ES2313016T3

ES2313016T3 - Sal de isetionato de un inhibidor selectivo de cdk4.

Info

Publication number: ES2313016T3
Application number: ES04737186T
Authority: ES
Inventors: Vladimir Genukh Pfizer Global R & D BEYLIN; Anthony Clyde Pfizer Global R & D BLACKBURN; David Thomas Erdman; Peter Laurence Pfizer Global R & D TOOGOOD
Original assignee: Warner Lambert Co LLC
Current assignee: Warner Lambert Co LLC
Priority date: 2003-07-11
Filing date: 2004-06-28
Publication date: 2009-03-01
Anticipated expiration: 2024-06-28
Also published as: CL2004001701A1; RU2006101052A; KR20060054300A; MXPA06000484A; UY28404A1; SI1648889T1; AU2004255934A1; US7345171B2; PE20050700A1; BRPI0412516A; US20050059670A1; CA2532049C; CN1835951B; NZ544609A; JP2007530425A; ZA200600230B; ATE412650T1; NO335100B1; NO20060386L; DE602004017474D1

Abstract

Una sal de isetionato de 6-acetil-8-ciclopentil-5-metil-2-(5-piperazin-1-il-piridin-2-ilamino)-8H-pirido[2,3-d] pirimidin-7-ona.

Description

Sal de isetionato de un inhibidor selectivo de CDK4.

Antecedentes de la invención Campo de la invención

Esta invención se refiere a formas salinas de 6-acetil-8-ciclopentil-5-metil-2-(5-piperazin-1-il-piridin-2-ilamino)-8H-pirido[2,3-d]pirimidin-7-ona, que es un inhibidor selectivo de quinasa 4 dependiente de ciclina (CDK4) que es útil para tratar las enfermedades inflamatorias y proliferativas de células tales como el cáncer y la reestenosis.

Discusión

Las quinasas dependientes de ciclina y las quinasas relacionadas con proteína serina/treonina son enzimas celulares importantes que realizan funciones esenciales en la regulación de la división y proliferación célular. Las unidades catalíticas de quinasa dependientes de ciclina se activan por subunidades reguladoras conocidas como ciclinas. Al menos han sido identificadas dieciséis ciclinas en mamíferos (D.G. Johnson y C.L. Walker, Annu. Rev. Pharmacol. Toxicol. (1999) 39:295-312). Ciclina B/CDK-1, Ciclina A/CDK2, Ciclina E/CDK2; Ciclina D/CDK4, Ciclina D/CDK6 y probablemente otros heterodímeros, incluyendo CDK3 y CDK7, son los reguladores importantes de la progresión del ciclo celular. Las funciones adicionales de los heterodímeros Ciclina/CDK incluyen la regulación de la transcripción, la reparación del ADN, la diferenciación y la apoptosis (D.O. Morgan, Annu. Rev. Cell Dev. Biol. (1997) 13261-13291).

Los inhibidores de quinasa dependientes de ciclina pueden mostrarse útiles en el tratamiento del cáncer. Se ha mostrado que la actividad aumentada o la activación temporalmente anormal de quinasas dependientes de ciclina causa el desarrollo de tumores en seres humanos (C.J. Sherr, Science (1996) 274:1672-1677). De hecho, el desarrollo de tumores en seres humanos se asocia comúnmente con alteraciones en las mismas proteínas CDK o en sus reguladores (C. Cordon-Cardo, Am. J. Pathol. (1995) 147:545-560; J.E. Karp y S. Broder, Nat. Med. (1995) 1:309-320; M. Hall et al., Adv. Cancer Res. (1996) 68:67-108). Los inhibidores de proteína que ocurren naturalmente de las CDK, tales como p16 y p27, causan en líneas celulares de cáncer de pulmón la inhibición in vitro del crecimiento (A. Kamb, Curr. Top. Microbiol. Immunol. (1998)227-139-148).

Los inhibidores de molécula pequeña de CDK pueden usarse también en el tratamiento de trastornos cardiovasculares, tales como la reestenosis y la aterosclerosis y otros trastornos vasculares que son debidos a la proliferación celular aberrante. La proliferación de músculo vascular liso y la hiperplasia de la íntima después de la angioplastia coronaria son inhibidas por la sobreexpresión de la proteína p21 del inhibidor de quinasa dependiente de ciclina (M.W. Chang et al., J. Clin. Invest. (1995) 96:2260; Z-Y. Yang et al., Proc. Nat. Acad. Sci. (USA) (1996) 93:9905). Además, el inhibidor CVT-313 CDK2 de purina (Ki = 95 nM) causó mas del 80% de inhibición en la formación de aneurisma en ratas (E.E. Brooks et al., J. Biol. Chem. (1997) 29207-29211).

Los inhibidores de CDK pueden usarse para tratar enfermedades causadas por una variedad de agentes infecciosos, incluyendo hongos, parásitos de protozoos, tales como Plasmodium falciparum y virus de ARN y ADN. Por ejemplo, se requieren las quinasas dependientes de ciclina para la replicación viral después de la infección por el virus del herpes simple (HSV) (L.M. Schang et al., J Virol. (1998) 72:5626) y se sabe que los homólogos de CDK juegan papeles esenciales en levaduras.

Pueden usarse inhibidores selectivos de CDK para mejorar los efectos de varios trastornos autoinmunes. La artritis reumatoide, una enfermedad crónica inflamatoria, se caracteriza por la hiperplasia del tejido sinovial. La inhibición de la proliferación de tejido sinovial debería reducir al mínimo la inflamación y prevenir la destrucción de la articulación. Se ha encontrado que la expresión de la proteína p16 del inhibidor de CDK en fibroblastos sinoviales inhibe el crecimiento (K. Taniguchi et al., Nat. Med. (1999) 5:760-767). Asimismo, en un modelo de artritis en ratas, la hinchazón de la articulación fue inhibida sustancialmente por el tratamiento con un adenovirus que expresaba p16. Los inhibidores de CDK pueden ser eficaces contra otros trastornos de proliferación celular incluyendo la psoriasis (caracterizada por la hiperproliferación de queratinocito), glomerulonefritis y lupus.

Ciertos inhibidores de CDK pueden ser útiles como agentes quimio-protectores por su capacidad de inhibir la progresión del ciclo celular en células normales no transformadas (Chen et al. J. Natl. Cancer Institute (2000) 92:1999-2008). El pretratamiento de un paciente con cáncer con un inhibidor de CDK antes del uso de agentes citotóxicos puede reducir los efectos secundarios comúnmente asociados con la quimioterapia. Los tejidos proliferativos normales son protegidos de los efectos citotóxicos por la acción del inhibidor selectivo de CDK.

Los artículos de revisión sobre inhibidores de molécula pequeña de quinasas dependientes de ciclina han señalado la dificultad de identificar los compuestos que inhiben proteínas específicas de CDK sin inhibir otras enzimas. Así, a pesar de su potencial para tratar una variedad de enfermedades, ningún inhibidor de CDK ha sido aprobado actualmente para su uso comercial (P.M. Fischer, Curr. Opin. Drug Discovery (2001) 4:623-634; D.W. Fry y M.D. Garrett, Curr. Opin. Oncologic. Endocrine & Metabolic. Invest. (2000) 2:40-59; K.R.Webster y D. Kimball, Emerging Drugs (2000) 5:45-59; T.M. Sielecki et al., J. Med. Chem. (2000) 43:1-18.).

A pesar de estas dificultades, los estudios recientes han identificado un número de inhibidores selectivos de CDK4 que, como se ha dicho anteriormente, pueden demostrarse útiles en el tratamiento del cáncer -como agentes de anticáncer o como agentes quimio-protectores- y en el tratamiento de trastornos cardiovasculares, tales como reestenosis y aterosclerosis, enfermedades causadas por agentes infecciosos y trastornos autoinmunes, incluyendo la artritis reumatoide. Para una descripción de estos inhibidores selectivos de CDK4, véase la Solicitud de Patente Internacional PCT/lB03/00059 transferida legalmente, presentada el 10 de enero de 2003 (la solicitud '059).

La solicitud '059 describe un inhibidor particularmente potente y selectivo de CDK4 6-acetil-8-ciclopentil-5-metil-2-(5-piperazin-1-il-piridin-2-ilamino)-8H-pirido(2,3-d]pirimidin-7-ona:

1

En ensayos enzimáticos estándar el compuesto de Fórmula 1 exhibe concentraciones de IC_{50} para la inhibición de CDK4 y CDK2 (a 25ºC) de 0,011 \muM y > 5 \muM, respectivamente. Para una discusión de ensayos estándar de CDK4 y CDK2 para determinaciones de IC_{50}, véase D.W. Fry et al., J. Biol. Chem. (2001) 16617-16623.

Aunque el compuesto de Fórmula 1 sea un inhibidor potente y selectivo de CDK4, su uso en productos farmacéuticos presenta retos. Por ejemplo, la base libre tiene una pobre solubilidad en agua (9 \mug/mL) y exhibe una baja biodisponibilidad en estudios en animales. Una sal di-HCl del compuesto de Fórmula 1 parece exhibir la solubilidad adecuada en agua. Sin embargo, los estudios de respuesta frente a la humedad revelan que, hasta con una humedad relativa baja (10% de HR), la sal di-HCl absorbe agua en una cantidad mayor de aproximadamente el 2% de su masa, haciéndola inadecuada para uso como un producto farmacéutico sólido. Una sal mono-HCl del compuesto de Fórmula 1 es ligeramente higroscópica, absorbiendo más del 2% de su masa a una humedad relativa por encima del 80%. Sin embargo, el procedimiento para preparar la sal mono-HCl proporciona parcialmente una sustancia de fármaco cristalina, indicando problemas potenciales con procesos a gran escala. Otras formas salinas del compuesto de Fórmula 1 son, por lo tanto, necesarias.

Sumario de la invención

La presente invención proporciona una sal de mono-isetionato de 6-acetil-8-ciclopentil-5-metil-2-(5-piperazin-1-il-piridin-2-ilamino)-8H-pirido[2,3-d]pirimidin-7-ona, que se representa por la Fórmula 2:

2

La sal de isetionato puede existir como uno o varios polimorfos, incluyendo la Forma A, la Forma B y la Forma D. Cada uno de los polimorfos puede distinguirse por su perfil (difractograma) de difracción de rayos X en polvo (PXRD), o por el espectro Raman, o por el termograma de calorimetría diferencial de barrido (DSC), o alguna combinación del perfil de PXRD, espectro Raman y termograma DSC. La sal de isetionato puede ser anhidra, o puede contener cantidades variables de agua o uno o varios disolventes.

Así, un aspecto de la presente invención proporciona una sal de mono-isetionato de 6-acetil-8-ciclopentil-5-metil-2-(5-piperazin-1-il-piridin-2-ilamino)-8H-pirido[2,3-d]pirimidin-7-ona, que se designa como la Forma A y se caracteriza por uno o varios de lo siguiente: un perfil de difracción de rayos X en polvo que tiene picos a valores de 2\theta de aproximadamente 8,7, 13,5 y 17,6, o un espectro Raman que tiene picos en los valores de desplazamiento Raman de aproximadamente 1600 cm^{-1}, 1290 cm^{-1}, 675 cm^{-1}, 470 cm^{-1}, 450 cm^{-1} y 425 cm^{-1}, o un termograma DSC que tiene una endotermia estrecha a 273ºC.

\newpage

Otro aspecto de la presente invención proporciona una sal de mono-isetionato de 6-acetil-8-ciclopentil-5-metil-2-(5-piperazin-1-il-piridin-2-ilamino)-8H-pirido[2,3-d]pirimidin-7-ona, que se designa como la Forma B y se caracteriza por uno o varios de lo siguiente: un perfil de difracción de Rayos X en polvo que tiene picos a valores de 2\theta de aproximadamente 5,1, 11,8, 12,1, 12,8, 13,1 y 14,7, un espectro Raman que tiene picos en los valores de desplazamiento Raman de aproximadamente 1600 cm^{-1}, 1290 cm^{-1}, 470 cm^{-1}, 450 cm^{-1} y 425 cm^{-1}, pero ningún pico sustancial a 675 cm^{-1}, o un termograma DSC que tiene una endotermia estrecha a 271ºC.

Un aspecto más de la presente invención proporciona una sal de mono-isetionato de 6-acetil-8-ciclopentil-5-metil-2-(5-piperazin-1-il-piridin-2-ilamino)-8H-pirido[2,3-d]pirimidin-7-ona, que se designa como la Forma D y que se caracteriza por uno o varios de lo siguiente. un perfil de difracción de rayos X en polvo que tiene picos a valores de 2\theta de aproximadamente 8,4, 8,9 y 21,9, un espectro Raman que tiene un pico en un valor de desplazamiento Raman de aproximadamente 463 cm^{-1}, o un termograma DSC que tiene una endotermia estrecha a 277ºC. Para cada forma de sal, el perfil de difracción de rayos X en polvo se obtiene usando radiación CuK_{\alpha} y se obtiene el termograma DSC usando una velocidad de calentamiento de 5ºC/min.

La presente invención también proporciona formas de dosificación farmacéuticas que incluyen una sal de isetionato de 6-acetil-8-ciclopentil-5-metil-2-(5-piperazin-1-il-piridin-2-ilamino)-8H-pirido[2,3-d]pirimidin-7-ona y uno o varios excipientes farmacéuticamente aceptables. Los excipientes útiles incluyen agentes disgregantes, aglomerantes, diluyentes, tensioactivos, lubricantes, conservantes, antioxidantes, aromatizantes, colorantes y otros similares.

La presente invención también proporciona métodos para preparar la sal de isetionato de 6-acetil-8-ciclopentil-5-metil-2-(5-piperazin-1-il-piridin-2-ilamino)-8H-pirido[2,3-d]pirimidin-7-ona. Un método incluye añadir una solución de ácido isetiónico y un primer disolvente a una mezcla acuosa de 6-acetil-8-ciclopentil-5-metil-2-(5-piperazin-1-il-piridin-2-ilamino)-8H-pirido[2,3-d]pirimidin-7-ona, para producir una primera mezcla. El método también incluye liofilizar la mezcla para dar una sal amorfa que posteriormente se combina con un segundo disolvente para producir una segunda mezcla que incluye la sal de isetionato de 6-acetil-8-ciclopentil-5-metil-2-(5-piperazin-1-il-piridin-2-ilamino)-8H-pirido[2,3-d]pirimidin-7-ona.

Otro método incluye suministrar un cristal semilla de una forma de sal de isetionato de 6-acetil-8-ciclopentil-5-metil-2-(5-piperazin-1-il-piridin-2-ilamino)-8H-pirido[2,3-d]pirimidin-7-ona y añadir el cristal semilla a una dispersión de 6-acetil-8-ciclopentil-5-metil-2-(5-piperazin-1-il-piridin-2-ilamino)-8H-pirido[2,3-d]pirimidin-7-ona y un primer disolvente para producir una primera mezcla. El método también incluye combinar la primera mezcla con una solución de ácido isetiónico y un segundo disolvente para producir una segunda mezcla que incluye la sal de isetionato de 6-acetil-8-ciclopentil-5-metil-2-(5-piperazin-1-il-piridin-2-ilamino)-8H-pirido[2,3-d]pirimidin-
7-ona.

En ambos de los métodos anteriores, los primeros y segundos disolventes pueden ser los mismos o diferentes y son disolventes miscibles en agua, incluyendo MeOH, EtOH y otros alcoholes. Para mejorar los rendimientos, los métodos pueden incluir calentar, refrigerar, o calentar y refrigerar la segunda mezcla a temperaturas superiores e inferiores a la temperatura ambiente. Por ejemplo, la segunda mezcla puede ser calentada a una temperatura en el intervalo de aproximadamente 30ºC a aproximadamente 60ºC y posteriormente permitise enfriar a temperatura ambiente. De forma alternativa, puede permitirse a la segunda mezcla estar a temperatura ambiente y posteriormente enfriarse a una temperatura igual o inferior a aproximadamente 0ºC. Asimismo, la segunda mezcla puede ser calentada a una temperatura en el intervalo de aproximadamente 30ºC a aproximadamente 60ºC y posteriormente enfriarse a una temperatura igual o inferior a aproximadamente 0ºC.

Otro método incluye hacer reaccionar el éster terc-butílico del ácido 4-{6-[6-(1-butoxi-vinil)-8-ciclopentil-5-metil-7-oxo-7,8-dihidro-pirido[2,3-d]pirimidin-2-ilamino]-piridin-3-il}-piperazin-1-carboxílico con ácido isetiónico en un disolvente y agua para dar una mezcla que incluye una sal de di-isetionato de 6-acetil-8-ciclopentil-5-metil-2-(5-piperazin-1-il-piridin-2-ilamino)-8H-pirido[2,3-d]pirimidin-7-ona. El método opcionalmente incluye añadir una base impedida a la mezcla de reacción para generar una sal de mono-isetionato de 6-acetil-8-ciclopentil-5-metil-2-(5-piperazin-1-il-piridin-2-ilamino)-8H-pirido[2,3-d]pirimidin-7-ona.

La presente invención proporciona además un método para tratar un trastorno o condición en un mamífero, incluyendo a un ser humano, causado por la proliferación de células anormales, o por infecciones virales o micóticas, o por una enfermedad autoinmune. El método incluye administrar al mamífero una cantidad de una sal de isetionato de 6-acetil-8-ciclopentil-5-metil-2-(5-piperazin-1-il-piridin-2-ilamino)-8H-pirido[2,3-d]pirimidin-7-ona, que es eficaz en el tratamiento del trastorno o de la condición. Los trastornos o las condiciones causados por la proliferación de células anormales incluyen cáncer y proliferación de músculo liso vascular asociada con aterosclerosis, estenosis porst-quirúrgica vascular y reestenosis y endometriosis. Las enfermedades autoinmunes incluyen la psoriasis, la artritis reumatoide de tipo inflamatoria, lupus, la diabetes de tipo I, nefropatía diabética, esclerosis múltiple, glomerulonefritis y el rechazo de transplantes de órgano, incluyendo la enfermedad injerto-contra-huésped.

La sal de isetionato proporciona ventajas significativas frente a la base libre (Fórmula 1) y otras formas salinas, incluyendo las sales de adición de mono- y di-HCl. Comparado con la base libre, la sal de isetionato exhibe una mejora de más de 20.000 veces la solubilidad en agua. A diferencia del caso de la sal de di-HCl, sin embargo, la mejora de la solubilidad no se acompaña con un aumento sustancial de la higroscopicidad. Además, la sal de isetionato es sustancialmente cristalina y, por lo tanto, no sufre de problemas a gran escala potenciales asociados con la sal de mono-HCl. Estas y otras ventajas deberían ayudar a aliviar muchos de los desafíos que afrontan el desarrollo de productos farmacéuticos que contienen el inhibidor selectivo de CDK4 de Fórmula 1.

Breve descripción de los dibujos

Varias características, ventajas y otros usos de la presente invención se harán más evidentes refiriéndose a la descripción y dibujos siguientes en los que:

La figura 1 muestra un perfil de PXRD de una sal de mono-isetionato (Forma A) de 6-acetil-8-ciclopentil-5-metil-2-(5-piperazin-1-il-piridin-2-ilamino)-8H-pirido[2,3-d]pirimidin-7-ona;

La figura 2 muestra el perfil de PXRD de una sal de mono-isetionato (Forma B y Forma D) de 6-acetil-8-ciclopentil-5-metil-2-(5-piperazin-1-il-piridin-2-ilamino)-8H-pirido[2,3-d]pirimidin-7-ona;

La figura 3 muestra un perfil de PXRD de una sal de mono-mesilato (Forma A, Forma B, Forma C y Forma D), de 6-acetil-8-ciclopentil-5-metil-2-(5-piperazin-1-il-piridin-2-ilamino)-8H-pirido[2,3-d]pirimidin-7-ona,

La figura 4 muestra un perfil de PXRD de una sal de di-mesilato de 6-acetil-8-ciclopentil-5-metil-2-(5-piperazin-1-il-piridin-2-ilamino)-8H-pirido[2,3-d]pirimidin-7-ona;

La figura 5 muestra un perfil de PXRD de una sal mono-HCl de 6-acetil-8-ciclopentil-5-metil-2-(5-piperazin-1-il-piridin-2-ilamino)-8H-pirido[2,3-d]pirimidin-7-ona;

La figura 6 muestra un perfil de PXRD de una sal di-HCl de 6-acetil-8-ciclopentil-5-metil-2-(5-piperazin-1-il-piridin-2-ilamino)-8H-pirido[2,3-d]pirimidin-7-ona;

La figura 7 muestra los espectros Raman de una sal de mono-isetionato (Forma A, Forma B y Forma D) de 6-acetil-8-ciclopentil-5-metil-2-(5-piperazin-1-il-piridin-2-ilamino)-8H-pirido[2,3-d]pirimidin-7-ona, que tiene desplazamientos Raman en el intervalo de 0 cm^{-1} a 1850 cm^{-1};

La Figura 8 muestra los espectros Raman de una sal de mono-isetionato (Forma A, Forma B y Forma D) de 6-acetil-8-ciclopentil-5-metil-2-(5-piperazin-1-il-piridin-2-ilamino)-8H-pirido[2,3-d]pirimidin-7-ona, que tiene desplazamientos Raman en el intervalo de 1350 cm^{-1} a 1800 cm^{-1};

La figura 9 muestra los espectros Raman de una sal de mono-isetionato (Forma A, Forma B y Forma D) de 6-acetil-8-ciclopentil-5-metil-2-(5-piperazin-1-il-piridin-2-ilamino)-8H-pirido[2,3-d]pirimidin-7-ona, que tiene desplazamientos Raman en el intervalo de 1100 cm^{-1} a 1350 cm^{-1};

La figura 10 muestra los espectros Raman de una sal de mono-isetionato (Forma A, Forma B y Forma D) de 6-acetil-8-ciclopentil-5-metil-2-(5-piperazin-1-il-piridin-2-ilamino)-8H-pyrido-[2,3-d]pirimidin-7-ona, que tiene desplazamientos Raman en el intervalo de 500 cm^{-1} a 850 cm^{-1};

La figura 11 muestra los espectros de Raman de una sal de mono-isetionato (Forma A, Forma B y Forma D) de 6-acetil-8-ciclopentil-5-metil-2-(5-piperazin-1-il-piridin-2-ilamino)-8H-pirido[2,3-d]pirimidin-7-ona, que tiene desplazamientos Raman en el intervalo de 340 cm^{-1} a 550 cm^{-1};

La figura 12 muestra un termograma DSC de una sal de mono-isetionato (Forma A) de 6-acetil-8-ciclopentil-5-metil-2-(5-piperazin-1-il-piridin-2-ilamino)-8H-pirido[2,3-d]pirimidin-7-ona;

La figura 13 muestra termogramas DSC de una sal de mono-isetionato (Forma B y Forma D) de 6-acetil-8-ciclopentil-5-metil-2-(5-piperazin-1-il-piridin-2-ilamino)-8H-pirido[2,3-d]pirimidin-7-ona;

La figura 14 muestra termogramas DSC de una sal de mono-mesilato (Forma A, Forma B, Forma C y Forma D) de 6-acetil-8-ciclopentil-5-metil-2-(5-piperazin-1-il-piridin-2-ilamino)-8H-pirido[2,3-d]pirimidin-7-ona;

La figura 15 muestra un termograma DSC de una sal de di-mesilato de 6-acetil-8-ciclopentil-5-metil-2-(5-piperazin-1-il-piridin-2-ilamino)-8H-pirido[2,3-d]pirimidin-7-ona;

La figura 16 muestra un termograma DSC de una sal di-HCl de 6-acetil-8-ciclopentil-5-metil-2-(5-piperazin-1-il-piridin-2-ilamino)-8H-pirido[2,3-d]pirimidin-7-ona;

La figura 17 muestra isotermas de adsorción/desorción en agua para la base libre de 6-acetil-8-ciclopentil-5-metil-2-(5-piperazin-1-il-piridin-2-ilamino)-8H-pirido[2,3-d]pirimidin-7-ona;

La figura 18 muestra isotermas de adsorción/desorción en agua para varias sales de 6-acetil-8-ciclopentil-5-metil-2-(5-piperazin-1-il-piridin-2-ilamino)-8H-pirido[2,3-d]pirimidin-7-ona, incluyendo mono-isetionato, (Forma B y Forma D), mono- y di-HCl, mono-mesilato (Forma A y Forma C), di-mesilato y mono-tosilato.

Descripción detallada Definiciones y abreviaturas

A no ser que se indique de otra manera, esta descripción usa las definiciones proporcionadas a continuación.

El término "cáncer" incluye, pero no se limita, a los cánceres siguientes: cánceres de ovario, pecho, cerviz, próstata, testículo, esófago, estómago, piel, pulmón, hueso, colon, páncreas, tiroides, canales biliares, cavidad bucal y faringe (oral), labios, lengua, boca, faringe, intestino delgado, colon-recto, intestino grueso, recto, cerebro y sistema nervioso central, glioblastoma, neuroblastoma, queratoacantoma, carcinoma epidermoide, carcinoma de célula grande, adenocarcinoma, adenocarcinoma, adenoma, adenocarcinoma, carcinoma folicular, carcinoma no diferenciado, carcinoma papilar, seminoma, melanoma, sarcoma, carcinoma de vejiga, carcinoma de hígado, carcinoma de riñón, trastornos mieloides, trastornos linfoides, enfermedad de Hodgkin, células capilares y leucemia.

La expresión "farmacéuticamente aceptable" se refiere a sustancias, que son en la amplitud del sano juicio médico, adecuadas para uso en contacto con los tejidos de pacientes sin toxicidad excesiva, irritación, respuesta alérgica y similares, conmensurativa con una relación razonable de beneficio/riesgo y eficaz para su uso intencionado.

El término "tratar" se refiere a invertir, aliviar, inhibir el progreso o prevenir un trastorno o una condición a la que se aplica tal término o para prevenir uno o varios síntomas de tal trastorno o condición.

El término "tratamiento" se refiere al acto de "tratar" como se define inmediatamente arriba.

La tabla 1 enumera las abreviaturas usadas en la memoria descriptiva.

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TABLA 1 Abreviaturas

3

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La sal de mono-isetionato (Fórmula 2) puede existir como uno o varios polimorfos, incluyendo la Forma A, Forma B y Forma D. Como se indica anteriormente, cada uno de los polimorfos puede distinguirse por la difracción de rayos X en polvo (PXRD), o por espectroscopia Raman, o por calorimetría diferencial de barrido (DSC), o alguna combinación de estos métodos de caracterización. La sal de mono-isetionato (Fórmula 2) puede ser anhidra, o puede contener cantidades variables de agua o uno o varios disolventes. Además, la sal de mono-isetionato (Fórmula 2) puede ser sustancialmente pura, es decir, puede contener al menos aproximadamente 99% en peso de un polimorfo particular o puede ser una mezcla de dos o más de los polimorfos (por ejemplo, Forma B y Forma D, etc.),

La base libre (Fórmula 1) es un compuesto dibásico, que puede formarse tanto como sales de adición de mono- como de di-ácido. Su ácido conjugado tiene un pK_{a}s de 7,3 y 4,1, de modo que son necesarios ácidos relativamente fuertes para generar la di-sal. Aunque pueda ser posible formar una sal de di-isetionato del compuesto de Fórmula 1, la sal de mono-isetionato parece ser más útil porque requiere menos contra-ión.

La figura 1 y la figura 2 proporcionan difractogramas de PXRD para las formas salinas de mono-isetionato de 6-acetil-8-ciclopentil-5-metil-2-(5-piperazin-1-il-piridin-2-ilamino)-8H-pirido[2,3-d]pirimidin-7-ona (Fórmula 2). Estas formas son designadas como la Forma A en la figura 1 y la Forma B y Forma D en la figura 2. Para mejorar la legibilidad, el difractograma de la Forma D en la figura 2 ha sido desplazado hacia arriba aproximadamente unas 700 unidades. La tabla 2, debajo, enumera los picos de PXRD significativos (es decir, aquellos que exhiben la relación altura de pico frente al ruido mayor que 3,5) para los polimorfos de mono-isetionato A, B y D y proporciona con la fuente del formato subrayado un subconjunto de picos característicos que pueden usarse para distinguir un polimorfo del otro. La lista de picos característicos proporcionados en la tabla 2 no es la única lista posible de picos característicos. Las personas expertas ordinarias en la técnica de identificación de polimorfos pueden escoger otros conjuntos de picos característicos que también distinguirán a un polimorfo del otro.

Con objetivos de comparación, las figura 3-figura 6 muestran difractogramas de PXRD para, respectivamente, las sales de mono-mesilato, di-mesilato, mono-HCl y di-HCl de 6-acetil-8-ciclopentil-5-metil-2-(5-piperazin-1-il-piridin-2-ilamino)-8H-pirido[2,3-d]pirimidin-7-ona. Aunque estas sales puedan existir en más de una forma, los polimorfos distintos sólo han sido identificado para la sal de mono-mesilato, cuya figura 3 designa como la Forma A, Forma B, Forma C y la Forma D. Para destacar las diferencias entre las formas salinas de mono-mesilato, los difractogramas de la Forma B, la Forma C y la Forma D en la figura 3 han sido desplazados hacia arriba en varias cantidades.

Cada uno de los perfiles de PXRD mostrados en las figura 1-figura 6 fueron obtenidos en un difractómetro de rayos X D/Max 2200 de RIGAKU para polvo usando radiación CuK_{\alpha}. El difractómetro fue equipado con un tubo de rayos X de foco fino. Durante cada experimento, el voltaje del tubo y la corriente fueron puestos a 40 kV y 40 mA, respectivamente, las rendijas de divergencia y dispersión fueron puestas a 0,5º y la rendija receptora fue puesta a 0,3 mm. La radiación difractada fue detectada usando un detector de centelleo de NaI. Para cada uno de los experimentos, fue usada una exploración continua de \theta-2\theta de aproximadamente 1º/minuto (3 s/0,040º etapa) de 3,0 a 40,0º 2\theta: Las muestras fueron preparadas para el análisis colocándolas en un soporte de oblea de silicio. Los datos fueron recogidos usando el software RIGMEAS de RIGAKU y fueron analizados usando un paquete de software desarrollado por el propietario usando la plataforma de software JADE.

Para cada medida de difracción de rayos X en polvo, fue colocada una muestra de una forma de sal en una cavidad localizada sobre una superficie plana del soporte y fue usado un portaobjetos para nivelar la superficie de la muestra. El soporte, que contenía la muestra, se colocó en el difractómetro y la fuente de haz de rayos X irradió la muestra, al principio con un pequeño ángulo en relación con la superficie plana del soporte. El haz de rayos X fue movido posteriormente formando un arco a razón de varias etapas, que sucesivamente aumentaron el ángulo entre el haz incidente y la superficie plana del soporte. En cada etapa de la exploración, el contador de centelleo detectó la cantidad de radiación difractada, que fue registrada como una función de 2\theta. El software del instrumento muestra los resultados de radiación difractada de la exploración como intensidad frente a 2\theta (figura 1-figura 6).

Pueden surgir diferencias del perfil PXRD entre las medidas separadas del mismo polimorfo por muchos motivos. Las fuentes de error incluyen variaciones en la preparación de la muestra (por ejemplo, la altura de la muestra), errores de instrumento, errores de calibración y errores de operador (incluyendo errores en la determinación de las posiciones de los picos). La orientación preferencial, es decir, una carencia de la orientación arbitraria de los cristales en la muestra de PXRD, puede causar diferencias significativas de alturas de pico relativas. Los errores de calibración y los errores de altura de la muestra a menudo causan un desplazamiento de todos los picos del difractograma en la misma dirección y por la misma cantidad. Pequeñas diferencias de la altura de la muestra sobre un soporte plano pueden conducir a grandes desplazamientos en las posiciones de los picos de PXRD. Para un estudio sistemático mostrando que las diferencias de altura de la muestra de 1 mm pueden conducir a desplazamientos de picos tan altos como 1º 2\theta véase Chen et al., J. Pharmaceutical and Biomedical Analysis (2001) 26:63.

En muchos casos, los desplazamientos de picos entre perfiles de difracción que son resultado del error sistemático pueden eliminarse compensando el desplazamiento (por ejemplo, aplicando un factor de corrección a todos los valores de posición de picos) o calibrando de nuevo el difractómetro. Generalmente, pueden usarse las mismas técnicas para compensar las diferencias entre difractómetros de modo que las posiciones de pico de PXRD obtenidas de dos instrumentos diferentes puedan llevarse a una concordancia. Además, cuando estas técnicas son aplicadas a medidas PXRD del mismo o diferente difractómetro las posiciones de los picos para un polimorfo particular por lo general tendrán concordancia en aproximadamente \pm0,2º 2 \theta.

TABLA 2 Picos de PXRD significativos para la Forma A, B y D de la sal de mono-isetionato

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Las figura 7-figura 11 muestran los espectros Raman de las formas salinas de mono-isetionato de 6-acetil-8-ciclopentil-5-metil-2-(5-piperazin-1-il-piridin-2-ilamino)-8H-pirido[2,3-d]pirimidin-7-ona (Fórmula 2). La figura 7 muestra los espectros Raman de la sal de mono-isetionato de las Forma A, Forma B, Forma D para desplazamientos Raman en el intervalo de 0 cm^{-1} a 1850 cm^{-1}, mientras que las figura 8-figura 11 proporcionan los espectros Raman para la sal de mono-isetionato de las Forma A, Forma B y Forma D para desplazamientos Raman en el intervalo de 1350 cm^{-1} a 1800 cm^{-1}, de 1100 cm^{-1} a 1350 cm^{-1}, de 500 cm^{-1} a 850 cm^{-1} y de 340 cm^{-1} a 550 cm^{-1}, respectivamente. En algunas de las figuras, uno o varios de los espectros Raman pueden emplear diferentes ordenes de escala (por ejemplo, la Forma A en las figuras 7, 8, 10 y 11) o líneas de fondo diferentes (por ejemplo, las Forma A y Forma B en la figura 9) o ordenes de escala y líneas de fondo diferentes (figura 10) para acentuar las diferencias entre las formas salinas de mono-isetionato.

La tabla 3, debajo, enumera los picos característicos de los espectros Raman que pueden usarse para distinguir una forma de sal de mono-isetionato de la otra. Como con los datos de PXRD, la lista de picos característicos proporcionados en la tabla 3 no es la única lista posible de picos característicos y personas expertas ordinarias en la técnica de identificación de polimorfos pueden escoger otro grupo de picos característicos que también distinguirán un polimorfo del otro.

Los espectros Raman mostrados en las figura 7-figura 11 fueron obtenidos usando un microscopio y espectrógrafo Raman de KAISER OPTICAL SYSTEMS HOLOLAB. El espectrógrafo Raman utiliza un láser de diodo en estado sólido que opera a 785 nm con una potencia de salida de aproximadamente 90 mW. La potencia de entrada a la muestra por el objetivo del microscopio era de aproximadamente 27 mW. Fue usado un detector CCD termoeléctrico enfriado para detectar la señal Raman. Los cables de fibra óptica que conectan el microscopio y el espectrógrafo Raman fueron usados para dirigir la luz de excitación láser y la luz dispersada Raman desde y hacia la muestra, respectiva-
mente.

Para obtener los espectros representativos Raman, las muestras de cada una de las formas polimorfas fueron sondadas en múltiples posiciones o puntos. Para cada muestra, los espectros Raman fueron obtenidos a cuatro o cinco puntos, con cuatro espectros replicados en cada punto. Como es normalmente el caso con muestras sólidas, los datos para una forma polimorfa dada exhibieron la mayor variación de intensidad de pico y exhibieron relativamente poca variación en la posición del pico. Para cada una de las formas, los valores del desplazamiento Raman (posiciones de pico como una función del número de onda) variaban en menos de 1 cm^{-1}, aunque como se esperara, las posiciones de picos entre las formas diferentes podrían variar en más de 1 cm^{-1}. Al menos algo de la variación en la intensidad de pico o en la posición de pico, como se piensa, proviene de las diferencias del modo en que la luz de láser golpea los diferentes cristales en la muestra.

TABLA 3 Picos característicos de espectros Raman para las Formas A, B y D de la sal de mono-isetionato

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Como la variación de experimento-a-experimento descrita anteriormente, los espectros Raman de un polimorfo particular que se obtienen usando instrumentos diferentes parecen exhibir poca variación (p. ej., 1 cm^{-1} o menos) en la posición del pico y relativamente mayor variación en la intensidad del pico. Considerando que la dispersión Raman es independiente de la longitud de onda de excitación usada, las posiciones de los picos deberían estar sobre la misma posición entre los instrumentos que usan fuentes de excitación diferentes. Las intensidades de picos pueden variar dependiendo, entre otras cosas, del tipo de detector u óptica, de la potencia del láser de excitación y de la posición de la muestra.

Las figura 12 y figura 13 muestran termogramas DSC de las formas salinas de mono-isetionato de 6-acetil-8-ciclopentil-5-metil-2-(5-piperazin-1-il-piridin-2-ilamino-8H-pirido[2,3-d]pirimidin-7-ona (Fórmula 2) designadas como la Forma A (figura 12) y las Formas B y D (figura 13). Además, las figura 14-figura 16 muestran termogramas DSC de la sal de mono-mesilato (Formas A, B, C y D), la sal de di-mesilato y la sal di-HCl, respectivamente. Los datos de DSC fueron obtenidos usando un DSC V2.6 Modulado de TA INSTRUMENTS 2920. Las muestras de polimorfos individuales fueron analizadas al aire, selladas en platillos de aluminio usando una velocidad de calentamiento de 5ºC/min a 350ºC y una purga de nitrógeno de 50 mL/min.

Como se muestra en las figura 12-figura 15, la sal de mono-isetionato (Formas A, B y D), la sal de mono-mesilato (Formas A, B, C y D) y la sal de di-mesilato tienen puntos de fusión distintos, exhibiendo endotermias estrechas a aproximadamente 273ºC, 271ºC, 277ºC, 309ºC, 307ºC, 302ºC, 304ºC y 289ºC, respectivamente. Al contrario, la sal di-HCl (figura 16) posee un termograma DSC relativamente complejo, que incluye amplias endotermias entre aproximadamente 40ºC y 110ºC y entre aproximadamente 160ºC y 200ºC, que probablemente indican la pérdida de humedad y agua reticular, respectivamente. La traza de DSC de la sal di-HCl también exhibe un comienzo de exotermia relativamente estrecho a aproximadamente 207ºC y una amplia endotermia que comienza a aproximadamente 275ºC, que probablemente indica, respectivamente, la transformación de la forma y la fusión o la descomposición o ambas.

Las figura 17 y la figura 18 muestran las isotermas de adsorción y desorción en agua (a 25ºC) para la base libre (Fórmula 1) y varias sales de 6-acetil-8-ciclopentil-5-metil-2-(5-piperazin-1-il-piridin-2-ilamino)-8H-pirido[2,3-d]pirimidin-7-ona, incluyendo mono-isetionato (Formas B y D), mono- y di-HCl, mono-mesilato (Formas A y C), di-mesilato y mono-tosilato. Los datos de adsorción y desorción en agua fueron obtenidos usando un analizador gravimétrico simétrico modelo SGA-100 de VTI CORPORATION. Para obtener una isoterma de vapor de agua, fue colocada una muestra de un polimorfo sobre una microbalanza en una cámara ambiental sellada y posteriormente se calentó a una velocidad de 5ºC/min hasta que la temperatura en la cámara alcanzó los 40ºC. Para obtener un peso seco de la muestra, se permitió al polimorfo equilibrarse a 40ºC hasta que la muestra experimentó un cambio de peso de menos de 0,0270% en peso en 2 minutos. Después de secar, la muestra se enfrió a 25ºC y posteriormente se expuso a diferentes niveles de humedad en el intervalo de 5 ó 10% de HR al 90% de HR y del 90% de HR al 10 ó 5% de HR, en incrementos de 10% de HR. En cada nivel de humedad, se permitió al polimorfo equilibrarse hasta que la muestra experimentó un cambio de peso de menos de 0,0270% en peso en 2 minutos. La masa en equilibrio en cada nivel de humedad fue registrada y, con el peso seco de la muestra, usada para generar una representación del cambio de peso frente a la humedad relativa.

De los compuestos mostrados en la figura 17 y la figura 18, sólo la base libre, la sal de mono-isetionato (Forma B y D) y la sal de mono-tosilato exhiben menos de un cambio del 2% de la masa cuando se exponen a niveles de humedad en el intervalo de 10% de HR al 90% de HR a 25ºC.

La tabla 4 enumera la solubilidad en agua de la base libre (su fase más estable de cristal de acuerdo con los experimentos de mezcla) y la sal de isetionato (Forma B, su forma más estable de acuerdo con los resultados de los experimentos de mezcla). Dado que la forma B parece ser la forma de sal de isetionato más estable, debería exhibir la solubilidad más baja en agua entre las formas salinas de isetionato observadas. Las otras formas salinas de isetionato no fueron evaluadas para la solubilidad metaestable. La solubilidad acuosa para la sal de isetionato fue obtenida disolviendo la sal en agua hasta aproximadamente 300 mg/mL, equilibrando durante aproximadamente 48 h después de cuyo tiempo fueron observados unos sólidos y midiendo la concentración de sal de la fase acuosa usando HPLC. Véase la tabla 5 para una lista de las condiciones del HPLC. La solubilidad acuosa para la base libre fue obtenida equilibrando el sólido en agua durante 14 h y midiendo la concentración de la base libre en la fase acuosa usando un método semiautomatizado UV-vis, que utilizaba un lector de placa de un espectrofotómetro SPECTRMAX PLUS.

Los datos en la tabla 4 indican que la solubilidad en agua de la sal de mono-isetionato (a pH 5,4) es más de 20,000 veces más alta que para la base libre (a pH 7,9). Esta gran disparidad en la solubilidad en agua no puede ser explicada por la diferencia relativamente modesta en el pH de las soluciones saturadas para la base libre y la sal de mono-isetionato. De hecho, la solubilidad teórica en agua de la base libre es sólo 0,62 mgA/mL a pH 5,4 por el cálculo Henderson-Hasselbalch (usando una solubilidad de la base libre de 0,0092 mg/mL, a pH 7,9 y pK_{a}s de 7,3 y 4,1). Sembrando una solución acuosa de la sal de mono-isetionato preparada a 117 mgA/mL, pH 5,4 (supersaturada en lo que concierne a la base libre) con cristales de la base libre no causó precipitación. En cambio, las semillas se disolvieron, indicando alguna capacidad del ión de isetionato de solubilizar la base libre en agua.

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TABLA 4 Solubilidad en agua de la base libre y de la sal de isetionato (Forma B)

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TABLA 5 Condiciones generales de HPLC para medidas de solubilidad en agua

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La solubilidad de la sal de isetionato en solución salina normal es 0,58 mgA/mL, que es mucho menos que su solubilidad en agua y es muy próxima al valor teórico de 0,43 mgA/mL (cálculo Henderson-Hasselbalch) al pH final de esta solución (pH 5,56). En la solución salina normal, el sorprendente poder de solubilización del ión de isetionato desaparece esencialmente y la solubilidad del compuesto se comporta más bien como un típico compuesto básico.

La sal de isetionato puede prepararse usando un número de técnicas. Por ejemplo, en un método, una solución de ácido isetiónico y un primer disolvente se mezclan con una mezcla acuosa de 6-acetil-8-ciclopentil-5-metil-2-(5-piperazin-1-il-piridin-2-ilamino)-8H-pirido[2,3-d]pirimidin-7-ona. La mezcla se filtra para eliminar cualquier sólido y el filtrado resultante se liofiliza para dar una sal de isetionato amorfa. La sal amorfa se convierte a una forma cristalina disolviéndolo en un segundo disolvente que puede acompañarse calentando para promover la disolución completa. La solución resultante posteriormente se enfria a TA o menos para precipitar una forma cristalina de la sal, que puede aislarse vía filtración y luego secarse en una estufa al vacío.

El método generalmente emplea cantidades estequiométricas (es decir, relaciones molares de 1:1 ó 2:1) o casi estequiométricas de ácido isetiónico y 6-acetil-8-ciclopentil-5-metil-2-(5-piperazin-1-il-piridin-2-ilamino)-8H-pirido[2,3-d]pirimidin-7-ona. Los primeros y segundos disolventes pueden ser los mismos o diferentes y son disolventes típicamente miscibles en agua, incluyendo alcoholes tales como MeOH y EtOH. La cantidad de calor necesario para disolver la sal amorfa en el segundo disolvente dependerá del disolvente usado; pero la temperatura de la mezcla está típicamente en el intervalo de aproximadamente 30ºC a aproximadamente 60ºC y está normalmente en el intervalo de aproximadamente 30ºC a aproximadamente 50ºC. En algunos casos, la temperatura de la mezcla está en el intervalo de aproximadamente 30ºC a aproximadamente 40ºC o aproximadamente de 35ºC a aproximadamente 40ºC.

En otro método, la base libre (Fórmula 1) se dispersa (mezclada) en un primer disolvente y se siembra con una forma de isetionato cristalina. La mezcla resultante se mezcla con una solución de ácido isetiónico y un segundo disolvente. Típicamente, la solución de ácido isetiónico se añade en múltiples porciones durante un período de tiempo. La mezcla resultante o la dispersión se agitan a TA o inferior, por lo general a una temperatura mayor de aproximadamente 35ºC o 40ºC. Para mejorar el rendimiento, la mezcla resultante puede enfriarse a una temperatura inferior a aproximadamente 0ºC, que precipita en cristales de sal de isetionato adicionales. Los cristales de sal de isetionato pueden ser aislados vía filtración y luego secados en una estufa al vacío. Como el método descrito anteriormente, esta técnica emplea cantidades estequiométricas o casi estequiométricas de ácido isetiónico y 6-acetil-8-ciclopentil-5-metil-2-(5-piperazin-1-il-piridin-2-ilamino)-8H-pirido[2,3-d]pirimidin-7-ona. Además, los primeros y segundos disolventes pueden ser los mismos o diferentes y son disolventes típicamente miscibles en agua, incluyendo alcoholes tales como MeOH y EtOH. Comparado con el procedimiento antes descrito, este método causa a menudo mejores rendimientos y mejores cristales (por ejemplo, más grandes y más uniformes).

Otro método evita la base libre (Fórmula 1) y genera la sal de isetionato directamente a partir de un intermedio del procedimiento protegido. El método incluye hacer reaccionar un compuesto protegido con N-BOC de Fórmula 3,

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con aproximadamente 3,5 equivalentes (o más) de ácido isetiónico en un primer disolvente y agua, que elimina el grupo BOC protector y desenmascara un grupo acetilo para dar una sal de di-isetionato de 6-acetil-8-ciclopentil-5-metil-2-(5-piperazin-1-il-piridin-2-ilamino)-8H-pirido[2,3-d]pirimidin-7-ona. La reacción puede llevarse a cabo a temperatura ambiente o más alta y a menudo se lleva a cabo a una temperatura en el intervalo de aproximadamente 30ºC a aproximadamente 60ºC. A esta mezcla de reacción se añade una base impedida (por ejemplo, Et_{3}N) en un segundo disolvente, formando una sal con el ácido isetiónico que es soluble en la mezcla de reacción. La cantidad de base añadida es suficiente para mantener -en la presencia de la sal de di-isetionato- un leve exceso de ácido isetiónico libre en la mezcla de reacción. Por ejemplo, si 3,5 equivalentes de ácido isetiónico fueron llevados a reaccionar con el compuesto de Fórmula 3 BOC-protegido, podrían usarse aproximadamente 1,45 equivalentes de la base impedida, causando aproximadamente 0,05 exceso de equivalentes del ácido isetiónico libre. De ser deseado, la sal de di-isetionato puede ser aislada por filtración.

Para obtener una sal de mono-isetionato de 6-acetil-8-ciclopentil-5-metil-2-(5-piperazin-1-il-piridin-2-ilamino)-8H-pirido[2,3-d]pirimidin-7-ona, la base adicional se añade durante un período ampliado de tiempo (por ejemplo, gota a gota) para asegurar la formación de la forma de sal de mono-isetionato precisa (por ejemplo, la Forma B). La adición de la base impedida demasiado rápidamente puede causar la formación de otra, polimorfos metaestables. Para mejorar el rendimiento, la mezcla resultante puede enfriarse a una temperatura de aproximadamente 5ºC o inferior y luego filtrarse y secarse. Como en los métodos descritos anteriormente, los primeros y segundos disolventes pueden ser los mismos o diferentes y son disolventes miscibles en agua, incluyendo alcoholes tales como MeOH y EtOH.

Las otras formas de sal descritas, por ejemplo, sales mono- o di-HCl, de mesilato, o de tosilato pueden prepararse de una manera similar a los métodos descritos anteriormente para la sal de isetionato (Fórmula 2).

Los compuestos descritos (Fórmula 1 y sales) comprenden todas las variaciones isotópicas farmacéuticamente aceptables. Una variación isotópica es un compuesto en el que al menos un átomo se sustituye por un átomo que tiene el mismo número atómico, pero de una masa atómica diferente de la masa atómica encontrada generalmente en la naturaleza. Isótopos útiles incluyen los isótopos de hidrógeno, carbono, nitrógeno, oxígeno, fósforo, azufre, flúor y cloro. Isótopos ejemplares incluyen así, sin restricción, ^{2}H, ^{3}H, ^{13}C, ^{14}C, ^{15}N, ^{17}O, ^{18}O, ^{32}P, ^{35}S, ^{18}F y ^{36}Cl.

La sustitución de los compuestos descritos con isótopos tales como el deuterio, p. ej. ^{2}H, puede ofrecer ciertas ventajas terapéuticas dando como resultado una mayor estabilidad metabólica, por ejemplo, semivida aumentada in vivo o requerimientos de dosificación reducidos y de ahí que pueda ser útil en algunas circunstancias. Además, ciertas variaciones isotópicas, por ejemplo, aquellas que incorporan un isótopo radiactivo, son útiles en estudios de distribución de tejido del fármaco y/o del sustrato. Los isótopos radiactivos, como p. ej. el tritio, ^{3}H y el carbono 14, ^{14}C, son particularmente útiles por esta razón a la vista de su facilidad de incorporación y de los fáciles medios de detección.

Las variaciones isotópicas de los compuestos descritos pueden prepararse generalmente por técnicas convencionales conocidas por los expertos en la técnica o por procesos análogos a los descritos en los ejemplos que acompañan que usan variaciones isotópicas apropiadas de reactivos adecuados. Los solvatos farmacéuticamente aceptable de los compuestos descritos incluyen aquellos en los cuales el disolvente de cristalización puede ser sustituido isotópicamente, por ejemplo, D_{2}O, d_{6}-acetona, d_{6}-DMSO.

Los compuestos descritos (Fórmula 1 y sales) pueden administrarse como productos cristalinos o amorfos. Pueden obtenerse, por ejemplo, como rollos sólidos, polvos, o películas por métodos tales como la precipitación, la cristalización, la liofilización, secado por pulverización, o secado por evaporación. El secado por microondas o por radiofrecuencia puede usarse para este propósito.

Los compuestos descritos pueden administrarse solos o en combinación con otros fármacos y generalmente serán administrados como una formulación en asociación con uno o varios excipientes farmacéuticamente aceptables. El término "excipiente" describe cualquier otro ingrediente que los compuestos representados por la Fórmula 1 y sus sales. La elección del excipiente dependerá en gran parte del modo particular de administración.

Los compuestos descritos pueden administrarse oralmente. La administración oral puede implicar tragar, de modo que el compuesto entre en el tracto gastrointestinal, o puede emplearse administración bucal o sublingual por la que el compuesto entra en la circulación sanguínea directamente desde la boca.

Las formulaciones adecuadas para la administración oral incluyen formulaciones sólidas tales como comprimidos, cápsulas que contienen partículas, líquidos o polvos, pastillas (incluyendo rellenas de líquido), gomas de mascar, multi- y nano-partículas, geles, solución sólida, liposoma, películas (incluyendo muco-adhesivos), óvulos, pulverizaciones y formulaciones líquidas. Las formulaciones líquidas incluyen suspensiones, soluciones, jarabes y elixires. Tales formulaciones pueden emplearse como cargas en cápsulas blandas o duras y típicamente comprende un vehículo, por ejemplo, agua, EtOH, polietilenglicol, propilenglicol, metilcelulosa, o un aceite adecuado y uno o varios agentes emulsionantes y/o agentes de suspensión. También pueden prepararse formulaciones líquidas por la reconstitución de un sólido, por ejemplo, de una bolsita.

Los compuestos descritos pueden usarse también en formas de dosificación de disolución rápida, desintegración rápida tales como las descritos en Liang y Chen Expert Opinion in Therapeutic Patents (2001) 11(6):981-986.

Para formas de dosificación de comprimido, dependiendo de la dosis, el fármaco puede prepararse a partir de 1% en peso a 80% en peso de la forma de dosificación, más típicamente de 5% en peso a 60% en peso de la forma de dosificación. Además del fármaco, los comprimidos contienen generalmente un agente disgregante. Los ejemplos de agentes disgregantes incluyen glicolato de almidón de sodio, carboximetilcelulosa de sodio, carboximetilcelulosa de calcio, croscarmelosa de sodio, crospovidona, polivinilpirrolidona, metilcelulosa, celulosa microcristalina, hidroxipropilcelulosa sustituida por alquilo inferior, almidón, almidón pregelatinizado y alginato de sodio. Generalmente, el agente disgregante comprenderá de 1% en peso a 25% en peso, preferiblemente de 5% en peso a 20% en peso de la forma de dosificación.

Los aglomerantes generalmente se usan para impartir cualidades cohesivas a una formulación de comprimido. Aglomerantes adecuados incluyen celulosa microcristalina, gelatina, azúcares, polietilenglicol, polivinilpirrolidona, gomas naturales y sintéticas, almidón pregelatinizado, hidroxipropilcelulosa e hidroxipropilmetilcelulosa. Los comprimidos pueden contener también diluyentes, tales como lactosa (monohidrato, monohidrato secado por pulverización, anhidro y similares), manitol, xilitol, dextrosa, sacarosa, sorbitol, celulosa microcristalina, almidón y dihidrato de fosfato de calcio dibásico.

Los comprimidos opcionalmente pueden incluir también a agentes tensioactivos tales como lauril-sulfato de sodio y polisorbato 80 y deslizantes tales como el dióxido de silicio y el talco. Cuando están presentes, los agentes tensioactivos pueden comprender de 0,2% en peso a 5% en peso del comprimido y pueden comprender deslizantes de 0,2% en peso a 1% en peso del comprimido.

Los comprimidos generalmente también contienen lubricantes tales como estearato de magnesio, estearato de calcio, estearato de cinc, estearil-fumarato de sodio y mezclas de estearato de magnesio con lauril-sulfato de sodio. Los lubricantes generalmente comprenden de 0,25% en peso a 10% en peso, preferiblemente de 0,5% en peso a 3% en peso del comprimido. Otros ingredientes pueden incluir conservantes, antioxidantes, aromatizantes y colorantes.

Las mezclas de comprimido pueden ser comprimidas directamente para formar comprimidos. Las mezclas de comprimido o las porciones de mezclas pueden mojarse-, secarse- o fundirse-granularse, fundirse-coagularse, o extrusarse de forma alternativa antes de comprimirse. La formulación final puede comprender una o varias capas y puede ser revestida o no revestida. Comprimidos ejemplares contienen hasta aproximadamente el 80% de fármaco, de aproximadamente 10% en peso a aproximadamente 90% en peso de aglomerante, de aproximadamente 0% en peso a aproximadamente 85% en peso de diluyente, de aproximadamente 2% en peso a aproximadamente 10% en peso de agente disgregante y de aproximadamente 0,25% en peso a aproximadamente 10% en peso de lubricante. Para detalles adicionales acerca de la formulación de comprimidos, véase H. Lieberman and L. Lachman, Pharmaceutical Dosage Forms - Tablets, Vol. 1 (1980).

Formulaciones sólidas para la administración oral pueden formularse para ser de liberación inmediata y/o modificada. Las formulaciones de liberación modificadas incluyen liberación retrasada, sostenida, pulsada, controlada, dirigida y programada. Para una descripción general de formulaciones de liberación adecuadas modificadas, véase la patente de EE.UU. Nº. 6.106.864. Para detalles de otras tecnologías de liberación útiles, tales como dispersiones de alta energía y osmóticas y partículas revestidas, véase Verma et al., Pharmaceutical Technology On-line (2001) 25(2):1-14. Para una discusión del uso de goma de mascar para alcanzar liberación controlada, véase el documento WO 00/35298.

Los compuestos descritos (Fórmula 1 y sales) pueden administrarse también directamente en la circulación sanguínea, en el músculo o en un órgano interno. El medio adecuado para la administración parenteral incluye intravenosa, intraarterial, intraperitoneal, intratecal, intraventricular, intrauretral, intrastemal, intracraneal, intramuscular y subcutánea. Dispositivos adecuados para la administración parenteral incluyen inyectores de aguja (incluyendo microaguja), inyectores sin aguja y técnicas de infusión.

Formulaciones parenterales son típicamente soluciones acuosas que pueden contener excipientes tales como sales, carbohidratos y agentes de tampón (preferiblemente a un pH de 3 a 9), pero para algunas aplicaciones pueden ser formuladas más adecuadamente como una solución estéril no acuosa o como una forma seca para usarse en conjunción con un vehículo adecuado tal como agua estéril y libre de pirógeno. La preparación de formulaciones parenterales en condiciones estériles, por ejemplo, por liofilización, puede lograrse fácilmente usando técnicas farmacéuticas estándar conocidas por los expertos en la técnica.

La solubilidad de los compuestos descritos usados en la preparación de soluciones parenterales puede ser aumentada por el uso de técnicas de formulación apropiadas, tales como la incorporación de agentes que realzan la solubilidad. Las formulaciones para la administración parenteral pueden formularse para ser de liberación inmediata y/o modificada como se describe anteriormente. Así, los compuestos descritos pueden formularse en una forma más sólida para la administración como un depósito implantado que proporcione la liberación a largo plazo del compuesto activo.

Los compuestos de la invención pueden ser administrados también tópicamente a la piel o en la mucosa, dermalmente o transdérmicamente. Formulaciones típicas por esta vía incluyen geles, hidrogeles, lociones, soluciones, cremas, ungüentos, polvos de talco, preparaciones, espumas, películas, parches de la piel, obleas, implantes, esponjas, fibras, vendas y microemulsiones. También pueden usarse liposomas. Vehículos típicos incluyen alcohol, agua, aceite mineral, vaselina neutra líquida, vaselina neutra blanca, glicerina, polietilenglicol y propilenglicol. Formulaciones tópicas pueden incluir también potenciadores de penetración. Véase, por ejemplo, Finnin y Morgan, J. Pharm. Sci. (1999) 88 (10):955-958.

Otro medio de administración tópica incluye el suministro por iontoforesis, electroporación, fonoforesis, sonoforesis y sin aguja (por ejemplo, POWDERJECT) o por inyección con microaguja. Las formulaciones para la administración tópica pueden ser formuladas para ser de liberación inmediata y/o modificada como se describe anteriormente.

Los compuestos descritos también pueden administrarse por la nariz o por inhalación, típicamente en forma de un polvo seco (solo, como una mezcla, por ejemplo, en una mezcla seca con lactosa, o como unas partículas de componentes mixtas, por ejemplo, mezcladas con fosfolípidos) de un inhalador seco en polvo o como un pulverizador de aerosol de un recipiente presurizado, bomba, pulverizador, atomizador (preferiblemente un atomizador que usa electrohidrodinámica para producir una niebla fina), o nebulizador, con o sin el uso de un propulsor adecuado, tal como diclorofluorometano. El recipiente presurizado, la bomba, el pulverizador, atomizador, o nebulizador contienen una solución o suspensión que comprende el compuesto activo, un agente para la dispersión, para la solubilización o para la liberación extendida del compuesto activo (por ejemplo, EtOH o EtOH acuoso), uno o varios disolventes que sirven como un propulsor y un tensioactivo opcional tal como trioleato de sorbitán o un ácido oligoláctico.

Antes del uso en una formulación de polvo seco o suspensión, el producto de fármaco se microniza a un tamaño adecuado para el suministro por inhalación (típicamente en menos de 5 micras). Esto puede lograrse por cualquier método de pulverización apropiado, tal como por micronización de chorro en espiral, micronización de chorro en lecho fluidizado, procesamiento de fluido supercrítico para formar nanopartículas, homogeneización a alta presión o secado por pulverización.

Las cápsulas, ampollas y cartuchos (preparados, por ejemplo, a partir de gelatina o hidroxipropilmetilcelulosa) para uso en un inhalador o insuflador pueden ser formulados para contener una mezcla en polvo del compuesto activo, una base adecuada en polvo tal como la lactosa o el almidón y un modificante del funcionamiento tal como la L-leucina, el manitol o el estearato de magnesio. La lactosa puede ser anhidra o preferiblemente monohidratada. Otros excipientes adecuados incluyen dextrano, glucosa, maltosa, sorbitol, xilitol, fructosa, sacarosa y trehalosa.

Una formulación de solución adecuada para uso en un atomizador que usa electrohidrodinámica para producir una niebla fina puede contener de 1 \mug a 20 mg del compuesto de la invención por impulsión y el volumen de impulsión puede variar de 1 \mul a 100 \mul. Una formulación típica puede comprender un compuesto de Fórmula 1 o Fórmula 2, propilenglicol, agua estéril, EtOH y NaCl. Disolventes alternativos, que pueden usarse en vez de propilenglicol, incluyen polietilenglicol y glicerol.

Las formulaciones para la administración inhalada/intranasal pueden ser formuladas para ser liberadas inmediatamente y/o modificadas usando, por ejemplo, ácido poli-DL-lactic-coglicólico (PGLA). Aromatizantes adecuados, tales como mentol y levomentol, o edulcorantes, tales como sacarina o sacarina de sodio pueden ser añadidos a formulaciones intencionadas para la administración inhalada/intranasal.

En el caso de inhaladores de polvo seco y aerosoles, la unidad de dosificación se determina mediante una válvula que suministra una cantidad medida. Típicamente, unidades conforme a la invención se distribuyen para administrar una dosis medida o "soplo" que contiene de 100 a 1000 \mug del ingrediente farmacéutico activo. La dosis total diaria típicamente estará en el intervalo de 100 \mug a 10 mg que puede ser administrada en una dosis sola o, más por lo general, como dosis divididas a lo largo del día.

Los compuestos activos pueden administrarse por vía rectal o por vía vaginal, por ejemplo, en la forma de un supositorio, pesario o enema. La mantequilla de cacao es una base de supositorio tradicional, pero pueden usarse otras alternativas como apropiadas. Las formulaciones para la administración rectal/vaginal pueden formularse para ser de liberación inmediata y/o modificada como se describe anteriormente.

Los compuestos descritos también pueden administrarse directamente al ojo o al oído, típicamente en forma de gotas de una suspensión micronizada o solución salina isotónica, ajustada en el pH y estéril. Otras formulaciones adecuadas para administración ocular y auditiva incluyen ungüentos, implantes biodegradables (por ejemplo, esponjas de gel absorbibles, colágeno) y no biodegradables (por ejemplo, silicona), obleas, lentillas y sistemas de partículas o vesiculares, tales como niosomas o liposomas. Un polímero tal como ácido poliacrílico entrecruzado, poli(alcohol vinílico), ácido hialurónico, un polímero celulósico (por ejemplo, hidroxipropilmetilcelulosa, hidroxietilcelulosa o metilcelulosa), o un polímero heteropolisacárido (por ejemplo, goma gellan), puede ser incorporado junto con un conservante, tal como el cloruro de benzalconio. Tales formulaciones pueden también ser suministradas por iontoforesis. Las formulaciones para la administración ocular/andial pueden ser formuladas para ser de liberación inmediata y/o modificada como se describe anteriormente.

Los compuestos descritos pueden ser combinados con entidades macromoleculares solubles tales como ciclodextrina o polímeros que contienen polietilenglicol para mejorar su solubilidad, velocidad de disolución, enmascaramiento del sabor, biodisponibilidad y/o estabilidad. Los complejos de ciclodextrina de fármaco, por ejemplo, son encontrados que son generalmente útiles para la mayor parte de las formas de dosificación y vías de administración. Pueden usarse tanto complejos de inclusión como de no inclusión. Como una alternativa para dirigir la complejación con el fármaco, puede usarse la ciclodextrina como aditivo auxiliar, es decir, como vehículo, diluyente o solubilizador. Las alfa-, beta- y gamma- ciclodextrinas se usan comúnmente para estos objetivos. Véase, por ejemplo, las solicitudes de patentes Internacionales WO 91/11172, WO 94/02518 y WO 98/55148.

La dosis terapéuticamente eficaz de los compuestos de Fórmula 1, Fórmula 2 u otras sales variará de aproximadamente 0,01 mg/kg a aproximadamente 100 mg/kg por peso de cuerpo y por día. Dosis típicas adultas serán aproximadamente de 0,1 mg a aproximadamente 3000 mg por día. La cantidad de componente activo en una preparación de dosis de una unidad puede ser variada o ajustada de aproximadamente 0,1 mg a aproximadamente 500 mg, preferiblemente de aproximadamente 0,6 mg a 100 mg de acuerdo con la aplicación particular y la potencia del componente activo. La composición puede, de ser deseado, contener también otros agentes terapéuticos compatibles. A un sujeto en necesidad de tratamiento se le administra una dosificación de aproximadamente 0,6 a aproximadamente 500 mg por día, separadamente o en múltiples dosis durante un período de 24 horas. Tal tratamiento puede ser repetido en intervalos sucesivos para tanto tiempo como sea necesario.

Ejemplos

Los ejemplos siguientes pretenden ser ilustrativos y no restrictivos y pretenden representar realizaciones específicas de la presente invención.

Ejemplo 1 Preparación del éster terc-butílico del ácido 4-[6-(6-bromo-8-ciclopentil-5-metil-7-oxo-7,8-dihidro-pirido[2,3-d]piri- midin-2-ilamino)-piridin-3-il]-piperazin-1-carboxílico

Se calentó una suspensión de 6-bromo-8-ciclopentil-2-metansulfinil-5-metil-8H-pirido[2,3-d]pirimidin-7-ona
(10,00 g, 0,027 mol, preparados como en el Ejemplo 6 del documento WO 01/707041 y 10,37 g (0,0373 mol) del éster terc-butílico del ácido 4-(6-amino-piridin-3-il)-piperazin-1-carboxílico en tolueno (100 mL) en atmósfera de nitrógeno en un baño de aceite durante 7 horas. La cromatografía de capa fina (SiO_{2}, 10% de MeOH/DCM) indicó la presencia de ambos materiales de partida. La suspensión se calentó bajo reflujo durante 18 horas adicionales. La suspensión resultante se enfrió a TA y se filtró para dar el éster terc-butílico del ácido 4-[6-(6-bromo-8-ciclopentil-5-metil-7-oxo-7,8-dihidro-pirido[2,3-d]pirimidin-2-ilamino)-piridin-3-il]-piperazin-1-carboxílico (5,93 g, 38%). Punto de fusión> 250ºC. MS (APCI) M^{+}+1: calculado, 584,2, encontrado, 584,2.

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Ejemplo 2 Preparación del éster terc-butílico del ácido 4-{6-[8-ciclopentil-6-(1-etoxi-vinil)-5-metil-7-oxo-7,8-dihidro-pirido[2,3-d]pirimidin-2-ilamino]-piridin-3-il}-piperazin-1-carboxílico

Una suspensión del éster terc-butílico del ácido 4-[6-(6-bromo-8-ciclopentil-5-metil-7-oxo-7,8-dihidro-pirido[2,3-d]pirimidin-2-ilamino)-piridin-3-il]-piperazin-1-carboxílico (5,93 g, 0,010 mol, preparados como en el Ejemplo 1), tetrakis (trifenilfosfina) paladio (0) (1,40 g, 0,00121 mol) y tributil(1-etoxivinil)tin (5,32 mL, 0,0157 mol) en tolueno (30 mL) se calentó bajo reflujo durante 3,5 horas. La mezcla se enfrió y se filtró para dar un sólido. La purificación del sólido por cromatografía de gel de sílice usando un gradiente de acetato de etilo/hexano del 5%-66% en 15 minutos dió el éster terc-butílico del ácido 4-{6-[8-ciclopentil-6-(1-etoxi-vinil)-5-metil-7-oxo-7,8-dihidro-pirido[2,3-d]pirimidin-2-ilamino]-piridin-3-il}-piperizin-1-carboxílico como una espuma amarilla (4,50 g, 78%). MS (APCI) M^{+}+1: calculado 576,2, encontrado, 576,3.

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Ejemplo 3 Preparación de hidrocloruro de 6-acetil-8-ciclopentil-5-metil-2-(5-piperazin-1-il-piridin-2-ilamino)-8H-pirido[2,3-d]pirimidin-7-ona

Se burbujeó gas cloruro de hidrógeno en una solución enfriada en baño de hielo del éster terc-butílico del ácido 4-{6-[8-ciclopentil-6-(1-etoxi-vinil)-5-metil-7-oxo-7,8-dihidro-pirido[2,3-d]pirimidin-2-ilamino]-piridin-3-il}-pipera-
zin-1-carboxílico (4,50 g, 0,00783 mol, preparado como en el Ejemplo 2) en DCM (100 mL). La suspensión resultante fue taponada y agitada a TA de la noche a la mañana y entonces fue diluída con dietiléter (200 mL). El sólido se recogió por filtración, se lavó con dietiléter y se secó para dar la sal de hidrocloruro de 6-acetil-8-ciclopentil-5-metil-2-(5-piperazin-1-il-piridin-2-ilamino)-8H-pirido[2,3-d]pirimidin-7-ona como un sólido amarillo (4,01 g, 92%). Punto de fusión 200ºC. HPLC, C18 fase inversa, gradiente del 10%-95% de 0,1% de TFA/CH_{3}CN en 0,1% de TFA/H_{2}O durante 22 minutos: 99,0% a 11,04 minutos. MS (APCI) M^{+}+1: calculado, 448,2, encontrado, 448,3. Anal. calculado para C_{24}H_{29}N_{7}O_{2}\cdot2,4H_{2}O-1,85HCl: C, 51,64; H, 6,44; N, 17,56, Cl (total), 11,75. Encontrado: C, 51,31; H, 6,41; N, 17,20; Cl (total), 12,11.

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Ejemplo 4 Preparación de una sal de mono-isetionato de 6-acetil-8-ciclopentil-5-metil-2-(5-piperazin-1-il-piridin-2-ilamino)-8H-pirido[2,3-d]pirimidin-7-ona (Forma B)

A una mezcla de 6-acetil-8-ciclopentil-5-metil-2-(5-piperazin-1-il-piridin-2-ilamino)-8H-pirido[2,3-d]pirimidin-7-ona (7,0 g, 15,64 mmol, preparados como en el Ejemplo 3 después del contacto con NaOH) dispersada en 250 ml de agua se añadió gota a gota 30 mL de una solución 0,52 M de ácido isetiónico en MeOH (15,64 mmol) a un pH de 5,2. La solución se filtró por un filtro de vidrio (fino) y la solución clara se liofilizó para dar 9,4 g de la sal amorfa. La sal amorfa (3,16 g) se mezcló con 25 mL de MeOH y después de la disolución casi completa se formó un nuevo precipitado. Se añadieron otros 25 mL de MeOH y la mezcla se agitó de 46ºC a 49ºCdurante cuatro horas. La mezcla se enfrió despacio a 32ºC y se puso en un cuarto frío (+4ºC) de la noche a la mañana. Se tomó una muestra para PXRD, que indicó la formación de la Forma B. La mezcla se filtró y el precipitado se secó de la noche a la mañana a 50ºC en una estufa al vacío. Esto supuso 2,92 g de la sal de mono-isetionato del compuesto de Fórmula 1 con un rendimiento del 92%. HPLC - 99,25%. PXRD - Forma B, CHNS, H-RMN fueron compatibles con la estructura.

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Ejemplo 5 Preparación de una sal de mono-isetionato de 6-acetil-8-ciclopentil-5-metil-2-(5-piperazin-1-il-piridin-2-ilamino)-8H-pirido[2,3-d]pirimidin-7-ona (Forma D)

Se colocó MeOH (100 mL) en un matraz de 250 mL equipado con un agitador mecánico, termopar/regulador, condensador y manta calefactora y se precalentó a 35ºC. Una sal de isetionato amorfa (2 g, preparada como en el Ejemplo 4) se añadió despacio en tres partes con un intervalo de 25 minutos a 30 minutos entre las adiciones. La mezcla de reacción se agitó de la noche a la mañana a 35ºC y posteriormente se enfrió. Una muestra se filtró y se examinó por PXRD. Era la Forma B pura. La mezcla de reacción entera fue usada entonces como semillas de la Forma B en un experimento a escala más grande.

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Ejemplo 6 Preparación de una sal de mono-isetionato de 6-acetil-8-ciclopentil-5-metil-2-(5-pirimidin-1-il-piridin-2-ilamino)-8H-pirido[2,3-d]pirimidin-7-ona (Forma B)

Se colocó MeOH (50 mL) en un matraz de 250 mL equipado con un agitador magnético, condensador, termopar/regulador y manta de calentamiento y se precalentó a 40ºC. Se añadió despacio una sal de isetionato amorfa (1 g, preparada como en el Ejemplo 4) en tres partes con un intervalo de 30 minutos entre las partes y luego se agitó de la noche a la mañana a 40ºC. La reacción fue controlada por espectroscopia Raman in situ. La muestra se tomó, se filtró y se analizó por PXRD. Era la Forma B pura por PXRD y por espectroscopia Raman. La mezcla se enfrió a 25ºC a una velocidad de 3ºC/h, se enfrió a -10ºC, se filtró y se secó al vacío para dar 0,85 g del producto cristalino de la Forma B.

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Ejemplo 7 Preparación de una sal de mono-isetionato de 6-acetil-8-ciclopentil-5-metil-2-(5-piperazin-1-il-piridin-2-ilamino)-8H-pirido[2,3-d]pirimidin-7-ona (Forma B)

Se mezcló la base libre (Fórmula 1, 0,895 mg, 2 mmol) con 10 mL de MeOH y se sembró con 33 mg de una sal de mono-isetionato del compuesto de Fórmula 1 (Forma B). Entonces fueron añadidos 5,6 mL de una solución 0,375 M de ácido isetiónico en MeOH (2,1 mmol) en hasta 10 porciones en un período de tiempo de 75 minutos. La mezcla se agitó durante una hora adicional y se tomó una muestra para el análisis PXRD. Esto confirmó la formación de la Forma B cristalina. La mezcla se agitó a TA de la noche a la mañana y se tomó otro PXRD. No hubo ningún cambio de la forma cristalina. La mezcla se enfrió en un refrigerador a -8ºC de la noche a la mañana, se filtró y se secó a 50ºC en una estufa al vacío para dar 1,053 g (91,8% de teoría) del compuesto susodicho (Forma B). HPLC -99,8%, CHNS, H-RMN, IR son consistentes con la estructura, PXRD - Forma B.

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Ejemplo 8 Preparación de una sal de mono-isetionato de 6-acetil-8-ciclopentil-5-metil-2-(5-piperazin-1-il-piridin-2-ilamino)-8H-pirido[2,3-d]pirimidin-7-ona (Forma A)

Se mezcló una sal de isetionato amorfa (47 mg preparados como en el Ejemplo 4) con 4 mL de EtOH en un matraz de 15 mL equipado con un agitador magnético, termopar y condensador. La mezcla se calentó al reflujo, lo que causó la formación de una solución casi clara. Después del reflujo durante 10-15 minutos, la mezcla se enturbió. Se enfrió despacio a 50ºC y se sembró a 69ºC con la Forma A. La mezcla se mantuvo a 50ºC durante 5 h y se permitió enfriar a TA de la noche a la mañana. La mezcla se enfrió posteriormente a 1ºC con un baño de hielo, se mantuvo durante 1,5 h, se filtró, se lavó con 0,5 mL de EtOH frío, se secó al aire y luego se secó en una estufa al vacío a 70ºC de la noche a la mañana para dar 38,2 mg de un material cristalino fino. Se encontró que el material cristalino era la Forma A de la sal de mono-isetionato por PXRD. El H-RMN fue consistente para la sal de mono-isetionato e indicó la presencia de EtOH residual en aproximadamente 5,9% en mol o 0,6% en peso.

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Ejemplo 9 Preparación de una sal de mono-isetionato de 6-acetil-8-ciclopentil-5-metil-2-(5-piperazin-1-il-piridin-2-ilamino)-8H-pirido[2,3-d]pirimidin-7-ona (Forma D)

Se mezcló una sal de isetionato amorfa (9,0 g, preparada como en el Ejemplo 4) con 300 mL de MeOH, se agitó y se calentó a 63,8ºC (a reflujo). A la mezcla ligeramente turbia se le añadieron dos partes de 50 mL de MeOH. La mezcla caliente se filtró en un matraz de 2 L equipado con un agitador mecánico. La mezcla se calentó brevemente a reflujo y luego se enfrió a 60ºC. Se añadió IPA (100 mL) a la mezcla. La mezcla se calentó de nuevo a 60ºC y se añadieron 110 mL adicionales de IPA. Comenzó a formarse un precipitado a 59,7ºC. La mezcla se calentó de nuevo a 67,5ºC, se enfrió a 50ºC y se mantuvo de la noche a la mañana. Se tomó una muestra a la mañana siguiente para el análisis PXRD. La mezcla se enfrió a 25ºC a una velocidad de 3ºC/h y se tomó otra muestra de PXRD cuando la mezcla alcanzó los 28ºC. Se permitió a la mezcla enfriarse a TA de la noche a la mañana. Se recogió un precipitado y se secó en una estufa al vacío a 65ºC y 30 Torr. El procedimiento produjo 7,45 g (rendimiento del 82,8%) del compuesto cristalino (Forma D por el análisis PXRD). Las muestras antes analizadas fueron también la Forma D. El HPLC mostró una pureza del 98,82% y el microanálisis de CHNS estuvo dentro de +/-0,4%. Una mezcla de la Forma A, B y D de la sal de isetionato en MeOH proporcionó la Forma B sustancialmente pura en menos de tres días.

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Ejemplo 10 Preparación de ácido isetiónico (ácido 2-hidroxi-etanosulfónico)

Se cargó un matraz de fondo redondo de 5 L con cuatro bocas equipado con un agitador mecánico, termopar, suministrador de gas y ventilación a la atmósfera por una trampa de agua con 748 g (5,05 mol) de isetionato de sodio (ALDRICH) y 4 L de IPA. La mezcla se agitó a TA. Se usó un baño de hielo para mantener la temperatura interna por debajo de 50ºC al tiempo que se insuflaron 925 g (25,4 mol) de gas cloruro de hidrógeno (ALDRICH) en el sistema a una velocidad tal que se disolvió tan rápido como fue añadido (como se observó por la carencia de burbujeo por la trampa de agua). Fue añadido gas HCl suficiente hasta que el sistema fue saturado (como se observó por el principio de burbujeo por la trampa de agua). Durante la adición de HCl, la temperatura subió a 45ºC. La mezcla se enfrió a TA y se filtró sobre un filtro frito-grueso. La torta se lavó con 100 mL de IPA y el filtrado turbio se filtró a través de un filtro de 10-20 \mu. El filtrado resultante claro, sin color, fue concentrado bajo presión reducida en un evaporador rotatorio, manteniendo la temperatura del baño por debajo de 50ºC. Se diluyeron los 1,07 kg resultantes del aceite ligero amarillo claro con 50 mL de agua del grifo y 400 mL de tolueno y se concentraron bajo presión reducida en un evaporador rotatorio durante tres días, manteniendo la temperatura del baño por debajo de 50ºC. Los resultantes 800 g de aceite ligero amarillo claro fueron diluidos con 500 mL de tolueno y 250 mL de IPA y se concentraron bajo presión reducida en un evaporador rotatorio durante 11 días, manteniendo la temperatura del baño por debajo de 50ºC. Los resultantes 713 g del aceite ligero amarillo claro fueron titulados en 81% en peso (580 g, rendimiento del 91,1%) conteniendo 7,9% en peso de agua y 7,5% en peso de IPA.

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Ejemplo 11 Preparación del éster terc-butílico del ácido 4-{6-[6-(1-butoxi-vinil)-8-ciclopentil-5-metil-7-oxo-7,8-dihidro-pirido[2,3-d]pirimidin-2-ilamino]-piridin-3-il}-piperazin-1-carboxílico

Un matraz de fondo redondo de 5 L y tres bocas equipado con un agitador mecánico, un termopar y una entrada/salida de nitrógeno conectada a través de un burbujeador de aceite de silicona fue colocado bajo una atmósfera de nitrógeno y cargado con éster terc-butílico del ácido 4-[6-(6-bromo-8-ciclopentil-5-metil-7-oxo-7,8-dihidro-pirido[2,3-d]pirimidin-2-ilamino)-piridin-3-il]-pipierazin-1-carboxílico (300 g, 0,51 mol, preparado como en el Ejemplo 2), vinil-butil-éter (154 g, 1,54 mol, ALDRICH), n-butanol (1,5 L, ALDRICH) y diisopropil etilamina (107 mL, 0,62 mol, ALDRICH). La mezcla fue colocada bajo un vacío de aproximadamente 50 Torr y luego fue rellenada con nitrógeno 3 veces. A esto fueron añadidos 8,3 g (0,01 mol) de dicloruro diclorometano de bis-(difenilfosfinoferroceno)-paladio (JOHNSON MATTHEY, Lote 077598001) y la mezcla resultante fue purgada tres veces adicionales como se describe anteriormente. La mezcla entonces se calentó a 95ºC y se agitó durante 20 h. La mezcla resultante fina y roja fue diluida con 2 L de heptano y enfriada a aproximadamente 5ºC. A esta temperatura, se añadieron 400 mL de carbonato de potasio acuoso saturado y la mezcla se filtró y se aclaró con 250 mL de heptano. Después de secar en una estufa durante 16 h a 45ºC, se obtuvieron 231,7 g (rendimiento del 75%) del compuesto del título como un sólido amarillo.

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Ejemplo 12 Preparación de una sal de mono-isetionato de 6-acetil-8-ciclopentil-5-metil-2-(5-piperazin-1-il-piridin-2-ilamino)-8H-pirido[2,3-d]pirimidin-7-ona (Forma B)

Un matraz de fondo redondo de 22 L y tres bocas equipado con un agitador mecánico, un termopar y una entrada/salida de nitrógeno conectada a través de un burbujeador de aceite de silicona se colocó bajo una atmósfera de nitrógeno y se cargo con éster terc-butílico del ácido 4-{6-[6-(1-butoxi-vinil)-8-ciclopentil-5-metil-7-oxo-7,8-dihidro-pirido-[2,3-d]pirimidin-2-ilamino]-piridin-3-il}-piperazin-1-carboxílico (725 g, 1,20 mol, preparado como en el Ejemplo 11) y MeOH (14 L). La mezcla se agitó a TA según fue cargada con una solución de ácido isetiónico (530 g, 4,20 mol, preparado como en el Ejemplo 10), MeOH (1,5 L) y agua (70 mL, 3,89 mol). La mezcla resultante se calentó a 55ºC en 30 minutos y luego se agitó a 55ºC durante 30 minutos. Una solución de 175 g (1,73 mol) de Et_{3}N (ALDRICH) en 200 mL de MeOH fue cargada a la mezcla según fue enfriada a 30ºC. La mezcla se mantuvo a 30ºC al tiempo en el que se añadió una solución de 128 g (1,26 mol) de Et_{3}N en 2 L de MeOH gota a gota durante 6 horas. La mezcla resultante fue analizada para determinar la forma del cristal (Forma B). La mezcla se enfrió y se mantuvo a 5ºC durante 15 minutos y posteriormente se filtró por un filtro frito grueso. La torta de filtro resultante fue lavada con múltiples lavados de 200 mL de MeOH frío. El producto sólido se secó a 55ºC bajo el vacío para proporcionar 710 g (rendimiento del 91%) del compuesto del título como cristales amarillos.

Claims

1. Una sal de isetionato de 6-acetil-8-ciclopentil-5-metil-2-(5-piperazin-1-il-piridin-2-ilamino)-8H-pirido[2,3-d]
pirimidin-7-ona.

2. La sal de isetionato de la reivindicación 1 que comprende una sal de mono-isetionato de la Forma A, caracterizada por uno o más de los siguientes: un perfil de difracción de rayos X en polvo que tiene picos en valores 2\theta de 8,7, 13,5 y 17,6, o un espectro Raman que tiene picos en valores de desplazamiento Raman de 1600 cm^{-1}, 1290 cm^{-1}, 675 cm^{-1}, 470 cm^{-1}, 450 cm^{-1} y 425 cm^{-1}, o un termograma DSC que tiene una endotermia estrecha a 273ºC.

3. La sal de isetionato de la reivindicación 1 que comprende una sal de mono-isetionato de la Forma B, caracterizada por uno o más de los siguientes: un perfil de difracción de rayos X en polvo que tiene picos en valores 2\theta de 5,1, 11,8, 12,1, 12,8, 13,1 y 14,7, un espectro Raman que tiene picos en valores de desplazamiento Raman de 1600 cm^{-1}, 1290 cm^{-1}, 470 cm^{-1}, 450 cm^{-1} y 425 cm^{-1}, pero que no tiene sustancialmente ningún pico a 675 cm^{-1}, o un termograma DSC que tiene una endotermia estrecha a 271ºC.

4. La sal de isetionato de la reivindicación 1 que comprende una sal de mono-isetionato de la Forma D, caracterizada por uno o más de los siguientes: un perfil de difracción de rayos X en polvo que tiene picos en valores 2\theta de 8,4, 8,9 y 21,9, un espectro Raman que tiene un pico en un valor de desplazamiento Raman de463 cm^{-1}, o un termograma DSC que tiene una endotermia estrecha a 277ºC.

5. Una forma de administración farmacéutica que comprende una sal de isetionato de 6-acetil-8-ciclopentil-5-metil-2-(5-piperazin-1-il-piridin-2-ilamino)-8H-pirido[2,3-d]pirimidin-7-ona y uno o más excipientes farmacéuticamente aceptables.

6. Un método para preparar una sal de isetionato cristalina de 6-acetil-8-ciclopentil-5-metil-2-(5-piperazin-1-il-piridin-2-ilamino)-8H-pirido[2,3-d]pirimidin-7-ona, comprendiendo el método:

combinar una solución de ácido isetiónico y un primer disolvente con una dispersión de 6-acetil-8-ciclopentil-5-metil-2-(5-piperazin-1-il-pirazin-2-ilamino)-8H-pirido[2,3-d]pirimidin-7-ona y agua para producir una primera mezcla;

liofilizar la primera mezcla para dar una sal amorfa;

mezclar la sal amorfa con un segundo disolvente para producir una segunda mezcla que incluye una sal de isetionato cristalina de 6-acetil-8-ciclopentil-5-metil-2-(5-piperazin-1-il-piridin-2-ilamino)-8H-pirido[2,3-d]pirimidin-7-ona, siendo el segundo disolvente el mismo o diferente que el primer disolvente; y

opcionalmente calentar la segunda mezcla, refrigerar la segunda mezcla, o calentar y refrigerar la segunda mezcla.

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7. Un método para preparar una sal de isetionato de 6-acetil-8-ciclopentil-5-metil-2-(5-piperazin-1-il-piridin-2-ilamino)-8H-pirido[2,3-d]pirimidin-7-ona que comprende:

proporcionar un cristal de semilla de una forma de sal de isetionato de 6-acetil-8-ciclopentil-5-metil-2-(5-piperazin-1-il-piridin-2-ilamino)-8H-pirido[2,3-d]pirimidin-7-ona;

añadir el cristal de semilla a una dispersión de 6-acetil-8-ciclopentil-5-metil-2-(5-piperazin-1-il-piridin-2-ilamino)-8H-pirido[2,3-d]pirimidin-7-ona y un primer disolvente para producir una primera mezcla;

combinar la primera mezcla con una solución de ácido isetiónico y un segundo disolvente para producir una segunda mezcla que incluye la sal de isetionato de 6-acetil-8-ciclopentil-5-metil-2-(5-piperazin-1-il-piridin-2-ilamino)-8H-pirido[2,3-d]pirimidin-7-ona; y

opcionalmente calentar la segunda mezcla, enfriar la segunda mezcla, o calentar y enfriar la segunda mezcla.

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8. El método de las reivindicaciones 6 ó 7, en el que el primer y segundo disolventes son miscibles en agua.

9. El método de las reivindicaciones 6 ó 7, en el que el primer y segundo disolventes son alcoholes.

10. El método de las reivindicaciones 6 ó 7, en el que el primer y segundo disolventes son MeOH.

11. El método de las reivindicaciones 6 ó 7, en el que la primera mezcla o la segunda mezcla, respectivamente, se produce combinando aproximadamente cantidades equimolares de ácido isetiónico y 6-acetil-8-ciclopentil-5-metil-2-(5-piperazin-1-il-piridin-2-ilamino)-8H-pirido[2,3-d]pirimidin-7-ona.

12. El método de la reivindicación 6 ó 7, que comprende además agitar la segunda mezcla a una temperatura en el intervalo de 30ºC a 60ºC.

13. El método de la reivindicación 6 ó 7, que comprende además enfriar la segunda mezcla a una temperatura igual o inferior a 0ºC.

14. Un método para preparar una sal de isetionato de 6-acetil-8-ciclopentil-5-metil-2-(5-piperazin-1-il-piridin-2-ilamino)-8H-pirido[2,3-d]pirimidin-7-ona, comprendiendo el método:

hacer reaccionar el éster terc-butílico del ácido 4-{6-[6-(1-butoxi-vinil)-8-ciclopentil-5-metil-7-oxo-7,8-dihidro-pirido-[2,3-d]pirimidin-2-ilamino}-piridin-3-il)-piperazin-1-carboxílico con el ácido isetiónico en un primer disolvente y agua para dar una mezcla que incluye una sal de di-isetionato de 6-acetil-8-ciclopentil-5-metil-2-(5-piperazin-1-il-piridin-2-ilamino)-8H-pirido[2,3-d]pirimidin-7-ona.

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15. El método de la reivindicación 14, que comprende además añadir una base impedida a la mezcla de reacción para dar una sal de mono-isetionato de 6-acetil-8-ciclopentil-5-metil-2-(5-piperazin-1-il-piridin-2-ilamino)-8H-pirido[2,3-d]pirimidin-7-ona.

16. El uso de una sal de isetionato de 6-acetil-8-ciclopentil-5-metil-2-(5-piperazin-1-il-piridin-2-ilamino)-8H-pirido[2,3-d]pirimidin-7-ona para la fabricación de un medicamento para el tratamiento de un trastorno o condición causado por la proliferación de células anormales en un mamífero, incluyendo un ser humano.

17. El uso de la reivindicación 16, en el que el trastorno o la condición es proliferación de músculo liso vascular asociada con aterosclerosis, estenosis post-quirúrgica vascular y reestenosis y endometriosis.

18. El uso de la reivindicación 16, en el que la proliferación de células anormales es un cáncer.

19. El uso de una sal de isetionato de 6-acetil-8-ciclopentil-5-metil-2-(5-piperazin-1-il-piridin-2-ilamino)-8H-pirido[2,3-d]pirimidin-7-ona para la fabricación de un medicamento para el tratamiento de un trastorno o condición causado por infecciones virales o micóticas en un mamífero, incluyendo un ser humano.

20. El uso de una sal de isetionato de 6-acetil-8-ciclopentil-5-metil-2-(5-piperazin-1-il-piridin-2-ilamino)-8H-pirido[2,3-d]pirimidin-7-ona para la fabricación de un medicamento para el tratamiento de una enfermedad autoinmune en un mamífero, incluyendo un ser humano.

21. El uso de la reivindicación 20, en el que la enfermedad autoinmune es psoriasis, artritis reumatoide de tipo inflamatoria, lupus, diabetes tipo I, nefropatía diabética, esclerosis múltiple, glomerulonefritis, rechazo de transplante de órganos, incluyendo la enfermedad injerto-contra-huésped.