JPH10330284A - 肝細胞保護剤 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】 【課題】新規な肝細胞保護剤を提供する。 【解決手段】ＦＧＦ−１０を有効成分として含有する肝
細胞保護剤を提供する。肝細胞を保護して、ＧＯＴ、Ｇ
ＰＴなどの肝機能マーカーを低下させる作用を有する。
適用しうる肝疾患としては、急性、慢性肝炎（ウィルス
性、薬剤性、自己免疫性など）、急性肝不全（劇症肝
炎、肝切除手術後の肝不全など）、肝硬変などが挙げら
れる。

Description

【発明の詳細な説明】

【０００１】

【発明の属する技術分野】本発明は肝細胞保護剤、より
詳しくは、線維芽細胞増殖因子１０（ＦＧＦ−１０）を
有効成分として含有する肝細胞保護剤に関する。

【０００２】

【従来の技術】慢性肝炎はＨＢＶやＨＣＶなどの肝炎ウ
ィルスの感染、アルコールなどの薬物過剰摂取、免疫異
常などを原因にして起こる難治性の肝臓障害であり、肝
細胞の炎症と破壊による肝機能の減退により、黄疸や極
度の倦怠感を生じる。炎症の長期化に伴って、食道静脈
瘤が形成されたり、肝硬変、肝ガンへの移行が高率に観
察される。近年、インターフェロンを始めとする抗ウィ
ルス剤の投与により、Ｃ型慢性肝炎も完治例が見られる
ようになったが、依然、長期的には予後不良の疾患であ
る。また、時に炎症が急速に進行し、劇症肝炎の病像を
示した場合、救命率は極めて低くなる。

【０００３】肝炎治療の臨床では、抗ウィルス剤：イン
ターフェロンや免疫抑制剤：ステロイドのような病因の
治療剤以外に、グリシルリチン製剤、ウルソデオキシコ
ール酸製剤、グルタチオン製剤などの肝細胞保護剤が良
く用いられる。血中ＧＯＴ、ＧＰＴなどの肝細胞破壊の
程度を示すパラメーターはこれらの薬剤で低下するが、
この肝細胞保護効果は肝細胞膜保護作用、免疫調整作
用、利胆作用、あるいは解毒作用の補助によるものとさ
れており、一般に肝組織や肝細胞の維持はできても、再
生を促進する効果は期待できない。この点について、近
年、肝細胞の賦活効果を有するいくつかの細胞成長因子
やホルモンが、新しい肝疾患治療剤として注目されてい
る。たとえば、上皮細胞増殖因子（ＥＧＦ）は、インシ
ュリン−グルカゴン療法に併用することにより、劇症肝
炎に対する治療効果が報告されているし〔特開平３−８
６８３５〕、ｈＧＨについては、慢性アルコール肝炎
〔Ｗｏ９３／４６９４〕や、急性肝不全〔宮際幹ほか、
肝臓、３６巻追補３、７８頁〕に対する効果が報告され
ている。

【０００４】一方、線維芽細胞増殖因子１０（ＦＧＦ−
１０）は、京都大学の伊藤らのグループが初めて、組換
え製法による発現および生理活性の確認を行った増殖因
子である〔特願平８−２１４３７８〕。構造的にはＦＧ
Ｆファミリーに属し、特にケラチノサイト増殖因子：Ｋ
ＧＦ−１とも呼ばれている線維芽細胞増殖因子７（ＦＧ
Ｆ−７）と約６０％のアミノ酸相同性を有する。また、
ほぼ同時期に、グラバー（Ｇｒｕｂｅｒ，Ｊ．Ｒ．）他
も、ＦＧＦ−１０と同じアミノ酸配列をコードする、Ｋ
ＧＦ−２遺伝子を発見している〔Ｗｏ９６／２５４２
２：Ｈｕｍａｎ Ｇｅｎｏｍｅ Ｓｃｉｅｎｃｅ Ｉｎ
ｃ．〕。この因子に関しては、骨形成促進作用が確認さ
れているものの〔特願平８−２１４３７８〕、肝細胞保
護作用については、全く知られていなかった。

【０００５】

【発明が解決しようとする課題】本発明の目的は、肝疾
患における肝細胞の脱落を防ぎ、組織を賦活・再生させ
る新規な肝細胞保護剤を提供することにある。

【０００６】

【課題を解決するための手段】本発明者らは、新規なＦ
ＧＦファミリータンパク、ＦＧＦ−１０を遺伝子組み替
え技術を用いて活性ある形で取得し、その生理活性を実
験動物で検討したところ、この因子が肝細胞の脱落程度
の指標となる、ＧＯＴ、ＧＰＴなどの血中肝機能マーカ
ーを減少させることを見いだした。この知見に基づき、
更なる検討の結果、本発明を完成した。

【０００７】すなわち、本発明は、下記の医薬に関する
ものである。 （１）線維芽細胞増殖因子１０（ＦＧＦ−１０）、ある
いはケラチノサイト増殖因子２（ＫＧＦ−２）を有効成
分として含有する肝細胞保護剤。 （２）配列番号：１のアミノ酸配列から成るポリペプチ
ド、もしくはその付加、欠失、あるいは置換改変体であ
る増殖因子を有効成分として含有する肝細胞保護剤。 （３）増殖因子が大腸菌宿主が産生する組換えタンパク
である（１）または（２）の肝細胞保護剤。

【０００８】以下、詳細に本発明を説明する。本明細書
において、「線維芽細胞増殖因子１０（ＦＧＦ−１
０）、あるいはケラチノサイト増殖因子２（ＫＧＦ−
２）」とは、１９９６年に伊藤らによって発見されたＦ
ＧＦファミリーの細胞増殖因子〔特願平８−２１４３７
８〕で、配列番号：１のアミノ酸配列を有し、ＦＲＳＫ
細胞（上皮細胞系の培養細胞）などの増殖作用、ラット
骨形成促進を有するタンパク質を意味する。以後の説明
では、ＦＧＦ−１０の改変体、即ち、配列番号：１のア
ミノ酸配列から成るポリペプチドの付加、欠失、あるい
は置換改変体をも含めて、「ＦＧＦ−１０」と総称す
る。代表的な改変体の作成方法や活性の測定法は、特願
平８−２１４３７８号明細書に示されている。

【０００９】なお、天然ＦＧＦ−１０は糖鎖を有するタ
ンパク質であるが、糖鎖の有無、種類に関わらず、同種
の細胞増殖活性を有する限り、ＦＧＦ−１０という概念
に含まれるものとする。また、ＦＧＦ−１０成熟タンパ
ク質としては、（１）配列番号：１の４０位ロイシン
（Ｌｅｕ４０）から始まり、２０８位セリン（Ｓｅｒ２
０８）に終わる１６９アミノ酸のタンパク質、および、
（２）６９位セリン（Ｓｅｒ６９）に始まり、２０８位
セリン（Ｓｅｒ２０８）に終わる１４０アミノ酸のタン
パク質、が現在判明しているが、上記のようにＦＧＦ−
１０はこの二種の成熟タンパク質に限定されるものでは
ない。

【００１０】本明細書において、「肝細胞保護剤」と
は、肝実質細胞の生存維持、再生あるいは増殖を促進す
る作用を有し、肝疾患患者に投与することにより、肝機
能マーカーを低下させる薬剤を意味する。代表的な肝機
能マーカーとして、下記の肝臓由来酵素が挙げられる
が、これに限定されるものではない。肝疾患としては、
急性、慢性肝炎（ウィルス性、薬剤性、自己免疫性な
ど）、急性肝不全（劇症肝炎、肝切除手術後の肝不全な
ど）、肝硬変などが挙げられる。 ＧＯＴ（＝ＡＳＴ）：アスパラギン酸アミノトランスフ
ェラーゼ ＧＰＴ（＝ＡＬＴ）：アラニンアミノトランスフェラー
ゼ γ−ＧＴＰ：γ−グルタミルトランスペプチダーゼ ＡＬＰ：アルカリフォスファターゼ ＬＡＰ：ロイシンアミノペプチダーゼ

【００１１】（製造）本発明の肝細胞保護剤に用いるＦ
ＧＦ−１０は、固有の生理活性を示すもので有れば、天
然抽出品、遺伝子組み替え品を問わず、精製して本発明
に使用することができる。ＦＧＦ−１０の生産方法とし
ては、（１）ＦＧＦ−１０産生組織からの抽出、（２）
ＦＧＦ−１０産生細胞（初代培養細胞や株化細胞）の培
養および抽出、（３）組換えＤＮＡを導入した宿主細胞
の培養および抽出などが考えられるが、一般的には、
（３）組換えＤＮＡを導入した宿主からの抽出が大量生
産に適している。組換え技術によるＦＧＦ−１０の製造
方法を以下に簡単に記載するが、詳細は、特願平８−２
１４３７８に記載されている。

【００１２】（組換え工程）配列番号：２で示されるＤ
ＮＡ配列を含むＦＧＦ−１０のｃＤＮＡを発現ベクター
に組み込む。ベクターとしては、適当な大腸菌、枯草
菌、酵母、動物昆虫細胞等の宿主内で増殖できるプラス
ミドやファージが選ばれるが、例えば、大腸菌由来のｐ
ＢＲ３２２、ｐＢＲ３２５〔ジーン（Ｇｅｎｅ）４巻１
２１頁（１９７８）〕、枯草菌由来ｐＵＢ１１０〔バイ
オケミカル・バイオフィジカル・リサーチ・コミュニケ
ーション（Ｂｉｏｃｈｅｍ．Ｂｉｏｐｈｙｓ．Ｒｅｓ．
Ｃｏｍｍｕｎ．）１１２巻，６７８頁（１９８３）〕、
ＣＯＳ細胞に好適なｐＣＤＭ８等が挙げられる。ｃＤＮ
Ａをプラスミドに組み込む方法としては、常法が、マニ
アティス（Ｔ．Ｍａｎｉａｔｉｓ）他、モレキュラー・
クローニング（Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ ｃｌｏｎｉｎ
ｇ）、コールドスプリング ハーバー ラボラトリー
（Ｃｏｌｄ ｓｐｒｉｎｇ ｈａｒｂａｒ ｌａｂ．）
２３９頁（１９８２）に記載されている。

【００１３】（宿主）宿主は、ベクターの導入により形
質転換され、ＦＧＦ−１０を産生できる生物や培養細胞
であれば、特に限定されない。細菌としては、大腸菌、
枯草菌（バチルス類）等、酵母としては、サッカロマイ
セス属、トルラ属、ピキア属等、動物細胞としては、Ｃ
ＯＳ細胞、ＣＨＯ細胞、ＮＳＯ細胞等が代表例である。
培養昆虫細胞、真菌、植物細胞、単細胞系だけでなく、
目的蛋白質遺伝子を組み込まれた昆虫や哺乳類、植物も
宿主の範疇に入る。

【００１４】（活性測定）形質転換体から、公知の方
法、例えば、コロニー・ハイブリダイゼイション法〔ジ
ーン（Ｇｅｎｅ），１０巻 ６３頁（１９８０）〕およ
びＤＮＡ塩基配列決定法〔プロシーディングス オブ
ナショナル アカデミー オブサイエンス（Ｐｒｏｃ．
Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ）７４巻５６０頁
（１９７７）〕を用い、所望のクローンを選出する。ま
た、ＣＯＳ細胞にて一過性に発現させ、培養上清の生理
活性を評価してクローン選択することも可能である。発
現されたＦＧＦ−１０蛋白の生理活性は、ＦＲＳＫ細胞
などの培養上皮細胞の増殖促進作用を測定することによ
り評価できる。

【００１５】（精製）組換え技術により生産されたＦＧ
Ｆ−１０蛋白は、生化学の分野で常用される精製方法に
て精製が可能である。イオン交換クロマトグラフィー、
ゲル濾過、逆相ＨＰＬＣ、硫安沈澱、限外濾過、ＳＤＳ
−ＰＡＧＥなどが適宜組み合わせて用いられるが、ＦＧ
Ｆ類の場合、特にヘパリン等のリガンドを用いたアフィ
ニティークロマトグラフィー、抗体カラムクロマトグラ
フィーなどが大量精製に好適である。ＦＧＦ−１０蛋白
に対する抗体は、ポリクローナル、モノクローナル共
に、自体公知の方法で作製し得る。ＦＧＦ−１０特異的
抗体は抗体カラムに使用出来るだけでなく、ＥＬＩＳＡ
等の免疫化学的定量法に使用できる。

【００１６】（製剤）製剤としては、注射剤、経口剤、
液剤、凍結乾燥品いずれも用いることが出来るが、特に
皮下投与用注射製剤が好ましい。これら非経口投与製剤
には、当該分野にて公知の安定化剤、担体を用いること
ができ、使用時に等張溶液として用いるのが好ましい。
医薬担体としては、例えば、アルブミン等の血漿由来蛋
白、グリシン等のアミノ酸、マンニトール等の糖を用い
ることができ、通常、皮下あるいは筋肉内投与用凍結乾
燥製剤に用いられる。また、水溶製剤、凍結乾燥製剤と
して使用する場合、凝集を防ぐためにＴｗｅｅｎ８０な
どの界面活性剤を添加するのが好ましい。長期の薬効を
要する場合は、公知のタンパク除放性製剤担体を用いて
製剤する事もできる。

【００１７】（使用方法）本発明の肝細胞保護剤は、主
成分：ＦＧＦ−１０を、通常成人キログラムあたり０．
５μｇ〜５ｍｇを静脈内、皮下、または筋肉内投与す
る。投与回数は投与量、投与経路や患者の症状により適
宜増減されるものであるが、月一回から一日三回の投与
が可能であり、一般的には週１から５回、数週間の投薬
治療が行われる。この治療により、肝細胞は保護、再生
あるいは賦活され、肝疾患が改善される。インターフェ
ロンや他の肝細胞保護剤と併用も可能である。

【００１８】（毒性）正常マウス〔Ｃ５７ＢＬ／６Ｎ、
雄性、５週齢：日本チャールスリバー社〕に一週間、最
大５ｍｇ／ｍｇのＦＧＦ−１０を腹腔内投与したが、体
重減少や死亡例はなかった。一般的に毒性は低いと考え
られる。

【００１９】

【発明の効果】本発明の肝細胞保護剤は、肝実質細胞の
保護、再生あるいは賦活という新しい機序により、難治
性の肝臓障害を改善しうる。

【００２０】

【実施例】以下、本発明を実施例にて説明する。 （ＦＧＦ−１０の発現および精製）ヒトＦＧＦ−１０の
構造遺伝子に相当するＤＮＡ断片（配列番号：２）と、
大腸菌発現ベクターであるｐＥＴ１１ｃ（ストラタジー
ン社）をＮｄｅＩおよびＢａｍＨＩで消化し、アガロー
スゲル電気泳動にて分取することにより直鎖化したベク
ターＤＮＡをライゲーションし、大腸菌ＪＭ１０９を形
質転換することによりクローン化した。これらの中から
ＦＧＦ−１０ｃＤＮＡが正しい方向に挿入されたプラス
ミドを単離し、塩基配列の確認を行い、ｐＥＴ−ｈＦＧ
Ｆ−１０を得た。これを用いて大腸菌ＢＬ２１（ＤＥ
３）を形質転換した。得られた組換えクローンのうちの
１つをＢＬ２１（ＤＥ３）／ｐＥＴ−ｈＦＧＦ−１０と
名づけ、これを用いてヒトＦＧＦ−１０の発現生産を行
った。

【００２１】（培養）ＢＬ２１（ＤＥ３）／ｐＥＴ−ｈ
ＦＧＦ−１０をアンピシリン１００μｇ／ｍｌを含むＬ
Ｂ培地１０ｍｌに植菌したものを４本用意し、３７℃で
一晩前培養を行った。翌日それぞれ全量を１００μｇ／
ｍｌを含むＴＢ培地５００ｍｌ×４本に植え込み３７℃
で振とう培養した。ＯＤ６００＝０．８に達した時点で
ＩＰＴＧを最終濃度が１ｍＭになるように添加し、培養
温度を２８℃に下げてさらに６時間培養を継続した。

【００２２】（抽出精製）培養液を遠心分離し、得られ
た菌体を５０ｍＭＴｒｉｓ−ＨＣｌ，ｐＨ８．０にて１
回洗浄し、１ｍＭ ＥＤＴＡ、２μｇ／ｍｌロイペプチ
ン、２μｇ／ｍｌペプスタチン、１ｍＭ ＰＭＳＦを含
む５０ｍＭＴｒｉｓ−ＨＣｌ，ｐＨ８．０に懸濁した。
超音波破砕により菌体を破砕し、ベックマンＪ２−２１
Ｍ／Ｅ高速冷却遠心機にてＪＡ−２０ローターを用い
て、１５０００回転で１時間遠心分離することにより上
清を採取した。ＨｉＴｒａｐ Ｈｅｐａｒｉｎ５ｍｌ
〔ファルマシア社〕を５０ｍＭＴｒｉｓ−ＨＣｌ，ｐＨ
８．０で平衡化し、先に調製した菌体破砕上清をアプラ
イした。続いて５０ｍＭＴｒｉｓ−ＨＣｌ，ｐＨ８．０
で溶出液のＡ２６０がベースラインに戻るまで洗浄した
後、連続的にＮａＣｌ濃度勾配を３Ｍまで増加させるこ
とにより、蛋白を溶出した。組換えヒトＦＧＦ−１０に
相当する約１９ｋＤａの蛋白は約１．２Ｍ ＮａＣｌの
位置に溶出された。なお、流速は２ｍｌ／分で行った。

【００２３】（製剤例）本発明のＦＧＦ−１０製剤のう
ち、代表的なものである皮下投与用水溶／凍結乾燥製剤
は、以下のように製造することができる。 （１）精製組換えＦＧＦ−１０：１ｍｇに対し、グリシ
ン０．３４ｍｇ、マンニトール９ｍｇ、非イオン性界面
活性剤：ポリソルベート８０、０．２ｍｇを加え、燐酸
緩衝液１ｍｌ（ｐＨ７．４、５ｍＭ）に溶解させ、上記
溶液を凍結乾燥する。（２）１５０ｍＭ塩化ナトリウ
ム、０．０１％Ｔｗｅｅｎ８０を含有する１０ｍＭリン
酸緩衝液（ｐＨ７．０）でＦＧＦ−１０を５ｍｇ／ｍｌ
になるように調製し、ＦＧＦ−１０水溶液を得る。
（３）１５０ｍＭ塩化ナトリウム、０．０１％Ｔｗｅｅ
ｎ８０を含有する１０ｍＭリン酸緩衝液（ｐＨ７．０）
でＦＧＦ−１０を５ｍｇ／ｍｌになるように調製した。
続いて、マンニトールを１０ｍｇ／ｍｌになるように添
加し、ＦＧＦ−１０水溶液を得る。無菌的にバイアル充
填し、常法に従って凍結乾燥して、ＦＧＦ−１０凍結乾
燥製剤を得る。バイアル内に窒素を封入し、打栓する。

【００２４】（薬理試験）一群５匹の正常マウス〔Ｃ５
７ＢＬ／６Ｎ、雄性、５週齢：日本チャールスリバー
社〕を自由摂食させ、１および５ｍｇ／ｋｇのＦＧＦ−
１０を一日一回一週間投与した（腹腔内投与）。一群１
０匹の肥満型糖尿病ｏｂｅｓｅ（ｏｂ／ｏｂ）マウス
〔Ｃ５７ＢＬ／６Ｊ−Ｌｅｐ＜ｏｂ＞、雌性、６週齢：
日本チャールスリバー社、Ｊａｃｋｓｏｎ ｌａｂｏｒ
ａｔｏｒｙ〕を自由摂食させ、１および５ｍｇ／ｋｇの
ＦＧＦ−１０を一日一回二週間投与した（皮下投与）。
対照群（Ｎ＝１０）には生理食塩水を投与した。また、
一群５匹の正常マウス〔Ｃ５７ＢＬ／６Ｎ、雄性、５週
齢：日本チャールスリバー社〕を自由摂食させ、１およ
び５ｍｇ／ｋｇのＦＧＦ−１０を一日一回一週間投与し
た（腹腔内投与）。全ての群において最後の投与の５時
間後に腹部大動脈より採血し、血清を得た。血中ＧＯ
Ｔ、ＧＰＴ、ＡＬＰおよびＬＡＰ濃度は、それぞれ超微
量多目的生化学自動分析装置ＣＨＥＭ１〔ＧＯＴ、ＧＰ
Ｔ；ＵＶ法、ＡＬＰ；ｐ−ニトロフェノール法、ＬＡ
Ｐ；Ｌ−ロイシル−ｐ−ニトロアニリド法、バイエル
社〕を用いて測定した。

【００２５】ＦＧＦ−１０を用いて得られた結果を表１
〜表４に示す。スチューデントｔ検定により、ＦＧＦ−
１０投与群と対照群の肝マーカーの有意差を検定した。 表１：ｏｂ／ｏｂマウスのＧＯＴ、ＧＰＴ （Ｕ／ｌ：平均値±ＳＤ） ＧＯＴ ＧＰＴ 対照群 ２６０±４ ２７０±５ ＦＧＦ−１０（１ｍｇ／ｋｇ）投与群 １８０±８２ ２３３±１５７ ＦＧＦ−１０（５ｍｇ／ｋｇ）投与群 １３７±１１５ １５５±１４０ ＊＊：ｐ＜０．０１

【００２６】 表２：正常マウスのＧＯＴ、ＧＰＴ （Ｕ／ｌ：平均値±ＳＤ） ＧＯＴ ＧＰＴ 対照群 ４６±４ ２６±５ ＦＧＦ−１０（１ｍｇ／ｋｇ）投与群 ５３±３＊ ３０±６ ＦＧＦ−１０（５ｍｇ／ｋｇ）投与群 ４５±５ ２１±２ ＊：ｐ＜０．０５

【００２７】 表３：ｏｂ／ｏｂマウスのＡＬＰ、ＬＡＰ （Ｕ／ｌ：平均値±ＳＤ） ＡＬＰ ＬＡＰ 対照群 ２１９±２１ ８５±５ ＦＧＦ−１０（１ｍｇ／ｋｇ）投与群 １４１±２８ ７１±５ ＦＧＦ−１０（５ｍｇ／ｋｇ）投与群 １０６±３３＊＊ ６８±１３ ＊＊：ｐ＜０．０１

【００２８】 表４：正常マウスのＡＬＰ、ＬＡＰ （Ｕ／ｌ：平均値±ＳＤ） ＡＬＰ ＬＡＰ 対照群 １８０±２１ ４４±５ ＦＧＦ−１０（１ｍｇ／ｋｇ）投与群 １８０±１８ ４５±２ ＦＧＦ−１０（５ｍｇ／ｋｇ）投与群 １７２±１５ ４３±３ 表１〜表４に示すようにＦＧＦ−１０を投与されたマウ
ス群では、肝臓マーカーが有意に減少しており、肝細胞
を賦活再生する作用が期待される。

【００２９】配列番号：１ 配列の長さ：２０８ 配列の型：アミノ酸 トポロジー：直鎖状 配列の種類：ペプチド 起源 生物名：ヒト 配列 Met Trp Lys Trp Ile Leu Thr His Cys Ala Ser Ala Phe Pro His Leu 1 5 10 15 Pro Gly Cys Cys Cys Cys Cys Phe Leu Leu Leu Phe Leu Val Ser Ser 20 25 30 Val Pro Val Thr Cys Gln Ala Leu Gly Gln Asp Met Val Ser Pro Glu 35 40 45 Ala Thr Asn Ser Ser Ser Ser Ser Phe Ser Ser Pro Ser Ser Ala Gly 50 55 60 Arg His Val Arg Ser Tyr Asn His Leu Gln Gly Asp Val Arg Trp Arg 65 70 75 80 Lys Leu Phe Ser Phe Thr Lys Tyr Phe Leu Lys Ile Glu Lys Asn Gly 85 90 95 Lys Val Ser Gly Thr Lys Lys Glu Asn Cys Pro Tyr Ser Ile Leu Glu 100 105 110 Ile Thr Ser Val Glu Ile Gly Val Val Ala Val Lys Ala Ile Asn Ser 115 120 125 Asn Tyr Tyr Leu Ala Met Asn Lys Lys Gly Lys Leu Tyr Gly Ser Lys 130 135 140 Glu Phe Asn Asn Asp Cys Lys Leu Lys Glu Arg Ile Glu Glu Asn Gly 145 150 155 160 Tyr Asn Thr Tyr Ala Ser Phe Asn Trp Gln His Asn Gly Arg Gln Met 165 170 175 Tyr Val Ala Leu Asn Gly Lys Gly Ala Pro Arg Arg Gly Gln Lys Thr 180 185 190 Arg Arg Lys Asn Thr Ser Ala His Phe Leu Pro Met Val Val His Ser 195 200 205

【００３０】配列番号：２ 配列の長さ：６９０ｂｐ 配列の型：核酸 鎖の数：二本鎖 トポロジー：直鎖状 配列の種類：ｃＤＮＡ 起源 生物名：ヒト 配列 CTTCCAGTAT GTTCCTTCTG ATGAGACAAT TTCCAGTGCC GAGAGTTCCA GTACA ATG 58 TGG AAA TGG ATA CTG ACA CAT TGT GCC TCA GCC TTT CCC CAC CTG CCC 106 GGC TGC TGC TGC TGC TGC TTT TTG TTG CTG TTC TTG GTG TCT TCC GTC 154 CCT GTC ACC TGC CAA GCC CTT GGT CAG GAC ATG GTG TCA CCA GAG GCC 202 ACC AAC TCT TCT TCC TCC TCC TTC TCC TCT CCT TCC AGC GCG GGA AGG 250 CAT GTG CGG AGC TAC AAT CAC CTT CAA GGA GAT GTC CGC TGG AGA AAG 298 CTA TTC TCT TTC ACC AAG TAC TTT CTC AAG ATT GAG AAG AAC GGG AAG 346 GTC AGC GGG ACC AAG AAG GAG AAC TGC CCG TAC AGC ATC CTG GAG ATA 394 ACA TCA GTA GAA ATC GGA GTT GTT GCC GTC AAA GCC ATT AAC AGC AAC 442 TAT TAC TTA GCC ATG AAC AAG AAG GGG AAA CTC TAT GGC TCA AAA GAA 490 TTT AAC AAT GAC TGT AAG CTG AAG GAG AGG ATA GAG GAA AAT GGA TAC 538 AAT ACC TAT GCA TCA TTT AAC TGG CAG CAT AAT GGG AGG CAA ATG TAT 586 GTG GCA TTG AAT GGA AAA GGA GCT CCA AGG AGA GGA CAG AAA ACA CGA 634 AGG AAA AAC ACC TCT GCT CAC TTT CTT CCA ATG GTG GTA CAC TCA TAGAG 684 GAAGGC 690

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【手続補正書】

【提出日】平成１０年８月１８日

【手続補正１】

【補正対象書類名】明細書

【補正対象項目名】００２９

【補正方法】変更

【補正内容】

【００２９】

【配列表】 配列番号：１ 配列の長さ：２０８ 配列の型：アミノ酸 トポロジー：直鎖状 配列の種類：ペプチド 起源 生物名：ヒト 配列 Met Trp Lys Trp Ile Leu Thr His Cys Ala Ser Ala Phe Pro His Leu 1 5 10 15 Pro Gly Cys Cys Cys Cys Cys Phe Leu Leu Leu Phe Leu Val Ser Ser 20 25 30 Val Pro Val Thr Cys Gln Ala Leu Gly Gln Asp Met Val Ser Pro Glu 35 40 45 Ala Thr Asn Ser Ser Ser Ser Ser Phe Ser Ser Pro Ser Ser Ala Gly 50 55 60 Arg His Val Arg Ser Tyr Asn His Leu Gln Gly Asp Val Arg Trp Arg 65 70 75 80

【提出日】平成１０年８月１８日

【手続補正１】

【補正対象書類名】明細書

【補正対象項目名】００２９

【補正方法】変更

【補正内容】 Lys Leu Phe Ser Phe Thr Lys Tyr Phe Leu Lys Ile Glu Lys Asn Gly 85 90 95 Lys Val Ser Gly Thr Lys Lys Glu Asn Cys Pro Tyr Ser Ile Leu Glu 100 105 110 Ile Thr Ser Val Glu Ile Gly Val Val Ala Val Lys Ala Ile Asn Ser 115 120 125 Asn Tyr Tyr Leu Ala Met Asn Lys Lys Gly Lys Leu Tyr Gly Ser Lys 130 135 140 Glu Phe Asn Asn Asp Cys Lys Leu Lys Glu Arg Ile Glu Glu Asn Gly 145 150 155 160 Tyr Asn Thr Tyr Ala Ser Phe Asn Trp Gln His Asn Gly Arg Gln Met 165 170 175 Tyr Val Ala Leu Asn Gly Lys Gly Ala Pro Arg Arg Gly Gln Lys Thr 180 185 190 Arg Arg Lys Asn Thr Ser Ala His Phe Leu Pro Met Val Val His Ser 195 200 205

【提出日】平成１０年８月１８日

【手続補正２】

【補正対象書類名】明細書

【補正対象項目名】００３０

【補正方法】変更

【補正内容】

【００３０】配列番号：２ 配列の長さ：６９０ｂｐ 配列の型：核酸 鎖の数：二本鎖 トポロジー：直鎖状 配列の種類：ｃＤＮＡ 起源 生物名：ヒト 配列 CTTCCAGTAT GTTCCTTCTG ATGAGACAAT TTCCAGTGCC GAGAGTTCCA GTACA ATG 58 TGG AAA TGG ATA CTG ACA CAT TGT GCC TCA GCC TTT CCC CAC CTG CCC 106 GGC TGC TGC TGC TGC TGC TTT TTG TTG CTG TTC TTG GTG TCT TCC GTC 154 CCT GTC ACC TGC CAA GCC CTT GGT CAG GAC ATG GTG TCA CCA GAG GCC 202 ACC AAC TCT TCT TCC TCC TCC TTC TCC TCT CCT TCC AGC GCG GGA AGG 250

【提出日】平成１０年８月１８日

【手続補正２】

【補正対象書類名】明細書

【補正対象項目名】００３０

【補正方法】変更

【補正内容】 CAT GTG CGG AGC TAC AAT CAC CTT CAA GGA GAT GTC CGC TGG AGA AAG 298 CTA TTC TCT TTC ACC AAG TAC TTT CTC AAG ATT GAG AAG AAC GGG AAG 346 GTC AGC GGG ACC AAG AAG GAG AAC TGC CCG TAC AGC ATC CTG GAG ATA 394 ACA TCA GTA GAA ATC GGA GTT GTT GCC GTC AAA GCC ATT AAC AGC AAC 442 TAT TAC TTA GCC ATG AAC AAG AAG GGG AAA CTC TAT GGC TCA AAA GAA 490

【提出日】平成１０年８月１８日

【手続補正２】

【補正対象書類名】明細書

【補正対象項目名】００３０

【補正方法】変更

【補正内容】 TTT AAC AAT GAC TGT AAG CTG AAG GAG AGG ATA GAG GAA AAT GGA TAC 538 AAT ACC TAT GCA TCA TTT AAC TGG CAG CAT AAT GGG AGG CAA ATG TAT 586 GTG GCA TTG AAT GGA AAA GGA GCT CCA AGG AGA GGA CAG AAA ACA CGA 634 AGG AAA AAC ACC TCT GCT CAC TTT CTT CCA ATG GTG GTA CAC TCA TAGAG 684 GAAGGC 690

───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (51)Int.Cl.⁶ 識別記号 ＦＩ Ｃ１２Ｒ 1:19）

Claims (3)

【特許請求の範囲】
1. 【請求項１】線維芽細胞増殖因子１０（ＦＧＦ−１
   ０）、あるいはケラチノサイト増殖因子２（ＫＧＦ−
   ２）を有効成分として含有する肝細胞保護剤。
2. 【請求項２】配列番号：１のアミノ酸配列から成るポリ
   ペプチド、もしくはその付加、欠失、あるいは置換改変
   体である増殖因子を有効成分として含有する肝細胞保護
   剤。
3. 【請求項３】増殖因子が大腸菌宿主が産生する組換えタ
   ンパクである請求項１または２の肝細胞保護剤。