JP2017525370A - 腫瘍壊死因子スーパーファミリーおよびｔｎｆ様リガンドムテインならびに腫瘍壊死因子スーパーファミリーおよびｔｎｆ様リガンドムテインを調製および使用する方法 - Google Patents

腫瘍壊死因子スーパーファミリーおよびｔｎｆ様リガンドムテインならびに腫瘍壊死因子スーパーファミリーおよびｔｎｆ様リガンドムテインを調製および使用する方法 Download PDF

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Abstract

本発明は、各TNFSFリガンドまたはTNF様リガンドムテイン単量体が、隣接するTNFSFまたはTNF様リガンドムテイン単量体上のシステイン残基とのジスルフィド結合の形成を促進する少なくとも1つのシステイン残基の置換または挿入を含有する、該TNFSFまたはTNF様リガンドムテインのホモ多量体、例えば、ホモ三量体を特徴とする。本発明は、かかるTNFSFおよびTNF様リガンドムテインを製造する方法、かかるムテインを含有する医薬組成物、ならびにかかるムテインを癌免疫療法、自己免疫疾患と神経疾患の治療、および臓器移植または組織もしくは臓器の修復もしくは再生における合併症と拒絶反応のリスクの軽減または除去に使用する方法を特徴とする。【選択図】なし

Description

本発明は、腫瘍壊死因子スーパーファミリーおよびTNF様リガンドムテインならびに腫瘍壊死因子スーパーファミリーおよびTNF様リガンドムテインを調製および使用する方法
に関する。
腫瘍壊死因子スーパーファミリー(TNFSF)とは、免疫系における多様な機能を有する一群のリガンド、例えば、サイトカインを指す。TNFSFリガンド、例えば、TNF-α、リンホトキシン(例えば、LT-αおよびLT-β)、CD40L、CD70、CD153、OX40リガンド(OX40L)、Fasリガンド(FasL)、4-1BBリガンド(4-1BBL)、TRAIL、RANKL、TWEAK、APRIL、BLys、LIGHT、TL1、GITRL(TL6としても知られている)、ならびにEDA(例えば、EDA-A1およびEDA-A2)は、前記TNFSFの1つ以上の受容体に結合する、構造上関連のあるリガンドである。前記TNFSFのリガンドは、典型的にはII型膜貫通タンパク質として発現され、該タンパク質はその細胞外ドメインが可溶性タンパク質として放出されるように、タンパク質分解的に切断されうる(図1A)。前記TNFSFリガンドの膜貫通および可溶性部分はいずれも、それらの各々の受容体に結合してそれらの生物学的機能を発揮するために、非共有結合ホモ多量体、例えば、ホモ三量体を形成する。しかし、低濃度では可溶性TNFSFリガンドの解離速度が早いため、可溶性TNFSFリガンドは多くの場合、分解されて身体から除去される。半減期を増大させるため、またこれらのタンパク質のシグナル伝達を改善するために、TNFSFリガンドの二次架橋の種々の方法が探求されている(例えば、米国特許公報第20030064480号を参照されたい)。しかし、これらの方法には、例えば単量体TNFSFリガンド間の長くて邪魔なリンカー配列に起因する重度の免疫原性作用の発生を含む、重大な欠点がある。改善された半減期およびシグナル伝達活性を有する種々のTNFSF受容体の安定した、かつ可溶性のリガンドが必要とされている。
TNF様リガンドは、前記TNFSFリガンドのものと類似したフォールディングトポロジー、重要なアミノ酸残基の保存、およびイントロンの位置を有するリガンドである。TNF様リガンドとしては、補体1q(C1q)ファミリーのタンパク質(TNF関連ファミリーのタンパク質としても知られている)、例えば、アディポネクチン、ミオネクチン(myonectin)、補体1q腫瘍壊死因子関連タンパク質3(C1QTNF3)、およびC1QTNF5が挙げられる。C1qファミリーのタンパク質は筋細胞または肝細胞上の受容体を標的としうる。TNFSFリガンドおよびTNF様リガンドは、細胞増殖、炎症、アポトーシス、および形態発生において多様な機能を示す。治療的使用のための安定したTNFSFおよびTNF様リガンド、ならびに安定したTNFSFおよびTNF様リガンドを生成するために利用しうる方法が必要とされている。
米国特許公報第20030064480号
本発明のTNFSFまたはTNF様リガンドムテイン（突然変異タンパク質）は、隣接するTNFSFまたはTNF様リガンドムテイン上の別のシステイン残基とのジスルフィド結合の形成を促進する、少なくとも1つの表面に露出した(例えば、外向きの)システイン残基の置換または挿入を含有する。本発明のTNFSFまたはTNF様リガンドムテインの多量体は、2つ、3つ、4つ、またはそれ以上の、特に3つのTNFSFまたはTNF様リガンド単量体あるいはその断片から構成されている。TNFSFまたはTNF様リガンドムテインは、1つ以上のTNFSFまたはTNF様リガンド受容体に結合し、天然の非共有結合的に架橋したTNFSFまたはTNF様リガンド対応物と比較してより長い半減期および改善されたシグナル伝達活性を呈示する場合がある。さらに、本発明のTNFSFまたはTNF様リガンドムテインのジスルフィド結合した多量体は、リガンド受容体相互作用を有効にモジュレートすることができる。TNFSFまたはTNF様リガンドムテインを製造する方法およびかかるムテインを含有する医薬組成物もまた本発明に含まれる。本発明のTNFSFまたはTNF様リガンドムテインを含有する医薬組成物を、自己免疫疾患、神経疾患、癌、感染症、代謝性疾患(例えば、糖尿病)、黄斑疾患(例えば、黄斑変性症)、筋萎縮、流産に関連する疾患、脈管疾患(例えば、粥状硬化症)、骨量減少に関連する疾患(すなわち、閉経の結果としての骨量減少、骨粗鬆症)、アレルギー、血液疾患(例えば、血友病)、AIDS、筋骨格障害、増殖受容体に関連する疾患、肥満症の治療のため、組織または臓器の修復または再生のため、ならびに臓器移植術に使用するため(例えば、臓器移植に起因する合併症(例えば、移植片対宿主病(GVHD)および移植片拒絶反応)を治療もしくは軽減するため)に使用してもよい。
第1の態様では、本発明は、腫瘍壊死因子スーパーファミリー(TNFSF)またはTNF様リガンドの全部または一部を含むポリペプチドであって、ここで該ポリペプチドが、該TNFSFまたはTNF様リガンドの表面に露出した、外向きのアミノ酸残基のシステイン残基による少なくとも1つの置換、あるいは該TNFSFまたはTNF様リガンドの表面に露出した、外向きのアミノ酸残基の領域にシステイン残基の少なくとも1つの挿入を含む、上記ポリペプチドを特徴とする。幾つかの実施形態では、前記ポリペプチドは、前記TNFSFまたはTNF様リガンドの表面に露出した、外向きのアミノ酸残基のシステイン残基による2つの置換を含む。他の実施形態では、前記ポリペプチドは、前記TNFSFまたはTNF様リガンドの表面に露出したアミノ酸残基のシステイン残基による3つまたは4つの置換を含む。幾つかの実施形態では、前記ポリペプチドは、前記TNFSFまたはTNF様リガンドの表面に露出した、外向きのアミノ酸残基の領域にシステイン残基の2つの挿入を含む。他の実施形態では、前記ポリペプチドは、前記TNFSFまたはTNF様リガンドの表面に露出した、外向きのアミノ酸残基の領域にシステイン残基の3つまたは4つの挿入を含む。第1の態様の全ての実施形態では、前記TNFSFまたはTNF様リガンドは、前記TNFSFまたはTNF様リガンドの前記膜貫通および細胞質ドメインの一方または両方を欠損した可溶性ポリペプチドでありうる。他の実施形態では、TNFSFまたはTNF様リガンドの天然に存在するシステイン残基を非システイン残基、例えばセリンに置換することにより、例えば非特異的ジスルフィド結合の形成に起因する望ましくない二量体もしくは多量体の形成を回避するか、または野生型TNFSFもしくはTNF様リガンド中のジスルフィド結合を形成する天然に存在するシステイン残基を除去してもよい。
この第1の態様では、前記TNFSFまたはTNF様リガンドは、TNF-α、リンホトキシン(例えば、LT-αおよびLT-β)、CD40L、CD70、CD153、OX40L、FasL、4-1BBリガンド、TRAIL、RANKL、TWEAK、APRIL、BLys、LIGHT、TL1、GITRL(TL6としても知られている)、EDA(例えば、EDA-A1およびEDA-A2)、またはアディポネクチンである。
幾つかの実施形態では、前記TNFSFリガンドはTNF-αである。幾つかの実施形態では、前記ポリペプチドは、TNF-αの全部または一部を含み、かつ配列番号1のアミノ酸配列に対して、次のシステイン置換、すなわちR82C、T83C、P84C、S85C、H91C、N110C、G130C、L131C、Y135C、N168C、L169C、L170C、S171C、A172C、I173C、K174C、S175C、Q178C、E180C、W190C、Y191C、P193C、G198C、V199C、F200C、Q201C、S223C、G224C、およびQ225Cのうちの1つ、2つ、3つ、4つ、またはそれ以上を有するTNF-αムテインである。他の実施形態では、前記ポリペプチドは、TNF-αの全部または一部を含み、かつ配列番号1のアミノ酸配列に対して、次のシステイン置換対、すなわちG130C/S85C、L131C/T83C、L131C/P84C、S171C/G224C、N168C/S223C、N168C/G224C、L169C/S223C、L169C/G224C、L170C/S223C、S171C/S223C、S171C/Q225C、A172C/P193C、I173C/Y191C、I173C/P193C、K174C/Y191C、S175C/W190C、S175C/Y191C、Q178C/E180C、G198C/Y135C、V199C/H91C、F200C/H91C、F200C/N110C、Q201C/R82C、およびQ201C/T83Cのうちの1つ以上(好ましくは1つ)を有するTNF-αムテインである。さらに他の実施形態では、前記ポリペプチドは、TNF-αの全部または一部を含み、かつ配列番号1のアミノ酸配列に対して、次のアミノ酸領域、すなわちアミノ酸77〜94、107〜113、127〜138、165〜204、および220〜228のうちの1つ以上、および好ましくは少なくとも2つに少なくとも1つのシステイン置換または挿入(例えば、2つの異なる領域に1つのシステイン置換または挿入)を有するTNF-αムテインである。幾つかの実施形態では、各TNF-αムテインまたはその断片は、少なくとも1つのシステイン置換または挿入(例えば、2つ、3つ、4つ、またはそれ以上のシステイン置換または挿入、好ましくは2つ)を有し、かつ少なくとも1つ(および好ましくは少なくとも2つ)のシステイン置換または挿入(先に記載した通り)を有し、かつ配列番号1〜39および624〜638のいずれか1つから選択される配列と少なくとも50％の配列同一性(例えば、50％、55％、60％、65％、70％、75％、80％、85％、90％、95％、99％、または100％)を有する。
幾つかの実施形態では、前記ポリペプチドは、TNF-αの全部または一部を含み、かつ配列番号1のアミノ酸配列に対して、前記システイン置換S171CおよびG224Cを有するTNF-αムテインである。幾つかの実施形態では、前記TNF-αムテインはTNF受容体に結合する。他の実施形態では、前記TNF-αムテインは、TNF受容体1(TNFR1)またはTNF受容体2(TNFR2)に結合する。特に、前記TNF-αムテインはTNFR2に特異的に結合する。好ましくは、前記TNF-αムテインはTNFR2特異的アゴニストである。幾つかの実施形態では、前記TNF-αムテインはTNFR2多量体化を促進する。好ましくは、前記TNF-αムテインは、前記TNF-αの前記膜貫通および細胞質ドメインの一方または両方を欠損した可溶性ポリペプチドである。
他の実施形態では、前記TNF-αムテインを癌特異的抗体(例えば、該癌特異的抗体が特異的に結合する抗原を発現している癌の標的化送達および治療に使用するためのもの)に融合する。
他の実施形態では、前記TNF-αムテインはTNFR2のアンタゴニストである。
幾つかの実施形態では、前記TNFSFリガンドはLT-αである。幾つかの実施形態では、前記可溶性ポリペプチドは、LT-αの全部または一部を含み、かつ配列番号40のアミノ酸配列に対して、次のシステイン置換、すなわちH66C、R85C、Y110C、P147C、L148C L149C、S150C、S151C、Q152C、K153C、M154C、W163C、L164C、S166C、A171C、A172C、F173C、P195C、S196C、およびT197Cのうちの1つ、2つ、3つ、4つ、またはそれ以上を有するLT-αムテインである。他の実施形態では、前記可溶性ポリペプチドは、LT-αの全部または一部を含み、かつ配列番号40のアミノ酸配列に対して、次のシステイン置換対、すなわちP147C/P195C、P147C/S196C、L148C/P195C、L148C/S196C、L149C/P195C、S150C/S196C、S150C/P195C、S150C/T197C、S151C/S166C、Q152C/L164C、Q152C/S166C、K153C/L164C、M154C/W163C、M154C/L164C、A171C/Y110C、A172C/H66C、F173C/H66C、およびF173C/R85Cのうちの1つ以上(好ましくは1つ)を有するLT-αムテインである。さらに他の実施形態では、前記ポリペプチドは、LT-αの全部または一部を含み、かつ配列番号40のアミノ酸配列に対して、次のアミノ酸領域、すなわちアミノ酸52〜69、82〜88、107〜113、144〜176、および192〜200のうちの1つ以上、および好ましくは少なくとも2つに少なくとも1つのシステイン置換または挿入(例えば、2つの異なる領域に1つのシステイン置換または挿入)を有するLT-αムテインである。幾つかの実施形態では、各LT-αムテインまたはその断片は、少なくとも1つ(および好ましくは少なくとも2つ)のシステイン置換または挿入(先に記載した通り)を有し、かつ配列番号40〜75のいずれか1つから選択される配列と少なくとも50％の配列同一性(例えば、50％、55％、60％、65％、70％、75％、80％、85％、90％、95％、99％、または100％)を有する。
幾つかの実施形態では、前記TNFSFリガンドはLT-βである。幾つかの実施形態では、前記可溶性ポリペプチドは、LT-βの全部または一部を含み、かつ配列番号76のアミノ酸配列に対して、次のシステイン置換、すなわちH91C、Q110C、Y136C、L177C、L178C、L179C、E180C、G181C、A182C、E183C、T184C、W201C、Y202C、S204C、G209C、L210C、V211C、R233C、G234C、およびK235Cのうちの1つ、2つ、3つ、4つ、またはそれ以上を有するLT-βムテインである。他の実施形態では、前記可溶性ポリペプチドは、LT-βの全部または一部を含み、かつ配列番号76のアミノ酸配列に対して、次のシステイン置換対、すなわちL177C/R233C、L177C/G234C、L178C/R233C、L178C/G234C、L179C/R233C、E180C/R233C、E180C/G234C、E180C/K235C、G181C/S204C、A182C/Y202C、A182C/S204C、E183C/Y202C、T184C/W201C、T184C/Y202C、G209C/Y136C、L210C/H91C、V211C/H91C、およびV211C/Q110Cのうちの1つ以上(好ましくは1つ)を有するLT-βムテインである。さらに他の実施形態では、前記ポリペプチドは、LT-βの全部または一部を含み、かつ配列番号76のアミノ酸配列に対して、次のアミノ酸領域、すなわちアミノ酸77〜94、107〜113、133〜139、174〜187、199〜214、および230〜238のうちの1つ以上、および好ましくは少なくとも2つに少なくとも1つのシステイン置換または挿入(例えば、2つの異なる領域に1つのシステイン置換または挿入)を有するLT-βムテインである。幾つかの実施形態では、各LT-βムテインまたはその断片は、少なくとも1つ(および好ましくは少なくとも2つ)のシステイン置換または挿入(先に記載した通り)を有し、かつ配列番号76〜111のいずれか1つから選択される配列と少なくとも50％の配列同一性(例えば、50％、55％、60％、65％、70％、75％、80％、85％、90％、95％、99％、または100％)を有する。
幾つかの実施形態では、前記TNFSFリガンドはOX40リガンド(OX40L)である。幾つかの実施形態では、前記可溶性ポリペプチドは、OX40Lの全部または一部を含み、かつ配列番号112のアミノ酸配列に対して、次のシステイン置換、すなわちK63C、S104C、P125C、L126C、Q128C、L129C、K130C、S134C、M139C、V140C、A141C、N166C、およびG167Cのうちの1つ、2つ、3つ、4つ、またはそれ以上を有するOX40Lムテインである。幾つかの実施形態では、前記可溶性ポリペプチドは、OX40Lの全部または一部を含み、かつ配列番号112のアミノ酸配列に対して、次のシステイン置換対、すなわちP125C/N166C、L126C/N166C、Q128C/N166C、Q128C/G167C、L129C/S134C、K130C/S134C、M139C/S104C、V140C/K63C、およびA141C/K63Cのうちの1つ以上(好ましくは1つ)を有するOX40Lムテインである。さらに他の実施形態では、前記ポリペプチドは、OX40Lの全部または一部を含み、かつ配列番号112のアミノ酸配列に対して、次のアミノ酸領域、すなわちアミノ酸49〜66、101〜107、122〜144、および163〜170のうちの1つ以上、および好ましくは少なくとも2つに少なくとも1つのシステイン置換または挿入(例えば、2つの異なる領域に1つのシステイン置換または挿入)を有するOX40Lムテインである。幾つかの実施形態では、各OX40Lムテインまたはその断片は、少なくとも1つ(および好ましくは少なくとも2つ)のシステイン置換または挿入(先に記載した通り)を有し、かつ配列番号112〜131および645〜647のいずれか1つから選択される配列と少なくとも50％の配列同一性(例えば、50％、55％、60％、65％、70％、75％、80％、85％、90％、95％、99％、または100％)を有する。
幾つかの実施形態では、前記TNFSFリガンドはCD40Lである。幾つかの実施形態では、前記可溶性ポリペプチドは、CD40Lの全部または一部を含み、かつ配列番号132のアミノ酸配列に対して、次のシステイン置換、すなわちH125C、Y145C、Y172C、I204C、L205C、L206C、R207C、A208C、A209C、N210C、T211C、S213C、K216C、P217C、G219C、Q220C、S222C、G227C、V228C、F229C、T251C、G252C、およびF253Cのうちの1つ、2つ、3つ、4つ、またはそれ以上を有するCD40Lムテインである。幾つかの実施形態では、前記可溶性ポリペプチドは、CD40Lの全部または一部を含み、かつ配列番号132のアミノ酸配列に対して、次のシステイン置換対、すなわちI204C/T251C、I204C/G252C、L205C/T251C、L205C/G252C、L206C/T251C、R207C/T251C、R207C/G252C、R207C/F253C、A208C/S222C、A209C/Q220C、A209C/S222C、N210C/Q220C、T211C/G219C、T211C/Q220C、S213C/K216C、S213C/P217C、G227C/Y172C、V228C/H125C、F229C/H125C、およびF229C/Y145Cのうちの1つ以上(好ましくは1つ)を有するCD40Lムテインである。さらに他の実施形態では、前記ポリペプチドは、CD40Lの全部または一部を含み、かつ配列番号132のアミノ酸配列に対して、次のアミノ酸領域、すなわちアミノ酸111〜128、142〜148、169〜175、201〜232、および248〜256のうちの1つ以上、および好ましくは少なくとも2つに少なくとも1つのシステイン置換または挿入(例えば、2つの異なる領域に1つのシステイン置換または挿入)を有するCD40Lムテインである。幾つかの実施形態では、各CD40Lムテインまたはその断片は、少なくとも1つ(および好ましくは少なくとも2つ)のシステイン置換または挿入(先に記載した通り)を有し、かつ配列番号132〜166、620、648〜650、および723〜727のいずれか1つから選択される配列と少なくとも50％の配列同一性(例えば、50％、55％、60％、65％、70％、75％、80％、85％、90％、95％、99％、または100％)を有する。
幾つかの実施形態では、前記TNFSFリガンドはFasLである。幾つかの実施形態では、前記可溶性ポリペプチドは、FasLの全部または一部を含み、かつ配列番号167のアミノ酸配列に対して、次のシステイン置換、すなわちH148C、I168C、Y192C、V223C、M224C、M225C、E226C、G227C、K228C、M229C、M230C、W239C、A240C、S242C、A247C、V248C、F249C、E271C、S272C、およびQ273Cのうちの1つ、2つ、3つ、4つ、またはそれ以上を有するFasLムテインである。幾つかの実施形態では、前記可溶性ポリペプチドは、FasLの全部または一部を含み、かつ配列番号167のアミノ酸配列に対して、次のシステイン置換対、すなわちV223C/E271C、V223C/S272C、M224C/E271C、M224C/S272C、M225C/E271C、E226C/E271C、E226C/S272C、E226C/Q273C、G227C/S242C、K228C/A240C、K228C/S242C、M229C/A240C、M230C/W239C、M230C/A240C、A247C/Y192C、V248C/H148C、F249C/H148C、およびF249C/I168Cのうちの1つ以上(好ましくは1つ)を有するFasLムテインである。さらに他の実施形態では、前記ポリペプチドは、FasLの全部または一部を含み、かつ配列番号167のアミノ酸配列に対して、次のアミノ酸領域、すなわちアミノ酸134〜151、165〜171、189〜195、220〜252、および268〜276のうちの1つ以上、および好ましくは少なくとも2つに少なくとも1つのシステイン置換または挿入(例えば、2つの異なる領域に1つのシステイン置換または挿入)を有するFasLムテインである。幾つかの実施形態では、各FasLムテインまたはその断片は、少なくとも1つ(および好ましくは少なくとも2つ)のシステイン置換または挿入(先に記載した通り)を有し、かつ配列番号167〜202および651〜653のいずれか1つから選択される配列と少なくとも50％の配列同一性(例えば、50％、55％、60％、65％、70％、75％、80％、85％、90％、95％、99％、または100％)を有する。
幾つかの実施形態では、前記TNFSFリガンドはCD153である。幾つかの実施形態では、前記可溶性ポリペプチドは、CD153の全部または一部を含み、かつ配列番号236のアミノ酸配列に対して、次のシステイン置換、すなわちY101C、I142C、C151S、A172C、L173C、V174C、T175C、V176C、E178C、S179C、V186C、Y187C、N189C、L194C、L195C、D196C、P220C、L221C、およびE222Cのうちの1つ、2つ、3つ、4つ、またはそれ以上を有するCD153ムテインである。幾つかの実施形態では、前記可溶性ポリペプチドは、CD153の全部または一部を含み、かつ配列番号236のアミノ酸配列に対して、次のシステイン置換対、すなわちA172C/P220C、A172C/L221C、L173C/P220C、L173C/L221C、V174C/P220C、T175C/P220C、T175C/L221C、T175C/E222C、V176C/N189C、E178C/Y187C、S179C/V186C、S179C/Y187C、Y187C/C151S、N189C/C151S、L194C/I142C、L195C/Y101C、およびD196C/Y101Cのうちの1つ以上(好ましくは1つ)を有するCD153ムテインである。さらに他の実施形態では、前記ポリペプチドは、CD153の全部または一部を含み、かつ配列番号236のアミノ酸配列に対して、次のアミノ酸領域、すなわちアミノ酸86〜104、169〜199、および217〜225のうちの1つ以上、および好ましくは少なくとも2つに少なくとも1つのシステイン置換または挿入(例えば、2つの異なる領域に1つのシステイン置換または挿入)を有するCD153ムテインである。幾つかの実施形態では、各CD153ムテインまたはその断片は、少なくとも1つ(および好ましくは少なくとも2つ)のシステイン置換または挿入(先に記載した通り)を有し、かつ配列番号236〜266のいずれか1つから選択される配列と少なくとも50％の配列同一性(例えば、50％、55％、60％、65％、70％、75％、80％、85％、90％、95％、99％、または100％)を有する。幾つかの実施形態では、CD153ムテインの天然に存在するシステイン残基、例えば残基C151を、望ましくない二量体化を回避するためにセリン残基に変異させてもよい。
幾つかの実施形態では、前記TNFSFリガンドは4-1BBリガンドである。幾つかの実施形態では、前記可溶性ポリペプチドは、4-1BBリガンドの全部または一部を含み、かつ配列番号267のアミノ酸配列に対して、次のシステイン置換、すなわちQ94C、L115C、F144C、A178C、L179C、L181C、T182C、V183C、D184C、L185C、N194C、S195C、F197C、R202C、L203C、L204C、G231C、およびA232Cのうちの1つ、2つ、3つ、4つ、またはそれ以上を有する4-1BBリガンドムテインである。幾つかの実施形態では、前記可溶性ポリペプチドは、4-1BBリガンドの全部または一部を含み、かつ配列番号267のアミノ酸配列に対して、次のシステイン置換対、すなわちA178C/G231C、L179C/G231C、L181C/G231C、L181C/A232C、T182C/F197C、V183C/S195C、V183C/F197C、D184C/S195C、L185C/N194C、L185C/S195C、R202C/F144C、L203C/Q94C、L204C/Q94C、およびL204C/L115Cのうちの1つ以上(好ましくは1つ)を有する4-1BBリガンドムテインである。さらに他の実施形態では、前記ポリペプチドは、4-1BBリガンドの全部または一部を含み、かつ配列番号267のアミノ酸配列に対して、次のアミノ酸領域、すなわちアミノ酸80〜97、112〜118、175〜207、および228〜235のうちの1つ以上、および好ましくは少なくとも2つに少なくとも1つのシステイン置換または挿入(例えば、2つの異なる領域に1つのシステイン置換または挿入)を有する4-1BBリガンドムテインである。幾つかの実施形態では、各4-1BBリガンドムテインまたはその断片は、少なくとも1つ(および好ましくは少なくとも2つ)のシステイン置換または挿入(先に記載した通り)を有し、かつ配列番号267〜296および731〜733のいずれか1つから選択される配列と少なくとも50％の配列同一性(例えば、50％、55％、60％、65％、70％、75％、80％、85％、90％、95％、99％、または100％)を有する。
幾つかの実施形態では、前記TNFSFリガンドはTRAILである。幾つかの実施形態では、前記可溶性ポリペプチドは、TRAILの全部または一部を含み、かつ配列番号297のアミノ酸配列に対して、次のシステイン置換、すなわちH125C、L147C、H161C、Y185C、L221C、L222C、M223C、K224C、S225C、A226C、R227C、N228C、C230S、G238C、L239C、S241C、G246C、I247C、H270C、E271C、およびA272Cのうちの1つ、2つ、3つ、4つ、またはそれ以上を有するTRAILムテインである。幾つかの実施形態では、前記可溶性ポリペプチドは、TRAILの全部または一部を含み、かつ配列番号297のアミノ酸配列に対して、次のシステイン置換対、すなわちL221C/H270C、L221C/E271C、L222C/H270C、L222C/E271C、M223C/H270C、K224C/H270C、K224C/E271C、K224C/A272C、S225C/S241C、A226C/L239C、A226C/S241C、R227C/L239C、N228C/G238C、N228C/L239C、G246C/Y185C、I247C/H125C、およびL147C/H161Cのうちの1つ以上(好ましくは1つ)を有するTRAILムテインである。さらに他の実施形態では、前記ポリペプチドは、TRAILの全部または一部を含み、かつ配列番号297のアミノ酸配列に対して、次のアミノ酸領域、すなわちアミノ酸111〜128、144〜150、158〜164、182〜188、218〜250、および267〜275のうちの1つ以上、および好ましくは少なくとも2つに少なくとも1つのシステイン置換または挿入(例えば、2つの異なる領域に1つのシステイン置換または挿入)を有するTRAILムテインである。幾つかの実施形態では、各TRAILムテインまたはその断片は、少なくとも1つ(および好ましくは少なくとも2つ)のシステイン置換または挿入(先に記載した通り)を有し、かつ配列番号297〜332、621、623、660〜662、および734のいずれか1つから選択される配列と少なくとも50％の配列同一性(例えば、50％、55％、60％、65％、70％、75％、80％、85％、90％、95％、99％、または100％)を有する。幾つかの実施形態では、TRAILムテインの天然に存在するシステイン残基、例えば残基C230を、望ましくない二量体化を回避するためにセリン残基に変異させてもよい。
幾つかの実施形態では、前記TNFSFリガンドはRANKLである。幾つかの実施形態では、前記可溶性ポリペプチドは、RANKLの全部または一部を含み、かつ配列番号333のアミノ酸配列に対して、次のシステイン置換、すなわちH167C、W193C、Y217C、T254C、L255C、M256C、K257C、G258C、G259C、S260C、W264C、G266C、H271C、F272C、S274C、G279C、F280C、F281C、Q303C、D304C、およびA305Cのうちの1つ、2つ、3つ、4つ、またはそれ以上を有するRANKLムテインである。幾つかの実施形態では、前記可溶性ポリペプチドは、RANKLの全部または一部を含み、かつ配列番号333のアミノ酸配列に対して、次のシステイン置換対、すなわちT254C/Q303C、T254C/D304C、L255C/Q303C、L255C/D304C、M256C/Q303C、K257C/Q303C、K257C/D304C、K257C/A305C、G258C/S274C、G259C/F272C、G259C/S274C、S260C/H271C、S260C/F272C、W264C/G266C、G279C/Y217C、F280C/H167C、F281C/H167C、およびF281C/W193Cのうちの1つ以上(好ましくは1つ)を有するRANKLムテインである。さらに他の実施形態では、前記ポリペプチドは、RANKLの全部または一部を含み、かつ配列番号333のアミノ酸配列に対して、次のアミノ酸領域、すなわちアミノ酸153〜170、190〜196、214〜220、251〜284、および300〜308のうちの1つ以上、および好ましくは少なくとも2つに少なくとも1つのシステイン置換または挿入(例えば、2つの異なる領域に1つのシステイン置換または挿入)を有するRANKLムテインである。幾つかの実施形態では、各RANKLムテインまたはその断片は、少なくとも1つ(および好ましくは少なくとも2つ)のシステイン置換または挿入(先に記載した通り)を有し、かつ配列番号333〜368および622のいずれか1つから選択される配列と少なくとも50％の配列同一性(例えば、50％、55％、60％、65％、70％、75％、80％、85％、90％、95％、99％、または100％)を有する。
幾つかの実施形態では、前記TNFSFリガンドはTWEAKである。幾つかの実施形態では、前記可溶性ポリペプチドは、TWEAKの全部または一部を含み、かつ配列番号369のアミノ酸配列に対して、次のシステイン置換、すなわちY164C、L187C、A188C、L189C、R190C、L192C、E193C、E194C、Q206C、L207C、L209C、R208C、S213C、G214C、P238C、F239C、およびL240Cのうちの1つ、2つ、3つ、4つ、またはそれ以上を有するTWEAKムテインである。幾つかの実施形態では、前記可溶性ポリペプチドは、TWEAKの全部または一部を含み、かつ配列番号369のアミノ酸配列に対して、次のシステイン置換対、すなわちY164C/S213C、Y164C/G214C、L187C/P238C、L187C/F239C、A188C/P238C、A188C/F239C、L189C/P238C、R190C/P238C、R190C/F239C、R190C/L240C、L192C/L207C、L192C/L209C、E193C/R208C、E194C/Q206C、およびE194C/L207Cのうちの1つ以上(好ましくは1つ)を有するTWEAKムテインである。さらに他の実施形態では、前記ポリペプチドは、TWEAKの全部または一部を含み、かつ配列番号369のアミノ酸配列に対して、次のアミノ酸領域、すなわちアミノ酸96〜105、161〜167、184〜197、204〜217、および235〜243のうちの1つ以上、および好ましくは少なくとも2つに少なくとも1つのシステイン置換または挿入(例えば、2つの異なる領域に1つのシステイン置換または挿入)を有するTWEAKムテインである。幾つかの実施形態では、各TWEAKムテインまたはその断片は、少なくとも1つ(および好ましくは少なくとも2つ)のシステイン置換または挿入(先に記載した通り)を有し、かつ配列番号369〜397のいずれか1つから選択される配列と少なくとも50％の配列同一性(例えば、50％、55％、60％、65％、70％、75％、80％、85％、90％、95％、99％、または100％)を有する。
幾つかの実施形態では、前記TNFSFリガンドはAPRILである。幾つかの実施形態では、前記可溶性ポリペプチドは、APRILの全部または一部を含み、かつ配列番号398のアミノ酸配列に対して、次のシステイン置換、すなわちH119C、F127C、A141C、Y166C、T192C、L193C、F194C、R195C、I197C、R198C、S199C、A207C、Y208C、S210C、C211S、G215C、V216C、F217C、P240C、H241C、およびG242Cのうちの1つ、2つ、3つ、4つ、またはそれ以上を有するAPRILムテインである。幾つかの実施形態では、前記可溶性ポリペプチドは、APRILの全部または一部を含み、かつ配列番号398のアミノ酸配列に対して、次のシステイン置換対、すなわちT192C/P240C、T192C/H241C、L193C/P240C、L193C/H241C、F194C/P240C、R195C/P240C、R195C/H241C、R195C/G242C、I197C/Y208C、I197C/S210C、R198C/Y208C、S199C/A207C、S199C/Y208C、S210C/C211S、G215C/Y166C、V216C/H119C、F217C/H119C、およびF127C/A141Cのうちの1つ以上(好ましくは1つ)を有するAPRILムテインである。さらに他の実施形態では、前記ポリペプチドは、APRILの全部または一部を含み、かつ配列番号398のアミノ酸配列に対して、次のアミノ酸領域、すなわちアミノ酸105〜130、138〜144、163〜169、189〜220、および237〜245のうちの1つ以上、および好ましくは少なくとも2つに少なくとも1つのシステイン置換または挿入(例えば、2つの異なる領域に1つのシステイン置換または挿入)を有するAPRILムテインである。幾つかの実施形態では、各APRILムテインまたはその断片は、少なくとも1つ(および好ましくは少なくとも2つ)のシステイン置換または挿入(先に記載した通り)を有し、かつ配列番号398〜434のいずれか1つから選択される配列と少なくとも50％の配列同一性(例えば、50％、55％、60％、65％、70％、75％、80％、85％、90％、95％、99％、または100％)を有する。
幾つかの実施形態では、前記TNFSFリガンドはBLysである。幾つかの実施形態では、前記可溶性ポリペプチドは、Blysの全部または一部を含み、かつ配列番号435のアミノ酸配列に対して、次のシステイン置換、すなわちQ148C、Y196C、T228C、L229C、F230C、R231C、I233C、Q234C、N235C、P241C、N242C、S244C、G249C、I250C、A251C、G274C、D275C、およびV276Cのうちの1つ、2つ、3つ、4つ、またはそれ以上を有するBLysムテインである。幾つかの実施形態では、前記可溶性ポリペプチドは、Blysの全部または一部を含み、かつ配列番号435のアミノ酸配列に対して、次のシステイン置換対、すなわちT228C/G274C、T228C/D275C、L229C/G274C、L229C/D275C、F230C/G274C、R231C/G274C、R231C/D275C、R231C/V276C、I233C/N242C、I233C/S244C、Q234C/N242C、N235C/P241C、N235C/N242C、G249C/Y196C、I250C/Q148C、およびA251C/Q148Cのうちの1つ以上(好ましくは1つ)を有するBLysムテインである。さらに他の実施形態では、前記ポリペプチドは、Blysの全部または一部を含み、かつ配列番号435のアミノ酸配列に対して、次のアミノ酸領域、すなわちアミノ酸134〜151、225〜254、および271〜279のうちの1つ以上、および好ましくは少なくとも2つに少なくとも1つのシステイン置換または挿入(例えば、2つの異なる領域に1つのシステイン置換または挿入)を有するBLysムテインである。幾つかの実施形態では、各BLysムテインまたはその断片は、少なくとも1つ(および好ましくは少なくとも2つ)のシステイン置換または挿入(先に記載した通り)を有し、かつ配列番号435〜466のいずれか1つから選択される配列と少なくとも50％の配列同一性(例えば、50％、55％、60％、65％、70％、75％、80％、85％、90％、95％、99％、または100％)を有する。
幾つかの実施形態では、前記TNFSFリガンドはLIGHTである。幾つかの実施形態では、前記可溶性ポリペプチドは、LIGHTの全部または一部を含み、かつ配列番号467のアミノ酸配列に対して、次のシステイン置換、すなわちH97C、L120C、Y144C、E178C、L179C、L180C、V181C、S182C、Q183C、Q184C、S185C、G188C、T191C、W197C、W198C、S200C、G205C、V206C、V207C、G230C、T231C、およびR232Cのうちの1つ、2つ、3つ、4つ、またはそれ以上を有するLIGHTムテインである。幾つかの実施形態では、前記可溶性ポリペプチドは、LIGHTの全部または一部を含み、かつ配列番号467のアミノ酸配列に対して、次のシステイン置換対、すなわちE178C/G230C、E178C/T231C、L179C/G230C、L179C/T231C、L180C/G230C、V181C/G230C、V181C/T231C、V181C/R232C、S182C/S200C、Q183C/W198C、Q183C/S200C、Q184C/W198C、S185C/W197C、S185C/W198C、G188C/T191C、G205C/Y144C、V206C/H97C、V207C/H97C、およびV207C/L120Cのうちの1つ以上(好ましくは1つ)を有するLIGHTムテインである。さらに他の実施形態では、前記ポリペプチドは、LIGHTの全部または一部を含み、かつ配列番号467のアミノ酸配列に対して、次のアミノ酸領域、すなわちアミノ酸83〜100、117〜123、175〜210、および227〜235のうちの1つ以上、および好ましくは少なくとも2つに少なくとも1つのシステイン置換または挿入(例えば、2つの異なる領域に1つのシステイン置換または挿入)を有するLIGHTムテインである。幾つかの実施形態では、各LIGHTムテインまたはその断片は、少なくとも1つ(および好ましくは少なくとも2つ)のシステイン置換または挿入(先に記載した通り)を有し、かつ配列番号467〜505のいずれか1つから選択される配列と少なくとも50％の配列同一性(例えば、50％、55％、60％、65％、70％、75％、80％、85％、90％、95％、99％、または100％)を有する。
幾つかの実施形態では、前記TNFSFリガンドはTL1である。幾つかの実施形態では、前記可溶性ポリペプチドは、TL1の全部または一部を含み、かつ配列番号506のアミノ酸配列に対して、次のシステイン置換、すなわちH98C、L125C、Y150C、Q193C、L194C、L195C、M196C、G197C、T198C、K199C、S200C、W208C、F209C、P211C、A216C、M217C、F218C、E241C、D242C、およびK243Cのうちの1つ、2つ、3つ、4つ、またはそれ以上を有するTL1ムテインである。幾つかの実施形態では、前記可溶性ポリペプチドは、TL1の全部または一部を含み、かつ配列番号506のアミノ酸配列に対して、次のシステイン置換対、すなわちQ193C/E241C、Q193C/D242C、L194C/E241C、L194C/D242C、L195C/E241C、M196C/E241C、M196C/D242C、M196C/K243C、G197C/P211C、T198C/F209C、T198C/P211C、K199C/F209C、S200C/W208C、S200C/F209C、A216C/Y150C、M217C/H98C、F218C/H98C、およびF218C/L125Cのうちの1つ以上(好ましくは1つ)を有するTL1ムテインである。さらに他の実施形態では、前記ポリペプチドは、TL1の全部または一部を含み、かつ配列番号506のアミノ酸配列に対して、次のアミノ酸領域、すなわちアミノ酸84〜101、122〜128、190〜221、および238〜246のうちの1つ以上、および好ましくは少なくとも2つに少なくとも1つのシステイン置換または挿入(例えば、2つの異なる領域に1つのシステイン置換または挿入)を有するTL1ムテインである。幾つかの実施形態では、各TL1ムテインまたはその断片は、少なくとも1つ(および好ましくは少なくとも2つ)のシステイン置換または挿入(先に記載した通り)を有し、かつ配列番号506〜541のいずれか1つから選択される配列と少なくとも50％の配列同一性(例えば、50％、55％、60％、65％、70％、75％、80％、85％、90％、95％、99％、または100％)を有する。
幾つかの実施形態では、前記TNFSFリガンドはGITRL(TL6としても知られている)である。幾つかの実施形態では、前記可溶性ポリペプチドは、GITRLの全部または一部を含み、かつ配列番号542のアミノ酸配列に対して、次のシステイン置換、すなわちK83C、Y120C、T148C、L149C、N184C、T150C、N151C、K152C、S153C、I155C、G160C、T161C、およびY162Cのうちの1つ、2つ、3つ、4つ、またはそれ以上を有するGITRLムテインである。幾つかの実施形態では、前記可溶性ポリペプチドは、GITRLの全部または一部を含み、かつ配列番号542のアミノ酸配列に対して、次のシステイン置換対、すなわちT148C/N184C、L149C/I155C、T150C/S153C、T150C/I155C、N151C/S153C、K152C/S153C、G160C/Y120C、T161C/K83C、およびY162C/K83Cのうちの1つ以上(好ましくは1つ)を有するGITRLムテインである。さらに他の実施形態では、前記ポリペプチドは、GITRLの全部または一部を含み、かつ配列番号542のアミノ酸配列に対して、次のアミノ酸領域、すなわちアミノ酸69〜86、117〜123、145〜165、181〜187、および269〜277のうちの1つ以上、および好ましくは少なくとも2つに少なくとも1つのシステイン置換または挿入(例えば、2つの異なる領域に1つのシステイン置換または挿入)を有するGITRLムテインである。幾つかの実施形態では、各GITRLムテインまたはその断片は、少なくとも1つ(および好ましくは少なくとも2つ)のシステイン置換または挿入(先に記載した通り)を有し、かつ配列番号542〜561のいずれか1つから選択される配列と少なくとも50％の配列同一性(例えば、50％、55％、60％、65％、70％、75％、80％、85％、90％、95％、99％、または100％)を有する。
幾つかの実施形態では、前記TNFSFリガンドはCD70である。幾つかの実施形態では、前記可溶性ポリペプチドは、CD70の全部または一部を含み、かつ配列番号203のアミノ酸配列に対して、次のシステイン置換、すなわちR83C、H107C、T127C、L128C、A129C、V130C、G131C、I132C、S134C、S137C、S139C、Q149C、G150C、C151S、T152C、R157C、T159C、T181C、D182C、およびE183Cのうちの1つ、2つ、3つ、4つ、またはそれ以上を有するCD70ムテインである。幾つかの実施形態では、前記可溶性ポリペプチドは、CD70の全部または一部を含み、かつ配列番号203のアミノ酸配列に対して、次のシステイン置換対、すなわちT127C/T181C、T127C/D182C、L128C/T181C、L128C/D182C、A129C/T181C、V130C/T181C、V130C/D182C、V130C/E183C、G131C/T152C、I132C/G150C、I132C/T152C、S134C/Q149C、S134C/G150C、S137C/S139、G150C/C151S、R157C/H107C、およびT159C/R83Cのうちの1つ以上(好ましくは1つ)を有するCD70ムテインである。さらに他の実施形態では、前記ポリペプチドは、CD70の全部または一部を含み、かつ配列番号203のアミノ酸配列に対して、次のアミノ酸領域、すなわちアミノ酸69〜86、104〜110、124〜162、および178〜186のうちの1つ以上、および好ましくは少なくとも2つに少なくとも1つのシステイン置換または挿入(例えば、2つの異なる領域に1つのシステイン置換または挿入)を有するCD70ムテインである。幾つかの実施形態では、各CD70ムテインまたはその断片は、少なくとも1つ(および好ましくは少なくとも2つ)のシステイン置換または挿入(先に記載した通り)を有し、かつ配列番号203〜235および654〜656のいずれか1つから選択される配列と少なくとも50％の配列同一性(例えば、50％、55％、60％、65％、70％、75％、80％、85％、90％、95％、99％、または100％)を有する。幾つかの実施形態では、CD70ムテインの天然に存在するシステイン残基、例えば残基C151を、望ましくない二量体化を回避するためにセリン残基に変異させてもよい。
幾つかの実施形態では、前記TNFSFリガンドはEDA(例えば、EDA-A1およびEDA-A2)である。幾つかの実施形態では、前記可溶性ポリペプチドは、EDAの全部または一部を含み、かつ配列番号562または590のアミノ酸配列に対して、次のシステイン置換、すなわちV250C、H252C、T278C、Y304C、P328C、F329C、L330C、Q331C、T333C、R334C、S335C、N342C、Y343C、T345C、G350C、V351C、H376C、およびT377Cのうちの1つ、2つ、3つ、4つ、またはそれ以上を有するEDA(例えば、EDA-A1およびEDA-A2)ムテインである。幾つかの実施形態では、前記可溶性ポリペプチドは、EDAの全部または一部を含み、かつ配列番号562または590のアミノ酸配列に対して、次のシステイン置換対、すなわちP328C/H376C 577、F329C/H376C、L330C/H376C、L330C/T377C、Q331C/H376C、Q331C/T377C、T333C/Y343C、T333C/T345C、R334C/Y343C、S335C/N342C、S335C/Y343C、G350C/Y304C、V351C/V250C、およびV351C/H252Cのうちの1つ以上(好ましくは1つ)を有するEDA(例えば、EDA-A1およびEDA-A2)ムテインである。さらに他の実施形態では、前記ポリペプチドは、EDAの全部または一部を含み、かつ配列番号562または590のアミノ酸配列に対して、次のアミノ酸領域、すなわちアミノ酸238〜255、275〜281、301〜307、325〜354、および373〜380のうちの1つ以上、および好ましくは少なくとも2つに少なくとも1つのシステイン置換または挿入(例えば、2つの異なる領域に1つのシステイン置換または挿入)を有するEDA(例えば、EDA-A1およびEDA-A2)ムテインである。幾つかの実施形態では、各EDAムテインまたはその断片は、少なくとも1つ(および好ましくは少なくとも2つ)のシステイン置換または挿入(先に記載した通り)を有し、かつ配列番号562〜619のいずれか1つから選択される配列と少なくとも50％の配列同一性(例えば、50％、55％、60％、65％、70％、75％、80％、85％、90％、95％、99％、または100％)を有する。
幾つかの実施形態では、前記TNF様リガンドはアディポネクチンである。幾つかの実施形態では、前記可溶性ポリペプチドは、アディポネクチンの全部または一部を含み、かつ配列番号688のアミノ酸配列に対して、次のシステイン置換、すなわちS116C、A161C、A181C、M182C、L183C、F184C、T185C、Y186C、D187C、Q188C、N193C、V194C、Q196C、V201C、L202C、D229C、N230C、およびD231Cのうちの1つ、2つ、3つ、4つ、またはそれ以上を有するアディポネクチンムテインである。幾つかの実施形態では、前記可溶性ポリペプチドは、アディポネクチンの全部または一部を含み、かつ配列番号688のアミノ酸配列に対して、次のシステイン置換対、すなわちA181C/D229C、A181C/N230C、M182C/D229C、M182C/N230C、L183C/D229C、F184C/D229C、F184C/N230C、F184C/D231C、T185C/Q196C、Y186C/V194C、Y186C/Q196C、D187C/V194C、Q188C/N193C、Q188C/V194C、V201C/A161C、およびL202C/S116Cのうちの1つ以上(好ましくは1つ)を有するアディポネクチンムテインである。さらに他の実施形態では、前記ポリペプチドは、アディポネクチンの全部または一部を含み、かつ配列番号688のアミノ酸配列に対して、次のアミノ酸領域、すなわちアミノ酸103〜119、158〜164、178〜205、および226〜234のうちの1つ以上、および好ましくは少なくとも2つに少なくとも1つのシステイン置換または挿入(例えば、2つの異なる領域に1つのシステイン置換または挿入)を有するアディポネクチンムテインである。幾つかの実施形態では、各アディポネクチンムテインまたはその断片は、少なくとも1つ(および好ましくは少なくとも2つ)のシステイン置換または挿入(先に記載した通り)を有し、かつ配列番号688〜722のいずれか1つから選択される配列と少なくとも50％の配列同一性(例えば、50％、55％、60％、65％、70％、75％、80％、85％、90％、95％、99％、または100％)を有する。
幾つかの実施形態では、本発明の第1の態様の可溶性ポリペプチドは、少なくとも1つ(および好ましくは少なくとも2つ)のシステイン置換または挿入(先に記載した通り)を有し、かつ配列番号1〜735のいずれか1つ、またはその生物学的に活性な断片と少なくとも50％(例えば、少なくとも60％、70％、75％、80％、85％、90％、92％、95％、97％、99％、または100％)の配列同一性を有する。他の実施形態では、これらの可溶性ポリペプチド(ムテイン)は、前記TNFSFまたはTNF様リガンドの前記膜貫通ドメインを、場合によっては前記細胞質ドメインとともに欠損している。好ましくは、前記膜貫通および細胞質ドメインは両方とも存在しない。
好適な実施形態では、本発明の第1の態様の可溶性ポリペプチドは、少なくとも1つ(および好ましくは少なくとも2つ)のシステイン置換または挿入(先に記載した通り)を有し、かつ配列番号1の配列、またはその生物学的に活性な断片と少なくとも50％(例えば、少なくとも60％、70％、75％、80％、85％、90％、92％、95％、97％、99％、または100％)の配列同一性を有し、かつTNF-αの前記膜貫通ドメインを、場合によっては前記細胞質ドメインとともに欠損している。好ましくは、前記膜貫通および細胞質ドメインは両方とも存在しない。
幾つかの実施形態では、本発明の第1の態様の可溶性ポリペプチドは、ホモ多量体、具体的にはホモ二量体もしくはホモ三量体、より具体的にはホモ三量体であるか、またはそれらを形成可能である。前記S171C/G224置換を含有する前記TNF-αムテインは、ジスルフィド結合したホモ三量体複合体を形成できることが好ましい。
ある実施形態では、本発明の第1の態様の可溶性ポリペプチドにおいてシステイン残基により置換される表面に露出した、外向きのアミノ酸残基は、前記TNFSFまたはTNF様リガンドの天然に存在するアミノ酸残基である。例えば、前記TNFSFまたはTNF様リガンドが、前記TNFSFまたはTNF様リガンドにとって内在性ではない第2ポリペプチドを含む融合タンパク質である場合、前記置換は前記TNFSFまたはTNF様リガンドの天然に存在するアミノ酸残基で生じ、かつ該第2ポリペプチドのアミノ酸残基では生じない。
第2の態様では、本発明は、本発明の第1の態様のポリペプチド(例えば、天然に存在するTNFSFまたはTNF様リガンドに対して、システイン残基で置換されている少なくとも1つの表面に露出した、外向きのアミノ酸残基を有するTNFSFまたはTNF様リガンドムテイン)をコードする核酸分子を特徴とする。他の実施形態では、前記核酸分子は、少なくとも1つ(および好ましくは少なくとも2つ)のシステイン置換または挿入(先に記載した通り)を有し、かつ配列番号1〜735のいずれか1つ、またはその生物学的に活性な断片と少なくとも50％(例えば、少なくとも60％、70％、75％、80％、85％、90％、92％、95％、97％、99％、または100％)の配列同一性を有するTNFSFまたはTNF様リガンドムテインをコードし、ここで前記核酸分子によりコードされる該TNFSFまたはTNF様リガンドムテインの少なくとも1つの表面に露出した、外向きのアミノ酸残基は、天然に存在するTNFSFまたはTNF様リガンドには存在しないシステイン残基である。幾つかの実施形態では、前記核酸分子によりコードされる前記TNFSFまたはTNF様リガンドムテインの少なくとも2つの表面に露出した、外向きのアミノ酸残基は、天然に存在するTNFSFまたはTNF様リガンドには存在しないシステイン残基である。他の実施形態では、前記核酸分子によりコードされる前記TNFSFまたはTNF様リガンドムテインの少なくとも3つまたは4つの表面に露出した、外向きのアミノ酸残基は、天然に存在するTNFSFまたはTNF様リガンドには存在しないシステイン残基である。さらに他の実施形態では、前記核酸分子は、前記TNFSFまたはTNF様リガンドの膜貫通ドメインを、場合によっては細胞質ドメインとともに欠損した可溶性TNFSFまたはTNF様リガンドムテインをコードしている。好ましくは、前記核酸分子は、前記TNFSFまたはTNF様リガンドの前記膜貫通および細胞質ドメインを欠損している可溶性TNFSFまたはTNF様リガンドムテインをコードしている。ある実施形態では、前記核酸分子は、S171CおよびG224C置換を含有するTNF-αムテインをコードしており、好ましくは該TNF-αムテインはTNF-αの前記膜貫通および細胞質ドメインを欠損している。
幾つかの実施形態では、前記核酸分子は、ベクター、細胞(例えば、ヒトもしくは非ヒト細胞であり、該細胞はin vivoもしくはex vivoのものでありうる)、または動物(例えば、ヒトもしくは非ヒト動物)に存在する。幾つかの実施形態では、前記ベクターは、アデノウイルスベクター(例えば、Ad5、Ad26、Ad34、Ad35)、ポックスウイルスベクター、ワクシニアウイルスベクター(例えば、改変ワクシニアウイルスアンカラ(MVA))、レトロウイルスベクター、アデノ随伴ウイルスベクター、またはアルファウイルスベクターである。
第3の態様では、本発明は、本発明の第1の態様のポリペプチド(例えば、前記TNFSFまたはTNF様リガンドの前記膜貫通および細胞質ドメインの一方または両方を欠損している本発明の第1の態様の可溶性ポリペプチド)の治療上有効な量を含む医薬組成物を特徴とする。
第4の態様では、本発明は、本発明の第1の態様のポリペプチド(例えば、前記TNFSFまたはTNF様リガンドの前記膜貫通および細胞質ドメインの一方または両方を欠損している本発明の第1の態様の可溶性ポリペプチド)をコードする本発明の第2の態様の核酸分子を含む医薬組成物を特徴とする。
好ましくは、本発明の第3および第4の態様では、前記可溶性ポリペプチドはTNF-αの全部または一部を含み、ここで前記可溶性ポリペプチドは、配列番号1のアミノ酸配列または少なくとも1つ(および好ましくは少なくとも2つ)のシステイン置換もしくは挿入(先に記載した通り)を有し、かつ配列番号1と少なくとも50〜99％の配列同一性を有するアミノ酸配列に対して、次のシステイン置換、すなわちR82C、T83C、P84C、S85C、H91C、N110C、G130C、L131C、Y135C、N168C、L169C、L170C、S171C、A172C、I173C、K174C、S175C、Q178C、E180C、W190C、Y191C、P193C、G198C、V199C、F200C、Q201C、S223C、G224C、およびQ225Cのうちの1つ以上(例えば、1つ、2つ、3つ、または4つ)、あるいは配列番号1のアミノ酸配列または少なくとも1つ(および好ましくは少なくとも2つ)のシステイン置換もしくは挿入(先に記載した通り)を有し、かつ配列番号1と少なくとも50〜99％の配列同一性を有するアミノ酸配列に対して、次のシステイン置換対、すなわちG130C/S85C、L131C/T83C、L131C/P84C、S171C/G224C、N168C/S223C、N168C/G224C、L169C/S223C、L169C/G224C、L170C/S223C、S171C/S223C、S171C/Q225C、A172C/P193C、I173C/Y191C、I173C/P193C、K174C/Y191C、S175C/W190C、S175C/Y191C、Q178C/E180C、G198C/Y135C、V199C/H91C、F200C/H91C、F200C/N110C、Q201C/R82C、およびQ201C/T83Cのうちの1つ以上(好ましくは1つ)を含有する。ある実施形態では、前記可溶性ポリペプチドは、配列番号1のアミノ酸配列または配列番号1と少なくとも50〜99％の配列同一性を有するアミノ酸配列に対して、S171Cおよび／またはG224Cを含有する。
前記医薬組成物は、1つ以上の製薬上許容される担体または賦形剤を含んでいてもよい。
第5の態様では、本発明は、本発明の第1の態様のポリペプチド(例えば、可溶性ポリペプチド)、本発明の第2の態様の核酸分子(例えば、可溶性ポリペプチドをコードする核酸分子)、または本発明の第3もしくは第4の態様の医薬組成物を、その必要がある被験体に投与することを含む医学療法の方法を特徴とする。ある実施形態では、前記被験体は、自己免疫疾患、神経疾患、癌、感染症、代謝性疾患(例えば、糖尿病)、黄斑疾患(例えば、黄斑変性症)、筋萎縮、流産に関連する疾患、脈管疾患(例えば、粥状硬化症)、骨量減少に関連する疾患(すなわち、閉経の結果としての骨量減少、骨粗鬆症)、アレルギー、血液疾患(例えば、血友病)、後天性免疫不全症候群(AIDS)、筋骨格障害、増殖受容体に関連する疾患、もしくは肥満症の治療を必要としているか、組織もしくは臓器の修復もしくは再生を必要としているか、または臓器移植と併せて行なう治療(例えば、臓器移植に起因する合併症(例えば、移植片対宿主病(GVHD)および移植片拒絶反応)を治療もしくは軽減するための治療)を必要としている。他の実施形態では、前記被験体に、TNF-αムテイン、リンホトキシンムテイン(例えば、LT-αムテインおよびLT-βムテイン)、CD40Lムテイン、CD70ムテイン、CD153ムテイン、OX40Lムテイン、FasLムテイン、4-1BBリガンドムテイン、TRAILムテイン、RANKLムテイン、TWEAKムテイン、APRILムテイン、BLysムテイン、LIGHTムテイン、TL1ムテイン、GITRL(TL6としても知られている)ムテイン、EDAムテイン(例えば、EDA-A1ムテインおよびEDA-A2ムテイン)、ならびにアディポネクチンムテインからなる群より選択される本発明の第1の態様のTNFSFもしくはTNF様リガンドムテイン、または該TNFSFもしくはTNF様リガンドムテインをコードする本発明の第2の態様の核酸分子を投与する。ある実施形態では、前記被験体に、TNF-αムテインまたはTRAILムテインを投与する。さらに他の実施形態では、前記ポリペプチドは、前記TNFSFまたはTNF様リガンドの前記膜貫通および細胞質ドメインの一方または両方を欠損している(好ましくは、前記膜貫通および細胞質ドメインは両方とも存在しない)可溶性ポリペプチドである。他の実施形態では、前記被験体に投与する前記TNFSFまたはTNF様リガンドムテインは、少なくとも1つ(および好ましくは少なくとも2つ)のシステイン置換または挿入(先に記載した通り)を有し、かつ配列番号1〜735のいずれか1つ、またはその生物学的に活性な断片と少なくとも50％(例えば、少なくとも60％、70％、75％、80％、85％、90％、92％、95％、97％、99％、または100％、好ましくは100％)の配列同一性を有し、かつ前記TNFSFまたはTNF様リガンドの表面に露出した、外向きのアミノ酸残基のシステイン残基による少なくとも1つの置換または挿入(例えば、2つ、3つ、または4つの置換または挿入、好ましくは2つの置換または挿入)を含む。
幾つかの実施形態では、前記被験体は、自己免疫疾患(例えば、インスリン依存性糖尿病、円形脱毛症、強直性脊椎炎、抗リン脂質抗体症候群、アジソン病、溶血性貧血、自己免疫性肝炎、ベーチェット病、水疱性類天疱瘡、心筋症、セリアックスプルー皮膚炎(Celiac Sprue-Dermatitis)、慢性疲労免疫不全症候群(CFIDS)、慢性炎症性脱髄性多発ニューロパチー、チャーグ・ストラウス症候群、瘢痕性類天疱瘡、限局性強皮症(クレスト症候群)、寒冷凝集素症、クローン病、円板状ループス、本態性混合性クリオグロブリン血症、繊維筋痛症-繊維筋炎、グレーヴス病、ギラン・バレー症候群、橋本甲状腺炎、甲状腺機能低下症、炎症性腸疾患、自己免疫性リンパ増殖症候群(ALPS)、特発性肺線維症、特発性血小板減少性紫斑病(ITP)、IgA腎症、若年性関節炎、扁平苔癬、狼瘡、メニエール病、混合性結合組織病、多発性硬化症、重症筋無力症、尋常性天疱瘡、悪性貧血、結節性多発動脈炎、多発性軟骨炎、多腺性症候群、リウマチ性多発筋痛、多発性筋炎、皮膚筋炎、原発性無ガンマグロブリン血症、原発性胆汁性肝硬変、乾癬、レイノー現象、ライター症候群、リウマチ熱、関節リウマチ、サルコイドーシス、硬皮症、シェーグレン症候群、全身強直症候群、高安動脈炎、側頭動脈炎／巨細胞動脈炎、潰瘍性大腸炎、ブドウ膜炎、脈管炎、白斑、およびウェゲナー肉芽腫からなる群より選択される自己免疫疾患)を有する。好ましくは、前記自己免疫疾患は、インスリン依存性糖尿病、関節リウマチ、シェーグレン症候群、多発性硬化症、またはクローン病である。特に、前記自己免疫疾患はインスリン依存性糖尿病である。ある実施形態では、自己免疫疾患の治療を受けている前記被験体に、TNF-αムテイン(例えば、前記S171C/G224C置換を有する可溶性TNF-αムテイン)を投与する。好ましくは、前記自己免疫疾患がインスリン依存性糖尿病、関節リウマチ、シェーグレン症候群、多発性硬化症、またはクローン病である場合、前記被験体に、本発明のTNF-αムテイン(例えば、第1の態様のTNF-αムテイン、またはTNF-αムテインをコードする第2の態様の核酸分子、または第3もしくは第4の態様の医薬組成物)を投与する。特に、前記TNF-αムテインは前記膜貫通および細胞質ドメインの一方または両方を欠損した可溶性ポリペプチドであり、好ましくは、前記膜貫通および細胞質ドメインは両方とも存在しない。他の実施形態では、前記TNF-αムテインは前記S171C/G224C置換を有し、かつ可溶性ポリペプチド(例えば、前記膜貫通および細胞質ドメインの一方または両方を欠損しており、好ましくは、前記膜貫通および細胞質ドメインは両方とも存在しない)である。ある実施形態では、前記TNF-αムテインは前記S171C/G224C置換を有し、かつ可溶性ポリペプチド(例えば、前記膜貫通および細胞質ドメインの一方または両方を欠損しており、好ましくは、前記膜貫通および細胞質ドメインは両方とも存在しない)であり、かつ治療すべき疾患はインスリン依存性糖尿病、関節リウマチ、シェーグレン症候群、多発性硬化症、またはクローン病である(特に、前記疾患はインスリン依存性糖尿病である)。
幾つかの実施形態では、前記被験体は、組織または臓器の修復または再生を必要としている。幾つかの実施形態では、前記の組織または臓器は、膵臓、唾液腺、下垂体、腎臓、心臓、肺、造血器系、脳神経、心臓、大動脈を含む血管、嗅腺、耳、神経、頭部の構成物、眼、胸腺、舌、骨、肝臓、小腸、大腸、消化管、肺、脳、皮膚、末梢神経系、中枢神経系、脊髄、乳房、胚構成物、胚、または精巣である。他の実施形態では、前記被験体は、細胞移植を必要としている。幾つかの実施形態では、細胞移植に使用する細胞は、哺乳動物(例えば、ヒト)の臓器から単離した細胞、例えば、ランゲルハンス島由来のインスリン分泌細胞、ニューロン、線維芽細胞、幹細胞(例えば、骨髄幹細胞)、筋細胞、筋芽細胞、および心臓細胞であってもよい。幾つかの実施形態では、前記被験体に、TNF-αムテイン、リンホトキシンムテイン(例えば、LT-αムテインおよびLT-βムテイン)、CD40Lムテイン、CD70ムテイン、CD153ムテイン、OX40Lムテイン、FasLムテイン、4-1BBリガンドムテイン、TRAILムテイン、RANKLムテイン、TWEAKムテイン、APRILムテイン、BLysムテイン、LIGHTムテイン、TL1ムテイン、GITRL(TL6としても知られている)ムテイン、EDAムテイン(例えば、EDA-A1ムテインおよびEDA-A2ムテイン)、ならびにアディポネクチンムテインからなる群より選択される本発明の第1の態様のTNFSFもしくはTNF様リガンドムテイン、または該TNFSFもしくはTNF様リガンドムテインをコードする本発明の第2の態様の核酸分子を投与する。好ましくは、前記被験体に、本発明のTNF-αムテイン(例えば、第1の態様のTNF-αムテイン、またはTNF-αムテインをコードする第2の態様の核酸分子、または第3もしくは第4の態様の医薬組成物)を投与する。特に、前記TNF-αムテインは、前記膜貫通および細胞質ドメインの一方または両方を欠損した可溶性ポリペプチドであり、好ましくは、前記膜貫通および細胞質ドメインは両方とも存在しない。他の実施形態では、前記TNF-αムテインは前記S171C/G224C置換を有し、かつ可溶性ポリペプチド(例えば、前記膜貫通および細胞質ドメインの一方または両方を欠損しており、好ましくは、前記膜貫通および細胞質ドメインは両方とも存在しない)である。
幾つかの実施形態では、前記被験体は癌を有する。幾つかの実施形態では、前記癌は固形腫瘍癌または造血器癌(hematopoietic cancer)であってもよい。幾つかの実施形態では、前記癌は、膀胱癌、膵臓癌、子宮頸癌、肺癌、肝臓癌、卵巣癌、結腸癌、胃癌、ウイルス誘発癌、神経芽腫、乳癌、前立腺癌、腎癌、白血病、肉腫、癌腫、非小細胞肺癌、非ホジキンリンパ腫、急性骨髄性白血病(AML)、慢性リンパ球性白血病(CLL)、B細胞性慢性リンパ球性白血病(B-CLL)、多発性骨髄腫(MM)、赤白血病、腎細胞癌、軟部組織肉腫、黒色腫、星状細胞腫、乏突起星細胞腫、骨の癌、脳の癌、消化管癌、噴門癌、子宮癌、頭頚部癌、胆嚢癌、喉頭癌、口唇および口腔の癌、眼の癌、大腸癌、精巣癌、咽頭癌、急性リンパ芽球性白血病(ALL)、慢性骨髄性白血病(CML)、副腎皮質癌、AIDS関連リンパ腫、原発性CNSリンパ腫、肛門癌、虫垂癌、非定型奇形腫様／横紋筋肉腫様腫瘍、基底細胞癌、胆管癌、肝外癌、ユーイング肉腫ファミリー、骨肉腫および悪性線維性組織球腫、中枢神経系胚芽腫、中枢神経系胚細胞腫瘍、頭蓋咽頭腫、上衣腫、気管支腫瘍、バーキットリンパ腫、カルチノイド腫瘍、原発性リンパ腫、脊索腫、慢性骨髄増殖性腫瘍、肝外非浸潤性乳管癌(DCIS)、子宮内膜癌、食道癌、鼻腔神経芽細胞腫、頭蓋外胚細胞腫瘍、性腺外胚細胞腫瘍、卵管癌、骨の線維性組織球腫、消化管カルチノイド腫瘍、消化管間質腫瘍(GIST)、精巣性胚細胞腫瘍、妊娠性絨毛性疾患、神経膠腫、小児脳幹神経膠腫、毛髪様細胞白血病、肝細胞癌、ランゲルハンス細胞組織球症、ホジキンリンパ腫、下咽頭癌、膵島細胞腫瘍、膵神経内分泌腫瘍、ウィルムス腫瘍および他の小児腎腫瘍、ランゲルハンス細胞組織球症、小細胞肺癌、皮膚T細胞性リンパ腫、眼内黒色腫、メルケル細胞癌、中皮腫、転移性扁平上皮性頸部癌、正中腺管癌(midline tract carcinoma)、多発性内分泌腫瘍症候群、骨髄異形成症候群、鼻腔および副鼻腔の癌、鼻咽腔癌、上皮性卵巣癌、胚細胞性卵巣癌、低悪性度の卵巣癌、乳頭腫症、傍神経節腫、副甲状腺癌、陰茎癌、咽頭癌、褐色細胞腫、下垂体腫瘍、胸膜肺芽腫、原発性腹膜癌、直腸癌、網膜芽細胞腫、横紋筋肉腫、唾液腺癌、カポジ肉腫、セザリー症候群、小腸癌、胸腺腫および胸腺癌、甲状腺癌、腎盂および尿管の移行上皮癌、尿道癌、子宮内膜子宮癌、子宮肉腫、膣癌、外陰癌、ならびにワルデンシュトレーム・マクログロブリン血症から選択される。好ましくは、前記被験体に、前記癌を治療するために本発明のTNF-αムテイン(例えば、第1の態様のTNF-αムテイン、またはTNF-αムテインをコードする第2の態様の核酸分子、または第3もしくは第4の態様の医薬組成物)を投与する。特に、前記TNF-αムテインは前記膜貫通および細胞質ドメインの一方または両方を欠損した可溶性ポリペプチドであり、好ましくは、前記膜貫通および細胞質ドメインは両方とも存在しない。他の実施形態では、前記被験体に、前記癌を治療するために本発明(例えば、本発明の第1、第2、第3、および第4の態様)のTRAILムテインを投与する。前記方法は、1つ以上の化学療法剤、免疫療法剤、または放射線を前記被験体に投与することをさらに含んでいてもよい。
幾つかの実施形態では、前記化学療法剤は、カンプトテシン、シスプラチン、カルボプラチン、オキサリプラチン、ブレオマイシン、マイトマイシンC、カリケアマイシン、メイタンシノイド、ゲルダナマイシン、ドキソルビシン、イダルビシン、ダウノルビシン、エピルビシン、ブスルファン、カルムスチン(BCNU)、ロムスチン(CCNU)、セムスチン、サリドマイド、レナリドマイド、メトトレキサート、アザチオプリン、6-メルカプトプリン、フルダラビン、5-アザシチジン、ペントスタチン(2'-デオキシコホルマイシン)、シタラビン(シトシンアラビノシド)、ゲムシタビン、5-フルオロウラシル、ヒドロキシ尿素、エレスクロモル、エトポシド、テニポシド、アムサクリン、トポテカン、イリノテカン、クロラムブシル、シクロホスファミド、イフォスファミド、メルファラン、ボルテゾミブ、ビンクリスチン、ビンブラスチン、ビノレルビン、パクリタキセル、ドセタキセル、アムホテリシンB、リファンピシン、ペンタミジン、シクロスポリンA、タクロリムス(FK506)、シロリムス(ラパマイシン)、エベロリムス、テムシロリムス、ゾタロリムス、およびバイオリムスからなる群より選択される。
幾つかの実施形態では、前記免疫療法剤は、抗TNF受容体スーパーファミリーアゴニスト抗体、抗TNF受容体スーパーファミリーアンタゴニスト抗体、抗CTLA-4剤、抗PD-1剤、抗PD-L1剤、抗PD-L2剤、TNF-α架橋剤、TRAIL架橋剤、CD27剤、CD30剤、CD40剤、4-1BB剤、GITR剤、OX40剤、TRAILR1剤、TRAILR2剤、TWEAKR剤、および、例えば、Mahoneyら、Cancer Immunotherapy 14：561〜584、2015(その全内容は参照により本明細書中に組み込まれるものとする)の表1に記載されている免疫学的標的を対象とする薬剤からなる群より選択される。例えば、免疫学的標的4-1BBリガンドを抗4-1BBリガンド抗体で標的化してもよく、免疫学的標的OX40Lを抗OX40L抗体で標的化してもよく、免疫学的標的GITRを抗GITR抗体で標的化してもよく、免疫学的標的CD27を抗CD27抗体で標的化してもよく、免疫学的標的TL1Aを抗TL1A抗体で標的化してもよく、免疫学的標的CD40Lを抗CD40L抗体で標的化してもよく、免疫学的標的LIGHTを抗LIGHT抗体で標的化してもよく、免疫学的標的BTLAを抗BTLA抗体で標的化してもよく、免疫学的標的LAG3を抗LAG3抗体で標的化してもよく、免疫学的標的TIM3を抗TIM3抗体で標的化してもよく、免疫学的標的Singlecsを抗Singlecs抗体で標的化してもよく、免疫学的標的ICOSリガンドを抗ICOSリガンド抗体で標的化してもよく、免疫学的標的B7-H3を抗B7-H3抗体で標的化してもよく、免疫学的標的B7-H4を抗B7-H4抗体で標的化してもよく、免疫学的標的VISTAを抗VISTA抗体で標的化してもよく、免疫学的標的TMIGD2を抗TMIGD2抗体で標的化してもよく、免疫学的標的BTNL2を抗BTNL2抗体で標的化してもよく、免疫学的標的CD48を抗CD48抗体で標的化してもよく、免疫学的標的KIRを抗KIR抗体で標的化してもよく、免疫学的標的LIRを抗LIR抗体で標的化してもよく、免疫学的標的ILTを抗ILT抗体で標的化してもよく、免疫学的標的NKG2Dを抗NKG2D抗体で標的化してもよく、免疫学的標的NKG2Aを抗NKG2A抗体で標的化してもよく、免疫学的標的MICAを抗MICA抗体で標的化してもよく、免疫学的標的MICBを抗MICB抗体で標的化してもよく、免疫学的標的CD244を抗CD244抗体で標的化してもよく、免疫学的標的CSF1Rを抗CSF1R抗体で標的化してもよく、免疫学的標的IDOを抗IDO抗体で標的化してもよく、免疫学的標的TGFβを抗TGFβ抗体で標的化してもよく、免疫学的標的CD39を抗CD39抗体で標的化してもよく、免疫学的標的CD73を抗CD73抗体で標的化してもよく、免疫学的標的CXCR4を抗CXCR4抗体で標的化してもよく、免疫学的標的CXCL12を抗CXCL12抗体で標的化してもよく、免疫学的標的SIRPAを抗SIRPA抗体で標的化してもよく、免疫学的標的CD47を抗CD47抗体で標的化してもよく、免疫学的標的VEGFを抗VEGF抗体で標的化してもよく、また免疫学的標的ニューロピリンを抗ニューロピリン抗体で標的化してもよい(例えば、Mahoneyらの表1を参照されたい)。
幾つかの実施形態では、放射線は、細胞の正常に機能する能力が制限されるように該細胞に十分な損傷を誘発するため、または細胞を完全に破壊するための、指向性(directed)ガンマ線またはベータ線の利用を含む。
幾つかの実施形態では、前記被験体は神経疾患を有する。幾つかの実施形態では、前記神経疾患は、脳腫瘍、脳転移、統合失調症、てんかん、筋萎縮性側索硬化症(ALS)、パーキンソン病、アルツハイマー病、ハンチントン病、および卒中から選択される。好ましくは、前記神経疾患は、筋萎縮性側索硬化症(ALS)、パーキンソン病、またはアルツハイマー病である。幾つかの実施形態では、前記被験体に、TNF-αムテイン、リンホトキシンムテイン(例えば、LT-αムテインおよびLT-βムテイン)、CD40Lムテイン、CD70ムテイン、CD153ムテイン、OX40Lムテイン、FasLムテイン、4-1BBリガンドムテイン、TRAILムテイン、RANKLムテイン、TWEAKムテイン、APRILムテイン、BLysムテイン、LIGHTムテイン、TL1ムテイン、GITRL(TL6としても知られている)ムテイン、EDAムテイン(例えば、EDA-A1ムテインおよびEDA-A2ムテイン)、ならびにアディポネクチンムテインからなる群より選択される本発明の第1の態様のTNFSFもしくはTNF様リガンドムテイン、または該TNFSFもしくはTNF様リガンドムテインをコードする本発明の第2の態様の核酸分子を投与する。好ましくは、前記被験体に、本発明のTNF-αムテイン(例えば、第1の態様のTNF-αムテイン、またはTNF-αムテインをコードする第2の態様の核酸分子、または第3もしくは第4の態様の医薬組成物)を投与する。特に、前記TNF-αムテインは前記膜貫通および細胞質ドメインの一方または両方を欠損した可溶性ポリペプチドであり、好ましくは、前記膜貫通および細胞質ドメインは両方とも存在しない。他の実施形態では、前記TNF-αムテインは前記S171C/G224C置換を有し、かつ可溶性ポリペプチド(例えば、前記膜貫通および細胞質ドメインの一方または両方を欠損しており、好ましくは、前記膜貫通および細胞質ドメインは両方とも存在しない)である。ある実施形態では、前記TNF-αムテインは前記S171C/G224C置換を有し、かつ可溶性ポリペプチド(例えば、前記膜貫通および細胞質ドメインの一方または両方を欠損しており、好ましくは、前記膜貫通および細胞質ドメインは両方とも存在しない)であり、かつ前記疾患が筋萎縮性側索硬化症(ALS)、パーキンソン病、またはアルツハイマー病である。
幾つかの実施形態では、前記方法は、TNF-αの全部または一部を含む前記ポリペプチドの治療上有効な量を含む医薬組成物を投与することを含む。特に、前記ポリペプチドは、配列番号1のアミノ酸配列(または少なくとも1つ(および好ましくは少なくとも2つ)のシステイン置換もしくは挿入(先に記載した通り)を有し、かつ配列番号1と少なくとも50％(例えば、少なくとも60％、70％、75％、80％、85％、90％、92％、95％、97％、99％、もしくは100％)の配列同一性を有するアミノ酸配列)に対して、次のシステイン置換、すなわちR82C、T83C、P84C、S85C、H91C、N110C、G130C、L131C、Y135C、N168C、L169C、L170C、S171C、A172C、I173C、K174C、S175C、Q178C、E180C、W190C、Y191C、P193C、G198C、V199C、F200C、Q201C、S223C、G224C、およびQ225Cのうちの1つ以上(例えば、1つ、2つ、3つ、または4つ)を有するTNF-αの全部または一部を含むTNF-αムテインである。ある実施形態では、前記TNF-αムテインは、膜貫通ドメインを、場合によっては細胞質ドメインとともに欠損した可溶性ポリペプチドであり、好ましくは、該膜貫通および細胞質ドメインは両方とも存在しない。
他の実施形態では、前記ポリペプチドは、配列番号1のアミノ酸配列(または少なくとも1つ(および好ましくは少なくとも2つ)のシステイン置換もしくは挿入(先に記載した通り)を有し、かつ配列番号1と少なくとも50％(例えば、少なくとも60％、70％、75％、80％、85％、90％、92％、95％、97％、99％、もしくは100％)の配列同一性を有するアミノ酸配列)に対して、次のシステイン置換対、すなわちG130C/S85C、L131C/T83C、L131C/P84C、S171C/G224C、N168C/S223C、N168C/G224C、L169C/S223C、L169C/G224C、L170C/S223C、S171C/S223C、S171C/Q225C、A172C/P193C、I173C/Y191C、I173C/P193C、K174C/Y191C、S175C/W190C、S175C/Y191C、Q178C/E180C、G198C/Y135C、V199C/H91C、F200C/H91C、F200C/N110C、Q201C/R82C、およびQ201C/T83Cのうちの1つ以上(好ましくは1つ)を有するTNF-αの全部または一部を含むTNF-αムテインである。特に、前記TNF-αムテインは前記膜貫通および細胞質ドメインの一方または両方を欠損した可溶性ポリペプチドであり、好ましくは、前記膜貫通および細胞質ドメインは両方とも存在しない。
幾つかの実施形態では、前記方法は、配列番号1のアミノ酸配列(または少なくとも1つ(および好ましくは少なくとも2つ)のシステイン置換もしくは挿入(先に記載した通り)を有し、かつ配列番号1と少なくとも50％(例えば、少なくとも60％、70％、75％、80％、85％、90％、92％、95％、97％、99％、もしくは100％)の配列同一性を有するアミノ酸配列)に対して、次のシステイン置換、すなわちR82C、T83C、P84C、S85C、H91C、N110C、G130C、L131C、Y135C、N168C、L169C、L170C、S171C、A172C、I173C、K174C、S175C、Q178C、E180C、W190C、Y191C、P193C、G198C、V199C、F200C、Q201C、S223C、G224C、およびQ225Cのうちの1つ以上(例えば、1つ、2つ、3つ、または4つ)を有するTNF-αの全部または一部を含むTNF-αムテインをコードする核酸分子を含む医薬組成物の投与を含む。特に、前記核酸分子によりコードされる前記TNF-αムテインは前記膜貫通および細胞質ドメインの一方または両方を欠損した可溶性ポリペプチドであり、好ましくは、前記膜貫通および細胞質ドメインは両方とも存在しない。
他の実施形態では、前記核酸分子は、配列番号1のアミノ酸配列(または少なくとも1つ(および好ましくは少なくとも2つ)のシステイン置換もしくは挿入(先に記載した通り)を有し、かつ配列番号1と少なくとも50％(例えば、少なくとも60％、70％、75％、80％、85％、90％、92％、95％、97％、99％、もしくは100％)の配列同一性を有するアミノ酸配列)に対して、次のシステイン置換対、すなわちG130C/S85C、L131C/T83C、L131C/P84C、S171C/G224C、N168C/S223C、N168C/G224C、L169C/S223C、L169C/G224C、L170C/S223C、S171C/S223C、S171C/Q225C、A172C/P193C、I173C/Y191C、I173C/P193C、K174C/Y191C、S175C/W190C、S175C/Y191C、Q178C/E180C、G198C/Y135C、V199C/H91C、F200C/H91C、F200C/N110C、Q201C/R82C、およびQ201C/T83Cのうちの1つ以上(好ましくは1つ)を有するTNF-αの全部または一部を含むTNF-αムテインをコードする。特に、前記TNF-αムテインは前記膜貫通および細胞質ドメインの一方または両方を欠損した可溶性ポリペプチドであり、好ましくは、前記膜貫通および細胞質ドメインは両方とも存在しない。
ある実施形態では、前記核酸分子は、前記S171C/G224C置換を有するTNF-αの全部または一部を含むTNF-αムテインをコードする。特に、前記核酸分子によりコードされる前記TNF-αムテインは前記膜貫通および細胞質ドメインの一方または両方を欠損した可溶性ポリペプチドであり、好ましくは、前記膜貫通および細胞質ドメインは両方とも存在しない。
前記方法はさらに、1つ以上の免疫療法剤を、癌免疫療法に関して本明細書中に記載したTNF-αムテインの治療上有効な量を含む医薬組成物と組み合わせて投与することを含んでいてもよい。幾つかの実施形態では、前記癌免疫療法における前記免疫療法剤は、抗TNF受容体スーパーファミリーアゴニスト抗体、抗TNF受容体スーパーファミリーアンタゴニスト抗体、抗CTLA-4剤、抗PD-1剤、抗PD-L1剤、抗PD-L2剤、TNF-α架橋剤、CD27剤、CD30剤、CD40剤、4-1BB剤、GITR剤、OX40剤、TRAILR1剤、TRAILR2剤、TWEAKR剤、および、例えば、Mahoneyらの表1に記載されている免疫学的標的を対象とする薬剤からなる群より選択される。
例えば、免疫学的標的4-1BBリガンドを抗4-1BBリガンド抗体で標的化してもよく、免疫学的標的OX40Lを抗OX40L抗体で標的化してもよく、免疫学的標的GITRを抗GITR抗体で標的化してもよく、免疫学的標的CD27を抗CD27抗体で標的化してもよく、免疫学的標的TL1Aを抗TL1A抗体で標的化してもよく、免疫学的標的CD40Lを抗CD40L抗体で標的化してもよく、免疫学的標的LIGHTを抗LIGHT抗体で標的化してもよく、免疫学的標的BTLAを抗BTLA抗体で標的化してもよく、免疫学的標的LAG3を抗LAG3抗体で標的化してもよく、免疫学的標的TIM3を抗TIM3抗体で標的化してもよく、免疫学的標的Singlecsを抗Singlecs抗体で標的化してもよく、免疫学的標的ICOSリガンドを抗ICOSリガンド抗体で標的化してもよく、免疫学的標的B7-H3を抗B7-H3抗体で標的化してもよく、免疫学的標的B7-H4を抗B7-H4抗体で標的化してもよく、免疫学的標的VISTAを抗VISTA抗体で標的化してもよく、免疫学的標的TMIGD2を抗TMIGD2抗体で標的化してもよく、免疫学的標的BTNL2を抗BTNL2抗体で標的化してもよく、免疫学的標的CD48を抗CD48抗体で標的化してもよく、免疫学的標的KIRを抗KIR抗体で標的化してもよく、免疫学的標的LIRを抗LIR抗体で標的化してもよく、免疫学的標的ILTを抗ILT抗体で標的化してもよく、免疫学的標的NKG2Dを抗NKG2D抗体で標的化してもよく、免疫学的標的NKG2Aを抗NKG2A抗体で標的化してもよく、免疫学的標的MICAを抗MICA抗体で標的化してもよく、免疫学的標的MICBを抗MICB抗体で標的化してもよく、免疫学的標的CD244を抗CD244抗体で標的化してもよく、免疫学的標的CSF1Rを抗CSF1R抗体で標的化してもよく、免疫学的標的IDOを抗IDO抗体で標的化してもよく、免疫学的標的TGFβを抗TGFβ抗体で標的化してもよく、免疫学的標的CD39を抗CD39抗体で標的化してもよく、免疫学的標的CD73を抗CD73抗体で標的化してもよく、免疫学的標的CXCR4を抗CXCR4抗体で標的化してもよく、免疫学的標的CXCL12を抗CXCL12抗体で標的化してもよく、免疫学的標的SIRPAを抗SIRPA抗体で標的化してもよく、免疫学的標的CD47を抗CD47抗体で標的化してもよく、免疫学的標的VEGFを抗VEGF抗体で標的化してもよく、また免疫学的標的ニューロピリンを抗ニューロピリン抗体で標的化してもよい(例えば、Mahoneyらの表1を参照されたい)。
第6の態様では、本発明は、本発明の第1の態様のポリペプチドのいずれか1つ(例えば、前記TNFSFまたはTNF様リガンドの前記膜貫通および細胞質ドメインの一方または両方を欠損した第1の態様の可溶性ポリペプチド)を調製する方法を特徴とする。前記方法は、a)前記ポリペプチドをコードするポリヌクレオチドを含有する宿主細胞を提供すること、b)該宿主細胞で前記ポリペプチドを発現させること、および、場合によっては、c)前記ポリペプチドを回収すること、を含む。ある実施形態では、前記宿主細胞を、前記核酸分子を前記宿主細胞に(例えば、形質転換、トランスフェクション、電気穿孔、リン酸カルシウム沈殿、直接マイクロインジェクション、感染等により)組み込むことにより調製する。別の実施形態では、前記宿主細胞は哺乳動物、例えば、ヒトに存在する。前記方法は、治療(例えば、本発明の第5の態様の、前記の疾患または障害のうちの1つ以上の治療)の方法に照らして実施してもよく、その場合、回収ステップc)は実施しない。前記核酸分子は、前記宿主細胞を、前記核酸分子を含有するベクター(例えば、アデノウイルスベクター(例えば、Ad5、Ad26、Ad34、Ad35)、ポックスウイルスベクター、ワクシニアウイルスベクター(例えば、改変ワクシニアウイルスアンカラ(MVA))、レトロウイルスベクター、アデノ随伴ウイルスベクター、またはアルファウイルスベクター)と接触させることにより組み込むことができる。好ましくは、前記ポリペプチドは、多量体、例えば、三量体の形態で発現される。他の実施形態では、前記方法の回収ステップc)は、多量体(例えば、三量体)の形態ではないポリペプチドを除去することを含む。さらに他の実施形態では、前記ポリペプチドは、少なくとも1つ(および好ましくは少なくとも2つ)のシステイン置換または挿入(先に記載した通り)を有し、かつ配列番号1〜735のいずれか1つ、またはその生物学的に活性な断片と少なくとも50％(例えば、少なくとも60％、70％、75％、80％、85％、90％、92％、95％、97％、99％、もしくは100％)の配列同一性を有する可溶性ポリペプチドであり、かつ該可溶性ポリペプチドは、前記膜貫通ドメインの配列を、場合によっては前記細胞質ドメインの配列とともに欠損しており、好ましくは、前記膜貫通および細胞質ドメインは両方とも存在しない。さらに他の実施形態では、前記可溶性ポリペプチドは、少なくとも1つ(および好ましくは少なくとも2つ)のシステイン置換または挿入(先に記載した通り)を有し、かつ配列番号1の配列、またはその生物学的に活性な断片と少なくとも50％(例えば、少なくとも60％、70％、75％、80％、85％、90％、92％、95％、97％、99％、または100％)の配列同一性を有し、かつ前記膜貫通ドメインの配列を、場合によっては前記細胞質ドメインの配列とともに欠損しており、好ましくは、前記膜貫通および細胞質ドメインは両方とも存在しない。ある実施形態では、前記可溶性ポリペプチドは前記S171C/G224C置換を有するTNF-αムテインである。
第7の態様では、本発明は、本発明の第1の態様のポリペプチド(例えば、前記TNFSFまたはTNF様リガンドの前記膜貫通および細胞質ドメインの一方または両方を欠損した第1の態様の可溶性ポリペプチド)を発現する宿主細胞を特徴とする。特に、前記宿主細胞は、前記ポリペプチドをコードする外来核酸分子(例えば、本発明の第2の態様の核酸分子)を含み、その際、該核酸分子は前記宿主細胞で発現される。幾つかの実施形態では、前記核酸分子はベクターに存在する。他の実施形態では、前記宿主細胞はヒトまたは非ヒト細胞である。さらに他の実施形態では、前記宿主細胞は動物(例えば、ヒトまたは非ヒト動物)に存在する。幾つかの実施形態では、前記ベクターは、アデノウイルスベクター(例えば、Ad5、Ad26、Ad34、Ad35)、ポックスウイルスベクター、ワクシニアウイルスベクター(例えば、改変ワクシニアウイルスアンカラ(MVA))、レトロウイルスベクター、アデノ随伴ウイルスベクター、またはアルファウイルスベクターである。
定義
本明細書で使用される「可溶性ポリペプチド」という用語は、TNFSFもしくはTNF様リガンドの細胞外部分を指す。本発明の可溶性ポリペプチドはTNFSFもしくはTNF様リガンドの膜貫通ドメインを欠いており、場合によっては細胞質ドメインも欠いている。好ましくは、可溶性ポリペプチドは膜貫通ドメインおよび細胞質ドメインをいずれも欠いている。可溶性ポリペプチドは、TNFSFもしくはTNF様リガンドの表面に露出した（たとえば外側に面した）アミノ酸残基の、システイン残基による、少なくとも1つのアミノ酸置換を含有する。
本明細書で使用される「表面に露出した」という用語は、TNFSFもしくはTNF様リガンドにおけるアミノ酸の場所もしくは位置を説明するために使用される。表面露出アミノ酸は、TNFSFもしくはTNF様リガンドの細胞外ドメインにある（たとえば、TNFSFもしくはTNF様リガンドのそのドメインは本来、細胞の外側に存在する）。アミノ酸は「外側に面して」いることが好ましく、したがって三次構造にフォールドされたときにアミノ酸は空間的にタンパク質の外表面上に位置する。外側に面したアミノ酸は、第2のTNFSFもしくはTNF様リガンド（たとえば本発明のTNFSFもしくはTNF様リガンド変異タンパク質）上のアミノ酸（たとえば表面露出アミノ酸）と相互作用する（たとえば、ジスルフィド結合などの共有結合をする）ために接近しやすいことが好ましく、したがって2つのタンパク質は、少なくとも2つまたは3つ以上（たとえば少なくとも3つ）の相互作用する（たとえばジスルフィド結合した）モノマーを有する四次構造を形成することができる。
本明細書で使用される「変異タンパク質（ムテイン）」、「TNFSFリガンド変異タンパク質（ムテイン）」もしくは「TNF様リガンド変異タンパク質（ムテイン）」という用語は、野生型残基（システイン以外の残基）（1つもしくは複数）をシステイン残基で置き換えた、少なくとも1つのアミノ酸置換（たとえば、2、3、4、5、または6個のアミノ酸置換；特に2つのアミノ酸置換）、または少なくとも1つのシステイン挿入（たとえば、2、3、4、5、または6個のシステイン挿入；特に2つのシステイン挿入）を有するTNFSFもしくはTNF様リガンドを表す。変異タンパク質は、他のTNFSFもしくはTNF様リガンド、たとえば本発明のTNFSFもしくはTNF様リガンド変異タンパク質、と共有結合して、多量体型を形成することができるが、この多量体型には、少なくとも2つ（たとえば2、3、4、5、6、7、8、9、もしくは10個）の共有結合したTNFSFもしくはTNF様リガンドモノマーを有する形態がある。共有結合（たとえばジスルフィド結合）変異タンパク質は、3つのTNFSFもしくはTNF様リガンドモノマーを含有することが好ましい。各TNFSFもしくはTNF様リガンドモノマーは、少なくとも1つのシステイン残基置換もしくは挿入（特に2つのシステイン残基置換もしくは挿入）を含有しており、それぞれが隣接するTNFSFもしくはTNF様リガンドモノマー上の別のシステイン残基とジスルフィド結合を形成する。たとえば、2つのシステイン置換もしくは挿入を有するTNFSF変異タンパク質は、三量体を形成することができるが、この三量体において、第1のTNFSFリガンド変異タンパク質上の第1のシステイン残基は第2のTNFSF変異タンパク質上の第1のシステイン残基（たとえば、第1のTNFSFリガンド変異タンパク質のシステイン残基と比べて異なるアミノ酸位置にある）とジスルフィド結合を形成し、第1のTNFSFリガンド変異タンパク質上の第2のシステイン残基は第3のTNFSF変異タンパク質上の第1のシステイン残基（たとえば、第1のTNFSFリガンド変異タンパク質の第2のシステイン残基と比べて異なるアミノ酸位置にある）とジスルフィド結合を形成することができる。第2のTNFSF変異タンパク質上の第2のシステイン残基は、第3のTNFSF変異タンパク質上の第2のシステイン残基とジスルフィド結合を形成して三量体を完成することができる。
本明細書で使用される「TNF相同ドメイン」という用語は、C末端細胞外ドメインを表すが、これはTNFSFおよびTNF様リガンドに共通する構造モチーフである。TNF相同ドメインは、TNFSFリガンド間で20-30％のアミノ酸同一性を有しており、受容体との結合に関与する（Bharat, Nature Reviews Immunology 3:745-756, 2003）。
本明細書で使用される「TNFSFリガンド」という用語は、腫瘍壊死因子スーパーファミリー（TNFSF）と構造的に関係のあるリガンドを指す。それぞれのTNFSFリガンドは選択的複合体として体内を移動し、そのそれぞれの受容体と結合して、その生物活性を発揮する。TNFSFリガンドは、細胞増殖、炎症、アポトーシス、形態形成、リンパ組織発生、ならびにTおよびB細胞応答においてさまざまな機能を呈する。ほとんどのTNFSFリガンドは、II型膜貫通タンパク質（細胞外C末端）として合成され、膜内にホモ三量体の形で存在する。こうした膜貫通リガンドは通常、外側の細胞膜からタンパク質分解切断によって遊離され、可溶性TNFSFリガンドとなる。可溶性TNFSFリガンドは単量体としてはあまり活性がなく、したがって、その受容体と結合するために多量体（たとえばホモ三量体）を形成するように、多量体化する必要がある。可溶性TNFSFリガンドは、単量体として体内を循環することができるが、必要に応じて、受容体結合の際に多量体（たとえばホモ三量体）を形成してもよく、したがって、同様に受容体の多量体化を引き起こす。
本明細書で使用される、「TNF様リガンド」は、TNFSFリガンドと類似したフォールディング形態、重要アミノ酸残基の保存、三量体境界面、およびイントロン位置を有するリガンドを指す。TNF様リガンドには、補体1q（C1q）タンパク質ファミリー（TNF関連タンパク質ファミリー）、たとえば、アディポネクチン、マイオネクチン、補体1q腫瘍壊死因子関連タンパク質3（C1QNF3）、およびC1QTNF5がある。
本明細書で使用される「保存的置換」は、側鎖の化学的性質の類似で関連づけられるアミノ酸ファミリーの中で、アミノ酸を別のアミノ酸に置き換えることを指す。遺伝子コードされたアミノ酸は4つのファミリーに分けることができる：酸性（アスパラギン酸、グルタミン酸）；塩基性（リジン、アルギニン、ヒスチジン）；非極性（アラニン、バリン、ロイシン、イソロイシン、プロリン、フェニルアラニン、メチオニン、トリプトファン）；および無電荷極性（グリシン、アスパラギン、グルタミン、システイン、セリン、スレオニン、チロシン）。フェニルアラニン、トリプトファン、およびチロシンは芳香族アミノ酸として一群に分類されることもある。同様に、アミノ酸は以下のグループに分けることもできる：酸性（アスパラギン酸、グルタミン酸）；塩基性（リジン、アルギニン、ヒスチジン）；脂肪族（グリシン、アラニン、バリン、ロイシン、イソロイシン、セリン、スレオニン）、セリンおよびスレオニンは脂肪族-ヒドロキシルとして別に分類されることもある；芳香族（フェニルアラニン、チロシン、トリプトファン）；アミド（アスパラギン、グルタミン）；および含硫（システイン、メチオニン）。
本明細書に記載の「特異的に結合する」という用語は、サンプル（たとえば生体サンプル）中、またはin vivoもしくはex vivoにて、他分子の存在下での、結合部分（たとえば、TNFSFもしくはTNF様リガンド変異タンパク質、TNF-α変異タンパク質など）と標的分子（たとえば、TNFSF受容体、TNFR2など）との選択的結合を表す。結合部分と非標的分子との間で、ある程度の非特異的相互作用が生じる可能性があることは認識されている。とはいえ、特異的結合は、標的分子の特異的認識を介するとして区別することができる。特異的結合は結果として、結合部分（たとえば、TNFSFもしくはTNF様リガンド変異タンパク質、TNF-α変異タンパク質など）と標的分子（たとえば、TNFSF受容体、TNFR2など）との間に、結合部分と非標的分子との間よりも強い結合をもたらす。たとえば、TNFSF変異タンパク質は、他の受容体（たとえば、非TNFSF受容体（非標的分子））よりもTNFSF受容体（標的分子）と特異的に結合することができる。TNFSF変異タンパク質はたとえば、TNFSF受容体に対して、非TNFSF受容体に対するよりも少なくとも2倍高い親和性（たとえば、2、3、4、5、6、7、8、9、10、102-、103-、104-、105-、106-、107-、108-、109-、または1010-倍高い親和性）を有する可能性がある。具体的な例として、TNF-α変異タンパク質は、TNFR1（非標的分子）よりもTNFR2（標的分子）と特異的に結合することができる。TNF-α変異タンパク質はたとえば、TNFR2に対して、TNFR1もしくは他のTNFSF受容体に対するよりも少なくとも2倍高い親和性（たとえば、2、3、4、5、6、7、8、9、10、102-、103-、104-、105-、106-、107-、108-、109-、または1010-倍高い親和性）を有する可能性がある。
本明細書で使用される「アゴニスト」という用語は、細胞において、細胞受容体と相互作用して、生物学的反応、たとえば、刺激性シグナルをもたらす生物活性リガンド、たとえば、タンパク質、核酸、脂質、炭水化物を表す。好ましくは、アゴニストは、細胞（たとえば免疫細胞）上で、TNFSFもしくはTNF様リガンドの特異的受容体と選択的に相互作用することによって細胞（たとえば免疫細胞）を刺激するように作用する、TNFSFおよびTNF様リガンド変異タンパク質を表す。
本明細書で使用される「アンタゴニスト」という用語は、細胞において、細胞受容体と相互作用して、生物学的反応を抑制もしくは縮減する生物活性リガンド、たとえば、タンパク質、核酸、脂質、炭水化物を表す。好ましくは、アンタゴニストは、細胞上でTNFSFもしくはTNF様リガンドの特異的受容体と相互作用することによって細胞（たとえば免疫細胞およびがん細胞）の活動を抑制もしくは縮減するように作用する、TNFSFおよびTNF様リガンド変異タンパク質を表す。
本明細書で使用される「TNFR2特異的アゴニスト」という用語は、細胞において、TNFR2受容体と相互作用して、生物学的反応、たとえば、刺激性シグナルをもたらす生物活性リガンド、たとえば、タンパク質、核酸、脂質、炭水化物を表す。好ましくは、TNFR2特異的アゴニストは、細胞（たとえば免疫細胞）上で、TNFR2受容体と選択的に相互作用することによって細胞（たとえば免疫細胞）を刺激するように作用する、TNF-α変異タンパク質である。たとえば、TNF-α変異タンパク質は、TNFR1（非標的分子）よりもTNFR2（標的分子）と特異的に結合することができる。TNF-α変異タンパク質はたとえば、TNFR2に対して、TNFR1もしくは他のTNFSF受容体に対するよりも少なくとも2倍高い親和性（たとえば、2、3、4、5、6、7、8、9、10、102-、103-、104-、105-、106-、107-、108-、109-、または1010-倍高い親和性）を有する可能性がある。
本明細書で使用される「パーセント（％）配列同一性」という用語は、最大のパーセント配列同一性を達成できるように、必要に応じて、配列をアラインしてギャップを導入した後に、基準配列、たとえば野生型TNFSFリガンド、のアミノ酸（もしくは核酸）残基と同一である、候補配列、たとえばTNFSFリガンド変異タンパク質、のアミノ酸（もしくは核酸）残基のパーセンテージを表す（たとえば、ギャップは、最適なアラインメントが得られるように候補配列および基準配列の一方または両方に導入することができ、比較のために非相同配列を無視することができる）。パーセント配列同一性を求めるためのアラインメントは、当技術分野の範囲に含まれるさまざまな方法で達成することができるが、それはたとえば、一般に公開されているコンピューターソフトウェア、BLAST、ALIGNまたはMegalign (DNASTAR)ソフトウェアなどを使用する。当業者は、比較する配列の全長にわたって最大のアラインメントを達成するために必要とされる任意のアルゴリズムを含めて、アラインメントを調整するために適当なパラメーターを決定することができる。特定の実施形態において、候補配列と比較するためにアラインされた基準配列は、その候補配列が、候補配列の全長にわたって、または候補配列の連続したアミノ酸（もしくは核酸）残基の選択された部分の全域にわたって、50％から100％の配列同一性を示すことを明らかにすることがある。比較目的でアラインされる候補配列の長さは、基準配列の長さの少なくとも30％、たとえば少なくとも40％、たとえば少なくとも50％、60%、70％、80％、90％、または100％である。候補配列内のある位置が、基準配列の対応する位置と同一のアミノ酸残基によって占められているならば、その分子はその位置において同一である。
本明細書に記載の「実質的に同一な」という用語は、2つの配列を最適にアラインしたときに、基準配列と同一のポリペプチドもしくはポリヌクレオチド配列をそれぞれ有するか、または基準配列内の対応する位置において同一である一定のパーセンテージのアミノ酸残基もしくはヌクレオチドをそれぞれ有する、ポリペプチドもしくはポリヌクレオチド配列を表す。たとえば、基準配列に対して「実質的に同一」であるアミノ酸配列は、基準のアミノ酸配列に対して少なくとも50％、60％、70％、75％、80％、85％、90％、95％、96％、97％、98％、99％、または100％の配列同一性を有する。ポリペプチドに関して、比較配列の長さは、概して、少なくとも5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、25、50、75、90、100、150、200、250、300、または350個の連続したアミノ酸、またはそれ以上（たとえば全長配列）となる。核酸については、比較配列の長さは、概して、少なくとも5, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 50, 75, 100, 200, 300, 400, 500, 1000, 2000, 3000, 4000, 5000個またはそれ以上の連続したヌクレオチド（たとえば全長ヌクレオチド配列）となる。配列同一性は、配列解析ソフトウェアをデフォルト設定で使用して評価することができる（たとえば、Sequence Analysis Software Package of the Genetics Computer Group, University of Wisconsin Biotechnology Center, 1710 University Avenue, Madison, WI 53705）。このようなソフトウェアは、さまざまな置換、挿入、欠失、および他の改変に相同性の度数を割り当てることによって、類似した配列をマッチさせることができる。
本明細書で使用される「被験体」という用語は、非霊長類（たとえば、ウシ、ブタ、ウマ、ネコ、イヌ、ラットなど）または霊長類（たとえば、サルまたはヒト）のいずれかを指すが、もっとも好ましいのはヒトである。好ましい実施形態において、被験者は（たとえば、明白な疾患もしくは障害がないか、または診断されていない）正常ヒトである。別の好ましい実施形態において、被験者は、未治療の（たとえば診断されたが治療を受けていない）、または治療を受けた疾患もしくは障害を有するヒトである。
本明細書で使用される「治療上有効な量」という用語は、望ましい治療効果を達成するために有効な量を指す。特に、治療上有効な量は有害な副作用を回避する。
本明細書で使用される「治療」という用語は、有益な、または望ましい結果、たとえば臨床結果などを得るためのアプローチを指す。有益な、または望ましい結果には、1つもしくは複数の症状もしくは異常の軽減または改善；疾患、障害、もしくは異常の範囲の縮小；疾患、障害、もしくは異常の状態の安定化（たとえば悪化しないこと）；疾患、障害、もしくは異常の拡大の防止；疾患、障害、もしくは異常の進行の延引または鈍化；疾患、障害、もしくは異常の改善；および寛解（部分寛解か完全寛解かを問わない）を、検出の可否にかかわらず含めることができるが、それに限定されない。
Bremer et al. (ISRN Oncology 2013:371854, 2013)によるものであって、TNFSFリガンド/TNFSF受容体シグナル伝達の模式図を示す。TNFSFリガンドは典型的には、II型膜貫通タンパク質として生成されるが、こうしたリガンドのほとんどの細胞外ドメインは、プロテアーゼによりタンパク質分解切断されて可溶性の形をとることができる。典型的には、可溶性リガンドは結合活性を保持するが、受容体活性化能の一部またはすべてを失っていた。 図2Aおよび2Bは、共有結合で架橋されたTNF-αモノマーからなるホモ三量体TNF-α変異タンパク質の3Dモデルを示す。図2Aはホモ三量体の上面図を示す。各モノマーはTNF-αのS171C/G224C（配列番号28のアミノ酸77から233まで；PDB ID: 1TNFのS95CおよびG148Cに相当する）二重変異体である。3つのモノマーおよびそれらの表面図を示す。四角で囲んだ区域は2つのモノマー間のCys-Cys結合を強調している。モノマー1のC171はモノマー2のC224と結合している。モノマー1のC224はモノマー3のC171と結合している。モノマー2のC171はモノマー3のC224と結合している。図2Bはホモ三量体の側面図を示す。四角で囲んだ区域はCys-Cys結合の1つを強調するものであって、挿入図はクローズアップ図を示す。残基171および224は、スティックとして表現されている。モデルは、テンプレートとしてマウスTNF（PDB ID: 2TNF）の構造を用いてModeller (v. 9.12)により作製された。画像はプログラムPyMolにより作製された。 図3A、3B、および3Cは、TNF-α変異タンパク質（“TNF07”、共有結合で架橋されたホモ三量体TNF-α変異タンパク質）の分子および機能形質を、野生型可溶性TNF-α（非共有結合で架橋されたホモ三量体TNF-α）と比較して、ゲル上で示し、CD4陽性 制御性T細胞増殖アッセイにおいて示し、さらにヒトCD8陽性T細胞に対する増殖活性物質または自己反応性糖尿病T細胞に対する死滅活性物質として示す。図3Aは野生型可溶性TNF-αおよびTNF-α変異タンパク質のウェスタンブロット上での分析を示す。この分析は、野生型可溶性TNF-αが25 kDの概算分子量を有するモノマーのままであるが、TNF-α変異タンパク質は依然として75 kDの概算分子量を有する安定した三量体であることを明らかにする。図3Bは、野生型可溶性TNF-α、TNF-α変異タンパク質、またはTNFR2抗体アンタゴニストを加えたヒト制御性T細胞（CD4+CD25+FOXP3+）の増殖を、IL-2のみを加えた典型的な増殖と比較して示す。図3Cは、(i)野生型可溶性TNF-α（“(2)”）およびTNF-α変異タンパク質の共有結合ホモ三量体（“(1)”）が、正常な被験者から得られた細胞において用量依存的に、CD8陽性T細胞増殖を誘導することを示す。TNF-α変異タンパク質の共有結合ホモ三量体は、正常細胞において野生型可溶性TNFよりも高い効力を有する。(ii) 野生型可溶性TNF-α（“(2)”）およびTNF-α変異タンパク質の共有結合ホモ三量体（“(1)”）は、6名の1型糖尿病患者から得られた細胞において、用量依存的に、標的とされたCD8陽性自己反応性T細胞の死を誘導し、その後TNF-α高濃度において、残存する健常なCD8陽性T細胞の増殖を誘導する。TNF-α変異タンパク質の共有結合ホモ三量体は、濃度が低いほど、野生型可溶性TNF-αより高い効力を示した。
発明の詳細な説明
TNFSFおよびTNF様リガンドは、それぞれの受容体と結合してシグナル伝達をもたらすために、TNF相同ドメインを共有して、非共有結合ホモ多量体、たとえばホモ三量体を形成する。こうした多量体は天然では、膜結合型TNFSFまたはTNF様リガンドが結合したときに生じる。しかしながら、天然に存在する多量体、たとえば三量体の低濃度における解離は、結果としてリガンドの分解および体内からの排出をもたらす。ここで開示されるのは、TNFSFおよびTNF様リガンドの、共有結合で架橋された（たとえばジスルフィド結合）多量体、たとえば二量体、三量体など（特にTNFSFリガンドTNF-αの三量体）を提供するプラットフォーム技術であって、こうした多量体は安定性の向上、ならびに半減期およびシグナル伝達活性の改善を示す。
本発明のTNFSFおよびTNF様リガンド変異タンパク質（ムテイン）
本発明のTNFSFおよびTNF様リガンド変異タンパク質は、共有結合で架橋された少なくとも2つのTNFSFもしくはTNF様リガンドモノマー（特に、たとえば3つのモノマー）を含有するが、それは、少なくとも2つ（たとえば3つ）のモノマー間のジスルフィド結合形成を進める少なくとも1つのシステイン残基の（置換もしくは挿入による）追加によるものである。TNFSFリガンドは、天然では膜結合型として発現されるが、タンパク質分解により切断することができ、細胞外ドメインは可溶性タンパク質として遊離される。あるいはまた、可溶性型のTNFSFリガンドを当技術分野で公知の組換え法または合成法によって作製することができる。本発明のTNFSFリガンド変異タンパク質には、膜貫通結合型および可溶性型の2つがあり、ホモ多量体（たとえばホモ三量体）を形成している。好ましくは、TNFSFリガンド変異タンパク質は可溶性である（すなわち、膜貫通ドメインを欠き、場合によっては細胞質ドメインも欠いている（膜貫通ドメインおよび細胞質ドメインが両方ともないことが好ましい））。それぞれのTNFSFリガンド変異タンパク質は、少なくとも1つのシステイン残基の置換もしくは挿入を含有するが、好ましくは2つのシステイン残基の置換もしくは挿入を含有する。TNFSFリガンド変異タンパク質の少なくとも1つのシステイン残基が、隣接するTNFSFリガンド変異タンパク質の別のシステイン残基とジスルフィド結合を形成し、それによって2つの変異タンパク質が共有結合で結びつけられると、本発明のTNFSFリガンド変異タンパク質は架橋されて、ホモ多量体を形成することができる。一部の実施形態において、ジスルフィド結合は、一方のTNFSFリガンド変異タンパク質の置換もしくは挿入されたシステイン残基と他のTNFSFリガンド変異タンパク質の置換もしくは挿入されたシステイン残基との間、一方のTNFSFリガンド変異タンパク質の置換もしくは挿入されたシステイン残基と他のTNFSFリガンド変異タンパク質の天然に存在するシステイン残基との間、または2つのTNFSFリガンド変異タンパク質の2つの天然に存在するシステイン残基の間で、形成される可能性がある。他の実施形態において、たとえば非特異的ジスルフィド結合形成によって引き起こされる望ましくない二量体もしくは多量体形成を回避するために、または野生型TNFSFリガンドにおいてジスルフィド結合を形成する天然に存在するシステイン残基を取り除くために、TNFSFリガンドの天然に存在するシステイン残基をシステイン以外の残基、たとえばセリン、に置き換えてもよい。あるいはまた、ジスルフィド結合により架橋されたTNFSFリガンド変異タンパク質の他に、当技術分野で公知の、化学架橋などの他の架橋手段によって、TNFSFリガンド変異タンパク質のホモ多量体、たとえばホモ三量体を形成することもできる。
TNF様リガンドは、TNFSFリガンドと類似したフォールディング形態、重要なアミノ酸残基の保存、三量体境界面、およびイントロン位置を有するリガンドである。本発明はまた、補体1q（C1q）タンパク質ファミリー（TNF関連タンパク質ファミリーとしても知られる）、たとえば、アディポネクチン、マイオネクチン、補体1q腫瘍壊死因子関連タンパク質3（C1QNF3）、およびC1QTNF5などのTNF様リガンドの変異タンパク質を特徴とする。それぞれのTNF様リガンド変異タンパク質はまた、少なくともシステイン残基の置換もしくは挿入を含有する。TNF様リガンド変異タンパク質の少なくとも1つのシステイン残基が、隣接するTNF様リガンド変異タンパク質の別のシステイン残基とジスルフィド結合を形成し、それによって2つの変異タンパク質が共有結合で結びつけられると、本発明のTNF様リガンド変異タンパク質は架橋されて、ホモ多量体を形成することができる。一部の実施形態において、ジスルフィド結合は、一方のTNF様リガンド変異タンパク質の置換もしくは挿入されたシステイン残基と他のTNF様リガンド変異タンパク質の置換もしくは挿入されたシステイン残基との間、一方のTNF様リガンド変異タンパク質の置換もしくは挿入されたシステイン残基と他のTNF様リガンド変異タンパク質の天然に存在するシステイン残基との間、または2つのTNF様リガンド変異タンパク質の2つの天然に存在するシステイン残基の間で、形成される可能性がある。他の実施形態において、たとえば非特異的ジスルフィド結合形成によって引き起こされる望ましくない二量体もしくは多量体形成を回避するために、または野生型TNF様リガンドにおいてジスルフィド結合を形成する天然に存在するシステイン残基を取り除くために、TNF様リガンドの天然に存在するシステイン残基をシステイン以外の残基、たとえばセリン、に置き換えることができる。あるいはまた、ジスルフィド結合により架橋されたTNF様リガンド変異タンパク質の他に、当技術分野で公知の、化学架橋などの他の架橋手段によって、TNF様リガンド変異タンパク質のホモ多量体、たとえばホモ三量体を形成することもできる。
2つ以上のシステイン残基を置換もしくは挿入によって追加することによって、ジスルフィド結合した二量体、三量体、およびさらに高次の多量体を形成することが可能となる。その結果、TNFSFもしくはTNF様リガンド変異タンパク質のホモ三量体（たとえば、TNF-α変異タンパク質のホモ三量体）が形成されることが好ましい。TNFSFおよびTNF様リガンド変異タンパク質には、TNF-α、リンホトキシン（たとえばLT-αおよびLT-β）、CD40L、CD70、CD153、OX40L、Fasリガンド（FasL）、4-1BBリガンド（4-1BBL）、TRAIL、RANKL、TWEAK、APRIL、BLys、LIGHT、TL1、GITRL（TL6としても知られる）、EDA（たとえばEDA-A1およびEDA-A2）、およびアディポネクチンがある。新しく追加された1つもしくは複数のシステイン残基における変異タンパク質間でのジスルフィド結合の形成によって、本発明のTNFSFおよびTNF様リガンド変異タンパク質（その全長または断片）を架橋して（たとえばジスルフィド結合させて）、ホモ多量体（たとえばホモ三量体）形成することができる。ある実施形態において、TNFSFもしくはTNF様リガンド変異タンパク質、または生物活性のあるその断片は、1つもしくは複数のシステイン置換または挿入に加えて、配列番号1-735のいずれか1つ、または生物活性のあるその断片（たとえば、TNFSFもしくはTNF様リガンドの可溶性部分に相当する断片であって、膜貫通ドメインを欠き、場合によっては細胞質ドメインも欠いた部分など（膜貫通および細胞質ドメインが両方ともないことが好ましい））から選択される配列に対して少なくとも50％の配列同一性（たとえば、50％、55％、60％、65％、70％、75％、80％、85％、90％、95％、99％、または100％の配列同一性）を有する。
それぞれのTNFSFおよびTNF様リガンドに関するUniPort Accession番号およびPDB ID番号を表1および表2に記載する。UniPort Accession番号で識別されるアミノ酸配列（配列番号1、40、76、112、132、167、203、236、267、297、333、369、398、435、467、506、542、562、590、および688）は、全長TNFSFおよびTNF様リガンドの野生型配列である。それぞれのTNFSFおよびTNF様リガンド変異タンパク質を操作するために、PDB IDに対応する結晶構造を用いて、各TNFSFおよびTNF様リガンドの中の、システイン残基で置き換えることができるアミノ酸を確認した。たとえば、2つのシステイン置換を有するTNFSF変異タンパク質はホモ三量体を形成することができる。それぞれのTNFSFリガンド変異タンパク質モノマーは、他の2つのモノマーと相互作用して、ホモ三量体において3つの同一のモノマー-モノマー境界面を形成する。入手可能な結晶構造および当技術分野の一般的な知識に基づいて、ジスルフィド結合における2つのシステイン残基間のCα-Cα結合距離は、4〜9Åの範囲となる（The Anatomy and Taxonomy of Protein Structure (Richardson, 2000)）。そのα炭素が互いに9Åまでは離れていない、隣接するそれぞれの単量体上に1つずつ2つの残基が特定され、システイン残基で置換された。一例として、2つのシステイン置換、S171CおよびG224Cを含有するTNF-α変異タンパク質モノマーが本発明にしたがって与えられる。第1のTNF-α変異タンパク質上の第1のシステイン残基S171Cは、第2のTNF-α変異タンパク質上の第2のシステイン残基G224Cとともにジスルフィド結合を形成し、第1のTNF-α変異タンパク質上の第2のシステイン残基G224Cは、第3のTNF-α変異タンパク質上の第1のシステイン残基S171Cとジスルフィド結合を形成することができる。第2のTNF-α変異タンパク質上の第1のシステイン残基S171Cは、第3のTNF-α変異タンパク質上の第2のシステイン残基G224Cとジスルフィド結合を形成し、三量体を完成することができる。他の実施形態において、隣接する2つのモノマー上の互いに近接した位置にある明確な領域を特定し、その分野の従来技術（たとえば部位特異的変異誘発およびタンパク質合成）を用いてモノマーの各領域内にシステイン残基挿入を加えることができる。
他の実施形態において、TNFSFもしくはTNF様リガンド変異タンパク質は、表2に記載した1つもしくは複数のアミノ酸領域内に位置する、1つもしくは複数のシステイン置換もしくは挿入（たとえば2つの置換もしくは挿入）を含有する。一例として、TNF-α変異タンパク質は、以下の領域のうち1か所または複数か所内に位置する、1つもしくは複数のシステイン置換もしくは挿入（たとえば2つの置換もしくは挿入）を含有する：配列番号1のアミノ酸配列に対して、アミノ酸77-94、107-113、127-138、165-204、および220-228（たとえば、2つの異なる領域内に1つのシステイン置換または挿入）。
5つのTNFSFリガンド、TNF-α、LT-α、TWEAK、TL1、およびGITRL（TL6としても知られる）について、PBD ID番号のもとでのアミノ酸ナンバリングは、UniPort Accession番号のもとでのアミノ酸ナンバリングと異なる。たとえば、TNF-αについて、PDB ID番号1TNF、chain A、のS95CおよびG148Cは、UniPort Accession番号P01375、O43647、Q9P1Q2、およびQ9UIV3のS171CおよびG224Cに相当する。
ある実施形態において、本発明のTNFSFおよびTNF様リガンド変異タンパク質は、小分子、ペプチド、もしくはタンパク質などの作用物質により改変して、タンパク質の発現を改善し、半減期を長くし、または治療効果を改善することができる。ある実施形態において、改変されたTNFSFおよびTNF様リガンド変異タンパク質は、ホモ多量体、たとえばホモ三量体を形成する共有結合（たとえばジスルフィド結合形成）の後、小分子、ペプチド、もしくはタンパク質などの作用物質とコンジュゲートすることができる（TNFSFもしくはTNF様リガンド多量体は、この場合TNFSFもしくはTNF様リガンド変異タンパク質複合体とも称される）。他の実施形態において、TNFSFもしくはTNF様リガンド変異タンパク質は、最初に小分子、ペプチド、もしくはタンパク質などの作用物質とコンジュゲートしてから、共有結合でホモ多量体、たとえばホモ三量体を形成することができる。TNFSFもしくはTNF様リガンド変異タンパク質、または架橋されたTNFSFもしくはTNF様リガンド変異タンパク質複合体（たとえばホモ三量体）とコンジュゲートすることができる小分子には、当技術分野で周知のさまざまな有機小分子薬剤、たとえば抗がん剤、があるがそれらに限定されない（たとえば、米国特許第8,779,008号および第8,771,966号を参照されたいが、これらはいずれも参考としてその全体を本明細書に含めるものとする）。TNFSFもしくはTNF様リガンド変異タンパク質、または架橋されたTNFSFもしくはTNF様リガンド変異タンパク質複合体とコンジュゲートすることができるペプチドおよびタンパク質には、リンカー配列（たとえば、切断可能なリンカー配列）、グリコシル化ペプチド、アルブミン結合ペプチド、抗体（たとえば、IgA、IgD、IgE、IgM、IgG（たとえば、IgG1、IgG2、IgG3、IgG4）、抗体フラグメント、二重特異性抗体）、Fcドメイン、Fc融合タンパク質、トランスフェリン融合タンパク質、およびペプチド系薬物（たとえば、米国特許第8,772,231、8,716,247、8,211,656、8,362,218、7,833,979、7,566,767、および8,084,493号に記載のもの、これらはいずれも参考としてその全体を本明細書に含めるものとする、ならびにある種の毒素）があるがそれらに限定されない。複合融合タンパク質を作製する他の方法は、Fusion Protein Technologies for Biopharmaceuticals: Applications and Challenges (Wiley Publishing, 2013)に記載されており、参考として本明細書に組み入れられる。
ある実施形態において、TNFSFもしくはTNF様リガンド変異タンパク質は、小分子、ペプチド、もしくはタンパク質などの作用物質と、シンプルな共有結合、たとえばペプチド結合、または化学反応から生じる任意の結合を介して、たとえば化学的結合によって、直接コンジュゲートすることができる。他の実施形態において、リンカーを用いてTNFSFもしくはTNF様リガンド変異タンパク質を小分子、ペプチド、もしくはタンパク質などの作用物質と結合することができる。リンカーは、ペプチド、タンパク質、または合成ポリマー、たとえばポリエチレングリコール（PEG）ポリマーとすることができる。たとえば、リンカーがペプチドであるならば、TNFSFもしくはTNF様リガンド変異タンパク質のC末端にあるカルボン酸基を、ペプチドリンカーのN末端のアミノ基に連結し、ペプチドリンカーのC末端カルボン酸基を作用物質と連結することができる。あるいはまた、TNFSFもしくはTNF様リガンド変異タンパク質のN末端にあるアミノ基を、ペプチドリンカーのC末端のカルボン酸基に連結し、ペプチドリンカーのN末端アミノ基を作用物質と連結することができる。適当なペプチドリンカーは、当技術分野で知られており、例として、グリシンおよびセリンといった可動性のアミノ酸残基、たとえばGS、GGS、GGGGS、GGSG、もしくはSGGGという多重もしくは反復モチーフを含有するペプチドリンカーなどがある。TNFSFもしくはTNF様リガンド変異タンパク質と、小分子、ペプチド、もしくはタンパク質などの作用物質（たとえば全長抗体、Fcドメイン）とのコンジュゲートまたは融合タンパク質を構築するために使用することができる方法は、米国特許公開番号US20070083006、US20130309192、US20130165389、およびUS20130065815に記載されており、これらはその全体を参考として組み入れる。
本発明のTNFSFおよびTNF様リガンド変異タンパク質には、それぞれの受容体のアゴニストもしくはアンタゴニストとして特異的に作用する変異タンパク質も含まれる。通常、TNFSFもしくはTNF様リガンド変異タンパク質は、システイン残基置換（1つもしくは複数）または挿入（1つもしくは複数）に加えて、それぞれの受容体に対するTNFSFもしくはTNF様リガンド変異タンパク質の結合親和性を変化させる、他のアミノ酸置換（1つもしくは複数）または挿入（1つもしくは複数）を含有してもよい。アゴニストまたはアンタゴニストであるTNFSFもしくはTNF様リガンド変異タンパク質を生じさせる置換もしくは挿入は本明細書に記載される。TNFSFおよびTNF様リガンド変異タンパク質は、いくつかの治療領域において有効である可能性があり、その治療領域には、自己免疫疾患、神経疾患、がん、感染性疾患、代謝性疾患（たとえば糖尿病）、黄斑疾患（たとえば黄斑変性）、筋萎縮、流産に関係する疾患、血管疾患（たとえばアテローム性動脈硬化）、骨量減少に関係する疾患（すなわち更年期の結果としての骨量減少、骨粗鬆症）、アレルギー、血液疾患（たとえば血友病）、AIDS、筋骨格系障害、成長受容体に関係する疾患、肥満、組織もしくは臓器の修復または再生における使用、ならびに臓器移植術における使用（たとえば、臓器移植に起因する合併症（たとえば移植片対宿主病（GVHD）および移植片拒絶）を治療し、または減らすための）が含まれるがそれらに限定されない。
TNF-α変異タンパク質
TNFスーパーファミリーのリガンドである腫瘍壊死因子(TNF)-αは、細胞増殖、炎症、アポトーシス、および形態形成において多様な機能を有する多面的なサイトカインである。TNF-αは天然では非共有結合性三量体膜貫通タンパク質として発現されるが、これは切断されて可溶性TNF-α三量体を生成する可能性がある。TNF-αは免疫系において重要な役割を果たし、がんおよび自己免疫の重要な標的となっている。膜貫通TNF-αおよび可溶性TNF-αは、2つの受容体、TNF受容体1（TNFR1）およびTNFR2を介してその機能を発揮する。TNFR1は、リンパ系、および体内のほとんどすべての細胞において普遍的に発現されている。TNFR1はアポトーシスのシグナル伝達に関与する細胞内デスドメインを含有する。外来TNF-αによるTNFR1単独の活性化は、全身に害がある。TNFR1に対するリガンドの結合は細胞質デスドメインを活性化するが、この細胞質デスドメインはアダプタータンパク質TNFR1結合デスドメイン（TRADD）およびFas結合デスドメイン（FADD）と結合してアポローシスを引き起こす。それに加えて、TNF-αによって引き起こされるTNFR1シグナル伝達は、アダプタータンパク質TRADDを通じて、古典的な核因子κB（NFκB）炎症誘発性シグナル伝達も活性化する。
TNFR2は細胞質デスドメインを欠いており、免疫細胞、内皮細胞、および特定の神経細胞において、より限定された細胞発現を示す。細胞質デスドメインがないにもかかわらず、TNFR2はTNFR1シグナル伝達の調節に重要な役割を果たし、炎症性シグナル伝達からアポトーシスシグナル伝達へとバランスを変化させることができる。具体的には、TNF-αとTNFR2との結合は、特定のアダプタータンパク質のプロテアソームによる分解によってTNFR1シグナル伝達を調節する。典型的には、TNFR2を発現する細胞はTNFR1も発現しており、発現の割合は細胞型および機能的役割に応じてさまざまである。TNFR1とTNFR2の同時発現の割合は、細胞生存とアポトーシスとの間のバランスを変化させる。TNFR2アゴニズムは、細胞発現がより限定されているため毒性の低い、より標的を絞った免疫治療を提供することができる。TNFR2アゴニストおよびTNF誘導物質は、自己免疫疾患の新しい治療戦略として近年浮上しているが、これには自己反応性T細胞の選択的除去および制御性T細胞の誘導が含まれる。TNFR2の発現はより限定されているため、TNFR2によるシグナル伝達は、より副作用の少ないいっそう標的化しうる治療を提供する。可溶性TNF-α三量体は、低い親和性でTNFR2と結合し、ほぼTNFR1を介してのみシグナル伝達する；膜貫通三量体TNF-αだけが、効果的にTNFR2を活性化することができる。その上、可溶性TNF-α三量体は、TNF-α変換酵素（TACE）によるタンパク質分解切断によって膜から遊離された後、急速に解離してモノマーとなる傾向がある。
TNFR2シグナル伝達には2つの大きな利点がある。正常なT細胞において、TNFR2の活性化は細胞増殖または分化を促進することができる。自己反応性T細胞において、TNFR2の活性化は、そうした細胞にさまざまなタンパク質シグナル伝達がないため、選択的アポトーシスの経路を援助する可能性がある。たとえば、自己反応性T細胞におけるNFκB機能不全は、生存促進性遺伝子を活性することができないために、その細胞をTNF-α誘導性アポトーシスに対して選択的に脆弱にする。研究によれば、TNFR2のアゴニストは、1型糖尿病患者由来の血液サンプルにおいて、自己反応性T細胞を選択的に破壊することができるが、健康なT細胞は破壊できないことが判明した（Bremer, ISRN Oncology 2013:1-25, 2013; Faustman et al., Frontiers In Immuno. 4:1-8, 2013）。TNFR2アゴニストは、多発性硬化症、グレーブス病、およびシェーグレン症候群といった、他のタイプの疾患を有する患者の自己反応性T細胞も選択的に死滅させることが明らかになった（Bremer, ISRN Oncology 2013:1-25, 2013; Faustman et al., Frontiers In Immuno. 4:1-8, 2013）。TNFR2の活性化は、自己免疫疾患およびがんを治療するための治療法として検討された。それに加えて、TNFR2を介してのみ作用するようにTNF-αなどのシグナル伝達分子に影響を及ぼす、TNFR1に対するアンタゴニストも、選択的TNFR2シグナル伝達の方法として検討された。したがって、TNFR2シグナル伝達を特異的に活性化する安定した形のTNF-αは、有用な治療有効性を示す可能性がある。
本発明の架橋された（たとえばジスルフィド結合した）TNF-α変異タンパク質複合体は、少なくとも2つのTNF-α変異タンパク質（たとえば、2、3、4、5、6、7、8、9、もしくは10個の変異タンパク質、好ましくは3つの変異タンパク質）を含有する。複合体のそれぞれのTNF-α変異タンパク質は少なくとも1つのシステイン残基置換もしくは挿入を含んでおり、これが隣接するTNF-α変異タンパク質上のシステイン残基とのジスルフィド結合の形成を可能にする。TNF-α変異タンパク質は、膜貫通ドメインを含有するTNF-α（すなわち膜結合型TNF-α）であってもよいが、可溶性TNF-αであってもよい。好ましくはTNF-α変異タンパク質は、膜貫通ドメインを欠き、場合によっては細胞質ドメインもない、可溶性TNF-αである（膜貫通ドメインも細胞質ドメインもいずれもないことが好ましい）。それぞれのTNF-α変異タンパク質は、複合体において隣接するTNF-α変異タンパク質と共有結合（たとえばジスルフィド結合）している。ある実施形態において、ジスルフィド結合は、隣接するTNF-α変異タンパク質上の置換されたシステイン残基間、隣接するTNF-α変異タンパク質上の置換されたシステイン残基と天然に存在するシステイン残基との間、または隣接するTNF-α変異タンパク質上の天然に存在するシステイン残基間で形成することができる。本発明のTNF-α変異タンパク質の多量体は、2、3、4、もしくは5個以上、好ましくは3つ、のTNF-α変異タンパク質または生物活性のあるその断片からなる。これらのTNF-α変異タンパク質は同一（たとえばホモ三量体などのホモ多量体）であることが好ましいが、ただし、TNF-α変異タンパク質のヘテロ多量体（たとえばヘテロ三量体）も本発明に含まれる。ある実施形態において、それぞれのTNF-α変異タンパク質またはその断片は、少なくとも1つのシステイン置換もしくは挿入（たとえば、2、3、4、もしくは5個以上のシステイン置換もしくは挿入であるが2つが好ましい）を有し、配列番号1-39および624-638のいずれか1つもしくは生物活性のあるその断片から選択される配列に対して少なくとも50％（たとえば50％、55％、60％、65％、70％、75％、80％、85％、90％、95％、99％、または100％）の同一性を有する。
ある実施形態において、TNF-α変異タンパク質は、TNF-αホモ三量体を形成する可溶性TNF-α変異タンパク質であって、そのそれぞれのモノマーは、天然に存在する2つのアミノ酸残基（すなわちシステイン以外の残基）をシステイン残基で置き換えたシステイン置換、または1つもしくは複数のシステイン挿入を含有する。一部の実施形態において、TNF-α変異タンパク質は、以下のシステイン置換のうち1つもしくはいくつかを含有する：配列番号1に対して、R82C、T83C、P84C、S85C、H91C、N110C、G130C、L131C、Y135C、N168C、L169C、L170C、S171C、A172C、I173C、K174C、S175C、Q178C、E180C、W190C、Y191C、P193C、G198C、V199C、F200C、Q201C、S223C、G224C、およびQ225C。またある実施形態では、TNF-α変異タンパク質は、以下のシステイン置換ペアのうち1つもしくは複数（好ましくは1つ）を含有する：配列番号1に対して、G130C/S85C、L131C/T83C、L131C/P84C、S171C/G224C、N168C/S223C、N168C/G224C、L169C/S223C、L169C/G224C、L170C/S223C、S171C/S223C、S171C/Q225C、A172C/P193C、I173C/Y191C、I173C/P193C、K174C/Y191C、S175C/W190C、S175C/Y191C、Q178C/E180C、G198C/Y135C、V199C/H91C、F200C/H91C、F200C/N110C、Q201C/R82C、およびQ201C/T83C。ある実施形態において、TNF-α変異タンパク質は置換S171Cおよび/またはG224Cを含有するが、その結果、一方の変異タンパク質上のS171Cは、隣接するTNF-α変異タンパク質上のG224Cと共有結合性のジスルフィド結合を形成することができる。他の実施形態において、TNF-α変異タンパク質は、1つもしくは複数のシステイン置換もしくは挿入（たとえば2つの置換もしくは挿入）を含有するが、その位置は1つまたは複数の、以下の領域の中にある：配列番号1のアミノ酸配列に対して、アミノ酸77-94、107-113、127-138、165-204、および220-228（たとえば、2つの異なる領域内に1つのシステイン置換もしくは挿入）。アミノ酸ナンバリングは、野生型TNF-α配列（たとえば配列番号1；UniProt Accession番号：P01375、O43647、Q9P1Q2、およびQ9UIV3）に関するものである。
TNF-αのアミノ酸残基Ser171（PDB ID: 1TNF、chain AのS95に相当する）は、構造的に保存されたβストランド上に位置する。SerからCysへのアミノ酸変化は化学的に保存されており、その置換がTNF-αの二次構造もしくは三次構造、またはその機能に障害を引き起こすことはありそうにない。TNF-αのアミノ酸残基Gly224（PDB ID: 1TNF、chain AのG148に相当する）は、受容体結合に関与するループ221-223の端に位置するが、Gly224それ自体は受容体相互作用に関与しない。野生型可溶性TNF-α構造の比較によれば、アミノ酸残基224は遊離型と受容体結合型との間でほとんど動かないので、常にジスルフィド結合形成のために、アミノ酸残基171との理想的な距離を維持することが明らかである。さらに、外側のかさばる付加、または化学架橋剤とは異なり、アミノ酸残基S171およびG224（PDB ID: 1TNF、chain AのS95およびG148に相当する）は、TNF-αホモ三量体の表面から隠れている（図2）。したがって、こうした残基の置換が免疫原性を引き起こしたり毒性をもたらすことはありそうにない。図2は、S171C/G224C (S95/G148)二重システインTNF-α変異タンパク質の3つのモノマーから形成されたTNF-αの共有結合性ホモ三量体を示す。
本発明のTNF-α変異タンパク質は、たとえばホモ三量体を形成したときに、受容体アゴニストまたはアンタゴニストとして作用することができる（たとえば、TNFR2もしくはTNFR1のアゴニスト、好ましくはTNFR2のアゴニスト）。システイン残基置換もしくは挿入に加えて、TNF-α変異タンパク質は、TNF-α変異タンパク質の親和性を変化させる、たとえば、TNF-α変異タンパク質がTNFR1よりTNFR2と選択的に結合するような、またはその逆であるような、他のアミノ酸置換もしくは挿入を含有することができる。たとえば、アミノ酸置換Q67K、A145F、およびA145Rのうち1つもしくは複数を有するTNF-α変異タンパク質はTNFR2のアゴニストである。1つもしくは複数の上記置換を有するTNF-αの、共有結合で架橋された（たとえばジスルフィド結合した）ホモ三量体は、CD8+細胞死を引き起こし、制御性T細胞の増殖を促進する能力を、いずれもTNFR2シグナル伝達を通じて示す。
制御性T細胞は、移植、アレルギー、感染症、GVHD、自己免疫、およびがんにおいてさまざまな臨床応用を示す免疫抑制細胞の一種である。制御性T細胞は、自己免疫疾患を予防または治療すると提唱されたが、律速問題は、ex vivoでの生成によるか、in vivoでの生成の刺激によるかにかかわらず、十分な量の制御性T細胞を得ることであった。TNFR2シグナル伝達の活性化はCD4 T細胞の制御性T細胞への分化を引き起こすことが判明しており、それは最も一般的にはCD25および転写因子フォークヘッドボックスP3(FOXP3)細胞内タンパク質の同時発現を特徴とする。
本発明のTNF-α変異タンパク質（たとえばTNF-αホモ三量体）の機能を検討するために、CD4 T細胞をTNF-α変異タンパク質ホモ三量体と接触させて、その活性を非共有結合型TNF-αホモ三量体もしくは野生型、可溶性TNF-αモノマーの活性と比較することができる。CD25および高濃度FOXP3細胞内タンパク質の下流発現はフローサイトメトリーによって分析することができる（図3B）。
本発明のTNF-α変異タンパク質（たとえばTNF-α変異タンパク質ホモ三量体）によって治療することができる疾患および障害には、がん（たとえば米国特許公開番号US20100305199およびWO2013186329に記載のもの)、炎症性疾患（たとえば米国特許公開番号US20120329846およびUS20100016232に記載のもの）、神経障害（たとえば米国特許公開番号US20010055594およびUS 20120093816に記載のもの）、および自己免疫疾患（たとえば米国特許番号US7101974に記載のもの）があるがそれらに限定されない。引用される特許および特許公開番号の内容は参考としてその全体を本明細書に含めるものとする。
ある実施形態において、3つのTNF-α変異タンパク質を含有するジスルフィド結合ホモ三量体TNF-α変異タンパク質複合体（たとえば、各モノマーがS171CおよびG224C置換を含有する複合体）は、円形脱毛症、強直性脊椎炎、抗リン脂質症候群、アジソン病、溶血性貧血、自己免疫性肝炎、肝炎、ベーチェット病、水疱性類天疱瘡、心筋症、セリアック病皮膚炎、慢性疲労免疫不全症候群（CFIDS）、慢性炎症性脱髄性多発神経炎、チャーグ・ストラウス症候群、瘢痕性類天疱瘡、限局性強皮症（CREST症候群）、寒冷凝集素症、クローン病、円板状エリテマトーデス、本態性混合型クリオグロブリン血症、線維筋痛-線維筋炎、グレーブス病、ギラン・バレー症候群、橋本甲状腺炎、甲状腺機能低下、炎症性腸疾患、自己免疫性リンパ増殖症候群（ALPS）、特発性肺線維症、特発性血小板減少性紫斑病（ITP）、IgA腎症、腎症、インスリン依存性糖尿病、若年性関節炎、扁平苔癬、狼瘡、メニエール病、混合性結合組織病、多発性硬化症、重症筋無力症、尋常性天疱瘡、悪性貧血、結節性多発動脈炎、多発性軟骨炎、多腺性症候群、リウマチ性多発筋痛、多発性筋炎、皮膚筋炎、原発性無ガンマグロブリン血症、原発性胆汁性肝硬変、乾癬、レイノー現象、ライター症候群、リウマチ熱、関節リウマチ、サルコイドーシス、強皮症、シェーグレン症候群、スティフマン症候群、高安動脈炎、側頭動脈炎/巨細胞性動脈炎、潰瘍性大腸炎、ブドウ膜炎、血管炎、白斑、およびウェゲナー肉芽腫症などの自己免疫疾患を治療するために使用することができる。好ましくは、TNF-α変異タンパク質ホモ三量体（たとえば、三量体のそれぞれのTNF-α変異タンパク質がS171C/G224C置換を有するようなホモ三量体）によって治療される自己免疫疾患は、インスリン依存性糖尿病（1型糖尿病もしくは自己免疫性糖尿病としても知られる）、多発性硬化症、関節リウマチ、シェーグレン症候群、クローン病、甲状腺炎、狼瘡、または皮膚炎である。ジスルフィド結合性ホモ三量体TNF-α変異タンパク質を含有する医薬組成物の投与は、自己反応性T細胞の選択的死滅、および/または制御性T細胞の増殖促進によって、自己免疫疾患を治療する。本発明のTNF-α変異タンパク質はまた、他の自己免疫疾患治療法、たとえばカルメット・ゲラン菌（Bacillus Calmette-Guerin）（BCG）と併用して投与することもできる。
ある実施形態において、3つのTNF-α変異タンパク質を含有するジスルフィド結合性ホモ三量体TNF-α変異タンパク質複合体（たとえばその各モノマーがS171CおよびG224C置換を含有する複合体）を使用して、神経疾患、たとえば、脳腫瘍、脳転移、統合失調症、てんかん、筋萎縮性側索硬化症（ALS）、パーキンソン病、アルツハイマー病、ハンチントン病、および脳卒中などを治療することができる。好ましくは、神経疾患は筋萎縮性側索硬化症（ALS）、パーキンソン病、またはアルツハイマー病である。
ある実施形態において、3つのTNF-α変異タンパク質を含有するジスルフィド結合性ホモ三量体TNF-α変異タンパク質複合体（たとえばその各モノマーがS171CおよびG224C置換を含有する複合体）を使用して、細胞、組織、もしくは臓器の拒絶に伴うリスクおよび合併症、たとえば、移植片対宿主病（GVHD）および移植片拒絶を減らすか、または取り除き、移植された細胞、組織、もしくは臓器のよりよい生着をもたらすことができる。移植患者の例としては、心臓、心臓弁、血管（たとえば動脈もしくは静脈）、腎臓、肝臓、肺もしくは肺葉、膵臓、卵巣、膀胱、胃、精巣、腸、胸腺、骨、腱、角膜、皮膚、神経、手、腕、足、脚、または細胞（たとえば、膵島β細胞、幹細胞もしくは多能性細胞（たとえば、骨髄由来のCD34+幹細胞などの造血幹細胞（HSC）、間葉系幹細胞（MSC）、およびHox11+細胞））の移植を受けている、または受けたことのある患者である。移植患者は、自家、同種または同系細胞移植を受けたかもしれない。
他の実施形態において、3つのTNF-α変異タンパク質を含有するジスルフィド結合性ホモ三量体TNF-α変異タンパク質複合体（たとえばその各モノマーがS171CおよびG224C置換を含有する複合体）を使用して、臓器もしくは組織を修復または再生することができる（たとえば、自己反応性CD8+ T細胞がその臓器もしくは組織を標的としている自己免疫疾患の患者において）。TNF-αホモ三量体の投与は、自己反応性CD8+ T細胞を死滅させ、それによって臓器もしくは組織の再生が可能となる。ある実施形態において、TNF-αホモ三量体は、併用療法として投与してもよく、これには多能性細胞（たとえば、MSC、HSC、またはHox11+ 細胞（たとえば、米国特許第8,017,392および8,021,693号を参照されたいが、これらはいずれも参考としてその全体を本明細書に含めるものとする））の同時投与（いっしょでも別々でも）が含まれる。TNF-α変異タンパク質複合体の投与を用いて、心臓、心臓弁、血管（たとえば動脈もしくは静脈）、腎臓、肝臓、肺もしくは肺葉、膵臓、卵巣、膀胱、胃、精巣、腸、胸腺、骨、腱、角膜、皮膚、神経、手、腕、足、および脚からなる一群から選択される臓器もしくは組織を修復または再生することができる。TNF-α変異タンパク質複合体はまた、細胞療法（たとえば、膵島β細胞、幹細胞もしくは多能性細胞（たとえば、骨髄由来のCD34+幹細胞などの造血幹細胞（HSC）、間葉系幹細胞（MSC）、およびHox11+細胞）の投与）を受けているか、または受けたことのある患者に投与することもできる。
他の実施形態において、TNFR2に対する結合親和性の増加したTNF-α変異タンパク質、たとえば上記の置換（例、S171CおよびG224C）に加えて置換（例、Q67K、A145F、およびA145R）を有するTNF-α変異タンパク質のようなTNF-α変異タンパク質（たとえばホモ三量体型複合体として）は、前記自己免疫疾患（たとえば、1型糖尿病、関節リウマチ、シェーグレン症候群、多発性硬化症、およびクローン病）ならびに神経疾患（たとえば、筋萎縮性側索硬化症（ALS）、パーキンソン病、およびアルツハイマー病）の治療のために使用され、臓器および組織の再生および修復のためにももちろんであるが、細胞、組織、または臓器の拒絶に伴う合併症（たとえば、移植片対宿主病（GVHD）および移植片拒絶）を治療するために使用することができる。
さらに他の実施形態において、3つのTNF-α変異タンパク質を含有するジスルフィド結合性ホモ三量体TNF-α変異タンパク質複合体（たとえばその各モノマーがS171CおよびG224C置換を含有する複合体）を使用して、感染性疾患、代謝性疾患（たとえば糖尿病）、黄斑疾患（たとえば黄斑変性）、筋萎縮、流産に関係する疾患、血管疾患（たとえばアテローム性動脈硬化）、骨量減少に関係する疾患（すなわち更年期の結果としての骨量減少、骨粗鬆症）、アレルギー、血液疾患（たとえば血友病）、AIDS、筋骨格系障害、成長受容体に関係する疾患、および肥満を治療することができる。
より詳細には、3つのTNF-α変異タンパク質を含有するジスルフィド結合性ホモ三量体TNF-α変異タンパク質複合体（たとえばその各モノマーがS171CおよびG224C置換を含有する複合体）を使用して、1型糖尿病、シェーグレン症候群、多発性硬化症、炎症性腸疾患、関節リウマチ、流産に関係する疾患、およびがんを治療することができる。
ある実施形態において、3つのTNF-α変異タンパク質を含有するジスルフィド結合性ホモ三量体TNF-α変異タンパク質複合体（たとえばその各モノマーがS171CおよびG224C置換を含有する複合体）を単独で、または化学療法剤、免疫療法剤、もしくは放射線とともに併用療法で使用して、さまざまながんを治療することができる。併用療法に使用される化学療法剤には、カンプトテシン、シスプラチン、カルボプラチン、オキサリプラチン、ブレオマイシン、マイトマイシンC、カリケアミシン、メイタンシノイド、ゲルダナマイシン、ドキソルビシン、イダルビシン、ダウノルビシン、エピルビシン、ブスルファン、カルムスチン（BCNU）、ロムスチン（CCNU）、セムスチン、サリドマイド、レナリドミド、メトトレキサート、アザチオプリン、6-メルカプトプリン、フルダラビン、5-アザシチジン、ペントスタチン（2'-デオキシコホルマイシン）、シタラビン（シトシンアラビノシド）、ゲムシタビン、5-フルオロウラシル、ヒドロキシ尿素、エレスクロモル、エトポシド、テニポシド、アムサクリン、トポテカン、イリノテカン、クロラムブシル、シクロホスファミド、イホスファミド、メルファラン、ボルテゾミブ、ビンクリスチン、ビンブラスチン、ビノレルビン、パクリタキセル、ドセタキセル、アムホテリシンB、リファンピシン、ペンタミジン、シクロスポリンA、タクロリムス（FK506）、シロリムス（ラパマイシン）、エベロリムス、テムシロリムス、ゾタロリムス、およびバイオリムスを含めることができるがそれらに限定されない。本明細書に記載のTNF-α変異タンパク質と併用することができる他の化学療法剤には、トラスツズマブ（ハーセプチン（HERCEPTIN（登録商標）））、ベバシズマブ（アバスチン（AVASTIN (登録商標）））、セツキシマブ（アービタックス（ERBITUX(登録商標）））、パニツムマブ（ベクチビックス（VECTIBIX(登録商標）））、イピリムマブ（ヤーボイ（YERVOY(登録商標）））、リツキシマブ（リツキサン（RITUXAN (登録商標））およびMABTHERA（登録商標））、アレムツズマブ（CAMPATH（登録商標））、オファツムマブ（アーゼラ（ARZERRA（登録商標）））、ゲムツズマブオゾガマイシン（マイロターグ（MYLOTARG（登録商標）））、ブレンツキシマブベドチン（アドセトリス（ADCETRIS（登録商標）））、90Y-イブリツモマブチウキセタン（セヴァリン（ZEVALIN（登録商標）））、および 131I-トシツモマブ（BEXXAR（登録商標））があるが、これらはScott et al., Cancer Immun., 12:14-21, 2012に詳細に記載されており、これは参考としてその全体を本明細書に含めるものとする。化学療法剤の追加例を本明細書に記載する（「TNFSFもしくはTNF様リガンド変異タンパク質の共有結合性架橋多量体を使用する治療法」の項を参照されたい）。
併用療法に使用される免疫療法剤には、抗TNF受容体スーパーファミリーアゴニスト抗体、抗TNF受容体スーパーファミリーアンタゴニスト抗体、がんチェックポイント阻害剤、たとえば抗CTLA-4剤、抗PD-1剤、抗PD-L1剤、および抗PD-L2剤など、TNF-α架橋剤、CD27剤、CD30剤、CD40剤、4-1BB剤、GITR剤、OX40剤、TRAILR1剤、TRAILR2剤、TWEAKR剤、ならびに、たとえば、Mahoneyらの表1に記載の免疫学的標的に対する薬剤を含めることができるがそれらに限定されない。たとえば、免疫標的4-1BBリガンドは、抗4-1BBリガンド抗体の標的となりうる；免疫標的OX40Lは抗OX40L抗体の標的となり得る；免疫標的GITRは抗GITR抗体の標的となり得る；免疫標的CD27は抗CD27抗体の標的となり得る；免疫標的TL1Aは抗TL1A抗体の標的となり得る；免疫標的CD40Lは抗CD40L抗体の標的となり得る；免疫標的LIGHTは抗LIGHT抗体の標的となり得る；免疫標的BTLAは抗BTLA抗体の標的となり得る；免疫標的LAG3は抗LAG3抗体の標的となり得る；免疫標的TIM3は抗TIM3抗体の標的となり得る；免疫標的Singlecs（シグレクス）は抗Singlecs（シグレクス）抗体の標的となり得る；免疫標的ICOSリガンドは抗ICOSリガンド抗体の標的となり得る；免疫標的B7-H3は抗B7-H3抗体の標的となり得る；免疫標的B7-H4は抗B7-H4抗体の標的となり得る；免疫標的VISTAは抗VISTA抗体の標的となり得る；免疫標的TMIGD2は抗TMIGD2抗体の標的となり得る；免疫標的BTNL2は抗BTNL2抗体の標的となり得る；免疫標的CD48は抗CD48抗体の標的となり得る；免疫標的KIRは抗KIR抗体の標的となり得る；免疫標的LIRは抗LIR抗体の標的となり得る；免疫標的ILTは抗ILT抗体の標的となり得る；免疫標的NKG2Dは抗NKG2D抗体の標的となり得る；免疫標的NKG2Aは抗NKG2A抗体の標的となり得る；免疫標的MICAは抗MICA抗体の標的となり得る；免疫標的MICBは抗MICB抗体の標的となり得る；免疫標的CD244は抗CD244抗体の標的となり得る；免疫標的CSF1Rは抗CSF1R抗体の標的となり得る；免疫標的IDOは抗IDO抗体の標的となり得る；免疫標的TGFβは抗TGFβ抗体の標的となり得る；免疫標的CD39は抗CD39抗体の標的となり得る；免疫標的CD73は抗CD73抗体の標的となり得る；免疫標的CXCR4は抗CXCR4抗体の標的となり得る；免疫標的CXCL12は抗CXCL12抗体の標的となり得る；免疫標的SIRPAは抗SIRPA抗体の標的となり得る；免疫標的CD47は抗CD47抗体の標的となり得る；免疫標的VEGFは抗VEGF抗体の標的となり得る；ならびに、免疫標的ニューロピリンは抗ニューロピリン抗体の標的となり得る（たとえば、Mahoneyらの表1を参照されたい）。
ある実施形態において、放射線療法は、細胞の正常に機能する能力を制限するように、または細胞を完全に破壊するように、細胞に十分な損傷を引き起こす指向性ガンマ線またはベータ線の使用を含む。
また別の実施形態において、3つのTNF-α変異タンパク質を含有するジスルフィド結合性ホモ三量体TNF-α変異タンパク質複合体（たとえばその各モノマーがS171CおよびG224C置換を含有する複合体）を、その複合体の標的化導入、ならびにがん抗原を発現するがんの治療のために、がん抗原特異抗体と融合させることができる。
FasL変異タンパク質
Fasリガンド（FasL）はT細胞などの免疫エフェクター細胞上で発現されるII型膜貫通タンパク質である。FasLの主要な受容体は、I型膜貫通受容体Fasであって、これはさまざまな正常ヒト細胞上でホモ三量体として発現される。Fasに対するFasLの結合は、Fasのオリゴマー形成を引き起こし、下流のアポトーシスシグナル伝達経路を開始させる。それに加えて、NFκBによる炎症誘発性シグナル伝達もFasLによって誘導される可能性がある。ほとんどのTNFSFリガンドと同様に、膜貫通FasLの細胞外ドメインは、タンパク質分解による切断を受けて、可溶性ホモ三量体FasLを生じる。可溶性三量体FasLは不安定で、プロテアーゼにより絶えず分解されるので、Fasシグナル伝達を誘導する有効性が膜貫通FasLより約1000倍劣っている。T細胞免疫における細胞溶解の経路としてFasL/Fasのシグナル伝達は、がんの免疫療法に応用されてきた。研究によれば、Fasシグナル伝達の区分された活性化（たとえば、FasLの腹腔内投与）は、毒性なしにマウスリンパ腫細胞を除去するのに有効であることが証明された（Rensing-Ehl et al., European Journal of Immunology 25:2253-2258, 1995）。より選択的なFasアゴニストをデザインするのに際して、組換え六量体型のFasL（たとえば、免疫グロブリンのFc部分、またはACRP30/アディポネクチンのコラーゲンドメインにFasLを融合させる）、たとえばFc-FasLもしくはメガ-FasLは、Fasアポトーシスシグナル伝達を活性化する能力を有することが判明している（Holler et al., Molecular and Cellular Biology 23:1428-1440, 2003; Greaney et al., Leukemia Research 30:415-426, 2006）。
本発明のFasL変異タンパク質は、少なくとも2つのFasL変異タンパク質（たとえば、2、3、4、5、6、7、8、9、または10個の変異タンパク質、好ましくは3つの変異タンパク質）を含有する。それぞれのFasL変異タンパク質は、隣接するFasL変異タンパク質上のシステイン残基とのジスルフィド結合形成を促進する、少なくとも1つのシステイン残基置換もしくは挿入を含有する。FasL変異タンパク質は、膜貫通FasLまたは可溶性FasLとすることができる。好ましくは、FasL変異タンパク質は膜貫通ドメインを欠いた可溶性FasLである。それぞれのFasL変異タンパク質は、隣接するFasL変異タンパク質にジスルフィド結合している。ある実施形態において、ジスルフィド結合は、隣接するFasL変異タンパク質上の置換されたシステイン残基間、隣接するFasL変異タンパク質上の置換されたシステイン残基と天然に存在するシステイン残基との間、または隣接するFasL変異タンパク質上の天然に存在するシステイン残基間で、形成することができる。本発明のFasL変異タンパク質の多量体は、2、3、4、または5つ以上の、好ましくは3つの、FasL変異タンパク質またはその断片からなる。ある実施形態において、それぞれのFasL変異タンパク質またはその断片は、配列番号167-202および651-653のいずれか1つ、またはそれらの生物活性断片（たとえば、膜貫通ドメインを欠き、場合によっては細胞質ドメインも欠き、またはその両方のドメインを欠いた断片）から選択される配列に対して、少なくとも50％（たとえば、50％、55％、60％、65％、70％、75％、80％、85％、90％、95％、99％、または100％）の配列同一性を有する。
好ましくは、FasL変異タンパク質は、FasLホモ三量体を形成する可溶性FasL変異タンパク質であって、この三量体において各モノマーは、2つの天然に存在するアミノ酸残基（すなわち非システイン残基）をシステイン残基で置き換えたシステイン置換、または1つもしくは複数のシステイン挿入を含有する。ある実施形態において、FasL変異タンパク質は、配列番号167に対して以下のシステイン置換のうち1つ、もしくは2つ以上を含有する：H148C、I168C、Y192C、V223C、M224C、M225C、E226C、G227C、K228C、M229C、M230C、W239C、A240C、S242C、A247C、V248C、F249C、E271C、S272C、およびQ273C。ある実施形態において、FasL変異タンパク質は、配列番号167に対して以下のシステイン置換ペアのうち1つ、もしくは2つ以上（好ましくは1つ）を含有する：V223C/E271C、V223C/S272C、 M224C/E271C、M224C/S272C、M225C/E271C、E226C/E271C、E226C/S272C、E226C/Q273C、G227C/S242C、K228C/A240C、K228C/S242C、M229C/A240C、M230C/W239C、M230C/A240C、A247C/Y192C、V248C/H148C、F249C/H148C、およびF249C/I168C。他の実施形態において、FasL変異タンパク質は、配列番号167のアミノ酸配列に対して、以下の1つもしくは複数の領域内に位置する1つもしくは複数のシステイン置換または挿入（たとえば2つの置換または挿入）を含有する：アミノ酸134-151、165-171、189-195、220-252、および268-276（たとえば、2つの異なる領域内に1つのシステイン置換または挿入）。アミノ酸ナンバリングは、野生型FasL配列に対応する（たとえば配列番号167；UniProt Accession番号：P48023およびQ9BZP9）。
本発明のFasL変異タンパク質で治療することができる疾患および障害には、免疫系に関係する疾患（たとえば、米国特許US5759536およびUS6046310に記載の疾患）、がん（たとえば、米国特許第6451759号に記載のがん）、および組織もしくは臓器移植に起因する合併症（たとえば、米国特許第5858990号に記載の合併症）があるがそれらに限定されない。引用される特許および特許公開番号の内容は、参考としてその全体を本明細書に含めるものとする。ある実施形態において、本発明のFasL変異タンパク質は、三量体型Fas受容体のオリゴマー形成を誘導し、下流のアポトーシス経路を活性化してがん細胞を選択的に死滅させることができる。
具体的には、3つのFasL変異タンパク質を含有するジスルフィド結合性ホモ三量体FasL変異タンパク質複合体を使用して、自己免疫性リンパ増殖症候群（ALPS）、口腔扁平上皮がん、神経芽細胞腫、関節リウマチ、およびがんを治療することができる。
ある実施形態において、3つのFasL変異タンパク質を含有するジスルフィド結合性ホモ三量体FasL変異タンパク質複合体を単独で、または化学療法剤、免疫療法剤、もしくは放射線とともに併用療法で使用して、さまざまながんを治療することができる。併用療法に使用される化学療法剤には、カンプトテシン、シスプラチン、カルボプラチン、オキサリプラチン、ブレオマイシン、マイトマイシンC、カリケアミシン、メイタンシノイド、ゲルダナマイシン、ドキソルビシン、イダルビシン、ダウノルビシン、エピルビシン、ブスルファン、カルムスチン（BCNU）、ロムスチン（CCNU）、セムスチン、サリドマイド、レナリドミド、メトトレキサート、アザチオプリン、6-メルカプトプリン、フルダラビン、5-アザシチジン、ペントスタチン（2'-デオキシコホルマイシン）、シタラビン（シトシンアラビノシド）、ゲムシタビン、5-フルオロウラシル、ヒドロキシ尿素、エレスクロモル、エトポシド、テニポシド、アムサクリン、トポテカン、イリノテカン、クロラムブシル、シクロホスファミド、イホスファミド、メルファラン、ボルテゾミブ、ビンクリスチン、ビンブラスチン、ビノレルビン、パクリタキセル、ドセタキセル、アムホテリシンB、リファンピシン、ペンタミジン、シクロスポリンA、タクロリムス（FK506）、シロリムス（ラパマイシン）、エベロリムス、テムシロリムス、ゾタロリムス、およびバイオリムスを含めることができるがそれらに限定されない。本明細書に記載のFasL変異タンパク質と併用することができる他の化学療法剤には、トラスツズマブ（ハーセプチン（HERCEPTIN（登録商標）））、ベバシズマブ（アバスチン（AVASTIN (登録商標）））、セツキシマブ（アービタックス（ERBITUX(登録商標）））、パニツムマブ（ベクチビックス（VECTIBIX(登録商標）））、イピリムマブ（ヤーボイ（YERVOY(登録商標）））、リツキシマブ（リツキサン（RITUXAN (登録商標））およびMABTHERA（登録商標））、アレムツズマブ（CAMPATH（登録商標））、オファツムマブ（アーゼラ（ARZERRA（登録商標）））、ゲムツズマブオゾガマイシン（マイロターグ（MYLOTARG（登録商標）））、ブレンツキシマブベドチン（アドセトリス（ADCETRIS（登録商標）））、90Y-イブリツモマブチウキセタン（セヴァリン（ZEVALIN（登録商標）））、および 131I-トシツモマブ（BEXXAR（登録商標））があるが、これらはScott et al.に詳細に記載されている。化学療法剤の追加例を本明細書に記載する（「TNFSFもしくはTNF様リガンド変異タンパク質の共有結合性架橋多量体を使用する治療法」の項を参照されたい）。
併用療法に使用される免疫療法剤には、抗TNF受容体スーパーファミリーアゴニスト抗体、抗TNF受容体スーパーファミリーアンタゴニスト抗体、がんチェックポイント阻害剤、たとえば抗CTLA-4剤、抗PD-1剤、抗PD-L1剤、および抗PD-L2剤など、FasL架橋剤、CD27剤、CD30剤、CD40剤、4-1BB剤、GITR剤、OX40剤、TRAILR1剤、TRAILR2剤、TWEAKR剤、ならびに、たとえば、Mahoneyらの表1に記載の免疫学的標的に対する薬剤を含めることができるがそれらに限定されない。たとえば、免疫標的4-1BBリガンドは、抗4-1BBリガンド抗体の標的となりうる；免疫標的OX40Lは抗OX40L抗体の標的となり得る；免疫標的GITRは抗GITR抗体の標的となり得る；免疫標的CD27は抗CD27抗体の標的となり得る；免疫標的TL1Aは抗TL1A抗体の標的となり得る；免疫標的CD40Lは抗CD40L抗体の標的となり得る；免疫標的LIGHTは抗LIGHT抗体の標的となり得る；免疫標的BTLAは抗BTLA抗体の標的となり得る；免疫標的LAG3は抗LAG3抗体の標的となり得る；免疫標的TIM3は抗TIM3抗体の標的となり得る；免疫標的Singlecsは抗Singlecs抗体の標的となり得る；免疫標的ICOSリガンドは抗ICOSリガンド抗体の標的となり得る；免疫標的B7-H3は抗B7-H3抗体の標的となり得る；免疫標的B7-H4は抗B7-H4抗体の標的となり得る；免疫標的VISTAは抗VISTA抗体の標的となり得る；免疫標的TMIGD2は抗TMIGD2抗体の標的となり得る；免疫標的BTNL2は抗BTNL2抗体の標的となり得る；免疫標的CD48は抗CD48抗体の標的となり得る；免疫標的KIRは抗KIR抗体の標的となり得る；免疫標的LIRは抗LIR抗体の標的となり得る；免疫標的ILTは抗ILT抗体の標的となり得る；免疫標的NKG2Dは抗NKG2D抗体の標的となり得る；免疫標的NKG2Aは抗NKG2A抗体の標的となり得る；免疫標的MICAは抗MICA抗体の標的となり得る；免疫標的MICBは抗MICB抗体の標的となり得る；免疫標的CD244は抗CD244抗体の標的となり得る；免疫標的CSF1Rは抗CSF1R抗体の標的となり得る；免疫標的IDOは抗IDO抗体の標的となり得る；免疫標的TGFβは抗TGFβ抗体の標的となり得る；免疫標的CD39は抗CD39抗体の標的となり得る；免疫標的CD73は抗CD73抗体の標的となり得る；免疫標的CXCR4は抗CXCR4抗体の標的となり得る；免疫標的CXCL12は抗CXCL12抗体の標的となり得る；免疫標的SIRPAは抗SIRPA抗体の標的となり得る；免疫標的CD47は抗CD47抗体の標的となり得る；免疫標的VEGFは抗VEGF抗体の標的となり得る；ならびに、免疫標的ニューロピリンは抗ニューロピリン抗体の標的となり得る（たとえば、Mahoneyらの表1を参照されたい）。
ある実施形態において、放射線療法は、細胞の正常に機能する能力を制限するように、または細胞を完全に破壊するように、細胞に十分な損傷を引き起こす、指向性ガンマ線またはベータ線の使用を含む。
また別の実施形態において、3つのFasL変異タンパク質を含有するジスルフィド結合性ホモ三量体FasL変異タンパク質複合体を、その複合体の標的化導入、ならびにがん抗原を発現するがんの治療のために、がん抗原特異抗体と融合させることができる。
TRAIL変異タンパク質
腫瘍壊死因子関連アポトーシス誘導リガンド（TRAIL）は、TNFSFのもう1つのメンバーである。TRAILは、さまざまな免疫エフェクター細胞上に発現し、TNF受容体ファミリーの4つの受容体、TRAIL-R1、TRAIL-R2、TRAIL-R3、およびTRAIL-R4と結合する。TRAIL-R1およびTRAIL-R2は、アポトーシス誘導のための特徴的な細胞質デスドメインを含有する。TRAIL-R1およびTRAIL-R2を介したTRAILによるアポトーシスシグナル伝達は、Fas誘導アポトーシスシグナル伝達と類似している。加えて、TRAILは炎症誘発性NFκBシグナル伝達も誘発することができる。TRAILおよび他のTRAIL受容体アゴニストは、毒性をほとんど伴わずに殺腫瘍活性を示すことが判明した。TRAILの可溶性型は、TRAIL-R1に対して活性を有するが、TRAIL-R2を効果的に活性化することはできず、それはおそらくTRAILおよびTRAIL-R2の無効なオリゴマー形成に起因する。臨床データによれば、可溶性TRAILはほとんど、またはまったく毒性なしに安全に使用できるが、アポトーシス活性は最適には及ばないことが判明している。ある種の腫瘍におけるアゴニストTRAIL受容体の相対的寄与に応じて、TRAIL-R1もしくはTRAIL-R2を選択的に活性化できる改変された可溶性TRAILバリアントは、殺腫瘍活性を高めるのに有用であると考えられる。TRAIL-R2アゴニストとして特異的に作用するタンパク質を調製する方法は、米国特許公開番号US20090131317に記載されており、これは参考としてその全体が組み入れられる。
本発明のTRAIL変異タンパク質には、TRAIL変異タンパク質のホモ多量体を含める。それぞれのTRAIL変異タンパク質は、隣接するTRAIL変異タンパク質上のシステイン残基とのジスルフィド結合の形成を促進する、少なくとも1つのシステイン残基置換もしくは挿入を含有する。TRAIL変異タンパク質は、膜貫通TRAILまたは可溶性TRAILとすることができる。好ましくは、TRAIL変異タンパク質は膜貫通ドメインを欠いた可溶性TRAILである。ある実施形態において、本発明のTRAIL変異タンパク質は、TRAIL-R1もしくはTRAIL-R2のアゴニストとして作用することができる。ある実施形態において、ジスルフィド結合は、隣接するTRAIL変異タンパク質上の置換されたシステイン残基間、隣接するTRAIL変異タンパク質上の置換されたシステイン残基と天然に存在するシステイン残基との間、または隣接するTRAIL変異タンパク質上の天然に存在するシステイン残基間で、形成することができる。本発明のTRAIL変異タンパク質の多量体は、2、3、4、または5つ以上の、好ましくは3つの、TRAIL変異タンパク質またはその断片からなる。ある実施形態において、それぞれのTRAIL変異タンパク質またはその断片は、配列番号297-332、621、623、660-662、および734のいずれか1つから選択される配列に対して、少なくとも50％（たとえば、50％、55％、60％、65％、70％、75％、80％、85％、90％、95％、99％、または100％）の配列同一性を有する。
好ましくは、TRAIL変異タンパク質は、TRAILホモ多量体を形成する可溶性TRAIL変異タンパク質であって、この多量体において各モノマーは、2つの天然に存在するアミノ酸残基（すなわち非システイン残基）をシステイン残基で置き換えたシステイン置換、または1つもしくは複数のシステイン挿入を含有する。ある実施形態において、TRAIL変異タンパク質は、配列番号297に対して以下のシステイン置換のうち1つ、もしくは2つ以上を含有する：H125C、L147C、H161C、Y185C、L221C、L222C、M223C、K224C、S225C、A226C、R227C、N228C、C230S、G238C、L239C、S241C、G246C、I247C、H270C、E271C、およびA272C。ある実施形態において、TRAIL変異タンパク質は、配列番号297に対して以下のシステイン置換ペアのうち1つ、もしくは2つ以上（好ましくは1つ）を含有する：L221C/H270C、L221C/E271C、L222C/H270C、L222C/E271C、M223C/H270C、K224C/H270C、K224C/E271C、K224C/A272C、S225C/S241C、A226C/L239C、A226C/S241C、R227C/L239C、N228C/G238C、N228C/L239C、G246C/Y185C、I247C/H125C、およびL147C/H161C。他の実施形態において、TRAIL変異タンパク質は、配列番号297のアミノ酸配列に対して、以下の1つもしくは複数の領域内に位置する1つもしくは複数のシステイン置換または挿入（たとえば2つの置換または挿入）を含有する：アミノ酸111-128、144-150、158-164、182-188、218-250、および267-275（たとえば、2つの異なる領域内に1つのシステイン置換または挿入）。他の実施形態において、TRAIL変異タンパク質の天然に存在するシステイン残基、たとえばC230、は、望ましくない二量体化を回避するためにセリン残基に変異させることができる。アミノ酸ナンバリングは、野生型TRAIL配列に対応する（たとえば配列番号297；UniProt Accession番号：P50591およびA1Y9B3）。
本発明のTRAIL変異タンパク質で治療することができる疾患および障害には、がん（たとえば、米国特許公開番号US20110165265およびWO2009140469、ならびに米国特許番号US7736637に記載のがん）、自己免疫疾患（たとえば、米国特許公開番号US20130065815に記載の疾患）、および代謝性疾患（たとえば、米国特許公開番号US20130345116に記載の疾患）があるがそれらに限定されない。引用された特許および特許公開番号の内容は、参考としてその全体を本明細書に含めるものとする。ある実施形態において、TRAILの共有結合性架橋多量体は、がん細胞において、TRAIL-R1およびTRAIL-R2オリゴマー形成、ならびにアポトーシスシグナル伝達を効果的に活性化することができる。
詳細には、本発明のTRAIL変異タンパク質を、がん治療（たとえば、化学療法剤、免疫療法剤、または放射線とのがん併用療法）に使用することができるが、これはたとえば、固形腫瘍（たとえば乳がん、膵臓がん、脳腫瘍、結腸がん、ならびにFalschlehner et al, Adv Exp Med Biol. 647:195-206, 2009、これは参考としてその全体を本明細書に含められるが、これに記載のがん）の治療などである。本発明のTRAIL変異タンパク質で治療することができる腫瘍細胞には、たとえば、非小細胞肺がん、非ホジキンリンパ腫、赤白血病細胞、急性骨髄性白血病（AML）、軟部組織肉腫、黒色腫がある（たとえば、Falschlehnerらの表1を参照されたい）。ある実施形態において、本発明のTRAIL変異タンパク質は、がん治療（たとえば固形腫瘍（たとえば進行性固形腫瘍）の治療）において、1つもしくは複数の化学療法剤（たとえばFalschlehnerらの表1、2、および3を参照されたい）と併用することができる。
ある実施形態において、TRAIL変異タンパク質を単独で、または化学療法剤、免疫療法剤、もしくは放射線とともに併用療法で使用して、さまざまながんを治療することができる。併用療法に使用される化学療法剤には、カンプトテシン、シスプラチン、カルボプラチン、オキサリプラチン、ブレオマイシン、マイトマイシンC、カリケアミシン、メイタンシノイド、ゲルダナマイシン、ドキソルビシン、イダルビシン、ダウノルビシン、エピルビシン、ブスルファン、カルムスチン（BCNU）、ロムスチン（CCNU）、セムスチン、サリドマイド、レナリドミド、メトトレキサート、アザチオプリン、6-メルカプトプリン、フルダラビン、5-アザシチジン、ペントスタチン（2'-デオキシコホルマイシン）、シタラビン（シトシンアラビノシド）、ゲムシタビン、5-フルオロウラシル、ヒドロキシ尿素、エレスクロモル、エトポシド、テニポシド、アムサクリン、トポテカン、イリノテカン、クロラムブシル、シクロホスファミド、イホスファミド、メルファラン、ボルテゾミブ、ビンクリスチン、ビンブラスチン、ビノレルビン、パクリタキセル、ドセタキセル、アムホテリシンB、リファンピシン、ペンタミジン、シクロスポリンA、タクロリムス（FK506）、シロリムス（ラパマイシン）、エベロリムス、テムシロリムス、ゾタロリムス、およびバイオリムスを含めることができるがそれらに限定されない。本明細書に記載のTRAIL変異タンパク質と併用することができる他の化学療法剤には、トラスツズマブ（ハーセプチン（HERCEPTIN（登録商標）））、ベバシズマブ（アバスチン（AVASTIN (登録商標）））、セツキシマブ（アービタックス（ERBITUX(登録商標）））、パニツムマブ（ベクチビックス（VECTIBIX(登録商標）））、イピリムマブ（ヤーボイ（YERVOY(登録商標）））、リツキシマブ（リツキサン（RITUXAN (登録商標））およびMABTHERA（登録商標））、アレムツズマブ（CAMPATH（登録商標））、オファツムマブ（アーゼラ（ARZERRA（登録商標）））、ゲムツズマブオゾガマイシン（マイロターグ（MYLOTARG（登録商標）））、ブレンツキシマブベドチン（アドセトリス（ADCETRIS（登録商標）））、90Y-イブリツモマブチウキセタン（セヴァリン（ZEVALIN（登録商標）））、および 131I-トシツモマブ（BEXXAR（登録商標））があるが、これらはScott et al.に詳細に記載されている。化学療法剤の追加例を本明細書に記載する（「TNFSFもしくはTNF様リガンド変異タンパク質の共有結合性架橋多量体を使用する治療法」の項を参照されたい）。
併用療法に使用される免疫療法剤には、抗TNF受容体スーパーファミリーアゴニスト抗体、抗TNF受容体スーパーファミリーアンタゴニスト抗体、がんチェックポイント阻害剤、たとえば抗CTLA-4剤、抗PD-1剤、抗PD-L1剤、および抗PD-L2剤など、TRAIL架橋剤、CD27剤、CD30剤、CD40剤、4-1BB剤、GITR剤、OX40剤、TRAILR1剤、TRAILR2剤、TWEAKR剤、ならびに、たとえば、Mahoneyらの表1に記載の免疫学的標的に対する薬剤を含めることができるがそれらに限定されない。たとえば、免疫標的4-1BBリガンドは、抗4-1BBリガンド抗体の標的となりうる；免疫標的OX40Lは抗OX40L抗体の標的となり得る；免疫標的GITRは抗GITR抗体の標的となり得る；免疫標的CD27は抗CD27抗体の標的となり得る；免疫標的TL1Aは抗TL1A抗体の標的となり得る；免疫標的CD40Lは抗CD40L抗体の標的となり得る；免疫標的LIGHTは抗LIGHT抗体の標的となり得る；免疫標的BTLAは抗BTLA抗体の標的となり得る；免疫標的LAG3は抗LAG3抗体の標的となり得る；免疫標的TIM3は抗TIM3抗体の標的となり得る；免疫標的Singlecsは抗Singlecs抗体の標的となり得る；免疫標的ICOSリガンドは抗ICOSリガンド抗体の標的となり得る；免疫標的B7-H3は抗B7-H3抗体の標的となり得る；免疫標的B7-H4は抗B7-H4抗体の標的となり得る；免疫標的VISTAは抗VISTA抗体の標的となり得る；免疫標的TMIGD2は抗TMIGD2抗体の標的となり得る；免疫標的BTNL2は抗BTNL2抗体の標的となり得る；免疫標的CD48は抗CD48抗体の標的となり得る；免疫標的KIRは抗KIR抗体の標的となり得る；免疫標的LIRは抗LIR抗体の標的となり得る；免疫標的ILTは抗ILT抗体の標的となり得る；免疫標的NKG2Dは抗NKG2D抗体の標的となり得る；免疫標的NKG2Aは抗NKG2A抗体の標的となり得る；免疫標的MICAは抗MICA抗体の標的となり得る；免疫標的MICBは抗MICB抗体の標的となり得る；免疫標的CD244は抗CD244抗体の標的となり得る；免疫標的CSF1Rは抗CSF1R抗体の標的となり得る；免疫標的IDOは抗IDO抗体の標的となり得る；免疫標的TGFβは抗TGFβ抗体の標的となり得る；免疫標的CD39は抗CD39抗体の標的となり得る；免疫標的CD73は抗CD73抗体の標的となり得る；免疫標的CXCR4は抗CXCR4抗体の標的となり得る；免疫標的CXCL12は抗CXCL12抗体の標的となり得る；免疫標的SIRPAは抗SIRPA抗体の標的となり得る；免疫標的CD47は抗CD47抗体の標的となり得る；免疫標的VEGFは抗VEGF抗体の標的となり得る；ならびに、免疫標的ニューロピリンは抗ニューロピリン抗体の標的となり得る（たとえば、Mahoneyらの表1を参照されたい）。
ある実施形態において、放射線療法は、細胞の正常に機能する能力を制限するように、または細胞を完全に破壊するように、細胞に十分な損傷を引き起こす、指向性ガンマ線またはベータ線の使用を含む。
また別の実施形態において、TRAIL変異タンパク質を、その複合体の標的化導入、ならびにがん抗原を発現するがんの治療のために、がん抗原特異抗体と融合させることができる。
CD40L変異タンパク質
CD40Lは、単球、活性化B細胞、上皮細胞、内皮細胞、血小板、および平滑筋細胞上で発現されるII型膜貫通タンパク質である。CD40Lおよびその同族の受容体CD40の主な機能は、樹状細胞（DC）を活性化して、有効な細胞傷害性CD8+ T細胞応答を刺激することである。CD40の治療ターゲティングの主な目的は、DCを介したT細胞免疫の効果的なプライミングを誘導すること、ならびに有効な抗腫瘍T細胞免疫応答の誘導を確実にすることであった。CD40が標的細胞の膜内でクラスター化されたときにはじめて、CD40シグナル伝達が開始されることを示す証拠が集まっている。FLAGタグで標識された可溶性CD40Lの架橋三量体はCD40シグナル伝達を引き起こすことができることが研究で判明した（Fick et al., Journal of Immuno. 183:1851-1861, 2009）。この知見に合致して、可溶性CD40Lの六量体型は、DCを活性化し、T細胞応答を誘導することができた。
本発明のCD40L変異タンパク質には、CD40L変異タンパク質のホモ多量体を含める。それぞれのCD40L変異タンパク質は、隣接するCD40L変異タンパク質上のシステイン残基とのジスルフィド結合の形成を促進する、少なくとも1つのシステイン残基置換もしくは挿入を含有する。CD40L変異タンパク質は、膜貫通CD40Lまたは可溶性CD40Lとすることができる。好ましくは、CD40L変異タンパク質は膜貫通ドメインを欠いた可溶性CD40Lである。ある実施形態において、ジスルフィド結合は、隣接するCD40L変異タンパク質上の置換されたシステイン残基間、隣接するCD40L変異タンパク質上の置換されたシステイン残基と天然に存在するシステイン残基との間、または隣接するCD40L変異タンパク質上の天然に存在するシステイン残基間で、形成することができる。本発明のCD40L変異タンパク質の多量体は、2、3、4、または5つ以上の、好ましくは6つの、CD40L変異タンパク質またはその断片からなる。ある実施形態において、それぞれのCD40L変異タンパク質またはその断片は、配列番号132-166、620、648-650、および723-727のいずれか1つから選択される配列に対して、少なくとも50％（たとえば、50％、55％、60％、65％、70％、75％、80％、85％、90％、95％、99％、または100％）の配列同一性を有する。
好ましくは、CD40L変異タンパク質は、CD40Lホモ多量体、たとえばホモ六量体、を形成する可溶性CD40L変異タンパク質であって、この多量体において各変異タンパク質は、2つの天然に存在するアミノ酸残基（すなわち非システイン残基）をシステイン残基で置き換えたシステイン置換、または1つもしくは複数のシステイン挿入を含有する。ある実施形態において、CD40L変異タンパク質は、配列番号132に対して以下のシステイン置換のうち1つ、もしくは2つ以上を含有する：H125C、Y145C、Y172C、I204C、L205C、L206C、R207C、A208C、A209C、N210C、T211C、S213C、K216C、P217C、G219C、Q220C、S222C、G227C、V228C、F229C、T251C、G252C、およびF253C。ある実施形態において、CD40L変異タンパク質は、配列番号132に対して以下のシステイン置換ペアのうち1つ、もしくは2つ以上（好ましくは1つ）を含有する：I204C/T251C、I204C/G252C、L205C/T251C、L205C/G252C、L206C/T251C、R207C/T251C、R207C/G252C、R207C/F253C、A208C/S222C、A209C/Q220C、A209C/S222C、N210C/Q220C、T211C/G219C、T211C/Q220C、S213C/K216C、S213C/P217C、G227C/Y172C、V228C/H125C、F229C/H125C、およびF229C/Y145C。他の実施形態において、CD40L変異タンパク質は、配列番号132のアミノ酸配列に対して、以下の1つもしくは複数の領域内に位置する1つもしくは複数のシステイン置換または挿入（たとえば2つの置換または挿入）を含有する：アミノ酸111-128、142-148、169-175、201-232、および248-256（たとえば、2つの異なる領域内に1つのシステイン置換または挿入）。アミノ酸ナンバリングは、野生型CD40L配列に対応する（たとえば配列番号132、UniProt Accession番号：P29965）。
本発明のCD40L変異タンパク質を含有する医薬組成物を、免疫療法（たとえば、米国特許公開番号US20030031668に記載の治療）、がんの治療（たとえば、米国特許公開番号US 20010018041に記載の治療）、および組織もしくは臓器移植拒絶の治療（たとえば、WO2005044854に記載の治療）に使用することができる。引用された特許公開番号の内容は、参考としてその全体を本明細書に含めるものとする。
具体的には、本発明のCD40L変異タンパク質を、シェーグレン症候群、アレルギー、アテローム性動脈硬化、乳がん、および1型糖尿病の治療に使用することができる。
ある実施形態において、CD40L変異タンパク質を単独で、または化学療法剤、免疫療法剤、もしくは放射線とともに併用療法で使用して、さまざまながんを治療することができる。併用療法に使用される化学療法剤には、カンプトテシン、シスプラチン、カルボプラチン、オキサリプラチン、ブレオマイシン、マイトマイシンC、カリケアミシン、メイタンシノイド、ゲルダナマイシン、ドキソルビシン、イダルビシン、ダウノルビシン、エピルビシン、ブスルファン、カルムスチン（BCNU）、ロムスチン（CCNU）、セムスチン、サリドマイド、レナリドミド、メトトレキサート、アザチオプリン、6-メルカプトプリン、フルダラビン、5-アザシチジン、ペントスタチン（2'-デオキシコホルマイシン）、シタラビン（シトシンアラビノシド）、ゲムシタビン、5-フルオロウラシル、ヒドロキシ尿素、エレスクロモル、エトポシド、テニポシド、アムサクリン、トポテカン、イリノテカン、クロラムブシル、シクロホスファミド、イホスファミド、メルファラン、ボルテゾミブ、ビンクリスチン、ビンブラスチン、ビノレルビン、パクリタキセル、ドセタキセル、アムホテリシンB、リファンピシン、ペンタミジン、シクロスポリンA、タクロリムス（FK506）、シロリムス（ラパマイシン）、エベロリムス、テムシロリムス、ゾタロリムス、およびバイオリムスを含めることができるがそれらに限定されない。本明細書に記載のCD40L変異タンパク質と併用することができる他の化学療法剤には、トラスツズマブ（ハーセプチン（HERCEPTIN（登録商標）））、ベバシズマブ（アバスチン（AVASTIN (登録商標）））、セツキシマブ（アービタックス（ERBITUX(登録商標）））、パニツムマブ（ベクチビックス（VECTIBIX(登録商標）））、イピリムマブ（ヤーボイ（YERVOY(登録商標）））、リツキシマブ（リツキサン（RITUXAN (登録商標））およびMABTHERA（登録商標））、アレムツズマブ（CAMPATH（登録商標））、オファツムマブ（アーゼラ（ARZERRA（登録商標）））、ゲムツズマブオゾガマイシン（マイロターグ（MYLOTARG（登録商標）））、ブレンツキシマブベドチン（アドセトリス（ADCETRIS（登録商標）））、90Y-イブリツモマブチウキセタン（セヴァリン（ZEVALIN（登録商標）））、および 131I-トシツモマブ（BEXXAR（登録商標））があるが、これらはScott et al.に詳細に記載されている。化学療法剤の追加例を本明細書に記載する（「TNFSFもしくはTNF様リガンド変異タンパク質の共有結合性架橋多量体を使用する治療法」の項を参照されたい）。
併用療法に使用される免疫療法剤には、抗TNF受容体スーパーファミリーアゴニスト抗体、抗TNF受容体スーパーファミリーアンタゴニスト抗体、がんチェックポイント阻害剤、たとえば抗CTLA-4剤、抗PD-1剤、抗PD-L1剤、および抗PD-L2剤など、CD40L架橋剤、CD27剤、CD30剤、CD40剤、4-1BB剤、GITR剤、OX40剤、TRAILR1剤、TRAILR2剤、TWEAKR剤、ならびに、たとえば、Mahoneyらの表1に記載の免疫学的標的に対する薬剤を含めることができるがそれらに限定されない。たとえば、免疫標的4-1BBリガンドは、抗4-1BBリガンド抗体の標的となりうる；免疫標的OX40Lは抗OX40L抗体の標的となり得る；免疫標的GITRは抗GITR抗体の標的となり得る；免疫標的CD27は抗CD27抗体の標的となり得る；免疫標的TL1Aは抗TL1A抗体の標的となり得る；免疫標的CD40Lは抗CD40L抗体の標的となり得る；免疫標的LIGHTは抗LIGHT抗体の標的となり得る；免疫標的BTLAは抗BTLA抗体の標的となり得る；免疫標的LAG3は抗LAG3抗体の標的となり得る；免疫標的TIM3は抗TIM3抗体の標的となり得る；免疫標的Singlecsは抗Singlecs抗体の標的となり得る；免疫標的ICOSリガンドは抗ICOSリガンド抗体の標的となり得る；免疫標的B7-H3は抗B7-H3抗体の標的となり得る；免疫標的B7-H4は抗B7-H4抗体の標的となり得る；免疫標的VISTAは抗VISTA抗体の標的となり得る；免疫標的TMIGD2は抗TMIGD2抗体の標的となり得る；免疫標的BTNL2は抗BTNL2抗体の標的となり得る；免疫標的CD48は抗CD48抗体の標的となり得る；免疫標的KIRは抗KIR抗体の標的となり得る；免疫標的LIRは抗LIR抗体の標的となり得る；免疫標的ILTは抗ILT抗体の標的となり得る；免疫標的NKG2Dは抗NKG2D抗体の標的となり得る；免疫標的NKG2Aは抗NKG2A抗体の標的となり得る；免疫標的MICAは抗MICA抗体の標的となり得る；免疫標的MICBは抗MICB抗体の標的となり得る；免疫標的CD244は抗CD244抗体の標的となり得る；免疫標的CSF1Rは抗CSF1R抗体の標的となり得る；免疫標的IDOは抗IDO抗体の標的となり得る；免疫標的TGFβは抗TGFβ抗体の標的となり得る；免疫標的CD39は抗CD39抗体の標的となり得る；免疫標的CD73は抗CD73抗体の標的となり得る；免疫標的CXCR4は抗CXCR4抗体の標的となり得る；免疫標的CXCL12は抗CXCL12抗体の標的となり得る；免疫標的SIRPAは抗SIRPA抗体の標的となり得る；免疫標的CD47は抗CD47抗体の標的となり得る；免疫標的VEGFは抗VEGF抗体の標的となり得る；ならびに、免疫標的ニューロピリンは抗ニューロピリン抗体の標的となり得る（たとえば、Mahoneyらの表1を参照されたい）。
ある実施形態において、放射線療法は、細胞の正常に機能する能力を制限するように、または細胞を完全に破壊するように、細胞に十分な損傷を引き起こす、指向性ガンマ線またはベータ線の使用を含む。
また別の実施形態において、CD40L変異タンパク質を、その複合体の標的化導入、ならびにがん抗原を発現するがんの治療のために、がん抗原特異抗体と融合させることができる。
CD70変異タンパク質
リガンドCD70はII型ホモ三量体型膜貫通リガンドである。正常細胞でのCD70の発現は、活性化されたTおよびBリンパ球ならびに成熟DCに限定されている。CD70に対する同族受容体はCD27であって、ナイーブT細胞、成熟T細胞、メモリーB細胞、およびNK細胞上で発現されるI型膜貫通受容体である。CD27は、細胞表面上にホモ二量体として発現されるので、そのことは、機能的なCD70/CD27相互作用が、少なくともCD70の六量体型で生じることを示唆する。CD70の重要な生物学的機能は、CD4+ およびCD8+ T細胞応答を効果的に刺激すること、T細胞生存を高めること、ならびにエフェクター機能を最適化することである。多くの種類の血液系および固形腫瘍が細胞表面上にCD70を発現すると実証されたが、抗原活性化リンパ球ではCD70は一過性にしか発現されない。この発現パターンは、CD70が抗体によるがん治療の標的となる可能性があることを確証する。ある実施形態において、本発明はCD70の共有結合性架橋多量体を特記する。
本発明のCD70変異タンパク質には、CD70変異タンパク質のホモ多量体を含める。それぞれのCD70変異タンパク質は、隣接するCD70変異タンパク質上のシステイン残基とのジスルフィド結合の形成を促進する、少なくとも1つのシステイン残基置換もしくは挿入を含有する。CD70変異タンパク質は、膜貫通CD70または可溶性CD70とすることができる。好ましくは、CD70変異タンパク質は膜貫通ドメインを欠いた可溶性CD70である。ある実施形態において、ジスルフィド結合は、隣接するCD70変異タンパク質上の置換されたシステイン残基間、隣接するCD70変異タンパク質上の置換されたシステイン残基と天然に存在するシステイン残基との間、または隣接するCD70変異タンパク質上の天然に存在するシステイン残基間で、形成することができる。本発明のCD70変異タンパク質の多量体は、2、3、4、または5つ以上の、好ましくは6つの、CD70変異タンパク質またはその断片からなる。ある実施形態において、それぞれのCD70変異タンパク質またはその断片は、配列番号203-235および654-656のいずれか1つから選択される配列に対して、少なくとも50％（たとえば、50％、55％、60％、65％、70％、75％、80％、85％、90％、95％、99％、または100％）の配列同一性を有する。
好ましくは、CD70変異タンパク質は、CD70ホモ多量体、たとえばホモ六量体、を形成する可溶性CD70変異タンパク質であって、この多量体において各モノマーは、2つの天然に存在するアミノ酸残基（すなわち非システイン残基）をシステイン残基で置き換えたシステイン置換、または1つもしくは複数のシステイン挿入を含有する。ある実施形態において、CD70変異タンパク質は、配列番号203に対して以下のシステイン置換のうち1つ、もしくは2つ以上を含有する：R83C、H107C、T127C、L128C、A129C、V130C、G131C、I132C、S134C、S137C、S139C、Q149C、G150C、C151S、T152C、R157C、T159C、T181C、D182C、およびE183C。ある実施形態において、CD70変異タンパク質は、配列番号203に対して以下のシステイン置換ペアのうち1つ、もしくは2つ以上（好ましくは1つ）を含有する：T127C/T181C、T127C/D182C、L128C/T181C、L128C/D182C、A129C/T181C、V130C/T181C、V130C/D182C、V130C/E183C、G131C/T152C、I132C/G150C、I132C/T152C、S134C/Q149C、S134C/G150C、S137C/S139、G150C/C151S、R157C/H107C、およびT159C/R83C。他の実施形態において、CD70変異タンパク質は、配列番号203のアミノ酸配列に対して、以下の1つもしくは複数の領域内に位置する1つもしくは複数のシステイン置換または挿入（たとえば2つの置換または挿入）を含有する：アミノ酸69-86、104-110、124-162、および178-186（たとえば、2つの異なる領域内に1つのシステイン置換または挿入）。他の実施形態において、望ましくない二量体形成を回避するために、CD70変異タンパク質の天然に存在するシステイン残基、たとえば残基C151、をセリン残基に変異させることができる。アミノ酸ナンバリングは、野生型CD70配列に対応する（たとえば配列番号203、UniProt Accession番号：P32970、Q53XX4、およびQ96J57）。
本発明のCD70変異タンパク質を含有する医薬組成物を使用して、免疫異常（たとえば、米国特許番号US8647624に記載の異常）、がん（たとえば、米国特許番号US8535678およびUS8609104に記載のがん）、および炎症性疾患（たとえば、米国特許公開番号US 20050191299に記載の疾患）を治療することができる。引用された特許および特許公開番号の内容は、参考としてその全体を本明細書に含めるものとする。
具体的には、本発明のCD70変異タンパク質は、関節リウマチ、接触皮膚炎、ぜんそく、GVHD、乾癬、および口腔がん（たとえば、口腔扁平上皮がん）の治療のために使用することができる。
ある実施形態において、CD70変異タンパク質を単独で、または化学療法剤、免疫療法剤、もしくは放射線とともに併用療法で使用して、さまざまながんを治療することができる。併用療法に使用される化学療法剤には、カンプトテシン、シスプラチン、カルボプラチン、オキサリプラチン、ブレオマイシン、マイトマイシンC、カリケアミシン、メイタンシノイド、ゲルダナマイシン、ドキソルビシン、イダルビシン、ダウノルビシン、エピルビシン、ブスルファン、カルムスチン（BCNU）、ロムスチン（CCNU）、セムスチン、サリドマイド、レナリドミド、メトトレキサート、アザチオプリン、6-メルカプトプリン、フルダラビン、5-アザシチジン、ペントスタチン（2'-デオキシコホルマイシン）、シタラビン（シトシンアラビノシド）、ゲムシタビン、5-フルオロウラシル、ヒドロキシ尿素、エレスクロモル、エトポシド、テニポシド、アムサクリン、トポテカン、イリノテカン、クロラムブシル、シクロホスファミド、イホスファミド、メルファラン、ボルテゾミブ、ビンクリスチン、ビンブラスチン、ビノレルビン、パクリタキセル、ドセタキセル、アムホテリシンB、リファンピシン、ペンタミジン、シクロスポリンA、タクロリムス（FK506）、シロリムス（ラパマイシン）、エベロリムス、テムシロリムス、ゾタロリムス、およびバイオリムスを含めることができるがそれらに限定されない。本明細書に記載のCD70変異タンパク質と併用することができる他の化学療法剤には、トラスツズマブ（ハーセプチン（HERCEPTIN（登録商標）））、ベバシズマブ（アバスチン（AVASTIN (登録商標）））、セツキシマブ（アービタックス（ERBITUX(登録商標）））、パニツムマブ（ベクチビックス（VECTIBIX(登録商標）））、イピリムマブ（ヤーボイ（YERVOY(登録商標）））、リツキシマブ（リツキサン（RITUXAN (登録商標））およびMABTHERA（登録商標））、アレムツズマブ（CAMPATH（登録商標））、オファツムマブ（アーゼラ（ARZERRA（登録商標）））、ゲムツズマブオゾガマイシン（マイロターグ（MYLOTARG（登録商標）））、ブレンツキシマブベドチン（アドセトリス（ADCETRIS（登録商標）））、90Y-イブリツモマブチウキセタン（セヴァリン（ZEVALIN（登録商標）））、および 131I-トシツモマブ（BEXXAR（登録商標））があるが、これらはScott et al.に詳細に記載されている。化学療法剤の追加例を本明細書に記載する（「TNFSFもしくはTNF様リガンド変異タンパク質の共有結合性架橋多量体を使用する治療法」の項を参照されたい）。
併用療法に使用される免疫療法剤には、抗TNF受容体スーパーファミリーアゴニスト抗体、抗TNF受容体スーパーファミリーアンタゴニスト抗体、がんチェックポイント阻害剤、たとえば抗CTLA-4剤、抗PD-1剤、抗PD-L1剤、および抗PD-L2剤など、CD70架橋剤、CD27剤、CD30剤、CD40剤、4-1BB剤、GITR剤、OX40剤、TRAILR1剤、TRAILR2剤、TWEAKR剤、ならびに、たとえば、Mahoneyらの表1に記載の免疫学的標的に対する薬剤を含めることができるがそれらに限定されない。たとえば、免疫標的4-1BBリガンドは、抗4-1BBリガンド抗体の標的となりうる；免疫標的OX40Lは抗OX40L抗体の標的となり得る；免疫標的GITRは抗GITR抗体の標的となり得る；免疫標的CD27は抗CD27抗体の標的となり得る；免疫標的TL1Aは抗TL1A抗体の標的となり得る；免疫標的CD40Lは抗CD40L抗体の標的となり得る；免疫標的LIGHTは抗LIGHT抗体の標的となり得る；免疫標的BTLAは抗BTLA抗体の標的となり得る；免疫標的LAG3は抗LAG3抗体の標的となり得る；免疫標的TIM3は抗TIM3抗体の標的となり得る；免疫標的Singlecsは抗Singlecs抗体の標的となり得る；免疫標的ICOSリガンドは抗ICOSリガンド抗体の標的となり得る；免疫標的B7-H3は抗B7-H3抗体の標的となり得る；免疫標的B7-H4は抗B7-H4抗体の標的となり得る；免疫標的VISTAは抗VISTA抗体の標的となり得る；免疫標的TMIGD2は抗TMIGD2抗体の標的となり得る；免疫標的BTNL2は抗BTNL2抗体の標的となり得る；免疫標的CD48は抗CD48抗体の標的となり得る；免疫標的KIRは抗KIR抗体の標的となり得る；免疫標的LIRは抗LIR抗体の標的となり得る；免疫標的ILTは抗ILT抗体の標的となり得る；免疫標的NKG2Dは抗NKG2D抗体の標的となり得る；免疫標的NKG2Aは抗NKG2A抗体の標的となり得る；免疫標的MICAは抗MICA抗体の標的となり得る；免疫標的MICBは抗MICB抗体の標的となり得る；免疫標的CD244は抗CD244抗体の標的となり得る；免疫標的CSF1Rは抗CSF1R抗体の標的となり得る；免疫標的IDOは抗IDO抗体の標的となり得る；免疫標的TGFβは抗TGFβ抗体の標的となり得る；免疫標的CD39は抗CD39抗体の標的となり得る；免疫標的CD73は抗CD73抗体の標的となり得る；免疫標的CXCR4は抗CXCR4抗体の標的となり得る；免疫標的CXCL12は抗CXCL12抗体の標的となり得る；免疫標的SIRPAは抗SIRPA抗体の標的となり得る；免疫標的CD47は抗CD47抗体の標的となり得る；免疫標的VEGFは抗VEGF抗体の標的となり得る；ならびに、免疫標的ニューロピリンは抗ニューロピリン抗体の標的となり得る（たとえば、Mahoneyらの表1を参照されたい）。
ある実施形態において、放射線療法は、細胞の正常に機能する能力を制限するように、または細胞を完全に破壊するように、細胞に十分な損傷を引き起こす、指向性ガンマ線またはベータ線の使用を含む。
また別の実施形態において、CD70変異タンパク質を、その複合体の標的化導入、ならびにがん抗原を発現するがんの治療のために、がん抗原特異抗体と融合させることができる。
4-1BBリガンド変異タンパク質
4-1BBリガンドおよびその受容体4-1BBはいずれも、天然に存在するII型膜貫通ホモ三量体である。しかしながら、4-1BBリガンドによる4-1BBの活性化は、オリゴマー形成を必要とし、三量体可溶性4-1BBリガンドはオリゴマー化した4-1BBリガンドより活性が約100倍低い。図1Bは4-1BBリガンドによる4-1BBシグナル伝達の、シグナル必要量の仮定に基づく図式を示す。4-1BBリガンドは活性化された抗原提示細胞上、たとえばDC、B細胞、およびマクロファージ上におもに発現される。受容体4-1BBは、活性化されたT細胞ならびに活性化されたNK細胞上で発現される誘導性共刺激受容体である。4-1BBリガンド/4-1BBシグナル伝達は、がん免疫療法の主要ターゲットであった。研究によれば、さまざまな腫瘍浸潤T細胞が4-1BB受容体を発現しており、アゴニスト4-1BB抗体が有効な抗腫瘍免疫応答を引き起こすことが判明している。
本発明の4-1BBリガンド変異タンパク質には、4-1BBリガンド変異タンパク質のホモ多量体を含める。それぞれの4-1BBリガンド変異タンパク質は、隣接する4-1BBリガンド変異タンパク質上のシステイン残基とのジスルフィド結合の形成を促進する、少なくとも1つのシステイン残基置換もしくは挿入を含有する。4-1BBリガンド変異タンパク質は、膜貫通4-1BBリガンドまたは可溶性4-1BBリガンドとすることができる。好ましくは、4-1BBリガンド変異タンパク質は膜貫通ドメインを欠いた可溶性4-1BBリガンドである。ある実施形態において、ジスルフィド結合は、隣接する4-1BBリガンド変異タンパク質上の置換されたシステイン残基間、隣接する4-1BBリガンド変異タンパク質上の置換されたシステイン残基と天然に存在するシステイン残基との間、または隣接する4-1BBリガンド変異タンパク質上の天然に存在するシステイン残基間で、形成することができる。本発明の4-1BBリガンド変異タンパク質の多量体は、2、3、4、または5つ以上の4-1BBリガンド変異タンパク質またはその断片からなる。ある実施形態において、それぞれの4-1BBリガンド変異タンパク質またはその断片は、配列番号267-296および731-733のいずれか1つから選択される配列に対して、少なくとも50％（たとえば、50％、55％、60％、65％、70％、75％、80％、85％、90％、95％、99％、または100％）の配列同一性を有する。
好ましくは、4-1BBリガンド変異タンパク質は、4-1BBリガンドホモ多量体を形成する可溶性4-1BBリガンド変異タンパク質であって、この多量体において各モノマーは、2つの天然に存在するアミノ酸残基（すなわち非システイン残基）をシステイン残基で置き換えたシステイン置換、または1つもしくは複数のシステイン挿入を含有する。ある実施形態において、4-1BBリガンド変異タンパク質は、配列番号267に対して以下のシステイン置換のうち1つ、もしくは2つ以上を含有する：Q94C、L115C、F144C、A178C、L179C、L181C、T182C、V183C、D184C、L185C、N194C、S195C、F197C、R202C、L203C、L204C、G231C、およびA232C。ある実施形態において、4-1BBリガンド変異タンパク質は、配列番号267に対して以下のシステイン置換ペアのうち1つ、もしくは2つ以上（好ましくは1つ）を含有する：A178C/G231C、L179C/G231C、L181C/G231C、L181C/A232C、T182C/F197C、V183C/S195C、V183C/F197C、D184C/S195C、L185C/N194C、L185C/S195C、R202C/F144C、L203C/Q94C、L204C/Q94C、およびL204C/L115C。他の実施形態において、4-1BBリガンド変異タンパク質は、配列番号267のアミノ酸配列に対して、以下の1つもしくは複数の領域内に位置する1つもしくは複数のシステイン置換または挿入（たとえば2つの置換または挿入）を含有する：アミノ酸80-97、112-118、175-207、および228-235（たとえば、2つの異なる領域内に1つのシステイン置換または挿入）。アミノ酸ナンバリングは、野生型4-1BBリガンド配列に対応する（たとえば配列番号267、UniProt Accession番号：P41273およびQ2M3S2）。
本発明の4-1BBリガンド変異タンパク質で治療することができる疾患および障害には、自己免疫疾患（たとえば、米国特許公開番号US20140081011に記載の疾患）、がん（たとえば、米国特許公開番号US 20120076722に記載のがん）、および炎症性疾患（たとえば、米国特許番号US7288638に記載の疾患）があるがそれらに限定されない。引用された特許および特許公開番号の内容は、参考としてその全体を本明細書に含めるものとする。ある実施形態において、本発明の4-1BBリガンド変異タンパク質を使用して、腫瘍選択的T細胞およびNK細胞上での4-1BB受容体発現を活性化することができる。
詳細には、本発明の4-1BBリガンド変異タンパク質を、自己免疫疾患（たとえば、多発性硬化症）、ぜんそく、およびGVHDの治療のために使用することができる。
ある実施形態において、4-1BBリガンド変異タンパク質を単独で、または化学療法剤、免疫療法剤、もしくは放射線とともに併用療法で使用して、さまざまながんを治療することができる。併用療法に使用される化学療法剤には、カンプトテシン、シスプラチン、カルボプラチン、オキサリプラチン、ブレオマイシン、マイトマイシンC、カリケアミシン、メイタンシノイド、ゲルダナマイシン、ドキソルビシン、イダルビシン、ダウノルビシン、エピルビシン、ブスルファン、カルムスチン（BCNU）、ロムスチン（CCNU）、セムスチン、サリドマイド、レナリドミド、メトトレキサート、アザチオプリン、6-メルカプトプリン、フルダラビン、5-アザシチジン、ペントスタチン（2'-デオキシコホルマイシン）、シタラビン（シトシンアラビノシド）、ゲムシタビン、5-フルオロウラシル、ヒドロキシ尿素、エレスクロモル、エトポシド、テニポシド、アムサクリン、トポテカン、イリノテカン、クロラムブシル、シクロホスファミド、イホスファミド、メルファラン、ボルテゾミブ、ビンクリスチン、ビンブラスチン、ビノレルビン、パクリタキセル、ドセタキセル、アムホテリシンB、リファンピシン、ペンタミジン、シクロスポリンA、タクロリムス（FK506）、シロリムス（ラパマイシン）、エベロリムス、テムシロリムス、ゾタロリムス、およびバイオリムスを含めることができるがそれらに限定されない。本明細書に記載の4-1BBリガンド変異タンパク質と併用することができる他の化学療法剤には、トラスツズマブ（ハーセプチン（HERCEPTIN（登録商標）））、ベバシズマブ（アバスチン（AVASTIN (登録商標）））、セツキシマブ（アービタックス（ERBITUX(登録商標）））、パニツムマブ（ベクチビックス（VECTIBIX(登録商標）））、イピリムマブ（ヤーボイ（YERVOY(登録商標）））、リツキシマブ（リツキサン（RITUXAN (登録商標））およびMABTHERA（登録商標））、アレムツズマブ（CAMPATH（登録商標））、オファツムマブ（アーゼラ（ARZERRA（登録商標）））、ゲムツズマブオゾガマイシン（マイロターグ（MYLOTARG（登録商標）））、ブレンツキシマブベドチン（アドセトリス（ADCETRIS（登録商標）））、90Y-イブリツモマブチウキセタン（セヴァリン（ZEVALIN（登録商標）））、および 131I-トシツモマブ（BEXXAR（登録商標））があるが、これらはScott et al.に詳細に記載されている。化学療法剤の追加例を本明細書に記載する（「TNFSFもしくはTNF様リガンド変異タンパク質の共有結合性架橋多量体を使用する治療法」の項を参照されたい）。
併用療法に使用される免疫療法剤には、抗TNF受容体スーパーファミリーアゴニスト抗体、抗TNF受容体スーパーファミリーアンタゴニスト抗体、がんチェックポイント阻害剤、たとえば抗CTLA-4剤、抗PD-1剤、抗PD-L1剤、および抗PD-L2剤など、4-1BBリガンド架橋剤、CD27剤、CD30剤、CD40剤、4-1BB剤、GITR剤、OX40剤、TRAILR1剤、TRAILR2剤、TWEAKR剤、ならびに、たとえば、Mahoneyらの表1に記載の免疫学的標的に対する薬剤を含めることができるがそれらに限定されない。たとえば、免疫標的4-1BBリガンドは、抗4-1BBリガンド抗体の標的となりうる；免疫標的OX40Lは抗OX40L抗体の標的となり得る；免疫標的GITRは抗GITR抗体の標的となり得る；免疫標的CD27は抗CD27抗体の標的となり得る；免疫標的TL1Aは抗TL1A抗体の標的となり得る；免疫標的CD40Lは抗CD40L抗体の標的となり得る；免疫標的LIGHTは抗LIGHT抗体の標的となり得る；免疫標的BTLAは抗BTLA抗体の標的となり得る；免疫標的LAG3は抗LAG3抗体の標的となり得る；免疫標的TIM3は抗TIM3抗体の標的となり得る；免疫標的Singlecsは抗Singlecs抗体の標的となり得る；免疫標的ICOSリガンドは抗ICOSリガンド抗体の標的となり得る；免疫標的B7-H3は抗B7-H3抗体の標的となり得る；免疫標的B7-H4は抗B7-H4抗体の標的となり得る；免疫標的VISTAは抗VISTA抗体の標的となり得る；免疫標的TMIGD2は抗TMIGD2抗体の標的となり得る；免疫標的BTNL2は抗BTNL2抗体の標的となり得る；免疫標的CD48は抗CD48抗体の標的となり得る；免疫標的KIRは抗KIR抗体の標的となり得る；免疫標的LIRは抗LIR抗体の標的となり得る；免疫標的ILTは抗ILT抗体の標的となり得る；免疫標的NKG2Dは抗NKG2D抗体の標的となり得る；免疫標的NKG2Aは抗NKG2A抗体の標的となり得る；免疫標的MICAは抗MICA抗体の標的となり得る；免疫標的MICBは抗MICB抗体の標的となり得る；免疫標的CD244は抗CD244抗体の標的となり得る；免疫標的CSF1Rは抗CSF1R抗体の標的となり得る；免疫標的IDOは抗IDO抗体の標的となり得る；免疫標的TGFβは抗TGFβ抗体の標的となり得る；免疫標的CD39は抗CD39抗体の標的となり得る；免疫標的CD73は抗CD73抗体の標的となり得る；免疫標的CXCR4は抗CXCR4抗体の標的となり得る；免疫標的CXCL12は抗CXCL12抗体の標的となり得る；免疫標的SIRPAは抗SIRPA抗体の標的となり得る；免疫標的CD47は抗CD47抗体の標的となり得る；免疫標的VEGFは抗VEGF抗体の標的となり得る；ならびに、免疫標的ニューロピリンは抗ニューロピリン抗体の標的となり得る（たとえば、Mahoneyらの表1を参照されたい）。
ある実施形態において、放射線療法は、細胞の正常に機能する能力を制限するように、または細胞を完全に破壊するように、細胞に十分な損傷を引き起こす、指向性ガンマ線またはベータ線の使用を含む。
また別の実施形態において、4-1BBリガンド変異タンパク質を、その複合体の標的化導入、ならびにがん抗原を発現するがんの治療のために、がん抗原特異抗体と融合させることができる。
OX40リガンド（OX40L）変異タンパク質
リガンドOX40（OX40L）は、主として抗原提示細胞、たとえばDC、B細胞、およびマクロファージ上に発現される。OX40Lおよびその受容体OX40の治療ターゲティングは、アゴニストOX40抗体または可溶性OX40Lの組換え型を用いて、がんの治療（たとえば、化学療法剤、免疫療法剤、または放射線を用いたがんの併用療法）に向けて追求されてきた。抗OX40治療による臨床試験の患者は、治療後に腫瘍特異的免疫応答が増加し、CD4+ およびCD8+ T細胞の増殖が増加した。重要なことは、ヒトOX40およびFcドメインの組換え六量体融合タンパク質が、抗OX40抗体治療と比べて、in vitroで可溶性治療薬として優れた生物活性を有したことである。
本発明のOX40L変異タンパク質にはOX40L変異タンパク質のホモ多量体を含める。それぞれのOX40L変異タンパク質は、隣接するOX40L変異タンパク質上のシステイン残基とのジスルフィド結合の形成を促進する、少なくとも1つのシステイン残基置換もしくは挿入を含有する。OX40L変異タンパク質は、膜貫通OX40Lまたは可溶性OX40Lとすることができる。好ましくは、OX40L変異タンパク質は膜貫通ドメインを欠いた可溶性OX40Lである。ある実施形態において、ジスルフィド結合は、隣接するOX40L変異タンパク質上の置換されたシステイン残基間、隣接するOX40L変異タンパク質上の置換されたシステイン残基と天然に存在するシステイン残基との間、または隣接するOX40L変異タンパク質上の天然に存在するシステイン残基間で、形成することができる。本発明のOX40L変異タンパク質の多量体は、2、3、4、または5つ以上のOX40L変異タンパク質またはその断片からなる（たとえば三量体）。ある実施形態において、それぞれのOX40L変異タンパク質またはその断片は、配列番号112-131および645-647のいずれか1つから選択される配列に対して、少なくとも50％（たとえば、50％、55％、60％、65％、70％、75％、80％、85％、90％、95％、99％、または100％）の配列同一性を有する。
好ましくは、OX40L変異タンパク質は、OX40Lホモ多量体を形成する可溶性OX40L変異タンパク質であって、この多量体において各モノマーは、2つの天然に存在するアミノ酸残基（すなわち非システイン残基）をシステイン残基で置き換えたシステイン置換、または1つもしくは複数のシステイン挿入を含有する。ある実施形態において、OX40L変異タンパク質は、配列番号112に対して以下のシステイン置換のうち1つ、もしくは2つ以上を含有する：K63C、S104C、P125C、L126C、Q128C、L129C、K130C、S134C、M139C、V140C、A141C、N166C、およびG167C。ある実施形態において、OX40L変異タンパク質は、配列番号112に対して以下のシステイン置換ペアのうち1つ、もしくは2つ以上（好ましくは1つ）を含有する：P125C/N166C、L126C/N166C、Q128C/N166C、Q128C/G167C、L129C/S134C、K130C/S134C、M139C/S104C、V140C/K63C、およびA141C/K63C。他の実施形態において、OX40L変異タンパク質は、配列番号112のアミノ酸配列に対して、以下の1つもしくは複数の領域内に位置する1つもしくは複数のシステイン置換または挿入（たとえば2つの置換または挿入）を含有する：アミノ酸49-66、101-107、122-144、および163-170（たとえば、2つの異なる領域内に1つのシステイン置換または挿入）。アミノ酸ナンバリングは、野生型OX40L配列に対応する（たとえば配列番号112、UniProt Accession番号：P23510、Q5JZA5、およびQ9HCN9）。
本発明のOX40L変異タンパク質で治療することができる疾患および障害には、炎症性疾患（たとえば、米国特許公開番号US20100136030に記載の疾患）、がん（たとえば、米国特許公開番号US20120269825およびWO2013119202に記載のがん）、および免疫疾患（たとえば、米国特許番号US8551477）があるがそれらに限定されない。引用された特許および特許公開番号の内容は、参考としてその全体を本明細書に含めるものとする。ある実施形態において、T細胞上でのOX40シグナル伝達の選択的な腫瘍特異的活性化に、本発明のOX40L変異タンパク質を使用することができる。
詳細には、本発明のOX40L変異タンパク質を、慢性C型肝炎、狼瘡、アテローム性動脈硬化、同種移植片拒絶、1型糖尿病、およびぜんそくの治療のために使用することができる。
ある実施形態において、OX40L変異タンパク質を単独で、または化学療法剤、免疫療法剤、もしくは放射線とともに併用療法で使用して、さまざまながんを治療することができる。併用療法に使用される化学療法剤には、カンプトテシン、シスプラチン、カルボプラチン、オキサリプラチン、ブレオマイシン、マイトマイシンC、カリケアミシン、メイタンシノイド、ゲルダナマイシン、ドキソルビシン、イダルビシン、ダウノルビシン、エピルビシン、ブスルファン、カルムスチン（BCNU）、ロムスチン（CCNU）、セムスチン、サリドマイド、レナリドミド、メトトレキサート、アザチオプリン、6-メルカプトプリン、フルダラビン、5-アザシチジン、ペントスタチン（2'-デオキシコホルマイシン）、シタラビン（シトシンアラビノシド）、ゲムシタビン、5-フルオロウラシル、ヒドロキシ尿素、エレスクロモル、エトポシド、テニポシド、アムサクリン、トポテカン、イリノテカン、クロラムブシル、シクロホスファミド、イホスファミド、メルファラン、ボルテゾミブ、ビンクリスチン、ビンブラスチン、ビノレルビン、パクリタキセル、ドセタキセル、アムホテリシンB、リファンピシン、ペンタミジン、シクロスポリンA、タクロリムス（FK506）、シロリムス（ラパマイシン）、エベロリムス、テムシロリムス、ゾタロリムス、およびバイオリムスを含めることができるがそれらに限定されない。本明細書に記載のOX40L変異タンパク質と併用することができる他の化学療法剤には、トラスツズマブ（ハーセプチン（HERCEPTIN（登録商標）））、ベバシズマブ（アバスチン（AVASTIN (登録商標）））、セツキシマブ（アービタックス（ERBITUX(登録商標）））、パニツムマブ（ベクチビックス（VECTIBIX(登録商標）））、イピリムマブ（ヤーボイ（YERVOY(登録商標）））、リツキシマブ（リツキサン（RITUXAN (登録商標））およびMABTHERA（登録商標））、アレムツズマブ（CAMPATH（登録商標））、オファツムマブ（アーゼラ（ARZERRA（登録商標）））、ゲムツズマブオゾガマイシン（マイロターグ（MYLOTARG（登録商標）））、ブレンツキシマブベドチン（アドセトリス（ADCETRIS（登録商標）））、90Y-イブリツモマブチウキセタン（セヴァリン（ZEVALIN（登録商標）））、および 131I-トシツモマブ（BEXXAR（登録商標））があるが、これらはScott et al.に詳細に記載されている。化学療法剤の追加例を本明細書に記載する（「TNFSFもしくはTNF様リガンド変異タンパク質の共有結合性架橋多量体を使用する治療法」の項を参照されたい）。
併用療法に使用される免疫療法剤には、抗TNF受容体スーパーファミリーアゴニスト抗体、抗TNF受容体スーパーファミリーアンタゴニスト抗体、がんチェックポイント阻害剤、たとえば抗CTLA-4剤、抗PD-1剤、抗PD-L1剤、および抗PD-L2剤など、OX40L架橋剤、CD27剤、CD30剤、CD40剤、4-1BB剤、GITR剤、OX40剤、TRAILR1剤、TRAILR2剤、TWEAKR剤、ならびに、たとえば、Mahoneyらの表1に記載の免疫学的標的に対する薬剤を含めることができるがそれらに限定されない。たとえば、免疫標的4-1BBリガンドは、抗4-1BBリガンド抗体の標的となりうる；免疫標的OX40Lは抗OX40L抗体の標的となり得る；免疫標的GITRは抗GITR抗体の標的となり得る；免疫標的CD27は抗CD27抗体の標的となり得る；免疫標的TL1Aは抗TL1A抗体の標的となり得る；免疫標的CD40Lは抗CD40L抗体の標的となり得る；免疫標的LIGHTは抗LIGHT抗体の標的となり得る；免疫標的BTLAは抗BTLA抗体の標的となり得る；免疫標的LAG3は抗LAG3抗体の標的となり得る；免疫標的TIM3は抗TIM3抗体の標的となり得る；免疫標的Singlecsは抗Singlecs抗体の標的となり得る；免疫標的ICOSリガンドは抗ICOSリガンド抗体の標的となり得る；免疫標的B7-H3は抗B7-H3抗体の標的となり得る；免疫標的B7-H4は抗B7-H4抗体の標的となり得る；免疫標的VISTAは抗VISTA抗体の標的となり得る；免疫標的TMIGD2は抗TMIGD2抗体の標的となり得る；免疫標的BTNL2は抗BTNL2抗体の標的となり得る；免疫標的CD48は抗CD48抗体の標的となり得る；免疫標的KIRは抗KIR抗体の標的となり得る；免疫標的LIRは抗LIR抗体の標的となり得る；免疫標的ILTは抗ILT抗体の標的となり得る；免疫標的NKG2Dは抗NKG2D抗体の標的となり得る；免疫標的NKG2Aは抗NKG2A抗体の標的となり得る；免疫標的MICAは抗MICA抗体の標的となり得る；免疫標的MICBは抗MICB抗体の標的となり得る；免疫標的CD244は抗CD244抗体の標的となり得る；免疫標的CSF1Rは抗CSF1R抗体の標的となり得る；免疫標的IDOは抗IDO抗体の標的となり得る；免疫標的TGFβは抗TGFβ抗体の標的となり得る；免疫標的CD39は抗CD39抗体の標的となり得る；免疫標的CD73は抗CD73抗体の標的となり得る；免疫標的CXCR4は抗CXCR4抗体の標的となり得る；免疫標的CXCL12は抗CXCL12抗体の標的となり得る；免疫標的SIRPAは抗SIRPA抗体の標的となり得る；免疫標的CD47は抗CD47抗体の標的となり得る；免疫標的VEGFは抗VEGF抗体の標的となり得る；ならびに、免疫標的ニューロピリンは抗ニューロピリン抗体の標的となり得る（たとえば、Mahoneyらの表1を参照されたい）。
ある実施形態において、放射線療法は、細胞の正常に機能する能力を制限するように、または細胞を完全に破壊するように、細胞に十分な損傷を引き起こす、指向性ガンマ線またはベータ線の使用を含む。
また別の実施形態において、OX40L変異タンパク質を、その複合体の標的化導入、ならびにがん抗原を発現するがんの治療のために、がん抗原特異抗体と融合させることができる。
アディポネクチン変異タンパク質
アディポネクチン（GBP28、apM1、AdipoQ、またはACRP30とも呼ばれる）はTNF様リガンドであって、脂肪組織で合成され、代謝およびエネルギー恒常性に関与する。アディポネクチンは、タンパク質の補体-1q（C1q）ファミリー（タンパク質のTNF関連ファミリーとしても知られる）の一員であって、このファミリーは構造上TNFSFリガンドと類縁のタンパク質を含んでいる。アディポネクチンおよびその他のC1qファミリータンパク質、たとえばマイオネクチン（myonectin）、補体-1q腫瘍壊死因子関連タンパク質3（C1QTNF3）、およびC1QTNF5は、筋肉または肝細胞上の受容体を標的とすることができる。
本発明のアディポネクチン変異タンパク質には、アディポネクチン変異タンパク質のホモ多量体を含める。それぞれのアディポネクチン変異タンパク質は、隣接するアディポネクチン変異タンパク質上のシステイン残基とのジスルフィド結合の形成を促進する、少なくとも1つのシステイン残基置換もしくは挿入を含有する。アディポネクチン変異タンパク質は、膜貫通アディポネクチンまたは可溶性アディポネクチンとすることができる。好ましくは、アディポネクチン変異タンパク質は膜貫通ドメインを欠いた可溶性アディポネクチンである。ある実施形態において、ジスルフィド結合は、隣接するアディポネクチン変異タンパク質上の置換されたシステイン残基間、隣接するアディポネクチン変異タンパク質上の置換されたシステイン残基と天然に存在するシステイン残基との間、または隣接するアディポネクチン変異タンパク質上の天然に存在するシステイン残基間で、形成することができる。本発明のアディポネクチン変異タンパク質の多量体は、2、3、4、または5つ以上のアディポネクチン変異タンパク質またはその断片からなる。ある実施形態において、それぞれのアディポネクチン変異タンパク質またはその断片は、配列番号688-722のいずれか1つから選択される配列に対して、少なくとも50％（たとえば、50％、55％、60％、65％、70％、75％、80％、85％、90％、95％、99％、または100％）の配列同一性を有する。
好ましくは、アディポネクチン変異タンパク質は、アディポネクチンホモ多量体を形成する可溶性アディポネクチン変異タンパク質であって、この多量体において各モノマーは、2つの天然に存在するアミノ酸残基（すなわち非システイン残基）をシステイン残基で置き換えたシステイン置換、または1つもしくは複数のシステイン挿入を含有する。ある実施形態において、アディポネクチン変異タンパク質は、配列番号688のアミノ酸配列に対して以下のシステイン置換のうち1つ、もしくは2つ以上を含有する：S116C、A161C、A181C、M182C、L183C、F184C、T185C、Y186C、D187C、Q188C、N193C、V194C、Q196C、V201C、L202C、D229C、N230C、およびD231C。ある実施形態において、アディポネクチン変異タンパク質は、配列番号688に対して以下のシステイン置換ペアのうち1つ、もしくは2つ以上（好ましくは1つ）を含有する：A181C/D229C、A181C/N230C、M182C/D229C、M182C/N230C、L183C/D229C、F184C/D229C、F184C/N230C、F184C/D231C、T185C/Q196C、Y186C/V194C、Y186C/Q196C、D187C/V194C、Q188C/N193C、Q188C/V194C、V201C/A161C、およびL202C/S116C。他の実施形態において、アディポネクチン変異タンパク質は、配列番号688のアミノ酸配列に対して、以下の1つもしくは複数の領域内に位置する1つもしくは複数のシステイン置換または挿入（たとえば2つの置換または挿入）を含有する：アミノ酸103-119、158-164、178-205、および226-234（たとえば、2つの異なる領域内に1つのシステイン置換または挿入）。アミノ酸ナンバリングは、野生型アディポネクチン配列に対応する（たとえば配列番号688、UniProt Accession番号：Q15848）。
アディポネクチンで治療することができる疾患および障害には、代謝性疾患（たとえば、米国特許出願公開番号US 20020132773およびUS 20100273708に記載の疾患）および肺疾患（たとえば、米国特許出願公開番号US 20110218146）があるがそれらに限定されない。引用された特許公報の内容は、参考としてその全体を本明細書に含めるものとする。
詳細には、本発明のアディポネクチン変異タンパク質は、メタボリックシンドローム、2型糖尿病、およびアテローム性動脈硬化を治療するために使用することができる。
ある実施形態において、アディポネクチン変異タンパク質を単独で、または化学療法剤、免疫療法剤、もしくは放射線とともに併用療法で使用して、さまざまながんを治療することができる。併用療法に使用される化学療法剤には、カンプトテシン、シスプラチン、カルボプラチン、オキサリプラチン、ブレオマイシン、マイトマイシンC、カリケアミシン、メイタンシノイド、ゲルダナマイシン、ドキソルビシン、イダルビシン、ダウノルビシン、エピルビシン、ブスルファン、カルムスチン（BCNU）、ロムスチン（CCNU）、セムスチン、サリドマイド、レナリドミド、メトトレキサート、アザチオプリン、6-メルカプトプリン、フルダラビン、5-アザシチジン、ペントスタチン（2'-デオキシコホルマイシン）、シタラビン（シトシンアラビノシド）、ゲムシタビン、5-フルオロウラシル、ヒドロキシ尿素、エレスクロモル、エトポシド、テニポシド、アムサクリン、トポテカン、イリノテカン、クロラムブシル、シクロホスファミド、イホスファミド、メルファラン、ボルテゾミブ、ビンクリスチン、ビンブラスチン、ビノレルビン、パクリタキセル、ドセタキセル、アムホテリシンB、リファンピシン、ペンタミジン、シクロスポリンA、タクロリムス（FK506）、シロリムス（ラパマイシン）、エベロリムス、テムシロリムス、ゾタロリムス、およびバイオリムスを含めることができるがそれらに限定されない。本明細書に記載の4-1BBリガンド変異タンパク質と併用することができる他の化学療法剤には、トラスツズマブ（ハーセプチン（HERCEPTIN（登録商標）））、ベバシズマブ（アバスチン（AVASTIN (登録商標）））、セツキシマブ（アービタックス（ERBITUX(登録商標）））、パニツムマブ（ベクチビックス（VECTIBIX(登録商標）））、イピリムマブ（ヤーボイ（YERVOY(登録商標）））、リツキシマブ（リツキサン（RITUXAN (登録商標））およびMABTHERA（登録商標））、アレムツズマブ（CAMPATH（登録商標））、オファツムマブ（アーゼラ（ARZERRA（登録商標）））、ゲムツズマブオゾガマイシン（マイロターグ（MYLOTARG（登録商標）））、ブレンツキシマブベドチン（アドセトリス（ADCETRIS（登録商標）））、90Y-イブリツモマブチウキセタン（セヴァリン（ZEVALIN（登録商標）））、および 131I-トシツモマブ（BEXXAR（登録商標））があるが、これらはScott et al.に詳細に記載されている。化学療法剤の追加例を本明細書に記載する（「TNFSFもしくはTNF様リガンド変異タンパク質の共有結合性架橋多量体を使用する治療法」の項を参照されたい）。
併用療法に使用される免疫療法剤には、抗TNF受容体スーパーファミリーアゴニスト抗体、抗TNF受容体スーパーファミリーアンタゴニスト抗体、がんチェックポイント阻害剤、たとえば抗CTLA-4剤、抗PD-1剤、抗PD-L1剤、および抗PD-L2剤など、アディポネクチン架橋剤、CD27剤、CD30剤、CD40剤、4-1BB剤、GITR剤、OX40剤、TRAILR1剤、TRAILR2剤、TWEAKR剤、ならびに、たとえば、Mahoneyらの表1に記載の免疫学的標的に対する薬剤を含めることができるがそれらに限定されない。たとえば、免疫標的4-1BBリガンドは、抗4-1BBリガンド抗体の標的となりうる；免疫標的OX40Lは抗OX40L抗体の標的となり得る；免疫標的GITRは抗GITR抗体の標的となり得る；免疫標的CD27は抗CD27抗体の標的となり得る；免疫標的TL1Aは抗TL1A抗体の標的となり得る；免疫標的CD40Lは抗CD40L抗体の標的となり得る；免疫標的LIGHTは抗LIGHT抗体の標的となり得る；免疫標的BTLAは抗BTLA抗体の標的となり得る；免疫標的LAG3は抗LAG3抗体の標的となり得る；免疫標的TIM3は抗TIM3抗体の標的となり得る；免疫標的Singlecsは抗Singlecs抗体の標的となり得る；免疫標的ICOSリガンドは抗ICOSリガンド抗体の標的となり得る；免疫標的B7-H3は抗B7-H3抗体の標的となり得る；免疫標的B7-H4は抗B7-H4抗体の標的となり得る；免疫標的VISTAは抗VISTA抗体の標的となり得る；免疫標的TMIGD2は抗TMIGD2抗体の標的となり得る；免疫標的BTNL2は抗BTNL2抗体の標的となり得る；免疫標的CD48は抗CD48抗体の標的となり得る；免疫標的KIRは抗KIR抗体の標的となり得る；免疫標的LIRは抗LIR抗体の標的となり得る；免疫標的ILTは抗ILT抗体の標的となり得る；免疫標的NKG2Dは抗NKG2D抗体の標的となり得る；免疫標的NKG2Aは抗NKG2A抗体の標的となり得る；免疫標的MICAは抗MICA抗体の標的となり得る；免疫標的MICBは抗MICB抗体の標的となり得る；免疫標的CD244は抗CD244抗体の標的となり得る；免疫標的CSF1Rは抗CSF1R抗体の標的となり得る；免疫標的IDOは抗IDO抗体の標的となり得る；免疫標的TGFβは抗TGFβ抗体の標的となり得る；免疫標的CD39は抗CD39抗体の標的となり得る；免疫標的CD73は抗CD73抗体の標的となり得る；免疫標的CXCR4は抗CXCR4抗体の標的となり得る；免疫標的CXCL12は抗CXCL12抗体の標的となり得る；免疫標的SIRPAは抗SIRPA抗体の標的となり得る；免疫標的CD47は抗CD47抗体の標的となり得る；免疫標的VEGFは抗VEGF抗体の標的となり得る；ならびに、免疫標的ニューロピリンは抗ニューロピリン抗体の標的となり得る（たとえば、Mahoneyらの表1を参照されたい）。
ある実施形態において、放射線療法は、細胞の正常に機能する能力を制限するように、または細胞を完全に破壊するように、細胞に十分な損傷を引き起こす、指向性ガンマ線またはベータ線の使用を含む。
また別の実施形態において、アディポネクチン変異タンパク質を、その複合体の標的化導入、ならびにがん抗原を発現するがんの治療のために、がん抗原特異抗体と融合させることができる。
LT-α変異タンパク質
本発明のLT-α変異タンパク質にはLT-α変異タンパク質のホモ多量体を含める。それぞれのLT-α変異タンパク質は、隣接するLT-α変異タンパク質上のシステイン残基とのジスルフィド結合の形成を促進する、少なくとも1つのシステイン残基置換もしくは挿入を含有する。LT-α変異タンパク質は、膜貫通LT-αまたは可溶性LT-αとすることができる。好ましくは、LT-α変異タンパク質は膜貫通ドメインを欠いた可溶性LT-αである。ある実施形態において、ジスルフィド結合は、隣接するLT-α変異タンパク質上の置換されたシステイン残基間、隣接するLT-α変異タンパク質上の置換されたシステイン残基と天然に存在するシステイン残基との間、または隣接するLT-α変異タンパク質上の天然に存在するシステイン残基間で、形成することができる。本発明のLT-α変異タンパク質の多量体は、2、3、4、または5つ以上のLT-α変異タンパク質またはその断片からなる。ある実施形態において、それぞれのLT-α変異タンパク質またはその断片は、配列番号40-75のいずれか1つから選択される配列に対して、少なくとも50％（たとえば、50％、55％、60％、65％、70％、75％、80％、85％、90％、95％、99％、または100％）の配列同一性を有する。
好ましくは、LT-α変異タンパク質は、LT-αホモ多量体を形成する可溶性LT-α変異タンパク質であって、この多量体において各モノマーは、2つの天然に存在するアミノ酸残基（すなわち非システイン残基）をシステイン残基で置き換えたシステイン置換、または1つもしくは複数のシステイン挿入を含有する。ある実施形態において、LT-α変異タンパク質は、配列番号40に対して以下のシステイン置換のうち1つ、もしくは2つ以上を含有する：H66C、R85C、Y110C、P147C、L148C、L149C、S150C、S151C、Q152C、K153C、M154C、W163C、L164C、S166C、A171C、A172C、F173C、P195C、S196C、およびT197C。ある実施形態において、LT-α変異タンパク質は、配列番号40に対して以下のシステイン置換ペアのうち1つ、もしくは2つ以上（好ましくは1つ）を含有する：P147C/P195C、P147C/S196C、L148C/P195C、L148C/S196C、L149C/P195C、S150C/S196C、S150C/P195C、S150C/T197C、S151C/S166C、Q152C/L164C、Q152C/S166C、K153C/L164C、M154C/W163C、M154C/L164C、A171C/Y110C、A172C/H66C、F173C/H66C、およびF173C/R85C。他の実施形態において、LT-α変異タンパク質は、配列番号40のアミノ酸配列に対して、以下の1つもしくは複数の領域内に位置する1つもしくは複数のシステイン置換または挿入（たとえば2つの置換または挿入）を含有する：アミノ酸52-69、82-88、107-113、144-176、および192-200（たとえば、2つの異なる領域内に1つのシステイン置換または挿入）。アミノ酸ナンバリングは、野生型LT-α配列に対応する（たとえば配列番号40、UniProt Accession番号：P01374、Q8N4C3、およびQ9UKS8）。
本発明のLT-α変異タンパク質は、自己免疫疾患、神経疾患、がん（たとえば、固形腫瘍がん、造血器がん、膀胱がん、膵がん、子宮頸がん、肺がん、肝がん、卵巣がん、結腸がん、胃がん、ウイルス性がん、神経芽細胞腫、乳がん、前立腺がん、腎がん、白血病、肉腫、がん腫、非小細胞肺がん、非ホジキンリンパ腫、急性骨髄性白血病（AML）、慢性リンパ性白血病（CLL）、B細胞慢性リンパ性白血病（B-CLL）、多発性骨髄腫（MM）、赤白血病、腎細胞がん、軟部組織肉腫、黒色腫、星状細胞腫、および乏突起星状細胞腫）、感染性疾患、代謝性疾患（たとえば、糖尿病）、黄斑疾患（たとえば、黄斑変性）、筋萎縮、流産に関係する疾患、血管疾患（たとえばアテローム性動脈硬化）、骨量減少に関係する疾患（すなわち更年期の結果としての骨量減少、骨粗鬆症）、アレルギー、血液疾患（たとえば血友病）、AIDS、筋骨格系障害、成長受容体に関係する疾患、肥満の治療、臓器および組織の再生および修復、ならびに臓器移植術での使用のために（たとえば、臓器移植に起因する合併症（たとえば、移植片対宿主病（GVHD）および移植片拒絶）を治療または軽減するために）、使用することができる。
特に、本発明のLT-α変異タンパク質は、T細胞リンパ腫、白斑、非ホジキンリンパ腫、乾癬性関節炎、およびハンセン病の治療のために使用することができる。
ある実施形態において、LT-α変異タンパク質を単独で、または化学療法剤、免疫療法剤、もしくは放射線とともに併用療法で使用して、さまざまながんを治療することができる。併用療法に使用される化学療法剤には、カンプトテシン、シスプラチン、カルボプラチン、オキサリプラチン、ブレオマイシン、マイトマイシンC、カリケアミシン、メイタンシノイド、ゲルダナマイシン、ドキソルビシン、イダルビシン、ダウノルビシン、エピルビシン、ブスルファン、カルムスチン（BCNU）、ロムスチン（CCNU）、セムスチン、サリドマイド、レナリドミド、メトトレキサート、アザチオプリン、6-メルカプトプリン、フルダラビン、5-アザシチジン、ペントスタチン（2'-デオキシコホルマイシン）、シタラビン（シトシンアラビノシド）、ゲムシタビン、5-フルオロウラシル、ヒドロキシ尿素、エレスクロモル、エトポシド、テニポシド、アムサクリン、トポテカン、イリノテカン、クロラムブシル、シクロホスファミド、イホスファミド、メルファラン、ボルテゾミブ、ビンクリスチン、ビンブラスチン、ビノレルビン、パクリタキセル、ドセタキセル、アムホテリシンB、リファンピシン、ペンタミジン、シクロスポリンA、タクロリムス（FK506）、シロリムス（ラパマイシン）、エベロリムス、テムシロリムス、ゾタロリムス、およびバイオリムスを含めることができるがそれらに限定されない。本明細書に記載のLT-α変異タンパク質と併用することができる他の化学療法剤には、トラスツズマブ（ハーセプチン（HERCEPTIN（登録商標）））、ベバシズマブ（アバスチン（AVASTIN (登録商標）））、セツキシマブ（アービタックス（ERBITUX(登録商標）））、パニツムマブ（ベクチビックス（VECTIBIX(登録商標）））、イピリムマブ（ヤーボイ（YERVOY(登録商標）））、リツキシマブ（リツキサン（RITUXAN (登録商標））およびMABTHERA（登録商標））、アレムツズマブ（CAMPATH（登録商標））、オファツムマブ（アーゼラ（ARZERRA（登録商標）））、ゲムツズマブオゾガマイシン（マイロターグ（MYLOTARG（登録商標）））、ブレンツキシマブベドチン（アドセトリス（ADCETRIS（登録商標）））、90Y-イブリツモマブチウキセタン（セヴァリン（ZEVALIN（登録商標）））、および 131I-トシツモマブ（BEXXAR（登録商標））があるが、これらはScott et al.に詳細に記載されている。化学療法剤の追加例を本明細書に記載する（「TNFSFもしくはTNF様リガンド変異タンパク質の共有結合性架橋多量体を使用する治療法」の項を参照されたい）。
併用療法に使用される免疫療法剤には、抗TNF受容体スーパーファミリーアゴニスト抗体、抗TNF受容体スーパーファミリーアンタゴニスト抗体、がんチェックポイント阻害剤、たとえば抗CTLA-4剤、抗PD-1剤、抗PD-L1剤、および抗PD-L2剤など、LT-α架橋剤、CD27剤、CD30剤、CD40剤、4-1BB剤、GITR剤、OX40剤、TRAILR1剤、TRAILR2剤、TWEAKR剤、ならびに、たとえば、Mahoneyらの表1に記載の免疫学的標的に対する薬剤を含めることができるがそれらに限定されない。たとえば、免疫標的4-1BBリガンドは、抗4-1BBリガンド抗体の標的となりうる；免疫標的OX40Lは抗OX40L抗体の標的となり得る；免疫標的GITRは抗GITR抗体の標的となり得る；免疫標的CD27は抗CD27抗体の標的となり得る；免疫標的TL1Aは抗TL1A抗体の標的となり得る；免疫標的CD40Lは抗CD40L抗体の標的となり得る；免疫標的LIGHTは抗LIGHT抗体の標的となり得る；免疫標的BTLAは抗BTLA抗体の標的となり得る；免疫標的LAG3は抗LAG3抗体の標的となり得る；免疫標的TIM3は抗TIM3抗体の標的となり得る；免疫標的Singlecsは抗Singlecs抗体の標的となり得る；免疫標的ICOSリガンドは抗ICOSリガンド抗体の標的となり得る；免疫標的B7-H3は抗B7-H3抗体の標的となり得る；免疫標的B7-H4は抗B7-H4抗体の標的となり得る；免疫標的VISTAは抗VISTA抗体の標的となり得る；免疫標的TMIGD2は抗TMIGD2抗体の標的となり得る；免疫標的BTNL2は抗BTNL2抗体の標的となり得る；免疫標的CD48は抗CD48抗体の標的となり得る；免疫標的KIRは抗KIR抗体の標的となり得る；免疫標的LIRは抗LIR抗体の標的となり得る；免疫標的ILTは抗ILT抗体の標的となり得る；免疫標的NKG2Dは抗NKG2D抗体の標的となり得る；免疫標的NKG2Aは抗NKG2A抗体の標的となり得る；免疫標的MICAは抗MICA抗体の標的となり得る；免疫標的MICBは抗MICB抗体の標的となり得る；免疫標的CD244は抗CD244抗体の標的となり得る；免疫標的CSF1Rは抗CSF1R抗体の標的となり得る；免疫標的IDOは抗IDO抗体の標的となり得る；免疫標的TGFβは抗TGFβ抗体の標的となり得る；免疫標的CD39は抗CD39抗体の標的となり得る；免疫標的CD73は抗CD73抗体の標的となり得る；免疫標的CXCR4は抗CXCR4抗体の標的となり得る；免疫標的CXCL12は抗CXCL12抗体の標的となり得る；免疫標的SIRPAは抗SIRPA抗体の標的となり得る；免疫標的CD47は抗CD47抗体の標的となり得る；免疫標的VEGFは抗VEGF抗体の標的となり得る；ならびに、免疫標的ニューロピリンは抗ニューロピリン抗体の標的となり得る（たとえば、Mahoneyらの表1を参照されたい）。
ある実施形態において、放射線療法は、細胞の正常に機能する能力を制限するように、または細胞を完全に破壊するように、細胞に十分な損傷を引き起こす、指向性ガンマ線またはベータ線の使用を含む。
また別の実施形態において、LT-α変異タンパク質を、その複合体の標的化導入、ならびにがん抗原を発現するがんの治療のために、がん抗原特異抗体と融合させることができる。
LT-β変異タンパク質
本発明のLT-β変異タンパク質にはLT-β変異タンパク質のホモ多量体を含める。それぞれのLT-β変異タンパク質は、隣接するLT-β変異タンパク質上のシステイン残基とのジスルフィド結合の形成を促進する、少なくとも1つのシステイン残基置換もしくは挿入を含有する。LT-β変異タンパク質は、膜貫通LT-βまたは可溶性LT-βとすることができる。好ましくは、LT-β変異タンパク質は膜貫通ドメインを欠いた可溶性LT-βである。ある実施形態において、ジスルフィド結合は、隣接するLT-β変異タンパク質上の置換されたシステイン残基間、隣接するLT-β変異タンパク質上の置換されたシステイン残基と天然に存在するシステイン残基との間、または隣接するLT-β変異タンパク質上の天然に存在するシステイン残基間で、形成することができる。本発明のLT-β変異タンパク質の多量体は、2、3、4、または5つ以上のLT-β変異タンパク質またはその断片からなる。ある実施形態において、それぞれのLT-β変異タンパク質またはその断片は、配列番号76-111のいずれか1つから選択される配列に対して、少なくとも50％（たとえば、50％、55％、60％、65％、70％、75％、80％、85％、90％、95％、99％、または100％）の配列同一性を有する。
好ましくは、LT-β変異タンパク質は、LT-βホモ多量体を形成する可溶性LT-β変異タンパク質であって、この多量体において各モノマーは、2つの天然に存在するアミノ酸残基（すなわち非システイン残基）をシステイン残基で置き換えたシステイン置換、または1つもしくは複数のシステイン挿入を含有する。ある実施形態において、LT-β変異タンパク質は、配列番号76に対して以下のシステイン置換のうち1つ、もしくは2つ以上を含有する：H91C、Q110C、Y136C、L177C、L178C、L179C、E180C、G181C、A182C、E183C、T184C、W201C、Y202C、S204C、G209C、L210C、V211C、R233C、G234C、およびK235C。ある実施形態において、LT-β変異タンパク質は、配列番号76に対して以下のシステイン置換ペアのうち1つ、もしくは2つ以上（好ましくは1つ）を含有する：L177C/R233C、L177C/G234C、L178C/R233C、L178C/G234C、L179C/R233C、E180C/R233C、E180C/G234C、E180C/K235C、G181C/S204C、A182C/Y202C、A182C/S204C、E183C/Y202C、T184C/W201C、T184C/Y202C、G209C/Y136C、L210C/H91C、V211C/H91C、およびV211C/Q110C。他の実施形態において、LT-β変異タンパク質は、配列番号76のアミノ酸配列に対して、以下の1つもしくは複数の領域内に位置する1つもしくは複数のシステイン置換または挿入（たとえば2つの置換または挿入）を含有する：アミノ酸77-94、107-113、133-139、174-187、199-214、および230-238（たとえば、2つの異なる領域内に1つのシステイン置換または挿入）。アミノ酸ナンバリングは、野生型LT-β配列に対応する（たとえば配列番号76、UniProt Accession番号：Q06643、P78370、Q52LU8、およびQ99761）。
本発明のLT-β変異タンパク質は、自己免疫疾患、神経疾患、がん（たとえば、固形腫瘍がん、造血器がん、膀胱がん、膵がん、子宮頸がん、肺がん、肝がん、卵巣がん、結腸がん、胃がん、ウイルス性がん、神経芽細胞腫、乳がん、前立腺がん、腎がん、白血病、肉腫、がん腫、非小細胞肺がん、非ホジキンリンパ腫、急性骨髄性白血病（AML）、慢性リンパ性白血病（CLL）、B細胞慢性リンパ性白血病（B-CLL）、多発性骨髄腫（MM）、赤白血病、腎細胞がん、軟部組織肉腫、黒色腫、星状細胞腫、および乏突起星状細胞腫）、感染性疾患、代謝性疾患（たとえば、糖尿病）、黄斑疾患（たとえば、黄斑変性）、筋萎縮、流産に関係する疾患、血管疾患（たとえばアテローム性動脈硬化）、骨量減少に関係する疾患（すなわち更年期の結果としての骨量減少、骨粗鬆症）、アレルギー、血液疾患（たとえば血友病）、AIDS、筋骨格系障害、成長受容体に関係する疾患、肥満の治療、臓器および組織の再生および修復、ならびに臓器移植術での使用のために（たとえば、臓器移植に起因する合併症（たとえば、移植片対宿主病（GVHD）および移植片拒絶）を治療または軽減するために）、使用することができる。
特に、本発明のLT-α変異タンパク質は、1型糖尿病、関節リウマチ、およびがん（たとえば、固形腫瘍がん、造血器がん、膀胱がん、膵がん、子宮頸がん、肺がん、肝がん、卵巣がん、結腸がん、胃がん、ウイルス性がん、神経芽細胞腫、乳がん、前立腺がん、腎がん、白血病、肉腫、がん腫、非小細胞肺がん、非ホジキンリンパ腫、急性骨髄性白血病（AML）、慢性リンパ性白血病（CLL）、B細胞慢性リンパ性白血病（B-CLL）、多発性骨髄腫（MM）、赤白血病、腎細胞がん、軟部組織肉腫、黒色腫、星状細胞腫、および乏突起星状細胞腫）を治療するために使用することができる。
ある実施形態において、LT-β変異タンパク質を単独で、または化学療法剤、免疫療法剤、もしくは放射線とともに併用療法で使用して、さまざまながんを治療することができる。併用療法に使用される化学療法剤には、カンプトテシン、シスプラチン、カルボプラチン、オキサリプラチン、ブレオマイシン、マイトマイシンC、カリケアミシン、メイタンシノイド、ゲルダナマイシン、ドキソルビシン、イダルビシン、ダウノルビシン、エピルビシン、ブスルファン、カルムスチン（BCNU）、ロムスチン（CCNU）、セムスチン、サリドマイド、レナリドミド、メトトレキサート、アザチオプリン、6-メルカプトプリン、フルダラビン、5-アザシチジン、ペントスタチン（2'-デオキシコホルマイシン）、シタラビン（シトシンアラビノシド）、ゲムシタビン、5-フルオロウラシル、ヒドロキシ尿素、エレスクロモル、エトポシド、テニポシド、アムサクリン、トポテカン、イリノテカン、クロラムブシル、シクロホスファミド、イホスファミド、メルファラン、ボルテゾミブ、ビンクリスチン、ビンブラスチン、ビノレルビン、パクリタキセル、ドセタキセル、アムホテリシンB、リファンピシン、ペンタミジン、シクロスポリンA、タクロリムス（FK506）、シロリムス（ラパマイシン）、エベロリムス、テムシロリムス、ゾタロリムス、およびバイオリムスを含めることができるがそれらに限定されない。本明細書に記載のLT-β変異タンパク質と併用することができる他の化学療法剤には、トラスツズマブ（ハーセプチン（HERCEPTIN（登録商標）））、ベバシズマブ（アバスチン（AVASTIN (登録商標）））、セツキシマブ（アービタックス（ERBITUX(登録商標）））、パニツムマブ（ベクチビックス（VECTIBIX(登録商標）））、イピリムマブ（ヤーボイ（YERVOY(登録商標）））、リツキシマブ（リツキサン（RITUXAN (登録商標））およびMABTHERA（登録商標））、アレムツズマブ（CAMPATH（登録商標））、オファツムマブ（アーゼラ（ARZERRA（登録商標）））、ゲムツズマブオゾガマイシン（マイロターグ（MYLOTARG（登録商標）））、ブレンツキシマブベドチン（アドセトリス（ADCETRIS（登録商標）））、90Y-イブリツモマブチウキセタン（セヴァリン（ZEVALIN（登録商標）））、および 131I-トシツモマブ（BEXXAR（登録商標））があるが、これらはScott et al.に詳細に記載されている。化学療法剤の追加例を本明細書に記載する（「TNFSFもしくはTNF様リガンド変異タンパク質の共有結合性架橋多量体を使用する治療法」の項を参照されたい）。
併用療法に使用される免疫療法剤には、抗TNF受容体スーパーファミリーアゴニスト抗体、抗TNF受容体スーパーファミリーアンタゴニスト抗体、がんチェックポイント阻害剤、たとえば抗CTLA-4剤、抗PD-1剤、抗PD-L1剤、および抗PD-L2剤など、LT-β架橋剤、CD27剤、CD30剤、CD40剤、4-1BB剤、GITR剤、OX40剤、TRAILR1剤、TRAILR2剤、TWEAKR剤、ならびに、たとえば、Mahoneyらの表1に記載の免疫学的標的に対する薬剤を含めることができるがそれらに限定されない。たとえば、免疫標的4-1BBリガンドは、抗4-1BBリガンド抗体の標的となりうる；免疫標的OX40Lは抗OX40L抗体の標的となり得る；免疫標的GITRは抗GITR抗体の標的となり得る；免疫標的CD27は抗CD27抗体の標的となり得る；免疫標的TL1Aは抗TL1A抗体の標的となり得る；免疫標的CD40Lは抗CD40L抗体の標的となり得る；免疫標的LIGHTは抗LIGHT抗体の標的となり得る；免疫標的BTLAは抗BTLA抗体の標的となり得る；免疫標的LAG3は抗LAG3抗体の標的となり得る；免疫標的TIM3は抗TIM3抗体の標的となり得る；免疫標的Singlecsは抗Singlecs抗体の標的となり得る；免疫標的ICOSリガンドは抗ICOSリガンド抗体の標的となり得る；免疫標的B7-H3は抗B7-H3抗体の標的となり得る；免疫標的B7-H4は抗B7-H4抗体の標的となり得る；免疫標的VISTAは抗VISTA抗体の標的となり得る；免疫標的TMIGD2は抗TMIGD2抗体の標的となり得る；免疫標的BTNL2は抗BTNL2抗体の標的となり得る；免疫標的CD48は抗CD48抗体の標的となり得る；免疫標的KIRは抗KIR抗体の標的となり得る；免疫標的LIRは抗LIR抗体の標的となり得る；免疫標的ILTは抗ILT抗体の標的となり得る；免疫標的NKG2Dは抗NKG2D抗体の標的となり得る；免疫標的NKG2Aは抗NKG2A抗体の標的となり得る；免疫標的MICAは抗MICA抗体の標的となり得る；免疫標的MICBは抗MICB抗体の標的となり得る；免疫標的CD244は抗CD244抗体の標的となり得る；免疫標的CSF1Rは抗CSF1R抗体の標的となり得る；免疫標的IDOは抗IDO抗体の標的となり得る；免疫標的TGFβは抗TGFβ抗体の標的となり得る；免疫標的CD39は抗CD39抗体の標的となり得る；免疫標的CD73は抗CD73抗体の標的となり得る；免疫標的CXCR4は抗CXCR4抗体の標的となり得る；免疫標的CXCL12は抗CXCL12抗体の標的となり得る；免疫標的SIRPAは抗SIRPA抗体の標的となり得る；免疫標的CD47は抗CD47抗体の標的となり得る；免疫標的VEGFは抗VEGF抗体の標的となり得る；ならびに、免疫標的ニューロピリンは抗ニューロピリン抗体の標的となり得る（たとえば、Mahoneyらの表1を参照されたい）。
ある実施形態において、放射線療法は、細胞の正常に機能する能力を制限するように、または細胞を完全に破壊するように、細胞に十分な損傷を引き起こす、指向性ガンマ線またはベータ線の使用を含む。
また別の実施形態において、LT-β変異タンパク質を、その複合体の標的化導入、ならびにがん抗原を発現するがんの治療のために、がん抗原特異抗体と融合させることができる。
CD153変異タンパク質
本発明のCD153変異タンパク質にはCD153変異タンパク質のホモ多量体を含める。それぞれのCD153変異タンパク質は、隣接するCD153変異タンパク質上のシステイン残基とのジスルフィド結合の形成を促進する、少なくとも1つのシステイン残基置換もしくは挿入を含有する。CD153変異タンパク質は、膜貫通CD153または可溶性CD153とすることができる。好ましくは、CD153変異タンパク質は膜貫通ドメインを欠いた可溶性CD153である。ある実施形態において、ジスルフィド結合は、隣接するCD153変異タンパク質上の置換されたシステイン残基間、隣接するCD153変異タンパク質上の置換されたシステイン残基と天然に存在するシステイン残基との間、または隣接するCD153変異タンパク質上の天然に存在するシステイン残基間で、形成することができる。本発明のCD153変異タンパク質の多量体は、2、3、4、または5つ以上のCD153変異タンパク質またはその断片からなる。ある実施形態において、それぞれのCD153変異タンパク質またはその断片は、配列番号236-266のいずれか1つから選択される配列に対して、少なくとも50％（たとえば、50％、55％、60％、65％、70％、75％、80％、85％、90％、95％、99％、または100％）の配列同一性を有する。
好ましくは、CD153変異タンパク質は、CD153ホモ多量体を形成する可溶性CD153変異タンパク質であって、この多量体において各モノマーは、2つの天然に存在するアミノ酸残基（すなわち非システイン残基）をシステイン残基で置き換えたシステイン置換、または1つもしくは複数のシステイン挿入を含有する。ある実施形態において、CD153変異タンパク質は、配列番号236に対して以下のシステイン置換のうち1つ、もしくは2つ以上を含有する：Y101C、I142C、C151S、A172C、L173C、V174C、T175C、V176C、E178C、S179C、V186C、Y187C、N189C、L194C、L195C、D196C、P220C、L221C、およびE222C。ある実施形態において、CD153変異タンパク質は、配列番号236に対して以下のシステイン置換ペアのうち1つ、もしくは2つ以上（好ましくは1つ）を含有する：A172C/P220C、A172C/L221C、L173C/P220C, L173C/L221C、V174C/P220C、T175C/P220C、T175C/L221C、T175C/E222C、V176C/N189C、E178C/Y187C、S179C/V186C、S179C/Y187C、Y187C/C151S、N189C/C151S、L194C/I142C、L195C/Y101C、およびD196C/Y101C。他の実施形態において、CD153変異タンパク質は、配列番号236のアミノ酸配列に対して、以下の1つもしくは複数の領域内に位置する1つもしくは複数のシステイン置換または挿入（たとえば2つの置換または挿入）を含有する：アミノ酸86-104、169-199、および217-225（たとえば、2つの異なる領域内に1つのシステイン置換または挿入）。アミノ酸ナンバリングは、野生型CD153配列に対応する（たとえば配列番号236、UniProt Accession番号：P32971およびO43404）。
本発明のCD153変異タンパク質は、自己免疫疾患、神経疾患、がん（たとえば、固形腫瘍がん、造血器がん、膀胱がん、膵がん、子宮頸がん、肺がん、肝がん、卵巣がん、結腸がん、胃がん、ウイルス性がん、神経芽細胞腫、乳がん、前立腺がん、腎がん、白血病、肉腫、がん腫、非小細胞肺がん、非ホジキンリンパ腫、急性骨髄性白血病（AML）、慢性リンパ性白血病（CLL）、B細胞慢性リンパ性白血病（B-CLL）、多発性骨髄腫（MM）、赤白血病、腎細胞がん、軟部組織肉腫、黒色腫、星状細胞腫、および乏突起星状細胞腫）、感染性疾患、代謝性疾患（たとえば、糖尿病）、黄斑疾患（たとえば、黄斑変性）、筋萎縮、流産に関係する疾患、血管疾患（たとえばアテローム性動脈硬化）、骨量減少に関係する疾患（すなわち更年期の結果としての骨量減少、骨粗鬆症）、アレルギー、血液疾患（たとえば血友病）、AIDS、筋骨格系障害、成長受容体に関係する疾患、肥満の治療、臓器および組織の再生および修復、ならびに臓器移植術での使用のために（たとえば、臓器移植に起因する合併症（たとえば、移植片対宿主病（GVHD）および移植片拒絶）を治療または軽減するために）、使用することができる。
特に、本発明のCD153変異タンパク質は、アテローム性動脈硬化、関節リウマチ、卵巣がん、結核（TB）、ぜんそく、およびGVHDを治療するために使用することができる。
ある実施形態において、CD153変異タンパク質を単独で、または化学療法剤、免疫療法剤、もしくは放射線とともに併用療法で使用して、さまざまながんを治療することができる。併用療法に使用される化学療法剤には、カンプトテシン、シスプラチン、カルボプラチン、オキサリプラチン、ブレオマイシン、マイトマイシンC、カリケアミシン、メイタンシノイド、ゲルダナマイシン、ドキソルビシン、イダルビシン、ダウノルビシン、エピルビシン、ブスルファン、カルムスチン（BCNU）、ロムスチン（CCNU）、セムスチン、サリドマイド、レナリドミド、メトトレキサート、アザチオプリン、6-メルカプトプリン、フルダラビン、5-アザシチジン、ペントスタチン（2'-デオキシコホルマイシン）、シタラビン（シトシンアラビノシド）、ゲムシタビン、5-フルオロウラシル、ヒドロキシ尿素、エレスクロモル、エトポシド、テニポシド、アムサクリン、トポテカン、イリノテカン、クロラムブシル、シクロホスファミド、イホスファミド、メルファラン、ボルテゾミブ、ビンクリスチン、ビンブラスチン、ビノレルビン、パクリタキセル、ドセタキセル、アムホテリシンB、リファンピシン、ペンタミジン、シクロスポリンA、タクロリムス（FK506）、シロリムス（ラパマイシン）、エベロリムス、テムシロリムス、ゾタロリムス、およびバイオリムスを含めることができるがそれらに限定されない。本明細書に記載のCD153変異タンパク質と併用することができる他の化学療法剤には、トラスツズマブ（ハーセプチン（HERCEPTIN（登録商標）））、ベバシズマブ（アバスチン（AVASTIN (登録商標）））、セツキシマブ（アービタックス（ERBITUX(登録商標）））、パニツムマブ（ベクチビックス（VECTIBIX(登録商標）））、イピリムマブ（ヤーボイ（YERVOY(登録商標）））、リツキシマブ（リツキサン（RITUXAN (登録商標））およびMABTHERA（登録商標））、アレムツズマブ（CAMPATH（登録商標））、オファツムマブ（アーゼラ（ARZERRA（登録商標）））、ゲムツズマブオゾガマイシン（マイロターグ（MYLOTARG（登録商標）））、ブレンツキシマブベドチン（アドセトリス（ADCETRIS（登録商標）））、90Y-イブリツモマブチウキセタン（セヴァリン（ZEVALIN（登録商標）））、および 131I-トシツモマブ（BEXXAR（登録商標））があるが、これらはScott et al.に詳細に記載されている。化学療法剤の追加例を本明細書に記載する（「TNFSFもしくはTNF様リガンド変異タンパク質の共有結合性架橋多量体を使用する治療法」の項を参照されたい）。
併用療法に使用される免疫療法剤には、抗TNF受容体スーパーファミリーアゴニスト抗体、抗TNF受容体スーパーファミリーアンタゴニスト抗体、がんチェックポイント阻害剤、たとえば抗CTLA-4剤、抗PD-1剤、抗PD-L1剤、および抗PD-L2剤など、CD153架橋剤、CD27剤、CD30剤、CD40剤、4-1BB剤、GITR剤、OX40剤、TRAILR1剤、TRAILR2剤、TWEAKR剤、ならびに、たとえば、Mahoneyらの表1に記載の免疫学的標的に対する薬剤を含めることができるがそれらに限定されない。たとえば、免疫標的4-1BBリガンドは、抗4-1BBリガンド抗体の標的となりうる；免疫標的OX40Lは抗OX40L抗体の標的となり得る；免疫標的GITRは抗GITR抗体の標的となり得る；免疫標的CD27は抗CD27抗体の標的となり得る；免疫標的TL1Aは抗TL1A抗体の標的となり得る；免疫標的CD40Lは抗CD40L抗体の標的となり得る；免疫標的LIGHTは抗LIGHT抗体の標的となり得る；免疫標的BTLAは抗BTLA抗体の標的となり得る；免疫標的LAG3は抗LAG3抗体の標的となり得る；免疫標的TIM3は抗TIM3抗体の標的となり得る；免疫標的Singlecsは抗Singlecs抗体の標的となり得る；免疫標的ICOSリガンドは抗ICOSリガンド抗体の標的となり得る；免疫標的B7-H3は抗B7-H3抗体の標的となり得る；免疫標的B7-H4は抗B7-H4抗体の標的となり得る；免疫標的VISTAは抗VISTA抗体の標的となり得る；免疫標的TMIGD2は抗TMIGD2抗体の標的となり得る；免疫標的BTNL2は抗BTNL2抗体の標的となり得る；免疫標的CD48は抗CD48抗体の標的となり得る；免疫標的KIRは抗KIR抗体の標的となり得る；免疫標的LIRは抗LIR抗体の標的となり得る；免疫標的ILTは抗ILT抗体の標的となり得る；免疫標的NKG2Dは抗NKG2D抗体の標的となり得る；免疫標的NKG2Aは抗NKG2A抗体の標的となり得る；免疫標的MICAは抗MICA抗体の標的となり得る；免疫標的MICBは抗MICB抗体の標的となり得る；免疫標的CD244は抗CD244抗体の標的となり得る；免疫標的CSF1Rは抗CSF1R抗体の標的となり得る；免疫標的IDOは抗IDO抗体の標的となり得る；免疫標的TGFβは抗TGFβ抗体の標的となり得る；免疫標的CD39は抗CD39抗体の標的となり得る；免疫標的CD73は抗CD73抗体の標的となり得る；免疫標的CXCR4は抗CXCR4抗体の標的となり得る；免疫標的CXCL12は抗CXCL12抗体の標的となり得る；免疫標的SIRPAは抗SIRPA抗体の標的となり得る；免疫標的CD47は抗CD47抗体の標的となり得る；免疫標的VEGFは抗VEGF抗体の標的となり得る；ならびに、免疫標的ニューロピリンは抗ニューロピリン抗体の標的となり得る（たとえば、Mahoneyらの表1を参照されたい）。
ある実施形態において、放射線療法は、細胞の正常に機能する能力を制限するように、または細胞を完全に破壊するように、細胞に十分な損傷を引き起こす、指向性ガンマ線またはベータ線の使用を含む。
また別の実施形態において、CD153変異タンパク質を、その複合体の標的化導入、ならびにがん抗原を発現するがんの治療のために、がん抗原特異抗体と融合させることができる。
RANKL突然変異タンパク質
本発明のRANKL突然変異タンパク質は、RANKL突然変異タンパク質のホモ-マルチマーを含む。それぞれのRANKL突然変異タンパク質は、近隣のRANKL突然変異タンパク質上のシステイン残基とのジスルフィド結合の形成を促進する少なくとも1つのシステイン残基の置換または挿入を含む。RANKL突然変異タンパク質は、膜貫通性RANKLまたは可溶性RANKLであってもよい。好ましくは、RANKL突然変異タンパク質は、膜貫通ドメインを欠く可溶性RANKLである。いくつかの実施形態においては、近隣のRANKL突然変異タンパク質上の置換されたシステイン残基間、置換されたシステイン残基と、近隣のRANKL突然変異タンパク質上の天然のシステイン残基との間、または近隣のRANKL突然変異タンパク質上の天然のシステイン残基間でジスルフィド結合を形成させることができる。本発明のRANKL突然変異タンパク質のマルチマーは、2、3、4つ以上のRANKL突然変異タンパク質またはその断片から構成される。いくつかの実施形態においては、それぞれのRANKL突然変異タンパク質またはその断片は、配列番号333〜368および622のうちのいずれか1つから選択される配列に対する少なくとも50%の配列同一性(例えば、50%、55%、60%、65%、70%、75%、80%、85%、90%、95%、99%、または100%)を有する。
好ましくは、RANKL突然変異タンパク質は、それぞれのモノマーが2個の天然アミノ酸残基(すなわち、非システイン残基)をシステイン残基または1個以上のシステイン挿入で置き換わるシステイン置換を含有する、RANKLホモ-マルチマーを形成する可溶性RANKL突然変異タンパク質である。いくつかの実施形態においては、RANKL突然変異タンパク質は、配列番号333と比較して、1個以上の下記システイン置換：H167C、W193C、Y217C、T254C、L255C、M256C、K257C、G258C、G259C、S260C、W264C、G266C、H271C、F272C、S274C、G279C、F280C、F281C、Q303C、D304C、およびA305Cを含有する。いくつかの実施形態においては、RANKL突然変異タンパク質は、配列番号333と比較して、1個以上(好ましくは、1個)の下記のシステイン置換対: T254C/Q303C、T254C/D304C、L255C/Q303C、L255C/D304C、M256C/Q303C、K257C/Q303C、K257C/D304C、K257C/A305C、G258C/S274C、G259C/F272C、G259C/S274C、S260C/H271C、S260C/F272C、W264C/G266C、G279C/Y217C、F280C/H167C、F281C/H167C、およびF281C/W193Cを含有する。他の実施形態においては、RANKL突然変異タンパク質は、配列番号333のアミノ酸配列と比較して、1個以上の下記領域：アミノ酸153〜170、190〜196、214〜220、251〜284、および300〜308内に位置する1個以上のシステイン置換または挿入(例えば、2個の置換または挿入)を含有する(例えば、2つの異なる領域内の1個のシステイン置換または挿入)。アミノ酸番号は、野生型RANKL配列(例えば、配列番号333、UniProt受託番号O14788、O14723、Q96Q17、およびQ9P2Q3)と比較したものである。
本発明のRANKL突然変異タンパク質を、自己免疫疾患、神経疾患、がん(例えば、固形腫瘍がん、造血がん、膀胱がん、膵臓がん、子宮頸がん、肺がん、肝臓がん、卵巣がん、結腸がん、胃がん、ウイルス誘導性がん、神経芽腫、乳がん、前立腺がん、腎がん、白血病、肉腫、癌腫、非小細胞肺癌、非ホジキンリンパ腫、急性骨髄性白血病(AML)、慢性リンパ球性白血病(CLL)、B細胞慢性リンパ球性白血病(B-CLL)、多発性骨髄腫(MM)、赤白血病、腎細胞癌、軟部組織肉腫、メラノーマ、アストロサイトーマ、およびオリゴアストロサイトーマ)、感染症、代謝性疾患(例えば、糖尿病)、黄斑疾患(例えば、黄斑変性)、筋萎縮症、流産と関連する疾患、血管疾患(例えば、アテローム性動脈硬化症)、骨量減少と関連する疾患(すなわち、閉経、骨粗鬆症の結果としての骨量減少)、アレルギー、血液障害(例えば、血友病)、AIDS、骨格筋障害、増殖受容体と関連する疾患、肥満の処置のため、組織または臓器修復または再生のため、ならびに臓器移植手順における使用のため(例えば、臓器移植の結果生じる合併症(例えば、移植片対宿主疾患(GVHD)および移植片拒絶)を処置または軽減するため)に用いることができる。
特に、本発明のRANKL突然変異タンパク質を、骨量減少と関連する疾患、歯周病、高カルシウム血症、疼痛、移植(例えば、細胞、組織、および臓器)と関連する合併症、がん(例えば、固形腫瘍がん、造血がん、膀胱がん、膵臓がん、子宮頸がん、肺がん、肝臓がん、卵巣がん、結腸がん、胃がん、ウイルス誘導性がん、神経芽腫、乳がん、前立腺がん、腎がん、白血病、肉腫、癌腫、非小細胞肺癌、非ホジキンリンパ腫、急性骨髄性白血病(AML)、慢性リンパ球性白血病(CLL)、B細胞慢性リンパ球性白血病(B-CLL)、多発性骨髄腫(MM)、赤白血病、腎細胞癌、軟部組織肉腫、メラノーマ、アストロサイトーマ、およびオリゴアストロサイトーマ)、感染症、自己免疫疾患、ならびにHofbauerら(Cancer 92:460-470, 2001)、Sudaら(Endocr Rev. 20:345-357, 1999)、および米国特許第7,399,829号(それぞれ、その全体が参照により本明細書に組み込まれる)に記載された疾患および障害の処置のために用いることができる。
いくつかの実施形態においては、RANKL突然変異タンパク質を用いて、単独で、または化学療法剤、免疫療法剤、もしくは照射との組合せ療法において、様々ながんを処置することができる。組合せ療法において用いられる化学療法剤としては、限定されるものではないが、カンプトテシン、シスプラチン、カルボプラチン、オキサリプラチン、ブレオマイシン、マイトマイシンC、カリケアマイシン、メイタンシノイド、ゲルダナマイシン、ドキソルビシン、イダルビシン、ダウノルビシン、エピルビシン、ブスルファン、カルムスチン(BCNU)、ロムスチン(CCNU)、セムスチン、サリドマイド、レナリドミド、メトトレキサート、アザチオプリン、6-メルカプトプリン、フルダラビン、5-アザシチジン、ペントスタチン(2'-デオキシコホルマイシン)、シタラビン(シトシンアラビノシド)、ゲムシタビン、5-フルオロウラシル、ヒドロキシウレア、エレスクロモル、エトポシド、テニポシド、アムサクリン、トポテカン、イリノテカン、クロラムブシル、シクロホスファミド、イホスファミド、メルファラン、ボルテゾミブ、ビンクリスチン、ビンブラスチン、ビノレルビン、パクリタキセル、ドセタキセル、アンホテリシンB、リファンピシン、ペンタミジン、シクロスポリンA、タクロリムス(FK506)、シロリムス(ラパマイシン)、エベロリムス、テムシロリムス、ゾタロリムス、およびビオリムスが挙げられる。本明細書に記載のRANKL突然変異タンパク質と組み合わせて用いることができる他の化学療法剤としては、Scottらに詳細に記載されている、トラスツズマブ(HERCEPTIN(登録商標))、ベバシズマブ(AVASTIN(登録商標))、セツキシマブ(ERBITUX(登録商標))、パニツムマブ(VECTIBIX(登録商標))、イピリムマブ(YERVOY(登録商標))、リツキシマブ(RITUXAN(登録商標)およびMABTHERA(登録商標))、アレムツズマブ(CAMPATH(登録商標))、オファツムマブ(ARZERRA(登録商標))、ゲムツズマブオゾガマイシン(MYLOTARG(登録商標))、ブレンツキシマブベドチン(ADCETRIS(登録商標))、90Y-イブリツモマブチウキセタン(ZEVALIN(登録商標))、および131I-トシツモマブ(BEXXAR(登録商標))が挙げられる。化学療法剤のさらなる例は、本明細書に記載される(TNFSFまたはTNF様リガンド突然変異タンパク質の共有架橋マルチマーを用いる処置方法のセクションを参照されたい)。
組合せ療法において用いられる免疫療法剤としては、限定されるものではないが、抗TNF受容体スーパーファミリーアゴニスト抗体、抗TNF受容体スーパーファミリーアンタゴニスト抗体、抗CTLA-4剤、抗PD-1剤、抗PD-L1剤、および抗PD-L2剤などのがんチェックポイント阻害剤、RANKL架橋剤、CD27剤、CD30剤、CD40剤、4-1BB剤、GITR剤、OX40剤、TRAILR1剤、TRAILR2剤、TWEAKR剤、ならびに、例えば、Mahoneyらの表1に記載の免疫学的標的を指向する薬剤が挙げられる。例えば、免疫学的標的4-1BBリガンドを、抗4-1BBリガンド抗体を用いて標的化することができる；免疫学的標的OX40Lを、抗OX40抗体を用いて標的化することができる；免疫学的標的GITRを、抗GITR抗体を用いて標的化することができる；免疫学的標的CD27を、抗CD27抗体を用いて標的化することができる；免疫学的標的TL1Aを、抗TL1A抗体を用いて標的化することができる；免疫学的標的CD40Lを、抗CD40L抗体を用いて標的化することができる；免疫学的標的LIGHTを、抗LIGHT抗体を用いて標的化することができる；免疫学的標的BTLAを、抗BTLA抗体を用いて標的化することができる；免疫学的標的LAG3を、抗LAG3抗体を用いて標的化することができる；免疫学的標的TIM3を、抗TIM3抗体を用いて標的化することができる；免疫学的標的Singlecsを、抗Singlecs抗体を用いて標的化することができる；免疫学的標的ICOSリガンドを、抗ICOSリガンド抗体を用いて標的化することができる；免疫学的標的B7-H3を、抗B7-H3抗体を用いて標的化することができる；免疫学的標的B7-H4を、抗B7-H4抗体を用いて標的化することができる；免疫学的標的VISTAを、抗VISTA抗体を用いて標的化することができる；免疫学的標的TMIGD2を、抗TMIGD2抗体を用いて標的化することができる；免疫学的標的BTNL2を、抗BTNL2抗体を用いて標的化することができる；免疫学的標的CD48を、抗CD48抗体を用いて標的化することができる；免疫学的標的KIRを、抗KIR抗体を用いて標的化することができる；免疫学的標的LIRを、抗LIR抗体を用いて標的化することができる；免疫学的標的ILTを、抗ILT抗体を用いて標的化することができる；免疫学的標的NKG2Dを、抗NKG2D抗体を用いて標的化することができる；免疫学的標的NKG2Aを、抗NKG2A抗体を用いて標的化することができる；免疫学的標的MICAを、抗MICA抗体を用いて標的化することができる；免疫学的標的MICBを、抗MICB抗体を用いて標的化することができる；免疫学的標的CD244を、抗CD244抗体を用いて標的化することができる；免疫学的標的CSF1Rを、抗CSF1R抗体を用いて標的化することができる；免疫学的標的IDOを、抗IDO抗体を用いて標的化することができる；免疫学的標的TGFβを、抗TGFβ抗体を用いて標的化することができる；免疫学的標的CD39を、抗CD39抗体を用いて標的化することができる；免疫学的標的CD73を、抗CD73抗体を用いて標的化することができる；免疫学的標的CXCR4を、抗CXCR4抗体を用いて標的化することができる；免疫学的標的CXCL12を、抗CXCL12抗体を用いて標的化することができる；免疫学的標的SIRPAを、抗SIRPA抗体を用いて標的化することができる；免疫学的標的CD47を、抗CD47抗体を用いて標的化することができる；免疫学的標的VEGFを、抗VEGF抗体を用いて標的化することができる；および免疫学的標的ニューロピリンを、抗ニューロピリン抗体を用いて標的化することができる(例えば、Mahoneyらの表1を参照されたい)。
いくつかの実施形態においては、照射は、細胞に対する十分な損傷を誘導して、正常に機能するその能力を制限するため、または細胞を完全に破壊するための指向性ガンマ線またはベータ線の使用を含む。
いくつかの実施形態においては、RANKL突然変異タンパク質を、複合体の標的化された送達およびがん抗原を発現するがんの処置のために、がん抗原特異的抗体に融合させることができる。
TWEAK突然変異タンパク質
本発明のTWEAK突然変異タンパク質は、TWEAK突然変異タンパク質のホモ-マルチマーを含む。それぞれのTWEAK突然変異タンパク質は、近隣のTWEAK突然変異タンパク質上のシステイン残基とのジスルフィド結合の形成を促進する少なくとも1つのシステイン残基の置換または挿入を含む。TWEAK突然変異タンパク質は、膜貫通性TWEAKまたは可溶性TWEAKであってもよい。好ましくは、TWEAK突然変異タンパク質は、膜貫通ドメインを欠く可溶性TWEAKである。いくつかの実施形態においては、近隣のTWEAK突然変異タンパク質上の置換されたシステイン残基間、置換されたシステイン残基と、近隣のTWEAK突然変異タンパク質上の天然のシステイン残基との間、または近隣のTWEAK突然変異タンパク質上の天然のシステイン残基間でジスルフィド結合を形成させることができる。本発明のTWEAK突然変異タンパク質のマルチマーは、2、3、4つ以上のTWEAK突然変異タンパク質またはその断片から構成される。いくつかの実施形態においては、それぞれのTWEAK突然変異タンパク質またはその断片は、配列番号369〜397のうちのいずれか1つから選択される配列に対する少なくとも50%の配列同一性(例えば、50%、55%、60%、65%、70%、75%、80%、85%、90%、95%、99%、または100%)を有する。
好ましくは、TWEAK突然変異タンパク質は、それぞれのモノマーが2個の天然アミノ酸残基(すなわち、非システイン残基)をシステイン残基または1個以上のシステイン挿入で置き換わるシステイン置換を含有する、TWEAKホモ-マルチマーを形成する可溶性TWEAK突然変異タンパク質である。いくつかの実施形態においては、TWEAK突然変異タンパク質は、配列番号369と比較して、1個以上の下記システイン置換：Y164C、L187C、A188C、L189C、R190C、L192C、E193C、E194C、Q206C、L207C、L209C、R208C、S213C、G214C、P238C、F239C、およびL240Cを含有する。いくつかの実施形態においては、TWEAK突然変異タンパク質は、配列番号369と比較して、1個以上(好ましくは、1個)の下記のシステイン置換対: Y164C/S213C、Y164C/G214C、L187C/P238C、L187C/F239C、A188C/P238C、A188C/F239C、L189C/P238C、R190C/P238C、R190C/F239C、R190C/L240C、L192C/L207C、L192C/L209C、E193C/R208C、E194C/Q206C、およびE194C/L207Cを含有する。他の実施形態においては、TWEAK突然変異タンパク質は、配列番号369のアミノ酸配列と比較して、1個以上の下記領域：アミノ酸96〜105、161〜167、184〜197、204〜217、および235〜243内に位置する1個以上のシステイン置換または挿入(例えば、2個の置換または挿入)を含有する(例えば、2つの異なる領域内の1個のシステイン置換または挿入)。アミノ酸番号は、野生型TWEAK配列(例えば、配列番号369、UniProt受託番号O43508、O8IZK7、およびQ8WUZ7)と比較したものである。
本発明のTWEAK突然変異タンパク質を、自己免疫疾患、神経疾患、がん(例えば、固形腫瘍がん、造血がん、膀胱がん、膵臓がん、子宮頸がん、肺がん、肝臓がん、卵巣がん、結腸がん、胃がん、ウイルス誘導性がん、神経芽腫、乳がん、前立腺がん、腎がん、白血病、肉腫、癌腫、非小細胞肺癌、非ホジキンリンパ腫、急性骨髄性白血病(AML)、慢性リンパ球性白血病(CLL)、B細胞慢性リンパ球性白血病(B-CLL)、多発性骨髄腫(MM)、赤白血病、腎細胞癌、軟部組織肉腫、メラノーマ、アストロサイトーマ、およびオリゴアストロサイトーマ)、感染症、代謝性疾患(例えば、糖尿病)、黄斑疾患(例えば、黄斑変性)、筋萎縮症、流産と関連する疾患、血管疾患(例えば、アテローム性動脈硬化症)、骨量減少と関連する疾患(すなわち、閉経、骨粗鬆症の結果としての骨量減少)、アレルギー、血液障害(例えば、血友病)、AIDS、骨格筋障害、増殖受容体と関連する疾患、肥満の処置のため、組織または臓器修復または再生のため、ならびに臓器移植手順における使用のため(例えば、臓器移植の結果生じる合併症(例えば、移植片対宿主疾患(GVHD)および移植片拒絶)を処置または軽減するため)に用いることができる。
特に、本発明のTWEAK突然変異タンパク質を、組織修復および再モデリングにおいて用いることができる。
いくつかの実施形態においては、TWEAK突然変異タンパク質を用いて、単独で、または化学療法剤、免疫療法剤、もしくは照射との組合せ療法において、様々ながんを処置することができる。組合せ療法において用いられる化学療法剤としては、限定されるものではないが、カンプトテシン、シスプラチン、カルボプラチン、オキサリプラチン、ブレオマイシン、マイトマイシンC、カリケアマイシン、メイタンシノイド、ゲルダナマイシン、ドキソルビシン、イダルビシン、ダウノルビシン、エピルビシン、ブスルファン、カルムスチン(BCNU)、ロムスチン(CCNU)、セムスチン、サリドマイド、レナリドミド、メトトレキサート、アザチオプリン、6-メルカプトプリン、フルダラビン、5-アザシチジン、ペントスタチン(2'-デオキシコホルマイシン)、シタラビン(シトシンアラビノシド)、ゲムシタビン、5-フルオロウラシル、ヒドロキシウレア、エレスクロモル、エトポシド、テニポシド、アムサクリン、トポテカン、イリノテカン、クロラムブシル、シクロホスファミド、イホスファミド、メルファラン、ボルテゾミブ、ビンクリスチン、ビンブラスチン、ビノレルビン、パクリタキセル、ドセタキセル、アンホテリシンB、リファンピシン、ペンタミジン、シクロスポリンA、タクロリムス(FK506)、シロリムス(ラパマイシン)、エベロリムス、テムシロリムス、ゾタロリムス、およびビオリムスが挙げられる。本明細書に記載のTWEAK突然変異タンパク質と組み合わせて用いることができる他の化学療法剤としては、Scottらに詳細に記載されている、トラスツズマブ(HERCEPTIN(登録商標))、ベバシズマブ(AVASTIN(登録商標))、セツキシマブ(ERBITUX(登録商標))、パニツムマブ(VECTIBIX(登録商標))、イピリムマブ(YERVOY(登録商標))、リツキシマブ(RITUXAN(登録商標)およびMABTHERA(登録商標))、アレムツズマブ(CAMPATH(登録商標))、オファツムマブ(ARZERRA(登録商標))、ゲムツズマブオゾガマイシン(MYLOTARG(登録商標))、ブレンツキシマブベドチン(ADCETRIS(登録商標))、90Y-イブリツモマブチウキセタン(ZEVALIN(登録商標))、および131I-トシツモマブ(BEXXAR(登録商標))が挙げられる。化学療法剤のさらなる例は、本明細書に記載される(TNFSFまたはTNF様リガンド突然変異タンパク質の共有架橋マルチマーを用いる処置方法のセクションを参照されたい)。
組合せ療法において用いられる免疫療法剤としては、限定されるものではないが、抗TNF受容体スーパーファミリーアゴニスト抗体、抗TNF受容体スーパーファミリーアンタゴニスト抗体、抗CTLA-4剤、抗PD-1剤、抗PD-L1剤、および抗PD-L2剤などのがんチェックポイント阻害剤、TWEAK架橋剤、CD27剤、CD30剤、CD40剤、4-1BB剤、GITR剤、OX40剤、TRAILR1剤、TRAILR2剤、TWEAKR剤、ならびに、例えば、Mahoneyらの表1に記載の免疫学的標的を指向する薬剤が挙げられる。例えば、免疫学的標的4-1BBリガンドを、抗4-1BBリガンド抗体を用いて標的化することができる；免疫学的標的OX40Lを、抗OX40抗体を用いて標的化することができる；免疫学的標的GITRを、抗GITR抗体を用いて標的化することができる；免疫学的標的CD27を、抗CD27抗体を用いて標的化することができる；免疫学的標的TL1Aを、抗TL1A抗体を用いて標的化することができる；免疫学的標的CD40Lを、抗CD40L抗体を用いて標的化することができる；免疫学的標的LIGHTを、抗LIGHT抗体を用いて標的化することができる；免疫学的標的BTLAを、抗BTLA抗体を用いて標的化することができる；免疫学的標的LAG3を、抗LAG3抗体を用いて標的化することができる；免疫学的標的TIM3を、抗TIM3抗体を用いて標的化することができる；免疫学的標的Singlecsを、抗Singlecs抗体を用いて標的化することができる；免疫学的標的ICOSリガンドを、抗ICOSリガンド抗体を用いて標的化することができる；免疫学的標的B7-H3を、抗B7-H3抗体を用いて標的化することができる；免疫学的標的B7-H4を、抗B7-H4抗体を用いて標的化することができる；免疫学的標的VISTAを、抗VISTA抗体を用いて標的化することができる；免疫学的標的TMIGD2を、抗TMIGD2抗体を用いて標的化することができる；免疫学的標的BTNL2を、抗BTNL2抗体を用いて標的化することができる；免疫学的標的CD48を、抗CD48抗体を用いて標的化することができる；免疫学的標的KIRを、抗KIR抗体を用いて標的化することができる；免疫学的標的LIRを、抗LIR抗体を用いて標的化することができる；免疫学的標的ILTを、抗ILT抗体を用いて標的化することができる；免疫学的標的NKG2Dを、抗NKG2D抗体を用いて標的化することができる；免疫学的標的NKG2Aを、抗NKG2A抗体を用いて標的化することができる；免疫学的標的MICAを、抗MICA抗体を用いて標的化することができる；免疫学的標的MICBを、抗MICB抗体を用いて標的化することができる；免疫学的標的CD244を、抗CD244抗体を用いて標的化することができる；免疫学的標的CSF1Rを、抗CSF1R抗体を用いて標的化することができる；免疫学的標的IDOを、抗IDO抗体を用いて標的化することができる；免疫学的標的TGFβを、抗TGFβ抗体を用いて標的化することができる；免疫学的標的CD39を、抗CD39抗体を用いて標的化することができる；免疫学的標的CD73を、抗CD73抗体を用いて標的化することができる；免疫学的標的CXCR4を、抗CXCR4抗体を用いて標的化することができる；免疫学的標的CXCL12を、抗CXCL12抗体を用いて標的化することができる；免疫学的標的SIRPAを、抗SIRPA抗体を用いて標的化することができる；免疫学的標的CD47を、抗CD47抗体を用いて標的化することができる；免疫学的標的VEGFを、抗VEGF抗体を用いて標的化することができる；および免疫学的標的ニューロピリンを、抗ニューロピリン抗体を用いて標的化することができる(例えば、Mahoneyらの表1を参照されたい)。
いくつかの実施形態においては、照射は、細胞に対する十分な損傷を誘導して、正常に機能するその能力を制限するため、または細胞を完全に破壊するための指向性ガンマ線またはベータ線の使用を含む。
いくつかの実施形態においては、TWEAK突然変異タンパク質を、複合体の標的化された送達およびがん抗原を発現するがんの処置のために、がん抗原特異的抗体に融合させることができる。
APRIL突然変異タンパク質
本発明のAPRIL突然変異タンパク質は、APRIL突然変異タンパク質のホモ-マルチマーを含む。それぞれのAPRIL突然変異タンパク質は、近隣のAPRIL突然変異タンパク質上のシステイン残基とのジスルフィド結合の形成を促進する少なくとも1つのシステイン残基の置換または挿入を含む。APRIL突然変異タンパク質は、膜貫通性APRILまたは可溶性APRILであってもよい。好ましくは、APRIL突然変異タンパク質は、膜貫通ドメインを欠く可溶性APRILである。いくつかの実施形態においては、近隣のAPRIL突然変異タンパク質上の置換されたシステイン残基間、置換されたシステイン残基と、近隣のAPRIL突然変異タンパク質上の天然のシステイン残基との間、または近隣のAPRIL突然変異タンパク質上の天然のシステイン残基間でジスルフィド結合を形成させることができる。本発明のAPRIL突然変異タンパク質のマルチマーは、2、3、4つ以上のAPRIL突然変異タンパク質またはその断片から構成される。いくつかの実施形態においては、それぞれのAPRIL突然変異タンパク質またはその断片は、配列番号398〜434のうちのいずれか1つから選択される配列に対する少なくとも50%の配列同一性(例えば、50%、55%、60%、65%、70%、75%、80%、85%、90%、95%、99%、または100%)を有する。
好ましくは、APRIL突然変異タンパク質は、それぞれのモノマーが2個の天然アミノ酸残基(すなわち、非システイン残基)をシステイン残基または1個以上のシステイン挿入で置き換わるシステイン置換を含有する、APRILホモ-マルチマーを形成する可溶性APRIL突然変異タンパク質である。いくつかの実施形態においては、APRIL突然変異タンパク質は、配列番号398と比較して、1個以上の下記システイン置換：H119C、F127C、A141C、Y166C、T192C、L193C、F194C、R195C、I197C、R198C、S199C、A207C、Y208C、S210C、C211S、G215C、V216C、F217C、P240C、H241C、およびG242Cを含有する。いくつかの実施形態においては、APRIL突然変異タンパク質は、配列番号398と比較して、1個以上(好ましくは、1個)の下記のシステイン置換対: T192C/P240C、T192C/H241C、L193C/P240C、L193C/H241C、F194C/P240C、R195C/P240C、R195C/H241C、R195C/G242C、I197C/Y208C、I197C/S210C、R198C/Y208C、S199C/A207C、S199C/Y208C、S210C/C211S、G215C/Y166C、V216C/H119C、F217C/H119C、およびF127C/A141Cを含有する。他の実施形態においては、APRIL突然変異タンパク質は、配列番号398のアミノ酸配列と比較して、1個以上の下記領域：アミノ酸105〜130、138〜144、163〜169、189〜220、および237〜245内に位置する1個以上のシステイン置換または挿入(例えば、2個の置換または挿入)を含有する(例えば、2つの異なる領域内の1個のシステイン置換または挿入)。アミノ酸番号は、野生型APRIL配列(例えば、配列番号398、UniProt受託番号O75888、A8MYD5、B4DVT2、Q541E1、Q5U0G8、Q96HV6、Q9P1M8、およびQ9P1M9)と比較したものである。
本発明のAPRIL突然変異タンパク質を、自己免疫疾患、神経疾患、がん(例えば、固形腫瘍がん、造血がん、膀胱がん、膵臓がん、子宮頸がん、肺がん、肝臓がん、卵巣がん、結腸がん、胃がん、ウイルス誘導性がん、神経芽腫、乳がん、前立腺がん、腎がん、白血病、肉腫、癌腫、非小細胞肺癌、非ホジキンリンパ腫、急性骨髄性白血病(AML)、慢性リンパ球性白血病(CLL)、B細胞慢性リンパ球性白血病(B-CLL)、多発性骨髄腫(MM)、赤白血病、腎細胞癌、軟部組織肉腫、メラノーマ、アストロサイトーマ、およびオリゴアストロサイトーマ)、感染症、代謝性疾患(例えば、糖尿病)、黄斑疾患(例えば、黄斑変性)、筋萎縮症、流産と関連する疾患、血管疾患(例えば、アテローム性動脈硬化症)、骨量減少と関連する疾患(すなわち、閉経、骨粗鬆症の結果としての骨量減少)、アレルギー、血液障害(例えば、血友病)、AIDS、骨格筋障害、増殖受容体と関連する疾患、肥満の処置のため、組織または臓器修復または再生のため、ならびに臓器移植手順における使用のため(例えば、臓器移植の結果生じる合併症(例えば、移植片対宿主疾患(GVHD)および移植片拒絶)を処置または軽減するため)に用いることができる。
特に、本発明のAPRIL突然変異タンパク質を、B細胞成熟および再構成を誘導および刺激するために用いることができる。
いくつかの実施形態においては、APRIL突然変異タンパク質を用いて、単独で、または化学療法剤、免疫療法剤、もしくは照射との組合せ療法において、様々ながんを処置することができる。組合せ療法において用いられる化学療法剤としては、限定されるものではないが、カンプトテシン、シスプラチン、カルボプラチン、オキサリプラチン、ブレオマイシン、マイトマイシンC、カリケアマイシン、メイタンシノイド、ゲルダナマイシン、ドキソルビシン、イダルビシン、ダウノルビシン、エピルビシン、ブスルファン、カルムスチン(BCNU)、ロムスチン(CCNU)、セムスチン、サリドマイド、レナリドミド、メトトレキサート、アザチオプリン、6-メルカプトプリン、フルダラビン、5-アザシチジン、ペントスタチン(2'-デオキシコホルマイシン)、シタラビン(シトシンアラビノシド)、ゲムシタビン、5-フルオロウラシル、ヒドロキシウレア、エレスクロモル、エトポシド、テニポシド、アムサクリン、トポテカン、イリノテカン、クロラムブシル、シクロホスファミド、イホスファミド、メルファラン、ボルテゾミブ、ビンクリスチン、ビンブラスチン、ビノレルビン、パクリタキセル、ドセタキセル、アンホテリシンB、リファンピシン、ペンタミジン、シクロスポリンA、タクロリムス(FK506)、シロリムス(ラパマイシン)、エベロリムス、テムシロリムス、ゾタロリムス、およびビオリムスが挙げられる。本明細書に記載のAPRIL突然変異タンパク質と組み合わせて用いることができる他の化学療法剤としては、Scottらに詳細に記載されている、トラスツズマブ(HERCEPTIN(登録商標))、ベバシズマブ(AVASTIN(登録商標))、セツキシマブ(ERBITUX(登録商標))、パニツムマブ(VECTIBIX(登録商標))、イピリムマブ(YERVOY(登録商標))、リツキシマブ(RITUXAN(登録商標)およびMABTHERA(登録商標))、アレムツズマブ(CAMPATH(登録商標))、オファツムマブ(ARZERRA(登録商標))、ゲムツズマブオゾガマイシン(MYLOTARG(登録商標))、ブレンツキシマブベドチン(ADCETRIS(登録商標))、90Y-イブリツモマブチウキセタン(ZEVALIN(登録商標))、および131I-トシツモマブ(BEXXAR(登録商標))が挙げられる。化学療法剤のさらなる例は、本明細書に記載される(TNFSFまたはTNF様リガンド突然変異タンパク質の共有架橋マルチマーを用いる処置方法のセクションを参照されたい)。
組合せ療法において用いられる免疫療法剤としては、限定されるものではないが、抗TNF受容体スーパーファミリーアゴニスト抗体、抗TNF受容体スーパーファミリーアンタゴニスト抗体、抗CTLA-4剤、抗PD-1剤、抗PD-L1剤、および抗PD-L2剤などのがんチェックポイント阻害剤、APRIL架橋剤、CD27剤、CD30剤、CD40剤、4-1BB剤、GITR剤、OX40剤、TRAILR1剤、TRAILR2剤、TWEAKR剤、ならびに、例えば、Mahoneyらの表1に記載の免疫学的標的を指向する薬剤が挙げられる。例えば、免疫学的標的4-1BBリガンドを、抗4-1BBリガンド抗体を用いて標的化することができる；免疫学的標的OX40Lを、抗OX40抗体を用いて標的化することができる；免疫学的標的GITRを、抗GITR抗体を用いて標的化することができる；免疫学的標的CD27を、抗CD27抗体を用いて標的化することができる；免疫学的標的TL1Aを、抗TL1A抗体を用いて標的化することができる；免疫学的標的CD40Lを、抗CD40L抗体を用いて標的化することができる；免疫学的標的LIGHTを、抗LIGHT抗体を用いて標的化することができる；免疫学的標的BTLAを、抗BTLA抗体を用いて標的化することができる；免疫学的標的LAG3を、抗LAG3抗体を用いて標的化することができる；免疫学的標的TIM3を、抗TIM3抗体を用いて標的化することができる；免疫学的標的Singlecsを、抗Singlecs抗体を用いて標的化することができる；免疫学的標的ICOSリガンドを、抗ICOSリガンド抗体を用いて標的化することができる；免疫学的標的B7-H3を、抗B7-H3抗体を用いて標的化することができる；免疫学的標的B7-H4を、抗B7-H4抗体を用いて標的化することができる；免疫学的標的VISTAを、抗VISTA抗体を用いて標的化することができる；免疫学的標的TMIGD2を、抗TMIGD2抗体を用いて標的化することができる；免疫学的標的BTNL2を、抗BTNL2抗体を用いて標的化することができる；免疫学的標的CD48を、抗CD48抗体を用いて標的化することができる；免疫学的標的KIRを、抗KIR抗体を用いて標的化することができる；免疫学的標的LIRを、抗LIR抗体を用いて標的化することができる；免疫学的標的ILTを、抗ILT抗体を用いて標的化することができる；免疫学的標的NKG2Dを、抗NKG2D抗体を用いて標的化することができる；免疫学的標的NKG2Aを、抗NKG2A抗体を用いて標的化することができる；免疫学的標的MICAを、抗MICA抗体を用いて標的化することができる；免疫学的標的MICBを、抗MICB抗体を用いて標的化することができる；免疫学的標的CD244を、抗CD244抗体を用いて標的化することができる；免疫学的標的CSF1Rを、抗CSF1R抗体を用いて標的化することができる；免疫学的標的IDOを、抗IDO抗体を用いて標的化することができる；免疫学的標的TGFβを、抗TGFβ抗体を用いて標的化することができる；免疫学的標的CD39を、抗CD39抗体を用いて標的化することができる；免疫学的標的CD73を、抗CD73抗体を用いて標的化することができる；免疫学的標的CXCR4を、抗CXCR4抗体を用いて標的化することができる；免疫学的標的CXCL12を、抗CXCL12抗体を用いて標的化することができる；免疫学的標的SIRPAを、抗SIRPA抗体を用いて標的化することができる；免疫学的標的CD47を、抗CD47抗体を用いて標的化することができる；免疫学的標的VEGFを、抗VEGF抗体を用いて標的化することができる；および免疫学的標的ニューロピリンを、抗ニューロピリン抗体を用いて標的化することができる(例えば、Mahoneyらの表1を参照されたい)。
いくつかの実施形態においては、照射は、細胞に対する十分な損傷を誘導して、正常に機能するその能力を制限するため、または細胞を完全に破壊するための指向性ガンマ線またはベータ線の使用を含む。
いくつかの実施形態においては、APRIL突然変異タンパク質を、複合体の標的化された送達およびがん抗原を発現するがんの処置のために、がん抗原特異的抗体に融合させることができる。
BLys突然変異タンパク質
本発明のBLys突然変異タンパク質は、BLys突然変異タンパク質のホモ-マルチマーを含む。それぞれのBLys突然変異タンパク質は、近隣のBLys突然変異タンパク質上のシステイン残基とのジスルフィド結合の形成を促進する少なくとも1つのシステイン残基の置換または挿入を含む。BLys突然変異タンパク質は、膜貫通性BLysまたは可溶性BLysであってもよい。好ましくは、BLys突然変異タンパク質は、膜貫通ドメインを欠く可溶性BLysである。いくつかの実施形態においては、近隣のBLys突然変異タンパク質上の置換されたシステイン残基間、置換されたシステイン残基と、近隣のBLys突然変異タンパク質上の天然のシステイン残基との間、または近隣のBLys突然変異タンパク質上の天然のシステイン残基間でジスルフィド結合を形成させることができる。本発明のBLys突然変異タンパク質のマルチマーは、2、3、4つ以上のBLys突然変異タンパク質またはその断片から構成される。いくつかの実施形態においては、それぞれのBLys突然変異タンパク質またはその断片は、配列番号435〜466のうちのいずれか1つから選択される配列に対する少なくとも50%の配列同一性(例えば、50%、55%、60%、65%、70%、75%、80%、85%、90%、95%、99%、または100%)を有する。
好ましくは、BLys突然変異タンパク質は、それぞれのモノマーが2個の天然アミノ酸残基(すなわち、非システイン残基)をシステイン残基または1個以上のシステイン挿入で置き換わるシステイン置換を含有する、BLysホモ-マルチマーを形成する可溶性BLys突然変異タンパク質である。いくつかの実施形態においては、BLys突然変異タンパク質は、配列番号435と比較して、1個以上の下記システイン置換：Q148C、Y196C、T228C、L229C、F230C、R231C、I233C、Q234C、N235C、P241C、N242C、S244C、G249C、I250C、A251C、G274C、D275C、およびV276Cを含有する。いくつかの実施形態においては、BLys突然変異タンパク質は、配列番号435と比較して、1個以上(好ましくは、1個)の下記のシステイン置換対: T228C/G274C、T228C/D275C、L229C/G274C、L229C/D275C、F230C/G274C、R231C/G274C、R231C/D275C、R231C/V276C、I233C/N242C、I233C/S244C、Q234C/N242C、N235C/P241C、N235C/N242C、G249C/Y196C、I250C/Q148C、およびA251C/Q148Cを含有する。他の実施形態においては、BLys突然変異タンパク質は、配列番号435のアミノ酸配列と比較して、1個以上の下記領域：アミノ酸134〜151、225〜254、および271〜279内に位置する1個以上のシステイン置換または挿入(例えば、2個の置換または挿入)を含有する(例えば、2つの異なる領域内の1個のシステイン置換または挿入)。アミノ酸番号は、野生型BLys配列(例えば、配列番号435、UniProt受託番号Q9Y275、E0ADT7、Q6FHD6、およびQ7Z5J2)と比較したものである。
本発明のBLys突然変異タンパク質を、自己免疫疾患、神経疾患、がん(例えば、固形腫瘍がん、造血がん、膀胱がん、膵臓がん、子宮頸がん、肺がん、肝臓がん、卵巣がん、結腸がん、胃がん、ウイルス誘導性がん、神経芽腫、乳がん、前立腺がん、腎がん、白血病、肉腫、癌腫、非小細胞肺癌、非ホジキンリンパ腫、急性骨髄性白血病(AML)、慢性リンパ球性白血病(CLL)、B細胞慢性リンパ球性白血病(B-CLL)、多発性骨髄腫(MM)、赤白血病、腎細胞癌、軟部組織肉腫、メラノーマ、アストロサイトーマ、およびオリゴアストロサイトーマ)、感染症、代謝性疾患(例えば、糖尿病)、黄斑疾患(例えば、黄斑変性)、筋萎縮症、流産と関連する疾患、血管疾患(例えば、アテローム性動脈硬化症)、骨量減少と関連する疾患(すなわち、閉経、骨粗鬆症の結果としての骨量減少)、アレルギー、血液障害(例えば、血友病)、AIDS、骨格筋障害、増殖受容体と関連する疾患、肥満の処置のため、組織または臓器修復または再生のため、ならびに臓器移植手順における使用のため(例えば、臓器移植の結果生じる合併症(例えば、移植片対宿主疾患(GVHD)および移植片拒絶)を処置または軽減するため)に用いることができる。
特に、本発明のBLys突然変異タンパク質を、B細胞成熟および再構成を誘導および刺激するために用いることができる。
いくつかの実施形態においては、BLys突然変異タンパク質を用いて、単独で、または化学療法剤、免疫療法剤、もしくは照射との組合せ療法において、様々ながんを処置することができる。組合せ療法において用いられる化学療法剤としては、限定されるものではないが、カンプトテシン、シスプラチン、カルボプラチン、オキサリプラチン、ブレオマイシン、マイトマイシンC、カリケアマイシン、メイタンシノイド、ゲルダナマイシン、ドキソルビシン、イダルビシン、ダウノルビシン、エピルビシン、ブスルファン、カルムスチン(BCNU)、ロムスチン(CCNU)、セムスチン、サリドマイド、レナリドミド、メトトレキサート、アザチオプリン、6-メルカプトプリン、フルダラビン、5-アザシチジン、ペントスタチン(2'-デオキシコホルマイシン)、シタラビン(シトシンアラビノシド)、ゲムシタビン、5-フルオロウラシル、ヒドロキシウレア、エレスクロモル、エトポシド、テニポシド、アムサクリン、トポテカン、イリノテカン、クロラムブシル、シクロホスファミド、イホスファミド、メルファラン、ボルテゾミブ、ビンクリスチン、ビンブラスチン、ビノレルビン、パクリタキセル、ドセタキセル、アンホテリシンB、リファンピシン、ペンタミジン、シクロスポリンA、タクロリムス(FK506)、シロリムス(ラパマイシン)、エベロリムス、テムシロリムス、ゾタロリムス、およびビオリムスが挙げられる。本明細書に記載のBLys突然変異タンパク質と組み合わせて用いることができる他の化学療法剤としては、Scottらに詳細に記載されている、トラスツズマブ(HERCEPTIN(登録商標))、ベバシズマブ(AVASTIN(登録商標))、セツキシマブ(ERBITUX(登録商標))、パニツムマブ(VECTIBIX(登録商標))、イピリムマブ(YERVOY(登録商標))、リツキシマブ(RITUXAN(登録商標)およびMABTHERA(登録商標))、アレムツズマブ(CAMPATH(登録商標))、オファツムマブ(ARZERRA(登録商標))、ゲムツズマブオゾガマイシン(MYLOTARG(登録商標))、ブレンツキシマブベドチン(ADCETRIS(登録商標))、90Y-イブリツモマブチウキセタン(ZEVALIN(登録商標))、および131I-トシツモマブ(BEXXAR(登録商標))が挙げられる。化学療法剤のさらなる例は、本明細書に記載される(TNFSFまたはTNF様リガンド突然変異タンパク質の共有架橋マルチマーを用いる処置方法のセクションを参照されたい)。
組合せ療法において用いられる免疫療法剤としては、限定されるものではないが、抗TNF受容体スーパーファミリーアゴニスト抗体、抗TNF受容体スーパーファミリーアンタゴニスト抗体、抗CTLA-4剤、抗PD-1剤、抗PD-L1剤、および抗PD-L2剤などのがんチェックポイント阻害剤、BLys架橋剤、CD27剤、CD30剤、CD40剤、4-1BB剤、GITR剤、OX40剤、TRAILR1剤、TRAILR2剤、TWEAKR剤、ならびに、例えば、Mahoneyらの表1に記載の免疫学的標的を指向する薬剤が挙げられる。例えば、免疫学的標的4-1BBリガンドを、抗4-1BBリガンド抗体を用いて標的化することができる；免疫学的標的OX40Lを、抗OX40抗体を用いて標的化することができる；免疫学的標的GITRを、抗GITR抗体を用いて標的化することができる；免疫学的標的CD27を、抗CD27抗体を用いて標的化することができる；免疫学的標的TL1Aを、抗TL1A抗体を用いて標的化することができる；免疫学的標的CD40Lを、抗CD40L抗体を用いて標的化することができる；免疫学的標的LIGHTを、抗LIGHT抗体を用いて標的化することができる；免疫学的標的BTLAを、抗BTLA抗体を用いて標的化することができる；免疫学的標的LAG3を、抗LAG3抗体を用いて標的化することができる；免疫学的標的TIM3を、抗TIM3抗体を用いて標的化することができる；免疫学的標的Singlecsを、抗Singlecs抗体を用いて標的化することができる；免疫学的標的ICOSリガンドを、抗ICOSリガンド抗体を用いて標的化することができる；免疫学的標的B7-H3を、抗B7-H3抗体を用いて標的化することができる；免疫学的標的B7-H4を、抗B7-H4抗体を用いて標的化することができる；免疫学的標的VISTAを、抗VISTA抗体を用いて標的化することができる；免疫学的標的TMIGD2を、抗TMIGD2抗体を用いて標的化することができる；免疫学的標的BTNL2を、抗BTNL2抗体を用いて標的化することができる；免疫学的標的CD48を、抗CD48抗体を用いて標的化することができる；免疫学的標的KIRを、抗KIR抗体を用いて標的化することができる；免疫学的標的LIRを、抗LIR抗体を用いて標的化することができる；免疫学的標的ILTを、抗ILT抗体を用いて標的化することができる；免疫学的標的NKG2Dを、抗NKG2D抗体を用いて標的化することができる；免疫学的標的NKG2Aを、抗NKG2A抗体を用いて標的化することができる；免疫学的標的MICAを、抗MICA抗体を用いて標的化することができる；免疫学的標的MICBを、抗MICB抗体を用いて標的化することができる；免疫学的標的CD244を、抗CD244抗体を用いて標的化することができる；免疫学的標的CSF1Rを、抗CSF1R抗体を用いて標的化することができる；免疫学的標的IDOを、抗IDO抗体を用いて標的化することができる；免疫学的標的TGFβを、抗TGFβ抗体を用いて標的化することができる；免疫学的標的CD39を、抗CD39抗体を用いて標的化することができる；免疫学的標的CD73を、抗CD73抗体を用いて標的化することができる；免疫学的標的CXCR4を、抗CXCR4抗体を用いて標的化することができる；免疫学的標的CXCL12を、抗CXCL12抗体を用いて標的化することができる；免疫学的標的SIRPAを、抗SIRPA抗体を用いて標的化することができる；免疫学的標的CD47を、抗CD47抗体を用いて標的化することができる；免疫学的標的VEGFを、抗VEGF抗体を用いて標的化することができる；および免疫学的標的ニューロピリンを、抗ニューロピリン抗体を用いて標的化することができる(例えば、Mahoneyらの表1を参照されたい)。
いくつかの実施形態においては、照射は、細胞に対する十分な損傷を誘導して、正常に機能するその能力を制限するため、または細胞を完全に破壊するための指向性ガンマ線またはベータ線の使用を含む。
いくつかの実施形態においては、BLys突然変異タンパク質を、複合体の標的化された送達およびがん抗原を発現するがんの処置のために、がん抗原特異的抗体に融合させることができる。
LIGHT突然変異タンパク質
本発明のLIGHT突然変異タンパク質は、LIGHT突然変異タンパク質のホモ-マルチマーを含む。それぞれのLIGHT突然変異タンパク質は、近隣のLIGHT突然変異タンパク質上のシステイン残基とのジスルフィド結合の形成を促進する少なくとも1つのシステイン残基の置換または挿入を含む。LIGHT突然変異タンパク質は、膜貫通性LIGHTまたは可溶性LIGHTであってもよい。好ましくは、LIGHT突然変異タンパク質は、膜貫通ドメインを欠く可溶性LIGHTである。いくつかの実施形態においては、近隣のLIGHT突然変異タンパク質上の置換されたシステイン残基間、置換されたシステイン残基と、近隣のLIGHT突然変異タンパク質上の天然のシステイン残基との間、または近隣のLIGHT突然変異タンパク質上の天然のシステイン残基間でジスルフィド結合を形成させることができる。本発明のLIGHT突然変異タンパク質のマルチマーは、2、3、4つ以上のLIGHT突然変異タンパク質またはその断片から構成される。いくつかの実施形態においては、それぞれのLIGHT突然変異タンパク質またはその断片は、配列番号467〜505のうちのいずれか1つから選択される配列に対する少なくとも50%の配列同一性(例えば、50%、55%、60%、65%、70%、75%、80%、85%、90%、95%、99%、または100%)を有する。
好ましくは、LIGHT突然変異タンパク質は、それぞれのモノマーが2個の天然アミノ酸残基(すなわち、非システイン残基)をシステイン残基または1個以上のシステイン挿入で置き換わるシステイン置換を含有する、LIGHTホモ-マルチマーを形成する可溶性LIGHT突然変異タンパク質である。いくつかの実施形態においては、LIGHT突然変異タンパク質は、配列番号467と比較して、1個以上の下記システイン置換：H97C、L120C、Y144C、E178C、L179C、L180C、V181C、S182C、Q183C、Q184C、S185C、G188C、T191C、W197C、W198C、S200C、G205C、V206C、V207C、G230C、T231C、およびR232Cを含有する。いくつかの実施形態においては、LIGHT突然変異タンパク質は、配列番号467と比較して、1個以上(好ましくは、1個)の下記のシステイン置換対: E178C/G230C、E178C/T231C、L179C/G230C、L179C/T231C、L180C/G230C、V181C/G230C、V181C/T231C、V181C/R232C、S182C/S200C、Q183C/W198C、Q183C/S200C、Q184C/W198C、S185C/W197C、S185C/W198C、G188C/T191C、G205C/Y144C、V206C/H97C、V207C/H97C、およびV207C/L120Cを含有する。他の実施形態においては、LIGHT突然変異タンパク質は、配列番号467のアミノ酸配列と比較して、1個以上の下記領域：アミノ酸83〜100、117〜123、175〜210、および227〜235内に位置する1個以上のシステイン置換または挿入(例えば、2個の置換または挿入)を含有する(例えば、2つの異なる領域内の1個のシステイン置換または挿入)。アミノ酸番号は、野生型LIGHT配列(例えば、配列番号467、UniProt受託番号O43557、A8K7M2、C9J5H4、O75476、Q6FHA1、Q8WVF8、およびQ96LD2)と比較したものである。
本発明のLIGHT突然変異タンパク質を、自己免疫疾患、神経疾患、がん(例えば、固形腫瘍がん、造血がん、膀胱がん、膵臓がん、子宮頸がん、肺がん、肝臓がん、卵巣がん、結腸がん、胃がん、ウイルス誘導性がん、神経芽腫、乳がん、前立腺がん、腎がん、白血病、肉腫、癌腫、非小細胞肺癌、非ホジキンリンパ腫、急性骨髄性白血病(AML)、慢性リンパ球性白血病(CLL)、B細胞慢性リンパ球性白血病(B-CLL)、多発性骨髄腫(MM)、赤白血病、腎細胞癌、軟部組織肉腫、メラノーマ、アストロサイトーマ、およびオリゴアストロサイトーマ)、感染症、代謝性疾患(例えば、糖尿病)、黄斑疾患(例えば、黄斑変性)、筋萎縮症、流産と関連する疾患、血管疾患(例えば、アテローム性動脈硬化症)、骨量減少と関連する疾患(すなわち、閉経、骨粗鬆症の結果としての骨量減少)、アレルギー、血液障害(例えば、血友病)、AIDS、骨格筋障害、増殖受容体と関連する疾患、肥満の処置のため、組織または臓器修復または再生のため、ならびに臓器移植手順における使用のため(例えば、臓器移植の結果生じる合併症(例えば、移植片対宿主疾患(GVHD)および移植片拒絶)を処置または軽減するため)に用いることができる。
特に、本発明のLIGHT突然変異タンパク質を、固形腫瘍がん、造血がん、膀胱がん、膵臓がん、子宮頸がん、肺がん、肝臓がん、卵巣がん、結腸がん、胃がん、ウイルス誘導性がん、神経芽腫、乳がん、前立腺がん、腎がん、白血病、肉腫、癌腫、非小細胞肺癌、非ホジキンリンパ腫、急性骨髄性白血病(AML)、慢性リンパ球性白血病(CLL)、B細胞慢性リンパ球性白血病(B-CLL)、多発性骨髄腫(MM)、赤白血病、腎細胞癌、軟部組織肉腫、メラノーマ、アストロサイトーマ、およびオリゴアストロサイトーマなどのがんの処置のために用いることができる。
いくつかの実施形態においては、LIGHT突然変異タンパク質を用いて、単独で、または化学療法剤、免疫療法剤、もしくは照射との組合せ療法において、様々ながんを処置することができる。組合せ療法において用いられる化学療法剤としては、限定されるものではないが、カンプトテシン、シスプラチン、カルボプラチン、オキサリプラチン、ブレオマイシン、マイトマイシンC、カリケアマイシン、メイタンシノイド、ゲルダナマイシン、ドキソルビシン、イダルビシン、ダウノルビシン、エピルビシン、ブスルファン、カルムスチン(BCNU)、ロムスチン(CCNU)、セムスチン、サリドマイド、レナリドミド、メトトレキサート、アザチオプリン、6-メルカプトプリン、フルダラビン、5-アザシチジン、ペントスタチン(2'-デオキシコホルマイシン)、シタラビン(シトシンアラビノシド)、ゲムシタビン、5-フルオロウラシル、ヒドロキシウレア、エレスクロモル、エトポシド、テニポシド、アムサクリン、トポテカン、イリノテカン、クロラムブシル、シクロホスファミド、イホスファミド、メルファラン、ボルテゾミブ、ビンクリスチン、ビンブラスチン、ビノレルビン、パクリタキセル、ドセタキセル、アンホテリシンB、リファンピシン、ペンタミジン、シクロスポリンA、タクロリムス(FK506)、シロリムス(ラパマイシン)、エベロリムス、テムシロリムス、ゾタロリムス、およびビオリムスが挙げられる。本明細書に記載のLIGHT突然変異タンパク質と組み合わせて用いることができる他の化学療法剤としては、Scottらに詳細に記載されている、トラスツズマブ(HERCEPTIN(登録商標))、ベバシズマブ(AVASTIN(登録商標))、セツキシマブ(ERBITUX(登録商標))、パニツムマブ(VECTIBIX(登録商標))、イピリムマブ(YERVOY(登録商標))、リツキシマブ(RITUXAN(登録商標)およびMABTHERA(登録商標))、アレムツズマブ(CAMPATH(登録商標))、オファツムマブ(ARZERRA(登録商標))、ゲムツズマブオゾガマイシン(MYLOTARG(登録商標))、ブレンツキシマブベドチン(ADCETRIS(登録商標))、90Y-イブリツモマブチウキセタン(ZEVALIN(登録商標))、および131I-トシツモマブ(BEXXAR(登録商標))が挙げられる。化学療法剤のさらなる例は、本明細書に記載される(TNFSFまたはTNF様リガンド突然変異タンパク質の共有架橋マルチマーを用いる処置方法のセクションを参照されたい)。
組合せ療法において用いられる免疫療法剤としては、限定されるものではないが、抗TNF受容体スーパーファミリーアゴニスト抗体、抗TNF受容体スーパーファミリーアンタゴニスト抗体、抗CTLA-4剤、抗PD-1剤、抗PD-L1剤、および抗PD-L2剤などのがんチェックポイント阻害剤、LIGHT架橋剤、CD27剤、CD30剤、CD40剤、4-1BB剤、GITR剤、OX40剤、TRAILR1剤、TRAILR2剤、TWEAKR剤、ならびに、例えば、Mahoneyらの表1に記載の免疫学的標的を指向する薬剤が挙げられる。例えば、免疫学的標的4-1BBリガンドを、抗4-1BBリガンド抗体を用いて標的化することができる；免疫学的標的OX40Lを、抗OX40抗体を用いて標的化することができる；免疫学的標的GITRを、抗GITR抗体を用いて標的化することができる；免疫学的標的CD27を、抗CD27抗体を用いて標的化することができる；免疫学的標的TL1Aを、抗TL1A抗体を用いて標的化することができる；免疫学的標的CD40Lを、抗CD40L抗体を用いて標的化することができる；免疫学的標的LIGHTを、抗LIGHT抗体を用いて標的化することができる；免疫学的標的BTLAを、抗BTLA抗体を用いて標的化することができる；免疫学的標的LAG3を、抗LAG3抗体を用いて標的化することができる；免疫学的標的TIM3を、抗TIM3抗体を用いて標的化することができる；免疫学的標的Singlecsを、抗Singlecs抗体を用いて標的化することができる；免疫学的標的ICOSリガンドを、抗ICOSリガンド抗体を用いて標的化することができる；免疫学的標的B7-H3を、抗B7-H3抗体を用いて標的化することができる；免疫学的標的B7-H4を、抗B7-H4抗体を用いて標的化することができる；免疫学的標的VISTAを、抗VISTA抗体を用いて標的化することができる；免疫学的標的TMIGD2を、抗TMIGD2抗体を用いて標的化することができる；免疫学的標的BTNL2を、抗BTNL2抗体を用いて標的化することができる；免疫学的標的CD48を、抗CD48抗体を用いて標的化することができる；免疫学的標的KIRを、抗KIR抗体を用いて標的化することができる；免疫学的標的LIRを、抗LIR抗体を用いて標的化することができる；免疫学的標的ILTを、抗ILT抗体を用いて標的化することができる；免疫学的標的NKG2Dを、抗NKG2D抗体を用いて標的化することができる；免疫学的標的NKG2Aを、抗NKG2A抗体を用いて標的化することができる；免疫学的標的MICAを、抗MICA抗体を用いて標的化することができる；免疫学的標的MICBを、抗MICB抗体を用いて標的化することができる；免疫学的標的CD244を、抗CD244抗体を用いて標的化することができる；免疫学的標的CSF1Rを、抗CSF1R抗体を用いて標的化することができる；免疫学的標的IDOを、抗IDO抗体を用いて標的化することができる；免疫学的標的TGFβを、抗TGFβ抗体を用いて標的化することができる；免疫学的標的CD39を、抗CD39抗体を用いて標的化することができる；免疫学的標的CD73を、抗CD73抗体を用いて標的化することができる；免疫学的標的CXCR4を、抗CXCR4抗体を用いて標的化することができる；免疫学的標的CXCL12を、抗CXCL12抗体を用いて標的化することができる；免疫学的標的SIRPAを、抗SIRPA抗体を用いて標的化することができる；免疫学的標的CD47を、抗CD47抗体を用いて標的化することができる；免疫学的標的VEGFを、抗VEGF抗体を用いて標的化することができる；および免疫学的標的ニューロピリンを、抗ニューロピリン抗体を用いて標的化することができる(例えば、Mahoneyらの表1を参照されたい)。
いくつかの実施形態においては、照射は、細胞に対する十分な損傷を誘導して、正常に機能するその能力を制限するため、または細胞を完全に破壊するための指向性ガンマ線またはベータ線の使用を含む。
いくつかの実施形態においては、LIGHT突然変異タンパク質を、複合体の標的化された送達およびがん抗原を発現するがんの処置のために、がん抗原特異的抗体に融合させることができる。
TL1突然変異タンパク質
本発明のTL1突然変異タンパク質は、TL1突然変異タンパク質のホモ-マルチマーを含む。それぞれのTL1突然変異タンパク質は、近隣のTL1突然変異タンパク質上のシステイン残基とのジスルフィド結合の形成を促進する少なくとも1つのシステイン残基の置換または挿入を含む。TL1突然変異タンパク質は、膜貫通性TL1または可溶性TL1であってもよい。好ましくは、TL1突然変異タンパク質は、膜貫通ドメインを欠く可溶性TL1である。いくつかの実施形態においては、近隣のTL1突然変異タンパク質上の置換されたシステイン残基間、置換されたシステイン残基と、近隣のTL1突然変異タンパク質上の天然のシステイン残基との間、または近隣のTL1突然変異タンパク質上の天然のシステイン残基間でジスルフィド結合を形成させることができる。本発明のTL1突然変異タンパク質のマルチマーは、2、3、4つ以上のTL1突然変異タンパク質またはその断片から構成される。いくつかの実施形態においては、それぞれのTL1突然変異タンパク質またはその断片は、配列番号506〜541のうちのいずれか1つから選択される配列に対する少なくとも50%の配列同一性(例えば、50%、55%、60%、65%、70%、75%、80%、85%、90%、95%、99%、または100%)を有する。
好ましくは、TL1突然変異タンパク質は、それぞれのモノマーが2個の天然アミノ酸残基(すなわち、非システイン残基)をシステイン残基または1個以上のシステイン挿入で置き換わるシステイン置換を含有する、TL1ホモ-マルチマーを形成する可溶性TL1突然変異タンパク質である。いくつかの実施形態においては、TL1突然変異タンパク質は、配列番号506と比較して、1個以上の下記システイン置換：H98C、L125C、Y150C、Q193C、L194C、L195C、M196C、G197C、T198C、K199C、S200C、W208C、F209C、P211C、A216C、M217C、F218C、E241C、D242C、およびK243Cを含有する。いくつかの実施形態においては、TL1突然変異タンパク質は、配列番号506と比較して、1個以上(好ましくは、1個)の下記のシステイン置換対: Q193C/E241C、Q193C/D242C、L194C/E241C、L194C/D242C、L195C/E241C、M196C/E241C、M196C/D242C、M196C/K243C、G197C/P211C、T198C/F209C、T198C/P211C、K199C/F209C、S200C/W208C、S200C/F209C、A216C/Y150C、M217C/H98C、F218C/H98C、およびF218C/L125Cを含有する。他の実施形態においては、TL1突然変異タンパク質は、配列番号506のアミノ酸配列と比較して、1個以上の下記領域：アミノ酸84〜101、122〜128、190〜221、および238〜246内に位置する1個以上のシステイン置換または挿入(例えば、2個の置換または挿入)を含有する(例えば、2つの異なる領域内の1個のシステイン置換または挿入)。アミノ酸番号は、野生型TL1配列(例えば、配列番号506、UniProt受託番号O95150、Q3SX69、Q5VJK8、Q5VWH1、およびQ8NFE9)と比較したものである。
本発明のTL1突然変異タンパク質を、自己免疫疾患、神経疾患、がん(例えば、固形腫瘍がん、造血がん、膀胱がん、膵臓がん、子宮頸がん、肺がん、肝臓がん、卵巣がん、結腸がん、胃がん、ウイルス誘導性がん、神経芽腫、乳がん、前立腺がん、腎がん、白血病、肉腫、癌腫、非小細胞肺癌、非ホジキンリンパ腫、急性骨髄性白血病(AML)、慢性リンパ球性白血病(CLL)、B細胞慢性リンパ球性白血病(B-CLL)、多発性骨髄腫(MM)、赤白血病、腎細胞癌、軟部組織肉腫、メラノーマ、アストロサイトーマ、およびオリゴアストロサイトーマ)、感染症、代謝性疾患(例えば、糖尿病)、黄斑疾患(例えば、黄斑変性)、筋萎縮症、流産と関連する疾患、血管疾患(例えば、アテローム性動脈硬化症)、骨量減少と関連する疾患(すなわち、閉経、骨粗鬆症の結果としての骨量減少)、アレルギー、血液障害(例えば、血友病)、AIDS、骨格筋障害、増殖受容体と関連する疾患、肥満の処置のため、組織または臓器修復または再生のため、ならびに臓器移植手順における使用のため(例えば、臓器移植の結果生じる合併症(例えば、移植片対宿主疾患(GVHD)および移植片拒絶)を処置または軽減するため)に用いることができる。
特に、本発明のTL1突然変異タンパク質を、固形腫瘍がん、造血がん、膀胱がん、膵臓がん、子宮頸がん、肺がん、肝臓がん、卵巣がん、結腸がん、胃がん、ウイルス誘導性がん、神経芽腫、乳がん、前立腺がん、腎がん、白血病、肉腫、癌腫、非小細胞肺癌、非ホジキンリンパ腫、急性骨髄性白血病(AML)、慢性リンパ球性白血病(CLL)、B細胞慢性リンパ球性白血病(B-CLL)、多発性骨髄腫(MM)、赤白血病、腎細胞癌、軟部組織肉腫、メラノーマ、アストロサイトーマ、およびオリゴアストロサイトーマなどのがんの処置のために用いることができる。
いくつかの実施形態においては、TL1突然変異タンパク質を用いて、単独で、または化学療法剤、免疫療法剤、もしくは照射との組合せ療法において、様々ながんを処置することができる。組合せ療法において用いられる化学療法剤としては、限定されるものではないが、カンプトテシン、シスプラチン、カルボプラチン、オキサリプラチン、ブレオマイシン、マイトマイシンC、カリケアマイシン、メイタンシノイド、ゲルダナマイシン、ドキソルビシン、イダルビシン、ダウノルビシン、エピルビシン、ブスルファン、カルムスチン(BCNU)、ロムスチン(CCNU)、セムスチン、サリドマイド、レナリドミド、メトトレキサート、アザチオプリン、6-メルカプトプリン、フルダラビン、5-アザシチジン、ペントスタチン(2'-デオキシコホルマイシン)、シタラビン(シトシンアラビノシド)、ゲムシタビン、5-フルオロウラシル、ヒドロキシウレア、エレスクロモル、エトポシド、テニポシド、アムサクリン、トポテカン、イリノテカン、クロラムブシル、シクロホスファミド、イホスファミド、メルファラン、ボルテゾミブ、ビンクリスチン、ビンブラスチン、ビノレルビン、パクリタキセル、ドセタキセル、アンホテリシンB、リファンピシン、ペンタミジン、シクロスポリンA、タクロリムス(FK506)、シロリムス(ラパマイシン)、エベロリムス、テムシロリムス、ゾタロリムス、およびビオリムスが挙げられる。本明細書に記載のTL1突然変異タンパク質と組み合わせて用いることができる他の化学療法剤としては、Scottらに詳細に記載されている、トラスツズマブ(HERCEPTIN(登録商標))、ベバシズマブ(AVASTIN(登録商標))、セツキシマブ(ERBITUX(登録商標))、パニツムマブ(VECTIBIX(登録商標))、イピリムマブ(YERVOY(登録商標))、リツキシマブ(RITUXAN(登録商標)およびMABTHERA(登録商標))、アレムツズマブ(CAMPATH(登録商標))、オファツムマブ(ARZERRA(登録商標))、ゲムツズマブオゾガマイシン(MYLOTARG(登録商標))、ブレンツキシマブベドチン(ADCETRIS(登録商標))、90Y-イブリツモマブチウキセタン(ZEVALIN(登録商標))、および131I-トシツモマブ(BEXXAR(登録商標))が挙げられる。化学療法剤のさらなる例は、本明細書に記載される(TNFSFまたはTNF様リガンド突然変異タンパク質の共有架橋マルチマーを用いる処置方法のセクションを参照されたい)。
組合せ療法において用いられる免疫療法剤としては、限定されるものではないが、抗TNF受容体スーパーファミリーアゴニスト抗体、抗TNF受容体スーパーファミリーアンタゴニスト抗体、抗CTLA-4剤、抗PD-1剤、抗PD-L1剤、および抗PD-L2剤などのがんチェックポイント阻害剤、TL1架橋剤、CD27剤、CD30剤、CD40剤、4-1BB剤、GITR剤、OX40剤、TRAILR1剤、TRAILR2剤、TWEAKR剤、ならびに、例えば、Mahoneyらの表1に記載の免疫学的標的を指向する薬剤が挙げられる。例えば、免疫学的標的4-1BBリガンドを、抗4-1BBリガンド抗体を用いて標的化することができる；免疫学的標的OX40Lを、抗OX40抗体を用いて標的化することができる；免疫学的標的GITRを、抗GITR抗体を用いて標的化することができる；免疫学的標的CD27を、抗CD27抗体を用いて標的化することができる；免疫学的標的TL1Aを、抗TL1A抗体を用いて標的化することができる；免疫学的標的CD40Lを、抗CD40L抗体を用いて標的化することができる；免疫学的標的LIGHTを、抗LIGHT抗体を用いて標的化することができる；免疫学的標的BTLAを、抗BTLA抗体を用いて標的化することができる；免疫学的標的LAG3を、抗LAG3抗体を用いて標的化することができる；免疫学的標的TIM3を、抗TIM3抗体を用いて標的化することができる；免疫学的標的Singlecsを、抗Singlecs抗体を用いて標的化することができる；免疫学的標的ICOSリガンドを、抗ICOSリガンド抗体を用いて標的化することができる；免疫学的標的B7-H3を、抗B7-H3抗体を用いて標的化することができる；免疫学的標的B7-H4を、抗B7-H4抗体を用いて標的化することができる；免疫学的標的VISTAを、抗VISTA抗体を用いて標的化することができる；免疫学的標的TMIGD2を、抗TMIGD2抗体を用いて標的化することができる；免疫学的標的BTNL2を、抗BTNL2抗体を用いて標的化することができる；免疫学的標的CD48を、抗CD48抗体を用いて標的化することができる；免疫学的標的KIRを、抗KIR抗体を用いて標的化することができる；免疫学的標的LIRを、抗LIR抗体を用いて標的化することができる；免疫学的標的ILTを、抗ILT抗体を用いて標的化することができる；免疫学的標的NKG2Dを、抗NKG2D抗体を用いて標的化することができる；免疫学的標的NKG2Aを、抗NKG2A抗体を用いて標的化することができる；免疫学的標的MICAを、抗MICA抗体を用いて標的化することができる；免疫学的標的MICBを、抗MICB抗体を用いて標的化することができる；免疫学的標的CD244を、抗CD244抗体を用いて標的化することができる；免疫学的標的CSF1Rを、抗CSF1R抗体を用いて標的化することができる；免疫学的標的IDOを、抗IDO抗体を用いて標的化することができる；免疫学的標的TGFβを、抗TGFβ抗体を用いて標的化することができる；免疫学的標的CD39を、抗CD39抗体を用いて標的化することができる；免疫学的標的CD73を、抗CD73抗体を用いて標的化することができる；免疫学的標的CXCR4を、抗CXCR4抗体を用いて標的化することができる；免疫学的標的CXCL12を、抗CXCL12抗体を用いて標的化することができる；免疫学的標的SIRPAを、抗SIRPA抗体を用いて標的化することができる；免疫学的標的CD47を、抗CD47抗体を用いて標的化することができる；免疫学的標的VEGFを、抗VEGF抗体を用いて標的化することができる；および免疫学的標的ニューロピリンを、抗ニューロピリン抗体を用いて標的化することができる(例えば、Mahoneyらの表1を参照されたい)。
いくつかの実施形態においては、照射は、細胞に対する十分な損傷を誘導して、正常に機能するその能力を制限するため、または細胞を完全に破壊するための指向性ガンマ線またはベータ線の使用を含む。
いくつかの実施形態においては、TL1突然変異タンパク質を、複合体の標的化された送達およびがん抗原を発現するがんの処置のために、がん抗原特異的抗体に融合させることができる。
GITRL突然変異タンパク質
本発明のGITRL(TL6とも呼ばれる)突然変異タンパク質は、GITRL突然変異タンパク質のホモ-マルチマーを含む。それぞれのGITRL突然変異タンパク質は、近隣のGITRL突然変異タンパク質上のシステイン残基とのジスルフィド結合の形成を促進する少なくとも1つのシステイン残基の置換または挿入を含む。GITRL突然変異タンパク質は、膜貫通性GITRLまたは可溶性GITRLであってもよい。好ましくは、GITRL突然変異タンパク質は、膜貫通ドメインを欠く可溶性GITRLである。いくつかの実施形態においては、近隣のGITRL突然変異タンパク質上の置換されたシステイン残基間、置換されたシステイン残基と、近隣のGITRL突然変異タンパク質上の天然のシステイン残基との間、または近隣のGITRL突然変異タンパク質上の天然のシステイン残基間でジスルフィド結合を形成させることができる。本発明のGITRL突然変異タンパク質のマルチマーは、2、3、4つ以上のGITRL突然変異タンパク質またはその断片から構成される。いくつかの実施形態においては、それぞれのGITRL突然変異タンパク質またはその断片は、配列番号542〜561のうちのいずれか1つから選択される配列に対する少なくとも50%の配列同一性(例えば、50%、55%、60%、65%、70%、75%、80%、85%、90%、95%、99%、または100%)を有する。
好ましくは、GITRL突然変異タンパク質は、それぞれのモノマーが2個の天然アミノ酸残基(すなわち、非システイン残基)をシステイン残基または1個以上のシステイン挿入で置き換わるシステイン置換を含有する、GITRLホモ-マルチマーを形成する可溶性GITRL突然変異タンパク質である。いくつかの実施形態においては、GITRL突然変異タンパク質は、配列番号542と比較して、1個以上の下記システイン置換：K83C、Y120C、T148C、L149C、N184C、T150C、N151C、K152C、S153C、I155C、G160C、T161C、およびY162Cを含有する。いくつかの実施形態においては、GITRL突然変異タンパク質は、配列番号542と比較して、1個以上(好ましくは、1個)の下記のシステイン置換対: T148C/N184C、L149C/I155C、T150C/S153C、T150C/I155C、N151C/S153C、K152C/S153C、G160C/Y120C、T161C/K83C、およびY162C/K83Cを含有する。他の実施形態においては、GITRL突然変異タンパク質は、配列番号542のアミノ酸配列と比較して、1個以上の下記領域：アミノ酸69〜86、117〜123、145〜165、181〜187、および269〜277内に位置する1個以上のシステイン置換または挿入(例えば、2個の置換または挿入)を含有する(例えば、2つの異なる領域内の1個のシステイン置換または挿入)。アミノ酸番号は、野生型GITRL配列(例えば、配列番号542、UniProt受託番号Q9UNG2、A9IQG8、O95852、およびQ6ISV1)と比較したものである。
本発明のGITRL突然変異タンパク質を、自己免疫疾患、神経疾患、がん(例えば、固形腫瘍がん、造血がん、膀胱がん、膵臓がん、子宮頸がん、肺がん、肝臓がん、卵巣がん、結腸がん、胃がん、ウイルス誘導性がん、神経芽腫、乳がん、前立腺がん、腎がん、白血病、肉腫、癌腫、非小細胞肺癌、非ホジキンリンパ腫、急性骨髄性白血病(AML)、慢性リンパ球性白血病(CLL)、B細胞慢性リンパ球性白血病(B-CLL)、多発性骨髄腫(MM)、赤白血病、腎細胞癌、軟部組織肉腫、メラノーマ、アストロサイトーマ、およびオリゴアストロサイトーマ)、感染症、代謝性疾患(例えば、糖尿病)、黄斑疾患(例えば、黄斑変性)、筋萎縮症、流産と関連する疾患、血管疾患(例えば、アテローム性動脈硬化症)、骨量減少と関連する疾患(すなわち、閉経、骨粗鬆症の結果としての骨量減少)、アレルギー、血液障害(例えば、血友病)、AIDS、骨格筋障害、増殖受容体と関連する疾患、肥満の処置のため、組織または臓器修復または再生のため、ならびに臓器移植手順における使用のため(例えば、臓器移植の結果生じる合併症(例えば、移植片対宿主疾患(GVHD)および移植片拒絶)を処置または軽減するため)に用いることができる。
特に、本発明のGITRL突然変異タンパク質を、固形腫瘍がん、造血がん、膀胱がん、膵臓がん、子宮頸がん、肺がん、肝臓がん、卵巣がん、結腸がん、胃がん、ウイルス誘導性がん、神経芽腫、乳がん、前立腺がん、腎がん、白血病、肉腫、癌腫、非小細胞肺癌、非ホジキンリンパ腫、急性骨髄性白血病(AML)、慢性リンパ球性白血病(CLL)、B細胞慢性リンパ球性白血病(B-CLL)、多発性骨髄腫(MM)、赤白血病、腎細胞癌、軟部組織肉腫、メラノーマ、アストロサイトーマ、およびオリゴアストロサイトーマなどのがんの処置のために用いることができる。
いくつかの実施形態においては、GITRL突然変異タンパク質を用いて、単独で、または化学療法剤、免疫療法剤、もしくは照射との組合せ療法において、様々ながんを処置することができる。組合せ療法において用いられる化学療法剤としては、限定されるものではないが、カンプトテシン、シスプラチン、カルボプラチン、オキサリプラチン、ブレオマイシン、マイトマイシンC、カリケアマイシン、メイタンシノイド、ゲルダナマイシン、ドキソルビシン、イダルビシン、ダウノルビシン、エピルビシン、ブスルファン、カルムスチン(BCNU)、ロムスチン(CCNU)、セムスチン、サリドマイド、レナリドミド、メトトレキサート、アザチオプリン、6-メルカプトプリン、フルダラビン、5-アザシチジン、ペントスタチン(2'-デオキシコホルマイシン)、シタラビン(シトシンアラビノシド)、ゲムシタビン、5-フルオロウラシル、ヒドロキシウレア、エレスクロモル、エトポシド、テニポシド、アムサクリン、トポテカン、イリノテカン、クロラムブシル、シクロホスファミド、イホスファミド、メルファラン、ボルテゾミブ、ビンクリスチン、ビンブラスチン、ビノレルビン、パクリタキセル、ドセタキセル、アンホテリシンB、リファンピシン、ペンタミジン、シクロスポリンA、タクロリムス(FK506)、シロリムス(ラパマイシン)、エベロリムス、テムシロリムス、ゾタロリムス、およびビオリムスが挙げられる。本明細書に記載のGITRL突然変異タンパク質と組み合わせて用いることができる他の化学療法剤としては、Scottらに詳細に記載されている、トラスツズマブ(HERCEPTIN(登録商標))、ベバシズマブ(AVASTIN(登録商標))、セツキシマブ(ERBITUX(登録商標))、パニツムマブ(VECTIBIX(登録商標))、イピリムマブ(YERVOY(登録商標))、リツキシマブ(RITUXAN(登録商標)およびMABTHERA(登録商標))、アレムツズマブ(CAMPATH(登録商標))、オファツムマブ(ARZERRA(登録商標))、ゲムツズマブオゾガマイシン(MYLOTARG(登録商標))、ブレンツキシマブベドチン(ADCETRIS(登録商標))、90Y-イブリツモマブチウキセタン(ZEVALIN(登録商標))、および131I-トシツモマブ(BEXXAR(登録商標))が挙げられる。化学療法剤のさらなる例は、本明細書に記載される(TNFSFまたはTNF様リガンド突然変異タンパク質の共有架橋マルチマーを用いる処置方法のセクションを参照されたい)。
組合せ療法において用いられる免疫療法剤としては、限定されるものではないが、抗TNF受容体スーパーファミリーアゴニスト抗体、抗TNF受容体スーパーファミリーアンタゴニスト抗体、抗CTLA-4剤、抗PD-1剤、抗PD-L1剤、および抗PD-L2剤などのがんチェックポイント阻害剤、GITRL架橋剤、CD27剤、CD30剤、CD40剤、4-1BB剤、GITR剤、OX40剤、TRAILR1剤、TRAILR2剤、TWEAKR剤、ならびに、例えば、Mahoneyらの表1に記載の免疫学的標的を指向する薬剤が挙げられる。例えば、免疫学的標的4-1BBリガンドを、抗4-1BBリガンド抗体を用いて標的化することができる；免疫学的標的OX40Lを、抗OX40抗体を用いて標的化することができる；免疫学的標的GITRを、抗GITR抗体を用いて標的化することができる；免疫学的標的CD27を、抗CD27抗体を用いて標的化することができる；免疫学的標的TL1Aを、抗TL1A抗体を用いて標的化することができる；免疫学的標的CD40Lを、抗CD40L抗体を用いて標的化することができる；免疫学的標的LIGHTを、抗LIGHT抗体を用いて標的化することができる；免疫学的標的BTLAを、抗BTLA抗体を用いて標的化することができる；免疫学的標的LAG3を、抗LAG3抗体を用いて標的化することができる；免疫学的標的TIM3を、抗TIM3抗体を用いて標的化することができる；免疫学的標的Singlecsを、抗Singlecs抗体を用いて標的化することができる；免疫学的標的ICOSリガンドを、抗ICOSリガンド抗体を用いて標的化することができる；免疫学的標的B7-H3を、抗B7-H3抗体を用いて標的化することができる；免疫学的標的B7-H4を、抗B7-H4抗体を用いて標的化することができる；免疫学的標的VISTAを、抗VISTA抗体を用いて標的化することができる；免疫学的標的TMIGD2を、抗TMIGD2抗体を用いて標的化することができる；免疫学的標的BTNL2を、抗BTNL2抗体を用いて標的化することができる；免疫学的標的CD48を、抗CD48抗体を用いて標的化することができる；免疫学的標的KIRを、抗KIR抗体を用いて標的化することができる；免疫学的標的LIRを、抗LIR抗体を用いて標的化することができる；免疫学的標的ILTを、抗ILT抗体を用いて標的化することができる；免疫学的標的NKG2Dを、抗NKG2D抗体を用いて標的化することができる；免疫学的標的NKG2Aを、抗NKG2A抗体を用いて標的化することができる；免疫学的標的MICAを、抗MICA抗体を用いて標的化することができる；免疫学的標的MICBを、抗MICB抗体を用いて標的化することができる；免疫学的標的CD244を、抗CD244抗体を用いて標的化することができる；免疫学的標的CSF1Rを、抗CSF1R抗体を用いて標的化することができる；免疫学的標的IDOを、抗IDO抗体を用いて標的化することができる；免疫学的標的TGFβを、抗TGFβ抗体を用いて標的化することができる；免疫学的標的CD39を、抗CD39抗体を用いて標的化することができる；免疫学的標的CD73を、抗CD73抗体を用いて標的化することができる；免疫学的標的CXCR4を、抗CXCR4抗体を用いて標的化することができる；免疫学的標的CXCL12を、抗CXCL12抗体を用いて標的化することができる；免疫学的標的SIRPAを、抗SIRPA抗体を用いて標的化することができる；免疫学的標的CD47を、抗CD47抗体を用いて標的化することができる；免疫学的標的VEGFを、抗VEGF抗体を用いて標的化することができる；および免疫学的標的ニューロピリンを、抗ニューロピリン抗体を用いて標的化することができる(例えば、Mahoneyらの表1を参照されたい)。
いくつかの実施形態においては、照射は、細胞に対する十分な損傷を誘導して、正常に機能するその能力を制限するため、または細胞を完全に破壊するための指向性ガンマ線またはベータ線の使用を含む。
いくつかの実施形態においては、GITRL突然変異タンパク質を、複合体の標的化された送達およびがん抗原を発現するがんの処置のために、がん抗原特異的抗体に融合させることができる。
EDA突然変異タンパク質
本発明のEDA(例えば、EDA-A1およびEDA-A2)突然変異タンパク質は、EDA突然変異タンパク質のホモ-マルチマーを含む。それぞれのEDA突然変異タンパク質は、近隣のEDA突然変異タンパク質上のシステイン残基とのジスルフィド結合の形成を促進する少なくとも1つのシステイン残基の置換または挿入を含む。EDA突然変異タンパク質は、膜貫通性EDAまたは可溶性EDAであってもよい。好ましくは、EDA突然変異タンパク質は、膜貫通ドメインを欠く可溶性EDAである。いくつかの実施形態においては、近隣のEDA突然変異タンパク質上の置換されたシステイン残基間、置換されたシステイン残基と、近隣のEDA突然変異タンパク質上の天然のシステイン残基との間、または近隣のEDA突然変異タンパク質上の天然のシステイン残基間でジスルフィド結合を形成させることができる。本発明のEDA突然変異タンパク質のマルチマーは、2、3、4つ以上のEDA突然変異タンパク質またはその断片から構成される。いくつかの実施形態においては、それぞれのEDA突然変異タンパク質またはその断片は、配列番号562〜589のうちのいずれか1つから選択される配列に対する少なくとも50%の配列同一性(例えば、50%、55%、60%、65%、70%、75%、80%、85%、90%、95%、99%、または100%)を有する。
好ましくは、EDA突然変異タンパク質は、それぞれのモノマーが2個の天然アミノ酸残基(すなわち、非システイン残基)をシステイン残基または1個以上のシステイン挿入で置き換わるシステイン置換を含有する、EDAホモ-マルチマーを形成する可溶性EDA突然変異タンパク質である。いくつかの実施形態においては、EDA突然変異タンパク質は、配列番号562と比較して、1個以上の下記システイン置換：V250C、H252C、T278C、Y304C、P328C、F329C、L330C、Q331C、T333C、R334C、S335C、N342C、Y343C、T345C、G350C、V351C、H376C、およびT377Cを含有する。いくつかの実施形態においては、EDA突然変異タンパク質は、配列番号562と比較して、1個以上(好ましくは、1個)の下記のシステイン置換対: P328C/H376C 577、F329C/H376C、L330C/H376C、L330C/T377C、Q331C/H376C、Q331C/T377C、T333C/Y343C、T333C/T345C、R334C/Y343C、S335C/N342C、S335C/Y343C、G350C/Y304C、V351C/V250C、およびV351C/H252Cを含有する。他の実施形態においては、EDA突然変異タンパク質は、配列番号562のアミノ酸配列と比較して、1個以上の下記領域：アミノ酸238〜255、275〜281、301〜307、325〜354、および373〜380内に位置する1個以上のシステイン置換または挿入(例えば、2個の置換または挿入)を含有する(例えば、2つの異なる領域内の1個のシステイン置換または挿入)。アミノ酸番号は、野生型EDA配列(例えば、配列番号562、UniProt受託番号Q92838、A0AUZ2、A2A337、B7ZLU2、B7ZLU4、O75910、Q5JS00、Q5JUM7、Q9UP77、Q9Y6L0、Q9Y6L1、Q9Y6L2、Q9Y6L3、およびQ9Y6L4)と比較したものである。
本発明のEDA突然変異タンパク質を、自己免疫疾患、神経疾患、がん(例えば、固形腫瘍がん、造血がん、膀胱がん、膵臓がん、子宮頸がん、肺がん、肝臓がん、卵巣がん、結腸がん、胃がん、ウイルス誘導性がん、神経芽腫、乳がん、前立腺がん、腎がん、白血病、肉腫、癌腫、非小細胞肺癌、非ホジキンリンパ腫、急性骨髄性白血病(AML)、慢性リンパ球性白血病(CLL)、B細胞慢性リンパ球性白血病(B-CLL)、多発性骨髄腫(MM)、赤白血病、腎細胞癌、軟部組織肉腫、メラノーマ、アストロサイトーマ、およびオリゴアストロサイトーマ)、感染症、代謝性疾患(例えば、糖尿病)、黄斑疾患(例えば、黄斑変性)、筋萎縮症、流産と関連する疾患、血管疾患(例えば、アテローム性動脈硬化症)、骨量減少と関連する疾患(すなわち、閉経、骨粗鬆症の結果としての骨量減少)、アレルギー、血液障害(例えば、血友病)、AIDS、骨格筋障害、増殖受容体と関連する疾患、肥満の処置のため、組織または臓器修復または再生のため、ならびに臓器移植手順における使用のため(例えば、臓器移植の結果生じる合併症(例えば、移植片対宿主疾患(GVHD)および移植片拒絶)を処置または軽減するため)に用いることができる。
特に、本発明のEDA突然変異タンパク質を、固形腫瘍がん、造血がん、膀胱がん、膵臓がん、子宮頸がん、肺がん、肝臓がん、卵巣がん、結腸がん、胃がん、ウイルス誘導性がん、神経芽腫、乳がん、前立腺がん、腎がん、白血病、肉腫、癌腫、非小細胞肺癌、非ホジキンリンパ腫、急性骨髄性白血病(AML)、慢性リンパ球性白血病(CLL)、B細胞慢性リンパ球性白血病(B-CLL)、多発性骨髄腫(MM)、赤白血病、腎細胞癌、軟部組織肉腫、メラノーマ、アストロサイトーマ、およびオリゴアストロサイトーマなどのがんの処置のために用いることができる。
いくつかの実施形態においては、EDA突然変異タンパク質を用いて、単独で、または化学療法剤、免疫療法剤、もしくは照射との組合せ療法において、様々ながんを処置することができる。組合せ療法において用いられる化学療法剤としては、限定されるものではないが、カンプトテシン、シスプラチン、カルボプラチン、オキサリプラチン、ブレオマイシン、マイトマイシンC、カリケアマイシン、メイタンシノイド、ゲルダナマイシン、ドキソルビシン、イダルビシン、ダウノルビシン、エピルビシン、ブスルファン、カルムスチン(BCNU)、ロムスチン(CCNU)、セムスチン、サリドマイド、レナリドミド、メトトレキサート、アザチオプリン、6-メルカプトプリン、フルダラビン、5-アザシチジン、ペントスタチン(2'-デオキシコホルマイシン)、シタラビン(シトシンアラビノシド)、ゲムシタビン、5-フルオロウラシル、ヒドロキシウレア、エレスクロモル、エトポシド、テニポシド、アムサクリン、トポテカン、イリノテカン、クロラムブシル、シクロホスファミド、イホスファミド、メルファラン、ボルテゾミブ、ビンクリスチン、ビンブラスチン、ビノレルビン、パクリタキセル、ドセタキセル、アンホテリシンB、リファンピシン、ペンタミジン、シクロスポリンA、タクロリムス(FK506)、シロリムス(ラパマイシン)、エベロリムス、テムシロリムス、ゾタロリムス、およびビオリムスが挙げられる。本明細書に記載のEDA突然変異タンパク質と組み合わせて用いることができる他の化学療法剤としては、Scottらに詳細に記載されている、トラスツズマブ(HERCEPTIN(登録商標))、ベバシズマブ(AVASTIN(登録商標))、セツキシマブ(ERBITUX(登録商標))、パニツムマブ(VECTIBIX(登録商標))、イピリムマブ(YERVOY(登録商標))、リツキシマブ(RITUXAN(登録商標)およびMABTHERA(登録商標))、アレムツズマブ(CAMPATH(登録商標))、オファツムマブ(ARZERRA(登録商標))、ゲムツズマブオゾガマイシン(MYLOTARG(登録商標))、ブレンツキシマブベドチン(ADCETRIS(登録商標))、90Y-イブリツモマブチウキセタン(ZEVALIN(登録商標))、および131I-トシツモマブ(BEXXAR(登録商標))が挙げられる。化学療法剤のさらなる例は、本明細書に記載される(TNFSFまたはTNF様リガンド突然変異タンパク質の共有架橋マルチマーを用いる処置方法のセクションを参照されたい)。
組合せ療法において用いられる免疫療法剤としては、限定されるものではないが、抗TNF受容体スーパーファミリーアゴニスト抗体、抗TNF受容体スーパーファミリーアンタゴニスト抗体、抗CTLA-4剤、抗PD-1剤、抗PD-L1剤、および抗PD-L2剤などのがんチェックポイント阻害剤、EDA架橋剤、CD27剤、CD30剤、CD40剤、4-1BB剤、GITR剤、OX40剤、TRAILR1剤、TRAILR2剤、TWEAKR剤、ならびに、例えば、Mahoneyらの表1に記載の免疫学的標的を指向する薬剤が挙げられる。例えば、免疫学的標的4-1BBリガンドを、抗4-1BBリガンド抗体を用いて標的化することができる；免疫学的標的OX40Lを、抗OX40抗体を用いて標的化することができる；免疫学的標的GITRを、抗GITR抗体を用いて標的化することができる；免疫学的標的CD27を、抗CD27抗体を用いて標的化することができる；免疫学的標的TL1Aを、抗TL1A抗体を用いて標的化することができる；免疫学的標的CD40Lを、抗CD40L抗体を用いて標的化することができる；免疫学的標的LIGHTを、抗LIGHT抗体を用いて標的化することができる；免疫学的標的BTLAを、抗BTLA抗体を用いて標的化することができる；免疫学的標的LAG3を、抗LAG3抗体を用いて標的化することができる；免疫学的標的TIM3を、抗TIM3抗体を用いて標的化することができる；免疫学的標的Singlecsを、抗Singlecs抗体を用いて標的化することができる；免疫学的標的ICOSリガンドを、抗ICOSリガンド抗体を用いて標的化することができる；免疫学的標的B7-H3を、抗B7-H3抗体を用いて標的化することができる；免疫学的標的B7-H4を、抗B7-H4抗体を用いて標的化することができる；免疫学的標的VISTAを、抗VISTA抗体を用いて標的化することができる；免疫学的標的TMIGD2を、抗TMIGD2抗体を用いて標的化することができる；免疫学的標的BTNL2を、抗BTNL2抗体を用いて標的化することができる；免疫学的標的CD48を、抗CD48抗体を用いて標的化することができる；免疫学的標的KIRを、抗KIR抗体を用いて標的化することができる；免疫学的標的LIRを、抗LIR抗体を用いて標的化することができる；免疫学的標的ILTを、抗ILT抗体を用いて標的化することができる；免疫学的標的NKG2Dを、抗NKG2D抗体を用いて標的化することができる；免疫学的標的NKG2Aを、抗NKG2A抗体を用いて標的化することができる；免疫学的標的MICAを、抗MICA抗体を用いて標的化することができる；免疫学的標的MICBを、抗MICB抗体を用いて標的化することができる；免疫学的標的CD244を、抗CD244抗体を用いて標的化することができる；免疫学的標的CSF1Rを、抗CSF1R抗体を用いて標的化することができる；免疫学的標的IDOを、抗IDO抗体を用いて標的化することができる；免疫学的標的TGFβを、抗TGFβ抗体を用いて標的化することができる；免疫学的標的CD39を、抗CD39抗体を用いて標的化することができる；免疫学的標的CD73を、抗CD73抗体を用いて標的化することができる；免疫学的標的CXCR4を、抗CXCR4抗体を用いて標的化することができる；免疫学的標的CXCL12を、抗CXCL12抗体を用いて標的化することができる；免疫学的標的SIRPAを、抗SIRPA抗体を用いて標的化することができる；免疫学的標的CD47を、抗CD47抗体を用いて標的化することができる；免疫学的標的VEGFを、抗VEGF抗体を用いて標的化することができる；および免疫学的標的ニューロピリンを、抗ニューロピリン抗体を用いて標的化することができる(例えば、Mahoneyらの表1を参照されたい)。
いくつかの実施形態においては、照射は、細胞に対する十分な損傷を誘導して、正常に機能するその能力を制限するため、または細胞を完全に破壊するための指向性ガンマ線またはベータ線の使用を含む。
いくつかの実施形態においては、EDA突然変異タンパク質を、複合体の標的化された送達およびがん抗原を発現するがんの処置のために、がん抗原特異的抗体に融合させることができる。
上記の例は、いくつかのTNFSFおよびTNF様リガンド突然変異タンパク質ならびにTNFSFおよびTNF様リガンド突然変異タンパク質を用いることができる様々な型の疾患におけるそのシグナリング機構および治療的役割を記載する。本発明のTNFSFおよびTNF様リガンド突然変異タンパク質は、半減期およびシグナリング活性が改善されたTNFSFまたはTNF様リガンドの安定な、架橋した(すなわち、ジスルフィド結合した)マルチマーを形成する。本発明のTNFSFおよびTNF様リガンド突然変異タンパク質(ホモ-トリマーなどのホモ-マルチマー複合体として)を、医薬組成物中で、または自己免疫疾患、神経疾患、がん(例えば、固形腫瘍がん、造血がん、膀胱がん、膵臓がん、子宮頸がん、肺がん、肝臓がん、卵巣がん、結腸がん、胃がん、ウイルス誘導性がん、神経芽腫、乳がん、前立腺がん、腎がん、白血病、肉腫、癌腫、非小細胞肺癌、非ホジキンリンパ腫、急性骨髄性白血病(AML)、慢性リンパ球性白血病(CLL)、B細胞慢性リンパ球性白血病(B-CLL)、多発性骨髄腫(MM)、赤白血病、腎細胞癌、軟部組織肉腫、メラノーマ、アストロサイトーマ、およびオリゴアストロサイトーマ)、感染症、代謝性疾患(例えば、糖尿病)、黄斑疾患(例えば、黄斑変性)、筋萎縮症、流産と関連する疾患、血管疾患(例えば、アテローム性動脈硬化症)、骨量減少と関連する疾患(すなわち、閉経、骨粗鬆症の結果としての骨量減少)、アレルギー、血液障害(例えば、血友病)、AIDS、骨格筋障害、増殖受容体と関連する疾患、肥満の処置のため、組織または臓器修復または再生のため、ならびに臓器移植手順における使用のため(例えば、臓器移植の結果生じる合併症(例えば、移植片対宿主疾患(GVHD)および移植片拒絶)を処置または軽減するため)の任意の治療方法において用いることができる。
TNFSFおよびTNF様リガンド突然変異タンパク質の共有架橋
TNFSFまたはTNF様リガンドの安定なマルチマー(例えば、安定なホモ-トリマー)を、TNFSFまたはTNF様リガンドモノマー間の境界面にある残基(例えば、外面残基)に1個以上のシステイン残基を導入することによって形成させることができる。システイン残基を、互いにジスルフィド結合させて、架橋された(例えば、ジスルフィド結合された)TNFSFまたはTNF様リガンド突然変異タンパク質マルチマーを形成させることができる。本発明のTNFSFまたはTNF様リガンド突然変異タンパク質のマルチマーは、2、3、4個以上のTNFSFまたはTNF様リガンド突然変異タンパク質またはその断片(好ましくは3個の突然変異タンパク質)から構成される。
一般に、TNFSFまたはTNF様リガンドの少なくとも1個のアミノ酸をシステイン残基と置換することによって、および／または1個以上のシステイン残基を挿入してTNFSFまたはTNF様リガンド突然変異タンパク質を形成させることによって、本発明のTNFSFまたはTNF様リガンド突然変異タンパク質を形成させることができる。本明細書に開示される残基および領域に加えて、TNFSFおよびTNF様リガンドの利用可能な結晶構造は、他のアミノ酸残基をシステインと置換することができることを選択する際、または1個以上のシステイン残基を挿入するためのさらなるアミノ酸領域を同定する際に役立ち得る。好ましくは、アミノ酸置換は、保存的置換である。TNFSFまたはTNF様リガンド突然変異タンパク質上の導入されるシステイン残基は、好ましくは、TNFSFまたはTNF様リガンドモノマー間の境界面(すなわち、外面残基)に位置する。近隣のTNFSFまたはTNF様リガンド突然変異タンパク質上のシステイン残基は、好ましくは、互いに近接して位置し、ジスルフィド結合形成を可能にする。システイン残基のために選択されるアミノ酸は、好ましくは、リガンド/受容体相互作用に関与しない。また、選択されるアミノ酸は、好ましくは、ジスルフィド結合を形成するための理想的な距離が維持されるように、遊離状態から受容体に結合した状態へのいかなる劇的な構造的変化も受けない。TNFSFおよびTNF様リガンドの利用可能な結晶構造は、システイン置換およびシステイン残基を挿入するための領域の選択を誘導するのに役立ち得る。表1は、それぞれのTNFSFまたはTNF様リガンド突然変異タンパク質のための単一および対の例示的なシステイン置換を列挙する。表2は、システイン残基を、それぞれのTNFSFまたはTNF様リガンド突然変異タンパク質中で置換および/または挿入することができるアミノ酸領域を列挙する(例えば、2個の異なる領域内の1個のシステイン置換または挿入)。例として、TNF-α突然変異タンパク質は、配列番号1のアミノ酸配列と比較して、1個以上の下記領域：アミノ酸77〜94、107〜113、127〜138、165〜204、および220〜228内に位置する1個以上のシステイン置換または挿入(例えば、2個の置換または挿入)を含有する(例えば、2個の異なる領域内の1個のシステイン置換または挿入)。
Figure 2017525370
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TNFSFおよびTNF様リガンド突然変異タンパク質を産生する方法
本発明のTNFSFおよびTNF様リガンド突然変異タンパク質を、宿主細胞から産生させることができる。宿主細胞は、本明細書に記載のポリペプチドおよび構築物を、その対応する核酸から発現させるのに必要とされる、必要な細胞成分、例えば、オルガネラを含むビヒクルを指す。前記核酸を、当業界で公知の従来の技術(例えば、形質転換、トランスフェクション、エレクトロポレーション、リン酸カルシウム沈降、直接マイクロインジェクション、感染など)により宿主細胞中に導入することができる核酸ベクター中に含有させることができる。核酸ベクターの選択は、用いられる宿主細胞に一部依存する。一般に、好ましい宿主細胞は、原核生物(例えば、細菌)または真核生物(例えば、哺乳動物)起源のものである。
核酸ベクターの構築および宿主細胞
モノマーTNFSFまたはTNF様リガンド突然変異タンパク質のアミノ酸配列をコードするポリヌクレオチドを、当業界で公知の様々な方法により調製することができる。これらの方法としては、限定されるものではないが、オリゴヌクレオチド媒介性(または部位特異的)突然変異誘発およびPCR突然変異誘発が挙げられる。本発明のTNFSFまたはTNF様リガンド突然変異タンパク質、例えば、TNF-αのS171C/G224C二重システイン突然変異体をコードするポリヌクレオチドを、標準的な技術、例えば、遺伝子合成を用いて取得することができる。あるいは、野生型TNFSFまたはTNF様リガンドをコードするポリヌクレオチドを、当業界における標準的な技術、例えば、QuikChange(商標)突然変異誘発を用いて、特定のシステイン置換、例えば、S171C/G224Cを含有するように突然変異させることができる。ポリヌクレオチドを、ヌクレオチド合成装置またはPCR技術を用いて合成することができる。
TNFSFまたはTNF様リガンド突然変異タンパク質ポリペプチドをコードするポリヌクレオチド配列を、原核または真核宿主細胞中で該ポリヌクレオチドを複製および発現することができるベクター中に挿入してもよい。多くのベクターが当業界で利用可能であり、本発明のために用いることができる。それぞれのベクターは、特定の宿主細胞との適合性のために調整および最適化することができる様々な成分を含有してもよい。例えば、ベクター成分は、限定されるものではないが、複製起点、選択マーカー遺伝子、プロモーター、リボソーム結合部位、シグナル配列、目的のタンパク質をコードするポリヌクレオチド、および転写終結配列を含んでもよい。いくつかの実施形態においては、ベクターは、複数のTNFSFまたはTNF様リガンド突然変異タンパク質の発現を可能にする内部リボソーム進入部位(IRES)を含んでもよい。細菌発現ベクターのいくつかの例としては、限定されるものではないが、pGEXシリーズのベクター(例えば、pGEX-2T、pGEX-3X、pGEX-4T、pGEX-5X、pGEX-6P)、pETシリーズのベクター(例えば、pET-21、pET-21a、pET-21b、pET-23、pET-24)、pACYCシリーズのベクター(例えば、pACYDuet-1)、pDESTシリーズのベクター(例えば、pDEST14、pDEST15、pDEST24、pDEST42)、ならびにpBR322およびその誘導体(例えば、米国特許第5,648,237号を参照されたい)が挙げられる。哺乳動物発現ベクターのいくつかの例としては、限定されるものではないが、pCDNA3、pCDNA4、pNICE、pSELECT、およびpFLAG-CMVが挙げられる。
いくつかの実施形態においては、大腸菌細胞を、本発明の宿主細胞として用いる。大腸菌株の例としては、限定されるものではないが、大腸菌294 (ATCC(登録商標)31,446)、大腸菌λ1776 (ATCC(登録商標)31,537、大腸菌BL21 (DE3) (ATCC(登録商標)BAA-1025)、および大腸菌RV308 (ATCC(登録商標)31,608)が挙げられる。他の実施形態においては、哺乳動物細胞を、本発明のための宿主細胞として用いる。哺乳動物細胞型の例としては、限定されるものではないが、ヒト胚性腎臓(HEK)細胞、チャイニーズハムスター卵巣(CHO)細胞、HeLa細胞、PC3細胞、Vero細胞、およびMC3T3細胞が挙げられる。異なる宿主細胞は、翻訳後プロセッシングおよびタンパク質産物の改変のための特徴的かつ特異的な機構を有する。適切な細胞株または宿主系を選択して、発現されるタンパク質の正確な改変およびプロセッシングを確保することができる。上記の発現ベクターを、当業界における従来の技術、例えば、形質転換、トランスフェクション、エレクトロポレーション、リン酸カルシウム沈降、および直接マイクロインジェクションを用いて適切な宿主細胞中に導入することができる。一度、ベクターがタンパク質産生のために宿主細胞中に導入されたら、プロモーターを誘導し、形質転換体を選択する、または所望の配列をコードする遺伝子を増幅するために必要に応じて改変された従来の栄養培地中で、宿主細胞を培養する。
好ましい実施形態においては、TNFSFまたはTNF様リガンド突然変異タンパク質ポリペプチド、例えば、TNF-αのS171C/G224C二重システイン突然変異体をコードするポリヌクレオチド配列を、細菌発現ベクター、例えば、pDEST42ベクター中にクローニングすることができる。pDEST42ベクターは、バクテリオファージT7誘導プロモーターおよびアンピシリン耐性選択マーカー遺伝子を含有する。陽性クローンを、TNFSFまたはTNF様リガンド突然変異タンパク質の発現のために、細菌宿主細胞、例えば、BL21(DE3)pLysS中に形質転換することができる。
他の型の核酸ベクターとしては、細胞(例えば、被験体の細胞)中でタンパク質を発現させるためのウイルスベクターが挙げられる。そのようなウイルスベクターとしては、限定されるものではないが、レトロウイルスベクター、アデノウイルスベクター、ポックスウイルスベクター(例えば、改変ワクシニアアンカラ(MVA)などのワクシニアウイルスベクター)、アデノ随伴ウイルスベクター、およびアルファウイルスベクターが挙げられる。
タンパク質の産生、回収、および精製
本発明のTNFSFまたはTNF様リガンド突然変異タンパク質ポリペプチドを産生させるために用いられる宿主細胞を、当業界で公知であり、選択された宿主細胞の培養にとって好適である培地中で増殖させることができる。細菌宿主細胞のための好適な培地の例としては、Luriaブロス(LB)+選択剤、例えば、アンピシリンなどの必要な補給物質が挙げられる。哺乳動物宿主細胞のための好適な培地の例としては、最少必須培地(MEM)、ダルベッコ改変イーグル培地(DMEM)、ウシ胎仔血清(FBS)を添加したDMEM、およびRPMI-1640が挙げられる。
宿主細胞を、約20℃〜約39℃、例えば、25℃〜約37℃などの好適な温度で培養する。培地のpHは、一般的には、主に宿主生物に応じて、約6.8〜7.4、例えば、7.0である。誘導性プロモーターが本発明の発現ベクター中で用いられる場合、タンパク質発現はプロモーターの活性化にとって好適な条件下で誘導される。
タンパク質回収は、典型的には、一般的には、浸透圧ショック、超音波処理、または溶解などの手段による、宿主細胞の破壊を含む。一度、細胞が破壊されたら、遠心分離または濾過によって細胞破片を除去することができる。例えば、親和性樹脂クロマトグラフィーにより、タンパク質をさらに精製することができる。当業界で公知の標準的なタンパク質精製方法を用いることができる。以下の手順は、好適な精製手順の例である：免疫親和性またはイオン交換カラム上での分画、エタノール沈降、逆相HPLC、シリカまたは陽イオン交換樹脂上でのクロマトグラフィー、SDS-PAGE、およびゲル濾過。いくつかの実施形態においては、精製手順はまた、当業界における従来の技術、例えば、サイズ排除クロマトグラフィーを用いて、モノマーTNFSFまたはTNF様突然変異タンパク質を除去することを含む。
好ましい実施形態においては、形質転換された大腸菌BL21細胞の種培養を用いて、大量のLB、例えば、2〜10リットルに接種することができる。BL21培養物を、A600=0.8の光密度(OD)まで増殖させることができる。タンパク質発現を、0.1mMのIPTGで誘導することができる。IPTG誘導の後、細胞を、18℃で10〜20時間、好ましくは、16時間増殖させることができる。続いて、遠心分離により細胞を収獲し、当業界における従来の技術を用いて溶解して、細胞培養上清を得ることができる。いくつかの実施形態においては、Ni-NTAカラムを、ポリヒスチジンタグ付の本発明のTNFSFまたはTNF様リガンド突然変異タンパク質の親和性精製のために用いることができる。ポリヒスチジンタグは、マイクロモル濃度の親和性でNTA(ニトリロ三酢酸)キレート化Niに結合する。細胞培養上清をNi-NTAカラムにロードした後、ポリヒスチジンタグ付タンパク質は、カラムに結合したままである。カラムをリン酸バッファーで洗浄して、Niイオンと特異的に相互作用しない望ましくないタンパク質を除去することができる。最後に、所望のタンパク質、例えば、本発明のTNFSFまたはTNF様リガンド突然変異タンパク質を、150〜300mMイミダゾールを用いてNi-NTAカラムから溶出させることができる。回収されたTNFSFまたはTNF様リガンド突然変異タンパク質のサイズおよび純度を、SDS-PAGEゲルおよび/またはウェスタンブロットを用いてアッセイすることができる。
あるいは、TNFSFおよびTNF様リガンド突然変異タンパク質ポリペプチドを、被験体(例えば、ヒト)の細胞によって、例えば、治療の文脈では、TNFSFまたはTNF様リガンド突然変異タンパク質(例えば、TNF-α突然変異タンパク質)をコードする核酸分子を含有するベクター(例えば、レトロウイルスベクター、アデノウイルスベクター、ポックスウイルスベクター(例えば、改変ワクシニアアンカラ(MVA)などのワクシニアウイルスベクター)、アデノ随伴ウイルスベクター、およびアルファウイルスベクター)を投与することによって産生させることができる。ベクターは、一度、被験体の細胞の内部に入ったら(例えば、形質転換、トランスフェクション、エレクトロポレーション、リン酸カルシウム沈降、直接マイクロインジェクション、感染などによる)、TNFSFまたはTNF様リガンド突然変異タンパク質の発現を促進し、次いで、マルチマー(例えば、ホモ-トリマー)として細胞から分泌される。疾患または障害の処置が所望の転帰である場合、さらなる活動は必要ない。タンパク質の収集を望む場合、被験体から血液を採取し、当業界で公知の方法により血液からタンパク質を精製することができる。
医薬組成物および調製物
いくつかの実施形態においては、本発明の医薬組成物は、治療タンパク質として1つ以上の本発明のTNFSFまたはTNF様リガンド突然変異タンパク質を含有してもよい。治療量のタンパク質に加えて、医薬組成物は、当業者には公知の方法により製剤化することができる製薬上許容し得る担体または賦形剤を含有してもよい。他の実施形態においては、本発明の医薬組成物は、1つ以上の本発明のTNFSFまたはTNF様リガンド突然変異タンパク質をコードする核酸分子(例えば、ウイルスベクターなどのベクター中に)を含有してもよい。好ましくは、本発明の医薬組成物中のTNFSFまたはTNF様リガンド突然変異タンパク質は、共有結合される(例えば、ジスルフィド結合される)、2、3、4個以上、好ましくは、3個のTNFSFもしくはTNF様リガンド突然変異タンパク質またはその断片の複合体から構成される。いくつかの実施形態においては、本発明の医薬組成物は、モノマーTNFSFまたはTNF様リガンド突然変異タンパク質を含有してもよい。好ましくは、本発明の医薬組成物中のTNFSFまたはTNF様リガンド突然変異タンパク質は、膜貫通ドメイン、および場合により、細胞質ドメインも、または両ドメインを欠く可溶性TNFSFまたはTNF様リガンド突然変異タンパク質である。
本発明のTNFSFおよびTNF様リガンド突然変異タンパク質は、TNFSFまたはTNF様リガンド突然変異タンパク質のモノマーおよびホモ-マルチマーを含む。それぞれの突然変異タンパク質は、近隣のTNFSFまたはTNF様リガンド突然変異タンパク質上の別のシステイン残基とのジスルフィド結合の形成を促進する少なくとも1個のシステイン残基置換または挿入を含む。本発明のTNFSFまたはTNF様リガンド突然変異タンパク質のマルチマーは、共有結合される(例えば、ジスルフィド結合される)、2、3、4個以上のTNFSFもしくはTNF様リガンド突然変異タンパク質またはその断片から構成される。いくつかの実施形態においては、それぞれのTNFSFもしくはTNF様リガンド突然変異タンパク質またはその断片は、システイン置換および挿入に加えて、配列番号1〜735のいずれか1つまたはその生物学的に活性な断片から選択される配列に対する少なくとも50%の配列同一性(例えば、50%、55%、60%、65%、70%、75%、80%、85%、90%、95%、99%、または100%)を有する。
いくつかの実施形態においては、本発明の医薬組成物は、本発明のTNF-α突然変異タンパク質を含有してもよい。好ましくは、TNF-α突然変異タンパク質は、それぞれのモノマーが、1個以上の下記システイン置換：H91C、N110C、N168C、L169C、L170C、S171C、A172C、I173C、K174C、S175C、Q178C、E180C、W190C、Y191C、P193C、V199C、F200C、S223C、G224C、およびQ225Cを含有する、TNF-αホモ-トリマーを形成する可溶性TNF-α突然変異タンパク質である。他の実施形態においては、TNF-α突然変異タンパク質は、それぞれのモノマーが1個以上(好ましくは、1個)の下記システイン置換対：N92C/S147C、N92C/G224C、L93C/S147C、L93C/G224C、L94C/S147C、S171C/S147C、S171C/G224C、S171C/Q149C、A96C/P117C、I97C/Y115C、I97C/P117C、K98C/Y115C、S99C/W114C、S99C/Y115C、Q102C/E104C、V123C/H15C、F124C/H15C、およびF124C/N34Cを含有する、TNF-αホモ-トリマーを形成する(例えば、ジスルフィド結合形成を介して)可溶性TNF-α突然変異タンパク質である。好ましい実施形態においては、本発明の医薬組成物は、それぞれのモノマーがアミノ酸置換S171C、G224C、またはその両方を含有する、TNF-αホモ-トリマーを形成する(例えば、ジスルフィド結合形成を介して)本発明のTNF-α突然変異タンパク質を含有する。
本発明の医薬組成物は、1つ以上の本発明のTNFSFまたはTNF様リガンド突然変異タンパク質をコードする核酸分子を含有してもよい。TNFSFまたはTNF様リガンド突然変異タンパク質をコードする核酸分子を、遺伝子療法における周知の方法により送達することができる、適切な発現ベクター中にクローニングすることができる。in vivoでの遺伝子の送達および発現のために用いることができるベクターとしては、限定されるものではないが、レトロウイルスベクター、アデノウイルスベクター、ポックスウイルスベクター(例えば、改変ワクシニアアンカラ(MVA)などのワクシニアウイルスベクター)、アデノ随伴ウイルスベクター、およびアルファウイルスベクターが挙げられる。いくつかの実施形態においては、ベクターは、複数のTNFSFまたはTNF様リガンド突然変異タンパク質の発現を可能にする内部リボソーム進入部位(IRES)を含んでもよい。TNFSFまたはTNF様リガンド突然変異タンパク質をコードするベクター由来核酸分子を、in situまたはin vivoで発現させ、ホモ-マルチマー、例えば、ホモ-トリマーを形成させることができる。いくつかの実施形態においては、核酸分子は、配列番号1〜735のいずれか1つまたはその生物学的に活性な断片から選択される配列に対する少なくとも50%の配列同一性(例えば、50%、55%、60%、65%、70%、75%、80%、85%、90%、95%、99%、または100%)を有するTNFSFもしくはTNF様リガンド突然変異タンパク質またはその断片をコードしてもよい。いくつかの実施形態においては、本発明の医薬組成物は、本発明のTNF-α突然変異タンパク質をコードする核酸分子を含有してもよい。好ましくは、核酸分子は、1個以上の下記システイン置換：H91C、N110C、N168C、L169C、L170C、S171C、A172C、I173C、K174C、S175C、Q178C、E180C、W190C、Y191C、P193C、V199C、F200C、S223C、G224C、およびQ225Cを有するTNF-α突然変異タンパク質をコードする。他の実施形態においては、核酸分子は、1個以上(好ましくは、1個)の下記システイン置換対：N92C/S147C、N92C/G224C、L93C/S147C、L93C/G224C、L94C/S147C、S171C/S147C、S171C/G224C、S171C/Q149C、A96C/P117C、I97C/Y115C、I97C/P117C、K98C/Y115C、S99C/W114C、S99C/Y115C、Q102C/E104C、V123C/H15C、F124C/H15C、およびF124C/N34Cを有するTNF-α突然変異タンパク質をコードする。好ましい実施形態においては、本発明の医薬組成物は、アミノ酸置換S71C、G224C、またはその両方を有するTNF-α突然変異タンパク質をコードする核酸分子を含有する。
他の実施形態においては、本発明の医薬組成物は、治療タンパク質として、1つ以上のTNFSFおよびTNF様リガンド突然変異タンパク質、またはTNF-α以外の他のTNFSFおよびTNF様リガンド、例えば、リンホトキシン(例えば、LT-αおよびRANKL)、OX40L、CD40L、FasL、CD70、RANKL、4-1BBリガンド、TRAIL、RANKL、TWEAK、APRIL、BLys、LIGHT、TL1、GITRL(TL6としても知られる)、EDA(例えば、EDA-A1およびEDA-A2)、およびアジポネクチンのそのような突然変異タンパク質をコードする核酸分子を含有してもよい。
医薬組成物中の許容し得る担体および賦形剤は、用いられる用量および濃度で、レシピエントに対して非毒性的である。許容し得る担体および賦形剤は、リン酸、クエン酸、HEPES、およびTAEなどのバッファー、アスコルビン酸およびメチオニンなどの酸化防止剤、塩化ヘキサメトニウム、オクタデシルジメチルベンジル塩化アンモニウム、レゾルシノールおよび塩化ベンズアルコニウムなどの保存剤、ヒト血清アルブミン、ゼラチン、デキストラン、および免疫グロブリンなどのタンパク質、ポリビニルピロリドンなどの親水性ポリマー、グリシン、グルタミン、ヒスチジン、およびリジンなどのアミノ酸、ならびにグルコース、マンノース、スクロース、およびソルビトールなどの炭水化物を含んでもよい。本発明の医薬組成物を、注入可能な製剤の形態で非経口的に投与することができる。注入用の医薬組成物を、ビヒクルとして滅菌溶液または任意の製薬上許容し得る液体を用いて製剤化することができる。製薬上許容し得るビヒクルとしては、限定されるものではないが、滅菌水、生理食塩水、および細胞培養培地(例えば、ダルベッコ改変イーグル培地(DMEM)、α-改変イーグル培地(α-MEM)、F-12培地)が挙げられる。
本発明の医薬組成物を、ヒドロキシメチルセルロースまたはゼラチンマイクロカプセルおよびポリ-(メチルメタクリレート)マイクロカプセルなどのマイクロカプセル中で調製することができる。本発明の医薬組成物はまた、リポソーム、アルブミンミクロスフェア、マイクロエマルジョン、ナノ粒子、およびナノカプセルなどの他の薬物送達系中で調製することもできる。そのような技術は、Remington: The Science and Practice of Pharmacy 20th edition (2000)に記載されている。in vivoでの投与のために用いられる医薬組成物は無菌である必要がある。これは、滅菌濾過膜を通す濾過によって容易に達成される。
また、本発明の医薬組成物を、持続放出製剤として調製することもできる。持続放出調製物の好適な例としては、本発明のTNFSFまたはTNF様リガンド突然変異タンパク質を含有する固体疎水性ポリマーの半透過性マトリックスが挙げられる。持続放出マトリックスの例としては、ポリエステル、ヒドロゲル、ポリアクチド(米国特許第3,773,919号)、L-グルタミン酸とγエチル-L-グルタミン酸とのコポリマー、非分解性エチレン-酢酸ビニル、分解性乳酸-グリコール酸コポリマー、例えば、LUPRON DEPOT(商標)、およびポリ-D-(-)-3-ヒドロキシ酪酸が挙げられる。いくつかの持続放出製剤は、数ヶ月、例えば、1〜6ヶ月にわたる分子の放出を可能にするが、他の製剤はより短期間、例えば、数日から数週間にわたって本発明の医薬組成物を放出する。
医薬組成物を、必要に応じて単位用量形態で形成させることができる。医薬調製物中に含まれる、活性成分、例えば、ジスルフィド結合したマルチマーTNFSFまたはTNF様リガンド突然変異タンパク質複合体の量は、指定の範囲内の好適な用量(例えば、0.01〜100mg/kg体重の範囲内の用量)が提供されるようなものである。
遺伝子療法のための医薬組成物は、許容し得る希釈剤中にあるか、または遺伝子送達ビヒクルが埋め込まれた遅延放出マトリックスを含んでもよい。in vivoでの遺伝子送達ビヒクルとして用いることができるベクターとしては、限定されるものではないが、レトロウイルスベクター、アデノウイルスベクター、ポックスウイルスベクター(例えば、改変ワクシニアアンカラ(MVA)などのワクシニアウイルスベクター)、アデノ随伴ウイルスベクター、およびアルファウイルスベクターが挙げられる。いくつかの実施形態においては、ベクターは、複数のTNFSFおよびTNF様リガンド突然変異タンパク質の発現を可能にする内部リボソーム進入部位(IRES)を含んでもよい。遺伝子送達のための他のビヒクルおよび方法は、それぞれその全体が参照により組み込まれる米国特許第5,972,707号、第5,697,901号および第6,261,554号に記載されている。
医薬組成物を製造する他の方法は、例えば、米国特許第5,478,925号、第8,603,778号、第7,662,367、および第7,892,558号、ならびにWO1996003141(これらは全てその全体が参照により本明細書に組み込まれる)に記載されている。
投与の経路、用量およびタイミング
治療タンパク質として1つ以上のTNFSFおよびTNF様リガンド突然変異タンパク質を含有する本発明の医薬組成物を、非経口投与、皮下投与、静脈内投与、筋肉内投与、動脈内投与、くも膜下投与、または腹腔内投与のために製剤化することができる(静脈内投与が特に好適である)。また、医薬組成物を、経鼻、スプレー、経口、エアロゾル、直腸、または経膣投与のために製剤化するか、またはそれを介して投与することもできる。治療タンパク質を投与する方法は、当業界で公知である。例えば、米国特許第6,174,529号、第6,613,332号、第8,518,869号、第7,402,155号、および第6,591,129号、ならびに米国特許出願公開第20140051634号、WO1993000077、米国特許出願公開第20110184145号(これらの開示はその全体が参照により組み込まれる)を参照されたい。1つ以上のこれらの方法を用いて、1つ以上の本発明のTNFSFおよびTNF様リガンド突然変異タンパク質を含有する本発明の医薬組成物を投与することができる。注入用製剤については、様々な有効な医薬担体が当業界で公知である。例えば、Pharmaceutics and Pharmacy Practice, J. B. Lippincott Company, Philadelphia, Pa., Banker and Chalmers, eds., pages 238-250 (1982)、およびASHP Handbook on Injectable Drugs, Toissel, 4th ed., pages 622-630 (1986)を参照されたい。
本発明の医薬組成物の用量は、投与経路、処置される疾患、および被験体の身体的特徴、例えば、年齢、体重、全体的な健康などの因子に依存する。典型的には、単一用量中に含有される本発明のTNFSFまたはTNF様リガンド突然変異タンパク質の量は、有意な毒性を誘導することなく、疾患を有効に防止する、遅延させる、または処置する量であってもよい。本発明の医薬組成物は、0.001〜500mgの範囲(例えば、0.05、0.01、0.1、0.2、0.3、0.5、0.7、0.8、1mg、2mg、3mg、4mg、5mg、10mg、15mg、20mg、30mg、50mg、100mg、250mg、または500mg)、より特定の実施形態においては、約0.1〜約100mg、より特定の実施形態においては、約0.2〜約20mgのTNFSFもしくはTNF様リガンド突然変異タンパク質またはそのジスルフィド結合したホモ-マルチマー複合体の用量を含んでもよい。医師であれば、疾患の程度および被験体の様々なパラメータなどの従来の因子に従って、用量を適合させることができる。
本発明の医薬組成物を、約0.001mg〜約500mg/kg/日(例えば、0.05、0.01、0.1、0.2、0.3、0.5、0.7、0.8、1mg、2mg、3mg、4mg、5mg、10mg、15mg、20mg、30mg、50mg、100mg、250mg、または500mg/kg/日)の量で投与することができる。TNFSFまたはTNF様リガンド突然変異タンパク質を含有する本発明の医薬組成物を、それを必要とする被験体に、例えば、毎日、毎週、毎月、半年毎、毎年、または医学的に必要に応じて、1回以上(例えば、1〜10回以上)投与してもよい。用量を、単回または複数回用量レジメンで提供することができる。例えば、いくつかの実施形態においては、有効量は、約0.1〜約100mg/kg/日、約0.2mg〜約20mgのTNFSFまたはTNF様リガンド突然変異タンパク質/日、約1mg〜約10mgのTNFSFまたはTNF様リガンド突然変異タンパク質/日、約0.7mg〜約210mgのTNFSFまたはTNF様リガンド突然変異タンパク質/週、1.4mg〜約140mgのTNFSFまたはTNF様リガンド突然変異タンパク質/週、3日毎に約0.3mg〜約300mgのTNFSFまたはTNF様リガンド突然変異タンパク質、1日おきに約0.4mg〜約40mgのTNFSFまたはTNF様リガンド突然変異タンパク質、および1日おきに約2mg〜約20mgのTNFSFまたはTNF様リガンド突然変異タンパク質の範囲にある用量である。投与間のタイミングは、医学的状態が改善するにつれて減少するか、または患者の健康が低下するにつれて増加してもよい。
TNFSFまたはTNF様リガンド突然変異タンパク質の共有架橋マルチマーを用いた処置方法
本発明は、自己免疫疾患(例えば、円形脱毛症、強直性脊椎炎、抗リン脂質症候群、アジソン病、溶血性貧血、自己免疫性肝炎、肝炎、ベーチェット病、水疱性類天疱瘡、心筋症、セリアック病-皮膚炎、慢性疲労免疫不全症候群(CFIDS)、慢性炎症性脱髄性多発性神経障害、チャーグ・ストラウス症候群、瘢痕性類天疱瘡、限局性強皮症(CREST症候群)、寒冷凝集素症、クローン病、円板状ループス、本態性混合型クリオグロブリン血症、線維筋痛-線維筋炎、グレーブス病、ギラン・バレー症候群、橋本甲状腺炎、甲状腺機能低下症、炎症性腸疾患、自己免疫性リンパ球増殖性症候群(ALPS)、特発性肺線維症、特発性血小板減少性紫斑病(ITP)、IgAニューロパシー、インスリン依存性糖尿病、若年性関節炎、扁平苔癬、狼瘡、メニエール病、混合型結合組織疾患、多発性硬化症、重症筋無力症、尋常性天疱瘡、悪性貧血、結節性多発動脈炎、多発性軟骨炎、多腺性症候群、リウマチ性多発性筋痛、多発性筋炎、皮膚筋炎、原発性無ガンマグロブリン血症、原発性胆汁性肝硬変、乾癬、レイノー現象、ライター症候群、リウマチ熱、関節リウマチ、サルコイドーシス、強皮症、シェーグレン症候群、スティフ・マン症候群、高安動脈炎、側頭動脈炎/巨細胞性動脈炎、潰瘍性大腸炎、ブドウ膜炎、血管炎、白斑、およびウェゲナー肉芽腫症、ならびにインスリン依存性糖尿病、好ましくは、前記自己免疫疾患は、インスリン依存性糖尿病、関節リウマチ、シェーグレン症候群、多発性硬化症、およびクローン病である)、神経疾患(例えば、脳腫瘍、脳転移、統合失調症、てんかん、筋萎縮性側索硬化症(ALS)、パーキンソン病、アルツハイマー病、ハンチントン病、および脳卒中、好ましくは、前記神経疾患は、筋萎縮性側索硬化症(ALS)、パーキンソン病、およびアルツハイマー病である)、がん(例えば、膀胱がん、膵臓がん、子宮頸がん、肺がん、肝臓がん、卵巣がん、結腸がん、胃がん、ウイルス誘導性がん、神経芽腫、乳がん、前立腺がん、腎がん、白血病、肉腫、癌腫、非小細胞肺癌、非ホジキンリンパ腫、急性骨髄性白血病(AML)、慢性リンパ球性白血病(CLL)、B細胞慢性リンパ球性白血病(B-CLL)、多発性骨髄腫(MM)、赤白血病、腎細胞癌、軟部組織肉腫、メラノーマ、アストロサイトーマ、およびオリゴアストロサイトーマ)、感染症、代謝性疾患(例えば、糖尿病)、黄斑疾患(例えば、黄斑変性)、筋萎縮症、流産と関連する疾患、血管疾患(例えば、アテローム性動脈硬化症)、骨量減少と関連する疾患(すなわち、閉経、骨粗鬆症の結果としての骨量減少)、アレルギー、血液障害(例えば、血友病)、AIDS、骨格筋障害、増殖受容体と関連する疾患、肥満、ならびに組織もしくは臓器修復、再生、もしくは移植の結果生じる合併症(例えば、移植片対宿主疾患(GVHD)および移植片拒絶)などの疾患および障害に罹患している患者、または臓器もしくは組織再生もしくは修復を必要とする患者(例えば、1型糖尿病患者などの自己免疫疾患患者)を処置するために用いることができる1つ以上のTNFSFまたはTNF様リガンド突然変異タンパク質を含有する医薬組成物を提供する。
TNFSFまたはTNF様リガンド突然変異タンパク質を含有する本発明の医薬組成物を用いて、限定されるものではないが、自己免疫疾患およびがん(例えば、膀胱がん、膵臓がん、子宮頸がん、肺がん、肝臓がん、卵巣がん、結腸がん、胃がん、ウイルス誘導性がん、神経芽腫、乳がん、前立腺がん、腎がん、白血病、肉腫、癌腫、非小細胞肺癌、非ホジキンリンパ腫、急性骨髄性白血病(AML)、慢性リンパ球性白血病(CLL)、B細胞慢性リンパ球性白血病(B-CLL)、多発性骨髄腫(MM)、赤白血病、腎細胞癌、軟部組織肉腫、メラノーマ、アストロサイトーマ、またはオリゴアストロサイトーマ)を含む医学的状態を処置することができる。1つ以上のこれらの医学的状態を処置するために、医薬組成物は、それを必要とする患者に投与されるTNFSFまたはTNF様リガンド突然変異タンパク質の共有架橋(例えば、ジスルフィド結合)したマルチマーの量を含んでもよい。
本発明の医薬組成物を、自己免疫疾患、例えば、円形脱毛症、強直性脊椎炎、抗リン脂質症候群、アジソン病、溶血性貧血、自己免疫性肝炎、肝炎、ベーチェット病、水疱性類天疱瘡、心筋症、セリアック病-皮膚炎、慢性疲労免疫不全症候群(CFIDS)、慢性炎症性脱髄性多発性神経障害、チャーグ・ストラウス症候群、瘢痕性類天疱瘡、限局性強皮症(CREST症候群)、寒冷凝集素症、クローン病、円板状ループス、本態性混合型クリオグロブリン血症、線維筋痛-線維筋炎、グレーブス病、ギラン・バレー症候群、橋本甲状腺炎、甲状腺機能低下症、炎症性腸疾患、自己免疫性リンパ球増殖性症候群(ALPS)、特発性肺線維症、特発性血小板減少性紫斑病(ITP)、IgAニューロパシー、インスリン依存性糖尿病、若年性関節炎、扁平苔癬、狼瘡、メニエール病、混合型結合組織疾患、多発性硬化症、重症筋無力症、尋常性天疱瘡、悪性貧血、結節性多発動脈炎、多発性軟骨炎、多腺性症候群、リウマチ性多発性筋痛、多発性筋炎、皮膚筋炎、原発性無ガンマグロブリン血症、原発性胆汁性肝硬変、乾癬、レイノー現象、ライター症候群、リウマチ熱、関節リウマチ、サルコイドーシス、強皮症、シェーグレン症候群、スティフ・マン症候群、高安動脈炎、側頭動脈炎/巨細胞性動脈炎、潰瘍性大腸炎、ブドウ膜炎、血管炎、白斑、およびウェゲナー肉芽腫症の処置において用いることができる。
好ましくは、自己免疫疾患は、インスリン依存性糖尿病(1型糖尿病もしくは自己免疫性糖尿病としても知られる)、多発性硬化症、関節リウマチ、シェーグレン症候群、クローン病、甲状腺炎、狼瘡、または皮膚炎である。TNFSFまたはTNF様リガンド突然変異タンパク質、例えば、ホモ-トリマー性TNF-α突然変異タンパク質複合体(例えば、それぞれのモノマーがS171CおよびG224C置換を含有する複合体)を含有する医薬組成物の投与は、自己反応性T細胞を選択的に殺傷する、および/または健康なTNF細胞、例えば、調節性T細胞の増殖を促進する。一実施形態においては、TNFSFリガンド突然変異タンパク質は、ジスルフィド結合したホモ-トリマー複合体中に存在するTNF-α突然変異タンパク質(例えば、S171C/G224C TNF-α突然変異タンパク質)である。
本発明の医薬組成物を、神経疾患、例えば、脳腫瘍、脳転移、統合失調症、てんかん、筋萎縮性側索硬化症(ALS)、パーキンソン病、アルツハイマー病、ハンチントン病、および脳卒中の処置において用いることができる。好ましくは、神経疾患は、筋萎縮性側索硬化症(ALS)、パーキンソン病、またはアルツハイマー病である。好ましくは、本発明の医薬組成物は、1つ以上のTNFSFまたはTNF様リガンド突然変異タンパク質を含有する。一実施形態においては、TNFSFリガンド突然変異タンパク質は、ジスルフィド結合したホモ-トリマー複合体中に存在するTNF-α突然変異タンパク質(例えば、S171C/G224C TNF-α突然変異タンパク質)である。
いくつかの実施形態においては、本発明の医薬組成物を、がん処置において1つ以上の化学療法剤と共に用いることができる。いくつかの実施形態においては、本発明の医薬組成物を、がん処置、例えば、腫瘍選択的T細胞活性化、樹状細胞療法、抗体療法、およびサイトカイン療法において1つ以上の化学療法剤と共に用いることができる。
がん処置において用いられる化学療法剤は、限定されるものではないが、カンプトテシン、シスプラチン、カルボプラチン、オキサリプラチン、ブレオマイシン、マイトマイシンC、カリケアマイシン、メイタンシノイド、ゲルダナマイシン、ドキソルビシン、イダルビシン、ダウノルビシン、エピルビシン、ブスルファン、カルムスチン(BCNU)、ロムスチン(CCNU)、セムスチン、サリドマイド、レナリドミド、メトトレキサート、アザチオプリン、6-メルカプトプリン、フルダラビン、5-アザシチジン、ペントスタチン(2'-デオキシコホルマイシン)、シタラビン(シトシンアラビノシド)、ゲムシタビン、5-フルオロウラシル、ヒドロキシウレア、エレスクロモル、エトポシド、テニポシド、アムサクリン、トポテカン、イリノテカン、クロラムブシル、シクロホスファミド、イホスファミド、メルファラン、ボルテゾミブ、ビンクリスチン、ビンブラスチン、ビノレルビン、パクリタキセル、ドセタキセル、アンホテリシンB、リファンピシン、ペンタミジン、シクロスポリンA、タクロリムス(FK506)、シロリムス(ラパマイシン)、エベロリムス、テムシロリムス、ゾタロリムス、およびビオリムスを含んでもよい。他の化学療法剤としては、Scottらに詳細に記載されている、トラスツズマブ(HERCEPTIN(登録商標))、ベバシズマブ(AVASTIN(登録商標))、セツキシマブ(ERBITUX(登録商標))、パニツムマブ(VECTIBIX(登録商標))、イピリムマブ(YERVOY(登録商標))、リツキシマブ(RITUXAN(登録商標)およびMABTHERA(登録商標))、アレムツズマブ(CAMPATH(登録商標))、オファツムマブ(ARZERRA(登録商標))、ゲムツズマブオゾガマイシン(MYLOTARG(登録商標))、ブレンツキシマブベドチン(ADCETRIS(登録商標))、90Y-イブリツモマブチウキセタン(ZEVALIN(登録商標))、および131I-トシツモマブ(BEXXAR(登録商標))が挙げられる。
がん処置において本発明の医薬組成物と共に用いることができるさらなる化学療法剤としては、O6-ベンジルグアニン、13-cisレチノイン酸、14-ヒドロキシ-レトロ-レチノール、2'デオキシホルマイシン、20-パイ-1,25ジヒドロキシビタミンD3、2クロロ-2'-アラビノ-フルオロ-2'-デオキシアデノシン、2-クロロ-2'-デオキシアデノシン、2-クロロデオキシアデノシン、2-クロロデオキシアデノシン(2-Cda)、2'デオキシコホルマイシン(DCF)、3-メチルTTNEB、5-エチニルウラシル、5-fdump、6-メルカプトプリン、6-チオグアニン、9-アミノカンプトテシン、9-cisレチノイン酸、酢酸アメタントロン、アビラテロン、アシビシン、アクラルビシン、塩酸アコダゾール、アクロニン、アシルフルベン、アデシペノール、アドゼレシン、アドリアマイシン、アルデスロイキン、ALL-TKアンタゴニスト、all-transレチノイン酸、all-transレチノール、アルトレタミン、アンバムスチン、アンボマイシン、アミドックス、アミホスチン、アミノグルテチミド、アミノレブリン酸、アムルビシン、アムサクリン、アナグレリド、アナストロゾール、アンドログラホリド、血管新生阻害剤、アニソマイシン、アンタゴニストD、アンタゴニストG、アンタレリックス、アントラマイシン、抗アンドロゲン剤、前立腺癌、抗背側形成タンパク質-1、抗エストロゲン剤、抗新生物剤、アンチセンスオリゴヌクレオチド、アフィジコリングリシネート、アポトーシス遺伝子モジュレータ、アポトーシス調節剤、アプリン酸、アラ-CDP-DL-PTBA、アルギニンデアミナーゼ、アスパラギナーゼ、アスペリン、アスラクリン、アタメスタン、アトリムスチン、アキシナスタチン1、アキシナスタチン2、アキシナスタチン3、アザシチジン、アザセトロン、アザトキシン、アザチロシン、アゼテパ、アゾトマイシン、AZQ、B、R=Me)、バッカチンIII誘導体、バラノール、バチマスタット、BCR/ABLアンタゴニスト、ベンゾクロリン、ベンゾデパ、ベンゾイルスタウロスポリン、ベータラクタム誘導体、ベータ-アレチン、ベタクラマイシンB、ベツリン酸、bFGF阻害剤、ビカルタミド、ビス(白金)、ビサントレン、塩酸ビサントレン、ビサジリジニルスペルミン、ビスナフィド、ジメシル酸ビスナフィド、ビストラテンA、ビゼレシン、ブレオマイシンA2、ブレオマイシンB2、硫酸ブレオマイシン、ブレフラート、ブレキナールナトリウム、ブロピリミン、ブドチタン、ブスルファン、ブチオニンスルホキシミン、カクチノマイシン、カルシポトリオール、カルホスチンC、カルステロン、カンプトテシン、カンプトテシン誘導体(例えば、10-ヒドロキシ-カンプトテシン)、カナリポックスIL-2、カペシタビン、カラセミド、カルベチメル、カルボプラチン、カルボキサミド-アミノ-トリアゾール、カルボキシアミドトリアゾール、CaRest M3、カルムスチン、CARN700、軟骨由来阻害剤、塩酸カルビシン、カルゼレシン、カゼインキナーゼ阻害剤(ICOS)、カスタノスペルミン、セクロピンB、セデフィンゴール、CEP-751、セトロレリックス、クロラムブシル、クロリン、クロロキノキサリンスルホンアミド、シカプロスト、シロレマイシン、シスプラチン、cis-ポルフィリン、クラドリビン、クロミフェン類似体、クロトリマゾール、コリスマイシンA、コリスマイシンB、コンブレタスタチンA4、コンブレタスタチン類似体、コンブレタスタチンa-4、コナゲニン、CPT-11、クラムベシジン816、クリスナトール、メシル酸クリスナトール、クリプトフィシン8、クリプトフィシンA誘導体、クラシンA、シクロペンタントラキノン、シクロホスファミド、シクロプラタム、シペマイシン、シタラビン、シタラビンオクホスファート、細胞溶解因子、サイトスタチン、デカ(n-[2-(ジメチル-アミノ)-エチル]アクリジン-4-カルボキサミド)、デカルバジン、ダクリキシマブ、ダクチノマイシン、ダクチノマイシン(アクチノマイシンD)、ダルビシン、ダウノマイシン、塩酸ダウノルビシン、デシタビン、デヒドロジデムニンB、デスロレリン、デキシホスファミド、デキソルマプラチン、デキスラゾキサン、デキスベラパミル、デザグアニン、メシル酸デザグアニン、ジカルバジン(DTIC)、ジアジクオン、ジデムニンB、ジドックス、ジエチルノルスペルミン、ジヒドロ-5-アザシチジン、ジヒドロタキソール、9-ジオキサマイシン、ジフェニルスピロムスチン、ジスコデルモリド、ドセタキセル、ドコサノール、ドラサチン、ドラセトロン、ドキシフルリジン、ドキソルビシン、塩酸ドキソルビシン、ドロロキシフェン、クエン酸ドロロキシフェン、プロピオン酸ドロモスタノロン、ドロナビノール、デュアゾマイシン、デュオカルマイシンSA、DWA2114R、エブセレン、エコムスチン、エダトレキサート、エデルホシン、エドレコロマブ、エフロルニチン、塩酸エフロルニチン、エレメン、エリプチシン、エルサミトルシン、エミテフル、エンロプラチン、エンプロマート、エピプロピジン、エピルビシン、塩酸エピルビシン、エピチロン、エポチロン(A、R=H、エプリステリド、エルブロゾール、塩酸エソルビシン、エストラムスチン、エストラムスチン類似体、エストラムスチンリン酸ナトリウム、エストロゲンアゴニスト、エストロゲンアンタゴニスト、エタニダゾール、エチオジゼドオイルi131、エトポシド、エトポシド4'-リン酸(エトポホス)、リン酸エトポシド、エトプリン、エキセメスタン、ファドロゾール、塩酸ファドロゾール、ファザラビン、フェンレチニド、フィルグラスチム、フィナステリド、フラボピリドール、フレゼラスチン、フロクスウリジン、フルアステロン、フルダラビン、フルダラビン(2-F-ara-AMP)、リン酸フルダラビン、塩酸フルオロダウノルニシン、フルオロウラシル、フルロシタビン、ホルフェニメックス、ホルメスタン、ホスキドン、ホストリエシン、ホストリエシンナトリウム、ホテムスチン、ガドリニウムテキサフィリン、硝酸ガリウム、ガロシタビン、ガニレリックス、ゼラチナーゼ阻害剤、ゲムシタビン、塩酸ゲムシタビン、グルタチオン阻害剤、金au198、ヘプスルファム、ヘレグリン、ヘキサメチレンビスアセタミド、ホモカンプトテシン、ホモハリントニン(HHT)、hPRL-G129R、ヒドロキシウレア、ハイペリシン、ヒポキサンチン、イバンドロン酸、イダルビシン、塩酸イダルビシン、イドキシフェン、イドラマントン、イフェプリストン、イホスファミド、イルモホシン、イロマスタット、イミダゾアクリドン、イミキモッド、免疫刺激ペプチド、インスリン様増殖因子-1受容体阻害剤、インターフェロンアゴニスト、インターフェロンアルファ-2a、インターフェロンアルファ-2b、インターフェロンアルファ-n3、インターフェロンアルファ-n1、インターフェロンベータ-ia、インターフェロンガンマ-ib、インターフェロン、インターロイキン、イオベングアン、ヨードドキソルビシン、イポメアノール、4-、イプロプラチン、イリノテカン、塩酸イリノテカン、イロプラクト、イルソグラジン、イソベンガゾール、イソホモハリコンドリンB、イタセトロン、ジャスプラキノリド、JM216、JM335、カハラリドF、ラメラリン-N三酢酸塩、ランレオチド、酢酸ランレオチド、レイナマイシン、レノグラスチム、硫酸レンチナン、レプトスタチン、レトロゾール、白血病阻害因子、白血球アルファインターフェロン、ロイプロリド + エストロゲン + プロゲステロン、酢酸ロイプロリド、ロイプロレリン、レバミソール、リアロゾール、塩酸リアロゾール、線状ポリアミン類似体、リノミド、親油性ジサッカリドペプチド、親油性白金化合物、リソクリナミド7、ロバプラチン、ロムブリシン、ロメトレキソール、ロメトレキソールナトリウム、ロムスチン、ロニダミン、ロソキサントロン、塩酸ロソキサントロン、ロバスタチン、ロキソリビン、ルルトテカン、ルテチウムテキサフィリン、リソフィリン、溶解ペプチド、マンノスタチンA、マリマスタット、マソプロコール、マスピン、マトリリシン阻害剤、マトリックスメタロプロテイナーゼ阻害剤、メイタンシン、塩酸メクロレタミン、酢酸メゲストロール、酢酸メレンゲストロール、メルファラン、メノガリル、メルカプトプリン、メテレリン、メチオニナーゼ、メトトレキサート、メトトレキサートナトリウム、メトクロプラミド、メトプリン、メツレデパ、MIF阻害剤、ミルテホシン、ミリモスチム、ミスマッチ二本鎖RNA、ミトラシン、ミチンドミド、ミトカルシン、ミトクロミン、ミトギリン、ミトグアゾン、ミトラクトール、ミトマルシン、マイトマイシン、マイトマイシン類似体、マイトマイシンC、ミトナフィド、ミトスペル、ミトタン、ミトトキシン線維芽細胞増殖因子-サポリン、ミトキサントロン、塩酸ミトキサントロン、ミトゾロミド、モファロテン、モルグラモスチム、モノクローナル抗体、ヒト絨毛性ゴナドトロピン、モノホスホリルリピドA + ミオバクテリウム細胞壁sk、モピダモール、多剤耐性遺伝子阻害剤、多腫瘍サプレッサー1に基づく療法、マスタード抗がん剤、マイカペルオキシドB、マイコバクテリウム細胞壁抽出物、ミコフェノール酸、ミリアポロン、N-(4-ヒドロキシフェニル)レチナミド、N-(2-クロロエチル)-N'-(ジエチル)エチルホスホン酸-N-ニトロソウレア(ホテムスチン)、N-(2-クロロエチル)-N'-(trans-4-メチルシクロヘキシル-N-ニトロソウレア(MeCCNU)、N-(2-クロロエチル)-N'シクロヘキシル-N-ニトロソウレア(CCNU)、N,N'-Bis(2-クロロエチル)-N-ニトロソウレア(BCNU)、N-アセチルジナリン、ナファレリン、ナグレスチップ、ナロキソン + ペンタゾシン、ナパビン、ナフテルピン、ナルトグラスチム、ナダプラチン、ネモルビシン、ネリドロン酸、中性エンドペプチダーゼ、ニルタミド、ニサマイシン、一酸化窒素モジュレータ、窒素マスタード(メクロルエタミン)、ニトロオキシド抗酸化剤、ニトルリン、N-メチル-Nニトロソウレア(MNU)、ノコダゾール、ノガラマイシン、オルマプラチン、N-プロパルギル-5,8-ジデアザ葉酸、N-置換ベンズアミド、オクトレオチド、オキセノン、オリゴヌクレオチド、オナプリストン、オンダンセトロン、オラシン、経口サイトカイン誘導剤、オルマプラチン、オサテロン、オキサリプラチン、オキサリプラチン、C1-973、オキサウノマイシン、オキシスラン、パクリタキセル、パクリタキセル類似体、パクリタキセル誘導体、パラウアミン、パルミトイルリゾキシン、パミドロン酸、パナキシトリオール、パノミフェン、パラバクチン、パゼリプチン、ペガスパルガーゼ、ペルデシン、ペリオマイシン、ペンタムスチン、ペントサンポリ硫酸ナトリウム、ペントスタチン、ペントロゾール、ペプロイシンサルフェート、パーフルブロン、ペルホスファミド、ペリリルアルコール、フェナジノマイシン、フェニル酢酸、ホスファターゼ阻害剤、ピシバニル、塩酸ピロカルピン、ピポブロマン、ピポスルファン、ピラルビシン、ピリトレキシム、塩酸ピロキサントロン、プラセチンA、プラセチンB、プラスミノーゲン活性化因子阻害剤、白金複合体、白金化合物、白金トリアミン複合体、プリカマイシン、プロメスタン、ポドフィロトキシン、ポルフィマーナトリウム、ポルフィロマイシン、プレドニムスチン、塩酸プロカルバジン、プロピルビス-アクリドン、プロスタグランジンJ2、プロテアソーム阻害剤、プロテインAに基づく免疫モジュレータ、タンパク質キナーゼC阻害剤、タンパク質キナーゼC阻害剤、ミクロアルガル、タンパク質チロシンホスファターゼ阻害剤、プリンヌクレオシドホスホリラーゼ阻害剤、ピューロマイシン、塩酸ピューロマイシン、プルプリン、ピラゾフリン、ピラゾロアクリジン、ピリドキシル化ヘモグロビンポリオキシエチレンコンジュゲート、rafアンタゴニスト、ラルチトレキセド、ラモセトロン、rasファルネシルタンパク質トランスフェラーゼ阻害剤、ras阻害剤、ras-GAP阻害剤、脱メチル化レテリプチン、レニウムRe186エチドロナート、リゾキシン、リゾキシンd、リボプリン、リボザイム、RIIレチナミド、ルネルバロン(rnerbarone)、ログレチミド、
ロヒツキン、ロムルチド、ロキニメックス、ルビギノンB1、ルボキシル、サフィンゴール、塩酸サフィンゴール、サイントピン、SarCNU、サルコフィトールA、サルグラモスチム、Sdi1模倣物質、セムスチン、老化由来阻害剤1、センスオリゴヌクレオチド、シグナル伝達阻害剤、シグナル伝達モジュレータ、シムトラゼン、一本鎖抗原結合タンパク質、シゾフィラン、ソブゾキサン、ナトリウムボロカプテート、フェニル酢酸ナトリウム、ソルベロール、ソマトメジン結合タンパク質、ソネルミン、スパルホサートナトリウム、スパルホス酸、スパルソマイシン、スピカマイシンD、塩酸スピロゲルマニウム、スピロムスチン、スピロプラチン、スプレノペンチン、スポンギスタチン1、スクアラミン、幹細胞阻害剤、幹細胞分裂阻害剤、スチピアミド、ストレプトニグリン、ストレプトゾシン、ストレプトゾトシン、ストロメリシン阻害剤、塩化ストロンチウムsr89、スルフィノシン、硫黄マスタード、スロフェヌル、超活性血管作用性腸ペプチドアンタゴニスト、スラジスタ、スラミン、スワインソニン、合成グリコサミノグリカン、タリソマイシン、タリムスチン、タモキシフェンメチオジド、タウロムスチン、タキサン、タキソイド、タザロテン、テコガランナトリウム、テガフル、テルラピリリウム、テロメラーゼ阻害剤、塩酸テロキサントロン、テモポルフィン、テモゾロミド、テニポシド、テニポシド9-アミノカンプトテシン、テロキシロン、テストラクトン、テトラクロロデカオキシド、テトラゾミン、サリブラスチン、サリドマイド、チアミプリン、チオコラリン、チオグアニン、チオテパ、トロンボポエチン、トロンボポエチン模倣物質、チマルファシン、チミタック、チモポエチン受容体アゴニスト、チモトリナン、甲状腺刺激ホルモン、チアゾフリン、スズエチルエチオプルプリン、チラパザミン、チタノセンジクロリド、トムデックス、top53、トポテカン、塩酸トポテカン、トプセンチン、トレミフェン、クエン酸トレミフェン、多能性幹細胞因子、翻訳阻害剤、酢酸トレストロン、トレチノイン、トリアセチルウリジン、トリコスタチンA、トリシルビン、リン酸トリシルビン、トリメトレキサート、グルクロン酸トリメトレキサート、トリプトレリン、トロピセトロン、塩酸ツブロゾール、ツロステリド、チロシンキナーゼ阻害剤、チロホスチン、UBC阻害剤、ウベニメックス、ウラシルマスタード、ウレデパ、尿生殖洞由来増殖阻害因子、ウロキナーゼ受容体アンタゴニスト、バプレオチド、バリオリンB、ベクターシステム、赤血球遺伝子療法、ベラレソール、ベラミン、ベルジン、ベルテポルフィン、ビンブラスチン、硫酸ビンブラスチン、ビンクリスチン、硫酸ビンクリスチン、ビンデシン、硫酸ビンデシン、硫酸ビネピジン、硫酸ビングリシネート、硫酸ビンロイロシン、ビノレルビン、酒石酸ビノレルビン、硫酸ビンロシジン、ビンキサルチン、硫酸ビンゾリジン、ビタキシン、ボロゾール、ボロゾール、ザノテロン、ゼニプラチン、ジラスコルブ、ジノスタチン、ジノスタチンスチマラマー、および塩酸ゾルビシンが挙げられる。
がん免疫療法において用いられる免疫療法剤は、限定されるものではないが、抗TNF受容体スーパーファミリーアゴニスト抗体、抗TNF受容体スーパーファミリーアンタゴニスト抗体、抗PL-L2剤、CD27剤、CD30剤、CD40剤、4-1BB剤、GITR剤、OX40剤、TRAILR1剤、TRAILR2剤、TWEAKR剤、および例えば、Mahoneyらの表1に記載された免疫学的標的を指向する薬剤を含んでもよい。例えば、免疫学的標的4-1BBリガンドを、抗4-1BBリガンド抗体を用いて標的化することができる；免疫学的標的OX40Lを、抗OX40抗体を用いて標的化することができる；免疫学的標的GITRを、抗GITR抗体を用いて標的化することができる；免疫学的標的CD27を、抗CD27抗体を用いて標的化することができる；免疫学的標的TL1Aを、抗TL1A抗体を用いて標的化することができる；免疫学的標的CD40Lを、抗CD40L抗体を用いて標的化することができる；免疫学的標的LIGHTを、抗LIGHT抗体を用いて標的化することができる；免疫学的標的BTLAを、抗BTLA抗体を用いて標的化することができる；免疫学的標的LAG3を、抗LAG3抗体を用いて標的化することができる；免疫学的標的TIM3を、抗TIM3抗体を用いて標的化することができる；免疫学的標的Singlecsを、抗Singlecs抗体を用いて標的化することができる；免疫学的標的ICOSリガンドを、抗ICOSリガンド抗体を用いて標的化することができる；免疫学的標的B7-H3を、抗B7-H3抗体を用いて標的化することができる；免疫学的標的B7-H4を、抗B7-H4抗体を用いて標的化することができる；免疫学的標的VISTAを、抗VISTA抗体を用いて標的化することができる；免疫学的標的TMIGD2を、抗TMIGD2抗体を用いて標的化することができる；免疫学的標的BTNL2を、抗BTNL2抗体を用いて標的化することができる；免疫学的標的CD48を、抗CD48抗体を用いて標的化することができる；免疫学的標的KIRを、抗KIR抗体を用いて標的化することができる；免疫学的標的LIRを、抗LIR抗体を用いて標的化することができる；免疫学的標的ILTを、抗ILT抗体を用いて標的化することができる；免疫学的標的NKG2Dを、抗NKG2D抗体を用いて標的化することができる；免疫学的標的NKG2Aを、抗NKG2A抗体を用いて標的化することができる；免疫学的標的MICAを、抗MICA抗体を用いて標的化することができる；免疫学的標的MICBを、抗MICB抗体を用いて標的化することができる；免疫学的標的CD244を、抗CD244抗体を用いて標的化することができる；免疫学的標的CSF1Rを、抗CSF1R抗体を用いて標的化することができる；免疫学的標的IDOを、抗IDO抗体を用いて標的化することができる；免疫学的標的TGFβを、抗TGFβ抗体を用いて標的化することができる；免疫学的標的CD39を、抗CD39抗体を用いて標的化することができる；免疫学的標的CD73を、抗CD73抗体を用いて標的化することができる；免疫学的標的CXCR4を、抗CXCR4抗体を用いて標的化することができる；免疫学的標的CXCL12を、抗CXCL12抗体を用いて標的化することができる；免疫学的標的SIRPAを、抗SIRPA抗体を用いて標的化することができる；免疫学的標的CD47を、抗CD47抗体を用いて標的化することができる；免疫学的標的VEGFを、抗VEGF抗体を用いて標的化することができる；および免疫学的標的ニューロピリンを、抗ニューロピリン抗体を用いて標的化することができる(例えば、Mahoneyらの表1を参照されたい)。
いくつかの実施形態においては、本発明の医薬組成物を、がん放射線療法と共に用いることができる。いくつかの実施形態においては、がん放射線療法は、細胞に対する十分な損傷を誘導して、正常に機能するその能力を制限するため、または細胞を完全に破壊するための指向性ガンマ線またはベータ線の使用を含む。
本発明による処置に対して修正可能であるがんとしては、限定されるものではないが、膀胱がん、膵臓がん、子宮頸がん、肺がん、肝臓がん、卵巣がん、結腸がん、胃がん、ウイルス誘導性がん、神経芽腫、乳がん、前立腺がん、腎がん、白血病、肉腫、癌腫、口腔扁平上皮癌、非小細胞肺癌、非ホジキンリンパ腫、および例えば、Falschlehnerら、Adv Exp Med Biol. 647:195-206, 2009(その全体が参照により本明細書に組み込まれる)の表1に記載のものが挙げられる。いくつかの実施形態においては、本発明による処置に対して修正可能であるがん性状態としては、転移がんが挙げられる。好ましくは、本発明の医薬組成物は、ジスルフィド結合したホモ-マルチマー(例えば、ホモ-トリマー)複合体中に存在する1つ以上のTNFSFまたはTNF様リガンド突然変異タンパク質を含有する。
特に、本発明のTRAIL突然変異タンパク質を、固形腫瘍(例えば、Falschlehnerら、Adv Exp Med Biol. 647:195-206, 2009(その全体が参照により本明細書に組み込まれる)に記載のもの)の処置におけるなど、がん療法(例えば、化学療法剤、免疫療法剤、または照射とのがん組合せ療法)において用いることができる。本発明のTRAIL突然変異タンパク質で処置することができる腫瘍細胞としては、例えば、非小細胞肺癌、非ホジキンリンパ腫赤白血球細胞、急性骨髄性白血病(AML)、軟部組織肉腫、メラノーマ(例えば、Falschlehnerらの表1を参照されたい)が挙げられる。いくつかの実施形態においては、本発明のTRAIL突然変異タンパク質を、がん療法(例えば、化学療法)における1つ以上の化学療法剤(例えば、Falschlehnerらの表1、2および3を参照されたい)と共に用いることができる(例えば、固形腫瘍(例えば、進行性固形腫瘍)の処置において)。がん化学療法において用いられる化学療法剤は、限定されるものではないが、カンプトテシン、シスプラチン、カルボプラチン、オキサリプラチン、ブレオマイシン、マイトマイシンC、カリケアマイシン、メイタンシノイド、ゲルダナマイシン、ドキソルビシン、イダルビシン、ダウノルビシン、エピルビシン、ブスルファン、カルムスチン(BCNU)、ロムスチン(CCNU)、セムスチン、サリドマイド、レナリドミド、メトトレキサート、アザチオプリン、6-メルカプトプリン、フルダラビン、5-アザシチジン、ペントスタチン(2'-デオキシコホルマイシン)、シタラビン(シトシンアラビノシド)、ゲムシタビン、5-フルオロウラシル、ヒドロキシウレア、エレスクロモル、エトポシド、テニポシド、アムサクリン、トポテカン、イリノテカン、クロラムブシル、シクロホスファミド、イホスファミド、メルファラン、ボルテゾミブ、ビンクリスチン、ビンブラスチン、ビノレルビン、パクリタキセル、ドセタキセル、アンホテリシンB、リファンピシン、ペンタミジン、シクロスポリンA、タクロリムス(FK506)、シロリムス(ラパマイシン)、エベロリムス、テムシロリムス、ゾタロリムス、およびビオリムスを含んでもよい。
いくつかの実施形態においては、本発明のTRAIL突然変異タンパク質を、がん免疫療法において1つ以上の免疫療法剤と共に用いることができる。がん免疫療法において用いられる免疫療法剤は、限定されるものではないが、抗TNF受容体スーパーファミリーアゴニスト抗体、抗TNF受容体スーパーファミリーアンタゴニスト抗体、抗CTLA-4剤、抗PD-1剤、抗PD-L1剤、および抗PD-L2剤などのがんチェックポイント阻害剤、TRAIL架橋剤、CD27剤、CD30剤、CD40剤、4-1BB剤、GITR剤、OX40剤、TRAILR1剤、TRAILR2剤、TWEAKR剤、ならびに、例えば、Mahoneyらの表1に記載の免疫学的標的を指向する薬剤を含んでもよい。Mahoneyらの表1に記載の免疫学的標的を指向する薬剤の例は、以前に記載されている。
いくつかの実施形態においては、本発明のTRAIL突然変異タンパク質を、がん放射線療法と共に用いることができる。いくつかの実施形態においては、がん放射線療法は、細胞に対する十分な損傷を誘導して、正常に機能するその能力を制限するため、または細胞を完全に破壊するための指向性ガンマ線またはベータ線の使用を含む。
本発明の医薬組成物を、感染症、例えば、B型肝炎、C型肝炎、後天性免疫不全症候群(AIDS)、ハンセン病、および結核(TB)の処置において用いることができる。好ましくは、本発明の医薬組成物は、1つ以上のTNFSFまたはTNF様リガンド突然変異タンパク質を含有する。一実施形態においては、TNFSFリガンド突然変異タンパク質は、ジスルフィド結合したホモ-トリマー複合体中に存在するTNF-α突然変異タンパク質(例えば、S171C/G224C TNF-α突然変異タンパク質)である。
臓器移植、または組織もしくは臓器修復もしくは再生を受けている、または受けた患者のために、本発明のTNFSFまたはTNF様リガンド突然変異タンパク質を含有する医薬組成物を患者に投与することができる(例えば、患者の血流への注入により、または組織もしくは臓器または移植部位に、もしくはその近くに直接的に)。好ましくは、医薬組成物は、1つ以上のTNFSFリガンド突然変異タンパク質(例えば、ジスルフィド結合したホモ-マルチマー(例えば、ホモ-トリマー)複合体中に存在するTNFSFリガンド突然変異タンパク質)を含有する。一実施形態においては、TNFSFリガンド突然変異タンパク質は、ジスルフィド結合したホモ-トリマー複合体中に存在するTNF-α突然変異タンパク質(例えば、S171C/G224C TNF-α突然変異タンパク質)である。移植患者の例は、心臓、心臓弁、血管(例えば、動脈もしくは静脈)、腎臓、肝臓、肺、または肺葉、膵臓、卵巣、膀胱、胃、精巣、腸、胸腺、骨、腱、角膜、皮膚、神経、手、腕、足、脚、または細胞(例えば、膵島ベータ細胞、幹細胞(例えば、骨髄幹細胞(例えば、CD34+幹細胞)などの造血幹細胞))移植を受けている、または受けた者である。移植患者はまた、自己、同種異系、または同系細胞移植を受けていてもよい。共有架橋したTNFSFリガンド突然変異タンパク質のマルチマー、例えば、共有架橋したTNF-α突然変異タンパク質ホモ-トリマーを含有する医薬組成物の投与は、細胞、組織、または臓器拒絶、例えば、移植片対宿主疾患(GVHD)および移植片拒絶の危険性を軽減または排除する、ならびに移植された細胞、組織、または臓器のより良好な生着を提供するのに役立ち得る。
他の好ましい実施形態においては、3つのTNF-α突然変異タンパク質を含有するジスルフィド結合したホモ-トリマーTNF-α突然変異タンパク質複合体(例えば、それぞれのモノマーがS171CおよびG224C置換を含有する複合体)を用いて、臓器または組織を修復または再生することができる(例えば、臓器または組織が自己反応性CD8+T細胞によって標的化される自己免疫疾患患者において)。TNF-αホモ-トリマーの投与は、自己反応性CD8+T細胞を殺傷し、臓器または組織を再生させる。実施形態においては、TNF-α突然変異タンパク質ホモ-トリマーを、多能性細胞(例えば、MSC、HSC、またはHox11細胞)の同時投与(一緒に、または別々に)を含む、組合せ療法において投与することができる(例えば、それぞれその全体が参照により本明細書に組み込まれる米国特許第8,017,392号および第8,021,693号を参照されたい)。いくつかの実施形態においては、TNF-α突然変異タンパク質複合体の投与を用いて、心臓、心臓弁、血管(例えば、動脈もしくは静脈)、腎臓、肝臓、肺、または肺葉、膵臓、卵巣、膀胱、胃、精巣、腸、胸腺、骨、腱、角膜、皮膚、神経、手、腕、足、および脚からなる群から選択される臓器または組織を修復または再生することができる。他の実施形態においては、TNF-α突然変異タンパク質複合体の投与を、細胞(例えば、膵島ベータ細胞、幹細胞(例えば、骨髄幹細胞(例えば、CD34+幹細胞)などの造血幹細胞))移植を受けている、または受けた患者において用いることもできる。
表3は、本発明のそれぞれのTNFSFまたはTNF様突然変異タンパク質を用いて処置することができる例示的な疾患および障害を列挙する。
Figure 2017525370
 (実施例)
材料および方法
試薬
組換えヒトおよびマウスTNF-αを、Leinco Technologies (St. Louis, MO)から購入し、組換えヒトIL-2を、Sigma-Aldrich(St.Louis, MO)から購入した。TNFR2に対するヒトモノクローナル抗体は、内部の供給源および外部の商業的供給業者からのものであった。FOXP3およびCD25の細胞内染色を、FOXP3 Fix/Perm Bufferセット(Biolegend)またはヒトFOXP3 Bufferセット(BD Biosciences)を用いて実施した。
ヒト被験者
この試験において用いられる被験者は、1型糖尿病被験者または非罹患対照被験者のいずれかであった。彼らは、完全な組織の認可およびインフォームドコンセント(MGH-2001P001379)と共にMssachusetts General Hospitalから募集した。それぞれの被験者は4本の血液チューブを提供し、血液を、WST-1増殖/死滅アッセイのためのCD8 T細胞または調節性T細胞アッセイのためのCD4 T細胞の調製のために朝に新鮮に用いた。細胞増殖または死滅のWST-1アッセイのために、それぞれの自己免疫被験者を、対照被験者と同時に試験した。全ての血液を、クエン酸およびデキストロースを含有するBD Vacutainerチューブ中に引き込んだ。
血液の調製
精製されたCD4またはCD8 T細胞サブセットを、末梢血リンパ球から単離し、Dynal磁気単離法(Invitrogen製品番号113-33Dおよび113-31D)を用いて単離した。この方法により、新鮮なヒトCD4またはCD8 T細胞が得られ、95%を超えて生存していた。PBLを、Ficoll-Hypque勾配を用いて単離した。
野生型可溶性TNF-αおよびTNF-α突然変異タンパク質の構築
この実施例では、野生型可溶性TNF-αは、TNF-αモノマーであり、TNF-α突然変異タンパク質は、それぞれのモノマーがS171CおよびG224Cシステイン置換を含有するTNF-α突然変異タンパク質のジスルフィド結合したホモ-トリマーである。野生型可溶性TNF-αおよびTNF-α突然変異タンパク質の構築物は、His6-トロンビン部位-TNF-α遺伝子融合物中へのDNA断片の元々の遺伝子の合成を含み、これらのものをpDEST42発現ベクター中にサブクローニングした。陽性クローンを、制限酵素消化および配列検証により確認した。野生型可溶性TNF-αおよびTNF-α突然変異タンパク質を、以下の条件を用いて大腸菌株BL21 DE3 pLys S中で発現させた：種培養を37℃で16時間インキュベートし、これを用いて、4リットルの組織培養培地に接種し、A600=0.8まで37℃でインキュベートした。タンパク質発現を、IPTG(0.1mM)を用いて18℃で16時間誘導した。細胞を、遠心分離により収獲し、-80℃で保存した。
細胞ペーストをバッファーA(20mM Tris、pH7.9、500mM NaCl、5mMイミダゾール、0.01%NP-40)中に懸濁し、PANDAホモジェナイザーを用いて溶解した。溶解物を遠心分離により明澄化し、上清を、AKTA Explorer (GE Heathcare)を用いて5mlのNi-NTAセファロースカラム(Qiagen)に印加した。カラムを、10倍カラム容量のバッファーAで洗浄し、結合したタンパク質を、0〜100%のバッファーBの直線勾配を用いて溶出させ、5mlの画分を収集した。タンパク質含有画分のアリコートを、SDS-試料バッファーと混合し、4〜20%のゲル上、還元条件下で電気泳動した。ゲルを、Coomassie Brilliant Blue(R-25)を用いて染色した。抗his抗体(Clontech)を、ウェスタンブロット分析のために用いた。
N末端ポリヒスチジンタグを、製造業者のプロトコールに従って、トロンビン切断捕捉キット(Novagen、カタログ番号69022-3)を用いて切断した。ビオチン化されたトロンビンを、製造業者のプロトコールに従って、ストレプトアビジンアガロースを用いてタンパク質調製物から除去した。
タンパク質濃度を、Bradfordの方法により決定した。タンパク質の最終プールを、1X PBS、0.1%アルブミン(pH7.4)中でバッファー交換し、0.5mlアリコート中で簡易凍結し、-80℃で保存した。最終タンパク質調製物を、N末端配列決定にかけて、タンパク質の同一性および正確なHisタグ除去を確認した。
TNF-α突然変異タンパク質のウェスタンブロット分析
この実施例では、野生型可溶性TNF-αはTNF-αモノマーであり、TNF突然変異タンパク質は、それぞれのモノマーがS171CおよびG224Cシステイン置換を含有するTNF-α突然変異タンパク質のジスルフィド結合したホモ-トリマーである。野生型可溶性TNF-αおよびTNF-α突然変異タンパク質を、サイズ分離モードのPeggy Automated Western Assay Platform (ProteinSimple、Santa Clara、CA)上で分析した。試料(0.5μg/μl)を、蛍光分子量標準および試料バッファーを含有するが、DTT(ジチオトレイトール)還元剤を含まない4x Mastermixと3:1の比で混合した。還元をさらに防止するために、試料を、慣例通り高温(95℃)にかけず、むしろ使用まで氷上で保持した。ローディング時間(デフォルトの8秒の代わりに12秒)および第1抗体インキュベーション時間(デフォルトの120minの代わりに240min)を除いて、全ての泳動パラメータをそのデフォルトのままにした。野生型可溶性TNF-αおよびTNF-α突然変異タンパク質の検出を、ヒトTNF(Abcam ab8348、Cambridge、MA)に対するモノクローナル抗体、次いで、HRP標識第2抗体およびルミノール/H2O2を用いて実施した。
ウェスタンブロット分析により、TNF-α突然変異タンパク質が、モノマーとして出現する野生型可溶性TNF-αと比較して安定な共有的トリマーであることが示された(図2)。
ヒトCD4 T細胞上での野生型可溶性TNF-αまたはTNF-α突然変異タンパク質の機能的試験
この実施例では、野生型可溶性TNF-αは、野生型可溶性TNF-αの非共有架橋ホモ-トリマーを指し、TNF突然変異タンパク質は、それぞれのモノマーがS171CおよびG224Cシステイン置換を含有する、TNF-αモノマーの共有架橋ホモ-トリマーを指す。
選択的TNFR2アゴニズムで処理された単離された新鮮なヒトCD4 T細胞は、CD25と高密度のFOXP3細胞内タンパク質との同時発現により定義される豊富なヒト調節性T細胞(Treg)に増殖および拡張する。CD4 T細胞を、Dynal CD4陽性単離キット(Invitrogen)を用いて、静脈穿刺の2時間以内に新鮮なヒト血液から単離した。本発明者らは、IL-2のみ、またはIL-2と野生型可溶性TNF-αと共に、新鮮に単離されたヒトCD4細胞を培養した。本発明者らは、PBSの代わりに2%ウシ胎仔血清(FBS)(Hyclone、Logan、UT)を添加したHBSSを用いることによって、製造業者により推奨されるプロトコールを改変した。単離された細胞の品質を検証するために、CD4およびヨウ化プロピジウム染色により、それらは、純度が98%を超え、生存能力が96%を超えると評価された。単離後、2x105個の細胞を96丸底ウェルに塗布し、IL-2(50U/ml)のみ、IL-2(50U/ml)と野生型可溶性TNF-α(20ng/ml)、IL-2(50U/ml)とTNF-α突然変異タンパク質(20ng/ml)、またはImmunobiology Core (Harvard Medical School、Boston、MA)からのTNFR2アンタゴニスト抗体で処理した。16時間後、細胞を収集し、細胞内FOXP3をフローサイトメトリーにより決定した。
図3B中のデータが示すように、IL-2と野生型可溶性TNF-αを用いる処理は、16時間後に、IL-2のみよりも高い程度でFOXP3発現を誘導した。単離されたCD4 T細胞とIL-2およびTNF-α突然変異タンパク質との同時インキュベーションも、調節性T細胞を拡張した。それとは好対照に、IL2および周知のTNFR2抗体アンタゴニストと共に16時間インキュベートされたCD4 T細胞は、反対の効果を示した。TNFR2に対するアンタゴニスト抗体は、IL-2、IL-2と野生型可溶性TNF-α、またはIL-2とTNF-α突然変異タンパク質と比較してTreg拡張を止めた。代表的なフローヒストグラムを、図3Bに示す。このデータは、全体として、TNF-α突然変異タンパク質と同様の拡張およびFOXP3 Treg細胞の発現の上昇を示す6人の正常な被験者を含んでいた。
ヒトCD8 T細胞上での野生型可溶性TNF-αまたはTNF-α突然変異タンパク質シグナリングの機能的試験
この実施例では、野生型可溶性TNF-αは野生型可溶性TNF-αの非共有架橋ホモ-トリマーを指し、TNF突然変異タンパク質は、それぞれのモノマーがS171CおよびG224Cシステイン置換を含有する、TNF-αモノマーの共有架橋ホモ-トリマーを指す。
正常なドナーからの新鮮なヒトCD8 T細胞は、野生型可溶性TNF-αと共にインキュベートしたか、またはTNFR2アゴニストと共にインキュベートした場合、NFκB経路の活性化を介して増殖することが知られている。図3C(i)は、野生型可溶性TNF-αとTNF-α突然変異タンパク質の両方が、増殖および細胞死アッセイにおいて用量応答様式でCD8細胞増殖を誘導したことを示す。CD8細胞を、10人の正常なドナーの群から収集した。TNF-α突然変異タンパク質は、野生型可溶性TNF-αよりも優れた様式で機能した。1型糖尿病被験者からの新鮮なヒトCD8 T細胞は、低用量TNF-αで選択的に殺傷することができる自己反応性CD8 T細胞の少量のサブ集団を含有する。図3C(ii)は、野生型可溶性TNF-αとTNF-α突然変異タンパク質との両方が、最初に感受性自己反応性CD8 T細胞の細胞死を誘導し、次いで、糖尿病被験者からの残りのCD8 T細胞の増殖を誘導したことを示す。CD8細胞を、6人の糖尿病被験者の群から収集した。正常なCD8 T細胞の以前の増殖応答と同様、TNF-α突然変異タンパク質は、野生型可溶性TNF-αよりも強力であったが、その効果は、野生型可溶性TNF-αのみよりも高いTNFR2アゴニズムに帰する。
WST-1(Roche Applied Science)アッセイを用いて、正常な対照または1型糖尿病被験者からの単離された新鮮なヒトCD8 T細胞への野生型可溶性TNF-αまたはTNF-α突然変異タンパク質の添加後の細胞死対増殖を確認した。WST-1アッセイは、細胞死を間接的に測定する細胞増殖アッセイである。WST-1アッセイにおいては、単離されたCD8 T細胞を、100,000個の細胞/ウェルの細胞濃度で、96ウェルのU底プレート中に塗布した。細胞を、1%熱不活化ウシ胎仔血清(FCS)を含むRPMI培地中、26℃で一晩培養した。朝に、細胞を、野生型可溶性TNF-αまたはTNF-α突然変異タンパク質で1時間処理した。野生型可溶性TNF-αまたはTNF-α突然変異タンパク質への1時間の曝露後、WST-1試薬(44-[3-(4-ヨードフェニル)-2-(4-ニトロフェニル)2H-5-テトラゾリオ]-1,3-ベンゼンジスルホネート)を、製造業者の指示書に従って添加した。代謝的に活性な細胞によるWST-1のフロマザンへの切断を、405mの波長でBeckman Coulter DTX880 Spectrophotometer (Beckman Coulter)により定量した。各実験を、3回実施した。試験培地を、バックグラウンド対照として用いた。様々な用量のリガンドで処理された細胞を、以下の式：［処理された野生型TNFまたはTNF突然変異タンパク質-未処理]/[未処理]を用いて、未処理の細胞と比較した増殖のパーセンテージとして提示する。負の数は、CD8 T細胞の混合細胞集団の増殖と比較してより多い細胞死が存在していたことを意味する。
本発明者らは、TNF-α突然変異タンパク質がヒトCD4またはCD8 T細胞上でより安定なトリマーだけでなく、機能的結果が改善されたものを生成することができることを示した。ヒト機能的T細胞アッセイの結果は、TNF-α突然変異タンパク質がTNFR2アゴニズムを示す強力な膜貫通TNF様類似体であることを示す。TNF-α突然変異タンパク質は、1型糖尿病患者における自己反応性CD8 T細胞の選択的死滅および正常なCD8 T細胞の増殖を誘導するだけでなく、CD4 Treg細胞も拡張させた。TNF-α突然変異タンパク質はまた、TNFR1とTNFR2の両方へのより良好な結合を示しながら、TNFR2アゴニズムを示さなかった、可溶性TNFの一本鎖構築物(sc-TNF)よりも優れていると考えられる。TNFシグナリング経路における様々な欠陥は、クローン病、シェーグレン症候群、多発性硬化症、強直性脊椎炎、および1型糖尿病などのいくつかの自己免疫障害のヒトおよびマウスモデルの両方において存在する。可溶性TNF、TNF誘導因子、およびTNFR2アゴニズムは、これらの疾患を処置にとって有望であることを示した。TNFR2のより限られた発現のため、TNFR2アゴニズムは、潜在的により標的化された療法を提供し、より少ない副作用を示す。TNF-α突然変異タンパク質を、受容体特異性を導入するためのさらなる突然変異と組み合わせることができた。TNFR2特異的sc-TNF変異体は、酸化的細胞死からヒトニューロンをレスキューすることが最近示されたが、これは、神経変性疾患におけるTNF類似体の潜在的な用途を強調している(Fischerら、PloS One 6:e27621, 2011)。最後に、TNFSFおよびTNF様リガンド内の高い構造的相同性は、共有架橋概念を、他のTNFスーパーファミリーメンバーおよびTNF様構造まで拡張する機会を提供する。外部二次架橋の様々な方法が、FasL、TRAIL、CD40L、4-1BBLその他に関するシグナリングを改善することが既に示されている(Bremerら、ISRN Oncology 2013:371854, 2013)。
TRAIL突然変異タンパク質による固形腫瘍の処置
患者を、固形腫瘍がんなどのがんについて本発明のTRAIL突然変異タンパク質を用いて処置することができる。TRAILを用いる固形腫瘍がんの様々な処置は、その全体が参照により本明細書に組み込まれるFalschlehnerら、Adv Exp Med Biol. 647:195-206, 2009に記載されている。本発明のTRAIL突然変異タンパク質を用いて処置することができる腫瘍細胞としては、例えば、非小細胞肺癌、非ホジキンリンパ腫赤白血病細胞、急性骨髄性白血病(AML)、軟部組織肉腫、メラノーマが挙げられる(例えば、Falschlehnerらの表1を参照されたい)。いくつかの実施形態においては、本発明のTRAIL突然変異タンパク質を、がん療法(例えば、化学療法)において(例えば、固形腫瘍(例えば、進行性固形腫瘍)の処置において)1つ以上の化学療法剤(例えば、Falschlehnerらの表1、2および3を参照されたい)と共に用いることができる。がん化学療法において用いられる化学療法剤は、限定されるものではないが、カンプトテシン、シスプラチン、カルボプラチン、オキサリプラチン、ブレオマイシン、マイトマイシンC、カリケアマイシン、メイタンシノイド、ゲルダナマイシン、ドキソルビシン、イダルビシン、ダウノルビシン、エピルビシン、ブスルファン、カルムスチン(BCNU)、ロムスチン(CCNU)、セムスチン、サリドマイド、レナリドミド、メトトレキサート、アザチオプリン、6-メルカプトプリン、フルダラビン、5-アザシチジン、ペントスタチン(2'-デオキシコホルマイシン)、シタラビン(シトシンアラビノシド)、ゲムシタビン、5-フルオロウラシル、ヒドロキシウレア、エレスクロモル、エトポシド、テニポシド、アムサクリン、トポテカン、イリノテカン、クロラムブシル、シクロホスファミド、イホスファミド、メルファラン、ボルテゾミブ、ビンクリスチン、ビンブラスチン、ビノレルビン、パクリタキセル、ドセタキセル、アンホテリシンB、リファンピシン、ペンタミジン、シクロスポリンA、タクロリムス(FK506)、シロリムス(ラパマイシン)、エベロリムス、テムシロリムス、ゾタロリムス、およびビオリムスを含んでもよい。
いくつかの実施形態においては、本発明のTRAIL突然変異タンパク質を、がん免疫療法において1つ以上の免疫療法と共に用いることができる。がん免疫療法において用いられる免疫療法剤は、限定されるものではないが、抗TNF受容体スーパーファミリーアゴニスト抗体、抗TNF受容体スーパーファミリーアンタゴニスト抗体、抗CTLA-4剤、抗PD-1剤、抗PD-L1剤、および抗PD-L2剤などのがんチェックポイント阻害剤、TRAIL架橋剤、CD27剤、CD30剤、CD40剤、4-1BB剤、GITR剤、OX40剤、TRAILR1剤、TRAILR2剤、TWEAKR剤、ならびに、例えば、Mahoneyらの表1に記載の免疫学的標的を指向する薬剤を含んでもよい。Mahoneyらの表1に記載の免疫学的標的を指向する薬剤の例は、以前に記載されている。
いくつかの実施形態においては、本発明のTRAIL突然変異タンパク質を、がん放射線療法と共に用いることができる。いくつかの実施形態においては、がん放射線療法は、細胞に対する十分な損傷を誘導して、正常に機能するその能力を制限するため、または細胞を完全に破壊するための指向性ガンマ線またはベータ線の使用を含む。
0.2〜約20mg/kg体重の精製されたTRAIL突然変異タンパク質を含有する単位用量を、適切な投与経路(例えば、静脈内または経口)により、毎日、毎週、毎月、半年毎、毎年、または医学的必要性に応じて1回以上(例えば、1〜10回以上)患者に投与することができる。1つ以上の化学療法剤または免疫療法剤との同時療法において用いられる場合、TRAIL突然変異タンパク質を、化学療法剤または免疫療法剤の前に、後に、またはそれと同時に投与することができる。投与間のタイミングは、医学的状態が改善するにつれて減少するか、または患者の健康が低下するにつれて増加してもよい。
用いられる特定の医薬組成物および処置レジメンに対する患者の応答をモニタリングするために、血液試料を、処置される疾患を示す様々なバイオマーカーについてアッセイされる患者から取得することができる。これらのものは、それらがTRAIL突然変異タンパク質療法に応答して経時的にどのように変化し得るかを決定するために血液中で試験される炎症性サイトカインのパネルの評価を含んでもよい。
TNF-α突然変異タンパク質による自己免疫疾患の処置
自己免疫疾患、特に、インスリン依存的(1型)糖尿病、関節リウマチ、シェーグレン症候群、多発性硬化症、またはクローン病に罹患する患者のために、ジスルフィド結合したホモ-トリマーTNF-α突然変異タンパク質を含有する医薬組成物を投与して、自己反応性T細胞を選択的に殺傷する、および/または調節性T細胞の増殖を促進することができる。あるいは、医薬組成物は、TNF-α突然変異タンパク質(例えば、ジスルフィド結合したホモ-トリマーTNF-α突然変異タンパク質)をコードする核酸分子を含有してもよい。核酸分子を、発現ベクター中にクローニングし、TNF-α突然変異タンパク質がin vivoで発現されるように、遺伝子療法における周知の方法を用いて患者に送達することができる。ジスルフィド結合したホモ-トリマーTNF-α突然変異タンパク質は、それぞれのモノマーがS171CおよびG224Cシステイン置換を含有する3個のTNF-α突然変異タンパク質を含有する。
0.2〜約20mg/kg体重の精製されたTNF-α突然変異タンパク質を含有する単位用量を、適切な投与経路(例えば、静脈内または経口)により、毎日、毎週、毎月、半年毎、毎年、または医学的必要性に応じて1回以上(例えば、1〜10回以上)患者に投与することができる。投与間のタイミングは、医学的状態が改善するにつれて減少するか、または患者の健康が低下するにつれて増加してもよい。
用いられる特定の医薬組成物および処置レジメンに対する患者の応答をモニタリングするために、血液試料を、処置される疾患を示す様々なバイオマーカーについてアッセイされる患者から取得することができる。これらのものは、それらがTNF-α突然変異タンパク質療法に応答して経時的にどのように変化し得るかを決定するために血液中で試験される炎症性サイトカインのパネルの評価を含んでもよい。
TNF-α突然変異タンパク質による神経疾患の処置
神経疾患、特に、筋萎縮性側索硬化症(ALS)、パーキンソン病、またはアルツハイマー病に罹患する患者のために、ジスルフィド結合したホモ-トリマーTNF-α突然変異タンパク質を含有する医薬組成物を投与することができる。あるいは、医薬組成物は、TNF-α突然変異タンパク質(例えば、ジスルフィド結合したホモ-トリマーTNF-α突然変異タンパク質)をコードする核酸分子を含有してもよい。核酸分子を、発現ベクター中にクローニングし、TNF-α突然変異タンパク質がin vivoで発現されるように、遺伝子療法における周知の方法を用いて患者に送達することができる。ジスルフィド結合したホモ-トリマーTNF-α突然変異タンパク質は、それぞれのモノマーがS171CおよびG224Cシステイン置換を含有する3個のTNF-α突然変異タンパク質を含有する。ジスルフィド結合したホモ-トリマーTNF-α突然変異タンパク質は、それぞれのモノマーがS171CおよびG224Cシステイン置換を含有する3個のTNF-α突然変異タンパク質を含有する。
0.2〜約20mg/kg体重の精製されたTNF-α突然変異タンパク質を含有する単位用量を、適切な投与経路(例えば、静脈内または経口)により、毎日、毎週、毎月、半年毎、毎年、または医学的必要性に応じて1回以上(例えば、1〜10回以上)患者に投与することができる。投与間のタイミングは、医学的状態が改善するにつれて減少するか、または患者の健康が低下するにつれて増加してもよい。
用いられる特定の医薬組成物および処置レジメンに対する患者の応答をモニタリングするために、血液試料を、処置される疾患を示す様々なバイオマーカーについてアッセイされる患者から取得することができる。これらのものは、それらがTNF-α突然変異タンパク質療法に応答して経時的にどのように変化し得るかを決定するために血液中で試験される炎症性サイトカインのパネルの評価を含んでもよい。
他の実施形態
上記明細書に記載の全ての刊行物、特許、および特許出願は、参照により本明細書に組み込まれる。本発明の記載された組成物、方法、および使用の様々な改変および変更は、本発明の範囲および精神から逸脱することなく、当業者には明らかであろう。本発明を特定の実施形態と関連付けて説明してきたが、特許請求される本発明はそのような特定の実施形態に過度に限定されするべきではないことが理解されるべきである。実際、当業者には自明である本発明を実行するための記載の様式の様々な改変は、本発明の範囲内にあることが意図される。
他の実施形態は、以下の特許請求の範囲内にある。

Claims (354)

  1. 腫瘍壊死因子スーパーファミリー(TNFSF)またはTNF様リガンドの全部または一部を含む可溶性ポリペプチドであって、ここで前記可溶性ポリペプチドが、前記TNFSFまたはTNF様リガンドの表面に露出した、外向きのアミノ酸残基のシステイン残基による少なくとも1つの置換、あるいは表面に露出した、外向きのアミノ酸残基を含む前記TNFSFまたはTNF様リガンドの領域にシステイン残基の少なくとも1つの挿入を含む、上記可溶性ポリペプチド。
  2. 前記可溶性ポリペプチドが、前記TNFSFまたはTNF様リガンドの2つの表面に露出した、外向きのアミノ酸残基のシステイン残基による置換を含む、請求項1記載の可溶性ポリペプチド。
  3. 前記可溶性ポリペプチドが、前記TNFSFまたはTNF様リガンドの3つまたは4つの表面に露出したアミノ酸残基のシステイン残基による置換を含む、請求項1記載の可溶性ポリペプチド。
  4. 前記可溶性ポリペプチドが、表面に露出した、外向きのアミノ酸残基を含む前記TNFSFまたはTNF様リガンドの2つの別個の領域にシステイン残基の挿入を含む、請求項1記載の可溶性ポリペプチド。
  5. 前記可溶性ポリペプチドが、表面に露出した、外向きのアミノ酸残基を含む前記TNFSFまたはTNF様リガンドの3つまたは4つの別個の領域にシステイン残基の挿入を含む、請求項1記載の可溶性ポリペプチド。
  6. 前記可溶性ポリペプチドが、前記TNFSFまたはTNF様リガンドの表面に露出した、外向きのアミノ酸残基のシステイン残基による少なくとも1つの置換、および表面に露出した、外向きのアミノ酸残基を含む前記TNFSFまたはTNF様リガンドの領域にシステイン残基の少なくとも1つの挿入を含む、請求項1記載の可溶性ポリペプチド。
  7. 前記TNFSFまたはTNF様リガンドが、TNF-α、リンホトキシン(例えば、LT-αおよびRANKL)、CD40L、CD70、RANKL、OX40L、FasL、4-1BBリガンド、TRAIL、RANKL、TWEAK、APRIL、BLys、LIGHT、TL1、GITRL、EDA(例えば、EDA-A1およびEDA-A2)、またはアディポネクチンである、請求項1記載の可溶性ポリペプチド。
  8. 前記TNFSFリガンドがTNF-αである、請求項7記載の可溶性ポリペプチド。
  9. 前記可溶性ポリペプチドが、配列番号1のアミノ酸配列に対して、次のシステイン置換、すなわちR82C、T83C、P84C、S85C、H91C、N110C、G130C、L131C、Y135C、N168C、L169C、L170C、S171C、A172C、I173C、K174C、S175C、Q178C、E180C、W190C、Y191C、P193C、G198C、V199C、F200C、Q201C、S223C、G224C、およびQ225Cのうちの1つ以上を含む、請求項8記載の可溶性ポリペプチド。
  10. 前記可溶性ポリペプチドが、配列番号1のアミノ酸配列に対して、次のシステイン置換、すなわちR82C、T83C、P84C、S85C、H91C、N110C、G130C、L131C、Y135C、N168C、L169C、L170C、S171C、A172C、I173C、K174C、S175C、Q178C、E180C、W190C、Y191C、P193C、G198C、V199C、F200C、Q201C、S223C、G224C、およびQ225Cのうちの2つ以上を含む、請求項8記載の可溶性ポリペプチド。
  11. 前記可溶性ポリペプチドが、配列番号1のアミノ酸配列に対して、次のシステイン置換、すなわちR82C、T83C、P84C、S85C、H91C、N110C、G130C、L131C、Y135C、N168C、L169C、L170C、S171C、A172C、I173C、K174C、S175C、Q178C、E180C、W190C、Y191C、P193C、G198C、V199C、F200C、Q201C、S223C、G224C、およびQ225Cのうちの3つ以上を含む、請求項8記載の可溶性ポリペプチド。
  12. 前記可溶性ポリペプチドが、配列番号1のアミノ酸配列に対して、次のシステイン置換、すなわちR82C、T83C、P84C、S85C、H91C、N110C、G130C、L131C、Y135C、N168C、L169C、L170C、S171C、A172C、I173C、K174C、S175C、Q178C、E180C、W190C、Y191C、P193C、G198C、V199C、F200C、Q201C、S223C、G224C、およびQ225Cのうちの4つ以上を含む、請求項8記載の可溶性ポリペプチド。
  13. 前記可溶性ポリペプチドが、配列番号1のアミノ酸配列に対して、次のシステイン置換対、すなわちG130C/S85C、L131C/T83C、L131C/P84C、S171C/G224C、N168C/S223C、N168C/G224C、L169C/S223C、L169C/G224C、L170C/S223C、S171C/S223C、S171C/Q225C、A172C/P193C、I173C/Y191C、I173C/P193C、K174C/Y191C、S175C/W190C、S175C/Y191C、Q178C/E180C、G198C/Y135C、V199C/H91C、F200C/H91C、F200C/N110C、Q201C/R82C、およびQ201C/T83Cのうちの1つ以上(好ましくは1つ)を含む、請求項8記載の可溶性ポリペプチド。
  14. 前記可溶性ポリペプチドが、配列番号1のアミノ酸配列に対して、次のアミノ酸領域、すなわちアミノ酸77〜94、107〜113、127〜138、165〜204、および220〜228のうちの1つ以上、および好ましくは少なくとも2つに少なくとも1つのシステイン置換または挿入を含む、請求項8記載の可溶性ポリペプチド。
  15. 前記可溶性ポリペプチドが、配列番号1のアミノ酸配列に対して、前記システイン置換S171CおよびG224Cを含む、請求項9記載の可溶性ポリペプチド。
  16. 前記可溶性ポリペプチドがTNFSF受容体に結合する、請求項1記載の可溶性ポリペプチド。
  17. 前記可溶性ポリペプチドがTNF受容体1(TNFR1)またはTNF受容体2(TNFR2)に結合する、請求項8記載の可溶性ポリペプチド。
  18. 前記可溶性ポリペプチドがTNFR2に特異的に結合する、請求項17記載の可溶性ポリペプチド。
  19. 前記可溶性ポリペプチドがTNFR2特異的アゴニストである、請求項18記載の可溶性ポリペプチド。
  20. 前記可溶性ポリペプチドがTNFR2多量体化を促進する、請求項18記載の可溶性ポリペプチド。
  21. 前記可溶性ポリペプチドが前記TNFR2のアンタゴニストである、請求項18記載の可溶性ポリペプチド。
  22. 前記TNFSFリガンドがLT-αである、請求項7記載の可溶性ポリペプチド。
  23. 前記可溶性ポリペプチドが、配列番号40のアミノ酸配列に対して、次のシステイン置換、すなわちH66C、R85C、Y110C、P147C、L148C L149C、S150C、S151C、Q152C、K153C、M154C、W163C、L164C、S166C、A171C、A172C、F173C、P195C、S196C、およびT197Cのうちの1つ以上を含む、請求項22記載の可溶性ポリペプチド。
  24. 前記可溶性ポリペプチドが、配列番号40のアミノ酸配列に対して、次のシステイン置換、すなわちH66C、R85C、Y110C、P147C、L148C L149C、S150C、S151C、Q152C、K153C、M154C、W163C、L164C、S166C、A171C、A172C、F173C、P195C、S196C、およびT197Cのうちの2つ以上を含む、請求項22記載の可溶性ポリペプチド。
  25. 前記可溶性ポリペプチドが、配列番号40のアミノ酸配列に対して、次のシステイン置換、すなわちH66C、R85C、Y110C、P147C、L148C L149C、S150C、S151C、Q152C、K153C、M154C、W163C、L164C、S166C、A171C、A172C、F173C、P195C、S196C、およびT197Cのうちの3つ以上を含む、請求項22記載の可溶性ポリペプチド。
  26. 前記可溶性ポリペプチドが、配列番号40のアミノ酸配列に対して、次のシステイン置換、すなわちH66C、R85C、Y110C、P147C、L148C L149C、S150C、S151C、Q152C、K153C、M154C、W163C、L164C、S166C、A171C、A172C、F173C、P195C、S196C、およびT197Cのうちの4つ以上を含む、請求項22記載の可溶性ポリペプチド。
  27. 前記可溶性ポリペプチドが、配列番号40のアミノ酸配列に対して、次のシステイン置換対、すなわちP147C/P195C、P147C/S196C、L148C/P195C、L148C/S196C、L149C/P195C、S150C/S196C、S150C/P195C、S150C/T197C、S151C/S166C、Q152C/L164C、Q152C/S166C、K153C/L164C、M154C/W163C、M154C/L164C、A171C/Y110C、A172C/H66C、F173C/H66C、およびF173C/R85Cのうちの1つ以上(好ましくは1つ)を含む、請求項22記載の可溶性ポリペプチド。
  28. 前記可溶性ポリペプチドが、配列番号40のアミノ酸配列に対して、次のアミノ酸領域、すなわちアミノ酸52〜69、82〜88、107〜113、144〜176、および192〜200のうちの1つ以上、および好ましくは少なくとも2つに少なくとも1つのシステイン置換または挿入を含む、請求項22記載の可溶性ポリペプチド。
  29. 前記TNFSFリガンドがLT-βである、請求項7記載の可溶性ポリペプチド。
  30. 前記可溶性ポリペプチドが、配列番号76のアミノ酸配列に対して、次のシステイン置換、すなわちH91C、Q110C、Y136C、L177C、L178C、L179C、E180C、G181C、A182C、E183C、T184C、W201C、Y202C、S204C、G209C、L210C、V211C、R233C、G234C、およびK235Cのうちの1つ以上を含む、請求項29記載の可溶性ポリペプチド。
  31. 前記可溶性ポリペプチドが、配列番号76のアミノ酸配列に対して、次のシステイン置換、すなわちH91C、Q110C、Y136C、L177C、L178C、L179C、E180C、G181C、A182C、E183C、T184C、W201C、Y202C、S204C、G209C、L210C、V211C、R233C、G234C、およびK235Cのうちの2つ以上を含む、請求項29記載の可溶性ポリペプチド。
  32. 前記可溶性ポリペプチドが、配列番号76のアミノ酸配列に対して、次のシステイン置換、すなわちH91C、Q110C、Y136C、L177C、L178C、L179C、E180C、G181C、A182C、E183C、T184C、W201C、Y202C、S204C、G209C、L210C、V211C、R233C、G234C、およびK235Cのうちの3つ以上を含む、請求項29記載の可溶性ポリペプチド。
  33. 前記可溶性ポリペプチドが、配列番号76のアミノ酸配列に対して、次のシステイン置換、すなわちH91C、Q110C、Y136C、L177C、L178C、L179C、E180C、G181C、A182C、E183C、T184C、W201C、Y202C、S204C、G209C、L210C、V211C、R233C、G234C、およびK235Cのうちの4つ以上を含む、請求項29記載の可溶性ポリペプチド。
  34. 前記可溶性ポリペプチドが、配列番号76のアミノ酸配列に対して、次のシステイン置換対、すなわちL177C/R233C、L177C/G234C、L178C/R233C、L178C/G234C、L179C/R233C、E180C/R233C、E180C/G234C、E180C/K235C、G181C/S204C、A182C/Y202C、A182C/S204C、E183C/Y202C、T184C/W201C、T184C/Y202C、G209C/Y136C、L210C/H91C、V211C/H91C、およびV211C/Q110Cのうちの1つ以上(好ましくは1つ)を含む、請求項29記載の可溶性ポリペプチド。
  35. 前記可溶性ポリペプチドが、配列番号76のアミノ酸配列に対して、次のアミノ酸領域、すなわちアミノ酸77〜94、107〜113、133〜139、174〜187、199〜214、および230〜238のうちの1つ以上、および好ましくは少なくとも2つに少なくとも1つのシステイン置換または挿入を含む、請求項29記載の可溶性ポリペプチド。
  36. 前記TNFSFリガンドがOX40リガンド(OX40L)である、請求項7記載の可溶性ポリペプチド。
  37. 前記可溶性ポリペプチドが、配列番号112のアミノ酸配列に対して、次のシステイン置換、すなわちK63C、S104C、P125C、L126C、Q128C、L129C、K130C、S134C、M139C、V140C、A141C、N166C、およびG167Cのうちの1つ以上を含む、請求項36記載の可溶性ポリペプチド。
  38. 前記可溶性ポリペプチドが、配列番号112のアミノ酸配列に対して、次のシステイン置換、すなわちK63C、S104C、P125C、L126C、Q128C、L129C、K130C、S134C、M139C、V140C、A141C、N166C、およびG167Cのうちの2つ以上を含む、請求項36記載の可溶性ポリペプチド。
  39. 前記可溶性ポリペプチドが、配列番号112のアミノ酸配列に対して、次のシステイン置換、すなわちK63C、S104C、P125C、L126C、Q128C、L129C、K130C、S134C、M139C、V140C、A141C、N166C、およびG167Cのうちの3つ以上を含む、請求項36記載の可溶性ポリペプチド。
  40. 前記可溶性ポリペプチドが、配列番号112のアミノ酸配列に対して、次のシステイン置換、すなわちK63C、S104C、P125C、L126C、Q128C、L129C、K130C、S134C、M139C、V140C、A141C、N166C、およびG167Cのうちの4つ以上を含む、請求項36記載の可溶性ポリペプチド。
  41. 前記可溶性ポリペプチドが、配列番号112のアミノ酸配列に対して、次のシステイン置換対、すなわちP125C/N166C、L126C/N166C、Q128C/N166C、Q128C/G167C、L129C/S134C、K130C/S134C、M139C/S104C、V140C/K63C、およびA141C/K63Cのうちの1つ以上(好ましくは1つ)を含む、請求項36記載の可溶性ポリペプチド。
  42. 前記可溶性ポリペプチドが、配列番号112のアミノ酸配列に対して、次のアミノ酸領域、すなわちアミノ酸49〜66、101〜107、122〜144、および163〜170のうちの1つ以上、および好ましくは少なくとも2つに少なくとも1つのシステイン置換または挿入を含む、請求項36記載の可溶性ポリペプチド。
  43. 前記TNFSFリガンドがCD40Lである、請求項7記載の可溶性ポリペプチド。
  44. 前記可溶性ポリペプチドが、配列番号132のアミノ酸配列に対して、次のシステイン置換、すなわちH125C、Y145C、Y172C、I204C、L205C、L206C、R207C、A208C、A209C、N210C、T211C、S213C、K216C、P217C、G219C、Q220C、S222C、G227C、V228C、F229C、T251C、G252C、およびF253Cのうちの1つ以上を含む、請求項43記載の可溶性ポリペプチド。
  45. 前記可溶性ポリペプチドが、配列番号132のアミノ酸配列に対して、次のシステイン置換、すなわちH125C、Y145C、Y172C、I204C、L205C、L206C、R207C、A208C、A209C、N210C、T211C、S213C、K216C、P217C、G219C、Q220C、S222C、G227C、V228C、F229C、T251C、G252C、およびF253Cのうちの2つ以上を含む、請求項43記載の可溶性ポリペプチド。
  46. 前記可溶性ポリペプチドが、配列番号132のアミノ酸配列に対して、次のシステイン置換、すなわちH125C、Y145C、Y172C、I204C、L205C、L206C、R207C、A208C、A209C、N210C、T211C、S213C、K216C、P217C、G219C、Q220C、S222C、G227C、V228C、F229C、T251C、G252C、およびF253Cのうちの3つ以上を含む、請求項43記載の可溶性ポリペプチド。
  47. 前記可溶性ポリペプチドが、配列番号132のアミノ酸配列に対して、次のシステイン置換、すなわちH125C、Y145C、Y172C、I204C、L205C、L206C、R207C、A208C、A209C、N210C、T211C、S213C、K216C、P217C、G219C、Q220C、S222C、G227C、V228C、F229C、T251C、G252C、およびF253Cのうちの4つ以上を含む、請求項43記載の可溶性ポリペプチド。
  48. 前記可溶性ポリペプチドが、配列番号132のアミノ酸配列に対して、次のシステイン置換対、すなわちI204C/T251C、I204C/G252C、L205C/T251C、L205C/G252C、L206C/T251C、R207C/T251C、R207C/G252C、R207C/F253C、A208C/S222C、A209C/Q220C、A209C/S222C、N210C/Q220C、T211C/G219C、T211C/Q220C、S213C/K216C、S213C/P217C、G227C/Y172C、V228C/H125C、F229C/H125C、およびF229C/Y145Cのうちの1つ以上(好ましくは1つ)を含む、請求項43記載の可溶性ポリペプチド。
  49. 前記可溶性ポリペプチドが、配列番号132のアミノ酸配列に対して、次のアミノ酸領域、すなわちアミノ酸111〜128、142〜148、169〜175、201〜232、および248〜256のうちの1つ以上、および好ましくは少なくとも2つに少なくとも1つのシステイン置換または挿入を含む、請求項43記載の可溶性ポリペプチド。
  50. 前記TNFSFリガンドがFasLである、請求項7記載の可溶性ポリペプチド。
  51. 前記可溶性ポリペプチドが、配列番号167のアミノ酸配列に対して、次のシステイン置換、すなわちH148C、I168C、Y192C、V223C、M224C、M225C、E226C、G227C、K228C、M229C、M230C、W239C、A240C、S242C、A247C、V248C、F249C、E271C、S272C、およびQ273Cのうちの1つ以上を含む、請求項50記載の可溶性ポリペプチド。
  52. 前記可溶性ポリペプチドが、配列番号167のアミノ酸配列に対して、次のシステイン置換、すなわちH148C、I168C、Y192C、V223C、M224C、M225C、E226C、G227C、K228C、M229C、M230C、W239C、A240C、S242C、A247C、V248C、F249C、E271C、S272C、およびQ273Cのうちの2つ以上を含む、請求項50記載の可溶性ポリペプチド。
  53. 前記可溶性ポリペプチドが、配列番号167のアミノ酸配列に対して、次のシステイン置換、すなわちH148C、I168C、Y192C、V223C、M224C、M225C、E226C、G227C、K228C、M229C、M230C、W239C、A240C、S242C、A247C、V248C、F249C、E271C、S272C、およびQ273Cのうちの3つ以上を含む、請求項50記載の可溶性ポリペプチド。
  54. 前記可溶性ポリペプチドが、配列番号167のアミノ酸配列に対して、次のシステイン置換、すなわちH148C、I168C、Y192C、V223C、M224C、M225C、E226C、G227C、K228C、M229C、M230C、W239C、A240C、S242C、A247C、V248C、F249C、E271C、S272C、およびQ273Cのうちの4つ以上を含む、請求項50記載の可溶性ポリペプチド。
  55. 前記可溶性ポリペプチドが、配列番号167のアミノ酸配列に対して、次のシステイン置換対、すなわちV223C/E271C、V223C/S272C、M224C/E271C、M224C/S272C、M225C/E271C、E226C/E271C、E226C/S272C、E226C/Q273C、G227C/S242C、K228C/A240C、K228C/S242C、M229C/A240C、M230C/W239C、M230C/A240C、A247C/Y192C、V248C/H148C、F249C/H148C、およびF249C/I168Cのうちの1つ以上(好ましくは1つ)を含む、請求項50記載の可溶性ポリペプチド。
  56. 前記可溶性ポリペプチドが、配列番号167のアミノ酸配列に対して、次のアミノ酸領域、すなわちアミノ酸134〜151、165〜171、189〜195、220〜252、および268〜276のうちの1つ以上、および好ましくは少なくとも2つに少なくとも1つのシステイン置換または挿入を含む、請求項50記載の可溶性ポリペプチド。
  57. 前記TNFSFリガンドがCD153である、請求項7記載の可溶性ポリペプチド。
  58. 前記可溶性ポリペプチドが、配列番号236のアミノ酸配列に対して、次のシステイン置換、すなわちY101C、I142C、C151S、A172C、L173C、V174C、T175C、V176C、E178C、S179C、V186C、Y187C、N189C、L194C、L195C、D196C、P220C、L221C、およびE222Cのうちの1つ以上を含む、請求項57記載の可溶性ポリペプチド。
  59. 前記可溶性ポリペプチドが、配列番号236のアミノ酸配列に対して、次のシステイン置換、すなわちY101C、I142C、C151S、A172C、L173C、V174C、T175C、V176C、E178C、S179C、V186C、Y187C、N189C、L194C、L195C、D196C、P220C、L221C、およびE222Cのうちの2つ以上を含む、請求項57記載の可溶性ポリペプチド。
  60. 前記可溶性ポリペプチドが、配列番号236のアミノ酸配列に対して、次のシステイン置換、すなわちY101C、I142C、C151S、A172C、L173C、V174C、T175C、V176C、E178C、S179C、V186C、Y187C、N189C、L194C、L195C、D196C、P220C、L221C、およびE222Cのうちの3つ以上を含む、請求項57記載の可溶性ポリペプチド。
  61. 前記可溶性ポリペプチドが、配列番号236のアミノ酸配列に対して、次のシステイン置換、すなわちY101C、I142C、C151S、A172C、L173C、V174C、T175C、V176C、E178C、S179C、V186C、Y187C、N189C、L194C、L195C、D196C、P220C、L221C、およびE222Cのうちの4つ以上を含む、請求項57記載の可溶性ポリペプチド。
  62. 前記可溶性ポリペプチドが、配列番号236のアミノ酸配列に対して、次のシステイン置換対、すなわちA172C/P220C、A172C/L221C、L173C/P220C、L173C/L221C、V174C/P220C、T175C/P220C、T175C/L221C、T175C/E222C、V176C/N189C、E178C/Y187C、S179C/V186C、S179C/Y187C、Y187C/C151S、N189C/C151S、L194C/I142C、L195C/Y101C、およびD196C/Y101Cのうちの1つ以上(好ましくは1つ)を含む、請求項57記載の可溶性ポリペプチド。
  63. 前記可溶性ポリペプチドが、配列番号236のアミノ酸配列に対して、次のアミノ酸領域、すなわちアミノ酸86〜104、169〜199、および217〜225のうちの1つ以上、および好ましくは少なくとも2つに少なくとも1つのシステイン置換または挿入を含む、請求項57記載の可溶性ポリペプチド。
  64. 前記TNFSFリガンドが4-1BBリガンドである、請求項7記載の可溶性ポリペプチド。
  65. 前記可溶性ポリペプチドが、配列番号267のアミノ酸配列に対して、次のシステイン置換、すなわちQ94C、L115C、F144C、A178C、L179C、L181C、T182C、V183C、D184C、L185C、N194C、S195C、F197C、R202C、L203C、L204C、G231C、およびA232Cのうちの1つ以上を含む、請求項64記載の可溶性ポリペプチド。
  66. 前記可溶性ポリペプチドが、配列番号267のアミノ酸配列に対して、次のシステイン置換、すなわちQ94C、L115C、F144C、A178C、L179C、L181C、T182C、V183C、D184C、L185C、N194C、S195C、F197C、R202C、L203C、L204C、G231C、およびA232Cのうちの2つ以上を含む、請求項64記載の可溶性ポリペプチド。
  67. 前記可溶性ポリペプチドが、配列番号267のアミノ酸配列に対して、次のシステイン置換、すなわちQ94C、L115C、F144C、A178C、L179C、L181C、T182C、V183C、D184C、L185C、N194C、S195C、F197C、R202C、L203C、L204C、G231C、およびA232Cのうちの3つ以上を含む、請求項64記載の可溶性ポリペプチド。
  68. 前記可溶性ポリペプチドが、配列番号267のアミノ酸配列に対して、次のシステイン置換、すなわちQ94C、L115C、F144C、A178C、L179C、L181C、T182C、V183C、D184C、L185C、N194C、S195C、F197C、R202C、L203C、L204C、G231C、およびA232Cのうちの4つ以上を含む、請求項64記載の可溶性ポリペプチド。
  69. 前記可溶性ポリペプチドが、配列番号267のアミノ酸配列に対して、次のシステイン置換対、すなわちA178C/G231C、L179C/G231C、L181C/G231C、L181C/A232C、T182C/F197C、V183C/S195C、V183C/F197C、D184C/S195C、L185C/N194C、L185C/S195C、R202C/F144C、L203C/Q94C、L204C/Q94C、およびL204C/L115Cのうちの1つ以上(好ましくは1つ)を含む、請求項64記載の可溶性ポリペプチド。
  70. 前記可溶性ポリペプチドが、配列番号267のアミノ酸配列に対して、次のアミノ酸領域、すなわちアミノ酸80〜97、112〜118、175〜207、および228〜235のうちの1つ以上、および好ましくは少なくとも2つに少なくとも1つのシステイン置換または挿入を含む、請求項64記載の可溶性ポリペプチド。
  71. 前記TNFSFリガンドがTRAILである、請求項7記載の可溶性ポリペプチド。
  72. 前記可溶性ポリペプチドが、配列番号297のアミノ酸配列に対して、次のシステイン置換、すなわちH125C、L147C、H161C、Y185C、L221C、L222C、M223C、K224C、S225C、A226C、R227C、N228C、C230S、G238C、L239C、S241C、G246C、I247C、H270C、E271C、およびA272Cのうちの1つ以上を含む、請求項71記載の可溶性ポリペプチド。
  73. 前記可溶性ポリペプチドが、配列番号297のアミノ酸配列に対して、次のシステイン置換、すなわちH125C、L147C、H161C、Y185C、L221C、L222C、M223C、K224C、S225C、A226C、R227C、N228C、C230S、G238C、L239C、S241C、G246C、I247C、H270C、E271C、およびA272Cのうちの2つ以上を含む、請求項71記載の可溶性ポリペプチド。
  74. 前記可溶性ポリペプチドが、配列番号297のアミノ酸配列に対して、次のシステイン置換、すなわちH125C、L147C、H161C、Y185C、L221C、L222C、M223C、K224C、S225C、A226C、R227C、N228C、C230S、G238C、L239C、S241C、G246C、I247C、H270C、E271C、およびA272Cのうちの3つ以上を含む、請求項71記載の可溶性ポリペプチド。
  75. 前記可溶性ポリペプチドが、配列番号297のアミノ酸配列に対して、次のシステイン置換、すなわちH125C、L147C、H161C、Y185C、L221C、L222C、M223C、K224C、S225C、A226C、R227C、N228C、C230S、G238C、L239C、S241C、G246C、I247C、H270C、E271C、およびA272Cのうちの4つ以上を含む、請求項71記載の可溶性ポリペプチド。
  76. 前記可溶性ポリペプチドが、配列番号297のアミノ酸配列に対して、次のシステイン置換対、すなわちL221C/H270C、L221C/E271C、L222C/H270C、L222C/E271C、M223C/H270C、K224C/H270C、K224C/E271C、K224C/A272C、S225C/S241C、A226C/L239C、A226C/S241C、R227C/L239C、N228C/G238C、N228C/L239C、G246C/Y185C、I247C/H125C、およびL147C/H161Cのうちの1つ以上(好ましくは1つ)を含む、請求項71記載の可溶性ポリペプチド。
  77. 前記可溶性ポリペプチドが、配列番号297のアミノ酸配列に対して、次のアミノ酸領域、すなわちアミノ酸111〜128、144〜150、158〜164、182〜188、218〜250、および267〜275のうちの1つ以上、および好ましくは少なくとも2つに少なくとも1つのシステイン置換または挿入を含む、請求項71記載の可溶性ポリペプチド。
  78. 前記TNFSFリガンドがRANKLである、請求項7記載の可溶性ポリペプチド。
  79. 前記可溶性ポリペプチドが、配列番号333のアミノ酸配列に対して、次のシステイン置換、すなわちH167C、W193C、Y217C、T254C、L255C、M256C、K257C、G258C、G259C、S260C、W264C、G266C、H271C、F272C、S274C、G279C、F280C、F281C、Q303C、D304C、およびA305Cのうちの1つ以上を含む、請求項78記載の可溶性ポリペプチド。
  80. 前記可溶性ポリペプチドが、配列番号333のアミノ酸配列に対して、次のシステイン置換、すなわちH167C、W193C、Y217C、T254C、L255C、M256C、K257C、G258C、G259C、S260C、W264C、G266C、H271C、F272C、S274C、G279C、F280C、F281C、Q303C、D304C、およびA305Cのうちの2つ以上を含む、請求項78記載の可溶性ポリペプチド。
  81. 前記可溶性ポリペプチドが、配列番号333のアミノ酸配列に対して、次のシステイン置換、すなわちH167C、W193C、Y217C、T254C、L255C、M256C、K257C、G258C、G259C、S260C、W264C、G266C、H271C、F272C、S274C、G279C、F280C、F281C、Q303C、D304C、およびA305Cのうちの3つ以上を含む、請求項78記載の可溶性ポリペプチド。
  82. 前記可溶性ポリペプチドが、配列番号333のアミノ酸配列に対して、次のシステイン置換、すなわちH167C、W193C、Y217C、T254C、L255C、M256C、K257C、G258C、G259C、S260C、W264C、G266C、H271C、F272C、S274C、G279C、F280C、F281C、Q303C、D304C、およびA305Cのうちの4つ以上を含む、請求項78記載の可溶性ポリペプチド。
  83. 前記可溶性ポリペプチドが、配列番号333のアミノ酸配列に対して、次のシステイン置換対、すなわちT254C/Q303C、T254C/D304C、L255C/Q303C、L255C/D304C、M256C/Q303C、K257C/Q303C、K257C/D304C、K257C/A305C、G258C/S274C、G259C/F272C、G259C/S274C、S260C/H271C、S260C/F272C、W264C/G266C、G279C/Y217C、F280C/H167C、F281C/H167C、およびF281C/W193Cのうちの1つ以上(好ましくは1つ)を含む、請求項78記載の可溶性ポリペプチド。
  84. 前記可溶性ポリペプチドが、配列番号333のアミノ酸配列に対して、次のアミノ酸領域、すなわちアミノ酸153〜170、190〜196、214〜220、251〜284、および300〜308のうちの1つ以上、および好ましくは少なくとも2つに少なくとも1つのシステイン置換または挿入を含む、請求項78記載の可溶性ポリペプチド。
  85. 前記TNFSFリガンドがTWEAKである、請求項7記載の可溶性ポリペプチド。
  86. 前記可溶性ポリペプチドが、配列番号369のアミノ酸配列に対して、次のシステイン置換、すなわちY164C、L187C、A188C、L189C、R190C、L192C、E193C、E194C、Q206C、L207C、L209C、R208C、S213C、G214C、P238C、F239C、およびL240Cのうちの1つ以上を含む、請求項85記載の可溶性ポリペプチド。
  87. 前記可溶性ポリペプチドが、配列番号369のアミノ酸配列に対して、次のシステイン置換、すなわちY164C、L187C、A188C、L189C、R190C、L192C、E193C、E194C、Q206C、L207C、L209C、R208C、S213C、G214C、P238C、F239C、およびL240Cのうちの2つ以上を含む、請求項85記載の可溶性ポリペプチド。
  88. 前記可溶性ポリペプチドが、配列番号369のアミノ酸配列に対して、次のシステイン置換、すなわちY164C、L187C、A188C、L189C、R190C、L192C、E193C、E194C、Q206C、L207C、L209C、R208C、S213C、G214C、P238C、F239C、およびL240Cのうちの3つ以上を含む、請求項85記載の可溶性ポリペプチド。
  89. 前記可溶性ポリペプチドが、配列番号369のアミノ酸配列に対して、次のシステイン置換、すなわちY164C、L187C、A188C、L189C、R190C、L192C、E193C、E194C、Q206C、L207C、L209C、R208C、S213C、G214C、P238C、F239C、およびL240Cのうちの4つ以上を含む、請求項85記載の可溶性ポリペプチド。
  90. 前記可溶性ポリペプチドが、配列番号369のアミノ酸配列に対して、次のシステイン置換対、すなわちY164C/S213C、Y164C/G214C、L187C/P238C、L187C/F239C、A188C/P238C、A188C/F239C、L189C/P238C、R190C/P238C、R190C/F239C、R190C/L240C、L192C/L207C、L192C/L209C、E193C/R208C、E194C/Q206C、およびE194C/L207Cのうちの1つ以上(好ましくは1つ)を含む、請求項85記載の可溶性ポリペプチド。
  91. 前記可溶性ポリペプチドが、配列番号369のアミノ酸配列に対して、次のアミノ酸領域、すなわちアミノ酸96〜105、161〜167、184〜197、204〜217、および235〜243のうちの1つ以上、および好ましくは少なくとも2つに少なくとも1つのシステイン置換または挿入を含む、請求項85記載の可溶性ポリペプチド。
  92. 前記TNFSFリガンドがAPRILである、請求項7記載の可溶性ポリペプチド。
  93. 前記可溶性ポリペプチドが、配列番号398のアミノ酸配列に対して、次のシステイン置換、すなわちH119C、F127C、A141C、Y166C、T192C、L193C、F194C、R195C、I197C、R198C、S199C、A207C、Y208C、S210C、C211S、G215C、V216C、F217C、P240C、H241C、およびG242Cのうちの1つ以上を含む、請求項92記載の可溶性ポリペプチド。
  94. 前記可溶性ポリペプチドが、配列番号398のアミノ酸配列に対して、次のシステイン置換、すなわちH119C、F127C、A141C、Y166C、T192C、L193C、F194C、R195C、I197C、R198C、S199C、A207C、Y208C、S210C、C211S、G215C、V216C、F217C、P240C、H241C、およびG242Cのうちの2つ以上を含む、請求項92記載の可溶性ポリペプチド。
  95. 前記可溶性ポリペプチドが、配列番号398のアミノ酸配列に対して、次のシステイン置換、すなわちH119C、F127C、A141C、Y166C、T192C、L193C、F194C、R195C、I197C、R198C、S199C、A207C、Y208C、S210C、C211S、G215C、V216C、F217C、P240C、H241C、およびG242Cのうちの3つ以上を含む、請求項92記載の可溶性ポリペプチド。
  96. 前記可溶性ポリペプチドが、配列番号398のアミノ酸配列に対して、次のシステイン置換、すなわちH119C、F127C、A141C、Y166C、T192C、L193C、F194C、R195C、I197C、R198C、S199C、A207C、Y208C、S210C、C211S、G215C、V216C、F217C、P240C、H241C、およびG242Cのうちの4つ以上を含む、請求項92記載の可溶性ポリペプチド。
  97. 前記可溶性ポリペプチドが、配列番号398のアミノ酸配列に対して、次のシステイン置換対、すなわちT192C/P240C、T192C/H241C、L193C/P240C、L193C/H241C、F194C/P240C、R195C/P240C、R195C/H241C、R195C/G242C、I197C/Y208C、I197C/S210C、R198C/Y208C、S199C/A207C、S199C/Y208C、S210C/C211S、G215C/Y166C、V216C/H119C、F217C/H119C、およびF127C/A141Cのうちの1つ以上(好ましくは1つ)を含む、請求項92記載の可溶性ポリペプチド。
  98. 前記可溶性ポリペプチドが、配列番号398のアミノ酸配列に対して、次のアミノ酸領域、すなわちアミノ酸105〜130、138〜144、163〜169、189〜220、および237〜245のうちの1つ以上、および好ましくは少なくとも2つに少なくとも1つのシステイン置換または挿入を含む、請求項92記載の可溶性ポリペプチド。
  99. 前記TNFSFリガンドがBLysである、請求項7記載の可溶性ポリペプチド。
  100. 前記可溶性ポリペプチドが、配列番号435のアミノ酸配列に対して、次のシステイン置換、すなわちQ148C、Y196C、T228C、L229C、F230C、R231C、I233C、Q234C、N235C、P241C、N242C、S244C、G249C、I250C、A251C、G274C、D275C、およびV276Cのうちの1つ以上を含む、請求項99記載の可溶性ポリペプチド。
  101. 前記可溶性ポリペプチドが、配列番号435のアミノ酸配列に対して、次のシステイン置換、すなわちQ148C、Y196C、T228C、L229C、F230C、R231C、I233C、Q234C、N235C、P241C、N242C、S244C、G249C、I250C、A251C、G274C、D275C、およびV276Cのうちの2つ以上を含む、請求項99記載の可溶性ポリペプチド。
  102. 前記可溶性ポリペプチドが、配列番号435のアミノ酸配列に対して、次のシステイン置換、すなわちQ148C、Y196C、T228C、L229C、F230C、R231C、I233C、Q234C、N235C、P241C、N242C、S244C、G249C、I250C、A251C、G274C、D275C、およびV276Cのうちの3つ以上を含む、請求項99記載の可溶性ポリペプチド。
  103. 前記可溶性ポリペプチドが、配列番号435のアミノ酸配列に対して、次のシステイン置換、すなわちQ148C、Y196C、T228C、L229C、F230C、R231C、I233C、Q234C、N235C、P241C、N242C、S244C、G249C、I250C、A251C、G274C、D275C、およびV276Cのうちの4つ以上を含む、請求項99記載の可溶性ポリペプチド。
  104. 前記可溶性ポリペプチドが、配列番号435のアミノ酸配列に対して、次のシステイン置換対、すなわちT228C/G274C、T228C/D275C、L229C/G274C、L229C/D275C、F230C/G274C、R231C/G274C、R231C/D275C、R231C/V276C、I233C/N242C、I233C/S244C、Q234C/N242C、N235C/P241C、N235C/N242C、G249C/Y196C、I250C/Q148C、およびA251C/Q148Cのうちの1つ以上(好ましくは1つ)を含む、請求項99記載の可溶性ポリペプチド。
  105. 前記可溶性ポリペプチドが、配列番号435のアミノ酸配列に対して、次のアミノ酸領域、すなわちアミノ酸134〜151、225〜254、および271〜279のうちの1つ以上、および好ましくは少なくとも2つに少なくとも1つのシステイン置換または挿入を含む、請求項99記載の可溶性ポリペプチド。
  106. 前記TNFSFリガンドがLIGHTである、請求項7記載の可溶性ポリペプチド。
  107. 前記可溶性ポリペプチドが、配列番号467のアミノ酸配列に対して、次のシステイン置換、すなわちH97C、L120C、Y144C、E178C、L179C、L180C、V181C、S182C、Q183C、Q184C、S185C、G188C、T191C、W197C、W198C、S200C、G205C、V206C、V207C、G230C、T231C、およびR232Cのうちの1つ以上を含む、請求項106記載の可溶性ポリペプチド。
  108. 前記可溶性ポリペプチドが、配列番号467のアミノ酸配列に対して、次のシステイン置換、すなわちH97C、L120C、Y144C、E178C、L179C、L180C、V181C、S182C、Q183C、Q184C、S185C、G188C、T191C、W197C、W198C、S200C、G205C、V206C、V207C、G230C、T231C、およびR232Cのうちの2つ以上を含む、請求項106記載の可溶性ポリペプチド。
  109. 前記可溶性ポリペプチドが、配列番号467のアミノ酸配列に対して、次のシステイン置換、すなわちH97C、L120C、Y144C、E178C、L179C、L180C、V181C、S182C、Q183C、Q184C、S185C、G188C、T191C、W197C、W198C、S200C、G205C、V206C、V207C、G230C、T231C、およびR232Cのうちの3つ以上を含む、請求項106記載の可溶性ポリペプチド。
  110. 前記可溶性ポリペプチドが、配列番号467のアミノ酸配列に対して、次のシステイン置換、すなわちH97C、L120C、Y144C、E178C、L179C、L180C、V181C、S182C、Q183C、Q184C、S185C、G188C、T191C、W197C、W198C、S200C、G205C、V206C、V207C、G230C、T231C、およびR232Cのうちの4つ以上を含む、請求項106記載の可溶性ポリペプチド。
  111. 前記可溶性ポリペプチドが、配列番号467のアミノ酸配列に対して、次のシステイン置換対、すなわちE178C/G230C、E178C/T231C、L179C/G230C、L179C/T231C、L180C/G230C、V181C/G230C、V181C/T231C、V181C/R232C、S182C/S200C、Q183C/W198C、Q183C/S200C、Q184C/W198C、S185C/W197C、S185C/W198C、G188C/T191C、G205C/Y144C、V206C/H97C、V207C/H97C、およびV207C/L120Cのうちの1つ以上(好ましくは1つ)を含む、請求項106記載の可溶性ポリペプチド。
  112. 前記可溶性ポリペプチドが、配列番号467のアミノ酸配列に対して、次のアミノ酸領域、すなわちアミノ酸83〜100、117〜123、175〜210、および227〜235のうちの1つ以上、および好ましくは少なくとも2つに少なくとも1つのシステイン置換または挿入を含む、請求項106記載の可溶性ポリペプチド。
  113. 前記TNFSFリガンドがTL1である、請求項7記載の可溶性ポリペプチド。
  114. 前記可溶性ポリペプチドが、配列番号506のアミノ酸配列に対して、次のシステイン置換、すなわちH98C、L125C、Y150C、Q193C、L194C、L195C、M196C、G197C、T198C、K199C、S200C、W208C、F209C、P211C、A216C、M217C、F218C、E241C、D242C、およびK243Cのうちの1つ以上を含む、請求項113記載の可溶性ポリペプチド。
  115. 前記可溶性ポリペプチドが、配列番号506のアミノ酸配列に対して、次のシステイン置換、すなわちH98C、L125C、Y150C、Q193C、L194C、L195C、M196C、G197C、T198C、K199C、S200C、W208C、F209C、P211C、A216C、M217C、F218C、E241C、D242C、およびK243Cのうちの2つ以上を含む、請求項113記載の可溶性ポリペプチド。
  116. 前記可溶性ポリペプチドが、配列番号506のアミノ酸配列に対して、次のシステイン置換、すなわちH98C、L125C、Y150C、Q193C、L194C、L195C、M196C、G197C、T198C、K199C、S200C、W208C、F209C、P211C、A216C、M217C、F218C、E241C、D242C、およびK243Cのうちの3つ以上を含む、請求項113記載の可溶性ポリペプチド。
  117. 前記可溶性ポリペプチドが、配列番号506のアミノ酸配列に対して、次のシステイン置換、すなわちH98C、L125C、Y150C、Q193C、L194C、L195C、M196C、G197C、T198C、K199C、S200C、W208C、F209C、P211C、A216C、M217C、F218C、E241C、D242C、およびK243Cのうちの4つ以上を含む、請求項113記載の可溶性ポリペプチド。
  118. 前記可溶性ポリペプチドが、配列番号506のアミノ酸配列に対して、次のシステイン置換対、すなわちQ193C/E241C、Q193C/D242C、L194C/E241C、L194C/D242C、L195C/E241C、M196C/E241C、M196C/D242C、M196C/K243C、G197C/P211C、T198C/F209C、T198C/P211C、K199C/F209C、S200C/W208C、S200C/F209C、A216C/Y150C、M217C/H98C、F218C/H98C、およびF218C/L125Cのうちの1つ以上(好ましくは1つ)を含む、請求項113記載の可溶性ポリペプチド。
  119. 前記可溶性ポリペプチドが、配列番号506のアミノ酸配列に対して、次のアミノ酸領域、すなわちアミノ酸84〜101、122〜128、190〜221、および238〜246のうちの1つ以上、および好ましくは少なくとも2つに少なくとも1つのシステイン置換または挿入を含む、請求項113記載の可溶性ポリペプチド。
  120. 前記TNFSFリガンドがGITRLである、請求項7記載の可溶性ポリペプチド。
  121. 前記可溶性ポリペプチドが、配列番号542のアミノ酸配列に対して、次のシステイン置換、すなわちK83C、Y120C、T148C、L149C、N184C、T150C、N151C、K152C、S153C、I155C、G160C、T161C、およびY162Cのうちの1つ以上を含む、請求項120記載の可溶性ポリペプチド。
  122. 前記可溶性ポリペプチドが、配列番号542のアミノ酸配列に対して、次のシステイン置換、すなわちK83C、Y120C、T148C、L149C、N184C、T150C、N151C、K152C、S153C、I155C、G160C、T161C、およびY162Cのうちの2つ以上を含む、請求項120記載の可溶性ポリペプチド。
  123. 前記可溶性ポリペプチドが、配列番号542のアミノ酸配列に対して、次のシステイン置換、すなわちK83C、Y120C、T148C、L149C、N184C、T150C、N151C、K152C、S153C、I155C、G160C、T161C、およびY162Cのうちの3つ以上を含む、請求項120記載の可溶性ポリペプチド。
  124. 前記可溶性ポリペプチドが、配列番号542のアミノ酸配列に対して、次のシステイン置換、すなわちK83C、Y120C、T148C、L149C、N184C、T150C、N151C、K152C、S153C、I155C、G160C、T161C、およびY162Cのうちの4つ以上を含む、請求項120記載の可溶性ポリペプチド。
  125. 前記可溶性ポリペプチドが、配列番号542のアミノ酸配列に対して、次のシステイン置換対、すなわちT148C/N184C、L149C/I155C、T150C/S153C、T150C/I155C、N151C/S153C、K152C/S153C、G160C/Y120C、T161C/K83C、およびY162C/K83Cのうちの1つ以上(好ましくは1つ)を含む、請求項120記載の可溶性ポリペプチド。
  126. 前記可溶性ポリペプチドが、配列番号542のアミノ酸配列に対して、次のアミノ酸領域、すなわちアミノ酸69〜86、117〜123、145〜165、181〜187、および269〜277のうちの1つ以上、および好ましくは少なくとも2つに少なくとも1つのシステイン置換または挿入を含む、請求項120記載の可溶性ポリペプチド。
  127. 前記TNFSFリガンドがCD70である、請求項7記載の可溶性ポリペプチド。
  128. 前記可溶性ポリペプチドが、配列番号203のアミノ酸配列に対して、次のシステイン置換、すなわちR83C、H107C、T127C、L128C、A129C、V130C、G131C、I132C、S134C、S137C、S139C、Q149C、G150C、C151S、T152C、R157C、T159C、T181C、D182C、およびE183Cのうちの1つ以上を含む、請求項127記載の可溶性ポリペプチド。
  129. 前記可溶性ポリペプチドが、配列番号203のアミノ酸配列に対して、次のシステイン置換、すなわちR83C、H107C、T127C、L128C、A129C、V130C、G131C、I132C、S134C、S137C、S139C、Q149C、G150C、C151S、T152C、R157C、T159C、T181C、D182C、およびE183Cのうちの2つ以上を含む、請求項127記載の可溶性ポリペプチド。
  130. 前記可溶性ポリペプチドが、配列番号203のアミノ酸配列に対して、次のシステイン置換、すなわちR83C、H107C、T127C、L128C、A129C、V130C、G131C、I132C、S134C、S137C、S139C、Q149C、G150C、C151S、T152C、R157C、T159C、T181C、D182C、およびE183Cのうちの3つ以上を含む、請求項127記載の可溶性ポリペプチド。
  131. 前記可溶性ポリペプチドが、配列番号203のアミノ酸配列に対して、次のシステイン置換、すなわちR83C、H107C、T127C、L128C、A129C、V130C、G131C、I132C、S134C、S137C、S139C、Q149C、G150C、C151S、T152C、R157C、T159C、T181C、D182C、およびE183Cのうちの4つ以上を含む、請求項127記載の可溶性ポリペプチド。
  132. 前記可溶性ポリペプチドが、配列番号203のアミノ酸配列に対して、次のシステイン置換対、すなわちT127C/T181C、T127C/D182C、L128C/T181C、L128C/D182C、A129C/T181C、V130C/T181C、V130C/D182C、V130C/E183C、G131C/T152C、I132C/G150C、I132C/T152C、S134C/Q149C、S134C/G150C、S137C/S139、G150C/C151S、R157C/H107C、およびT159C/R83Cのうちの1つ以上(好ましくは1つ)を含む、請求項127記載の可溶性ポリペプチド。
  133. 前記可溶性ポリペプチドが、配列番号203のアミノ酸配列に対して、次のアミノ酸領域、すなわちアミノ酸69〜86、104〜110、124〜162、および178〜186のうちの1つ以上、および好ましくは少なくとも2つに少なくとも1つのシステイン置換または挿入を含む、請求項127記載の可溶性ポリペプチド。
  134. 前記TNFSFリガンドがEDA(例えば、EDA-A1およびEDA-A2)である、請求項7記載の可溶性ポリペプチド。
  135. 前記可溶性ポリペプチドが、配列番号562または590のアミノ酸配列に対して、次のシステイン置換、すなわちV250C、H252C、T278C、Y304C、P328C、F329C、L330C、Q331C、T333C、R334C、S335C、N342C、Y343C、T345C、G350C、V351C、H376C、およびT377Cのうちの1つ以上を含む、請求項134記載の可溶性ポリペプチド。
  136. 前記可溶性ポリペプチドが、配列番号562または590のアミノ酸配列に対して、次のシステイン置換、すなわちV250C、H252C、T278C、Y304C、P328C、F329C、L330C、Q331C、T333C、R334C、S335C、N342C、Y343C、T345C、G350C、V351C、H376C、およびT377Cのうちの2つ以上を含む、請求項134記載の可溶性ポリペプチド。
  137. 前記可溶性ポリペプチドが、配列番号562または590のアミノ酸配列に対して、次のシステイン置換、すなわちV250C、H252C、T278C、Y304C、P328C、F329C、L330C、Q331C、T333C、R334C、S335C、N342C、Y343C、T345C、G350C、V351C、H376C、およびT377Cのうちの3つ以上を含む、請求項134記載の可溶性ポリペプチド。
  138. 前記可溶性ポリペプチドが、配列番号562または590のアミノ酸配列に対して、次のシステイン置換、すなわちV250C、H252C、T278C、Y304C、P328C、F329C、L330C、Q331C、T333C、R334C、S335C、N342C、Y343C、T345C、G350C、V351C、H376C、およびT377Cのうちの4つ以上を含む、請求項134記載の可溶性ポリペプチド。
  139. 前記可溶性ポリペプチドが、配列番号562または590のアミノ酸配列に対して、次のシステイン置換対、すなわちP328C/H376C 577、F329C/H376C、L330C/H376C、L330C/T377C、Q331C/H376C、Q331C/T377C、T333C/Y343C、T333C/T345C、R334C/Y343C、S335C/N342C、S335C/Y343C、G350C/Y304C、V351C/V250C、およびV351C/H252Cのうちの1つ以上(好ましくは1つ)を含む、請求項134記載の可溶性ポリペプチド。
  140. 前記可溶性ポリペプチドが、配列番号562または590のアミノ酸配列に対して、次のアミノ酸領域、すなわちアミノ酸238〜255、275〜281、301〜307、325〜354、および373〜380のうちの1つ以上、および好ましくは少なくとも2つに少なくとも1つのシステイン置換または挿入を含む、請求項134記載の可溶性ポリペプチド。
  141. 前記TNF様リガンドがアディポネクチンである、請求項7記載の可溶性ポリペプチド。
  142. 前記可溶性ポリペプチドが、配列番号688のアミノ酸配列に対して、次のシステイン置換、すなわちS116C、A161C、A181C、M182C、L183C、F184C、T185C、Y186C、D187C、Q188C、N193C、V194C、Q196C、V201C、L202C、D229C、N230C、およびD231Cのうちの1つ以上を含む、請求項141記載の可溶性ポリペプチド。
  143. 前記可溶性ポリペプチドが、配列番号688のアミノ酸配列に対して、次のシステイン置換、すなわちS116C、A161C、A181C、M182C、L183C、F184C、T185C、Y186C、D187C、Q188C、N193C、V194C、Q196C、V201C、L202C、D229C、N230C、およびD231Cのうちの2つ以上を含む、請求項141記載の可溶性ポリペプチド。
  144. 前記可溶性ポリペプチドが、配列番号688のアミノ酸配列に対して、次のシステイン置換、すなわちS116C、A161C、A181C、M182C、L183C、F184C、T185C、Y186C、D187C、Q188C、N193C、V194C、Q196C、V201C、L202C、D229C、N230C、およびD231Cのうちの3つ以上を含む、請求項141記載の可溶性ポリペプチド。
  145. 前記可溶性ポリペプチドが、配列番号688のアミノ酸配列に対して、次のシステイン置換、すなわちS116C、A161C、A181C、M182C、L183C、F184C、T185C、Y186C、D187C、Q188C、N193C、V194C、Q196C、V201C、L202C、D229C、N230C、およびD231Cのうちの4つ以上を含む、請求項141記載の可溶性ポリペプチド。
  146. 前記可溶性ポリペプチドが、配列番号688のアミノ酸配列に対して、次のシステイン置換対、すなわちA181C/D229C、A181C/N230C、M182C/D229C、M182C/N230C、L183C/D229C、F184C/D229C、F184C/N230C、F184C/D231C、T185C/Q196C、Y186C/V194C、Y186C/Q196C、D187C/V194C、Q188C/N193C、Q188C/V194C、V201C/A161C、およびL202C/S116Cのうちの1つ以上(好ましくは1つ)を含む、請求項141記載の可溶性ポリペプチド。
  147. 前記可溶性ポリペプチドが、配列番号688のアミノ酸配列に対して、次のアミノ酸領域、すなわちアミノ酸103〜119、158〜164、178〜205、および226〜234のうちの1つ以上、および好ましくは少なくとも2つに少なくとも1つのシステイン置換または挿入を含む、請求項141記載の可溶性ポリペプチド。
  148. 前記可溶性ポリペプチドが配列番号1〜735のいずれか1つと少なくとも50％の配列同一性を有し、好ましくは前記可溶性ポリペプチドが少なくとも55％、60％、65％、70％、75％、80％、85％、90％、95％、99％、または100％の配列同一性を有する、請求項1〜147のいずれか1項に記載の可溶性ポリペプチド。
  149. 前記可溶性ポリペプチドがホモ多量体を形成するかまたは形成可能であり、具体的には前記可溶性ポリペプチドがホモ二量体またはホモ三量体を形成するかまたは形成可能であり、具体的には前記可溶性ポリペプチドがホモ三量体を形成するかまたは形成可能である、請求項1〜147のいずれか1項に記載の可溶性ポリペプチド。
  150. 請求項1〜147のいずれか1項に記載の可溶性ポリペプチドをコードする核酸分子。
  151. 請求項1〜147のいずれか1項に記載の可溶性ポリペプチドの治療上有効な量を含む医薬組成物であって、好ましくはここで該組成物が請求項8〜21のいずれか1項に記載の可溶性ポリペプチドを含む、上記医薬組成物。
  152. 請求項1〜147のいずれか1項に記載の可溶性ポリペプチドをコードする核酸分子を含む医薬組成物であって、好ましくはここで該組成物が請求項8〜21のいずれか1項に記載の可溶性ポリペプチドをコードする核酸分子を含む、上記医薬組成物。
  153. 前記組成物が1つ以上の製薬上許容される担体または賦形剤を含む、請求項151記載の医薬組成物。
  154. 請求項151記載の医薬組成物を、それを必要とする被験体に投与することを含む、医学療法の方法。
  155. 前記被験体が自己免疫疾患を有する、請求項154記載の方法。
  156. 前記自己免疫疾患が、円形脱毛症、強直性脊椎炎、抗リン脂質抗体症候群、アジソン病、溶血性貧血、自己免疫性肝炎、肝炎、ベーチェット病、水疱性類天疱瘡、心筋症、セリアックスプルー皮膚炎、慢性疲労免疫不全症候群(CFIDS)、慢性炎症性脱髄性多発ニューロパチー、チャーグ・ストラウス症候群、瘢痕性類天疱瘡、限局性強皮症(クレスト症候群)、寒冷凝集素症、クローン病、円板状ループス、本態性混合性クリオグロブリン血症、繊維筋痛症-繊維筋炎、グレーヴス病、ギラン・バレー症候群、橋本甲状腺炎、甲状腺機能低下症、炎症性腸疾患、自己免疫性リンパ増殖症候群(ALPS)、特発性肺線維症、特発性血小板減少性紫斑病(ITP)、IgA腎症、インスリン依存性糖尿病、若年性関節炎、扁平苔癬、狼瘡、メニエール病、混合性結合組織病、多発性硬化症、重症筋無力症、尋常性天疱瘡、悪性貧血、結節性多発動脈炎、多発性軟骨炎、多腺性症候群、リウマチ性多発筋痛、多発性筋炎、皮膚筋炎、原発性無ガンマグロブリン血症、原発性胆汁性肝硬変、乾癬、レイノー現象、ライター症候群、リウマチ熱、関節リウマチ、サルコイドーシス、硬皮症、シェーグレン症候群、全身強直症候群、高安動脈炎、側頭動脈炎／巨細胞動脈炎、潰瘍性大腸炎、ブドウ膜炎、脈管炎、白斑、およびウェゲナー肉芽腫、およびインスリン依存性糖尿病から選択され、好ましくは前記自己免疫疾患がインスリン依存性糖尿病、関節リウマチ、シェーグレン症候群、多発性硬化症、およびクローン病である、請求項155記載の方法。
  157. 前記自己免疫疾患がインスリン依存性糖尿病である、請求項155記載の方法。
  158. 前記方法が、請求項8〜21のいずれか1項に記載の可溶性ポリペプチドを投与することを含む、請求項155記載の方法。
  159. 前記被験体が組織または臓器の修復または再生を必要としている、請求項154記載の方法。
  160. 前記の組織または臓器が膵臓、唾液腺、下垂体、腎臓、心臓、肺、造血器系、脳神経、心臓、大動脈を含む血管、嗅腺、耳、神経、頭部の構成物、眼、胸腺、舌、骨、肝臓、小腸、大腸、消化管、肺、脳、皮膚、末梢神経系、中枢神経系、脊髄、乳房、胚構成物、胚、または精巣である、請求項159記載の方法。
  161. 前記被験体が癌を有する、請求項154記載の方法。
  162. 前記癌が固形腫瘍癌または造血器癌である、請求項161記載の方法。
  163. 前記癌が、膀胱癌、膵臓癌、子宮頸癌、肺癌、肝臓癌、卵巣癌、結腸癌、胃癌、ウイルス誘発癌、神経芽腫、乳癌、前立腺癌、腎癌、白血病、肉腫、癌腫、非小細胞肺癌、非ホジキンリンパ腫、急性骨髄性白血病(AML)、慢性リンパ球性白血病(CLL)、B細胞性慢性リンパ球性白血病(B-CLL)、多発性骨髄腫(MM)、赤白血病、腎細胞癌、軟部組織肉腫、黒色腫、星状細胞腫、乏突起星細胞腫、骨の癌、脳の癌、消化管癌、噴門癌、子宮癌、頭頚部癌、胆嚢癌、喉頭癌、口唇および口腔の癌、眼の癌、大腸癌、精巣癌、咽頭癌、急性リンパ芽球性白血病(ALL)、慢性骨髄性白血病(CML)、副腎皮質癌、AIDS関連リンパ腫、原発性CNSリンパ腫、肛門癌、虫垂癌、非定型奇形腫様／横紋筋肉腫様腫瘍、基底細胞癌、胆管癌、肝外癌、ユーイング肉腫ファミリー、骨肉腫および悪性線維性組織球腫、中枢神経系胚芽腫、中枢神経系胚細胞腫瘍、頭蓋咽頭腫、上衣腫、気管支腫瘍、バーキットリンパ腫、カルチノイド腫瘍、原発性リンパ腫、脊索腫、慢性骨髄増殖性腫瘍、肝外非浸潤性乳管癌(DCIS)、子宮内膜癌、食道癌、鼻腔神経芽細胞腫、頭蓋外胚細胞腫瘍、性腺外胚細胞腫瘍、卵管癌、骨の線維性組織球腫、消化管カルチノイド腫瘍、消化管間質腫瘍(GIST)、精巣性胚細胞腫瘍、妊娠性絨毛性疾患、神経膠腫、小児脳幹神経膠腫、毛髪様細胞白血病、肝細胞癌、ランゲルハンス細胞組織球症、ホジキンリンパ腫、下咽頭癌、膵島細胞腫瘍、膵神経内分泌腫瘍、ウィルムス腫瘍および他の小児腎腫瘍、ランゲルハンス細胞組織球症、小細胞肺癌、皮膚T細胞性リンパ腫、眼内黒色腫、メルケル細胞癌、中皮腫、転移性扁平上皮性頸部癌、正中腺管癌、多発性内分泌腫瘍症候群、骨髄異形成症候群、鼻腔および副鼻腔の癌、鼻咽腔癌、上皮性卵巣癌、胚細胞性卵巣癌、低悪性度の卵巣癌、乳頭腫症、傍神経節腫、副甲状腺癌、陰茎癌、咽頭癌、褐色細胞腫、下垂体腫瘍、胸膜肺芽腫、原発性腹膜癌、直腸癌、網膜芽細胞腫、横紋筋肉腫、唾液腺癌、カポジ肉腫、セザリー症候群、小腸癌、胸腺腫および胸腺癌、甲状腺癌、腎盂および尿管の移行上皮癌、尿道癌、子宮内膜子宮癌、子宮肉腫、膣癌、外陰癌、ならびにワルデンシュトレーム・マクログロブリン血症から選択される、請求項161記載の方法。
  164. 前記方法が、請求項71〜77のいずれか1項に記載の可溶性ポリペプチドを投与することを含む、請求項161記載の方法。
  165. 前記方法が、1つ以上の化学療法剤、免疫療法剤、または放射線をさらに含む、請求項161記載の方法。
  166. 前記免疫療法剤が、抗TNF受容体スーパーファミリーアゴニスト抗体、抗TNF受容体スーパーファミリーアンタゴニスト抗体、抗CTLA-4剤、抗PD-1剤、抗PD-L1剤、抗PD-L2剤、TNF-α架橋剤、およびTRAIL架橋剤からなる群より選択される、請求項165記載の方法。
  167. 前記被験体が神経疾患を有する、請求項154記載の方法。
  168. 前記神経疾患が脳腫瘍、脳転移、統合失調症、てんかん、筋萎縮性側索硬化症(ALS)、パーキンソン病、アルツハイマー病、ハンチントン病、および卒中から選択され、好ましくは前記神経疾患が筋萎縮性側索硬化症(ALS)、パーキンソン病、およびアルツハイマー病である、請求項167記載の方法。
  169. 前記方法が、請求項8〜21のいずれか1項に記載の可溶性ポリペプチドを投与することを含む、請求項167記載の方法。
  170. 前記被験体が感染症を有する、請求項154記載の方法。
  171. 前記感染症が、B型肝炎、C型肝炎、後天性免疫不全症候群(AIDS)、ハンセン病、および結核(TB)から選択される、請求項170記載の方法。
  172. 前記被験体が、代謝性疾患、黄斑疾患、筋萎縮、流産に関連する疾患、脈管疾患、骨量減少に関連する疾患、アレルギー、血液疾患、筋骨格障害、増殖受容体に関連する疾患、または肥満症を有する、請求項154記載の方法。
  173. 前記方法が、請求項8〜21のいずれか1項に記載の可溶性ポリペプチドの治療上有効な量を含む医薬組成物を投与することを含む、請求項154記載の方法。
  174. 前記方法が、請求項8〜21のいずれか1項に記載の可溶性ポリペプチドをコードする核酸分子を含む医薬組成物を投与することを含む、請求項154記載の方法。
  175. 請求項1〜147のいずれか1項に記載の可溶性ポリペプチドを調製する方法であって、ここで該方法が、
    a)前記可溶性ポリペプチドをコードするポリヌクレオチドを含む宿主細胞を提供すること、
    b)前記可溶性ポリペプチドを前記宿主細胞で発現させること、および、場合によっては、
    c)前記可溶性ポリペプチドを回収すること
    を含む、上記方法。
  176. 前記方法のステップc)が多量体の形態ではない前記可溶性ポリペプチドを除去することを含み、好ましくは前記方法がホモ三量体の形態ではない前記可溶性ポリペプチドを除去することを含む、請求項175記載の方法。
  177. 請求項1〜147のいずれか1項に記載の可溶性ポリペプチドを発現する宿主細胞であって、ここで前記宿主細胞が前記可溶性ポリペプチドをコードするポリヌクレオチドを含み、ここで前記ポリヌクレオチドが前記宿主細胞で発現される、上記宿主細胞。
  178. 請求項150記載の核酸分子を含むベクター。
  179. 前記ベクターが、ウイルスベクター、例えば、レトロウイルスベクター、アデノウイルスベクター、ポックスウイルスベクター(例えば、改変ワクシニアアンカラ(MVA)などのワクシニアウイルスベクター)、アデノ随伴ウイルスベクター、またはアルファウイルスベクターである、請求項178記載のベクター。
  180. 請求項178記載のベクターを含む、請求項177記載の宿主細胞。
  181. 前記TNFSFまたはTNF様リガンドが、TNF-α、リンホトキシン(例えば、LT-αおよびRANKL)、CD40L、CD70、RANKL、OX40L、FasL、4-1BBリガンド、TRAIL、RANKL、TWEAK、APRIL、BLys、LIGHT、TL1、GITRL、EDA(例えば、EDA-A1およびEDA-A2)、またはアディポネクチンである、請求項1〜6のいずれか1項に記載の可溶性ポリペプチド。
  182. 前記TNFSFリガンドがTNF-αである、請求項181記載の可溶性ポリペプチド。
  183. 前記可溶性ポリペプチドが、配列番号1のアミノ酸配列に対して、次のシステイン置換、すなわちR82C、T83C、P84C、S85C、H91C、N110C、G130C、L131C、Y135C、N168C、L169C、L170C、S171C、A172C、I173C、K174C、S175C、Q178C、E180C、W190C、Y191C、P193C、G198C、V199C、F200C、Q201C、S223C、G224C、およびQ225Cのうちの1つ以上を含む、請求項182記載の可溶性ポリペプチド。
  184. 前記可溶性ポリペプチドが、配列番号1のアミノ酸配列に対して、次のシステイン置換、すなわちR82C、T83C、P84C、S85C、H91C、N110C、G130C、L131C、Y135C、N168C、L169C、L170C、S171C、A172C、I173C、K174C、S175C、Q178C、E180C、W190C、Y191C、P193C、G198C、V199C、F200C、Q201C、S223C、G224C、およびQ225Cのうちの2つ以上を含む、請求項182または183記載の可溶性ポリペプチド。
  185. 前記可溶性ポリペプチドが、配列番号1のアミノ酸配列に対して、次のシステイン置換、すなわちR82C、T83C、P84C、S85C、H91C、N110C、G130C、L131C、Y135C、N168C、L169C、L170C、S171C、A172C、I173C、K174C、S175C、Q178C、E180C、W190C、Y191C、P193C、G198C、V199C、F200C、Q201C、S223C、G224C、およびQ225Cのうちの3つ以上を含む、請求項182〜184のいずれか1項に記載の可溶性ポリペプチド。
  186. 前記可溶性ポリペプチドが、配列番号1のアミノ酸配列に対して、次のシステイン置換、すなわちR82C、T83C、P84C、S85C、H91C、N110C、G130C、L131C、Y135C、N168C、L169C、L170C、S171C、A172C、I173C、K174C、S175C、Q178C、E180C、W190C、Y191C、P193C、G198C、V199C、F200C、Q201C、S223C、G224C、およびQ225Cのうちの4つ以上を含む、請求項182〜185のいずれか1項に記載の可溶性ポリペプチド。
  187. 前記可溶性ポリペプチドが、配列番号1のアミノ酸配列に対して、次のシステイン置換対、すなわちG130C/S85C、L131C/T83C、L131C/P84C、S171C/G224C、N168C/S223C、N168C/G224C、L169C/S223C、L169C/G224C、L170C/S223C、S171C/S223C、S171C/Q225C、A172C/P193C、I173C/Y191C、I173C/P193C、K174C/Y191C、S175C/W190C、S175C/Y191C、Q178C/E180C、G198C/Y135C、V199C/H91C、F200C/H91C、F200C/N110C、Q201C/R82C、およびQ201C/T83Cのうちの1つ以上(好ましくは1つ)を含む、請求項182〜186のいずれか1項に記載の可溶性ポリペプチド。
  188. 前記可溶性ポリペプチドが、配列番号1のアミノ酸配列に対して、次のアミノ酸領域、すなわちアミノ酸77〜94、107〜113、127〜138、165〜204、および220〜228のうちの1つ以上、および好ましくは少なくとも2つに少なくとも1つのシステイン置換または挿入を含む請求項182記載の可溶性ポリペプチド。
  189. 前記可溶性ポリペプチドが、配列番号1のアミノ酸配列に対して、前記システイン置換S171CおよびG224Cを含む、請求項183記載の可溶性ポリペプチド。
  190. 前記可溶性ポリペプチドがTNFSF受容体に結合する、請求項1〜6および181〜189のいずれか1項に記載の可溶性ポリペプチド。
  191. 前記可溶性ポリペプチドがTNF受容体1(TNFR1)またはTNF受容体2(TNFR2)に結合する、請求項182〜189のいずれか1項に記載の可溶性ポリペプチド。
  192. 前記可溶性ポリペプチドがTNFR2に特異的に結合する、請求項191記載の可溶性ポリペプチド。
  193. 前記可溶性ポリペプチドがTNFR2特異的アゴニストである、請求項192記載の可溶性ポリペプチド。
  194. 前記可溶性ポリペプチドがTNFR2多量体化を促進する、請求項192または193記載の可溶性ポリペプチド。
  195. 前記可溶性ポリペプチドが前記TNFR2のアンタゴニストである、請求項192記載の可溶性ポリペプチド。
  196. 前記TNFSFリガンドがLT-αである、請求項181記載の可溶性ポリペプチド。
  197. 前記可溶性ポリペプチドが、配列番号40のアミノ酸配列に対して、次のシステイン置換、すなわちH66C、R85C、Y110C、P147C、L148C L149C、S150C、S151C、Q152C、K153C、M154C、W163C、L164C、S166C、A171C、A172C、F173C、P195C、S196C、およびT197Cのうちの1つ以上を含む、請求項196記載の可溶性ポリペプチド。
  198. 前記可溶性ポリペプチドが、配列番号40のアミノ酸配列に対して、次のシステイン置換、すなわちH66C、R85C、Y110C、P147C、L148C L149C、S150C、S151C、Q152C、K153C、M154C、W163C、L164C、S166C、A171C、A172C、F173C、P195C、S196C、およびT197Cのうちの2つ以上を含む、請求項196または197記載の可溶性ポリペプチド。
  199. 前記可溶性ポリペプチドが、配列番号40のアミノ酸配列に対して、次のシステイン置換、すなわちH66C、R85C、Y110C、P147C、L148C L149C、S150C、S151C、Q152C、K153C、M154C、W163C、L164C、S166C、A171C、A172C、F173C、P195C、S196C、およびT197Cのうちの3つ以上を含む、請求項196〜198のいずれか1項に記載の可溶性ポリペプチド。
  200. 前記可溶性ポリペプチドが、配列番号40のアミノ酸配列に対して、次のシステイン置換、すなわちH66C、R85C、Y110C、P147C、L148C L149C、S150C、S151C、Q152C、K153C、M154C、W163C、L164C、S166C、A171C、A172C、F173C、P195C、S196C、およびT197Cのうちの4つ以上を含む、請求項196〜199のいずれか1項に記載の可溶性ポリペプチド。
  201. 前記可溶性ポリペプチドが、配列番号40のアミノ酸配列に対して、次のシステイン置換対、すなわちP147C/P195C、P147C/S196C、L148C/P195C、L148C/S196C、L149C/P195C、S150C/S196C、S150C/P195C、S150C/T197C、S151C/S166C、Q152C/L164C、Q152C/S166C、K153C/L164C、M154C/W163C、M154C/L164C、A171C/Y110C、A172C/H66C、F173C/H66C、およびF173C/R85Cのうちの1つ以上(好ましくは1つ)を含む、請求項196〜200のいずれか1項に記載の可溶性ポリペプチド。
  202. 前記可溶性ポリペプチドが、配列番号40のアミノ酸配列に対して、次のアミノ酸領域、すなわちアミノ酸52〜69、82〜88、107〜113、144〜176、および192〜200のうちの1つ以上、および好ましくは少なくとも2つに少なくとも1つのシステイン置換または挿入を含む、請求項196記載の可溶性ポリペプチド。
  203. 前記TNFSFリガンドがLT-βである、請求項181記載の可溶性ポリペプチド。
  204. 前記可溶性ポリペプチドが、配列番号76のアミノ酸配列に対して、次のシステイン置換、すなわちH91C、Q110C、Y136C、L177C、L178C、L179C、E180C、G181C、A182C、E183C、T184C、W201C、Y202C、S204C、G209C、L210C、V211C、R233C、G234C、およびK235Cのうちの1つ以上を含む、請求項203記載の可溶性ポリペプチド。
  205. 前記可溶性ポリペプチドが、配列番号76のアミノ酸配列に対して、次のシステイン置換、すなわちH91C、Q110C、Y136C、L177C、L178C、L179C、E180C、G181C、A182C、E183C、T184C、W201C、Y202C、S204C、G209C、L210C、V211C、R233C、G234C、およびK235Cのうちの2つ以上を含む、請求項203または204記載の可溶性ポリペプチド。
  206. 前記可溶性ポリペプチドが、配列番号76のアミノ酸配列に対して、次のシステイン置換、すなわちH91C、Q110C、Y136C、L177C、L178C、L179C、E180C、G181C、A182C、E183C、T184C、W201C、Y202C、S204C、G209C、L210C、V211C、R233C、G234C、およびK235Cのうちの3つ以上を含む、請求項203〜205のいずれか1項に記載の可溶性ポリペプチド。
  207. 前記可溶性ポリペプチドが、配列番号76のアミノ酸配列に対して、次のシステイン置換、すなわちH91C、Q110C、Y136C、L177C、L178C、L179C、E180C、G181C、A182C、E183C、T184C、W201C、Y202C、S204C、G209C、L210C、V211C、R233C、G234C、およびK235Cのうちの4つ以上を含む、請求項203〜206のいずれか1項に記載の可溶性ポリペプチド。
  208. 前記可溶性ポリペプチドが、配列番号76のアミノ酸配列に対して、次のシステイン置換対、すなわちL177C/R233C、L177C/G234C、L178C/R233C、L178C/G234C、L179C/R233C、E180C/R233C、E180C/G234C、E180C/K235C、G181C/S204C、A182C/Y202C、A182C/S204C、E183C/Y202C、T184C/W201C、T184C/Y202C、G209C/Y136C、L210C/H91C、V211C/H91C、およびV211C/Q110Cのうちの1つ以上(好ましくは1つ)を含む、請求項203〜207のいずれか1項に記載の可溶性ポリペプチド。
  209. 前記可溶性ポリペプチドが、配列番号76のアミノ酸配列に対して、次のアミノ酸領域、すなわちアミノ酸77〜94、107〜113、133〜139、174〜187、199〜214、および230〜238のうちの1つ以上、および好ましくは少なくとも2つに少なくとも1つのシステイン置換または挿入を含む、請求項203記載の可溶性ポリペプチド。
  210. 前記TNFSFリガンドがOX40リガンド(OX40L)である、請求項181記載の可溶性ポリペプチド。
  211. 前記可溶性ポリペプチドが、配列番号112のアミノ酸配列に対して、次のシステイン置換、すなわちK63C、S104C、P125C、L126C、Q128C、L129C、K130C、S134C、M139C、V140C、A141C、N166C、およびG167Cのうちの1つ以上を含む、請求項210記載の可溶性ポリペプチド。
  212. 前記可溶性ポリペプチドが、配列番号112のアミノ酸配列に対して、次のシステイン置換、すなわちK63C、S104C、P125C、L126C、Q128C、L129C、K130C、S134C、M139C、V140C、A141C、N166C、およびG167Cのうちの2つ以上を含む、請求項210または211記載の可溶性ポリペプチド。
  213. 前記可溶性ポリペプチドが、配列番号112のアミノ酸配列に対して、次のシステイン置換、すなわちK63C、S104C、P125C、L126C、Q128C、L129C、K130C、S134C、M139C、V140C、A141C、N166C、およびG167Cのうちの3つ以上を含む、請求項210〜212のいずれか1項に記載の可溶性ポリペプチド。
  214. 前記可溶性ポリペプチドが、配列番号112のアミノ酸配列に対して、次のシステイン置換、すなわちK63C、S104C、P125C、L126C、Q128C、L129C、K130C、S134C、M139C、V140C、A141C、N166C、およびG167Cのうちの4つ以上を含む、請求項210〜213のいずれか1項に記載の可溶性ポリペプチド。
  215. 前記可溶性ポリペプチドが、配列番号112のアミノ酸配列に対して、次のシステイン置換対、すなわちP125C/N166C、L126C/N166C、Q128C/N166C、Q128C/G167C、L129C/S134C、K130C/S134C、M139C/S104C、V140C/K63C、およびA141C/K63Cのうちの1つ以上(好ましくは1つ)を含む、請求項210〜214のいずれか1項に記載の可溶性ポリペプチド。
  216. 前記可溶性ポリペプチドが、配列番号112のアミノ酸配列に対して、次のアミノ酸領域、すなわちアミノ酸49〜66、101〜107、122〜144、および163〜170のうちの1つ以上、および好ましくは少なくとも2つに少なくとも1つのシステイン置換または挿入を含む、請求項210記載の可溶性ポリペプチド。
  217. 前記TNFSFリガンドがCD40Lである、請求項181記載の可溶性ポリペプチド。
  218. 前記可溶性ポリペプチドが、配列番号132のアミノ酸配列に対して、次のシステイン置換、すなわちH125C、Y145C、Y172C、I204C、L205C、L206C、R207C、A208C、A209C、N210C、T211C、S213C、K216C、P217C、G219C、Q220C、S222C、G227C、V228C、F229C、T251C、G252C、およびF253Cのうちの1つ以上を含む、請求項217記載の可溶性ポリペプチド。
  219. 前記可溶性ポリペプチドが、配列番号132のアミノ酸配列に対して、次のシステイン置換、すなわちH125C、Y145C、Y172C、I204C、L205C、L206C、R207C、A208C、A209C、N210C、T211C、S213C、K216C、P217C、G219C、Q220C、S222C、G227C、V228C、F229C、T251C、G252C、およびF253Cのうちの2つ以上を含む、請求項217または218記載の可溶性ポリペプチド。
  220. 前記可溶性ポリペプチドが、配列番号132のアミノ酸配列に対して、次のシステイン置換、すなわちH125C、Y145C、Y172C、I204C、L205C、L206C、R207C、A208C、A209C、N210C、T211C、S213C、K216C、P217C、G219C、Q220C、S222C、G227C、V228C、F229C、T251C、G252C、およびF253Cのうちの3つ以上を含む、請求項217〜219のいずれか1項に記載の可溶性ポリペプチド。
  221. 前記可溶性ポリペプチドが、配列番号132のアミノ酸配列に対して、次のシステイン置換、すなわちH125C、Y145C、Y172C、I204C、L205C、L206C、R207C、A208C、A209C、N210C、T211C、S213C、K216C、P217C、G219C、Q220C、S222C、G227C、V228C、F229C、T251C、G252C、およびF253Cのうちの4つ以上を含む、請求項217〜220のいずれか1項に記載の可溶性ポリペプチド。
  222. 前記可溶性ポリペプチドが、配列番号132のアミノ酸配列に対して、次のシステイン置換対、すなわちI204C/T251C、I204C/G252C、L205C/T251C、L205C/G252C、L206C/T251C、R207C/T251C、R207C/G252C、R207C/F253C、A208C/S222C、A209C/Q220C、A209C/S222C、N210C/Q220C、T211C/G219C、T211C/Q220C、S213C/K216C、S213C/P217C、G227C/Y172C、V228C/H125C、F229C/H125C、およびF229C/Y145Cのうちの1つ以上(好ましくは1つ)を含む、請求項217〜221のいずれか1項に記載の可溶性ポリペプチド。
  223. 前記可溶性ポリペプチドが、配列番号132のアミノ酸配列に対して、次のアミノ酸領域、すなわちアミノ酸111〜128、142〜148、169〜175、201〜232、および248〜256のうちの1つ以上、および好ましくは少なくとも2つに少なくとも1つのシステイン置換または挿入を含む、請求項217記載の可溶性ポリペプチド。
  224. 前記TNFSFリガンドがFasLである、請求項181記載の可溶性ポリペプチド。
  225. 前記可溶性ポリペプチドが、配列番号167のアミノ酸配列に対して、次のシステイン置換、すなわちH148C、I168C、Y192C、V223C、M224C、M225C、E226C、G227C、K228C、M229C、M230C、W239C、A240C、S242C、A247C、V248C、F249C、E271C、S272C、およびQ273Cのうちの1つ以上を含む、請求項224記載の可溶性ポリペプチド。
  226. 前記可溶性ポリペプチドが、配列番号167のアミノ酸配列に対して、次のシステイン置換、すなわちH148C、I168C、Y192C、V223C、M224C、M225C、E226C、G227C、K228C、M229C、M230C、W239C、A240C、S242C、A247C、V248C、F249C、E271C、S272C、およびQ273Cのうちの2つ以上を含む、請求項224または225記載の可溶性ポリペプチド。
  227. 前記可溶性ポリペプチドが、配列番号167のアミノ酸配列に対して、次のシステイン置換、すなわちH148C、I168C、Y192C、V223C、M224C、M225C、E226C、G227C、K228C、M229C、M230C、W239C、A240C、S242C、A247C、V248C、F249C、E271C、S272C、およびQ273Cのうちの3つ以上を含む、請求項224〜226のいずれか1項に記載の可溶性ポリペプチド。
  228. 前記可溶性ポリペプチドが、配列番号167のアミノ酸配列に対して、次のシステイン置換、すなわちH148C、I168C、Y192C、V223C、M224C、M225C、E226C、G227C、K228C、M229C、M230C、W239C、A240C、S242C、A247C、V248C、F249C、E271C、S272C、およびQ273Cのうちの4つ以上を含む、請求項224〜227のいずれか1項に記載の可溶性ポリペプチド。
  229. 前記可溶性ポリペプチドが、配列番号167のアミノ酸配列に対して、次のシステイン置換対、すなわちV223C/E271C、V223C/S272C、M224C/E271C、M224C/S272C、M225C/E271C、E226C/E271C、E226C/S272C、E226C/Q273C、G227C/S242C、K228C/A240C、K228C/S242C、M229C/A240C、M230C/W239C、M230C/A240C、A247C/Y192C、V248C/H148C、F249C/H148C、およびF249C/I168Cのうちの1つ以上(好ましくは1つ)を含む、請求項224〜228のいずれか1項に記載の可溶性ポリペプチド。
  230. 前記可溶性ポリペプチドが、配列番号167のアミノ酸配列に対して、次のアミノ酸領域、すなわちアミノ酸134〜151、165〜171、189〜195、220〜252、および268〜276のうちの1つ以上、および好ましくは少なくとも2つに少なくとも1つのシステイン置換または挿入を含む、請求項224記載の可溶性ポリペプチド。
  231. 前記TNFSFリガンドがCD153である、請求項181記載の可溶性ポリペプチド。
  232. 前記可溶性ポリペプチドが、配列番号236のアミノ酸配列に対して、次のシステイン置換、すなわちY101C、I142C、C151S、A172C、L173C、V174C、T175C、V176C、E178C、S179C、V186C、Y187C、N189C、L194C、L195C、D196C、P220C、L221C、およびE222Cのうちの1つ以上を含む、請求項231記載の可溶性ポリペプチド。
  233. 前記可溶性ポリペプチドが、配列番号236のアミノ酸配列に対して、次のシステイン置換、すなわちY101C、I142C、C151S、A172C、L173C、V174C、T175C、V176C、E178C、S179C、V186C、Y187C、N189C、L194C、L195C、D196C、P220C、L221C、およびE222Cのうちの2つ以上を含む、請求項231または232記載の可溶性ポリペプチド。
  234. 前記可溶性ポリペプチドが、配列番号236のアミノ酸配列に対して、次のシステイン置換、すなわちY101C、I142C、C151S、A172C、L173C、V174C、T175C、V176C、E178C、S179C、V186C、Y187C、N189C、L194C、L195C、D196C、P220C、L221C、およびE222Cのうちの3つ以上を含む、請求項231〜233のいずれか1項に記載の可溶性ポリペプチド。
  235. 前記可溶性ポリペプチドが、配列番号236のアミノ酸配列に対して、次のシステイン置換、すなわちY101C、I142C、C151S、A172C、L173C、V174C、T175C、V176C、E178C、S179C、V186C、Y187C、N189C、L194C、L195C、D196C、P220C、L221C、およびE222Cのうちの4つ以上を含む、請求項231〜234のいずれか1項に記載の可溶性ポリペプチド。
  236. 前記可溶性ポリペプチドが、配列番号236のアミノ酸配列に対して、次のシステイン置換対、すなわちA172C/P220C、A172C/L221C、L173C/P220C、L173C/L221C、V174C/P220C、T175C/P220C、T175C/L221C、T175C/E222C、V176C/N189C、E178C/Y187C、S179C/V186C、S179C/Y187C、Y187C/C151S、N189C/C151S、L194C/I142C、L195C/Y101C、およびD196C/Y101Cのうちの1つ以上(好ましくは1つ)を含む、請求項231〜235のいずれか1項に記載の可溶性ポリペプチド。
  237. 前記可溶性ポリペプチドが、配列番号236のアミノ酸配列に対して、次のアミノ酸領域、すなわちアミノ酸86〜104、169〜199、および217〜225のうちの1つ以上、および好ましくは少なくとも2つに少なくとも1つのシステイン置換または挿入を含む、請求項231記載の可溶性ポリペプチド。
  238. 前記TNFSFリガンドが4-1BBリガンドである、請求項181記載の可溶性ポリペプチド。
  239. 前記可溶性ポリペプチドが、配列番号267のアミノ酸配列に対して、次のシステイン置換、すなわちQ94C、L115C、F144C、A178C、L179C、L181C、T182C、V183C、D184C、L185C、N194C、S195C、F197C、R202C、L203C、L204C、G231C、およびA232Cのうちの1つ以上を含む、請求項238記載の可溶性ポリペプチド。
  240. 前記可溶性ポリペプチドが、配列番号267のアミノ酸配列に対して、次のシステイン置換、すなわちQ94C、L115C、F144C、A178C、L179C、L181C、T182C、V183C、D184C、L185C、N194C、S195C、F197C、R202C、L203C、L204C、G231C、およびA232Cのうちの2つ以上を含む、請求項238または239記載の可溶性ポリペプチド。
  241. 前記可溶性ポリペプチドが、配列番号267のアミノ酸配列に対して、次のシステイン置換、すなわちQ94C、L115C、F144C、A178C、L179C、L181C、T182C、V183C、D184C、L185C、N194C、S195C、F197C、R202C、L203C、L204C、G231C、およびA232Cのうちの3つ以上を含む、請求項238〜240のいずれか1項に記載の可溶性ポリペプチド。
  242. 前記可溶性ポリペプチドが、配列番号267のアミノ酸配列に対して、次のシステイン置換、すなわちQ94C、L115C、F144C、A178C、L179C、L181C、T182C、V183C、D184C、L185C、N194C、S195C、F197C、R202C、L203C、L204C、G231C、およびA232Cのうちの4つ以上を含む、請求項238〜241のいずれか1項に記載の可溶性ポリペプチド。
  243. 前記可溶性ポリペプチドが、配列番号267のアミノ酸配列に対して、次のシステイン置換対、すなわちA178C/G231C、L179C/G231C、L181C/G231C、L181C/A232C、T182C/F197C、V183C/S195C、V183C/F197C、D184C/S195C、L185C/N194C、L185C/S195C、R202C/F144C、L203C/Q94C、L204C/Q94C、およびL204C/L115Cのうちの1つ以上(好ましくは1つ)を含む、請求項238〜242のいずれか1項に記載の可溶性ポリペプチド。
  244. 前記可溶性ポリペプチドが、配列番号267のアミノ酸配列に対して、次のアミノ酸領域、すなわちアミノ酸80〜97、112〜118、175〜207、および228〜235のうちの1つ以上、および好ましくは少なくとも2つに少なくとも1つのシステイン置換または挿入を含む、請求項238記載の可溶性ポリペプチド。
  245. 前記TNFSFリガンドがTRAILである、請求項181記載の可溶性ポリペプチド。
  246. 前記可溶性ポリペプチドが、配列番号297のアミノ酸配列に対して、次のシステイン置換、すなわちH125C、L147C、H161C、Y185C、L221C、L222C、M223C、K224C、S225C、A226C、R227C、N228C、C230S、G238C、L239C、S241C、G246C、I247C、H270C、E271C、およびA272Cのうちの1つ以上を含む、請求項245記載の可溶性ポリペプチド。
  247. 前記可溶性ポリペプチドが、配列番号297のアミノ酸配列に対して、次のシステイン置換、すなわちH125C、L147C、H161C、Y185C、L221C、L222C、M223C、K224C、S225C、A226C、R227C、N228C、C230S、G238C、L239C、S241C、G246C、I247C、H270C、E271C、およびA272Cのうちの2つ以上を含む、請求項245または246記載の可溶性ポリペプチド。
  248. 前記可溶性ポリペプチドが、配列番号297のアミノ酸配列に対して、次のシステイン置換、すなわちH125C、L147C、H161C、Y185C、L221C、L222C、M223C、K224C、S225C、A226C、R227C、N228C、C230S、G238C、L239C、S241C、G246C、I247C、H270C、E271C、およびA272Cのうちの3つ以上を含む、請求項245〜247のいずれか1項に記載の可溶性ポリペプチド。
  249. 前記可溶性ポリペプチドが、配列番号297のアミノ酸配列に対して、次のシステイン置換、すなわちH125C、L147C、H161C、Y185C、L221C、L222C、M223C、K224C、S225C、A226C、R227C、N228C、C230S、G238C、L239C、S241C、G246C、I247C、H270C、E271C、およびA272Cのうちの4つ以上を含む、請求項245〜248のいずれか1項に記載の可溶性ポリペプチド。
  250. 前記可溶性ポリペプチドが、配列番号297のアミノ酸配列に対して、次のシステイン置換対、すなわちL221C/H270C、L221C/E271C、L222C/H270C、L222C/E271C、M223C/H270C、K224C/H270C、K224C/E271C、K224C/A272C、S225C/S241C、A226C/L239C、A226C/S241C、R227C/L239C、N228C/G238C、N228C/L239C、G246C/Y185C、I247C/H125C、およびL147C/H161Cのうちの1つ以上(好ましくは1つ)を含む、請求項245〜249のいずれか1項に記載の可溶性ポリペプチド。
  251. 前記可溶性ポリペプチドが、配列番号297のアミノ酸配列に対して、次のアミノ酸領域、すなわちアミノ酸111〜128、144〜150、158〜164、182〜188、218〜250、および267〜275のうちの1つ以上、および好ましくは少なくとも2つに少なくとも1つのシステイン置換または挿入を含む、請求項245記載の可溶性ポリペプチド。
  252. 前記TNFSFリガンドがRANKLである、請求項181記載の可溶性ポリペプチド。
  253. 前記可溶性ポリペプチドが、配列番号333のアミノ酸配列に対して、次のシステイン置換、すなわちH167C、W193C、Y217C、T254C、L255C、M256C、K257C、G258C、G259C、S260C、W264C、G266C、H271C、F272C、S274C、G279C、F280C、F281C、Q303C、D304C、およびA305Cのうちの1つ以上を含む、請求項252記載の可溶性ポリペプチド。
  254. 前記可溶性ポリペプチドが、配列番号333のアミノ酸配列に対して、次のシステイン置換、すなわちH167C、W193C、Y217C、T254C、L255C、M256C、K257C、G258C、G259C、S260C、W264C、G266C、H271C、F272C、S274C、G279C、F280C、F281C、Q303C、D304C、およびA305Cのうちの2つ以上を含む、請求項252または253記載の可溶性ポリペプチド。
  255. 前記可溶性ポリペプチドが、配列番号333のアミノ酸配列に対して、次のシステイン置換、すなわちH167C、W193C、Y217C、T254C、L255C、M256C、K257C、G258C、G259C、S260C、W264C、G266C、H271C、F272C、S274C、G279C、F280C、F281C、Q303C、D304C、およびA305Cのうちの3つ以上を含む、請求項252〜254のいずれか1項に記載の可溶性ポリペプチド。
  256. 前記可溶性ポリペプチドが、配列番号333のアミノ酸配列に対して、次のシステイン置換、すなわちH167C、W193C、Y217C、T254C、L255C、M256C、K257C、G258C、G259C、S260C、W264C、G266C、H271C、F272C、S274C、G279C、F280C、F281C、Q303C、D304C、およびA305Cのうちの4つ以上を含む、請求項252〜255のいずれか1項に記載の可溶性ポリペプチド。
  257. 前記可溶性ポリペプチドが、配列番号333のアミノ酸配列に対して、次のシステイン置換対、すなわちT254C/Q303C、T254C/D304C、L255C/Q303C、L255C/D304C、M256C/Q303C、K257C/Q303C、K257C/D304C、K257C/A305C、G258C/S274C、G259C/F272C、G259C/S274C、S260C/H271C、S260C/F272C、W264C/G266C、G279C/Y217C、F280C/H167C、F281C/H167C、およびF281C/W193Cのうちの1つ以上(好ましくは1つ)を含む、請求項252〜256のいずれか1項に記載の可溶性ポリペプチド。
  258. 前記可溶性ポリペプチドが、配列番号333のアミノ酸配列に対して、次のアミノ酸領域、すなわちアミノ酸153〜170、190〜196、214〜220、251〜284、および300〜308のうちの1つ以上、および好ましくは少なくとも2つに少なくとも1つのシステイン置換または挿入を含む、請求項252記載の可溶性ポリペプチド。
  259. 前記TNFSFリガンドがTWEAKである、請求項181記載の可溶性ポリペプチド。
  260. 前記可溶性ポリペプチドが、配列番号369のアミノ酸配列に対して、次のシステイン置換、すなわちY164C、L187C、A188C、L189C、R190C、L192C、E193C、E194C、Q206C、L207C、L209C、R208C、S213C、G214C、P238C、F239C、およびL240Cのうちの1つ以上を含む、請求項259記載の可溶性ポリペプチド。
  261. 前記可溶性ポリペプチドが、配列番号369のアミノ酸配列に対して、次のシステイン置換、すなわちY164C、L187C、A188C、L189C、R190C、L192C、E193C、E194C、Q206C、L207C、L209C、R208C、S213C、G214C、P238C、F239C、およびL240Cのうちの2つ以上を含む、請求項259または260記載の可溶性ポリペプチド。
  262. 前記可溶性ポリペプチドが、配列番号369のアミノ酸配列に対して、次のシステイン置換、すなわちY164C、L187C、A188C、L189C、R190C、L192C、E193C、E194C、Q206C、L207C、L209C、R208C、S213C、G214C、P238C、F239C、およびL240Cのうちの3つ以上を含む、請求項259〜261のいずれか1項に記載の可溶性ポリペプチド。
  263. 前記可溶性ポリペプチドが、配列番号369のアミノ酸配列に対して、次のシステイン置換、すなわちY164C、L187C、A188C、L189C、R190C、L192C、E193C、E194C、Q206C、L207C、L209C、R208C、S213C、G214C、P238C、F239C、およびL240Cのうちの4つ以上を含む、請求項259〜262のいずれか1項に記載の可溶性ポリペプチド。
  264. 前記可溶性ポリペプチドが、配列番号369のアミノ酸配列に対して、次のシステイン置換対、すなわちY164C/S213C、Y164C/G214C、L187C/P238C、L187C/F239C、A188C/P238C、A188C/F239C、L189C/P238C、R190C/P238C、R190C/F239C、R190C/L240C、L192C/L207C、L192C/L209C、E193C/R208C、E194C/Q206C、およびE194C/L207Cのうちの1つ以上(好ましくは1つ)を含む、請求項259〜263のいずれか1項に記載の可溶性ポリペプチド。
  265. 前記可溶性ポリペプチドが、配列番号369のアミノ酸配列に対して、次のアミノ酸領域、すなわちアミノ酸96〜105、161〜167、184〜197、204〜217、および235〜243のうちの1つ以上、および好ましくは少なくとも2つに少なくとも1つのシステイン置換または挿入を含む、請求項259記載の可溶性ポリペプチド。
  266. 前記TNFSFリガンドがAPRILである、請求項181記載の可溶性ポリペプチド。
  267. 前記可溶性ポリペプチドが、配列番号398のアミノ酸配列に対して、次のシステイン置換、すなわちH119C、F127C、A141C、Y166C、T192C、L193C、F194C、R195C、I197C、R198C、S199C、A207C、Y208C、S210C、C211S、G215C、V216C、F217C、P240C、H241C、およびG242Cのうちの1つ以上を含む、請求項266記載の可溶性ポリペプチド。
  268. 前記可溶性ポリペプチドが、配列番号398のアミノ酸配列に対して、次のシステイン置換、すなわちH119C、F127C、A141C、Y166C、T192C、L193C、F194C、R195C、I197C、R198C、S199C、A207C、Y208C、S210C、C211S、G215C、V216C、F217C、P240C、H241C、およびG242Cのうちの2つ以上を含む、請求項266または267記載の可溶性ポリペプチド。
  269. 前記可溶性ポリペプチドが、配列番号398のアミノ酸配列に対して、次のシステイン置換、すなわちH119C、F127C、A141C、Y166C、T192C、L193C、F194C、R195C、I197C、R198C、S199C、A207C、Y208C、S210C、C211S、G215C、V216C、F217C、P240C、H241C、およびG242Cのうちの3つ以上を含む、請求項266〜268のいずれか1項に記載の可溶性ポリペプチド。
  270. 前記可溶性ポリペプチドが、配列番号398のアミノ酸配列に対して、次のシステイン置換、すなわちH119C、F127C、A141C、Y166C、T192C、L193C、F194C、R195C、I197C、R198C、S199C、A207C、Y208C、S210C、C211S、G215C、V216C、F217C、P240C、H241C、およびG242Cのうちの4つ以上を含む、請求項266〜269のいずれか1項に記載の可溶性ポリペプチド。
  271. 前記可溶性ポリペプチドが、配列番号398のアミノ酸配列に対して、次のシステイン置換対、すなわちT192C/P240C、T192C/H241C、L193C/P240C、L193C/H241C、F194C/P240C、R195C/P240C、R195C/H241C、R195C/G242C、I197C/Y208C、I197C/S210C、R198C/Y208C、S199C/A207C、S199C/Y208C、S210C/C211S、G215C/Y166C、V216C/H119C、F217C/H119C、およびF127C/A141Cのうちの1つ以上(好ましくは1つ)を含む、請求項266〜270のいずれか1項に記載の可溶性ポリペプチド。
  272. 前記可溶性ポリペプチドが、配列番号398のアミノ酸配列に対して、次のアミノ酸領域、すなわちアミノ酸105〜130、138〜144、163〜169、189〜220、および237〜245のうちの1つ以上、および好ましくは少なくとも2つに少なくとも1つのシステイン置換または挿入を含む、請求項266記載の可溶性ポリペプチド。
  273. 前記TNFSFリガンドがBLysである、請求項181記載の可溶性ポリペプチド。
  274. 前記可溶性ポリペプチドが、配列番号435のアミノ酸配列に対して、次のシステイン置換、すなわちQ148C、Y196C、T228C、L229C、F230C、R231C、I233C、Q234C、N235C、P241C、N242C、S244C、G249C、I250C、A251C、G274C、D275C、およびV276Cのうちの1つ以上を含む、請求項273記載の可溶性ポリペプチド。
  275. 前記可溶性ポリペプチドが、配列番号435のアミノ酸配列に対して、次のシステイン置換、すなわちQ148C、Y196C、T228C、L229C、F230C、R231C、I233C、Q234C、N235C、P241C、N242C、S244C、G249C、I250C、A251C、G274C、D275C、およびV276Cのうちの2つ以上を含む、請求項273または274記載の可溶性ポリペプチド。
  276. 前記可溶性ポリペプチドが、配列番号435のアミノ酸配列に対して、次のシステイン置換、すなわちQ148C、Y196C、T228C、L229C、F230C、R231C、I233C、Q234C、N235C、P241C、N242C、S244C、G249C、I250C、A251C、G274C、D275C、およびV276Cのうちの3つ以上を含む、請求項273〜275のいずれか1項に記載の可溶性ポリペプチド。
  277. 前記可溶性ポリペプチドが、配列番号435のアミノ酸配列に対して、次のシステイン置換、すなわちQ148C、Y196C、T228C、L229C、F230C、R231C、I233C、Q234C、N235C、P241C、N242C、S244C、G249C、I250C、A251C、G274C、D275C、およびV276Cのうちの4つ以上を含む、請求項273〜276のいずれか1項に記載の可溶性ポリペプチド。
  278. 前記可溶性ポリペプチドが、配列番号435のアミノ酸配列に対して、次のシステイン置換対、すなわちT228C/G274C、T228C/D275C、L229C/G274C、L229C/D275C、F230C/G274C、R231C/G274C、R231C/D275C、R231C/V276C、I233C/N242C、I233C/S244C、Q234C/N242C、N235C/P241C、N235C/N242C、G249C/Y196C、I250C/Q148C、およびA251C/Q148Cのうちの1つ以上(好ましくは1つ)を含む、請求項273〜277のいずれか1項に記載の可溶性ポリペプチド。
  279. 前記可溶性ポリペプチドが、配列番号435のアミノ酸配列に対して、次のアミノ酸領域、すなわちアミノ酸134〜151、225〜254、および271〜279のうちの1つ以上、および好ましくは少なくとも2つに少なくとも1つのシステイン置換または挿入を含む、請求項273記載の可溶性ポリペプチド。
  280. 前記TNFSFリガンドがLIGHTである、請求項181記載の可溶性ポリペプチド。
  281. 前記可溶性ポリペプチドが、配列番号467のアミノ酸配列に対して、次のシステイン置換、すなわちH97C、L120C、Y144C、E178C、L179C、L180C、V181C、S182C、Q183C、Q184C、S185C、G188C、T191C、W197C、W198C、S200C、G205C、V206C、V207C、G230C、T231C、およびR232Cのうちの1つ以上を含む、請求項280記載の可溶性ポリペプチド。
  282. 前記可溶性ポリペプチドが、配列番号467のアミノ酸配列に対して、次のシステイン置換、すなわちH97C、L120C、Y144C、E178C、L179C、L180C、V181C、S182C、Q183C、Q184C、S185C、G188C、T191C、W197C、W198C、S200C、G205C、V206C、V207C、G230C、T231C、およびR232Cのうちの2つ以上を含む、請求項280または281記載の可溶性ポリペプチド。
  283. 前記可溶性ポリペプチドが、配列番号467のアミノ酸配列に対して、次のシステイン置換、すなわちH97C、L120C、Y144C、E178C、L179C、L180C、V181C、S182C、Q183C、Q184C、S185C、G188C、T191C、W197C、W198C、S200C、G205C、V206C、V207C、G230C、T231C、およびR232Cのうちの3つ以上を含む、請求項280〜282のいずれか1項に記載の可溶性ポリペプチド。
  284. 前記可溶性ポリペプチドが、配列番号467のアミノ酸配列に対して、次のシステイン置換、すなわちH97C、L120C、Y144C、E178C、L179C、L180C、V181C、S182C、Q183C、Q184C、S185C、G188C、T191C、W197C、W198C、S200C、G205C、V206C、V207C、G230C、T231C、およびR232Cのうちの4つ以上を含む、請求項280〜283のいずれか1項に記載の可溶性ポリペプチド。
  285. 前記可溶性ポリペプチドが、配列番号467のアミノ酸配列に対して、次のシステイン置換対、すなわちE178C/G230C、E178C/T231C、L179C/G230C、L179C/T231C、L180C/G230C、V181C/G230C、V181C/T231C、V181C/R232C、S182C/S200C、Q183C/W198C、Q183C/S200C、Q184C/W198C、S185C/W197C、S185C/W198C、G188C/T191C、G205C/Y144C、V206C/H97C、V207C/H97C、およびV207C/L120Cのうちの1つ以上(好ましくは1つ)を含む、請求項280〜284のいずれか1項に記載の可溶性ポリペプチド。
  286. 前記可溶性ポリペプチドが、配列番号467のアミノ酸配列に対して、次のアミノ酸領域、すなわちアミノ酸83〜100、117〜123、175〜210、および227〜235のうちの1つ以上、および好ましくは少なくとも2つに少なくとも1つのシステイン置換または挿入を含む、請求項280記載の可溶性ポリペプチド。
  287. 前記TNFSFリガンドがTL1である、請求項181記載の可溶性ポリペプチド。
  288. 前記可溶性ポリペプチドが、配列番号506のアミノ酸配列に対して、次のシステイン置換、すなわちH98C、L125C、Y150C、Q193C、L194C、L195C、M196C、G197C、T198C、K199C、S200C、W208C、F209C、P211C、A216C、M217C、F218C、E241C、D242C、およびK243Cのうちの1つ以上を含む、請求項287記載の可溶性ポリペプチド。
  289. 前記可溶性ポリペプチドが、配列番号506のアミノ酸配列に対して、次のシステイン置換、すなわちH98C、L125C、Y150C、Q193C、L194C、L195C、M196C、G197C、T198C、K199C、S200C、W208C、F209C、P211C、A216C、M217C、F218C、E241C、D242C、およびK243Cのうちの2つ以上を含む、請求項287または288記載の可溶性ポリペプチド。
  290. 前記可溶性ポリペプチドが、配列番号506のアミノ酸配列に対して、次のシステイン置換、すなわちH98C、L125C、Y150C、Q193C、L194C、L195C、M196C、G197C、T198C、K199C、S200C、W208C、F209C、P211C、A216C、M217C、F218C、E241C、D242C、およびK243Cのうちの3つ以上を含む、請求項287〜289のいずれか1項に記載の可溶性ポリペプチド。
  291. 前記可溶性ポリペプチドが、配列番号506のアミノ酸配列に対して、次のシステイン置換、すなわちH98C、L125C、Y150C、Q193C、L194C、L195C、M196C、G197C、T198C、K199C、S200C、W208C、F209C、P211C、A216C、M217C、F218C、E241C、D242C、およびK243Cのうちの4つ以上を含む、請求項287〜290のいずれか1項に記載の可溶性ポリペプチド。
  292. 前記可溶性ポリペプチドが、配列番号506のアミノ酸配列に対して、次のシステイン置換対、すなわちQ193C/E241C、Q193C/D242C、L194C/E241C、L194C/D242C、L195C/E241C、M196C/E241C、M196C/D242C、M196C/K243C、G197C/P211C、T198C/F209C、T198C/P211C、K199C/F209C、S200C/W208C、S200C/F209C、A216C/Y150C、M217C/H98C、F218C/H98C、およびF218C/L125Cのうちの1つ以上(好ましくは1つ)を含む、請求項287〜292のいずれか1項に記載の可溶性ポリペプチド。
  293. 前記可溶性ポリペプチドが、配列番号506のアミノ酸配列に対して、次のアミノ酸領域、すなわちアミノ酸84〜101、122〜128、190〜221、および238〜246のうちの1つ以上、および好ましくは少なくとも2つに少なくとも1つのシステイン置換または挿入を含む、請求項287記載の可溶性ポリペプチド。
  294. 前記TNFSFリガンドがGITRLである、請求項181記載の可溶性ポリペプチド。
  295. 前記可溶性ポリペプチドが、配列番号542のアミノ酸配列に対して、次のシステイン置換、すなわちK83C、Y120C、T148C、L149C、N184C、T150C、N151C、K152C、S153C、I155C、G160C、T161C、およびY162Cのうちの1つ以上を含む、請求項294記載の可溶性ポリペプチド。
  296. 前記可溶性ポリペプチドが、配列番号542のアミノ酸配列に対して、次のシステイン置換、すなわちK83C、Y120C、T148C、L149C、N184C、T150C、N151C、K152C、S153C、I155C、G160C、T161C、およびY162Cのうちの2つ以上を含む、請求項294または295記載の可溶性ポリペプチド。
  297. 前記可溶性ポリペプチドが、配列番号542のアミノ酸配列に対して、次のシステイン置換、すなわちK83C、Y120C、T148C、L149C、N184C、T150C、N151C、K152C、S153C、I155C、G160C、T161C、およびY162Cのうちの3つ以上を含む、請求項294〜296のいずれか1項に記載の可溶性ポリペプチド。
  298. 前記可溶性ポリペプチドが、配列番号542のアミノ酸配列に対して、次のシステイン置換、すなわちK83C、Y120C、T148C、L149C、N184C、T150C、N151C、K152C、S153C、I155C、G160C、T161C、およびY162Cのうちの4つ以上を含む、請求項294〜297のいずれか1項に記載の可溶性ポリペプチド。
  299. 前記可溶性ポリペプチドが、配列番号542のアミノ酸配列に対して、次のシステイン置換対、すなわちT148C/N184C、L149C/I155C、T150C/S153C、T150C/I155C、N151C/S153C、K152C/S153C、G160C/Y120C、T161C/K83C、およびY162C/K83Cのうちの1つ以上(好ましくは1つ)を含む、請求項294〜298のいずれか1項に記載の可溶性ポリペプチド。
  300. 前記可溶性ポリペプチドが、配列番号542のアミノ酸配列に対して、次のアミノ酸領域、すなわちアミノ酸69〜86、117〜123、145〜165、181〜187、および269〜277のうちの1つ以上、および好ましくは少なくとも2つに少なくとも1つのシステイン置換または挿入を含む、請求項294記載の可溶性ポリペプチド。
  301. 前記TNFSFリガンドがCD70である、請求項181記載の可溶性ポリペプチド。
  302. 前記可溶性ポリペプチドが、配列番号203のアミノ酸配列に対して、次のシステイン置換、すなわちR83C、H107C、T127C、L128C、A129C、V130C、G131C、I132C、S134C、S137C、S139C、Q149C、G150C、C151S、T152C、R157C、T159C、T181C、D182C、およびE183Cのうちの1つ以上を含む、請求項301記載の可溶性ポリペプチド。
  303. 前記可溶性ポリペプチドが、配列番号203のアミノ酸配列に対して、次のシステイン置換、すなわちR83C、H107C、T127C、L128C、A129C、V130C、G131C、I132C、S134C、S137C、S139C、Q149C、G150C、C151S、T152C、R157C、T159C、T181C、D182C、およびE183Cのうちの2つ以上を含む、請求項301または302記載の可溶性ポリペプチド。
  304. 前記可溶性ポリペプチドが、配列番号203のアミノ酸配列に対して、次のシステイン置換、すなわちR83C、H107C、T127C、L128C、A129C、V130C、G131C、I132C、S134C、S137C、S139C、Q149C、G150C、C151S、T152C、R157C、T159C、T181C、D182C、およびE183Cのうちの3つ以上を含む、請求項301〜303のいずれか1項に記載の可溶性ポリペプチド。
  305. 前記可溶性ポリペプチドが、配列番号203のアミノ酸配列に対して、次のシステイン置換、すなわちR83C、H107C、T127C、L128C、A129C、V130C、G131C、I132C、S134C、S137C、S139C、Q149C、G150C、C151S、T152C、R157C、T159C、T181C、D182C、およびE183Cのうちの4つ以上を含む、請求項301〜304のいずれか1項に記載の可溶性ポリペプチド。
  306. 前記可溶性ポリペプチドが、配列番号203のアミノ酸配列に対して、次のシステイン置換対、すなわちT127C/T181C、T127C/D182C、L128C/T181C、L128C/D182C、A129C/T181C、V130C/T181C、V130C/D182C、V130C/E183C、G131C/T152C、I132C/G150C、I132C/T152C、S134C/Q149C、S134C/G150C、S137C/S139、G150C/C151S、R157C/H107C、およびT159C/R83Cのうちの1つ以上(好ましくは1つ)を含む、請求項301〜305のいずれか1項に記載の可溶性ポリペプチド。
  307. 前記可溶性ポリペプチドが、配列番号203のアミノ酸配列に対して、次のアミノ酸領域、すなわちアミノ酸69〜86、104〜110、124〜162、および178〜186のうちの1つ以上、および好ましくは少なくとも2つに少なくとも1つのシステイン置換または挿入を含む、請求項301記載の可溶性ポリペプチド。
  308. 前記TNFSFリガンドがEDA(例えば、EDA-A1およびEDA-A2)である、請求項181記載の可溶性ポリペプチド。
  309. 前記可溶性ポリペプチドが、配列番号562または590のアミノ酸配列に対して、次のシステイン置換、すなわちV250C、H252C、T278C、Y304C、P328C、F329C、L330C、Q331C、T333C、R334C、S335C、N342C、Y343C、T345C、G350C、V351C、H376C、およびT377Cのうちの1つ以上を含む、請求項308記載の可溶性ポリペプチド。
  310. 前記可溶性ポリペプチドが、配列番号562または590のアミノ酸配列に対して、次のシステイン置換、すなわちV250C、H252C、T278C、Y304C、P328C、F329C、L330C、Q331C、T333C、R334C、S335C、N342C、Y343C、T345C、G350C、V351C、H376C、およびT377Cのうちの2つ以上を含む、請求項308または309記載の可溶性ポリペプチド。
  311. 前記可溶性ポリペプチドが、配列番号562または590のアミノ酸配列に対して、次のシステイン置換、すなわちV250C、H252C、T278C、Y304C、P328C、F329C、L330C、Q331C、T333C、R334C、S335C、N342C、Y343C、T345C、G350C、V351C、H376C、およびT377Cのうちの3つ以上を含む、請求項308〜310のいずれか1項に記載の可溶性ポリペプチド。
  312. 前記可溶性ポリペプチドが、配列番号562または590のアミノ酸配列に対して、次のシステイン置換、すなわちV250C、H252C、T278C、Y304C、P328C、F329C、L330C、Q331C、T333C、R334C、S335C、N342C、Y343C、T345C、G350C、V351C、H376C、およびT377Cのうちの4つ以上を含む、請求項308〜311のいずれか1項に記載の可溶性ポリペプチド。
  313. 前記可溶性ポリペプチドが、配列番号562または590のアミノ酸配列に対して、次のシステイン置換対、すなわちP328C/H376C 577、F329C/H376C、L330C/H376C、L330C/T377C、Q331C/H376C、Q331C/T377C、T333C/Y343C、T333C/T345C、R334C/Y343C、S335C/N342C、S335C/Y343C、G350C/Y304C、V351C/V250C、およびV351C/H252Cのうちの1つ以上(好ましくは1つ)を含む、請求項308〜312のいずれか1項に記載の可溶性ポリペプチド。
  314. 前記可溶性ポリペプチドが、配列番号562または590のアミノ酸配列に対して、次のアミノ酸領域、すなわちアミノ酸238〜255、275〜281、301〜307、325〜354、および373〜380のうちの1つ以上、および好ましくは少なくとも2つに少なくとも1つのシステイン置換または挿入を含む、請求項308記載の可溶性ポリペプチド。
  315. 前記TNF様リガンドがアディポネクチンである、請求項181記載の可溶性ポリペプチド。
  316. 前記可溶性ポリペプチドが、配列番号688のアミノ酸配列に対して、次のシステイン置換、すなわちS116C、A161C、A181C、M182C、L183C、F184C、T185C、Y186C、D187C、Q188C、N193C、V194C、Q196C、V201C、L202C、D229C、N230C、およびD231Cのうちの1つ以上を含む、請求項315記載の可溶性ポリペプチド。
  317. 前記可溶性ポリペプチドが、配列番号688のアミノ酸配列に対して、次のシステイン置換、すなわちS116C、A161C、A181C、M182C、L183C、F184C、T185C、Y186C、D187C、Q188C、N193C、V194C、Q196C、V201C、L202C、D229C、N230C、およびD231Cのうちの2つ以上を含む、請求項315または316記載の可溶性ポリペプチド。
  318. 前記可溶性ポリペプチドが、配列番号688のアミノ酸配列に対して、次のシステイン置換、すなわちS116C、A161C、A181C、M182C、L183C、F184C、T185C、Y186C、D187C、Q188C、N193C、V194C、Q196C、V201C、L202C、D229C、N230C、およびD231Cのうちの3つ以上を含む、請求項315〜317のいずれか1項に記載の可溶性ポリペプチド。
  319. 前記可溶性ポリペプチドが、配列番号688のアミノ酸配列に対して、次のシステイン置換、すなわちS116C、A161C、A181C、M182C、L183C、F184C、T185C、Y186C、D187C、Q188C、N193C、V194C、Q196C、V201C、L202C、D229C、N230C、およびD231Cのうちの4つ以上を含む、請求項315〜318のいずれか1項に記載の可溶性ポリペプチド。
  320. 前記可溶性ポリペプチドが、配列番号688のアミノ酸配列に対して、次のシステイン置換対、すなわちA181C/D229C、A181C/N230C、M182C/D229C、M182C/N230C、L183C/D229C、F184C/D229C、F184C/N230C、F184C/D231C、T185C/Q196C、Y186C/V194C、Y186C/Q196C、D187C/V194C、Q188C/N193C、Q188C/V194C、V201C/A161C、およびL202C/S116Cのうちの1つ以上(好ましくは1つ)を含む、請求項315〜319のいずれか1項に記載の可溶性ポリペプチド。
  321. 前記可溶性ポリペプチドが、配列番号688のアミノ酸配列に対して、次のアミノ酸領域、すなわちアミノ酸103〜119、158〜164、178〜205、および226〜234のうちの1つ以上、および好ましくは少なくとも2つに少なくとも1つのシステイン置換または挿入を含む、請求項315記載の可溶性ポリペプチド。
  322. 前記可溶性ポリペプチドが配列番号1〜735のいずれか1つと少なくとも50％の配列同一性を有し、好ましくは前記可溶性ポリペプチドが少なくとも55％、60％、65％、70％、75％、80％、85％、90％、95％、99％、または100％の配列同一性を有する、請求項1〜6および181〜321のいずれか1項に記載の可溶性ポリペプチド。
  323. 前記可溶性ポリペプチドがホモ多量体を形成するかまたは形成可能であり、具体的には前記可溶性ポリペプチドがホモ二量体またはホモ三量体を形成するかまたは形成可能であり、具体的には前記可溶性ポリペプチドがホモ三量体を形成するかまたは形成可能である、請求項1〜6および181〜322のいずれか1項に記載の可溶性ポリペプチド。
  324. 請求項1〜6および181〜323のいずれか1項に記載の可溶性ポリペプチドをコードする核酸分子。
  325. 請求項1〜6および181〜323のいずれか1項に記載の可溶性ポリペプチドの治療上有効な量を含む医薬組成物であって、好ましくはここで該組成物が請求項182〜195のいずれか1項に記載の可溶性ポリペプチドを含む、上記医薬組成物。
  326. 請求項1〜6および181〜323のいずれか1項に記載の可溶性ポリペプチドをコードする核酸分子を含む医薬組成物であって、好ましくはここで該組成物が請求項182〜195のいずれか1項に記載の可溶性ポリペプチドをコードする核酸分子を含む、上記医薬組成物。
  327. 前記組成物が1つ以上の製薬上許容される担体または賦形剤を含む、請求項325または326記載の医薬組成物。
  328. 請求項325〜327のいずれか1項に記載の医薬組成物を、その必要がある被験体に投与することを含む、医学療法の方法。
  329. 前記被験体が自己免疫疾患を有する、請求項328記載の方法。
  330. 前記自己免疫疾患が、円形脱毛症、強直性脊椎炎、抗リン脂質抗体症候群、アジソン病、溶血性貧血、自己免疫性肝炎、肝炎、ベーチェット病、水疱性類天疱瘡、心筋症、セリアックスプルー皮膚炎、慢性疲労免疫不全症候群(CFIDS)、慢性炎症性脱髄性多発ニューロパチー、チャーグ・ストラウス症候群、瘢痕性類天疱瘡、限局性強皮症(クレスト症候群)、寒冷凝集素症、クローン病、円板状ループス、本態性混合性クリオグロブリン血症、繊維筋痛症-繊維筋炎、グレーヴス病、ギラン・バレー症候群、橋本甲状腺炎、甲状腺機能低下症、炎症性腸疾患、自己免疫性リンパ増殖症候群(ALPS)、特発性肺線維症、特発性血小板減少性紫斑病(ITP)、IgA腎症、インスリン依存性糖尿病、若年性関節炎、扁平苔癬、狼瘡、メニエール病、混合性結合組織病、多発性硬化症、重症筋無力症、尋常性天疱瘡、悪性貧血、結節性多発動脈炎、多発性軟骨炎、多腺性症候群、リウマチ性多発筋痛、多発性筋炎、皮膚筋炎、原発性無ガンマグロブリン血症、原発性胆汁性肝硬変、乾癬、レイノー現象、ライター症候群、リウマチ熱、関節リウマチ、サルコイドーシス、硬皮症、シェーグレン症候群、全身強直症候群、高安動脈炎、側頭動脈炎／巨細胞動脈炎、潰瘍性大腸炎、ブドウ膜炎、脈管炎、白斑、およびウェゲナー肉芽腫、およびインスリン依存性糖尿病から選択され、好ましくは前記自己免疫疾患がインスリン依存性糖尿病、関節リウマチ、シェーグレン症候群、多発性硬化症、およびクローン病である、請求項329記載の方法。
  331. 前記自己免疫疾患がインスリン依存性糖尿病である、請求項329または330記載の方法。
  332. 前記方法が、請求項182〜195のいずれか1項に記載の可溶性ポリペプチドを投与することを含む、請求項329〜331のいずれか1項に記載の方法。
  333. 前記被験体が組織または臓器の修復または再生を必要としている、請求項328記載の方法。
  334. 前記の組織または臓器が、膵臓、唾液腺、下垂体、腎臓、心臓、肺、造血器系、脳神経、心臓、大動脈を含む血管、嗅腺、耳、神経、頭部の構成物、眼、胸腺、舌、骨、肝臓、小腸、大腸、消化管、肺、脳、皮膚、末梢神経系、中枢神経系、脊髄、乳房、胚構成物、胚、または精巣である、請求項333記載の方法。
  335. 前記被験体が癌を有する、請求項328記載の方法。
  336. 前記癌が固形腫瘍癌または造血器癌である、請求項335記載の方法。
  337. 前記癌が、膀胱癌、膵臓癌、子宮頸癌、肺癌、肝臓癌、卵巣癌、結腸癌、胃癌、ウイルス誘発癌、神経芽腫、乳癌、前立腺癌、腎癌、白血病、肉腫、癌腫、非小細胞肺癌、非ホジキンリンパ腫、急性骨髄性白血病(AML)、慢性リンパ球性白血病(CLL)、B細胞性慢性リンパ球性白血病(B-CLL)、多発性骨髄腫(MM)、赤白血病、腎細胞癌、軟部組織肉腫、黒色腫、星状細胞腫、乏突起星細胞腫、骨の癌、脳の癌、消化管癌、噴門癌、子宮癌、頭頚部癌、胆嚢癌、喉頭癌、口唇および口腔の癌、眼の癌、大腸癌、精巣癌、咽頭癌、急性リンパ芽球性白血病(ALL)、慢性骨髄性白血病(CML)、副腎皮質癌、AIDS関連リンパ腫、原発性CNSリンパ腫、肛門癌、虫垂癌、非定型奇形腫様／横紋筋肉腫様腫瘍、基底細胞癌、胆管癌、肝外癌、ユーイング肉腫ファミリー、骨肉腫および悪性線維性組織球腫、中枢神経系胚芽腫、中枢神経系胚細胞腫瘍、頭蓋咽頭腫、上衣腫、気管支腫瘍、バーキットリンパ腫、カルチノイド腫瘍、原発性リンパ腫、脊索腫、慢性骨髄増殖性腫瘍、肝外非浸潤性乳管癌(DCIS)、子宮内膜癌、食道癌、鼻腔神経芽細胞腫、頭蓋外胚細胞腫瘍、性腺外胚細胞腫瘍、卵管癌、骨の線維性組織球腫、消化管カルチノイド腫瘍、消化管間質腫瘍(GIST)、精巣性胚細胞腫瘍、妊娠性絨毛性疾患、神経膠腫、小児脳幹神経膠腫、毛髪様細胞白血病、肝細胞癌、ランゲルハンス細胞組織球症、ホジキンリンパ腫、下咽頭癌、膵島細胞腫瘍、膵神経内分泌腫瘍、ウィルムス腫瘍および他の小児腎腫瘍、ランゲルハンス細胞組織球症、小細胞肺癌、皮膚T細胞性リンパ腫、眼内黒色腫、メルケル細胞癌、中皮腫、転移性扁平上皮性頸部癌、正中腺管癌、多発性内分泌腫瘍症候群、骨髄異形成症候群、鼻腔および副鼻腔の癌、鼻咽腔癌、上皮性卵巣癌、胚細胞性卵巣癌、低悪性度の卵巣癌、乳頭腫症、傍神経節腫、副甲状腺癌、陰茎癌、咽頭癌、褐色細胞腫、下垂体腫瘍、胸膜肺芽腫、原発性腹膜癌、直腸癌、網膜芽細胞腫、横紋筋肉腫、唾液腺癌、カポジ肉腫、セザリー症候群、小腸癌、胸腺腫および胸腺癌、甲状腺癌、腎盂および尿管の移行上皮癌、尿道癌、子宮内膜子宮癌、子宮肉腫、膣癌、外陰癌、ならびにワルデンシュトレーム・マクログロブリン血症から選択される、請求項335記載の方法。
  338. 前記方法が、請求項245〜251のいずれか1項に記載の可溶性ポリペプチドを投与することを含む、請求項335〜337のいずれか1項に記載の方法。
  339. 前記方法が、1つ以上の化学療法剤、免疫療法剤、または放射線をさらに含む、請求項335記載の方法。
  340. 前記免疫療法剤が、抗TNF受容体スーパーファミリーアゴニスト抗体、抗TNF受容体スーパーファミリーアンタゴニスト抗体、抗CTLA-4剤、抗PD-1剤、抗PD-L1剤、抗PD-L2剤、TNF-α架橋剤、およびTRAIL架橋剤からなる群より選択される、請求項339記載の方法。
  341. 前記被験体が神経疾患を有する、請求項328記載の方法。
  342. 前記神経疾患が脳腫瘍、脳転移、統合失調症、てんかん、筋萎縮性側索硬化症(ALS)、パーキンソン病、アルツハイマー病、ハンチントン病、および卒中から選択され、好ましくは前記神経疾患が筋萎縮性側索硬化症(ALS)、パーキンソン病、およびアルツハイマー病である、請求項341記載の方法。
  343. 前記方法が、請求項182〜195のいずれか1項に記載の可溶性ポリペプチドを投与することを含む、請求項341または342記載の方法。
  344. 前記被験体が感染症を有する、請求項328記載の方法。
  345. 前記感染症が、B型肝炎、C型肝炎、後天性免疫不全症候群(AIDS)、ハンセン病、および結核(TB)から選択される、請求項344記載の方法。
  346. 前記被験体が、代謝性疾患、黄斑疾患、筋萎縮、流産に関連する疾患、脈管疾患、骨量減少に関連する疾患、アレルギー、血液疾患、筋骨格障害、増殖受容体に関連する疾患、または肥満症を有する、請求項328記載の方法。
  347. 前記方法が、請求項182〜195のいずれか1項に記載の可溶性ポリペプチドの治療上有効な量を含む医薬組成物を投与することを含む、請求項328〜346のいずれか1項に記載の方法。
  348. 前記方法が、請求項8〜21のいずれか1項に記載の可溶性ポリペプチドをコードする核酸分子を含む医薬組成物を投与することを含む、請求項328〜346のいずれか1項に記載の方法。
  349. 請求項1〜6および181〜323のいずれか1項に記載の可溶性ポリペプチドを調製する方法であって、ここで該方法が、
    a)前記可溶性ポリペプチドをコードするポリヌクレオチドを含む宿主細胞を提供すること、
    b)前記可溶性ポリペプチドを前記宿主細胞で発現させること、および、場合によっては、
    c)前記可溶性ポリペプチドを回収すること
    を含む、上記方法。
  350. 前記方法のステップc)が多量体の形態ではない前記可溶性ポリペプチドを除去することを含み、好ましくは前記方法がホモ三量体の形態ではない前記可溶性ポリペプチドを除去することを含む、請求項349記載の方法。
  351. 請求項1〜6および181〜323のいずれか1項に記載の可溶性ポリペプチドを発現する宿主細胞であって、ここで前記宿主細胞が前記可溶性ポリペプチドをコードするポリヌクレオチドを含み、ここで前記ポリヌクレオチドが前記宿主細胞で発現される、上記宿主細胞。
  352. 請求項324記載の核酸分子を含むベクター。
  353. 前記ベクターが、ウイルスベクター、例えば、レトロウイルスベクター、アデノウイルスベクター、ポックスウイルスベクター(例えば、改変ワクシニアアンカラ(MVA)などのワクシニアウイルスベクター)、アデノ随伴ウイルスベクター、またはアルファウイルスベクターである、請求項352記載のベクター。
  354. 請求項352記載のベクターを含む、請求項351記載の宿主細胞。
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