KR20060054300A

KR20060054300A - 선택적인 사이클린 의존성 키나제 4 억제제로서의이세싸이오네이트 염

Info

Publication number: KR20060054300A
Application number: KR1020067000729A
Authority: KR
Inventors: 블라디미르 게누크 베일린; 안토니 클라이드 블랙번; 데이비드 토마스 어드만; 피터 로렌스 투굿
Original assignee: 워너-램버트 캄파니 엘엘씨
Priority date: 2003-07-11
Filing date: 2004-06-28
Publication date: 2006-05-22
Also published as: CL2004001701A1; RU2006101052A; MXPA06000484A; UY28404A1; SI1648889T1; AU2004255934A1; US7345171B2; ES2313016T3; PE20050700A1; BRPI0412516A; US20050059670A1; CA2532049C; CN1835951B; NZ544609A; JP2007530425A; ZA200600230B; ATE412650T1; NO335100B1; NO20060386L; DE602004017474D1

Abstract

본 발명은 염증 및 세포 증식 질병, 예를 들면 암 및 재발협착증을 치료하는데 유용한 선택적인 사이클린-의존성 키나제 4(CDK4) 억제제인 6-아세틸-8-사이클로펜틸-5-메틸-2-(5-피페라진-1-일-피리딘-2-일아미노)-8H-피리도[2,3-d]피리미딘-7-온의 이세싸이오네이트 염의 다형체에 관한 것이다.

Description

선택적인 사이클린 의존성 키나제 4 억제제로서의 이세싸이오네이트 염{ISETHIONATE SALT OF A SELECTIVE CDK4 INHIBITOR}

본 발명은 염증 및 세포 증식 질병, 예를 들면 암 및 재발협착증을 치료하는데 유용한 선택적인 사이클린-의존성 키나제 4(CDK4) 억제제인 6-아세틸-8-사이클로펜틸-5-메틸-2-(5-피페라진-1-일-피리딘-2-일아미노)-8H-피리도[2,3-d]피리미딘-7-온의 염 형태에 관한 것이다.

사이클린 의존성 키나제 및 연관된 세린/트레오닌 단백질 키나제는 세포의 분할 및 증식 조절에 있어 본질적인 역할을 수행하는 중요한 세포 효소이다. 사이클린 의존성 키나제 촉매 유니트는 사이클린으로 공지된 조절 서브유니트에 의해 활성화된다. 16개 이상의 포유동물 사이클린이 확인되었다(존슨(D.G. Johnson) 및 워커(C.L. Walker) 등의 문헌[Annu. Rev. Pharmacol. Toxicol. (1999) 39:295-312]) 참고). 사이클린 B/CDK1, 사이클린 A/CDK2, 사이클린 E/CDK2, 사이클린 D/CDK4, 사이클린 D/CDK6, 및 CDK3 및 CDK7을 포함하는 다른 이종이량체가 세포 주기 진행의 중요한 조절자이다. 사이클린/CDK 이종이량체의 추가의 역할은 전사, DNA 보수, 분화 및 아팝토시스(apoptosis)의 조절을 포함한다. (모르간(D.O. Morgan)의 문헌[Annu. Rev. Cell. Dev. Biol. (1997) 13261-13291].

사이클린 의존성 키나제 억제제는 암의 치료에 유용한 것으로 입증될 수 있다. 사이클린 의존성 키나제의 증가된 활성 또는 일시적인 비정상적 활성화가 인간의 암의 전개를 야기시키는 것으로 보인다(셔(C. J. Sherr)의 문헌[Sience(1996) 274: 1672-1677]). 실제로, 인간의 종양 발전은 흔히 CDK 단백질 그 자체 또는 이들의 조절에서의 변화와 연관되어 있다(코돈-카르도(C. Cordon-Cardo)의 문헌[Am. J.Pathol. (1995) 147:545-560]; 카프(J. E. Karp) 및 브로더(S. Broder)의 문헌[Nat. Med. (1995) 1:309-320]; 할(M. Hall) 등의 문헌[Adv. Cancer Res. (1996) 68:67-108] 참조). CDK의 자연적으로 발생하는 단백질 억제제, 예를 들면 p16 및 p27은 폐암 세포주에서 생체외 성장 억제를 야기한다(캄브(A. Kamb)의 문헌[Curr. Top.Microbiol. Immunol. (1998)227 :139-148]).

작은 분자 CDK 억제제는 또한 심혈관 질병, 예를 들면 재발협착증 및 아테롬성 동맥경화증, 및 비정상적인 세포 증식으로 인한 다른 혈관 질병의 치료에 유용할 수 있다. 기구 혈관 형성술 이후의 혈관내막 과형성증 및 혈관 평활근 증식은 사이클린-의존성 키나제 억제제인 단백질 p21의 과다발현에 의해 억제된다(창(M.W. Chang) 등의 문헌[J. Clin. Invest. (1995) 96:2260]; 양(Z-Y. Yang) 등의 문헌[Proc.Natl.Acad.Sci.(USA)(1996) 93:9905] 참조). 더욱이, 퓨린 CDK2 억제제인 CVT 313(Ki=95nM)은 래트에서 신생혈관내막 형성을 80% 이상 억제한다(브룩스(E. E. Brooks) 등의 문헌[J. Biol. Chem. (1997) 29207-29211]).

CDK 억제제는 진균, 원생동물 기생충, 예를 들면 플라스모디움 팔시파룸(Plasmodium falciparum) 및 DNA 및 RNA 바이러스를 포함하는 다양한 감염원에 의한 질병을 치료하는데 이용될 수 있다. 예를 들면 사이클린-의존성 키나제는 허피스 심플렉스 바이러스(HSV)에 의한 감염 후의 바이러스 증식에 필요하고(샹(L. M. Schang) 등의 문헌[J. Virol. (1998) 72: 5626] 참고), CDK 동족체는 효모에서 필수적인 역할을 하는 것으로 알려져 있다.

선택적인 CDK 억제제는 다양한 자가면역 질환의 효과를 완화시키기 위해 사용될 수 있다. 만성 염증성 질병인 류마티스성 관절염은 활액 조직 과형성증을 특징으로 한다. 활액 조직 증식을 억제하면 염증이 최소화되고, 관절의 파괴를 방지한다. 활액 섬유아세포에서 CDK 억제제인 단백질 p16의 발현이 성장을 억제시키는 것으로 발견되어왔다(다니구치(K. Taniguchi) 등의 문헌[Nat Med. (1999) 5: 760-767] 참조). 유사하게, 관절염의 래트 모델에서, p16 발현 아데노바이러스를 이용한 치료에 의해 관절 팽윤이 실질적으로 억제되었다. CDK 억제제는 건선(케라티노사이트 과증식을 특징으로 한다), 사구체 신염 및 루퍼스를 포함하는 다른 세포 증식 질환에도 효과적일 수 있다.

일부 CDK 억제제는 정상적인 형질전환되지 않은 세포의 세포 주기 진행을 억제하는 능력을 통해 화학보호제로서 사용될 수 있다(첸(Chen) 등의 문헌[J. Natl. Cancer Institute (2000) 92: 1999-2008]). 세포독성 약물을 이용하기 전에 암 환자를 CDK 억제제로서 전처리하면 화학치료에 흔히 연관되는 부작용을 감소시킬 수 있다. 정상적인 증식 조직은 선택적인 CDK 억제제의 작용에 의한 세포독성 효과로 부터 보호된다.

사이클린-의존성 키나제의 작은 세포 억제제에 대한 리뷰 문헌은 다른 효소를 억제하지 않고 특정 CDK 단백질만을 억제하는 화합물을 확인하는 것이 어렵다는 점을 언급하고 있다. 따라서, 다양한 질병을 치료할 수 있는 이들의 능력에도 불구하고, 현재 상업적인 용도로 승인된 CDK 억제제가 없다(피셔(P. M. Fischer) 등의 문헌[Curr. Opin. Drug Discovery (2001) 4: 623-634]; 프라이(D. W. Fry) 및 가레트(M. D. Garrett)의 문헌[Curr. Opin. Oncologic, Endocrine & Metabolic Invest. (2000) 2: 40-59]; 웹스터(K.R. Webster) 및 킴볼(D.Kimball)의 문헌[Emerging Drugs(2000) 5:45-59]; 실레키(T.M. Sielecki) 등의 문헌[J.Med.Chem. (2000)43 :1-18] 참고).

이런 어려움에도 불구하고, 최근의 연구는, 상기 논의된 바와 같이 항암제로서 또는 화학보호제로서 암의 치료에 유용하고, 재발협착증과 아테롬성 동맥경화와 같은 심혈관 질병, 감염원에 의한 질병 및 류마티스성 관절염을 포함하는 자가면역 질환을 치료하는데 유용한 것으로 입증될 수 있는 다수의 선택적인 CDK4 억제제를 확인하여왔다. 이들 선택적인 CDK4 억제제에 대한 상세한 내용은 본원에 전체가 참고로 인용되어 있는 일반 양도된 국제 특허 출원 제 PCT/IB03/00059 호(2003년 1월 10일 출원; 이후에는 '059 출원으로 약칭함)를 참고할 수 있다.

'059호 출원은 특히 강력하고 선택적인 CDK4 억제제인 6-아세틸-8-사이클로펜틸-5-메틸-2-(5-피페라진-1-일-피리딘-2-일아미노)-8H-피리도[2,3-d]피리미딘-7-온을 개시하고 있다.

표준 효소 분석에서, 화학식 1의 화합물은 CDK4 및 CDK2 억제(25℃에서)에 대해서 각각 0.011 μM 및 >5 μM의 IC₅₀ 농도를 보인다. IC₅₀ 측정을 위한 표준 CDK4 및 CDK2 분석에 대한 논의는 문헌[D. W. Fry et al., J. Biol. Chem. (2001) 16617-16623]을 참조하시오.

화학식 1의 화합물이 강력하고 선택적인 CDK4 억제제이지만, 약학적 제품에서의 이것의 사용은 여러 과제를 제공한다. 예컨대, 유리 염기는 나쁜 수 용해도(9 μg/㎖)를 갖고, 동물 연구에서 낮은 생체이용률을 보인다. 화학식 1의 화합물의 다이-HCl 염은 적당한 수 용해도를 보이는 것으로 나타난다. 그러나, 습기 흡수 연구에서는, 매우 낮은 상대 습도(10% RH)에서도, 다이-HCl 염이 이것의 질량의 약 2% 초과의 양으로 물을 흡수하여, 고체 약제 제조에서 사용하는데 부적당하다는 것이 밝혀졌다. 화학식 1의 화합물의 모노-HCl 염은 가까스로 흡습성이어서, 80% 초과의 상대 습도에서 이것의 질량의 2%를 초과하여 흡수한다. 그러나, 모노-HCl 염의 제조방법은 부분적으로 결정질인 약제 물질을 수득하여, 공정의 확대 시에 잠재적인 문제를 암시한다. 따라서, 화학식 1의 화합물의 다른 염 형태가 필요하다.

발명의 요약

본 발명은 화학식 2로 표시되는, 6-아세틸-8-사이클로펜틸-5-메틸-2-(5-피페라진-1-일-피리딘-2-일아미노)-8H-피리도[2,3-d]피리미딘-7-온의 모노-이세싸이오네이트 염을 제공한다:

본 발명의 이세싸이오네이트 염은 형태 A, 형태 B 및 형태 D를 포함하는 하나 이상의 다형체(polymorph)로서 존재할 수 있다. 각 다형체는 이들의 분말 X-선 회절(PXRD) 패턴(디프렉토그램), 라만 스펙트럼, 시차 주사 열계량법(DSC) 서모그램, 또는 PXRD 패턴, 라만 스펙트럼 및 DSC 서모그램의 일부 조합에 의해 구별될 수 있다. 이세싸이오네이트 염은 무수물이거나, 또는 다양한 양의 물 또는 하나 이상의 용매를 함유할 수 있다.

따라서, 본 발명의 한 양태는 6-아세틸-8-사이클로펜틸-5-메틸-2-(5-피페라진-1-일-피리딘-2-일아미노)-8H-피리도[2,3-d]피리미딘-7-온(형태 A로 지정)을 제공하고, 이는 다음 중 하나 이상의 특성을 갖는다: 2θ 값에서 약 8.7, 13.5 및 17.6의 피크를 갖는 분말 X-선 회절 패턴; 라만 쉬프트 값에서 약 1600 cm^-1, 1290 cm^-1, 675 cm^-1, 470 cm^-1, 450 cm^-1 및 425 cm^-1의 피크를 갖는 라만 스펙트럼; 또는 273℃에서 예리한 내열원을 갖는 DSC 서모그램.

본 발명의 다른 양태는 6-아세틸-8-사이클로펜틸-5-메틸-2-(5-피페라진-1-일-피리딘-2-일아미노)-8H-피리도[2,3-d]피리미딘-7-온(형태 B로 지정)을 제공하고, 이는 다음 중 하나 이상의 특성을 갖는다: 2θ 값에서 약 5.1, 11.8, 12.1, 12.8, 13.1 및 14.7의 피크를 갖는 분말 X-선 회절 패턴; 라만 쉬프트 값에서 약 1600 cm^-1, 1290 cm^-1, 470 cm^-1, 450 cm^-1 및 425 cm^-1의 피크를 갖지만 675 cm^-1에서는 실질적인 피크가 없는 라만 스펙트럼; 또는 271℃에서 예리한 내열원을 갖는 DSC 서모그램.

본 발명의 다른 양태는 6-아세틸-8-사이클로펜틸-5-메틸-2-(5-피페라진-1-일-피리딘-2-일아미노)-8H-피리도[2,3-d]피리미딘-7-온(형태 D로 지정)을 제공하고, 이는 다음 중 하나 이상의 특성을 갖는다: 2θ 값에서 약 8.4, 8.9 및 21.9의 피크를 갖는 분말 X-선 회절 패턴; 라만 쉬프트 값에서 약 1600 cm^-1, 1290 cm^-1, 470 cm^-1, 463 cm^-1의 피크를 갖는 라만 스펙트럼; 또는 277℃에서 예리한 내열원을 갖는 DSC 서모그램. 각 염 형태에서, 분말 X-선 분획 패턴은 CuK_α 조사를 사용하여 수득되고, DSC 서모그램은 5℃/분의 가열 속도를 이용하여 수득된다.

또한, 본 발명은 6-아세틸-8-사이클로펜틸-5-메틸-2-(5-피페라진-1-일-피리딘-2-일아미노)-8H-피리도[2,3-d]피리미딘-7-온의 이세싸이오네이트 염 및 하나 이 상의 약학적으로 허용 가능한 부형제를 포함하는 약학적 투여 형태를 제공한다. 유용한 부형제는 붕해제, 결합제, 희석제, 표면-활성화제, 윤활제, 보존제, 항산화제, 향미제, 착색제 등을 포함한다.

또한, 본 발명은 6-아세틸-8-사이클로펜틸-5-메틸-2-(5-피페라진-1-일-피리딘-2-일아미노)-8H-피리도[2,3-d]피리미딘-7-온의 이세싸이오네이트 염의 제조 방법을 제공한다. 한 방법은 이세싸이온산 및 제 1 용매의 용액을 6-아세틸-8-사이클로펜틸-5-메틸-2-(5-피페라진-1-일-피리딘-2-일아미노)-8H-피리도[2,3-d]피리미딘-7-온의 수성 슬러리에 첨가하여 제 1 혼합물을 생성하는 것을 포함한다. 또한, 상기 방법은 그 혼합물을 냉동-건조시켜 비정질 염을 수득하고, 이어서 제 2 용매와 조합시켜, 6-아세틸-8-사이클로펜틸-5-메틸-2-(5-피페라진-1-일-피리딘-2-일아미노)-8H-피리도[2,3-d]피리미딘-7-온의 이세싸이오네이트 염을 포함하는 제 2 혼합물을 생성하는 것을 포함한다.

다른 방법은 6-아세틸-8-사이클로펜틸-5-메틸-2-(5-피페라진-1-일-피리딘-2-일아미노)-8H-피리도[2,3-d]피리미딘-7-온의 이세싸이오네이트 염의 씨이드 결정을 제공하고, 그 씨이드 결정을 6-아세틸-8-사이클로펜틸-5-메틸-2-(5-피페라진-1-일-피리딘-2-일아미노)-8H-피리도[2,3-d]피리미딘-7-온 및 제 1 용매의 분산액에 첨가하여 제 1 혼합물을 생성하는 것을 포함한다. 또한, 본 방법은 제 1 혼합물을 이세싸이온산 및 제 2 용매의 용액과 조합시켜, 6-아세틸-8-사이클로펜틸-5-메틸-2-(5-피페라진-1-일-피리딘-2-일아미노)-8H-피리도[2,3-d]피리미딘-7-온의 이세싸이오네이트 염을 포함하는 제 2 혼합물을 생성하는 것을 포함한다.

전술된 두 방법 모두에서, 제 1 및 제 2 용매는 동일하거나 상이할 수 있고, MeOH, EtOH 및 다른 알코올을 포함하는 수-혼화성 용매이다. 수율을 개선하기 위해, 상기 방법들은 제 2 혼합물을 실온의 초과 및 미만의 온도로 가열, 냉각 또는 가열 및 냉각하는 것을 포함할 수 있다. 예컨대, 제 2 혼합물은 약 30℃ 내지 약 60℃의 범위의 온도로 가열될 수 있고, 이어서 실온으로 냉각될 수 있다. 다르게는, 제 2 혼합물은 실온에서 방치될 수 있고, 이어서 약 0℃의 이하의 온도로 냉각될 수 있다. 유사하게, 제 2 혼합물은 약 30℃ 내지 약 60℃의 범위의 온도로 가열될 수 있고, 이어서 약 0℃의 이하의 온도로 냉각될 수 있다.

다른 방법은 용매 및 물 중에서 4-{6-[6-(1-뷰톡시-바이닐)-8-사이클로펜틸-5-메틸-옥소-7,8-다이하이드로-피리도[2,3-d]피리미딘-2-일아미노]-피리딘-3-일}-피페라진-1-카복실산 3급-뷰틸 에스터를 이세싸이온산과 반응시켜, 6-아세틸-8-사이클로펜틸-5-메틸-2-(5-피페라진-1-일-피리딘-2-일아미노)-8H-피리도[2,3-d]피리미딘-7-온의 다이-이세싸이오네이트 염을 포함하는 혼합물을 수득하는 것을 포함한다. 본 발명은 장애 염기를 반응 혼합물에 첨가하여, 6-아세틸-8-사이클로펜틸-5-메틸-2-(5-피페라진-1-일-피리딘-2-일아미노)-8H-피리도[2,3-d]피리미딘-7-온의 모노-이세싸이오네이트 염을 포함하는 혼합물을 수득하는 것을 임의적으로 포함한다.

본 발명은 비정상적 세포 증식에 의해, 바이러스 또는 균류 감염에 의해, 또는 자가면역 질환에 의해 발생된, 인간을 포함하는 포유동물에서 질환 또는 질병을 치료하는 방법을 또한 제공한다. 그 방법은 질환 또는 질병의 치료에 효과적인 양의 6-아세틸-8-사이클로펜틸-5-메틸-2-(5-피페라진-1-일-피리딘-2-일아미노)-8H-피 리도[2,3-d]피리미딘-7-온의 이세싸이오네이트 염을 포유동물에게 투여하는 것을 포함한다. 비정상적 세포 증식에 의해 발생된 장애 또는 질병은 암 및 죽상경화증, 수술후 혈관 협착증 및 재협착증, 및 자궁내막증과 관련된 혈관 평활근 증식을 포함한다. 자가면역 질환은 건선, 염증-유사 류마티스 관절염, 루푸스, 1형 당뇨병, 당뇨성 신장병, 다중 경화증, 사구체신증 및 호스트 대 그래프트 질환을 포함하는 장기 이식 거부를 포함한다.

이세싸이오네이트 염은 유리 염기(화학식 1) 및 모노- 및 다이-HCl 부가 염을 포함한 다른 염 형태보다 현저한 이점을 제공한다. 유리 염기와 비교하여, 이세싸이오네이트 염은 수 용해성에서 20,000배의 개선도를 보인다. 그러나, 다이-HCl 염의 경우와 달리, 용해성에서의 개선은 흡습성에서 실질적인 증가를 동반하지 않는다. 또한, 이세싸이오네이트 염은 실질적으로 결정질이므로, 모노-HCl 염과 관련된 잠재적인 스케일-업(scale-up) 문제가 발생하지 않는다. 이러한 이점 및 다른 이점은 화학식 1의 선택적인 CDK4 억제제를 함유하는 약학 생성물의 개발이 직면한 수많은 도전을 경감시키는데 도움이 되어야 한다.

본 발명의 다양한 특징, 이점 및 다른 용도는 하기의 설명 및 도면을 참조하여 더욱 명백해질 것이다.

도 1은 6-아세틸-8-사이클로펜틸-5-메틸-2-(5-피페라진-1-일-피리딘-2-일아미노)-8H-피리도[2,3-d]피리미딘-7-온의 모노-이세싸이오네이트 염(형태 A)의 PXRD 패턴을 나타낸다.

도 2는 6-아세틸-8-사이클로펜틸-5-메틸-2-(5-피페라진-1-일-피리딘-2-일아미노)-8H-피리도[2,3-d]피리미딘-7-온의 모노-이세싸이오네이트 염(형태 B 및 형태 D)의 PXRD 패턴을 나타낸다.

도 3은 6-아세틸-8-사이클로펜틸-5-메틸-2-(5-피페라진-1-일-피리딘-2-일아미노)-8H-피리도[2,3-d]피리미딘-7-온의 모노-메실레이트 염(형태 A, 형태 B, 형태 C 및 형태 D)의 PXRD 패턴을 나타낸다.

도 4는 6-아세틸-8-사이클로펜틸-5-메틸-2-(5-피페라진-1-일-피리딘-2-일아미노)-8H-피리도[2,3-d]피리미딘-7-온의 다이-메실레이트 염의 PXRD 패턴을 나타낸다.

도 5는 6-아세틸-8-사이클로펜틸-5-메틸-2-(5-피페라진-1-일-피리딘-2-일아미노)-8H-피리도[2,3-d]피리미딘-7-온의 모노-HCl 염의 PXRD 패턴을 나타낸다.

도 6은 6-아세틸-8-사이클로펜틸-5-메틸-2-(5-피페라진-1-일-피리딘-2-일아미노)-8H-피리도[2,3-d]피리미딘-7-온의 다이-HCl 염의 PXRD 패턴을 나타낸다.

도 7은 0cm^-1 내지 1850cm^-1의 범위에서 라만 쉬프트를 갖는, 6-아세틸-8-사이클로펜틸-5-메틸-2-(5-피페라진-1-일-피리딘-2-일아미노)-8H-피리도[2,3-d]피리미딘-7-온의 모노-이세싸이오네이트 염(형태 A, 형태 B 및 형태 D)의 라만 분광을 나타낸다.

도 8은 1350cm^-1 내지 1800cm^-1의 범위에서 라만 쉬프트를 갖는, 6-아세틸-8- 사이클로펜틸-5-메틸-2-(5-피페라진-1-일-피리딘-2-일아미노)-8H-피리도[2,3-d]피리미딘-7-온의 모노-이세싸이오네이트 염(형태 A, 형태 B 및 형태 D)의 라만 분광을 나타낸다.

도 9는 1100cm^-1 내지 1350cm^-1의 범위에서 라만 쉬프트를 갖는, 6-아세틸-8-사이클로펜틸-5-메틸-2-(5-피페라진-1-일-피리딘-2-일아미노)-8H-피리도[2,3-d]피리미딘-7-온의 모노-이세싸이오네이트 염(형태 A, 형태 B 및 형태 D)의 라만 분광을 나타낸다.

도 10은 500cm^-1 내지 850cm^-1의 범위에서 라만 쉬프트를 갖는, 6-아세틸-8-사이클로펜틸-5-메틸-2-(5-피페라진-1-일-피리딘-2-일아미노)-8H-피리도[2,3-d]피리미딘-7-온의 모노-이세싸이오네이트 염(형태 A, 형태 B 및 형태 D)의 라만 분광을 나타낸다.

도 11은 340cm^-1 내지 550cm^-1의 범위에서 라만 쉬프트를 갖는, 6-아세틸-8-사이클로펜틸-5-메틸-2-(5-피페라진-1-일-피리딘-2-일아미노)-8H-피리도[2,3-d]피리미딘-7-온의 모노-이세싸이오네이트 염(형태 A, 형태 B 및 형태 D)의 라만 분광을 나타낸다.

도 12는 6-아세틸-8-사이클로펜틸-5-메틸-2-(5-피페라진-1-일-피리딘-2-일아미노)-8H-피리도[2,3-d]피리미딘-7-온의 모노-이세싸이오네이트 염(형태 A)의 DSC 온도기록도(thermogram)를 나타낸다.

도 13은 6-아세틸-8-사이클로펜틸-5-메틸-2-(5-피페라진-1-일-피리딘-2-일아 미노)-8H-피리도[2,3-d]피리미딘-7-온의 모노-이세싸이오네이트 염(형태 B 및 형태 D)의 DSC 온도기록도를 나타낸다.

도 14는 6-아세틸-8-사이클로펜틸-5-메틸-2-(5-피페라진-1-일-피리딘-2-일아미노)-8H-피리도[2,3-d]피리미딘-7-온의 모노-메실레이트 염(형태 A, 형태 B, 형태 C 및 형태 D)의 DSC 온도기록도를 나타낸다.

도 15는 6-아세틸-8-사이클로펜틸-5-메틸-2-(5-피페라진-1-일-피리딘-2-일아미노)-8H-피리도[2,3-d]피리미딘-7-온의 다이-HCl 염의 DSC 온도기록도를 나타낸다.

도 16은 6-아세틸-8-사이클로펜틸-5-메틸-2-(5-피페라진-1-일-피리딘-2-일아미노)-8H-피리도[2,3-d]피리미딘-7-온의 다이-메실레이트 염의 DSC 온도기록도를 나타낸다.

도 17은 6-아세틸-8-사이클로펜틸-5-메틸-2-(5-피페라진-1-일-피리딘-2-일아미노)-8H-피리도[2,3-d]피리미딘-7-온의 유리 염기에 대한 물 흡착/탈착 등온선을 나타낸다.

도 18은 모노-이세싸이오네이트(형태 B 및 형태 D), 모노- 및 다이-HCl, 모노-메실레이트(형태 A 및 형태 C), 다이-메실레이트, 및 모노-토실레이트를 포함하는, 6-아세틸-8-사이클로펜틸-5-메틸-2-(5-피페라진-1-일-피리딘-2-일아미노)-8H-피리도[2,3-d]피리미딘-7-온의 다양한 염에 대한 물 흡착/탈착 등온선을 나타낸다.

정의 및 약어

달리 지시되지 않는 한, 본원은 하기에 제공된 정의를 사용한다.

용어 "암"은 유방암, 난소암, 자궁암, 전립선암, 고환암, 식도암, 위암, 피부암, 폐암, 골암, 결장암, 췌장암, 갑상선암, 담도암, 구강 및 인구(경구)암, 구순암, 설암, 구암, 인두암, 소장암, 결장-직장암, 대장암, 직장암, 뇌 및 중추신경계 암, 아교모세포종(glioblastoma), 신경모세포종(neuroblastoma), 각질가시세포종(keratoacanthoma), 편평세포암종(epidermoid carcinoma), 대세포암종(large cell carcinoma), 샘암종(adenocarcinoma), 샘암종, 샘종(adenoma), 샘암종, 갑상선 소포암종(follicular carcinoma), 미분화암종, 유두암종(papillary carcinoma), 고환종(seminoma), 멜라닌종, 육종(sarcoma), 방광암종(bladder carcinoma), 간암종(liver carcinoma), 신장암종(kidney carcinoma), 골수양 질환(myeloid disorders), 림프양 질환(lymphoid disorders), 호지킨 병(Hodgkin's disease), 모발상 세포(hairy cells) 및 백혈병을 포함하지만 이에 국한되지 않는 암을 포함한다.

용어 "약학적으로 허용 가능함"은 건전한 의학적 판단의 범위 내에서 과도한 독성, 염증, 알레르기 반응 등이 없이 환자의 조직과의 접촉에 사용하기 적합하고, 합리적인 혜택/위험 비율이 균형을 이루고, 의도된 용도에 효과적인 물질을 지칭한다.

용어 "치료함"은 이러한 용어가 적용되는 질환 또는 상태를 회복시키거나, 경감시키거나, 상기 질환 또는 상태의 진행을 억제하거나 또는 예방하는 것, 또는 이러한 질환 또는 상태의 하나 이상의 징후를 예방하는 것을 지칭한다.

용어 "치료"는 바로 직전에 정의한 "치료함"의 행위를 지칭한다.

표 1은 명세서 전체를 통해 사용하는 약어를 제시한다.

모노-이세싸이오네이트 염(화학식 2)은, 형태 A, 형태 B, 및 형태 D를 포함하는 하나 이상의 다형체로서 존재할 수 있다. 상기에 개시된 바와 같이, 각각의 다형체는 분말 X-레이 회절(PXRD), 또는 라만 분광, 또는 시차 주사 열량계(DSC), 또는 이들 특징분석 방법의 조합에 의해 구분될 수 있다. 모노-이세싸이오네이트 염(화학식 2)은 무수물일 수 있거나, 또는 다양한 분량의 하나 이상의 용매를 함유할 수 있다. 게다가, 상기 모노-이세싸이오네이트 염(화학식 2)은 실질적으로 순수하거나(즉, 특정 다형체를 약 99중량% 이상 함유한다), 또는 두 개 이상의 다형체의 혼합물일 수 있다(예를 들어, 형태 B 및 형태 D 등).

유리 염기(화학식 1)는 모노- 및 다이-산 부가 염 둘 다를 형성할 수 있는 이염기성 화합물이다. 이의 짝염기는 7.3 및 4.1의 pK_aS를 가지므로, 상대적으로 강산이 다이-염을 생성하기 위해 필요하다. 화학식 1의 화합물의 이세싸이오네이트 염을 형성하는 것이 가능할 수 있음에도 불구하고, 모노-이세싸이오네이트 염은 보다 유용함을 나타내는데, 이는 상기 염이 보다 적은 반대 이온을 필요하기 때문이다.

도 1 및 도 2는 6-아세틸-8-사이클로펜틸-5-메틸-2-(5-피페라진-1-일-피리딘-2-일아미노)-8H-피리도[2,3-d]피리미딘-7-온(화학식 2)의 모노-이세싸이오네이트 염 형태에 대한 PXRD 회절 패턴을 제공한다. 상기 형태는 도 1에서 형태 A, 및 도 2에서 형태 B 및 형태 D로서 나타내었다. 가독성을 증진시키기 위해, 도 2의 형태 B의 회절 패턴은 약 700 단위 위로 이동시켰다. 하기 표 2는 모노-이세싸이오네이트 다형체 A, B 및 D에 대한 현저한 PXRD 피크(즉, 3.5 초과의 잡음 비율에 대한 피크 높이를 나타내는 것)를 나열하고, 하나의 다형체와 다른 다형체를 구별하는데 사용될 수 있는 특성 피크의 부분집합을 밑줄친 글씨체로 제공하였다. 표 2에 제공된 특성 피크의 목록은 특성 피크의 가능한 유일한 목록이 아니다. 다형체 식별에 관해 당해 분야의 숙련자는 하나의 다형체와 다른 다형체를 또한 구별하는 다른 집합의 특성 피크를 선택할 수 있다.

비교 목적을 위해, 도 3 내지 도 6은 각각, 6-아세틸-8-사이클로펜틸-5-메틸-2-(5-피페라진-1-일-피리딘-2-일아미노)-8H-피리도[2,3-d]피리미딘-7-온의 모노-메실레이트, 다이-메실레이트, 모노-HCl 및 다이-HCl 염에 대한 PXRD 회절 패턴을 도시하고 있다. 비록 상기 염들이 하나 보다 많은 형태로 존재할 수 있을지라도, 별개의 다형체는 단지 모노-메실레이트 염에 대해 식별하였고, 이는 도 3에서 형태 A, 형태 B, 형태 C 및 형태 D로 나타내었다. 모노-메실레이트 염 형태 중에서 차이점을 강조하기 위해, 도 3의 형태 B, 형태 C 및 형태 D의 회절 패턴을 다양한 양에 의해 위로 이동시켰다.

도 1 내지 도 6에 나타난 각각의 PXRD 패턴은 CuK_α방사를 사용하는 RIGAKU D/최대 2200 분말 X-선 회절계 상에서 얻었다. 회절계는 파인-포커스 X-선 튜브가 구비되어 있다. 각각의 실시 동안, 튜브 전압 및 전류를 각각 40kV 및 40mA로 조정하고, 발산 및 산란 슬릿을 0.5°로 조정하고, 수광 슬릿을 0.3mm로 조정하였다. 회절된 방사를 NaI 신틸레이션 검출기를 사용하여 검출하였다. 각각의 실시 동안, 3.0 내지 40.0°2θ의 약 1°/분(3초/0.040° 단계)의 θ-2θ연속 스캔을 사용하였다. 샘플을 규소-웨이퍼 지지대에 위치시켜 분석을 위해 제조하였다. RIGAKU의 RIGMEAS 소프트웨어를 사용하여 데이터를 모으고, JADE 소프트웨어 플랫폼을 사용하여 개발된 독점 소프트웨어 패키지를 사용하여 분석하였다.

각각의 분말 X-선 회절 측정에서, 염 형태의 샘플을 지지대의 평면 표면에 위치한 공동 내에 위치시키고, 유리 슬라이드를 사용하여 샘플의 표면을 평평하게 하였다. 샘플을 함유하는 지지대를 회절계 내에 위치시키고, 먼저 지지대의 평면 표면에 대해 작은 각으로 X-선 광선 공급원이 샘플에 조사되었다. 이어, X-선 광선이 순차적인 방식으로 아크를 통해 이동하였고, 이는 연속적으로 입사 광선 및 지지대의 평면 표면 사이에 각을 증가시킨다. 각각의 스캔 단계에서, 신틸레이션 계수관은 2θ의 함수로서 기록된 회절된 방사량을 검출하였다. 기계 소프트웨어는 강도 대 2θ로서 스캔의 회절된 방사 결과를 나타낸다(도 1 내지 도 6).

동일한 다형체의 별도의 측정치 중에서 PXRD 패턴의 차이는 다양한 이유로 발생할 수 있다. 오차의 원인은 샘플 제조의 변화(예, 샘플 높이), 기계 오차, 검정 오차, 및 작동자 오차(피크 위치 측정시 오차를 포함)를 포함한다. 우선 배향, 즉 PXRD 샘플에서 결정의 랜덤 배향의 부족은 상대적인 피크 높이에 상당한 차이점을 발생시킬 수 있다. 종종, 검정 오차 및 샘플 높이 오차는 동일한 방향에서 동일한 양에 의해 회절 패턴의 모든 피크의 이동을 야기시킨다. 평평한 지지대 상의 샘플 높이의 작은 차이는 PXRD 피크 위치 내에 큰 변위를 야기시킬 수 있다. 계통 연구에서, 1mm의 샘플 높이 차이를 보이는 것은 1°2θ만큼 높은 피크 이동을 야기시킬 수 있다(문헌[Chen et al., J. Pharmaceutical and Biomedical Analysis(2001) 26:63]을 참고).

다양한 예시에서, 계통 오차로부터 발생하는 회절 패턴 중 피크 이동은 이동에 대해 보상하거나(예, 보정 요인을 모든 피크 위치 값에 적용시킴) 또는 회절계를 재검정하여 제거할 수 있다. 일반적으로, 동일한 기법을 사용하여 회절계 중의 차이점에 대해 보상하여 두 개의 서로 다른 기계로부터 얻은 PXRD 피크 위치가 일치하게 만들 수 있다. 또한, 상기 기법을 동일 또는 서로 다른 회절계로부터의 PXRD 측정에 적용하는 경우, 특히 다형체에 대한 피크 위치는 일반적으로 약 ±0.2°2θ내에서 일치할 것이다.

도 7 내지 도 11은 6-아세틸-8-사이클로펜틸-5-메틸-2-(5-피페라진-1-일-피리딘-2-일아미노)-8H-피리도[2,3-d]피리미딘-7-온(화학식 2)의 모노-이세싸이오네이트 염 형태의 라만 분광을 도시하고 있다. 도 7은 0cm^-1 내지 1850cm^-1의 라만 쉬프트 범위에 대한 모노-이세싸이오네이트 염 형태 A, 형태 B, 및 형태 D의 라만 분광을 도시하는 반면, 도 8 내지 도 11은 각각 1350cm^-1 내지 1800cm^-1, 1100cm^-1 내지 1350cm^-1, 500cm^-1 내지 850cm^-1, 및 340cm^-1내지 550cm^-1의 라만 쉬프트 범위에 대한 모노-이세싸이오네이트 염 형태 A, 형태 B, 및 형태 D의 라만 분광을 제공한다. 일부 도면에서, 하나 이상의 라만 분광은 서로 다른 세로좌표 축소 비율(예, 도 7, 8, 10 및 11 중 형태 A) 또는 서로 다른 기준선(예, 도 9 중 형태 A 및 형태 B) 또는 서로 다른 세로좌표 축소 비율 및 기준선(도 10)을 사용하여 모노-이세싸이오네이트 염 형태 중의 차이점을 부각시킬 수 있다.

하기 표 3은 하나의 모노-이세싸이오네이트 염 형태와 다른 형태를 구별하는데 사용될 수 있는 라만 분광의 특성 피크를 나열하고 있다. PXRD 데이터를 사용한 것과 같이, 표 3에 제공된 특성 피크의 목록은 특성 피크의 가능한 유일한 목록이 아니고, 다형체 식별에 관해 당해 분야의 숙련자는 하나의 다형체와 다른 다형체를 또한 구별하는 다른 집합의 특성 피크를 선택할 수 있다.

도 7 내지 도 11에 도시된 라만 분광은 카이저 광학 시스템 홀로렙(KAISER OPTICAL SYSTEMS HOLOLAB) 라만 현미경 및 분광기를 사용하여 얻었다. 785nm로 고체-상태 다이오드 레이저를 작동하고, 약 90mW의 출력 전력을 사용하여 라만 분광을 이용하였다. 현미경 대물 렌즈를 통해 샘플에 가해진 전력은 약 27mW이었다. 열전기적으로 냉각된 CCD 검출기를 사용하여 라만 신호를 검출하였다. 라만 현미경 및 분광계를 접촉하는 섬유 광학 케이블을 사용하여 레이저 여기 빛 및 라만 산란된 빛을 각각 샘플로 그리고 샘플로부터 안내하였다.

대표적인 라만 분광을 얻기 위해, 각각의 다형체 형태의 샘플을 다중 위치 또는 스폿(spot)에서 탐침으로 검사하였다. 각각의 샘플에 대해, 라만 분광은 4 또는 5 스폿과 함께, 각 스폿에서 4개의 복제 분광을 얻었다. 일반적으로, 고체 샘플을 사용하는 경우, 주어진 다형체 형태에 대한 데이터는 피크 강도에서 가장 큰 변화를 나타내고, 피크 위치에서 비교적 거의 변화가 없음을 나타낸다. 각각의 형태에 대해, 비록 예상되는 바와 같이, 서로 다른 형태 중 피크 위치가 1cm^-1 초과로 변할 수 있을지라도, 라만 쉬프트 값(파수 함수로서 피크 위치)은 1cm^-1 미만으로 변한다. 피크 강도 또는 피크 위치의 적어도 일부 변화는 샘플에서 레이저 빛이 서로 다른 결정을 비추는 방식의 차이점으로부터 발생되는 것으로 생각된다.

상기 기재한 실시-대 실시 변화와 같이, 서로 다른 기계를 사용하여 얻은 특정 다형체의 라만 분광은 피크 위치에서 변화가 거의 없고(즉, 1cm^-1 미만), 피크 강도에서 비교적 변화가 큼을 나타낸다. 라만 산란이 사용된 여기 파장에 독립적으로 주어지기 때문에, 피크 위치는 서로 다른 여기 공급원을 사용하는 기계 사이에서 동일한 것에 대한 것이어야 한다. 피크 강도는, 여럿 중에서, 검출기 또는 광학 렌즈의 유형, 여기 레이저의 전력, 및 샘플 위치에 따라 변할 수 있다.

도 12 및 도 13은, A형(도 12), 및 B 및 D형(도 13)으로 도시된 바와 같이, 6-아세틸-8-사이클로펜틸-5-메틸-2-(5-피페라진-1-일-피리딘-2-일아미노)-8H-피리도[2,3-d]피리미딘-7-온(화학식 2)의 모노-이세싸이오네이트 염 형태의 DSC 온도 기록도를 도시한 것이다. 또한, 도 14 내지 도 16은 각각 모노-메실레이트 염(A형, B형, C형 및 D형), 다이-메실레이트 염 및 다이-HCl 염의 DSC 온도 기록도를 도시한 것이다. 상기 DSC 데이터는 TA INSTRUMENTS 2920 조정된 DSC V2.6을 사용하여 수득하였다. 개별적인 다형체 샘플을 분당 5℃의 가열 속도 및 분당 50㎖의 질소 퍼지를 사용하는, 배기 및 밀봉된 알루미늄 팬에서 분석하였다.

도 12 내지 도 15에 도시한 바와 같이, 모노-이세싸이오네이트 염(A형, B형 및 D형), 모노-메실레이트 염(A형, B형, C형 및 D형) 및 다이-메실레이트 염은 뚜렷한 융점을 갖고, 각각 약 273℃, 271℃, 277℃, 309℃, 307℃, 302℃, 304℃ 및 289℃에서 선명한 흡열을 나타낸다. 반면, 다이-HCl 염(도 16)은 약 40℃에서 110℃ 사이 및 약 160℃에서 200℃ 사이에서 넓은 흡열을 포함한 비교적 복잡한 DSC 온도 기록도를 나타내는데, 이는 각각 습기 및 격자수의 손실을 의미하는 것으로 보인다. 또한, 다이-HCl 염의 DSC 온도 기록도는 약 207℃에서 시작하는 비교적 선명한 발열 및 약 275℃에서 시작하는 넓은 흡열을 나타내는데, 이는 각각 변형 및 용융 또는 분해, 또는 이들 모두가 발생하였음을 의미한다.

도 17 및 도 18은 유리 염기(화학식 1) 및 6-아세틸-8-사이클로펜틸-5-메틸-2-(5-피페라진-1-일-피리딘-2-일아미노)-8H-피리도[2,3-d]피리미딘-7-온의 다양한 염(모노-이세싸이오네이트(B형 및 D형), 모노- 및 다이-HCl, 모노-메실레이트(A형 및 C형), 다이-메실레이트 및 모노-토실레이트를 포함한다)에 대한 수 흡착 및 제거 등온선(25℃)을 도시한 것이다. 이러한 수 흡착 및 제거 데이터는 VTI CORPORATION MODEL SGA-100 대칭 중량측정 분석기를 사용하여 수득하였다. 수증기 등온선을 수득하기 위해, 다형체의 샘플을 밀봉된 상태의 챔버 내부에 있는 미량 천칭에 올려놓은 후, 챔버 온도가 40℃가 될 때까지 분당 5℃의 속도로 가열하였다. 무수 샘플 중량을 수득하기 위해, 샘플의 중량 변화가 2분내 0.0270중량% 미만이 될 때까지 상기 다형체를 40℃에서 평형을 이루게 하였다. 건조 후, 샘플을 25℃로 냉각시킨 다음, 10% RH 만큼 증가하는 5 또는 10% RH 내지 90% RH 범위, 및 90% RH 내지 10 또는 5% RH 범위의 상이한 습도 수준에 노출시켰다. 각각의 습도 수준에서, 샘플의 중량 변화가 2분내 0.0270중량% 미만이 될 때까지 다형체를 평형화시켰다. 각각의 습도 수준에서의 평형 질량을 기록하고, 무수 샘플 중량에 따른 중량 변화 대 상대 습도의 그래프를 작성하였다.

도 17 및 도 18에 도시된 화합물 중에서, 유리 염기, 모노-이세싸이오네이트 염(B형 및 D형) 및 모노-토실레이트 염은 25℃에서 10% RH 내지 90% RH 범위의 습도 수준에 노출시켰을 때 2% 미만의 질량 변화를 나타낸다.

표 4에 유리 염기(슬러리 실험 결과에 따른 가장 안정한 결정 상) 및 이세싸이오네이트 염(B형, 슬러리 실험 결과에 따른 가장 안정한 형태)의 수 용해도를 기재한다. B형은 가장 안정한 이세싸이오네이트 염 형태인 것으로 생각되므로, 관찰된 이세싸이오네이트 염 형태들 중에서 가장 낮은 수 용해도를 나타내어야 한다. 다른 이세싸이오네이트 염 형태는 준안정한 용해도에 대해 평가하지 않았다. 이세싸이오네이트 염의 수 용해도는 약 300㎎/㎖ 이하의 염을 수 중에 용해시키고, 약 48시간 동안 평형화시킨 후, 일부 고체를 관찰하고, HPLC를 사용하여 수상 염 농도를 측정함으로써 수득하였다. HPLC 조건은 하기 표 5에 요약한다. 유리 염기의 수 용해도는 고체를 수 중에서 14시간 동안 평형화시키고 SPECTRAMAX PLUS 분광 광도계 플레이트 판독기를 사용한 반자동 UV-vis 방법을 사용하여 수상 유리 염기 농도를 측정함으로써 수득하였다.

표 4의 데이터를 통해, 모노-이세싸이오네이트 염의 수 용해도(pH 5.4에서)가 유리 염기의 수 용해도(pH 7.9에서)보다 20,000배 이상 크다는 것을 알 수 있다. 이러한 수 용해도의 큰 차이는 유리 염기 및 모노-이세싸이오네이트 염의 표화 용액의 비교적 완만한 pH 차이에 의해 설명될 수 없다. 실제로, 유리 염기의 이론적 수 용해도는 헨더슨-하셀바크(Henderson-Hasselbalch) 계산법(pH 7.9에서 유리 염기 용해도 0.0092㎎/㎖ 및 pK_as 7.3 및 4.1 사용)에 의해 측정시 pH 5.4에서 단지 0.62㎎A/㎖이다. 유리 염기의 결정을 사용하여 117㎎A/㎖, pH 5.4(유리 염기에 대해 과포화됨)에서 제조된 모노-이세싸이오네이트 염의 수용액을 씨딩(seeding)하는 것은 침전을 유발하지 않았다. 대신, 씨이드가 용해되었고, 이는 이세싸이오네이트 이온이 유리 염기를 수중에 용해시키는 능력을 가짐을 의미하는 것이다.

이세싸이오네이트의 표준 염수 용해도는 0.58㎎A/㎖으로서, 이는 수 용해도보다 훨씬 낮은 값이며, 이 용액의 최종 pH(pH 5.56)에서의 이론 값(헨더슨-하셀바크 계산법)인 0.43㎎A/㎖에 매우 근접한 값이다. 표준 염수에서는, 이세싸이오네이트 이온의 놀라운 용해력이 사라지고 화합물 용해도가 전형적인 염기성 화합물과 같은 양상을 보이게 된다.

이세싸이오네이트 염은 다수의 기법을 사용하여 제조할 수 있다. 예를 들어, 한 방법으로는, 이세싸이오산 및 제 1 용매의 용액을 6-아세틸-8-사이클로펜틸-5-메틸-2-(5-피페라진-1-일-피리딘-2-일아미노)-8H-피리도[2,3-d]피리미딘-7-온의 수성 슬러리와 혼합한다. 혼합물을 여과하여 고체를 제거하고 수득된 여과액을 냉동-건조(동결건조)시켜 비결정 이세싸이오네이트 염을 수득한다. 비결정 염을 제 2 용매에 용해시켜(이 때, 완전한 용해를 촉진시키기 위해 가열할 수 있다) 결정형으로 전환시킨다. 수득된 용액을 실온 이하로 냉각시켜 염의 결정형을 침전시키고, 이를 여과시켜 단리한 후, 진공 오븐에서 건조시킨다.

이 방법은 일반적으로 이세싸이오산 및 6-아세틸-8-사이클로펜틸-5-메틸-2-(5-피페라진-1-일-피리딘-2-일아미노)-8H-피리도[2,3-d]피리미딘-7-온의 화학량론적 양(1:1 또는 2:1의 몰비) 또는 근사 화학량론적 양을 사용한다. 제 1 용매 및 제 2 용매는 동일하거나 상이할 수 있으며, 전형적으로 MeOH 및 EtOH와 같은 알코올을 포함하는 수혼화성 용매이다. 비결정 염을 제 2 용매에 용해시키는데 필요한 가열의 정도는 사용된 용매에 따라 좌우되나, 혼합물의 온도는 전형적으로 약 30 내지 약 60℃, 통상적으로 약 30 내지 약 50℃이다. 일부 경우, 혼합물의 온도는 약 30 내지 약 40℃ 또는 약 35 내지 약 40℃이다.

또다른 방법에서는, 유리 염기(화학식 1)을 제 1 용매에 분산시키고(슬러리화) 결정 이세싸이오네이트 염 형태로 씨딩한다. 수득된 혼합물을 이세싸이오산 및 제 2 용매의 용액과 혼합한다. 전형적으로, 이세싸이오산 용액을 일정 시간 동안 여러번 나누어 첨가한다. 수득된 슬러리 또는 분산액을 실온 이상, 일반적으로 약 35℃ 또는 40℃ 초과의 온도에서 교반한다. 수율을 개선시키기 위해, 수득된 혼합물을 약 0℃ 미만의 온도로 냉각시킬 수 있으며, 이 때 추가의 이세싸이오네이트 염 결정이 침전된다. 이어서, 이세싸이오네이트 염 결정을 여과를 통해 단리시킬 수 있고, 진공 오븐에서 건조시킨다. 전술한 방법과 같이, 이 방법은 이세싸이오산 및 6-아세틸-8-사이클로펜틸-5-메틸-2-(5-피페라진-1-일-피리딘-2-일아미노)-8H-피리도[2,3-d]피리미딘-7-온을 화학량론적 양 또는 근사 화학양론적 양으로 사용한다. 또한, 제 1 용매 및 제 2 용매는 동일하거나 상이할 수 있으며, 전형적으로는 MeOH 및 EtOH와 같은 알코올을 포함하는 수혼화성 용매이다. 전술한 방법과 비교하여, 이 방법을 통해 종종 개선된 수율 및 양호한(예를 들어, 보다 크고 보다 균일한) 결정이 수득된다.

또다른 방법은 유리 염기(화학식 1) 없이 보호된 중간체로부터 직접 이세싸이오네이트 염을 생성한다. 이 방법은, 하기 화학식 3의 N-BOC 보호된 화합물을 제 1 용매 및 물 중에서 이세싸이오산 약 3.5당량 이상과 반응시키고, BOC 보호기를 제거하고 아세틸 기를 노출시켜 6-아세틸-8-사이클로펜틸-5-메틸-2-(5-피페라진-1-일-피리딘-2-일아미노)-8H-피리도[2,3-d]피리미딘-7-온의 다이-이세싸이오네이트 염을 수득한다. 이 반응은 실온 이상에서 수행할 수 있고, 종종 약 30 내지 약 60℃의 온도에서 수행된다. 이 반응 혼합물에 제 2 용매중의 장애 염기(예를 들어, Et₃N)를 첨가하여, 반응 혼합물 중에 용해된 이세싸이오산과의 염을 형성한다. 첨가되는 염기의 양은 다이-이세싸이오네이트 염의 존재 하에서 반응 혼합물 중에 소량의 유리 이세싸이오산을 유지시키기에 충분한 양이다. 예를 들어, 이세싸이오산 3.5당량을 화학식 3의 BOC-보호된 화합물과 반응시킨 경우, 장애 염기는 약 1.45당량이 사용될 수 있고, 결과적으로 유리 이세싸이오산이 약 0.05당량 많다. 경우에 따라, 다이-이세싸이오네이트 염은 여과에 의해 단리될 수 있다.

6-아세틸-8-사이클로펜틸-5-메틸-2-(5-피페라진-1-일-피리딘-2-일아미노)-8H-피리도[2,3-d]피리딘-7-온의 모노-이세싸이오네이트 염을 수득하기 위하여, 추가의 염기를 증가된 기간에 걸쳐 첨가하여(예들 들어 적가) 필수적인 모노-이세싸이오네이트 염 형태(예를 들어 B 형태)의 형성을 유지하였다. 장애 염기를 너무 빨리 첨가하게 되면 기타 준안정원자 다형체의 형성을 유발할 수 있다. 수율을 향상시키기 위하여, 생성된 슬러리를 약 5℃ 이하의 온도로 냉각시키고 이어서 여과 및 건조시킬 수 있다. 전술된 방법에서와 같이, 제 1 및 제 2 용매는 동일하거나 상이할 수 있으며, 이들은 알코올, 예컨대 MeOH 및 EtOH를 비롯한 수혼화성 용매이다.

다른 개시된 염 형태, 예를 들어 모노- 또는 다이-HCl, 메실레이트 또는 토실레이트 염은 이세싸이오네이트 염(화학식 2)에 대한 전술된 방법과 유사한 방법으로 제조될 수 있다.

개시된 화합물(화학식 1 및 염)은 모든 약학적으로 허용 가능한 동위원소 변이체를 포함한다. 동위원소 변이체는 하나 이상의 원자가 동일한 원자 수를 갖는 원자에 의해 대체되나, 원자 질량이 대개 천연에서 발견되는 원자 질량과 상이한 화합물이다. 유용한 동위원소는 수소, 탄소, 질소, 산소, 인, 황, 불소 및 염소의 동위원소를 포함한다. 따라서, 동위원소의 예로는 ²H, ³H, ¹³C, ¹⁴C, ¹⁵N, ¹⁷O, ¹⁸O, ³²P, ³⁵S, ¹⁸F 및 ³⁶Cl을 들 수 있으나 이에 한정되지는 않는다.

개시된 혼합물의 동위원소, 예컨대 중수소, 즉 ²H로의 치환은 보다 큰 대사 안정성, 예를 들어 생체 내 반감기의 증가 또는 투여 요구량의 감소로 인해 특정한 치료적 이점을 수득할 수 있으며, 이에 따라 몇몇 상황에서 보다 더 유용할 수 있다. 또한, 특정한 동위원소 변이체, 예를 들어 방사성 동위원소를 도입한 화합물은 약물 및/또는 기질 조직 분포 연구에 유용하다. 방사성 동위원소 3중수소, 즉 ³H 및 탄소-14, 즉 ¹⁴C는 이들의 용이한 혼합성 및 능숙한 탐색 수단 면에서 이러한 목적에 대해 특히 유용하다.

개시된 화합물의 동위원소 변이체는 일반적으로 당해 분야의 숙련가에게 공지된 통상적인 기술 또는 적합한 시약의 적절한 동위원소 변이체를 사용하는 적용예에 개시된 것과 유사한 방법에 의해 제조될 수 있다. 개시된 화합물의 약학적으로 허용 가능한 용매화물은 결정화 용매가 동위원소적으로 치환될 수 있는, 예를 들어 D₂O, d₆-아세톤, d₆-DMSO일 수 있는 것을 포함한다.

개시된 화합물(화학식 1 및 염)은 결정성 또는 비결정성 산물로서 투여될 수 있다. 이들은 예컨대 침전, 결정화, 냉동 건조, 분무 건조 또는 증발 건조와 같은 방법에 의해 예를 들어, 고체 플러그, 분말 또는 필름으로서 수득될 수 있다. 미 세파장 또는 방사 주파수 건조가 이러한 목적에 대해 사용될 수 있다.

개시된 화합물은 단독으로 또는 기타 약물과 조합으로 투여될 수 있으며, 일반적으로 하나 이상의 약학적으로 허용 가능한 부형제와 함께 제형으로서 투여될 수 있다. "부형제"라는 용어는 화학식 1로 표시되는 화합물 및 이의 염 이외의 임의의 성분을 나타낸다. 부형제의 선택은 특정한 투여 모드에 따라 광범위한 범위로 수행된다.

개시된 화합물은 경구 투여될 수 있다. 경구 투여는 삼키는 것을 포함할 수 있으며, 이러한 화합물은 위장관 또는 코로 유입되거나 또는 설하 투여를 사용하여 화합물이 입으로부터 직접 혈류로 유입되도록 할 수 있다.

경구 투여에 적합한 제형은 고체 제형, 예컨대 정제, 입자를 포함하는 캡슐, 액체 또는 분말, 로젠즈(액체-충전제 포함), 츄즈(chews), 다- 및 나노-입자, 겔, 고체 용액, 리포좀, 필름(점액성 접착제), 난세포, 분무 및 액체 제형을 포함한다. 액체 제형은 현탁액, 용액, 시럽 및 엘리시르를 포함한다. 이러한 제형은 연질 또는 경질 캡슐에서 충전제로서 사용될 수 있으며, 전형적으로 담체, 예를 들어 물, EtOH, 폴리에틸렌 글라이콜, 프로필렌 글라이콜, 메틸셀룰로스 또는 적합한 오일, 및 하나 이상의 유화제 및/또는 현탁제를 포함한다. 액체 제형은 또한 고체, 예를 들어 사세이를 다시 용해시킴으로써 제조될 수 있다.

개시된 화합물은 또한 빠른 용해, 빠른 분해 투약 형태, 예컨대 문헌[Liang and Chen, Expert Opinion in Therapeutic Patents (2001) 11(6): 981-986]에 개시된 형태로 사용될 수 있다.

정제 투약 형태에 있어서, 투여량에 따라 약물은 투약 형태의 1 내지 80중량%, 보다 전형적으로 투약 형태의 5 내지 60중량%로 이루어질 수 있다. 약물에 더하여, 정제는 일반적으로 분해제를 포함한다. 분해제의 예로는 소듐 전분 글라이콜레이트, 소듐 카복시메틸 셀룰로스, 칼슘 카복시메틸 셀룰로스, 크로스카멜로스 소듐, 크로스포비돈, 폴리바이닐피롤리돈, 메틸셀룰로스, 미세결정성 셀룰로스, 저급 알킬 치환된 하이드록시프로필 셀룰로스, 전분, 예비젤라틴화된 전분 및 소듐 알기네이트를 들 수 있다. 일반적으로, 분해제는 투약 형태의 1 내지 25중량%, 바람직하게 5 내지 20중량%를 포함할 수 있다.

결합제는 일반적으로 정제 제형의 응집성을 부여하기 위해 사용된다. 적합한 결합제는 미세결정성 셀룰로스, 젤라틴, 설탕, 폴리에틸렌 글라이콜, 천연 및 합성 검, 폴리바이닐피롤리돈, 예비젤라틴화된 전분, 하이드록시프로필 셀룰로스, 및 하이드록시프로필 메틸셀룰로스를 들 수 있다. 정제는 또한 희석제, 예컨대 락토즈(모노하이드레이트, 분무 건조된 모노하이드레이트, 무수물 등), 만니톨, 자일리톨, 덱스트로스, 슈크로스, 솔비톨, 미세결정성 셀룰로스, 전분 및 이염기성 칼슘 포스페이트 다이하이드레이트를 포함한다.

정제는 또한 선택적으로 표면 활성제, 예컨대 소듐 라우릴 설페이트 및 폴리소르베이트 80 및 광택제, 예컨대 실리콘 다이옥사이드 및 활석을 포함한다. 이들 성분이 포함될 때, 표면 활성제는 정제의 0.2 내지 5중량%로 포함될 수 있고, 광택제는 정제의 0.2 내지 1중량%로 포함될 수 있다.

정제는 또한 일반적으로 윤활제, 예컨대 마그네슘 스테아레이트, 칼슘 스테 아레이트, 아연 스테아레이트, 소듐 스테아릴 푸마레이트 및 마그네슘 스테아레이트와 소듐 라우릴 설페이트의 혼합물을 포함한다. 윤활제는 일반적으로 정제의 0.25 내지 10중량%, 바람직하게 0.5 내지 3중량%로 포함된다. 기타 성분으로는 보존제, 산화방지제, 향미제 및 착색제가 포함될 수 있다.

정제 블렌드는 정제 형태로 직접 압축될 수 있다. 정제 블렌드 또는 블렌드의 일부분은 정제화 전에 선택적으로 습윤-, 건조- 또는 용융-과립화, 용융-동결화 또는 압출될 수 있다. 최종 제형은 하나 이상의 층을 포함할 수 있고 코팅되거나 비코팅될 수 있다. 예시적인 정제는 약 80% 이하의 약물, 약 10 내지 약 90중량%의 결합제, 약 0 내지 약 85중량%의 희석제, 약 2 내지 약 10중량%의 분해제 및 약 0.25 내지 약 10중량%의 윤활제를 포함한다. 정제 제형에 관한 추가의 상세한 설명은 문헌[H. Lieberman and L. Lachman, Pharmarceutical Dosage Forms: Tablets, Vol. 1(1980)]을 참조할 수 있다.

경구 투여를 위한 고체 제형은 직접형 제형 및/또는 개질화 방출성 제형으로 제형화될 수 있다. 개질화 방출성 제형은 지연성-, 서방성-, 펄스화-, 조절된-, 목적화된- 및 프로그램화-방출성을 포함한다. 적합한 개질화 방출성 제형의 일반적인 설명은 미국 특허 제 6,106,864 호를 참조할 수 있다. 기타 유용한 방출성 기술, 예컨대 고에너지 분산액 및 삼투성 코팅된 입자에 대한 상세한 설명은 문헌[Verma et al., Pharmaceutical Technology On-line (2001) 25(2):1-14]을 참조할 수 있다. 조절된 방출성을 수득하는 츄잉(chewing) 검의 사용에 대한 설명은 국제 특허출원 공개 제 00/35298 호를 참조할 수 있다.

개시된 화합물(화학식 1 및 염)은 또한 혈류, 근육 또는 내부 기관으로 직접 투여될 수 있다. 비경구 투여의 적합한 방법은 정맥내, 동맥내, 복막내, 수액강내, 심실내, 요도내, 흉골내, 두개골내, 근육내 또는 파하를 포함한다. 비경구 투여를 위한 적합한 장치로는 바늘(미세바늘 포함) 주사, 바늘이 없는 주사 및 주입 기술이 포함된다.

비경구 제형은 전형적으로 부형제, 예컨대 염, 카보하이드레이트, 및 완중체(바람직하게 pH 3 내지 9)를 포함하는 수용액이지만, 일부 적용에서는 이들은 적합한 비히클, 예컨대 살균, 발열물질 비함유 물과 혼합되어 사용될 수 있는 살균 비수성 용액 또는 건조 형태로서 보다 적합하게 제형화될 수 있다. 살균 조건 하에서 예를 들어 동결건조에 의한 비경구 제형의 제조는 당해 분야의 숙련가에게 공지된 표준 약학적 기술을 사용함으로써 용이하게 달성할 수 있다.

비경구 용액의 제조에 사용되는 개시된 화합물의 용해도는 적합한 제형화 기술의 사용, 예컨대 용해도 향상제의 도입에 의해 증가될 수 있다. 비경구 투여를 위한 제형은 전술된 바와 같이 직접형 제형 및/또는 개질화 방출성 제형으로 제형화될 수 있다. 따라서, 개시된 화합물은 활성 화합물의 장기간 방출을 제공하는 이식된 저장소로서 투여를 위해 보다 고체 형태로 제형화될 수 있다.

또한 본 발명의 화합물을 피부 또는 점막에 국소적으로 피부에 또는 경피적으로 투여할 수 있다. 이 목적을 위한 국소 제형은 젤, 하이드로젤, 로션, 용액, 크림, 연고, 살포제, 드레싱, 발포제, 필름, 피부 패치, 웨이퍼, 이식물, 스폰지, 섬유, 붕대 및 미세유제를 포함한다. 리포솜 또한 사용할 수 있다. 전형적인 담 체는 알코올, 물, 광유, 바셀린, 백색 바셀린, 글라이세린, 폴리에틸렌 글라이콜 및 프로필렌 글라이콜을 포함한다. 국소 제형은 또한 투과 증강제를 포함한다. 예를 들어, 문헌[Finnin and Morgan, J Pharm Sci(1999) 88(10):955-958]을 참조하시오.

국소 투여의 기타 수단은 이온삼투요법, 전기영동법, 음성영동법, 초음파영동법 및 무 침상물(예를 들어, 파우더제트(POWDERJECT)) 또는 미세-침상물 주입에 의한 전달을 포함한다 국소 투여용 제형은 상기 기술된 바와 같은 즉시 및/또는 개질된 방출되도록 제형화될 수 있다.

또한, 개시된 화합물을 비강 내로 또는 흡입에 의해, 전형적으로 건조 분말 흡입제로부터 무수 분말(단독으로, 혼합물로서, 예를 들어 락토스와 함께 무수 혼합물중 또는 혼합된 성분 입자로서, 예를 들어 인지질과 혼합되어)의 형태 또는 가압된 용기, 펌프, 스프레이, 분무기(바람직하게는 전기수동력을 사용하여 미세한 연무질을 생산하는 분무기)로부터 분무질 스프레이 또는 연무기, 적합한 촉진제, 예컨대 다이클로로플루오로메탄을 사용하거나 또는 미사용하여 투여할 수 있다. 가압된 용기, 펌프, 스프레이, 분무기 또는 연무기는 용액 또는 현탁액을 포함하고, 이는 활성 화합물, 분산제, 용해제, 또는 활성 화합물의 증가된 방출(예를 들어, EtOH 또는 수성 EtOH), 하나 이상의 용매를 포함하고, 촉진제 및 선택적 계면활성제, 예컨대 솔비탄 트라이올레이트 또는 올리고락트산으로 제공된다.

무수 분말 또는 현탁 제형에서 사용하기 이전에, 무수 생성물을 흡입(전형적으로 5마이크론 미만)에 의해 전달하기 적합한 크기로 미분화한다. 이는 임의의 적합한 소통 방법, 예컨대 방사 제트 제분, 유동상 제트 제분, 나노입자를 형성하는 초임계 유동 공정에 의해, 고 압력 균질화 또는 분무 건조에 의해 달성할 수 있다.

흡입제 또는 취입기에서 사용하기 위한 캡슐, 발포제 및 카트리지(예를 들어, 젤라틴 또는 하이드록시프로필메틸 셀룰로부터 제조됨)는 제형화되어 활성 화합물, 적합한 분말 기제, 예컨대 락토스 또는 전분 및 성능 개질제, 예컨대 L-류신, 만니톨 또는 마그네슘 스테아레이트의 분말 혼합믈 함유할 수 있다. 락토스는 무수 또는 바람직하게 단일수화물일 수 있다. 다른 적합한 부형제는 덱스트란, 글루토스, 말토스, 솔비톨, 자일리톨, 프락토스, 수크로스 및 트레할로스를 포함한다.

연무기를 사용하여 미세 연무질을 생산하는 연무기에서 사용하기 위한 적합한 용액 제형은 실행당 본 발명의 화합물 1㎍ 내지 20㎎을 함유하고 실행 부피는 1㎕ 내지 100㎕로 다양할 수 있다. 전형적인 제형은 화학식 1 또는 화학식 2의 화합물, 프로필렌 글라이콜, 멸균수, EtOH 및 NaCl을 포함할 수 있다. 프로필렌 글라이콜 대신에 사용할 수 있는 다른 용매는 글라이세롤 및 폴리에틸렌 글라이콜을 포함한다.

흡입/비강 투여를 위한 제형은 예를 들어 폴리(DL-락트-코글라이콜산(PGLA))를 사용하여 즉시 및/또는 개질된 방출되도록 제형화될 수 있다. 적합한 향, 예컨대 메탄올 및 레보메탄올 또는 감미제, 예컨대 사카린 또는 사카린 소듐을 흡입/비강 투여를 위해 의도된 제형에 첨가할 수 있다.

무수 분말 흡입제 및 분무질의 경우에, 투여 단위는 계량된 양을 전달하는 밸브에 의해 결정된다. 본 발명에 따른 단위는 전형적으로 조정하여 계량된 투여량 또는 활성 약학 성분의 100 내지 1000㎍을 함유하는 "퍼프"로 투여된다. 전체적인 1일 투여량은 전형적으로 단일 투여 또는 주로 그 이상으로; 즉 1일 동안 나눠진 투여량을 투여할 수 있는 100㎍ 내지 10㎎ 범위일 수 있다.

활성 화합물을 직장으로 또는 질로, 예를 들어 좌약, 페서리 또는 관장기의 형태로 투여할 수 있다. 코코아 버터는 전통적인 좌약 기제이지만, 다양한 대응물을 적당하게 사용할 수 있다. 직장/질 투여를 위한 제형을 상기 기술된 바와 같이 즉시 및/또는 개질된 방출되도록 제형화할 수 있다.

또한, 개시된 화합물을 눈 또는 귀에 직접, 전형적으로 미분된 현탁액 또는 등장성, pH-조절된 멸균 식염수중 용액의 소적의 형태로 투여할 수 있다. 눈 및 귀 투여용으로 적한한 다른 제형은 연고, 생물분해성(예를 들어 흡수 가능한 젤 스폰지, 콜라겐) 및 비-생물분해성(예를 들어, 실리콘) 이식물, 웨이퍼, 렌즈 및 미립자 또는 소포 시스템, 예컨대 니오좀 또는 리포좀을 포함한다. 중합체, 예컨대 가교 폴리아크릴산, 폴리바이닐알코올, 히아루론산, 셀룰로스 중합체(예를 들어, 하이드록시프로필메틸셀룰로스, 하이드록시에틸셀룰로스 또는 메틸 셀룰로스) 또는 헤테로폴리사카라이드 중합체(예를 들어, 젤라틴, 검)을 방부제, 예컨대 벤즈알코늄 클로라이드와 함께 혼입될 수 있다. 또한, 이러한 제형을 이온전기영동에 의해 전달할 수 있다. 시각/아니달(andial) 투여용 제형을 상기 기술된 바와 같이 즉시 및/또는 개질된 방출되도록 제형화할 수 있다.

개시된 화합물은 용해성 거대분자 본체, 예컨대 사이클로덱스트린 또는 폴리에틸렌 글라이콜-함유 중합체와 조합으로 이들의 용해성, 용해 속도, 맛 차폐, 생물이용성 및/또는 안정성을 개선할 수 있다. 예를 들어, 약물-사이클로덱스트린 착체를 일반적으로 대부분 투여 형태 및 투여 경로용으로 유용하게 관찰하였다. 함유 및 비-함유-착체 둘다를 사용할 수 있다. 약물과 함께 직접 복합체 형성에 대응물로서, 사이클로덱스트린을 보조 첨가제로서, 즉 담체, 희석제 또는 용해제로서 사용할 수 있다. 알파-, 베타-, 및 감마-사이클로덱스트린을 통상적으로 이들 목적에 사용한다. 예를 들어, 국제 특허 출원 제 WO 91/11172 호, 제 WO 94/02518 호 및 제 WO 98/55148 호를 참조하시오.

화학식 1, 화학식 2 또는 다른 염의 화합물의 치료 효과 투여량은 1일당 제중량의 약 0.01㎎/kg 내지 약 100㎎/kg으로 다양할 수 있다. 전형적인 성인 투여량은 1일당 약 0.1㎎ 내지 약 3000㎎일 수 있다. 단위 투여량 제제중 활성 성분의 양은 활성 성분의 특정 적용 및 효능에 따라서 약 0.1㎎ 내지 약 500㎎, 바람직하게는 약 0.6㎎ 내지 100㎎으로 다양하거나 조정할 수 있다. 조성물은 필요하다면 다른 혼화성 치료제를 함유할 수 있다. 치료가 필요한 대상을 약 0.6 내지 약 500㎎의 투여량으로 24시간 동안 1회 또는 여러 회로 투여한다. 이러한 처리를 필요한 한 연속적인 간격에서 반복할 수 있다.

다음 실시예는 설명적이고 비-제한적이고자 하며 본 발명의 구체적인 양태를 나타낸다.

실시예 1

4-[6-(6-브로모-8-사이클로펜틸-5-메틸-7-옥소-7,8-다이하이드로-피리도[2,3-d]피리미딘-2-일아미노)-피리딘-3-일]-피페라진-1-카복실산 t-뷰틸 에스터의 제조

톨루엔(100㎖)중 6-브로모-8-사이클로펜틸-2-메탄설핀일-5-메틸-8H-피리도[2,3-d]피리미딘-7-온(10.00g, 0.027몰, 본원에서 참고로 인용하는 제 WO 01/707041 호의 실시예 6과 같이 제조됨) 및 4-(6-아미노-피리딘-3-일)-피페라진-1-카복실산 t-뷰틸 에스터의 현탁액을 질소 하에서 오일욕중 7시간 동안 가열하였다. 박층 크로마토그래피(SiO₂, 10% MeOH/DCM)는 출발 물질 둘다의 존재를 나타냈다. 현탁액을 추가의 18시간 동안 환류 하에서 가열하였다. 생성된 현탁액을 실온에서 냉각하고 여과하여 4-[6-(6-브로모-8-사이클로펜틸-5-메틸-7-옥소-7,8-다이하이드로-피리도[2,3-d]피리미딘-2-일아미노)-피리딘-3-일]-피페라진-1-카복실산 t-뷰틸 에스터(5.93g, 38%)를 수득하였다. 융점 250℃ 초과, MS(APCI) M⁺+1: 계산치 584.2, 실측치 584.2.

실시예 2

4-{6-[8-사이클로펜틸-6-(1-에톡시-바이닐)-5-메틸-7-옥소-7,8-다이하이드로-피리도[2,3-d]피리미딘-2-일아미노]-피리딘-3-일}-피페라진-1-카복실산 t-뷰틸 에스터의 제조

톨루엔(30㎖)중 4-[6-(6-브로모-8-사이클로펜틸-5-메틸-7-옥소-7,8-다이하이 드로-피리도[2,3-d]피리미딘-2-일아미노)-피리딘-3-일]-피페라진-1-카복실산 t-뷰틸 에스터(5,93g, 0.010몰, 실시예 1과 같이 제조됨), 테트라키스(트라이페닐포스핀)팔라듐(0)(1.40g, 0.00121몰) 및 트라이뷰틸(1-에톡시바이닐)틴(5.32㎖, 0.0157몰)을 환류 하에서 3.5시간 동안 가열하였다. 혼합물을 냉각하고 여과하여 고체를 수득하였다. 5% 내지 66% 에틸 아세테이트/헥산의 구배를 사용하여 15분 동안 실리카 겔 크로마토그래피에 의해 고체를 정제하여 4-{6-[8-사이클로펜틸-6-(1-에톡시-바이닐)-5-메틸-7-옥소-7,8-다이하이드로-피리도[2,3-d]피리미딘-2-일아미노]-피리딘-3-일}-피페라진-1-카복실산 t-뷰틸 에스터를 황색의 발포체(4.5g, 78%)로서 수득하였다. MS(APCI) M⁺+1: 계산치 576.2, 실측치 576.3.

실시예 3

6-아세틸-8-사이클로펜틸-5-메틸-2-(5-피페라진-1-일-피리딘-2-일아미노)-8H-피리도[2,3-d]피리미딘-7-온 하이드로클로라이드의 제조

하이드로 클로라이드 기체를 DCM(100㎖)중 4-{6-[8-사이클로펜틸-6-(1-에톡시-바이닐)-5-메틸-7-옥소-7,8-다이하이드로-피리도[2,3-d]피리미딘-2-일아미노]-피리딘-3-일}-피페라진-1-카복실산 t-뷰틸 에스터를 황색의 발포체(4.5g, 0.00783몰, 실시예 2에서와 같이 제조됨)의 빙욕 냉각된 용액에 거품화하였다. 생성된 현탁액을 반응을 중단시키고 실온에서 밤새도록 교반한 후 다이에틸 에터(200㎖)중에 희석하였다. 고체를 여과에 의해 수집하고 다이에틸 에터로 세척하고, 건조하여 6-아세틸-8-사이클로펜틸-5-메틸-2-(5-피페라진-1-일-피리딘-2-일아미노)-8H-피리 도[2,3-d]피리미딘-7-온의 하이드로클로라이드 염을 황색의 고체(4.01g, 92%)로서 수득하였다. 융점, 200℃. HPLC, C18 역상, 22분 동안 0.1% TFA/H₂O중 0.1% TFA/CH₃CN의 10% 내지 95% 구배: 11.04분에서 99.0%. MS(APCI) M⁺+1: 계산치 448.2, 실측치 448.3. C₂₄H₂₉N₇O₂·2.4H₂O·1.85HCl에 대한 분석 계산치: C, 51.64; H, 6.44; N, 17.56, Cl(총), 11.75. 실측치: C, 51.31; H, 6.41; N, 17.20; Cl(총), 12.11.

실시예 4

6-아세틸-8- 사이클로펜틸 -5- 메틸 -2-(5-피페라진-1-일-피리딘-2- 일아미노 )-8H- 피리도[2,3-d]피리미딘 -7-온(형태 B)

물 250㎖중에 분산된 6-아세틸-8-사이클로펜틸-5-메틸-2-(5-피페라진-1-일-피리딘-2-일아미노)-8H-피리도[2,3-d]피리미딘-7-온(7.0g, 15.64밀리몰, 실시예 3과 같이 제조한 후 NaOH와 접촉)의 슬러리에 pH 5.2로 MeOH(15.64밀리몰)중 아이세티온 산 용액 0.52M 30㎖를 적가하였다. 용액을 유리 필터(미세함)를 통하여 여과하고 투명한 용액을 동결 건조하여 무정형 염 9.4g을 수득하였다. 무정형 염(3.16g)을 MeOH 25㎖과 혼합하고 거의 완전히 용해시킨 후 새로운 침전물을 형성하였다. 추가의 MeOH 25㎖를 첨가하고 혼합물을 46℃ 내지 49℃에서 4시간 동안 교반하였다. 혼합물을 천천히 32℃로 냉각하고 냉방(+4℃)에서 밤새도록 놓아두었다. 샘플을 PXRD에 대해 채우고, 형태 B의 형성을 나타냈다. 혼합물을 여과하고 침전물을 밤새도록 50℃ 진공 오븐에서 건조하였다. 이는 92% 수율로 화학식 1의 화합물의 단일-이세싸이오네이트 염 2.92g을 제공하였다. HPLC-99.25%, PXRD-형태 B, CHNS, H-NMR은 구조와 일치하였다.

실시예 5

6-아세탈-8-사이클로펜틸-5-메틸-2-(5-피페라진-1-일-피리딘-2-일아미노)-8H-피리도[2,3-d]피리미딘-7-온의 모노-이세싸이오네이트 염의 제조(형태 B)

MeOH(100㎖)를 기계적 교반기, 열전지/조절기, 응축기 및 가열 맨틀을 장착한 250㎖들이 플라스크중에 두고, 35℃로 예열하였다. 무정형 이세싸이오네이트 염(2g, 실시예 4에서 제조됨)을 25분 내지 30분의 간격으로 심지어 3회 분량으로 천천히 첨가하였다. 반응 혼합물을 35℃에서 밤새 교반하고, 후속적으로 냉각하였다. 샘플을 여과하고, PXRD로 시험하였다. 이는 순수한 형태 B였다. 그 후, 보다 큰 규모의 실험에서 전체 반응 혼합물을 형태 B 씨이드로서 사용하였다.

실시예 6

MeOH(50㎖)를 자기 교반기, 응축기, 열전지/조절기 및 가열 맨틀을 장착한 250㎖들이 플라스크중에 두고, 40℃로 예열하였다. 무정형 이세싸이오네이트 염(1g, 실시예 4에서 제조됨)을 30분의 간격으로 심지어 3회 분량으로 천천히 첨가한 후, 40℃에서 밤새 교반하였다. 반응을 라만 분광법으로 동일반응계에서 관찰하였다. 샘플을 취하고, 여과하고 PXRD로 분석하였다. 이는 PXRD 및 라만 분광법에 의한 순수한 형태 B였다. 혼합물을 3℃/시간의 속도로 25℃로 냉각하고, -10℃로 냉각하고, 여과하고, 진공 하에 건조시켜 형태 B 결정성 생성물 0.85g을 제공하였다.

실시예 7

유리 염기(화학식 1, 0.895㎎, 2밀리몰)를 MeOH 10㎖과 혼합하고 화학식 1의 화합물의 모노-이세싸이오네이트 염(형태 B) 33㎎으로 살포하였다. 그 후, MeOH(2.1밀리몰)중에서 0.375M 이세싸이온산 용액 5.6㎖을 75분 간격으로 심지어 10회 분량으로 첨가하였다. 혼합물을 추가의 1시간 동안 교반하고, 샘플을 PXRD 분석으로 취하였다. 결정성 형태 B의 형성을 확인하였다. 혼합물을 실온에서 밤새 교반하고, 다른 PXRD를 취하였다. 결정성 형태에는 변화가 없었다. 혼합물을 냉장고에서 -8℃에서 밤새 냉각하고, 여과하고, 진공 오븐에서 50℃에서 건조시켜 상기 명명된 화합물(형태 B) 1.053g(이론상 91.8%)을 제공하였다. HPLC-99.8%, CHNS, H-NMR, IR을 구조, PXRD-형태 B로 일치하였다.

실시예 8

6-아세탈-8-사이클로펜틸-5-메틸-2-(5-피페라진-1-일-피리딘-2-일아미노)-8H-피리도[2,3-d]피리미딘-7-온의 모노-이세싸이오네이트 염의 제조(형태 A)

무정형 이세싸이오네이트 염(47㎎, 실시예 4에서 제조됨)을 자기 교반기, 열전지 및 응축기를 장착한 15㎖들이 플라스크중에서 EtOH 4㎖로 혼합하였다. 혼합물을 환류 가열하고, 거의 투명한 용액을 형성하였다. 10 내지 15분 동안 환류한 후, 혼합물이 탁해졌다. 50℃로 냉각하고 형태 A로 69℃에서 살포하였다. 혼합물을 50℃에서 5시간 동안 유지하고, 밤새 실온으로 냉각하였다. 후속적으로 혼합물을 빙욕으로 1℃로 냉각하고, 1.5시간 동안 유지하고, 여과하고, 차가운 EtOH 0.5㎖으로 세척하고, 공기-건조한 후, 진공 오븐중에서 70℃에서 밤새 건조시켜 미세 결정성 물질 38.2㎎을 수득하였다. PXRD로 결정성 물질이 모노-이세싸이오네이트 염 형태 A임을 밝혀냈다. H-NMR은 모노-이세싸이오네이트 염에 대해 일치하고, 잔류하는 EtOH 약 5.9몰% 또는 0.6중량%의 존재를 나타내었다.

실시예 9

6-아세탈-8-사이클로펜틸-5-메틸-2-(5-피페라진-1-일-피리딘-2-일아미노)-8H-피리도[2,3-d]피리미딘-7-온의 모노-이세싸이오네이트 염의 제조(형태 D)

무정형 이세싸이오네이트 염(9.0g, 실시예 4에서 제조됨)을 MeOH 300㎖으로 혼합하고, 교반하고 63.8℃로 (환류) 가열하였다. 약간 혼탁한 혼합물을 MeOH 50㎖씩 2회로 첨가하였다. 고온 혼합물을 기계적 교반기를 장착한 2L 플라스크로 여과하였다. 혼합물을 간략하게 환류 가열한 후, 60℃로 냉각하였다. IPA(100㎖)를 혼합물에 첨가하였다. 혼합물을 다시 60℃로 가열하고, 추가로 IPA 110㎖을 첨가하였다. 침전물을 59.7℃에서 형성하기 시작하였다. 혼합물을 67.5℃로 재가열하고, 50℃로 냉각하고, 밤새 유지하였다. PXRD 분석을 위한 샘플을 다음날 아침 취하였다. 혼합물을 3℃/시간의 속도로 25℃로 냉각하고, 혼합물이 28℃가 되었을 때 다른 PXRD 샘플을 취하였다. 혼합물을 밤새 실온으로 냉각하였다. 침전물을 수집하고, 진공오븐중에서 65℃ 및 30 Torr에서 건조시켰다. 이 과정으로 결정성 화합물(PXRD 분석에 의한 형태 D) 7.45g(82.8% 수율)을 제조하였다. 전에 분선된 샘플 또한 형태 D였다. HPLC는 순도 98.82%임을 나타내고, CHNS 미세분석은 ±0.4% 이내였다. MeOH중에서 이세싸이오네이트 염 형태 A, B 및 D의 슬러리를 3일 미만에서 실질적으로 순수한 형태 B로 수득하였다.

실시예 10

이세싸이온산 (2-하이드록시-에탄설폰산)의 제조

기계적 교반기, 열전지, 기체 살포기 및 물 트랩을 통과하는 기체 벤트를 장착한 5L들이 4목 둥근바닥 플라스크를 소듐 이세싸이오네이트(알드리취(ALDRICH)) 748g(5.05몰), 및 IPA 4L로 충전하였다. 슬러리를 실온에서 교반하였다. 염화 수소 기체(알드리취) 925g(25.4몰)을 첨가되면서 바로 용해되도록 하는 속도로 시스템에 살포하면서(물 트랩을 거품 내며 통과하지 않는다는 점을 숙지한다), 빙욕을 사용하여 온도 간격이 50℃ 미만으로 유지하였다. 충분한 HCl 기체를 시스템이 포화될 때까지 첨가하였다(물 트랩을 거품 내며 통과하지 않는다는 점을 숙지한다). HCl의 첨가동안, 온도는 45℃로 상승하였다. 슬러리를 실온으로 냉각하고, 소결형 여과기를 통과시켜 여과하였다. 케이크를 IPA 100㎖으로 세척하고, 혼탁한 여과물을 10 내지 20μ여과기를 통과시켜 여과하였다. 욕 온도를 50℃ 미만으로 유지하면서, 생성된 투명한 무색의 여과물을 회전 증발기 상에서 감압 하에 농축시켰다. 생성된 밝은 황색 오일 1.07 kg을 탭 물 50㎖ 및 톨루엔 400㎖로 희석하고, 욕 온도를 50℃ 미만으로 유지하면서 3일 동안 회전 증발기상에서 감압 하에 농축하였다. 생성된 투명한 밝은 황색 오일 800g을 톨루엔 500㎖ 및 IPA 250㎖로 희석하 고, 욕 온도를 50℃ 미만으로 유지하면서 11일 동안 회전 증발기상에서 감압 하에 농축하였다. 생성된 투명한 밝은 황색 오일 713g을 물 7.9중량% 및 IPA 7.5중량%를 함유하는 81중량%(580g, 91.1% 수율)에서 적정하였다.

실시예 11

4-{6-[6-(1-뷰톡시-바이닐)-8-사이클로펜틸-5-메틸-7-옥소-7,8-다이하이드로-피리도[2,3-d]피리미딘-2-일아미노]-피리딘-3-일}-피페라진-1-카복실산 t-뷰틸 에스터의 제조

기계적 교반기, 열전지 및 실리콘 오일 버블러를 통과하여 구부러진 질소 유입기/유출구를 장착한 5L 3목 둥근 바닥 플라스크를 질소 분위기 하에 두고, 4-[6-(6-브로모-8-사이클로펜틸-5-메틸-7-옥소-7,8-다이하이드로-피리도[2,3-d]피리미딘-2-일아미노)-피리딘-3-일]-피페라진-1-카복실산 t-뷰틸 에스터(300g, 0.51몰, 실시예 2에서 제조됨), 뷰틸 바이닐 에터(154g, 1.54몰, 알드리취), n-부탄올(1.5L, 알드리취), 및 다이아이소프로필 에틸아민(107㎖, 0.62몰, 알드리취)으로 충전하였다. 슬러리를 약 50 Torr 진공 하에 둔 후, 질소 3회로 재충전하였다. 여기에 비스-(다이페닐포스피노페로센) 팔라듐 다이클로라이드 다이클로로메탄 8.3g(0.01몰)(존슨 매트니(JOHNSON MATTHEY), 로트(Lot) 077598001) 8.3g(0.01몰)을 첨가하고, 생성된 슬러리를 상기 기술된 바와 같은 추가의 3회로 제거하였다. 그 후, 혼합물을 95℃로 가열하고, 20시간 동안 교반하였다. 생성된 얇은 적색 슬러리를 헵탄 2L로 희석하고 약 5℃로 냉각하였다. 이 온도에서, 포화된 수성 칼륨 카보네이트 400㎖을 첨가하고, 혼합물을 여과하고, 헵탄 250㎖로 세정하였다. 오븐중에서 16 시간 동안 45℃에서 건조시킨 후, 표제 화합물 231.7g(75% 수율)을 황색 고체로서 수득하였다.

실시예 12

기계적 교반기, 열전지 및 실리콘 오일 버블러를 통과하여 구부러진 질소 유입구/유출구를 장착한 22L들이 3목 둥근 바닥 플라스크를 질소 분위기 하에 두고, 4-{6-[6-(1-보툭시-바이닐)-8-사이클로펜틸-5-메틸-7-옥소-7,8-다이하이드로-피리도 [2,3-d]피리미딘-2-일아미노]피리딘-3-일}-피페라진-1-카복실산 t-뷰틸 에스터(725g, 1.20몰, 실시예 11에서 제조됨) 및 MeOH(14L)로 충전하였다. 슬러리를 이세싸이온산(530g, 4.20몰, 실시예 10에서 제조됨), MeOH(1.5L) 및 물(70㎖, 3.89몰)의 용액으로 충전하면서 실온에서 교반하였다. 생성된 슬러리를 30분에 걸쳐 55℃로 가열한 후, 55℃에서 30분 동안 교반하였다. MeOH 200㎖중에서 Et₃N(알드리취) 175g(1.73몰)의 용액을 30℃로 냉각하면서 슬러리로 충전하였다. 슬러리를 30℃에서 유지하면서 MeOH 2L중의 Et₃N의 128g(1.26몰) 용액을 6시간에 걸쳐 적가하였다. 생성된 슬러리를 결정성 형태로 샘플화하였다(형태 B). 슬러리를 냉각하고 15분 동안 5℃에서 유지하고 후속적으로 소결형 여과기를 통과시켜 여과하였다. 생성된 여과기 케이크를 차가운 MeOH 200㎖로 여러번 세척하였다. 고체 생성물을 진공 하에 55℃에서 건조시켜 표제 화합물을 황색 결정으로서 710g(91% 수율)을 수 득하였다.

상기 설명은 단지 예로서, 본 발명을 제한하지 않는 의도임을 숙지해야 한다. 상기 설명에 따르는 많은 양태가 당해 분야의 숙련자에게 분명하다. 그러므로, 본 발명의 범위는 상기 기술을 참조로 할 뿐만 아니라 청구의 범위도 참조로 하며, 그러한 청구의 범위에 등가하는 모든 범위를 포함한다. 특허, 특허 출원 및 특허 공보를 비롯한 모든 문헌 및 참고문헌의 개시내용은 그 전체 및 모든 목적이 본원에 참고로 인용한다.

Claims

6-아세틸-8-사이클로펜틸-5-메틸-2-(5-피페라진-1-일-피리딘-2-일아미노)-8H-피리도[2,3-d]피리미딘-7-온의 이세싸이오네이트 염.
제 1 항에 있어서,

형태 A의 모노-이세싸이오네이트 염을 포함하는 이세싸이오네이트 염.
제 1 항에 있어서,

형태 B의 모노-이세싸이오네이트 염을 포함하는 이세싸이오네이트 염.
제 1 항에 있어서,

형태 D의 모노-이세싸이오네이트 염을 포함하는 이세싸이오네이트 염.
6-아세틸-8-사이클로펜틸-5-메틸-2-(5-피페라진-1-일-피리딘-2-일아미노)-8H-피리도[2,3-d]피리미딘-7-온의 이세싸이오네이트 염 및 하나 이상의 약학적으로 허용 가능한 부형제를 포함하는 약학적 투여 형태.
이세싸이온산과 제 1 용매의 용액을 6-아세틸-8-사이클로펜틸-5-메틸-2-(5-피페라진-1-일-피리딘-2-일아미노)-8H-피리도[2,3-d]피리미딘-7-온과 물의 분산액과 혼합 하여 제 1 혼합물을 생성하는 단계;

상기 제 1 혼합물을 동결건조시켜 무정형 염을 제공하는 단계;

상기 무정형 염을, 제 1 용매와 동일하거나 상이한 제 2 용매와 혼합하여 6-아세틸-8-사이클로펜틸-5-메틸-2-(5-피페라진-1-일-피리딘-2-일아미노)-8H-피리도[2,3-d]피리미딘-7-온의 결정질 이세싸이오네이트 염을 유도하는 제 2 혼합물을 생성하는 단계; 및

선택적으로, 상기 제 2 혼합물을 가열하거나, 제 2 혼합물을 냉각시키거나, 또는 제 2 혼합물을 가열 및 냉각시키는 단계를 포함하는,

6-아세틸-8-사이클로펜틸-5-메틸-2-(5-피페라진-1-일-피리딘-2-일아미노)-8H-피리도[2,3-d]피리미딘-7-온의 결정질 이세싸이오네이트 염의 제조방법.
6-아세틸-8-사이클로펜틸-5-메틸-2-(5-피페라진-1-일-피리딘-2-일아미노)-8H-피리도[2,3-d]피리미딘-7-온의 이세싸이오네이트 염의 씨이드 결정(seed crystal)을 제공하는 단계;

상기 씨이드 결정을 6-아세틸-8-사이클로펜틸-5-메틸-2-(5-피페라진-1-일-피리딘-2-일아미노)-8H-피리도[2,3-d]피리미딘-7-온의 이세싸이오네이트 염과 제 1 용매의 분산에 첨가하여 제 1 혼합물을 생성하는 단계;

상기 제 1 혼합물을 이세싸이온산 및 제 2 용매의 용액과 혼합하여 6-아세틸-8-사이클로펜틸-5-메틸-2-(5-피페라진-1-일-피리딘-2-일아미노)-8H-피리도[2,3-d]피리미딘-7-온의 이세싸이오네이트 염을 유도하는 제 2 혼합물을 생성하는 단계; 및

선택적으로, 상기 제 2 혼합물을 가열하거나, 제 2 혼합물을 냉각시키거나, 또는 제 2 혼합물을 가열 및 냉각시키는 단계를 포함하는,

6-아세틸-8-사이클로펜틸-5-메틸-2-(5-피페라진-1-일-피리딘-2-일아미노)-8H-피리도[2,3-d]피리미딘-7-온의 이세싸이오네이트 염의 제조방법.
제 6 항 또는 제 7 항에 있어서,

제 1 및 제 2 용매가 수 혼화성인 이세싸이오네이트 염의 제조방법.
제 6 항 또는 제 7 항에 있어서,

제 1 및 제 2 용매가 알코올인 이세싸이오네이트 염의 제조방법.
제 6 항 또는 제 7 항에 있어서,

제 1 및 제 2 용매가 MeOH인 이세싸이오네이트 염의 제조방법.
제 6 항 또는 제 7 항에 있어서,

각각 대략적으로 등몰량의 이세싸이온산 및 6-아세틸-8-사이클로펜틸-5-메틸-2-(5-피페라진-1-일-피리딘-2-일아미노)-8H-피리도[2,3-d]피리미딘-7-온을 혼합함으로써, 제 1 혼합물 및 제 2 혼합물을 제조하는 이세싸이오네이트 염의 제조방법.
제 6 항 또는 제 7 항에 있어서,

제 2 혼합물을 약 30℃ 내지 약 60℃ 범위의 온도에서 교반하는 것을 추가적으로 포함하는 이세싸이오네이트 염의 제조방법.
제 6 항 또는 제 7 항에 있어서,

제 2 혼합물을 약 0℃ 이하의 온도로 냉각하는 것을 추가적으로 포함하는 이세싸이오네이트 염의 제조방법.
4-{6-[6-(1-뷰톡시-바이닐)-8-사이클로펜틸-5-메틸-7-옥소-7,8-다이하이드로-피리도 [2,3-d]피리미딘-2-일아미노]-피리딘-3-일}-피페라진-1-카복실산 t-뷰틸 에스터를 제 1 용매 및 물 중에서 이세싸이온산과 반응시켜서 6-아세틸-8-사이클로펜틸-5-메틸-2-(5-피페라진-1-일-피리딘-2-일아미노)-8H-피리도[2,3-d]피리미딘-7-온의 다이-이세싸이오네이트 염이 포함된 혼합물을 제공하는 단계를 포함하는,

6-아세틸-8-사이클로펜틸-5-메틸-2-(5-피페라진-1-일-피리딘-2-일아미노)-8H-피리도[2,3-d]피리미딘-7-온의 이세싸이오네이트 염의 제조방법.
제 14 항에 있어서,

반응 혼합물을 장애 염기에 첨가하여 6-아세틸-8-사이클로펜틸-5-메틸-2-(5-피페라진-1-일-피리딘-2-일아미노)-8H-피리도[2,3-d]피리미딘-7-온의 모노-이세싸이오네이트 염을 제공하는 것을 추가적으로 포함하는 이세싸이오네이트 염의 제조방법.
비정상 세포증식에 의해 유발된, 인간을 포함한 포유동물의 질병 또는 상태의 치료방법으로서, 상기 질병 또는 상태를 치료하는데 효과적인 양의 6-아세틸-8-사이클로펜틸-5-메틸-2-(5-피페라진-1-일-피리딘-2-일아미노)-8H-피리도[2,3-d]피리미딘-7-온의 이세싸이오네이트 염을 포유동물에게 투여하는 것을 포함하는 치료방법.
제 16 항에 있어서,

질병 또는 상태가 죽상경화증, 수술후 혈관 협착증 및 재발협착증 또는 자궁내막염과 관련된 혈관 평활근 증식(vascular smooth muscle proliferation)인 치료방법.
제 16 항에 있어서,

비정상 세포 증식이 암인 치료방법.
바이러스 또는 진균 감염에 의해 유발되는 인간이 포함된 포유동물의 질병 또는 상태의 치료방법으로서, 상기 질병 또는 상태를 치료하는데 효과적인 양의 6-아세틸-8-사이클로펜틸-5-메틸-2-(5-피페라진-1-일-피리딘-2-일아미노)-8H-피리도[2,3-d]피리미딘-7-온의 이세싸이오네이트 염을 포유동물에게 투여하는 것을 포함하는 치료방법.
인간이 포함된 포유동물의 자가면역 질환의 치료방법으로서, 상기 자가면역 질환을 치료하는데 효과적인 양의 6-아세틸-8-사이클로펜틸-5-메틸-2-(5-피페라진-1-일-피 리딘-2-일아미노)-8H-피리도[2,3-d]피리미딘-7-온의 이세싸이오네이트 염을 포유동물에게 투여하는 것을 포함하는 치료방법.
제 20 항에 있어서,

자가면역 질환이 건선, 염증형 류마티스성 관절염, 낭창, 유형 1 당뇨병, 당뇨병콩팥병증, 다발경화증, 사구체신염 또는 숙주편대이식질환(host versus graft disease)을 포함한 기관이식거부인 치료방법.