ES2275992T3 - Cdomposiciones farmaceuticas de toxina botulinica. - Google Patents
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Abstract
Una composición farmacéutica que comprende: (a) una toxina botulínica, y; (b) una seroalbúmina humana recombinante, en la que la composición farmacéutica está en una forma para reconstitución.
Description
Composiciones farmacéuticas de toxina
botulínica.
La presente invención se refiere a composiciones
farmacéuticas. En particular, la presente invención se refiere a
composiciones farmacéuticas que contienen una toxina botulínica y
una seroalbúmina humana fabricada recombinantemente.
Una composición farmacéutica es una formulación
que contiene uno o más ingredientes activos así como uno o más
excipientes, estabilizantes o agentes de carga, que es apropiada
para la administración a un paciente humano para conseguir un
resultado de diagnóstico o efecto terapéutico deseado.
Para su estabilidad en el almacenamiento y
conveniencia de manejo, una composición farmacéutica se puede
formular en forma de polvo liofilizado (es decir criodesecado) o
secado a vacío que se puede reconstituir con disolución salina o
agua previamente a la administración a un paciente.
Alternativamente, la composición farmacéutica se puede formular en
forma de una disolución acuosa. Una composición farmacéutica puede
contener un ingrediente activo proteínico. Desgraciadamente, las
proteínas pueden ser muy difíciles de estabilizar, dando como
resultado la pérdida de proteína y/o la pérdida de actividad de la
proteína durante la formulación, reconstitución (si se requiere) y
durante el almacenamiento previamente al uso de una composición
farmacéutica que contiene proteína. Los problemas de estabilidad
pueden ocurrir debido a la desnaturalización, degradación,
dimerización y/o polimerización de la proteína. Se han usado varios
excipientes, tales como albúmina y gelatina con diferentes grados de
éxito para tratar de estabilizar un ingrediente activo proteínico
presente en una composición farmacéutica. Adicionalmente, se han
usado crioprotectores tales como alcoholes para reducir la
desnaturalización de la proteína en las condiciones de congelación
de la liofilización.
Las albúminas son pequeñas y abundantes
proteínas del plasma. La seroalbúmina humana tiene un peso molecular
de alrededor de 69 kilodaltons (kD) y se ha usado como ingrediente
no activo en una composición farmacéutica en la que puede servir
como vehículo de carga y estabilizante de ciertos ingredientes
activos proteínicos presentes en una composición farmacéutica.
La función de estabilización de la albúmina en
una composición farmacéutica puede estar presente tanto durante la
formulación multietapa de la composición farmacéutica como en la
posterior reconstitución de la composición farmacéutica formulada.
De este modo, se puede impartir estabilidad por medio de la albúmina
a un ingrediente activo proteínico en una composición farmacéutica,
por ejemplo, (1) reduciendo la adhesión (comúnmente denominada
"adhesividad") del ingrediente activo proteínico a las
superficies, tales como las superficies del material de vidrio de
laboratorio, recipientes, al vial en el que se reconstituye la
composición farmacéutica y a la superficie interior de una
jeringuilla usada para inyectar la composición farmacéutica. La
adhesión de un ingrediente activo proteínico a las superficies
puede conducir a la pérdida de ingrediente activo y a la
desnaturalización del ingrediente activo proteínico retenido
restante, ambas reducen la actividad total del ingrediente activo
presente en la composición farmacéutica, y; (2) reduciendo la
desnaturalización del ingrediente activo, que puede ocurrir al
preparar una disolución de baja dilución del ingrediente activo.
Además de ser capaz de estabilizar un
ingrediente activo proteínico en una composición farmacéutica, la
albúmina tiene también la ventaja de la inmunogenicidad
generalmente negligible cuando se inyecta en un paciente humano. Un
compuesto con una inmunogenicidad apreciable puede provocar la
producción de anticuerpos contra él, que puede conducir a una
reacción anafiláctica y/o al desarrollo de resistencia al fármaco,
convirtiéndose la enfermedad o trastorno que se va a tratar en
potencialmente refractario a la composición farmacéutica que tiene
un componente inmunógeno.
Desgraciadamente, a pesar de su conocido efecto
estabilizante, existen inconvenientes significativos al uso de
albúmina en una composición farmacéutica. Por ejemplo, las albúminas
son caras y cada vez más difíciles de obtener. Además, los
productos de la sangre tales como la albúmina, cuando se administran
a un paciente pueden someter al paciente a un riesgo potencial de
recibir agentes patógenos o infecciosos transportados por la
sangre. De este modo, se sabe que existe la posibilidad de que la
presencia de albúmina en una composición farmacéutica puede dar
como resultado la incorporación inadvertida de elementos infecciosos
en la composición farmacéutica. Por ejemplo, se ha publicado que el
uso de albúmina puede transmitir priones a una composición
farmacéutica. Un prión es una partícula infecciosa proteínica que se
hipotetiza que surge como una isoforma conformacional anormal de la
misma secuencia de ácido nucleico que fabrica la proteína normal. Se
ha hipotetizado adicionalmente que la infectividad reside en una
"reacción de reclutamiento" de la proteína isoforma normal a
la isoforma de proteína priónica a un nivel
post-translacional. Aparentemente la proteína
celular endógena normal es inducida a doblarse erróneamente en una
conformación priónica patógena. Significativamente, se han retirado
de la distribución varios lotes de seroalbúmina humana después de
una determinación de que a un donante de sangre a un banco de
sangre del que se preparó la albúmina le fue diagnosticada la
enfermedad de Creutzfeldt-Jacob.
La enfermedad de
Creutzfeldt-Jacob (a veces caracterizada como
enfermedad de Alzheimer de avance rápido) es un raro trastorno
neurodegenerativo de encefalopatía espongiforme humana transmisible,
en la que el agente transmisible es aparentemente una isoforma
anormal de una proteína priónica. Un individuo con la enfermedad de
Creutzfeldt-Jacob se puede deteriorar desde una
aparente perfecta salud hasta un mutismo aquinético en seis meses.
Se ha publicado la posible transmisión iatrogénica de la enfermedad
de Creutzfeldt-Jacob por transfusión de albúmina y
se ha especulado que no se proporciona suficiente protección contra
la transmisión de la enfermedad de
Creutzfeldt-Jacob por los métodos usuales de
preparación de la albúmina, métodos que incluyen la retirada de los
elementos celulares de la sangre y el calentamiento a 60 grados
centígrados durante 10 horas. De este modo, puede existir un riesgo
potencial de adquirir una enfermedad mediada por un prión, tal como
la enfermedad de Creutzfeldt-Jacob, de la
administración de una composición farmacéutica que contiene
concentrados proteínicos de plasma humano, tal como
seroalbúmina.
Se ha usado gelatina en algunas composiciones
farmacéuticas de ingrediente activo proteínico como substituto de
la albúmina. Notablemente, la gelatina es una proteína derivada de
animales y por lo tanto supone el mismo riesgo de potencial
infectividad que puede poseer la albúmina. Por consiguiente, es
deseable encontrar un substituto para la albúmina que no sea una
fracción sanguínea, y preferentemente el substituto de la albúmina
no sea gelatina y no sea derivado de ninguna fuente animal.
La bacteria anaeróbica gram positiva
Clostridium botulinum produce una potente neurotoxina
polipéptido, toxina tobulínica, que causa una enfermedad
neuroparalítica en seres humanos y animales denominada botulismo. El
Clostridium botulinum y sus esporas se encuentran comúnmente
en el suelo y la bacteria puede crecer en recipientes de alimentos
inapropiadamente esterilizados y sellados de envases domésticos, que
son la causa de muchos de los casos de botulismo. Los efectos del
botulismo aparecen típicamente de 18 a 36 horas después de comer los
alimentos infectados con un cultivo o esporas de Clostridium
botulinum. La toxina botulínica puede pasar aparentemente
atenuada a través de las paredes del intestino y atacar a las
neuronas motoras periféricas. Los síntomas de la intoxicación por
toxina botulínica pueden progresar desde dificultad para caminar,
tragar, y hablar hasta la parálisis de los músculos respiratorios y
la muerte.
La toxina botulínica del tipo A es el agente
biológico natural más letal conocido por el hombre. Alrededor de 50
picogramos de toxina botulínica (complejo de neurotoxina purificada)
de tipo A es una LD_{50} en ratones. Interesantemente, en base
molar, la toxina botulínica de tipo A es 1,8 billones de veces más
letal que la difteria, 600 millones de veces más letal que el
cianuro de sodio, 30 millones de veces más letal que la cobrotoxina
y 12 millones de veces más letal que el cólera. Singh; Critical
Aspects of Bacterial Protein Toxins, páginas 63-84
(capítulo 4) de Natural toxins II, editado por B.R. Singh et
al., Plenum Press, New York (1976) (en el que la citada
LD_{50} de la toxina botulínica de tipo A de 0,3 ng que es igual a
1U se corrige por el hecho de que alrededor de 0,05 ng de BOTOX® es
igual a 1 unidad). Una unidad (U) de toxina botulínica se define
como la LD_{50} por inyección intraperitoneal en ratones hembra
Swiss Webster que pesan 18-20 gramos cada uno. Se
han caracterizado siete neurotoxinas botulínicas inmunológicamente
distintas, siendo estas respectivamente los serotipos de toxina
botulínica A, B, C_{1}, D, E, F y G cada una de las cuales se
distingue por la neutralización con un tipo específico de
anticuerpos. Los diferentes serotipos de toxina botulínica varían en
la especie animal a la que afectan y en la severidad y duración de
la parálisis que evocan. Por ejemplo, se ha determinado que la
toxina botulínica de tipo A es 500 veces más potente, tal como se
mide por la tasa de parálisis producida en la rata, que la toxina
botulínica de tipo B. Adicionalmente, se ha determinado que la
toxina botulínica de tipo B no es tóxica en primates a una dosis de
480 U/kg que es alrededor de 12 veces la LD_{50} de primate para
la toxina botulínica de tipo A. Las toxinas botulínicas
aparentemente se unen con alta afinidad a las neuronas motoras
colinérgicas, se translocan dentro la neurona y bloquean el
desprendimiento presináptico de acetilcolina.
Las toxinas botulínicas se han usado en
establecimientos clínicos para el tratamiento de trastornos
neuromusculares caracterizados por músculos esqueléticos
hiperactivos. La toxina botulínica de tipo A fue aprobada por la
Food and Drug Administration de EE.UU. en 1989 para el tratamiento
de blefarospasmo esencial, estrabismo y espasmo hemifacial en
pacientes de alrededor de 12 años de edad. Los efectos clínicos de
la toxina botulínica de tipo A se ven usualmente en una semana
desde la inyección. La duración típica del alivio sintomático (es
decir, parálisis de músculos flácidos) de una única inyección
intramuscular de toxina botulínica de tipo A puede ser de alrededor
de tres meses.
Aunque todos los serotipos de toxinas
botulínicas aparentemente inhiben el desprendimiento del
neurotransmisor acetilcolina en la unión neuromuscular, lo hacen
afectando a diferentes proteínas neurosecretoras y/o escindiendo
estas proteínas en diferentes sitios. La toxina botulínica A es una
endopeptidasa de cinc que puede hidrolizar específicamente una
unión peptídica de la proteína asociada a la vesícula intracelular
SNAP-25. El botulinum del tipo E también escinde la
proteína asociada sinaptosomal de 25 kiloDalton (kD)
(SNAP-25), pero tiene como objetivo diferentes
secuencias de aminoácido dentro de esta proteína, comparada con la
toxina botulínica de tipo A. La toxina botulínica de los tipos B,
D, F y G actúa sobre la proteína asociada a vesículas (VAMP,
también denominada sinaptobrevina), escindiendo cada serotipo la
proteína en un sitio diferente. Finalmente, se ha mostrado que la
toxina botulínica de tipo C_{1} escinde tanto la sintaxina como la
SNAP-25. Estas diferencias en el mecanismo de
acción pueden afectar a la potencia relativa y/o a la duración de la
acción de varios serotipos de toxina botulínica.
El peso molecular de la molécula de toxina
botulínica, para todos los siete serotipos de toxina botulínica
conocidos, es de alrededor de 150 kD. Interesantemente, las toxinas
botulínicas son desprendidas por la bacteria de Clostridio en forma
de complejos que comprenden la molécula de proteína de toxina
botulínica de 150 kD junto con proteínas no-toxina
asociadas. De este modo, el complejo de tipo A de toxina botulínica
puede ser producido por la bacteria de Clostridio en formas de 900
kD, 500 kD y 300 kD. La toxina botulínica de los tipos B y C_{1}
se produce aparentemente solo como un complejo de 500 kD. La toxina
botulínica del tipo D se produce en forma de complejos tanto de 300
kD como de 500 kD. Finalmente, las toxinas botulínicas de los tipos
E y F se producen solo aproximadamente como complejos de 300 kD. Se
cree que los complejos (es decir, de peso molecular mayor de
alrededor de 150 kD) contienen una proteína hemaglutinina
no-toxina y una no-toxina y
proteína no-hemaglutinina no tóxica. Estas dos
proteínas no-toxina (que junto con la molécula de
toxina botulínica pueden comprender el complejo de neurotoxina
relevante) pueden actuar para proporcionar estabilidad contra la
desnaturalización de la molécula de toxina botulínica y protección
frente a los ácidos digestivos cuando se ingiere la toxina.
Adicionalmente, es posible que los mayores (mayores de alrededor de
un peso molecular de 150 kD) complejos de toxina botulínica pueden
dar como resultado una velocidad más lenta de difusión de la toxina
botulínica lejos del lugar de la inyección intramuscular de un
complejo de toxina botulínica. Los complejos de toxina se pueden
disociar en proteína de toxina y proteínas de hemaglutinina tratando
el complejo con células rojas sanguíneas a pH 7,3. La proteína de
toxina tiene una notable inestabilidad al retirar la proteína de
hemaglutinina.
Todos los serotipos de toxina botulínica
fabricados por la bacteria Clostridium botulinum son
proteínas de cadena única inactivas que deben ser escindidas o
cortadas por proteasas para convertirse en neuroactivas. Las cepas
bacterianas que fabrican las toxinas botulínicas de serotipos A y G
poseen proteasas endógenas y los serotipos A y G se pueden
recuperar por lo tanto de cultivos bacterianos predominantemente en
su forma activa. En contraste, las toxinas botulínicas de serotipos
C_{1}, D y E se sintetizan por cepas no proteolíticas y por lo
tanto están típicamente inactivadas cuando se recuperan del cultivo.
Los serotipos B y F se producen tanto por las cepas proteolíticas
como no proteolíticas y por lo tanto se pueden retirar en la forma
activa o inactiva. Sin embargo, incluso las cepas proteolíticas que
producen, por ejemplo, la toxina botulínica de serotipo de tipo B
solo escinden una porción de la toxina producida. La proporción
exacta de moléculas cortadas a no cortadas depende de la duración
de la incubación y de la temperatura del cultivo. Por lo tanto,
cierto porcentaje de cualquier preparación de, por ejemplo, toxina
botulínica de tipo B es probable que sea inactivo, dando cuenta de
la conocida significativamente más baja potencia de la toxina
botulínica de tipo B comparada con la toxina botulínica de tipo A.
La presencia de moléculas de toxina botulínica inactiva en una
preparación clínica contribuirá a la carga proteínica total de la
preparación, que se ha relacionado con la antigenicidad
incrementada, sin contribuir a su eficacia clínica. Adicionalmente,
se sabe que la toxina botulínica de tipo B tiene, al inyectarla
intramuscularmente, una duración más corta de su actividad y también
es menos potente que la toxina botulínica de tipo A con el mismo
nivel de dosis.
Se puede producir toxina botulínica de tipo A
cristalina de alta calidad a partir de la cepa Hall A de
Clostridium botulinum con características de \geq3 x
10^{7} U/mg, una A_{260}/A_{278} de menos de 0,60 y un
diagrama distinto de bandas en electroforesis de gel. Se puede usar
el conocido procedimiento de Shantz para obtener toxina botulínica
de tipo A cristalina, como se describe en Shantz, E.J. et
al., Properties and use of Botulinum toxin and Other Microbial
Neurotoxins in Medicine, Microbiol Rev. 56: 80:99 (1922).
Generalmente, el complejo de toxina botulínica de tipo A se puede
aislar y purificar de una fermentación anaeróbica cultivando
Clostridium botulinum de tipo A en un medio apropiado. Se
puede recoger toxina en bruto por precipitación con ácido sulfúrico
y concentrar por ultramicrofiltración. La purificación se puede
llevar a cabo disolviendo el precipitado ácido en cloruro de
calcio. La toxina se puede precipitar a continuación con etanol
frío. El precipitado se puede disolver en tampón de fosfato de
sodio y centrifugar. Al secar se puede obtener a continuación
aproximadamente complejo de toxina botulínica de tipo A cristalina
de 900 kD con una potencia específica de 3 x 10^{7} LD_{50}
U/mg o mayor. Este procedimiento conocido se puede usar también, al
separar las proteínas de no-toxina, para obtener
toxinas botulínicas puras, tales como por ejemplo: toxina botulínica
de tipo A purificada con un peso molecular de aproximadamente 150
kD con una potencia específica de 1-2 x 10^{8}
LD_{50} U/mg o mayor; toxina botulínica de tipo B purificada con
un peso molecular de aproximadamente de 156 kD con una potencia
específica de 1-2 x 10^{8} LD_{50} U/mg o mayor,
y; toxina botulínica de tipo F purificada con un peso molecular de
aproximadamente de 155 kD con una potencia específica de
1-2 x 10^{7} LD_{50} U/mg o mayor.
Las toxinas botulínicas ya preparadas y
purificadas y los complejos de toxina apropiados para preparar
formulaciones farmacéuticas se pueden obtener de List Biological
Laboratoires, Inc. Campbell, California; the Centre for Applied
Microbiology and Research, Porton Down, U.K.; Wako (Osaka, Japan),
así como de Sigma Chemicals de St Louis, Missouri.
La toxina botulínica pura es tan lábil que tiene
utilidad práctica limitada para preparar una composición
farmacéutica. Además, los complejos de toxina botulínica, tales como
el complejo de toxina de tipo A son también extremadamente
susceptibles a la desnaturalización debido a la desnaturalización
por superficies, calor y condiciones alcalinas. La toxina
inactivada forma proteínas toxoides que pueden ser inmunogénicas.
Los anticuerpos resultantes pueden convertir a un paciente en
refractario a la inyección de toxina.
Como con las enzimas generalmente, las
actividades biológicas de las toxinas botulínicas (que son
peptidasas intracelulares) dependen, por lo menos en parte, de su
conformación tridimensional. De este modo, la toxina botulínica de
tipo A se destoxifica por calor, ensanchamiento de la superficie con
varios compuestos químicos y secado de la superficie.
Adicionalmente, se sabe que la dilución del complejo de toxina
obtenido del cultivo, fermentación y purificación conocidos a las
mucho más bajas concentraciones usadas para la formulación de la
composición farmacéutica da como resultado la rápida destoxificación
de la toxina a menos que esté presente un apropiado agente
estabilizante. La dilución de la toxina de cantidades de miligramos
a una disolución que contiene nanogramos por mililitro presenta
dificultades significativas debido a la rápida pérdida de toxicidad
específica con tan gran dilución. Dado que la toxina se puede usar
meses o años después de que se formule la composición farmacéutica
que contiene la toxina, la toxina se debe estabilizar con un agente
estabilizante. El único agente estabilizante con éxito para este
propósito han sido las proteínas derivadas de animales albúmina y
gelatina. Y como se indica, la presencia de proteínas derivadas de
animales en la formulación final presenta problemas potenciales
porque ciertos virus estables, priones y otros compuestos patógenos
o infecciosos que transportaban los donantes pueden contaminar la
toxina. Además, una cualquiera de las severas condiciones de pH,
temperatura e intervalos de concentración requeridas para
liofilizar (criodesecar) o secar a vacío una composición
farmacéutica que contiene una toxina botulínica en un formato para
transporte y almacenamiento de la toxina (lista para su uso o
reconstitución por un médico) puede destoxificar la toxina. De este
modo, se han usado con cierto éxito para estabilizar la toxina
botulínica proteínas derivadas de animales o de un banco de
donantes tales como gelatina y seroalbúmina.
Una composición farmacéutica que contiene toxina
botulínica comercialmente disponible se vende con el nombre
comercial BOTOX® (disponible de Allergan, Inc., de Irvine,
California). BOTOX® consiste en un complejo de toxina botulínica de
tipo A, albúmina y cloruro de sodio envasado en forma estéril secada
a vacío. La toxina botulínica de tipo A se fabrica de un cultivo de
la cepa Hall de Clostridium botulinum cultivada en un medio
que contiene NZ-amina y extracto de levadura. El
complejo de toxina botulínica de tipo A se purifica de la
disolución de cultivo por una serie de precipitaciones ácidas hasta
un complejo cristalino que consiste en la proteína activa de toxina
de alto peso molecular y una proteína de hemaglutinina asociada. El
complejo cristalino se redisuelve en una disolución que contiene
disolución salina y albúmina y se filtra estérilmente (0,2
micrómetros) previamente al secado a vacío. El BOTOX® se puede
reconstituir con disolución salina estéril no conservada
previamente a la inyección intramuscular. Cada vial de BOTOX®
contiene alrededor de 100 unidades (U) de complejo de toxina de
Clostridium botulinum de tipo A, 0,5 miligramos de
seroalbúmina humana y 0,9 miligramos de cloruro de sodio en una
forma estéril secada a vacío sin un conservante.
Para reconstituir BOTOX® estéril normal salino
sin un conservante; se usa una inyección de cloruro de sodio al
0,9% retirando la cantidad apropiada de diluyente en la jeringuilla
de tamaño apropiado. Dado que el BOTOX® se desnaturaliza por
burbujeo o por agitación violenta similar, el diluyente se inyecta
suavemente en el vial. El BOTOX® se debe administrar en las cuatro
horas siguientes después de la reconstitución. Durante este periodo
de tiempo, el BOTOX® reconstituido se almacena en un refrigerador
(de 2º a 8ºC). El BOTOX® reconstituido es transparente, incoloro y
libre de materia en partículas. El producto secado a vacío se
almacena en un frigorífico a o por debajo de 5ºC. El BOTOX® se
administra en las cuatro horas después de que se retira al vial del
frigorífico y se reconstituye. Durante estas cuatro horas, el
BOTOX® reconstituido se puede almacenar en un refrigerador (de 2º a
8ºC).
Se ha publicado que una alternativa apropiada a
la albúmina como estabilizador de la toxina botulínica puede ser
otra proteína o alternativamente un compuesto (no proteínico) de
bajo peso molecular. Carpender et al., Interactions of
Stabilizing Additives with Proteins During
Freeze-Thawing and Freeze-
Drying, International Symposium on Biological Product freeze-Drying and Formulation, 24-26 October 1990; Karger (1992), 225-239.
Drying, International Symposium on Biological Product freeze-Drying and Formulation, 24-26 October 1990; Karger (1992), 225-239.
Muchas substancias comúnmente usadas como
vehículos y agentes de carga en composiciones farmacéuticas han
mostrado ser inapropiadas como sustitutos de la albúmina en la
composición farmacéutica que contiene la neurotoxina. Por ejemplo,
se ha encontrado que el disacárido celobiosa es inapropiado como
estabilizante de la toxina. De este modo, se sabe que el uso de
celobiosa como excipiente junto con albúmina y cloruro de sodio da
como resultado un nivel de toxicidad mucho más bajo (10% de
recuperación) después de la liofilización de toxina botulínica
cristalina de tipo A con estos excipientes, comparada con la
toxicidad después de la liofilización solo con albúmina (de >75%
a >90% de recuperación). Goodnough et al., Stabilization
of Botulinum Toxin Type A During Lyophilization, App & Envir.
Micro. 58 (10) 3426-3428 (1992).
Además, los sacáridos, incluyendo los
polisacáridos, son en general pobres candidatos a servir como
estabilizantes de proteínas. De este modo, se sabe que una
composición farmacéutica que contiene un ingrediente activo
proteínico es inherentemente inestable si la formulación de
proteína comprende un sacárido (tal como glucosa o un polímero de
glucosa) o carbohidratos porque las proteínas y la glucosa se sabe
que interaccionan conjuntamente y sufren la bien conocida reacción
de Maillard, debida, es decir, a la naturaleza reductora de la
glucosa y polímeros de glucosa. Se ha dedicado mucho trabajo a
intentos en su mayor parte sin éxito de prevenir esta reacción
proteína-sacárido, por ejemplo, por reducción de la
humedad o uso de azúcares no reductores. Significativamente, el
camino degradante de la reacción de Maillard puede dar como
resultado una insuficiencia terapéutica del ingrediente activo
proteínico. Una formulación farmacéutica que comprende proteína y un
sacárido, carbohidrato o azúcar reductor, tal como un polímero de
glucosa, es por lo tanto inherentemente inestable y no se puede
almacenar durante un largo periodo de tiempo sin pérdida
significativa de la actividad biológica deseada de la proteína
ingrediente activo.
Notablemente, una de las razones de que la
seroalbúmina humana pueda funcionar efectivamente como estabilizante
de un ingrediente activo proteínico en una composición farmacéutica
es porque la albúmina, siendo una proteína, no sufre la reacción de
Maillard con el ingrediente activo proteínico en una composición
farmacéutica. Por consiguiente, uno esperaría buscar y encontrar un
substituto de la albúmina entre otras proteínas.
Encontrar un substituto apropiado para la
albúmina como estabilizante de la toxina botulínica presente en una
composición farmacéutica es difícil y problemático porque se cree
que la albúmina funciona en una composición farmacéutica como más
que un mero agente de carga. De este modo, la albúmina aparentemente
puede interactuar con la toxina botulínica para incrementar la
potencia de la neurotoxina. Por ejemplo, se sabe que la seroalbúmina
bovina puede actuar como más que un mero excipiente estabilizante
para la toxina botulínica de tipo A, dado que la seroalbúmina
bovina aparentemente también acelera la velocidad de catálisis de
substratos de péptido sintético, substratos que se parecen al
substrato intraneuronal SNAP-25 para la toxina
botulínica de tipo A, Schmidt et al., Endoproteinase
Activity of Type A Botulinum Neurotoxin Substrate Requirements and
Activation by Serum Albumin, J. of Protein Chemistry, 16 (1),
19-26 (1997). De este modo, la albúmina puede tener
un efecto potenciante, aparentemente afectando a las cinéticas de
velocidad, en la acción proteolítica intracelular de una toxina
botulínica en el substrato de la toxina. Este efecto potenciante
puede ser debido a la albúmina que ha acompañado a la toxina
botulínica en la endocitosis de la toxina en una neurona blanco o el
efecto potenciador puede ser debido a la presencia
pre-existente de albúmina citoplasmática dentro de
la proteína de la neurona previamente a la endocitosis de la toxina
botulínica.
El descubrimiento de la presencia de un efecto
estimulante de la velocidad de la cinética por la seroalbúmina
bovina en la actividad proteolítica de la toxina botulínica de tipo
A convierte en especialmente problemática la búsqueda de un
substituto apropiado para la albúmina en una formulación
farmacéutica que contiene toxina botulínica. De este modo, un
substituto de la albúmina con características deseables de
estabilización de la toxina puede tener un efecto desconocido y
posiblemente perjudicial en la velocidad de la catálisis del
substrato por la toxina, dado que por lo menos con respecto a la
seroalbúmina bovina las dos características (estabilización de la
toxina y potenciación de la catálisis del substrato de toxina) son
aparentemente inherentes al mismo excipiente de albúmina. Este
efecto de potenciación de la albúmina muestra que la albúmina no
actúa como un mero excipiente en la formulación y por lo tanto
convierte en más difícil la búsqueda de un substituto apropiado de
la albúmina.
Adicionalmente hay muchas características únicas
de la toxina botulínica y su formulación en una composición
farmacéutica apropiada que restringen e impiden y convierten en muy
problemática la búsqueda de un substituto para la albúmina usada en
las actuales formulaciones farmacéuticas que contiene toxina
botulínica. A continuación siguen ejemplos de cuatro de estas
características únicas. Primera, la toxina botulínica es una
proteína relativamente grande para su incorporación en una
formulación farmacéutica (el peso molecular de un complejo de toxina
botulínica de tipo A es 900 kD) y por lo tanto es inherentemente
frágil y lábil. El tamaño del complejo de toxina lo hace mucho más
frágil y lábil que las proteínas más pequeñas menos complejas, por
ello las dificultades de formulación y manejo de la formulación si
se va a mantener la estabilidad de la toxina. Por consiguiente, un
substituto de la albúmina debe ser capaz de interaccionar con la
toxina de una manera que no desnaturalice, fragmente o de
destoxifique de otro modo la molécula de toxina o provoque la
disociación de las proteínas no-toxina presentes en
el complejo de toxina. Segunda, como producto biológico conocido más
letal, se exige excepcional seguridad, precisión y exactitud para
todas las etapas de la formulación de una composición farmacéutica
que contiene toxina botulínica. De este modo, un potencial
substituto preferido de la albúmina no debe ser él mismo tóxico o
difícil de manejar para no exacerbar los requerimientos ya
extremadamente exigentes de formulación de la composición
farmacéutica que contiene toxina botulínica.
Tercera, dado que la toxina botulínica fue la
primera toxina microbiana en ser aprobada para inyección para el
tratamiento de enfermedad humana, se tuvieron que desarrollar y
aprobar protocolos específicos para el cultivo, producción en masa,
formulación en un compuesto farmacéutico y uso de la toxina
botulínica. Son consideraciones importantes la pureza de la toxina
y la dosis para inyección. La producción por cultivo y la
purificación se deben llevar a cabo de modo que la toxina no se
exponga a ninguna substancia que pueda contaminar el producto final
incluso en cantidades de trazas y provocar reacciones indebidas en
el paciente. Estas restricciones requieren el cultivo en medio
simplificado sin el uso de productos de carne animal y la
purificación por procedimientos que no impliquen disolventes o
resinas sintéticas. La preparación de la toxina usando enzimas,
varios intercambiadores, tales como los presentes en columnas de
cromatografía y disolventes sintéticos puede introducir
contaminantes y son por lo tanto excluidos de las etapas de la
formulación preferida. Además, la toxina botulínica de tipo A se
desnaturaliza ya a temperaturas por encima de 40ºC, pierde toxicidad
cuando se forman burbujas en la interfase aire/líquido, y se
desnaturaliza en presencia de nitrógeno o dióxido de carbono.
Cuarta, existen dificultades particulares para
estabilizar la toxina botulínica de tipo A, porque el tipo A
consiste en una molécula de toxina de alrededor de 150 kD en
asociación no covalente con proteínas no-toxina que
pesan alrededor de 750 kD. Las proteínas no-toxina
se cree que conservan o ayudan a estabilizar las estructuras
secundaria y terciaria de las que depende la toxicidad. Los
procedimientos o protocolos aplicables a la estabilización de
no-proteínas o a proteínas relativamente más
pequeñas no son aplicables a los problemas inherentes a la
estabilización de los complejos de toxina botulínica, tales como el
complejo de toxina botulínica de tipo A de 900 kD. De este modo,
aunque de pH 3,5 a 6,8 la toxina de tipo A y las proteínas
no-toxina están unidas conjuntamente no
covalentemente, en condiciones ligeramente alcalinas (pH >7,1) la
toxina muy lábil se desprende del complejo de toxina. Debido a su
labilidad, la toxina pura no tiene o tiene utilidad limitada para la
administración médica.
A la vista de la naturaleza única de la toxina
botulínica y de los requerimientos descritos anteriormente, se debe
ver que la probabilidad de encontrar un substituto apropiado de la
albúmina para la albúmina usada en las actuales composiciones
farmacéuticas de toxina botulínica en realidad se aproxima a cero.
Previamente a la presente invención, se ha sabido que solo las
proteínas derivadas de animales albúmina y gelatina tienen utilidad
como estabilizantes apropiados de la toxina botulínica presente en
una formulación farmacéutica. De este modo, se sabe que la
albúmina, por si misma o con una o más substancias adicionales tales
como fosfato de sodio o citrato de sodio, permite una alta
recuperación de la toxicidad de la toxina botulínica de tipo A
después de la liofilización. Desgraciadamente, como se describe ya,
la albúmina, como producto de sangre mezclada, puede, por lo menos
potencialmente, transportar elementos infecciosos o causantes de
enfermedad cuando está presente en una composición farmacéutica.
Ciertamente, cualquier producto o proteína animal tal como gelatina
puede también contener potencialmente pirógenos u otras substancias
que pueden causar reacciones adversas al inyectarla a un
paciente.
La solicitud de patente china CN 1215084A
discute una toxina botulínica de tipo A formulada con gelatina, una
proteína derivada de un animal. Esta formulación por lo tanto no
elimina el riesgo de transmitir un derivado de proteína animal o un
elemento infeccioso que lo acompañe.
Un polisacárido puede estar formado de cientos o
incluso miles de unidades de sacárido unidas conjuntamente por
uniones glicósido (éter). Dos importantes polisacáridos son la
celulosa y el almidón, La celulosa es el principal material
estructural en las plantas, dando a las plantas su rigidez y forma.
El almidón constituye el suministro de alimento de reserva de las
plantas y se encuentra principalmente en varias semillas y
tubérculos.
El almidón se presenta en forma de gránulos cuyo
tamaño y forma son característicos de la planta de la que se
obtiene el almidón. En general alrededor del 80% del almidón es una
fracción insoluble en agua llamada amilopectina. La amilopectina
está compuesta de cadenas de unidades de D-glucosa
(como glucopiranosa), estando cada unidad unida por una unión
alfa-glicósido al C-4 de la
siguiente unidad de glucosa. Como el almidón, la celulosa también
está formada de cadenas de unidades de D-glucosa, en
la que cada unidad está unida por una unión glucósido al
C-4 de la siguiente unidad. Sin embargo, al
contrario que en el almidón, las uniones glicósido en la celulosa
son uniones beta. El tratamiento de la celulosa con ácido sulfúrico
y anhídrido acético da el disacárido celobiosa. Como se describe
previamente, los intentos de estabilizar la toxina botulínica usando
celobiosa no han tenido éxito.
Un derivado de almidón particular que se puede
obtener tratando el almidón con piridina y etilenclorohidrina,
2-hidroxietilalmidón, denominado también hetalmidón.
La patente de EE.UU: No 4.457.916 describe una combinación de un
tensioactivo no iónico e hidroxietilalmidón para estabilizar
disoluciones acuosas de factor de necrosis tumoral (TNF).
Adicionalmente, es conocida una disolución acuosa al 6% de
2-hidroxietilalmidón (hetalmidón) (disponible de Du
Pont Pharma, Wilmington, Delaware con el nombre comercial HESPAN®,
hetalmidón al 6% en inyección de cloruro de sodio al 0,9%). Se sabe
que la albúmina actúa como expansor del volumen plasmático en la
administración intravenosa a un paciente. También se ha
administrado HESPAN® a pacientes para conseguir un efecto de
expansión del volumen plasmático y en ese sentido el HESPAN® se
puede considerar un substituto de la albúmina intravenosa.
El hetalmidón es un coloide artificial derivado
de un almidón céreo compuesto casi completamente de amilopectina.
El hetalmidón se puede obtener introduciendo grupos de éter
hidroxietílico en unidades de glucosa del almidón, y el material
resultante se puede hidrolizar a continuación para dar un producto
con un peso molecular apropiado para su uso como un expansor del
volumen plasmático. El hetalmidón está caracterizado por su
substitución molar y también por su peso molecular. La substitución
molar puede ser aproximadamente 0,75, queriendo decir que el
hetalmidón está eterificado hasta el punto de que por cada 100
unidades de glucosa de hetalmidón hay, como promedio,
aproximadamente 75 grupos hidroxietilo substituyentes. El peso
molecular promedio en peso del hetalmidón es aproximadamente 670 kD
con un intervalo de 450 kD a 800 kD y estando por lo menos el 80% de
las unidades del polímero dentro del intervalo de 20 kD a 2.500 kD.
Los grupos hidroxietilo están unidos por uniones éter
principalmente en el C-2 de la unidad de glucosa y
en menor grado en el C-3 y C-6. El
polímero se parece al glicógeno, y las unidades de
D-glucosa polimerizada están unidas principalmente
por uniones \alpha-1,4 con uniones de
ramificación \alpha-1,6 ocasionales. El grado de
ramificación es aproximadamente 1:20, queriendo decir que hay un
promedio de aproximadamente una ramificación
\alpha-1,6 por cada 20 unidades de monómero de
glucosa. El hetalmidón comprende más de 90% de amilopectina.
La expansión de volumen plasmático producida por
HESPAN® se puede aproximar a la obtenida por la albúmina. Las
moléculas de hetalmidón por debajo de 50 kD de peso molecular se
eliminan rápidamente por excreción renal y una única dosis de
aproximadamente 500 ml de HESPAN® (aproximadamente 30 g) dan como
resultado la eliminación en la orina de aproximadamente el 33% del
HESPAN® administrado en alrededor de 24 horas. El grupo hidroxietilo
del hidroxietilalmidón no se escinde in vivo, sino que
permanece intacto y unido a las unidades de glucosa cuando se
excreta. No se producen cantidades significativas de glucosa ya que
la hidroxietilación evita el metabolismo completo de los polímeros
de hidroxietilalmidón más pequeños.
La celulosa se puede convertir similarmente en
hidroxietilcelulosa. El peso molecular medio de
2-hidroxietil-celulosa (un éter
2-hidroxietílico de celulosa) es de alrededor de 90
kD. Desgraciadamente, la hidroxietilcelulosa, al contrario que el
hidroxietilalmidón, es altamente reactiva y por lo tanto inapropiada
para su uso como estabilizante de un ingrediente de proteína activa
en una formulación farmacéutica.
Lo que se necesita por lo tanto es un substituto
apropiado para la proteína derivada de animal o estabilizante de
albúmina de banco de donantes usado en composiciones farmacéuticas
que contienen neurotoxina.
Las solicitudes de patente WO 96/11699 y WO
97/35604, así como los documentos de M.C. Goodnough et al.,
Appl. Environ. Microbiol., 58, 1992, 3426-3428 y
J.D. Rollnik et al., Eur. Neurol. 2000,
43:9-12 describen composiciones farmacéuticas que
comprenden neurotoxina botulínica y albúmina nativa. No obstante,
ninguno de estos documentos describe o sugiere el uso de una
composición farmacéutica que comprende una toxina botulínica y una
albúmina fabricada recombinantemente. Además, la solicitud de
patente WO 00/15245 que se publicó después de la fecha de prioridad
de la presente invención, describe formulaciones líquidas de toxina
botulínica que incluyen adicionalmente una proteína como
excipiente, tal como seroalbúmina, que no confiere una actividad
biológica significativa adicional a la preparación.
La presente invención cumple esta necesidad y
proporciona la substitución de la albúmina presente en una
composición farmacéutica por un compuesto que puede estabilizar la
toxina botulínica presente en la composición farmacéutica. El
compuesto de substitución de la albúmina tiene la característica de
baja y preferiblemente negligible inmunogenicidad cuando se inyecta
en un paciente humano. Adicionalmente, el substituto de la albúmina
preferido tiene una rápida velocidad de aclaramiento del cuerpo
después de la inyección de la composición farmacéutica.
Tal como se usan aquí, las palabras o términos
descritos a continuación tienen las siguientes definiciones.
La palabra "alrededor" quiere decir que el
objeto, parámetro o término así calificado incluye un intervalo de
más o menos diez por ciento por encima y por debajo del valor del
objeto, parámetro o término citado.
La palabra "aminoácido" incluye
poliaminoácidos.
La palabra "polisacárido" quiere decir un
polímero de más de dos monómeros de molécula de sacárido, monómeros
que pueden ser idénticos o diferentes.
La frase "composición farmacéutica" quiere
decir una formulación en la que un ingrediente activo es una
neurotoxina, tal como una neurotoxina de Clostridio. La palabra
"formulación" quiere decir que hay por lo menos un ingrediente
adicional en la composición farmacéutica además del ingrediente
activo de neurotoxina. Una composición farmacéutica es por lo tanto
una formulación que es apropiada para el diagnóstico o
administración terapéutica (es decir, por inyección intramuscular o
subcutánea) a un paciente humano. La composición farmacéutica puede
estar: en un estado liofilizado o secado a vacío; una disolución
formada después de la reconstitución de la composición farmacéutica
liofilizada o secada a vacío con disolución salina o agua, o; en
forma de una disolución que no requiere reconstitución. El
ingrediente activo de neurotoxina puede ser uno de los serotipos de
toxina botulínica A, B, C_{1}, D, E, F o G o una toxina tetánica,
todas las cuales son fabricadas por bacterias de Clostridio.
La frase "formulación terapéutica" quiere
decir una formulación que se puede usar para tratar y por ello
aliviar un trastorno o enfermedad, tal como un trastorno o
enfermedad caracterizada por la hiperactividad (es decir,
espasticidad) de un músculo periférico.
Las palabras "que estabiliza",
"estabiliza" o "estabilización" quieren decir que al
reconstituir con disolución salina o agua una composición
farmacéutica que contiene toxina botulínica liofilizada, o secada a
vacío que se ha almacenado a por debajo de alrededor de -2 grados
centígrados durante entre seis meses y cuatro años, o para una
disolución acuosa de composición farmacéutica que contiene toxina
botulínica que se ha almacenado a entre alrededor de 2 grados y
alrededor de 8 grados centígrados durante de seis meses a cuatro
años, la toxina botulínica presente en la composición farmacéutica
reconstituida o en disolución acuosa tiene más de alrededor del 20%
y hasta alrededor del 100% de la toxicidad que tenía la toxina
botulínica biológicamente activa previamente a ser incorporada en
la composición farmacéutica.
El aspecto de la presente invención es una
composición farmacéutica que comprende una toxina botulínica y una
seroalbúmina humana fabricada recombinantemente en una forma para
reconstitución. Esta composición también incluye preferiblemente un
acetiltriptofanato o sus sales o derivados.
Esta invención también incluye la adición de una
fuente de ion cinc a una formulación farmacéutica que contiene
toxina botulínica. Los metales, especialmente los cationes
divalentes, se dice que influyen enormemente en el éxito de una
formulación liofilizada debido a varias criopropiedades incluyendo
las estructuras de red de los hielos formados. Los metales extraños
tales como especies de cobre y hierro se prestan ellos mismos a
oxidaciones radicales y se deben evitar generalmente. Más
específicamente, la toxina botulínica de tipo A depende del cinc
unido para su actividad. Muchos de los excipientes propuestos o
productos de reacción con los excipientes quelarán metales. Esto
podría conducir a la formación de hielos inestables y/o toxina
inactivada. Suministrando cinc abundante en la formulación se
asegura la presencia de cationes divalentes deseables, la
probabilidad de la pérdida de cinc por la toxina se reduce, y se
mejora la estabilidad. Esto se puede conseguir por la adición de
ZnSO_{4} a una composición farmacéutica de toxina botulínica.
Se conoce la producción de seroalbúmina humana
recombinante (rHSA, del inglés recombinant human serum
albumin) usando una cepa de expresión de la levadura
metilotrófica Pichia pastoris con elevada productividad. Las
formulaciones farmacéuticas que contienen toxina botulínica se
pueden preparar conteniendo rHSA estabilizante. La rHSA expresada
por células hospedadoras de levadura alteradas genéticamente, aunque
tienen la misma secuencia primaria de aminoácidos, difiere en otros
aspectos de la HSA derivada de plasma. Así, aunque eucariota, a la
levadura, le faltan muchos procesos intracelulares que se
encuentran en mamíferos. Adicionalmente, la pHSA (seroalbúmina
humana derivada de plasma) se obtiene en forma no glicosilada y
sufre adición extracelular, no enzimática de glucosa. Por tanto,
los restos carbohidrato de pHSA y rHSA son diferentes. Además, se
sabe que las cantidades de ácido palmítico y ácido esteárico
presentes en rHSA son muchos menores que las contenidas en pHSA.
Cabe esperar que estas diferencias den lugar a diferencias en,
entre otros, unión a ligandos, estabilidad conformacional y carga
molecular entre rHSA y pHSA. Por tanto, fue sorprendente descubrir
que rHSA se puede usar para estabilizar toxina botulínica,
particularmente a la vista del conocido efecto de velocidad cinético
de pHSA frente a toxina botulínica. Una ventaja de rHSA es que está
libre de patógenos derivados de la sangre. Así, otro aspecto de la
invención abarca la sustitución de la seroalbúmina humana derivada
de sangre en una composición farmacéutica con rHSA.
Preferiblemente, la rHSA está presente en la formulación
farmacéutica que contiene toxina botulínica con acetiltriptofanato,
como se ha indicado anteriormente.
Se calienta seroalbúmina humana disponible
comercialmente a 60ºC durante diez horas como requisito para
eliminar agentes potencialmente infecciosos derivados de la
acumulación de sangre humana. Para prevenir una desnaturalización
seria durante este procedimiento, se añaden dos estabilizantes:
acetiltriptofanato de sodio y caprilato de sodio. Con una rHA no es
necesario añadir estos ingredientes pues no existe riesgo de
enfermedad y no se requiere etapa de calentamiento. Se ha
descubierto que la adición de acetiltriptofanato de sodio a rHA
aumenta la estabilidad térmica más que lo mostrado por el uso de
caprilato de sodio solamente, incluso cuando la concentración de
caprilato de sodio se duplica. Sin querer limitarse a la teoría, se
cree que puede ser debido a la unión de caprilato a solamente un
sitio, mientras que el acetiltriptofanato de sodio se une a dos
sitios. Parece que la unión a este segundo sitio aumenta la
resistencia a la perturbación térmica. Se puede postular además,
que la adición de acetiltriptofanato de sodio puede, de alguna
manera, aumentar la estabilidad de las formulaciones de toxina
botulínica, posiblemente manteniendo una conformación favorable
termodinámicamente en la molécula, uniéndose a la toxina o evitando
la desnaturalización de la propia seroalbúmina humana.
Esta invención también abarca la adición de un
conservante, bien en el diluyente o en la propia formulación, para
permitir el almacenamiento prolongado. Un conservante preferido es
disolución salina conservada que contiene alcohol bencílico.
Una formulación líquida puede ser ventajosa. Una
presentación de una sola etapa (p. ej., jeringa cargada previamente)
o una configuración de producto que el usuario percibe como si
fuera una presentación de una sola etapa (p. ej., una jeringa con
dos compartimentos) sería cómoda, eliminando la etapa de
reconstitución. La criodesecación es un proceso complicado, caro y
difícil. A menudo es más fácil y más barato producir formulaciones
líquidas. Por otro lado, las formulaciones líquidas son sistemas
dinámicos y por tanto son más susceptibles a la interacción de
excipientes, reacciones rápidas, crecimiento bacteriano y oxidación,
que las formulaciones criodesecadas. Se puede necesitar un
conservante compatible. Los antioxidantes tales como metionina
también pueden ser útiles como depuradores, especialmente si se
usan tensioactivos, para reducir la adsorción pues muchos de estos
compuestos contienen o producen peróxidos. Cualquiera de los
excipientes estabilizantes que se pueden usar en una formulación
criodesecada (p.ej., hidroxietil-almidón o un
aminoácido tal como lisina) se puede adaptar para usarlo en una
formulación líquida para ayudar a reducir la adsorción y estabilizar
la toxina. Las suspensiones similares a las desarrolladas para
insulina también son buenas candidatas. Adicionalmente, la
estabilización de toxina botulínica en un vehículo líquido puede
requerir un vehículo de pH bajo, pues está recogido que la toxina
es lábil por encima de pH 7. Esta acidez podría producir quemaduras
y ardor tras la inyección. Se podría emplear una jeringa binaria.
La inclusión de un tampón co-dispensador, suficiente
para elevar el pH hasta el fisiológico, aliviaría la incomodidad de
la inyección de pH bajo a la vez que mantendría la toxina a un pH
bajo durante el almacenamiento. Otra opción de jeringa de dos
compartimentos incluiría diluyente y material liofilizado segregado
en un compartimento distinto, mezclándose solamente tras el uso.
Esta opción proporciona las ventajas de una formulación líquida sin
el tiempo y recursos
adicionales.
adicionales.
Así, la toxina botulínica se puede preparar a pH
bajo para ser dispensado conjuntamente con un tampón que eleva el
pH hasta o próximo al pH fisiológico en el momento de la
administración. La jeringa binaria o con dos compartimentos puede
tener en el primer compartimento (próximo al émbolo) una formulación
líquida de una toxina botulínica con un pH entre 3 a 6 (es decir, a
pH 4,0). El segundo compartimiento (próximo a la punta de la aguja)
puede contener un tampón adecuado, tal como disolución salina
tamponada de fosfato a un pH superior (es decir, pH 7,0).
Alternativamente, el primer compartimiento puede contener un
diluyente salino y el segundo compartimiento puede contener una
formulación de neurotoxina criodesecada o liofilizada. Los dos
compartimentos se pueden unir de tal modo, y los componentes
tamponantes seleccionados de tal modo que las disoluciones se
mezclan en o cerca de la aguja, llevando así la disolución final a
un pH fisiológico. Jeringas de dos compartimentos adecuadas para
usar como jeringas cargadas previamente para los fines indicados en
esta memoria, se pueden obtener en Vetter
Pharma-Fertigung de Yardley, Pennsylvania.
Hay distintas ventajas para formular toxina
botulínica a un pH bajo. La toxina tiene un punto isoleléctrico
(pI) bajo y formular proteínas cerca de sus pI es un modo conocido
para estabilizar una proteína. Adicionalmente, la toxina se usa a
una concentración muy baja, haciendo que la adsorción superficial
sea un problema. El uso de una disolución de pH bajo puede suprimir
la ionización de los sitios de la toxina que pueden interaccionar
con las superficies. Los materiales de la jeringa y del émbolo son
materiales que reducen la adsorción superficial por la toxina. Tales
materiales adecuados son polipropileno.
Como se describe previamente, el complejo de
toxina botulínica de tipo A se puede obtener de un cultivo de la
cepa Hall de Clostridium botulinum cultivado en un medio que
contiene NZ-amina y extracto de levadura. El
complejo de toxina botulínica de tipo A se purifica de la disolución
de cultivo por una serie de precipitaciones ácidas hasta un
complejo cristalino que consiste en la proteína de toxina activa de
alto peso molecular y una proteína de hemaglutinina asociada. El
complejo cristalino se redisuelve a continuación en una disolución
que contiene disolución salina y albúmina y se filtra estérilmente
(0,2 micrómetros) previamente al secado a vacío. El BOTOX® se
reconstituye a continuación con disolución salina estéril no
conservada previamente a la inyección intramuscular. Cada vial de
BOTOX® contenía alrededor de 100 (U) de complejo de toxina de
Clostridium botulinum de tipo A, 0,5 miligramos de
seroalbúmina humana y 0,9 miligramos de cloruro de sodio en forma
estéril secada a vacío sin un conservante. Según la presente
invención, la seroalbúmina humana se reemplaza por una albúmina
fabricada recombinantemente.
Ejemplo de referencia
2
Se prepararon formulaciones farmacéuticas de
complejo de neurotoxina de toxina botulínica de tipo A purificada
de la misma manera descrita en el Ejemplo 1 anterior, excepto que se
reemplazaron los 0,5 miligramos de albúmina por 500 \mug o 600
\mug de hetalmidón. Se determinó que se mantenía la potencia total
con la preparación de las formulaciones que contienen hetalmidón.
De este modo, con ambas formulaciones que contienen hetalmidón, la
potencia de la composición que contiene hetalmidón, libre de
albúmina, tal como se mide en el momento de la reconstitución del
complejo de toxina butulínica de tipo A de 100 U (\pm20 U)
liofilizado, era de 96 a 128 unidades. Tres composiciones
farmacéuticas diferentes de complejo de toxina botulínica de tipo A
con hetalmidón tenían medidas de potencia, en el momento de la
reconstitución, de 105, 111 y 128 unidades respectivamente. La
potencia se midió usando el ensayo de potencia de toxina por
administración estándar a ratones.
Ejemplo de referencia
3
Se prepararon formulaciones farmacéuticas de
complejo de neurotoxina de toxina botulínica de tipo A purificada
de la misma manera descrita en el Ejemplo 1 anterior, excepto que se
reemplazaron los 0,5 miligramos de albúmina por 500 \mug o 600
\mug de hetalmidón. Además se añadió 1 mg de glicina a la
formulación. Una composición farmacéutica liofilizada de complejo
de toxina botulínica de tipo A de 100 U, libre de albúmina, con
hetalmidón más glicina se almacenó a continuación durante siete
meses a -5ºC. Al final de este periodo de siete meses se determinó
que la potencia de esta formulación de toxina con hetalmidón más
glicina, usando el ensayo de administración a ratones, estaba
esencialmente sin cambios (es decir, la potencia difería en menos
del 5% de la potencia original).
Ejemplo de referencia
4
Se prepararon formulaciones farmacéuticas de
complejo de neurotoxina de toxina botulínica de tipo A purificada
de 100 U de la misma manera descrita en el Ejemplo 1 anterior,
excepto que se reemplazaron los 0,5 miligramos de albúmina por 600
\mug de hetalmidón. Además se añadió 1 mg de lisina a la
formulación. Una composición farmacéutica liofilizada de complejo
de toxina botulínica de tipo A de 100 U, libre de albúmina, con
hetalmidón más lisina se almacenó a continuación durante un año a
-5ºC Al final de este periodo de un año se determinó que la
potencia de esta formulación de toxina con hetalmidón más glicina,
usando el ensayo de administración a ratones, estaba esencialmente
sin cambios (es decir, la potencia difería en menos del 5% de la
potencia original).
Ejemplo de referencia
5
Se preparan formulaciones farmacéuticas de
complejo de neurotoxina purificada de toxina botulínica de tipo A
de 100 U de la misma manera descrita en el Ejemplo 1 anterior,
excepto que se reemplazaron los 0,5 miligramos de albúmina por 600
\mug de hetalmidón. Además se añadió 1 mg de histidina a la
formulación. Una composición farmacéutica liofilizada de complejo
de toxina botulínica de tipo A de 100 U, libre de albúmina, con
hetalmidón más histidina se almacenó a continuación durante un año
a -5ºC. Al final de este periodo de un año se determinó que la
potencia de esta formulación de toxina con hetalmidón más histidina,
usando el ensayo de administración a ratones, estaba esencialmente
sin cambios (es decir, la potencia difería en menos del 5% de la
potencia original).
Ejemplo de referencia
6
Se prepararon formulaciones farmacéuticas de
complejo de neurotoxina purificada de toxina botulínica de tipo A
de 100 U de la misma manera descrita en el Ejemplo 1 anterior,
excepto que se reemplazaron los 0,5 miligramos de albúmina por 600
\mug de hetalmidón. Además se añadió 1 mg de arginina a la
formulación. Una composición farmacéutica liofilizada de complejo
de toxina botulínica de tipo A de 100 U, libre de albúmina, con
hetalmidón más arginina se almacenó a continuación durante un año a
-5ºC. Al final de este periodo de un año se determinó que la
potencia de esta formulación de toxina con hetalmidón más glicina,
usando el ensayo de administración a ratones, estaba esencialmente
sin cambios (es decir, la potencia difería en menos del 5% de la
potencia original).
Ejemplo de referencia
7
Se pueden preparar formulaciones farmacéuticas
de complejo de neurotoxina purificada de toxina botulínica de tipo
A de la misma manera descrita en el Ejemplo 1 anterior, excepto que
los 0,5 miligramos de albúmina se pueden reemplazar por
aproximadamente 1 mg de un aminoácido tal como lisina, glicina,
histidina o arginina. Una composición farmacéutica liofilizada de
complejo de toxina botulínica de tipo A de 100 U, libre de
polisacárido, libre de albúmina, más glicina se puede almacenar
durante al menos un año a -5ºC, y al final de este periodo se puede
tener una potencia esencialmente sin cambios (es decir, la potencia
puede diferir en menos del 5% de la potencia original).
Ejemplo de referencia
8
A un varón de 48 años de edad se le diagnostica
un estado de músculo espástico, tal como distonía cervical. Se
inyecta intramuscularmente al paciente entre alrededor de 1 x
10^{-3} U/kg y 35 U/kg de una composición farmacéutica de toxina
botulínica de tipo A que contiene 600 \mug de hetalmidón y 1 mg de
un aminoácido tal como lisina. En 1-7 días los
síntomas del estado de músculo espástico se alivian y el alivio de
los síntomas persiste durante por lo menos durante de alrededor de
2 meses a alrededor de 6 meses.
Una composición farmacéutica según la invención
descrita aquí tiene muchas ventajas, que incluyen las
siguientes:
1. La composición farmacéutica se puede preparar
libre de cualquier otro producto de la sangre, tal como albúmina y
por lo tanto libre de cualquier elemento infeccioso producto de la
sangre tal como un prión.
2. La composición farmacéutica tiene estabilidad
y alto % de recuperación de la potencia de la toxina, comparable o
superior a la conseguida con las composiciones farmacéuticas
actualmente disponibles.
Aunque la presente invención se ha descrito con
detalle con respecto a ciertos métodos preferidos, son posibles
otras realizaciones, versiones y modificaciones dentro del alcance
de la presente invención.
Por consiguiente, el alcance de las siguientes
reivindicaciones no debe estar limitado a las descripciones de las
realizaciones preferidas descritas anteriormente.
Claims (5)
1. Una composición farmacéutica que
comprende:
(a) una toxina botulínica, y;
(b) una seroalbúmina humana recombinante,
en la que la composición farmacéutica está en
una forma para reconstitución.
2. La composición farmacéutica de la
reivindicación 1, que se encuentra en un estado liofilizado, secado
a vacío o criodesecado.
3. La composición farmacéutica de la
reivindicación 1 ó 2, que comprende además un acetiltriptofanato o
sus sales o derivados.
4. La composición farmacéutica de la
reivindicación 1, en la que la seroalbúmina humana recombinante se
expresó en células de levadura.
5. La composición farmacéutica de una cualquiera
de las reivindicaciones anteriores, en la que la toxina botulínica
es toxina botulínica de tipo A.
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---|---|---|---|---|
TW574036B (en) * | 1998-09-11 | 2004-02-01 | Elan Pharm Inc | Stable liquid compositions of botulinum toxin |
PT1253932E (pt) * | 2000-02-08 | 2005-07-29 | Allergan Inc | Composicoes farmaceuticas de toxina botulinica |
US7780967B2 (en) * | 2000-02-08 | 2010-08-24 | Allergan, Inc. | Reduced toxicity Clostridial toxin pharmaceutical compositions |
US8632785B2 (en) * | 2000-02-08 | 2014-01-21 | Allergan, Inc. | Clostridial toxin pharmaceutical composition containing a gelatin fragment |
DE10035156A1 (de) * | 2000-07-19 | 2002-02-07 | Biotecon Ges Fuer Biotechnologische Entwicklung & Consulting Mbh | Proteinkomplex als Vehikel für oral verfügbare Protein-Arzneimittel |
US6423319B1 (en) * | 2000-10-04 | 2002-07-23 | Allergan Sales, Inc. | Methods for treating muscle injuries |
DE10149030A1 (de) * | 2001-10-05 | 2003-04-10 | Viscum Ag | Stabile galenische gefriergetrocknete Arzneimittelzubereitung von rViscumin |
US7140371B2 (en) * | 2002-03-14 | 2006-11-28 | Allergan, Inc. | Surface topography method for determining effects of a botulinum toxin upon a muscle and for comparing botulinum toxins |
EP1491205A4 (en) * | 2002-03-29 | 2007-04-25 | Chemo Sero Therapeut Res Inst | MEANS FOR THE TREATMENT OF HYPERMYOTONIA |
US7491403B2 (en) | 2002-12-20 | 2009-02-17 | Botulinum Toxin Research Associates | Pharmaceutical botulinum toxin compositions |
US7459164B2 (en) | 2002-05-28 | 2008-12-02 | Botulinum Toxin Research Associates, Inc. | Composition for therapeutic and cosmetic botulinum toxin |
US7691394B2 (en) | 2002-05-28 | 2010-04-06 | Botulinum Toxin Research Associates, Inc. | High-potency botulinum toxin formulations |
US7238357B2 (en) * | 2002-11-05 | 2007-07-03 | Allergan, Inc. | Methods for treating ulcers and gastroesophageal reflux disease |
DE602004015755D1 (de) * | 2003-03-31 | 2008-09-25 | Alza Corp | Nicht wässrige einphasige visköse vehikel und formulierungen die diese vehikel verwenden |
US7220422B2 (en) * | 2003-05-20 | 2007-05-22 | Allergan, Inc. | Methods and compositions for treating eye disorders |
FR2855177B1 (fr) * | 2003-05-23 | 2005-07-08 | Raymond Robert | Composition contenant des acides nucleiques lyophilises en presence de collagene et de disaccharides |
US7160699B2 (en) | 2003-09-25 | 2007-01-09 | Allergan, Inc. | Media for clostridium bacterium and processes for obtaining a clostridial toxin |
US7148041B2 (en) | 2003-09-25 | 2006-12-12 | Allergan, Inc. | Animal product free media and processes for obtaining a botulinum toxin |
US7452697B2 (en) | 2003-09-25 | 2008-11-18 | Allergan, Inc. | Chromatographic method and system for purifying a botulinum toxin |
US9078892B2 (en) * | 2004-02-26 | 2015-07-14 | Allergan, Inc. | Methods for treating pain and for treating a medication overuse disorder |
US20100266638A1 (en) | 2004-02-26 | 2010-10-21 | Allergan, Inc. | Headache treatment method |
US20050191321A1 (en) | 2004-02-26 | 2005-09-01 | Allergan, Inc. | Methods for treating headache |
US7691381B2 (en) * | 2004-04-15 | 2010-04-06 | Allergan, Inc. | Stabilized biodegradable neurotoxin implants |
RU2255761C1 (ru) * | 2004-07-01 | 2005-07-10 | Общество с ограниченной ответственностью "Токсины и сопутствующие продукты" | Препарат для лечения мышечных дистоний из токсина культуры clostridium botulinum и способ его получения |
GB2416122A (en) | 2004-07-12 | 2006-01-18 | Ipsen Ltd | Botulinum neurotoxin composition |
CA2799413A1 (en) | 2004-07-26 | 2006-02-23 | Merz Pharma Gmbh & Co. Kgaa | Therapeutic composition with a botulinum neurotoxin |
PL1776137T3 (pl) | 2004-08-04 | 2015-03-31 | Ipsen Biopharm Ltd | Kompozycja farmaceutyczna zawierająca neurotoksynę botulinową |
WO2006013370A1 (en) | 2004-08-04 | 2006-02-09 | Ipsen Limited | Pharmaceutical composition containing botulinum neurotoxin a2 |
WO2006073410A1 (en) * | 2005-01-03 | 2006-07-13 | Botulinum Toxin Research Associates, Inc. | Compositions, methods and devices for preparing less painful botulinum toxin formulations |
US7727537B2 (en) | 2005-02-14 | 2010-06-01 | Dpm Therapeutics Corp. | Stabilized compositions for topical administration and methods of making same |
US7838011B2 (en) | 2005-02-14 | 2010-11-23 | Pankaj Modi | Stabilized protein compositions for topical administration and methods of making same |
BRPI0508299A (pt) * | 2005-03-03 | 2007-07-31 | Allergan Inc | sistema livre de produto animal e processo para purificação de uma toxina botulina |
BRPI0608249A2 (pt) * | 2005-03-03 | 2009-12-08 | Revance Therapeutics Inc | formulação, método para aplicação tópica e kit para distribuição transdérmica de toxina botulìnica |
US8926991B2 (en) * | 2005-06-14 | 2015-01-06 | Botulinum Toxin Research Associates, Inc. | Botulinum toxin and the treatment of primary disorders of mood and affect |
US20230390368A1 (en) * | 2005-06-27 | 2023-12-07 | Revance Therapeutics, Inc. | Methods of Treating Cervical Dystonia in a Subject Having Underlying Condition(s) |
US20070027105A1 (en) | 2005-07-26 | 2007-02-01 | Alza Corporation | Peroxide removal from drug delivery vehicle |
US8323666B2 (en) * | 2005-08-01 | 2012-12-04 | Allergan, Inc. | Botulinum toxin compositions |
FR2889936B1 (fr) | 2005-09-01 | 2007-12-21 | Sod Conseils Rech Applic | Methode pour quantifier une neurotoxine cholinergique dans un echantillon |
US7744904B1 (en) | 2005-09-26 | 2010-06-29 | B.B. Scientific L.L.C. | Stabilization of Clostridium botulinum neurotoxin complex |
AU2013202329B2 (en) * | 2005-10-06 | 2016-04-14 | Allergan, Inc. | Non-protein stabilized clostridial toxin pharmaceutical compositions |
US8168206B1 (en) | 2005-10-06 | 2012-05-01 | Allergan, Inc. | Animal protein-free pharmaceutical compositions |
US8137677B2 (en) * | 2005-10-06 | 2012-03-20 | Allergan, Inc. | Non-protein stabilized clostridial toxin pharmaceutical compositions |
US20090324647A1 (en) * | 2005-10-11 | 2009-12-31 | Borodic Gary E | Albumin-Free Botulinum Toxin Based Pharmaceutical Compositions Containing a Hyaluronidase and Methods of Use |
CN100384993C (zh) * | 2005-11-02 | 2008-04-30 | 浙江大学 | 提高地衣芽孢杆菌zjuel31410弹性蛋白酶稳定性的方法 |
FR2896693B1 (fr) * | 2006-01-27 | 2008-03-14 | Sod Conseils Rech Applic | Composition comprenant plusieurs toxines botuliques |
DE102006019447A1 (de) * | 2006-04-24 | 2007-10-25 | Dressler, Dirk, Dr. | Markierung von Botulinum Toxin |
PL2029740T3 (pl) | 2006-05-31 | 2012-11-30 | Genzyme Corp | Zastosowanie polisacharydów do promowania aktywności enzymatycznej |
FR2902341B1 (fr) * | 2006-06-16 | 2011-02-25 | Scras | Utilisation therapeutique simultanee, separee ou etalee dans le temps d'au moins une neurotoxine botulique, et d'au moins un derive opiace |
FR2907680B1 (fr) | 2006-10-27 | 2012-12-28 | Scras | Utilisation therapeutique d'au moins une neurotoxine botulique dans le traitement de la douleur induite par au moins un agent anti-cancereux |
FR2910327B1 (fr) | 2006-12-22 | 2013-04-26 | Scras | Utilisation d'au moins une neurotoxine botulique pour traiter la douleur induite par les traitements therapeutiques du virus du sida. |
BRPI0720730A2 (pt) * | 2006-12-29 | 2014-04-08 | Revance Therapeutics Inc | Composições e métodos de aplicação tópica e liberação transdérmica de toxinas botulínicas estabilizadas com fragmentos de polipeptídeo derivados de hiv-tat. |
GB0705245D0 (en) | 2007-03-19 | 2007-04-25 | Stabilitech Ltd | Stable biological products |
EP2486936A1 (en) * | 2007-06-13 | 2012-08-15 | CSL Behring GmbH | A composition comprising VWF and FVIII preparations for use in treating of bleeding disorders |
CA2690773C (en) | 2007-07-10 | 2013-09-17 | Medy-Tox, Inc. | Pharmaceutical liquid composition of botulinum toxin with improved stability |
US7473429B1 (en) * | 2007-07-27 | 2009-01-06 | Renfroe J Ben | Method for treatment of laminitis in animals |
JP2009132686A (ja) * | 2007-10-26 | 2009-06-18 | Okayama Univ | ボツリヌス毒素由来のポリペプチド及びボツリヌス毒素の検出方法 |
EP2072057A1 (en) | 2007-12-21 | 2009-06-24 | Merz Pharma GmbH & Co.KGaA | Early administration of Botulinum toxin in the treatment of cerebrovascular event and spinal cord injury |
EP2072039A1 (en) | 2007-12-21 | 2009-06-24 | Merz Pharma GmbH & Co.KGaA | Use of a neurotoxic component of Clostridium botulinum toxin complex to reduce or prevent side effects |
US9107815B2 (en) | 2008-02-22 | 2015-08-18 | Allergan, Inc. | Sustained release poloxamer containing pharmaceutical compositions |
FR2930447B1 (fr) | 2008-04-25 | 2010-07-30 | Sod Conseils Rech Applic | Utilisation therapeutique d'au moins une neurotoxine botulique dans le traitement de la douleur dans le cas de la neuropathie diabetique |
EP2315598A1 (en) * | 2008-08-05 | 2011-05-04 | Solstice Neurosciences, Inc. | Compositions of activated botulinum toxin type b |
WO2010016901A1 (en) * | 2008-08-05 | 2010-02-11 | Solstice Neurosciences, Inc. | Compositions of activated botulinum holotoxin type b (150 kd) |
WO2010051039A1 (en) * | 2008-11-03 | 2010-05-06 | Solstice Neurosciences, Inc. | Compositions of activated botulinum toxin type b |
US20100112006A1 (en) * | 2008-11-03 | 2010-05-06 | Solstice Neurosciences, Inc. | Compositions of activated botulinum holotoxin type B (150 kD) |
WO2010096134A1 (en) | 2008-12-04 | 2010-08-26 | Botulinum Toxin Research Associates, Inc. | Extended length botulinum toxin formulation for human or mammalian use |
WO2010090677A1 (en) * | 2008-12-10 | 2010-08-12 | Allergan, Inc. | Clostridial toxin pharmaceutical compositions |
SG172812A1 (en) | 2008-12-31 | 2011-08-29 | Revance Therapeutics Inc | Injectable botulinum toxin formulations |
US20100184685A1 (en) * | 2009-01-19 | 2010-07-22 | Zavala Jr Gerardo | Systems and methods for treating post- operative, acute, and chronic pain using an intra-muscular catheter administrated combination of a local anesthetic and a neurotoxin protein |
EP2248518B1 (en) | 2009-04-17 | 2013-01-16 | Merz Pharma GmbH & Co. KGaA | Formulation for stabilizing proteins, peptides or mixtures thereof. |
KR102328155B1 (ko) | 2009-06-25 | 2021-11-17 | 레반스 테라퓨틱스, 아이엔씨. | 알부민불포함 보툴리눔 독소 제제 |
US8129139B2 (en) | 2009-07-13 | 2012-03-06 | Allergan, Inc. | Process for obtaining botulinum neurotoxin |
JP2013522239A (ja) * | 2010-03-12 | 2013-06-13 | サーモディクス,インコーポレイテッド | 注射用薬物送達システム |
JP5769379B2 (ja) * | 2010-03-17 | 2015-08-26 | グンゼ株式会社 | Danceタンパク質溶液 |
JP2013545504A (ja) * | 2010-10-06 | 2013-12-26 | アラーガン、インコーポレイテッド | ボツリヌス毒素の貯蔵およびその後の取り扱いのためのシステム |
CA2814054A1 (en) | 2010-10-12 | 2012-04-19 | Merz Pharma Gmbh & Co. Kgaa | Formulation suitable for stabilizing proteins, which is free of mammalian excipients |
ES2810098T3 (es) * | 2011-03-31 | 2021-03-08 | Medy Tox Inc | Preparación liofilizada de toxina botulínica |
KR101135486B1 (ko) | 2011-05-25 | 2012-04-13 | 함종욱 | 보툴리눔 에이형 독소의 액상제품 |
US9393291B2 (en) | 2012-04-12 | 2016-07-19 | Botulinum Toxin Research Associates, Inc. | Use of botulinum toxin for the treatment of cerebrovascular disease, renovascular and retinovascular circulatory beds |
US11484580B2 (en) | 2014-07-18 | 2022-11-01 | Revance Therapeutics, Inc. | Topical ocular preparation of botulinum toxin for use in ocular surface disease |
US9901627B2 (en) | 2014-07-18 | 2018-02-27 | Revance Therapeutics, Inc. | Topical ocular preparation of botulinum toxin for use in ocular surface disease |
CN104189891B (zh) * | 2014-08-15 | 2016-03-30 | 北京四环生物制药有限公司 | 一种不含人血清蛋白的重组人促红素制剂 |
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WO2017188618A1 (en) * | 2016-04-26 | 2017-11-02 | Korea Prime Pharm Co., Ltd. | A novel composition comprising botulinum toxin |
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WO2018038301A1 (en) * | 2016-08-26 | 2018-03-01 | Hugel Inc. | Stabilized liquid formulation of botulinum toxin and preparation method thereof |
WO2018038585A1 (ko) * | 2016-08-26 | 2018-03-01 | 주식회사 에이비바이오 | 보툴리눔 독소 및 안정화제를 포함하는 액상 제형 및 이의 제조방법 |
JP7217700B2 (ja) | 2016-09-13 | 2023-02-03 | アラーガン、インコーポレイテッド | 安定化非タンパク質クロストリジウム毒素組成物 |
US20210162026A1 (en) | 2017-08-28 | 2021-06-03 | Revance Therapeutics, Inc. | Transmucosal botulinum toxin compositions, kits, and methods for treating bladder disorders |
KR20190038292A (ko) * | 2017-09-29 | 2019-04-08 | 한국프라임제약주식회사 | 효능 지속시간이 연장된 보툴리눔 독소 조성물 |
SG11202004467PA (en) * | 2017-11-17 | 2020-06-29 | Swedish Orphan Biovitrum Ab Publ | Syringe assembly with ion-exchange material |
KR102063475B1 (ko) * | 2018-02-22 | 2020-01-09 | 주식회사 에이비바이오 | 보툴리눔 독소, 안정화제, 및 국소마취제를 포함하는 액상 제형 및 이의 제조방법 |
KR102259423B1 (ko) * | 2018-11-30 | 2021-06-02 | 주식회사 휴온스바이오파마 | 보툴리눔 독소의 안정화 액상 조성물 |
WO2020111852A1 (ko) | 2018-11-30 | 2020-06-04 | 주식회사 휴온스글로벌 | 보툴리눔 독소의 안정화 액상 조성물 |
KR20220140711A (ko) | 2020-01-13 | 2022-10-18 | 듀렉트 코퍼레이션 | 불순물이 감소된 지속 방출 약물 전달 시스템 및 관련 방법 |
WO2021206360A1 (ko) * | 2020-04-08 | 2021-10-14 | (주)메디톡스 | 토출 속도 조절이 용이하고 안정한 보툴리눔 독소 사전충전된 주사기 제형 |
KR102404217B1 (ko) * | 2020-04-08 | 2022-06-02 | (주)메디톡스 | 토출 속도 조절이 용이하고 안정한 보툴리눔 독소 사전충전된 주사기 제형 |
CN111675754A (zh) * | 2020-05-19 | 2020-09-18 | 四川一埃科技有限公司 | 一种肉毒毒素蛋白晶体结构及晶体制备方法和解析方法 |
Family Cites Families (75)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
US5625041A (en) * | 1990-09-12 | 1997-04-29 | Delta Biotechnology Limited | Purification of proteins |
US3269912A (en) * | 1963-04-08 | 1966-08-30 | Boehringer & Soehne Gmbh | Aluminum oxide depot vaccines |
US3758382A (en) * | 1968-07-26 | 1973-09-11 | Us Navy | Ve agent process of freezing blood using a hydroxyalkyl starch as cryoprotecti |
GB1514720A (en) * | 1974-10-07 | 1978-06-21 | Secr Defence | Preparation of hydroxyethyl starch |
DE2457047C3 (de) * | 1974-12-03 | 1979-10-31 | Behringwerke Ag, 3550 Marburg | Verfahren zur Herstellung eines Derivates der leichten Kette des Tetanustoxins, dessen Verwendung zur Tetanusprophylaxe |
NZ199722A (en) * | 1981-02-25 | 1985-12-13 | Genentech Inc | Dna transfer vector for expression of exogenous polypeptide in yeast;transformed yeast strain |
US4391801A (en) * | 1981-10-29 | 1983-07-05 | Cutter Laboratories, Inc. | Plasma protein fraction substantially free of acetate ions |
JPS5959625A (ja) * | 1982-09-28 | 1984-04-05 | Dainippon Pharmaceut Co Ltd | ガン壊死因子を安定化する方法 |
US4457916A (en) * | 1982-08-31 | 1984-07-03 | Asahi Kasei Kogyo Kabushiki Kaisha | Method for stabilizing Tumor Necrosis Factor and a stable aqueous solution or powder containing the same |
HU188847B (en) * | 1983-02-22 | 1986-05-28 | Human Oltoanyagtermeloe Es Kutato Intezet,Hu | Process for producing liophylized combined vaccines |
JPS59163313A (ja) * | 1983-03-09 | 1984-09-14 | Teijin Ltd | 経鼻投与用ペプチドホルモン類組成物 |
EP0150067A3 (en) * | 1984-01-23 | 1986-12-30 | Takeda Chemical Industries, Ltd. | Stable composition of gamma-interferon |
JPS61161222A (ja) * | 1985-01-09 | 1986-07-21 | Takeda Chem Ind Ltd | γ型インタ−フエロンフラグメントの組成物 |
JPS60258125A (ja) * | 1984-06-06 | 1985-12-20 | Hayashibara Biochem Lab Inc | 蛋白性生理活性物質を含有する水溶性乾燥物 |
US4597966A (en) * | 1985-01-09 | 1986-07-01 | Ortho Diagnostic Systems, Inc. | Histidine stabilized immunoglobulin and method of preparation |
JPS61194034A (ja) * | 1985-02-25 | 1986-08-28 | Teijin Ltd | 経鼻投与用粉末状組成物 |
US4962091A (en) * | 1986-05-23 | 1990-10-09 | Syntex (U.S.A.) Inc. | Controlled release of macromolecular polypeptides |
DE3621828A1 (de) * | 1986-06-28 | 1988-01-14 | Biotest Pharma Gmbh | Stabilisierung eines fuer therapeutische zwecke, insbesondere beim menschen, bestimmten interleukin-2-praeparates sowie dieses praeparat enthaltende stabilisierte waessrige loesung oder feststoff |
JPH0696536B2 (ja) * | 1988-02-26 | 1994-11-30 | 佐藤製薬株式会社 | 制酸剤含有内用懸濁液 |
JP2849632B2 (ja) * | 1988-04-08 | 1999-01-20 | 社団法人北里研究所 | ワクチン製剤 |
FR2630115B1 (fr) * | 1988-04-14 | 1994-10-28 | Merieux Inst | Procede de stabilisation des solutions d'albumine humaine et solution obtenue |
FR2649991B2 (fr) † | 1988-08-05 | 1994-03-04 | Rhone Poulenc Sante | Utilisation de derives stables du plasmide pkd1 pour l'expression et la secretion de proteines heterologues dans les levures du genre kluyveromyces |
US5997856A (en) * | 1988-10-05 | 1999-12-07 | Chiron Corporation | Method and compositions for solubilization and stabilization of polypeptides, especially proteins |
US5919665A (en) * | 1989-10-31 | 1999-07-06 | Ophidian Pharmaceuticals, Inc. | Vaccine for clostridium botulinum neurotoxin |
US5945098A (en) * | 1990-02-01 | 1999-08-31 | Baxter International Inc. | Stable intravenously-administrable immune globulin preparation |
AU7489091A (en) * | 1990-03-01 | 1991-09-18 | Agouron Pharmaceuticals, Inc. | Enhanced cryopreservation with thermal hysteresis peptide |
US5401243A (en) * | 1990-08-21 | 1995-03-28 | Associated Synapse Biologics | Controlled administration of chemodenervating pharmaceuticals |
FR2666340A1 (fr) * | 1990-08-30 | 1992-03-06 | Warner Lambert Co | Nouvelles compositions comprenant un polymere hydrophile et un materiau hydrophile different du premier. |
US5695956A (en) * | 1990-11-26 | 1997-12-09 | University Of Pittsburgh Of The Commonwealth System Of Higher Education | Clostridium perfingens type a enterotoxin toxoid and methods of preparation and use as a vaccine and therapeutic agent |
JP2916947B2 (ja) * | 1990-11-28 | 1999-07-05 | 興和株式会社 | Cpb―iの安定化方法及び製剤組成物 |
US5704297A (en) * | 1991-02-06 | 1998-01-06 | The Dupont Merck Pharmaceutical Company | Dry powder composition of hydroxyethyl starch suitable for reconstitution |
ES2109362T3 (es) * | 1991-06-21 | 1998-01-16 | Univ Cincinnati | Unas proteinas administrables oralmente y metodo para hacerlas. |
AU2309692A (en) * | 1991-07-03 | 1993-02-11 | Cryolife, Inc. | Method for stabilization of biomaterials |
JPH0672891A (ja) * | 1992-08-31 | 1994-03-15 | Green Cross Corp:The | ヒト血清アルブミン含有製剤 |
WO1994000481A1 (en) * | 1992-06-23 | 1994-01-06 | Associated Synapse Biologics | Pharmaceutical composition containing botulinum b complex |
US5445817A (en) * | 1992-08-21 | 1995-08-29 | The United States Of America As Represented By The Department Of Health And Human Services | Pertussis toxin used as a carrier protein with non-charged saccharides in conjugate vaccines |
US5728553A (en) * | 1992-09-23 | 1998-03-17 | Delta Biotechnology Limited | High purity albumin and method of producing |
JPH06192118A (ja) * | 1992-09-28 | 1994-07-12 | Wisconsin Alumni Res Found | ボツリヌス毒素を含む異常に過敏な筋運動障害の治療用薬剤組成物およびその製造方法 |
US5466672A (en) * | 1992-12-04 | 1995-11-14 | Ophidian Pharmaceuticals, Inc. | Therapeutic use of clostridium difficile toxin A |
JP3007785B2 (ja) * | 1993-03-16 | 2000-02-07 | 旭化成工業株式会社 | トロンボモジュリン組成物およびその変性防止方法 |
US5562907A (en) * | 1993-05-14 | 1996-10-08 | Arnon; Stephen S. | Method to prevent side-effects and insensitivity to the therapeutic uses of toxins |
AU681675B2 (en) * | 1993-06-04 | 1997-09-04 | Biotime, Inc. | Plasma-like solution |
US5437291A (en) * | 1993-08-26 | 1995-08-01 | Univ Johns Hopkins | Method for treating gastrointestinal muscle disorders and other smooth muscle dysfunction |
JP3684584B2 (ja) * | 1993-12-17 | 2005-08-17 | 三菱ウェルファーマ株式会社 | ヒト血清アルブミンの脱色方法 |
JP3533687B2 (ja) * | 1993-12-17 | 2004-05-31 | 三菱ウェルファーマ株式会社 | ヒト血清アルブミンの脱色方法 |
US5766605A (en) * | 1994-04-15 | 1998-06-16 | Mount Sinai School Of Medicine Of The City University Of New York | Treatment of autonomic nerve dysfunction with botulinum toxin |
ATE292977T1 (de) * | 1994-05-09 | 2005-04-15 | William J Binder | Präsynaptische neurotoxine gegen migränekopfschmerzen |
US5670484A (en) * | 1994-05-09 | 1997-09-23 | Binder; William J. | Method for treatment of skin lesions associated with cutaneous cell-proliferative disorders |
JPH07308199A (ja) † | 1994-05-18 | 1995-11-28 | Green Cross Corp:The | ヒト血清アルブミンの製造方法 |
EP1516615A3 (en) * | 1994-08-04 | 2007-10-31 | Quadrant Drug Delivery Limited | Solid delivery systems for controlled release of molecules incorporated therein and methods of making same |
AU2907695A (en) * | 1994-08-08 | 1996-03-07 | Wisconsin Alumni Research Foundation | Purification and pharmaceutical compositions containing type g botulinum neurotoxin |
US5756468A (en) † | 1994-10-13 | 1998-05-26 | Wisconsin Alumni Research Foundation | Pharmaceutical compositions of botulinum toxin or botulinum neurotoxin and methods of preparation |
US5512547A (en) * | 1994-10-13 | 1996-04-30 | Wisconsin Alumni Research Foundation | Pharmaceutical composition of botulinum neurotoxin and method of preparation |
DK0773788T3 (da) * | 1995-06-06 | 2003-09-01 | Allergan Inc | Forbedrede præparater og fremgangsmåder til kemodenervering under anvendelse af neurotoxiner |
US5919463A (en) * | 1995-07-07 | 1999-07-06 | Oravax, Inc. | Clostridium difficle toxins as mucosal adjuvants |
JP3098401B2 (ja) * | 1995-07-12 | 2000-10-16 | 株式会社エルティーティー研究所 | 経鼻投与用製剤 |
DE19538687A1 (de) * | 1995-10-17 | 1997-04-24 | Boehringer Mannheim Gmbh | Stabile pharmazeutische Darreichungsformen enthaltend Parathormon |
US5837265A (en) * | 1996-03-08 | 1998-11-17 | The Regents Of The University Of California | Chemically-modified clostridiatoxin with improved properties |
JP4318751B2 (ja) * | 1996-03-13 | 2009-08-26 | ノボザイムス、 バイオファーマ、 ユーケー、 リミテッド | 発酵制御 |
US5721215A (en) * | 1996-03-20 | 1998-02-24 | Allergan | Injectable therapy for control of muscle spasms and pain related to muscle spasms |
US5908825A (en) * | 1997-01-09 | 1999-06-01 | University Of Maryland At Baltimore | Dosage composition for nasal delivery and method of use of the same |
JPH10245400A (ja) * | 1997-02-28 | 1998-09-14 | Eiken Chem Co Ltd | トランスフェリンレセプターの安定化方法 |
JPH10251161A (ja) * | 1997-03-11 | 1998-09-22 | Green Cross Corp:The | 浮腫治療効果増強剤 |
US6210683B1 (en) * | 1997-09-05 | 2001-04-03 | Merck & Co., Inc. | Stabilizers containing recombinant human serum albumin for live virus vaccines |
US6051239A (en) * | 1997-10-20 | 2000-04-18 | Thomas Jefferson University | Compositions and methods for systemic delivery of oral vaccines and therapeutic agents |
ATE220558T1 (de) * | 1997-11-22 | 2002-08-15 | Roche Diagnostics Gmbh | Verbessertes verfahren zur stabilisierung von proteinen |
US6346519B1 (en) * | 1998-09-09 | 2002-02-12 | Advanced Medical Instruments | Method and composition for treating arthritis |
TW574036B (en) * | 1998-09-11 | 2004-02-01 | Elan Pharm Inc | Stable liquid compositions of botulinum toxin |
US6358917B1 (en) * | 1999-08-24 | 2002-03-19 | Jean D. A. Carruthers | Cosmetic use of botulinum toxin for treatment of downturned mouth |
US6113915A (en) * | 1999-10-12 | 2000-09-05 | Allergan Sales, Inc. | Methods for treating pain |
US6139845A (en) * | 1999-12-07 | 2000-10-31 | Allergan Sales, Inc. | Method for treating cancer with a neurotoxin |
US6337075B1 (en) * | 2000-01-11 | 2002-01-08 | Allergan Sales, Inc. | Methods for treating diabetes |
PT1253932E (pt) * | 2000-02-08 | 2005-07-29 | Allergan Inc | Composicoes farmaceuticas de toxina botulinica |
JP2003009897A (ja) * | 2001-07-03 | 2003-01-14 | Keiji Oguma | ボツリヌス毒素の分離・精製法 |
MXPA01011542A (es) * | 2001-11-13 | 2003-05-22 | Alcon Inc | Regeneracion del cartilago articular da°ado por la osteoartritis de grado i y ii, mediante la aplicacion intra-articular de una mezcla de hialuronato de sodio y de condroitin sulfato en un vehiculo de gel. |
-
2001
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---|---|---|
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