NO329816B1 - Antistoffer mot humant IL-10, anvendelse av disse, DNA konstruksjoner, ekspresjonsvektor, fremgangsmate for fremstilling og farmasoytisk sammensetning - Google Patents
Antistoffer mot humant IL-10, anvendelse av disse, DNA konstruksjoner, ekspresjonsvektor, fremgangsmate for fremstilling og farmasoytisk sammensetning Download PDFInfo
- Publication number
- NO329816B1 NO329816B1 NO20023266A NO20023266A NO329816B1 NO 329816 B1 NO329816 B1 NO 329816B1 NO 20023266 A NO20023266 A NO 20023266A NO 20023266 A NO20023266 A NO 20023266A NO 329816 B1 NO329816 B1 NO 329816B1
- Authority
- NO
- Norway
- Prior art keywords
- amino acid
- human
- ser
- antibody
- binding
- Prior art date
Links
- 239000013604 expression vector Substances 0.000 title claims description 17
- 238000000034 method Methods 0.000 title claims description 13
- 239000008194 pharmaceutical composition Substances 0.000 title claims description 5
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 title claims description 4
- -1 their use Proteins 0.000 title description 2
- 101001033233 Homo sapiens Interleukin-10 Proteins 0.000 title 1
- 102000052620 human IL10 Human genes 0.000 title 1
- 238000009739 binding Methods 0.000 claims description 91
- 230000027455 binding Effects 0.000 claims description 90
- 125000003275 alpha amino acid group Chemical group 0.000 claims description 54
- 108010002352 Interleukin-1 Proteins 0.000 claims description 34
- 102000000589 Interleukin-1 Human genes 0.000 claims description 34
- 102100035360 Cerebellar degeneration-related antigen 1 Human genes 0.000 claims description 33
- 108020004705 Codon Proteins 0.000 claims description 30
- 101000737793 Homo sapiens Cerebellar degeneration-related antigen 1 Proteins 0.000 claims description 30
- 150000001413 amino acids Chemical class 0.000 claims description 30
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 claims description 23
- 238000011282 treatment Methods 0.000 claims description 23
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 claims description 22
- 239000000427 antigen Substances 0.000 claims description 21
- 108091007433 antigens Proteins 0.000 claims description 21
- 102000036639 antigens Human genes 0.000 claims description 21
- 239000012634 fragment Substances 0.000 claims description 19
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 claims description 18
- 201000010099 disease Diseases 0.000 claims description 17
- 101001033249 Homo sapiens Interleukin-1 beta Proteins 0.000 claims description 16
- 206010020751 Hypersensitivity Diseases 0.000 claims description 16
- 230000001404 mediated effect Effects 0.000 claims description 15
- 206010003246 arthritis Diseases 0.000 claims description 12
- 206010028980 Neoplasm Diseases 0.000 claims description 9
- 230000001419 dependent effect Effects 0.000 claims description 9
- 206010040070 Septic Shock Diseases 0.000 claims description 8
- 239000003814 drug Substances 0.000 claims description 8
- 208000023275 Autoimmune disease Diseases 0.000 claims description 7
- 230000001154 acute effect Effects 0.000 claims description 7
- 230000007815 allergy Effects 0.000 claims description 7
- 230000001363 autoimmune Effects 0.000 claims description 7
- 208000015181 infectious disease Diseases 0.000 claims description 7
- 206010006895 Cachexia Diseases 0.000 claims description 6
- 102000006496 Immunoglobulin Heavy Chains Human genes 0.000 claims description 6
- 108010019476 Immunoglobulin Heavy Chains Proteins 0.000 claims description 6
- 208000001132 Osteoporosis Diseases 0.000 claims description 6
- 208000026935 allergic disease Diseases 0.000 claims description 6
- 201000011510 cancer Diseases 0.000 claims description 6
- 230000009610 hypersensitivity Effects 0.000 claims description 6
- 230000004968 inflammatory condition Effects 0.000 claims description 6
- 230000002265 prevention Effects 0.000 claims description 6
- 206010065687 Bone loss Diseases 0.000 claims description 5
- 208000035475 disorder Diseases 0.000 claims description 5
- 230000002757 inflammatory effect Effects 0.000 claims description 5
- FWMNVWWHGCHHJJ-SKKKGAJSSA-N 4-amino-1-[(2r)-6-amino-2-[[(2r)-2-[[(2r)-2-[[(2r)-2-amino-3-phenylpropanoyl]amino]-3-phenylpropanoyl]amino]-4-methylpentanoyl]amino]hexanoyl]piperidine-4-carboxylic acid Chemical compound C([C@H](C(=O)N[C@H](CC(C)C)C(=O)N[C@H](CCCCN)C(=O)N1CCC(N)(CC1)C(O)=O)NC(=O)[C@H](N)CC=1C=CC=CC=1)C1=CC=CC=C1 FWMNVWWHGCHHJJ-SKKKGAJSSA-N 0.000 claims description 4
- 206010014824 Endotoxic shock Diseases 0.000 claims description 4
- 102000013463 Immunoglobulin Light Chains Human genes 0.000 claims description 4
- 108010065825 Immunoglobulin Light Chains Proteins 0.000 claims description 4
- 208000025747 Rheumatic disease Diseases 0.000 claims description 4
- 208000007502 anemia Diseases 0.000 claims description 4
- 208000006673 asthma Diseases 0.000 claims description 4
- 229940079593 drug Drugs 0.000 claims description 4
- 208000027866 inflammatory disease Diseases 0.000 claims description 4
- 206010039073 rheumatoid arthritis Diseases 0.000 claims description 4
- 208000011580 syndromic disease Diseases 0.000 claims description 4
- 210000001519 tissue Anatomy 0.000 claims description 4
- 208000030507 AIDS Diseases 0.000 claims description 3
- 206010027654 Allergic conditions Diseases 0.000 claims description 3
- 206010008909 Chronic Hepatitis Diseases 0.000 claims description 3
- 208000015943 Coeliac disease Diseases 0.000 claims description 3
- 206010009900 Colitis ulcerative Diseases 0.000 claims description 3
- 208000011231 Crohn disease Diseases 0.000 claims description 3
- 206010014561 Emphysema Diseases 0.000 claims description 3
- 206010019755 Hepatitis chronic active Diseases 0.000 claims description 3
- 206010021245 Idiopathic thrombocytopenic purpura Diseases 0.000 claims description 3
- 206010061218 Inflammation Diseases 0.000 claims description 3
- 208000022559 Inflammatory bowel disease Diseases 0.000 claims description 3
- 206010065390 Inflammatory pain Diseases 0.000 claims description 3
- 201000009906 Meningitis Diseases 0.000 claims description 3
- 206010035664 Pneumonia Diseases 0.000 claims description 3
- 206010065159 Polychondritis Diseases 0.000 claims description 3
- 201000004681 Psoriasis Diseases 0.000 claims description 3
- 208000002200 Respiratory Hypersensitivity Diseases 0.000 claims description 3
- 206010052779 Transplant rejections Diseases 0.000 claims description 3
- 201000006704 Ulcerative Colitis Diseases 0.000 claims description 3
- 208000016807 X-linked intellectual disability-macrocephaly-macroorchidism syndrome Diseases 0.000 claims description 3
- 201000003710 autoimmune thrombocytopenic purpura Diseases 0.000 claims description 3
- 230000004097 bone metabolism Effects 0.000 claims description 3
- 206010006451 bronchitis Diseases 0.000 claims description 3
- 201000001981 dermatomyositis Diseases 0.000 claims description 3
- 239000003085 diluting agent Substances 0.000 claims description 3
- 210000003527 eukaryotic cell Anatomy 0.000 claims description 3
- 208000014951 hematologic disease Diseases 0.000 claims description 3
- 208000007475 hemolytic anemia Diseases 0.000 claims description 3
- 230000004054 inflammatory process Effects 0.000 claims description 3
- 208000002551 irritable bowel syndrome Diseases 0.000 claims description 3
- 206010028417 myasthenia gravis Diseases 0.000 claims description 3
- 230000000414 obstructive effect Effects 0.000 claims description 3
- 210000000056 organ Anatomy 0.000 claims description 3
- 230000004768 organ dysfunction Effects 0.000 claims description 3
- 201000008482 osteoarthritis Diseases 0.000 claims description 3
- 208000028169 periodontal disease Diseases 0.000 claims description 3
- 206010035653 pneumoconiosis Diseases 0.000 claims description 3
- 210000001236 prokaryotic cell Anatomy 0.000 claims description 3
- 210000002345 respiratory system Anatomy 0.000 claims description 3
- 230000036303 septic shock Effects 0.000 claims description 3
- 201000000596 systemic lupus erythematosus Diseases 0.000 claims description 3
- 208000032467 Aplastic anaemia Diseases 0.000 claims description 2
- 208000023328 Basedow disease Diseases 0.000 claims description 2
- 208000008439 Biliary Liver Cirrhosis Diseases 0.000 claims description 2
- 208000033222 Biliary cirrhosis primary Diseases 0.000 claims description 2
- 206010060742 Endocrine ophthalmopathy Diseases 0.000 claims description 2
- 206010018364 Glomerulonephritis Diseases 0.000 claims description 2
- 208000015023 Graves' disease Diseases 0.000 claims description 2
- 208000029523 Interstitial Lung disease Diseases 0.000 claims description 2
- 208000012654 Primary biliary cholangitis Diseases 0.000 claims description 2
- 201000001263 Psoriatic Arthritis Diseases 0.000 claims description 2
- 208000036824 Psoriatic arthropathy Diseases 0.000 claims description 2
- 206010067584 Type 1 diabetes mellitus Diseases 0.000 claims description 2
- 206010046851 Uveitis Diseases 0.000 claims description 2
- 208000002205 allergic conjunctivitis Diseases 0.000 claims description 2
- 230000008859 change Effects 0.000 claims description 2
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 claims description 2
- 206010012601 diabetes mellitus Diseases 0.000 claims description 2
- 208000016036 idiopathic nephrotic syndrome Diseases 0.000 claims description 2
- 201000006417 multiple sclerosis Diseases 0.000 claims description 2
- 201000001119 neuropathy Diseases 0.000 claims description 2
- 230000007823 neuropathy Effects 0.000 claims description 2
- 208000033808 peripheral neuropathy Diseases 0.000 claims description 2
- 201000000306 sarcoidosis Diseases 0.000 claims description 2
- 239000000126 substance Substances 0.000 claims description 2
- 208000018464 vernal keratoconjunctivitis Diseases 0.000 claims description 2
- 230000009429 distress Effects 0.000 claims 1
- 230000000241 respiratory effect Effects 0.000 claims 1
- 108020004414 DNA Proteins 0.000 description 28
- 108020003175 receptors Proteins 0.000 description 21
- 102000005962 receptors Human genes 0.000 description 21
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 description 14
- 230000000890 antigenic effect Effects 0.000 description 10
- 230000014509 gene expression Effects 0.000 description 10
- 210000004408 hybridoma Anatomy 0.000 description 10
- 210000002950 fibroblast Anatomy 0.000 description 9
- 230000002401 inhibitory effect Effects 0.000 description 9
- 241001529936 Murinae Species 0.000 description 8
- 230000005764 inhibitory process Effects 0.000 description 8
- 102000004889 Interleukin-6 Human genes 0.000 description 7
- 108090001005 Interleukin-6 Proteins 0.000 description 7
- 241000699670 Mus sp. Species 0.000 description 7
- 108091028043 Nucleic acid sequence Proteins 0.000 description 7
- 241000700159 Rattus Species 0.000 description 7
- 238000003556 assay Methods 0.000 description 7
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 7
- 239000013078 crystal Substances 0.000 description 6
- 229960002986 dinoprostone Drugs 0.000 description 6
- XEYBRNLFEZDVAW-ARSRFYASSA-N dinoprostone Chemical compound CCCCC[C@H](O)\C=C\[C@H]1[C@H](O)CC(=O)[C@@H]1C\C=C/CCCC(O)=O XEYBRNLFEZDVAW-ARSRFYASSA-N 0.000 description 6
- 208000037765 diseases and disorders Diseases 0.000 description 6
- 230000002500 effect on skin Effects 0.000 description 6
- 239000002773 nucleotide Substances 0.000 description 6
- 125000003729 nucleotide group Chemical group 0.000 description 6
- XEYBRNLFEZDVAW-UHFFFAOYSA-N prostaglandin E2 Natural products CCCCCC(O)C=CC1C(O)CC(=O)C1CC=CCCCC(O)=O XEYBRNLFEZDVAW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 description 6
- 239000013598 vector Substances 0.000 description 6
- 108091026890 Coding region Proteins 0.000 description 5
- 108060003951 Immunoglobulin Proteins 0.000 description 5
- 102000019223 Interleukin-1 receptor Human genes 0.000 description 5
- 108050006617 Interleukin-1 receptor Proteins 0.000 description 5
- 241000699666 Mus <mouse, genus> Species 0.000 description 5
- 206010037660 Pyrexia Diseases 0.000 description 5
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 5
- 239000003623 enhancer Substances 0.000 description 5
- 102000018358 immunoglobulin Human genes 0.000 description 5
- 108090000765 processed proteins & peptides Proteins 0.000 description 5
- 229940115586 simulect Drugs 0.000 description 5
- 239000006228 supernatant Substances 0.000 description 5
- 238000002965 ELISA Methods 0.000 description 4
- 108010021625 Immunoglobulin Fragments Proteins 0.000 description 4
- 102000008394 Immunoglobulin Fragments Human genes 0.000 description 4
- FBOZXECLQNJBKD-ZDUSSCGKSA-N L-methotrexate Chemical compound C=1N=C2N=C(N)N=C(N)C2=NC=1CN(C)C1=CC=C(C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(O)=O)C=C1 FBOZXECLQNJBKD-ZDUSSCGKSA-N 0.000 description 4
- 229960004669 basiliximab Drugs 0.000 description 4
- 239000002299 complementary DNA Substances 0.000 description 4
- 238000002347 injection Methods 0.000 description 4
- 239000007924 injection Substances 0.000 description 4
- 230000003993 interaction Effects 0.000 description 4
- 210000004962 mammalian cell Anatomy 0.000 description 4
- 229960000485 methotrexate Drugs 0.000 description 4
- 238000006386 neutralization reaction Methods 0.000 description 4
- 238000010561 standard procedure Methods 0.000 description 4
- 102000004127 Cytokines Human genes 0.000 description 3
- 108090000695 Cytokines Proteins 0.000 description 3
- 241000701022 Cytomegalovirus Species 0.000 description 3
- 241000282412 Homo Species 0.000 description 3
- 108060008682 Tumor Necrosis Factor Proteins 0.000 description 3
- 102100040247 Tumor necrosis factor Human genes 0.000 description 3
- 230000009471 action Effects 0.000 description 3
- 230000004913 activation Effects 0.000 description 3
- 230000003321 amplification Effects 0.000 description 3
- 210000003719 b-lymphocyte Anatomy 0.000 description 3
- 210000004899 c-terminal region Anatomy 0.000 description 3
- 230000001413 cellular effect Effects 0.000 description 3
- 230000006957 competitive inhibition Effects 0.000 description 3
- 239000003636 conditioned culture medium Substances 0.000 description 3
- 238000010276 construction Methods 0.000 description 3
- 238000003199 nucleic acid amplification method Methods 0.000 description 3
- 230000009257 reactivity Effects 0.000 description 3
- 230000004044 response Effects 0.000 description 3
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 3
- 230000000638 stimulation Effects 0.000 description 3
- 206010001052 Acute respiratory distress syndrome Diseases 0.000 description 2
- 241000282693 Cercopithecidae Species 0.000 description 2
- 101150074155 DHFR gene Proteins 0.000 description 2
- 102000053602 DNA Human genes 0.000 description 2
- 101001002634 Homo sapiens Interleukin-1 alpha Proteins 0.000 description 2
- 108700005091 Immunoglobulin Genes Proteins 0.000 description 2
- 108091092195 Intron Proteins 0.000 description 2
- 108060001084 Luciferase Proteins 0.000 description 2
- 239000005089 Luciferase Substances 0.000 description 2
- 241000282567 Macaca fascicularis Species 0.000 description 2
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 description 2
- 241000283973 Oryctolagus cuniculus Species 0.000 description 2
- 206010035226 Plasma cell myeloma Diseases 0.000 description 2
- 108020004511 Recombinant DNA Proteins 0.000 description 2
- 108700008625 Reporter Genes Proteins 0.000 description 2
- 208000013616 Respiratory Distress Syndrome Diseases 0.000 description 2
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M Sodium chloride Chemical compound [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 2
- 102000000852 Tumor Necrosis Factor-alpha Human genes 0.000 description 2
- 208000011341 adult acute respiratory distress syndrome Diseases 0.000 description 2
- 201000000028 adult respiratory distress syndrome Diseases 0.000 description 2
- 238000004113 cell culture Methods 0.000 description 2
- 238000012258 culturing Methods 0.000 description 2
- 235000013601 eggs Nutrition 0.000 description 2
- 230000004927 fusion Effects 0.000 description 2
- 230000036541 health Effects 0.000 description 2
- 238000001727 in vivo Methods 0.000 description 2
- 238000001802 infusion Methods 0.000 description 2
- 229940100601 interleukin-6 Drugs 0.000 description 2
- 239000003550 marker Substances 0.000 description 2
- 108020004999 messenger RNA Proteins 0.000 description 2
- 239000000203 mixture Substances 0.000 description 2
- 230000035772 mutation Effects 0.000 description 2
- 201000000050 myeloid neoplasm Diseases 0.000 description 2
- 230000007170 pathology Effects 0.000 description 2
- 210000003819 peripheral blood mononuclear cell Anatomy 0.000 description 2
- 229920001184 polypeptide Polymers 0.000 description 2
- 102000004196 processed proteins & peptides Human genes 0.000 description 2
- 230000000069 prophylactic effect Effects 0.000 description 2
- 238000011321 prophylaxis Methods 0.000 description 2
- 238000000746 purification Methods 0.000 description 2
- 238000011552 rat model Methods 0.000 description 2
- 238000012163 sequencing technique Methods 0.000 description 2
- 230000009261 transgenic effect Effects 0.000 description 2
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Chemical compound O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- MZOFCQQQCNRIBI-VMXHOPILSA-N (3s)-4-[[(2s)-1-[[(2s)-1-[[(1s)-1-carboxy-2-hydroxyethyl]amino]-4-methyl-1-oxopentan-2-yl]amino]-5-(diaminomethylideneamino)-1-oxopentan-2-yl]amino]-3-[[2-[[(2s)-2,6-diaminohexanoyl]amino]acetyl]amino]-4-oxobutanoic acid Chemical compound OC[C@@H](C(O)=O)NC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)[C@H](CCCN=C(N)N)NC(=O)[C@H](CC(O)=O)NC(=O)CNC(=O)[C@@H](N)CCCCN MZOFCQQQCNRIBI-VMXHOPILSA-N 0.000 description 1
- 108010088751 Albumins Proteins 0.000 description 1
- 102000009027 Albumins Human genes 0.000 description 1
- 241000894006 Bacteria Species 0.000 description 1
- 108091003079 Bovine Serum Albumin Proteins 0.000 description 1
- 239000008000 CHES buffer Substances 0.000 description 1
- 230000006820 DNA synthesis Effects 0.000 description 1
- 108700039691 Genetic Promoter Regions Proteins 0.000 description 1
- 208000009329 Graft vs Host Disease Diseases 0.000 description 1
- 206010072579 Granulomatosis with polyangiitis Diseases 0.000 description 1
- 208000031886 HIV Infections Diseases 0.000 description 1
- 208000037357 HIV infectious disease Diseases 0.000 description 1
- 101000909492 Homo sapiens Collagen alpha-1(VIII) chain Proteins 0.000 description 1
- 101001055222 Homo sapiens Interleukin-8 Proteins 0.000 description 1
- 108091006905 Human Serum Albumin Proteins 0.000 description 1
- 102000008100 Human Serum Albumin Human genes 0.000 description 1
- 108090000193 Interleukin-1 beta Proteins 0.000 description 1
- 102000003777 Interleukin-1 beta Human genes 0.000 description 1
- 102100026018 Interleukin-1 receptor antagonist protein Human genes 0.000 description 1
- 101710144554 Interleukin-1 receptor antagonist protein Proteins 0.000 description 1
- 108090001007 Interleukin-8 Proteins 0.000 description 1
- 208000004883 Lipoid Nephrosis Diseases 0.000 description 1
- 101001033289 Macaca fascicularis Interleukin-1 beta Proteins 0.000 description 1
- 241000282560 Macaca mulatta Species 0.000 description 1
- 241000699660 Mus musculus Species 0.000 description 1
- 101001033286 Mus musculus Interleukin-1 beta Proteins 0.000 description 1
- MKWKNSIESPFAQN-UHFFFAOYSA-N N-cyclohexyl-2-aminoethanesulfonic acid Chemical compound OS(=O)(=O)CCNC1CCCCC1 MKWKNSIESPFAQN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 108091007491 NSP3 Papain-like protease domains Proteins 0.000 description 1
- 229930193140 Neomycin Natural products 0.000 description 1
- 206010029164 Nephrotic syndrome Diseases 0.000 description 1
- 108091034117 Oligonucleotide Proteins 0.000 description 1
- 238000012408 PCR amplification Methods 0.000 description 1
- 229920000604 Polyethylene Glycol 200 Polymers 0.000 description 1
- 229920001030 Polyethylene Glycol 4000 Polymers 0.000 description 1
- 241000288906 Primates Species 0.000 description 1
- 241000283984 Rodentia Species 0.000 description 1
- 239000006146 Roswell Park Memorial Institute medium Substances 0.000 description 1
- 240000004808 Saccharomyces cerevisiae Species 0.000 description 1
- 206010040047 Sepsis Diseases 0.000 description 1
- 108010003723 Single-Domain Antibodies Proteins 0.000 description 1
- 102100036865 Solute carrier family 52, riboflavin transporter, member 3 Human genes 0.000 description 1
- 101710102466 Solute carrier family 52, riboflavin transporter, member 3 Proteins 0.000 description 1
- 239000007983 Tris buffer Substances 0.000 description 1
- 208000010399 Wasting Syndrome Diseases 0.000 description 1
- JLCPHMBAVCMARE-UHFFFAOYSA-N [3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[5-(2-amino-6-oxo-1H-purin-9-yl)-3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[5-(2-amino-6-oxo-1H-purin-9-yl)-3-[[5-(2-amino-6-oxo-1H-purin-9-yl)-3-hydroxyoxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxyoxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(5-methyl-2,4-dioxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxyoxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(5-methyl-2,4-dioxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(4-amino-2-oxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(5-methyl-2,4-dioxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(5-methyl-2,4-dioxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(4-amino-2-oxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(4-amino-2-oxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(4-amino-2-oxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(4-amino-2-oxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methyl [5-(6-aminopurin-9-yl)-2-(hydroxymethyl)oxolan-3-yl] hydrogen phosphate Polymers Cc1cn(C2CC(OP(O)(=O)OCC3OC(CC3OP(O)(=O)OCC3OC(CC3O)n3cnc4c3nc(N)[nH]c4=O)n3cnc4c3nc(N)[nH]c4=O)C(COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3CO)n3cnc4c(N)ncnc34)n3ccc(N)nc3=O)n3cnc4c(N)ncnc34)n3ccc(N)nc3=O)n3ccc(N)nc3=O)n3ccc(N)nc3=O)n3cnc4c(N)ncnc34)n3cnc4c(N)ncnc34)n3cc(C)c(=O)[nH]c3=O)n3cc(C)c(=O)[nH]c3=O)n3ccc(N)nc3=O)n3cc(C)c(=O)[nH]c3=O)n3cnc4c3nc(N)[nH]c4=O)n3cnc4c(N)ncnc34)n3cnc4c(N)ncnc34)n3cnc4c(N)ncnc34)n3cnc4c(N)ncnc34)O2)c(=O)[nH]c1=O JLCPHMBAVCMARE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000010521 absorption reaction Methods 0.000 description 1
- 238000007792 addition Methods 0.000 description 1
- 239000002671 adjuvant Substances 0.000 description 1
- 238000001042 affinity chromatography Methods 0.000 description 1
- 230000000735 allogeneic effect Effects 0.000 description 1
- 125000000539 amino acid group Chemical group 0.000 description 1
- BFNBIHQBYMNNAN-UHFFFAOYSA-N ammonium sulfate Chemical compound N.N.OS(O)(=O)=O BFNBIHQBYMNNAN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229910052921 ammonium sulfate Inorganic materials 0.000 description 1
- 235000011130 ammonium sulphate Nutrition 0.000 description 1
- 239000008365 aqueous carrier Substances 0.000 description 1
- 238000004166 bioassay Methods 0.000 description 1
- 230000004071 biological effect Effects 0.000 description 1
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 1
- 210000004369 blood Anatomy 0.000 description 1
- 239000008280 blood Substances 0.000 description 1
- 230000036760 body temperature Effects 0.000 description 1
- 230000037396 body weight Effects 0.000 description 1
- 210000001185 bone marrow Anatomy 0.000 description 1
- 230000015556 catabolic process Effects 0.000 description 1
- 239000003795 chemical substances by application Substances 0.000 description 1
- 101150076615 ck gene Proteins 0.000 description 1
- 238000010367 cloning Methods 0.000 description 1
- 238000012875 competitive assay Methods 0.000 description 1
- 230000009137 competitive binding Effects 0.000 description 1
- 230000002860 competitive effect Effects 0.000 description 1
- 230000001143 conditioned effect Effects 0.000 description 1
- 230000009260 cross reactivity Effects 0.000 description 1
- 238000002425 crystallisation Methods 0.000 description 1
- 230000008025 crystallization Effects 0.000 description 1
- 238000007405 data analysis Methods 0.000 description 1
- 230000007812 deficiency Effects 0.000 description 1
- 238000006731 degradation reaction Methods 0.000 description 1
- 238000012217 deletion Methods 0.000 description 1
- 230000037430 deletion Effects 0.000 description 1
- 230000008021 deposition Effects 0.000 description 1
- 238000011161 development Methods 0.000 description 1
- 239000000032 diagnostic agent Substances 0.000 description 1
- 229940039227 diagnostic agent Drugs 0.000 description 1
- 238000009792 diffusion process Methods 0.000 description 1
- 238000010494 dissociation reaction Methods 0.000 description 1
- 230000005593 dissociations Effects 0.000 description 1
- 238000005516 engineering process Methods 0.000 description 1
- 238000011067 equilibration Methods 0.000 description 1
- 239000012894 fetal calf serum Substances 0.000 description 1
- 238000009472 formulation Methods 0.000 description 1
- 208000024908 graft versus host disease Diseases 0.000 description 1
- 102000050164 human Col8A1 Human genes 0.000 description 1
- 210000005260 human cell Anatomy 0.000 description 1
- 208000033519 human immunodeficiency virus infectious disease Diseases 0.000 description 1
- 230000001900 immune effect Effects 0.000 description 1
- 230000028993 immune response Effects 0.000 description 1
- 210000000987 immune system Anatomy 0.000 description 1
- 230000016784 immunoglobulin production Effects 0.000 description 1
- 230000006872 improvement Effects 0.000 description 1
- 238000000338 in vitro Methods 0.000 description 1
- 230000006698 induction Effects 0.000 description 1
- 230000028709 inflammatory response Effects 0.000 description 1
- 239000003978 infusion fluid Substances 0.000 description 1
- 238000003780 insertion Methods 0.000 description 1
- 230000037431 insertion Effects 0.000 description 1
- 230000018276 interleukin-1 production Effects 0.000 description 1
- 230000017306 interleukin-6 production Effects 0.000 description 1
- 238000010253 intravenous injection Methods 0.000 description 1
- 208000028867 ischemia Diseases 0.000 description 1
- 210000003734 kidney Anatomy 0.000 description 1
- 210000004185 liver Anatomy 0.000 description 1
- 210000004072 lung Anatomy 0.000 description 1
- 241001515942 marmosets Species 0.000 description 1
- 201000001441 melanoma Diseases 0.000 description 1
- 238000000520 microinjection Methods 0.000 description 1
- 230000002969 morbid Effects 0.000 description 1
- 238000002703 mutagenesis Methods 0.000 description 1
- 231100000350 mutagenesis Toxicity 0.000 description 1
- 208000010125 myocardial infarction Diseases 0.000 description 1
- 239000013642 negative control Substances 0.000 description 1
- 229960004927 neomycin Drugs 0.000 description 1
- 210000000496 pancreas Anatomy 0.000 description 1
- 230000036961 partial effect Effects 0.000 description 1
- 230000002093 peripheral effect Effects 0.000 description 1
- 230000002688 persistence Effects 0.000 description 1
- 239000000546 pharmaceutical excipient Substances 0.000 description 1
- 230000000144 pharmacologic effect Effects 0.000 description 1
- 230000004962 physiological condition Effects 0.000 description 1
- 239000002504 physiological saline solution Substances 0.000 description 1
- 229920001223 polyethylene glycol Polymers 0.000 description 1
- 239000002243 precursor Substances 0.000 description 1
- 230000003449 preventive effect Effects 0.000 description 1
- 230000008569 process Effects 0.000 description 1
- 238000012545 processing Methods 0.000 description 1
- 239000000047 product Substances 0.000 description 1
- 238000000159 protein binding assay Methods 0.000 description 1
- 230000005180 public health Effects 0.000 description 1
- 238000012205 qualitative assay Methods 0.000 description 1
- 238000010188 recombinant method Methods 0.000 description 1
- 230000003362 replicative effect Effects 0.000 description 1
- 238000003571 reporter gene assay Methods 0.000 description 1
- 208000013223 septicemia Diseases 0.000 description 1
- 238000002741 site-directed mutagenesis Methods 0.000 description 1
- 210000003491 skin Anatomy 0.000 description 1
- 239000011780 sodium chloride Substances 0.000 description 1
- 238000002415 sodium dodecyl sulfate polyacrylamide gel electrophoresis Methods 0.000 description 1
- 125000006850 spacer group Chemical group 0.000 description 1
- 210000004989 spleen cell Anatomy 0.000 description 1
- 239000008227 sterile water for injection Substances 0.000 description 1
- 239000011550 stock solution Substances 0.000 description 1
- 238000007920 subcutaneous administration Methods 0.000 description 1
- 238000006467 substitution reaction Methods 0.000 description 1
- 230000001629 suppression Effects 0.000 description 1
- 238000002198 surface plasmon resonance spectroscopy Methods 0.000 description 1
- 238000003786 synthesis reaction Methods 0.000 description 1
- 238000010998 test method Methods 0.000 description 1
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 1
- 229940124597 therapeutic agent Drugs 0.000 description 1
- 238000013518 transcription Methods 0.000 description 1
- 230000035897 transcription Effects 0.000 description 1
- 238000011830 transgenic mouse model Methods 0.000 description 1
- LENZDBCJOHFCAS-UHFFFAOYSA-N tris Chemical compound OCC(N)(CO)CO LENZDBCJOHFCAS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 210000003462 vein Anatomy 0.000 description 1
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
- C07K16/18—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans
- C07K16/24—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against cytokines, lymphokines or interferons
- C07K16/244—Interleukins [IL]
- C07K16/245—IL-1
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
- C07K16/18—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans
- C07K16/24—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against cytokines, lymphokines or interferons
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P11/00—Drugs for disorders of the respiratory system
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P11/00—Drugs for disorders of the respiratory system
- A61P11/06—Antiasthmatics
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P13/00—Drugs for disorders of the urinary system
- A61P13/12—Drugs for disorders of the urinary system of the kidneys
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P19/00—Drugs for skeletal disorders
- A61P19/02—Drugs for skeletal disorders for joint disorders, e.g. arthritis, arthrosis
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P19/00—Drugs for skeletal disorders
- A61P19/08—Drugs for skeletal disorders for bone diseases, e.g. rachitism, Paget's disease
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P25/00—Drugs for disorders of the nervous system
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P25/00—Drugs for disorders of the nervous system
- A61P25/08—Antiepileptics; Anticonvulsants
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P27/00—Drugs for disorders of the senses
- A61P27/02—Ophthalmic agents
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P29/00—Non-central analgesic, antipyretic or antiinflammatory agents, e.g. antirheumatic agents; Non-steroidal antiinflammatory drugs [NSAID]
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P3/00—Drugs for disorders of the metabolism
- A61P3/08—Drugs for disorders of the metabolism for glucose homeostasis
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P3/00—Drugs for disorders of the metabolism
- A61P3/08—Drugs for disorders of the metabolism for glucose homeostasis
- A61P3/10—Drugs for disorders of the metabolism for glucose homeostasis for hyperglycaemia, e.g. antidiabetics
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P35/00—Antineoplastic agents
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P37/00—Drugs for immunological or allergic disorders
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P37/00—Drugs for immunological or allergic disorders
- A61P37/02—Immunomodulators
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P37/00—Drugs for immunological or allergic disorders
- A61P37/02—Immunomodulators
- A61P37/06—Immunosuppressants, e.g. drugs for graft rejection
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P37/00—Drugs for immunological or allergic disorders
- A61P37/08—Antiallergic agents
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P43/00—Drugs for specific purposes, not provided for in groups A61P1/00-A61P41/00
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P7/00—Drugs for disorders of the blood or the extracellular fluid
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P9/00—Drugs for disorders of the cardiovascular system
- A61P9/10—Drugs for disorders of the cardiovascular system for treating ischaemic or atherosclerotic diseases, e.g. antianginal drugs, coronary vasodilators, drugs for myocardial infarction, retinopathy, cerebrovascula insufficiency, renal arteriosclerosis
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K2039/505—Medicinal preparations containing antigens or antibodies comprising antibodies
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
- C07K2317/20—Immunoglobulins specific features characterized by taxonomic origin
- C07K2317/24—Immunoglobulins specific features characterized by taxonomic origin containing regions, domains or residues from different species, e.g. chimeric, humanized or veneered
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
- C07K2317/50—Immunoglobulins specific features characterized by immunoglobulin fragments
- C07K2317/56—Immunoglobulins specific features characterized by immunoglobulin fragments variable (Fv) region, i.e. VH and/or VL
- C07K2317/565—Complementarity determining region [CDR]
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Veterinary Medicine (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- General Chemical & Material Sciences (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
- Public Health (AREA)
- Pharmacology & Pharmacy (AREA)
- Animal Behavior & Ethology (AREA)
- Immunology (AREA)
- Diabetes (AREA)
- Pulmonology (AREA)
- Biophysics (AREA)
- Rheumatology (AREA)
- Hematology (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Physical Education & Sports Medicine (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
- Pain & Pain Management (AREA)
- Emergency Medicine (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- Neurology (AREA)
- Neurosurgery (AREA)
- Obesity (AREA)
- Urology & Nephrology (AREA)
- Orthopedic Medicine & Surgery (AREA)
- Endocrinology (AREA)
- Transplantation (AREA)
- Ophthalmology & Optometry (AREA)
- Vascular Medicine (AREA)
- Cardiology (AREA)
- Heart & Thoracic Surgery (AREA)
Description
Oppfinnelsen vedrører antistoffer mot humant interleukin I beta (IL-ip) og anvendelsen av slike antistoffer for fremstilling av et medikament for behandling av IL-1-formidlede sykdommer og forstyrrelser.
Interleukin 1 (IL-1) er en aktivitet produsert av celler i immunsystemet som virker som en formidler av akutt fase inflammatorisk respons. Uhensiktsmessig eller overskudds-produksjon av IL-1, spesielt IL-ip, er assosiert med patologien til forskjellige sykdommer og forstyrrelser, slik som septicemi, septisk eller endotoksisk sjokk, allergier, astma, bentap, ischemi, hjerteinfarkt, rheumatoid artritt og andre inflammatoriske sykdommer. Antistoffer mot IL-ip har blitt foreslått for anvendelse i behandlingen av IL-1-formidlede sykdommer og forstyrrelser; se f.eks. WO 95/01997 og diskusjonen i intro-duksjonen.
Vi har nå preparert forbedrede antistoffer mot human IL-ip for anvendelse i fremstilling av et medikament for behandling av IL-1-formidlede sykdommer og forstyrrelser.
Følgelig tilveiebringer foreliggende oppfinnelse,
antistoff til IL-ip, kjennetegnet ved at det har antigen-bindingsspesifisitet for et antigen-epitop til det modne humane IL-ip som inkluderer løkken som omfatter residiene Gly 22, Pro 23, Tyr 24 og Glu 25 og som er i stand til å inhibere bindingen av IL-ip til dets reseptor og hvori IL-ip bindingsmolekylet omfatter et antigen -bindingssete som omfatter minst ett immunoglobulin tungkjede variabelt domene (Vh) som omfatter i sekvenshypervariable regioner CDR1, CDR2 og CDR3 som vist i SEKV ID NR 1, det vil si at nevnte CDR1 har aminosyresekvensen Ser-Tyr-Trp-Ile-Gly, nevnte CDR2 har aminosyresekvensen Ile-Ile-Tyr-Pro-Ser-Asp-Thr-Arg-Tyr-Ser-Pro-Ser-Phe-Gln-Gly, og nevnte CDR3 har aminosyresekvensen Tyr-Thr-Asn-Trp-Asp-Ala-Phe-Asp-Ile og hvori IL-ip-bindingsmolekylet omfatter et antigenbindingssete som omfatter minst ett immunoglobulin lett kjedevariabelt domene (Vl) som omfattes i sekvenshypervariable regioner CDR1', CDR2' og CDR3' som vist i SEKV ID NR 2, det vil si at nevnte CDR1' har aminosyresekvensen Arg-Ala-Ser-Gln-Ser-Val-Ser-Ser-Tyr-Leu-Ala, nevnte CDR2' har aminosyresekvensen Asp-Ala-Ser-Asn-Arg-Ala-Thr, og nevnte CDR3' har aminosyresekvensen Gln-Gln-Arg-Ser-Asn-Trp-Met-Phe-Pro.
Opprinnelsen omfatter videre en anvendelse av IL-ip-bindingsmolekylet ifølge ethvert av kravene 1 - 2 for fremstilling av et medikament for forebygging av eller behandling av IL-1-mediert sykdom eller forstyrrelser, akutte og hyperakutte inflammatorisk reaksjoner, akutte infeksjoner, septisk sjokk, endotoksisk sjokk, voksenrespiratorisk "distress" syndrom, meningitt, lungebetennelse og alvorlige forbrenninger, kakeksi eller "wasting" syndrom, cancer, organdysfunksjon, AIDS-relatert kakeksi eller for forebygging eller behandling av inflammatoriske tilstander, allergier og allergiske tilstander, hypersensitive reaksjoner, autoimmune sykdommer, alvorlige infeksjoner, organ- eller vevstransplantatsavstøtning, autoimmun sykdom, artritt, rheumatorid artritt, fremskreden kronisk artritt, deformativ artritt, reumatiske sykdommer, inflammatoriske smerter, hypersensitivitet, luftveishypersensitivitet, hudhypersensitivitet, allergier, autoimmune hematologiske sykdommer, hemolytisk anemi, aplastisk anemi, genuin rødcelleanemi og idiopatisk trombocytopeni, systemisk lupuserythematose, polykondritt, sklerodoma, Wegener ganulomatose, dermatomyositis, kronisk aktiv hepatitt, myasthenia gravis, psoriasis, Steven-Johnson syndrom, idiopatisk "sprue", autoimmun inflammatorisk tarmsykdom, ulkerøs kolitt, Crohns sykdom, irritabel Bowel-syndrom, endokrin oftalmopati, Graves sykdom, sarcoidosis, multippel sklerose, primær gallecirros, juvenil diabetes, diabetes mellitus type I, uveititt (anterior og posterior), keratokonjunktiv sicca, vernal keratoconjunctivitt, interstitiell lungefibrose, psoriatrisk artritt og glomerulonefritt, idiopatisk nefrotisk syndrom, minimal "change" neuropati, astma, bronkitt, pneumoconiosis, lungeemfysem og andre obstruktive eller inflammatoriske sykdommer i luftveiene, sykdommer i benmetabolismen, osteoartritt, osteoporose, andre inflammatoriske artritter, generelt bentap, aldersrelatert bentap, periodental sykdom, cancer og IL-1-avhengige tumorer.
Omfattet av oppfinnelsen er også en første DNA-konstruksjon som koder for en tung kjede eller fragment derav, kjennetegnet ved at det omfatter
i) en første del som koder for et variabelt domene som omfatter en alternativ rammestruktur og hypervariable regioner, hvor nevnte hypervariable regioner er i sekvens CDR1, CDR2 og CDR3, aminosyresekvensene som er vist i SEKV ID NR 1, denne første delen starter med et codon som koder for den første aminosyren til det variable domenet og ender ved et codon som koder for den siste aminosyren til det variable domenet, og
ii) en andre del som koder for en tung kjedekonstant del som starter med et codon som koder for den første aminosyren til den konstante delen av den tunge kjeden, og slutter med et codon som koder for den siste aminosyren i den konstante delen, etterfulgt av et stoppcodon,
og
en andre DNA-konstruksjon som koder for en lett kjede som omfatter
iii) en første del som koder for et variabelt domene som omfatter en alternativ rammestruktur og hypervariable regioner; hvor nevnte hypervariable regioner er CDR3' og eventuelt CDR1' og CDR2', hvis aminosyresekvenser er vist i SEKV ID NR 2, hvor første del starter med et codon som koder for den første aminosyren til det variable domenet og slutter med et codon som koder for den siste aminosyren til det variable domenet, og
iv) en andre del som koder for en lett kjedekonstant del, som starter med et codon som koder for den første aminosyren til den konstante delen i den lette kjeden og slutter med et codon som koder for den siste aminosyren i den konstante delen etterfulgt av et stoppcodon.
Ekspresjonsvektor er omfattet av oppfinnelsen og er kjennetegnet ved at den er i stand til å replikere i en prokaryot eller eukaryot cellelinje som omfatter DNA-konstruksj onene ifølge krav 5.
Videre er en fremgangsmåte for produksjon av IL-ip-bindingsmolekyl, som omfatter i) å dyrke en organisme som er transformert med en ekspresjonsvektor ifølge krav 6, og (ii) gjenvinne IL-ip-bindingsmolekylet fra kulturen.
Til slutt omfatter foreliggende oppfinnelse farmasøytisk sammensetning , kjennetegnet ved at den omfatter et antistoff mot IL-ip i følge krav 1 i kombinasjon med et farmasøytisk hjelpestoff, fortynningsmiddel eller bærer.
Hvis ikke annet er indikert, er en hvilken som helst polypeptidkjede heri beskrevet som å ha en aminosyresekvens som starter med det N-terminale ytterpunkt og som ender i det C-terminale ytterpunktet. Når antigen-bindingssetet omfatter både Vh- og VL-domenene, kan disse lokaliseres på det samme polypeptidmolekylet eller, fortrinnsvis, kan hvert domene være på en forskjellig kjede, hvor Vn-domenet er en del av en immunoglobulin-tungkjede eller fragment derav, og Vler en del av en immunoglobuli-lettkjede eller fragment derav.
"IL-1 p-bindingsmolekylet" betyr et hvilket som helst molekyl som er i stand til å binde IL-ip-antigenet enten alene eller assosiert med andre molekyler. Bindingsreaksjonen kan ses ved standardmetoder (kvalitative analyser) som inkluderer, f.eks., en bioanalyse for å bestemme inhiberingen av IL-ip-binding til dets reseptor, eller en hvilken som
helst type av bindingsanalyser, med referanse til en negativ kontrolltest hvori et antistoff av ubeslektet spesifisitet, men av samme isotype, f.eks. et anti-CD25-antistoff, blir brukt. Bindingen av IL-ip-molekyler ifølge oppfinnelsen til IL-ip kan vises i en kon-kurransebindingsanalyse.
Eksempler på antigenbindingsmolekyler inkluderer antistoffer som produsert av B-celler eller hybridomer og kimære, CDR-transplanterte eller humane antistoffer eller et hvilket som helst fragment derav, f.eks. F(ab')2- og F ab-fragmenter, så vel som enkle kjeder eller enkle domenantistoffer.
Et enkelt kjedeantistoff består av de variable domenene til de tunge og lette kjedene til et antistoff kovalent bundet ved en peptidlinker som vanligvis består av fra 10 til 30 aminosyrer, fortrinnsvis fra 15 til 25 aminosyrer. Derfor inkluderer en slik struktur ikke den konstante delen av de tunge og lette kjedene og man tror at den lille peptid-spaceren skulle være mindre antigen enn den hele konstante delen. "Kimært antistoff betyr et antistoff hvor de konstante regionene til de tunge eller lette kjedene begge er av human opprinnelse, mens de variable domenene av både tunge og lette kjeder er av ikke-humane (f.eks. murine) opprinnelse, eller av human opprinnelse, men avledet fra et annet, humant antistoff. "CDR-transplantert antistoff betyr et antistoff hvor de hypervariable regionene (CDR) er avledet fra et donorantistoff, slik som et ikke-humant (f.eks. murint) antistoff eller et annet, humant antistoff, mens hele eller i det vesentlige hele av de andre delene av immunoglobulinet, f.eks. de konstante regionene og de høyt konser-verte delene av de variable domenene, dvs. rammestrukturregionene, er avledet fra et akseptorantistoff, f.eks. et antistoff av human opprinnelse. Et CDR-transplantert antistoff kan imidlertid inneholde få aminosyrer av donorsekvensen i rammestruktur-regionene, f.eks. i delene av rammestruktur-regionene nær de hypervariable regionene. "Humant antistoff betyr et antistoff hvor de konstante og variable regionene til både de tunge og lette kjedene alle er av human opprinnelse, eller i det vesentlige identisk til sekvensene til den humane opprinnelsen, ikke nødvendigvis fra det samme antistoffet og inkluderer antistoffet produsert av mus hvori de murine immunoglobulin-variable og konstante delgenene har blitt erstattet av deres humane motparter, f.eks. som beskrevet generelt i EP 0546073 Bl, USP 5545806, USP 5569825, USP 5625126, USP 5633425, USP 5661016, USP 5770429, EP 0 438474 Bl og EP 0 463151 Bl.
I WO 9006371 Al beskrives en fremstilling av anti-IL-alfa og -beta antistoffer og anvendelse av slike som diagnostiske og terapeutiske agenser, imidlertid blir ikke bindingsmolekyl med de spesifikke CDR områdene beskrevet.
Spesielt foretrukne IL-ip-bindingsmolekyler ifølge oppfinnelsen er humane antistoffer spesielt AAL 160-antistoffet, som beskrevet heri i eksemplene.
Skjønt i foretrukne kimære antistoffer er de variable domenene til både tunge og lette kjeder av human opprinnelse, f.eks. de fra AAL 160-antistoffet som er vist i Seq.Id.Nr. 1 og Seq.Id.Nr 2. De konstante regiondomene omfatter fortrinnsvis også egnede humane, konstante regiondomener, f.eks. som beskrevet i "Sequences of Proteins of Immunological Interest", Kabat E.A. et al., US Department of Health and Human Ser-vices, Public Health Service, National Institute of Health.
Hypervariable regioner kan assosieres med hvilke som helst rammestruktur-regioner, skjønt fortrinnsvis av human opprinnelse. Egnede rammestruktur-regioner er beskrevet i Kabat E.A. et al., ibid. Den foretrukne tungkjede-rammestrukturen er en human tungkjede-rammestruktur, f.eks. den til AAL 160-antistoffet som er vist i Seq.Id.Nr. 1. Den består av sekvensen til FRI-, FR2-, FR3- og FR4-regionene.
Følgelig tilveiebringer oppfinnelsen et IL-ip-bindingsmolekyl som omfatter minst ett antigen-bindingssete som omfatter enten et første domene som har en aminosyresekvens som i det vesentlige er identisk til den vist i Seq.Id.Nr. 1 som starter med aminosyre i posisjon 1 og som ender med aminosyre i posisjon 118 eller et første domene som beskrevet over og et andre domene som har en aminosyresekvens som i det vesentlige er identisk til den vist i Seq.Id.Nr. 2, som starter med aminosyre i posisjon 1 og som ender med aminosyre i posisjon 107.
Monoklonale antistoffer som reises mot et protein som naturlig finnes i alle mennesker er de typisk utviklet i et ikke-humant system, f.eks. i mus. Som en direkte konsekvens av dette, reiser et xenogent antistoff produsert av et hybridom, når den administreres til mennesker, en uønsket immunrespons som fortrinnsvis blir formidlet av den konstante delen av det xenogene immunoglobulinet. Dette begrenser klart anvendelsen av slike antistoffer siden de ikke kan administreres i en lengre tidsperiode. Derfor er det spesielt foretrukket å anvende enkelkjede, enkeltdomene, kimære, CDR-transplanterte, eller spesielt humane antistoffer som ikke kan reise en vesentlig allogen respons når den blir ad-ministrert til mennesker.
I lys av det foregående, er et mer foretrukket IL-ip-bindingsmolekyl ifølge oppfinnelsen valgt fra et humant anti- IL-ip-antistoff som omfatter minst a) en immunoglobulin tungkjede eller fragment derav som omfatter (i) et variabelt domene som omfatter i sekvens de hypervariable regionene CDR1, CDR2 og CDR3 og (ii) den konstante delen eller fragment derav av en human tungkjede; hvor nevnte CDR1 har aminosyresekvensen Ser-Tyr-Trp-Ile-Gly, nevnte CDR2 har aminosyresekvensen Ile-Ile-Tyr-Pro-Ser-Asp-Ser-Asp-Thr-Arg-Tyr-Ser-Pro-Ser-Phe-Gln-Gly, og nevnte CDR3 har aminosyresekvensen Tyr-Thr-Asn-Trp-Asp-Ala-Phe-Asp-Ile og
b) en immunoglobulin-lettkjede eller fragment derav som omfatter (i) et variabelt domene som omfatter CDR3"hypervariabel region og eventuelt også
CDR1', CDR2' hypervariable regioner og (ii) den konstante delen eller fragment derav av en human lettkjede, hvor nevnte CDR1' har aminosyresekvensen Arg-Ala-Ser-Gln-Ser-Val-Ser-Ser-Tyr-Leu Ala, nevnte CDR2' har aminosyresekvensen Asp-Ala-Ser-Asn-Arg-Ala-Thr, og nevnte CDR3' har aminosyresekvensen Gln-GlnArg-Ser-Asn-Trp-Met-Phe-Pro;
og direkte ekvivalenter derav.
Alternativt kan et IL-ip-bindingsmolekyl ifølge oppfinnelsen bli valgt fra et enkelkjede bindingsmolekyl som omfatter et antigenbindingssete som omfatter
a) et første domene som omfatter i sekvens de hypervariable regionene CDR1, CDR2 og CDR3, hvor nevnte hypervariable regioner har aminosyresekvensene som vist i Seq.Id.Nr. 1, b) et andre domene som omfatter de hypervariable regionene CDR3' og eventuelt CDR1' og CDR2', hvor nevnte hypervariable regioner har aminosyresekvensene som vist i Seq.Id.Nr. 2 og c) en peptidlinker som er bundet enten til det N-terminale ytterpunktet til det første domenet og det C-terminale ytterpunktet til det andre domenet, eller til
det C-terminale ytterpunktet til det første domenet og til det N-terminale ytterpunktet til det andre domenet;
og direkte ekvivalenter derav.
Det er vel kjent at mindre endringer i en aminosyresekvens slik som delesjon, addisjon eller substitusjon av én eller et fåtall eller til og med flere aminosyrer, kan føre til en allelisk form av utgangsproteinet som har i det vesentlige identiske egenskaper. Derfor betyr "direkte ekvivalenter derav" enten et hvilken som helst enkelt domene i IL-ip-bindingsmolekylet (molekyl X). (i) hvori de hypervariable regionene CDR1, CDR2 og CDR3 sett på som et hele er minst 80% homologe, fortrinnsvis minst 90% homologe, mer foretrukket minst 95% homologe til de hypervariable regionene som vist i Seq.Id.Nr. 1 og, (ii) som er i stand til å inhibere bindingen av IL-1 p til dets reseptorer i det vesentlige i samme grad som et referansemolekyl som har rammestrukturregionene identisk til den hos molekyl X, men som har hypervariable regionene CDR1, CDR2 og CDR3 identisk til de som er vist i Seq.Id.No. 1
eller et hvilket som helst IL-ip-bindingsmolekyl som har minst to domener pr. bindingssete (molekyl X') (i) hvor de hypervariable regionene CDR1, CDR2, CDR3, CDR3' og eventuelt CDR1' og CDR2' sett under ett, er minst 80% homologe, fortrinnsvis minst 90% homologe, mer foretrukket minst 95% homologe, til de hypervariable regionene som vist i Seq.Id.No. 1 og 2, og (iii) som er i stand til å inhibere bindingen av IL-ip til dets reseptorer i det vesentlige til samme grad som et referansemolekyl som har rammestrukturregionene og kontante deler identisk til molekyl X', men som har de hypervariable regionene CDR1, CDR2, CDR3 og CDR3', og eventuelt CDR1' og CDR2' identisk til de vist i Seq.Id.No. 1 og 2.
I den foreliggende beskrivelse er aminosyresekvensene minst 80% homolog til hver-andre hvis de har minst 80% identiske aminosyreresidier i en lik posisjon når de blir sekvensert og oppstilt optimalt, mellomrommene eller insersj onene i aminosyresekvensene blir beregnet som ikke-identiske residier.
Inhiberingen av bindingen av IL-ip til dets reseptor kan lett testes i forskjellige analyser som inkluderer slike analyser som er beskrevet nedenfor i teksten. IL-ip-reseptoren som anvendes er fortrinnsvis IL-ip-type-1-reseptoren. Betegnelsen "i samme grad" betyr at referansen og de ekvivalente molekylene utviser, på et statistisk grunnlag, det vesentlige identisk IL-ip-bindingsinhibisjonskurve i én av analysene som er referert til over. Analysen som anvendes kan f.eks. være en analyse for konkurrerende inhibering av binding IL-ip ved løselig IL-1-reseptorer og IL-ip-bindingsmolekylene ifølge oppfinnelsen.
Mest foretrukket omfatter det humane IL-ip-antistoffet minst
a) en tung kjede som omfatter et variabelt domene som har en aminosyresekvens som i det vesentlige er identisk til den vist i Seq.Id.No. 1 som starter
med aminosyren i posisjon 1 og som slutter ved aminosyren i posisjon 118, og den konstante delen av en human tung kjede; og
b) en lett kjede som omfatter et variabelt domene som har en aminosyresekvens som i det vesentlige er identisk til den vist i Seq.Id.No. 2 som begynner med
aminosyren i posisjon 1 og som ender ved aminosyren i posisjon 107, og den konstante delen av en human lett kjede.
Den konstante delen av en human tungkjede kan være yi,72,73, j4, u, ai,0,2, 5 eller e-typen, fortrinnsvis av y-typen eller mer foretrukket av yi-typen, mens den konstante delen av en human lett kjede kan være av%eller X,-typen (som inkluderer X,i, X2og Å^-sub-typene), men er fortrinnsvis av x-typen. Aminosyresekvensene til alle disse konstante delene er gitt i Kabat et al. ibid.
Et IL-ip-bindingsmolekyl ifølge oppfinnelsen kan produseres ved rekombinante DNA-teknikker. I lys av dette, må ett eller flere DNA-molekyler som koder for bindingsmolekylet konstrueres, plasseres under egnede kontrollsekvenser og overført inn i en egnet vertsorganisme for ekspresjon.
På en svært generell måte er det følgelig tilveiebrakt:
(i) DNA-molekyler som koder for et enkelt domene IL-1 p-bindingsmolekyl fra oppfinnelsen, et enkeltkjedet IL-ip-bindingsmolekyl ifølge oppfinnelsen, en tung eller lett kjede eller fragmenter derav av et IL-ip-bindingsmolekyl ifølge oppfinnelsen og (ii) Anvendelsen av DNA-molekylene ifølge oppfinnelsen for produksjon av et IL-ip-bindingsmolekyl ifølge oppfinnelsen ved rekombinante meto-der.
Den foreliggende oppfinnelsen innen fagfeltet er slik at en som kjenner fagfeltet er i stand til å syntetisere DNA-molekylene ifølge oppfinnelsen, gitt den informasjonen som tilveiebringes heri, dvs. aminosyresekvensene til de hypervariable regionene og DNA-sekvensene som koder for disse. En fremgangsmåte for å konstruere et variabelt dome-negen er f.eks. beskrevet i EPA 239 400, og kan i korthet oppsummeres som følger: Et gen som koder for et variabelt domene av MAb av en hvilken som helst spesifisitet er klonet. DNA-segmentene som koder for rammestrukturen og de hypervariable regionene er bestemt og DNA-segmentene som koder for de hypervariable regionene blir fjernet slik at DNA-segmentene som koder for rammestrukturregionene blir satt sam-men med egnede restriksjonsseter i koblingene. Restriksjonssetene kan fremstilles i de egnede posisjonene ved mutagenese av DNA-molekylet ved standardprosedyre. Dob-belttrådede syntetiske CDR-kassetter blir fremstilt ved DNA-syntese ifølge sekvensene gitt i Seq.Id. nr. 1 eller 2. Disse kassettene er tilveiebrakt med "sticky" ender, slik at de kan ligeres i koblingene til rammestrukturen.
Dessuten er det ikke nødvendig å ha tilgang til mRNA fra en produserende hybridom-cellelinje for å erverve en DNA-konstruksjon som koder for IL-ip-bindingsmolekylene ifølge oppfinnelsen. Derfor gir PCT-søknad WO 90/07861 fullverdige instruksjoner for produksjonen av et antistoff ved rekombinante DNA-teknikker, bare gitt som skriftlig informasjon for nukleotidsekvensene til genet. Fremgangsmåten omfatter syntese av et antall av oligonukleotider, deres amplifisering ved PCR-metoden, og deres spleising slik at det gir den ønskede DNA-sekvensen.
Ekspresjonsvektorene omfatter en egnet promoter eller gener som koder for tung og lett kjedekonstantdeler er offentlig tilgjengelig. Når et DNA-molekyl ifølge oppfinnelsen blir fremstilt, kan det derfor lett overføres til en egnet ekspresjonsvektor. DNA-molekylene som koder for enkel-kjedeantistoffer kan også bli fremstilt ved standardmetoder, feks. som beskrevet i WO 88/1649.
I lys av det foregående er ingen hybridom eller cellelinjedeponering nødvendig for å etterkomme kriteriene for tilstrekkelig beskrivelse.
I en spesiell utførelsesform av oppfinnelsen inkluderes første og andre DNA-konstruk-sjoner for produksjon av et IL-ip-bindingsmolekyl som beskrevet under
Den første DNA-konstruksjonen koder for en tungkjede eller fragment derav, og omfatter a) en første del som koder for et variabelt domene som omfatter alternative rammestruktur og hypervariable regioner, hvor nevnte hypervariable regioner er i sekvens CDR1, CDR2 og CDR3 aminosyresekvensen som er vist i Seq.id.nr. 1; denne første delen som starter med et codon som koder for den første aminosyren i det variable domene, og ender i et codon som koder for den siste aminosyren i det variable domenet, og b) en andre del som koder for en tungkjede, konstant del eller fragment derav som starter med et codon som koder for den første aminosyren i den konstante delen til den tunge kjeden, og som ender med et codon som koder for den siste aminosyren i den konstante delen eller fragment derav, etterfulgt av et stoppcodon.
Fortrinnsvis koder denne første delen et variabelt domene som er en aminosyresekvens som i det vesentlige er identisk til aminosyresekvensen som vist i seq.id nr. 1 som starter ved aminosyren i posisjon 1 og som ender med aminosyren i posisjon 118. Mer foretrukket har nukleotidsekvensen som vist i seq.id.nr. 1, som starter med nukleotidposisjon 1 og som stopper ved nukleotidposisjon 354. Fortrinnsvis koder den andre delen den konstante delen av en human tung kjede, mer fortrinnsvis den konstante delen av human yl-kjede. Den andre delen kan være et DNA-fragment av genomisk opprinnelse (som omfatter introner) eller et cDNA-fragment (uten introner).
Den andre DNA-konstruksjonen som koder for en lett kjede eller fragment derav og omfatter a) en første del som koder for et variabelt domene som omfatter alternativ rammestruktur og hypervariable regioner; hvor nevnte hypervariable regioner er CDR3' og eventuelt CDR1' og CDR2', aminosyresekvensene som er vist i Seq.id.nr. 2; denne første delen som starter med et codon som koder for den første aminosyren i det variable domenet og som slutter ved et codon som koder for den siste aminosyren i det variable domenet, og b) en andre del som koder for en lett kjedekonstant del eller fragment derav som starter med et codon som koder for den første aminosyren i den konstante delen til den lette kjeden og slutter ved et codon som koder for den siste aminosyren til den konstante delen eller fragmenter derav etterfulgt av et stoppcodon.
Fortrinnsvis koder denne første delen et variabelt domene som har en aminosyresekvens som i det vesentlige er identisk til aminosyresekvensen som vist i Seq.id.nr. 2 som starter med aminosyren i posisjon 1 og som slutter ved aminosyren i posisjon 107. Mer foretrukket har den første delen nukleotidsekvensen som vist i Seq.id. nr. 2 som starter med nukleotidet i posisjonl og som slutter ved nukleotidet i posisjon 321. Foretrukket er også den andre delen som koder for den konstante delen av en human lett kjede, mer foretrukket den konstante delen av den humane x-kjeden.
Oppfinnelsen inkluderer IL-ip-bindingsmolekyler hvor én eller flere av residiene til CDR1, CDR2, CDR3, CDR1' CDR2' eller CDR3' er byttet ut fra residiene vist i Seq.id.nr. 1 og Seq.id.nr. 2; f.eks. ved mutasjon, f.eks. setedirigert mutagenese til de korresponderende DNA-sekvensene. Oppfinnelsen inkluderer DNA-sekvenser som koder for slike endrede IL-ip-bindingsmolekyler. Spesielt omfatter oppfinnelsen IL-ip-bindingsmolekyler hvori én eller flere residier av CDR1' eller CDR2' har blitt endret fra residiene vist i Seq.id.nr. 2.
I de første og andre DNA-konstruksjonene kan de første og andre delene bli separert av et intron, og en enhancer kan lokaliseres i intronet mellom første og andre del. Tilstedeværelse av en slik enhancer som blir transskribert, men ikke translatert kan assistere i effektiv transskripsjon. I spesielle utførelsesformer omfatter de første og andre DNA-konstruksj onene enhanceren til et tungkjedegen, fortrinnsvis av human opprinnelse.
Hvert av DNA-konstruksj onene er satt under kontroll av egnede kontrollsekvenser, spesielt under kontroll av en egnet promoter. En hvilken som helst type av promoter kan
anvendes, forutsatt at den er tilpasset til vertsorganismen hvor DNA-konstruksj onene vil bli overført for ekspresjon. Hvis ekspresjonen imidlertid skal finne sted i en mammalsk celle, er det spesielt foretrukket å anvende promotere til et immunoglobulingen, eller en cytomegalovirus (CMV) promoter, f.eks. en human CMV-promoter.
Det ønskede antistoffet kan produseres i en cellekultur eller i et transgent dyr. Et egnet, transgent dyr kan erverves ifølge standardmetoder som inkluderer mikroinjeksjon inn i egg, de første og andre DNA-konstruksj onene plassert under egnede kontrollsekvenser, overføring av de preparerte eggene inn i egnede pseudo-gravide hunner og selektere et-terkommere som uttrykker det ønskede antistoffet.
Når antistoffkj edene blir produsert i en cellekultur, må DNA-konstruksj onene først set-tes inn i en enkel ekspresjonsvektor eller i to separate, men kompatible ekspresjonsvektorer, det siste er muligens mest foretrukket.
Følgelig tilveiebringer oppfinnelsen også en ekspresjonsvektor som er i stand til å replikere i en prokaryot eller eukaryot cellelinje som omfatter minst ett av DNA-konstruksjonene som er beskrevet over.
Hver ekspresjonsvektor som inneholder en DNA-konstruksj on blir deretter overført til en egnet vertsorganisme. Når DNA-konstruksj onene separat blir satt inn i to ekspresjonsvektorer, kan det blir overført separat, dvs. én type av vektor pr. celle, eller co-overført, hvor den siste er foretrukket. En egnet vertsorganisme kan være en bakterie, gjær eller en mammalsk cellelinje, hvor den siste er foretrukket. Mer foretrukket er den mammalske cellelinjen av lymfoid opprinnelse, dvs. et myelom, hybridom eller en nor-mal, immortalisert B-celle som ikke uttrykker noe endogent antistoff tung eller lett kjede.
For ekspresjon i mammalske celler er det foretrukket at IL-ip-bindingsmolekyl-kodende sekvens er integrert i vertcelle-DNA inne i et locus som tillater eller favoriserer høy-nivåekspresjon av IL-ip-molekylet. Celler hvori IL-ip-bindingsmolekyl-kodende sekvens er integrert inn i et slikt favoriserbart loci, kan identifiseres og selekteres på basis av nivåene til IL-ip-bindingsmolekylet som de uttrykker. En hvilken som helst egnet, selekterbar markør kan bli brukt for fremstilling av vertceller som inneholder IL-ip-bindingsmolekyl-kodende sekvens; f.eks. et dhfr-gen/metotrexat eller ekvivalent seleksjonssystem kan anvendes. Foretrukne systemer for ekspresjon av IL-1 p-bindingsmolekylet ifølge oppfinnelsen inkluderer GS-basert amplifisering/seleksjons-systemer, slik som de beskrevet i EP 0256055 B, EP 0323997 B og europeisk patentsøknad 89303964.4. Fortrinnsvis inneholder vektoren andre sekvenser som fremmer ekspresjon, prosessering og eksport av det uttrykte protein; f.eks. kan vektoren inneholde en ledersekvens assosiert med den kodende sekvensen.
I et ytterligere aspekt av oppfinnelsen er det tilveiebrakt en prosess for produktet av et IL-ip-bindingsmolekyl som omfatter (i) å dyrke en organisme som blir transformer med en ekspresjonsvektor som definert over, og (ii) gjenvinne i IL-1 P-bindingsmolekylet fra kulturen.
I overensstemmelse med den foreliggende oppfinnelse har det blitt funnet at AAL 160-antistoffet har bindingsspesifisitet for det antigene epitopet fra human IL-ip som inkluderer løkken som omfatter residiene, Gly 22, Pro 23, Tyr 24 og Glu 25 av modent, humant IL-lp. (Residiene, Gly 22, Pro 23, Tyr 24 og Glu 25 til modent, humant IL-lp som korresponderer til residiene 138, 139, 140 og 141 respektivt fra den humane IL-ip-forløper.) Dette epitopet ser ut til å være på utsiden av gjenkjenningssetet til IL-1-reseptoren og det er derfor mest overraskende at antistoffene til dette epitopet, f.eks. AAL 160-antistoffet, er i stand til å inhibere bindingen av IL-ip til dets reseptor. Antistoffene, spesielt kimære og CDR-transplanterte antistoffer, og spesielt humane antistoffer, som har bindingsspesifisitet for det antigene epitopet til det modne, humane IL-ip som inkluderer løkken som omfatter residiene, Gly 22, Pro 23, Tyr24 og Glu 25 og som er i stand til å inhibere bindingen av IL-ip til dets reseptor; og anvendelse av slike antistoffer for fremstilling av et medikament for behandling av IL-1-formidlede sykdommer og forstyrrelser, er nye og er inkludert innenfor området av foreliggende oppfinnelse.
Følgelig inkluderer foreliggende oppfinnelse i et ytterligere aspekt et antistoff til IL-ip som har antigen-bindingsspesifisitet for et antigenepitop av IL-ip som inkluderer løk-ken som omfatter residiene Gly 22, Pro 23, Tyr 24 og Glu 25 av modent, humant IL-ip fra modent, humant IL-ip som er i stand til å inhibere bindingen av IL-ip til dets reseptor.
Enda et ytterligere aspekt av oppfinnelsen inkluderer:
i) anvendelse av et antistoff til IL-1 p, som har antigen-bindingsspesifisitet for et antigenepitop fra modent, humant IL-ip som inkluderer løkken som omfatter residiene Gly 22, Pro 23, Tyr 24 og Glu 25, og som er i stand til å inhibere bindingen av IL-ip til dets reseptor, for behandling av en IL-1-formidlet sykdom eller forstyrrelse;
ii) en farmasøytisk sammensetning som omfatter et antistoff til IL-ip, som har antigen-bindingsspesifisitet for et antigenepitop fra modent, humant IL-ip som inkluderer løkken som omfatter residiene Gly 22, Pro 23, Tyr 24 og Glu 25, og som er i stand til å inhibere bindingen av IL-ip til dets reseptor, i kombinasjon med en farmasøytisk akseptabel eksipient, diluent eller bærer;
og
iii) anvendelse av et antistoff til IL-1 p som har antigen-bindingsspesifisitet for et antigent epitop av modent, humant IL-ip som inkluderer løkken som omfatter residiene Gly 22, Pro 23, Tyr 24 og Glu 25 og som er i stand til å inhibere
bindingen av IL-ip til dets reseptor, for fremstilling av et medikament for behandlingen av en IL-1-formidlet sykdom eller forstyrrelse.
Foreliggende oppfinnelse kan benyttes i en fremgangsmåte for å behandle en IL-1-formidlet sykdom eller forstyrrelse hos en pasient som omfatter å administrere til pasienten en effektiv mengde av et antistoff til IL-ip, som har antigen-bindingsspesifisitet for et antigenisk epitop til modent, humant IL-ip som inkluderer løkken som omfatter residiene Gly 22, Pro 23, Tyr 24 og Glu 25, og som er i stand til å inhibere bindingen av IL-ip til dets reseptor;
For formålene ifølge den foreliggende oppfinnelse er beskrivelsen av et antistoff "i stand til å inhibere bindingen av IL-1 P" hvis antistoffet er i stand til å inhibere bindingen av IL-ip til dets reseptor som i det vesentlige har samme utstrekning som AAL 160-antistoffet, hvor "til samme grad" har betydningen som definert over.
I den foreliggende beskrivelsen omfatter betegnelsen "IL-1-formidlet sykdom", alle sykdommer og medisinske tilstander hvor IL-1 spiller en rolle, enten direkte eller indi-rekte, i sykdommen eller i medisinsk tilstand, som inkluderer årsaksforhold, utvikling, progresjon, vedholdenhet eller patologi for sykdommen eller tilstanden.
I den foreliggende beskrivelse refererer betegnelsene "behandling" eller "behandle" seg til både profylaktiske eller forebyggende behandling så vel som kurativ eller sykdoms-modifiserende behandling, som inkluderer behandling av pasient som har risiko for å kontrahere sykdommen eller er mistenkt å ha kontrahert sykdommen, så vel som pasi-entene som er syke eller har blitt diagnostisert til å lide av en sykdom eller medisinsk tilstand, og inkluderer suppresjon av klinisk tilbakefall.
Antistoffer som har bindingsspesifisitet for antigent epitop fra modent, humant IL-ip som inkluderer løkken som omfatter residiene Gly 22, Pro 23, Tyr 24 og Glu 25 og som er i stand til å inhibere bindingen av IL-ip til dets reseptor, blir heretter referert til som antistoffer ifølge oppfinnelsen. Foretrukne antistoffer ifølge oppfinnelsen er antistoffer som har bindingsspesifisitet for dette epitopet hos humant IL-ip, når det humane IL-ip er under nativ, f.eks. normale fysiologiske tilstander, men ikke under denaturerende tilstander, f.eks. ikke med tilstedeværelse av et denaturerende middel, slik som SDS. Anti stoffer ifølge oppfinnelsen kan kryssreagere med ikke-human IL-1(3, som har antigene epitoper som inkluderer Gly ved residiet 22, Pro ved residiet 23, Tyr ved residiet 24 og Glu ved residiet 25, og som er svært likt det korresponderende humane epitopet. F.eks. kan antistoffene ifølge oppfinnelsen kryssreagere med primat IL-ip, slik som rhesus-ape, cynomolgus-ape IL-1 eller marmoset-ape IL-1.
Fortrinnsvis er antistoffene ifølge oppfinnelsen IL-ip-bindingsmolekyler ifølge første og andre aspekter ifølge oppfinnelsen. Antistoffene ifølge oppfinnelsen er humane antistoffer, mest foretrukket AAL160-antistoff eller direkte ekvivalent derav.
Antistoffene ifølge oppfinnelsen blokkerer effektene av IL-ip på dets målceller og kan derfor benyttes i behandlingen av IL-1-formidlede sykdommer og forstyrrelser. Disse og andre farmakologiske aktiviteter av antistoffene ifølge oppfinnelsen, kan vises i standardtestfremgangsmåten, f.eks. som beskrevet under: 1. Nøytralisering av humant IL-1 P-formidlet aktivering av IL-8-promoter Potensialet til å nøytralisere IL-ip-avhengig cellulære signaler blir bestemt i en reporter-genanalyse.
Den humane melanoma-cellelinjen G361 er stabilt transfektert med en luciferase-repor-tergenkonstruksjon basert på den humane IL-8-promoteren. Reporter-genekspresjonen og aktiviteten er avhengig av IL-ip eller TNFa i denne cellelinjen. Cellene blir stimulert med 300 pg/ml med rekombinant humant IL-ip eller ekvivalenten med 100 pg/ml i kondisjonert medium med tilstedeværelse av forskjellige konsentrasjoner av antistoff ifølge oppfinnelsen eller IL-l-reseptorantagonist, som varierer mellom 6 og 18000 pM. Det kimære antistoffet Simulect® (basiliximab) blir brukt som en matchende isotype-kontroll. Luciferase-aktiviteten blir kvantifisert i en kjemiilluminiscens-analyse. Antistoffer ifølge oppfinnelsen har IC50på omtrent 1 nM (f.eks. fra omtrent 0,2 til omtrent 5 nM) når den blir testet i denne analysen.
2. Nøytralisering av IL-1 P-avhengig produksjon av PGE2og interleukin-6 ved primære, humane fibroblaster
Produksjonen av PGE2og IL-6 i primære, humane, dermale fibroblaster er avhengig av IL-ip. TNFa alene kan ikke effektivt indusere disse inflammatoriske formidlerne, men ha en synerg med IL-1. Primære, dermale fibroblaster blir brukt som surrogatmodell for IL-1-indusert cellulær aktivering. Primære, humane fibroblaster blir stimulert med re kombinant IL-ip eller kondisjonert medium ervervet fra LPS-stimulerte, humane PBMC ved tilstedeværelse av forskjellige konsentrasjoner av antistoff ifølge oppfinnelsen, eller IL-IRA varierende fra 6 til 18000 pM. Det kimære anti-CD25-antistoffet Simulect® (basiliximab) blir brukt som matchende isotype-kontroll. Supernatanten blir tatt etter 16 timer med stimulering og analysert for IL-6 ved ELISA eller PGE2ved RIA. Antistoffene ifølge oppfinnelsen har IC50Sfor inhibering av IL-6-produksjon på omtrent 1 nM eller mindre (f.eks. fra omtrent 0,1 til omtrent 1 nM) og for inhibering av PGE2-produksjon på omtrent 1 nM (f.eks. fra omtrent 0,1 til omtrent 1 nM) når den blir testet som over.
Som indikert i de ovenfor nevnte analysene, blokkerer antistoffene ifølge oppfinnelsen effektene til IL-ip. Følgelig har antistoffene ifølge oppfinnelsen farmasøytisk utnyttelse som følger: Antistoffene ifølge oppfinnelsen er nyttige for profylakse og behandling av IL-1-for-midlede sykdommer eller medisinske tilstander, f.eks. inflammatoriske tilstander, allergier og allergiske tilstander, hypersensitivitetsreaksjoner, autoimmunsykdommer, alvorlige infeksjoner og organ- og vevstransplantatavstøtning.
Antistoffene ifølge oppfinnelsen kan f.eks. anvendes for behandling av resipienter av hjerte, lunge, kombinert hjerte-lunge, lever, nyre, bukspyttkjertel, hud eller corneal-tran-splantater og for å forebygge transplantatavstøtningssykdom ("graft-versus-host disease"), slik som etter en benmargstransplantasjon.
Antistoffer ifølge oppfinnelsen er spesielt nyttige og kan anvendes i behandling, forebygging eller bedre autoimmun sykdom og inflammatoriske tilstander, spesielt inflammatoriske tilstander med en etiologi som inkluderer en autoimmun komponent, slik som artritt (f.eks. rheumatoid artritt, artritt chronica progediente og artriitt deformans), og reumatiske sykdommer som inkluderer inflammatoriske tilstander og reumatiske sykdommer som involverer bentap, inflammatorisk smerte, hypersensitivitet (som inkluderer både luftveishypersensitivitet og dermal hypersensitivitet) og allergier. Spesifikke autoimmune sykdommer for hvilke antistoffene ifølge oppfinnelsen kan anvendes, inkluderer autoimmune hematologiske sykdommer (som inkluderer f.eks. hemolytisk anemi, aplastisk anemi, rene røde celle-anemi og ideopatisk trombocytopeni), systemisk lupus erytematosus, polykondritt, sclerodom, Wegener granulomatosis, dermatomyositt, kronisk aktiv hepatitt, myasthenia gravis, psoriasis, Steven-Johnson syndrom, ideopatisk sprue, autoimmun inflammatorisk tarmsykdom
(som inkluderer f.eks. ulcerativ colit, Crohns sykdom og irritabel Bowel syndrom), endokrin oftalmopati, Graves sykdom, sarkoidosis, multippel sklerose, primær gallecirrhose, juvenil diabetes (diabetes mellitus type I), uveitis (anterior og posterior), kertoconjunctivit sicca og vernal keratoconjunctivit og, interstitiell lungefibrose, psoriasis artritt og glomerulonephritt (med og uten nephrotisk syndrom, f.eks. som inkluderer idiopatisk nephrotisk syndrom eller minimalendrings nephropati).
Antistoffene ifølge oppfinnelsen kan også anvendes i behandling, forebygging og forbedring av astma, bronkitt, pneumokoniose, lungeemfysem og andre obstruktive eller inflammatoriske sykdommer i luftveiene.
Antistoffene ifølge oppfinnelsen kan anvendes i behandling av uønskede akutte og hyperakutte inflammatoriske reaksjoner som er formidlet av IL-1 eller involvere IL-1-produksjon, spesielt IL-ip, eller fremme TNF-frigjøring ved IL-1, f.eks. akutte infeksjoner, f.eks. septisk sjokk (f.eks. endotoksisk sjokk og voksen respiratorisk "distress"-syndrom), meningitt, pneumoni; og alvorlige forbrenninger; og for behandling av kakeksi eller "wasting"-syndrom assosiert med morbid TNF-frigivelse, konsekvenser av infeksjoner, cancer eller organdysfunksjon, spesielt AIDS-relatert kakeksi, f.eks. assosiert med eller en konsekvens av HIV-infeksjon.
Antistoffene ifølge oppfinnelsen kan anvendes til å behandle sykdommer med ben-metabolisme som inkluderer osteartritt, osteoporose og andre inflammatoriske artritides, og bentap generelt som inkluderer aldersrelatert bentap, og spesielt periodontal sykdom.
Antistoffene ifølge oppfinnelsen kan bli brukt for behandling av cancere, spesielt IL-1-avhengige tumorer.
For disse indikasjonene vil selvfølgelig den egnede dosen variere, f.eks. på grunnlag av det spesielle antistoffet ifølge oppfinnelsen som anvendes, verten, måten for administrering og egenskapene og alvorlighetsgraden til tilstanden som blir behandlet. For profylaktisk anvendelse vil imidlertid tilfredsstillende resultater generelt erverves ved daglige doser fra omtrent 0,1 mg til omtrent 5 mg pr. kg kroppsvekt. Antistoff ifølge oppfinnelsen kan administreres parenteralt, intravenøst, f.eks. inn i antecubital eller andre perifere vener, intramuskulært eller subkutant. En profylaktisk behandling omfatter å administrere molekylet ifølge oppfinnelsen én gang daglig til én gang i uken i 2 til 4 uker. Farmasøytiske sammensetninger ifølge oppfinnelsen kan fremstilles på konvensjonelle måter. Sammensetningen ifølge oppfinnelsen blir fortrinnsvis tilveiebrakt i lyofilisert form. For umiddelbar administrering blir den løst i en egnet vandig bærer, f.eks. sterilt vann for injeksjon, eller sterilt buffret, fysiologisk saltvann. Hvis det er ønskelig å fremstille en løsning med større volum for administrering ved infusjon, f.eks. iv-infusjon, heller enn en bolusinjeksjon, f.eks. en subkutan bolusinjeksjon, er det fordelaktig å in-korporere humant serumalbumin eller pasientens eget heparinisert blod i saltvannet på tidspunktet for formuleringen. Tilstedeværelse av et overskudd av slikt fysiologisk, inert protein hindrer tap av antistoff ved absorpsjon til veggene i beholderen og røret som brukes ved infusjonsløsning. Hvis albumin blir brukt, er en egnet konsentrasjon fra 0,5 til 4,5 vektprosent med saltvannsløsning.
Oppfinnelsen blir ytterligere beskrevet ved følgende eksempler som refererer til vedlagte figurer: Fig. 1 er en graf som viser konkurranse-inhibering av AAL160-binding til IL-ip ved lø-selig IL-1-type I og type II-reseptorer; Fig. 2 er en graf som viser inhibering av IL-ip-indusert feber i en rottemodell ved AAL 160, og Fig. 3 er en graf som viser varighet av virkningen til AAL160 i rotte-IL-ip-indusert feber.
EKSEMPLER
Transgene mus genmodifiserte for å uttrykke IgG/x-repertoiret i stedet for murint immunoglobulint repertoire (Fishwild et al., 1996, Nat Biotechnol., 14, 845-851) blir brukt for å fremstille antistoffer til humant IL-ip. B-cellene fra disse musene blir immortalisert ved standard hybridomteknologi og murine hybridom-celler erverves, som sekreterer det humane IgGl/x-antistoffet AAL160.
Eksempel 1: Fremstilling av hybridom og rensning av antistoff
Genetisk modifiserte mus 66 (Medarex Inc. Annadale, NJ) blir immunisert med rekombinant IL-ip (50 ug) subkutant på flere steder i adjuvant. Musene blir boosted fem ytterligere ganger med den siste injeksjonen tre dager før fusjon. På dagen for fusjonen blir mus 66 drept ved C02-inhalasjon og miltcellene (4,1 x IO<7>) blir fusert ved en ruti-nemetode ved å bruke PEG 4000 med et likt antall av PAI-O-celler, en musemyelom-cellelinje. Fuserte celler blir platet ut på en 624 brønner (1 ml/brønn) som inneholder et "forings"-lag av museperitoneale celler (Balb C-mus), i HAT supplert RPMI 1640,10% varmeinaktivert føtalt kalveserum 5 x 10"<5>M p-merkaptoetanol. Supernatantene blir samlet og testet i ELISA og screenet for IL-ip-reaktive monoklonale antistoffer. Fem monoklonale antistoffer fra IgG/^-subklassen blir identifisert. Kloningen utføres ved å bruke 4 x 96 brønners mikrotiterplater, hvor en plater 0,5 celler pr. brønn. Etter to uker blir brønnene inspisert med et invertert mikroskop. Supernatanten blir samlet fra brøn-nene positive for vekst og produksjon av anti- IL-1 p-monoklonale antistoffer blir evalu-ert med ELISA. 1-2L av kondisjonert supernatant fra fire subkloner av den i utgangs-punktet identifiserte hybridoma # 476 blir preparert og antistoffene renset ved affinitets-kromatografi på en protein A-kolonne.
Rensning og partiell aminosyresekvenser av tung- og lett-kjede aminosyresekven-sering
Lette og tunge kjeder av det rensede antistoffet AAL 160 blir separert ved SDS-PAGE og de amino-terminale aminosyrene bestemt ved Edman degradering. Renheten til antistoffet som brukes i disse studiene er >90 % ved sekvensering. cDNA-sekvensene som koder for de tunge og lette kjedevariable domenene blir ervervet ved PCR-amplifisering av cDNA ervervet fra mRNA fra de klonede hybridomcellene og fullstendig sekvensert. Amino-terminale sekvenser av tunge og lette kjedevariable domener og korresponderende DNA-sekvenser er gitt under, hvor CDR blir vist med uthevet skrift. DNA-sekvensene som koder for de tunge og lette kjedevariable domenene og korresponderende aminosyresekvenser for AAL 160 er også gitt i de vedlagte sekvenslistene som Seq.Id. numrene 1 til 4.
Konstruksjon av ekspresjonsvektorer for tung og lett kjede
De klonede Vlog Vh kodende sekvenser ble amplifisert ved PCR og satt inn via egnede restriksjonsseter inn i kasett-vektorene som tilveiebringer immunoglobulinpromoteren, ledersekvensene fra RFT2-antistoffer (Heinrich et al., (1989) J.Immunol. 143, 3589-97), del av J-segmentene og et spleiset donorsete. Den lette kjede-kassetten som inneholder den fullstendige VL-regionen, promoter og ledersekvens for ekspresjon ble overført til en ekspresjonsvektor som inneholdt det humane Ck-genet, immunoglobulin tung kjede-enhancer, og den modifiserte murine dhfr cDNA for seleksjon ved metotrexat (MTX). Tungkjedekassetten ble overført i en ekspresjonsvektor som koder for det humane IgGl-genet, immunoglobulin tungkjede-enhanceren og neomycin-resistensgenet for seleksjon.
Både den tunge og lette kjeden er i konfigurasjon i ekspresjonsvektorene som ligner den genomiske konfigurasjonen av rearrangert immunoglobulingener som man tror er viktig for høynivå-ekspresjon.
For antistoffproduksjon blir de ovenfor nevnte vektorene også ko-transfektert inn i en egnet vertscellelinje, f.eks. SP2/0-cellelinjen, cellene som inneholder vektorsekvensene blir selektert ved metotrexat-seleksjon, og utvalgte cellelinjer blir dyrket for å uttrykke AAL160-antistoff. Alternativt kan et GS-basert amplifisering/seleksjonssystem slik som den beskrevet i EP 0256055 B, EP 0323997 B eller europeisk patentsøknad 89303964.4 anvendes, i dette tilfellet er dhfr-selekterbar markør erstattet av en GS-kodende sekvens.
Eksempel 2: Biokjemiske og biologiske data
Det monoklonale antistoffet AAL 160 er funnet å nøytralisere aktiviteten til interleukin-ip in vitro. Det monoklonale antistoffet er ytterligerekarakterisertfor dets binding til rekombinant humant IL-ip Biacore-analyse. Metoden for nøytralisering blir vurdert ved konkurrende bindingsstudier ved løselige IL-1-reseptor. Den biologiske aktiviteten til antistoffet AAL160 mot rekombinant og naturlig IL-ip, blir bestemt i primære, humane celler (eksempel 3), som responderer på stimulering av IL-ip.
2.1 Bestemmelse av dissosierings-ekvilibreringskonstant
Assosiering og dissosierings-ratekonstanten for bindingen av rekombinant, humant IL-ip til AAL160 ble bestemt av BIAcore analyse. AAL160 ble immobilisert, og bindingen av rekombinant IL-ip i et konsentrasjonsområde fira 0,5 til 12 nM ble målt ved overflate plasmonresonans. Det valgte formatet tillater behandling av bindingshendelsen av IL-ip til AAL160 ifølge en l:l-støkiometri. Data-analyse ble utført ved å bruke BIAevaluation software.
AAL 160 bindes til rekombinant, humant IL-ip med en høy affinitet.
2.2 Konkurrerende inhibering av binding til løselig IL-l-reseptorer
Bindingskonkurransestudiet med løselig IL-1 type I og II-reseptorer
Konkurranse mellom AAL 160 og løselig, human IL-1 type I og II-reseptorer ble målt Biacore. AAL 160 ble immobilisert på "chip"-overflaten og rekombinant, human IL-ip (8 nM) ble injisert på binding til AAL 160 ved fravær eller tilstedeværelse av økende konsentrasjoner av rekombinant, humant løselig reseptor I (0 - 10 nM) eller reseptor II (0 - 80 nM). Resultatene som ble ervervet er vist i fig. 1. Binding av NVP AAL 160 NX-1 til IL-ip er konkurrerende ved både IL-l-resptor type I og type II.
2.3 Reaktivitetsprofil mot humant IL-1 a, humant IL-1RA og IL-ip fra gnagere
og apearter
Reaktivitetsprofilen til AAL160 mot humant IL-la, IL-IRA og murine, rotte, kanin og cynomolgus-ape IL-ip er bestemt ved Biacore-analyse. AAL 160 ble mobilisert, og cytokinene som ble undersøkt ble anvendt i en konsentrasjon på 8 nM (eller 20 nM når det gjelder IL-lp).
AAL160 gir ingen signifikant kryssreaksjon med human IL-la, human IL-1RA, eller murine, rotte eller kanin IL-ip. Reaktiviteten mot cynomolgus-ape IL-ip er praktisk talt identisk med det humane cytokinet.
Eksempel 3: Nøytralisering av IL-ip-avhengig produksjon av PGE2og
interleukin-6 ved primære humane fibroblaster.
Produksjonen av PGE2og IL-6 i primære, humane dermale fibroblaster er avhengig av IL-ip. TNF-a alene kan effektivt indusere disse inflammatoriske mediatorene, men har synergi med IL-1. Primære, dermale fibroblaster blir brukt som en surrogatmodell for IL-1-indusert cellulær aktivering.
Primære, humane fibroblastere blir stimulert med rekombinant IL-ip eller kondisjonert medium ervervet fra LPS-stimulerte humane PBMC ved tilstedeværelse av forskjellige konsentrasjoner av AAL160 eller IL-1RA, varierende fra 6 til 18000 pM. Det kimære anti-CD25 antistoffet Simulect® blir brukt som en matchende isotype-kontroll. Supernatanten blir tatt 16 timer etter stimuleringen, og blir analysert for IL-6 med ELISA eller PGE2med RIA.
AAL 160 blokkerer effektivt produksjonen av IL-6 og PGE2i humane, dermale fibroblaster med en IC50lik for både det rekombinante og naturlige IL-ip.
Eksempel 4: In vivo-effektivitet og varighet av virkningen av AAL160
Effektivitet:
In vivo-effektiviteten til anti-huIL-ip-antistoff, AAL160 ble testet gjennom en rottemodell hvor feber blir indusert ved en iv-injeksjon av huIL-ip (100 ng/rotte). Antistoffet forårsaker en dose relatert inhibering av feberresponsen i et doseområde på 1, 3 og 10 ug/kg intravenøst (n = 6 rotter) - se fig. 2. CHI621 (Simulect® , basiliximab) blir brukt som kontrollantistoffet.
Varighet av virkning:
Varigheten av virkningen til AAL160 ble undersøkt i rotte- IL-ip-indusert feber som følger: Antistoffet blir injisert intravenøst enten 24 timer eller 30 minutter (standard protokoll) før induksjon av feber ved en intravenøs injeksjon av humant IL-ip, og kroppstemperaturen målt 2 og 4 timer senere. En lik grad av inhibering av feberresponsen ses ved begge tider (se fig. 3). Som forventet, er kontroll-antistoffet CHI621 (Simulect®, basiliximab) ikke effektivt ved begge tidspunkter. Dette funnet indikerer at AAL 160 humant antistoff er tilstede i en aktiv form i minst 24 timer i rotten, og blir ikke metabolisert, utskilt eller bundet i vevet i dette tidsrommet.
Eksempel 5: Røntgenstudier av AAL160 Fab og dets kompleks med IL-ip-struk-turbestemmelser av AAL160 Fab ved 2,0Å oppløsning: Et 2,0Å oppløsningsdata-sett av svært god kvalitet (Rsym=0,051, fullstendiggjøring = 99,9%, overskudd (redundancy) = 8,2) ble samlet fra en Fab-krystall dyrket ved damp-diffusjon "hanging drop"-teknikk ved pH 9,5 i 50% PEG 200, 0,1 M CHES. Krystallen var i "space"-gruppe P2i2i2imed enhet-celledimensjoner a = 62,17Å b=89,83Å c=123,73Å og ett Fab-molekyl pr. symmetrisk enhet (Matthew koeffisient: 3,6Å<3>/Da, estimert oppløsningsinnhold: 66%). Strukturen ble bestemt ved molekylær erstatning og ble foredlet til en sluttkrystallografisk R-faktor på 0,209 (fri R-faktor = 0,261). Slutt-modellen inkluderer residiene 1 - 213 på den lette kjeden, 1 - 131 og 138 - 218 på den tunge kjeden, 387 vannmolekyler og 1 PEG-molekyl. Slutt-elektrontettheten er godt definert for alle CDR-residier unntatt Trp 94 (CDR3) fra den lette kjeden. Posisjonen til sidekjeden til denne residien er ikke godt definert i de to krystallformene som har blitt undersøkt til dags dato, skjønt den foreslår at den er svært mobil ved fravær av et bundet antigen.
Krystallisering av Fab-komplekset med IL-ip og preliminær eksperimentell modell av komplekset: noen få krystaller fra AAL 160 Fab i kompleks med antigenet IL-ip ble ervervet fra en 76 mg/ml stokkløsning fra l:l-komplekset i 2,0 M ammoniumsulfat, 0,1 M Tris pH 8,5. Krystallene vokste svært langsomt i en tidsperiode på flere uker. De dif-frakterte svakt til omtrent 3,2Å på hjemmekilden. Preliminære datasett ble samlet og molekylærerstatning ble utført ved å bruke høy-resulosjonsstrukturer til det frie Fab og til humant IL-lp (J.P. riestle et al, EMBO J. 7,339 (1988)) som utgangsmodeller. Be-regningene ga en svært klar og utvetydig løsning når Fv og Fc-delene på Fab ble brukt som separate moduler (korrelasjon 67,1%, R-faktor 0,354 etter "AMORE FITTING"-trinn, ved å bruke data mellom 8,0 og 3,5Å). Den etterfølgende sammenligningen av de frie og bundne former av Fab viste at albuevinkelen er svært forskjellig i de to struktu-rene. Resultatene av de molekylære erstatningsberegningene tilveiebrakte en første molekylær modell av interaksjonene mellom antigenet IL-ip og det monoklonale antistoffet AAL160. En preliminær analyse av disse interaksjonene indikerer at 1) IL-ip utgjør tette interaksjoner med alle tre CDR til den tunge kjeden og til CDR3 på den lette kjeden. I motsetning involverer få interaksjoner, hvis noen i det hele tatt, CDR1 og CDR2 på den lette kjeden. 2) Løkken som omfatter residiene Gly 22, Pro 23, Tyr 24 og Glu 25 fra modent IL-ip bindes til senteret for antigen-kombinerende sete, og ser derved ut til å være en nøkkelkomponent i epitopet. Denne løkken er ikke lokalisert til regionen til molekylet som er forskjellig fra de fleste muse- IL-ip. Pro 23, Tyr 24 og Glu 25 er kon-servert, men residiet 22 er en Gly i human IL-1 p, og en Asp i muse- IL-ip. Sammenlig-ning av krystallstrukturene til humant (PDB entry 2ilb) og muse- IL-ip (PDB entry 8ilb) viser at denne punktmutasjonen resulterer i en svært forskjellig konformasjon i hovedkjeden rundt Pro 23. Denne lokale, strukturelle forskjellen er konsistent med den observerte mangelen på kryssreaktivitet hos AAL160 når det gjelder musecytokine.
Claims (8)
1.
Antistoff til IL-1 p,karakterisert vedat det har antigen-bindingsspesifisitet for et antigen-epitop til det modne humane IL-ip som inkluderer løkken som omfatter residiene Gly 22, Pro 23, Tyr 24 og Glu 25 og som er i stand til å inhibere bindingen av IL-1 p til dets reseptor og hvori IL-1 p bindingsmolekylet omfatter et antigen -bindingssete som omfatter minst ett immunoglobulin tungkjede variabelt domene (Vh) som omfatter i sekvenshypervariable regioner CDR1, CDR2 og CDR3 som vist i SEKV ID NR 1, det vil si at nevnte CDR1 har aminosyresekvensen Ser-Tyr-Trp-Ile-Gly, nevnte CDR2 har aminosyresekvensen Ile-Ile-Tyr-Pro-Ser-Asp-Thr-Arg-Tyr-Ser-Pro-Ser-Phe-Gln-Gly, og nevnte CDR3 har aminosyresekvensen Tyr-Thr-Asn-Trp-Asp-Ala-Phe-Asp-Ile og hvori IL-ip-bindingsmolekylet omfatter et antigenbindingssete som omfatter minst ett immunoglobulin lett kjedevariabelt domene (Vl) som omfattes i sekvenshypervariable regioner CDR1', CDR2' og CDR3' som vist i SEKV ID NR 2, det vil si at nevnte CDR1' har aminosyresekvensen Arg-Ala-Ser-Gln-Ser-Val-Ser-Ser-Tyr-Leu-Ala, nevnte CDR2' har aminosyresekvensen Asp-Ala-Ser-Asn-Arg-Ala-Thr, og nevnte CDR3' har aminosyresekvensen Gln-Gln-Arg-Ser-Asn-Trp-Met-Phe-Pro.
2. IL-ip-bindingsmolekyl ifølge krav 1,karakterisertv e d at det er et humant antistoff.
3. IL-ip-bindingsmolekyl ifølge et hvert av kravene 1-2,karakterisert vedat det anvendes som et medikament.
4.
Anvendelse av IL-ip-bindingsmolekylet ifølge ethvert av kravene 1 - 2 for fremstilling av et medikament for forebygging av eller behandling av IL-1-mediert sykdom eller forstyrrelser, akutte og hyperakutte inflammatorisk reaksjoner, akutte infeksjoner, septisk sjokk, endotoksisk sjokk, voksenrespiratorisk "distress" syndrom, meningitt, lungebetennelse og alvorlige forbrenninger, kakeksi eller "wasting" syndrom, cancer, organdysfunksjon, AIDS-relatert kakeksi eller for forebygging eller behandling av inflammatoriske tilstander, allergier og allergiske tilstander, hypersensitive reaksjoner, autoimmune sykdommer, alvorlige infeksjoner, organ- eller
vevstransplantatsavstøtning, autoimmun sykdom, artritt, rheumatorid artritt, fremskreden kronisk artritt, deformativ artritt, reumatiske sykdommer, inflammatoriske smerter, hypersensitivitet, luftveishypersensitivitet, hudhypersensitivitet, allergier, autoimmune hematologiske sykdommer, hemolytisk anemi, aplastisk anemi, genuin rødcelleanemi og idiopatisk trombocytopeni, systemisk lupuserythematose, polykondritt, sklerodoma, Wegener ganulomatose, dermatomyositis, kronisk aktiv hepatitt, myasthenia gravis, psoriasis, Steven-Johnson syndrom, idiopatisk "sprue", autoimmun inflammatorisk tarmsykdom, ulkerøs kolitt, Crohns sykdom, irritabel Bowel-syndrom, endokrin oftalmopati, Graves sykdom, sarcoidosis, multippel sklerose, primær gallecirros, juvenil diabetes, diabetes mellitus type I, uveititt (anterior og posterior), keratokonjunktiv sicca, vernal keratoconjunctivitt, interstitiell lungefibrose, psoriatrisk artritt og glomerulonefritt, idiopatisk nefrotisk syndrom, minimal "change" neuropati, astma, bronkitt, pneumoconiosis, lungeemfysem og andre obstruktive eller inflammatoriske sykdommer i luftveiene, sykdommer i benmetabolismen, osteoartritt, osteoporose, andre inflammatoriske artritter, generelt bentap, aldersrelatert bentap, periodental sykdom, cancer og IL-1-avhengige tumorer.
5.
En første DNA-konstruksj on som koder for en tung kjede eller fragment derav,karakterisert vedat det omfatter v) en første del som koder for et variabelt domene som omfatter en alternativ rammestruktur og hypervariable regioner, hvor nevnte hypervariable regioner er i sekvens CDR1, CDR2 og CDR3, aminosyresekvensene som er vist i SEKV ID NR 1, denne første delen starter med et codon som koder for den første aminosyren til det variable domenet og ender ved et codon som koder for den siste aminosyren til det variable domenet, og vi) en andre del som koder for en tung kjedekonstant del som starter med et codon som koder for den første aminosyren til den konstante delen av den tunge kjeden, og slutter med et codon som koder for den siste aminosyren i den konstante delen, etterfulgt av et stoppcodon,
og
en andre DNA-konstruksj on som koder for en lett kjede som omfatter vii) en første del som koder for et variabelt domene som omfatter en alternativ rammestruktur og hypervariable regioner; hvor nevnte hypervariable regioner er CDR3' og eventuelt CDR1' og CDR2', hvis aminosyresekvenser er vist i SEKV ID NR 2, hvor første del starter med et codon som koder for den første amino syren til det variable domenet og slutter med et codon som koder for den siste aminosyren til det variable domenet, og viii) en andre del som koder for en lett kjedekonstant del, som starter med et codon som koder for den første aminosyren til den konstante delen i den lette kjeden og slutter med et codon som koder for den siste aminosyren i den konstante delen etterfulgt av et stoppcodon.
6.
Ekspresjonsvektor,karakterisert vedat den er i stand til å replikere i en prokaryot eller eukaryot cellelinje som omfatter DNA-konstruksj onene ifølge krav 5.
7.
Fremgangsmåte for produksjon av IL-1 p-bindingsmolekyl,karakterisert vedat den omfatter i) å dyrke en organisme som er transformert med en ekspresjonsvektor ifølge krav 6, og (ii) gjenvinne IL-ip-bindingsmolekylet fra kulturen.
8.
Farmasøytisk sammensetning,karakterisert vedat den omfatter et antistoff til IL-1 p i følge krav 1 i kombinasjon med et farmasøytisk hjelpestoff, fortynningsmiddel eller bærer.
Applications Claiming Priority (2)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| GBGB0001448.0A GB0001448D0 (en) | 2000-01-21 | 2000-01-21 | Organic compounds |
| PCT/EP2001/000591 WO2001053353A2 (en) | 2000-01-21 | 2001-01-19 | Recombinant antibodies to human interkleukin-1 beta |
Publications (3)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| NO20023266D0 NO20023266D0 (no) | 2002-07-05 |
| NO20023266L NO20023266L (no) | 2002-08-28 |
| NO329816B1 true NO329816B1 (no) | 2010-12-27 |
Family
ID=9884137
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| NO20023266A NO329816B1 (no) | 2000-01-21 | 2002-07-05 | Antistoffer mot humant IL-10, anvendelse av disse, DNA konstruksjoner, ekspresjonsvektor, fremgangsmate for fremstilling og farmasoytisk sammensetning |
Country Status (33)
| Country | Link |
|---|---|
| US (4) | US20030124617A1 (no) |
| EP (1) | EP1248804B2 (no) |
| JP (2) | JP3978338B2 (no) |
| KR (1) | KR100697126B1 (no) |
| CN (1) | CN1395581B (no) |
| AR (1) | AR027253A1 (no) |
| AT (1) | ATE346868T1 (no) |
| AU (1) | AU772949B2 (no) |
| BR (1) | BR0107661A (no) |
| CA (1) | CA2396212C (no) |
| CO (1) | CO5261584A1 (no) |
| CY (1) | CY1107989T1 (no) |
| CZ (1) | CZ302738B6 (no) |
| DE (1) | DE60124863T3 (no) |
| DK (1) | DK1248804T4 (no) |
| ES (1) | ES2274865T5 (no) |
| GB (1) | GB0001448D0 (no) |
| HK (1) | HK1050013A1 (no) |
| HU (1) | HUP0204156A3 (no) |
| IL (2) | IL150551A0 (no) |
| MX (1) | MXPA02007091A (no) |
| MY (1) | MY155269A (no) |
| NO (1) | NO329816B1 (no) |
| NZ (1) | NZ519936A (no) |
| PE (1) | PE20011219A1 (no) |
| PL (1) | PL207642B1 (no) |
| PT (1) | PT1248804E (no) |
| RU (1) | RU2264413C2 (no) |
| SI (1) | SI1248804T2 (no) |
| SK (1) | SK288054B6 (no) |
| TR (1) | TR200201780T2 (no) |
| WO (1) | WO2001053353A2 (no) |
| ZA (1) | ZA200205659B (no) |
Families Citing this family (40)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| GB0001448D0 (en) * | 2000-01-21 | 2000-03-08 | Novartis Ag | Organic compounds |
| EP1297142B1 (en) | 2000-06-29 | 2009-01-14 | Abbott Laboratories | Dual specificity antibodies and methods of making and using |
| GB0020685D0 (en) | 2000-08-22 | 2000-10-11 | Novartis Ag | Organic compounds |
| KR20040077889A (ko) * | 2002-01-28 | 2004-09-07 | 메다렉스, 인코포레이티드 | 전립선 특이적 막 항원 (ｐｓｍａ)에 대한 인간모노클로날 항체 |
| GB0303337D0 (en) | 2003-02-13 | 2003-03-19 | Celltech R&D Ltd | Biological products |
| EP2280286A1 (en) * | 2003-09-15 | 2011-02-02 | Oklahoma Medical Research Foundation | Method of using cytokine assays to diagnose, treat, and evaluate systemic lupus erythematosus |
| DK2270045T3 (en) | 2004-02-06 | 2015-04-07 | Univ Massachusetts | ANTIBODIES AGAINST CLOSTRIDIUM DIFFICILE TOXINES AND APPLICATIONS THEREOF |
| EP1851245B1 (en) * | 2005-01-26 | 2012-10-10 | Amgen Fremont Inc. | Antibodies against interleukin-1 beta |
| PE20061324A1 (es) * | 2005-04-29 | 2007-01-15 | Centocor Inc | Anticuerpos anti-il-6, composiciones, metodos y usos |
| MX2007016032A (es) | 2005-06-21 | 2008-03-10 | Xoma Technology Ltd | Anticuerpos de enlace a il-1-beta y fragmentos de los mismos. |
| ES2944067T3 (es) * | 2005-10-26 | 2023-06-19 | Novartis Ag | Uso de anticuerpos anti il-1beta |
| EA035459B1 (ru) * | 2005-12-29 | 2020-06-19 | Сентокор, Инк. | Антитело против il-23p19 |
| US7943328B1 (en) | 2006-03-03 | 2011-05-17 | Prometheus Laboratories Inc. | Method and system for assisting in diagnosing irritable bowel syndrome |
| KR20110079922A (ko) * | 2006-04-14 | 2011-07-11 | 노파르티스 아게 | 안과 장애 치료를 위한 ｉｌ－1 항체의 용도 |
| US20080085524A1 (en) * | 2006-08-15 | 2008-04-10 | Prometheus Laboratories Inc. | Methods for diagnosing irritable bowel syndrome |
| RU2554747C9 (ru) | 2006-12-20 | 2015-10-20 | Ксома (Сша) Ллс | Способы лечения il-1бета-зависимых заболеваний |
| US8324350B2 (en) * | 2006-12-29 | 2012-12-04 | Abbott Laboratories | Dual-specific IL-1α/IL-1β antibodies |
| WO2008106131A2 (en) | 2007-02-28 | 2008-09-04 | Schering Corporation | Combination therapy for treatment of immune disorders |
| CA3213888A1 (en) * | 2007-05-29 | 2008-12-04 | Novartis Ag | New indications for anti-il-i-beta therapy |
| CA2710252C (en) * | 2007-12-20 | 2017-03-28 | Xoma Technology Ltd. | Methods for the treatment of gout |
| ES2398693T3 (es) * | 2008-06-06 | 2013-03-21 | Xoma Technology Ltd. | Métodos para el tratamiento de la artritis reumatoide |
| US8377429B2 (en) | 2008-09-05 | 2013-02-19 | Xoma Technology Ltd. | Methods for improvement of beta cell function with anti-IL-1β antibodies or fragments thereof |
| KR102071834B1 (ko) | 2009-10-26 | 2020-01-30 | 에프. 호프만-라 로슈 아게 | 글리코실화된 면역글로불린의 제조 방법 |
| BR112012028557A2 (pt) * | 2010-05-07 | 2019-09-24 | Xoma Technology Ltd. | uso de um anticorpo anti-il-1b ou de fragmentos de ligação do mesmo. |
| DE102010033565B4 (de) * | 2010-07-27 | 2012-06-21 | Tetec Tissue Engineering Technologies Ag | Marker zur Bestimmung von Chondrozyten |
| NZ606824A (en) | 2010-08-02 | 2015-05-29 | Regeneron Pharma | Mice that make binding proteins comprising vl domains |
| CN103328511B (zh) * | 2010-09-10 | 2016-01-20 | 埃派斯进有限公司 | 抗-IL-1β抗体及其使用方法 |
| PL2578688T5 (pl) | 2011-02-25 | 2023-05-29 | Regeneron Pharmaceuticals, Inc. | Myszy adam6 |
| MY172718A (en) | 2011-08-05 | 2019-12-11 | Regeneron Pharma | Humanized universal light chain mice |
| DE102011083595A1 (de) | 2011-09-28 | 2013-03-28 | Bayer Pharma AG | Inhibition der Wirkung von Interleukin 1 beta zur Behandlung der Endometriose |
| EP3050900A1 (en) | 2011-12-19 | 2016-08-03 | Xoma (Us) Llc | Methods for treating acne |
| CA2859408C (en) | 2011-12-20 | 2020-06-16 | Regeneron Pharmaceuticals, Inc. | Humanized light chain mice |
| SG10201708562VA (en) | 2012-02-13 | 2017-12-28 | Agency Science Tech & Res | IL-1β Neutralizing Human Monoclonal Antibodies |
| KR102436654B1 (ko) | 2012-06-12 | 2022-08-26 | 리제너론 파마슈티칼스 인코포레이티드 | 제한된 면역글로불린 중쇄 유전자좌를 가지는 인간화된 비-인간 동물 |
| AU2015231025A1 (en) | 2014-03-21 | 2016-09-15 | Regeneron Pharmaceuticals, Inc. | Vl antigen binding proteins exhibiting distinct binding characteristics |
| KR102601491B1 (ko) | 2014-03-21 | 2023-11-13 | 리제너론 파마슈티칼스 인코포레이티드 | 단일 도메인 결합 단백질을 생산하는 비-인간 동물 |
| CN107438622A (zh) | 2015-03-19 | 2017-12-05 | 瑞泽恩制药公司 | 选择结合抗原的轻链可变区的非人动物 |
| CN110818793A (zh) * | 2018-08-14 | 2020-02-21 | 中山康方生物医药有限公司 | 抗IL-1β的抗体、其药物组合物及其用途 |
| AU2019383017A1 (en) | 2018-11-20 | 2021-06-03 | Janssen Biotech, Inc. | Safe and effective method of treating psoriasis with anti-IL-23 specific antibody |
| CA3138241A1 (en) | 2019-05-23 | 2020-11-26 | Janssen Biotech, Inc. | Method of treating inflammatory bowel disease with a combination therapy of antibodies to il-23 and tnf alpha |
Family Cites Families (11)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US4772685A (en) | 1985-10-02 | 1988-09-20 | Merck & Co., Inc. | Immunogenic peptides of human interleukin-1 and the corresponding anti-peptide antibodies |
| US4935343A (en) * | 1986-08-08 | 1990-06-19 | Syntex (U.S.A.) Inc. | Monoclonal antibodies for interleukin-1β |
| FR2640146B1 (fr) * | 1988-12-08 | 1993-12-24 | Commissariat A Energie Atomique | Anticorps monoclonaux anti-interleukines 1(alpha) et 1(beta), leur procede de production et applications desdits anticorps a la detection des interleukines 1(alpha) et 1(beta) et en therapeutique |
| GB8928874D0 (en) | 1989-12-21 | 1990-02-28 | Celltech Ltd | Humanised antibodies |
| US5859205A (en) * | 1989-12-21 | 1999-01-12 | Celltech Limited | Humanised antibodies |
| GB9014932D0 (en) | 1990-07-05 | 1990-08-22 | Celltech Ltd | Recombinant dna product and method |
| JP3714683B2 (ja) * | 1992-07-30 | 2005-11-09 | 生化学工業株式会社 | 抗リウマチ剤 |
| US5429614A (en) | 1993-06-30 | 1995-07-04 | Baxter International Inc. | Drug delivery system |
| WO1995001997A1 (en) * | 1993-07-09 | 1995-01-19 | Smithkline Beecham Corporation | RECOMBINANT AND HUMANIZED IL-1β ANTIBODIES FOR TREATMENT OF IL-1 MEDIATED INFLAMMATORY DISORDERS IN MAN |
| US6051228A (en) | 1998-02-19 | 2000-04-18 | Bristol-Myers Squibb Co. | Antibodies against human CD40 |
| GB0001448D0 (en) * | 2000-01-21 | 2000-03-08 | Novartis Ag | Organic compounds |
-
2000
- 2000-01-21 GB GBGB0001448.0A patent/GB0001448D0/en not_active Ceased
-
2001
- 2001-01-18 CO CO01003434A patent/CO5261584A1/es active IP Right Grant
- 2001-01-18 MY MYPI20010226A patent/MY155269A/en unknown
- 2001-01-19 KR KR1020027009374A patent/KR100697126B1/ko not_active IP Right Cessation
- 2001-01-19 PE PE2001000065A patent/PE20011219A1/es not_active Application Discontinuation
- 2001-01-19 IL IL15055101A patent/IL150551A0/xx unknown
- 2001-01-19 CZ CZ20022531A patent/CZ302738B6/cs not_active IP Right Cessation
- 2001-01-19 SI SI200130698T patent/SI1248804T2/sl unknown
- 2001-01-19 AU AU33697/01A patent/AU772949B2/en not_active Ceased
- 2001-01-19 US US10/181,324 patent/US20030124617A1/en not_active Abandoned
- 2001-01-19 CN CN018039529A patent/CN1395581B/zh not_active Expired - Fee Related
- 2001-01-19 EP EP01905671A patent/EP1248804B2/en not_active Expired - Lifetime
- 2001-01-19 DK DK01905671.2T patent/DK1248804T4/da active
- 2001-01-19 AR ARP010100247A patent/AR027253A1/es active IP Right Grant
- 2001-01-19 DE DE60124863T patent/DE60124863T3/de not_active Expired - Lifetime
- 2001-01-19 PL PL356297A patent/PL207642B1/pl unknown
- 2001-01-19 PT PT01905671T patent/PT1248804E/pt unknown
- 2001-01-19 BR BR0107661-2A patent/BR0107661A/pt not_active IP Right Cessation
- 2001-01-19 RU RU2002121649/13A patent/RU2264413C2/ru not_active IP Right Cessation
- 2001-01-19 TR TR2002/01780T patent/TR200201780T2/xx unknown
- 2001-01-19 AT AT01905671T patent/ATE346868T1/de active
- 2001-01-19 SK SK1035-2002A patent/SK288054B6/sk not_active IP Right Cessation
- 2001-01-19 CA CA2396212A patent/CA2396212C/en not_active Expired - Fee Related
- 2001-01-19 WO PCT/EP2001/000591 patent/WO2001053353A2/en active IP Right Grant
- 2001-01-19 HU HU0204156A patent/HUP0204156A3/hu not_active Application Discontinuation
- 2001-01-19 ES ES01905671T patent/ES2274865T5/es not_active Expired - Lifetime
- 2001-01-19 NZ NZ519936A patent/NZ519936A/en not_active IP Right Cessation
- 2001-01-19 JP JP2001553825A patent/JP3978338B2/ja not_active Expired - Fee Related
- 2001-01-19 MX MXPA02007091A patent/MXPA02007091A/es active IP Right Grant
-
2002
- 2002-07-02 IL IL150551A patent/IL150551A/en not_active IP Right Cessation
- 2002-07-05 NO NO20023266A patent/NO329816B1/no not_active IP Right Cessation
- 2002-07-16 ZA ZA2002/05659A patent/ZA200205659B/en unknown
-
2003
- 2003-03-19 HK HK03102022.5A patent/HK1050013A1/zh unknown
-
2006
- 2006-07-11 US US11/484,472 patent/US7491392B2/en not_active Expired - Fee Related
- 2006-12-29 CY CY20061101860T patent/CY1107989T1/el unknown
-
2007
- 2007-01-04 JP JP2007000148A patent/JP2007097598A/ja active Pending
-
2009
- 2009-01-09 US US12/351,007 patent/US20090232803A1/en not_active Abandoned
-
2011
- 2011-03-10 US US13/044,918 patent/US20110182894A1/en not_active Abandoned
Also Published As
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| EP1248804B2 (en) | Recombinant antibodies to human interleukin-1 beta | |
| AU2001295490B2 (en) | Antibodies to human IL-1beta | |
| EP1299421B1 (en) | Antibodies to human mcp-1 | |
| AU2001295490A1 (en) | Antibodies to human IL-1beta | |
| AU2001283903A1 (en) | Antibodies to human MCP-1 |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| MM1K | Lapsed by not paying the annual fees |