JPS60155136A - γ型インタ−フエロン組成物 - Google Patents
γ型インタ−フエロン組成物Info
- Publication number
- JPS60155136A JPS60155136A JP59010857A JP1085784A JPS60155136A JP S60155136 A JPS60155136 A JP S60155136A JP 59010857 A JP59010857 A JP 59010857A JP 1085784 A JP1085784 A JP 1085784A JP S60155136 A JPS60155136 A JP S60155136A
- Authority
- JP
- Japan
- Prior art keywords
- human
- aqueous solution
- ifn
- gamma
- frozen
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Pending
Links
Landscapes
- Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
- Peptides Or Proteins (AREA)
Abstract
(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。
め要約のデータは記録されません。
Description
【発明の詳細な説明】
本発明はｒ型インターフェロン組成物に関する。
ヒトインターフェロンは現在、α型、β型およびγ型の
８種類に分類されている。α型およびβ型インター７二
ロンは比較的安定で、主として非経口投与剤の形態で臨
床に供せられ、組織的臨床研究も進んでいる。一方、γ
型インターフェロン（ＩＦＮ−γと略称することがある
）は極めて不安定で、水溶液の保存、凍結あるいは凍結
乾燥の操！ 作中において、容易にその活性を減じ、臨床上使用する
に値する安定な組成物を得ることを、極めて困難にして
いる。その為、インターフェロンの中でも著しく強い抗
腫瘍作用を有し、医薬として最も期待の大きい工ＦＮ−
１の臨床応用への大きな妨げとなっている。
８種類に分類されている。α型およびβ型インター７二
ロンは比較的安定で、主として非経口投与剤の形態で臨
床に供せられ、組織的臨床研究も進んでいる。一方、γ
型インターフェロン（ＩＦＮ−γと略称することがある
）は極めて不安定で、水溶液の保存、凍結あるいは凍結
乾燥の操！ 作中において、容易にその活性を減じ、臨床上使用する
に値する安定な組成物を得ることを、極めて困難にして
いる。その為、インターフェロンの中でも著しく強い抗
腫瘍作用を有し、医薬として最も期待の大きい工ＦＮ−
１の臨床応用への大きな妨げとなっている。
本発明者らは、ヒトエＦＮ−γの安定化およびとトエＦ
Ｎ−γの安定な組成物の製造につき鋭意υＦ究を行い、
凍結および凍結乾燥の操作においても工ＦＮ−γの活性
の低下を来たすことのない安定なＩＦＮ−γ組成物の製
造法を確立し、本発明を完成した。
Ｎ−γの安定な組成物の製造につき鋭意υＦ究を行い、
凍結および凍結乾燥の操作においても工ＦＮ−γの活性
の低下を来たすことのない安定なＩＦＮ−γ組成物の製
造法を確立し、本発明を完成した。
すなわち本発明は、デキストランまたは（および）ヒド
ロキシエチル澱粉の共存下に凍結もしくは凍結乾燥した
ヒトｒ型インターフェロン組成物を提供するものである
。
ロキシエチル澱粉の共存下に凍結もしくは凍結乾燥した
ヒトｒ型インターフェロン組成物を提供するものである
。
本発明に用いられる工ＦＮ−ｆはヒト由来のものであれ
ば、天然のあるいは遺伝子組み換え技術で得られるいず
れの１ＦＮ−γでもよい。とシわけ遺伝子組み換え技術
で得られるヒトエｒｆｆｉｉ−１を高濃度に含有する水
溶液が有利に使用される。
ば、天然のあるいは遺伝子組み換え技術で得られるいず
れの１ＦＮ−γでもよい。とシわけ遺伝子組み換え技術
で得られるヒトエｒｆｆｉｉ−１を高濃度に含有する水
溶液が有利に使用される。
ヒトエＦＮ−γの比活性は、Ｉ Ｘ １０５ 〜ｌ×１
０７国際単位／ＩＩＩ （工Ｕ／Ｉｌｌ ）であること
が好ましく、工ＦＮ−γ水溶液としてＩ Ｘ １０２
〜１×１０ ＩＵ／ＩＩ１．！： ｐわけｌＸｌ０’
〜ｌＸ１０’ＩＵ／ ｗｌの活性を有するものが好まし
い。
０７国際単位／ＩＩＩ （工Ｕ／Ｉｌｌ ）であること
が好ましく、工ＦＮ−γ水溶液としてＩ Ｘ １０２
〜１×１０ ＩＵ／ＩＩ１．！： ｐわけｌＸｌ０’
〜ｌＸ１０’ＩＵ／ ｗｌの活性を有するものが好まし
い。
デキストランおよびヒドロキシエチル澱粉澱粉は、市販
のものを使用できるが、本組成物を臨床応用するだめに
は、代用血漿として非経口投与に用いられる程度の品質
のものが好ましい。デキストフンは、平均分子ｍ１万〜
１０刀、と９わけ４万〜７万のものが、ヒドロキシエチ
ル澱粉は、平均分子量１カ〜２０刀、とシわけ２万〜６
Ｊ静ｆ宮が有利に使用される。
のものを使用できるが、本組成物を臨床応用するだめに
は、代用血漿として非経口投与に用いられる程度の品質
のものが好ましい。デキストフンは、平均分子ｍ１万〜
１０刀、と９わけ４万〜７万のものが、ヒドロキシエチ
ル澱粉は、平均分子量１カ〜２０刀、とシわけ２万〜６
Ｊ静ｆ宮が有利に使用される。
デキストフンおよびヒドロキシエチル澱粉は、工ＦＮ−
１水溶液１震ｌ当シＩＭｙ以上、好ましくは３Ｍｇ〜５
０ｍｇ含有させることが好ましい。
１水溶液１震ｌ当シＩＭｙ以上、好ましくは３Ｍｇ〜５
０ｍｇ含有させることが好ましい。
本発明の組成物には、上記テ°キストランまたは（およ
び）ヒドロキシエチル澱粉に加え、ヒト血清ア〜プミン
（Ｈ８Ａ）を配合することができる。
び）ヒドロキシエチル澱粉に加え、ヒト血清ア〜プミン
（Ｈ８Ａ）を配合することができる。
Ｈ８Ａを配合する場合、ＩＦＮ−１水溶液１ ｍｌ当９
２〜２０１％’加えることが好ましい。
２〜２０１％’加えることが好ましい。
また本発明の組成物は、還元性硫黄化合物を共存せしめ
てもよい。該還元性硫黄化合物として、グルタチオン（
還元型）、チオクト酸、システィン、Ｎ−アセチルシス
ティン、Ｎ−アセチルホモシスティン、チオジグリコー
ル、チオエタノールアミン、モノチオグリセロール、ジ
チオスレイトールおよび炭素数１〜７のチオアルカン酸
が挙げられるがとりわけ、グルタチオン（還元型）が好
ましい。還元性硫黄化合物を共存せしめる場合、工ＦＮ
−γ水溶液１ｍ？当り還元性硫黄化合物０．１ｑ以上、
とシわけ０．５〜１０〜が好ましい。
てもよい。該還元性硫黄化合物として、グルタチオン（
還元型）、チオクト酸、システィン、Ｎ−アセチルシス
ティン、Ｎ−アセチルホモシスティン、チオジグリコー
ル、チオエタノールアミン、モノチオグリセロール、ジ
チオスレイトールおよび炭素数１〜７のチオアルカン酸
が挙げられるがとりわけ、グルタチオン（還元型）が好
ましい。還元性硫黄化合物を共存せしめる場合、工ＦＮ
−γ水溶液１ｍ？当り還元性硫黄化合物０．１ｑ以上、
とシわけ０．５〜１０〜が好ましい。
更に他の安定化剤として、グリシン、グルタミン酸およ
びα−アラニンのようなアミノ酸およびその生理的に許
容される塩またはその誘導体、ブドウ糖、果糖、マンノ
ースおよびガラクトースのような単糖類およびショ糖、
マρドースおよび乳糖のような三糖類から迩ばれる１極
または２種以上の物質を加えると一層、安定性が向上す
るので、これらを適宜配合してもよい。
びα−アラニンのようなアミノ酸およびその生理的に許
容される塩またはその誘導体、ブドウ糖、果糖、マンノ
ースおよびガラクトースのような単糖類およびショ糖、
マρドースおよび乳糖のような三糖類から迩ばれる１極
または２種以上の物質を加えると一層、安定性が向上す
るので、これらを適宜配合してもよい。
上記安定化剤の中でも、ショ糖が好ましく、ショ糖を配
合する場合は、工ＦＮ−ｒ水溶液１ｓｔ当）１０〜５０
ｇ１１／が好ましい。
合する場合は、工ＦＮ−ｒ水溶液１ｓｔ当）１０〜５０
ｇ１１／が好ましい。
さらにツイーン２０などの界面活性剤、緩衝剤。
等張化剤などを含有していてもよい。
本発明の凍結および凍結乾燥したヒト１ＦＨ−ｒ組成物
は、たとえば以下の方法によシ製造することができる。
は、たとえば以下の方法によシ製造することができる。
ヒト１ＦＨ−ｆＩＸ１０ −ＩＸＩＯ工Ｕ ／ ｘｔ含
有水溶液に、デキストランまたは（および）ヒドロキシ
エチル澱粉をＩＩＩＰ／ｇ／以上、−好ましくは８〜５
０１Ｗ／１ｔｔｔ （両者を用いる場合は合計量として
）の濃度になるように加える。さらに上記したＨ８ｋや
ショ糖なども合せて加えることもできる。
有水溶液に、デキストランまたは（および）ヒドロキシ
エチル澱粉をＩＩＩＰ／ｇ／以上、−好ましくは８〜５
０１Ｗ／１ｔｔｔ （両者を用いる場合は合計量として
）の濃度になるように加える。さらに上記したＨ８ｋや
ショ糖なども合せて加えることもできる。
なお上記工ＦＮ−１水溶液には０−１１１ｖ／ｍ１以上
、好ましくは０．５〜１１０１１Ｉ／Ｍｌの還元性硫黄
化合物や微量の界面活性剤を含有していてもよく、また
上記安定化剤と同様、これらを新たに加えることもでき
る。
、好ましくは０．５〜１１０１１Ｉ／Ｍｌの還元性硫黄
化合物や微量の界面活性剤を含有していてもよく、また
上記安定化剤と同様、これらを新たに加えることもでき
る。
本発明の凍結したヒ）ＩＰ’Ｎ−γ組成物は、例えは上
記水溶液を通Ｎ −８０’〜−８０℃で凍結することに
よシ製造できる。該凍結組成物は−８０゜〜−１θ℃で
保管することが好ましい。
記水溶液を通Ｎ −８０’〜−８０℃で凍結することに
よシ製造できる。該凍結組成物は−８０゜〜−１θ℃で
保管することが好ましい。
本発明の凍結乾燥したヒ）ＩＦＩＪ−１組成物は、例え
ば上記凍結組成物を常法によシ減圧乾燥するか上記水溶
液または上記凍結組成物の融解によシ得られる水溶液を
、所望によシ小分けし、上記同様凍結した後、常法によ
シ減圧乾燥することによシ製造することができる。
ば上記凍結組成物を常法によシ減圧乾燥するか上記水溶
液または上記凍結組成物の融解によシ得られる水溶液を
、所望によシ小分けし、上記同様凍結した後、常法によ
シ減圧乾燥することによシ製造することができる。
注射用製剤としての本発明の凍結乾燥したヒトエＦＥ−
γ組成物を製造する場合は、小分けする前に無菌濾過等
によシ精製し、無菌操作によりバイプル瓶等に分注小分
けした後上記凍結乾燥処理に付すことが好ましい。
γ組成物を製造する場合は、小分けする前に無菌濾過等
によシ精製し、無菌操作によりバイプル瓶等に分注小分
けした後上記凍結乾燥処理に付すことが好ましい。
本発明の凍結もしくは凍結乾燥したヒ）ＩＦＮ−ｒｉｍ
成物は、その凍結操作および保存中の活性の低下が少な
く有用である。また凍結乾燥した組成物は、安定化され
たヒト１ＦＮ−γの粉末として得られとシわけ非経口投
与製剤として有利に用いることができる。
成物は、その凍結操作および保存中の活性の低下が少な
く有用である。また凍結乾燥した組成物は、安定化され
たヒト１ＦＮ−γの粉末として得られとシわけ非経口投
与製剤として有利に用いることができる。
本発明の凍結乾燥したヒ）ＩＦＮ−γ組成物を注射用製
剤として用いる場合は、通常旧時、凍結乾燥組成物をバ
イアル当シ１〜１００ｇｊ？の注射用蒸留も生理食塩液
またはブドウ糖注射液に溶解して使用する。また適当な
担体、賦型剤、希釈剤を用いて眼、耳、＃！内投与用の
剤形として用いることができる。
剤として用いる場合は、通常旧時、凍結乾燥組成物をバ
イアル当シ１〜１００ｇｊ？の注射用蒸留も生理食塩液
またはブドウ糖注射液に溶解して使用する。また適当な
担体、賦型剤、希釈剤を用いて眼、耳、＃！内投与用の
剤形として用いることができる。
本発明の凍結したもしくは凍結乾燥したヒトエ１？Ｈ−
１組成物は、低連性で、公知のとトエＦＮ−ｒと同様の
目的に同様の用法によシ使用することができる。
１組成物は、低連性で、公知のとトエＦＮ−ｒと同様の
目的に同様の用法によシ使用することができる。
本願明細書中、工ＦＮ−１の活性（抗ウィルス活性）と
して国際単位（ＩＵ）および単位（Ｕ）は以下によりめ
た。
して国際単位（ＩＵ）および単位（Ｕ）は以下によりめ
た。
■Ｕ：単位（ユニット）の確定した国除標準工ＦＮ−７
と目的とする資料をヒト羊膜由来ＦＬ細胞株に対するシ
ンドビス ウィルス（８１ｎｄｂｉｓＶｉｒｕｓ ）の
細胞変性効果阻止試験を用いて測定し。
と目的とする資料をヒト羊膜由来ＦＬ細胞株に対するシ
ンドビス ウィルス（８１ｎｄｂｉｓＶｉｒｕｓ ）の
細胞変性効果阻止試験を用いて測定し。
その比率から力価を算出してめた。
Ｕ二単位（ユニット）の確定した国際標準１ＦＮ−αと
白血球由来の粗工ＦＮ−γをヒト羊膜由来ＦＬ細胞株に
対する水泡性口内炎ウィルス（ＶＳＶ）の細胞変性効果
阻止試験を用いて測定し、その力価の比較から白血球由
来粗工ＦＮ−１の力価を決定し工ＦＮ−γの標準品とし
た。目的とする資料中のＩＦＮ−１の力価算定のために
は、常にこの標準ＩＦＮ−γを並べてヒト羊膜由来ＷＩ
ＳＨ細胞株に対するＶＳＶの細胞変性効果阻止試験によ
るウィルス活性測定を行い、その比率から力価を算出し
た。
白血球由来の粗工ＦＮ−γをヒト羊膜由来ＦＬ細胞株に
対する水泡性口内炎ウィルス（ＶＳＶ）の細胞変性効果
阻止試験を用いて測定し、その力価の比較から白血球由
来粗工ＦＮ−１の力価を決定し工ＦＮ−γの標準品とし
た。目的とする資料中のＩＦＮ−１の力価算定のために
は、常にこの標準ＩＦＮ−γを並べてヒト羊膜由来ＷＩ
ＳＨ細胞株に対するＶＳＶの細胞変性効果阻止試験によ
るウィルス活性測定を行い、その比率から力価を算出し
た。
なお溶液中の蛋白量は、Ｅ： ２８０ ｎｍ ＝１．０
を１岬として計算してめた。
を１岬として計算してめた。
かくして得られた国際単位（ＩＵ）の数値と単位（Ｕ）
の数値は、おおむね下式の関係にあった。
の数値は、おおむね下式の関係にあった。
工Ｕキ１／４Ｕ
以下に実施例によシ本発明を具体的に説明するが、本発
明はこれらに限定されるものではない。
明はこれらに限定されるものではない。
なお実施例で用いたと）Ｉｌ’Ｎ−γは、特に注記しな
い場合は、特願昭５８−１８６８８ａ（昭和５８年１０
月２４日出願）明細書記載の方法で製造したものでＴｏ
Ｊ）、実施例６においては参考例１〜８に記載した方法
で調製したとトエＦＮ−ｒを使用した。
い場合は、特願昭５８−１８６８８ａ（昭和５８年１０
月２４日出願）明細書記載の方法で製造したものでＴｏ
Ｊ）、実施例６においては参考例１〜８に記載した方法
で調製したとトエＦＮ−ｒを使用した。
実施例１
グルタチオンａｗｇを含む２Ｘ１０ Ｕ／ｇ／のヒトエ
ＦＮ−γ水溶液１ ｄにデキストラン（平均分子量７万
）６０ＩＩ１１および注射用蒸留水０−５ｘｔを加え無
菌濾過して得た水溶液ｌ・６ｗｔをバイアル瓶中で一８
０℃で凍結し、凍結乾燥した。凍結乾燥品は注射用蒸留
水で再溶解して工ＦＮ−１の力価を測定した。
ＦＮ−γ水溶液１ ｄにデキストラン（平均分子量７万
）６０ＩＩ１１および注射用蒸留水０−５ｘｔを加え無
菌濾過して得た水溶液ｌ・６ｗｔをバイアル瓶中で一８
０℃で凍結し、凍結乾燥した。凍結乾燥品は注射用蒸留
水で再溶解して工ＦＮ−１の力価を測定した。
対照としてデキストランの代シに、通常凍結乾燥によく
用いられるＤ−マンニトールを５０１１１Ｉｇ配合した
水溶液を、同様に凍結乾燥した。
用いられるＤ−マンニトールを５０１１１Ｉｇ配合した
水溶液を、同様に凍結乾燥した。
その結果、凍結乾燥前のヒトエＦ’Ｎ−ｙ溶液の力価に
対して計算された力価残存率は、対照が６１％、本発明
による凍結乾燥品９４％であった。
対して計算された力価残存率は、対照が６１％、本発明
による凍結乾燥品９４％であった。
実施例２
グルタチオンａＩＩｖを含む７Ｘ１０５Ｕ／ｇ／のヒト
エＦＮ−１水溶液１ｇ／にヒドロキシエチル澱粉（平均
分子ｆｉ２０万）８０〜および注射用蒸留水０．５４を
加え無菌濾過して得た水溶液１．５ｇ＋／をバイアル瓶
中で凍結（−ａＯ’ｌｃ）あるいは凍結乾燥を行った。
エＦＮ−１水溶液１ｇ／にヒドロキシエチル澱粉（平均
分子ｆｉ２０万）８０〜および注射用蒸留水０．５４を
加え無菌濾過して得た水溶液１．５ｇ＋／をバイアル瓶
中で凍結（−ａＯ’ｌｃ）あるいは凍結乾燥を行った。
凍結晶は融解し、凍結乾燥品は注射用蒸留水で再溶解し
てＩＦＮ−１の力価を測定し丸。
てＩＦＮ−１の力価を測定し丸。
その結果、凍結あるいは凍結乾燥前のヒトＩＦＮ−１溶
液の力価に対する力価残存率は凍結晶（−８０℃）１１
１％、凍結乾燥品１１７％と安定であった。また凍結晶
（−ａＯ’ｃ保存）および凍結乾燥品（４０℃保存）の
２週間後の保存開始時に対する残存率は、それぞれ１２
１％、１０７％であった。
液の力価に対する力価残存率は凍結晶（−８０℃）１１
１％、凍結乾燥品１１７％と安定であった。また凍結晶
（−ａＯ’ｃ保存）および凍結乾燥品（４０℃保存）の
２週間後の保存開始時に対する残存率は、それぞれ１２
１％、１０７％であった。
実施例８
実施例２において、更にグルタミン酸ナトリウム１ｏｓ
ｙを加えた以外は実施例２と同様に行った。
ｙを加えた以外は実施例２と同様に行った。
その結果は、凍結乾燥品か力価残存率８３％、−８０℃
凍結２週問品が１０５％であった。凍結乾燥品の４０℃
、２週間保存後の保存開始時に対する残存率は１０５％
といずれも安定性でめった。
凍結２週問品が１０５％であった。凍結乾燥品の４０℃
、２週間保存後の保存開始時に対する残存率は１０５％
といずれも安定性でめった。
実施例４
実施例１において、デキストラン（平均分子量７万）を
ａｏｓｙとしてヒト血猾アルブミン’ｒ ５ ＩＩＩを
更に加えた以外は同様に行った。
ａｏｓｙとしてヒト血猾アルブミン’ｒ ５ ＩＩＩを
更に加えた以外は同様に行った。
その結果は、凍結乾燥品が力価残存率７８％、−８０℃
凍結２週闇品が９０％であった。凍結乾燥品の４０℃、
２週間保存後の保存開始時に対する残存率は１１２％と
いずれも対冊曾音＋安定であった。
凍結２週闇品が９０％であった。凍結乾燥品の４０℃、
２週間保存後の保存開始時に対する残存率は１１２％と
いずれも対冊曾音＋安定であった。
実施例５
実施例２の処方に、更にショ糖５１〜を添加した水溶液
を凍結乾燥した。凍結乾燥品は注射用蒸留水で再溶解し
て、と）ＩＦＮ−γの力価を測定した。
を凍結乾燥した。凍結乾燥品は注射用蒸留水で再溶解し
て、と）ＩＦＮ−γの力価を測定した。
その結果、凍結乾燥前のヒトエＦＮ−１溶液の力価に対
する残存率は９９％であフた。
する残存率は９９％であフた。
実施例６
参考例８の方法で得たグルタチオンａ＊を含む１ 、６
Ｘ １ ｏ’ ｒｕ／ｇ／のヒトＩＦＮ−γ水溶液１
ｗｅにヒドロキシエチ／Ｉ／＃粉（平均分子ｊｉｉ２０
万）８０岬および注射用蒸留水０・５ｍｌを加え無［濾
過して得た水溶液１−５ｇｔを、バイアル瓶中で凍結乾
燥した。
Ｘ １ ｏ’ ｒｕ／ｇ／のヒトＩＦＮ−γ水溶液１
ｗｅにヒドロキシエチ／Ｉ／＃粉（平均分子ｊｉｉ２０
万）８０岬および注射用蒸留水０・５ｍｌを加え無［濾
過して得た水溶液１−５ｇｔを、バイアル瓶中で凍結乾
燥した。
凍結乾燥品を注射用蒸留水で再溶解して、とトエＦＮ−
ｒの力価を測定した。
ｒの力価を測定した。
凍結乾燥する前の水溶液の力価に対する残存率は８８％
であった。
であった。
実施例７
予め窒素ガス置換された注射用蒸留水で調製した、ａ、
０Ｘ１０ 工Ｕ／耐のとトエＦＮ−γ水溶液１ ｗｔ
およびヒドロキシエチ／ｌ／澱粉８０ダを含む水溶液１
．５ｍ？を、バイアル瓶中で凍結乾燥した。
０Ｘ１０ 工Ｕ／耐のとトエＦＮ−γ水溶液１ ｗｔ
およびヒドロキシエチ／ｌ／澱粉８０ダを含む水溶液１
．５ｍ？を、バイアル瓶中で凍結乾燥した。
凍結乾燥品を注射用蒸留水で再溶解して、ＩＦＮ−ｒの
力価を測定した。
力価を測定した。
凍結乾燥する前の水溶液の力価に対する残存率は７４％
であった。
であった。
参考例１
特開昭５８−１８９１９７号公報実施例８記載の発現用
ヒトエＦＮ−γ遺伝子を有する菌株ＲＲ工（ｐＲＫ２４
８ ｃＩｔｓ、ｐＲＣ２ａ １ ／ ＩＮ’ニー９００
）をＭｏ−グルコース培地で３０℃で菌体濃度が３−４
Ｘ１０８ 細胞／ゴになるまで培養した後、グルコース
、カザミノ酸を濃度がそれぞれ１．０％。
ヒトエＦＮ−γ遺伝子を有する菌株ＲＲ工（ｐＲＫ２４
８ ｃＩｔｓ、ｐＲＣ２ａ １ ／ ＩＮ’ニー９００
）をＭｏ−グルコース培地で３０℃で菌体濃度が３−４
Ｘ１０８ 細胞／ゴになるまで培養した後、グルコース
、カザミノ酸を濃度がそれぞれ１．０％。
０・５％になるように加えて４２℃で１時間誘発させた
。得られた培養液を遠心分離にかけて菌体を集め、凍結
して保存した。
。得られた培養液を遠心分離にかけて菌体を集め、凍結
して保存した。
参考例２
（Ｉｌ 参考例１でえた凍結菌体１０００Ｆに７Ｍ塩酸
グアニジンおよび２ｍＭ フェニ〜メチルスルホニ／Ｉ
／７／Ｉ／オライドを含む１００ｍＭ）リス塩酸緩衝液
（ｐＨ７，０）を３０００ｍｌ加え、４℃で１時間携拌
したのち遠心分離’ａ（１７，００Ｏｒｐｍ／ａ ０分
）に付し、澄明な上信液をえた。この上溝液を１３７
ｍＭ塩化ナトリウム、２７ｍＭ塩化カリウム、８ｍＭリ
ン酸二ナトリウムおよび１４７ ｍＭリン酸−カリウム
から成る緩衝液Ｃ以下Ｐ、 Ｂ、 ８と略す）で７０倍
に希釈し、生じてくる沈澱物をシャープレス遠心分Ｎ１
ａ（１０，０００ｒｐｍ）に付して除去した。次いでえ
られた上前液２２０１をベリコンＣミリボッ社製１公幽
分子、３１：１０，０００）で１５１Ｋまで濃縮した。
グアニジンおよび２ｍＭ フェニ〜メチルスルホニ／Ｉ
／７／Ｉ／オライドを含む１００ｍＭ）リス塩酸緩衝液
（ｐＨ７，０）を３０００ｍｌ加え、４℃で１時間携拌
したのち遠心分離’ａ（１７，００Ｏｒｐｍ／ａ ０分
）に付し、澄明な上信液をえた。この上溝液を１３７
ｍＭ塩化ナトリウム、２７ｍＭ塩化カリウム、８ｍＭリ
ン酸二ナトリウムおよび１４７ ｍＭリン酸−カリウム
から成る緩衝液Ｃ以下Ｐ、 Ｂ、 ８と略す）で７０倍
に希釈し、生じてくる沈澱物をシャープレス遠心分Ｎ１
ａ（１０，０００ｒｐｍ）に付して除去した。次いでえ
られた上前液２２０１をベリコンＣミリボッ社製１公幽
分子、３１：１０，０００）で１５１Ｋまで濃縮した。
この濃縮液を４℃で一夜放置し、生じた沈澱物をさらに
シャープレス遠心分離機にかけて除去した。この上溝液
を予め充填Ｌ７’Ｃ抗体カラム〔Ａｂ（Ｍｏ・ｒ２−１
１．１）；５Ｘ３ＱｃＩＩＩｉ特顧昭５８−１７６０９
１号〔昭和５８年９月２２日出ｍ）明細書参照〕に流速
１，０００＃／／時間で負荷したのち、ＰＢＳの２，５
５００ｍｌ。
シャープレス遠心分離機にかけて除去した。この上溝液
を予め充填Ｌ７’Ｃ抗体カラム〔Ａｂ（Ｍｏ・ｒ２−１
１．１）；５Ｘ３ＱｃＩＩＩｉ特顧昭５８−１７６０９
１号〔昭和５８年９月２２日出ｍ）明細書参照〕に流速
１，０００＃／／時間で負荷したのち、ＰＢＳの２，５
５００ｍｌ。
１Ｍ塩化ナトリウムおよび０．１％ツイーン２Ｇを含ん
だ１０ ｍｌリン酸緩島液（ｐＨ７，０）の５．０００
ｍ１．ＰＢＳの２，５００ｘｔおよび０．５Ｍ塩酸グア
ニジンを含んだ２０ｍＭ リン酸緩衝１便（ｐＨ７−０
）の２，５００ｘｔの各洗浄液を逐次抗体カラムを通過
させたのち、２Ｍ塩収グアニジンを含む２０ｍＭ リン
酸緩１ｌｌＪ液（ｐＨ７，０）で溶出し、抗ウィルス活
性を有する溶出山分５００ＩＩｌｌを集めた。
だ１０ ｍｌリン酸緩島液（ｐＨ７，０）の５．０００
ｍ１．ＰＢＳの２，５００ｘｔおよび０．５Ｍ塩酸グア
ニジンを含んだ２０ｍＭ リン酸緩衝１便（ｐＨ７−０
）の２，５００ｘｔの各洗浄液を逐次抗体カラムを通過
させたのち、２Ｍ塩収グアニジンを含む２０ｍＭ リン
酸緩１ｌｌＪ液（ｐＨ７，０）で溶出し、抗ウィルス活
性を有する溶出山分５００ＩＩｌｌを集めた。
（３）参考例２（■）の方法で得た溶出画分４２０ｓｔ
に還元型グルタチオンを１０ｍＭ量添加し、ヒ）ＩＦＮ
−γをモノマーに収斂させた。
に還元型グルタチオンを１０ｍＭ量添加し、ヒ）ＩＦＮ
−γをモノマーに収斂させた。
このヒトＩＦＮ−γ水溶液の４２０ｚｌを予め１ｍＭエ
チレンジアミン四酢酸塩、 １６０ ｍＭ塩化ナトリウ
ム、１０ｍＭ還元型グルタチオンおよび２Ｍ塩酸グアニ
ジンを含んだ２５ｍＭ酢酸緩衝液（ｐＨ６，０）で平衡
化したセファクリ−／ｌ／Ｓ−２００（７アルマシア社
製）のカラム（９×１００個）に負荷し、同一緩衝液で
溶出し、七ツマー溶出画分４５０ｇ／を集めた。本操作
によ）比活性３・４×１０６エＵ／Ｍｇタン白の工Ｆｉ
ｔ−１（０−４１０１１１／ ｍｌ ）を得た。
チレンジアミン四酢酸塩、 １６０ ｍＭ塩化ナトリウ
ム、１０ｍＭ還元型グルタチオンおよび２Ｍ塩酸グアニ
ジンを含んだ２５ｍＭ酢酸緩衝液（ｐＨ６，０）で平衡
化したセファクリ−／ｌ／Ｓ−２００（７アルマシア社
製）のカラム（９×１００個）に負荷し、同一緩衝液で
溶出し、七ツマー溶出画分４５０ｇ／を集めた。本操作
によ）比活性３・４×１０６エＵ／Ｍｇタン白の工Ｆｉ
ｔ−１（０−４１０１１１／ ｍｌ ）を得た。
参考例８
参考例２（１０でえたヒトエＦ Ｉｆ−１（−ｖ：ノマ
ー）溶出画分４５０ｍ１に１０ｍＭＭ元型グルタチオン
。
ー）溶出画分４５０ｍ１に１０ｍＭＭ元型グルタチオン
。
１５０ｍＭ塩化ナトリウム、０．５Ｍ塩酸グアニジンお
よび０．０１％ツイーン２０を含む２５ｍＭ！［緩衝Ｍ
（ｐＨ６、０）ｆ）希釈液ａ、２４０ｘｔｌを添加、混
合し、タン白含景０．０６ Ｍｙ／ｍｌの低濃度溶液を
調整した。この溶液を予め、１０ ｍＭ還元型グルタチ
オン、１５０ｍＭ塩化ナトリウムおよび０．０１％ツイ
ーン２０を含む２５ｍＭ酢酸緩陶液（ｐＨ６，０）で平
衡化したセファデックスＧ−２５のカラム（１４Ｘ１０
０ｃＩ１１）に負荷し、同一緩衝液でゲル濾過を行い、
塩酸グアニジンを除去したヒトエＦＮ−１の溶出画分ａ
、 １８０ｇ／（１５５，８％Ｆ）をえた。この溶液
のタン白含量は０・０４９ Ｍｌ／ｌｔｌでめった。タ
ン白回収率は８４．４％であった。その比活性はａ、５
Ｘ１０６Ｉ Ｕ ／１１９タン白であった。この溶液を
４℃で４８時間熟成させたのち、ダイアフローＰＭ−１
０゜４３ｓｏｒｄ （アミコン社製限外濾過膜）を用い
、限外濾過によシ１５９ｍ１″ｌでｓｊＭした。この濃
縮液は澄明で、そのタン白含量は０・９２Ｍｌ１／ｓｔ
ｌであった。タン白回収率は９８．９％（１４６，ａｌ
ｌｆ）であった。なおヒトエＦＭ−１の比活性は６．８
×１０６エＴＪ／ｌ１ｆｌタン白であった。
よび０．０１％ツイーン２０を含む２５ｍＭ！［緩衝Ｍ
（ｐＨ６、０）ｆ）希釈液ａ、２４０ｘｔｌを添加、混
合し、タン白含景０．０６ Ｍｙ／ｍｌの低濃度溶液を
調整した。この溶液を予め、１０ ｍＭ還元型グルタチ
オン、１５０ｍＭ塩化ナトリウムおよび０．０１％ツイ
ーン２０を含む２５ｍＭ酢酸緩陶液（ｐＨ６，０）で平
衡化したセファデックスＧ−２５のカラム（１４Ｘ１０
０ｃＩ１１）に負荷し、同一緩衝液でゲル濾過を行い、
塩酸グアニジンを除去したヒトエＦＮ−１の溶出画分ａ
、 １８０ｇ／（１５５，８％Ｆ）をえた。この溶液
のタン白含量は０・０４９ Ｍｌ／ｌｔｌでめった。タ
ン白回収率は８４．４％であった。その比活性はａ、５
Ｘ１０６Ｉ Ｕ ／１１９タン白であった。この溶液を
４℃で４８時間熟成させたのち、ダイアフローＰＭ−１
０゜４３ｓｏｒｄ （アミコン社製限外濾過膜）を用い
、限外濾過によシ１５９ｍ１″ｌでｓｊＭした。この濃
縮液は澄明で、そのタン白含量は０・９２Ｍｌ１／ｓｔ
ｌであった。タン白回収率は９８．９％（１４６，ａｌ
ｌｆ）であった。なおヒトエＦＭ−１の比活性は６．８
×１０６エＴＪ／ｌ１ｆｌタン白であった。
Claims (2)
- （１）デキストランまたは（および）ヒドロキシエチル
澱粉澱粉の共存下に凍結もしくは凍結乾燥したヒトｒ型
インターフェロン組成物。 - （２）ショ糖の共存下に凍結もしくは凍結乾燥した特許
請求の範囲第１項記載の組成物。
Priority Applications (12)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP59010857A JPS60155136A (ja) | 1984-01-23 | 1984-01-23 | γ型インタ−フエロン組成物 |
| EP85100550A EP0150067A3 (en) | 1984-01-23 | 1985-01-19 | Stable composition of gamma-interferon |
| GR850158A GR850158B (ja) | 1984-01-23 | 1985-01-21 | |
| DK28985A DK28985A (da) | 1984-01-23 | 1985-01-22 | Stabilt humant gamma-interferonpraeparat samt fremgangsmaade til fremstilling deraf |
| PH31752A PH22531A (en) | 1984-01-23 | 1985-01-22 | Stable composition of interferon |
| KR1019850000356A KR850005455A (ko) | 1984-01-23 | 1985-01-22 | r-인터페론 안정화 조성물의 제조방법 |
| NZ210897A NZ210897A (en) | 1984-01-23 | 1985-01-22 | Stable human gamma-interferon compositions |
| US06/693,669 US4714611A (en) | 1984-01-23 | 1985-01-22 | Stable composition of gamma-interferon |
| PT79854A PT79854B (en) | 1984-01-23 | 1985-01-22 | Process for the preparation of a gamma interferon composition and stabilization thereof |
| ZA85497A ZA85497B (en) | 1984-01-23 | 1985-01-22 | Stable composition of ypsilon-interferon |
| ES539737A ES8609367A1 (es) | 1984-01-23 | 1985-01-22 | Un metodo de producir una composicion de gamma-interferon dehumano |
| AU38016/85A AU569365B2 (en) | 1984-01-23 | 1985-01-23 | Stabilization of human gamma interferon |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP59010857A JPS60155136A (ja) | 1984-01-23 | 1984-01-23 | γ型インタ−フエロン組成物 |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPS60155136A true JPS60155136A (ja) | 1985-08-15 |
Family
ID=11762020
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP59010857A Pending JPS60155136A (ja) | 1984-01-23 | 1984-01-23 | γ型インタ−フエロン組成物 |
Country Status (3)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JPS60155136A (ja) |
| ES (1) | ES8609367A1 (ja) |
| ZA (1) | ZA85497B (ja) |
Cited By (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JPS63146827A (ja) * | 1986-07-18 | 1988-06-18 | Chugai Pharmaceut Co Ltd | 安定な顆粒球コロニ−刺激因子含有製剤 |
| US5026772A (en) * | 1987-09-01 | 1991-06-25 | Yamanouchi Pharmaceutical Co., Ltd. | Lyophilized pharmaceutical composition of neocarzinostatin derivative |
| US9175283B2 (en) | 2006-05-31 | 2015-11-03 | Genzyme Corporation | Use polysaccharides for promotion of enzymatic activity |
-
1984
- 1984-01-23 JP JP59010857A patent/JPS60155136A/ja active Pending
-
1985
- 1985-01-22 ES ES539737A patent/ES8609367A1/es not_active Expired
- 1985-01-22 ZA ZA85497A patent/ZA85497B/xx unknown
Cited By (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JPS63146827A (ja) * | 1986-07-18 | 1988-06-18 | Chugai Pharmaceut Co Ltd | 安定な顆粒球コロニ−刺激因子含有製剤 |
| US5026772A (en) * | 1987-09-01 | 1991-06-25 | Yamanouchi Pharmaceutical Co., Ltd. | Lyophilized pharmaceutical composition of neocarzinostatin derivative |
| US9175283B2 (en) | 2006-05-31 | 2015-11-03 | Genzyme Corporation | Use polysaccharides for promotion of enzymatic activity |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| ZA85497B (en) | 1986-09-24 |
| ES8609367A1 (es) | 1986-08-01 |
| ES539737A0 (es) | 1986-08-01 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| US4714611A (en) | Stable composition of gamma-interferon | |
| KR920005048B1 (ko) | 인터로이킨-2의 안정화 조성물 제조방법 | |
| US5917021A (en) | Stabilized monomeric protein compositions | |
| EP2315603B1 (en) | Polysaccharide-protein conjugates reversibly coupled via imine bonds | |
| JPH0558000B2 (ja) | ||
| JP2012211166A (ja) | 安定化させたインターロイキン２ | |
| JPS6232A (ja) | 慢性関節リウマチ性貧血治療剤 | |
| KR890000103A (ko) | 조직 플라스미노겐 활성화제(t-PA) 활성을 갖는 단백질의 고농도 용액의 제조방법, t-PA 활성을 갖는 단백질을 함유하는 용액, 및 인체 및 수의약제에 있어서 용액의 용도 | |
| EP0168008A2 (en) | Stable composition of gamma-interferon | |
| EP4074337A1 (en) | Pharmaceutical taci-fc fusion protein formulation | |
| JPS60155136A (ja) | γ型インタ−フエロン組成物 | |
| JPH07145070A (ja) | 医薬組成物 | |
| KR880002037B1 (ko) | 인터페론 조성물 및 이의 제조방법 | |
| JPH0585942A (ja) | インターフエロン−ヒアルロン酸及び／又はその塩の結合体 | |
| US5534251A (en) | Stabilized il-1α medicinal composition | |
| Lin et al. | Interferon-β-1b (Betaseron®): A model for hydrophobic therapeutic proteins | |
| JP4006058B2 (ja) | 多臓器不全予防及び／又は治療剤 | |
| US5340574A (en) | Stabilized non-glycosylated recombinant human IL2 in reduced form compositions | |
| JPS6059000A (ja) | インタ−フェロンの安定化方法 | |
| JPS60215631A (ja) | インタ−ロイキン−２組成物 | |
| JPS6144826A (ja) | γ型インタ−フエロン組成物 | |
| JPH0378847B2 (ja) | ||
| JPS61161222A (ja) | γ型インタ−フエロンフラグメントの組成物 | |
| JP4025394B2 (ja) | 組織プラスミノーゲン活性化因子医薬組成物 | |
| JPS60260523A (ja) | インタ−フエロンの凍結乾燥医薬組成物 |