): m/z 787,4 [M+H+], tiempo de retencion = 7,229 minutos, (pureza > 97 %); RMN 1H (400 MHz , DMSO-d6), presuntamente una mezcla de rotameros, senales caractensticas: 6 [10,54 (d a, J = 8 Hz ) y 10,81 (d a, J = 8 Hz ), total 1H], [7,99 (d a, J = 9 Hz ) y 8,00 (d a, J = 9 Hz ), total 1H], [7,80 (d, J = 3,3 Hz ) y 7,83 (d, J = 3,3 Hz ), total 1H], [7,65 (d, J = 3,2 Hz ) y 7,69 (d, J = 3,3 Hz ), total 1H], 7,29-7,34 (m, 2H), 7,19-7,28 (m, 2H), 7,13­ 7,19 (m, 1H), [6,31 (ddd, J = 11, 8, 4,5 Hz ) y 6,45 (ddd, J = 11,5, 8, 4,5 Hz ), total 1H], [4,57 (dd, J = 8,9, 8,7 Hz ) y 4,63 (dd, J = 8,7, 8,7 Hz ), total 1H], 3,16, 3,21, 3,24 y 3,25 (4 s, total 6H), 2,96 y 3,03 (2 s a, total 3H), [1,14 (d, J = 6,6 Hz ) y 1,17 (d, J = 6,4 Hz ), total 3H].
Preparacion de W2-[(1-Aminociclopentil)carbonil]-W-[(3R,4S,5S)-3-metoxi-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-1-metoxi-2-metil-3-{[(lS)-2-feniM-(1,3-tiazol-2-il)etil]amino}-3-tioxopropil]pirrolidin-1-il}-5-metiM-oxoheptan-4-il]-W-metil-L-valinamida (n.° 30)
Figure imgf000079_0001
Etapa 1. Smtesis de (3R,4S,5S)-4-[{N-[(1-{[(9H-fluoren-9-ilmetoxi)carbonil] amino} ciclopentil)oarbonil]-L-valil}(metil)amino] -3-metoxi-5-metilheptanoato de terc-butilo (n.° 27). A n.° 6 (287 mg, 0,801 mmol, 1 equiv.) en diolorometano (4 ml, 0,2 M) se anadieron aoido 1-{[(9H-fluoren-9-ilmetoxi)oarbonil]amino}oiolopentanooarbox^lioo (309 mg, 0,879 mmol, 1,1 equiv.), diisopropiletilamina (281 pl, 1,60 mmol, 2 equiv.) y HAt U (376 mg, 0,960 mmol, 1.2 equiv.). La mezola se agito durante 18 horas y se diluyo oon aoetato de etilo (15 ml). La mezola de reaooion se lavo oon una soluoion aouosa 1 M de aoido olortndrioo (2 x 5 ml) y oon salmuera (5 ml). La fase organioa se seoo sobre sulfato sodioo, se filtro y se oonoentro al vaom. El material en bruto se purifioo por oromatograffa sobre gel de silioe (Gradiente: de 0 % a 60 % de aoetato de etilo en heptano) para proporoionar n.° 27 (502 mg, 91 %) en forma de una espuma de color blanoo. CL-EM: m/z 692,3 [M+H+], 714,3 [M+Na+], 636,3 [(M -2-metilprop-1-eno)+H+], tiempo de retenoion = 1,13 minutos; RMN 1H (400 MHz , DMSO-d6), senales oaraotenstioas: 67,89 (d a, J = 7,4 Hz , 2H), 7,67-7,75 (m, 2H), 7,60 (s a, 1H), 7,38-7,44 (m, 2H), 7,30-7,36 (m, 2H), 7,21 (d a, J = 8,8 Hz , 1H), 4,44-4,59 (m, 2H), 4,17-4,27 (m, 3H), 3,68-3,78 (m a, 1H), 3,21 (s, 3H), 2,88 (s a, 3H), 2,09-2,20 (m, 2H), 1,39 (s, 9H).
Etapa 2. Smtesis de aoido (3R,4S,5S)-4-[{N-[(1-{[(977-fluoren-9-ilmetoxi)oarbonil]amino} oiolopentil)oarbonil]-L-valil}(metil)amino]-3-metoxi-5-metilheptanoioo (n.° 28). A una soluoion de n.° 27 (500 mg, 0,723 mmol) en diolorometano (7 ml, 0,1 M) se anadio aoido trifluoroaoetioo (3 ml). La mezola de reaooion se volvio inioialmente de color naranja, despues se osoureoio a lo largo del tiempo. Despues de agitar durante 18 horas, el disolvente se retiro al vaom para dar n.° 28 (460 mg, ouantitativo) en forma de un vidrio de color pardo osouro, que se uso sin purifioaoion adioional. CL-EM: m/z 636,3 [M+H+].
Etapa 3. Smtesis de W2-[(1-{[(9H-fluoren-9-ilmetoxi)oarbonil]amino}oiolopentil)oarbonil]-A/-[(3R,4S,5S)-3-metoxi-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-1-metoxi-2-metil-3-{[(1S)-2-fenil-1-(1,3-tiazol-2-il)etil]amino}-3-tioxopropil]pirrolidin-1-il}-5-metil-1-oxoheptan-4-il]-A/-metil-L-valinamida (n.° 29). De aouerdo oon prooedimiento general D, a partir de n.° 28 (50 mg, 0,079 mmol, 1 equiv.) diolorometano (3 ml, 0,03 M), W,W-dimetilformamida (0,5 ml), amina n.° 18 (44 mg, 0,087 mmol, 1,1 equiv.), trietilamina (33,0 pl, 0,237 mmol, 3 equiv.) y HATU (36 mg, 0,95 mmol, 1,2 equiv.) se sintetizo el material en bruto deseado, que se purifioo por oromatograffa sobre gel de silioe (Gradiente: de 0 % a 30 % de aoetona en heptano) para dar n.° 29 (59 mg, 67 %) en forma de un solido. CL-EM: m/z 1007,5 [M+H+], tiempo de retenoion = 1,11 minutos; RMN 1H (400 MHz , DMSO-d6), presuntamente una mezola de rotameros, senales oaraotenstioas: 6 [10,54 (d a, J = 8 Hz ) y 10,80 (d a, J = 8 Hz), total 1H], 7,89 (d a, J = 7 Hz , 2H), [7,80 (d, J = 3,3 Hz ) y 7,82 (d, J = 3,1 Hz), total 1H], 7,68-7,75 (m, 2H), [7,64 (d, J = 3,2 Hz) y 7,68 (d, J = 3,2 Hz), total 1H], 7,38-7,44 (m, 2H), 7,27-7,36 (m, 4H), 7,12-7,25 (m, 4H), [6,30 (ddd, J = 11,8, 4,5 Hz) y 6,39-6,48 (m), total 1H], [4,50 (dd a, J = 8, 8 Hz ) y 4,54-4,59 (m), total 1H], 4,17-4,29 (m, 3H), 2,89 y 2,96 (2 s a, total 3H), [1,13 (d, J = 6,5 Hz ) y 1,16 (d, J = 6,4 Hz), total 3H].
Etapa 4. Smtesis de W2-[(1-aminooiolopentil)oarbonil]-A/-[(3R,4S,5S)-3-metoxi-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-1-metoxi-2-metil-3-{[(1 S)-2-fenil-1-(1,3-tiazol-2-il)etil]amino}-3-tioxopropil] pirrolidin-1-il}-5-metil-1-oxoheptan-4-il]-A/-metil-L-valinamida (n.° 30). De aouerdo oon prooedimiento general A, a partir de n.° 29 (54 mg, 0,054 mmol) en diolorometano (6 ml, 0,9 mM) y dietilamina (4 ml) se sintetizo el material en bruto deseado, que se purifioo por oromatograffa sobre gel de silioe (Gradiente: de 0 % a 10 % de metanol en diolorometano) para dar el ejemplo n.° 30 (26 mg, 61 %) en forma de un solido. HPLC (Protocolo A): tiempo de retenoion = 7,233 minutos, m/z 785,4 [M+H+], (pureza > 72 %). RMN 1H (400 MHz , DMSO-d6), presuntamente una mezola de rotameros, senales oaraotenstioas: 6 [10,54 (d a, J = 8 Hz ) y 10,82 (d a, J = 8 Hz ), total 1H], 8,19-8,27 (m, 1H), [7,80 (d, J = 3,2 Hz ) y 7,83 (d, J = 3,2 Hz ), total 1H], [7,65 (d, J = 3.3 Hz ) y 7,69 (d, J = 3,3 Hz ), total 1H], 7,28-7,33 (m, 2H), 7,20-7,27 (m, 2H), 7,14-7,19 (m, 1H), [6,31 (ddd, J = 11,8, 4,5 Hz) y 6,44 (ddd, J = 11,8, 4 Hz ), total 1H], [4,53 (dd, J = 9, 8 Hz ) y 4,60 (dd, J = 9, 7,5 Hz ), total 1H], 3,24 y 3,25 (2 s, total 3H), 3,17 y 3,21 (2 s, total 3H), 2,93 y 3,00 (2 s a, total 3H), [1,14 (d, J = 6,5 Hz) y 1,17 (d, J = 6,5 Hz), total 3H].
Preparacion de 2-Metilalanil-N-[(3R,4S,5S)-3-metoxM-{(2S)-2-[(1R,2RM-metoxi-2-metil-3-{[(1S)-2-feniM-(1,3-tiazol-2-il)etil]amino}-3-tioxopropil]pirrolidin-1-il}-5-metil-1-oxoheptan-4-il]-N-metil-L-valinamida (n.034)
Figure imgf000080_0001
Etapa 1. Smtesis de N-[(9H-fluoren-9-ilmetoxi)carbonil]-2-metilalanil-N-[(3R,4S,5S)-1-terc-butoxi-3-metoxi-5-metil-1-oxoheptan-4-il]-N-metil-L-valinamida (n.o 31). A una solucion de n.o 6 (70 % puro, 3,13 g, 6,1 mmol, 1 equiv.) en diclorometano (40 ml, 0,15 M) se anadieron N-[(9H-fluoren-9-ilmetoxi)carbonil]-2-metilalanina (1,99 g, 6,12 mmol, 1 equiv.), diisopropiletilamina (2,67 ml, 15,3 mmol, 2,5 equiv.) y HATU (2,79 g, 7,35 mmol, 1,2 equiv.). La mezcla de reaccion se agito durante 18 horas, se diluyo con acetato de etilo, se lavo con una solucion acuosa 1 M de acido clorhffdrico y se lavo con salmuera. La fase organica se seco sobre sulfato sodico, se filtro y se concentro al vado sobre sHice. Despues, el material se purifico por cromatograffa sobre gel de sflice (Gradiente: de 0 % a 45 % de acetato de etilo en heptano) para proporcionar n.o 31 (3,65 g, 90 %) en forma de un solido. CL-EM: m/z 665,5 [M+H+], 688,5 [M+Na+], 610,5 [(M -2-metilprop-1-eno)+H+]; HPLC (Protocolo C): tiempo de retencion = 9,455 (pureza > 94 %); RMN 1H (400 MHz , DMSO-da), senales caractensticas: 57,89 (d, J = 7,4 Hz , 2H), 7,67-7,74 (m, 2H), 7,39­ 7,48 (m, 3H), 7,31-7,36 (m, 2H), 7,29 (d a, J = 8,8 Hz , 1H), 4,47-4,60 (m a, 1H), 4,47 (dd, J = 8,6, 8,0 Hz , 1H), 4,18­ 4,28 (m, 3H), 3,69-3,79 (m a, 1H), 3,21 (s , 3H), 2,88 (s a, 3H), 2,15 (dd, J = 15,5, 9,3 Hz , 1H), 1,91-2,01 (m, 1H), 1,67-1,81 (m a, 1H), 1,39 (s , 9H), 1,36 (s a, 3H), 1,30 (s , 3H), 0,75 (d, J = 6,6 Hz , 3H), 0,66-0,73 (m a, 3H).
Etapa 2. Smtesis de N-[(9H-fluoren-9-ilmetoxi)carbonil]-2-metilalanil-N-[(2R,3S,4S)-1-carboxi-2-metoxi-4-metilhexan-3-il]-N-metil-L-valinamida (n.o 32). De acuerdo con procedimiento general B, a partir de n.o 31 (500 mg, 0,751 mmol) en diclorometano (7 ml, 0,1 M) y acido trifluoroacetico (3 ml) se sintetizo n.o 32 en forma de un cristal (458 mg, cuantitativo), que se uso en la siguiente etapa sin purificacion adicional. CL-EM: m/z 611,4 [M+2H+], 632,2 [M+Na+], tiempo de retencion = 0,94 minutos.
Etapa 3. Smtesis de N-[(9H-fluoren-9-ilmetoxi)carbonil]-2-metilalanil-N-[(3R,4S,5S)-3-metoxi-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-1-metoxi-2-metil-3-{[(1S)-2-fenil-1-(1,3-tiazol-2-il)etil]amino}-3-tioxopropil]pirrolidin-1-il}-5-metil-1-oxoheptan-4-il]-N-metil-L-valinamida (n.o 33). De acuerdo con procedimiento general D, a partir de n.o 32 (53,0 mg, < 0,083 mmol, 1 equiv.), diclorometano (4 ml, 0,02 M), N,N-dimetilformamida (1 ml), la amina n.o 18 (43,8 mg, 0,0870 mmol, 1 equiv.), trietilamina (36 |jl, 0,26 mmol, 3 equiv.) y HATU (39,5 mg, 0,104 mmol, 1,2 equiv.) se sintetizo el material en bruto deseado, que se purifico por cromatograffa sobre gel de sflice (Gradiente: de 0 % a 30 % de acetona en heptano) para dar n.o 33 (60 mg, 69 % en dos etapas). CL-EM: m/z 981,4 [M+H+], tiempo de retencion = 1,090 minutos; RMN 1H (400 MHz , DMSO-d6), presuntamente una mezcla de rotameros, senales caractensticas: 5 [10,54 (d a, J = 8 Hz ) y 10,80 (d a, J = 8 Hz ), total 1H], 7,86-7,91 (m, 2H), [7,80 (d, J = 3,3 Hz ) y 7,82 (d, J = 3,3 Hz ), total 1H], 7,68-7,74 (m, 2H), [7,64 (d, J = 3,2 Hz ) y 7,68 (d, J = 3,3 Hz ), total 1H], 7,38-7,44 (m, 2H), 7,20-7,36 (m, 6H), 7,12-7,17 (m, 1H), 6,27-6,34 y 6,40-6,47 (2 m, total 1H), 3,22 y 3,24 (2 s, total 3H), 3,14 y 3,18 (2 s, total 3H), 2,90 y 2,97 (2 s a, total 3H), 1,37 (s a, 3H), 1,31 (2 s a, total 3H), [1,13 (d, J = 6,6 Hz ) y 1,16 (d, J = 6,5 Hz ), total 3H].
Etapa 4. Smtesis de 2-metilalanil-N-[(3R,4S,5S)-3-metoxi-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-1-metoxi-2-metil-3-{[(1S)-2-fenil-1-(1,3-tiazol-2-il)etil]amino}-3-tioxopropil]pirrolidin-1-il}-5-metil-1-oxoheptan-4-il]-N-metil-L-valinamida (n.o 34). De acuerdo con procedimiento general A, a partir de n.o 33 (55 mg, 0,055 mmol, 1 equiv.) en diclorometano (6 ml, 0,009 M) y dietilamina (4 ml) se sintetizo el material en bruto deseado, que se purifico por cromatograffa sobre gel de sflice (Gradiente: de 0 % a 5 % de metanol en diclorometano) para dar n.o 34 (25 mg, 60 %) en forma de un solido. HPLC (Protocolo A): m/z 759,4 [M+H+], tiempo de retencion = 7,088 minutos, (pureza > 75 %). RMN 1H (400 MHz , DMSO-da), presuntamente una mezcla de rotameros, senales caractensticas: 5 [ i 0,54 (d a, J = 8 Hz ) y 10,81 (d a, J = 8 Hz ), total 1H], 8,01-8,08 (m, 1H), [7,80 (d, J = 3,1 Hz ) y 7,83 (d, J = 3,3 Hz ), total 1H], [7,65 (d, J = 3,2 Hz ) y 7,69 (d, J = 3,2 Hz ), total 1H], 7,29-7,33 (m, 2H), 7,20-7,27 (m, 2H), 7,13-7,19 (m, 1H), 6,27-6,35 y 6,40-6,48 (2 m, total 1H), [4,49 (dd, J = 9, 8 Hz ) y 4,56 (dd, J = 9, 8 Hz ), total 1H], 3,24 y 3,25 (2 s, total 3H), 3,17 y 3,21 (2 s, total 3H), 2,92 y 2,99 (2 s a, total 3H), 1,20 y 1,21 (2 s, total 3H), 1,12 y 1,13 (2 s, total 3H), 0,75-0,81 (m, 3H).
Preparacion de Ejemplo de Referenda de W-metil-L-valil-W-{(3R,4S,5S)-3-metoxM-[(2S)-2-{(1R,2R)-1-metoxi-2-metil-3-[(2-feniletil)amino]-3-tioxopropil}pirrolidin-1-il]-5-metil-1-oxoheptan-4-il}-W-metil-L-valinamida (n.° 36)
Figure imgf000081_0001
Etapa 1. Smtesis de W-[(9H-fluoren-9-ilmetoxi)carbonil]-W-metil-L-valil-W-{(3R,4S,5S)-3-metoxi-1-[(2S)-2-{(1R,2R)-1-metoxi-2-metil-3-[(2-feniletil)amino]-3-tioxopropil}pirrolidin-1-il]-5-metil-1-oxoheptan-4-il}-W-metil-L-valinamida (n.° 35). A una mezcla de n.° 23 (337 mg, 0,983 mmol, 1 equiv.) en diclorometano (8 ml, 0,1 M) y A/,W-dimetilformamida (1 ml) se anadieron n.° 8 (564 mg, 0,885 mmol, 0,9 equiv.), diisopropiletilamina (383 mg, 2,95 mmol, 3 equiv.) y HATU (472 mg, 1,18 mmol, 1,2 equiv.). Despues de 2 horas, la mezcla se diluyo con diclorometano, se lavo secuencialmente con acido clorddrico acuoso 0,1 M y con salmuera, se seco sobre sulfato de magnesio, se filtro y se concentro al vado. El residuo se purifico por cromatograffa de fase inversa (Procedimiento G) para dar n.° 35 (600 mg, 66 %); CL-EM: m/z 926,6 [M+H+], tiempo de retencion = 1,16 minutos; RMN 1H (400 MHz , DMSO-d6), presuntamente una mezcla de rotameros, senales caracteristicas: 5 [9,94 (t a, J = 5 Hz ) y 10,16-10,23 (m a), total 1H], 7,90 (d, J = 7,2 Hz , 2H), [7,71 (d a, J = 7 H z ) y 8,06 (d a, J = 8 Hz ), total 1H], 7,60-7,65 (m, 2H), 7,41 (dd a, J = 7, 7 H z , 2H), 7,15­ 7,36 (m, 7H), 3,29 (s, 3H), 1,16-1,22 (m, 3H).
Etapa 2. Smtesis de W-metil-L-valil-W-{(3R,4S,5S)-3-metoxi-1-[(2S)-2-{(1 R,2R)-1-metoxi-2-metil-3-[(2-feniletil)amino]-3-tioxopropil}pirrolidin-1-il]-5-metil-1-oxoheptan-4-il}-A/-metil-L-valinamida (n.° 36). De acuerdo con procedimiento general A, a partir de n.° 35 (465 mg, 0,502 mmol, 1 equiv.) en diclorometano (5 ml, 0,1 M) y dietilamina (5 ml) se sintetizo el material en bruto deseado, que se purifico por cromatograffa sobre gel de silice (Gradiente: de 0 % a 10 % de metanol en diclorometano) para dar n.° 36 (310 mg, 88 %) en forma de un solido. CL-EM: m/z 704,6 [M+H+], tiempo de retencion = 0,74 minutos; HRMS: m/z calculado para C38H66N5O5S: 704,4779, encontrado: 704,477 [M+H+]; RMN 1H (400 M Hz , CD3OD), presuntamente una mezcla de rotameros, senales caracteristicas: 57,23-7,30 (m, 4H), 7,15-7,22 (m, 1H), [4,68 (d, J = 8,6 Hz ) y 4,74 (d, J = 8,0 Hz ), total 1H], 3,39 y 3,40 (2 s, total 3H), 3,12 y 3,22 (2 s a, total 3H), [2,82 (d, J = 6,0 Hz ) y 2,84 (d, J = 6,0 Hz ), total 1H], 2,29 y 2,30 (2 s, total 3H), [1,27 (d, J = 6,8 Hz ) y 1,29 (d, J = 6,6 Hz ), total 3H], [0,84 (t, J = 7,4 Hz ) y 0,87 (t, J = 7,4 Hz ), total 3H].
Preparation de Ejemplo de Referenda de W-metil-L-valil-W-[(3R,4S,5S)-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-3-{[(1S)-1-carboxi-2-feniletil]amino}-1-metoxi-2-metil-3-tioxopropil]pirrolidin-1-il}-3-metoxi-5-metil-1-oxoheptan-4-il]-R-metil-L-valinamida, sal de acido trifluoroacetico (n.041) y Ejemplo de Referenda W-metil-L-valN-W-[(3R,4S,5S)-3-metoxi-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-1-metoxi-3-{[(2S)-1-metoxM-oxo-3-fenNpropan-2-N]amino}-2-metN-3-tioxopropil]pirrolidin-1-il}-5-metiM-oxoheptan-4-il]-W-metil-L-valinamida (n.o 42)
Figure imgf000082_0001
Etapa 1. Sintesis de N-{(2R,3R)-3-[(2S)-1-(terc-butoxicarbonil)pirrolidin-2-il]-3-metoxi-2-metilpropanoil}-L-fenilalaninato de metilo (n.o 37). A una mezcla de n.o 11 (2,7 g, 9,4 mmol, 1 equiv.) en diclorometano (30 ml, 0,3 M) y N,N-dimetilformamida (3 ml) se anadieron diisopropiletilamina (3,30 ml, 18,8 mmol, 2 equiv.), clorhidrato de ester metilico de L-fenilalanina (2,03 g, 9,40 mmol, 1,2 equiv.) y HATU (4,79 g, 12,2 mmol, 1,3 equiv.). La reaction se agito durante 18 horas y despues se concentro al vatio. El residuo se recogio en acetato de etilo (100 ml) y se lavo secuencialmente con acido clorhidrico 1 M (2 x 50 ml) y salmuera. La fase organica se seco sobre sulfato sodico, se filtro y se evaporo al vatio. El material en bruto se recogio en diclorometano y se filtro. El filtrado se purifico por cromatografia sobre gel de silice (Gradiente: de 0 % a 100 % de acetato de etilo en heptano) para dar n.o 37 (2,76 g, 65 %) en forma de un solido de color blanquecino. CL-EM: m /z 449,3 [M+H+], 349,2 [(M - B oc)+ H ]; tiempo de retention = 0,88 minutos; RMN 1H (400 M H z , DMSO-de), presuntamente una mezcla de rotameros, senales caracteristicas: 68,28 (d, J = 8,2 Hz, 1H), 7,14-7,29 (m, 5H), 4,50 (ddd, J =10,9, 8,1, 4,4 Hz, 1H), 3,64 (s , 3H), 3,23 (s , 3H), 2,15-2,24 (m, 1H), 1,56-1,76 (m, 2H), 1,31-1,55 (m, 11H), 1,02 (d, J = 6,6 Hz, 3H).
Etapa 2. Sintesis de N-{(2R,3R)-3-[(2S)-1-(terc-butoxicarbonil)pirrolidin-2-il]-3-metoxi-2-metilpropanotioil}-L-fenilalaninato de metilo (n.o 38). Una mezcla de n.o 37 (1,52 g, 3,39 mmol, 1 equiv.) y n.o 21 (1,68 g, 4,41 mmol, 1,3 equiv.) en acetonitrilo (12 ml, 0,28 M) se sometio a radiation de microondas a 1000C durante 1 hora. La mezcla se repartio entre agua y acetato de etilo. La fase acuosa se extrajo de nuevo con acetato de etilo. Las fases organicas combinadas se lavaron con una solution acuosa al 10 % de acido titrico y con salmuera, se secaron sobre sulfato sodico, se filtraron y se concentraron al vatio. El material se disolvio en una pequena cantidad de acetato de etilo y se concentro sobre silice al vatio. La purification por cromatografia sobre gel de silice (Gradiente: de 0 % a 30 % de acetato de etilo en heptano) proporciono n.o 38 (680 mg, 43 %); CL-EM: m/z 465,2 [M+H+], 487,3 [M+Na+], 365,2 [(M - Boc)+H+], tiempo de retention = 0,97 minutos; H P l C (Protocolo B): 465,2 [M+H+], 487,2 [M+Na+], 365,2 [(M -Boc)+H+], tiempo de retention = 7,444 minutos (pureza > 98 %); RMN 1H (400 M h z , D m SO^ ), presuntamente una mezcla de rotameros, senales caracteristicas: 61o ,23 (d a, J = 7,5 Hz, 1H), 7,17-7,28 (m, 5H), 5,24 (ddd, J = 11,7, 5, 4,5 Hz, 1H), 3,66 (s , 3H), 3,28 (s , 3H), 3,21 (dd, J = 14,3, 4,4 Hz, 1H), 3,07 (dd, J = 14,2, 11,2 Hz, 1H), 2,65-2,74 (m, 1H), 1,54-1,71 (m, 2H), 1,37 (s , 9H), 1,17 (d, J = 6,4 Hz, 3H).
Etapa 3. Sintesis de N-{(2R,3R)-3-metoxi-2-metil-3-[(2S)-pirrolidin-2-il]propanotioil}-L-fenilalaninato de metilo, sal clorhidrato (n.o 39). De acuerdo con procedimiento general C, a 0 oc a partir de n.o 38 (660 mg, 1,42 mmol, 1 equiv.), dioxano (10 ml, 0,14 M) y una solution 4 M de acido clorhidrico en dioxano (20 ml, 80 mmol, 60 equiv.) se sintetizo n.o 39 (590 mg) en forma de un solido de color blanquecino, que se uso en la siguiente etapa sin purification adicional. C L-e M: m/ z 365,2 [M+H+], tiempo de retention = 0,58 minutos; RMN 1H (400 MHz , DMSO-d6) 6 10,67 (d, J = 7,7 Hz, 1H), 9,42-9,54 (m a, 1H), 8,21-8,33 (m a, 1H), 7,20-7,35 (m , 5H), 5,25 (ddd, J =11,1,7,6, 4,4 Hz, 1H), 3,76 (dd, J = 8,9, 3,0 Hz , 1H), 3,68 (s , 3H), 3,39 (s , 3H), 3,24 (dd, J = 14,2, 4,5 Hz, 1H), 3,13 (dd, J = 14,3, 11,0 Hz , 1H), 2,93-3,09 (m, 3H), 2,85-2,93 (m, 1H), 1,72-1,84 (m, 1H), 1,36-1,60 (m, 3H), 1,22 (d, J = 6,6 Hz , 3H).
Etapa 4. Smtesis de W-[(9H-fluoren-9-ilmetoxi)carbonil]-W-metil-L-valil-W-[(3R,4S,5S)-3-metoxi-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-1-metoxi-3-{[(2S)-1-metoxi-1-oxo-3-fenilpropan-2-il]amino}-2-metil-3-tioxopropil]pirrolidin-1-il}-5-metil-1-oxoheptan-4-il]-W-metil-L-valinamida (n.040). De acuerdo con procedimiento general D, a partir de n.08 (247 mg, 0,387 mmol, 1 equiv.), n.039 (186 mg, <0,450 mmol, 1,2 equiv.), diclorometano (10 ml, 0,04 M), W,A/-dimetilformamida (2 ml), HATU (176 mg, 0,464 mmol, 1,2 equiv.) y trietilamina (189 pi, 1,35 mmol, 3,5 equiv.) se sintetizo el material en bruto deseado, que se purifico por cromatograffa sobre gel de s l^ice (Gradiente: de 0 % a 25 % de acetona en heptano) para dar n.o 40 (410 mg, 9o % en 2 etapas) en forma de un solido de color blanquecino. CL-EM: m/z 984,7 [M+H+], 1006,7 [M+Na+], tiempo de retencion = 1,15 minutos; HPLC (Protocolo C): tiempo de retencion = 9,683 minutos (pureza > 99 %); RMN 1H (400 MHz , DMSO-d6), presuntamente una mezcla de rotameros, senales caractensticas: 6 [10,19 (d a, J = 7 Hz ) y 10,49 (d a, J = 8 Hz ), total 1H], 7,90 (d, J = 7,5 Hz , 2H), 7,60-7,65 (m, 2H), 7,38-7,45 (m, 2H), 7,29-7,35 (m, 2H), 7,14-7,28 (m, 5H), [5,20 (ddd, J = 11,7, 4 Hz ) y 5,35-5,43 (m), total 1H], 3,65 y 3,69 (2 s , total 3H), [1,15 (d, J = 6,5 Hz ) y 1,18 (d, J = 6,4 Hz ), total 3H].
Etapa 5A. Smtesis de N-metil-L-valil-N-[(3R,4S,5S)-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-3-{[(1S)-1-carboxi-2-feniletil]amino}-1-metoxi-2-metil-3-tioxopropil]pirrolidin-1-il}-3-metoxi-5-metil-1-oxoheptan-4-il]-W-metil-L-valinamida, sal de acido trifluoroacetico (n.o 4l). A una solucion de n.o 40 (401 mg, 0,407 mmol, 1 equiv.) en tetrahidrofurano (10 ml, 0,03 M) se anadio una solucion de hidroxido de litio (24,4 mg, 1,02 mmol, 2,5 equiv.) en agua (5 ml). Despues de 4 horas, la reaccion se concentro al vado y despues se destilo azeotropicamente tres veces con heptano. El material en bruto se disolvio en dimetilsulfoxido (7 ml) y se purifico por cromatograffa de fase inversa (Procedimiento C, 7 inyecciones de 1 ml). Las fracciones apropiadas se concentraron (Genevac) antes de diluirse con una pequena cantidad de metanol en diclorometano. La mezcla se concentro al vado para dar un solido parecido al cristal. Despues, se anadio eter diefflico, seguido de heptano, y la mezcla se concentro al vado para proporcionar n.o 41 (180 mg, 59 %) en forma de un solido de color bianco. CL-EM: m/z 748,6 [M+H+], tiempo de retencion = 0,68 minutos; HPLC (Protocolo A): 748,4 [M+H+], tiempo de retencion = 6,922 minutos; RMN 1H (400 MHz , DMSO-d6), presuntamente una mezcla de rotameros, senales caractensticas: 612,9 y 13,1 (2 x s a, total 1H), [10,12 (d a, J = 8 Hz ) y 10,45 (d a, J = 8 Hz ), total 1H], 8,75-8,90 (m, 2H), 8,62-8,73 (m a, 1H), 7,13-7,29 (m, 5H), [5,20 (ddd, J = 11,7,5, 4 Hz ) y 5,40 (ddd, J = 11,5, 8, 4 Hz ), total 1H], 4,55-4,73 (m, 2H), 3,23 y 3,25 (2 s , total 3H), 3,16 y 3,18 (2 s , total 3H), 2,97 y 3,01 (2 s a, total 3H), 1,13-1,20 (m, 3H), 0,73-0,81 (m, 3H).
Etapa 5B. Smtesis de W-metil-L-valil-A/-[(3R,4S,5S)-3-metoxi-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-1-metoxi-3-{[(2S)-1-metoxi-1-oxo-3-fenilpropan-2-il]amino}-2-metil-3-tioxopropil]pirrolidin-1-il}-5-metil-1-oxoheptan-4-il]-W-metil-L-valinamida (n.o 42). De acuerdo con procedimiento general A, a partir de n.o 40 (561 mg, 0,570 mmol, 1 equiv.), diclorometano (10 ml, 0,057 M) y dietilamina (10 ml) se sintetizo n.o 42 (348 mg, 80 %) en forma de un solido de color bianco despues de cromatograffa sobre gel de sflice (Gradiente: de 0% a 10% de metanol en diclorometano). CL-EM: m/z 762,7 [M+H+], tiempo de retencion = 0,74 minutos; HPLC (Protocolo A): 762,4 [M+H+], tiempo de retencion = 7,315 minutos (pureza > 95 %); RMN 1H (400 MHz , DMSO-d6), presuntamente una mezcla de rotameros, senales caractensticas: 6 [10,20 (d a, J = 7,5 Hz ) y 10,50 (d a, J = 8 Hz ), total 1H], 7,95-8,03 (m, 1H), 7,15-7,29 (m, 5H), [5,20 (ddd, J = 11,7,5, 5 Hz ) y 5,39 (ddd, J = 11,7, 5, 4 Hz , total 1H], [4,57 (dd, J = 8,8, 8,7 Hz ) y 4,61 (dd, J = 8,7, 8,6 Hz ), total 1H], 3,65 y 3,69 (2 s , total 3H), 3,24 y 3,25 (2 s , total 3H), 3,16 y 3,17 (2 s , total 3H), 2,96 y 2,99 (2 s a, total 3H), 2,69-2,79 (m, 1H), 2,62-2,68 (m, 1H), 2,14 y 2,15 (2 s a, total 3H), [1,15 (d, J = 6,6 Hz ) y 1,18 (d, J = 6,5 Hz ), total 3H], [0,75 (t, J = 7,4 Hz ) y 0,76 (t, J = 7,3 Hz ), total 3H].
Preparacion de 2-Metilalanil-W-[(3R,4S,5S)-1-{2S)-2-[(1R,2R)-3-{[(1S)-1-carboxi-2-feniletil]amino}-1-metoxi-2-metil-3-tioxopropil]pirrolidin-1-il}-3-metoxi-5-metil-1-oxoheptan-4-il]-W-metil-L-valinamida, sal clorhidrato (n.° 44) y 2-metilalanil-W-[(3R,4S,5S)-3-metoxi-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-1-metoxi-3-{[(2S)-1-metoxi-1-oxo-3-fenilpropan-2-il]amino}-2-metil-3-tioxopropil] pirrolidin-1-il}-5-metil-1-oxoheptan-4-il]-W-metil-L-valinamida, sal clorhidrato (n.° 45)
Figure imgf000084_0001
Etapa 1. Smtesis de N-[(9H-fluoren-9-ilmetoxi)carbonil]-2-metilalanil-N-[(3R,4S,5S)-3-metoxi-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-1-metoxi-3-{[(2S)-1-metoxi-1-oxo-3-fenilpropan-2-il] amino }-2-metil-3-tioxopropil]pirrolidin-1-il}-5-metil-1-oxoheptan-4-il]-A/-metil-L-valinamida (n.° 43). A una solucion de n.° 32 (321 mg, 0,881 mmol, 1 equiv.) en diclorometano (5 ml, 0,1 M) y A/,N-dimetilformamida (1 ml) se anadieron n.° 39 (484 mg, <0,769 mmol, 0,9 equiv.), HATU (353 mg, 0,881 mmol, 1 equiv.) y diisopropiletilamina (463 gl, 2,64 mmol, 3 equiv.). Despues de agitar durante 18 horas, la mezcla se diluyo con diclorometano, se lavo con agua y con salmuera, se seco sobre sulfato de magnesio, se filtro y se concentro sobre sflioe al vado. El residuo se purifico por cromatografia sobre gel de sflioe (Gradiente: de 0 % a 30 % de acetona en heptano) para dar n.° 43 (574 mg, 68 % en dos etapas) en forma de un solido de color blanco. CL­ EM: m/z 956,6 [M+H+], tiempo de retention = 4,49 minutos; RMN 1H (40o MHz, CD3OD), presuntamente una mezcla de rotameros, senales caractensticas: 57,80 (d, J = 7,5 Hz, 2H), 7,64-7,72 (m, 2H), 7,16-7,35 (m, 7H), [5,43 (dd, J = 11.4.5 Hz) y 5,58 (dd, J = 11,5, 4 Hz), total 1H], 3,72 y 3,75 (2 s, total 3H), 3,34 y 3,35 (2 s, total 3H), 3,26 y 3,29 (2 s, total 3H), 3,05 y 3,11 (2 s a, total 3H), 1,39 y 1,40 (2 s, total 3H), [1,24 (d, J = 6,7 Hz) y 1,29 (d, J = 6,4 Hz), total 3H].
Etapa 2A. Smtesis de 2-metilalanil-N-[(3R,4S,5S)-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-3-{[(1S)-1-carboxi-2-feniletil]amino}-1-metoxi-2-metil-3-tioxopropil]pirrolidin-1-il}-3-metoxi-5-metil-1-oxoheptan-4-il]-N-metil-L-valinamida, sal clorhidrato (n.° 44). A una solucion de n.° 43 (100 mg, 0,105 mmol, 1 equiv.) en tetrahidrofurano (5 ml, 0,02 M) se anadio una solucion de hidroxido de litio (10 mg, 0,417 mmol, 3 equiv.) en agua (3 ml). Despues de 3 horas, la reaction se concentro al vado y se purifico por cromatografia de fase inversa (Procedimiento C) para dar una sal de acido trifluoroacetico, que se disolvio en metanol, se trato con una solucion 4 M de acido clorhidrico en dioxano y se concentro al vado para dar n.° 44 (56 mg, 71 %) en forma de un solido de color blanco. CL-EM: m/z 720,6 [M+H+], tiempo de retencion = 0,67 minutos; HPLC (Protocolo D): tiempo de retencion = 8,851 minutos; Rm N 1H (400 MHz , CD3OD), presuntamente una mezcla de rotameros, senales caractensticas: 57,17-7,31 (m, 5H), 3,34 y 3,35 (2 s, total 3H), 3,10 y 3,16 (2 s a, total 3H), 1,62 y 1,64 (2 s, total 3H), 1,53 y 1,55 (2 s, total 3H), [1,26 (d, J = 6,5 Hz) y 1,30 (d, J = 6.5 Hz), total 3H], 0,84-0,91 (m, 3H).
Etapa 2B. Smtesis de 2-metilalanil-A/-[(3R,4S,5S)-3-metoxi-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-1-metoxi-3-{[(2S)-1-metoxi-1-oxo-3-fenilpropan-2-il]amino}-2-metil-3-tioxopropil]pirrolidin-1-il}-5-metil-1-oxoheptan-4-il]-N-metil-L-valinamida, sal clorhidrato (n.° 45). De acuerdo con procedimiento general A, a partir de n.° 43 (176 mg, 0,184 mmol, 1 equiv.), diclorometano (4 ml, 0,05 M) y dietilamina (4 ml) se sintetizo el material en bruto deseado, que se purifico por cromatografia de fase inversa (Procedimiento C). La sal de acido trifluoroacetico resultante se disolvio en metanol, se trato con una solucion 4 M de acido clorhidrico en dioxano y se concentro al vado para dar n.° 45 (100 mg, 70 %) en forma de un solido de color blanco. CL-EM: m/z 734,6 [M+H+], tiempo de retencion = 0,72 minutos; RMN 1H (4o0 MHz, CD3OD), presuntamente una mezcla de rotameros, senales caractensticas: 57,18-7,31 (m, 5H), 5,41-5,47 y 5,55-5,62 (2 m, total 1H), 3,73 y 3,76 (2 s, total 3H), 3,35 y 3,36 (2 s, total 3H), 3,10 y 3,15 (2 s a, total 3H), 1,62 y 1,64 (2 s, total 3H), 1,53 y 1,55 (2 s, total 3H), [1,25 (d, J = 6,6 Hz) y 1,29 (d, J = 6,5 Hz), total 3H], 0,84-0,91 (m, 3H).
Preparacion de W2-[(1-Aminociclopentil)carbonil]-W-[(3R,4S,5S)-3-metoxi-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-1-metoxi-2-metil-3-oxo-3-{[(1S)-2-fenil-1-(1,3-tiazol-2-il)etil]amino}propil]pirrolidin-1-il}-5-metiM-oxoheptan-4-il]-W-metil-L-valinamida (n.° 47)
Figure imgf000085_0001
Etapa 1. Smtesis de W2-[(1-{[(9H-fluoren-9-ilmetoxi)carbonil]amino}ciclopentil)-carbonil]-W-[(3R,4S,5S)-3-metoxi-1-{(2S)-2-[(1 R,2R)-1-metoxi-2-metil-3-oxo-3-{[(1 S)-2-fenil-1-(1,3-tiazol-2-il)etil]amino}propil]pirrolidin-1-il}-5-metil-1-oxoheptan-4-il]-A/-metil-L-valinamida (n.° 46). A una solucion de n.° 19 (353 mg, 0,944 mmol, 1 equiv.) en diclorometano (10 ml, 0,094 M) se anadieron n.° 28 (600 mg, 0,944 mmol, 0,9 equiv.), diisopropiletilamina (498 pl, 2,83 mmol, 3 equiv.) y HATU (444 mg, 1,13 mmol, 1,2 equiv.). Despues de agitar durante dos dfas, la mezcla se concentro al vado y el residuo se diluyo con acetato de etilo (60 ml), se lavo con una solucion acuosa 1 M de acido clorhndrico y con salmuera, se seco sobre sulfato sodico, se filtro y se concentro al vado. El residuo se diluyo con diclorometano y se filtro. El filtrado se concentro a presion reducida sobre silice y se purifico por cromatograffa sobre gel de sflice (Gradiente: de 40 % a 100 % de acetato de etilo en heptano) para dar n.° 46 (644 mg, 69 %) en forma de un solido de color blanco. CL-EM: m/z 991,8 [M+H+], tiempo de retencion = 1,07 minutos; RMN 1H (400 MHz , DMSO-d6), presuntamente una mezcla de rotameros, senales caractensticas: 67,89 (d a, J = 7,4 Hz , 2H), [7,77 (d, J = 3,3 Hz ) y 7,79 (d, J = 3,3 Hz ), total 1H], 7,66-7,76 (m, 2H), [7,62 (d, J = 3,3 Hz ) y 7,65 (d, J = 3,3 Hz ), total 1H], 7 ,37-7,44 (m, 2H), 7,11-7,36 (m, 7H), [5,38 (ddd, J = 11,8, 4 Hz ) y 5,48-5,57 (m), total 1H], 3,13, 3,17, 3,18 y 3,24 (4 s, total 6H), 2,90 y 3,00 (2 s a, total 3H), [1,05 (d, J = 6,6 Hz ) y 1,09 (d, J = 6,8 Hz ), total 3H].
Etapa 2. Smtesis de W2-[(1-aminociclopentil)carbonil]-A/-[(3R,4S,5S)-3-metoxi-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-1-metoxi-2-metil-3-oxo-3-{[(1S)-2-fenil-1-(1,3-tiazol-2-il)etil]amino}propil]pirrolidin-1-il}-5-metil-1-oxoheptan-4-il]-W-metil-L-valinamida (n.° 47). ia mezcla de n.° 46 (500 mg, 0,504 mmol, 1 equiv.) en tetrahidrofurano (8 ml, 0,06 M) se anadio dietilamina (4 ml). Despues de agitar durante 18 horas, la mezcla de reaccion se concentro al vado y el residuo se purifico por cromatograffa sobre gel de silice (Gradiente: de 0 % a 10 % de metanol en diclorometano) para dar n.° 47 (374 mg, 96 %) en forma de un solido de color blanco. CL-EM: m/z 769,6 [M+H+], tiempo de retencion = 0,70 minutos; RMN 1H (400 MHz , DMSO-d6), presuntamente una mezcla de rotameros, senales caractensticas: 6 [8,64 (d a, J = 8,4 Hz ) y 8,87 (d a, J = 8,6 Hz ), total 1H], [8,22 (d a, J = 9,4 Hz ) y 8,26 (d a, J = 9,4 Hz ), total 1H], [7,77 (d, J = 3,3 Hz ) y 7,80 (d, J = 3,3 Hz ), total 1H], [7,63 (d, J = 3,1 Hz ) y 7,66 (d, J = 3,3 Hz ), total 1H], 7,13-7,31 (m, 5H), [5,39 (ddd, J = 11,1, 8,5, 4,2 Hz ) y 5,54 (ddd, J = 11,7, 8,8, 4,1 Hz ), total 1H], [4,53 (dd, J = 9,2, 7,6 Hz ) y 4,64 (dd, J = 9,2, 6,6 Hz ), total 1H], 3,16, 3,20, 3,21 y 3,25 (4 s, total 6H), 2,93 y 3,03 (2 s a, total 3H), [1,05 (d, J = 6,8 Hz ) y 1,10 (d, J = 6,6 Hz ), total 3H], 0,73-0,80 (m, 3H).
Preparacion de W2-[(1-Aminociclopropil)carbonil]-W-[(3R,4S,5S)-3-metoxi-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-1-metoxi-2-metil-3-oxo-3-{[(1S)-2-fenil-1-(1,3-tiazol-2-il)etil]amino}propil]pirrolidin-1-il}-5-metiM-oxoheptan-4-il]-W-metil-L-valinamida (n.o 51) y 1-amino-W-[(2S)-1-{[(3R,4S,5S)-3-metoxM-{(2S)-2-[(1R,2R)-1-metoxi-2-metil-3-oxo-3-{[(1S)-2-fenil-1-(1,3-tiazol-2-il)etil]amino}propil]pirrolidin-1-il}-5-metil-1-oxoheptan-4-il](metil)amino}-3-metil-1-oxobutan-2-il]ciclohexanocarboxamida (n.o 52)
Figure imgf000086_0001
Etapa 1. Smtesis de (2R,3R)-3-metoxi-2-metil-N-[(1S)-2-fenil-1-(1,3-tiazol-2-il)etil]-3-[(2S)-pirrolidin-2-il]propanamida, sal de acido trifluoroacetico y acido (3R,4S,5S)-4-[{N-[(9H-fluoren-9-ilmetoxi)carbonil]-L-valil}(metil)amino]-3-metoxi-5-metilheptanoico (n.o 48). A una solueion de n.o 16 (1,0 g, 2,11 mmol, 1 equiv.) y n.o 5 (1,22 g, 2,11 mmol, 1 equiv.) en diclorometano (20 ml, 0,1 M) a 00C se anadio acido trifluoroacetico (6 ml). Despues de 3 horas, la mezcla se concentro al vado para dar la mezcla n.o 48 (1,8 g), que se uso en la siguiente etapa sin purificacion adicional; CL­ EM (Protocolo K): m/z 374,2 [M+H+], tiempo de retencion = 2,093 minutos, 525,2 [M+H+], tiempo de retencion = 4,875 minutos.
Etapa 2. Smtesis de N2-[(9H-fluoren-9-ilmetoxi)carbonil]-N-[(3R,4S,5S)-3-metoxi-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-1-metoxi-2-metil-3-oxo-3-{[(1S)-2-fenil-1-(1,3-tiazol-2-il)etil]amino}propil]pirrolidin-1-il}-5-metil-1-oxoheptan-4-il]-A/-metil-L-valinamida (n.o 49). A una solucion de n.o 48 (1,8 g, <2,1 mmol, 1 equiv.) y cianofosfonato de dietilo (DEPC) (0,51 g, 3,2 mmol, 1,5 equiv.) en 1,2-dimetoxietano (30 ml, 0,07 M) a 0 oc se anadio trietilamina (1,47 ml, 10,6 mmol, 5 equiv.). Despues de agitar a temperatura ambiente durante 2 horas, la mezcla se concentro al vaem y el residuo se purifieo por eromatograffa sobre gel de silice (de 10 % a 50 % de acetato de etilo en eter de petroleo) para dar n.o 49 (0,8 g, 45 %). Fr 0,6 (metanol al 10 % en diclorometano); CL-EM (Protocolo K): m/z 881,3 [M+H+], 903,3 [M+Na+], tiempo de retencion = 4,837 minutos.
Etapa 3. Smtesis de N-[(3R,4S,5S)-3-metoxi-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-1-metoxi-2-metil-3-oxo-3-{[(1S)-2-fenil-1-(1,3-tiazol-2- il)etil]amino}propil]pirrolidin-1-il}-5-metil-1-oxoheptan-4-il]-N-metil-L-valinamida (n.o 50). De acuerdo con procedimiento general A, a partir de n.o 49 (0,70 g, 0,79 mmol, 1 equiv.), diclorometano (15 ml, 0,05 M) y dietilamina (10 ml) se sintetizo n.o 50 (160 mg, 30 %) despues de la purificacion por eromatograffa sobre gel de sniee (Gradiente: de 0% a 5% de metanol en diclorometano). Fr 0,4 (metanol al 10% en diclorometano); CL-EM (Protocolo K): m/z 658,3 [M+H+], 680,3 [M+Na+], tiempo de retencion = 2,760 minutos.
Etapa 4A. Smtesis de N2-[(1-aminociclopropil)earbonil]-N-[(3R,4S,5S)-3-metoxi-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-1-metoxi-2-metil-3- oxo-3-{[(1S)-2-fenil-1-(1,3-tiazol-2-il)etil]amino}propil]pirrolidin-1-il}-5-metil-1-oxoheptan-4-il]-N-metil-L-valinamida (n.0 51). A una solucion de n.0 50 (100 mg, 0,15 mmol, 1 equiv.), hexafluorofosfato de bromotris(dimetilamino)fosfonio (Brop, 70 mg, 0,18 mmol, 1,2 equiv.) y diisopropiletilamina (0,08 ml, 0,45 mmol, 3 equiv.) en diclorometano (15 ml, 0,01 M) a 00C se anadio acido 1-aminoddopropanocarbox^lico (18 mg, 0,18 mmol, 1,2 equiv.). Despues de 2 horas, la mezcla se inactivo con agua y se extrajo dos veces con acetato de etilo. Las fases organicas combinadas se secaron con sulfato sodico, se filtraron y se concentraron al vado. El residuo se purifico por cromatograffa sobre gel de silice (Gradiente: de 0 % a 5 % de metanol en diclorometano) para dar n.o 51 (45 mg, 34 %). Fr 0,5 (metanol al 10 % en diclorometano). CL-EM (Protocolo l): m/z 741,44 [M+H+]; RMN 1H (300 MHz , DMSO-d6), presuntamente una mezcla de rotameros, senales caractensticas: 6 [8,64 (d a, J = 8 Hz ) y 8,88 (d a, J = 8 Hz ), total 1H], [8,16 (d a, J = 9 Hz ) y 8,22 (d a, J = 10 Hz ), total 1H], [7,77 (d, J = 3,5 Hz ) y 7,79 (d, J = 3,5 Hz ), total 1H], [7,63 (d, J = 3,5 Hz ) y 7,65 (d, J = 3 Hz ), total 1H], 7,10-7,32 (m, 5H), 5,33-5,60 (m, 1H), 3,16, 3,20, 3,21 y 3,26 (4 s , total 6H), 2,93 y 3,02 (2 s a, total 3H), [1,05 (d, J = 6,3 Hz ) y 1,10 (d, J = 6,3 Hz ), total 3H].
Etapa 4B. Smtesis de 1-amino-N-[(2S)-1-{[(3R,4S,5S)-3-metoxi-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-1-metoxi-2-metil-3-oxo-3-{[(1S)-2-fenil-1-(1,3-tiazol-2-il)etil]amino}propil]pirrolidin-1-il}-5-metil-1-oxoheptan-4-il](metil)amino}-3-metil-1-oxobutan-2-il]ciclohexanocarboxamida (n.o 52). A una solucion de n.o 50 (120 mg, 0,18 mmol, 1 equiv.), Brop (84 mg, 0,21 mmol, 1,2 equiv.) y diisopropiletilamina (0,1 ml, 0,54 mmol, 3 equiv.) en diclorometano (15 ml, 0,009 M) a 0 oc se anadio acido 1-aminocidohexanocarboxflico (31 mg, 0,21 mmol, 1,2 equiv.). Despues de 2 horas, la mezcla se inactivo con agua y se extrajo dos veces con acetato de etilo. Las fases organicas combinadas se secaron con sulfato sodico, se filtraron y se concentraron al vado. El residuo se purifico por cromatograffa sobre gel de sflice (Gradiente: de 0 % a 5 % de metanol en diclorometano) para dar n.o 52 (50 mg, 35 %). Fr 0,6 (metanol al 10 % en diclorometano). CL-EM (Protocolo K): m/z 783,79 [M+H+]; R m N 1H (400 m Hz , DMSO-d6), presuntamente una mezcla de rotameros, senales caractensticas: 6 [8,64 (d a, J = 8 Hz ) y 8,87 (d a, J = 9 Hz ), total 1H], 8,18-8,28 (m, 1H), [7,77 (d, J = 3,5 Hz ) y 7,80 (d, J = 3,3 Hz ), total 1H], [7,63 (d, J = 3,3 Hz ) y 7,66 (d, J = 3,3 Hz ), total 1H], 7,12-7,31 (m, 5H), 5,35-5,43 y 5,49­ 5,57 (2 m, total 1H), [4,51 (dd, J = 9, 8 Hz ) y 4,61 (dd, J = 9, 7 Hz ), total 1H], 3,16, 3,19, 3,21 y 3,25 (4 s , total 6H), 2,93 y 3,02 (2 s a, total 3H), [1,05 (d, J = 6,8 Hz ) y 1,10 (d, J = 6,8 Hz ), total 3H].
Preparacion de 2-Metilalanil-W-[(3R,4S,5S)-3-metoxi-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-1-metoxi-2-metil-3-oxo-3-{[(1S)-2-fenil-1-(1,3-tiazol-2-il)etil]amino}propil]pirrolidin-1-il}-5-metil-1-oxoheptan-4-il]-W-metil-L-valinamida (n.o 54)
Figure imgf000087_0001
Etapa 1. Smtesis de N-[(9H-fluoren-9-ilmetoxi)carbonil]-2-metilalanil-N-[(3R,4S,5S)-3-metoxi-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-1-metoxi-2-metil-3-oxo-3-{[(1S)-2-fenil-1-(1,3-tiazol-2-il)etil]amino}propil]pirrolidin-1-il}-5-metil-1-oxoheptan-4-il]-N-metil-L-valinamida (n.o 53). De acuerdo con procedimiento general D, a partir de n.o 32 (2,05 g, 2,83 mmol, 1 equiv.) en diclorometano (20 ml, 0,1 M) y N,N-dimetilformamida (3 ml), la amina n.o 19 (2,5 g, 3,4 mmol, 1,2 equiv.), h A t U (1,29 g, 3,38 mmol, 1,2 equiv.) y trietilamina (1,57 ml, 11,3 mmol, 4 equiv.) se sintetizo el material en bruto deseado, que se purifico por cromatograffa sobre gel de sflice (Gradiente: de 0 % a 55 % de acetona en heptano), produciendo n.o 53 (2,42 g, 74 %) en forma de un solido. CL-EM: m/z 965,7 [M+H+], 987,6 [M+Na+], tiempo de retencion = 1,04 minutos; HPLC (Protocolo A): m/z 965,4 [M+H+], tiempo de retencion = 11,344 minutos (pureza > 97%); RMN 1H (400 MHz , DMSO-d6), presuntamente una mezcla de rotameros, senales caractensticas: 67,86-7,91 (m, 2H), [7,77 (d, J = 3,3 Hz ) y 7,79 (d, J = 3,2 Hz ), total 1H], 7,67-7,74 (m, 2H), [7,63 (d, J = 3,2 Hz ) y 7,65 (d, J = 3,2 Hz ), total 1H], 7,38-7,44 (m, 2H), 7,30-7,36 (m, 2H), 7,11-7,30 (m, 5H), [5,39 (ddd, J = 11,4, 8,4, 4,1 Hz ) y 5,52 (ddd, J = 11,7, 8,8, 4,2 Hz ), total 1H], [4,49 (dd, J = 8,6, 7,6 Hz ) y 4,59 (dd, J = 8,6, 6,8 Hz ), total 1H], 3,13, 3,17, 3,18 y 3,24 (4 s , total 6H), 2,90 y 3,00 (2 s a, total 3H), 1,31 y 1,36 (2 s a, total 6H), [1,05 (d, J = 6,7 Hz ) y 1,09 (d, J = 6,7 Hz ), total 3H].
Etapa 2. Smtesis de 2-metilalanil-N-[(3R,4S,5S)-3-metoxi-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-1-metoxi-2-metil-3-oxo-3-{[(1S)-2-fenil-1-(1,3-tiazol-2-il)etil]amino}propil]pirrolidin-1-il}-5-metil-1-oxoheptan-4-il]-N-metil-L-valinamida (n.o 54). De acuerdo con procedimiento general A, a partir de n.o 53 (701 mg, 0,726 mmol) en diclorometano (10 ml, 0,07 M) se sintetizo el material en bruto deseado, que se purifico por cromatograffa sobre gel de silice (Gradiente: de 0 % a 10 % de metanol en diclorometano). El residuo se diluyo con eter diefflico y heptano y se concentro al vado para proporcionar n.054 (406 mg, 75 %) en forma de un solido de color bianco. CL-EM: m/z 743,6 [M+H+], tlempo de retenclon = 0,70 mlnutos; HPLC (Protocolo A): m/z 743,4 [M+H+], tiempo de retencion = 6,903 minutos, (pureza > 97 %); RMN 1H (400 MHz , DMSO-d6), presuntamente una mezcla de rotameros, senales caractensticas: 6 [8,64 (d a, J = 8,5 Hz ) y 8,86 (d a, J = 8,7 Hz ), total 1H], [8,04 (d a, J = 9,3 Hz ) y 8,08 (d a, J = 9,3 Hz ), total 1H], [7,77 (d, J = 3,3 Hz ) y 7,80 (d, J = 3,2 Hz ), total 1H], [7,63 (d, J = 3,3 Hz ) y 7,66 (d, J = 3,2 Hz ), total 1H], 7,13-7,31 (m, 5H), [5,39 (ddd, J = 11, 8,5, 4 Hz ) y 5,53 (ddd, J = 12, 9, 4 Hz ), total 1H], [4,49 (dd, J = 9, 8 Hz ) y 4,60 (dd, J = 9, 7 Hz ), total 1H], 3,16, 3,20, 3,21 y 3,25 (4 s , total 6H), 2,93 y 3,02 (2 s a, total 3H), 1,21 (s , 3H), 1,13 y 1,13 (2 s , total 3H), [1,05 (d, J = 6,7 Hz ) y 1,10 (d, J = 6,7 Hz ), total 3H], 0,73-0,80 (m, 3H).
Preparacion de 2-Metilalanil-W-{(3R,4S,5S)-3-metoxi-1-[(2S)-2-{(1R,2R)-1-metoxi-2-metil-3-oxo-3-[(2-feniletil)amino]propil}pirrolidin-1-il]-5-metiM-oxoheptan-4-il}-W-metil-L-valinamida, sal de acido acetico (n.o 56)
Figure imgf000088_0001
Etapa 1. Smtesis de W-[(9H-fluoren-9-ilmetoxi)carbonil]-2-metilalanil-W-{(3R,4S,5S)-3-metoxi-1-[(2S)-2-{(1R,2R)-1-metoxi-2-metil-3-oxo-3-[(2-feniletil)amino]propil}pirrolidin-1-il]-5-metil-1-oxoheptan-4-il}-W-metil-L-valinamida (n.o 55). A una solucion de n.o 24 (104 mg, 0,256 mmol, 1 equiv.) en diclorometano (10 ml, 0,094 M) se anadieron n.o 32 (156 mg, 0,256 mmol, 0,9 equiv.), diisopropiletilamina (135 pi, 0,768 mmol, 3 equiv.) y HATU (120 mg, 0,307 mmol, 1,2 equiv.). Despues de agitar durante 18 horas, la mezcla se concentro al vado y el residuo se diluyo con acetato de etilo (10 ml), se lavo con una solucion acuosa 1 M de acido clorfndrico (2 x 5 ml) y con salmuera, se seco sobre sulfato sodico, se filtro y se concentro al vado. El residuo se diluyo con diclorometano y se filtro. El filtrado se concentro a presion reducida sobre s l^ice y se purifico por cromatograffa sobre gel de silice (Gradiente: de 0 % a 100 % de acetato de etilo en heptano) para dar n.o 55 (44 mg, 19 %) en forma de un solido de color bianco. CL-EM: m/z 884,5 [M+2H+], tiempo de retencion = 1,04 minutos.
Etapa 2. Smtesis de 2-metilalanil-W-{(3R,4S,5S)-3-metoxi-1-[(2S)-2-{(1R,2R)-1-metoxi-2-metil-3-oxo-3-[(2-feniletil)amino]propil}pirrolidin-1-il]-5-metil-1-oxoheptan-4-il}-A/-metil-L-valinamida, sal de acido acetico (n.o 56). A una mezcla de n.o 55 (44 mg, 0,050 mmol, 1 equiv.) en tetrahidrofurano (1 ml, 0,05 M) se anadio dietilamina (0,5 ml). Despues de agitar durante 18 horas, la mezcla de reaccion se concentro al vado y el residuo se purifico por cromatograffa de fase inversa (Procedimiento B) para dar n.o 56 (16,2 mg, 49 %) en forma de un solido. CL-EM: m/z 660,8 [M+H+], tiempo de retencion = 2,23 minutos; HPLC (Protocolo A): m/z 660,5 [M+H+], 682,4 [M+Na+], tiempo de retencion = 6,865 minutos.
Preparacion de 2-Metilalanil-W-[(3R,4S,5S)-3-metoxM-{2S)-2-[(1R,2R)-1-metoxi-2-metil-3-oxo-3-{[(1-fenilciclopropil)metil]amino}propil]pirrolidin-1-il}-5-metil-1-oxoheptan-4-il]-W-metil-L-valmamida (n.° 60)
Figure imgf000089_0001
Etapa 1. Smtesis de 1-(1-fenilciclopropil)metanamina n.°@1. A una solucion de 1-fenilciclopropanocarbonitrilo (50 g, 0,34 mol, 1 equiv.) en tetrahidrofurano (500 ml, 0,7 M) a 00C se anadio hidruro de litio y aluminio (23 g, 0,35 mol, 1,03 equiv.). La mezcla de reaccion se agito a 0 oc durante una hora y despues a reflujo durante una hora. Despues, la mezcla de reaccion se enfrio y se inactivo con agua (23 ml) y una solucion acuosa al 15% hidroxido sodico acuoso (69 ml). La mezcla se filtro y se concentro al vado para proporcionar n.°@1 (36 g, 72 %). CL-EM: m/z 148,1 [M+H+], tiempo de retencion = 0,86 minutos; RMN 1H (400 MHz , CDCIs) 67,2-7,4 (m, 5H), 2,78 (s, 2H), 1,19 (s a, 2H), 0,72-0,84 (m, 4H).
Etapa 2. Smtesis de (2S)-2-[(1R,2R)-1-metoxi-2-metil-3-oxo-3-{[(1-fenilciclo propil)metil]amino}propil]pirrolidin-1-carboxilato de terc-butilo (n.° 57). De acuerdo con procedimiento general D, a partir de n.° l l (2,15 g, 7,48 mmol, 1,1 equiv.) en diclorometano (20 ml, 0,3 M) y W,W-dimetilformamida (4 ml), 1-(1-fenilciclopropil)metanamina n.°@1 (1,001 g, 6,799 mmol, 1 equiv.), HATU (3,10 g, 8,16 mmol, 1,2 equiv.) y trietilamina (2,84 ml, 20,4 mmol, 3 equiv.) se sintetizo el material en bruto deseado, que se purifico por cromatograffa sobre gel de silice (Gradiente: de 0 % a 100 % de acetato de etilo en heptano), produciendo n.° 57 (1,93 g, 68 %) en forma de un solido. HPLC (Protocolo A a 45 oc): m/z 417,3 [M+H+], tiempo de retencion = 10,575 minutos; RMN 1H (400 MHz , DMSO-d6), se presume que es una mezcla de rotameros: 6 7,75-7,81 (m, 1H), 7,20-7,27 (m, 4H), 7,12-7,19 (m, 1H), 3,33-3,62 y 3,71-3,80 (multipletes a, total 4H), 3,28 (s, 3H), 2,97-3,17 (m a, 2H), 2,14-2,24 (m, 1H), 1,67-1,80 (m a, 2H), 1,45-1,65 (m, 2H), 1,41 (s, 9H), 1,00 (d, J = 6,6 Hz , 3H), 0,67-0,93 (m, 4H).
Etapa 3. Smtesis de (2R,3R)-3-metoxi-2-metil-W-[(1-fenilciclopropil)metil]-3-[(2S)-pirrolidin-2-il]propanamida, sal clorhidrato (n.° 58). De acuerdo con procedimiento general C, a partir de n.° 57 (566 mg, 1,36 mmol, 1 equiv.) en dioxano (4 ml, 0,3 M) y una solucion 4 M de acido clorhndrico en dioxano (4 ml, 16 mmol, 11,7 equiv.) se sintetizo n.° 58 (466 mg, 97%); CL-EM: m/z 318,2 [M+H+], 339,2 [M+Na+], tiempo de retencion = 0,56 minutos; RMN 1H (400 MHz , DMSO-d6) 69,53 (s a, 1H), 8,48 (s a, 1H), 8,11 (dd a, J = 5,7, 5,6 Hz , 1H), 7,23-7,30 (m, 4H), 7,14-7,21 (m, 1H), 3,58 (dd, J = 7,5, 3,9 Hz , 1H), 3,50 (dd, J = 13,7, 6,3 Hz , 1H), 3,34 (s, 3H), 3,21-3,29 (m a, 1H), 3,18 (dd, J = 13,8, 5,0 Hz , 1H), 3,04-3,13 (m a, 2H), 2,42-2,50 (m, 1H), 1,56-1,89 (m, 4H), 1,04 (d, J = 6,9 Hz , 3H), 0,71-0,91 (m, 4H).
Etapa 4. Smtesis de W-[(9H-fluoren-9-ilmetoxi)carbonil]-2-metilalanil-W-[(3R,4S,5S)-3-metoxi-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-1-metoxi-2-metil-3-oxo-3-{[(1-fenilciclopropil)metil]amino}propil]pirrolidin-1-il}-5-metil-1-oxo-heptan-4-il]-A/-metil-L-valinamida (n.° 59). De acuerdo con procedimiento general D, a partir de n.° 32 (550 mg, 0,902 mmol, 1 equiv.), n.° 58 (350 mg, 0,992 mmol, 1,1 equiv.) diclorometano (10 ml, 0,08 M) y W,W-dimetilformamida (2 ml), HATU (446 mg, 1,17 mmol, 1,3 equiv.) y trietilamina (0,503 ml, 3,61 mmol, 4 equiv.) se sintetizo el material en bruto deseado, que se purifico por cromatograffa sobre gel de silice (Gradiente: de 0 % a 30 % de acetona en heptano), produciendo n.° 59 (618 mg, 69 %) en forma de un solido de color blanquecino. CL-EM: m/z 908,7 [M+H+], 930,7 [M+Na+], tiempo de retencion = 1,07 minutos; HPLC (Protocolo B a 45 oc): m/z 908,5 [M+H+], tiempo de retencion = 8,721 minutos (pureza > 97 %); RMN 1H (400 MHz , DMSO-d6), presuntamente una mezcla de rotameros, senales caractensticas: 6 7,89 (d, J = 7,5 Hz , 2H), 7,38-7,44 (m, 2H), 7,30-7,36 (m, 2H), [4,49 (dd, J = 8,5, 7,8 Hz ) y 4,59 (dd, J = 8,7, 6,9 Hz), total 1H], 4,18-4,26 (m, 3H), 3,93-4,01 (m a, 1H), 3,23 y 3,26 (2 s, total 3H), 3,16 y 3,16 (2 s, total 3H), 2,91 y 3,05 (2 s a, total 3H), 1,36 y 1,37 (2 s a, total 3H), 1,30 y 1,32 (2 s a, total 3H), [1,00 (d, J = 6,7 Hz) y 1,02 (d, J = 6,6 Hz ), total 3H], 0,67-0,78 (m, 7H).
Etapa 5. Smtesis de 2-metilalanil-A/-[(3R,4S,5S)-3-metoxi-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-1-metoxi-2-metil-3-oxo-3-{[(1-fenilciclopropil)metil]amino}propil]pirrolidin-1-il}-5-metil-1-oxoheptan-4-ilj-W-metil-L-valinamida (n.° 60). De acuerdo con procedimiento general A, a partir de n.° 59 (605 mg, 0,666 mmol, 1 equiv.) diclorometano (10 ml, 0,067 M) y dietilamina (10 ml) se sintetizo n.060 (379 mg, 83%); HPLC (Protocolo A a 450C) m/z 685,5 [M+H+], tiempo de retencion = 7,072 minutos; RMN 1H (400 MHz , DMSO-d6), presuntamente una mezcla de rotameros, senales caractensticas: 6 [8,03 (d a, J = 9,6 Hz ) y 8,07 (d a, J = 9,4 Hz ), total 1H], [7,74 (dd a, J = 7, 4 Hz ) y 7,99 (dd a, J = 5,9, 5,7 Hz ), total 1H], 7,20-7,27 (m, 4H), 7,11-7,17 (m, 1H), [4,49 (dd, J = 9, 7 Hz ) y 4,58 (dd, J = 9, 7,5 Hz ), total 1H], 3,96-4,04 (m a, 1H), 3,24 y 3,27 (2 s , total 3H), 3,18 y 3,19 (2 s , total 3H), 2,93 y 3,07 (2 s a, total 3H), 1,20 y 1,21 (2 s , total 3H), 1,12 y 1,14 (2 s , total 3H), [1,00 (d, J = 6,7 Hz ) y 1,03 (d, J = 6,7 Hz ), total 3H].
Preparacion de 2-Metilalanil-W-[(3R,4S,5S)-1-£(2S)-2-[(1R,2R)-3-£[2-(dclohepta-2,4,6-trien-1-il)etil]amino}-1-metoxi-2-metil-3-oxopropil]pirrolidin-1-il}-3-metoxi-5-metiM-oxoheptan-4-il]-W-metil-L-valinamida (n.o 66)
Figure imgf000090_0001
Etapa 1. Smtesis de ciclohepta-2,4,6-trien-1-ilacetonitrilo (n.o 61). A una solucion de acetonitrilo anhidro (3,12 ml, 56,2 mmol, 1 equiv.) en tetrahidrofurano (281 ml, 0,2 m ) se anadio diisopropilamina de litio (1,8 M en heptano/ etilbenceno/ tetrahidrofurano, 31,2 ml, 56,2 mmol, 1 equiv.) a -78 oc. Despues de 20 minutos a -78 oc, se anadio tetrafluoroborato de tropilio (10 g, 56 mmol, 1 equiv.). Despues de 10 minutos, la reaccion se concentro al vad o y el residuo se diluyo con acetato de etilo y se lavo con agua. La fase organica se seco sobre sulfato sodico, se filtro y se concentro al vad o para proporcionar un aceite de color pardo, que se purifico por cromatograffa sobre gel de sflice (Gradiente: de 0 % a 10 % de acetato de etilo en heptano) para proporcionar n.o 61 (1,88 g, 25 %) en forma de un aceite de color amarillo. RMN 1H (400 MHz, CDCIs) 66,69-6,71 (m, 2H), 6,27-6,32 (m, 2H), 5,28-5,33 (m, 2H), 2,61 (d, J = 7,2 Hz , 2H), 2,26-2,34 (m, 1H).
Etapa 2. Smtesis de 2-(ciclohepta-2,4,6-trien-1-il)etanamina (n.o 62). A una suspension de hidruro de litio y aluminio (911 mg, 24,0 mmol, 1,4 equiv.) en eter dietilico anhidro (75 ml, 0,23 M) a 0 oc se anadio lentamente, gota a gota durante 15 minutos, una solucion de n.o 61 (2,25 g, 17,2 mmol, 1 equiv.) en eter dietflico (15 ml). La reaccion se calento a temperatura ambiente. Despues de 5 horas, la reaccion se enfrio a 0 oc y se interrumpio mediante la adicion de agua (1 ml), despues se filtro a traves de un lecho pequeno de Celite y se lavo con metanol. El filtrado se seco sobre sulfato sodico, se filtro y se concentro al vad o para proporcionar n.o 62 (1,683 g, 73 %) en forma de un aceite de color dorado. CL-EM: m/z 136,1 [M+H+], tiempo de retencion = 0,23 minutos; RMN 1H (400 MHz , CDCI3) 6 6,64-6,67 (m, 2H), 6,16-6,21 (m, 2H), 5,16-5,21 (m, 2H), 2,84-2,89 (m, 2H), 1,86-1,92 (m, 2H), 1,62-1,70 (m, 1H). Etapa 3. Smtesis de (2S)-2-[(1R,2R)-3-{[2-(ciclohepta-2,4,6-trien-1-il)etil]amino}-1-metoxi-2-metil-3-oxopropil]pirrolidin-1-carboxilato de terc-butilo (n.o 63). A una solucion de n.o 11 (3,57 g, 12,4 mmol, 1 equiv.) en diclorometano (100 ml, 0,1 M) y A/,W-dimetilformamida (4 ml) se anadio HATU (5,36 g, 13,7 mmol, 1,1 equiv.). Despues de 20 minutos, se anadio trietilamina (5,20 ml, 37,3 mmol, 3 equiv.), seguido de n.o 62 (1,68 g, 12,4 mmol, 1 equiv.) y la mezcla se agito durante 18 horas. La reaccion se concentro al vad o y el residuo se recogio en acetato de etilo y se lavo con agua (50 ml). La fase acuosa se extrajo de nuevo con acetato de etilo (3 times) y las fases organicas combinadas se secaron, se filtraron y se concentraron al vad o para proporcionar un aceite de color pardo, que se purifico por cromatograffa sobre gel de sflice (Gradiente: de 0 % a 100 % de acetato de etilo en heptano) para proporcionar n.o 63 (2,95 g, rendimiento del 59 %) en forma de un aceite viscoso. CL-EM: m/z 405,4 [M+H+], 427,4 [M+Na+], tiempo de retencion = 0,75 minutos; RMN 1H (400 MHz , CDCI3), presuntamente una mezcla de rotameros: 6 6,63-6,68 (m, 2H), 6,16-6,23 (m, 2H), 5,19 (dd a, J = 9,0, 5,8 Hz , 2H), 3,51-3,63 y 3,71-3,90 (2 multipletes a, total 3H), 3,42 (s, 3H), 3,18-3,29 y 3,34-3,47 (2 multipletes a, total 3H), 2,27-2,45 (m a, 1H), 1,6-2,00 (m, 7H), 1,47 y 1,50 (2 s a, total 9H), 1,16-1,29 (m a, 3H).
Etapa 4. Smtesis de (2R,3R)-W-[2-(ciclohepta-2,4,6-trien-1-il)etil]-3-metoxi-2-metil-3-[(2S)-pirrolidin-2-il]propanamida, sal clorhidrato (n.o 64)
El Intermedio n.o 63 (400 mg, 0,989 mmol, 1 equiv.) se trato con una solucion 4 M de acido clorddrico en dioxano (10 ml, 40 mmol, 40 equiv.). Despues de 1 hora, la mezcla de reaccion se concentro al vad o y el residuo se recogio en diclorometano y se lavo con una solucion 1 M de hidroxido sodico. La fase acuosa se extrajo de nuevo con diclorometano y las fases organicas combinadas se secaron sobre sulfato sodico, se filtraron y se concentraron al vado para proporcionar n.064 (301 mg, cuantitativo) en forma de un aceite de color pardo, que comenzo a solidificarse lentamente tras un periodo de reposo. CL-EM: m/z 305,3 [M+H+], tiempo de retention = 0,54 minutos; HPLC (Protocolo G): tiempo de retencion = 4,848 minutos; RMN 1H (4o0 m Hz , CDCI3), senales caractensticas: 5 6,64-6,67 (m, 2H), 6,16-6,22 (m, 2H), 6,08-6,14 (m a, 1H), 5,16-5,22 (m, 2H), 3,44 (s, 3H), 3,31 (dd, J = 6,3, 4,5 Hz , 1H), 2,98-3,04 (m, 1H), 2,94 (ddd, J =10,5, 7,2, 5,6 Hz , 1H), 2,81 (ddd, J =10,5, 7,7, 6,7 Hz , 1H), 2,57 (cd, J = 7,1,4,5 Hz , 1H), 1,90-1,97 (m, 2H), 1,49-1,55 (m, 1H), 1,18 (d, J = 7,1 Hz , 3H).
Etapa 5. Smtesis de N-[(9H-fiuoren-9-iImetoxi)carboniI]-2-metiIaIaniI-N-[(3R,4S,5S)-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-3-{[2-(cicIohepta-2,4,6-trien-1-iI)etiI]amino}-1-metoxi-2-metiI-3-oxopropiI]pirroIidin-1-iI}-3-metoxi-5-metiI-1-oxoheptan-4-iI]-A/-metil-L-valinamida (n.o 65). De acuerdo con procedimiento general D, a partir de n.o 32 (678 mg, 0,937 mmol, 1 equiv.) en diclorometano (9,37 ml, 0,1 M), la amina n.o 64 (300 mg, 0,985 mmol, 1,1 equiv.), HAt U (427 mg, 1,12 mmol, 1,2 equiv.) y diisopropiletilamina (494 gl, 2,81 mmol, 3 equiv.) se sintetizo el material en bruto deseado, que se purifico por cromatografia sobre gel de sflice (Gradiente: de 0 % a 50 % de acetona en heptano), produciendo n.o 65 (546 mg, 65%) en forma de un solido. CL-Em : m/z 896,7 [M+H+], 918,7 [M+Na+], tiempo de retencion = 1,06 minutos.
Etapa 6. Smtesis de 2-metiIaIaniI-N-[(3R,4S,5S)-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-3-{[2-(cicIohepta-2,4,6-trien-1-iI)etiI]amino}-1-metoxi-2-metiI-3-oxopropiI]pirroIidin-1-iI}-3-metoxi-5-metiI-1-oxoheptan-4-iI]-A/-metiI-L-vaIinamida (n.o 66). A una solucion de n.o 65 (540 mg, 0,603 mmol, 1 equiv.) en diclorometano (10 ml, 0,06 M) se anadio trietilamina (10 ml) y la mezcla de reaction se agito durante 2 horas. La mezcla se concentro al vad o y el residuo se purifico por cromatografia sobre gel de sflice (Gradiente: de 0 % a 10 % de metanol en diclorometano) para dar n.o 66 (347 mg, 85 %) en forma de un solido incoloro. HPLC (Protocolo A a 45 °C): m/z 674,5 [M+H+], tiempo de retencion = 7,015 minutos. RMN 1H (400 MHz , DMSO-d6), presuntamente una mezcla de rotameros, senales caractensticas: 5 [8,03 (d a, J = 9 Hz) y 8,05 (d a, J = 9 Hz), total 1H], [7,77 (dd a, J = 5,5, 5,5 Hz) y 7,98 (dd a, J = 5,5, 5,5 Hz), total 1H], 6,54­ 6,65 (m, 2H), 6,10-6,19 (m, 2H), 5,11-5,19 (m, 2H), [4,48 (dd, J = 9, 8 Hz) y 4,54 (dd, J = 9, 7,5 Hz), total 1H], 3,94­ 4,04 (m a, 1H), 3,26 y 3,29 (2 s, total 3H), 3,17 y 3,19 (2 s, total 3H), 2,93 y 3,06 (2 s a, total 3H), 1,20 y 1,21 (2 s, total 3H), 1,12 y 1,13 (2 s, total 3H), [1,04 (d, J = 6,8 Hz) y 1,07 (d, J = 6,7 Hz), total 3H].
Preparacion de 2-Metilalanil-A#-[(3R,4S,5S)-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-3-{[(1S)-1-carboxi-2-feniletil]amino}-1-metoxi-2-metil-3-oxopropil]pirrolidin-1-il}-3-metoxi-5-metil-1-oxoheptan-4-il]-W-metil-L-valinamida (n.o 69) y 2-metilalanil-W-[(3R,4S,5S)-3-metoxi-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-1 -metoxi-3-{[(2S)-1-metoxi-1-oxo-3-fenilpropan-2-il]amino}-2-metil-3-oxopropil]pirrolidin-1-il}-5-metil-1-oxoheptan-4-il]-W-metil-L-valinamida (n.o 70)
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Etapa 1. Smtesis de N-{(2R,3R)-3-metoxi-2-metiI-3-[(2S)-pirroIidin-2-iI]propanoiI}-L-feniIaIaninato de metilo, sal clorhidrato (n.o 67). De acuerdo con procedimiento general C, a partir de n.o 37 (2,39 g, 5,33 mmol, 1 equiv.), dioxano (10 ml, 0,53 M) y una solucion 4 M de acido clorddrico en dioxano (10 ml, 40 mmol, 7,5 equiv.) se sintetizo n.o 67 (2,21 g) en forma de un solido de color blanco, que se uso en la siguiente etapa sin purification adicional. CL­ EM: m/z 349,2 [M+H+], tiempo de retencion = 0,53 minutos; RMN 1H (400 M Hz , DMSO-d6) 59,45-9,58 (m a, 1H), 8,63 (d, J = 8,1 Hz , 1H), 8,51-8,62 (m a, 1H), 7,25-7,33 (m, 4H), 7,18-7,25 (m, 1H), 4,50 (ddd, J =10,8, 8,1, 4,5 Hz , 1H), 3,65 (s , 3H), 3,54 (dd, J = 6,8, 4,5 Hz , 1H), 3,20 (s , 3H), 3,11 (dd, J = 13,8, 4,5 Hz , 1H), 2,99-3,14 (m a, 3H), 2,89 (dd, J = 13,8, 10,9 Hz , 1H), 2,44-2,50 (m, 1H, supuesto; parcialmente oscurecido por pico de disolvente), 1,77­ 1,89 (m, 1H), 1,60-1,73 (m, 2H), 1,46-1,57 (m, 1H), 1,05 (d, J = 6,8 Hz , 3H).
Etapa 2. Smtesis de A/-[(9H-fluoren-9-ilmetoxi)carbonil]-2-metilalanil-A/-[(3R,4S,5S)-3-metoxi-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-1-metoxi-3-{[(2S)-1-metoxi-1-oxo-3-fenilpropan-2-il]amino}-2-metil-3-oxopropil]pirrolidin-1-il}-5-metil-1-oxoheptan-4-il]-W-metil-L-valinamida (n.068). De acuerdo con procedimiento general D, a partir de n.032 (353 mg, 0,488 mmol, 1 equiv.) en diclorometano (10 ml, 0,04 M), la amina n.o 67 (271 mg, <0,588 mmol, 1,3 equiv.), HATU (223 mg, 0,586 mmol, 1,2 equiv.) y diisopropiletilamina (238 pi, 1,71 mmol, 3,5 equiv.) se sintetizo el material en bruto deseado, que se purifico por cromatograffa sobre gel de sHice (Gradiente: de 0 % a 40 % de acetona en heptano), proporcionando n.o 68 (404 mg, 88 % en dos etapas) en forma de un solido. CL-EM: m/z 940,7 [M+H+], 962,7 [M+Na+], tiempo de retencion = 1,o4 minutos; HPLC (Protocolo C): tiempo de retencion = 9,022 minutos; RMN 1H (40o MHz , DMSO-d6), presuntamente una mezcla de rotameros, senales caracteristicas: 5 [8,25 (d a, J = 8 Hz ) y 8,48 (d a, J = 8 Hz ), total 1H], 7,89 (d, J = 7,4 Hz , 2H), 7,67-7,75 (m, 2H), 7,38-7,44 (m, 2H), 7,31-7,36 (m, 2H), 7,14-7,24 (m, 5H), 4,43-4,69 (m, 3H), 4,17-4,26 (m, 3H), 3,91-3,99 (m a, 1H), 3,63 y 3,65 (2 s , total 3H), 3,19 y 3,24 (2 s , total 3H), 3,14 y 3,15 (2 s , total 3H), 2,90 y 2,99 (2 s a, total 3H), 1,36 y 1,37 (2 s a, total 3H), 1,30 y 1,32 (2 s , total 3H), [1,02 (d, J = 6,8 Hz ) y 1,06 (d, J = 6,6 Hz ), total 3H].
Etapa 3A. Smtesis de 2-metilalanil-W-[(3R,4S,5S)-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-3-{[(1S)-1-carboxi-2-feniletil]amino}-1-metoxi-2-metil-3-oxopropil]pirrolidin-1-il}-3-metoxi-5-metil-1-oxoheptan-4-il]-A/-metil-L-valinamida, sal de acido trifluoroacetico (n.o 69). A una solucion de n.o 68 (143 mg, 0,152 mmol, 1 equiv.) en tetrahidrofurano (5 ml, 0,02 M) se anadio una solucion de hidroxido de litio (9,10 mg, 0,378 mmol, 2,5 equiv.) en agua (3 ml). Despues de 5 horas, la reaccion se concentro al vado, se destilo azeotropicamente tres veces con heptano, se disolvio en dimetilsulfoxido (2,2 ml) y se purifico por cromatograffa de fase inversa (Procedimiento C) para dar n.o 69 (56 mg, 52 %). HPLC (Protocolo A a 450C): 704,4 [M+H+], tiempo de retencion = 6,623 minutos; RMN 1H (400 M h z , DMSO-da), presuntamente una mezcla de rotameros, senales caracteristicas: 58,08-8,22 y 8,37-8,49 (2 m, total 5H), 7,12-7,28 (m, 5H), 3,18, 3,20 y 3,24 (3 s , total 6H), 2,95 y 3,04 (2 s a, total 3H), 1,52 y 1,53 (2 s , total 3H), 1,39 y 1,41 (2 s , total 3H), [1,02 (d, J = 6,8 Hz ) y 1,05 (d, J = 6,6 Hz ), total 3H], 0,74-0,81 (m, 3H).
Etapa 3B. Smtesis de 2-metilalanil-A/-[(3R,4S,5S)-3-metoxi-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-1-metoxi-3-{[(2S)-1-metoxi-1-oxo-3-fenilpropan-2-il]amino}-2-metil-3-oxopropil]pirrolidin-1-il}-5-metil-1-oxoheptan-4-il]-W-metil-L-valinamida (n.o 70). De acuerdo con procedimiento general A, a partir de n.o 68 (240 mg, 0,255 mmol, 1 equiv.), diclorometano (10 ml, 0,026 M) y dietilamina (10 ml) se sintetizo n.o 7o (120 mg, 65 %) en forma de una mezcla de solido/cristal de color bianco despues de cromatograffa sobre gel de sflice (Gradiente: de 0% a 10% de metanol en diclorometano). HPLC (Protocolo A a 45 oc): m/z 762,7 [M+H+], 740,4 [M+Na+], tiempo de retencion = 6,903 minutos; RMN 1H (400 MHz , DMSO-d6), presuntamente una mezcla de rotameros, senales caracteristicas: 5 [8,26 (d, J = 8,1 Hz ) y 8,49 (d, J = 8,3 Hz ), total 1H], [8,03 (d, J = 9,5 Hz ) y 8,07 (d, J = 9,5 Hz ), total 1H], 7,14-7,27 (m, 5H), 3,63 y 3,67 (2 s , total 3H), 3,16, 3,18, 3,20 y 3,25 (4 s , total 6H), 2,92 y 3,01 (2 s a, total 3H), 1,20 y 1,22 (2 s , total 3H), 1,12 y 1,13 (2 s , total 3H), [1,02 (d, J = 6,8 Hz ) y 1,06 (d, J = 6,7 Hz ), total 3H], 0,74-0,80 (m, 3H).
Preparacion de W2-[(3-Aminooxetan-3-il)carbonil]-W-{(3R,4S,5S)-3-metoxM -[(2S)-2-{(1 R,2R)-1-metoxi-2-metil-3-oxo-3-[(2-feniletil)amino]propil}pirrolidin-1-il]-5-metii-1-oxoheptan-4-il}-W-metil-L-valinamida, sal de acido acetico (n.o 75)
Etapa 1. Smtesis de acido 3-[(terc-butoxicarbonil)amino]oxetano-3-carbox^lico (n.071). A acido 1-aminooxetano-3-carboxflico (1,00 g, 8,54 mmol, 1 equiv.) en dioxano (15 ml, 0,5 M) se anadio una solucion de hidroxido sodico (1,55 g, 38,7 mmol, 4,5 equiv.) en agua (15 ml) seguido de dicarbonato de di-terc-butilo (2,09 g, 9,29 mmol, 1,1 equiv.) Se formo un solido de color bianco. La reaccion se agito durante 18 horas y despues se concentro al vado. El residuo se recogio en acetato de etilo y se lavo con una solucion acuosa 1 M de acido clorlddrico y con salmuera. La fase organica se seco sobre sulfato sodico, se filtro y se concentro al vado para dar n.o 71 (633 mg, 38 %) en forma de un solido de color bianco. RMN 1H (400 MHz , DMSO-d6), se presume que es una mezcla de rotameros: 612,93 (s a, 1H), 7,59 y 7,93 (2 s a, total 1H), 4,71-4,78 (m, 2H), 4,47 (d, J = 6,4 Hz , 2H), 1,30 y 1,38 (2 s, total 9H).
Etapa 2. Smtesis de W2-[(9H-fluoren-9-ilmetoxi)carbonil]-A/-{(3R,4S,5S)-3-metoxi-1-[(2S)-2-{(1R,2R)-1-metoxi-2-metil-3-oxo-3-[(2-feniletil)amino]propil}pirrolidin-1-il]-5-metil-1-oxoheptan-4-il}-W-metil-L-valinamida (n.o 72). A n.o@5 (9,47 g, 18,0 mmol, 1 equiv.) y n.o 24 (5,90 g, l8,0 mmol, 1 equiv.) en diclorometano (250 ml, 0,072 M) se anadieron diisopropiletilamina (9,52 ml, 54,2 mmol, 3 equiv.) y HATU (8,49 g, 21,7 mmol, 1,2 equiv.). La reaccion se agito durante 18 horas y despues se concentro al vado. El residuo se recogio en acetato de etilo (300 ml) y se lavo con una solucion acuosa 1 M de acido clorlddrico (2 x 100 ml) y con salmuera. La fase organica se seco sobre sulfato sodico, se filtro y se concentro al vado. El residuo se recogio en diclorometano (250 ml) y se filtro. El filtrado se concentro al vado sobre sflice y se purifico por cromatograffa sobre gel de sflice (Gradiente: de 0 % a 50 % de acetona en heptano) para proporcionar n.o 72 (11,61 g, 81 %) en forma de un solido de color amarillo claro. CL-EM: m/z 797,6 [M+H+], 819,6 [M+Na+], tiempo de retencion = 1,06 minutos; RMN 1H (400 MHz , DMSO-da), presuntamente una mezcla de rotameros, senales caractensticas: 63,26 y 3,28 (2 s, total 3H), 3,18 y 3,20 (2 s, total 3H), 2,95 y 3,10 (2 s a, total 3H), 1,01-1,09 (m, 3H), 0,67-0,78 (m, 3H).
Etapa 3. Smtesis de W-{(3R,4S,5S)-3-metoxi-1-[(2S)-2-{(1R,2R)-1-metoxi-2-metil-3-oxo-3-[(2-feniletil)amino]propil}pirrolidin-1-il]-5-metil-1-oxoheptan-4-il}-A/-metil-L-valinamida (n.o 73). A n.o 72 (5,16 g, 6,47 mmol, 1 equiv.) en tetrahidrofurano (10 ml, 0,65 M) se anadio dietilamina (10 ml). Despues de 2 horas, la reaccion se concentro al vado y el residuo se purifico por cromatograffa sobre gel de sflice (Gradiente: de 0% a 10% de metanol en diclorometano) para dar n.o 73 (2414 mg, 65 %). CL-EM: m/z 576,5 [M+H+], tiempo de retencion = 0,64 minutos; RMN 1H (400 MHz , DMSO-d6), presuntamente una mezcla de rotameros, senales caractensticas: 67,80­ 7,88 y 7,99-8,10 (2 m, total 1H), 7,14-7,31 (m, 5H), 3,17 y 3,18 (2 s, total 3H), 2,87 y 3,03 (2 s a, total 3H), 1,02-1,08 (m, 3H).
Etapa 4. Smtesis de W2-({3-[(ferc-butoxicarbonil)amino]oxetan-3-il}carbonil)-W-{(3R,4S,5S)-3-metoxi-1-[(2S)-2-{(1R,2R)-1-metoxi-2-metil-3-oxo-3-[(2-feniletil)amino]propil} pirrolidin-1-il]-5-metil-1-oxoheptan-4-il}-W-metil-L-valinamida (n.o 74). A n.o 73 (100 mg, 0,174 mmol, 1 equiv.) en diclorometano (4 ml, 0,04) y A/,W-dimetilformamida (0,5 ml) se anadio n.o 71 (45,2 mg, 0,208 mmol, 1,2 equiv.), seguido de diisopropiletilamina (92 pi, 0,521 mmol, 3 equiv.) y HATU (102 mg, 0,260 mmol, 1,5 equiv.). Despues de 16 horas, la reaccion se concentro al vado y el residuo se recogio en acetato de etilo (6 ml) y se lavo con una solucion acuosa 1 M de acido clorlddrico (2 x 2 ml) y con salmuera. La fase organica se seco sobre sulfato sodico, se filtro y se concentro al vado. El material en bruto se purifico por cromatograffa de fase inversa (Procedimiento C) para dar n.o 74 (140 mg), que se uso en la siguiente etapa sin purificacion adicional. CL-EM: m/z 774,7 [M+H+], 796,6 [M+Na+], tiempo de retencion = 0,91 minutos.
Etapa 5. Smtesis de W2-[(3-aminooxetan-3-il)carbonil]-A/-{(3R,4S,5S)-3-metoxi-1-[(2S)-2-{(1R,2R)-1-metoxi-2-metil-3-oxo-3-[(2-feniletil)amino]propil}pirrolidin-1-il]-5-metil-1-oxoheptan-4-il}-A/-metil-L-valinamida, sal de acido acetico (n.o 75). A n.o 74 (140 mg, <0,l8 l mmol, 1 equiv.) en diclorometano (3 ml, 0,06 M) se anadio acido trifluoroacetico (1 ml). Despues de 1 hora, la reaccion se concentro al vado y el residuo se recogio en acetato de etilo (6 ml) y se lavo con una solucion acuosa saturada de bicarbonato sodico (2 ml) y con salmuera. La fase organica se seco sobre sulfato sodico, se filtro y se concentro al vado. La mitad del material en bruto se purifico por cromatograffa de fase inversa (Procedimiento B) para dar n.o 75 (16 mg, 26 %, en dos etapas). CL-EM: m/z 674,6 [M+H+], tiempo de retencion = 0,68 minutos; HPLC (Protocolo A a 450C): m/z 674,5 [M+H+], tiempo de retencion = 7,128 minutos; RMN 1H (400 MHz , DMSO-d6), presuntamente una mezcla de rotameros, senales caractensticas: 67,80-7,87 y 8,02-8,07 (2 m, total 2H), 7,23-7,30 (m, 2H), 7,14-7,22 (m, 3H), 4,28-4,33 (m, 2H), 3,96-4,04 (m a, 1H), 3,17 y 3,19 (2 s, total 3H), 2,96 y 3,10 (2 s a, total 3H), [1,04 (d, J = 7,0 Hz ) y 1,07 (d, J = 6,6 Hz), total 3H].
Preparacion de N,2-Dimetilalanil-W-[(3R,4S,5S)-3-metoxM-{2S)-2-[(1R,2R)-1-metoxi-3-{[(2S)-1-metoxM-oxo-3-fenilpropan-2-il]amino}-2-metil-3-tioxopropil]pirrolidin-1-il}-5-metiM-oxoheptan-4-il]-W-metil-L-valinamida (n.0 79) y N,2-dimetilalanil-W-[(3R,4S,5S)-H2S)-2-[(1R,2R)-3-£[(1S)-1-carboxi-2-feniletil]amino}-1-metoxi-2-metil-3-tioxopropil]pirrolidin-1-il}-3-metoxi-5-metiM-oxoheptan-4-il]-W-metil-L-valinamida, sal de acido trifluoroacetico (n.o 80)
Figure imgf000094_0001
Etapa 1. Smtesis de N-{(2R,3R)-3-[(2S)-1-{(3R,4S,5S)-4-[{N-[(9H-fluoren-9-ilmetoxi) carbonil]-L-valil}(metil)amino]-3-metoxi-5-metilheptanoil}pirrolidin-2-il]-3-metoxi-2-metilpropanotioil}-L-fenilalaninato de metilo (n.o 76). De acuerdo con procedimiento general D, a partir de n.o @5 (260 mg, 0,648 mmol, 1 equiv.), n.o 39 (340 mg, <0,629 mmol, 1 equiv.), diclorometano (10 ml, 0,065 M), HATU (296 mg, 0,778 mmol, 1,2 equiv.) y diisopropiletilamina (339 pi, 1,94 mmol, 3 equiv.) se sintetizo el material en bruto deseado, que se purifico por cromatograffa sobre gel de silice (Gradiente: de 0 % a 40 % de acetona en heptano) para dar n.o 76 (466 mg, 83 % en dos etapas) en forma de un solido. CL-EM: m/z 871,5 [M+H+], 893,5 [M+Na+], tiempo de retencion = 1,10 minutos; HPLC (Protocolo C): tiempo de retencion = 9,249 minutos (pureza > 99%); R m N 1H (400 MHz , DMSO-d6), presuntamente una mezcla de rotameros, senales caracteffsticas: d [10,19 (d a, J = 7,4 Hz ) y 10,49 (d a, J = 7,8 Hz ), total 1H], 7,89 (d a, J = 7,4 Hz , 2H), 7,68-7,75 (m, 2H), 7,54-7,60 (m, 1H), 7,41 (dd a, J = 7,4, 7,4 Hz , 2H), 7,28-7,36 (m, 2H), 7,15-7,28 (m, 5H), [5,20 (ddd, J = 10,9, 7,3, 4,4 Hz ) y 5,34-5,43 (m), total 1H], 3,65 y 3,69 (2 s , total 3H), 3,24 y 3,25 (2 s , total 3H), 3,17 (s a, 3H), 2,93 y 2,98 (2 s a, total 3H), [1,15 (d, J = 6,6 Hz ) y 1,18 (d, J = 6,6 Hz ), total 3H].
Etapa 2. Smtesis de N-{(2R,3R)-3-metoxi-3-[(2S)-1-{(3R,4S,5S)-3-metoxi-5-metil-4-[metN(L-valil)amino]heptanoil}pirrolidin-2-il]-2-metilpropanotioil}-L-fenilalaninato de metilo (n.o 77). De acuerdo con procedimiento general A, a partir de n.o 76 (460 mg, 0,528 mmol, 1 equiv.) tetrahidrofurano (8 ml, 0,07 M) y dietilamina (8 ml) se sintetizo n.o 77 (399 mg), que se uso en la siguiente etapa sin purificacion adicional; CL-EM m/z 649,5 [M+H+], tiempo de retencion = 0,73 minutos; RMN 1H (400 MHz , DMSO-d6), presuntamente una mezcla de rotameros, senales de producto caracteffsticas: 6 [10,20 (d, J = 7,4 Hz ) y 10,49 (d, J = 7,4 Hz ), total 1H], 7,15-7,28 (m, 5H), [5,20 (ddd, J = 10,9, 7,2, 4,5 Hz ) y 5,34-5,42 (m), total 1H], 3,65 y 3,68 (2 s , total 3H), 3,24 y 3,25 (2 s , total 3H), 3,15 y 3,15 (2 s , total 3H), 2,83 y 2,88 (2 s a, total 3H), [1,15 (d, J = 6,6 Hz ) y 1,18 (d, J = 6,6 Hz ), total 3H].
Etapa 3. Smtesis de N-[(9H-fluoren-9-ilmetoxi)carbonil]-N,2-dimetilalanil-N-[(3R,4S,5S)-3-metoxi-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-1-metoxi-3-{[(2S)-1-metoxi-1-oxo-3-fenilpropan-2-il]amino}-2-metil-3-tioxopropil]pirrolidin-1-il}-5-metil-1-oxoheptan-4-il]-N-metil-L-valinamida (n.o 78). De acuerdo con procedimiento general D, a partir de n.o 71 (399 mg, <0,52 mmol, 1 equiv.), N-[(9H-fluoren-9-ilmetoxi)carbonil]-N,2-dimetilalanina (213 mg, 0,628 mmol, 1,2 equiv.), diclorometano (5 ml, 0,1 M), HATU (239 mg, 0,628 mmol, 1,2 equiv.) y diisopropiletilamina (282 pi, 1,62 mmol, 3,1 equiv.) se sintetizo el material en bruto deseado, que se purifico por cromatograffa sobre gel de silice (Gradiente: de 0 % a 50 % de acetona en heptano), proporcionando n.o 78 (231 mg, 46 % en dos etapas). CL-EM: m/z 970,7 [M+H+], 992,6 [M+Na+], tiempo de retencion = 1,11 minutos; H p LC (Protocolo C): tiempo de retencion = 9,260 minutos; R m N 1H (400 m Hz , DMSO-d6), presuntamente una mezcla de rotameros, senales caracteffsticas: 6 [10,19 (d, J = 7,4 Hz ) y 10,47 (d, J = 7,8 Hz ), total 1H], 7,89 (d, J = 7,4 Hz , 2H), 7,61-7,67 (m, 2H), 7,41 (dd a, J = 7,4, 7,4 Hz , 2H), 7,14-7,36 (m, 8H), [5,20 (ddd, J = 11,7, 5 Hz ) y 5,38 (ddd, J = 11,8, 4 Hz ), total 1H], [4,41 (dd, J = 8,6, 8,4 Hz ) y 4,46 (dd, J = 8,2, 8,2 Hz ), total 1H], 3,65 y 3,68 (2 s , total 3H), 3,23 y 3,24 (2 s , total 3H), 3,13 (s a, 3H), 2,88 y 2,93 (2 s a, total 3H), 2,84 y 2,85 (2 s , total 3H), 1,31 y 1,32 (2 s , total 3H), [1,15 (d, J = 6,6 Hz ) y 1,18 (d, J = 6,4 Hz ), total 3H].
Etapa 4A. Smtesis de N,2-dimetilalanil-N-[(3R,4S,5S)-3-metoxi-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-1-metoxi-3-{[(2S)-1-metoxi-1-oxo-3-fenilpropan-2-il]amino}-2-metil-3-tioxopropil] pirrolidin-1-il}-5-metil-1-oxoheptan-4-il]-N-metil-L-valinamida (n.o 79). De acuerdo con procedimiento general A, a partir de n.o 18 (223 mg, 0,230 mmol, 1 equiv.), diclorometano (6 ml, 0,04 M) y dietilamina (6 ml) se sintetizo n.o 19 (146 mg, 85 %) en forma de un solido de color bianco despues de cromatograffa sobre gel de silice (Gradiente: de 0% a 5% de metanol en heptano despues de 0% a 10% de metanol en diclorometano). HPLC (Protocolo A a 450C): 749,4 [M+H+], tiempo de retencion = 7,315 minutos; RMN 1H (400 MHz , DMSO-d6), presuntamente una mezcla de rotameros, senales caractensticas: 6 [10,20 (d, J = 7,6 Hz ) y 10,50 (d, J = 8,0 Hz ), total 1H], 7,79-7,88 (m, 1H), 7,15-7,29 (m, 5H), [5,20 (ddd, J = 11, 7, 4 Hz ) y 5,38 (ddd, J = 11, 8, 4 Hz ), total 1H], [4,50 (dd, J = 8,8, 8,6 Hz ) y 4,56 (dd, J = 9, 8 Hz ), total 1H], 3,65 y 3,69 (2 s, total 3H), 3,24 y 3,25 (2 s , total 3H), 3,16 (s a, 3H), 2,93 y 2,97 (2 s a, total 3H), 2,10 y 2,11 (2 s , total 3H).
Etapa 4B. Smtesis de N,2-dimetilalanil-N-[(3R,4S,5S)-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-3-{[(1S)-1-carboxi-2-feniletil]amino}-1-metoxi-2-metil-3-tioxopropil]pirrolidin-1-il}-3-metoxi-5-metil-1-oxoheptan-4-il]-N-metil-L-valinamida, sal de acido trifluoroacetico (n.080). A una solucion de n.078 (170 mg, 0,175 mmol, 1 equiv.) en tetrahidrofurano (3 ml, 0,04 M) se anadio una solucion de hidroxido de litio (12,6 mg, 0,525 mmol, 3 equiv.) en agua (1,5 ml). Despues de agitar durante una noche, el disolvente se retiro al vado. El residuo se destilo azeotropicamente tres veces con heptano. Despues, el residuo se diluyo con dimetilsulfoxido (2,2 ml) y se purifico cromatograffa de fase inversa (Procedimiento C) para proporcionar n.o 80 (74 mg, 58 %) en forma de un solido. CL-EM: m/z 734,6 [M+H+], tiempo de retencion = 0,69 minutos; HPLC (Protocolo A a 45 oc): 734,4 [M+H+], tiempo de retencion = 6,9o3 minutos (pureza > 96 %); RMN 1H (400 MHz , DMSO-d6), presuntamente una mezcla de rotameros, senales caracten sticas: 612,9 y 13,1 (2 x s a, total 1H), [10,12 (d, J = 7,4 Hz ) y 10,46 (d, J = 7,8 Hz ), total 1H], 8,77-8,89 (m a, 2H), [8,47 (d, J = 8,6 Hz ) y 8,51 (d, J = 8,6 Hz ), total 1H], 7,21-7,29 (m, 4H), 7,14-7,21 (m, 1H), [5,16-5,23 (m) y 5,38 (ddd, J = 11,3, 8,2, 3,9 Hz ), total 1H], [4,51 (dd, J = 9,0, 9,0 Hz ) y 4,57 (dd, J = 9,4, 8,6 Hz ), total 1H], 3,24 y 3,24 (2 s , total 3H), 3,18 y 3,19 (2 s , total 3H), 2,96 y 3,00 (2 s a, total 3H), 1,51 y 1,53 (2 s , total 3H), 1,40 y 1,42 (2 s , total 3H), 1,14-1,19 (m, 3H), 0,74-0,81 (m, 3H).
Preparacion de N,2-Dimetilalanil-W-[(3R,4S,5S)-3-metoxM-£(2S)-2-[(1R,2R)-1-metoxi-2-metil-3-£[(1S)-2-feniM-(1,3-tiazol-2-il)etil]amino}-3-tioxopropil]pirrolidin-1-il}-5-metiM-oxoheptan-4-il]-W-metil-L-valinamida (n.o 84)
Figure imgf000095_0001
-{[(1S)-2-fenil-1-(1,3-tiazol-2-il)etil]amino}-3-tioxopropil]pirrolidin-1-il}-5-metil-1-oxoheptan-4-il]-N-metil-L-valinamida (n.o 81). De acuerdo con procedimiento general D, a partir de n.o @5 (620 mg, 1,18 mmol, 1 equiv.) diclorometano (l0 ml, 0,1 M), amina n.o 18 (604 mg, 1,42 mmol, 1,2 equiv.), diisopropiletilamina (618 pl, 3,54 mmol, 3 equiv.) y HATU (539 mg, 1,42 mmol, 1,2 equiv.) se sintetizo el material en bruto deseado, que se purifico por cromatograffa sobre gel de silice (Gradiente: de 0 % a 30 % de acetona en heptano) para dar n.o 81 (737 mg, 58 %). HPLC (Protocolo C): tiempo de retencion = 9,235 minutos; RMN 1H (400 MHz , DMSO-d6), presuntamente una mezcla de rotameros, senales caractensticas: 6 [10,54 (d a, J = 8 Hz ) y 10,81 (d a, J = 8 Hz ), total 1H], 7,89 (d, J = 7,6 Hz , 2H), [7,80 (d, J = 3,3 Hz) y 7,83 (d, J = 3,1 Hz ), total 1H], 7,70-7,75 (m, 2H), [7,64 (d, J = 3,1 Hz ) y 7,68 (d, J = 3,3 Hz ), total 1H], 7,55-7,60 (m, 1H), 7,38-7,44 (m, 2H), 7,13-7,35 (m, 7H), [6,31 (ddd, J = 11,8, 4,5 Hz) y 6,40-6,48 (m), total 1H], 3,23 y 3,24 (2 s, total 3H), 3,17 y 3,22 (2 s, total 3H), 2,94 y 3,01 (2 s a, total 3H), [1,14 (d, J = 6,4 Hz ) y 1,17 (d, = 6,2 Hz), total 3H].
Etapa 2. Smtesis de N-[(3R,4S,5S)-3-metoxi-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-1-metoxi-2-metil-3-{[(1S)-2-feml-1-(1,3-tiazol-2-il)etil]amino}-3-tioxopropil]pirrolidin-1-il}-5-metil-1-oxoheptan-4-il]-N-metil-L-valinamida (n.o 82). De acuerdo con procedimiento general A, a partir de n.o 81 (733 mg, 0,818 mmol, 1 equiv.) en diclorometano (7 ml, 0,1 M) y dietilamina (7 ml) se sintetizo n.o 82 (670 mg), que se uso en la siguiente etapa sin purificacion adicional. CL-EM: m/z 674,5 [M+H+], tiempo de retencion = 1,29 minutos; RMN 1H (400 MHz , DMSO-d6), presuntamente una mezcla de rotameros, senales de producto caractensticas: 6 [10,55 (d a, J = 8 Hz ) y 10,84 (d a, J = 8 Hz), total 1H], [7,64 (d, J = 3,1 Hz ) y 7,69 (d, J = 3,3 Hz ), total 1H], 7,13-7,33 (m, 5H), 6,27-6,35 y 6,38-6,47 (2 m, total 1H), 3,23 y 3,25 (2 s, total 3H), 3,15 y 3,19 (2 s, total 3H), 2,84 y 2,91 (2 s a, total 3H).
Etapa 3. Smtesis de N-[(9H-fluoren-9-ilmetoxi)carbonil]-N,2-dimetilalanil-N-[(3R,4S,5S)-3-metoxi-1-{(2S)-2-[(1R,2R)--metoxi-2-metil-3-{[(1S)-2-fenil-1-(1,3-tiazol-2-il)etil] amino}-3-tioxopropil]pirrolidin-1-il}-5-metil-1-oxoheptan-4-il]-N-metil-L-valinamida (n.o 83). De acuerdo con procedimiento general D, a partir de n.o 82 (670 mg, < 0,818 mmol, 1 equiv.), diclorometano (5 ml, 0,16 M), A/-[(9H-fluoren-9-ilmetoxi)carbonil]-N,2-dimetilalanina (304 mg, 0,896 mmol, 1,1 equlv.), HATU (372 mg, 0,978 mmol, 1,2 equiv.) y diisopropiletilamina (440 pl, 2,53 mmol, 3,1 equiv.) se sintetizo el material en bruto deseado, que se purifico por cromatograffa sobre gel de silice (Gradiente: de 0 % a 30 % de acetona en heptano) para dar n.083 (556 mg, 69 % en dos etapas). CL-EM: m/z 994,7 [M+H+], tiempo de retencion = 0,69 minutos; H P l C (Protocolo C): tiempo de retencion = 9,333 minutos (pureza > 98 %); RMN 1H (400 MHz , DMSO-d6), presuntamente una mezcla de rotameros, senales caractensticas: 6 [10,53 (d a, J = 8 Hz ) y 10,80 (d a, J = 8 Hz ), total 1H], 7,86-7,91 (m, 2H), [7,80 (d, J = 3,3 Hz ) y 7,82 (d, J = 3,2 Hz ), total 1H], [7,64 (d, J = 3,2 Hz ) y 7,68 (d, J = 3,2 Hz ), total 1H], 7,62-7,66 (m, 2H), 7,38-7,44 (m, 2H), 7,28-7,36 (m, 5H), 7,19-7,26 (m, 2H), 7,12-7,17 (m, 1H), [6,31 (ddd, J = 11,8, 4,5 Hz ) y 6,44 (ddd, J = 11,8,5, 4,5 Hz ), total 1H], [4,42 (dd, J = 9, 8 Hz ) y 4,48 (dd, J = 8, 8 Hz ), total 1H], 3,22 y 3,24 (2 s , total 3H), 3,13 y 3,17 (2 s, total 3H), 2,89 y 2,97 (2 s a, total 3H), 2,84 y 2,85 (2 s , total 3H), [1,13 (d, J = 6,4 Hz ) y 1,16 (d, J = 6,4 Hz ), total 3H].
Etapa 4. Smtesis de N,2-dimetilalanil-N-[(3R,4S,5S)-3-metoxi-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-1-metoxi-2-metil-3-{[(1S)-2-fenil-1-(1,3-tiazol-2-il)etil]amino}-3-tioxopropil]pirrolidin-1-il}-5-metil-1-oxoheptan-4-il]-N-metil-L-valinamida (n.o 84). De acuerdo con procedimiento general A, a partir de n.o 83 (552 mg, 0,555 mmol, 1 equiv.) en diclorometano (10 ml, 0,05 M) y dietilamina (10 ml) se sintetizo el material en bruto deseado, que se diluyo con metanol, se concentro al vacm sobre sflice y se purifico por cromatograffa sobre gel de sflice (Gradiente: de 0 % a 10 % de metanol en diclorometano) para dar n.o 84 (406 mg, 95 %) en forma de un solido de color blanco. CL-EM: m/z 772,8 [M+H+], tiempo de retencion = 1,35 minutos; HPLC (Protocolo A): 774,4 [M+H+], tiempo de retencion = 7,390 minutos; R m N 1H (400 MHz , DMSO-d6), presuntamente una mezcla de rotameros, senales caractensticas: 6 [10,54 (d a, J = 8 Hz ) y 10,81 (d a, J = 8 Hz ), total 1H], 7,78-7,84 (m, 2H), [7,65 (d, J = 3,1 Hz ) y 7,69 (d, J = 3,3 Hz ), total 1H], 7,29-7,34 (m, 2H), 7,20-7,28 (m, 2H), 7,14-7,19 (m, 1H), 6,27-6,35 y 6,40-6,48 (2 m, total 1H), [4,51 (dd, J = 9, 8 Hz ) y 4,57 (dd, J = 9, 8 Hz ), total 1H], 3,24 y 3,25 (2 s , total 3H), 3,16 y 3,21 (2 s , total 3H), 2,94 y 3,00 (2 s a, total 3H), 2,09 y 2,10 (2 s , total 3H), 1,08 y 1,09 (2 s, total 3H), 0,73-0,80 (m, 3H).
N,2-Dimetilalanil-W-[(3R,4S,5S)-3-metoxM-{(2S)-2-[(1R,2R)-1-metoxi-2-metil-3-oxo-3-£[(1S)-2-feniM-(1,3-tiazol-2-il)etil]amino}propil]pirrolidin-1-il}-5-metil-1-oxoheptan-4-il] -W-metil-L-valinamida (n.o 88)
Figure imgf000096_0001
Etapa 1. Smtesis de N2-[(9H-fluoren-9-ilmetoxi)carbonil]-N-[(3R,4S,5S)-3-metoxi-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-1-metoxi-2-metil-3-oxo-3-{[(1S)-2-fenil-1-(1,3-tiazol-2-il)etil]amino} propil] pirrolidin-1-il}-5-metil-1-oxoheptan-4-il]-N-metil-L-valinamida (n.o 85). A una mezcla de n.o @5 (5,48 g, l0,4 mmol, 1 equiv.) y n.o 19 (3,90 g, 10,4 mmol, 1 equiv.) en diclorometano (50 ml, 0,2M) se anadio diisopropiletilamina (5,51 ml, 31,3 mmol, 3 equiv.) seguido de HATU (4,91 g, 12,5 mmol, 1,2 equiv.). Despues de agitar durante una noche, la mezcla de reaccion se concentro al vacm. El residuo se recogio en acetato de etilo (100 ml) y se lavo con una solucion acuosa 1 M de acido clorlffdrico (2 x 30 ml) y con salmuera (30 ml). La fase organica se seco sobre sulfato sodico, se filtro y se concentro al vacm. El residuo se recogio en diclorometano y se filtro; el filtrado se purifico por cromatograffa sobre gel de silice (Gradiente; de 0 % a 50 % de acetona en heptano) para proporcionar n.o 85 (7,20 g, 78 %) en forma de un solido. CL-EM: m/z 880,6 [M+H+], tiempo de retencion = 1,07 minutos.
Etapa 2. Smtesis de N-[(3R,4S,5S)-3-metoxi-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-1-metoxi-2-metil-3-oxo-3-{[(1S)-2-fenil-1-(1,3-tiazol-2-il)etil]amino}propil]pirrolidin-1-il}-5-metil-1-oxoheptan-4-il]-N-metil-L-valinamida (n.o 86). De acuerdo con procedimiento general A, a partir de n.o 85 (5,00 g, 5,68 mmol, 1 equiv.) en tetrahidrofurano (10 ml, 0,56 M) y dietilamina (3 ml) se sintetizo el material en bruto deseado, que se purifico por cromatograffa sobre gel de sflice (Gradiente: de 0 % a 10 % de metanol en diclorometano) para dar n.o 86 (2,952 g, 79 %) en forma de un solido. CL­ EM: m/z 658,5 [M+H+], 680,5 [M+Na+]; tiempo de retencion = 0,66 minutos; RMN 1H (400 MHz , DMSO-d6), presuntamente una mezcla de rotameros, senales caractensticas: 6 [8,64 (d a, J = 8,4 Hz ) y 8,90 (d a, J = 8,8 Hz ), total 1H], [7,77 (d, J = 3,3 Hz ) y 7,80 (d, J = 3,3 Hz ), total 1H], [7,63 (d, J = 3,3 Hz ) y 7,66 (d, J = 3,3 Hz ), total 1H], 7,12-7,31 (m, 5H), [5,39 (ddd, J = 11,2, 8,4, 4,2 Hz ) y 5,54 (ddd, J = 11,9, 8,9, 4,0 Hz ), total 1H], 3,15, 3,19, 3,20 y 3,26 (4 s, total 6H), 2,86 y 2,98 (2 s a, total 3H), [1,06 (d, J = 6,6 Hz ) y 1,11 (d, J = 6,6 Hz ), total 3H].
Etapa 3. Smtesis de W-(terc-butoxicarbonil)-N,2-dimetilalanil-A/-[(3R,4S,5S)-3-metoxi-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-1-metoxi-2-metil-3-oxo-3-{[(1S)-2-fenil-1-(1,3-tiazol-2-il)etil]amino} propil]pirrolidin-1-il}-5-metil-1-oxoheptan-4-il]-W-metil-L-valinamida A una mezcla de n.086 (80,3 mg, 0,122 mmol, 1 equiv.) en diclorometano (4 ml, 0,03 M) se anadio A/-(terc-butoxicarbonil)-N,2-dimetilalanina (29,1 mg, 0,134 mmol, 1,1 equiv.) seguido de diisopropiletilamina (64 pi, 0,365 mmol, 3 equiv.) y HATU (71,7 mg, 0,183 mmol, 1,5 equiv.). Despues de agitar durante una noche, la mezcla de reaccion se concentro al vad o. El residuo se recogio en acetato de etilo (6 ml) y se lavo con una solucion acuosa 1 M de acido clorddrico (2 x 2 ml) y con salmuera. El disolvente organico se seco sobre sulfato sodico, se filtro y se concentro al vad o. El residuo se recogio en diclorometano y se filtro; el filtrado se concentro al vad o sobre silice y se purifico por cromatograffa sobre gel de sflice (Gradiente: de 0 % a 50 % de acetona en heptano) para proporcionar n.o 87 (58 mg, 50 %) en forma de un solido de color bianco. CL-EM: m/z 857,7 [M+H+], 879,7 [M+Na+], tiempo de retencion = 0,99 minutos; RMN 1H (400 MHz , DMSO-d6), presuntamente una mezcla de rotameros, senales caracteffsticas: 6 [8,64 (d a, J = 8 Hz ) y 8,87 (d a, J = 9 Hz ), total 1H], [7,77 (d, J = 3,3 Hz ) y 7,80 (d, J = 3,3 Hz), total 1H], [7,63 (d, J = 3,2 Hz ) y 7,66 (d, J = 3,2 Hz ), total 1H], 7,13-7,31 (m, 5H), [6,95 (d a, J = 8 Hz ) y 7,06 (d a, J = 8 Hz ), total 1H], 5,35-5,42 y 5,51-5,58 (2 m, total 1H), 3,15, 3,19, 3,20 y 3,26 (4 s, total 6H), 2,94 y 3,03 (2 s a, total 3H), 2,83 y 2,84 (2 s, total 3H), [1,05 (d, J = 6,7 Hz ) y 1,11 (d, J = 6,7 Hz ), total 3H].
Etapa 4. Smtesis de N,2-dimetilalanil-A/-[(3R,4S,5S)-3-metoxi-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-1-metoxi-2-metil-3-oxo-3-{[(1S)-2-fenil-1-(1,3-tiazol-2-il)etil]amino}propil]pirrolidin-1-il}-5-metil-1-oxoheptan-4-il]-A/-metil-L-valinamida (n.o 88). A una mezcla de n.o 87 (58 mg, 0,068 mmol, 1 equiv.) en diclorometano (8 ml) se anadio acido trifluoroacetico (2 ml). Despues de agitar durante una noche, la mezcla de reaccion se concentro al vad o. El residuo se recogio en acetato de etilo (10 ml), se lavo con una solucion acuosa saturada de bicarbonato sodico, se seco sobre sulfato sodico, se filtro y se concentro al vad o para dar n.o 88 (52 mg, cuantitativo). CL-EM 757,6 [M+H+], tiempo de retencion = 0,69 minutos; RMN 1H (400 MHz , DMSO-d6), presuntamente una mezcla de rotameros, senales caracteffsticas: 6 [8,64 (d a, J = 8,6 Hz) y 8,87 (d a, J = 8,6 Hz), total 1H], 7,80-7,85 (m, 1H), [7,77 (d, J = 3,3 Hz ) y 7,80 (d, J = 3,1 Hz ), total 1H], [7,63 (d, J = 3,1 Hz ) y 7,66 (d, J = 3,3 Hz), total 1H], 7,20-7,31 (m, 4H), 7,13-7,19 (m, 1H), [5,39 (ddd, J = 11,8,5, 4 Hz ) y 5,49-5,56 (m), total 1H], [4,51 (dd, J = 9, 8 Hz) y 4,61 (dd, J = 9, 8 Hz ), total 1H], 3,16, 3,20, 3,21 y 3,25 (4 s, total 6H), 2,94 y 3,03 (2 s a, total 3H), 2,10 y 2,10 (2 s, total 3H), 1,16 (s a, 3H), 1,04-1,12 (m, 6H), 0,72-0,80 (m, 3H).
Preparacion de Ejemplo de Referenda de W2-(3-Amino-2,2-dimetilpropanoil)-W-[(3R,4S,5S)-3-metoxi-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-1-metoxi-2-metM-3-oxo-3-{[(1S)-2-feniM-(1,3-tiazol-2-il)etM]amino}propil]pirrolidin-1-il}-5-metiM-oxoheptan-4-il]-N-metil-L-valinamida, sal de acido trifluoroacetico (n.o 95)
Figure imgf000097_0001
Etapa 1. Smtesis de acido 3-{[(9H-fluoren-9-ilmetoxi)carbonil]amino}-2,2-dimetilpropanoico (n.o 93). A acido 3-amino-2,2-dimetilpropanoico, sal clorhidrato (250 mg, 1,63 mmol, 1 equiv.) en diclorometano (4 ml, 0,4 M) se anadio diisopropiletilamina (859 pi, 4,88 mmol, 3 equiv.), seguido de cloruro de (9H-fluoren-9-ilmetoxi)carbonilo (473 mg, 1,79 mmol, 1,1 equiv.) La reaccion se agito durante 18 horas y despues se concentro al vad o. El residuo se recogio en acetato de etilo (3 ml) y se lavo con una solucion acuosa 1 M de acido clorddrico (2 x 1 ml) y con salmuera. La fase organica se seco sobre sulfato sodico, se filtro y se purifico por cromatograffa sobre gel de sflice (Gradiente: de 0 % a 100 % de acetato de etilo en heptano) para dar n.o 93 (250 mg, 45 %) en forma de un aceite. RMN 1H (400 MHz , DMSO-d6) 612,22 (s , 1H), 7,89 (d, J = 7,4 Hz , 2H), 7,72 (d, J = 7,4 Hz , 2H), 7,38-7,44 (m, 2H), 7,27-7,35 (m, 3H), 4,18-4,30 (m, 3H), 3,16 (d, J = 6,2 Hz , 2H), 1,05 (s , 6H).
Etapa 2. Smtesis de W2-(3-{[(9H-fluoren-9-ilmetoxi)carbonil]amino}-2,2-dimetilpropanoil)-A/-[(3R,4S,5S)-3-metoxi-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-1-metoxi-2-metil-3-oxo-3-{[(1S)-2-fenil-1-(1,3-tiazol-2-il)etil]amino}propil]pirrolidin-1-il}-5-metil-1-oxoheptan-4-il]-A/-metil-L-valinamida (n.o 94). A n.o 86 (100 mg, 0,152 mmol, 1 equiv.) en diclorometano (4 ml, 0,038 M) y W,W-dimetilformamida (0,5 ml) se anadio n.o 93 (51,6 mg, 0,152 mmol, 1 equiv.) seguido de diisopropiletilamina (80,0 pi, 0,457 mmol, 3 equiv.) y HATU (89,8 mg, 0,229 mmol, 1,5 equiv.). La reaccion se agito durante 18 horas y despues se concentro al vad o. El residuo se recogio en acetato de etilo (6 ml) y se lavo con una solucion acuosa 1 M de acido clord drico (2 x 2 ml) y con salmuera. La fase organica se seco sobre sulfato sodico, se filtro y se concentro al vad o. El residuo se recogio en diclorometano (250 ml) y se filtro; el filtrado se concentro al vad o sobre silice y se purifico por cromatograffa sobre gel de sflice (Gradiente: de 0 % a 50 % de acetona en heptano) para proporcionar n.o 94 (90 mg, 60 %) en forma de un solido de color bianco. CL-EM: m/z 979,8 [M+H+], 1002,7 [M+Na+], tiempo de retencion = 1,15 minutos; RMN 1H (400 MHz , DMSO-d6), presuntamente una mezcla de rotameros, senales de producto caractensticas: 6 [8,64 (d a, J = 8,6 Hz ) y 8,86 (d a, J = 8,6 Hz ), total 1H], 7,86-7,91 (m, 2H), [7,77 (d, J = 3,3 Hz ) y 7,79 (d, J = 3,3 Hz ), total 1H], 7,67-7,73 (m, 2H), [7,63 (d, J = 3,3 Hz ) y 7,65 (d, J = 3,3 Hz ), total 1H], 6,87-6,95 (m, 1H), [5,39 (ddd, J = 11, 8, 4 Hz ) y 5,52 (ddd, J = 11,5, 9, 4 Hz ), total 1H], [4,44 (dd, J = 8,4, 8,4 Hz ) y 4,55 (dd, J = 8,4, 8,4 Hz ), total 1H], 3,16, 3,20, 3,21 y 3,25 (4 s, total 6H), 2,96 y 3,06 (2 s a, total 3H), 0,69­ 0,77 (m, 3H).
Etapa 3. Smtesis de W2-(3-amino-2,2-dimetilpropanoil)-A/-[(3R,4S,5S)-3-metoxi-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-1-metoxi-2-metil-3-oxo-3-{[(1 S)-2-fenil-1-(1,3-tiazol-2-N)etil]amino}propil] pirrolidin-1-il}-5-metil-1-oxoheptan-4-il]-W-metil-L-valinamida, sal de acido trifluoroacetico (n.095). A n.094 (86 mg, 0,088 mmol, 1 equiv.) en tetrahidrofurano (2 ml, 0,04 M) se anadio dietilamina (10 ml). Despues de agitar durante una noche, la reaccion se concentro al vad o y el residuo se purifico por cromatograffa de fase inversa (Procedimiento C) para dar n.o 5 (55 mg, 72 %). CL-EM: m/z 757,5 [M+H+], tiempo de retencion = 0,74 minutos; RMN 1H (400 MHz , DMSO-d6), presuntamente una mezcla de rotameros, senales caractensticas: 6 [8,66 (d a, J = 8 Hz ) y 8,92 (d a, J = 9 Hz ), total 1H], [7,91 (d a, J = 8 Hz ) y 7,97 (d a, J = 9 Hz ), total 1H], [7,78 (d, J = 3,3 Hz ) y 7,81 (d, J = 3,1 Hz ), total 1H], 7,65-7,74 (m a, 3H), [7,63 (d, J = 3,3 Hz ) y 7,67 (d, J = 3,3 Hz ), total 1H], 7,12-7,31 (m, 5H), [5,35-5,42 (m) y 5,45-5,52 (m), total 1H], [4,44 (dd, J = 9, 9 Hz ) y 4,55 (dd, J = 9, 9 Hz ), total 1H], 3,17, 3,20, 3,22 y 3,25 (4 s, total 6H), 2,96 y 3,05 (2 s a, total 3H), 1,25 y 1,25 (2 s, total 3H), 1,14 y 1,15 (2 s, total 3H), [1,06 (d, J = 6,6 Hz ) y 1,10 (d, J = 6,4 Hz ), total 3H], 0,72-0,80 (m, 3H).
Preparacion de Ejemplo de Referenda de W2-(3-Amino-2,2-dimetilpropanoil)-W-{(3R,4S,5S)-3-metoxi-1-[(2S)-2-{(1R,2R)-1-metoxi-2-metil-3-oxo-3-[(2-fenMetM)amino]propM}pirrolidin-1-il]-5-metiM-oxoheptan-4-il}-W-metil-L-valinamida, sal de acido trifluoroacetico (n.o 97)
Figure imgf000098_0001
[(2S)-2-{(1R,2R)-1-metoxi-2-metil-3-oxo-3-[(2-feniletil)amino]propil}pirrolidin-1-il]-5-metil-1-oxoheptan-4-il}-W-metil-L-valinamida (n.o 96). A n.o 73 (100 mg, 0,174 mmol, 1 equiv.) en diclorometano (4 ml, 0,04 M) y W,A/-dimetilformamida (0,5 ml) se anadio n.o 93 (59,1 mg, 0,174 mmol, 1 equiv.), seguido de diisopropiletilamina (92 pl, 0,52 mmol, 3 equiv.) y HATU (102 mg, 0,260 mmol, 1,5 equiv.). La reaccion se agito durante 18 horas y despues se concentro al vad o. El residuo se recogio en acetato de etilo (6 ml) y se lavo con una solucion acuosa 1 M de acido clorddrico (2 x 2 ml) y con salmuera. La fase organica se seco sobre sulfato sodico, se filtro y se concentro al vad o. La purificacion por cromatograffa sobre gel de sflice (Gradiente: de 0 % a 50 % de acetona en heptano) proporciono n.o 96 (102 mg, 65 %) en forma de un solido de color blanco. CL-EM: m/z 896,7 [M+H+], 918,8 [M+Na+], tiempo de retencion = 1,14 minutos; RMN 1H (400 MHz , DMSO-c^ , presuntamente una mezcla de rotameros, senales de producto caractensticas: 67,88 (d, J = 7,4 Hz , 2H), [7,83 (dd a, J = 6, 5 Hz ) y 8,03 (dd a, J = 6, 5 Hz), total 1H], 7,67-7,73 (m, 2H), 7,36-7,48 (m, 3H), 7,22-7,35 (m, 4H), 7,13-7,21 (m, 3H), 6,86-6,96 (m, 1H), [4,44 (dd, J = 8,6, 8,6 Hz) y 4,50 (dd, J = 8,6, 8,6 Hz), total 1H], 3,18, 3,19, 3,26 y 3,29 (4 s, total 6H), 2,96 y 3,11 (2 s a, total 3H), 0,70-0,77 (m, 3H).
Etapa 2. Smtesis de W2-(3-amino-2,2-dimetilpropanoil)-W-{(3R,4S,5S)-3-metoxi-1-[(2S)-2-{(1R,2R)-1-metoxi-2-metil-3-oxo-3-[(2-feniletil)amino]propil}pirrolidin-1-il]-5-metil-1-oxoheptan-4-il}-W-metil-L-valinamida, sal de acido trifluoroacetico A n.o 96 (98 mg, 0,11 mmol, 1 equiv.) en tetrahidrofurano (2 ml, 0,04 M) se anadio dietilamina (0,5 ml). Despues de agitar durante una noche, la reaccion se concentro al vad o y el residuo se purifico por cromatograffa de fase inversa (Procedimiento C) para dar n.o 97 (58 mg, 68 %). CL-EM: m/z 674,4 [M+H+], 696,4 [M+Na+], tiempo de retencion = 0,74 minutos; HPLC (Protocolo A): 674,5 [M+H+], tiempo de retencion = 7,072 minutos; RMN 1H (400 MHz , DMSO-d6), presuntamente una mezcla de rotameros, senales caractensticas: 6 [7,92 (d a, J = 8 Hz) y 7,97 (d a, J = 8 Hz), total 1H], [7,86 (dd a, J = 6, 5 Hz) y 8,07 (dd a, J = 6, 5 Hz), total 1H], 7,64-7,74 (m a, 3H), 7,15-7,29 (m, 5H), [4,44 (dd, J = 9, 9 Hz) y 4,50 (dd, J = 9, 9 Hz ), total 1H], 3,26 y 3,29 (2 s, total 3H), 3,18 y 3,20 (2 s, total 3H), 2,96 y 3,10 (2 s a, total 3H), 1,24 y 1,25 (2 s, total 3H), 1,14 y 1,16 (2 s, total 3H), 1,02-1,07 (m, 3H), 0,73-0,80 (m, 3H).
Preparacion de 2-metil-L-prolil-W-[(3R,4S,5S)-3-metoxM-{(2S)-2-[(1R,2R)-1-metoxi-2-metil-3-oxo-3-{[(1S)-2-feniM-(1,3-tiazol-2-il)etil]amino}propil]pirrolidin-1-il}-5-metiM-oxoheptan-4-il]-W-metil-L-valinamida, sal de acido trifluoroacetico (n.° 98)
Figure imgf000099_0001
A una mezcla de 1-(terc-butoxicarbonil)-2-metil-L-prolina (65,1 mg, 0,284 mmol, 1,1 equiv.) y n.° 86 (170 mg, 0,258 mmol, 1 equiv.) en diclorometano (5 ml, 0,03 M) se anadio HATU (0,108 mg, 0,284 mmol, 1,1 equiv.), seguido de diisopropiletilamina (139 pl, 0,800 mmol, 3,1 equiv.). Despues de agitar durante una noche, la mezcla de reaccion se enfrio a 00C, se anadio diclorometano (3 ml), seguido de la adicion lenta de acido trifluoroacetico (2 ml). La mezcla de reaccion se agito a 0 oc durante 5 minutos, se dejo calentar a temperatura ambiente y despues se agito a temperatura ambiente durante 30 minutos antes de concentrarse al vado. El residuo se destilo azeotropicamente dos veces con heptano, se diluyo con una pequena cantidad de diclorometano y metanol antes de concentrarse al vad o sobre silice. El residuo se purifico por cromatograffa sobre gel de silice (Gradiente: de 0 % a 10 % de metanol en diclorometano) y despues por cromatograffa de fase inversa (Procedimiento C) para proporcionar n.° 98 (128 mg, 56 %) en forma de un solido de color blanco. CL-EM: m/z 769,4 [M+H+], tiempo de retencion = 1,28 minutos; HPLC (Protocolo A a 45 oc) m/z 769,4 [M+H+], tiempo de retencion = 7,146 minutos (pureza > 98 %); RMN 1H (400 MHz, DMSO-d6), presuntamente una mezcla de rotameros, senales caracteffsticas: 69,03-9,15 (m a, 1H), 8,77-8,86 (m a, 1H), 8,69-8,76 (m, 1H), [8,66 (d, J = 8,2 Hz ) y 8,92 (d, J = 8,6 Hz), total 1H], [7,78 (d, J = 3,1 Hz ) y 7,80 (d, J = 3,5 Hz), total 1H], [7,63 (d, J = 3,1 Hz ) y 7,67 (d, J = 3,1 Hz), total 1H], 7,12-7,31 (m, 5H), [5,38 (ddd, J = 11,8, 4 Hz ) y 5,47 (ddd, J = 11,9, 4 Hz ), total 1H], [4,46 (dd, J = 9,4, 9,0 Hz) y 4,55 (dd, J = 9,0, 8,6 Hz), total 1H], 3,17, 3,20, 3,22 y 3,25 (4 s, total 6H), 2,98 y 3,04 (2 s a, total 3H), [1,06 (d, J = 7,0 Hz) y 1,09 (d, J = 6,6 Hz), total 3H], 0,73-0,80 (m, 3H).
Preparacion de amino(biciclo[4,2,0]octa-1,3,5-trien-7-il)acetato de metilo, sal clorhidrato (n.° 102)
Figure imgf000099_0002
Etapa 1. Smtesis de (acetilamino)(biciclo[4,2,0]octa-1,3,5-trien-7-il)cianoacetato de etilo (n.° 99). Se dejo que sodio (464 mg, 20,2 mmol, 1,2 equiv.) reaccionara con etanol absoluto (40 ml, 0,42 M); a la mezcla resultante se le anadio 2-(acetilamino)-2-cianoacetato de etilo (3,44 g, 20,2 mmol, 1,2 equiv.). Despues de 20 minutos a 60 oc, se anadio 7-bromobiciclo[4,2,0]octa-1,3,5-trieno (3,092 g, 16,89 mmol, 1 equiv.) y la mezcla de reaccion se calento a reflujo durante una noche, despues se filtro y se concentro al vad o. El residuo se diluyo con agua y se extrajo con acetato de etilo. La fase organica se lavo con salmuera, se seco sobre sulfato sodico, se filtro y se concentro al vad o para dar un aceite oscuro, que se purifico por cromatograffa sobre gel de sflice (Gradiente: de 0 % a 50 % de acetato de etilo en heptano) para dar n.° 99 (4,38 g) en forma de una goma de color amarillo. CL-EM: m/z 273,2 [M+H+], tiempo de retencion = 2,36 minutos.
Etapa 2. Smtesis de acido (acetilamino)(biciclo[4,2,0]octa-1,3,5-trien-7-il)acetico (n.° 100). A una mezcla de n.° 99 (4,38 mg, <16,1 mmol, 1 equiv.) en metanol (30 ml, 0,53 M) se anadio una solucion acuosa 1 N de hidroxido sodico (38 ml, 38 mmol, 2,4 equiv.). La mezcla de reaccion se calento a reflujo durante una noche, despues se concentro al vad o, se diluyo con agua (40 ml) y se acidifico con una solucion acuosa 1 N de acido clorfffdrico (40 ml). La fase acuosa se extrajo con diclorometano (3 x 30 ml). Las fases organicas combinadas se secaron sobre sulfato sodico, se filtraron y se concentraron al vad o. El aceite resultante se purifico por cromatograffa sobre gel de sflice (Disolvente A: diclorometano; Disolvente B: metanol al 20 % en diclorometano que contema acido trifluoroacetico al 0,02 %; Gradiente: de 0 % a 40 % de B) despues por cromatograffa de fluidos supercffticos (Columna: Chiralpak AD H, 250 x 21 mm; Eluyente: 85:15 de dioxido de carbono/metanol; Caudal: 65 g/min; Deteccion: 210 nm; Instrumento: sistema de SFC preparativa Berger minigram). El segundo pico de elusion se aislo para dar n.0100 (600 mg, 17 % en dos etapas) en forma de un enantiomero individual (tiempo de retencion = 3,37 minutos, pureza >99 %). CL-EM: m/z 220,3 [M+H+], tiempo de retencion = 2,10 minutos; RMN 1H (400 MHz , CDsO D) 67,14-7,24 (m, 2H), 7,03-7,09 (m, 2H), 4,59 (d, J = 8,6 Hz , 1H), 3,87 (ddd, J =8,5, 5,3, 2,4 Hz , 1H), 3,35 (dd, J = 14,5, 5,4 Hz , 1H, supuesto, parcialmente oscurecido por pico de disolvente), 3,10 (dd, J = 14,4, 2,4 Hz , 1H), 2,00 (s , 3H). Rotacion optica: [ci,]d26 70,9°(c 0,67, metanol)
Etapa 3. Smtesis de acido amino(biciclo[4,2,0]octa-1,3,5-trien-7-il)acetico, sal clorhidrato (n.o 101). Una mezcla de n.o 100 (200 mg, 0,912 mmol, 1 equiv.) y acido clorhndrico acuoso 6 N (12,3 ml, 73,8 mmol, 81 equiv.) se calento a reflujo durante una noche. La mezcla de reaccion se concentro al vad o para dar el enantiomero individual n.o 101 (195 mg) en forma de un solido de color blanquecino, que se uso en la siguiente etapa sin purificacion adicional.
Etapa 4. Smtesis de amino(biciclo[4,2,0]octa-1,3,5-trien-7-il)acetato de metilo, sal clorhidrato (n.o 102). A una mezcla de n.o 101 (195 mg, <0,9 i 3 mmol, 1 equiv.) en metanol (20 ml, 0,04 M) se anadio cloruro de tionilo (0,666 ml, 9,13 mmol, 10 equiv.). Despues de dos horas a reflujo, la mezcla de reaccion se concentro al vad o para dar el enantiomero individual n.o 102 (175 mg, 84 % en dos etapas) en forma de un solido de color claro. CL-EM: m/z 192,3 [M+H+], tiempo de retencion = 0,80 minutos; CG-EM: m/z 192 [M+H+], tiempo de retencion = 3,206 minutos; RMN 1H (400 M Hz , CD sOD) 67,24-7,33 (m, 2H), 7,11-7,18 (m, 2H), 4,40 (d, J = 6,9 Hz , 1H), 3,99-4,05 (m, 1H), 3,78 (s , 3H), 3,46 (dd, J = 14,8, 5,4 Hz , 1H), 3,23 (dd, J = 14,8, 2,5 Hz , 1H).
Preparacion de acido (2R,3R)-3-metoxi-2-metil-3-[(2S)-pirroMdin-2-N]propanoico, sal clorhidrato (n.o 103)
Figure imgf000100_0001
A una mezcla de n.o 11 (4,09 g, 14,2 mmol, 1 equiv.) en ciclopentil metil eter (10 ml, 0,14 M) se anadio una solucion 4 N de cloruro de hidrogeno en dioxano (37 ml, 100 mmol, 7 equiv.). Despues de tres horas, la mezcla de reaccion se concentro al vad o y se destilo azeotropicamente tres veces con heptano para dar n.o 103 (1000 mg, 31 %) en forma de una goma, que se uso en la siguiente etapa sin purificacion adicional. RMN 1H (400 MHz , DMSO-d6) 6 9,92-10,06 (s a, 1H), 8,66-8,80 (s a, 1H), 3,89 (dd, J = 5,2, 4,9 Hz , 1H), 3,43-3,53 (m, 1H), 3,39 (s , 3H), 3,06-3,17 (m, 2H), 2,66 (cd, J = 7,1,4,6 Hz , 1H), 1,71-2,03 (m, 4H), 1,11 (d, J = 7,1 Hz , 3H).
Preparacion de 2-Metilalanil-W-[(3R,4S,5S)-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-3-£[1-(biciclo[4,2,0]octa-1,3,5-trien-7-il)-2-metoxi-2-oxoetil] amino}-1-metoxi-2-metil-3-oxopropil]pirrolidin-1-il}-3-metoxi-5-metil-1-oxoheptan-4-il]-W-metil-L-valinamida, sal de acido trifluoroacetico (n.o 107) y 2-metilalanil-W-[(3R,4S,5S)-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-3-{[biciclo [4,2,0]octa-1,3,5-trien-7-il(carboxi)metil]amino}-1 -metoxi-2-metil-3-oxopropil]pirrolidin-1-il}-3-metoxi-5-metil-1-oxoheptan-4-il]-W-metil-L-valinamida, sal de acido trifluoroacetico (n.o 108)
Figure imgf000100_0002
Etapa 1. Smtesis de W-[(9H-fluoren-9-ilmetoxi)carbonil]-2-metilalanil-W-[(3R,4S,5S)-3-metoxi-5-metil-1-oxo-1-(pentafluorofenoxi)heptan-4-il]-A/-metil-L-valinamida (n.o 104). A n.o 32 (4,00 g, 6,56 mmol, 1 equiv.) en diclorometano (20 ml, 0,33 M) y piridina (1,06 ml, 13,1 mmol, 2 equiv.) se anadio gota a gota trifluoro-acetato de pentafluorofenilo (2,25 ml, 13,1 mmol, 2 equiv.). La mezcla de reaccion se agito durante una hora.
En un segundo matraz que contema n.o 32 (360 mg, 0,59 mmol) en diclorometano (0,6 ml, 1 M) y piridina (0,095 ml, 1,2 mmol, 2 equiv.) se anadio gota a gota trifluoroacetato de pentafluorofenilo (0,203 ml, 1,18 mmol). Esta mezcla de reaccion se agito durante 15 minutos.
Las dos mezclas de reaccion se combinaron, se lavaron dos veces con acido dortffdrico acuoso 1 N, se secaron sobre sulfato sodico, se filtraron y se concentraron al vado. El aceite de color amarillo resultante se disolvio en acetato de etilo, se preadsorbio sobre gel de sflice y se purifico por cromatograffa sobre gel de s l^ice (Gradiente: de 0 % a 40 % de acetato de etilo en heptano) para dar n.0104 (4,6 g, 83 %) en forma de una espuma de color bianco que contema algunas impurezas. CL-EM: m/z 798,3 [M+Na+], tiempo de retencion = 1,23 minutos.
Etapa 2. Smtesis de W-[(9H-fIuoren-9-iImetoxi)carboniI]-2-metiiaIaniI-W-[(3R,4S,5S)-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-2-carboxi-1-metoxipropiI]pirroIidin-1-ii}-3-metoxi-5-metiI-1-oxoheptan-4-iI]-W-metiI-L-vaIinamida (n.o i 05). A una mezcla de n.o 104 (2,00 g, <2,58 mmol, 1 equiv.) en diclorometano (6 ml, 0,4 M) se anadio una solucion de n.o 103 (483 mg, 2,16 mmol, 1 equiv.) en diclorometano (2 ml), seguido de diisopropiletilamina (1,35 ml, 7,73 mmol, 3 equiv.). La mezcla de reaccion se agito durante 16 horas, despues se adsorbio sobre s l^ice y se purifico por cromatograffa sobre gel de sflice (Gradiente: de 0 % a 20 % de metanol en diclorometano) para dar n.o 105 (1,67 g, 83 %) en forma de una espuma de color bianco. Las fracciones que conteman el producto deseado con impurezas (0,571 g) se recogieron por separado.
La reaccion y la purificacion anteriores se repitieron de una manera similar usando n.o 104 (2,60 g, <3,35 mmol, 1 equiv.), n.o 103 (750 mg, 3,35 mmol, 1 equiv.), diclorometano (10 ml, 0,3 M) y diisopropiletilamina (1,35 ml, 7,73 mmol, 2,3 equiv.) para dar n.o 105 (2,4 g, 92%) en forma de una espuma de color castano. Las fracciones que conteman producto impuro (1,7 g) con las fracciones impuras previas y se purificaron como se ha descrito anteriormente para proporcionar mas cantidad de n.o 105 (1,30 g, rendimiento cuantitativo para ambas reacciones en dos etapas). CL-Em : m/z 779,3 [M+H+], 802,3 [M+Na+], tiempo de retencion = 1,05 minutos.
Etapa 3. Smtesis de N-[(9H-fIuoren-9-iImetoxi)carboniI]-2-metiIaIaniI-N-[(3R,4S,5S)-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-3-{[1-(biciclo[4,2,0]octa-1,3,5-trien-7-il)-2-metoxi-2-oxoetil]amino}-1-metoxi-2-metil-3-oxopropil]pirrolidin-1-il}-3-metoxi-5-metiI-1-oxoheptan-4-iI]-A/-metiI-L-vaiinamida (n.o 106). A una mezcla de n.o 105 (225 mg, 0,289 mmol, 1 equiv.) en diclorometano (15 ml, 0,02 M) y W,W-dimetilformamida (1 ml) se anadio HATU (136 mg, 0,347 mmol, 1,2 equiv.). Despues de cinco minutos, se anadio una solucion de la amina n.o 102 (72,4 mg, 0,318 mmol, 1 equiv.) y diisopropilamina (203 pi, 1,16 mmol, 3 equiv.) en diclorometano (5 ml). Despues de 24 horas, la mezcla de reaccion se lavo con salmuera, se seco sobre sulfato sodico, se filtro y se concentro al vado sobre gel de sflice, y se purifico por cromatograffa sobre gel de sflice (Gradiente: de 0 % a 50 % de acetona en heptano) para dar el enantiomero individual n.o 106 (210 mg, 76 %) en forma de un aceite transparente. CL-EM: m/z 953,1 [M+H+], tiempo de retencion = 3,99 minutos; RMN 1H (400 MHz , CDCI3), presuntamente una mezcla de rotameros, senales caractensticas: 7,76 (d, J = 7,5 Hz , 2H), 7,57-7,64 (m, 2H), 7,40 (dd, J = 7,5, 7,4 Hz , 2H), 7,28-7,34 (m, 2H), 4,82-4,88 (m, 1H), 3,95-4,01 (m, 1H), 3,76 y 3,82 (2 s, total 3H), 3,30, 3,31, 3,34 y 3,35 (4 s, total 6H), [1,20 (d, J = 7,0 Hz ) y 1,20 (d, J = 7,0 Hz), total 3H].
Etapa 4A. Smtesis de 2-metiIaIaniI-N-[(3R,4S,5S)-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-3-{[1-(bicicIo[4,2,0]octa-1,3,5-trien-7-iI)-2-metoxi-2-oxoetiI]amino}-1-metoxi-2-metiI-3-oxopropiI]pirroiidin-1-iI}-3-metoxi-5-metiI-1-oxoheptan-4-iI]-A/-metiI-L-valinamida, sal de acido trifluoroacetico (n.o i 07). De acuerdo con procedimiento general A, a partir de n.o 106 (25 mg, 0,026 mmol, 1 equiv.) en diclorometano (10 ml, 0,003 M) y dietilamina (4 ml) se sintetizo el material en bruto deseado, que se purifico por cromatograffa de fase inversa (Procedimiento C) para dar el enantiomero individual n.o 107 (16 mg, 73%) en forma de un solido. CL-EM: m/z 730,8 [M+H+], tiempo de retencion = 2,13 minutos; HPLC (Protocolo N): tiempo de retencion = 9,889 minutos.
Etapa 4B. Smtesis de 2-metiIaIaniI-A/-[(3R,4S,5S)-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-3-{[bicicIo[4,2,0]octa-1,3,5-trien-7-iI(carboxi)metiI]amino}-1-metoxi-2-metiI-3-oxopropiI]pirroiidin-1-iI}-3-metoxi-5-metiI-1-oxoheptan-4-iI]-W-metiI-L-valinamida, sal de acido trifluoroacetico (n.o 108). El enantiomero individual n.o 108 (94,5 mg, 57 %) se sintetizo a partir de n.o 106 (190 mg, 0,200 mmol) de acuerdo con un procedimiento similar al descrito para la smtesis de n.o 41 a partir de n.o 4O. CL-EM: m/z 716,8 [M+H+], tiempo de retencion = 2,06 minutos; HPLC (Protocolo N): tiempo de retencion = 9,137 minutos.
Preparacion de 2-metilalanil-W-[(3R,4S,5S)-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-3-{[(1S,2R)-1-hidroxM-fenilpropan-2-N]amino}-1-metoxi-2-metil-3-oxopropil]pirrolidin-1-il}-3-metoxi-5-metil-1-oxoheptan-4-il]-W-metil-L-valinamida (n.0112)
Figure imgf000102_0001
Etapa 1. Smtesis de (2S)-2-[(1R,2R)-3-{[(1S,2R)-1-hidroxi-1-feniIpropan-2-iI]amino}-1-metoxi-2-metiI-3-oxopropil]pirrolidin-1-carboxilato de terc-butilo (n.o 109). A una solucion de n.o 11 (2,00 g, 6,96 mmol, 1 equiv.) en diclorometano (21 ml, 0,3 M) y W,W-dimetiIformamida (3 ml) se anadio HATU (3270 mg, 8,35 mmol, 1,2 equiv.). Despues de dos minutos, se anadieron la amina (1R,2S)-(+)-norefedrina (1,07 mg, 6,96 mmol, 1 equiv.) y trietilamina (1,94 ml, 13,9 mmol, 2 equiv.). Despues de dos horas, la mezcla de reaccion se diluyo con acetato de etilo (100 ml), se lavo con una solucion acuosa 1 M de acido clortffdrico y con salmuera, se seco sobre sulfato sodico, se filtro, se concentro al vado, y se purifico por cromatograffa sobre gel de silice (Gradiente: de 0 % a 60 % de acetato de etilo en heptano) para proporcionar n.o 109 (2,18 g, 74 %) en forma de un solido de color blanco. CL-EM: m/z 321,3 [(M -Boc)+H+], tiempo de retencion = 3,14 minutos; r M n 1H (400 MHz , DMSO-d6), presuntamente una mezcla de rotameros, senales caractensticas: 67,64 (d, J = 8,6 Hz , 1H), 7,24-7,33 (m, 4H), 7,15-7,21 (m, 1H), 5,35 (d a, J = 5 Hz , 1H), 4,45 (dd a, J = 5, 5 Hz , 1H), 3,91-4,00 (m, 1H), 3,30-3,39 (m, 1H), 3,26 (s, 3H), 2,94-3,07 (m, 1H), 2,04-2,14 (m, 1H), 1,46-1,78 (m, 4H), 1,40 (s, 9H), 0,97-1,04 (m, 6H).
Etapa 2. Smtesis de (2R,3R)-W-[(1S,2R)-1-hidroxi-1-fenilpropan-2-N]-3-metoxi-2-metN-3-[(2S)-pirrolidin-2-il]propanamida, sal de acido trifluoroacetico (n.o lio ). De acuerdo con procedimiento general C, a 00C a partir de n.o 109 (414 mg, 0,984 mmol, 1 equiv.), dioxano (5 ml, 0,2 M) y una solucion 4 M de cloruro de hidrogeno en dioxano (15 ml, 60 mmol, 60 equiv.) se sintetizo el compuesto en bruto deseado, que se purifico por cromatograffa de fase inversa (Procedimiento C) para dar n.o 110 (120 mg, 34%) en forma de un ffquido viscoso. CL-EM: m/z 321,1 [M+H+], tiempo de retencion = 0,55 minutos; R m N 1H (400 MHz , DMSO-d6), senales caractensticas: 67,90 (d, J = 8,6 Hz , 1H), 7,28-7,36 (m, 4H), 7,20-7,27 (m, 1H), 4,46 (d, J = 6,2 Hz , 1H), 3,48 (dd, J = 8,6, 2,3 Hz , 1H), 3,38 (s, 3H), 2,92-3,16 (m, 3H), 2,24-2,35 (m, 1H), 1,49-1,88 (m, 4H), 1,09 (d, J = 6,6 Hz , 3H), 1,01 (d, J = 6,6 Hz , 3H).
Etapa 3. Smtesis de N-[(9H-fIuoren-9-iImetoxi)carboniI]-2-metiIaIaniI-N-[(3R,4S,5S)-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-3-{[(1S,2R)-1-hidroxi-1-feniIpropan-2-il]amino}-1-metoxi-2-metiI-3-oxopropiI]pirroIidin-1-iI}-3-metoxi-5-metiI-1-oxoheptan-4-iI]-W-metil-L-valinamida (n.o i l l ) . De acuerdo con procedimiento general D, a partir de n.o 32 (140 mg, 0,230 mmol, 1 equiv.), n.o 110 (110 mg, 0,253 mmol, 1,1 equiv.), diclorometano (3 ml, 0,08 M), W,W-dimetiIformamida (0,5 ml), h A t U (96,2 mg, 0,253 mmol, 1,1 equiv.) y trietilamina (96 pl, 0,69 mmol, 3 equiv.) se sintetizo el producto en bruto deseado, que se purifico por cromatograffa sobre gel de sflice (Gradiente: de 0 % a 40 % de acetona en heptano) para dar n.o i l l (220 mg, 95%). CL-EM: m/z 912,4 [M+H+], 935,4 [M+Na+], tiempo de retencion = 2,15 minutos; HPLC (Protocolo B): m/z 912,5 [M+H+], 934,5 [M+Na+], tiempo de retencion = 10,138 minutos (pureza >94 %); RMN 1H (400 MHz , DMSO-d6), presuntamente una mezcla de rotameros, senales caractensticas: 67,89 (d, J = 7,8 Hz , 2H), 7,66-7,75 (m, 2H), 7,41 (dd, J = 7,4, 7,4 Hz , 2H), 7,12-7,20 (m, 1H), [5,33 (d, J = 4,7 Hz ) y 5,38 (d, J = 4,7 Hz ), total 1H], 3,15, 3,18, 3,22 y 3,23 (4 s, total 6H), 1,30, 1,33, 1,36 y 1,39 (4 s, total 6H), 0,95-1,06 (m, 6H).
Etapa 4. Smtesis de 2-metiIaIaniI-N-[(3R,4S,5S)-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-3-{[(1S,2R)-1-hidroxi-1-feniIpropan-2-iI]amino}-1-metoxi-2-metiI-3-oxopropiI]pirroIidin-1-iI}-3-metoxi-5-metiI-1-oxoheptan-4-iI]-A/-metiI-L-vaIinamida (n.o 112). De acuerdo con procedimiento general A, a partir de n.o i l l (210 mg, 0,230 mmol) en diclorometano (5 ml, 0,05 M) y dietilamina (5 ml) se sintetizo el material en bruto deseado, que se purifico por cromatograffa sobre gel de sflice (Gradiente: de 0 % a 10 % de metanol en diclorometano) para dar una mezcla de un aceite y un solido. Se anadieron eter diefflico y heptano y la mezcla se concentro al vado, produciendo n.o 112 (81 mg, 51 %) en forma de un solido de color bianco. CL-EM: m/z 690,4 [M+H+], tlempo de retenclon = 1,10 minutes; HPLC (Protocolo A): m/z 690,5 [M+H+], 712,4 [M+Na+], tlempo de retenclon = 7,229 mlnutos (pureza > 90 %); RMN 1H (400 MHz , DMSO-da), presuntamente una mezcla de rotameros, senales caractenstlcas: 6 [7,62 (d a, J = 8 Hz ), 7,88 (d a, J = 8 Hz ), 8,07 (d a, J = 9 Hz ) y 8,11 (d a, J = 9 Hz ), total 2H], 7,15-7,34 (m, 5H), [5,34 (d, J = 4 Hz ) y 5,41 (d, J = 5 Hz ), total 1H], 3,18, 3,21, 3,23 y 3,25 (4 s , total 6H), 2,93 y 3,08 (2 s a, total 3H), 1,15, 1,18, 1,21 y 1,25 (4 s , total 6H).
Preparacion de N,2-dimetilalanil-W-{(1S,2R)-4-{(2S)-2-[(1R,2R)-3-{[(1S)-1-carboxi-2-feniletil]amino}-1-metoxi-2-metil-3-oxopropil]pirrolidin-1-il}-2-metoxi-1-[(1S)-1-metilpropil]-4-oxobutil}-W-metil-L-valinamida, sal de acido trifluoroacetico (115).
Figure imgf000103_0001
Etapa 1. Smtesls de N-{(2R,3R)-3-[(2S)-1-{(3R,4S,5S)-4-[{N-[(9H-fluoren-9-llmetoxl)carbonll]-L-valll}(metll)amlno]-3-metoxl-5-metllheptanoll}plrrolldln-2-ll]-3-metoxl-2-metllpropanoll}-L-fenllalanlnato de metllo (n.0113). A una mezcla en agltaclon del dfmero del acldo n.o 5 (12,1 g, 23,0 mM) y n.o 67 (11,5 g, 23,0 mM) en 75 ml de dlclorometano en una atmosfera de nltrogeno, se anadlo HATU (10,8 g, 27,6 mM) seguldo de base de Hunlg (12,1 ml, 69,0 mM). La reacclon se dejo en agltaclon a temperatura amblente durante 15 horas. La reacclon se concentro a un volumen menor, se recoglo con acetato de etllo y se lavo dos veces con HCl 1 N. Despues, la fase organlca se lavo con salmuera, se seco sobre sulfato sodlco, se flltro y se concentro al vacte. Despues, el reslduo se purlflco por cromatograffa sobre gel de sillce (Gradlente: de 0 % a 70 % de acetona en heptanos), produclendo n.o 113 (12,3 g, 62 %) en forma de un solldo de color bianco. CL-EM (Protocolo Q): m/z 855,3 [M+H+], 877,2 [M+Na+], tlempo de retenclon = 2,32 mlnutos; HPLC (Protocolo R): m/z 855,5 [M+H+], tlempo de retenclon = 9,596 mlnutos (pureza > 97 %).
Etapa 2. Smtesls de W-{(2R,3R)-3-metoxl-3-[(2S)-1-{(3R,4S,5S)-3-metoxl-5-metll-4-[metll(L-valll)amlno]heptanoll}plrrolldln-2-ll]-2-metllpropanoll}-L-fenllalanlnato de metllo (n.o 114). De acuerdo con procedlmlento general A, a partlr de n.o 113 (12 g, 14 mmol, 1 equlv.), dlclorometano (60 ml, 0,24 M) y dletllamlna (40 ml, 390 mM) se slntetlzo n.o 114 (5,9 g, 67 %), solldo de color blanco/amarlllo claro, despues de la purlflcaclon por cromatograffa sobre gel de siNce (Gradlente: de 0 % a 25 % de metanol en dlclorometano). CL-EM (Protocolo Q): m/z 633,0 [M+H+], tlempo de retenclon = 1,19 mlnutos. HPLC (Protocolo A): m/z 633,5 [M+H+], tlempo de retenclon = 7,142 mlnutos (pureza > 98 %).
Etapa 3. Smtesls de N,2-dlmetllalanll-N-{(1S,2R)-4-{(2S)-2-[(1R,2R)-3-{[(1S)-1-carboxl-2-fenlletll] amlno }-1-metoxl-2-metll-3-oxopropll]plrrolldln-1-ll}-2-metoxl-1-[(1S)-1-metllpropll]-4-oxobutll}-W-metll-L-vallnamlda-sal de acldo trlfluoroacetlco (n.o 115). A una mezcla en agltaclon de W-[(9H-fluoren-9-llmetoxl)carbonll]-N,2-dlmetllalanlna (167 mg, 0,493 mM), n.o 114 (260 mg, 0,411 mM) y HATU (188 mg, 0,493 mM) en 10 ml de dlclorometano, se anadlo base de Hunlg (0,14 ml, 0,82 mM). La reacclon se dejo en agltaclon a temperatura amblente durante 1 hora y 20 mlnutos. La reacclon se redujo. Se anadlo THF (9 ml) a un materlal en bruto y a esta mezcla en agltaclon se anadlo hldroxldo de iltlo (49,2 mg, 2,06 mM) dlsuelto en 3 ml de agua. La reacclon se dejo en agltaclon a temperatura amblente durante 4 horas. La reacclon se concentro, seguldo de purlflcaclon por cromatograffa C18 de fase lnversa y preslon medla (Gradlente: de 5 % a 45 % de agua en acetonltrllo con TFA al 0,02 % en cada fase) para dar n.o 115 (218 mg, 64%) en forma de un solldo de color bianco. CL-EM (Protocolo Q): m/z 718,7 [M+H+], 740,6 [M+Na+], tlempo de retenclon = 1,21 mlnutos. HPLC (Protocolo A a 450C): m/z 718,4 [M+H+], tlempo de retenclon = 6,903 mlnutos. RMN 1H (400 MHz , DMSO-d6), 68,81-8,95 (m), 8,44-8,50 (m), 8,42 (d), 8,15 (d), 7,14-7,28 (m), 4,71-4,78 (m), 4,57-4,66 (m), 4,49-4,56 (m), 4,41-4,48 (m), 3,94-4,05 (m), 3,72-3,79 (m), 3,39-3,60 (m), 2,95-3,33 (m), 2,78­ 2,89 (m), 2,69 (s ), 2,43-2,50 (m), 2,08-2,42 (m), 1,60-1,92 (m), 1,20-1,57 (m), 0,84-1,11 (m), 0,74-0,83 (m).
Preparacion de 2-metil-L-prolil-N-[(3R,4S,5S)-3-metoxi-1-{2S)-2-[(1R,2R)-1-metoxi-3-{[(2S)-1-metoxi-1-oxo-3-fenilpropan-2-il]amino}-2-metil-3 oxopropil]pirrolidin-1-il}-5-metil-1-oxoheptan-4-il]-N-metil-L-valinamida, sal de acido trifluoroacetico (n.o 117) y 2-metil-L-prolil-N-[(3R,4S,5S)-1-£2S)-2-[(1R,2R)-3-{[(1S)-1-carboxi-2-feniletil] amino}-1-metoxi-2-metil-3-oxopropil] pirrolidin-1-il}-3-metoxi-5-metiM-oxoheptan-4-il]-N-metil-L-valinamida, sal de acido trifluoroacetico (n.o 118).
Figure imgf000104_0001
Etapa 1. Smtesis de 1-(terc-butoxicarbonil)-2-metil-L-prolil-W-{(1S,2R)-4-{(2S)-2-[(1R,2R)-3-{[(1S)-1-bencil-2-metoxi-2-oxoetil]amino}-1-metoxi-2-metil-3-oxopropil]pirrolidin-1-il}-2-metoxi-1-[(lS)-1-metilpropil]4-oxobutil}-W-metil-L-valinamida (n.o 116). A una solucion en agitacion de n.o 114 (1,02 g, 1,6i mmol, 1,0 equiv.) y l-(terc-butoxicarbonil)-2-metil-L-prolina (443 mg, 1,93 mmol, 1,2 equiv.) en 12 ml de diclorometano, se anadio HATu (735 mg, 1,93 mmol, 1,2 equiv.), seguido de base de Hunig (1,12 ml, 6,45 mmol, 4,0 equiv.). La reaccion se dejo en agitacion a temperatura ambiente durante 2 horas. La reaccion se redujo, se diluyo con acetato de etilo antes de lavarse con HCl 0,5 N y salmuera. Despues, los materiales organicos se secaron sobre sulfato sodico, se redujeron a un volumen menor y despues se redujeron sobre silice. Despues, se realizo cromatograffa de sflice (Gradiente: 0 %-45 % de acetona en heptanos) produciendo n.o 116 (1,02 g, 74 %) en forma de un solido de color blanco. CL-EM (Protocolo Q): m/z 844,3 [M+H+], 867,2 [M+Na+], tiempo de retencion = 2,15 minutos.
Etapa 2A. Smtesis de 2-metil-L-prolil-N-{(1S,2R)-4-{(2S)-2-[(1R,2R)-3-{[(1S)-1-bencil-2-metoxi-2-oxoetil] amino}-1-metoxi-2-metil-3-oxopropil]pirrolidin-1-il}-2-metoxi-1-[(1S)-1-metilpropil]-4-oxobutil}-W-metil-L-valinamida, sal de acido trifluoroacetico (n.o 117). A una solucion en agitacion de n.o 116 (450 mg, 0,533 mmol, 1,0 equiv.) en 7 ml de diclorometano a 00C, se anadio TFA (3 ml, 40 mmol, 70 equiv.). La reaccion se dejo en agitacion a 00C durante 5 minutos y despues se dejo calentar a temperatura ambiente mientras se agitaba durante 20 minutos. La reaccion se redujo, se diluyo con diclorometano y una pequena cantidad de metanol antes de reducirse sobre silice. Despues, se realizo cromatograffa de silice (Gradiente: 0 %-20 % de metanol en acetato de etilo) produciendo n.o 117 (396 mg, 89 %) en forma de un solido de color blanco. CL-EM (Protocolo Q): m/z 744,5 [M+H+], 767,2 [M+Na+], tiempo de retencion = 1,40 minutos; HPLC (Protocolo A a 45 oc): m/z 744,5 [M+H+], tiempo de retencion = 7,149 minutos (pureza > 91 %). RMN 1H (400 MHz , DMSO-d6), 68,73-9,14 (m), 8,66 (d a), 8,50 (d), 8,22 (d), 7,12-7,25 (m), 4,67­ 4,74 (m), 4,41-4,63 (m), 3,93-4,00 (m), 3,73 (dd), 3,63 (d), 3,46-3,57 (m), 3,38-3,45 (m), 3,26-3,23 (m), 3,22-3,25 (m), 3,06-3,22 (m), 2,99-3,05 (m), 2,93-2,97 (m), 2,80-2,89 (m), 2,75-2,78 (m), 2,64-2,67 (m), 2,46-2,50 (m), 2,27-2,43 (m), 2,00-2,26 (m), 1,85-1,99 (m), 1,70-1,83 (m), 1,52-1,69 (m), 1,33-1,51 (m), 1,18-1,31 (m), 0,98-1,07 (m), 0,93­ 0,97 (m), 0,82-0,92 (m), 0,71-0,78 (m).
Etapa 2B. Smtesis de 2-metil-L-prolil-N-[(3R,4S,5S)-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-3-{[(1S)-1-carboxi-2-feniletil]amino}-1-metoxi-2-metil-3-oxopropil]pirrolidin-1-il}-3-metoxi-5-metil-1-oxoheptan-4-il]-W-metil-L-valinamida, sal de acido trifluoroacetico (n.o 118). A una solucion en agitacion de n.o 116 (435 mg, 0,515 mmol), en 4 ml de THF en una atmosfera de nitrogeno, se anadio LiOH (24,7 mg, 1,03 mmol, 2,0 equiv.) disuelto en 2 ml de agua. La reaccion se dejo en agitacion a temperatura ambiente hasta que la CL-EM indico la saponificacion del ester mefflico. La reaccion se concentro al vado y despues se puso al vacm. La reaccion se diluyo con diclorometano y se puso en una atmosfera de nitrogeno. A esta mezcla en agitacion se anadio TFA (3 ml, 40,5 mmol, 80 equiv.). La reaccion se dejo en agitacion a temperatura ambiente durante 30 minutos. Despues, la reaccion se redujo. El residuo se purifico por cromatograffa C18 de fase inversa y presion media (Gradiente: de 5 % a 60 % de acetonitrilo en agua con TFA al 0,02 % en cada fase) para dar n.o 118 (396 mg, 89 %) en forma de un solido de color blanco. CL-EM (Protocolo Q): m/z 730,2 [M+H+], tiempo de retencion = 1,18 minutos; HPLC (Protocolo A a 45 oc): m/z 730,5 [M+H+], tiempo de retencion = 7,088 minutos (pureza > 98 %). RMN 1H (400 MHz , DMSO-d6), 69,04-9,13 (m), 8,75-8,87 (m), 8,70 (d), 8,38 (d), 8,11 (d), 7,10-7,24 (m), 4,66-4,74 (m), 4,48-4,64 (m), 4,37-4,47 (m), 3,91-3,99 (m), 3,77 (m), 3,47-3,56 (m), 3,33-3,47 (m), 3,08-3,30 (m), 2,93-3,07 (m), 2,75-2,86 (m), 2,63-2,69 (m), 2,45-2,50 (m), 2,28-2,44 (m), 2,03-2,27 (m), 1,88-2,02 (m), 1,68-1,86 (m), 1,55-1,67 (m), 1,30-1,47 (m), 1,17-1,29 (m), 0,98-1,05 (m), 0,93-0,97 (m), 0,83­ 0,92 (m), 0,71-0,79 (m).
Preparacion de 2-metilalanil-W-[(3R,4S,5S)-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-3-{[(2S)-1-ferc-butoxi-1-oxo-3-fenilpropan-2-il]amino}-1-metoxi-2-metil-3-oxopropil]pirrolidin-1-il}-3-metoxi-5-metil-1-oxoheptan-4-il]-W-metil-L-valinamida (n.o123).
Figure imgf000105_0001
.
Etapa 1. Smtesis de acido (2R,3R)-3-{(2S)-1-[(9H-fluoren-9-ilmetoxi)carbonil]pirrolidin-2-il}-3-metoxi-2-metilpropanoico (n.o 119). A una solucion en agitacion de n.o 11 (2,4 g, 8,4 mmol, 1,0 equiv.) en 10 ml de dioxano en una atmosfera de nitrogeno, se anadio HCl 4 M en dioxano(20 ml, 80 mM, 10 equiv.). La reaccion se dejo en agitacion a temperatura ambiente durante 3 horas antes de concentrarse al vad o y de ponerse a alto vad o. Despues, el material en bruto se disolvio con 30 ml de Na2C03 al 10 %. Despues, esta solucion se anadio a una solucion en agitacion de 1-{[(9H-fluoren-9-Nmetoxi)carbonil]oxi}pirrolidin-2,5-diona (2,96 g, 8,77 mmol, 1,05 equiv.) en 30 ml de DME. La reaccion se dejo en agitacion a temperatura ambiente hasta que la TLC (20 % de metanol/40 % de acetato de etilo/40 % de heptanos) indico el consumo del material de partida desprotegido de Boc. La reaccion se concentro al vad o a un volumen menor, se lavo dos veces con eter, se acidifico a pH 2 usando HCl concentrado y despues se extrajo tres veces con una solucion de diclorometano al 90% y metanol al 10 %. Los materiales organicos se lavaron con bicarbonato sodico saturado y salmuera antes de secarse sobre sulfato sodico, se filtraron y se concentraron al vad o hasta un solido de color pardo n.o 119 (3,4 g, cuant.). CL-EM (Protocolo Q): m/z 410,0 [m +H+], tiempo de retencion = 1,81 minutos.
Etapa 2. Smtesis de W-[(2R,3R)-3-{(2S)-1-[(9H-fluoren-9-ilmetoxi)carbonil]pirrolidin-2-il}-3-metoxi-2-metilpropanoil]-L-fenilalaninato de terc-butilo (n.o 120). A una solucion en agitacion de L-fenilalaninato de terc-butilo, sal clorhidrato (1,67 g, 6,5 mmol, 1,0 equiv.) y n.o 119 (5,9 g, 6,5 mmol, 1,0 equiv.) en 50 ml de diclorometano y 5 ml de DMF, se anadio HATU (2,9 g, 7,9 mmol, 1,2 equiv.), seguido de base de Hunig (5,6 ml, 32 mmol, 5,0 equiv.). La reaccion se dejo en agitacion a temperatura ambiente durante 45 minutos. La reaccion se redujo, se diluyo con acetato de etilo, se lavo con HCl 0,5 N y salmuera antes de concentrarse sobre silice. Despues, se realizo cromatograffa de sflice (Gradiente: 0 %-25 % de acetona en heptano) produciendo n.o 120 (3,14 g, 79 %) en forma de un solido de color bianco amarillo. CL-EM (Protocolo Q): m/z 613,1 [M+H+], tiempo de retencion = 2,37 minutos.
Etapa 3. Smtesis de W-{(2R,3R)-3-metoxi-2-metil-3-[(2S)-pirrolidin-2-il]propanoil}-L-fenilalaninato de terc-butilo (n.o 121). A una solucion en agitacion de n.o 120 (2,87 g, 4,68 mmol, 1,00 equiv.) en 20 ml de diclorometano, se anadio dietilamina (10 ml, 95 mM, 20,5 equiv.). La reaccion se dejo en agitacion a temperatura ambiente durante 2 horas. Se anadio mas dietilamina (10 ml, 95 mmol, 20,5 equiv.) y la reaccion se dejo en agitacion a temperatura ambiente durante 3 horas mas. La reaccion se concentro al vad o y se puso a alto vad o, produciendo n.o 121 (1,8 g, cuant.) en forma de una mezcla de solido y aceite de color amarillo bianco. CL-EM (Protocolo Q): m/z 391,1 [M+H+], tiempo de retencion = 1,05 minutos.
Etapa 4. Smtesis de N-[(9H-fluoren-9-ilmetoxi)carbonil]-2-metilalanil-A/-[(3R,4S,5S)-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-3-{[(2S)-1-tercbutoxi-1-oxo-3-fenilpropan-2-il]amino}-1-metoxi-2-metil-3-oxopropil]pirrolidin-1-il}-3-metoxi-5-metil-1-oxoheptan-4-il] -W-metil-L-valinamida (n.o 122). A una solucion en agitacion de n.o 121 (0,55 g, 1,0 mmol, 1,0 equiv.) en 10 ml de diclorometano y 1 ml de DMF, se anadio n.o 32 (0,62 g, 1,0 mmol, 1,0 equiv.), seguido de HATU (0,42 g, 1,1 mmol, 1,1 equiv.) y base de Hunig (0,72 ml, 4,1 mmol, 4,0 equiv.). La reaccion se dejo en agitacion a temperatura ambiente durante aproximadamente 21 horas. La reaccion se redujo, se diluyo con acetato de etilo y despues se lavo con HCl 0,5 N y salmuera. La fase organica se seco sobre sulfato sodico, se filtro y se concentro a un volumen menor antes de concentrarse sobre silice. Despues, se realizo cromatograffa de sflice (Gradiente: 0 %-40 % de acetona en heptano) produciendo n.o 122 (0,62 g, 62 %) en forma de un solido de color bianco. CL-EM (Protocolo Q): m/z 982,3 [M+H+], tiempo de retencion = 2,44 minutos.
Etapa 5. Smtesis de 2-metilalanil-W-[(3R,4S,5S)-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-3-{[(2S)-1-ferc-butoxi-1-oxo-3-fenilpropan-2-il]amino}-1-metoxi-2-metil-3-oxopropil]pirrolidin-1-il}-3-metoxi-5-metil-1-oxoheptan-4-il]-W-metil-L-valinamida (n.o 123). A una mezcla en agitacion de n.o 122 (600 mg, 0,611 mmol, 1,00 equiv.) en 15 ml de diclorometano, se anadio dietilamina (5 ml, 50 mmol, 80 equiv.). La reaccion se dejo en agitacion a temperatura ambiente durante 3 horas. La reaccion se concentro al vad o y la mezcla se purifico por cromatograffa de sflice (Gradiente: 0 %-40 % de metanol en diclorometano) produciendo n.0123 (0,46 g, 99%) en forma de un solido. CL-EM (Protocolo Q1): m/z 760,3 [M+H+], tiempo de retencion = 0,83 minutos. RMN 1H (400 MHz , CDsOD), 67,14-7,30 (m), 4,70-4,78 (m), 4,56-4,64 (m), 4,05-4,19 (m), 3,87 (dd), 3,79-3,84 (m), 3,72-3,77 (m), 3,62-3,70 (m), 3,46-3,56 (m), 3,37-3,45 (m), 3,33-3,36 (m), 3,16-3,24 (m), 3,09-3,11 (m), 2,98-3,05 (m), 2,95 (d), 2,91 (d), 2,87 (d), 2,83 (d), 2,73-2,79 (m), 2,40-2,51 (m), 2,29-2,39 (m), 2,16-2,28 (m), 2,04-2,15 (m), 2,01 (s), 1,73-1,96 (m), 1,50-1,68 (m), 1,47-1,49 (m), 1,46 (s), 1,43 (s), 1,38 (s), 1,35 (d), 1,23-1,32 (m), 1,17-1,22 (m), 1,15 (d), 1,04-1,11 (m), 0,94-1,03 (m), 0,82-0,91 (m).
Preparacion de Ejemplo de Referenda de W-[(2R,3R)-3-{(2S)-1-[(3R,4S,5S)-4-{[N-(3-amino-2,2-dimetilpropanoil)-L-valil] (metil)amino}-3-metoxi-5-metilheptanoil]pirrolidin-2-il}-3-metoxi-2-metilpropanoil]-L-fenilalaninato de metilo (n.o 126).
Figure imgf000106_0001
Etapa 1. Smtesis de acido 3-{[(9H-fluoren-9-ilmetoxi)carbonil]amino}-2,2-dimetilpropanoico (n.o 124). Una solucion de clorhidrato del acido 3-amino-2,2-dirnetilpropanoico (1,0 g, 6,5 mmol, 1,0 equiv.) en 10 ml de Na2C03 al 10% se anadio a una solucion de 1-{[(9H-fluoren-9-ilmetoxi)carbonil]oxi}pirrolidin-2,5-diona (2,3 g, 6,5 mmol, 1,0 equiv.) en 10 ml de DME. La reaccion se dejo en agitacion a temperatura ambiente durante una noche. La reaccion se concentro a un volumen menor y despues se lavo dos veces con eter. La fase acuosa se acidifico a pH <2 con HCl concentrado y despues se extrajo tres veces con una solucion de metanol al 10 % y diclorometano al 90 %. Los materiales organicos se combinaron antes de lavarse con HCl 1 M y salmuera. La fase organica se seco sobre sulfato sodico y se concentro al vado, produciendo n.o 124 (2,2 g, 98 %) en forma de un solido de color bianco. CL­ EM (Protocolo Q1): m/z 362,0 [M+Na+]; tiempo de retencion = 0,89 minutos.
Etapa 2. Smtesis de N-[(2R,3R)-3-{(2S)-1-[(3R,4S,5S)-4-{[N-(3-{[(9H-fluoren-9-ilmetoxi)carbonil]amino}-2,2-dimetilpropanoil)-L-valil](metil)amino}-3-metoxi-5-meTilheptanoil]pirrolidin-2-il}-3-metoxi-2-metilpropanoil]-L-fenilalaninato de metilo (n.o 125). A una solucion en agitacion de n.o 114 (200 mg, 0,316 mmol, 1,00 equiv.) en 2 ml de diclorometano, se anadio n.o 124 (107 mg, 0,316 mmol, 1,00 equiv.), seguido de base de Hunig (0,167 ml, 0,948 mmol, 3,00 equiv.) y HATU (149 mg, 0,379 mmol, 1,20 equiv.). La reaccion se dejo en agitacion a temperatura ambiente durante ~12 horas. La reaccion se concentro a un volumen menor, se recogio en 10 ml de acetato de etilo y se lavo dos veces con 5 ml de HCl 1 M y una vez con 5 ml de salmuera. La fase organica se seco sobre sulfato sodico y se decanto. Los materiales organicos se concentraron al vado y el material en bruto se recogio en diclorometano. El precipitado se filtro. La fase organica se concentro al vado y el residuo se purifico por cromatograffa de silice (Gradiente: 0 %-50 % de acetona en heptano) produciendo n.o 125 (235 mg, 78 %) en forma de un solido de color bianco. CL-EM (Protocolo Q): m/z 954,2 [M+H+], tiempo de retencion = 2,28 minutos.
Etapa 3. Smtesis de W-[(2R,3R)-3-{(2S)-1-[(3R,4S,5S)-4-{[N-(3-amino-2,2-dimetilpropanoil)-L-valil](metil)amino}-3-meToxi-5-metilheptanoil]pirrolidin-2-il}-3-metoxi-2-metilpropanoil]-L-fenilalaninato de metilo (n.o 126). A una solucion en agitacion de n.o 125 (235 mg, 0,246 mmol, 1,00 equiv.) en 2 ml de THF, se anadio dietilamina (1 ml, 10 mM, 40,6 equiv.). La reaccion se dejo en agitacion a temperatura ambiente durante 3 horas. La reaccion se concentro al vado y el residuo se purifico por cromatograffa de sflice (Gradiente: 0 %-30 % de metanol en acetato de etilo) produciendo n.o 126 (101 mg, 56 %) en forma de un solido de color bianco. CL-EM (Protocolo Q): m/z 732,2 [M+H+], tiempo de retencion = 1,32 minutos. RMN 1H (400 MHz , DMSO-d6), 68,51 (dd), 8,28 (d), 7,15-7,29 (m), 5,77 (s), 4,55-4,77 (m), 4,44-4,54 (m), 3,94-4,10 (m), 3,73-3,79 (m), 3,66 (d), 3,49-3,60 (m), 3,40-3,48 (m), 3,10-3,36 (m), 3,00-3,09 (m), 2,83-2,98 (m), 2,57-2,77 (m), 2,19-2,46 (m), 1,87-2,14 (m), 1,61-1,86 (m), 1,36-1,55 (m), 1,23-1,36 (m), 1,12-1,22 (m), 0,97-1,11 (m), 0,82-0,96 (m), 0,73-0,81 (m).
Preparacion de N,2-dimetilalanil-W-[(3R,4S,5S)-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-3-{[(2S)-1-ferc-butoxi-1-oxo-3-fenilpropan-2-il]amino}-1-metoxi-2-metil-3-oxopropil]pirrolidin-1-il}-3-metoxi-5-metil-1-oxoheptan-4-il]-W-metil-L-valinamida (n.o130).
Figure imgf000107_0001
Etapa 1. Smtesis de W-[(9H-fluoren-9-ilmetoxi)carbonil]-N,2-dimetilalanil-W-[(3R,4S,5S)-1-terc-butoxi-3-metoxi-5-metil-1-oxoheptan-4-il]-A/-metil-L-valinamida (n.o 127). En un matraz de fondo redondo que contema n.06 (4,7 g, 7,9 mmol, 1,0 equiv.) y A/-[(9H-fluoren-9-ilmetoxi)carbonil]-N,2-dimetilalanina (3,2 g, 9,4 mmol, 1,2 equiv.) y una barra de agitacion en una atmosfera de nitrogeno, se anadieron 50 ml de diclorometano, seguido de HATU (3,6 g, 9,4 mmol, 1,2 equiv.) y base de Hunig (5,5 ml, 32 mmol, 4,0 equiv.). La reaccion se dejo en agitacion a temperatura ambiente durante ~ l2 horas. La reaccion se redujo a un volumen menor, se recogio en acetato de etilo, antes de lavarse con HCl 1 N y salmuera. Despues, los materiales organicos se secaron sobre sulfato sodico, se filtraron y despues se redujeron sobre silice, El residuo se purifico por cromatograffa de silice (Gradiente: 0 %-30 % de acetona en heptano) produciendo n.o 127 (4,2 g, 78 %) en forma de un solido de color bianco. CL-EM (Protocolo Q): m/z 680,2 [M+H+], tiempo de retencion = 2,52 minutos.
Etapa 2. Smtesis de W-[(9H-fluoren-9-ilmetoxi)carbonil]-N,2-dimetilalanil-A/-[(2R,3S,4S)-1-carboxi-2-metoxi-4-metilhexan-3-il]-A/-metil-L-valinamida, (n.o 128). A una solucion en agitacion de n.o 127 (4,2 g, 6,1 mmol, 1,0 equiv.) en 21 ml de diclorometano en una atmosfera de nitrogeno, se anadio TFA (7 ml, 90 mmol, 10 equiv.). La reaccion se dejo en agitacion a temperatura ambiente durante ~4 horas. La reaccion se concentro al vado, se destilo azeotropicamente una vez con heptano y despues se puso a alto vado, produciendo n.o 128 en forma de un solido de color bianco amarillo claro (3,8 g, cuant.). CL-EM (Protocolo Q): m/z 624,2 [M+H+], tiempo de retencion = 2,01 minutos.
Etapa 3. Smtesis de N-[(9H-fluoren-9-ilmetoxi)carbonil]-N,2-dimetilalanil-N-[(3R,4S,5S)-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-3-{[(2S)-1-terc-butoxi-1-oxo-3-fenilpropan-2-il]amino}-1-metoxi-2-metil-3-oxopropil]pirrolidin-1-il}-3-metoxi-5-metil-1-oxoheptan-4-il]-A/-metil-L-valinamida (n.o 129). A una solucion en agitacion de n.o 128 (1,67 g, 3,1 mmol, 1,0 equiv.) en 20 de diclorometano y 2 ml de DMF, se anadio n.o 121 (2,4 g, 3,1 mmol, 1,0 equiv.), seguido de HATU (1,29 g, 3,39 mmol, 1,1 equiv.) y despues base de Hunig (2,2 ml, 12,3 mmol, 4,0 equiv.). La reaccion se dejo en agitacion a temperatura ambiente durante ~2 horas. La reaccion se redujo, se diluyo con acetato de etilo antes de lavarse con HCl 0,5 N y salmuera. Los materiales organicos se secaron sobre sulfato sodico y despues se redujeron sobre s l^ice, El residuo se purifico por cromatograffa de silice (Gradiente: 0 %-50 % de acetona en heptanos) produciendo n.o 129 (1,9 g, 62 %) en forma de un solido de color bianco. CL-EM (Protocolo Q): m/z 996,3 [M+H+]; tiempo de retencion =2,53 minutos.
Etapa 4. Smtesis de N,2-dimetilalanil-N-[(3R,4S,5S)-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-3-{[(2S)-1-terc-butoxi-1-oxo-3-fenilpropan-2-il] amino}-1-metoxi-2-metil-3-oxopropil]pirrolidin-1-il}-3-metoxi-5-metil-1-oxoheptan-4-il]-A/-metil-L-valinamida (n.o 130). A una solucion en agitacion de n.o 129 (823 mg, 0,826 mmol, 1,00 equiv.) en 15 ml de diclorometano, se anadio dietilamina (4 ml, 40 mmol, 50 equiv.). La reaccion se dejo en agitacion a temperatura ambiente durante ~14 A horas. La reaccion se concentro al vado y se destilo azeotropicamente una vez con heptanos. El residuo se diluyo con diclorometano y una pequena cantidad de metanol antes de reducirse sobre silice, El residuo se purifico por cromatograffa de silice (Gradiente: 0 %-20 % de metanol en acetato de etilo) produciendo n.o 130 (518 mg, 81 %) en forma de un solido de color bianco. CL-EM (Protocolo Q): m/z 774,3 [M+H+]; tiempo de retencion =1,48 minutos. HPLC (Protocolo A a 25 oc): m/z 774,5 [M+H+], tiempo de retencion = 7,733 minutos (pureza > 98 %). RMN 1H (400 MHz , DMSO-d6), 68,36 (d). 8,14 (d), 7,81 (t), 7,14-7,25 (m), 7,01-7,07 (m), 4,87-4,94 (m), 4,78-4,85 (m), 4,67-4,76 (m), 4,46-4,65 (m), 4,29-4,40 (m), 3,93-4,03 (m), 3,70-3,81 (m), 3,49-3,60 (m), 3,38-3,47 (m), 3,29-3,36 (m), 3,15­ 3,28 (m), 2,98-3,13 (m), 2,94 (s a), 2,74-2,89 (m), 2,64-2,69 (m), 2,18-2,45 (m), 2,02-2,14 (m), 1,90-2,01 (m), 1,62­ 1,87 (m), 1,40-1,55 (m), 1,37 (d), 1,20-1,33 (m), 1,16 (d), 1,01-1,10 (m), 0,90-0,98 (m), 0,82 -0,89 (m), 0,69-0,79 (m).
Preparacion de 2-metil-D-prolil-W-[(3R,4S,5S)-3-metoxi-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-1-metoxi-3-{[(2S)-1-metoxi-1-oxo-3-fenilpropan-2-il]amino}-2-metil-3-oxopropil]pirrolidin-1-il}-5-metil-1-oxoheptan-4-il]-W-metil-L-valinamida, sal de acido trifluoroacetico (n.0131).
Figure imgf000108_0001
Etapa 1. Smtesis de sal de acido trifluoroacetico de 2-metil-D-prolil-A/-[(3R,4S,5S)-3-metoxi-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-1-metoxi-3-{[(2S)-1-metoxi-1-oxo-3-fenilpropan-2-il]amino}-2-metil-3-oxopropil]pirrolidin-1-il}-5-metil-1-oxoheptan-4-il]-W-metil-L-valinamida (n.o 131). A una solucion en agitacion de n.o 114 (164 mg, 0,259 mmol, 1,0 equiv.) y 1-(tercbutoxicarbonil)-2-metil-D-prolina (71,3 mg, 0,311 mmol, 1,2 equiv.) en 4 ml de diclorometano, se anadio hAt U (118 mg, 0,311 mmol, 1,2 equiv.), seguido de base de Hunig (0,180 ml, 1,04 mmol, 4 equiv.). La reaccion se dejo en agitacion a temperatura ambiente durante ~30 minutos. La reaccion se redujo. La reaccion se recogio en 3,5 ml de diclorometano y se puso en una atmosfera de nitrogeno. A esta solucion en agitacion, se anadio TFA (1,5 ml, 20 mmol, 76 equiv.). La reaccion se dejo en agitacion a temperatura ambiente durante ~1 hora. La reaccion se redujo y se puso a alto vad o. La purificacion por (Procedimiento J*) proporciono n.o 131 (119 mg, 54%) en forma de un solido de color blanco. HPLC (Protocolo A a 450C): m/z 744,5 [M+H+], tiempo de retencion = 7,342 minutos (pureza > 98 %). RMN 1H (400 MHz , DMSO-d6), 69,08-9,18 (m), 8,79-8,89 (m), 8,76 (t), 8,54 (d), 8,29 (d), 7,14-7,31 (m), 4,70-4,79 (m), 4,57-4,66 (m), 4,45-4,55 (m), 3,96-4,04 (m), 3,74-3,80, 3,66 (d), 3,48-3,61 (m), 3,40-3,48 (m), 3,09­ 3,34 (m), 3,00-3,09 (m), 2,95-3,00 (m), 2,83-2,93 (m), 2,36-2,53 (m), 2,21-2,35 (m), 2,10-2,19 (m), 1,99-2,10 (m), 1,61-1,09 (m), 1,36-1,53 (m), 1,21-1,35 (m), 1,02-1,10 (m), 0,94-1,0 (m), 0,86-0,93 (m), 0,73-0,82 (m).
Preparacion de 2-metil-L-prolil-W-[(3R,4S,5S)-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-3-{[(1S,2R)-1-hidroxi-1-fenilpropan-2-il]amino}-1-metoxi-2-metil-3-oxopropil]pirrolidin-1-il}-3-metoxi-5-metil-1-oxoheptan-4-il]-W-metil-L-valinamida, sal de acido trifluoroacetico (n.o 134).
Figure imgf000108_0002
Etapa 1. Smtesis de N~2~-[(9H-fluoren-9-ilmetoxi)carbonil]-N-[(3R,4S,5S)-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-3-{[(1S,2R)-1-hidroxi-1-fenilpropan-2-il]amino}-1-metoxi-2-metil-3-oxopropil]pirrolidin-1-il}-3-metoxi-5-metil-1-oxo-heptan-4-il]-A/-metil-L-valinamida (n.o 132). En un matraz que contema n.o @5 (1,14 g, 2,17 mmol, 1,0 equiv.), se anadieron 10 ml de diclorometano, seguido de base de Hunig (1,15 ml, 6,52 mmol, 3,0 equiv.), HATU (1,02 g, 2,61 mmol, 1,2 equiv.) y n.o 110 (0,776 g, 2,17 mmol, 1,0 equiv.). La reaccion se dejo en agitacion a temperatura ambiente durante 30 minutos y despues se concentro al vado. El material en bruto se recogio en 50 ml de acetato de etilo, se lavo dos veces con 25 ml de HCl 1 M y una vez con 25 ml de salmuera. Los materiales organicos se secaron sobre sulfato sodico y se decantaron. Los materiales organicos se concentraron al vad o, se recogieron en 30 ml de diclorometano y el precipitado resultante se retiro por filtracion. Los materiales organicos se concentraron al vad o y el residuo se purifico por cromatograffa de sflice (Gradiente: 0 %-50 % de acetona en heptanos) produciendo n.o 132 (1,33 g, 81 %) en forma de un solido. CL-EM (Protocolo Q): m/z 849,2 [M+Na+]; tiempo de retencion = 2,19 minutos.
Etapa 2. Smtesis de N-[(3R,4S,5S)-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-3-{[(1S,2R)-1-hidroxi-1-fenilpropan-2-il]amino}-1-metoxi-2-meiil-3-oxopropil]pirrolidin-1-il}-3-metoxi-5-metil-1-oxoheptan-4-il]-A/-metil-L-valinamida (n.o 133). A una solucion en agitacion de n.o 132 (1,33 g, 1,60 mmol, 1,0 equiv.) en 10 ml de THF se anadio dietilamina (5 ml, 50 mM, 31,3 equiv.). La reaccion se dejo en agitacion a temperatura ambiente durante 4 horas. La reaccion se concentro al vad o y el residuo se purifico por cromatograffa de sflice (Gradiente: 0 %-30 % de metanol en acetato de etilo) produciendo n.o 133 (418 mg, 43 %) en forma de un solido de color blanco. CL-EM (Protocolo Q1): m/z 605,2 [M+H+]; tiempo de retencion = 1,48 minutos.
Etapa 3. Smtesis de 2-metil-L-prolil-N-[(3R,4S,5S)-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-3-{[(1S,2R)-1-hidroxi-1-fenilpropan-2-il] amino }-1-metoxi-2-metil-3-oxopropil]pirrolidin-1-il}-3-metoxi-5-metil-1-oxoheptan-4-il]-N-metil-L-valinamida, sal de acido trifluoroacetico (n.0134). Se combinaron HATU (151 mg, 0,398 mmol, 1,2 equiv.), n.0133 (201 mg, 0,332 mmol, 1,0 equiv.) y 1-(terc-butoxicarbonil)-2-metil-L-prolina (91,3 mg, 0,398 mM, 1,2 equiv.) en un matraz de fondo redondo que contema una barra de agitacion en una atmosfera de nitrogeno. Se anadieron 5 ml de diclorometano, seguido de base de Hunig (0,231 ml, 1,33 mmol, 4,0 equiv.). La reaccion se dejo en agitacion a temperatura ambiente durante ~15 horas. Despues, la reaccion se concentro al vado y se puso a alto vado. Despues, se anadieron 4 ml de dioxano al residuo, seguido de HCl 4 M en dioxano (4 ml, 20 mmol, 50 equiv.). Despues, la reaccion se dejo en agitacion a temperatura ambiente durante 1 hora. Despues, la reaccion se concentro al vado y el residuo se purifico por cromatograffa C18 de fase inversa y presion media (Gradiente: de 5 % a 90 % de acetonitrilo en agua con TFA al 0,02 % en cada fase) para dar n.o 134 (237 mg, 86 %) en forma de un solido de color bianco. CL-EM (Protocolo Q): m/z 716,3 [M+H+], tiempo de retencion = 1,16 minutos; HPLC (Protocolo A a 450C): m/z 716,5 [M+H+], tiempo de retencion = 6,930 minutos (pureza > 98 %). RMN 1H (400 MHz , DMSO-d6), 9,12-9,21 (m), 8,79-8,90 (m), 8,70-8,78 (m), 7,95 (d), 7,64 (d), 7,25-7,36 (m), 7,16-7,23 (m), 4,74-4,80 (m), 4,61-4,69 (m), 4,41-4,59 (m), 3,91-4,06 (m), 3,78 (dd), 3,54-3,64 (m), 3,45-3,51 (m), 3,17-3,36 (m), 3,02-3,15 (m), 3,00 (s a), 2,40-2,48 (m), 2,24-2,35 (m), 1,91-2,21 (m), 1,68-1,90 (m), 1,61-1,68 (m), 1,48-1,59 (m), 1,22-1,35 (m), 0,97-1,09 (m), 0,84-0,97 (m), 0,74-0,83 (m).
Preparacion de N,2-dimetilalanil-N-{(1S,2R)-4-£(2S)-2-[(1R,2R)-3-£[(1S)-1-bencil-2-(metilamino)-2-oxoetil]amino}-1-metoxi-2-metil-3-oxopropil]pirrolidin-1-il}-2-metoxM-[(1S)-1-metilpropil]-4-oxobutil}-N-metil-L-valinamida, sal de acido trifluoroacetico (n.o 140), N,2-dimetilalanil-N-{(1S,2R)-4-£(2S)-2-[(1R,2R)-3-£[(1S)-2-amino-1-bencil-2-oxoetil]amino}-1-metoxi-2-metil-3-oxopropil]pirrolidin-1-il}-2-metoxi-1-[(1S)-1-metilpropil]-4-oxobutil}-N-metil-L-valinamida, sal de acido trifluoroacetico (n.o 141), N,2-dimetilalanil-N-{(1S,2R)-4-{(2S)-2-[(1R,2R)-3-{[(1S)-1-bencil-2-oxo-2-(propilamino)etil]amino}-1-metoxi-2-metil-3-oxo-propil]pirrolidin-1-il}-2-metoxi-1-[(1S)-1-metilpropil]-4-oxobutil}-N-metil-L-valinamida, sal de acido trifluoroacetico (n.o 142), N,2-dimetilalanil-N-{(1S,2RM-{(2S)-2-[(1R,2R)-3-{[(1S)-1-bencil-2-(dietilamino)-2-oxoetil]amino}-1-metoxi-2-metil-3-oxopropil]pirrolidin-1-il}-2-metoxi-1-[(1S)-1-metilpropil]-4-oxobutil}-N-metil-L-valinamida, sal de acido trifluoroacetico (n.o 143, y N,2-dimetilalanil-N-{(1S,2R)-4-{(2S)-2-[(1R,2R)-3-{[(1S)-1-bencil-2-(ferc-butilamino)-2-oxoetil]amino}-1-metoxi-2-metil-3-oxopropil]pirrolidin-1-il}-2-metoxi-1-[(1S)-1-metilpropil]-4-oxobutil}-N-metil-L-valinamida, sal de acido trifluoroacetico (n.o 144).
Figure imgf000110_0001
Etapa 1. Smtesis de W-[(9H-fluoren-9-ilmetoxi)carbonil]-N,2-dimetilalanil-W-[(3R,4S,5S)-3-metoxi-5-metil-1-oxo-1-(pentafluorofenoxi)heptan-4-il]-A/-metil-L-valinamida (n.0 135). Se anadio 3,3,3-trifluoropropanoato de pentafluorofenilo (2,44 ml, 13,4 mmol, 2,0 equiv.) a una solucion de n.o 128 (4,18 g, 6,70 mmol, 1,0 equiv.) en 50 ml de diclorometano, seguido de piridina (1,61 ml, 20,1 mmol, 3,0 equiv.). La reaccion se dejo en agitacion a temperatura ambiente durante ~12 horas. La reaccion se concentro al vado y el residuo se purifico por cromatograffa de silice (Gradiente: 0 %-70 % de acetona en heptanos) produciendo n.o 135 (5,2 g, 98 %) en forma de una espuma de color blanco. CL-EM (Protocolo Q1): m/z 812,1 [M+Na+]; tiempo de retencion = 1,24 minutos.
Etapa 2. Smtesis de W-[(9H-fluoren-9-ilmetoxi)carbonil]-N,2-dimetilalanil-W-[(3R,4S,5S)-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-2-carboxi--metoxipropil]pirrolidin-1-il}-3-metoxi-5-metil-1-oxoheptan-4-il]-W-metil-L-valinamida (n.o 136). A una solucion en agitacion de HCI 4 M en dioxano (10 ml, 25 mmol, 3,7 equlv.) en 10 ml de dloxano se anadio n.011 (2,31 g, 8,05 mmol, 1,2 equiv.). La reaccion se dejo en agitacion a temperatura ambiente durante 6 horas. La reaccion se concentro al vado produciendo una goma de color amarillo. Una solucion de n.o 135 (5,3 g, 6,7 mmol, 1,0 equiv.) en 30 ml de diclorometano se anadio al residuo previo, seguido de base de Hunig (3,5 ml, 20 mmol, 3 equiv.). La reaccion se dejo en agitacion a temperatura ambiente durante 4 horas. La reaccion se diluyo con diclorometano antes de lavarse con una solucion acuosa al 1 % de HCI y despues salmuera. La fase organica se seco sobre sulfato sodico, se concentro al vado y el residuo se purifico por cromatograffa de s l^ice (Gradiente: 20 %-50 % de acetato de etilo en heptanos, seguido de 93 % de acetato de etilo y 6,6 % de metanol y 0,4 % de acido acetico) produciendo n.o 136 (4,87 g, 92 %) en forma de un solido de color blanquecino. CL-EM (Protocolo Q1): m/z 793,3 [M+H+]; tiempo de retencion =1,07 minutos.
Etapa 3. Smtesis de W-[(9H-fIuoren-9-iImetoxi)carboniI]-N,2-dimetiiaIaniI-W-[(3R,4S,5S)-3-metoxi-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-1-metoxi-2-metiI-3-oxo-3-(pentafIuorofenoxi)propiI]pirroIidin-1-iI}-5-metiI-1-oxoheptan-4-iI]-A/-metiI-L-vaIinamida (n.o 137). Se anadio 3,3,3-trifIuoropropanoato de pentafluorofenilo (1,3 ml, 7,1 mmol, 2,0 equiv.) a una solucion de n.o 136 (2,8 g, 3,5 mmol, 1,0 equiv.) en 30 ml de diclorometano, seguido de la adicion de piridina (0,85 ml, 10,6 mM). La reaccion se dejo en agitacion a temperatura ambiente durante 2 horas. La reaccion se concentro al vado, y el residuo se purifico por cromatograffa de sflice (Gradiente: 0 %-70 % de acetona en heptano) produciendo n.o 137 (3,1 g, 92 %) en forma de un polvo de color bianco. CL-EM (Protocolo Q1): m/z 959,2 [M+H+]; tiempo de retencion =1,28 minutos.
Etapa 4. Smtesis de N-[(9H-fIuoren-9-iImetoxi)carboniI]-N,2-dimetiIaIaniI-N-[(3R,4S,5S)-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-3-{[(1S)-1-carboxi-2-feniIetiI]amino}-1-metoxi-2-metiI-3-oxopropiI]pirroIidin-1-iI}-3-metoxi-5-metii-1-oxoheptan-4-iI]-W-metiI-L-valinamida (n.o 138). A una solucion en agitacion de n.o 137 (493 mg, 0,514 mmol, 1,0 equiv.) en 4 ml de DMF, se anadio L-fenilalanina (84,9 mg, 0,514 mmol, 1,0 equiv.), seguido de base de Hunig (0,27 ml, 1,54 mmol, 3,0 equiv.). La reaccion se dejo en agitacion a temperatura ambiente durante ~12 horas. La reaccion se concentro al vado y el residuo se purifico por cromatograffa de sflice (Gradiente: 0 %-100 % de acetato de etilo en heptano) produciendo n.o 138 (200 mg, 41 %) en forma de una espuma de color bianco. CL-EM (Protocolo Q1): m/z 94o,3 [M+H+]; tiempo de retencion =1,08 minutos.
Etapa 5. Smtesis de W-[(9H-fIuoren-9-iImetoxi)carboniI]-N,2-dimetiiaIaniI-W-[(3R,4S,5S)-3-metoxi-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-1-metoxi-2-metiI-3-oxo-3-{[(2S)-1-oxo-1-(pentafiuorofenoxi)-3-feniIpropan-2-iI]amino}propiI]pirroIidin-1-iI}-5-metiI-1-oxoheptan-4-iI]-A/-metiI-L-vaiinamida (n.o 139). A una solucion en agitacion de n.o 138 (200 mg, 0,213 mmol, 1,0 equiv.) en 5 ml de diclorometano, se anadio 3,3,3-trifiuoropropanoato de pentafluorofenilo (126 mg, 0,426 mM, 2,0 equiv.), seguido de piridina (0,051 ml, 0,64 mmol, 3,0 equiv.). La reaccion se dejo en agitacion a temperatura ambiente durante ~12 horas. La reaccion se concentro al vado y el residuo se purifico por cromatograffa de sflice (Gradiente: 0 %-100 % de acetato de etilo en heptanos) produciendo n.o 139 (174 mg, 74 %) en forma de un aceite de color amarillo. CL-EM (Protocolo Q1): m/z 1128 [M+Na+]; tiempo de retencion = 1,23 minutos.
Etapa 6A. Smtesis de N,2-dimetiIaIaniI-A/-{(1S,2R)-4-{(2S)-2-[(1R,2R)-3-{[(1S)-1-benciI-2-(metiIamino)-2-oxoetiI]amino}-1-metoxi-2-metiI-3-oxopropiI]pirroIidin-1-iI}-2-metoxi-1-[(1S)-1-metiIpropilj-4-oxobutiI}-W-metiI-L-valinamida, sal de acido trifluoroacetico (n.o 140). A una solucion agitada de n.o 139 (20 mg, 0,018 mmol, 1,0 equiv.) en 1 ml de THF se anadio metilamina (1 M en THF, 0,18 ml, 0,18 mmol, 10 equiv.) y la mezcla se agito a temperatura ambiente durante 3 horas. La reaccion se redujo y se diluyo con DMSO y se sometio a purificacion (Procedimiento J*). Las fracciones se recogieron y se concentraron al vado para dar n.o 140 (4,0 mg, 30 %) en forma de un solido de color bianco. CL-EM (Protocolo Q1): m/z 731,2 [M+H+], tiempo de retencion = 0,70 minutos. RMN 1H (400 MHz , metanoi-d4), 7,30-7,41 (m), 4,71-4,78 (m), 4,58-4,69 (m), 4,04-4,15 (m), 3,86-3,98 (m), 3,73-3,78 (m), 3,61-3,70 (m), 3,50-3,58 (m), 3,32-3,47 (m), 3,23-3,26 (m), 3,17-3,22 (m), 3,07-3,15 (m), 2,95-2,98 (m), 2,76­ 2,91 (m), 2,68-2,75 (m), 2,63-2,66 (m), 2,43-2,51 (m), 2,22-2,28 (m), 1,99-2,11 (m), 1,74-1,96 (m), 1,21-1,31 (m), 1,17-1,20 (m), 0,92-1,10 (m), 0,79-0,89 (m).
Etapa 6B. Smtesis de N,2-dimetiIaIaniI-A/-{(1S,2R)-4-{(2S)-2-[(1R,2R)-3-{[(1S)-2-amino-1-benciI-2-oxoetii]amino}-1-metoxi-2-metiI-3-oxopropiI]pirroIidin-1-iI}-2-metoxi-1-[(1S)-1-metiIpropiI]-4-oxobutiI}-W-metiI-L-vaiinamida, sal de acido trifluoroacetico (n.o 141). Siguiendo el mismo procedimiento que para el n.o 140 usando n.o 139 (20 mg, 0,018 mmol, 1,0 equiv.), una solucion de amoniaco (7 M en metanol, 0,026 ml, 0,18 mmol, 10 equiv.) y purificacion (Procedimiento j*), se obtuvo n.o 141 (3,0 mg, 20 %) en forma de un solido de color bianco. CL-EM (Protocolo Q): m/z 717,2 [M+H+], tiempo de retencion = 0,79 minutos. RMN 1H (400 MHz , metanoi-d4), 7,22-7,30 (m), 7,14-7,21 (m), 4,57-4,480 (m), 4,02-4,17 (m), 3,92-3,98 (m), 3,84-3,91 (m), 3,32-3,74 (m), 3,17-3,27 (m), 3,06-3,14 (m), 2,77-3,05 (m), 2,65 (s), 2,43-2,51 (m), 2,21-2,26 (m), 1,98-2,13 (m), 1,70-1,94 (m), 1,32-1,69 (m), 1,16-1,31 (m), 0,89-1,13 (m), 0,80-0,88 (m).
Etapa 6C. Smtesis de N,2-dimetiIaIaniI-N-{(1S,2R)-4-{(2S)-2-[(1R,2R)-3-{[(1S)-1-benciI-2-oxo-2-(propiIamino)etiI]amino}-1-metoxi-2-metiI-3-oxopropiI]pirroIidin-1-iI}-2-metoxi-1-[(1S)-1-metiIpropii]-4-oxobutiI}-A/-metiI-L-valinamida, sal de acido trifluoroacetico (n.o 142). Siguiendo el mismo procedimiento que para el n.o 140 usando n.o 139 (20 mg, 0,018 mmol, 1,0 equiv.), n-propilamina (1 M en THF, 0,18 ml, 0,18 mmol, 10. equiv.) y purificacion (Procedimiento j*), se obtuvo n.o 142 (3,0 mg, 20 %) en forma de un solido de color bianco. CL-EM (Protocolo Q): m/z 759,2 [M+H+], tiempo de retencion = 0,74 minutos. RMN 1H (400 MHz , metanoi-d4), 7,15-7,29 (m), 4,71-4,79 (m), 4,52-4,68 (m), 4,04-4,17 (m), 3,87-3,99 (m), 3,73-3,99 (m), 3,73-3,79 (m), 3,50-3,70 (m), 3,34-3,49 (m), 3,06-3,23 (m), 2,79-2,99 (m), 2,44-2,50 (m), 2,28-2,43 (m), 2,22-2,27 (m), 1,75-2,10 (m), 1,34-1,61 (m), 1,16-1,29 (m), 0,92­ 1,10 (m), 0,77-0,89 (m).
Etapa 6D. Smtesis de N,2-dimetilalanil-N-{(1S,2R)-4-{(2S)-2-[(1R,2R)-3-{[(1S)-1-bencil-2-(dietilamino)-2-oxoetil]amino}-1-metoxi-2-metil-3-oxopropil]pirrolidin-1-il}-2-metoxi-1-[(1S)-1-metilpropil]-4-oxobutil}-N-metil-L-valinamida, sal de acido trifluoroacetico (n.0143). Siguiendo el mismo procedimiento que para el n.0140 usando n.0 139 (20 mg, 0,018 mmol, 1,0 equiv.) dietilamina (1 M en THF, 0,18 ml, 0,18 mmol, 10 equiv.) y purificacion (Procedimiento J*), se obtuvo n.o 143 (4,0 mg, 30 %) en forma de un solido de color bianco. c L-EM (Protocolo Q): m/z 773,3 [M+H+], tiempo de retencion = 0,77 minutos. RMN 1H (400 MHz , metanol-d4), 7,16-7,33 (m), 5,10-5,17 (m), 4,96-5,07 (m), 4,68-4,75 (m), 4,60-4,65 (m), 3,61-4,23 (m), 3,35-3,67 (m), 3,16-3,26 (m), 2,99-3,15 (m), 2,78-2,94 (m), 2,30-2,52 (m), 2,19-2,28 (m), 1,73-2,13 (m), 1,83-1,45 (m), 1,19-1,31 (m), 0,92-1,18 (m), 0,80-0,89 (m).
Etapa 6E. Smtesis de N,2-dimetilalanil-N-{(1S,2R)-4-{(2S)-2-[(1R,2R)-3-{[(1S)-1-bencil-2-(terc-butilamino)-2-oxoetil]amino}-1-metoxi-2-metil-3-oxopropil]pirrolidin-1-il}-2-metoxi-1-[(1S)-1-metilpropil]-4-oxobutil}-N-metil-L-valinamida, sal de acido trifluoroacetico n.o 144. Siguiendo el mismo procedimiento que para el n.o 140 usando n.o 139 (20 mg, 0,018 mmol, 1,0 equiv.), Terc-butilamina (1 M en THF, 0,18 ml, 0,18 mmol, 10 equiv.) y purificacion (Procedimiento J*), se obtuvo n.o 144 (3,4 mg, 24 %) en forma de un solido de color bianco. CL-EM (Protocolo Q1): m/z 773,3 [M+H+], tiempo de retencion = 0,74 minutos. RMN 1H (400 MHz , DMSO-d6), 68,21 (d), 8,03-7,98 (m), 7,92 (d), 7,81-7,62 (m), 7,46-7,16 (m), 4,83-4,69 (m), 4,68-4,56 (m), 4,21-4,07 (m), 3,92-3,86 (m), 3,83-3,80 (m), 3,74-3,65 (m), 3,60-3,48 (m), 3,47-3,36 (m), 3,28-3,13 (m), 3,11-3,01 (m), 2,96-2,82 (m), 2,69-2,62 (m), 2,54-2,43 (m), 2,38­ 2,12 (m), 2,00-1,76 (m), 1,69-1,161 (m), 1,60-1,53 (m), 1,52-0,98 (m), 0,94-0,86 (m).
Preparacion de N,2-dimetilalanil-N-[(3R,4S,5S)-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-3-£[(1S,2R)-1-hidroxM-fenilpropan-2-il]amino}-1-metoxi-2-metil-3-oxopropil]pirrolidin-1-il}-3-metoxi-5-metil-1-oxoheptan-4-il]-N-metil-L-valinamida, sal de acido trifluoroacetico (n.o 145).
Figure imgf000112_0001
Etapa 1. Smtesis de N,2-dimetilalanil-N-{(1S,2R)-4-{(2S)-2-[(1R,2R)-3-{[(1R,2S)-2-hidroxi-1-metil-2-feniletil]amino }-1-metoxi-2-metil-3-oxopropil]pirrolidin-1-il}-2-metoxi-1-[(1S)-1-metilpropil]-4-oxobutil}-N-metil-L-valinamida, sal de acido trifluoroacetico (n.o 145). A una solucion en agitacion de n.o 137 (300 mg, 0,313 mmol, 1,0 equiv.) en 3 ml de DMF, se anadio (1S,2R)-2-amino-1-fenilpropan-1-ol (54,8 mg, 0,344 mmol, 1,1 equiv.), seguido de base de Hunig (0,164 ml, 0,939 mmol, 3,0 equiv.). La reaccion se dejo en agitacion a temperatura ambiente durante ~12 horas. Despues, se anadio una solucion al 20 % de piperidina en DMF (1 ml, 2,2 mmol, 7,0 equiv.) y la reaccion se dejo en agitacion a temperatura ambiente durante 2 horas. La purificacion (Procedimiento J, seguido de concentracion de los tubos de ensayo adecuados produjo n.o 145 (190 mg, 74 %) en forma de un polvo de color bianco. CL-EM (Protocolo Q): m/z 704,3 [M+H+], tiempo de retencion = 0,67 minutos. RMN 1H (400 MHz , CDsOD), 67,97 (d), 7,73 (d), 7,37-7,41 (m), 7,27-7,36 (m), 7,19-7,25 (m), 4,70-4,75 (m), 4,58-4,63 (m), 4,49-4,54 (m), 4,14-4,30 (m), 4,04-4,11 (m), 3,87 (dd), 3,63-3,77 (m), 3,51-3,58 (m), 3,46-3,49 (m), 3,38-3,43 (m), 3,25-3,37 (m), 3,15-3,23 (m), 3,11-3,14 (m), 3,01-3,02 (m), 2,59-2,64 (m), 2,52-2,55 (m), 2,44-2,52 (m), 2,41-2,43 (m), 2,07-2,26 (m), 1,73-2,0 (m), 1,65-1,73 (m), 1,59-1,65 (m), 1,51-1,59 (m), 1,32-1,46 (m), 1,23-1,26 (m), 1,08-1,21 (m), 0,94-1,07 (m), 0,83-0,92 (m).
Preparacion de 3-metil-D-isovalil-N-{(1S,2R)-4-{(2S)-2-[(1R,2R)-3-{[(1S)-1-bencil-2-metoxi-2-oxoetil]amino}-1-metoxi-2-metil-3-oxopropil]pirrolidin-1-il}-2-metoxi-1-[(lS)-1-metilpropil]-4-oxobutil}-N-metil-L-valinamida (n.o 146), 3-metil-L-isovalil-N-{(1 S,2R)-4-{(2S)-2-[(1 R,2R)-3-{[(1 S)-1 -bencil-2-metoxi-2-oxoetil]amino}-1 -metoxi-2-metil-3-oxopropil]pirrolidin-1-il}-2-metoxi-1-[(lS)-1-metilpropil]-4-oxobutil}-N-metil-L-valinamida (n.o 147), L-isovalil-N-{(1S,2R)-4-£(2S)-2-[(1R,2R)-3-£[(1S)-1-bencil-2-metoxi-2-oxoetil]amino}-1-metoxi-2-metil-3-oxopropil]pirrolidin-1-il}-2-metoxi-1-[(lS)-1-metilpropil]-4-oxobutil}-N-metil-L-valinamida (n.o 148) y D-isovalil-N-{(1S,2R)-4-{(2S)-2-[(1R,2R)-3-{[(1S)-1-bencil-2-metoxi-2-oxoetil]amino}-1-metoxi-2-metil-3-oxopropil]pirrolidin-1-il}-2-metoxi-1-[(1S)-1-metilpropil]-4-oxobutil}-N-metil-L-valinamida (n.o 149).
Figure imgf000113_0001
Etapa 1A. Smtesis de 3-metil-D-isovalil-N-{(1S,2R)-4-{(2S)-2-[(1R,2R)-3-{[(1S)-1-bencil-2-metoxi-2-oxoetil]amino}-1-metoxi-2-metil-3-oxopropil]pirrolidin-1-il}-2-metoxi-1-[(1S)-1-metilpropil]-4-oxobutil}-N-metil-L-valinamida (n.0 146). Una solucion de n.o 114 (225 mg, 0,356 mmol, 1,0 equiv.) en 2 ml de diclorometano se anadio a una solucion de N-[(9H-fluoren-9-ilmetoxi)carbonil]-3-metil-D-isovalina (126 mg, 0,356 mmol, 1,0 equiv.) en 4 ml de diclorometano. Se anadio base de Hunig (0,188 ml, 1,07 mmol, 3,0 equiv.), seguido de HATU (167 mg, 0,427 mmol, 1,2 equiv.). La reaccion se dejo en agitacion a temperatura ambiente durante 12 horas. La reaccion se concentro al vado y despues se recogio en acetato de etilo antes de lavarse dos veces con HCl 1 M y una vez con salmuera. La fase organica se seco sobre sulfato sodico y se decanto. El disolvente organico se retiro en un Genevac. Se anadio THF (4 ml), seguido de dietilamina (2 ml, 19 mmol, 53,4 equiv.). La reaccion se dejo en agitacion durante ~12 horas. La reaccion se concentro usando un Genevac, seguido de cromatograffa de sflice (Gradiente: 0 %-30 % de metanol en acetato de etilo), produciendo n.o 146 (183 mg, 69 %) en forma de un solido. CL-EM (Protocolo Q): m/z 746,4 [M+H+]; tiempo de retencion =1,37 minutos. RMN 1H (400 MHz , DMSO-d6), 68,55 (d), 8,26-8,36 (m), 7,88-8,03 (m), 7,81 (d), 7,41­ 7,53 (m), 7,13-7,30 (m), 7,01 (s), 4,71-4,79 (m), 4,44-4,70 (m), 3,96-4,04 (m), 3,70-3,80 (m), 3,62-3,69 (m), 3,40-3,61 (m), 2,76-3,35 (m), 2,67-2,71 (m), 2,56-2,58 (m), 2,06-2,46 (m), 1,61-1,90 (m), 1,14-1,54 (m), 0,72-1,12 (m).
Etapa IB. Smtesis de 3-metil-L-isovalil-N-{(1S,2R)-4-{(2S)-2-[(1R,2R)-3-{[(1S)-1-bencil-2-metoxi-2-oxoetil] amino}-1-metoxi-2-metil-3-oxopropil]pirrolidin-1-il}-2-metoxi-1-[(1S)-1-metilpropil]-4-oxobutil}-N-metil-L-valinamida (n.o i 47). Una solucion de n.o 114 (224 mg, 0,354 mmol, 1,0 equiv.) en 2 ml de diclorometano se anadio a una solucion de N-[(9H-fluoren-9-ilmetoxi)carbonil]-3-metil-L-isovalina (125 mg, 0,354 mmol, 1,0 equiv.) en 4 ml de diclorometano. Se anadio base de Hunig (0,187 ml, 1,06 mmol, 3,0 equiv.), seguido de HATU (167 mg, 0,425 mmol, 1,2 equiv.). La reaccion se dejo en agitacion a temperatura ambiente durante 12 horas. La reaccion se concentro al vad o y despues se recogio en acetato de etilo antes de lavarse dos veces con HCl 1 M y una vez con salmuera. La fase organica se seco sobre sulfato sodico y se decanto. El disolvente organico se retiro en un Genevac. Se anadio THF (4 ml), seguido de dietilamina (2 ml, 19 mmol, 53,7 equiv.). La reaccion se dejo en agitacion durante ~12 horas. La reaccion se concentro usando un Genevac, seguido de cromatograffa de sflice (Gradiente: 0 %-30 % de metanol en acetato de etilo), produciendo n.o 147 (216 mg, 82 %) en forma de un solido. CL-EM (Protocolo Q): m/z 746,6 [M+H+]; tiempo de retencion =1,29 minutos. RMN 1H (400 MHz , DMSO-d6), 68,56 (m), 8,31-8,39 (m), 8,50 (d), 8,30 (d a), 7,87-8,01 (m), 7,80 (d), 7,40-7,53 (m), 7,14-7,30 (m), 4,45-4,78 (m), 3,94-4,04 (m), 3,70-3,79 (m), 3,61-3,69 (m), 3,42-3,59 (m), 2,97-3,37 (m), 2,80-2,92 (m), 2,32-2,49 (m), 2,05-2,30 (m), 1,61-1,89 (m), 1,37-1,56 (m), 1,14-1,135 (m), 0,70-1,11 (m).
Etapa 1C. Smtesis de L-isovalil-N-{(1S,2R)-4-{(2S)-2-[(1R,2R)-3-{[(1S)-1-bencil-2-metoxi-2-oxoetil]amino}-1-metoxi-2-metil-3-oxopropil]pirrolidin-1-il}-2-metoxi-1-[(1S)-1-metilpropil]-4-oxobutil}-N-metil-L-valinamida (n.o 148). Una solucion de n.o 1 l4 (447 mg, 0,707 mmol, 1,0 equiv.) en 2 ml de diclorometano se anadio a una solucion de N-[(9H-fluoren-9-ilmetoxi)carbonil]-L-isovalina (240 mg, 0,707 mmol, 1,0 equiv.) en 4 ml de diclorometano. Se anadio base de Hunig (0,373 ml, 2,12 mmol, 3,0 equlv.), seguldo de HATU (332 mg, 0,425 mmol, 1,2 equlv.). La reaccion se dejo en agitacion a temperatura ambiente durante 12 horas. La reaccion se concentro al vad o y despues se recogio en acetato de etilo antes de lavarse dos veces con HCl 1 M y una vez con salmuera. La fase organica se seco sobre sulfato sodico y se decanto. El disolvente organico se retiro en un Genevac. Se anadio THF (4 ml), seguido de dietilamina (2 ml, 19 mmol, 26,9 equiv.). La reaccion se dejo en agitacion durante ~12 horas. La reaccion se concentro usando un Genevac, seguido de cromatograffa de silice (Gradiente: 0 %-30 % de metanol en acetato de etilo), produciendo n.0148 (182 mg, 35 %) en forma de un solido. CL-EM (Protocolo Q1): m/z 732,3 [M+H+]; tiempo de retencion =0,71 minutos. RMN '1H (400 MHz , DMSO-da), 68,56 (d), 8,46-8,52 (m), 8,30 (d), 8,02-8,15 (m), 7,98 (d), 7,80 (d), 7,40-7,53 (m), 7,15-7,30 (m), 4,70-4,80 (m), 4,44-4,69 (m), 3,96-4,05 (m), 3,70-3,79 (m), 3,62-3,69 (m), 3,41-3,59 (m), 2,99-3,35 (m), 2,31-2,95 (m), 2,67-2,71 (m), 2,55-2,59 (m), 2,32-2,48 (m), 2,20-2,31 (m), 1,97-2,19 (m), 1,61-1,88 (m), 1,37-1,56 (m), 1,20-1,34 (m), 1,14-1,19 (m), 1,02-1,11 (m), 0,97-1,01 (m), 0,86-0,96 (m), 0,71­ 0,83 (m).
Etapa ID. Smtesis de D-isovalil-N-{(1S,2R)-4-{(2S)-2-[(1R,2R)-3-{[(1S)-1-bencil-2-metoxi-2-oxoetil]amino}-1-metoxi-2-metil-3-oxopropil]pirrolidin-1-il}-2-metoxi-1-[(lS)-1-metilpropil]-4-oxobutil}-N-metil-L-valinamida (n.o 149). Una solucion de n.o 114 (447 mg, 0,707 mmol, 1,0 equiv.) en 2 ml de diclorometano se anadio a una solucion de N-[(9H-fluoren-9-ilmetoxi)carbonil]-D-isovalina (240 mg, 0,707 mmol, 1,0 equiv.) en 4 ml de diclorometano. Se anadio base de Hunig (0,373 ml, 2,12 mmol, 3 equiv.), seguido de HATU (332 mg, 0,425 mmol, 1,2 equiv.). La reaccion se dejo en agitacion a temperatura ambiente durante 12 horas. La reaccion se concentro al vad o y despues se recogio en acetato de etilo antes de lavarse dos veces con HCl 1 M y una vez con salmuera. La fase organica se seco sobre sulfato sodico y se decanto. El disolvente organico se retiro en un Genevac. Se anadio THF (4 ml), seguido de dietilamina (2 ml, 19 mmol, 26,9 equiv.). La reaccion se dejo en agitacion durante ~12 horas. La reaccion se concentro usando un Genevac, seguido de cromatograffa de silice (Gradiente: 0 %-30 % de metanol en acetato de etilo), produciendo n.o 149 (154 mg, 30 %) en forma de un solido. CL-EM (Protocolo Q): m/z 732,0 [M+H+]; tiempo de retencion =1,24 minutos. RMN 1H (400 MHz , DMSO-d6), 68,55 (d), 8,38-8,46 (m), 8,29 (d), 8,03-8,14 (m), 7,97 (d), 7,81 (d), 7,40-7,53 (m), 7,14-7,28 (m), 7,02 (s), 4,71-4,79 (m), 4,43-4,69 (m), 3,96-4,05 (m), 3,71-3,80 (m), 3,62-3,70 (m), 3,49-3,60 (m), 3,40-3,48 (m), 3,15-3,34 (m), 3,10-3,14 (m), 3,01-3,09 (m), 2,94-3,00 (m), 2,83-2,93 (m), 2,65­ 2,71 (m), 2,55-2,59 (m), 2,32-2,48 (m), 2,04-2,31 (m), 1,61-1,89 (m), 1,37-1,52 (m), 1,21-1,35 (m), 1,15-1,20 (m), 1,02-1,10 (m), 0,75-1,01 (m).
Preparacion de 1,2-dimetil-L-prolil-W-{(1S,2R)-4-{(2S)-2-[(1R,2R)-3-{[(1S)-1-carboxi-2-feniletil]amino}-1-metoxi-2-metil-3-oxopropil]pirrolidin-1-il}-2-metoxi-1-[(1S)-1-metilpropil]-4-oxobutil}-W-metil-L-valinamida (n.o 151).
Figure imgf000114_0001
Etapa 1. Smtesis de 1,2-dimetil-L-prolina (n.o 150). Un matraz Parr que contema 2-metil-L-prolina (1,0 g, 7,7 mmol, 1,0 equiv.), 40 ml de metanol, formaldeddo al 37 % en peso en agua (2,1 ml, 77 mmol, 10 equiv.) y paladio al 10 % en peso sobre carbono (313 mg, 2,94 mmol, 0,38 equiv.) se puso en un agitador Parr y se dejo en agitacion en una atmosfera de 0,28 MPa (40 psi) de hidrogeno durante ~12 horas. Se retiro hidrogeno y la reaccion se filtro a traves de una capa de celite, que se aclaro con una solucion de metanol al 50 % y diclorometano al 50 %. El residuo se concentro al vado, produciendo n.o 150 (1,1 g, 100%) en forma de un solido de color blanco ligeramente ennegrecido. CL-EM (Protocolo Q): m/z 144,0 [M+H+]; tiempo de retencion =0,17 minutos.
Etapa 2. Smtesis de 1,2-dimetil-L-prolil-N-{(1S,2R)-4-{(2S)-2-[(1R,2R)-3-{[(1S)-1-carboxi-2-feniletil]amino}-1-metoxi-2-metil-3-oxopropil]pirrolidin-1-il}-2-metoxi-1-[(1S)-1-metilpropil]-4-oxobutil}-N-metil-L-valinamida (n.o 151). A una mezcla en agitacion de n.o 114 (125 mg, 0,198 mmol, 1,0 equiv.), n.o 150 (37 mg, 0,26 mmol, 1,3 equiv.) y HATU (98 mg, 0,26 mmol, 1,3 equiv.) en 5 ml de diclorometano, se anadio base de Hunig (0,14 ml, 0,80 mmol, 4,1 equiv.). La reaccion se dejo en agitacion a temperatura ambiente durante 1 hora. La reaccion se concentro al vad o. Se anadio THF (6 ml) al material en bruto. A esta mezcla en agitacion se anadio LiOH (14 mg, 0,59 mmol, 3,0 equiv.) en 2 ml de agua. La reaccion se dejo en agitacion a temperatura ambiente durante 90 minutos. La reaccion se concentro al vad o y el residuo se purifico por cromatograffa C l8 de fase inversa y presion media (Gradiente: de 5 % a 40 % de acetonitrilo en agua con TFA al 0,02 % en cada fase) para dar n.o 151 (147 mg, 69 %) en forma de un solido de color blanco. CL-EM (Protocolo Q): m/z 744,3 [M+H+], tiempo de retencion = 1,19 minutos; HPLC (Protocolo A a 450C): m/z 744,4 [M+H+], tiempo de retencion = 6,631 minutos (pureza > 98 %). RMN 1H (400 MHz , DMSO-d6), 69,57-9,71 (m), 8,75 (d), 8,42 (d), 8,15 (d), 7,14-7,29 (m), 4,70-4,79 (m), 4,40-4,68 (m), 3,95-4,03 (m), 3,73-3,80 (m), 3,37-3,61 (m), 2,97-3,31 (m), 2,79-2,88 (m), 2,66-2,76 (m), 2,54-2,58 (m), 2,31-2,43 (m), 1,94-2,29 (m), 1,57-1,91 (m), 1,21­ 1,52 (m), 0,85-1,10 (m), 0,74-0,82 (m).
Preparacion de 1,2-dimetil-D-prolil-W-{(1S,2R)-4-{(2S)-2-[(1R,2R)-3-{[(1S)-1-carboxi-2-feniletil]amino}-1-metoxi-2-metil-3-oxopropil]pirrolidin-1-il}-2-metoxi-1-[(lS)-1-metilpropil]-4-oxobutil}-W-metil-L-valinamida (n.0153).
Figure imgf000115_0001
Etapa 1. Smtesis de 1,2-dimetil-D-prolina (n.o 152). En un matraz Parr que contema 2-metil-D-prolina (432 mg, 3,34 mmol, 1,0 equiv.), formaldeddo al 37% en peso en agua (1,0 ml, 37 mM, 11 equiv.), 3,5 ml de metanol y 1 ml de agua, se anadio paladio 10 % en peso sobre carbono (108 mg, 0,304 mmol, 0,304 equiv.). El matraz se puso en un agitador Parr y se dejo en agitacion en una atmosfera de 0,21 MPa (30 psi) de hidrogeno durante ~48 horas. Se retiro hidrogeno y la reaccion se lavo a traves de una capa de celite, que a continuacion se lavo con metanol. Los materiales organicos se concentraron al vad o y despues se destilaron azeotropicamente con tolueno, proporcionando n.o 152 (517 mg, 100 %) en forma de un solido. RMN 1H (400 MHz , metanol-d4): 6 [3,61-3,56 (m, 1H), 3,07-2,96 (m, 1H), 2,68 (s a, 3H), 2,34-2,22 (m, 1H), 2,01-1,88 (m, 1H), 1,87-1,73 (m, 1H), 1,40 (s a, 3H)].
Etapa 2. Smtesis de 1,2-dimetil-D-prolil-A/-{(1S,2R)-4-{(2S)-2-[(1R,2R)-3-{[(1S)-1-carboxi-2-feniletil]amino}-1-metoxi-2-metil-3-oxopropil]pirrolidin-1-il}-2-metoxi-1-[(1S)-1-meTilpropil]-4-oxobutil}-W-metil-L-valinamida (n.o 153). A una mezcla en agitacion de n.o 114 (240 mg, 0,379 mmol, 1,0 equiv.), n.o i 52 (71 mg, 0,49 mmol, 1,3 equiv.) y HATU (188 mg, 0,49 mmol, 1,3 equiv.) en 10 ml de diclorometano, se anadio base de Hunig (0,27 ml, 4,1 mM, 4,1 equiv.). La reaccion se dejo en agitacion a temperatura ambiente durante 1 hora. La reaccion se concentro al vado. Se anadio THF (6 ml) al material en bruto. A esta mezcla en agitacion se anadio LiOH (36 mg, 1,5 mmol, 4 equiv.) disuelto en 2 ml de agua. La reaccion se dejo en agitacion a temperatura ambiente durante 1 hora. La reaccion se concentro al vad o y el residuo se purifico por cromatograffa C18 de fase inversa y presion media (Gradiente: de 5 % a 40 % de acetonitrilo en agua con 0,02 % de TFA en cada fase) para dar n.o 153 (220 mg, 78 %) en forma de un solido de color blanco. CL-EM (Protocolo Q): m/z 744,8 [M+H+], tiempo de retencion = 1,16 minutos; HPLC (Protocolo A a 450C): m/z 744,4 [M+H+], tiempo de retencion = 6,713 minutos (pureza > 98 %). RMN 1H (400 MHz , DMSO-d6), 69,72-9,85 (m), 8,65 (t), 8,41 (d), 8,14 (d), 7,14-7,28 (m), 4,69-4,79 (m), 4,38-4,53 (m), 3,95-4,04 (m), 3,73-3,79 (m), 3,37-3,62 (m), 3,13-3,33 (m), 2,95-3,10 (m), 2,79-2,89 (m), 2,67-2,75 (m), 2,00-2,46 (m), 1,61-1,90 (m), 1,22-1,54 (m), 1,02-1,09 (m), 0,95-1,01 (m), 0,85-0,94 (m), 0,75-0,83 (m).
Preparacion de Ejemplo de Referenda de N~2~[2,2-dimetil-3-(metilamino)propanoil]-W-{(1S,2R)-2-metoxi-4-{(2S)-2-[(1R,2R)-1-metoxi-2-metil-3-oxo-3-{[(1S)-2-fenil-1-(1,3-tiazol-2-il)etil]amino}propil]pirrolidin-1-il}-1-[(1S)-1-metilpropil]-4-oxobutil}-W-metil-L-valinamida, sal de acido trifluoroacetico (n.o 154).
Figure imgf000115_0002
Etapa 1. Smtesis de N~2~-[2,2-dimetil-3-(metilamino)propanoil]-W-{(1S,2R)-2-metoxi-4-{(2S)-2-[(1R,2R)-1-metoxi-2-metil-3-oxo-3-{[(1S)-2-fenil-1-(1,3-tiazol-2-il)etil]amino}propil]pirrolidin-1-il}-1-[(1S)-1-metilpropil]-4-oxobutil}-W-metil-L-valinamida, sal de acido trifluoroacetico (n.o i 54). En un vial que contema n.o 50 (100 mg, 0,152 mmol, 1,0 equiv.) y 1 ml de diclorometano, se anadio acido 2,2-dimetil-3-(metilamino)propanoico (36 mg, 0,152 mmol, 1,0 equiv.), seguido de base de Hunig (0,080 ml, 0,456 mmol, 3,0 equiv.) y HATU (66 mg, 0,17 mmol, 1,1 equiv.). La reaccion se dejo en agitacion a temperatura ambiente durante 1 hora. La reaccion se concentro al vad o y despues se recogio en acetato de etilo antes de lavarse dos veces con HCl 1 M y una vez con salmuera. La fase organica se seco sobre sulfato sodico y se decanto. La reaccion se concentro al vad o. Se anadio dioxano (1 ml), seguido de HCl 4 M en dioxano (1,0 ml, 4,0 mmol, 26 equiv.). La reaccion se dejo en agitacion a temperatura ambiente durante ~12 horas. La reaccion se concentro al vad o. El material en bruto se purifico por cromatograffa C18 de fase inversa y presion media (Gradiente: de 10 % a 100 % de acetonitrilo en agua con 0,02 % de TFA en cada fase), produciendo n.o 154 (55,8 mg, 41 %) en forma de un solido. CL-EM (Protocolo Q): m/z 771,8 [M+H+]. RMN 1H (400 MHz , DMSO-d6), 6 8,70 (d), 8,45 (d), 7,90-8,15 (m), 7,82 (d), 7,75 (d), 7,55 (dd), 7,40 (dd), 6,90-7,10 (m), 5,10-5,30 (m), 4,45-4,55 (a), 4,30-4,45 (m), 4,20-4,30 (m), 3,75-3,90 (m), 3,50-3,60 (m), 3,15-3,40 (m), 3,05-3,15 (m), 2,85-3,05 (m), 2,60-2,85 (m), 2,25-2,40 (m), 1,80-2,25 (m), 1,70-1,80 (m), 1,20-1,60 (m), 0,80-1,10 (m), 0,05-0,80 (m).
Preparacion de Ejemplo de Referenda de N-{(2R,3R)-3-[(2S)-1-{(3R,4S,5S)-4-[{N-[2,2-dimetil-3-(metilamino)propanoil]-L-valil}(metil)amino]-3-metoxi-5-metilheptanoil}pirrolidin-2-il]-3-metoxi-2-metilpropanoil}-L-fenilalaninato de metilo, sal de acido trifluoroacetico (n.° 155).
Figure imgf000116_0001
Etapa 1. Smtesis de N-{(2R,3R)-3-[(2S)-1-{(3R,4S,5S)-4-[{N-[2,2-dimetil-3-(metilamino)propanoil]-L-valil}(metil)amino]-3-metoxi-5-metilheptanoil}pirrolidin-2-il]-3-metoxi-2-metilpropanoil}-L-fenilalaninato de metilo, sal de acido trifluoroacetico (n.° 155). En un vial que contema n.° 114 (96,2 mg, 0,152 mmol, 1,0 equiv.) y 1 ml de diclorometano, se anadio acido 2,2-dimetil-3-(metilamino)propanoico (36,1 mg, 0,152 mmol, 1,0 equiv.), seguido de base de Hunig (0,080 ml, 0,456 mmol, 3,0 equiv.) y HATU (66 mg, 0,17 mmol, 1,1 equiv.). La reaccion se dejo en agitacion a temperatura ambiente durante 1 hora. La reaccion se concentro al vado y despues se recogio en acetato de etilo antes de lavarse dos veces con HCl 1 M y una vez con salmuera. La fase organica se seco sobre sulfato sodico y se decanto. La reaccion se concentro al vado. Se anadio dioxano (1 ml), seguido de HCl 4 M en dioxano (1,0 ml, 4,0 mmol, 26 equiv.). La reaccion se dejo en agitacion a temperatura ambiente durante ~12 horas. La reaccion se concentro al vado. El material en bruto se purifico por cromatograffa C18 de fase inversa y presion media (Gradiente: de 10 % a 100 % de acetonitrilo en agua con 0,02 % de TFA en cada fase), produciendo n.° 155 (22,2 mg, 17%). RMN 1H (400 MHz , DMSO-d6), 68,55 (d), 8,22 (d), 8,15-8,35 (m), 7,90-8,05 (m), 7,10-7,25 (m), 4,70-4,80 (m), 4,55-4,65 (m), 4,45-4,52 (m), 3,93-4,00 (m), 3,72-3,78 (m), 3,60-3,70 (m), 3,50-3,60 (m), 3,40-3,50 (m), 2,80-3,30 (m), 2,45-2,60 (m), 2,00-2,45 (m), 1,60-1,80 (m), 1,35-1,50 (m), 1,10-1,35 (m).
Preparacion de N-{(2R,3R)-3-metoxi-3-[(2S)-1-{3R,4S,5S)-3-metoxi-5-metil-4-[metil(N-{[(2S)-2-metilpiperidin-2-il]carbonil}-L-valil)amino]heptanoil}pirrolidin-2-il]-2-metilpropanoil}-L-fenilalaninato de metilo, sal de acido trifluoroacetico (n.° 158) y N-{(2R,3R)-3-metoxi-3-[(2S)-1-{(3R,4S,5S)-3-metoxi-5-metil-4-[metil(N-{[(2R)-2-metilpiperidin-2-il]carbonil}-L-valil)amino]heptanoil}pirrolidin-2-il]-2-metilpropanoil}-L-fenilalaninato de metilo, sal de acido trifluoroacetico (n.° 159)
Figure imgf000116_0002
Etapa 1. Smtesis de acido (2S)-1-(ferc-butoxicarbonil)-2-metilpiperidin-2-carboxflico (n.° 156) y acido (2R)-1-(tercbutoxicarbonil)-2-metilpiperidin-2-carbox^lico (n.° 157). Se separo acido 1-(terc-butoxicarbonil)-2-metilpiperidin-2-carbox^lico (500 mg, 2,06 mmol, 1 equiv.) por cromatograffa de fluidos supercnticos (Columna: Chiralcel OJ-H, 250 x 21 mm; Eluyente: 90:10 de dioxido de carbono/etanol; Caudal: 65 g/min; para dar los enantiomeros correspondientes. El primer pico de elusion (tiempo de retencion = 1,57 minutos) se aislo para dar n.° 156 en forma de una goma (140 mg, 28 %) (estereoqmmica asignada arbitrariamente como el enantiomero S). RMN 1H (400 MHz, CDCIs) 63,83-3,90 (m, 1H), 2,93-3,01 (m, 1H), 1,87-1,97 (m, 1H), 1,67-1,77 (m, 3H), 1,48-1,66 (m, 2H), 1,46 (s, 3H), 1,44 (s, 9H). Rotacion optica: [ci]d25 -21,7° (c 0,40, cloroformo). El segundo pico de elusion (tiempo de retencion = 2,22 minutos) se aislo para dar n.° 157 en forma de un aceite (255 mg, 51 %) (estereoqmmica asignada arbitrariamente como el enantiomero R). RMN 1H (400 MHz , CDCI3) 63,83-3,90 (m, 1H), 2,93-3,01 (m, 1H), 1,87­ 1,97 (m, 1H), 1,67-1,77 (m, 3H), 1,48-1,66 (m, 2H), 1,46 (s, 3H), 1,44 (s, 9H). Rotacion optica: [ci]d25 30,2°(cloroformo).
Etapa 2A. Smtesis de N-{(2R,3R)-3-metoxi-3-[(2S)-1-{(3R,4S,5S)-3-metoxi-5-metiI-4-[metiI(N-{[(2S)-2-metiIpiperidin-2-iI]carboniI}-L vaIiI)amino]heptanoiI}pirroIidin-2-iI]-2-metiIpropanoiI}-L-feniIaIaninato de metilo, sal de acido trifluoroacetico (n.0158). A una solucion de n.0156 (8,3 mg, 0,034 mmol, 1 equiv.) en diclorometano (0,3 ml) y N,N-dimetilformamida (0,05 ml), se anadio N,N-diisopropiIetiIamina (0,018 ml, 0,102 mmol, 3 equiv.), seguido de HATU (16,1 mg, 0,041 mmol, 1,2 equiv.). La reaccion se agito durante 15 minutos y se anadio n.o 114 (23,4 mg, 0,037 mmol, 1,1 equiv.) y se agito a temperatura ambiente durante 18 horas. La reaccion se diluyo con diclorometano (2,5 ml) y se anadio acido citrico al 10 % (1,5 ml). Las fases se separaron usando un cartucho de separacion de fases y la fase acuosa se extrajo con diclorometano (2 x 2,5 ml), y las fases organicas combinadas se concentraron al vad o. El residuo se disolvio en diclorometano (4 ml) y se anadio acido trifluoroacetico (0,5 ml). La reaccion se agito a temperatura ambiente durante 2 horas, despues se concentro al vado. La purificacion por cromatograffa de fase inversa (procedimiento M*) proporciono n.o 158 (10,6 mg, 49 %). HPLC (Protocolo T): m/z 758,4 [M+H+], tiempo de retencion = 2,53 minutos (pureza >99 %). RMN 1H (400 MHz, DMSO-d6), 68,74-8,90 (m), 8,49-8,55 (m), 8,24 (d), 8,08-8,12 (m), 7,94-8,01 (m), 7,14-7,26 (m), 4,71-4,77 (m), 4,57-4,68 (m), 4,44-4,55 (m), 3,94-4,0 (m), 3,73-3,78 (m), 3,40-3,72 (m), 3,16-3,32 (m), 2,98-3,16 (m), 2,82-2,92 (m), 2,47-2,56 (m), 2,38-2,44 (m), 2,20-2,37 (m), 2,08-2,19 (m), 1,74-1,88 (m), 1,61-1,73 (m), 1,52-1,59 (m), 1,22-1,52 (m), 1,05 (dd), 0,94-1,00 (m), 0,85-0,93 (m), 0,74-0,79 (m).
Etapa 2B. Smtesis de N-{(2R,3R)-3-metoxi-3-[(2S)-1-{(3R,4S,5S)-3-metoxi-5-metiI-4-[metiI(N-{[(2R)-2-metiIpiperidin-2-iI]carboniI}-L-vaIiI)amino]heptanoiI}pirroIidin-2-iI]-2-metiIpropanoiI}-L-feniIaIaninato de metilo, sal de acido trifluoroacetico (n.o 159). A una solucion de n.o 157 (7,8 mg, 0,032 mmol, 1 equiv.) en diclorometano (0,3 ml) y N,N-dimetilformamida (0,05 ml), se anadio N,N-diisopropiIetiIamina (0,017 ml, 0,o96 mmol, 3 equiv.), seguido de HATU (14,9 mg, 0,038 mmol, 1,2 equiv.). La reaccion se agito durante 15 minutos y se anadio n.o 114 (22,1 mg, 0,035 mmol, 1,1 equiv.) y se agito a temperatura ambiente durante 3 horas y despues se concentro al vad o. La purificacion del residuo por cromatograffa sobre gel de silice (Gradiente: de 0 a 80 % de acetona en heptano) proporciono un solido de color blanco, que se disolvio en dioxano (0,2 ml) y se anadio HCI 4 N en dioxano (0,2 ml). La reaccion se agito a temperatura ambiente durante 2 horas y se anadio mas cantidad de HCI 4 N en dioxano (0,1 ml). La reaccion se agito durante 2 horas a temperatura ambiente y se concentro al vad o. La purificacion por cromatograffa de fase inversa (Procedimiento M*) proporciono n.o 159 (6,6 mg, 33 %). HPLC (Protocolo T): m/z 758,4 [M+H+], tiempo de retencion = 2,46 minutos (pureza = 89 %). RMN 1H (400 MHz , DMSO-d6), 68,86-8,95 (m), 8,75-8,84 (m), 8,48-8,54 (m), 8,33-8,45 (m), 8,22-8,27 (m), 8,17-8,19 (m), 7,99-8,12 (m), 7,83-7,91 (m), 7,13-7,29 (m), 7,04-7,08 (m), 4,69­ 4,76 (m), 4,55-4,66 (m), 4,45-4,53 (m), 3,96-4,01 (m), 3,41-3,78 (m), 3,28-3,33 (m), 3,24-3,27 (m), 3,16-3,23 (m), 3,11-3,15 (m), 3,02-3,10 (m), 2,93-3,02 (m), 2,91-2,93 (m), 2,84-2,91 (m), 2,76-2,82 (m), 2,69-2,71 (m), 2,60-2,63 (m), 2,53-2,55 (m), 2,47-2,53 (m), 2,40-2,46 (m), 2,30-2,38 (m), 2,20-2,30 (m), 2,06-2,17 (m), 1,75-1,87 (m), 1,52­ 1,74 (m), 1,35-1,51 (m), 1,14-1,34 (m), 1,01-1,08 (m), 0,92-1,0 (m), 0,85-0,94 (m), 0,74-0,82 (m).
Preparacion de N-{(2R,3R)-3-metoxi-3-[(2S)-1-{(3R,4S,5S)-3-metoxi-5-metil-4-[metil(N-{[(2S)-2-metil-piperidin-2-il]carbonil}-L-valil)amino]heptanoil}pirrolidin-2-il]-2-metilpropanoil}-L-fenilalanina, sal de acido trifluoroacetico (n.o 162), y N-{(2R,3R)-3-metoxi-3-[(2S)-1-{(3R,4S,5S)-3-metoxi-5-metil-4-[metil(N-{[(2R)-2-metilpiperidin-2-il]carbonil}-L-valil)amino]heptanoil}pirrolidin-2-il]-2-metilpropanoil}-L-fenilalanina, sal de acido trifluoroacetico (n.o 163).
Figure imgf000117_0001
Etapa 1A. Smtesis de N-{(2R,3R)-3-[(2S)-1-{(3R,4S,5S)-4-[(N-{[(2S)-1-(terc-butoxicarboniI)-2-metiI-piperidin-2-iI]carboniI}-L-vaIiI)(metiI)amino]-3-metoxi-5-metiIheptanoiI}pirroIidin-2-iI]-3-metoxi-2-metiIpropanoiI}-L-feniIaIaninato de metilo (n.o 160). A una solucion de n.o 156 (106 mg, 0,436 mmol, 1 equiv.) en diclorometano (3 ml) y N,N-dimetilformamida (0,5 ml) se anadio diisopropiletilamina (0,228 ml, 1,31 mmol, 3 equiv.), seguido de HATU (205 mg, 0,523 mmol, 1,2 equiv.). La reaccion se agito durante 15 minutos y se anadio n.o 114 (276 mg, 0,436 mmol, 1 equiv.) y se agito a temperatura ambiente durante 2 horas. La reaccion se diluyo con diclorometano (10 ml) y se lavo con acido d trico al 10 % (3 x 5 ml). La fase organica se seco sobre sulfato sodico, se filtro y el filtrado se concentro al vad o. La purificacion del residuo por cromatograffa sobre gel de sflice (Gradiente: de 0 a 80 % de acetona en heptano) proporciono n.o 160 (145 mg, 39 %). CL-EM (protocolo Q1): m/z 858,8 [M+H+], tiempo de retencion = 1,12 minutes.
Etapa IB. Smtesis de N-{(2R,3R)-3-[(2S)-1-{(3R,4S,5S)-4-[(N-{[(2R)-1-(terc-butoxicarbonil)-2-metil-piperidin-2-il]carbonil}-L-valil)(metil)amino]-3-metoxi-5-metilheptanoil}pirrolidin-2-il]-3-metoxi-2-metilpropanoil}-L-fenilalaninato de metilo (n.0161). A una solucion de n.0157 (109 mg, 0,448 mmol, 1 equiv.) en diclorometano (3 ml} y N,N-dimetilformamida (0,5 ml), se anadio diisopropiletilamina (0,234 ml, 1,34 mmol, 3 equiv.}, seguido de HATU (205 mg, 0,538 mmol, 1,2 equiv.}. La reaccion se agito durante 15 minutos y se anadio n.o 114 (284 mg, 0,448 mmol, 1 equiv.}. Despues de agitar a temperatura ambiente durante 2 horas, la mezcla se diluyo con diclorometano (10 ml), se lavo con acido citrico al 10 % (3 x 5 ml). La fase organica se seco sobre sulfato sodico, se filtro y se concentro al vacte. La purificacion del residuo por cromatograffa sobre gel de sflice (Gradiente: de 0 a 100 % de acetona en heptano} proporciono n.o 161 (185 mg, 48 %). CL-EM (Protocolo Q): m/z 858,3 [M+H+], tiempo de retencion = 2,25 minutos.
Etapa 2A. Smtesis de N-{(2R,3R)-3-metoxi-3-[(2S)-1-{(3R,4S,5S)-3-metoxi-5-metil-4-[metil(N-{[(2S)-2-metilpiperidin-2-il]carbonil}-L-valil)amino]heptanoil}pirrolidin-2-il]-2-metilpropanoil}-L-fenilalanina, sal de acido trifluoroacetico (n.o 162). A una solucion de n.o 160 (145 mg, 0,169 mmol, 1 equiv.) en tetrahidrofurano (1,25 ml) se anadio hidroxido de litio (8 mg, 0,338 mmol, 2 equiv.) disuelto en agua (0,75 ml). La reaccion se agito a temperatura ambiente durante 2 horas y se evaporo a sequedad al vacte. El residuo se disolvio en diclorometano (2,5 ml) y se anadio acido trifluoroacetico (1 ml). La reaccion se agito durante 30 minutos, se concentro al vacte y se purifico por cromatograffa C18 de fase inversa y presion media (Gradiente: de 0 % a 100 % de acetonitrilo en agua con 0,02 % de TFA en cada fase) para proporcionar el compuesto del tttulo n.o 162 (145 mg, cuantitativo) en forma de un solido de color blanco. HPLC (Protocolo U): m/z 744,5 [M+H+], tiempo de retencion = 7,121 minutos (pureza = 98 %). RMN 1H (400 MHz, DMSO-da). 68,76-8,96 (m), 8,52-8,58 (m), 8,38-8,43 (m), 8,11-8,16 (m), 7,27-7,30 (m), 7,12-7,27 (m), 7,01-7,05 (m), 4,71-4,79 (m), 4,48-4,67 (m), 4,39-4,47 (m), 3,79-4,22 (m), 3,71-3,78 (m), 3,38-3,57 (m), 3,22-3,30 (m), 3,14-3,23 (m), 3,07-3,13 (m), 2,96-3,06 (m), 2,76-2,87
(m), 2,66-2,68 (m), 2,47-2,57 (m), 2,42-2,44 (m), 2,06-2,40 (m), 1,73-1,89 (m), 1,51-1,72 (m), 1,36-1,49 (m), 1,20­ 1,35 (m), 1,00-1,09 (m), 0,95-0,99 (m), 0,83-0,94 (m), 0,73-0,80 (m).
Etapa 2B. Smtesis de N-{(2R,3R)-3-metoxi-3-[(2S)-1-{(3R,4S,5S)-3-metoxi-5-metil-4-[metil(N-{[(2R)-2-metilpiperidin-2-il]carbonil}-L-valil)amino]heptanoil}pirrolidin-2-il]-2-metilpropanoil}-L-fenilalanina, sal de acido trifluoroacetico (n.o 163). El compuesto n.o 161 (185 mg, 0,216 mmol, 1 equiv.) se convirtio en el compuesto del tttulo en bruto n.o 163, usando el procedimiento descrito para la preparacion de n.o 162. El material en bruto se purifico por cromatograffa C18 de fase inversa y presion media (Gradiente: de 0 % a 85 % de acetonitrilo en agua con 0,02 % de TFA en cada fase) para producir n.o 163 (127 mg, 68 %) en forma de un solido de color blanco. HPLC (Protocolo U): m/z 744,5 [M+H+], tiempo de retencion = 7,077 minutos (pureza = 98 %). RMN 1H (400 MHz , DMSO-d6). 68,79-8,99 (m), 8,36­ 8,49 (m), 8,12-8,17 (m), 7,31-7,34 (m), 7,11-7,27 (m), 7,05-7,09 (m), 4,71-4,77 (m), 4,54-4,68 (m), 4,40-4,53 (m), 3,88-4,39 (m), 3,71-3,77 (m), 3,39-3,58 (m), 3,22-3,32 (m), 3,10-3,22 (m), 3,04-3,09 (m), 2,92-3,03 (m), 2,77-2,88 (m), 2,68-2,71 (m), 2,47-2,57 (m), 2,43-2,45 (m), 2,30-2,42 (m), 2,03-2,29 (m), 1,74-1,88 (m), 1,52-1,73 (m), 1,37­ 1,51 (m), 1,17-1,37 (m), 1,00-1,07 (m), 0,95-0,99 (m), 0,84-0,93 (m), 0,73-0,81 (m).
Preparacion de Ejemplo de Referenda de N-{(2R,3R)-3-[(2S)-1-{(3R,4S,5S)-4-[(N-{[(3R)-3-fluoropirrolidin-3-il]carbonil}-L-valil)(metil)amino]-3-metoxi-5-metilheptanoil}pirrolidin-2-il]-3-metoxi-2-metilpropanoil}-L-fenilalaninato de metilo, sal de acido trifluoroacetico (n.o 172), y el Ejemplo de Referenda N-{(2R,3r )-3-[(2S)-1-{(3R,4S,5S)-4-[(N-{[(3R)-3-fluoropirrolidin-3-il]carbonil}-L-valil)(metil)amino]-3-metoxi-5-metilheptanoil}pirrolidin-2-il]-3-metoxi-2-metilpropanoil}-L-fenilalaninato de metilo, sal de acido trifluoroacetico (n.o 173).
Figure imgf000119_0001
Etapa 1. Smtesis de (3R)-1-bencil-3-fluoropirrolidin-3-carboxilato de metilo (n.0164) y (3S)-1 -bencil-3-fluoropirrolidin-3-carboxilato de metilo (n.o 165). Se preparo el 1-bencil-3-fluoropirrolidin-3-carboxilato de metilo conocido (3900 mg, 16,4 mmol, 1 equiv.) por cromatografia de fluidos supercnticos (Columna: Ohiralpak 1C, 250 x 21 mm; Eluyente: 95:5 de dioxido de carbono/propanol; Caudal: 65 g/min; para dar los enantiomeros correspondientes. El primer pico de elusion (tiempo de retencion = 3,37 minutos) se aislo para proporcionar n.o 164 (1720 mg, 36%) como un enantiomero individual (estereoqmmica asignada arbitrariamente como enantiomero R). RMN 1H (400 MHz, TMS-CDCIs; 67,17-7,30 (m , 5H), 3,74 (s, 3H), 3,65 (d, J = 12,9 Hz , 1H), 3,63 (d, J = 12,9 Hz , 1H), 2,86-3,03 (m , 3H), 2,61 (c, J = 8,0 Hz , 1H), 2,34-2,46 (m, 1H), 2,13-2,26 (m, 1H). Rotacion optica: [o]d25 24,7° (cloroformo). El segundo pico de elusion (tiempo de retencion = 3,91 minutos) se aislo para proporcionar n.o 165 (1600 mg, 33 %) como un enantiomero individual (estereoqmmica asignada arbitrariamente como enantiomero S). RMN 1H (400 MHz , CDCI3. (CHs)4Si), 67,17-7,30 (m , 5H), 3,74 (s, 3H), 3,65 (d, J = 12,9 Hz , 1H), 3,63 (d, J = 12,9 Hz , 1H), 2,86-3,03 (m , 3H), 2,61 (c, J = 8,0 Hz, 1H), 2,34-2,46 (m, 1H), 2,13-2,26 (m, 1H). Rotacion optica: [q]d25 -23,3° (cloroformo).
Etapa 2A. Smtesis de (3R)-3-fluoropirrolidin-1,3-dicarboxilato de 3-metil 1-terc-butilo (n.o 166). A una solucion que contema n.o 164 (355 mg, 1,50 mmol, 1 equiv.) y carbonato de di-terc-butilo (400 mg, 1,8 mmol, 1,2 equiv.) en metanol (15,5 ml) se anadio Pd al 10 %/C (70 mg). La reaccion se hidrogeno a 0,34 MPa (45 psi) en un agitador Parr durante 22 horas, se filtro sobre celite y el filtrado se concentro al vado y se purifico por cromatografia sobre gel de sflice (Gradiente: de 0 a 30 % de acetato de etilo en heptano) para proporcionar n.o 166 en forma de un aceite transparente. (272 mg, 74 %). RMN 1H (400 MHz , CDCI3), 63,87 (s, 3H), 3,85-3,66 (m, 3H), 3,56 (m, 1H), 2,53-2,28 (m, 2H), 1,51 (s, 9H).
Etapa 2B. Smtesis de (3S)-3-fluoropirrolidin-1,3-dicarboxNato de 3-metil 1-terc-butilo (n.o 167). El compuesto n.o 165 (362 mg, 1,53 mmol, 1 equiv.) se convirtio en n.o 167 con un rendimiento del 63 %, usando el procedimiento descrito anteriormente para n.o 164. RMN 1H (400 MHz , CDCI3), 63,87 (s, 3H), 3,85-3,66 (m, 3H), 3,56 (m, 1H), 2,53-2,28 (m, 2H), 1,51 (s, 9H).
Etapa 3A. Smtesis de acido (3R)-1-(terc-butoxicarbonil)-3-fluoropirrolidin-3-carboxnico (n.o 168). A una solucion de n.o 166 (272 mg, 1,10 mmol, 1 equiv.) disuelto en metanol (2,96 ml) se anadio una solucion acuosa de hidroxido sodico (2,5 M, 0,88 ml) y la reaccion se agito a temperatura ambiente durante 3,5 horas. La reaccion se interrumpio con acido dtrico acuoso al 10% (5 ml), se anadio acetato de etilo (100 ml) y las fases se separaron. La fase organica se lavo con acido dtrico al 10 %, agua y salmuera, se seco sobre sulfato sodico, se filtro y se concentro al vado para proporcionar n.o 168 en forma de un solido de color bianco. (253mg, 99 %). RMN 1H (400 MHz , CDCI3), 6 3,96-3,69 (m, 3H), 3,59 (m, 1H), 2,59-2,33 (m, 2H), 1,51 (s, 9H). CL-EM (Protocolo Q1): m /z 232,1 [M-H+], tiempo de retencion = 0,67 minutos. tiempo de retencion de HPLC quiral: 3,39 min (pureza = 99 %). (Columna: Chiralpak AD-H, 4,6 mm x 25 cm, fase movil CO2 al 5-60 %/Metanol, caudal 3,0 ml/min); Rotacion optica: [o]d254,8 (c = 0,52, MeOH)
Etapa 3B. Smtesis de acido (3S)-1-(terc-butoxicarbonil)-3-fluoropirrolidin-3-carboxnico (n.o 169). A una solucion de n.o 167 (238 mg, 0,963 mmol, 1 equiv.) disuelto en metanol (2,6 ml) se anadio una solucion acuosa de hidroxido sodico (2,5 M, 0,88 ml) y la reaccion se agito a temperatura ambiente durante 3 horas. Despues, la reaccion se interrumpio con acido dtrico acuoso al 10 % (5 ml) y se anadio acetato de etilo (100 ml), y las fases se separaron. La fase organica se lavo con acido dtrico al 10 %, agua y salmuera, despues se seco sobre sulfato sodico, se filtro y se concentro al vado para proporcionar n.o 169 en forma de un solido de color bianco (221 mg, 99 %). RMN 1H (400 MHz, CDCI3), 63,96-3,69 (m, 3H), 3,59 (m, 1H), 2,59-2,33 (m, 2H), 1,51 (s, 9H). CL-EM (Protocolo Q1): m /z 232,1 [M-H+], tiempo de retencion = 0,67 minutos. tiempo de retencion de HPLC quiral: 3,95 min (pureza = 98 %) (Columna: Chiralpak AD-H, 4,6 mm x 25 cm, fase movil CO2 al 5-60 %/Metanol, caudal 3,0 ml/min); Rotacion optica:
[q]d25 -3,6 (c = 0,55, MeOH)
Etapa 4A. Smtesis de (3R)-1-(Terc-butoxicarbonN)-3-fluoropirrolidin-3-carboxilato de litio (n.o 170). A una solucion de n.o 168 (50 mg, 0,21 mmol, 1 equiv.) en metanol (0,2 ml) se anadio una solucion de hidroxido de litio (9,2 mg, 0,38 mmol, 1,8 equiv.) disuelto en agua (0,1 ml). A continuacion, se anadio tetrahidrofurano (0,3 ml) y la reaccion se agito a 450C durante 18 horas. La reaccion se concentro al vado y el material se destilo azeotropicamente (3 x) con tolueno (2 ml) para obtener n.o 170 (51 mg, 100 %) en forma de un solido de color bianco, que se uso en la siguiente etapa sin purificacion adicional.
Etapa 4B. Smtesis de (3S)-1-(terc-butoxicarbonil)-3-fluoropirrolidin-3-carboxilato de litio (n.0171). A una solucion de n.0169 (75 mg, 0,32 mmol, 1 equiv.) en metanol (0,3 ml) se anadio una solucion de hidroxido de litio (13,8 mg, 0,572 mmol, 1,8 equiv.) en agua (0,4 ml). A continuacion, se anadio tetrahidrofurano (0,45 ml ) y la reaccion se agito a 450C durante 18 horas. La reaccion se concentro al vado y el material se destilo azeotropicamente (3 x ) con tolueno (4 ml) para obtener n.o 171 (77 mg, 100 %) en forma de un solido de color blanco, que se uso en la siguiente etapa sin purificacion adicional.
Etapa 5A. Smtesis de N-{(2R,3R)-3-[(2S)-1-{(3R,4S,5S)-4-[(N-{[(3R)-3-fluoropirrolidin-3-il]carbonil}-L-valil)(metil)amino]-3-metoxi-5-metilheptanoil}pirrolidin-2-il]-3-metoxi-2-metilpropanoil}-L-fenilalaninato de metilo, sal de acido trifluoroacetico (n.o 172). A una suspension de n.o 168 (36,9 mg, 0,158 mmol, 1 equiv.) y n.o 114 (100 mg, 0,158 mmol, 1,0 equiv.) en W,A/-dimetilformamida (0,8 ml) y diclorometano (3,6 ml) se anadio A/,W-diisopropiletilamina (0,083 ml, 0,474 mmol, 3 equiv.), seguido de HATU (60,7 mg, 0,158 mmol, 1,0 equiv.) y la reaccion se agito a temperatura ambiente durante 18 horas. La reaccion se diluyo con acetato de etilo y se lavo sucesivamente con agua, acido d trico acuoso al 10 % (P/V) y salmuera. La fase organica se seco sobre sulfato sodico y se concentro al vad o para dar 220 mg (164 % del teorico) de un intermedio en bruto. Una porcion de este intermedio en bruto (50 mg, 23%) se disolvio en diclorometano (1,5 ml) y se anadio acido trifluoroacetico (0,4 ml). La mezcla se agito a temperatura ambiente durante 2 horas y se evaporo a sequedad al vad o. La purificacion por cromatograffa de fase inversa (Prncedimiento M*) proporciono n.o 172 (15,8 mg, 51 %) CL-EM (Protocolo Q): m/z 748,9 [M+H+], tiempo de retencion = 1,29 minutos. RMN 1H (DMSO-d6), 69,16-9,43 (m), 8,48-8,53 (m), 8,40-8,44 (m), 8,34-8,39 (m), 8,22­ 8,30 (m), 8,09-8,16 (m), 7,87-7,91 (m), 7,77-7,83 (m), 7,12-7,24 (m), 4,56-4,72 (m), 4,41-4,54 (m), 3,92-4,00 (m), 3,70-3,75 (m), 3,39-3,66 (m), 3,20-3,25 (m), 3,12-3,20 (m), 2,97-3,11 (m), 2,94 (s a), 2,75-2,89 (m), 2,63-2,69 (m), 2,47-2,54 (m), 2,29-2,45 (m), 2,15-2,27 (m), 2,02-2,15 (m), 1,57-1,87 (m), 1,33-1,51 (m), 1,19-1,30 (m), 1,02 (dd), 0,82-0,97 (m), 0,70-0,79 (m).
Etapa 5B. Smtesis de N-{(2R,3R}-3-[(2S)-1-{(3R,4S,5S)-4-[(N-{[(3R)-3-fluoropirrolidin-3-il]carbonil}-L-valil)(metil)amino]-3-metoxi-5-metilheptanoil}pirrolidin-2-il]-3-metoxi-2-metilpropanoil}-L-fenilalaninato de metilo, sal de acido trifluoroacetico (n.o 173). A una suspension de n.o 169 (36,9 mg, 0,158 mmol, 1 equiv.) y n.o 114 (100,0 mg, 0,158 mmol, 1 equiv.) en W,A/-dimetilformamida (0,8 ml) y diclorometano (3,6 ml) se anadio W,A/-diisopropiletilamina (0,083 ml, 0,474 mmol, 3 equiv.), seguido de HATU (60,7 mg, 0,158 mmol, 1 equiv.}. La reaccion se agito a temperatura ambiente durante 14 horas, se diluyo con acetato de etilo y se lavo sucesivamente con agua, acido d trico acuoso al 10 % (P/V) y salmuera. La fase organica se seco sobre sulfato sodico y se concentro al vad o para dar 180 mg (134 % del teorico) de un intermedio en bruto. Una porcion de ester intermedio en bruto (50 mg, 27 %) se disolvio en diclorometano (1,5 ml) y se anadio acido trifluoroacetico (0,4 ml), y la mezcla se agito a temperatura ambiente durante 2 horas y se evaporo a sequedad al vad o. La purificacion por cromatograffa de fase inversa (Prncedimiento M*) proporciono n.o 173 (17,6 mg, 45%). CL-EM (Protocolo Q): m/z 748,9 [M+H+]; tiempo de retencion =1,29 minutos. RMN 1H (DMSO-d6) 69,35-9,50 (m), 9,22-9,34 (m), 8,47-8,52 (m), 8,39-8,45 (m), 8,30-8,37 (m), 8,22-8,24 (m), 8,09-8,13 (m), 7,80-7,85 (m), 7,67-7,72 (m), 7,09-7,24 (m), 6,97-6,98 (m), 4,65-4,72 (m), 4,55­ 4,64 (m), 4,41-4,50 (m), 3,92-3,99 (m), 3,42-3,75 (m), 3,32-3,39 (m), 3,25-3,31 (m), 3,21-3,24 (m), 3,11-3,20 (m), 3,06-3,11 (m), 2,97-3,05 (m), 2,95 (s a), 2,83-2,88 (m), 2,76-2,82 (m), 2,65-2,70 (m), 2,44-2,54 (m), 2,15-2,42 (m), 2,02-2,14 (m), 1,57-1,84 (m), 1,33-1,48 (m), 1,19-1,30 (m), 1,02 (dd), 0,92-0,97 (m), 0,82-0,91 (m), 0,70-0,77 (m).
Preparacion de (2S)-N-[(2S)-1-{[(3R,4S,5S)-1-£(2S)-2-[(1R,2R)-3-£[2-(dclohepta-2A6-trien-1-il)etil]amino}-1-metoxi-2-metil-3-oxopropil]pirrolidin-1-il}-3-metoxi-5-metil-1-oxoheptan-4-il](metil)amino}-3-metil-1-oxobutan-2- il]-2-metilpiperidin-2-carboxamida, sal clorhidrato (n.o 178), y (2R)-N-[(2S)-1-{[(3R,4S,5S)-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-3- {[2-(ciclohepta-2,4,6-trien-1-il)etil]amino}-1 -metoxi-2-metil-3-oxopropil]pirrolidin-1-il}-3-metoxi-5-metil-1-oxoheptan-4-il](metil)amino}-3-metil-1-oxobutan-2-il]-2-metil-piperidin-2-carboxamida, sal clorhidrato (n.o 180).
Etapa 1. Smtesis de (3R,4S,5S)-4-[{N-[(9H-fluoren-9-ilmetoxi)carbonil]-L-valil}(metil)amino]-3-metoxi-5-metilheptanoato de pentafluorofenilo (n.0 174). A una solucion de n.0@5 (19,43 g, 37,03 mmol, 1 equiv.) en diclorometano (100 ml) y piridina (5,86 g, 74,1 mmol, 2 equiv.) se anadio trifluoroacetato de pentafluorofenilo (20,7 g, 74,1 mmol, 2 equiv.) y la reaccion se agito a temperatura ambiente durante 1 hora. La reaccion se concentro al vado y se purifico por cromatograffa sobre gel de sflice (Gradiente: de 0 a 52 % de acetato de etilo en heptano) para proporcionar n.o 174 (23,58 g, 92%) en forma de un aceite de color amarillo. CL-EM (Protocolo Q1): m/z 691,2 [m H+], tiempo de retencion = 1,23 minutos.
Etapa 2. Smtesis de N-[(3R,4S,5S)-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-3-{[2-(ciclohepta-2,4,6-trien-1-il)etil]amino}-1-metoxi-2-metil-3-oxopropil]pirrolidin-1-il}-3-metoxi-5-metil-1-oxoheptan-4-il]-N~2~-[(9H-fluoren-9-ilmetoxi)carbonil]-N-metil-L-valinamida (n.o 175). A una solucion de n.o 174 (706 mg, 1,02 mmol, 1 equiv.) y n.o 64 (311 mg, 1,02 mmol, 1 equiv.) en diclorometano (3 ml) se anadio N,N-diisopropiletilamina (400 mg, 3,o7 mmol, 3 equiv.). Despues de 18 horas de agitacion a temperatura ambiente, la reaccion se concentro al vado y se purifico por cromatograffa sobre gel de sflice (Gradiente: de 0 a 100 % de acetato de etilo en heptano) para proporcionar n.o 175 (560 mg, 68 %) en forma de un solido de color bianco. CL-EM (Protocolo Q1): m/z 611,8 [M+H+], tiempo de retencion = 1,15 minutos.
Etapa 3. Smtesis de N-[(3R,4S,5S)-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-3-{[2-(ciclohepta-2,4,6-trien-1-il)etil]amino}-1-metoxi-2-metil-3-oxopropil]pirrolidin-1-il}-3-metoxi-5-metil-1-oxoheptan-4-il]-N-metil-L-valinamida (n.o 176). De acuerdo con el procedimiento general A, a partir de n.o 175 (560 mg, 0,690 mmol, 1 equiv.) en diclorometano (9 ml) y N,N-dietilamina (6,0 ml), se sintetizo el compuesto deseado en bruto, que se purifico por cromatograffa sobre gel de sflice (Gradiente: de 0 a 50 % de metanol en diclorometano) para proporcionar n.o 176 (351 mg, 87 %) en forma de un aceite de color amarillo. CL-EM (Protocolo Q1): m/z 589,5 [M+H+], tiempo de retencion = 0,72 minutos.
Etapa 4A. Smtesis de (2S)-2-{[(2S)-1-{[(3R,4S,5S)-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-3-{[2-(ciclohepta-2,4,6-trien-1-il)etil]amino}-1-metoxi-2-metil-3-oxopropil]pirrolidin-1-il}-3-metoxi-5-metil-1-oxoheptan-4-il](metil)amino}-3-metil-1-oxobutan-2-il]carbamoil}-2-metilpiperidin-1-carboxilato de terc-butilo (n.o 177). De acuerdo con el procedimiento general D, a partir de n.o 176 (lOo mg, 0,170 mmol, 1 equiv.), n.o 156 (53,8 mg, 0,221 mmol, 1,3 equiv.), diclorometano (4,5 ml), HATU (84,9 mg, 0,221 mmol, 1,3 equiv.) y N,N-diisopropiletilamina (0,123 ml, 0,697 mmol, 4,1 equiv.), se sintetizo el material en bruto deseado, que se purifico por cromatograffa sobre gel de sflice (Gradiente: de O a 1OO % de acetato de etilo en heptano) para proporcionar n.o 177 (145 mg, asumido rendimiento cuantitativo) en forma de un solido de color bianco. Cl-e M (Protocolo Q1): m/z 814,7 [M+H+], tiempo de retencion = 1,14 minutos.
Etapa 4B. Smtesis de (2R)-2-{[(2S)-1-{[(3R,4S,5S)-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-3-{[2-(ciclohepta-2,4,6-trien-1-il)etil]amino}-1-metoxi-2-metil-3-oxopropil]pirrolidin-1-il}-3-metoxi-5-metil-1-oxoheptan-4-il](metil)amino}-3-metil-1-oxobutan-2-il]carbamoil}-2-metilpiperidin-1-carboxilato de terc-butilo (n.o 179). De acuerdo con el procedimiento general D, a partir de n.o 176 (lOo mg, 0,170 mmol, 1 equiv.), n.o 157 (53,8 mg, 0,221 mmol, 1,3 equiv.), diclorometano (4,5 ml), HATU (84,9 mg, 0,221 mmol, 1,3 equiv.) y N,N-diisopropiletilamina (0,123 ml, 0,697 mmol, 4,1 equiv.), se sintetizo el material en bruto deseado, que se purifico por cromatograffa sobre gel de sflice (Gradiente: de O a 1OO % de acetato de etilo en heptano) para proporcionar n.o 179 (155 mg, asumido rendimiento cuantitativo) en forma de un solido de color bianco. Cl-e M (Protocolo Q1): m/z 814,7 [M+H+], tiempo de retencion = 1,14 minutos.
Etapa 5A. Smtesis de (2S)-N-[(2S)-1-{[(3R,4S,5S)-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-3-{[2-(ciclohepta-2,4,6-trien-1-il)etil]amino}-1-meToxi-2-metil-3-oxopropil]pirrolidin-1-il}-3-metoxi-5-metil-1-oxoheptan-4-il](metil)amino}-3-metil-1-oxobutan-2-il]-2-metilpiperidin-2-carboxamida, sal clorhidrato (n.o 178). De acuerdo con el procedimiento general C, a partir de n.o 177 (143 mg, 0,176 mmol, 1 equiv.) y una solucion 4 M de acido clorhffdrico en dioxano (2,0 ml) se sintetizo el material deseado en forma de una goma (145 mg). Una porcion de este residuo en bruto (25 mg) se destilo azeotropicamente con una mezcla de metanol/acetonitrilo para proporcionar n.o 178 (20 mg, rendimiento del 89 %) en forma de un solido de color bianco. RMN 1H (4OO MHz , DMSO-d6), 68,96-9,07 (m), 8,79-8,96 (m), 8,58 (d), 8,02­ 8,08 (m), 7,77-7,83 (m), 7,25-7,31 (m), 7,19-7,24 (m), 6,56-6,67 (m), 6,12-6,21 (m), 5,13-5,22 (m), 4,72-4,81 (m), 4,63-4,70 (m), 4,50-4,59 (m), 4,07-4,16 (m), 3,98-4,05 (m), 3,80-3,86 (m), 3,55-3,76 (m), 3,46-3,54 (m), 3,38 -3,44 (m), 3,26-3,35 (m), 3,18-3,24 (m), 3,05-3,18 (m), 2,98-3,04 (m), 2,40-2,55 (m), 2,27-2,35 (m), 2,08-2,27 (m), 1,74­ 1,98 (m), 1,50-1,74 (m), 1,20-1,46 (m), 0,73-1,16 (m). CL-EM (Protocolo Q1): m/z 714,6 [M+H+], tiempo de retencion = 0,76 minutos. HPLC (Protocolo U): m/z 714,5 [M+H+]; tiempo de retencion = 7,124 minutos (pureza = 91 %).
Etapa 5B. Smtesis de (2R)-N-[(2S)-1-{[(3R,4S,5S)-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-3-{[2-(ciclohepta-2,4,6-trien-1-il)etil]amino}-1-meToxi-2-metil-3-oxopropil]pirrolidin-1-il}-3-metoxi-5-metil-1-oxoheptan-4-il](metil)amino}-3-metil-1-oxobutan-2-il]-2-metilpiperidin-2-carboxamida, sal clorhidrato (n.o 180). De acuerdo con el procedimiento general C, a partir de n.o 179 (162 mg, 0,199 mmol, 1 equiv.) y una solucion 4 M de acido clorhffdrico en dioxano (2,0 ml) se sintetizo el material deseado en forma de una goma (155 mg). Una porcion de esta goma (25 mg) se destilo azeotropicamente con una mezcla 1/1 de metanol/acetonitrilo para proporcionar n.o 180 (20 mg, 83 %) en forma de un solido. RMN 1H (4OO MHz , DMSO-d6), 69,02-9,13 (m), 8,83-8,93 (m), 8,39-8,46 (m), 8,OO-8,O6 (m), 7,78 (t), 7,24-7,30 (m), 7,16-7,21 (m), 6,54-6,65 (m), 6,09-6,19 (m), 5,11-5,18 (m), 4,69-4,78 (m), 4,59-4,68 (m), 4,46-4,56 (m), 4,08-4,13 (m), 3,95­ 4,03 (m), 3,77-3,85 (m), 3,54-3,73 (m), 3,43-3,53 (m), 3,37-3,42 (m), 3,24-3,33 (m), 3,16-3,22 (m), 3,03-3,15 (m), 2,99-3,02 (m), 2,89-2,98 (m), 2,65-2,76 (m), 2,41-2,54 (m), 2,15-2,39 (m), 2,07-2,15 (m), 1,51-1,94 (m), 1,49 (d), 1,38 (t), 1,20-1,32 (m), 1,02-1,09 (m), 0,84-0,97 (m), 0,73-0,81 (m). CL-EM (Protocolo Q1): m/z 714,6 [M+H+], tiempo de retencion = 0,76 HPLC (Protocolo U): m/z 714,4 [M+H+], tiempo de retencion = 7,409 minutos (pureza = 90 %).
Preparacion de 2-metil-L-prolil-W-[(3R,4S,5S)-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-3-{[2-(ciclohepta-2A6-trien-1-il)etil]amino}-1-metoxi-2-metil-3-oxopropil]pirrolidin-1-il}-3-metoxi-5-metil-1-oxoheptan-4-il]-N-metil-L-valinamida, sal de acido formico (n.0182), y Eiemplo de Referencia W-[(3R,4S,5S)-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-3-{[2-(ciclohepta-2,4,6-trien-1-il)etil]amino}-1-metoxi-2-metil-3-oxopropil]pirrolidin-1 -il}-3-metoxi-5-metil-1-oxoheptan-4-il]-N~2~{[(3R)-3-fluoropirrolidin-3-il]carbonil}-W-metil-L-valinamida, sal de acido trifluoroacetico (n.o 184) y Ejemplo de Referencia W-[(3R,4S,5S)-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-3-{[2-(ciclohepta-2,4,6-trien-1-il)etil]amino}-1-metoxi-2-metil-3-oxopropil]pirrolidin-1 -il}-3-metoxi-5-metil-1 -oxoheptan-4-il]-N~2—[[(3S)-3-fluoropirrolidin-3-il]carbonil}-W-metil-L-valinamida, sal de acido trifluoroacetico (n.o 186).
Figure imgf000122_0001
Etapa 1A. Smtesis de 1-(terc-butoxicarbonil)-2-metil-L-prolil-N-[(3R,4S,5S)-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-3-{[2-(ciclohepta-2,4,6-trien-1-il)etil]amino}-1-metoxi-2-metil-3-oxopropil]pirrolidin-1-il}-3-metoxi-5-metil-1-oxoheptan-4-il]-N-metil-L-valinamida (n.o 181). De acuerdo con el procedimiento general D, a partir de n.o 176 (lOo mg, 0,170 mmol, 1 equiv.), (S)-1-(terc-butoxicarbonil)-2-metil-L-prolina (50,7 mg, 0,221 mmol, 1,3 equiv.), diclorometano (4,3 ml), HATU (84,9 mg, 0,221 mmol, 1,3 equiv.) y N,N-diisopropiletilamina (0,123 ml, 0,697 mmol, 4,1 equiv.), se sintetizo el material en bruto deseado, que se purified por eromatografia sobre gel de sflice (Gradiente: de O a 1OO % de acetato de etilo en heptano) para proporcionar n.o 181 (142 mg, asumido rendimiento euantitativo). CL-EM (Protoeolo Q1): m/z 8OO,6 [M+H+], tiempo de reteneion = 1,11 minutos.
Etapa 1B. Smtesis de (3R)-3-{[(2S)-1-{[(3R,4S,5S)-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-3-{[2-(ciclohepta-2,4,6-trien-1-il)etil]amino}-1-metoxi-2-metil-3-oxopropil]pirrolidin-1-il}-3-metoxi-5-metil-1-oxoheptan-4-il](metil)amino}-3-metil-1-oxobutan-2-il]carbamoil}-3-fluoropirrolidin-1-carboxilato de tere-butilo (n.o 183). A una solueion de n.o 170 (18,2 mg, O,O76 mmol, 1 equiv.) en diclorometano (1,8 ml) y N,N-dimetilformamida (0,3 ml) se anadio N,N-diisopropiletilamina (O,O4O ml, 0,228 mmol, 3 equiv.), seguido de hAt U (29,2 mg, O,O76 mmol, 1 equiv.). Despues de agitar durante 10 minutos a temperatura ambiente, se anadio n.o 176 (45 mg, O,O76 mmol, 1 equiv.). La reaceion se agito a temperatura ambiente durante 18 horas y se anadio mas cantidad de HATU (29 mg, O,O76 mmol, 1 equiv.). Despues de 8 horas, la reaceion se concentro al vado para proporcionar n.o 183 (61,0 mg, euantitativo), que se recogio en la siguiente etapa sin purificaeion adieional. CL-EM (Protoeolo Q1): m/z 826,6 [M+Na+], tiempo de reteneion = 1,05 minutos.
Etapa 1C. Smtesis de (3S)-3-{[(2S)-1-{[(3R,4S,5S)-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-3-{[2-(ciclohepta-2,4,6-trien-1-il)etil]amino}-1-metoxi-2-metil-3-oxopropil]pirrolidin-1-il}-3-metoxi-5-metil-1-oxoheptan-4-il](metil)amino}-3-metil-1-oxobutan-2-il]carbamoil}-3-fluorociclopentanocarboxilato de tere-butilo (n.o 185). A una solueion de n.o 171 (24 mg, 0,1 mmol, 1 equiv.) en diclorometano (2,35 ml) y N,N-dimetilformamida (0,33 ml) se anadio N,N-diisopropiletilamina (O,O53 ml, O,3OO mmol, 3 equiv.), seguido de HATU (38,4 mg, O,1OO mmol, 1 equiv.). Despues de agitar a temperatura ambiente durante 1o minutos, se anadio n.o 176 (58,9 mg, 0,1 mmol, 1 equiv.). La reaceion se agito a temperatura ambiente durante 18 horas y se anadio mas cantidad de HATU (38,4 mg, O,1OO mmol, 1 equiv.) y N,N-dimetilformamida (0,2 ml) y se agito durante 9 horas mas. La reaceion se concentro al vado para dar n.o 185 (80 mg, euantitativo), que se recogio en la siguiente etapa sin purificaeion adieional. CL-EM (Protoeolo Q1): m/z 804,6 [M+H+], tiempo de reteneion = 1,05 minutos.
Etapa 2A. Smtesis de 2-metil-L-prolil-N-[(3R,4S,5S)-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-3-{[2-(ciclohepta-2,4,6-trien-1-il)etil]amino}-1-metoxi-2-metil-3-oxopropil]pirrolidin-1-il}-3-metoxi-5-metil-1-oxoheptan-4-il]-N-metil-L-valinamida, sal de acido formico (n.o 182). De acuerdo eon el procedimiento general C, a partir de n.o 181 (136 mg, O,17O mmol, 1 equiv.) y una solueion 4 M de acido dorhidrico en dioxano (2 ml) se sintetizo el material deseado en forma de una goma (l42 mg). Una poreion de este residuo en bruto (20 mg, 14%) se destilo azeotropieamente eon una mezela 1/1 de metanol/aeetonitrilo y despues se purifieo por eromatografia de fase inversa (Procedimiento O) para obtener n.o 182 (10 mg, 57 % en dos etapas) en forma de un solido. HPLC (Protoeolo U): m/z 7OO,4 [M+H+], tiempo de reteneion = 7,106 minutos (pureza > 90 %). RMN 1H (4OO MHz , DMSO-cfe), d 8,25-8,39 (m), 8,20-8,25 (m), 7,96-7,99 (m), 7,74­ 7,77 (m), 6,55-6,63 (m), 6,10-6,18 (m), 5,11-5,18 (m), 4,66-4,72 (m), 4,51-4,61 (m), 4,46-4,50 (m), 3,96-4,01 (m), 3,37-3,86 (m ), 3,20-3,36 (m ), 3,11-3,19 (m ), 3,03-3,11 (m ), 2,98-3,03 (m ), 2,90-2,96 (m ), 2,77-2,79 (m ), 2,65-2,73
(m ), 2,57-2,63 (m ), 2,47-2,56 (m ), 2,36-2,46 (m ), 2,26-2,32 (m ), 2,14-2,25 (m ), 2,03-2,10 (m ), 1,92-2,03 (m ), 1,72­
1,92 (m ), 1,64-1,72 (m ), 1,60-1,64 (m ), 1,50-1,59 (m ), 1,39-1,48 (m ), 1,23-1,32 (m ), 1,18-1,22 (m ), 1,12-1,14 (m ),
1.01- 1,09 (m ), 0,83-1,00 (m ), 0,74-0,83 (m ), 0,70-0,74 (m ).
Etapa 2B. Smtesis de sal de acido trifluoroacetico de W-[(3R,4S,5S)-1-{(2S)-2-[(1 R,2R)-3-{[2-(ciclohepta-2,4,6-trien-1-il)etil]aMino}-1-Metoxi-2-Metil-3-oxopropil]pirrolidin-1-il}-3-Metoxi-5-Metil-1-oxoheptan-4-il]-N~2~-{[(3R)-3-fluoropirrolidin-3-il]carbonil}-W-Metil-L-valinaMida (n.0184). De acuerdo con el procediMiento general C, a partir de n.0183 (61,1 Mg, 0,076 mmo I, 1 equiv.), dicloroMetano (0,3 m I) y una solution 4 M de acido clorddrico en dioxano
(0,9 m I) se sintetizo el Material en bruto deseado (140 Mg). Una portion del Material en bruto (98 Mg, 69%) se purifico por croMatograffa de fase inversa (Pmcedimiento M*) para dar n.o 184 (7,6 Mg, 20 % en dos etapas). HPlC (Protocolo T): m/z 704,5 [M+H+], tieMpo de retention = 2,50 Minutos (pureza = 84 %). RMN 1H (400 MHz, DMSO-de),
5 8,67-8,71 (m ), 8,44-8,48 (m ), 8,27-8,33 (m ), 8,22-8,27 (m ), 7,97-8,03 (m ), 7,84-7,89 (m ), 7,74-7,81 (m ), 7,43-7,48
(m ), 7,23-7,29 (m ), 7,17-7,21 (m ), 6,55-6,66 (m ), 6,10-6,19 (m ), 5,10-5,19 (m ), 4,66-4,75 (m ), 4,51-4,63 (m ), 3,96­
4,04 (m ), 3,78-3,85 (m ), 3,65-3,73 (m ), 3,46-3,62 (m ), 3,37-3,45 (m ), 3,24-3,37 (m ), 3,21-3,24 (m ), 3,13-3,21 (m ) 3.02- 3,13 (m ), 2,95-3,00 (m ), 2,80-2,82 (m ), 2,66-2,71 (m ), 2,47-2,57 (m ), 2,24-2,46 (m ), 2,09-2,24 (m ), 1,95-2,05
(m ), 1,49-1,93 (m ), 1,22-1,34 (m ), 1,02-1,09 (m ), 0,83-1,01 (m ), 0,74-0,82 (m ).
Etapa 2C. Smtesis de W-[(3R,4S,5S)-1-{(2S)-2-[(1 R,2R)-3-{[2-(ciclohepta-2,4,6-trien-1-il)etil]aMino}-1-Metoxi-2-Metil-3-oxopropil]pirrolidin-1-il}-3-Metoxi-5-Metil-1-oxoheptan-4-il]-N~2~-{[(3S)-3-fluoropirrolidin-3-il]carbonil}-A/-Metil-L-valinaMida, sal de acido trifluoroacetico (n.o 186). De acuerdo con el procediMiento general C, a partir de n.o 185
(80,3 Mg, 0,1mmo I, 1 equiv.), dicloroMetano (0,4 m I) y una solucion 4 M de acido clor^drico en dioxano (1,2 m I) se sintetizo el Material en bruto deseado, en el que se purifico una porcion (94 Mg, 53 %) por croMatograffa de fase
inversa (Pmcedimiento M*) para dar n.o 186 (11,8 Mg, 32 % en dos etapas). RMN 1H (400 MHz , DMSO-de), 58,85­
9,07 (m ), 8,29-8,41 (m ), 7,99-8,04 (m ), 7,76-7,84 (m ), 6,56-6,68 (m ), 6,12-6,21 (m ), 5,12-5,21 (m ), 4,87-4,99 (m ) 4,69-4,79 (m ), 4,49-4,67 (m ), 3,98-4,06 (m ), 3,80-3,87 (m ), 3,64-3,76 (m ), 3,55-3,64 (m ), 3,47-3,54 (m ), 3,39-3,4 (m ), 3,26-3,39 (m ), 3,22-3,25 (m ), 3,18-3,22 (m ), 3,06-3,14 (m ), 2,98-3,01 (m ), 2,55-2,57 (m ), 2,42-2,49 (m ), 2,11­
2,38 (m ), 2,09 (s), 1,78-1,97 (m ), 1,72-1,77 (m ), 1,51-1,71 (m ), 1,24-1,36 (m ), 1,07 (dd), 0,83-1,03 (m ), 0,75-0,82 (m ).
HPlC (Protocolo T): m /z 704,5 [m +H+], tieMpo de retencion = 2,48 Minutos (pureza = 100 %).
Preparadon de (2S)-N-[(2S)-1-{[(3R,4S,5S)-3-metoxi-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-1-metoxi-2-metil-3-oxo-3-{[(1S)-2-fenil-1-(1,3-tiazol-2-il)etil]amino}propil]pirrolidin-1-il}-5-metil-1 -oxoheptan-4-il](metil)amino}-3-metil-1-oxobutan-2-il]-2-metilpiperidin-2-carboxamida, sal formiato (n.o 188), y (2R)-N-[(2S)-1-{[(3R,4S,5S)-3-metoxi-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-1-metoxi-2-metil-3-oxo-3-{[(1S)-2-fenil-1-(1,3-tiazol-2-il)etil]amino}propil]pirrolidin-1-il}-5-metil-1-oxoheptan-4-il](metil)amino}-3-metil-1-oxobutan-2-il]-2-metilpiperidin-2-carboxamida, sal formiato (n.o 190) y Ejemplo de Referenda N~2~-{[(3R)-3-fluoropirrolidin-3-il]carbonil}-N-[(3R,4S,5S)-3-metoxi-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-1-metoxi-2-metil-3-oxo-3-{[(1S)-2-fenil-1-(1,3-tiazol-2-il)etil]amino}propil]pirrolidin-1-il}-5-metil-1-oxoheptan-4-il]-N-metil-L-valinamida, sal de acido trifluoroacetico (n.o 192) y Ejemplo de Referenda N~2~-{[(3S)-3-fluoropirrolidin-3-il]carbonil}-N-[(3R,4S,5S)-3-metoxi-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-1-metoxi-2-metil-3-oxo-3-{[(1S)-2-fenil-1-(1,3-tiazol-2-il)etil]amino}propil]pirrolidin-1-il}-5-metil-1-oxoheptan-4-il]-N-metil-L-valinamida, sal de acido trifluoroacetico (n.o 194).
Figure imgf000123_0001
Etapa 1A. Smtesis de (2S)-2-{[(2S)-1-{[(3R,4S,5S)-3-Metoxi-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-1-Metoxi-2-Metil-3-oxo-3-{[(1 S)-2-fenil-1 -(1,3-tiazol-2-il)etil]aMino}propil]pirrolidin-1-il}-5-Metil-1 -oxoheptan-4-il](Metil)aMino}-3-Metil-1-oxobutan-2-il]carbaMoil}-2-Metilpiperidin-1-carboxilato de terc-butilo (n.o 187). De acuerdo con el procediMiento general D, a partir de n.o 86 (280 Mg, 0,4 mmoI, 1 equiv.), n.o 156 (100 Mg, 0,4 mmo I, 1 equiv.), dicloroMetano (5 m I), HATU (182
Mg, 0,48 mmo I, 1,2 equiv.) y W,W-diisopropiletilaMina (100 Mg, 0,8 mmo I, 2 equiv.) se sintetizo el Material en bruto deseado, que se purifico por croMatograffa sobre gel de silice (Gradiente: de 0,01 a 0,05 % de Metanol en dicloroMetano) para proporcionar n.o 187 (220 Mg, 62 %) en forMa de un solido de color bianco. HPLC (Protocolo V):
m/z 883,57 [M+H+], tiempo de retencion = 3,23 minutes (pureza = 95 %).
Etapa IB. Smtesis de (2R)-2-{[(2S)-1-{[(3R,4S,5S)-3-metoxi-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-1-metoxi-2-metil-3-oxo-3-{[(1S)-2-feniM-(1,3-tiazol-2-il)etil]amino}propil]pirrolidin-1-il}-5-metiM-oxoheptan-4-il](metil)amino}-3-metiM-oxobutan-2-il]carbamoil}-2-metilpiperidin-1-carboxilato de terc-butilo (n.0189). De acuerdo con el procedimiento general D, a
partir de n.o 86 (400 mg, 0,6 mmol, 1 equiv.), n.o 157 (146 mg, 0,6 mmol, 1 equiv.), diclorometano (10 ml), HATU
(259 mg, 0,72 mmol, 1,2 equiv.) y N,N-diisopropiletilamina (158 mg, 1,2 mmol, 2 equiv.) se sintetizo el material en
bruto deseado, que se purifico por cromatograffa sobre gel de sflice (Gradiente: de 0,01 a 0,05 % de metanol en diclorometano) para proporcionar n.o 189 (220 mg, 37 %) en forma de un solido de color bianco. HPLC (Protocolo
W): m/z 883,7 [M+H+], tiempo de retencion = 4,12 minutos (pureza = 95 %).
Etapa 1C. Smtesis de (3R)-3-fluoro-3-{[(2S)-1-{[(3R,4S,5S)-3-metoxi-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-1-metoxi-2-metil-3-oxo-3-{[(1S)-2-fenil-1-(1,3-tiazol-2-il)etil]amino}propil]pirrolidin-1-il}-5-metil-1-oxoheptan-4-il](metN)amino}-3-metil-1-oxobutan-2-il]carbamoil}pirrolidin-1-carboxilato de terc-butilo (n.o 191). De acuerdo con el procedimiento general D, a
partir de n.o 86 (300 mg, 0,45 mmol, 1 equiv.), n.o 168 (106 mg, 0,45 mmol, 1 equiv.), diclorometano (10 ml), HATU
(194 mg, 0,54 mmol, 1,2 equiv.) y diisopropiletilamina (117 mg, 0,9 mmol, 2 equiv.) se sintetizo el material en bruto deseado, que se purifico por cromatograffa de fase inversa (Procedimiento P) para proporcionar n.o 191 (159 mg,
40 %) en forma de un solido de color bianco. HPLC (Protocolo X): m/z 873,4 [m H+], tiempo de retencion = 3,32 minutos (pureza = 99 %).
Etapa ID. Smtesis de (3S)-3-fluoro-3-{[(2S)-1-{[(3R,4S,5S)-3-metoxi-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-1-metoxi-2-metil-3-oxo-3-{[(1S)-2-fenil-1-(1,3-tiazol-2-il)etil]amino}propil]pirrolidin-1-il}-5-metil-1-oxoheptan-4-il](metN)amino}-3-metil-1-oxobutan-2-il]carbamoil}pirrolidin-1-carboxilato de terc-butilo (n.o 193). De acuerdo con el procedimiento general D, a
partir de n.o 86 (300 mg, 0,45 mmol, 1 equiv.), n.o 169 (106 mg, 0,45 mmol, 1 equiv.), diclorometano (10 ml), HATU
(194 mg, 0,54 mmol, 1,2 equiv.) y diisopropiletilamina (117 mg, 0,9 mmol, 2 equiv.) se sintetizo el material en bruto deseado, que se purifico por cromatograffa de fase inversa (Procedimiento P) para proporcionar n.o 193 (149 mg,
37 %) en forma de un solido de color bianco. HPLC (Protocolo X): m/z 873,4 [m +H+], tiempo de retencion = 3,34 minutos (pureza = 98 %).
Etapa 2A. Smtesis de (2S)-N-[(2S)-1-{[(3R,4S,5S)-3-metoxi-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-1-metoxi-2-metil-3-oxo-3-{[(1S)-2-fenil-1-(1,3-tiazol-2-il)etil]amino}propil]pirrolidin-1-il}-5-metil-1-oxoheptan-4-il](metil)amino}-3-metil-1-oxobutan-2-il]-2-metilpiperidin-2-carboxamida, sal de acido formico (n.o 188). De acuerdo con el procedimiento general C, a partir de
n.o 187 (20 mg, 0,023 mmol, 1 equiv.), diclorometano (0,1 ml), acetonitrilo (0,1 ml) y una solucion 4 M de acido clorhndrico en dioxano (0,26 ml) se sintetizo el material en bruto deseado, que se purifico por cromatograffa de fase
inversa (Procedimiento N*) para obtener n.o 188 (11,6 mg, 61 %,); HPLC (Protocolo T): m/z 783,8 [M+H+], tiempo de retencion = 2,53 minutos (pureza = 96 %). RMN ’'H (400 MHz , DMSO-de), 68,82-8,87 (m), 8,60-8,63 (m), 8,26-8,29
(m), 7,84-7,90 (m), 7,75-7,81 (m), 7,60-7,67 (m), 7,21-7,31 (m), 7,14-7,19 (m), 5,49-5,55 (m), 5,37-5,42 (m), 4,69­
4,75 (m), 4,59-4,65 (m), 4,50-4,56 (m), 3,95-4,01 (m), 3,77-3,82 (m), 3,54-3,61 (m), 3,47-3,53 (m), 3,24-3,45 (m), 3,14-3,23 (m), 3,03-3,08 (m), 2,96-3,03 (m), 2,78-2,80 (m), 2,64-2,73 (m), 2,60-2,62 (m), 2,47-2,56 (m), 2,31-2,4 (m), 2,13-2,28 (m), 2,00-2,07 (m), 1,92-1,99 (m), 1,71-1,86 (m), 1,58-1,70 (m), 1,50-1,56 (m), 1,38-1,49 (m), 1,15­
1,36 (m), 1,08-1,14 (m), 1,03-1,07 (m), 0,90-1,02 (m), 0,83-0,90 (m), 0,73-0,80 (m), 0,70-0,73 (m).
Etapa 2B. Smtesis de (2R)-N-[(2S)-1-{[(3R,4S,5S)-3-metoxi-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-1-metoxi-2-metil-3-oxo-3-{[(1S)-2-fenil-1-(1,3-tiazol-2-il)etil]amino}propil]pirrolidin-1-il}-5-metil-1-oxoheptan-4-il](metil)amino}-3-metil-1-oxobutan-2-il]-2-metilpiperidin-2-carboxamida, sal de acido formico (n.o 190). De acuerdo con el procedimiento general C, a partir de
n.o 189 (20 mg, 0,022 mmol, 1 equiv.), diclorometano (0,1 ml), acetonitrilo (0,1 ml) y una solucion 4 M de acido clorhndrico en dioxano (0,26 ml) se sintetizo el material en bruto deseado, que se purifico por cromatograffa de fase
inversa (Procedimiento N*) para obtener n.o 190 (13,2 mg, 73 %), HPLC (Protocolo T): m/z 783,7 [M+H+], tiempo de retencion = 2,5 minutos (pureza = 100 %). RMN 1H (400 MHz , DMSO-de), 68,83-8,86 (m), 8,60-8,62 (m), 8,24-8,27
(m), 7,83-7,89 (m), 7,78-7,80 (m), 7,75-7,77 (m), 7,64-7,66 (m), 7,60-7,63 (m), 7,20-7,31 (m), 7,13-7,19 (m), 5,49­
5,55 (m), 5,36-5,42 (m), 4,65-4,74 (m), 4,60-4,65 (m), 4,50-4,56 (m), 3,95-4,01 (m), 3,76-3,81 (m), 3,53-3,62 (m) 3,47-3,52 (m), 3,22-3,45 (m), 3,14-3,21 (m), 2,97-3,05 (m), 2,93-2,96 (m), 2,79-2,86 (m), 2,76-2,78 (m), 2,65-2,6 (m), 2,48-2,56 (m), 2,37-2,43 (m), 2,29-2,35 (m), 2,17-2,27 (m), 2,04-2,11 (m), 1,93-2,00 (m), 1,70-1,85 (m), 1,53­
1,69 (m), 1,36-1,48 (m), 1,28-1,36 (m), 1,13-1,26 (m), 1,08-1,12 (m), 0,98-1,07 (m), 0,91-0,97 (m), 0,84-0,91 (m),
0,73-0,78 (m).
Etapa 2C. Smtesis de N~2~-{[(3R)-3-fluoropirrolidin-3-il]carbonil}-N-[(3R,4S,5S)-3-metoxi-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-1-metoxi-2-metil-3-oxo-3-{[(1S)-2-fenil-1-(1,3-tiazol-2-il)etil]amino}propil]pirrolidin-1-il}-5-metil-1-oxoheptan-4-il]-N-metil-L-valinamida, sal de acido trifluoroacetico (n.o 192). De acuerdo con el procedimiento general C, a partir de n.o 191
(10 mg, 0,011 mmol, 1 equiv.), diclorometano (0,1 ml), acetonitrilo (0,1 ml) y una solucion 4 M de acido clorhndrico en dioxano (0,13 ml) se sintetizo el material en bruto deseado, que se purifico por cromatograffa de fase inversa (Procedimiento M*) para obtener n.o 192 (5,1 mg, 60 %), HPLC (Protocolo T): m/z 773,5 [M+H+], tiempo de retencion
= 2,43 minutos (pureza = 100 %). RMN 1H (400 MHz , DMSO-d6) 69,32-9,44 (m), 9,17-9,21 (m), 8,91 (d), 8,63-8,69
(m), 8,38-8,43 (m), 8,22-8,27 (m), 7,80 (dd), 7,66 (dd), 7,14-7,33 (m), 5,49-5,57 (m), 5,37-5,45 (m), 4,10-4,78 (m),
3,97-4,06 (m), 3,77-3,83 (m), 3,33-3,65 (m), 3,15-3,29 (m), 2,95-3,09 (m), 2,82-2,83 (m), 2,67-2,71 (m), 2,55-2,57
(m), 2,32-2,54 (m), 2,10-2,31 (m), 2,09 (s), 1,72-1,90 (m), 1,57-1,72 (m). 1,38-1,50 (m), 1,15-1,38 (m), 1,09 (dd),
0,85-1,0 (m), 0,75-0,83 (m).
Etapa 2D. Smtesis de N~2~-{[(3S)-3-fluoropirrolidin-3-il]carbonil}-N-[(3R,4S,5S)-3-metoxi-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-1-metoxi-2-metil-3-oxo-3-{[(1S)-2-fenil-1-(1,3-tiazol-2-il)etil]amino}propil]pirrolidin-1-il}-5-metil-1-oxoheptan-4-il]-N-metil-L-valinamida, sal de acido trifluoroacetico (n.0194). De acuerdo con el procedimiento general C, a partir de n.0193 (10 mg, 0,011 mmol, 1 equiv.), diclorometano (0,1 ml), acetonitrilo (0,1 ml) y una solucion 4 M de acido clorhndrico en dioxano (0,13 ml) se sintetizo el material en bruto deseado, que se purifico por cromatograffa de fase inversa (Procedimiento M*) para obtener n.o 194 (9 mg, 93 %), HPLC (Protocolo T): m/z 773,8 [M+H+], tiempo de retencion = 2,42 minutos (pureza = 100%). RMN 1H (400 MHz , DMSO-da) 69,39-9,52 (m), 9,21-9,35 (m), 8,90 (d), 8,63-8,69 (m), 8,42-8,48 (m), 8,29 -8,34 (m), 7,80 (dd), 7,66 (dd), 7,22-7,33 (m), 7,13-7,21 (m), 5,47-5,57 (m), 5,36-5,44 (m), 4,43-4,93 (m), 3,97-4,05 (m), 3,64-3,83 (m), 3,32-3,61 (m), 3,15-3,29 (m), 3,06-3,09 (m), 2,95-3,05 (m), 2,89-2,95 (m), 2,82-2,84 (m), 2,67-2,72 (m), 2,54-2,56 (m), 2,48-2,53 (m), 2,28-2,48 (m), 2,11-2,28 (m), 2,09 (s ), 1,57-1,72 (m), 1,38-1,47 (m), 1,15-1,37 (m), 1,09 (dd), 0,85-0,99 (m), 0,78 (t).
Preparacion de 1,2-dimetil-D-prolil-N-[(3R,4S,5S)-1-{2S)-2-[(1R,2R)-3-£[(2S)-3-(4-aminofenil)-1-metoxi-1-oxopropan-2-il]amino}-1-metoxi-2-metil-3-oxopropil]pirrolidin-1-il}-3-metoxi-5-metil-1-oxoheptan-4-il]-N-metil-L-valinamida, sal formiato (n.o 200), y 1,2-dimetil-D-prolil-N-[(3R,4S,5S)-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-3-£[(2S)-3-(4-aminofenil)-1-metoxi-1-oxopropan-2-il]amino}-1-metoxi-2-metil-3-oxopropil]pirrolidin-1 -il}-3-metoxi-5-metil-1-oxoheptan-4-il]-N-metil-L-valinamida, sal formiato (n.o 201).
Figure imgf000125_0001
Etapa 1. Smtesis de 1,2-dimetil-D-prolil-N-[(3R,4S,5S)-1-terc-butoxi-3-metoxi-5-metil-1-oxoheptan-4-il]-N-metil-L-valinamida (n.o 195). De acuerdo con el procedimiento general D, a partir de n.o 6 (7,75 g, 21,6 mmol, 1 equiv.), n.o 152 (3,88 g, 21,6 mmol, 1 equiv.), diclorometano (100 ml), HATU (9,8 g, 25,9 mmol, 1,2 equiv.) y diisopropiletilamina (11,1 g, 86,4 mmol, 4 equiv.) se sintetizo el material en bruto deseado, que se purifico por cromatograffa sobre gel de silice (Gradiente: de 20 a 55% de acetato de etilo en eter de petroleo) para proporcionar n.o 195 (11,1 g, rendimiento cuantitativo) en forma de un aceite de color amarillo.
Etapa 2. Smtesis de 1,2-dimetil-D-prolil-N-[(2R,3S,4S)-1-carboxi-2-metoxi-4-metilhexan-3-il]-N-metil-L-valinamida (n.o 196). De acuerdo con el procedimiento general B, a partir de n.o 195 (11,1 g, 21,6 mmol, 1 equiv.), diclorometano (100 ml) y acido trifluoroacetico (40 ml), se sintetizo el material en bruto deseado, para obtener n.o 196 (10,1 g, rendimiento cuantitativo) que se uso en la siguiente etapa sin purificacion adicional. CL-EM (Protocolo Z): m/z 428,5 [M+H+], tiempo de retencion = 0,9 minutos.
Etapa 3. Smtesis de 1,2-dimetil-D-prolil-N-[(3R,4S,5S)-3-metoxi-5-metil-1-oxo-1-(pentafluorofenoxi)heptan-4-il]-N-metil-L-valinamida (n.o 197). A una solucion enfriada (00C) de n.o 196 (4,0 g, 9,4 mmol, 1 equiv.) en diclorometano (40 ml) se anadio gota a gota piridina (2,95 g, 37,6 mmol, 4 equiv.), seguido de una solucion de trifluoroacetato de pentafluorofenilo (3,9 g, 13,6 mmol, 1,4 equiv.) en diclorometano (5 ml). La mezcla se agito a temperatura ambiente durante una hora y el disolvente se concentro al vacm. El reslduo se purlflco por cromatograffa sobre gel de s l^ice (Gradlente: de 1 a 10 % de metanol en diclorometano) para proporcionar el compuesto n.0197 (4,5 g, 81,2 % (en tres etapas) en forma de un solido de color bianco.
Etapa 4. Smtesis de 1,2-dimetil-D-prolil-N-[(3R,4S,5S)-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-2-carboxi-1-metoxipropil]pirrolidin-1-il}-3-metoxi-5-metil-1-oxoheptan-4-il]-N-metil-L-valinamida, sal de acido trifluoroacetico (n.o 198). A una solucion enfriada (00C) de n.o 197 (4,0 g, 7,4 mmol, 1 equiv.) en diclorometano (25 ml) se anadio gota a gota diisopropiletilamina (3,4 g, 26,3 mmol, 3,5 equiv.), seguido de una solucion de n.o 103 (2,3 g, 7,6 mmol, 1,02 equiv.) en diclorometano (15 ml). Despues de la adicion, la mezcla se agito a temperatura ambiente durante 16 horas y el disolvente se retiro al vacm. El residuo se purified por cromatograffa sobre gel de sflice (Gradiente: de 1 a 10% de metanol en diclorometano), seguido de una segunda purificacion por cromatograffa de fase inversa (Procedimiento Q) para dar n.o 198 (1,57 g, 57,5 %) en forma de un solido de color bianco HPLC (Protoeolo X): m/z 597,49 [M+H+]; tiempo de reteneion = 8,879 minutos (pureza = 98 %). tiempo de reteneion de HPLC quiral: 3,328 min (pureza = 98 %); Columna: Columna: Chiraleel OJ-H, 250 x 4,6 mm, 5 pm; Fase movil: metanol (0,05 % de dietilamina) en CO2 del 5 % al 40 % durante 15 minutos; Caudal: 2,35 ml/minuto.
Etapa 5. Smtesis de 1,2-dimetil-D-prolil-N-[(3R,4S,5S)-3-metoxi-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-1-metoxi-2-metil-3-oxo-3-(pentafluorofenoxi)propil]pirrolidin-1-il}-5-metil-1-oxoheptan-4-il]-N-metil-L-valinamida (n.o 199). A una solucion de n.o 198 (280 mg, 0,394 mmol, 1 equiv.) en diclorometano (2 ml) se anadio piridina (75 mg, 0,94 mmol, 2,4 equiv.), seguido de una solucion de trifluoroaeetato de pentafluorofenilo (268 mg, 0,94 mmol, 2,4 equiv.) en diclorometano (1,5 ml). La mezcla se agito a temperatura ambiente durante 2,5 horas y el disolvente se concentro al vacm. El residuo se purifieo por cromatograffa sobre gel de sflice (Gradiente: de 1 a 10 % de metanol en diclorometano) para proporcionar el compuesto n.o 199 (279 mg, 39 %) en forma de un solido de color bianco. CL-EM (Protoeolo Q1): m/z 763,5 [M+H+], tiempo de reteneion = 0,93 minutos.
Etapa 6A. Smtesis de 1,2-dimetil-D-prolil-N-[(3R,4S,5S)-3-metoxi-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-1-metoxi-3-{[(2S)-1-metoxi-1-oxo-3-(1,2,3,4-tetrahidroquinolin-6-il)propan-2-il]amino}-2-metil-3-oxopropil]pirrolidin-1-il}-5-metil-1-oxoheptan-4-il]-N-metil-L-valinamida, sal de acido trifluoroacetico (n.o 2O0). A una mezcla de n.o 199 (25 mg, 0,033 mmol, 1 equiv.) y n.o 215 ((7,7 mg, 0,033 mmol, 1 equiv.) en diclorometano (1,5 ml), se anadio N,N-diisopropiletilamina (30,2 mg, 2,31 mmol, 7 equiv.). La reaceion se agito durante 5 minutos y se anadio N,N-dimetilformamida (0,5 ml). Despues de agitar durante 2 A horas, se anadio mas eantidad de N,N-diisopropiletilamina (30,2 mg, 2,31 mmol, 7 equiv.). Despues de 3 A horas, se anadio mas N,N-dimetilformamida (0,75 ml) y la mezcla se agito durante 18 horas. Se anadieron mas eantidades de N,N-diisopropiletilamina (15,1 mg, 1,15 mmol, 3,6 equiv.) y N,N-dimetilformamida (0,25 ml) y la reaceion se agito a temperatura ambiente durante 48 horas. La mezcla de reaceion se concentro al vacm y el produeto en bruto se purifieo por cromatograffa de fase inversa (Procedimiento M*) para dar n.o 200 (12,9 mg, 48 %). HPLC (Protoeolo T): m/z HpLC (Protoeolo T): m/z 407,7, doble earga [2+], tiempo de reteneion = 1,69 minutos (pureza = 100 %). RMN 1H (400 MHz , DMSO-d6) d 9,72-9,82 (m), 8,61-8,67 (m), 8,42-8,48 (m), 8,19-8,24 (m), 7,25­ 7,27 (m), 7,12-7,14 (m), 6,94-7,01 (m), 6,88-6,94 (m), 6,78-6,84 (m), 6,67-6,74 (m), 6,57-6,64 (m), 4,69-4,77 (m), 4,60-4,68 (m), 4,53-4,60 (m), 4,46-4,53 (m), 4,37-4,45 (m), 3,97-4,05 (m), 3,76-3,81 (m), 3,62-3,67 (m), 3,53-3,62 (m), 3,44-3,52 (m), 3,32-3,38 (m), 3,27-3,32 (m), 3,22-3,27 (m), 3,15-3,22 (m), 3,06-3,14 (m), 2,97-3,01 (m), 2,92­ 2,96 (m), 2,74-2,83 (m), 2,61-2,74 (m), 2,57-2,61 (m), 2,48-2,56 (m), 2,37-2,46 (m), 2,25-2,36 (m), 2,00-2,20 (m), 1.67- 1,91 (m), 1,47-1,60 (m), 1,37-1,47 (m), 1,24-1,35 (m), 1,03-1,10 (m), 0,95-1,00 (m), 0,88-0,94 (m), 0,76-0,83 (m).
Etapa 6B. Smtesis de 1,2-dimetil-D-prolil-N-[(3R,4S,5S)-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-3-{[(2S)-3-(4-aminofenil)-1-metoxi-1-oxopropan-2-il]amino}-1-metoxi-2-metil-3-oxopropil]pirrolidin-1-il}-3-metoxi-5-metil-1-oxoheptan-4-il]-N-metil-L-valinamida, sal de acido trifluoroacetico (n.o 201). A una mezcla de n.o 199 (25 mg, 0,033 mmol, lequiv.) y el 4-amino-L-fenilalaninato de metilo disponible en el mereado (8,8 mg, 0,033 mmol, 1 equiv.) en diclorometano (l,5 ml), se anadio N,N-diisopropiletilamina (30,2 mg, 2,31 mmol, 7 equiv.). La reaceion se agito durante 5 minutos y se anadio N,N-dimetilformamida (0,5 ml). Despues de 4 horas, se anadio mas eantidad de N,N-diisopropiletilamina (37,75 mg, 2,88 mmol, 8,25 equiv.) y la mezcla se agito durante 50 minutos. Se anadio mas eantidad de N,N-dimetilformamida (0,75 ml) y la reaceion se agito durante 66 horas, se concentro al vacm y el produeto en bruto se purifieo por cromatograffa de fase inversa (Procedimiento M*) para dar n.o 201 (14,3 mg, 56 %); HPLC (Protoeolo T): m/z 387,2, doble earga [2+], tiempo de reteneion = 1,50 minutos (pureza= 100 %); RMN 1H (400 MHz , DMSO-d6) 6 9.68- 9,84 (m), 8,57-8,66 (m), 8,46-8,51 (m), 8,23-8,29 (m), 7,18-7,28 (m), 7,11-7,16 (m), 7,03-7,08 (m), 6,97-7,02 (m), 4,67-4,75 (m), 4,58-4,66 (m), 4,34-4,57 (m), 3,95-4,03 (m), 3,85-3,90 (m), 3,73-3,81 (m), 3,66-3,72 (m), 3,57­ 3,66 (m), 3,50-3,57 (m), 3,42-3,49 (m), 3,32-3,38 (m), 3,14-3,30 (m), 2,95-3,11 (m), 2,84-2,94 (m), 2,78-2,81 (m), 2,63-2,74 (m), 2,46-2,57 (m), 2,34-2,45 (m), 2,19-2,34 (m), 1,97-2,19 (m), 1,67-1,90 (m), 1,45-1,62 (m), 1,34-1,41 (m), 1,21-1,34 (m), 1,01-1,10 (m), 0,82-0,99 (m), 0,72-0,81 (m).
Preparacion de 1,2-dimetil-L-prolil-N-[(3R,4S,5S)-3-metoxi-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-1-metoxi-3-{[(2S)-1-metoxi-1-oxo-3-(1,2,3,4-tetrahidroquinolin-6-il)propan-2-il]amino}-2-metil-3-oxopropil]pirrolidin-1-il}-5-metil-1-oxoheptan-4-il]-N-metil-L-valinamida, sal formiato (n.o 207), y 1,2-dimetil-L-prolil-N-[(3R,4S,5S)-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-3-{[(2S)-3-(4-aminofenil)-1-metoxi-1-oxopropan-2-il]amino}-1 -metoxi-2-metil-3-oxopropil]pirrolidin-1-il}-3-metoxi-5-metil-1-oxoheptan-4-il]-N-metil-L-valinamida, sal formiato (n.o 208), y 1,2-dimetil-L-prolil-N-[(3R,4S,5S)-3-metoxi-1-{(2S)-2-[(i R,2R)-1 -metoxi-3-{[(2S)-1-metoxi-1-oxo-3-fenil-propan-2-il]amino}-2-metil-3-oxopropil]pirrolidin-1-il}-5-metil-1-oxoheptan-4-il]-N-metil-L-valinamida, sal de acido trifluoroacetico (n.o 209)
Figure imgf000127_0001
Etapa 1. Smtesis de 1,2-dimetil-L-prolil-A/-[(3R,4S,5S)-1-terc-butoxi-3-metoxi-5-metil-1-oxoheptan-4-il]-A/-metil-L-valinamida (n.0202). De acuerdo con el procedimiento general D, a partir de n.06 (4,3 g, 12 mmol, 1 equiv.), n.0150 (2,15 g, 12 mmol, 1 equiv.), diclorometano (50 ml), HATU (5,46 g, 14 mmol, 1,2 equiv.) y diisopropiletilamina (8,17 ml) se sintetizo el material en bruto deseado, que se purifico por cromatograffa sobre gel de silice (Gradiente: de 20 a 55 % de acetato de etilo en eter de petroleo) para proporcionar n.o 202 (5,2 g, 89 %) en forma de un aceite de color amarillo.
Etapa 2. Smtesis de 1,2-dirnetil-L-prolil-A/-[(2R,3S,4S)-1-carboxi-2-metoxi-4-metilhexan-3-il]-A/-metil-L-valinamida (n.o 203). De acuerdo con el procedimiento general B, a partir de n.o 202 (5,2 g, 10,77 mmol, 1 equiv.), diclorometano (45 ml) y acido trifluoroacetico (20 ml), se sintetizo el material en bruto deseado, para obtener n.o 203 (7 g, rendimiento cuantitativo) que se uso en la siguiente etapa sin purificacion adicional.
Etapa 3. Smtesis de 1,2-dimetil-L-prolil-W-[(3R,4S,5S)-3-metoxi-5-metil-1-oxo-1-(pentafluorofenoxi)heptan-4-il]-W-metil-L-valinamida (n.o 204). A una solucion enfriada (00C) de n.o 203 (7,0 g, 10,77 mmol, 1 equiv.) en diclorometano (15 ml), se anadio gota a gota piridina (3,41 g 43,08 mmol, 4 equiv.), seguido de una solucion de trifluoroacetato de pentafluorofenilo (6,03 g, 21,54 mmol, 2 equiv.) en diclorometano (7 ml). La mezcla se agito a temperatura ambiente durante una hora y el disolvente se concentro al vado. El residuo se purifico por cromatograffa sobre gel de sflice (Gradiente: de 1 a 10 % de metanol en diclorometano) para proporcionar el compuesto n.o 204 (8 g, 82 % en dos etapas) en forma de un solido de color amarillo.
Etapa 4. Smtesis de 1,2-dimetil-L-prolil-W-[(3R,4S,5S)-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-2-carboxi-1-metoxipropil]pirrolidin-1-il}-3-metoxi-5-metil-1-oxoheptan-4-il]-A/-metil-L-valinamida (n.o 205). A una solucion enfriada (0 oc) de n.o 204 (8,0 g, 10,77 mmol, 1 equiv.) en diclorometano (25 ml) se anadio gota a gota diisopropiletilamina (5,6 g, 43,08 mmol, 4 equiv.), seguido de una solucion de n.o 103 (3,22 g, 10,77 mmol, 1 equiv.) en diclorometano (15 ml). Despues de la adicion, la mezcla se agito a temperatura ambiente durante 16 horas y el disolvente se retiro al vado. El residuo se purifico por cromatograffa sobre gel de sflice (Gradiente: de 1 a 10 % de metanol en diclorometano) para dar n.o 205 (2,2 g, 33 %) en forma de un solido de color amarillo HPLC (Protocolo X): m/z 597,42 [M+H+], tiempo de retencion = 8,729 minutos (pureza > 97 %), tiempo de retencion de HPLC quiral: 2,87 min (pureza = 89 %); Columna: Chiralcel OD-3, 150 x 4,6 mm, 3 pm; Fase movil: etanol (0,05 % de dietilamina) en CO2 del 5 % al 40 % durante 12 minutos; Caudal: 2,5 ml/minuto.
Etapa 5. Smtesis de 1,2-dimetil-L-prolil-N-[(3R,4S,5S)-3-metoxi-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-1-metoxi-2-metil-3-oxo-3-(pentafluorofenoxi)propil]pirrolidin-1-il}-5-metil-1-oxoheptan-4-il]-N-metil-L-valinamida (n.0206). A una solucion de n.0 198 (0,28 g, 0,47 mmol, 1 equiv.) en diclorometano (2 ml) se anadio piridina (75 mg, 0,94 mmol, 2 equiv.), seguido de una solucion de trifluoroacetato de pentafluorofenilo (268 mg, 0,94 mmol, 2 equiv.) en diclorometano (1,5 ml). La mezcla se agito a temperatura ambiente durante 2,5 horas y el disolvente se concentro al vacm. El residuo se purifico por cromatograffa sobre gel de silice (Gradiente: de 1 a 10% de metanol en diclorometano) para proporcionar el compuesto n.o 206 (348 mg, 97 %) en forma de un solido de color blanco. CL-EM (protocolo Q1): m/z 763,5 [M+H+], tiempo de retencion = 0,9 minutos.
Etapa 6A. Smtesis de 1,2-dimetil-L-prolil-N-[(3R,4S,5S)-3-metoxi-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-1-metoxi-3-{[(2S)-1-metoxi-1-oxo-3-(1,2,3,4-tetrahidroquinolin-6-il)propan-2-il]amino}-2-metil-3-oxopropil]pirrolidin-1-il}-5-metil-1-oxoheptan-4-il]-N-metil-L-valinamida, sal de acido trifluoroacetico (n.o 207). El compuesto del titulo se preparo a partir de n.o 206 (25 mg, 0,033 mmol, 1 equiv.) y n.o 215 (7,7 mg, 0,033 mmol, 1 equiv.) usando el procedimiento descrito anteriormente para la preparacion de n.o 200. El producto en bruto se purifico por cromatograffa de fase inversa (Procedimiento M*) para dar n.o 207 (11,7 mg, 44%). HPLC (Protocolo T): m/z 4o7,6, doble carga [2+], tiempo de retencion = 1,59 minutos (pureza = 100%). RMN fH (DMSO-da) 69,57-9,69 (m), 8,68-8,76 (m), 8,42-8,47 (m), 8,23-8,29 (m), 8,18­ 8,23 (m), 7,24-7,27 (m), 6,95-7,01 (m), 6,89-6,94 (m), 6,80-6,86 (m), 6,70-6,78 (m), 6,60-6,67 (m), 4,69-4,77 (m), 4,60-4,68 (m), 4,46-4,60 (m), 4,34-4,46 (m), 3,95-4,03 (m), 3,87-3,91 (m), 3,79-3,85 (m), 3,74-3,79 (m), 3,60-3,66 (m), 3,49-3,60 (m), 3,41-3,49 (m), 3,12-3,35 (m), 3,04-3,12 (m), 2,89-3,04 (m), 2,68-2,83 (m), 2,61-2,67 (m), 2,45­ 2,55 (m), 2,34-2,44 (m), 2,08-2,33 (m), 2,05-2,08 (m), 1,92-2,05 (m), 1,75-1,91 (m), 1,65-1,75 (m), 1,59-1,64 (m), 1,34-1,58 (m), 1,20-1,31 (m), 1,01-1,09 (m), 0,94-0,99 (m), 0,84-0,93 (m), 0,80-0,83 (m), 0,72-0,80 (m).
Etapa 6B. Smtesis de sal de acido trifluoroacetico de 1,2-dimetil-L-prolil-N-[(3R,4S,5S)-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-3-{[(2S)-3-(4-aminofenil)-1-metoxi-1-oxopropan-2-il]amino}-1-metoxi-2-metil-3-oxopropil]pirrolidin-1-il}-3-metoxi-5-metil-1-oxoheptan-4-il]-A/-metil-L-valinamida (n.o 208). A una mezcla de n.o 206 (25,0 mg, 0,o33 mmol, 1 equiv.), y el 4-amino-L-fenilalaninato de metilo disponible en el mercado (8,8 mg, 0,033 mmol, 1 equiv.) en diclorometano (1,5 ml), se anadio N,N-diisopropiletilamina (30,2 mg, 2,31 mmol, 7 equiv.). La reaccion se agito durante 5 minutos y se anadio N,N-dimetilformamida (0,5 ml). Despues de 2 A horas, se anadio mas cantidad de N,N-diisopropiletilamina (30,2 mg, 2,31 mmol, 7 equiv.). Despues de agitar durante 3 1/2 horas, se anadio mas cantidad de N,N-dimetilformamida (0,75 ml) y la reaccion se agito durante 66 horas, se concentro al vacm y el producto en bruto se purifico por cromatograffa de fase inversa (Procedimiento M*) para dar n.o 208 (13 mg, 51 %); HPLC (Protocolo T): m/z 387,2, doble carga [2+], tiempo de retencion = 1,58 minutos (pureza= 100 %); RMN 1H (4o0 MHz , DMSO-d6) 6 9,54-9,69 (m), 8,68-8,75 (m), 8,46-8,50 (m), 8,33-8,37 (m), 8,22-8,31 (m), 8,09-8,14 (m), 7,17-7,27 (m), 7,07-7,16 (m), 6,99-7,05 (m), 6,92-6,99 (m), 4,69-4,75 (m), 4,60-4,68 (m), 4,42-4,59 (m), 4,34-4,42 (m), 3,95-4,03 (m), 3,85­ 3,90 (m), 3,74-3,80 (m), 3,65-3,72 (m), 3,62-3,65 (m), 3,42-3,62 (m), 3,31-3,36 (m), 3,24-3,30 (m), 3,11-3,24 (m), 3,03-3,11 (m), 2,96-3,03 (m), 2,81-2,92 (m), 2,65-2,76 (m), 2,43-2,55 (m), 2,34-2,43 (m), 2,06-2,33 (m), 1,93-2,05 (m), 1,75-1,89 (m), 1,66-1,74 (m), 1,58-1,65 (m), 1,47-1,57 (m), 1,34-1,43 (m), 1,20-1,32 (m), 1,10-1,14 (m), 1,00­ 1,09 (m), 0,83-0,99 (m), 0,72-0,81 (m).
Etapa 6C. Smtesis de 1,2-dimetil-L-prolil-N-[(3R,4S,5S)-3-metoxi-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-1-metoxi-3-{[(2S)-1-metoxi-1-oxo-3-fenilpropan-2-il]amino}-2-metil-3-oxopropil]pirrolidin-1-il}-5-metil-1-oxoheptan-4-il]-N-metil-L-valinamida, sal de acido trifluoroacetico (n.o 209). El compuesto del titulo se preparo a partir de n.o 206 (25,0 mg, 0,033 mmol, 1 equiv.) y clorhidrato de L-fenilalaninato de metilo (7,1 mg, 0,033 mmol, 1 equiv.) usando el procedimiento descrito anteriormente para la preparacion de n.o 200. El producto en bruto se purifico por cromatograffa de fase inversa (Procedimiento M*) para dar n.o 209 (10,3 mg, 41 %). HPLC (Protocolo T): m/z 758,7 [M+H+], tiempo de retencion = 1,787 minutos (pureza = 100 %). RMN 1H (DMSO-d6) 69,57-9,70 (m), 8,70-8,75 (m), 8,50-8,56 (m), 8,32-8,42 (m), 8,24-8,26 (m), 8,10-8,15 (m), 7,14-7,27 (m), 7,12-7,13 (m), 6,98-7,00 (m), 4,69-4,77 (m), 4,55-4,67 (m), 4,43-4,53 (m), 3,94-4,02 (m), 3,73-3,78 (m), 3,62-3,68 (m), 3,48-3,60 (m), 3,39-3,48 (m), 3,23-3,33 (m), 3,13-3,22 (m), 3,08­ 3,13 (m), 3,02-3,08 (m), 2,96-3,01 (m), 2,81-2,94 (m), 2,76-2,80 (m), 2,66-2,75 (m), 2,62-2,66 (m), 2,46-2,55 (m), 2,31-2,45 (m), 2,09-2,29 (m), 2,05-2,09 (m), 1,93-2,04 (m), 1,74-1,88 (m), 1,65-1,74 (m), 1,59-1,65 (m), 1,36-1,52 (m), 1,21-1,35 (m), 1,01-1,08 (m), 0,94-1,00 (m), 0,83-0,94 (m), 0,73-0,81 (m).
Preparacion de (2S)-2-amino-3-(1,2,3,4-tetrahidroquinolin-6-il)propanoato de metilo
Figure imgf000128_0001
Etapa 1. Smtesis de 6-(bromometil)quinolina (n.0210). Una solucion de 6-metilquinolina (5 g, 35 mmol, 1 equiv.), N-bromosuccinimida (8,1 g, 45,5 mmol, 1,3 equiv.) y peroxido de benzoMo (840 mg, 3,5 mmol, 0,1 equiv.) en tetracloruro de carbono (100 ml) se agito a la temperatura de reflujo durante 3 horas y despues se enfrio a temperatura ambiente. La mezcla de reaccion se filtro y el filtrado se concentro al vado. El residuo se disolvio en tetrahidrofurano (100 ml) y se filtro. El filtrado se uso directamente en la siguiente etapa sin purificacion adicional.
Etapa 2. Smtesis de 6-{[(2S,5R)-3,6-dimetoxi-5-(propan-2-il)-2,5-dihidropirazin-2-il]metil}quinolina (n.o 211). A una solucion enfriada (-700C) de (2R)-3,6-dimetoxi-2-(propan-2-il)-2,5-dihidropirazina (25,8 g, 140 mmol, 2 equiv.) en tetrahidrofurano (200 ml) se anadio gota a gota n-butillitio (2,5 M, 64,4 ml, 161 mmol, 2,3 equiv.) y despues se agito durante 30 minutos. Una solucion de n.o 210 (15,4 g, 70 mmol, 1 equiv.) en tetrahidrofurano (150 ml) se anadio gota a gota a - 65 oc y despues la solucion se agito durante 2 horas a esta temperatura. La reaccion se interrumpio con cloruro de amonio acuoso saturado (100 ml) y se extrajo con acetato de etilo (100 ml). La fase organica se seco sobre sulfato sodico y se concentro al vado. El residuo se purifico por cromatograffa en columna de sflice (Gradiente: de 10 a l6 % de acetato de etilo en eter de petroleo) para proporcionar n.o 211 (7,3 g, 32 %, en dos etapas) en forma de un solido de color amarillo. CL-EM (Protocolo Z): m/z 326,2 [M+H+], tiempo de retencion = 0,88 minutos.
Etapa 3. Smtesis de (2S)-2-amino-3-(quinolin-6-il)propanoato de metilo (n.o 212). A una solucion de n.o 211 (7,3 g, 22,5 mmol, 1 equiv.) en agua (25 ml) y acetonitrilo (80 ml) se anadio acido trifluoroacetico (9 ml) a 0 oc y la solucion se agito a 10 oc durante una noche. La fase organica se retiro al vado y la fase acuosa restante se basifico a pH 9 con carbonato sodico, que se uso directamente para la siguiente etapa.
Etapa 4. Smtesis de (2S)-2-[(terc-butoxicarbonil)amino]-3-(quinolin-6-il)propanoato de metilo (n.o 213). A una solucion de n.o 212 (5,2 g, 22,5 mmol, 1 equiv.) y trietilamina (9,1 g, 90 mmol, 4 equiv.) en un disolvente mixto de metanol (30 ml) y agua (50 ml) se anadio dicarbonato de di-terc-butilo (17,5 g, 78,75 mmol, 3,5 equiv.) a 0 oc y despues la solucion se agito a 10 oc durante una noche. La mezcla de reaccion se filtro y la torta de filtro se lavo con metanol (20 ml x 2). El filtrado se extrajo con acetato de etilo (50 ml x 2) y la fase organica se concentro al vado. El residuo se purifico por cromatograffa en columna de sflice (Gradiente: de 25 a 50 % de acetato de etilo en eter de petroleo) para proporcionar n.o 213 (5,5 g, 74 % en dos etapas) en forma de un aceite de color amarillo. CL-EM (Protocolo Z): m/z 331,2 [M+H+], tiempo de retencion = 0,76 minutos.
Etapa 5. Smtesis de (2S)-2-[(terc-butoxicarbonil)amino]-3-(1,2,3,4-tetrahidroquinolin-6-il)propanoato de metilo (n.o 214). Una suspension de n.o 2 l3 (1,5 g, 4,55 mmol, 1 equiv.) y paladio sobre carbono (150 mg) en etanol (20 ml) se agito a 50 oc en una atmosfera de 0,21 MPa (30 psi) de hidrogeno durante una noche. La mezcla de reaccion se filtro a traves de una capa de celite y el filtrado se concentro al vado. El residuo se purifico por cromatograffa en columna de sflice (Gradiente: 40 % de acetato de etilo en eter de petroleo) para proporcionar n.o 214 (1,2 g, 80 %) en forma de un aceite. RMN 1H (400 MHz , CDCIs): 66,70 (d, 2H), 6,40 (m, 1H), 4,95 (m, 1H), 4,49 (m, 1H), 3,77 (s, 3H), 3,28 (m, 2H), 2,97 (m, 2H), 2,71 (m, 2H), 1,95 (m, 2H), 1,26 (s, 9H), HPLC (Protocolo Y): m/z 357,0 [M+Na+]; tiempo de retencion = 5,304 minutos (pureza >98 %). tiempo de retencion de HPLC quiral: 4,64 min (pureza = 98 %) (Columna: Chiralcel OJ-H, 150 x 4,6 mm, 5 pm; Fase movil: etanol (0,05 % de dietilamina) en CO2 del 5 % al 40 % durante 15 minutos; Caudal: 2,5 ml/minuto.
Etapa 6. Smtesis de (2S)-2-amino-3-(1,2,3,4-tetrahidroquinolin-6-il)propanoato de metilo (n.o 215). A una solucion de n.o 214 (750 mg, 2,25 mmol, 1 equiv.) en diclorometano (20 ml) se anadio gota a gota acido trifluoracetico (2 ml) a 0 oc y despues la solucion se agito a 20 oc durante una noche. La mezcla de reaccion se concentro al vado y el residuo se disolvio en agua (20 ml). La solucion se basifico con carbonato sodico y se extrajo con acetato de etilo/tetrahidrofurano (30 ml x 3). La fase organica se seco sobre sulfato sodico y se concentro al vado para proporcionar n.o 215 (450 mg, 85 %) en forma de un aceite de color amarillo. RMN 1H (400 MHz , CDCI3): 66,70 (d, 2H), 6,40 (m, 1H), 3,73 (s, 3H), 3,67 (m, 1H), 3,30 (m, 2H), 2,96 (m, 1H), 2,75 (m, 3H), 1,96 (m, 2H), 1,50 (a, 2H), 1,26 (a, iH). Hp Lc (Protocolo Y): m/z 235,14 [M+H+]; tiempo de retencion = 4,35 minutos (pureza > 96 %). tiempo de retencion de HPLC quiral: 5,71 min (pureza = 98 %). (Columna: Chiralcel OJ-H, 150 x 4,6 mm, 5 pm; Fase movil: etanol (0,05 % de dietilamina) en CO2 del 5 % al 40 % durante 15 minutos; Caudal: 2,5 ml/minuto.
Preparacion de Ejemplo de Referenda de N-{(2R,3R)-3-[(2S)-1-{(3R,4S,5S)-4-[(N-{[(3R)-3-fluoropirrolidin-3-il]carbonil}-L-valil)(metil)amino]-3-metoxi-5-metilheptanoil}pirrolidin-2-il]-3-metoxi-2-metilpropanoil}-L-fenilalanina, sal de acido trifluoroacetico (n.o 2l7), y Ejemplo de Referenda de N-{(2R,3R)-3-[(2S)-1-{(3R,4S,5S)-4-[(N-{[(3S)-3-fluoropirrolidin-3-il]carbonil}-L-valil)(metil)amino]-3-metoxi-5-metilheptanoil}pirrolidin-2-il]-3-metoxi-2-metilpropanoil}-L-fenilalanina, sal de acido trifluoroacetico (n.o 219).
Figure imgf000130_0001
Etapa 1A. Smtesis de N-{(2R,3R)-3-[(2S)-1-{(3R,4S,5S)-4-[(N-{[(3R)-1-(terc-butoxicarbonil)-3-fluoro-pirrolidin-3-il]carbonil}-L-valil)(metil)amino]-3-metoxi-5-metilheptanoil}pirrolidin-2-il]-3-metoxi-2-metilpropanoil}-L-fenilalaninato de
metilo (n.0216). A una solucion de n.0168 (36,9 mg, 0,158 mmol, 1 equiv.) y n.0114 (100 mg, 0,158 mmol, 1 equiv.)
en diclorometano (3,6 ml) y N,N-dimetilformamida (0,8 ml), se anadio diisopropiletilamina (0,083 ml, 0,474 mmol, 3 equiv.), seguido de HATU (60,7 mg, 0,158 mmol, 1 equiv.). La reaccion se dejo en agitacion a temperatura ambiente durante 18 horas, se diluyo con acetato de etilo (25 ml), se lavo con agua (1x ), acido citrico al 10 % (1x ) y salmuera
(1x ). La fase organica se seco sobre sulfato sodico, se filtro y el filtrado se concentro al vacm para dar n.o 216 en
bruto (220 mg, 164% del teorico) que se uso en la siguiente etapa sin purificacion adicional. H p LC (protocolo Q):
m/z 848,6 [M+H+], tiempo de retencion = 2,10 minutos.
Etapa IB. Smtesis de N-{(2R,3R)-3-[(2S)-1-{(3R,4S,5S)-4-[(N-{[(3S)-1-(terc-butoxicarbonil)-3-fluoro-pirrolidin-3-il]carbonil}-L-valil)(metil)amino]-3-metoxi-5-metilheptanoil}pirrolidin-2-il]-3-metoxi-2-metilpropanoil}-L-fenilalaninato de
metilo (n.o 218). A una solucion de n.o 169 (36,9 mg, 0,158 mmol, 1 equiv.) y n.o 114 (100 mg, 0,158 mmol, 1 equiv.)
en diclorometano (3,6 ml) y N,N-dimetilformamida (0,8 ml), se anadio diisopropiletilamina (0,083 ml, 0,474 mmol, 3 equiv.), seguido de HATU (60,7 mg, 0,158 mmol, 1 equiv.). La reaccion se dejo en agitacion a temperatura ambiente durante 18 horas, se diluyo con acetato de etilo (25 ml), se lavo con agua (1x ), acido citrico al 10 % (1x ) y salmuera
(1x ). La fase organica se seco sobre sulfato sodico, se filtro y el filtrado se concentro al vacm para proporcionar n.o
218 en bruto (180 mg, 134 % del teorico) que se uso en la siguiente etapa sin purificacion adicional. H p Lc (protocolo
Q): m/z 848,6 [M+H+], tiempo de retencion = 2,10 minutos.
Etapa 2A. Smtesis de N-{(2R,3R)-3-[(2S)-1-{(3R,4S,5S)-4-[(N-{[(3R)-3-fluoropirrolidin-3-il]carbonil}-L-valil)(metil)amino]-3-metoxi-5-metilheptanoil}pirrolidin-2-il]-3-metoxi-2-metilpropanoil}-L-fenilalanina, sal de acido trifluoroacetico (n.o 217). A una solucion de n.o 216 en bruto (134 mg) en tetrahidrofurano (4 ml) se anadio hidroxido
de litio (1 M, 0,5 ml). La reaccion se agito a temperatura ambiente durante 18 horas y se concentro al vacm. El residuo se disolvio en diclorometano (2 ml) y se anadio acido trifluoroacetico (2 ml). La reaccion se agito durante 4
horas y se concentro al vacm. El material en bruto se purifico por cromatograffa de fase inversa (Procedimiento M*)
para obtener n.o 217 (60 mg, 86 % en dos etapas) en forma de una goma. CL-EM (protocolo Q): m/z 734,93 [M+H+], tiempo de retencion = 1,19 minutos. RMN 1H (DMSO-d6) 12,62-12,83 (m), 9,30-9,43 (m), 9,17-9,28 (m), 8,34-8,41
(m), 8,22-8,31 (m), 8,08-8,15 (m), 7,87-7,93 (m), 7,76-7,81 (m), 7,11-7,23 (m), 4,93-4,99 (m), 4,81-4,88 (m), 4,55­
4,71 (m), 4,48-4,54 (m), 4,37-4,45 (m), 3,92-3,99 (m), 3,69-3,75 (m), 3,31-3,65 (m), 3,25-3,30 (m), 3,20-3,24 (m), 3,12-3,19 (m), 3,08-3,10 (m), 2,97-3,07 (m), 2,92-2,97 (m), 2,75-2,84 (m), 2,64-2,70 (m), 2,43-2,57 (m), 2,28-2,4 (m), 2,15-2,26 (m), 2,02-2,15 (m), 1,56-1,87 (m), 1,31-1,48 (m), 1,05-1,30 (m), 0,97-1,06 (m), 0,82-0,97 (m), 0,71­
0,79 (m).
Etapa 2B. Smtesis de N-{(2R,3R)-3-[(2S)-1-{(3R,4S,5S)-4-[(N-{[(3S)-3-fluoropirrolidin-3-il]carbonil}-L-valil)(metil)amino]-3-metoxi-5-metilheptanoil}pirrolidin-2-il]-3-metoxi-2-metilpropanoil}-L-fenilalanina, sal de acido trifluoroacetico (n.o 219). A una solucion de n.o 218 en bruto (100 mg) en tetrahidrofurano (4 ml) se anadio hidroxido
de litio 1,0 M en agua (0,5 ml). La reaccion se agito a temperatura ambiente durante 18 horas y despues se concentro al vacm. El material en bruto se disolvio en diclorometano (2 ml) y se anadio acido trifluoroacetico (2 ml).
La reaccion se agito durante 4 horas y despues se concentro al vacm. El material en bruto se purifico por cromatograffa de fase inversa (Procedimiento M*) para obtener n.o 219 en forma de una goma (60 mg, 91 % en dos etapas). CL-EM (protocolo Q): m/z 734,97 [M+H+], tiempo de retencion = 1,14 minutos. RMN 1H (400 MHz , DMSO-d6), 612,62-12,85 (m), 9,32-9,43 (m), 9,13-9,26 (m), 8,39-8,46 (m), 8,30-8,39 (m), 8,25-8,29 (m), 8,08-8,13 (m), 7,79­
7,85 (m), 7,67-7,72 (m), 7,10-7,23 (m), 4,94-5,01 (m), 4,83-4,89 (m), 4,64-4,73 (m), 4,56-4,63 (m), 4,44-4,50 (m) 4,37-4,44 (m), 3,92-3,99 (m), 3,60-3,74 (m), 3,24-3,55 (m), 3,11-3,24 (m), 3,07-3,10 (m), 3,02-3,06 (m), 2,98-3,0 (m), 2,93-2,97 (m), 2,75-2,85 (m), 2,68-2,69 (m), 2,63-2,67 (m), 2,45-2,55 (m), 2,26 -2,44 (m), 2,15-2,25 (m), 2,03­
2,14 (m), 1,55-1,87 (m), 1,31-1,47 (m), 1,15-1,31 (m), 0,98-1,05 (m), 0,91-0,98 (m), 0,82-0,91 (m), 0,71-0,78 (m).
Preparacion de 2-metilalanil-N-{(3R,4S,5S)-H(2S)-2-£(3R,4R,7S)-7-bendl-4-metiM8-[(4S,5R)-5-metil-2-oxoimidazolidin-4-il]-5,8,13-trioxo-2-oxa-6,9,12-triazaoctadecan-3-il}pirrolidin-1 -il]-3-metoxi-5-metil-1-oxoheptan-4-il}-N-metil-L-valinamida (n.0257).
Figure imgf000131_0001
-
Etapa 1. Smtesis de [(2S)-1-({2-[(terc butoxicarbonil)amino]etil}amino)-1-oxo-3-fenilpropan-2-il]carbamato de 9H-fluoren-9-ilmetilo (n.o 253). Siguiendo el procedimiento general D, usando W-[(9H-fluoren-9-ilmetoxi)carbonil]-L-fenilalanina (500 mg, 1,29 mmol, 1,0 equiv.), (2-aminoetil)carbamato de terc-butilo (207 mg, 1,29 mmol, 1,0 equiv.), HATU (620 mg, 1,55 mmol, 1,2 equiv.) y base de Hunig (0,452 ml, 2,58 mmol, 2,0 equiv.) en 6 ml de DMF, se produjo n.o 253 en forma de un solido de color bianco (620 mg, 91 %), despues de concentracion del disolvente y recristalizacion usando acetato de etilo. CL-EM (Protocolo Q1): m/z 552,3 [M+Na+], tiempo de retencion = 1,o1 minutos.
Etapa 2. Smtesis de W-alfa-[(9H-fluoren-9-ilmetoxi)carbonil]-W-[2-({6-[(4S,5R)-5-metil-2-oxoimidazolidin-4-il]hexanoil}amino)etil]-L-fenilalaninamida (n.o 254). La proteccion de Boc se retiro usando el procedimiento general C, usando n.o 251 (88 mg, 0,17 mmol, 1,0 equiv.) y HCl 4 M (2,0 ml, 8,0 mmol, 48 equiv.), seguido de concentracion al vado. Despues, la reaccion de acoplamiento se realizo siguiendo el procedimiento general D, usando un residuo en bruto, acido 6-[(4S,5R)-5-metil-2-oxoimidazolidin-4-il]hexanoico (35,6 mg, 0,166 mmol, 1,0 equiv.), HATU (73,2 mg, 0,18 mmol, 1,1 equiv.) y base de Hunig (0,087 ml, 0,50 mmol, 3,0 equiv.) en 2 ml de DMF, seguido de purificacion (Procedimiento J), para producir n.o 254 (35 mg, 34 %) en forma de un solido de color bianco. CL-EM (Protocolo Q1): m/z 626,3 [M+H+], tiempo de retencion = 0,86 minutos.
Etapa 3. Smtesis de A/-[2-({6-[(4S,5R)-5-metil-2-oxoimidazolidin-4-il]hexanoil}amino)etil]-L-fenilalaninamida (n.o 255). Siguiendo el procedimiento general A, usando n.o 254 (35 mg, 0,056 mmol, 1,0 equiv.), piperidina (0,lO ml, 1,0 mmol, 20 equiv.) en O,5 ml de DMF, seguido de purificacion usando cromatograffa de silice (O-3O % de metanol en diclorometano) se obtuvo n.o 253 (19 mg, 84 %). CL-EM (Protocolo Q1): m/z 404,2 [M+H+], tiempo de retencion = 0,48 minutos.
Etapa 4. Smtesis de A/-[(9H-fluoren-9-ilmetoxi)carbonil]-2-metilalanil-W-{(3R,4S,5S)-1-[(2S)-2-{(3R,4R,7S)-7-bencil-4-metil-18-[(4S,5R)-5-metil-2-oxoimidazolidin-4-il]-5,8,13-trioxo-2-oxa-6,9,l2-triazaoctadecan-3-il}pirrolidin-1-il]-3-metoxi-5-metil-1-oxoheptan-4-il}-A/-metil-L-valinamida (n.o 256). Siguiendo el procedimiento general D, usando n.o 105 (36,6 mg, 0,047 mmol, 1,0 equiv.), n.o 255 (19 mg, 0,047 mmol, 1,0 equiv.), HATU (22,4 mg, 0,o56 mmol, 1,2 equiv.) y base de Hunig (O,O25 ml, 0,141 mmol) en 1,5 ml de DMF, seguido de purificacion (Procedimiento J), se produjo n.o 256 (15 mg, 27 %) en forma de un solido de color bianco. CL-EM (Protocolo Q1): m/z 1164,8 [M+H+], tiempo de retencion = 0,99 minutos.
Etapa 5. Smtesis de 2-metilalanil-A/-{(3R,4S,5S)-1-[(2S)-2-{(3R,4R,7S)-7-bencil-4-metil-18-[(4S,5R)-5-metil-2-oxoimidazolidin-4-il]-5,8,13-trioxo-2-oxa-6,9,l2-triazaoctadecan-3-il}pirrolidin-1-il]-3-metoxi-5-metil-1-oxoheptan-4-il}-W-metil-L-valinamida (n.o 257). Siguiendo el procedimiento general A, usando n.o 256 (5 mg, O,OO4 mmol, 1,0 equiv.) y piperidina (0,02 ml, 0,2 mmol, 50 equlv.) en 0,7 ml de DMF, seguldo de purificacion (Procedlmlento J), se obtuvo n.0257 (2 mg, 50 %) en forma de un cristal incoloro. CL-EM (Protocolo Q1): m/z 1164,8 [M+H+], tiempo de retencion = 0,99 minutos. RMN 1H (400 MHz , DMSO-d6), 68,44-8,52 (m), 8,06-8,20 (m), 7,96-8,01 (m), 7,69-7,83 (m), 7,20­ 7,28 (m), 7,11-7,19 (m), 3,38-3,83 (m), 3,19-3,26 (m), 3,03-3,12 (m), 2,98 (s ), 2,91 (s ), 2,75 (s ), 2,65-2,70 (m), 2,01­ 2,36 (m), 1,65-1,87 (m), 1,39-1,57 (m), 1,13-1,37 (m), 1,04-1,08 (m), 0,74-1,01 (m).
Preparacion de W-[5-(2,5-dioxo-2,5-dihidro-1H-pirrol-1-il)pentanoil]-N,2-dimetilalanil-W-{(1S,2R)-4-{(2S)-2-[(1R,2R)-3-{K1S)-1-carboxi-2-feniletil]amino}-1-metoxi-2-metil-3-oxopropil]pirrolidin-1 -il}-2-metoxi-1-[(1S)-1-metilpropil]-4-oxobutil}-W-metil-L-valinamida (mv n.o 115).
Figure imgf000132_0001
Etapa 1. Preparacion de W-[5-(2,5-dioxo-2,5-dihidro-1H-pirrol-1-il)pentanoil]-N,2-dimetilalanil-W-{(1S,2R)-4-{(2S)-2-[(1R,2R)-3-{[(1S)-1-carboxi-2-feniletil]amino}-1-metoxi-2-metil-3-oxopropil]pirrolidin-1-il}-2-metoxi-1-[(1S)-1-metilpropil]-4-oxobutil}-W-metil-L-valinamida (mvn.o 115). A una solucion en agitacion de acido 5-(2,5-dioxo-2,5-dihidro-1H-pirrol-1-il)pentanoico (12 mg, 0,061 mM) en 0,4 ml de diclorometano y 0,1 ml de DMF, se anadio HATU (23,2 mg, 0,061 mM), seguido de base de Hunig (0,033 ml, 0,188 mM). La reaccion se dejo en agitacion durante 5 minutos antes de anadirse n.o 115 (39 mg, 0,047 mM) como una solucion en 0,4 ml de diclorometano y 0,1 ml de DMF. La reaccion se dejo en agitacion a temperatura ambiente durante 3 horas y 15 minutos, antes de interrumpirse a traves de la adicion de agua que contema una pequena cantidad de TFA. Despues, la reaccion se redujo. El material en bruto se disolvio con Dm SO y se purifico por cromatograffa de fase inversa (Procedimiento J). Despues, las fracciones apropiadas se concentraron (Genevac). Despues, el material purifico adicionalmente por cromatograffa de fase inversa (Procedimiento K) concentrandose las fracciones apropiadas (Genevac). Despues, el material se transfirio a un vial pequeno usando diclorometano y metanol antes de reducirse (Genevac) para proporcionar mvn.o 115 (1,4 mg, 3,3 %) como una mezcla de aceite/solido. HPLC (Protocolo A a 450C): m/z 897,5 [m +H+], tiempo de retencion = 9,149 minutos (pureza > 97 %).
Preparacion de W-[6-(2,5-dioxo-2,5-dihidro-1H-pirrol-1-il)hexanoil]-N,2-dimetilalanil-W-[(1S,2R)-4-{(2S)-2-[(1R,2R)-3-{K1S)-1-carboxi-2-feniletil]amino}-1-metoxi-2-metil-3-oxopropil]pirrolidin-1 -il}-2-metoxi-1-[(1S)-1-metilpropil]-4-oxobutil}-W-metil-L-valinamida (mcn.o 115)
Figure imgf000132_0002
Etapa 1. Smtesis de cloruro de 6-(2,5-dioxo-2,5-dihidro-1H-pirrol-1-il)hexanoflo (n.o 248). A una solucion en agitacion de acido 6-(2,5-dioxo-2,5-dihidro-1H-pirrol-1-il)hexanoico (3,15 g, 14,9 mM) en 15 ml de diclorometano, se anadio cloruro de oxalilo (1,61 ml, 17,9 mM), seguido de una gota de DMF. La reaccion se dejo en agitacion a temperatura ambiente durante tres horas. La reaccion se concentro al vad o. El residuo se disolvio en una solucion uno a uno de heptano y diclorometano y despues se concentro al vad o. Este procedimiento se repitio dos veces mas, produciendo un n,0248 solido (3,43 g, 100 %). RMN 1H (400 MHz , DMSO-da): 6 [7,02 (s , 2H), 3,43 (m, 2H), 2,53 (m, 1H), CH2,18 (m, 1H), 1,54 (m, 4H), 1,26 (m, 2H)].
Etapa 2. Smtesis de W-[6-(2,5-dioxo-2,5-dihidro-1H-pirrol-1-il)hexanoil]-N,2-dimetilalanina (n.o 249). A una solucion en agitacion de n.o 248 (600 mg, 2,61 mM) en 10 ml de diclorometano, se anadio N,2-dimetilalanina (306 mg, 2,61 mM), seguido de trietilamina (1,09 ml, 7,84 mM). La reaccion se dejo en agitacion a temperatura ambiente durante tres horas. Se anadio diclorometano a la reaccion y la fase organica se lavo tres veces con agua y dos veces con salmuera. La fase organica se separo y despues se seco sobre sulfato sodico antes de concentrarse al vad o. El residuo en bruto se purifico por cromatograffa de s l^ice (0-30 % de metanol en diclorometano) sobre sflice que se hada neutralizado previamente con trietilamina, produciendo un solido de color blanco, n.o 249 (127 mg, 16 %). CL­ EM (Protocolo Q): m/z 309,0 [M-K], tiempo de retencion = 0,96 minutos.
Etapa 3. Smtesis de W-{(2R,3R)-3-metoxi-3-[(2S)-1-{(3R,4S,5S)-3-metoxi-5-metil-4-[metil(L-valil)amino]heptanoil}pirrolidin-2-il]-2-metilpropanoil}-L-fenilalanina (n.o 250). A una solucion en agitacion de n.o 113 (2,10 g, 2,46 mM) en 10 ml de THF, se anadio hidroxido de litio (228 mg, 5,16 mM), seguido de 3 ml de agua. La reaccion se dejo en agitacion a temperatura ambiente durante 2 horas. La reaccion se acidifico a traves de la adicion de HCl 1 M y despues se concentro al vad o. El solido de color blanco resultante se recogio en 20 ml de acetonitrilo y 5 ml de agua. La fase acuosa se retiro y la fase organica se lavo una vez con agua. La fase organica se seco sobre sulfato sodico, se filtro y se concentro al vad o. Despues, se anadio acetato de etilo (20 ml) y el aceite en bruto se dejo en agitacion durante 30 minutos, antes de filtrarse para producir un solido de color blanco, n.o 250 (1,42 g, 94 %). CL-EM (Protocolo Q): m/z 619,5 [M+H+], tiempo de retencion = 1,10 minutos. HPLC (Protocolo A a 450C) m/z 619,4 [M+H+], tiempo de retencion = 6,732 minutos.
Etapa 4. Smtesis de W-[6-(2,5-dioxo-2,5-dihidro-1H-pirrol-1-il)hexanoil]-N,2-dimetilalanil-A/-{(1S,2R)-4-{(2S)-2-[(1R,2R)-3-{[(1S)-1-carboxi-2-feniletil]amino}-1-metoxi-2-metil-3-oxopropil]pirrolidin-1-il}-2-metoxi-1-[(1S)-1-metilpropil]-4-oxobutil}-W-metil-L-valinamida (mcn.o 115). A una solucion en agitacion de n.o 249 (382 mg, 1,23 mM) en 5 ml de diclorometano, se anadio HATU (482 mg, 1,23 mM), seguido de trietilamina (0,52 ml, 1,23 mM). La reaccion se dejo en agitacion durante 1 hora a temperatura ambiente, seguido de la adicion de n.o 250 (762 mg, 1,23 mM). La reaccion se dejo en agitacion durante 3 horas. La reaccion se concentro al vad o. La purificacion de fase inversa (Procedimiento L), seguido de liofilizacion, produjo un solido de color blanco mcn.o 120 (124 mg, 11 %). HPLC (Protocolo A a 45 oC); m/z 911,5 [M+H+], tiempo de retencion = 9,676 minutos.
Preparacion de W-[4-(2,5-dioxo-2,5-dihidro-1H-pirrol-1-il)butanoil]-N,2-dimetilalanil-W-{(1S,2R)-4-{(2S)-2-[(1R,2R)-3-{[(1S)-1-carboxi-2-feniletil]amino}-1-metoxi-2-metil-3-oxopropil]pirrolidin-1 -il}-2-metoxi-1-[(1S)-1-metilpropil]-4-oxobutil}-N-metil-L-valinamida (mbn.o 115).
Figure imgf000133_0001
Etapa 1. Smtesis de W-[4-(2,5-dioxo-2,5-dihidro-1H-pirrol-1-il)butanoil]-N,2-dimetilalanil-A/-{(1S,2R)-4-{(2S)-2-[(1R,2R)-3-{[(1S)-1-carboxi-2-feniletil]amino}-1-metoxi-2-metil-3-oxopropil]pirrolidin-1-il}-2-metoxi-1-[(1S)-1-metilpropil]-4-oxobutil}-W-metil-L-valinamida (mbn.o 115). una solucion en agitacion de acido 4-(2,5-dioxo-2,5-dihidro-1H-pirrol-1-il)butanoico (1,2 equivalentes), HATU (1,2 equivalentes) y base de Hunig (3 equivalentes) en DMF y diclorometano se deja en agitacion durante 30 minutos. Despues, se anadio el compuesto n.o 115 (1 equivalente) en forma de una solucion en diclorometano y DMF. La reaccion se concentro por CL-EM. La reaccion se concentro y la purificacion se completo mediante cromatograffa de fase inversa de media presion Isco (Gradiente: 5 %-100 % de agua en acetonitrilo).
Preparacion de W-[7-(2,5-dioxo-2,5-dihidro-1H-pirrol-1-il)heptanoil]-N,2-dimetilalanil-W-{(1S,2R)-4-{(2S)-2-[(1R,2R)-3-{[(1S)-1-carboxi-2-feniletil]amino}-1-metoxi-2-metil-3-oxopropil]pirrolidin-1 -il}-2-metoxi-1-[(1S)-1-metilpropil]-4-oxobutil}-W-metil-L-valinamida (men.0115).
Figure imgf000134_0001
Etapa 1. Smtesis de /V-[7-(2,5-dioxo-2,5-dihidro-1H-pirrol-1-il)heptanoil]-N,2-dimetilalanil-^-{(1 S,2R)-4-{(2S)-2-[(1R,2R)-3-{[(1S)-1-carboxi-2-feniletil]amino}-1-metoxi-2-metil-3-oxopropil]pirrolidin-1-il}-2-metoxi-1-[(1S)-1-metilpropil]-4-oxobutil}-W-metil-L-valinamida (men.o 115). Una solucion en agitacion de acido 7-(2,5-dioxo-2,5-dihidro-1H-pirrol-1-il)heptanoico (1,2 equivalentes), HATU (1,2 equivalentes) y base de Hunig (3 equivalentes) en DMF y diclorometano se deja en agitacion durante 30 minutos. Despues, se anadio el compuesto n.o 115 (1 equivalente) en forma de una solucion en diclorometano y DMF. La reaccion se concentro por CL-EM. La reaccion se concentro y la purificacion se completo mediante cromatograffa de fase inversa de media presion Isco (Gradiente: 5 %-100 % de agua en acetonitrilo).
Preparacion de W-[6-(2,5-dioxo-2,5-dihidro-1H-pirrol-1-il)hexanoil]-L-valil-N~5—carbamoil-N-(4-{(8S,11 S,12R)-12-(2-{(2S)-2-[(1 R,2R)-3-{[(1 S)-1-carboxi-2-feniletil] amino}-1-metoxi-2-metil-3-oxo-propil]pirrolidin-1-il}-2-oxoetil)-8-isopropil-4,5,5,10-tetrametil-11-[(1S)-1-metilpropil]-3,6,9-trioxo-2,13-dioxa-4,7,10-triazatetradec-1-il}fenil)-L-ornitinamida (mcValCitPABCn.o 115).
Figure imgf000134_0002
Etapa 1. Smtesis de W-[6-(2,5-dioxo-2,5-dihidro-1H-pirrol-1-il)hexanoil]-L-valil-N~5~-carbamoil-A/-(4-{(8S,11S,12R)-12-(2-{(2S)-2-[(1R,2R)-3-{[(1 S)-1-carboxi-2-feniletil]amino}-1-metoxi-2-metil-3-oxopropil]pirrolidin-1-il}-2-oxoetil)-8-isopropil-4,5,5,10-tetrametil-11-[(1S)-1-metilpropil]-3,6,9-trioxo-2,13-dioxa-4,7,10-triazatetradec-1-il}fenil)-L-omitinamida (mcValCitPABCn.o 115). Se preparo una solucion de mcCValCitPABC (Engarce n.0 D, 1 equivalente) y n.o 115 (1 equivalente) en DMF. Se anadio base de Hunig (4 equivalentes), 2,6-Luditina (4 equivalentes) y HOAT (0,2 equivalentes). La reaccion se concentro por CL-EM. La reaccion se concentro y la purificacion se completo mediante cromatograffa de fase inversa de media presion Isco (Gradiente: 5 %-100 % de agua en acetonitrilo).
Preparacion de W-(21-amino-4,7,10,13,16,19-hexaoxahenicosan-1-oil)-N,2-dimetilalanil-W-{(1S,2R)-4-{(2S)-2-[(1R,2R)-3-{[(1S)-1-carboxi-2-feniletil]amino}-1-metoxi-2-metil-3-oxopropil]pirrolidin-1 -il}-2-metoxi-1-[(1S)-1-metilpropil]-4-oxobutil}-W-metil-L-valinamida (AmPeg6C2n.o 115).
Figure imgf000134_0003
Etapa 1. Smtesis de W-(21-amino-4,7,10,13,16,19-hexaoxahenicosan-1-oil)-N,2-dimetilalanil-W-{(1S,2R)-4-{(2S)-2-[(1R,2R)-3-{[(1S)-1-carboxi-2-feniletil]amino}-1-metoxi-2-metil-3-oxopropil]pirrolidin-1-il}-2-metoxi-1-[(1S)-1-metilpropil]-4-oxobutil}-W-metil-L-valinamida (AmPeg6C2n.o 115). Una solucion de acido 1-(9H-fluoren-9-il)-3-oxo-2,7,10,13,l6,19,22-heptaoxa-4-azapentacosan-25-oico (1 equivalente), HATU (1 equivalente) y base de Hunig (3 equivalentes) se dejo en agitacion durante 30 minutos. Se anadio el compuesto n.o 115 en forma de una solucion en DMF. La reaccion se concentro por CL-EM. Cuando la reaccion de acoplamiento estaba casi completa, se anadio piperidina (5 equivalentes). La desproteccion de Fmoc se controlo por CL-EM. La reaccion se concentro y la purificacion se completo mediante cromatograffa de fase inversa de media presion Isco (Gradiente: 5 %-100 % de agua en acetonitrilo).
Preparacion de 1,2-dimetil-D-prolil-N-[(3R,4S,5S)-1-£2S)-2-[(1R,2R)-3-({(2S)-3-[4-({N-[6-(2,5-dioxo-2,5-dihidro-1H-pirroM-il)hexanoil]glicil}amino)fenil]-1-metoxM-oxopropan-2-il}amino)-1-metoxi-2-metil-3-oxopropil]pirrolidin-1-M}-3-metoxi-5-metil-1-oxoheptan-4-M]-N-metil-L-valinamida mcGlyn.0201.
Figure imgf000135_0001
Etapa 1: Smtesis de N-(terc-butoxicarbonil)-4-({N-[6-(2,5-dioxo-2,5-dihidro-1H pirrol-1-il)hexanoil]glicil}amino)-L-fenilalaninato de metilo (n.o 251): A una solucion de 4-amino-N-(terc-butoxicarbonil)-L-fenilalaninato de metilo (4,1 g, 15,3 mmol, 1 equiv.) en N,N-dimetilformamida seca (70 ml) se anadio N,N'-diciclohexilcarbodiimida (2,9 g, 15,3 mmol, 1 equiv.) a 00C. La mezcla se agito a 00C durante 30 minutos. Se anadio una solucion de acido 2-(6-(2,5-dioxo-2,5-dihidro-1H-pirrol-1-il)hexanamido)acetico (3 g, 10,2 mmol, 0,66 equiv.) en N,N-dimetilformamida seca (20 ml) se anadio a 0 oc. La mezcla se agito a temperatura ambiente durante 3 dfas. La mezcla se filtro. El filtrado se vertio en agua enfriada con hielo (200 ml) y se extrajo con EtOAc (200 ml x 3). El extracto se lavo con salmuera (200 ml), se seco sobre Na2S04 y se concentro al vado para proporcionar n.o 251 (1,8 g, rendimiento del 32,3 %) en forma de un solido de color amarillo claro. HPLC (Protocolo Q2) [M+Na+] 567,3, tiempo de retencion = 1,02 min. Etapa 2: Smtesis de 4-({N-[6-(2,5-dioxo-2,5-dihidro-1H-pirrol-1-il)hexanoil]glicil}amino)-L-fenilalaninato de metilo (n.o 252): A una solucion de n.o 251 (800 mg, 1,47 mmol, 1 equiv.) en diclorometano (16 ml) se anadio TFA (4,8 ml) a 0 oc. La mezcla se agito a temperatura ambiente durante 2 horas. La mezcla se concentro al vado. El residuo se disolvio en agua y se filtro. El filtrado se liofilizo para proporcionar n.o 252 (800 mg, 97,5 %) en forma de un solido de color blanco. Hp Lc (Protocolo Q3) [M+H+] 445,4, tiempo de retencion = 0,9o min.
Etapa 3: Smtesis de 1,2-dimetil-D-prolil-N-[(3R,4S,5S)-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-3-({(2S)-3-[4-({N-[6-(2,5-dioxo-2,5-dihidro-1H-pirrol-1-il)hexanoil]glicil}amino)fenil]-1-metoxi-1-oxopropan-2-il}amino)-1-metoxi-2-metil-3-oxopropil]pirrolidin-1-il}-3-metoxi-5-metil-1-oxoheptan-4-il]-N-metil-L-valinamida (mcGlyn.o 201). A una solucion de n.o 198 (94 mg, 0,13 mmol, 1 equiv.) y n.o 252 (60,3 mg, 0,18 mmol, 1,4 equiv.) en N,N-dimetilformamida (2 ml) se anadio HATU (64,2 mg, 0,13 mmol, 1 equiv.) seguido de N,N-diisopropiletilamina (66 mg, 0,52 mmol). La solucion se agito a temperatura ambiente durante 1 hora. La mezcla de reaccion se neutralizo con acido dtrico ac. y se concentro para dar el producto en bruto, que se purifico por cromatograffa de gel de silice (eluyendo con MeOH/DCM de 1 % a 7 %), despues se purifico de nuevo por TLC preparativa (Metanol:diclorometano = 1:10) para dar mcGlyn.o 201 (25 mg, 16,2%) en forma de un solido de color blanco: iEn-EM: m/z 1023,59 [M+H+], HPlC (Protocolo EB); tiempo de retencion = 4,0 minutos (Pureza = 96 %). RMN 1H (DMSO-d6) 9,88 (d, 1H), 8,48 (d, 0,5H), 8,24 (d, 0,5H), 8,11 (m, 1H), 7,82 (m, 1H), 7,47 (d, 2H), 7,15 (m, 2H), 7,01 (s, 2H), 4,67 (m, 3H), 3,96 (m, 4H), 3,65 (m, 4H), 3,40 (m, 4H), 3,27 (m, 7H), 3,16 (m, 5H), 2,24 (m, 8H), 1,50 (m, 11H), 1,19 (m, 21H).
Preparacion de 1,2-dimetil-L-propil-N-[(3R,4S,5S)-1-£(2S)-2-[(1R,2R)-3-£[(2S)-1-£[6-(2,5-dioxo-2,5-dihidro-1H-pirrol-1-il)hexil]amino}-1-oxo-3-fenilpropan-2-il]amino}-1-metoxi-2-metil-3-oxopropil]pirrolidin-1-il}-3-metoxi-5-metil-1-oxoheptan-4-il]-N-metil-L-valinamida (MalC6Amn.o 151).
Etapa 1. Smtesis de 1,2-dimetil-L-prolil-N-[(3R,4S,5S)-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-3-{[(2S)-1-{[6-(2,5-dioxo-2,5-dihidro-1H-pirrol-1-il)hexil]amino}-1-oxo-3-fenilpropan-2-il]amino}-1-metoxi-2-metil-3-oxopropil]pirrolidin-1-il}-3-metoxi-5-metil-1-oxoheptan-4-il]-N-metil-L-valinamida (MalC6Amn.0151). Siguiendo el procedimiento general D, usando n.0151 (20 mg, 0,023 mmol, 1,0 equiv.), 1-(6-aminohexil)-1H-pirrol-2,5-diona (7,0 mg, 0,030 mmol, 1,3 equiv.), HATU (11,4 mg, 0,030 mmol, 1,3 equiv.) y base de Hunig (0,016 ml, 0,092 mmol, 1,3 equiv.) en 2 ml de diclorometano y 0,2 ml de DMF, seguido de purificacion usando eromatograffa C18 de fase inversa y presion media (Gradiente: de 5 % a 80 % de acetonitrilo en agua con 0,02 % de TFA en cada fase) se produjo Malc6Amn.o 151 (18,4 mg, 86 %) en forma de una mezcla transparente de aeeite/solido. CL-EM (Protocolo Q): m/z 922,3 [M+H+], tiempo de retencion = 1,43 minutos; HPLC (Protocolo A a 450C): m/z 922,4 [M+H+], tiempo de retencion = 7,203 minutos.
Preparacion de W-[6-(2,5-dioxo-2,5-dihidro-1H-pirrol-1-il)hexanoil]-L-valil-W-(4-{(6S,9R,10R)-6-bencil-10-[(2S)-1-{(3R,4S,5S)-4-[(1,2-dimetil-L-prolil-L-valil)(metil)amino]-3-metoxi-5-metilheptanoil}pirrolidin-2-il]-9-metil-3,8-dioxo-2,11-dioxa-4,7-diazadodec-1-il}fenil)-N~5~-carbamoil-L-omitinamida (mcVal-CitPABCn.o 246)
Figure imgf000136_0001
Etapa 1. Smtesis de N-[6-(2,5-dioxo-2,5-dihidro-1H-pirrol-1-il)hexanoil]-L-valil-N-(4-{(6S,9R,10R)-6-bencil-10-[(2S)-1-{(3R,4S,5S)-4-[(1,2-dimetil-L-prolil-L-valil)(metil)amino]-3-metoxi-5-metilheptanoil}pirrolidin-2-il]-9-metil-3,8-dioxo-2,11-dioxa-4,7-diazadodec-1-il}fenil)-N~5~-carbamoil-L-ornitinamida (mcValCitPABCn.o 246). Siguiendo el procedimiento general E, usando n.o 246 (29,2 mg, 0,035 mmol, 1,0 equiv.), mcValCitPABC-PNP (28,8 mg, 0,039 mmol, 1,1 equiv.), 2,6-Luditina (0,016 ml, 0,14 mmol, 4,0 equiv.), base de Hunig (0,025 ml, 0,14 mmol, 4,0 equiv.) y HOAT (4,8 mg, 0,035 mmol, 1,0 equiv.) en 2,0 ml de DMA, seguido de purificacion usando eromatograffa C18 de fase inversa y presion media (Gradiente: de 5 % a 50 % de acetonitrilo en agua con 0,02 % de TFA en cada fase) se produjo mcValCitPABCn.o 246 (21 mg, 45 %) en forma de una mezcla transparente de aceite/solido. CL-EM (Protocolo Q): m/z 1327,9 [M+H+], tiempo de retencion = 1,36 minutos.
Estudios de HERCEPTIN® in vitro e in vivo
Notese que para los siguientes estudios HERCEPTIN® en ausencia de agentes eitotoxieos conjugados no muestra potencia significativa in vitro 0 efectividad in vivo a concentraciones equivalentes de anticuerpo.
Procedimiento de ensayo celular in vitro
Se sembraron celulas que expresan la diana (BT474 (cancer de mama, N87 (cancer de gastrieo), HCC1954 (cancer de mama), MDA-MB-361-DYT2 (cancer de mama)) 0 celulas que no la expresan (MDA-MB-468) en placas de cultivo celular de 96 pocillos durante 24 horas antes del tratamiento. Las celulas se trataron con conjugados farmaco anticuerpo diluidos en serie 3 veces 0 compuestos libres (es decir, sin anticuerpo conjugado al farmaco) por duplicado a 10 concentraciones. La viabilidad celular se determino por el Ensayo CellTiter 96® AQueous One Solution Cell Proliferation MTS (Promega, Madison Wl) 96 horas despues del tratamiento. La viabilidad celular relativa se determino como porcentaje de control sin tratar. Los valores CI50 se calcularon usando un modelo n.o 203 logistieo de cuatro parametros eon XLfit v4.2 (IDBS, Guildford, Surry, RU). Los resultados se muestran en las Tablas 20, 21A y 21B.
Modelo de xenoinjerto de tumor MDAMB-361 DYT2 in vivo
Se realizaron estudios de efectividad in vivo de los conjugados farmaco anticuerpo eon la lmea celular Her2+ MDAMB-361 DYT2. Para los estudios de efectividad, se implantaron subeutaneamente 10 millones de celulas tumorales en matrigel al 50 % en ratones desnudos irradiados de 6-8 semanas de edad. Cuando los tamanos del tumor aleanzaron entre 250-350 mm3 se administraron farmaeos 0 vehmulo a traves de inyeeeion de bolo en la vena de la cola. Los ratones se inyeetaron eon 1 mg/kg de conjugados farmaco anticuerpo tratados cuatro veces cada cuatro dfas (Q4dx4). El volumen del tumor se mide dos veees a la semana durante los primeros 50 dfas y una vez a la semana en lo sucesivo por un dispositivo ealibrador y se ealeulo eon la siguiente formula: Volumen del tumor = (longitud x anehura2) / 2. Los resultados se eompararon a lo largo de los estudios normalizando la regresion tumoral del raton tratado eon farmaco dividiendo el volumen tumoral por el volumen tumoral tratado eon vehmulo (T/C). Se ensayaron seis compuestos en los tres diferentes estudios de xenoinjerto MDA-MB-361-DYT2 para determinar su aetividad antitumoral. Los resultados de un estudio representativo eon cuatro de los compuestos demuestran la regresion significativa del tumor de los ratones tratados eon vehmulos durante el periodo de observaeion de 50 d^as (Figura 1). Para eomparar los resultados de los compuestos en los tres estudios, la aetividad anti-tumoral se normalizo dividiendo el volumen del tumor tratado eon farmaco por el volumen tumoral tratado eon vehmulo (T/C). Un grafieo de los seis valores T/C (Figura 2) demuestra que cada uno de los seis compuestos provoea la regresion tumoral eompleta (0 easi eompleta) durante el periodo de observaeion que fue hasta 107 d^as para uno de los estudios.
Los resultados de la prueba de H(C)-n.0D54, H(C)-vcMMAE, H(C)-iticMMAF y H(K)-MCC-DM1 en Ios estudios de xenoinjerto de MDA-MB-361-DYT2 se Tuestran en la Figura 4. El grafico del voluTen tuToral en el grupo de trataTiento frente al grupo control (T/C) perTite la coTparacion entre conjugados (vease la Figura 5C). Estos resultados deTuestran que H(C)n.0D54 Tuestra eficiencia equivalente a Ios conjugados de HERCEPTIN® con H(C)-vcMMAE, H(C)-t c MMa F y es superior a H(K)-MCC-DM1 en este Todelo.
Modelo de xenoinjerto de tumor N87 in vivo (HERCEPTIN®)
Se realizaron estudios de efectividad in vivo de Ios conjugados farTaco anticuerpo con Todelos de xenoinjerto que expresan la diana usando las Imeas celulares N87. Para Ios estudios de efectividad, se Tplantan subcutaneaTente 7,5 Tillones de celulas tuTorales en Tatrigel al 50 % en ratones desnudos de 6-8 seTanas de edad hasta que Ios taTanos de Ios tuTores alcanzan entre 250 y 350 t t 3. La dosificacion se realiza a traves de inyeccion de bolo de la vena de la cola. Dependiendo de la respuesta del tuTor al trataTiento, Ios aniTales se inyectaron con 1-10 Tg/kg de conjugados farTaco anticuerpo tratados cuatro veces cada cuatro d^ as. Todos Ios aniTales experiTentales se Tonitorizan para Ios caTbios en el peso corporal seTanalTente. El voluTen del tuTor se Tide dos veces a la seTana durante Ios priTeros 50 d^as y una vez a la seTana en Io sucesivo por un dispositivo calibrador y se calculo con la siguiente forTula: VoluTen del tuTor = (longitud x anchura2) / 2. Los aniTales se sacrifican huTanaTente antes de que sus voluTenes tuTorales alcancen 2500 t t 3. El taTano del tuTor se observa disTinuir despues de la priTera seTana de trataTiento. Los aniTales pueden Tonitorizarse continuaTente para el re-creciTiento del tuTor despues de que el trataTiento sea discontinuo.
Los resultados de la prueba de H(C)-n.0D54, H(C)-vcMMAE, H(C)-t c MMAF y H(K)-MCC-DM1 en Ios estudios en el Todelo de deteccion in vivo de xenoinjerto de raton N87 se Tuestran en las Figuras 3 y 5. Estos resultados deTuestran que H(C)-n.0D54 es superior/siTilar al conjugado H(C)-vcMMAE y es Tas potente que Ios conjugados H(C)-t c MMAF y H(K)-MCC-DM1 en este Todelo.
Farmacocinetica y toxicocinetica
La farTacocinetica de raton y la toxicocinetica de rata se deterTinaron a partir de estudios de farTacocinetica de raton de dosis unica y de toxicologfa de rata (veanse las Tablas 22 y 23). La farTacocinetica de raton y la toxicocinetica de rata se deterTinaron a partir de estudios de farTacocinetica de raton de dosis unica y de toxicologfa de rata. La farTacocinetica de raton se deterTino a partir de Tuestras recogidas de ratones desnudos que se adTinistraron una dosis unica de 3 Tg/kg. Las Tuestras se recogieron durante hasta 336 h. La toxicocinetica de ratas se deterTino en ratas (Sprague-Dawley (Crl:CD (SD))) que se adTinistraron una unica adTinistracion de H(C)-vc-MMAE o H(C)-n.o D54 a dosis de 3, 10 y 3o Tg/kg o se adTinistraron H(C)-tc -MMAD o H(C)-tc -MMAF a 10, 30 y 100 Tg/kg. Las Tuestras se recogieron durante hasta 336 horas. Las concentraciones circulantes de anticuerpo total y ADC se Tidieron usando ensayos ELISA. El area bajo la curva (AUC) se calculo para el anticuerpo total y ADC y para cada ADC. TaTbien se calcularon las relaciones a Uc ADC frente a anticuerpo.
La exposicion del anticuerpo total H(C)-n.o D54 y el ADC fue Mayor que la observada para H(C)-vc-MMAE en ratones a 3 Tg/kg y a todas las dosis evaluadas en ratas. La relacion ADC a AUC Ac para H(C)-n.o D54 taTbien fue Mayor que la observada para H(C)-vc-MMAE. Estos resultados sugieren que H(C)-n.o D54 tiene Mayor exposicion y que el ADC y/o la carga util de engarce son potencialTente Tas estables que h (C)-vc-MMAE.
Toxicidad
La toxicidad independiente de diana de n.0 D54 y el coTparador engarce-cargas utiles (TcValCitPABC-MMAD y TcVal-CitPABC-MMAE) conjugado a un anticuerpo Monoclonal sin reactividad cruzada (IgG 1) se evaluo en un estudio de toxicidad de rata de dosis unica en un periodo de observacion de dos seTanas. Las dosis de Ios conjugados farTaco anticuerpo (ADC) fueron 0, 3,i 0 y 30 Tg/kg con una n es 5 Tachos/grupo y la carga de engarce-carga util fue siTilar a Io largo de Ios conjugados (3,8, 3,2, y 4 respectivaTente). Estos estudios inclman observaciones clmicas al Tenos diarias, pesos corporales seTanales, patolog^a clmica (final de la vida) y necropsia ^ a 15-17) con exaTinacion al Ticroscopio de 9 o Tas tejidos y cualquier lesion bruta.
La Tortalidad con Ios caTbios de peso corporal relacionados y Ios signos de Torbilidad se observaron en la dosis de 30 Tg/kg para todos Ios conjugados y a la dosis de 10 Tg/kg para el conjugado MMAD. No hubo observaciones clmicas o caTbios en el peso corporal en Ios grupos supervivientes.
Los organos diana de Ios conjugados identificados por exaTinacion al Ticroscopio en Ios grupos supervivientes de dosis fueron coto sigue. El conjugado a 10 Tg/kg tema deshechos en la Iuz del epid^diTO (5/5, de TmiTO a suave), inflaTacion en la base del corazon (1/5 ratas, TmiTO) y Mitosis auTentada en la cornea (1/5 ratones, TmiTO). No hubo descubriTientos histologicos para el conjugado a 3 Tg/kg. Para el conjugado MMAD en el grupo de dosis superviviente a 3 Tg/kg, hubo caTbios en y relacionados con la Tedula osea y en Ios testmulos y el epidfdiTO. Para el conjugado MMAE a 10 Tg/kg, hubo caTbios en la Tedula osea, el rinon, el tugado y el epidfdiTO. En la dosis de 3 Tg/kg para este conjugado, hubo caTbios en el rinon y Mitosis auTentada en el hugado. Por Io tanto, en estudios de diseno siTilar en Ios grupos supervivientes, el conjugado no tuvo descubriTientos de Tedula osea vistos con Ios conjugados comparadores y tampoco tuvieron descubrimientos vistos del hngado o el rinon con uno de Ios comparadores.
En resumen, la dosis maxima tolerada (MTD) del conjugado y el conjugado MMAE fue 10 mg/kg y la MTD del conjugado MMAD fue 3 mg/kg. El nivel de efecto adverso no observado (NOAEL) del conjugado fue 3 mg/kg mientras que el NOAEL de Ios conjugados comparadores engarce-carga util fue menos de 3 mg/kg. Este estudio demuestra como el perfil toxicologico de n.0 D54 se compara con ciertos compuestos descritos en la tecnica.
Estudios in vitro e in vivo ADC Anti-IL-13Ra2
Anticuerpos y ADC Anti-IL-13Ra2
El anticuerpo hu08 humanizado se une espedficamente al receptor IL-13Rci2. Las secuencias de aminoacidos y nucleotidos para hu08 se muestran en la Tabla 3. Las CDR de Kabat estan subrayadas.
Tabla 3. Secuencias de aminoacidos y nucleotidos del anticuerpo hu08 humanizado.
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(continuacion)
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El anticuerpo hu08 anti-IL-13Ra2 humanizado se conjugo a diversas combinaciones engarce-carga util de la presente invencion, como se proporciona en la Tabla 4. Los conjugados farmaco anticuerpo se prepararon de acuerdo con los procedimientos de la presente invencion.
Tabla 4 ADC anti-IL-13Ra2.
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Ensayo de citotoxicidad in Vitro con ADC antML-13Ra2
Se cultivaron Imeas celulares que expresan el antigeno lL-13Ra2 y una Imea celular de control negativo, con concentraciones en aumento de ADC anti-IL-13Ra2 que comprenden el anticuerpo hu08 conjugado a diversas cargas conectoras de la presente invencion. Despues de cuatro d^as, se evaluo la viabilidad de cada cultivo. los valores CI50 se calcularon por regresion no linear Iog^stica y se presentan como ng de Ac/ml.
Los datos demuestran que el anticuerpo hu08v1.0/1.0 anti-IL-13Ra2 conjugado a seis cargas utiles de auristatina diferentes es eficaz contra ambas de las Imeas celulares positivas lL-13Ra2 ensayadas (PC3MM2), que tiene un CI50 que vana de 1,1 a 4,9 ng Ac/ml 07,3-32,7 pM (Tabla 5). Todos los ADC no eran activos contra la Imea celular negativa IL-13Rci2, H460, y los ADC control de no union a IL-13Rci2, hulgG8.84-vc0101 y hulgG8.84-mc3377, no fueron activos contra cualquiera de las Imeas celulares ensayadas.
Tabla 5. Valores CI50 n de Ac/ml de ADC anti-IL-13Ra2 humanizado.
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Modelos de xenoinjerto subcutaneos in vivo con ADC anti-IL13Ra2
El anticuerpo hu08 humanizado se une espedficamente al receptor IL-13Ra2. Se probaron ADC hu08 con once combinaciones diferentes de engarce-carga util en un modelo de xenoinjerto in vivo. Unos ratones hembra admicos (desnudos) fueron inyectados subcutaneamente con PC3MM2. Los ratones con tumores faseados, aproximadamente 0,1 a 0,3 g (n = 8 a 10 ratones/grupo de tratamiento), fueron administrados intravenosamente q4d x 4 con solucion salina normal (veld culo), ADC hu08v1.0/1.0 con engarces-cargas utiles vc-0101, vc-6780, vc-3906, mc-8261, mc-0131, mc-6121, mc-3377, MalPeg-8261, MalPeg-0131, MalPeg-6121 o MalPeg-3906 y un A c de no union (hulgG8.84) conjugado con vc-0101 o mc-3377, a una dosis de 2 o 3 mg Ac/kg. Los ADC fueron dosificados a base3 de un contenido de A c. Los 2 tumores se midieron al menos una vez a la semana y
hura del tumor) x (longitud del tumor). J su tamano se calcula como mm = 0,5 x (anc
Los resultados de efectividad in vivo listados en la Tabla 6 muestran un intervalo de actividad anti-tumoral con los diversos ADC probados. El orden relativo de potencia es hu08-vc-0101 > hu08-vc-6780 > hu08-mc-0131 > hu08-mc-6121 > hu08-mc-3906 > hu08-MalPeg-0131 >hu08-MalPeg-6121 > hu08-MalPeg-3906 > > hu08-mc-8261. En el nivel de dosis de 3 mg/kg, tanto hu08-vc-0101 y hu08-mc-3377 demostraron actividad antitumoral, mientras que el A c de no union (hulgG8.84) conjugado con vc-0101 o mc-3377 no tuvo actividad y fueron similares al control veldculo.
T l . Ef ivi AD ni-IL-1 R 2 n x n in r P MM2.
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Estudios in vitro e in vivo ADC Anti-Notch
Anticuerpos y ADC anti-Notch
Los anticuerpos humanizados, hu28 y hu75 y los anticuerpos quimericos rata-humano, ch28 y ch75, se unen espedficamente al receptor Notch. Las secuencias de aminoacidos y de nucleotidos para hu28 y hu75 se proporcionan a la Tabla 7. Las CDR de Kabat estan subrayadas.
Tabla 7. Secuencias de aminoacidos y de nucleotidos de anticuerpos anti-Notch humanizados.
Figure imgf000142_0001
continuacion
Figure imgf000143_0001
continuacion
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Los anticuerpos anti-Notch humanizados, hu28 y hu75 y los anticuerpos anti-Notch quimericos rata-humano, ch28 y ch75, se conjugaron a diversas combinaciones de engarce-carga util de la presente invencion, como se proporciona en la Tabla 8. Los conjugados farmaco anticuerpo se prepararon de acuerdo con los procedimientos de la presente invencion.
Tabla 8. ADC anti-Notch.
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continuacion
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Ensayo de citotoxicidad in Vitro con ADC anti-Notch
Los efectos de ADC anti-Notch se evaluaron en 1) Imeas celulares que expresan endogenamente la protema Notch: HCC2429 (cancer pulmonar), OVCAR3 (cancer de ovario) y MdA-MB-468 (cancer de ama), 2) Imeas celulares disenadas por ingeniena para expresar la protema Notch: MDA-MB-468/hNotch y U20S/hNotch y 3) una Imea celular de control negativo (SW900) usando un indicador de viabilidad celular MTS (Promega, Madison, Wl). Estas Imeas celulares se cultivaron con concentraciones en aumento de ADC anti-Notch. que comprenden anticuerpos anti-Notch humanizados, hu28 y hu75 y anticuerpos anti-Notch quimericos rata-humano, ch28 y ch75, se conjugaron a diversas combinaciones de engarce-carga util de la presente invencion. Como un control de especificidad para los ADC anti-Notch, tambien se probaron ADC control no marcados como diana (ADC huNeg8.8 o AdC ch2H6) en las mismas Imeas celulares. Despues de cuatro d^as, se evaluo la viabilidad de cada cultivo. los valores CI50 se calcularon por regresion no linear logfstica y se presentan como ng de Ac/ml. Tambien se proporciona la relacion farmaco anticuerpo (DAR).
La Tabla 9 muestra valores CI50 (ng Ac/ml) de los tratamientos de ADC anti-Notch humanizados. Las Imeas celulares HCC2429 y MDA-MB-468/hNotch tuvieron dos repeticiones individuales. Los datos demostraron que los ADC anti-Notch humanizados con diversos engarces-cargas utiles fueron activos e indujeron muerte celular en las Imeas celulares cancerosas que expresan y sobreexpresan Notch HCC2429, OVCAr3, MdA-MB-468, MDA-MB-468/hNotch, U20S/hNotch, pero no en la Imea celular de control negativo SW900 que carecen de expresion Notch. Los ADC control no marcados como diana bien carecen de potencia (LP) y por lo tanto los valores CI50 no se generaron como se indico, o bien estuvieron mmimamente activos a las dosis mas altas ensayadas. Los ADC anti­ Notch que tienen valores CI50 iguales a o mayores que los valores CI50 para los ADC control se consideraron que caredan de potencia in vitro como se indica por LP.
Tabla 9. Valores CI50 (ng de Ac/ml) de ADC anti-Notch humanizado.
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La Tabla 10 muestra valores CI50 (ng Ac/ml) de los tratamientos de ADC anti-Notch quimericos rata-humano. Para experimentos con 2-4 repeticiones individuales, se calcularon valores promedio CI50 Junto con el error estandar de la media (S.E.M.). Los datos demostraron que los ADC anti-Notch quimericos rata-humano con diversos engarcescargas utiles fueron activos e induJeron muerte celular en las Imeas celulares cancerosas que expresan y sobreexpresan Notch HCC2429, OVCAR3, MDA-MB-468, MDA-MB-468/hNotch, U20S/hNotch. Los ADC control no marcados como diana bien carecen de potencia (LP) y por lo tanto los valores CI50 no se generaron como se indico, o bien estuvieron mmimamente activos a las dosis mas altas ensayadas. Los ADC anti-Notch que tienen valores CI50 iguales a 0 mayores que los valores CI50 para los ADC control se consideraron que caredan de potencia in vitro como se indica por LP.
Tabla 10. Valores CI50 (ng de Ac/ml) de ADC anti-Notch humanizado (nd = no determinado).
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Continuacion
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Modelos de xenoinjerto de tumor humano in vivo con ADC anti-Notch
Los anticuerpos anti-Notch humanizados, hu28 y hu75 y anticuerpos anti-Notch quimericos rata-humano, ch28 y ch75, se conjugaron a diversas combinaciones de engarce-carga util y se probaron en cancer pulmonar no microcftico (nSc LC) 37622A1, cancer pulmonar HCC2429, cancer de mama MdA-MB-468 y modelos de xenoinjerto de cancer gastrico N87. Para cada modelo descrito a continuacion se dio la primera dosis el D^ a 0. Los tumores se midieron al menos una vez a la semana y su volumen se calculo con la formula: volumen (mm3) = 0,5 x (anchura del tumor2)(longitud del tumor). Los volumenes medios de tumor (± S.E.M.) para cada grupo de tratamiento se calcularon teniendo un maximo de 10 animales y un mmimo de 6 animales a incluirse.
A. Xenoinjertos 37622A1 NSCLC
Los efectos de ADC anti-Notch se examinaron en ratones inmunodeficientes en el crecimiento in vivo de xenoinjertos de tumor humano que se establecieron a partir de fragmentos recientemente reseccionados de tumores 37622A1 NSCLC de acuerdo con procedimientos consentidos apropiados (Asterand). Los xenoinjertos derivados de pacientes 37622A1 NSCLC se pasaron subcutaneamente in vivo como fragmentos de animal a animal en ratones hembra desnudos (Nu/Nu). Cuando los tumores alcanzaron un volumen de 150 a 300 mm3, se fasearon para asegurar la uniformidad del tamano tumoral entre diversos grupos de tratamiento. El modelo 37622A1 NSCLC se dosifico intravenosamente cuatro veces cada cuatro d^as (Q4dx4) con vefnculo PBS, ACD anti-Notch humanizados, ADC huNeg-8.8 control y cisplatino a las dosis proporcionadas en la Tabla 11.
El cisplatino es un agente anti-cancer basado en platino usado en el tratamiento de cancer y considerado un patron de terapia de cuidado. El cisplatino reticula el ADN induciendo de esta manera la apoptosis e inhibiendo el crecimiento celular. Los datos demuestran que los ADC anti-Notch hu28-vc0101, hu28-vc6780, hu75-vc0101 y hu75-vc6780 inhibieron el crecimiento de xenoinjertos 37622A1 NSCLC. Ademas, los datos muestran que los ADC anti­ Notch inhibieron el crecimiento tumoral mas potentemente que los ADC huNeg8.8 control. Adicionalmente, los datos muestran que los ADC anti-Notch inhibieron el crecimiento tumoral mas potentemente que el cisplatino indicando una potencia mayor que un patron de cuidado a base de platino de farmaco quimioterapeutico.
Tabla 11. Efectividad de ADC anti-Notch en xenoinjertos 37622A1 NSCLC.
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Continuacion
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B. Xenoinjertos de pulmon HCC2429
Se realizaron experimentos similares in vivo con la lmea celular pulmonar HCC2429 como se describe anteriormente. Para generar los xenoinjertos, los ratones femeninos (Nu/Nu) desnudos se implantaron subcutaneamente con celulas 3,5x106 hCC2429 en Mariel al 50 % (BD Vascuences). Cuando los tumores alcanzaron un volumen de 200 a 400 mm3, los tumores se fasearon para asegurar la uniformidad de la masa tumoral entre diversos grupos de tratamiento. El modelo pulmonar HCC2429 se dosifico intravenosamente Q4dx4 con vehuculo PBS, los ACD anti-Notch humanizados y los ADC control huNeg-8.8 a las dosis proporcionadas en las Tablas 12 y 13. Los datos demuestran que los ADC anti-Notch hu28-vc0101, hu28-vc6780, hu75-vc0101 y hu75-vc6780 inhibieron el crecimiento de los xenoinjertos de pulmon HCC2429 de una manera dependiente de dosis. Ademas, los datos muestran que los ADC anti-Notch inhibieron el crecimiento tumoral mas potentemente que los ADC huNeg8.8 control y las dosis 1 y 3 mg/kg para ADC anti-Notch con engarces-cargas utiles vc0101 y a las dosis 3 y 10 mg/kg para ADC anti-Notch con engarces-cargas utiles vc6780. Adicionalmente, los datos demuestran que una dosis 3 mg/kg de hu28-vc0101 fue mas potente que una dosis 10 mg/kg de hu28-vc6780.
Tabla 12. Efectividad de ADC anti-Notch-vcO 101 en xenoinjertos de pulmon HCC2429.
Figure imgf000149_0002
Continuacion
Figure imgf000150_0001
Tabla 13. Efectividad de ADC anti-Notch-vc6780 en xenoinjertos de pulmon HCC2429.
Figure imgf000150_0002
Continuacion
Figure imgf000151_0001
El modelo pulmonar HCC2429 se dosifico intravenosamente Q4dx4 con vehfculo PBS, ADC anti-Notch quimericos rata-humano y ADC huNeg-8.8 control, a una dosis de 5 mg/kg como se proporciona en la Figura 8A. Los datos demuestran que los ADC anti-Notch con engarces no escindibles (mc) y escindibles (vc) y diversas combinaciones de cargas utiles inhibieron el crecimiento de xenoinjertos de pulmon HCC2429. Ademas, los datos muestran que los ADC anti-Notch quimericos rata-humano inhibieron el crecimiento tumoral mas potentemente que los ADC huNeg8.8 control. Adicionalmente, los datos demuestran que los ADC anti-Notch quimericos rata-humano con engarces-cargas utiles vc0101 fueron mas potentes que los otros ADC anti-Notch probados.
C. Xenoinjertos de mama MDA-MB-468
Se realizaron experimentos similares in vivo con la lmea celular de cancer de mama MDA-MB-468 como se describe anteriormente. Las celulas MDA-MB-468 se clasifican como un subtipo tipo basal de cancer de mama triple negativo (TNBC) ya que carecen de la expresion del receptor de estrogeno, del receptor de progesterona y el receptor 2 del factor de crecimiento epidermico (HER2) (Lehmann, BD, y coI., J Clin Invest. 2011;121(7):2750-2767). Para generar Ios xenoinjertos, se implantaron ortopedicamente ratones hembra SCID Outbred sin pelo (SHO) con celulas 10x106 MDA-MB-468 que contienen Mariel al 50 % (BD Vascuences) en la almohadilla grasa mamaria. Cuando Ios tumores alcanzaron un volumen de 250 a 450 mm3, Ios tumores se fasearon para asegurar la uniformidad de la masa tumoral entre diversos grupos de tratamiento. El modelo en mama MDA-MB-468 se dosifico intravenosamente Q4dx4 con vetuculo PBS, Ios ACD anti-Notch humanizados y Ios ADC control huNeg-8.8 a las dosis proporcionadas en las Tablas 14 y 15. Los datos demuestran que Ios ADC anti-Notch hu28-vc0101, hu28-vc6780, hu75-vc0101 y hu75-vc6780 inhibieron el crecimiento de Ios xenoinjertos de mama MDA-MB-468 de una manera dependiente de dosis. Ademas, Ios datos muestran que Ios ADC anti-Notch inhibieron el crecimiento tumoral mas potentemente que Ios ADC huNeg8.8 control y las dosis 1 y 3 mg/kg para ADC con engarces-cargas utiles vc0101 y a las dosis 1,3 y 10 mg/kg para ADC con engarces-cargas utiles vc6780. Adicionalmente, Ios datos demuestran que una dosis 1 mg/kg de ADC anti-Notch con engarces-cargas utiles vc0101 fueron mas potentes que una dosis 3 mg/kg de ADC anti­ Notch con engarces-cargas utiles vc6780.
Tabla 14. Efectividad de ADC anti-Notch-vcO 101 en xenoinjertos de mama MDA-MB-468.
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Tabla 15. Efectividad de ADC anti-Notch-vc6780 en xenoinjertos de mama MDA-MB-468.
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El modelo de mama MDA-MB-468 tambien se dosifico intravenosamente Q4dx4 con vehfculo PBS, ADC anti-Notch quimericos rata-humano y ADC huNeg-8.8 control, a una dosis de 5 mg/kg como se proporciona en las Figura 8B y 8C. Los dates demuestran que Ios ADC anti-Notch quimericos rata-humano con engarces no escindibles (me) y escindibles (vc ) y diversas eombinaeiones de eargas utiles inhibieron el ereeimiento de xenoinjertos de mama MDA-MB-468. Ademas, Ios datos muestran que Ios ADC anti-Notch quimericos rata-humano inhibieron el ereeimiento tumoral mas potentemente que Ios ADC huNeg8.8 control. Adicionalmente, Ios datos demuestran que Ios ADC anti-Notch quimericos rata-humano con engarces-cargas utiles vc0101 fueron mas potentes que Ios otros ADC anti­ Notch quimericos rata-humano probados.
D. Xenoinjertos gastricos N87
Se realizaron experimentos similares in vivo con la lmea celular gastriea N87 como se describe anteriormente. Para generar Ios xenoinjertos, Ios ratones femeninos (N u/N u) desnudos se implantaron subeutaneamente con eelulas N87 7,5,5x 106 en Mariel al 50 % (BD Vascuences). Cuando Ios tumores alcanzaron un volumen de 250 a 450 mm3, Ios tumores se fasearon para asegurar la uniformidad de la masa tumoral entre diversos grupos de tratamiento. El modelo gastrieo N87 se dosifieo intravenosamente Q4dx4 con vehteulo PBS, ACD anti-Notch humanizados, ADC huNeg-8.8 control y cisplatino a las dosis proporcionadas en las Tablas 16 y 17. Los datos demuestran que Ios ADC anti-Notch hu28-vc0101, hu28-vc6780, hu75-vc0101 y hu75-vc6780 inhibieron el ereeimiento de Ios xenoinjertos gastricos N87 de una manera dependiente de dosis. Ademas, Ios datos muestran que Ios ADC anti-Notch inhibieron el ereeimiento tumoral mas potentemente que Ios ADC huNeg8.8 control a las dosis 1,3, 5 mg/kg para ADC eon engarces-cargas utiles vcOlOl y 3 y 10 mg/kg dosis para ADC eon engarces-cargas utiles vc6780. Adicionalmente, Ios datos demuestran que Ios ADC eon engarces-cargas utiles vc0101 fueron en general mas potentes que el cisplatino patron de terapia de euidado y ADC eon engarces-cargas utiles vc6780.
Tabla 16. Efeetividad de ADC anti-Notch-veO 101 en xenoinjertos gastricos N87.
Figure imgf000154_0001
Tabla 17. Efectividad de ADC anti-Notch-vc6780 en xenoinjertos gastricos N87.
Figure imgf000155_0001
El modelo gastrico N87 tambien se dosifico intravenosamente Q4dx4 con vehnculo PBS, ADC anti-Notch quimericos rata-humano y ADC huNeg-8.8 control, a una dosis de 5 mg/kg como se proporciona en la Figura 8D. Los datos demuestran que Ios ADC anti-Notch quimericos rata-humano con engarces no escindibles (me) y escindibles (vc) y diversas eombinaeiones de eargas utiles inhibieron el ereeimiento de xenoinjertos gasrieos N87. Ademas, los datos muestran que los ADC anti-Notch quimericos rata-humano inhibieron el ereeimiento tumoral mas potentemente que los ADC huNeg8.8 control. Adicionalmente, los datos demuestran que los ADC anti-Notch quimericos rata-humano con engarces-cargas utiles vc0101 fueron mas potentes que los otros ADC anti-Notch probados.
El modelo gastrieo N87 tambien se dosifieo intravenosamente Q4dx4 con vetueulo PBS y ADC antiNotch quimericos rata-humano ch28-mc0131, ch75-mc0131, ch28-m(H2O)c-0131 y ch75-m(H2O)c-0131 a una dosis de 5 mg/kg como se proporciona en la Figura 8E. Los datos demuestran que los ADC anti-Notch quimericos rata-humano que tienen engarces-cargas utiles mc0131 y iti(H2O)c-0131 inhibieron el ereeimiento de xenoinjertos gastrieos N87. Ademas, los datos demuestran que los ADC anti-Noteh quimericos rata-humano eon engarces-cargas utiles it (H2O)c-0131 fueron mas potentes que los ADC anti-Noteh quimericos rata-humano que tienen engarces-cargas utiles me0131.
Tabla 18A - Compuestos seleeeionados (peptidos eitotoxieos eon engarces) de la inveneion y EJemplos de
Referenda
Figure imgf000156_0001
(eontinuaeion)
Figure imgf000157_0001
(continuacion)
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(continuacion)
Figure imgf000159_0001
(continuacion)
Figure imgf000160_0001
(continuacion)
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(continuacion)
Figure imgf000162_0001
(continuacion)
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Tabla 18B - Compuesto seleccionados (peptidos citotoxicos con engarces) de la invencion y Ejemplos de Referenda
Figure imgf000163_0002
(continuacion)
Figure imgf000164_0001
(eontinuaeion)
Figure imgf000165_0001
(continuacion)
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(eontinuaeion)
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(eontinuaeion)
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(continuacion)
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(eontinuaeion)
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(continuacion)
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(continuacion)
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(eontinuaeion)
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(oontinuaoion)
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(continuacion)
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(continuacion)
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(continuacion)
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(oontinuaoion)
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(oontinuaoion)
Figure imgf000179_0001
(continuacion)
Figure imgf000180_0001
(continuacion)
Figure imgf000181_0001
(continuacion)
Figure imgf000182_0001
Tabla 19A - Conjugados seleccionados de la invencion y conjugados de referenda
Figure imgf000183_0001
(continuacion)
Figure imgf000184_0001
(continuacion)
Figure imgf000185_0001
(continuacion)
Figure imgf000186_0001
(continuacion)
Figure imgf000187_0001
(continuacion)
Figure imgf000188_0001
(continuacion)
Figure imgf000189_0001
(continuacion)
Figure imgf000190_0001
(continuacion)
Figure imgf000191_0001
(continuacion)
Figure imgf000192_0001
(continuacion)
Figure imgf000193_0001
(continuacion)
Figure imgf000194_0001
Tabla 19B - Conjugados seleccionados de la invencion y conjugados de referenda
Figure imgf000194_0002
(continuacion)
Figure imgf000195_0001
(continuacion)
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(continuacion)
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(continuacion)
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(continuacion)
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(continuacion)
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(continuacion)
Figure imgf000201_0001
(continuacion)
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(continuacion)
Figure imgf000203_0001
(continuacion)
Figure imgf000204_0001
Tabla 20 - Valores CI50 para compuestos seleccionados (peptidos citotoxicos) de la invencion y Ios Ejemplos de
Referenda
Figure imgf000204_0002
(continuacion)
Figure imgf000205_0001
(continuacion)
Figure imgf000206_0001
(continuacion)
Figure imgf000207_0001
Tabla 21 A_ - Valores CIm para conjugados seleccionados de la invencion y los CDnjugados de refe
Figure imgf000208_0001
(Continuacion)
Figure imgf000209_0001
(Continuacitfn)
Figure imgf000210_0001
(Continuacion)
Figure imgf000211_0001
ADC-Engarce-Carga util n “ CUo (nM) CI50 de Anticuerpo Cl50 (nM) CI5Q de Anticuerpo (ng'ml) n /ml
Figure imgf000211_0002
H-(C)_MalPeg6C2-n.Q 36 878,903 159,1 H-(C)_mcValCitPABCAmPeg3C2-n.a 41 2,363 2,28 H-(C)-MalPeg3C2-n.s 41 0,725 0.54 H-(C}_m cVal Git PA BCAm Peg 6C2- n A 60 979,982 >1000,0 H A114C-(C114)_mc-n.!! 66 17,235 >1000,0 H-L398C+L443C-(C398+C443)_mcValCitPABC-n° 54 0,249 0,27 H-K392C+L443C-(C392+C443)_mcValCitPABC-n .= 54 <0,195 0,42 H-L443C-(C443)_mcValCitPABC-n.s 54 <0.130 0.32 H-L398C+V422C-(C398+C422)_mcValCitPABC-n54 0,387 0,27 H-(C)-mc-n.044 3,553 >507,23 H-(C)-Mal-PEG3C2-n.e 45 2,886 68,41 H-(C)_2AcAmPeg6C2-n,- 66 703,419 >1000,0 H-(C)-Mal-PEG6C2-n.Q 45 1,274 2,74
Figure imgf000211_0003
H-(C)-mc-n ° 79 0,483 0,65
Figure imgf000211_0005
H-(C)-MalPeg3C2-n.e 44 2,603 5,11 H-(C)-mcValCitP ABC-n." 70 0,188 0,09 H-(C)-MalPeg6C2-n.a 44 1,318 1.47 H-A114C-(C114)_meValCitPABC-n.s 69 0,174 0,06 H-(C)-mcV alCitP ABC-n.979 0,152 0,15 H-A114C-(C114)_mcValCitPABC-n.B 79 0,124 0,12 H-(C)-mcValCitPABC-n.s 44 0,252
Figure imgf000211_0004
0.18
Figure imgf000211_0006
(Continuacion)
Figure imgf000212_0001
(Continuaeion)
Figure imgf000213_0001
(Continuacion)
Figure imgf000214_0001
(Continuation)
Figure imgf000215_0001
(Continuacibn)
Figure imgf000216_0001
(Continuation)
Figure imgf000217_0001
Tabla 21B - Valores Cl 50 para conjugados seleccionados de la invencion y los conjugados de referencia
Figure imgf000218_0001
(continuacion)
Figure imgf000219_0001
(continuacion)
Figure imgf000220_0001
(continuacion)
Figure imgf000221_0001
(continuacion)
Figure imgf000222_0001
G\
H
o
r -<r>
'O
(N
on
W
Figure imgf000223_0001
(continuacion)
Figure imgf000224_0001
Tabla 22 - Valores farmacocineticos seleccionados en ratas para Ios conjugados de la invencion y valores farmacocineticos seleccionados en ratas para conjugados que comprenden MmAD, MMAE o MMAF. Las AUC se calcularon a 0-ultima de 0-336 h excepto donde se indique.
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(Continuaeion)
Figure imgf000225_0001
Tabla 23 - Valores farmaeoeinetieos seleccionados en ratones para conjugados de la inveneion y para conjugados que comprenden MMAD, MMAE o MMAF. Las AUC se calcularon a 0-ultima de 0-336 h excepto donde se indique.
Figure imgf000225_0003
Tabla 24 - Datos que muestran la estabilidad de los conjugados preparados usando engarces a base de succinimida de anillo abierto frente a de anillo cerrado.
Figure imgf000225_0002
Continuacion
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Tabla 25A - Cargas seleccionadas y sus procedimientos de smtesis
Figure imgf000226_0002
continuacion
Figure imgf000227_0001
Tabla 25B - Cargas seleccionadas y sus nombres IUPAC y datos de caracterizacion
Figure imgf000227_0002
Continuacion
Figure imgf000228_0001
Continuacion
Figure imgf000229_0001
Continuacion
Figure imgf000230_0001
Continuacion
Figure imgf000231_0001

Claims (42)

r e iv in d ic a c io n e s
1. Un compuesto de formula I:
Figure imgf000261_0001
o una de sus sales o solvatos farmaceuticamente aceptables, en la que, independientemente cada vez que aparece, W es
Figure imgf000261_0002
R1 es hidrogeno, alquilo C i -C8 o haloalquilo C i -C8;
R2 es hidrogeno, alquilo C1-C80 haloalquilo C1-C8;
r 3A y r 3B son cualquiera de los siguientes:
(i) R3A es alquilo C1-C8, haloalquilo C1-C8, carbociclilo C3-C80 halogeno; y
R3B es alquilo C1-C8, haloalquilo C1-C8, carbociclilo C3-C80 halogeno; 0
(ii) R3A y R3B tornados Juntos son bien alquileno C2-C8, alquileno C2-C8 que cuando se toma Junto con el carbono al que esta enlazado, forma un anillo carbodclico saturado; 0 bien heteroalquileno C1-C8, heteroalquileno C1-C8 que, Junto con el carbono al que esta enlazado, forma un anillo heterodclico saturado; R5 es
Figure imgf000262_0001
heterociclilo Ci-Cio, carbociclilo C3-C8 y arilo C6-C14 opcionalmente sustituido con 1, 2, 3, 4 0 5 grupos seleccionados independientemente entre el grupo que consiste en -alquilo Ci-C8, -alquil Ci -C8-N(R')2, -alquil Ci -C8-C(O)R', -alquil Ci -C8-C(O)OR', -0-(alquilo Ci -C8), -C(0)R', -0C(0)R', -C(0)0R', -C(O)N(R')2, -NHC(0)R', -S(0 )2R', -S(0)R', -Oh , halogeno, -N3, -N(R')2, -CN, -NHC(=NH)NH2, -NHCONH2, -S(=0 )2R' y -SR', en los que cada R' se selecciona independientemente entre el grupo que consiste en hidrogeno, alquilo C1-C8 y arilo no sustituido, 0 dos R' pueden, Junto con el nitrogeno al que estan unidos, formar un heterociclilo Ci -Cio; 0
R5 es
Figure imgf000262_0002
opcionalmente sustituido con 1, 2, 3, 4 0 5 grupos seleccionados independientemente entre el grupo que consiste en alquilo Ci -C8, -alquil Ci -C8-N(R')2, -alquil Ci -C8-C(O)R', -alquil Ci -C8-C(O)OR', -0-(alquilo Ci -C8), -c (O)R', -o c (O)R', -c (O)o r ', -c (O)N(R')2, -n h c (O)R', -s (O)2R', -s (O)R', -o h ,
halogeno, -N3, -N(R')2, -CN, -NHC(=NH)NH2, -NHCONH2, -S(=0)2R', -SR' y arileno-R', en los que cada R' se selecciona independientemente entre el grupo que consiste en hidrogeno, alquilo C-i-C8, heterociclilo C-i-C8, alquilen Ci-Cio-heterociclilo C3-C8 y arilo, 0 dos R' pueden, Junto con el nitrogeno al que estan unidos, formar un heterociclilo Ci -Cio;
R6 es hidrogeno, -alquilo Ci -C8, -alquenilo C2-C8, -alquinilo C2-C80 -haloalquilo Ci -C8;
R12 es hidrogeno, alquilo C1-C4, heterociclilo Ci -Cio 0 arilo C6-C14;
R13 es heterociclilo Ci-Cio; y
X es O.2
2. Un compuesto de formula Ma:
Figure imgf000262_0003
0 una de sus sales 0 solvatos farmaceuticamente aceptables, en la que, independientemente cada vez que aparece,
W es
R1 es
Figure imgf000263_0001
Y es -alquileno C2-C20-, -heteroalquileno C2-C20-; -carbociclo C3-C8-, -arileno-, -heterociclo C3-C8-, -alquilen Ci -C10-arileno-, -arileno-alquileno C1-C10-, -alquilen C1-C10-(carbociclo C3-C8)-, -(carbociclo C3-C8)-alquileno C1-C10-, -alquilen Ci-Cio-(heterociclo C3-C8)- 0 -(heterociclo C3-C8)-alquileno C1-C10-;
Z es
Figure imgf000263_0002
0 -NH2;
G es halogeno, -OH, -SH 0 -S-alquilo C i -C8;
R2 es hidrogeno, alquilo C1-C80 haloalquilo C1-C8;
r 3A y r 3B son cualquiera de los siguientes:
(i) R3A es alquilo C i -C 8, haloalquilo C i -C 8, carbociclilo C3-C80 halogeno; y R3B es alquilo C i -C 8, haloalquilo C i -C 8, carbociclilo C3-C80 halogeno; 0
(ii) R3A y R3B tornados Juntos son bien alquileno C2-C8, alquileno C2-C8 que cuando se toma Junto con el carbono al que esta enlazado, forma un anillo carbodclico saturado; 0 bien heteroalquileno C i -C 8, heteroalquileno C1-C8 que, Junto con el carbono al que esta enlazado, forma un anillo heterodclico saturado;
R5 es
Figure imgf000264_0001
heterociclilo Ci-Cio, carbociclilo C3-C8 y arilo C6-C14 opcionalmente sustituido con 1, 2, 3, 4 0 5 grupos seleccionados independientemente entre el grupo que consiste en -alquilo Ci-C8, -alquil Ci -C8-N(R')2, -alquil Ci -C8-C(O)R', -alquil Ci -C8-C(O)OR' -0-(alquilo Ci-C8), -C(0)R', -0C(0)R', -C(0)0R', -C(O)N(R')2, -n h c (O)R', -s (O)2R', -s (O)R', -o h ,
halogeno, -N3, -N(R')2, -c N, -NHC(=NH)NH2, -NHCONH2, -S(=0 )2R' y -SR', en los que cada R' se selecciona independientemente entre el grupo que consiste en hidrogeno, alquilo C1-C8 y arilo no sustituido, 0 dos R' pueden, junto con el nitrogeno al que estan unidos, formar un heterociclilo C1-C10; 0 R5 es
Figure imgf000264_0002
opcionalmente sustituido con 1, 2, 3, 4 0 5 grupos seleccionados independientemente entre el grupo que consiste en alquilo C-i-C8, -alquil C-i-C8-N(R')2, -alquil C-i-C8-C(O)R', -alquil C-i-C8-C(O)OR', -0-(alquilo C-i-C8), -c (O)R', -o c (O)R', -c (O)o r ', -c (O)N(R')2, -n h c (O)R', -s (O)2R', -s (O)R', -o h ,
halogeno, -N3, -N(R>, -CN, -NHC(=NH)NH2, -NHCONH2, -S(=0 )2R', -SR' y arileno-R', en los que cada R' se selecciona independientemente entre el grupo que consiste en hidrogeno, alquilo C1-C8, heterociclilo C1-C8, alquilen C1-C10-heterociclilo C3-C8 y arilo, 0 dos R' pueden, junto con el nitrogeno al que estan unidos, formar un heterociclilo C1-C10;
R6 es hidrogeno, -alquilo C1-C8, -alquenilo C2-C8, -alquinilo C2-C80 -haloalquilo C1-C8;
R12 es hidrogeno, alquilo C1-C4, heterociclilo C1-C100 arilo C6-C14;
R713 es heterociclilo C1-C10; y J
R se selecciona independientemente cada vez que aparece entre el grupo que consiste en F, Cl, I, Br, NO2, CN y CF3;
R es hidrogeno, -alquilo C1-C10, -carbociclilo C3-C8, arilo, -heteroalquilo C1-C10, -heterocicio C3-C8, -alquilen C1-C1o-arilo, -arileno-alquilo C1-C10, -alquileno C1-C10-(carbociclo C3-C8), -(carbociclo C3-C8)-alquilo C1-C10, -alquilen C1-C1o-(heterociclo C3-C8) y -(heterocicio C3-C8)-alquilo C1-C10, en el que el arilo en los R10 que comprenden arilo esta opcionalmente sustituido con [RzK
h es 1, 2, 3, 405; y
X es O.
3. Un compuesto de formula Mia:
Figure imgf000265_0001
na de sus sales o solvatos farmaceuticamente aceptables, en la que, Independlentemente cada vez que aparece,
W es
Figure imgf000265_0002
R1 es hidrogeno, alquilo Ci-C8 o haloalquilo Ci-C8;
R2 es hidrogeno, alquilo Ci-C8 o haloalquilo Ci-C8;
r3A y r3B son cualquiera de los siguientes:
(i) R3A es alquilo Ci-C8, haloalquilo Ci-C8, carbociclilo C3-C80 halogeno; y
R3B es alquilo Ci-C8, haloalquilo Ci-C8, carbociclilo C3-C80 halogeno; 0
(ii) R3A y R3B tomados Juntos son bien alquileno C2-C8, alquileno C2-C8 que cuando se toma Junto con el carbono al que esta enlazado, forma un anillo carbodclico saturado; 0 bien heteroalquileno Ci -C8, heteroalquileno Ci-C8 que, Junto con el carbono al que esta enlazado, forma un anillo heterodclico saturado;
R5 es
Figure imgf000265_0003
opcionalmente sustituido con 1,2, 3, 405 grupos seleccionados independlentemente entre el grupo que consiste en alquilo C1-C8, -0-(alquilo C1-C8), -C(0)R', -0C(0)R', -C(0)0R', -C(0 )NH2, -C(0)NHR', -C(O)N(R')2, -NHC(0)R', -S(0 )2R', -S(0)R', -OH, halogeno, -N3, -NH2, -NH(R'), -N(R')2, -CN, -NHC(=NH)NH2, -NHCONH2, -S(=0)2R' y -SR', en los que cada R' se selecciona independlentemente entre el grupo que consiste en hidrogeno, alquilo C1-C8 y arilo no sustituido;
R11 es
Figure imgf000266_0001
Y es -alquileno C2-C20-, -heteroalquileno C2-C20-, carbociclo C3-C8-, -arileno-, -heterociclo C3-C8-, -alquilen C1-C10-arileno-, -arileno-alquileno C1-C10-, -alquilen C1-C10-(carbociclo C3-C8)-, -(carbociclo C3-C8)-alquileno C1-C10-, -alquilen C1-C10-(heterociclo C3-C8)- 0 -(heterociclo C3-C8)-alquileno C1-C10-;
Z es
Figure imgf000266_0002
0 -NH2;
G es halogeno, -OH, -SH 0 -S-alquilo C1-C6;
R7 se selecciona independientemente cada vez que aparece entre el grupo que consiste en F, Cl, I, Br, NO2, CN y CF3;
h es 1, 2, 3, 405; y
X es O.
4. Un compuesto de formula Mb:
na de sus sales o solvatos farmaceuticamente aceptables, en la que, Independlentemente cada vez que aparece,
W es
Figure imgf000267_0001
R1 es
Figure imgf000267_0002
Y es -alquileno C2-C20-, -heteroalquileno C2-C20-, -carbociclo C3-C8-, -arileno-, -heterociclo C3-C8-, -alquilen Ci -Cio-arileno-, -arileno-alquileno C1-C10-, -alquilen Ci-Cio-(carbociclo C3-C8)-, -(carbociclo C3-C8)-alquileno C1-C10-, -alquilen Ci-Cio-(heterociclo C3-C8)- 0 -(heterociclo C3-C8)-alquileno C1-C10-;
Z es
Figure imgf000267_0003
0 -NHL;
L es un anticuerpo;
R2 *es hidrogeno, alquilo C1-C80 haloalquilo C1-C8;
R3A y R3B son cualquiera de los siguientes:
(i) R3A es alquilo Ci-C8, haloalquilo Ci-C8, carbociclilo C3-C80 halogeno; y
R3B es alquilo Ci-C8, haloalquilo Ci-C8, carbociclilo C3-C80 halogeno; 0
(ii) R3A y R3B tomados Juntos son bien alquileno C2-C8, alquileno C2-C8 que cuando se toma Junto con el carbono al que esta enlazado, forma un anillo carbodclico saturado; 0 bien heteroalquileno Ci -C8, heteroalquileno C1-C8 que, Junto con el carbono al que esta enlazado, forma un anillo heterodclico saturado; R5 es
Figure imgf000268_0001
heterociclilo Ci-Cio, carbociclilo C3-C8 y arilo C6-C14 opcionalmente sustituido con 1, 2, 3, 4 0 5 grupos seleccionados independientemente entre el grupo que consiste en -alquilo C1-C8, -alquil C1-C8-N(R')2, -alquil C1-C8-C(0)R', -alquil C1-C8-C(0 )0 R' -0-(alquilo C1-C8), -C(0)R', -0C(0)R', -C(0)0R', -C(O)N(R')2, -NHC(0)R', -S(0 )2R', -S(0)R', -Oh , halogeno, -N3, -N(R')2, -CN, -NHC(=NH)NH2, -NHCONH2, -S(=0 )2R' y -SR', en los que cada R' se selecciona independientemente entre el grupo que consiste en hidrogeno, alquilo C1-C8 y arilo no sustituido, 0 dos R' pueden, Junto con el nitrogeno al que estan unidos, formar un heterociclilo C1-C10;
0 R5 es
Figure imgf000268_0002
opcionalmente sustituido con 1, 2, 3, 405 grupos seleccionados independientemente entre el grupo que consiste en alquilo C1-C8, -alquil C1-C8-N(R')2, -alquil C1-C8-C(0 )R', -alquil C1-C8-C(O)0 R', -0-(alquilo C1-C8), -C(0)R', -o c (O)R', -c (O)o r ', -c (O)N(R')2, -n h c (O)R', -s (O)2R', -s (O)R', -o h ,
halogeno, -N3, -N(R')2, -CN, -NHC(=NH)NH2, -NHCONH2, -S(=0)2R', -SR' y arileno-R', en los que cada R' se selecciona independientemente entre el grupo que consiste en hidrogeno, alquilo C1-C8, heterociclilo C1-C8, alquilen C1-C10-heterociclilo C3-C8 y arilo, 0 dos R' pueden, Junto con el nitrogeno al que estan unidos, formar un heterociclilo C1-C10;
R6 es hidrogeno, -alquilo C1-C8, -alquenilo C2-C8, -alquinilo C2-C80 -haloalquilo C1-C8;
R12 es hidrogeno, alquilo C1-C4, heterociclilo C1-C100 arilo C6-C14;
R13 es heterociclilo C1-C10; y
X es O.
5. Un compuesto de formula Mlb:
Figure imgf000269_0001
o una de sus sales o solvatos farmaceuticamente aceptables, en la que, Independlentemente cada vez que aparece, W es
Figure imgf000269_0002
R1 es hidrogeno, alquilo C1-C8 o haloalquilo C1-C8;
R2 es hidrogeno, alquilo Ci-C8 o haloalquilo Ci-C8;
r3A y r3B son cualquiera de los siguientes:
(i) R3A es alquilo Ci-C8, haloalquilo Ci-C8, carbociclilo C3-C80 halogeno; y
R3B es alquilo Ci-C8, haloalquilo Ci-C8, carbociclilo C3-C80 halogeno; 0
(ii) R3A y R3B tomados Juntos son bien alquileno C2-C8, alquileno C2-C8 que cuando se toma Junto con el carbono al que esta enlazado, forma un anillo carbodclico saturado; 0 bien heteroalquileno Ci -C8, heteroalquileno Ci-C8 que, Junto con el carbono al que esta enlazado, forma un anillo heterodclico saturado; R5 es
Figure imgf000269_0003
opcionalmente sustituido con 1, 2, 3, 405 grupos seleccionados independlentemente entre el grupo que consiste en alquilo C1-C8, -0-(alquilo C1-C8), -C(0)R', -0C(0)R', -C(0)0R', -C(0 )NH2, -C(0)NHR', -C(O)N(R')2, -NHC(0)R', -S(0 )2R', -S(0)R', -Oh , halogeno, -N3, -NH2, -NH(R'), -N(R')2, -CN, -NHC(=NH)NH2, -NHCONH2, -S(=0 )2R' y -SR', en los que cada R' se selecciona independlentemente entre el grupo que consiste en hidrogeno, alquilo C1-C8 y arilo no sustituido;
R11 es
Figure imgf000270_0001
Y es -alquileno C2-C20-, -heteroalquileno C2-C20-, -carbociclo C3-C s-, -arileno-, -heterociclo C3-C s-, -alquilen C i -Cio-arileno-, -arileno-alquileno C1-C10-, -alquilen Ci-Cio-(carbociclo C3-C s)-, -(carbociclo C3-Cs)-alquileno C1-C10-, -alquilen C1-C10-(heterociclo C3-C s)- o -(heterociclo C3-Cs)-alquileno C1-C10-;
Z es
Figure imgf000270_0002
o -NHL;
L es un anticuerpo;
X es O.
6. Un compuesto de formula IIc :
Figure imgf000271_0001
o una de sus sales o solvatos farmaceuticamente aceptables, en la que, independientemente cada vez que aparece,
R1' es
Figure imgf000271_0002
Y es -alquileno C2-C20-, -heteroalquileno C2-C20-, -carbociclo C3-C8-, -arileno-, -heterociclo C3-C8-, -alquilen C10-arileno-, -arileno-alquileno C1-C10-, -alquilen C1-C10-(carbociclo C3-C8)-, -(carbociclo C3-C8)-alquileno C1-C10-, -alquilen C1-C10-(heterociclo C3-C8)- o -(heterociclo C3-C8)-alquileno C1-C10-;
Z' es
Figure imgf000271_0003
o -NH-;
L es un anticuerpo;
D esta ausente;
R2'es hidrogeno, alquilo Ci-Cs, haloalquilo Ci-Cs, 0 esta ausente si
Figure imgf000271_0004
esta presente;
3A 3D
R ' y R ' son cualquiera de los siguientes:
3A
(i) R ' es alquilo C1-C8, haloalquilo C1-C8, carbociclilo C3-C80 halogeno; y
R3B' es alquilo Ci-Cs, haloalquilo Ci-Cs, carbociclilo C3-C8 0 halogeno, 0 R3B' es alquileno C2-C4 y forma un anillo saturado de 5 a 6 miembros segun se indica mediante * ' > 0
(ii) R3A’ y R3B’ tornados juntos son bien alquileno C2-C8, alquileno C2-C8 que cuando se toma junto con el carbono al que esta enlazado, forma un anillo carbodclico saturado; 0 bien heteroalquileno Ci-C8, heteroalquileno Ci-C8 que, junto con el carbono al que esta enlazado, forma un anillo heterodclico saturado; R5 es
Figure imgf000272_0001
heterociclilo C1-C10, carbociclilo C3-C8 y arilo C6-Ci4 opcionalmente sustituido con 1, 2, 3, 4 0 5 grupos seleccionados independientemente entre el grupo que consiste en -alquilo Ci-C8, -alquil Ci-C8-N(R’)2, -alquil C1-C8-C(0)R’, -alquil C1-C8-C(0)0R’ -0-(alquilo C1-C8), -C(0)R’, -0C(O)R’, -C(O)0R’, -C(0)N(R’)2, -n h c (O)R’, -s (O)2R’, -s (O)R’, -o h ,
halogeno, -N3, -N(R’)2, -CN, -NHC(=NH)NH2, -NHCONH2, -S(=0 )2R’ y -SR’, en los que cada R’ se selecciona independientemente entre el grupo que consiste en hidrogeno, alquilo C1-C8 y arilo no sustituido, 0 dos R’ pueden, junto con el nitrogeno al que estan unidos, formar un heterociclilo C1-C10;
0 R5 es
Figure imgf000272_0002
opcionalmente sustituido con 1, 2, 3, 4 0 5 grupos seleccionados independientemente entre el grupo que consiste en alquilo C1-C8, -alquil C1-C8-N(R')2, -alquil C1-C8-C(0)R', -alquil C1-C8-C(0)0R', -0-(alquilo C1-C8), -c (O)R', -o c (O)R', -c (O)o r ', -c (O)N(R')2, -n h c (O)R', -s (O)2R', -s (O)R', -o h ,
halogeno, -N3, -N(R')2, -CN, -NHC(=NH)NH2, -NHCONH2, -S(=0 )2R', -SR' y arileno-R', en los que cada R' se selecciona independientemente entre el grupo que consiste en hidrogeno, alquilo C1-C8, heterociclilo C1-C8, alquilen C1-C10-heterociclilo C3-C8 y arilo, 0 dos R' pueden, junto con el nitrogeno al que estan unidos, formar un heterociclilo C1-C10;
R6 es hidrogeno, -alquilo C1-C8, -alquenilo C2-C8, -alquinilo C2-C80 -haloalquilo C1-C8;
R12 es hidrogeno, alquilo C1-C4, heterociclilo C1-C100 arilo C6-C14;
R13 es heterociclilo C1-C10; y
X es O.
7. Un compuesto de formula IIIc:
Figure imgf000273_0001
o una de sus sales o solvatos farmaceuticamente aceptables, en la que, independientemente cada vez que aparece, W es
Figure imgf000273_0002
R1 es hidrogeno, alquilo C i-C 8 o haloalquilo C i-C 8;
R2 es hidrogeno, alquilo C1-C8 o haloalquilo C1-C8;
r 3A y r 3B son cualquiera de los siguientes:
(i) R3A es alquilo C1-C8, haloalquilo C1-C8, carbociclilo C3-C8 o halogeno; y
R3B es alquilo C1-C8, haloalquilo C1-C8, carbociclilo C3-C8 o halogeno; o
(ii) R3A y R3B tomados juntos son bien alquileno C2-C8, alquileno C2-C8 que cuando se toma junto con el carbono al que esta enlazado, forma un anillo carbod clico saturado; o bien heteroalquileno C1-C8, heteroalquileno C1-C8 que, junto con el carbono al que esta enlazado, forma un anillo heterodclico saturado; R5 es
opcionalmente sustituido con 1, 2, 3, 4 o 5 grupos seleccionados independientemente entre el grupo que consiste en alquilo Ci -C8, -0-(alquilo Ci-C8), -C(0)R', -0C(0)R', -C(O)0R', -C(0)NH2, -C(0)NHR', -C(0)N(R')2, -NHC(0)R', -S(0)2R', -S(0)R', -Oh , halogeno, -Ns, -NH2, -NH(R'), -N(R')2, -CN, -NHC(=NH)NH2, -NHCONH2, -S(=0)2R' y -SR', en los que cada R' se selecciona independientemente entre el grupo que consiste en hidrogeno, alquilo Ci-C8 y arilo no sustituido; R11' es
Figure imgf000274_0001
Y es -alquileno C2-C20-, -heteroalquileno C2-C20-, -carbociclo C3-C8-, -arileno-, -heterociclo C3-C8-, -alquilen Ci -Cio-arileno-, -arileno-alquileno C1-C10-, -alquilen Ci-Ci0-(carbociclo C3-C8)-, -(carbociclo C3-C8)-alquileno C1-C10-, -alquilen Ci-Ci0-(heterociclo C3-C8)- o -(heterociclo C3-C8)-alquileno C1-C10-;
Z’ es
Figure imgf000274_0002
o -NH-;
L es un anticuerpo;
X es O.
8. Un compuesto de formula lid:
Figure imgf000274_0003
o una de sus sales o solvatos farmaceuticamente aceptables, en la que, independientemente cada vez que aparece, L es un anticuerpo;
[engarce] es un engarce divalente;
D esta ausente;
R2’ es hidrogeno, alquilo CrCs, haloalquilo CrCs, 0 esta ausente si ''•> esta presente;
R3A' y R3B' son cualquiera de Ios siguientes:
(i) R3A' es alquilo Ci-C8, haloalquilo Ci-C8, carbociclilo C3-C80 halogeno; y
R36’ es alquilo C-i-Cs, haloalquilo C-i-Cs, carbociclilo C3-C8, 0 R36’ es alquileno C2-C4 y forma un anillo
saturado de 5 a 6 miembros segun se indica mediante ' > 0
(ii) R3A' y R3B' tornados Juntos son bien alquileno C2-C8, alquileno C2-C8 que cuando se toma Junto con el carbono al que esta enlazado, forma un anillo carbodclico saturado; 0 bien heteroalquileno Ci -C8, heteroalquileno Ci -C8 que, Junto con el carbono al que esta enlazado, forma un anillo heterodclico saturado; R5 es
Figure imgf000275_0001
heterociclilo C1-C10, carbociclilo C3-C8 y arilo C6-C14 opcionalmente sustituido con 1, 2, 3, 4 0 5 grupos seleccionados independientemente entre el grupo que consiste en -alquilo C1-C8, -alquil C1-C8-N(R')2, -alquil C1-C8-C(0)R', -alquil C1-C8-C(0)0R' -0-(alquilo C1-C8), -C(0)R', -0C(0)R', -C(0)0R', -C(0)N(R')2, -NHC(0)R', -S(0)2R', -S(0)R', -O h , halogeno, -N3, -N(R')2, -CN, -NHC(=NH)NH2, -NHCONH2, -S(=0)2R' y -SR', en Ios que cada R' se selecciona independientemente entre el grupo que consiste en hidrogeno, alquilo C1-C8 y arilo no sustituido, 0 dos R' pueden, Junto con el nitrogeno al que estan unidos, formar un heterociclilo C1-C10;
0 R5 es
Figure imgf000275_0002
opcionalmente sustituido con 1,2, 3, 405 grupos seleccionados independientemente entre el grupo que consiste en alquilo C1-C8, -alquil C1-C8-N(R')2, -alquil C1-C8-C(0 )R', -alquil C1-C8-C(O)0 R', -0-(alquilo C1-C8), -C(0)R', 0C(O)R’, -C(O)0R’, -C(0 )N(R’)2, -NHC(0)R’, -S(0 )2R’, -S(0)R’, -o h , halogeno, -N3, -N(R’)2, -CN, -NhC(=NH)NH2, -NHCOn H2, -S(=0)2R', -SR’ y arileno-R’, en los que cada R’ se selecciona independientemente entre el grupo que consiste en hidrogeno, alquilo Ci-C8, heterociclilo Ci-C8, alquilen Ci-Cio-heterociclilo C3-C8 y arilo, o dos R’ pueden, junto con el nitrogeno al que estan unidos, formar un heterociclilo C1-C1o;
R6 es hidrogeno, -alquilo C1-C8, -alquenilo C2-C8, -alquinilo C2-C8 o -haloalquilo C1-C8;
R12 es hidrogeno, alquilo C1-C4, heterociclilo C1-C100 arilo C6-C14;
R13 es heterociclilo C1-C10; y
X es O.
9. Un compuesto de formula Mid:
Figure imgf000276_0001
0 una de sus sales 0 solvatos farmaceuticamente aceptables, en la que, independientemente cada vez que aparece, W es
Figure imgf000276_0002
1
R es hidrogeno, alquilo C1-C80 haloalquilo C1-C8;
R2 es hidrogeno, alquilo C1-C80 haloalquilo C1-C8;
r 3A y r 3B son cualquiera de los siguientes:
(i) R es alquilo C1-C8, haloalquilo C1-C8, carbociclilo C3-C80 halogeno; y
R3B es alquilo C1-C8, haloalquilo C1-C8, carbociclilo C3-C80 halogeno; 0
(ii) R3A y R3B tomados juntos son bien alquileno C2-C8, alquileno C2-C8 que cuando se toma junto con el carbono al que esta enlazado, forma un anillo carbodclico saturado; 0 bien heteroalquileno C1-C8, heteroalquileno C1-C8 que, junto con el carbono al que esta enlazado, forma un anillo heterodclico saturado; R5 es
o
Figure imgf000277_0001
opcionalmente sustituido con 1,2, 3, 4 o 5 grupos seleccionados independientemente entre el grupo que consiste en alquilo CrC8, -0-(alquilo C i -C8), -C(0)R', -0C(0)R', -C(O)0R', -C(0)NH2, -C(0)NHR', -C(0)N(R')2, -NHC(0)R', -S(0)2R', -S(0)R', -OH, halogeno, -N s, -NH2, -NH(R'), -N(R')2, -CN, -NHC(=NH)NH2, -NHCONH2, -S(=0)2R' y -SR', en los que cada R' se selecciona independientemente entre el grupo que consiste en hidrogeno, alquilo C i -C8 y arilo no sustituido;
[engarce] es un engarce divalente;
L es un anticuerpo;
X es O.
10. El compuesto, sal o solvato de cualquiera de las reivindicaciones 1-5, 7 y 9, en el que W es
Figure imgf000277_0002
11. El compuesto, sal o solvato de cualquiera de las reivindicaciones 1-5, 7 y 9, en el que W es
Figure imgf000277_0003
12. El compuesto, sal o solvato de cualquiera de las reivindicaciones 1-5, 7 y 9, en el que R2 es hidrogeno o alquilo C i -C8.
13. El compuesto, sal o solvato de cualquiera de las reivindicaciones 1-5, 7 y 9, en el que R3A es alquilo C-i-C8, preferentemente metilo.
14. El compuesto, sal o solvato de cualquiera de las reivindicaciones 1-5, 7 y 9, en el que R3A y R3B tomados juntos son bien alquileno C2-C8, alquileno C2-C8 que cuando se toma junto con el carbono al que esta enlazado, forma un anillo carbodclico saturado; 0 bien heteroalquileno Cr C8, heteroalquileno C-i-C8 que, junto con el carbono al que esta enlazado, forma un anillo heterodclico saturado.
15. El compuesto, sal 0 solvato de la reivindicacion 14, en el que R3A y R3B tomados juntos son -CH2CH2-, -CH2CH2-que cuando se toma junto con el carbono al que esta enlazado forma ciclopropilo.
16. El compuesto, sal 0 solvato de la reivindicacion 14, en el que R3A y R3B tomados juntos son -CH2CH2CH2CH2-, -CH2CH2CH2CH2- que cuando se toma junto con el carbono al que esta enlazado forma ciclopentilo.
17. El compuesto, sal 0 solvato de la reivindicacion 14, en el que R3A y R3B tomados juntos son -CH2OCH2-, -CH2OCH2- que cuando se toma junto con el carbono al que esta enlazado forma oxetanilo.
18. El compuesto, sal 0 solvato de cualquiera de las reivindicaciones 1-2, 4, 6 y 8, en el que R5 es
Figure imgf000278_0001
19. El compuesto, la sal o el solvato de cualqulera de las relvlndlcaclones 4-9 en el que el antlcuerpo se selecclona de trastuzumab, oregovomab, edrecolomab, cetuxlmab, un antlcuerpo monoclonal humanlzado al receptor de vltronectlna (avp3); alemtuzumab; un antlcuerpo antl-HLA-DR humanlzado para el tratamlento de llnfoma no hodklnlano; 1311 Lym-1; un antlcuerpo antl-HLA-DrIO murlno para el tratamlento de llnfoma no hodklnlano; un antl-CD1 mAb humanlzado para el tratamlento de Enfermedad de Hodgkln o un llnfoma no hodgklnlano; labetuzumab; bevaclzumab; Ibrltumomab tluxetan; ofatumumab; panltumumab; rltuxlmab; tosltumomab; Iplllmumab; gemtuzumab; un antlcuerpo antI-IL13; y un antlcuerpo antl-Notch.
20. Un compuesto o una sal o solvato del mlsmo farmaceutlcamente aceptable, de acuerdo con la relvlndlcaclon 1 selecclonado entre:
Figure imgf000279_0001
Figure imgf000280_0001
Figure imgf000281_0001
Figure imgf000282_0001
21. Un compuesto o una sal o solvato del mlsmo farmaceutlcamente aceptable, de acuerdo con la relvlndlcaclon 1 selecclonado entre:
Figure imgf000283_0001
Figure imgf000284_0001
Figure imgf000285_0001
Figure imgf000286_0001
22. Una carga util-engarce o conjugado de anticuerpo-farmaco, o una de sus sales o solvatos farmaceuticamente aceptables, de acuerdo con una cualquiera de las reivindicaciones 2 a 9, que comprende un radical de un compuesto de la reivindicacion 20 o 21.
23. Un conjugado de anticuerpo farmaco, o una de sus sales o solvatos farmaceuticamente aceptables, que comprende un radical de un compuesto de las reivindicaciones 1-3.
24. Un compuesto o una sal o solvato del mismo farmaceuticamente aceptable, de acuerdo con una cualquiera de las reivindicaciones 2 o 3 seleccionado entre:
Figure imgf000287_0001
Figure imgf000288_0001
Figure imgf000289_0001
Figure imgf000290_0001
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Figure imgf000293_0001
Figure imgf000294_0001
Figure imgf000295_0001
Figure imgf000296_0001
Figure imgf000297_0001
Figure imgf000298_0004
25. Un conjugado de anticuerpo-farmaco o una sal o solvato del mlsmo farmaceuticamente aceptable, de acuerdo con una cualquiera de las reivindicaciones 4, 5, 7 o 9 que comprende un radical de un compuesto de la reivindicacion 24.
26. Un compuesto de la reivindicacion 1, o una sal o solvato del mismo farmaceuticamente aceptable, que es
Figure imgf000298_0001
27. Un compuesto de la reivindicacion 1, o una sal o solvato del mismo farmaceuticamente aceptable, que es
Figure imgf000298_0002
28. Un compuesto de la reivindicacion 1, o una sal o solvato del mismo farmaceuticamente aceptable, que es
Figure imgf000298_0003
29. Un compuesto de la reivindicacion 1, o una sal o solvato del mismo farmaceuticamente aceptable, que es
Figure imgf000299_0001
30. Un compuesto de la reivindicacion 1, o una sal o solvato del mlsmo farmaceuticamente aceptable, que es
Figure imgf000299_0002
31. Un compuesto de la reivindicacion 1, o una sal o solvato del mismo farmaceuticamente aceptable, que es
Figure imgf000299_0003
32. Un compuesto de la reivindicacion 1, o una sal o solvato del mismo farmaceuticamente aceptable, que es
Figure imgf000299_0004
33. Un compuesto de la reivindicacion 1, o una sal o solvato del mismo farmaceuticamente aceptable, que es
Figure imgf000300_0001
34. Una carga util-engarce o conjugado de anticuerpo-farmaco, o una sal o solvato del mlsmo farmaceuticamente aceptable, de acuerdo con una cualquiera de las reivindicaciones 2 a 9, que comprende un radical de un compuesto de las reivindicaciones 26-33.
35. Un compuesto de la reivindicacion 24, o una sal o solvato del mismo farmaceuticamente aceptable, que es
Figure imgf000300_0002
36. Un compuesto de la reivindicacion 24, o una sal o solvato del mismo farmaceuticamente aceptable, que es
Figure imgf000300_0003
37. Un compuesto de la reivindicacion 24, o una sal o solvato del mismo farmaceuticamente aceptable, que es
Figure imgf000300_0004
38. Un compuesto de la reivindicacion 24, o una sal o solvato del mismo farmaceuticamente aceptable, que es
Figure imgf000300_0005
39. Un compuesto de la reivindicacion 24, o una sal o solvato del mismo farmaceuticamente aceptable, que es
Figure imgf000301_0001
40. Un conjugado farmaco-anticuerpo, o una sal o solvato farmaceuticamente aceptable del mlsmo, de acuerdo con una cualquiera de las reivindicaciones 4, 5, 7 o 9, que comprende un radical de un compuesto de las reivindicaciones 35-39.
41. Una composicion farmaceutica que comprende un compuesto de una cualquiera de las reivindicaciones 1-40 o una sal o un solvato farmaceuticamente aceptable del mismo, y un excipiente farmaceuticamente aceptable.
42. Un compuesto de una cualquiera de las reivindicaciones 1-40 o una sal o un solvato farmaceuticamente aceptable del mismo, o una composicion farmaceutica de la reivindicacion 41, para su uso en el tratamiento de cancer.
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