CZ20022531A3 - Rekombinantní protilátka k humánnímu interleukinu-l beta a farmaceutický přípravek obsahující tuto protilátku - Google Patents

Rekombinantní protilátka k humánnímu interleukinu-l beta a farmaceutický přípravek obsahující tuto protilátku Download PDF

Info

Publication number
CZ20022531A3
CZ20022531A3 CZ20022531A CZ20022531A CZ20022531A3 CZ 20022531 A3 CZ20022531 A3 CZ 20022531A3 CZ 20022531 A CZ20022531 A CZ 20022531A CZ 20022531 A CZ20022531 A CZ 20022531A CZ 20022531 A3 CZ20022531 A3 CZ 20022531A3
Authority
CZ
Czechia
Prior art keywords
amino acid
ser
antibody
tyr
human
Prior art date
Application number
CZ20022531A
Other languages
English (en)
Other versions
CZ302738B6 (cs
Inventor
Hermann Gram
Padova Franco E. Di
Original Assignee
Novartis Ag
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Family has litigation
First worldwide family litigation filed litigation Critical https://patents.darts-ip.com/?family=9884137&utm_source=google_patent&utm_medium=platform_link&utm_campaign=public_patent_search&patent=CZ20022531(A3) "Global patent litigation dataset” by Darts-ip is licensed under a Creative Commons Attribution 4.0 International License.
Application filed by Novartis Ag filed Critical Novartis Ag
Publication of CZ20022531A3 publication Critical patent/CZ20022531A3/cs
Publication of CZ302738B6 publication Critical patent/CZ302738B6/cs

Links

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
    • C07K16/18—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans
    • C07K16/24—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against cytokines, lymphokines or interferons
    • C07K16/244—Interleukins [IL]
    • C07K16/245—IL-1
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
    • C07K16/18—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans
    • C07K16/24—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against cytokines, lymphokines or interferons
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P11/00—Drugs for disorders of the respiratory system
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P11/00—Drugs for disorders of the respiratory system
    • A61P11/06—Antiasthmatics
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P13/00—Drugs for disorders of the urinary system
    • A61P13/12—Drugs for disorders of the urinary system of the kidneys
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P19/00—Drugs for skeletal disorders
    • A61P19/02—Drugs for skeletal disorders for joint disorders, e.g. arthritis, arthrosis
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P19/00—Drugs for skeletal disorders
    • A61P19/08—Drugs for skeletal disorders for bone diseases, e.g. rachitism, Paget's disease
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P25/00—Drugs for disorders of the nervous system
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P25/00—Drugs for disorders of the nervous system
    • A61P25/08—Antiepileptics; Anticonvulsants
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P27/00—Drugs for disorders of the senses
    • A61P27/02—Ophthalmic agents
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P29/00—Non-central analgesic, antipyretic or antiinflammatory agents, e.g. antirheumatic agents; Non-steroidal antiinflammatory drugs [NSAID]
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P3/00—Drugs for disorders of the metabolism
    • A61P3/08—Drugs for disorders of the metabolism for glucose homeostasis
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P3/00—Drugs for disorders of the metabolism
    • A61P3/08—Drugs for disorders of the metabolism for glucose homeostasis
    • A61P3/10—Drugs for disorders of the metabolism for glucose homeostasis for hyperglycaemia, e.g. antidiabetics
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P35/00—Antineoplastic agents
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P37/00—Drugs for immunological or allergic disorders
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P37/00—Drugs for immunological or allergic disorders
    • A61P37/02—Immunomodulators
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P37/00—Drugs for immunological or allergic disorders
    • A61P37/02—Immunomodulators
    • A61P37/06—Immunosuppressants, e.g. drugs for graft rejection
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P37/00—Drugs for immunological or allergic disorders
    • A61P37/08—Antiallergic agents
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P43/00—Drugs for specific purposes, not provided for in groups A61P1/00-A61P41/00
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P7/00—Drugs for disorders of the blood or the extracellular fluid
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P9/00—Drugs for disorders of the cardiovascular system
    • A61P9/10—Drugs for disorders of the cardiovascular system for treating ischaemic or atherosclerotic diseases, e.g. antianginal drugs, coronary vasodilators, drugs for myocardial infarction, retinopathy, cerebrovascula insufficiency, renal arteriosclerosis
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K2039/505—Medicinal preparations containing antigens or antibodies comprising antibodies
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/20—Immunoglobulins specific features characterized by taxonomic origin
    • C07K2317/24—Immunoglobulins specific features characterized by taxonomic origin containing regions, domains or residues from different species, e.g. chimeric, humanized or veneered
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/50—Immunoglobulins specific features characterized by immunoglobulin fragments
    • C07K2317/56—Immunoglobulins specific features characterized by immunoglobulin fragments variable (Fv) region, i.e. VH and/or VL
    • C07K2317/565—Complementarity determining region [CDR]

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • Immunology (AREA)
  • Diabetes (AREA)
  • Pulmonology (AREA)
  • Biophysics (AREA)
  • Rheumatology (AREA)
  • Hematology (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • Physical Education & Sports Medicine (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
  • Pain & Pain Management (AREA)
  • Emergency Medicine (AREA)
  • Biomedical Technology (AREA)
  • Neurology (AREA)
  • Neurosurgery (AREA)
  • Obesity (AREA)
  • Urology & Nephrology (AREA)
  • Orthopedic Medicine & Surgery (AREA)
  • Endocrinology (AREA)
  • Transplantation (AREA)
  • Ophthalmology & Optometry (AREA)
  • Vascular Medicine (AREA)
  • Cardiology (AREA)
  • Heart & Thoracic Surgery (AREA)

Description

Předkládaný vynález se týká protilátky proti humánnímu interleukinu I beta (IL-Ιβ) a použití této protilátky při léčení nemocí a poruch zprostředkovaných IL-1.
Dosavadní stav techniky
Interleukin 1 (IL-1) je aktivita produkovaná buňkami imunitního systému, která působí jako mediátor akutní fáze zánětlivé reakce. Nevhodná nebo nadměrná tvorba IL-1, zejména pak IL-Ιβ, je patologický stav vedoucí k různým nemocem a poruchám jako je např. septikémie, septický nebo endotoxický šok, alergie, astma, ztráta kostní hmoty, ischémie, infarkt, revmatoidní artritida a další zánětlivá onemocnění. Protilátky k IL-Ιβ již byly navrženy pro použití při léčení IL-1 zprostředkovaných nemocí a poruch, viz např. WO 95/01997 a diskuse v úvodu uvedeného dokumentu.
Původci předkládaného vynálezu připravili zlepšené protilátky k humánnímu IL-Ιβ pro použití při léčení IL-1 zprostředkovaných nemocí a poruch.
Podstata vynálezu
Předkládaný vynález poskytuje molekulu vázající IL-Ιβ, která obsahuje místo vázající antigen obsahující alespoň jednu variabilní doménu těžkého řetězce imunoglobulinu (VH), která v ·· · · ···· ·· ·· • · ·· · ···· • ····· · · ·· · · • ···· ··· • · · · · ·· · · · · · · · sekvenci obsahuje hypervariabilní úseky CDR1, CDR2 a CDR3, kde CDR1 má aminokyselinovou sekvenci Ser-Tyr-Trp-Ile-Gly, CDR2 má aminokyselinovou sekvenci Ile-Ile-TyrPro-Ser-Asp-Ser-AspThr-Arg-Tyr-Ser-Pro-Ser-Phe-Gln-Gly a CDR3 má aminokyselinovou sekvenci Tyr-Thr-Asn-Trp-Asp-Ala-Phe-Asp-Ile; a její přímé ekvivalenty.
První aspekt vynálezu poskytuje jednodoménovou molekulu vázající IL-Ιβ obsahující izolovaný těžký řetězec imunoglobulinu obsahující variabilní doména těžkého řetězce (VH) , který byla definována výše.
Druhý aspekt předkládaného vynálezu dále poskytuje molekula vázající IL-Ιβ obsahující variabilní domény jak těžkého řetězce (VH) tak lehkého řetězce (VL) , přičemž molekula vázající IL-Ιβ obsahuje alespoň jedno vazebné místo pro antigen obsahující:
a) variabilní doménu těžkého řetězce imunoglobulinu (VH) která v sekvenci obsahuje hypervariabilní úseky CDRl, CDR2 a CDR3, a sice CDRl mající aminokyselinovou sekvenci SerTyr-Trp-Ile-Gly, CDR2 mající aminokyselinovou sekvenci IleIle-TyrPro-Ser-Asp-Ser-Asp-Thr-Arg-Tyr-Ser-Pro-Ser-Phe-GlnGly a CDR3 mající aminokyselinovou sekvenci Tyr-Thr-AsnTrp-Asp-Ala-Phe-Asp-Ile, a
b) variabilní doménu lehkého řetězce imunoglobulin (VL) , která obsahuje hypervariabilní úsek CDR3' mající aminokyselinovou sekvenci Gln-Gln-Arg-Ser-Asn-Trp-Met-PhePro, a její přímé ekvivalenty.
V konkrétním provedení druhého aspektu vynález poskytuje molekulu vázající IL-Ιβ obsahující variabilní domény jak těžkého (VH) tak lehkého (VL) řetězce, kde molekula vázající •· ·· ··*· ·· a· • ·· · ···· ·«··· ·· · · · · • · · · · · ·
IL-Ιβ obsahuje alespoň jedno vazebné místo pro antigen obsahuj ící:
a) variabilní doménu těžkého řetězce imunoglobulinu (VH) , které v sekvenci obsahuje hypervariabilní úseky CDR1, CDR2 a CDR3, a sice CDR1 mající aminokyselinovou sekvenci Ser-TyrTrp-Ile-Gly, CDR2 mající aminokyselinovou sekvenci Ile-IleTyr-Pro-Ser-Asp-Ser-Asp-Thr-Arg-Tyr-Ser-Pro-Ser-Phe-Gln-Gly a CDR3 mající aminkyselinovou sekvenci Tyr-Thr-Asn-Trp-AspAla-Phe-Asp-Ile a
b) variabilní doménu lehkého řetězce imunoglobulinu (VL) , která obsahuje v sekvence hypervariabilní úseky CDR1', CDR2' a CDR3', a sice CDR1' mající aminokyselinovou sekvenci ArgAla-Ser-Gln-Ser-Val-Ser-Ser-Tyr-Leu Ala, CDR2' mající aminokyselinovou sekvenci Asp-Ala-Ser-Asn-Arg-Ala-Thr a CDR3' mající aminokyselinovou sekvenci Gln-Gln-Arg-Ser-AsnTrp-Met-Phe-Pro, a její přímé ekvivalenty.
Pokud není výslovně uvedeno jinak, každý polypeptidový řetězec je v tomto textu popsán jako sekvence začínající N-koncovým úsekem a končící C-koncovým úsekem.
Když vazebné místo pro antigen obsahuje obě VH a VL domény, tyto domény mohou být lokalizovány na stejné molekule polypeptidů, nebo výhodně každá doména může být na jiném řetězci, přičemž doména VH je částí těžkého řetězce imunoglobulinu nebo jeho fragmentu a VL je částí lehkého řetězce imunoglobulinu nebo jeho fragmentu.
Termín molekula vázající IL-ipa označuje v předkládaném popisu jakoukoliv molekulu schopnou vazby k antigenu IL-Ιβ, buďto samotnému nebo asociovanému s dalšími molekulami. Vazebná reakce může být prokázána pomocí standardních metod
(kvalitativních testů), jako je například biologický test (bioassay) pro stanovení inhibice vazby IL-Ιβ na jeho receptor nebo jakýkoliv jiný test vazby, vždy vzhledem k testu s negativní kontrolou, kdy se užije protilátka s nepříbuznou specificitou ale stejným isotypem, např. protilátka anti-CD25. Výhodně, vazba molekuly vázající IL-Ιβγ podle vynálezu k IL-Ιβ může být demonstrována užitím kompetitivního vazebného testu.
antigen jsou protilátky chimérické protilátky s nebo humánní protilátky
Příklady molekul vázajících tvořené B-lymfocyty, hybridomy, naroubovaným CDR (CDR-grafted) nebo jakékoliv jejich fragmenty, např. fragmenty F(ab')2 a Fab, a také jednořetězcové (single chain) protilátky nebo jednodoménové (single domain) protilátky.
Jednořetězcová protilátka sestává z variabilní domény těžkého a lehkého řetězce protilátky kovalentně spojených pomocí peptidové spojky (linker), kterou tvoří obvykle 10 až 30 aminokyselin, výhodně 15 až 25 aminokyselin. Tudíž taková struktura neobsahuje konstantní úseky těžkého a lehkého řetězce a věří se, že malý spojovací peptidový úsek by měl být méně antigenní než celý konstantní úsek protilátky.
Termín chimérická protilátka v popisu označuje protilátku, ve které konstantní úseky těžkého nebo lehkého řetězce nebo obou jsou humánního původu, zatímco variabilní domény jak těžkého tak lehkého řetězce jsou jiného než humánního původu (non-humánní), např. myšího, nebo jsou humánního původu, ale pocházejí z odlišné humánní protilátky.
Termín CDR-roubovaná protilátka označuje protilátku, ve které hypervariabilní úseky (CDR) pocházejí z donorové (dárcovské) protilátky, jako je například non-humánní (např. myší) protilátka nebo odlišná humánní protilátka, zatímco všechny nebo v podstatě všechny další části imunoglobulinu, ·· · ♦ ··· · např. konstantní úseky a vysoce konzervativní úseky variabilní domény, tj. úseky definující rámec protilátky („framework) , pocházejí z akceptorové (příjemcovské) protilátky, např. protilátky humánního původu. CDR-roubovaná protilátka může však obsahovat několik aminokyselin donorové sekvence v úseku rámce, například v úsecích rámce sousedících s hypervariabilními úseky.
Termín humánní protilátka označuje protilátku, ve které konstantní a variabilní úseky těžkého a lehkého řetězce jsou všechny humánního původu, nebo mají sekvence v podstatě identické se sekvencemi humánního původu, nikoliv nutně ze stejné protilátky, a patří sem i protilátky produkované v myších, ve kterých byly geny pro variabilní a konstantní části imunoglobulinu byly nahrazeny jejich humánními protějšky, např. jak bylo popsáno obecně v dokumentech EP 0546073 Bl, US Patent 5545806, US Patent 5569825, US Patent 5625126, US Patent 5633425, US Patent 5661016, US Patent 5770429, EP 0 438474 Bl a EP 0 463151 Bl.
Zvláště výhodné molekula vázající IL-ipy podle vynálezu jsou humánní protilátky, obzvláště protilátka AAL 160, která je dále popsána v příkladech.
Tedy ve výhodných chimérických protilátkách jsou variabilní domény jak těžkého tak i lehkého řetězce humánního původu, například takové, jaké jsou v protilátce AAL 160, a jsou v seznamu sekvencí uvedeny jako SEKVENCE ID. Č. 1 a SEKVENCE ID. Č. 2. Domény konstantního úseku výhodně také obsahují vhodné humánní domény konstantního úseku, například jak byly popsány v Sequences of Proteins of Immunological Interest, Kabat E.A. et al., US Department of Health and Human Services, Public Health Service, National Institute of Health.
• ·· «· ···· ·· «· ···· · · · · · · · • » · ··· ·· · • ····· ·· · · · · • · · · Λ ··· • · · ·· · · · · · ····
Hypervariabilní úseky mohou být asociovány s jakýmkoliv úseky rámce protilátky, avšak výhodně humánního původu. Vhodné úseky rámce protilátek byly popsány v Kabat E.A. et al., ibid. Výhodný rámec těžkého řetězce je humánní rámec těžkého řetězce, například protilátky AAL160, uvedený v seznamu sekvencí jako SEKVENCE ID. Č. 1. Tato sekvence sestává ze úseků FR1, FR2, FR3 a FR4. Podobně SEKVENCE ID. Č. 2 ukazuje výhodný rámec lehkého řetězce protilátky AAL160, jehož sekvence sestává z úseků FRl', FR2’, FR3' a FR4'.
Tudíž vynález také poskytuje Molekula vázající IL-Ιβ , která obsahuje alespoň jedno vazebné místo pro antigen obsahující buďto první doménu mající aminokyselinovou sekvenci v podstatě identickou se sekvencí uvedenou v seznamu sekvencí jako SEKVENCE ID. Č. 1 počínající aminokyselinou v poloze 1 a končící aminokyselinou v poloze 118, nebo první doménu popsanou výše a druhou doménu mající aminokyselinovou sekvenci v podstatě identickou se sekvencí uvedenou v seznamu sekvencí jako SEKVENCE ID. Č. 2, počínající aminokyselinou v poloze 1 a končící aminokyselinou v poloze 107.
Monoklonální protilátky namířené proti proteinům přirozeně se vyskytujícím u všech lidí jsou typicky produkovány v non-humánních systémech, např. v myši. Přímým důsledkem těchto skutečnosti je to, že xenogenní protilátka produkovaná pomocí hybridomu, když je podávána člověku, vyvolává nežádoucí imunitní reakci, která je především zprostředkovaná konstantní částí xenogenního imunoglobulinu. To jasně omezuje použití takových protilátek, jelikož nemohou být podávány po delší období. Tudíž je zvláště výhodné použití jednořetězcových, jednodoménových, chimérických, CDR-roubovaných nebo zejména humánních protilátek, které po podání člověku s velkou pravděpodobností nevyvolají významnou allogenní reakci.
S ohledem na skutečnosti výše uvedené, výhodnější molekula vázající IL-Ιβ podle předkládaného vynálezu je molekula vybraná ze skupiny humánních protilátek anti-IL-Ιβ, které obsahují alespoň
a) těžký řetězec imunoglobulinu nebo jeho fragment, který obsahuje (i) variabilní doména obsahující v sekvenci hypervariabilní úseky CDR1, CDR2 a CDR3 a (ii) konstantní úsek nebo jeho fragment z humánního těžkého řetězce, a to CDR1 mající aminokyselinovou sekvenci Ser-Tyr-Trp-Ile-Gly, CDR2 mající aminokyselinovou sekvenci Ile-Ile-TyrPro-SerAsp-Ser-Asp-Thr-Arg-Tyr-Ser-Pro-Ser-Phe-Gln-Gly a CDR3 mající aminokyselinovou sekvenci Tyr-Thr-Asn-Trp-Asp-AlaPhe-Asp-Ile, a
b) lehký řetězec imunoglobulinu nebo jeho fragment, který obsahuje (i) variabilní doménu obsahující hypervariabilní úsek CDR3' a volitelně také hypervariabilní úseky CDR1', CDR2' a (ii) konstantní úsek nebo jeho fragment z humánního lehkého řetězce, a to CDR1' mající aminokyselinovou sekvenci Arg-Ala-Ser-Gln-Ser-Val-Ser-Ser-Tyr-Leu-Ala, CDR2' mající aminokyselinovou sekvenci Asp-Ala-Ser-Asn-Arg-AlaThr a CDR3' mající aminokyselinovou sekvenci Gln-Gln-ArgSer-Asn-Trp-Met-Phe-Pro, a její přímé ekvivalenty.
Alternativně molekula vázající ΙΣ-Ιββ podle vynálezu je molekula vybraná ze skupiny jednořetězcových vázajících molekul, které obsahuje vazebné místo pro antigen obsahující • · · * · « · ·
a) první doménu obsahující v sekvenci hypervariabilní úseky CDR1, CDR2 a CDR3, přičemž tyto hypervariabilní úseky mají aminokyselinové sekvence uvedené v SEKVENCI ID. Č. 1,
b) druhou doménu obsahující hypervariabilní úsek CDR3' a volitelně také CDR1' a CDR2', přičemž tyto hypervariabilní úseky mají aminokyselinové sekvence uvedené v SEKVENCI ID. Č. . 2 a
c) peptidový linker, který je navázán buďto k N-konci první domény a k C-konci druhé domény, nebo k C-konci první domény k N-konci druhé domény, a její přímé ekvivalenty.
Jak je odborníkovi známo, malé změny v aminokyselinové sekvenci, jako je například delece (odstranění), adice (přidání) nebo substituce (nahrazení) jedné, několika málo nebo dokonce i více aminokyselin, mohou poskytnout alelickou formu původního proteinu, která má v podstatě identické vlastnosti.
Tudíž termín její přímý ekvivalent označuje v předkládaném popisu buďto jednodoménovou molekula vázající IL-Ιβ· (molekula X) (i) ve které hypervariabilní úseky CDR1, CDR2 a CDR3 jakožto celek jsou alespoň z 80 % homologní, výhodně alespoň z 90 % homologní, výhodněji alespoň z 95 % homologní s hypervariabilními úseky v SEKVENCI ID. Č. 1, a (ii) která je schopná inhibovat vazbu IL-Ιβ k jeho receptoru v podstatě ve stejném rozsahu jako referenční molekula mající úseky protilátkového rámce identické s odpovídajícími úseky molekuly X, ale mající
• ·· ·· ···· ·· ·· «··· ·« · ··· hypervariabilní úseky CDR1, CDR2 a CDR3 identické s odpovídajícími úseky SEKVENCE ID. Č. 1 nebo jakoukoliv molekula vázající IL-1(3 mající alespoň dvě domény na každé vazebné místo (molekula X') (i) ve které hypervariabilní úseky CDR1, CDR2, CDR3, CDR3' a volitelně také CDR1' a CDR2' jakožto celek, jsou alespoň z 80 % homologní, výhodně alespoň z 90 % homologní, výhodněji alespoň z 95 % homologní s hypervariabilními úseky SEKVENCE ID. Č. 1 a SEKVENCE ID. Č. 2, a (ii) která je schopná inhibovat vazbu IL-Ιβ k jeho receptoru v podstatě ve stejném rozsahu jako referenční molekula mající úseky protilátkového rámce a konstantní úseky identické s odpovídajícími úseky molekuly X', ale
mající hypervariabilní úseky CDR1, CDR2, CDR3 a CDR3',
a volitelně také CDR1' a CDR2', identické
s odpovídajícími úseky SEKVENCE ID. Č . 1 a SEKVENCE
ID. Č. 2.
kontextu předkládaného popisu vynálezu je
aminokyselinová sekvence alespoň z 80 % homologní s druhou sekvencí, jestliže tyto sekvence mají alespoň 80 % identických aminokyselinových zbytků ve stejné poloze, když jsou sekvence optimálně přiřazeny (srovnány), přičemž mezery nebo inzerce v aminokyselinové sekvenci jsou počítány za neidentické zbytky.
Inhibice vazby IL-Ιβ na receptor může být snadno testována pomocí různých testů jako jsou např. testy popsané dále v textu. Použitý IL-Ιβ receptor je výhodně receptor IL-Ιβ typu 1.
Výraz ve stejném rozsahu nebo ve stejné míře znamená v kontextu předkládaného popisu, že referenční a s ní
ekvivalentní molekula vykazují, statisticky vzato, v podstatě identickou funkční závislost inhibice IL-Ιβ vazby podle jednoho z testů zmíněných výše.
Například použitý test může být test kompetitivní inhibice vazby IL-Ιβ prováděný pomocí rozpustných IL-1 receptorů a IL-Ιβ vázajících molekul podle vynálezu.
Nejvýhodněji humánní IL-Ιβ protilátka obsahuje alespoň
a) jeden těžký řetězec, který obsahuje variabilní doménu mající aminokyselinovou sekvenci v podstatě identickou se SEKVENCÍ ID. Č. 1 počínající aminokyselinou v poloze 1 a končící aminokyselinou v poloze 118, a konstantní úsek humánního těžkého řetězce, a
b) jeden lehký řetězec, který obsahuje variabilní doménu mající aminokyselinovou sekvenci v podstatě identickou s SEKVENCÍ ID. Č. 2 počínající aminokyselinou v poloze 1 a končící aminokyselinou v poloze 107, a konstantní úsek humánního lehkého řetězce.
Konstantní úsek humánního těžkého řetězce může být typu
Yi, Y2z Y3 a γ4, μ, cti, α2, δ nebo ε, výhodně typu γ, a výhodněji typu γχ, zatímco konstantní úsek humánního lehkého řetězce může být typu κ nebo λ (který zahrnuje subtypy λχ, λ2, λ3) , ale výhodně je typu K. Aminokyselinové sekvence všech těchto konstantních úseků jsou uvedeny v publikaci Kabat et al., citované výše.
Molekula vázající IL-Ιβ podle vynálezu může být připravena metodami rekombinantní DNA. Pro tento účel musí být zkonstruována jedna nebo více DNA molekul kódujících vázající molekulu a umístěna s vhodnou kontrolní sekvencí a přenesena do vhodného hostitelského organismu, kde je pak exprimována.
«· · · ···· ·· · ·
V obecném smyslu tak vynález poskytuje:
(i) DNA molekuly kódující jednodoménovou molekulu vázající IL-Ιβ· podle vynálezu, jednořetězcovou molekulu vázající IL-Ιβ podle vynálezu, těžké nebo lehké řetězce nebo jejich fragmenty z molekuly vázající IL-Ιβ podle vynálezu, a (ii) použití DNA molekuly podle vynálezu k produkci IL-Ιβ vázajících molekul podle vynález pomocí rekombinantní technologie.
Dosavadní stav techniky je takový, že odborník je schopen snadno syntetizovat DNA molekuly podle předkládaného vynálezu na základě informací uvedených v tomto popisu, tj. aminokyselinových sekvencí hypervariabilních úseků a DNA sekvencí, které je kódují. Způsob konstrukce genu pro variabilní doménu byl například popsán v Evropské patentové přihlášce č. 239 400 a může být stručně shrnut následovně: Klonuje se gen kódující variabilní doménu MAb (monoklonální protilátky) s libovolnou specificitou. DNA segmenty kódující rámec protilátky a hypervariabilní úseky se určí a DNA segmenty kódující hypervariabilní úseky se odstraní, takže DNA segmenty kódující rámcové úseky jsou vzájemně spojeny pomocí vhodných restrikčních míst v místě spojení. Restrikční místa mohou být vytvořena ve vhodných polohách mutagenezí DNA molekul pomocí standardních postupů odborníkovi známých. Dvoj řetězcové syntetické CDR kazety jsou připraveny pomocí DNA syntézy podle sekvence uvedené jako SEKVENCE ID. Č. 1 nebo SEKVENCE ID. Č. 2. Tyto kazety jsou opatřeny (sticky) konci, takže mohou být ligovány (restrikčních míst) rámcových úseků.
lepivými do spojů
Navíc není potřeba mít přístup k mRNA z produkujícího hybridomové buněčné linie, aby bylo možné získat DNA konstrukt ···· ·· · · · · · ··· ··· ·· · • ····· · · · · · · • ··«· ··· «·· ·· ·· · ·· ···· kódující molekulu vázající IL-Ιβγ podle vynálezu. Tak např. PCT přihláška publikovaná jako WO 90/07861 poskytuje úplné instrukce pro produkci protilátky pomocí techniky rekombinantní DNA, přičemž výchozí informací je pouze nukleotidová sekvence genu. Popsaný způsob zahrnuje syntézu řady oligonukleotidů, jejich amplifikaci pomocí PCR (polymerázové řetězové reakce) a nakonec jejich sestřih a spojení (splicing), čímž vznikne požadovaná DNA sekvence.
Expresní vektory obsahující vhodný promotor nebo geny kódující konstantní úseky těžkého a lehkého řetězce jsou veřejně k dispozici. Tedy jakmile je jednou DNA molekula podle vynálezu připravena, může být snadno přenesena ve vhodném expresním vektoru. DNA molekuly kódující jednořetězcové protilátky mohou také být připraveny pomocí standardního postupu, například jak byl popsán v mezinárodní patentové přihlášce WO 88/1649.
Vzhledem k výše uvedenému není nutné ukládat ani hybridomy ani buněčné linie, aby byl splněn požadavek dostatečnosti popisu vynálezu.
V konkrétním provedení vynález obsahuje první a druhý DNA konstrukt pro produkci Molekula vázající IL-Ιβ, jak jsou popsány dále:
První DNA konstrukt kóduje těžký řetězec nebo jeho fragment a obsahuje
a) první část, která kóduje variabilní doménu obsahující střídavě rámec a hypervariabilní úseky, přičemž hypervariabilní úseky jsou CDRl, CDR2 a CDR3 s aminokyselinovou sekvencí uvedenou v seznamu sekvencí jako SEKVENCE ID. Č. 1, a tato první část začíná kodonem kódujícím první aminokyselinu variabilní domény a končí ♦ · ·· *·*· · · ·· • · ·· · · · · · kodonem kódujícím poslední aminokyselinu variabilní domény, a
b) druhou část kódující konstantní úsek těžkého řetězce nebo jeho fragment, který začíná kodonem kódujícím první aminokyselinu konstantní části těžkého řetězce a končí kodonem kódujícím poslední aminokyselinu konstantní části nebo jejího fragmentu, po kterém následuje stop kodon.
Výhodně, první část kóduje variabilní doménu mající aminokyselinovou sekvenci v podstatě identickou s aminokyselinovou sekvencí uvedenou v seznamu sekvencí jako SEKVENCE ID. Č. 1 počínající aminokyselinou v poloze 1 a končící aminokyselinou v poloze 118. Výhodněji první část má nukleotidovou sekvenci jako SEKVENCE ID. Č. 1 začínající nukleotidem v poloze 1 a končící nukleotidem v poloze 354. Výhodně druhá část kóduje konstantní část humánního těžkého řetězce, výhodněji konstantní část humánního řetězce γΐ. Tato druhá část může být DNA fragment genomového původu, (obsahující introny) nebo cDNA fragment (bez intronů).
Druhý DNA konstrukt kóduje lehký řetězec nebo jeho fragment a obsahuje
a) první část, která kóduje variabilní doménu obsahující střídavě úseky rámce a hypervariabilní úseky, přičemž hypervariabilní úseky jsou CDR3' a volitelně CDR1' a CDR2', jejichž aminokyselinové sekvence jsou v seznamu sekvencí uvedeny jako SEKVENCE ID. Č. 2, přičemž tato část začíná kodonem kódujícím první aminokyselinu variabilní domény a končí kodonem kódujícím poslední aminokyselinu variabilní domény, a
b) druhou část kódující konstantní část lehkého řetězce nebo její fragment, který začíná kodonem kódujícím první aminokyselinu konstantní části lehkého řetězce a končí • ·
kodonem kódujícím poslední aminokyselinu konstantní části nebo jejího fragmentu, po kterém následuje stop kodon.
Výhodně tato první část kóduje variabilní doménu mající aminokyselinovou sekvenci v podstatě identickou s aminokyselinovou sekvencí uvedenou v seznamu sekvencí jako SEKVENCE ID. Č. 2 začínající aminokyselinou v poloze 1 a končící aminokyselinou v poloze 107. Výhodněji, první část má nukleotidovou sekvenci uvedenou jako SEKVENCE ID. Č. 2 začínající nukleotidem v poloze 1 a končící nukleotidem v poloze 321. Výhodně druhá část kóduje konstantní část humánního lehkého řetězce, výhodněji konstantní část humánního řetězce k.
Vynález také zahrnuje molekulu vázající IL-Ιβ, ve kterých je jeden nebo více zbytků v CDRl, CDR2, CDR3, CDR1', CDR2' nebo CDR3' změněno proti zbytkům v SEKVENCI ID. Č. 1 a SEKVENCI ID. Č. 2, například mutací, např. místně cílenou mutagenezí příslušné DNA sekvence. Vynález také zahrnuje DNA sekvence kódující takto změněné molekuly vázající IL-Ιβ. Zejména vynález zahrnuje molekuly vázající IL-Ιβ, ve kterých jeden nebo více zbytků v CDRl' nebo CDR2' byly změněny proti zbytkům v SEKVENCI ID. Č. 2.
V prvním a druhém DNA konstruktu může být první a druhý část oddělena intronem, a v intronu mezi první a druhou částí může být výhodně lokalizován enhancer (zesilovací element). Přítomnost takového enhanceru, který je transkribován ale není translatován, může napomoci účinnosti transkripce. Ve zvláštním provedení první a druhý DNA konstrukt obsahují enhancer genu těžkého řetězce výhodně humánního původu.
Každý z DNA konstruktů je vložen pod kontrolu vhodných kontrolních sekvencí, zejména vhodného promotoru. Může být použit jakýkoliv typ promotoru, za předpokladu, že je ·* ··» · adaptován pro hostitelský organismus, do které budou DNA konstrukty přeneseny pro expresi. Avšak pokud má k expresi dojít v savčích buňkách, zvláště výhodné je použití promotoru imunoglobulinového genu, nebo promotoru cytomegaloviru (CMV), např. promotor humánního CMV.
Požadovaná protilátka může být produkována v buněčné kultuře nebo v transgenním zvířeti. Vhodné transgenní zvíře může být připraveno standardním způsobem, který je odborníkům znám, a který zahrnuje mikroinjekce prvního a druhého DNA konstruktu s vhodnými kontrolními sekvencemi do vajíčka a pak přenesení takto připraveného vajíčka do vhodné pseudopregnantní samice a nakonec selekci potomstva exprimujícího požadovanou protilátku.
Když jsou řetězce protilátky produkovány v buněčné kultuře, DNA konstrukty musí být nejdříve vloženy buďto do jednoho expresního vektoru nebo do dvou oddělených ale přitom kompatibilních expresních vektorů, což je považováno za výhodnější možnost.
Takže předkládaný vynález také poskytuje expresní vektor schopný replikace v prokaryotické nebo eukaryotické buněčné linii, která obsahuje alespoň jeden z DNA konstruktů výše popsaných.
Každý z expresních vektorů obsahujících DNA konstrukt je pak přenesen do vhodného hostitelského organizmu. Když jsou DNA konstrukty odděleně vloženy do dvou expresních vektorů, mohou být přeneseny odděleně, tj. jeden typ vektoru do jedné buňky, nebo mohou být přeneseny společně (ko-transfer), což je považováno za výhodnější možnost. Vhodným hostitelským organismem jsou baktérie, kvasinky nebo savčí buněčné linie, přičemž výhodná je tato třetí možnost. Výhodněji, savčí buněčná linie je lymfoidního původu, např. myelom, hybridom » *· **·*»« η» • · · · · · · c * · * • · · · · · *· * • ····· » · · * * » • ···· ··· ··· ·· ·· · ·· κ ·« · nebo normální imortalizované B-lymfocyty, které neexprimují endogenně žádné těžké ani lehké řetězce protilátky .
Pro expresi v savčích buňkách je výhodné, když sekvence kódující molekulu vázající IL-Ιβ je integrována do DNA hostitelské buňky do lokusu, který dovoluje nebo podporuje vysoký stupeň exprese IL-Ιβ vázajících molekul. Buňky, ve kterých je sekvence kódující molekulu vázající IL-Ιβ integrována do takového výhodného lokusu, mohou být identifikovány a selektovány na základě hladiny molekul vázajících IL-Ιβ, kterou exprimují. Jakýkoliv vhodný selekční markér může být použit pro přípravu hostitelských buněk obsahujících kódující sekvenci pro molekulu vázající IL-Ιβ, např. gen dhfr/metotrexat nebo ekvivalentní selekční systém. Výhodné systémy pro expresi molekuly vázající IL-Ιβ podle vynálezu jsou např. systémy založené na GS-amplifikaci/selekci, popsané v EP 0256055 B, EP 0323997 B a evropské patentové přihlášce 89303964.4. Výhodně vektor obsahuje i další sekvence než jen požadované, a sice pro usnadnění exprese, opracování a transport exprimovaného proteinu, např. vektor typicky obsahuje vedoucí (leader) sekvenci asociovanou s kódující sekvencí.
Další aspekt předkládaného vynálezu poskytuje způsob produkce IL-Ιβ vázajících molekul, kterýžto způsob zahrnuje kroky (i) kultivace organizmu, který je transformován expresním vektorem definovaným výše, a (ii) izolace molekuly vázající IL-Ιβ z kultury.
V souladu s předkládaným vynálezem bylo zjištěno, že protilátka AAL160 má vazebnou specificitu pro antigenní epitop humánního IL-Ιβ, který zahrnuje kličku obsahující zbytky Gly22, Pro23, Tyr24 a Glu25 ze zralého humánního IL-Ιβ (tyto zbytky Gly22, Pro23, Tyr24 a Glu25 ze zralého humánního IL-Ιβ <·* • *· ·»»« 49 Vtr
9 9 9 94 9 · * » · • ····· * 4 99 4 O • · · 9 · ««· • · · ·· ·Λ 9 9 9 94 U 4 odpovídají zbytkům 138, 139, 140 a 141, v uvedeném pořadí, prekurzoru humánního IL-Ιβ). Tento epitop je lokalizován vně rozpoznávacího místa receptoru IL-1 a je proto nanejvýš překvapující, že protilátky proti tomuto epitopu, tj. např. protilátka AAL160, jsou schopné inhibovat vazbu IL-Ιβ k receptoru. Protilátky, zejména chimérické protilátky a CDRroubované protilátky, a zejména humánní protilátky, které mají vazebnou specificitu pro antigenní epitop zralého humánního IL-Ιβ, který obsahuje kličku obsahující zbytky Gly22, Pro23, Tyr24 a Glu25, a které jsou schopné inhibovat vazbu IL-Ιβ na jeho receptor, a také použití těchto protilátek při léčení nemocí a poruch zprostředkovaných IL-1, jsou proto nové a spadají také do rozsahu předkládaného vynálezu.
Takže dalším aspektem předkládaného vynálezu je protilátka proti IL-Ιβ, která má antigenní vazebnou specificitu pro antigenní epitop humánního IL-Ιβ, který obsahuje kličku obsahující zbytky Gly22, Pro23, Tyr24 a Glu25 zralého humánního IL-Ιβ, a která je schopná inhibovat vazbu IL-Ιβ na jeho receptor.
Další aspekty předkládaného vynálezu se týkají:
i) použití protilátky proti IL-Ιβ, která má antigenní vazebnou specificitu pro antigenní epitop zralého humánního IL-Ιβ, který zahrnuje kličku obsahující zbytky Gly22, Pro23, Tyr24 a Glu25, a která je schopná inhibice vazby IL-Ιβ k jeho receptoru, při léčení IL-1 zprostředkovaných nemocí nebo poruch, ii) léčení IL-1 zprostředkovaných nemocí a poruch u pacientů, které spočívá v tom, že se pacientovi podává účinné množství protilátky proti IL-Ιβ, která má antigenní vazebnou specificitu pro antigenní epitop zralého humánního IL-Ιβ, který zahrnuje kličku obsahující zbytky ·· • · · 4 * • ·· ·· » r · ·· ···· • ··· · · · 4 · · · · ··· *· ** 4 • » ·· ·*· 4
Gly22, Pro23, Tyr24 a Glu25, vazby IL-Ιβ k jeho receptoru, která je schopná inhibice iii) farmaceutického přípravku, který obsahuje protilátku proti IL-Ιβ, která má antigenní vazebnou specificitu pro antigenní epitop zralého humánního IL-Ιβ, který zahrnuje kličku obsahující zbytky Gly22, Pro23, Tyr24 a Glu25, a která je schopná inhibice vazby IL-Ιβ k jeho receptoru, v kombinaci s farmaceuticky přijatelným excipientem, ředidlem nebo nosičem, a iv) použití protilátky proti IL-Ιβ, která má antigenní vazebnou specificitu pro antigenní epitop zralého humánního IL-Ιβ, který zahrnuje kličku obsahující zbytky Gly22, Pro23, Tyr24 a Glu25, a která je schopná inhibice vazby IL-Ιβ k jeho receptoru, pro výrobu léku k léčení IL-1 zprostředkovaných nemocí a poruch.
V kontextu předkládaného popisu výraz, že protilátka je schopná inhibovat vazbu IL-Ιβ znamená, že protilátka je schopná inhibovat vazbu IL-Ιβ k jeho receptoru v podstatě ve stejném rozsahu jako protilátka AAL160, přičemž výraz ve stejném rozsahu již byl definován výše.
V kontextu předkládaného popisu výraz IL-1 zprostředkovaná nemoc zahrnuje všechna onemocnění a zdravotní stavy, ve kterých hraje nějakou roli IL-1, ať již přímo nebo nepřímo při nemoci nebo stavu, včetně příčiny nemoci, rozvoji a progrese nemoci, persistence nebo patologie nemoci nebo stavu.
V kontextu předkládaného popisu se termíny léčení nebo léčit týkají jak profylaktické péče tak i kurativní péče nebo péče vedoucí k modifikaci onemocnění, včetně péče o
pacienty, kteří jsou v riziku získání nemoci nebo mají podezření, že nemoc získali, a také pacienty, kteří nemocí již trpí nebo byly diagnostikováni jako trpící nemocí, a dále se týkají i potlačení klinického relapsu.
Protilátky, které mají vazebnou specificitu pro antigenní epitop zralého humánního IL-Ιβ zahrnující kličku obsahující zbytky Gly22, Pro23, Tyr24 a Glu25, a které jsou schopné inhibice vazby IL-Ιβ k jeho receptoru jsou dále označovány jako protilátky podle vynálezu.
Výhodné protilátky podle vynálezu jsou protilátky, které mají vazebnou specificitu pro tento epitop humánního IL-Ιβ, když humánní IL-Ιβ je v nativním stavu, jako jsou např.
a nikoliv v denaturovaném přítomnosti denaturujících Protilátky podle vynálezu normální fyziologické podmínky, stavu, jako je tomu např. v činidel, jako je například SDS.
mohou zkříženě reagovat s non-humánními IL-Ιβ, které mají antigenní epitopy obsahující Gly jako zbytek v poloze 22, Pro jako zbytek v poloze 23, Tyr jako zbytek v poloze 24 a Glu jako zbytek v poloze 25, a které jsou blízce podobné odpovídajícímu humánnímu epitopu. Například protilátky podle vynálezu mohou zkříženě reagovat s IL-Ιβ primátů, jako jsou například makak rhesus, makak cynomolgus nebo marmoset.
Výhodné protilátky podle vynálezu jsou molekuly vázající IL-Ιβ podle prvního a druhého aspektu vynálezu. Výhodně jsou protilátky podle vynálezu humánní protilátky, nejvýhodněji je to protilátka AAL160 nebo její přímý ekvivalent.
Protilátky podle vynálezu blokují účinky IL-Ιβ na jeho cílové buňky a jsou tedy určeny pro použití při léčení IL-1 zprostředkovaných nemocí a poruch. Tyto a další farmakologické účinky protilátek podle vynálezu mohou být prokázány užitím standardních testovacích metod, např. uvedených dále:
• · · ·
1. Neutralizace aktivace promotoru IL-8 zprostředkované humánním IL-Ιβ
Potenciální neutralizace buněčné signalizace závislé na IL-Ιβ se může stanovit pomocí testu s reportérovým genem.
Humánní melanomová buněčná linie G361 je stabilně transfekována konstruktem založeným na humánním IL-8 promotoru s luciferázovým reportérovým genem. Exprese a aktivita reportérového genu je závislá v této buněčné linii na IL-Ιβ nebo TNFa. Buňky se stimulují 300pg/ml rekombinantního humánního IL-Ιβ nebo ekvivalentem 100 pg/ml v kondicionovaném médiu v přítomnosti různých koncentrací protilátky podle vynálezu nebo antagonisty IL-1 receptoru v rozmezí 6 až 18000 pM. Chimérická protilátka Simulect® (basiliximab) se užívá jako kontrola se shodným isotypem. Luciferázová aktivita se kvantifikuje užitím chemiluminescenčního testu. Protilátky podle vynálezu mají při testování v tomto testu typicky hodnotu IC50 přibližně InM (např. 0,2 až 5 nM)
2. Neutralizace IL-Ιβ dependentní tvorby PGE2 a interleukinu-6 v primárních humánních fibroblastech
Tvorba PGF2 a IL-6 v primárních humánních dermálních fibroblastech je závislá na IL-Ιβ. Samotný TNF-α nemůže účinně indukovat zánětové mediátory, ale působí synergicky s IL-1. Primární dermální fibroblasty se užívají jako náhradní model pro IL-l-indukovanou buněčnou aktivaci.
Primární humánní fibroblasty se stimulují rekombinantním IL-Ιβ nebo kondicionovaným médiem získaným z LPS-stimulovaných humánních PBMC v přítomnosti různých koncentrací protilátky podle vynálezu nebo IL-1RA v rozsahu 6 až 18000 pM. Chimérická protilátka Simulect® (basiliximab) se užívá jako kontrola se
shodným isotypem. Supernatant se odebírá po 16 hodinách stimulace a testuje se na přítomnost IL-6 testem ELISA nebo na přítomnost PGE2 testem RIA. Protilátky podle vynálezu mají při testování v těchto testech typicky hodnotu IC50 pro inhibici produkce IL-6 přibližně 1 nM nebo nižší (např. 0,1 až 1 nM) a pro inhibici produkce PGE2 přibližně lnM (např. 0,1 až 1 nM) .
Jak bylo ukázáno výše, protilátky podle vynálezu silně blokují účinek IL-Ιβ. Tudíž jsou protilátky podle vynálezu farmaceuticky využitelné, a sice následujícími způsoby:
Protilátky podle vynálezu jsou užitečné k profylaxi a léčení IL-1 zprostředkovaných nemocí a stavů, jako je např. zánět, alergie a alergický stav, hypersensitivní reakce, autoimunitní choroba, silná infekce a rejekce orgánového nebo tkáňového transplantátu.
Tak například protilátky podle vynálezu mohou být užity při léčení příjemců transplantátů srdce, plic, bloku srdceplíce, ledvin, slinivky, kůže nebo rohovky, a také při prevenci reakce příjemce proti dárcovskému štěpu (graftversus-host disease), např. po transplantaci kostní dřeně.
Protilátky podle vynálezu jsou konkrétně použitelné např. při léčení, prevenci nebo zmírnění autoimunitních onemocnění a zánětlivých onemocnění, zejména zánětlivých stavů s etiologií zahrnující autoimunitní složku, jako je například artritida (např. revmatoidní artritida, artritida chronica progrediente a artritida deformans), a revmatických onemocnění, včetně zánětlivých stavů a revmatických onemocnění zahrnujících ztrátu kostní hmoty, bolestivé záněty, a hypersenzitivity (včetně hypersenzitivity dýchacích cest i kožní hypersenzitivity) a alergií. Ke specifickým autoimunitních chorobám, pro které mohou být protilátky podle vynálezu • ·
použity, patří autoimunitní hematologické poruchy (včetně např. hemolytické anemie, aplastické anemie, anemie pouze červených krvinek a idiopatické trombocytopenie), systémový lupus erythematosus, polychondritida, skleroderma, Wegenerova granulomatóza, dermatomyositida, chronická aktivní hepatitida, myasthenia gravis, psoriáza, Steven-Johnsonův syndrom, idiopatická porucha vstřebávánní v tenkém střevu (sprue), autoimunitní zánětlivé onemocnění střev (včetně např. ulcerativní kolitidy, Crohnovy nemoci a syndromu dráždivého tračníku), endokrinní oftalmopatie, Gravesova nemoc, sarkoidóza, sclerosis multiplex, primární biliární cirhóza, juvenilní diabetes (diabetes mellitus typu I), uveitida (anterior a posterior), keratoconjunctivitis sicca a vernální keratokonjunktivitida, fibróza plicního interstitia, psoriatická artritida a glomerulonefritida (jak bez tak i s nefrotickým syndromem, např. včetně idiopatického nefrotického syndromu nebo nefropatie s minimálními změnami).
Protilátky podle vynálezu jsou také použitelné při léčení, prevenci nebo zmírnění nemocí jako je astma, bronchitida, pneumokonióza, emfyzém plic, a další obstruktivní nebo zánětlivá onemocnění dýchacích cest.
Protilátky podle vynálezu jsou použitelné také při léčení nežádoucí akutní a hyperakutní zánětlivé reakce, která je zprostředkovaná IL-1 nebo zahrnuje tvorbu IL-1, obzvláště IL-Ιβ, nebo podporou uvolňování TNF pomocí IL-1, např. jako je např. akutní infekce, např. septický šok (např. endotoxický šok a respirační distres syndrom dospělých), meningitida, pneumonie, těžké popáleniny, a dále při léčení kachexie nebo úbyťového syndromu spojeného s patologickým uvolňováním TNF v důsledku infekcí, karcinomu nebo orgánových dysfunkcí, obzvláště s AIDS související kachexie, např. asociované nebo následující po infekci HIV.
Protilátky podle vynálezu jsou dále zejména použitelné při léčení onemocnění metabolismu kostí, jako je např. osteoartritida, osteoporóza a další zánětlivé artritidy a ztráty kostní hmoty obecně, včetně ztráty kostní hmoty související se stárnutím, a při specifických onemocněních periodontu.
Protilátky podle vynálezu mohou být také použit při léčení karcinomů, zejména IL-1 dependentních nádorů.
Pro uvedené indikace bude vhodná dávka, samozřejmě, různá, a to v závislosti například na konkrétní použité protilátce podle vynálezu, příjemci, způsobu podávání, a povaze a závažnosti onemocnění, které se má léčit. Avšak při profylaktickém použití lze obecně uspokojivých výsledků dosáhnout s denními dávkami přibližně 0,1 mg až přibližně 5 mg na 1 kilogram tělesné hmotnosti. Protilátka podle vynálezu se obvykle podává parenterálně, intravenózně, např. do antekubitální nebo jiné periferní žíly, intramuskulárně, nebo subkutánně. Profylaktické léčení typicky spočívá v podávání molekul podle vynálezu jedenkrát denně až jedenkrát týdně po dobu 2 až 4 týdnů.
Farmaceutické přípravky podle předkládaného vynálezu jsou vyráběny obvyklými způsoby, které jsou odborníkům známy. Přípravek podle vynálezu je výhodné poskytnut v lyofilizované formě. Pro okamžité podání je rozpuštěn ve vhodném vodném nosiči, jako je například sterilní voda pro injekce nebo sterilní pufrovaný fyziologický roztok. Je vhodné připravit větší objem takového roztoku pro podávání infúzí, např. i.v. infúzí, namísto bolusové injekce, např. s.c. bolusové injekce. Při formulaci takového přípravku je výhodné do fyziologického roztoku přidat humánní sérový albumin nebo přímo pacientovu vlastní heparinizovanou krev. Přítomnost nadbytku fyziologicky inertního proteinu zabraňuje ztrátě protilátky v důsledku adsorpce na stěnách kontejneru a hadiček, které se užívají pro infúzní roztok. Pokud se užije albumin, pak vhodná koncentrace je 0,5 až 4,5 % (hmot.) vzhledem k fyziologickému roztoku.
Předkládaný vynález je dále popsán pomocí příkladů, jejichž funkce je ilustrativní, a které jsou doplněny následujícími obrázky.
Popis obrázků
Obrázek 1 je graf ukazující kompetitivní inhibici vazby AAL160 k IL-Ιβ pomocí rozpustného receptorů IL-1 typu 1 a typu II.
Obrázek 2 je graf ukazující inhibici horečky vyvolané IL-Ιβ podáním AAL160 na modelu laboratorního potkana.
Obrázek 3 je graf ukazující trvání účinku AAL160 na horečku vyvolanou IL-Ιβ na modelu laboratorního potkana.
Příklady provedení vynálezu
Transgenní myši exprimující humánní IgG/κ repertoár místo vlastního imunoglobulinového repertoáru (Fishwild et al., 1996, Nátuře Biotechnol., 14, 845-851) byly použity pro přípravu protilátky proti humánnímu IL-Ιβ. B lymfocyty z těchto myší byly imortalizovány užitím standardní hybridomové technologie a byly tak získány myší hybridomové buňky secernující humánní IgGl/κ protilátku označenou AAL160.
Příklad 1
Vytvoření hybridomu a purifikace protilátky
Geneticky modifikovaná myš 66 (Medarex lne. Annadale, NJ) byla imunizována rekombinantním humánním IL-Ιβ (50 pg) v adjuvans s.c. v několika místech. Imunitní reakce myši byla dále zesílena pěti dalšími injekcemi, poslední injekce tři dni před fúzí. V den fúze byla myš 66 utracena inhalací CO2 a buňky ze sleziny (4,1 x 107) byly fúzovány rutinním způsobem užitím PEG 4000 se stejným počtem buněk PAI-0 myší myelomové buněčné linie. Fúzované buňky byly přeneseny do 624 jamek (1 ml/jamka) obsahujících podpůrnou (feeder) vrstvu myších peritoneálních buněk (Balb C myši), v médiu RPMI 1640 s HAT, 10% tepelně inaktivovaným fetálním telecím sérem a 5 x 10’5 M β-merkaptoethanolem. Supernatanty byly odebírány a testovány pomocí ELISA testu a byl prováděn screening na IL-Ιβ reaktivní monoklonální protilátky. Pět monoklonálních protilátek podtřídy IgG/κ bylo identifikováno. Klonování bylo provedeno 4 x 96jamkové mikrotitrační destičky, do každé jamky bylo přeneseno 0,5 buněk. Po dvou týdnech byly jamky kontrolovány inverzním mikroskopem. Supernatanty byly odebrány z jamek s pozitivním růstem a produkce monoklonální protilátky anti-IL-Ιβ byla vyhodnocována pomocí ELISA. 1 až 2 litry kondicionovaného supernatantu ze čtyřech subklonů původně identifikovaného hybridomu #476 bylo připraveno a protilátky • · • · · · · · · * · · · * • ···· · · · • · · ·· ·· · ·· ···· byly purifikovány pomocí afinitní chromatografie na koloně s proteinem A.
Čistota a částečná aminokyselinová sekvence těžkého a lehkého řetězce
Aminokyselinové sekvencování
Lehké a těžké řetězce purifikované protilátky AAL160 byly odděleny pomocí SDS-PAGE a amino-koncové aminokyseliny byly stanoveny pomocí Edmanovy degradace. Čistota protilátky použité v této studii pomocí sekvencování byla >90%. cDNA sekvence kódující variabilní domény těžkého a lehkého řetězce byly získány pomocí PCR amplifikace z cDNA připravené z mRNA z klonovaných hybridomových buněk a úplného sekvencování. Aminokoncové sekvence variabilních domén těžkého a lehkého řetězce a odpovídající DNA sekvence jsou uvedeny dále, přičemž tučně jsou vyznačeny úseky CDR.
60
SEKVENCE ID. Č. 1
GAG GTG CAG CTG GTG CAG TCT GGA GCA GAG GTG AAA AAG CCC GGG GAG TCT CTG AAG ATC
Glu Val Gin Leu Val Gin Ser Gly Ala Glu 10 Val Lys Lys Pro Gly Glu Ser Leu Lys Ile 20
90 CDRl 120
TCC TGT AAG GGT TCT GGA TAC AGC TTT ACC AGC TAC TGG ATC GGC TGG GTG CGC CAG ATG
Ser Cys Lys Gly Ser Gly Tyr Ser Phe Thr Ser Tyr Trp Ile Gly Trp Val Arg Gin Met
30 40
150 CDR2 180
CCC GGG AAA GGC CTG GAG TGG ATG GGG ATC ATC TAT CCT AGT GAC TCT GAT ACC AGA TAC
Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Met Gly Ile Ile Tyr Pro Ser Asp Ser Asp Thr Arg Tyr
50 60
210 240
AGC CCG TCC TTC CAA GGC CAG GTC ACC ATC TCA GCC GAC AAG TCC ATC AGC ACC GCC TAC
Ser Pro Ser Phe Gin Gly Gin Val Thr Ile Ser Ala Asp Lys Ser Ile Ser Thr Ala Tyr
70 80
270 300
CTG CAG TGG AGC AGC CTG AAG GCC TCG GAC ACC GCC ATG TAT TAC TGT GCG AGA TAT ACC
Leu Gin Trp Ser Ser Leu Lys Ala Ser Asp Thr Ala Met Tyr Tyr Cys Ala Arg Tyr Thr
90 100
CDR3 330
AAC TGG GAT GCT TTT GAT ATC TGG GGC CAA GGG ACA ATG GTC ACC GTC TCT TCA
Asn Trp Asp Ala Phe Asp Ile Trp Gly Gin Gly Thr Met Val Thr Val Ser Ser
SEKVENCE ID. Č. 2
30 60
GAA ATT GTG TTG ACA CAG TCT CCA GCC ACC CTG TCT TTG TCT CCA GGG GAA AGA GCC ACC
Glu Ile Val Leu Thr Gin Ser Pro Ala Thr Leu Ser Leu Ser Pro Gly Glu Arg Ala Thr
10 20
CDRl 90 120
CTC TCC TGC AGO GCC AGT CAG AGT GTT AGC AGC TAC TTA GCC TGG TAC CAA CAG AAA CCT
Leu Ser Cys •Arg Ala Ser Gin Ser Val Ser Ser Tyr Leu Ala Trp Tyr Gin Gin Lys Pro
30 40
150 CDR2 180
GGC CAG GCT CCC AGG CTC CTC ATC TAT GAT OCX TCC AAC AGG GCC ACT GGC ATC CCA GCC
Gly Gin Ala Pro Arg Leu Leu Ile Tyr Asp Ala Ser Asn Arg Ala Thr Gly Ile Pro Ala 50 60 210 240 ' AGG TTC AGT GGC AGT GGG TCT GGG ACA GAC TTC ACT CTC ACC ATC AGC AGC CTT GAG CCT Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Glu Pro 70 80
270 CDR3 300
GAA GAT TTT GCA GTT TAT TAC TGT CAG CAO COT AOC AAC TOO ATO TTC CCT TTT GGC CAG Glu Asp Phe Ala Val Tyr Tyr Cys Oln Oln Arg Ser Asn Trp Met Phe Pro Phe Gly Gin 90 100
GGG ACC AAG CTG GAG ATC AAA Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys
DNA sekvence kódující variabilní domény těžkého a lehkého řetězce a odpovídající aminokyselinová sekvence AAL160 jsou také uvedeny v seznamu sekvencí jako SEKVENCE ID. Č. 1 až SEKVENCE ID. Č. 4.
Konstrukce expresních vektorů pro těžký a lehký řetězec
Klonované sekvence kódující VL a VH byly amplifikovány pomocí PCR a vloženy prostřednictvím vhodného restrikční místa na kazety vektorů obsahujících imunoglobulinový promotor, vedoucí sekvenci z RFT2 protilátky (Heinrich et al. (1989) J. Immunol. 143, 3589-97), část J-segmentů a sestřihové donorové místo. Kazeta lehkého řetězce obsahující celý VL úsek, promotor a vedoucí sekvenci pro sekreci byla přenesena do expresního vektoru obsahujícího humánní gen Ck, enhancer těžkého řetězce imunoglobulinu a modifikovanou myší dhfr cDNA pro selekci pomocí metotrexatu (MTX).
Kazeta těžkého řetězce byl přenesena do expresního vektoru kódujícího humánní gen IgGl, enhancer těžkého řetězce imunoglobulinu a gen rezistence k neomycinu pro selekci.
Jak těžký tak i lehký řetězec jsou v expresních vektorech v konfiguraci, která připomíná genomovou konfiguraci přeskupených („rearranged) imunoglobulinových genů, což je považováno za důležitý faktor pro vysoký stupeň exprese.
Pro produkci protilátky podle vynálezu byly výše popsané vektory kotransfekovány do vhodné hostitelské buněčné linie, např. buněčné linie SP2/0, buňky obsahující vektorové sekvence byly selektovány pomocí metotrexatové selekce a vyselektované buněčné linie byly kultivovány, aby exprimovaly protilátku AAL160. Alternativně může být použit amplifikační/selekční systém založený na GS, jaký byl například popsán v EP 0256055 B, EP 0323997 B nebo evropské patentové přihlášce 89303964.4, kdy je selekční markér dhfr nahrazen GS kódující sekvencí.
Příklad 2
Biochemická a biologická data
Bylo zjištěno, že monoklonální protilátka AAL160 neutralizuje in vitro aktivitu interleukinu-ΐβ. Monoklonální protilátka byla dále charakterizována její vazbou k rekombinantnímu humánnímu ILl-β analýzou Biacore. Způsob neutralizace byl hodnocen kompetitivní vazebnou studií s rozpustnými IL-1 receptory. Biologická aktivita protilátky AAL160 vůči rekombinantně připravenému a přirozeně tvořenému IL-Ιβ byla stanovena na primárních humánních buňkách (viz příklad 3), responzivních ke stimulaci pomocí IL-Ιβ.
» · » · • · ·
2.1 Stanovení disociační rovnovážné konstanty
Konstanty rychlosti asociace a disociace vazby rekombinantního humánního IL-Ιβ a AAL160 byly stanoveny analýzou BIAcore. AAL160 byla imobilizována a vazba rekombinantního IL-Ιβ v rozmezí koncentrací 0,5 až 12 nM byla měřena pomocí povrchové plazmonové rezonance. Vybraný formát analýzy umožnil zacházet s vazebnou událostí IL-Ιβ k AAL160 podle 1:1 stechiometrie. Analýza dat byla provedena pomocí softwaru „BIAevaluation.
Asociační rychl. konstanta (M_1 s'1) (n=15) (3,91 ± 0,14)x 105 Průměr ± stř. chyba průměru
Dosociační rychl. konstanta (M'1 s’1) (n=15) (1,53 ± 0,05)xl0'4 Průměr + stř. chyba průměru
Disociační rovnovážná konstanta KD (M) (n=15) (396,6 ± 19,5) x 10'lž Průměr ± stř. chyba průměru
AAL160 se váže k rekombinantnímu humánnímu IL-Ιβ s vysokou afinitou.
2.2. Kompetitivní inhibice vazby k rozpustným IL-1 receptorům
Studium kompetice vazby pomocí rozpustných receptor IL-1 typu I a II
Kompetice mezi AAL160 a rozpustným humánním receptorem IL-1 typu I a typu II byla měřena opět pomocí zařízení Biacore. AAL160 byla imobilizována na povrchu čipu a rekombinantní humánní IL-Ιβ (8nM) byl injikován, aby se vázal na AAL160 za absence nebo přítomnosti zvyšující se koncentrace rekombinantního humánního rozpustného receptoru I (O až 10 nM) nebo receptoru II (0 až 80 nM). Získané výsledky jsou ukázány na obrázku 1. Vazba NVP AAL160 NX-1 k IL-Ιβ je kompetitivní jak s receptorem IL-1 typ I tak i s receptorem typu II
2.3. Profil reaktivity s humánním IL-Ια, humánním IL-IRA a IL-Ιβ z některých druhů hlodavců a primátů
Profily reaktivity AAL160 s humánním IL-Ια, IL-IRA a ILΙβ z myši, laboratorního potkana, králíka a makaka „cynomolgus byly analyzovány opět pomocí zařízení Biacore. AAL160 byla imobilizována a zkoumané cytokiny byly užity v koncentraci 8 nM (nebo 20 nM v případ IL-Ιβ).
Procento celkově navázaného ± stř. chyba průměru
Humánní IL-Ιβ 100
Humánní IL-la 0,7 ± 0,7 (n=3)
Humánní IL-IRa 1,2 ± 1,2 (n=3)
Myší IL-Ιβ 2,8 ± 1,5 (n=3)
IL-Ιβ lab. potkana 3,0 ± 2,5 (n=3)
IL-Ιβ makaka „cynomolgus 96,4 ±6,8 (n=3)
Králičí IL-Ιβ 12,1 ± 2,3 (n=4)
AAL160 zkříženě významně nereaguje s humánním IL-Ιβ, humánním IL-IRa, nebo IL-Ιβ z myši, laboratorního potkana nebo králíka. Reaktivita vůči IL-Ιβ z makaka „cynomolgus je v podstatě shodná s humánním cytokinem.
• * ·
4« w* «·»· »· ··« »
Příklad 3
Neutralizace na IL-Ιβ závislé produkce PGE2 a interleukinu-6 v primárních humánních fibroblastech
Produkce PGE2 a IL-6 v primárních humánních dermálních fibroblastech je závislá na IL-Ιβ. Samotný TNF-α nemůže účinně indukovat zánětové mediátory, ale působí synergicky s IL-1. Primární dermální fibroblasty se užívají jako náhradní model pro IL-l-indukovanou buněčnou aktivaci.
Primární humánní fibroblasty se stimulují rekombinantním IL-Ιβ nebo kondicionovaným médiem získaným z LPS-stimulovaných humánních PBMC v přítomnosti různých koncentrací protilátky podle vynálezu nebo IL-1RA v rozsahu 6 až 18000 pM. Chimérická anti-CD25 protilátka Simulect® (basiliximab) se užívá jako kontrola se shodným isotypem. Supernatant se odebírá po 16 hodinách stimulace a testuje se na přítomnost IL-6 testem ELISA nebo na přítomnost PGE2 testem RIA.
AAL160 IC50 + stř. chyba (n > 3) IL-1 Ra IC50 ± stř. chyba (n > 3)
Sekrece IL-6 rekombínantní 0,34 ± 0,037 nM nestanoveno
Sekrece IL-6 Kond. médium 0,6 ± 0,09 nM 0,03 ± 0,001 nM
Produkce PGE2 Kond. médium 0,79 ± 0,17 nM nestanoveno
Výsledky ukázaly, že AAL160 účinně blokuje produkci IL-6 a PGE2 v primárních humánních dermálních fibroblastech s hodnotou IC5o podobnou pro rekombínantní a přírodní IL-Ιβ.
• · • · · · · ·
Příklad 4
Účinnost a trvání působení AAL160 in vivo
Účinnost in vivo účinnost anti-huIL-Ιβ protilátky AAL160 byla testována na modelu laboratorního potkana, kde byla horečka indukována pomocí i.v. injekce huIL-Ιβ (100 ng/potkan). Protilátka vedla k inhibici horečky způsobem závislým na dávce při dávkách v rozmezí 1, 3 a 10 pg/kg i.v. (n = 6 potkanů) viz také obrázek 2. CHI 621 (Simulect®, basiliximab) byla použita jako kontrolní protilátka.
Trvání účinku
Trvání účinku AAL-160 bylo zkoumáno na laboratorních potkanech, u kterých byla IL-Ιβ indukována horečka, následujícím způsobem: protilátka byla injikována i.v. buďto 24 hodin nebo 30 minut (standardní protokol) před indukcí horečky pomocí i.v. injekce humánního IL-Ιβ a tělesná teplota byla měřena později za 2 a 4 hodiny. V obou časech byla pozorována přibližně stejná inhibice horečky (viz obrázek 3) . Jak se dalo očekávat, kontrolní protilátka CHI 621 (Simulect®, basiliximab) byla neúčinná v obou časových bodech. Toto zjištění ukazuje na to, že humánní protilátka AAL160 je přítomná v potkanovi v aktivní formě alespoň po 24 hodin a v průběhu této doby není metabolizována, vylučována ani vázána na tkáně.
• · • · · · • · • · • · · • · · ·
Příklad 5
Rentgenografické studie AAL160 Fab a jeho komplexu s IL-Ιβ
Stanovení struktury AAL160 Fab s rozlišením 2,0 Á
Soubor dat s rozlišením 2,0 Á (2,0 x 1O'10 m) velmi dobré kvality (Rsym = 0,051, úplnost = 99,9%, redundance = 8,2) byl získán na krystalech Fab pěstovaných pomocí difúze páry v metodě visící kapky, při pH 9,5 v 50% PEG 200 a 0,lM CHES. Krystal byl v prostorové skupině P2i2i2i s rozměry jednotkové buňky a = 62,17 Á, b = 89, 83 Á a c = 123, 73 Á a jednou Fab molekulou na jednu symetrickou jednotku (Matthewsův koeficient: 3,6 Á3/Da, stanovený obsah rozpouštědla: 66%). Struktura byla určena pomocí molekulárním nahrazením a byla zjemněna na konečný krystalografický R-faktor 0,209 (volný R-faktor = 0,261). Výsledný model zahrnuje aminokyselinové zbytky 1 až 213 lehkého řetězce, 1 až 131 a 138 až 218 těžkého řetězce, 387 molekul vody a 1 molekulu PEG. Výsledná elektronová denzita je dobře definována pro všechny zbytky CDR s výjimkou Trp94 (CDR3) lehkého řetězce. Poloha postranního řetězce tohoto zbytku je chybně definována ve dvou krystalových formách, které byly dosud prozkoumány, takže je možné předpokládat, že je v nepřítomnosti vázaného antigenů vysoce mobilní.
Krystalizace Fab komplexu s IL-Ιβ a předběžný experimentální model komplexu:
Několik krystalů AAL160 Fab v komplex s antigenem IL-Ιβ bylo získáno ze zásobního roztoku 1:1 komplexu o koncentraci 76 mg/ml v 2,0M síranu amonném, 0,lM Tris, pH 8,5. Krystaly rostly velmi pomalu po dobu několika týdnů. Vykazovaly slabou • · » · • · difrakci přibližně do 3,2 Á na domácím zdroji. Soubor předběžných dat byl zjištěn pomocí molekulárního nahrazování s využitím struktury volného Fab a humánního IL-Ιβ s vysokým rozlišením (J.P. Priestle et al., EMBO J. 7, 339 (1988)) jakožto výchozích modelů. Výpočty poskytly velmi jasný a nepochybný výsledek, když byly části Fv a Fc z Fab použity jako oddělené moduly (korelace 67,1 %, R-faktor 0,354 po dalším aproximačním kroku AMOREFITTING s použitím dat mezi 8,0 Á a 3,5 Á) . Následné srovnání volné a vázané formy Fab ukázalo, že úhel ohybu je pro tyto dvě struktury velmi odlišný. Výsledky výpočtů molekulárního nahrazování poskytly první molekulární model interakce mezi antigenem IL-Ιβ a monoklonální protilátkou AAL160. Předběžná analýza této interakce ukázala, že 1) IL-Ιβ vstupuje do těsné interakce se všemi třemi CDR těžkého řetězce a s CDR3 lehkého řetězce. Naproti tomu, CDR1 a CDR2 lehkého řetězce se účastní jen několika málo interakcí, pokud vůbec, a 2) klička obsahující zbytky Gly22, Pro23, Tyr24 a Glu25 zralého IL-Ιβ se váže ve středu antigen-kombinujícího místa zdá se tedy být klíčovou složkou epitopů. Je proto značně zajímavé, že tato klička není lokalizována v úseku molekuly, která se nejvíce odlišuje od myšího IL-Ιβ. Pro23, Tyr24 a Glu25 jsou zachovány, ale zbytek v poloze 22 je Gly v humánním IL-Ιβ, zatímco v myším IL-Ιβ je to Asp. Srovnání krystalové struktury humánního (PDB č. 2ilb) a myšího IL-Ιβ (PDB č. 8ilb) ukazuje, že tato bodová mutace má za následek velmi odlišnou konformaci hlavního řetězce v okolí Pro23. Tato lokální strukturní diference je ve shodě souhlasný s pozorovaným nedostatkem zkřížené reaktivity AAL160 s příslušným myším cytokinem.
SEZNAM SEKVENCI <160> 4 <170> Patentln version 3.0 <210> 1 <211> 354 <212> DNA <213> Mus musculus <220>
<221> CDS <222> (1)..(354) <400> 1
gag gtg cag ctg gtg cag tet gga gca gag gtg aaa aag Lys ccc Pro ggg Gly 15 gag Glu 48
Glu 1 Val Gin Leu Val 5 Gin Ser Gly Ala Glu 10 Val Lys
tet ctg aag atc tcc tgt aag ggt tet gga tac age ttt acc age tac 96
Ser Leu Lys Ile 20 Ser Cys Lys Gly Ser 25 Gly Tyr Ser Phe Thr 30 Ser Tyr
tgg atc ggc tgg gtg ege cag atg ccc ggg aaa ggc ctg gag tgg atg 144
Trp Ile Gly 35 Trp Val Arg Gin Met 40 Pro Gly Lys Gly Leu 45 Glu Trp Met
ggg atc atc tat cct agt gac tet gat acc aga tac age ccg tcc ttc 192
Gly Ile 50 Ile Tyr Pro Ser Asp 55 Ser Asp Thr Arg Tyr 60 Ser Pro Ser Phe
caa ggc cag gtc acc atc tea gcc gac aag tcc atc age acc gcc tac 240
Gin 65 Gly Gin Val Thr Ile 70 Ser Ala Asp Lys Ser 75 Ile Ser Thr Ala Tyr 80
ctg cag tgg age age ctg aag gcc tcg gac acc gcc atg tat tac tgt 288
Leu Gin Trp Ser Ser 85 Leu Lys Ala Ser Asp 90 Thr Ala Met Tyr Tyr 95 Cys
gcg aga tat acc aac tgg gat gct ttt gat atc tgg ggc caa ggg aca 336
Ala Arg Tyr Thr Asn Trp Asp Ala Phe Asp Ile Trp Gly Gin Gly Thr
100 105 110
atg gtc acc gtc tet tea 354
Met Val Thr 115 Val Ser Ser
<210> 2 <211> 118 <212> PRT <213> Mus musculus <400> 2
Glu Val Gin Leu Val Gin Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Glu
1 5 10 15
Ser Leu Lys Ile Ser Cys Lys Gly Ser Gly Tyr Ser Phe Thr Ser Tyr
20 25 30
Trp Ile Gly Trp Val Arg Gin Met Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Met
• ·
40 45
Gly Ile Ile Tyr Pro Ser Asp Ser Asp Thr Arg Tyr Ser Pro Ser Phe
50 55 60
Gin Gly Gin Val Thr Ile Ser Ala Asp Lys Ser Ile Ser Thr Ala Tyr
65 70 75 80
Leu Gin Trp Ser Ser Leu Lys Ala Ser Asp Thr Ala Met Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Tyr Thr Asn Trp Asp Ala Phe Asp Ile Trp Gly Gin Gly Thr
100 105 110
Met Val Thr Val Ser Ser
115 <210> 3 <211> 321 <212> DNA <213> Mus musculus <220>
<221> CDS
<222> (1) . . . (321)
<400> · 5
gaa att gtg ttg aca cag tet cca gcc acc ctg tet ttg tet cca ggg 48
Glu Ile Val Leu Thr Gin Ser Pro Ala Thr Leu Ser Leu Ser Pro Gly
1 5 10 15
gaa aga gcc acc ctc tcc tgc agg gcc agt cag agt gtt age age tac 96
Glu Arg Ala Thr Leu Ser Cys Arg Ala Ser Gin Ser Val Ser Ser Tyr
20 25 30
tta gcc tgg tac caa cag aaa cct ggc cag get ccc agg ctc ctc atc 144
Leu Ala Trp Tyr Gin Gin Lys Pro Gly Gin Ala Pro Arg Leu Leu Ile
35 40 45
tat gat gca tcc aac agg gcc act ggc atc cca gcc agg ttc agt ggc 192
Tyr Asp Ala Ser Asn Arg Ala Thr Gly Ile Pro Ala Arg Phe Ser Gly
50 55 60
agt ggg tet ggg aca gac ttc act ctc acc atc age age ctt gag cct 240
Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Glu Pro
65 70 75 80
gaa gat ttt gca gtt tat tac tgt cag cag cgt age aac tgg atg ttc 288
Glu Asp Phe Ala Val Tyr Tyr Cys Gin Gin Arg Ser Asn Trp Met Phe
85 90 95
cčt ttt ggc cag ggg acc aag ctg gag atc aaa 321
Pro Phe Gly Gin Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys
100 105
<210> ^211> <212> <213> 4 107 PRT Mus musculus
<400> 4
Glu Ile Val Leu Thr Gin Ser Pro Ala Thr Leu Sér Leu Ser Pro Gly 15 10 15
Glu Arg Ala Thr Leu Ser Cys Arg 20
Ala Ser Gin Ser Val Ser Ser Tyr 25 30
Leu Ala Trp Tyr Gin Gin Lys Pro 35 40
Gly Gin Ala Pro Arg Leu Leu Ile 45
Tyr Asp Ala Ser Asn Arg Ala Thr 50 55
Gly Ile Pro Ala Arg Phe Ser Gly 60
Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr 65 70
Leu Thr Ile Ser Ser Leu Glu Pro 75 80
Glu Asp Phe Ala Val Tyr Tyr Cys 85
Gin Gin Arg Ser Asn Trp Met Phe 90 95
Pro Phe Gly Gin Gly Thr Lys Leu 100
Glu Ile Lys 105 • · · · • · pí/ eZsOt

Claims (12)

1. Molekula vázající IL-Ιβ, která obsahuje vazebné místo pro antigen obsahující alespoň jednu variabilní doménu těžkého řetězce imunoglobulinu (VH) , která obsahuje v sekvenci hypervariabilní úseky CDR1, CDR2 a CDR3, a sice CDR1 mající aminokyselinovou sekvenci Ser-Tyr-Trp-Ile-Gly, CDR2 mající aminokyselinovou sekvenci Ile-Ile-Tyr-Pro-Ser-Asp-Ser-AspThr-Arg-Tyr-Ser-Pro-Ser-Phe-Gln-Gly a CDR3 mající aminokyselinovou sekvenci Tyr-Thr-Asn-Trp-Asp-Ala-Phe-AspIle, a její přímé ekvivalenty.
2. Molekula vázající IL-Ιβ, která obsahuje variabilní domény jak těžkého (VH) tak i lehkého řetězce (VL) , v nichž molekula vázající IL-Ιβ obsahuje alespoň jedno vazebné místo pro antigen obsahující:
a) variabilní doménu těžkého řetězce imunoglobulinu (VH) , která obsahuje v sekvenci hypervariabilní úseky CDR1, CDR2 a CDR3, a sice CDR1 mající aminokyselinovou sekvenci Ser-Tyr-Trp-Ile-Gly, CDR2 mající aminokyselinovou sekvenci Ile-Ile-Tyr-Pro-Ser-Asp-SerAsp-Thr-Arg-Tyr-Ser-Pro-Ser-Phe-Gln-Gly a CDR3 mající aminokyselinovou sekvenci Tyr-Thr-Asn-Trp-Asp-Ala-PheAsp-Ile a
b) variabilní doménu lehkého řetězce imunoglobulinu (VL), která obsahuje hypervariabilní úsek CDR3' mající aminokyselinovou sekvenci Gln-Gln-Arg-Ser-Asn-Trp-MetPhe-Pro, a její přímé ekvivalenty.
• ·
3. Molekula vázající IL-Ιβ podle nároku 2, ve které variabilní doména lehkého řetězce imunoglobulinu (VL) obsahuje v sekvenci hypervariabilní úseky CDR1', CDR2 ’ a CDR3’, a to CDR1' mající aminokyselinovou sekvenci Arg-Ala-SerGln-Ser-Val-Ser-Ser-Tyr-Leu-Ala, CDR2' mající aminokyselinovou sekvenci Asp-Ala-Ser-Asn-Arg-Ala-Thr a CDR3' mající aminokyselinovou sekvenci Gln-Gln-Arg-Ser-AsnTrp-Met-Phe-Pro, a její přímé ekvivalenty.
4. Molekula vázající IL-Ιβ podle nároku 1, 2 nebo3, která je humánní protilátka.
5. Molekula vázající IL-Ιβ, která obsahuje alespoň jedno vazebné místo pro antigen obsahující buďto první doménu mající aminokyselinovou sekvenci v podstatě identickou se sekvencí uvedenou v seznamu sekvencí jako SEKVENCE ID. Č. 1, začínající aminokyselinou v poloze 1 a končící aminokyselinou v poloze 128, nebo první doménu, jak byla popsána výše, a druhou doménu mající aminokyselinovou sekvenci v podstatě identickou se sekvencí uvedenou v seznamu sekvencí jako SEKVENCE ID. Č. 2, začínající aminokyselinou v poloze 1 a končící aminokyselinou v poloze 107.
6. Molekula vázající IL-Ιβ podle kteréhokoliv z nároků 1 až 5 pro použití při léčení nemoci nebo poruchy zprostředkované IL-1.
7. První DNA konstrukt kódující těžký řetězec nebo jeho fragment, který obsahuje
a) první část, která kóduje variabilní doménu obsahující střídavě úseky rámce a hypervariabilní úseky, přičemž hypervariabilní úseky jsou CDR1, CDR2 a CDR3, jejichž aminokyselinové sekvence jsou uvedeny v SEKVENCI ID. Č. 1, přičemž tato první část začíná kodonem kódujícím první aminokyselinu variabilní domény a končí kodonem kódujícím poslední aminokyselinu variabilní domény, a
b) druhou část kódující konstantní úsek těžkého řetězce nebo jeho fragment, který začíná kodonem kódujícím první aminokyselinu konstantní části těžkého řetězce a končí kodonem kódujícím poslední aminokyselinu konstantní části nebo jejího fragmentu, po kterém následuje stop kodon.
8. Druhý DNA konstrukt kódující lehký řetězec fragment, který obsahuje nebo jeho
a) první část, která kóduje variabilní doménu obsahující střídavě úseky rámce a hypervariabilní úseky, a hypervariabilní úseky jsou CDR3' a volitelně CDR1' a CDR2', jejichž aminokyselinové sekvence jsou uvedeny v SEKVENCI ID. Č. 2, přičemž tato první část začíná kodonem kódujícím první aminokyselinu variabilní domény a končí kodonem kódujícím poslední aminokyselinu variabilní domény, a
b) druhou část kódující konstantní úsek lehkého řetězce nebo jeho fragment, který začíná kodonem kódujícím první aminokyselinu konstantní části lehkého řetězce a končí kodonem kódujícím poslední aminokyselinu konstantní části nebo jejího fragmentu, po kterém následuje stop kodon.
• · · «
9. Expresní vektor schopný replikace v prokaryotické nebo eukaryotické buněčné linii, který obsahuje alespoň jeden z DNA konstruktů podle nároku 7 nebo nároku 8.
10. Způsob přípravy molekuly vázající IL-Ιβ vyznačující se tím, že zahrnuje kroky (i) kultivace organizmu, který je transformován expresním vektorem podle nároku 9 a (ii) izolace molekuly vázající IL-Ιβ z kultury.
11. Protilátka proti IL-Ιβ, která má antigenní vazebnou specificitu pro antigenní epitop zralého humánního IL-Ιβ obsahující zbytky Gly22, Pro23, Tyr24 a Glu25, a která je schopná inhibovat navázání IL-Ιβ na jeho receptor.
12. i) Použití protilátky proti IL-Ιβ, která má antigenní vazebnou specificitu pro antigenní epitop zralého humánního IL-Ιβ zahrnující kličku obsahující zbytky Gly22, Pro23, Tyr24 a Glu25, a která je schopná inhibovat navázání IL-Ιβ k jeho receptorů, při léčení IL-1 zprostředkovaných nemocí nebo poruch.
ii) Způsob léčení IL-1 zprostředkovaných nemocí a poruch u pacientů vyznačující se tím, že se pacientovi podává účinné množství protilátky proti IL-Ιβ, která má antigenní vazebnou specificitu pro antigenní epitop zralého humánního IL-Ιβ zahrnující kličku obsahující zbytky Gly22, Pro23, Tyr24 a Glu25, a která je schopná inhibice vazby ILΙβ k jeho receptorů.
iii) Farmaceutický přípravek vyznačující se tím, že obsahuje protilátku proti IL-Ιβ, která má antigenní vazebnou specificitu pro antigenní epitop zralého humánního IL-Ιβ zahrnující kličku obsahující zbytky Gly22, Pro23, Tyr24 a Glu25, a která je schopná inhibovat navázání IL-Ιβ k jeho receptoru, v kombinaci s farmaceuticky přijatelným excipientem, ředidlem nebo nosičem.
iv) Použití protilátky proti IL-Ιβ, která má antigenní vazebnou specificitu pro antigenní epitop zralého humánního IL-Ιβ zahrnující kličku obsahující zbytky Gly22, Pro23, Tyr24 a Glu25, a která je schopná inhibovat navázání IL-Ιβ k jeho receptoru, pro výrobu léku k léčení nemocí a poruch zprostředkovaných IL-1.
CZ20022531A 2000-01-21 2001-01-19 Protilátka proti IL-1beta tvorená molekulou vázající IL-1beta, tato molekula pro použití jako lécivo, použití této molekuly pro výrobu léciva, odpovídající DNA konstrukty a expresní vektor, zpusob prípravy uvedené molekuly a farmaceutická kompozice o CZ302738B6 (cs)

Applications Claiming Priority (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
GBGB0001448.0A GB0001448D0 (en) 2000-01-21 2000-01-21 Organic compounds

Publications (2)

Publication Number Publication Date
CZ20022531A3 true CZ20022531A3 (cs) 2002-10-16
CZ302738B6 CZ302738B6 (cs) 2011-10-12

Family

ID=9884137

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
CZ20022531A CZ302738B6 (cs) 2000-01-21 2001-01-19 Protilátka proti IL-1beta tvorená molekulou vázající IL-1beta, tato molekula pro použití jako lécivo, použití této molekuly pro výrobu léciva, odpovídající DNA konstrukty a expresní vektor, zpusob prípravy uvedené molekuly a farmaceutická kompozice o

Country Status (33)

Country Link
US (4) US20030124617A1 (cs)
EP (1) EP1248804B2 (cs)
JP (2) JP3978338B2 (cs)
KR (1) KR100697126B1 (cs)
CN (1) CN1395581B (cs)
AR (1) AR027253A1 (cs)
AT (1) ATE346868T1 (cs)
AU (1) AU772949B2 (cs)
BR (1) BR0107661A (cs)
CA (1) CA2396212C (cs)
CO (1) CO5261584A1 (cs)
CY (1) CY1107989T1 (cs)
CZ (1) CZ302738B6 (cs)
DE (1) DE60124863T3 (cs)
DK (1) DK1248804T4 (cs)
ES (1) ES2274865T5 (cs)
GB (1) GB0001448D0 (cs)
HK (1) HK1050013A1 (cs)
HU (1) HUP0204156A3 (cs)
IL (2) IL150551A0 (cs)
MX (1) MXPA02007091A (cs)
MY (1) MY155269A (cs)
NO (1) NO329816B1 (cs)
NZ (1) NZ519936A (cs)
PE (1) PE20011219A1 (cs)
PL (1) PL207642B1 (cs)
PT (1) PT1248804E (cs)
RU (1) RU2264413C2 (cs)
SI (1) SI1248804T2 (cs)
SK (1) SK288054B6 (cs)
TR (1) TR200201780T2 (cs)
WO (1) WO2001053353A2 (cs)
ZA (1) ZA200205659B (cs)

Families Citing this family (40)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
GB0001448D0 (en) * 2000-01-21 2000-03-08 Novartis Ag Organic compounds
EP1297142B1 (en) 2000-06-29 2009-01-14 Abbott Laboratories Dual specificity antibodies and methods of making and using
GB0020685D0 (en) 2000-08-22 2000-10-11 Novartis Ag Organic compounds
KR20040077889A (ko) * 2002-01-28 2004-09-07 메다렉스, 인코포레이티드 전립선 특이적 막 항원 (ｐｓｍａ)에 대한 인간모노클로날 항체
GB0303337D0 (en) 2003-02-13 2003-03-19 Celltech R&D Ltd Biological products
EP2280286A1 (en) * 2003-09-15 2011-02-02 Oklahoma Medical Research Foundation Method of using cytokine assays to diagnose, treat, and evaluate systemic lupus erythematosus
DK2270045T3 (en) 2004-02-06 2015-04-07 Univ Massachusetts ANTIBODIES AGAINST CLOSTRIDIUM DIFFICILE TOXINES AND APPLICATIONS THEREOF
EP1851245B1 (en) * 2005-01-26 2012-10-10 Amgen Fremont Inc. Antibodies against interleukin-1 beta
PE20061324A1 (es) * 2005-04-29 2007-01-15 Centocor Inc Anticuerpos anti-il-6, composiciones, metodos y usos
MX2007016032A (es) 2005-06-21 2008-03-10 Xoma Technology Ltd Anticuerpos de enlace a il-1-beta y fragmentos de los mismos.
ES2944067T3 (es) * 2005-10-26 2023-06-19 Novartis Ag Uso de anticuerpos anti il-1beta
EA035459B1 (ru) * 2005-12-29 2020-06-19 Сентокор, Инк. Антитело против il-23p19
US7943328B1 (en) 2006-03-03 2011-05-17 Prometheus Laboratories Inc. Method and system for assisting in diagnosing irritable bowel syndrome
KR20110079922A (ko) * 2006-04-14 2011-07-11 노파르티스 아게 안과 장애 치료를 위한 ｉｌ－1 항체의 용도
US20080085524A1 (en) * 2006-08-15 2008-04-10 Prometheus Laboratories Inc. Methods for diagnosing irritable bowel syndrome
RU2554747C9 (ru) 2006-12-20 2015-10-20 Ксома (Сша) Ллс Способы лечения il-1бета-зависимых заболеваний
US8324350B2 (en) * 2006-12-29 2012-12-04 Abbott Laboratories Dual-specific IL-1α/IL-1β antibodies
WO2008106131A2 (en) 2007-02-28 2008-09-04 Schering Corporation Combination therapy for treatment of immune disorders
CA3213888A1 (en) * 2007-05-29 2008-12-04 Novartis Ag New indications for anti-il-i-beta therapy
CA2710252C (en) * 2007-12-20 2017-03-28 Xoma Technology Ltd. Methods for the treatment of gout
ES2398693T3 (es) * 2008-06-06 2013-03-21 Xoma Technology Ltd. Métodos para el tratamiento de la artritis reumatoide
US8377429B2 (en) 2008-09-05 2013-02-19 Xoma Technology Ltd. Methods for improvement of beta cell function with anti-IL-1β antibodies or fragments thereof
KR102071834B1 (ko) 2009-10-26 2020-01-30 에프. 호프만-라 로슈 아게 글리코실화된 면역글로불린의 제조 방법
BR112012028557A2 (pt) * 2010-05-07 2019-09-24 Xoma Technology Ltd. uso de um anticorpo anti-il-1b ou de fragmentos de ligação do mesmo.
DE102010033565B4 (de) * 2010-07-27 2012-06-21 Tetec Tissue Engineering Technologies Ag Marker zur Bestimmung von Chondrozyten
NZ606824A (en) 2010-08-02 2015-05-29 Regeneron Pharma Mice that make binding proteins comprising vl domains
CN103328511B (zh) * 2010-09-10 2016-01-20 埃派斯进有限公司 抗-IL-1β抗体及其使用方法
PL2578688T5 (pl) 2011-02-25 2023-05-29 Regeneron Pharmaceuticals, Inc. Myszy adam6
MY172718A (en) 2011-08-05 2019-12-11 Regeneron Pharma Humanized universal light chain mice
DE102011083595A1 (de) 2011-09-28 2013-03-28 Bayer Pharma AG Inhibition der Wirkung von Interleukin 1 beta zur Behandlung der Endometriose
EP3050900A1 (en) 2011-12-19 2016-08-03 Xoma (Us) Llc Methods for treating acne
CA2859408C (en) 2011-12-20 2020-06-16 Regeneron Pharmaceuticals, Inc. Humanized light chain mice
SG10201708562VA (en) 2012-02-13 2017-12-28 Agency Science Tech & Res IL-1β Neutralizing Human Monoclonal Antibodies
KR102436654B1 (ko) 2012-06-12 2022-08-26 리제너론 파마슈티칼스 인코포레이티드 제한된 면역글로불린 중쇄 유전자좌를 가지는 인간화된 비-인간 동물
AU2015231025A1 (en) 2014-03-21 2016-09-15 Regeneron Pharmaceuticals, Inc. Vl antigen binding proteins exhibiting distinct binding characteristics
KR102601491B1 (ko) 2014-03-21 2023-11-13 리제너론 파마슈티칼스 인코포레이티드 단일 도메인 결합 단백질을 생산하는 비-인간 동물
CN107438622A (zh) 2015-03-19 2017-12-05 瑞泽恩制药公司 选择结合抗原的轻链可变区的非人动物
CN110818793A (zh) * 2018-08-14 2020-02-21 中山康方生物医药有限公司 抗IL-1β的抗体、其药物组合物及其用途
AU2019383017A1 (en) 2018-11-20 2021-06-03 Janssen Biotech, Inc. Safe and effective method of treating psoriasis with anti-IL-23 specific antibody
CA3138241A1 (en) 2019-05-23 2020-11-26 Janssen Biotech, Inc. Method of treating inflammatory bowel disease with a combination therapy of antibodies to il-23 and tnf alpha

Family Cites Families (11)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US4772685A (en) 1985-10-02 1988-09-20 Merck & Co., Inc. Immunogenic peptides of human interleukin-1 and the corresponding anti-peptide antibodies
US4935343A (en) * 1986-08-08 1990-06-19 Syntex (U.S.A.) Inc. Monoclonal antibodies for interleukin-1β
FR2640146B1 (fr) * 1988-12-08 1993-12-24 Commissariat A Energie Atomique Anticorps monoclonaux anti-interleukines 1(alpha) et 1(beta), leur procede de production et applications desdits anticorps a la detection des interleukines 1(alpha) et 1(beta) et en therapeutique
GB8928874D0 (en) 1989-12-21 1990-02-28 Celltech Ltd Humanised antibodies
US5859205A (en) * 1989-12-21 1999-01-12 Celltech Limited Humanised antibodies
GB9014932D0 (en) 1990-07-05 1990-08-22 Celltech Ltd Recombinant dna product and method
JP3714683B2 (ja) * 1992-07-30 2005-11-09 生化学工業株式会社 抗リウマチ剤
US5429614A (en) 1993-06-30 1995-07-04 Baxter International Inc. Drug delivery system
WO1995001997A1 (en) * 1993-07-09 1995-01-19 Smithkline Beecham Corporation RECOMBINANT AND HUMANIZED IL-1β ANTIBODIES FOR TREATMENT OF IL-1 MEDIATED INFLAMMATORY DISORDERS IN MAN
US6051228A (en) 1998-02-19 2000-04-18 Bristol-Myers Squibb Co. Antibodies against human CD40
GB0001448D0 (en) * 2000-01-21 2000-03-08 Novartis Ag Organic compounds

Also Published As

Publication number Publication date
DE60124863T3 (de) 2010-05-20
CN1395581A (zh) 2003-02-05
GB0001448D0 (en) 2000-03-08
HK1050013A1 (zh) 2003-06-06
PL356297A1 (en) 2004-06-28
HUP0204156A3 (en) 2005-09-28
IL150551A0 (en) 2003-02-12
SK10352002A3 (sk) 2003-03-04
CZ302738B6 (cs) 2011-10-12
DE60124863D1 (de) 2007-01-11
WO2001053353A2 (en) 2001-07-26
PL207642B1 (pl) 2011-01-31
AR027253A1 (es) 2003-03-19
JP3978338B2 (ja) 2007-09-19
ES2274865T5 (es) 2010-04-19
EP1248804A2 (en) 2002-10-16
ES2274865T3 (es) 2007-06-01
CN1395581B (zh) 2010-10-13
MY155269A (en) 2015-09-30
DK1248804T3 (da) 2007-02-26
PT1248804E (pt) 2007-02-28
EP1248804B1 (en) 2006-11-29
SK288054B6 (sk) 2013-03-01
NZ519936A (en) 2004-02-27
JP2007097598A (ja) 2007-04-19
US20110182894A1 (en) 2011-07-28
CA2396212C (en) 2013-04-02
US7491392B2 (en) 2009-02-17
ATE346868T1 (de) 2006-12-15
ZA200205659B (en) 2003-12-31
KR100697126B1 (ko) 2007-03-20
DE60124863T2 (de) 2007-04-26
CY1107989T1 (el) 2013-09-04
US20090232803A1 (en) 2009-09-17
HUP0204156A2 (hu) 2003-03-28
AU3369701A (en) 2001-07-31
NO20023266L (no) 2002-08-28
RU2002121649A (ru) 2004-03-10
BR0107661A (pt) 2002-11-19
JP2003520595A (ja) 2003-07-08
NO329816B1 (no) 2010-12-27
CA2396212A1 (en) 2001-07-26
US20060251660A1 (en) 2006-11-09
CO5261584A1 (es) 2003-03-31
NO20023266D0 (no) 2002-07-05
KR20020073178A (ko) 2002-09-19
PE20011219A1 (es) 2001-12-17
SI1248804T2 (sl) 2010-04-30
TR200201780T2 (tr) 2003-01-21
US20030124617A1 (en) 2003-07-03
EP1248804B2 (en) 2009-12-02
IL150551A (en) 2010-11-30
RU2264413C2 (ru) 2005-11-20
WO2001053353A3 (en) 2002-04-04
DK1248804T4 (da) 2010-04-06
SI1248804T1 (sl) 2007-06-30
AU772949B2 (en) 2004-05-13
MXPA02007091A (es) 2002-12-13

Similar Documents

Publication Publication Date Title
US7491392B2 (en) Antibodies to human IL-1β
JP4271936B2 (ja) ヒトＩＬ−１βに対する抗体
AU2001295490A1 (en) Antibodies to human IL-1beta

Legal Events

Date Code Title Description
MM4A Patent lapsed due to non-payment of fee

Effective date: 20150119