ES2286040T3 - Microesferas de liberacion prolongada. - Google Patents
Microesferas de liberacion prolongada. Download PDFInfo
- Publication number
- ES2286040T3 ES2286040T3 ES00973477T ES00973477T ES2286040T3 ES 2286040 T3 ES2286040 T3 ES 2286040T3 ES 00973477 T ES00973477 T ES 00973477T ES 00973477 T ES00973477 T ES 00973477T ES 2286040 T3 ES2286040 T3 ES 2286040T3
- Authority
- ES
- Spain
- Prior art keywords
- microspheres
- microsphere
- agent
- polymer
- protein
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Expired - Lifetime
Links
Classifications
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K9/00—Medicinal preparations characterised by special physical form
- A61K9/14—Particulate form, e.g. powders, Processes for size reducing of pure drugs or the resulting products, Pure drug nanoparticles
- A61K9/16—Agglomerates; Granulates; Microbeadlets ; Microspheres; Pellets; Solid products obtained by spray drying, spray freeze drying, spray congealing,(multiple) emulsion solvent evaporation or extraction
- A61K9/1605—Excipients; Inactive ingredients
- A61K9/1629—Organic macromolecular compounds
- A61K9/1652—Polysaccharides, e.g. alginate, cellulose derivatives; Cyclodextrin
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K9/00—Medicinal preparations characterised by special physical form
- A61K9/14—Particulate form, e.g. powders, Processes for size reducing of pure drugs or the resulting products, Pure drug nanoparticles
- A61K9/16—Agglomerates; Granulates; Microbeadlets ; Microspheres; Pellets; Solid products obtained by spray drying, spray freeze drying, spray congealing,(multiple) emulsion solvent evaporation or extraction
- A61K9/1605—Excipients; Inactive ingredients
- A61K9/1629—Organic macromolecular compounds
- A61K9/1635—Organic macromolecular compounds obtained by reactions only involving carbon-to-carbon unsaturated bonds, e.g. polyvinyl pyrrolidone, poly(meth)acrylates
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K9/00—Medicinal preparations characterised by special physical form
- A61K9/14—Particulate form, e.g. powders, Processes for size reducing of pure drugs or the resulting products, Pure drug nanoparticles
- A61K9/16—Agglomerates; Granulates; Microbeadlets ; Microspheres; Pellets; Solid products obtained by spray drying, spray freeze drying, spray congealing,(multiple) emulsion solvent evaporation or extraction
- A61K9/1605—Excipients; Inactive ingredients
- A61K9/1629—Organic macromolecular compounds
- A61K9/1658—Proteins, e.g. albumin, gelatin
-
- Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
- Y10—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC
- Y10S—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
- Y10S977/00—Nanotechnology
- Y10S977/70—Nanostructure
- Y10S977/788—Of specified organic or carbon-based composition
- Y10S977/797—Lipid particle
- Y10S977/798—Lipid particle having internalized material
- Y10S977/799—Containing biological material
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Epidemiology (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Pharmacology & Pharmacy (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Animal Behavior & Ethology (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Public Health (AREA)
- Veterinary Medicine (AREA)
- Medicinal Preparation (AREA)
- Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)
Abstract
Microesfera que comprende: (1) una proteína portadora; (2) un polímero soluble en agua; (3) un primer agente complejante que es un polisacárido polianiónico y (4) un segundo agente complejante que es un catión metálico divalente seleccionado de entre el grupo consistente en calcio y magnesio caracterizada porque, excluyendo una microesfera la proteína portadora es albúmina, el polímero soluble en agua es polietilenglicol (PEG), polivinilpirrolidona (PVP), mezclas de ambos, almidón o hidroxietilalmidón; el primer agente complejante que es un polisacárido polianiónico es sulfato de dextrano, heparina o sulfato de heparina; y el segundo agente complejante que es un catión metálico divalente es calcio o magnesio.
Description
Microesferas de liberación prolongada.
La invención se refiere a métodos y
composiciones para formar y utilizar microesferas de liberación
prolongada. Las microesferas son porosas e incluyen múltiples
orificios acanalados con un diámetro inferior a 1.000 angstroms.
Las micropartículas, microesferas y
microcápsulas, en conjunto denominadas aquí "micropartículas",
son partículas sólidas o semisólidas que tienen un diámetro
inferior a un milímetro, preferentemente inferior a 100 micras, las
cuales pueden estar formadas por diversos materiales, incluyendo
polímeros sintéticos, proteínas y polisacáridos. Las
micropartículas han sido utilizadas en numerosas aplicaciones
diferentes, principalmente separaciones, diagnósticos y suministro
de medicamentos.
Los ejemplos más conocidos de micropartículas
empleadas en técnicas de separación son aquellas que están formadas
por polímeros de origen tanto sintético como proteico, tales como
poliacrilamida, hidroxiapatita o agarosa. Estas micropartículas
poliméricas normalmente se utilizan para separar moléculas, tales
como proteínas, según el peso molecular y/o la carga iónica o por
la interacción con moléculas químicamente acopladas a las
micropartículas.
En el campo del diagnóstico, las micropartículas
se utilizan frecuentemente para inmovilizar una enzima, el sustrato
para una enzima o un anticuerpo marcado, el cual luego se somete a
la interacción con una molécula para ser detectado directa o
indirectamente.
En el área del suministro controlado de
medicamentos, las moléculas están encapsuladas dentro de las
micropartículas o se incorporan en una matriz monolítica para su
liberación posterior. Habitualmente se emplean diversas distintas
técnicas para elaborar estas micropartículas a partir de polímeros
sintéticos, de polímeros naturales, de proteínas y polisacáridos,
incluyendo una separación de fases, la evaporación del disolvente,
una emulsificación y un secado por pulverización. Generalmente los
polímeros forman la estructura soporte de estas microesferas y el
medicamento de interés es incorporado en la estructura polimérica.
Ejemplos de polímeros empleados para la formación de microesferas
incluyen homopolímeros y copolímeros de ácido láctico y de ácido
glicólico (PLGA), tal como se describe en la Patente de Estados
Unidos Nº 5.213.812 de Ruiz, en la Patente de Estados Unidos Nº
5.417.986 de Reid y col., en la Patente de Estados Unidos Nº
4.530.840 de Tice y col., la Patente de Estados Unidos Nº 4.897.268
de Tice y col., la Patente de Estados Unidos Nº 5.075.109 de Tice y
col., la Patente de Estados Unidos Nº 5.102.872 de Singh y col., la
Patente de Estados Unidos Nº 5.384.133 de Boyes y col., la Patente
de Estados Unidos Nº 5.360.610 de Tice y col., y en la Publicación
de Solicitud de Patente Europea Número 248.531 de Southern Research
Institute; copolímeros en bloque como tetronic 908 y poloxamer 407,
tal como se describe en la Patente de Estados Unidos Nº 4.904.479
de Illum; biopolímeros como quitosano hidrolizado, tal como se
describe en la WO 99/48479; y polifosfacenos, tal como se describe
en la Patente de Estados Unidos Nº 5.149.543 de Cohen y col. Las
microesferas elaboradas mediante la utilización de polímeros tales
como éstos presentan poca eficacia ante la carga y, a menudo, sólo
son capaces de incorporar un pequeño porcentaje del medicamento de
interés en la estructura polimérica. Por ello, a menudo se deben
administrar cantidades sustanciales de microesferas para conseguir
un efecto
terapéutico.
terapéutico.
Las perlas o partículas esféricas han estado
disponibles comercialmente durante muchos años como una herramienta
para los bioquímicos. Por ejemplo, anticuerpos conjugados con perlas
originan partículas relativamente grandes específicas de ligandos
particulares. Normalmente se emplean grandes partículas recubiertas
de anticuerpos para reticular los receptores en la superficie de
una célula para la activación celular, están unidas a una fase
sólida para la purificación por inmunoafinidad y pueden utilizarse
para suministrar un agente terapéutico que se libera lentamente en
el tiempo, utilizando anticuerpos específicos tisulares o tumorales
conjugados con las partículas para dirigir el agente hacia el sitio
deseado.
El método más común de unión covalente de un
anticuerpo a una matriz de fase sólida consiste en derivatizar una
perla con un agente químico de conjugación y entonces unir el
anticuerpo a la perla activada. La utilización de una perla
sintética polimérica y no de una molécula proteica permite utilizar
condiciones de derivatización mucho más severas que las que puedan
soportar muchas proteínas, es relativamente barato y a menudo genera
un enlace que es estable en un amplio espectro de condiciones
desnaturalizantes. Se dispone comercialmente de diversas perlas
derivatizadas, todas con diferentes constituyentes y tamaños. Las
perlas formadas a partir de polímeros sintéticos, tales como
poliacrilamida, poliacrilato, poliestireno o látex, están
disponibles comercialmente de numerosas fuentes, como
Bio-Rad Laboratories (Richmond, Calif.) y LKB
Produkter (Stockholm, Suecia). Las perlas formadas a partir de
macromoléculas y partículas naturales tales como agarosa, agarosa
reticulada, globulina, ácido desoxirribonucleico y liposomas están
disponibles comercialmente de fuentes como Bio-Rad
Laboratories, Pharmacia (Piscataway, N.J.) e IBF (Francia). Las
perlas formadas a partir de copolímeros de poliacrilamida y agarosa
están disponibles comercialmente de fuentes como IBF y Pharmacia.
Las perlas magnéticas están disponibles comercialmente de fuentes
como Dynal Inc. (Great Neck, N.Y.).
Una desventaja de las micropartículas o perlas
actualmente disponibles estriba en que son difíciles y caras de
producir. Las micropartículas producidas por medio de estos métodos
conocidos tienen una amplia distribución de tamaños de partícula, a
menudo carecen de uniformidad y no consiguen presentar una cinética
de liberación a largo plazo cuando la concentración de los
ingredientes activos es alta. Además, los polímeros utilizados en
estos métodos conocidos se disuelven en disolventes orgánicos con el
fin de formar las microesferas. Por tanto, las microesferas deben
elaborarse en instalaciones especiales diseñadas para manejar
disolventes orgánicos. Estos disolventes orgánicos podrían
desnaturalizar las proteínas o los péptidos contenidos en las
micropartículas. Los disolventes orgánicos residuales podrían ser
tóxicos cuando se administran a seres humanos o animales.
Además, las micropartículas disponibles rara vez
vez tienen un tamaño lo suficientemente pequeño como para justo
atravesar los orificios del tamaño de una aguja comúnmente
utilizados para administrar la terapéutica o como para ser útiles
en la administración vía inhalación. Por ejemplo, las
micropartículas preparadas empleando ácido glicólico poliláctico
(PLGA) son grandes y tienden a agregarse. Es necesaria una etapa de
selección de tamaño, lo que resulta en una pérdida de producto,
para eliminar aquellas partículas demasiado grandes como para su
inyección. Aquellas partículas de PLGA con un tamaño adecuado para
su inyección deben ser administradas mediante una aguja de gran
calibre para corresponderse al gran tamaño de partícula, con
frecuencia causando molestias al paciente.
Generalmente, todas las microesferas actualmente
disponibles están activadas para liberar su contenido en medios
acuosos y, por tanto, deben ser liofilizadas para impedir su
liberación prematura. Además, las partículas como aquellas
preparadas mediante el sistema de PLGA presentan una cinética de
liberación basada tanto en la erosión como en la difusión. En este
tipo de sistema, se observa una explosión inicial o una liberación
rápida del medicamento. Este efecto de explosión puede resultar en
efectos secundarios no deseados en aquellos pacientes a quienes se
han administrado las partículas.
Actualmente se dispone de micropartículas
preparadas utilizando lípidos para encapsular medicamentos diana.
Por ejemplo, para encapsular medicamentos solubles en agua con el
fin de su suministro posterior, tal como se describe en la Patente
de Estados Unidos Nº 5.422.120 de Sinil Kim, se pueden utilizar
lípidos dispuestos en membranas bicapa que rodean múltiples
compartimentos acuosos para formar partículas. En general estas
partículas tienen un tamaño superior a 10 \mum y están diseñadas
para la administración articular, intratecal, subcutánea o
epidural. Como alternativa, para el suministro intravenoso de
pequeñas moléculas se han utilizado liposomas. Los liposomas son
partículas esféricas compuestas por bicapas múltiples o simples de
fosfolípidos y colesterol. Los liposomas tienen un tamaño de 30
\mum o superior y pueden portar una variedad de medicamentos
solubles en agua o en lípidos. La tecnología de los liposomas se ha
visto dificultada por problemas que incluyen la pureza de los
componentes lipídicos, una posible toxicidad, la heterogeneidad y
estabilidad de las vesículas, una absorción excesiva y dificultades
con su fabricación o su vida útil.
Por tanto, existe una creciente necesidad de
desarrollar nuevos métodos de fabricación de micropartículas, en
particular que pueden adaptarse a su utilización en separaciones, en
el campo diagnóstico y de suministro de medicamentos.
Preferentemente, estas micropartículas mejoradas permitirían la
liberación prolongada de los agentes activos de una manera
predecible y coherente.
La invención resuelve estos y otros problemas al
proporcionar métodos y composiciones para la liberación prolongada
de agentes terapéuticos y/o diagnósticos in vivo e in
vitro. Tal como se emplea posteriormente aquí, con el término
"agente terapéutico" se pretende incluir agentes clínicos que
puedan ser administrados en forma microcapsular cuando se emplean
esencialmente para el tratamiento o el diagnóstico.
De acuerdo con un aspecto de la invención, se
proporciona una microesfera de superficie lisa que incluye múltiples
orificios acanalados. Los orificios acanalados tienen un diámetro
inferior a 1.000 angstroms, tal como se determina mediante la
técnica de adsorción de gas para determinar el tamaño de poro. Las
microesferas de la invención incluyen una macromolécula,
preferentemente una proteína o un ácido nucleico, y al menos un
polímero soluble en agua. En general, las microesferas se forman
poniendo en contacto la macromolécula y al menos un polímero
soluble en agua bajo condiciones acuosas para formar las
microesferas, y entonces las microesferas se estabilizan tanto por
reticulación química como por su exposición a una fuente de energía,
preferentemente de calor, o por ambos, a determinada temperatura,
lo que resulta en microesferas que son resistentes a tratamientos
físicos y químicos tales como sonicación y a soluciones cáusticas
bajo estas condiciones. Aunque no se desee una vinculación a
ninguna teoría o mecanismo particular, se piensa que las
microesferas se forman durante la etapa de mezcla; sin embargo,
estas microesferas inicialmente formadas son transitorias y
requieren de otra etapa (por ejemplo, incluir un agente de
reticulación en la mezcla y/o aplicar calor u otra fuente de
energía) para estabilizar tales microesferas transitoriamente
formadas. Las condiciones particulares para formar las microesferas
representativas de la invención se describen en los Ejemplos. En las
realizaciones preferentes, la reacción de formación se lleva a cabo
sin adición de aceites o disolventes orgánicos. El aceite se define
como una sustancia que es grasa líquida, la cual es insoluble en
agua.
El componente proteico de la microesfera puede
ser una proteína portadora o una proteína terapéutica (véase, por
ejemplo, la Tabla 1). Tal como se utiliza aquí, una "proteína
portadora" se refiere a una proteína que tiene un peso molecular
de aproximadamente 1.500 mínimo y que se presenta en estructura
tridimensional. La proteína portadora puede ser también una
proteína terapéutica, esto es, una proteína que tiene actividad
terapéutica; sin embargo, en general, la expresión "proteína
portadora" se utilizará en esta solicitud para referirse a una
proteína que tiene una función esencial para proporcionar una
estructura tridimensional con el propósito de la formación de
microesferas, incluso aunque la proteína portadora pueda tener
también una función secundaria como agente terapéutico. En ciertas
realizaciones preferentes, la proteína portadora es una albúmina, en
particular seroalbúmina humana. Opcionalmente, las microesferas
proteicas de la invención incluyen además un agente terapéutico tal
como un esteroide (por ejemplo estradiol, testosterona,
prednisolona, dexametasona, hidrocortisona, base de lidocaína, base
de procaína) o cualquier otra entidad química conocida por unirse a
la proteína, preferentemente a la albúmina, tal como GCSF o
paclitaxel. En todavía otras realizaciones (expuestas más abajo),
las microesferas de la invención incluyen además un agente
complejante y, preferentemente, un agente terapéutico
(preferentemente un péptido) que está asociado al agente
complejante mediante una interacción iónica o no iónica. En ciertas
realizaciones, la proteína que comprende la matriz es una proteína
terapéutica (por ejemplo una hormona como insulina u hormona de
crecimiento humana) y la microesfera está construida y dispuesta
para proporcionar una liberación prolongada de la proteína
terapéutica in vivo. Preferentemente, la microesfera está
construida y dispuesta para proporcionar una liberación prolongada
del agente terapéutico en ausencia de un aumento de volumen
significativo de la microesfera.
Sorprendentemente, la superficie de la
microesfera es diferente de su interior. Un lavado fuerte con agua
de las microesferas rotas por congelación disuelve gran parte del
material de la matriz de la microesfera, dejando una envoltura
fina. Además, la superficie de la microesfera es lisa; los orificios
(poros) acanalados tienen un diámetro inferior a 1.000 angstroms,
tal como se determina mediante técnicas de adsorción de gas para la
determinación del tamaño de poro, utilizando por ejemplo la
tecnología BET para el análisis de datos.
En general, las microesferas de la invención se
forman por mezcla de la macromolécula, preferentemente una proteína
o un ácido nucleico, con al menos un polímero acuoso bajo
condiciones que permiten que el polímero soluble en agua elimine
agua ("deshidrate") de la macromolécula, dentro de unas
proporciones específicas o preferentes entre la macromolécula y el
polímero soluble en agua. Tal como se utiliza aquí, un "polímero
soluble en agua" de la invención se refiere a un polímero o a
una mezcla de polímeros que son capaces de eliminar el agua o
deshidratar la macromolécula o que sea capaz de otro modo de
provocar una exclusión de volumen. Así, el proceso preferente
implica la exclusión de volumen mediante la utilización de un
sistema totalmente acuoso sin involucrar ningún aceite o disolvente
orgánico.
Los polímeros solubles en agua adecuados
incluyen polímeros ramificados o lineales solubles, preferentemente
aquellos de alto peso molecular. Los polímeros pueden ser muy
solubles en agua, moderadamente solubles en agua o ligeramente
solubles en agua (solubilidad en agua superior a un 2%
peso/volumen). Los polímeros solubles en agua preferentes son
solubles en agua o solubles en un disolvente miscible en agua. Los
polímeros solubles en agua pueden solubilizarse primero mediante su
disolución en un disolvente miscible en agua y después combinando
la solución de polímero con un disolvente acuoso. En las
realizaciones particularmente preferentes, los polímeros solubles
en agua de la invención se seleccionan de entre los polímeros
solubles en agua mostrados en la Tabla 2. En ciertas realizaciones,
las microesferas de la invención están formadas por proteínas y
polímeros solubles en agua y contienen del 40 a menos del 100% (en
peso) de proteína. El producto final de microesferas que ha sido
estabilizado utilizando un agente reticulante y/o por su exposición
a una fuente de energía, por ejemplo calor, no se hincha
notablemente en presencia de agua (es decir, no es un hidrogel). En
las realizaciones particularmente preferentes, el polímero soluble
en agua es un polímero basado en hidrocarburos. Así, en ciertas
realizaciones preferentes, la microesfera comprende: (1) una
proteína, preferentemente albúmina; y (2) un polímero soluble en
agua basado en hidrocarburos, preferentemente hetalmidón,
representando la proteína al menos un 40% y menos del 100% en peso
de la microesfera. Preferentemente, el polímero basado en
hidrocarburos representa más del 0% y menos o igual al 30% en peso
de la microesfera. En esta y otras realizaciones, las microesferas
preferentemente comprenden además un agente activo, preferentemente
una hormona de liberación de la hormona luteinizante o un análogo
de la misma. En general, las microesferas de la invención, cuando
están en contacto con una solución de agente activo, son capaces de
incorporar al menos el 60%, preferentemente al menos el 70%, al
menos el 80% o al menos el 90%, y con especial preferencia, al menos
el 95% o al menos el 98% del agente activo. Opcionalmente las
microesferas que contienen el agente activo se estabilizan además
poniendo en contacto las microesferas con el mismo tipo de agente
reticulante y utilizando los mismos tipos de condiciones aquí
descritas para la estabilización inicial de las microesferas.
De acuerdo con otro aspecto de la invención, se
proporciona una microesfera que incluye además un agente
complejante. Según este aspecto, la microesfera incluye: (1) una
macromolécula tal como una proteína (por ejemplo albúmina, tal como
se ha descrito anteriormente); (2) al menos un polímero soluble en
agua (por ejemplo, hetalmidón (hidroxietilalmidón), PEG/PVP); y (3)
un agente complejante. Tal como se utiliza aquí, un agente
complejante se refiere a una molécula que es capaz de interactuar
con un agente terapéutico (expuesto más abajo) para facilitar la
carga, retención y/o de otro modo retrasar la liberación del agente
terapéutico desde la microesfera (véase por ejemplo la Tabla 3).
Como con todos los aspectos de la invención, estas microesferas
tienen una superficie lisa que incluye múltiples orificios
acanalados cuyo diámetro es inferior a 1.000 angstroms, tal como se
determina por técnicas de adsorción de gas para la determinación del
tamaño de poro y, preferentemente, no contienen aceites o
disolventes orgánicos detectables.
De acuerdo con un aspecto particularmente
preferente de la invención, se proporciona una microesfera que
incluye además al menos dos agentes complejantes. Según este
aspecto, la microesfera incluye: (1) una macromolécula tal como una
proteína portadora (por ejemplo albúmina, tal como se ha descrito
anteriormente); (2) al menos un polímero soluble en agua (por
ejemplo hetalmidón (hidroxietilalmidón), PEG/PVP); (3) un primer
agente complejante que es un polisacárido aniónico; y (4) un
segundo agente complejante que es un catión metálico divalente
seleccionado de entre el grupo consistente en calcio, magnesio,
zinc, estroncio, bario, manganeso y hierro. Una realización
particularmente preferente de este aspecto de la invención se
ilustra en el Ejemplo 17. El calcio y el magnesio son los cationes
metálicos divalentes preferentes.
Tal como se utiliza aquí, un agente complejante
se refiere a una molécula que es capaz de interactuar con un agente
terapéutico (expuesto más abajo) para facilitar la carga, la
retención y/o de otro modo retrasar la liberación del agente
terapéutico desde la microesfera (véase por ejemplo la Tabla 3).
Como con otros aspectos de la invención, estas microesferas tienen
preferentemente una superficie lisa que incluye múltiples orificios
acanalados cuyo diámetro es inferior a 1.000 angstroms, tal como se
determina por técnicas de adsorción de gas para la determinación
del tamaño de poro y, preferentemente, no contienen aceites o
disolventes orgánicos detectables.
Un método preferente para incorporar
el(los) agente(s) complejante(s) consiste en
combinar el(los) agente(s) complejante(s) con
un polímero soluble en agua en solución acuosa, luego añadir la
macromolécula y estabilizar las microesferas con calor y/o con
agentes reticulantes.
En general, el agente complejante es un agente
complejante iónico (es decir, el agente complejante es capaz de una
interacción iónica con un agente terapéutico (expuesto más abajo)) o
un agente complejante no iónico (es decir, el agente complejante es
capaz de una interacción no iónica (por ejemplo hidrofóbica,
iónica/no iónica mixta) con un agente terapéutico o con otro agente
complejante). Ejemplos de agentes complejantes se muestran en la
Tabla 3. Los agentes complejantes iónicos de la invención se
clasifican además en agentes complejantes aniónicos (es decir,
agentes complejantes que tienen carga negativa, como polisacáridos
aniónicos, por ejemplo sulfato de dextrano, ácidos galacturónicos,
alginatos, ácido manurónico, ácido gulurónico, ácido hialurónico,
sulfatos de condroitina, heparina, quitina, quitosano,
glicosaminoglicanos, proteoglicanos) y agentes complejantes
catiónicos (es decir, agentes complejantes que tienen carga
positiva). Los agentes complejantes preferentes de la invención son
polisacáridos aniónicos y cationes metálicos divalentes
seleccionados de entre el grupo consistente en calcio y
magnesio.
En ciertas realizaciones, el agente complejante
es un agente complejante aniónico que tiene una estructura de
fórmula I:
(I)POLY-[Y^{-}]_{n}
\hskip0.2cmX^{+}
donde
- \quad
- POLY representa una cadena principal del agente complejante aniónico que puede ser lineal o ramificada;
- \quad
- Y^{-} representa un grupo aniónico, por ejemplo sulfato, carboxilo, fosfato, nitrato, carbonato y similares, que pueden acoplarse a una o más de las ramificaciones de la cadena principal;
- \quad
- X^{+} representa un grupo catiónico, por ejemplo que es un contraión del grupo aniónico;
- \quad
- n es un número entero de 1 a 10.000, preferentemente de 5 a 100 y, en especial de 5 a 1.000 y en particular de 5 a 10.000; y
- \quad
- cuando n es superior a 1, los n grupos Y^{-} pueden ser iguales o diferentes.
En todavía otras realizaciones de la invención,
el agente complejante es un agente complejante catiónico que tiene
la estructura de fórmula II:
(II)POLY-[X^{+}]_{n}
\hskip0.2cmY^{-}
donde
- \quad
- POLY representa una cadena principal del agente complejante catiónico que puede ser lineal o ramificada;
- \quad
- X^{+} representa un grupo catiónico, por ejemplo un grupo amino, que puede acoplarse a una o más de las ramificaciones de la cadena principal;
- \quad
- Y^{-} representa un grupo aniónico, que es un contraión del grupo catiónico;
- \quad
- n es un número entero de 1 a 10.000, preferentemente de 5 a 100, en especial de 5 a 1.000 y en particular de 5 a 10.000; y
- \quad
- cuando n es superior a 1, los n grupos X^{+} pueden ser iguales o diferentes.
De acuerdo con otro aspecto de la invención, se
proporciona una microesfera que incluye además un agente activo
(véase por ejemplo la Tabla 4). Las microesferas dentro de las
cuales puede cargarse el agente activo pueden incluir uno o varios
agentes complejantes para facilitar la carga y/o para modificar la
liberación del agente activo desde la microesfera. Como
alternativa, el agente activo puede cargarse dentro de las
microesferas anteriormente descritas sin que exista un agente
complejante, por ejemplo, la proteína y/o los polímeros solubles en
agua de la invención pueden interactuar con el agente activo para
facilitar la carga y/o modificar su liberación desde la
microesfera. En general, aunque se pueda cargar el agente activo en
una microesfera de la invención durante la preparación de la
microesfera, es preferible cargar el agente activo en una
microesfera preformada de la invención y, en particular cargar el
agente activo en una microesfera preformada que contenga uno o más
agentes complejantes para facilitar la carga y/o la liberación
prolongada del agente. Contrariamente a las microesferas de
hidrogel, las microesferas de la invención no se hinchan
significativamente en agua y, además, las microesferas no requieren
tal hinchamiento para proporcionar la liberación prolongada de la
proteína terapéutica y/o del agente fisiológicamente activo desde la
microesfera.
Tal como se utiliza aquí, un agente activo se
refiere a un agente que posee una actividad diagnóstica o
terapéutica. En consecuencia, un agente activo puede incluir una
etiqueta detectable (por ejemplo radioactiva) que sirve para
identificar la localización del agente liberado in vivo; los
agentes activos también incluyen agentes terapéuticos, que sirven
para tratar una enfermedad o condición. En ciertas realizaciones,
los agentes fisiológicamente activos preferentes son proteínas o
los agentes peptídicos. Tales proteínas o agentes peptídicos
típicamente pueden dividirse además en categorías según la
actividad del agente o el tipo de enfermedad o condición que se
está tratando. Las categorías de agentes fisiológicamente activos
que se pueden utilizar en la presente invención incluyen, pero no
se limitan a, antibióticos, hematopoyéticos, agentes
antiinfecciosos, agentes antidemencia, antivirales, antitumorales,
antipiréticos, analgésicos, agentes antiinflamatorios, agentes
antiulcerosos, antialérgicos, antidepresivos, agentes
psicotrópicos, cardiotónicos, agentes antiarrítmicos,
vasodilatadores, agentes antihipertensivos, tales como diuréticos
para hipotensos, agentes antidiabéticos, anticoagulantes, agentes
reductores del colesterol, agentes terapéuticos para la
osteoporosis, hormonas, vacunas, etc... (véase por ejemplo la Tabla
4).
El péptido o la proteína fisiológicamente activa
que se emplea de acuerdo con la presente invención es un péptido
compuesto por dos o más aminoácidos. Preferentemente, este péptido
tiene un peso molecular superior a 200, por ejemplo en el rango de
aproximadamente 200 a 200.000. El rango de peso molecular
especialmente preferente se sitúa entre aproximadamente 200 y
100.000. Ejemplos más específicos de agentes fisiológicamente
activos, incluyendo agentes no proteicos, que pueden utilizarse en
lo que respecta a los métodos y composiciones de la invención se
proporcionan en la descripción detallada de la invención.
De acuerdo con todavía otro aspecto de la
invención, se proporciona un método para formar una microesfera. El
método implica: (1) la formación de una mezcla acuosa que contiene
una macromolécula, preferentemente una proteína o un ácido
nucleico, y un polímero soluble en agua, preferentemente un polímero
basado en hidrocarburos, por ejemplo hetalmidón; (2) permitir que
se formen las microesferas en la mezcla acuosa; (3) estabilización
de las microesferas, preferentemente poniéndolas en contacto con un
agente reticulante y/o exponiéndolas a una fuente de energía,
preferentemente calor, bajo condiciones suficientes para estabilizar
las microesferas; estando presente la macromolécula en la mezcla
acuosa en una cantidad suficiente para formar una microesfera que
contiene al menos el 40% y menos del 100% en peso de macromolécula.
Aunque sin vincularse a una teoría o mecanismo particular, se
piensa que las microesferas se forman durante la etapa de mezcla;
sin embargo, estas microesferas inicialmente formadas son
transitorias y requieren otra etapa (por ejemplo, la inclusión de
un agente reticulante en la mezcla y/o la aplicación de calor o de
otra fuente de energía) para estabilizar las microesferas formadas
transitoriamente. En los Ejemplos se proporcionan métodos típicos
para preparar las microesferas.
De acuerdo con todavía otro aspecto de la
invención, se proporciona una composición farmacéutica del material
y el método para fabricar dicha composición. En ciertas
realizaciones, la composición incluye un recipiente que contiene
una única dosis de microesferas que contienen un agente activo para
tratar un estado que es tratable por medio de la liberación
prolongada de un agente activo desde las microesferas. El número de
microesferas en la dosis única depende de la cantidad de agente
activo presente en cada microesfera y del período de tiempo durante
el cual se desee la liberación prolongada. Preferentemente, se
selecciona la dosis única para conseguir una liberación prolongada
del agente activo durante un período de aproximadamente 1 a
aproximadamente 180 días, seleccionándose la dosis única de
microesferas de forma que se consiga el perfil de liberación deseado
para tratar la condición.
De acuerdo con otro aspecto de la invención, se
proporciona una jeringuilla que contiene cualquiera de las
microesferas aquí descritas. Por ejemplo, la composición puede
incluir un jeringuilla que contiene una única dosis de microesferas
que contienen un agente activo para tratar una condición que es
tratable por medio de la liberación prolongada del agente activo
desde las microesferas. Preferentemente, se sujeta una aguja a la
jeringuilla, teniendo la aguja un diámetro interior de calibre 14 a
30.
En especial, las microesferas de la invención
pueden prepararse para que tengan una dimensión que permita su
suministro utilizando una jeringuilla sin aguja (MediJector, Derata
Corporation, Minneapolis, MN 55427), eliminando así los problemas
de evacuación inherentes a las agujas que deben desecharse como
desperdicio biológico peligroso. Así, de acuerdo con un aspecto
particularmente preferente de la invención, se proporciona una
jeringuilla sin aguja que contiene una o más dosis de microesferas
que contienen un agente activo para tratar una condición. Se pueden
preparar las microesferas de forma que se obtenga la calidad
adecuada para su suministro por otras vías parenterales y no
parenterales, como por vía oral, bucal, intratecal, nasal, pulmonar,
transdérmica, transmucosa y similares.
De acuerdo con todavía otras realizaciones de la
invención, se proporcionan microesferas que contienen ácidos
nucleicos. Las microesferas que contienen ácidos nucleicos incluyen:
(1) un ácido nucleico (por ejemplo, un plásmido, un vector viral,
oligonucleótidos, ARN, ácidos nucleicos antisentido y sin sentido);
(2) un polímero policatiónico (por ejemplo polilisina); y (3) un
polímero soluble en agua (tal como se ha descrito anteriormente).
Así, se proporciona un método para formar microesferas que contienen
ácidos nucleicos. El método implica: (1) combinar, en una o más
soluciones acuosas, un ácido nucleico, un polímero policatiónico y
un polímero soluble en agua para formar una mezcla acuosa que puede
ser mono- o multi- fase; y (2) someter la mezcla acuosa a un agente
reticulante y/o a una fuente de energía, bajo condiciones
suficientes (por ejemplo de concentración, tiempo de incubación)
como para estabilizar una microesfera. En los Ejemplos se
proporcionan métodos típicos para la formación de microesferas de
ácidos nucleicos.
Estos y otros aspectos de la invención se
describirán con más detalle a continuación. A lo largo de esta
descripción, todos los términos técnicos y científicos tienen el
mismo sentido que el entendido comúnmente por un especialista medio
en la materia a la que pertenece esta invención, salvo que se defina
de otro modo.
Fig. 1: gráfico que muestra el porcentaje
acumulativo de polietilenglicol (PEG) radiomarcado y de seroalbúmina
bovina (BSA) radiomarcada liberados por las microesferas en función
de la raíz cuadrada del tiempo en horas. El símbolo cuadrado negro
representa PEG y el símbolo cuadrado blanco representa BSA.
Fig. 2 gráfico que muestra el porcentaje
acumulativo de seroalbúmina bovina (BSA) radiomarcada liberado por
las microesferas preparadas con tres concentraciones diferentes de
polímero en función de la raíz cuadrada del tiempo en horas. El
símbolo cuadrado gris representa una concentración total de polímero
del 50%, el símbolo cuadrado blanco representa una concentración
total de polímero del 40% y el símbolo triángulo negro representa
una concentración total de polímero del 25%.
Fig. 3 gráfico que muestra el porcentaje
acumulativo de polietilenglicol (PEG) radiomarcado liberado por las
microesferas preparadas con tres concentraciones diferentes de
polímero en función de la raíz cuadrada del tiempo en horas. El
símbolo triángulo blanco representa una concentración total de
polímero del 50%, el símbolo cuadrado negro representa una
concentración total de polímero del 40% y el símbolo cuadrado blanco
representa una concentración total de polímero del 25%.
Fig. 4 gráfico que muestra el porcentaje
acumulativo de seroalbúmina bovina (BSA) radiomarcada liberado por
las microesferas preparadas con tres concentraciones diferentes de
polímero, a distintas temperaturas de incubación, en función de la
raíz cuadrada del tiempo en horas. El símbolo cuadrado blanco
representa una concentración total de polímero del 25% y una
incubación a 58ºC, el símbolo cuadrado negro representa una
concentración total de polímero del 25% y una incubación a 70ºC, el
símbolo círculo blanco representa una concentración total de
polímero del 40% y una incubación a 58ºC, el símbolo círculo negro
representa una concentración total de polímero del 40% y una
incubación a 70ºC, el símbolo triángulo blanco representa una
concentración total de polímero del 50% y una incubación a 58ºC, el
símbolo triángulo negro representa una concentración total de
polímero del 50% y una incubación a 70ºC, el símbolo "X"
representa una concentración total de polímero del 25% y una
incubación a 37ºC y 58ºC, y el símbolo en "X" representa una
concentración total de polímero del 25% y una incubación a 37ºC y
70ºC.
Fig. 5 gráfico que muestra el porcentaje
acumulativo de polietilenglicol (PEG) radiomarcado liberado por las
microesferas preparadas con tres concentraciones diferentes de
polímero a distintas temperaturas de incubación en función de la
raíz cuadrada del tiempo en horas. Los símbolos son los mismos que
los descritos en la Fig. 4.
Fig. 6 gráfico que muestra el porcentaje
acumulativo de polietilenglicol (PEG) radiomarcado liberado por las
microesferas preparadas con tres concentraciones diferentes de
polímero a una temperatura de incubación que incluye 58ºC en
función de la raíz cuadrada del tiempo en horas. El símbolo
triángulo blanco representa una concentración total de polímero del
50% y una incubación a 58ºC, el símbolo cuadrado negro representa
una concentración total de polímero del 40% y una incubación a 58ºC,
el símbolo triángulo gris representa una concentración total de
polímero del 25% y una incubación a 37ºC y 58ºC y el símbolo
cuadrado blanco representa una concentración total de polímero del
25% y una incubación a 58ºC.
Fig. 7 gráfico de barras que muestra la
cantidad de producto genético expresado por la actividad
beta-galactosidasa en miliunidades en función de la
formación de microesferas para ADN desnudo, para liposomas
catiónicos que contienen ADN y para microesferas de ADN.
Fig. 8 gráfico de la liberación en porcentaje
acumulativo de acetato de leuprolida desde las microesferas con el
tiempo en días.
Fig. 9 gráfico de la liberación en porcentaje
acumulativo de acetato de nafarelina en función del tiempo en horas
para tres concentraciones de sulfato de zinc utilizadas durante la
preparación de las microesferas. El círculo representa sulfato de
zinc 0,01M; el símbolo cuadrado representa sulfato de zinc 0,1M; y
el símbolo triángulo representa sulfato de zinc 1M.
Fig. 10 muestra la liberación prolongada de
estradiol in vitro por las microesferas de la invención.
Fig. 11 muestra la liberación prolongada de
estradiol in vivo (concentraciones de suero) por las
microesferas de la invención.
Fig. 12 muestra la eficacia de la incorporación
de diclofenaco sódico mediante el ajuste de las condiciones de
incubación.
Fig. 13 muestra un perfil representativo de
distribución de tamaño para las microesferas de la invención.
La invención proporciona los métodos y
composiciones para la liberación prolongada de agentes terapéuticos
y/o diagnósticos in vivo y/o in vitro. En general las
microesferas tienen un tamaño y forma uniformes, oscilando el
tamaño entre aproximadamente 0,5 micras y aproximadamente 20 micras,
según las condiciones de fabricación. Las características de las
microesferas pueden verse alteradas durante la preparación debido a
la manipulación de la concentración del polímero soluble en agua, la
temperatura de reacción, el pH, la concentración de proteína, el
agente reticulante y/o el tiempo de exposición de la macromolécula
al agente reticulante y/o a la fuente de energía.
Las microesferas sirven para una amplia variedad
de separaciones, propósitos diagnósticos, terapéuticos,
industriales, comerciales, cosméticos y de investigación o con
cualquier propósito que requiera la incorporación y estabilización
de una molécula activa, reactivo o medicamento. Así, las
microesferas de la invención son útiles en aplicaciones médicas y
diagnósticas tales como el suministro de medicamentos, la
vacunación, la terapia genética y la formación de imágenes
tumorales o de tejidos in vivo o histopatológicas. En
consecuencia, las microesferas son adecuadas para su administración
oral o parenteral; administración vía mucosas; oftálmica, por
inyección intravenosa, subcutánea, intraarticular o intramuscular;
administración por inhalación; y para la administración tópica.
De acuerdo con un aspecto de la invención, se
proporciona una microesfera que tiene una superficie lisa incluyendo
múltiples orificios acanalados. Cada orificio acanalado tiene un
diámetro inferior a 1.000 angstroms, tal como se determina por
técnicas de adsorción de gas para la determinación del tamaño de
poro mediante, por ejemplo, la metodología BET para análisis de
datos.
Las microesferas se preparan mezclando o
disolviendo macromoléculas con un polímero soluble en agua o con
una mezcla de polímeros solubles en agua, tales como los polímeros
lineales o ramificados de la Tabla 2, a un pH cercano al punto
isoeléctrico de la macromolécula. La macromolécula y la mezcla de
polímeros se exponen a un agente reticulante y/o a una fuente de
energía, por ejemplo calor, bajo las condiciones suficientes como
para estabilizar las microesferas. Las microesferas se separan
entonces de los reactivos no incorporados por medio de métodos de
separación, por ejemplo filtración o centrifugación.
En general, la macromolécula o la combinación de
macromoléculas constituye al menos el 40% y menos del 100% en peso
del peso final de cada microesfera. Preferentemente, la
concentración de polímero en la microesfera es superior al 0% e
inferior o igual al 30% en peso. Los tipos de macromoléculas que
forman las microesferas incluyen, pero no se limitan a, proteínas,
péptidos, hidrocarburos, ácidos nucleicos, virus o mezclas de los
mismos.
Cada microesfera se compone de macromoléculas y
de moléculas poliméricas, las cuales se entrelazan o entremezclan
en la microesfera y que generalmente están distribuidas de forma
homogénea. Aunque no sin vincularse a ninguna teoría o mecanismo
particular, se piensa que la matriz interna es soluble en agua y,
cuando está solubilizada, la matriz interna se difunde por la
superficie exterior bajo las condiciones apropiadas, tal como se
explica con más detalle posteriormente. Las microesferas muestran
una estrecha distribución de tamaño y en general tienen una forma
uniforme. La distribución de tamaño también es ajustable mediante la
modificación de las condiciones y de los reactivos utilizados
durante el proceso de preparación y puede asociarse a la cinética
de liberación, tal como se describirá más adelante. En general, las
microesferas tienen un diámetro inferior a 10 \mum. Véase la
Figura 13 para una distribución representativa de tamaño de las
microesferas de la invención. La forma uniforme de las microesferas
es sustancialmente esférica, razón por la cual las micropartículas
se denominan también aquí como
"microesferas".
"microesferas".
La superficie exterior de cada microesfera es
permeable al agua y a macromoléculas disueltas y no sólo permite
que los fluidos acuosos penetren en la microesfera, sino permite
también que la macromolécula solubilizada y el polímero salgan de
la microesfera. Las microesferas pueden elaborarse de forma que
liberen la macromolécula y el polímero del interior de la
microesfera cuando están en un medio acuoso apropiado, tal como
fluidos corporales o en un tampón fisiológicamente aceptable, en
condiciones fisiológicas, durante un período de tiempo prolongado,
proporcionando así la liberación prolongada de las macromoléculas.
Además, las microesferas pueden fabricarse de forma que liberen la
macromolécula sin explosión inicial o liberación rápida de la
macromolécula. La liberación prolongada se define aquí como
liberación de las macromoléculas durante un largo período de tiempo.
El período de tiempo durante el cual la macromolécula continúa
siendo liberada desde la microesfera depende de las características
de la macromolécula que está liberándose y de los parámetros
utilizados para formar las microesferas, pero en todos los casos es
mayor que el de la difusión acuosa libre de la macromolécula. Las
microesferas que contienen compuestos farmacéuticos pueden
fabricarse de forma que liberen el compuesto farmacéutico con la
macromolécula y el polímero, tal como se ha descrito
anteriormente.
Tal como se describió brevemente anteriormente y
con más detalle se hará en adelante, las características de las
microesferas pueden manipularse durante la preparación mediante el
ajuste del tipo de polímero, de la concentración polimérica, de la
composición polimérica, de la temperatura de incubación, del pH, de
la concentración de macromoléculas o del período de tiempo durante
el cual la macromolécula está expuesta a la fuente de energía.
Se pueden administrar las microesferas a un ser
humano o a un animal por vías de administración oral o parenteral,
incluyendo la inyección intravenosa, subcutánea o intramuscular;
administración por inhalación; administración intraarticular;
administración vía mucosas; administración oftálmica; y
administración tópica. La administración intravenosa incluye la
cateterización o la angioplastia. La administración puede ser con
propósitos del tipo terapéutico y diagnóstico, tal como se expondrá
posteriormente.
Las microesferas se obtienen mezclando las
macromoléculas en una mezcla acuosa con un polímero soluble en agua
o con una mezcla de polímeros para formar las microesferas y
opcionalmente, a continuación, poniendo en contacto las
microesferas con un agente reticulante y/o con una fuente de
energía, preferentemente calor, bajo condiciones suficientes como
para estabilizar las microesferas. Preferentemente, la solución es
una solución acuosa. Para provocar la eliminación del agua o la
deshidratación de las macromoléculas, o bien la solución de
macromoléculas se añade al polímero o bien se añade la solución de
polímeros a la solución de macromoléculas. Los especialistas en la
materia también denominan a este proceso como "exclusión de
volumen". Aunque sin vincularse a ninguna teoría o mecanismo
particular, se piensa que las microesferas se forman durante la
etapa de mezcla; sin embargo, estas microesferas inicialmente
formadas son transitorias y requieren otra etapa (por ejemplo, la
inclusión de un agente reticulante en la mezcla y/o la aplicación de
calor o de otra fuente de energía) para estabilizar las
microesferas formadas transitoriamente.
El pH de la solución de
macromolécula-polímero se ajusta antes, después o
durante la mezcla del polímero con la macromolécula a un pH cercano
al punto isoeléctrico (pI) de la macromolécula, preferentemente
dentro de un rango de 3 a 4 unidades de pH del pI de la
macromolécula, en especial entre 1,5 y 2 unidades de pH del pI de
la macromolécula.
El ajuste de pH puede llevarse a cabo mediante
la adición de un ácido, de una base, bien en forma de solución o
sólida, o de un tampón u otra sal o solución de ajuste del pH a la
solución de macromolécula, solución de polímero, o a la mezcla de
macromolécula y polímero de acuerdo con métodos bien conocidos por
los especialistas en la materia. Preferentemente, el polímero se
disuelve en un tampón con un pH cercano al pI de la macromolécula y
entonces la solución de polímero con el pH ajustado se añade a la
macromolécula, que ha sido disuelta en una solución acuosa. El pH
de la solución final debe permanecer cercano al pI de la
macromolécula.
Entonces se expone la solución de macromolécula
y polímero a un agente reticulante y/o a una fuente de energía, por
ejemplo de calor, radiación o ionización, sola o en combinación con
sonicación, vórtex, mezcla o agitación, durante un período de
tiempo predeterminado, para estabilizar las microesferas. Las
microesferas resultantes se separan entonces de cualquier
componente no incorporado presente en la solución por medio de
métodos de separación física bien conocidos por los especialistas
en la materia y después pueden lavarse.
La duración de la incubación depende de las
concentraciones respectivas del polímero y la macromolécula y del
nivel de energía de la fuente de energía. La estabilización de las
microesferas puede empezar inmediatamente bajo la exposición a la
fuente de energía. Preferentemente, la mezcla de macromolécula y
polímero se calienta a una temperatura superior a la temperatura
ambiente durante aproximadamente 5 minutos hasta 24 horas. En
especial, se mezclan el polímero y las macromoléculas mediante
agitación u oscilación durante 30 minutos, a una temperatura
situada aproximadamente entre 37ºC y 70ºC.
Las macromoléculas que componen la microesfera
consisten en cualquier molécula que tenga una estructura terciaria
y cuaternaria o que sea capaz de tener una estructura terciaria y
cuaternaria. Con más preferencia, la macromolécula es una
biomolécula tal como una proteína, incluidas las enzimas y proteínas
recombinantes, un péptido, un hidrocarburo, un polisacárido, un
conjugado hidrocarburo- o polisacárido- proteína, un ácido nucleico,
un virus, una partícula vírica, un conjugado de una molécula
pequeña (tal como un hapteno) y una proteína, o sus mezclas. En las
microesferas puede incorporarse un compuesto farmacéutico natural o
sintético, orgánico o inorgánico o un medicamento mediante la
sujeción del medicamento a una macromolécula, tal como una proteína,
y luego mediante la formación de las microesferas a partir del
complejo o conjugado macromolécula-medicamento. Los
especialistas en la materia entenderán que puede formarse dentro de
una microesfera un compuesto incapaz de tener una estructura
terciaria y cuaternaria, mediante la incorporación o acoplamiento
del compuesto dentro de una molécula portadora que posea una
estructura terciaria y cuaternaria. Los especialistas en la materia
entenderán, además, que la macromolécula puede ser una parte de una
molécula, por ejemplo un péptido, un segmento de una sola hebra de
una molécula de ácido nucleico de doble hebra, que tenga una
estructura terciaria y cuaternaria. Se entenderá también que el
término "macromolécula" incluye una pluralidad de
macromoléculas e incluye combinaciones de distintas macromoléculas,
tal como una combinación de un compuesto farmacéutico y una molécula
con afinidad para dirigir el compuesto farmacéutico hacia un
tejido, órgano o tumor que necesita el tratamiento. Se entenderá
además que una molécula con afinidad puede ser la parte del receptor
o la parte del ligando de una interacción
receptor-ligando. Ejemplos de ligandos que
interactúan con otras biomoléculas incluyen virus, bacterias,
polisacáridos o toxinas que actúan como antígenos para generar una
respuesta inmune cuando se administra a un animal y provoca la
producción de anticuerpos.
Compuestos o macromoléculas adecuados incluyen,
pero sin limitarse a, Betaxolol^{TM}, Diclofenaco^{TM},
doxorrubicina, Rifampin^{TM}, acetato de leuprolida, hormona
liberadora de la hormona luteinizante (LHRH),
(D-Tryp6)-LHRH, acetato de
nafarelina, insulina, insulina sódica, insulina de zinc, protamina,
lisozima, alfa-lactoalbúmina, factor de crecimiento
de fibroblastos básicos (bFGF), beta-lactoglobulina,
tripsina, anhidrasa carbónica, ovalbúmina, seroalbúmina bovina
(BSA), seroalbúmina humana (HSA), fosforilasa b, fosfatasa alcalina,
beta-galactosidasa, IgG, fibrinógeno,
poli-L-lisina, IgM, ADN, acetato de
desmopresina^{TM}, factor de liberación de la hormona del
crecimiento (GHRF), somatostatina, antida, Factor VIII,
G-CSF/GM-CSF, hormona del
crecimiento humano (hGH), beta interferón, antitrombina III, alfa
interferón, alfa interferón 2b.
Las condiciones de incubación se optimizan
normalmente para incorporar aproximadamente el 100% de la
macromolécula en la mezcla de reacción ajustando el pH, la
temperatura, la concentración de macromolécula o la duración de la
reacción o incubación. En general, se necesita menos energía para
formar microesferas con altas concentraciones de macromolécula.
Preferentemente, las microesferas compuestas por
ácidos nucleicos se preparan mezclando primero el ácido nucleico
bien con una proteína, tal como seroalbúmina bovina, o, como los
ácidos nucleicos son aniones, con la adición de un catión, tal como
polilisina, lo cual ayuda mucho a la formación de microesferas.
Tal como se ha mencionado anteriormente, una
pequeña molécula o compuesto incapaz de tener una estructura
terciaria y cuaternaria, por ejemplo un péptido o un compuesto
farmacéutico, puede formarse dentro de una microesfera mediante la
incorporación o el acoplamiento del compuesto dentro de una molécula
portadora que posee una estructura terciaria y cuaternaria. Esto
puede conseguirse de distintas maneras. Por ejemplo, se pueden
formar las microesferas tal como se describe aquí, mediante la
utilización de una macromolécula que tiene una estructura terciaria
y cuaternaria, por ejemplo una proteína, y luego la pequeña molécula
o compuesto se une dentro y/o en la superficie de la microesfera.
Como alternativa, la molécula pequeña o el compuesto se une a la
macromolécula de estructura terciaria y cuaternaria utilizando
interacciones hidrofóbicas o iónicas y luego se forman las
microesferas a partir del complejo
macromolécula-molécula pequeña por medio del método
descrito aquí. Una tercera forma de obtener microesferas a partir de
moléculas pequeñas consiste en preparar microesferas utilizando una
macromolécula que tiene una estructura terciaria y cuaternaria de
modo tal que la microesfera tenga una carga neta y luego añadir una
pequeña molécula o compuesto que tenga una carga neta opuesta para
que la molécula pequeña esté atraída físicamente hacia la
microesfera y permanezca unida a la misma, pero que pueda liberarse
con el tiempo bajo condiciones apropiadas. Como alternativa, pueden
utilizarse distintos tipos de interacciones no covalentes, tales
como interacciones hidrofóbicas o de afinidad, para permitir la
fijación y liberación posterior de las moléculas
pequeñas.
pequeñas.
Cuando se preparan microesferas que contienen
proteínas, antes de la adición de los polímeros durante la formación
de las microesferas puede añadirse un estabilizador de proteína,
tal como glicerol, ácidos grasos, azúcares como sacarosa, iones por
ejemplo de zinc, cloruro de sodio o cualquier otro estabilizador de
proteína conocido por los especialistas en la materia, para
minimizar la desnaturalización de las proteínas.
Antes de ser incorporada en una microesfera, la
macromolécula puede marcarse con una etiqueta detectable. Los
distintos tipos y métodos de marcado de las proteínas y moléculas de
ácidos nucleicos son bien conocidos por los especialistas en la
materia. Éstos entenderán que una sustancia magnética, tal como un
metal, se incluye dentro de la definición del término marca. Por
ejemplo, se puede marcar la macromolécula con una sustancia
metálica, por ejemplo con un metal, para que las microesferas puedan
separarse de otras sustancias en solución con la ayuda de un
dispositivo magnético.
Se exponen más adelante varias otras etiquetas
específicas o grupos de marcadores. Por ejemplo, la etiqueta puede
ser una radiomarca tal como, pero no limitada a, ^{[32]}P,
^{[3]}H, ^{[14]}C, ^{[35]}S, ^{[125]}I o ^{[131]}I. Puede
conjugarse una marca ^{[32]}P a una proteína con un reactivo de
conjugación o puede incorporarse en la secuencia de una molécula de
ácido nucleico mediante nick-translation (corte y
cambio), por marcado final o por incorporación de un nucleótido
marcado. Por ejemplo, una marca ^{[3]}H, ^{[14]}C, ^{[35]}S
puede incorporarse en una secuencia de nucleótidos incorporando un
precursor marcado o por modificación química, mientras que una
marca, ^{[125]}I o ^{[131]}I generalmente se incorpora en una
secuencia de nucleótidos por modificación química. La detección de
una marca puede llevarse a cabo por métodos tales como recuento de
escintilación, espectrometría de rayos gamma o autorradiografía.
La etiqueta también puede ser una marca de
Resonancia Magnética Nuclear (NMR) o de Masas, por ejemplo,
^{[13]}C o ^{[15]}N o ^{[19]}O. La detección de tales marcas
puede realizarse por Espectrometría de Masas o NMR. Se pueden
utilizar también tinciones, agentes quimioluminiscentes, agentes
bioluminiscentes y fluorógenos para marcar la macromolécula.
Ejemplos de tinciones que sirven para marcar los ácidos nucleicos
incluyen bromuro de etidio, de acridina, de propidio y otros tintes
intercalantes, y
4',6'-diamidino-2-fenilindol
(DAPI) (Sigma Chemical Company, St. Louis, Mo.) u otros tintes para
ácidos nucleicos. Ejemplos de fluorógenos incluyen fluoresceína y
derivados, ficoeritrina, aloficocianina, rodamina, Rojo de Texas u
otros fluorógenos. Los fluorógenos generalmente se unen por
modificación química. Las marcas de tinción pueden detectarse en un
espectrofotómetro y las de fluorógenos en un detector de
fluorescencia.
La macromolécula puede marcarse también con un
cromógeno (sustrato enzimático) para proporcionar una enzima o
marca de afinidad, o con una enzima. Como alternativa, la
macromolécula puede ser biotinilada para que pueda emplearse en una
reacción biotina-avidina, que puede acoplarse
también a una marca tal como una enzima o un fluorógeno. La
macromolécula puede marcarse con peroxidasa, fosfatasa alcalina o
con otras enzimas que producen una reacción cromogénica o
fluorogénica cuando se añaden al sustrato.
También puede llevarse a cabo el etiquetado por
incorporación de cualquier base modificada, aminoácido o precursor
que contenga cualquier marca, incorporando una base modificada o un
aminoácido que contenga un grupo químico reconocible por
anticuerpos específicos, o mediante la detección de cualquier
complejo de anticuerpos enlado, por diversos medios, incluyendo
reacciones de inmunofluorescencia o inmunoenzimáticas. Estas marcas
pueden detectarse por inmuoensayos de unión a enzimas (ELISA) o
mediante la detección de un cambio de color con la ayuda de un
espectrofotómetro.
A la superficie exterior de las microesferas
pueden unirse otras moléculas, distintas de las macromoléculas de
las que están compuestas las microesferas, según métodos conocidos
por los especialistas en la materia, para "recubrir" o
"decorar" las microesferas. La capacidad de las moléculas de
unirse a la superficie exterior de la microesfera se debe a la alta
concentración de la macromolécula en la microesfera. Estas moléculas
se unen con el objetivo de, por ejemplo, facilitar el targeting
(localización de la diana), mejora la mediación del receptor y
poder escapar de la endocitosis o de la destrucción. Por ejemplo,
biomoléculas tales como fosfolípidos pueden unirse a la superficie
de la microesfera para impedir la endocitosis por endosomas;
receptores, anticuerpos u hormonas pueden unirse a la superficie
para promover o facilitar el targeting de la microesfera hacia el
órgano, tejido o células deseados del cuerpo; y polisacáridos, por
ejemplo glucanos, pueden unirse a la superficie exterior de la
microesfera para aumentar o para evitar ser ingeridas por
macrofagos.
Además, a la superficie exterior o dentro de las
microesferas pueden unirse una o más moléculas segmentables. Las
moléculas segmentables están diseñadas para que las microesferas se
dirijan primero hacia un sitio predeterminado bajo condiciones
biológicas apropiadas y luego, a su exposición a un cambio en las
condiciones biológicas, por ejemplo un cambio de pH, las moléculas
se segmenten, provocando la liberación de la microesfera desde el
sitio diana. De esta manera, las microesferas están unidas o son
ingeridas por las células debido a la presencia de moléculas unidas
a la superficie de las microesferas. Cuando se segmenta la molécula,
las microesferas permanecen en el sitio deseado, por ejemplo dentro
del citoplasma o del núcleo celular, y pueden liberar las
macromoléculas de las cuales están compuestas. Esto es
particularmente útil para el suministro de medicamentos,
conteniendo las microesferas un medicamento que se dirige hacia un
sitio específico necesitado de tratamiento, pudiendo el medicamento
liberarse lentamente en dicho sitio. El sitio de segmentación
preferente es un enlace diéster.
Las microesferas también pueden estar
recubiertas de una o más sustancias estabilizantes, las cuales
pueden ser particularmente útiles para un almacenamiento a largo
plazo en administración parenteral o para el suministro oral,
permitiendo el paso de las microesferas por el estómago o intestino
sin que se disuelvan. Por ejemplo, las microesferas destinadas al
suministro oral pueden estabilizarse con un recubrimiento de una
sustancia tal como mucina, una secreción que contiene
mucopolisacáridos producidos por las células caliciformes
intestinales, glándulas submaxilares y demás células glandulares
mucosas.
Además, las partículas pueden estar recubiertas
de forma no covalente con compuestos tales como ácidos grasos o
lípidos. El recubrimiento puede aplicarse a las microesferas
mediante su inmersión en la sustancia de recubrimiento
solubilizada, mediante pulverización de las microesferas con la
sustancia o por otros métodos bien conocidos por los especialistas
en la materia.
En algunas de las realizaciones preferentes, las
microesferas de la invención incluyen una proteína y al menos un
polímero soluble en agua. Tal como se ha expuesto anteriormente, las
microesferas se forman al poner en contacto la proteína y al menos
un polímero soluble en agua en condiciones acuosas para formar las
microesferas, y las microesferas se estabilizan entonces mediante
reticulación química o por su exposición a una fuente de energía,
preferentemente calor, o por ambos, en condiciones (por ejemplo,
concentración, temperatura) que resultan en microesferas
resistentes a tratamientos físicos y químicos, tales como soluciones
caústicas y de sonicación. En los Ejemplos se describen las
condiciones particulares para formar las microesferas
representativas de la invención. En las realizaciones preferentes,
la reacción de formación se lleva a cabo sin añadir aceites o
disolventes orgánicos.
El componente proteico de la microesfera puede
ser una proteína portadora o una proteína terapéutica (véase por
ejemplo la Tabla 1) que representa desde aproximadamente el 40 hasta
menos del 100% (% en peso) de la microesfera.
Tal como se utiliza aquí, una "proteína
portadora" se refiere a una proteína que tiene un peso molecular
de al menos aproximadamente 1.500 y que existe como una estructura
tridimensional. La proteína portadora puede ser también una
proteína terapéutica, es decir una proteína que posee una actividad
terapéutica; sin embargo, en general, la expresión "proteína
portadora" se utilizará en esta solicitud para referirse a una
proteína que tiene la función principal de proporcionar una
estructura tridimensional, con el propósito de la formación de
microesferas, aunque la proteína portadora pueda tener también una
función secundaria como agente terapéutico. En ciertas
realizaciones preferentes, la proteína portadora es albúmina, en
particular seroalbúmina humana. Opcionalmente, las microesferas de
proteína de la invención incluyen además un agente terapéutico, tal
como un esteroide (por ejemplo estradiol, testosterona,
prednisolona, dexametasona, hidrocortisona, base de lidocaína, base
de procaína) o cualquier otra entidad química conocida por unirse a
la albúmina, como GCSF o paclitaxel. En todavía otras realizaciones
(expuestas más adelante), las microesferas de la invención incluyen
además un agente complejante (preferentemente un agente complejante
iónico) y, en especial un agente terapéutico (preferentemente un
péptido) que se asocia al agente complejante a través de una
interacción iónica o no iónica. En algunas otras realizaciones, la
proteína que comprende la matriz es una proteína terapéutica (por
ejemplo una hormona como insulina u hormona del crecimiento humano)
y la microesfera se construye y dispone para proporcionar la
liberación prolongada de la proteína terapéutica in vivo sin
que se produzca un aumento de volumen significativo de la
microesfera.
En general, las microesferas de la invención se
forman mediante mezcla de la proteína junto con al menos un
polímero soluble en agua bajo condiciones adecuadas, las cuales,
preferentemente, permiten al polímero soluble en agua eliminar el
agua ("deshidratar") de la proteína (véase por ejemplo la Tabla
2) dentro de unas proporciones especificadas o preferentes
(peso/peso) entre la proteína y el polímero soluble en agua (por
ejemplo, rango de proporciones proteína:polímero desde
aproximadamente 1:1 hasta aproximadamente 1:1.000). La proporción
preferente proteína:polímero soluble en agua en la reacción de
formación de microesferas se sitúa en el rango de aproximadamente
1:5 a 1:30. Tal como se ha observado anteriormente, un "polímero
soluble en agua" de la invención se refiere a un polímero o a
una mezcla de polímeros que, preferentemente, son capaces de
interactuar con la macromolécula (por ejemplo, con la proteína o
con otra molécula) para provocar la exclusión de volumen. Así, el
proceso preferente implica la utilización de un sistema totalmente
acuoso sin involucrar ningún aceite o disolvente orgánico.
Los polímeros solubles en agua adecuados
incluyen polímeros solubles lineales o ramificados, preferentemente
de alto peso molecular. Los polímeros pueden ser muy solubles en
agua, moderadamente solubles en agua o ligeramente solubles en agua
(solubles en agua en un porcentaje superior al 2% peso/volumen). Los
polímeros solubles en agua preferentes son solubles en agua o
solubles en un disolvente miscible en agua. Los polímeros solubles
en agua pueden solubilizarse primero mediante su disolución en un
disolvente miscible en agua y luego combinando la solución de
polímero con un disolvente acuoso. En las realizaciones
particularmente preferentes, los polímeros solubles en agua de la
invención se seleccionan de entre aquellos mostrados en la Tabla 2.
En las realizaciones particularmente preferentes, el polímero
soluble en agua es un polímero basado en un hidrocarburo.
Polímeros preferentes son polivinilpirrolidona,
polietilenglicol, dextrano, copolímero
polioxietileno-polioxipropileno, alcohol
polivinílico, almidón, hetalmidón, o mezclas de los mismos, cuyas
características se describen con más detalles más adelante. El
polímero o la mezcla de polímeros puede prepararse de acuerdo con
los métodos mencionados en la Patente de Estados Unidos Nº
5.525.519 de James E. Woiszwillo, o en la Solicitud de Patente PCT
Nº US93-00073 (Solicitud Internacional Nº WO
93/14110), presentada el 7 de enero de 1993 y publicada el 22 de
julio de 1993, de James E. Woiszwillo, incorporándose ambas aquí
como referencia), donde se disuelve el polímero en agua o en una
solución acuosa, tal como un tampón, en una concentración situada
entre 1 y 50 g/100 ml, según el peso molecular del polímero. La
concentración total de polímero preferente en la solución
polimérica se encuentra entre el 10% y el 80%, expresada en
porcentaje en peso/volumen. La concentración preferente de cada
polímero en la solución polimérica se sitúa entre el 5% y el 50%.
Tal como se ha expuesto anteriormente, el pH de la solución
polimérica puede ajustarse antes de combinarse con la macromolécula
para que la adición del polímero provoque un ajuste del pH de la
solución de la macromolécula, preferentemente dentro de una unidad
de pH del pI. El pH puede ajustarse durante la preparación de la
solución polimérica, preparando el polímero en un tampón con un pH
predeterminado. Como alternativa, el pH puede ajustarse con un ácido
o una base después de la preparación de la solución polimérica.
El copolímero de
polioxietileno-polioxipropileno, también conocido
como poloxámero, es vendido por BASF (Parsippany, N.J.) y está
disponible en una variedad de formas con distintos porcentajes
relativos de polioxietileno y polioxipropileno dentro del
copolímero.
El PVP es un polímero no ionógeno, hidrofílico,
con un peso molecular medio que oscila entre aproximadamente 10.000
y 700.000 y una fórmula química (C_{6}H_{9}NO)[n]. El PVP se
conoce también como
poli[1-(2-oxo-1-pirrolidinil)etileno],
Povidone^{TM}, Polyvidone^{TM}, RP 143^{TM}, Kollidon^{TM},
Peregal ST^{TM}, Periston^{TM}, Plasdone^{TM},
Plasmosan^{TM}, Protagent^{TM}, Subtosan^{TM}, y
Vinisil^{TM}. El PVP es no tóxico, altamente higroscópico y se
disuelve inmediatamente en agua o en disolventes orgánicos.
El polietilenglicol (PEG), también conocido como
poli(oxietilen)glicol, es un polímero de condensación
de óxido de etileno y agua de fórmula química general
HO(CH_{2}CH_{2}O)[n]H.
El dextrano es un término aplicado a los
polisacáridos producidos por bacterias que crecen en un sustrato de
sacarosa. Los dextranos nativos producidos por bacterias como
Leuconostoc mesenteroides y Lactobacteria dextranicum
tienen normalmente un peso molecular alto. Los dextranos están
normalmente disponibles y se utilizan en forma inyectable como
expansores de plasma en los seres humanos.
El alcohol de polivinilo (PVA) es un polímero
preparado a partir de acetatos de polivinilo por sustitución de los
grupos acetato con grupos hidroxilo y tiene la fórmula
(CH_{2}CHOH)[n]. La mayoría de los alcoholes de polivinilo son
solubles en agua.
Proveedores químicos tales como Sigma Chemical
Company (St. Louis, Mo.) disponen comercialmente de PEG, dextrano,
PVA y PVP.
Preferentemente, el polímero es una mezcla de
polímeros que contiene una solución acuosa de una PVP con un peso
molecular situado entre 10.000 y 360.00, en particular de 40.000, y
un PEG con un peso molecular entre 200 y 35.000. Son preferentes
una PVP con un peso molecular de 40.000 y un PEG con un peso
molecular de 3.500. Preferentemente, el PVP se disuelve en un
tampón de acetato y se añade PEG a la solución acuosa de PVP. La
concentración de cada polímero se sitúa preferentemente entre 1 y 40
g/100 ml, según el peso molecular de cada polímero. Generalmente
concentraciones iguales de PVP y PEG proporcionan la mezcla de
polímeros más favorable para la formación de microesferas.
El polímero alternativo preferente es un
dextrano con un peso molecular entre aproximadamente 3.000 y 500.000
dalton.
El volumen de polímero añadido a la
macromolécula varía según el tamaño, la cantidad y la concentración
de la macromolécula. Preferentemente, a un volumen de solución que
contiene la macromolécula se añaden dos volúmenes de la mezcla de
polímeros con un concentración total de polímeros del
5-50%. El polímero está presente en fase líquida
durante la reacción con la macromolécula.
En algunas de las realizaciones y, en particular
en las realizaciones de las microesferas que no contienen además un
agente complejante, el polímero soluble en agua preferentemente no
es PEG, PVP, dextrano, nonilfenol- etoxilatos y/o alcohol de
polivinilo.
De acuerdo con otro aspecto de la invención, se
proporciona una microesfera que incluye además un agente
complejante. Tal como se utiliza aquí, un agente complejante se
refiere a una molécula que es capaz de facilitar la carga,
retención y/o de otro modo retrasar la liberación del agente
terapéutico desde la microesfera (véase por ejemplo la Tabla 3). En
algunas realizaciones, la microesfera según este aspecto incluye:
(1) una macromolécula tal como una proteína (por ejemplo albúmina,
tal como se ha descrito anteriormente); (2) al menos un polímero
soluble en agua (por ejemplo hetalmidón, PEG/PVP, tal como se ha
descrito anteriormente); y (3) un agente complejante.
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip1.000000\baselineskip
(Tabla pasa a página
siguiente)
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip1.000000\baselineskip
En algunas realizaciones particularmente
preferentes de este aspecto de la invención, las microesferas
incluyen: (1) una proteína portadora; (2) un polímero soluble en
agua; (3) un primer agente complejante que es un polisacárido
polianiónico tal como sulfato de dextrano, ácidos galacturónicos,
alginatos, ácido manurónico, ácido gulurónico, ácido hialurónico,
sulfatos de condroitina, heparina, quitina, quitosano,
glicosaminoglicanos, proteoglicanos y agentes complejantes
catiónicos (es decir agentes complejantes que tienen una carga
positiva); y (4) un segundo agente complejante que es un catión
metálico divalente seleccionado de entre el grupo consistente en
calcio, magnesio, zinc, estroncio, bario, manganeso e hierro. En las
realizaciones preferentes según este aspecto, la proteína portadora
es una albúmina o una inmunoglobulina u otra proteína seleccionada
de entre el grupo consistente en las proteínas portadoras de la
Tabla 1. En general, las microesferas según este aspecto de la
invención contienen aproximadamente del 40 a menos del 100% de
proteína. En las realizaciones preferentes según este aspecto, el
polímero soluble en agua se selecciona de entre el grupo consistente
en los polímeros solubles en agua de la Tabla 2, preferentemente un
polímero basado en un hidrocarburo, en particular un
hidroxietilalmidón.
Como con otros aspectos de la invención,
preferentemente estas microesferas tienen una superficie lisa que
incluye múltiples orificios acanalados que son inferiores a 1.000
angstrom, tal como se determina por técnicas de adsorción de gas
para la determinación del tamaño de poro y, preferentemente, no
contienen aceites o disolventes orgánicos detectables.
Un método preferente para la incorporación de
uno o más agentes complejantes consiste en combinar el o los
agentes complejantes con un polímero soluble en agua en solución
acuosa y con la proteína en solución acuosa y estabilizar las
microesferas con calor o con agentes reticulantes.
En general, el agente complejante es un agente
complejante iónico (es decir, el agente complejante es capaz de una
interacción iónica) o un agente complejante no iónico (es decir, el
agente complejante es capaz de una interacción no iónica (por
ejemplo hidrofóbica)) o un agente que interactúa tanto de forma
iónica como no iónica (por ejemplo IgG). En la Tabla 3 se muestran
los agentes complejantes no iónicos y los agentes complejantes
iónicos, tales como agentes complejantes aniónicos (es decir,
agentes complejantes que tienen una carga negativa) y agentes
complejantes catiónicos (es decir, agentes complejantes que tienen
una carga positiva) típicos.
\newpage
En ciertas realizaciones, el agente complejante
es un agente complejante aniónico que tiene la estructura de
fórmula I:
(I)POLY-[Y^{-}]_{n}
\hskip0.2cmX^{+}
en la
cual
- \quad
- POLY representa una cadena principal del agente complejante aniónico que puede ser lineal o ramificada;
- \quad
- Y^{-} representa un grupo aniónico, por ejemplo sulfato, carboxilo, fosfato, nitrato, carbonato y similar, que puede acoplarse a una o más de las ramificaciones de la cadena principal;
- \quad
- X^{+} representa un grupo catiónico, por ejemplo un contraión del grupo aniónico;
- \quad
- n es un número entero de 1 a 10.000, preferentemente de 5 a 100, en especial de 5 a 1.000 y en particular de 5 a 10.000; y
- \quad
- cuando n es superior a 1, los n grupos Y^{-} pueden ser iguales o diferentes.
En todavía otras realizaciones de la invención,
el agente complejante es un agente complejante catiónico que tiene
la estructura de fórmula II:
(II)POLY-[X^{+}]_{n}
\hskip0.2cmY^{-}
en la
cual
- \quad
- POLY representa una cadena principal del agente complejante catiónico que puede ser lineal o ramificada;
- \quad
- X^{+} representa un grupo catiónico, por ejemplo un grupo amino, que puede acoplarse a una o más de las ramificaciones de la cadena principal;
- \quad
- Y^{-} representa un grupo aniónico que es un contraión del grupo catiónico;
- \quad
- n es un número entero de 1 a 10.000, preferentemente de 5 a 100, en especial de 5 a 1.000 y en particular de 5 a 10.000; y
- \quad
- cuando n es superior a 1, los n grupos X^{+} pueden ser iguales o diferentes.
De acuerdo con otro aspecto de la invención, se
proporciona una microesfera que incluye además un agente activo. En
la Tabla 4 se muestran las categorías típicas de agentes
activos.
Las microesferas en las cuales puede cargarse el
agente activo pueden incluir un agente complejante para facilitar
la carga y/o modificar la liberación del agente activo desde la
microesfera. Como alternativa, el agente activo puede cargarse en
las microesferas descritas anteriormente, las cuales carecen de un
agente complejante, por ejemplo, la proteína y/o los polímeros
solubles en agua de la invención pueden interactuar con el agente
activo para facilitar la carga y/o modificar su liberación desde la
microesfera. En general, aunque el agente activo pueda cargarse en
una microesfera de la invención durante su preparación, es
preferible cargar el agente activo en una microesfera preformada de
la invención y, con más preferencia, cargar el agente activo en una
microesfera preformada que contiene uno o más agentes complejantes
para facilitar la carga y/o la liberación prolongada del agente.
Contrariamente a las microesferas de hidrogel, las microesferas de
la invención no aumentan significativamente de volumen en agua y,
además, las microesferas estabilizadas no necesitan aumentar de
volumen con el fin de proporcionar la liberación prolongada de la
proteína terapéutica y/o del agente fisiológicamente activo desde
la
microesfera.
microesfera.
Tal como se utiliza aquí, un agente activo se
refiere a un agente que posee actividad diagnóstica o terapéutica.
En consecuencia, un agente activo incluye, opcionalmente, una marca
detectable (por ejemplo, una marca radioactiva) que sirve para
identificar la localización del agente liberado in vivo; los
agentes activos incluyen también agentes terapéuticos que sirven
para tratar una enfermedad o condición. En ciertas realizaciones,
los agentes fisiológicamente activos preferentes son agentes
proteicos o peptídicos. Estos agentes proteicos o peptídicos
típicamente pueden dividirse además en categorías según la actividad
del agente o el tipo de enfermedad o condición que se está
tratando. El agente fisiológicamente activo que puede utilizarse en
la presente invención incluye, pero sin limitarse a, las categorías
de antibióticos, hematopoyéticos, agentes antiinfecciosos, agentes
antidemencia, agentes antivirales, agentes antitumorales,
antipiréticos, analgésicos, agentes antiinflamatorios, agentes
antiúlcera, agentes antialérgicos, antidepresivos, agentes
psicotrópicos, cardiotónicos, agentes antiarrítmicos,
vasodilatadores, agentes antihipertensivos como diuréticos para
hipotensos, agentes antidiabéticos, anticoagulantes, agentes
reductores del colesterol, agentes terapéuticos para la
osteoporosis, hormonas, vacunas, etc. (véase por ejemplo la Tabla
4). Aunque los ejemplos específicos de agentes activos (por ejemplo,
agentes peptídicos y no peptídicos) para su uso de acuerdo con esta
invención se mencionen más adelante, esto no significa que se
excluyan otros agentes peptídicos o no peptídicos. Estos agentes
activos pueden ser sustancias naturales, recombinantes o
sintetizadas químicamente.
Los agentes fisiológicamente activos de la
invención incluyen agentes proteicos o peptídicos, así como agentes
no proteicos o no peptídicos. Para una exposición más fácil, estos
agentes proteicos o peptídicos se denominan en conjunto aquí
agentes peptídicos; los agentes no proteicos y no peptídicos se
denominarán en conjunto aquí agentes no peptídicos. Los agentes no
peptídicos típicos incluyen las siguientes categorías no limitativas
de agentes: a) nucleótidos y ácidos nucleicos; b) hidrocarburos y
polisacáridos; c) virus y partículas víricas; d) conjugados o
complejos de pequeñas moléculas y proteínas o mezclas de los mismos;
y e) medicamentos farmacéuticos naturales o sintéticos, orgánicos o
inorgánicos. Otra descripción de estos y otros agentes que pueden
utilizarse de acuerdo con los métodos y composiciones de la
presente invención se describe en las Patentes de Estados Unidos
Nºs 5.482.706; 5.514.670 y 4.357.259, cuyo contenido en su totalidad
se incorpora aquí como referencia.
Los agentes peptídicos fisiológicamente activos
preferentes incluyen hormonas peptídicas, citoquinas, factores de
crecimiento, factores que actúan sobre el sistema cardiovascular,
factores que actúan sobre los sistemas nerviosos central y
periférico, factores que actúan sobre los electrolitos humorales y
sustancias orgánicas hemales, factores que actúan sobre los huesos
y esqueleto, factores que actúan sobre el sistema gastrointestinal,
factores que actúan sobre el sistema inmune, factores que actúan
sobre el sistema respiratorio, factores que actúan sobre los
órganos genitales y enzimas.
Hormonas típicas incluyen insulina, hormona del
crecimiento, hormona paratiroide, hormona liberadora de la hormona
luteinizante (LH-RH), hormona adrenocorticotrópica
(ACTH), amilina, oxitocina, hormona luteinizante,
(D-Tryp6)-LHRH, acetato de
nafarelina, acetato de leuprolida, hormona estimulante del folículo,
glucagón, prostaglandinas, PGE1, PGE2 y demás factores que actúan
sobre los órganos genitales y sus derivados, análogos y congéneres.
Como análogos de dicha LH-RH se pueden mencionar las
sustancias conocidas, por ejemplo aquellas descritas en las
Patentes de Estados Unidos Nºs 4.008.209, 4.086.219, 4.124.577,
4.317.815 y 5.110.904,
Antibióticos típicos incluyen tetraciclina,
aminoglicósidos, penicilinas, cefalosporinas, medicamentos de
sulfonamida, succinato de cloranfenicol-sodio,
eritromicina, vancomicina, lincomicina, clindamicina, nistatina,
anfotericina B, amantidina, idoxuridina, ácido
p-aminosalicílico, isoniazida, rifampina,
antinomicina D, mitramicina, daunomicina, adriamicina, bleomicina,
vinblastina, vincristina, procarbazina, imidazolcarboxamida.
Los factores hematopoyéticos o trombopoyéticos
típicos incluyen, entre otros, eritropoyetina, factor estimulante
de las colonias de granulocitos (G-CSF), factor
estimulante de macrófagos-granulocitos
(GM-CSF) y factor estimulante de la colonia de
macrófagos (M-CSF), preparación del factor de
proliferación de leucocitos (Leucoprol, Morinaga Milk),
trombopoyetina, factor estimulante de proliferación plaquetaria,
factor (estimulante) de proliferación de megacariocitos y factor
VIII.
Los agentes antidemencia típicos incluyen
selegeleno.
Los agentes antivirales típicos incluyen
amantidina e inhibidores de proteasas.
Los agentes antitumorales típicos incluyen
doxorrubicina, Daunorrubicina, taxol y metotrexato. Los
antipiréticos y analgésicos típicos incluyen aspirina, Motrina,
Ibuprofina, naprosina, Indocin y acetaminofeno.
Los agentes antiinflamatorios típicos incluyen
NSAIDS, aspirina, esteroides, dexametasona, hidrocortisona,
prednisolona y diclofenaco sódico.
Los agentes antiúlcera típicos incluyen
famotidina, cimetidina, nizatidina, ranitidina y sucralfato.
Los agentes antialérgicos típicos incluyen
antihistaminas, difenildramina, loratadina y clorfeniramina.
Los agentes antidepresivos y psicotrópicos
típicos incluyen litio, amitriptalina, antidepresivos tricíclicos,
fluoxetina, Prozac y paroxetina.
Ejemplos de cardiotónicos incluyen digoxina.
Los agentes antiarrítmicos típicos incluyen
metoprolol y procainamida.
Los vasodilatadores típicos incluyen
nitroglicerina, nifedipina y dinitrato de Isosorbide.
Los diuréticos típicos incluyen
hidroclorotiazida y furosemida.
Los agentes antihipertensivos típicos incluyen
captopril, nifedipina y antenolol.
Los agentes antidiabéticos típicos incluyen
gucozida, cloropropamida, metformina e insulina.
Los anticoagulantes típicos incluyen warfarina,
heparina e hirudina.
Los agentes reductores del colesterol típicos
incluyen lovastatina, colestiamina y clofibrato.
Los agentes terapéuticos típicos para tratar la
osteoporosis y demás factores que actúan sobre los huesos y el
esqueleto incluyen calcio, alendronato, péptido GLa óseo, hormona
paratiroidea y sus fragmentos activos (osteostatina, Endocrinology
129, 324, 1991), péptido de proliferación y formación ósea asociadas
a histonas H4 (OGP, The EMBO Journal 11, 1867, 1992) y sus
muteínas, derivados y análogos de los mismos.
Enzimas y cofactores enzimáticos típicos
incluyen pancreasa, L-asparaginasa, hialuronidasa,
quimiotripsina, tripsina, tPA, estreptoquinasa, uroquinasa,
pancreatina, colagenasa, tripsinógeno, quimiotripsinógeno,
plasminógeno, estreptoquinasa, ciclasa de adenilo y
superóxido-dismutasa (SOD).
Las vacunas típicas incluyen de hepatitis B, MMR
(sarampión, paperas y rubeola) y vacunas contra la polio.
Los adyuvantes inmunológicos típicos incluyen
adyuvante de Freunds, dipéptidos de muramilo, concanavalina A, BCG
y levamisole.
Las citoquinas típicas incluyen linfoquinas,
monoquinas, factores hematopoyéticos, etc. Las linfoquinas y
citoquinas útiles en la práctica de la invención incluyen
interferones (por ejemplo interferón alfa, beta y gama),
interleuquinas (por ejemplo interleuquina 2 a 11), etc. Las
monoquinas útiles en la práctica de la invención incluyen
interleuquina-1, factores de necrosis tumoral (por
ejemplo, TNF alfa y beta), factor inhibidor de leucocitos malignos
(LIF), etc.
Los factores de crecimiento típicos incluyen
factores de crecimiento nervioso (NGF,
NGF-2/NT-3), factor de crecimiento
epidérmico (EGF), factor de crecimiento de fibroblastos (FGF),
factor de crecimiento análogo de insulina (IGF), factor de
crecimiento transformante (TGF), factor de crecimiento celular
derivado de plaquetas (PDGF), factor de crecimiento de hepatocitos
(HGF), etc.
Los factores típicos que actúan sobre el sistema
cardiovascular incluyen aquellos factores que controlan la presión
sanguínea, arterioesclerosis, etc., como las endotelinas,
inhibidores de endotelinas, antagonistas de endotelinas descritos
en EP 436189, 457195, 496452 y 528312, JP [Abierta] Nº
H-3-94692/1991 y 130299/1991,
inhibidores de la enzima que produce la endotelina, vasopresina,
renina, angiotensina I, angiotensina II, angiotensina III,
inhibidor de la angiotensina I, antagonista del receptor de la
angiotensina II, péptido natriurético atrial (ANP), péptido
antiarrítmico, etc.
Los factores típicos que actúan sobre los
sistemas nerviosos central y periférico incluyen péptidos opioides
(por ejemplo enquefalinas, endorfinas), factor neurotrópico (NTF),
péptido asociado al gen de calcitonina (CGRP), hormona de
liberación de la hormona tiroidea (TRH), sales y derivados de TRH
[JP [Abierta] Nº 50-121273/1975 (Pat. de Estados
Unidos Nº 3.959.247), JP [Abierta] Nº 52-116465/1977
(Pat. de Estados Unidos Nº 4.100.152)], neurotensina, etc.
Los factores típicos que actúan sobre el sistema
gastrointestinal incluyen secretina y gastrina.
Los factores típicos que actúan sobre los
electrolitos humorales y sustancias orgánicas hemales incluyen los
factores que controlan la hemaglutinación, nivel de colesterol en
plasma o concentraciones de iones metálicos, como la calcitonina,
apoproteína e hirudina. La laminina y la molécula de adhesión
intercelular-I (ICAM I) representan los factores de
adhesión celular típicos.
Los factores típicos que actúan sobre el riñón y
el tracto urinario incluyen sustancias que regulan la función
renal, como el péptido natriurético derivado del cerebro (BNP),
urotensina, etc.
Los factores típicos que actúan sobre los
órganos sensoriales incluyen los factores que controlan la
sensibilidad de los distintos órganos, como la sustancia P.
Los factores típicos que actúan sobre el sistema
inmune incluyen los factores que controlan la inflamación y
neoplasmas malignos y los factores que atacan los microorganismos
infecciosos, como péptidos quimiotácticos y bradiquininas.
Los factores típicos que actúan sobre el sistema
respiratorio incluyen los factores asociados a las respuestas
asmáticas.
Se incluyen también proteínas o péptidos
recombinantes o sintetizados químicamente o naturales que pueden
actuar como antígenos, como polen de cedro y polen de ambrosía.
Estos factores son administrados bien por separado, combinados a
haptenos o junto con un adyuvante en las formulaciones de acuerdo
con la presente invención.
El método para formar las microesferas de la
invención implica: (1) la combinación, en una o más soluciones
acuosas, de una macromolécula tal como una proteína, un polímero
soluble en agua (por ejemplo, un polímero basado en un
hidrocarburo) y uno o más agentes complejantes, para formar una
mezcla acuosa (como sistema de fase única o múltiple); y,
preferentemente (2) someter la mezcla acuosa a un agente reticulante
(por ejemplo EDC
[1-etil-3-(3-dimetilaminopropilcarbodiimida])
y/o a una fuente de energía, durante un tiempo suficiente para
formar una microesfera, en particular una microesfera que tiene una
superficie lisa que incluye múltiples orificios acanalados, de
diámetro inferior a 1.000 angstroms, tal como se determina por
técnicas de adsorción de gas para la determinación del tamaño de
poro. En los ejemplos se proporcionan los métodos típicos para
preparar las microesferas.
Las realizaciones particularmente preferentes
son microesferas que incluyen:
(1) una proteína portadora;
(2) un polímero soluble en agua;
(3) un primer agente complejante que es un
polisacárido polianiónico; y
(4) un segundo agente complejante que es un
catión metálico divalente, preferentemente calcio o magnesio. Los
agentes activos, tales como agentes terapéuticos o diagnósticos,
pueden introducirse en estas microesferas después de su formación.
El método preferente para la formación de estas realizaciones
particularmente preferentes de la invención implica: (1) la
combinación, en esencia simultánea, en una o más soluciones acuosas,
de la proteína portadora, el polímero soluble en agua, el primer
agente complejante y el segundo agente complejante, para formar una
mezcla acuosa; y (2) dejar que las microesferas se formen.
Opcionalmente, las microesferas pueden someterse además a un agente
reticulante para su estabilización. Por "en esencia simultánea"
se entiende que el segundo agente complejante (preferentemente
calcio o magnesio) se añade aproximadamente a los 30 minutos de la
adición de los demás componentes de la formación. Los solicitantes
han descubierto que la adición de calcio o magnesio a la mezcla
acuosa, que no es una adición en esencia simultánea, resulta en la
formación de agregados y otras formas amorfas de partículas más que
en microesferas de forma esférica, las cuales se forman cuando se
combina el calcio o el magnesio de manera en esencia simultánea
junto con los demás componentes durante el proceso de formación de
las microesferas.
Las microesferas pueden estabilizarse mediante
incubación de las microesferas formadas en presencia de un agente
reticulante y/o de una fuente de energía (por ejemplo calor),
durante un período de tiempo predeterminado. Los agentes
reticulantes típicos incluyen dialdehídos, aminas, iones
multivalentes, moléculas multifuncionales que tienen afinidad por
los grupos reactivos específicos de la macromolécula que se está
reticulando, N-maleimidas sustituidas, haluros de
alquilo bifuncionales, haluros de arilo, isocianatos, ácidos
dicarboxílicos alifáticos o aromáticos, ácidos disulfónicos
alifáticos o aromáticos, imidoésteres bifuncionales y vinilsulfonas.
Agentes de reticulación adicionales y sus de utilización para
estabilizar las microesferas se describen en U.S. 5.578.709 de J.
Woiszwillo, cuyo contenido entero se incorpora aquí como referencia.
La fuente de energía preferente es calor. Sin embargo, los
especialistas en la materia entenderán que otras fuentes de energía
incluyen calor, radiación e ionización, por separado o combinadas
con sonicación, vórtex, mezcla o agitación. La formación y/o
estabilización de las microesferas puede llevarse a cabo
inmediatamente, exponiéndolas a la fuente de energía, o pueden
necesitar una larga exposición a la fuente de energía, dependiendo
de las características de los componentes y las condiciones.
Preferentemente, se incuba la mezcla de la solución
macromolécula-polímero en un baño de agua a una
temperatura superior o igual a 37ºC e inferior o igual a 90ºC
durante 5 minutos a 2 horas aproximadamente. En especial, se incuba
la mezcla durante 5-30 minutos a una temperatura
entre 50ºC y 90ºC. Se debe observar que las microesferas pueden
formarse a temperaturas más bajas si se utiliza una concentración
mayor de macromolécula. La temperatura máxima de incubación viene
determinada por las características de la macromolécula y por la
función esencial de la microesfera. Por ejemplo, para una
microesfera en la que la macromolécula es una proteína, es
preferente una temperatura inferior a aproximadamente 70ºC para
conservar la actividad de la proteína.
Las microesferas formadas se separan de los
componentes no incorporados de la mezcla de incubación por métodos
convencionales de separación, bien conocidos por los especialistas
en la materia. Preferentemente, la mezcla de incubación se
centrifuga para que las microesferas se sedimenten en el fondo del
tubo de centrifugación y los componentes no incorporados queden en
el sobrenadante, el cual se elimina luego por decantación. Como
alternativa, una suspensión que contiene las microesferas formadas
se filtra para que las microesferas queden retenidas en el filtro y
los componentes no incorporados lo atraviesen.
La purificación de las microesferas se lleva a
cabo mediante lavado en un volumen adecuado de una solución de
lavado. La solución de lavado preferente es un tampón, en particular
una solución no iónica acuosa o una solución no iónica acuosa que
contiene polímeros solubles en agua. Se pueden repetir los lavados
según sea necesario y las microesferas se pueden separar de la
solución de lavado tal como se ha descrito anteriormente.
Tal como se ha mencionado anteriormente, las
características de las microesferas pueden verse alteradas por la
manipulación de las condiciones de incubación. Por ejemplo, la
cinética de liberación de las microesferas puede retardarse
aumentando la temperatura de reacción o ampliando el tiempo de
reacción durante la formación de las microesferas. La cinética de
liberación se manipula también mediante la selección de distintos
polímeros, distintas concentraciones de polímeros o distintas
proporciones de los polímeros utilizados en la formación de las
microesferas.
El tamaño, la forma de las microesferas y la
cinética de liberación pueden controlarse mediante el ajuste de las
condiciones de formación de las microesferas. Por ejemplo, las
condiciones de formación de las partículas pueden optimizarse de
forma que se produzcan partículas más pequeñas o más grandes o se
puede aumentar el tiempo total de incubación o la temperatura de
incubación, lo que resulta en partículas que tienen una cinética de
liberación prolongada.
De acuerdo todavía con otras realizaciones de la
invención, se proporcionan microesferas en las cuales la
macromolécula es un ácido nucleico. Las microesferas que contienen
ácidos nucleicos incluyen: (1) un ácido nucleico (por ejemplo un
plásmido, vector viral, oligonucleótido, ARN, ácidos nucleicos
antisentido y sin sentido); (2) un o más polímeros policatiónicos
(por ejemplo polilisina); y (3) un polímero soluble en agua (tal
como se describe anteriormente). Así, de acuerdo con un aspecto
asociado de la invención, se proporciona un método para formar
microesferas que contienen ácidos nucleicos. El método implica: (1)
combinar, en una o más soluciones acuosas, uno o más ácidos
nucleicos, uno o más polímeros policatiónicos y uno o más polímeros
solubles en agua, para formar una mezcla acuosa; y (2) someter la
mezcla acuosa a un agente reticulante y/o a una fuente de energía,
durante un tiempo suficiente, para formar una microesfera. En los
ejemplos se proporcionan los métodos típicos de formación de
microesferas de ácidos nucleicos.
De acuerdo con todavía otro aspecto de la
invención, se proporciona una composición farmacéutica de los
materiales y el método para producir la misma. La composición
incluye un recipiente que contiene una dosis única de microesferas
que contienen un agente activo para tratar una condición que es
tratable por la liberación prolongada, desde las microesferas, de
un agente activo. El número de microesferas en la dosis única
depende de la cantidad de agente activo presente en cada
microesfera y del período de tiempo durante el cual se desea la
liberación prolongada. Preferentemente, se selecciona la dosis
única para conseguir la liberación prolongada del agente activo
durante un período de aproximadamente 1 a aproximadamente 180 días,
con el perfil de liberación deseado.
De acuerdo con otro aspecto de la invención, se
proporciona la composición contenida en una jeringuilla. La
composición incluye una jeringuilla que contiene una dosis simple de
microesferas que contienen un agente activo para tratar una
condición que es tratable por la liberación prolongada, desde las
microesferas, del agente activo; y una aguja unida a la
jeringuilla, donde la aguja tiene un tamaño de diámetro interior de
calibre 14 a 30.
En especial, se pueden preparar las microesferas
preferentes de la invención para que tengan una dimensión tal que
permita su suministro por medio de una jeringuilla sin aguja
(MediJector, Derata Corporation, Minneapolis, MN 55427), eliminando
así los problemas de desecho inherentes a las agujas, que deben
desecharse como desperdicio biológicamente peligroso. Así, de
acuerdo con un aspecto particularmente preferente de la invención,
se proporciona una jeringuilla sin aguja que contiene una o más
dosis de microesferas que contienen un agente activo para tratar
una condición. Se pueden preparar las microesferas para que tengan
una calidad adecuada para su suministro por otras vías parenterales
y no parenterales, tales como vía oral, bucal, intratecal, nasal,
pulmonar, transdérmica, transmucosa y similares.
En resumen, se puede pensar en las composiciones
de la invención como una combinación de varios componentes, tal
como se ilustra en las Tablas,bajo condiciones para formar las
microesferas, las cuales, preferentemente, tienen las
características deseables de una superficie lisa, que sean
cuantificables en términos de determinar si éstas se han formado
(por ejemplo, por detección visual) y en términos de determinar el
diámetro de los orificios acanalados en las microesferas. Así, en
algunos de sus aspectos más amplios, las composiciones de la
invención son destinadas a microesferas que tengan las dimensiones
necesarias en los orificios acanalados y que comprendan una
macromolécula (preferentemente una proteína de la Tabla 1) y también
un polímero soluble en agua (preferentemente un polímero de la
Tabla 2). En todavía otro aspecto, las microesferas comprenden una
macromolécula (preferentemente una proteína de la Tabla 1), un
polímero soluble en agua (preferentemente un polímero de la Tabla
2) y un agente complejante (preferentemente de la Tabla 3). En las
realizaciones particularmente preferentes, las microesferas
incluyen: (1) una proteína portadora; (2) un polímero soluble en
agua; (3) un primer agente complejante que es un polisacárido
polianiónico; y (4) un segundo agente complejante que es un catión
metálico divalente seleccionado de entre el grupo consistente en
calcio y magnesio. En todavía otros aspectos, la invención es
destinada a cualquiera de estos aspectos en los cuales las
microesferas comprenden además un agente terapéutico
(preferentemente de la Tabla 4). Así, en ciertas realizaciones de
estos aspectos, se combinan una o más proteínas de la Tabla 1 con
uno o más polímeros solubles en agua de la Tabla 2 y con uno o más
agentes activos de la Tabla 4. En todavía otras realizaciones de
estos aspectos, se combinan uno o más ácidos nucleicos con uno o
más policationes de la Tabla 3, con uno o más polímeros solubles en
agua de la Tabla 2 y, opcionalmente, con uno o más agentes
terapéuticos de la Tabla 4. En consecuencia, los métodos de la
invención proporcionan diversas microesferas que pueden diseñarse
para distintas aplicaciones terapéuticas y diagnósticas mediante la
selección de la combinación adecuada de agentes para lograr el
objetivo terapéutico o diagnóstico.
Cuando se utilizan en la terapia, las
microesferas de la invención se administran en cantidades
terapéuticamente eficaces. En general, una cantidad
terapéuticamente eficaz es aquellas cantidad de agente activo
necesaria para retrasar el inicio, inhibir la progresión o detener
del todo la condición particular que se está tratando.
Generalmente, la cantidad terapéuticamente eficaz variará con la
edad, condición y sexo del sujeto, así como con la naturaleza y el
alcance de la enfermedad en el sujeto, todo ello determinado por un
especialista en la materia. La dosificación puede ser ajustada por
el médico o el veterinario, particularmente en caso de cualquier
complicación. Una cantidad terapéuticamente eficaz de agente activo
varía típicamente entre 0,01 mg/kg a aproximadamente 1.000 mg/kg,
preferentemente desde aproximadamente 0,1 mg/kg hasta
aproximadamente 200 mg/kg y en particular desde aproximadamente 0,2
mg/kg hasta aproximadamente 20 mg/kg, en una o más dosis diarias,
durante uno o más días, todas las semanas, meses, cada dos o tres
meses, y así sucesivamente.
Las microesferas pueden administrarse solas o en
combinación con otras terapias medicamentosas como parte de una
composición farmacéutica. Esta composición farmacéutica puede
incluir las microesferas en combinación con cualquier soporte
estándar fisiológica y/o farmacéuticamente aceptable que sea
conocido en la técnica. Las composiciones deben ser estériles y
contener una cantidad terapéuticamente eficaz de la microesfera en
una unidad de peso o volumen adecuada para su administración a un
paciente. El término "soporte farmacéuticamente aceptable",
tal como se utiliza aquí, significa uno o más rellenos sólidos o
líquidos compatibles, diluyentes o sustancias encapsulantes que
sean apropiadas para la administración a un ser humano o animal. El
término "soporte" indica un ingrediente orgánico o inorgánico,
natural o sintético, con el que se combina el ingrediente activo
para facilitar la aplicación. Los componentes de las composiciones
farmacéuticas son capaces también de comezclarse con las moléculas
de la presente invención, y entre sí, de un modo tal que no exista
interacción, lo cual deterioraría sustancialmente la eficacia
farmacéutica deseada. "Farmacéuticamente aceptable" significa
además un material no tóxico compatible con un sistema biológico tal
como una célula, un cultivo celular, un tejido o un organismo. Las
características del soporte dependerán de la vía de administración.
Los soportes fisiológica y farmacéuticamente aceptables incluyen
diluyentes, rellenos, sales, tampones, estabilizantes, desecantes,
agentes de aumento de volumen, propelentes, agentes acidificantes,
agentes de recubrimiento, solubilizantes y demás materiales bien
conocidos en la técnica. Las formulaciones de soportes adecuados
para las administraciones orales, subcutáneas, intravenosas,
intramusculares, etc., pueden encontrarse en Remington's
Pharmaceutical Sciences, Mack Publishing Co., Easton, PA.
Se dispone de variedad de vías de
administración. El modo particular seleccionado dependerá, por
supuesto, del medicamento particular seleccionado, de la gravedad
de la condición que se está tratando y de la dosificación necesaria
para la eficacia terapéutica. En general, los métodos de la
invención pueden ponerse en práctica utilizando cualquier modo de
administración que sea médicamente aceptable, lo que significa
cualquier modo que genere niveles eficaces de los compuestos
activos sin causar efectos adversos clínicamente inaceptables.
Estos modos de administración incluyen las vías oral, rectal,
tópica, nasal, intradérmica o parenteral. El término
"parenteral" incluye la vía subcutánea, intravenosa,
intramuscular o por perfusión. Se preferirá la administración oral
para el tratamiento profiláctico debido a la comodidad para el
paciente, así como para la programación de las dosis.
Las composiciones farmacéuticas pueden
presentarse convenientemente en forma de dosificación unitaria y
pueden prepararse por métodos bien conocidos la técnica
farmacéutica. Todos los métodos incluyen la etapa de asociar la a
un soporte, el cual constituye uno o más ingredientes accesorios. En
general, las composiciones se preparan asociando uniforme e
íntimamente las microesferas con un soporte líquido, un soporte
sólido finamente dividido o ambos, y luego, si es necesario, dando
forma al producto.
Las preparaciones para la administración
parenteral incluyen soluciones estériles acuosas o no acuosas,
suspensiones y emulsiones. Otros ejemplos de disolventes incluyen
propilenglicol, polietilenglicol, aceites vegetales como aceite de
oliva, ésteres orgánicos inyectables como oleato de etilo. Los
soportes acuosos incluyen soluciones acuosas, de sales y tampones,
tales como medios salinos y tamponados, soluciones y emulsiones o
suspensiones alcohólicas/acuosas. Los vehículos parenterales
incluyen una solución de cloruro de sodio, dextrosa Ringer,
dextrosa y cloruro de sodio, aceites fijos o de Ringer lactados. Los
vehículos intravenosos incluyen cargas nutrientes y fluidas, cargas
de electrolitos (como aquellos basados en dextrosa Ringer) y
similares. También pueden estar presentes conservantes y otros
aditivos, por ejemplo agentes antimicrobianos, antioxidantes,
quelantes y gases inertes y similares. En general, las microesferas
pueden administrarse al sujeto (cualquier receptor mamífero)
utilizando los mismos modos de administración que los que se
utilizan corrientemente para la terapia con micropartículas en los
seres humanos.
Las microesferas son útiles para una gran
variedad de separaciones, para propósitos diagnósticos,
terapéuticos, industriales, comerciales, cosméticos y de
investigación, tal como se expone más detalladamente a continuación.
Por ejemplo, con un propósito de diagnóstico in vivo, las
microesferas pueden incluir una macromolécula tal como una
inmunoglobulina o un receptor celular marcado con una marca
detectable. La administración de la microesfera marcada a un
paciente crea un agente de formación de imágenes diagnósticas de un
trastorno proliferativo, tal como el cáncer, o una herramienta para
la evaluación del éxito de un agente terapéutico en la reducción de
la proliferación de células o de organismos particulares
adversos.
Para el diagnóstico in vitro, las
microesferas que contienen una macromolécula, tal como una
inmunoglobulina, un receptor celular o una sonda con
oligonucleótidos específicos de la célula u organismo bajo
investigación se combinan con una muestra de prueba, las
microesferas se separan de cualquier componente no unido de la
muestra y las moléculas unidas son detectadas por métodos
convencionales.
Las microesferas son útiles como agentes
terapéuticos y pueden permitir la utilización de vías de
administración alternativas cuando incluyen un medicamento
terapéutico y se administran a un paciente para una liberación
lenta o suministro dirigido del medicamento hacia el sitio que
requiere la terapia. Las microesferas son útiles también como
agentes terapéuticos o profilácticos cuando incluyen una
macromolécula que es de por sí un agente terapéutico o
profiláctico, por ejemplo una enzima o una inmunoglobulina. La
liberación lenta de estos agentes terapéuticos es particularmente
útil para los péptidos o las proteínas terapéuticas que tienen una
vida media corta y que deben administrarse por inyección
Además, las microesferas son útiles para la
purificación de moléculas procedentes de una mezcla compleja, como
reactivo para la detección o cuantificación de una molécula
específica o para la producción de moléculas tales como
anticuerpos. Por ejemplo, las microesferas que contienen una
macromolécula tal como una inmunoglobulina pueden fijarse a una
columna de cromatografía y utilizarse en la cromatografía de
inmunoafinidad para separar un ligando de una mezcla compleja.
Alternativamente, las microesferas que incluyen una macromolécula
marcada o una mezcla de macromoléculas marcadas específicas de
distintas células o biomoléculas, tales como receptores celulares,
pueden utilizarse para detectar cambios en el número de células o
biomoléculas en respuesta a una condición particular de prueba por
medio de técnicas tales como la citometría de flujo.
Además, las microesferas pueden utilizarse como
adyuvantes para la producción de vacunas, en las cuales se inyectan
a un animal a estudiar, por ejemplo a un ratón o conejo, las
microesferas que contienen antígenos, para activar una respuesta
inmune intensificada de la producción de anticuerpos al
antígeno.
Otras utilizaciones comerciales adicionales
incluyen formulaciones clínicas, tal como la formación de partículas
enzimáticas para su adición a detergentes; cosméticas, tal como la
formación de partículas de colágeno que deben suspenderse en una
loción o crema; tintes; y pinturas.
Ensayos In Vitro: las microesferas
descritas aquí son útiles como partículas en fase sólida en un
ensayo, tal como un ensayo inmunosorbente asociado con enzimas,
dot-blot o Western blot, para la detección de una
diana particular tal como una célula, biomolécula o medicamento en
una muestra biológica. Las microesferas diseñadas para este uso se
componen de moléculas con afinidades específicas por la molécula
diana. Por ejemplo, la macromolécula es una inmunoglobulina, un
receptor celular o una sonda con oligonucleótidos y está unida a un
tubo de prueba o a una placa de microvaloración.
Para la detección o cuantificación de una
molécula diana de interés, se combina una muestra con una solución
que contiene las microesferas, las macromoléculas sobre las
microesferas se someten a reacción con la molécula diana, se
separan las microesferas de cualquier componente no unido de la
muestra y las microesferas que contienen las moléculas unidas son
detectadas por métodos convencionales. Las microesferas
fluorescentemente coloreadas son particularmente útiles en el
análisis por citometría de flujo de acuerdo con métodos bien
conocidos por los especialistas en la materia.
Histopatología: las microesferas descritas aquí
son útiles como sondas o marcadores visuales de patologías en una
muestra histológica. Las macromoléculas de las microesferas
diseñadas para esta utilización son específicas de las biomoléculas
expresadas durante una condición patológica particular y están
marcadas con una marca detectable. Por ejemplo, la macromolécula es
una inmunoglobulina, un receptor celular o una sonda con
oligonucleótidos específica de una célula anormal, tal como una
célula que prolifera rápidamente, o de un organismo patológico, por
ejemplo, un virus.
Para la detección de una condición patógena, se
combina una muestra histológica con una solución que contiene las
microesferas, las macromoléculas marcadas sobre las microesferas se
someten a reacción con la molécula diana de interés y las
microesferas unidas se detectan mediante la detección de la marca de
acuerdo con métodos bien conocidos por los especialistas en la
materia.
Las microesferas descritas aquí son útiles como
agentes de formación de imágenes para la localización in
vivo de una molécula particular, de un tipo de célula o de una
condición patológica, de forma similar a la descrita anteriormente
con respecto a su utilización histopatológica. Las macromoléculas de
las microesferas diseñadas para este uso son específicas de las
moléculas expresadas por una célula particular o por un organismo
patológico y están marcadas con una marca detectable. Por ejemplo,
la macromolécula es una inmunoglobulina, un receptor celular o una
sonda con oligonucleótidos específica de una célula tumoral o de un
organismo patológico tal como un virus.
Las microesferas se utilizan para detectar una
condición patológica o para comprobar el éxito de una terapia, por
ejemplo quimioterapia o cirugía, para garantizar que el tamaño de un
tumor de tejido anormal ha disminuido o ha sido eliminado
completamente. Para este uso, un paciente recibe la administración
de una solución de microesferas, preferentemente de forma
intravenosa, a las macromoléculas marcadas de las microesferas una
cantidad suficiente se les da tiempo para que se orienten hacia el
órgano o la región del cuerpo afectada, la macromolécula se somete
a reacción con una molécula diana expresada por la célula o por el
organismo bajo investigación, y las microesferas enlazadas se
detectan mediante la detección de la marca por técnicas
convencionales de formación de imágenes, bien conocidas por los
especialistas en la materia, por ejemplo rayos X.
Las microesferas son útiles para la terapia o la
profilaxis cuando la macromolécula es un agente terapéutico o un
compuesto farmacéutico que se suministra a un paciente y se libera
lentamente desde las microesferas con el tiempo. Estas microesferas
son particularmente útiles para la liberación lenta de fármacos con
una vida media biológica corta, por ejemplo proteínas o péptidos.
Si el compuesto farmacéutico no puede formarse en una partícula,
entonces se compleja en un soporte tal como albúmina, y el complejo
compuesto farmacéutico-soporte se forma en una
microesfera. La microesfera puede mantener la liberación lenta del
agente por todo el cuerpo o puede incluir una molécula de afinidad
específica por un tejido, o tumor diana, y ser inyectada en un
paciente, para la liberación lenta dirigida del agente terapéutico,
tal como un agente antitumoral, antiviral, antibacteriano,
antiparásito o antiartrítico, una citoquina, hormona o insulina,
directamente hacia el sitio que necesita la terapia. Tal como se ha
expuesto anteriormente, la molécula de afinidad puede ser
segmentable.
Las microesferas compuestas por proteínas
antigénicas o conjugados polisacárido-proteína
capaces de provocar una respuesta inmune son particularmente
adecuadas para su uso como vacunas.
Las microesferas son también útiles como
vehículos para la terapia genética o para la producción de
"vacunas genéticas" cuando están compuestas de ácidos
nucleicos, por ejemplo de ADN o ARN, que son incorporados al ADN
del paciente o son transfectados en una célula diana para producir
una proteína deseada. Por ejemplo, los polinucleótidos que
codifican las proteínas del núcleo de virus como el de la gripe o de
la inmunodeficiencia humana VIH pueden suministrarse como
microesferas para la expresión de una proteína antigénica. Esto es
ventajoso porque las nuevas vacunas no necesitan ser desarrolladas
tan a menudo, ya que las proteínas del núcleo viral mutan en menor
grado que los antígenos de la superficie celular actualmente
utilizados en las vacunas. Las microesferas de ácido nucleico son
suministradas a las células de mamíferos poco más o menos de la
misma manera que es suministrado el ADN desnudo. La secuencia de
ácido nucleico deseada se inserta en un vector, como un plásmido de
ADN, con un promotor, tal como el promotor SV40 o el promotor de
citomegalovirus, y opcionalmente puede incluir un gen reporter, tal
como beta-galactosidasa. El ácido nucleico se
combina preferentemente con una proteína soporte y/o un catión como
polilisina para facilitar la formación de partículas, tal como se
ha descrito anteriormente. Entonces las microesferas se administran
directamente al paciente o son transfectadas en células de
mamíferos que luego son administradas al paciente que necesita la
terapia o la profilaxis. Las microesferas de ácido nucleico pueden
incluir una sustancia tal como cloroquina, que permite que los
ácidos nucleicos salgan de los compartimentos citoplásmicos en el
citoplasma para que pueda ser transcrita y traducida más fácilmente
por las células. Además, las microesferas pueden estar recubiertas
de una sustancia que aumenta la eficacia de la traducción o pueden
estar recubiertas de una sustancia que proporcione el
direccionamiento específico de las microesferas hacia la
célula.
Las microesferas son útiles como herramientas de
investigación para la purificación de biomoléculas procedentes de
mezclas complejas, como reactivo para la detección o cuantificación
de una biomolécula, o para la producción de biomoléculas, por
ejemplo de anticuerpos.
Por ejemplo, las microesferas compuestas por una
macromolécula tal como una inmunoglobulina se sujetan a una columna
de cromatografía y se utilizan en la cromatografía de inmunoafinidad
para separar un ligando de una mezcla compleja. Los especialistas
en la materia entenderán que la microesfera, para su utilización en
cromatografía de líquidos a alta presión, tendría que sujetarse
primero a una esfera o perla en fase sólida no compresible para que
la guarnición de la columna mantenga su estructura rígida bajo
presión.
Alternativamente, se emplean microesferas que
incluyen una macromolécula marcada o una mezcla de macromoléculas
marcadas específicas de distintas células o receptores celulares
para detectar cambios en el número de células o de receptores
celulares superficiales en respuesta a una condición particular de
prueba, utilizando técnicas como la citometría de flujo.
Se entenderá de forma más completa la invención
con referencia a los ejemplos siguientes. Estos ejemplos, sin
embargo, pretenden simplemente ilustrar las realizaciones de la
invención y no deben interpretarse como una limitación del alcance
de la misma.
Ejemplo
1
Se prepararon microesferas de seroalbúmina
humana (HSA) adecuadas para su utilización como vehículo en el
suministro de medicamento.
Se añadió carbonildiimidazol (124 mg, Sigma
Chemical Co., St. Louis, Mo.) a una solución de 50 mg del
antibiótico Rifampicin TM
(3-[4-metilpiperaziniliminometil]rifamicina,
Sigma Chemical Co., St. Louis, Mo.) en 2 ml de dimetilformamida
(DMF). Se dejó reposar la mezcla resultante a temperatura ambiente
durante cuatro horas. A la mezcla se añadió una mezcla de 1 ml de
seroalbúmina humana (HSA, 25%, Armour Pharmaceutical Co.,
Collegeville, Pa.) y 2 ml de agua desionizada. Se dejó la mezcla a
temperatura ambiente durante toda la noche. Se añadieron a la
mezcla 14 ml de una solución polimérica que contenía un 25% de PVP
(40.000 dalton) y un 25% de PEG (3.350 dalton) en NaOAc 0,1M, pH 4.
Se incubó la mezcla durante 30 minutos a temperatura ambiente,
durante 30 minutos a 37ºC y durante 30 minutos a 58ºC y luego se
enfrió a temperatura ambiente. Las partículas fueron aisladas por
centrifugación, se lavaron con agua desionizada tres veces y se
resuspendieron en 20 ml de agua. El porcentaje de HSA incorporada
en las partículas fue del 74% (sometidas al ensayo de proteína BCA
TM (Pierce, Rockford, III)). El porcentaje de Rifampicin TM
incorporada en las partículas era superior al 6,8%. Se determinó que
el tamaño medio de partícula era de 68 nm de diámetro por medio de
un clasificador celular Coulter TM.
Se añadió carbonildiimidazol (100 mg, Sigma
Chemical Co., St. Louis, Mo.) a una solución de 36 mg del fármaco
antiviral Virazole TM Registrado (ICN Pharmaceuticals, Inc., Costa
Mesa, Calif.) en 0,2 ml de dimetilformamida (DMF). Se dejó reposar
la mezcla resultante a temperatura ambiente durante cuatro horas. Se
añadió a la mezcla, una mezcla de 0,2 ml de seroalbúmina humana
(HSA) (25%, Armour Pharmaceutical Co., Collegeville, Pa.) y 0,4 ml
de agua desionizada. Se incubó la mezcla durante 30 minutos a
temperatura ambiente, durante 30 minutos a 37ºC y durante 30
minutos a 58ºC y luego se enfrió a temperatura ambiente. Las
partículas fueron aisladas por centrifugación, se lavaron con agua
desionizada tres veces y se resuspendieron en 20 ml de agua. El
porcentaje de HSA incorporada en las partículas fue del 61%
(sometidas al ensayo de proteína BCA TM (Pierce, Rockford, III)).
El porcentaje de Virazole TM Registrado incorporado en las
partículas era del 10%.
Ejemplo
2
Se acopló el polisacárido PRP-AH
a la superficie exterior de dos microesferas de proteína
distintas.
Un derivado dihidrazida de ácido adípico (AH)
del fosfato de polirribosilribitol (PRP) del tipo b de
Haemophilus influenza (Hib), uno de los mayores organismos
causantes de la meningitis bacteriana, denominado
PRP-AH, se preparó mediante el acoplamiento de PRP
a ácido adípico (Sigma Chemical Co., St. Louis, Mo.) en presencia
de bromuro de cianógeno (Sigma Chemical Co., St. Louis, Mo.) (se
obtuvo el PRP del Massachusetts Public Health Biologic Laboratory
(Jamaica Plain, Mass.)).
Se prepararon microesferas de ovalbúmina
mediante la adición de ovalbúmina (1%, Sigma Chemical Co., St.
Louis, Mo.) a una solución polimérica que contenía un 25% de PVP
(40.000 dalton) y un 25% de PEG (3.500 dalton). Se incubó la mezcla
durante 30 minutos a temperatura ambiente, 30 minutos a 37ºC y 30
minutos a 58ºC, provocando la formación de microesferas. Las
partículas fueron recogidas por centrifugación. Se determinó que el
diámetro medio de partícula era de aproximadamente 0,068 \mum.
Las partículas de ovalbúmina (1,5 mg) en tampón MES 1M, pH 5,0 (0,1
ml), se combinaron con el PRP-AH (1,5 mg).
Posteriormente, se añadieron 2,79 mg de clorhidrato de
1-etil-3-(3-dimetilaminopropilcarbodiimida)
(EDC, Sigma Chemical Company, St. Louis, Mo.). Se mezcló la
reacción a temperatura ambiente durante tres horas. Las partículas
fueron recogidas por centrifugación y lavadas tres veces con tampón
MES 1M pH 5,0 (400 mu 1). Se determinó que la producción de PRP era
del 25% por medio del ensayo de polisacárido libre con antrona
descrito en METHODS IN IMMUNOLOGY AND IMMUNOCHEMISTRY, Vol. II,
Williams, C.A. and Chase, M.W. (eds.), 1968, pp.
288-289, Academics Press, NY. Se determinó que el
contenido en proteína era del 55% mediante el ensayo de proteína
BCA TM (Pierce, Rockford, III). La proporción de PRP con respecto a
la proteína era de 0,46. El diámetro medio de partícula resultante
era de 0,067 \mum.
La recuperación del polisacárido libre y la
carga de polisacárido en las partículas (proporción
polisacárido:ovalbú-
mina) dependían de la proporción inicial entre las partículas de ovalbúmina y el polisacárido. Como la proporción de polisacárido con respecto a la partícula de ovalbúmina aumentó, la recuperación de polisacárido libre disminuyó y la carga de polisacárido sobre las partículas aumentó tal como se muestra en el Ejemplo de la Tabla 1 siguiente.
mina) dependían de la proporción inicial entre las partículas de ovalbúmina y el polisacárido. Como la proporción de polisacárido con respecto a la partícula de ovalbúmina aumentó, la recuperación de polisacárido libre disminuyó y la carga de polisacárido sobre las partículas aumentó tal como se muestra en el Ejemplo de la Tabla 1 siguiente.
EJEMPLO TABLA
1
Recuperación de Polisacárido y
Carga en Microesferas de
Ovalbúmina
El tétanos toxoide (27 mg/ml, obtenido del
Massachusetts Public Health Biologic Laboratory (Jamaica Plain,
Mass.)) se combinó con dos volúmenes de una solución polimérica que
contenía un 25% de PVP (40.000 dalton) y un 25% de PEG (3.500
dalton), pH 5,0. Se incubó la mezcla durante 30 minutos a
temperatura ambiente, 30 minutos a 37ºC y 30 minutos a 58ºC,
provocando la formación de microesferas. Las partículas fueron
recogidas por centrifugación. Se determinó que el diámetro medio de
partícula era de aproximadamente 0,082 \mum.
Las partículas de tétanos toxoide (0,825 mg) en
tampón MES 1M, pH 5,0 (0,1 ml) fueron combinadas con
PRP-AH (1,5 mg). Posteriormente, se añadieron 2,79
mg de clorhidrato de
1-etil-3-(3-dimetilaminopropilcarbodiimida)
(EDC, Sigma Chemical Company, St. Louis, Mo.). Se mezcló la
reacción a temperatura ambiente durante tres horas. Las partículas
fueron recogidas por centrifugación y lavadas tres veces con tampón
MES 1M, pH 5,0 (400 mu 1). Se determinó que la producción de PRP era
del 16% por medio del ensayo de polisacárido libre con antrona
descrito en METHODS IN IMMUNOLOGY AND IMMUNOCHEMISTRY, Vol. II,
Williams, C.A. and Chase, M.W. (eds.), 1968, pp.
288-289, Academics Press, NY. Se determinó que el
contenido en proteína era del 99% mediante el ensayo de proteína
BCA TM (Pierce, Rockford, III). La proporción de PRP con respecto a
la proteína era de 0,1. El diámetro medio de partícula resultante
era de 0,080 \mum.
Ejemplo
3
Se prepararon las microesferas utilizando una
proteína radiomarcada (seroalbúmina bovina, BSA) y un polímero
radiomarcado (PEG). Se midió la liberación de la radioactividad en
función del tiempo.
Las microesferas se prepararon mediante la
combinación de la proteína radiomarcada (10 mg/ml de
^{[14]}C-BSA, NEN, Boston, Mass.) con dos
volúmenes de una solución polimérica que contenía un 25% de PVP
(40.000 dalton) y un 25% de ^{[3]}H-PEG (3.500
dalton, NEN, Boston, Mass.), pH 5,0. Se incubó la mezcla durante 30
minutos a 37ºC, 30 minutos a 58ºC y 30 minutos a 70ºC, provocando
la formación de microesferas. Las partículas fueron recogidas por
centrifugación.
La proteína y el polímero se liberaron
lentamente de las microesferas mediante la adición de 500 ml de una
solución salina tamponada de fosfato (pH 7,4) e incubación de la
mezcla a 37ºC, mientras se agitaba suavemente en un agitador
Nutator TM. En distintos momentos, las partículas fueron
precipitadas por centrifugación a 8.000 rpm durante 10 minutos, se
eliminó el sobrenadante con una pipeta y se sometió a prueba la
radioactividad mediante la adición de un fluido de escintilación
líquida y recuento en un contador de escintilación de líquidos.
Entonces se resuspendieron las partículas en 500 ml de una solución
salina tamponada de fosfato (pH 7,4) y se repusieron a 37ºC con
rotación suave hasta el siguiente momento. La cinética de liberación
de la proteína y el polímero radiomarcados durante la incubación a
37ºC se muestra en la Fig. 1.
Las microesferas fueron preparadas y sometidas a
ensayo en cuanto a su liberación tal como se ha descrito
anteriormente, sin embargo, se utilizaron tres concentraciones
distintas de polímero, y las microesferas se formaron por
incubación a 58ºC. En la primera preparación, se utilizó un 25% de
PEG y un 25% de PVP. En la segunda preparación, se utilizó un 20%
de PEG y un 20% de PVP. En la tercera preparación, se utilizó un
12,5% de PEG y un 12,5% de PVP. Se muestra en la Fig. 2 la cinética
de liberación de la proteína radiomarcada. La cinética de
liberación del polímero radiomarcado se muestra en la Fig. 3.
Las microesferas fueron preparadas y sometidas a
ensayo una vez más en cuanto a su liberación tal como se ha
descrito anteriormente, se utilizaron tres concentraciones distintas
de polímero y las microesferas se formaron por incubación a 58ºC,
70ºC, tanto a 37ºC como a 58ºC y tanto a 37ºC como a 70ºC. La
cinética de liberación de la proteína radiomarcada se muestra en la
Fig. 4. La cinética del polímero radiomarcado se muestra en la Fig.
5. La liberación de PEG radiomarcado en función de la concentración
de polímero se muestra en la Fig. 6.
Ejemplo
4
Las microesferas que contienen ADN fueron
preparadas y transfectadas en células de fibroblastos. Las
microesferas fueron analizadas en cuanto a la eficacia de
transfección y expresión de la proteína.
Una parte alícuota de 0,025 ml de una solución
de 1 mg/ml de un ADN de plásmido (pCMV beta Gal, Promega, Milwaukee,
Wis.) fue complejada con 0,025 ml de una solución de 5,0 mg/ml de
poli-L-lisina que tenía un rango de
peso molecular medio situado entre 1 kDa y 40 kDa (Sigma Chemical
Co., St. Louis, Mo.).
Se añadió al complejo de ADN de
plásmido-poli-L-lisina,
mientras se sometía a rotación, 0,1 ml de una solución de un 25%
(peso/volumen) de polivinilpirrolidona (peso molecular medio de 40
kDa, Spectrum, Gardena, Calif.) y un 25% (peso/volumen) de
polietilenglicol (peso molecular medio de 3,35 kDa, Spectrum,
Gardena, Calif.) en acetato de sodio 0,1M, pH 5,5.
Se incubó la mezcla a 37ºC durante 30 minutos y
luego a 70ºC durante 30 minutos. Se formaron microesferas que
contenían ADN. Se centrifugó la mezcla a 17.500 x g durante 10
minutos, se aspiró el sobrenadante y se lavaron tres veces las
partículas con 0,3 ml de glicerol al 10% (volumen/volumen) en agua
desionizada. Se resuspendieron las microesferas en 0,050 ml de agua
desionizada. Las microesferas que contenían ADN se aplicaron a
células fibroblastos NIH3T3 y se incubaron hasta 24 horas para
permitir la captación de las microesferas por las células. La
captación finalizó al lavar las células tres veces con una solución
salina tamponada de fosfato (PBS/Ca[2+] + Mg[2+]
-libre) (GIBCO-BRL, Gaithersburg, Md.) y la adición
de Medio Mínimo Esencial de Dulbecco (DMEM,
GIBCO-BRL, Gaithersburg, Md.).
La captación y expresión del ADN pCMV beta Gal
fueron sometidas a ensayo en cuanto a la eficacia de la transfección
y la cantidad de enzima beta-galactosidasa
expresada. La eficacia de transfección fue determinada por la
fijación de las células y el desarrollo del color con el substrato
de la enzima beta-galactosidasa
X-Gal
(5-bromo-4-cloro-3-indolil-beta-D-galactopiranósido,
GIBCO-BRL, Gaithersburg, Md.). La cantidad de
enzima beta-galactosidasa expresada se determinó
mediante lisis de las células transfectadas y medida de la
actividad enzimática total con el substrato de la enzima
beta-galactosidasa CPRG (rojo de
clorofenol-beta-D-galactopiranósido,
Boehringer Mannheim, Indianapolis, Ind.).
La cantidad de enzima
beta-galactosidasa expresada procedente de las
células lisadas que fueron transfectadas mediante la utilización
de: 1) ADN desnudo (ninguna adición); 2) liposomas catiónicos más
ADN; ó 3) la microesfera que contiene el ADN, preparada tal como se
ha descrito anteriormente, se muestra en la Fig. 7.
Ejemplo
5
Se prepararon microesferas que contenían el
péptido acetato de leuprolide y seroalbúmina humana. El acetato de
leuprolide es un análogo genérico de la hormona liberadora de la
hormona luteinizante, que es un péptido utilizado esencialmente en
el tratamiento del cáncer de próstata.
Se añadió una parte alícuota de 0,010 ml de una
solución de 10-100 mg/ml de acetato de leuprolide en
agua (LHRH, TAP Pharmaceuticals, Deerfield, III) a 0,168 ml de una
solución del 2-10% (peso/volumen) de sulfato de
dextrano en agua (peso molecular medio 500 kDa), y se mezcló
suavemente la solución. A la solución de leuprolide/dextrano se
añadieron 0,856 ml de una parte alícuota de una solución que
contenía un 25% (peso/volumen) de polietilenglicol con un peso
molecular medio de 3,35 kDa (Spectrum, Gardena, Calif.) y un 25%
(peso/volumen) de polivinilpirrolidona con un peso molecular medio
de 40 kDa, en solución acuosa 0,1M de acetato de sodio, pH 5,5. Se
mezcló suavemente la solución resultante y se dejó reposar hasta
durante 30 minutos. Una parte alícuota de 0,25 ml de una solución
al 20% (peso/volumen) de seroalbúmina humana (Sigma Chemical Co.,
St. Louis, Mo.) en agua se añadió entonces a la solución. Se mezcló
suavemente la solución final y se colocó en un baño de agua a 70ºC
hasta 90ºC durante un período de tiempo entre 30 minutos y 3 horas.
Se formaron las microesferas.
Las microesferas fueron recogidas por
centrifugación a 17,5 K x g durante 10 minutos, se lavaron con 0,5
ml de H_{2}O desionizada y se recogieron de nuevo mediante
centrifugación.
Se prepararon partículas estériles empleando el
procedimiento anteriormente mencionado y mediante filtración
estéril de todas las soluciones antes de su uso y conducción de
todas las manipulaciones en tubo abierto en una cabina de cultivo
de tejido de flujo laminar.
La liberación in vitro del acetato de
leuprolide se midió mediante centrifugación de las microesferas y
la resuspensión en un medio salino de liberación tamponado con
fosfato. Se muestra la cinética de liberación en la Fig. 8.
Las microesferas estaban compuestas de
aproximadamente un 10% de acetato de leuprolide, un 50% de
seroalbúmina humana, un 20% de sulfato de dextrano y un 20% de
polietilenglicol/polivinilpirrolidona.
Se prepararon partículas similares que incluían
también sulfato de zinc o ácido caprílico, los cuales retardaron la
liberación de la proteína y del péptido desde las microesferas.
\vskip1.000000\baselineskip
Ejemplo
6
Se prepararon microesferas de seroalbúmina
bovina por medio de una mezcla de polímeros de polietilenglicol y
poloxámero 407. Se disolvieron 1,25 gramos polietilenglicol (PM
3.550, Sigma Chemical Co., St. Louis, Mo.) y poloxámero 407 (BASF,
Parsippany, N.J.) en 100 ml de un tapón de acetato de sodio 0,1N, pH
5,5, para elaborar una solución al 12,5%. Se disolvió una solución
de 10 mg/ml de seroalbúmina bovina (BSA, Fraction V, Sigma Chemical
Co.) en H_{2}O desionizada. Una parte alícuota de 400 ml de la
solución de BSA se combinó con 800 ml de la solución de polímero.
Se agitó la mezcla. Se formó una solución transparente. Se calentó
la solución hasta 70ºC durante 30 minutos. Se observó la formación
de partículas por la presencia de una suspensión blanca
lechosa.
La solución de polímero residual fue eliminada
por centrifugación a 12.500 rpm durante 10 minutos y luego mediante
decantación del disolvente. Se realizaron dos etapas de lavado y
centrifugación con etanol al 10% en agua para eliminar el polímero
residual adicional.
\vskip1.000000\baselineskip
Ejemplo
7
Se prepararon microesferas de seroalbúmina
bovina mediante la utilización de dextrano.
Se disolvieron 12,5 g de dextrano (PM 500.000,
Sigma Chemical Co., St. Louis, Mo.) en 100 ml de un tampón de
acetato de sodio 0,1M, pH 5,0, para elaborar una solución al 12,5%.
Se disolvió la seroalbúmina bovina (BSA, Sigma Chemical Co.) en
H_{2}O desionizada a una concentración de 10 mg/ml. Se colocó una
parte alícuota de 400 ml de la solución de BSA en un tubo de
microcentrifugación de 1,5 ml. Se añadió a la solución de BSA una
parte alícuota de 800 ml de la solución polimérica de dextrano. Se
agitó la solución. Se formó una solución transparente. Se colocó el
tubo de microcentrifugación en un baño de agua a 70ºC durante 30
minutos. Se observó una suspensión blanca lechosa que indicaba la
formación de microesferas.
La solución polimérica de dextrano residual fue
eliminada por centrifugación a 12.500 rpm durante 10 minutos y
luego mediante decantación del disolvente. Se realizaron dos etapas
de lavado y centrifugación con etanol al 10% en agua para eliminar
el polímero residual adicional. Las micrografías electrónicas de
exploración revelaron la formación de microesferas del tamaño de
una submicra, a menudo dispuestas en una estructura parecida a un
hebra.
\vskip1.000000\baselineskip
Ejemplo
8
Se prepararon microesferas de seroalbúmina
bovina mediante la utilización del polímero Eudragit® E100. Este
polímero es soluble en un disolvente orgánico miscible con agua.
Se disolvió el polímero Eudragit® E100 (Rohm,
Malden, Mass.) en una solución 1:1 de tampón de acetato de sodio
0,1M (pH 5,0) y etanol. El pH final de la solución era de 6,5. Una
parte alícuota de 400 ml de una solución de 10 mg/ml de
seroalbúmina bovina (BSA, Sigma Chemical Co. St. Louis, Mo.) se
combinó con 800 ml de la solución del polímero Eudragit® E100. Se
formó una solución transparente. La solución BSA/polímero se incubó
en un baño de agua a 70ºC durante 30 minutos. Se observó una
suspensión blanca lechosa que indicaba la formación de
microesferas. Las partículas se recogieron por centrifugación
durante 10 minutos a 8.000 rpm y decantación del líquido.
\vskip1.000000\baselineskip
Ejemplo
9
Se prepararon microesferas de insulina mediante
la utilización del polímero dextrano.
Se disolvió una solución al 20% (peso/peso) de
polímero dextrano (PM 500.000, Sigma Chemical Co., St. Louis, Mo.)
en un tampón de acetato de sodio pH 5,0. Se añadieron 1,9 ml de
H_{2}O desionizada a 20,5 mg de insulina (Sigma Chemical Co.). Se
añadieron 100 ml de HCl 0,2M para disolver la insulina. Se colocó en
un tubo de prueba una parte alícuota de 400 ml de la solución de
insulina. Se añadió una parte alícuota de 800 ml de la solución de
dextrano a la solución de insulina. Se agitó la mezcla. Al añadir la
solución de dextrano la mezcla se volvió turbia. Se calentaron los
tubos hasta una temperatura final de 70ºC ó 90ºC para formar
microesferas de insulina. Se centrifugaron las microesferas a
10.000 rpm durante 5 minutos y se decantó el líquido para eliminar
el polímero residual. Se lavaron las microesferas con etanol al 10%
en agua.
Se colocaron las microesferas en una solución
salina tamponada de fosfato pH 7,4 para determinar las
características de disolución. Las partículas de insulina formadas
a una temperatura final de 90ºC no se disolvieron en la solución
salina tamponada de fosfato, mientras que las partículas de insulina
preparadas a una temperatura final de 70ºC se disolvieron en 15
minutos. Por tanto, la estabilidad de las partículas de insulina
puede ajustarse variando la temperatura de incubación empleada
durante la formación de partículas.
\vskip1.000000\baselineskip
Ejemplo
10
Se prepararon microesferas de seroalbúmina
humana mediante la utilización de nueve polímeros distintos o
mezclas de polímeros.
Se preparó una solución proteica
(1-5% de seroalbúmina humana, pH
4,5-5,5 o de seroalbúmina bovina) en un tampón. Se
prepararon las siguientes soluciones poliméricas:
polietilenglicol/polivinilpirrolidona (PEG 3 kDa/PEG 40 kDa en una
mezcla 1:1); hetalmidón (500 kDa); polímero Pluronic
L-101^{TM}; dextrano (3-500 kDa);
sulfato de dextrano (3-500 kDa);
polivinilpirrolidona (10-360 kDa);
polietilenglicol/polivinilpirrolidona con inulina (un
polisacárido); polietilenglicol/polivinilpirrolidona con el polímero
Pluronic L-101^{TM}; dextrano con el polímero
Pluronic L-101^{TM}. Se mezcló aproximadamente un
volumen de solución proteica con dos volúmenes de solución
polimérica. Se incubó la mezcla en un baño de agua a 70ºC hasta 90ºC
durante treinta minutos. Luego se colocó la mezcla en un baño de
hielo. Se observó la formación de microesferas.
Se centrifugaron las microesferas hasta que se
compactaron en un gránulo, se decantó el sobrenadante y se lavó el
gránulo dos veces en etanol al 10% en solución acuosa para eliminar
la solución polimérica residual. Luego se lavaron tres veces las
microesferas con agua desionizada. Las microesferas se utilizaron o
sometieron a prueba inmediatamente o se liofilizaron para su
posterior uso.
Las microesferas preparadas mediante la
utilización de polímeros que tienen un peso molecular más alto o
una concentración más alta de polímeros proporcionan un medio más
viscoso, lo cual produce una distribución del tamaño de las
microesferas más uniforme. La inclusión de un agente tensioactivo
tal como el polímero Pluronic L-101^{TM} o de una
mezcla durante la formación de las microesferas afectó al tamaño de
éstas. Un incremento en la concentración de proteína durante la
formación de las microesferas provocó un aumento en la
incorporación de proteína en las microesferas. En general, un
incremento en el tamaño del polímero provocó un aumento en la
incorporación de proteína en las microesferas. La utilización de
distintos polímeros afectó a la cinética de liberación. Por
ejemplo, las microesferas de seroalbúmina bovina (BSA) preparadas
utilizando dextrano liberaron aproximadamente un 15% menos de BSA
que las microesferas preparadas utilizando PEG/PVP. Sin embargo, la
liberación de polisacárido por las microesferas de
proteína-polisacárido, tal como la liberación de
^{[3]}H-inulina por las microesferas de
seroalbúmina humana/inulina fue más rápida cuando se empleó
dextrano en lugar de PEG/PVP.
\vskip1.000000\baselineskip
Ejemplo
11
Se prepararon microesferas de proteína que
contenían el medicamento acetato de nafarelina.
El acetato de nafarelina se emplea para el
tratamiento de la endometriosis, pubertad precoz y el cáncer de
próstata.
Se prepararon microesferas de seroalbúmina
humana tal como se ha descrito anteriormente en el Ejemplo 10
utilizando nueve polímeros distintos o mezclas de polímeros. Se
disolvió acetato de nafarelina (Rocher Laboratories, Nutley, N.J.)
en agua desionizada para producir 10 mg/ml de una solución.
A 1 mg de acetato de nafarelina se añadieron 10
mg de las microesferas de seroalbúmina humana. Se agitó la mezcla y
se mezcló durante 16 horas a 4ºC. Se añadió a la mezcla una
disolución de sulfato de amonio 3M hasta una concentración final de
0,5M y se agitó y mezcló durante 15 minutos a temperatura ambiente.
Se añadió una disolución de sulfato de zinc 1M hasta una
concentración final de 0,01M; 0,1M ó 1M y se agitó y mezcló durante
1 hora a temperatura ambiente.
Se centrifugaron las mezclas, se decantó el
sobrenadante y se resuspendió el gránulo en agua desionizada tres
veces para lavar las microesferas.
La adición de sulfato de zinc redujo la
velocidad de liberación del acetato de nafarelina por las
microesferas de seroalbúmina humana. Se muestran los resultados en
la Fig. 9.
Ejemplo
12
Se prepararon microesferas de seroalbúmina
humana que contenían doxorrubicina, medicamento
quimioterapéutico.
A 1 ml de una solución de 250 mg/ml de
seroalbúmina humana (Sigma, St. Louis, Mo.) en H_{2}O desionizada
se añadieron 0,05 ml de una solución de 5 mg/mL de doxorrubicina
(Sigma Chemical Co., St. Louis, Mo.) en H_{2}O desionizada, se
mezcló la solución combinada y se dejó reposar a temperatura
ambiente durante 30 minutos. A la solución anterior, se añadieron
3,0 ml de una solución de 200 mg/ml de sulfato de dextrano (PM
500.000, Sigma Chemical Co., St. Louis, Mo.) en H_{2}O
desionizada y la solución resultante se mezcló e incubó a 37ºC
durante 30 minutos. Luego se incubó la solución a 70ºC durante 30
minutos, después de lo cual se añadió 1,0 ml de acetato de sodio
3M, pH 5,0, y se mezcló la solución resultante. Luego se incubó la
solución a 90ºC durante 30 minutos. Se formaron microesferas. Se
lavaron dos veces las microesferas con 5,0 ml de H_{2}O
desionizada.
Ejemplo
13
La hormona liberadora de la hormona luteinizante
se incorporó en microesferas compuestas de seroalbúmina humana y
microesferas de sulfato de dextrano.
A 0,168 ml de una solución al 10% (peso/volumen)
de sulfato de dextrano (PM medio 500.000, Sigma Chemical Co., St.
Louis, Mo.) en H_{2}O desionizada se añadieron 0,25 ml de una
solución al 20% (peso/volumen) de seroalbúmina humana (Sigma
Chemical Company, St. Louis, Mo.) en H_{2}O desionizada. Se mezcló
suavemente la solución y se añadieron 0,856 ml de una solución de
polietilenglicol al 25% (peso/volumen) (PM medio 3,35 kDa,
Spectrum, Gardena, Calif.) y polivinilpirrolidona al 25%
(peso/volumen) (PM medio 40 kDa, Spectrum, Gardena, Calif.) en una
solución acuosa de acetato de sodio 0,1M, pH 5,5.
Se mezcló suavemente la solución resultante y se
colocó en un baño de agua a una temperatura entre 70ºC y 90ºC
durante 30 minutos a 3 horas. Se formaron microesferas. Las
microesferas se recogieron mediante centrifugación a 17,5K x g
durante 10 minutos, se resuspendieron para su lavado en 0,5 ml de
H_{2}O desionizada y se volvieron a recoger mediante
centrifugación. Se resuspendieron las microesferas en 0,3 ml de una
solución de acetato de sodio 0,1M, pH 5,5. Se añadió una parte
alícuota de 0,01 ml de una solución de 10 mg/ml de una hormona
liberadora de la hormona luteinizante (LHRH, Sigma Chemical Co., St.
Louis, Mo.) en H_{2}O desionizada y se incubó durante 16 horas a
temperatura ambiente para que el péptido de LHRH pudiera unirse a
las microesferas. Después de la incubación de unión de 16 horas, se
eliminó el péptido de LHRH no unido mediante dos ciclos de lavado
con H_{2}O desionizada y se recogió por centrifugación. El
rendimiento de incorporación de LHRH fue típicamente del 83 al
90%.
Ejemplo
14
Se formaron microesferas de seroalbúmina humana
mediante la combinación del 12,5% en peso de polietilenglicol y del
12,5% en peso de polivinilpirrolidona en tampón de acetato de sodio
50 mM, pH 5,3, y con un 1% (peso/volumen) de seroalbúmina humana
disuelta en solución acuosa. Se colocó la solución a 70ºC durante 30
minutos. Se formaron las microesferas y precipitaron en la
solución. La suspensión de microesferas se lavó 3 veces en agua
desionizada. Luego se cargó estradiol en las microesferas de
seroalbúminaahumano a 3 porcentajes en peso distintos de carga. Se
disolvió el estradiol en etanol y se incubó en presencia de las
microesferas de albúmina. La afinidad del estradiol para la
albúmina por medio de interacciones hidrofóbicas resultó en la
capacidad de cargar el estradiol a varios porcentajes en peso de
carga. Las microesferas que contenían estradiol en un 10% en peso
contenían 1 mg de estradiol y 8,33 mg de seroalbúmina humana (HSA).
Las microesferas que contenían estradiol en un 49% en peso
contenían 8,15 mg de estradiol y 8,33 mg de HSA. Las microesferas
que contenían estradiol en un 77% en peso contenían 27,68 mg de
estradiol y 8,33 mg de HSA.
Las microesferas se liberaron en una solución
salina tamponada de fosfato (PBS) a pH 7,4.
Todas las muestras fueron sometidas a rotación a
20 rpm a 37ºC para asegurar una mezcla constante. Se añadió un (1)
ml de PBS a las microesferas, que se colocaron en tubos de
centrifugación estándar de polipropileno. En cada momento, los
tubos fueron centrifugados, el sobrenadante eliminado y se colocó 1
ml del medio de liberación en un vial de muestras. Cada muestra de
1 ml se secó a vacío rápido y se resuspendió en 200 \mul de
etanol. El estradiol liberado fue medido por HPLC.
La liberación prolongada de estradiol se muestra
en la Fig. 10.
Se demostró también la liberación prolongada de
estradiol in vivo. Se inyectaron las microesferas en cinco
perros y las concentraciones de suero resultantes se determinaron
mediante un radioinmunoensayo para estradiol. Se muestran los
resultados en la Figura 11. Los tres grupos compuestos de cinco
perros incluían todos un control de estradiol, que resultó en las
concentraciones más bajas y la vida media más corta in vivo.
El ProMaxx®, que son las microesferas de albúmina cargadas con
estradiol, básicamente produjo concentraciones más altas de
estradiol en plasma, con una vida media notablemente más larga. Y
cuando las microesferas con estradiol fueron estabilizadas
químicamente con EDC (etil dimetilaminopropil carbodiimida), se
observaron mayores niveles prolongados en plasma y un aumento de la
vida media del estradiol durante un período de 43 días.
Ejemplo
15
Se formaron microesferas de seroalbúmina bovina
mediante la combinación de un 12,5% en peso polietilenglicol y un
12,5% en peso de polivinilpirrolidona en tampón acetato de sodio 50
mM a un pH 5,3 y con seroalbúminaabovino disuelta en solución
acuosa. Se colocó la solución a 70ºC durante 30 minutos. Se formaron
las microesferas y precipitaron en la solución. La suspensión de
microesferas se lavó 3 veces en agua desionizada.
El medicamento antiinflamatorio no esteroide,
diclofenaco-Na, se unió a las microesferas de
albúmina mediante manipulación del grado de ionización del
diclofenaco-Na alterando el pH de las soluciones de
incubación. La eficacia de la incorporación de
diclofenaco-Na podría ser optimizada hasta la
incorporación de un 65% mediante el ajuste de las condiciones de
incubación a un pH que se muestra en la Fig. 12.
Ejemplo
16
El acetato de leuprolida es un análogo de la
hormona liberadora de la hormona luteinizante.
Se añade una solución acuosa de albúmina (por
ejemplo, seroalbúmina humana, bovina, de ratón o de rata) a una
solución acuosa de agente aniónico complejante (sulfato de dextrano
de peso molecular (PM) 10 kDa a 500 kDa o heparina o heparan
sulfato o ácidos poliglutámico o poliaspártico) con o sin una
solución acuosa de cationes divalentes (calcio o magnesio o zinc) a
temperatura ambiente y se agita la mezcla resultante durante un
período de tiempo de 5 minutos a 3 horas. A esta mezcla se añade
luego una solución acuosa de polímero (polietilenglicol (PEG) de PM
3,5 a 40 kDa; polivinilpirrolidona (PVP) de PM 6 a 40 kDa, o mezclas
de ambos PEG y PVP, o almidón o hidroxietilalmidón de PM 500 kDa).
La concentración de albúmina en la mezcla final es de
5-30 g/l, la de agente iónico complejante de
5-30 g/l, la de cationes divalentes de
0-30 g/l y la concentración de polímero es de 100
g/l a 400 g/l. Se agita la mezcla durante un período de 5 minutos a
6 horas a temperatura ambiente. La temperatura de la mezcla se
eleva luego a una entre 37ºC y 50ºC durante un período de 5 minutos
a 3 horas. Las microesferas son sometidas a estabilización mediante
la adición de un estabilizante químico (EDC u otro agente
enlazante) o a estabilización térmica mediante calentamiento a una
temperatura situada entre 70ºC y 100ºC durante un período de 0,5 a
6 horas. La mezcla es sometida al estabilizante durante un período
de 10 minutos a 16 horas o para la estabilización térmica se
mantiene la temperatura al valor final durante 10 minutos a 6
horas. Luego se recogen las microesferas y se separan de los
componentes no incorporados de la mezcla de reacción mediante
filtración o centrifugación, con lavado posterior, o mediante
diafiltración. La incorporación de acetato de leuprolida a las
microesferas se lleva a cabo mediante la adición de una solución
acuosa de la solución de leuprolida a una suspensión acuosa de
microesferas. Las concentraciones de microesferas son de
1-50 g/l, las de acetato de leuprolida son de
1-100 g/l, en un medio acuoso tamponado
0-100 mM a un pH entre 2,5 y 10,0. Después de la
incubación del acetato de leuprolida con la suspensión de
microesferas durante 5 minutos hasta 8 horas a
5-50ºC, las microesferas que contienen el péptido se
lavan por medio de los métodos descritos anteriormente para
eliminar el péptido no unido. En algunos casos, las microesferas
que contienen el péptido se someten a otra estabilización mediante
la exposición reiterada a estabilizantes químicos, tal como se ha
descrito anteriormente, y luego se lavan para eliminar el péptido no
unido. Las microesferas finales que contienen el péptido son
resuspendidas luego en agua o liofilizadas. Se determina su eficacia
farmacéutica mediante la utilización de un modelo farmacodinámico,
en ratas, de supresión de testosterona durante períodos de 7 a 180
días. Microesferas que contienen acetato de leuprolida fabricadas de
acuerdo con el método anterior se inyectan en ratas y se detecta el
acetato de leuprolida en el suero durante 7 hasta 120 días. Se
suprime la testosterona del suero de rata en las ratas inyectadas
con microesferas que contienen acetato de leuprolida durante 7
hasta 120 días. Estos resultados evidencian la liberación prolongada
de acetato de leuprolida fisiológicamente activo durante ese
período de tiempo.
Ejemplo
17
Los ejemplos siguientes ilustran las condiciones
específicas para formar las microesferas preferentes de la
invención. Se debe entender que las concentraciones, tiempos y pHs
pueden variar dentro de un rango experimental razonable y siguen
resultando en microesferas que tienen las características descritas
más adelante. Tal como se ha descrito en la descripción detallada
de la invención, es preferente añadir metal divalente
(preferentemente calcio o magnesio) durante el proceso de formación
y que esta condición del metal tenga lugar dentro de los 30 minutos
a partir de la adición de los demás componentes que se utilizan para
la formación de las microesferas. Se proporcionan a continuación
más detalles con respecto al procedimiento de formación de
microesferas.
A 1 volumen de una solución al 25%
(peso/volumen) de sulfato de dextrano (PM medio 500 kDa) se añaden
aproximadamente 2 volúmenes de una solución al 25% (peso/volumen)
de albúmina (humana) y se agita la mezcla suavemente durante al
menos 5 minutos. En esta mezcla se agitan suavemente aproximadamente
6 volúmenes de una solución al 36% (peso/volumen) de hetalmidón en
acetato de Na 63 mM acuoso y a esta solución de hetalmidón se añade
agua mientras se sigue agitando suavemente. Se agita suavemente la
solución resultante durante al menos 5 minutos, momento en el cual
se añade lentamente la mezcla de sulfato de
dextrano-albúmina. A esta mezcla, se añade un
volumen adecuado de una disolución de CaCl_{2}, ZnCl_{2} ó
MgCl_{2} 1,5M para elaborar una mezcla final que contiene 25 mM o
100 mM de catión metálico. Esta mezcla se agita suavemente de manera
constante. La temperatura de la mezcla de reacción se aumenta
entonces hasta una temperatura final de 60-90ºC
durante un período de 50-60 minutos. Se mantiene la
temperatura de la mezcla a 60-90ºC durante
30-120 minutos, momento en el cual se añade un
igual volumen de una solución MES-Na^{+} 25 mM
(ácido N-morfolinetanosulfónico) a temperatura
ambiente, pH 6,0 \pm 0,5 mientras se sigue agitando. Luego las
microesferas formadas se someten a diafiltración contra 1 vol de
MES 25 mM, pH 6,0 \pm 0,5. Entonces, las microesferas son
concentradas y diafiltradas contra 9 volúmenes de MES 25 mM, pH 6,0
\pm 0,5 a temperatura ambiente. La carga y la diafiltración se
llevan a cabo a un pH de 4,5 \pm 0,5 en el caso de microesferas
que contienen Zn^{2+}. Las microesferas son concentradas por
diafiltración. A la suspensión de microesferas que contiene 17,1 g
de albúmina (humana) se añade una solución de 3,43 g de acetato de
leuprolida en MES 25 mM, pH 6,0, a una velocidad de 0,4 litros por
minuto. La adición de la solución de leuprolida es seguida de la
adición de la solución de MES a la suspensión de microesferas de
acetato de leuprolida. Se mezcla la suspensión durante 15 minutos a
temperatura ambiente, momento en el cual se concentra la suspensión
mediante diafiltración. A esta suspensión se añade una solución de
17,14 g de EDC
((3,3-etildimetilaminopropil)carbodiimida) en
MES 25 mM, pH 6,0 \pm 0,5, a 0,4 litros por minuto. Se incuba la
suspensión a temperatura ambiente mientras se agita durante 180
minutos, después de lo cual es diafiltrada contra 10 volúmenes de
agua destilada y es concentrada por diafiltración. El contenido en
acetato de leuprolida de la suspensión se determina al añadir y
diluir una solución al 50% (peso/volumen) de sacarosa en agua para
que la suspensión final sea de aproximadamente
3,75-4,025 mg/ml de acetato de leuprolida en
sacarosa al 5% (peso/volumen). Esta suspensión bruta se rellena
luego en un vial en una cantidad de 2,0 ml por vial y se
liofiliza.
Características de carga: las microesferas que
contienen Mg^{2+} y Ca^{2+} se unen al medicamento a un alto
rendimiento (> 90%), mientras que las microesferas que contienen
Zn^{2+} se unen al medicamento a un rendimiento inferior al
70%.
Las microesferas que contenían Mg^{2+} y
Ca^{2+} tenían velocidades similares de liberación de leuprolida
que no variaban con la concentración de catión metálico presente
durante la fabricación de las microesferas. Con 25 mM de Zn^{2+},
la velocidad de liberación era similar a la de las microesferas que
contenían Ca^{2+} y Mg^{2+}, pero con 100 mM de Zn^{2+}, la
magnitud de la fase inicial de "explosión" era superior.
En las ratas, a una dosificación idéntica de
medicamento, las microesferas que contenían Ca^{2+} y Mg^{2+}
suprimieron la testosterona del suero hasta niveles de castración
durante al menos 4 semanas. Las microesferas que contenían
Zn^{2+} no suprimieron la testosterona durante siquiera tres
semanas en el modelo de rata.
Claims (23)
1. Microesfera que comprende:
- (1)
- una proteína portadora;
- (2)
- un polímero soluble en agua;
- (3)
- un primer agente complejante que es un polisacárido polianiónico y
- (4)
- un segundo agente complejante que es un catión metálico divalente seleccionado de entre el grupo consistente en calcio y magnesio
caracterizada porque,
excluyendo una microesfera la proteína portadora es albúmina, el
polímero soluble en agua es polietilenglicol (PEG),
polivinilpirrolidona (PVP), mezclas de ambos, almidón o
hidroxietilalmidón; el primer agente complejante que es un
polisacárido polianiónico es sulfato de dextrano, heparina o sulfato
de heparina; y el segundo agente complejante que es un catión
metálico divalente es calcio o
magnesio.
2. Microesfera según la reivindicación 1,
caracterizada porque la proteína portadora es una albúmina o
una inmunoglobulina.
3. Microesfera según cualquiera de las
reivindicaciones anteriores, caracterizada porque la proteína
se selecciona de entre el grupo consistente en las proteínas
portadoras de la Tabla 1.
4. Microesfera según cualquiera de las
reivindicaciones anteriores, caracterizada porque la
microesfera contiene del 40 a menos del 100% de proteína.
5. Microesfera según la reivindicación 1,
caracterizada porque el polímero soluble en agua es un
polímero basado en un hidrocarburo.
6. Microesfera según la reivindicación 1,
caracterizada porque el polímero soluble en agua es un
hidroxietilalmidón.
7. Microesfera según cualquiera de las
reivindicaciones anteriores, caracterizada porque el polímero
soluble en agua se selecciona de entre el grupo consistente en los
polímeros solubles en agua de la Tabla 2, preferentemente un
polímero basado en un hidrocarburo y en especial hetalmidón.
8. Microesfera según la reivindicación 1,
caracterizada porque el polisacárido polianiónico se
selecciona de entre el grupo consistente en sulfato de dextrano,
ácidos galacturónicos, alginatos, ácido manurónico, ácido
gulurónico, ácido hialurónico, sulfatos de condroitina, heparina,
quitina, quitosano, glicosaminoglicanos, proteoglicanos y agentes
complejantes catiónicos (es decir agentes complejantes que tienen
una carga positiva).
9. Microesfera según la reivindicación 1,
caracterizada porque el polisacárido polianiónico es sulfato
de dextrano.
10. Microesfera según la reivindicación 1,
caracterizada porque el catión metálico divalente es
calcio.
11. Microesfera según la reivindicación 1,
caracterizada porque el catión metálico divalente es
magnesio.
12. Microesfera según la reivindicación 1,
caracterizada porque la microesfera tiene una superficie lisa
que incluye múltiples orificios acanalados, teniendo cada uno de
dichos orificios acanalados un diámetro que es inferior a 1.000
angstroms.
13. Microesfera según la reivindicación 1,
caracterizada porque la microesfera no contiene aceites o
disolventes orgánicos detectables.
14. Microesfera según la reivindicación 1, que
comprende además un agente terapéutico.
15. Microesfera según cualquiera de las
reivindicaciones anteriores, caracterizada porque el agente
activo se selecciona de entre el grupo consistente en los agentes
activos de la Tabla 4, preferentemente hormona liberadora de la
hormona luteinizante (LH-RH) o un análogo de la
misma, preferentemente leuprolida.
16. Microesfera según cualquiera de las
reivindicaciones anteriores, caracterizada porque la
macromolécula es albúmina, preferentemente seroalbúmina humana y el
polímero soluble en agua es un polímero basado en un hidrocarburo,
preferentemente hetalmidón.
17. Microesfera según cualquiera de las
reivindicaciones anteriores, que comprende además un agente
complejante, preferentemente sulfato de dextrano y un agente
activo, preferentemente acetato de leuprolida.
18. Jeringuilla que contiene un única dosis de
las microesferas según cualquiera de las reivindicaciones
anteriores, caracterizada porque la jeringuilla
preferentemente incluye además una aguja que tiene un tamaño de
diámetro interior de calibre 14 a 30.
19. Método para formar una microesfera según las
reivindicaciones 1 a 17, que comprende:
- (1)
- la formación de una mezcla acuosa que contiene:
- (a)
- una proteína portadora;
- (b)
- un polímero soluble en agua;
- (c)
- un primer agente complejante que es un polisacárido polianiónico; y
- (d)
- un segundo agente complejante que es un catión metálico divalente seleccionado de entre el grupo consistente en calcio y magnesio;
- (2)
- dejar que las microesferas se formen en la mezcla acuosa; y
- (3)
- estabilizar las microesferas, preferentemente poniendo en contacto las microesferas con un agente reticulante y/o exponiendo las microesferas a una fuente de energía, preferentemente calor, en condiciones suficientes para estabilizar las microesferas.
20. Método según la reivindicación 19,
caracterizado porque la formación de la mezcla acuosa se
lleva a cabo mediante la combinación en esencia simultánea de la
proteína portadora, el polímero soluble en agua, el primer agente
complejante y el segundo agente complejante.
21. Método según la reivindicación 19, que
comprende además el paso de:
- (4)
- poner en contacto la microesfera con una solución de un agente activo, preferentemente un agente activo de la Tabla 4, en especial una hormona liberadora de la hormona luteinizante o un análogo de la misma, y, en particular leuprolida, para incorporar el agente activo en la microesfera.
22. Método según la reivindicación 21,
caracterizado porque el paso de poner en contacto la
microesfera con la solución del agente activo resulta en un
rendimiento de incorporación de al menos el 60%, preferentemente de
al menos el 70%, al menos el 80%, al menos el 90% y en particular de
al menos el 95% o al menos el 98% del agente activo.
23. Método según la reivindicación 19, 20 ó 21,
que comprende además el paso de:
- (5)
- estabilizar las microesferas, preferentemente poniendo en contacto las microesferas con un agente reticulante bajo condiciones suficientes para estabilizar la microesfera.
Applications Claiming Priority (2)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
US09/420,361 US6458387B1 (en) | 1999-10-18 | 1999-10-18 | Sustained release microspheres |
US420361 | 1999-10-18 |
Publications (1)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
ES2286040T3 true ES2286040T3 (es) | 2007-12-01 |
Family
ID=23666151
Family Applications (2)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
ES07011199T Expired - Lifetime ES2341578T3 (es) | 1999-10-18 | 2000-10-12 | Microesferas de liberacion prolongada. |
ES00973477T Expired - Lifetime ES2286040T3 (es) | 1999-10-18 | 2000-10-12 | Microesferas de liberacion prolongada. |
Family Applications Before (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
ES07011199T Expired - Lifetime ES2341578T3 (es) | 1999-10-18 | 2000-10-12 | Microesferas de liberacion prolongada. |
Country Status (7)
Country | Link |
---|---|
US (2) | US6458387B1 (es) |
EP (2) | EP1837018B1 (es) |
AT (2) | ATE364375T1 (es) |
AU (1) | AU1198001A (es) |
DE (2) | DE60035211T2 (es) |
ES (2) | ES2341578T3 (es) |
WO (1) | WO2001028524A1 (es) |
Cited By (1)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
US7931916B2 (en) | 2008-12-23 | 2011-04-26 | Grifols, S.A. | Composition of biocompatible microparticles of alginic acid for the controlled release of active ingredients by intravenous administration |
Families Citing this family (184)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
US7662409B2 (en) | 1998-09-25 | 2010-02-16 | Gel-Del Technologies, Inc. | Protein matrix materials, devices and methods of making and using thereof |
US6458387B1 (en) * | 1999-10-18 | 2002-10-01 | Epic Therapeutics, Inc. | Sustained release microspheres |
US6706034B1 (en) * | 1999-12-30 | 2004-03-16 | Advanced Cardiovascular Systems, Inc. | Process for agent retention in biological tissues |
US6992065B2 (en) | 2000-04-19 | 2006-01-31 | Genentech, Inc. | Sustained release formulations |
US7527807B2 (en) * | 2000-06-21 | 2009-05-05 | Cubist Pharmaceuticals, Inc. | Compositions and methods for increasing the oral absorption of antimicrobials |
AU2001284982A1 (en) * | 2000-08-15 | 2002-02-25 | Board Of Trustees Of The University Of Illinois | Method of forming microparticles |
US7374782B2 (en) | 2000-10-27 | 2008-05-20 | Baxter International Inc. | Production of microspheres |
US20050048126A1 (en) | 2000-12-22 | 2005-03-03 | Barrett Rabinow | Formulation to render an antimicrobial drug potent against organisms normally considered to be resistant to the drug |
US20030072807A1 (en) * | 2000-12-22 | 2003-04-17 | Wong Joseph Chung-Tak | Solid particulate antifungal compositions for pharmaceutical use |
US20030096013A1 (en) * | 2000-12-22 | 2003-05-22 | Jane Werling | Preparation of submicron sized particles with polymorph control |
US9700866B2 (en) | 2000-12-22 | 2017-07-11 | Baxter International Inc. | Surfactant systems for delivery of organic compounds |
US20040022862A1 (en) * | 2000-12-22 | 2004-02-05 | Kipp James E. | Method for preparing small particles |
CA2433353C (en) * | 2000-12-28 | 2017-03-21 | Altus Biologics, Inc. | Crystals of whole antibodies and fragments thereof and methods for making and using them |
US9080146B2 (en) | 2001-01-11 | 2015-07-14 | Celonova Biosciences, Inc. | Substrates containing polyphosphazene as matrices and substrates containing polyphosphazene with a micro-structured surface |
ES2554106T3 (es) | 2001-06-21 | 2015-12-16 | Genentech, Inc. | Formulación de liberación sostenida |
NZ530700A (en) * | 2001-06-21 | 2009-02-28 | Altus Pharmaceuticals Inc | Spherical protein particles and methods of making and using them |
US20080026068A1 (en) * | 2001-08-16 | 2008-01-31 | Baxter Healthcare S.A. | Pulmonary delivery of spherical insulin microparticles |
WO2003015750A1 (en) * | 2001-08-16 | 2003-02-27 | Baxter International, Inc. | Propellant-based microparticle formulations |
AU2002337692B2 (en) | 2001-09-26 | 2007-09-13 | Baxter International Inc. | Preparation of submicron sized nanoparticles via dispersion and solvent or liquid phase removal |
US8101209B2 (en) * | 2001-10-09 | 2012-01-24 | Flamel Technologies | Microparticulate oral galenical form for the delayed and controlled release of pharmaceutical active principles |
AU2002361083A1 (en) * | 2001-12-11 | 2003-06-23 | Ajinomoto Co., Inc. | Edible capsules |
US20040033265A1 (en) * | 2001-12-31 | 2004-02-19 | Industrial Technology Research Institute | Composite matrix containing chitosan derivatives and a process for making the same |
AU2003221497A1 (en) * | 2002-03-13 | 2003-09-22 | Novartis Ag | Pharmaceutical microparticles |
WO2003094887A1 (en) * | 2002-05-09 | 2003-11-20 | Peptron Co., Ltd | Sustained release formulation of protein and preparation method thereof |
US7819908B2 (en) * | 2002-06-17 | 2010-10-26 | Aeris Therapeutics, Inc. | Compositions and methods for reducing lung volume |
WO2003105676A2 (en) * | 2002-06-17 | 2003-12-24 | Bistech, Inc. | Compositions and methods for reducing lung volume |
WO2004030659A1 (en) * | 2002-09-30 | 2004-04-15 | Acusphere, Inc. | Sustained release porous microparticles for inhalation |
DE10306604A1 (de) * | 2003-02-18 | 2004-08-26 | Goldschmidt Ag | Kosmetische Zubereitungen mit Wirkstoffen in Mikrokapseln |
US6960345B2 (en) * | 2003-03-06 | 2005-11-01 | Incell Corporation, Llc | Oral vaccinia formulation |
US8986736B2 (en) * | 2003-06-24 | 2015-03-24 | Baxter International Inc. | Method for delivering particulate drugs to tissues |
US9044381B2 (en) * | 2003-06-24 | 2015-06-02 | Baxter International Inc. | Method for delivering drugs to the brain |
FI20045223A (fi) * | 2004-06-15 | 2005-12-16 | Bioretec Oy | Monitoiminen biohajoava komposiitti ja kirurginen implantti, joka käsittää mainitun komposiitin |
US20050142205A1 (en) * | 2003-07-18 | 2005-06-30 | Julia Rashba-Step | Methods for encapsulating small spherical particles prepared by controlled phase separation |
US20070092452A1 (en) * | 2003-07-18 | 2007-04-26 | Julia Rashba-Step | Methods for fabrication, uses, compositions of inhalable spherical particles |
KR101137785B1 (ko) * | 2003-07-18 | 2012-04-25 | 백스터 인터내셔널 인코포레이티드 | 제어된 상 분리에 의해 제조된 작은 구형 입자의 제조방법, 이용 방법 및 조성물 |
WO2005009375A2 (en) * | 2003-07-22 | 2005-02-03 | Baxter International Inc. | Small spherical particles of low molecular weight organic molecules and methods of preparation and use thereof |
WO2005032523A1 (en) * | 2003-09-30 | 2005-04-14 | Acusphere, Inc. | Injectable, oral, or topical sustained release pharmaceutical formulations |
KR20060097020A (ko) * | 2003-10-31 | 2006-09-13 | 테바 파마슈티컬 인더스트리즈 리미티드 | 약물 전달용 나노입자 |
EP2264191A1 (en) * | 2003-11-21 | 2010-12-22 | ANP Technologies, Inc. | Asymmetrically branched polymer conjugates and microarray assays |
US7309500B2 (en) * | 2003-12-04 | 2007-12-18 | The Board Of Trustees Of The University Of Illinois | Microparticles |
US8529939B2 (en) * | 2003-12-08 | 2013-09-10 | Gel-Del Technologies, Inc. | Mucoadhesive drug delivery devices and methods of making and using thereof |
US20050186183A1 (en) * | 2003-12-08 | 2005-08-25 | Deangelo Joseph | Stabilized products, processes and devices for preparing same |
US20050202094A1 (en) * | 2004-01-29 | 2005-09-15 | Werling Jane O. | Nanosuspensions of anti-retroviral agents for increased central nervous system delivery |
WO2006083254A1 (en) | 2004-02-11 | 2006-08-10 | Amylin Pharmaceuticals, Inc. | Amylin family peptides and methods for making and using them |
US7780873B2 (en) * | 2004-02-23 | 2010-08-24 | Texas A&M University System | Bioactive complexes compositions and methods of use thereof |
US8628690B2 (en) * | 2004-02-23 | 2014-01-14 | The Texas A&M University System | Nanoemulsion compositions and methods of use thereof |
US7399744B2 (en) * | 2004-03-04 | 2008-07-15 | Amylin Pharmaceuticals, Inc. | Methods for affecting body composition |
EP1753404A1 (en) | 2004-05-12 | 2007-02-21 | Baxter International Inc. | Microspheres comprising protein and showing injectability at high concentrations of said agent |
US7884085B2 (en) | 2004-05-12 | 2011-02-08 | Baxter International Inc. | Delivery of AS-oligonucleotide microspheres to induce dendritic cell tolerance for the treatment of autoimmune type 1 diabetes |
US8728525B2 (en) * | 2004-05-12 | 2014-05-20 | Baxter International Inc. | Protein microspheres retaining pharmacokinetic and pharmacodynamic properties |
DK1765294T3 (da) | 2004-05-12 | 2008-11-10 | Baxter Int | Nukleinsyremikrokugler samt deres fremstilling og afgivelse |
JP2008502706A (ja) * | 2004-06-15 | 2008-01-31 | バクスター・インターナショナル・インコーポレイテッド | 固体微粒子治療剤のエキソビボ適用 |
US7270305B2 (en) * | 2004-06-15 | 2007-09-18 | The Boeing Company | Aircraft leading edge apparatuses and corresponding methods |
JP4971149B2 (ja) | 2004-06-17 | 2012-07-11 | スラソス セラピューティックス インコーポレーテッド | Tdf関連化合物およびその類似体 |
US7901711B1 (en) * | 2006-04-17 | 2011-03-08 | Gp Medical, Inc. | Nanoparticles for protein/peptide delivery and delivery means thereof |
US20210299056A9 (en) | 2004-10-25 | 2021-09-30 | Varian Medical Systems, Inc. | Color-Coded Polymeric Particles of Predetermined Size for Therapeutic and/or Diagnostic Applications and Related Methods |
BRPI0518383A2 (pt) | 2004-10-25 | 2008-11-18 | Polyzenix Gmbh | partÍculas polimÉricas carregÁveis para aplicaÇÕes terepÊuticas e/ou diagnàstico e mÉtodos para preparar e usar as mesmas |
US9114162B2 (en) | 2004-10-25 | 2015-08-25 | Celonova Biosciences, Inc. | Loadable polymeric particles for enhanced imaging in clinical applications and methods of preparing and using the same |
US9107850B2 (en) | 2004-10-25 | 2015-08-18 | Celonova Biosciences, Inc. | Color-coded and sized loadable polymeric particles for therapeutic and/or diagnostic applications and methods of preparing and using the same |
US7748343B2 (en) | 2004-11-22 | 2010-07-06 | The Board Of Trustees Of The University Of Illinois | Electrohydrodynamic spraying system |
US11246913B2 (en) | 2005-02-03 | 2022-02-15 | Intarcia Therapeutics, Inc. | Suspension formulation comprising an insulinotropic peptide |
MY139088A (en) | 2005-02-21 | 2009-08-28 | Lg Life Sciences Ltd | Sustained release composition of protein drug |
FR2883750B1 (fr) * | 2005-04-04 | 2009-07-31 | Virbac Sa Sa | Compositions topiques et leurs utilisations |
WO2007004067A2 (en) * | 2005-04-15 | 2007-01-11 | Interface Biologics Inc. | Methods and compositions for the delivery of biologically active agents |
MX2007013356A (es) * | 2005-04-27 | 2008-03-26 | Baxter Int | Microparticulas modificadas en la superficie y metodos de formacion y uso de las mismas. |
WO2006118948A2 (en) * | 2005-04-29 | 2006-11-09 | Cubist Pharmaceuticals, Inc. | Therapeutic compositions |
DE602006019709D1 (es) | 2005-05-02 | 2011-03-03 | Anp Technologies Inc | |
US8236759B2 (en) * | 2005-06-30 | 2012-08-07 | Ipsen Pharma Sas | GLP-1 pharmaceutical compositions |
WO2007011708A2 (en) | 2005-07-15 | 2007-01-25 | Micell Technologies, Inc. | Stent with polymer coating containing amorphous rapamycin |
KR101406415B1 (ko) | 2005-07-15 | 2014-06-19 | 미셀 테크놀로지즈, 인코포레이티드 | 제어된 형태의 약물 분말을 함유하는 중합체 코팅 |
HUE026634T2 (en) | 2005-09-20 | 2016-07-28 | Thrasos Innovation Inc | TDF-related compounds and analogues thereof |
WO2007038619A2 (en) * | 2005-09-27 | 2007-04-05 | Amunix, Inc. | Proteinaceous pharmaceuticals and uses thereof |
US7855279B2 (en) * | 2005-09-27 | 2010-12-21 | Amunix Operating, Inc. | Unstructured recombinant polymers and uses thereof |
US20090099031A1 (en) * | 2005-09-27 | 2009-04-16 | Stemmer Willem P | Genetic package and uses thereof |
US7846445B2 (en) * | 2005-09-27 | 2010-12-07 | Amunix Operating, Inc. | Methods for production of unstructured recombinant polymers and uses thereof |
GB2430881B (en) | 2005-10-06 | 2010-10-13 | Ntnu Technology Transfer As | Oligoelectrolyte polyols for the treatment of mucosal hyperviscosity |
KR100720056B1 (ko) * | 2005-10-06 | 2007-05-18 | (주) 차바이오텍 | 성장인자가 함유된 나노입자가 코팅된 마이크로스피어의제조 및 이의 신경분화로의 이용 방법 |
EP1981525B1 (en) | 2005-12-30 | 2015-01-21 | Zensun (Shanghai) Science and Technology Limited | Extended release of neuregulin for improved cardiac function |
KR101787939B1 (ko) | 2006-01-24 | 2017-10-18 | 안선 바이오파르마, 아이엔씨. | 고분자 미소 구체들의 조제를 위한 기술 |
PL2019657T3 (pl) | 2006-04-26 | 2015-10-30 | Micell Technologies Inc | Powłoki zawierające wiele leków |
US20090238883A1 (en) * | 2006-04-28 | 2009-09-24 | Kren Betsy T | Liver-specific nanocapsules and methods of using |
PT2029740E (pt) * | 2006-05-31 | 2012-07-06 | Genzyme Corp | Utilização de polissacáridos para promoção de actividade enzimática |
US20070281031A1 (en) * | 2006-06-01 | 2007-12-06 | Guohan Yang | Microparticles and methods for production thereof |
EP2049560B1 (en) * | 2006-07-13 | 2013-05-15 | Novozymes Biopharma DK A/S | Process for preparing particles of proteinaceous material |
US20080102128A1 (en) * | 2006-07-28 | 2008-05-01 | Flamel Technologies, Inc. | Modified-release microparticles based on amphiphilic copolymer and on active principles(s) and pharmaceutical formulations comprising them |
JP5118139B2 (ja) | 2006-08-04 | 2013-01-16 | バクスター・インターナショナル・インコーポレイテッド | 新規発症自己免疫性糖尿病を予防および/または逆転させるためのマイクロスフィアに基づく組成物 |
WO2008021133A2 (en) | 2006-08-09 | 2008-02-21 | Intarcia Therapeutics, Inc. | Osmotic delivery systems and piston assemblies |
EP2068845A2 (en) * | 2006-10-06 | 2009-06-17 | Baxter International Inc. | Microencapsules containing surface-modified microparticles and methods of forming and using the same |
KR100784134B1 (ko) * | 2006-10-09 | 2007-12-12 | 주식회사 대웅 | 상피세포성장인자를 함유하는 안정한 구내염 치료용 액상조성물 |
US11426494B2 (en) | 2007-01-08 | 2022-08-30 | MT Acquisition Holdings LLC | Stents having biodegradable layers |
JP5603598B2 (ja) | 2007-01-08 | 2014-10-08 | ミセル テクノロジーズ、インコーポレイテッド | 生物分解層を有するステント |
WO2008124764A1 (en) * | 2007-04-10 | 2008-10-16 | Saint Simeon Lda | Novel compositions containing lysozyme and c-1/c-4 polysaccharides and use thereof in oral care, cosmetology and dermatology, contraception, urology and gynecology |
GB0707096D0 (en) | 2007-04-12 | 2007-05-23 | Ntnu Technology Transfer As | Method |
MX2009011218A (es) * | 2007-04-17 | 2010-02-11 | Baxter Int | Microparticulas de acido nucleico para administracion pulmonar. |
JP2010526822A (ja) * | 2007-05-07 | 2010-08-05 | クエスター ファーマシューティカルズ,インク. | ベンゾジアゼピン類の経鼻投与 |
US8530463B2 (en) * | 2007-05-07 | 2013-09-10 | Hale Biopharma Ventures Llc | Multimodal particulate formulations |
US8722736B2 (en) | 2007-05-22 | 2014-05-13 | Baxter International Inc. | Multi-dose concentrate esmolol with benzyl alcohol |
US8426467B2 (en) | 2007-05-22 | 2013-04-23 | Baxter International Inc. | Colored esmolol concentrate |
US20100173001A1 (en) * | 2007-06-14 | 2010-07-08 | Genesegues, Inc. | Metal Ion-Treated Biocompatible Polymers Useful for Nanoparticles |
US20090029347A1 (en) * | 2007-07-27 | 2009-01-29 | Thornthwaite Jerry T | Method for Identifying Multiple Analytes Using Flow Cytometry |
KR100845009B1 (ko) * | 2007-08-07 | 2008-07-08 | 한국생명공학연구원 | 전하를 띠는 물질이 고착된 다공성 고분자 입자 및 그제조방법 |
AU2008287340A1 (en) * | 2007-08-15 | 2009-02-19 | Amunix, Inc. | Compositions and methods for modifying properties of biologically active polypeptides |
EP2214770A4 (en) * | 2007-11-05 | 2011-01-05 | Puretech Ventures | METHODS, KITS AND COMPOSITIONS FOR ADMINISTERING PHARMACEUTICAL COMPOUNDS |
IL188647A0 (en) * | 2008-01-08 | 2008-11-03 | Orina Gribova | Adaptable structured drug and supplements administration system (for oral and/or transdermal applications) |
EP2240155B1 (en) | 2008-02-13 | 2012-06-06 | Intarcia Therapeutics, Inc | Devices, formulations, and methods for delivery of multiple beneficial agents |
RU2496482C2 (ru) | 2008-03-05 | 2013-10-27 | Бакстер Интернэшнл Инк. | Композиции и способы для доставки лекарственных средств |
ES2586032T3 (es) | 2008-03-28 | 2016-10-11 | Hale Biopharma Ventures, Llc | Administración de composiciones de benzodiazepinas |
AU2009251504B2 (en) | 2008-04-17 | 2013-09-05 | Micell Technologies, Inc. | Stents having bioabsorbable layers |
AU2009237577B2 (en) | 2008-04-18 | 2014-06-05 | Baxter Healthcare Sa | Microsphere-based composition for preventing and/or reversing new-onset autoimmune diabetes |
KR20130097813A (ko) | 2008-04-21 | 2013-09-03 | 오토노미, 인코포레이티드 | 귀 질환 및 병태를 치료하기 위한 귀 조제물 |
WO2011009096A1 (en) | 2009-07-16 | 2011-01-20 | Micell Technologies, Inc. | Drug delivery medical device |
CA2730995C (en) | 2008-07-17 | 2016-11-22 | Micell Technologies, Inc. | Drug delivery medical device |
AU2009274229B2 (en) | 2008-07-21 | 2013-08-22 | Otonomy, Inc. | Controlled-release otic structure modulating and innate immune system modulating compositions and methods for the treatment of otic disorders |
US8784870B2 (en) * | 2008-07-21 | 2014-07-22 | Otonomy, Inc. | Controlled release compositions for modulating free-radical induced damage and methods of use thereof |
US8367427B2 (en) | 2008-08-20 | 2013-02-05 | Baxter International Inc. | Methods of processing compositions containing microparticles |
US8323685B2 (en) | 2008-08-20 | 2012-12-04 | Baxter International Inc. | Methods of processing compositions containing microparticles |
US8323615B2 (en) | 2008-08-20 | 2012-12-04 | Baxter International Inc. | Methods of processing multi-phasic dispersions |
US20100047292A1 (en) * | 2008-08-20 | 2010-02-25 | Baxter International Inc. | Methods of processing microparticles and compositions produced thereby |
AU2009289529B2 (en) | 2008-09-04 | 2015-05-28 | Amylin Pharmaceuticals, Llc | Sustained release formulations using non-aqueous carriers |
EP2161030A1 (en) * | 2008-09-09 | 2010-03-10 | Rijksuniversiteit te Groningen | Oxytocin formulations and uses thereof |
ES2773766T3 (es) | 2008-12-19 | 2020-07-14 | Baxalta GmbH | Inhibidores de TFPI y métodos de uso |
CA2748314C (en) | 2009-02-03 | 2018-10-02 | Amunix Operating Inc. | Extended recombinant polypeptides and compositions comprising same |
GB0904941D0 (en) | 2009-03-23 | 2009-05-06 | Ntnu Technology Transfer As | Composition |
GB0904942D0 (en) | 2009-03-23 | 2009-05-06 | Ntnu Technology Transfer As | Composition |
JP2012522589A (ja) | 2009-04-01 | 2012-09-27 | ミシェル テクノロジーズ,インコーポレイテッド | 被覆ステント |
CA2759015C (en) | 2009-04-17 | 2017-06-20 | James B. Mcclain | Stents having controlled elution |
US10952965B2 (en) * | 2009-05-15 | 2021-03-23 | Baxter International Inc. | Compositions and methods for drug delivery |
MX340134B (es) | 2009-07-09 | 2016-06-28 | Oshadi Drug Administration Ltd | Composiciones portadoras de matriz, métodos y usos. |
WO2011028229A1 (en) | 2009-08-24 | 2011-03-10 | Amunix Operating Inc. | Coagulation factor ix compositions and methods of making and using same |
CN104323981B (zh) | 2009-09-28 | 2019-03-12 | 精达制药公司 | 基本稳态药物递送的快速建立和/或终止 |
CA2778678A1 (en) | 2009-10-30 | 2011-05-05 | Cns Therapeutics, Inc. | Improved neurturin molecules |
WO2011088229A2 (en) | 2010-01-13 | 2011-07-21 | The Regents Of The University Of Michigan | Active self-healing biomaterial system |
WO2011097103A1 (en) | 2010-02-02 | 2011-08-11 | Micell Technologies, Inc. | Stent and stent delivery system with improved deliverability |
AU2011227714B2 (en) | 2010-03-19 | 2014-09-04 | Takeda Pharmaceutical Company Limited | TFPI inhibitors and methods of use |
CN106983862A (zh) * | 2010-03-22 | 2017-07-28 | 弗·哈夫曼-拉罗切有限公司 | 对于稳定含有蛋白质的制剂有用的组合物和方法 |
RU2012145811A (ru) * | 2010-03-29 | 2014-05-10 | Евоник Корпорейшн | Композиции и способы улучшенного удержания фармацевтической композиции на участке местного введения |
CA2797110C (en) | 2010-04-22 | 2020-07-21 | Micell Technologies, Inc. | Stents and other devices having extracellular matrix coating |
CA2805631C (en) | 2010-07-16 | 2018-07-31 | Micell Technologies, Inc. | Drug delivery medical device |
BR112013014021A8 (pt) | 2010-12-06 | 2017-10-03 | Follica Inc | Métodos para tratamento de calvície e promoção de crescimento de cabelos |
US20120208755A1 (en) | 2011-02-16 | 2012-08-16 | Intarcia Therapeutics, Inc. | Compositions, Devices and Methods of Use Thereof for the Treatment of Cancers |
EP2680827B1 (en) * | 2011-03-04 | 2020-01-08 | Institut National de la Santé et de la Recherche Médicale | Particles containing a growth factor, and uses thereof |
CN103747798B (zh) * | 2011-05-18 | 2018-10-26 | 马特里瓦克斯公司 | 包含聚阳离子的蛋白质基质疫苗组合物 |
ES2917973T3 (es) | 2011-06-14 | 2022-07-12 | Neurelis Inc | Administración de benzodiacepina |
WO2013012689A1 (en) | 2011-07-15 | 2013-01-24 | Micell Technologies, Inc. | Drug delivery medical device |
US10188772B2 (en) | 2011-10-18 | 2019-01-29 | Micell Technologies, Inc. | Drug delivery medical device |
CN102516778A (zh) * | 2011-11-29 | 2012-06-27 | 上海交通大学 | 一种基于谷物蛋白的、用于大规模培养细胞的微载体,制备方法及用途 |
US20150010527A1 (en) | 2012-02-01 | 2015-01-08 | Protalix Ltd. | Dnase i polypeptides, polynucleotides encoding same, methods of producing dnase i and uses thereof in therapy |
LT3564260T (lt) | 2012-02-15 | 2023-01-10 | Bioverativ Therapeutics Inc. | Viii faktoriaus kompozicijos ir jų gamybos bei panaudojimo būdai |
CA2864126A1 (en) | 2012-02-15 | 2013-08-22 | Biogen Idec Ma Inc. | Recombinant factor viii proteins |
AU2013235741C1 (en) | 2012-03-21 | 2017-12-21 | Takeda Pharmaceutical Company Limited | TFPI inhibitors and methods of use |
WO2014005103A2 (en) | 2012-06-28 | 2014-01-03 | Ansun Biopharma, Inc. | Microparticle formulations for delivery to the lower and central respiratory tract and methods of manufacture |
PL2872121T3 (pl) | 2012-07-12 | 2019-02-28 | SpecGx LLC | Kompozycje farmaceutyczne o przedłużonym uwalnianiu, zniechęcające do nadużywania |
CN102885710B (zh) * | 2012-10-22 | 2014-10-22 | 西安雅芝生物科技有限公司 | 一种载有活性成分的海藻酸钠/壳聚糖/胶原复合微球及其制备方法 |
JP6330024B2 (ja) | 2013-03-12 | 2018-05-23 | マイセル・テクノロジーズ,インコーポレイテッド | 生体吸収性バイオメディカルインプラント |
CN103285375A (zh) * | 2013-05-09 | 2013-09-11 | 中国药科大学 | 藻蓝蛋白微球制剂及其制备方法 |
WO2014186532A1 (en) | 2013-05-15 | 2014-11-20 | Micell Technologies, Inc. | Bioabsorbable biomedical implants |
TW202003554A (zh) | 2013-08-14 | 2020-01-16 | 美商百歐維拉提夫治療公司 | 因子viii-xten融合物及其用途 |
AR101476A1 (es) | 2014-08-07 | 2016-12-21 | Acerta Pharma Bv | Métodos para tratar cánceres, enfermedades inmunes y autoinmunes, y enfermedades inflamatorias en base a la tasa de ocupación de la tirosin quinasa de bruton (btk) y a la tasa de resíntesis de la tirosin quinasa de bruton (btk) |
CN104225607B (zh) * | 2014-08-25 | 2017-05-03 | 华南理工大学 | 玉米醇溶蛋白微球的制备方法及制备用超声内置透析装置 |
US10987308B2 (en) | 2014-09-03 | 2021-04-27 | Genesegues, Inc. | Therapeutic nanoparticles and related compositions, methods and systems |
WO2016040266A1 (en) * | 2014-09-08 | 2016-03-17 | Battelle Memorial Institute | Enzyme formulation and method for degradation |
DE102014013751A1 (de) | 2014-09-22 | 2016-03-24 | Justus-Liebig-Universität Giessen | Pulmonale Arzneimittelformulierung mit verzögerter Freisetzung |
US9889085B1 (en) | 2014-09-30 | 2018-02-13 | Intarcia Therapeutics, Inc. | Therapeutic methods for the treatment of diabetes and related conditions for patients with high baseline HbA1c |
US20170304459A1 (en) | 2014-10-10 | 2017-10-26 | Alnylam Pharmaceuticals, Inc. | Methods and compositions for inhalation delivery of conjugated oligonucleotide |
WO2016196851A2 (en) | 2015-06-03 | 2016-12-08 | Intarcia Therapeutics, Inc. | Implant placement and removal systems |
BR112018001900A2 (pt) | 2015-07-28 | 2018-09-18 | Otonomy, Inc. | composições agonistas de trkb ou trkc e métodos para o tratamento de condições óticas |
EA201890423A1 (ru) | 2015-08-03 | 2018-07-31 | Биовератив Терапьютикс Инк. | Слитые белки фактора ix, способы их получения и применения |
MX2018014016A (es) | 2016-05-16 | 2019-08-01 | Intarcia Therapeutics Inc | Polipéptidos selectivos del receptor de glucagón y métodos para utilizarlos. |
USD840030S1 (en) | 2016-06-02 | 2019-02-05 | Intarcia Therapeutics, Inc. | Implant placement guide |
USD860451S1 (en) | 2016-06-02 | 2019-09-17 | Intarcia Therapeutics, Inc. | Implant removal tool |
JP7033789B2 (ja) | 2016-06-29 | 2022-03-11 | オトノミー,インク. | トリグリセリド耳用製剤とその使用 |
CN110225762A (zh) | 2017-01-03 | 2019-09-10 | 因塔西亚制药公司 | 包括glp-1受体激动剂的连续施用和药物的共同施用的方法 |
CA3052157A1 (en) | 2017-01-31 | 2018-08-09 | Veru Inc. | Compositions and methods for long term release of ganadotropin-releasing hormone (gnrh) antagonists |
CN110115776A (zh) * | 2018-02-07 | 2019-08-13 | 沈阳药科大学 | 一种具有抗菌活性的可吸收淀粉微球止血粉及其应用 |
CA3097047A1 (en) * | 2018-04-13 | 2019-10-17 | University Of Virginia Patent Foundation | Compositions and methods for preparing and using non-immunogenic fast annealing microporous annealed particle hydrogels |
SG11202010767SA (en) | 2018-05-18 | 2020-11-27 | Bioverativ Therapeutics Inc | Methods of treating hemophilia a |
CN108853595B (zh) * | 2018-06-28 | 2021-04-27 | 高鼎精细化工(昆山)有限公司 | 一种磷酸钙修饰的交联玻尿酸微球的制备方法 |
CN108969470B (zh) * | 2018-07-11 | 2020-07-14 | 清华大学 | 缓释药物纳米纤维及其制备方法 |
KR20210114399A (ko) * | 2018-11-29 | 2021-09-23 | 인시그나 인크. | 불임제로서의 에스트라디올 벤조에이트 |
CN109364029A (zh) * | 2018-12-04 | 2019-02-22 | 临沂大学 | 一种白藜芦醇微球及其制备方法 |
WO2020114615A1 (en) | 2018-12-07 | 2020-06-11 | Baxalta GmbH | Bispecific antibodies binding factor ixa and factor x |
WO2020115283A1 (en) | 2018-12-07 | 2020-06-11 | Baxalta GmbH | Bispecific antibodies binding factor ixa and factor x |
GB201906835D0 (en) * | 2019-05-15 | 2019-06-26 | Ucb Biopharma Sprl | Dry microparticles |
US20230158125A1 (en) | 2020-04-20 | 2023-05-25 | Sorrento Therapeutics, Inc. | Pulmonary Administration of ACE2 Polypeptides |
Family Cites Families (84)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
NL289785A (es) * | 1962-11-29 | |||
DE2010115A1 (de) * | 1970-03-04 | 1971-09-16 | Farbenfabriken Bayer Ag, 5090 Leverkusen | Verfahren zur Herstellung von Mikrogranulaten |
JPS523342B2 (es) * | 1972-01-26 | 1977-01-27 | ||
US4083831A (en) * | 1976-04-09 | 1978-04-11 | Armstrong Cork Company | Process for the preparation of granular urethane-urea polymers |
US4389330A (en) * | 1980-10-06 | 1983-06-21 | Stolle Research And Development Corporation | Microencapsulation process |
US4530840A (en) * | 1982-07-29 | 1985-07-23 | The Stolle Research And Development Corporation | Injectable, long-acting microparticle formulation for the delivery of anti-inflammatory agents |
US4612008A (en) * | 1983-05-11 | 1986-09-16 | Alza Corporation | Osmotic device with dual thermodynamic activity |
JPS60100516A (ja) * | 1983-11-04 | 1985-06-04 | Takeda Chem Ind Ltd | 徐放型マイクロカプセルの製造法 |
US4818542A (en) * | 1983-11-14 | 1989-04-04 | The University Of Kentucky Research Foundation | Porous microspheres for drug delivery and methods for making same |
US4744933A (en) | 1984-02-15 | 1988-05-17 | Massachusetts Institute Of Technology | Process for encapsulation and encapsulated active material system |
US5417986A (en) * | 1984-03-16 | 1995-05-23 | The United States Of America As Represented By The Secretary Of The Army | Vaccines against diseases caused by enteropathogenic organisms using antigens encapsulated within biodegradable-biocompatible microspheres |
JP2551756B2 (ja) * | 1985-05-07 | 1996-11-06 | 武田薬品工業株式会社 | ポリオキシカルボン酸エステルおよびその製造法 |
US5102872A (en) * | 1985-09-20 | 1992-04-07 | Cetus Corporation | Controlled-release formulations of interleukin-2 |
GB8601100D0 (en) * | 1986-01-17 | 1986-02-19 | Cosmas Damian Ltd | Drug delivery system |
US5160745A (en) | 1986-05-16 | 1992-11-03 | The University Of Kentucky Research Foundation | Biodegradable microspheres as a carrier for macromolecules |
ES2053549T3 (es) * | 1986-08-11 | 1994-08-01 | Innovata Biomed Ltd | Un proceso para la preparacion de una formulacion farmaceutica apropiada para inhalacion. |
US5075109A (en) * | 1986-10-24 | 1991-12-24 | Southern Research Institute | Method of potentiating an immune response |
US4861627A (en) * | 1987-05-01 | 1989-08-29 | Massachusetts Institute Of Technology | Preparation of multiwall polymeric microcapsules |
US4897268A (en) * | 1987-08-03 | 1990-01-30 | Southern Research Institute | Drug delivery system and method of making the same |
US5422120A (en) * | 1988-05-30 | 1995-06-06 | Depotech Corporation | Heterovesicular liposomes |
FR2634121B1 (fr) | 1988-07-13 | 1992-05-07 | Imedex | Procede de preparation de microparticules de collagene et produits obtenus |
US4925677A (en) | 1988-08-31 | 1990-05-15 | Theratech, Inc. | Biodegradable hydrogel matrices for the controlled release of pharmacologically active agents |
US5213788A (en) * | 1988-09-29 | 1993-05-25 | Ranney David F | Physically and chemically stabilized polyatomic clusters for magnetic resonance image and spectral enhancement |
US5008116A (en) | 1988-11-14 | 1991-04-16 | Frederick Cahn | Immunostimulatory microsphere |
AU5741590A (en) * | 1989-05-04 | 1990-11-29 | Southern Research Institute | Improved encapsulation process and products therefrom |
MY107937A (en) * | 1990-02-13 | 1996-06-29 | Takeda Chemical Industries Ltd | Prolonged release microcapsules. |
GB9004950D0 (en) * | 1990-03-06 | 1990-05-02 | Kelco Int Ltd | Controlled release formulation |
DE69133136T2 (de) * | 1990-05-16 | 2003-06-18 | Southern Research Institute, Birmingham | Mikrokapseln mit gesteuerter freigabe sowie deren verwendung zur stimulierung des nervenfaserwachstums |
GB9016885D0 (en) * | 1990-08-01 | 1990-09-12 | Scras | Sustained release pharmaceutical compositions |
US5149543A (en) * | 1990-10-05 | 1992-09-22 | Massachusetts Institute Of Technology | Ionically cross-linked polymeric microcapsules |
WO1992014449A1 (en) * | 1991-02-20 | 1992-09-03 | Nova Pharmaceutical Corporation | Controlled release microparticulate delivery system for proteins |
US5330768A (en) * | 1991-07-05 | 1994-07-19 | Massachusetts Institute Of Technology | Controlled drug delivery using polymer/pluronic blends |
US5525519A (en) * | 1992-01-07 | 1996-06-11 | Middlesex Sciences, Inc. | Method for isolating biomolecules from a biological sample with linear polymers |
US5173454A (en) * | 1992-01-09 | 1992-12-22 | Corning Incorporated | Nanocrystalline materials |
US5573934A (en) * | 1992-04-20 | 1996-11-12 | Board Of Regents, The University Of Texas System | Gels for encapsulation of biological materials |
US5912015A (en) * | 1992-03-12 | 1999-06-15 | Alkermes Controlled Therapeutics, Inc. | Modulated release from biocompatible polymers |
JP2651320B2 (ja) * | 1992-07-16 | 1997-09-10 | 田辺製薬株式会社 | 徐放性マイクロスフェア製剤の製造方法 |
JP3277342B2 (ja) * | 1992-09-02 | 2002-04-22 | 武田薬品工業株式会社 | 徐放性マイクロカプセルの製造法 |
EP0595030A3 (en) * | 1992-10-01 | 1995-06-07 | Tanabe Seiyaku Co | Composition of microspheres with several delayed release nuclei and its preparation process. |
DE69329295T2 (de) * | 1992-12-02 | 2001-03-15 | Alkermes Controlled Therapeutics, Inc. | Wachstumhormon enthaltende mikrosphaeren mit kontrollierter freisetzung |
US6090925A (en) * | 1993-03-09 | 2000-07-18 | Epic Therapeutics, Inc. | Macromolecular microparticles and methods of production and use |
US5981719A (en) * | 1993-03-09 | 1999-11-09 | Epic Therapeutics, Inc. | Macromolecular microparticles and methods of production and use |
US5578709A (en) * | 1993-03-09 | 1996-11-26 | Middlesex Sciences, Inc. | Macromolecular microparticles and methods of production |
US5543158A (en) * | 1993-07-23 | 1996-08-06 | Massachusetts Institute Of Technology | Biodegradable injectable nanoparticles |
KR950007873A (ko) | 1993-09-20 | 1995-04-15 | 후꾸하라 요시하루 | 생리 활성 물질 지속 방출형의 의약 제제 |
DE69432867T2 (de) * | 1993-11-18 | 2004-04-22 | Sirtex Medical Ltd., Burswood | Zubereitung mit gesteuerter freisetzung |
AU684324B2 (en) * | 1993-11-19 | 1997-12-11 | Alkermes Controlled Therapeutics Inc. Ii | Preparation of biodegradable microparticles containing a biologically active agent |
US5650173A (en) * | 1993-11-19 | 1997-07-22 | Alkermes Controlled Therapeutics Inc. Ii | Preparation of biodegradable microparticles containing a biologically active agent |
US5783214A (en) * | 1994-06-13 | 1998-07-21 | Buford Biomedical, Inc. | Bio-erodible matrix for the controlled release of medicinals |
US5603955A (en) * | 1994-07-18 | 1997-02-18 | University Of Cincinnati | Enhanced loading of solutes into polymer gels |
US5595760A (en) | 1994-09-02 | 1997-01-21 | Delab | Sustained release of peptides from pharmaceutical compositions |
US6387399B1 (en) * | 1994-12-02 | 2002-05-14 | The United States Of America As Represented By The Administrator Of The National Aeronautics And Space Administration | Microencapsulated bioactive agents and method of making |
JPH08225454A (ja) | 1995-02-23 | 1996-09-03 | Chugai Pharmaceut Co Ltd | マイクロスフェア製剤 |
US6265389B1 (en) * | 1995-08-31 | 2001-07-24 | Alkermes Controlled Therapeutics, Inc. | Microencapsulation and sustained release of oligonucleotides |
SE505146C2 (sv) * | 1995-10-19 | 1997-06-30 | Biogram Ab | Partiklar för fördröjd frisättning |
US6270795B1 (en) * | 1995-11-09 | 2001-08-07 | Microbiological Research Authority | Method of making microencapsulated DNA for vaccination and gene therapy |
CA2192782C (en) * | 1995-12-15 | 2008-10-14 | Nobuyuki Takechi | Production of microspheres |
EP0920339A2 (en) * | 1996-07-09 | 1999-06-09 | The Johns Hopkins University | Gene delivery system |
US6395302B1 (en) * | 1996-11-19 | 2002-05-28 | Octoplus B.V. | Method for the preparation of microspheres which contain colloidal systems |
US5945126A (en) * | 1997-02-13 | 1999-08-31 | Oakwood Laboratories L.L.C. | Continuous microsphere process |
US6656508B2 (en) * | 1997-04-17 | 2003-12-02 | Amgen Inc. | Sustained-release alginate gels |
US20020039594A1 (en) * | 1997-05-13 | 2002-04-04 | Evan C. Unger | Solid porous matrices and methods of making and using the same |
TR200001021T2 (tr) * | 1997-07-18 | 2000-09-21 | Infimed Inc. | Aktif maddelerin kontrollü salınması için biyo aşındırılabilir makromerler. |
US5989463A (en) * | 1997-09-24 | 1999-11-23 | Alkermes Controlled Therapeutics, Inc. | Methods for fabricating polymer-based controlled release devices |
SE512663C2 (sv) * | 1997-10-23 | 2000-04-17 | Biogram Ab | Inkapslingsförfarande för aktiv substans i en bionedbrytbar polymer |
US20010053761A1 (en) * | 1998-01-08 | 2001-12-20 | Dimarchi Richard Dennis | Method for administering aspb28-human insulin |
ATE281844T1 (de) * | 1998-01-16 | 2004-11-15 | Univ Johns Hopkins | Orale verabreichung von nukleinsäure-impstoffen durch partikelkomplexe |
DE19813010A1 (de) | 1998-03-25 | 1999-10-14 | Aventis Res & Tech Gmbh & Co | Mikrokapseln mit verzögertem Release |
US6395253B2 (en) * | 1998-04-23 | 2002-05-28 | The Regents Of The University Of Michigan | Microspheres containing condensed polyanionic bioactive agents and methods for their production |
US6270802B1 (en) * | 1998-10-28 | 2001-08-07 | Oakwood Laboratories L.L.C. | Method and apparatus for formulating microspheres and microcapsules |
AU768535B2 (en) * | 1998-11-30 | 2003-12-18 | Nanosphere, Inc. | Nanoparticles with polymer shells |
US6194006B1 (en) * | 1998-12-30 | 2001-02-27 | Alkermes Controlled Therapeutics Inc. Ii | Preparation of microparticles having a selected release profile |
US6395300B1 (en) * | 1999-05-27 | 2002-05-28 | Acusphere, Inc. | Porous drug matrices and methods of manufacture thereof |
DE69910987T2 (de) | 1999-06-14 | 2004-05-19 | Baxter International Inc., Deerfield | Mikrosphären mit verzögerter Wirkstoffabgabe |
US6458387B1 (en) * | 1999-10-18 | 2002-10-01 | Epic Therapeutics, Inc. | Sustained release microspheres |
FR2809309B1 (fr) * | 2000-05-23 | 2004-06-11 | Mainelab | Microspheres a liberation prolongee pour administration injectable |
KR100392501B1 (ko) * | 2000-06-28 | 2003-07-22 | 동국제약 주식회사 | 다중 에멀젼법에 의한 서방출성 미립구의 제조방법 |
US6471995B1 (en) * | 2000-09-27 | 2002-10-29 | Alkermes Controlled Therapeutics, Inc. Ii | Apparatus and method for preparing microparticles using liquid-liquid extraction |
US6475468B2 (en) * | 2001-02-15 | 2002-11-05 | Aeropharm Technology Incorporated | Modulated release particles for aerosol delivery |
US6896905B2 (en) * | 2001-02-15 | 2005-05-24 | Rohm And Haas Company | Porous particles, their aqueous dispersions, and method of preparation |
WO2003015750A1 (en) * | 2001-08-16 | 2003-02-27 | Baxter International, Inc. | Propellant-based microparticle formulations |
US20040014698A1 (en) * | 2002-07-18 | 2004-01-22 | Gonzalo Hortelano | Oral administration of therapeutic agent coupled to transporting agent |
KR101137785B1 (ko) * | 2003-07-18 | 2012-04-25 | 백스터 인터내셔널 인코포레이티드 | 제어된 상 분리에 의해 제조된 작은 구형 입자의 제조방법, 이용 방법 및 조성물 |
WO2005009375A2 (en) * | 2003-07-22 | 2005-02-03 | Baxter International Inc. | Small spherical particles of low molecular weight organic molecules and methods of preparation and use thereof |
-
1999
- 1999-10-18 US US09/420,361 patent/US6458387B1/en not_active Expired - Lifetime
-
2000
- 2000-10-12 AT AT00973477T patent/ATE364375T1/de active
- 2000-10-12 WO PCT/US2000/028200 patent/WO2001028524A1/en active IP Right Grant
- 2000-10-12 DE DE60035211T patent/DE60035211T2/de not_active Expired - Lifetime
- 2000-10-12 EP EP07011199A patent/EP1837018B1/en not_active Expired - Lifetime
- 2000-10-12 ES ES07011199T patent/ES2341578T3/es not_active Expired - Lifetime
- 2000-10-12 AT AT07011199T patent/ATE458474T1/de active
- 2000-10-12 DE DE60043910T patent/DE60043910D1/de not_active Expired - Lifetime
- 2000-10-12 EP EP00973477A patent/EP1223917B1/en not_active Expired - Lifetime
- 2000-10-12 AU AU11980/01A patent/AU1198001A/en not_active Abandoned
- 2000-10-12 ES ES00973477T patent/ES2286040T3/es not_active Expired - Lifetime
-
2002
- 2002-09-17 US US10/245,776 patent/US20030059474A1/en not_active Abandoned
Cited By (1)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
US7931916B2 (en) | 2008-12-23 | 2011-04-26 | Grifols, S.A. | Composition of biocompatible microparticles of alginic acid for the controlled release of active ingredients by intravenous administration |
Also Published As
Publication number | Publication date |
---|---|
EP1837018A1 (en) | 2007-09-26 |
ATE364375T1 (de) | 2007-07-15 |
ATE458474T1 (de) | 2010-03-15 |
WO2001028524A1 (en) | 2001-04-26 |
US20030059474A1 (en) | 2003-03-27 |
EP1223917A1 (en) | 2002-07-24 |
ES2341578T3 (es) | 2010-06-22 |
DE60035211T2 (de) | 2008-02-21 |
AU1198001A (en) | 2001-04-30 |
DE60035211D1 (de) | 2007-07-26 |
EP1837018B1 (en) | 2010-02-24 |
US6458387B1 (en) | 2002-10-01 |
EP1223917B1 (en) | 2007-06-13 |
DE60043910D1 (de) | 2010-04-08 |
Similar Documents
Publication | Publication Date | Title |
---|---|---|
ES2286040T3 (es) | Microesferas de liberacion prolongada. | |
ES2207123T3 (es) | Microesferas de liberacion sostenida. | |
US6090925A (en) | Macromolecular microparticles and methods of production and use | |
US5981719A (en) | Macromolecular microparticles and methods of production and use | |
ES2326209T3 (es) | Produccion de microesferas. | |
ES2527286T3 (es) | Microesferas de liberación sostenida y métodos de fabricación y uso de las mismas | |
ES2318860T3 (es) | Gel sensible a la temperatura para el aporte sostenido de farmacos a base de proteinas. | |
ES2229286T3 (es) | Cesion prolongada de gm-csf. | |
ES2307779T3 (es) | Formulaciones de microparticulas a base de propelentes. | |
ES2313346T3 (es) | Composicion de gel de polimeros cargados. | |
ES2243497T3 (es) | Composicion de vacuna, procedimiento de preparacion de la misma y procedimiento para vacunacion de vertebrados. | |
CN101721709B (zh) | 磷酸钙和两亲性聚合物复合载药纳米微球、制备方法和用途 | |
JP2014532071A5 (es) | ||
CA2395132A1 (en) | Pharmaceutical formulations for the delivery of drugs having low aqueous solubility | |
BRPI0715299A2 (pt) | mÉtodo para preparar nanoparticulas polimÉricas, mÉtodod para preparar uma coposiÇço micelar, micelas polimÉricas reconstituÍveis, composiÇço polimÉrica bioativa de nanopartÍculas, mÉtodo para proporcionar um medicamento a um paciente e processo para preparar composiÇÕes de nanoparticulas polimÉricas | |
BRPI0714718B1 (pt) | Composição de micela polimérica de encapsulamento de polipeptídeos ou proteínas e seu método de preparo | |
ES2351756B1 (es) | Nanopartículas lipídicas para terapia génica. | |
Crooke et al. | Lung tissue delivery of virus-like particles mediated by macrolide antibiotics | |
US20160158154A1 (en) | Protein vesicles and methods of making and using thereof | |
ES2242287T3 (es) | Microparticulas para la administracion controlada de moleculas biologicamente activas. | |
CN102188379A (zh) | 载药脂质体的制备方法 | |
JP7549575B2 (ja) | 経口投与用生物学的ポリマーの製剤 | |
US6495527B1 (en) | Complex of DNA and microparticle of defatted lipid-binding protein for gene therapy | |
WO2024083221A1 (zh) | 一种黏膜给药制剂及其制备方法和应用 | |
Italiani et al. | Concepts for Nano-delivery of Therapeutic Immunomodulatory Agents |