JPS61161222A - γ型インタ−フエロンフラグメントの組成物 - Google Patents
γ型インタ−フエロンフラグメントの組成物Info
- Publication number
- JPS61161222A JPS61161222A JP60002585A JP258585A JPS61161222A JP S61161222 A JPS61161222 A JP S61161222A JP 60002585 A JP60002585 A JP 60002585A JP 258585 A JP258585 A JP 258585A JP S61161222 A JPS61161222 A JP S61161222A
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- composition
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Abstract
(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。
め要約のデータは記録されません。
Description
【発明の詳細な説明】
（産業上の利用分野）
本発明はγ型インターフェロンプラグメントの組成物に
関する。
関する。
（従来の技術）
ヒトインターフェロンは現在、α型、β型およびγ型の
３種類に分類されている。α型およびβ型インターフェ
ロンは比較的安定で、主として非経口投与剤の形態で臨
床に供せられ、組織的臨床研究も進んでいる。一方、γ
型インターフェロン（１ＦＮ−７と略称することがある
）は極めて不安定で、水溶液の保存、凍結あるいは凍結
乾燥の操作中において、容易にその活性を減じ、臨床上
使用するに値する安定な組成物を得ることを、極めて困
難にしている。その為、インターフェロンの中でも著し
く強い抗腫瘍作用を有し、医薬として最も期待の大きい
ＩＩＮ−ｒの臨床応用への大きな妨げとなっている。と
りわけγ型インターフェロンフラグメントにおいてはそ
の性状に関する知見も少なく、安定なその組成物を得た
との報告はない。
３種類に分類されている。α型およびβ型インターフェ
ロンは比較的安定で、主として非経口投与剤の形態で臨
床に供せられ、組織的臨床研究も進んでいる。一方、γ
型インターフェロン（１ＦＮ−７と略称することがある
）は極めて不安定で、水溶液の保存、凍結あるいは凍結
乾燥の操作中において、容易にその活性を減じ、臨床上
使用するに値する安定な組成物を得ることを、極めて困
難にしている。その為、インターフェロンの中でも著し
く強い抗腫瘍作用を有し、医薬として最も期待の大きい
ＩＩＮ−ｒの臨床応用への大きな妨げとなっている。と
りわけγ型インターフェロンフラグメントにおいてはそ
の性状に関する知見も少なく、安定なその組成物を得た
との報告はない。
（発明が解決しようとする問題点）
本発明者らは、ヒトエＦＮ−ｒフラグメントの安定化お
よびヒトＩＰ’Ｎ−ｒフラグメントの安定な組成物の製
造につき鋭意研究を行い、凍結および凍結乾燥の操作に
おいても工ＦＮ−γの活性の低下を来たすことのない安
定なＩＦ’Ｎ−γフラグメントの組成物の製造法を確立
し、本発明を完成した。
よびヒトＩＰ’Ｎ−ｒフラグメントの安定な組成物の製
造につき鋭意研究を行い、凍結および凍結乾燥の操作に
おいても工ＦＮ−γの活性の低下を来たすことのない安
定なＩＦ’Ｎ−γフラグメントの組成物の製造法を確立
し、本発明を完成した。
（問題を解決するための手段）
本発明は、デキストランまたは（および）ヒドロキシエ
チル澱粉の共存下に凍結もしくは凍結乾燥シタヒトｒ型
インターフェロンフラグメントの組成物を提供するもの
である。
チル澱粉の共存下に凍結もしくは凍結乾燥シタヒトｒ型
インターフェロンフラグメントの組成物を提供するもの
である。
本発明に用いられるＩＦ’Ｎ−ｒフラグメントはヒト出
来のものであれば、天然のあるいは遺伝子組み換え技術
で得られるいずれのＩＦ’Ｎ−γフラグメントでもよい
。
来のものであれば、天然のあるいは遺伝子組み換え技術
で得られるいずれのＩＦ’Ｎ−γフラグメントでもよい
。
本発明におけるＩＦＮ−γフラグメントは、第１図で示
される１４６個のアミノ酸からなるポリペプチドの拙々
のフラグメントを包含する。す々わち、例えば上記ポリ
ペプチドのＮ末端部分の４個以下のアミノ酸が欠落した
Ｎ末端部欠落スピーシーズや上記ポリペプチドもしくは
Ｎ末端部欠落スピーシーズの第１３１番アミノ酸残基以
降の部位で切断されたＣ末端部欠落スピーシーズなどが
挙げられる。
される１４６個のアミノ酸からなるポリペプチドの拙々
のフラグメントを包含する。す々わち、例えば上記ポリ
ペプチドのＮ末端部分の４個以下のアミノ酸が欠落した
Ｎ末端部欠落スピーシーズや上記ポリペプチドもしくは
Ｎ末端部欠落スピーシーズの第１３１番アミノ酸残基以
降の部位で切断されたＣ末端部欠落スピーシーズなどが
挙げられる。
上記種々のフラグメントの中で、第１図で示される１４
６個のアミノ酸からなるポリペプチドのＮ末端部分の４
個以下のアミノ酸が欠落したＮ末端部欠落スピーシーズ
が好ましい。
６個のアミノ酸からなるポリペプチドのＮ末端部分の４
個以下のアミノ酸が欠落したＮ末端部欠落スピーシーズ
が好ましい。
−γ〕が好ましい。
本発明においては、遺伝子組み換え技術で得られる上記
ヒトエｒＮ−γフヲグメントを高濃度に含有する水溶液
が有利に使用される。
ヒトエｒＮ−γフヲグメントを高濃度に含有する水溶液
が有利に使用される。
本願におけるヒトエＰＨ−γフフグメントの比活性はＩ
Ｆ”Ｎ−γの比活性として表示され、その比活性は、１
ｘ１０５〜１ｘ１０７［ｉ原単位／ａ！／（工［Ｊ／ｑ
）であることが好ましく、工Ｆ’Ｎ−γフフグメント水
溶液として１×１０〜ｌＸｌＯ７エＵ／ｗｔｌ とりわ
け１ｘｌＯ〜１ｘｌＯ工Ｕ ／ｍｌの活性を有するもの
が好ましい。
Ｆ”Ｎ−γの比活性として表示され、その比活性は、１
ｘ１０５〜１ｘ１０７［ｉ原単位／ａ！／（工［Ｊ／ｑ
）であることが好ましく、工Ｆ’Ｎ−γフフグメント水
溶液として１×１０〜ｌＸｌＯ７エＵ／ｗｔｌ とりわ
け１ｘｌＯ〜１ｘｌＯ工Ｕ ／ｍｌの活性を有するもの
が好ましい。
デキストフンおよびヒドロキンエチ／ｌ／澱粉は、市販
の吃のを使用できるが、本組成物を臨床応用するために
は、代用血漿として非経口投与に用いられる程度の品質
のものが好ましい。デキストフンは、平均分子量１万〜
１０万、とシわけ４万〜７万のものが、ヒドロキシェチ
／ｌ／澱粉は、平均分子量１万〜２０万、とシわけ２万
〜６万またけ２０万のものが有利に使用される。
の吃のを使用できるが、本組成物を臨床応用するために
は、代用血漿として非経口投与に用いられる程度の品質
のものが好ましい。デキストフンは、平均分子量１万〜
１０万、とシわけ４万〜７万のものが、ヒドロキシェチ
／ｌ／澱粉は、平均分子量１万〜２０万、とシわけ２万
〜６万またけ２０万のものが有利に使用される。
デキストフンおよびヒドロキシエチル細粉は、１１’Ｎ
−γフラグメント水溶液１ゴ当９１ダ以上、好ましくは
３Ｎ１〜５０Ｍ／／含有させることが好ましい。
−γフラグメント水溶液１ゴ当９１ダ以上、好ましくは
３Ｎ１〜５０Ｍ／／含有させることが好ましい。
本発明の組成物には、上記デキストランまたは（および
）ヒドロキシ星チル勲粉に加え、ヒト孟清アルブミン（
ＵＳＡ）を配合すること系できる。
）ヒドロキシ星チル勲粉に加え、ヒト孟清アルブミン（
ＵＳＡ）を配合すること系できる。
Ｕ Ｓ Ａ ’ｉｌ’５合す６５合、Ｉ’ Ｆ Ｍ−７
７→、７し。
７→、７し。
水溶液１ｗｌ１当シ２〜２０ ＩＩＱ加えることが好ま
しい。
しい。
また本発明の組成物は、該フラグメントがシスティン残
基を有する場合還元性硫黄化合物ｉ共存せ七めてもよい
。該還元性硫黄化合物として□、グルタチオン（還元型
）、チオケト酸。システィン、Ｎ−アセチルシスティン
、Ｎ−アセチルホモシヌテイン、チオジグリコール、チ
オエタノールアミン、モノチオグリセロール、ジチオス
レイトールおよび炭素数１〜７のチオアルカン酸が挙げ
られるがとシわけ、グルタチオン（還元型）が好ましい
。還元性硫黄化合物を共存せしめる場合、工ＦＮ−γフ
ラグメント水溶液１ｄ当シ還元性硫黄化合物０．１４以
上、とシわけ０５〜１０ｑが好ましい。
基を有する場合還元性硫黄化合物ｉ共存せ七めてもよい
。該還元性硫黄化合物として□、グルタチオン（還元型
）、チオケト酸。システィン、Ｎ−アセチルシスティン
、Ｎ−アセチルホモシヌテイン、チオジグリコール、チ
オエタノールアミン、モノチオグリセロール、ジチオス
レイトールおよび炭素数１〜７のチオアルカン酸が挙げ
られるがとシわけ、グルタチオン（還元型）が好ましい
。還元性硫黄化合物を共存せしめる場合、工ＦＮ−γフ
ラグメント水溶液１ｄ当シ還元性硫黄化合物０．１４以
上、とシわけ０５〜１０ｑが好ましい。
更に他の安定化剤として、グリシン、グルタミン酸およ
びα−アヲニンのようなアミノ酸およびその生理的に許
容される塩またはその誘導体、ブドウ糖、果糖、マンノ
ースおよびガフクトースのような単糖類およびショ糖、
マルトースおよび乳糖のよりな二糖類から選ばれる１種
または２種以上の物質を加えると一層、一定性が向上す
るので、これらを適宜配合してもよい。
びα−アヲニンのようなアミノ酸およびその生理的に許
容される塩またはその誘導体、ブドウ糖、果糖、マンノ
ースおよびガフクトースのような単糖類およびショ糖、
マルトースおよび乳糖のよりな二糖類から選ばれる１種
または２種以上の物質を加えると一層、一定性が向上す
るので、これらを適宜配合してもよい。
上記安定化剤の中でも、ショ糖が好ましく、ショ糖を配
合する場合は、工ＹＮ−７フフグメント水溶液１胃ｌ当
シ１０〜５０ｑが好ましい。
合する場合は、工ＹＮ−７フフグメント水溶液１胃ｌ当
シ１０〜５０ｑが好ましい。
さらにツイーシ２′θなどの界面活性剤、緩衝剤、等張
化剤々どを含有していてもよい。
化剤々どを含有していてもよい。
本発明の凍結お工゛び凍結乾燥したとトエＦ’Ｎ−γフ
ッグメントの組成物は、たとえば以下の方法により製造
することができる。
ッグメントの組成物は、たとえば以下の方法により製造
することができる。
ヒトエＦ’Ｎ−γフラグメント１×１０２〜１×ＩＱ７
ＩＵ／ｆｆ／含有水溶液に、デキストラン丑たは（およ
び）ヒドロキシエチｌし酸扮をＩ Ｍ９ ／ ｒｓ１以
上、好ましくは３〜５０’ｌｆＪ／ｍｌｃ両者全用いる
場合は合計ｎ′として）の濃度になるように加える。さ
らに上記しだＨ８ｋやショ糖なども合せて加えることも
できる。なお上記工Ｆ’Ｎ−γフラグメント水浴液には
０．１ｍ４／ゴ以上、好ましくは０５〜１０ｑ／ｍｌの
還元性硫黄化合物や做財の界面活性剤を含有していても
よく、また上記安定化剤と同様、これらを新たに加える
こともできる。
ＩＵ／ｆｆ／含有水溶液に、デキストラン丑たは（およ
び）ヒドロキシエチｌし酸扮をＩ Ｍ９ ／ ｒｓ１以
上、好ましくは３〜５０’ｌｆＪ／ｍｌｃ両者全用いる
場合は合計ｎ′として）の濃度になるように加える。さ
らに上記しだＨ８ｋやショ糖なども合せて加えることも
できる。なお上記工Ｆ’Ｎ−γフラグメント水浴液には
０．１ｍ４／ゴ以上、好ましくは０５〜１０ｑ／ｍｌの
還元性硫黄化合物や做財の界面活性剤を含有していても
よく、また上記安定化剤と同様、これらを新たに加える
こともできる。
本発明の凍結したヒトエＦＮ−γフラグメントの組成物
は、例えば上記水溶液を通常−８０’−−３０℃で凍結
することによシ製造できる。該凍結組成物は一８０°〜
−１０′ｃで保管することが好ましい。
は、例えば上記水溶液を通常−８０’−−３０℃で凍結
することによシ製造できる。該凍結組成物は一８０°〜
−１０′ｃで保管することが好ましい。
本発明の凍結乾燥したヒトエＦＮ−γフラグメントの組
成物は、例えば上記凍結組成物を常法（例、真空度Ｑ、
ｌ ｔｏｒｒ以下で、凍結温度から徐々に温度を上昇
させ約３０して乾燥を終了する）により減圧乾燥するか
、上記水浴液または上記凍結組成物の融解によシ得られ
る水浴液を、所望によシ小分けし、上記同様凍結した後
、常法によシ減圧乾燥することによシ製造することがで
きる。
成物は、例えば上記凍結組成物を常法（例、真空度Ｑ、
ｌ ｔｏｒｒ以下で、凍結温度から徐々に温度を上昇
させ約３０して乾燥を終了する）により減圧乾燥するか
、上記水浴液または上記凍結組成物の融解によシ得られ
る水浴液を、所望によシ小分けし、上記同様凍結した後
、常法によシ減圧乾燥することによシ製造することがで
きる。
注射用製剤としての本発明の凍結乾燥したヒトエＦＭ−
γフラグメントの組成物全製造する場合は、小分けする
前に無Ｍ濾過等によｐ精製し、無菌操作によシバイアル
瓶等に分注小分けした後上記凍結乾燥処理に付すことが
好ましい。
γフラグメントの組成物全製造する場合は、小分けする
前に無Ｍ濾過等によｐ精製し、無菌操作によシバイアル
瓶等に分注小分けした後上記凍結乾燥処理に付すことが
好ましい。
本発明の凍結もしくは凍結乾燥したヒトエＦ’Ｎ−γフ
ラグメントの組成物は、その凍結操作および保存中の活
性の低下が少なく有用である。また凍結乾燥した組成物
は、安定化されたヒ）ＩＩＩＪ−γフラグメントの粉末
として得られとりわけ非経口投与製剤として有利に用い
ることができる。
ラグメントの組成物は、その凍結操作および保存中の活
性の低下が少なく有用である。また凍結乾燥した組成物
は、安定化されたヒ）ＩＩＩＪ−γフラグメントの粉末
として得られとりわけ非経口投与製剤として有利に用い
ることができる。
本発明の凍結乾燥したヒ）ＩＦ’Ｎ−ｆフラグメントの
組成物を注射用製剤として用いる場合は、通常用時、凍
結乾燥組成物をバイアル当９１〜１００訂／の注射用蒸
留水、生理食塩液またはブドウ糖注射液に溶解して使用
する。また適当な担体、賦型剤、希釈剤を用いて眼、耳
、鼻内投与用の剤形として用いることができる。
組成物を注射用製剤として用いる場合は、通常用時、凍
結乾燥組成物をバイアル当９１〜１００訂／の注射用蒸
留水、生理食塩液またはブドウ糖注射液に溶解して使用
する。また適当な担体、賦型剤、希釈剤を用いて眼、耳
、鼻内投与用の剤形として用いることができる。
本発明の凍結したもしくは凍結乾燥したヒトエＦＮ−ｆ
フラグメントの組成物は、低毒性で、公知のヒトＩＰ’
Ｎ−ｆと同様の目的に同様の用法により使用することが
できる。
フラグメントの組成物は、低毒性で、公知のヒトＩＰ’
Ｎ−ｆと同様の目的に同様の用法により使用することが
できる。
本願明細書中、工Ｆ’Ｎ−γフラグメントの活性（抗ウ
ィルス活性）は下記にょシ求めたＩＦＮ−γの国際単位
（ＩＵ）として表示した。
ィルス活性）は下記にょシ求めたＩＦＮ−γの国際単位
（ＩＵ）として表示した。
工Ｕ二単位（ユニット）の確定した国際標準工Ｆ’Ｎ−
γと目的とする資料をヒト羊膜由来Ｆ’Ｌ細胞株に対す
るシンドビス ウィルス（５ｉｎｄｂｉｓＶｉｒｕａ
）の細胞変性効果阻止試験を用いて測定し、その比率か
ら力価を算出して求めた。
γと目的とする資料をヒト羊膜由来Ｆ’Ｌ細胞株に対す
るシンドビス ウィルス（５ｉｎｄｂｉｓＶｉｒｕａ
）の細胞変性効果阻止試験を用いて測定し、その比率か
ら力価を算出して求めた。
なお溶液中の蛋白量は、Ｋ：２８０ｎｍ＝１．０を１ｑ
として計算して求めた。
として計算して求めた。
（作用および実施例）
以下に実施例により本発明を具体的に説明するが、本発
明はこれらに限定されるものではない。
明はこれらに限定されるものではない。
なお実施例で用いたヒトエＦＮ−γフラグメントは、参
考例１に記載した方法で製造したデス（Ｃｙｓ−Ｔｙｒ
−Ｃｙａ ）工Ｆ’Ｎ−７の高濃度水溶液を使用した。
考例１に記載した方法で製造したデス（Ｃｙｓ−Ｔｙｒ
−Ｃｙａ ）工Ｆ’Ｎ−７の高濃度水溶液を使用した。
実施例１
参考例１で得たデス（Ｃｙｓ−Ｔｙｒ−Ｃｙｓ ） Ｉ
Ｆ Ｎ−ｒの２．５Ｘ１０ 工Ｕ／ｓ／水溶液１１
１Ｉｌにデキストラン（平均分子量７万）３０ｑおよび
注射用蒸留水０．５ ｗｔを加え無菌沖過して得た１、
５ ｙｌをバイアル瓶中で凍結乾燥した。
Ｆ Ｎ−ｒの２．５Ｘ１０ 工Ｕ／ｓ／水溶液１１
１Ｉｌにデキストラン（平均分子量７万）３０ｑおよび
注射用蒸留水０．５ ｗｔを加え無菌沖過して得た１、
５ ｙｌをバイアル瓶中で凍結乾燥した。
凍結乾燥品を注射用蒸留水で再溶解して、ヒトＩＮ’Ｎ
−γの力価を測定した。
−γの力価を測定した。
凍結乾燥する前の水溶液の力価に対する残存率は９２％
であった。
であった。
実施例２
実施例１においてデキストランの代シにヒドロキシエチ
ル澱粉（平均分子量２ｏ万）３０９を用いた以外は実施
例１と同様に行った。
ル澱粉（平均分子量２ｏ万）３０９を用いた以外は実施
例１と同様に行った。
凍結乾燥する前の水溶液の力価に対する残存率は９５％
であった。
であった。
実施例３
実施例２において、更にグルタミン酸ナトリウム１０ｍ
ｇを加えた以外は実施例２と同様に行った。
ｇを加えた以外は実施例２と同様に行った。
凍結乾燥する前の水溶液の力価に対する残存率は１０４
％であった。 ′ 実施例４ ° 参考例１で得たデス（Ｃｙａ−Ｔｙｒ−Ｃｙｓ
） Ｉ Ｆ Ｎ−ｒの２．５ Ｘ １０ 工Ｕ／’
Ｑ水溶液１ｗｌにヒドロキシエチル澱粉（平均分子量２
０万）３０９および注射用蒸留水０．５ゴを加え無菌沖
過して得た１、５ｇｌをバイアル瓶に入れ、−３０℃に
凍結した。凍結品を融解後、ＩＦＮ−γの力価を測定し
た。凍結前の水溶液の力価に対する残存率は９８％であ
った。
％であった。 ′ 実施例４ ° 参考例１で得たデス（Ｃｙａ−Ｔｙｒ−Ｃｙｓ
） Ｉ Ｆ Ｎ−ｒの２．５ Ｘ １０ 工Ｕ／’
Ｑ水溶液１ｗｌにヒドロキシエチル澱粉（平均分子量２
０万）３０９および注射用蒸留水０．５ゴを加え無菌沖
過して得た１、５ｇｌをバイアル瓶に入れ、−３０℃に
凍結した。凍結品を融解後、ＩＦＮ−γの力価を測定し
た。凍結前の水溶液の力価に対する残存率は９８％であ
った。
参考例１ デス（Ｃｙｓ−Ｔｙｒ−Ｃｙｓ ） Ｉ Ｆ
Ｎ −１の製造 （１）形質転換体の製造 ｘｖＮ−ｒ％現プラスミドｐＲＣ２３／Ｉ Ｆ ｌ−９
００（ＥＰＣ公開第００８９６７６号公報実施例７参照
〕を制限酵素ＮｄｅＩ、ＮｃｏＩ で消化し、工ＦＮ−
γ遺伝子部分を含むＮｄｅＩ−Ｎｃｏエフ１０ｂｐ
ＤＮＡ断片（Ａ）を分取した。一方、プラスミドｐＲＣ
２３を＃Ａ＠酵素ＢｇｌＩ［、ＥｃｏＲＩで消化し、λ
ＰＬプロモーターを含む２６５ ｂｐのＤＮＡ断片（Ｂ
）を分取した。（Ａ） 、 （Ｂ）と化学合成して得た
蛋白合成開始コドンを含むオリゴヌクレオチドアダプタ
ー ＡＡＴＴＣＡＴＧＣＡＧＧＡＴＣＣＡ ＧＴＡＣＧＴＣＣＴＡＧＧＴＡＴ ′ｆｔ’ｌ’４ＤＮＡリガーゼを用いてＮｄｅＩとＥｃ
ｏＲＩののりしろ部分に結合させた。得られたＤＮＡ断
片をＮｃｏＩとＢｇｌｌＩで処理して得たプラスミドｐ
Ｒ０２３／ＩＰＩ−９００に結合させ、Ｃｙａ−２３゛ Ｔｙｒ−Ｃｙａ 欠落工Ｆ’Ｎ−γのポリペプチドをコ
ードする発現プラスミドｐＬＣ２を構築した。（第２図
）このプラスミドｐＬＣ２を用いてＣｏｈｅｎらの方法
〔プロシージンゲス オブ ナショナルアカデミ−オプ
サイエンス、６９．２１１０（１９７２））に従って
大腸菌ＲＲＩ （ｐＲＫ２４８Ｃ工ｔｓ）を形質転換し
、形質転換体エシェリヒア コリ（Ｅｓｃｈｅｒｉｃｈ
ｉａ ｃｏｌｉ ｗ Ｅ、 ｃｏｌｉ ） ＲＲ工（ｐ
ＬＣ２，ｐＲＫ２４８ ｏＩｔａ ）ｉ得た。
Ｎ −１の製造 （１）形質転換体の製造 ｘｖＮ−ｒ％現プラスミドｐＲＣ２３／Ｉ Ｆ ｌ−９
００（ＥＰＣ公開第００８９６７６号公報実施例７参照
〕を制限酵素ＮｄｅＩ、ＮｃｏＩ で消化し、工ＦＮ−
γ遺伝子部分を含むＮｄｅＩ−Ｎｃｏエフ１０ｂｐ
ＤＮＡ断片（Ａ）を分取した。一方、プラスミドｐＲＣ
２３を＃Ａ＠酵素ＢｇｌＩ［、ＥｃｏＲＩで消化し、λ
ＰＬプロモーターを含む２６５ ｂｐのＤＮＡ断片（Ｂ
）を分取した。（Ａ） 、 （Ｂ）と化学合成して得た
蛋白合成開始コドンを含むオリゴヌクレオチドアダプタ
ー ＡＡＴＴＣＡＴＧＣＡＧＧＡＴＣＣＡ ＧＴＡＣＧＴＣＣＴＡＧＧＴＡＴ ′ｆｔ’ｌ’４ＤＮＡリガーゼを用いてＮｄｅＩとＥｃ
ｏＲＩののりしろ部分に結合させた。得られたＤＮＡ断
片をＮｃｏＩとＢｇｌｌＩで処理して得たプラスミドｐ
Ｒ０２３／ＩＰＩ−９００に結合させ、Ｃｙａ−２３゛ Ｔｙｒ−Ｃｙａ 欠落工Ｆ’Ｎ−γのポリペプチドをコ
ードする発現プラスミドｐＬＣ２を構築した。（第２図
）このプラスミドｐＬＣ２を用いてＣｏｈｅｎらの方法
〔プロシージンゲス オブ ナショナルアカデミ−オプ
サイエンス、６９．２１１０（１９７２））に従って
大腸菌ＲＲＩ （ｐＲＫ２４８Ｃ工ｔｓ）を形質転換し
、形質転換体エシェリヒア コリ（Ｅｓｃｈｅｒｉｃｈ
ｉａ ｃｏｌｉ ｗ Ｅ、 ｃｏｌｉ ） ＲＲ工（ｐ
ＬＣ２，ｐＲＫ２４８ ｏＩｔａ ）ｉ得た。
（１１）形質転換体の培養
上記（１）で構築したプラスミドを含む菌株Ｅ。
ｃｏｌｉ ＲＲＩ （ｐＬＣ２，ｐＲＫ２４８ ｃＩｔ
ａ’）を１％バクトドリプトン、０．５％酵母エキス、
０．５％食塩、７μｇ ／ｗｌテトフサイクリンを含む
液体培地５０ｍｔ中で、３５℃、１２時間振とり培ｇｌ
を行った。培養液を０．５％カザミノ酸、０．５％グル
コース、７μ９／ｒｓｌのテトラサイクリンを含むＭ９
培地２．５１に移し、３５℃で４時間、ついで４２℃で
３時間培養した。遠心分離して菌体を集め、−８０℃で
保存した。
ａ’）を１％バクトドリプトン、０．５％酵母エキス、
０．５％食塩、７μｇ ／ｗｌテトフサイクリンを含む
液体培地５０ｍｔ中で、３５℃、１２時間振とり培ｇｌ
を行った。培養液を０．５％カザミノ酸、０．５％グル
コース、７μ９／ｒｓｌのテトラサイクリンを含むＭ９
培地２．５１に移し、３５℃で４時間、ついで４２℃で
３時間培養した。遠心分離して菌体を集め、−８０℃で
保存した。
（１）精製
上記（龍）と同様の方法で得た凍結菌体７．１′ｇを７
Ｍ塩酸グアニジンおよび２ｍＭフェニルメチルスルフオ
ニ〃フルオライドを含む０．１Ｍ）リス塩酸緩衝液Ｃｐ
Ｈ７，０） ２２ｗｌに懸濁し、４℃で１時間撹拌した
のち１０，０ＯＯＸＩＦで３０分間遠心分離にかけて上
清２４ｍ１を得た。この上清に１３７ ｍＭ塩化ナトリ
ウム、 ２．７ ｍＭ塩化カリウム、８．１ｍＭリン酸
二ナトリウムおよび１．５ ｍＭリン酸−カリウムから
成る緩衝液（ｐＨ７，４）３００ｍｌを加えて希釈し、
抗体カラム（Ｍｏγ２−１１．１．カラム容量１５−）
に流速１解ｊ／分でかけた。そののち、０．５Ｍ塩酸グ
アニジンを含む２９ｍＭリン酸ナトリウム緩衝液（ｐＨ
７，０）６０ｇ／でカラムを洗浄し、ついで、２Ｍ塩酸
グアニシンを含む２９ｍＭリン酸ナトリウふ緩衝液（ｐ
Ｈ７，０） ４５−で溶出し、抗ウィルス活性を有する
画分２５ｇ／を得た。この両分２５ｍ１をあらカシメＩ
ＮＩＩＭエチレンジアミン四酢酸、 ０．１５ Ｍ塩化
す千すウム、ｌＱｍＭシスティンおよび２Ｍ塩酸グアニ
ジンを含む２５ｍＭ酢酸アンモニウム緩衝液（ｐＨ６，
０）で平衡化したセファクリＩＬ／Ｓ−２００（ファル
マシア社製）のカラム（２，６Ｘ９４ｃｍ＋）、カラム
容量５００胃ｊにかけ、同一緩衝液で溶出して抗ウィル
ス活性を有する画分４０ｄを得た。
Ｍ塩酸グアニジンおよび２ｍＭフェニルメチルスルフオ
ニ〃フルオライドを含む０．１Ｍ）リス塩酸緩衝液Ｃｐ
Ｈ７，０） ２２ｗｌに懸濁し、４℃で１時間撹拌した
のち１０，０ＯＯＸＩＦで３０分間遠心分離にかけて上
清２４ｍ１を得た。この上清に１３７ ｍＭ塩化ナトリ
ウム、 ２．７ ｍＭ塩化カリウム、８．１ｍＭリン酸
二ナトリウムおよび１．５ ｍＭリン酸−カリウムから
成る緩衝液（ｐＨ７，４）３００ｍｌを加えて希釈し、
抗体カラム（Ｍｏγ２−１１．１．カラム容量１５−）
に流速１解ｊ／分でかけた。そののち、０．５Ｍ塩酸グ
アニジンを含む２９ｍＭリン酸ナトリウム緩衝液（ｐＨ
７，０）６０ｇ／でカラムを洗浄し、ついで、２Ｍ塩酸
グアニシンを含む２９ｍＭリン酸ナトリウふ緩衝液（ｐ
Ｈ７，０） ４５−で溶出し、抗ウィルス活性を有する
画分２５ｇ／を得た。この両分２５ｍ１をあらカシメＩ
ＮＩＩＭエチレンジアミン四酢酸、 ０．１５ Ｍ塩化
す千すウム、ｌＱｍＭシスティンおよび２Ｍ塩酸グアニ
ジンを含む２５ｍＭ酢酸アンモニウム緩衝液（ｐＨ６，
０）で平衡化したセファクリＩＬ／Ｓ−２００（ファル
マシア社製）のカラム（２，６Ｘ９４ｃｍ＋）、カラム
容量５００胃ｊにかけ、同一緩衝液で溶出して抗ウィル
ス活性を有する画分４０ｄを得た。
ここで得られたＣｙａ−Ｔｙｒ−Ｃｙａ欠落ＩＦＷ−ｙ
のポリペプチド〔デス（Ｃｙａ−Ｔｙｒ−Ｃｙａ ）
ｒ ）’ １ｌｒ−ｒ）は、７．０ＪｌｌＦであ多胞活
性は２．７Ｘ１０ＩＵ／ｑであった。
のポリペプチド〔デス（Ｃｙａ−Ｔｙｒ−Ｃｙａ ）
ｒ ）’ １ｌｒ−ｒ）は、７．０ＪｌｌＦであ多胞活
性は２．７Ｘ１０ＩＵ／ｑであった。
（＠明の効果）
本発明のデキストランまたは（および）ヒドロキシエチ
／Ｌ’ｆｆｌ’Ｊ粉の共存下に凍結もしくは凍結乾燥し
たヒトエＦＮ−γフラグメントの組成物は、その凍結操
作および保存中の活性の低下が少なく、医薬品等として
有利に用いることができる。
／Ｌ’ｆｆｌ’Ｊ粉の共存下に凍結もしくは凍結乾燥し
たヒトエＦＮ−γフラグメントの組成物は、その凍結操
作および保存中の活性の低下が少なく、医薬品等として
有利に用いることができる。
第１図は１４６個のアミノ酸からなるヒトＩＦ’Ｎ−γ
のアミノ酸配列を示す。 第２図は参考例１（Ｉ）に開示する発現用プラヌミドｐ
ＬＣ２の構築図を示す。
のアミノ酸配列を示す。 第２図は参考例１（Ｉ）に開示する発現用プラヌミドｐ
ＬＣ２の構築図を示す。
Claims (2)
- （１）デキストランまたは（および）ヒドロキシエチル
澱粉の共存下に凍結もしくは凍結乾燥したヒトγ型イン
ターフェロンフラグメントの組成物。 - （２）ショ糖の共存下に凍結もしくは凍結乾燥した特許
請求の範囲第１項記載の組成物。
Priority Applications (11)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP60002585A JPS61161222A (ja) | 1985-01-09 | 1985-01-09 | γ型インタ−フエロンフラグメントの組成物 |
| EP85100550A EP0150067A3 (en) | 1984-01-23 | 1985-01-19 | Stable composition of gamma-interferon |
| GR850158A GR850158B (ja) | 1984-01-23 | 1985-01-21 | |
| US06/693,669 US4714611A (en) | 1984-01-23 | 1985-01-22 | Stable composition of gamma-interferon |
| NZ210897A NZ210897A (en) | 1984-01-23 | 1985-01-22 | Stable human gamma-interferon compositions |
| PT79854A PT79854B (en) | 1984-01-23 | 1985-01-22 | Process for the preparation of a gamma interferon composition and stabilization thereof |
| KR1019850000356A KR850005455A (ko) | 1984-01-23 | 1985-01-22 | r-인터페론 안정화 조성물의 제조방법 |
| DK28985A DK28985A (da) | 1984-01-23 | 1985-01-22 | Stabilt humant gamma-interferonpraeparat samt fremgangsmaade til fremstilling deraf |
| PH31752A PH22531A (en) | 1984-01-23 | 1985-01-22 | Stable composition of interferon |
| AU38016/85A AU569365B2 (en) | 1984-01-23 | 1985-01-23 | Stabilization of human gamma interferon |
| CN 85101930 CN85101930A (zh) | 1985-01-09 | 1985-04-01 | 稳定型γ-干扰素制剂的制备方法 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP60002585A JPS61161222A (ja) | 1985-01-09 | 1985-01-09 | γ型インタ−フエロンフラグメントの組成物 |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPS61161222A true JPS61161222A (ja) | 1986-07-21 |
Family
ID=11533447
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP60002585A Pending JPS61161222A (ja) | 1984-01-23 | 1985-01-09 | γ型インタ−フエロンフラグメントの組成物 |
Country Status (2)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JPS61161222A (ja) |
| CN (1) | CN85101930A (ja) |
Families Citing this family (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| EP1253932B1 (en) * | 2000-02-08 | 2005-04-27 | Allergan, Inc. | Botulinum toxin pharmaceutical compositions |
-
1985
- 1985-01-09 JP JP60002585A patent/JPS61161222A/ja active Pending
- 1985-04-01 CN CN 85101930 patent/CN85101930A/zh active Pending
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| CN85101930A (zh) | 1986-07-09 |
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