ES2274865T5 - Anticuerpos recombinantes para la interleuquina-1 beta humana. - Google Patents
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Abstract
Un anticuerpo para IL-1ß que tiene especificidad de enlazamiento con el antígeno por un epítopo antigénico de IL-1ß humana madura que incluye al asa que contiene a los residuos Gly 22, Pro 23, Tyr 24 y Glu 25 y que es capaz de inhibir el enlazamiento de IL-1ß a su receptor.
Description
Anticuerpos recombinantes para la
interleuquina-1 beta humana.
Esta invención se relaciona con anticuerpos para
la interleuquina I beta humana (IL-1\beta) y con
el uso de tales anticuerpos para el tratamiento de enfermedades y
desordenes mediados por IL-1.
La interleuquina 1 (IL-1) es una
actividad producida por células del sistema inmunológico que actúa
como mediador de la respuesta inflamatoria en fase aguda. La
producción excesiva o inapropiada de IL-1, en
particular de IL-1\beta, está asociada con la
patología de diferentes enfermedades y desordenes, tales como
septicemia, choque séptico o endotóxico, alergias, asma, pérdida de
masa ósea, isquemia, ataque súbito, artritis reumatoide y otros
desordenes inflamatorios. Se ha propuesto a los anticuerpos para
IL-1\beta para el uso en el tratamiento de
enfermedades y desordenes mediados por IL-1, ver,
por ejemplo, WO 95/01997 y la discusión en la introducción de la
misma.
Ahora hemos preparado anticuerpos mejorados para
IL-1\beta humana para ser utilizados en el
tratamiento de enfermedades y desordenes mediados por
IL-1.
La invención provee un anticuerpo para
IL-1\beta que tiene las propiedades solicitadas en
la reivindicación 1.
Por lo tanto la invención provee una molécula
para enlazamiento a IL-1\beta que comprende un
sitio de enlazamiento para el antígeno que contiene al menos un
dominio variable (V_{H}) en la cadena pesada de la inmunoglobulina
en secuencia a las regiones hipervariables CDR1, CDR2 y CDR3, dicha
CDR1 teniendo la secuencia de aminoácidos
Ser-Tyr-Trp-Ile-Gly,
dicha CDR2 teniendo la secuencia de aminoácidos
Ile-Ile-Tyr-Pro-Ser-Asp-Ser-Asp-Thr-Arg-Tyr-Ser-Pro-Ser-Phe-Gln-Gly,
y dicha CDR3 teniendo la secuencia de aminoácidos
Tyr-Thr-Asn-Trp-Asp-Ala-Phe-Asp-Ile,
y donde la molécula enlazante 1L-1\beta comprende
un sitio de enlace del antígeno que comprende la menos un dominio
variable de una cadena de inmunoglobulina liviana (V_{L}) en la
cual comprende en regiones hipervariables de secuencia CDR1', CDR2'
y CDR3' como se muestra en Seq. Id. No. 2, es decir, teniendo dicho
CDR1' la secuencia de aminoácidos
Ar-Ala-Ser-Gln-Ser-Val-Ser-Ser-Tyr-Leu-
Ala, teniendo dicho CRD2' la secuencia de aminoácidos
Asp-Ala-Ser-Asn-Arg-Ala-Thr,
y teniendo dicho CDR3' la secuencia de aminoácidos
Gln-Gln-Arg-SerAsn-Trp-Met-Phe-Pro.
La invención también provee una molécula para
enlazamiento a IL-1\beta que comprende tanto
dominios variables (V_{L}) de cadena pesada (V_{H}) como de
cadena liviana (V_{L}) en los cuales dicha molécula para
enlazamiento a IL-1\beta contiene al menos un
sitio de enlazamiento para el antígeno que comprende:
- a)
- un dominio variable en la cadena pesada de la inmunoglobulina (V_{H}) que contiene en secuencia a las regiones hipervariables CDR1, CDR2 y CDR3, dicha CDR1 teniendo la secuencia de aminoácidos Ser-Tyr-Trp-Ile-Gly, dicha CDR2 teniendo la secuencia de aminoácidos Ile-Ile-Tyr-Pro-Ser-Asp-Ser-Asp-Thr-Arg-Tyr-Ser-Pro-Ser-Phe-Gln-Gly, y dicha CDR3 teniendo la secuencia de aminoácidos Tyr-Thr-Asn-Trp-Asp-Ala-Phe-Asp-Ile, y
- b)
- un dominio variable en la cadena liviana de la inmunoglobulina (V_{L}) que contiene una región hipervariable CDR3' que tiene la secuencia de aminoácidos Gln-Gln-Arg-Ser-Asn-Trp-Met- Phe-Pro.
\vskip1.000000\baselineskip
A menos que se indique otra cosa, cualquier
cadena polipeptídica es descrita aquí como teniendo una cadena de
aminoácidos que arranca en el extremo N-terminal y
termina en el extremo C-terminal. Cuando el sitio
para el enlazamiento del antígeno contenga tanto a los dominios
V_{H} como V_{L}, estos se pueden ubicar sobre la misma
molécula de polipéptido o, preferiblemente, cada dominio puede estar
sobre una cadena diferente, el dominio de V_{H} siendo parte de
una cadena pesada de inmunoglobulina o de un fragmento de la misma,
y el de V_{L} siendo parte de una cadena liviana de
inmunoglobulina o de un fragmento de la misma.
Por "molécula para enlazamiento a
IL-1\beta" se quiere dar a entender cualquier
molécula capaz de enlazarse al antígeno para
IL-1\beta, ya sea sola o asociada con otras
moléculas. La reacción de enlazamiento se puede mostrar por medio
de métodos estándar (ensayos cualitativos) incluidos, por ejemplo,
un bioensayo para determinar la inhibición del enlazamiento de
IL-1\beta a su receptor o cualquier clase de
ensayos de enlazamiento, con referencia a una prueba de control
negativo en la cual se utiliza un anticuerpo de especificidad no
relacionada pero del mismo isotipo, por ejemplo, un anticuerpo
anti-CD25. Convenientemente, se puede mostrar el
enlazamiento de las moléculas para enlazamiento a
IL-1\beta de la invención a
IL-1\beta en un ensayo de enlazamiento
competitivo.
Los ejemplos de moléculas que se enlazan al
antígeno incluyen a anticuerpos como los producidos por las células
B o por hibridomas y anticuerpos humanos o quiméricos injertados a
CDR o a cualquier fragmento de los mismos, por ejemplo fragmentos
F(ab')_{2} y Fab, así como anticuerpos para el dominio
único de la cadena pesada.
Un anticuerpo de cadena sencilla consiste de los
dominios variables de las cadenas liviana y pesada de un anticuerpo
enlazado en forma covalente por medio de un enlazador peptídico que
usualmente consiste aproximadamente desde 10 hasta 30 aminoácidos,
preferiblemente desde 15 hasta 25 aminoácidos. Por lo tanto, tal
estructura no incluye la parte constante de las cadenas liviana y
pesada y se cree que el espaciador del péptido pequeño debe ser
menos antigénico que una parte completa constante. Por "anticuerpo
quimérico" se quiere dar a entender un anticuerpo en el cual las
regiones constantes de las cadenas liviana o pesada o de ambas son
de origen humano mientras que los dominios variables tanto de las
cadenas liviana como pesada son de origen no humano (por ejemplo
murino) o de origen humano pero derivados de un anticuerpo humano
diferente. Por "anticuerpo injertado a CDR" se quiere dar a
entender un anticuerpo en el cual las regiones hipervariables (las
CRD) se derivan a partir de un anticuerpo donante, tal como un
anticuerpo no humano (por ejemplo murino) o un anticuerpo humano
diferente, mientras que todas o sustancialmente todas las otras
partes de la inmunoglobulina como por ejemplo las regiones
constantes y las partes altamente conservadas de los dominios
variables, esto es, las regiones marco, se derivan de un anticuerpo
aceptor, por ejemplo un anticuerpo de origen humano. Un anticuerpo
injertado a una CDR puede contener sin embargo unos pocos
aminoácidos de la secuencia donante en las regiones marco, por
ejemplo en las partes de las regiones marco adyacentes a las
regiones hipervariables. Por "anticuerpo humano" se quiere dar
a entender un anticuerpo en el cual las regiones constante y
variable tanto de las cadenas liviana como pesada son todas de
origen humano, o sustancialmente idénticas a las secuencias de
origen humano, no necesariamente del mismo anticuerpo e incluyen
anticuerpo producidos por ratones en los cuales los genes de la
parte constante y variable de la inmunoglobulina murina han sido
reemplazados por sus contrapartes humanas, por ejemplo, como se
describe en términos generales en EP 0546073 B1, USP 5545806, USP
5569825, USP 5625126, USP 5633425, USP 5661016, USP 5770429, EP 0
438474 B1 y en EP 0 463151 B1.
Las moléculas de la invención particularmente
preferidas para enlazarse a IL-1\beta son los
anticuerpos humanos, especialmente el anticuerpo AAL 160 que se
describe aquí más adelante en los Ejemplos.
Por lo tanto, en los anticuerpos quiméricos
preferidos, los dominios variables tanto de las cadenas liviana
como pesada son de origen humano, por ejemplo aquellos del
anticuerpo AAL 160 que se muestran en la Seq. Id. No. 1 y en la
Seq. Id. No. 2. Los dominios de la región constante comprenden
también preferiblemente a los dominios apropiados de la región
constante humana, por ejemplo como se describe en "Secuencias de
Proteínas de Interés Inmunológico", Kabat E.A. y colaboradores,
Departamento de Salud y de Servicios Humanos, Servicio de Salud
Pública, Instituto Nacional de Salud.
Las regiones hipervariables se pueden asociar
con cualquier clase de regiones marco, aunque preferiblemente son
de origen humano. Las regiones marco apropiadas se describen en
Kabat E.A. y colaboradores, citado anteriormente. El marco
preferido de la cadena pesada es un marco humano de cadena pesada,
por ejemplo, aquel del anticuerpo AAL 160 que se muestra en la Seq.
Id. No. 1. Este consiste en la secuencia de las regiones FR1, FR2,
FR3 y FR4. En forma similar, la Seq. Id. No. 2 muestra al marco
preferido de la cadena liviana de AAL 160 que consiste, en
secuencia, de las regiones FR1', FR2', FR3' y FR4'.
Por lo tanto, la invención también provee una
molécula para enlazamiento a IL-1\beta que
contiene al menos un sitio para el enlazamiento del antígeno que
comprende ya sea a un primer dominio que tiene una secuencia de
aminoácidos sustancialmente idéntica a aquella mostrada en la Seq.
Id. No. 1 comenzando con un aminoácido en la posición 1 y
terminando con un aminoácido en la posición 118, o a un segundo
dominio como se describió anteriormente, y a un segundo dominio que
tiene una secuencia de aminoácidos sustancialmente idéntica a
aquella mostrada en la Seq. Id. No. 2, comenzando con un aminoácido
en la posición 1 y terminando con un aminoácido en la posición
107.
Los anticuerpos monoclonales surgidos contra una
proteína que se encuentra en forma natural en todos los humanos, se
desarrollan típicamente en un sistema no humano, por ejemplo, en
ratones. Como consecuencia directa de esto, un anticuerpo
xenogénico como el producido por un hibridoma, cuando se lo
administra a humanos, produce una respuesta inmunológica indeseable
que es predominante mediada por la parte constante de la
inmunoglobulina xenogénica. Esto limita claramente el uso de tales
anticuerpos ya que ellos no se pueden administrar durante un
período prolongado de tiempo. Por lo tanto, se prefiere
particularmente utilizar anticuerpos de cadena sencilla, un solo
dominio, quiméricos, injertados a la CDR o anticuerpos humanos
especialmente que no son idóneos para producir una respuesta
alogénica sustancial cuando se los administra a humanos.
En vista de lo anterior, una molécula preferida
para enlazamiento a IL-1\beta de la invención se
selecciona a partir de un anticuerpo
anti-IL-1\beta que comprende al
menos:
- a)
- una cadena pesada de una inmunoglobulina o fragmento de la misma que contiene (i) un dominio variable que comprende en secuencia a las regiones hipervariables CDR1, CDR2 y CDR3, y (ii) a la parte constante o fragmento de la misma de una cadena humana pesada; dicha CDR1 teniendo la secuencia de aminoácidos Ser-Tyr-Trp-Ile-Gly, dicha CDR2 teniendo la secuencia de aminoácidos Ile-Ile-Tyr-Pro-Ser-Asp-Ser-Asp-Thr-Arg-Tyr-Ser-Pro-Ser-Phe-Gln-Gly, y dicha CDR3 teniendo la secuencia de aminoácidos Tyr-Thr-Asn-Trp-Asp-Ala-Phe-Asp-Ile, y
- b)
- una cadena liviana de una inmunoglobulina o fragmento de la misma que contiene (i) un dominio variable que comprende a las región hipervariable y opcionalmente también a las regiones hipervariables CDR1', CDR2' y CDR3, y (ii) a la parte constante o fragmento de la misma de una cadena humana liviana, dicha CDR1' teniendo la secuencia de aminoácidos Arg-Ala-Ser-Gln-Ser-Val-Ser-Ser-Tyr-Leu-Ala, dicha CDR2' teniendo la secuencia de aminoácidos Asp-Ala-Ser-Asn-Arg-Ala-Thr, y dicha CDR3' teniendo la secuencia de aminoácidos Gln-Gln-Arg-Ser-Asn-Trp-Met-Phe-Pro.
\vskip1.000000\baselineskip
Alternativamente, se puede seleccionar una
molécula de la invención para enlazamiento a
IL-1\beta a partir de una molécula para
enlazamiento de cadena sencilla que contiene un sitio de
enlazamiento a un antígeno que comprende:
- a)
- un primer dominio que contiene en secuencia a las regiones hipervariables CDR1, CDR2 y CDR3, dichas regiones hipervariables teniendo las secuencias de aminoácidos como se muestra en la Seq. Id. No. 1,
- b)
- un segundo dominio que contiene a las regiones hipervariables CDR3', y opcionalmente CDR1' y CDR2', dichas regiones hipervariables teniendo las secuencias de aminoácidos como se muestra en la Seq. Id. No. 2, y
- c)
- un péptido enlazador que se une ya sea al extremo N-terminal del primer dominio y al extremo C-terminal del segundo dominio, o al extremo C-terminal del primer dominio y al extremo N-terminal del segundo dominio.
\vskip1.000000\baselineskip
Como es bien conocido, cambios menores en la
secuencia de aminoácidos tales como supresión, adición o sustitución
de uno, unos pocos o inclusive de varios aminoácidos pueden
conducir a una forma alélica de la proteína original que tiene
propiedades sustancialmente idénticas.
Por lo tanto, por medio del término
"equivalentes directos de los mismos" se quiere dar a entender
a cualquier molécula para enlazamiento a
IL-1\beta de dominio sencillo (molécula X).
- (i)
- en la cual las regiones hipervariables CDR1, CDR2 y CDR3 tomadas como un todo son al menos 80% homólogas, preferiblemente al menos 90% homólogas, más preferiblemente al menos 95% homólogas a las regiones hipervariables como se muestra en la Seq. Id No. 1 y,
- (ii)
- que es capaz de inhibir el enlazamiento de IL-1\beta a sus receptores sustancialmente hasta el mismo grado que una molécula de referencia que tiene regiones marco idénticas a aquellas de la molécula X pero que tie- nen las regiones hipervariables CDR1, CDR2 y CDR3 idénticas a aquellas mostradas en la Seq. Id. No. 1.
o cualquier molécula para enlazamiento a
IL-1\beta que tenga al menos dos dominios por
sitio de enlazamiento (molécula X).
\vskip1.000000\baselineskip
- (i)
- en la cual las regiones hipervariables CDR1, CDR2, CDR3 y CDR3' y opcionalmente CDR1' y CDR2' tomadas como un todo son al menos 80% homólogas, preferiblemente al menos 90% homólogas, más preferiblemente al menos 95% homólogas, a las regiones hipervariables como se muestra en las Seq. Id No. 1 y 2, y
- (ii)
- que es capaz de inhibir el enlazamiento de IL-1\beta a sus receptores sustancialmente hasta el mismo grado que una molécula de referencia que tiene regiones marco y partes constantes idénticas a la molécula X', pero que tienen las regiones hipervariables CDR1, CDR2, CDR3 y CDR3', y opcionalmente CDR1' y CDR2', idénticas a aquellas mostradas en las Seq. Id. No. 1 y 2.
\vskip1.000000\baselineskip
En la presente descripción las secuencias de
aminoácidos son al menos 80% homólogas entre sí si ellas tienen al
menos 80% de identidad en los residuos aminoácidos en una posición
similar cuando las secuencias están óptimamente alineadas, los
vacíos o las inserciones en la secuencia de aminoácidos estando
contados como residuos no idénticos.
La inhibición del enlazamiento de
IL-1\beta a su receptor puede ser convenientemente
analizada en diferentes ensayos que incluyen ensayos tales como los
descritos aquí más adelante en el texto. El receptor utilizado para
IL-1\beta es preferiblemente el receptor tipo 1
para IL-1\beta. Por medio del término "hasta el
mismo grado" se quiere dar a entender que las moléculas de
referencia y la equivalente exhiben, sobre una base estadística,
curvas de inhibición para el enlazamiento a
IL-1\beta esencialmente idénticas a las curvas de
inhibición para el enlazamiento a IL-1\beta en
uno de los ensayos mencionados anteriormente.
Por ejemplo, el ensayo utilizado pude ser un
ensayo de inhibición competitiva de enlazamiento de
IL-1\beta por medio de receptores
IL-1 solubles y de las moléculas para enlazamiento a
IL-1\beta de la invención.
Lo más preferiblemente, el anticuerpo para la
IL-1\beta humana comprende al menos:
- a)
- una cadena pesada que contiene un dominio variable que tiene una secuencia de aminoácidos sustancialmente idéntica a aquella mostrada en la Seq. Id. No. 1 comenzando con el aminoácido en la posición 1 y terminando con el aminoácido en la posición 118 y a la parte constante de una cadena humana pesada; y
- b)
- una cadena liviana que contiene un dominio variable que tiene una secuencia de aminoácidos sustancialmente idéntica a aquella mostrada en la Seq. Id. No. 2 comenzando con el aminoácido en la posición 1 y terminando con el aminoácido en la posición 107 y a la parte constante de una cadena liviana humana.
\vskip1.000000\baselineskip
La parte constante de una cadena pesada humana
puede ser del tipo \gamma_{1}, \gamma_{2}, \gamma_{3},
\gamma_{4}, \mu, \alpha_{1}, \alpha_{2}, \delta o
\varepsilon, preferiblemente de tipo \gamma, más
preferiblemente del tipo \gamma_{1}, mientras que la parte
constante de una cadena liviana humana puede ser del tipo \kappa
o \lambda (que incluye a los subtipos \lambda_{1},
\lambda_{2} y \lambda_{3}) pero es preferiblemente del tipo
\kappa. Las secuencias de aminoácidos de todas estas partes
constantes se presentan en Kabat y colaboradores, citado
anteriormente.
Una molécula de la invención para enlazamiento a
IL-1\beta puede ser producida por medio de
técnicas de ADN recombinante. En vista de esto, se deben construir
una o más moléculas de ADN que codifican a la molécula para
enlazamiento, colocarlas bajo secuencias apropiadas de control y
transferirlas a organismos huéspedes adecuados para expresión. En
una forma muy general, se proveen por lo tanto
- (i)
- moléculas de ADN que codifican a una molécula de la invención para enlazamiento a IL-1\beta de un solo dominio, a una molécula de la invención para enlazamiento a IL-1\beta de cadena sencilla, a una cadena liviana o pesada o a fragmentos de la misma de una molécula de la invención para enlazamiento a IL-1\beta y
- (ii)
- el uso de las moléculas de ADN de la invención para la producción de una molécula de la invención para el enlazamiento a IL-1\beta por medios recombinantes.
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El estado actual del arte es tal que un
trabajador entrenado en el arte es capaz de sintetizar las moléculas
de ADN de la invención por medio de la información provista aquí,
esto es, de las secuencias de aminoácidos de las regiones
hipervariables y de las secuencias de ADN codificadas por ellas. Un
método para construir un gen de dominio variable es descrito por
ejemplo en EPA 239 400 y puede ser resumido brevemente como sigue:
Se clona un gen que codifica a un dominio variable de una MAb de
cualquier especificidad. Se determinan los segmentos de ADN que
codifican a las regiones marco e hipervariable y se remueven los
segmentos de ADN que codifican a las regiones hipervariables para
que los segmentos de ADN que codifican a las regiones marco se
fusionen entre sí con sitios de restricción adecuados en las
uniones. Los sitios de restricción se pueden generar en las
posiciones apropiadas por medio de mutagénesis de la molécula de ADN
y de procedimientos estándar. Los casetes sintéticos bicatenarios
de la CDR se preparan por medio de la síntesis del ADN de acuerdo a
las secuencias dadas en la Seq. Id. No. 1 ó 2. Estas casetes se
suministran con extremos pegajosos para que se puedan ligar a las
uniones del marco.
Además, no es necesario tener acceso al ARNm a
partir de una línea celular productora de hibridoma con el
propósito de obtener una construcción de ADN que codifica a las
moléculas de la invención para el enlazamiento a
IL-1\beta. Así, la solicitud PCT WO 90/07861
provee instrucciones completas para la producción de una anticuerpo
por medio de técnicas de ADN recombinante dando únicamente
información escrita en cuanto a la secuencia de nucleótidos del
gen. El método comprende la síntesis de una cantidad de
oligonucleótidos, su amplificación por medio del método PCR, y su
empalme para producir la secuencia deseada de ADN.
Los vectores de expresión que contiene a un
promotor adecuado o a genes que codifiquen a las partes constantes
de la cadena pesada y de la cadena liviana se encuentran disponibles
al público. Por lo tanto, una vez que se prepara una molécula de
ADN de la invención, puede ser conveniente transferirla en un vector
apropiado de expresión. Las moléculas de ADN que codifican a los
anticuerpos de cadena sencilla se pueden preparar también por medio
de métodos estándar, por ejemplo, como se describe en WO
88/1649.
En vista de lo anterior, no es necesario un
depósito de hibridoma o de línea celular para cumplir con el
criterio de suficiencia en la descripción.
En una modalidad particular, la invención
incluye una primera y una segunda construcciones de ADN para la
producción de una molécula para enlazamiento a
IL-1\beta como se describe más adelante:
La primera construcción de ADN codifica a una
cadena pesada o fragmento de la misma y comprende:
- a)
- una primera parte que codifica a un dominio variable que contiene alternativamente a las regiones marco e hipervariable, estando dichas regiones hipervariables en la secuencia CDR1, CDR2 y CDR3 cuyas secuencias de aminoácidos se muestran en la Seq. Id. No. 1; esta primera parte comenzando con un codón que codifica al primer aminoácido del dominio variable y terminando con un codón que codifica al último aminoácido del dominio variable, y
- b)
- una segunda parte que codifica a una parte constante de cadena pesada o fragmento de la misma que inicia con un codón que codifica al primer aminoácido de la parte constante de la cadena pesada y termina con un codón que codifica al último aminoácido de la parte constante o fragmento de la misma, seguido por un codón de detención.
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Preferiblemente, esta primera parte codifica a
un dominio variable que tiene una secuencia de aminoácidos
sustancialmente idéntica a la secuencia de aminoácidos como la
mostrada en la Seq. Id. No. 1 comenzando con el aminoácido en la
posición 1 y terminando con el aminoácido en la posición 118. Más
preferiblemente la primera parte tiene la secuencia de nucleótidos
como la mostrada en la Seq. Id. No. 1 comenzando con el nucleótido
en la posición 1 y terminando con el nucleótido en la posición 354.
Preferiblemente también, la segunda parte codifica a la parte
constante de una cadena pesada humana, más preferiblemente la parte
constante de la cadena \gamma_{1} humana. Esta segunda parte
puede ser un fragmento de ADN de origen genómico (que contiene
intrones) o un fragmento de ADNc (sin intrones).
La segunda construcción de ADN codifica a una
cadena liviana o fragmento de la misma y comprende:
- a)
- una primera parte que codifica a un dominio variable que comprende alternativamente a las regiones marco e hipervariable; siendo dichas regiones hipervariables CDR3' y opcionalmente CDR1' y CDR2', cuyas secuencias de aminoácidos se muestran en la Seq. Id. No. 2; esta primera parte comenzando con un codón que codifica al primer aminoácido del dominio variable y terminando con un codón que codifica al último aminoácido del dominio variable, y
- b)
- una segunda parte que codifica a una parte constante de una cadena liviana o fragmento de la misma que comienza con un codón que codifica al primer aminoácido de la parte constante de la cadena liviana y termina con un codón que codifica al último aminoácido de la parte constante o fragmento de la misma seguido por un codón de detención.
\vskip1.000000\baselineskip
Preferiblemente, esta primera parte codifica a
un dominio variable que tiene una secuencia de aminoácidos
sustancialmente idéntica a la secuencia de aminoácidos como la
mostrada en la Seq. Id. No. 2 que comienza con el aminoácido en la
posición 1 y termina con el aminoácido en la posición 107. Más
preferiblemente, la primera parte tiene la secuencia de nucleótidos
como la mostrada en la Seq. Id. No. 2 que comienza con el
nucleótido en la posición 1 y termina con el nucleótido en la
posición 321. Preferiblemente también, la segunda parte codifica a
la parte constante de una cadena liviana humana, más preferiblemente
la parte constante de la cadena \kappa humana.
La descripción también incluye moléculas para el
enlazamiento a IL-1\beta en las cuales uno o más
de los residuos de CDR1, CDR2, CDR3, CDR1', CDR2' o CDR3' son
cambiados de los residuos mostrados en la Seq. Id. No. 1 y la Seq.
Id. No. 2; por ejemplo por mutación, por ejemplo la mutación
dirigida al sitio de las secuencias correspondientes de ADN. La
divulgación incluye a las secuencias del ADN que codifican a tales
moléculas cambiadas para enlazamiento a
IL-1\beta. En particular, la divulgación incluye
moléculas para el enlazamiento a IL-1\beta en las
cuales uno o más residuos de CDR1' o CDR2' han sido cambiados de los
residuos mostrados en la Seq. Id. No. 2.
En la primera y segunda construcciones de ADN,
la primera y segunda partes se pueden separar por medio de un
intrón, y, se puede localizar convenientemente un reforzador en el
intrón entre la primera y segunda partes. La presencia de tal
reforzador que se transcribe pero no se traduce, puede ayudar en una
transcripción eficiente. En modalidades particulares, la primera y
la segunda construcciones de ADN contienen al reforzador de un gen
de cadena liviana convenientemente de origen humano.
Cada una de las construcciones de ADN se coloca
bajo el control de secuencias apropiadas de control, en particular
bajo el control de un promotor adecuado. Se puede utilizar cualquier
tipo de promotor, con tal de que se adapte al organismo huésped en
el cual se transferirán las construcciones de ADN para expresión.
Sin embargo, si la expresión tiene lugar en una célula de mamífero,
se prefiere particularmente utilizar al promotor de un gen de
inmunoglobulina, o un promotor del citomegalovirus (CMV), por
ejemplo un promotor CMV humano.
El anticuerpo deseado puede ser producido en un
cultivo celular o en un animal transgénico. Un animal transgénico
adecuado pude ser obtenido de acuerdo a métodos estándar que
incluyen la microinyección en óvulos de la primera y segunda
construcciones de ADN colocadas bajo secuencias de control adecuadas
transfiriendo los óvulos así preparados en hembras pseudopreñadas
apropiadas y seleccionando a un descendiente que exprese al
anticuerpo deseado.
Cuando se producen las cadenas de anticuerpo en
un cultivo celular, las construcciones de ADN deben ser primero
insertadas ya sea dentro de un solo vector de expresión o dentro de
dos vectores de expresión compatibles pero separados, siendo esta
última posibilidad la preferida.
Por lo tanto, la invención también provee un
vector de expresión capaz de replicarse en una línea celular
procariota o eucariota que contiene al menos una de las
construcciones de ADN anteriormente descritas.
El vector de expresión que contiene una
construcción de ADN es transferido luego dentro del organismo
huésped adecuado. Cuando las construcciones de ADN se insertan
separadamente en dos vectores de expresión, ellos pueden ser
transferidos en forma separada, esto es, un tipo de vector por
célula, o transferidos en forma conjunta, siendo esta última
posibilidad la preferida. Un organismo huésped apropiado puede ser
una bacteria, una levadura o una línea celular de mamífero, siendo
esta última la preferida. Más preferiblemente, la línea celular de
mamífero es de origen linfoide, por ejemplo, un mieloma, hibridoma o
una célula B normal inmortalizada, que convenientemente no expresa
a ningún anticuerpo de cadena liviana o pesada.
Para la expresión en células de mamífero se
prefiere que la secuencia que codifica a la molécula para
enlazamiento a IL-1\beta se integre dentro del
ADN de la célula huésped dentro de un locus que permita o favorezca
una expresión de alto nivel de la molécula para enlazamiento a
IL-1\beta. Las células en las cuales la secuencia
que codifica a la molécula para enlazamiento a
IL-1\beta está integrada dentro de tales loci
favorables, pueden ser identificadas y seleccionadas con base en
los niveles de la molécula para enlazamiento a
IL-1\beta que ellas expresan. Cualquier marcador
seleccionable apropiado puede ser utilizado para la preparación de
las células huésped que contienen a la secuencia que codifica a la
molécula para enlazamiento a IL-1\beta; por
ejemplo, se puede utilizar un sistema de selección con el gen
dhfr/metotrexato o equivalente. Los sistemas preferidos para la
expresión de las moléculas de la invención para enlazamiento a
IL-1\beta incluyen sistemas de
amplificación/selección con base en GS, tales como aquellos
descritos en EP 0256055 B, ER 0323997 B y la publicación de patente
europea EP 0 338 841-B1. Preferiblemente, el vector
también puede contener otras secuencias según se desee para
facilitar la expresión, el procesamiento y la exportación de la
proteína expresada; por ejemplo, el vector puede contener
típicamente una secuencia líder asociada con la secuencia de
codificación.
En un aspecto adicional de la invención, se
suministra un proceso para el producto de una molécula para
enlazamiento a IL-1\beta que comprende (i)
cultivar un organismo que se transforma con un vector de expresión
como el que se definió anteriormente y (ii) recobrar la molécula
para enlazamiento a IL-1\beta a partir del
cultivo.
De acuerdo con la presente invención, se ha
encontrado que el anticuerpo AAL160 tiene especificidad de
enlazamiento por el epítopo antigénico de
IL-1\beta humana que incluye a los residuos
contenidos en el asa, Gly 22, Pro 23, Tyr 24 y Glu 25 de
IL-1\beta humana madura. (Los residuos, Gly 22,
Pro 23, Tyr 24 y Glu 25 de la IL-1\beta humana
madura, corresponden a los residuos 138, 139, 140 y 141
respectivamente del precursor de IL-1\beta
humana). Este epítopo parece estar por fuera del sitio de
reconocimiento del receptor de IL-1 y por lo tanto
es más sorprendente que los anticuerpos para este epítopo, por
ejemplo, el anticuerpo AAL160, sean capaces de inhibir el
enlazamiento de IL-1\beta a su receptor. Los
anticuerpos, en particular los anticuerpos quiméricos y los
injertados a CDR y especialmente los anticuerpos humanos, que tiene
especificidad de enlazamiento por el epítopo antigénico de
IL-1\beta humana madura que incluye a los
residuos que comprenden al asa, Gly 22, Pro 23, Tyr 24 y Glu 25 y
que son capaces de inhibir el enlazamiento de
IL-1\beta a su receptor; y se divulgan el uso de
tales anticuerpos para el tratamiento de las enfermedades y los
desórdenes mediados por IL-1.
Por lo tanto, en un aspecto adicional, la
invención incluye a un anticuerpo para IL-1\beta
que tiene especificidad de enlazamiento por el antígeno para un
epítopo antigénico de IL-1\beta humana que incluye
a los residuos contenidos en el asa Gly 22, Pro 23, Tyr 24 y Glu 25
de la IL-1\beta humana madura y que es capaz de
inhibir el enlazamiento de IL-1\beta a su
receptor.
En un aspecto aún adicional, la invención
incluye:
- i)
- el uso de un anticuerpo para IL-1\beta, que tiene especificidad de enlazamiento con el antígeno para un epítopo antigénico de IL-1\beta humana madura que incluye al asa que contiene los residuos Gly 22, Pro 23, Tyr 24 y Glu 25 y que es capaz de inhibir el enlazamiento de IL-1\beta a su receptor, para el tratamiento de una enfermedad o desorden mediado por IL-1;
- ii)
- un método para el tratamiento de un desorden o enfermedades mediadas por IL-1 en un paciente, que comprende administrar al paciente una cantidad efectiva de un anticuerpo para IL-1\beta, que tiene especificidad de enlazamiento con el antígeno para un epítopo antigénico de IL-1\beta humana madura que incluye al asa que contiene los residuos Gly 22, Pro 23, Tyr 24 y Glu 25 y que es capaz de inhibir el enlazamiento de IL-1\beta a su receptor;
- iii)
- una composición farmacéutica que contiene un anticuerpo para IL-1\beta, que tiene especificidad de enlazamiento con el antígeno para un epítopo antigénico de IL-1\beta humana madura que incluye al asa que contiene los residuos Gly 22, Pro 23, Tyr 24 y Glu 25 y que es capaz de inhibir el enlazamiento de IL-1\beta a su receptor, en combinación con un excipiente farmacéuticamente aceptable, diluyente o vehículo; y
- iv)
- el uso de un anticuerpo para IL-1\beta, que tiene especificidad de enlazamiento con el antígeno para un epítopo antigénico de IL-1\beta humana madura que incluye al asa que contiene los residuos Gly 22, Pro 23, Tyr 24 y Glu 25 y que es capaz de inhibir el enlazamiento de IL-1\beta a su receptor, para la preparación de un medicamento para el tratamiento de una enfermedad o desorden mediado por IL-1.
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Para los propósitos de la presente descripción,
un anticuerpo es "capaz de inhibir el enlazamiento de
IL-1\beta" si el anticuerpo es capaz de
inhibir el enlazamiento de IL-1\beta a su receptor
sustancialmente en la misma medida que el anticuerpo AAL160, en
donde "en la misma medida" tiene el significado que se definió
anteriormente.
En la presente descripción, la frase
"enfermedad mediada por IL-1" abarca a todas
las enfermedades y condiciones médicas en las cuales
IL-1 juega un papel, ya sea en forma directa o
indirecta, en la enfermedad o condición médica incluida la causa,
el desarrollo, progreso, persistencia o patología de la enfermedad o
condición.
En la presente descripción, los términos
"tratamiento" o "tratar" se refieren tanto al tratamiento
profiláctico como al preventivo así como al tratamiento curativo o
modificador de la enfermedad, incluido el tratamiento del paciente
con riesgo de contraer la enfermedad o de quien se sospecha que haya
contraído la enfermedad así como de pacientes que se encuentran
enfermos o hayan sido diagnosticados por sufrir de una enfermedad o
condición médica, e incluye la supresión de reincidencia
clínica.
Los anticuerpos que tienen especificidad de
enlazamiento por el epítopo antigénico de la
IL-1\beta humana madura que incluye al asa que
contiene los residuos Gly 22, Pro 23, Tyr 24 y Glu 25 y que son
capaces de inhibir el enlazamiento de IL-1\beta a
su receptor. Preferiblemente, los Anticuerpos de la Invención son
anticuerpos que tienen especificidad de enlazamiento por este
epítopo de IL-1\beta humana cuando la
IL-1\beta humana está por ejemplo bajo
condiciones fisiológicas normales nativas, no bajo condiciones
desnaturalizadas, por ejemplo no en presencia de una agente
desnaturalizante tal como SDS. Los Anticuerpos de la Invención
pueden reaccionar en forma cruzada con las
IL-1\beta no humanas, que tiene epítopos
antigénicos que incluyen Gly en el residuo 22, Pro en el residuo
23, Tyr en el residuo 24 y Glu en el residuo 25 y que son muy
similares al epítopo humano correspondiente. Por ejemplo, los
Anticuerpos de la Invención pueden reaccionar en forma cruzada con
las IL-1\beta de primate, tal como mono rhesus,
IL-1 de mono cinomólogo o IL-1 de
mono tití.
Convenientemente, los Anticuerpos de la
Invención son anticuerpos humanos, más preferiblemente el anticuerpo
AAL160 o un equivalente directo del mismo.
Los Anticuerpos de la Invención bloquean los
efectos de IL-1\beta sobre sus células objetivo y
por lo tanto son indicadas para ser utilizadas en el tratamiento de
enfermedades y desordenes mediados por IL-1. Estas
y otras actividades farmacológicas de los Anticuerpos de la
Invención pueden ser demostradas en métodos estándares de ensayo
por ejemplo como los descritos más adelante.
El potencial para neutralizar la señalización
celular que depende de IL-1\beta está determinado
en un ensayo para el gen reportero.
La línea celular G361 de melanoma humano se
transfecta en forma estable con una construcción del gen reportero
para la luciferasa con base en el promotor IL-8
humano. La expresión y la actividad del gen reportero dependen de
IL-1\beta o de TNF\alpha en esta línea celular.
Las células se estimulan con 300 pg/ml de
IL-1\beta humana recombinante o el equivalente de
100 pg/ml en un medio acondicionado en presencia de diferentes
concentraciones de Anticuerpo de la Invención o de antagonista el
receptor de IL-1 en rango entre 6 y 18.000 pM. El
anticuerpo quimérico Simulect® (basiliximab) es utilizado como
control isotipo que hace juego. La actividad de la luciferasa se
cuantifica en un ensayo de quimioluminiscencia. Los Anticuerpos de
la Invención tienen típicamente un IC_{50} aproximadamente de 1
nM (por ejemplo aproximadamente desde 0,2 hasta aproximadamente 5
nM) cuando se los prueba en este ensayo.
La producción de PGE_{2} y de
IL-6 en fibroblastos dérmicos humanos primarios
depende de IL-1\beta. TNF\alpha solo no puede
inducir en forma eficiente a estos mediadores inflamatorios, pero
sinergiza con IL-1. Los fibroblastos dérmicos
primarios son utilizados como un modelo sustituto para la activación
celular inducida por IL-1.
Los fibroblastos humanos primarios son
estimulados con IL-1\beta recombinante o con medio
acondicionado obtenido a partir de los PBMC humanos estimulados por
LPS en presencia de diferentes concentraciones de Anticuerpo de la
Invención o IL-1RA en el rango entre 6 y 18.000 pM.
El anticuerpo quimérico anti-CD25 Simulect®
(basiliximab) es utilizado como control isotipo que hace juego. El
sobrenadante es tomado después de 16 h de estimulación y analizado
por IL-6 por medio de ELISA o PGE2 por medio de RIA.
Los Anticuerpos de la Invención tienen típicamente los IC_{50}
para la inhibición de la producción de IL-6
aproximadamente de 1 nM o menor (por ejemplo, aproximadamente desde
0,1 hasta aproximadamente 1 nM) y para la inhibición de la
producción de PGE_{2} aproximadamente de 1 nM (por ejemplo,
aproximadamente desde 0,1 hasta aproximadamente 1 nM) cuando se los
analiza como anteriormente.
Como se indicó en los ensayos anteriores, los
Anticuerpos de la Invención bloquean en forma potente los efectos
de IL-1\beta. Por lo tanto, los Anticuerpos de la
Invención tienen utilidad farmacéutica como sigue:
Los Anticuerpos de la Invención son útiles para
la profilaxis y el tratamiento de las enfermedades o condiciones
médicas mediadas por IL-1, por ejemplo, las
condiciones inflamatorias, alergias y condiciones alérgicas,
reacciones de hipersensibilidad, enfermedades autoinmunes,
infecciones severas, y el rechazo de órganos o transplante de
tejidos.
Por ejemplo, los Anticuerpos de la Invención se
pueden utilizar para el tratamiento de receptores de trasplantes de
corazón, pulmón, corazón-pulmón combinados, hígado,
riñón, páncreas, piel o cornea, y para la prevención de la
enfermedad injerto versus huésped, tal como después del trasplante
de médula ósea.
Los Anticuerpos de la Invención son
particularmente útiles para el tratamiento, la prevención, o el
mejoramiento de las enfermedades autoinmunes y de las condiciones
inflamatorias, en particular las condiciones inflamatorias con una
etiología que incluye a un componente autoinmune tal como artritis
(por ejemplo artritis reumatoide progrediente y artritis
deformante) y enfermedades reumáticas, incluidas las condicione
inflamatorias y las enfermedades reumáticas que involucran perdida
de masa ósea, dolor inflamatorio, hipersensibilidad (incluidas
tanto la hipersensibilidad de las vías respiratorias como la
hipersensibilidad dérmica) y alergias. Las enfermedades autoinmunes
específicas para las cuales los Anticuerpos de la Invención pueden
ser empleados incluyen los desordenes hematológicos autoinmunes
(incluidos, por ejemplo, anemia hemolítica, anemia aplástica, anemia
eritrocítica pura y trombocitopenia idiopática), lupus eritematoso
sistémico, policondritis, esclerodoma, granulomatosis de Wegener,
dermatomiositis, hepatitis crónica activa, miastenia grave,
soriasis, síndrome de Steven-Johnson, psilosis
idiopática, enfermedad inflamatoria autoinmune del intestino
(incluida, por ejemplo, la colitis ulcerativa, la enfermedad de
Crohn y el Síndrome de Intestino Irritable), oftalmopatía endocrina,
enfermedad de Graves, sarcoidosis, esclerosis múltiple, cirrosis
biliar primaria, diabetes juvenil (diabetes miellitus tipo I),
uveítis (anterior y posterior), queratoconjuntivitis sicca y
queratoconjuntivitis primaveral, fibrosis pulmonar intersticial,
artritis soriática y glomerulonefritis (con y sin síndrome
nefrótico, por ejemplo incluido el síndrome nefrótico idiopático o
la nefropatía de cambio mínimo).
Los Anticuerpos de la Invención también son
útiles para el tratamiento, la prevención o el mejoramiento del
asma, la bronquitis, la pneumoconiosis, enfisema pulmonar, y otras
enfermedades inflamatorias u obstructivas de las vías
respiratorias.
Los Anticuerpos de la Invención son útiles para
tratar las reacciones inflamatorias hiperagudas y agudas indeseables
que son mediadas por IL-1 o involucran la
producción de IL-1, especialmente
IL-1\beta, o la promoción de la liberación de TNF
por medio de IL-1, por ejemplo infecciones agudas,
por ejemplo choque séptico (por ejemplo, choque endotóxico y
síndrome de angustia respiratoria en adultos), meningitis, neumonía;
y quemaduras severas; y para el tratamiento de caquexia o síndrome
de emaciación asociada con la liberación mórbida de TNF, consecuente
con infección, cáncer, o disfunción orgánica, especialmente SIDA,
caquexia relacionada, por ejemplo, asociada con o consecuencial con
infección por VIH.
Los Anticuerpos de la Invención son
particularmente útiles para tratar enfermedades del metabolismo óseo
incluidas la osteoartritis, osteoporosis y otras artritis
inflamatorias, y pérdida de masa ósea en general, incluida la
pérdida de masa ósea relacionada con la edad, y en particular la
enfermedad periodontal.
Los Anticuerpos de la Invención pueden ser
utilizados para el tratamiento de cánceres, en particular tumores
que dependen de IL-1.
Para estas indicaciones, la dosis apropiada
variará, desde luego, dependiendo, por ejemplo, del Anticuerpo
particular de la Invención que se empleará, del huésped, de la forma
de administración y de la naturaleza y severidad de la condición
que está siendo tratada. Sin embargo, en uso profiláctico, los
resultados satisfactorios son indicados generalmente para lograrse
con dosis diarias aproximadamente desde 0,1 mg hasta aproximadamente
5 mg por kilogramo de peso corporal. El Anticuerpo de la Invención
es convenientemente administrado en forma parenteral, intravenosa,
por ejemplo, dentro de la vena antecubital u otra vena periférica,
en forma intramuscular, o subcutánea. Un tratamiento profiláctico
típicamente comprende la administración de la molécula de la
invención desde una vez al día hasta una vez a la semana durante 2
a 4 semanas.
Las composiciones farmacéuticas de la invención
pueden ser fabricadas en forma convencional. Una composición de
acuerdo a la invención es preferiblemente proveída en forma
liofilizada. Para administración inmediata se la disuelve en un
excipiente acuoso adecuado, por ejemplo agua estéril para inyección
o suero fisiológico estéril amortiguado. Si se considera deseable
elaborar una solución de mayor volumen para administrarla por medio
de infusión, por ejemplo, infusión intravenosa, en vez de cómo una
inyección en bolo, por ejemplo, una inyección subcutánea en bolo,
es conveniente incorporar albúmina de suero humano o la sangre
heparinizada del propio paciente dentro del suero fisiológico al
mismo momento que la formulación. La presencia de un exceso de tal
proteína fisiológicamente inerte evita la pérdida de anticuerpo por
medio de la adsorción sobre las paredes del contenedor y del tubo
utilizado con la solución de la infusión. Si se utiliza albúmina,
una concentración adecuada está en el rango entre 0,5 a 4,5% en
peso de la solución salina.
La invención es descrita además a manera de
ilustración solamente en los siguientes Ejemplos que se refieren a
las Figuras acompañantes:
La Figura 1 que es un gráfico que muestra la
inhibición competitiva del enlazamiento de AAL160 a
IL-1\beta por medio de los receptores solubles
IL-1 tipo I y tipo II;
La Figura 2 que es un gráfico que muestra la
inhibición de la fiebre inducida por IL-1\beta en
un modelo de rata por medio de AAL160, y
La Figura 3 que es un gráfico que muestra la
duración de la acción de AAL160 en fiebre inducida por
IL-1\beta de rata.
\vskip1.000000\baselineskip
Se utilizan ratones transgénicos modificados por
ingeniería genética para expresar el repertorio de IgG/\kappa
humana en vez del repertorio de inmunoglobulina murina (Fishwild y
colaboradores, 1996, Nat. Biotechnol., 14,
845-851) para generar anticuerpos para la
IL-1\beta humana. Las células B de estos ratones
se inmortalizan por medio de tecnología estándar de hibridoma y se
obtienen las células de hibridoma murino que segregan al anticuerpo
AAL160 de IgG1/\kappa humana.
El ratón 66 modificado por medio de ingeniería
genética (Medarex Inc., Annadale, NJ) se inmuniza con
IL-1\beta humana recombinante (50 \mug) en
forma subcutánea en diferentes sitios en adyuvante. El ratón es
reforzado cinco veces más con la última inyección tres días antes
de la infusión. El día de la infusión, se sacrifica al ratón 66 por
medio de inhalación de CO_{2} y las células del bazo (4,1 x
10^{7}) se fusionan por medio de métodos de rutina utilizando PEG
4000 con un número igual de células PAI-O, una línea
celular de mieloma de ratón. Las células fusionadas se depositan en
624 pozos (1 ml/pozo) que contenían una capa alimentadora de
células peritoneales de ratón (ratones Balb C), en RPMI 1640
suplementado con HAT, \beta-mercaptoetanol 5 x
10^{-5} M en suero fetal de ternera al 10% inactivado por calor.
Se identificaron con 5 anticuerpos monoclonales de la subclase
IgG/\kappa. La clonación se realiza utilizando 4 placas de
microtitulación de 96 pozos, depositando 0,5 células por pozo.
Después de dos semanas, se inspeccionan los pozos con un microscopio
invertido. Se recolecta el sobrenadante de los pozos con
crecimiento positivo y se evalúa la producción de anticuerpos
monoclonales anti-IL-1\beta por
medio de ELISA. Se prepararon 1-2 L de sobrenadante
acondicionado a partir de cuatro subclones del hibridoma # 476
originalmente identificado, y se purifican los anticuerpos por
medio de cromatografía de afinidad sobre una columna de proteína
A.
Las cadenas liviana y pesada del anticuerpo
AAL160 purificado se separan por medio de SDS-PAGE y
se determinan los aminoácidos amino-terminales por
medio de la degradación de Edman. La pureza del anticuerpo utilizado
en estos estudios es \geq 90% por medio de secuenciación. Las
secuencias de ADNc que codifican para los dominios variables de
cadena pesada y liviana se obtienen por medio de amplificación por
PCR del ADNc obtenido a partir del ARNm de las células clonadas de
hibridoma y completamente secuenciadas. Las secuencias
amino-terminales de los dominios variables de
cadena liviana y pesada y las secuencias correspondientes de ADN se
presentan más abajo, en las cuales las CDR se muestran en
negrilla.
Las secuencias de ADN que codifican para los
dominios variables de cadena liviana y pesada y las correspondientes
secuencias de aminoácidos de AAL160 se presentan también en el
listado de secuencia acompañante como las Seq. Id. Nos. 1 a 4.
Las secuencias de codificación clonadas V_{L}
y V_{H} fueron amplificadas por medio de PCR e insertadas a
través de sitios de restricción apropiados dentro de vectores casete
que proveen al promotor de inmunoglobulina, las secuencias líder
del anticuerpo RFT2 (Heinrich y colaboradores (1989) J. Immunol.
143, 3589-97), parte de los segmentos J y un sitio
para empalme del donante. El casete de cadena liviana que contiene a
la región V_{L} entera, al promotor y a la secuencia líder para
secreción fue transferido dentro de un vector de expresión que
contiene al gen Ck humano, al reforzador de la cadena pesada de la
inmunoglobulina, y al ADNc modificado de dhfr murino para selección
por medio de metotrexato (MTX).
El casete de cadena pesada fue transferido por
lo tanto dentro de un vector de expresión que codifica al gen IgG1
humano, al reforzador de cadena pesada de la inmunoglobulina, y al
gen de resistencia a la neomicina para selección.
Tanto la cadena liviana como la pesada están en
una configuración en los vectores de expresión que se parecen a la
configuración genómica de los genes reordenados de la
inmunoglobulina que se piensa que son cruciales para la expresión
de alto nivel.
Para la producción del Anticuerpo, se
cotransfectaron los vectores anteriores dentro de una línea celular
apropiada de un huésped, por ejemplo la línea celular SP2/0, las
células que contienen a las secuencias del vector se seleccionan
por medio de la selección con metotrexato, y las líneas celulares
seleccionadas se cultivan para expresar al anticuerpo AAL160.
Alternativamente, se puede utilizar un sistema para
amplificación/selección con base en GS tal como aquel descrito en
EP 0256055 B, EP 0323997 B o la publicación de la patente europea
EP 0 338 841-B1, en cuyo caso el marcador
seleccionable dhfr es remplazado por una secuencia de codificación
de GS.
Se encontró que el anticuerpo monoclonal AAL160
neutraliza la actividad de interleuquina-1\beta
in vitro. El anticuerpo monoclonal se caracteriza además por
su enlazamiento a la IL-1\beta humana recombinante
a través del análisis Biacore. La forma de neutralización se evalúa
por medio de estudios competitivos de enlazamiento con receptores
IL-1 solubles. La actividad biológica del anticuerpo
AAL160 con la IL-1\beta recombinante producida en
forma natural se determina en las células primarias humanas
(Ejemplo 3), responsables de la estimulación por medio de la
IL-1\beta.
\vskip1.000000\baselineskip
La constante de velocidad de asociación y
disociación para el enlazamiento de la IL-1\beta
humana recombinante a AAL160 se determina por medio del análisis
BIAcore. AAL160 se inmoviliza, y se mide el enlazamiento de la
IL-1\beta recombinante en un rango de
concentración desde 0,5 hasta 12 nM por medio de resonancia en un
plasmón de superficie. El formato escogido permite tratar el evento
de enlazamiento de IL-1\beta a AAL160 de acuerdo
a una estequiometría 1:1. El análisis de datos se realiza utilizando
el software BIAevaluation.
\vskip1.000000\baselineskip
La competición entre AAL160 y los receptores
humanos solubles IL-1 tipo I y tipo II se mide por
medio de Biacore. AA160 se inmoviliza sobre la superficie del chip
y se inyecta IL-1\beta humano recombinante (8 nM)
para enlazamiento a AAL160 en ausencia o en presencia de
concentraciones crecientes de receptor I humano soluble recombinante
(0-10 nM) o de receptor II (0-80
nM). Los resultados obtenidos se muestran se muestran en la Figura
1. El enlazamiento de NVP AAL160 NX-1 a
IL-1\beta es competitivo tanto con el receptor
IL-1 tipo I como con el tipo II.
\vskip1.000000\baselineskip
El perfil de reactividad de AAL160 para
IL-1\alpha humana, IL-1RA humana,
e IL-1\beta murino, de rata, de conejo y de mono
cinomólogo, se determina por medio del análisis Biacore. AAL160 se
inmoviliza, y las citoquinas examinadas se aplican en una
concentración de 8 nM (o 20 nM en el caso de
IL-1\beta).
AAL160 no reacciona significativamente en forma
cruzada con IL-1\alpha humana,
IL-1Ra humana, IL-1\beta murina,
de rata o de conejo. La reactividad hacia
IL-1\beta de mono cinomólogo es virtualmente
idéntica a la de la citoquina humana.
\newpage
La producción de PGE_{2} y de
IL-6 en fibroblastos dérmicos humanos depende de
IL-1\beta. TNF-\alpha solo no
puede deducir eficientemente estos mediadores inflamatorios, pero
hace sinergia con IL-1. Los fibroblastos dérmicos
primarios se utilizan como un modelo sustituto para la activación
celular inducida por IL-1.
Los fibroblastos humanos primarios son
estimulados con IL-1\beta recombinante o con medio
acondicionado obtenido a partir de los PBMC humanos estimulados por
LPS en presencia de diferentes concentraciones de AAL160 o
IL-1RA en el rango entre 6 y 18.000 pM. El
anticuerpo quimérico anti-CD25 Simulect®
(basiliximab) es utilizado como control isotipo que hace juego. El
sobrenadante es tomado después de 16 h de estimulación y analizado
por IL-6 por medio de ELISA o PGE_{2} por medio de
RIA.
\vskip1.000000\baselineskip
Para la eficacia in vivo del anticuerpo
anti-hulL-1\beta, AA160 es probada
en un modelo de rata donde se induce fiebre por medio de una
inyección intravenosa de hulL-1\beta (100
ng/rata). El anticuerpo causa una inhibición relacionada con la
dosis de la respuesta febril en el rango de dosis 1, 3 y 10
\mug/kg intravenosa (n=6 ratas) - ver Figura 2. CHI621
(Simulect®, basiliximab) se utiliza como el anticuerpo de
control.
La duración de la acción de
AAL-160 se investigó en fiebre inducida por
IL-1\beta de rata como sigue: Se inyecta el
anticuerpo en forma intravenosa ya sea a las 24 horas o a los 30
minutos (protocolo estándar) antes de la inducción de fiebre por
medio de una inyección intravenosa de IL-1\beta
humana, y se midió la temperatura corporal 2 y 4 horas después. Se
observa un grado similar de inhibición de la respuesta febril en
ambos momentos (ver Figura 3). Como se esperaba, el anticuerpo de
control CHI 621 (Simulect®, basiliximab) es inefectivo en ambos
momentos. Este hallazgo indica que el anticuerpo humano AAL160 está
presente en una forma activa al menos durante 24 horas en la rata y
no es metabolizada, excretada o enlazada en los tejidos durante este
tiempo.
\vskip1.000000\baselineskip
Se recolectaron un conjunto de datos con
resolución de 2,0 \ring{A} de muy buena calidad (R_{sym} =
0,051, completitud = 99,9%, redundancia = 8,2) a partir de un
cristal de Fab que se desarrolló por medio de la difusión de vapor
en la técnica de gota suspendida, a un pH de 9,5 en PEG 200 al 50%,
CHES 0,1 M. El cristal era una agrupación espacial
P2_{1}2_{1}2_{1} con dimensiones de celda unitaria de a =
62,17\ring{A} b = 89,83\ring{A} c = 123,73\ring{A} y una
molécula de Fab por unidad de simetría (coeficiente de Matthews:
3,6 \ring{A}^{3}/Da, contenido estimado de solvente: 66%). Se
determinó la estructura por medio de reemplazo molecular y se la
refinó hasta un factor cristalográfico R final de 0,209 (factor R
libre = 0,261). El modelo final incluye los residuos
1-213 de la cadena liviana, 1-131 y
138-218 de la cadena pesada, 387 moléculas de agua y
1 molécula PEG. La densidad electrónica final está bien definida
para todos los residuos CDR excepto Trp 94 (CDR3) de la cadena
liviana. La posición de la cadena lateral de este residuo está mal
definida en las dos formas cristalinas que han sido examinadas
hasta la fecha, sugiriendo así que es altamente móvil en ausencia de
un antígeno enlazado.
Cristalización del complejo Fab con
IL-1\beta y del modelo experimental preliminar del
complejo: se obtuvieron unos pocos cristales de AAL160 Fab en
complejo con el antígeno IL-1\beta a partir de una
solución patrón de 76 mg/ml del complejo 1:1 en sulfato de amonio
2,0 M, Tris 0,1 M pH 8,5. Los cristales crecieron muy lentamente
durante un período de varias semanas. Ellos se difractaron
débilmente aproximadamente hasta 3,2\ring{A} sobre la fuente
inicial. Se recolectó un conjunto preliminar de datos y se intentó
el reemplazo molecular utilizando las estructuras de alta
resolución de Fab libre y de IL-1\beta humana
(J.P. Priestle y colaboradores, EMBO J. 7, 339 (1988)) como modelos
de partida. Los cálculos produjeron una solución muy clara y sin
ambigüedades cuando se utilizaron las partes Fv y Fc del Fab como
módulos separados (correlación 67,1%, factor R 0,354 después de la
etapa AMORE FITTING, utilizando datos entre 8,0 y 3,5\ring{A}). La
comparación posterior de las formas libre y enlazada del Fab mostró
que el ángulo acodado es muy diferente en las dos estructuras. Los
resultados de los cálculos de reemplazo molecular proporcionan un
primer modelo molecular de las interacciones entre el antígeno
IL-1\beta y el anticuerpo monoclonal AAL160. Un
análisis preliminar de estas interacciones indica que 1)
IL-1\beta hace interacciones estrechas con las
tres CDR de cadena pesada y con CDR3 de cadena liviana. En
contraste, pocas interacciones, si las hay, involucran a CDR1 y a
CDR2 de la cadena liviana. 2) El asa que contiene a los residuos
Gly 22, Pro 23, Tyr 24 y Glu 25 de IL-1\beta
madura se enlaza en el centro del sitio de combinación del antígeno
y por lo tanto parece ser un componente clave del epítopo.
Curiosamente, esta asa no está localizada en la región de la
molécula que difiere mucho de la IL-1\beta de
ratón. Pro 23, Tyr 24 y Glu 25 se conservan, pero el residuo 22 es
una Gly en la IL-1\beta humana y una Asp en la
IL-1\beta de ratón. La comparación de las
estructuras cristalinas de la IL-1\beta humana
(PDB entrada 2i 1b) y de ratón (PDB entrada 8ilb) muestra que esta
mutación puntual resulta en una conformación muy diferente de la
cadena principal alrededor de Pro 23. Esta diferencia local
estructural es consistente con la carencia observada de reactividad
cruzada de AAL160 con respecto a la citoquina de ratón.
<110> Novartis AG
\vskip0.400000\baselineskip
<120> ANTICUERPOS PARA
IL-1 BETA HUMANA
\vskip0.400000\baselineskip
<130> 4-31289A
\vskip0.400000\baselineskip
<160> 4
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<170> Patentin versión 3.0
\vskip0.400000\baselineskip
<210> 1
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<211> 354
\vskip0.400000\baselineskip
<212> ADN
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<213> Mus musculus
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<220>
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<221> CDS
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<222> (1)..(354)
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<400> 1
\hskip1cm
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<210> 2
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<211> 118
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<212> PRT
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<213> Mus musculus
\newpage
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<400> 2
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\hskip1cm
\vskip0.400000\baselineskip
<210> 3
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<211> 321
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<212> ADN
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<213> Mus musculus
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<220>
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<221> CDS
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<222> (1)..(321)
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<400> 3
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\hskip1cm
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<210> 4
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<211> 107
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<212> PRT
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<213> Mus musculus
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<400> 4
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<110> Novartis AG
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<120> ANTICUERPOS PARA
IL-1 BETA HUMANA
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<212> ADN
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Claims (8)
1. Un anticuerpo para
IL-1\beta que tiene especificidad de enlazamiento
con el antígeno por un epítopo antigénico de
IL-1\beta humana madura que incluye al asa que
contiene a los residuos Gly 22, Pro 23, Tyr 24 y Glu 25 y que es
capaz de inhibir el enlazamiento de IL-1\beta a su
receptor y donde la molécula para enlazamiento a
IL-1\beta comprende un sitio de enlazamiento para
el antígeno que contiene al menos un dominio variable (V_{H}) en
la cadena pesada de la inmunoglobulina en secuencia a las regiones
hipervariables CDR1, CDR2 y CDR3 como se observa en la Seq. Id. No.
1, esto es, dicha CDR1 teniendo la secuencia de aminoácidos Ser-
Tyr-Trp-Ile-Gly,
dicha CDR2 teniendo la secuencia de aminoácidos
Ile-Ile-Tyr-Pro-Ser-Asp-Ser-Asp-Thr-Arg-Tyr-Ser-Pro-Ser-Phe-Gln-Gly,
y dicha CDR3 teniendo la secuencia de aminoácidos
Tyr-Thr-Asn-Trp-Asp-Ala-Phe-Asp-Ile
y
donde la molécula enlazante de
IL-1\beta comprende un sitio de enlace del
antígeno que comprende al menos un dominio variable en la cadena
liviana de la inmunoglobulina (VL) que contiene en secuencia a las
regiones hipervariables CDR1', CDR2' y CDR3' como se muestra en la
Seq. Id. No. 2, esto es, dicha CDR1' teniendo la secuencia de
aminoácidos
Arg-Ala-Ser-Gln-Ser-Val-Ser-Ser-Tyr-Leu-Ala,
dicha CDR2' teniendo la secuencia de aminoácidos
Asp-Ala-Ser-Asn-Arg-Ala-Thr,
y dicha CDR3' teniendo la secuencia de aminoácidos
Gln-Gln-Arg-Ser-Asn-Trp-Met-Phe-Pro.
2. La molécula para enlazamiento a
IL-1\beta de acuerdo con la reivindicación 1 la
cual es un anticuerpo humano.
3. La molécula para enlazamiento a
IL-1\beta de acuerdo a cualquiera de las
reivindicaciones 1-2, para uso como un
medicamento.
4. El uso de una molécula para enlazamiento a
IL-1\beta de acuerdo a cualquiera de las
reivindicaciones 1-2 para la fabricación de un
medicamento para la prevención o el tratamiento de una enfermedad o
desorden mediado por IL-1 o desórdenes agudos o
reacciones inflamatorias hiperagudas, infecciones agudas, choque
séptico, choque endotóxico, síndrome de angustia respiratoria en
adultos, meningitis, neumonía; y quemaduras severas; cauqexia o
síndrome de desperdicio, cáncer, disfunción de órganos, caquexia
relacionada con el SIDA; o para la prevención o el tratamiento de
condiciones inflamatorias, alergias y condiciones alérgicas,
reacciones de hipersensibilidad, enfermedades autoinmunes,
infecciones severas, rechazo de órganos y trasplante de tejidos;
enfermedad autoinmune, artritis deformante, enfermedades reumáticas,
dolor inflamatorio, hipersensibilidad, hipersensibilidad de las
vías respiratorias, hipersensibilidad dérmica, alergias, desordenes
hematológicos, anemia hemolítica, anemia aplástica, anemia
eritrocítica pura y trombocitopenia idiopática, lupus eritematoso
sistémico, policondritis, esclerodoma, granulomatosis de Wegener,
dermatomiositis, hepatitis crónica activa, miastenia grave,
soriasis, síndrome de Steven-Johnson, psilosis
idiopática, enfermedad inflamatoria autoinmune del intestino,
colitis ulcerativa, enfermedad de Crohn, Síndrome de Intestino
Irritable, oftalmopatía endocrina, enfermedad de Graves,
sarcoidosis, esclerosis múltiple, cirrosis biliar primaria, diabetes
juvenil, diabetes mellitus tipo I, uveítis (anterior y posterior),
queratoconjuntivitis sicca, queratoconjuntivitis primaveral,
fibrosis pulmonar intersticial, artritis soriática y
glomerulonefritis, síndrome nefrótico idiopático, nefropatía de
cambio mínimo, asma, bronquitis, neumoconiosis, enfisema pulmonar, y
otras enfermedades inflamatorias u obstructivas de las vías
respiratorias, enfermedades del metabolismo óseo, osteoartritis,
osteoporosis y otras artritis inflamatorias, pérdida general de
masa ósea, pérdida de masa ósea relacionada con la edad, enfermedad
periodontal, cánceres, y tumores que dependen de
IL-1.
5. Una primera construcción de ADN que codifica
a una cadena pesada o fragmento de la misma que comprende
- (i)
- una primera parte que codifica un dominio variable que contiene alternativamente regiones marco e hipervariables, estando dichas regiones hipervariables en secuencia CDR1, CDR2 y CDR3 cuyas secuencias de aminoácidos se muestran en SEQ ID NO:1, comenzando esta primera parte con un codón que codifica al primer aminoácido del dominio variable y terminando con un codón que codifica al último aminoácido del dominio variable, y
- (ii)
- una segunda parte que codifica una parte constante de una cadena pesada que inicia con un codón que codifica al primer aminoácido de la parte constante de la cadena pesada y termina con un codón que codifica al último aminoácido de la parte constante, seguido por un codón de detención; y
\vskip1.000000\baselineskip
una segunda construcción de ADN que codifica una
cadena liviana que comprende
- (iii)
- una primera parte que codifica un dominio variable que contiene alternativamente regiones marco e hipervariables, siendo dichas regiones hipervariables CDR3' y opcionalmente CDR1' y CDR2', cuyas secuencias de aminoácidos se muestran en la figura 2; esta primera parte comenzando con un codón que codifica al primer aminoácido del dominio variable y terminando con un codón que codifica al último aminoácido del dominio variable, y
- (ii)
- una segunda parte que codifica una parte constante de cadena liviana que inicia con un codón que codifica al primer aminoácido de la parte constante de la cadena liviana y termina con un codón que codifica al último aminoácido de la parte constante, seguido por un codón de detención.
\vskip1.000000\baselineskip
6. Un vector de expresión capaz de replicarse en
una línea celular procariota o eucariota que comprende al menos una
construcción de ADN de acuerdo con la reivindicación 6.
7. Un proceso para la producción de una molécula
para enlazamiento a IL-1\beta que comprende
- a.
- cultivar un organismo que se transforma con un vector de expresión de acuerdo a la reivindicación 6; y
- b.
- recuperar del cultivo la molécula para enlazamiento a IL-1\beta.
\vskip1.000000\baselineskip
8. Una composición farmacéutica que contiene un
anticuerpo para IL-1\beta de acuerdo con la
reivindicación 1, en combinación con un excipiente, diluyente o
vehículo farmacéuticamente aceptables.
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| EP1851245B1 (en) * | 2005-01-26 | 2012-10-10 | Amgen Fremont Inc. | Antibodies against interleukin-1 beta |
| PE20061324A1 (es) * | 2005-04-29 | 2007-01-15 | Centocor Inc | Anticuerpos anti-il-6, composiciones, metodos y usos |
| PL2163562T3 (pl) * | 2005-06-21 | 2014-03-31 | Xoma Us Llc | Przeciwciała wiążące IL-1 beta i ich fragmenty |
| EP3332807B1 (en) * | 2005-10-26 | 2023-02-22 | Novartis AG | Use of anti il-1beta antibodies |
| PL1971366T3 (pl) * | 2005-12-29 | 2015-01-30 | Janssen Biotech Inc | Ludzkie przeciwciała skierowane przeciw IL-23, kompozycje, sposoby i zastosowanie |
| US7943328B1 (en) | 2006-03-03 | 2011-05-17 | Prometheus Laboratories Inc. | Method and system for assisting in diagnosing irritable bowel syndrome |
| KR20080109093A (ko) * | 2006-04-14 | 2008-12-16 | 노파르티스 아게 | 안과 장애 치료를 위한 ｉｌ－1 항체의 용도 |
| US20080085524A1 (en) * | 2006-08-15 | 2008-04-10 | Prometheus Laboratories Inc. | Methods for diagnosing irritable bowel syndrome |
| CN103405768A (zh) * | 2006-12-20 | 2013-11-27 | 爱克索马技术有限公司 | 用于治疗IL-1β相关疾病的方法 |
| WO2008082651A2 (en) * | 2006-12-29 | 2008-07-10 | Abbott Laboratories | Dual-specific il-1a/ il-1b antibodies |
| JP5337055B2 (ja) | 2007-02-28 | 2013-11-06 | メルク・シャープ・アンド・ドーム・コーポレーション | 免疫性障害の処置のための組合せ治療 |
| CA3080328C (en) * | 2007-05-29 | 2022-06-21 | Novartis Ag | New indications for anti-il-1-beta therapy |
| US8637029B2 (en) | 2007-12-20 | 2014-01-28 | Xoma Technology Ltd. | Methods for the treatment of gout |
| EP2293816B1 (en) * | 2008-06-06 | 2012-11-07 | XOMA Technology Ltd. | Methods for the treatment of rheumatoid arthritis |
| EP2341936A4 (en) | 2008-09-05 | 2012-07-25 | Xoma Technology Ltd | METHOD FOR TREATING OR PREVENTING IL-1ß-CONTAINED ILLNESSES |
| ES2622366T3 (es) | 2009-10-26 | 2017-07-06 | F. Hoffmann-La Roche Ag | Procedimiento para la producción de una inmunoglobulina glucosilada |
| SG2014014724A (en) * | 2010-05-07 | 2014-07-30 | Xoma Technology Ltd | METHODS FOR THE TREATMENT OF IL-1ß RELATED CONDITIONS |
| DE102010033565B4 (de) * | 2010-07-27 | 2012-06-21 | Tetec Tissue Engineering Technologies Ag | Marker zur Bestimmung von Chondrozyten |
| US9516868B2 (en) | 2010-08-02 | 2016-12-13 | Regeneron Pharmaceuticals, Inc. | Mice that make VL binding proteins |
| NZ607510A (en) * | 2010-09-10 | 2014-10-31 | Apexigen Inc | Anti-il-1 beta antibodies and methods of use |
| KR101387377B1 (ko) | 2011-02-25 | 2014-04-21 | 리제너론 파아마슈티컬스, 인크. | Ａｄａｍ６ 마우스 |
| PL3572517T3 (pl) | 2011-08-05 | 2021-10-04 | Regeneron Pharmaceuticals, Inc. | Myszy z humanizowanym uniwersalnym łańcuchem lekkim |
| DE102011083595A1 (de) | 2011-09-28 | 2013-03-28 | Bayer Pharma AG | Inhibition der Wirkung von Interleukin 1 beta zur Behandlung der Endometriose |
| CN104144946A (zh) | 2011-12-19 | 2014-11-12 | 爱克索马美国有限责任公司 | 治疗痤疮的方法 |
| RU2664181C2 (ru) | 2011-12-20 | 2018-08-15 | Регенерон Фармасьютикалз, Инк. | Мыши с гуманизированной легкой цепью |
| RS60583B1 (sr) | 2012-02-13 | 2020-08-31 | Agency Science Tech & Res | Ljudska monoklonalna antitela koja vrše neutralizaciju il-ss |
| NZ717848A (en) | 2012-06-12 | 2019-03-29 | Regeneron Pharma | Humanized non-human animals with restricted immunoglobulin heavy chain loci |
| BR112016021679A2 (pt) | 2014-03-21 | 2018-12-04 | Regeneron Pharmaceuticals, Inc. | proteína de ligação ao antígeno, métodos de produção de uma proteína de ligação ao antígeno e de identificação de uma ou mais proteínas de ligação ao antígeno, hibridoma, ácido nucleico, célula, e, animal não humano geneticamente modificado. |
| KR20210088756A (ko) | 2014-03-21 | 2021-07-14 | 리제너론 파마슈티칼스 인코포레이티드 | 단일 도메인 결합 단백질을 생산하는 비-인간 동물 |
| CN107438622A (zh) | 2015-03-19 | 2017-12-05 | 瑞泽恩制药公司 | 选择结合抗原的轻链可变区的非人动物 |
| CN110818793A (zh) * | 2018-08-14 | 2020-02-21 | 中山康方生物医药有限公司 | 抗IL-1β的抗体、其药物组合物及其用途 |
| CN113395979A (zh) | 2018-11-20 | 2021-09-14 | 詹森生物科技公司 | 用抗il-23特异性抗体治疗银屑病的安全且有效的方法 |
| AU2020279987A1 (en) | 2019-05-23 | 2021-11-18 | Janssen Biotech, Inc. | Method of treating inflammatory bowel disease with a combination therapy of antibodies to IL-23 and TNF alpha |
Family Cites Families (11)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US4772685A (en) | 1985-10-02 | 1988-09-20 | Merck & Co., Inc. | Immunogenic peptides of human interleukin-1 and the corresponding anti-peptide antibodies |
| US4935343A (en) * | 1986-08-08 | 1990-06-19 | Syntex (U.S.A.) Inc. | Monoclonal antibodies for interleukin-1β |
| FR2640146B1 (fr) * | 1988-12-08 | 1993-12-24 | Commissariat A Energie Atomique | Anticorps monoclonaux anti-interleukines 1(alpha) et 1(beta), leur procede de production et applications desdits anticorps a la detection des interleukines 1(alpha) et 1(beta) et en therapeutique |
| GB8928874D0 (en) | 1989-12-21 | 1990-02-28 | Celltech Ltd | Humanised antibodies |
| US5859205A (en) * | 1989-12-21 | 1999-01-12 | Celltech Limited | Humanised antibodies |
| GB9014932D0 (en) | 1990-07-05 | 1990-08-22 | Celltech Ltd | Recombinant dna product and method |
| JP3714683B2 (ja) * | 1992-07-30 | 2005-11-09 | 生化学工業株式会社 | 抗リウマチ剤 |
| US5429614A (en) | 1993-06-30 | 1995-07-04 | Baxter International Inc. | Drug delivery system |
| WO1995001997A1 (en) * | 1993-07-09 | 1995-01-19 | Smithkline Beecham Corporation | RECOMBINANT AND HUMANIZED IL-1β ANTIBODIES FOR TREATMENT OF IL-1 MEDIATED INFLAMMATORY DISORDERS IN MAN |
| US6051228A (en) | 1998-02-19 | 2000-04-18 | Bristol-Myers Squibb Co. | Antibodies against human CD40 |
| GB0001448D0 (en) * | 2000-01-21 | 2000-03-08 | Novartis Ag | Organic compounds |
-
2000
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