EA017898B1 - Стирилпиридиновые производные и их применение для связывания и визуализации амилоидных бляшек - Google Patents

Abstract

Изобретение относится к способу визуализации амилоидных отложений и к стирилпиридинам и способам получения стирилпиридинов, меченных радиоактивными изотопами, применимых при визуализации амилоидных отложений. Данное изобретение также относится к соединениям и способам получения соединений для ингибирования агрегации амилоидных белков, при которой образуются амилоидные отложения, и к способу доставки лечебного средства к амилоидным отложениям.

Description

Область техники, к которой относится изобретение

Данное изобретение относится к новым стирилпиридинам, их применению при диагностической визуализации и ингибировании агрегации амилоида-β и способам получения указанных соединений.

Уровень техники

Болезнь Альцгеймера (ΑΌ) представляет собой прогрессирующее нейродегенеративное расстройство, характеризующееся снижением познавательных способностей, необратимой потерей памяти, дезориентацией и ухудшением речи. Посмертное исследование срезов головного мозга с ΑΌ показывает обильные старческие бляшки (8Р), состоящие из амилоидных-β (Αβ) пептидов, и многочисленные нейрофибриллярные сплетения (ΝΡΤ), образованные филаментами высокофосфорилированных тау-белков (последний обзор и дополнительные ссылки см. в СтзЬегд 8.Ό. е! а1., Мо1еси1аг Ра1ко1оду οί А1х11сипсг'5 О|зеазе аиб Ре1а1еб Пкогбетз, в СетеЬга1 Соктех: №игобедеиега1гуе аиб Аде-ге1а1еб Скаидез ίη 81гис1иге аиб Риисйои οί СегеЬга1 Соктех, Кк.1\\ег Асабет1с/Р1еиит, ΝΥ (1999), рр. 603-654; УодекЬегд-Кададка V. е! а1., Се11 Вю1оду οί Таи аиб Су!озке1е!а1 Ра!ко1оду ш А1/11еипег'5 Пкеазе, А1/11еипег'5 Пкеазе, ЫрршсоБ \νί11ίηιη5 & АШбиз, РЬ11абе1рЫа, РА (1999), рр. 359-372).

Амилоидоз является состоянием, характеризующимся накоплением различных нерастворимых фибриллярных белков в тканях пациента. Амилоидное отложение образуется путем агрегации амилоидных белков с последующим дополнительным объединением агрегатов и/или амилоидных белков. Образование и накопление агрегатов амилоидных-β (Αβ) пептидов в головном мозгу являются критическими факторами в развитии и прогрессировании ΑΌ.

Кроме роли амилоидных отложений при болезни Альцгеймера показано наличие амилоидных отложений при таких заболеваниях, как средиземноморская лихорадка, синдром Миск1е^е1к, идеопатическая миелома, амилоидная полиневропатия, амилоидная кардиомиопатия, системный сенильный амилоидоз, наследственное внутримозговое кровотечение с амилоидозом, синдром Дауна, почесуха, болезнь Крейтцфельда-Якоба, куру, синдром 6е^з!атии-8!^аизз1е^-8ске^ηке^, медуллярная карцинома щитовидной железы, 1зо1а!еб а!г1а1 ату1о1б, в2-амилоид микроглобулина у пациентов при диализе, миозит телец включения, отложение в2-амилоида при мышечной атрофии и инсулинома островков Лангерганса при диабете типа II.

Фибриллярные агрегаты амилоидных пептидов Αβ_1-40 и Αβ_1-42 являются основными метаболическими пептидами, образованными амилоидным белком-предшественником, обнаруженными в старческих бляшках и амилоидных отложениях сосудов головного мозга у больных ΑΌ (Х1а V. е! а1., I. Ргос. №11. Асаб. 8ст υδΑ., 97: 9299-9304 (2000)). Предупреждение и прекращение образования бляшек А(3 намечены как способ лечения такого заболевания (8е1кое Ό.Ι., ΙΑΜΑ, 283: 1615-1617 (2000); Vο1ίе Μ.δ. е! а1., I. Меб. Скет., 41: 6-9 (1998); 8коугоизку Ό.Μ. аиб Ьее У.М., Тгеибз Ркагтасо1. 8ск, 21: 161-163 (2000)).

Семейная ΑΌ (ΡΑΌ) вызвана несколькими мутациями в белке-предшественнике А (АРР), генах пресенилина 1 (Р81) и пресенилина 2 (Р82) (ОшзЬетд 8.Ό. е! а1., Мо1еси1аг Ра!ко1оду οί Α1ζке^те^'з Экеазе аиб Ке1а!еб Пкогбетз, в СегеЬга1 Соктех: №игобедеиега!1уе аиб Αде-^е1а!еб Скаидез ш 81тис!иге аиб Риис!юи οί СегеЬга1 Соктех, Кк.1\\ег Αсабет^с/Р1еиит, ΝΥ (1999), рр. 603-654; УодекЬегд-Кададка V. е! а1., Се11 Вю1оду οί Таи аиб Су!озке1е!а1 Ра!ко1оду т ΑΜ^ιηκ^ Пкеазе, Α1ζке^те^'з Пкеазе, Ырртсо!, АПНатз & АШбиз, Рк11абе1рЫа, РΑ (1999), рр. 359-372) .

Хотя точные механизмы, лежащие в основе ΑΌ, полностью не выяснены, все патогенные мутации ΡΑΌ, исследованные до сих пор, повышают продуцирование более амилоидогенной формы пептида Αβ длиной в 42-43 аминокислоты. Таким образом, по меньшей мере, при ΡΑΌ, представляется, что разрегулирование продуцирования Αβ является достаточным для индуцирования каскада событий, ведущих к нейродегенерации. Действительно, гипотеза амилоидного каскада преполагает, что образование агрегатов внеклеточного фибриллярного Αβ в головном мозгу может являться центральным событием в патогенезе ΑΌ (8е1кое Ό.Ι, Вю1оду β-ату1ο^б Ртеситзог Рто!еш аиб !ке Мескаикт οί Α1ζке^те^'з Пкеазе, Α1ζкетег'з Пкеазе, Ырртсо!, Аббатз & νΠΜ^, Рк11абе1рк1а, РΑ (1999), рр. 293-310; 8е1кое Ό.Ι, I. Αт. Меб. Αззοс, 283: 1615-1617 (2000); казкпб I. е! а1., I. Αт. Меб. Αззοс, 283: 1571-1577 (2000); Оо1бе Т.Е. е! а1., Вюсктка е! Вюркузка Α^η, 1502: 172-187 (2000)).

В настоящее время различные подходы в попытке ингибировать образование и снизить накопление фибриллярного Αβ в головном мозгу оцениваются как возможные методы лечения ΑΌ (8коутоизку Э.М. аиб Ьее У.М., Тгеибз Ркагтасо1. 8ск, 21: 161-163 (2000); Уаззаг К. е! а1., 8скисе, 286: 735-741 (1999); №оКе М.8. е! а1., I. Меб. Скет., 41: 6-9 (1998); Мооге С.Ь. е! а1., I. Меб. Скет., 43: 3434-3442 (2000); Ртбкз МА, ВюсЫтка е! Вюркузка Α^-τ 1502: 76-84 (2000); Киииег Р., Вокгтаии е! а1., I. Вю1. Скет., 273: 1673-1678 (2000)). Поэтому существует заинтересованность в разработке лигандов, которые специфически связывают агрегаты фибриллярного Αβ. Так как внеклеточные 8Р являются доступными мишенями, такие новые лиганды можно было бы использовать в качестве диагностических инструментов 1и у|уо и зондов для визуализации прогрессирующего отложения Αβ в исследованиях амилоидогенеза АД в организме пациентов.

В связи с этим сообщается о некоторых подходах для разработки специфических лигандов к агрега

- 1 017898 там фибриллярного Αβ (АккЬигп Т.Т. е! а1., Скет. ΒίοΙ., 3: 351-358 (1996); Нап С. е! а1., 1. Ат. Скет. 8ос., 118: 4506-4507 (1996); К1ипк ^.Е. е! а1., Вю1. РкусЫаку, 35: 627 (1994); К1ипк ^.Е. е! а1., №игоЬю1. Ад1пд, 16: 541-548 (1995); К1ипк ^.Е. е! а1., 8оае1у Гог Ыеиго8С1епсе АЬйгас!, 23: 1638 (1997); Ма!к1§ С.А. е! а1., Ргос. ХШк Ιηίί. 8утр. Каб1оркагт. Скет., иррка1а, 8\гебеп: 94-95 (1997); Богепхо А. апб Уапкпег В.А., Ргос. Ыа!1. Асаб. Ай. И.8.А., 91: 12243-12247 (1994); 2кеп е! а1., 1. Меб. Скет., 42:2805-2815 (1999)). Наиболее привлекательный подход основан на высококонъюгированном хризамине-С (СС) и конго красном (СК), и последний используют для флуоресцентного окрашивания 8Р и ΝΕΤ в посмертных срезах головного мозга с АО (АккЬигп Т.Т. е! а1., Скет. Вю1., 3: 351-358 (1996); К1ипк ^.Е. е! а1., 1. Н1§!оскет. Су!оскет., 37: 1273-1281 (1989)). Константы ингибирования (К₁) в случае связывания с агрегатами фибриллярного Ав СК, СС и 3'-бром- и 3'-иодпроизводных СС составляют 2800, 370, 300 и 250 нМ, соответственно (Ма!к1§ С.А. е! а1., Ргос. ХШк 1п!1. 8утр. Кабюркагт. Скет., Ирр8а1а, 8\гебеп: 94-95 (1997)). Показано, что такие соединения селективно связываются с агрегатами пептида Ав (1-40) ш уйго, а также с отложениями фибриллярного Ав в срезах головного мозга с АО (Ма!Ы§ С.А. е! а1., Ргос. ХШк 1п!1. 8утр. Кабюркагт. Скет., Ирр8а1а, 8\\ебеп: 94-95 (1997)).

Существует несколько возможностей визуализации агрегатов Ав в головном мозгу. Метод визуализации будет улучшать диагностику путем идентификации потенциальных больных с избыточными бляшками Ав в головном мозгу; следовательно, у них возможно развитие болезни Альцгеймера. Он также будет применим для контроля за развитием болезни. Когда лечение лекарственными средствами против бляшек станет доступным, визуализация бляшек Ав в головном мозгу сможет обеспечить важный инструмент для контроля за лечением. Таким образом, идет напряженный поиск простого неинвазивного способа детекции и количественного определения амилоидных отложений у пациента. В настоящее время детекция амилоидных отложений включает гистологический анализ материалов биопсии или аутопсии. Оба способа имеют недостатки. Например, аутопсию можно использовать только для посмертного диагноза.

Непосредственная визуализация амилоидных отложений ш у1уо затруднена, так как отложения могут иметь многие физические свойства (например, плотность и содержание воды) такие же, как у здоровых тканей. Попытки визуализации амилоидных отложений с использованием ядерного магнитного резонанса (МК1) и вспомогательной компьютерной томографии (САТ) не оправдали надежд и позволяли обнаруживать амилоидные отложения только при некоторых благоприятных условиях. Кроме того, усилия в отношении мечения амилоидных отложений антителами, сывороточным амилоидным Р-белком или другими молекулами-зондами обеспечивали некоторую селективность на периферии тканей, но давали плохую визуализацию внутренних областей тканей.

Потенциальные лиганды для детекции агрегатов Ав в живом головном мозгу должны преодолевать интактный гематоэнцефалический барьер. Таким образом, поглощение в головном мозгу можно улучшить, используя лиганды с молекулами относительно небольшого размера (в сравнении с конго красным) и повышенной липофильностью. Обычно в качестве красителей для окрашивания агрегатов Ав в головном мозгу используют высококонъюгированные тиофлавины (8 и Т) (Е1каббаош А. е! а1.. Вюкрес!гоксору, 1: 351-356 (1995)).

Имеется сообщение о высоколипофильном радиоактивном индикаторе [¹⁸Р]РОО№ для связывания как со сплетениями (состоящими, главным образом, из гиперфосфорилированного тау-белка), так и с бляшками (содержащими агрегаты белка Ав) (8кодЫ-1аб1б К. е! а1., Ат. 1. СепаШ РкусЫаку, 2002, 10: 24-35). Сообщается, что, с использованием позитронной эмиссионной томографии (РЕТ), таким радиоактивным индикатором специфически метили отложения бляшек и сплетений у девяти больных АО и семи субъектов для сравнения (ШгбЬегд А., Ьапсе! №иго1., 2004, 3: 519-27). С использованием названной новой процедуры фармакокинетического анализа показаны различия в относительном времени пребывания в участке головного мозга, представляющего интерес, против моста у больных АО и субъектов для сравнения. Относительное время пребывания существенно выше у больных АО. Это дополнительно осложняется вызывающим интерес результатом, что РЭО№ конкурирует с №АЮ за связывание с фибриллами Ав 1п уйго и бляшками Ав ех у1уо (Адберра Е.Э. е! а1., 2001; Адберра Е.Э. е! а1., Nеи^05С^еηсе. 2003, 117: 723-30).

Недавно появились сообщения о визуализации в-амилоида в головном мозгу больных АО с использованием производного бензотиазоланилина |С|6-ОН-ВТА-1 (также называемого |¹¹С|Р1В) (Ма!кщ С.А. е! а1., Сигг. Ркагт. Ое§., 2004, 10: 1469-92; Ма!к1§ С.А. е! а1., Агск. №иго1., 2005, 62: 196-200). В противоположность тому, что наблюдали в случае [¹⁸Р]РОО№, |¹¹С| 6-ОН-ВТА-1 связывается специфически с фибриллярным Ав 1п у1уо. Больные с диагнозом слабой АО показали заметное удерживание |¹¹С|6-ОНВТА-1 в коре головного мозга, которая, как известно, при АО содержит большое количество амилоидных отложений. В группе больных АО удерживание |¹¹С| 6-ОН-ВТА-1 повышено, главным образом, в лобной части коры головного мозга. Большое возрастание также наблюдали в теменной, височной и затылочной частях коры головного мозга и в полосатом теле. Удерживание |¹¹С| 6-ОН-ВТА-1 эквивалентно у больных АО и субъектов для сравнения в участках, которые, как известно, относительно не подвергаются отложению амилоида (таких как подкорковое белое вещество, мост и мозжечок). Недавно иссле

- 2 017898 дован другой зонд, метящий ^ПС бляшки Αβ - производное стильбена [¹¹С]8В-13. Связывание ίη νίίτο с использованием [¹¹С]8В-13 предполагает, что соединение показывает превосходную аффиность связывания, и связывание можно четко измерить в сером веществе коры головного мозга в случаях АО, но не в белом веществе (Кипд М.-Р. с1 а1. , Вгаш Век., 2004, 1025: 89-105). Специфическое связывание в гомогенатах кортикальных тканей контрольного головного мозга было очень низким. Величины Кб [³Н]8В-13 в кортикальных гомогенатах АО составляли 2,4±0,2 нМ. Наблюдали высокую связывающую способность и сравнимые значения (14-45 пмоль/мг белка) (там же). Как ожидалось, у больных АО [¹¹С]8В-13 отображал высокое накопление в лобной части коры головного мозга (возможно, в области, содержащей бляшки Αβ высокой плотности) у больных со слабой и умеренной АО, но не у контрольных субъектов соответствующего возраста (УегйоеГГΝ.Ρ. е1 а1., Ат. 1. Сенат. РкусЫа1гу. 2004, 12: 584-95).

Было бы полезно иметь неинвазивный метод визуализации и количественного определения амилоидных отложений у пациента. Кроме того, было бы полезно иметь соединения, которые ингибируют агрегацию амилоидных белков с образованием амилоидных осаждений и способ определения способности соединения ингибировать агрегацию амилоидных белков.

Сущность изобретения

Настоящее изобретение относится к соединениям формул I и III.

Настоящее изобретение также относится к диагностическим композициям, содержащим меченное изотопом соединение формулы I и III и фармацевтически приемлемый носитель или разбавитель.

Изобретение также относится к способу визуализации амилоидных отложений, включающему введение пациенту детектируемого количества меченного изотопом соединения формулы I и III или его фармацевтически приемлемой соли.

Настоящее изобретение также относится к способу ингибирования агрегации амилоидных белков, включающему введение млекопитающему ингибирующего амилоид количества соединения формулы I и III или его фармацевтически приемлемой соли.

Другой аспект данного изобретения относится к способам и промежуточным соединениям, применимым для синтеза ингибирующих и визуализирующих амилоид соединений формул I и III, описанных в данном описании.

Описание фигур

Фиг. 1 отображает пленку с результатами визуализации соединением по настоящему изобретению.

Фиг. 2 изображает поглощение головным мозгом и костной тканью стирилпиридина 2 в сравнении со стильбеновым аналогом.

Фиг. 3 отображает ауторадиографию на пленке, где стирилпиридин 2 сравнивается со стильбеновым аналогом.

Фиг. 4 изображает кривую насыщения стирилпиридина 2 в гомогенатах головного мозга с АО.

Фиг. 5 показывает некоторые соединения по настоящему изобретению и соответствующие им данные по связыванию.

Фиг. 6 отображает ауторадиографию ίη νίίτο ряда срезов головного мозга.

Фиг. 7 отображает устойчивость ίη νίίτο меченных Р-18 индикаторов к смешанным микросомным фракциям печени человека. Индикаторы в РВ8 без микросомных фракций служат в качестве контроля. Величины (% неизменившегося исходного соединения) являются средними из двух повторений.

Фиг. 8 отображает специфическое связывание [¹⁸Р]2 со смешанными гомогенатами тканей головного мозга с АО и контроля. Серое и белое вещества иссечены из кортикальных участков. Высокоспецифическое связывание обнаружено только в сером веществе. Приведенные величины являются средними ± 8ЕМ из шести измерений. Относительно слабое связывание наблюдают в гомогенатах белого вещества. Напротив, гомогенаты контрольного головного мозга, и серого и белого вещества, показывают существенно более низкое специфическое связывание [¹⁸Р]2.

Фиг. 9 отображает (в верхней части) профиль ВЭЖХ соединения [¹⁸Р]2 и (в нижней части) УФзапись нерадиоактивного стандартного соединения 2 (350 нм). Условия ВЭЖХ: серия 1100 Ащ1еп1: колонка С-18 Рйеиотеиех Сетил, 5 мкм, 250 х 4,6 мм, буфер СН₃С№формиат аммония (1 мМ), 8/2, об./об., 1 мл/мин. Кт 6,34 мин (радиоактивного), 6,05 мин (УФ). Интервал во времени удерживания имеет место из-за конфигурации детектора.

Подробное описание изобретения

Изобретение относится к соединению формулы I

или его фармацевтически приемлемой соли, где η равен 1;

А|, А₂, А₃ и А₅ каждый независимо представляет собой -СН - или -СВ², по необходимости; А₄ представляет собой Ν;

В¹ представляет собой -(СН2)р№^аВ^ь, где В^а и В^ь представляют собой, независимо, водород или С!-4- 3 017898 алкил, и р равно 0; гидрокси; -ОСО (С_1-4) алкил; Я² представляет собой:

где с.| равен целому числу от 1 до 5;

ΐ равен 0;

Ζ представляет собой гидрокси или галоген; и

31 32 33

Я , Я , Я и Я в каждом случае представляют собой независимо водород; или

где ΐ равен 0;

Υ представляет собой галоген;

и представляет собой водород, гидрокси или галоген; и

Я, Я, Я, Я, Я, Я и Я в каждом случае представляют собой, независимо, водород; и

Я⁷ и Я⁸ в каждом случае представляют собой независимо водород.

Предпочтительные соединения включают соединения, в которых галоген при одном или нескольких появлениях в структуре представляет собой радиоизотоп галогена. Также предпочтительными являются соединения, в которых галоген выбирают из группы, состоящей из I, ¹²³1, ¹²⁵1, ¹³¹1, Вг, ⁷⁶Вг, ⁷⁷Вг, Р или ¹⁸Р. Особенно предпочтительными являются соединения, которые содержат ¹⁸Р. Соединения, содержащие ¹²³1, также являются особенно предпочтительными.

Применимые значения Я¹ перечислены выше. Предпочтительными значениями являются гидрокси или -(СН2)рПЯ^аЯ^ь, где р равен 0, и Я^а и Я^ь представляют собой независимо водород или С1-4-алкил. Применимые значения р включают целые числа от 0 до 5. В предпочтительных воплощениях Я¹ находится или в мета- или в пара-положении относительно соответствующего мостика.

Предпочтительным значением Я¹ является ЫЯ^аЯ^ь, где Я^а и Я^ь представляют собой, независимо, водород или С1-4-алкил. В таком воплощении предпочтительно, чтобы С1-4-алкил представлял собой метил. Предпочтительно, один из Я^а и Я^ь представляет собой водород, а другой представляет собой С1-4-алкил, такой как метил. Наиболее предпочтительно, когда как Я^а, так и Я^ь представляет собой метил. Другим предпочтительным значением Я¹ является гидрокси. Также предпочтительными являются любые пролекарственные группы, которые после введения дают предпочтительное значение Я¹. Такие пролекарственные группы хорошо известны в технике.

Предпочтительные соединения формулы I включают такие соединения, в которых А₄ представляет собой Ν, имеющие формулу

где Я^а и Я^ь выбирают, независимо, из водорода или С_1-4-алкила, Ζ имеет значения, указанные выше, и

с.| равен целому числу от 1 до 5.

Примеры предпочтительных соединений включают

- 4 017898

Другие предпочтительные соединения формулы I, где Я² представляет собой ίί, включают

В другом воплощении соединения по настоящему изобретению представляют собой соединения формулы III, имеющие структуру

или их фармацевтически приемлемые соли, где

Л!, А₂, А₃ и А₅ каждый независимо представляет собой -СН, -СЯ² или -СЯ³, по необходимости;

Ад представляет собой Ν;

η равен 1;

Я¹ представляет собой -(ΌΗ^ρΝΚ³^, где Я^а и Я^ь представляют собой, независимо, водород или С_1-4 алкил, и р равен 0;

гидрокси; или

-ОСО(С_1-4)алкил;

Я³ представляет собой радиоизотоп галогена или -§п((С_1-4-алкил)₃; и

Я² представляет собой

ί)

где с.| равен целому числу от 1 до 5;

равен 0;

Ζ представляет собой гидрокси или галоген, и

31 32 33

Я , Я , Я и Я в каждом случае представляют собой, независимо, водород; или ϋ)

где 1 равен 0;

Υ представляет собой галоген;

и представляет собой водород, гидрокси или галоген; и

Я, Я, Я, Я, Я, Я и Я в каждом случае представляют собой, независимо, водород; и

Я⁷ и Я⁸ в каждом случае представляют собой, независимо, водород.

Предпочтительные соединения включают соединения, в которых галоген при одном или нескольких появлениях в структуре представляет собой радиоизотоп галогена. Также предпочтительными являются соединения, в которых галоген выбирают из группы, состоящей из I, Ή. Ή. ¹³¹С Вг, ⁷⁶Вг, ⁷⁷Вг, Р или ¹⁸Р. Особенно предпочтительными являются соединения, которые содержат ¹⁸Р. Соединения, содержащие ¹²³С также являются особенно предпочтительными.

Применимые значения Я¹ перечислены выше. Предпочтительными значениями являются гидрокси или -(СН2)^Я^аЯ^ь, где р равен 0, так что Я¹ представляет собой NЯ^аЯ^ь В предпочтительных воплощениях Я¹ находится или в мета- или в пара-положении относительно соответствующего мостика. Предпочтительным значением Я¹ является NЯ^аЯ^ь, где Я^а и Я^ь представляют собой, независимо, водород или С1-4алкил. В таком воплощении предпочтительно, чтобы С_1-4-алкил представлял собой метил. Предпочтительно один из Я^а и Я^ь представляет собой водород, а другой представляет собой С_1-4-алкил, такой как

- 5 017898 метил. Наиболее предпочтительно, когда как К³, так и К^ь представляет собой метил. Другим предпочтительным значением К¹ является гидрокси.

Примеры наиболее предпочтительных соединений формулы III включают

Другие предпочтительные соединения формулы III, в которых К² представляет собой ίί, включают

где Υ представляет Р.

Соединения формулы III, в которых К² представляет собой ί, когда I равен 0, включают простые гидроксиэфиры, такие как

где К¹ и К² имеют значения, указанные в случае формулы III.

Соединения по настоящему изобретению также могут содержать радиоактивный изотоп углерода в качестве радиоизотопа. Это относится к соединениям, которые содержат один или несколько радиоактивных атомов углерода, предпочтительно ¹¹С, с удельной радиоактивностью, превышающей активность фонового уровня для такого атома. Хорошо известно, в этом отношении, что встречающиеся в природе элементы присутствуют в форме различных изотопов, из которых некоторые являются радиоактивными изотопами. Радиоактивность встречающихся в природе элементов является результатом естественного распределения или распространенности таких изотопов и обычно называется фоновым уровнем. Соединения по настоящему изобретению с радиоизотопом углерода имеют удельную радиоактивность, которая более высокая, чем распространенная в природе, и поэтому выше фонового уровня. Композиция, заявленная в данной заявке, включающая соединение(я) по настоящему изобретению с радиоизотопом(ами) углерода, будет включать такое количество соединения, чтобы композицию можно было использовать для индикации, визуализации, радиотерапии и подобного применения.

В некоторых воплощениях соединений, раскрытых в данном описании, галоген, предпочтительно Р, или хелатирующии агент соединяются со стирилпиридиновой основой через цепь ПЭГ с различным числом этоксигрупп. Фторированный стирилпиридин 2 показывает высокую аффинность связывания (Κί = 2,5±0,4 нМ) . Аналог с диметиламиногруппой показывает самую высокую аффинность. Это противоположно аналогам стильбена, имеющим склонность проявлять более высокую аффинность в случае замещения монометиламино. Как видно на схемах 1-3 в данном описании, введение радиоактивных изотопов осуществляется успешно с образованием соединений-мишеней. Синтез соединения 2 по схеме 5 приводит ко времени получения примерно 60 мин; радиохимический выход ~35% (скорректирован на распад);

- 6 017898 радиохимическая чистота >98%; и удельная радиоактивность от примерно 1000 до примерно 1500 Ки/ммоль. Биораспределение ίη νίνο ¹⁸Р-пегилированного стиролпиридина у здоровых мышей показывает исключительное проникновение в головной мозг после ίν инъекции и быстрое вымывание. Ауторадиография с 2 посмертных срезов головного мозга с АО подтверждает специфическое связывание, связанное с наличием бляшек Αβ.

Соединения формул I и III также могут быть сольватированы, в особенности, гидратированы. Г идратация может происходить во время получения соединений или композиций, содержащих соединения, или гидратация может происходить со временем из-за гигроскопичного характера соединений. Кроме того, соединения по настоящему изобретению могут существовать в несольватированной, а также в сольватированной формах с фармацевтически приемлемыми растворителями, такими как вода, этанол и подобные растворители. Вообще, для целей настоящего изобретения сольватированные формы считаются эквивалентыми несольватированным формам.

Когда любая переменная встречается более одного раза в любом элементе или в формуле I или III, ее определение при каждом появлении не зависит от ее определения при любом другом появлении. Также сочетания заместителей и/или переменных допустимы только в том случае, если такие сочетания приводят к устойчивым соединениям.

Термин алкил, используемый в данном описании сам по себе или как часть другой группы, относится как к линейным, так и к разветвленным радикалам с числом атомов углерода до 4 атомов углерода, таким как метил, этил, пропил, изопропил, бутил, трет-бутил и изобутил.

Термин гало или галоген, используемый в данном описании сам по себе или как часть другой группы, относится к атомам хлора, брома, фтора или иода и их изотопам. Термин радиогалоген относится конкретно к радиоактивным изотопам галогена.

Другой аспект данного изобретения относится к способам получения соединений формул I и III.

Синтез диметиламинозамещенного производного стирилпиридина 1 и его фторпегелированного варианта 2 показан на схеме 1. Соединение 1 получают реакцией Виттига между диэтил-4(диметиламино)бензилфосфонатом и 6-хлорникотинальдегидом в присутствии трет-бутоксида калия в ДМФА (выход 62%). Прямым аликилированием соединения 1 2-(2-(2-фторэтокси)этокси)этанолом² с использованием гидрида натрия в ТГФ получают фторпегелированное соединение 2 (выход 33%), которое можно использовать в качестве холодного стандарта для введения радиоактивных изотопов. Получение монометиламинозамещенного производного 6 осуществляют способом, показанным на схеме 2. Реакция Виттига между 4-нитробензилфосфонатом и 6-хлорникотинальдегидом в присутствии метоксида натрия в метаноле при кипячении с обратным холодильником дает соединение 3 с высоким выходом (88%). Соединение 3 после реакции можно легко извлечь фильтрацией и использовать непосредственно на следующей стадии; дополнительной очистки не требуется. Алкилированием 3 2-(2-(2фторэтокси)этокси)этанолом с использованием гидрида натрия в ТГФ получают соединение 4 (выход 30%). Нитрогруппу соединения 4 можно восстановить с использованием хлорида олова(2) в этаноле и получить соединение 5 (выход 58%). Монометилирования 5 достигают с использованием параформальдегида, метоксида натрия и борогидрида натрия, и получают соединение 6 с относительно высоким выходом (73%).

Для того, чтобы получить нужное меченное Р-18 диметиламинозамещенное производное стирилпиридина [¹⁸Р]2, используют в качестве предшественника тозилат 10 (схема 3). Получение 10 начинают с алкилирования 3 триэтиленгликолем в ДМФА, которому способствует микроволновое излучение, и получают соединение 7 (выход 77%). Затем нитрогруппу 7 восстанавливают до аминогрупы с использованием хлорида олова(2) и получают соединение 8 (выход 76%), а затем следует диметилирование с использованием параформальдегида и цианоборогидрида натрия в уксусной кислоте с образованием соединения 9 с высоким выходом (95%). Сначала пытались мезилировать 9, однако мезилат 9 оказался очень неустойчивым и разлагался во время получения. Успешно осуществляют тозилирование 9 с использованием тозилхлорида в пиридине, и получают нужный тозилат 10 (выход 41%) как предшественник для получения меченного радиоактивным изотопом [¹⁸Р]2.

- 7 017898

Схема 1

X—/Ч—_ч / \=/ р(0)(0Е1)г онс-ΖΛ-οι >2^1 >

МаН, ДМФА

КО'би, ДМФА

ОЧ^Р

СХЕМА

ОНО—О \=м

ЫаОСНд. СН₃ОН

Ο₂Ν

Η2Ν №Н, ДМФА ⁴⁼⁷ Р(О)(ОЕ1)г

^О^з ^8Π?ΐ2

НС1/ЕЮН

С1

О'^4'^Р '3

1ХСНР)п

ΝθΟΟΗ₃

2) Ν3ΒΗ, нн

'3

ОН в

Схема 3

К_гСОа. ОМЕ

ОгМ микроволновое излучение, (СНгО)_п ЫаВНзСМ

Схема 4 синтеза соединений формулы III. Схема 5 отображает синтез неко-

х

О^^ОН

Схемы 5-7 отображают способ торых промежуточных соединений, применимых для получения соединений по изобретению. Схемы 6 и 7 отображают синтез меченных радиоактивными изотопами и немеченных соединений по изобретению. В соединениях 17-110 I в названии соединения означает промежуточное соединение.

Реагенты и условия:

(a) N18, СНзСН кипячение с обратным холодильником, 1 ч;

(b) Р(СН2СН2О)зН, Р1ьР. ΌΙΆΌ, ТГФ, от -5°С до к.т., 2 ч;

(c) (1) НОСН2СН2ОТБПМ8, РН₃Р. ΌΙΆΌ, ТГФ, от -5°С до к.т., 2 ч;

(2) 1% НС1 в 95% ЕЮН, к.т., 1 ч.

- 8 017898

Схема 6

111 К^-^Н^НзО^СНаСИаР, К^-Вх

12: ^-(СНэСНр) _аСИаСН)Р₄ Κ₃--3ηΒί»3 13: ^-(СНзСНРЭаСНаСН 14: П_г«.СН₁СН рН, К^.Вг

15: Вз^-СНзСНаОН, К^-Зг

16: Е^-СНзСНаОН.В^Л

а; Β₁=-Ν®Ηώ_ϊ ¢: ек^=чососн₅ е: Н_х ^и-ОН

Реагенты и условия:

(a) 4-замещенные стиролы, К₂СО₃, ВщИВг, Ρά(ΟΛο)₂, ДМФА, 55-65°С;

(b) (Ви₃§и)₂, Ρά(ΡΡΗ₃)₄, толуол, 110°С;

(c) К₂СО₃, ΕΐΟΗ/ТГФ, к.т., 2 ч;

(ά) 1₂, ТГФ, от 0°С до к.т.;

(е) ΤΜδΟΤί, 2,6-лутидин, ЭСМ. от -78°С до к.т.

Схема 7

Р“1ЦЗа: ΐς—Ы(СН,)_а, Κ^ΟΗ^Η^ΟΗ^ΟΗ/ (^и6Щ31> :К1-ЫН(СН3), К^ЧСН,СНаОЬСНаСН5Р [^ι»ΐμ&ι: Κ^-4φΗ£,. к:— СН_аСН₃ОН Р»1]16Ь: К^ШССНй.Ва-СН^Н^ОН [“®Ι (Ιίβ: К,—ОН, К^МЗ^СН^Н

Комплексы Тс-99т можно получить следующим образом. Небольшое количество несодержащего радиоактивные изотопы соединения (1-2 мг) растворяют в 100 мкл Ε1ΟΗ и смешивают с 200 мкл НС1 (1 н) и 1 мл раствора δη-глюкогептоната (содержащего 8-32 мкг 8иС1₂ и 80-320 мкг Ыа-глюкогептоната, рН 6,67) и 50 мкл раствора ЭДТК (0,1 н). Затем добавляют раствор [^99тТс]пертехнетата в физиологическом растворе (100-200 мкл; колебание в пределах 2-20 мКи). Реакционную смесь греют в течение 30 мин при 100°С и затем охлаждают до комнатной температуры. Реакционную смесь анализируют ТСХ (Ε1ΟΗ: конц. ΝΗ₃, 9:1) на образование продукта реакции и для контроля за чистотой. Смесь можно нейтрализовать фосфатным буфером до рН 5,0.

Настоящее изобретение также относится к способу получения комплекса технеция-99т по настоящему изобретению взаимодействием технеция-99т в форме пертехнетата в присутствии восстановителя и, необязательно, подходящего хелатообразователя с соответствующим Сй-содержащим соединением.

Восстановитель служит для восстановления пертехнетата Тс-99т, который элюируют из генератора молибдена-технеция в физиологическом растворе. Подходящими восстановителями являются, например, дитионит, формамидинсульфиновая кислота, диаминоэтандисульфинат или подходящие восстанавливающие ионы металлов, такие как δη(ΙΙ), Ее(11), Си(1), Τί(ΙΙΙ) или 8Ь(Ш). Установлено, что δη(ΙΙ) является особенно подходящим.

В случае вышеуказанной реакции образования комплекса технеций-99т вводят во взаимодействие с соответствующим соединением по изобретению в виде соли или в форме технеция, связанного с относительно слабым хелатообразователем. В последнем случае нужный комплекс технеция-99т формируется за счет лигандного обмена. Примерами подходящих хелатообразователей для радионуклеида являются дикарбоновые кислоты, такие как щавелевая кислота, малоновая кислота, янтарная кислота, малеиновая кислота, ортофталевая кислота, яблочная кислота, молочная кислота, винная кислота, лимонная кислота, аскорбиновая кислота, салициловая кислота, или производные таких кислот; соединения фосфора, такие как пирофосфаты; или еноляты. Лимонная кислота, винная кислота, аскорбиновая кислота, глюкогептоновая кислота или их производные являются особенно подходящими хелатообразователями для

- 9 017898 такой цели, поскольку хелат технеция-99т с одним из указанных хелатообразователей претерпевает нужный лигандный обмен особенно легко.

Самая используемая процедура получения комплексов |Τ(Ό|'³Ν;$2 основана на восстановлении хлоридом олова (II) [^99тТс] пертехнетата - обычного исходного вещества. Процедура введения радиоактивного изотопа обычно имеет в основе реакцию обмена лигандами Тс-99т между (8и)глюкогептонатом Тс-99т и лигандом Ν28₂. Получение хлорида олова (II) и сохранение его в соответствующей форме олова(П) критически важно для успеха реакции введения радиоактивного изотопа. Для того, чтобы стабилизировать чувствительный к воздуху ион олова, обычной практикой в медицинской радиологии является применение лиофилизованного набора, в котором ион олова находится в веществе в форме лиофилизованного порошка, смешанного с избыточным количеством глюкогептаноата, в атмосфере инертного газа, такого как азот или аргон. Получение наборов лиофилизованный хлорид олова/глюкогептаноат натрия обеспечивает воспроизводимость и предсказуемость реакции введения радиоактивного изотопа. Лиганды Ν₂8₂, как правило, чувствительны к воздушной атмосфере (тиолы легко окисляются воздухом), и существуют последующие реакции, которые ведут к разложению лигандов. Наиболее распространенным и предсказуемым способом сохранения лигандов является получение лиофилизованных наборов, содержащих по 100-500 мкг лигандов в атмосфере аргона или азота.

Когда соединения по данному изобретению должны использоваться в качестве средств визуализации, в них следует ввести подходящие радиоактивные изотопы галогена. Хотя изотопы ¹²Д применимы для лабораторного тестирования, они, как правило, неприменимы для целей фактического диагноза из-за относительно длительного периода полураспада (60 дней) и низкого гамма-излучения (30-60 кэВ) ¹²⁵Р Изотоп ^Ι23Ί имеет период полураспада тринадцать часов и энергию гамма-излучения 159 кэВ, и поэтому ожидается, что возможно мечение таким изотопом лигандов, используемых для диагностических целей. Другие изотопы, которые можно использовать, включают ¹³Й (период полураспада 2 часа). Подходящие изотопы брома включают ⁷⁷Вг и ⁷⁶Вг.

Соединения по данному изобретению, содержащие радиоактивные изотопы галогенов, допускают простое получение из материалов, которые могут получить пользователи в наборах. Наборы для получения средств для визуализации, могут содержать, например, флакон, содержащий физиологически подходящий раствор промежуточного соединения формулы I или III, в концентрации и при рН, подходящих для оптимальных условий комплексообразования. Пользователю следует добавить во флакон соответствующее количество вещества, содержащего радиоизотоп, например Να¹⁷³!, и окислителя, такого как пероксид водорода. Полученный содержащий радиоактивный изотоп лиганд затем можно вводить внутривенно пациенту и визуализировать рецепторы в головном мозгу посредством измерения их гаммаизлучения или фотоэмиссии.

Так как радиоактивную фармацевтическую композицию по настоящему изобретению можно получить легко и просто, получение может легко осуществить пользователь. Поэтому настоящее изобретение также относится к набору, включающему:

(1) несодержащее радиоактивные изотопы соединение по настоящему изобретению, находящееся, необязательно, в сухом состоянии; и также необязательно содержащее инертный фармацевтически приемлемый носитель и/или вспомогательные вещества, добавляемые к нему; и (2) восстановитель и, необязательно, хелатообразователь;

где ингредиенты (1) и (2) могут быть, необязательно, объединены; и где также, необязательно, могут быть включены инструкции по применению с предписанием по осуществлению вышеуказанного способа путем введения во взаимодействие реагентов (1) и (2) с технецием-99т в форме раствора пертехнетата.

Примеры подходящих восстановителей и хелатообразователей для вышеуказанного набора приводятся выше. Раствор пертехнетата пользователь может получить из генератора молибдена-технеция. Такие генераторы доступны от ряда институтов, которые осуществляют радиодиагностические процедуры. Как отмечалось выше, ингредиенты (1) и (2) могут быть объединены, при условии, что они совместимы. Такой однокомпонентный набор, в котором объединенные ингредиенты предпочтительно лиофилизованы, исключительно подходит для осуществления пользователем взаимодействия с раствором пертехнетата простым способом.

При желании радиоактивное диагностическое средство может содержать любую добавку, такую как вещества, регулирующие рН (например, кислоты, основания, буферы), стабилизаторы (например, аскорбиновую кислоту) или вещества, придающие изотоничность (например, хлорид натрия).

Термин фармацевтически приемлемая соль, используемый в данном описании, относится к солям карбоновых кислот или солям присоединения кислот соединений по настоящему изобретению, которые, в рамках здравого смысла в медицине, подходят для применения в контакте с тканями пациентов без нежелательных токсичности, раздражения, аллергической реакции и т.п., соизмеримо с разумным соотношением благоприятное воздействие/риск и эффективны для их предполагаемого применения, а также к цвиттерионным формам соединений по изобретению, когда они возможны. Термин соли относится к относительно нетоксичным солям присоединения неорганических и органических кислот соединений по

- 10 017898 настоящему изобретению. Он также включает соли, полученные с нетоксичными органическими кислотами, такими как алифатические моно- и дикарбоновые кислоты, например, уксусная кислота, фенилзамещенные алкановые кислоты, гидроксиалкановые и алкандиовые кислоты, ароматические кислоты и алифатические и ароматические сульфоновые кислоты. Такие соли можно получить ίη δίΐιι во время конечной стадии извлечения и очистки соединений или отдельно взаимодействием очищенного соединения в его форме свободного основания с подходящей органической или неорганической кислотой и выделением полученной таким образом соли. Другие характерные соли включают гидробромиды, гидрохлориды, сульфаты, бисульфаты, нитраты, ацетаты, оксалаты, валераты, олеаты, пальмитаты, стеараты, лаураты, бораты, бензоаты, лактаты, фосфаты, тозилаты, цитраты, малеаты, фумараты, сукцинаты, тартраты, нафтилаты, мезилаты, глюкогептонаты, лактобионаты и лаурилсульфонаты, пропионаты, пивалаты, цикламаты, изэтионаты и подобные соли. Они могут включать катионы на основе щелочных и щелочноземельных металлов, таких как натрий, литий, калий, кальций, магний, и т.п., а также нетоксичные катионы аммония, четвертичного аммония и аминов, в том числе, но без ограничения, аммония, тетраметиламмония, тетраэтиламмония, метиламина, диметиламина, триметиламина, триэтиламина, этиламина и т.п. (см., например, работу Вегде 8.М. с1 а1., Рйаттасеи11са1 8а1К 1. Рйатт. 8с1., 66: 1-19 (1977), включенную в данное описание в качестве ссылки).

На первой стадии способа визуализации по настоящему изобретению меченное соединение формулы I или III вводят в ткань или пациенту в детектируемом количестве. Соединение, типично, является частью фармацевтической композиции и вводится в ткань или пациенту способами, хорошо известными специалистам в данной области техники.

Введение меченного соединения пациенту может быть способом общего или локального введения. Например, соединение можно ввести или перорально, или ректально, парентерально (внутривенно, внутримышечно или подкожно), внутриполостно, интравагинально, интраперитонеально, интравезикулярно, локально (порошки, мази или капли), или в виде внутриротового или назального спрея. Меченое соединение можно вводить пациенту таким образом, что оно доставляется в определенный орган или ткань, представляющие интерес. Например, желательно обнаружить местоположение и количество амилоидных отложений в головном мозгу с целью диагностики или отслеживания развития болезни Альцгеймера у пациента. Одним из наиболее желательных свойств средства визуализации ίη νίνο головного мозга является способность проходить через интактный гематоэнцефалический барьер после инъекции ίν ударной дозы.

В предпочтительном воплощении изобретения меченое соединение вводят пациенту в детектируемом количестве, и после того, как пройдет достаточное время для того, чтобы соединение ассоциировалось с амилоидными отложениями, меченое соединение детектируют неинвазивно в организме пациента. В другом воплощении изобретения меченное радиоактивными изотопами соединение формулы I или III вводят пациенту, оставляют достаточное время для того, чтобы соединение ассоциировалось с амилоидными отложениями, затем берут у пациента образец ткани и детектируют в ткани меченое соединение вне организма пациента. В третьем воплощении изобретения берут у пациента образец ткани и вводят в образец меченное радиоактивными изотопами соединение формулы I или III. Спустя достаточное время для того, чтобы соединение связалось с амилоидными отложениями, соединение детектируют.

Термин ткань обозначает часть тела пациента. Примеры тканей включают головной мозг, сердце, печень, кровеносные сосуды и артерии. Детектируемое количество представляет собой количество меченого соединения, необходимое для обнаружения выбранным способом детекции. Количество меченого соединения, которое вводят пациенту для того, чтобы обеспечить детекцию, могут легко определить специалисты в данной области техники. Например, пациенту можно давать возрастающие количества меченого соединения до тех пор, пока соединение не будет обнаруживаться выбранным способом детекции. В соединения вводят метку для обеспечения детекции соединений.

Термин пациент обозначает людей и других млекопитающих. Специалисты в данной области техники также хорошо знакомы с определением промежутка времени, достаточного для того, чтобы соединение ассоциировалось с амилоидными отложениями. Необходимое количество времени можно легко определить путем введения пациенту детектируемого количества соединения формулы I или III и последующей детекции меченого соединения в различные моменты времени после введения.

Термин ассоциированный обозначает химическое взаимодействие между меченым соединением и амилоидным отложением. Примеры ассоциаций включают ковалентные связи, ионные связи, гидрофильные-гидрофобные взаимодействия, гидрофобные-гидрофильные взаимодействия и комплексообразование.

Специалисты в данной области техники хорошо знакомы с различными способами детекции меченых соединений. Например, ядерный магнитный резонанс (МР!), позитронную эмиссионную томографию (РЕТ) или эмиссионную компьютерную томографию отдельных фотонов (8РЕСТ) можно использовать для детекции соединений, меченных радиоактивными изотопами. Радиоизотоп, который вводят в соединение, будет зависеть от желательного способа детекции. Например, если в качестве способа детекции выбирают РЕТ, соединение должно обладать атомом, испускающим позитроны, таким как ¹¹С

- 11 017898 или ¹⁸Р.

Радиоактивное диагностическое средство должно иметь достаточную радиоактивность и концентрацию радиоактивного фактора, которая может обеспечить достоверный диагноз. Например, в случае, когда радиоактивным металлом является технеций-99т, его можно включать, как правило, в количестве 0,1-50 мКи в примерно 0,5-5,0 мл во время введения. Количество соединения формулы I или III может быть таким, какого достаточно для образования устойчивого хелатного соединения с радиоактивным металлом.

Полученное таким образом хелатное соединение как радиоактивное диагностическое средство является достаточно устойчивым и поэтому его можно сразу же вводить как таковое или хранить до его применения. При необходимости радиоактивное диагностическое средство может содержать любую добавку, такую как вещества, регулирующие рН (например, кислоты, основания, буферы), стабилизаторы (например, аскорбиновую кислоту) или вещества, придающие изотоничность (например, хлорид натрия).

Визуализацию амилоидных отложений также можно осуществить количественно, так что можно определить количество амилоидных отложений.

123 125

Предпочтительные соединения для визуализации включают радиоизотопы, такие как С, I, I, ¹³¹Σ, ¹⁸р, 7б_Вг или ⁷⁷Вг.

Другим аспектом изобретения является способ ингибирования агрегации амилоидных бляшек. Настоящее изобретение также относится к способу ингибирования агрегации амилоидных белков с образованием амилоидных отложений путем введения пациенту амилоидингибирующего количества соединения указанной выше формулы I, Ы, II или III.

Специалисты в данной области техники могут легко определить амилоидингибирующее количество путем простого введения пациенту соединения формулы I или III в возрастающих количествах до тех пор, пока рост амилоидных отложений на уменьшится или не прекратится. Скорость роста можно оценить с использованием визуализации, как описано выше, или путем взятия образца ткани у пациента и наблюдения в нем амилоидных отложений. Соединения по настоящему изобретению можно вводить пациенту при уровнях дозировки в интервале от примерно 0,1 до примерно 1000 мг в сутки. Для обычного взрослого человека с массой тела примерно 70 кг достаточной является дозировка в интервале от примерно 0,01 до примерно 100 мг на килограмм массы тела в сутки. Однако конкретная используемая дозировка может изменяться. Например, дозировка может зависеть от ряда факторов, включая потребности пациента, тяжесть состояния, от которого лечат, и фармакологическую активность используемого соединения. Определение оптимальных дозировок хорошо известно специалистам в данной области техники.

Приведенные далее примеры являются иллюстративными, но не ограничительными, для способа и композиций по настоящему изобретению. Другие подходящие модификации и адаптации к различным условиям и параметрам, которые обычно встречаются и очевидны для специалистов в данной области техники, находятся в сфере сущности и объема изобретения.

Все реагенты, используемые в синтезах, являются коммерческими продуктами, используются без дополнительной очистки, если не указано иное. Спектры ¹Н ЯМР получают на спектрометре Вгискег ΌΡΧ (200 МГц) в СЭС1₃. Химические сдвиги приводятся в величинах δ (миллионные доли) относительно внутреннего стандарта ТМС. Константы взаимодействия приводятся в герцах. Мультиплетность определена с (синглет), д (дублет), т (триплет), уш (уширенный), м (мультиплет). Элементный анализ осуществляет ЛИаиИс М1сго1аЬ ГИС. В случае каждой процедуры стандартная обработка относится к следующим стадиям: добавление указанного органического растворителя, промывка органического слоя водой и затем солевым раствором, отделение органического слоя от водного слоя, сушка объединенных органических слоев безводным сульфатом натрия, отфильтровывание сульфата натрия и удаление органического растворителя при пониженном давлении.

Примеры

Пример 1. Синтез соединения 2 (Е)-2-Хлор-5-(4-диметиламиностирил)пиридин (1)

К раствору диэтил-(4-диметиламинобензил)фосфоната (80 мг, 0,30 ммоль) в безводном ДМФА (5,0 мл) при 0°С добавляют трет-бутоксид калия (99 мг, 0,89 ммоль). Затем добавляют 2-хлор-5пиридилальдегид (42 мг, 0,30 ммоль). Реакционную смесь нагревают до комнатной температуры и перемешивают в течение 4 ч. Добавляют воду и смесь экстрагируют МеОН/ЭСМ (1:9, об./об.). Органический слой отделяют, промывают солевым раствором, сушат над безводным сульфатом натрия и упаривают. Остаток очищают ПТСХ (РТЬС) (в качестве проявляющего растворителя 20% гексана в ΌΟΜ) и получают продукт 1 (48 мг, выход 62%).

¹Н ЯМР (200 МГц, СЭС1₃): δ 8,42 (1Н, д, 1=2,2 Гц), 7,77 (1Н, д, д, 1₁=8,4 Гц, 1₂=2,4 Гц), 7,41 (2Н, д, 1=8,6 Гц), 7,27 (1Н, д, 1=8,2 Гц), 7,08 (1Н, д, 1=16,4 Гц), 6,77 (3Н, м), МСВР (ЕТ) т/ζ вычислено для [С₁₃Н₉С1Ы₂О₂]⁺ 260,0353.

(Е)-2-(2-(2-(2-Фторэтокси)этокси)этокси)-5-(4-диметиламиностирил)пиридин (2)

К раствору 2-(2-(2-фторэтокси)этокси)этанола (39 мг, 0,26 ммоль) в безводном ДМФА (5,0 мл) добавляют гидрид натрия (95%, 10 мг, 0,39 ммоль). После перемешивания при комнатной температуре в

- 12 017898 течение 20 мин добавляют соединение 5 (35 мг, 0,13 ммоль) и реакционную смесь греют при 100°С в течение 2 ч. После охлаждения до комнатной температуры добавляют воду и реакционную смесь экстрагируют этилацетатом. Органический слой отделяют, промывают солевым раствором, сушат над безводным сульфатом натрия и упаривают. Остаток очищают ПТСХ (в качестве проявляющего растворителя 4% МеОН в ЭСМ). и получают продукт 2 (16 мг, выход 32,9%).

¹Н ЯМР (200 МГц, С1)С1_;): δ 8,14 (1Н, д, 1=2,4 Гц), 7,76 (1Н, д, д, 1₁=8,6 Гц, 1₂=2,4 Гц), 7,39 (2Н, д, 1=8,8 Гц), 6,87 (2Н, м) , 6,76 (3Н, м) , 4,53 (2Н, д, т, ^=47,6 Гц, 1₂=4,2 Гц), 4,50 (2Н, т, 1=4,8 Гц), 3,85 (3Н, м), 3,70 (5Н, м), 2,99 (6Н, с). МСВР (ΕΙ) т/ζ вычислено для [С₂₁Н₂₈Ы₂О₄]⁺ 372, 2049.

Пример 2. Синтез соединения 6 (Е)-2-Хлор-5-(4-нитростирил)пиридин (3)

В раствор диэтил-(4-нитробензил)фосфоната (546 мг, 2,0 ммоль) и 2-хлор-5-пиридилальдегида (283 мг, 2,0 ммоль) в метаноле (5,0 мл) постепенно добавляют метоксид натрия (1М раствор в метаноле, 5,0 мл). Затем реакционную смесь кипятят с обратным холодильником в течение 1 ч. После охлаждения до 0°С выпавшее в осадок желтое вещество отфильтровывают и промывают холодным метанолом, и получают продукт 3 (458 мг, выход 88%), который используют непосредственно на следующей стадии без дополнительной очистки.

Ή ЯМР (200 МГц, С11С1;): δ 8,53 (1Н, д, ,1=2,4 Гц), 8,25 (2Н, д, 1=8,8 Гц), 7,85 (1Н, д, д, ί₁=8,4 Гц, 1₂=2,4 Гц), 7,65 (2Н, д, 1=8,8 Гц), 7,36 (1Н, д, 1=8,4 Гц), 7,19 (2Н, с), МСВР (ΕΙ) т/ζ вычислено для [С₁₃Н₉С1Ы₂О₂]⁺ 260,0353.

(Е)-2-(2-(2-(2-Фторэтокси)этокси)этокси)-5-(4-нитростирил)пиридин (4)

В защитной атмосфере азота при 0°С 2-(2-(2-фторэтокси)этокси)этанол (60 мг, 0,39 ммоль) добавляют в смесь гидрида натрия (26,4 мг, 60% дисперсия в минеральном масле, 0,66 ммоль) и безводного ДМФА (5 мл). Смесь перемешивают при комнатной температуре в течение получаса, и добавляют соединение 3 (85,7 мг, 0,33 ммоль). Затем реакционную смесь греют при 100°С в течение 2 ч и охлаждают. Добавляют этилацетат и воду, органический слой отделяют, промывают солевым раствором, сушат над безводным сульфатом натрия и упаривают. Остаток очищают ПТСХ (в качестве проявляющего растворителя 2% МеОН в ЭСМ). и получают продукт 4 (37 мг, выход 30%).

Ή ЯМР (200 МГц, С1)С1_;): δ 8,22 (3Н, д, 1=8,8 Гц), 7,84 (1Н, д, д, ί₁=8,6 Гц, 1₂=2,4 Гц), 7,61 (2Н, д, 1=8,8 Гц), 7,20 (1Н, д, 1=16,4 Гц), 7,02 (1Н, д, 1=16,4 Гц), 6,84 (1Н, д, 1=8,6 Гц), 4,53 (2Н, д, т, ^=47,6 Гц, 12=4,2 Гц), 4,52 (2Н, т, 1=4,8 Гц), 3,85 (3Н, м), 3,70 (5Н, м); МСВР (ΕΙ) т/ζ вычислено для [С1₉Н₂₁ГХ₂О₅]⁺ 376,1435.

(Е)-2-(2-(2-(2-Фторэтокси)этокси)этокси)-5-(4-аминостирил)пиридин (5)

Соединение 4 (34 мг, 0,09 ммоль) растворяют в этаноле (5 мл), и затем добавляют хлорид олова(11) (51,4 мг, 0,27 ммоль) и концентрированную НС1 (0,25 мл). Реакционную смесь кипятят с обратным холодильником в течение 2 ч и охлаждают. Используют 2 н раствор ЫаОН для доведения рН до 10. Добавляют дихлорметан, и органический слой отделяют, промывают солевым раствором, сушат над безводным сульфатом натрия и упаривают. Остаток очищают ПТСХ (в качестве проявляющего растворителя 3% МеОН в ЭСМ) , и получают продукт 5 (18 мг, выход 58%).

Ή ЯМР (200 МГц, С1)С1_;): δ 8,14 (1Н, д, 1=2,2 Гц), 7,76 (1Н, д, д, ί₁=8,6 Гц, 1₂=2,4 Гц), 7,32 (2Н, д, 1=8,4 Гц), 6,80 (5Н, м), 4,53 (2Н, д, т, ^=47,6 Гц, 1₂=4,2 Гц), 4,49 (2Н, т, 1=4,8 Гц), 3,85 (3Н, м), 3,70 (5Н, м), 1,8-3,0 (2Н, ушир.); МСВР (ΕΙ) т/ζ вычислено для [С1₉Н₂₃ЕХ₂О₃]⁺ 376,1693.

(Е)-2-(2-(2-(2-Фторэтокси)этокси)этокси)-5-(4-метиламиностирил)пиридин (6)

К раствору соединения 5 (15,8 мг, 0,046 ммоль) в метаноле (5 мл) добавляют метоксид натрия (1 М раствор в метаноле, 0,23 мл), а затем добавляют параформальдегид (6,6 мг, 0,23 ммоль). Реакционную смесь кипятят с обратным холодильником в течение 1,5 ч и затем охлаждают до 0°С на ледяной бане. Осторожно добавляют борогидрид натрия (10,4 мг, 0,27 ммоль). Смесь снова кипятят с обратным холодильником в течение 1 ч и охлаждают. Добавляют дихлорметан и воду. Органический слой отделяют, промывают солевым раствором, сушат над безводным сульфатом натрия и упаривают. Остаток очищают ПТСХ (в качестве проявляющего растворителя 3% МеОН в ЭСМ) и получают продукт 6 (12 мг, выход 73%).

Ή ЯМР (200 МГц, С1)С1_;): δ 8,14 (1Н, д, 1=2,2 Гц), 7,76 (1Н, Д, д, ί₁=8,6 Гц, 1₂=2,4 Гц), 7,35 (2Н, д, 1=8,6 Гц), 6,92 (1Н, д, 1=16,4 Гц), 6,80 (1Н, д, 1=16,4 Гц), 6,76 (2Н, д, 1=8,6 Гц), 4,53 (2Н, д, т, ^=47,6 Гц, 1₂=4,2 Гц), 4,49 (2Н, т, 1=4,8 Гц), 3,85 (3Н, м), 3,70 (5Н, м), 2,88 (3Н, с).

МСВР (ΕΙ) т/ζ вычислено для |С11_;.1^;\ О_;|' 360,1849.

Пример 3. Синтез соединения 10 (Е)-2-(2-(2-(2-Г идроксиэтокси)этокси)этокси)-5 -(4-нитростирил)пиридин (7)

Смесь карбоната калия (158,7 мг, 1,15 ммоль), соединения 3 (100 мг, 0,38 ммоль) и триэтиленгликоля (576 мг, 3,8 ммоль) в безводном ДМФА (5,0 мл) запаивают в ампуле для микроволновой электропечи (от Вю1аде) и подвергают облучению микроволнами (система Вю1аде Ιηί(ίαΙθΓ) при 180°С в течение 25 мин. После охлаждения до комнатной температуры добавляют воду и реакционную смесь экстрагируют этилацетатом. Органический слой отделяют, промывают солевым раствором, сушат над безводным

- 13 017898 сульфатом натрия и упаривают. Остаток очищают ПТСХ (в качестве проявляющего растворителя 4% МеОН в БСМ) и получают продукт 7 (110 мг, выход 77%).

¹Н ЯМР (200 МГц, СБС1₃): δ 8,20 (3Н, м), 7,83 (1Н, д, д, 11=8,6 Гц, 1₂=2,4 Гц), 7,61 (2Н, д, 1=8,8 Гц),

7.10 (2Н, м) 6,84 (1Н, д, 1=8,6 Гц), 4,53 (2Н, т, 1=4,8 Гц), 3,88 (2Н, т, 1=4,8 Гц), 3,71 (6Н, м) , 3,61 (2Н, м),

2.10 (1Н, ушир.), МСВР (ЕЦ т/ζ вычислено для [С19Н₂₂Ы₂О₆]⁺ 374,1478.

(Е)-2-(2-(2-(2-Гидроксиэтокси)этокси)этокси)-5-(4-аминостирил)пиридин (8)

К раствору соединения 7 (100 мг, 0,27 ммоль) в этаноле (10 мл) добавляют хлорид олова(П) (202,8 мг, 1,07 ммоль), а затем добавляют концентрированную НС1 (0,5 мл). Реакционную смесь кипятят с обратным холодильником в течение 1,5 ч и затем охлаждают до 0°С. Выпавшее в осадок желтое вещество собирают фильтрацией и затем суспендируют в этилацетате. Добавляют насыщенный раствор ЫаНСО₃ для доведения рН до 9. Органический слой отделяют, промывают солевым раствором, сушат над безводным сульфатом натрия и упаривают. Остаток очищают ПТСХ (в качестве проявляющего растворителя 5% МеОН в БСМ), и получают продукт 8 (710 мг, выход 76%).

'|| ЯМР (200 МГц, СБС1₃): δ 8,12 (1Н, д, 1=2,4 Гц), 7,73 (1Н, д, д, ^=8,6 Гц, 1₂=2,4 Гц), 7,29 (2Н, д, 1=8,5 Гц), 6,84 (2Н, м) , 6,75 (1Н, д, 1=8,6 Гц), 6,69 (2Н, д, 1=8,5 Гц), 4,48 (2Н, т, 1=4,8 Гц), 3,86 (2Н, т, 1=4,8 Гц), 3,71 (6Н, м), 3,60 (2Н, м), 3,32 (3Н, ушир.), МСВР (ΕΣ) т/ζ вычислено для [С1₉Н₂₄Ы₂О₄]⁺ 344,1736.

(Е)-2-(2-(2-(2-Гидроксиэтокси)этокси)этокси)-5-(4-диметиламиностирил)пиридин (9)

К раствору соединения 8 (65 мг, 0,19 ммоль) и параформальдегида (57 мг, 1,9 ммоль) в уксусной кислоте (10 мл) добавляют цианоборогидрид натрия (36 мг, 0,57 ммоль). Реакционную смесь перемешивают при комнатной температуре в течение ночи и выливают на лед. Используют бикарбонат натрия для доведения рН до 9. Реакционную смесь экстрагируют этилацетатом. Органический слой отделяют, промывают солевым раствором, сушат над безводным сульфатом натрия и упаривают. Остаток очищают ПТСХ (в качестве проявляющего растворителя 5% МеОН в БСМ) и получают продукт 9 (67 мг, выход 95%).

'|| ЯМР (200 МГц, СБС1₃): δ 8,14 (1Н, д, 1=2,4 Гц), 7,76 (1Н, д, д, ^=8,6 Гц, 1₂=2,4 Гц), 7,39 (2Н, д, 1=8,8 Гц), 6,87 (2Н, м), 6,76 (3Н, м), 4,50 (2Н, т, 1=4,8 Гц), 3,87 (2Н, т, 1=4,8 Гц), 3,70 (6Н, м), 3,61 (2Н, м), 2,98 (6Н, с), 2,49 (1Н, ушир.), МСВР (ЕЦ т/ζ вычислено для [С₂1Н₂₈Ы₂О₄]⁺ 372,2049 (Е)-2-(2-(2-(2-Тозилоксиэтокси)этокси)этокси)-5-(4-диметиламиностирил)пиридин (10)

К раствору соединения 9 (43 мг, 0,116 ммоль) в пиридине (5,0 мл) при 0°С добавляют тозилхлорид (52 мг, 0,27 ммоль). Реакционную смесь перемешивают при 0°С в течение 1 ч и затем нагревают до комнатной температуры и перемешивают в течение 3 ч. Добавляют воду и реакционную смесь экстрагируют этилацетатом. Органический слой отделяют, промывают солевым раствором, сушат над безводным сульфатом натрия и упаривают.

Остаток очищают ПТСХ (в качестве проявляющего растворителя 4% МеОН в БСМ) и получают продукт 10 (25 мг, выход 41%).

'|| ЯМР (200 МГц, СБС1₃): δ 8,14 (1Н, д, 1=2,0 Гц), 7,76 (3Н, м), 7,39 (2Н, д, 1=8,8 Гц), 7,32 (2Н, д, 1=8,0 Гц), 6,87 (2Н, м), 6,75 (3Н, м), 4,46 (2Н, т, 1=4,6 Гц), 4,16 (2Н, т, 1=4,8 Гц), 3,81(2Н, т, 1=4,8 Гц), 3,66 (6Н, м), 2,99 (6Н, с), 2,43 (3Н, с), МСВР (ЕЦ т/ζ вычислено для [С₂₈Н₃₄Ы₂О₆8]⁺ 526,2138.

Пример 4. Синтез соединения 11а

А) Синтез промежуточных соединений 18 и 19

2-Гидрокси-3-бром-5-иодпиридин (18)

Следуя ранее разработанному способу (Меапа А. с1 а1., 8уп1ей., 2003, 1678-1682) получают соединение 18 из Ν-иодсукцинимида (2,48 г, 11,0 ммоль) и 3-бром-2-гидроксипиридина 17 (1,74 г, 10,0 ммоль) в виде бледно-коричневого твердого вещества (2,55 г, 85%).

'|| ЯМР (ДМСО-б₆) δ 12,21 (ушир.с, 1Н), 8,08 (д, 1Н, 1=2,3 Гц), 7,71 (д, 1Н, 1=2,3 Гц).

{2-[2-(2-Фторэтокси)этокси]этокси}-3-бром-5-иодпиридин Ц9)

К суспензии 18 (0,393 г, 1,3 ммоль), 2-(2-(2-фторэтокси)этокси)этанола (0,200 г, 1,3 ммоль) и РР1₃ (0,511 г, 1,95 ммоль) в 10 мл ТГФ при перемешивании при -10°С добавляют по каплям раствор диизопропилазодикарбоксилата (О!АО. 0,394 г, 1,95 ммоль) в 5 мл ТГФ. Ледяную баню с солью удаляют, и реакционную смесь выдерживают при комнатной температуре (г.1.) в течение 2 ч. Реакционный раствор концентрируют и остаток очищают ФХ (РС) (МеОН/СНС1₃, 1/99), и получают И - бесцветную вязкую жидкость (0,423 г, 75%).

'|| ЯМР δ 8,21 (д, 1Н, 1=2,0 Гц), 8,02 (д, 1Н, 1=2,0 Гц), 4,66 (т, 1Н, 1=4,1 Гц), 4,50-4,39 (м, 3Н), 3,893,64 (м, 8Н). ¹³С ЯМР δ 159,4, 151,2, 148,5, 108,5, 84,9, 81,6, 81,5, 71,1, 71,0, 70,8, 70,4, 69,3, 66,9. МСВР вычислено для СцН1₄ВгРШО₃ (М⁺), 432,9186; найдено, 432,9173.

Ь) Синтез соединения 11а (Е)-(5-Бром-6-{2-[2-(2-фторэтокси)этокси]этокси}пиридин-3-ил)-2-(4-диметиламинофенил)этилен (11а)

Смесь 4-диметиламиностирола (0,110 г, 0,75 ммоль), Ю (0,217 г, 0,5 ммоль), К₂СО₃ (0,173 г, 1,25 ммоль), бромида тетрабутиламмония (ТВАВ, 0,322 г, 1,0 ммоль) и ацетата палладия (Рб(ОАс)₂), 0,006 г,

- 14 017898

0,025 ммоль) в 2 мл ДМФА особождают от кислорода, продувая азотом в течение 15 мин, и затем греют при 65°С в течение 2 ч. Реакционную смесь охлаждают до г.1. и подвергают стандартной обработке с этилацетатом (ЕЮАс). Сырой продукт реакции очищают ФХ (ЕЮАс/гексан, 30/70) и получают 11а в виде светло-желтого твердого вещества (0,178 г, 79%).

¹Н ЯМР δ 8,08 (д, 1Н, 1=2,1 Гц), 8,00 (д, 1Н, 1=2,1 Гц), 7,39 (д, 2Н, 1=8,8 Гц), 6,92 (д, 1Н, 1=16,3 Гц),

6,74 (д, 1Н, 1=16,3 Гц), 6,72 (д, 2Н, 1=8,1 Гц), 4,69 (т, 1Н, 1=4,2 Гц), 4,55 (т, 2Н, 1=4,8 Гц), 4,45 (т, 1Н, 1=4,2 Гц), 3,94-3,68 (м, 8Н), 3,00 (с, 6Н).

¹³С ЯМР δ 158,3, 150,4, 143,5, 138,0, 129,6, 129,5, 127,7, 125,2, 118,8, 112,5, 107,5, 85,0, 81,6, 71,2, 71,0, 70,8, 70,4, 69,6, 66,7, 40,5. МСВР вычислено для С₂₁Н₂₆ВгР^О₃ (М⁺), 452,1111; найдено, 452,1099.

Пример 5. Синтез соединения 11Ь (Е)-(5-Бром-6-{2-[2-(2-фторэтокси)этокси]этокси}пиридин-3-ил)-2-(4-метиламинофенил)этилен (11Ь)

Соединение 11Ь получают из 4-метиламиностирола (0,073 г, 0,55 ммоль) и 19 (0,217 г, 0,50 ммоль) в виде светло-желтой вязкой жидкости (0,113 г, выход 52%).

Ή ЯМР δ 8,07 (д, 1Н, 1=2,1 Гц), 8,00 (д, 1Н, 1=2,1 Гц), 7,35 (д, 2Н, 1=8,6 Гц), 6,91 (д, 1Н, 1=16,3 Гц),

6,74 (д, 1Н, 1=16,3 Гц), 6,60 (д, 2Н, 1=8,6 Гц), 4,69 (т, 1Н, 1=4,2 Гц), 4,55 (т, 2Н, 1=4,8 Гц), 4,45 (т, 1Н, 1=4,2 Гц), 3,94-3,68 (м, 8Н) , 2,88 (с, 3Н).

¹³С ЯМР δ 158,4, 149,5, 143,6, 138,0, 129,8, 129,5, 127,9, 126,1, 118,9, 112,6, 107,5, 85,0, 81,7, 71,2,

71,1, 70,8, 70,4, 69,6, 66,8, 30,7.

МСВР вычислено для С₂₀Н₂₄ВгР^О₃ (М⁺) , 438,0954; найдено, 438,0967.

Пример 6. Синтез соединения 11е (Е)-(5-Бром-6-{2-[2-(2-фторэтокси)этокси]этокси}пиридин-3-ил)-2-[4-№метил-4-№(трет-бутилоксикарбонил)аминофенил]этилен (11с)

Соединение 11с получают из 4-№метил-4-№(трет-бутилоксикарбонил) аминостирола (0,219 г, 0,94 ммоль) и 19 (0,273 г, 0,63 ммоль) в виде белой вязкой жидкости (0,319 г, выход 94%).

Ή ЯМР δ 8,12 (д, 1Н, 1=2,1 Гц), 8,03 (д, 1Н, 1=2,1 Гц), 7,44 (д, 2Н, 1=8,6 Гц), 7,25 (д, 2Н, 1=9,0 Гц),

6,94 (д, 2Н, 1=2,1 Гц), 4,69 (т, 1Н, 1=4,2 Гц), 4,56 (т, 2Н, 1=4,9 Гц), 4,45 (т, 1Н, 1=4,2 Гц), 3,94-3,68 (м, 8Н), 3,28 (с, 3Н), 1,48 (с, 9Н).

¹³С ЯМР δ 158,8, 154,5, 144,0, 143,5, 138,2, 133,6, 128,5, 128,4, 126,8, 126,6, 125,4, 122,9, 107,4, 84,8,

81,4, 80,4, 71,0, 70,9, 70,6, 70,2, 69,4, 66,7, 53,5, 37,1, 28,4. МСВР вычислено для С₂₅Н₃₂ВгР^О₅ (М⁺), 538,1479; найдено, 538,1476.

(Е)-(5-Бром-6-{2-[2-(2-фторэтокси)этокси]этокси}пиридин-3-ил)-2-(4-ацетоксифенил)этилен (11ά) Соединение 11ά получают из 4-ацетоксистирола (0,122 г, 0,75 ммоль) и 19 (0,217 г, 0,5 ммоль) в виде белой вязкой жидкости (0,181 г, выход 77%).

Ή ЯМР δ 8,12 (д, 1Н, 1=2,1 Гц), 8,03 (д, 1Н, 1=2,1 Гц), 7,50 (д, 2Н, 1=8,6 Гц), 7,10 (д, 2Н, 1=8,6 Гц),

6,94 (д, 2Н, 1=3,3 Гц), 4,69 (т, 1Н, 1=4,2 Гц), 4,56 (т, 2Н, 1=4,9 Гц), 4,45 (т, 1Н, 1=4,2 Гц), 3,94-3,68 (м, 8Н), 2,32 (с, 3Н), 1,48 (с, 9Н).

¹³С ЯМР δ 169,3, 158,9, 150,3, 144,1, 138,2, 134,5, 128,24, 128,16, 127,4, 123,4, 121,9, 107,5, 84,8, 81,5, 71,0, 70,9, 70,6, 70,3, 69,4, 66,7, 21,1. МСВР вычислено для С1 ΓΙ’ιΓΝΌ, (М⁺), 467,0744; найдено, 467,0731.

(Е)-(5-Бром-6-{2-[2-(2-фторэтокси)этокси]этокси}пиридин-3-ил)-2-(4-гидроксифенил) этилен (11е)

Ацетат 11ά (0,145 г, 0,31 ммоль) и К₂СО₃ (0,064 г, 0,465 ммоль) помещают в смесь Е1ОН/ТГФ (5 мл/5 мл), и реакционную смесь перемешивают при г.1. в течение 2 ч. После стандартной обработки с ЕЮАс сырой продукт реакции очищают ПТСХ и получают 11е в виде белого твердого вещества (0,128 г, 97%).

Ή ЯМР δ 8,07 (д, 1Н, 1=2,1 Гц), 7,99 (д, 1Н, 1=2,1 Гц), 7,35 (д, 2Н, 1=8,6 Гц), 6,96-6,74 (м, 4Н), 5,22 (ушир.с, 1Н), 4,69 (т, 1Н, 1=4,2 Гц), 4,54 (т, 2Н, 1=4,8 Гц), 4,45 (т, 1Н, 1=4,2 Гц), 3,94-3,68 (м, 8Н).

¹³С ЯМР δ 158,5, 156,4, 143,6, 138,2, 129,2, 129,0, 127,9, 120,7, 116,0, 107,6, 84,9, 81,6, 71,1, 71,0,

70,8, 70,4, 69,6, 66,8. МСВР вычислено для С1 Г-ВгРМА (М⁺), 425,0638; найдено, 425,0651.

Пример 7. Синтез соединения 12Ь (Е)-(5-три-Бутилстаннил-6-{2-[2-(2-фторэтокси)этокси]этокси}пиридин-3-ил)-2-(4-метиламинофенил)этилен (12Ь)

Соединение 12Ь получают из 11Ь (0,069 г, 0,156 ммоль) в виде светло-желтого масла (0,068 г, выход 68%).

Ή ЯМР δ 8,10 (д, 1Н, 1=2,5 Гц), 7,80 (д, 1Н, 1=2,5 Гц), 7,36 (д, 2Н, 1=8,6 Гц), 6,92 (д, 1Н, 1=16,3 Гц),

6,80 (д, 1Н, 1=16,3 Гц), 6,61 (д, 2Н, 1=8,6 Гц), 4,69 (т, 1Н, 1=4,2 Гц), 4,45 (т, 3Н, 1=5,1 Гц), 3,83 (т, 3Н, 1=4,4 Гц), 3,71-3,66 (м, 5Н), 2,88 (с, 3Н), 1,68-1,48 (м, 6Н), 1,43-1,25 (м, 6Н), 1,15-1,02 (м, 6Н), 0,91 (т, 9Н, 1=7,1 Гц).

¹³С ЯМР δ 166,8, 149,1, 145,4, 143,6, 127,8, 127,7, 127,0, 123,8, 121,2, 112,6, 85,0, 81,6, 71,1, 70,9,

70,8, 70,5, 70,1, 65,0, 30,8, 29,5, 29,3, 29,1, 28,1, 27,5, 26,9, 13,9, 13,4, 13,3, 9,9, 6,6, 6,4.

МСВР вычислено для С₃₂Н₅₁Р^О₃8п (М⁺), 650,2906; найдено, 650,2894.

- 15 017898

Пример 8. Синтез соединения 12е (Е)-(5-три-Бутилстаннил-6-{2-[2-(2-фторэтокси)этокси]этокси}пиридин-3-ил)-2-(4-гидроксифенил)этилен (12е)

Соединение 12е получают из 11е (0,032 г, 0,075 ммоль) в виде белой вязкой жидкости (0,04 0 г, выход 84%).

¹Н ЯМР δ 8,11 (д, 1Н, 1=2,5 Гц), 7,82 (д, 1Н, 1=2,5 Гц), 7,39 (д, 2Н, 1=8,6 Гц), 6,98-6,74 (м, 4Н), 5,19 (ушир.с, 1Н), 4,71-4,66 (м, 1Н), 4,48-4,43 (м, 3Н), 3,90-3,62 (м, 8Н), 1,70-1,02 (м, 18Н), 0,91 (т, 9Н, 1=7,1 Гц).

¹³С ЯМР δ 166,9, 156,0, 145,4, 144,0, 130,1, 127,9, 127,6, 127,4, 124,3, 123,0, 115,9, 85,0, 81,6, 71,0,

70,9, 70,7, 70,5, 70,0, 65,2, 29,5, 29,3, 29,1, 28,0, 27,5, 26,9, 13,9, 13,4, 13,3, 9,9, 6,6, 6,4. МСВР вычислено для С_;-1 ΙΑ'ΝΌΝιι (М⁺), 637,2589; найдено, 637,2573.

Пример 9. Синтез соединения 13а (Е)-(5-три-Бутилстаннил-6-{2-[2-(2фторэтокси)этокси]этокси}пиридин-3-ил)-2-(4-диметиламинофенил)этилен (12а)

Смесь 11а (0,052 г, 0,115 ммоль), бис(трибутилолова) ((Ви₃§п)₂, 0,333 г, 0,57 ммоль) и тетракистрифенилфосфинпалладия (Ρά(ΡΡΓ₃)₄ (0,013 г, 10 мол.%) в толуоле греют при 110°С в течение 18 ч. Реакционный раствор охлаждают до к.т. и обрабатывают 5 мл 10% КР. После энергичного перемешивания еще в течение 0,5 ч стандартная обработка с Е1ОАс и последующая ФХ (Е1ОАс/гексан, 25/75) дают 12а в виде светло-желтого масла (0,052 г, 68%).

¹Н ЯМР δ 8,11 (д, 1Н, 1=2,5 Гц), 7,81 (д, 1Н, 1=2,5 Гц), 7,41 (д, 2Н, 1=8,8 Гц), 6,93 (д, 1Н, 1=16,5 Гц),

6,81 (д, 1Н, 1=16,5 Гц), 6,72 (д, 2Н, 1=8,7 Гц), 4,69 (т, 1Н, 1=4,2 Гц), 4,46 (т, 3Н, 1=4,9 Гц), 3,83 (т, 3Н, 1=4,8 Гц), 3,71-3,66 (м, 5Н) , 3,00 (с, 6Н), 1,68-1,48 (м, 6Н), 1,43-1,21 (м, 6Н), 1,15-1,02 (м, 6Н), 0,91 (т, 9Н, 1=7,1 Гц).

¹³С ЯМР δ 166,7, 150,2, 145,4, 143,6, 127,8, 127,7, 127,5, 126,0, 123,7, 121,2, 112,6, 85,0, 81,6, 71,0, 70,8, 70,7, 70,4, 70,0, 65,0, 40,6, 29,5, 29,3, 29,1, 28,1, 27,5, 26,9, 13,9, 13,4, 13,3, 9,9, 6,6, 6,4. МСВР вычислено для С₃₃Н₅₃Р^О₃8п (М⁺), 664,3062; найдено, 664,3037.

(Е)-(5-Иод-6-{2-[2-(2-фторэтокси)этокси]этокси}пиридин-3-ил)-2-(4-диметиламинофенил)этилен (13а)

К раствору 12а (0,114 г, 0,172 ммоль) в ТГФ (3 мл) при охлаждении на ледяной бане добавляют по каплям раствор иода (Г· 0,063 г, 0,024 ммоль) в ТГФ (2 мл). По окончании добавления реакционную смесь перемешивают при 0°С в течение 1 ч. После стандартной обработки с СН₂С1₂ сырой продукт реакции очищают ФХ (Е1ОАс/гексан, 25/75), и получают светло-желтое твердое вещество 13а (0,037 г, 48%).

’Н ЯМР δ 8,22 (д, 1Н, 1=2,1 Гц), 8,10 (д, 1Н, 1=2,1 Гц), 7,38 (д, 2Н, 1=8,8 Гц), 6,92 (д, 1Н, 1=16,3 Гц), 6,72 (д, 1Н, 1=16,3 Гц), 6,71 (д, 2Н, 1=8,8 Гц), 4,72-4,67 (м, 1Н), 4,54-4,44 (м, 3Н), 3,93-3,69 (м, 8Н), 3,00 (с, 6Н).

¹³С ЯМР δ 160,4, 150,5, 144,6, 144,55, 129,8, 129,5, 127,8, 125,3, 118,8, 112,6, 85,1, 81,7, 80,6, 71,3,

71,1, 70,8, 70,5, 69,6, 67,1, 40,6. МСВР вычислено для С₂₁Н₂₆РШ₂О₃ (М⁺), 500,0972; найдено, 500,0959.

Пример 10. Синтез соединения 13Ь (Е)-(5-1ри-Бутилстаннил-6-{2-[2-(2-фторэтокси)этокси]этокси}пиридин-3-ил)-2-[4-№метил-4-№ (трет-бутилоксикарбонил)аминофенил]этилен (12с)

Соединение 12с получают из 11с (0,072 г, 0,133 ммоль) в виде белой вязкой жидкости (0,07 7 г, выход 77%).

’Н ЯМР δ 8,14 (д, 1Н, 1=2,5 Гц), 7,83 (д, 1Н, 1=2,5 Гц), 7,46 (д, 2Н, 1=8,6 Гц), 7,23 (д, 2Н, 1=8,5 Гц),

6.96 (с, 2Н), 4,70-4,66 (м, 1Н), 4,49-4,42 (м, 3Н), 3,86-3,66 (м, 8Н), 3,28 (с, 3Н), 1,80-1,02 (м, 27Н), 0,90 (т, 9Н, 1=7,1 Гц).

¹³С ЯМР δ 167,3, 146,1, 143,8, 143,2, 134,6, 127,0, 126,8, 126,6, 125,7, 125,4, 124,1, 85,0, 81,6, 80,6,

71,1, 70,9, 70,8, 70,5, 70,0, 65,1, 37,4, 29,5, 29,3, 29,1, 28,1, 27,5, 26,9, 13,9, 13,4, 9,9, 6,4. МСВР вычислено для С₃ 11,.1'ХО,811 (М⁺) , 750,343; найдено, 750,3425.

(Е)-(5-Иод-6-{2-[2-(2-фторэтокси)этокси]этокси}пиридин-3-ил)-2-[4-№метил-4-№(третбутилоксикарбонил)аминофенил] этилен (13с)

Соединение 13с получают из 12с (0,024 г, 0,032 ммоль) в виде белой вязкой жидкости (0,018 г, 98%).

’Н ЯМР δ 8,25 (д, 1Н, 1=1,6 Гц), 8,13 (д, 1Н, 1=1,6 Гц), 7,44 (д, 2Н, 1=8,4 Гц), 7,24 (д, 2Н, 1=8,4 Гц),

6.97 (д, 1Н, 1=16,4 Гц), 6,86 (д, 1Н, 1=16,4 Гц), 4,69 (т, 1Н, 1=4,1 Гц), 4,53 (т, 2Н, 1=4,8 Гц), 4,45 (т, 1Н, 1=4,1 Гц), 3,94-3,69 (м, 8Н), 3,28 (с, 3Н), 1,47 (с, 9Н).

¹³С ЯМР δ 161,0, 154,8, 145,3, 144,9, 143,7, 133,9, 128,9, 128,6, 126,8, 125,7, 123,1, 85,1, 81,7, 80,7,

77,4, 71,3, 71,1, 70,9, 70,5, 69,6, 67,2, 37,4, 28,6. МСВР вычислено для С₂₁Н₂₆РШ₂О₃ (М⁺), 500,0972; найдено, 500,0959.

(Е)-(5-Иод-6-{2-[2-(2-фторэтокси)этокси]этокси}пиридин-3-ил)-2-(4-метиламинофенил)этилен (13Ь) К раствору 13е (0,014 г, 0,024 ммоль) и 2,6-лутидина (28 мкл, 0,24 ммоль) в 2 мл СН₂С1₂ при перемешивании при 0°С добавляют триметилсилилфталат (34 мкл, 0,19 ммоль). Через 15 мин реакционный

- 16 017898 раствор подвергают стандартной обработке с СН₂С1₂. Сырой продукт реакции очищают ПТСХ и получают светло-желтую вязкую жидкость 13Ь (0,010 г, 88%).

'|| ЯМР δ 8,22 (д, 1Н, 1=2,1 Гц), 8,10 (д, 1Н, 1=2,1 Гц), 7,34 (д, 2Н, 1=8,6 Гц), 6,91 (д, 1Н, 1=16,3 Гц), 6,70 (д, 1Н, 1=16,3 Гц), 6,60 (д, 2Н, 1=8,6 Гц), 4,71-4,67 (м, 1Н) , 4,54-4,43 (м, 3Н), 3,94-3,69 (м, 9Н), 2,88 (с, 3Н).

¹³С ЯМР δ 160,5, 149,5, 144,6, 129,8, 129,7, 128,0, 126,3, 118,9, 112,6, 85,1, 81,7, 80,6, 77,4, 71,3, 71,2,

70,9, 70,5, 69,7, 67,2, 30,8. МСВР вычислено для С₂₀Н₂₄Г1Ы₂О₃ (М⁺), 486,0816; найдено, 486,0818.

Пример 11. Синтез соединения 13е (Е)-(5-три-Бутилстаннил-6-{2-[2-(2-фторэтокси)этокси]этокси}пиридин-3-ил)-2-(4-гидроксифенил)этилен (12е)

Соединение 12е получают из 11е (0,032 г, 0,075 ммоль) в виде белой вязкой жидкости (0,040 г, выход 84%).

'|| ЯМР ввв 8,11 (д, 1Н, 1=2,5 Гц), 7,82 (д, 1Н, 1=2,5 Гц), 7,39 (д, 2Н, 1=8,6 Гц), 6,98-6,74 (м, 4Н) , 5,19 (ушир.с, 1Н), 4,71-4,66 (м, 1Н), 4,48-4,43 (м, 3Н), 3,90-3,62 (м, 8Н), 1,70-1,02 (м, 18Н), 0,91 (т, 9Н, 1=7,1 Гц). ¹³С ЯМР δ 166,9, 156,0, 145,4, 144,0, 130,1, 127,9, 127,6, 127,4, 124,3, 123,0, 115,9, 85,0, 81,6, 71,0, 70,9, 70,7, 70,5, 70,0, 65,2, 29,5, 29,3, 29,1, 28,0, 27,5, 26,9, 13,9, 13,4, 13,3, 9,9, 6,6, 6,4. МСВР вычислено для С₃1Н₄₈ГХО₄8и (М⁺), 637,2589; найдено, 637,2573.

(Е)-(5-Иод-6-{2-[2-(2-фторэтокси)этокси]этокси}пиридин-3-ил)-2-(4-гидроксифенил)этилен (13е)

Соединение 13е получают из 12е (0,012 г, 0,019 ммоль) в виде белого твердого вещества (0,008 г, 90%).

'|| ЯМР δ 8,21 (д, 1Н, 1=2,1 Гц), 8,08 (д, 1Н, 1=2,1 Гц), 7,33 (д, 2Н, 1=8,6 Гц), 6,94-6,69 (м, 4Н), 4,714,67 (м, 1Н), 4,53-4,43 (м, 3Н), 3,94-3,69 (м, 8Н).

МСВР вычислено для С1дН₂₁Р1ЫО₄ (М⁺), 473,0499; найдено, 473,0498.

Пример 12. Синтез соединения 14а

2-Гидрокси-3-бром-5-иодпиридин (9Ь)

К суспензии 18 (см. пример 4 выше) (0,906 г, 3,0 ммоль), 2-(трет-бутилдиметилсиланилокси)этанола (0,554 г, 3,15 ммоль) и РРй₃ (0,944 г, 3,6 ммоль) в 20 мл ТГФ при перемешивании при -10°С добавляют по каплям раствор диизопропилазодикарбоксилата (ΌΙΑΌ) (0,728 г, 3,6 ммоль) в 10 мл ТГФ. Ледяную баню с солью удаляют, и реакционную смесь выдерживают при т.1. в течение 2 ч. Реакционный раствор концентрируют и остаток очищают ФХ (ЕЮАс/гексан, 5/95), и получают 2-(третбутилдиметилсиланилокси)этокси-3-бром-5-иодпиридин - бесцветную вязкую жидкость (0,995 г, 72%).

'|| ЯМР δ 8,23 (д, 1Н, 1=2,0 Гц), 8,05 (д, 1Н, 1=2,0 Гц), 4,42 (т, 2Н, 1=4,9 Гц), 3,98 (т, 2Н, 1=4,9 Гц), 0,90 (с, 9Н), 0,10 (с, 6Н). МСВР вычислено для С1₂Н₁₈Вг1ЫО₂81 (М-СН3⁺), 441,9335; найдено, 441,9312.

(Е)-[5-Бром-6-(2-гидроксиэтокси)пиридин-3-ил]-2-(4-диметиламинофенил)этилен (14а)

Соединение 14а получают из 4-диметиламиностирола (0,031 г, 0,212 ммоль) и 110 (0,073 г, 0,212 ммоль) в виде светло-желтого твердого вещества (0,022 г, выход 29%).

'|| ЯМР δ 8,07 (д, 1Н, 1=2,1 Гц), 8,03 (д, 1Н, 1=2,1 Гц), 7,39 (д, 2Н, 1=8,8 Гц), 6,94 (д, 1Н, 1=16,3 Гц), 6,78-6,69 (м, 3Н), 4,57-4,52 (м, 2Н), 3,99 (т, 2Н, 1=4,3 Гц), 3,21 (ушир.с, 1Н), 3,00 (с, 6Н).

¹³С ЯМР δ 158,3, 150,4, 143,0, 138,2, 129,9, 129,8, 127,6, 124,9, 118,3, 112,3, 107,5, 69,6, 62,1, 40,3. МСВР вычислено для С17Н_1дВ^N₂О₂ (М⁺). 362,063; найдено, 362,0629.

Пример 13. Синтез соединения 14Ь (Е)-[5-Бром-6-(2-гидроксиэтокси)пиридин-3-ил]-2-(4-метиламинофенил)этилен (14Ь)

Соединение 14Ь получают из 4-метиламиностирола (0,140 г, 1,05 ммоль) и 110 (0,241 г, 0,7 ммоль) в виде светло-желтой вязкой жидкости (0,241 г, выход 61%).

'|| ЯМР δ 8,07 (д, 1Н, 1=2,1 Гц), 8,03 (д, 1Н, 1=2,1 Гц), 7,35 (д, 2Н, 1=8,6 Гц), 6,93 (д, 1Н, 1=16,3 Гц),

6,74 (д, 1Н, 1=16,3 Гц), 6,61 (д, 2Н, 1=8,6 Гц), 4,57-4,52 (м, 2Н), 3,99 (ушир.с, 2Н), 3,18 (ушир.с, 1Н), 2,88 (с, 3Н).

¹³С ЯМР δ 149,6, 143,3, 138,5, 130,1, 130,0, 128,0, 126,0, 118,6, 112,6, 107,7, 69,8, 62,2, 30,7.

МСВР вычислено для СгН^Вг^О: (М⁺), 348,0473; найдено, 348,0468.

Пример 14. Синтез соединения 146 (Е)-[5-Бром-6-(2-гидроксиэтокси)пиридин-3-ил]-2-(4-ацетоксифенил)этилен (146)

Соединение 146 получают из 4-ацетоксистирола (0,130 г, 0,80 ммоль) и 10 (0,244 г, 0,7 ммоль) в виде белой вязкой жидкости (0,031 г, выход 12%).

'|| ЯМР δ 8,12 (д, 1Н, 1=2,1 Гц), 8,08 (д, 1Н, 1=2,1 Гц), 7,50 (д, 2Н, 1=6,8 Гц), 7,11 (д, 2Н, 1=6,8 Гц),

6,95 (д, 2Н, 1=5,2 Гц), 4,58-4,54 (м, 2Н), 4,01 (ушир.с, 2Н), 3,08 (ушир.с, 1Н), 2,32 (с, 3Н).

Пример 15. Синтез соединения 14е (Е)-[5-Бром-6-(2-гидроксиэтокси)пиридин-3-ил]-2-(4-гидроксифенил)этилен (14е)

Процедурой, подобной процедуре, описанной при получении 11е, из ацетата 146 (0,031 г, 0,082 ммоль) получают соединение 14е в виде белого твердого вещества (0,020 г, 73%).

'|| ЯМР (ДМСО-66) δ 9,60 (ушир.с, 1Н), 8,31 (с, 1Н), 8,23 (с, 1Н), 7,39 (д, 2Н, 1=8,3 Гц), 7,19 (д, 1Н, 1=16,8 Гц), 6,94 (д, 1Н, 1=16,6 Гц), 6,77 (д, 2Н, 1=8,3 Гц), 4,35 (т, 2Н, 1=5,1 Гц), 3,73 (т, 2Н, 1=5,1 Гц).

- 17 017898 ¹³С ЯМР (ДМСО-Й6) δ 157,9, 157,4, 143,7, 138,1, 129,2, 129,0, 127,8, 119,8, 115,6, 106,7, 68,4, 59,2. МСВР вычислено для Οι₅Ηι₄ΒγΝΘ₃ (М⁺) , 335,0157; найдено, 335,0165.

Пример 16. Синтез соединения 15е (Е)-[5-три-Бутилстаннил-6-(2-гидроксиэтокси)пиридин-3 -ил] -2-(4-гидроксифенил)этилен (15е) Соединение 15е получают из 14е (0,031 г, 0,092 ммоль) в виде белой вязкой жидкости (0,012 г, выход 24%).

Ή ЯМР δ 8,07 (д, 1Н, 1=2,5 Гц), 7,85 (д, 1Н, 1=2,5 Гц), 7,39 (д, 2Н, 1=8,6 Гц), 6,99-6,80 (м, 4Н), 5,97 (ушир.с, 1Н), 5,01 (ушир.с, 1Н), 4,50-4,46 (м, 2Н), 3,98-3,94 (м, 2Н), 1,69-1,01 (м, 18Н), 0,91 (т, 9Н, 1=7,1 Гц).

¹³С ЯМР δ 167,2, 156,0, 144,9, 144,7, 144,5, 130,1, 128,0, 127,96, 124,7, 122,8, 116,0, 69,9, 63,4, 29,9,

29,5, 29,3, 29,1, 28,1, 27,5, 26,9, 13,9, 13,6, 13,5, 10,1, 6,7, 6,6. МСВР вычислено для С₂₇Н₄^О₃8п (М+), 547,2108; найдено, 547,2112.

Пример 17. Синтез соединения 16а (Е)-[5-три-Бутилстаннил-6-(2-гидроксиэтокси)пиридин-3 -ил] -2-(4-диметиламинофенил)этилен (15а) Соединение 15а получают из 14а (0,100 г, 0,275 ммоль) в виде светло-желтого масла (0,105 г, выход 66%).

Ή ЯМР δ 8,10 (д, 1Н, 1=2,5 Гц), 7,85 (д, 1Н, 1=2,4 Гц), 7,41 (д, 2Н, 1=8,7 Гц), 6,95 (д, 1Н, 1=16,3 Гц),

6,81 (д, 1Н, 1=16,6 Гц), 6,73 (д, 2Н, 1=8,8 Гц), 4,48-4,44 (м, 2Н), 3,96-3,92 (м, 2Н), 2,99 (с, 6Н), 1,68-1,01 (м, 18Н), 0,92 (т, 9Н, 1=7,2 Гц).

¹³С ЯМР δ 166,6, 150,1, 144,5, 144,1, 128,2, 128,1, 127,4, 125,6, 124,0, 120,5, 112,4, 69,4, 63,0, 40,4, 29,0, 27,2, 13,6, 9,8. МСВР вычислено для С1 ΕΝ ΟΑιι (М⁺), 574,2581; найдено, 574,2584.

(Е)-[5-Иод-6-(2-гидроксиэтокси)пиридин-3-ил]-2-(4-диметиламинофенил)этилен (16а)

Соединение 16а получают из 15а (0,011 г, 0,019 ммоль) в виде светло-желтого твердого вещества (0,004 г, 50%).

Ή ЯМР δ 8,25 (с, 1Н), 8,10 (с, 1Н), 7,39 (д, 2Н, 1=8,6 Гц), 6,94 (д, 1Н, 1=16,3 Гц), 6,76-6,70 (м, 3Н), 4,51 (т, 2Н, 1=4,2 Гц), 4,02-3,95 (м, 2Н), 3,19 (с, 1Н), 3,00 (с, 6Н). МСВР вычислено для С₁₇Н₁₉ПХ₂О₂ (М⁺) , 410,0491; найдено, 410,0489.

Пример 18. Синтез соединения 16Ь (Е)-[5-три-Бутилстаннил-6-(2-гидроксиэтокси)пиридин-3 -ил] -2-(4-метиламинофенил)этилен (15Ь) Соединение 15Ь получают из 14Ь (0,052 г, 0,15 ммоль) в виде светло-желтого масла (0,059 г, выход 64%).

Ή ЯМР δ 8,08 (д, 1Н, 1=2,5 Гц), 7,84 (д, 1Н, 1=2,4 Гц), 7,37 (д, 2Н, 1=8,6 Гц), 6,93 (д, 1Н, 1=16,3 Гц), 6,80 (д, 1Н, 1=16,4 Гц), 6,61 (д, 2Н, 1=8,6 Гц), 4,48-4,43 (м, 2Н), 3,95-3,91 (м, 2Н), 2,88 (с, 3Н), 1,69-1,01 (м, 18Н), 0,91 (т, 9Н, 1=7,1 Гц).

¹³С ЯМР δ 166,9, 149,2, 144,7, 144,3, 128,4, 128,3, 127,8, 126,7, 124,2, 120,7, 112,6, 69,6, 63,2, 30,8,

29,5, 29,3, 29,1, 28,0, 27,5, 26,9, 13,9, 13,5, 13,4, 10,0, 6,6, 6,5. МСВР вычислено для С₂₈Н₄₄^О₂8п (М⁺), 560,2425; найдено, 560,2419.

(Е)-[5-Иод-6-(2-гидроксиэтокси)пиридин-3-ил]-2-(4-метиламинофенил)этилен (16Ь)

Соединение 16Ь получают из 15Ь (0,032 г, 0,057 ммоль) в виде светло-желтого твердого вещества (0,005 г, 21%).

Ή ЯМР δ 8,24 (д, 1Н, 1=2,1 Гц), 8,09 (д, 1Н, 1=2,0 Гц), 7,36 (д, 2Н, 1=8,5 Гц), 6,92 (д, 1Н, 1=16,3 Гц), 6,76-6,64 (м, 3Н), 4,53-4,49 (м, 2Н), 4,01-3,96 (м, 2Н), 2,96 (с, 1Н), 2,89 (с, 3Н). МСВР вычислено для С₁₆Н₁₇Ш₂О₂ (М⁺), 396,0335; найдено, 396,0335.

Пример 19. Иодирование радиоактивными изотопами

Иодированные радиоактивным изотопом иода [¹²⁵Р| соединения 13а, 13Ь, 16а, 16Ь и 16е получают реакций иоддестаннилирования из соответствующих предшественников соединений трибутилолова согласно способу, описанному ранее (ссылка). К смеси 50 мкл предшественника соединения трибутилолова (4 мкг/мкл ЕЮН), 50 мкл 1 н НС1 и [¹²⁵I]NаI (1-5 мКи, закупают у Реткш Е1тег) добавляют пероксид водорода (50 мкл, 3%, мас./об.) в запаяной ампуле. Реакции дают возможность протекать в течение 5-10 мин при комнатной температуре и прекращают, добавляя 100 мкл насыщ. раствора NаН8О₃. Реакционную смесь экстрагируют этилацетатом (3 х 1 мл), и экстракты нейтрализуют 1,5 мл насыщенного раствора бикарбоната натрия. Объединенные экстракты упаривают досуха. Остаток растворяют в 100 мкл ЕЮН и очищают ВЭЖХ с использованием колонки с обращенной фазой (аналитическая колонка Рйепотепех Сепши С18, 4,6 х 250 мм, 5 мкм, буфер СН₃С№формиат аммония (1 мМ), 8/2 или 7/3; скорость потока 0,5-1,0 мл/мин). Продукты реакции без добавления носителя упаривают досуха и снова растворяют в 100% ЕЮН (1 мкКи/мкл), и хранят при -20°С до 6 недель для исследований на животных и аутографических исследований.

Пример 20. Исследования связывания [¹²⁵Р| ГМРУ с удельной активностью 2200 Ки/ммоль и радиохимической чистотой более 95% получают с использованием стандартной реакции иоддестаннилирования и очищают с помощью упрощенной миниколонки с С-4, как описано ранее в Кипд М.-Р., Нои С, Ζ1ιιι;·ιη§ Ζ.-Р., Сто55 А.1., Ма1ег Э.Ь., Кипд

- 18 017898

Н.Р., СНагаШеНхаиои оГ IМΡΥ ак ро1ен11а1 ипадтд адек Гог Ь-ату1о1б р1адиек ίη боиЬ1е (гаикдешс Р8АРР тке, Еиг. ί. №с1. Меб. Мо1. Iтад^ηд, 2004, 31, 1136-1145. Анализы конкурентного связывания осуществляют в пробирках из боросиликатного стекла 12 х 75 мм. Реакционная смесь содержит 50 мкл объединенных гомогенатов головного мозга с АО (20-50 мкг), 50 мкл [¹²⁵Г| IМΡΥ (0,04-0,06 нМ, разведенного в РВ8) и 50 мкл ингибиторов (10^-5-10^-10 М, серийно разведенных в РВ8, содержащем 0,1% бычьего сывороточного альбумина) в конечном объеме 1 мл. Неспецифическое связывание определяют в присутствии 600 нМ ГМРУ в таких же аналитических пробирках. Смесь инкубируют при 37°С в течение 2 ч и связанную и свободную радиоактивность разделяют фильтрацией под вакуумом через фильтры \νΐι;·ιΙιη;·ιη СР/В с использованием клеточного харвестера Вгаибе1 М-24В с последующими промывками 2х3 мл РВ8 при комнатной температуре. Фильтры, содержащие лиганд со связанным 1-125, обсчитывают в счетчике гамма-квантов (Раскагб 5000) с эффективностью подсчета 70%. В условиях анализа специфически связанная фракция составляет менее 15% от общей радиоактивности. Результаты экспериментов по ингибированию подвергают нелинейному регрессионному анализу с использованием анализа данных по равновесному связыванию, из которых вычисляют величины К₁. Фиг. 1 и 6 показывают величины К₁ для выбранных соединений по настоящему изобретению.

Пример 21. Пленочная ауторадиография

Индикаторы с [¹⁸Р].

Срезы головного мозга больных АО получают, замораживая головной мозг на измельченном сухом льду и нарезая на срезы толщиной 20 мкм. Срезы инкубируют с индикаторами с [¹⁸Р] (200000-250000 чим/200 мкл) в течение 1 ч при комнатной температуре. Затем срезы погружают в насыщенный раствор Ь1₂СО₃ в 40% ΕίΟΗ (две промывки по две минуты) и промывают 40% ΕίΟΗ (одна двухминутная промывка), а затем ополаскивают водой в течение 30 с. После сушки срезы, меченные ¹⁸Р, экспонируют на пленку Кобак МВ в течение ночи. Результаты, полученные на пленке, отображены на фиг. 2.

Индикаторы с [¹²⁵Г|.

Для того, чтобы сравнить различные зонды с использованием схожих срезов ткани головного мозга человека, собирают макросрезы головного мозга от 6 субъектов с подтвержденной АО и одного контрольного субъекта. Наличие и локализацию бляшек на срезах подтверждают иммуногистохимическим окрашиванием моноклональными антителами против Ав 4С8 (81дта). Срезы инкубируют с индикаторами с [¹²⁵Г| (200000-250000 чим/200 мкл) в течение 1 ч при комнатной температуре. Затем срезы погружают в насыщенный раствор Ь1₂СОз в 40% ΕίΟΗ (две промывки по две минуты) и промывают 40% ΕίΟΗ (одна двухминутная промывка), а затем ополаскивают водой в течение 30 с. После сушки срезы, меченные ¹²⁵Σ, экспонируют на пленку Кобак Вютах МВ в течение ночи.

Пример 22. Распределение в органах у мышей

В это время под анестезией изофураном 0,15 мл 0,1% раствора бычьего сывороточного альбумина, содержащего индикаторы с [¹²⁵Г| (5-10 мкКи, инъецируют непосредственно в хвостовую вену мышам ГСВ (самцы, 22-25 г). Мышей (η = 3 для каждого момента времени) умерщвляют цервикальной дислокацией в установленные моменты времени после инъекции. Органы, представляющие интерес, извлекают и взвешивают, и подсчитывают радиоактивность автоматическим счетчиком гамма-квантов. Дозу, в процентах, на орган вычисляют, сравнивая число импульсов ткани с подходящим образом разведенными аликвотами инъецируемого вещества. Общую активность крови вычисляют при предположении, что она составляет 7% от общей массы тела. Вычисляют % дозы/г образцов, сравнивая число импульсов для образцов с числом импульсов разведенной исходной дозы.

Таблица 1. Биораспределение у мышей ГСВ после ίν инъекции [¹⁸Р] 10 в 5% ΕίΟΗ в физиологическом растворе (% дозы/г, средн. для 3 мышей ± ср.-кв. откл.)

Орган	2 мин	30 мин	1 час	2 часа
Кровь	6,05 + 0,33	2,65 ± 0,22	3,48 ± 0,47	2,15 ± 0,25
Сердце	0,75 ± 0,14	0,17 ± 0,03	0,22 ± 0,03	0,13 ± 0,08
Мышца	7,03 ± 1,30	8,58 ± 0,26	10,62+ 2,59	5,96 ± 0,06
Легкие	1,07 ± 0,20	0,30 ± 0,01	0,35 ± 0,07	0,20 ± 0,36
Почки	6,38 ± 0,95	1,68 ± 0,11	1,96 ± 0,21	0,96 ± 1,58
Селезенка	0,43 ± 0,11	0,15 ± 0,05	0,13 ± 0,03	0,10 ± 0,17
Печень	24,90 ±1,49	9,26 ± 0,83	10,52 ±2,18	6,86 ± 0,59
Кока	2,52 ± 0,24	3,99 ± 0,34	4,42 ± 0,65	2,91 ± 0,16
Головной мозг	3,49 ± 0,58	0,48 ± 0,07	0,55 ± 0,10	0,37 ± 0,08
Кости	5,97 ± 0,56	2,52 ± 0,34	4,39 ± 0,40	6,49 ± 0,08

- 19 017898

Орган	2 мин	30 мин	1 час	2 часа
Кровь	3,04 ± 0,29	1,33 ± 0,16	1,80 ± 0,16	1,08 ± 0,06
Сердце	6,00 ± 0,56	1,28 ± 0,16	1,66 ± 0,24	1,32 ± 0,33
Мышца	0,62 ± 0,10	0,75 ± 0,04	0,95 ± 0,18	0,52 ± 0,08
Легкие	5,65 ± 0,39	1,73 ± 0,17	1,82 ± 0,31	0,98 ± 0,08
Почки	14,19 ±2,34	3,77 ± 0,36	4,29 + 0,52	2,19 ± 0,36
Селезенка	4,65 ± 0,76	1,57 + 0,51	1,56 ± 0,17	1,14 ± 0,18
Печень	17,00 ±0,69	7,21 + 0,69	8,13 ± 1,42	4,96 ± 0,90
Кожа	0,59 ± 0,03	0,93 + 0,13	1,06 ± 0,09	0,68 ± 0,16
Головней мозг	7,77 ± 1,34	1,03 ± 0,11	1,28 ± 0,20	0,84 ± 0,08
Кости	1,49 ± 0,08	0,63 ± 0,12	1,13 ± 0,01	1,64 ± 0,50

Таблица 2. Биораспределение у мышей ЮК после ίν инъекции индикаторов, меченных [¹²⁵Р| (% дозы/г, средн. для 3 мышей ± ср.-кв. откл.) [¹²⁵Ц13а (1одр = 2,59)

Орган	2 мин	30 мин	1 час	2 часа
Кровь	2,70 ± 0,58	2,05 ± 0,18	1,65 ± 0,45	1,45 + 0,41
Сердце	12,76 ±1,24	1,63 ± 0,03	0,97 ± 0,16	0,73 ± 0,17
Мышца	0,90 ± 0,20	1,00 ± 0,08	0,59 ± 0,13	0,53 ± 0,08
Легкие	10,08 ±2,15	2,50 ± 0,14	1,62 ± 0,46	1,33 ± 0,39
Почки	16,62 ±1,96	3,32 ± 0,11	2,30 ± 0,54	1,71 ± 0,24
Селезенка	4,47 ± 1,28	1,42 ± 0,05	0,99 ± 0,47	0,79 ± 0,27
Печень	22,15 ±4,34	9,54 ± 1,30	5,34 ± 2,22	5,62 ± 1,31
Кожа	0,54 ± 0,05	1,47 ± 0,26	1,59 ± 0,68	1,23 ± 0,41
Головной мозг	4,03 ± 0,43	1,93 ± 0,18	0,68 ± 0,17	0,26 ± 0,04
Щитовидная железа	3,89 ± 0,67	16,23 ± 11,75	24,19 ±8,26	60,76 ±6,09

¹²⁵Г|13Ъ (1одР = 2,54)

Орган	2 мин	30 мин*	1 час	2 часа
Кровь	4,37 + 1,07	3,83 ± 1,11	2,88 ± 0,28	2,21 ± 0,73
Сердце	9,85 ± 1,78	2,54 ± 0,37	1,75 ± 0,26	1,22 ± 0,28
Мышца	1,04 ± 0,25	1,11 ± 0,34	0,85 ± 0,06	0,44 ± 0,19
Легкие	6,85 ± 0,27	3,01 ± 0,96	2,37 ± 0,29	1,85 ± 0,74
Почки	9,03 ± 6,81	3,40 ± 0,76	2,81 + 0,70	1,86 ± 0,36
Селезенка	4,41 ± 1,05	2,49 ± 0,75	1,75 + 0,33	1,27 + 0,24
Печень	26,24 ±4,47	11,47 ±2,10	7,70 ± 1,22	6,25 + 1,79
Кожа	1,48 ± 0,07	2,95 ± 0,81	2,46 + 0,16	1,32 ± 0,41
Головной мозг	6,22 ± 1,01	1,23 + 0,13	0,62 ± 0,17	0,26 + 0,01
Щитовидная железа	5,74 ± 0,42	24,09 ± 27,44	38,09 ±6,37	215,05 ± 74,59

[¹²⁵Щ6а (1о§Р = 2,64)

Орган	2 мин	| 30 мин	1 час*	2 часа
Кровь	2,71 ± 0,07	2,24 ± 0,38	2,18 ± 0,66	1,01 ± 0,02
Сердце	10,24 ±0,45	1,93 ± 0,27	1,12 ± 0,02	0,62 ± 0,12
Мышца	0,71 ± 0,46	1,05 ± 0,20	0,55 ± 0,03	0,22 ± 0,04
Легкие	9,41 ± 0,56	3,02 ± 0,38	1,98 ± 0,21	1,00 + 0,15
Почки	14,25 ±1,98	4,19 ± 0,45	2,49 ± 0,33	1,48 ± 0,20
Селезенка	4,40 ± 1,89	1,94 ± 0,19	1,32 ± 0,10	0,80 ± 0,11
Печень	19,12 ±3,68	12,38 ±1,29	6,22 ± 0,96	4,87 ± 0,46
Кожа	0,46 ± 0,13	1,18 ± 0,26	1,16 ± 0,00	0,40 ± 0,05
Головной мозг	5,43 ± 0,85	3,56 ± 0,32	1,32 ± 0,00	0,46 ± 0,05
Щитовидная железа	4,15 ± 0,43	11,21 ±7,88	59,13 ±6,26	24,81 ±0,62

[¹²⁵Б|16Ъ (1о§Р = 2,20)

Орган	2 мин	30 мин	1 час	2 часа
Кровь	4,14 ± 0,41	3,08 ± 0,35	1,81 ± 0,56	1,96 ± 0,14
Сердце	7,16 ± 1,16	1,50 ± 0,13	0,88 + 0,30	0,76 ± 0,03
Мышца	1,15 ± 0,38	0,91 ± 0,06	0,42 ± 0,08	0,38 ± 0,02
Легкие· ·	7,43 ± 1,21	2,67 ± 0,46	1,76 ± 0,32	1,58 ± 0,10
Почки	11,51 ±1,48	3,73 ± 0,75	2,16 ± 0,08	1,53 ± 0,20
Селезенка	4,08 ± 0,68	1,34 ± 0,29	0,87 ± 0,37	1,08 + 0,15
Печень	20,84 ±2,38	12,57 ±3,03	5,62 ± 0,68	3,41 ± 0,20
Кожа	0,95 ± 0,09	1,86 ± 0,50	1,29 ± 0,51	1,43 ± 0,10
Головной мозг	8,04 ± 0,82	0,88 ± 0,30	0,26 + 0,03	0,15 ± 0,02
Щитовидная железа	6,31 ± 1,59	17,23 + 14,23	36,69 ± 37,17	99,88 ± 69,45

- 20 017898 [¹²⁵Г|16е (1одР = 1,98)

Орган	2 мин	30 мин	1 час	2 часа
Кровь	10,09 ±1,12	3,92 ± 0,07	1,29 ± 0,05	1,56 ± 0,04
Сердце	6,66 + 0,31	1,35 ± 0,16	0,65 ± 0,21	0,51 ± 0,09
Мышца	1,01 + 0,34	0,59 ± 0,05	0,21 ± 0,02	0,12 ± 0,01
Легкие	14,22 ±0,92	3,10 + 0,05	1,34 ± 0,11	1,02 ± 0,01
Почки	20,40 ±2,20	10,03 ±2,12	2,94 ± 0,17	2,50 ± 1,32
Селезенка	4,20 ± 0,31	1,28 ± 0,44	0,50 ± 0,03	0,50 ± 0,06
Печень	18,27 ±1,29	5,15 ± 0,61	2,38 ± 0,58	2,63 ±1,30
Кожа	0,64 ± 0,20	1,36 ± 0,07	0,62 ± 0,01	0,37 ± 0,08
Головной мозг	0,99 ± 0,24	0,26 ± 0,03	0,09 ± 0,01	0,06 + 0,01
Щитовидная железа	4,38 ± 0,46	3,99 ± 3,56	13,02 ±8,11	16,02 + 11,52

Специалистам в данной области техники следует иметь в виду, что то же самое можно осуществить в широком и равнозначном интервале условий, композиций и других параметров без отхода от объема изобретения или любых его воплощений. Все патенты, заявки на патенты и публикации, цитированные в данном описании, входят в него в качестве ссылок.

Claims (30)

1. ФОРМУЛА ИЗОБРЕТЕНИЯ

   1. Соединение формулы I или его фармацевтически приемлемая соль, где η равен 1;

   А!, А₂, А₃ и А₅, каждый независимо, представляют собой -СН или -СВ², по необходимости;

   Ад представляет собой Ν;

   В¹ представляет собой

   -(ΌΗ^ρΝΒ^, где В^а и В^ь представляют собой, независимо, водород или С1_-4-алкил и р равен 0;

   гидрокси; -ОСО(С1_-4)алкил;

   В² представляет собой: ί) где с.| равен целому числу от 1 до 5;

   ΐ равен 0;

   Ζ представляет собой гидрокси или галоген и

   30 31 32 33

   В , В , В и В в каждом случае представляют собой, независимо, водород; или ϋ) где ΐ равен 0;

   Υ представляет собой галоген;

   и представляет собой водород, гидрокси или галоген и

   В, В, В, В, В, В и В в каждом случае представляют собой, независимо, водород и

   В⁷ и В⁸ в каждом случае представляют собой, независимо, водород.
2. 2. Соединение по п.1, содержащее по меньшей мере один радиоактивный изотоп галогена.
3. 3. Соединение по п.1, содержащее по меньшей мере один галоген, который представляет собой I, ¹²³Е ¹²⁵Е ¹³¹Е Вг, ⁷⁶Вг, ⁷⁷Вг, Б или ¹⁸Б.
4. 4. Соединение по п.1, где В² представляет собой:

   - 21 017898 ,ζ

   ί)

   -5-(СГТК^у)г
5. 5. Соединение по п.1, имеющее формулу н

   ^к\

   N

   Р«/ н , где Я^а и Я^Ь представляют собой, независимо, водород или С1_-4-алкил и Ζ представляет собой I, ¹²³Σ, ¹²⁵Σ, ¹³¹Σ, Вг, ⁷⁶Вг, ⁷⁷Вг, Р или ¹⁸Р.
6. 6. Соединение по

   Ί, ¹²Д, ¹³Ί, Вг, п.1, имеющее формулу
7. 7. Соединение по

   п.1, имеющее формулу
8. 8. Соединение по

   п.1, имеющее формулу где Ζ представляет собой I, ¹²Д, ¹²Д, ¹³¹Σ, Вг, ⁷⁶Вг, ⁷⁷Вг, Р или ¹⁸Р.
9. 9. Соединение по п.1, имеющее формулу
10. 10. Соединение по п.1, где Я² представляет собой ί) где Ζ представляет собой гидрокси.
11. 11. Соединение по п.1, где с.| равен 1, 2 или 3.
12. 12. Соединение по п.1, где Я² представляет собой: ϋ) где и представляет собой гидрокси.
13. 13. Соединение по п.12, имеющее формулу > где Я^а и Я^Ь представляют собой, независимо, водород или С1_-4-алкил.
14. 14. Соединение по п.12, имеющее формулу
15. 15. Композиция, содержащая эффективное количество соединения по п.1 и фармацевтически приемлемый носитель или разбавитель, где указанное соединение содержит изотоп ¹¹С, указанный изотоп присутствует в количестве, превышающим распространенность в природе, и указанное соединение, со- 22 017898 держащее указанный изотоп ^ПС, имеет удельную радиоактивность, превышающую уровень фона.
16. 16. Соединение формулы III или его фармацевтически приемлемая соль, где

    А1, А₂, А₃ и А₅, каждый независимо, представляют собой -СН, -СК² или -СК³, по необходимости; А₄ представляет собой Ν;

    η равен 1;

    К¹ представляет собой

    -(^^ΝΗ^³, где К^а и К^Ь представляют собой, независимо, водород или С1_-4-алкил и р равен 0;

    гидрокси или

    -ОСО(С1_-4)алкил;

    К³ представляет собой радиоизотоп галогена или -§п((С_!-4-алкил)₃; и К² представляет собой:

    ί) где с.| равен целому числу от 1 до 5;

    ΐ равен 0;

    Ζ представляет собой гидрокси или галоген и

    30 31 32 33

    К , К , К и К в каждом случае представляют собой, независимо, водород или ίί) где ΐ равен 0;

    Υ представляет собой галоген;

    и представляет собой водород, гидрокси или галоген и

    К, К, К, К, К, К и К в каждом случае представляют собой, независимо, водород; и К⁷ и К⁸ в каждом случае представляют собой, независимо, водород.
17. 17. Соединение по п.16, где К³ представляет собой ¹²Э, ¹²³ф ¹³¹ф ¹⁸Р, ¹⁸Р(С1-4-алкил), ⁷⁶Вг, ⁷⁷Вг и 8п(С1-4-алкил)₃.
18. 18. Соединение по п.16, где К¹ представляет собой гидрокси или -(СН₂)ρNΚ'Κ'', где К' и К'' представляют собой, независимо, водород или С1_-4-алкил и р равен 0.
19. 19. Соединение по п.16, где К² представляет собой ί) где с.| равен целому числу от 1 до 4.
20. 20. Соединение по п.16, где Ζ представляет собой фтор.
21. 21. Соединение по п.16, где К² представляет собой:

    11)
22. 22. Соединение по п.21, где и представляет собой гидрокси.
23. 23. Соединение по п.16, представляющее собой

    - 23 017898 где Υ представляет собой фтор.
24. 24. Фармацевтическая композиция, содержащая эффективное количество соединения по п.1 или 16 и фармацевтически приемлемый носитель или разбавитель.
25. 25. Диагностическая композиция для визуализации амилоидных отложений, содержащая эффективное количество меченного радиоактивным изотопом соединения по п.1 или 16 и фармацевтически приемлемый носитель или разбавитель.
26. 26. Способ визуализации амилоидных отложений, включающий:

    a) введение млекопитающему детектируемого количества диагностической композиции по п.25;

    b) предоставление достаточного времени для ассоциации меченого соединения с амилоидными отложениями и

    c) детекцию меченого соединения, ассоциированного с одним или несколькими амилоидными от- ложениями.
27. 27. Способ ингибирования агрегации амилоидных бляшек у млекопитающего, включающий введение композиции по п.24 в количестве, эффективном для ингибирования агрегации амилоидных бляшек.
28. 28. Соединение по п.1, представляющее собой
29. 29. Фармацевтическая композиция, содержащая эффективное количество соединения по п.7 или 28 и фармацевтически приемлемый носитель или разбавитель.

    .о.

    .ζ
30. 30. Соединение по п.1, имеющее формулу н

    N

    Н где Я^а и Я^Ь представляют собой, независимо, водород или метил и Ζ представляет собой Р или ¹⁸Р.