TWI317283B - Pharmaceutical composition comprising botulinum toxin and recombinant human serum albumin - Google Patents

Pharmaceutical composition comprising botulinum toxin and recombinant human serum albumin Download PDF

Info

Publication number
TWI317283B
TWI317283B TW095148526A TW95148526A TWI317283B TW I317283 B TWI317283 B TW I317283B TW 095148526 A TW095148526 A TW 095148526A TW 95148526 A TW95148526 A TW 95148526A TW I317283 B TWI317283 B TW I317283B
Authority
TW
Taiwan
Prior art keywords
botulinum toxin
pharmaceutical composition
toxin
protein
albumin
Prior art date
Application number
TW095148526A
Other languages
English (en)
Other versions
TW200711657A (en
Inventor
J Hunt Terrence
Original Assignee
Allergan Inc
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Family has litigation
First worldwide family litigation filed litigation Critical https://patents.darts-ip.com/?family=23988236&utm_source=google_patent&utm_medium=platform_link&utm_campaign=public_patent_search&patent=TWI317283(B) "Global patent litigation dataset” by Darts-ip is licensed under a Creative Commons Attribution 4.0 International License.
Application filed by Allergan Inc filed Critical Allergan Inc
Publication of TW200711657A publication Critical patent/TW200711657A/zh
Application granted granted Critical
Publication of TWI317283B publication Critical patent/TWI317283B/zh

Links

Classifications

    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K39/02—Bacterial antigens
    • A61K39/08—Clostridium, e.g. Clostridium tetani
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K9/00—Medicinal preparations characterised by special physical form
    • A61K9/14—Particulate form, e.g. powders, Processes for size reducing of pure drugs or the resulting products, Pure drug nanoparticles
    • A61K9/19—Particulate form, e.g. powders, Processes for size reducing of pure drugs or the resulting products, Pure drug nanoparticles lyophilised, i.e. freeze-dried, solutions or dispersions
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
    • A61K38/16—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
    • A61K38/43—Enzymes; Proenzymes; Derivatives thereof
    • A61K38/46—Hydrolases (3)
    • A61K38/48—Hydrolases (3) acting on peptide bonds (3.4)
    • A61K38/4886—Metalloendopeptidases (3.4.24), e.g. collagenase
    • A61K38/4893—Botulinum neurotoxin (3.4.24.69)
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/06—Organic compounds, e.g. natural or synthetic hydrocarbons, polyolefins, mineral oil, petrolatum or ozokerite
    • A61K47/16—Organic compounds, e.g. natural or synthetic hydrocarbons, polyolefins, mineral oil, petrolatum or ozokerite containing nitrogen, e.g. nitro-, nitroso-, azo-compounds, nitriles, cyanates
    • A61K47/18—Amines; Amides; Ureas; Quaternary ammonium compounds; Amino acids; Oligopeptides having up to five amino acids
    • A61K47/183—Amino acids, e.g. glycine, EDTA or aspartame
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/30—Macromolecular organic or inorganic compounds, e.g. inorganic polyphosphates
    • A61K47/36—Polysaccharides; Derivatives thereof, e.g. gums, starch, alginate, dextrin, hyaluronic acid, chitosan, inulin, agar or pectin
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K9/00—Medicinal preparations characterised by special physical form
    • A61K9/0012—Galenical forms characterised by the site of application
    • A61K9/0019—Injectable compositions; Intramuscular, intravenous, arterial, subcutaneous administration; Compositions to be administered through the skin in an invasive manner
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P21/00—Drugs for disorders of the muscular or neuromuscular system
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P21/00—Drugs for disorders of the muscular or neuromuscular system
    • A61P21/02—Muscle relaxants, e.g. for tetanus or cramps
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P25/00—Drugs for disorders of the nervous system
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P25/00—Drugs for disorders of the nervous system
    • A61P25/28—Drugs for disorders of the nervous system for treating neurodegenerative disorders of the central nervous system, e.g. nootropic agents, cognition enhancers, drugs for treating Alzheimer's disease or other forms of dementia
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P27/00—Drugs for disorders of the senses
    • A61P27/02—Ophthalmic agents

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Epidemiology (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • Neurology (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
  • Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
  • Biomedical Technology (AREA)
  • Neurosurgery (AREA)
  • Immunology (AREA)
  • Orthopedic Medicine & Surgery (AREA)
  • Inorganic Chemistry (AREA)
  • Oil, Petroleum & Natural Gas (AREA)
  • Dermatology (AREA)
  • Gastroenterology & Hepatology (AREA)
  • Physical Education & Sports Medicine (AREA)
  • Psychiatry (AREA)
  • Hospice & Palliative Care (AREA)
  • Ophthalmology & Optometry (AREA)
  • Pain & Pain Management (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • Mycology (AREA)
  • Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
  • Medicinal Preparation (AREA)
  • Infusion, Injection, And Reservoir Apparatuses (AREA)
  • Medicines Containing Material From Animals Or Micro-Organisms (AREA)
  • Enzymes And Modification Thereof (AREA)
  • Peptides Or Proteins (AREA)

Description

•1317283 九、發明說明： 【發明所屬之技術領域】 — 本發明係關於醫藥組成物。特定地說，本發明係關於含 • 肉毒毒素的醫藥組成物及關於製造此醫藥組成物的方法。 【先前技術】 醫樂組成物疋含一或多種活性成分及一或多種賦形劑， 載劑，安定劑或增量劑的調配物，適於給予病人以達所需 I 診斷或治療效果。 為儲存安定及方便持拿，醫藥組成物可調配成凍晶（及凍 乾）的或真空乾燥的散，此散在使用於病人前可以生理鹽水 或水重建。醫藥組成物可含似蛋白質的（pr〇teinace〇us)活性 1 成分。不幸的是，含蛋白質的醫藥組成物蛋白質很難以安 ' 定化，在調配、重組（如果需要）及儲存備用期常會失去蛋白 質及/或失去蛋白質活性。因為蛋白質的變性、降解、二聚 作用，及/或聚合作用，常有安定性的問題出現。各種賦形 •齊,j ’如白蛋白及明膠曾在不同程度上成功地用以安定醫藥 組成物中的蛋白質活性成分。此外，也曾用低溫保護劑 ⑽yoprotectants>醇在；東晶的、结冰條件下減少蛋白 性。 白 量約 分， 蛋白是小而多的血漿蛋白質。人之血清白蛋白之分_ 為的千道爾頓㈣，於醫藥組成物中曾用作非活性, 當作增量載劑及於醫藥組成物中當作某些蛋白請
O:\116\116805.DOC 1317283 成分的安定劑。 白蛋白在醫藥組成物中的安定功能可存在於醫藥組成物 、夕步驟# g己過程中以及存在於後來已調配好的醫藥組成 物的重建中。所以，安定可由白蛋白傳給醫藥組成物中的 蛋白質活性成分，此種傳與是藉了，例如，⑴減少蛋白質 活性成分對表面的黏連，例如實驗室破璃器材、反應器的 表減少對重建醫藥組成物所用的小瓶的黏連及對注射 醫藥組成物注射筒内面的黏連。蛋白質活性成分對表面的 黏連會導致活性成分的損失及導致剩餘蛋白質活性成分的 變性，此二者都是減少醫藥組成物中活性成分的總活性 的’及；（2)減少活性成分的變性，這在製備活性成分的低 稀釋溶液是會出現的。 除了能安定醫藥組成物中的蛋白質活性成分外，白蛋白 在注射於病A時也有可忽略不計的免疫祕的優點。具有 可認知的免疫原性的化合物會導致對其產生抗體，這又會 導致發生過敏反應及/或產生抗藥性，因而導致有免疫成分 的醫藥組成物難以治療疾病。 不幸的是’儘管白蛋白有安定化效果，但在醫藥組成物 中使用白蛋白仍有明顯缺點。例如，白蛋白昂貴，獲得日 益困難。此外，血液產物，如白蛋白，在給予病人時會使 病人接受到源自血液的病原或感染劑。是以現已知有這樣 的可能，醫I组錢中有自蛋白時會無意中给醫藥組成物 帶進感染因素。例如，現已有報告稱使用白蛋白可能將朊 病毒帶入醫藥組成物。朊病毒即是蛋白質樣感染微粒，理 O:\116\116805.DOC -6- 1317283 論上他能由同-製造正常蛋白質的核酸排序發展成不正常 的構形。更有—種理論稱’在正常異構蛋白質轉化成朊蛋 、自質異構物的"志願反應"中’在後翻譯階段會殘存感染 .# °很明顯的’正常的内生性細胞蛋白質會被誘導錯疊成 病原性朊病毒構形。值得注意的是，有數批人血清白蛋白 $從市場上收回’只因有位向該批生產白蛋白所用的血的 捐血者診斷出患有Creutzfeldt-Jacob病。 # θ CreUtZfeldWaC〇1^ (有時類似進行快速的愛滋海默氏病） 是一種稀有的可傳播的海綿樣腦病變的神經退化疾病，其 傳播劑明顯是朊病毒蛋白質的不正常的異構物。患 CreutzfeldWaeGb病的人可在六個月内由良好的健康退步 4 ^不能動的緘默病。已有報告謂Creutzfeldt山eGb病的傳播 、 是由白蛋白輪液所引起，並進一步稱對creutzfeldt_Jacob病 的有效防止*能靠一般的白蛋白製備方法，此法包括丢棄 血細胞成分並於6(TC加熱10小時。所以仍有因給予含人血 • 漿蛋白質濃縮物，如血清白蛋白，而傳染到以朊病毒傳介 的疾病’如Creutzfeldt-Jacob病的危險。 於二蛋白質/舌性成分醫藥組成物中曾使用明膠作為白 蛋白替代品。應注意到，明膠是動物蛋白質衍生物，所以 也有人白蛋白所有的感染危險性。所以，需要找出一種白 蛋白替代品，其不是血液的一部分，較佳是白蛋白替代品 不是明膠，也不是衍生自動物蛋白質。 肉毒毒素 厭氣性革蘭陽性菌肉毒梭狀芽孢桿菌產生一種有效的多
O:\116\l 16805.DOC -1317283 月太神經毒素’肉毒毒素’其能於人及動物引起神經麻痒疾 病，稱作肉毒中毒。肉毒梭狀芽孢桿菌及其芽孢常見於土 - 壤’此種細菌可生長於消毒不完全的及密封的食物容器 、 内，這正是多數肉毒中毒的情形。肉毒中毒一般出現於食 入肉毒梭狀芽孢桿菌或其芽抱感染的食物18至36小時以 後。肉毒毒素明顯地能通過腸内皮並攻擊週邊運動神經 元。肉毒毒素中毒症狀的進展可由走路困難，吞嚥困難及 講話困難至呼吸肌肉痲痺至死亡。 ® A型肉毋毒素是已知對人最危險的天然生物致死劑。對鼠 而吕，A型肉毒毒素（純化的神經毒素複合物）的為約5〇 皮克。令人感興趣的是，以莫耳為基礎言，A型肉毒毒素較 , 白喉的致死毒性大18億倍，較氰化鈉大6億倍，較眼睛蛇毒 — 素大3千萬倍，較霍亂大一千貳百萬倍。見Singh，Critical Aspects of Bacterial Protein Toxins，頁 63_84 (第4章）〇f Natural Toxins II，B.R. Singh et al編著，Plenum press，New • Y〇rk (1976)(其中所述A型肉毒毒素之LD50為〇·3毫微克相 當於1單位，現已校正為0.05毫微克Β〇τ〇χ⑧相當於1單 位）。一單位（u)肉毒毒素之定義為以腹内注射給重18_2〇克 的Swiss Webster雌鼠所產生的LDw的量。現已區別出七種 不同免疾性的肉毒神經毒素，分別為肉毒神經毒素血清型 (serotypes) A，B，Cl5 D，E，F及 G，久 6 -Γ m , d次Lr其各自可用型特異型抗體 中和區別。此不同血清型的肉毒毒素隨作用於動物種類及 其引起的痲痒嚴重性及期間而異。例如，現已測出，以在 鼠產生的痳痺而言，A型肉毒毒素較3型肉毒毒素強遍
O:\116\116805.DOC 1317283 倍。此外，尚測出480 U/公片患丨1 厅劑量的B型肉毒毒素對靈掌類 疋無毒的’但 - ^)] Θ A tr» 疋A型肉毒毒素對靈掌類動物ld 的12倍。肉毒毒素明顧±士曰 ‘ 疋對膽鹼能運動神經具高親和 性’並轉移入神經元，阻齡 1且新乙醯膽鹼的節前釋出。 肉毒毒素曾在臨床上用以 丄用U冶療骨胳肌過動為特徵的神經 肌肉疾病。1989年美國单物各0 樂物食管理局批準A型肉毒毒素用 於治療自發性臉痙攣，斜相，B丄 :硯及十二歲以上的病人的半邊
臉痙攣。肌肉内注射A型肉毒毒素後—個星期—般即會見出 床效果 a肌肉内注射A型肉毒毒素後的症狀解除期 (即輕度肌肉麻痺）一般約為三個月。 雖所有的肉毋毋素A清型明顯地抑制神經肌肉接頭處神 經傳遞質乙酿膽鹼的釋出，但其作用是於不同位置影響不 同的神經分泌蛋白質及/或裂解此等蛋白質。肉毒毒素A型 鋅内肽酶，此種酶能特異地水解細胞内與小泡心相連的蛋 白質SNAP-25的肽鏈。e型肉毒毒素裂解25千道爾頓突觸小 體相連的蛋白質（SNAP-25)，但與A型肉毒毒素相比，是以 此蛋白質内的不同胺基酸排序為目標。B，D，17及〇型肉毒毒 素係作用於小泡相連的蛋白質（VAMP，也稱作小突觸泡蛋 白），每一血清型於不同位置裂解蛋白質。最後，Ci型肉毒 毒素是裂解突觸溶合蛋白及SNAP-25。此種作用機制的不 同可能會影響各種肉毒毒素血清型的相對效果及/或作用 期間。 所有此七類已知肉毒毒素血清型的肉毒毒素蛋白質分子 的分子量約為150 kD。令人感趣的是，肉毒毒素是由肉毒
O:\116\116805.DOC •1317283 梭狀芽孢桿菌以複合物形式釋出，此種複合物含有15〇 kD 肉毒毒素蛋白質分子及與其相連的非毒素蛋白質。是以，A 型肉毒毒素複合物可用肉毒梭狀芽孢桿菌以9〇〇 kD，500 kD及300 kD形式生產。B&Ci型肉毒毒素很明顯地是只以 5〇〇kD複合物形式生產。D型肉毒毒素是以3〇〇]^〇及5〇〇]^1) 複合物形式生產。而E及F型肉毒毒素則只以約3〇〇 kD複合 物形式生產。相信此等複合物（即分子量大於約15〇 kD的） 含非毒素血凝素蛋白質及無毒的非毒素非血凝素蛋白質。 此二種非毒素蛋白質（其可與肉毒毒素分子構成有關的神 經毒素複合物）可能保護肉毒毒素分子使不發生變性，並當 毋素被攝取後保護其不被消化。此外，也有可能，較大的（大 於約150 kD分子量）的肉毒毒素複合物會被肉毒毒素以較 緩慢的擴散速度從肉毒毒素複合物肌肉内注射位置擴散。 此等毒素複合物在以紅血球於pH 7 3處理時，可分解成毒 素蛋白質及血凝素蛋白質。 所有此等由肉毒梭狀芽抱桿菌以非活性單一鏈蛋白質生 產的肉毒毒素▲清型在變成神經活性之前必須先以蛋白酶 裂解或切斷。製造肉毒毒素血清型八及〇的菌屬能生成内生 性蛋白酶’所以可由細菌培養中回收主為活性形式的血清 型A及G。相反的’肉毒毒素血清型q是非蛋白質分 解菌屬合成’所以由細菌培養收取的為非活性的。血清型B 及F是由蛋白質分解及非蛋白f分解菌屬生產，所以可以活 性或非活性形式收取…即使生產，例如，肉毒毒素B 血清型的蛋白質分解菌屬也只分解所生成的毒素的一部
O:\116\116805.DOC 1317283
分。切斷的（nieked)與未切斷的分子的確實比例取決於培養 時間的長短及培養温度。所以，例如，任何製劑中肉毒毒 素B型毒素有一部分是非活性的，這可用以說明與a型肉毒 毒素相比為什麼B型肉毒毒素活性較低的原因。臨床製劑中 非活性肉毒毒素分的存在可歸因於製劑中總蛋白質載荷， 此與抗原性的增加相聯而與臨床效果無關。此外，現已知B 型肉毒毒素作肌肉内注射時只有短暫活性’其效期及活性 與相同劑量的A型肉毒毒素相比也較短而弱。 高品質的A型肉毒毒素可用肉毒梭狀芽抱桿菌㈣八菌 屬生產，其特點是23χ107 U/毫克，A26〆、78小於〇6〇，於 凝膠電泳上有不同形式的帶M(banding pattem)。可用已知 的Shantz方法製得A型肉毒毒素晶體，如Shamz，E. j.
Properties and use of Botulinum toxin and Other Microbial
Neurotoxins in Medicine，Microbiol Rev· 56:80-99 (1992)所 述。一般而言，A型肉毒毒素複合物可藉於適宜的培養基内 培養A型肉毒梭狀芽孢桿菌產生無氧發酵物，再由此分離並 純化製得。可用硫酸沉澱出生毒素，再用超微過濾濃縮。 純化可藉將酸性沉澱物溶於氣化妈内進行。然後用冷乙醇 沉澱出毒素。再將沉澱物溶於硫酸鈉緩衝液内並離心。乾 燥後可製得約900 kD的A型肉毒毒素複合物結晶，比效 3x107 LDso U/毫克或更大。也可用此法非離非毒素蛋白質 以製得純肉毒毒素，例如：純A型肉毒毒素，分子量約1 5 〇 kD ’比效l-2x 108 LDw U/毫克或更大；純b型肉毒毒素，分 子約156kD，比效1-2x108LD50U/毫克或更大；及純f型肉 O:\116\116805.DOC -11- 1317283 毒毒素，分子量約155 kD ’比效1·2χ107 LD5Q U/毫克或更 大。 製備醫藥調配物用的已製好的及已純化的肉毒毒素及毒 素複合物可由 List Biological Laboratories，Inc.，Campbell，
California; the Centre for Applied Microbiology and
Research，Porton Down，U.K·; Wako (Osaka，Japan)及 Sigma
Chemicals of St Louis，Missouri購得。 純肉毒毒素十分不穩定，是以限制了其在製備醫藥組成 物上的使用。此外，肉毒毒素複合物，如A型毒素複合物， 也因素面變性、熱、及鹼性條件的關係極易變性。非活化 毒素形成產生免疫的類毒素蛋白質。生成的抗體會導致病 人對毒素注射發生敏感。 如同一般的酶一樣’肉毒毒素（其細胞内肽酶）的生物活 性疋依賴於，至少是部分依賴於，其三向構形。是以，A 型肉毒毒素可藉加熱，各種化學表面拉伸及表面乾燥去 毒此外，現已知，除非有安定劑的存在，以培養、發酵 及純化所製得的毒素複合物可藉醫藥組成物調配所用的方 法稀釋很多倍而快速失去其毒性。將毫克量的毒素稀釋成 每毫升含數毫微克的溶液有明顯困難，其原因即在這樣的 大幅度稀釋會迅即使其喪失特異毒性。因為在毒素調配成 含醫藥組成物後’經數月或數年此毒素才會被用到，所以 毒素必須用安定劑安定。過去唯一能成功使用於此目的的 安定劑是衍生自動物的白蛋白及明膠。如前所述，調配物 中含衍生自動物的蛋白f會引起—些問題，由志願者帶進
O:\116\l 16805.DOC -12- .1317283 的一些安定的病毒、朊病毒或其他感染性或致病性化合物 會污染毒素。 此外，任何凍乾或真空乾燥含肉毒毒素的醫藥組成物成 可運輸及儲存的毒素調配物（醫生可立即使用或重建的形 式）所需嚴格pH、溫度及濃度的變化，都會使毒素去毒。是 以曾用衍生自動物的或志願者的蛋白質如明膠及血清白蛋 白以安定肉毒毒素。 商業上可購得的含肉毒毒素的醫藥組成物是以商品 BOTOX® (可從Allergan, Inc·，of Irvine, California)出售。 BOTOX®含純化的A型肉毒毒素複合物，白蛋白及氯化鈉， 以滅菌的真空乾燥形式包裝。此A型肉毒毒素是用由含N-Z 胺基酵母萃取物的介質培養出的肉毒梭狀芽孢桿菌Hall菌 屬製成。此A型肉毒毒素複合物是用培養物溶液經一系列酸 沉澱純化成晶體複合物而成，内含活性高分子量毒素蛋白 質及血凝素蛋白質。將此晶體複合物再溶於含生理鹽水及 白蛋白的溶液内，滅菌濾（0.2微米），然後真空乾燥。 BOTOX®可用滅菌的非防腐生理鹽水在作肌肉内注射前重 建。每一小瓶BOTOX®含約100單位（U) A型肉毒梭狀芽孢 桿菌毒素複合物，0.5毫克人血清白蛋白及0.9毫克氣化鈉， 為滅菌的真空乾燥形式，不含防腐劑。 重建真空乾燥不含防腐劑的BOTOX®滅菌生理鹽水時， 是用適宜大小的注射筒抽取適量的0.9%氯化鈉注射液。因 為BOTOX®會因起泡或類似強裂振動而變性，所以必須輕 輕注射稀釋劑劑入小瓶内。BOTOX® —旦重建後，必須於 O:\116\116805.DOC -13- .1317283 四小時使用。在此期間，須將重建BOTOX®儲於冰箱内（2 至8°C)。重建的BOTOX®是澄清的無色的無微粒的物質。 此真空乾燥的產物須儲存於低於5°C的冰箱内。小瓶從冰内 取出並重建後，必須於四小時内使用BOTOX®。在此四小 時間，重建的BOTOX®可儲於冰箱内（2至8°C)。 有報告稱作為肉毒毒素安定劑的白蛋白可為其他蛋白質 或低分子量（非蛋白質）化合物代替。見Carpender et al.， Interactions of Stabilizing Additives with Proteins During Freeze-Thawing and Freeze-Drying, International Symposium on Biological Product freeze-Drying and Formulation, 24-26 October 1990; Karger (1992), 225-239 0 一般常於醫藥組成物内用作增量劑的多種物質已證明不 適於作為含神經毒素的醫藥組成物中的白蛋白替代品。例 如，雙糖纖維二糖已發現不宜作為毒素安定劑。是以，現 已知，用纖維二糖作為賦形劑與白蛋白及氯化鈉合用，在A 型肉毒毒素晶體與此等賦形劑凍乾後，與單獨使用白蛋白 凍乾後相比（>75%至>90%恢復）會大幅降低素性（10%恢 復）0 Goodnough et al.，Stabilization of Botulinum Toxin Type A During Lyophilization, App & Envir. Micro. 58 (10) 3426-3428 (1992) ° 此外，糖，包括多糖，一般也不是蛋白質安定劑的良好 備用品。現已知，含蛋白質活性成分的醫藥組成物，如果 蛋白質調配物含糖類（如葡萄糖或葡萄糖聚合物）或碳水化 合物，本質上就是不安定的，因為蛋白質與葡萄糖會交互 O:\116\116805.DOC • 14- J317283 • 作用，由於，例如，葡萄糖及葡萄糖聚合物的還原性質’ 進行週知的Maillard反應。利用，例如’減少濕氣或使用非 . 還原糖以防止此蛋白質-糖反應，多以失敗告終。很明顯 的，Maillard反應的變性途徑可導致蛋白質活性成分失去其 治療效果。所以，含蛋白質及還原糖’碳水化合物’及糠’ 如葡萄糖聚合物的醫藥調配物本質上即是不安定的’不能 作長期儲存而不失去其蛋白質活性成分的生物活性。 值得注意的是，人血清白蛋白能於醫藥組成物中有效地 ，用作蛋白質活性成分的安定劑的理由之—是因為白蛋白是 蛋白質不與醫藥組成物内的蛋白質活性成分行Maillard反 應。所以可希望由其他蛋白質中尋找白蛋白替代品。 尋找作為醫藥組成物中肉毒毒素白蛋白安定劑的代替品 的工作相當困難，因為白蛋白在醫藥組成物中不僅具增量 劑的作用。白蛋白明顯地可與肉毒毒素起交互作用，因而 增強此神經毒素的效果。例如，現已知，牛血清白蛋白即 g 不只是A型肉毒毒素的安定賦形劑，牛血清白蛋白也能加速 合成肽基質的分解速度，此種基質類似A型肉毒毒素的 SNAP-25神經元内基質。Schmidt，et al.，Endoproteinase
Activity of Type A Botulinum Neurotoxin Substrate Requirements and Activation by Serum Albumin, J. of Protein Chemistry, 16(1)，19-26 (1997)。是以，由於肉毒毒 素對毒素基質的細胞内蛋白質分解作用上影響動力學速度 的關係，白蛋白具有增強效果。此種增強效果可能原自白 蛋白伴隨肉毒毒素進行胞吞作用（endocytosis)進入目標神 O:\116\116805.DOC -15- •1317283 經元内，s戈者此增強作用是原於肉毒毒素胞吞作用前在神 經元蛋白質内即有胞質白蛋白的存在。 • 牛血清白蛋白對A型肉毒毒素蛋白質分解活性的動力學 ' $度刺激效果的發現，促使尋找含肉毒毒素醫藥調配物内 的適宜的白蛋白替代品。具所需毒素安定特性的白蛋白替 代品可能對毒素分解基質的速度尚不為 響，因為至少以牛血清白蛋白言，此二種特性(毒戈素安= φ 及毒素基質分解效果）是明顯同一白蛋白賦形劑固有的。此 白蛋白的增強效果顯示自蛋白不僅在調配物内具賦形劑 作用，並因而使尋找一種適宜的白蛋白替代品更為困難。 此外’肉毒毒素及其調配成適宜的醫藥組成物有許多特 ' &致使尋找種含肉毒毒素的醫藥組成物的白蛋白替代 . &十分困難。此等特性的四種例如下。第-，肉毒毒素是 加於醫藥組成物中的較大蛋白質（A型肉毒毒素複合物的分 子量疋9G0 kD) ’所以本f上較脆及不安定的。毒素複合物 • ㈣積使其較小而簡單的蛋白質更脆及不安定，所以如欲 維持調配物中毒素的安定性是較困難的。所以，白蛋白替 代品:須能與毒素以不發生變性、不使破碎及不使毒素分 子去母、或引起毒素複合物中非毒素蛋白質分離的方式交 互反應。第二，作為最具毒性的生物製品，在製造含毒素 的醫藥組成物的所有步驟中都需要極安全、準確及精確I、 是以，較佳的可能的白蛋白替代品本身應是無毒的或難以 處理的，以不使含肉毒毒素的醫藥組成物更具毒性。 第一 φ於肉毒毒素是第一種被批准用作注射以治療人
O:\116\116805.DOC -16· 1317283 體疾病的生物毒素，必須發展出特定的准許的方案以培 養、大量生產、並調配成醫藥以便使用肉毒毒素。重要的 考慮疋毒素純度及注射劑量。培養及純化生產必須能使毒 素不曝露於任何可能污染終產物並使病人發生不必要反應 的物質’即使極微量也不可以。這種限制需以簡化的介質 培養’不使用動物肉製品，也需不用合成性溶劑或樹脂作 純化。使用酶、各種交換劑，如色層分析柱所用者，及合
成溶劑可能會引人污染物，所以都是調配步驟中所排除 的此外，A型肉毒毒素於40。(：以上極易變性，於空氣/液 體界面發生氣泡時會失去毒性，並在有二氧化碳及氮的存 在下發生變性。 第四’使A型肉毒毒素安定化有特定困難，因為a型含有 約150⑸的毒素分子及非共價連接的重約750 kD的非毒素 蛋白質。此非毒素蛋白質相信是維護或幫助第二及第三構 造的安定化’此種構造與毒性㈣1於安定化非蛋
或較小蛋白質的方法或方案不能用於肉毒毒素複合物，如A 型_kD肉毒毒素複合的問題。在阳為3心.叫，a 素及非毒素蛋白質是以非共價方式連到一 條件下（ρημ)^應㈣素即 7度驗陡 毐素複合物釋出。 由於八不女定性，純毒素不能作醫藥使 作醫藥使用。 利「才月b 見於岡蚕毒素的特性 '"" 16¾ —裡週宜的 白替代品以代替白蛋白用於現在所用的含的 組成物’事實求是地說’這—可能近乎零。在本發明之
O:\116\116805.DOC -17- 1317283 只有衍生自動物的I白暂& 幻货白質白蛋白與明膠是已知的 毒毒素的醫藥調配物中肉n 肉 物中肉毒毒素的安定劑。現已知 本身或其與一或多種另外沾&桥 ^ 贫白 卜的物質如磷酸鈉或檸檬酸鈉， 凍乾後容許A型肉毒毒素恢漶 在 *每常陝復其背性。不幸的是，如前所 白蛋白，作為A液製品，出現於醫藥組成物時至少 可能帶有感染或致病因子。確是這樣，任何動物製品 白質如明膠也可能含熱原或其他在注射給病人後產生 反應的物質。 &
中國專利申請案CN 1215〇84A號揭示一種無白蛋白的以 明膠調配的A型肉毒毒素，此種明膠是衍生自動物的蛋白 質。所以此種調配物不排除有衍生自動物蛋白質或伴有感 染因子的危險的可能。 〜 羥基乙基澱粉 多糖可由數百甚至數千個單糖單位以甞鍵（醚）相連構 成。二種重要的多糖是纖維素及澱粉。纖維素是植物的主 要構成物質’給予了植物剛性及形狀。澱粉構成植物的食 物供應，且主要存於植物的種子及球根。 澱粉為顆粒狀’顆粒的大小及形狀取決於澱粉來自的植 物的特性。一般而言’約80%的澱粉是不溶於水的部分， 稱作支鍵殺粉。支鍵殿粉是由右旋-葡萄糖（P比喃形葡萄糖） 單位鏈構成，每一單位是以α苷鏈聯於下一葡萄糖單位的 C-4上。但纖維素内的嘗鍵和殿粉不一樣，是β鍵。用硫酸 及醋酸酐處理纖維素即生成二糖纖維二糖。如前所述，用 纖維二糖安定化肉毒毒素的企圖已失敗。 O:\116\116805.DOC -18 - 1317283 用吡啶及伸乙基氯乙醇處理澱粉可製得的特殊澱粉衍生 物是2-羥基乙基澱粉，也稱作異澱粉（hetastarch)。美國專 利4,45 7,91 6號揭示非離子界面活性劑及羥基乙基澱粉混合 物安定腫瘤壞死因子（TNF)水溶液。此外，已知有一種6% 的 2-經基乙基澱粉（hetastarch)(可由 Du Pont Pharma， Wilmington, Delaware 以商品名 HESPAN® 購得，6% hetastarch於0.9%氯化鈉注射液内的溶液）。現已知白蛋白在 以靜脈内給予病人後有增加血漿容積的作用。HESPAN®也 曾給予病人以達血清容積增加的效果，就此一意義而言， 靜脈内HESPAN®可視作是靜脈内白蛋白的替代品。 異澱粉是人造的衍生自蠟樣澱粉的類膠體，幾全由支鏈 澱粉構成。異澱粉可藉由將羥基乙基醚基團引入澱粉的葡 萄糖單位製得，然後可將所得物質水解生成其分子量適用 作血漿溶積增加劑的產物。異澱粉以其莫耳取代及分子量 為特點。莫耳取代約為0.75，其意是異澱粉醚化到平均異 澱粉每100葡萄糖單位有75個羥基乙基取代基。異澱粉的重 量平均分子量約為670 kD，其範圍為450 kD至800 kD，至 少有80%的聚合物單位在20 kD至2,5 00 kD範圍内。羥基乙 基基團主要是以醚鏈聯於葡萄糖單位的C-2位，較少聯於 C-3及C-6位。此等聚合物類似肝糖，而聚合的D-葡萄糖單 位主要是以α-1，4鍵相聯，較少以α-1，6鍵相聯。分支的程度 約為1:20，意為每20個葡萄糖單體單位有一個α-1,6分支。 異澱粉是由90%以上的支鏈澱粉構成。 HESPAN®所產生的血漿增容積約相當於白蛋白所增加 O:\116\116805.DOC •19- 1317283 者。小於50 kD的異澱粉分子很快由腎臟排出，單一劑量約 5 〇〇毫升的HE SPAN® (約30克）在24小時内約有33%由腎臟 • 排出。羥基乙基澱粉的羥基乙基基團並不於活體内分解， * 在排出前仍維持完整並聯於葡萄糖單位上。由於羥基乙基 化防止較小羥基乙基澱粉聚合物的完全代謝，不產生大量 的葡萄糖。 纖維素也可轉化成羥基乙基纖維素。2_羥基乙基纖維素 修 （即纖維素的2-羥基乙基醚）的平均分子量約為9〇 kE^不幸 的是，不像羥基乙基澱粉那樣，羥基乙基纖維素是高度活 性的，所以不適於在醫藥調配物中用作蛋白質活性成分的 安定劑。 ' 所以現在需要一種適宜的用於含神經毒素的醫藥組成物 内的衍生自動物的蛋白質或志願者血漿白蛋白的替代品。 【發明内容】 本發明滿足此一需求並提供一種化合物替代醫藥組成物 • 中的白蛋白，此種化合物能安定醫藥組成物中的肉毒毒 素。此白蛋白替代化合物的特點是在注射於人類病人時具 低，較佳是忽略的，免疫原性。此外，此較佳白蛋白替代 品在注射醫藥組成物後能以快速度從體内清除。 【實施方式】 此處所用的字或詞具下述意義。 "約"—詞意為，以此字修飾的項目，參數，或詞包括所 述該項目，參數，或詞的值的上、下1〇%範圍。 "胺基酸"一詞包括聚胺基酸。
O:\116\116805.DOC -20· •1317283 "多糖"一詞意為二個以上糖分子單體的聚合物，此等單 體可相同或相異。 ”醫藥組成物”―詞意為—種調配物，其中活性成分為神 經毒素，如梭狀芽孢桿菌神經毒素。而"調配物"一詞意為 醫藥組成物中除了神經毒素活性成分外至少尚有一種另外 的成分。所以，醫藥組成物是調配物，適於為人類病人作 診斷或治療給予（即肌肉内或皮下注射）。此醫藥組成物可以
是：凍乾的或真空乾燥的形式；以凍乾的或真空乾燥的醫 藥組成物用生理鹽水或水重建的溶液，或；作為溶液時不 需重建。神經毒素可以是A，B，Cl，d，E，f，或g血清 型肉毒毒素或破傷風毒素’所有這類毒素都是用梭狀芽孢 桿菌製成。 "治療調配物詞意為可用於治療並進而舒緩疾病，如 以週邊肌肉過動（即抽搐）為特徵的疾病的調配物。 "安定化"-詞意為，當已於約_2。。儲存六個月至四年的凍 乾的或真空乾燥的含肉毒毒素的醫藥組成物用生理鹽水或 水重建時，或已於約至儲存六個月至四年的含肉毒 毒素的醫藥組成物的水溶液，於此重建的或醫藥組成物的 水溶液中的肉毒毒素的毒性大於此肉毒毒素在加於醫藥組 成物則的生物活性肉毒毒素毒性的約2〇%至約1 。 本發明的範圍内的醫藥組成物可含有神經毒素及多糖。 此多糖安定化神經毒素。 重建或注射時為約5至7.3 較佳是約345 D至約2,0〇〇 此處所揭示的醫藥組成物的pH在 。多糖中雙糖單位的平均分子量 D。於更佳具體實施例中，多糠
〇：M16\116805.D〇C •21- 1317283 中雙糖單位的平均分子量較佳是約35〇 kD至約1，〇〇〇 kD， 最佳的具體實施例中為約375 D至約700 D。此外，此多糖 可含至少約70%的支鏈澱粉。此外，多糖本身的重量平均 分子量為約20 kD至約2,500 kD。
較佳是實質上所有多糖的雙糖單位含醚鍵合的吡喃形葡 萄糖分子。多糖中每1〇個吡喃形葡萄糖有平均約4至約1〇 個羥基是經由醚鏈以式（CH2)n_〇H化合物所取代，其中η可 以是1至10的整數。η更佳是1至3的整數。 於特佳具體實施例中，多糖中每1〇個峨喃形葡萄糖有平 均約6至約9個羥基是經由醚鏈以式（CH2)n_〇H化合物所取 代’其可以是的整數。於最佳具體實施例中，多 糖中每10個吡喃形葡萄糖有平均約7至約8個羥基是經由醚 鏈以式（CH2)n-〇H化合物所取代，其中n可以是丨至1〇的整 數。 本發明詳細具时施例可以適於注射給人類病人的醫 藥組成物，其含有肉毒毒素及多冑。此多糖可有多個鍵聯 的峨喃形葡萄糖單位，每形葡萄糖單位有多個經 基’其中每H)㈣喃形葡萄糖有平均約6至約9個經基是經 由賴以式（CH2)n-OH化合物所取代，其中η可以是i至4的 整數。此多糖可以是乙基_經取代的多糖。 人類病人以達治療效果，而神 ，E，F及〇肉毒毒素血清型之 此醫藥組成物含肉毒毒素及羥 此醫藥組成物適於注射給 經毒素可以是A，B，Ci，D 一。於特佳具體實施例中， 基乙基殿粉。
O:\116\116805.DOC 22· J317283 本發明另-具时施例可包括醫藥組成物， 素，多糖，及胺基酸或聚胺基酸。 “肉毒毒 不論此醫藥組成物’除了含神經毒素活性成分外，口含 =多糖安定劑’只含-種胺基酸安定劑或多糖及胺基酸 女疋劑-者’此醫樂組成物在儲存於約_rc及約]代時， 實質上維持其效果於六個月，一年，二 - 一干，二年及/或四年 中不改變。此外，此醫藥組成物於重建時可有效或％恢復
率為議至約雜。或者是，此醫藥組成物於重建時之 效果為約1〇 U/毫克至約30 U/毫克’例如重建時效果為約20 U/毫克。明顯的是’此醫藥組成物不含白蛋白。是以，此 ，藥組成物可實質上無非毒素複合物蛋白質。值得注意的 是，胺基酸的量可以是每⑽單位肉毒毒素約^毫克至約 1 -5毫克。 多糖。可以是澱粉，如經基乙基殿粉，當此醫藥組成物含 約100單位肉毒毒素時，經基乙基澱粉的量可以是約遍微 克至約7GG微克。較佳是，肉毒毒素是A型肉毒毒素，而胺 如果有時，疋選自包括賴胺酸，甘胺酸，組胺酸及 精胺酸。 本發明另一詳細的具體實施例可以是安定的、高效的、 無熱原的、真空乾燥的A型肉毒毒素醫藥組成物，其含有A 型肉毒毒素複合物’多糖，及胺基酸或聚胺基酸。此醫藥 組成物可以是無白蛋白的，於_5〇c貨架壽命為i年時其以圣 理鹽水或水重建時的效果約為90¼，重建後存於2°C 72小時 後其效為約80%。此外，此醫藥組成物於重建時的比毒性
O:\116\116805.DOC -23- 1317283 (specific toxicity)至少約 18 以毫克。 本發明也包括凍乾的或真空乾燥的醫藥組成物，其主要 纟高分子量多糖及肉毒毒素，其中肉毒毒素是以高分子量 多糖安定化。此高分子量多糖可選自包括羥基甲基澱粉， 羥基乙基澱粉，羥基丙基澱粉，羥基丁基澱粉，及羥基戊
基殺粉，而肉毒毒素可選自包括A，B，C1，D，E，F及G 肉毒毒素血清型。 此醫藥組成物内多糖的量可以是約1χ1〇_9莫耳多糖/單位 肉毒毒素至約2Χ10-!2莫耳多糖/單位肉毒毒素。 本發明還包括（a)製造醫藥組成物的方法，其包括製備肉 毒毋素及由共價鍵合的單體構成的多糖的混合物的步驟， 八中平均單體分子量為約35〇 D至約1,000 D，及（b)安定梭 菌神經毒素使不變性或凝聚的方法，此法包括將梭菌神經 毒素與含多糖的安定組成物接觸的步驟。後一方法中的接 觸步驟可包括於水溶液或含梭菌神經毒素的来乾的或真空 | 乾燥的散内加有效量的多糖的步驟。 、本發明另—方面是醫藥組成物，其含有肉毒毒素及重組 的白蛋白。此組成物較佳也含乙醯基色胺酸鹽及其鹽及衍 生物。 本發明另—具體實施例是注射此醫藥組成物的裝置，其 包2雙至預裝針筒，此針筒的一室含肉毒毒素，針筒的另 至含稀釋劑或緩衝液。 、本發明另—具體實施例是使用此醫藥組成物的方法，此 法包括局部給予病人此醫藥組成物以達治療效果，其中此
O:\116\116805.DOC -24- .1317283 醫藥組成物含有肉毒毒素，多糖及胺基酸。 很明顯，我的發明也包括醫藥組成物，其含有肉毒毒素 及胺基酸。我的發明也包括安定的醫藥組成物，其主含肉 毒毒素及胺基酸。此等醫藥組成物可以是無白蛋白的，無 多糖的’於-5°C時的1年或貨架壽命時其以生理鹽水或水重 建時的效果約為90%，重建後存於2。〇 72小時後其效為約 8 0%。 本發明是以這樣的發現為基礎，安定的含神經毒素的無 衍生自動物的蛋白質或血庫白蛋白的醫藥組成物可藉加多 糖及/或胺基酸於醫藥組成物内製成。特定地說，本發明是 以這樣的發現為基礎，安定的含肉毒毒素的適於給予人類 病人供治療用的醫藥組成物可藉以衍生自澱粉的高分子量 多糖及/或特定易反應的胺基酸代替已知的含肉毒毒素的 醫藥組成物中的血庫白蛋白製成。 令人驚奇的是，我已發現適宜的白蛋白替代品是既不是 另一種蛋白質也不是低分子量的非蛋白質化合物的化合 物。是以，我已發現特定的高分子量的多糖於醫藥組成物 中有神經毒素安定劑的作用。如下所述，胺基酸也可加於 醫藥組成物中以增加醫藥組成物的安定性及儲存期限。 本發明所用多糖可以如下方式給予醫藥組成物中的神經 毒素活性成分，如肉毒毒素，以安定性：（1)減少肉毒毒素 對各種表面’如實驗室玻璃儀器，管子，重建醫藥組成物 的小瓶，及用以注射醫藥組成物的注射筒的表面的黏連（一 〇：\116\116805.DOC •25- 1317283 般稱之為"黏度"）。肉毒毒素對各種表面的黏連可導致肉毒 f素的損失及存留肉毒毒素的變性，此二種情形都減少醫 .藥組成物中的肉毒毒素的毒性。（2)減少肉毒毒素的變性及/ •或減少肉毒毒素複合物中肉毒毒素與其他非毒素蛋白質的 分離，此種變性及/或分離活性會因醫藥組成物中肉毒毒素 的低稀釋而出現（即;東乾和真空乾燥前），也會出現於重建的 醫藥組成物。（3)減少醫藥組成物在製備、加工及重建中因 PH及濃度的變化而致的肉毒毒素的損失（即因變性或與複 合物中非毒素蛋白質的分離所致的損失）。 由夕糖所提供的此三種肉毒毒素的安定化可保留肉毒毒 素本來的毒性在醫藥組成物注射前不會有變化。 用於此組成物的較佳的多糖包括於大多數葡萄糖單體上 有一或多個取代基的葡萄糖單體（分子量180)，是以較佳的 多糖之分子量約20 kD至約800 kD。令人驚奇的是，此種多 糖此女疋化醫藥組成物内的神經毒素成分。本發明不包括 • 分子篁少於約20 kD的雙糖寡糖。本發明也不包括環形聚合 物如環糊精。後二種化合物之被排除於本發明外是因為較 佳多糖的安定化特性具有較高的分子量（即分子量大於2〇 kD) ’而不需有環糊精那樣在凍乾時生成凍乾腔的特性，這 是因為壞糊精束乾腔較本發明較佳多糖安定化的神經毒素 的體積小得多。此外，環糊精是低分子量化合物，只有6 至8個葡萄糖單體。 本發明也包括以多糖安定化含梭菌毒素的醫藥組成物的 方法。安定化效果是藉將梭菌毒素與多糖接觸達成。本發 O:\116\116805.DOC • 26 - Ϊ317283 月fe圍内適宜的多糖的例包括特定的澱粉級澱粉衍生物。 應主意的疋’此多糖對梭菌毒素展現安定化效果。此外， 多糖對梭菌毒素的安定化效果可藉加胺基酸而增強。 、令人意想不到的是’發明人已發現2·經基乙基澱粉在安 定化含肉毒毒素的醫藥組成物内的肉毒毒素上有獨特能 力，由而提供了這樣一種醫藥組成物，其避免因人血或血 庫或動物蛋白質如明膠所藏的傳播疾病的可能。 疋以，發明人發現特定的高分子量多糖，羥基乙基澱粉， 能在調配、乾燥、儲存及重建中安定化毒素。較佳是，為 進一步安定化蛋白質活性成分，於含多糖的調配物中也加 胺基酸。 此醫藥組成物中的多糖較佳是以每單位肉毒毒素約1微 克多糖至每單位肉毒毒素約10微克多糖的量與梭菌神經毒 素混合。更佳是，此醫藥組成物中的多糖是以每單位肉毒 毒素約4微克多糖至每單位肉毒毒素約8微克多糖的量與梭 菌神經毒素混合。於最佳具體實施例中，其中多糖是羥基 乙基澱粉，此醫藥組成物中的羥基乙基澱粉較佳是以每單 位肉毒毒素約5微克羥基乙基澱粉至每單位肉毒毒素約7微 克夕糖的1與A型肉毒毒素複合物混合。更佳是，此醫藥組 成物中的羥基乙基澱粉較佳是以每單位肉毒毒素約6微克 羥基乙基殿粉的量與A型肉毒毒素複合物混合。因為每小瓶 BOTOX®内含約100單位A型肉毒毒素複合物，及羥基乙基 澱粉的平均分子量是約20 kD至約2,500 kD，經基乙基澱粉 的最佳漢度是約每單位肉毒毒素1 X 1〇·9莫耳（M/υ)至約每單 O:\116\116805.DOC •27- .1317283 4肉毋毒素2xl〇莫耳。於另一較佳具體實施例中，於⑽ 的里肉毒毋素複合物醫藥組成物的調配物中含約微 ’ 克I基乙基;殿粉及約1毫克胺基酸，如賴胺酸，甘胺酸，組 . ㈣或㈣酸n發明人的發明包括使用多糖及胺基 酸或聚胺基酸安定化醫藥組成物中的神經毒素活性成分。 此外發明人的發明也包括用足量的適宜的胺基酸安定 化醫藥組成物中的蛋白質活性成分，不論調配物内是否含 有彡糖。是以，發日月人驚奇地發現含神經毒素的醫藥組成 物内加特疋的胺基酸能延長此醫藥組成物的貨架壽命。是 以，發明人的發明包括含神經毒素的醫藥組成物，此組成 物含胺基酸，及此醫藥組成物的用途。不願受理論的限制， - 發明人可主張，由於神經毒素如肉毒毒素，因為毒素複合 . 物中有二硫化物鍵的關係而易於被氧化，加入可氧化的胺 基酸會減少氧化劑，如過氧化物及游離基，與神經毒素的 反應。是以，可氧化的神經毒素二硫化物鍵被氧化劑，如 Φ 過氧化物及游離基，所氧化會因胺基酸的存在而降低，此 種胺基酸有氧化槽（oxidative sink)的作用，即有氧化化合物 的清除劑的作用。適宜的胺基酸是易於氧化的胺基酸。較 佳的胺基酸的例是甲硫胺酸，半胱胺酸，色胺酸及酪胺酸。 特佳的胺基酸是甲硫胺酸。 發明人的發明的較佳具體實施例中也包括單獨使用二或 多個胺基酸或並用多糠安定化醫藥組成物内的蛋白只活性 成分。是以，於含100 u的A型肉毒毒素醫藥組成物内，可 用於〇_5毫克賴胺酸及約〇.5毫克甘胺酸，並可同時用或不用 O:\116\116805DOC -28 · 1317283 約500微克至約700微克異澱粉。 是以如前所述，此發明包括含蛋白質的醫藥組成物，其 含多糖。此多糠有安定化醫藥組成物内蛋白質活性成分的 作用。本發明也包括含蛋白質的醫藥組成物，其含有多糖 及胺基酸。令人驚奇的是，發明人已發現，於也含碳水化 合物的含神經毒素的醫藥組成物調配物内含特定胺基酸 時，可延長此醫藥組成物的貨架壽命。是以，發明人的發 明包括含神經毒素的醫藥组成物，此組成物含多糖及胺基 酸二者，及此醫藥組成物的用途。此外，此發明還包括於 無多糖的蛋白質活性成分醫藥組成物内使用胺基酸。 現已知’含蛋白質的醫藥組成物，其也含糖，多糖及/或 礙水化合物（以後通稱"反應性化合物"），由於蛋白質及反應 性化合物之一會行充分說明的Maillard反應的關係，本質上 是不安定的。企圖以降低調配物内的水分或使用非還原糖 以減少蛋白質-多糖的Maillard反應的許多研究都歸於失 敗。發明人的發現是基於這樣的觀察事實，高濃度的高反 應胺基酸鼓勵安定化多糖及加入的胺基酸間發生Maillard 反應。藉了提供大量的胺源與碳水化合物反應，即可減少 蛋白質藥物（即肉毒毒素活性成分）介入MaiUard反應，從而 減少了蛋白質活性成分的降解途徑，因而安定醫藥組成物 内的蛋白質活性成分。 較佳是’為達成此目的，可用任何含初級或二級胺的化 合物。最佳是胺基酸，如賴胺酸，甘胺酸，精胺酸。聚胺 酸’如聚賴胺酸’也是適宜的。陽離子胺基酸如賴胺酸’ O:\116\116805.DOC -29- .1317283 會發生離子吸引，結合酸性蛋白質（例如肉毒毒素）而播住活 性蛋白質不與糖接觸。聚賴胺酸除了因為較大可有盾的作 • 用外，有抗菌的優點。 . 本發明另一方面，是預先以糖與胺基酸成分反應，以在 加活性蛋白質成分（肉毒毒素）至糖與胺基酸調配^成分内 前消耗掉Maillard反應的可能，從而基本上限制了活性蛋白 質曝露於Maillard反應。 A以’纟發明f藥組成物含有胺基酸及聚胺錢，並用 琴此胺基酸及聚胺基酸在含澱粉，糖及/或多糖的蛋白質（即肉 毒毒素）藥物調配内作為Maillard反應抑制劑。 本發明以活性蛋白質（例如肉毒毒素）與安定化澱粉、 . *、或多糖或其與胺基酸如賴胺酸的混合物製成調配物。 • 值得注意的是，發明人發現，與其他多糖或碳水化合物 相較，羥基乙基澱粉與蛋白質，如肉毒毒素，不行^ 反應或以較弱或較低之速率反應。此外，發明人還發現， φ 加了胺基酸會增強羥基乙基澱粉的防腐效果，這可能是因 為其具競爭抑制者的作用，即由於其與易反應的糖與毒素 對Maillard反應有競爭性的關係。就此目的言，胺基酸如賴 胺酸，甘胺酸，精胺酸，及組胺酸是較佳的胺基酸。此外 也可用展現所需競爭抑制行為的聚胺基酸，如聚賴胺酸。 值得注意的是’此等特定胺基酸及聚胺基酸也展現抗微生 物性質，所以在醫藥組成物中還有減少細菌污染的作用。 還原糖，如葡萄糖及葡萄糖聚合物，與蛋白質行Mamard 反應。甚至糖醇如甘露糖醇也起反應，雖則有時是經由污 O:\116\116805.DOC -30- .1317283 染物或降解產物起反應。所以多糖可安定化毒素一段時 間，後來又起化學反應，這樣就減少了储存安定性。很明 ._ ’多糖的選擇是極重要的。發明人發現，羥基乙基澱粉 , 介人MaiUard反應的速度很緩慢。此夕卜，發明人還發現，經 基乙基纖維素，雖則構造上很像經基乙基殿粉，並不宜於 用作安定劑，因為發明人發現經基乙基纖維素會很快與賴 胺酸反應。這不僅意謂經基乙基殿粉較其他糖（即多糖）安定 齊】有顯著優點，即使類似經基乙基殿粉的賦形劑，如經基 ’ “纖維素’也不宜用作醫藥組成物内蛋白質活性成分二 安定劑。 如前所述，經基乙基澱粉至少在某種程度上介入MaiUard - 反應。是以，如前所述，單獨的多糖可能不足以對毒素提 . 供適宜的安定化。是以’發明人發現，加胺基酸有作為競 爭性抑制者作用的優點。不願被理論所束缚，這一假設是， 藉了k供較毒素為尚的濃度的胺源，可減少毒素發生 # Maillard反應的可能，從而就安定了毒素。雖則可用任何胺 基酸’但賴胺酸易於反應’所以也是較佳的胺基酸。 發明人的發明包括將鋅離子源加於含肉毒毒素的醫藥組 成物内。金屬，特別是二價陽離子，據報告，由於各種低 溫性質，包括生成的冰的晶格構造的關係，很大地影響凍 乾調配物。外來金屬如銅及鐵會導致游離基氧化，一般是 需避免的。更特地說，A型肉毒毒素的活性有賴於結合的 辞。多種賦形劑或賦形劑的反應產物會螯合金屬。這會形 成不安定的冰及/或不活化的毒素。調製時藉了供應安瓿鋅 O:\116\116805.DOC -31- 1317283 即可確保所需二價陽離子，減少毒素使鋅損失並增強安定 性。此可藉於肉毒毒素醫藥組成物中加ZnS04達成。 現已知使用高產的甲基營養酵母表達菌屬巴斯德畢赤氏 酵母生產重組人血清白蛋白（rHSA)。含肉毒毒素的醫藥調 配物可製成含安定的rHS A的調配物。以基因改變的酵母主 細胞表逹的rHSA，雖有相同的初級胺基酸排序，其他方面 卻不同於血漿衍生的HSA。是以，真核酵母缺少哺乳動物 細胞内所見的細胞内活動。此外，pHS A (衍生自jk漿的人 血清白蛋白）是製成非糖基化的形式並行細胞外非酶加葡 萄糖。是以，pHS A及rHS A的碳水化合物部分並不相同。而 且，現已知rHS A内的棕摘酸及硬脂酸的量較pHS A的多。可 期望此一不同形成rHSA及pHSA間的配位體結合，構形安定 性及分子載荷的不同。所以令人驚奇地發現，rHSA可用於 安定化肉毒毒素，特別是在已知pHSA動力學速度對肉毒毒 素的影響後。rHSA的優點是其無來自血的病原體。是以， 本發明另一方面包括於醫藥組成物中用rHSA代替來自血 液的人血清白蛋白。較佳是rHS A是與乙醯基色胺酸鹽共同 存在於含肉毒毒素的醫藥組成物中，如所述。 商業上可購得的人血清白蛋白於60°C加熱10小時才能除 去人血庫中的可能有的感染劑。為了要防止在此加工中的 嚴重變性，加入二種安定劑：乙醯基色胺酸鈉及辛酸鈉。 如是使用rHA，則不需加此等成分，因為並無此危險，也不 需加熱步驟。發明人已發現，rHA中加乙醯基色胺酸鈉較單 獨使用辛酸鈉更能增強熱安定性，即使辛酸鈉的濃度加倍 O:\116\116805.DOC -32- 1317283 時仍如此。不願受任何理論的束缚，發明人相信，這可能 是因為辛酸鈉只結合於-個位置上，而乙醯基色胺酸納則 ' 是結合於二個位置上。結合於第二位置似能增強对熱干擾 ' 的抗性。發明人並進一步假設’乙醯基色胺酸鈉的加入可 能增強肉毒毒素調配物的安定性，這可能是因為能於分子 内維持對熱動力有益的構形，由於結合毒素，或由於二止 人血清白蛋白本身變性的關係。 鲁 本發明還包括於稀釋劑内或調配物内加防腐劑以延長儲 存期。較佳的防腐劑是防腐的含芊基醇的生理鹽水。 液體調配物可能是較有益的。單一步驟成品（例如預裝的 注=筒）或使用者感覺上是單一步驟成品的產物構形（例如 •冑室注射筒）可提供減少重建步驟的方便。珠乾是較複雜而 ’ 貴的加工法。液體調配物常易於生產，也較廉優。另一 方面，與束乾調配物相比，液體調配物是動力系統，較易 ’、賦开v劑發生交互反應，反應較快，細菌較易生長，也易 • 於乳化。可能需相容的防腐劑。因為多種此類化合物含或 產生過氧化物，抗氧化劑如甲硫胺酸也可用作清除劑，尤 其是在用界面活性劑減少吸附時。任何用於康乾調配物的 安定賦形劑（例如經基乙基澱粉或胺基酸或賴胺酸）也可用 於液體調配物以幫助減少吸附及安定毒素。類似用於騰島 素的懸子液也疋良好備用物。此外，安定液體載體内的肉 毒毒素可能需低pH载體，因為據報告毒素在pH 7以上時易 於反應jtb種酸性在注射時會產生剌痛感。這時可用雙套 注射筒。在毒素維持於低pH儲存時，可加入供分散緩衝溶
O:\116\116805.DOC -33 - .1317283 液使pH升至生理pH以減少注射時的不適。另—種雙室注射 筒包括稀釋液及凍乾物質，分別裝於不同室内，只在使用 時混合。此方法提供液體調配物不需另外的來源及時間的 優點。
是以肉毒毒素可調配成低pH與緩衝溶液共同投藥以於給 藥時提高pH至近生理PH。此種二室或雙套注射筒可於第一 室（鄰近推進柱）内裝PH3至6 (如pH4.0)的液體肉毒毒素調 配物。而第二室（鄰近針頭）内可裝適宜的較高pH(如 緩衝溶液，如磷酸鹽緩衝的生理鹽水。或者是第一室内裝 生理鹽水稀釋液，而於第二室内裝凍乾的神經毒素調配 物。此二室可作這樣的聯接，即所緩衝成分與溶液於接近 針頭處混合，以便投藥時的終溶液接近生理pH。適於此處 使用的二室注射器可由Vetter PWma_Fenigung ^ ㈣，
Pennsylvania購得。 調配肉毒毒素成低PH還有另外的優點。毒素有低等電點 ⑽，調配蛋白質近其pI是已知的安定蛋白質的方法。此 外，毒素是以很低濃度使用，界面吸附是1題。使用低 PH洛液可抑制毒素位的離子化不易於界㈣交互作用。注 二,進柱材料是能減少毒素吸附於界面的材料。適宜 的材料是聚丙烯。 實例 實例1 如前所述 肉毒毒素醫藥組成物 A型肉毒毒素複合物可由於含Ν·Ζ胺及酵母萃
O:\116\116805.DOC
-34· 、S 1317283 取物的基質内培養肉毒梭狀芽孢桿iHallg株製得。此八型 肉毒毒素複合物是藉一系列酸沉澱將培養物純化成含活性 局分子量毒素蛋白質的結晶複合物及與其相聯的血凝素蛋 白質。然後將此結晶複合物溶於含生理鹽水及白蛋白的溶 液内，再過濾（0.2微米），真空乾燥。然後將Βοτοχ⑧以滅 菌的無防腐劑的生理鹽水重建，再作肌肉内注射。每一小 瓶BOTOX®含約1〇〇單位A型肉毒梭狀芽孢桿菌毒素複 合物，0.5毫克人血清白蛋白及〇·9毫克氯化鈉，為滅菌的真 空乾燥的形式，無防腐劑。或者，此人血清白蛋白可用重 組白蛋白代替。 實例2 含2-羥基乙基澱粉的肉毒毒素醫藥組成物 以實例1所述方式製成A型肉毒毒素純化的神經毒素複合 物醫藥組成物，只是用500微克或600微克異澱粉代替〇.5毫 克白蛋白。已測出含異澱粉的調配物仍有充分有效性。是 以’此二種含異澱粉的調配物’無白蛋白的含異澱粉的組 成物的效價，於凍乾的組成物重建時所測出者，1 〇〇u (+2〇 U) A型肉毒毒素複合物，為96至128單位。於重建時測定了 三種異澱粉’ Α型肉毒毒素複合物醫藥組成物的效價分別為 10 5 ’ 111及12 8單位。效價是以標準給予鼠的肉毒效價測定 法測定。 實例3 含甘胺酸的肉毒毒素醫藥組成物 以實例1所述方式製成A型肉毒毒素純化的神經毒素複合 O:\116\H6805.DOC •35· S ) .1317283 物醫藥組成物，只是用500微克或6〇〇微克異澱粉代替〇·5毫 克白蛋白。此外，調配物内加丨毫克甘胺酸。然後將凍乾的， 異澱粉加甘胺酸的，無白蛋白的，1〇〇 1;的八型肉毒毒素複 合物醫藥組成物於-5°C儲存七個月。於七個月結束時，用 鼠給予測定法測定此異澱粉加甘胺酸毒素調配物的效價， 發現其基本上無改變（即只有效價較原效價少5%的差別卜 實例4 含甘胺酸的肉毒毒素醫藥組成物 以實例1所述方式製成1〇〇 1;的八型肉毒毒素純化的神經 毒素複合物醫藥組成物，只是用600微克異澱粉代替〇5毫 克白蛋白。此外，調配物内加丨毫克甘胺酸。然後將凍乾的， 異澱粉加甘胺酸的，無白蛋白的，1〇〇 UWA型肉毒毒素複 π物醫藥組成物於_5C儲存一年。於一年結束時，用鼠給 予測定法測定此異澱粉加甘胺酸毒素調配物的效價，發現 其基本上無改變（即只有效價較原效價少5%的差別）。 實例5 含組胺酿的肉毒毒素醫藥組成物 以實例1所述方式製成1 〇 〇 U的A型肉毒毒素純化的神經 毒素複合物醫藥組成物’只是用6〇〇微克異澱粉代替〇 5毫 克白蛋白。此外’調配物内加1毫克組胺酸。然後將凍乾的， 異澱粉加組胺酸的，無白蛋白的，1〇〇1；的A型肉毒毒素複 合物醫藥組成物於-5 °C儲存一年。於一年結束時，用鼠給 予測定法測定此異澱粉加組胺酸毒素調配物的效價，發現 其基本上無改變（即只有效價較原效價少5%的差別）。
O:\116\I 16805.DOC • 36 - 1317283 實例6 含精胺酸的肉毒毒素醫藥組成物 以實例1所述方式製成1 〇〇 U的A型肉毒毒素純化的神經 毒素複合物醫藥組成物，只是用600微克異澱粉代替〇·5毫 克白蛋白。此外，調配物内加1毫克精胺酸。然後將凍乾的， 異澱粉加精胺酸的’無白蛋白的，1〇〇 U的A型肉毒毒素複 合物醫藥組成物於-5 °C儲存一年。於一年結束時，用鼠給 予測定法測定此異澱粉加精胺酸毒素調配物的效價，發現 其基本上無改變（即只有效價較原效價少5%的差別）。 實例7 含胺基酸的肉毒毒素醫藥組成物 以實例1所述方式製成A型肉毒毒素純化的神經毒素複合 物醫藥調配物’只是用1毫克胺基酸，如賴胺酸，甘胺酸， 組胺酸或精胺酸代替0_5毫克白蛋白。然後將凍乾的，無多 糖的，無白蛋白加甘胺酸的，無白蛋白的，1〇〇 1；的人型肉 毒毒素複合物醫藥組成物於_5°c儲存至少一年，於一年結 束時，其效價基本無改變（即只有效價較原效價少5%的差 別）。 實例8 肉毒毒素醫藥組成物之用途 診斷出一48歲男人患痙攣性肌肉疾病，如頸部肌肉張力 障礙:給病人肌肉内注射約1〇-3 U/公斤至約35 W公斤的A 里肉毋毒素醫藥組成物’内含咖微克異殺粉及1克胺基 酸’如賴胺酸^_7天内痙攣肌肉症狀減輕，且此症狀的
O:\116\116805.DOC -37- 1317283 Λ * 減輕持續至少約2個月至約6個月。 根據本發明所揭示的醫藥組成物有許多優點，包括： * 此醫藥組成物可製成無血液產物，如白蛋白，所以無 . 任何血液產物感染因子，如朊病毒。 … 2.與現在能購得的醫藥組成物相比，此醫藥組成物之安 疋性及I性效價向％恢復性可相比或超過。 雖則本發明在較佳方法及其他具體實施例方面作了詳系 敘述，但在本發明範圍内還可作修改及變化。例如，=π ί 安定化多糖及胺基酸屬於本發明範圍。 種 因之’本發明精神及範圍並不限於前述較佳具 的說明。 、饅實施例
O:\116\116805.DOC • 38 -

Claims (1)

1317283 十、申請專利範圍： 1. 一種具安定化肉毒毒素之醫藥組成物，其包含： (a) 肉毒毒素，及； (b) 重組的人類血清白蛋白。 2. 根據申請範圍第1項之醫藥組成物，其中該肉毒毒素係以 肉毒毒素複合物存在。 3. 根據申請範圍第1項之醫藥組成物，其中該肉毒毒素係以 純肉毒毒素存在。 4. 根據申請範圍第1項之醫藥組成物，進一步包含鋅。 5. 根據申請範圍第1項之醫藥組成物，其中該肉毒毒素係選 自由A、B、C、D、E、F及G型肉毒毒素所組成之群。 6. 根據申請範圍第1項之醫藥組成物，其中該肉毒毒素係A 型肉毒毒素。 7· —種用於注射根據申請專利範圍第1項之醫藥組成物之 裝置，其包括雙室預裝的注射筒，此筒之一室含肉毒毒 素而此筒之第二室含稀釋劑或緩衝溶液。 O:\116\116805.DOC
TW095148526A 2000-02-08 2001-02-06 Pharmaceutical composition comprising botulinum toxin and recombinant human serum albumin TWI317283B (en)

Applications Claiming Priority (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
US50014700A 2000-02-08 2000-02-08

Publications (2)

Publication Number Publication Date
TW200711657A TW200711657A (en) 2007-04-01
TWI317283B true TWI317283B (en) 2009-11-21

Family

ID=23988236

Family Applications (2)

Application Number Title Priority Date Filing Date
TW095148526A TWI317283B (en) 2000-02-08 2001-02-06 Pharmaceutical composition comprising botulinum toxin and recombinant human serum albumin
TW090102480A TWI282739B (en) 2000-02-08 2001-02-06 Pharmaceutical compositions of stabilized botulinum toxin

Family Applications After (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
TW090102480A TWI282739B (en) 2000-02-08 2001-02-06 Pharmaceutical compositions of stabilized botulinum toxin

Country Status (19)

Country Link
US (2) US20020064536A1 (zh)
EP (4) EP1253932B1 (zh)
JP (7) JP2003522154A (zh)
KR (3) KR100753765B1 (zh)
CN (2) CN1331532C (zh)
AR (1) AR027391A1 (zh)
AT (2) ATE519494T1 (zh)
AU (2) AU2001233315B2 (zh)
BR (1) BR0108173A (zh)
CA (3) CA2478621C (zh)
CY (1) CY1108007T1 (zh)
DE (2) DE60110372T2 (zh)
DK (3) DK1514556T3 (zh)
ES (3) ES2275992T5 (zh)
MX (1) MXPA02007519A (zh)
NZ (2) NZ530779A (zh)
PT (3) PT1253932E (zh)
TW (2) TWI317283B (zh)
WO (1) WO2001058472A2 (zh)

Families Citing this family (99)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
TW574036B (en) * 1998-09-11 2004-02-01 Elan Pharm Inc Stable liquid compositions of botulinum toxin
US7780967B2 (en) * 2000-02-08 2010-08-24 Allergan, Inc. Reduced toxicity Clostridial toxin pharmaceutical compositions
US8632785B2 (en) * 2000-02-08 2014-01-21 Allergan, Inc. Clostridial toxin pharmaceutical composition containing a gelatin fragment
EP1253932B1 (en) * 2000-02-08 2005-04-27 Allergan, Inc. Botulinum toxin pharmaceutical compositions
DE10035156A1 (de) * 2000-07-19 2002-02-07 Biotecon Ges Fuer Biotechnologische Entwicklung & Consulting Mbh Proteinkomplex als Vehikel für oral verfügbare Protein-Arzneimittel
US6423319B1 (en) * 2000-10-04 2002-07-23 Allergan Sales, Inc. Methods for treating muscle injuries
DE10149030A1 (de) * 2001-10-05 2003-04-10 Viscum Ag Stabile galenische gefriergetrocknete Arzneimittelzubereitung von rViscumin
US7140371B2 (en) * 2002-03-14 2006-11-28 Allergan, Inc. Surface topography method for determining effects of a botulinum toxin upon a muscle and for comparing botulinum toxins
US20050163809A1 (en) * 2002-03-29 2005-07-28 Ryuji Kaji Remedy for hypermyotonia
US7691394B2 (en) 2002-05-28 2010-04-06 Botulinum Toxin Research Associates, Inc. High-potency botulinum toxin formulations
US7459164B2 (en) 2002-05-28 2008-12-02 Botulinum Toxin Research Associates, Inc. Composition for therapeutic and cosmetic botulinum toxin
US7238357B2 (en) * 2002-11-05 2007-07-03 Allergan, Inc. Methods for treating ulcers and gastroesophageal reflux disease
KR20050094817A (ko) 2002-12-20 2005-09-28 보툴리늄 톡신 리서치 어쏘시에이츠, 인크. 개선된 약제학적 보툴리늄 독소 조성물
WO2004089335A2 (en) * 2003-03-31 2004-10-21 Alza Corporation Non-aqueous single phase vehicles and formulations utilizing such vehicles
US7220422B2 (en) * 2003-05-20 2007-05-22 Allergan, Inc. Methods and compositions for treating eye disorders
FR2855177B1 (fr) * 2003-05-23 2005-07-08 Raymond Robert Composition contenant des acides nucleiques lyophilises en presence de collagene et de disaccharides
US7148041B2 (en) 2003-09-25 2006-12-12 Allergan, Inc. Animal product free media and processes for obtaining a botulinum toxin
US7160699B2 (en) 2003-09-25 2007-01-09 Allergan, Inc. Media for clostridium bacterium and processes for obtaining a clostridial toxin
US7452697B2 (en) 2003-09-25 2008-11-18 Allergan, Inc. Chromatographic method and system for purifying a botulinum toxin
US7354740B2 (en) 2003-09-25 2008-04-08 Allergan, Inc. Animal product free system and process for purifying a botulinum toxin
US20050191321A1 (en) 2004-02-26 2005-09-01 Allergan, Inc. Methods for treating headache
US9078892B2 (en) * 2004-02-26 2015-07-14 Allergan, Inc. Methods for treating pain and for treating a medication overuse disorder
US20100266638A1 (en) 2004-02-26 2010-10-21 Allergan, Inc. Headache treatment method
US7691381B2 (en) 2004-04-15 2010-04-06 Allergan, Inc. Stabilized biodegradable neurotoxin implants
RU2255761C1 (ru) * 2004-07-01 2005-07-10 Общество с ограниченной ответственностью "Токсины и сопутствующие продукты" Препарат для лечения мышечных дистоний из токсина культуры clostridium botulinum и способ его получения
GB2416122A (en) 2004-07-12 2006-01-18 Ipsen Ltd Botulinum neurotoxin composition
AU2005274822B2 (en) 2004-07-26 2008-10-30 Merz Pharma Gmbh & Co. Kgaa Therapeutic composition with a botulinum neurotoxin
HUE032950T2 (en) 2004-08-04 2017-11-28 Ipsen Biopharm Ltd Pharmaceutical preparation containing botulinum neurotoxin A2
WO2006013370A1 (en) 2004-08-04 2006-02-09 Ipsen Limited Pharmaceutical composition containing botulinum neurotoxin a2
WO2006073410A1 (en) * 2005-01-03 2006-07-13 Botulinum Toxin Research Associates, Inc. Compositions, methods and devices for preparing less painful botulinum toxin formulations
US7727537B2 (en) 2005-02-14 2010-06-01 Dpm Therapeutics Corp. Stabilized compositions for topical administration and methods of making same
US7838011B2 (en) 2005-02-14 2010-11-23 Pankaj Modi Stabilized protein compositions for topical administration and methods of making same
RU2007136616A (ru) * 2005-03-03 2009-04-10 Риванс Терапьютикс, Инк. (Us) Композиция и способ для местного применения и чрескожного введения ботулинового токсина
US8926991B2 (en) * 2005-06-14 2015-01-06 Botulinum Toxin Research Associates, Inc. Botulinum toxin and the treatment of primary disorders of mood and affect
US20230390368A1 (en) * 2005-06-27 2023-12-07 Revance Therapeutics, Inc. Methods of Treating Cervical Dystonia in a Subject Having Underlying Condition(s)
US20070027105A1 (en) 2005-07-26 2007-02-01 Alza Corporation Peroxide removal from drug delivery vehicle
US8323666B2 (en) * 2005-08-01 2012-12-04 Allergan, Inc. Botulinum toxin compositions
FR2889936B1 (fr) 2005-09-01 2007-12-21 Sod Conseils Rech Applic Methode pour quantifier une neurotoxine cholinergique dans un echantillon
US7744904B1 (en) * 2005-09-26 2010-06-29 B.B. Scientific L.L.C. Stabilization of Clostridium botulinum neurotoxin complex
US8168206B1 (en) 2005-10-06 2012-05-01 Allergan, Inc. Animal protein-free pharmaceutical compositions
US8137677B2 (en) * 2005-10-06 2012-03-20 Allergan, Inc. Non-protein stabilized clostridial toxin pharmaceutical compositions
AU2013202329B2 (en) * 2005-10-06 2016-04-14 Allergan, Inc. Non-protein stabilized clostridial toxin pharmaceutical compositions
WO2007044809A2 (en) * 2005-10-11 2007-04-19 Botulinum Toxin Research Associates, Inc. Albumin-free botulinum toxin based pharmaceutical compositions containing a hyaluronidase and methods of use
CN100384993C (zh) * 2005-11-02 2008-04-30 浙江大学 提高地衣芽孢杆菌zjuel31410弹性蛋白酶稳定性的方法
FR2896693B1 (fr) * 2006-01-27 2008-03-14 Sod Conseils Rech Applic Composition comprenant plusieurs toxines botuliques
DE102006019447A1 (de) * 2006-04-24 2007-10-25 Dressler, Dirk, Dr. Markierung von Botulinum Toxin
ES2386972T3 (es) 2006-05-31 2012-09-10 Genzyme Corporation Uso de polisacáridos para la estimulación de la actividad enzimática
FR2902341B1 (fr) * 2006-06-16 2011-02-25 Scras Utilisation therapeutique simultanee, separee ou etalee dans le temps d'au moins une neurotoxine botulique, et d'au moins un derive opiace
FR2907680B1 (fr) 2006-10-27 2012-12-28 Scras Utilisation therapeutique d'au moins une neurotoxine botulique dans le traitement de la douleur induite par au moins un agent anti-cancereux
FR2910327B1 (fr) 2006-12-22 2013-04-26 Scras Utilisation d'au moins une neurotoxine botulique pour traiter la douleur induite par les traitements therapeutiques du virus du sida.
AU2007340162B2 (en) * 2006-12-29 2013-08-01 Revance Therapeutics, Inc. Compositions and methods of topical application and transdermal delivery of botulinum toxins stabilized with polypeptide fragments derived from HIV-TAT
GB0705245D0 (en) 2007-03-19 2007-04-25 Stabilitech Ltd Stable biological products
WO2008151817A1 (en) * 2007-06-13 2008-12-18 Csl Behring Gmbh Use of vwf stabilized fviii preparations and of vwf preparations without fviii for extravascular administration in the therapy and prophylactic treatment of bleeding disorders
US8617568B2 (en) 2007-07-10 2013-12-31 Medy-Tox, Inc. Pharmaceutical liquid composition of botulinum toxin with improved stability
US7473429B1 (en) * 2007-07-27 2009-01-06 Renfroe J Ben Method for treatment of laminitis in animals
JP2009132686A (ja) * 2007-10-26 2009-06-18 Okayama Univ ボツリヌス毒素由来のポリペプチド及びボツリヌス毒素の検出方法
EP2072039A1 (en) 2007-12-21 2009-06-24 Merz Pharma GmbH & Co.KGaA Use of a neurotoxic component of Clostridium botulinum toxin complex to reduce or prevent side effects
EP2072057A1 (en) 2007-12-21 2009-06-24 Merz Pharma GmbH & Co.KGaA Early administration of Botulinum toxin in the treatment of cerebrovascular event and spinal cord injury
US9107815B2 (en) 2008-02-22 2015-08-18 Allergan, Inc. Sustained release poloxamer containing pharmaceutical compositions
FR2930447B1 (fr) 2008-04-25 2010-07-30 Sod Conseils Rech Applic Utilisation therapeutique d'au moins une neurotoxine botulique dans le traitement de la douleur dans le cas de la neuropathie diabetique
WO2010016895A1 (en) * 2008-08-05 2010-02-11 Solstice Neurosciences, Inc. Compositions of activated botulinum toxin type b
WO2010016901A1 (en) * 2008-08-05 2010-02-11 Solstice Neurosciences, Inc. Compositions of activated botulinum holotoxin type b (150 kd)
WO2010051039A1 (en) * 2008-11-03 2010-05-06 Solstice Neurosciences, Inc. Compositions of activated botulinum toxin type b
US20100112006A1 (en) * 2008-11-03 2010-05-06 Solstice Neurosciences, Inc. Compositions of activated botulinum holotoxin type B (150 kD)
EP2364168A1 (en) 2008-12-04 2011-09-14 Botulinum Toxin Research Associates, Inc. Extended length botulinum toxin formulation for human or mammalian use
KR20110106346A (ko) * 2008-12-10 2011-09-28 알러간, 인코포레이티드 클로스트리디움 독소 약제학적 조성물
CN102300584A (zh) 2008-12-31 2011-12-28 雷文斯治疗公司 可注射的肉毒杆菌毒素制剂
US20100184685A1 (en) * 2009-01-19 2010-07-22 Zavala Jr Gerardo Systems and methods for treating post- operative, acute, and chronic pain using an intra-muscular catheter administrated combination of a local anesthetic and a neurotoxin protein
EP2248518B1 (en) 2009-04-17 2013-01-16 Merz Pharma GmbH & Co. KGaA Formulation for stabilizing proteins, peptides or mixtures thereof.
MX366344B (es) 2009-06-25 2019-07-05 Revance Therapeutics Inc Formulaciones de toxina botulinica libres de albumina.
US8129139B2 (en) 2009-07-13 2012-03-06 Allergan, Inc. Process for obtaining botulinum neurotoxin
JP2013522239A (ja) * 2010-03-12 2013-06-13 サーモディクス，インコーポレイテッド 注射用薬物送達システム
JP5769379B2 (ja) * 2010-03-17 2015-08-26 グンゼ株式会社 Ｄａｎｃｅタンパク質溶液
RU2013119297A (ru) * 2010-10-06 2014-11-20 Аллерган, Инк. Система для хранения и последующей обработки ботулотоксина
AU2011316111B2 (en) 2010-10-12 2015-05-28 Merz Pharma Gmbh & Co. Kgaa Formulation suitable for stabilizing proteins, which is free of mammalian excipients
CA2831908C (en) * 2011-03-31 2018-11-13 Medy-Tox Inc. Lyophilized preparation of botulinum toxin
KR101135486B1 (ko) * 2011-05-25 2012-04-13 함종욱 보툴리눔 에이형 독소의 액상제품
US9393291B2 (en) 2012-04-12 2016-07-19 Botulinum Toxin Research Associates, Inc. Use of botulinum toxin for the treatment of cerebrovascular disease, renovascular and retinovascular circulatory beds
US11484580B2 (en) 2014-07-18 2022-11-01 Revance Therapeutics, Inc. Topical ocular preparation of botulinum toxin for use in ocular surface disease
US9901627B2 (en) 2014-07-18 2018-02-27 Revance Therapeutics, Inc. Topical ocular preparation of botulinum toxin for use in ocular surface disease
CN104189891B (zh) * 2014-08-15 2016-03-30 北京四环生物制药有限公司 一种不含人血清蛋白的重组人促红素制剂
SG11201705019PA (en) * 2014-12-23 2017-07-28 Merz Pharma Gmbh & Co Kgaa Botulinum toxin prefilled container
CN107206175B (zh) 2015-02-03 2021-06-01 莫茨制药有限及两合公司 肉毒杆菌毒素预填充式容器
WO2017075468A1 (en) 2015-10-29 2017-05-04 Revance Therapeutics, Inc. Injectable botulinum toxin formulations and methods of use thereof having long duration of therapeutic or cosmetic effect
WO2017188618A1 (en) * 2016-04-26 2017-11-02 Korea Prime Pharm Co., Ltd. A novel composition comprising botulinum toxin
KR102423739B1 (ko) * 2016-05-27 2022-07-21 입센 바이오팜 리미티드 트립토판 또는 타이로신으로 안정화된 액체 신경독 제형
WO2018038585A1 (ko) * 2016-08-26 2018-03-01 주식회사 에이비바이오 보툴리눔 독소 및 안정화제를 포함하는 액상 제형 및 이의 제조방법
WO2018038301A1 (en) * 2016-08-26 2018-03-01 Hugel Inc. Stabilized liquid formulation of botulinum toxin and preparation method thereof
AU2017326253B2 (en) 2016-09-13 2021-10-21 Allergan, Inc. Stabilized non-protein clostridial toxin compositions
US20210162026A1 (en) 2017-08-28 2021-06-03 Revance Therapeutics, Inc. Transmucosal botulinum toxin compositions, kits, and methods for treating bladder disorders
KR20190038292A (ko) * 2017-09-29 2019-04-08 한국프라임제약주식회사 효능 지속시간이 연장된 보툴리눔 독소 조성물
SG11202004467PA (en) * 2017-11-17 2020-06-29 Swedish Orphan Biovitrum Ab Publ Syringe assembly with ion-exchange material
KR102063475B1 (ko) * 2018-02-22 2020-01-09 주식회사 에이비바이오 보툴리눔 독소, 안정화제, 및 국소마취제를 포함하는 액상 제형 및 이의 제조방법
WO2020111852A1 (ko) 2018-11-30 2020-06-04 주식회사 휴온스글로벌 보툴리눔 독소의 안정화 액상 조성물
KR102259423B1 (ko) * 2018-11-30 2021-06-02 주식회사 휴온스바이오파마 보툴리눔 독소의 안정화 액상 조성물
CA3167217A1 (en) 2020-01-13 2021-07-22 Durect Corporation Sustained release drug delivery systems with reduced impurities and related methods
KR102404217B1 (ko) * 2020-04-08 2022-06-02 (주)메디톡스 토출 속도 조절이 용이하고 안정한 보툴리눔 독소 사전충전된 주사기 제형
US20230165946A1 (en) * 2020-04-08 2023-06-01 Medytox Inc. Botulinum toxin pre-filled injectable formulation that facilitates discharge rate control and is stable
CN111675754A (zh) * 2020-05-19 2020-09-18 四川一埃科技有限公司 一种肉毒毒素蛋白晶体结构及晶体制备方法和解析方法

Family Cites Families (75)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US5625041A (en) * 1990-09-12 1997-04-29 Delta Biotechnology Limited Purification of proteins
US3269912A (en) * 1963-04-08 1966-08-30 Boehringer & Soehne Gmbh Aluminum oxide depot vaccines
US3758382A (en) * 1968-07-26 1973-09-11 Us Navy Ve agent process of freezing blood using a hydroxyalkyl starch as cryoprotecti
GB1514720A (en) * 1974-10-07 1978-06-21 Secr Defence Preparation of hydroxyethyl starch
DE2457047C3 (de) * 1974-12-03 1979-10-31 Behringwerke Ag, 3550 Marburg Verfahren zur Herstellung eines Derivates der leichten Kette des Tetanustoxins, dessen Verwendung zur Tetanusprophylaxe
NZ199722A (en) * 1981-02-25 1985-12-13 Genentech Inc Dna transfer vector for expression of exogenous polypeptide in yeast;transformed yeast strain
US4391801A (en) * 1981-10-29 1983-07-05 Cutter Laboratories, Inc. Plasma protein fraction substantially free of acetate ions
US4457916A (en) * 1982-08-31 1984-07-03 Asahi Kasei Kogyo Kabushiki Kaisha Method for stabilizing Tumor Necrosis Factor and a stable aqueous solution or powder containing the same
JPS5959625A (ja) * 1982-09-28 1984-04-05 Dainippon Pharmaceut Co Ltd ガン壊死因子を安定化する方法
HU188847B (en) * 1983-02-22 1986-05-28 Human Oltoanyagtermeloe Es Kutato Intezet,Hu Process for producing liophylized combined vaccines
JPS59163313A (ja) * 1983-03-09 1984-09-14 Teijin Ltd 経鼻投与用ペプチドホルモン類組成物
EP0150067A3 (en) * 1984-01-23 1986-12-30 Takeda Chemical Industries, Ltd. Stable composition of gamma-interferon
JPS61161222A (ja) * 1985-01-09 1986-07-21 Takeda Chem Ind Ltd γ型インタ−フエロンフラグメントの組成物
JPS60258125A (ja) * 1984-06-06 1985-12-20 Hayashibara Biochem Lab Inc 蛋白性生理活性物質を含有する水溶性乾燥物
US4597966A (en) * 1985-01-09 1986-07-01 Ortho Diagnostic Systems, Inc. Histidine stabilized immunoglobulin and method of preparation
JPS61194034A (ja) * 1985-02-25 1986-08-28 Teijin Ltd 経鼻投与用粉末状組成物
US4962091A (en) * 1986-05-23 1990-10-09 Syntex (U.S.A.) Inc. Controlled release of macromolecular polypeptides
DE3621828A1 (de) * 1986-06-28 1988-01-14 Biotest Pharma Gmbh Stabilisierung eines fuer therapeutische zwecke, insbesondere beim menschen, bestimmten interleukin-2-praeparates sowie dieses praeparat enthaltende stabilisierte waessrige loesung oder feststoff
JPH0696536B2 (ja) * 1988-02-26 1994-11-30 佐藤製薬株式会社 制酸剤含有内用懸濁液
JP2849632B2 (ja) * 1988-04-08 1999-01-20 社団法人北里研究所 ワクチン製剤
FR2630115B1 (fr) * 1988-04-14 1994-10-28 Merieux Inst Procede de stabilisation des solutions d'albumine humaine et solution obtenue
FR2649991B2 (fr) † 1988-08-05 1994-03-04 Rhone Poulenc Sante Utilisation de derives stables du plasmide pkd1 pour l'expression et la secretion de proteines heterologues dans les levures du genre kluyveromyces
US5997856A (en) * 1988-10-05 1999-12-07 Chiron Corporation Method and compositions for solubilization and stabilization of polypeptides, especially proteins
US5919665A (en) * 1989-10-31 1999-07-06 Ophidian Pharmaceuticals, Inc. Vaccine for clostridium botulinum neurotoxin
US5945098A (en) * 1990-02-01 1999-08-31 Baxter International Inc. Stable intravenously-administrable immune globulin preparation
AU7489091A (en) * 1990-03-01 1991-09-18 Agouron Pharmaceuticals, Inc. Enhanced cryopreservation with thermal hysteresis peptide
US5401243A (en) * 1990-08-21 1995-03-28 Associated Synapse Biologics Controlled administration of chemodenervating pharmaceuticals
CA2049524A1 (en) * 1990-08-30 1992-03-01 Jakob Silbiger Compositions comprising a hydrophillic polymer and a hydrophillic material different therefrom
US5695956A (en) * 1990-11-26 1997-12-09 University Of Pittsburgh Of The Commonwealth System Of Higher Education Clostridium perfingens type a enterotoxin toxoid and methods of preparation and use as a vaccine and therapeutic agent
JP2916947B2 (ja) * 1990-11-28 1999-07-05 興和株式会社 Ｃｐｂ―ｉの安定化方法及び製剤組成物
US5704297A (en) * 1991-02-06 1998-01-06 The Dupont Merck Pharmaceutical Company Dry powder composition of hydroxyethyl starch suitable for reconstitution
EP0590060B1 (en) * 1991-06-21 1997-09-17 University Of Cincinnati Orally administrable therapeutic proteins and method of making
AU2309692A (en) * 1991-07-03 1993-02-11 Cryolife, Inc. Method for stabilization of biomaterials
JPH0672891A (ja) * 1992-08-31 1994-03-15 Green Cross Corp:The ヒト血清アルブミン含有製剤
WO1994000481A1 (en) * 1992-06-23 1994-01-06 Associated Synapse Biologics Pharmaceutical composition containing botulinum b complex
US5445817A (en) * 1992-08-21 1995-08-29 The United States Of America As Represented By The Department Of Health And Human Services Pertussis toxin used as a carrier protein with non-charged saccharides in conjugate vaccines
US5728553A (en) * 1992-09-23 1998-03-17 Delta Biotechnology Limited High purity albumin and method of producing
JPH06192118A (ja) * 1992-09-28 1994-07-12 Wisconsin Alumni Res Found ボツリヌス毒素を含む異常に過敏な筋運動障害の治療用薬剤組成物およびその製造方法
US5466672A (en) * 1992-12-04 1995-11-14 Ophidian Pharmaceuticals, Inc. Therapeutic use of clostridium difficile toxin A
JP3007785B2 (ja) * 1993-03-16 2000-02-07 旭化成工業株式会社 トロンボモジュリン組成物およびその変性防止方法
US5562907A (en) * 1993-05-14 1996-10-08 Arnon; Stephen S. Method to prevent side-effects and insensitivity to the therapeutic uses of toxins
CN1102851C (zh) * 1993-06-04 2003-03-12 生物时间公司 类血浆溶液
US5437291A (en) * 1993-08-26 1995-08-01 Univ Johns Hopkins Method for treating gastrointestinal muscle disorders and other smooth muscle dysfunction
JP3533687B2 (ja) * 1993-12-17 2004-05-31 三菱ウェルファーマ株式会社 ヒト血清アルブミンの脱色方法
JP3684584B2 (ja) * 1993-12-17 2005-08-17 三菱ウェルファーマ株式会社 ヒト血清アルブミンの脱色方法
US5766605A (en) * 1994-04-15 1998-06-16 Mount Sinai School Of Medicine Of The City University Of New York Treatment of autonomic nerve dysfunction with botulinum toxin
DK0758900T3 (da) * 1994-05-09 2002-07-29 William J Binder Botulinumtoksin til reduktion af migræne-hovedpinesmerter
US5670484A (en) * 1994-05-09 1997-09-23 Binder; William J. Method for treatment of skin lesions associated with cutaneous cell-proliferative disorders
JPH07308199A (ja) † 1994-05-18 1995-11-28 Green Cross Corp:The ヒト血清アルブミンの製造方法
EP1138319A3 (en) * 1994-08-04 2003-03-19 Elan Drug Delivery Limited Solid delivery systems for controlled release of molecules incorporated therein and methods of making same
WO1996005222A1 (en) * 1994-08-08 1996-02-22 Wisconsin Alumni Research Foundation Purification and pharmaceutical compositions containing type g botulinum neurotoxin
US5512547A (en) * 1994-10-13 1996-04-30 Wisconsin Alumni Research Foundation Pharmaceutical composition of botulinum neurotoxin and method of preparation
US5756468A (en) * 1994-10-13 1998-05-26 Wisconsin Alumni Research Foundation Pharmaceutical compositions of botulinum toxin or botulinum neurotoxin and methods of preparation
DK0773788T3 (da) * 1995-06-06 2003-09-01 Allergan Inc Forbedrede præparater og fremgangsmåder til kemodenervering under anvendelse af neurotoxiner
US5919463A (en) * 1995-07-07 1999-07-06 Oravax, Inc. Clostridium difficle toxins as mucosal adjuvants
JP3098401B2 (ja) * 1995-07-12 2000-10-16 株式会社エルティーティー研究所 経鼻投与用製剤
DE19538687A1 (de) * 1995-10-17 1997-04-24 Boehringer Mannheim Gmbh Stabile pharmazeutische Darreichungsformen enthaltend Parathormon
US5837265A (en) * 1996-03-08 1998-11-17 The Regents Of The University Of California Chemically-modified clostridiatoxin with improved properties
PT889949E (pt) * 1996-03-13 2003-10-31 Delta Biotechnology Ltd Controlo de fermentacao
US5721215A (en) * 1996-03-20 1998-02-24 Allergan Injectable therapy for control of muscle spasms and pain related to muscle spasms
US5908825A (en) * 1997-01-09 1999-06-01 University Of Maryland At Baltimore Dosage composition for nasal delivery and method of use of the same
JPH10245400A (ja) * 1997-02-28 1998-09-14 Eiken Chem Co Ltd トランスフェリンレセプターの安定化方法
JPH10251161A (ja) * 1997-03-11 1998-09-22 Green Cross Corp:The 浮腫治療効果増強剤
US6210683B1 (en) * 1997-09-05 2001-04-03 Merck & Co., Inc. Stabilizers containing recombinant human serum albumin for live virus vaccines
US6051239A (en) * 1997-10-20 2000-04-18 Thomas Jefferson University Compositions and methods for systemic delivery of oral vaccines and therapeutic agents
PT917879E (pt) * 1997-11-22 2002-12-31 Roche Diagnostics Gmbh Processo melhorado para estabilizacao de proteinas
US6346519B1 (en) * 1998-09-09 2002-02-12 Advanced Medical Instruments Method and composition for treating arthritis
TW574036B (en) * 1998-09-11 2004-02-01 Elan Pharm Inc Stable liquid compositions of botulinum toxin
US6358917B1 (en) * 1999-08-24 2002-03-19 Jean D. A. Carruthers Cosmetic use of botulinum toxin for treatment of downturned mouth
US6113915A (en) * 1999-10-12 2000-09-05 Allergan Sales, Inc. Methods for treating pain
US6139845A (en) * 1999-12-07 2000-10-31 Allergan Sales, Inc. Method for treating cancer with a neurotoxin
US6337075B1 (en) * 2000-01-11 2002-01-08 Allergan Sales, Inc. Methods for treating diabetes
EP1253932B1 (en) * 2000-02-08 2005-04-27 Allergan, Inc. Botulinum toxin pharmaceutical compositions
JP2003009897A (ja) * 2001-07-03 2003-01-14 Keiji Oguma ボツリヌス毒素の分離・精製法
MXPA01011542A (es) * 2001-11-13 2003-05-22 Alcon Inc Regeneracion del cartilago articular da°ado por la osteoartritis de grado i y ii, mediante la aplicacion intra-articular de una mezcla de hialuronato de sodio y de condroitin sulfato en un vehiculo de gel.

Also Published As

Publication number Publication date
KR20020084115A (ko) 2002-11-04
KR100753765B1 (ko) 2007-08-31
EP1253932B1 (en) 2005-04-27
DK1253932T3 (da) 2005-06-27
ES2237551T3 (es) 2005-08-01
ATE519494T1 (de) 2011-08-15
KR100665469B1 (ko) 2007-01-04
CA2478621A1 (en) 2001-08-16
BR0108173A (pt) 2003-01-21
KR100799400B1 (ko) 2008-01-30
US20020064536A1 (en) 2002-05-30
DE60125986T2 (de) 2007-10-18
TW200711657A (en) 2007-04-01
JP2007332155A (ja) 2007-12-27
JP2004256545A (ja) 2004-09-16
EP1398038A1 (en) 2004-03-17
JP2003522154A (ja) 2003-07-22
EP1398038B2 (en) 2011-01-26
CN1258379C (zh) 2006-06-07
DE60110372T2 (de) 2006-01-19
CA2478621C (en) 2006-11-21
DE60125986D1 (de) 2007-02-22
EP1398038B1 (en) 2007-01-10
PT1398038E (pt) 2007-02-28
CN1616084A (zh) 2005-05-18
DK1398038T4 (da) 2011-03-28
ES2368061T3 (es) 2011-11-14
KR20060028475A (ko) 2006-03-29
AU2001233315B2 (en) 2004-07-08
WO2001058472A2 (en) 2001-08-16
DK1514556T3 (da) 2011-10-24
JP2012031194A (ja) 2012-02-16
JP4118830B2 (ja) 2008-07-16
PT1253932E (pt) 2005-07-29
PT1514556E (pt) 2011-09-08
ATE293988T1 (de) 2005-05-15
ES2275992T3 (es) 2007-06-16
US20080213315A1 (en) 2008-09-04
CN1331532C (zh) 2007-08-15
CA2400318C (en) 2005-06-14
AR027391A1 (es) 2003-03-26
JP2005336201A (ja) 2005-12-08
EP1253932A2 (en) 2002-11-06
DE60110372D1 (de) 2005-06-02
ES2275992T5 (es) 2011-05-18
EP1514556B1 (en) 2011-08-10
KR20060090938A (ko) 2006-08-17
NZ530779A (en) 2004-08-27
AU3331501A (en) 2001-08-20
DK1398038T3 (da) 2007-04-02
JP5080902B2 (ja) 2012-11-21
DE60125986T3 (de) 2011-07-28
MXPA02007519A (es) 2004-10-15
CY1108007T1 (el) 2013-09-04
CA2400318A1 (en) 2001-08-16
EP1514556A1 (en) 2005-03-16
TWI282739B (en) 2007-06-21
CA2494241C (en) 2011-06-14
JP2011251988A (ja) 2011-12-15
JP2005179375A (ja) 2005-07-07
CN1398188A (zh) 2003-02-19
WO2001058472A3 (en) 2002-01-03
NZ520201A (en) 2004-04-30
CA2494241A1 (en) 2001-08-16
EP1586329A1 (en) 2005-10-19

Similar Documents

Publication Publication Date Title
TWI317283B (en) Pharmaceutical composition comprising botulinum toxin and recombinant human serum albumin
KR100852824B1 (ko) 보툴리눔 신경독소를 포함하는 치료 조성물
AU2001233315A1 (en) Botulinum toxin pharmaceutical compositions
AU2005203171B2 (en) Botulinum toxin pharmaceutical compositions
AU2008201176B2 (en) Botulinum toxin pharmaceutical compositions

Legal Events

Date Code Title Description
MK4A Expiration of patent term of an invention patent