JPH10330283A - 消化管組織再生賦活剤 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】 【課題】新規な消化管組織再生賦活剤を提供する。 【解決手段】ＦＧＦ−１０を有効成分として含有する消
化管組織再生賦活剤を提供する。消化器系医薬で用いら
れている種々の粘膜防御因子強化剤と異なり、粘膜を含
む胃や腸管の組織全体を再生・賦活する作用を有する。
胃酸分泌抑制剤や抗ヘリコバクター・ピロリ剤などの攻
撃因子除去剤と併用もでき、慢性消化性潰瘍や潰瘍性大
腸炎のような難治性消化管障害に新しい治療方法をもた
らすことができる。

Description

【発明の詳細な説明】

【０００１】

【発明の属する技術分野】本発明は消化管組織再生賦活
剤、より詳しくは、線維芽細胞増殖因子１０（ＦＧＦ−
１０）を有効成分として含有する消化管組織再生賦活剤
に関する。

【０００２】

【従来の技術】最近のＨ２受容体拮抗剤、プロトンポン
プ阻害剤による胃酸分泌抑制技術の発展により、胃潰瘍
や十二指腸潰瘍などの消化性潰瘍は、急性の症状悪化は
抑制しやすくなった。しかし、消化性潰瘍は再発しやす
い疾患であり、胃酸分泌再開後、再発が多いと言われ
る。維持療法に使用されている胃粘膜防御因子強化剤に
は、種々の薬剤が使用されているが、再発防止の切り札
にはなっていない。また、再発の原因と言われ出したヘ
リコバクター・ピロリ（ＨｅｌｉｃｏｂａｃｔｅｒＰｙ
ｒｏｒｉ）に対する抗菌剤療法も、試験的に試されてい
るだけで、効果が確認されたわけではない。依然とし
て、ストレスや抗炎症剤に起因する消化性潰瘍は、高齢
者に多い難治疾病である。

【０００３】また、若年者に多い潰瘍性大腸炎、クロー
ン病などの非特異性炎症性腸疾患（Ｉｎｆｌａｍｍａｔ
ｏｒｙ Ｂｏｗｅｌ Ｄｉｓｅａｓｅ）は、腹痛と下痢
を主症状とする難治性の慢性疾患であり、免疫が関連す
るとも言われる。栄養補給とともに、サラゾピリンやス
テロイドなどの抗炎症剤が治療に用いられるが、ステロ
イドの連用は、胃潰瘍などの危険な副作用や感染症の危
険を伴うことが良く知られている。

【０００４】上記の慢性消化器疾患とは別に、悪性腫瘍
などの治療のために消化器の組織を切除した場合や慢性
膵炎の際にも、種々の消化器機能障害が生じる。これら
を総括した病態として、胃手術後症候群（Ｐｏｓｔｇａ
ｓｔｒｅｃｔｏｍｙ Ｄｉｓｔｕｒｂａｎｃｅｓ）や吸
収不全症候群（Ｍａｌａｂｓｏｒｐｔｉｏｎ Ｓｙｎｄ
ｒｏｍｅ）が知られているが、栄養補給以外、特に有効
な治療法は無い〔治療：第７８巻増刊号、「標準処方ガ
イド‘９６」、５５１〜６１５頁、内山真一郎他編集、
南山堂、１９９６年発行〕。

【０００５】一方、線維芽細胞増殖因子１０（ＦＧＦ−
１０）は、京都大学の伊藤らのグループが初めて、組換
え製法による発現および生理活性の確認を行った増殖因
子である〔特願平８−２１４３７８〕。構造的にはＦＧ
Ｆファミリーに属し、特にケラチノサイト増殖因子：Ｋ
ＧＦ−１とも呼ばれている線維芽細胞増殖因子７（ＦＧ
Ｆ−７）と約６０％のアミノ酸相同性を有する。また、
ほぼ同時期に、グラバー（Ｇｒｕｂｅｒ，Ｊ．Ｒ．）他
も、ＦＧＦ−１０と同じアミノ酸配列をコードする、Ｋ
ＧＦ−２遺伝子を発見している〔Ｗｏ９６／２５４２
２：Ｈｕｍａｎ Ｇｅｎｏｍｅ Ｓｃｉｅｎｃｅ Ｉｎ
ｃ．〕。成長因子と消化管の関係については、上皮細胞
成長因子（ＥＧＦ）について、乳児の壊死性小腸炎に対
する劇的な効果が報告されているものの〔Ｐ．Ｅ．サリ
バン（Ｐ．Ｅ．Ｓｕｌｌｉｖａｎ）他、ランセット（Ｌ
ａｎｃｅｔ）、３３８巻、５３頁、１９９１年〕、ＦＧ
Ｆ−１０（ＫＧＦ−２）については、このような消化管
組織に対する作用は未だ報告されていない。

【０００６】

【発明が解決しようとする課題】本発明の目的は、難治
性の消化管障害患者の消化管組織を賦活し、再生させう
る、新規な消化管組織再生賦活剤を提供することにあ
る。

【０００７】

【課題を解決するための手段】本発明者らは、新規なＦ
ＧＦファミリータンパク、ＦＧＦ−１０を遺伝子組換え
技術を用いて活性ある形で取得し、その生理活性を実験
動物で検討したところ、この因子が消化管細胞賦活作用
を有することを見いだした。この知見に基づき、更なる
検討の結果、本発明を完成した。すなわち、本発明は、
下記の医薬に関するものである。 （１）線維芽細胞増殖因子１０（ＦＧＦ−１０）、ある
いはケラチノサイト増殖因子２（ＫＧＦ−２）を有効成
分として含有する消化管組織再生賦活剤。 （２）配列番号：１のアミノ酸配列から成るポリペプチ
ド、もしくはその付加、欠失、あるいは置換改変体であ
る増殖因子を有効成分として含有する消化管組織再生賦
活剤。 （３）増殖因子が大腸菌宿主が産生する組換えタンパク
である（１）または（２）の消化管組織再生賦活剤。

【０００８】以下、詳細に本発明を説明する。本明細書
において、「線維芽細胞増殖因子１０（ＦＧＦ−１
０）、あるいはケラチノサイト増殖因子２（ＫＧＦ−
２）」とは、１９９６年に伊藤らによって発見されたＦ
ＧＦファミリーの細胞増殖因子（特願平８−２１４３７
８）で、配列番号：１のアミノ酸配列を有し、ＦＲＳＫ
細胞（上皮細胞系の培養細胞）などの増殖作用、ラット
骨形成促進を有するタンパク質を意味する。以後の説明
では、ＦＧＦ−１０の改変体、即ち、配列番号：１のア
ミノ酸配列から成るポリペプチドの付加、欠失、あるい
は置換改変体をも含めて、「ＦＧＦ−１０」と総称す
る。代表的な改変体の作成方法や活性の測定法は、特願
平８−２１４３７８号明細書に示されている。

【０００９】なお、天然ＦＧＦ−１０は糖鎖を有するタ
ンパク質であるが、糖鎖の有無、種類に関わらず、同種
の細胞増殖活性を有する限り、ＦＧＦ−１０という概念
に含まれるものとする。また、ＦＧＦ−１０成熟タンパ
ク質としては、（１）配列番号：１の４０位ロイシン
（Ｌｅｕ４０）から始まり、２０８位セリン（Ｓｅｒ２
０８）に終わる１６９アミノ酸のタンパク質、および、
（２）６９位セリン（Ｓｅｒ６９）に始まり、２０８位
セリン（Ｓｅｒ２０８）に終わる１４０アミノ酸のタン
パク質、が現在判明しているが、上記のようにＦＧＦ−
１０はこの二種の成熟タンパク質に限定されるものでは
ない。

【００１０】「消化管組織再生賦活剤」とは、食道、
胃、小腸あるいは大腸の組織の細胞を増殖させ、当該組
織の機能を高める薬理効果を有し、難治性消化管障害の
治療に用いられる薬剤を意味する。本明細書において、
「難治性消化管障害」とは、組織の損傷、消耗や機能異
常を伴う慢性消化器疾患のうち、再発性が高く、全身的
に消耗をもたらすものを意味する。具体的には、「慢性
胃炎・腸炎」、「消化性潰瘍」、「非特異性炎症性腸疾
患」、「胃手術後症候群」、「吸収不全症候群」などを
含む概念である。

【００１１】（製造）本発明の消化管組織再生賦活剤に
用いるＦＧＦ−１０は、固有の生理活性を示すもので有
れば、天然抽出品、遺伝子組換え品を問わず、精製して
本発明に使用することができる。ＦＧＦ−１０の生産方
法としては、（１）ＦＧＦ−１０産生組織からの抽出、
（２）ＦＧＦ−１０産生細胞（初代培養細胞や株化細
胞）の培養および抽出、（３）組換えＤＮＡを導入した
宿主細胞の培養および抽出などが考えられるが、一般的
には、（３）組換えＤＮＡを導入した宿主からの抽出が
大量生産に適している。組換え技術によるＦＧＦ−１０
の製造方法を以下に簡単に記載するが、詳細は、特願平
８−２１４３７８に記載されている。

【００１２】（組換え工程）配列番号：２で示されるＤ
ＮＡ配列を含むＦＧＦ−１０のｃＤＮＡを発現ベクター
に組み込む。ベクターとしては、適当な大腸菌、枯草
菌、酵母、動物昆虫細胞等の宿主内で増殖できるプラス
ミドやファージが選ばれるが、例えば、大腸菌由来のｐ
ＢＲ３２２、ｐＢＲ３２５〔ジーン（Ｇｅｎｅ）４巻１
２１頁（１９７８）〕、枯草菌由来ｐＵＢ１１０〔バイ
オケミカル・バイオフィジカル・リサーチ・コミュニケ
ーション（Ｂｉｏｃｈｅｍ．Ｂｉｏｐｈｙｓ．Ｒｅｓ．
Ｃｏｍｍｕｎ．）１１２巻，６７８頁（１９８３）〕、
ＣＯＳ細胞に好適なｐＣＤＭ８等が挙げられる。ｃＤＮ
Ａをプラスミドに組み込む方法としては、常法が、マニ
アティス（Ｔ．Ｍａｎｉａｔｉｓ）他、モレキュラー・
クローニング（Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ ｃｌｏｎｉｎ
ｇ）、コールドスプリング ハーバー ラボラトリー
（Ｃｏｌｄ ｓｐｒｉｎｇ ｈａｒｂａｒ ｌａｂ．）
２３９頁（１９８２）に記載されている。

【００１３】（宿主）宿主は、ベクターの導入により形
質転換され、ＦＧＦ−１０を産生できる生物や培養細胞
であれば、特に限定されない。細菌としては、大腸菌、
枯草菌（バチルス類）等、酵母としては、サッカロマイ
セス属、トルラ属、ピキア属等、動物細胞としては、Ｃ
ＯＳ細胞、ＣＨＯ細胞、ＮＳＯ細胞等が代表例である。
培養昆虫細胞、真菌、植物細胞、単細胞系だけでなく、
目的蛋白質遺伝子を組み込まれた昆虫や哺乳類、植物も
宿主の範疇に入る。

【００１４】（活性測定）形質転換体から、公知の方
法、例えば、コロニー・ハイブリダイゼイション法〔ジ
ーン（Ｇｅｎｅ），１０巻 ６３頁（１９８０）〕およ
びＤＮＡ塩基配列決定法〔プロシーディングス オブ
ナショナル アカデミー オブサイエンス（Ｐｒｏｃ．
Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ）７４巻５６０頁
（１９７７）〕を用い、所望のクローンを選出する。ま
た、ＣＯＳ細胞にて一過性に発現させ、培養上清の生理
活性を評価してクローン選択することも可能である。発
現されたＦＧＦ−１０蛋白の生理活性は、ＦＲＳＫ細胞
などの培養上皮細胞の増殖促進作用を測定することによ
り評価できる。

【００１５】（精製）組換え技術により生産されたＦＧ
Ｆ−１０蛋白は、生化学の分野で常用される精製方法に
て精製が可能である。イオン交換クロマトグラフィー、
ゲル濾過、逆相ＨＰＬＣ、硫安沈澱、限外濾過、ＳＤＳ
−ＰＡＧＥなどが適宜組み合わせて用いられるが、ＦＧ
Ｆ類の場合、特にヘパリン等のリガンドを用いたアフィ
ニティークロマトグラフィー、抗体カラムクロマトグラ
フィーなどが大量精製に好適である。ＦＧＦ−１０蛋白
に対する抗体は、ポリクローナル、モノクローナル共
に、自体公知の方法で作製し得る。ＦＧＦ−１０特異的
抗体は抗体カラムに使用出来るだけでなく、ＥＬＩＳＡ
等の免疫化学的定量法に使用できる。

【００１６】（製剤）製剤としては、注射剤、経口剤、
液剤、凍結乾燥品いずれも用いることが出来るが、特に
皮下投与用注射製剤が好ましい。これら非経口投与製剤
には、当該分野にて公知の安定化剤、担体を用いること
ができ、使用時に等張溶液として用いるのが好ましい。
医薬担体としては、例えば、アルブミン等の血漿由来蛋
白、グリシン等のアミノ酸、マンニトール等の糖を用い
ることができ、通常、皮下あるいは筋肉内投与用凍結乾
燥製剤に用いられる。また、水溶製剤、凍結乾燥製剤と
して使用する場合、凝集を防ぐためにＴｗｅｅｎ８０な
どの界面活性剤を添加するのが好ましい。長期の薬効を
要する場合は、公知のタンパク除放性製剤担体を用いて
製剤する事もできる。

【００１７】（使用方法）本発明の消化管組織再生賦活
剤は、主成分：ＦＧＦ−１０を、通常成人キログラムあ
たり０．５μｇ〜５ｍｇを静脈内、皮下、または筋肉内
投与する。投与回数は投与量、投与経路や患者の症状に
より適宜増減されるものであるが、月一回から一日三回
の投与が可能であり、一般的には週１から５回、数週間
の投薬治療が行われる。この治療により、消化管細胞や
組織は賦活され、難治性の消化管障害や低栄養状態が改
善される。胃酸分泌抑制剤や抗ヘリコバクター・ピロリ
剤などの攻撃因子除去剤と併用も可能である。

【００１８】（毒性）正常マウス〔Ｃ５７ＢＬ／６Ｎ、
雄性、５週齢：日本チャールスリバー社〕に一週間、最
大５ｍｇ／ｍｇのＦＧＦ−１０を腹腔内投与したが、体
重減少や死亡例はなかった。一般的に毒性は低いと考え
られる。

【００１９】

【発明の効果】本発明の消化管組織再生賦活剤は、消化
管組織細胞の増殖および賦活という新しい機序により、
難治性の消化管障害を改善しうる。消化器系医薬で用い
られている種々の粘膜防御因子強化剤と異なり、粘膜を
含む胃や腸管の組織全体を再生・賦活する作用を有す
る。胃酸分泌抑制剤や抗ヘリコバクター・ピロリ剤など
の攻撃因子除去剤と併用もでき、慢性消化性潰瘍や潰瘍
性大腸炎のような難治性消化管障害に新しい治療方法を
もたらすことができる。

【００２０】

【実施例】以下、本発明を実施例にて説明する。（ＦＧ
Ｆ−１０の発現および精製）ヒトＦＧＦ−１０の構造遺
伝子に相当するＤＮＡ断片（配列番号：２）と、大腸菌
発現ベクターであるｐＥＴ１１ｃ〔ストラタジーン社〕
をＮｄｅＩおよびＢａｍＨＩで消化し、アガロースゲル
電気泳動にて分取することにより直鎖化したベクターＤ
ＮＡをライゲーションし、大腸菌ＪＭ１０９を形質転換
することによりクローン化した。これらの中からＦＧＦ
−１０ｃＤＮＡが正しい方向に挿入されたプラスミドを
単離し、塩基配列の確認を行い、ｐＥＴ−ｈＦＧＦ−１
０を得た。これを用いて大腸菌ＢＬ２１（ＤＥ３）を形
質転換した。得られた組換えクローンのうちの１つをＢ
Ｌ２１（ＤＥ３）／ｐＥＴ−ｈＦＧＦ−１０と名づけ、
これを用いてヒトＦＧＦ−１０の発現生産を行った。

【００２１】（培養）ＢＬ２１（ＤＥ３）／ｐＥＴ−ｈ
ＦＧＦ−１０をアンピシリン１００μｇ／ｍｌを含むＬ
Ｂ培地１０ｍｌに植菌したものを４本用意し、３７℃で
一晩前培養を行った。翌日それぞれ全量を１００μｇ／
ｍｌを含むＴＢ培地５００ｍｌ×４本に植え込み３７℃
で振とう培養した。ＯＤ６００＝０．８に達した時点で
ＩＰＴＧを最終濃度が１ｍＭになるように添加し、培養
温度を２８℃に下げてさらに６時間培養を継続した。

【００２２】（抽出精製）培養液を遠心分離し、得られ
た菌体を５０ｍＭＴｒｉｓ−ＨＣｌ，ｐＨ８．０にて１
回洗浄し、１ｍＭ ＥＤＴＡ、２μｇ／ｍｌロイペプチ
ン、２μｇ／ｍｌペプスタチン、１ｍＭ ＰＭＳＦを含
む５０ｍＭＴｒｉｓ−ＨＣｌ，ｐＨ８．０に懸濁した。
超音波破砕により菌体を破砕し、ベックマンＪ２−２１
Ｍ／Ｅ高速冷却遠心機にてＪＡ−２０ローターを用い
て、１５０００回転で１時間遠心分離することにより上
清を採取した。ＨｉＴｒａｐ Ｈｅｐａｒｉｎ５ｍｌ
〔ファルマシア社〕を５０ｍＭＴｒｉｓ−ＨＣｌ，ｐＨ
８．０で平衡化し、先に調製した菌体破砕上清をアプラ
イした。続いて５０ｍＭＴｒｉｓ−ＨＣｌ，ｐＨ８．０
で溶出液のＡ２６０がベースラインに戻るまで洗浄した
後、連続的にＮａＣｌ濃度勾配を３Ｍまで増加させるこ
とにより、蛋白を溶出した。組換えヒトＦＧＦ−１０に
相当する約１９ｋＤａの蛋白は約１．２Ｍ ＮａＣｌの
位置に溶出された。なお、流速は２ｍｌ／分で行った。

【００２３】（製剤例）本発明のＦＧＦ−１０製剤のう
ち、代表的なものである皮下投与用水溶／凍結乾燥製剤
は、以下のように製造することができる。 （１）精製組換えＦＧＦ−１０：１ｍｇに対し、グリシ
ン０．３４ｍｇ、マンニトール９ｍｇ、非イオン性界面
活性剤：ポリソルベート８０、０．２ｍｇを加え、燐酸
緩衝液１ｍｌ（ｐＨ７．４、５ｍＭ）に溶解させ、上記
溶液を凍結乾燥する。（２）１５０ｍＭ塩化ナトリウ
ム、０．０１％Ｔｗｅｅｎ８０を含有する１０ｍＭリン
酸緩衝液（ｐＨ７．０）でＦＧＦ−１０を５ｍｇ／ｍｌ
になるように調製し、ＦＧＦ−１０水溶液を得る。
（３）１５０ｍＭ塩化ナトリウム、０．０１％Ｔｗｅｅ
ｎ８０を含有する１０ｍＭリン酸緩衝液（ｐＨ７．０）
でＦＧＦ−１０を５ｍｇ／ｍｌになるように調製した。
続いて、マンニトールを１０ｍｇ／ｍｌになるように添
加し、ＦＧＦ−１０水溶液を得る。無菌的にバイアル充
填し、常法に従って凍結乾燥して、ＦＧＦ−１０凍結乾
燥製剤を得る。バイアル内に窒素を封入し、打栓する。

【００２４】（薬理試験）一群５匹の正常マウス〔Ｃ５
７ＢＬ／６Ｎ、雄性、５週齢：日本チャールスリバー
社〕を自由摂食させ、１および５ｍｇ／ｋｇのＦＧＦ−
１０を一日一回一週間投与した（腹腔内投与）。全ての
群において最後の投与の５時間後、体重測定ののちに屠
殺し、胃腸などを採取、それぞれ湿重量を計測した。

【００２５】ＦＧＦ−１０投与の影響を表１〜表２に示
す。スチューデントｔ検定により、ＦＧＦ−１０投与群
と対照群の臓器湿重量の有意差を検定した。なお、各群
の平均体重（ｇ：ｍｅａｎ±ＳＤ、Ｎ＝５）は、対照
群：１４．９±０．８、ＦＧＦ−１０（１ｍｇ／ｋｇ）
投与群：１５．０±１．１、ＦＧＦ−１０（５ｍｇ／ｋ
ｇ）投与群：１４．４±１．４で、有意な変動は無かっ
た。

【００２６】 表１：正常マウスの胃（ｓｔｏｍａｃｈ）重量 湿重量（ｍｇ：平均値±ＳＤ） 対照群 １２２±８ ＦＧＦ−１０（１ｍｇ／ｋｇ）投与群 １２６±９ ＦＧＦ−１０（５ｍｇ／ｋｇ）投与群 １３２±４＊ ＊：ｐ＜０．０５

【００２７】 表２：正常マウスの結腸（ｃｏｌｏｎ）重量 湿重量（ｍｇ：平均値±ＳＤ） 対照群 ２８６±１７ ＦＧＦ−１０（１ｍｇ／ｋｇ）投与群 ２９２±１４ ＦＧＦ−１０（５ｍｇ／ｋｇ）投与群 ３３１±１３＊＊ ＊＊：ｐ＜０．０１

【００２８】なお、同時に測定した小腸（ｆｏｒｇｕ
ｔ）、肺（ｌｕｎｇ）、肝臓（ｌｉｖｅｒ）、腎臓（ｋ
ｉｄｎｅｙ）については、有意な変動は認められなかっ
た。表１、表２に示すようにＦＧＦ−１０を投与された
マウス群では、消化管湿重量が有意に増加しており、種
々の要因により疲弊した胃や腸の組織を賦活再生する作
用が期待される。

【００２９】配列番号：１ 配列の長さ：２０８ 配列の型：アミノ酸 トポロジー：直鎖状 配列の種類：ペプチド 起源 生物名：ヒト 配列 Met Trp Lys Trp Ile Leu Thr His Cys Ala Ser Ala Phe Pro His Leu 1 5 10 15 Pro Gly Cys Cys Cys Cys Cys Phe Leu Leu Leu Phe Leu Val Ser Ser 20 25 30 Val Pro Val Thr Cys Gln Ala Leu Gly Gln Asp Met Val Ser Pro Glu 35 40 45 Ala Thr Asn Ser Ser Ser Ser Ser Phe Ser Ser Pro Ser Ser Ala Gly 50 55 60 Arg His Val Arg Ser Tyr Asn His Leu Gln Gly Asp Val Arg Trp Arg 65 70 75 80 Lys Leu Phe Ser Phe Thr Lys Tyr Phe Leu Lys Ile Glu Lys Asn Gly 85 90 95 Lys Val Ser Gly Thr Lys Lys Glu Asn Cys Pro Tyr Ser Ile Leu Glu 100 105 110 Ile Thr Ser Val Glu Ile Gly Val Val Ala Val Lys Ala Ile Asn Ser 115 120 125 Asn Tyr Tyr Leu Ala Met Asn Lys Lys Gly Lys Leu Tyr Gly Ser Lys 130 135 140 Glu Phe Asn Asn Asp Cys Lys Leu Lys Glu Arg Ile Glu Glu Asn Gly 145 150 155 160 Tyr Asn Thr Tyr Ala Ser Phe Asn Trp Gln His Asn Gly Arg Gln Met 165 170 175 Tyr Val Ala Leu Asn Gly Lys Gly Ala Pro Arg Arg Gly Gln Lys Thr 180 185 190 Arg Arg Lys Asn Thr Ser Ala His Phe Leu Pro Met Val Val His Ser 195 200 205

【００３０】配列番号：２ 配列の長さ：６９０ｂｐ 配列の型：核酸 鎖の数：二本鎖 トポロジー：直鎖状 配列の種類：ｃＤＮＡ 起源 生物名：ヒト 配列 CTTCCAGTAT GTTCCTTCTG ATGAGACAAT TTCCAGTGCC GAGAGTTCCA GTACA ATG 58 TGG AAA TGG ATA CTG ACA CAT TGT GCC TCA GCC TTT CCC CAC CTG CCC 106 GGC TGC TGC TGC TGC TGC TTT TTG TTG CTG TTC TTG GTG TCT TCC GTC 154 CCT GTC ACC TGC CAA GCC CTT GGT CAG GAC ATG GTG TCA CCA GAG GCC 202 ACC AAC TCT TCT TCC TCC TCC TTC TCC TCT CCT TCC AGC GCG GGA AGG 250 CAT GTG CGG AGC TAC AAT CAC CTT CAA GGA GAT GTC CGC TGG AGA AAG 298 CTA TTC TCT TTC ACC AAG TAC TTT CTC AAG ATT GAG AAG AAC GGG AAG 346 GTC AGC GGG ACC AAG AAG GAG AAC TGC CCG TAC AGC ATC CTG GAG ATA 394 ACA TCA GTA GAA ATC GGA GTT GTT GCC GTC AAA GCC ATT AAC AGC AAC 442 TAT TAC TTA GCC ATG AAC AAG AAG GGG AAA CTC TAT GGC TCA AAA GAA 490 TTT AAC AAT GAC TGT AAG CTG AAG GAG AGG ATA GAG GAA AAT GGA TAC 538 AAT ACC TAT GCA TCA TTT AAC TGG CAG CAT AAT GGG AGG CAA ATG TAT 586 GTG GCA TTG AAT GGA AAA GGA GCT CCA AGG AGA GGA CAG AAA ACA CGA 634 AGG AAA AAC ACC TCT GCT CAC TTT CTT CCA ATG GTG GTA CAC TCA TAGAG 684 GAAGGC 690

─────────────────────────────────────────────────────

【手続補正書】

【提出日】平成１０年８月１８日

【手続補正１】

【補正対象書類名】明細書

【補正対象項目名】００２９

【補正方法】変更

【補正内容】

【００２９】

【配列表】 配列番号：１ 配列の長さ：２０８ 配列の型：アミノ酸 トポロジー：直鎖状 配列の種類：ペプチド 起源 生物名：ヒト 配列 Met Trp Lys Trp Ile Leu Thr His Cys Ala Ser Ala Phe Pro His Leu 1 5 10 15 Pro Gly Cys Cys Cys Cys Cys Phe Leu Leu Leu Phe Leu Val Ser Ser 20 25 30 Val Pro Val Thr Cys Gln Ala Leu Gly Gln Asp Met Val Ser Pro Glu 35 40 45 Ala Thr Asn Ser Ser Ser Ser Ser Phe Ser Ser Pro Ser Ser Ala Gly 50 55 60 Arg His Val Arg Ser Tyr Asn His Leu Gln Gly Asp Val Arg Trp Arg 65 70 75 80

【提出日】平成１０年８月１８日

【手続補正１】

【補正対象書類名】明細書

【補正対象項目名】００２９

【補正方法】変更

【補正内容】 Lys Leu Phe Ser Phe Thr Lys Tyr Phe Leu Lys Ile Glu Lys Asn Gly 85 90 95 Lys Val Ser Gly Thr Lys Lys Glu Asn Cys Pro Tyr Ser Ile Leu Glu 100 105 110 Ile Thr Ser Val
Glu Ile Gly Val Val Ala Val Lys Ala Ile Asn Ser 115 120 125 Asn Tyr Tyr Leu Ala Met Asn Lys Lys Gly Lys Leu Tyr Gly Ser Lys 130 135 140 Glu Phe Asn Asn Asp Cys Lys Leu Lys Glu Arg Ile Glu Glu Asn Gly 145 150 155 160 Tyr Asn Thr Tyr Ala Ser Phe Asn Trp Gln His Asn Gly Arg Gln Met 165 170 175 Tyr Val Ala Leu Asn Gly Lys Gly Ala Pro Arg Arg Gly Gln Lys Thr 180 185 190 Arg Arg Lys Asn Thr Ser Ala His Phe Leu Pro Met Val Val His Ser 195 200 205

【提出日】平成１０年８月１８日

【手続補正２】

【補正対象書類名】明細書

【補正対象項目名】００３０

【補正方法】変更

【補正内容】

【００３０】配列番号：２ 配列の長さ：６９０ｂｐ 配列の型：核酸 鎖の数：二本鎖 トポロジー：直鎖状 配列の種類：ｃＤＮＡ 起源 生物名：ヒト 配列 CTTCCAGTAT GTTCCTTCTG ATGAGACAAT TTCCAGTGCC GAGAGTTCCA GTACA ATG 58 TGG AAA TGG ATA CTG ACA CAT TGT GCC TCA GCC TTT CCC CAC CTG CCC 106 GGC TGC TGC TGC TGC TGC TTT TTG TTG CTG TTC TTG GTG TCT TCC GTC 154 CCT GTC ACC TGC CAA GCC CTT GGT CAG GAC ATG GTG TCA CCA GAG GCC 202 ACC AAC TCT TCT TCC TCC TCC TTC TCC TCT CCT TCC AGC GCG GGA AGG 250 CAT GTG CGG AGC TAC AAT CAC CTT CAA GGA GAT GTC CGC TGG AGA AAG 298

【提出日】平成１０年８月１８日

【手続補正２】

【補正対象書類名】明細書

【補正対象項目名】００３０

【補正方法】変更

【補正内容】 CTA TTC TCT TTC ACC AAG TAC TTT CTC AAG ATT GAG AAG AAC GGG AAG 346 GTC AGC GGG ACC AAG AAG GAG AAC TGC CCG TAC AGC ATC CTG GAG ATA 394 ACA TCA GTA GAA ATC GGA GTT GTT GCC GTC AAA GCC ATT AAC AGC AAC 442 TAT TAC TTA GCC ATG AAC AAG AAG GGG AAA CTC TAT GGC TCA AAA GAA 490 TTT AAC AAT GAC TGT AAG CTG AAG GAG AGG ATA GAG GAA AAT GGA TAC 538 AAT ACC TAT GCA TCA TTT AAC TGG CAG CAT AAT GGG AGG CAA ATG TAT 586

【提出日】平成１０年８月１８日

【手続補正２】

【補正対象書類名】明細書

【補正対象項目名】００３０

【補正方法】変更

【補正内容】 GTG GCA TTG AAT GGA AAA GGA GCT CCA AGG AGA GGA CAG AAA ACA CGA 634 AGG AAA AAC ACC TCT GCT CAC TTT CTT CCA ATG GTG GTA CAC TCA TAGAG 684 GAAGGC 690

───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (51)Int.Cl.⁶ 識別記号 ＦＩ Ｃ１２Ｒ 1:19）

Claims (3)

【特許請求の範囲】
1. 【請求項１】線維芽細胞増殖因子１０（ＦＧＦ−１
   ０）、あるいはケラチノサイト増殖因子２（ＫＧＦ−
   ２）を有効成分として含有する消化管組織再生賦活剤。
2. 【請求項２】配列番号：１のアミノ酸配列から成るポリ
   ペプチド、もしくはその付加、欠失、あるいは置換改変
   体である増殖因子を有効成分として含有する消化管組織
   再生賦活剤。
3. 【請求項３】増殖因子が大腸菌宿主が産生する組換えタ
   ンパクである請求項１または２の消化管組織再生賦活
   剤。