ES2346977T3 - Procedimiento de terapia para canceres que expresan el antigeno cd40. - Google Patents
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Abstract
Un anticuerpo anti CD40 o un fragmento de unión a antígeno del mismo, para usar en un procedimiento de tratar a un sujeto humano de un cáncer que comprende células neoplásicas que expresan antígeno CD40, en el que dicho procedimiento comprende administrar a dicho sujeto una terapia de combinación, en el que dicha terapia comprende la administración de una cantidad eficaz del anticuerpo anti CD40 o un fragmento de unión a antígeno del mismo en combinación con una interleucina-2 (IL-2) o una variante biológicamente activa de la misma, en el que dicho anticuerpo anti CD40 o fragmento de unión a antígeno del mismo está exento de actividad agonista significativa cuando está unido al antígeno CD40 y se selecciona del grupo constituido por:# a) un anticuerpo o fragmento de unión a antígeno del mismo, que se une a un epítopo capaz de unirse al anticuerpo monoclonal CHIR-5.9 que puede obtenerse de la línea celular de hibridoma depositada en la ATCC como Depósito de Patente Nº PTA-5542 o al anticuerpo monoclonal CHIR-12.12 que puede obtenerse de la línea celular de hibridoma depositada en la ATCC como Depósito de Patente Nº PTA-5543;# b) un anticuerpo o fragmento de unión a antígeno del mismo, que se une a un epítopo que comprende los residuos 82-87 de la secuencia de CD40 humano que se muestra en la SEC ID Nº 10 ó la SEC ID Nº 12;# c) un anticuerpo o fragmento de unión a antígeno del mismo, que se une a un epítopo que comprende los residuos 82-89 de la secuencia de CD40 humano que se muestra en la SEC ID Nº 10 o la ó SEC ID Nº 12; y# d) un anticuerpo o fragmento de unión a antígeno del mismo, que compite con el anticuerpo monoclonal CHIR-5.9 que puede obtenerse de la línea celular de hibridoma depositada en la ATCC como Depósito de Patente Nº PTA-5542 o el anticuerpo monoclonal CHIR-12.12 que puede obtenerse de la línea celular de hibridoma depositada en la ATCC como Depósito de Patente Nº PTA-5543 en un ensayo de unión competitiva.
Description
Procedimiento de terapia para cánceres que
expresan el antígeno CD40.
La presente invención se refiere a
procedimientos de terapia de combinación para cánceres que
comprenden células neoplásicas que expresan el antígeno CD40,
incluidos cánceres relacionados con las células B y tumores
sólidos.
A más de un millón de americanos se les
diagnostica cáncer todos los años. Leucemia, linfomas y mielomas
afectan a más de 100.00 individuos solo en EE.UU. Los tumores
sólidos, como el cáncer de mama, el cáncer de ovarios y el cáncer
de pulmón, afectan a un número incluso mayor de individuos. Para
combatir estas enfermedades se ha desarrollado la inmunoterapia.
Generalmente, la inmunoterapia refuerza la respuesta antitumoral del
paciente contra las células tumorales diana. La terapia con
citocinas es un procedimiento de inmunoterapia que activa la
inmunovigilancia, especialmente contra tumores y antígenos
tumorales. Como alternativa, se puede apuntar directamente a las
células cancerosas usando terapia con anticuerpos. Estos anticuerpos
son específicos de antígenos de superficie celular individuales que
se expresan sobre las células cancerosas y los resultados de los
ensayos clínicos son prometedores. Se han obtenido resultados
terapéuticos satisfactorios usando anticuerpos dirigidos a
antígenos tales como el CD20 (que se expresa sobre células B
normales y muchos linfomas de células B) y el HER2 (que se expresa
en muchos carcinomas de mama).
Un gran porcentaje de casos de cáncer se
caracterizan por un sobrecrecimiento de las células neoplásicas que
expresan el antígeno CD40. El antígeno CD40 es un antígeno de
superficie celular de 55 kDa presente en la superficie tanto de las
células B normales como de las células B neoplásicas humanas,
células dendríticas, otras células presentadoras de antígenos
(APC), células endoteliales, células monocíticas y células
epiteliales. La unión del ligando de CD40 al antígeno CD40 en la
membrana de la célula B proporciona una señal coestimuladora que
estimula la activación y proliferación de las células B, causando la
maduración de la célula B a una célula plasmática que secreta altos
niveles de inmunoglobulinas solubles. Las células transformadas de
pacientes con linfomas de células B de bajo y alto grado, leucemia
linfoblástica aguda de células B, mieloma múltiple, leucemia
linfocítica crónica y enfermedad de Hodgkin expresan el antígeno
CD40. La expresión de CD40 también se detecta en dos tercios de los
casos de leucemia mieloblástica aguda y en 50% de los linfomas
relacionados con el SIDA. Las células B malignas de diversos
tumores de linaje de células B niveles altos de CD40 y parecen
depender de la señalización de CD40 para la supervivencia y
proliferación.
La expresión de CD40 también se ha detectado en
muchos cánceres que no son de células B. Entre los carcinomas que
expresan CD40 se incluyen carcinoma de vejiga urinaria (Paulie y
col. (1989) J. Immunol. 142:590-595;
Braesch-Andersen y col. (1989) J. Immunol.
142:562-567), carcinoma de mama (Hirano y col.
(1999) Blood 93:2999-3007; Wingett y col. (1998)
Breast Cancer Res. Treat. 50:27-36); cáncer de
próstata (Rokhlin y col. (1997) Cancer Res.
57:1758-1768), carcinoma de células renales (Kluth y
col. (1997) Cancer Res. 57:891-899), carcinoma
nasofaríngeo indiferenciado (LTNPC) (Agathanggelou y col. (1995)
Am. J. Pathol. 147: 1152-1160), carcinoma de células
escamosas (SCC) (Amo y col. (2000) Eur. J. Dermatol.
10:438-442; Posner y col. (1999) Clin. Cancer Res.
5:2261-2270), carcinoma tiroideo papilar (Smith y
col. (1999) Thyroid 9:749-755), melanoma cutáneo
maligno (van den Oord y col. (1996) Am. J. Pathol. 149:
1953-1961), cáncer de ovarios (Ciaravino y col.
(2004) Eur. J. Gynaecol. Oncol. 25:27-32), cáncer
de pulmón (Sabel y col. (2000) Cancer Immunol. Immunother.
49:101-8), cáncer cervical (Altenberg y col. (1999)
J. Immunol. 162:4140-4147), carcinoma gástrico
(Yamaguchi y col. (2003) Int. J. Oncol.
23(6):1697-702), sarcomas (véase, por
ejemplo, Lollini y col. (1998) Clin. Cancer Res.
4(8):1843-849, que trata el osteosarcoma
humano y el carcoma de Ewing), y carcinoma hepático (véase, por
ejemplo, Sugimoto y col. (1999) Hepatology30
(4):920-26, que trata el carcinoma hepatocelular
humano). El papel del CD40 en estos cánceres que no son de células
B no se conoce bien. En algunos estudios se ha demostrado que la
unión de CD40 en células transformadas puede tener como resultado
la muerte celular por apoptosis. No obstante, en algunos cánceres,
tales como el melanoma maligno y el cáncer de pulmón, la expresión
de CD40 puede ser un indicador pronóstico negativo (véase, por
ejemplo, Sabel y col. (2000) Cancer Immuno. Immunother.
49(2):101-108; Ottaiano y col. (2004) Clin.
Cancer Res. 10(8):
2824-2831).
2824-2831).
La interleucina 2 (L-2) es una
citocina que es un potente estimulador de la proliferación y función
de células asesinas naturales (NK) y de linfocitos T (véase, por
ejemplo, Morgan y col. (1976) Science 193:1007-1011;
Weil-Hillman y col. (1989) Cancer Res.
49(13): 3680-3688). La IL-2
tiene actividad antitumoral contra varias neoplasias malignas, bien
sola o cuando se combina con células asesinas activadas por
linfocinas (LAK) o linfocitos de infiltración tumoral (TIL) (véase,
por ejemplo, Rosenberg y col. (1987) N. Engl. J. Med.
316:889-897; Rosenberg (1988) Ann. Surg.
208:121-135; Topalian y col. (1988) J. Clin. Oncol.
6:839-853; Rosenberg y col. (1988) N. Engl. J. Med.
319: 1676-1680; y Weber y col. (1992) J. Clin.
Oncol. 10:33-40). Aunque la actividad antitumoral
de la IL-2 se ha descrito en pacientes con melanoma
metastásico y carcinoma de células renales, otras enfermedades,
incluidos los linfomas, también parecen responder al tratamiento con
IL-2 (véase, por ejemplo, Dutcher y Wiernik (1993)
Sem. Oncol. 20(6 Suppl. 9):33-40). No
obstante, dosis elevadas de IL-2 usadas para
alcanzar resultados terapéuticos positivos con respecto al
crecimiento tumoral con frecuencia causan efectos secundarios
graves, incluidos pérdidas capilares, hipotensión y cambios
neurológicos (véase, por ejemplo, Duggan y col. (1992) J.
Immunotherapy 12:115-122; Gisselbrecht y col. (1994)
Blood 83: 2081-2085; y Sznol y Parkinson 1994) Blood
83:2020-2022). Además, las respuestas clínicas a la
IL-2 son variables. Por ejemplo, la mediana del
índice de supervivencia para los subgrupos de pacientes con
carcinoma de células renales tratados con IL-2 puede
ser de entre 28 y 5 meses en función de los factores de riesgo
(Palmer y col. (1992) Ann. Oncol. 3:475-80).
Aunque un agente inmunoterapéutico cualquiera
puede proporcionar un beneficio al paciente, se necesitan otros
procedimientos para reducir la toxicidad, mejorar la eficacia y
mejorar los resultados del tratamiento. Además, el cáncer a menudo
puede convertirse en resistente al tratamiento con una oncoterapia
con un solo agente, bien como resultado de la resistencia iniciar a
una terapia con un solo anticuerpo o a una terapia con una sola
citoquina, o como resultado de la resistencia que se desarrolla
durante uno o más ciclos de tiempo de terapia con el único
anticuerpo o la única citocina.
En consecuencia, el descrubrimiento de una
inmunoterapia de combinación que puede simultáneamente mejorar los
resultados del tratamiento con respecto a oncoterapia con un único
agente y reducir la toxicidad de una inmunoterapéutica cualquiera
puede reducir considerablemente la mortalidad y la morbididad de los
pacientes de cáncer, especialmente de los que sufren tumores
sólidos, mielomas, leucemias y linfomas.
Los documentos WO 01/83755, WO 02/28904 y WO
02/28904 describen anticuerpos capaces de unirse a CD40,
procedimientos para producir estos anticuerpos y procedimientos
para su uso.
Ellmark y col. (Immunology 2002, 106,
456-463) dan un informe sobre la modulación de la
interacción CD40-ligando de CD40 usando fragmentos
de anticuerpos anti CD40 de cadena simple humanos.
La invención proporciona un anticuerpo
anti-CD40 o un fragmento de unión a antígeno del
mismo, para usar en un procedimiento de tratar a un sujeto humano
por un cáncer que comprende células neoplásicas que expresan el
antígeno CD40, en el que dicho procedimiento comprende administrar a
dicho sujeto una terapia de combinación, en la que dicha terapia
comprende la administración de una cantidad eficaz del anticuerpo
anti-CD40, o fragmento de unión a antígeno del
mismo, en combinación con una interleucina-2
(IL-2) o una variante biológicamente activa de la
misma, estando dicho anticuerpo anti-CD40, o
fragmento de unión a antígeno del mismo, exento de actividad
agonista cuando se une al antígeno CD40 y se selecciona del, grupo
constituido por:
- a)
- un anticuerpo o fragmento de unión a antígeno del mismo, que se une a un epítopo capaz de unirse al anticuerpo monoclonal CHIR-5.9 que puede obtenerse de la línea celular de hibridoma depositada en la ATCC como Depósito de Patente Nº PTA-5542 o al anticuerpo monoclonal CHIR-12.12 que puede obtenerse de la línea celular de hibridoma depositada en la ATCC como Depósito de Patente Nº PTA-5543;
- b)
- un anticuerpo o fragmento de unión a antígeno del mismo, que se une a un epítopo que comprende los residuos 82-87 de la secuencia de CD40 humano que se muestra en la SEC ID Nº 10 o la SEC ID Nº 12;
- c)
- un anticuerpo o fragmento de unión a antígeno del mismo, que se une a un epítopo que comprende los residuos 82-89 de la secuencia de CD40 humano que se muestra en la SEC ID Nº 10 o la SEC ID Nº 12; y
- d)
- un anticuerpo o fragmento de unión a antígeno del mismo,que compite con el anticuerpo monoclonal CHIR-5.9 que puede obtenerse de la línea celular de hibridoma depositada en la ATCC como Depósito de Patente Nº PTA-5542 o el anticuerpo monoclonal CHIR-12.12 que puede obtenerse de la línea celular de hibridoma depositada en la ATCC como Depósito de Patente Nº PTA-5543 en un ensayo de unión competitiva.
La invención también proporciona el uso de una
cantidad eficaz de un anticuerpo anti CD40 o fragmento de unión a
antígeno del mismo, en combinación con en combinación con una
interleucina-2 (IL-2) o una variante
biológicamente activa de la misma en la fabricación de un
medicamento para tratar a un sujeto humano por un cáncer que
comprende células neoplásicas que expresan el antígeno CD40
mediante terapia de combinación, en la que dicho anticuerpo
anti-CD40, o fragmento de unión a antígeno del
mismo, está exento de actividad agonista significativa cuando está
unido al antígeno CD40 y se selecciona del grupo constituido
por:
- a)
- un anticuerpo o fragmento de unión a antígeno del mismo, que se une a un epítopo capaz de unirse al anticuerpo monoclonal CHIR-5.9 que puede obtenerse de la línea celular de hibridoma depositada en la ATCC como Depósito de Patente Nº PTA-5542 o al anticuerpo monoclonal CHIR-12.12 que puede obtenerse de la línea celular de hibridoma depositada en la ATCC como Depósito de Patente Nº PTA-5543;
- b)
- un anticuerpo o fragmento de unión a antígeno del mismo, que se une a un epítopo que comprende los residuos 82-87 de la secuencia de CD40 humano que se muestra en la SEC ID Nº 10 o la SEC ID Nº 12;
- c)
- un anticuerpo o fragmento de unión a antígeno del mismo, que se une a un epítopo que comprende los residuos 82-89 de la secuencia de CD40 humano que se muestra en la SEC ID Nº 10 o la SEC ID Nº 12; y
- d)
- un anticuerpo o fragmento de unión a antígeno del mismo, que compite con el anticuerpo monoclonal CHIR-5.9 que puede obtenerse de la línea celular de hibridoma depositada en la ATCC como Depósito de Patente Nº PTA-5542 o el anticuerpo monoclonal CHIR-12.12 que puede obtenerse de la línea celular de hibridoma depositada en la ATCC como Depósito de Patente Nº PTA-5543 en un ensayo de unión competitiva.
Otros aspectos de la invención se presentan en
las reivindicaciones adjuntas.
Se divulgan procedimientos de tratar un sujeto
por cáncer, que comprende células neoplásicas que expresan el
antígeno de superficie celular CD40. Los procedimientos comprenden
terapia de combinación con interleucina-2
(IL-2), o una variante biológicamente activa de la
misma, y al menos un anticuerpo anti-CD40 o un
fragmento de unión a antígeno del mismo. La administración de estos
dos agentes en combinación proporciona mayor eficacia que
cualquiera de los dos agentes por separado, lo que resulta en una
respuesta terapéutica positiva. En algunas formas de realización se
produce un efecto terapéutico sinergístico, lo que convierte a la
divulgación en especialmente útil para tratar cánceres que son
resistentes a una terapia con un único agente.
De acuerdo con los procedimientos divulgados en
la presente memoria descriptiva, a un individuo que lo necesite se
le administra una combinación de una IL-2, o una
variante biológicamente activa de la misma, y un anticuerpo
anti-CD40 antagonista o un fragmento de unión a
antígeno del mismo. Entre las moléculas de interleucina adecuadas
se incluyen la IL-2 humana y sus variantes
biológicamente activas, tales como la muteína de
IL-2 aldesleucina
(des-alanil-1,
serina-125 interleucina 2 humana). Entre los
anticuerpos anti-CD40 antagonistas adecuados para
usar en los procedimientos descritos en la presente memoria
descriptiva se incluyen anticuerpos monoclonales, o fragmentos de
unión a antógeno de los mismos, capaces de unirse específicamente a
un antígeno CD40 humano expresado en la superficie de una célula
humana. Estos anticuerpos anti-CD40 antagonistas,
están exentos de actividad agonista significativa, pero exhiben
actividad antagonista cuando se unen al antígeno CD40 en las
células humanas, particularmente cuando se unen al antígeno CD40
sobre células neoplásicas humanas. Anticuerpos monoclonales
anti-CD40 adecuados tienen regiones constantes
humanas; preferentemente también tienen regiones estructurales
total o parcialmente humanizadas; y, más preferentemente son
anticuerpos completamente humanos, o fragmentos de unión a antígeno
del mismo.
Ejemplos de tales anticuerpos monoclonales
anti-CD40 antagonistas son los anticuerpos
denominados en el presente documento como CHIR-5.9
y CHIR-12.12, que se pueden producir de forma
recombinante; los anticuerpos monoclonales producidos por las
líneas celulares de hibridoma denominadas en el presente documento
como 131.2F8.5.9 (a la que se hace referencia en el presente
documento línea celular 5.9) y 153.8E2.D10.D6.12.12 (a la que se
hace referencia en el presente documento línea celular 12.12); un
anticuerpo monoclonal que comprende una secuencia de aminoácidos
seleccionada del grupo constituido por la secuencia mostrada en SEC
ID Nº 6, la secuencia mostrada en SEC ID Nº 7; la secuencia
mostrada en SEC ID Nº 8, las secuencias mostradas en SEC ID Nº 6 y
SEC ID Nº 7, y las secuencias mostradas en SEC ID Nº 6 y SEC ID Nº
8; un anticuerpo monoclonal que comprende una secuencia de
aminoácidos seleccionada del grupo constituido por la secuencia
mostrada en SEC ID Nº 2, la secuencia mostrada en SEC ID Nº 4, la
secuencia mostrada en SEC ID Nº 5, las secuencias mostradas SEC ID
Nº 2 y SEC ID Nº 4, y las secuencias mostradas SEC ID Nº 2 y SEC ID
Nº 5; un anticuerpo monoclonal que comprende una secuencia de
aminoácidos codificada por una molécula de ácido nucleico que
comprende una secuencia de nucleótidos seleccionada del grupo
constituido por la secuencia mostrada en SEC ID Nº 1, la secuencia
mostrada en SEC ID Nº 3, y las secuencias mostradas en SEQ ID Nº 1
y SEC ID Nº 3; y los fragmentos de estos anticuerpos monoclonales
que se unen al antígeno que retienen la capacidad de unirse
específicamente al CD40 humano y que están exentos de actividad
agonista significativa pero que exhiben actividad antagonista cuando
se unen al antígeno CD40 en las células humanas. Ejemplos de tales
anticuerpos monoclonales CD40 también incluyen un anticuerpo
monoclonal que se une a un epítopo capaz de unirse al anticuerpo
monoclonal producido por la línea celular de hibridoma 12.12 o al
producido por la línea celular de hibridoma 5.9; un anticuerpo
monoclonal que se une a un epítopo que comprende los residuos
82-87 de la secuencia de aminoácidos mostrada en la
SEC ID Nº 10 o la SEC ID Nº 12; un anticuerpo monoclonal que
compite con el anticuerpo monoclonal CHIR-12.12 o
CHIR-5.9 en un ensayo de unión competitiva; y un
anticuerpo monoclonal que es un fragmento de unión al antígeno del
anticuerpo monoclonal CHIR-12.12 o
CHIR-5.9 o cualquiera de los anteriores anticuerpos
monoclonales, en los que el fragmento retiene la capacidad de
unirse específicamente al antígeno CD40 humano.
En algunas formas de realización, estos dos
agentes terapéuticos se administran de forma concurrente en forma
de dos composiciones farmacéuticas distintas, una que contiene
IL-2 o una variante biológicamente activa de la
misma, y otra que contiene el anticuerpo anti-CD40
antagonista, el fragmento de unión a antígeno adecuado, en la que
cada una se administra de acuerdo con un régimen de dosificación
concreto. La composición farmacéutica que comprende el anticuerpo
anti-CD40 antagonista, o el fragmento de unión a
antígeno del mismo, se administra de acuerdo con un programa de
dosificación semanal o, como alternativa, se administra una vez cada
dos, tres o cuatro semanas. El anticuerpo anti-CD40
antagonista, o el fragmento de unión a antígeno del mismo, se puede
administrar a lo largo de un periodo de tratamiento o para una
duración fija dentro de un periodo de tratamiento. La composición
farmacéutica que comprende IL-2, o una variante
biológicamente activa de la misma, se administra de acuerdo con un
régimen de dosificación constante de IL-2, o se
administra de acuerdo con un régimen de dosificación de
IL-2 de dos
niveles.
niveles.
El régimen de dosificación constante de
IL-2 comprende un periodo de tiempo durante el cual
se administra a un sujeto una dosis semanal total constante de
IL-2, o de su variante biológicamente activa,
seguido por un periodo de tiempo sin dosis de IL-2.
Uno o más ciclos de un régimen de dosificación constante de
IL-2 se administran a un sujeto que lo necesite. La
dosis semanal total que se debe administra durante cada ciclo del
régimen de dosificación constante de IL-2 se puede
administrar en forma de una única dosis. Como alternativa, la dosis
semanal total administrada durante cada ciclo del régimen de
dosificación constante de IL-2 se puede repartir en
una serie de dosis equivalentes que se administran de acuerdo con un
programa de dosificación de dos, tres, cuatro, cinco, seis o siete
veces a la semana.
El régimen de dosificación de
IL-2 de dos niveles comprende un primer periodo de
tiempo de dosificación de IL-2, en el que una dosis
semanal total mayor de IL-2, o de su variante
biológicamente activa, se administra al sujeto, seguido por un
segundo periodo de tiempo de dosificación de IL-2,
en el que se administra al sujeto una dosis semanal total menor de
IL-2, o de su variante biológicamente activa.
La dosis semanal total de IL-2,
o su variante biológicamente activa, durante el segundo periodo de
tiempo de la dosificación de IL-2 es menor que la
dosis semanal total de IL-2, su variante
biológicamente activa, administrada durante el primer periodo de
tiempo de dosificación de IL-2. La dosis semanal
total que se va a administrar durante el primer periodo de tiempo
y/o durante el segundo periodo de tiempo de la dosificación de
IL-2 se puede administrar en forma de una dosis
única. Como alternativa, la dosis semanal total administrada
durante uno o ambos periodos de tiempo, primero y segundo, de la
dosificación de la IL-2 se puede repartir en una
serie de dosis equivalentes que se administran de acuerdo con un
programa de dosificación de dos, tres, cuatro, cinco, seis o siete
veces a la semana. Los procedimientos descritos en la presente
memoria descriptiva también proporcionan una interrupción en el
régimen de dosificación de la IL-2 de dos niveles,
en el que se proporciona al sujeto un periodo de tiempo sin
administrar IL-2 y, opcionalmente, un periodo de
tiempo sin dosificación del anticuerpo anti-CD40,
entre el primero y el segundo periodo de tiempo del régimen de
dosificación de IL-2 de dos niveles. La terapia
concurrente con estos dos agentes terapéuticos puede comprender
administrar uno o más ciclos de un régimen de dosificación de
IL-2 de dos niveles en combinación con el régimen de
dosificación recomendado para el anticuerpo
anti-CD40 antagonista, o el fragmento de unión a
antígeno adecuado.
Los procedimientos descritos en la presente
memoria descriptiva son útiles para tratar individuos por un cáncer
que comprende células neoplásicas que expresan el antígeno de
superficie celular CD40. Ejemplos de tales cánceres incluyen, entre
otros, tumores sólidos, tales como cáncer de pulmón, de ovarios, de
vejiga urinaria, de riñón, de hígado, gástrico, de próstata, de
piel y de mama, y sarcomas, y cánceres relacionados con las células
B tales como linfomas no Hodgkin (linfomas de grado alto, linfomas
de grado intermedio y linfomas de grado bajo), la enfermedad de
Hodgkin, leucemias linfoblásticas agudas, mielomas, leucemias
linfocíticas crónicas y leucemias mieloblásticas.
La Figura 1 presenta las secuencias de
aminoácidos para las cadenas ligeras y pesadas del mAb
CHIR-12.12. Las regiones líder (residuos
1-20 de SEC ID Nº 2), variable (residuos
21-132 de SEC ID Nº 2), y constante (residuos
133-239 de SEC ID Nº 2) de la cadena ligera se
muestran en la Figura 1A. Las regiones líder (residuos
1-19 de SEC ID Nº 4), variable (residuos
20-139 de SEC ID Nº 4), y constante (residuos
140-469 de SEC ID Nº 4) de la cadena pesada se
muestran en la Figura 1B. La región constante alternativa para la
cadena pesada del mAb CHIR-12.12 mostrada en la
Figura 1B refleja una sustitución de un residuo de serina por un
residuo de alanina en la posición 153 de SEC ID Nº 4. La secuencia
completa para esta variante de la cadena pesada del mAb
CHIR-12.12 se presenta en SEC ID
Nº 5.
Nº 5.
La Figura 2 muestra la secuencia codificadora
para la cadena ligera (Figura 2A; SEC ID Nº 1) y la cadena pesada
(Figura 2B; SEC ID Nº 3) para el mAb CHIR-12.12.
La Figura 3 presenta las secuencias de
aminoácidos para las cadenas ligera y pesada del mAb
CHIR-5.9. Las regiones líder (residuos
1-20 de SEC ID Nº 6), variable (residuos
21-132 de SEC ID Nº 6), y constante (residuos
133-239 de SEC ID Nº 6) de la cadena ligera se
muestran en la Figura 3A. Las regiones líder (residuos
1-19 de SEC ID Nº 7), variable (residuos
20-144 de SEC ID Nº 7), y constante (residuos
145-474 de SEC ID Nº 7) de la cadena pesada se
muestran en la Figura 3B. La región constante alternativa para la
cadena pesada del mAb CHIR-5.9 mostrada en la
Figura 3B refleja una sustitución de un residuo serina por un
residuo alanina en la posición 158 de SEC ID Nº 7. La secuencia
completa para esta variante de la cadena pesada del mAB
CHIR-5.9 se presenta en la SEC ID Nº 8.
La Figura 4 muestra la secuencia codificadora
(Figura 4A; SEC ID Nº 9) para la isoforma corta del CD40 humano
(secuencia de aminoácidos mostrada en la Figura 4B; SEC ID Nº 10), y
la secuencia codificadora (Figura 4C; SEC ID Nº 11) para la
isoforma larga del CD40 humano (secuencia de aminoácidos mostrada en
la Figura 4D; SEC ID Nº 12).
La Figura 5 demuestra la actividad antitumoral
potenciada in vivo del tratamiento de combinación con el
anticuerpo monoclonal CHIR-12.12 e
IL-2 usando un modelo de xenoinjerto de Namalwa de
linfoma no Hodgkin (LNH).
La figura 6 muestra la temperatura de fusión
térmica de CHIR-12.12 en formulaciones de diferente
pH medida por calorimetría diferencial de barrido (DSC).
La presente invención se refiere a
procedimientos para tratar a un sujeto humano por cáncer que
comprende células neoplásicas que expresan el antígeno CD40,
incluidos, entre otros, sólidos, linfomas, como el linfoma de
células B, leucemias y mielomas. Los procedimientos comprenden la
terapia de combinación con interleucina-2
(IL-2), o su variante biológicamente activa, y al
menos un anticuerpo anti-CD40 antagonista, o un
fragmento de unión a antígeno del mismo, cada uno de los cuales se
administra de acuerdo con un régimen de dosificación concreto
descrito en la presente memoria descriptiva. En algunas formas de
realización de la invención, estos regímenes de dosificación se
siguen hasta que se suspende en el sujeto la terapia con el
anticuerpo anti-CD40, por ejemplo cuando el sujeto
exhibe una respuesta completa o exhibe uno o más síntomas de
toxicidad por el anticuerpo anti-CD40 o hasta que
se retira al sujeto la terapia con IL-2 debido al
desarrollo de síntomas de toxicidad por IL-2
indicados a continuación en la presente memoria descriptiva. Cuando
se retira al sujeto la terapia con IL-2 debido a
toxicidad, la terapia con el anticuerpo anti-CD40 se
puede continuar, siguiendo el régimen de dosificación del
anticuerpo recomendado, o se puede suspender; y una vez que los
síntomas de toxicidad por IL-2 han remitido o se
han resuelto, la terapia con IL-2, o la terapia con
IL-2 y con el anticuerpo anti-CD40
en la que se ha suspendido la terapia con el anticuerpo, se puede
reinstaurar usando el mismo régimen de dosificación con
IL-2 y la misma dosis de IL-2, o su
variante biológicamente activa, el mismo régimen de dosificación de
IL-2 con una dosis menor de este agente terapéutico
o un régimen de dosificación de IL-2 diferente al
descrito en la presente memoria descriptiva.
En otras formas de realización de la invención,
el régimen de dosificación para la terapia con anticuerpo
anti-CD40 se sigue durante un periodo de tiempo
fijo, por ejemplo de 2 semanas a 16 semanas, y se administra en
combinación con un régimen de dosificación de IL-2
descrito en la presente memoria descriptiva, en el que un periodo
de tratamiento dado comprende un periodo de tiempo superpuesto
durante el que el sujeto está recibiendo la terapia con el
anticuerpo anti-CD40 y la terapia con
IL-2 de acuerdo con los regímenes de dosificación y
las dosis descritas en la presente memoria descriptiva. En dichas
formas de realización, generalmente, la duración de la
administración del anticuerpo anti-CD20 es de
aproximadamente 4 semanas a aproximadamente 12 semanas, incluidas
4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11 ó 12 semanas. La duración de la
administración de IL-2 es una función del régimen
de dosificación de IL-2.
La terapia de combinación con estos dos agentes
terapéuticos proporciona actividad antitumoral. Por "actividad
antitumoral" se entiende una reducción en el índice de
proliferación celular y, por tanto, una disminución del índice de
crecimiento de un tumor existente o en un tumor que aparece durante
la terapia, y/o la destrucción de células neoplásicas (tumorales) o
de células neoplásicas recién formadas, y, por tanto, una
disminución del tamaño global de un tumor durante la terapia. Los
sujetos sometidos a terapia con una combinación de
IL-2 (o una variante de la misma) y al menos un
anticuerpo anti-CD40 antagonista (o un fragmento de
unión a antígeno del mismo) experimentan una respuesta fisiológica
que es beneficiosa con respecto al tratamiento de un cáncer que
comprende células neoplásicas que expresan el antígeno CD40,
incluidos, entre otros, cánceres relacionados con células B y
tumores sólidos, como se cita a continuación en la presente memoria
descriptiva.
Aunque los procedimientos descritos en la
presente memoria descriptiva están dirigidos al tratamiento de un
cáncer existente, se reconoce que los procedimientos pueden ser
útiles en la prevención adicional de sobrecrecimientos tumorales
que surgen durante la terapia. La terapia de combinación con
IL-2 (o una variante biológicamente aceptable de la
misma) y un anticuerpo anti-CD40 antagonista (o un
fragmento de unión a antígeno del mismo) proporciona un beneficio
terapéutico que es superior al proporcionado por el uso de
cualquiera de estos agentes terapéuticos por separado. Además,
estos dos agentes terapéuticos se pueden usar en combinación para
tratar tumores que son resistentes al tratamiento con cualquiera de
estos agentes por separado (es decir, tratamiento con un único
agente), bien como resultado de la resistencia inicial a la terapia
con un único anticuerpo o a la terapia con una única citocina, o
como resultado de la resistencia que se desarrolla durante uno o más
ciclos de tiempo de terapia con el único anticuerpo o la citocina
única. En otras formas de realización más, la terapia de
combinación con estos dos agentes terapéuticos tiene un efecto
terapéutico sinergístico contra los tumores que son resistentes o
no resistentes (es decir, respondedores) a la terapia con un único
agente.
El término "oncoterapia" se entiende que
significa cualquier tratamiento del cáncer, incluidos quimioterapia,
radioterapia, inmunoterapia, combinaciones de las mismas, y
similares. En la presente memoria descriptiva se hace referencia a
los agentes usados en la oncoterapia como "agentes
oncoterapéuticos". El término "inmunoterapia" es aplicable
a cualquier terapia del cáncer en la que se modula el sistema
inmunológico e incluye administración de citocinas, administración
de anticuerpos, administración de antígenos/vacunación,
administración de células inmunitarias, refuerzo de células
inmunitarias, combinaciones de los mismos y similares
"Tumor", según se usa en el presente
documento, se refiere a todo crecimiento y proliferación de células
neoplásicas, sea maligno o benigno, y a todas las células y tejidos
precancerosos y cancerosos. "Neoplásico", según se usa en el
presente documento, se refiere a cualquier forma de crecimiento
celular no regulado o con regulación alterada, ya sea maligno o
benigno, que tiene como resultado un crecimiento tisular anormal.
Por "célula neoplásica que expresa CD40" se entiende cualquier
célula neoplásca, maligna o benigna, que expresa el antígeno de
superficie celular CD40. En la técnica se conocen bien
procedimientos para detectar la expresión de CD40 en las células e
incluyen, entre otros, técnicas de PCR, inmunohistoquímica,
citometría de flujo, transferencia de tipo western, ELISA y
similares.
Los términos "cáncer" y "canceroso" se
refieren a, o describen, la afección fisiológica en mamíferos que
está típicamente caracterizada por el crecimiento celular no
regulado. Ejemplos de cáncer incluyen, entre otros, linfoma y
leucemia, mieloma y tumores sólidos, incluidos, entre otros, cáncer
de pulmón, cáncer de mama, cáncer de ovarios, carcinomas renales,
carcinomas hepáticos, carcinomas gástricos, cáncer de colon, cáncer
de próstata, cáncer de piel, sarcomas y similares.
Por "refractario" en el contexto de un
cáncer se entiende que el cáncer concreto es resistente, o no
responde, a la terapia con un agente terapéutico concreto. Un
cáncer puede ser refractario a la terapia con un agente terapéutico
concreto desde el inicio del tratamiento con el agente terapéutico
concreto (es decir, no responde a la exposición inicial al agente
terapéutico) o como resultado de desarrollar resistencia al agente
terapéutico, bien durante el curso de un primer periodo de
\hbox{tratamiento con el agente terapéutico o durante un periodo de tratamiento posterior con agente terapéutico.}
El término "interleucina-2"
(IL-2), como se usa en el presente documento, se
refiere a una citocina con un peso molecular indicado en el
intervalo de 13.000 a 17.000 dalton (Gillis y Watson (1980) J. Exp.
Med. 159:1709) y con un punto isoeléctrico en el intervalo de
6-8,5. La IL-2 se produce de forma
natural en las células T normales y está presente en el cuerpo a
concentraciones bajas. Morgan y col. (1976) Science
193:1007-1008 describieron por primera vez la
IL-2 y originariamente la denominaron factor de
crecimiento de células T por su capacidad para inducir la
proliferación de linfocitos T estimulados. Los "anticuerpos" y
las "inmunoglobulinas" (Ig) son glicoproteínas que tienen las
mismas características estructurales. Los términos se usan de forma
sinónima. En algunos casos, se puede conocer la especificidad
antigénica de la inmunoglobulina.
El término "anticuerpo" se usa en el
sentido más amplio y abarca anticuerpos totalmente estructurados,
fragmentos de anticuerpos que pueden unirse al antígeno (por
ejemplo, Fab, F(ab')_{2}, Fv, anticuerpos de cadena
simple, fragmentos divalentes o diabodies, anticuerpos quimeras,
anticuerpos híbridos, anticuerpos biespecíficos, anticuerpos
humanizados y similares), y péptidos recombinantes que comprenden
los anteriores.
Los términos "anticuerpo monoclonal" y
"mAb", según se usan en el presente documento, se refieren a un
anticuerpo obtenido de una población de anticuerpos sustancialmente
homogénea, es decir, los anticuerpos individuales que comprenden la
población son idénticos excepto por las posibles mutaciones que se
dan en la naturaleza que pueden estar presentes en cantidades
menores. Según se utiliza en el presente documento "anticuerpo
anti CD40" abarca cualquier anticuerpo que reconoce
específicamente el antígeno CD40 de superficie celular, incluidos
anticuerpos policlonales, anticuerpos monoclonales, anticuerpos de
cadena única y sus fragmentos tales como Fab, F(ab')_{2},
F_{v}, y otros fragmentos que retienen la función de unión al
antígeno del anticuerpo anti CD40 original. Son de particular
interés para la práctica de los procedimientos descritos en el
presente documento los anticuerpos anti CD40 o sus fragmentos de
unión a antígeno que tienen las propiedades de unión exhibidas por
los anticuerpos monoclonales anti CD40 humanos
CHIR-5.9 y CHIR-12.12 descritos en
el presente documento más adelante.
Los "anticuerpos nativos" y las
"inmunoglobulinas nativas" son, usualmente, glicoproteínas
heterotetraméricas de aproximadamente 150.000 dalton, compuestas
por dos cadenas ligeras (L) idénticas y dos cadenas pesadas (H)
idénticas. Cada cadena ligera está unida a una cadena pesada por un
enlace disulfuro covalente, mientras que el número de enlaces
disulfuro varía entre las cadenas pesadas de diferentes isotipos de
inmunoglobulinas. Cada cadena ligera y pesada también tiene puentes
disulfuro intracatenarios espaciados regularmente. Cada cadena
pesada tiene en un extremo un dominio variable (V_{H}) seguido por
un número de dominios constantes. Cada cadena ligera tiene un
dominio variable en un extremo (V_{L}) y un dominio constante en
su otro extremo; el dominio constante de la cadena ligera está
alineado con el primer dominio constante de la cadena pesada y el
dominio variable de la cadena ligera está alineado con el dominio
variable de la cadena pesada. Se cree que residuos de aminoácidos
concretos forman una interfaz entre los dominios variables de las
cadenas ligera y pesada.
El término "variable" se refiere al hecho
de que ciertas partes de los dominios variables difieren ampliamente
en la secuencia entre los anticuerpos. Las regiones variables
confieren especificidad de unión a antígeno. Sin embargo, la
variabilidad no se distribuye uniformemente a lo largo de los
dominios variables de los anticuerpos. Está concentrada en tres
segmentos llamados regiones determinantes de complementariedad (CDR)
o regiones hipervariables, en los dominios variables tanto de las
cadenas ligeras como de las cadenas pesadas. Las partes más
altamente conservadas de los dominios variables están encerradas en
las regiones de marco (FR). Los dominios variables de las cadenas
ligeras y pesadas nativas comprenden, cada uno, cuatro regiones FR,
que adoptan en gran medida una configuración en lámina \beta
plegada, conectadas por tres CDR, que forman bucles que conectan la
estructura de la lámina \beta plegada, y en algunos casos forman
parte de la misma. Las CDR en cada cadena se mantienen juntas en
estrecha proximidad por las regiones FR y, con las CDR de la otra
cadena, contribuyen a la formación del sitio de unión al antígeno
de los anticuerpos (véase Kabat y col. (1991) NIH Publ. Nº
91-3242, Vol. I, páginas
647-669).
Los dominios constantes no participan
directamente en la unión de un anticuerpo a un antígeno, pero
exhiben diversas funciones efectoras, tales como la unión del
receptor de Fc (FcR), la participación del anticuerpo en la
toxicidad celular dependiente de anticuerpos, la opsonización, la
iniciación de la citotoxicidad dependiente del complemento y la
desgranulación de los mastocitos.
El término "región hipervariable" cuando se
usa en el presente documento se refiere a los residuos de
aminoácidos de un anticuerpo que son responsables de la unión del
antígeno. La región hipervariable comprende residuos de aminoácidos
de una "región determinante de complementariedad" o "CDR"
(es decir, los residuos 24-34 (L1),
50-56 (L2) y 89-97 (L3) en el
dominio variable de la cadena ligera y 31-35 (H1),
50-65 (H2) y 95-102 (H3) en el
dominio variable de la cadena pesada; Kabat y col. (1991) Sequences
of Proteins of Immunological Interest (5ª ed., Public Health
Service, National Institute of Health, Bethesda, MD) y/o los
residuos de un "bucle hipervariable" (es decir, los residuos
26-32 (L1), 50-52 (L2) y
91-96 (L3) en el dominio variable de la cadena
ligera y (H1), 53-55 (H2) y 96-101
(H3) en el dominio variable de la cadena pesada; Clothia y Lesk
(1987) J. Mol. Biol. 196: 901-917). Los residuos
del "marco" o "FR" son los residuos del dominio variable
diferentes a los residuos de la región hipervariable, como se
considera en el presente documento.
Los "fragmentos de anticuerpos" comprenden
una parte de un anticuerpo intacto, de preferencia la región de
unión al antígeno o la región variable del anticuerpo intacto.
Ejemplos de fragmentos de anticuerpos incluyen los fragmentos Fab,
Fab', F(ab')2 y Fv; fragmentos divalentes o diacuerpos;
anticuerpos lineales (Zapata y col. (1995) Protein Eng.
8(10): 1057-1062); moléculas de anticuerpos
de cadena simple; y anticuerpos multiespecíficos formados a partir
de fragmentos de anticuerpos. La digestión con papaína de los
anticuerpos produce dos fragmentos idénticos de unión al antígeno,
llamados fragmentos "Fab", cada uno con un único sitio de unión
al antígeno, y un fragmento residual "Fc", cuyo nombre refleja
su capacidad para cristalizar fácilmente. El tratamiento con
pepsina da un fragmento F(ab')2 que tiene dos sitios de
combinación con el antígeno y aún es capaz de formar un
entrecruzamiento con el antígeno.
"Fv" es el fragmento mínimo del anticuerpo
que contiene un sitio de reconocimiento y unión del antígeno
completo. Esta región está constituida por un dímero de un dominio
variable de cadena pesada y uno de cadena ligera en estrecha
asociación no covalente. En esta configuración, las tres CDR de cada
dominio variable interaccionan para definir un sitio de unión al
antígeno sobre la superficie del dímero
V_{H}-V_{L}. En conjunto, las seis CDR
confieren la especificidad de unión al antígeno para el anticuerpo.
Sin embargo, incluso un único dominio variable (o la mitad de un Fv
que comprende sólo tres CDR específicas para un antígeno) tiene la
capacidad de reconocer y unirse al antígeno, aunque con una menor
afinidad que el sitio de unión completo.
El fragmento Fab también contiene el dominio
constante de la cadena ligera y el primer dominio constante
(C_{H}1) de la cadena pesada. Los fragmentos Fab difieren de los
fragmentos Fab' por la adición de unos pocos residuos en el extremo
carboxi terminal del dominio C_{H}1 de la cadena pesada, que
incluye una o más cisteínas de la región de bisagra del anticuerpo.
Fab'-SH es la denominación en el presente documento
para el Fab' en el que el(los) residuo(s) cisteína de
los dominios constantes tiene(n) un grupo tiol libre. Los
fragmentos Fab' se producen mediante la reducción del puente
disulfuro de la cadena pesada del fragmento F(ab')2. También
se conocen otros acoplamientos químicos de fragmentos de
anticuerpos.
Las "cadenas ligeras" de los anticuerpos
(inmunoglobulinas) de cualquier especie de vertebrado pueden
asignarse a uno de dos tipos claramente diferentes, llamados kappa
(\kappa) y lambda (\lambda), basándose en las secuencias de
aminoácidos de sus dominios constantes.
Según la secuencia de aminoácidos del dominio
constante de sus cadenas pesadas, las inmunoglobulinas pueden
asignarse a diferentes clases. Hay cinco clases principales de
inmunoglobulinas humanas: IgA, IgD, IgE, IgG e IgM, y varias de
estas pueden dividirse además en subclases (isotipos), por ejemplo,
IgG1, IgG2, IgG3, IgG4, IgA 1 e IgA2. Los dominios constantes de
las cadenas pesadas que corresponden a las diferentes clases de
inmunoglobulinas se denominan alfa, delta, épsilon, gamma y mu,
respectivamente. Las estructuras y las configuraciones
tridimensionales de las subunidades de las diferentes clases de
inmunoglobulinas son bien conocidas. Los isotipos diferentes tienen
funciones efectoras diferentes. Por ejemplo, los isotipos IgG1 e
IgG3 humanos median la actividad de citotoxicidad mediada por
células dependiente de anticuerpos (ADCC).
La palabra "marcador" cuando se utiliza en
el presente documento se refiere a un compuesto o composición
detectable que se conjuga directamente o indirectamente con el
anticuerpo para generar un anticuerpo "marcado". El marcador
puede ser detectable por sí mismo (por ejemplo, marcadores
radioisótopos o marcadores fluorescentes) o, en el caso de un
marcador enzimático, puede catalizar la alteración química de un
compuesto o composición de sustrato que es detectable.
Radionúclidos que pueden servir como marcadores detectables
incluyen, por ejemplo, I-131,
I-123, I-125, Y-90,
Re-188, Re-186,
At-211, Cu-67,
Bi-212 y Pd-109. El marcador podría
también ser una entidad no detectable, tal como una toxina.
El término "antagonista" se utiliza en el
sentido más amplio e incluye cualquier molécula que bloquea parcial
o totalmente, inhibe o neutraliza una actividad biológica de una
diana nativa dada a conocer en el presente documento o su
transcripción o traducción.
"Vehículos", según se usa en el presente
documento, incluye vehículos, excipientes o estabilizadores
farmacéuticamente aceptables que son no tóxicos para la célula o el
mamífero que se expone al mismo a las dosis y concentraciones
utilizadas. Frecuentemente, el vehículo fisiológicamente aceptable
es una solución acuosa de pH tamponado. Ejemplos de vehículos
fisiológicamente aceptables incluyen tampones tales como fosfato,
citrato, succinato y otros ácidos orgánicos; antioxidantes,
incluido el ácido ascórbico; polipéptidos de bajo peso molecular
(con menos de aproximadamente 10 residuos); proteínas, tales como
albúmina sérica, gelatina, o inmunoglobulinas; polímeros
hidrófilos, tales como polivinilpirrolidona; aminoácidos, tales como
glicina, glutamina, asparagina, arginina o lisina; monosacáridos,
disacáridos y otros carbohidratos, incluidos glucosa, manosa o
dextrinas; agentes quelantes tales como EDTA; alcoholes de azúcar,
tales como manitol o sorbitol; contraiones formadores de sales,
tales como sodio; y/o tensioactivos no iónicos tales como TWEEN,
polietilenglicol (PEG) y Pluronics. La administración "en
combinación con" uno o más agentes terapéuticos incluye la
administración simultánea (al mismo tiempo) y consecutiva (es
decir, secuencial) en cualquier orden.
Una "célula huésped", según se usa en el
presente documento, se refiere a un microorganismo o a una célula o
línea celular eucariota cultivada como una entidad unicelular que
puede usarse, o se ha usado, como receptor de un vector
recombinante o de otros polinucleótidos de transferencia, e incluye
a la progenie de la célula original que se ha transfeccionado. Se
entiende que la progenie de una célula única puede no ser
necesariamente completamente idéntica en cuanto a morfología o en
cuando al complemento de ADN genómico o total a la original
parental, por las mutaciones naturales, accidentales o
deliberadas.
"Células efectoras humanas" son leucocitos
que expresan uno o más FcR y que realizan funciones efectoras. De
preferencia, las células expresan al menos Fc\gammaRIII y llevan a
cabo la función efectora de citotoxicidad mediada por células
dependiente de antígenos (ADCC). Ejemplos de leucocitos humanos que
median la ADCC incluyen células mononucleares de sangre periférica
(PBMC), células citolíticas naturales (NK), monocitos, macrófagos,
eosinófilos y neutrófilos; siendo las de preferencia las PBMC y las
células NK. Los anticuerpos que tienen actividad ADCC son,
típicamente, del isotipo IgG1 o IgG3. Nótese que además de aislar
anticuerpos IgG1 e IgG3, tales anticuerpos que median la ADCC
pueden generarse modificando una región variable de un anticuerpo
que no media la ADCC o un fragmento de región variable sobre una
región constante del isotipo IgG1 o IgG3.
Los términos "receptor de Fc" o "FcR"
se usan para describir un receptor que se une a la región Fc de un
anticuerpo. El FcR de preferencia es un FcR humano de secuencia
nativa. Además, un FcR de preferencia es uno que se une a un
anticuerpo IgG (un receptor gamma) e incluye los receptores de las
subclases Fc\gammaRI, Fc\gammaRII y Fc\gammaRIII, incluidas
las variantes alélicas y formas de corte y empalme alternativas de
estos receptores. Los receptores Fc\gammaRII incluyen
Fc\gammaRIIA (un "receptor activador") y Fc\gammaRIIB (un
"receptor inhibidor"), que tienen secuencias de aminoácidos
similares que difieren principalmente en sus dominios citoplásmicos.
El receptor activador Fc\gammaRIIA contiene un motivo de
activación inmunorreceptor basado en tirosina (ITAM) en su dominio
citoplásmico. El receptor inhibidor Fc\gammaRIIB contiene un
motivo de inhibición inmunorreceptor basado en tirosina (ITIM) en
su dominio citoplásmico. Véase Daeron (1997) Annu. Rev. Immunol. 15:
203-234. Los FcR se revisan en Ravetch y Kinet
(1991) Annu. Rev. Immunol. 9: 457-492 (1991); Capel
y col. (1994) Immunomethods 4: 25-34; y de Haas y
col. (1995) J. Lab. Clin. Med. 126: 330-341. Otros
FcR, incluidos los que se identificarán en el futuro, están
abarcados por el término "FcR" en el presente documento. El
término incluye también el receptor neonatal, FcRn, que es
responsable de la transferencia de las IgG maternas al feto (Guyer y
col. (1976) J. Immunol. 117: 587 y Kim y col. (1994) J. Immunol.
24: 249).
El término "sinergia" se usa para describir
un efecto combinado de dos o más agentes activos que es superior a
la suma de los efectos individuales de cada agente activo
respectivo. Por tanto, cuando el efecto combinado de dos o más
agentes tiene como resultado una "inhibición sinérgica" de una
actividad o proceso, por ejemplo el crecimiento tumoral, se
entiende que la inhibición de la actividad o proceso es mayor a la
suma de los efectos inhibidores de cada agente activo respectivo.
El término "efecto terapéutico sinérgico" se refiere a un
efecto terapéutico observado con una combinación de dos o más
terapias en la que el efecto terapéutico (medido mediante
cualquiera de una serie de parámetros) es mayor que la suma de los
efectos terapéuticos individuales observados con las terapias
individuales respectivas.
Los términos "dosis terapéuticamente
eficaz", "cantidad terapéuticamente eficaz" o "cantidad
eficaz" se entiende una cantidad del anticuerpo anti CD40
antagonista (o su fragmento de unión al antígeno) o de
interleucina-2 (o su variante) que, cuando se
administra como parte de una terapia de combinación que comprende al
menos estos dos agentes, da lugar a una respuesta terapéutica
positiva con respecto al tratamiento de un sujeto por un cáncer que
comprende células neoplásicas.
La presente invención se refiere a
procedimientos para tratar a un sujeto que sufre un cáncer
caracterizado por crecimiento de células neoplásicas. Los
procedimientos dados a conocer en el presente documento abarcan una
terapia de combinación con un anticuerpo anti CD40 antagonista, o un
fragmento de unión a antígeno del mismo, e IL-2 o
una variante biológicamente activa de la misma. Los procedimientos
descritos en el presente documento son especialmente útiles para el
tratamiento de cánceres que comprenden células neoplásicas que
expresan el antígeno de superficie CD40, tal como muchos tumores
sólidos y linfomas de células B.
Los tumores sólidos que se pueden tratar usando
los procedimientos descritos en el presente documento incluyen,
entre otros, cáncer de ovarios, de pulmón (por ejemplo, cáncer de
pulmón de células no pequeñas del los tipos de carcinoma de células
escamosas, adenocarcinoma y carcinoma de células granes, y cáncer de
pulmón de células pequeñas), de mama, de colon, renal (incluidos,
por ejemplo, los carcinomas de células renales), de vejiga
urinaria, de hígado (incluidos, por ejemplo, los carcinomas
hepatocelulares), gástrico, cervical, próstata, nasifaríngeo,
tiroideo (por ejemplo, carcinoma papilar tiroideo) y de piel, tal
como melanoma, y sarcomas (incluidos, por ejemplo, osteosarcomas y
sarcomas de Ewing). Los cánceres relacionados con las células B,
tales como linfomas, incluyen linfomas de células B de grado bajo,
intermedio y alto, linfomas inmunoblásticos, linfomas no Hodgkin,
enfermedad de Hodgkin, linfomas inducidos por el virus de Epstein
Barr (EBV) y linfomas relacionados con el SIDA, así como leucemias
agudas de células B, mielomas, leucemias linfocíticas crónicas,
leucemias mieloblásticas agudas, y similares, como se indica en el
presente documento a continuación.
Por tanto, los procedimientos dados a conocer en
el presente documento encuentran utilidad en el tratamiento de
linfomas no Hodgkin relacionados con la proliferación o acumulación
anormal, incontrolable de células B. Para los fines de la presente
invención, se hará referencia a tales linfomas según el esquema de
clasificación de Working Formulation, es decir los linfomas
de células B clasificados como grado bajo, grado intermedio y grado
alto (véase "The Non-Hodgkin's Lymphoma Pathologic
Classification Project", Cancer 49 (1982):
2112-2135). Por consiguiente, los linfomas de
células B de grado bajo incluyen los linfomas linfocíticos de
células pequeñas, linfomas foliculares de células pequeñas hendidas
y linfomas foliculares mixtos de células hendidas pequeñas y
grandes; los linfomas de grado intermedio incluyen linfomas
foliculares de células grandes, linfomas difusos de células
pequeñas hendidas, linfomas difusos mixtos de células pequeñas y
grandes y linfomas difusos de células grandes; y los linfomas de
grado alto incluyen linfomas inmunoblásticos de células grandes,
linfomas linfoblásticos y linfomas de células pequeñas no hendidas
del tipo Burkitt y no Burkitt.
Se sabe que los procedimientos dados a conocer
en el presente documento son útiles en el tratamiento terapéutico
de linfomas de células B que se clasifican según el sistema Revised
European and American Lymphoma Classification (REAL). Tales
linfomas de células B incluyen, entre otros, linfomas clasificados
como neoplasias de células B precursoras, tales como
leucemia/linfoma linfoblástico de células B; neoplasias de células B
periféricas, incluidos la leucemia linfocítica crónica de células
B/linfoma linfocítico de células pequeñas, linfoma
linfoplasmacitoide/inmunocitoma, linfoma de células del manto
(MCL), linfoma centrofolicular (folicular) (incluidos los linfomas
difuso de células pequeñas, difuso mixto de células grandes y
pequeñas, y difuso de células grandes), linfoma marginal de células
B (incluidos los tipos extranodal, nodal y esplénico), leucemia de
células vellosas, plasmacitoma/mieloma, linfoma difuso de células B
grandes del subtipo mediastínicoprimario (tímico), linfoma de
Burkitt y linfoma de Burkitt de grado alto de células B; leucemias
agudas; leucemia linfocítica aguda; leucemias mieloblásticas;
leucemias mielocíticas agudas; leucemia promielocítica; leucemia
mielomonocítica; leucemia monocítica; eritroleucemia; leucemia
granulocítica (leucemia mielocítica crónica); leucemia linfocítica
crónica; policitemia vera; mieloma múltiple; macroglobulinemia de
Waldenstrom; enfermedad de las cadenas pesadas; y linfomas de
células B de grado bajo o grado alto no clasificables.
En particular, los procedimientos dados a
conocer en el presente documento son útiles para tratar tumores
sólidos que comprenden células neoplásicas que expresan el antígeno
CD40 y linfomas de células B, incluidos los que se han indicado en
lo que antecede. En el presente documento se define
"tratamiento" como la aplicación o administración de un
anticuerpo anti CD40 antagonista o su fragmento de unión al antígeno
a un sujeto, o la aplicación o administración de un anticuerpo anti
CD40 antagonista o su fragmento de unión al antígeno a un tejido
aislado o línea celular de un sujeto, en combinación con la
aplicación o administración de IL-2 (o una variante
biológicamente activa de la misma) al sujeto o a un tejido o línea
celular aislado del sujeto, en el caso de un sujeto que tiene una
enfermedad, un síntoma de una enfermedad o una predisposición hacia
una enfermedad, en el que el objetivo es curar, sanar, calmar,
aliviar, alterar, remediar, atenuar, mejorar o afectar la
enfermedad, los síntomas de la enfermedad o la predisposición hacia
la enfermedad. Por "tratamiento" también se entiende la
combinación del anticuerpo anti-CD40 antagonista (o
su fragmento de unión al antígeno) e IL-2 (o una
variante biológicamente activa de la misma) que se puede aplicar o
administrar al sujeto, o al tejido o línea celular aislado del
sujeto, como parte de una única composición farmacéutica o, como
alternativa, como parte de composiciones farmacéuticas
individuales, en las que cada una comprende bien el anticuerpo
anti-CD40 antagonista (o su fragmento de unión al
antígeno) o IL-2 (o una variante biológicamente
activa de la misma), en el caso de que el sujeto tiene una
enfermedad, un síntoma de una enfermedad o una predisposición hacia
una enfermedad, en el que el objetivo es curar, sanar, calmar,
aliviar, alterar, remediar, atenuar, mejorar o afectar la
enfermedad, los síntomas de la enfermedad o la predisposición hacia
la enfermedad.
Los anticuerpos ant CD40 antagonistas adecuados
para uso en los procedimientos dados a conocer en el presente
documento se unen específicamente a un antígeno CD40 humano
expresado en la superficie de una célula humana y están exentos de
actividad agonista significativa pero exhiben actividad antagonista
cuando se unen al antígeno CD40 en la célula humana que expresa
CD40, incluidas células humanas normales y neoplásicas (malignas o
benignas). En algunas formas de realización, su unión al CD40
mostrado sobre la superficie de células humanas tiene como resultado
la inhibición de la proliferación y diferenciación de estas células
humanas. Por tanto, los anticuerpos anti CD40 antagonistas adecuados
para usar en los procedimientos descritos en el presente documento
incluyen anticuerpos monoclonales que exhiben actividad antagonista
hacia las células humanas normales y neoplásicas que expresan el
antígeno CD40 de superficie celular. Estos anticuerpos anti CD40 y
sus fragmentos de unión a antígeno se denominan en el presente
documento "anticuerpos anti CD40 antagonistas". Dichos
anticuerpos incluyen, entre otros, los anticuerpos monoclonales
completamente humanos CHIR-5.9 y
CHIR-12.12 que se describen a continuación y los
anticuerpos monoclonales que tienen las características de unión de
los anticuerpos monoclonales CHIR-5.9 y
CHIR-12.12. Estos anticuerpos monoclonales, que se
pueden producir de forma recombinante, se describen a
continuación.
Además de los anticuerpos monoclonales
CHIR-5.9 y CHIR-12.12, otros
anticuerpos anti CD40 que serían útiles en la práctica de los
procedimientos descritos en el presente documento incluyen, entre
otros; (1) los anticuerpos monoclonales producidos por las líneas
celulares de hibridoma denominadas 131.2F8.5.9 (a la que se hace
referencia en el presente documento como línea celular 5.9) y
153.8E2.D10.D6.12.12 (a la que se hace referencia en el presente
documento como línea celular 12.12), depositadas en la ATCC como
Depósito de Patente Nº PTA-5542 y Depósito de
Patente Nº PTA-5543, respectivamente; (2) un
anticuerpo monoclonal comprende una secuencia de aminoácidos
seleccionada del grupo constituido por la secuencia mostrada en SEC
ID Nº 2, la secuencia mostrada en SEC ID Nº 4, la secuencia
mostrada en SEC ID Nº 5, las secuencias mostradas SEC ID Nº 2 y SEC
ID Nº 4, y las secuencias mostradas en SEC ID Nº 2 y SEC ID Nº 5;
(3) un anticuerpo monoclonal que comprende una secuencia de
aminoácidos seleccionada del grupo constituido por la secuencia
mostrada en SEC ID Nº 6, la secuencia mostrada en la SEC ID Nº 7,
la secuencia mostrada en la SEC ID Nº 8, las secuencias mostradas en
las SEC ID Nº 6 y SEC ID Nº 7, y as secuencias mostradas en las SEC
ID Nº 6 y SEC ID Nº 8; (4) un anticuerpo monoclonal que tiene una
secuencia de aminoácidos codificada por una molécula de ácido
nucleico que comprende una secuencia de nucleótidos seleccionada
del grupo constituido por la secuencia de nucleótidos mostrada en
SEC ID Nº 1, la secuencia de nucleótidos mostrada en SEC ID Nº 3, y
las secuencias mostradas en SEQ ID Nº 1 y SEC ID Nº 3; (5) un
anticuerpo monoclonal que se une a un epítopo capaz de unirse al
anticuerpo monoclonal producido par la línea celular de hibridoma
5.9 o la línea celular de hibridoma 12.12; (6) un anticuerpo
monoclonal que se une a un epítopo que comprende los residuos
82-87 de la secuencia de aminoácidos mostrada en SEC
ID Nº 10 o SEC ID Nº 12; (7) un anticuerpo monoclonal que compite
con el anticuerpo monoclonal CHIR 5.9 o CHIR-12.12
en un ensayo de unión competitiva; y (8) un anticuerpo monoclonal
que es un fragmento del anticuerpo monoclonal CHIR 5.9 o
CHIR-12.12 de unión al antígeno o los anteriores
anticuerpos monoclonales en los puntos precedentes (1)-(7), en los
que el fragmento retiene la capacidad de unirse específicamente al
antígeno CD40 humano. Los expertos en la técnica reconocen que los
anticuerpos y los fragmentos de unión al antígeno de los mismos
dados a conocer en el presente documento incluyen anticuerpos y sus
fragmentos de unión al antígeno que son producidos de manera
recombinante usando procedimientos bien conocidos en la técnica y
que se describen en el presente documento a continuación, e
incluyen, por ejemplo, los anticuerpos monoclonales
CHIR-5.9 y CHIR-12.12 que se han
producido de manera recombinante.
Los fragmentos de los anticuerpos anti CD40
descritos en el presente documento son adecuados para uso en los
procedimientos descritos en el presente documento siempre que
retengan la afinidad deseada del anticuerpo de longitud total. Por
consiguiente, un fragmento de un anticuerpo anti CD40 retendrá la
capacidad para unirse al antígeno CD40 de superficie de las células
B. Tales fragmentos se caracterizan por tener propiedades similares
al anticuerpo anti CD40 antagonista de longitud total
correspondiente. Por ejemplo, los fragmentos de anticuerpos anti
CD40 antagonistas se unirán específicamente a un antígeno CD40
humano expresado en la superficie de una célula humana y están
exentos de actividad agonista significativa pero exhiben actividad
antagonista cuando se unen a un antígeno CD40 en una célula humana
que expresa CD40. En el presente documento se hace referencia a
estos fragmentos como fragmentos "de unión al antígeno".
Además de usar los anticuerpos anti CD40
antagonistas mencionados en lo que antecede y descritos más
completamente en el presente documento más adelante, los
procedimientos descritos en el presente documento se pueden poner
en práctica usando anticuerpos que tienen las características de
unión de los anticuerpos monoclonales CHIR-5.9 y
CHIR-12.12 y que interfieren de manera competitiva
con la unión de estos anticuerpos a sus respectivos antígenos o se
unen a los mismos epítopos. Un experto en la técnica podría
determinar si un anticuerpo interfiere de manera competitiva con la
unión de CHIR-5.9 o CHIR-12.12
usando procedimientos convencionales.
La IL-2, o su variante
biológicamente activa, para usar en los procedimientos descritos en
el presente documento, pueden proceder de cualquier fuente pero,
preferentemente, es IL-2 recombinante, más
particularmente IL-2 humana recombinante. Por
"IL-2 recombinante" se entiende
IL-2 que tiene actividad biológica comparable con
la IL-2 de secuencia nativa y que se ha preparado
mediante técnicas de ADN recombinante tal como han descrito, por
ejemplo, Taniguchi y col. (1983) Nature 302:305 310 y Devos (1983)
Nucleic Acids Res. 11: 4307-4323 o
IL-2 alterada mediante mutaciones tal como han
descrito Wang y col. (1984) Science 224:1431-1433.
En general, el gen que codifica la IL-2 se clona y,
después, se expresa en organismos transformados, preferentemente un
microorganismo, por ejemplo E. coli, tal como se describe en
el presente documento. El organismo huésped expresa el gen extraño
para producir IL-2 en condiciones de expresión. La
IL-2 recombinante sintética también se puede
producir en eucariotas, tales como levaduras o células humanas. Los
procedimientos para el crecimiento, la recolección, fragmentación o
extracción de la IL-2 de las células se describen
sustancialmente en, por ejemplo, las patentes de EE.UU. nº
4.604.377; 4.738.927; 4.656.132; 4.569.790; 4.748.234; 4.530.787;
4.572.798; 4.748.234; y 4.931.543.
Para ejemplos de proteínas IL-2
variantes, véase la solicitud de patente europea EP 0136489; la
solicitud de patente europea EP 0091539; la solicitud de patente
europea EP 0088195; las muteínas recombinantes de
IL-2 descritas en la solicitud de patente europea
EP 0109748, que es la equivalente a la patente belga nº 893.016, la
patente de EE.UU. de propiedad común nº 4.518.584; las muteínas
descritas en la patente de EE.UU. nº 4.752.585 y el documento WO
99/60128; y la muteína de IL-2
des-alanil-1,
serina-125 IL-2 humana (también
denominada "aldesleukina") usada en los ejemplos del presente
documento y descrita en la patente de EE.UU. nº 4.931.543, así como
las otras muteínas de IL-2 descritas en la presente
patente de EE.UU. Adicionalmente, la IL-2 se puede
modificar con polietilenglicol para proporcionar mayor solubilidad y
un perfil farmacocinético alterado (véase la patente de EE.UU. nº
4.766.106). Véase también a continuación, donde se tratan más
completamente las variantes adecuadas de la
IL-2.
En algunas formas de realización, los
procedimientos descritos en el presente documento comprenden la
terapia de combinación con IL-2, por ejemplo
IL-2 humana, y el anticuerpo monoclonal anti CD40
CHIR-12.12. En otras formas de realización, los
procedimientos descritos en el presente documento comprenden la
terapia de combinación con IL-2, por ejemplo
IL-2 humana, y el anticuerpo monoclonal anti CD40
CHIR-5.9. En otras formas de realización más, los
procedimientos descritos en el presente documento comprenden la
terapia de combinación con IL-2, por ejemplo
IL-2 humana, y un fragmento de unión al antígeno del
anticuerpo monoclonal anti CD40 CHIR-12.12 o
CHIR-5,9.
En formas de realización alternativas, los
procedimientos descritos en el presente documento comprenden la
terapia de combinación con una variante biológicamente activa de la
IL-2, por ejemplo la muteína de la
IL-2 des-alanil-1,
serina-125 IL-2 humana (También
denominada "aldesleukina", que está disponible comercialmente
como una formulación comercializada con la marca Proleukin® (Chiron
Corporation, Emeryville, California)), y el anticuerpo monoclonal
anti CD40 CHIR-12.12 o CHIR-5.9. En
otras formas de realización más, los procedimientos descritos en el
presente documento comprenden la terapia de combinación con una
variante biológicamente activa de la IL-2, por
ejemplo la muteína de la IL-2
des-alanil-1,
serina-125 IL-2 humana
IL-2 humana, y un fragmento de unión al antígeno
del anticuerpo monoclonal anti CD40 CHIR-12,12 o
CHIR-5.9. La terapia de combinación descrita en el
presente documento puede comprender otras variaciones, siempre que
se dirijan al antígeno CD40 en el procedimiento de tratamiento.
De conformidad con los procedimientos dados a
conocer en el presente documento, la IL-2 o una
variante biológicamente activa de la misma y al menos un anticuerpo
anti CD40 antagonista, o su fragmento de unión al antígeno, tal
como se define en otras partes en el presente documento se utilizan
en combinación para estimular una respuesta terapéutica positiva con
respecto a un cáncer que comprende células neoplásicas que expresan
el antígeno CD40. Por "respuesta terapéutica positiva" se
entiende una mejora en la enfermedad asociada con la actividad
antitumoral combinada de estos agentes terapéuticos administrados
y/o una mejora en los síntomas asociados con la enfermedad. Por
tanto, una respuesta terapéutica positiva se referiría a, por
ejemplo, una o más de las siguientes mejoras en la enfermedad: (1)
una reducción del tamaño del tumor; (2) una reducción en la
cantidad de células cancerosas (es decir, neoplásicas); (3) un
incremento de la muerte de las células neoplásicas; (4) inhibición
de la supervivencia de las células neoplásicas; (4) inhibición (es
decir, retraso en cierta medida, preferentemente detención) del
crecimiento tumoral; (5) inhibición (es decir, retraso en cierta
medida, preferentemente detención) de la infiltración por células
cancerosas de órganos periféricos; (6) inhibición (es decir,
retraso en cierta medida, preferentemente detención) de la
metástasis tumoral; (7) prevención de otros sobrecrecimientos
tumorales; (8) incremento del índice de supervivencia de los
pacientes; y (9) algún alivio de uno o más síntomas asociados con el
cáncer. Estas respuestas terapéuticas pueden caracterizarse además
según el grado de mejora. Por tanto, por ejemplo, una mejora de la
enfermedad puede caracterizarse como una respuesta completa. Por
"respuesta completa" se entiende la ausencia de enfermedad
clínicamente detectable con normalización de cualquier estudio
radiográfico, de médula ósea y de líquido cefalorraquídeo (LCR),
previamente anormal. Tal respuesta debe persistir durante al menos
un mes después del tratamiento según los procedimientos dados a
conocer en el presente documento. Una respuesta completa puede no
confirmarse si no se realiza una repetición de la evaluación del
estado del tumor al menos un mes después de evaluar la respuesta
inicial. Como alternativa, una mejora en la enfermedad puede
clasificarse como una respuesta parcial. Por "respuesta
parcial" se entiende una disminución de al menos el 50% en todas
las cargas tumorales que pueden medirse (es decir, la cantidad de
células tumorales presentes en el sujeto) en ausencia de nuevas
lesiones y que persiste durante al menos un mes. Tal respuesta es
aplicable sólo a los tumores que pueden medirse.
Múltiples parámetros pueden ser indicativos de
la eficacia del tratamiento. Éstos incluyen, entre otros, una
reducción del tamaño de la masa tumoral; una reducción de la
capacidad de invasión metastásica del tumor; una reducción de la
tasa de crecimiento tumoral; una disminución de la gravedad o la
incidencia de las secuelas relacionadas con el tumor, tal como
caquexia y producción de ascitis; una disminución y/o prevención de
las complicaciones relacionadas con el tumor, tales como fracturas
óseas patológicas, anemia hemolítica autoinmunitaria,
transformación prolinfocítica y síndrome de Richter, etc.;
sensibilización del tumor a quimioterapia y otros tratamientos; un
incremento de la tasa de supervivencia del paciente; un incremento
de los datos clínicos observados de pronósitico de mejora, tales
como incremento de infiltración de linfocitos en el tumor y
disminución de la vascularización en el tumor; y similares. Por
tanto, en algunas formas de realización, la administración de la
combinación terapéutica tendrá como resultado una mejora de uno o
más de estos parámetros en un paciente (es decir, sujeto) sometido
a tratamiento. En otras formas de realización, las mejoras en el
paciente serán sinérgicas con respecto a algunos parámetros, pero
aditivas con respecto a otros.
La respuesta del tumor puede evaluarse según los
cambios en la morfología del tumor (es decir, carga general del
tumor, tamaño del tumor y similares) utilizando técnicas de
detección tales como resonancia magnética (RM), imágenes de rayos
x, tomografía computerizada (TC), citometría de flujo o análisis de
clasificación celular activada por fluorescencia (FACS), imágenes
bioluminiscentes, por ejemplo, imágenes con luciferasa, imágenes de
gammagrafía ósea y recogida de muestras de biopsias de tumor,
incluyendo la aspiración de médula ósea (AMO). Además de estas
respuestas terapéuticas positivas, el sujeto que se somete a terapia
puede experimentar el efecto beneficioso de una mejora en los
síntomas asociados con la enfermedad. Por consiguiente, para los
tumores de células B, el sujeto puede experimentar una disminución
en los llamados síntomas B, es decir, los sudores nocturnos, la
fiebre, la pérdida de peso y/o la urticaria.
Un procedimiento para predecir la eficacia
clínica es medir los efectos de la terapia de combinación con estos
dos agentes terapéuticos en un modelo adecuado, por ejemplo el uso
de la combinación de IL-2 o una variante
biológicamente activa de la misma, y un anticuerpo anti CD40
antagonista, o un fragmento de unión a antígeno del mismo, en uno o
más modelos de cáncer murino. Para los linfomas, estos modelos
incluyen, por ejemplo, los modelos de xenoinjerto de tumores en
ratón desnudo tales como los que usan líneas celulares de linfoma
de Burkitt humanas conocidas como Namalwa y Daudi. Por tanto, en
algunas formas de realización, la actividad antitumoral de la
combinación de estos dos agentes terapéuticos se analiza en un
modelo de xenoinjerto de Namalwa NHL humano tal como se describe en
los ejemplos del presente documento a continuación. La línea celular
de Namalwa da lugar a tumores agresivos resistentes a rituximab
cuando se implantan en ratones desnudos.
En otras formas de realización, actividad
antitumoral de la combinación de estos dos agentes terapéuticos se
analiza en un modelo de xenoinjerto de tumor estadificado en ratón
desnudo usando la línea celular de linfoma Daudi. Generalmente, un
modelo de xenoinjerto de tumor estatificado es más eficaz para
distinguir la eficacia terapéutica de un protocolo terapéutico dado
que un modelo no estadificado, ya que en el modelo estadificado la
dosis terapéutica se inicia sólo después de que el tumor haya
alcanzado un tamaño que puede medirse. En el modelo no
estadificado, la dosis terapéutica se inicia, por lo general, en un
plazo de aproximadamente 1 día de la inoculación del tumor y antes
de que esté presente el tumor palpable. La capacidad de un régimen
terapéutico de combinación para exhibir actividad antitumoral
aumentada en un modelo estadificado es una fuerte indicación de que
el régimen terapéutico de combinación será más eficaz en términos
terapéuticos.
En la técnica se conocen bien otros modelos
tumorales. Por ejemplo, para el mieloma múltiple (MM), los modelos
tumorales incluyen, entre otros, aquéllos en los que las líneas
celulares se cultivan en ratones inmunodeficientes y, después, los
ratones se tratan con las terapéuticas de interés, y aquéllos en los
que las células de mieloma del paciente se implantan junto con
hueso fetal en ratones inmunodeficientes y, después, los ratones se
tratan con las terapéuticas de interés. Por tanto, por ejemplo, la
actividad antitumoral de la combinación de estos dos agentes
terapéuticos se puede analizar in vivo en un modelo de
xenoinjerto de MM IM-9, que isa la línea celular de
MM humano IM-9. De este modo, la eficacia de la
terapia de combinación con IL-2, o su variante
biológicamente activa, y un anticuerpo anti CD40 antagonista o un
fragmento de unión a antígeno del mismo se puede evaluar usando un
modelo de supervivencia condicionado no estatificado, en el que el
tratamiento con estos agentes terapéuticos comienza un día después
de la inoculación intravenosa de las células tumorales
IM-9. Como alternativa, la eficacia de esta terapia
de combinación se puede evaluar usando un modelo subcutáneo
estatificado, en el que las células IM9- se inyecta SC en ratones
SCID y, después, comienza el tratamiento de combinación con estos
agentes terapéuticos una vez que el tumor alcanza un tamaño que se
puede medir.
La actividad antitumoral de la terapia de
combinación con IL-2 o una variante biológicamente
activa de la misma y un anticuerpo anti CD40 antagonista o un
fragmento de unión al antígeno del mismo se puede evaluar en un
modelo de tumor sólido murino. Entre los ejemplos se incluyen un
modelo de xenoinjerto de cáncer de colon usando la línea celular de
carcinoma de colon humano HCT 116, que expresa CD40; un modelo
murino ortópico no estadificado (profiláctico) de cáncer de ovarios
usando la línea celular de cáncer de ovarios SKOV3i.p.1; y un
modelo murino estadificado (terapéutico) de cáncer de ovarios usando
la línea celular de cáncer de ovarios SKOV3i.p.1.
Para los fines de llevar a cabo la terapia de
combinación descrita en el presente documento, las composiciones
farmacéuticas que comprenden estas dos clases de agentes
terapéuticos (es decir, la citoquina y el anticuerpo anti CD40 o)
como componentes terapéuticamente activos se pueden administrar
usando cualquier procedimiento aceptable conocido en la técnica. Por
tanto, por ejemplo, una composición farmacéutica que comprende
IL-2 (o una variante biológicamente activa de la
misma) o una composición farmacéutica que comprende
IL-2 (o una variante de la misma) y el anticuerpo
anti CD40 antagonista (o, su fragmento de unión a antígeno) se
puede administrar por medio de cualquier forma de inyección,
incluida las inyecciones intravenosa (IV), intratumoral (IT),
intraperitoneal (IP), intramuscular (IM) o subcutánea (SC). En
algunas formas de realización, una composición farmacéutica que
comprende IL-2 (o una variante biológicamente activa
de la misma) se administra mediante inyección IV, IM, IP o SC y una
composición farmacéutica que comprende anticuerpo anti CD40
antagonista (o, su fragmento de unión a antígeno) se administra
mediante inyección IV, IP o SC. En otras formas de realización, una
composición farmacéutica que comprende IL-2 (o una
variante biológicamente activa de la misma) se administra mediante
inyección IV, IT o SC, y una composición farmacéutica que comprende
anticuerpo anti CD40 antagonista (o, su fragmento de unión a
antígeno) se administra mediante inyección IV o SC.
En formas de realización descritas en el
presente documento, una composición farmacéutica que comprende
IL-2 o una variante de la misma se administra
mediante inyección SC y una composición farmacéutica que comprende
el anticuerpo anti CD40 antagonista o, su fragmento de unión a
antígeno se administra por vía intravenosa. Cuando se administra
por vía intravenosa, la farmacéutica que comprende el anticuerpo
anti CD40 antagonista o, su fragmento de unión a antígeno se puede
administrar mediante infusión durante un período de aproximadamente
1 hasta aproximadamente 10 horas. En algunas formas de realización,
la infusión se produce durante un periodo de aproximadamente a
hasta aproximadamente 8 horas, durante un periodo de aproximadamente
3 hasta aproximadamente 7 horas, durante un periodo de
aproximadamente 4 hasta aproximadamente 6 horas, o durante un
periodo de aproximadamente 6 horas, dependiendo del anticuerpo anti
CD40 antagonista que se administrase administrando.
Los procedimientos descritos en la presente
memoria descriptiva comprenden usar terapia de combinación. El
término "combinación" se usa en su sentido más amplio y
significa que un sujeto es tratado con al menos dos regímenes
terapéuticos. Por tanto, la "terapia de combinación" se
entiende que quiere decir que un sujeto es tratado con al menos dos
regímenes oncoterapéuticos, más particularmente con al menos
IL-2 o su variante biológicamente activa en
combinación con al menos un anticuerpo anti CD40 antagonista o su
fragmento de unión a antígeno, pero el momento de la administración
de los diferentes regímenes oncoterapéuticos se puede variar
siempre que se consigan los efectos beneficiosos de la combinación
de estos dos agentes terapéuticos.
El tratamiento con IL-2 o su
variante biológicamente activa en combinación con un anticuerpo anti
CD40 antagonista o su fragmento de unión a antígeno puede ser
simultáneo (concurrente), consecutivo (secuencial, en cualquier
orden) o una combinación de ambos. Por tanto, un sujeto tratado con
una terapia de combinación puede recibir tratamiento con ambos
agentes terapéuticos a la vez (es decir, simultáneamente) o en
momentos diferentes (es decir, secuencialmente, en cualquier orden,
el mismo día o en días diferentes), siempre que se produzca el
efecto terapéutico de la combinación de ambas sustancias en el
sujeto sometido a terapia. En algunas formas de realización, la
combinación de IL-2 o su variante biológicamente
activa y el anticuerpo anti CD40 antagonista o su fragmento de
unión a antígeno se administrarán de forma simultánea para una
dosificación, pero otras dosificaciones incluirán administración
secuencia, en en cualquier orden, el mismo día o en días diferentes.
La administración secuencial puede realizarse con independencia de
si el sujeto responde o no al primer agente terapéutico
administrado. Cuando estos dos agentes terapéuticos se administran
simultáneamente, se pueden administrar como composiciones
farmacéuticas separadas, en la que cada una comprende la
IL-2 (o su variante biológicamente activa) o el
anticuerpo anti CD40 antagonista (o su fragmento de unión a
antígeno), o pueden administrarse en forma de una única composición
farmacéutica que comprenden ambos agentes terapéuticos.
El efecto de la terapia de combinación también
se puede optimizar variando el momento de la administración de
IL-2 (o su variante biológicamente activa) y/o el
anticuerpo anti CD40 antagonista (o su fragmento de unión a
antígeno). Por tanto, en algunas formas de realización, la
IL-2 (o su variante biológicamente activa, tal como
la muteína de IL-2 des-alanil C125S
humana) se administrará simultáneamente con el anticuerpo anti CD40
antagonista, tal como el anticuerpo monoclonal
CHIR-12.12 o CHIR-5.9 (o su
fragmento de unión a antígeno). En otras formas de realización, la
IL-2 (o su variante biológicamente activa, tal como
la muteína de IL-2 des-alanil C125S
humana) se administrará primero y después se administrará el
anticuerpo anti CD40 antagonista, tal como el anticuerpo monoclonal
CHIR-12.12 o CHIR-5.9 (o su
fragmento de unión a antígeno). En otras formas de realización más,
el anticuerpo anti CD40 antagonista, tal como el anticuerpo
monoclonal CHIR-12.12 o CHIR-5.9 (o
su fragmento de unión a antígeno) se administrará primero y la
IL-2 (o su variante biológicamente activa, tal como
la muteína de IL-2 des-alanil C125S
humana) se administrará después. En algunas formas de realización,
la combinación de la IL-2 (o su variante
biológicamente activa, tal como la muteína de IL-2
des-alanil C125S humana) y el anticuerpo anti CD40
antagonista, tal como el anticuerpo monoclonal
CHIR-12.12 o CHIR-5.9 (o su
fragmento de unión a antígeno) se administrarán de forma concurrente
para una dosificación, pero otras dosificaciones incluirán
administración secuencial, en cualquier orden, el mismo día o en
días diferentes. Como se ha indicado previamente, cuando la
IL-2 (o su variante biológicamente activa, tal como
la muteína de IL-2 des-alanil C125S
humana) y el anticuerpo anti CD40 antagonista, tal como el
anticuerpo monoclonal CHIR-12.12 o
CHIR-5.9 (o su fragmento de unión a antígeno) se
administran de forma simultánea, se pueden administrar en forma de
composiciones farmacéuticas separadas, en las que cada una comprende
la IL-2 (o su variante biológicamente activa) o el
anticuerpo anti CD40 antagonista (o su fragmento de unión a
antígeno), o pueden administrarse en forma de una única composición
farmacéutica que comprende ambos agentes
terapéuticos.
terapéuticos.
La terapia con una cantidad eficaz de la
combinación de IL-2 (o su variante biológicamente
activa) y al menos un anticuerpo anti CD40 antagonista (o su
fragmento de unión a antígeno) estimula una respuesta terapéutica
positiva para un cáncer que comprende células neoplásicas que
expresan el antígeno CD40, incluidos linfomas relacionados con
células B y tumores sólidos tal como se han definido en otras partes
del presente documento. La terapia concurrente con estos dos
agentes antitumorales potencia la actividad antitumoral de cada uno
de estos agentes, de modo que proporciona una respuesta terapéutica
positiva mejorada con respecto a la observada con la administración
de IL-2 (o su variante biológicamente activa) sola o
la administración del anticuerpo anti CD40 antagonista (o su
fragmento de unión a antígeno) solo. La mejora de la respuesta
terapéutica positiva puede ser de naturaleza aditiva o de
naturaleza sinérgica. Cuando es sinérgica, la terapia concurrente
con IL-2 (o su variante biológicamente activa) y al
menos un anticuerpo anti CD40 antagonista (o su fragmento de unión
a antígeno) tiene como resultado una respuesta terapéutica positiva
que es mayor que la suma de las respuestas terapéuticas positivas
conseguidas con los componentes IL-2 (o su variante
biológicamente activa) y anticuerpo anti CD40 antagonista (o su
fragmento de unión a antígeno) por
separado.
separado.
Además, el tratamiento se puede conseguir con
varias dosis así como regímenes de dosificación, siempre que la
combinación de estas dosis sea eficaz en el tratamiento de uno
cualquiera o más de una serie de parámetros terapéuticos. Estos
regímenes terapéuticos se basan en dosis y programas de dosificación
que maximizan los efectos terapéuticos, tales como los que se
describen más adelante. Los expertos en la técnica reconocen que
una dosis de un anticuerpo monoclonal cualquiera o una citocina
cualquiera, como la IL-2, puede no ser
terapéuticamente eficaz cuando se administra de forma individual,
pero será terapéuticamente eficaz cuando se administra en
combinación con el otro agente. Por tanto, en algunas formas de
realización, la dosis terapéuticamente eficaz de una combinación de
IL-2 y anticuerpo anti CD40 antagonista puede
comprender dosis de agentes activos individuales que, cuando se
administran solos, no serían terapéuticamente eficaces o serían
menos terapéuticamente eficaces que cuando se administran
combinados.
Dado que la administración combinada de estos
dos agentes terapéuticos potencia la eficacia de ambos agentes, se
puede conseguir una respuesta terapéutica positiva que es similar a
la conseguida con una dosis concreta de IL-2 sola
con menores dosis de este agente. El significado de esto es doble.
En primer lugar, los posibles beneficios terapéuticos del
tratamiento de neoplasias malignas de células B o de tumores sólidos
con IL-2 o una variante de la misma se pueden
conseguir a dosis de IL-2 que minimizan las
respuestas de toxicidad normalmente asociadas con dosis altas de
administración de IL-2. Estas respuestas de
toxicidad incluyen, entre otras, fatiga crónica, náuseas,
hipotensión, fiebre, escalofríos, ganancia de peso, prurito o
exantema, disnea, azoemia, confusión, trombocitopenia, infarto de
miocardio, toxicidad gastrointestinal y síndrome de fuga vascular
(véase, por ejemplo, Allison y col. (1989) J. Clin. Oncol.
7(1):75-80). En segundo lugar, apuntar los
anticuerpos monoclonales a moléculas específicas sobre la
superficie de las células tumorales puede seleccionar clones que no
son reconocidos por el anticuerpo o que no se ven afectados por su
unión, lo que tiene como resultado el escape del tumor y la pérdida
de tratamiento terapéutico eficaz. La mejor actividad antitumoral
del anticuerpo anti CD40 antagonista (o un fragmento del mismo)
administrado en combinación con IL-2 (o una variante
de la misma) se puede traducir en un incremento de la potencia de
los anticuerpos monoclonales, administración menos frecuente de
anticuerpos monoclonales y/o dosis menores de anticuerpos
monoclonales, de modo que se reduce el potencial de escape del
tumor. Además, la actividad ADCC del anticuerpo monoclonal también
se puede producir a partir de la actividad de la población de
neutrófilos y monocitos/macrófagos. Véase, por ejemplo,
Hernández-Ilizaliturri y col. (2003) Clin. Cancer
Res. 9(16, Pt 1):5866-5873; y Uchida y col.
(2004) J. Exp. Med. 199(12):1659-1669). Dado
que se sabe que la IL-2 activa estas poblaciones
celulares, la terapia de combinación del anticuerpo anti CD40
antagonista con IL-2 o una variante biológicamente
activa de la misma puede mejorar la actividad antitumoral mediada
por ADCC del anticuerpo.
Un experto en la técnica puede determinar
fácilmente sin excesiva experimentación dada la divulgación expuesta
en el presente documento la cantidad de al menos un anticuerpo anti
CD40 antagonista (o su fragmento de unión a antígeno) a administrar
en combinación con una cantidad de IL-2 (o su
variante) y la cantidad de estos agentes terapéuticos necesaria
para potenciar la eficacia del otro agente terapéutico. Los factores
que influyen en el modo de administración y la respectiva cantidad
de IL-2 (o su variante) y del anticuerpo anti CD40
antagonista (o su fragmento de unión al mismo) administrados en
combinación incluyen, entre otros, el linfoma o tumor sólido
concreto que se somete a terapia, la gravedad de la enfermedad, la
historia de la enfermedad, y la edad, altura, peso, salud y
condición física del individuo que se somete al tratamiento. De
manera similar, la cantidad de estos agentes terapéuticos a
administrar en combinación dependerá del modo de administración y
de si el sujeto se someterá a una monodosis o a dosis múltiples de
estos agentes terapéuticos. Por lo general, al aumentar el peso del
sujeto sometido al tratamiento, resulta de preferencia una dosis más
alta del agente anticuerpo.
En algunas formas de realización de la
divulgación, la terapia de combinación se consigue mediante la
administración de la dosis semanal total recomendada de una
composición farmacéutica que comprende IL-2 (o su
variante biológicamente activa) en combinación con la dosis
terapéuticamente eficaz recomendada de una composición farmacéutica
que comprende el anticuerpo anti CD40 antagonista (o su fragmento
de unión del mismo), administrándose cada una de acuerdo con un
régimen de dosificación concreto. Por "dosis o cantidad
terapéuticamente eficaz" se entiende una cantidad de uno de
estos dos agentes terapéuticos que, cuando se administran con una
dosis o cantidad terapéuticamente eficaz con la otra de estos dos
agentes terapéuticos da lugar a una respuesta terapéutica positiva
con respecto al tratamiento de cánceres que comprenden células
neoplásicas que expresan el antígeno de superficie celular CD40.
Como se ha indicado en lo que antecede, la administración de las
composiciones farmacéuticas por separado puede ser a la vez o en
momentos diferentes, siempre que se produzca el efecto terapéutico
de la combinación de ambas sustancias en el sujeto sometido a
terapia. De acuerdo con algunas formas de realización de la
divulgación, al sujeto humano sometido a tratamiento con una o más
dosis semanales del anticuerpo anti CD40 antagonista, o el
fragmento de unión a antígeno del mismo, tal como se define en el
presente documento más adelante también se le administra
IL-2, o una variante biológicamente activa de la
misma, como se define en el presente documento más adelante de
acuerdo con un régimen de dosificación de IL-2
constante o de acuerdo con un régimen de dosificación de
IL-2 de dos niveles. Un importante aspecto de esta
terapia de combinación es un periodo de tiempo de solapamiento
durante el cual se está administrando al sujeto los dos agentes
terapéuticos, cada uno de acuerdo con el régimen de dosificación
concreto divulgado en el presente documento. De acuerdo con esto,
cuando la terapia de combinación comprende este tiempo de
solapamiento de la dosificación con estos dos agentes terapéuticos,
la terapia de combinación también se denomina "terapia
concurrente". La primera dosis terapéuticamente eficaz
administrada al sujeto puede ser el anticuerpo anti CD40
antagonista (o un fragmento de unión a antígeno del mismo) o puede
ser la IL-2 (o una variante biológicamente activa
de la misma). Los días en los que está programada la administración
al sujeto de ambos agentes, el anticuerpo anti CD40 antagonista (o
un fragmento de unión a antígeno del mismo) y la
IL-2 (o una variante biológicamente activa de la
misma), estos agentes terapéuticos se pueden administrar a la vez
(es decir, administración simultánea) o en momentos diferentes (es
decir, administración secuencial, en cualquier orden). Aunque los
comentarios siguientes sobre los regímenes de dosificación
preferidos se refieren a la dosificación de un anticuerpo anti CD40
antagonista como se define en el presente documento en combinación
con IL-2 como se define en el presente documento,
se reconoce que los protocolos (es decir, inicio del tratamiento,
duración del tratamiento con anticuerpo e IL-2,
regímenes de dosificación del anticuerpo y la IL-2,
interrupción de la dosificación de IL-2, ciclos
posteriores de terapia de combinación con
IL-2/anticuerpo anti CD40 antagonista, programa de
dosificación de IL-2, y similares) son igualmente
aplicables a la dosificación con un fragmento de unión a antígeno
de un anticuerpo anti CD40 antagonista tal como se define en el
presente documento en combinación con IL-2 tal como
se define en el presente documento, a la dosificación con un
fragmento de unión a antígeno de un anticuerpo anti CD40
antagonista tal como se define en el presente documento en
combinación con una variante biológicamente activa de la
IL-2 tal como se define en el presente documento o a
la dosificación con un anticuerpo anti CD40 antagonista tal como se
define en el presente documento en combinación con una variante
biológicamente activa de la IL-2 tal como se define
en el presente documento.
Cuando la terapia concurrente con
IL-2 y un anticuerpo anti CD40 antagonista
comprende uno o más ciclos de un régimen de dosificación de
IL-2 constante, el agente terapéutico inicial que
se va a administrar al sujeto al inicio de un periodo de tratamiento
puede ser la IL-2 o el anticuerpo anti CD40
antagonista, siempre que el sujeto tenga un periodo de tiempo de
solapamiento durante el cual se administra al sujeto ambos agentes
terapéuticos, cada uno de acuerdo con el régimen de dosificación
concreto divulgado en el presente documento.
Por tanto, en una forma de realización, la
terapia concurrente con estos dos agentes terapéuticos comprende
inicial el régimen de dosificación de IL-2 constante
antes de iniciar la administración de las dosis terapéuticamente
eficaces del anticuerpo anti CD40 antagonista, que se administran
semanalmente o, como alternativa, una vez cada dos, tres o cuatro
semanas. De este modo, una primera dosis de IL-2 se
administra hasta un mes antes de la primera dosis del anticuerpo
anti CD40 antagonista. Por "hasta un mes" se entiende la
primera dosis de IL-2 administrada al menos un día
antes de iniciar la administración del anticuerpo anti CD40
antagonista, pero no más de un mes (es decir, 30 días) antes de
inicial la administración del anticuerpo anti CD40 antagonista. Por
tanto, la administración de IL-2 puede comenzar, por
ejemplo, 1 día, 2 días, 3 días, 4 días, 5 días, 6 días, 7 días (es
decir 1 semana), 10 días, 14 días (es decir, dos semanas), 17 días,
21 días (es decir, 3 semanas), 24 días, 28 días (4 semanas), o
hasta un mes (es decir, 30 ó 31 días) antes de administrar la
primera dosis terapéuticamente eficaz del anticuerpo anti CD40
antagonista.
En otras formas de realización, el régimen de
dosificación de IL-2 constante y la administración
del anticuerpo anti CD40 antagonista comienzan de forma concurrente
el mismo día, bien a la vez (es decir, administración simultánea) o
en momentos diferentes (es decir, administración secuencial, en
cualquier orden). Por tanto, por ejemplo, en una forma de
realización en la que la terapia concurrente con estos dos agentes
terapéuticos comienza el día 1 de un periodo de tratamiento, una
primera dosis terapéuticamente eficaz del anticuerpo anti CD40
antagonista y una primera dosis de IL-2 se
administrarían ambos el día 1 de este periodo de tratamiento. En
una forma de realización tal, la dosis del anticuerpo anti CD40
antagonista se administra primero, seguida por la administración de
la dosis de IL-2 en un plazo de aproximadamente 10
minutos a aproximadamente 4 horas de la finalización de la
administración de la dosis del anticuerpo anti CD40 antagonista, tal
como en un plazo de aproximadamente 10, 15, 20, 25, 30, 45, 60, 90,
120, 150, 180, 210, o 240 minutos.
En formas de realización alternativas, el agente
terapéutico inicial que se va a administrar al sujeto al comienzo
de un periodo de tratamiento es el anticuerpo anti CD40 antagonista,
mientras que el primer ciclo de dosificación de
IL-2 constante se inicia mediante la administración
de una primera dosis de IL-2 posteriormente, por
ejemplo, en un plazo de 10 días tras la administración de la primera
dosis terapéuticamente eficaz del anticuerpo anti CD40 antagonista,
por ejemplo en un plazo de 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 ó 10 días. En
algunas formas de realización, el primer ciclo de dosificación de
IL-2 constante se inicia con la administración de
una primera dosis de IL-2 en un plazo de 7 días
desde la administración de la primera dosis terapéuticamente eficaz
del anticuerpo anti CD40 antagonista, tal como en un plazo de 1, 2,
3, 4, 5, 6 o 7 días. Por tanto, por ejemplo, en una forma de
realización se administra una dosis terapéuticamente eficaz del
anticuerpo anti CD40 antagonista el día 1 de un periodo de
tratamiento y el primer ciclo de dosificación de
IL-2 constante se inicia 7 días después, es decir
mediante la administración de la dosis inicial de
IL-2 el día 8 del periodo de tratamiento.
Tras la finalización del primer ciclo de
dosificación constante de IL-2, se puede administrar
a un sujeto humano que está recibiendo dosis terapéuticamente
eficaces del anticuerpo anti CD40 antagonista de acuerdo con un
programa de dosificación semanal o, como alternativa, una vez cada
dos, tres o cuatro semanas, uno o más ciclos posteriores de la
dosificación constante de IL-2. Durante el segundo y
los ciclos posteriores de dosificación constante de
IL-2, en general, el primer agente terapéutico que
se va a administrar al sujeto es el anticuerpo anti CD40
antagonista, iniciándose el segundo o posterior ciclo de
dosificación constante de IL-2 mediante la
administración de una primera dosis de IL-2 en un
plazo de 24 horas, tal como en un plazo de 0.5, 1, 2, 4, 8, 12, 16,
20, o 24 desde la administración de la dosis del anticuerpo anti
CD40 antagonista. Los días en los que está programada la
administración al sujeto de ambos agentes, el anticuerpo anti CD40
antagonista y la IL-2, estos agentes terapéuticos se
pueden administrar a la vez (es decir, administración simultánea) o
en momentos diferentes (es decir, administración secuencial, en
cualquier orden). En una forma de realización tal, la dosis del
anticuerpo anti CD40 antagonista se administra primero, seguida por
la administración de la dosis de IL-2 en un plazo
de aproximadamente 10 minutos a aproximadamente 4 horas de la
finalización de la administración de la dosis del anticuerpo anti
CD40 antagonista, tal como en un plazo de aproximadamente 10, 15,
20, 25, 30, 45, 60, 90, 120, 150, 180, 210, o 240 minutos.
Cuando la terapia concurrente con
IL-2 y un anticuerpo anti CD40 antagonista comprende
uno o más ciclos de un régimen de dosificación de IL2 de dos
niveles, el agente terapéutico inicial que se va a administrar al
sujeto al inicio de un periodo de tratamiento puede ser la
IL-2 o el anticuerpo anti CD40 antagonista, siempre
que el sujeto tenga un periodo de tiempo de solapamiento durante el
cual se administra al sujeto ambos agentes terapéuticos, cada uno
de acuerdo con el régimen de dosificación concreto divulgado en el
presente documento.
Por tanto, en una forma de realización, la
terapia concurrente con estos dos agentes terapéuticos comprende
iniciar el régimen de dosificación de IL2 de dos niveles antes de
iniciar la administración de dosis terapéuticamente eficaces del
anticuerpo anti CD40 antagonista, en el que una dosis
terapéuticamente eficaz del anticuerpo se administra de acuerdo con
un programa de dosificación semanal o, como alternativa, una vez
cada dos, tres o cuatro semanas. De este modo, una primera dosis de
IL-2 se administra hasta un mes antes de la primera
dosis del anticuerpo anti CD40 antagonista. Por "hasta un mes"
se entiende la primera dosis de IL-2 administrada
al menos un día antes de iniciar la administración del anticuerpo
anti CD40 antagonista, pero no más de un mes (es decir, 30 días)
antes de inicial la administración del anticuerpo anti CD40
antagonista. Por tanto, la administración de IL-2
puede comenzar, por ejemplo, 1 día, 2 días, 3 días, 4 días, 5 días,
6 días, 7 días (es decir 1 semana), 10 días, 14 días (es decir, dos
semanas), 17 días, 21 días (es decir, 3 semanas), 24 días, 28 días
(4 semanas), o hasta un mes (es decir, 30 ó 31 días) antes de
administrar la primera dosis terapéuticamente eficaz del anticuerpo
anti CD40 antagonista.
En otras formas de realización, el régimen de
dosificación de IL-2 de dos niveles y la
administración del anticuerpo anti CD40 antagonista comienzan de
forma concurrente el mismo día, bien a la vez (es decir,
administración simultánea) o en momentos diferentes (es decir,
administración secuencial, en cualquier orden). Por tanto, por
ejemplo, en una forma de realización en la que la terapia
concurrente con estos dos agentes terapéuticos comienza el día 1 de
un periodo de tratamiento, una primera dosis terapéuticamente eficaz
del anticuerpo anti CD40 antagonista y una primera dosis de
IL-2 se administrarían ambos el día 1 de este
periodo de tratamiento. En una forma de realización tal, la dosis
del anticuerpo anti CD40 antagonista se administra primero, seguida
por la administración de la dosis de IL-2 en un
plazo de aproximadamente 10 minutos a aproximadamente 4 horas de la
finalización de la administración de la dosis del anticuerpo anti
CD40 antagonista, tal como en un plazo de aproximadamente 10, 15,
20, 25, 30, 45, 60, 90, 120, 150, 180, 210, o 240 minutos.
En formas de realización alternativas, se
administra al sujeto una primera dosis terapéuticamente eficaz del
anticuerpo anti CD40 antagonista, por ejemplo el día 1 de un periodo
de tratamiento, y el régimen de dosificación de
IL-2 de dos niveles se inicia mediante la
administración de una primera dosis de IL-2 en un
plazo de 10 días desde la administración de la primera dosis
terapéuticamente eficaz del anticuerpo anti CD40 antagonista. En
estas formas de realización, preferentemente, el régimen de
dosificación de IL-2 de dos niveles se inicia con
la administración de una primera dosis de IL-2 en un
plazo de 7 días desde la administración de la primera dosis
terapéuticamente eficaz del anticuerpo anti CD40 antagonista, tal
como en un plazo de 1, 2, 3, 4, 5, 6 o 7 días.
En función de la gravedad de la enfermedad, el
estado de salud y la historia previa de la enfermedad del paciente
se pueden administrar uno o más ciclos de un régimen de dosificación
de IL-2 de dos niveles de forma concurrente con la
terapia con el anticuerpo anti CD40 antagonista, en la que las dosis
terapéuticamente eficaces del anticuerpo se administran
semanalmente o, como alternativa, una vez cada dos, tres o cuatro
semanas
De acuerdo con los procedimientos divulgados en
el presente documento, una dosis terapéuticamente eficaz del
anticuerpo anti CD40 antagonista se administra semanalmente o se
administra una vez cada dos, tres o cuatro semanas, en combinación
con uno o más ciclos de un régimen de dosificación de
IL-2 constante o en combinación con uno o más ciclos
de un régimen de dosificación de IL-2 de dos
niveles. Cuando un sujeto está recibiendo una terapia concurrente
con estos dos agentes terapéuticos del modo indicado en el presente
documento, la duración de la administración del anticuerpo anti CD40
antagonista y la duración de cualquier ciclo dado de cualquiera de
los dos regímenes de dosificación de IL-2 dependerá
del estado de salud general del paciente, la historia de la
progresión de la enfermedad y la tolerancia del protocolo de
administración concreto del anticuerpo anti CD40
antagonista/IL-2.
Por tanto, en algunas formas de realización, las
dosis terapéuticamente eficaces del anticuerpo anti CD40
antagonista se administran semanalmente (es decir, una vez a la
semana) o una vez de cada dos a cada cuatro semanas, por ejemplo
una vez cada dos semanas, vez cada tres semanas o vez cada cuatro
semanas, a lo largo de un periodo de tratamiento, en el que el
periodo de tratamiento incluye uno o más ciclos de un régimen de
dosificación de IL-2 constante o uno o más ciclos de
un régimen de dosificación de IL-2 de dos
niveles.
Como alternativa, la terapia con anticuerpo anti
CD40 antagonista puede tener una duración fija dentro de un periodo
de tratamiento. De este modo, una dosis terapéuticamente eficaz del
anticuerpo anti CD40 antagonista se administra semanalmente o se
administra una vez cada dos, tres o cuatro semanas, para un periodo
fijo de aproximadamente 4 semanas a aproximadamente 16 semanas,
incluidas 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15 ó 16 semanas, en
combinación con uno o más ciclos de un régimen de dosificación de
IL-2 constante o en combinación con uno o más
ciclos de un régimen de dosificación de IL-2 de dos
niveles. Por tanto, por ejemplo, cuando el anticuerpo se administra
semanalmente para una duración de 4 semanas u 8 semanas, el sujeto
recibirá cuatro u ocho dosis terapéuticamente eficaces del
anticuerpo anti CD40 antagonista, respectivamente, durante la
terapia concurrente con IL-2. De forma similar,
cuando el anticuerpo se administra una vez cada dos semanas para una
duración de 4 semanas u 8 semanas, por ejemplo, el sujeto recibiría
dos o cuatro dosis terapéuticamente eficaces del anticuerpo anti
CD40 antagonista, respectivamente, durante la terapia concurrente
con IL-2. Cuando el anticuerpo se administra una
vez cada tres semanas para una duración de 6 semanas, 9 semanas, 12
semanas o 15 semanas, por ejemplo, el sujeto recibiría dos, tres,
cuatro o cinco dosis terapéuticamente eficaces del anticuerpo anti
CD40 antagonista, respectivamente, durante la terapia concurrente
con IL-2. De forma similar, cuando el anticuerpo se
administra una vez cada cuatro semanas para una duración de 8
semanas, 12 semanas ó 16 semanas, el sujeto recibiría dos, tres o
cuatro dosis terapéuticamente eficaces del anticuerpo anti CD40
antagonista, respectivamente, durante la terapia concurrente con
IL-2.
La duración de la administración de
IL-2 durante la terapia concurrente con estos dos
agentes terapéuticos es una función del régimen de dosificación de
IL-2 usado. En general, la IL-2 se
administra de acuerdo con los protocolos divulgados, y un sujeto
puede repetir uno o más ciclos de un régimen de dosificación de
IL-2 constante o de dos niveles según sea
necesario, a menos que se desarrollen síntomas de toxicidad por la
IL-2. Si se desarrollan dichos síntomas de
toxicidad, se puede retirar al sujeto la dosificación de
IL-2 hasta la resolución completa de todos los
síntomas de toxicidad observados. Estas respuestas de toxicidad por
IL-2 incluyen, entre otras, fatiga crónica,
náuseas, hipotensión, fiebre, escalofríos, ganancia de peso, prurito
o exantema, disnea, azoemia, confusión, trombocitopenia, infarto de
miocardio, toxicidad gastrointestinal y síndrome de fuga vascular
(véase, por ejemplo, Allison y col. (1989) J. Clin. Oncol. 7
(1):75-80). El sujeto puede continuar con la
terapia concurrente con estos dos agentes terapéuticos según sea
necesario tras la resolución de los signos y síntomas de estos
síntomas de toxicidad por IL-2. La continuación de
la terapia concurrente con estos dos agentes terapéuticos puede
implicar cualquiera de los protocolos de administración de
anticuerpo anti CD40 antagonista/IL-2 divulgados en
el presente documento (es decir, anticuerpo anti CD40 antagonista
con el régimen de dosificación de IL-2 constante o
anticuerpo anti CD40 antagonista con el régimen de dosificación de
IL-2 de dos niveles) en función del estado de salud
general del sujeto, el estado de la enfermedad relevante y la
tolerancia del protocolo de administración de anticuerpo anti CD40
antagonista/IL-2 concreto.
En algunas formas de realización de la
divulgación, al sujeto sometido a la terapia concurrente con estos
dos agentes terapéuticos se le administra uno o más ciclos de un
régimen de dosificación de IL-2 constante en
combinación con el programa de dosificación del anticuerpo anti
CD40 antagonista divulgado en el presente documento (es decir, dosis
terapéuticamente eficaces del anticuerpo anti CD40 antagonista
administradas o una vez de cada dos, tres o cuatro semanas a lo
largo de un periodo de tratamiento o para una duración fija dentro
del periodo de tratamiento como se ha indicado en lo que antecede).
Por "régimen de dosificación de IL-2 constante"
se entiende que al sujeto sometido a la terapia concurrente con
IL-2 y un anticuerpo anti CD40 antagonista se le
administra una dosis semanal total constante de IL-2
durante el transcurso de cualquier ciclo de administración de
IL-2. Un ciclo completo de un régimen dosificación
de IL-2 constante comprende administrar una dosis
semanal total constante de IL-2 durante un periodo
de aproximadamente 2 semanas a aproximadamente 12 semanas, tal como
de aproximadamente 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11 ó 12 semanas,
seguido por un periodo de tiempo sin dosificación de
IL-2, que tiene una duración de aproximadamente 1
semana a aproximadamente 4 semanas, incluidas 1, 2, 3 ó 4 semanas.
Por tanto, cada ciclo de un régimen dosificación de
IL-2 constante comprende un primer periodo de tiempo
durante el cual se administra al sujeto una dosis semanal total
constante de IL-2 y un segundo periodo de tiempo
durante el cual se suspende la dosificación de IL-2
(es decir, un periodo de "reposo" o "descanso" de la
administración de IL-2). Preferentemente, se
administra al sujeto la dosis semanal total constante de
IL-2 durante de al menos 4 semanas a aproximadamente
12 semanas, momento en el cual se suspende la dosificación de
IL-2 durante un periodo de aproximadamente 1 semana
a aproximadamente 4 semanas. Como se ha indicado en lo que antecede
en el presente documento, cualquiera de estos agentes terapéuticos
se puede administrar primero con el fin de iniciar este protocolo de
terapia concurrente.
Cuando el sujeto va a recibir la terapia con
anticuerpo anti CD40 antagonista a lo largo de un periodo de
tratamiento (es decir, un periodo de tiempo durante el cual el
sujeto está recibiendo terapia concurrente con estos dos agentes
terapéuticos), durante cada ciclo del régimen de dosificación de
IL-2 constante el sujeto permanece con el régimen
de dosificación recomendado para el anticuerpo anti CD40 antagonista
y, por tanto, recibe una dosis terapéuticamente eficaz del
anticuerpo anti CD40 antagonista de acuerdo con un programa de
dosificación semanal o de acuerdo con un programa de dosificación de
una vez cada dos semanas, una vez cada tres semanas o una vez cada
cuatro semanas.
Como alternativa, cuando el sujeto va a recibir
la terapia con anticuerpo anti CD40 antagonista a lo largo de un
periodo de tratamiento durante un tiempo fijo, el periodo de
tratamiento comprende administrar una dosis terapéuticamente eficaz
del anticuerpo anti CD40 antagonista durante un tiempo fijo de
aproximadamente 4 semanas a aproximadamente 16 semanas, cuando el
anticuerpo se administra una vez a la semana, una vez cada dos
semanas, una vez cada tres semanas o una vez cada cuatro semanas, y
administrar uno o más ciclos del régimen de dosificación de
IL-2 constante. Por tanto, por ejemplo, en algunas
formas de realización, se administra al sujeto una dosis
terapéuticamente eficaz del anticuerpo anti CD40 antagonista una vez
a la semana durante un tiempo fijo de 4 semanas u 8 semanas, en
combinación con al menos un ciclo de un régimen de dosificación de
IL-2 constante. En tales formas de realización,
cada ciclo completo del régimen dosificación de IL-2
constante comprende administrar una dosis semanal total constante
de IL-2 durante un periodo de aproximadamente 2
semanas a aproximadamente 12 semanas, tal como de aproximadamente
2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11 ó 12 semanas, seguido por un periodo
de tiempo sin dosificación de IL-2, que tiene una
duración de
\hbox{aproximadamente 1 semana a aproximadamente 4 semanas, incluidas 1, 2, 3 ó 4 semanas.}
A discreción del médico encargado del
tratamiento, el sujeto sometido a administración semanal del
anticuerpo anti CD40 antagonista o a anticuerpo anti CD40
antagonista una vez cada dos, tres o cuatro semanas, puede
continuar recibiendo la dosis semanal total constante de
IL-2 durante un periodo extendido de tiempo mayor
de 12 semanas, por ejemplo durante 1-8 semanas
adicionales, siempre que el protocolo de dosificación de anticuerpo
anti CD40 antagonista/IL-2 constante sea bien
tolerado y el sujeto exhiba signos mínimos de síntomas de toxicidad
bien por el anticuerpo anti CD40 antagonista y/o por la
IL-2. En tal forma de realización, a la conclusión
de la dosificación de IL-2 le seguiría un periodo de
aproximadamente 1 semana a aproximadamente 4 semanas durante el
cual la dosificación de IL-2 se suspendería para
permitir que el sujeto descanse de este agente terapéutico antes de
iniciar un ciclo posterior del régimen de dosificación de
IL-2 constante.
En una forma de realización, se administra a un
sujeto que necesita terapia concurrente con el anticuerpo anti CD40
antagonista e IL-2 una dosis terapéuticamente eficaz
del anticuerpo anti CD40 antagonista una vez a la semana a lo largo
de un periodo de tratamiento o se administra una dosis
terapéuticamente eficaz del anticuerpo anti CD40 antagonista una
vez cada tres semanas a lo largo de este periodo de tratamiento,
comenzando el día 1 de este periodo de tratamiento, y el primer
ciclo de un régimen de dosificación de IL-2
constante se inicia comenzando el día 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 ó 10 del
mismo periodo de tratamiento. En una forma de realización tal, el
primer ciclo de un régimen de dosificación de IL-2
constante comienza el día 8 (es decir, a principios de la semana 2)
del periodo de tratamiento y tiene una duración de administración de
IL-2 de aproximadamente 4 semanas a aproximadamente
12 semanas, seguido por un periodo de tiempo sin administración de
IL-2 que tiene una duración de aproximadamente 1
semana a aproximadamente 4 semanas. Al final de este primer ciclo
del régimen de dosificación de IL-2 constante, el
sujeto recibe uno o más ciclos posteriores del régimen de
dosificación de IL-2 constante como se ha indicado
en lo que antecede en el presente documento.
En una forma de realización, se administra al
sujeto una dosis terapéuticamente eficaz del anticuerpo anti CD40
antagonista una vez a la semana a lo largo de un periodo de
tratamiento o se administra una dosis terapéuticamente eficaz del
anticuerpo anti CD40 antagonista una vez cada tres semanas a lo
largo de este periodo de tratamiento, comenzando el día 1 de este
periodo de tratamiento, y un primer ciclo del régimen de
dosificación de IL-2 constante comienza el día 8
(es decir, a principios de la semana 2) del periodo de tratamiento y
tiene una duración de administración de IL-2 de 4
semanas, seguido por un periodo de tiempo sin administración de
IL-2 que tiene una duración de 1 semana. A
discreción del médico encargado del tratamiento, después se
administra al sujeto uno o más ciclos posteriores de este régimen
de administración de IL-2 constante, es decir
administración de la dosis semanal total constante de
IL-2 durante 4 semanas, seguido por 1 semana sin
administración de IL-2. Durante todo el periodo de
tratamiento, el sujeto continúa recibiendo la dosis terapéuticamente
eficaz del anticuerpo anti CD40 antagonista de acuerdo con el
programa de dosificación de una vez a la semana, o con el programa
de dosificación de una vez cada tres semanas, con la condición de
que el sujeto no exhiba síntomas de toxicidad por el anticuerpo
anti-CD40 antagonista. Por tanto, por ejemplo, si el
sujeto es sometido a tres ciclos del régimen de dosificación de
IL-2 constante en combinación con administración
semanal (es decir, una vez a la semana) del anticuerpo anti CD40
antagonista, comenzando el primer ciclo de administración de
IL-2 el día 8 de un periodo de tratamiento (es
decir, el día 1 de la semana 2), a este sujeto las dosis
terapéuticamente eficaces del anticuerpo anti CD40 antagonista se
administrarían el día 1 de cada semana de tratamiento (es decir, el
día 1 de las semanas 1-16) y una dosis semanal total
constante de IL-2 durante las semanas
2-5, las semanas 7-10 y las semanas
12-15, siendo el tiempo de
\hbox{descanso de la dosificación de IL-2 durante las semanas 6, 11 y 16.}
En formas de realización alternativas, se
administra a un sujeto que necesita terapia concurrente con el
anticuerpo anti CD40 antagonista e IL-2 una dosis
terapéuticamente eficaz del anticuerpo anti CD40 antagonista una vez
a la semana a lo largo de un periodo de tratamiento o se administra
una dosis terapéuticamente eficaz del anticuerpo anti CD40
antagonista una vez cada dos semanas durante un tiempo fijo de 4
semanas u 8 semanas, comenzando el día 1 de un periodo de
tratamiento, y el primer ciclo de un régimen de dosificación de
IL-2 constante se inicia comenzando el día 3, 4, 5,
6, 7, 8, 9 ó 10 del mismo periodo de tratamiento. En una forma de
realización tal, el primer ciclo de un régimen de dosificación de
IL-2 constante comienza el día 8 (es decir, a
principios de la semana 2) del periodo de tratamiento y tiene una
duración de administración de IL-2 de
aproximadamente 4 semanas a aproximadamente 12 semanas, seguido por
un periodo de tiempo sin administración de IL-2 que
tiene una duración de aproximadamente 1 semana a aproximadamente 4
semanas. Al final de este primer ciclo del régimen de dosificación
de IL-2 constante, el sujeto recibe uno o más ciclos
posteriores del régimen de dosificación de IL-2
constante como se ha indicado en lo que antecede en el presente
documento.
En otra forma de realización, se administra al
sujeto una dosis terapéuticamente eficaz del anticuerpo anti CD40
antagonista una vez a la semana, o una vez cada dos semanas, durante
un tiempo fijo de 4 semanas u 8 semanas, comenzando el día 1 de un
periodo de tratamiento, y un primer ciclo del régimen de
dosificación de IL-2 constante comienza el día 8
(es decir, a principios de la semana 2) del periodo de tratamiento y
tiene una duración de administración de IL-2 de 4
semanas, seguido por un periodo de tiempo sin administración de
IL-2 que tiene una duración de 1 semana. A
discreción del médico encargado del tratamiento, después se
administra al sujeto uno o más ciclos posteriores de este régimen
de administración de IL-2 constante, es decir
administración de la dosis semanal total constante de
IL-2 durante 4 semanas, seguido por 1 semana sin
administración de IL-2. Por tanto, por ejemplo, si
el sujeto es sometido a tres ciclos del régimen de dosificación de
IL-2 constante en combinación con administración
semanal (es decir, una vez a la semana) del anticuerpo anti CD40
antagonista durante un tiempo fijo de 4 semanas, comenzando el
primer ciclo de administración de IL-2 el día 8 de
un periodo de tratamiento (es decir, el día 1 de la semana 2), a
este sujeto las dosis terapéuticamente eficaces del anticuerpo anti
CD40 antagonista se administrarían el día 1 de las semanas
1-4 del periodo de tratamiento y se administraría
una dosis semanal total constante de IL-2 durante
las semanas 2-5, las semanas 7-10 y
las semanas 12-15, siendo el tiempo de descanso de
la dosificación de IL-2 durante las semanas 6, 11 y
16. Como alternativa, si el sujeto es sometido a tres ciclos del
régimen de dosificación de IL-2 constante en
combinación con administración semanal (es decir, una vez a la
semana) del anticuerpo anti CD40 antagonista durante un tiempo fijo
de 8 semanas, comenzando el primer ciclo de administración de
IL-2 el día 8 de un periodo de tratamiento (es
decir, el día 1 de la semana 2), a este sujeto las dosis
terapéuticamente eficaces del anticuerpo anti CD40 antagonista se
administrarían el día 1 de las semanas 1-8 del
periodo de tratamiento y se administraría una dosis semanal total
constante de IL-2 durante las semanas
2-5, las semanas 7-10 y las semanas
12-15, siendo el tiempo de descanso de la
dosificación de IL-2 durante las semanas 6, 11 y
16.
En otras formas de realización de la
divulgación, la terapia concurrente con anticuerpo anti CD40
antagonista e IL-2 comprende administrar una dosis
terapéuticamente eficaz del anticuerpo anti CD40 antagonista una a
la semana o una vez cada dos, tres o cuatro semanas a lo largo de
un periodo de tratamiento o para una duración fija dentro del
periodo de tratamiento, en combinación con uno o más ciclos de un
"régimen de dosificación de IL-2 de dos
niveles" durante el transcurso de este periodo de tratamiento.
Por "régimen de dosificación de IL-2 de dos
niveles" se entiende que se administra al sujeto sometido a
terapia concurrente con IL-2 y anticuerpo anti CD40
antagonista durante dos periodos de tiempo de dosificación de
IL-2, que tienen una duración combinada de
aproximadamente 2 semanas a aproximadamente 16 semanas, incluidas
2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15 ó 16. En una forma de
realización, el régimen de dosificación de IL-2 de
dos niveles tiene una duración combinada de aproximadamente 4
semanas a aproximadamente 12 semanas; en otras formas de
realización, el régimen de dosificación de IL-2 de
dos niveles tiene una duración combinada de aproximadamente 4
semanas a aproximadamente 8 semanas, incluidas aproximadamente 4,
5, 6, 7 u 8 semanas. La dosis semanal total de IL-2
que se va a administrar durante el primero y el segundo periodos de
tiempo del régimen de dosificación de IL-2 de dos
niveles se escoge de tal manera que durante el primer periodo de
tiempo se administra una dosis semanal total de IL-2
mayor y durante el segundo periodo de tiempo se administra una
dosis semanal total menor.
La duración del primero y el segundo periodos de
tiempo individuales de cualquier ciclo dado del régimen de
dosificación de IL-2 de dos niveles puede variar en
función de la salud del individuo y la historia de la progresión de
la enfermedad. En general, se administra al sujeto dosis semanales
totales mayores de IL-2 durante al menos 1 semana
de las 4 semanas a 16 semanas de régimen de dosificación de
IL-2 de dos niveles. En una forma de realización,
dosis semanales totales mayores de IL-2 se
administran durante la primera mitad del régimen de dosificación de
IL-2 de dos niveles y dosis semanales totales
menores se administran durante la segunda mitad del régimen de
dosificación de IL-2 de dos niveles. Por tanto, por
ejemplo, cuando un ciclo completo del régimen de dosificación de
IL-2 de dos niveles tiene una duración combinada de
8 semanas, las dosis semanales totales mayores de
IL-2 se administrarían durante las primeras 4
semanas de la dosificación de IL-2 y las dosis
semanales totales menores de IL-2 se administrarían
durante las segundas 4 semanas de la dosificación de
IL-2.
Cuando el sujeto va a recibir la terapia con
anticuerpo anti CD40 antagonista a lo largo de un periodo de
tratamiento (es decir, un periodo de tiempo durante el cual el
sujeto está recibiendo terapia concurrente con estos dos agentes
terapéuticos), durante cada ciclo del régimen de dosificación de
IL-2 de dos niveles el sujeto permanece con el
régimen de dosificación recomendado para el anticuerpo anti CD40
antagonista y, por tanto, recibe una dosis terapéuticamente eficaz
del anticuerpo anti CD40 antagonista de acuerdo con un programa de
dosificación semanal o de acuerdo con un programa de dosificación de
una vez cada dos semanas, una vez cada tres semanas o una vez cada
cuatro semanas.
Como alternativa, cuando el sujeto va a recibir
la terapia con anticuerpo anti CD40 antagonista a lo largo de un
periodo de tratamiento durante un tiempo fijo, el periodo de
tratamiento comprende administrar una dosis terapéuticamente eficaz
del anticuerpo anti CD40 antagonista durante un tiempo fijo de
aproximadamente 4 semanas a aproximadamente 16 semanas, cuando el
anticuerpo se administra una vez a la semana, una vez cada dos
semanas, una vez cada tres semanas o una vez cada cuatro semanas, y
administrar uno o más ciclos del régimen de dosificación de
IL-2 de dos niveles. Por tanto, por ejemplo, en
algunas formas de realización, se administra al sujeto una dosis
terapéuticamente eficaz del anticuerpo anti CD40 antagonista una vez
a la semana durante un tiempo fijo de 4 semanas u 8 semanas, en
combinación con al menos un ciclo de un régimen de dosificación de
IL-2 de dos niveles, como se ha definido en lo que
antecede en el presente documento.
Aunque más adelante en el presente documento se
divulgan regímenes de dosificación específicos, se reconoce que la
divulgación abarca cualquier protocolo de administración que
proporciona la terapia concurrente con un anticuerpo anti CD40
antagonista y uno o más ciclos de un régimen de dosificación de
IL-2 de dos niveles que proporciona exposición
inicial a dosis semanales totales mayores de IL-2 y
la exposición posterior a dosis semanales totales menores de
IL-2. Sin quedar ligado a teoría alguna, se cree que
administrar una dosis mayor de IL-2 durante las
etapas iniciales de la dosificación de IL-2
proporciona una estimulación inicial de actividad celular NK que
puede mantenerse con una dosis menor durante las semanas posteriores
de dosificación de IL-2. Dado que los efectos
secundarios de la IL-2 están relacionados con la
dosis, la dosis reducida de IL-2 incrementará la
tolerabilidad de este agente terapéutico durante el periodo de
tratamiento extendido.
Por tanto, los procedimientos divulgados en el
presente documento contemplan regímenes de tratamiento en los que
una dosis terapéuticamente eficaz de al menos un anticuerpo anti
CD40 antagonista se administra una vez a la semana a lo largo de un
periodo de tratamiento o se administra una vez cada dos, tres o
cuatro semanas a lo largo de este periodo de tratamiento, en
combinación con una dosificación de IL-2 de dos
niveles que tiene una duración combinada de aproximadamente 2
semanas a aproximadamente 16 semanas, incluidas 2, 3, 4, 5, 6, 7,
8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15 ó 16 semanas. En primer lugar se puede
administrar cualquier agente, como se ha explicado en lo que
antecede para este régimen de dosificación de IL-2
de dos niveles. Por ejemplo, en una forma de realización, primero
se administra una dosis terapéuticamente eficaz del anticuerpo anti
CD40 antagonista, por ejemplo el día 1 de un periodo de
tratamiento, seguida por el inicio del régimen de dosificación de
IL-2 de dos niveles en un plazo de 10 días,
preferentemente en un plazo de 7 días de la primera administración
del anticuerpo anti CD40 antagonista, por ejemplo en un plazo de 1,
2, 3, 4, 5, 6 ó 7 días. Durante el régimen de dosificación de
IL-2 de dos niveles se administra una dosis semanal
total mayor de IL-2 en el primer periodo de tiempo
del régimen de dosificación de IL-2 de dos niveles,
por ejemplo durante las primeras 1-4 semanas de
administración de IL-2 y dosis semanales totales
menores de IL-2 se administran durante el segundo
periodo de tiempo del régimen de dosificación de
IL-2 de dos niveles (es decir, durante el transcurso
restante del régimen de dosificación de IL-2 de dos
niveles).
En una forma de realización, los procedimientos
divulgados en el presente documento proporcionan la administración
de una dosis terapéuticamente eficaz de una composición farmacéutica
que comprende al menos un anticuerpo anti CD40 antagonista
semanalmente (es decir, una vez a la semana) a lo largo de un
periodo de tratamiento, o administrar esta dosis terapéuticamente
eficaz del anticuerpo anti CD40 antagonista una vez cada tres
semanas a lo largo de este periodo de tratamiento, en combinación
con uno o más ciclos de un régimen de dosificación de
IL-2 de dos niveles durante el transcurso de este
periodo de tratamiento, en el que cada ciclo del régimen de
dosificación de IL-2 de dos niveles tiene una
duración combinada de 4 semanas a 8 semanas, incluidas 4, 5, 6, 7 u
8 semanas. Por tanto, por ejemplo, cuando el anticuerpo anti CD40
antagonista se va a administrar una vez a la semana, una dosis
terapéuticamente eficaz de al menos un anticuerpo anti CD40
antagonista se administra el día 1 de cada semana del periodo de
tratamiento y el primer ciclo de un régimen de dosificación de
IL-2 de dos niveles de 4 semanas a 8 semanas se
inicia comenzando el día, 4, 5, 6, 7, 8, 9 ó 10 del mismo periodo
de tratamiento.
En una forma de realización tal, las dosis
terapéuticamente eficaces de la composición farmacéutica que
comprende el anticuerpo anti CD40 antagonista se administran
semanalmente comenzando el día 1 de un periodo de tratamiento y
continuando a lo largo del periodo de tratamiento, y un primer ciclo
del régimen de dosificación de IL-2 de dos niveles
comienza el día 8 del mismo periodo de tratamiento y continua
durante 8 semanas (es decir, durante las semanas
2-9 del periodo de tratamiento).
Como alternativa, los procedimientos divulgados
en el presente documento contemplan regímenes de tratamiento para
un sujeto que los necesite, en los que una dosis terapéuticamente
eficaz de al menos un anticuerpo anti CD40 antagonista se
administra una vez a la semana o se administra una vez cada dos
semanas, durante un tiempo fijo de 4 u 8 semanas, en combinación
con un régimen de dosificación de IL-2 de dos
niveles que tiene una duración combinada de aproximadamente 2
semanas a aproximadamente 16 semanas, incluidas 2, 3, 4, 5, 6, 7,
8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15 ó 16 semanas. En primer lugar se puede
administrar cualquier agente, como se ha explicado en lo que
antecede para este régimen de dosificación de IL-2
de dos niveles. Por ejemplo, en una forma de realización, primero
se administra una dosis terapéuticamente eficaz del anticuerpo anti
CD40 antagonista, por ejemplo el día 1 de un periodo de
tratamiento, seguida por el inicio del régimen de dosificación de
IL-2 de dos niveles en un plazo de 10 días,
preferentemente en un plazo de 7 días de la primera administración
del anticuerpo anti CD40 antagonista, por ejemplo en un plazo de 1,
2, 3, 4, 5, 6 ó 7 días. Durante el régimen de dosificación de
IL-2 de dos niveles se administra una dosis semanal
total mayor de IL-2 en el primer periodo de tiempo
del régimen de dosificación de IL-2 de dos niveles,
por ejemplo durante las primeras 1-4 semanas de
administración de IL-2 y dosis semanales totales
menores de IL-2 se administran durante el segundo
periodo de tiempo del régimen de dosificación de
IL-2 de dos niveles (es decir, durante el transcurso
restante del régimen de dosificación de IL-2 de dos
niveles).
En una forma de realización, los procedimientos
divulgados en el presente documento proporcionan la administración
de una dosis terapéuticamente eficaz de una composición farmacéutica
que comprende al menos un anticuerpo anti CD40 antagonista
semanalmente (es decir, una vez a la semana) o una vez cada dos
semanas durante un tiempo fijo de 4 semanas u 8 semanas, en
combinación con uno o más ciclos de un régimen de dosificación de
IL-2 de dos niveles durante el transcurso de este
periodo de tratamiento, en el que cada ciclo del régimen de
dosificación de IL-2 de dos niveles tiene una
duración combinada de 4 semanas a 8 semanas, incluidas 4, 5, 6, 7 u
8 semanas. Por tanto, por ejemplo, cuando el anticuerpo anti CD40
antagonista se va a administrar una vez a la semana durante 4
semanas, una dosis terapéuticamente eficaz de al menos un anticuerpo
anti CD40 antagonista se administra el día 1 de las semanas
1-4 del periodo de tratamiento y el primer ciclo de
un régimen de dosificación de IL-2 de dos niveles
de 4 semanas a 8 semanas se inicia comenzando el día, 4, 5, 6, 7, 8,
9 ó 10 del mismo periodo de tratamiento.
En una forma de realización tal, las dosis
terapéuticamente eficaces de la composición farmacéutica que
comprende el anticuerpo anti CD40 antagonista se administran
semanalmente durante un tiempo fijo de 4 semanas, comenzando el día
1 de un periodo de tratamiento, y un primer ciclo del régimen de
dosificación de IL-2 de dos niveles comienza el día
8 del mismo periodo de tratamiento y continua durante 8 semanas (es
decir, durante las semanas 2-9 del periodo de
tratamiento).
Los procedimientos divulgados en el presente
documento también contemplan formas de realización en las que se
proporciona a un sujeto sometido a administración de anticuerpo
anti CD40 antagonista de acuerdo con el programa de dosificación
recomendado en el presente documento en combinación con la
administración de uno o más ciclos de un régimen de dosificación de
IL-2 de dos niveles un "descanso del fármaco"
o un periodo sin dosificación de IL-2, o sin
dosificación de IL-2 y dosificación de anticuerpo
anti CD40 antagonista, entre la finalización del primer periodo de
tiempo de cualquier ciclo dado del régimen de dosificación de
IL-2 de dos niveles y el inicio del segundo periodo
de tiempo de dicho ciclo concreto del régimen de dosificación de
IL-2 de dos niveles. En estas formas de realización,
el régimen de dosificación de IL-2 de dos niveles
se interrumpe de tal modo que la dosificación de
IL-2 se suspende durante un periodo de
aproximadamente 1 semana a aproximadamente 4 semanas tras la
finalización del primer periodo de tiempo de un ciclo dado del
régimen de dosificación de IL-2 de dos niveles
durante el cual se ha administrado la dosis semanal total mayor.
Durante este periodo sin dosificación de IL-2, el
sujeto puede continuar recibiendo una dosis terapéuticamente eficaz
del anticuerpo anti CD40 antagonista de acuerdo con el programa de
dosificación recomendado en el presente documento (es decir, una
vez a la semana, o una vez cada dos, tres o cuatro semanas) o, como
alternativa, también se puede detener la dosificación del anticuerpo
anti CD40 antagonista. La duración de esta interrupción de la
dosificación de IL-2 dependerá de la salud del
sujeto, la historia de progresión de la enfermedad y la capacidad
de respuesta del sujeto a la terapia inicial con
IL-2/anticuerpo recibida durante el primer periodo
de tiempo de cualquier ciclo dado del régimen de dosificación de
IL-2 de dos niveles. En general, la dosificación de
IL-2 se interrumpe durante un periodo de
aproximadamente 1 semana a aproximadamente 4 semanas, momento en el
cual se administra al sujeto el segundo periodo de tiempo del
régimen de dosificación de IL-2 de dos niveles, en
el que se administran las dosis semanales totales menores de
IL-2 en combinación con la administración semanal
de dosis terapéuticamente eficaces del anticuerpo anti CD40
antagonista. Con el fin de completar cualquier ciclo dado de un
régimen de dosificación de IL-2 de dos niveles se
administrará a un sujeto tanto el primer periodo de dosificación
semanal total mayor como el segundo periodo de dosificación semanal
total menor.
Durante este descanso de fármaco (es decir,
periodo de tiempo sin administración de IL-2, o
periodo de tiempo sin administración de IL-2 y
anticuerpo anti CD40 antagonista), se controlan los recuentos de
células asesinas naturales (NK) para determinar cuándo se debe
continuar el régimen de dosificación de IL-2 de dos
niveles, o el régimen de dosificación de IL-2 de
dos niveles y la administración semanal del anticuerpo anti CD40
antagonista. Niveles de células NK superiores a 200 células/\mul
pueden ser un factor importante que influye sobre la respuesta
clínica positiva a la terapia con anticuerpo anti CD40 antagonista.
Por tanto, el control del recuento de células NK durante, al final,
y después de cualquier ciclo dado de dosificación de
IL-2 proporciona un medio para determinar si y
cuándo se debe reinstaurar la terapia con IL-2
después de un tiempo sin dosificación de IL-2, que
puede o no incluir un tiempo sin administración del anticuerpo anti
CD40 antagonista.
De este modo, los recuentos de células NK se
miden bisemanalmente o mensualmente durante el régimen de
dosificación de IL-2 de dos niveles y al final del
primer periodo de tiempo del régimen de dosificación de
IL-2 de dos niveles antes de iniciar el descanso
del fármaco. Cuando el recuento de células NK supera un nivel umbral
aceptable, el régimen de dosificación de IL-2 se
puede interrumpir. Por "nivel umbral aceptable" se entiende
que el sujeto sometido a tratamiento tiene un recuento de células NK
que es de aproximadamente 150 células/\mul o mayor,
preferentemente 200 células/\mul o mayor. Después de la
interrupción de la dosificación de IL-2, que puede
o no incluir la interrupción de la administración del anticuerpo
anti CD40 antagonista, los recuentos de células NK se miden una vez
a la semana o dos veces a la semana después, o se pueden controlar
con menor frecuencia, por ejemplo una vez cada dos semanas o una
vez cada tres semanas. Un recuento de células NK que es menor al
nivel umbral aceptable de aproximadamente 150 células/\mul, por
ejemplo un recuento de células NK inferior a 150 células/\mul, es
indicativo de la necesidad de continuar el régimen de dosificación
de IL-2 de dos niveles o el régimen de dosificación
de IL-2 de dos niveles y el régimen de dosificación
del anticuerpo CD40 antagonista cuando el descanso de fármaco
también incluye tiempo sin administración del anticuerpo CD40
antagonista. Preferentemente, el régimen de dosificación de
IL-2 de dos niveles se retoma cuando el recuento de
células NK es inferior al nivel umbral de aproximadamente 200
células/\mul, es decir un recuento de células NK inferior a 200
células/\mul. En este momento se administra al sujeto el segundo
periodo de tiempo del régimen de dosificación de
IL-2 de dos niveles, en el que se administran dosis
semanales totales menores de IL-2 en combinación
con el anticuerpo CD40 antagonista, en el que una dosis
terapéuticamente eficaz del anticuerpo se administra una vez a la
semana o se administra una vez cada dos, tres o cuatro semanas.
En función de la salud general del sujeto, la
respuesta clínica y la tolerabilidad de la terapia concurrente con
estos dos agentes terapéuticos, tras la finalización de un primer
ciclo de un régimen de dosificación de IL-2 de dos
niveles, se puede administrar al sujeto uno o más ciclos posteriores
de un régimen de dosificación de IL-2 de dos
niveles en combinación con la administración de dosis
terapéuticamente eficaces del anticuerpo CD40 antagonista, en la
que una dosis terapéuticamente eficaz del anticuerpo se administra
una vez a la semana o se administra una vez cada dos, tres o cuatro
semanas. En dichas formas de realización, el médico encargado del
tratamiento puede permitir un descanso del fármaco o un periodo de
tiempo sin administración de IL-2 entre ciclos
sucesivos. Por tanto, tras la finalización de cualquier ciclo dado
de un régimen de dosificación de IL-2 de dos
niveles, que en sí mismo puede incluir o no un periodo de tiempo sin
administración de IL-2 entre los periodos primero y
segundo de dosificación de IL-2, se puede
proporcionar al sujeto un descanso de la administración de
IL-2 antes de iniciar un ciclo posterior del régimen
de dosificación de IL-2 de dos niveles. En general,
el periodo de tiempo sin administración de IL-2
entre cualquier ciclo dado de la dosificación de
IL-2 de dos niveles es de aproximadamente 1 semana a
aproximadamente 4 semanas, incluidas aproximadamente 1, 2, 3 ó 4
semanas. Durante los descansos del fármaco IL-2,
este periodo sin dosificación de IL-2, el sujeto
puede continuar recibiendo dosis terapéuticamente eficaces del
anticuerpo anti CD40 antagonista que se pueden administrar una vez
a la semana, o una vez cada dos, tres o cuatro semanas, o, como
alternativa, también se puede detener la dosificación del
anticuerpo anti CD40 antagonista.
Cuando un sujeto sometido a terapia de acuerdo
con los regímenes de dosificación mencionados anteriormente exhibe
una respuesta parcial, o una recaída tras un periodo prolongado de
remisión, pueden ser necesarios ciclos adicionales de terapia
concurrente para alcanzar la remisión completa de la enfermedad. Por
tanto, después de un periodo de tiempo sin un primer periodo de
tratamiento que puede haber comprendido un régimen de dosificación
de IL-2 constante o un régimen de dosificación de
IL-2 de dos niveles en combinación con una terapia
con anticuerpo anti CD40 a lo largo del periodo de tratamiento o
durante un tiempo fijo en el periodo de tratamiento, un sujeto
puede recibir uno o más periodos de tratamiento adicionales que
comprende cualquiera de los regímenes de dosificación de
IL-2 constante o de dos niveles en combinación con
la administración del anticuerpo anti CD40 antagonista, en la que
el anticuerpo se puede administrar a lo largo del(los)
periodo(s) de tratamiento adicionales o se puede administrar
durante un tiempo fijo dentro del periodo de tratamiento. En el
presente documento, tal periodo de tiempo entre periodos de
tratamiento se denomina periodo de tiempo de interrupción. Se
reconoce que la duración del periodo de tiempo de interrupción
depende del grado de respuesta tumoral (es decir, completa frente a
parcial) obtenida con cualquier periodo de tratamiento previo de
terapia concurrente con estos dos agentes terapéuticos.
Por tanto, por ejemplo, cuando un sujeto es
sometido a terapia concurrente con dosis semanales del anticuerpo
anti CD40 antagonista y un régimen de dosificación de
IL-2 de dos niveles, que puede incluir o no un
periodo de descanso del fármaco entre los periodos de tiempo
primero y segundo del régimen de dosificación de
IL-2 de dos niveles, su régimen de tratamiento
puede incluir múltiples sesiones de tratamiento, cada una de las
cuales comprende terapia concurrente con dosis semanales del
anticuerpo anti CD40 antagonista y un régimen de dosificación de
IL-2 de dos niveles. En el presente documento, estas
múltiples sesiones de tratamiento se denominan ciclos de
mantenimiento, en el que cada ciclo de mantenimiento comprende la
administración del anticuerpo anti CD40 antagonista en combinación
con un régimen de dosificación de IL-2 de dos
niveles completado. Por "régimen de dosificación de
IL-2 de dos niveles completado" se entiende que
se ha administrado al sujeto tanto el primer periodo de
dosificación semanal total mayor como el segundo periodo de
dosificación semanal total menor. La necesidad de múltiples ciclos
de mantenimiento se puede evaluar controlando el recuento de
células NK de un modo similar al usado para determinar cuando se
necesita un descanso del fármaco y cuándo debe concluir dicho
descanso del fármaco. Por tanto, tras la finalización del régimen de
dosificación de IL-2 de dos niveles en cualquier
ciclo de mantenimiento dado, el médico encargado del tratamiento
obtiene una medición del recuento de células NK. Después, este
indicador se mide a intervalos mensuales (es decir, una vez al mes)
tras la finalización de cualquier régimen de dosificación de
IL-2 de dos niveles. Como ocurre con los descansos
del fármaco, un recuento de células NK inferior al nivel umbral
aceptable (es decir, inferior a aproximadamente 150 células/\mul,
preferentemente inferior a aproximadamente 200 células/\mul) es
indicativo de la necesidad de administrar otro ciclo de
mantenimiento al sujeto. La duración entre ciclos de mantenimiento
puede ser de aproximadamente 1 mes a aproximadamente 6 meses,
incluido 2 mes, 1,5 meses, 2 meses, 2,5 meses, 3 meses, 3,5 meses,
4 meses, 4,5 meses, 5 meses, 5,5 meses, 6 meses, u otros periodos de
tiempo tales que entran dentro del intervalo de aproximadamente 1
mes a aproximadamente 6 meses.
Por tanto, los procedimientos de administración
divulgados en el presente documento proporcionan un medio mejor
para tratar cánceres que comprenden células que expresan CD40, por
ejemplo cánceres relacionados con células B, tales como linfomas,
mielomas y leucemia, y cánceres sólidos, tales como cáncer riñón
(incluidos, por ejemplo, los carcinomas de células renales), de
vejiga urinaria, de hígado (incluidos, por ejemplo, los carcinomas
hepatocelulares), gástrico, cervical, de próstata, nasofaríngeo,
tiroideo (por ejemplo, carcinoma papilar tiroideo) y de piel, tal
como el melanoma, y sarcomas (incluidos, por ejemplo, osteosarcomas
y sarcomas de Ewing). Sin quedar ligado a teoría alguna, el
programa de dosificación de IL-2 constante con
interrupciones proporciona un programa de dosificación intermitente
que permite la administración menos frecuente de la
IL-2 durante la terapia con anticuerpo anti CD40
antagonista y mejor tolerabilidad de la terapia con
IL-2 a largo plazo. El régimen de dosificación de
IL-2 de dos niveles ofrece la oportunidad de
proporcionar a un paciente dosis semanales totales mayores de
IL-2, que proporcionan la expansión de la cifra de
células NK que se pueden mantener con una dosis menor durante las
semanas posteriores de dosificación de IL-2. Este
protocolo de administración tiene la atracción adicional de
proporcionar descansos del fármaco IL-2 entre los
programas de dosificación de IL-2 semanal total
mayor y menor, así como descansos del fármaco IL-2
entre los ciclos completados del régimen de dosificación de
IL-2 de dos niveles, contribuyendo de nuevo a un
incremento de la tolerabilidad de la terapia concurrente con el
anticuerpo anti CD40 antagonista e IL-2.
Se reconoce que cuando un sujeto sometido a
terapia de acuerdo con los regímenes de dosificación mencionados
anteriormente exhibe una respuesta parcial, o una recaída tras un
periodo prolongado de remisión, el sujeto podría recibir el
anticuerpo anti CD40 antagonista como único agente terapéutico, o en
combinación con otra oncoterapia. Por tanto, un sujeto que ha
recibido terapia concurrente previa con IL-2 y
anticuerpo anti CD40 antagonista para el tratamiento de un cáncer
que comprende células neoplásicas que expresan CD40 y que necesita
tratamiento adicional para el cáncer puede recibir terapia con un
anticuerpo anti CD40 antagonista solo o un anticuerpo anti CD40
antagonista y al menos una oncoterapia previa a la, o como
alternativa a la, terapia concurrente adicional con el anticuerpo
anti CD40 antagonista e IL-2. Otros tipos de
oncoterapia incluyen, entre otros, los descritos más adelante en el
presente documento.
Para sujetos humanos sometidos a terapia
concurrente con anticuerpo anti CD40 antagonista de acuerdo con el
programa de administración recomendado en el presente documento en
combinación con uno o más ciclos de un régimen de dosificación de
IL-2 constante o uno o más ciclos de un régimen de
dosificación de IL-2 de dos niveles, la dosis
semanal total de IL-2 que se va a administrar
durante los periodos de dosificación de IL-2 se
puede administrar cono una dosis única o puede repartirse en una
serie de dosis equivalentes que se administran de acuerdo con un
programa de dosificación de dos, tres, cuatro, cinco, seis o siete
veces a la semana. Cuando las dosis semanales totales mayores se
deben administrar durante un primer periodo de tiempo y las dosis
semanales totales menores e deben administrar durante un segundo
periodo de tiempo, no es necesario que la dosis semanal total se
administra del mismo modo durante los dos periodos de dosificación.
Por tanto, por ejemplo, la dosis semanal total mayor durante el
primer periodo de tiempo de un régimen de dosificación de
IL-2 de dos niveles se puede administrar en forma de
una dosis única o se puede repartir en una serie de dosis
equivalentes que se administran de acuerdo con un régimen de
dosificación de dos, tres, cuatro, cinco, seis o siete veces a la
semana. De forma similar, la dosis semanal total menor durante el
segundo periodo de tiempo de un régimen de dosificación de
IL-2 de dos niveles se puede administrar en forma
de una dosis única o se puede repartir en una serie de dosis
equivalentes que se administran de acuerdo con un régimen de
dosificación de dos, tres, cuatro, cinco, seis o siete veces a la
semana.
Para los fines de la presente invención, un
"programa de dosificación de dos, tres, cuatro, cinco, seis o
siete veces a la semana" se entiende que significa que la dosis
semanal total se reparte en dos, tres, cuatro, cinco, seis o siete
dosis equivalentes, respectivamente, que se administran al sujeto
durante el transcurso de un periodo de 7 días, no administrándose
más de una dosis equivalente por periodo de 24 horas. La serie de
dosis equivalentes se puede administrar en días secuenciales o se
puede administrar de modo que pasen uno o más días entre dos dosis
cualesquiera consecutivas, en función del número total de dosis
equivalentes administradas a la semana.
Por tanto, por ejemplo, cuando una serie de dos
dosis equivalentes de IL-2 se administra a la semana
(es decir, durante un periodo de 7 días) y la primera dosis
equivalente de dicha semana se administra el día 1, la segunda
dosis equivalente de IL-2 se puede administrar el
día, 3,4,5, 6 ó 7 de esa semana. En una forma de realización, la
dosis semanal total de IL-2 se reparte en dos dosis
equivalentes que se administran al sujeto en un periodo de 7 días,
lo que permite un mínimo de 72 horas entre dosis y un máximo de 96
horas entre dosis.
De forma similar, cuando una serie de tres dosis
equivalentes de IL-2 se administra a la semana y la
primera dosis equivalente de dicha semana se administra el día 1,
la segunda dosis equivalente se puede administrar el día 2, 3, 4, 5
ó 6 de esa semana y la tercera dosis equivalente se puede
administrar el día 3, 4, 5, 6 ó 7 de esa semana, siempre que
transcurran aproximadamente 24 horas entre la administración de la
segunda y la tercera dosis equivalente. En una forma de
realización, la dosis semanal total de IL-2 se
reparte en tres dosis equivalentes que se administran al sujeto en
un periodo de 7 días, lo que permite un mínimo de 25 horas entre
dosis y un máximo de 72 horas entre dosis.
Cuando una serie de cuatro dosis equivalentes de
IL-2 se administra a la semana y la primera dosis
equivalente de dicha semana se administra el día 1, la segunda
dosis equivalente se puede administrar el día 2, 3, 4 ó 5 de esa
semana y la tercera dosis equivalente se puede administrar el día 3,
4, 5 ó 6 de esa semana, y la cuarta dosis equivalente se puede
administrar el día 4, 5, 6 ó 7 de esa semana, siempre que
transcurran aproximadamente 24 horas entre la administración de
cualquiera de las dos dosis consecutivas (es decir, entre la primera
y la segunda dosis equivalentes, entre la segunda y la tercera
dosis equivalentes y entre la tercera y la cuarta dosis
equivalentes).
Cuando una serie de cinco dosis equivalentes de
IL-2 se administra a la semana y la primera dosis
equivalente de dicha semana se administra el día 1, la segunda
dosis equivalente se puede administrar el día 2, 3 ó 4 de esa
semana y la tercera dosis equivalente se puede administrar el día 3,
4 ó 5 de esa semana, la cuarta dosis equivalente se puede
administrar el día 4, 5, ó 6 de esa semana, y la quina dosis
equivalente se puede administrar el día 5, 6 ó 7 de esa semana
siempre que transcurran aproximadamente 24 horas entre la
administración de cualquiera de las dos dosis consecutivas (es
decir, entre la primera y la segunda dosis equivalentes, entre la
segunda y la tercera dosis equivalentes y entre la tercera y la
cuarta dosis equivalentes y entre la cuarta y la quinta dosis
equivalentes).
Cuando una serie de seis dosis equivalentes de
IL-2 se administra a la semana y la primera dosis
equivalente de dicha semana se administra el día 1, la segunda
dosis equivalente se puede administrar el día 2 ó 3 de esa semana,
la tercera dosis equivalente se puede administrar el día 3 ó 4 de
esa semana, la cuarta dosis equivalente se puede administrar el día
4, ó 5 de esa semana, la quinta dosis equivalente se puede
administrar el día 5, ó 6 de esa semana y la sexta dosis
equivalente se puede administrar el día 6 ó 7 de esa semana,
siempre que transcurran aproximadamente 24 horas entre la
administración de cualquiera de las dos dosis consecutivas (es
decir, entre la primera y la segunda dosis equivalentes, entre la
segunda y la tercera dosis equivalentes y entre la tercera y la
cuarta dosis equivalentes y entre la cuarta y la quinta dosis
equivalentes y entre la quina y la sexta dosis equivalentes).
En una forma de realización, la dosis semanal
total de IL-2 se reparte en siete dosis
equivalentes, que se administran a diario durante el periodo de 7
días, con aproximadamente 24 horas entre cada dosis consecutiva.
No es necesario seguir el mismo programa de
dosificación a lo largo de un régimen de dosificación de
IL-2 constante no seguir el mismo programa de
dosificación para el primero y el segundo periodos del régimen de
dosificación de IL-2 de dos niveles. Por tanto, el
programa de dosificación se puede ajustar para acomodar la
tolerancia de un individuo a la terapia IL-2
prolongada en combinación con la terapia con anticuerpo anti CD40
antagonista y para reflejar la capacidad de respuesta del individuo
a la terapia concurrente con estos dos agentes terapéuticos. El
médico encargado del tratamiento puede determinar con facilidad el
programa de dosificación durante el régimen de dosificación de
IL-2 constante y los dos periodos de tiempo del
régimen de dosificación de IL-2 de dos niveles
según la historia médica del paciente y la orientación proporcionada
en el presente documento.
Para los fines de la presente invención, la
dosis terapéuticamente eficaz de un anticuerpo anti CD40 antagonista
o su fragmento de unión al antígeno como se ha definido en otras
partes del presente documento que se va a administrar en
combinación con terapia con IL-2 como se ha
divulgado en el presente documento varía desde aproximadamente
0,003 mg/kg hasta aproximadamente 50 mg/kg, desde aproximadamente
0,01 mg/kg hasta aproximadamente 40 mg/kg, desde aproximadamente
0,01 mg/kg hasta aproximadamente 30 mg/kg, desde aproximadamente 0,1
mg/kg hasta aproximadamente 30 mg/kg, desde aproximadamente 0,5
mg/kg hasta aproximadamente 30 mg/kg, desde aproximadamente 1 mg/kg
hasta aproximadamente 30 mg/kg, desde aproximadamente 3 mg/kg hasta
aproximadamente 30 mg/kg, desde aproximadamente 3 mg/kg hasta
aproximadamente 25 mg/kg, desde aproximadamente 3 mg/kg hasta
aproximadamente 20 mg/kg, desde aproximadamente 5 mg/kg hasta
aproximadamente 15 mg/kg, o desde aproximadamente 7 mg/kg hasta
aproximadamente 12 mg/kg. Por consiguiente, por ejemplo, la dosis
de cualquier anticuerpo anti CD40 antagonista o su fragmento de
unión al antígeno, por ejemplo el anticuerpo monoclonal
anti-CD40 CHIR-12.12 o
CHIR-5.9 o su fragmento de unión al antígeno, puede
ser de 0,003 mg/kg, 0,01 mg/kg, 0,03 mg/kg, 0,1 mg/kg, 0,3 mg/kg,
0,5 mg/kg, 1 mg/kg, 1,5 mg/kg, 2 mg/kg, 2,5 mg/kg, 3 mg/kg, 5 mg/kg,
7 mg/kg, 10 mg/kg, 15 mg/kg, 20 mg/kg, 25 mg/kg, 30 mg/kg, 35
mg/kg, 40 mg/kg, 45 mg/kg, 50 mg/kg, u otra dosis semejante que esté
dentro el intervalo desde aproximadamente 0,003 mg/kg hasta
aproximadamente 50 mg/kg. La misma dosis terapéuticamente eficaz de
un anticuerpo anti CD40 antagonista o su fragmento de unión al
antígeno puede administrarse a lo largo de cada semana de
dosificación del anticuerpo. Como alternativa, pueden usarse
diferentes dosis terapéuticamente eficaces de un anticuerpo anti
CD40 antagonista o su
\hbox{fragmento de unión al antígeno durante el transcurso de un período de tratamiento.}
Por tanto, en algunas formas de realización, la
dosis terapéuticamente eficaz inicial de un anticuerpo anti CD40
antagonista o su fragmento de unión al antígeno según se define en
otra parte en el presente documento puede estar en el intervalo de
dosificación inferior (es decir, desde aproximadamente 0,003 mg/kg
hasta aproximadamente 20 mg/kg) con dosis posteriores dentro del
intervalo de dosificación superior (es decir, desde aproximadamente
20 mg/kg hasta aproximadamente 50 mg/kg).
En formas de realización alternativas, la dosis
terapéuticamente eficaz inicial de un anticuerpo anti CD40
antagonista o su fragmento de unión al antígeno según se define en
otra parte en el presente documento puede estar en el intervalo de
dosificación superior (es decir, desde aproximadamente 20 mg/kg
hasta aproximadamente 50 mg/kg) con dosis posteriores dentro del
intervalo de dosificación inferior (es decir, desde 0,003 mg/kg
hasta aproximadamente 20 mg/kg). Por consiguiente, en una forma de
realización, la dosis terapéuticamente eficaz inicial del
anticuerpo anti CD40 antagonista o su fragmento de unión al antígeno
es de aproximadamente 20 mg/kg hasta aproximadamente 35 mg/kg,
incluyendo aproximadamente 20 mg/kg, aproximadamente 25 mg/kg,
aproximadamente 30 mg/kg y aproximadamente 35 mg/kg, y las
posteriores dosis terapéuticamente eficaces del anticuerpo anti
CD40 antagonista o su fragmento de unión al antígeno son de
aproximadamente 5 mg/kg hasta aproximadamente 15 mg/kg, incluyendo
aproximadamente 5 mg/kg, 8 mg/kg, 10 mg/kg, 12 mg/kg y
aproximadamente 15 mg/kg.
En algunas formas de realización de la
invención, la terapia con anticuerpo anti CD40 antagonista se inicia
administrando una "dosis de carga" del anticuerpo o su
fragmento de unión al antígeno al sujeto que necesita terapia con
de combinación con IL-2/anticuerpo anti CD40
antagonista. Por "dosis de carga" se entiende una dosis
inicial del anticuerpo anti CD40 antagonista o su fragmento de unión
al antígeno que se administra al sujeto, en la que la dosis del
anticuerpo o su fragmento de unión al antígeno administrado está
dentro del intervalo de dosificación superior (es decir, desde
aproximadamente 20 mg/kg hasta aproximadamente 50 mg/kg). La
"dosis de carga" puede administrarse como una única
administración, por ejemplo, una infusión única en la que el
anticuerpo o su fragmento de unión al antígeno se administra por vía
IV, o como administraciones múltiples, por ejemplo, infusiones
múltiples en las que el anticuerpo o su fragmento de unión al
antígeno se administra por vía IV, siempre que la "dosis de
carga" completa se administre en un período de aproximadamente
24 horas. Tras la administración de la "dosis de carga", se
administra a continuación al sujeto una o más dosis
terapéuticamente eficaces del anticuerpo anti CD40 antagonista o su
fragmento de unión al antígeno al sujeto. Pueden administrarse
dosis terapéuticamente eficaces posteriores, por ejemplo, según un
programa de dosificación semanal, o una vez cada dos semanas, una
vez cada tres semanas, o una vez cada cuatro semanas, como se ha
indicado en lo que antecede en el presente documento. En tales
formas de realización, las dosis terapéuticamente eficaces
posteriores generalmente están en el intervalo de dosificación
inferior (es decir, desde 0,003 mg/kg hasta aproximadamente 20
mg/kg). Como alternativa, en algunas formas de realización, tras la
"dosis de carga", las posteriores dosis terapéuticamente
eficaces del anticuerpo anti CD40 antagonista o su fragmento de
unión al antígeno se administran según un "programa de
mantenimiento", en el que la dosis terapéuticamente eficaz del
anticuerpo o su fragmento de unión al antígeno se administra una vez
al mes, una vez cada 6 semanas, una vez cada dos meses, una vez
cada 10 semanas, una vez cada tres meses, una vez cada 14 semanas,
una vez cada cuatro meses, una vez cada 18 semanas, una vez cada
cinco meses, una vez cada 22 semanas, una vez cada seis meses, una
vez cada 7 meses, una vez cada 8 meses, una vez cada 9 meses, una
vez cada 10 meses, una vez cada 11 meses, o una vez cada 12 meses.
En tales formas de realización, la dosis terapéuticamente eficaz
del anticuerpo anti CD40 antagonista o su fragmento de unión al
antígeno está en el intervalo de dosificación inferior (es decir,
desde 0,003 mg/kg hasta aproximadamente 20 mg/kg), en particular
cuando las dosis posteriores se administran en intervalos más
frecuentes, por ejemplo, una vez cada dos semanas hasta una vez al
mes, o dentro del intervalo de dosificación superior (es decir,
desde aproximadamente 20 mg/kg hasta aproximadamente 50 mg/kg), en
particular cuando las dosis posteriores se administran en intervalos
menos frecuentes, por ejemplo, cuando las dosis posteriores se
administran separadas por aproximadamente un mes hasta
aproximadamente 12 meses.
Para los fines de la siguiente discusión de
dosis terapéuticamente eficaces de IL-2 o una
variante biológicamente activa de la misma que se va a administrar
en combinación con terapia con anticuerpo anti CD40 antagonista, la
composición farmacéutica de IL-2 disponible
comercialmente con la marca Proleukin® (Chiron Corporation,
Emeryville, California) se usa como la IL-2 de
referencia convencional. Por "IL-2 de referencia
convencional" se entiende la formulación de IL-2
que sirve como base para la determinación de las dosis
terapéuticamente eficaces de IL-2, o una variante
biológicamente activa de la misma, que se va a administrar a un
sujeto humano con un cáncer que comprende células que expresan CD40
en combinación con la terapia con anticuerpo anti CD40 antagonista.
El resto activo usado en este producto de IL-2 es la
muteína de IL-2 humana recombinante aldesleukina
(denominada interleucina-2 humana
des-alanil-1,
serina-125; véase la patente de EE.UU. nº
4.931.543).
Por tanto, por ejemplo, cuando la fuente de la
IL-2 es Proleukin®, la dosis semanal total de
Proleukin® IL-2 que se va a administrar en
combinación con la terapia con anticuerpo anti CD40 antagonista está
en el intervalo de aproximadamente 18 millones de unidades
internacionales (MUI) a aproximadamente 54 MUI, en función de la
historia médica del paciente que va a recibir la terapia y el
régimen de dosificación de IL-2 recomendado (por
ejemplo, régimen de dosificación de IL-2 constante
frente a de dos niveles). Cuando se van a administrar dosis mayores
de IL-2, la dosis semanal total de Proleukin®
IL-2 puede estar en el intervalo de aproximadamente
42,0 MUI a aproximadamente 54,0 MUI, incluidas aproximadamente 42,0
MUI, 43,5 MUI, 45,0 MUI, 46,5 MUI, 48,0 MUI, 49,5 MUI, 51,0 MUI,
52,5 MUI y 54,0, y otros de estos valores que entran dentro de este
intervalo. Cuando se van a administrar dosis intermedias de
IL-2, la dosis semanal total de Proleukin®
IL-2 puede estar en el intervalo de aproximadamente
30,0 MUI a aproximadamente 42,0 MUI, incluidas aproximadamente 30,0
MUI, 31,5 MUI, 33,0 MUI, 34,5 MUI, 36,0 MUI, 37,5 MUI, 39,0 MUI,
40,5 MUI y 42,0, y otros de estos valores que entran dentro de este
intervalo. Cuando se van a administrar dosis menores de
IL-2, la dosis semanal total de Proleukin®
IL-2 puede estar en el intervalo de aproximadamente
18,0 MUI a aproximadamente 30,0 MUI, incluidas aproximadamente 18,0
MUI, 19,5 MUI, 21,0 MUI, 22,5 MUI, 24,0 MUI, 25,5 MUI, 27,0 MUI,
28,5 MUI y 30,0, y otros de estos valores que entran dentro de este
intervalo.
Cuando Proleukin® IL-2 se va a
administrar de acuerdo con un régimen de dosificación de
IL-2 constante en combinación con la terapia con
anticuerpo anti CD40 antagonista, la dosis semanal total de esta
IL-2 de referencia convencional es de
aproximadamente 18,0 MUI a aproximadamente 54,0 MUI. Por tanto,
por ejemplo, en algunas formas de realización, la cantidad de
Proleukin® IL-2 que se va a administrar a la semana
como parte de un régimen de dosificación de IL-2
constante es aproximadamente 18,0 MUI, 20 MUI, 22,0 MUI, 24,0 MUI,
26,0 MUI, 28,0 MUI, 30,0 MUI, 32,0 MUI, 34,0 MUI, 36,0 MUI, 38,0
MUI, 40,0 MUI,42,0 MUI, 44,0 MUI, 46,0 MUI, 48,0 MUI, 50,0 MUI, 52,0
MUI o 54,0 MUI, y otras dosis similares que entran dentro del
intervalo de aproximadamente 18,0 MUI a aproximadamente 54,0 MUI. En
alguna forma de realización, la dosis semanal total de Proleukin®
IL-2 entra dentro del intervalo de aproximadamente
42,0 MUI a aproximadamente 54,0 MUI, por ejemplo, 42,0 MUI, 44,0
MUI, 46,0 MUI, 48,0 MUI, 50,0 MUI, 52,0 MUI o 54,0 MUI. En otras
formas de realización, la dosis semanal total de Proleukin®
IL-2 entra dentro del intervalo de aproximadamente
30,0 MUI a aproximadamente 42,0 MUI, por ejemplo aproximadamente
30,0 MUI, 32,0 MUI, 34,0 MUI, 36,0 MUI, 38,0 MUI, 40,0 MUI o 42,0
MUI. En formas de realización alternativas, la dosis semanal total
de Proleukin® IL-2 es aproximadamente 18,0 MUI a
aproximadamente 30,0 MUI, por ejemplo, 18,0 MUI, 20 MUI, 22,0 MUI,
24,0 MUI, 26,0 MUI, 28,0 MUI o 30,0 MUI.
Como se ha indicado anteriormente, la dosis
semanal total de IL-2 durante un régimen de
dosificación de IL-2 constante se puede administrar
en forma de una dosis única o se puede repartir en una serie de
dosis equivalentes que se administran de acuerdo con un régimen de
dosificación de dos, tres, cuatro, cinco, seis o siete veces a la
semana. Por tanto, por ejemplo, cuando la dosis semanal total de
Proleukin® IL-2 es 54,0 MUI, las tres dosis
equivalentes de esta fuente de IL-2 que se va a
administrar durante cada semana sería 18,0 MUI y las dos dosis
equivalentes de esta fuente de IL-2 que se va a
administrar durante cada semana sería 27,0 MUI. De forma similar,
cuando la dosis semanal total de Proleukin® IL-2 es
42,0 MUI, las tres dosis equivalentes de esta fuente de
IL-2 que se va a administrar durante cada semana
sería 14,0 MUI y las dos dosis equivalentes de esta fuente de
IL-2 que se va a administrar durante cada semana
sería 21,0 MUI. Cuando la dosis semanal total de Proleukin®
IL-2 es 30,0 MUI, las tres dosis equivalentes de
esta fuente de IL-2 que se va a administrar durante
cada semana de dosificación de IL-2 sería 10,0 MUI y
las dos dosis equivalentes de esta fuente de IL-2
que se va a administrar durante cada semana de dosificación de
IL-2 sería 15 MUI. De forma similar, cuando la
dosis semanal total de Proleukin® IL-2 es 18,0 MUI,
las tres dosis equivalentes de esta fuente de IL-2
que se va a administrar durante cada semana sería 6,0 MUI y las dos
dosis equivalentes de esta fuente de IL-2 que se va
a administrar durante cada semana sería 9,0 MUI.
De acuerdo con los procedimientos divulgados en
el presente documento, al sujeto se administra este régimen de
dosificación de IL-2 constante en combinación con
dosis terapéuticamente eficaces del anticuerpo anti CD40
antagonista, o su fragmento de unión a antígeno, en el que la dosis
terapéuticamente eficaz del anticuerpo o de su fragmento de unión a
antígeno se administra de acuerdo con un régimen de dosificación
divulgado en el presente documento (es decir, una vez a la semana,
una vez cada dos semanas, una vez cada tres semanas o una vez cada
cuatro semanas a lo largo de un periodo de tratamiento o para una
duración fija dentro de un periodo de tratamiento). La dosis
terapéuticamente eficaz de anticuerpo anti CD40 antagonista o su
fragmento de unión a antígeno que se va a administra está en el
intervalo de aproximadamente 0,003 mg/kg a aproximadamente 50
mg/kg, incluidas de aproximadamente 0,5 mg/kg a aproximadamente 30
mg/kg. Por tanto, por ejemplo, en algunas formas de realización, la
cantidad total del anticuerpo anti CD40 antagonista o su fragmento
de unión a antígeno es de aproximadamente 0,003 mg/kg, 0,01 mg/kg,
0,03 mg/kg, 0,1 mg/kg, 0,3 mg/kg, 0,5 mg/kg, 1 mg/kg, 1,5 mg/kg, 2
mg/kg, 2,5 mg/kg, 3 mg/kg, 5 mg/kg, 7 mg/kg, 10 mg/kg, 15 mg/kg, 20
mg/kg, 25 mg/kg, 30 mg/kg, 35 mg/kg, 40 mg/kg, 45 mg/kg, 50 mg/kg,
u otras dosis semejantes que estén dentro el intervalo desde
aproximadamente 0,003 mg/kg hasta aproximadamente 50 mg/kg.
Por tanto, por ejemplo, en algunas formas de
realización, la cantidad total de Proleukin® IL-2
que se va a administrar a la semana como parte de un régimen de
dosificación de IL-2 constante es aproximadamente
42,0 MUI, 44,0 MUI, 46,0 MUI, 48,0 MUI, 50,0 MUI, 52,0 MUI ó 54,0
MUI, y la dosis terapéuticamente eficaz del anticuerpo anti CD40
antagonista o su fragmento de unión a antígeno que se va a
administrar en combinación con el régimen de dosificación de
IL-2 constante es de aproximadamente 0,5 mg/kg, 1
mg/kg, 1,5 mg/kg, 2 mg/kg, 2,5 mg/kg, 3 mg/kg, 5 mg/kg, 7 mg/kg, 10
mg/kg, 15 mg/kg, 20 mg/kg, 25 mg/kg, 30 mg/kg, 35 mg/kg, 40 55
mg/kg, 45 mg/kg ó 50 mg/kg, en las que esta dosis del anticuerpo
anti CD40 antagonista o su fragmento de unión a antígeno se
administra una vez a la semana, una vez cada dos semanas, una vez
cada tres semanas o una vez cada cuatro semanas, a lo largo de un
periodo de tratamiento o para una duración fija dentro de un periodo
de tratamiento. En una de estas formas de realización, la cantidad
total de Proleukin® IL-2 que se va a administrar a
la semana como parte de un régimen de dosificación de
IL-2 constante es aproximadamente 42,0 MUI y la
dosis terapéuticamente eficaz del anticuerpo anti CD40 antagonista
o su fragmento de unión a antígeno que se va a administrar en
combinación con el régimen de dosificación de IL-2
constante es de aproximadamente 0,5 mg/kg, 1 mg/kg, 5 mg/kg, 7
mg/kg, 10 mg/kg, 15 mg/kg, 20 mg/kg, 25 mg/kg, 30 mg/kg ó 35 mg/kg,
en las que esta dosis del anticuerpo anti CD40 antagonista o su
fragmento de unión a antígeno se administra una vez a la semana, una
vez cada dos semanas, una vez cada tres semanas o una vez cada
cuatro semanas, a lo largo de un periodo de tratamiento o para una
duración fija dentro de un periodo de tratamiento. En formas de
realización preferidas, esta dosis semanal total de 42,0 MUI de
Proleukin® IL-2 se reparte en dos o tres dosis
equivalentes que se administran de acuerdo con un programa de
dosificación de dos o tres veces a la semana, respectivamente. De
esta manera, las dos dosis equivalentes de esta fuente de
IL-2 que se va a administrar durante cada semana del
régimen de dosificación de IL-2 constante sería
21,0 MUI y las tres dosis equivalentes de esta fuente de
IL-2 que se va a administrar
\hbox{durante cada semana del régimen de dosificación de IL-2 constante sería 14,0 MUI.}
En otras formas de realización, la cantidad
total de Proleukin® IL-2 que se va a administrar a
la semana como parte de un régimen de dosificación de
IL-2 constante es aproximadamente 30,0 MUI, 32,0
MUI, 34,0 MUI, 36,0 MUI, 38,0 MUI, 40,0 MUI ó 42,0 MUI, y la dosis
terapéuticamente eficaz del anticuerpo anti CD40 antagonista o su
fragmento de unión a antígeno que se va a administrar en combinación
con el régimen de dosificación de IL-2 constante es
de aproximadamente 0,5 mg/kg, 1 mg/kg, 1,5 mg/kg, 2 mg/kg, 2,5
mg/kg, 3 mg/kg, 5 mg/kg, 7 mg/kg, 10 mg/kg, 15 mg/kg, 20 mg/kg, 25
mg/kg, 30 mg/kg, 35 mg/kg, 40 mg/kg, 45 mg/kg ó 50 mg/kg, en las
que esta dosis del anticuerpo anti CD40 antagonista o su fragmento
de unión a antígeno se administra una vez a la semana, una vez cada
dos semanas, una vez cada tres semanas o una vez cada cuatro
semanas, a lo largo de un periodo de tratamiento o para una
duración fija dentro de un periodo de tratamiento. En una de estas
formas de realización, la cantidad total de Proleukin®
IL-2 que se va a administrar a la semana como parte
de un régimen de dosificación de IL-2 constante es
aproximadamente 30,0 MUI y la dosis terapéuticamente eficaz del
anticuerpo anti CD40 antagonista o su fragmento de unión a antígeno
que se va a administrar en combinación con el régimen de
dosificación de IL-2 constante es de aproximadamente
0,5 mg/kg, 1 mg/kg, 5 mg/kg, 7 mg/kg, 10 mg/kg, 15 mg/kg, 20 mg/kg,
25 mg/kg, 30 mg/kg, o 35 mg/kg, en las que esta dosis del anticuerpo
anti CD40 antagonista o su fragmento de unión a antígeno se
administra una vez a la semana, una vez cada dos semanas, una vez
cada tres semanas o una vez cada cuatro semanas, a lo largo de un
periodo de tratamiento o para una duración fija dentro de un
periodo de tratamiento. En formas de realización preferidas, esta
dosis semanal total de 30,0 MUI de Proleukin® IL-2
se reparte en dos o tres dosis equivalentes que se administran de
acuerdo con un programa de dosificación de dos o tres veces a la
semana, respectivamente. De esta manera, las dos dosis equivalentes
de esta fuente de IL-2 que se va a administrar
durante cada semana del régimen de dosificación de
IL-2 constante sería 15,0 MUI y las tres dosis
equivalentes de esta fuente de IL-2 que se va a
administrar durante cada semana del régimen de dosificación de
IL-2 constante sería 10,0 MUI.
En otras formas de realización más, la cantidad
total de Proleukin® IL-2 que se va a administrar a
la semana como parte de un régimen de dosificación de
IL-2 constante es aproximadamente 18,0 MUI, 20 MUI,
22,0 MUI, 24,0 MUI, 26,0 MUI, 28,0 MUI ó 30,0 MUI, y la dosis
terapéuticamente eficaz del anticuerpo anti CD40 antagonista o su
fragmento de unión a antígeno que se va a administrar en combinación
con el régimen de dosificación de IL-2 constante es
de aproximadamente 0,5 mg/kg, 1 mg/kg, 1,5 mg/kg, 2 mg/kg, 2,5
mg/kg, 3 mg/kg, 5 mg/kg, 7 mg/kg, 10 mg/kg, 15 mg/kg, 20 mg/kg, 25
mg/kg, 30 mg/kg, 35 mg/kg, 40 mg/kg, 45 35 mg/kg ó 50 mg/kg, en las
que esta dosis del anticuerpo anti CD40 antagonista o su fragmento
de unión a antígeno se administra una vez a la semana, una vez cada
dos semanas, una vez cada tres semanas o una vez cada cuatro
semanas, a lo largo de un periodo de tratamiento o para una
duración fija dentro de un periodo de tratamiento. En una de estas
formas de realización, la cantidad total de Proleukin®
IL-2 que se va a administrar a la semana como parte
de un régimen de dosificación de IL-2 constante es
aproximadamente 18,0 MUI y la dosis terapéuticamente eficaz del
anticuerpo anti CD40 antagonista o su fragmento de unión a antígeno
que se va a administrar en combinación con el régimen de
dosificación de IL-2 constante es de aproximadamente
0,5 mg/kg, 1 mg/kg, 5 mg/kg, 7 mg/kg, 10 mg/kg, 15 mg/kg, 20 mg/kg,
25 mg/kg, 30 mg/kg ó 35 mg/kg, en las que esta dosis del anticuerpo
anti CD40 antagonista o su fragmento de unión a antígeno se
administra una vez a la semana, una vez cada dos semanas, una vez
cada tres semanas o una vez cada cuatro semanas, a lo largo de un
periodo de tratamiento o para una duración fija dentro de un
periodo de tratamiento. En formas de realización preferidas, esta
dosis semanal total de 18,0 MUI de Proleukin® IL-2
se reparte en dos o tres dosis equivalentes que se administran de
acuerdo con un programa de dosificación de dos o tres veces a la
semana, respectivamente. De esta manera, las dos dosis equivalentes
de esta fuente de IL-2 que se va a administrar
durante cada semana del régimen de dosificación de
IL-2 constante sería 9,0 MUI y las tres dosis
equivalentes de esta fuente de IL-2 que se va a
administrar durante cada semana del régimen de dosificación de
IL-2 constante sería 6,0 MUI.
Cuando Proleukin® IL-2 se va a
administrar de acuerdo con un régimen de dosificación de
IL-2 de dos niveles en combinación con la terapia
con anticuerpo anti CD40 antagonista, la dosis semanal total mayor
de esta IL-2 de referencia convencional que se
administra durante el primer periodo de tiempo de este régimen de
dosificación de IL-2 es de aproximadamente 30,0 MUI
a aproximadamente 54,0 MUI y la dosis semanal total menor que se
administra durante el segundo periodo de tiempo de este régimen de
dosificación de IL-2 es de aproximadamente 18,0 MUI
a aproximadamente 39,0 MUI. Como se ha indicado anteriormente, la
dosis semanal total administrada durante el primer periodo de tiempo
del régimen de dosificación de IL-2 de dos niveles,
por ejemplo durante la primera mitad de este régimen de
dosificación, siempre es mayor que la dosis semanal total
administrada durante el segundo periodo de tiempo del régimen de
dosificación de IL-2 de dos
\hbox{niveles, por ejemplo durante la segunda mitad de este régimen de dosificación.}
Por tanto, en algunas formas de realización, la
dosis semanal total mayor de Proleukin® IL-2 que se
administra durante el primer periodo de tiempo de este régimen de
dosificación de IL-2 de dos niveles es de
aproximadamente 30,0 MUI a aproximadamente 54,0 MUI, incluidas
aproximadamente 30,0 MUI, 32,0 MUI, 35,0 MUI, 37,0 MUI, 40,0 MUI,
42,0 MUI, 45,0 MUI, 47,0 MUI, 50,0 MUI, 52,0 MUI ó 54,0 MUI, y otros
valores similares que entran dentro de este intervalo de
dosificación mayor; y la dosis semanal total menor de Proleukin®
IL-2 es de aproximadamente 18,0 MUI a
aproximadamente 39,0 MUI, incluidas 18,0 MUI, 20,0 MUI, 23,0 MUI,
25,0 MUI, 27,0 MUI, 30,0 MUI, 32 MUI, 35,0 MUI, 37,0 MUI ó 39,0
MUI, y otros valores similares que entran dentro de este intervalo
de dosificación menor.
Como se ha indicado anteriormente, la dosis
semanal total de IL-2 durante el primero y el
segundo periodos de tiempo de un régimen de dosificación de
IL-2 de dos niveles se administra en forma de una
dosis única o se reparte en una serie de dosis equivalentes que se
administran de acuerdo con un régimen de dosificación de dos, tres,
cuatro, cinco, seis o siete veces a la semana. Por tanto, por
ejemplo, cuando la dosis semanal total de Proleukin®
IL-2 durante el primer periodo del régimen de
dosificación de IL-2 de dos niveles es 42,0 MUI,
las tres dosis equivalentes de IL-2 de referencia
convencional que se va a administrar durante cada semana sería 14,0
MUI y las dos dosis equivalentes de esta IL-2 de
referencia convencional que se va a administrar durante cada semana
sería 21,0 MUI. De forma similar, cuando la dosis semanal total de
Proleukin® IL-2 durante el segundo periodo del
régimen de dosificación de IL-2 de dos niveles es
30,0 MUI, las tres dosis equivalentes de IL-2 de
referencia convencional que se va a administrar durante cada semana
sería 10,0 MUI y las dos dosis equivalentes de esta
IL-2 de referencia convencional que se va a
administrar durante cada semana sería 15,0 MUI.
De acuerdo con los procedimientos divulgados en
el presente documento, al sujeto se administra este régimen de
dosificación de IL-2 de dos niveles en combinación
con dosis terapéuticamente eficaces del anticuerpo anti CD40
antagonista, o su fragmento de unión a antígeno, en el que la dosis
terapéuticamente eficaz del anticuerpo o de su fragmento de unión a
antígeno se administra una vez a la semana, una vez cada dos
semanas, una vez cada tres semanas o una vez cada cuatro semanas a
lo largo de un periodo de tratamiento o para una duración fija
dentro de un periodo de tratamiento. La dosis terapéuticamente
eficaz de un anticuerpo anti CD40, o de su fragmento de unión a
antígeno, que se va a administrar está en el intervalo desde
aproximadamente 0,003 mg/kg hasta aproximadamente 50 mg/kg,
incluido de aproximadamente 0,1 mg/kg a aproximadamente 30 mg/kg.
Por tanto, por ejemplo, en algunas formas de realización, la dosis
terapéuticamente eficaz del anticuerpo anti CD40, o de su fragmento
de unión a antígeno, es de aproximadamente 0,003 mg/kg, 0,01 mg/kg,
0,03 mg/kg, 0,1 mg/kg, 0,3 mg/kg, 0,5 mg/kg, 1 mg/kg, 1,5 mg/kg, 2
mg/kg, 2,5 mg/kg, 3 mg/kg, 5 mg/kg, 7 mg/kg, 10 mg/kg, 15 mg/kg, 20
mg/kg, 25 mg/kg, 30 mg/kg, 35 mg/kg, 40 mg/kg, 45 mg/kg, 50 mg/kg, u
otras dosis que entran dentro del intervalo de aproximadamente
0,003 mg/kg a aproximadamente 50 mg/kg.
En una forma de realización, las dosis
terapéuticamente eficaces del anticuerpo anti CD40 antagonista, o su
fragmento de unión a antígeno, como se ha indicado en lo que
antecede, se administran una vez a la semana, una vez cada dos
semanas, una vez cada tres semanas o una vez cada cuatro semanas a
lo largo de un periodo de tratamiento o para una duración fija
dentro de un periodo de tratamiento, y el régimen de dosificación
de IL-2 de dos niveles que se debe administrar en
combinación con este régimen de dosificación del anticuerpo anti
CD40 antagonista tiene una duración combinada de 4 semanas a 8
semanas, en la que la dosis semanal total mayor de Proleukin®
IL-2 que se administra durante el primer periodo de
tiempo del régimen de dosificación de IL-2 de dos
niveles es de aproximadamente 30,0 MUI a aproximadamente 54,0 MUI,
tal como 30,0 MUI, 32,0 MUI, 34,0 MUI, 36,0 MUI, 38,0 MUI 40,0 MUI,
42,0 MUI, 45,0 MUI, 47,0 MUI, 50,0 MUI, 52,0 MUI, o 54,0 MUI, y la
dosis semanal total menor de Proleukin® IL-2 que se
administra durante el segundo periodo de tiempo del régimen de
dosificación de IL-2 de dos niveles es de
aproximadamente 18,0 MUI a aproximadamente 39,0 MUI, tales como
18,0, 20,0, 22,0, 24,0, 26,0, 28,0, 30,0 MUI, 32,0 MUI, 35,0 MUI,
37,0 MUI, o 39,0 MUI. En una forma de realización tal, la dosis
semanal total mayor de Proleukin® IL-2 que se
administra durante el primer periodo de tiempo del régimen de
dosificación de IL-2 de dos niveles es 42,0 MUI y la
dosis semanal total menor de Proleukin® IL-2 que se
administra durante el segundo periodo de tiempo del régimen de
dosificación de IL-2 de dos niveles es 30,0
MUI.
Por tanto, por ejemplo, en algunas formas de
realización, el sujeto se somete a terapia concurrente con
administración semanal del anticuerpo anti CD40 antagonista, o su
fragmento de unión a antígeno, y un régimen de dosificación de
IL-2 de dos niveles que tiene una duración combinada
de 8 semanas. Para esta forma de realización concreta, la
dosificación de IL-2 comienza el día 1 de la semana
2 (es decir, el día 8 tras la primera dosificación con el
anticuerpo anti CD40 antagonista, o su fragmento de unión a
antígeno, el día 1 de este periodo de tratamiento. De este modo, la
dosis semanal total de Proleukin® IL-2 que se va a
administrar durante las semanas 2-5 del periodo de
tratamiento está en el intervalo de aproximadamente 30,0 MUI a
aproximadamente 54,0 MUI, tal como 30,0 MUI, 32,0 MUI, 35,0 MUI,
37,0 MUI, 40,0 MUI, 42,0 MUI, 45,0 MUI, 47,0 MUI, 50,0 MUI, 52,0
MUI, o 54,0 MUI, u otros valores tales que entran dentro de este
intervalo de dosis mayor. En esta forma de realización, la dosis
semanal total de Proleukin® IL-2 que se va a
administrar durante las semanas 6-9 del periodo de
tratamiento está en el intervalo de aproximadamente 18,0 MUI a
aproximadamente 39,0 MUI, tales como 18,0, 20,0, 22,0, 24,0, 26,0,
28,0, 30,0 MUI, 32,0 MUI, 35,0 MUI, 37,0 MUI, o 39,0 MUI, u otros
valores tales que entran dentro de este intervalo. Como se ha
indicado previamente, la dosis semanal total que se va a administrar
durante el primero y el segundo periodo del régimen de dosificación
de IL-2 de dos niveles se escoge de entre estos
intervalos de modo que una dosis semanal total mayor se administra
durante el primer periodo del régimen de dosificación de
IL-2 de dos niveles (por ejemplo, las semanas
2-5 de un periodo de tratamiento de 9 semanas) y
una dosis semanal total menor se administra durante el segundo
periodo del régimen de dosificación de IL-2 de dos
niveles (por ejemplo, las semanas 6-9 del mismo
periodo de tratamiento de 9 semanas). Por tanto, por ejemplo,
cuando la dosis semanal total de IL-2 durante el
primer periodo del régimen de dosificación de IL-2
de dos niveles es de aproximadamente 42,0 MUI a aproximadamente 54,0
MUI, la dosis semanal total de Proleukin® IL-2
durante el segundo periodo de la dosificación de
IL-2 entra, preferentemente, dentro del intervalo de
aproximadamente 18,0 MUI a aproximadamente 39,0 MUI.
Por tanto, cuando la duración de un periodo de
tratamiento con la terapia concurrente con dosificación semanal del
anticuerpo anti CD40 antagonista y con un del régimen de
dosificación de IL-2 de dos niveles es de
aproximadamente 9 semanas, en una forma de realización la dosis
semanal total de Proleukin® IL-2 durante las semanas
2-5 del periodo de tratamiento es de
aproximadamente 30,0 MUI a aproximadamente 54,0 MUI o de
aproximadamente 30,0 MUI a aproximadamente 42,0 MUI, y la dosis
semanal total de Proleukin® IL-2 durante las semanas
6-9 del periodo de tratamiento es de
aproximadamente 18,0 MUI a aproximadamente 30,0 MUI.
En una forma de realización la dosis semanal
total de Proleukin® IL-2 durante las semanas
2-5 es de aproximadamente 42,0 MUI, y dosis semanal
total de Proleukin® IL-2 durante las semanas
6-9 es de aproximadamente 30,0 MUI. En esta forma
de realización, cada una de las dosis semanales totales mayor y
menor de Proleukin® IL-2 se reparte en dos dosis
equivalentes que se administran de acuerdo con un régimen de
dosificación de dos veces a la semana, en el que las dos dosis
equivalentes se administran al sujeto dentro de un periodo de 7
días, permitiendo un mínimo de 72 horas entre dosis y un máximo de
96 horas entre dosis. En una forma de realización alternativa, cada
una de las dosis semanales totales mayor y menor de Proleukin®
IL-2 se reparte en tres dosis equivalentes que se
administran de acuerdo con un régimen de dosificación de tres veces
a la semana, en el que las tres dosis equivalentes se administran
al sujeto dentro de un periodo de 7 días, permitiendo un mínimo de
25 horas entre dosis y un máximo de 72 horas entre dosis. Como se ha
indicado en lo que antecede, la dosis terapéuticamente eficaz del
anticuerpo anti CD40 antagonista o su fragmento de unión a antígeno
que se va a administrar en combinación con el régimen de
dosificación de IL-2 de dos niveles es de
aproximadamente 0,003 mg/kg, 0,01 mg/kg, 0,03 mg/kg, 0,1 mg/kg, 0,3
mg/kg, 0,5 mg/kg, 1 mg/kg, 1,5 mg/kg, 2 mg/kg, 2,5 mg/kg, 3 mg/kg,
5 mg/kg, 7 mg/kg, 10 mg/kg, 15 mg/kg, 20 mg/kg, 25 mg/kg, 30 mg/kg,
35 mg/kg, 40 mg/kg, 45 mg/kg, 50 mg/kg, u otras de tales dosis que
entran dentro del intervalo de aproximadamente 0,003 mg/kg a
aproximadamente 50 mg/kg, cuando esta dosis del anticuerpo anti
CD40 antagonista o su fragmento de unión a antígeno se administra
semanalmente, bien a lo largo del periodo de tratamiento o para una
duración fija de 4 semanas a 8 semanas dentro del periodo de
tratamiento. En una forma de realización alternativa, esta dosis
terapéuticamente eficaz del anticuerpo anti CD40 antagonista o su
fragmento de unión a antígeno se administra una vez cada dos
semanas, una vez cada tres semanas o una vez cada cuatro semanas, a
lo largo del periodo de tratamiento, o se administra una vez cada
dos semanas para una duración fija de 4 semanas a 8 semanas dentro
del periodo de tratamiento, en el que también se administra al
sujeto el régimen de dosificación de IL-2 de dos
niveles descrito en lo que antecede.
Las dosis semanales totales anteriores de
Proleukin® IL-2 se expresan en términos de MUI, que
representan las cantidades totales o las dosis absolutas que se van
a administrar a un sujeto humano semanalmente. La dosis semanal
total relativa correspondiente de Proleukin® IL-2
que se va a administrar a una persona se puede calcular con
facilidad. La persona media tiene un área de superficie corporal de
aproximadamente 1,7 m^{2}. Por tanto, cuando la dosis semanal
total absoluta de Proleukin® IL-2 que se va a
administrar es de aproximadamente 42,0 MUI a aproximadamente 54,0
MUI, la dosis semanal total relativa correspondiente de Proleukin®
IL-2 es de aproximadamente 24,7 MUI/m^{2} a
aproximadamente 31,8 MUI/m^{2}. De forma similar, cuando la dosis
semanal total absoluta es de aproximadamente 30,0 MUI a
aproximadamente 42,0 MUI, la dosis semanal total relativa
correspondiente es de aproximadamente 17,6 MUI/m^{2} a
aproximadamente 24,7 MUI/m^{2} Cuando la dosis semanal total
absoluta es de aproximadamente 18,0 MUI a aproximadamente 30,0 MUI,
la dosis semanal total relativa correspondiente es de
aproximadamente 10,6 MUI/m^{2} a aproximadamente 17,6
MUI/m^{2}
La unidad internacional (UI) para la actividad
biológica la estableció en 1988 la Organización Mundial de la Salud
(OMS) en International Laboratory for Biological Standards. Los
materiales de referencia biológica de IL-2
proporcionados por el National Institute for Biological Standards
and Control (NIBSC), que pertenece a la OMS, tienen 100 unidades
internacionales por ampolla de IL-2 humana nativa
derivada de células Jurkat. La actividad de un producto de
IL-2 se puede medir contra este patrón internacional
en un ensayo de potencia in vitro mediante proliferación de
células HT-2. Por tanto, por ejemplo, la Proleukin®
IL-2 tiene una actividad biológica de
aproximadamente 16,36 MUI por mg de este producto de
IL-2 según se determina mediante el ensayo de
proliferación de células HT-2 (véase, por ejemplo,
Gearing y Thorpe (1988) J. Immunological Methods
114:3-9; Nakanishi y col. (1984) J. Exp. Med.
160(6): 1605-1621). El resto activo usado en
este producto es la muteína de IL-2 humana
recombinante aldesleukina (denominada interleucina-2
humana des-alanil-1,
serina-125; véase la patente de EE.UU. nº
4.931.543). Usando esta información se puede calcular la dosis
absoluta terapéuticamente eficaz recomendada de Proleukin®
IL-2 en microgramos.
Por tanto, cuando la dosis semanal total
absoluta de Proleukin® IL-2 es de aproximadamente
18,0 MUI a aproximadamente 54,0 MUI, la dosis semanal total
absoluta correspondiente de Proleukin® IL 2 en microgramos es de
1100 \mug a aproximadamente 3300 \mug de este producto. De
forma similar, cuando la dosis semanal total absoluta en MUI es de
aproximadamente 18,0 MUI a aproximadamente 30,0 MUI, la dosis
semanal total absoluta correspondiente de Proleukin®
IL-2 en \mug es de aproximadamente 1100 \mug a
aproximadamente 1834 \mug. Cuando la dosis semanal total absoluta
de Proleukin® IL-2 en MUI es de aproximadamente 30,0
MUI a aproximadamente 42,0 MUI, la dosis semanal total absoluta
correspondiente en \mug es de aproximadamente 1833 \mug a
aproximadamente 2567 \mug. Por tanto, dada una semanal total
absoluta correspondiente de Proleukin® IL-2
expresada en MUI, un experto en la técnica puede computar la dosis
semanal total absoluta correspondiente expresada en \mug de este
producto de IL-2 concreto.
Para los fines de describir esta invención, las
dosis se IL-2 se han presentado usando Proleukin®
IL-2 como la IL-2 de referencia
convencional. Un experto en la técnica puede determinar fácilmente
que las dosis correspondientes serían para diferentes formulaciones
de aldesleukina y vías de administración usando un factor de
conversión basado en datos farmacocinéticos (PK) comparativos y la
curva de tiempo-concentración sérica (AUC) para los
datos PK recogidos durante un periodo de 24 horas para Proleukin®
IL-2. Usando los datos PK, se determinó la
exposición a IL-2 en sujetos humanos a los que se
administró una dosis única de la IL-2 de referencia
convencional. Estos sujetos se seleccionaron de modo que no habían
recibido terapia IL-2 exógena previa (es decir,
estos sujetos no habían recibido antes IL-2). Por
"terapia IL-2 exógena" se entiende cualquier
intervención mediante la cual un sujeto ha estado expuesto a una
fuente exógena de IL-2, en oposición a la exposición
que se produce con la producción del cuerpo de IL-2
natura. Algunos de estos sujetos habían recibido una dosis única de
4,5 MUI de la IL-2 de referencia convencional,
mientras que otros habían recibido una dosis única de 7,5 o 18,0 MUI
de la IL-2 de referencia convencional.
Tras la administración de la dosis única de la
IL-2 de referencia convencional, la exposición de
IL-2 en el suero sanguíneo se monitorizó durante
las primeras 10 a 12 horas después de la inyección, después se
extrapoló a 24 horas, y se calculó el área bajo la curva
concentración sérica-tiempo (AUC) resultante para
los datos recogidos durante ese periodo de 24 horas. Esta área bajo
la curva concentración sérica-tiempo se denomina en
el presente documento AUC_{0-24}. Los
procedimientos para medir la exposición de IL-2 de
este modo son bien conocidos en la técnica. Véase, por ejemplo
Gustavson (1998) J Biol. Response Modifiers
1998:440-449; 5 Thompson y col. (1987) Cancer
Research 47:4202-4207; Kirchner y col. (1998) Br. J.
Clin. Pharmacol. 46:5-10; Piscitelli y col. (1996)
Pharmacotherapy 16(5):754-759; y el ejemplo 8
más adelante. Por tanto, para los sujetos que reciben una dosis de
4,5 MUI (275 \mug) de Proleukin® IL-2, el valor de
la AUC_{0-24} fue 51 UI*h/ml (SD= 14); para los
sujetos que reciben una dosis de 7,5 MUI (458 \mug) de Proleukin®
IL-2, el valor de la AUC_{0-24}
fue 79 UI*h/ml (SD= 29); y para los sujetos que reciben una dosis de
18 MUI (1100 \mug) de Proleukin® IL-2, el valor
de la AUC_{0-24} fue 344 UI*h/ml (SD= 127).
Cuando estos datos de la AUC0-24 se determinan para
la IL-2 de referencia convencional, Proleukin®
IL-2, las dosis terapéuticamente eficaces descritas
en el presente documento tienen como resultado una exposición a
IL-2 dentro de un intervalo de aproximadamente 23
UI*h/ml de suero a aproximadamente 598 UI*h/ml de suero (véase el
Ejemplo 8 más adelante).
La suma de las AUC_{0-24}
individuales de dosis individuales comprenderá la
AUC_{0-24} semanal total en dosis individuales
repartidas. Por ejemplo, si una dosis de 18 MUI se administra tres
veces a la semana, la AUC_{0-24} individual se
estima a 344 UI*h/ml y la AUC_{0-24} semanal total
será de 1032 UI*h/ml sobre la base de la suposición lineal de
incremento de la AUC_{0-24} con la dosis tal como
se muestra en la Tabla 1 que figura a continuación.
Asimismo, también se pudo obtener la misma
AUC_{0-24} semanal total de 1032 UI*h/ml mediante
administración de la dosis dos veces a la semana a 27 MUI o
administración de la dosis cinco veces a la semana a aproximadamente
11 MUI.
Para cualquier otra formulación de aldesleukina,
se puede determinar una dosis recomendada comparable para usar en
los procedimientos descritos en el presente documento sobre la base
de estos datos de AUC_{0-24} semanal para
Proleukin®IL-2. De este modo, una dosis única de la
formulación de aldesleukina de interés se administra a un sujeto
humano y el nivel de IL-2 en el suero tras esta
exposición inicial de IL-2 se determina recogiendo
los datos PK y generando una AUC_{0-24} para la
formulación de aldesleukina de interés. Por "exposición inicial a
IL-2" se entiende que el sujeto utilizado para
medir la exposición a IL-2 no ha recibido terapia
previa con una fuente exógena de IL-2 como se ha
indicado en lo que antecede. A continuación, esta
AUC_{0-24} se compara con la
AUC_{0-24} para Proleukin® IL-2
para determinar un factor de conversión que se puede usar para
calcular una dosis de la formulación de aldesleukina de interés que
es comparable a la dosis recomendada para Proleukin®
IL-2. Véanse, por ejemplo, los cálculos para una
formulación representativa de IL-2 monomérica,
L2-7001, que se muestran en el ejemplo 8 más
adelante. Por tanto, para cualquier otra formulación de
aldesleukina usada en los procedimientos descritos en el presente
documento, la dosis semanal total de IL-2 que se va
a administrar durante un régimen de dosificación constante de
IL-2, o durante un régimen de dosificación de
IL-2 de dos niveles, está en una cantidad
equivalente a la dosis semanal total recomendada de la
IL-2 de referencia convencional, es decir Proleukin®
IL-2, tal como se determina con el área bajo la
curva concentración sérica-tiempo procedente de
datos PK humanos.
Variantes biológicamente activas de
IL-2 pueden tener alterada la actividad biológica
intrínseca. Para estimar la dosis de una variante de
IL-2 aparte de la aldesleukina o la dosis de
IL-2 de secuencia nativa que será comparable a las
dosis de aldesleukina divulgadas en el presente documento, la
actividad biológica relativa de la variante de IL-2
o la IL-2 de secuencia nativa se determinará
analizando su efecto biológico.
La actividad biológica relevante de una
IL-2 o su variante de acuerdo con la presente
invención es la capacidad para activar y/o conseguir expansión de
células NK humanas para mediar la actividad asesina activada por
linfocinas (LAK) y la citotoxicidad celular dependiente de
anticuerpos (ADCC). Tal actividad se mide usando un ensayo
convencional como el descrito en Nagler y col. (1989) J. Immunol.
143:3183-3191. Para determinar las dosis adecuadas
de variantes de IL-2 que no son aldesleukina o dosis
adecuadas de IL-2 de secuencia nativa se administran
una serie de dosis de la molécula de IL-2 de
interés (es decir, una variante de IL-2 distinta a
la aldesleukina o a la IL-2 de secuencia nativa) a
sujetos humanos mediante la misma vía de administración y en los
PBMC (células mononuclearas de sangre periférica) recién aislados
de los sujetos se analiza la citotoxicidad NK contra las células
K562, tal como describen, por ejemplo, Nagler y col. (1989)
ant.). El efecto estimulador de NK de la molécula de
IL-2 que se está analizando se compara con el de la
IL-2 de referencia convencional (Es decir,
aldesleukina tal como está formulada en Proleukin®) cuando se
administra en las mismas cantidades de \mug por la misma vía de
administración usando el mismo procedimiento descrito para la
IL-2 que se está analizando. Como alternativa se
podrían determinar dosis adecuadas in vitro usando PBMC
humanos no tratados sometidos a una serie de dosis de la molécula
de IL-2 de interés. La molécula de
IL-2 de interés (es decir, una variante de
IL-2 distinta a aldesleukina o a la
IL-2 de secuencia nativa) tendrán una potencia
estimuladora de células NK (es decir, actividad) que es,
preferentemente, al menos el 100% de la de la misma cantidad de la
IL-2 de referencia convencional (es decir,
aldesleukina como está formulada en Proleukin®), o el
95%,90%,80%,70%, o 60% de la de la misma cantidad de la
IL-2 de referencia convencional. La variante de
IL-2 deberá ser sustancialmente biológicamente
activa, definida como que posee al menos un 50% de la actividad
estimuladora de NK de la misma dosis de la IL-2 de
referencia convencional administrada por la misma vía.
Por tanto, cuando un sujeto va a recibir terapia
de combinación con anticuerpo anti CD40 antagonista y un régimen de
dosificación constante de IL-2, la dosis semanal
total de cualquier IL-2 o su variante biológicamente
activa es una cantidad equivalente a una dosis semanal total de la
IL-2 de referencia convencional (es decir,
aldesleukina como está formulada en Proleukin®) en el intervalo de
aproximadamente 1100 \mug (es decir, 18,0 MUI) a aproximadamente
3300 \mug (es decir, aproximadamente 54,0 MUI), preferentemente en
el intervalo de aproximadamente 1100 \mug a aproximadamente 2567
\mug (es decir, aproximadamente 42,0 MUI), en la que la dosis
semanal total de la IL-2 o su variante
biológicamente activa es una cantidad que proporciona al menos un
50% de la actividad estimuladora de NK de la dosis semanal total de
la IL-2 de referencia convencional (es decir,
aldesleukina como está formulada en Proleukin®).
En algunas formas de realización, la dosis
semanal total de la IL-2 o su variante
biológicamente activa que se va a administrar en el régimen de
dosificación constante de IL-2 es una cantidad que
proporciona al menos un 60% de la actividad estimuladora de NK de
una dosis semanal total de la IL-2 de referencia
convencional en el intervalo de aproximadamente 1100 \mug a
aproximadamente 3300 \mug, por ejemplo al menos un 60% de la
actividad estimuladora de NK de una dosis semanal total de la
IL-2 de referencia convencional administrada a
aproximadamente 1100 \mug (18,0 MUI), 1222 \mug (20,0 MUI), 1345
\mug (22,0 MUI), 1467 \mug (24,0 MUI), 1589 \mug (26,0 MUI),
1711 \mug (28,0 MUI), 1834 \mug (30,0 MUI), 1956 \mug (32,0
MUI), 2078 \mug (34,0 MUI), 2200 \mug (36,0 MUI), 2323 \mug
(38,0 MUI), 2445 \mug (40,0 MUI), 2567 \mug (42,0 MUI), 2689
\mug (44,0 MUI), 2812 \mug (46., MUI), 2934 \mug (48,0 MUI),
3056 \mug (50,0 MUI), 3178 \mug (52,0 MUI), o 3300 \mug (54,0
MUI). En otras formas de realización, la dosis semanal total de la
IL-2 o su variante biológicamente activa que se va a
administrar en el régimen de dosificación constante de
IL-2 es una cantidad que proporciona al menos un 70%
de la actividad estimuladora de NK de una dosis semanal total de la
IL-2 de referencia convencional en el intervalo de
aproximadamente 1100 \mug a aproximadamente 3300 \mug, por
ejemplo al menos un 70% de la actividad estimuladora de NK de una
dosis semanal total de la IL-2 de referencia
convencional administrada a aproximadamente 1100 \mug (18,0 MUI),
1222 \mug (20,0 MUI), 1345 \mug (22,0 MUI), 1467 \mug (24,0
MUI), 1589 \mug (26,0 MUI), 1711 \mug (28,0 MUI), 1834 \mug
(30,0 MUI), 1956 \mug (32,0 MUI), 2078 \mug (34,0 MUI), 2200
\mug (36,0 MUI), 2323 \mug (38,0 MUI), 2445 \mug (40,0 MUI),
2567 \mug (42,0 MUI), 2689 \mug (44,0 MUI), 2812 \mug (46.,
MUI), 2934 \mug (48,0 MUI), 3056 \mug (50,0 MUI), 3178 \mug
(52,0 MUI), o 3300 \mug (54,0 MUI).
En algunas formas de realización, la dosis
semanal total de la IL-2 o su variante
biológicamente activa que se va a administrar en el régimen de
dosificación constante de IL-2 es una cantidad que
proporciona al menos un 80% de la actividad estimuladora de NK de
una dosis semanal total de la IL-2 de referencia
convencional en el intervalo de aproximadamente 1100 \mug a
aproximadamente 3300 \mug, por ejemplo al menos un 80% de la
actividad estimuladora de NK de una dosis semanal total de la
IL-2 de referencia convencional administrada a
aproximadamente 1100 \mug (18,0 MUI), 1222 \mug (20,0 MUI), 1345
\mug (22,0 MUI), 1467 \mug (24,0 MUI), 1589 \mug (26,0 MUI),
1711 \mug (28,0 MUI), 1834 \mug (30,0 MUI), 1956 \mug (32,0
MUI), 2078 \mug (34,0 MUI), 2200 \mug (36,0 MUI), 2323 \mug
(38,0 MUI), 2445 \mug (40,0 MUI), 2567 \mug (42,0 MUI), 2689
\mug (44,0 MUI), 2812 \mug (46., MUI), 2934 \mug (48,0 MUI),
3056 \mug (50,0 MUI), 3178 \mug (52,0 MUI), o 3300 \mug (54,0
MUI). En formas de realización alternativas, la dosis semanal total
de la IL-2 o su variante biológicamente activa que
se va a administrar en el régimen de dosificación constante de
IL-2 es una cantidad que proporciona al menos un 90%
de la actividad estimuladora de NK de una dosis semanal total de la
IL-2 de referencia convencional en el intervalo de
aproximadamente 1100 \mug a aproximadamente 3300 \mug, por
ejemplo al menos un 90% de la actividad estimuladora de NK de una
dosis semanal total de la IL-2 de referencia
convencional administrada a aproximadamente 1100 \mug (18,0 MUI),
1222 \mug (20,0 MUI), 1345 \mug (22,0 MUI), 1467 \mug (24,0
MUI), 1589 \mug (26,0 MUI), 1711 \mug (28,0 MUI), 1834 \mug
(30,0 MUI), 1956 \mug (32,0 MUI), 2078 \mug (34,0 MUI), 2200
\mug (36,0 MUI), 2323 \mug (38,0 MUI), 2445 \mug (40,0 MUI),
2567 \mug (42,0 MUI), 2689 \mug (44,0 MUI), 2812 \mug (46.,
MUI), 2934 \mug (48,0 MUI), 3056 \mug (50,0 MUI), 3178 \mug
(52,0 MUI), o 3300 \mug (54,0 MUI).
En otras formas de realización más, la dosis
semanal total de la IL-2 o su variante
biológicamente activa que se va a administrar en el régimen de
dosificación constante de IL-2 es una cantidad que
proporciona al menos un 95% de la actividad estimuladora de NK de
una dosis semanal total de la IL-2 de referencia
convencional en el intervalo de aproximadamente 1100 \mug a
aproximadamente 3300 \mug, por ejemplo al menos un 95% de la
actividad estimuladora de NK de una dosis semanal total de la
IL-2 de referencia convencional administrada a
aproximadamente 1100 \mug (18,0 MUI), 1222 \mug (20,0 MUI), 1345
\mug (22,0 MUI), 1467 \mug (24,0 MUI), 1589 \mug (26,0 MUI),
1711 \mug (28,0 MUI), 1834 \mug (30,0 MUI), 1956 \mug (32,0
MUI), 2078 \mug (34,0 MUI), 2200 \mug (36,0 MUI), 2323 \mug
(38,0 MUI), 2445 \mug (40,0 MUI), 2567 \mug (42,0 MUI), 2689
\mug (44,0 MUI), 2812 \mug (46., MUI), 2934 \mug (48,0 MUI),
3056 \mug (50,0 MUI), 3178 \mug (52,0 MUI), o 3300 \mug (54,0
MUI).
En algunas formas de realización, la dosis
semanal total de la IL-2 o su variante
biológicamente activa que se va a administrar en el régimen de
dosificación constante de IL-2 es una cantidad que
proporciona un 100% de la actividad estimuladora de NK de una dosis
semanal total de la IL-2 de referencia convencional
en el intervalo de aproximadamente 1100 \mug a aproximadamente
3300 \mug, por ejemplo un 100% de la actividad estimuladora de NK
de una dosis semanal total de la IL-2 de referencia
convencional administrada a aproximadamente 1100 \mug (18,0 MUI),
0,1222 \mug (20,0 MUI), 1345 \mug (22,0 MUI), 1467 \mug (24,0
MUI), 1589 \mug (26,0 MUI), 1711 \mug (28,0 MUI), 1834 \mug
(30,0 MUI), 1956 \mug (32,0 MUI), 2078 \mug (34,0 MUI), 2200
\mug (36,0 MUI), 2323 \mug (38,0 MUI), 2445 \mug (40,0 MUI),
2567 \mug (42,0 MUI), 2689 \mug (44,0 MUI), 2812 \mug (46.,
MUI), 2934 \mug (48,0 MUI), 3056 \mug (50,0 MUI), 3178 \mug
(52,0 MUI), o 3300 \mug (54,0 MUI).
De un modo similar, cuando un sujeto va a
recibir terapia de combinación con anticuerpo anti CD40 antagonista
y un régimen de dosificación de IL-2 de dos niveles,
la dosis semanal total de cualquiera IL-2 o su
variante biológicamente activa que se va a administrar durante el
primer periodo o durante el segundo periodo del régimen de
dosificación de IL-2 de dos niveles se puede
expresar en forma de una cantidad equivalente a la dosis semanal
total de la IL-2 de referencia convencional que se
administra durante el régimen de dosificación de
IL-2 de dos niveles. Por tanto, la dosis semanal
total de cualquiera IL-2 o su variante
biológicamente activa que se va a administrar durante el primer
periodo del régimen de dosificación de IL-2 de dos
niveles es una cantidad equivalente a una dosis semanal total de la
IL-2 de referencia convencional (es decir
aldesleukina como está formulada en Proleukin®) en el intervalo de
aproximadamente 1834 \mug (es decir, 30,0 MUI) a aproximadamente
3300 \mug (es decir, 54,0 MUI), en la que la dosis semanal total
de la IL-2 o su variante biológicamente activa es
una cantidad que proporciona al menos un 50% de la actividad
estimuladora de NK de la dosis semanal total de la
IL-2 de referencia convencional (es decir,
aldesleukina como está formulada en Proleukin®). De forma similar,
la dosis semanal total de cualquiera IL-2 o su
variante biológicamente activa que se va a administrar durante el
segundo periodo del régimen de dosificación de IL-2
de dos niveles es una cantidad equivalente a una dosis semanal
total de la IL-2 de referencia convencional (es
decir, aldesleukina como está formulada en Proleukin®) en el
intervalo de aproximadamente 1100 \mug (es decir, 18,0 MUI) a
aproximadamente 2384 \mug (es decir, 39,0 MUI), en la que la
dosis semanal total de la IL2 o su variante biológicamente activa
es una cantidad que proporciona al menos un 50% de la actividad
estimuladora de NK de la dosis semanal total de la
IL-2 de referencia convencional (es decir,
aldesleukina como está formulada en Proleukin®). Como se ha
indicado anteriormente, la dosis semanal total administrada durante
el primer periodo de tiempo del régimen de dosificación de
IL-2 de dos niveles, por ejemplo durante la primera
mitad de este régimen de dosificación, siempre es mayor que la
dosis semanal total administrada durante el segundo periodo de
tiempo del régimen de dosificación de IL-2 de dos
niveles, por ejemplo durante la segunda mitad de este régimen de
dosificación.
Por tanto, en algunas formas de realización, la
dosis semanal total de la IL-2 o su variante
biológicamente activa que se va a administrar en el primer periodo
del régimen de dosificación constante de IL-2 es una
cantidad que proporciona al menos un 60% de la actividad
estimuladora de NK de una dosis semanal total de la
IL-2 de referencia convencional administrada en el
intervalo de aproximadamente 1834 \mug (es decir, 30,0 MUI) a
aproximadamente 3300 \mug (es decir, aproximadamente 54,0 UMI),
por ejemplo al menos un 60% de la actividad estimuladora de NK de
una dosis semanal total de la IL-2 de referencia
convencional administrada a aproximadamente 1834 \mug (30,0 MUI),
1956 \mug (32,0 MUI), 2078 \mug (34,0 MUI), 2200 \mug (36,0
MUI), 2323 \mug (38,0 MUI), 2445 \mug (40,0 MUI), 2567 \mug
(42,0 MUI), 2689 \mug (44,0 MUI), 2812 \mug (46,0 MUI), 2934
\mug (48,0 MUI), 3056 \mug (50,0 MUI), 3178 \mug (52,0 MUI) o
3300 \mug (54,0 MUI). Para estas formas de realización, la dosis
semanal total de la IL-2 o su variante
biológicamente activa que se va a administrar en el segundo periodo
del régimen de dosificación de IL-2 de dos niveles
es una cantidad que proporciona al menos un 60% de la actividad
estimuladora de NK de una dosis semanal total de la
IL-2 de referencia convencional administrada en el
intervalo de aproximadamente 1100 \mug (es decir, 18,0 MUI) a
aproximadamente 2384 \mug (es decir, aproximadamente 39,0 UMI),
por ejemplo al menos un 60% de la actividad estimuladora de NK de
una dosis semanal total de la IL-2 de referencia
convencional administrada a aproximadamente 1100 \mug (18,0 MUI),
1222 \mug (20,0 MUI), 1406 \mug (23,0 MUI), 1528 \mug (25,0
MUI), 1650 \mug (27,0 MUI), 1834 \mug (30,0 MUI), 1956 \mug
(32 MUI), 2139 \mug (35,0 MUI), 2262 \mug (37,0 MUI) o 2384
\mug (39,0 MUI). Como alternativa, la dosis semanal total de la
IL-2 o su variante biológicamente activa que se va a
administrar en el segundo periodo del régimen de dosificación de
IL-2 de dos niveles es una cantidad que proporciona
al menos un 70%, al menos un 90%, al menos un 95%, o incluso el 100%
de la actividad estimuladora de NK de una dosis semanal total de la
IL-2 de referencia convencional administrada en el
intervalo de aproximadamente 1100 \mug (es decir, 18,0 MUI) a
aproximadamente 2384 \mug (es decir, aproximadamente 39,0 UMI),
por ejemplo al menos un 70%, al menos un 80%, al menos un 90%, al
menos un 95% o incluso el 100% de la actividad estimuladora de NK
de una dosis semanal total de la IL-2 de referencia
convencional administrada a aproximadamente 1100 \mug (18,0 MUI),
1222 \mug (20,0 MUI), 1406 \mug (23,0 MUI), 1528 \mug (25,0
MUI), 1650 \mug (27,0 MUI), 1834 \mug (30,0 MUI), 1956 \mug
(32 MUI), 2139 \mug (35,0 MUI), 2262 \mug (37,0 MUI) o 2384
\mug (39,0 MUI).
En otras formas de realización, la dosis semanal
total de la IL-2 o su variante biológicamente activa
que se va a administrar en el primer periodo del régimen de
dosificación constante de IL-2 es una cantidad que
proporciona al menos un 70% de la actividad estimuladora de NK de
una dosis semanal total de la IL-2 de referencia
convencional administrada en el intervalo de aproximadamente 1834
\mug (es decir, 30,0 MUI) a aproximadamente 3300 \mug (es
decir, aproximadamente 54,0 UMI), por ejemplo al menos un 70% de la
actividad estimuladora de NK de una dosis semanal total de la
IL-2 de referencia convencional administrada a
aproximadamente 1834 \mug (30,0 MUI), 1956 \mug (32,0 MUI),
2078 \mug (34,0 MUI), 2200 \mug (36,0 MUI), 2323 \mug (38,0
MUI), 2445 \mug (40,0 MUI), 2567 \mug (42,0 MUI), 2689 \mug
(44,0 MUI), 2812 \mug (46,0 MUI), 2934 \mug (48,0 MUI), 3056
\mug (50,0 MUI), 3178 \mug (52,0 MUI) o 3300 \mug (54,0 MUI).
Para estas formas de realización, la dosis semanal total de la
IL-2 o su variante biológicamente activa que se va a
administrar en el segundo periodo del régimen de dosificación de
IL-2 de dos niveles es una cantidad que proporciona
al menos un 60% de la actividad estimuladora de NK de una dosis
semanal total de la IL-2 de referencia convencional
administrada en el intervalo de aproximadamente 1100 \mug (es
decir, 18,0 MUI) a aproximadamente 2384 \mug (es decir,
aproximadamente 39,0 UMI), por ejemplo al menos un 60% de la
actividad estimuladora de NK de una dosis semanal total de la
IL-2 de referencia convencional administrada a
aproximadamente 1100 \mug (18,0 MUI), 1222 \mug (20,0 MUI),
1406 \mug (23,0 MUI), 1528 \mug (25,0 MUI), 1650 \mug (27,0
MUI), 1834 \mug (30,0 MUI), 1956 \mug (32 MUI), 2139 \mug
(35,0 MUI), 2262 \mug (37,0 MUI) o 2384 \mu(39,0 MUI).
Como alternativa, la dosis semanal total de la IL-2
o su variante biológicamente activa que se va a administrar en el
segundo periodo del régimen de dosificación de IL-2
de dos niveles es una cantidad que proporciona al menos un 70%, al
menos un 90%, al menos un 95%, o incluso el 100% de la actividad
estimuladora de NK de una dosis semanal total de la
IL-2 de referencia convencional administrada en el
intervalo de aproximadamente 1100 \mug (es decir, 18,0 MUI) a
aproximadamente 2384 \mug (es decir, aproximadamente 39,0 UMI),
por ejemplo al menos un 70%, al menos un 80%, al menos un 90%, al
menos un 95% o incluso el 100% de la actividad estimuladora de NK
de una dosis semanal total de la IL-2 de referencia
convencional administrada a aproximadamente 1100 \mug (18,0 MUI),
1222 \mug (20,0 MUI), 1406 \mug (23,0 MUI), 1528 \mug (25,0
MUI), 1650 \mug (27,0 MUI), 1834 \mug (30,0 MUI), 1956 \mug
(32 MUI), 2139 \mug (35,0 MUI), 2262 \mug (37,0 MUI) o 2384
\mug (39,0 MUI).
En otras formas de realización más, la dosis
semanal total de la IL-2 o su variante
biológicamente activa que se va a administrar en el primer periodo
del régimen de dosificación constante de IL-2 es una
cantidad que proporciona al menos un 80% de la actividad
estimuladora de NK de una dosis semanal total de la
IL-2 de referencia convencional administrada en el
intervalo de aproximadamente 1834 \mug (es decir, 30,0 MUI) a
aproximadamente 3300 \mug (es decir, aproximadamente 54,0 UMI),
por ejemplo al menos un 80% de la actividad estimuladora de NK de
una dosis semanal total de la IL-2 de referencia
convencional administrada a aproximadamente 1834 \mug (30,0 MUI),
1956 \mug (32,0 MUI), 2078 \mug (34,0 MUI), 2200 \mug (36,0
MUI), 2323 \mug (38,0 MUI), 2445 \mug (40,0 MUI), 2567 \mug
(42,0 MUI), 2689 \mug (44,0 MUI), 2812 \mug (46,0 MUI), 2934
\mug (48,0 MUI), 3056 \mug (50,0 MUI), 3178 \mug (52,0 MUI) o
3300 \mug (54,0 MUI). Para estas formas de realización, la dosis
semanal total de la IL-2 o su variante
biológicamente activa que se va a administrar en el segundo periodo
del régimen de dosificación de IL-2 de dos niveles
es una cantidad que proporciona al menos un 60% de la actividad
estimuladora de NK de una dosis semanal total de la
IL-2 de referencia convencional administrada en el
intervalo de aproximadamente 1100 \mug (es decir, 18,0 MUI) a
aproximadamente 2384 \mug (es decir, aproximadamente 39,0 UMI),
por ejemplo al menos un 60% de la actividad estimuladora de NK de
una dosis semanal total de la IL-2 de referencia
convencional administrada a aproximadamente 1100 \mug (18,0 MUI),
1222 \mug (20,0 MUI), 1406 \mug (23,0 MUI), 1528 \mug (25,0
MUI), 1650 \mug (27,0 MUI), 1834 \mug (30,0 MUI), 1956 \mug
(32 MUI), 2139 \mug (35,0 MUI), 2262 \mug (37,0 MUI) o 2384
\mug (39,0 MUI). Como alternativa, la dosis semanal total de la
IL-2 o su variante biológicamente activa que se va a
administrar en el segundo periodo del régimen de dosificación de
IL-2 de dos niveles es una cantidad que proporciona
al menos un 70%, al menos un 90%, al menos un 95%, o incluso el 100%
de la actividad estimuladora de NK de una dosis semanal total de la
IL-2 de referencia convencional administrada en el
intervalo de aproximadamente 1100 \mug (es decir, 18,0 MUI) a
aproximadamente 2384 \mug (es decir, aproximadamente 39,0 UMI),
por ejemplo al menos un 70%, al menos un 80%, al menos un 90%, al
menos un 95% o incluso el 100% de la actividad estimuladora de NK
de una dosis semanal total de la IL-2 de referencia
convencional administrada a aproximadamente 1100 \mug (18,0 MUI),
1222 \mug (20,0 MUI), 1406 \mug (23,0 MUI), 1528 \mug (25,0
MUI), 1650 \mug (27,0 MUI), 1834 \mug (30,0 MUI), 1956 \mug
(32 MUI), 2139 \mug (35,0 MUI), 2262 \mug (37,0 MUI) o 2384
\mug (39,0 MUI).
En formas de realización alternativas, la dosis
semanal total de la IL-2 o su variante
biológicamente activa que se va a administrar en el primer periodo
del régimen de dosificación constante de IL-2 es una
cantidad que proporciona al menos un 90% de la actividad
estimuladora de NK de una dosis semanal total de la
IL-2 de referencia convencional administrada en el
intervalo de aproximadamente 1834 \mug (es decir, 30,0 MUI) a
aproximadamente 3300 \mug (es decir, aproximadamente 54,0 UMI),
por ejemplo al menos un 90% de la actividad estimuladora de NK de
una dosis semanal total de la IL-2 de referencia
convencional administrada a aproximadamente 1834 \mug (30,0 MUI),
1956 \mug (32,0 MUI), 2078 \mug (34,0 MUI), 2200 \mug (36,0
MUI), 2323 \mug (38,0 MUI), 2445 \mug (40,0 MUI), 2567 \mug
(42,0 MUI), 2689 \mug (44,0 MUI), 2812 \mug (46,0 MUI), 2934
\mug (48,0 MUI), 3056 \mug (50,0 MUI), 3178 \mug (52,0 MUI) o
3300 \mug (54,0 MUI). Para estas formas de realización, la dosis
semanal total de la IL-2 o su variante
biológicamente activa que se va a administrar en el segundo periodo
del régimen de dosificación de IL-2 de dos niveles
es una cantidad que proporciona al menos un 60% de la actividad
estimuladora de NK de una dosis semanal total de la
IL-2 de referencia convencional administrada en el
intervalo de aproximadamente 1100 \mug (es decir, 18,0 MUI) a
aproximadamente 2384 \mug (es decir, aproximadamente 39,0 UMI),
por ejemplo al menos un 60% de la actividad estimuladora de NK de
una dosis semanal total de la IL-2 de referencia
convencional administrada a aproximadamente 1100 \mug (18,0 MUI),
1222 \mug (20,0 MUI), 1406 \mug (23,0 MUI), 1528 \mug (25,0
MUI), 1650 \mug (27,0 MUI), 1834 \mug (30,0 MUI), 1956 \mug
(32 MUI), 2139 \mug (35,0 MUI), 2262 \mug (37,0 MUI) o 2384
\mug (39,0 MUI). Como alternativa, la dosis semanal total de la
IL-2 o su variante biológicamente activa que se va a
administrar en el segundo periodo del régimen de dosificación de
IL-2 de dos niveles es una cantidad que proporciona
al menos un 70%, al menos un 90%, al menos un 95%, o incluso el 100%
de la actividad estimuladora de NK de una dosis semanal total de la
IL-2 de referencia convencional administrada en el
intervalo de aproximadamente 1100 \mug (es decir, 18,0 MUI) a
aproximadamente 2384 \mug (es decir, aproximadamente 39,0 UMI),
por ejemplo al menos un 70%, al menos un 80%, al menos un 90%, al
menos un 95% o incluso el 100% de la actividad estimuladora de NK
de una dosis semanal total de la IL-2 de referencia
convencional administrada a aproximadamente 1100 \mug (18,0 MUI),
1222 \mug (20,0 MUI), 1406 \mug (23,0 MUI), 1528 \mug (25,0
MUI), 1650 \mug (27,0 MUI), 1834 \mug (30,0 MUI), 1956 \mug
(32 MUI), 2139 \mug (35,0 MUI), 2262 \mug (37,0 MUI) o 2384
\mug (39,0 MUI).
En otras formas de realización, la dosis semanal
total de la IL-2 o su variante biológicamente activa
que se va a administrar en el primer periodo del régimen de
dosificación constante de IL-2 es una cantidad que
proporciona al menos un 95% de la actividad estimuladora de NK de
una dosis semanal total de la IL-2 de referencia
convencional administrada en el intervalo de aproximadamente 1834
\mug (es decir, 30,0 MUI) a aproximadamente 3300 \mug (es
decir, aproximadamente 54,0 UMI), por ejemplo al menos un 95% de la
actividad estimuladora de NK de una dosis semanal total de la
IL-2 de referencia convencional administrada a
aproximadamente 1834 \mug (30,0 MUI), 1956 \mug (32,0 MUI),
2078 \mug (34,0 MUI), 2200 \mug (36,0 MUI), 2323 \mug (38,0
MUI), 2445 \mug (40,0 MUI), 2567 \mug (42,0 MUI), 2689 \mug
(44,0 MUI), 2812 \mug (46,0 MUI), 2934 \mug (48,0 MUI), 3056
\mug (50,0 MUI), 3178 \mug (52,0 MUI) o 3300 \mug (54,0 MUI).
Para estas formas de realización, la dosis semanal total de la
IL-2 o su variante biológicamente activa que se va a
administrar en el segundo periodo del régimen de dosificación de
IL-2 de dos niveles es una cantidad que proporciona
al menos un 60% de la actividad estimuladora de NK de una dosis
semanal total de la IL-2 de referencia convencional
administrada en el intervalo de aproximadamente 1100 \mug (es
decir, 18,0 MUI) a aproximadamente 2384 \mug (es decir,
aproximadamente 39,0 UMI), por ejemplo al menos un 60% de la
actividad estimuladora de NK de una dosis semanal total de la
IL-2 de referencia convencional administrada a
aproximadamente 1100 \mug (18,0 MUI), 1222 \mug (20,0 MUI),
1406 \mug (23,0 MUI), 1528 \mug (25,0 MUI), 1650 \mug (27,0
MUI), 1834 \mug (30,0 MUI), 1956 \mug (32 MUI), 2139 \mug
(35,0 MUI), 2262 \mug (37,0 MUI) o 2384 \mug (39,0 MUI). Como
alternativa, la dosis semanal total de la IL-2 o su
variante biológicamente activa que se va a administrar en el
segundo periodo del régimen de dosificación de IL-2
de dos niveles es una cantidad que proporciona al menos un 70%, al
menos un 90%, al menos un 95%, o incluso el 100% de la actividad
estimuladora de NK de una dosis semanal total de la
IL-2 de referencia convencional administrada en el
intervalo de aproximadamente 1100 \mug (es decir, 18,0 MUI) a
aproximadamente 2384 \mug (es decir, aproximadamente 39,0 UMI),
por ejemplo al menos un 70%, al menos un 80%, al menos un 90%, al
menos un 95% o incluso el 100% de la actividad estimuladora de NK
de una dosis semanal total de la IL-2 de referencia
convencional administrada a aproximadamente 1100 \mug (18,0 MUI),
1222 \mug (20,0 MUI), 1406 \mug (23,0 MUI), 1528 \mug (25,0
MUI), 1650 \mug (27,0 MUI), 1834 \mug (30,0 MUI), 1956 \mug
(32 MUI), 2139 \mug (35,0 MUI), 2262 \mug (37,0 MUI) o 2384
\mug (39,0 MUI).
En algunas formas de realización, la dosis
semanal total de la IL-2 o su variante
biológicamente activa que se va a administrar en el primer periodo
del régimen de dosificación constante de IL-2 es una
cantidad que proporciona un 100% de la actividad estimuladora de NK
de una dosis semanal total de la IL-2 de referencia
convencional administrada en el intervalo de aproximadamente 1834
\mug (es decir, 30,0 MUI) a aproximadamente 3300 \mug (es
decir, aproximadamente 54,0 UMI), por ejemplo un 100% de la
actividad estimuladora de NK de una dosis semanal total de la
IL-2 de referencia convencional administrada a
aproximadamente 1834 \mug (30,0 MUI), 1956 \mug (32,0 MUI),
2078 \mug (34,0 MUI), 2200 \mug (36,0 MUI), 2323 \mug (38,0
MUI), 2445 \mug (40,0 MUI), 2567 \mug (42,0 MUI), 2689 \mug
(44,0 MUI), 2812 \mug (46,0 MUI), 2934 \mug (48,0 MUI), 3056
\mug (50,0 MUI), 3178 \mug (52,0 MUI) o 3300 \mug (54,0 MUI).
Para estas formas de realización, la dosis semanal total de la
IL-2 o su variante biológicamente activa que se va a
administrar en el segundo periodo del régimen de dosificación de
IL-2 de dos niveles es una cantidad que proporciona
al menos un 60% de la actividad estimuladora de NK de una dosis
semanal total de la IL-2 de referencia convencional
administrada en el intervalo de aproximadamente 1100 \mug (es
decir, 18,0 MUI) a aproximadamente 2384 \mug (es decir,
aproximadamente 39,0 UMI), por ejemplo al menos un 60% de la
actividad estimuladora de NK de una dosis semanal total de la
IL-2 de referencia convencional administrada a
aproximadamente 1100 \mug (18,0 MUI), 1222 \mug (20,0 MUI),
1406 \mug (23,0 MUI), 1528 \mug (25,0 MUI), 1650 \mug (27,0
MUI), 1834 \mug (30,0 MUI), 1956 \mug (32 MUI), 2139 \mug
(35,0 MUI), 2262 \mug (37,0 MUI) o 2384 \mug (39,0 MUI). Como
alternativa, la dosis semanal total de la IL-2 o su
variante biológicamente activa que se va a administrar en el segundo
periodo del régimen de dosificación de IL-2 de dos
niveles es una cantidad que proporciona al menos un 70%, al menos
un 90%, al menos un 95%, o incluso el 100% de la actividad
estimuladora de NK de una dosis semanal total de la
IL-2 de referencia convencional administrada en el
intervalo de aproximadamente 1100 \mug (es decir, 18,0 MUI) a
aproximadamente 2384 \mug (es decir, aproximadamente 39,0 UMI),
por ejemplo al menos un 70%, al menos un 80%, al menos un 90%, al
menos un 95% o incluso el 100% de la actividad estimuladora de NK
de una dosis semanal total de la IL-2 de referencia
convencional administrada a aproximadamente 1100 \mug (18,0 MUI),
1222 \mug (20,0 MUI), 1406 \mug (23,0 MUI), 1528 \mug (25,0
MUI), 1650 \mug (27,0 MUI), 1834 \mug (30,0 MUI), 1956 \mug
(32 MUI), 2139 \mug (35,0 MUI), 2262 \mug (37,0 MUI) o 2384
\mug (39,0 MUI).
Los expertos en la técnica reconocen que los
procedimientos de terapia de combinación divulgados en el presente
documento pueden usarse antes, después o a la vez con otras formas
de oncoterapia. Tal oncoterapia puede incluir regímenes de
quimioterapia tales como tratamiento con CVP (ciclofosfamida,
vincristina y prednisona), CHOP (ciclofosfamida, vincristina,
prednisona más doxorubicina), ICE (ifosfamida, carboplatino y
etopósido), mitozantrona, citarabina, DVP (daunorubicina,
prednisona y vincristina), ATRA (ácido
todo-trans-retinoico), idarubicina,
régimen quimioterapéutico de hoelzer, régimen de quimioterapia La
La, ABVD (adriamicina, bleomicina, vinblastina y dacarbazina), CEOP
(ciclofosfamida, epirubicina, vincristina y prednisona),
CEOP-BE (ciclofosfamida, epirubicina, vincristina,
prednisona, bleomicina y etopósido), 2-CdA
(2-clorodesoxiadenosina (2-CDA),
FLAG e IDA (fludarabina, citarabina e idarubicina; con o sin
tratamiento posterior G-LCR), VAD (vincristina,
doxorubicina y dexametasona), M y P (melfalán y prednisona),
C-semanal (ciclofosfamida y prednisona), ABCM
(adriamicina (doxorubicina), BCNU, ciclofosfamida y melfalán), MOPP
(mostaza nitrógeno, oncovina, procarbazina y prednisona), DHAP
(dexametasona, dosis altas de ara-C y platinol),
fludarabina y ciclofosfamida. Como alternativa, dichas oncoterapias
pueden incluir cirugía o procedimientos quirúrgicos, incluidos
radioterapia, incluidas las terapias de mieloablación, u otra
terapia anticancerosa con anticuerpos monoclonales. Por tanto, los
procedimientos descritos en el presente documento son útiles como
tratamiento concurrente para matar células tumorales residuales,
bien in vivo o ex vivo tras dichas oncoterapias.
De esta manera, la terapia de combinación con
IL-2 (o su variante biológicamente activa) y los
anticuerpos anti CD40 antagonistas descritos en el presente
documento, o sus fragmentos de unión al antígeno, se pueden usar en
combinación con al menos otra terapia contra el cáncer, incluidas,
entre otras, cirugía o procedimientos quirúrgicos (por ejemplo,
esplenectomía, hepatectomía, linfadenectomía, leucoforesis,
transplante de médula ósea, y similares); radioterapia;
quimioterapia, opcionalmente en combinación con transplante autólogo
de médula ósea, en las que los agentes quimioterapéuticos adecuados
incluyen, pero no se limitan a, fludarabina o fosfato de
fludarabina, clorambucilo, vincristina, pentostatina,
2-clorodesoxiadenosina (cladribina), ciclofosfamida,
doxorubicina, prednisona, y sus combinaciones, por ejemplo,
regímenes que contienen antraciclina tales como CAP
(ciclofosfamida, doxorubicina más prednisona), CHOP (ciclofosfamida,
vincristina, prednisona más doxorubicina), VAD (vincritsina,
doxorubicina, más dexametasona), MP (melfalán más prednisona), y
otros agentes citotóxicos y/o terapéuticos usados en quimioterapia
tales como mitoxantrona, daunorubicina, idarubicina, asparaginasa,
y antimetabolitos, incluidos, pero no limitados a, citarabina,
metotrexato, 5-fluorouracilo decarbazina,
6-tioguanina, 6-mercaptopurina y
nelarabina; otra terapia anticancerosa con anticuerpos monoclonales
(por ejemplo, alemtuzumab (Campath®) u otro anticuerpo anti CD52
dirigido a la glicoproteína de superficie celular CD52 en células B
malignas; rituximab (Rituxan®), el anticuerpo
HuMax-CD20 totalmente humano,
R-1594, IMMU-106,
TRU-015, AME-133,
tositumomab/I-131 tositumomab (Bexxar®), ibritumomab
tiuxetan (Zevalin®), o cualquier otro anticuerpo anti CD20
terapéutico dirigido al antígeno CD20 en células B malignas;
anticuerpo anti CD19 (por ejemplo, MT103, un anticuerpo
biespecífico); anticuerpo anti CD22 (por ejemplo, el anticuerpo
monoclonal humanizado epratuzumab); bevacizumab (Avastin®) u otro
anticuerpo anticanceroso dirigido al factor de crecimiento vascular
endotelial humano; anticuerpo anti CD22 dirigido al antígeno CD22
en células B malignas (por ejemplo, el anticuerpo monoclonal
BL-22, una toxina alfaCD22); anticuerpo
\alpha-M-CSF dirigido al factor
estimulante de colonias de macrófagos; anticuerpos dirigidos al
activador del receptor del factor kappaB nuclear (RANK) y su ligando
(RANKL), que se sobreexpresan en el mieloma múltiple; anticuerpo
anti CD23 dirigido al antígeno CD23 en células B malignas (por
ejemplo, IDEC-152); anticuerpo anti CD80 dirigido al
antígeno CD80 (por ejemplo, IDEC-114); anticuerpo
anti CD38 dirigido al antígeno CD38 en células B malignas;
anticuerpos dirigidos a los receptores del complejo mayor de
histocompatibilidad clase II (anticuerpos anti MHC) expresados en
células B malignas; otros anticuerpos anti CD40 (por ejemplo,
SGN-40) dirigidos al antígeno CD40 en células B
malignas; y anticuerpos dirigidos al receptor 1 del ligando
inductor de apoptosis relacionado con el factor de necrosis tumoral
(TRAIL-R1) (por ejemplo, el anticuerpo monoclonal
agonista humano HGS-ETR1) y TRAIL-R2
expresado en una cantidad de tumores sólidos y tumores de origen
hematopoyético); terapia del cáncer basada en moléculas pequeñas,
incluidos, pero no limitados a, inhibidores de microtúbulos y/o
topoisomerasa (por ejemplo, el inhibidor mitótico dolastatina y
análogos de dolastatina; el agente de unión a tubulina T900607;
XL119; y el inhibidor de la topoisomerasa aminocamptotecina),
SDX-105 (clorhidrato de bendamustina), ixabepilona
(un análogo de epotilona, también llamado
BMS-247550), inhibidores de proteincinasa C, por
ejemplo, midostaurina ((PKC-412, CGP 41251,
N-benzoilstaurosporina), pixantrona, eloxatina (un
agente antineoplásico), ganite (nitrato de galio), Thalomid®
(talidomida), derivados inmunomoduladores de la talidomida (por
ejemplo, revlimid (anteriormente revimid)), Affinitak^{TM}
(inhibidor antisentido de proteincinasa C-alfa),
SDX-101 (R-etodolac, que induce la
apoptosis de linfocitos malignos), análogos de nucleósidos purina
de segunda generación tales como clofarabina, inhibidores de la
producción de la proteína Bcl-2 por células
cancerosas (por ejemplo, los agentes antisentido oblimersen y
Genasense®), inhibidores de proteasoma (por ejemplo, Velcade^{TM}
(bortezomib)), inhibidores de cinasas de molécula pequeña (por
ejemplo, CHIR-258), inhibidores de VEGF de molécula
pequeña (por ejemplo, ZD-6474), inhibidores de la
proteína del choque térmico (HSP) 90 de molécula pequeña (por
ejemplo, 17-AAG), agentes inhibidores de
desacetilasas de histonas de molécula pequeña (por ejemplo, HPC
híbrido/polar de citodiferenciación) tales como ácido
suberanilohidroxámico (SAHA), y FR-901228 y agentes
apoptóticos tales como Trisenox® (trióxido de arsénico) y Xcytrin®
(motexafina gadolinio); terapias contra el cáncer basadas en
vacunas/inmunoterapia, incluidas, pero no limitadas a, enfoques de
vacunas (por ejemplo, Id-KLH, oncofago, vitaletina),
inmunoterapia personalizada o inmunoterapia activa de idiotipo (por
ejemplo, MyVax® Personalized Immunotherapy, denominada formalmente
GTOP-99), Promune® (CpG 7909, un agonista sintético
para el receptor de tipo toll 9 (TLR9)), terapia con interferón
alfa, terapia con IL-12, terapia con
IL-15 y terapia con IL-21; terapia
con esteroides; u otra terapia contra el cáncer; en las que la
terapia anticancerosa adicional se administra antes de, 0durante, o
posteriormente a la terapia de combinación con
IL-2/anticuerpo anti CD40 antagonista. Por
consiguiente, cuando las terapias combinadas comprenden la
administración de IL-2/anticuerpo anti CD40
antagonista o su fragmento de unión al antígeno en combinación con
la administración de otro agente terapéutico, como con
quimioterapia, radioterapia, otra terapia anticancerosa con
anticuerpos, terapia contra el cáncer basada en moléculas pequeñas,
o terapia contra el cáncer basada en vacunas/inmunoterapia, los
procedimientos dados a conocer en el presente documento abarcan la
coadministración, usando formulaciones separadas de una formulación
farmacéutica única, y/o la administración consecutiva en cualquier
orden. Cuando los procedimientos dados a conocer en el presente
documento comprenden regímenes terapéuticos combinados, estas
terapias pueden darse de manera simultánea, es decir, el anticuerpo
anti CD40 antagonista o su fragmento de unión al antígeno se
administra simultáneamente o dentro del mismo período de tiempo que
la otra terapia contra el cáncer (es decir, las terapias tienen
lugar simultáneamente, pero la terapia de combinación con
IL-2/anticuerpo anti CD40 antagonista no se
administra precisamente en el mismo momento que la otra terapia
contra el cáncer). Como alternativa, la terapia de combinación con
IL-2/anticuerpo anti CD40 antagonista de la
presente puede también administrarse antes de, o posteriormente a la
otra terapia contra el cáncer. La administración secuencial de las
diferentes terapias contra el cáncer puede realizarse
independientemente de que el sujeto tratado responda al primer
\hbox{curso de terapia para disminuir la posibilidad de remisión o recaída.}
Por tanto, por ejemplo, en algunas formas de
realización, un sujeto sometido a la terapia de combinación con
IL-2/anticuerpo anti CD40 antagonista divulgada en
el presente documento también recibe terapia con FCR (fludarabina,
ciclofosfamida, rituximab y alemtuzumab). En formas de realización
alternativas, un sujeto sometido a la terapia de combinación con
IL-2/anticuerpo anti CD40 antagonista divulgada en
el presente documento también recibe terapia con FC (fludarabina,
ciclofosfamida) y cualquier otro anticuerpo anti CD20 dirigido al
antígeno CD20 en células B malignas, incluidos, entre otros, el
anticuerpo HuMax-CD20 totalmente humano,
R-1594, IMMU-106,
TRU-015, AME-133,
tositumomab/I-131 tositumomab (Bexxar®) e
ibritumomab tiuxetan (Zevalin®). En formas de realización más, un
sujeto sometido a la terapia de combinación con
IL-2/anticuerpo anti CD40 antagonista divulgada en
el presente documento también recibe terapia con CHOP más otro
anticuerpo anti CD20 o CFA (fludarabina, ciclofosfamida y
alemtuzumab) más otro anticuerpo anti CD20, en el que el otro
anticuerpo anti CD20 está dirigido al antógeno CD20 sobre células B
malignas, incluidos, entre otros, el anticuerpo
HuMax-CD20 totalmente humano,
R-1594, IMMU-106,
TRU-015, AME-133,
tositumomab/I-131 tositumomab (Bexxar®) e
ibritumomab tiuxetan (Zevalin®).
La IL-2 descrita en las
formulaciones farmacéuticas expuestas en el presente documento y que
se va a usar en los procedimientos descritos en el presente
documento puede ser nativa u obtenerse mediante técnicas
recombinantes, y puede proceder de cualquier fuente, incluidas
fuentes de mamíferos tales como, por ejemplo, de rata, conejo,
primate, cerdo y ser humano. Cuando el sujeto sometido a
tratamiento es un sujeto humano, la IL-2 deriva,
preferentemente, de una fuente humana e incluye IL-2
humana que se produce de forma recombinante, tal como polipéptidos
de IL-2 recombinante producidos por huéspedes
microbianos.
Inicialmente, la IL-2 humana se
traduce en forma de un precursor polipeptídico, que se muestra en la
SEC ID Nº 14, que está codificado por una secuencia nucleotídica
tal como la que se expone en la SEC ID Nº 13. El precursor
polipeptídico incluye una secuencia señal en los residuos
1-20 de la SEC ID Nº 14. El término
"IL-2 humana madura" se refiere a la secuencia
de aminoácidos expuesta como SEC ID Nº 16, que está codificada por
una secuencia de nucleótidos tal como la que se expone como SEC ID
Nº 15. Los términos "IL-2
des-alanil-1,C125S humana" y
"IL-2
des-alanil-1, serina 125 humana"
se refieren a una muteína de IL-2 humana madura que
tiene una sustitución de serina por cisteína en la posición del
aminoácido 125 de la secuencia de IL-2 humana madura
y que carece de la alanina N-terminal que reside en
la posición 1 de la secuencia de IL-2 humana madura
(es decir, en la posición 1 de la SEC ID Nº 16). La
IL-2 des-alanil-1,
C125S humana tiene la secuencia de aminoácidos expuesta en la SEC
ID Nº 18, que está codificada por una secuencia de nucleótidos, tal
como la que se expone en la SEC ID Nº 17. La muteína
IL-2 des-alanil-2,
C125S humana, que se denomina "aldesleukina", está disponible
comercialmente en forma de una formulación que se comercializa con
la marca Proleukin® (Chiron Corporation, Emeryville, California).
La IL-2 sirve como la IL-2 de
referencia convencional para determinar los intervalos de
dosificación de IL-2 adecuados para los protocolos
de la terapia de
\hbox{combinación con IL-2/anticuerpo anti CD40 antagonista que se describen en el presente documento.}
Las composiciones farmacéuticas útiles en los
procedimientos descritos en el presente documento pueden comprender
variantes biológicamente activas de IL-2. Dichas
variantes deberán conservar la actividad biológica del polipéptido
nativo de modo que la composición farmacéutica que comprenden el
polipéptido variante tiene el mismo efecto terapéutico que la
composición farmacéutica que comprende el polipéptido nativo cuando
se administra a un sujeto. Es decir, el polipéptido variante servirá
como componente terapéuticamente activo en la composición
farmacéutica de un modo similar al observado para el polipéptido
nativo. En la técnica se dispone de procedimientos para determinar
si un polipéptido variante conserva la actividad biológica deseada
y, por tanto, sirve como componente terapéuticamente activo en la
composición farmacéutica. La actividad biológica se puede medir
usando ensayos diseñados específicamente para medir la actividad
del polipéptido o proteína nativo, incluidos los ensayos descritos
en el presente documento.
Adicionalmente se pueden analizar los
anticuerpos producidos contra un polipéptido nativo biológicamente
activo según su capacidad para unirse al polipéptido variante, en
la que la unión eficaz es indicativa de un polipéptido que tiene
una conformación similar a la del polipéptido nativo.
Para los fines de la presente invención, la
actividad biológica de la IL-2 de interés es la
capacidad de la IL-2 para activar y/o expandir las
células asesinas naturales (NK) para mediar la actividad asesina
activada por linfocinas (LAK) y la citotoxicidad celular
dependiente de anticuerpos (ADCC). Por tanto, una variante de
IL-2 (por ejemplo, una muteína de
IL-2 humana) para usar en los procedimientos
descritos en el presente documento activará y/o expandirá las
células asesinas naturales (NK) para mediar la actividad asesina
activada por linfocinas (LAK) y la citotoxicidad celular
dependiente de anticuerpos (ADCC). Las células NK median la
citotoxidad espontánea o natural contra ciertas dianas celulares
in vitro denominadas dianas "sensibles a las células
NK", tales como la línea celular K562 de eritroleucemia humana.
Tras la activación por la IL-2, las células NK
adquieren actividad LAK. Tal actividad LAK se puede analizar
mediante la capacidad de las células NK activadas por la
IL-2 para matar a una amplia variedad de células
tumorales y otras dianas "no sensibles a NK", tal como la
línea de linfoma de células B de Daudi, que normalmente son
resistentes a la lisis por células NK en reposo (no activadas). De
forma similar, la actividad ADCC se puede analizar mediante la
capacidad de células NK activadas por IL-2 para
lisar las células diana "no sensibles a NK", tal como la línea
de linfoma de células B de Daudi, u otras células diana no lisadas
con facilidad por células NK en reposo en presencia de
concentraciones óptimas de anticuerpos específicos de células
tumorales relevantes. En la técnica se conocen procedimientos para
generar y medir la actividad citotóxica de células NK/LAK y ADCC.
Véase, por ejemplo, Current Protocols in Immunology: Immunologic
Studies in Humans, Suplemento 17, Unidad 7.7,7.18, y 7.27 (John
Wiley & Sons, Inc., 1996).
Para los fines de la presente invención, las
células NK activadas por una variante de IL-2 para
usar en los procedimientos descritos en el presente documento
demuestran una actividad de lisis específica de células no
sensibles a NK en presencia (Actividad ADCC) o ausencia (actividad
LAK) de anticuerpo, más particularmente células de Daudi no
sensibles a NK en presencia de anticuerpos específicos de células B,
incluido rituximab, es decir al menos aproximadamente 20% mayor, o
al menos aproximadamente 25%, o 30% o 35% o 40% mayor que la
actividad de lisis basal de las células NK en reposo (es decir, no
activadas) medida usando un efector dirigido a proporciones entre
12,5 a 50:1 en un ensayo convencional de citotoxicidad de liberación
de ^{51}Cr de 4 horas (véase, Current Protocols in Immunology:
Immunologic Studies in Humans, Unidad 7.7, Suplemento 17, Sección
17.18.1 (John Wiley & Sons, Inc., 1996).
En algunas formas de realización, la actividad
de lisis específica de estas células NK activadas por variante de
IL-2 es al menos aproximadamente 45% mayor, al menos
aproximadamente 50\cdot% mayor, al menos aproximadamente 55%
mayor, al menos aproximadamente 60% mayor, al menos aproximadamente
65% mayor, al menos aproximadamente 70% mayor, al menos
aproximadamente 75% mayor o al menos aproximadamente 80% mayor que
la actividad de lisis basal de las células NK en reposo cuando se
mide como se ha indicado en lo que antecede.
Variantes biológicamente activas de la
IL-2 nativa o natural pueden ser fragmentos,
análogos y derivados de dicho polipéptido, Por "fragmento" se
entiende un polipéptido constituido por sólo una parte de la
secuencia y estructura polipeptídicas intactas y puede ser una
deleción en el extremo C o una deleción en el extremo N del
polipéptido nativo. Por "análogo" se entiende un análogo del
polipéptido nativo o de un fragmento del polipéptido nativo, en el
que el análogo comprende una secuencia y estructura del polipéptido
nativo que tiene una o más sustituciones, inserciones o deleciones
de aminoácidos. "Muteínas", tales como las que se describen en
el presente documento, y péptidos que tienen uno o más peptoides
(similares a péptidos) también entran en el término análogo (véase
la publicación internacional nº WO 91/04282). Por "derivado" se
entiende cualquier modificación adecuada del polipéptido nativo de
interés, de un fragmento del polipéptido nativo o de sus
respectivos análogos, tales como glicosilación, fosforilación,
conjugación polimérica (tal como con polietilenglicol), u otra
adición de restos extraños, siempre que se conserve la actividad
biológica deseada del polipéptido nativo. Por lo general, en la
técnica están disponibles procedimientos para producir fragmentos,
análogos y derivados polipeptídicos.
Por ejemplo, pueden prepararse variantes de
secuencias de aminoácidos del polipéptido, por medio de mutaciones
en la secuencia de ADN clonada que codifica el polipéptido de
interés. Los procedimientos para mutagénesis y alteraciones de
secuencias de nucleótidos son bien conocidos en la técnica. Véase,
por ejemplo, Walker y Gaastra, eds. (1983) Techniques in Molecular
Biology (MacMillan Publishing Company, Nueva York); Kunkel (1985)
Proc. Natl. Acad Sci. USA 82: 488-492; Kunkel y col.
(1987) Methods Enzymol. 154: 367-382; Sambrook y
col. (1989) Molecular Cloning: A Laboratory Manual (Cold Spring
Harbor, Nueva York); Patente de EEUU Nº 4.873.192; y las
referencias citadas en la misma. En el modelo de Dayhoff y col.
(1978) en Atlas of Protein Sequence and Structure (Natl. Biomed.
Res. Found., Washington, D.C.) puede encontrarse orientación para
sustituciones adecuadas de aminoácidos que no afectan la actividad
biológica del polipéptido de interés.
Las sustituciones conservadoras, tales como los
intercambios de un aminoácido con otro que tiene propiedades
similares, pueden ser de preferencia. Los ejemplos de sustituciones
conservadoras incluyen, pero no se limitan a,
Gly\LeftrightarrowAla,
Val\LeftrightarrowIle\LeftrightarrowLeu,
Asp\LeftrightarrowGlu, Lys\LeftrightarrowArg,
Asn\LeftrightarrowGln y
Phe\LeftrightarrowTrpo\LeftrightarrowTyr.
En la construcción de variantes del polipéptido
de de IL-2, las modificaciones se realizan de manera
tal que las variantes sigan teniendo la actividad deseada.
Obviamente, cualquier mutación realizada en el ADN que codifica la
variante polipéptido no debe colocar a la secuencia fuera del marco
de lectura y de preferencia no creará regiones complementarias que
podrían producir una estructura de ARNm secundaria. Véase
Publicación de Solicitud de Patente Nº 75.444.
Además, la región constante de un anticuerpo
anti CD40 antagonista puede mutarse para alterar la función efectora
en una serie de formas. Por ejemplo, véase la Patente de EEUU Nº
6.737.056B1 y la Publicación de Solicitud de Patente Nº
2004/0132101A1, que dan a conocer mutaciones de Fc que optimizan la
unión del anticuerpo a los receptores de Fc.
Variantes biológicamente activas de
IL-2 tendrán, en general, al menos 70% de
preferencia al menos 80%, de más preferencia al menos de 90% a 95%
o más, y, más preferentemente, al menos 96%, 97%, 98% ó 99% de
homología de secuencia de homología de secuencia con la secuencia
de aminoácidos para la molécula polipeptídica de referencia, que
sirve de base para la comparación. Por tanto, cuando la molécula de
IL-2 de referencia es IL-2 humana,
una variante biológicamente activa de la misma tendrá al menos 70%,
preferentemente al menos 80%, más preferentemente al menos de 90% a
95% o más y, más preferentemente al menos 96%, 97%, 98% ó 99% de
homología de secuencia con la secuencia de aminoácidos de la
IL-2 humana.
Para los fines de la presente invención, el
porcentaje de homología de secuencia se determina usando el
algoritmo de búsqueda de homología de
Smith-Waterman usando una búsqueda de huecos afines
con parámetros de penalización de hueco abierto de 12 y
penalización de extensión de hueco de 2, matriz BLOSUM de 62. El
algoritmo de búsqueda de homología de
Smith-Waterman se enseña en Smith and Waterman
(1981) Adv. Appl. Math. 2: 482-489. Una variante
puede, por ejemplo, diferir de la secuencia de IL-2
de referencia en tan pocos como 1 a 15 residuos de aminoácidos,
tan pocos como 1 a 10 residuos de aminoácidos, tal como
6-10, tan pocos como 5, tan pocos como 4, 3, 2, o
incluso 1 residuo de aminoácido.
Con respecto a la alineación óptima de dos
secuencias de aminoácidos, el segmento contiguo de la secuencia de
aminoácidos variante puede tener residuos de aminoácidos adicionales
o residuos de aminoácidos delecionados con respecto a la secuencia
de aminoácidos de referencia. El segmento contiguo utilizado para la
comparación con la secuencia de aminoácidos de referencia incluirá
al menos 20 residuos de aminoácidos contiguos y puede tener 30, 40,
50, 100 o más residuos de aminoácidos. Pueden hacerse correcciones
para homología de secuencia asociadas con huecos o sustituciones
conservadoras de residuos (véase el algoritmo de búsqueda de
Smith-Waterman).
La estructura química exacta de un polipéptido
que tiene actividad IL-2, depende de una serie de
factores. Como en la molécula están presentes grupos amino y
carboxilo ionizables, puede obtenerse un polipéptido particular
como una sal ácida o básica, o en forma neutra. Todas las
preparaciones que retienen su actividad biológica cuando se colocan
en condiciones ambientales adecuadas están incluidas en la
definición de polipéptidos que tienen actividad
IL-2 como se usan en el presente documento. Además,
puede aumentarse la secuencia de aminoácidos principal del
polipéptido por derivatización con restos de azúcar (glicosilación)
o por otras moléculas complementarias tales como lípidos, fosfato,
grupos acetilo y similares. También puede aumentarse por conjugación
con sacáridos. Ciertos aspectos de tal aumento se realizan a través
de sistemas de procesamiento postraduccionales del huésped
productor; otras de tales modificaciones pueden introducirse in
vitro. En cualquier caso, tales modificaciones están incluidas
en la definición de un polipéptido IL-2 usada en el
presente documento siempre que no se destruyan la actividad
IL-2 del polipéptido. Se espera que tales
modificaciones puedan afectar cuantitativamente o cualitativamente
a la actividad, ya sea aumentando o disminuyendo la actividad del
polipéptido, en los diversos ensayos. Además, pueden modificarse
residuos de aminoácidos individuales en la cadena por oxidación,
reducción u otra derivatización, y el polipéptido puede escindirse
para obtener fragmentos que retengan la actividad. Tales
alteraciones que no destruyen la actividad antagonista no retiran a
la secuencia del polipéptido de la definición de polipéptidos
IL-2 de interés según se utiliza en el presente
documento.
La técnica proporciona orientación sustancial
con respecto a la preparación y al uso de las variantes de
polipéptidos. En la preparación de las variantes de
IL-2, un experto en la técnica puede determinar
fácilmente qué modificaciones a la secuencia de nucleótidos o
aminoácidos de la proteína nativa darán como resultado una variante
que sea adecuada para uso como un componente terapéuticamente
activo de una composición farmacéutica utilizada en los
procedimientos dados a conocer en el presente documento.
Para ejemplos de proteínas variantes de
IL-2, véase la publicación de patente europea (EP)
nº EP 136.489 (que describe una o más de las alteraciones
siguientes en la secuencia de aminoácidos de la IL-2
natural: Asn26 a Gln26; Trp121 a Phe121; Cys58 a Ser58 o Ala58,
Cys125 a Ser125 o Ala125; Cys125 a Ser125 o Ala125; deleción de
todos los residuos tras la Arg 120; y las formas
Met-1 de la misma; y las muteínas de
IL-2 recombinantes descritas en la solicitud de
patente europea EP 0 109 748, que es la equivalente a la patente
belga nº 893.016, y la patente de EE.UU. de propiedad común nº
4.518.584 (que divulgan la muteína de IL-2 humana
recombinante en la que la cisteína en la posición 125, numerada de
acuerdo con la IL-2 humana nativa, se ha eliminado o
sustituido por un aminoácido neutro;
alanil-ser125-IL-2;
y
des-alanil-ser125-IL2).
Véase también la patente de EE.UU. nº 4.752.585 (que divulga las
siguientes variantes de proteínas de IL-2: ala104
ser125 IL-2, ala104 IL-2, ala104
ala125 IL-2, val104 ser125 IL-2,
val104 IL-2, val104 ala125 IL-2,
des-ala1 ala104 ser125 IL-2,
des-ala1 ala104 IL-2,
des-ala1 ala104 ala125 IL-2,
des-ala1 val104 ser125 IL-2,
des-ala1 val104 IL-2,
des-ala1 val104 ala125 IL-2,
des-ala1 des-pro2 ala104 ser125
IL-2, des-ala1
des-pro2 ala104 IL-2,
des-ala1 des-pro2 ala104 ala125
IL-2, des-ala1
des-pro2 val104 ser125 IL-2,
des-ala1 des-pro2 val104
IL-2, des-ala1
des-pro2 val104 ala125 IL-2,
des-ala1 despro2 des-thr3 ala104
ser125 IL-2, des-ala1
des-pro2 des-thr3 ala104
IL-2, des-ala1
des-pro2 des-thr3 ala104 ala125
IL-2, des-ala1
des-pro2 des-thr3 val104 ser125
IL-2, des-ala1
des-pro2 des thr3 val104 IL-2,
des-ala1 des-pro2 desthr3 val104
ala125 IL-2, des-ala1
des-pro2 des-thr3
des-ser4 ala104 ser125 IL-2,
des-ala1 des-pro2
des-thr3 des-ser4 ala104
IL-2, des-ala1
des-pro2 des-thr3
des-ser4 ala104 ala125 IL-2,
des-ala1 des-pro2
des-thr3 des-ser4 val104 ser125
IL-2, des-ala1
des-pro2 des-thr3
des-ser4 val104 IL-2, des ala1
des-pro2 des-thr3
des-ser4 val104 ala125 IL-2,
des-ala1 des-pro2
des-thr3 des-ser4
des-ser5 ala104 ser125 IL-2,
des-ala1 des-pro2
des-thr3 des-ser4
des-ser5 ala104 IL-2,
des-ala1 des-pro2
des-thr3 des-ser4
des-ser5 ala104 ala125 IL-2,
des-ala1 des-pro2
des-thr3 des-ser4
des-ser5 val104 ser125 IL-2,
des-ala1 des-pro2
des-thr3 des-ser4
des-ser5 val 104 IL-2,
des-ala1 des-pro2
des-thr3 des-ser4
des-ser5 val104 ala125 IL-2,
des-ala1 des-pro2
des-thr3 des-ser4
des-ser5 des-ser6 ala104 ala125
IL-2, des-ala1
des-pro2 des-thr3
des-ser4 des-ser5
des-ser6 ala104 IL-2,
des-ala1 des-pro2
des-thr3 des-ser4
des-ser5 des-ser6 ala104 ser125
IL-2, des-ala1
des-pro2 des-thr3
des-ser4 des-ser5
des-ser6 val104 ser125 IL-2,
des-ala1 des-pro2
des-thr3 des ser4 des-ser5
des-ser6 val104 IL-2 y
des-ala1 des-pro2
des-thr3 des-ser4
des-ser5 des-ser6 val104 ala125 IL2)
y la patente de EE.UU. nº 4.931,543 (que divulga la muteína de
IL-2 des-alanil-2,
serina-125 IL-2 humana usada en los
ejemplos del presente documento, así como las demás muteínas de
IL-2).
Véase también la publicación de patente europea
nº EP 200.280 (publicada el 10 de diciembre de 1986), que divulga
muteínas de IL-2 recombinantes en las que la
metionina en la posición 104 se ha sustituido por un aminoácido
conservador. Ejemplos incluyen las muteínas siguientes: ser4
des-ser5 ala104 IL-2;
des-ala1 des-pro2
des-thr3 des-ser4
des-ser5 ala104 ala125 IL-2;
des-ala1 des-pro2
des-thr3 des-ser4
des-ser5 glu104 ser125 IL-2; des
ala1 des-pro2 des-thr3
des-ser4 des-ser5 glu104
IL-2; des-ala1
des-pro2 des-thr3
des-ser4 des-ser5 glu 104 ala125
IL-2; des-ala1
des-pro2 des-thr3
des-ser4 des-ser5
des-ser6 ala104 ala125 IL-2;
des-ala1 des-pro2
des-thr3 des-ser4
des-ser5 des-ser6 ala104
IL-2; des-ala1
des-pro2 des-thr3
des-ser4 des-ser5
des-ser6 ala104 ser125 IL-2;
des-ala1 des-pro2
des-thr3 des-ser4
des-ser5 des-ser6 glu104 ser125
IL-2; des-ala1
des-pro2 des-thr3
des-ser4 des-ser5
des-ser6 glu104 IL-2; y
des-ala1 des-pro2
des-thr3 des-ser4
des-ser5 des-ser6 glu104 ala125
IL-2. Véase también la publicación de patente
europea nº EP 118.617 y la patente de EE.UU. nº 5.700.913, que
divulgan variantes de IL-2 humana no glicosilada que
llevan alanina en lugar de la metionina de la IL-2
nativa como aminoácido N terminal; una IL-2 humana
no glicosilada con la metionina inicial eliminada de modo que la
prolina está en el aminoácido N-terminal; y una
IL-2 humana no glicosilada con una alanina insertada
entre los aminoácidos metionina y prolina en N terminal.
Otras muteínas de IL-2 incluyen
las divulgadas en el documento WO 99/60128 (sustituciones del
aspartato en la posición 20 con histidina o isoleucina, la
asparagina en la posición 88 con arginina, glicina o isoleucina, o
la glutamina en la posición 126 con leucina o ácido glutámico), que
se ha notificado que tienen actividad selectiva por los receptores
de alta afinidad de la IL-2 expresados por las
células que expresan los receptores de células T en preferencia a
las células NK y toxicidad reducida a la IL-2; las
muteínas divulgadas en la patente de EE.UU. nº 5.229.109
(sustituciones de arginina en la posición 38 con alanina, o
sustituciones de fenilalanina en la posición 42 con lisina), que
exhiben menor unión al receptor de IL-2 de alta
afinidad cuando se compara con la IL-2 nativa
mientras mantienen la capacidad para estimular las células LAK; las
muteínas divulgadas en la publicación internacional nº WO 00/58456
(que alteran o eliminan una secuencia (x)D(y)
naturales en la IL-2 nativa, en la que D es ácido
aspártico, (x) es leucina, isoleucina, glicina o valina, e (y) es
valina, leucina o serina), que se ha reivindicado que reducen el
síndrome de fuga vascular; el péptido p1-30 de
IL-2 divulgado en la publicación internacional nº WO
00/04048 (correspondiente a los primeros 30 aminoácidos de
IL-2, que contiene toda la hélice
A-a de la IL-2 e interacciona con la
cadena b del receptor de IL-2), que se ha
comunicado que estimula las células NK y la inducción de las células
LAK; y una forma mutante del péptido p1-30 de
IL-2 también divulgado en el documento WO 00/04048
(sustitución de ácido aspártico en la posición 20 con lisina), que
se ha notificado que es incapaz de inducir sangrados vasculares pero
permanece capaz de generar células LAK. Adicionalmente, la
IL-2 se puede modificar con polietilenglicol para
proporcionar una solubilidad potenciada y un perfil farmacocinético
alterado (véase la patentes de EE.UU. nº 4.766.106).
Otras muteínas de la IL-2
presentan perfiles funcionales mejorados predicativos de toxicidades
reducidas. Las muteínas inducen un menor nivel de producción de
citocinas proinflamatorias por las células NK, mientras mantienen o
aumentan la proliferación de células NK, mantienen las funciones
citolíticas NK, LAK y ADCC mediadas por células NK y mantienen la
función proliferativa de las células T en comparación con la
IL-2 humana
des-alanil-2, C125S o las muteínas
de IL-2 humana C125S. Ejemplos de estas muteínas de
IL-2 mejoradas incluyen, entre otros, T7A, L36G,
P65E, R81L, T7D, L36H, P65F, R81M, T7R, L361, P65G, R81N, K8L, L36K,
P65H, R81P, K9A, L36M, P65I, R81T, K9D, L36N, P65K, D84R, K9R,
L36P, P65L, S87T, K9S, L36R, P65N, N88D, K9V, L36S, P65Q, N88H,
K9W,L36W, P65R, N88T, T10K, L36Y, P65S, V91A, T10N R38D, P65T,
V91D, Q11A, R38G, P65V, V91E, Q11R, R38N, P65W, V91F, Q11T, R38P,
P65Y, V91G, E15A, R38S, L66A, V91Q, H16D, L40D, L66F, V91W, H16E,
L40G, E67A, V91N, L19D, L40N, L72G, L94A, L19E, L40S, L72N, L941,
D20E, T41E, L72T, L94T, I24L, T41G, F78S, L94V, K32A, F42A, F78W,
L94Y, K32W, F42E, H79F, E95D, N33E, F42R, H79M, E95G, P34E, F42T,
H79N, E95M, P34R, F42V, H79P, T102S, P34S, K43H, H79Q, T102V, P34T,
F44K, H79S, M104G, P34V, M46I, H79V, E106K, K35D, E61K, L80E, Y107H,
K35I, E61M, L80F, Y107K, K35L, E61R, L80G, Y107L, K35M, E62T, L80K,
Y107Q, K35N, E62Y, L80N, Y107R, K35P, K64D, L80R, Y107T, K35Q,
K64E, L80T, E116G, K35T, K64G, L80V, N119Q, L36A, K64L, L80W, T123S,
L36D, K64Q, L80Y, T123C, L36E, K64R, R81E, Q126I, L36F, P65D, R81K
y Q126V, en los que la posición del residuo es relativa a la
posición dentro de la secuencia de IL-2 humana
madura expuesta en la SEC ID Nº 16. Ejemplos de estas muteínas de
IL-2 combinatorias incluyen, entre otros, 19D40D,
19D81K, 36D42R, 36D61R, 36D65L, 40D36D, 40D61R, 40D65Y, 40D72N,
40D80K, 40G36D, 40G65Y, 80K36D, 80K65Y, 81K36D, 81K42E, 81K61R,
81K65Y, 81K72N, 81K88D, 81K91D, 81K107H, 81L107H, 91N95G, 107H36D,
107H42E, 107H65Y, 107R36D, 107R72N, 40D81K107H, 40G81K107H y
91N94Y95G, en los que la posición del residuo es relativa a la
posición dentro de la secuencia de IL-2 humana
madura expuesta en la SEC ID Nº 16.
El término IL-2 como se usa en
el presente documento también se entiende que incluye las fusiones o
conjugados de IL-2 que comprenden
IL-2 fusionada con una segunda proteína o conjugada
covalentemente con poliprolina o un polímero hidrosoluble para
reducir las frecuencias de la dosificación o para mejorar la
tolerabilidad de la IL-2. Por ejemplo, la
IL-2 (o una variante del mismo como se define en el
presente documento) se puede fusionar con albúmina humana o un
fragmento de albúmina usando procedimientos conocidos en la técnica
(véase el documento WO 01/79258). Como alternativa, la
IL-2 se puede conjugar de forma covalente con
homopolímeros de poliprolina o de polietilenglicol y polioles
polioxietilados, en los que el homopolímero está insustituido o
sustituido en un extremo con un grupo alquilo y el poliol está
insustituido, usando procedimientos conocidos en la técnica (véase,
por ejemplo, las patentes de EE.UU. nº 4.766.106, 5.206.344 y
4.894.226).
Cualquier composición farmacéutica que
comprenda IL-2 o una variante biológicamente activa
de la misma como el componente terapéuticamente activo puede usarse
en los procedimientos dados a conocer en el presente documento.
Dichas composiciones farmacéuticas se conocen en la técnica e
incluyen, entre otras, las descritas en las patentes de EE.UU. nº
4.604.377; 4.745.180; 4.766.106; 4.816.440; 4.894.226; 4.931.544;
4.992.271; 5.078.997; y 6.525,102. Por consiguiente, las
composiciones líquidas, liofilizadas o secadas por pulverización
que comprenden IL-2 o variantes de la misma que se
conocen en la técnica pueden prepararse como una disolución o
suspensión acuosa o no acuosa para la posterior administración a un
sujeto de acuerdo con los procedimientos dados a conocer en el
presente documento. Cada una de estas composiciones comprenderá
IL-2 o variantes de la misma como un componente
terapéuticamente o profilácticamente activo. Por "componente
terapéuticamente o profilácticamente activo" se entiende que la
IL-2 o variantes de la misma específicamente
incorporada en la composición para provocar una respuesta
terapéutica o profiláctica con respecto al tratamiento, la
prevención o el diagnóstico de una enfermedad o afección en un
sujeto cuando se administra la composición farmacéutica a ese
sujeto. De preferencia, las composiciones farmacéuticas comprenden
agentes estabilizantes, agentes de carga adecuados, o ambos para
reducir al mínimo los problemas asociados con la pérdida de
estabilidad y actividad biológica de las proteínas durante la
preparación y el almacenamiento.
Por ejemplo, la patente de EE.UU. n2 4.604.377
muestra una formulación de IL-2 que tiene una
cantidad terapéutica de IL-2, que está
sustancialmente exenta de proteína no IL-2 y
endotoxina, un transportador hidrosoluble fisiológicamente
aceptable y una cantidad suficiente de un agente de superficie
activa para solubilizar la IL-2, como dodecilsulfato
sódico. Otros ingredientes pueden incluirse, como azúcares. La
patente de EE.UU. Nº 4.766.106 muestra formulaciones que incluyen
IL-2 modificada con polietilenglicol (PEG). La
solicitud de patente europea, publicación nº 268.110 muestra
IL-2 formulada con diversos tensioactivos no iónicos
seleccionados del grupo constituido por ésteres de ácidos grasos
polioxietilensorbitano (Tween-80), monoestearato de
polietilenglicol y compuestos de octilfenoxi polietoxietanol
(Triton X405). La patente de EE.UU. nº 4.992.271 divulga
formulaciones de IL-2 que comprenden seroalbúmina
humana y la patente de EE.UU. nº 5.078.997 divulga formulaciones de
IL-2 que comprenden seroalbúmina humana y
aminoácidos. La patente de EE.UU. nº 6.525.102 divulga
formulaciones de IL-2 que comprenden una base de
aminoácido, que sirve como el principal agente estabilizante del
polipéptido y un ácido y/o su forma de sal para tamponar la
solución dentro de un intervalo de pH aceptable para la estabilidad
del polipéptido. El documento US 2003/0198602 divulga formulaciones
de IL-2 adecuadas para administración pulmonar.
Los anticuerpos monoclonales
CHIR-5.9 y CHIR-12.12 representan
anticuerpos anti CD40 antagonistas adecuados para uso en los
procedimientos de la presente invención. Los anticuerpos
CHIR-5.9 y CHIR-12.12 son
anticuerpos monoclonales anti CD40 totalmente humanos del isotipo
IgG1 producidos a partir de las líneas celulares de hibridoma
131.2F8.5.9 (a la que se hace referencia en el presente documento
como la línea celular 5.9) y 153.8E2.D10.D6.12.12 (a la que se hace
referencia en el presente documento como la línea celular 12.12).
Estas líneas celulares se crearon usando esplenocitos de ratones
xenotípicos inmunizados que contienen el locus de cadena pesada de
IgG1 humana y el locus de cadena \kappa humana (tecnología
XenoMouse®; Abgenix; Fremont, California). Las células del bazo se
fusionaron con las células de mieloma SP2/0 de ratón (Sierra
BioSource). Las hibridomas resultantes se subclonaron varias veces
para crear las líneas celulares monoclonales estables 5.9 y 12.12.
Otros anticuerpos de la invención pueden prepararse de manera
similar usando ratones transgénicos para loci de inmunoglobulina
humana o por otros procedimientos conocidos en la técnica y/o
descritos en el presente documento.
Se dan a conocer las secuencias de nucleótidos y
de aminoácidos de las regiones variables del anticuerpo
CHIR-12.12 y las secuencias de aminoácidos de las
regiones variables del anticuerpo CHIR-5.9. Más
particularmente, las secuencias de aminoácidos para las regiones
líder, variable y constante para la cadena ligera y cadena pesada
para el mAb CHIR-12.12 se presentan en las Figuras
9A y 9B, respectivamente. Véase también SEC ID Nº 2 (secuencia
completa para la cadena ligera del mAb CHIR-12.12),
SEC ID Nº 4 (secuencia completa para la cadena pesada para el mAb
CHIR-12.12) y SEC ID Nº 5 (secuencia completa para
una variante de la cadena pesada para el mAb
CHIR-12.12 presentada en SEC ID Nº 4, donde la
variante comprende una sustitución del residuo alanina por serina
en la posición de 153 de SEC ID Nº 4). Las secuencias de nucleótidos
que codifican la cadena ligera y la cadena pesada para el mAb
CHIR-12.12 se presentan en las Figuras 11A y 11B,
respectivamente. Véase también SEC ID Nº 1 (secuencia codificadora
para la cadena ligera para el mAb CHIR-12.12) y SEC
ID Nº 3 (secuencia codificadora para la cadena pesada para el mAb
CHIR-12.12). Las secuencias de aminoácidos para las
regiones líder, variable y constante para la cadena ligera y cadena
pesada del mAb CHIR-5.9 se presentan en las Figuras
10A y 10B, respectivamente. Véase también SEC ID Nº 6 (secuencia
completa para la cadena ligera del mAb CHR-5.9),
SEC ID Nº 7 (secuencia completa para la cadena pesada del mAb
CHIR-5.9) y SEC ID Nº 8 (secuencia completa para
una variante de la cadena pesada del mAb CHIR-5.9
presentada en SEC ID Nº 7, donde la variante comprende una
sustitución del residuo alanina por serina en la posición de 158 de
SEC ID Nº 7). Además, los hibridomas que expresan los anticuerpos
CHIR-5.9 y CHIR-12.12 se han
depositado en la ATCC con una denominación de depósito de patente
de PTA-5542 y PTA-5543,
respectivamente.
Además de la actividad antagonista, los
anticuerpos anti CD40 pueden tener otro mecanismo de acción contra
una célula tumoral. Por ejemplo, los anticuerpos
CHIR-5.9 y CHIR-12.12 nativos tienen
actividad ADCC. Como alternativa, las regiones variables de los
anticuerpos CHIR-5.9 y CHIR-12.12
pueden expresarse en otro isotipo de anticuerpos que tenga
actividad ADCC. También es posible conjugar formas nativas, formas
recombinantes o fragmentos de unión a antígeno de
CHR-5.9 o CHIR-12.12 a una
citotoxina, un agente terapéutico o a un ion radioisótopo.
Los anticuerpos monoclonales
CHIR-5.9 y CHIR-12.12 se unen a CD40
soluble en ensayos de tipo ELISA, evitan la unión del ligando de
CD40 al CD40 de la superficie celular, y desplazan el ligando de
CD40 previamente unido, según se determina por ensayos de
citometría de flujo. Los anticuerpos CHIR-5.9 y
CHIR-12.12 compiten uno con el otro por la unión a
CD40 pero no con 15B8, el anticuerpo monoclonal anti CD40 descrito
en el documento WO 02/28904. Cuando se prueban in vitro los
efectos en la proliferación de células B de sujetos humanos
normales, CHIR-5.9 y CHIR-12.12
actúan como anticuerpos anti CD40 antagonistas. Además,
CHIR-5.9 y CHIR-12.12 no inducen
fuerte proliferación de linfocitos humanos de sujetos normales.
Estos anticuerpos son capaces de matar las células diana que
expresan CD40 por citotoxicidad celular dependiente de anticuerpo
(ADCC). La afinidad de unión de CHIR-5.9 por el
CD40 humano es de 1,2 x 10^{-8} M y la afinidad de unión de
CHIR-12.12 es de 5 x 10^{-10} M, según se
determina por medio del ensayo Biacore^{TM}.
Los anticuerpos anti CD40 antagonistas adecuados
para uso en los procedimientos de la presente invención exhiben una
fuerte afinidad de unión de sitio único por el antígeno CD40 de
superficie celular. Los anticuerpos monoclonales de la invención
exhiben una constante de equilibrio de disociación (K_{D}) para
CD40 de al menos 10^{-5} M, al menos 3 X 10^{-5} M, de
preferencia al menos 10^{-6} M hasta 10^{-7} M, de más
preferencia al menos 10^{-8} M hasta aproximadamente 10^{-12}
M, medida usando un ensayo convencional tal como Biacore^{TM}. El
análisis Biacore se conoce en la técnica y se proporcionan detalles
en el "BIAapplications handbook". Los procedimientos descritos
en el documento WO 01/27160 pueden usarse para modular la afinidad
de unión.
Se entiende por "antígeno CD40",
"antígeno CD40 de superficie celular", "receptor de CD40"
o "CD40" una glicoproteína transmembranaria que pertenece a la
familia de receptores del factor de necrosis tumoral (TNF) (véase,
por ejemplo las Patentes de EEUU Nº 5.674.492 y 4.708.871;
Stamenkovic y col. (1989) EMBO 8: 1403; Clark (1990) Tissue
Antigens 36: 33; Barclay y col. (1997) The Leucocyte Antigen Facts
Book (2ª ed.; Academic Press, San Diego)). Se han identificado dos
isoformas de CD40 humano, codificadas por variantes de transcripción
con cortes y empalmes alternativos de este gen. La primera isoforma
(también conocida como la "isoforma larga" o "isoforma
1") se expresa como un polipéptido precursor de 277 aminoácidos
(SEC ID Nº 12 (informada primero en GenBank con Nº de acceso
CAA43045, e identificada como isoforma 1 en GenBank con Nº de acceso
NP 001241), codificado por SEC ID Nº 11 (véase Nº de acceso de
GenBank X60592 y NM 001250)), que tiene una secuencia señal
representada por los primeros 19 residuos. La segunda isoforma
(también conocida como la "isoforma corta" o "isoforma
2") se expresa como un polipéptido precursor de 203 aminoácidos
(SEC ID Nº 10 (Nº de acceso de GenBank NP 690593), codificado por
SEC ID Nº 9 (Nº de acceso de GenBank NM 152854)), que también tiene
una secuencia señal representada por los primeros 19 residuos. Los
polipéptidos precursores de estas dos isoformas de CD40 humano
comparten en común sus primeros 165 residuos (es decir, los residuos
1-165 de SEC ID Nº 10 y SEC ID Nº 12). El
polipéptido precursor de la isoforma corta (mostrado en SEC ID Nº
10) está codificado por una variante de transcripción (SEC ID Nº 9)
que carece de un segmento codificador, que da lugar a un cambio del
marco de traducción; la isoforma de CD40 resultante contiene un
extremo C terminal más corto y diferente (residuos
166-203 de SEC ID Nº 10) del que está contenido en
la isoforma larga de CD40 (extremo C terminal mostrado en los
residuos 166-277 de SEC ID Nº 12). Para los fines de
la presente invención, el término "antígeno CD40", "antígeno
CD40 de superficie celular", "receptor de CD40" o
"CD40" abarca tanto la isoforma corta como la larga de CD40.
Los anticuerpos anti CD40 de la presente invención se unen a un
epítopo de CD40 humano que se encuentra en la misma situación
dentro de la isoforma corta o la isoforma larga de este antígeno de
superficie celular como se señala a continuación en el
presente
documento.
documento.
El antígeno CD40 está expuesto en la superficie
de una diversidad de tipos celulares, según se describe en otras
partes en el presente documento. Por "expuesto en la
superficie" y "expresado en la superficie" se entiende que
todo o una parte del antígeno CD40 está expuesto al exterior de la
célula. El antígeno CD40 expuesto o expresado puede estar total o
parcialmente glicosilado.
Por "actividad agonista" se entiende que la
sustancia funciona como un agonista. Un agonista se combina con un
receptor en una célula e inicia una reacción o actividad que es
similar a la misma que se inicia por el ligando natural del
receptor. Un agonista de CD40 induce, pero no se limita a,
cualquiera o todas las siguientes respuestas: proliferación y
diferenciación de células B, producción de anticuerpos, adhesión
intercelular, generación de memoria de células B, cambio de
isotipo, regulación ascendente de la expresión en la superficie
celular de MHC clase II y CD80/86, y secreción de citocinas
proinflamatorias tales como IL-8,
IL-12 y TNF. Por "actividad antagonista" se
entiende que la sustancia funciona como un antagonista. Un
antagonista de CD40 evita o reduce la inducción de cualquiera de
las respuestas inducidas por la unión del receptor de CD40 a un
ligando agonista, en particular CD40L. El antagonista puede reducir
la inducción de una o más de las respuestas a la unión de agonistas
en un 5%, 10%, 15%, 20%, 25%, 30%, 35%, de preferencia 40%, 45%,
50%, 55%, 60%, de más preferencia 70%, 80%, 85% y de mayor
preferencia 90%, 95%, 99% ó 100%. Los procedimientos para medir la
especificidad de unión y la actividad de antagonista de anticuerpos
anti CD40 y ligandos de CD40 son conocidos por los expertos en la
técnica e incluyen, pero no se limitan a, ensayos de unión
competitiva convencionales, ensayos para controlar la secreción de
inmunoglobulinas por las células B, ensayos de proliferación de
células B, ensayos de proliferación de células B análogos a
Banchereau, ensayos de células T ayudantes para la producción de
anticuerpos, ensayos de proliferación de células B con
coestimulación y ensayos para regulación ascendente de marcadores
de activación de células B. Véase, por ejemplo, los ensayos dados a
conocer en el documento WO 00/75348 y en la Patente de EEUU Nº
6.087.329.
Por actividad antagonista "significativa"
se entiende una actividad agonista de al menos 30%, 35%, 40%, 45%,
50%, 60%, 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95% ó 100% superior a la
actividad agonista inducida por una sustancia neutra o un control
negativo según se mide en el ensayo de una respuesta de células B.
De preferencia, la actividad agonista "significativa" es una
actividad agonista que es al menos 2 veces mayor o al menos 3 veces
mayor que la actividad agonista inducida por una sustancia neutra o
un control negativo según se mide en el ensayo de una respuesta de
células B. Por consiguiente, por ejemplo, cuando la respuesta de
células B de interés es la proliferación de células B, la actividad
agonista "significativa" sería la inducción de un nivel de
proliferación de células B que es al menos 2 veces mayor o al menos
3 veces mayor que el nivel de proliferación de células B inducido
por una sustancia neutra o un control negativo. En una forma de
realización, una inmunoglobulina no específica, por ejemplo IgG1,
que no se une a CD40 sirve como el control negativo. Una sustancia
"exenta de actividad agonista significativa" exhibirá una
actividad agonista de no más que aproximadamente 25% mayor que la
actividad agonista inducida por una sustancia neutra o un control
negativo, de preferencia no más que aproximadamente 20% mayor, 15%
mayor, 10% mayor, 5% mayor, 1% mayor, 0.5% mayor, o incluso no más
que aproximadamente 0,1% mayor que la actividad agonista inducida
por una sustancia neutra o un control negativo según se mide en un
ensayo de una respuesta de células B. Los anticuerpos anti CD40
antagonistas útiles en los procedimientos de la presente invención
están exentos de actividad agonista significativa como se señaló
anteriormente cuando se unen a un antígeno CD40 en una célula
humana. En una forma de realización de la invención, el anticuerpo
anti CD40 antagonista está exento de actividad agonista
significativa en una respuesta de células B. En otra forma de
realización de la invención, el anticuerpo anti CD40 antagonista
está exento de actividad agonista significativa en ensayos de más
de una respuesta de células B (por ejemplo, proliferación y
diferenciación, o proliferación, diferenciación y producción
de
anticuerpos).
anticuerpos).
Los anticuerpos monoclonales contra CD40 son
conocidos en la técnica. Véase, por ejemplo, las secciones dedicadas
a antígenos de células B en McMichael, ed. (1987; 1989). Leukocyte
Typing III and IV (Oxford University Press, Nueva York); Patentes
de EEUU Nº 5.674.492; 5.874.082; 5.677.165; 6.056.959; documento WO
00/63395; documentos de Publicación Internacional Nº WO 02/28905 y
WO 02/28904; Gordon y col. (1988) J. Immunol. 140: 1425; Valle y
col. (1989) Eur. J. Immunol. 19: 1463; Clark y col. (1986) PNAS 83:
4494; Paulie y col. (1989) J. Immunol. 142: 590; Gordon y col.
(1987) Eur. J. Immunol. 17: 1535; Jabara y col. (1990) J. Exp. Med.
172: 1861; Zhang y col. (1991) J. Immunol. 146: 1836; Gascan y col.
(1991) J. Immunol. 147: 8; Banchereau y col. (1991) Clin. Immunol.
Spectrum 3: 8; y Banchereau y col. (1991) Science 251: 70. Son de
particular interés para la presente invención los anticuerpos anti
CD40 antagonistas dados a conocer en el presente documento que
comparten las características de unión de los anticuerpos
monoclonales CHIR-5.9 y CHIR-12.12
descritos anteriormente. Tales anticuerpos incluyen, pero no se
limitan a, los siguientes: (1) los anticuerpos monoclonales
producidos por las líneas celulares de hibridoma denominadas
131.2F8.5.9 (a la que se hace referencia en el presente documento
como línea celular 5.9) y 153.8E2.D10.D6.12.12 (a la que se hace
referencia en el presente documento como línea celular 12.12),
depositadas en la ATCC como Depósito de Patente Nº
PTA-5542 y Depósito de Patente Nº
PTA-5543, respectivamente; (2) un anticuerpo
monoclonal que comprende una secuencia de aminoácidos seleccionada
del grupo constituido por la secuencia mostrada en SEC ID Nº 2, la
secuencia mostrada en SEC ID Nº 4, la secuencia mostrada en SEC ID
Nº 5, las secuencias mostradas en SEC ID Nº 2 y SEC ID Nº 4, y por
las secuencias mostradas en SEC ID Nº 2 y SEC ID Nº 5; (3) un
anticuerpo monoclonal que comprende la secuencia de aminoácidos
seleccionada del grupo constituido por la secuencia mostrada en SEC
ID Nº 6, la secuencia mostrada en SEC ID Nº 7, la secuencia
mostrada en SEC ID Nº 8, las secuencias mostradas en SEQ ID NO:6 y
SEC ID Nº 7, y por las secuencias mostradas en SEC ID Nº 6 y SEC ID
Nº 8; (4) un anticuerpo monoclonal que tiene la secuencia de
aminoácidos codificada por una molécula de ácido nucleico que
comprende una secuencia de nucleótidos seleccionada del grupo
constituido por la secuencia de nucleótidos mostrada en SEC ID Nº 1,
la secuencia de nucleótidos mostrada en SEC ID Nº 3, y las
secuencias de nucleótidos mostradas en SEC ID Nº y SEC ID Nº 3; (5)
un anticuerpo monoclonal que se une a un epítopo capaz de unirse al
anticuerpo monoclonal producido por la línea celular de hibridoma
5.9 o la línea celular de hibridoma 12.12; (6) un anticuerpo
monoclonal que se une a un epítopo que comprende los residuos
82-87 de la secuencia de aminoácidos mostrada en SEC
ID Nº 10 o SEC ID Nº 12; (7) un anticuerpo monoclonal que compite
con el anticuerpo monoclonal CHIR-5.9 o
CHIR-12.12 en un ensayo de unión competitiva; y (8)
un anticuerpo monoclonal que es un fragmento del anticuerpo
monoclonal CHIR-12.12 o CHIR-5.9 que
se une al antígeno o los anticuerpos monoclonales anteriores en los
puntos anteriores (1)-(7), en los que el fragmento retiene la
capacidad de unirse específicamente al antígeno CD40 humano.
Los anticuerpos anti CD40 antagonistas y para
uso en los procedimientos descritos en el presente documento pueden
producirse mediante cualquier procedimiento de producción de
anticuerpos conocido por los expertos en la técnica. Por
consiguiente, pueden prepararse sueros policlonales por medio de
procedimientos convencionales. En general, primero se utiliza una
disolución que contiene el antígeno CD40 para inmunizar a un animal
adecuado, de preferencia un ratón, rata, conejo o cabra. Los
conejos o cabras son de preferencia para la preparación de sueros
policlonales por el volumen de suero que puede obtenerse y la
disponibilidad de anticuerpos anti conejo y anti cabra marcados.
Pueden prepararse sueros policlonales en un
animal transgénico, de preferencia un ratón que lleva loci de
inmunoglobulina humana. En una forma de realización de preferencia,
se usan células Sf9 que expresan CD40 como el inmunógeno. La
inmunización también puede llevarse a cabo mezclando o emulsionando
la disolución que contiene el antígeno en disolución salina, de
preferencia en un adyuvante tal como el adyuvante completo de
Freund, e inyectando por vía intravenosa la mezcla o emulsión por
vía parenteral (generalmente por vía subcutánea o intramuscular).
Típicamente es suficiente una dosis de 50-200
\mug/inyección. La inmunización se estimula por lo general
2-6 semanas más tarde con una o más inyecciones de
la proteína en disolución salina, de preferencia usando adyuvante
incompleto de Freund. Como alternativa, pueden también generarse
anticuerpos mediante inmunización in vitro usando
procedimientos conocidos en la técnica, que para los fines de esta
invención se considera equivalente a la inmunización in
vivo. Los antisueros policlonales se obtienen por extracción de
sangre de los animales inmunizados en un recipiente de vidrio o de
plástico, incubando la sangre a 25ºC durante una hora, seguido por
la incubación a 4ºC durante 2-18 horas. El suero se
recupera por centrifugación (por ejemplo, 1.000 g x durante 10
minutos). Pueden obtenerse aproximadamente 20-50 ml
por extracción de sangre de conejos...
La producción de células Sf9 (Spodoptera
frugiperda) se da a conocer en la Patente de EEUU Nº 6.004.552.
En resumen, se combinaron secuencias que codifican CD40 humano en un
baculovirus usando vectores de transferencia. Los plásmidos se
cotransfectaron con ADN de baculovirus de tipo silvestre en células
Sf9. Las células Sf9 infectadas con baculovirus recombinante se
identificaron y se purificaron como clones.
De preferencia el anticuerpo es monoclonal en la
naturaleza. Los anticuerpos monoclonales son muy específicos,
estando dirigidos contra un único sitio antigénico, es decir, el
antígeno CD40 de superficie celular. Además, a diferencia de las
preparaciones de anticuerpos (policlonales) convencionales que
típicamente incluyen diferentes anticuerpos dirigidos contra
diferentes determinantes (epítopos), cada anticuerpo monoclonal está
dirigido contra un único determinante en el antígeno. El
modificador "monoclonal" indica el carácter del anticuerpo ya
que se obtiene de una población sustancialmente homogénea de
anticuerpos, y no debe interpretarse como que es necesaria la
producción del anticuerpo por ningún procedimiento particular. Por
ejemplo, los anticuerpos monoclonales que se utilizan según la
presente invención pueden obtenerse por el procedimiento de
hibridomas descrito por primera vez por Kohler y col. (1975) Nature
256: 495, o pueden producirse por los procedimientos de ADN
recombinante (véase, por ejemplo, Patente de EEUU Nº 4.816.567). Los
"anticuerpos monoclonales" pueden aislarse también de
bibliotecas de anticuerpos de fagos usando las técnicas descritas
en, por ejemplo, Clackson y col. (1991) Nature 352:
624-628; Marks y col. (1991) J Mol. Biol. 222:
581-597; y en la Patente de EEUU Nº 5.514.548.
Por "epítopo" se entiende la parte de la
molécula antigénica para la que se produce un anticuerpo y a la que
se unirá el anticuerpo. Los epítopos pueden comprender residuos
lineales de aminoácidos (es decir, los residuos en el epítopo están
organizados consecutivamente uno después de otro en forma lineal),
residuos no lineales (a los que se hace referencia en el presente
documento como "epítopos no lineales"; estos epítopos no están
organizados de forma consecutiva), o residuos de aminoácidos tanto
lineales como no lineales.
Los anticuerpos monoclonales pueden prepararse
usando el procedimiento de Kohler y col. (1975) Nature 256:
495-496, o una de sus modificaciones. Típicamente,
se inmuniza un ratón con una disolución que contiene el antígeno.
La inmunización puede llevarse a cabo mezclando o emulsionando la
disolución que contiene el antígeno en disolución salina, de
preferencia en un adyuvante tal como el adyuvante completo de
Freund, e inyectando la mezcla o emulsión por vía parenteral. Puede
usarse cualquier procedimiento de inmunización conocido en la
técnica para obtener anticuerpos monoclonales de la invención. Tras
la inmunización del animal, se extirpa el bazo (y de manera
opcional, varios ganglios linfáticos grandes) y se separan las
células individuales. Las células del bazo pueden seleccionarse
aplicando una suspensión de células a una placa o pocillo recubierto
con el antígeno de interés. Las células B que expresan la
inmunoglobulina unida a membrana específica para el antígeno se
unen a la placa y no se eliminan por aclarado. A continuación se
induce la fusión de las células B resultantes, o de todas las
células separadas del bazo, con células de mieloma para formar
hibridomas, y se cultivan en un medio selectivo. Las células
resultantes se plaquean por dilución en serie y se realiza el
ensayo de producción de anticuerpos que se unen específicamente al
antígeno de interés (y que no se unen a antígenos no relacionados).
A continuación se cultivan los hibridomas que secretan el anticuerpo
monoclonal (mAb) seleccionado in vitro (por ejemplo, en
frascos de cultivo tisular o reactores de fibras huecas), o in
vivo (como ascitis en ratones).
Cuando los anticuerpos anti CD40 antagonistas de
la invención deben prepararse utilizando procedimientos de ADN
recombinante, el ADN que codifica los anticuerpos monoclonales se
aísla y secuencia fácilmente usando procedimientos convencionales
(por ejemplo, mediante el uso de sondas de oligonucleótidos que son
capaces de unirse específicamente a genes que codifican las cadenas
ligeras y pesadas de anticuerpos murinos). Las células de hibridoma
descritas en el presente documento sirven como una fuente de
preferencia de tal ADN. Una vez aislado, el ADN puede colocarse en
vectores de expresión, que a continuación se transfectan en las
células huésped tales como células de E. coli, células COS de
simio, células de ovario de hámster chino (CHO) o células de
mieloma que no producen de otra manera proteína inmunoglobulina,
para obtener la síntesis de anticuerpos monoclonales en las células
huésped recombinantes. Los artículos de recopilación sobre expresión
recombinante en bacterias de ADN que codifica el anticuerpo
incluyen Skerra y col. (1993) Curr. Opinion in Immunol. 5: 256 y
Phickthun (1992) Immunol. Revs. 130: 151. Como alternativa, puede
producirse anticuerpo en una línea celular tal como una línea
celular CHO, como se da a conocer en las Patentes de EEUU Nº
5.545.403; 5.545.405; y 5.998.144. En resumen, la línea celular se
transfecta con vectores capaces de expresar una cadena ligera y una
cadena pesada, respectivamente. Transfectando las dos proteínas en
vectores separados, pueden producirse anticuerpos quiméricos. Otra
ventaja es la glicosilación correcta del anticuerpo.
En algunas formas de realización, el anticuerpo
anti CD40 antagonista, por ejemplo el anticuerpo
CHIR-12.12 o CHIR-5.9, o su
fragmento de unión al antígeno se produce en células CHO usando el
sistema de expresión de genes GS (Lonza Biologics, Portsmouth, New
Hampshire), que usa glutamina sintetasa como un marcador. Véase
también las Patentes de EEUU Nº 5.122.464; 5.591.639; 5.658.759;
5.770.359; 5.827.739; 5.879.936; 5.891.693; y 5.981.216.
La expresión "epítopo del antígeno" según
se utiliza en el presente documento se refiere a una estructura
molecular tridimensional (lineal o conformacional) que es capaz de
tener inmunorreactividad con un anticuerpo monoclonal anti CD40.
Los epítopos del antígeno pueden comprender proteínas, fragmentos de
proteínas, péptidos, hidratos de carbono, lípidos y otras
moléculas, pero para los fines de la presente invención son más
comúnmente proteínas, oligopéptidos cortos, miméticos de
oligopéptidos (es decir, compuestos orgánicos que imitan las
propiedades de unión al anticuerpo del antígeno CD40), o sus
combinaciones. Los miméticos de oligopéptidos adecuados se
describen, entre otros, en la solicitud de PCT US 91/04282.
Además, el término "anticuerpo" según se
utiliza en el presente documento abarca anticuerpos quiméricos anti
CD40. Los anticuerpos anti CD40 quiméricos para uso en los
procedimientos de la invención tienen las características de unión
de los anticuerpos monoclonales CHIR-5.9 o
CHIR-12.12. Por anticuerpos "quiméricos" se
entiende que de más preferencia se obtienen usando técnicas de
ácido desoxirribonucleico recombinante y que comprenden tanto
componentes humanos (incluidas especies inmunológicamente
"relacionadas", por ejemplo, chimpancé) como no humanos. Por
consiguiente, la región constante del anticuerpo quimérico es de más
preferencia sustancialmente idéntica a la región constante de un
anticuerpo natural humano; la región variable del anticuerpo
quimérico de más preferencia se obtiene de una fuente no humana y
tiene la especificidad antigénica deseada para el antígeno CD40 de
superficie celular. La fuente no humana puede ser cualquier fuente
de vertebrado que pueda usarse para generar anticuerpos contra un
antígeno CD40 humano de superficie celular o material que comprenda
un antígeno CD40 humano de superficie celular. Tales fuentes no
humanas incluyen, pero no se limitan a, roedores (por ejemplo,
conejo, rata, ratón, etc.; véase, por ejemplo, la Patente de EEUU Nº
4.816.567) y primates no humanos (por ejemplo, mono del viejo
mundo, simio, etc.; véase, por ejemplo, las Patentes de EEUU Nº
5.750.105 y 5.756.096). Según se usa en el presente documento, la
frase "inmunológicamente activo" cuando se usa en referencia a
anticuerpos anti CD40 quiméricos significa un anticuerpo quimérico
que se une a CD40 humano.
Los anticuerpos anti CD40 humanizados
representan anticuerpos anti CD40 adicionales adecuados para usar en
los procedimientos descritos en el presente documento. Por
"humanizado" se entienden formas de anticuerpos anti CD40 que
contienen una secuencia mínima derivada de secuencias de
inmunoglobulinas no humanas. En su mayoría, los anticuerpos
humanizados son inmunoglobulinas humanas (anticuerpo receptor) en
las que están reemplazados residuos de una región hipervariable
(también conocida como región determinante de complementariedad o
CDR) del receptor por residuos de una región hipervariable de una
especie no humana (anticuerpo donador) tal como ratón, rata, conejo
o primate no humano que tiene la especificidad, afinidad y capacidad
deseadas. La expresión "región determinante de
complementariedad" se refiere a las secuencias de aminoácidos que
juntas definen la afinidad y especificidad de unión de la región Fv
natural de un sitio de unión de inmunoglobulina nativa. Véase, por
ejemplo, Chothia y col. (1987) J. Mol. Biol. 196:
901-917; Kabat y col. (1991) U.S. Dept of Health
and Human Services, Publicación NIH Nº 91-3242). La
expresión "región constante" se refiere a la parte de la
molécula de anticuerpo que confiere funciones de efector. En
trabajos anteriores dirigidos a la producción de anticuerpos no
inmunogénicos para uso en terapia de enfermedades humanas, se
sustituyeron regiones constantes de ratón por regiones constantes
humanas. Las regiones constantes de los anticuerpos humanizados del
sujeto se obtuvieron de inmunoglobulinas humanas. Sin embargo,
estos anticuerpos humanizados aún provocaron una respuesta inmune
no deseada y potencialmente peligrosa en seres humanos y hubo
pérdida de afinidad. Los anticuerpos anti CD40 humanizados para uso
en los procedimientos de la presente invención tienen
características de unión similares a las exhibidas por los
anticuerpos monoclonales CHIR-5.9 y
CHIR-12.12 descritos en el presente documento.
La humanización puede realizarse esencialmente
siguiendo el procedimiento de Winter y colaboradores (Jones y col.
(1986) Nature 321: 522-525; Riechmann y col. (1988)
Nature 332: 323-327; Verhoeyen y col. (1988) Science
239: 1534-1536), sustituyendo secuencias de un
anticuerpo humano por las correspondientes CDR o secuencias CDR de
roedores o roedores mutantes. Véase también las Patentes de EEUU Nº
5.225.539; 5.585.089; 5.693.761; 5.693.762; 5.859.205. En algunos
casos, los residuos dentro de las regiones marco de una o más
regiones variables de la inmunoglobulina humana se reemplazan por
los correspondientes residuos no humanos (véase, por ejemplo, las
Patentes de EEUU Nº 5.585.089; 5.693.761; 5.693.762; y 6.180.370).
Además, los anticuerpos humanizados pueden comprender residuos que
no se encuentran en el anticuerpo receptor ni en el anticuerpo
donador. Estas modificaciones se realizan para refinar más el
rendimiento del anticuerpo (por ejemplo, para obtener la afinidad
deseada). En general, en anticuerpo humanizado comprenderá
sustancialmente todo de al menos uno, y típicamente dos, dominios
variables, en el que todas o sustancialmente todas las regiones
hipervariables corresponden a los de una inmunoglobulina no humana
y todas o sustancialmente todas las regiones marco son las de una
secuencia de inmunoglobulina humana. El anticuerpo humanizado
también comprenderá opcionalmente al menos una parte de una región
constante (Fc) de inmunoglobulina, típicamente la de una
inmunoglobulina humana. Para más detalles, véase Jones y col.
(1986) Nature 331: 522-525; Riechmann y col. (1988)
Nature 332: 323-329; y Presta (1992) Curr. Op.
Struct. Biol. 2:593-596. Por consiguiente, tales
anticuerpos "humanizados" pueden incluir anticuerpos en los
que sustancialmente menos de un dominio variable intacto humano se
ha sustituido por la secuencia correspondiente de una especie no
humana. En la práctica, los anticuerpos humanizados son típicamente
anticuerpos humanos en los que algunos residuos de CDR y
posiblemente algunos residuos del marco están sustituidos por
residuos de sitios análogos en anticuerpos de roedores. Véase, por
ejemplo, las Patentes de EEUU Nº 5.225.539; 5.585.089; 5.693.761;
5.693.762; 5.859.205. Véase también la Patente de EEUU Nº 6.180.370,
y el documento de Publicación Internacional WO 01/27160, en los que
se dan a conocer anticuerpos humanizados y técnicas para producir
anticuerpos humanizados que tienen mejor afinidad para un antígeno
predeterminado.
También están abarcados por el término
anticuerpos anti CD40 los anticuerpos anti CD40 xenogénicos o
modificados producidos en un huésped mamífero no humano, más
particularmente un ratón transgénico, caracterizados por loci de
inmunoglobulina (Ig) endógena inactivados. En tales animales
transgénicos, los genes endógenos competentes para la expresión de
las subunidades ligera y pesada de las inmunoglobulinas del huésped
se convierten en no funcionales y se sustituyen con los loci
análogos de inmunoglobulina humana. Estos animales transgénicos
producen anticuerpos humanos en ausencia sustancial de subunidades
ligera o pesada de inmunoglobulina del huésped. Véase, por ejemplo,
la Patente de EEUU Nº 5.877.397 y 5.939.598.
De preferencia, los anticuerpos totalmente
humanos contra CD40 se obtienen inmunizando ratones transgénicos.
Uno de tales ratones se obtiene usando tecnología XenoMouse®
(Abgenix; Fremont, California), y se da a conocer en las Patentes
de EEUU Nº 6.075.181, 6.091.001 y 6.114.598. Para producir los
anticuerpos que se dan a conocer en el presente documento, se
inmunizaron ratones transgénicos para el locus de cadena pesada de
IgG_{1} humana y el locus de cadena ligera \kappa humana con
células Sf9 que expresan CD40 humano. Los ratones también pueden
ser transgénicos para otros isotipos. Los anticuerpos totalmente
humanos útiles en los procedimientos de la presente invención se
caracterizan por tener propiedades de unión similares a las
exhibidas por los anticuerpos monoclonales CHIR-5.9
y CHIR-12.12 descritos en el presente documento.
Los fragmentos de un anticuerpo de unión al
antígeno adecuados comprenden una parte de un anticuerpo de longitud
total, por lo general la región de unión al antígeno o una de sus
regiones variables. Los ejemplos de fragmentos de anticuerpos
incluyen, pero no se limitan a, fragmentos Fab, F(ab')_{2}
y Fv y moléculas de anticuerpos de cadena simple. Por "Fab" se
entiende un fragmento monovalente de una inmunoglobulina que se une
al antígeno que está compuesto por la cadena ligera y parte de la
cadena pesada. Por F(ab')_{2} se entiende un fragmento
bivalente de una inmunoglobulina que se une al antígeno que contiene
ambas cadenas ligeras y parte de ambas cadenas pesadas. Por "Fv
de cadena simple" o fragmentos "sFv" del anticuerpo se
entiende fragmentos que comprenden los dominios V_{H} y V_{L}
de un anticuerpo, en los que estos dominios están presentes en una
cadena polipeptídica simple. Véase, por ejemplo, las Patentes de
EEUU Nº 4.946.778, 5.260.203, 5.455.030 y 5.856.456. Por lo general,
el polipéptido Fv comprende además un conector de polipéptido entre
los dominios V_{H} y V_{L} que permite al sFv formar la
estructura deseada para la unión del antígeno. Para una revisión de
sFv véase Pluckthun (1994) en The Pharmacology of Monoclonal
Antibodies, Vol. 113, ed. Rosenburg and Moore
(Springer-Verlag, Nueva York), páginas
269-315.
Los anticuerpos o fragmentos de anticuerpos
pueden aislarse de bibliotecas de anticuerpos de fagos generadas
usando las técnicas descritas en, por ejemplo, McCafferty y col.
(1990) Nature 348: 552-554 (1990) y en la Patente
de EEUU Nº 5.514.548. Clackson y col. (1991) Nature 352:
624-628 y Marks y col. (1991) J. Mol. Biol. 222:
581-597 describen el aislamiento de anticuerpos
murinos y humanos, respectivamente, usando bibliotecas de fagos.
Publicaciones posteriores describen la producción de anticuerpos
humanos de alta afinidad (del orden de nM) por mezcla aleatoria de
cadenas (Marks y col. (1992) Biol/Technology
10:779-783), así como por infección combinatoria y
recombinación in vivo como una estrategia para construir
bibliotecas de fagos muy grandes (Waterhouse y col. (1993) Nucleic,
Acids Res. 21: 2265-2266). Por consiguiente, estas
técnicas son alternativas viables a las técnicas tradicionales de
hibridomas de anticuerpos monoclonales para el aislamiento de
anticuerpos monoclonales.
Se han desarrollado diversas técnicas para la
producción de fragmentos de anticuerpos. Tradicionalmente, estos
fragmentos se obtuvieron por digestión proteolítica de anticuerpos
intactos (véase, por ejemplo, Morimoto y col. (1992) Journal of
Biochemical and Biophysical Methods 24: 107-117
(1992) y Brennan y col. (1985) Science 229: 81). Sin embargo, estos
fragmentos pueden producirse ahora directamente por medio de células
huésped recombinantes. Por ejemplo, los fragmentos de anticuerpos
pueden aislarse de la biblioteca de anticuerpos de fagos analizada
anteriormente. Como alternativa, los fragmentos
Fab'-SH pueden recuperarse directamente de E.
coli y pueden acoplarse químicamente para formar fragmentos
F(ab')_{2} (Carter y col. (1992) Bio/Technology 10:
163-167). Según otro enfoque, los fragmentos
F(ab')_{2} pueden aislarse directamente del cultivo de
células huésped recombinantes. Otra técnica para la producción de
fragmentos de anticuerpos resultará evidente para el experto en la
técnica.
Los anticuerpos anti CD40 antagonistas útiles en
los procedimientos de la presente invención incluyen los
anticuerpos monoclonales CHIR-5.9 y CHIR 12.12 dados
a conocer en el presente documento así como los anticuerpos que
difieren de estos anticuerpos pero que retienen las CDR; y los
anticuerpos con una o más adiciones, deleciones o sustituciones, en
los que la actividad antagonista se mide por inhibición de la
proliferación y/o diferenciación de las células B. La invención
también abarca los anticuerpos anti CD40 antagonistas
desinmunizados, que pueden producirse como se describe en, por
ejemplo, los documentos de Publicación Internacional Nº WO 98/52976
y WO 0034317. De esta manera, los residuos dentro de los
anticuerpos anti CD40 antagonistas de la invención se modifican
para convertir a los anticuerpos en no inmunogénicos o menos
inmunogénicos para los seres humanos manteniendo al mismo tiempo su
actividad antagonista hacia las células humanas que expresan CD40,
en los que tal actividad se mide por medio de los ensayos señalados
en otra parte en el presente documento. También se incluyen dentro
del alcance de las reivindicaciones las proteínas de fusión que
comprenden un anticuerpo anti CD40 antagonista de la invención, o
uno de sus fragmentos, cuyas proteínas de fusión pueden sintetizarse
o expresarse a partir de vectores de polinucleótidos
correspondientes, como se conoce en la técnica. Tales proteínas de
fusión se describen con referencia a la conjugación de anticuerpos
como se señala a continuación.
Los anticuerpos útiles en la práctica de los
procedimientos descritos en el presente documento pueden tener
variaciones de secuencia producidas usando los procedimientos
descritos en, por ejemplo, los documentos de Publicación de Patente
Nº EP 0 983 303 A1, WO 00/34317 y WO 98/52976.
Por ejemplo, se ha mostrado que las secuencias
dentro de la CDR pueden provocar que un anticuerpo se una a MAC
Clase II y desencadenar una respuesta de células T colaboradoras no
deseada. Una sustitución conservadora puede permitir que el
anticuerpo retenga la actividad de unión y aún pierda su capacidad
para desencadenar una respuesta de células T no deseada. Cualquiera
de tales sustituciones conservadoras o no conservadoras puede
realizarse usando procedimientos reconocidos en la técnica, tales
como los señalados en otra parte en el presente documento, y los
anticuerpos resultantes se encontrarán dentro del alcance de la
invención. Los anticuerpos variantes pueden probarse de manera
rutinaria para verificar su actividad antagonista, afinidad y
especificidad usando los procedimientos descritos en el presente
documento.
Un anticuerpo producido por cualquiera de los
procedimientos descritos anteriormente, o cualquier otro
procedimiento no dado a conocer en el presente documento, se
encontrará dentro del alcance de esta descripción si posee al menos
una de las siguientes actividades biológicas: inhibición de la
secreción de inmunoglobulinas por las células B periféricas humanas
normales estimuladas por células T; inhibición de la supervivencia
y/o proliferación de células B periféricas humanas normales
estimuladas por células T Jurkat; inhibición de la proliferación de
células B periféricas humanas normales estimuladas por células que
expresan CD40L o ligando de CD40 soluble;e inhibición de la
proliferación de células B neoplásicas humanas como se señala a
continuación.
Véase también los ensayos descritos en Schultze
y col. (1998) Proc. Natl. Acad Sci. USA 92:
8200-8204; Denton y col. (1998) Pediatr.
transplant. 2: 6-15; Evans y col. (2000) J. Immunol.
164: 688-697; Noelle (1998) Agents Actions Suppl.
49: 17-22; Lederman y col. (1996) Curr. Opin.
Hematol. 3: 77-86; Coligan y col. (1991) Current
Protocols in Immunology 13: 12; Kwekkeboom y col. (1993) Immunology
79: 439-444; y Patentes de EEUU Nº 5.674.492 y
5.847.082.
Un ensayo representativo para detectar
anticuerpos anti CD40 antagonistas específicos para los epítopos del
antígeno CD40 identificado en el presente documento es un "ensayo
de unión competitiva". Los ensayos de unión competitiva son
ensayos serológicos en los que el desconocido se detecta y
cuantifica por su capacidad para inhibir la unión de un ligando
conocido marcado a su anticuerpo específico. Esto también se conoce
como un ensayo de inhibición competitiva. En un ensayo de unión
competitiva representativo, se precipita el polipéptido CD40
marcado por medio de anticuerpos candidato en una muestra, por
ejemplo, en combinación con anticuerpos monoclonales surgidos
contra uno o más epítopos de los anticuerpos monoclonales de la
invención. Los anticuerpos anti CD40 que reaccionan específicamente
con un epítopo de interés pueden identificarse seleccionando una
serie de anticuerpos preparados contra una proteína CD40 o fragmento
de la proteína que comprende el epítopo particular de la proteína
CD40 de interés. Por ejemplo, para CD40 humano, los epítopos de
interés incluyen epítopos que comprenden residuos de aminoácido
lineales o no lineales de la isoforma corta del CD40 humano (véase
GenBank Nº de acceso NP 690593) presentada en la Figura 12 (SEC ID
Nº 10), codificada por la secuencia presentada en la Figura 12A
(SEC ID Nº 9; véase también GenBank Nº de acceso M 152854), o de la
isoforma larga de CD40 humano (véase GenBank Nº de acceso CAA43045
y NP 001241) presentada en la Figura 12D (SEC ID Nº 12), codificada
por la secuencia presentada en la Figura 12C (SEC ID Nº 11; véase
GenBank Nº de acceso X60592 y MN 001250). Como alternativa, podrían
usarse ensayos de unión competitiva con anticuerpos anti CD40
antagonistas adecuados identificados anteriormente para seleccionar
los anticuerpos monoclonales comparables a los anticuerpos
identificados anteriormente.
Cualquiera de los anticuerpos anti CD40
antagonistas (o sus fragmentos de unión a antígeno) descritos
previamente pueden conjugarse antes del uso en los procedimientos
de la presente invención. Los procedimientos para producir
anticuerpos conjugados son conocidos en la técnica. Por
consiguiente, el anticuerpo anti CD40 puede marcarse usando una
marcación indirecta o un enfoque de marcación indirecta. Por
"marcación indirecta" o "enfoque de marcación indirecta"
se entiende que un agente quelante se une covalentemente a un
anticuerpo y se inserta al menos un radionúclido en el agente
quelante. Véase, por ejemplo, los agentes quelantes y radionúclidos
descritos en Srivagtava and Mease (1991) Nucl. Med. Bio. 18:
589-603.
Los marcadores adecuados incluyen fluoróforos,
cromóforos, átomos radiactivos (especialmente ^{32}P y ^{125}I),
reactivos densos a electrones, enzimas y ligandos que tienen
parejas de unión específicas. Las enzimas se detectan normalmente
por su actividad. Por ejemplo, la peroxidasa del rábano picante se
detecta usualmente mediante su capacidad para convertir
3,3',5,5'-tetrametilbenzidina (TMB) en un pigmento
azul, cuantificable con un espectrofotómetro. "Pareja de unión
específica" se refiere a una proteína capaz de unirse a una
molécula de ligando con alta especificidad, como por ejemplo en el
caso de un antígeno y un anticuerpo monoclonal específico para
éste. Otras parejas de unión específica incluyen biotina y avidina o
estreptavidina, IgG y proteína A, y las numerosas parejas de
receptor-ligando conocidas en la técnica. Debería
entenderse que la descripción anterior no pretende categorizar los
diversos marcadores en diferentes clases, ya que el mismo marcador
puede servir en varios modos diferentes. Por ejemplo, ^{125}I
puede servir como un marcador radioactivo o como un reactivo denso
en electrones. HRP puede servir como enzima o como antígeno para un
mAb. Además, pueden combinarse diversos marcadores para el efecto
deseado. Por ejemplo, los mAb y la avidina también requieren
marcadores en la práctica de esta invención: por consiguiente, puede
marcarse un mAb con biotina, y detectarse su presencia con avidina
marcada con ^{125}I, o con un mAb anti-biotina
marcado con HRP. Otras permutaciones y posibilidades serán
fácilmente evidentes para los expertos en la técnica, y se
consideran como equivalentes dentro del alcance de la presente
invención.
Como alternativa, el anticuerpo anti CD40 puede
marcarse usando "marcación directa" o un "enfoque de
marcación directa", en el que un radionúclido se fija
covalentemente a un anticuerpo (típicamente a través de un residuo
de aminoácido). Los radionúclidos de preferencia se proporcionan en
Srivagtava and Mease (1991) supra. El enfoque de marcación
indirecta es particularmente de preferencia. Véase también, por
ejemplo, los documentos de Publicación Internacional Nº WO 00/52031
y WO 00/52473, en los que se usa un conector para fijar el marcador
radiactivo a los anticuerpos; y las formas marcadas de anticuerpos
anti CD40 descritas en la Patente de EEUU Nº 6.015.542.
Además, un anticuerpo (o su fragmento) puede
conjugarse a un resto terapéutico como una citotoxina, un agente
terapéutico, iones metálicos radiactivos o radioisótopos. Una
citotoxina o agente citotóxico incluye cualquier agente que es
perjudicial para las células. Algunos ejemplos incluyen taxol,
citochalasina B, gramicidina D, bromuro de etidio, emetina,
mitomicina, etopósido, tenopósido, vincristina, vinblastina,
colchicina, doxorrubicina, daunorrubicina, dihidroxi antracin
diona, mitoxantrona, mitramicina, actinomicina D,
1-dehidrotestosterona, glucocorticoides, procaína,
tetracaína, lidocaína, propranolol y puromicina, y sus análogos y
homólogos. Los agentes terapéuticos incluyen, pero no se limitan a,
antimetabolitos (por ejemplo, metotrexato,
6-mercaptopurina, 6-tioguanina,
citarabina, 5-fluorouracilo decarbazina), agentes
alquilantes (por ejemplo, mecloretamina, tioepa clorambucilo,
melfalán, carmustina (BSNU) y lomustina (CCNU), ciclofosfamida,
busulfán, dibromomanitol, estreptozotocina, mitomicina C y
cis-diclorodiamina platino (II) (DDP) cisplatino),
antraciclinas (por ejemplo, daunorrubicina (anteriormente
daunomicina) y doxorrubicina), antibióticos (por ejemplo,
dactinomicina (anteriormente actinomicina), bleomicina, mitramicina
y antramicina (AMC)) y agentes antimitóticos (por ejemplo,
vincristina y vinblastina) Los radioisótopos incluyen, pero no se
limitan a, I-131, I-123,
I-125, Y-90, Re-188,
Re-186, At-211,
Cu-67, Bi-212,
Bi-213, Pd-109,
Tc-99, In-111 y similares. Los
conjugados de la invención pueden utilizarse para modificar una
respuesta biológica determinada; no debe entenderse que el resto del
fármaco esté limitado a los agentes terapéuticos químicos clásicos.
Por ejemplo, el resto del fármaco puede ser una proteína o un
polipéptido que tenga una actividad biológica deseada. Tales
proteínas pueden incluir, por ejemplo, una toxina tal como abrina,
ricina A, exotoxina de pseudomonas o toxina de difteria; una
proteína tal como el factor de necrosis tumoral, interferón alfa,
interferón beta, factor de crecimiento de los nervios, factor de
crecimiento derivado de las plaquetas, activador tisular del
plasminógeno, o, modificadores de respuesta biológica tales como,
por ejemplo, linfocinas, interleucina 1
("IL-1"), interleucina 2
("IL-2"), interleucina-6
("IL-6"), factor estimulador de colonias de
granulocitos y macrófagos ("GM-CSF"), factor
estimulador de colonias de granulocitos
("G-CSF") u otros factores de crecimiento.
Las técnicas para conjugar tales restos
terapéuticos a anticuerpos son bien conocidas. Véase, por ejemplo,
Amon y col. (1985) "Monoclonal Antibodies for Immunotargeting of
Drugs in Cancer Therapy", en Monoclonal Antibodies and Cancer
Therapy, ed. Reisfeld y col. (Alan R. Liss, Inc.), páginas
243-256; ed. Hellstrom y col. (1987) "Antibodies
for Drug Delivery", en Controlled Drug Delivery, ed. Robinson y
col. (2ª ed; Marcel Dekker, Inc.), páginas 623-653;
Thorpe (1985) "Antibody Carriers of Cytotoxic Agents in Cancer
Therapy: A Review", en Monoclonal Antibodies `84: Biological and
Clinical Applications, ed. Pinchera y col. páginas
475-506 (Editrice Kurtis, Milán, Italia, 1985);
"Analysis, Results, and Future Prospective of the Therapeutic Use
of Radiolabeled Antibody in Cancer Therapy", en Monoclonal
Antibodies for Cancer Detection and Therapy, ed. Baldwin y col.
(Academic Press, Nueva York, 1985), páginas
303-316; y Thorpe y col. (1982) Immunol. Rev. 62:
119-158.
Como alternativa, un anticuerpo puede conjugarse
a un segundo anticuerpo para formar un heteroconjugado de
anticuerpos como se describe en la Patente de EEUU Nº 4.676.980.
Además, pueden utilizarse conectores entre los marcadores y los
anticuerpos de la invención (véase Patente de EEUU Nº 4.831.175).
Los anticuerpos o sus fragmentos de unión al antígeno pueden
marcarse directamente con yodo, indio, itrio radiactivos o con otras
partículas radiactivas conocidas en la técnica (Patente de EEUU Nº
5.595.721). El tratamiento puede estar constituido por una
combinación de tratamiento con anticuerpos conjugados y no
conjugados administrados en forma simultánea o consecutiva
(documentos WO 00/52031 y WO 00/52473).
Las composiciones farmacéuticas útiles en los
procedimientos descritos en el presente documento pueden comprenden
variantes biológicamente activas de los anticuerpos anti CD40
antagonistas de la invención, Dichas variantes retendrán La
actividad biológica deseada del polipéptido nativo de modo que la
composición farmacéutica que comprende el polipéptido variante
tiene el mismo efecto terapéutico que la composición farmacéutica
que comprende el polipéptido nativo, cuando se administra a un
sujeto. Es decir, el anticuerpo anti CD40 variante servirá como
componente terapéuticamente eficaz en la composición farmacéutica
de un modo similar al observado para el anticuerpo antagonista
nativo, por ejemplo CHIR-5.9 o
CHIR-12.12 expresados por la línea celular de
hibridoma 5.9 o 12.12, respectivamente. En la técnica se dispone de
procedimientos para determinar si una variante de anticuerpo anti
CD40 conserva la actividad biológica deseada y, por tanto, sirve
como componente terapéuticamente activo en la composición
farmacéutica. La actividad biológica de las variantes de los
anticuerpos se pueden medir usando ensayos diseñados
específicamente para medir la actividad del antagonista nativo,
incluidos ensayos descritos en el presente documento. Variantes
adecuadas biológicamente activas de los anticuerpos anti CD40
antagonistas conservarán las propiedades de unión deseadas del
anticuerpo parental, es decir el anticuerpo anti CD40 antagonista
parental. Por lo general, en la técnica están disponibles
procedimientos para producir variantes de anticuerpos.
Por ejemplo, pueden prepararse variantes de
secuencias de aminoácidos de un anticuerpo anti CD40 antagonista,
por ejemplo, el anticuerpo monoclonal CHIR-5.9 o
CHIR-12.12 descritos en el presente documento, por
medio de mutaciones en la secuencia de ADN clonada que codifica el
anticuerpo de interés. Los procedimientos para mutagénesis y
alteraciones de secuencias de nucleótidos son bien conocidos en la
técnica. Véase, por ejemplo, Walker and Gaastra, eds. (1983)
Techniques in Molecular Biology (MacMillan Publishing Company, Nueva
York); Kunkel (1985) Proc. Natl. Acad Sci. USA 82:
488-492; Kunkel y col. (1987) Methods Enzymol. 154:
367-382; Sambrook y col. (1989) Molecular Cloning:
A Laboratory Manual (Cold Spring Harbor, Nueva York); Patente de
EEUU Nº 4.873.192; y las referencias citadas en la misma.
En el modelo de Dayhoff y col. (1978) en Atlas
of Protein Sequence and Structure (Natl. Biomed. Res. Found.,
Washington, D.C.) puede encontrarse orientación para sustituciones
adecuadas de aminoácidos que no afectan la actividad biológica del
polipéptido de interés. Las sustituciones conservadoras, tales como
los intercambios de un aminoácido con otro que tiene propiedades
similares, pueden ser de preferencia. Los ejemplos de sustituciones
conservadoras incluyen, pero no se limitan a,
Gly\LeftrightarrowAla,
Val\LeftrightarrowIle\LeftrightarrowLeu,
Asp\LeftrightarrowGlu, Lys\LeftrightarrowArg,
Asn\LeftrightarrowGln y
Phe\LeftrightarrowTrpo\LeftrightarrowTyr.
En la construcción de variantes del polipéptido
de interés del anticuerpo anti CD40 antagonista, las modificaciones
se realizan de manera tal que las variantes sigan teniendo la
actividad deseada, es decir, afinidad de unión similar y sean
capaces de unirse específicamente a un antígeno CD40 humano
expresado en la superficie de una célula humana y estén exentas de
actividad agonista significativa pero que exhiban actividad
antagonista cuando se unen a un antígeno CD40 en una célula humana
que expresa CD40. Obviamente, cualquier mutación realizada en el
ADN que codifica la variante polipéptido no deben colocar a la
secuencia fuera del marco de lectura y de preferencia no creará
regiones complementarias que podrían
\hbox{producir estructura de ARNm secundaria. Véase Publicación de Solicitud de Patente Nº 75.444.}
De preferencia, las variantes de un anticuerpo
anti CD40 antagonista de referencia tienen secuencias de aminoácidos
que tienen al menos 70% o 75% de homología de secuencia, de
preferencia al menos 80% u 85% de homología de secuencia, de más
preferencia al menos 90%, 91%, 92%, 93%, 94% ó 95% de homología de
secuencia con la secuencia de aminoácidos para la molécula del
anticuerpo anti CD40 antagonista de referencia, por ejemplo, el
anticuerpo monoclonal CHIR-5.9 o
CHIR-12.12 descritos en el presente documento, o con
una parte más corta de una molécula de anticuerpo de referencia. De
más preferencia, las moléculas comparten al menos 96%, 97%, 98% ó
99% de homología de secuencia.
Para los fines de la presente invención, el
porcentaje de homología de secuencia se determina usando el
algoritmo de búsqueda de homología de
Smith-Waterman usando una búsqueda de huecos afines
con parámetros de penalización de hueco abierto de 12 y
penalización de extensión de hueco de 2, matriz BLOSUM de 62. El
algoritmo de búsqueda de homología de
Smith-Waterman se enseña en Smith and Waterman
(1981) Adv. Appl. Math. 2: 482-489. Una variante
puede, por ejemplo, diferir del anticuerpo anti CD40 antagonista de
referencia en tan pocos como 1 a 15 residuos de aminoácidos, tan
pocos como 1 a 10 residuos de aminoácidos, tal como
6-10, tan pocos como 5, tan pocos como 4, 3, 2, o
incluso 1 residuo de aminoácido.
Con respecto a la alineación óptima de dos
secuencias de aminoácidos, el segmento contiguo de la secuencia de
aminoácidos variante puede tener residuos de aminoácidos adicionales
o residuos de aminoácidos delecionados con respecto a la secuencia
de aminoácidos de referencia. El segmento contiguo utilizado para la
comparación con la secuencia de aminoácidos de referencia incluirá
al menos 20 residuos de aminoácidos contiguos y puede tener 30, 40,
50 o más residuos de aminoácidos. Pueden hacerse correcciones para
homología de secuencia asociadas con huecos o sustituciones
conservadoras de residuos (véase el algoritmo de búsqueda de
Smith-Waterman).
La estructura química exacta de un polipéptido
capaz de unirse específicamente a CD40 y que retiene la actividad
antagonista, en particular cuando se une al antígeno CD40 en células
B malignas, depende de una serie de factores. Como en la molécula
están presentes grupos amino y carboxilo ionizables, puede obtenerse
un polipéptido particular como una sal ácida o básica, o en forma
neutra. Todas las preparaciones que retienen su actividad biológica
cuando se colocan en condiciones ambientales adecuadas están
incluidas en la definición de anticuerpos anti CD40 antagonistas en
el presente documento. Además, puede aumentarse la secuencia de
aminoácidos principal del polipéptido por derivatización con restos
de azúcar (glicosilación) o por otras moléculas complementarias
tales como lípidos, fosfato, grupos acetilo y similares. También
puede aumentarse por conjugación con sacáridos. Ciertos aspectos de
tal aumento se realizan a través de sistemas de procesamiento
postraduccionales del huésped productor; otras de tales
modificaciones pueden introducirse in vitro. En cualquier
caso, tales modificaciones están incluidas en la definición de un
anticuerpo anti CD40 usada en el presente documento siempre que no
se destruyan las propiedades de antagonista del anticuerpo anti
CD40. Se espera que tales modificaciones puedan afectar
cuantitativamente o cualitativamente la actividad, ya sea aumentando
o disminuyendo la actividad del polipéptido, en los diversos
ensayos. Además, pueden modificarse residuos de aminoácidos
individuales en la cadena por oxidación, reducción u otra
derivatización, y el polipéptido puede escindirse para obtener
fragmentos que retengan la actividad. Tales alteraciones que no
destruyen la actividad antagonista no retiran a la secuencia del
polipéptido de la definición de anticuerpos anti CD40 de interés
según se utiliza en el presente documento.
Como se ha indicado en lo que antecede, la
técnica proporciona orientación sustancial con respecto a la
preparación y al uso de las variantes de polipéptidos. En la
preparación de las variantes de anticuerpos, un experto en la
técnica puede determinar fácilmente qué modificaciones a la
secuencia de nucleótidos o aminoácidos de la proteína nativa darán
como resultado una variante que sea adecuada para uso como un
componente terapéuticamente activo de una composición farmacéutica
utilizada en los procedimientos dados a conocer en el presente
documento.
Los anticuerpos anti CD40 antagonistas de esta
invención se administran en una concentración que es
terapéuticamente eficaz para prevenir o tratar la leucemia
linfocítica crónica. Para lograr este objetivo, los anticuerpos
pueden formularse usando una diversidad de excipientes aceptables
conocidos en la técnica. Típicamente, los anticuerpos se administran
por medio de inyección, ya sea por vía intravenosa, por vía
intraperitoneal o por vía subcutánea. Los procedimientos para
llevar a cabo esta administración son conocidos por los expertos en
la técnica. También puede ser posible obtener composiciones que
pueden administrarse por vía tópica o por vía oral, o que pueden ser
capaces de transmitirse a través de membranas mucosas.
Una composición farmacéutica descrita en el
presente documento está formulada para que sea compatible con su
vía de administración prevista. Los ejemplos de posibles vías de
administración incluyen la administración parenteral (por ejemplo,
intravenosa (IV), intramuscular (IM), intradérmica, subcutánea (SC),
o infusión), oral y pulmonar (por ejemplo, inhalación), nasal,
transdérmica (tópica), transmucosa y rectal. Las soluciones o
suspensiones usadas para aplicaciones parenterales, intradérmicas o
subcutáneas pueden incluir los siguientes componentes: un diluyente
estéril tal como agua para inyección, solución salina, aceites
fijos, polietilenglicoles, glicerina, propilenglicol u otros
disolventes sintéticos; agentes antibacterianos tales como alcohol
bencílico o metilparabenos; antioxidantes tales como ácido
ascórbico o bisulfito de sodio; agentes quelantes tales como ácido
etilendiaminotetraacético; tampones tales como acetatos, citratos o
fosfatos. y agentes para ajustar la tonicidad tales como cloruro de
sodio o dextrosa. El pH puede ajustarse con ácidos o bases, tales
como ácido clorhídrico o hidróxido de sodio. La preparación
parenteral puede incluirse en ampollas, jeringas desechables o
viales de dosis múltiples fabricados de vidrio o de plástico.
Los anticuerpos se proporcionan típicamente por
medio de técnicas convencionales en un tampón farmacéuticamente
aceptable, por ejemplo, disolución salina estéril, agua tamponada
estéril, propilenglicol, combinaciones de los anteriores, etc. El
anticuerpo anti CD40 antagonista (o su fragmento de unión a
antígeno) se puede formular en composiciones farmacéuticas
separadas o se puede formular en una única composición farmacéutica
con IL-2, o una variante biológicamente activa de
la misma, para administración simultánea. En Remington's
Pharmaceutical Sciences (18th ed.; Mack Publishing Company, Eaton,
Pennsylvania, 1990) se describen procedimientos para preparar
agentes que pueden administrarse por vía parenteral. Véase también,
por ejemplo, el documento WO 98/56418, que describe formulaciones
farmacéuticas de anticuerpos estabilizadas adecuadas para usar en
los procedimientos descritos en el presente documento.
Los anticuerpos anti CD40 antagonistas o sus
fragmentos de unión a antígeno presentes en las composiciones
farmacéuticas descritas en el presente documento para usar en los
procedimientos dados a conocer en el presente documento pueden ser
nativos o pueden obtenerse por medio de técnicas recombinantes y
pueden ser de cualquier fuente, incluidas las fuentes de mamíferos
tales como, por ejemplo, ratón, rata, conejo, primate, cerdo y ser
humano. De preferencia, tales polipéptidos se obtienen de una fuente
humana, y de más preferencia, son proteínas humanas, recombinantes
de líneas celulares de hibridoma.
Cualquier composición farmacéutica que comprenda
un anticuerpo anti CD40 antagonista o su fragmento de unión a
antígeno que tenga las propiedades de unión descritas en el presente
documento como el componente terapéuticamente activo puede usarse
en los procedimientos dados a conocer en el presente documento. Por
consiguiente, las composiciones líquidas, liofilizadas o secadas
por pulverización que comprenden uno o más de los anticuerpos anti
CD40 antagonistas de la invención pueden prepararse como una
disolución o suspensión acuosa o no acuosa para la posterior
administración a un sujeto de acuerdo con los procedimientos dados a
conocer en el presente documento. Cada una de estas composiciones
comprenderá al menos uno de los anticuerpos anti CD40 antagonistas
de la presente invención, o su fragmento de unión a antígeno, como
un componente terapéuticamente o profilácticamente activo. Por
"componente terapéuticamente o profilácticamente activo" se
entiende que el anticuerpo anti CD40 o su fragmento de unión a
antígeno está específicamente incorporado en la composición para
provocar una respuesta terapéutica o profiláctica con respecto al
tratamiento, la prevención o el diagnóstico de una enfermedad o
afección en un sujeto cuando se administra la composición
farmacéutica a ese sujeto. De preferencia, las composiciones
farmacéuticas comprenden agentes estabilizantes, agentes de carga
adecuados, o ambos para reducir al mínimo los problemas asociados
con la pérdida de estabilidad y actividad biológica de las proteínas
durante la preparación y el almacenamiento.
Pueden añadirse compuestos de formulación a las
composiciones farmacéuticas que comprenden un anticuerpo anti CD40
antagonista de la invención o su fragmento de unión a antígeno.
Estos compuestos de formulación pueden incluir, pero se limitan a,
aceites, polímeros, vitaminas, hidratos de carbono, aminoácidos,
sales, tampones, albúmina, tensioactivos o agentes de carga.
Preferentemente, los hidratos de carbono de preferencia incluyen
azúcares o alcoholes de azúcar tales como mono-, di- o
polisacáridos, o glucanos solubles en agua. Los sacáridos o
glucanos pueden incluir fructosa, glucosa, manosa, sorbosa, xilosa,
maltosa, sacarosa, dextrano, pululano, dextrina, ciclodextrina
\alpha y \beta, almidón soluble, hidroxietil almidón y
carboximetilcelulosa, o sus mezclas. Se define "alcohol de
azúcar" como un hidrocarburo de C_{4} a C_{8} que tiene un
grupo hidroxilo e incluye galactitol, inositol, manitol, xilitol,
sorbitol, glicerol y arabitol. Estos azúcares o alcoholes de azúcar
pueden usarse de manera individual o en combinación. La
concentración del azúcar o de alcohol de azúcar está entre 1,0% y
7% p/v., de más preferencia entre 2,0% y 6,0% p/v. Los aminoácidos
de preferencia incluyen formas levógiras (L) de carnitina,
arginina, y betaína; sin embargo, pueden añadirse otros aminoácidos.
De preferencia, los polímeros incluyen polivinilpirrolidona (PVP)
con un peso molecular promedio entre 2.000 y 3.000, o
polietilenglicol (PEG) con un peso molecular promedio entre 3.000 y
5.000. Los tensioactivos que pueden añadirse a la formulación se
muestran en los documentos EP Nº 270.799 y 268.110.
Además, los anticuerpos pueden modificarse
químicamente por conjugación covalente con un polímero para, por
ejemplo, aumentar su semivida en circulación. Los polímeros de
preferencia y los procedimientos para ligarlos a péptidos se
muestran en las Patentes de EEUU Nº 4.766.106; 4.179.337; 4.495.285;
y 4.609.546. Los polímeros de preferencia son polioles
polioxietilados y polietilenglicol (PEG). El PEG es soluble en agua
a temperatura ambiente y tiene la fórmula general:
R(O-CH_{2}-CH_{2})_{n}
O-R, en la que R puede ser hidrógeno, o un grupo
protector tal como un grupo alquilo o alcanol. De preferencia, el
grupo protector tiene entre 1 y 8 carbonos, de más preferencia es
metilo. El símbolo n es un número entero positivo, de preferencia
entre 1 y 1.000, de más preferencia entre 2 y 500. El PEG tiene un
peso molecular promedio preferido entre 1.000 y 40.000, de más
preferencia entre 2.000 y 20.000, de mayor preferencia entre 3.000 y
12.000. De preferencia, el PEG tiene al menos un grupo hidroxi, de
más preferencia es un grupo hidroxi terminal. Este es el grupo
hidroxi que se activa de preferencia para reaccionar con un grupo
amino libre sobre el inhibidor. Sin embargo, se entenderá que el
tipo y la cantidad de los grupos reactivos pueden variarse para
obtener un PEG/anticuerpo de la presente invención conjugado de
manera covalente.
Los polioles polioxietilados solubles en agua
también son útiles en la presente invención. Estos incluyen
sorbitol polioxietilado, glucosa polioxietilada, glicerol
polioxietilado (POG), y similares. Resulta de preferencia el POG.
Una razón es porque la estructura central de glicerol del glicerol
polioxietilado es la misma estructura central que se presenta en la
naturaleza en, por ejemplo, animales y seres humanos en los mono-,
di-, triglicéridos. Por consiguiente, esta ramificación no será
considerada necesariamente como un agente extraño en el cuerpo. El
POG tiene un peso molecular de preferencia en el mismo intervalo que
el PEG. La estructura para el POG se muestra en Knauf y col. (1988)
J. Bio. Chem. 263:15064-15070, y puede encontrarse
un análisis de los conjugados POG/IL-2 en la
Patente de EEUU Nº. 4.766.106.
Otro sistema de administración de fármacos para
aumentar la semivida en circulación es el liposoma. Los
procedimientos para preparar los sistemas de administración de
liposomas se analizan en Gabizon y col. (1982) Cancer Research
42:4734; Cafiso (1981) Biochem Biophys Acta 649:129; y Szoka (1980)
Ann. Rev. Bioplsys. Eng. 9:467. En la técnica se conocen otros
sistemas de administración de fármacos y están descritos, por
ejemplo, en Poznansky y col. (1980) Drug Delivery Systems (R.L.
Juliano, ed., Oxford, N.Y.) páginas 253-315;
Poznansky (1984) Pharm Revs 36:277.
Los compuestos de formulación a incorporar en
una composición farmacéutica deberían proporcionar estabilidad del
anticuerpo anti CD40 antagonista o su fragmento de unión al
antígeno. Es decir, el anticuerpo anti CD40 antagonista o su
fragmento de unión al antígeno deberá retener su estabilidad física
y/o química y deberá tener la actividad biológica deseada, es
decir, una o más de las actividades antagonistas definidas
anteriormente en el presente documento, incluidas, entre otras,
inhibición de la secreción de inmunoglobulinas por las células B
periféricas humanas normales estimuladas por células T; inhibición
de la supervivencia y/o proliferación de las células B periféricas
humanas normales estimuladas por células T de Jurkat; inhibición de
la supervivencia y/o proliferación de las células B periféricas
humanas normales estimuladas por células que expresan CD40L o
ligando de CD40 soluble (sCD40L); inhibición de señales
intracelulares antiapoptóticas de "supervivencia" en cualquier
célula estimulada por el sCD40L o el CD40L de fase sólida;
inhibición de la transducción de señal de CD40 en cualquier célula
tras la unión con el sCD40L o el CD40L de fase sólida; e inhibición
de la proliferación de células B humanas malignas como se señaló en
otra parte en el presente documento.
Los procedimientos para controlar la estabilidad
de las proteínas son bien conocidos en la técnica. Véase, por
ejemplo, Jones (1993) Adv Drug Delivery Rev.
10:29-90; Lee, ed. (1991) Peptide y Protein Drug
Delivery (Marcel Dekker, Inc., Nueva York, Nueva York); y los
ensayos de estabilidad que se dan a conocer en el presente
documento a continuación. En general, la estabilidad de las
proteínas se mide a una temperatura elegida durante un período de
tiempo especificado. En formas de realización de preferencia, una
formulación farmacéutica de anticuerpo estable proporciona
estabilidad del anticuerpo anti CD40 antagonista o su fragmento de
unión al antígeno cuando se almacena a temperatura ambiente
(aproximadamente a 25ºC) durante al menos 1 mes, al menos 3 meses,
o al menos 6 meses, y/o es estable aproximadamente a
2-8ºC durante al menos 6 meses, al menos 9 meses,
al menos 12 meses, al menos 18 meses, al menos 24 meses.
Una proteína tal como un anticuerpo, cuando se
formula en una composición farmacéutica, se considera que mantiene
su estabilidad física en un momento dado si no muestra signos
visuales (es decir, decoloración o pérdida de transparencia) o
signos que pueden medirse (por ejemplo, usando cromatografía de
exclusión por tamaño (SEC) o dispersión de luz UV) de
precipitación, agregación, y/o desnaturalización en esa composición
farmacéutica. Con respecto a la estabilidad química, una proteína
tal como un anticuerpo, cuando se formula en una composición
farmacéutica, se considera que mantiene su estabilidad química en un
momento dado si las medidas de estabilidad química son indicativas
de que la proteína (es decir, el anticuerpo) mantiene su actividad
biológica de interés en esa composición farmacéutica. Los
procedimientos para controlar los cambios en la estabilidad química
son bien conocidos en la técnica e incluyen, entre otros,
procedimientos para detectar formas químicamente alteradas de la
proteína tales como el resultado la degradación, usando, por
ejemplo, SDS-PAGE, SEC, y/o espectrometría de masas
por tiempo de vuelo de desorción/ionización de láser asistida por
matriz; y degradación asociada con cambios en la carga molecular
(por ejemplo, asociada con desamidación), usando, por ejemplo,
cromatografía de intercambio iónico. Véase, por ejemplo, los
procedimientos que se dan a conocer en el presente documento a
continuación.
Se considera que un anticuerpo anti CD40
antagonista o su fragmento de unión al antígeno, cuando se formula
en una composición farmacéutica, mantiene una actividad biológica
deseada en un momento dado si la actividad biológica deseada en ese
momento está aproximadamente dentro del 30%, de preferencia
aproximadamente dentro del 20% de la actividad biológica deseada
exhibida en el momento en que se preparó la composición farmacéutica
según se determina en un ensayo adecuado para la actividad
biológica deseada. Los ensayos para medir la actividad biológica
deseada de los anticuerpos anti CD40 antagonistas dados a conocer en
el presente documento, y sus fragmentos de unión al antígeno,
pueden llevarse a cabo como se describe en los Ejemplos en el
presente documento. Véanse también los ensayos descritos en
Schultze y col. (1998) Proc. Natl. Acad. Sci. USA
92:8200-8204; Denton y col. (1998) Pediatr.
Transplant. 2:6-15; Evans y col. (2000) J. Immunol.
164:688-697; Noelle (1998) Agents Actions Suppl.
49:17-22; Lederman y col. (1996) Curr. Opin.
Hematol. 3:77-86; Coligan y col. (1991) Current
Protocols in Immunology 13:12; Kwekkeboom y col. (1993) Immunology
79:439-444; y las Patentes de EEUU Nº 5.674.492 y
5.847.082.
En algunas formas de realización de la
invención, el anticuerpo anti CD40 antagonista, por ejemplo, el
anticuerpo monoclonal CHIR-12.12 o
CHIR-5.9, o su fragmento de unión al antígeno se
formula en una formulación farmacéutica líquida. El anticuerpo anti
CD40 antagonista o su fragmento de unión al antígeno puede
prepararse usando cualquier procedimiento conocido en la técnica,
incluidos los procedimientos dados a conocer anteriormente en el
presente documento. En una forma de realización, el anticuerpo anti
CD40 antagonista, por ejemplo, el anticuerpo monoclonal
CHIR-12.12 o CHIR-5.9, o su
fragmento de unión al antígeno se produce de manera recombinante en
una línea celular CHO.
Tras su preparación y purificación, el
anticuerpo anti CD40 antagonista o su fragmento de unión al antígeno
puede formularse como una formulación farmacéutica líquida de la
manera expuesta en el presente documento. Cuando el anticuerpo anti
CD40 antagonista o su fragmento de unión al antígeno debe
almacenarse antes de su formulación, pueden congelarse, por
ejemplo, a \leq -20ºC, y, a continuación, descongelarse a
temperatura ambiente para otra formulación. La formulación
farmacéutica líquida comprende una cantidad terapéuticamente eficaz
del anticuerpo anti CD40 antagonista o su fragmento de unión al
antígeno. La cantidad de anticuerpo o su fragmento de unión al
antígeno presente en la formulación tiene en consideración la vía de
administración y el volumen de dosis deseado.
De esta manera, la composición farmacéutica
líquida comprende el anticuerpo anti CD40 antagonista, por ejemplo,
el anticuerpo CHIR-12.12 o CHIR-5.9,
o su fragmento de unión al antígeno en una concentración de
aproximadamente 0,1 mg/ml hasta aproximadamente 50,0 mg/ml,
aproximadamente 0,5 mg/ml hasta aproximadamente 40,0 mg/ml,
aproximadamente 1,0 mg/ml hasta aproximadamente 30,0 mg/ml,
aproximadamente 5,0 mg/ml hasta aproximadamente 25,0 mg/ml,
aproximadamente 5,0 mg/ml hasta aproximadamente 20,0 mg/ml, o
aproximadamente 15,0 mg/ml hasta aproximadamente 25,0 mg/ml. En
algunas formas de realización, la composición farmacéutica líquida
comprende el anticuerpo anti CD40 antagonista o su fragmento de
unión al antígeno en una concentración de aproximadamente 0,1 mg/ml
hasta aproximadamente 5,0 mg/ml, aproximadamente 5,0 mg/ml hasta
aproximadamente 10,0 mg/ml, aproximadamente 10,0 mg/ml hasta
aproximadamente 15,0 mg/ml, aproximadamente 15,0 mg/ml hasta
aproximadamente 20,0 mg/ml, aproximadamente 20,0 mg/ml hasta
aproximadamente 25,0 mg/ml, aproximadamente 25,0 mg/ml hasta
aproximadamente 30,0 mg/ml, aproximadamente 30,0 mg/ml hasta
aproximadamente 35,0 mg/ml, aproximadamente 35,0 mg/ml hasta
aproximadamente 40,0 mg/ml, aproximadamente 40,0 mg/ml hasta
aproximadamente 45,0 mg/ml, o aproximadamente 45,0 mg/ml hasta
aproximadamente 50,0 mg/ml. En otras formas de realización, la
composición farmacéutica líquida comprende el anticuerpo anti CD40
antagonista o su fragmento de unión al antígeno en una
concentración de aproximadamente 15:0 mg/ml, aproximadamente 16,0
mg/ml, aproximadamente 17,0 mg/ml, aproximadamente 18,0 mg/ml,
aproximadamente 19,0 mg/ml, aproximadamente 20,0 mg/ml,
aproximadamente 21,0 mg/ml, aproximadamente 22,0 mg/ml,
aproximadamente 23,0 mg/ml, aproximadamente 24,0 mg/ml, o
aproximadamente 25,0 mg/ml. La composición farmacéutica líquida
comprende el anticuerpo anti CD40 antagonista, por ejemplo, el
anticuerpo CHIR-12.12 o CHIR-5.9, o
su fragmento de unión al antígeno, y un tampón que mantiene el pH
de la formulación en el intervalo de aproximadamente pH 5,0 hasta
aproximadamente pH 7,0, incluyendo pH de aproximadamente 5,0, 5,1,
5,2, 5,3, 5,4, 5,5, 5,6, 5,7, 5,8, 5,9, 6,0, 6,1, 6,2, 6,3, 6,4,
6,5, 6,6, 6,7, 6,8, 6,9, 7,0, y otros valores semejantes dentro del
intervalo de aproximadamente pH 5,0 hasta aproximadamente pH 7,0.
En algunas formas de realización, el tampón mantiene el pH de la
formulación en el intervalo de aproximadamente pH 5,0 hasta
aproximadamente pH 6,5, aproximadamente pH 5,0 hasta aproximadamente
pH 6,0, aproximadamente pH 5,0 hasta aproximadamente pH 5,5,
aproximadamente pH 5,5 hasta aproximadamente 7,0, aproximadamente
pH 5,5 hasta aproximadamente pH 6,5, o aproximadamente pH 5,5 hasta
aproximadamente pH 6,0.
En la formulación puede usarse cualquier tampón
adecuado que mantenga el pH de la formulación líquida del
anticuerpo anti CD40 en el intervalo de aproximadamente pH 5,0 hasta
aproximadamente pH 7,0, siempre que la estabilidad fisicoquímica y
la actividad biológica deseada del anticuerpo se mantengan como se
señaló anteriormente en el presente documento. Los tampones
adecuados incluyen entre otros, ácidos convencionales y sus sales,
en los que el contraión puede ser, por ejemplo, sodio, potasio,
amonio, calcio o magnesio. Ejemplos de ácidos convencionales y su
sales que pueden usarse para tamponar la formulación farmacéutica
líquida incluyen, entre otros, tampones de ácido succínico o
succinato, ácido cítrico o citrato, ácido acético o acetato, ácido
tartárico o tartrato, ácido fosfórico o fosfato, ácido glucónico o
gluconato, ácido glutámico o glutamato, ácido aspártico o
aspartato, ácido maleico o maleato y ácido málico o malato. La
concentración del tampón en la formulación puede ser desde
aproximadamente 1 mM hasta aproximadamente 50 mM, incluyendo
aproximadamente 1 mM, 2 mM, 5 mM, 8 mM, 10 mM, 15 mM, 20 mM, 25 mM,
30 mM, 35 mM, 40 mM, 45 mM, 50 mM, u otros valores semejantes dentro
del intervalo de aproximadamente 1 mM hasta aproximadamente 50 mM.
En algunas formas de realización, la concentración del tampón en la
formulación es desde aproximadamente 5 mM hasta aproximadamente 15
mM, incluyendo aproximadamente 5 mM, 6 mM, 7 mM, 8 mM, 9 mM, 10 mM,
11 mM, 12 mM, 13 mM, 14 mM, 15 mM, u otros valores semejantes dentro
del intervalo de aproximadamente 5 mM hasta aproximadamente 15
mM.
En algunas formas de realización de la
invención, la formulación farmacéutica líquida comprende una
cantidad terapéuticamente eficaz del anticuerpo anti CD40
antagonista, por ejemplo, el anticuerpo monoclonal CHIR 12,12 o
CHIR-5.9, o su fragmento de unión al antígeno y
tampón succinato o tampón citrato a una concentración que mantiene
el pH de la formulación en el intervalo de aproximadamente pH 5,0
hasta aproximadamente pH 7,0, de preferencia aproximadamente pH 5,0
hasta aproximadamente pH 6,5. Por "tampón succinato" o
"tampón citrato" se entiende un tampón que comprende una sal
de ácido succínico o una sal de ácido cítrico, respectivamente. En
una forma de realización de preferencia, el contraión de succinato o
de citrato es el catión sodio y, por consiguiente, el tampón es
succinato de sodio o citrato de sodio, respectivamente. Sin embargo,
se espera que sea eficaz cualquier catión. Otros posibles cationes
de succinato o de citrato incluyen, entre otros, potasio, amonio,
calcio y magnesio. Como se señaló anteriormente, la concentración
del tampón succinato o citrato en la formulación puede ser desde
aproximadamente 1 mM hasta aproximadamente 50 mM, incluyendo
aproximadamente 1 mM, 2 mM, 5 mM, 8 mM, 10 mM, 15 mM, 20 mM, 25 mM,
30 mM, 35 mM, 40 mM, 45 mM, 50 mM, u otros valores semejantes
dentro del intervalo desde aproximadamente 1 mM hasta
aproximadamente 50 mM. En algunas formas de realización, la
concentración de tampón en la formulación va desde aproximadamente 5
mM hasta aproximadamente 15 mM, incluyendo aproximadamente 5 mM, 6
mM, 7 mM, 8 mM, 9 mM, 10 mM, 11 mM, 12 mM, 13 mM, 14 mM, o
aproximadamente 15 mM. En otras formas de realización, la
formulación farmacéutica líquida comprende el anticuerpo anti CD40
antagonista, por ejemplo, el anticuerpo monoclonal
CHIR-12.12 o CHIR-5.9, o su
fragmento de unión al antígeno en una concentración de
aproximadamente 0,1 mg/ml hasta aproximadamente 50,0 mg/ml, o
aproximadamente 5,0 mg/ml hasta aproximadamente 25,0 mg/ml, y
tampón succinato o citrato, por ejemplo, tampón succinato de sodio o
citrato de sodio, a una concentración de aproximadamente 1 mM hasta
aproximadamente 20 mM, aproximadamente 5 mM hasta aproximadamente
15 mM, de preferencia aproximadamente 10 mM.
Cuando es deseable que la formulación
farmacéutica líquida sea prácticamente isotónica, la formulación
farmacéutica líquida que comprende una cantidad terapéuticamente
eficaz del anticuerpo anti CD40 antagonista, por ejemplo, el
anticuerpo monoclonal CHIR-12.12 o
CHIR-5.9, o su fragmento de unión al antígeno, y un
tampón para mantener el pH de la formulación dentro del intervalo
de aproximadamente pH 5,0 hasta aproximadamente pH 7,0 puede
comprender además una cantidad de un agente de isotonicidad
suficiente para hacer que la formulación sea prácticamente
isotónica. Por "prácticamente isotónica" se entiende que la
formulación acuosa tiene una osmolaridad de aproximadamente 240
mmol/kg hasta aproximadamente 360 mmol/kg, de preferencia
aproximadamente 240 hasta aproximadamente 340 mmol/kg, de más
preferencia aproximadamente 250 hasta aproximadamente 330 mmol/kg,
aún de más preferencia aproximadamente 260 hasta aproximadamente
320 mmol/kg, de mayor preferencia aún aproximadamente 270 hasta
aproximadamente 310 mmol/kg. Los procedimientos para determinar la
isotonicidad de una disolución son conocidos por los expertos en la
técnica. Véase, por ejemplo, Setnikar y col. (1959) J. Am. Pharm.
Assoc. 48:628.
Los expertos en la técnica están familiarizados
con una diversidad de solutos farmacéuticamente aceptables útiles
para proporcionar isotonicidad en las composiciones farmacéuticas.
El agente de isotonicidad puede ser cualquier reactivo capaz de
ajustar la presión osmótica de la formulación farmacéutica líquida
de la presente invención hasta un valor prácticamente igual al de
un líquido corporal. Es deseable utilizar un agente de isotonicidad
fisiológicamente aceptable. Por consiguiente, la formulación
farmacéutica líquida que comprende una cantidad terapéuticamente
eficaz del anticuerpo anti CD40 antagonista, por ejemplo, el
anticuerpo monoclonal CHIR-12.12 o
CHIR-5.9, o su fragmento de unión al antígeno, y un
tampón para mantener el pH de la formulación dentro del intervalo
de aproximadamente pH 5,0 hasta aproximadamente pH 7,0, puede
comprender además componentes que pueden usarse para proporcionar
isotonicidad, por ejemplo, cloruro de sodio; aminoácidos tales como
alanina, valina y glicina; azúcares y alcoholes de azúcares
(polioles), incluidos, entre otros, glucosa, dextrosa, fructosa,
sacarosa, maltosa, manitol, trehalosa, glicerol, sorbitol, y
xilitol; ácido acético, otros ácidos orgánicos y sus sales, y
cantidades relativamente menores de citratos o fosfatos. El experto
en la técnica conocerá agentes adicionales que son adecuados para
proporcionar la tonicidad óptima de la formulación líquida.
En algunas formas de realización de preferencia,
la formulación farmacéutica líquida que comprende una cantidad
terapéuticamente eficaz de un anticuerpo anti CD40 antagonista, por
ejemplo, el anticuerpo monoclonal CHIR-12.12 o
CHIR-5.9, o su fragmento de unión al antígeno, y un
tampón para mantener el pH de la formulación dentro del intervalo
de aproximadamente pH 5,0 hasta aproximadamente pH 7,0 comprende
además cloruro de sodio como el agente de isotonicidad. La
concentración de cloruro de sodio en la formulación dependerá de la
contribución de otros componentes a la tonicidad. En algunas formas
de realización, la concentración de cloruro de sodio es de
aproximadamente 50 mM hasta aproximadamente 300 mM, de
aproximadamente 50 mM hasta aproximadamente 250 mM, de
aproximadamente 50 mM hasta aproximadamente 200 mM, de
aproximadamente 50 mM hasta aproximadamente 175 mM, de
aproximadamente 50 mM hasta aproximadamente 150 mM, de
aproximadamente 75 mM hasta aproximadamente 175 mM, de
aproximadamente 75 mM hasta aproximadamente 150 mM, de
aproximadamente 100 mM hasta aproximadamente 175 mM,
aproximadamente 100 mM hasta aproximadamente 200 mM, de
aproximadamente 100 mM hasta aproximadamente 150 mM, de
aproximadamente 125 mM hasta aproximadamente 175 mM, de
aproximadamente 125 mM hasta aproximadamente 150 mM,
aproximadamente de 130 mM hasta aproximadamente 170 mM, de
aproximadamente 130 mM hasta aproximadamente 160 mM, de
aproximadamente 135 mM hasta aproximadamente 155 mM, de
aproximadamente 140 mM hasta aproximadamente 155 mM, o de
aproximadamente 145 mM hasta aproximadamente 155 mM. En una de tales
formas de realización, la concentración de cloruro de sodio es de
aproximadamente 150 mM. En otra de tales formas de realización, la
concentración de cloruro de sodio es aproximadamente 150 mM, el
tampón es tampón succinato de sodio o citrato de sodio en una
concentración de aproximadamente 5 mM hasta aproximadamente 15 mM,
la formulación farmacéutica líquida comprende una cantidad
terapéuticamente eficaz del anticuerpo anti CD40 antagonista, por
ejemplo, el anticuerpo monoclonal CHIR-12.12 o
CHIR-5.9, o su fragmento de unión al antígeno, y la
formulación tiene un pH de aproximadamente pH 5,0 hasta
aproximadamente pH 7,0, aproximadamente pH 5,0 hasta aproximadamente
pH 6,0, o aproximadamente pH 5,5 hasta aproximadamente pH 6,5. En
otras formas de realización, la formulación farmacéutica líquida
comprende el anticuerpo anti CD40 antagonista, por ejemplo, el
anticuerpo monoclonal CHIR-12.12 o
CHIR-5.9, o su fragmento de unión al antígeno, en
una concentración de aproximadamente 0,1 mg/ml hasta
aproximadamente 50,0 mg/ml o aproximadamente 5,0 mg/ml hasta
aproximadamente 25,0 mg/ml, cloruro de sodio aproximadamente 150 mM
y succinato de sodio o citrato de sodio aproximadamente 10 mM, a un
pH de aproximadamente pH 5,5.
La degradación proteica por congelación
descongelación o cizallamiento mecánico durante el procesamiento de
una formulación farmacéutica líquida de la presente invención puede
inhibirse incorporando tensioactivos en la formulación para
disminuir la tensión superficial en la interfase
disolución-aire. Por consiguiente, en algunas
formas de realización, la formulación farmacéutica líquida comprende
una cantidad terapéuticamente eficaz del anticuerpo anti CD40
antagonista, por ejemplo, el anticuerpo monoclonal
CHIR-12.12 o CHIR 5,9, o su fragmento de unión al
antígeno, un tampón para mantener el pH de la formulación dentro del
intervalo de aproximadamente pH 5,0 hasta aproximadamente pH 7,0, y
comprende además un tensioactivo. En otras formas de realización,
la formulación farmacéutica líquida comprende una cantidad
terapéuticamente eficaz del anticuerpo anti CD40 antagonista, por
ejemplo, el anticuerpo monoclonal CHIR-12.12 o
CHIR-5.9, o su fragmento de unión al antígeno, un
tampón para mantener el pH de la formulación dentro del intervalo de
aproximadamente pH 5,0 hasta aproximadamente pH 7,0, un agente de
isotonicidad tal como cloruro de sodio en una concentración de
aproximadamente 50 mM hasta aproximadamente 300 mM, y comprende
además un tensioactivo.
Los tensioactivos típicos utilizados son
tensioactivos noiónicos, incluidos los ésteres de
polioxietilensorbitol tales como polisorbato 80 (Tween 80) y
polisorbato 20 (Tween 20); ésteres de
polioxipropileno-polioxietileno tales como Pluronic
F68; alcoholes de polioxietileno tales como Brij 35; simeticona;
polietilenglicol tal como PEG400; lisofosfatidilcolina; y
polioxietilen-p-t-octilfenol
tal como Triton X-100. La estabilización clásica de
compuestos farmacéuticos por medio de tensioactivos o emulsionantes
se describe, por ejemplo, en Levine y col. (1991) J. Parenteral
Sci. Technol. 45(3): 160-165. Un tensioactivo
de preferencia utilizado en la práctica de la presente invención es
polisorbato 80. Cuando se incluye un tensioactivo, éste se añade
típicamente en una cantidad desde aproximadamente 0,001% hasta
aproximadamente 1,0% (p/v), de aproximadamente 0,001% hasta
aproximadamente 0,5%, de aproximadamente 0,001% hasta
aproximadamente 0,4%, de aproximadamente 0,001% hasta
aproximadamente 0,3%, e aproximadamente 0,001% hasta aproximadamente
0,2%, de aproximadamente 0,005% hasta aproximadamente 0,5%, de
aproximadamente 0,005% hasta aproximadamente 0,2%, de
aproximadamente 0,01% hasta aproximadamente 0,5%, de
aproximadamente 0,01% hasta aproximadamente 0,2%, de aproximadamente
0,03% hasta aproximadamente 0,5%, de aproximadamente 0,03% hasta
aproximadamente 0,3%, de aproximadamente 0,05% hasta
aproximadamente 0,5%, o de aproximadamente 0,05% hasta
aproximadamente 0,2%.
Por consiguiente, en algunas formas de
realización, la formulación farmacéutica líquida comprende una
cantidad terapéuticamente eficaz del anticuerpo anti CD40
antagonista, por ejemplo, el anticuerpo monoclonal
CHIR-12.12 o CHIR-5.9, o su
fragmento de unión al antígeno, el tampón es tampón succinato de
sodio o citrato de sodio a una concentración de aproximadamente 1
mM hasta aproximadamente 50 mM, de aproximadamente 5 mM hasta
aproximadamente 25 mM, o de aproximadamente 5 mM hasta
aproximadamente 15 mM; la formulación tiene un pH de aproximadamente
pH de aproximadamente 5,0 hasta aproximadamente pH 7,0, de
aproximadamente pH 5,0 hasta aproximadamente pH 6,0, o de
aproximadamente pH 5,5 hasta aproximadamente pH 6,5; y la
formulación comprende además un tensioactivo, por ejemplo,
polisorbato 80, en una cantidad desde aproximadamente 0,001% hasta
aproximadamente 1,0% o de aproximadamente 0,001% hasta
aproximadamente 0,5%. Tales formulaciones pueden comprender
opcionalmente un agente de isotonicidad, tal como cloruro de sodio
a una concentración de aproximadamente 50 mM hasta aproximadamente
300 mM, de aproximadamente 50 mM hasta aproximadamente 200 mM, o de
aproximadamente 50 mM hasta aproximadamente 150 mM. En otras formas
de realización, la formulación farmacéutica líquida comprende el
anticuerpo anti CD40 antagonista, por ejemplo, el anticuerpo
monoclonal CHIR-12.12 o CHIR-5.9, o
su fragmento de unión al antígeno, a una concentración de
aproximadamente 0,1 mg/ml hasta aproximadamente 50,0 mg/ml o de
aproximadamente 5,0 mg/ml hasta aproximadamente 25,0 mg/ml,
incluyendo aproximadamente 20,0 mg/ml; cloruro de sodio de
aproximadamente 50 mM hasta aproximadamente 200 mM, incluyendo
cloruro de sodio de aproximadamente 150 mM; succinato de sodio o
citrato de sodio a una concentración de aproximadamente 5 mM hasta
aproximadamente 20 mM; incluyendo succinato de sodio o citrato de
sodio de aproximadamente 10 mM; cloruro de sodio a una concentración
de aproximadamente 50 mM hasta aproximadamente 200 mM, incluyendo
aproximadamente 150 mM; y opcionalmente un tensioactivo, por
ejemplo, polisorbato 80, en una cantidad de aproximadamente 0,001%
hasta aproximadamente 1,0%, incluyendo aproximadamente de 0,001%
hasta aproximadamente 0,5%; en la que la formulación farmacéutica
líquida tiene un pH de aproximadamente pH 5,0 hasta aproximadamente
pH 7,0, de aproximadamente pH 5,0 hasta aproximadamente pH 6,0, de
aproximadamente pH 5,0 hasta aproximadamente pH 5,5, de
aproximadamente pH 5,5 hasta aproximadamente pH 6,5, o de
aproximadamente pH 5,5 hasta aproximadamente pH 6,0.
La formulación farmacéutica líquida puede estar
esencialmente libre de conservantes y otros vehículos, excipientes,
o estabilizantes indicados en lo que antecede en el presente
documento. Como alternativa, la formulación puede incluir uno o más
conservantes, por ejemplo, agentes antibacterianos, vehículos,
excipientes o estabilizantes farmacéuticamente aceptables descritos
en lo que antecede en el presente documento con la condición de que
no afecten de manera adversa a la estabilidad fisicoquímica del
anticuerpo anti CD40 antagonista o su fragmento de unión al
antígeno. Ejemplos de vehículos, excipientes o estabilizantes
aceptables incluyen, entre otros, otros agentes tampón,
codisolventes, tensioactivos, antioxidantes, incluidos ácido
ascórbico y metionina, agentes quelantes tales como EDTA, complejos
de metales (por ejemplo, complejos Zn-proteína), y
polímeros biodegradables tales como poliésteres. Puede encontrarse
una discusión detallada de formulación y selección de vehículos,
estabilizantes e isomolitos farmacéuticamente aceptables en
Remington's Pharmaceutical Sciences (18th ed.; Mack Publishing
Company, Eaton, Pennsylvania, 1990).
Una vez que la formulación farmacéutica líquida
u otra composición farmacéutica descrita en el presente documento
está preparada, puede liofilizarse para evitar la degradación. Los
procedimientos para liofilizar composiciones líquidas son conocidos
por los expertos en la técnica. Justo antes de usar, la composición
puede reconstituirse con un diluyente estéril (solución de Ringer,
agua destilada o solución salina ésteril, por ejemplo) que puede
incluir ingredientes adicionales. Tras la reconstitución, la
composición se administra de preferencia a los sujetos usando los
procedimientos conocidos por los expertos en la técnica.
La presente invención también proporciona el uso
de un anticuerpo anti CD40 antagonista o su fragmento de unión al
antígeno en la fabricación de un medicamento para tratar un cáncer
que expresa CD40 en un sujeto, en el que el medicamento está
coordinado con el tratamiento con IL-2 o una
variante biológicamente activa de la misma. Por "cáncer que
expresa CD40" se entiende cualquier cáncer que comprende células
neoplásicas que expresan el antígeno de superficie celular CD40.
Como se ha indicado en el presente documento en lo que antecede,
dichos cánceres incluyen, entre otros, cánceres relacionados con las
células B, por ejemplo, linfoma no Hodgkin, leucemia linfocítica
crónica, mieloma múltiple, linfoma de células B, linfoma de células
B de grado alto, linfoma de células B de grado intermedio, linfoma
de células B de grado bajo, leucemia linfoblástica aguda de células
B, leucemia mieloblástica, enfermedad de Hodgkin, plasmacitoma,
linfoma folicular, linfoma folicular de células pequeñas hendidas,
linfoma folicular de células grandes, linfoma folicular mixto de
células pequeñas hendidas, linfoma difuso de células pequeñas
hendidas, linfoma linfocítico difuso de células pequeñas, leucemia
prolinfocítica, linfoma linfoplasmacítico, linfoma de zona marginal,
linfoma tisular linfoide asociado a mucosas, linfoma monocitoide de
células B, linfoma esplénico, leucemia de células vellosas, linfoma
difuso de células grandes, linfoma mediastínico de células B
grandes, granulomatosis linfomatoide, linfomatosis intravascular,
linfoma difuso de células mixtas, linfoma difuso de células grandes,
linfoma inmunoblástico, linfoma de Burkitt, linfoma relacionado con
el SIDA y linfoma de células del manto; y tumores sólidos que
expresan el antígeno CD40, incluidos, entre otros, cánceres de
ovarios, de pulmón (por ejemplo, cáncer de pulmón de células
pequeñas), de mama, de colon, de riñón (incluidos, por ejemplo,
carcinomas de células renales), de vejiga urinaria, de hígado
(incluidos, por ejemplo, los carcinomas hepatocelulares), gástrico,
cervical, próstata, nasofaríngeo, tiroideo (por ejemplo, carcinoma
papilar tiroideo) y de piel, tal como melanoma, y sarcomas
(incluidos, por ejemplo, osteosarcomas y sarcomas de Ewing).
Por "coordinado" se entiende que el
medicamento que comprende el anticuerpo anti CD40 antagonista o su
fragmento de unión al antígeno se usará antes, durante, o después
del tratamiento del sujeto con IL-2 o una variante
biológicamente activa de la misma. En una forma de realización tal,
la presente invención proporciona el uso de un anticuerpo
monoclonal CHIR-12.12 o CHIR-5.9 en
la fabricación de un medicamento para tratar un cáncer que expresa
CD40 en un sujeto, en el que el medicamento está coordinado con el
tratamiento con IL-2 o una variante biológicamente
activa de la misma, por ejemplo IL-2 humana o la
muteína IL-2 humana
des-alanil-1, serina 125, en el que
el medicamento debe usarse antes, durante o después del tratamiento
del sujeto con IL-2 o con una variante
biológicamente activa de la misma.
En algunas formas de realización, el medicamento
que comprende el anticuerpo anti CD40 antagonista, por ejemplo, el
anticuerpo monoclonal CHIR-12.12 o
CHIR-5.9 descrito en la memoria descriptiva, o su
fragmento de unión a antígeno, está coordinado con el tratamiento
con IL-2 o una variante biológicamente activa de la
misma y al menos otro tipo de terapia contra el cáncer. Ejemplos de
otras terapias contra el cáncer incluyen, entre otras, las
descritas en lo que antecede en el presente documento, es decir
cirugía o procedimientos quirúrgicos (por ejemplo, esplenectomía,
hepatectomía, linfadenectomía, leucoforesis, transplante de médula
ósea, y similares); radioterapia; quimioterapia, opcionalmente en
combinación con transplante autólogo de médula ósea, en las que los
agentes quimioterapéuticos adecuados incluyen, entre otros,
fludarabina o fosfato de fludarabina, clorambucilo, vincristina,
pentostatina, 2-clorodesoxiadenosina (cladribina),
ciclofosfamida, doxorubicina, prednisona, y sus combinaciones, por
ejemplo, regímenes que contienen antraciclina tales como CAP
(ciclofosfamida, doxorubicina más prednisona), CHOP
(ciclofosfamida, vincristina, prednisona más doxorubicina), VAD
(vincristina, doxorubicina, más dexametasona), MP (melfalán más
prednisona), y otros agentes citotóxicos y/o terapéuticos usados en
quimioterapia tales como mitoxantrona, daunorubicina, idarubicina,
asparaginasa, y antimetabolitos, incluidos, entre otros,
citarabina, metotrexato, 5-fluorouracilo
decarbazina, 6-tioguanina,
6-mercaptopurina y nelarabina; otra terapia
anticancerosa con anticuerpos monoclonales (por ejemplo, alemtuzumab
(Campath®) u otro anticuerpo anti CD52 dirigido a la glicoproteína
de superficie celular CD52 en células B malignas; rituximab
(Rituxan®), el anticuerpo HuMax-CD20 totalmente
humano, R-1594, IMMU-106,
TRU-015, AME-133,
tositumomab/I-131 tositumomab (Bexxar®),
ibritumomab tiuxetan (Zevalin®), o cualquier otro anticuerpo anti
CD20 terapéutico dirigido al antígeno CD20 en células B malignas;
anticuerpo anti CD19 (por ejemplo, MT103, un anticuerpo
biespecífico); anticuerpo anti CD22 (por ejemplo, el anticuerpo
monoclonal humanizado epratuzumab); bevacizumab (Avastin®) u otro
anticuerpo anticanceroso dirigido al factor de crecimiento vascular
endotelial humano; anticuerpo anti CD22 dirigido al antígeno CD22
en células B malignas (por ejemplo, el anticuerpo monoclonal
BL-22, una toxina alfaCD22); anticuerpo
\alpha-M-CSF dirigido al factor
estimulante de colonias de macrófagos; anticuerpos dirigidos al
activador del receptor del factor kappaB nuclear (RANK) y su ligando
(RANKL), que se sobreexpresan en el mieloma múltiple; anticuerpo
anti CD23 dirigido al antígeno CD23 en células B malignas (por
ejemplo, IDEC-152); anticuerpo anti CD80 dirigido
al antígeno CD80 (por ejemplo, IDEC-114); anticuerpo
anti CD38 dirigido al antígeno CD38 en células B malignas;
anticuerpos dirigidos a los receptores del complejo mayor de
histocompatibilidad de clase II (anticuerpos anti MHC) expresados
en células B malignas; otros anticuerpos anti CD40 (por ejemplo,
SGN-40) dirigidos al antígeno CD40 en células B
malignas; y anticuerpos dirigidos al receptor 1 del ligando
inductor de apoptosis relacionado con el factor de necrosis tumoral
(TRAIL-R1) (por ejemplo, el anticuerpo monoclonal
agonista humano HGS-ETR1) y TRAIL-R2
expresado en una serie de tumores sólidos y tumores de origen
hematopoyético); terapia del cáncer basada en moléculas pequeñas,
incluidos, entre otros, inhibidores de los microtúbulos y/o de la
topoisomerasa (por ejemplo, el inhibidor mitótico dolastatina y
análogos de dolastatina; el agente de unión a tubulina T900607;
XL119; y el inhibidor de la topoisomerasa aminocamptotecina),
SDX-105 (clorhidrato de bendamustina), ixabepilona
(un análogo de epotilona, también llamado
BMS-247550), inhibidores de la proteincinasa C, por
ejemplo, midostaurina ((PKC-412, CGP 41251,
N-benzoilstaurosporina), pixantrona, eloxatina (un
agente antineoplásico), ganite (nitrato de galio), Thalomid®
(talidomida), derivados inmunomoduladores de la talidomida (por
ejemplo, revlimid (anteriormente revimid)), Affinitak^{TM}
(inhibidor antisentido de la proteincinasa C-alfa),
SDX-101 (R-etodolac, que induce la
apoptosis de linfocitos malignos), análogos de nucleósidos de
purina de segunda generación tales como clofarabina, inhibidores de
la producción de la proteína Bcl-2 por células
cancerosas (por ejemplo, los agentes antisentido oblimersen y
Genasense®), inhibidores de proteasoma (por ejemplo, Velcade^{TM}
(bortezomib)), inhibidores de cinasas de molécula pequeña (por
ejemplo, CHIR-258), inhibidores de VEGF de molécula
pequeña (por ejemplo, ZD-6474), inhibidores de la
proteína del choque térmico (HSP) 90 de molécula pequeña (por
ejemplo, 17-AAG), agentes inhibidores de
desacetilasas de histonas de molécula pequeña (por ejemplo, HPC
híbrido/polar de citodiferenciación) tales como ácido
suberanilohidroxámico (SAHA), y FR-901228 y agentes
apoptóticos tales como Trisenox® (trióxido de arsénico) y Xcytrin®
(motexafina gadolinio); terapias contra el cáncer basadas en
vacunas/inmunoterapia, incluidos, entre otros, enfoques de vacunas
(por ejemplo, Id-KLH, oncofago, vitaletina),
inmunoterapia personalizada o inmunoterapia activa de idiotipo (por
ejemplo, MyVax® Personalized Immunotherapy, denominada formalmente
GTOP-99), Promune® (CpG 7909, un agonista sintético
para el receptor de tipo toll 9 (TLR9)), terapia con interferón
alfa, terapia con IL-12, terapia con
IL-15 y terapia con IL-21; terapia
con esteroides; u otra terapia contra el cáncer; en las que el
tratamiento con la IL-2 o una variante de la misma
biológicamente activa y la terapia anticancerosa adicional, o
terapias anticacerosas adicionales, se administra antes de, durante,
o posteriormente al tratamiento del sujeto con el medicamento que
comprende el anticuerpo anti CD40 antagonista o su fragmento de
unión al antígeno, como se ha indicado en lo que antecede en el
presente documento. Cuando el medicamento que comprende el
anticuerpo anti CD40 antagonista o su fragmento de unión al
antígeno está coordinado con la IL-2 o la variante
biológicamente activa de la misma y al menos otra terapia
anticancerosa, el uso del medicamento puede ser antes, durante o
después del tratamiento del sujeto con cualquiera o todas las demás
terapias anticancerosas.
La presente invención también proporciona el uso
de una combinación sinergística de un anticuerpo anti CD40
antagonista o su fragmento de unión al antígeno en la fabricación de
un medicamento para tratar un cáncer que expresa CD 40 en un
sujeto, como se ha definido en lo que antecede en el presente
documento, en el que el medicamento está coordinado con tratamiento
con IL-2 o su variante biológicamente activa. Por
Por "combinación sinérgica" se entiende que el medicamento
comprende una cantidad del anticuerpo anti CD40 antagonista o su
fragmento de unión al antígeno que proporciona un efecto terapéutico
sinérgico cuando el medicamento está coordinado con tratamiento con
IL-2 o su variante biológicamente activa del modo
indicado en lo que antecede en el presente documento. "Efecto
terapéutico sinérgico" se refiere a un efecto terapéutico
observado con una combinación de dos o más terapias (en este caso,
la terapia con el anticuerpo anti CD40 antagonista y la terapia con
IL-2) en el que el efecto terapéutico (medido por
cualquiera de una serie de parámetros, incluidas las medidas de
eficacia descritas en lo que antecede en el presente documento) es
superior a la suma de los efectos terapéuticos individuales
respectivos observados con las respectivas terapias
individuales.
En una forma de realización tal, la presente
invención proporciona el uso de una combinación sinérgica del
anticuerpo monoclonal CHIR-12.12 o
CHIR-5.9 en la fabricación de un medicamento para
tratar un cáncer que expresa CD40 en un sujeto, en el que el
medicamento está coordinado con tratamiento con IL-2
o su variante biológicamente activa, por ejemplo la
IL-2 humana o la muteína de IL-2
humana des-alanil-1 serina 125, en
el que el medicamento se debe usar antes, durante o después del
tratamiento del sujeto con IL-2 o su variante
biológicamente activa. En algunas formas de realización, el
medicamento que comprende la combinación sinérgica del anticuerpo
anti CD40 antagonista, por ejemplo el anticuerpo monoclonal
CHIR-12.12 o CHIR-5.9 descrito en
el presente documento, o su fragmento de unión al antígeno, está
coordinado con el tratamiento IL-2 o su variante
biológicamente activa y con al menos otro tipo de terapia contra el
cáncer como se ha indicado en lo que antecede en el presente
documento,
La invención también proporciona el uso de un
anticuerpo anti CD40 antagonista, por ejemplo, el anticuerpo
monoclonal CHIR-12.12 o CHIR-5.9 que
se da a conocer en el presente documento, o su fragmento de unión al
antígeno en la fabricación de un medicamento para tratar un cáncer
que expresa CD40 en un sujeto, como se ha definido en lo que
antecede en el presente documento, en el que el medicamento se usa
en un sujeto que ha recibido tratamiento previo con
IL-2 o una variante biológicamente activa de la
misma. Por "pretratado" o "tratamiento previo" se
entiende que el sujeto ha recibido terapia con IL-2
(es decir, ha sido tratado con IL-2 o una variante
biológicamente activa de la misma.) antes de recibir el medicamento
que comprende el anticuerpo anti CD40 antagonista o su fragmento de
unión al antígeno. "Pretratado" o "tratamiento previo"
incluye sujetos que han sido tratados con L-2 o una
variante biológicamente activa de la misma., sola o en combinación
con otras terapias contra el cáncer, en el plazo de 2 años, en el
plazo de 18 meses, en el plazo de 1 año, en el plazo de 6 meses, en
el plazo de 2 meses, en el plazo de 6 semanas, en el plazo de 1 mes,
en el plazo de 4 semanas, en el plazo de 3 semanas, en el plazo de
2 semanas, en el plazo de 1 semana, en el plazo de 6 días, en el
plazo de 5 días, en el plazo de 4 días, en el plazo de 3 días, en el
plazo de 2 días, o incluso en el plazo de 1 día antes del inicio
del tratamiento con el medicamento que comprende el anticuerpo anti
CD40 antagonista, por ejemplo, el anticuerpo monoclonal
CHIR-12.12 o CHIR-5.9 que se dan a
conocer en el presente documento, o su fragmento de unión al
antígeno. No es necesario que el sujeto haya respondido al
tratamiento previo con la anterior terapia con IL-2
o las anteriores terapias con IL-2 y terapias contra
el cáncer. Por consiguiente, el sujeto que recibe el medicamento
que comprende el anticuerpo anti CD40 antagonista o su fragmento de
unión al antígeno podría haber respondido, o podría no haber
respondido, al tratamiento previo con la anterior terapia con
IL-2 o a una o más terapias anteriores contra el
cáncer donde el tratamiento previo comprendía múltiples terapias
contra el cáncer, una de las cuales era terapia con
IL-2, por ejemplo terapia con IL-2 y
otra terapia anticancerosa con anticuerpos, por ejemplo rituximab u
otra terapia con anticuerpos anti CD20; terapia con
IL-2 y cirugía; terapia con IL-2 y
quimioterapia; o terapia con IL-2, quimioterapia y
otra terapia anticancerosa con anticuerpos.
Por tanto, en algunas formas de realización, la
invención proporciona el uso de un anticuerpo anti CD40 antagonista,
por ejemplo, el anticuerpo monoclonal CHIR-12.12 o
CHIR-5.9 descrito en el presente documento, o su
fragmento de unión a antígeno, en la fabricación de un medicamente
que se usa en un sujeto que necesite tratamiento para un cáncer que
expresa CD40 definido en lo que antecede en el presente documento,
en el que el sujeto ha sido pretratado con terapia con
IL-2 o ha sido pretratado con terapia con
IL-2 y una o más de las otras siguientes terapias
contra el cáncer: cirugía o procedimientos quirúrgicos (por ejemplo,
esplenectomía, hepatectomía, linfadenectomía, leucoforesis,
transplante de médula ósea, y similares); radioterapia;
quimioterapia, opcionalmente en combinación con transplante
autólogo de médula ósea, en las que los agentes quimioterapéuticos
adecuados incluyen, entre otros, fludarabina o fosfato de
fludarabina, clorambucilo, vincristina, pentostatina,
2-clorodesoxiadenosina (cladribina),
ciclofosfamida, doxorubicina, prednisona, y sus combinaciones, por
ejemplo, regímenes que contienen antraciclina tales como CAP
(ciclofosfamida, doxorubicina más prednisona), CHOP (ciclofosfamida,
vincristina, prednisona más doxorubicina), VAD (vincristina,
doxorubicina, más dexametasona), MP (melfalán más prednisona), y
otros agentes citotóxicos y/o terapéuticos usados en quimioterapia
tales como mitoxantrona, daunorubicina, idarubicina, asparaginasa,
y antimetabolitos, incluidos, entre otros, citarabina, metotrexato,
5-fluorouracilo decarbazina,
6-tioguanina, 6-mercaptopurina y
nelarabina; otra terapia anticancerosa con anticuerpos monoclonales
(por ejemplo, alemtuzumab (Campath®) u otro anticuerpo anti CD52
dirigido a la glicoproteína de superficie celular CD52 en células B
malignas; rituximab (Rituxan®), el anticuerpo
HuMax-CD20 totalmente humano,
R-1594, IMMU-106,
TRU-015, AME-133,
tositumomab/I-131 tositumomab (Bexxar®), ibritumomab
tiuxetan (Zevalin®), o cualquier otro anticuerpo anti CD20
terapéutico dirigido al antígeno CD20 en células B malignas;
anticuerpo anti CD19 (por ejemplo, MT103, un anticuerpo
biespecífico); anticuerpo anti CD22 (por ejemplo, el anticuerpo
monoclonal humanizado epratuzumab); bevacizumab (Avastin®) u otro
anticuerpo anticanceroso dirigido al factor de crecimiento vascular
endotelial humano; anticuerpo anti CD22 dirigido al antígeno CD22 en
células B malignas (por ejemplo, el anticuerpo monoclonal
BL-22, una toxina alfaCD22); anticuerpo
\alpha-M-CSF dirigido al factor
estimulante de colonias de macrófagos; anticuerpos dirigidos al
activador del receptor del factor kappaB nuclear (RANK) y su
ligando (RANKL), que se sobreexpresan en el mieloma múltiple;
anticuerpo anti CD23 dirigido al antígeno CD23 en células B
malignas (por ejemplo, IDEC-152); anticuerpo anti
CD80 dirigido al antígeno CD80 (por ejemplo,
IDEC-114); anticuerpo anti CD38 dirigido al antígeno
CD38 en células B malignas; anticuerpos dirigidos a los receptores
del complejo mayor de histocompatibilidad de clase II (anticuerpos
anti MHC) expresados en células B malignas; otros anticuerpos anti
CD40 (por ejemplo, SGN-40) dirigidos al antígeno
CD40 en células B malignas; y anticuerpos dirigidos al receptor 1
del ligando inductor de apoptosis relacionado con el factor de
necrosis tumoral (TRAIL-R1) (por ejemplo, el
anticuerpo monoclonal agonista humano HGS-ETR1) y
TRAIL-R2 expresado en una serie de tumores sólidos
y tumores de origen hematopoyético); terapia del cáncer basada en
moléculas pequeñas, incluidos, entre otros, inhibidores de los
microtúbulos y/o de la topoisomerasa (por ejemplo, el inhibidor
mitótico dolastatina y análogos de dolastatina; el agente de unión a
tubulina T900607; XL119; y el inhibidor de la topoisomerasa
aminocamptotecina), SDX-105 (clorhidrato de
bendamustina), ixabepilona (un análogo de epotilona, también
llamado BMS-247550), inhibidores de la proteincinasa
C, por ejemplo, midostaurina ((PKC-412, CGP 41251,
N-benzoilstaurosporina), pixantrona, eloxatina (un
agente antineoplásico), ganite (nitrato de galio), Thalomid®
(talidomida), derivados inmunomoduladores de la talidomida (por
ejemplo, revlimid (anteriormente revimid)), Affinitak^{TM}
(inhibidor antisentido de la proteincinasa C-alfa),
SDX-101 (R-etodolac, que induce la
apoptosis de linfocitos malignos), análogos de nucleósidos de purina
de segunda generación tales como clofarabina, inhibidores de la
producción de la proteína Bcl-2 por células
cancerosas (por ejemplo, los agentes antisentido oblimersen y
Genasense®), inhibidores de proteasoma (por ejemplo, Velcade^{TM}
(bortezomib)), inhibidores de cinasas de molécula pequeña (por
ejemplo, CHIR-258), inhibidores de VEGF de molécula
pequeña (por ejemplo, ZD-6474), inhibidores de la
proteína del choque térmico (HSP) 90 de molécula pequeña (por
ejemplo, 17-AAG), agentes inhibidores de
desacetilasas de histonas de molécula pequeña (por ejemplo, HPC
híbrido/polar de citodiferenciación) tales como ácido
suberanilohidroxámico (SAHA), y FR-901228 y agentes
apoptóticos tales como Trisenox® (trióxido de arsénico) y Xcytrin®
(motexafina gadolinio); terapias contra el cáncer basadas en
vacunas/inmunoterapia, incluidos, entre otros, enfoques de vacunas
(por ejemplo, Id-KLH, oncofago, vitaletina),
inmunoterapia personalizada o inmunoterapia activa de idiotipo (por
ejemplo, MyVax® Personalized Immunotherapy, denominada formalmente
GTOP-99), Promune® (CpG 7909, un agonista sintético
para el receptor de tipo toll 9 (TLR9)), terapia con interferón
alfa, terapia con IL-12, terapia con
IL-15 y terapia con IL-21; terapia
con esteroides; u otra terapia contra el cáncer.
La presente invención también proporciona el uso
de IL-2 o una variante de la misma biológicamente
activa en la fabricación de un medicamento para tratar un cáncer
que expresa CD40 en un sujeto, como se ha definido en lo que
antecede en el presente documento, en el que el medicamento está
coordinado con tratamiento con un anticuerpo anti CD40 antagonista
o un fragmento de unión a antígeno del mismo. En estas formas de
realización, por "coordinado" se entiende que el medicamento
que comprende la IL-2 o su variante biológicamente
activa se debe usar antes, durante o del tratamiento del sujeto con
anticuerpo anti CD40 antagonista o un fragmento de unión a antígeno
del mismo. En una forma de realización tal, la presente invención
proporciona el uso de IL-2 o una variante
biológicamente activa de la misma, por ejemplo, IL-2
humana o la muteína IL-2 humana
des-alanil-1, serina 125, en la
fabricación de un medicamento para tratar un cáncer que expresa CD40
en un sujeto, en el que el medicamento está coordinado con
tratamiento con el anticuerpo monoclonal CHIR-12.12
o CHIR-5.9, en el que el medicamento debe usarse
antes, durante o después del tratamiento del sujeto con el
anticuerpo monoclonal CHIR-12.12 o
CHIR-5.9.
En algunas formas de realización, el medicamento
que comprende la IL-2 o su variante biológicamente
activa está coordinado con tratamiento con el anticuerpo anti CD40
antagonista, por ejemplo el anticuerpo monoclonal
CHIR-12.12 o CHIR-5.9, o su
fragmento de unión a antígeno, y con al menos otro tipo de terapia
anticancerosa. Ejemplos de otras terapias contra el cáncer
incluyen, entre otras, las descritas en lo que antecede en el
presente documento, es decir cirugía o procedimientos quirúrgicos
(por ejemplo, esplenectomía, hepatectomía, linfadenectomía,
leucoforesis, transplante de médula ósea, y similares);
radioterapia; quimioterapia, opcionalmente en combinación con
transplante autólogo de médula ósea, en las que los agentes
quimioterapéuticos adecuados incluyen, entre otros, fludarabina o
fosfato de fludarabina, clorambucilo, vincristina, pentostatina,
2-clorodesoxiadenosina (cladribina),
ciclofosfamida, doxorubicina, prednisona, y sus combinaciones, por
ejemplo, regímenes que contienen antraciclina tales como CAP
(ciclofosfamida, doxorubicina más prednisona), CHOP (ciclofosfamida,
vincristina, prednisona más doxorubicina), VAD (vincristina,
doxorubicina, más dexametasona), MP (melfalán más prednisona), y
otros agentes citotóxicos y/o terapéuticos usados en quimioterapia
tales como mitoxantrona, daunorubicina, idarubicina, asparaginasa,
y antimetabolitos, incluidos, entre otros, citarabina, metotrexato,
5-fluorouracilo decarbazina,
6-tioguanina, 6-mercaptopurina y
nelarabina; otra terapia anticancerosa con anticuerpos monoclonales
(por ejemplo, alemtuzumab (Campath®) u otro anticuerpo anti CD52
dirigido a la glicoproteína de superficie celular CD52 en células B
malignas; rituximab (Rituxan®), el anticuerpo
HuMax-CD20 totalmente humano,
R-1594, IMMU-106,
TRU-015, AME-133,
tositumomab/I-131 tositumomab (Bexxar®), ibritumomab
tiuxetan (Zevalin®), o cualquier otro anticuerpo anti CD20
terapéutico dirigido al antígeno CD20 en células B malignas;
anticuerpo anti CD19 (por ejemplo, MT103, un anticuerpo
biespecífico); anticuerpo anti CD22 (por ejemplo, el anticuerpo
monoclonal humanizado epratuzumab); bevacizumab (Avastin®) u otro
anticuerpo anticanceroso dirigido al factor de crecimiento vascular
endotelial humano; anticuerpo anti CD22 dirigido al antígeno CD22 en
células B malignas (por ejemplo, el anticuerpo monoclonal
BL-22, una toxina alfaCD22); anticuerpo
\alpha-M-CSF dirigido al factor
estimulante de colonias de macrófagos; anticuerpos dirigidos al
activador del receptor del factor kappaB nuclear (RANK) y su
ligando (RANKL), que se sobreexpresan en el mieloma múltiple;
anticuerpo anti CD23 dirigido al antígeno CD23 en células B
malignas (por ejemplo, IDEC-152); anticuerpo anti
CD80 dirigido al antígeno CD80 (por ejemplo,
IDEC-114); anticuerpo anti CD38 dirigido al antígeno
CD38 en células B malignas; anticuerpos dirigidos a los receptores
del complejo mayor de histocompatibilidad de clase II (anticuerpos
anti MHC) expresados en células B malignas; otros anticuerpos anti
CD40 (por ejemplo, SGN-40) dirigidos al antígeno
CD40 en células B malignas; y anticuerpos dirigidos al receptor 1
del ligando inductor de apoptosis relacionado con el factor de
necrosis tumoral (TRAIL-R1) (por ejemplo, el
anticuerpo monoclonal agonista humano HGS-ETR1) y
TRAIL-R2 expresado en una serie de tumores sólidos
y tumores de origen hematopoyético); terapia del cáncer basada en
moléculas pequeñas, incluidos, entre otros, inhibidores de los
microtúbulos y/o de la topoisomerasa (por ejemplo, el inhibidor
mitótico dolastatina y análogos de dolastatina; el agente de unión a
tubulina T900607; XL119; y el inhibidor de la topoisomerasa
aminocamptotecina), SDX-105 (clorhidrato de
bendamustina), ixabepilona (un análogo de epotilona, también
llamado BMS-247550), inhibidores de la proteincinasa
C, por ejemplo, midostaurina ((PKC-412, CGP 41251,
N-benzoilstaurosporina), pixantrona, eloxatina (un
agente antineoplásico), ganite (nitrato de galio), Thalomid®
(talidomida), derivados inmunomoduladores de la talidomida (por
ejemplo, revlimid (anteriormente revimid)), Affinitak^{TM}
(inhibidor antisentido de la proteincinasa C-alfa),
SDX-101 (R-etodolac, que induce la
apoptosis de linfocitos malignos), análogos de nucleósidos de purina
de segunda generación tales como clofarabina, inhibidores de la
producción de la proteína Bcl-2 por células
cancerosas (por ejemplo, los agentes antisentido oblimersen y
Genasense®), inhibidores de proteasoma (por ejemplo, Velcade^{TM}
(bortezomib)), inhibidores de cinasas de molécula pequeña (por
ejemplo, CHIR-258), inhibidores de VEGF de molécula
pequeña (por ejemplo, ZD-6474), inhibidores de la
proteína del choque térmico (HSP) 90 de molécula pequeña (por
ejemplo, 17-AAG), agentes inhibidores de
desacetilasas de histonas de molécula pequeña (por ejemplo, HPC
híbrido/polar de citodiferenciación) tales como ácido
suberanilohidroxámico (SAHA), y FR-901228 y agentes
apoptóticos tales como Trisenox® (trióxido de arsénico) y Xcytrin®
(motexafina gadolinio); terapias contra el cáncer basadas en
vacunas/inmunoterapia, incluidos, entre otros, enfoques de vacunas
(por ejemplo, Id-KLH, oncofago, vitaletina),
inmunoterapia personalizada o inmunoterapia activa de idiotipo (por
ejemplo, MyVax® Personalized Immunotherapy, denominada formalmente
GTOP-99), Promune® (CpG 7909, un agonista sintético
para el receptor de tipo toll 9 (TLR9)), terapia con interferón
alfa, terapia con IL-12, terapia con
IL-15 y terapia con IL-21; terapia
con esteroides; u otra terapia contra el cáncer; en las que el
tratamiento con en anticuerpo anti CD40 antagonista o un fragmento
de unión al antígeno del mismo y la terapia anticacerosa adicional
o terapias anticancerosas adicionales, se producen antes, durante o
después del tratamiento del sujeto con el medicamento que comprende
la IL-2 o su variante, como se ha indicado en lo
que antecede en el presente documento. Cuando el medicamento
comprende IL-2 o su variante biológicamente activa
está coordinado con tratamiento con el anticuerpo anti CD40
antagonista o su fragmento de unión a antígeno y con al menos otra
terapia anticancerosa, el uso del medicamento puede ser antes,
durante o después del tratamiento del sujeto con cualquiera o con
ambas terapias anticancerosas adicionales.
Los siguientes ejemplos se ofrecen a modo de
ilustración y no como limitación.
Los anticuerpos anti CD40 antagonistas usados en
los ejemplos siguientes son CHIR-5.9 y
CHIR-12.12. Los anticuerpos anti CD40
CHIR-5.9 y CHIR-12.12 son
anticuerpos monoclonales (mAb) anti CD40 humanos del subtipo IgG1
humana generados por inmunización de ratones transgénicos que
llevan el locus de la cadena pesada de la IgG1 humana y el locus de
la cadena ligera \kappa humana (tecnología XenoMouse®; Abgenix;
Fremont, California). Como inmunógeno se usaron células de insecto
SF9 que expresan el dominio extracelular de CD40.
Brevemente, se fusionaron esplenocitos de
ratones inmunizados con células de mieloma murino SP 2/0 o P 3 x
63Ag8.653 en una relación de 10:1 usando polietilenglicol al 50%
como está descrito previamente por de Boer y col. (1988) J.
Immunol. Meth. 113:143. Las células fusionadas se resuspendieron en
medio IMDM completo suplementado con hipoxantina (0,1 mM),
aminopterina (0,01 mM), timidina (0,016 mM), y 0,5 ng/ml de
hIL-6 (Genzyme, Cambridge, Massachusetts). A
continuación se distribuyeron las células fusionadas entre los
pocillos de placas de cultivo tisular de 96 pocillos, de manera que
cada una contenía 1 hibridoma en crecimiento de promedio.
Tras 10-14 días se analizaron
los sobrenadantes de las poblaciones de hibridomas para detectar la
producción de anticuerpos específicos. Para la detección de
anticuerpos específicos por los clones de hibridoma, se combinaron
los sobrenadantes de cada pocillo y se probaron para especificidad
de actividad anti-CD 40 por ELISA en primer lugar.
A continuación se usaron los positivos para tinción fluorescente de
células de las células B transformadas con VEB usando un ensayo
FACS. Las células de hibridomas positivos se clonaron dos veces por
dilución límite en IMDM/FBS que contenía 0,5 ng/ml de
hIL-6.
Se fusionó un total de 31 bazos de ratones con
las células SP2/0 de mieloma de ratón para generar 895 anticuerpos
que reconocen el CD40 recombinante en ELISA. De media,
aproximadamente el 10% de los hibridomas producidos usando la
tecnología Abgenix XenoMouse® (Abgenix; Fremont, California) pueden
contener la cadena ligera lambda de ratón en lugar de la cadena
kappa humana. Se seleccionaron los anticuerpos que contenían cadena
ligera lambda de ratón y se descartaron. Se seleccionó una
subpoblación de 260 anticuerpos que también mostraban unión al CD40
de superficie celular para su análisis posterior. Los hibridomas
estables seleccionados durante una serie de procedimientos de
subclonación se usaron para caracterización adicional en los ensayos
de unión y funcionales.
Se identificaron clones de otros 7 hibridomas
que tenían actividad antagonista. Según su potencia antagonista
relativa y las actividades de ADCC, se seleccionaron dos clones de
hibridoma para otra evaluación (Tabla 2 a continuación). Se
denominan 131.2F8.5.9 (5.9) y 153.8E2.D10,D6.12.12 (12.12).
\vskip1.000000\baselineskip
La línea de hibridoma de ratón 131.2F8.5.9
(CMCC#12047) y la línea de hibridoma 153.8E2.D10.D6.12.12
(CMCC#12056) se han depositado en la American Type Culture
Collection [ATCC; 10801 University Blvd., Manassas, Virginia
20110-22209 (EEUU)] bajo el Número de Depósito de
Patente PTA-5542 y PTA-5543,
respecti-
vamente.
vamente.
Los ADNc que codifican las regiones variables de
los anticuerpos candidatos se amplificaron por PCR, se clonaron y
se secuenciaron. Las secuencias de aminoácido para la cadena ligera
y la cadena pesada del anticuerpo CHIR-12.12 se
presentan en las Figuras 1A y 1B, respectivamente. Véase también la
SEC ID Nº 2 (cadena ligera para el mAb CHIR-12.12)
y la SEC ID Nº 4 (cadena pesada para el mAb
CHIR-12.12). En la Figura 1B se muestra una variante
de la cadena pesada para el mAb CHIR-12.12 (véase
también la SEC ID Nº 5), que difiere de la SEC ID Nº 4 porque tiene
un residuo de serina sustituido por el residuo alanina en la
posición 153 de la SEC ID Nº 4. Las secuencias de nucleótidos que
codifican la cadena ligera y la cadena pesada del anticuerpo
CHIR-12.12 se presentan en las Figuras 2A y 2B,
respectivamente. Véase también la SEC ID Nº 1 (secuencia
codificadora de la cadena ligera del mAb
CHIR-12.12) y la SEC ID Nº 3 (secuencia codificadora
de la cadena pesada del mAb CHIR-12.12). Las
secuencias de aminoácidos para la cadena ligera y cadena pesada del
anticuerpo CHIR-5.9 se presentan en las Figuras 3A
y 3B, respectivamente. Véase también la SEC ID Nº 6 (cadena ligera
para mAb CHIR-5.9) y la SEC ID Nº 7 (cadena pesada
para mAb CHIR-5.9). En la Figura 3B se muestra una
variante de la cadena pesada para mAb CHIR-5.9
(véase también la SEC ID Nº 8), que difiere de la SEC ID Nº 7 porque
tiene un residuo serina sustituido por un residuo alanina en la
posición 158 de la SEC ID Nº 7.
Como se espera para los anticuerpos obtenidos de
hibridomas independientes, hay una variación sustancial en las
secuencias de nucleótidos en las regiones determinantes de
complementariedad (CDR). Se cree que la diversidad en la región de
CDR3 de V_{H} determina de manera significativa la especificidad
del anticuerpo.
Como se muestra por medio del análisis FACS,
CHIR-5.9 y CHIR-12.12 se unen
específicamente al CD40 humano y pueden prevenir la unión del
ligando de CD40. Ambos mAb pueden competir con la unión previa del
ligando de CD40 al CD40 de la superficie celular. La afinidad de
unión de CHIR-5.9 al CD40 humano es 1,2 x 10^{-8}M
y la afinidad de unión de CHIR-12.12 al CD40 humano
es 5 x 10^{-10}M.
Los anticuerpos monoclonales
CHIR-5.9 y CHIR-12.12 son fuertes
antagonistas e inhiben la proliferación in vitro de las
células B normales mediada por el ligando de CD40, así como de las
células cancerosas de pacientes con NHL y CLL. In vitro,
ambos anticuerpos matan las células cancerosas primarias de
pacientes con NHL por ADCC. Se observó actividad antitumoral
dependiente de la dosis en un modelo de xenoinjerto de linfoma
humano.
Ejemplo
1
Los anticuerpos monoclonales candidatos
CHIR-5.9 y CHIR-12.12 compiten uno
con el otro por la unión al CD40 pero no con 15B8, un mAb IgG_{2}
anti CD40 (véase documento de Publicación Internacional Nº WO
02/28904). Se diseñaron estudios de unión competitiva de
anticuerpos usando Biacore con chips biosensores CM5 con proteína A
inmovilizada por medio de acoplamiento de aminas, que se usó para
capturar anti CD40, CHIR-12.12, o 15B8. Se
observaron las curvas de unión de asociación/disociación normales
con concentraciones variables de CD40-his (datos no
mostrados). Para los estudios de competición, se capturaron
CHIR-12.12 o 15B8 en la superficie de la proteína
A. Posteriormente se hizo fluir un complejo
CD40-his/Fab de CHIR-5.9 (CD40 100
nM: Fab de CHIR-5.9 1 \muM), en concentraciones
variables, a través de la superficie modificada. En el caso de
CHIR-12.12, no se observó asociación del complejo,
lo que indica que CHIR-5.9 bloquea la unión de
CHIR-12.12 a CD40-his. Para 15B8,
se observó asociación del complejo Fab CHIR-5.9, lo
que indica que CHIR-5.9 no bloquea la unión de 15B8
al sitio de unión de CD40. Sin embargo, la tasa de disociación del
complejo aumentó drásticamente (datos no
mostrados).
mostrados).
También se determinó que 15B8 y
CHIR-12.12 no compiten por la unión de
CD40-his. Este experimento se llevó a cabo
capturando CHIR-12.12 en el chip biosensor de
proteína A, bloqueando los sitios residuales de proteína A con
hIgG1 control, uniendo CD40-his y a continuación
haciendo fluir 15B8 sobre la superficie modificada. 15B8 se unió
bajo estas condiciones, lo que indica que CHIR-12.12
no bloquea la unión de 15B8 al CD40.
Ejemplo
2
Se inmovilizó proteína A en chips biosensores
CM5 a través de acoplamiento de aminas. Se capturaron anticuerpos
monoclonales anti-CD40 humanos, a una concentración
de 1,5 \mug/ml, sobre la superficie modificada del biosensor
durante 1,5 minutos a 10 \mul/min. Se hizo fluir
CD40-his recombinante soluble sobre la superficie
del biosensor en concentraciones variables. El anticuerpo y el
antígeno se diluyeron en HEPES 0,01 M pH 7,4, NaCl 0,15 M, EDTA 3
mM, tensioactivo P20 al 0,005% (HBS-EP). Se
determinaron las constantes cinéticas y de afinidad usando el
programa informático Biaevaluation con un ajuste de interacción
modelo/global de 1:1.
\newpage
Como se muestra en la Tabla 3 a continuación,
hay una diferencia de 121 veces en la tasa de disociación de
CHIR-5.9 y CHIR-12.12, que da como
resultado una afinidad 24 veces mayor para
CHIR-12.12.
Ejemplo
3
Para determinar la localización del epítopo en
CD40 reconocido por los anticuerpos monoclonales
CHIR-12.12 y CHIR-5.9, se
realizaron análisis SDS-PAGE y de transferencia de
tipo Western. Se separó el CD40 purificado (0,5 \mug) en un gel
NUPAGE al 4-12% en condiciones reductoras y no
reductoras, se transfirió a membranas PVDF y se sondaron con
anticuerpos monoclonales a una concentración de 10 \mug/ml. Las
transferencias se sondaron con IgG anti humana conjugada con
fosfatasa alcalina y se desarrollaron usando el sustrato
estabilizado Azul Western® para fosfatasa alcalina (Promega).
Los resultados indican que el anticuerpo
monoclonal anti CD40 CHIR12.12 reconoce epítopos tanto en la forma
no reducida como en la forma reducida de CD40, en los que la forma
no reducida de CD40 exhibe mayor intensidad que la forma reducida
de CD40 (Tabla 4; transferencias no mostradas). El hecho de que el
reconocimiento fuera positivo para ambas formas de CD40 indica que
este anticuerpo interacciona con un epítopo conformacional, parte
del cual es una secuencia lineal. El anticuerpo monoclonal
CHIR-5.9 reconoce principalmente la forma no
reducida de CD40, lo que sugiere que este anticuerpo interacciona
con un epítopo principalmente conformacional (Tabla 4;
transferencias no mostradas).
Para realizar un mapa de la región antigénica en
CD40, se clonaron los cuatro dominios extracelulares de CD40 y se
expresaron en células de insecto como proteínas de fusión GST. La
secreción de los cuatro dominios se aseguró con una señal de
secreción GP67. El sobrenadante de las células de insecto se analizó
por análisis SDS-PAGE y transferencia de tipo
Western para identificar el dominio que contenía el epítopo.
El anticuerpo monoclonal
CHIR-12.12 reconoce un epítopo en el Dominio 2 tanto
en condiciones reductoras como no reductoras (Tabla 5;
transferencias no mostradas). Por el contrario, el anticuerpo
monoclonal CHIR-5.9 exhibe un reconocimiento muy
débil para el Dominio 2 (Tabla 5; transferencias no mostradas).
Ninguno de estos anticuerpos reconoce los Dominios 1, 3 ó 4 en este
análisis.
\newpage
\global\parskip0.980000\baselineskip
Para definir con más precisión el epítopo
reconocido por el mAb CHIR-12.12, se sintetizaron
péptidos del Dominio 2 extracelular de CD40, que corresponde a la
secuencia PCGESEFLDTWNRETHCHQHKYCDPNLGLRVQQKGTSETDTICT (residuos
61-104 de la secuencia mostrada en SEC ID Nº 10 o
SEC ID Nº 12). Se generaron membranas SPOTs (Sigma) que contenían
treinta y cinco péptidos 10-meros con un
desplazamiento de 1 aminoácido. Se realizó el análisis de
transferencia de tipo Western con el mAb CHIR-12.12
y anti IgG humana marcada con beta galactosidasa como anticuerpo
secundario. Se raspó la transferencia y se volvió a sondar con el
mAb CHIR-5.9 para determinar la región reconocida
por este anticuerpo.
Los análisis SPOTs con el anticuerpo monoclonal
anti CD40 CHIR-12.12 como sonda a una concentración
de 10 \mug/ml dieron reacciones positivas con las transferencias
18 a 22. La región de la secuencia cubierta por estos péptidos se
muestra en la Tabla 6.
Estos resultados corresponden a un epítopo
lineal de: YCDPNL (residuos 82-87 de la secuencia
mostrada en SEC ID Nº:10 o SEC ID Nº 12). Este epítopo contiene
Y82, D84 y N86, que se ha predicho que están implicados en la
interacción CD40-ligando de CD40.
Los análisis SPOTs con mAb
CHIR-5.9 mostraron un débil reconocimiento de los
péptidos representados por las transferencias 20-22
mostradas en la Tabla 7, lo que sugiere implicación de la región
YCDPNLGL (residuos 82-89 de la secuencia mostrada
en SEC ID Nº 10 o SEC ID Nº 12) en su unión a CD40. Debe señalarse
que los mAb CHIR-12.12 y CHR-5.9
compiten uno con el otro por la unión a CD40 en el análisis
BIACORE.
Los epítopos lineales identificados por los
análisis SPOTs están dentro del módulo B1 de CD40. La secuencia del
módulo B1 de CD40 es:
- HKYCDPNLGLRVQQKGTSETDTIC
- (residuos 80-103 de SEC ID Nº 10 o SEC ID Nº 12).
Dentro del epítopo lineal identificado para
CHIR-12.12 está C83. Se sabe que este residuo de
cisteína forma un enlace disulfuro con C103. Es probable que el
epítopo conformacional del mAb CHIR-12.12 contenga
este enlace disulfuro (C83-C103) y/o aminoácidos
vecinos conformacionalmente próximos a C103.
\newpage
\global\parskip1.000000\baselineskip
Ejemplo
4
Se espera que el mAb CHIR-12.12
produzca los efectos farmacológicos deseados para reducir la carga
tumoral por cualquiera de dos mecanismos antitumorales, bloqueo de
la señal de proliferación/supervivencia e inducción de ADCC. Los
modelos de xenoinjerto de linfoma humano disponibles en la
actualidad usan líneas celulares de linfoma a largo plazo que, a
diferencia de las células cancerosas primarias, no son dependientes
de la estimulación de CD40 para su crecimiento y supervivencia. Por
consiguiente, se espera que el componente de esta actividad
antitumoral de estos mAb basado en el bloqueo de la señal de
proliferación/supervivencia tumoral no contribuya a la eficacia
antitumoral en estos modelos. La eficacia en estos modelos es
dependiente de la ADCC, el segundo mecanismo antitumoral asociado
con el mAb CHIR-12.12.
El tratamiento de combinación con el mAb
CHIR-12.12 e IL-2 se evaluó en un
modelo de xenoinjerto NHL humano estadificado de Namalwa. Para
asegurar el crecimiento constante del tumor, se irradió el cuerpo
entero de ratones desnudos deficientes en células T con 3 Gy para
suprimir adicionalmente el sistema inmune un día antes de la
inoculación del tumor. Las células tumorales se inocularon por vía
subcutánea en el costado derecho a 5 x 10^{6} células por ratón.
El tratamiento se inició cuando el volumen del tumor alcanzó
aproximadamente 100-200 mm^{3} (aproximadamente 7
días después de la inoculación del tumor). Los ratones portadores
del tumor se trataron del siguiente modo: (1) IgG1 a 10 mg/kg, por
vía intraperitoneal, una vez a la semana durante 4 semanas; (2) mAb
CHIR-12.12 a 1 mg/kg, por vía intraperitoneal, una
vez a la semana durante 4 semanas; (3) IL-2 a 0,5
mg/kg, por vía subcutánea, diariamente durante 8 días; (4)
IL-2 a 0,5 mg/kg, por vía subcutánea, diariamente
durante 8 días + CHIR-12.12 a 1 mg/kg, por vía
intraperitoneal, una vez a la semana durante 4 semanas; y (5)
IL-2 a 0,5 mg/kg, por vía subcutánea, diariamente
durante 8 días + CHIR-12.12 a 10 mg/kg, por vía
intraperitoneal, una vez a la semana durante 4 semanas. Se
registraron los volúmenes tumorales dos veces por semana. Los datos
se analizaron usando
ANOVA-CHIR-12.12 e
IL-2 por separado inhibieron el crecimiento de los
tumores de Namalwa (N= 10 ratones/grupo). La combinación de
CHIR-12.12 e IL-2 dio como resultado
una actividad antitumoral aditiva (Figura 5).
Ejemplo
5
El ligando de CD40 soluble (CD40L) activa las
células B e induce diversos aspectos de respuestas funcionales,
incluidos el aumento de la supervivencia y la proliferación, y la
activación de las vías de señalización de NF\kappaB, ERK/MAPK,
PI3K/Akt y p38. Además, la estimulación de CD40 mediada por CD40L
proporciona señales de supervivencia por reducción de PARP
escindido e inducción de proteínas antiapoptóticas, XIAP y
Mcl-1, en células B normales. La estimulación de
CD40 mediada por CD40L también recluta TRAF2 y TRAF3 para la unión
al dominio citoplasmático de CD40.
Los siguientes estudios demuestran que
CHIR-12.12 inhibió directamente todos estos efectos
de la estimulación en las células B humanas normales. Por ejemplo,
el tratamiento con CHIR-12.12 dio como resultado el
aumento de escisión de caspasa-9,
caspasa-3 y PARP así como la reducción de XIAP y
Mcl-1 de una manera dependiente del tiempo y de la
dosis, restaurando la apoptosis de las células B. El tratamiento con
CHIR-12.12 también inhibió la fosforilación de
I\kappaB cinasa (IKK) \alpha y \beta (vía de NF\kappaB),
ERK, Akt y p38 en respuesta a la estimulación de CD40 mediada por
CD40L. Además, se encontró que CHIR-12.12 no provocó
estos efectos apoptóticos sin la estimulación inicial de CD40
mediada por CD40L.
En estos experimentos, se estimularon 0,6 x
10^{6} células B humanas normales de donadores sanos (porcentaje
de pureza entre 85 y 95%) con sCD40L 1 \mug/ml (Alexis Corp.,
Bingham, Nottinghamshire, RU). A continuación se añadió
CHIR-12.12 (10 \mug/ml) e IgG de control. Las
células se recogieron a los 0 y 20 minutos, a las 2 horas, 6 horas,
18 horas y 26 horas. Se detectaron controles de caspasa 9 escindida,
caspasa 3 escindida, PARP escindida y \beta actina en los lisados
celulares por transferencia de tipo Western.
En resumen, se observó que la estimulación de
CD40 mediada por CD40L proporcionó señales de supervivencia ya que
no dio lugar a aumentos de caspasa 9 escindida, caspasa 3 escindida
o PARP escindida con el tiempo, indicando que las células no
estaban sufriendo apoptosis. Sin embargo, el tratamiento con
CHIR-12.12 dio como resultado un aumento de estos
productos de escisión, indicando que el tratamiento con
CHIR-12.12 anuló los efectos de la unión de CD40L
en las señales de supervivencia en las células B normales
estimuladas con cCD40L, restaurando la apoptosis de las células B
(datos no mostrados).
En estos experimentos, se estimularon 0,6 x
10^{6} células B humanas normales de donadores sanos (porcentaje
de pureza entre 85 y 95%) con sCD40L 1 \mug/ml (Alexis Corp.,
Bingham, Nottinghamshire, RU). A continuación se añadió
CHIR-12.12 (10 \mug/ml) e IgG de control. Las
células se recogieron a los 0 y 20 minutos, a las 2 horas, 6 horas,
18 horas y 26 horas. Se detectaron controles de
Mcl-1, XIAP, CD40 y \beta actina en los lisados
celulares por transferencia de tipo Western.
En resumen, la estimulación con sCD40L dio como
resultado la expresión sostenida de Mcl-1 y XIAP con
el tiempo. Sin embargo, el tratamiento de las células estimuladas
con sCD40L con CHIR-12.12 dio como resultado una
disminución en la expresión de estas proteínas con el tiempo (datos
no mostrados). Como Mcl-1 y XIAP son señales de
"supervivencia" capaces de bloquear la vía apoptótica, estos
resultados demuestran que el tratamiento con
CHIR-12.12 elimina el bloqueo contra la apoptosis
en las células B normales estimuladas con sCD40L.
En estos experimentos, se estimularon 1,0 x
10^{6} células B humanas normales de donadores sanos (porcentaje
de pureza entre 85 y 95%) con sCD40L 1 \mug/ml (Alexis Corp.,
Bingham, Nottinghamshire, RU). A continuación se añadió
CHIR-12.12 (10 \mug/ml) e IgG de control. Las
células se recogieron a los 0 y 20 minutos. Se detectaron los
controles de IKK \alpha (Ser180) e IKK \beta (Ser 181) y de IKK
\beta total en los lisados celulares por transferencia de tipo
Western.
En resumen, la estimulación por medio de sCD40L
dio como resultado la fosforilación de IKK \alpha (Ser180) e IKK
\beta (Ser 181) con el tiempo; sin embargo, el tratamiento con
CHIR-12.12 anuló esta respuesta a la estimulación
de sCD40L en las células B normales (datos no mostrados).
En estos experimentos, se estimularon 0,6 x
10^{6} células B humanas normales de donadores sanos (porcentaje
de pureza entre 85 y 95%) con sCD40L 1 \mug/ml (Alexis Corp.,
Bingham, Nottinghamshire, RU). A continuación se añadió
CHIR-12.12 (0,01, 0,1, 0,2, 0,5, 1,0 \mug/ml) e
IgG de control. Las células se recogieron a las 24 horas. Se
detectaron los controles de PARP escindida y \beta actina en los
lisados celulares por transferencia de tipo Western.
Brevemente, el tratamiento con
CHIR-12.12 dio como resultado el aumento de escisión
de PARP en células estimuladas con sCD40L de una manera dependiente
de la dosis y, por consiguiente, anuló la vía de señales de
supervivencia en las células B normales estimuladas con sCD40L
(datos no mostrados).
En estos experimentos, se estimularon 0,6 x
10^{6} células B humanas normales de donadores sanos (porcentaje
de pureza entre 85 y 95%) con sCD40L 1 \mug/ml (Alexis Corp.,
Bingham, Nottinghamshire, RU). A continuación se añadió
CHIR-12.12 (0,5, 2 y 10 \mug/ml) e IgG de control.
Las células se recogieron a las 22 horas. Se detectaron los
controles de Mcl-1, XIAP, PARP escindida y \beta
actina en los lisados celulares por transferencia de tipo
Western.
Western.
Brevemente, el tratamiento con
CHIR-12.12 redujo la expresión de
Mcl-1 y XIAP y aumentó la expresión de PARP en
células estimuladas con sCD40L de una manera dependiente de la dosis
y, por consiguiente, anuló estos bloqueos a la vía apoptótica en
las células B normales estimuladas con sCD40L (datos no
mostrados).
En estos experimentos, se estimularon 1,0 x
10^{6} células B humanas normales de donadores sanos (porcentaje
de pureza entre 85 y 95%) con CHIR-12.12 (10
\mug/ml) e IgG de control sola (es decir, las células no se
estimularon previamente con sCD40L antes de añadir el anticuerpo).
Las células se recogieron a las 0, 4, 14 y 16 horas. Se detectaron
los controles de XIAP, PARP escindida y \beta actina en los
lisados celulares por transferencia de tipo
Western.
Western.
Brevemente, los resultados muestran que sin
estimulación de sCD40L, las células expresaron concentraciones
aumentadas de PARP escindida, mientras que la expresión de XIAP
permaneció constante, tanto en las células tratadas con IgG de
control como en las tratadas con CHIR-12.12 (datos
no mostrados). Estos datos indican que CHIR-12.12
no provoca apoptosis en las células B humanas normales sin
estimulación de CD40L.
En estos experimentos, se privaron de suero en
medio que contenía FBS al 1% 1,0 x 10^{6} células B humanas
normales de donadores sanos (porcentaje de pureza entre 85 y 95%) y
se estimularon con sCD40L 1 \mug/ml (Alexis Corp., Bingham,
Nottinghamshire, RU). Los cultivos se trataron con
CHIR-12.12 (1 y 10 \mug/ml) e IgG de control. Las
células se recogieron a los 0 y 20 minutos. Se detectaron
fosfo-IKK\alpha, fosfo-IKK\beta,
IKK\beta total, fosfoERK, ERK total, fosfo-Akt,
Akt total, fosfo-p38 y p38 total en los lisados
celulares por transferencia de tipo Western.
En resumen, la estimulación con sCD40L dio como
resultado aumentos en la fosforilación de IKK\alpha/\beta,
fosforilación de ERK, fosforilación de Akt y fosforilación de p38,
por consiguiente dando lugar a la supervivencia y/o proliferación
de las células. El tratamiento de las células con
CHIR-12.12 anuló los efectos de la estimulación de
sCD40L en estas vías de señalización en las células B normales
(datos no mostrados).
En estos experimentos, se privaron de suero en
medio que contenía FBS al 1% 1,0 x 10^{6} células B humanas
normales de donadores sanos (porcentaje de pureza entre 85 y 95%) y
se estimularon con sCD40L 1 \mug/ml (Alexis Corp., Bingham,
Nottinghamshire, RU). Los cultivos se trataron también con
CHIR-12.12 (1 y 10 \mug/ml), Wortmanin (un
inhibidor de PI3K/Akt, 1 y 10 \muM), LY 294002 (un inhibidor de
PI3K/Akt; 10 y 30 \muM) y PD 98095 (un inhibidor de MEK, 10 y 30
\mug/ml). Las células se recogieron a los 0 y 20 minutos. Se
detectaron fosfoERK, fosfo-Akt, Akt total,
fosfo-IKK\alpha/\beta y total en los lisados
celulares por transferencia de tipo Western.
En resumen, los resultados muestran que
CHIR-12.12 anuló la fosforilación de todas estas
moléculas de transducción de señales, mientras que los inhibidores
de transducción de señales mostraron sólo anulación específica de
las señales, indicando que CHIR-12.12 probablemente
inhibe en una etapa anterior a estas moléculas de transducción de
señales mediadas por la estimulación por CD40L (datos no
mostrados).
En estos experimentos, se privaron de suero
durante cuatro horas en medio que contenía FBS al 1% 4,0 x 10^{6}
células B humanas normales de donadores sanos (porcentaje de pureza
entre 85 y 95%) y se estimularon con sCD40L 1 \mug/ml (Alexis
Corp., Bingham, Nottinghamshire, RU) durante 20 minutos. Las células
se recogieron a los 0 y 20 minutos. Se inmunoprecipitó CD40 usando
anti CD40 policlonal (Santa Cruz Biotechnology, CA), y se sondeó en
una transferencia Western con mAb anti TRAF2 (Santa Cruz
Biotechnology, CA), mAb anti TRAF3 (Santa Cruz Biotechnology, CA),
y mAb anti CD40 (Santa Cruz Biotechnology, CA).
En resumen, los resultados muestran que TRAF2 y
TRAF3 precipitaron conjuntamente con CD40 tras la estimulación de
sCD40L. Por el contrario, el tratamiento con
CHIR-12.12 anuló la formación del complejo de señal
CD40-TRAF2/3 en células B normales estimuladas con
sCD40L. No hubo cambios en la expresión de CD40 (datos no
mostrados).
Sin estar ligados por la teoría, los resultados
de estos experimentos, y los resultados en los ejemplos resumidos
anteriormente, indican que el anticuerpo CHIR-12.12
es un anticuerpo monoclonal anti CD40 antagonista de acción dual
que tiene una única combinación de atributos. Este anticuerpo
monoclonal totalmente humano bloquea las vías de señalización de
CD40 mediadas por CD40L para la supervivencia y la proliferación de
las células B; este antagonismo da lugar finalmente a la muerte
celular. CHIR-12.12 también media el reconocimiento
y la unión por las células efectoras, iniciando la citotoxicidad
celular dependiente de anticuerpos (ADCC). Una vez que
CHIR-12.12 está unido a las células efectoras, se
liberan las enzimas citolíticas, dando lugar a la apoptosis y lisis
de las células B. CHIR-12.12 es un anticuerpo
antitumoral más potente que rituximab cuando se compara en modelos
de tumores
preclínicos.
preclínicos.
Ejemplo
6
Se sabe que la estabilidad de las proteínas es
sensible al pH de la solución porque la carga superficial de una
proteína varía con el pH de la solución, lo que tiene como resultado
estabilización o desestabilización. Por tanto, los pH no óptimos de
las formulaciones pueden alterar la interacción electrostática, que
conduce a la degradación física de un anticuerpo anti CD40
antagonista, tal como agregación, precipitación y similares. Los
cambios en las condiciones de pH podrían también producir la rotura
de los enlaces covalentes, lo que conduce a la degradación química,
tal como fragmentación, desamidación y similares. Por tanto, este
estudio se diseñó para identificar el pH óptimo de una solución
para minimizar la degradación del anticuerpo anti CD40 antagonista
debido a agregación, fragmentación y desamidación.
El objetivo de este estudio fue investigar los
efectos del pH de la disolución en la estabilidad del anticuerpo
anti CD40 antagonista CHIR-12.12 por medio de
procedimientos biofísicos y bioquímicos para seleccionar el entorno
de disolución óptimo para este anticuerpo. Los resultados de
calorimetría diferencial de barrido (DSC) mostraron que la
estabilidad de la conformación de CHIR-12.12 es
óptima en formulaciones que tienen pH 5,5-6,5.
Basado en una combinación de análisis SDS-PAGE, HPLC
de exclusión por tamaño (SEC-HPLC) y HPLC de
intercambio catiónico (CEX-HPLC), la estabilidad
fisicoquímica de CHIR-12.12 es óptima a un pH de
aproximadamente 5,0-5,5. En vista de estos
resultados, una formulación farmacéutica líquida recomendada que
comprende este anticuerpo es una formulación que comprende
CHIR-12.12 en una concentración de aproximadamente
20 mg/ml formulada en succinato de sodio aproximadamente 10 mM,
cloruro de sodio aproximadamente 150 mM y que tiene un pH de
aproximadamente pH 5,5.
El anticuerpo CHIR-12.12
utilizado en los estudios de formulación es un anticuerpo monoclonal
humano producido por un proceso de cultivo de células CHO. Este mAb
tiene un peso molecular de 150 kDa y está constituido por dos
cadenas ligeras y dos cadenas pesadas unidas juntas por enlaces
disulfuro. Está dirigido contra el receptor de CD40 de superficie
celular en las células que expresan CD40, incluidas las células B
normales y malignas, para el tratamiento de diversos tipos de
cáncer y enfermedades autoinmunes/inflamatorias.
La sustancia del fármaco anti CD40 utilizada
para este estudio fue un lote a granel de anti CD40
(CHIR-12.12) purificado obtenido de células CHO. La
composición de la sustancia del fármaco era de anticuerpo
CHIR-12.12 9,7 mg/ml en citrato de sodio 10 mM,
cloruro de sodio 150 mM, a pH 6,5. La muestra de control en el
estudio era la sustancia del fármaco recibida, seguida por
congelación a \leq -60ºC, descongelación a TA y probada junto con
muestras de estabilidad en los puntos temporales predeterminados.
Las muestras de estabilidad se prepararon por diálisis de la
sustancia del fármaco contra disoluciones de diferentes pH y la
concentración de CHIR-12.12 en cada una de las
muestras se determinó por UV 280 tal como se presenta en la Tabla
8.
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La estabilidad fisicoquímica del anticuerpo
CHIR-12.12 en las diversas formulaciones se ensayó
usando los siguientes protocolos.
La estabilidad conformacional de diferentes
muestras de formulaciones se controló usando un MicroCal
VP-DSC tras calentar de 15ºC hasta 90ºC a razón de
1ºC/min.
Se estimó la fragmentación y la agregación
usando gel Tris-glicina al 4-20%
bajo condiciones no reductoras y reductoras. Se detectaron las
proteínas por medio de tinción con azul Coomassie.
La fragmentación y agregación de proteínas
también se midió por medio de un sistema de HPLC Water Alliance con
una columna Tosohaas TSK-GEL 3000SWXL, con fosfato
de sodio 100 mM, pH 7,0 como fase móvil a un caudal de 0,7
ml/min.
La degradación relacionada con el cambio de
cargas se midió usando un sistema de HPLC Waters 600s con una
columna Dionex Propac WCX-10, con HEPES 50 mM, pH
7,3 como fase móvil A y HEPES 50 mM que contenía NaCl 500 mM, pH
7,3 como fase móvil B a un caudal de 0,5ºC/min.
El desplegamiento térmico de
CHIR-12.12 reveló al menos dos transiciones
térmicas, que representan probablemente el desplegamiento y fusión
de los dominios Fab y Fc, respectivamente. A temperaturas más altas,
la proteína presumiblemente agregó, dando lugar a pérdida de la
señal de DSC. Con la finalidad de seleccionar la formulación, se
definió la temperatura de transición térmica más baja como la
temperatura de fusión, Tf, en este estudio. La Figura 13 muestra la
temperatura de fusión térmica como una función de los pH de las
formulaciones. Las formulaciones a pH 5,5-6,5
proporcionaron anti CD40 con estabilidad conformacional superior
como se demuestra por las temperaturas de fusión térmica más
elevadas.
Las muestras de formulaciones de
CHIR-12.12 a pH 4,5-9,0 se incubaron
a 40ºC durante 2 meses y se sometieron al análisis
SDS-PAGE (datos no mostrados). Bajo condiciones no
reductoras, se observaron especies con peso molecular (PM) de 23
kDa y 2,7 kDa en formulaciones con pH superior a 5,5, y se
observaron especies con PM de 51 kDa en todas las formulaciones,
pero aparecieron menos a pH 5,0-5,5. Pudo verse una
especie con PM de 100 kDa a pH 7,5 y pH 9,0.
En condiciones reductoras,
CHIR-12.12 se redujo en cadenas pesadas y cadenas
ligeras libres con PM de 50 kDa y 24 kDa, respectivamente. Las
especies de 100 kDa parecieron no ser totalmente reducibles y
aumentaron con el aumento del pH de la disolución, sugiriendo que
podría existir asociación covalente diferente de disulfuro en las
moléculas. Como había otras especies con identidades desconocidas en
SDS-PAGE, la comparación de estabilidad para cada
formulación se basa en la pureza restante de
CHIR-12.12. Las formulaciones a pH
5,0-6,0 proporcionaron un entorno más estable para
CHIR-12.12. Se detectaron pocos agregados por medio
de SDS-PAGE (datos no mostrados).
El análisis SEC-HPLC detectó el
CHIR-12.12 intacto como la especie del pico
principal, una especie de agregación como una especie de pico
anterior separada de la especie del pico principal, una especie de
fragmento grande como un pico meseta en la parte posterior de la
especie del pico principal, y se detectaron especies de fragmentos
pequeños posteriores a las especies del pico principal. Tras la
incubación a 5ºC y 25ºC durante 3 meses, se detectaron cantidades
insignificantes de fragmentos y agregados de proteínas (<1,0%) en
las formulaciones anteriores y las especies del pico principal de
CHIR-12.12 siguieron teniendo más del 99% de pureza
(datos no mostrados). Sin embargo, se desarrollaron gradualmente
fragmentos tras el almacenamiento a 40ºC y se formaron más
fragmentos a pH 4,5 y pH 6,5-9,0, como se muestra en
la Tabla 9. Tras incubar las formulaciones de
CHIR-12.12 a 40ºC durante 3 meses, se detectó
aproximadamente 2-3% de agregados en pH 7,5 y pH
9,0, mientras que se detectó menos del 1% de agregados en las
formulaciones a otros pH (datos no mostrados). Los resultados de
SEC-HPLC indican que CHIR-12.12 es
más estable a un pH de aproximadamente 5,0-6,0.
El análisis CEX-HPLC detectó el
CHIR-12.12 intacto como la especie del pico
principal, las variantes ácidas eluyeron más temprano que las
especies del pico principal y las variantes de adición de lisina en
el extremo C terminal eluyeron después de las especies de pico
principal. La Tabla 10 muestra la dependencia de los porcentajes de
las especies restantes de CHIR-12.12 del pico
principal y las variantes ácidas en el pH de la disolución. La
muestra de control ya contenía un alto grado de especies ácidas
(aproximadamente 33%), probablemente debido a los procesos de
fermentación de etapa temprana y purificación. La susceptibilidad de
CHIR-12.12 a las disoluciones de pH más alto se
evidencia por dos hechos. Primero, la muestra de la formulación
inicial a pH 9 (t = 0) ya generaba 12% más especies ácidas que el
control. Segundo, el porcentaje de especies ácidas aumentó
bruscamente con el aumento del pH. La degradación relacionada con
el cambio de cargas se debe probablemente a la desamidación. Los
datos anteriores indican que este tipo de degradación de
CHIR-12.12 se redujo al mínimo a pH de
aproximadamente 5,0-5,5.
El pH tiene un efecto significativo en la
estabilidad conformacional y fisicoquímica de
CHIR-12.12. Se determinó que la degradación
relacionada con el cambio de cargas es la principal vía de
degradación para CHIR-12.12, que se redujo al
mínimo a pH 5,0-5,5. En base a los datos de
estabilidad general, una formulación farmacéutica líquida
recomendada que comprende este anticuerpo es una formulación que
comprende CHIR-12.12 a una concentración de
aproximadamente 20 mg/ml formulada en succinato de sodio
aproximadamente 10 mM, cloruro de sodio aproximadamente 150 mM, y
que tiene un pH de aproximadamente 5,5.
Ejemplo
7
El objetivo general es proporcionar una terapia
eficaz para tumores sólidos que expresan CD40 y cánceres
relacionados con células B convirtiéndolos en dianas con una
combinación de un anticuerpo anti CD40 antagonista e
IL-2 o una variante biológicamente activa de la
misma. Estos tumores incluyen tumores sólidos tales como carcinoma
de vejiga urinaria, carcinoma de mama, cáncer de próstata, carcinoma
de células renales, carcinoma nasofaríngeo, carcinoma de células
escamosas, carcinoma papilar tiroideo, melanoma, carcinoma de
ovarios, carcinoma de pulmón, carcinoma cervical, carcinoma
gástrico, carcinoma hepático y sarcomas. Entre los cánceres
relacionados con células B se incluyen linfoma de células B,
linfoma linfocítico crónico (CLL), leucemia linfoblástica aguda
(ALL), mieloma múltiple (MM), macroglobulinemia de Waldenstrom y
enfermedad sistémica de Castleman. La señal para estas enfermedades
se determina en fase II aunque puede obtenerse alguna medición de
actividad en la fase I. El anticuerpo anti CD40 antagonista inicial
es en CHIR-12.12 y el producto de
IL-2 inicial Proleukin®, que contiene la muletína
de IL-2 recombinante IL-2
des-alanil-1, serina 125 humana.
\newpage
\global\parskip0.910000\baselineskip
Fase
I
- \bullet
- Evaluar la seguridad y la farmacocinética - aumento de estas dos oncoterapias en neoplasias malignas.
- \bullet
- Elegir la dosis de cada oncoterapia en base a la seguridad, tolerabilidad y cambio en los marcadores séricos de las dianas respectivas, es decir CD40. En general se busca una dosis máxima tolerable (DMT) para cada uno de estos anticuerpos cuando se usan en combinación, pero pueden resultar adecuadas otras indicaciones de eficacia (depleción células B CD40+, etc.) para buscar la dosis.
- \bullet
- Considerar más de una combinación de dosis especialmente para indicaciones diferentes, por ejemplo, la dosis para CLL puede ser diferente que la dosis para NHL. Por consiguiente, puede ser necesaria alguna búsqueda de dosis en fase II.
- \bullet
- A los pacientes se les administra la dosis semanalmente, con toma de muestras para farmacocinética (PK) en tiempo real. Inicialmente, la dosis máxima permitida es un ciclo de 4 semanas. La PK puede ser muy variable según la enfermedad estudiada, la densidad de CD40, etc.
- \bullet
- Este(os) ensayo(s) está(n) abierto(s) a sujetos con tumores sólidos CD40+ y linfoma de células B, CLL, y. potencialmente, otras neoplasias malignas.
- \bullet
- La decisión de interrumpir o continuar los estudios se basa en la seguridad, las dosis y las pruebas preliminares de actividad antitumoral, particularmente de naturaleza sinérgica.
- \bullet
- La actividad de la terapia de combinación determinada por la tasa de respuesta, se determina en la Fase II.
- \bullet
- Identificar dosis de combinación para la Fase II.
Fase
II
Se iniciarán varios ensayos en los tipos de
tumores mencionados anteriormente con concentración en tumores
sólidos y en linfoma de células B, CLL y mieloma múltiple (MM).
Pueden ser necesarios ensayos separados en NHL de grado bajo y de
grado intermedio/alto ya que el CD40 puede tener una función
diferente según el grado del linfoma. En el contexto de la fase II
aleatorizada pueden analizarse más de una combinación de dosis y
más de un régimen. II.
En cada enfermedad, dirigir a una población que
ha fracasado con el tratamiento convencional actual:
- \bullet
- CLL: pacientes que fueron resistentes a Campath® y quimioterapia.
- \bullet
- NHL de grado bajo: fracasos con Rituxan® o CHOP-R
- \bullet
- NHL intermedio: fracasos con CHOP-R
- \bullet
- Mieloma múltiple: fracasos con quimioterapia, fracasos con dexametasona más talidomida o fracasos con quimioterapia de dosis elevadas más transplante de células madre
- \ding{51}
- La decisión de interrumpir o continuar con el estudio se basa en la prueba del concepto terapéutico en Fase II
- \ding{51}
- Determinar si puede usarse un marcador sustituto como indicación temprana de eficacia clínica
- \ding{51}
- Identificar las dosis para la Fase III.
Fase
III
La fase III dependerá de cuándo se detecta la
señal en la fase II y de qué terapias competidoras se consideran el
patrón de referencia. Si la señal se detecta en una etapa de la
enfermedad en la que no hay patrón de referencia de terapia,
entonces podrá servir un estudio de un único brazo, bien controlado,
como ensayo fundamental. Si hay agentes competidores que se
consideran patrones de referencia, entonces se realizan estudios
directos.
Ejemplo
8
El área bajo la curva de concentración
sérica-tiempo (AUC) de Proleukin®
IL-2 administrada por vía subcutánea (SC) a 4,5
millones de unidades internacionales (MUI) (equivalente a
aproximadamente 275 \mug de proteína) se determinó usando datos
de un estudio no publicado de VIH. Los perfiles de concentración
sérica-tiempo se midieron en 8 pacientes de VIH no
tratados previamente con IL-2 tras una exposición
inicial a dosis de IL-2 en este estudio. Para cada
paciente se calculó la AUC usando la norma trapezoidal lineal de
hasta la última concentración medible y se extrapoló a 14 horas
(software de Winnonlin, versión 3.1, Pharsight Corporation,
California). La AUC_{0-24} media, la SD y los
límites de confianza del 95% superior e inferior a la dosis de 4,5
MUI se presentan en la Tabla 11.
\newpage
\global\parskip1.000000\baselineskip
El valor de AUC_{0-24} de
Proleukin® IL-2 administrada SC a dosis equivalentes
a 18 MUI (1100 \mug) se estimó usando datos de tres estudios
diferentes en los que este producto de IL-2 se
administró SC. Dos son estudios publicados, uno en pacientes con
VIH (N= 3) (Piscitelli y col. (1996) Pharmacotherapy
16(5):754-759) y uno en pacientes de cáncer
(N=7) (Kirchner y col. (1998) Br. J. Clin. Pharmacol.
46:5-10). El tercero es un estudio no publicado en
el que se disponía de datos de concentración
sérica-tiempo de 6 pacientes de cáncer tras dosis
SC de IL-2. La similitud de la AUC en pacientes de
cáncer y de VIH se estableció previamente (datos no publicados).
Las dosis reales administradas en estos tres estudios variaron entre
18 y 34 MUI. Para los dos estudios publicados, los valores de la
AUC hasta 24 horas (AUC_{0-24}) se normalizaron a
la dosis de 18 MUI multiplicando la AUC por el cociente de 18 y la
dosis real en UMI. Por ejemplo si se calculó una
AUC_{0-24} para una dosis de 20 MUI de 400, la
AUC_{0-24} normalizada sería 400*18/20= 360. Para
el estudio no publicado de pacientes de cáncer, los valores
individuales de la AUC se calcularon a partir de los datos de
concentración sérica-tiempo usando la norma
trapezoidal lineal hasta las últimas concentraciones medibles y se
extrapolaron hasta 24 horas (Software de Winnonlin, versión 3.1,
Pharsight Corporation, California), después se normalizaron hasta
la dosis de 18 MUI como se ha indicado en lo que antecede. La media
global y la SD para los tres estudios se calcularon como la media
ponderada de las medias y las varianzas, respectivamente, usando las
ecuaciones 1 y 2.
En las que n_{1},n_{2}, n_{3},
\bar{X}_{1}, \bar{X}_{2}, \bar{X}_{3} y s_{1}^{2},
s^{2}_{2}, s^{2}_{3}, son el número de sujetos, las medias
y las varianzas para cada uno de los tres estudios, respectivamente.
\bar{X}_{p} y SD_{p} son estimaciones de la media global y la
desviación estándar. La AUC media global, la SD y los límites de
confianza del 95% superior e inferior a la dosis de 18 MUI se
presentan en la Tabla 11.
Similar a la Proleukin®IL-2,
L2-7001, se administró una formulación líquida de
IL-2 monomérica a pacientes de VIH a dosis que
varían de 50 a 180 \mug (datos no publicados. Las exposiciones
obtenidas de este estudio medidas mediante la AUC se muestran en la
tabla 12. Estos valores de exposición estaban dentro del intervalo
de los valores de exposición generados usando Proleukin®
IL-2 (Tabla 11).
Los datos de exposición a IL-2
(AUC) se obtuvieron de la literatura publicada, en la que se
administró SC IL-2 nativa humana recombinante a 8
pacientes de cáncer a dosis variables de 0,1 MU a 3,0 MU. Las AUC
medias indicadas (% CV) para los niveles de dosis de 0,3, 1 y 3 MU
fueron 120 (38), 177 (36) y 359 (46) U*h/ml (Gustavson (1998) J.
Biol. Response Modifiers 1998:440-449). Como se
indica en Thompson y col. 1987 Cancer Research
47:4202-4207, las unidades medidas en este estudio
se normalizaron a unidades BRMP units (Rossio y col. (1986)
Lymphokine Research 5 (suppl 1):S13S18), que se adoptaron más tarde
como unidades internacionales (UI) por la OMS (Gearing y Thorpe
(1988) J. Immunological Methods 114:3-9). Los
valores de AUC generados en las condiciones del estudio también
coinciden bien con la exposición establecida a Proleukin®
IL-2.
Muchas modificaciones y otras formas de
realización de las invenciones presentadas en el presente documento
acudirán a la mente del experto en la técnica al que pertenecen
estas invenciones que tienen el beneficio de las enseñanzas
presentadas en las descripciones anteriores y las figuras asociadas.
Por tanto, debe entenderse que las invenciones no se limitan a las
formas de realización específicas descritas y que se pretende
incluir dentro del alcance de las reivindicaciones adjuntas y
formas de realización descritas en el presente documento
modificaciones y otras formas de realización. Aunque en el presente
documento se emplean términos específicos, se usan en un sentido
genérico y descriptivo únicamente y no con el propósito de
limitación
\global\parskip0.000000\baselineskip
<110> Hurst, Deborah
\hskip1cmLong, Li
\hskip1cmLuqman, Mohammad
\hskip1cmLopes de Menezes, Daniel E.
\hskip1cmYabannavar, Asha
\hskip1cmZaror, Isabel
\vskip0.400000\baselineskip
<120> Procedimientos de terapia para
cánceres que expresan el antígeno CD40
\vskip0.400000\baselineskip
<130> PP23220.001 (281250)
\vskip0.400000\baselineskip
<150> 60/565,710
\vskip0.400000\baselineskip
<151>
2004-04-27
\vskip0.400000\baselineskip
<150> 60/525,579
\vskip0.400000\baselineskip
<151>
2003-11-26
\vskip0.400000\baselineskip
<150> 60/517,337
\vskip0.400000\baselineskip
<151>
2003-11-04
\vskip0.400000\baselineskip
<160> 18
\vskip0.400000\baselineskip
<170> FastSEQ for Windows Versión 4.0
\vskip0.400000\baselineskip
<210> 1
\vskip0.400000\baselineskip
<211> 720
\vskip0.400000\baselineskip
<212> ADN
\vskip0.400000\baselineskip
<213> Secuencia artificial
\vskip0.400000\baselineskip
<220>
\vskip0.400000\baselineskip
<223> Secuencia codificadora para la
cadena ligera del anticuerpo anti CD40 CHIR-12.12
humano
\vskip0.400000\baselineskip
<221> CDS
\vskip0.400000\baselineskip
<222> (1)...(720)
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<400> 1
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip1.000000\baselineskip
\hskip0,8cm
\hskip0,8cm
\vskip0.400000\baselineskip
<210> 2
\vskip0.400000\baselineskip
<211> 239
\vskip0.400000\baselineskip
<212> PRT
\vskip0.400000\baselineskip
<213> Secuencia artificial
\vskip0.400000\baselineskip
<220>
\vskip0.400000\baselineskip
<223> Cadena ligera del anticuerpo anti
CD40 CHIR-12.12 humano
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<400> 2
\vskip1.000000\baselineskip
\hskip0,8cm
\hskip0,8cm
\vskip0.400000\baselineskip
<210> 3
\vskip0.400000\baselineskip
<211> 2016
\vskip0.400000\baselineskip
<212> ADN
\vskip0.400000\baselineskip
<213> Secuencia artificial
\vskip0.400000\baselineskip
<220>
\vskip0.400000\baselineskip
<223> Secuencia codificadora para la
cadena pesada del anticuerpo anti CD40 CHIR-12.12
humano (con intrones)
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<400> 3
\hskip0,8cm
\vskip0.400000\baselineskip
<210> 4
\vskip0.400000\baselineskip
<211> 469
\vskip0.400000\baselineskip
<212> PRT
\vskip0.400000\baselineskip
<213> Secuencia artificial
\vskip0.400000\baselineskip
<220>
\vskip0.400000\baselineskip
<223> Cadena pesada del anticuerpo anti
CD40 CHIR-12.12 humano
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<400> 4
\hskip0,8cm
\vskip0.400000\baselineskip
<210> 5
\vskip0.400000\baselineskip
<211> 469
\vskip0.400000\baselineskip
<212> PRT
\vskip0.400000\baselineskip
<213> Secuencia artificial
\vskip0.400000\baselineskip
<220>
\vskip0.400000\baselineskip
<223> Cadena pesada de la variante del
anticuerpo anti CD40 CHIR-12.12 humano
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<400> 5
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip1.000000\baselineskip
\hskip0,8cm
\hskip0,8cm
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<210> 6
\vskip0.400000\baselineskip
<211> 239
\vskip0.400000\baselineskip
<212> PRT
\vskip0.400000\baselineskip
<213> Secuencia artificial
\vskip0.400000\baselineskip
<220>
\vskip0.400000\baselineskip
<223> Cadena ligera del anticuerpo anti
CD40 CHIR-5.9 humano
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<400> 6
\vskip1.000000\baselineskip
\hskip0,8cm
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<210> 7
\vskip0.400000\baselineskip
<211> 474
\vskip0.400000\baselineskip
<212> PRT
\vskip0.400000\baselineskip
<213> Secuencia artificial
\vskip0.400000\baselineskip
<220>
\vskip0.400000\baselineskip
<223> Cadena pesada del anticuerpo anti
CD40 CHIR-5.9 humano
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<400> 7
\vskip1.000000\baselineskip
\hskip0,8cm
\vskip0.400000\baselineskip
<210> 8
\vskip0.400000\baselineskip
<211> 474
\vskip0.400000\baselineskip
<212> PRT
\vskip0.400000\baselineskip
<213> Secuencia artificial
\vskip0.400000\baselineskip
<220>
\vskip0.400000\baselineskip
<223> Cadena pesada de la variante del
anticuerpo anti CD40 CHIR-5.9 humano
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<400> 8
\hskip0,8cm
\vskip0.400000\baselineskip
<210> 9
\vskip0.400000\baselineskip
<211> 612
\vskip0.400000\baselineskip
<212> ADN
\vskip0.400000\baselineskip
<213> Homo sapiens
\vskip0.400000\baselineskip
<220>
\vskip0.400000\baselineskip
<221> característica miscelánea
\vskip0.400000\baselineskip
<222> (0)...(0)
\vskip0.400000\baselineskip
<223> Secuencia codificadora para la
isoforma corta del CD40 humano
\vskip0.400000\baselineskip
<221> CDS
\vskip0.400000\baselineskip
<222> (1)...(612)
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<400> 9
\hskip0,8cm
\vskip0.400000\baselineskip
<210> 10
\vskip0.400000\baselineskip
<211> 203
\vskip0.400000\baselineskip
<212> PRT
\vskip0.400000\baselineskip
<213> Homo sapiens
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<400> 10
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip1.000000\baselineskip
\hskip0,8cm
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<210> 11
\vskip0.400000\baselineskip
<211> 834
\vskip0.400000\baselineskip
<212> ADN
\vskip0.400000\baselineskip
<213> Homo sapiens
\vskip0.400000\baselineskip
<220>
\vskip0.400000\baselineskip
<221> característica miscelánea
\vskip0.400000\baselineskip
<222> (0)...(0)
\vskip0.400000\baselineskip
<223> Secuencia codificadora para la
isoforma larga del CD40 humano
\vskip0.400000\baselineskip
<221> CDS
\vskip0.400000\baselineskip
<222> (1)...(834)
\newpage
\vskip0.400000\baselineskip
<400> 11
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip1.000000\baselineskip
\hskip0,8cm
\hskip0,8cm
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<210> 12
\vskip0.400000\baselineskip
<211> 277
\vskip0.400000\baselineskip
<212> PRT
\vskip0.400000\baselineskip
<213> Homo sapiens
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<400> 12
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip1.000000\baselineskip
\hskip0,8cm
\newpage
\vskip0.400000\baselineskip
<210> 13
\vskip0.400000\baselineskip
<211> 459
\vskip0.400000\baselineskip
<212> ADN
\vskip0.400000\baselineskip
<213> Homo sapiens
\vskip0.400000\baselineskip
<220>
\vskip0.400000\baselineskip
<221> característica misc.
\vskip0.400000\baselineskip
<222> (0)...(0)
\vskip0.400000\baselineskip
<223> Precursor de la IL-2
humana
\vskip0.400000\baselineskip
<221> CDS
\vskip0.400000\baselineskip
<222> (1)...(459)
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<400> 13
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip1.000000\baselineskip
\hskip0,8cm
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<210> 14
\vskip0.400000\baselineskip
<211> 153
\vskip0.400000\baselineskip
<212> PRT
\vskip0.400000\baselineskip
<213> Homo sapiens
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<400> 14
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip1.000000\baselineskip
\hskip0,8cm
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<210> 15
\vskip0.400000\baselineskip
<211> 399
\vskip0.400000\baselineskip
<212> ADN
\vskip0.400000\baselineskip
<213> Homo sapiens
\vskip0.400000\baselineskip
<220>
\vskip0.400000\baselineskip
<221> característica misc.
\vskip0.400000\baselineskip
<222> (0)...(0)
\vskip0.400000\baselineskip
<223> IL-2 humana
madura
\vskip0.400000\baselineskip
<221> CDS
\vskip0.400000\baselineskip
<222> (1)...(399)
\newpage
\vskip0.400000\baselineskip
<400> 15
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip1.000000\baselineskip
\hskip0,8cm
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<210> 16
\vskip0.400000\baselineskip
<211> 133
\vskip0.400000\baselineskip
<212> PRT
\vskip0.400000\baselineskip
<213> Homo sapiens
\newpage
\vskip0.400000\baselineskip
<400> 16
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip1.000000\baselineskip
\hskip0,8cm
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<210> 17
\vskip0.400000\baselineskip
<211> 396
\vskip0.400000\baselineskip
<212> ADN
\vskip0.400000\baselineskip
<213> Secuencia artificial
\vskip0.400000\baselineskip
<220>
\vskip0.400000\baselineskip
<223> muteína de IL-2
des-alanil 1, C125S humana
\vskip0.400000\baselineskip
<221> CDS
\vskip0.400000\baselineskip
<222> (1)...(396)
\newpage
\vskip0.400000\baselineskip
<400> 17
\vskip1.000000\baselineskip
\hskip0,8cm
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<210> 18
\vskip0.400000\baselineskip
<211> 132
\vskip0.400000\baselineskip
<212> PRT
\vskip0.400000\baselineskip
<213> Secuencia artificial
\vskip0.400000\baselineskip
<220>
\vskip0.400000\baselineskip
<223> muteína IL-2
des-alanil 1, C125S humana
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<400> 18
\vskip1.000000\baselineskip
\hskip0,8cm
Claims (51)
1. Un anticuerpo anti CD40 o un fragmento de
unión a antígeno del mismo, para usar en un procedimiento de tratar
a un sujeto humano de un cáncer que comprende células neoplásicas
que expresan antígeno CD40, en el que dicho procedimiento comprende
administrar a dicho sujeto una terapia de combinación, en el que
dicha terapia comprende la administración de una cantidad eficaz
del anticuerpo anti CD40 o un fragmento de unión a antígeno del
mismo en combinación con una interleucina-2
(IL-2) o una variante biológicamente activa de la
misma, en el que dicho anticuerpo anti CD40 o fragmento de unión a
antígeno del mismo está exento de actividad agonista significativa
cuando está unido al antígeno CD40 y se selecciona del grupo
constituido por:
- a)
- un anticuerpo o fragmento de unión a antígeno del mismo, que se une a un epítopo capaz de unirse al anticuerpo monoclonal CHIR-5.9 que puede obtenerse de la línea celular de hibridoma depositada en la ATCC como Depósito de Patente Nº PTA-5542 o al anticuerpo monoclonal CHIR-12.12 que puede obtenerse de la línea celular de hibridoma depositada en la ATCC como Depósito de Patente Nº PTA-5543;
- b)
- un anticuerpo o fragmento de unión a antígeno del mismo, que se une a un epítopo que comprende los residuos 82-87 de la secuencia de CD40 humano que se muestra en la SEC ID Nº 10 ó la SEC ID Nº 12;
- c)
- un anticuerpo o fragmento de unión a antígeno del mismo, que se une a un epítopo que comprende los residuos 82-89 de la secuencia de CD40 humano que se muestra en la SEC ID Nº 10 o la ó SEC ID Nº 12; y
- d)
- un anticuerpo o fragmento de unión a antígeno del mismo, que compite con el anticuerpo monoclonal CHIR-5.9 que puede obtenerse de la línea celular de hibridoma depositada en la ATCC como Depósito de Patente Nº PTA-5542 o el anticuerpo monoclonal CHIR-12.12 que puede obtenerse de la línea celular de hibridoma depositada en la ATCC como Depósito de Patente Nº PTA-5543 en un ensayo de unión competitiva.
2. Uso de una cantidad eficaz de un anticuerpo
anti CD40 o un fragmento de unión a antígeno en combinación con
interleucina-2 (IL-2) o una variante
biológicamente activa de la misma, en la fabricación de un
medicamento para tratar a un sujeto humano por un cáncer que
comprende células neoplásicas que expresan antígeno CD40 mediante
terapia de combinación, en el que dicho anticuerpo anti CD40 o
fragmento de unión a antígeno del mismo está exento de actividad
agonista significativa cuando está unido al antígeno CD40 y se
selecciona del grupo constituido por:
- a)
- un anticuerpo o fragmento de unión a antígeno que se une a un epítopo capaz de unirse al anticuerpo monoclonal CHIR-5.9 que puede obtenerse de la línea celular de hibridoma depositada en la ATCC como Depósito de Patente Nº PTA-5542 o al anticuerpo monoclonal CHIR-12.12 que puede obtenerse de la línea celular de hibridoma depositada en la ATCC como Depósito de Patente Nº PTA-5543;
- b)
- un anticuerpo o fragmento de unión a antígeno del mismo que se une a un epítopo que comprende los residuos 82-87 de la secuencia de CD40 humano que se muestra en la SEC ID Nº 10 ó la SEC ID Nº 12;
- c)
- un anticuerpo o fragmento de unión a antígeno del mismo que se une a un epítopo que comprende los residuos 82-89 de la secuencia de CD40 humano que se muestra en la SEC ID Nº 10 o la ó SEC ID Nº 12; y
- d)
- un anticuerpo o fragmento de unión a antígeno del mismo, que compite con el anticuerpo monoclonal CHIR-5.9 que puede obtenerse de la línea celular de hibridoma depositada en la ATCC como Depósito de Patente Nº PTA-5542 o el anticuerpo monoclonal CHIR-12.12 que puede obtenerse de la línea celular de hibridoma depositada en la ATCC como Depósito de Patente Nº PTA-5543 en un ensayo de unión competitiva.
3. El anticuerpo anti CD40 o fragmento de unión
a antígeno de la reivindicación 1 o el uso de la reivindicación 2,
en el que dicho anticuerpo anti CD40 es un anticuerpo humano.
4. El anticuerpo anti CD40 o fragmento de unión
a antígeno de la reivindicación 1 o el uso de la reivindicación 2,
en el que dicho anticuerpo anti CD40 se selecciona del grupo
constituido por el anticuerpo monoclonal CHIR-5.9
que puede obtenerse de la línea celular de hibridoma depositada en
la ATCC como Depósito de Patente Nº PTA-5542 y el
anticuerpo monoclonal CHIR-12.12 que puede obtenerse
de la línea celular de hibridoma depositada en la ATCC como
Depósito de Patente Nº PTA-5543.
5. El anticuerpo anti CD40 o fragmento de unión
a antígeno de la reivindicación 1 o el uso de la reivindicación 2,
en el que dicho anticuerpo anti CD40 o
\hbox{fragmento de unión a antígeno del mismo se selecciona del grupo constituido por:}
- (i)
- un anticuerpo o fragmento de unión a antígeno del mismo, que comprende un dominio variable de cadena ligera que contiene los residuos 44-54, 70-76 y 109-117 de la SEC ID Nº 2 o la SEC ID Nº 6;
- (ii)
- un anticuerpo o fragmento de unión a antígeno del mismo que comprende un dominio variable de cadena pesada que contiene los residuos 50-54, 69-84 y 114-121 de SEC ID Nº 4 o la SEC ID Nº 7;
- (iii)
- un anticuerpo o fragmento de unión a antígeno del mismo que comprende un dominio variable de cadena ligera que contiene los residuos 46-52, 70-72 y 111-116 de SEC ID Nº 2 y SEC ID Nº 6; y
- (iv)
- un anticuerpo o fragmento de unión a antígeno del mismo que comprende un dominio variable de cadena pesada que contiene los residuos 45-51, 72-74 y 115-120 de SEC ID Nº 4;o SEC ID Nº 7.
6. Un anticuerpo anti CD40 o fragmento de unión
a antígeno del mismo o el uso de la reivindicación 5, en el que
dicho anticuerpo anti CD40 o fragmento de unión a antígeno del mismo
comprende una secuencia de aminoácidos seleccionada del grupo
constituido por:
- (i)
- los residuos 21-132 de SEC ID Nº 2;
- (ii)
- los residuos 21-239 de SEC ID Nº 2;
- (iii)
- SEC ID Nº 2;
- (iv)
- los residuos 20-139 de SEC ID Nº 4;
- (v)
- los residuos 20-469 de SEC ID Nº 4;
- (vi)
- SEC ID Nº 4;
- (vii)
- los residuos 20-469 de SEC ID Nº 5;
- (viii)
- SEC ID Nº 5;
- (ix)
- los residuos 21-132 de SEC ID Nº 2 y los residuos 20-139 de SEC ID Nº 4;
- (x)
- los residuos 21-239 de SEC ID Nº 2 y los residuos 20-469 de SEC ID Nº 4;
- (xi)
- los residuos 21-239 de SEC ID Nº 2 y los residuos 20-469 de SEC ID Nº 5;
- (xii)
- SEC ID Nº 2 y SEC ID Nº 4; y
- (xiii)
- SEC ID Nº 2 y SEC ID Nº 5.
7. El anticuerpo anti CD40 o fragmento de unión
a antígeno del mismo o el uso de la reivindicación 5, en el que
dicho anticuerpo anti CD40 o fragmento de unión a antígeno del mismo
comprende una secuencia de aminoácidos seleccionada del grupo
constituido por:
- (i)
- los residuos 21-132 de SEC ID Nº 6;
- (ii)
- los residuos 21-239 de SEC ID Nº 6;
- (iii)
- SEC ID Nº 6;
- (iv)
- los residuos 20-144 de SEC ID Nº 7;
- (v)
- los residuos 20-474 de SEC ID Nº 7;
- (vi)
- SEC ID Nº 7;
- (vii)
- los residuos 20-474 de SEC ID Nº 8;
- (viii)
- SEC ID Nº 8;
- (ix)
- los residuos 21-132 de SEC ID Nº 6 y los residuos 20-144 de SEC ID Nº 7;
- (x)
- los residuos 21-239 de SEC ID Nº 6 y los residuos 20-474 de SEC ID Nº 7;
- (xi)
- los residuos 21-239 de SEC ID Nº 6 y los residuos 20-474 de SEC ID Nº 8
- (xii)
- SEC ID Nº 6 y SEC ID Nº 7; y
- (xiii)
- SEC ID Nº 6 y SEC ID Nº 8.
\newpage
8. El anticuerpo anti CD40 o fragmento de unión
a antígeno del mismo o el uso de cualquiera de las reivindicaciones
anteriores, en el que dicho anticuerpo o fragmento de unión a
antígeno del mismo se une a dicho antígeno CD40 humano con una
afinidad (K_{D}) de al menos 10^{-6} M.
9. El anticuerpo anti CD40 o fragmento de unión
a antígeno del mismo o el uso de la reivindicación 8, en el que
dicho anticuerpo o fragmento de unión a antígeno del mismo se une a
dicho antígeno CD40 humano con una afinidad (K_{D}) de al menos
10^{-8} M.
10. El anticuerpo anti CD40 o fragmento de unión
a antígeno del mismo o el uso de cualquiera de las reivindicaciones
anteriores, en el que dicho anticuerpo o fragmento de unión a
antígeno del mismo se produce en una línea celular CHO.
11. El anticuerpo anti CD40 o fragmento de unión
a antígeno del mismo de la reivindicación 1 o el uso de la
reivindicación 2, en el que dicha terapia de combinación proporciona
un efecto terapéutico sinérgico.
12. El anticuerpo anti CD40 o fragmento de unión
a antígeno del mismo de la reivindicación 1 o el uso de la
reivindicación 2, en el que dicho fragmento de unión a antígeno de
dicho anticuerpo anti CD40 se selecciona del grupo constituido por
un fragmento Fab, un fragmento F(ab')_{2}, un fragmento Fv
y un fragmento Fv de cadena sencilla.
13. El anticuerpo anti CD40 o fragmento de unión
a antígeno del mismo de la reivindicación 1 o el uso de la
reivindicación 2, en el que dicha IL-2 es
IL-2 humana o una variante biológicamente activa de
la misma.
14. El anticuerpo anti CD40 o fragmento de unión
a antígeno o el uso de la reivindicación 13, en el que dicha
variante de IL-2 humana es IL-2
desalanil-2, serina 125 humana.
15. El anticuerpo anti CD40 o fragmento de unión
a antígeno de la reivindicación 1 o el uso de la reivindicación 2,
en el que el cáncer es un cáncer relacionado con células B o un
tumor sólido.
16. El anticuerpo anti CD40 o fragmento de unión
a antígeno o uso de la reivindicación 15, en el que el cáncer
relacionado con células B se selecciona del grupo constituido por
linfoma no Hodgkin, leucemia linfocítica crónica, mieloma múltiple,
linfoma de células B, linfoma de células B de grado alto, linfoma de
células B de grado intermedio, linfoma de células B de grado bajo,
leucemia linfoblástica aguda de células B, leucemia mieloblástica,
enfermedad de Hodgkin, plasmacitoma, linfoma folicular, linfoma
folicular de células pequeñas hendidas, linfoma folicular de
células grandes, linfoma folicular mixto de células pequeñas
hendidas, linfoma difuso de células pequeñas hendidas, linfoma
linfocítico difuso de células pequeñas, leucemia prolinfocítica,
linfoma linfoplasmacítico, linfoma de zona marginal, linfoma tisular
linfoide asociado a mucosas, linfoma monocitoide de células B,
linfoma esplénico, leucemia de células vellosas, linfoma difuso de
células grandes, linfoma mediastínico de células B grandes,
granulomatosis linfomatoide, linfomatosis intravascular, linfoma
difuso de células mixtas, linfoma difuso de células grandes, linfoma
inmunoblástico, linfoma de Burkitt, linfoma relacionado con el SIDA
y linfoma de células del manto.
17. El anticuerpo anti CD40 o fragmento de unión
a antígeno o uso de la reivindicación 15, en el que dicho tumor
sólido se selecciona del grupo constituido por carcinoma de vejiga
urinaria, carcinoma de mama, carcinoma hepático, carcinoma
gástrico, carcinoma de colon, cáncer de próstata, carcinoma de
células renales, carcinoma nasofaríngeo, carcinoma de células
escamosas, carcinoma papilar tiroideo, melanoma, carcinoma de
ovarios, carcinoma de pulmón, carcinoma cervical, y sarcomas.
18. El anticuerpo anti CD40 o fragmento de unión
a antígeno de la reivindicación 1 o el uso de la reivindicación 2,
en el que dicha IL-2 o variante de la misma y dicho
anticuerpo anti CD40 o fragmento de unión a antígeno del mismo se
administran de forma secuencial.
19. El anticuerpo anti CD40 o fragmento de unión
a antígeno de la reivindicación 1 o el uso de la reivindicación 2,
en el que dicha IL-2 o variante de la misma y dicho
anticuerpo anti CD40 o fragmento de unión a antígeno del mismo se
administran de forma simultánea.
20. El anticuerpo anti CD40 o fragmento de unión
a antígeno de la reivindicación 1 o el uso de la reivindicación 2,
en el que dicho anticuerpo anti CD40 o fragmento de unión a antígeno
del mismo se administra de acuerdo con un régimen de dosificación
seleccionado del grupo constituido por una vez a la semana, una vez
cada dos semanas, una vez cada tres semanas y una vez cada cuatro
semanas a lo largo de un periodo de tratamiento o para una duración
fija de 4 semanas a 16 semanas dentro de dicho periodo de
tratamiento en combinación con la administración de uno o más
ciclos de un régimen de dosificación de IL-2
constante durante dicho periodo de tratamiento, en el que dicho
régimen de dosificación de IL-2 constante comprende
un primer periodo de tiempo, en el que una dosis semanal total
constante de IL-2, o de su variante biológicamente
activa, se administra a dicho sujeto, y un segundo periodo de
tiempo, en el que la administración de dicha IL-2 o
de su variante biológicamente activa, se suspende en dicho
sujeto.
21. El anticuerpo anti CD40 o fragmento de unión
a antígeno o uso de la reivindicación 20, en el que dicho primer
periodo de tiempo tiene una duración de aproximadamente 2 semanas a
aproximadamente 12 semanas, y en el que dicho segundo periodo de
tiempo tiene una duración de aproximadamente 1 semana a
aproximadamente 4 semanas.
22. El anticuerpo anti CD40 o fragmento de unión
a antígeno o uso de la reivindicación 21, en el que dicho primer
periodo de tiempo tiene una duración de 4 semanas y en el que dicho
segundo periodo de tiempo tiene una duración de 1 semana.
23. El anticuerpo anti CD40 o fragmento de unión
a antígeno o uso de la reivindicación 21, en el que una primera
administración de dicho anticuerpo anti CD40 o fragmento de unión a
antígeno del mismo comienza el día 1 de dicho periodo de
tratamiento y en el que un primer ciclo de dicho régimen de
dosificación constante de IL-2 se inicia en 10 días
desde dicha primera administración de dicho anticuerpo anti CD40 o
fragmento de unión a antígeno del mismo.
24. El anticuerpo anti CD40 o fragmento de unión
a antígeno o uso de la reivindicación 23, en el que dicho primer
ciclo de dicho régimen de dosificación constante de
IL-2 se inicia el día 8 de dicho periodo de
tratamiento.
25. El anticuerpo anti CD40 o fragmento de unión
a antígeno o uso de la reivindicación 23, en el que dicho periodo
de tratamiento comprende uno o más ciclos posteriores de dicho
régimen de dosificación constante de IL-2 que se
inicia en un plazo de 4 semanas tras la finalización de dicho primer
ciclo de dicho régimen de dosificación constante de
IL-2 o la finalización de cualquier ciclo posterior
de dicho régimen de dosificación constante de IL-2,
en el que dicha administración de dicho anticuerpo anti CD40 o
fragmento de unión a antígeno del mismo continua a lo largo de
dicho periodo de tratamiento.
26. El anticuerpo anti CD40 o fragmento de unión
a antígeno o uso de la reivindicación 20, en el que dicha dosis
terapéuticamente eficaz de dicho anticuerpo anti CD40 o fragmento de
unión a antígeno del mismo está en el intervalo de aproximadamente
0,5 mg/kg a aproximadamente 30,0 mg/kg.
27. El anticuerpo anti CD40 o fragmento de unión
a antígeno o uso de la reivindicación 20, en el que dicha dosis
semanal total constante de IL-2, o su variante
biológicamente activa, se administra en forma de una dosis única o
se reparte en una primera serie de dosis equivalentes que se
administran de acuerdo con un régimen de dosificación de dos, tres,
cuatro, cinco, seis o siete veces a la semana.
28. El anticuerpo anti CD40 o fragmento de unión
a antígeno o uso de la reivindicación 27, en el que dicha
IL-2 o su variante biológicamente activa se
administra por una vía seleccionada del grupo constituido por
intravenosa, intramuscular y subcutánea.
29. El anticuerpo anti CD40 o fragmento de unión
a antígeno o uso de la reivindicación 20, en el que dicha dosis
semanal total constante de dicha IL-2, o su variante
biológicamente activa, es una cantidad equivalente a una dosis
semanal total de una IL-2 de referencia convencional
administrada por la misma vía y con el mismo régimen de
dosificación, en el que dicha dicha dosis semanal total de la
IL-2 de referencia convencional está en un
intervalo de aproximadamente 1100 \mug (18,0 MUI) a
aproximadamente 3300 \mug (54,0 MUI), en el que dicha dosis
semanal total constante de dicha IL-2 o su variante
biológicamente activa proporciona al menos 70% de la actividad
celular de las asesinas naturales (NK) que es proporcionada por
dicha dosis semanal total de la IL-2 de referencia
convencional.
30. El anticuerpo anti CD40 o fragmento de unión
a antígeno o uso de la reivindicación 29, en el que dicha dosis
semanal total de la IL-2 de referencia convencional
es de aproximadamente 1100 \mug (18,0 MUI) a aproximadamente 2567
\mug (42,0 MUI), y en el que dicha dosis semanal total de la
IL-2 de referencia convencional se reparte en tres
dosis equivalentes que se administran de acuerdo con un régimen de
dosificación de tres veces a la semana.
31. El anticuerpo anti CD40 o fragmento de unión
a antígeno de la reivindicación 1 o el uso de la reivindicación 2,
en el que dicho anticuerpo anti CD40 o fragmento de unión a antígeno
del mismo se administra de acuerdo con un régimen de dosificación
seleccionado del grupo constituido por una vez a la semana, una vez
cada dos semanas, una vez cada tres semanas y una vez cada cuatro
semanas a lo largo de un periodo de tratamiento o para una duración
fija de 4 semanas a 16 semanas dentro de dicho periodo de
tratamiento en combinación con la administración de uno o más
ciclos de un régimen de dosificación de IL-2 de dos
niveles durante dicho periodo de tratamiento, en el que dicho
régimen de dosificación de IL-2 de dos niveles
comprende un primer periodo de tiempo, en el que se administra a
dicho sujeto una dosis semanal total mayor de una
IL-2, o su variante biológicamente activa, seguido
por un segundo periodo de tiempo, en el que se administra a dicho
sujeto una dosis semanal total menor de dicha IL-2,
o su variante biológicamente activa.
32. El anticuerpo anti CD40 o fragmento de unión
a antígeno o uso de la reivindicación 31, en el que se administra a
dicho sujeto una primera dosis de dicha IL-2, o su
variante biológicamente activa antes de administrar una primera
dosis de dicho anticuerpo anti CD40 o fragmento de unión a antígeno
del mismo.
33. El anticuerpo anti CD40 o fragmento de unión
a antígeno o uso de la reivindicación 32, en el que dicha primera
dosis de dicha IL-2, o su variante biológicamente
activa se administra hasta un mes antes de dicha primera dosis de
dicho anticuerpo anti CD40 o fragmento de unión a antígeno a dicho
sujeto.
34. El anticuerpo anti CD40 o fragmento de unión
a antígeno o uso de la reivindicación 33, en el que dicha primera
dosis de dicha IL-2, o su variante biológicamente
activa se administra una semana antes de que se administre a dicho
sujeto dicha primera dosis de dicho anticuerpo anti CD40 o fragmento
de unión a antígeno.
35. El anticuerpo anti CD40 o fragmento de unión
a antígeno o uso de la reivindicación 31, en el que una primera
dosis de dicha IL-2, o su variante biológicamente
activa se administra a dicho sujeto de forma concurrente con una
primera dosis de dicho anticuerpo anti CD40 o fragmento de unión a
antígeno del mismo.
36. El anticuerpo anti CD40 o fragmento de unión
a antígeno o uso de la reivindicación 31, en el que una primera
dosis de dicha IL-2, o su variante biológicamente
activa se administra a dicho sujeto una semana después de que se
administra a dicho sujeto una primera dosis de dicho anticuerpo anti
CD40 o fragmento de unión a antígeno.
37. El anticuerpo anti CD40 o fragmento de unión
a antígeno o uso de la reivindicación 31, en el que dicha dosis
terapéuticamente eficaz de dicho anticuerpo anti CD40 o fragmento de
unión a antígeno del mismo está en el intervalo de aproximadamente
0,5 mg/kg a aproximadamente 30,0 mg/kg.
38. El anticuerpo anti CD40 o fragmento de unión
a antígeno o uso de la reivindicación 31, en el que dicho régimen
de dosificación de IL-2 de dos niveles tiene una
duración combinada de 4 semanas a 16 semanas.
39. El anticuerpo anti CD40 o fragmento de unión
a antígeno o uso de la reivindicación 38, en el que dicho primer
periodo de dicho régimen de dosificación de IL-2 de
dos niveles tiene una duración de al menos 1 semana de dicha
duración combinada de 4 semanas a 16 semanas.
40. El anticuerpo anti CD40 o fragmento de unión
a antígeno o uso de la reivindicación 38, en el que dicho primer
periodo de tiempo de dicho régimen de dosificación de
IL-2 de dos niveles tiene una duración que es la
mitad de dicha duración combinada de 4 semanas a 16 semanas.
41. El anticuerpo anti CD40 o fragmento de unión
a antígeno o uso de la reivindicación 31, en el que dicha dosis
semanal total mayor de dicha IL-2 o su variante
biológicamente activa se administra en forma de una dosis única o
se reparte en una primera serie de dosis equivalentes que se se
administran de acuerdo con un régimen de dosificación de dos, tres,
cuatro, cinco, seis o siete veces a la semana, y en el que dicha
dosis semanal total menor de dicha IL-2 o su
variante biológicamente activa se administra en forma de una dosis
única o se reparte en una segunda serie de dosis equivalentes que se
se administran de acuerdo con un régimen de dosificación de dos,
tres, cuatro, cinco, seis o siete veces a la semana.
42. El anticuerpo anti CD40 o fragmento de unión
a antígeno o uso de la reivindicación 41, en el que dicha
IL-2 o su variante biológicamente activa se
administra por una vía seleccionada del grupo constituido por
intravenosa, intramuscular y subcutánea.
43. El anticuerpo anti CD40 o fragmento de unión
a antígeno o uso de la reivindicación 42, en el que dicha primera
serie de dosis equivalentes se administra de acuerdo con un régimen
de dosificación de tres veces a la semana, y en el que dicha
segunda serie de dosis equivalentes se administra de acuerdo con un
régimen de dosificación de tres veces a la semana.
44. El anticuerpo anti CD40 o fragmento de unión
a antígeno o uso de la reivindicación 31, en el que:
- a)
- dicha dosis semanal total mayor de dicha IL-2 o su variante biológicamente activa es una cantidad equivalente a una dosis semanal total mayor de una IL-2 de referencia convencional administrada por la misma vía y con el mismo régimen de dosificación, en el que dicha dosis semanal total mayor de la IL-2 de referencia convencional está en un intervalo de aproximadamente 1834 \mug (30,0 MU) a aproximadamente 3300 \mug (54,0 MU), en el que dicha dosis semanal total mayor de dicha IL-2 o su variante terapéuticamente eficaz proporciona al menos 70% de la actividad de asesina natural (NK) que proporciona dicha dosis semanal total mayor de de la IL-2 de referencia convencional;
- b)
- dicha dosis semanal total menor de dicha IL-2 o su variante biológicamente activa es una cantidad equivalente a una dosis semanal total menor de la IL-2 de referencia convencional administrada por la misma vía y con el mismo régimen de dosificación, en el que dicha dosis semanal total menor de la IL-2 de referencia convencional está en un intervalo de aproximadamente 1100 \mug (18,0 MU) a aproximadamente 2384 \mug (39,0 MU), en la que dicha dosis semanal total menor de IL-2 o su variante terapéuticamente eficaz proporciona al menos 70% de la actividad de asesina natural (NK) que proporciona dicha dosis semanal total menor de la IL-2 de referencia convencional; y
- c)
- dicha dosis semanal total menor de dicha IL-2 o su variante biológicamente activa es menor que dicha dosis semanal total mayor de dicha IL-2 o su variante biológicamente activa.
45. El anticuerpo anti CD40 o fragmento de unión
a antígeno o uso de la reivindicación 44, en el que dicha dosis
semanal total mayor de la IL-2 de referencia
convencional es de aproximadamente 1834 \mug (30,0 MU) a
aproximadamente 2567 \mug (42,0 MU), y dicha dosis semanal total
menor de la IL-2 de referencia convencional es de
aproximadamente 1100 \mug (18,0 MU) a aproximadamente 1834 \mug
(30,0 MU).
46. El anticuerpo anti CD40 o fragmento de unión
a antígeno o uso de la reivindicación 45, en el que dicha dosis
semanal total mayor de la IL-2 de referencia
convencional es de aproximadamente 2567 \mug (42,0 MU), dicha
dicha dosis semanal total menor de la IL-2 de
referencia convencional es de aproximadamente 1834 \mug (30,0 MU)
y en el que dicha dosis semanal total mayor de la
IL-2 de referencia convencional y dicha dosis
semanal total menor de la IL-2 de referencia
convencional se reparten, cada una, en tres dosis equivalentes que
se administran de acuerdo con un régimen de dosificación de tres
veces a la semana.
47. El anticuerpo anti CD40 o fragmento de unión
a antígeno o uso de la reivindicación 31, que además comprende una
interrupción en dicho régimen de dosificación de
IL-2 de dos niveles, en el que dicha interrupción
comprende un periodo de tiempo sin administración de dicha
IL-2 o su variante biológicamente activa entre dicho
primer periodo de tiempo y dicho segundo periodo de tiempo de dicho
régimen de dosificación de IL-2 de dos niveles.
48. El anticuerpo anti CD40 o fragmento de unión
a antígeno o uso de la reivindicación 47, en el que dicha
interrupción tiene una duración de aproximadamente 1 semana a
aproximadamente 4 semanas.
49. El anticuerpo anti CD40 o fragmento de unión
a antígeno o uso de la reivindicación 31, en el que dicho periodo
de tratamiento comprende uno o más ciclos posteriores de dicho
régimen de dosificación de IL-2 de dos niveles que
se inicia aproximadamente 1 semana a aproximadamente 4 semanas tras
la finalización de un primer ciclo de dicho régimen de dosificación
de IL-2 de dos niveles o la finalización de
cualquier ciclo posterior de dicho régimen de dosificación de
IL-2 de dos niveles, en el que dicha administración
semanal de dicho anticuerpo anti CD40 o fragmento de unión a
antígeno del mismo continúa a lo largo de dicho periodo de
tratamiento.
50. El anticuerpo anti CD40 o fragmento de unión
a antígeno o uso de la reivindicación 49, en el que al menos un
ciclo de dicho régimen de dosificación de IL-2 de
dos niveles comprende una interrupción en dicho régimen de
dosificación de IL-2 de dos niveles, en el que dicha
interrupción comprende un periodo de tiempo sin administración de
dicha IL-2 o su variante biológicamente activa entre
dicho primer periodo de tiempo y dicho segundo periodo de tiempo de
cualquier ciclo dado de dicho régimen de dosificación de
IL-2 de dos niveles que comprende dicha
interrupción.
51. El anticuerpo anti CD40 o fragmento de unión
a antígeno o el uso de una cualquiera de las reivindicaciones
1-50, en el que dicho anticuerpo anti CD40 o
fragmento de unión a antígeno del mismo se administra por vía
intravenosa o subcutánea.
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