ES2378785T3 - Derivados de estirilpiridina, y su uso para unir y formar imágenes de placas amiloides - Google Patents

Derivados de estirilpiridina, y su uso para unir y formar imágenes de placas amiloides Download PDF

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Abstract

Un compuesto de Fórmula I: o una de sus sales farmacéuticamente aceptables; en la que: n es uno. al menos uno, no más de tres, de A1, A2, A3, A4 y A5 es N, el resto son -CH o -CR2 según lo permitido; R1 es NRaRb(CH2)p- , en la que Ra y Rb son independientemente hidrógeno o alquilo(C1-C4) y p es 0; R2 es en la que q es un número entero de 1 a 5; R30, R31, R32 y R33 son, en cada caso, hidrógeno; Z se selecciona entre halógeno, benzoiloxilo sustituido con halógeno, benciloxilo sustituido con halógeno, fenilalquilo(C1-C4) sustituido con halógeno, ariloxilo sustituido con halógeno y arilo(C6-C10) sustituido con halógeno; R7 y R8 son cada uno hidrógeno; y en la que dicho halógeno, en cada caso, se selecciona entre I, 123I, 125I, Br, 76Br, 77Br, F y 18F.

Description

Derivados de estirilpiridina, y su uso para unir y formar imágenes de placas amiloides
Antecedentes de la invención
Campo de la invención
La presente invención se refiere a nuevos compuestos de estirilpiridina, a los usos de los mismos en el diagnóstico por imágenes y la inhibición de la agregación de �–amiloide, y a procedimientos para elaborar estos compuestos.
Antecedentes de la técnica
La enfermedad de Alzheimer (EA) es un trastorno neurodegenerativo progresivo que se caracteriza por el declive cognitivo, la pérdida irreversible de memoria, la desorientación y problemas del lenguaje. La autopsia de secciones cerebrales de pacientes con EA revela abundantes placas seniles (PS) compuestas por péptidos �–amiloides (A�) y numerosos ovillos neurofibrilares (ONF) formados por filamentos de proteínas tau muy fosforiladas (para consultar publicaciones recientes y otras citas, véase Ginsberg, S. D., et al., "Molecular Pathology of Alzheimer’s Disease and Related Disorders", en Cerebral Cortex: Neurodegenerative and Age–related Changes in Structure and Function of Cerebral Cortex, Kluwer Academic/Plenum, NY (1999), pp. 603–654; Vogelsberg–Ragaglia, V., et al., "Cell Biology of Tau and Cytoskeletal Pathology in Alzheimer’s Disease", Alzheimer’s Disease, Lippincot, Williams y Wilkins, Filadelfia, PA (1999), pp. 359–372).
La amiloidosis es una afección caracterizada por la acumulación de diversas proteínas fibrilares insolubles en los tejidos de un paciente. Los depósitos amiloides se forman mediante la agregación de proteínas amiloides, seguida por una mayor combinación de los agregados y/o las proteínas amiloides. La formación y acumulación de agregados de péptidos �–amiloides (A�) en el cerebro son factores fundamentales para el desarrollo y la progresión de la EA.
Además del papel de los depósitos amiloides en la enfermedad de Alzheimer, se ha observado que la presencia de depósitos amiloides en enfermedades tales como fiebre mediterránea, síndrome de Muckle–Wells, mieloma idiopático, polineuropatía amiloide, cardiomiopatía amiloide, amiloidosis senil sistemática, polineuropatía amiloide, hemorragia cerebral hereditaria con amiloidosis, síndrome de Down, picor, enfermedad de Creutzfeldt–Jacob, Kuru, síndrome de Gerstamnn–Straussler–Scheinker, carcinoma medular del tiroide, amiloide atrial aislado, amiloide de tipo �2–microglobulina en pacientes sometidos a diálisis, miositis de cuerpos de inclusión, depósitos de �2–amiloide en la enfermedad de desgaste muscular e insulinoma por diabetes de tipo II de islotes de Langerhans.
Los agregados fibrilares de los péptidos amiloides A�1–40 y A�1–42 son los principales péptidos metabólicos derivados de la proteína precursora amiloide encontrados en placas seniles y depósitos amiloides cerebrovasculares de pacientes de EA (Xia, W., et al., J. Proc. Natl. Acad. Sci. EE.UU. 97:9299–9304 (2000)). Se están empleando la prevención y la inversión de la formación de placas de A� como tratamiento de esta enfermedad (Selkoe, D., J. JAMA 283:1615–1617 (2000); Wolfe, M.S., et al., J. Med. Chem. 41:6–9 (1998); Skovronsky, D.M., y Lee, V.M., Trends Pharmacol. Sci. 21:161–163 (2000)).
La EA familiar (EAF) está provocada por múltiples mutaciones en los genes de la proteína precursora A (APP), la presenilina 1 (PS1) y la presenilina 2 (PS2) (Ginsberg, S. D., et al., "Molecular Pathology of Alzheimer’s Disease and Related Disorders", en Cerebral Cortex: Neurodegenerative and Age–related Changes in Structure and Function of Cerebral Cortex, Kluwer Academic/Plenum, NY (1999), pp. 603–654; Vogelsberg–Ragaglia, V., et al., "Cell Biology of Tau and Cytoskeletal Pathology in Alzheimer’s Disease", Alzheimer’s Disease, Lippincot, Williams y Wilkins, Filadelfia, PA (1999), pp. 359–372).
Aunque no se conocen los mecanismos exactos de la EA por completo, todas las mutaciones patógenas de la EAF estudiadas hasta el momento aumentan la producción de la forma de 42–43 aminoácidos de longitud más amiloidogénica del péptido A�. Así pues, al menos en la EAF, parece que basta con la desregulación de la producción de A� para inducir una cascada de eventos que conducen a la neurodegeneración. De hecho, la hipótesis de la cascada de amiloides sugiere que la formación de agregados de A� fibrilares extracelulares en el cerebro puede ser un hecho fundamental en la patogénesis de la EA (Selkoe, D. J., "Biology of �–amyloid Precursor Protein and the Mechanism of Alzheimer’s Disease", Alzheimer’s Disease, Lippincot Williams y Wilkins, Filadelfia, PA (1999), pp. 293–310; Selkoe, D. J., J. Am. Med. Assoc. 283:1615–1617 (2000); Naslund, J., et al., J. Am. Med. Assoc. 283:1571–1577 (2000); Golde, T. E., et al., Biochimica et Biophysica Acta 1502:172–187 (2000)).
Actualmente, se están evaluando diversos enfoques en el intento por inhibir la producción y reducir la acumulación de A� fibrilar en el cerebro como posibles terapias contra la EA (Skovronsky, D. M. y Lee, V. M., Trends Pharmacol. Sci. 21:161–163 (2000); Vassar, R., et al., Science 286:735–741 (1999); Wolfe, M. S., et al., J. Med. Chem. 41:6–9 (1998); Moore, C. L., et al., J. Med. Chem. 43:3434–3442 (2000); Findeis, M. A., Biochimica et Biophysica Acta
1502:76–84 (2000); Kuner, P., Bohrmann, et al., J. Biol. Chem. 275:1673–1678 (2000)). Por lo tanto, interesa desarrollar ligandos que se unan específicamente a agregados de A fibrilares. Debido a que las PS extracelulares son dianas accesibles, se podrían usar estos nuevos ligandos como herramientas de diagnóstico in vivo y como sondas para visualizar la deposición progresiva de A en los estudios sobre la amiloidogénesis de la EA en pacientes vivos.
Con este fin, se han publicado varios enfoques interesantes para el desarrollo de ligandos específicos de agregados de A fibrilares (Ashburn, T. T., et al., Chem. Biol. 3:351–358 (1996); Han, G., et al., J. Am. Chem. Soc. 118:4506–4507 (1996); Klunk, W. E., et al., Biol. Psychiatry 35:627 (1994); Klunk, W. E., et al., Neurobiol. Aging 16:541–548 (1995); Klunk, W. E., et al., Sumario de la Sociedad de Neurociencia 23:1638 (1997); Mathis, C. A., et al., Proc. XIIth Intl. Symp. Radiopharm. Chem., Uppsala, Suecia: 94–95 (1997); Lorenzo, A. y Yankner, B. A., Proc. Natl. Acad. Sci. EE.UU. 91:12243–12247 (1994); Zhen, W., et al., J. Med. Chem. 42:2805–2815 (1999)). El enfoque más atractivo se basa en los indicadores crisamina G (CG) y rojo Congo (CR) altamente conjugados, siendo usados para la tinción fluorescente de PS y ONF en secciones cerebrales con EA de autopsia (Ashburn, T. T., et al., Chem. Biol. 3:351–358 (1996); Klunk, W. E., et al., J. Histochem. Cytochem. 37:1273–1281 (1989)). Las constantes de inhibición (Ki) para inhibir los agregados de A fibrilares de CR, CG y derivados de 3’–bromo y de 3’–yodo de CG son 2.800, 370, 300 y 250nM, respectivamente (Mathis, C. A., et al., Proc. XIIth Intl. Symp. Radiopharm. Chem., Upsala, Suecia: 94–95 (1997)). Se ha observado que estos compuestos se unan selectivamente a los agregados de péptido A (1–40) in vitro, así como a depósitos de A fibrilar de secciones cerebrales con EA (Mathis, C. A., et al., Proc. XIIth Intl. Symp. Radiopharm. Chem., Uppsala, Suecia: 94–95 (1997)).
Existen varios posibles beneficios de la formación de imágenes de agregados de A en el cerebro. La técnica de formación de imágenes mejorará el diagnóstico mediante la identificación de posibles pacientes con un exceso de placas de A en el cerebro y que, por lo tanto, tienen tendencia a desarrollar la enfermedad de Alzheimer. También será útil controlar la progresión de la enfermedad. Cuando se cuente con tratamientos mediante fármacos contra las placas, la formación de imágenes de placas de A del cerebro podrá proporcionar una herramienta esencial para hacer un seguimiento del tratamiento. Así pues, se ha buscado con gran interés un procedimientos no invasivo y sencillo para detectar y cuantificar los depósitos amiloides en un paciente. En la actualidad, la detección de depósitos amiloides implica el análisis histológico de materiales de biopsia o autopsia. Ambos procedimientos tienen desventajas. Por ejemplo, la autopsia sólo se puede usar para un diagnóstico de autopsia.
La formación directa de imágenes de depósitos amiloides in vivo es complicada, pues los depósitos tienen muchas propiedades físicas similares (p.ej., densidad y contenido de agua) a las de los tejidos normales. Los intentos por formar imágenes de depósitos amiloides usando la formación de imágenes por resonancia magnética (MRI) y la tomografía computerizada (CAT) han sido decepcionantes y sólo han detectado depósitos amiloides en ciertas condiciones favorables. Además, los esfuerzos por marcar depósitos amiloides con anticuerpos, proteína P amiloide del suero u otras sondas moleculares han proporcionado una cierta selectividad en la periferia de los tejidos, pero han generado pocas imágenes del interior de los mismos.
Los posibles ligandos para detectar agregados de A en cerebro vivo deben atravesar la barrera hematoencefálica intacta. Por tanto, es posible mejorar la absorción cerebral mediante el uso de ligandos con un tamaño molecular relativamente más pequeño (en comparación con el indicador rojo Congo) y una mayor lipofilidad. Las tioflavinas (S y T) muy conjugadas se usan comúnmente como colorantes para teñir los agregados de A de cerebro con EA (Elhaddaoui, A., et al., Biospectroscopy 1:351–356 (1995)).
Se ha publicado acerca de un radioindicador muy lipófilo, el [18F]FDDNP, para unirse tanto a ovillos (principalmente compuestos por proteína tau hiperfosforilada) como a placas (que contienen agregados de proteínas A ). (Shoghi– Jadid K, et al., Am J Geriatr Psychiatry. 2002;10: 24–35). Mediante el uso de la tomografía por emisión de positrones (PET), se publicó que este radioindicador marcó específicamente depósitos de placas y ovillos de nueve pacientes de EA y siete sujetos control. (Nordberg A. Lancet Neurol. 2004; 3:519–27). Con el uso de un nuevo procedimiento de análisis farmacocinético denominado tiempo de residencia relativo de la región cerebral de interés frente a la protuberancia anular, se demostró la existencia de diferencias entre los pacientes de EA y los sujetos control. El tiempo de residencia relativo fue significativamente mayor en los pacientes de EA. Esto se complica aún más debido al fascinante hallazgo de que la FDDNP compite con algunos AINES por la unión a fibrillas de A in vitro y a placas de A ex vivo (Agdeppa ED, et al.. 2001; Agdeppa ED, et al., Neuroscience. 2003;117:723–30).
Recientemente, se ha publicado la formación de imágenes de amiloide del cerebro de pacientes con EA mediante al uso de un derivado de benzotiazol–anilina, [11C]6–OH–BTA–1 (también denominado [11C]PIB). (Mathis C. A., et al., Curr Pharm Des. 2004;10:1469–92; Mathis C. A., et al., Arch. Neurol. 2005, 62:196–200). Al contrario de lo observado para [18F]FDDNP, [11C]6–OH–BTA–1 se une específicamente al A fibrilar �in vivo. Los pacientes diagnosticados de EA leve mostraron una notable retención de [11C]6–OH–BTA–1 en la corteza, de la que se sabe que contiene grandes cantidades de depósitos amiloides en la EA. En el grupo de pacientes de EA, la retención de [11C]6–OH–BTA–1 aumentó más destacadamente en la corteza frontal. También se observaron grandes aumentos
en las cortezas parietal, temporal y occipital, y en el cuerpo estriado. La retención de [11C]6–OH–BTA–1 fue equivalente en pacientes de EA y en sujetos control en zonas conocidas por no estar relativamente afectadas por la deposición amiloide (tales como la materia blanca subcortical, la protuberancia anular y el cerebelo). Recientemente, se ha estudiado otra sonda dirigida a placas de A marcada con 11C, un derivado de estilbeno, [11C]SB–13. La unión in vitro con el uso de [3H]SB–13 sugiere que el compuesto mostró una excelente afinidad de unión y que es posible medir claramente la unión en la materia gris cortical, pero no en la materia blanca en el caso de la EA. (Kung M–P, et al., Brain Res. 2004; 1025: 89–105). Se produjo una unión específica muy baja en los tejidos corticales homogenizados de los cerebros control. Los valores de Kd de [3H]SB–13 de los tejidos corticales homogenizados con EA fueron de 2,4 ± 0,2nM. Se observaron una capacidad de unión elevada y valores comparables (14–45 pmol/mg de proteína) (Id.). Como era de esperar, en los pacientes con EA, [11C]SB–13 mostró una acumulación elevada en la corteza frontal (presumiblemente, en la zona que contiene una alta densidad de placas de A ) de pacientes con EA leve a moderada, pero no en los sujetos control de la misma edad. (Verhoeff NP, et al., Am J Geriatr Psychiatry. 2004;12: 584–95).
Sería útil contar con una técnica no invasiva para formar imágenes y cuantificar los depósitos amiloides en un paciente. Además, sería útil tener compuestos que inhibieran la agregación de proteínas amiloides para formar depósitos amiloides y un procedimiento para determinar la capacidad de un compuesto para inhibir la agregación de proteínas amiloides.
Resumen de la invención
La presente invención proporciona nuevos compuestos de Fórmula I.
La presente invención también proporciona composiciones de diagnóstico que comprenden un compuesto de Fórmula I radiomarcado y un vehículo o diluyente farmacéuticamente aceptable.
La invención proporciona además un procedimiento para formar imágenes de depósitos amiloides, procedimiento que comprende introducir en un paciente una cantidad detectable de un compuesto de Fórmula I marcado, o de una sal, éster, amida o profármaco farmacéuticamente aceptable del mismo.
La presente invención también proporciona un compuesto de Formula I o una sal, éster, amida o profármaco farmacéuticamente aceptable del mismo para usarlo en la inhibición de la agregación de proteínas amiloides.
Otro aspecto más de la presente invención se dirige a procedimientos y compuestos intermedios útiles para sintetizar los compuestos de Fórmula I de generación de imágenes e inhibición de amiloides descritos en la presente memoria.
Descripción de las figuras
La Fig. 1 representa una película producto de la formación de imágenes de un compuesto de la presente invención.
La Fig. 2 representa la absorción cerebral y ósea de la estirilpiridina 2 en comparación con un análogo de estilbeno.
La Fig. 3 representa una autorradiografía con película que compara la estirilpiridina 2 con un análogo de estilbeno.
La Fig. 4 representa una curva de saturación de estirilpiridina 2 en homogenizados cerebrales con EA.
La Fig. 5 representa varios compuestos de la presente invención y sus respectivos datos de unión.
La Fig. 6 representa la autorradiografía in vitro de secciones cerebrales macromatriciales para compuestos de referencia.
La Fig. 7 representa la estabilidad in vitro de radioindicadores marcados con F–18 hacia fracciones microsómicas de hígado humano mezcladas. Los radioindicadores en PBS sin fracciones microsómicas sirvieron como control. Los valores (% de compuesto precursor invariable) son la media de los duplicados.
La Fig. 8 representa la unión específica de [18F]2 con tejidos cerebrales homogenizados con EA y control mezclados. Se diseccionaron la materia gris y la materia blanca de regiones corticales. Se detectó una unión muy específica principalmente en materia gris. Los valores representados son la media ± EEM de seis mediciones. Se observó una unión relativamente baja en los homogenizados de materia blanca. Por el contrario, los homogenizados de cerebro control, bien de materia gris o blanca, mostraron una unión específica significativamente inferior de [18F]2.
La Fig. 9 representa: perfil de CLAR del compuesto [18F]2 (parte superior); radioindicador UV del compuesto de referencia no radiactivo 2 (350 nm) (parte inferior). Condiciones de la CLAR: series Agilent 1100; columna de 18 C Phenomenex Gemini, 51 250 x 4,6 mm, tampón de CH3CN/amonio (1mM) 8/2 v/v, 1 ml/min. TR: 6,34 min (radioactivo), 6,05 min (UV). La diferencia entre los tiempos de retención se debió a la configuración del detector.
Descripción detallada de la invención
Un compuesto de Fórmula I:
o una de sus sales farmacéuticamente aceptables; en la que: n es uno. al menos uno, no más de tres, de A1, A2, A3, A4 y A5 es N, el resto son –CH o –CR2 según lo permitido; R1 es NRaRb(CH2)p , en el que Ra y Rb son independientemente hidrógeno o alquilo(C1–C4) y p es O; R2 es
en la que q es un número entero de 1 a 5; R30, R31 y R33 son, en cada caso, hidrógeno; Z se selecciona entre halógeno, benzoiloxilo sustituido con halógeno, benciloxilo sustituido con halógeno, fenilalquilo(C1–C4) sustituido con halógeno, ariloxilo sustituido con halógeno y arilo(C6–C10) sustituido con halógeno;
R7 y R8 son cada uno hidrógeno;
15 y en la que dicho halógeno, en cada caso, se selecciona entre I, 123I,125I,131I, Br, 76Br, 77Br, F y 18F.
Especialmente, los compuestos preferidos son aquéllos que contienen 18F. También se prefieren especialmente los compuestos que contienen 123I.
En realizaciones preferidas, R1 está bien en la posición meta o en la posición para con respecto al respectivo puente. Un valor preferido de R1 es NRaRb, en el que Ra y Rb son independientemente hidrógeno o alquilo(C1–C4).
20 En la presente realización, es preferible que el alquilo(C1–C4) sea metilo. Preferiblemente, uno entre Ra y Rb es hidrógeno, el otro es alquilo(C1–C4), tal como metilo. Lo más preferible es que tanto Ra como Rb sean metilo. También se prefiere cualquier grupo de profármacos que, tras su administración, produzca un valor preferido de R1. Tales grupos de profármacos son ampliamente conocidos en la técnica.
En realizaciones preferidas de la Fórmula I, R2 está bien en la posición meta o para con respecto al respectivo 25 puente. Lo más preferible es que q sea 1 a 4, especialmente, 3 ó 4.
Los compuestos útiles incluyen aquellos compuestos en los que al menos uno, no más de tres, de A1, A2, A3, A4 y A5 es N, y el resto son –CH o –CR2 según lo permitido. Es más preferible que N esté en la posición A4.
Los compuestos de Fórmula I preferidos incluyen aquellos compuestos en los que A4 es N que tienen la siguiente fórmula:
en la que Ra y Rb se seleccionan independientemente entre hidrógeno o alquilo(C1–C4), Z es como se describió anteriormente y q es un número entero de 1 a 5. Los ejemplos de compuestos preferidos incluyen:
Los compuestos de la presente invención también pueden contener un isótopo radiactivo de carbono como radiomarcador. Esto se refiere a un compuesto que comprende uno o más átomos de carbono radiactivos, preferiblemente, 11C, con una actividad específica por encima de la del nivel de fondo para ese átomo. A este respecto, es ampliamente conocido que hay elementos naturales presentes en forma de isótopos variables, algunos de los cuales son isótopos radiactivos. La radiactividad de los elementos naturales es el resultado de la distribución natural o la abundancia de estos isótopos, y es lo que comúnmente se denomina nivel de fondo. Los compuestos marcados con carbono de la presente invención tienen una actividad específica que es superior a la abundancia natural y que, por tanto, es superior al nivel de fondo. La composición reivindicada en la presente memoria que comprende uno o varios compuestos marcados con carbono de la presente invención tendrá una cantidad del compuesto que permitirá usar la composición como radioindicador, para formar imágenes, para radioterapia y similares.
En ciertas realizaciones de los compuestos revelados en la presente memoria, hay un halógeno, preferiblemente, 18F, ligado a la estructura de estirilpiridina a través de una cadena de PEG, que tiene un número variable de grupos etosilo. La estirilpiridina fluorada, 2, mostró una alta afinidad de unión (Ki = 2,5 ± 0,4nM). El análogo de dimetilamino mostró la mayor afinidad. Esto es contrario a los análogos de estilbeno, que tienden a poseer una mayor afinidad cuando son sustituidos con monometilamino. Como se muestra en los esquemas 1–3 de la presente memoria, el radiomarcaje se realizó correctamente, dando los compuestos diana. La síntesis del compuesto 2 del Esquema 5 se produjo en un tiempo de preparación de aproximadamente 60 min; rendimiento radioquímico del ~35% (descomposición corregida); pureza radioquímica de >98%; y actividad específica de aproximadamente 1.000 a aproximadamente 1.500 Ci/mmol. La biodistribución in vivo de una estirilpiridina pegilada con 18F en ratones normales presentó excelentes penetraciones en cerebro y lavados rápidos tras una inyección i.v. La autorradiografía de secciones cerebrales con EA de autopsia de 2 confirmó la unión específica con respecto a la presencia de placas de A .
Los valores preferibles en cuanto a arilo(C6–C10) incluyen fenilo, naftilo o tetrahidronaftilo. Los valores preferibles para heteroarilo incluyen tienilo, furilo, piranilo, pirrolilo, piridinilo, indolilo e imidazolilo. Los valores preferibles para heterociclo incluyen piperidinilo, pirrolidinilo y morfolinilo. Una realización preferida de un arilo(C6–C10), heteroarilo, heterociclo, heterociclo–alquilo(C1–C4) o cicloalquilo(C3–C6) contiene un anillo sustituido con uno de los siguientes: alquiltio(C1–C4), alquil(C1–C4)sulfonilo, metosilo, hidroxilo, dimetilamino o metilamino.
Los compuestos de Fórmula I también pueden estar solvatados, especialmente, hidratados. La hidratación se puede producir durante la fabricación de los compuestos o de las composiciones que comprenden los compuestos,
o a lo largo del tiempo debido a la naturaleza higroscópica de los compuestos. Además, los compuestos de la presente invención pueden existir en forma no solvatada, así como solvatada con disolventes farmacéuticamente aceptables, tales como agua, etanol y similares. En general, las formas solvatadas se consideran equivalentes a las formas no solvatadas a efectos de la presente invención.
Cuando alguna variable aparece más de una vez en cualquier constituyente o en la Fórmula I, su definición en cada aparición es independiente de su definición en cualquier otra aparición. Además, sólo se permiten combinaciones de sustituyentes y/o variables si tales combinaciones producen compuestos estables.
El término "alquilo", como se emplea en la presente memoria por sí mismo o como parte de otro grupo, se refiere a radicales tanto de cadena lineal como ramificada de hasta 8 carbonos, preferiblemente, de 6 carbonos, más preferiblemente, de 4 carbonos, tales como metilo, etilo, propilo, isopropilo, butilo, t–butilo e isobutilo.
El término "alcoxilo" se usa en la presente memoria para referirse a un radical alquilo de cadena lineal o ramificada, según lo definido anteriormente, a no ser que la longitud de la cadena se limite al mismo, unido a un átomo de oxígeno, que incluye, pero no se limita a, metosilo, etosilo, n–propoxilo, isopropoxilo y similares. Preferiblemente, la cadena de alcoxilo es de una longitud de 1 a 6 átomos de carbono, más preferiblemente, de una longitud de 1–4 átomos de carbono.
El término "monoalquilamina", como se emplea en la presente memoria solo o como parte de otro grupo, se refiere a un grupo amino que está sustituido con un grupo alquilo según lo definido anteriormente.
El término "dialquilamina", como se emplea en la presente memoria solo o como parte de otro grupo, se refiere a un grupo amino que está sustituido con dos grupos alquilo según lo definido anteriormente.
El término "halo" o "halógeno", empleado en la presente memoria solo o como parte de otro grupo, se refiere a cloro, bromo, flúor o yodo, y a sus isótopos. El término "radiohalógeno" se refiere específicamente a isótopos de halógeno radiactivos.
El término "haloalquilo", como se emplea en la presente memoria, se refiere a cualquiera de los grupos alquilo anteriores sustituidos con uno o más entre cloro, bromo, flúor o yodo, prefiriéndose el flúor y el cloro, tales como clorometilo, yodometilo, trifluorometilo, 2,2,2–trifluoroetilo y 2–cloroetilo.
El término "alquiltio", como se emplea en la presente memoria solo o como parte de otro grupo, se refiere a un tioéter de estructura: R–S, en la que R es un alquilo(C1–C4) según lo definido anteriormente.
El término "alquilsulfonilo", como se emplea en la presente memoria solo o como parte de otro grupo, se refiere a una sulfona de estructura: R–SO2, en la que R es un alquilo(C1–C4) según lo definido anteriormente.
El término "arilo", como se emplea en la presente memoria solo o como parte de otro grupo, se refiere a grupos aromáticos monocíclicos o bicíclicos que contienen de 6 a 12 carbonos en la parte del anillo, preferiblemente, 6–10 carbonos en la parte del anillo, tales como fenilo, naftilo o tetrahidronaftilo.
El término "heterociclo" o la expresión "anillo heterocíclico", como se usa en la presente memoria excepto que se indique lo contrario, representa un sistema de anillos mono–heterocíclicos de 5 a 7 miembros que puede estar saturado o insaturado, y que está constituido por átomos de carbono y de uno a tres heteroátomos seleccionados del grupo que está constituido por N, O y S, y en el que el heteroátomo de nitrógeno y azufre puede estar opcionalmente oxidado. Son especialmente útiles los anillos que contienen un nitrógeno combinado con un oxígeno
o un azufre, o dos heteroátomos de nitrógeno. Los ejemplos de tales grupos heterocíclicos incluyen piperidinilo, pirrolilo, pirrolidinilo, imidazolilo, imidazinilo, imidazolidinilo, piridilo, pirazinilo, pirimidinilo, oxazolilo, oxazolidinilo, isoxazolilo, isoxazolidinilo, tiazolilo, tiazolidinilo, isotiazolilo, homopiperidinilo, homopiperazinilo, piridazinilo, pirazolilo y pirazolidinilo, siendo los más preferibles tiamorfolinilo, piperazinilo y morfolinilo.
El término “heteroátomo” se usa en la presente memoria para referirse a un átomo de oxígeno (“O”), un átomo de azufre ("S") o un átomo de nitrógeno (“N”). Se apreciará que cuando el heteroátomo sea nitrógeno, puede formar un resto NRR, en el que los grupos R pueden ser independientemente uno del otro hidrógeno, alquilo(C1–C4), aminoalquilo(C2–C4), haloalquilo(C1–C4), halobencilo, o R1 y R2 se toman conjuntamente para formar un anillo heterocíclico de 5 a 7 miembros que tiene opcionalmente O, S o NRc en dicho anillo, en el que Rc es hidrógeno o alquilo(C1–C4).
El término “heteroarilo”, como se emplea en la presente memoria, se refiere a grupos que tienen de 5 a 14 átomos por anillo; 6, 10 ó 14 electrones de H compartidos en una matriz cíclica; y que contienen átomos de carbono y 1, 2, 3 ó 4 heteroátomos de oxígeno, nitrógeno o azufre (siendo los ejemplos de grupos heteroarilo: grupos tienilo, benzo[b]tienilo, nafto[2,3–b]tienilo, tiantrenilo, furilo, piranilo, isobenzofuranilo, benzoxazolilo, cromenilo, xantenilo, fenoxatiinilo, 2H–pirrolilo, pirrolilo, imidazolilo, pirazolilo, piridilo, pirazinilo, pirimidinilo, piridazinilo, indolizinilo, isoindolilo, 3H–indolilo, indolilo, indazolilo, purinilo, 4H–quinalizinilo, isoquinolilo, quinolilo, ftalazinilo, naftiridinilo, quinazolinilo, cinnolinilo, pteridinilo, 4aH–carbazolilo, carbazolilo, a, o y–carbolinilo, fenantridinilo, acridinilo, perimidinilo, fenantrolinilo, fenazinilo, isotazolilo, fenotiazinilo, isoxazolilo, furazanilo y fenoxazinilo).
El término “aralquilo” o “arilalquilo”, como se emplea en la presente memoria por sí mismo o como parte de otro 5 grupo, se refiere a grupos alquilo(C1–C6) según lo revelado anteriormente que tienen un sustituyente arilo, tal como bencilo, feniletilo o 2–naftilmetilo.
También se revelan en la presente memoria procedimientos para preparar los compuestos de Fórmula I y III.
La síntesis del derivado de estirilpiridina dimetilamino–sustituido 1 y su compuesto fluoropegilado 2 se muestra en el Esquema 1. El Compuesto 1 se obtuvo mediante una reacción de Wittig entre 4–(dimetilamino)bencilfofonato de 10 dietilo y 6–cloronicotinaldehído en presencia de terc–butóxido de potasio en DMF (rendimiento del 62%). Una alquilación directa del compuesto 1 con 2–(2–(2–fluoroetoxi)etoxi)etanol2 usando hidruro de sodio en THF produjo el compuesto fluoropegilado 2 (rendimiento del 33%), que se puede usar como patrón frío para el radiomarcaje. La preparación de derivado monometilamino–sustituido 6 se realizó mediante una ruta que se muestra en el Esquema
2. Una reacción de Wittig entre 4–nitrobencilfosfonato y 6–cloronicotinaldehído en presencia de metóxido de sodio
15 en metanol en condiciones de reflujo produjo el compuesto 3 en un alto rendimiento (88%). El Compuesto 3 se puede filtrar fácilmente tras la reacción y usarlo directamente para la siguiente etapa; no es necesario realizar una mayor purificación. La alquilación de 3 con 2–(2–(2–fluoroetoxi)etoxi)etanol usando hidruro de sodio en THF produjo el Compuesto 4 (rendimiento del 30%). El grupo nitro del Compuesto 4 se redujo usando cloruro de estaño en etanol para obtener el Compuesto 5 (rendimiento del 58%). La monometilación de 5 se realizó usando
20 paraformaldehído, metóxido de sodio y borohidruro de sodio para obtener el Compuesto 6 en un rendimiento relativamente alto (73%).
Para elaborar el derivado de estirilpiridina dimetilamino–sustituido marcado con F–18 [18F]2, se usó el tosilato 10 (Esquema 3) como precursor. La preparación de 10 se inició con una alquilación con microondas de 3 con trietilenglicol en DMF para obtener el Compuesto 7 (rendimiento del 77%). Entonces se redujo el grupo nitro de 7 en 25 una amina usando cloruro de estaño, dando el Compuesto 8 (rendimiento del 76%), tras lo que se realizó una dimetilación usando paraformaldehído, cianoborohidruro de sodio en ácido acético hasta obtener el Compuesto 9 en un alto rendimiento (95%). Primero se intentó la mesilación de 9, sin embargo, el mesilato de 9 fue muy inestable y se descompuso durante la preparación. La tosilación de 9 se realizó satisfactoriamente usando cloruro de tosilo en piridina para dar el tosilato 10 deseado (rendimiento del 41%) como precursor para fabricar [18F]2 radiomarcado.
Como referencia, los Esquemas 5–7 representan una ruta sintética para los compuestos de Fórmula III. El Esquema 5 representa una síntesis de varios compuestos intermedios útiles para la preparación de los compuestos. El Esquema 6 y 7 representan la síntesis de compuestos radiomarcados y no radiomarcados. En los Compuestos 17– 110, la letra “I” del nombre del compuesto significa “intermedio”.
ESQUEMA 5
Reactivos y condiciones (a) NIS, CH3CN, reflujo, 1 h; (b) F(CH2CH2O)3H, Ph3P, DIAD; THF, –5°C a T.A., 2 h; (c) (1) HOCH2CH2OTBDMS, Ph3P, DIAD, THF, –5 °C a T.A., 2 h; (2) HCl al 1% en EtOH al 95%, T.A., 1 h.
ESQUEMA 6
Reactivos y condiciones: (a) estirenos 4–sustituidos, K2CO3, BuNBr, Pd(OAC)2, DMF, 55–65°C; (b) (Bu 3Sn)2 Pd(PPh3)4, tolueno, 110°C; (c) K 2CO3 EtOH/THF, T.A., 2 kc (d) I2, THF, 0°C a T.A.; (e) TMSOTf, 2,6–lutidina; DCM; – 38°C a T.A..
ESQUEMA 7
Los complejos de Tc–99m se pueden preparar de la siguiente manera. Se disuelve una pequeña cantidad de compuesto no radiomarcado (1–2 mg) en 100 1l de EtOH y se mezcla con 200 1l de HCl (1N) y 1 ml de solución de Sn–glucoheptonato (que contiene 8–32 1g de SnCl2 y 80–320 1g de Na–glucoheptonato, pH 6,67) y 50 1l de solución de EDTA (0,1N). Luego se añade solución salina de [99mTc]pertecnetato (100–200 1l; que varía de 2–20
mCi). Se calienta la reacción durante 30 min a 100ºC y luego se enfría hasta la temperatura ambiente. Se analiza la mezcla de reacción en CCF (EtOH:NH3 conc. (9:1) para la formación del producto y se comprueba la pureza. La mezcla se puede neutralizar con tampón de fosfato hasta un pH 5,0.
Además, se revela en la presente memoria un procedimiento para preparar un complejo de tecnecio–99m haciendo reaccionar tecnecio–99m en forma de un pertecnetato en presencia de un agente reductor y, opcionalmente, un quelante adecuado con un compuesto que contiene Ch apropiado.
El agente reductor sirve para reducir el pertecnetato Tc–99m que es eluido del generador de molibdeno–tecnecio en una solución salina fisiológica. Los agentes reductores adecuados son, por ejemplo, ditionito, formamidina, ácido sulfínico, disulfinato de diaminoetano o agentes reductores metálicos adecuados, tales como Sn (II), Fe (II), Cu (I), Ti (III) o Sb (III). El Sn (II) ha demostrado ser particularmente adecuado.
Para la reacción de formación de complejos anteriormente mencionada, se hace reaccionar el tecnecio–99m con un compuesto apropiado de la invención como una sal o en forma de tecnecio unido a quelantes comparativamente débiles. En el último caso, el complejo de tecnecio–99m deseado se forma mediante intercambio de ligandos. Los ejemplos de quelantes adecuados para el radionucleido son ácidos dicarboxílicos, tales como ácido oxálico, ácido malónico, ácido succínico, ácido maleico, ácido ortoftálico, ácido málico, ácido láctico, ácido tartárico, ácido cítrico, ácido ascórbico, ácido salicílico o derivados de estos ácidos; compuestos de fósforo, tales como pirofosfatos; o enolatos. El ácido cítrico, ácido tartárico, ácido ascórbico, ácido glucoheptónico o un derivado de los mismos son quelantes particularmente adecuados a tal efecto, porque un quelato de tecnecio–99m con uno de estos quelantes sufre el intercambio de ligandos de una manera particularmente fácil.
El procedimiento más comúnmente usado para preparar complejos [TcvO]+3N2S2 se basa en la reducción con cloruro de estaño (II) de [99mTc]pertecnetato, el material inicial común. El procedimiento de marcaje normalmente se basa en una reacción de intercambio de ligandos de Tc–99m entre Tc–99m(Sn)–glucoheptonato y el ligando N2S2. La preparación de cloruro de estaño (II) y su conservación en forma de estaño (II) consistente es primordial para el éxito de la reacción de marcaje. Para estabilizar el ión de estaño sensible al aire, una práctica común en medicina nuclear consiste en usar un kit liofilizado, en el que el ión de estaño está en forma de polvo liofilizado mezclado con una cantidad en exceso de glucoheptonato bajo un gas inerte como el nitrógeno o el argón. La preparación de los kits de cloruro de estaño/glucoheptonato de sodio liofilizados garantiza que la reacción de marcaje sea reproducible y predecible. Los ligandos de N2S2 son habitualmente sensibles al aire (los tioles se oxidan fácilmente con el aire) y se producen reacciones posteriores que conducen a la descomposición de los ligandos. El procedimiento más conveniente y predecible para conservar los ligandos consiste en producir kits liofilizados que contienen 100–500 1g de los ligandos bajo argón o nitrógeno.
Cuando los compuestos de la presente invención son para usarse como agentes de formación de imágenes, deben estar marcados con isótopos de halógenos radiactivos adecuados. Aunque los isótopos marcados con 125I son útiles para las pruebas de laboratorio, en general, no serán útiles a los efectos de diagnóstico reales, debido a la vida media relativamente larga (60 días) y a la baja emisión gamma (30–65 Kev) de 125I. El isótopo 123I tiene una vida media de trece horas y una energía gamma de 159 KeV y, por tanto, se espera que el marcaje de ligandos para su uso a efectos de diagnóstico sería con este isótopo. Otros isótopos que se pueden usar incluyen 131I (vida media de 2 horas). Los isótopos de bromo adecuados incluyen 77Br y 76Br.
Los compuestos radiohalogenados de la presente invención tienden fácilmente a formarse a partir de materiales que se podrían proporcionar a los usuarios en kits. Los kits para formar los agentes de formación de imágenes pueden contener, por ejemplo, un vial que contenga una solución fisiológicamente adecuada de un compuesto intermedio de Fórmula I, a concentración y pH adecuados para las condiciones óptimas de formación de complejos. El usuario añadiría al vial una cantidad apropiada del radioisótopo, p.ej., de Na123I, y un oxidante, tal como peróxido de hidrógeno. Luego se puede administrar el ligando marcado resultante intravenosamente a un paciente, y formarse las imágenes de los receptores del cerebro mediante la medición de las fotoemisiones y emisiones de rayos gamma de los mismos.
Como la composición radiofarmacéutica según la presente invención se puede preparar fácilmente y de manera sencilla, el usuario puede llevar a cabo la preparación fácilmente. Por lo tanto, también se revela en la presente memoria un kit que comprende:
(1)
un compuesto no radiomarcado de la invención, compuesto que se encuentra opcionalmente en estado seco; y que también, opcionalmente, tiene un vehículo farmacéuticamente aceptable inerte y/o sustancias auxiliares añadidas al mismo; y
(2)
un agente reductor y, opcionalmente, un quelante; en el que los ingredientes (1) y (2) pueden estar opcionalmente combinados; y
además, en el que, opcionalmente, pueden estar incluidas instrucciones de uso con una explicación sobre cómo
llevar a cabo el procedimiento anteriormente descrito mediante la reacción de los ingredientes (1) y (2) con tecnecio–99m en forma de una solución de pertecnetato.
Ejemplos de agentes reductores y quelantes adecuados para el kit anterior se han enumerado anteriormente. El usuario puede obtener la solución de pertecnetato de un generador de molibdeno–tecnecio. Tales generadores se encuentran disponibles en una serie de instituciones que realizan procedimientos de radiodiagnóstico. Como se indica anteriormente, los ingredientes (1) y (2) pueden estar combinados, con la condición de que sean compatibles. Tal kit de monocomponentes, en el que los ingredientes combinados están preferiblemente liofilizados, es excelentemente adecuado para que el usuario lo haga reaccionar con la solución de pertecnetato de una manera sencilla.
Cuando se desee, el agente de diagnóstico radiactivo puede contener cualquier aditivo, tal como agentes controladores del pH (p.ej., ácidos, bases, tampones), estabilizadores (p.ej., ácido ascórbico) o agentes isotonificantes (p.ej., cloruro de sodio).
La expresión “sal farmacéuticamente aceptable”, como se usa en la presente memoria, se refiere a aquellas sales carboxilato o sales de adición de ácido de los compuestos de la presente invención que son, según criterios médicos bien fundados, adecuadas para su uso en contacto con los tejidos de pacientes sin provocar una indebida toxicidad, irritación, respuesta alérgica y similares, acorde con una proporción de riesgo/beneficio razonable, y eficaces para el uso pretendido, así como las formas zwiteriónicas, dentro de lo posible, de los compuestos de la invención. El término “sales” se refiere a sales de adición de ácido orgánicas e inorgánicas relativamente no tóxicas de los compuestos de la presente invención. También se incluyen aquellas sales derivadas de ácidos orgánicos no tóxicos, tales como ácidos mono– y dicarboxílicos alifáticos, por ejemplo, ácido acético, ácido alcanoico fenil– susituido, ácidos hidroxialcanoico y alcanodioico, ácidos aromáticos, y ácidos sulfónicos alifáticos y aromáticos. Estas sales se pueden preparar in situ durante el aislamiento final y la purificación de los compuestos o haciendo reaccionar por separado el compuesto purificado en su forma de base libre con un ácido orgánico o inorgánico adecuado, y aislando la sal así formada. Otras sales representativas incluyen sales bromhidrato, clorhidrato, sulfato, bisulfato, nitrato, acetato, oxalato, valerato, oleato, palmitato, estearato, laurato, borato, benzoato, lactato, fosfato, tosilato, citrato, maleato, fumarato, succinato, tartrato, naftilato mesilato, glucoheptonato, lactiobionato y laurilsulfonato, propionato, pivalato, ciclamato, isetionato, y similares. Estas pueden incluir cationes basados en metales alcalinos y alcalinotérreos, tales como de sodio, litio, potasio, calcio, magnesio y similares, así como cationes de amonio, amonio cuaternario y amina no tóxicos que incluyen, pero no se limitan a, amonio, tetrametilamonio, tetraetilamonio, metilamina, dimetilamina, trimetilamina, trietilamina, etilamina y similares. (Véase, por ejemplo, Berge S. M., et al., “Pharmaceutical Salts”, J. Pharm. Sci. 66: 1–19 (1977) que se incorpora en la presente memoria por referencia).
En la primera etapa del presente procedimiento de formación de imágenes, se introduce un compuesto marcado de Fórmula I en un tejido o un paciente en una cantidad detectable. El compuesto forma parte comúnmente de una composición farmacéutica y se administra al tejido o al paciente mediante procedimientos ampliamente conocidos por los expertos en la técnica.
La administración del compuesto marcado a un paciente puede ser mediante una vía de administración general o local. Por ejemplo, el compuesto se puede administrar bien oral, rectal, parenteral (intravenosa, intramuscular o subcutáneamente), intracisternal, intravaginal, intraperitoneal, intravesical, localmente (polvos, pomadas o gotas) o en forma de un pulverizado bucal o nasal. El compuesto marcado se puede administrar al paciente, de modo que sea distribuido por todo el cuerpo. Alternativamente, el compuesto marcado se puede administrar en un órgano o tejido específico de interés. Por ejemplo, es deseable localizar y cuantificar los depósitos amiloides del cerebro para diagnosticar o seguir el progreso de la enfermedad de Alzheimer en un paciente. Una de las características más deseables de un agente de formación de imágenes in vivo del cerebro es la capacidad para atravesar la barrera hematoencefálica intacta tras una inyección de bolo.
En una realización preferida de la invención, se introduce el compuesto marcado en un paciente en una cantidad detectable y, tras un tiempo suficiente para que el compuesto se asocie con los depósitos amiloides, se detecta el compuesto marcado no invasivamente dentro del paciente. En otra realización de la invención, se introduce un compuesto radiomarcado de Fórmula I en un paciente, se deja un tiempo suficiente para que el compuesto se asocie con los depósitos amiloides y luego se retira una muestra de tejido del paciente y el compuesto marcado del tejido se detecta fuera del paciente. En una tercera realización de la invención, se retira una muestra de tejido de un paciente y se introduce un compuesto marcado de Fórmula I en la muestra de tejido. Tras una cantidad de tiempo suficiente para que el compuesto se una a los depósitos amiloides, se detecta el compuesto.
El término “tejido” significa una parte del cuerpo de un paciente. Los ejemplos de tejidos incluyen cerebro, corazón, hígado, vasos sanguíneos y arterias. Una cantidad detectable es una cantidad de compuesto marcado necesaria para que se pueda detectar mediante el procedimiento de detección seleccionado. Los expertos en la técnica pueden determinar fácilmente la cantidad de un compuesto marcado que se introducirá en un paciente para
proporcionar la detección. Por ejemplo, se pueden dar cantidades crecientes del compuesto marcado a un paciente hasta que el compuesto se detecte mediante el procedimiento de detección seleccionado. Se introduce un marcador en los compuestos para proporcionar la detección de los compuestos.
El término "paciente” significa seres humanos y otros animales. Los expertos en la técnica también están familiarizados con la determinación de la cantidad del tiempo suficiente para que un compuesto se asocie con los depósitos amiloides. La cantidad de tiempo necesario se puede determinar fácilmente introduciendo una cantidad detectable de un compuesto marcado de Fórmula I en un paciente y luego detectando el compuesto marcado en diversos momentos tras la administración.
El término “asociado” significa una interacción química entre el compuesto marcado y el depósito amiloide. Los ejemplos de asociaciones incluyen enlaces covalentes, enlaces iónicos, interacciones hidrófilo–hidrófilo, interacciones hidrófobo–hidrófobo y complejos.
Los expertos en la técnica están familiarizados con los diversos modos de detectar los compuestos marcados. Por ejemplo, se pueden usar la generación de imágenes por resonancia magnética (MRI), la tomografía de emisión de positrones (PET) o la tomografía computerizada de emisión de un solo fotón (SPECT) para detectar compuestos radiomarcados. El marcador que se introduce en el compuesto dependerá del procedimiento de detección deseado. Por ejemplo, si se elige la PET como procedimiento de detección, el compuesto debe poseer un átomo emisor de positrones, tal como 11C o 18F.
El agente de diagnóstico radiactivo ha de tener suficiente radiactividad y concentración de radiactividad para garantizar un diagnóstico fiable. Por ejemplo, en el caso de que el metal radiactivo sea tecnecio–99m, se puede incluir habitualmente en una cantidad de 0,1 a 50 mCi en aproximadamente 0,5 a 5,0 ml en el momento de la administración. La cantidad de un compuesto de fórmula I puede ser aquélla suficiente para formar un compuesto quelato estable con el metal radiactivo.
El compuesto quelato así formado como agente de diagnóstico radiactivo es suficientemente estable y, por tanto, se puede administrar inmediatamente como tal o almacenarse hasta su uso. Cuando se desee, el agente de diagnóstico radiactivo puede contener cualquier aditivo, tal como agentes controladores del pH (p.ej., ácidos, bases, tampones), estabilizadores (p.ej., ácido ascórbico) o agentes isotonificantes (p.ej., cloruro de sodio).
La formación de imágenes de depósitos amiloides también se puede llevar a cabo cuantitativamente de manera que sea posible determinar la cantidad de depósitos amiloides.
Los compuestos preferidos para la formación de imágenes incluyen un radioisótopo, tal como 11C, 123I, 125I, 131I, 18F,76Br o 77Br.
Otro aspecto de la invención es un compuesto de fórmula I para su uso en la inhibición de la agregación de placas amiloides. La presente invención también proporciona una cantidad inhibidora de amiloides de un compuesto de la Fórmula I anterior para inhibir la agregación de proteínas amiloides para formar depósitos amiloides.
Los expertos en la técnica pueden determinar fácilmente una cantidad inhibidora de amiloides simplemente administrando un compuesto de Fórmula I a un paciente en cantidades crecientes hasta que se disminuya o detenga el crecimiento de depósitos amiloides. Se puede medir la velocidad de crecimiento mediante la formación de imágenes según lo descrito anteriormente o tomando una muestra de tejido de un paciente y observando los depósitos amiloides que contiene. Los compuestos de la presente invención se pueden administrar a un paciente a niveles de dosificación en el intervalo de aproximadamente 0,1 a aproximadamente 1.000 mg al día. Para un ser humano adulto normal con un peso corporal de aproximadamente 70 kg, basta con una dosis en el intervalo de aproximadamente 0,01 a aproximadamente 100 mg por kilogramo de peso corporal al día. Sin embargo, la dosis específica usada puede variar. Por ejemplo, la dosis puede depender de una serie de factores que incluyen las necesidades del paciente, la gravedad de la afección que se esté tratando y la actividad farmacológica del compuesto que se esté usando. La determinación de dosis óptimas para un determinado paciente es ampliamente conocida por los expertos en la técnica.
Los siguientes ejemplos son ilustrativos, pero no restrictivos, del procedimiento y de las composiciones de la presente invención. Hay otras modificaciones y adaptaciones adecuadas de la variedad de condiciones y parámetros que se encuentran normalmente y que son evidentes para los expertos en la técnica, que pertenecen al espíritu y alcance de la invención.
Todos los reactivos usados en la síntesis fueron productos comerciales y se usaron sin mayor purificación a no ser que se indique lo contrario. Los espectros RMN de 1H se obtuvieron en un espectrómetro DPX de Bruker (200 MHz) en CDCl3. Los desplazamientos químicos se presentan como valores 5 (partes por millón) con respecto al TMS interno. Las constantes de acoplamiento se presentan en hercios. La multiplicidad se define por s (singlete), d (doblete), t (triplete), a (ancho), m (multiplete). Los análisis elementales fueron realizados por Atlantic Microlab INC.
Para cada procedimiento, "procesamiento estándar" se refiere a las siguientes etapas: adición del disolvente orgánico indicado, lavado de la capa orgánica con agua y luego con salmuera, separación de la capa orgánica de la capa acuosa, secado de las capas orgánicas combinadas con sulfato de sodio anhidro, filtración del sulfato de sodio y eliminación del disolvente orgánico bajo presión reducida.
Ejemplos
Ejemplo 1
Síntesis del Compuesto 2
(E)–2–Cloro–5–(4–dimetilaminoestiril)piridina (1)
Se añadió terc–butóxido de potasio (99 mg; 0,89 mmol) a una solución de (4–dimetilamino–bencil)–fosfonato de dietilo (80 mg; 0,30 mmol) en DMF anhidro (5,0 ml) a 0ºC. Luego se añadió aldehído de 2–cloro–5–piridilo (42 mg; 0,30 mmol). Se calentó la mezcla de reacción hasta la temperatura ambiente y se agitó durante 4 h. Se añadió agua y se extrajo la mezcla con MeOH/DCM (1:9, v/v). Se separó la capa orgánica, se lavó con salmuera, se secó sobre sulfato de sodio y se evaporó. Se purificó el residuo mediante CCFP (hexanos al 20% en DCM como disolvente revelador), dando el producto 1 (48 mg; rendimiento: 62%). RMN de 1H (200 MHz, CDCl3): 5 8,42 (1H, d, J = 2,2 Hz), 7,77 (1H, d, d, J1 = 8,4 Hz, J2 = 2,4 Hz), 7,41 (2H, d; J = 8,6 Hz), 7,27 (1H, d, J = 8,2 Hz), 7,08 (1H, d, J = 16,4 Hz), 6,77 (3H, m), EMAR (IE) m/z calcd. para [C13H9ClN2O2]+ 260,0353.
(E)–2–(2–(2–(2–Fluoroetoxi)etoxi)etoxi)–5–(4–dimetilaminoestiril)piridina (2)
Se añadió hidruro de sodio (95%; 10 mg; 0,39 mmol) a una solución de 2–(2–(2–fluoroetoxi)etoxi)etanol (39 mg; 0,26 mmol) en DMF anhidro (5,0 ml). Tras agitar hasta la temperatura ambiente durante 20 min, se añadió el Compuesto 5 (35 mg; 0,13 mmol) y se calentó la mezcla de reacción hasta 100ºC durante 2 h. Tras enfriar hasta la temperatura ambiente, se añadió agua y se extrajo la mezcla de reacción con acetato de etilo. Se separó la capa orgánica, se lavó con salmuera, se secó sobre sulfato de sodio anhidro y se evaporó. Se purificó el residuo mediante CCFP. (MeOH al 4% en DCM como disolvente revelador), dando el producto 2 (16 mg; rendimiento: 32,9%). RMN de 1H (200 MHz, CDCl3): 5 8,14 (1H, d, J = 2,4 Hz), 7,76 (1H, d, d, J1 = 8,6 Hz, J2 = 2,4 Hz), 7,39 (2H, d, J = 8,8 Hz), 6,87 (2H, m), 6,76 (3H, m), 4,53 (2H, d, t, J1 = 47,6 Hz, J2 = 4,2 Hz), 4,50 (2H, t, J = 4,8 Hz), 3,85 (3H, m), 3,70 (5H, m), 2,99 (6H, s). EMAR (IE) m/z calcd. para [C21H28N2O4]+ 372,2049.
Ejemplo 2
Síntesis del Compuesto 6
(E)–2–Cloro–5–(4–nitroestiril)piridina (3):
Se añadió lentamente metóxido de sodio (1M en metanol; 5,0 ml) a una solución de (4–nitro–bencil)–fosfonato de dietilo (546 mg; 2,0 mmol) y aldehído de 2–cloro–5–piridilo (283 mg; 2,0 mmol) en metanol (5,0 ml). Luego se sometió la mezcla de reacción a reflujo durante 1 h. Tras enfriar hasta 0ºC, se filtró el precipitado amarillo y se lavó con metanol frío, obteniéndose el producto 3 (458 mg; rendimiento: 88%), que se usó directamente para la siguiente etapa sin mayor purificación. 3: RMN de 1H (200 MHz, CDCl3): 5 8,53 (1H, d, J = 2,4 Hz), 8,25 (2H, d, J = 8,8 Hz), 7,85 (1H, d, d, J1 = 8,4 Hz, J2 = 2,4 Hz), 7,65 (2H, d, J = 8,8 Hz), 7,36 (1H, d, J = 8,4 Hz), 7,19 (2H, s), EMAR (IE) m/z calcd. para [C13H9ClN2O2]+ 260,0353.
(E)–2–(2–(2–(2–Fluoroetoxi)etoxi)etoxi)–5–(4–nitroestiril)piridina (4)
Bajo la protección de una atmósfera de nitrógeno, se añadió 2–(2–(2–fluoroetoxi)–etoxi)–etanol (60 mg; 0,39 mmol) a una mezcla de hidruro de sodio (26,4 mg; dispersión al 60% en aceite mineral; 0,66 mmol) en DMF anhidro (5 ml) a 0°C. Se agitó la mezcla a temperatura ambiente dur ante media hora y se añadió compuesto 3 (85,7 mg; 0,33 mmol). Se calentó la mezcla de reacción hasta 100°C durante 2 horas y luego se enfrió. Se añadieron acetato de etilo y agua, se separó la capa orgánica, se lavó con salmuera, se secó sobre sulfato de sodio anhidro y se evaporó. Se purificó el residuo mediante CCFP (MeOH al 2% en DCM como disolvente revelador), dando el producto 4 (37 mg; rendimiento: 30%): RMN de 1H (200 MHz, CDCl3): 5 8,22 (3H, d, J = 8,8 Hz), 7,84 (1H, d, d, J1 = 8,6 Hz, J2 = 2,4 Hz), 7,61 (2H, d, J = 8,8 Hz), 7,20 (1H, d, J = 16,4 Hz), 7,02 (1H, d, J = 16,4 Hz), 6,84 (1H, d, J = 8,6 Hz), 4,53 (2H, d, t, J1 = 47,6 Hz, J2 = 4,2 Hz), 4,52 (2H, t, J = 4,8 Hz), 3,85 (3H, m), 3,70 (5H, m); EMAR (IE) m/z calcd. para [C19H21FN2O5]+ 376,1435.
(E)–2–(2–(2–(2–Fluoroetoxi)etoxi)etoxi)–5–(4–aminoestiril)piridina (5)
Se disolvió el Compuesto 4 (34 mg; 0,09 mmol) en etanol (5 ml) seguido por la adición de cloruro de estaño (51,4 mg; 0,27 mmol) y HCl concentrado (0,25 ml). Se sometió la mezcla de reacción a reflujo durante 2 horas y se
enfrió. Se usó NaOH 2N para ajustar el pH hasta 10. Se añadió diclorometano y se separó la capa orgánica, se lavó con salmuera, se secó sobre sulfato de sodio anhidro y se evaporó. Se purificó el residuo mediante CCFP (MeOH al 3% en DCM como disolvente revelador), dando el producto 5 (18 mg; rendimiento: 58%): RMN de 1H (200 MHz, CDCl3): 5 8,14 (1H, d, J = 2,2 Hz), 7,76 (1H, d, d, J1 = 8,6 Hz, J2 = 2,4 Hz), 7,32 (2H, d, J = 8,4 Hz), 6,80 (5H, m), 4,53 (2H, d, t, J1 = 47,6 Hz, J2 = 4,2 Hz), 4,49 (2H, t, J = 4,8 Hz), 3,85 (3H, m), 3,70 (5H, m), 1,8 –3,0 (2H, s a); EMAR (IE) m/z calcd. para [C19H23FN2O3]+ 376,1693.
(E)–2–(2–(2–(2–Fluoroetoxi)etoxi)etoxi)–5–(4–metilaminoestiril)piridina (6)
Se añadió metóxido de sodio (1M en metanol, 0,23 ml) a una solución del Compuesto 5 (15,8 mg; 0,046 mmol) en metanol (5 ml) seguido por la adición de paraformaldehído (6,6 mg; 0,23 mmol). Se sometió la mezcla de reacción a reflujo durante 1,5 horas y luego se enfrió hasta 0ºC en un baño con hielo. Se añadió borohidruro de sodio con precaución (10,4 mg; 0,27 mmol). Se sometió la mezcla a reflujo durante 1 hora y se enfrió. Se añadieron diclorometano y agua. Se separó la capa orgánica, se lavó con salmuera, se secó sobre sulfato de sodio anhidro y se evaporó. Se purificó el residuo mediante CCFP (MeOH al 3% en DCM como disolvente revelador), dando el producto 6 (12 mg; rendimiento: 73%): RMN de 1H (200 MHz, CDCl3): 5 8,14 (1H, d, J = 2,2 Hz), 7,76 (1H, d, d, J1 = 8,6 Hz, J2 = 2,4 Hz), 7,35 (2H, d, J = 8,6 Hz), 6,92 (1H, d, J = 16,4 Hz), 6,80 (1H, d, J = 16,4 Hz), 6,76 (2H, d, J = 8,6 Hz), 4,53 (2H, d, t, J1 = 47,6 Hz, J2 = 4,2 Hz), 4,49 (2H, t, J = 4,8 Hz), 3,85 (3H, m), 3,70 (5H, m), 2,88 (3H, s). EMAR (IE) m/z calcd. para [C20H25FN2O3]+ 360,1849.
Ejemplo 3
Síntesis del Compuesto 10
(E)–2–(2–(2–(2–Hidroxietoxi)etoxi)etoxi)–5–(4–nitroestiril)piridina (7)
Se introdujo la mezcla de carbonato de potasio (158,7 mg; 1,15 mmol), Compuesto 3 (100 mg; 0,38 mmol) y trietilenglicol (576 mg; 3,8 mmol) en DMF anhidro (5,0 ml) en un vial para microondas (de Biotage) cerrado herméticamente y se sometió a una radiación de microondas (sistema iniciador de Biotage) a 180°C durant e 25 min. Tras enfriar hasta la temperatura ambiente, se añadió agua y se extrajo la mezcla de reacción con acetato de etilo. Se separó la capa orgánica, se lavó con salmuera, se secó sobre sulfato de sodio anhidro y se evaporó. Se purificó el residuo mediante CCFP (MeOH al 4% en DCM como disolvente revelador), dando el producto 7 (110 mg; rendimiento: 77%): RMN de 1H (200 MHz, CD4Cl3): 5 8,20 (3H, m), 7,83 (1H, d, d, J1 = 8,6 Hz, J2 = 2,4 Hz), 7,61 (2H, d, J = 8,8 Hz), 7,10 (2H, m) 6,84 (1H, d, J = 8,6 Hz), 4,53 (2H, t, J = 4,8 Hz), 3,88 (2H, t, J = 4,8 Hz), 3,71 (6H, m), 3,61 (2H, m), 2,10 (1H, s a), EMAR (IE) m/z calcd. para [C19H22N2O6]+ 374,1478.
(E)–2–(2–(2–(2–Hidroxietoxi)etoxi)etoxi)–5–(4–aminoestiril)piridina (8)
Se añadió cloruro de estaño (202,8 mg; 1,07 mmol) a una solución del Compuesto 7 (100 mg; 0,27 mmol) en etanol (10 ml) tras lo que se añadió HCl concentrado (0,5 ml). Se sometió la mezcla de reacción a reflujo durante 1,5 h y luego se enfrió hasta 0ºC. Se recogió el precipitado amarillo mediante filtración y luego se suspendió en acetato de etilo. Se añadió NaHCO3 saturado para ajustar el pH hasta 9. Se separó la capa orgánica, se secó sobre sulfato de sodio anhidro y se evaporó. Se purificó el residuo mediante CCFP (MeOH al 5% en DCM como disolvente revelador), dando el producto 8 (70 mg; rendimiento: 76%): RMN de 1H (200 MHz, CDCl3): 5 8,12 (1H, d, J = 2,4 Hz), 7,73 (1H, d, d, J1 = 8,6 Hz, J2 = 2,4 Hz), 7,29 (2H, d, J = 8,5 Hz), 6,84 (2H, m), 6,75 (1H, d, J = 8,6 Hz), 6,69 (2H, d, J = 8,5 Hz), 4,48 (2H, t, J = 4,8 Hz), 3,86 (2H, t, J = 4,8 Hz), 3,71 (6H, m), 3,60 (2H, m), 3,32 (3H, s a), EMAR (IE) m/z calcd. para [C19H24N2O4]+ 344,1736.
(E)–2–(2–(2–(2–Hidroxietoxi)etoxi)etoxi)–5–(4–dimetilaminoestiril)piridina (9)
Se añadió cianoborohidruro de sodio (36 mg; 0,57 mmol) a una solución del Compuesto 8 (65 mg; 0,19 mmol) y paraformaldehído (57 mg; 1,9 mmol) en ácido acético (10 ml). Se agitó la mezcla de reacción a temperatura ambiente durante una noche y se vertió sobre hielo. Se usó bicarbonato sódico hasta ajustar el pH hasta 9. Se extrajo la mezcla de reacción con acetato de etilo. Se separó la capa orgánica, se lavó con salmuera, se secó sobre sulfato de sodio anhidro y se evaporó. Se purificó el residuo mediante CCFP (MeOH al 5% en DCM como disolvente revelador), dando el producto 9 (67 mg; rendimiento: 95%): RMN de 1H (200 MHz, CDCl3): 5 8,14 (1H, d, J = 2,4 Hz), 7,76 (1H, d, d, J1 = 8,6 Hz, J2 = 2,4 Hz), 7,39 (2H, d, J = 8,8 Hz), 6,87 (2H, m), 6,76 (3H, m), 4,50 (2H, t, J = 4,8 Hz), 3,87 (2H, t, J = 4,8 Hz), 3,70 (6H, m), 3,61 (2H, m), 2,98 (6H, s), 2,49 (1H, s a), EMAR (IE) m/z calcd. para [C21H28N2O4]+ 372,2049.
(E)–2–(2–(2–(2–Tosiloxietoxi)etoxi)etoxi)–5–(4–dimetilaminoestiril)piridina (10)
Se añadió cloruro de tosilo (52 mg; 0,27 mmol) a una solución del Compuesto 9 (43 mg; 0,116 mmol) en piridina (5,0 ml) a 0°C. Se agitó la mezcla de reacción a 0°C durante 1 h y luego se calentó hasta la temperatura ambiente y se agitó durante 3 h. Se añadió agua y se extrajo la mezcla de reacción con acetato de etilo. Se separó la capa
orgánica, se lavó con salmuera, se secó sobre sulfato de sodio y se evaporó. Se purificó el residuo mediante CCFP (MeOH al 4% en DCM como disolvente revelador), dando el producto 10 (25 mg; rendimiento: 41%): RMN de 1H (200 MHz, CDCl3): 5 8,14 (1H, d, J = 2,0 Hz), 7,76 (3H, m), 7,39 (2H, d, J = 8,8 Hz), 7,32 (2H, d, J = 8,0 Hz), 6,87 (2H, m), 6,75 (3H, m), 4,46 (2H, t, J = 4,6 Hz), 4,16 (2H, t, J = 4,8 Hz), 3,81(2H, t, J = 4,8 Hz), 3,66 (6H, m), 2,99 (6H, s), 2,43 (3H, s), EMAR (IE) m/z calcd. para [C28H34N2O6S]+ 526,2138.
Ejemplo de referencia 4
Síntesis del Compuesto 11a
a. Síntesis de los Compuestos intermedios I8 y I9
2–Hidroxi–3–bromo–5–yodopiridina (I8)
Siguiendo un procedimiento anteriormente publicado (Meana A, et al, Synlett 2003, 1678–1682), se preparó el Compuesto I8 a partir de N–yodosuccinimida (2,48 g; 11,0 mmol) y 3–bromo–2–hidroxipiridina I7 (1,74 g; 10,0 mmol) en forma de sólido marrón pálido (2,55 g; 85%). RMN de 1H (DMSO–d6) 5 12,27 (s a, 1H), 8,08 (d, 1H, J = 2,3 Hz), 7,71 (d, 1H, J = 2,3 Hz).
{2–[2–(2–Fluoroetoxi)etoxi]etoxi} –3–bromo–5–yodopiridina (19)
A una suspensión en agitación de I8 (0,393 g; 1,3 mmol), 2–(2–(2–fluoroetoxi)etoxi)etanol (0,200 g; 1,3 mmol) y PPh3 (0,511 g; 1,95 mmol) en 10 ml de THF a –10°C, se a ñadieron gotas de azodicaboxilato de diisopropilo (DIAD, 0,394 g; 1,95 mmol) en 5 ml de THF. Se retiró el baño de sal y hielo, y se mantuvo la reacción a temperatura ambiente (t.a.) durante 2 h. Se concentró la solución de reacción y se purificó mediante CF (MeOH/CHCl3, 1/99), proporcionando 19, un líquido viscoso incoloro (0,423 g; 75%). RMN de 1H 5 8,21 (d, 1H, J = 2,0 Hz), 8,02 (d, 1H, J = 2,0 Hz), 4,66 (t, 1H, J = 4,1 Hz), 4,50–4,39 (m, 3H), 3,89–3,64 (m, 8H). RMN de 13C 5 159,4; 151,2; 148,5; 108,5; 84,9; 81,6; 81,5; 71,1; 71,0; 70,8; 70,4; 69,3; 66,9. EMAR calcd. para C11H14BrFINO3 (M+): 432,9186; encontrada: 432,9173.
b. Síntesis del Compuesto 11a
(E)–(5–Bromo–6–{2–[2–(2–fluoroetoxi)etoxi]etoxi}piridin–3–il)–2–4–dimetilaminofenil)–etileno (11a)
Se desoxigenó una mezcla de 4–dimetilaminoestireno (0,110 g; 0,75 mmol), I9 (0,217 g; 0,5 mmol), K2CO3 (0,173 g; 1,25 mmol), bromuro de tetrabutilamonio (TBAB, 0,322 g; 1,0 mmol) y acetato de paladio (Pd(OAc)2, 0,006 g, 0,025 mmol) en 2 ml de DMF purgando en nitrógeno durante 15 min, y luego se calentó hasta 65°C durante 2 h. Se enfrió la mezcla de reacción hasta la T.A. y se sometió a un procesamiento estándar con acetato de etilo (EtOAc). Se purificó el producto crudo mediante CF (EtOAc/hexanos, 30/70) y dio como resultado 11a en forma de un sólido amarillo claro (0,178 g; 79%). RMN de 1H 5 8,08 (d, 1H, J = 2,1 Hz), 8,00 (d, 1H, J = 2,1 Hz), 7,39 (d, 2H, J = 8,8 Hz), 6,92 (d, 1H, J= 16,3 Hz), 6,74 (d, 1H, J = 16,3 Hz), 6,72 (d, 2H, J = 8,1 Hz), 4,69 (t, 1H, J = 4,2 Hz), 4,55 (t, 2H, J = 4,8 Hz), 4,45 (t, 1H, J = 4,2 Hz), 3,94–3,68 (m, 8H), 3,00 (s, 6H). RMN de 13C 5 158,3; 150,4; 143,5; 138,0; 129,6; 129,5; 127,7; 125,2; 118,8; 112,5; 107,5; 85,0; 81,6; 71,2; 71,0; 70,8; 70,4; 69,6; 66,7; 40,5. EMAR calcd. para C21H26BrFN2O3 (M+), 452,1111; encontrada: 452,1099.
Ejemplo de referencia 5
Síntesis del Compuesto 11b
(E)–(5–Bromo–6–{2–[2–(2–fluoroetoxi)etoxi]etoxi}piridin–3–il)–2–(4–metilaminofenil)–etileno (11b)
Se preparó el Compuesto 11b a partir de 4–metilaminoestireno (0,073 g; 0,55 mmol) y I9 (0,217 g; 0,50 mmol) en forma de un líquido viscoso amarillo claro (0,113 g; rendimiento del 52%). RMN de 1H 5 8,07 (d, 1H, J = 2,1 Hz), 8,00 (d, 1H, J = 2,1 Hz), 7,35 (d, 2H, J = 8,6 Hz), 6,91 (d, 1H, J = 16,3 Hz), 6,74 (d, 1H, J = 16,3 Hz), 6,60 (d, 2H, J = 8,6 Hz), 4,69 (t, 1H, J = 4,2 Hz), 4,55 (t, 2H, J = 4,8 Hz), 4,45 (t, 1H, J = 4,2 Hz), 3,94–3,68 (m, 8H), 2,88 (s, 3H). RMN de 13C 5158,4; 149,5; 143,6; 138,0; 129,8; 129,5; 127,9; 126,1; 118,9; 112,6; 107,5; 85,0; 81,7; 71,2; 71,1; 70,8; 70,4; 69,6; 66,8; 30,7. EMAR calcd. para C20H24BrFN2O3 (M+), 438,0954; encontrada: 438,0967.
Ejemplo de referencia 6
Síntesis del Compuesto 11e
(E)–(5–Bromo–6–{2–[2–(2–fluoroetoxi)etoxi]etoxi}piridin–3–il)–2–[4–N–metil–4–N–(terc–butiloxicarbonil)amino– fenil]–etileno (11c)
Se preparó el Compuesto 11c a partir de 4–N–metil–4–N–(terc–butiloxicarbonil)aminoestireno (0,219 g; 0,94 mmol)
y I9 (0,273 g; 0,63 mmol) en forma de un líquido viscoso blanco (0,319 g; rendimiento del 94%). RMN de 1H 5 8,12 (d, 1H, J = 2,1 Hz), 8,03 (d, 1H, J = 2,1 Hz), 7,44 (d, 2H, J = 8,6 Hz), 7,25 (d, 2H, J = 9,6 Hz), 6,94 (d, 2H, J = 2,1 Hz), 4,69 (t, 1H, J = 4,2 Hz), 4,56 (t, 2H, J = 4,9 Hz), 4,45 (t, 1H, J = 4,2 Hz), 3,94–3,68 (m, 8H), 3,28 (s, 3H), 1,48 (s, 9H). RMN de 13C 5 158,8; 154,5; 144,0; 143,5; 138,2; 133,6; 128,5; 128,4; 126,8; 126,6; 125,4; 122,9; 107,4; 84,8; 81,4; 80,4; 71,0; 70,9; 70,6; 70,2; 69,4; 66,7; 53,5; 37,1; 28,4. EMAR calcd. para C25H32BrFN2O5 (M+), 538,1479; encontrada: 538,1476.
(E)–(5–Bromo–6–{2–[2–(2–fluoroetoxi)etoxi]etoxi}piridin–3–il)–2–(4–acetoxifenil)–etileno (11d)
Se preparó el Compuesto 11d a partir de 4–acetoxiestireno (0,122 g; 0,75 mmol) y I9 (0,217 g; 0,5 mmol) en forma de un líquido viscoso blanco (0,181 g; rendimiento del 77%). RMN de 1H 5 8,12 (d, 1H, J = 2,1 Hz), 8,03 (d, 1H, J = 2,1 Hz), 7:50 (d, 2H, J = 8,6 Hz), 7,10 (d, 2H, J = 8,6 Hz), 6,94 (d, 2H, J = 3,3 Hz), 4,69 (t, 1H, J = 4,2 Hz), 4,56 (t, 2H, J = 4,9 Hz), 4,45 (t, 1H, J = 4,2 Hz), 3,94–3,68 (m, 8H), 2,32 (s, 3H), 1,48 (s, 9H). RMN de 13C 5 169,3; 158,9; 150,3; 144,1; 138,2; 134,5; 128,24; 128,16; 127,4; 123,4; 121,9; 107,5; 84,8; 81,3; 71,0; 70,9; 70,6; 70,3; 69,4; 66,7; 21,1. EMAR calcd. para C21H23BrFNO5 (M+), 467,0744; encontrada: 467,0731.
(E)–(5–Bromo–6–{2–[2–(2–fluoroetoxi)etoxi]etoxi}piridin–3–il)–2–(4–hidroxifenil)–etileno (11e)
Se colocaron acetato 11d (0,145 g; 0,31 mmol) y K2CO3 (0,064 g, 0,465 mmol) en EtOH/THF (5 ml/5 ml) y se agitó la mezcla de reacción a T.A. durante 2 h. Tras el procesamiento estándar con EtOAc, se purificó el producto crudo mediante CCFP, dando 11e en forma de un sólido blanco (0,128 g; 97%). RMN de 1H 5 8,07 (d, 1H, J = 2,1 Hz), 7,99 (d, 1H, J = 2,1 Hz), 7,35 (d, 2H, J = 8,6 Hz), 6,96–6,74 (m, 4H), 5,22 (s a, 1H), 4,69 (t, 1H, J = 4,2 Hz), 4,54 (t, 2H, J = 4,8 Hz), 4,46 (t, 1H, J = 4,2 Hz), 3,94–3,68 (m, 8H). RMN de 13C 5 158,5; 156,4; 143,6; 138,2; 129,2; 129,0; 127,9; 120,7; 116,0; 107,6; 84,9; 81,6; 71,1; 71,0; 70,8; 70,4; 69,6; 66,8. EMAR calcd. para C19H21BrFNO4 (M+), 425,0638; encontrada: 425,0651.
Ejemplo de referencia 7
Síntesis del Compuesto 12b
(E)–(5–tri–Butilestanil–6–{2–[2–(2–fluoroetoxi)etoxi]etoxi}piridin–3–il)–2–(4–metilaminofenil)–etileno (12b)
Se preparó el Compuesto 12b a partir de 11b (0,069 g; 0,156 mmol) en forma de un aceite amarillo claro (0,068 g; rendimiento del 68%). RMN de 1H 5 8,10 (d, 1H, J = 2,5 Hz), 7,80 (d, 1H, J = 2,5 Hz), 7,36 (d, 2H, J = 8,6 Hz), 6,92 (d, 1H, J = 16,3 Hz), 6,80 (d, 1H, J = 16,3 Hz), 6,61 (d, 2H, J = 8,6 Hz), 4,69 (t, 1H, J = 4,2 Hz), 4,45 (t, 3H, J = 5,1 Hz), 3,83 (t, 3H, J = 4,4 Hz), 3,71–3,66 (m, 5H), 2,88 (s, 3H), 1,68–1,48 (m, 6H), 1,43–1,25 (m, 6H), 1,15–1,02 (m, 6H), 0,91 (t, 9H, J = 7,1 Hz). RMN de 13C 5 166,8; 149,1; 145,4; 143,6; 127,8; 127,7; 127,0; 123,8; 121,2; 112,6; 85,0; 81,6; 71,1; 70,9; 70,8; 70,5; 70,1; 65,0; 30,8; 29,5; 29,3; 29,1; 28,1; 27,5; 26,9; 13,9; 13,4; 13,3; 9,9; 6,6; 6,4. EMAR calcd. para C32H51FN2O)Sn (M+), 650,2906; encontrada: 650,2894.
Ejemplo de referencia 8
Síntesis del Compuesto 12e
(E)–(5–tri–Butilestanil–6–{2–[2–(2–fluoroetoxi)etoxi]etoxi}piridin–3–il)–2–(4–hidroxifenil)–etileno (12e)
Se preparó el Compuesto 12e a partir de 11e (0,032 g; 0,075 mmol) en forma de un líquido viscoso blanco (0,040 g; rendimiento del 84%). RMN de 1H 5 8,11 (d, 1H, J = 2,5 Hz), 7,82 (d, 1H, J = 2,5 Hz), 7,39 (d, 2H, J = 8,6 Hz), 6,98– 6,74 (m, 4H), 5,19 (s a, 1H), 4,71,4,66 (m, 1H), 4,48–4,43 (m, 3H), 3,90–3,62 (m, 8H), 1,70–1,02 (m, 18H), 0,91 (t, 9H, J= 7,1 Hz). RMN de 13C 5 166,9; 156,0; 145,4; 1,44,0; 130,1; 127,9; 127,6; 127,4; 124,3; 123,0; 115,9; 85,0; 81,6; 71,0; 70,9; 70,7; 70,5; 70,0; 65,2; 29,5; 29,3; 29,1; 28,0; 27,5; 26,9; 13,9; 13,4; 13,3; 9,9; 6,6; 6,4. EMAR calcd. para C31H48FNO4Sn (M+): 637,2589; encontrada: 637,2573.
Ejemplo de referencia 9
Síntesis del Compuesto 13a
(E)–(5–tri–Butilestanil–6–{2–[2–(2–fluoroetoxi)etoxi]etoxi}piridin–3–il)–2–(4–dimetilaminofenil)–etileno (12a)
Se calentó una mezcla de 11a (0,052 g; 0,115 mmol), bis(tributilestaño) ((Bu3Sn)2, 0,333 g; 0,57 mmol) y tetraquistrifenilfosfina de paladio (Pd(PPh3)4, 0,013 g, 10% molar) en tolueno a 110°C durante 18 h. Se enfrió la solución de reacción hasta la T.A. y se trató con 5 ml de KF al 10%. Tras agitar vigorosamente durante otras 0,5 h, el procesamiento estándar con EtOAc y la siguiente CF (EtOAc/hexanos, 25/75) proporcionó 12a en forma de un aceite amarillo claro (0,052 g; 68%). RMN de 1H 5 8,11 (d, 1H, J = 2,5 Hz), 7,81 (d, 1H, J = 2,5 Hz), 7,41 (d, 2H, J = 8,8 Hz), 6,93 (d, 1H, J = 16,5 Hz), 6,81 (d, 1H, J = 16,5 Hz), 6,72 (d, 2H, J = 8,7 Hz), 4,69 (t, 1H, J = 4,2 Hz), 4,46 (t, 3H, J = 4,9 Hz), 3,83 (t, 3H, J = 4,8 Hz), 3,71–3,66 (m, 5H), 3,00 (s, 6H), 1,68–1,48 (m, 6H), 1,43–1,21 (m, 6H),
1,15–1,02 (m, 6H), 0,91 (t, 9H, J = 7,1 Hz). RMN de 13C 5 166,7; 150,2; 145,4; 143,6; 127,8; 127,7; 127,5; 126,0; 123,7; 121,2; 112,d; 85,0; 81,6; 71,0; 70,8; 70,7; 70,4; 70,0; 65,0; 40,6; 29,5; 29,3; 29,1; 28,1; 27,5; 26,9; 13,9; 13,4; 13,3; 9,9; 6,6; 6,4. EMAR calcd. para C33H53FN2O3Sn (M+): 664,3062; encontrada: 664,3037.
(E)–(5–Yodo–6–{2–[2–(2–fluoroetoxi)etoxi]etoxi}piridin–3–il)–2–(4–dimetilaminofenil)–etileno (13a)
Se añadió una solución de yodo (I2; 0,063 g; 0,24 mmol) en THF (2 ml) en gotas a una solución de 12a enfriada en un baño de hielo (0,114 g; 0,172 mmol) en THF (3 ml). Tras la adición, se agitó la reacción a 0°C dura nte 1 h. Tras el procesamiento estándar con CH2Cl2, se purificó el producto crudo mediante CF (EtOAc/hexanos, 25/75), dando un sólido amarillo claro 13a (0,037 g; 48%). RMN de 1H 5 8,22 (d, 1H, J = 2,1 Hz), 8,10 (d, 1H, J = 2,1 Hz), 7,38 (d, 2H, J = 8,8 Hz), 6,92 (d, 1H, J = 16,3 Hz), 6,72 (d, 1H, J = 16,3 Hz), 6,71 (d, 2H, J = 8,8 Hz), 4,72–4,67 (m, 1H), 4,54–4,44 (m, 3H), 3,93–3,69 (m, 8H), 3,00 (s, 6H). RMN de 13C 5 160,4; 150,5; 144,6; 144,55; 129,8; 129,5; 127,8; 125,3; 118,8; 112,6; 85,1; 81,7; 80,6; 71,3; 71,1; 70,8; 70,5; 69,6; 67,1; 40,6. EMAR calcd. para C21H26FIN2O3 (M+): 500,0972; encontrada: 500,0959.
Ejemplo de referencia 10
Síntesis del Compuesto 13b
(E)–(5–tri–Butilestanil–6–{2–[2–(2–fluoroetoxi)etoxi]etoxi}piridin–3–il)–2–[4–N–metil–4–N–(terc–butiloxicarbonil} aminofenil]–etileno (12c)
Se preparó el Compuesto 12c a partir de 11c (0,072 g; 0,133 mmol) en forma de un líquido viscoso blanco (0,077 g; rendimiento del 77%). RMN de 1H 5 8,14 (d, 1H, J = 2,5 Hz), 7,83 (d, 1H, J = 2,5 Hz), 7,46 (d, 2H, J = 8,6 Hz), 7,23 (d, 2H, J = 8,5 Hz), 6,96 (s, 2H), 4,70–4,66 (m, 1H), 4,49–4,42 (m, 3H), 3,86–3,66 (m, 8H), 3,28 (s, 3H), 1,80–1,02 (m, 27H), 0,90 (t, 9H, J = 7,1 Hz). RMN de 13C 5 167,3; 146,1; 143,8; 143,2; 134,6; 127,0; 126,8; 126,6; 125,7; 125,4; 124,1; 85,0; 81,6; 80,6; 71,1; 70,9; 70,8; 70,5; 70,0; 65,1; 37,4; 29,5; 29,3; 29,1; 28,1; 27,5; 26,9; 13,9; 13,4; 9,9; 6,4. EMAR calcd. para C37H59FN2O5Sn (M+): 750,343; encontrada: 750,3425.
(E)–(5–Yodo–6–{2–[2–(2–Fluoroetoxi)etoxi]etoxi}piridin–3–il)–2–[4–N–metil–4–N–(terc–butiloxicarbonil)amino–fenil]– etileno (13c)
Se preparó el Compuesto 13c a partir de 12c (0,024 g; 0,032 mmol) en forma de un líquido viscoso blanco (0,018 g; rendimiento del 98%). RMN de 1H 5 8,25 (d, 1H, J = 1,6 Hz), 8,13 (d, 1H, J = 1,6Hz), 7,44 (d, 2H, J = 8,4 Hz), 7,24 (d, 2H, J = 8,4 Hz), 6,97 (d, 1H, J = 16,4 Hz), 6,86 (d, 1H, J = 16,4 Hz), 4,69 (t, 1H, J = 4,1 Hz), 4,53 (t, 2H, J = 4,8 Hz), 4,45 (t, 1H, J = 4,1 Hz), 3,94–3,69 (m, 8H), 3,28 (s, 3H), 1,47 (s, 9H). RMN de 13C 5 161,0; 154,8; 145,3; 144,9; 143,7; 133,9; 128,9; 128,6; 126,8; 125,7; 123,1; 85,1; 81,7; 80,7; 77,4; 71,3; 71,1; 70,9; 70,5; 69,6; 67,2; 37,4; 28,6. EMAR calcd. para C21B26FIN2O3 (M+): 500,0972; encontrada: 500,0959.
(E)–(5–Yodo–6–{2–[2–(2–fluoroetoxi)etoxi]etoxi}piridin–3–il)–2–(4–metilaminofenil)–etileno (13b)
A una solución agitada de 13c (0,014 g; 0,024 mmol) y 2,6–lutidina (28 1l; 0,24 mmol) en 2 ml de CH2Cl2 a 0°C, se añadió trimetilsililtriflato (34 1l; 0,19 mmol). Tras 15 min, se sometió la solución de reacción al procesamiento estándar con CH2Cl2. Se purificó el producto crudo mediante CCFP, dando un líquido viscoso amarillo claro 13b (0,010 g; 88%). RMN de 1H 5 8,22 (d, 1H, J = 2,1 Hz), 8,10 (d, 1H, J = 2,1 Hz), 7,34 (d, 2H, J = 8,6 Hz), 6,91 (d, 1H, J = 16,3 Hz), 6,70 (d, 1H, J = 16,3 Hz), 6,60 (d, 2H, J = 8,6 Hz), 4,71–4,67 (m, 1H), 4,54–4,43 (m, 3H), 3,94–3,69 (m, 9H), 2,88 (s, 3H). RMN de 13C 5 160,5; 149,5; 144,6; 129,8; 129,7; 128,0; 126,3; 118,9; 112,6; 85,1; 81,7; 80,6; 77,4; 71,3; 71,2; 70,9; 70,5; 69,7; 67,2; 30,8. EMAR calcd. para C20H24FIN2O3 (M+): 486,0816; encontrada: 486,0818.
Ejemplo de referencia 11
Síntesis del Compuesto 13e
(E)–(5–tri–Butilestanil–6–{2–[2–(2–fluoroetoxi)etoxi]etoxi}piridin–3–il)–2–(4–hidroxifenil)–etileno (12c)
Se preparó el Compuesto 12e a partir de 11e (0,032 g; 0,075 mmol) en forma de un líquido viscoso blanco (0,040 g; rendimiento del 84%). RMN de 1H 5 8,11 (d, 1H, J = 2,5 Hz), 7,82 (d, 1H, J = 2,5 Hz), 7,39 (d, 2H, J = 8,6 Hz), 6,98– 6,74 (m, 4H), 5,19 (s a, 1H), 4,71–4,66 (m, 1H), 4,48–4,43 (m, 3H), 3,90–3,62 (m, 8H), 1,70–1,02 (m, 18H), 0,91 (t, 9H, J = 7,1 Hz). RMN de 13C 5 166,9; 156,0; 145,4; 1,44,0; 130,1; 127,9; 121,6; 127,4; 124,3; 123,0; 115,9; 85,0; 81,6; 71,0; 70,9; 70,7; 70,5; 70,0; 65,2; 29,5; 29,3; 29,1; 28,0; 27,5; 26,9; 13,9; 13,4; 13,3; 9,9; 6,6; 6,4. EMAR calcd. para C31H48FNO4Sn (M+): 637,2589; encontrada: 637,2573.
(E)–(5–Yodo–6–{2–[2–(2–fluoroetoxi)etoxi]etoxi}piridin–3–il)–2–(4–hidroxifenil)–etileno (13e)
Se preparó el Compuesto 13e a partir de 12c (0,012 g; 0,019 mmol) en forma de un sólido blanco (0,008 g;
rendimiento del 90%). RMN de 1H 5 8,21 (d, 1H, J = 2,1 Hz), 8,08 (d, 1H, J = 2,1 Hz), 7,33 (d, 2H, J = 8,6 Hz), 6,94– 6,69 (m, 4H), 4,71–4,67 (m, 1H), 4,53–4,43 (m, 3H), 3,94–3,69 (m, 8H). HARMS calcd. para C19H21FINO4 (M+): 473,0499; encontrada: 473,0498.
Ejemplo de referencia 12
Síntesis del Compuesto 14ª
2–Hidroxietoxi–3–bromo–5–yodopiridina (9b)
A una suspensión en agitación de I8 (véase el Ejemplo 4 anterior) (0,906 g; 3,0 mmol), 2–(terc–butil–dimetil– silaniloxi)etanol (0,554 g; 3,15 mmol) y PPh3 (0,944 g; 3,6 mmol) en 20 ml de THF a –10 °C, se a ñadieron gotas de diisopropilazodicarboxilato (DIAD) (0,728 g; 3,6 mmol) en 10 ml de THF. Se retiró el baño de sal y hielo, y se mantuvo la reacción a temperatura ambiente (t.a.) durante 2 h. Se concentró la solución de reacción y se purificó mediante CF (EtOAc/Hexanos, 5/95), proporcionando 2–(terc–butildimetil–silaniloxi)etoxi–3–bromo–5–yodopiridina, un líquido viscoso incoloro (0,995 g, 72%). RMN de 1H 5 8,23 (d, 1H, J = 2,0 Hz), 8,05 (d, 1H, J = 2,0 Hz), 4,42 (t, 2H, J = 4,9 Hz), 3,98 (t, 2H, J = 4,9 Hz), 0,90 (s, 9H), 0,10 (s, 6H). EMAR calcd. para C12H18BrINO2Si (M–CH3+): 441,9335; encontrada: 441,9312.
(E)–[5–Bromo–6–(2–hidroxietoxi)piridin–3–il]–2–(4–dimetilaminofenil)–etileno (14a)
Se preparó el Compuesto 14a a partir de 4–dimetilaminoestireno (0,031 g; 0,212 mmol) y I10 (0,073 g; 0,212 mmol) en forma de un sólido amarillo claro (0,022 g; rendimiento del 29%). RMN de 1H 5 8,07 (d, 1H, J = 2,1 Hz), 8,03 (d, 1H, J = 2,1 Hz), 7,39 (d, 2H, J = 8,8 Hz), 6,94 (d, 1H, J = 16,3 Hz), 6,78–6,69 (m, 3H), 4,57–4,52 (m, 21–1), 3,99 (t, 2H, J = 4,3 Hz), 3,21 (s a, 1H), 3,00 (s, 6H). RMN de 13C 5158,3; 150,4; 143,0; 138,2; 129,9; 129,8; 127,6; 124,9; 118,3; 112,3; 107,5; 69,6; 62,1; 40,3. EMAR calcd. para C17H19BrN2O2 (M+): 362,063; encontrada: 362,0629.
Ejemplo de referencia 13
Síntesis del Compuesto 14b
(E)–[5–Bromo–6–(2–hidroxietoxi)piridin–3–il]–2–(4–metilaminofenil)–etileno (14b)
Se preparó el Compuesto 14b a partir de 4–metilaminoestireno (0,140 g; 1,05 mmol) y I10 (0,241 g; 0,7 mmol) en forma de un líquido viscoso amarillo claro (0,149 g; rendimiento del 61%). RMN de 1H 5 8,07 (d, 1H, J = 2,1 Hz), 8,03 (d, 1H, J = 2,1 Hz), 7,35 (d, 2H, J = 8,6 Hz), 6,93 (d, 1H, J = 16,3 Hz), 6,74 (d, 1H, J = 16,3 Hz), 6,61 (d, 2H, J = 8,6 Hz), 4,57–4,52 (m, 2H), 3,99 (s a, 2H), 3,18 (s a, 1H), 2,88 (s, 3H). RMN de 13C 5 149,6; 143,3; 138,5; 130,1; 130,0; 128,0; 126,0; 118,6; 112,6; 107,7; 69,8; 62,2; 30,7. EMAR calcd. para C17H19BrN2O2 (M+): 348,4473; encontrada: 348,0468.
Ejemplo de referencia 14
Síntesis del Compuesto 14d
(E)–[5–Bromo–6–(2–hidroxietoxi)piridin–3–il]–2–(4–acetoxifenil)–etileno (14d)
Se preparó el Compuesto 14d a partir de 4–acetoxiestireno (0,130 g; 0,80 mmol) y 10 (0,244 g; 0,7 mmol) en forma de un líquido viscoso blanco (0,031 g; rendimiento del 12%). RMN de 1H 5 8,12 (d, 1H, J = 2,1 Hz), 8,08 (d, 1H, J = 2,1 Hz), 7,50 (d, 2H, J = 6,8 Hz), 7,11 (d, 2H, J = 6,8 Hz), 6,95 (d, 2H, J = 5,2 Hz), 4,58–4,54 (m, 2H), 4,01 (s a, 2H), 3,08 (s a, 1H), 2,32 (s, 3H).
Ejemplo de referencia 15
Síntesis del Compuesto 14e
(E)–[5–Bromo–6–(2–hidroxietoxi)piridin–3–il]–2–(4–hidroxifenil)–etileno (14e)
En un procedimiento similar al descrito en la preparación de 11e, se preparó el compuesto 14e a partir de acetato 14d (0,031 g; 0,082 mmol) en forma de un sólido blanco (0,020 g; 73%). RMN de 1H (DMSO–d6) 59,60 (s a, 1H), 8,31 (s, 1H), 8,23 (s, 1H), 7,39 (d, 2H, J = 8,3 Hz), 7,19 (d, 1H, J = 16,8 Hz), 6,94 (d, 1H, J = 16,6 Hz), 6,77 (d, 2H, J = 8,3 Hz), 4,35 (t, 2H, J = 5,1 Hz), 3,73 (t, 2H, J = 5,1 Hz). RMN de 13C (DMSO–d6 5 157,9; 157,4; 143,7; 138,1; 129,2; 129,0; 127,8; 119,8; 115,6; 106,7; 68,4; 59,2. EMAR calcd. para C15H14BrNO3 (M+): 335,0157; encontrada: 335,0165.
Ejemplo de referencia 16
Síntesis del Compuesto 15e
(E)–[5–tri–Butilestanil–6–(2–hidroxietoxi)piridin–3–il]–2–(4–hidroxifenil)–etileno (15e)
Se preparó el Compuesto 15e a partir de 14e (0,031 g; 0,092 mmol) en forma de un líquido viscoso blanco (0,012 g; rendimiento del 24%). RMN de 1H 5 8,07 (d, 1H, J = 2,5 Hz), 7,85 (d, 1H, J = 2,5 Hz), 7,39 (d, 2H, J = 8,6 Hz), 6,99– 6,80 (m, 4H), 5,97 (s a, 1H), 5,01 (s a, 1H), 4,50–4,46 (m, 2H), 3,98–3,94 (m, 2H), 1,69–1,01 (m, 18H), 0,91 (t, 9H, J = 7,1 Hz). RMN de 13C 5 167,2; 156,0; 144,9; 144,7; 144,5; 130,1; 128,0; 127,96; 124,7; 122,8; 116,0; 69,9; 63,4; 29,9; 29,5; 29,3; 29,1; 28,1; 27,5; 26,9; 13,9; 13,6; 13,5; 10,1; 6,7; 6,6. EMAR calcd. para C27H41NO3Sn (M+): 547,2108; encontrada: 547,2112.
Ejemplo de referencia 17
Síntesis del Compuesto 16a
(E)–[5–tri–Butilestanil–6–(2–hidroxietoxi)piridin–3–il]–2–(4–dimetilaminofenil)–etileno (15a)
Se preparó el Compuesto 15a a partir de 14a (0,100 g; 0,275 mmol) en forma de un aceite amarillo claro (0,105 g; rendimiento del 66%). RMN de 1H 5 8,10 (d, 1H, J = 2,5 Hz), 7,85 (d, 1H, J = 2,4 Hz), 7,41 (d, 2H, J = 8,7 Hz), 6,95 (d, 1H, J = 16,3 Hz), 6,81 (d, 1H, J = 16,6 Hz), 6,73 (d, 2H, J = 8,8 Hz), 4,48–4,44 (m, 2H), 3,96–3,92 (m, 2H), 2,99 (s, 6H), 1,68–1,01 (m, 18H), 0,92 (t, 9H, J = 7,2 Hz). RMN de 13C 5 166,6; 150,1; 144,5; 144,1; 128,2; 128,1; 127,4; 125,6; 124,0; 120,5; 112,4; 69,4; 63,0; 40,4; 29,0; 27,2; 13,6; 9,8. EMAR calcd. para C29H46N2O2Sn (M+): 574,2581; encontrada: 574,2584.
(E)–[5–Yodo–6–(2–hidroxietoxi)piridin–3–il]–2–(4–dimetilaminofenil)–etileno (16a)
Se preparó el Compuesto 16a a partir de 15a (0,011 g; 0,019 mmol) en forma de un sólido amarillo claro (0,004 g; 50%). RMN de 1H 5 8,25 (s, 1H), 8,10 (s, 1H), 7,39 (d, 2H, J = 8,6 Hz), 6,94 (d, 1H, J = 16,3 Hz), 6,76–6,70 (m, 3H), 4,51 (t, 2H, J = 4,2 Hz), 4,02–3,95 (m, 2H), 3,19 (s, 1H), 3,00 (s, 6H). EMAR calcd. para C17H19IN2O2 (M+): 410,0491; encontrada, 410,0489.
Ejemplo de referencia 18
Síntesis del Compuesto 16b
(E)–[5–tri–Butilestanil–6–(2–hidroxietoxi)piridin–3–il]–2–(4–metilaminofenil)–etileno (15b)
Se preparó el Compuesto 15b a partir de 14b (0,052 g; 0,15 mmol) en forma de un aceite amarillo claro (0,059 g; rendimiento del 64%). RMN de 1H 5 8,10 (d, 1H, J = 2,5 Hz), 7,84 (d, 1H, J = 2,4 Hz), 7,37 (d, 2H, J = 8,6 Hz), 6,93 (d, 1H, J = 16,3 Hz), 6,80 (d, 1H, J = 16,4 Hz), 6,61 (d, 2H, J = 8,6 Hz), 4,48–4,43 (m, 2H), 3,95–3,91 (m, 2H), 2,88 (s, 3H), 1,69–1,01 (m, 18H), 0,91 (t, 9H, J = 7,1 Hz). RMN de 13C 5 166,9; 149,2; 144,7; 144,3; 128,4; 128,3; 127,8; 126,7; 124,2; 120,7; 1,12,6; 69,6; 63,2; 30,8; 29,5; 29,3; 29,1; 28,0; 27,5; 26,9; 13,9; 13,5; 13,4; 10,0; 6,6; 6,5; EMAR calcd. para C28H44N2O2Sn (M+): 560,2425; encontrada: 560,2419,
(E)–[5–Yodo–6–(2–hidroxietoxi)piridin–3–il]–2–(4–metilaminofenil)–etileno (16b)
Se preparó el Compuesto 16b a partir de 15b (0,032 g; 0,057 mmol) en forma de un sólido amarillo claro (0,005 g; 21%). RMN de 1H 5 8,24 (d, 1H, J = 2,1 Hz), 8,09 (d, 1H, J = 2,0 Hz), 7,36 (d, 2H, J = 8,5 Hz), 6,92 (d, 1H, J = 16,3 Hz), 6,76–6,64 (m, 3H), 4,53–4,49 (m, 2H), 4,01–3,96 (m, 2H), 2,96 (s, 1H), 2,89 (s, 3H). EMAR calc. para C16H17IN2O2 (M+): 396,0335; encontrada: 396,0335.
Ejemplo de referencia 19
Radioyodación
Los compuestos radioyodados, [1251]13a, 13b, 16a, 16b and 16e, se prepararon mediante reacciones de yododestanilación a partir de los precursores de tributilestaño correspondientes según el procedimiento previamente descrito (ref). Se añadió peróxido de hidrógeno (50 1l, 3% p/v) a una mezcla de 50 1l del precursor de tributilestaño (4 1g/1l de EtOH), 50 1l de HCl 1N y [125I]NaI (1–5 en Ci adquirido en Perkin Hiper) en un vial cerrado herméticamente. Se dejó que la reacción continuara durante 5–10 min a temperatura ambiente y se finalizó mediante la adición de 100 1l de NaHSO3 sat. Se extrajo la mezcla de reacción con acetato de etilo (3 x 1 ml) tras la neutralización con 1,5 ml de solución de bicarbonato sódico saturada. Se evaporaron los extractos combinados hasta la sequedad. Se disolvieron los residuos en 100 1l de EtOH y se purificaron mediante CLAR usando una columna de fase inversa (columna analítica de C18 Phenomenex Gemini, 4,6 x 250 min; 5 1m, tampón formato CH3CN/amonio (1mM) 8/2 o 7/3; caudal: 0,5–1,0 ml/min). Se evaporaron los productos añadidos sin vehículo hasta la sequedad y se volvieron a disolver en EtOH al 100% (1 1Ci/1l) para un almacenamiento a 20ºC de hasta 6 semanas para estudios animales y estudios de autorradiografía.
Ejemplo 20
Estudios de unión
Se preparó [125I]IMPY con una actividad específica de 2.200 Ci/mmol y más del 95% de pureza radioquímica usando la reacción de yododestanilación estándar y se purificó mediante una mini–columna de C-4 simplificada según lo descrito previamente por Kung, M.–P.; Hou, C.; Zhuang, Z.–P.; Cross, A. J.; Maier, D. L.; Kung, H. F., "Characterization of IMPY as a potential imaging agent for b–amyloid plaques in double transgenic PSAPP mice". Eur. J. Nucl. Med. Mol. Imaging 2004, 31, 1136–1145. Los análisis de unión competitiva se llevaron a cabo en tubos de vidrio de borosilicato de 12 x 75 mm. La mezcla de reacción contenía 50 1l de homogenizados de cerebro de EA mezclados (20–50 1g), 50 1l de [125I]IMPY (0,04–0,06nM diluidos en PBS) y 50 ul de inhibidores (10–5–10–10M diluidos en serie en PBS que contenía albúmina de suero bovino al 0,1%) en un volumen final de 1 ml. Se definió la unión inespecífica en presencia de IMPLY 600nM en los mismos tubos de ensayo. Se incubó la mezcla a 37ºC durante 2 h y se separaron la radiactividad unida y la libre mediante filtración al vacío a través de filtros GFIB Whatman usando un cosechador celular M–24R de Brandel seguido de 2 x 3 ml de lavados de PBS a temperatura ambiente. Se realizó el recuento en los filtros que contenían el ligando 1–125 unido en un contador gamma (Packard 5000) con una eficacia de recuento del 70%. En las condiciones de análisis, la fracción unida específicamente fue menor del 15% de la radiactividad total. Se sometieron los resultados de los experimentos de inhibición a un análisis de regresión no lineal usando el análisis de los datos de unión en equilibrio del que se calcularon los valores de Ki. Las Figuras 2 y 5 muestran los valores de Ki para los compuestos seleccionados de la presente invención.
Ejemplo 21
Autorradiografía de película
Radioindicadores [18F]: Se obtuvieron secciones de cerebro de sujetos con EA mediante la congelación del cerebro en hielo seco en polvo y se cortaron en secciones de un espesor de 20 micrómetros. Se incubaron las secciones con radioindicadores [18F] (200.000–250.000 cpm/200 1l) durante 1 h a temperatura ambiente. Se sumergieron luego las secciones en Li2CO3 saturado en EtOH al 40% (dos lavados de dos minutos) y se lavaron con EtOH al 40% (un lavado de dos minutos) seguidos por el aclarado con agua durante 30 s. Tras secar, se expusieron las secciones marcadas con 18F a una película de RM Kodak durante una noche. Los resultados se representan en la película de la Fig. 2.
Radioindicadores [125I]: Para comparar diferentes sondas usando secciones similares de tejido de cerebro humano, se ensamblaron secciones cerebrales macromatriciales humanas de 6 casos confirmados de EA y de un sujeto control. Se confirmó la presencia y la localización de las placas en las secciones con tinción inmunohistoquímica con anticuerpo A monoclonal 4G8 (Sigma). Se incubaron las secciones con radioindicadores [125I] (200.000–
250.000 cpm/200 µl) durante 1 h a temperatura ambiente. Se sumergieron luego las secciones en Li2CO3 saturado en EtOH al 40% (dos lavados de dos minutos) y se lavaron con EtOH al 40% (un lavado de dos minutos) seguidos por el aclarado con agua durante 30 s. Tras secar, se expusieron las secciones marcadas con 125I a una película de Biomax MR de Kodak durante una noche.
Ejemplo 22
Distribución de órganos en ratones
Anestesiados con isoflurano, se inyectaron 0,15 ml de solución de albúmina de suero bovino al 0,1% que contenía radioindicadores [125I] (5–10 1Ci) directamente en la vena de la cola de ratones ICR (22–25 g; macho). Se sacrificaron los ratones (n = 3 para cada punto temporal) mediante dislocación cervical en los puntos temporales designados tras la inyección. Se extirparon los órganos de interés y se pesaron, y se midió la radiactividad con un contador gamma automático. Se calculó el porcentaje de dosis por órgano mediante una comparación de los recuentos de los tejidos con alícuotas adecuadamente diluidas de material inyectado. Se calculó la actividad total de la sangre suponiendo que es del 7% del peso corporal total. Se calculó el % de dosis/g de las muestras mediante la comparación de los recuentos de las muestras con el recuento de la dosis inicial diluida.
Tabla 1. Biodistribución en ratones ICR tras inyección i.v. de [18F]10 en EtOH al 5% en solución salina (% de dosis/g, media de 3 ratones ± DE)
Órgano
2 min 30 min 1 h 2 h
Sangre Corazón Músculo Pulmón Riñón Bazo Hígado Piel Cerebro Hueso
6,05 ± 0,33 0,75 ± 0,14 7,03 ± 1,30 1,07 ± 0,20 6,38 ± 0,95 0,43 ± 0,11 24,90 ± 1,49 2,52 ± 0,24 3,49 ± 0,58 5,97 ± 0,56 2,65 ± 0,22 0,17 ± 0,03 8,58 ± 0,26 0,30 ± 0,01 1,68 ± 0,11 0,15 ± 0,05 9,26 ± 0,83 3,99 ± 0,34 0,48 ± 0,07 2,52 ± 0,34 3,48 ± 0,47 0,22 ± 0,03 10,62 ± 2,59 0,35 ± 0,07 1,96 ± 0,21 0,13 ± 0,03 10,52 ± 2,18 4,42 ± 0,65 0,55 ± 0,10 4,39 ± 0,40 2,15 ± 0,25 0,18 ± 0,08 5,96 ± 0,06 0,20 ± 0,36 0,96 ± 1,58 0,10 ± 0,17 6,86 ± 0,59 2,91 ± 0,16 0,37 ± 0,08 6,49 ± 0,08
Órgano
2 min 30 min 1 h 2 h
Sangre Corazón Músculo Pulmón Riñón Bazo Hígado Piel Cerebro Hueso
3,04 ± 0,29 6,00 ± 1056 0,62 ± 0,10 5,65 ± 0,89 14,19 ± 2,34 4,65 ± 0,76 17,00 ± 0,69 0,59 ± 0,03 7,77 ± 1,34 1,49 ± 0,08 1,33 ± 0,16 1,28 ± 0,16 0,75 ± 0,04 1,73 ± 0,17 3,77 ± 0,36 1,57 ± 0,51 7,21 ± 0,69 0,93 ± 0,13 1,03 ± 0,11 0,63 ± 0,12 1,80 ± 0,16 1,66 ± 0,24 0,95 ± 0,18 1,82 ± 0,31 4,29 ± 0,52 1,56 ± 0,17 8,13 ± 1,42 1,06 ± 0,09 1,28 ± 0,20 1,13 ± 0,01 1,08 ± 0,06 1,32 ± 0,33 0,52 ± 0,08 0,98 ± 0,08 2,19 ± 0,36 1,14 ± 0,18 4,96 ± 0,90 0,68 ± 0,16 0,84 ± 0,08 1,64 ± 0,50
Tabla 2. Biodistribución en ratones ICR tras inyecciones i.v. de radioindicadores marcados con [125I] de referencia (% de dosis/g; media de 3 ratones ± DE)
[125I]13a (logP = 2,59)
Órgano
2 min 30 min 1 h 2 h
Sangre Corazón Músculo Pulmón Riñón Bazo
2,70 ± 0,58 12,76 ± 1,24 0,90 ± 0,20 10,08 ± 2,15 16,62 ± 1,96 4,47 ± 1,28 2,05 ± 0,18 1,63 ± 0,03 1,00 ± 0,08 2,50 ± 0,14 3,32 ± 0,11 1,42 ± 0,05 1,65 ± 0,45 0,97 ± 0,16 0,59 ± 0,13 1,62 ± 0,46 2,30 ± 0,54 0,99 ± 0,47 1,45 ± 0,41 0,73 ± 0,17 0,53 ± 0,08 1,33 ± 0,39 1,71 ± 0,24 0,79 ± 0,27
(continuación)
Órgano
2 min 30 min 1 h 2 h
Hígado Piel Cerebro Tiroide
22,15 ± 4,34 0,54 ± 0,05 4,03 ± 0,43 3,89 ± 0,67 9,54 ± 1,30 1,47 ± 0,26 1,93 ± 0,18 16,23 ± 11,75 5,34 ± 2,22 1,59 ± 0,68 0,68 ± 0,17 24,19 ± 8,26 5,62 ± 1,31 1,23 ± 0,41 0,26 ± 0,04 60,76 ± 6,09
[125I]13b (log P = 2,54)
Órgano
2 min 30 min+ 1 h 2 h
Sangre Corazón Músculo Pulmón Riñón Bazo Hígado Piel Cerebro Tiroide
4,37 ± 1,07 9,85 ± 1,78 1,04 ± 0,25 6,85 ± 0,27 9,03 ± 6,81 4,41 ± 1,05 26,24 ± 4,47 1,48 ± 0,07 6,22 ± 1,01 5,74 ± 0,42 3,83 ± 1,11 2,54 ± 0,37 1,11 ± 0,34 3,01 ± 0,96 3,40 ± 0,76 2,49 ± 0,75 11,47 ± 2,10 2,95 ± 0,81 1,23 ± 0,13 24,09 ± 27,44 2,88 ± 0,28 1,75 ± 0,26 0,85 ± 0,06 2,37 ± 0,29 2,81 ± 0,70 1,75 ± 0,33 7,70 ± 1,22 2,46 ± 0,16 0,62 ± 0,17 38,09 ± 6,37 2,21 ± 0,73 1,22 ± 0,28 0,44 ± 0,19 1,85 ± 0,74 1,86 ± 0,36 1,27 ± 0,24 6,25 ± 1,79 1,32 ± 0,41 0,26 ± 0,01 215,05 ± 74,59
[125I]16a (log P = 2,64)
Órgano
2 min 30 min 1 h+ 2 h
Sangre Corazón Músculo Pulmón Riñón Bazo Hígado Piel Cerebro Tiroide
2,71 ± 0,07 10,24 ± 0,45 0,71 ± 0,46 9,41 ± 0,56 14,25 ± 1,98 4,40 ± 1,89 19,12 ± 2,68 0,46 ± 0,13 5,43 ± 0,85 4,15 ± 0,43 2,24 ± 0,38 1,93 ± 0,27 1,05 ± 0,20 3,02 ± 0,38 4,19 ± 0,45 1,94 ± 0,19 12,38 ± 1,29 1,18 ± 0,26 3,56 ± 0,32 11,21 ± 7,88 2,18 ± 0,66 1,12 ± 0,02 0,55 ± 0,03 1,98 ± 0,21 2,49 ± 0,33 1,32 ± 0,10 6,22 ± 0,96 1,16 ± 0,00 1,32 ± 0,00 59,13 ± 6,26 1,01 ± 0,02 0,62 ± 0,12 0,22 ± 0,04 1,00 ± 0,15 1,48 ± 0,20 0,80 ± 0,11 4,87 ± 0,46 0,40 ± 0,05 0,46 ± 0,05 24,81 ± 0,62
[125I]16b (log P = 2,20)
Órgano
2 min 30 min 1 h 2 h
Sangre
4,14 ± 0,41 3,08 ± 0,35 1,81 ± 0,56 1,96 ± 0,14
(continuación)
[125I]16b (log P = 2,20)
Órgano
2 min 30 min 1 h 2 h
Corazón Músculo Pulmón Riñón Bazo Hígado Piel Cerebro Tiroide
7,16 ± 1,16 1,15 ± 0,38 7,43 ± 1,21 11,51 ± 1,48 4,08 ± 0,68 20,84 ± 2,38 0,95 ± 0,09 8,04 ± 0,82 6,31 ± 1,59 1,50 ± 0,18 0,91 ± 0,06 2,67 ± 0,46 3,73 ± 0,75 1,34 ± 0,29 12,57 ± 3,03 1,86 ± 0,50 0,88 ± 0,30 17,23 ± 14,23 0,88 ± 0,30 0,42 ± 0,08 1,76 ± 0,32 2,16 ± 0,08 0,87 ± 0,37 5,62 ± 0,68 1,29 ± 0,51 0,26 ± 0,03 36,69 ± 37,17 0,76 ± 0,03 0,38 ± 0,02 1,58 ± 0,10 1,53 ± 0,20 1,08 ± 0,15 3,41 ± 0,20 1,43 ± 0,10 0,15 ± 0,02 99,88 ± 69,45
[125I]16e (log P = 1,98)
Órgano
2 min 30 min 1h 2 h
Sangre Corazón Músculo Pulmón Riñón Bazo Hígado Piel Cerebro Tiroide
10,09 ± 1,12 6,66 ± 0,31 1,01 ± 0,34 14,22 ± 0,92 20,40 ± 2,20 4,20 ± 0,31 18,27 ± 1,29 0,64 ± 0,20 0,99 ± 0,24 4,38 ± 0,46 3,92 ± 0,07 1,35 ± 0,16 0,59 ± 0,05 3,10 ± 0,05 10,03 ± 2,12 1,28 ± 0,44 5,15 ± 0,61 1,36 ± 0,07 0,26 ± 0,03 3,99 ± 3,56 1,29 ± 0,05 0,65 ± 0,21 0,21 ± 0,02 1,34 ± 0,11 2,94 ± 0,17 0,50 ± 0,03 2,38 ± 0,58 0,62 ± 0,01 0,09 ± 0,01 13,02 ± 8,11 1,56 ± 0,04 0,51 ± 0,09 0,12 ± 0,01 1,02 ± 0,01 2,50 ± 1,32 0,50 ± 0,06 2,63 ± 1,30 0,37 ± 0,08 0,06 ± 0,01 16,02 ± 11,52

Claims (5)

  1. REIVINDICACIONES
    1.– Un compuesto de Fórmula I:
    o una de sus sales farmacéuticamente aceptables; en la que: n es uno. al menos uno, no más de tres, de A1, A2, A3, A4 y A5 es N, el resto son –CH o –CR2 según lo permitido; R1 es NRaRb(CH2)p– , en la que Ra y Rb son independientemente hidrógeno o alquilo(C1–C4) y p es 0; R2 es
    10 en la que q es un número entero de 1 a 5; R30, R31, R32 y R33 son, en cada caso, hidrógeno; Z se selecciona entre halógeno, benzoiloxilo sustituido con halógeno, benciloxilo sustituido con halógeno, fenilalquilo(C1–C4) sustituido con halógeno, ariloxilo sustituido con halógeno y arilo(C6–C10) sustituido con halógeno;
    R7 y R8 son cada uno hidrógeno; y en la que dicho halógeno, en cada caso, se selecciona entre I, 123I, 125I, Br, 76Br, 77Br, F y 18F. 15 2.– El compuesto de la reivindicación 1 que tiene la estructura:
  2. 3.- El compuesto de la reivindicación 1, en el que A4 es N, que tiene la fórmula:
    en la que Z es I, 123I, 125I, 131I, Br, 76Br, 77Br, F o 18F. 4.– El compuesto de la reivindicación 1, que tiene la fórmula:
  3. 5.– El compuesto de la reivindicación 1, que tiene la fórmula:
  4. 6.– Una composición farmacéutica que comprende un compuesto de una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 5.
    5 7.– Una composición de diagnóstico para formar imágenes de depósitos amiloides que comprende un compuesto radiomarcado de una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 5. 8.– Un procedimiento de formación de imágenes de depósitos amiloides que comprende:
    a. introducir en un mamífero una cantidad detectable de una composición de diagnóstico de la reivindicación 7;
    10 b. dejar tiempo suficiente para que el compuesto marcado se asocie con los depósitos amiloides; y
    c. detectar el compuesto marcado asociado con uno o más depósitos amiloides.
  5. 9.– Un compuesto según una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 5 o una composición según la reivindicación 6 para su uso en la inhibición de la agregación de placas amiloides en un mamífero.
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