MX2007016032A

MX2007016032A - Anticuerpos de enlace a il-1-beta y fragmentos de los mismos.

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Publication number: MX2007016032A
Application number: MX2007016032A
Authority: MX
Inventors: Arnold Horwitz; Mary Haak-Frendscho; Linda Masat; Gang Chen; Marina Roell
Original assignee: Xoma Technology Ltd
Priority date: 2005-06-21
Filing date: 2006-06-21
Publication date: 2008-03-10
Also published as: IL188094A; US7829094B2; US7531166B2; US9206252B2; EP2322552A2; US8377442B2; CN102775493B; US7695717B2; HK1157351A1; EP2163562A2; HK1158218A1; EP2322552A3; SI2322552T1; ES2335232T3; BRPI0612273B8; KR20130076901A; HUE029021T2; US20100055110A1; CA2612760A1; PT2314623E

Abstract

Se describe un anticuerpo que se enlaza a IL-1?? o fragmento que se enlaza a IL-1?? del mismo, que comprende la secuencia de aminoacidos de la SEQ ID NO: 2, y los acidos nucleicos, vectores, celulas y composiciones relacionadas asi como el metodo para utilizar los mismos, para tratar o prevenir una enfermedad, y un metodo para preparar un polipeptido que se enlaza a IL-1?? madurado por afinidad. Los anticuerpo que se enlazan a IL-1?? o los fragmentos que se enlazan a IL-1?? de los mismos son proporcionados teniendo afinidad y potencia deseables.

Description

ANTICUERPOS DE ENLACE A IL-1-BETA Y FRAGMENTOS DE LOS MISüOS CAMPO DE LA INVENCIÓN La invención se refiere a los anticuerpos que se enlazan a IL-lß y que incluye fragmentos de los mismos, y ácidos nucleicos que codifican para tales anticuerpos, así como a los vectores, células y composiciones que comprenden los anticuerpos o ácidos nucleicos y usos de los mismos.

ANTECEDENTES DE LA INVENCION La frmilia de interleucina-1 (IL-1) de las citocinas ha estado implicada en estados de enfermedad tales como artritis reumatoide (RA) , osteoartritis, enfermedad de Crohn, colitis ulcerativa (UC) , choque séptico, enfermedad pulmonar obstructiva (COPD) , asma, enfermedad injerto versus huésped, ateroesclerosis, leucemia de células T del adulto, mieloma múltiple, esclerosis múltiple, apoplejía, y enfermedad de Alzheimer. Los miembros de la familia IL-la, IL-lß e IL-lRa. Aunque relacionados para su habilidad para enlazarse a los receptores de IL-1 (IL-1R1 e IL-1R2), cada una de estas citocinas es expresada por un gen diferente y tiene una secuencia primaria de aminoácidos diferente. Además, las actividades fisiológicas de estas citocinas pueden ser distinguidas . Los compuestos que perturban la señalización del REF. : 188708 receptor de IL-1 han sido investigados como agentes terapéuticos para tratar enfermedades mediadas por IL-1. Estos compuestos incluyen IL-IRa (Amgen Inc., Thousand Oaks, CA) y el péptido "trampa" del receptor de IL-1 (Regeneron Inc., Tarrytown, NY) . Los anticuerpos monoclonales derivados de animales que se enlazan a las citocinas IL-1, han sido también investigados. No obstante, su valor clínico puede ser limitado debido a su inmunogenicidad. Por ejemplo, los sujetos humanos administrados con anticuerpos monoclonales de ratón se ha sabido que producen anticuerpos humanos anti-ratón (HAMA) . Se ha reportado que HAMA reduce la eficacia de la terapia con anticuerpos monoclonales y producen reacciones adversas, incluyendo daño renal. Otros anticuerpos para IL-lß pueden ser limitados por su afinidad de enlace y/o su potencia. En consecuencia, los compuestos adicionales que perturban la señalización del receptor de IL-1 son necesarios. La invención proporciona tales compuestos, así como los métodos para preparar y utilizar tales compuestos.

BREVE DESCRIPCIÓN DE LA INVENCION La invención proporciona un anticuerpo de enlace a IL-lß o el fragmento de enlace IL-lß del mismo que comprende la secuencia de aminoácidos de la SEQ ID No.: 2. También se proporciona en la presente un ácido nucleico que codifica para el anticuerpo o fragmento de anticuerpo, así como un vector que comprende el ácido nucleico, una célula que comprende el ácido nucleico o el vector, y una composición que comprende el anticuerpo, el ácido nucleico y el vector. La invención proporciona además un método de tratamiento o prevención de una enfermedad en un mamífero, que comprende administrar una cantidad efectiva de un anticuerpo o fragmento de anticuerpo, ácido nucleico o vector de la invención a un mamífero en necesidad del mismo, con lo cual es tratada o prevenida una enfermedad en el mamífero. La invención proporciona un método de preparación de un polipéptido que se enlaza a IL-lß, madurado por afinidad que comprende (a) la provisión de un ácido nucleico que comprende una secuencia de ácido nucleico que codifica para un polipéptido que se enlaza a IL-lß, que comprende la secuencia de aminoácidos de cualquiera de las SEQ ID Nos.: 1-26 y un segundo ácido nucleico que comprende una secuencia de ácido nucleico que difiere de la primera secuencia de ácido nucleico por al menos un nucleótido, (b) la realización del entremezclado de ácido nucleico para proporcionar dos o más ácidos nucleicos mutados, (c) seleccionar un ácido nucleico mutado que codifica para un polipéptido que (i) se enlaza a IL-lß con una mayor afinidad que el polipéptido codificado por el primer ácido nucleico, (ii) tiene una selectividad para IL-lß sobre IL-la que es mayor que aquella del polipéptido codificado por el primer ácido nucleico, (iii) tiene una constante de disociación de enlace del equilibrio (KD) para IL-lß que es menor que aquella del polipéptido codificado por el primer ácido nucleico, o (iv) inhibe la expresión inducida por IL-lß de IL-6 en suero en un animal a un grado mayor que el polipéptido codificado por el primer ácido nucleico, y (d) la expresión del ácido nucleico mutado seleccionado, mediante lo cual es producido un polipéptido que se enlaza a IL-lß, madurado por afinidad. La invención proporciona los nuevos anticuerpos que se enlazan a IL-lß o los fragmentos que se enlazan a los mismos, que se enlazan a IL-lß humana con una constante de disociación menor de 3 pM, alternativamente de aproximadamente 2 pM o menor, preferentemente de aproximadamente 1 pM o menor. Tales anticuerpos de alta afinidad son contemplados como útiles para diversos métodos de tratamiento o prevención de enfermedades o condiciones relacionadas a IL-1. Alternativa o adicionalmente, los anticuerpos que se enlazan a IL-lß o los fragmentos que se enlazan a IL-lß, se enlazan a un epitopo de IL-lß, tal que el anticuerpo o fragmento enlazado sustancialmente no previene que IL-lß se enlace al receptor tipo I y de IL-1. Alternativa o adicionalmente, los anticuerpos que se enlazan a IL-lß o los fragmentos que se enlazan a IL-lß, se enlazan sustancialmente al mismo epitopo que uno o más de los anticuerpos ejemplares descritos en la presente, tal como el anticuerpo designado AB7 que comprende una región variable de cadena pesada. Alternativa o adicionalmente, los anticuerpos que se enlazan a IL-lß o los fragmentos de enlace a IL-lß compiten con el enlace de un anticuerpo que tiene la región variable de cadena ligera de la SEQ ID No.: 11 y una región variable de la cadena pesada de la SEQ ID No.: 15. Alternativa o adicionalmente, la presente invención abarca los anticuerpos que se enlazan a IL-lß, o los fragmentos que se enlazan a IL-lß, que se enlazan a un epitopo contenido en la secuencia ESVDPKNYPKKKMEKRFVFNKIE (SEQ ID No: 36) . Los anticuerpos ejemplares que se enlazan a IL-lß incluyen los anticuerpos designados AB5 y Ab7 en la presente. La invención también proporciona los anticuerpos que se enlazan a IL-1 o los fragmentos de los mismos que se enlazan a IL-lß que tienen una constante de disociación menor de 3 pM, alternativamente aproximadamente 1 pM o menos, alternativamente cualquiera de las otras constantes de disociación descritas en la presente, y que comprenden la región variable de cadena pesada que comprende una de las secuencias de aminoácidos de las SEQ ID Nos.: 12, 13, 21, 23 ó 24, o alternativamente la secuencia de aminoácidos de las SEQ ID Nos: 12, 13 ó 21, ó alternativamente la secuencia de aminoácidos de las SEQ ID Nos: 13 ó 21, ó alternativamente la secuencia de aminoácidos de las SEQ ID Nos: 8, 14 ó 15, ó alternativamente la secuencia de aminoácidos de las SEQ ID No: 8 ó 15. El anticuerpo que se enlaza a IL-lß o el fragmento que se enlaza a IL-lß puede también comprender la región variable de cadena ligera que comprende la secuencia de aminoácidos de las SEQ ID No: 9, SEQ ID No: 10, ó SEQ ID No: 11. Como otra modalidad más de la presente invención, los nuevos anticuerpos que se enlazan a IL-lß, o los fragmentos de los mismos que se enlazan a IL-lß, son proporcionados, los cuales se enlazan a IL-lß con una constante de disociación entre aproximadamente 6 pM y aproximadamente 50 pM, alternativamente entre aproximadamente 13 pM y aproximadamente 25 pM, alternativamente aproximadamente 19 pM, y donde el anticuerpo o fragmento tiene un IC50 menor de 0.5 mM (500 pM) , alternativamente, entre aproximadamente 5 pM y aproximadamente 200 pM, alternativamente entre aproximadamente 10 pM y aproximadamente 100 pM, alternativamente aproximadamente 30 pM, para inhibir la liberación de IL-6 estimulado por IL-lß, a partir de fibroblastos humanos. La IC50 para inhibir la liberación de IL-6 estimulada por IL-lß a partir de fibroblastos humanos, se refiere a la concentración requerida para inhibir 50% de la IL-6 liberada por la estimulación con IL-lß con los fibroblastos humanos. Los anticuerpos ejemplares incluyen el anticuerpo designado a ABl en la presente. La presente invención también proporciona los anticuerpos que se enlazan a IL-1 o los fragmentos de los mismos que se enlazan a IL-lß que tienen una constante de disociación entre aproximadamente 6 y aproximadamente 50 pM y que comprenden la región variable de cadena pesada que incluye una de las secuencias de aminoácidos de las SEQ ID Nos: 4, 5 ó 6, alternativamente, una de las secuencias de aminoácidos de las SEQ ID Nos: 4 ó 5, alternativamente, la secuencia de aminoácidos de SEQ ID No: 4. Se contempla que en algunas circunstancias, un anticuerpo que se enlaza a IL-lß o el fragmento de enlace a IL-lß que tiene una constante de disociación relativamente más alta puede ser deseable, por ejemplo, para algunos métodos de tratamiento o prevención de enfermedades o condicione relacionadas a IL-1 donde es deseable un grado relativamente menor de afinidad. Los anticuerpos ejemplares incluyen los anticuerpos designados ABl, AB2, AB3, AB4, AB5, AB6, AB7, AB8, y AB9. ABl comprende una región variable de cadena pesada que incluye las secuencias de aminoácidos de la SEQ ID No: 4 y una región variable de cadena ligera que comprende las secuencias de aminoácidos de SEQ ID No: 9. AB2 comprende una región variable de cadena pesada que comprende las secuencias de aminoácidos de SEQ ID No: 5 y una región variable de cadena ligera que incluye las secuencias de aminoácidos de SEQ ID No: 9. AB3 comprende una región variable de cadena pesada que comprende las secuencias de aminoácidos de SEQ ID No: 6 y una región variable de cadena ligera que incluye las secuencias de aminoácidos de SEQ ID No: 9. AB4 comprende una región variable de cadena pesada que incluye las secuencias de aminoácidos de SEQ ID No: 7 y una región variable de cadena ligera que incluye las secuencias de aminoácidos de SEQ ID No: 9. AB5 comprende una región variable de cadena pesada que comprende las secuencias de aminoácidos de SEQ ID No: 8 y una región variable de cadena ligera que incluye las secuencias de aminoácidos de SEQ ID No: 9. AB6 comprende una región variable de cadena pesada que comprende las secuencias de aminoácidos de SEQ ID No: 14 y una región variable de cadena ligera que incluye las secuencias de aminoácidos de SEQ ID No: 10. AB7 comprende una región variable de cadena pesada que comprende las secuencias de aminoácidos de SEQ ID NO: 15 y una región variable de cadena ligera que incluye las secuencias de aminoácidos de SEQ ID NO: 11. AB8 comprende has una región variable de cadena pesada que comprende las secuencias de aminoácidos de SEQ ID No: 25 y una región variable de cadena ligera que incluye las secuencias de aminoácidos de SEQ ID No: 10. AB9 comprende una región variable de cadena pesada que comprende las secuencias de aminoácidos de SEQ ID No: 26 y una región variable de cadena ligera que incluye las secuencias de aminoácidos de SEQ ID No: 11. La presente invención abarca los anticuerpos que se enlazan a IL-lß o los fragmentos que se enlazan a IL-lß que tienen una región variable de cadena pesada que comprende cualquiera de las secuencias descritas en las SEQ ID Nos: 2, 4-8, 12-15, 21, 23-26, 28-35, ó 42-57, alternativamente cualquiera de las secuencias descritas en la SEQ ID No: 21, alternativamente cualquiera de las secuencias descritas en las SEQ ID No: 4, SEQ ID No: 5, SEQ ID No: 6, SEQ ID No: 7, ó SEQ ID No: 8, alternativamente cualquiera de las secuencias descritas en las SEQ ID No: 12 ó SEQ ID No: 13, alternativamente cualquiera de las secuencias descritas en las SEQ ID No: 14, SEQ ID No: 15, SEQ ID No: 25, ó SEQ ID No: 26. La invención también abarca los anticuerpos que se enlazan a IL-lß o los fragmentos que se enlazan a IL-lß que tienen una región variable de cadena ligera que comprende cualquiera de las secuencias descritas en las SEQ ID No: 1, 9-11, ó 27, alternativamente, cualquiera de las secuencias descritas en la SEQ ID NO: 1, alternativamente cualquiera de las secuencias descritas en la SEQ ID No: 9, alternativamente cualquiera de las secuencias descritas en las SEQ ID Nos: 10 ó SEQ ID NO: 11. La presente invención también abarca los anticuerpos para IL-lß o los fragmentos que se enlazan a IL-lß, que comprenden una de las regiones variables de cadena pesada y las secuencias descritas en las SEQ ID Nos: 2, 4-8, 12-15, 21, 23-26, 28-35, ó 42-57, y una de las regiones variables de la cadena ligera de las secuencias descritas en las SEQ ID Nos: 1, 9-11, ó 27.

La presente invención también abarca los anticuerpos que se enlazan a IL-lß o los fragmentos que se enlazan a IL-lß, que incluyen porciones que no se enlazan a IL-lß sino más bien son responsables de otras funciones, tales como la vida media en circulación, el efecto citotóxico directo, la marcación detectable, o la activación de una cascada del complemento endógena al recipiente o paciente, o la citotoxicidad celular endógena. Los anticuerpos de la invención pueden comprender toda o una porción de una región constante de un anticuerpo. La región constante puede ser seleccionada de cualquier isotipo, incluyendo (por ejemplo, IgAl ó IgA2), IgD, IgE, IgG (por ejemplo, IgGl, IgG2, IgG3 ó IgG4), ó IgM. Por ejemplo, el anticuerpo puede comprender una región de IgG2. Además, o en vez de comprender una región constante, los anticuerpos y fragmentos de la invención pueden incluir un marcador epitopo, un epitopo receptor silvestre, una porción marcadora para fines de diagnóstico o purificación, o una porción citotóxica tal como un radionúclido o toxina. La presente invención también abarca las composiciones farmacéuticas que comprenden cualquiera de los anticuerpos que se enlazan a IL-lß o los fragmentos que se enlazan a IL-lß y un portador, excipiente o diluyente farmacéuticamente adecuado. Preferentemente, los anticuerpos y compuestos de la invención pueden ser administrados en una cantidad terapéuticamente efectiva que es una cantidad suficiente para mejorar un signo o síntoma clínico de una condición o trastorno asociado con la expresión de la proteína objetivo, a un sujeto en necesidad de tal tratamiento. En una modalidad relacionada, la composición farmacéutica comprende además un segundo agente activo. En otra modalidad relacionada, es proporcionada la composición farmacéutica en donde el segundo agente activo es un anticuerpo para o antagonista del factor de crecimiento o una citocina. En otra modalidad más, el segundo agente activo es otro anticuerpo. En otra modalidad más de la presente invención, el uso de los anticuerpos para IL-lß o fragmentos que se enlazan a IL-lß, es contemplado en la fabricación de un medicamento para prevenir o reducir una condición o trastorno asociado con IL-1. En cualquiera de los usos, el medicamento puede ser coordinado con el tratamiento utilizando un segundo agente activo. En otra modalidad más de la invención, se contempla el uso de una combinación sinérgica de un anticuerpo de la invención para la preparación de un medicamento para tratar a un paciente que muestra síntomas de una condición o trastorno relacionado a IL-1, descrito en la presente, en donde el medicamento es coordinado con el tratamiento utilizando un segundo agente activo. En una modalidad, relacionada, el segundo agente activo es un anticuerpo para o antagonista de citocina o, un factor de crecimiento. Las modalidades de cualquiera de los usos anteriormente mencionados son contempladas, en donde la cantidad del anticuerpo o fragmento que se enlaza a IL-lß en el medicamento está a una dosis efectiva para reducir la dosificación del segundo agente activo, requerida para lograr un efecto terapéutico . Son contemplados también los equipos por la presente invención. En una modalidad, un equipo comprende una cantidad terapéutica o profilácticamente efectiva de un compuesto o composición de la invención (tal como un anticuerpo, fragmento, ácido nucleico, vector o célula), empaquetado en un recipiente, tal como un frasco o botella, y que comprende además una etiqueta acoplada o empaquetada con el recipiente, una etiqueta que describe los contenidos del recipiente y que proporciona indicaciones y/o instrucciones respecto al uso de los contenidos del recipiente para prevenir o reducir una condición o enfermedad asociada con la expresión de la proteína objetivo.

BREVE DESCRIPCIÓN DE LAS FIGURAS La figura 1 es un par de secuencias de aminoácidos correspondientes a las cadenas ligeras y cadenas pesadas de la región variable de algunos de los anticuerpos descritos en la presente. Las porciones subrayadas de las secuencias de aminoácidos indican las regiones de determinación de la complementariedad (CDRs). La figura 2 es un grupo de secuencias de aminoácidos que corresponde a las regiones variables de cadena ligera y cadena pesada de los anticuerpos ABl, AB2, AB3, y AB4. Las porciones subrayadas de las secuencias de aminoácidos indican las regiones de determinación de la complementariedad (CDRs) . La figura 3 es un grupo de secuencias de aminoácidos que corresponde a las regiones variables de cadena ligera y cadena pesada de los anticuerpos AB5, AB5.1, y AB5.2. Las porciones subrayadas de las secuencias de aminoácidos indican las regiones de determinación de la complementariedad (CDRs) . La figura 4 es un grupo de secuencias de aminoácidos que corresponde a las regiones variables de cadena ligera y cadena pesada de los anticuerpos AB5.3 y AB5.4. Las porciones subrayadas de las secuencias de aminoácidos indican las regiones de determinación de la complementariedad (CDRs). La figura 4A es un grupo de secuencias de aminoácidos que corresponde a las regiones variables de cadena ligera y cadena pesada de los anticuerpos AB6 y AB7. Las porciones subrayadas de las secuencias de aminoácidos indican las regiones de determinación de la complementariedad (CDRs). La figura 4B es un grupo de secuencias de aminoácidos que corresponde a las regiones variables de cadena ligera y cadena pesada de los anticuerpos AB8 y AB9. Las porciones subrayadas de las secuencias de aminoácidos indican las regiones de determinación de la complementariedad (CDRs) . La figura 5 es una gráfica que muestra los resultados de un experimento de estimulación con IL-lß ín vi tro . La figura 6 es un histograma que muestra los resultados de un experimento de estimulación con IL-lß in vivo. La figura 7 es una gráfica que muestra los resultados del ensayo de exclusión cinética para el anticuerpo designado ABl. La figura 8 es una gráfica que muestra los resultados del ensayo de exclusión cinética para el anticuerpo designado AB5. La figura 9 es una gráfica que muestra los resultados del ensayo de exclusión cinética para el anticuerpo designado AB7. La figura 10 es una gráfica que muestra los resultados de un experimento de estimulación con IL-lß in vi tro para los anticuerpos designados ABl, AB2, y AB3. La figura 11 es una gráfica que muestra los resultados de un experimento de estimulación con IL-lß in vi tro para los anticuerpos designados ABl y AB7. La figura 12 es una gráfica que muestra los resultados de un experimento de estimulación con IL-lß in vitro para los anticuerpos designados AB5 y AB7, así como para Kineret®. La figura 13 es una gráfica que muestra los resultados de un experimento de estimulación con IL-lß in vivo para los anticuerpos designados AB5 y ABl. La figura 14 es un histograma que muestra los resultados de un experimento de estimulación in vivo para los anticuerpos designados AB5 y AB7. La figura 15 es una transferencia de Western que muestra los resultados de los experimentos de reactividad cruzada para el anticuerpo designado AB7 con IL-lß proveniente del mono cynomolgus y el macaco rhesus. La figura 16 es una transferencia de Western que muestra los resultados de los experimentos de reactividad cruzada para el anticuerpo designado AB7 con IL-lß proveniente de perro, cobayo, cerdo y conejo. La figura 17 es una transferencia de Western que muestra los resultados de los experimentos de reactividad cruzada para el anticuerpo designado AB7 con IL-lß recombinante humano, de ratón y de rata. La figura 18 es una gráfica que muestra los resultados de un experimento in vi tro para el anticuerpo designado AB7 y para Kineret que involucra la producción de IL-8 inducida por IL-1. La figura 19 es una gráfica que muestra los resultados de un ensayo para examinar si los anticuerpos presentes previenen o no que IL-lß se enlace al receptor tipo 1 de IL-1. La figura 20 es una ilustración de un ensayo para examinar si los presentes anticuerpos previenen que IL-lß se enlacen al receptor tipo 1 de IL-1.

DESCRIPCIÓN DETALLADA DE LA INVENCIÓN La presente invención abarca los novedosos anticuerpos para IL-lß de fragmentos que tienen afinidad y potencia deseables. Como un aspecto de la presente invención, son proporcionados los anticuerpos que se enlazan a IL-lß los cuales tienen afinidad inesperadamente alta y constantes de disociación bajas (por ejemplo, menos de 3 pM, alternativamente, aproximadamente 1 pM o menos) en comparación a los anticuerpos que se enlazan a IL-lß conocidos. Los anticuerpos ejemplares incluyen anticuerpos designados AB5 y Ab7 en la presente. Como otro aspecto más de la presente invención, los anticuerpos que se enlazan a IL-lß son proporcionados teniendo una constante de disociación deseable (por ejemplo, entre aproximadamente 6 pM y aproximadamente 50 pM) y una IC50 deseable (por ejemplo, menor de 500 pM) para inhibir la liberación de IL-6 estimulada por IL-lß, a partir de fibroblastos humanos. Los anticuerpos ejemplares incluyen el anticuerpo designado ABl en la presente.

La presente invención también abarca los anticuerpos que se enlazan a IL-lß, los fragmentos que se enlazan selectivamente a IL-lß, ya que éstos se enlazan a IL-lß con mayor afinidad que a otros antígenos. Los fragmentos que se enlazan a IL-lß o los fragmentos que se enlazan a IL-lß pueden enlazar selectivamente a la IL-lß humana, pero también se enlazan detectablemente a la IL-lß no humana. Alternativa o adicionalmente, los anticuerpos o fragmentos pueden enlazarse a la IL-lß humana y a la IL-lß de al menos otro mamífero (un primer mamífero) y no a la IL-lß de al menos otro mamífero (un segundo mamífero) . Por ejemplo, los anticuerpos de fragmentos pueden enlazarse a uno o más de la IL-lß de roedor, IL-lß de primate, IL-lß de perro, IL-lß de conejo y/o no se enlazan a IL-lß de cobayo. Alternativa o adicionalmente los anticuerpos o fragmentos pueden enlazarse a IL-lß de ratón con mayor afinidad que a IL-lß de rata. Alternativa o adicionalmente, los anticuerpos que se enlazan a IL-lß o los fragmentos que se enlazan a IL-lß pueden también tener la misma o sustancialmente la misma potencia contra la IL-lß de humana e IL-lß de primate. Alternativa o adicionalmente, los anticuerpos que se enlazan a IL-lß o los fragmentos que se enlazan a IL-lß pueden tener la misma o sustancialmente la misma contra la IL-lß humana recombinante y la IL-lß humana endógena. Alternativa o adicionalmente, los anticuerpos que se enlazan a IL-lß o los fragmentos que se enlazan a IL-lß pueden neutralizar IL-lß de ratón. Como se utiliza en la presente, el anticuerpo o fragmento que se enlaza específicamente con un antígeno diana u objetivo se refiere a un anticuerpo que se enlaza al antígeno diana u objetivo con mayor afinidad que con antígenos similares. Por ejemplo, un anticuerpo o fragmento es específico para su antígeno cognado cuando las regiones variables del anticuerpo o el fragmento reconocen y se enlazan al antígeno cognado con una preferencia detectable (distinguiendo el antígeno de otros polipéptidos conocidos de la misma familia, en virtud de las diferencias mensurables en la afinidad de enlace, a pesar de la posible existencia de identidad secuencial localizada, homología o similitud entre miembros de la familia) . Se entenderá que los anticuerpos y fragmentos específicos pueden también interactuar con otras proteínas (por ejemplo, proteína A de S . a ureus u otros anticuerpos en técnicas de ELISA) a través de interacciones con secuencias fuera de la región variable de los anticuerpos, y en particular, de la región constante del anticuerpo o fragmento. Los ensayos de selección para determinar la especificidad de enlace de un anticuerpo son bien conocidos y rutinariamente practicados en la técnica. Para una discusión integral de tales ensayos ver Harlow et al. (Eds), Antibodies A Laboratory Manual; Cold Spring Harbor Laboratory; Cold Spring Harbor, NY (1988), Capítulo 6.

Un aspecto de la presente invención abarca los anticuerpos que se enlazan a IL-lß y los fragmentos que se enlazan a IL-lß de los mismos que tienen inesperadamente constantes de disociación bajas (KD) , por ejemplo, menores de 3 pM, alternativamente 2 pM o menor, alternativamente 1 pM o menor, alternativamente 0.8 pM o menor, alternativamente 0.74 pM o menor, alternativamente 0.72 pM o menor, alternativamente 0.7 pM o menor, alternativamente 0.6 pM o menor, alternativamente 0.56 pM o menor, alternativamente 0.5 pM o menor, alternativamente 0.3 pM o menor, alternativamente 0.26 pM o menor, alternativamente 0.24 pM o menor, alternativamente 0.2 pM o menor. De este modo, en algunas modalidades de la presente invención, los anticuerpos que se enlazan a IL-lß y los fragmentos que se enlazan a IL-lß pueden ser descritos por referencia a un extremo alto de un intervalo de constantes de disociación. Adicional o alternativamente, en algunas modalidades de la presente invención, los anticuerpos que se enlazan a IL-lß y los fragmentos que se enlazan a IL-lß pueden ser descritos por referencia a un extremo bajo de un intervalo de constantes de disociación, tal como por ejemplo, un anticuerpo o fragmento que tiene una constante de disociación de 0.07 pM o mayor, alternativamente 0.1 pM o mayor, alternativamente 0.11 pM o mayor, alternativamente 0.15 pM o mayor, alternativamente 0.2 pM o mayor, alternativamente 0.24 pM o mayor, alternativamente 0.26 pM o mayor, alternativamente 0.3 pM o mayor, alternativamente 0.5 pM o mayor, alternativamente 0.7 pM o mayor. Cualquier constante de disociación más alta y constante de disociación más baja, como se especificó anteriormente, puede ser combinada para definir un intervalo de constantes de disociación, con la condición de que el valor menor seleccionado sea igual a o menor que el valor más alto seleccionado. Otro aspecto más de la presente invención proporciona los nuevos anticuerpos que se enlazan a IL-lß y los fragmentos de los mismos que se enlazan a IL-lß, los cuales se enlazan a IL-lß de una constante de disociación mayor de 6 pM y menor que o igual a 50 pM, alternativamente entre aproximadamente 13 pM y aproximadamente 25 pM, y donde el anticuerpo o fragmento tiene una IC50 para inhibir la liberación de IL-6 estimulada por IL-lß, a partir de los fibroblastos humanos que es menor de 0.5 nM (500 pM) , alternativamente entre aproximadamente 5 pM y aproximadamente 200 pM, alternativamente entre aproximadamente 10 pM y aproximadamente 100 pM, alternativamente aproximadamente 30 pM. Se contempla que puede ser deseable proporcionar un anticuerpo o fragmento de enlace a IL-lß que tenga la afinidad y potencia de enlace anteriores para algunos métodos de tratamiento o prevención de condiciones o enfermedades mediadas por IL-lß. Los anticuerpos ejemplares incluyen el anticuerpo designado ABl en la presente.

Los presentes anticuerpos y fragmentos que se enlazan a IL-lß con alta afinidad, como es indicado por las constantes de disociación descritas en la presente. Las constantes de afinidad que caracterizan las afinidades de anticuerpos o antígenos pueden ser constantes de asociación medidas por la cinética de la formación de complejo-anticuerpo. Alternativamente, la afinidad de enlace puede ser caracterizada por una constante de disociación que es el inverso de la constante de asociación. El término KD como se utiliza en la presente, está destinado a referirse a la constante de disociación de una interacción antígeno-anticuerpo. La presente invención también abarca los anticuerpos neutralizadores o los fragmentos neutralizadores de los mismos que se enlazan a IL-lß para neutralizar así la actividad biológica de IL-lß. La neutralización de la actividad biológica de IL-lß puede ser evaluada por ensayos para uno o más indicadores de la actividad biológica de IL-lß, tal como la liberación de IL-6 estimulada por IL-lß, a partir de fibroblastos humanos u otras células, la liberación de IL-8 inducida por IL-lß a partir de células sanguíneas, o la proliferación de células cooperadoras T, inducida por IL-1. Preferentemente, los anticuerpos y fragmentos que se enlazan a IL-lß de la presente invención neutralizan la actividad biológica de la IL-lß relacionada con la función de señalización del receptor tipo I de IL-1 (IL-1RI) enlazado por la IL-lß. En general, los anticuerpos y fragmentos neutralizadores de la presente invención pueden neutralizar la actividad biológica de IL-lß, no obstante de si el enlace de IL-lß al receptor tipo I de IL1, es bloqueado. Más preferentemente, los anticuerpos que se enlazan a IL-lß o los fragmentos que se enlazan a IL-lß neutralizan la actividad biológica de la IL-lß por enlace a la IL-lß, sin prevenir sustancialmente el enlace de la IL-lß enlazada, al receptor tipo I de IL-1. Una ventaja potencial de tales anticuerpos y fragmentos es que éstos pueden enlazarse a y neutralizar IL-lß al tiempo que permiten todavía que IL-lß se enlace a IL-1RI. Esto puede dar como resultado una reducción efectiva en la actividad biológica de IL-la así como una actividad biológica de IL-lß, ya que existen menos sitios de IL-1RI no enlazados para que IL-la se enlace. De este modo, los anticuerpos que se enlazan a IL-lß y los fragmentos que se enlazan a IL-lß de la presente invención son útiles en los métodos donde es deseable neutralizar la actividad biológica de IL-1 in ví tro e in vivo. Los presentes anticuerpos o fragmentos pueden ser anticuerpos y fragmentos neutralizadores que se enlazan específicamente al epitopo de IL-lß que afecta la actividad biológica de IL-lß. Los presentes anticuerpos o fragmentos pueden enlazarse a un epitopo de IL-lß sensible a la neutralización. Cuando un epitopo de IL-lß sensible a la neutralización es enlazado por uno de los presentes anticuerpos o fragmentos, el resultado es una pérdida de la actividad biológica de la IL-lß que contiene el epitopo. En algunas modalidades, los anticuerpos que se enlazan a IL-lß o los fragmentos que se enlazan a IL-lß pueden tener una IC5o para inhibir la liberación de IL-lß estimulada por IL-lß, a partir de las células sanguíneas que es menor de 50 pM, alternativamente de aproximadamente 25 pM o menor, alternativamente de aproximadamente 10 pM o menor, alternativamente de aproximadamente 2 pM o menor. La IC50 para inhibir la liberación de IL-lß estimulada por IL-lß, a partir de las células sanguíneas, se refiere a la concentración requerida para inhibir 50% de la IL-8 liberada por la estimulación de IL-lß de las células sanguíneas. Los anticuerpos ejemplares incluyen el anticuerpo designado AB7 en la presente. La presente invención también abarca un anticuerpo que se enlaza a IL-lß o el fragmento que se enlaza a IL-lß del mismo, que comprende una secuencia cambiada de aminoácidos, en donde el aminoácido cambiado tiene una o al menos una sustitución, adición o supresión de una secuencia de aminoácidos inicial seleccionada de las SEQ ID Nos: 27 ó 28 (o cualquiera de las otras secuencias descritas en la presente) , donde el anticuerpo o fragmento cambiado tiene la misma o sustancialmente la misma afinidad y especificidad del enlace al epitopo que la secuencia de aminoácidos inicial. Se contempla que una o más sustituciones, supresiones o adiciones pueden ser realizadas a los anticuerpos que se enlazan a IL-lß o los fragmentos que se enlazan a IL-lß proporcionados en la presente, tales como los anticuerpos o fragmentos que comprenden la SEQ ID No: 28 y/o la SEQ ID No: 27, mientras que se mantiene la misma o sustancialmente la misma afinidad y especificidad del enlace al epitopo del anticuerpo o fragmento inicial. Por ejemplo, la presente invención abarca un anticuerpo que se enlaza a IL-lß o el fragmento que se enlaza a IL-lß del mismo que comprende una secuencia cambiada de aminoácidos, en donde el aminoácido cambiado tiene una o al menos una sustitución, adición o supresión de una secuencia de aminoácidos inicial que comprende la SEQ ID No: 8 (o cualquiera de las otras secuencias descritas en la presente pueden ser utilizadas como una secuencia inicial), donde el anticuerpo o fragmento cambiado tiene la misma o sustancialmente la misma afinidad y especificidad de enlace al epitopo que la secuencia de aminoácidos inicial que comprende la SEQ ID No: 8 (o la secuencia particular que es utilizada como la secuencia inicial de aminoácidos) . Por la frase "sustancialmente la misma" afinidad, se entiende que la afinidad o la constante de disociación como se determinada por las enseñanzas de la presente, no es incrementada o disminuida más que la variación inherente en el ensayo para un anticuerpo o fragmento que comprende las SEQ ID Nos: 28 ó 27 que la variación observada cuando el ensayo es realizado tres o más veces independientes. Por la frase "sustancialmente la misma" especificidad de epitopo, se entiende que el enlace a una secuencia de aminoácidos que contiene el epitopo, como es determinado por las enseñanzas de la presente, está dentro de la variación inherente en el ensayo para un anticuerpo o fragmento que comprende las SEQ ID No: 28 ó 27, tal como la variación observada cuando se realiza tres o más veces independientes. Cuando se compara a una anticuerpo o fragmento de anticuerpo que comprende las SEQ ID No: 28 ó 27, se entiende que la comparación debe ser realizada entre la secuencia cambiada de aminoácidos y la secuencia inicial de aminoácidos de la cual una o más sustituciones, supresiones o adiciones son realizadas, siendo tal secuencia inicial idéntica en todos los otros aminoácidos.

Anticuerpos, Anticuerpos Humanizados y Anticuerpos Manipulados por Ingeniería Humana Los anticuerpos que se enlazan a IL-lß de la presente invención, pueden ser proporcionados como anticuerpos policlonales, anticuerpos monoclonales (mAbs), anticuerpos recombinantes, anticuerpos quiméricos, anticuerpos injertados con CDR, anticuerpos completamente humanos, anticuerpos de cadena simple y/o anticuerpos biespecíficos, así como fragmentos, incluyendo variantes y derivados de los mismos, proporcionados por técnicas conocidas incluyendo pero no limitadas a, escisión enzimática, síntesis peptídico o técnicas recombinantes. Los anticuerpos comprenden en general dos polipéptidos de cadena pesada y dos polipéptidos de cadena ligera, aunque los anticuerpos de dominio simple que tienen una cadena pesada y una cadena ligera y los anticuerpos de cadena pesada desprovistos de las cadenas ligeras son también contemplados. Existen cinco tipos de cadenas pesadas, llamadas alfa, delta, epsilon, gama y miu, con base en la secuencia de aminoácidos del dominio constante de cadena pesada. Tres diferentes tipos de cadenas pesadas dan origen a cinco clases de anticuerpos, IgA (incluyendo IgAl e IgA2) , IgD, IgE, IgG e IgM, respectivamente, incluyendo las cuatro subclases de IgG, a saber IgG?, IgG2, IgG3 e IgG4. Existen también dos tipos de cadenas ligeras, llamadas kappa (K) o lambda (?) con base en la secuencia de aminoácidos de los dominios constantes. Un anticuerpo de longitud completa incluye un dominio constante y un dominio variable. La región constante no necesita estar presente en un fragmento de enlace al antígeno de un anticuerpo. Los fragmentos de enlace al antígeno de un anticuerpo descrito en la presente pueden incluir los fragmentos de anticuerpo Fab, Fab1, F(ab')2, y F(v). Como se discute con más detalle más adelante, en los fragmentos que se enlazan a IL-lß abarcan los fragmentos de anticuerpo y los polipéptidos de enlace al antígeno que se enlazarán a IL-lß. Cada una de las secuencias de cadena pesada y cadena ligera de un anticuerpo o el fragmento de enlace al antígeno del mismo, incluyen una región variable con tres regiones de determinación de la complementariedad (CDRs) así como las regiones estructurales no CDRs (FRs) . Los términos "cadena pesada" y "cadena ligera" como son utilizados aquí, significan la región variable de cadena pesada y la región variable de cadena ligera, respectivamente, a no ser que se indique de otro modo. Las CDRs de cadena pesada son denominadas en la presente como CDR-H1, CDR-H2, y CDR-H3. Las CDRs de cadena ligera son denominadas en la presente como CDR-L1, CDR-L2, y CDR-L3. Las regiones variables y las CDRs en una secuencia de anticuerpo pueden ser identificadas (i) de acuerdo a las reglas generales que han sido desarrolladas en la técnica o (ii) mediante alineación de las secuencias contra una base de datos de regiones variables conocidas. Los métodos para identificar estas regiones son descritos en Kontermann and Dubel, eds., Antibody Engineering, Springer, New York, NY, 2001, y Dinarello et al., Current Protocols en Immunology, John Wiley and Sons Inc., Hoboken, NJ, 2000. Las bases de datos de las secuencias de anticuerpos son descritas en y pueden ser accedidas a través de la base de datos "The Kabatman" en www.bioinf.org.ulc/abs (mantenida por A.C. Martin en the Department of Biochemistry & Molecular Biology University College London, London, England) y VBASE2 at www.vbase2.org, como se describe en Retter et al., Nucí. Acids Res., 33 (emisión de base de datos): D671-D674 (2005). El sitio de la red de la base de datos "Kabatman" también incluye reglas generales prácticas para identificar las CDRs. El término "CDR, " como se utiliza en la presente, es como se define en Kabat et al., Sequences of Immunological Interest, 5a ed., U.S. Department of Health and Human Services, 1991, a no ser que se indique de otro modo. La presente invención abarca los anticuerpos que se enlazan a IL-lß, que incluyen dos cadenas pesadas de longitud completa y dos cadenas ligeras de longitud completa. Alternativamente, los anticuerpos que se enlazan a IL-lß pueden ser construcciones tales como anticuerpos de cadena simple o anticuerpos "mini" que conservan la actividad de enlace a IL-lß. Tales construcciones pueden ser preparadas mediante métodos conocidos en la materia tales como, por ejemplo, la clonación medida por PCR y el ensamblaje de anticuerpos de cadena simple para la expresión en E . coli (como se describe en Antibody Engineering, The practical approach series, J. McCafferty, H. R. Hoogenboom, y D. J.

Chiswell, editors, Oxford University Press, 1996) . En este tipo de construcción, las porciones variables de las cadenas pesadas y ligeras de una molécula de anticuerpo son amplificadas por PCR a partir de cADN . Los amplicones resultantes son luego ensamblados, por ejemplo, en un segundo paso de PCR, a través de un ADN ligador que codifica para un ligador proteico flexible compuesto de los aminoácidos Gly y Ser. Este ligador permite que las porciones variables de cadena pesada y ligera se plieguen de una manera tal que la bolsa de enlace al antígeno sea regenerada y el antígeno es enlazado con afinidades a menudo comparables a la molécula de inmunoglobulina dimérica de longitud completa, progenitora. Los anticuerpos y fragmentos que se enlazan a IL-lß de la presente invención abarcan variantes de los anticuerpos ejemplares, fragmentos y secuencias descritas en la presente. Las variantes incluyen péptidos y polipéptidos que comprenden una o más sustituciones, supresiones y/o adiciones en la secuencia de aminoácidos, que tienen la misma o sustancialmente la misma afinidad y especificidad de enlace al epitopo que uno o más de los anticuerpos, fragmentos y secuencias ejemplares descritas en la presente. De este modo, las variantes incluyen péptidos y polipéptidos que comprenden una o más sustituciones, supresiones y/o adiciones en la secuencia de aminoácidos, a los anticuerpos, fragmentos y secuencias ejemplares descritas en la presente, donde tales sustituciones, supresiones y/o adiciones no provocan cambios sustanciales en la afinidad y especificidad del enlace al epitopo. Por ejemplo, una variante de un fragmento o anticuerpo puede resultar de uno o más cambios a un anticuerpo o fragmento, que comprende una o más secuencias de aminoácidos de las SEQ ID No: 1-35 ó 42-57, donde el anticuerpo o fragmento cambiado tiene la misma o sustancialmente la misma afinidad y especificidad del enlace al epitopo que la secuencia inicial. Las variantes pueden ser de origen natural, tales como variantes alélicas o de empalme o pueden ser artificialmente construidas. Las variantes pueden ser preparadas a partir de las moléculas correspondientes de ácido nucleico que codifican para dichas variantes. Las variantes de los presentes anticuerpos y los fragmentos de enlace a IL-lß pueden tener cambios en las secuencias de aminoácidos de la cadena ligera y/o pesada que son de origen natural o son introducidas mediante ingeniería in vi tro de las secuencias nativas utilizando técnicas de ADN recombinante. Las variantes de origen natural incluyen variantes "somáticas" que son generadas in vivo en las secuencias nucleotídicas de línea germinal, correspondientes durante la generación de una respuesta de anticuerpo a un antígeno extraño. Las variantes de los anticuerpos que se enlazan a IL-lß y los fragmentos que se enlazan a IL-lß pueden también ser preparadas mediante técnicas de mutagénesis. Por ejemplo, los cambios de aminoácidos pueden ser introducidos aleatoriamente a todo lo largo de una región de codificación del anticuerpo, y las variantes resultantes pueden ser seleccionadas para la afinidad de enlace para IL-lß o para otra propiedad. Alternativamente, pueden ser introducidos cambios de aminoácidos en las regiones seleccionadas de un anticuerpo para IL-lß, tales como las CDRs de cadena ligera y/o pesada, y/o en las regiones estructurales, y los anticuerpos resultantes pueden ser seleccionados para el enlace para IL-lß o alguna otra actividad. Los cambios de aminoácidos abarcan una o más sustituciones de aminoácidos en una CDR, que van desde una diferencia de aminoácidos simple hasta la introducción de múltiples permutaciones de aminoácidos dentro de una CDR dada, tal como una CDR3. En otro método más, la contribución de cada residuo dentro de una CDR al enlace de IL-lß, puede ser evaluada mediante la sustitución de al menos un residuo dentro de la CDR con alanina. Lewis et al. (1995), Mol. Im unol. 32: 1065-72. Los residuos que no son óptimos para el enlace a IL-lß pueden ser luego cambiados con el fin de determinar una secuencia más óptima. También son abarcadas las variantes generadas por la inserción de aminoácidos para incrementar el tamaño de una CDR, tal como CDR3. Por ejemplo, la mayoría de las secuencias de CDR de cadena ligera son de 9 aminoácidos de longitud. Las secuencias de cadena ligera en un anticuerpo que son más cortas de 9 residuos, pueden ser optimizadas para el enlace a IL-lß por inserción de los aminoácidos apropiados para incrementar la longitud de la CDR. Pueden ser también preparadas variantes mediante "entremezclado de cadenas" de las cadenas pesadas o ligeras. Marks et al. (1992), Biotechnology 10: 779-83. Una cadena ligera (o pesada) simple puede ser combinada con una biblioteca que tiene un repertorio de cadenas pesadas (o ligeras) y la población resultante es seleccionada para una actividad deseada, tal como el enlace a IL-lß. Esto permite la selección de una muestra más grande de diferentes cadenas pesadas (o ligeras) en combinación con una cadena ligera simple (o pesada) que lo que es posible con bibliotecas que comprenden repertorios de cadenas pesadas y ligeras. Los anticuerpos y los fragmentos que se enlazan a IL-lß de la presente invención abarcan derivados de los anticuerpos, ejemplares, fragmentos y secuencias descritas en la presente, los derivados incluyen polipéptidos o péptidos, o variantes, fragmentos o derivados de los mismos que han sido químicamente modificados. Los ejemplos incluyen el enlace covalente de uno o más polímeros, tales como los polímeros solubles en agua, carbohidratos N-enlazados u O-enlazados, azúcares, fosfatos y/o otras moléculas tales. Los derivados son modificados de una manera que es diferente del péptido o los polipéptidos de origen natural o iniciales, ya sea en el tipo o localización de las moléculas enlazadas. Los derivados incluyen además la supresión de uno o más grupos químicos que están naturalmente presentes sobre el péptido o el polipéptido. Los anticuerpos y los fragmentos que se enlazan a IL-lß de la presente invención pueden ser biespecíficos. Los anticuerpos o fragmentos biespecíficos pueden ser de varias configuraciones. Por ejemplo, los anticuerpos biespecíficos pueden asemejarse a anticuerpos simples (o fragmentos de anticuerpos) pero tienen dos sitios de enlace al antígeno diferentes (regiones variables). Los anticuerpos biespecíficos pueden ser producidas mediante técnicas químicas (Kranz et al. (1981), Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 78: 5807), mediante técnicas de "polidoma" (Patente de los Estados Unidos No. 4,474,893), o mediante técnicas de ARN recombinantes. Los anticuerpos biespecíficos de la presente invención pueden tener especificidades de enlace para al menos dos epitopos diferentes, al menos uno de los cuales es un epitopo de IL-lß. Los anticuerpos y los fragmentos que se enlazan a IL-lß pueden ser heteroanticuerpos. Los heteroanticuerpos son dos o más anticuerpos, o fragmentos de enlace del anticuerpo (Fab) ligados entre sí, cada anticuerpo o fragmento tiene una diferente especificidad. Las técnicas para crear las versiones de ADN recombinante de las regiones de enlace al antígeno de las moléculas de anticuerpo que desvían la generación de anticuerpos monoclonales, son contempladas para los presentes anticuerpos y los fragmentos que se enlazan a IL-lß. El ADN es clonado dentro de un sistema de expresión bacteriano. Un ejemplo de tal técnica, adecuada para la práctica de esta invención, utiliza un sistema vector de bacteriófago lambda que tiene una secuencia guía o delantera que provoca que la proteína Fab expresada migre hacia el espacio periplásmico (entre la membrana celular bacteriana y la pared celular) o que sea secretada. Se pueden generar y seleccionar rápidamente grandes números de fragmentos Fab funcionales para aquellos que se enlazan a IL-lß. Tales agentes de enlace a IL-lß (fragmentos Fab con la especificidad para un polipéptido de IL-lß) son específicamente abarcados dentro de los anticuerpos de enlace de IL-lß y fragmentos de la presente invención. Los presentes anticuerpos y fragmentos de enlace al IL-lß pueden ser anticuerpos humanizados o humanos manipulados por ingeniería. Como se utiliza en la presente, un anticuerpo humanizado o fragmento de enlace al antígeno del mismo, es un polipéptido recombinante que comprende una porción de un sitio de enlace al antígeno proveniente de un anticuerpo no humano y una porción de las regiones estructurales y/o constantes de un anticuerpo humano. Un anticuerpo manipulado por ingeniería humana o fragmentos de anticuerpo es un anticuerpo no humano (por ejemplo de ratón) que ha sido manipulado por ingeniería mediante modificación (por ejemplo, supresión, inserción o sustitución) de aminoácidos en posiciones específicas para reducir o eliminar cualquier inmunogenicidad detectable del anticuerpo modificado, en un humano. Los anticuerpos humanizados incluyen anticuerpos quiméricos y anticuerpos injertados con CDR. Los anticuerpos quiméricos son anticuerpos que incluyen una región variable de anticuerpo no humano enlazada a una región constante humana. De este modo, en anticuerpos quiméricos, la región variable es principalmente no humana, y la región constante es humana. Los anticuerpos quiméricos y los métodos para la elaboración de éstos se describen en Morrison et al., Proc. Natl. Acad. Sci USA, 81: 6841-6855 (1984), Boulianne, et al., Nature, 312: 643-646 (1984), y la Solicitud del PCT Publicación No. WO 86/01533. Aunque éstos pueden ser menos inmunogénicos que un anticuerpo monoclonal de ratón, las administraciones de anticuerpos quiméricos han sido asociadas con respuestas inmunes humanas (HAMA) a la porción no humana de los anticuerpos. Los anticuerpos quiméricos pueden ser también producidos mediante el empalme de los genes provenientes de una molécula de anticuerpo de ratón de especificidad apropiada de enlace al antígeno junto con los genes provenientes de una molécula de anticuerpo humana de actividad biológica apropiada tal como la habilidad para activar el complemento humano y mediar ADCC. Morrison et al. (1984), Proc. Natl. Acad. Sci., 81 : 6851; Neuberger et al. (1984), Nature, 312: 604. Un ejemplo es el reemplazo de una región Fc con aquella de un isotipo diferente. Los anticuerpos injertados con CDRs son anticuerpos que incluyen los CDRs provenientes de un anticuerpo de "donador no humano" enlazado a la región estructural proveniente de un anticuerpo "recipiente" humano. En general, los anticuerpos injertados con CDR incluyen más secuencia de anticuerpo humano que los anticuerpos quiméricos, debido a que éstos incluyen las secuencias de la región constante y las secuencias de la región variable (estructura) de los anticuerpos humanos. De este modo, por ejemplo, un anticuerpo humanizado insertado con CDR de la invención puede comprender una cadena pesada que comprende una secuencia contigua de aminoácidos (por ejemplo, aproximadamente 5 o más, o incluso 15 o más residuos de aminoácidos contiguos) a partir de la región estructural de un anticuerpo humano (por ejemplo, FR-I, FR-2, ó FR-3 de un anticuerpo humano), u opcionalmente la mayoría o toda la región estructural completa de un anticuerpo humano. Los anticuerpos injertados con CDR y los métodos para la elaboración son descritos en Jones et al., Nature, 321: 522-525 (1986), Riechmann et al., Nature, 332: 323-327 (1988), y Verhoeyen et al., Science, 239: 1534-1536 (1988)). Los métodos que pueden ser utilizados para producir anticuerpos humanizados pueden ser descritos en las Patentes de los Estados Unidos Nos. 4,816,567, 5,721,367, 5,837,243, y 6,180,377. Los anticuerpos injertados con CDR son considerados menos adecuados que los anticuerpos quiméricos para inducir una reacción inmune contra porciones de anticuerpo no humanas. No obstante, se ha reportado que las secuencias estructurales provenientes de los anticuerpos donadores son requeridas para la afinidad de enlace y/o la especificad del anticuerpo donador, presumiblemente debido a que estas secuencias estructurales afectan el plegamiento de la porción de enlace al antígeno del anticuerpo donador. Por lo tanto, cuando las secuencias de CDR no humanas, donadoras son injertadas sobre secuencias estructurales humanas no alteradas, el anticuerpo injertado con CDR resultante puede mostrar, en algunos casos, pérdida de la avidez de enlace con relación al anticuerpo donador no humano original. Ver por ejemplo, Riechmann et al., Nature, 332: 323-327 (1988), y Verhoeyen et al., Science, 239: 1534-1536 (1988). Loa anticuerpos manipulados por ingeniería humana incluyen los anticuerpos "disfrazados" y anticuerpos preparados utilizando la tecnología HUMAN ENGINEERINGMR (XOMA (US) LLC, Berkeley, CA) . La tecnología HUMAN ENGINEERINGMR es comercialmente disponible e involucra la alteración de un anticuerpo no humano o fragmento de anticuerpo tal como un anticuerpo de ratón o quimérico o un fragmento de anticuerpo, mediante la realización de cambios específicos de la secuencia de aminoácidos del anticuerpo, para producir así un anticuerpo modificado con inmunogenicidad reducida en un humano que no obstante conserva las propiedades de enlace deseables de los anticuerpos no humanos originales. En general, la técnica involucra la clasificación de los residuos de aminoácidos de un anticuerpo no humano (por ejemplo, de ratón) como residuos de "bajo riesgo", "riesgo moderado" o "alto riesgo". La clasificación es realizada utilizando un cálculo de riesgo/recompensa global que evalúa los beneficios predichos de la realización de sustitución particular (por ejemplo, para la inmunogenicidad en humanos) contra el riesgo de que la sustitución afectará el plegamiento del anticuerpo resultante y/o las propiedades de enlace al antígeno. De este modo, una posición de bajo riesgo es una para la cual se predice que una sustitución es benéfica debido a que se predice que reduce la inmunogenicidad sin afectar significativamente las propiedades de enlace del antígeno. Una posición de riesgo moderado es una para la cual es predicha una sustitución para reducir la inmunogenicidad, pero es más probable que afecte el plegamiento de la proteína y/o el enlace al antígeno. Las posiciones de alto riesgo contienen residuos que más probablemente estén involucrados en el plegamiento adecuado o en el enlace al antígeno. En general, las posiciones de bajo riesgo con un anticuerpo no humano son sustituidas con residuos humanos, las posiciones de alto riesgo son raramente sustituidas, y las sustituciones de humanización en posición de riesgo moderado son algunas veces realizadas, aunque no indiscriminadamente. Las posiciones con prolinas en la secuencia de región variable del anticuerpo no humano, son usualmente clasificadas como al menos posiciones de riesgo moderado. Los residuos de aminoácidos humanos particulares que van a ser sustituidos en una posición de riesgo baja o moderada de una secuencia de anticuerpo no humana (por ejemplo, de ratón) pueden ser seleccionadas por la alineación de una secuencia de aminoácidos a partir de las regiones variables del anticuerpo no humano, con la región correspondiente de una secuencia de anticuerpo humana específica o de consenso. Los residuos de aminoácidos en posiciones de riesgo bajas o moderadas en la secuencia no humana pueden ser sustituidas por los residuos correspondientes en la secuencia de anticuerpo humano de acuerdo a la alineación. Las técnicas para la elaboración de proteínas manipuladas por ingeniería humana son descritas con mayor detalle en Studnicka et al., Protein Engineering, 7: 805-814 (1994), las Patentes de los Estados Unidos Nos. 5,766,886, 5,770,196, 5,821,123, y 5,869,619, y Solicitud del PCT Publicación No. WO 93/11794. Los anticuerpos "disfrazados" son anticuerpos no humanos o humanizados (por ejemplo, anticuerpos quiméricos o injertados con CDR) que han sido manipulados por ingeniería para reemplazar ciertos residuos de aminoácidos expuestos al solvente, para reducir adicionalmente su inmunogenicidad o mejorar su función. Ya que se presume que los residuos superficiales de un anticuerpo quimérico es menos probable que afecten el plegamiento adecuado del anticuerpo y más probablemente promuevan una reacción inmune, el disfraz o recubrimiento de un anticuerpo quimérico puede incluir, por ejemplo, la identificación de residuos expuestos al solvente en una región estructural no humana de un anticuerpo quimérico y reemplazando al menos una de ellas con residuos superficiales correspondientes provenientes de una región estructural humana. El disfraz o recubrimiento puede ser logrado mediante cualquier técnica de ingeniería adecuada, incluyendo el uso de la tecnología HUMAN ENGINEERINGMR anteriormente descrita. En un procedimiento diferente, puede ser lograda una recuperación de avidez de enlace por la "des-humanización" de un anticuerpo injertado con CDR. La des-humanización puede incluir la restauración de residuos provenientes de las regiones estructurales del anticuerpo donador al anticuerpo injertado con CDR, con lo cual se restaura el plegamiento adecuado. Similarmente, la "des-humanización" puede ser lograda mediante (i) la inclusión de porciones de la región estructural "donadora" en el anticuerpo "recipiente" o (ii) el injerto de porciones de la región estructural del anticuerpo "donador" dentro del anticuerpo recipiente (junto con las CDRs donadoras injertadas. Para una discusión adicional de los anticuerpos, los anticuerpos humanizados, manipulados por ingeniería humana, y los métodos para su preparación, ver Kontermann y Dubel, eds., Antibody Engineering, Springer, New York, NY, 2001. Los anticuerpos ejemplares humanizados o manipulados por ingeniería humana incluyen los anticuerpos IgG, IgM, IgE, IgA, e IgD. Los presentes anticuerpos pueden ser de cualquier clase (IgG, IgA, IgM, IgE, IgD, etc.) o isotipo y pueden comprender la cadena ligera kappa o lambda. Por ejemplo, un anticuerpo humano puede comprender una cadena pesada IgG o el fragmento definido, tal como al menos uno de los isotipos IgGl, IgG2, IgG3 o IgG4. Como un ejemplo adicional, los presentes anticuerpos o fragmentos pueden comprender una cadena pesada de IgG y una cadena ligera de IgGl. Los presentes anticuerpos y fragmentos pueden ser anticuerpos humanos, tales como los anticuerpos que se enlazan a los polipéptidos de IL-lß y son codificados por las secuencias de ácido nucleico que son variantes somáticas de origen natural de la secuencia de ácido nucleico de inmunoglobulina de línea germinal humana, y fragmentos, variantes sintéticas, derivados y fusiones de los mismos.

Tales anticuerpos pueden ser producidos mediante cualquier método conocido en la materia, tales como a través del uso de mamíferos transgénicos (tales como ratones transgénicos) en los cuales el repertorio de inmunoglobulina nativa ha sido reemplazado con genes V humanos en el cromosoma de mamífero. Tales mamíferos parecen llevar a cabo la recombinación VDJ y la hipermutación somática de los genes de anticuerpo de línea germinal humana de una manera normal, produciendo de este modo anticuerpos de alta afinidad con secuencias completamente humanas. Los anticuerpos humanos pueden ser también generados a través de la selección in vi tro de las bibliotecas de anticuerpo de visualización de fago. Ver Hoogenboom et al. (1991), J. Mol. Biol. 227: 381; y Marks et al. (1991), J. Mol. Biol. 222: 581. Diversas bibliotecas de visualización de fago que contienen anticuerpos han sido descritas y pueden ser fácilmente preparadas. Las bibliotecas pueden comprender una diversidad de secuencias humanas de anticuerpo tales como los fragmentos Fab, Fv, y scFv humanos, que pueden ser seleccionados contra un objetivo apropiado. Las bibliotecas de visualización de fago pueden comprender péptidos o proteínas diferentes de los anticuerpos que pueden ser seleccionados para identificar los agentes de enlace selectivos de IL-lß. Los anticuerpos de enlace a IL-lß y los enlaces de los mismos pueden comprenden una o más porciones que no se enlazan a IL-lß sino más bien son responsables de otras funciones, tales como la vida media en circulación, el efecto citotóxico directo, la marcación aceptable o la activación de la cascada del complemento endógena del recipiente, o la citotoxicidad celular endógena. Los anticuerpos o fragmentos pueden comprender toda o una porción de la región constante y pueden ser cualquier isotipo, incluyendo IgA (por ejemplo, IgAl ó IgA2), IgD, IgE, IgG (por ejemplo, IgGl, IgG2, IgG3 ó IgG4), ó IgM. Además de, o en vez de, comprender una región constante, los compuestos de enlace al antígeno de la invención pueden incluir un marcador epitópico, un epitopo de receptor de salvamento, una porción marcadora para fines de diagnóstico o de purificación o una porción citotóxica tal como un radionúclido o toxina. La región constante (cuando está presente) de los presentes anticuerpos y fragmentos puede ser del tipo ?l, ?2, ?3, ?4, µ, ß2, o d o e, preferentemente del tipo ?, más preferentemente del tipo ?l, mientras que la parte constante de una cadena ligera humana puede ser del tipo K o ? (que incluye los subtipos ?i, ?2 y ?3) pero es preferentemente del tipo K. Las variantes también incluyen anticuerpos de fragmentos que comprenden una porción Fc modificada, en donde la región Fc modificada comprende al menos una modificación de aminoácido con relación a ina región Fc tipo silvestre. La región Fc variante puede ser diseñada, con relación a una molécula comparable que comprende la región Fc de tipo silvestre para enlazarse a los receptores de Fc con una mayor o menor afinidad. Por ejemplo, los presentes anticuerpos y los fragmentos que se enlazan a IL-lß pueden comprender una región Fc modificada. Una región Fc se refiere a los polipéptidos de origen natural o sintéticos homólogos al dominio C-terminal de IgG que es producido después de la digestión con papaína de la IgG. Fc de IgG tiene un peso molecular de aproximadamente 50 kD. En los presentes anticuerpos y fragmentos, una región Fc completa puede ser utilizada, o únicamente una porción que aumenta la vida media. Además, son aceptables muchas modificaciones en la secuencia de aminoácidos, ya que la actividad nativa no es en todos los casos necesaria o deseada. La región Fc puede ser mutada, si se desea, para inhibir su habilidad para fijar el complemento para enlazarse al receptor Fc con alta afinidad. Para la Fc de IgG murina, la sustitución de los residuos de Ala por residuos de Glu 318, Lys 320, y Lys 322 hace a la proteína capaz de dirigir ADCC. La sustitución de Glu por Leu 235 inhibe la habilidad de la proteína para enlazarse al receptor de Fc con alta afinidad. Son conocidas diversas mutaciones para la IgG humana (ver por ejemplo, Morrison et al., 1994, The Immunologist 2: 119 124 y Brekke et al., 1994, The Imp unologist 2: 125). En algunas modaliaades, los presentes anticuerpos o fragmentos son proporcionados con una región Fc modificada donde una región Fc de origen natural es modificada para incrementar la vida media cel anticuerpo o del fragmento del mismo en un ambiente biológico, por ejemplo, la vida media en suero o una vida media medida por un ensayo in vi tro . Los métodos para alterar la forma original de una región Fc de una IgG son también descritos en la Patente de los Estados Unidos No. 6,998,253. En ciertas modalidades, puede ser deseable modificar el anticuerpo o fragmento con el fin de incrementar su vida media en suero, por ejemplo, agregando moléculas tael como PEG u otros polímeros solubles en agua, incluyendo polímeros polisacáridos, a los fragmentos de anticuerpo para incrementar la vida media. Esto puede ser también logrado, por ejemplo, mediante la incorporación de un epitopo de enlace al receptor de salvamento dentro del fragmento de anticuerpo (por ejemplo, mediante mutación de la región apropiada en el fragmento de anticuerpo o mediante la incorporación del epitopo dentro de un marcador peptídico que es luego fusionado al fragmento de anticuerpo en cualquier extremo o en la parte intermedia, por ejemplo, mediante síntesis de ADN o de péptidos) (ver Publicación Internacional del PCT No. W096/32478) . El epitopo de enlace al receptor de salvamento se refiere a un epitopo de la región Fc de una molécula de IgG (por ejemplo, IgG?, IgG2, IgG3, ó IgG ) que es responsable del incremento de la vida media sérica in vivo de la molécula de IgG. Un epitopo de enlace al receptor de salvamento, puede incluir una región en donde uno o más residuos de aminoácidos provenientes de uno o más bucles de un dominio Fc son transferidos a una posición análoga del fragmento de anticuerpo. Aún más preferentemente, tres o más residuos provenientes de uno o más bucles del dominio Fc son transferidos. Todavía más preferentemente el epitopo es tomado del dominio CH2 de la región Fc (por ejemplo, de una IgG) y transferido a la región CH1, CH3 o VH o más de una de tales regiones del anticuerpo. Alternativamente, el epitopo es tomado del dominio CH2 de la región Fc y transferido a la región CL o la región VL, o ambas, del fragmento de anticuerpo. Ver también las solicitudes Internacionales WO 97/34631 y WO 96/32478 las cuales describen las variantes de Fc y su interacción con el receptor de salvamento. La mutación de los residuos dentro de los sitios de enlace al receptor Fc puede dar como resultado la función efectora alterada, tal como la actividad ADCC o CDC alterada, o vida media alterada. Las mutaciones potenciales incluyen inserción, supresión o sustitución de uno o más residuos, incluyendo la sustitución con alanina, una sustitución conservadora, una sustitución no conservadora, o el reemplazo con un residuo de aminoácido correspondiente en la misma posición proveniente de una subclase de IgG diferente (por ejemplo, el reemplazo de un residuo de IgGl con un residuo de IgG2 correspondiente en esa posición) . Por ejemplo, se ha reportado que la mutación de la serina en la posición del aminoácido 241 en la IgG4 a prolina (encontrada en esa posición en la IgGl y en la IgG2) condujo a la producción de un anticuerpo homogéneo, así como la extensión de la vida media en suero y al mejoramiento de la distribución tisular en comparación a la IgG4 quimérica original. (Angal et al, Mol Immunol. 30:105-8, 1993). Preferentemente, el anticuerpo o el fragmento de anticuerpo de la presente invención no reacciona cruzadamante con ningún objetivo diferente de IL-lß. Por ejemplo, los presentes anticuerpos y fragmentos preferentemente no se enlazan detectablemente a IL-la.

Anticuerpo o Fragmento de Anticuerpo que se Enlaza a IL-lß Los fragmentos de anticuerpos son porciones de un anticuerpo intacto de longitud completa, tal como una región variable o de enlace al antígeno del anticuerpo intacto. Los ejemplos de fragmentos de anticuerpo incluyen los fragmentos Fab, Fab', F(ab')2, y Fv; diacuerpos; anticuerpos lineales; moléculas de anticuerpo de cadena simple (por ejemplo, scFv) ; fragmentos de anticuerpo multiespecíficos tales como anticuerpos biespecíficos, triespecíficos y multiespecíficos (por ejemplo, diacuerpos, triacuerpos, tetracuerpos) ; minicuerpos; anticuerpos recombinantes quelantes; tricuerpos o bicuerpos; intracuerpos; nanocuerpos; productos inmunofarmacéuticos modulares pequeños (SMIP) , proteínas de fusión de inmunoglobulina de dominio de enlace; anticuerpos canalizados, anticuerpos que contienen VHH; y cualesquiera otros polipéptidos formados a partir de fragmentos de anticuerpo . La invención proporciona un anticuerpo que se enlaza a IL-lß o el fragmento que se enlaza a IL-lß del mismo que comprende la SEQ ID No: 2. La figura 1 ilustra la secuencia de aminoácidos de la SEQ ID No: 2. Preferentemente, el anticuerpo o fragmento de anticuerpo comprende la secuencia de aminoácidos de la SEQ ID No: 21 y más preferentemente comprende la secuencia de aminoácidos de las SEQ ID No: 4, SEQ ID No: 5, SEQ ID No: 6, SEQ ID No: 7, o SEQ ID No: 8. Los anticuerpos de la invención también pueden comprenden la secuencia de aminoácidos de la SEQ ID No: 12 y la SEQ ID No: 13, y preferentemente comprende la SEQ ID No: 14 o la SEQ ID No: 15. Típicamente, el anticuerpo o fragmento de anticuerpo comprende una región variable de cadena ligera y una región variable de cadena pesada, y una región variable de cadena pesada comprende la secuencia de aminoácidos de la SEQ ID No: 2 (por ejemplo, comprende la secuencia de aminoácidos de las SEQ ID Nos: 4-8, 12-15 ó 21). La cadena ligera del anticuerpo comprende preferentemente, consiste esencialmente de, o consiste de la secuencia de aminoácidos de la SEQ ID No: 1. De este modo, por ejemplo, la cadena ligera del anticuerpo puede comprender, consistir esencialmente de, o consistir de la secuencia de aminoácidos de la SEQ ID No: 9, SEQ ID No: 10 o SEQ ID No: 11. También es preferido un anticuerpo o fragmento de anticuerpo (por ejemplo, una región variable de cadena pesada de un anticuerpo o fragmento de anticuerpo que comprende, consiste esencialmente de, o consiste de la secuencia de aminoácidos de la SEQ ID No: 23 ó la SEQ ID No: 24 (por ejemplo, SEQ ID No: 25 ó SEQ ID No: 26) . La invención proporciona un anticuerpo que se enlaza a IL-lß o el fragmento que se enlaza a IL-lß del mismo que comprende una región variable de cadena pesada que comprende unas de las secuencias de aminoácidos de las SEQ ID Nos: 2, 23 ó 24, alternativamente una de las secuencias de aminoácidos de las SEQ ID Nos: 12, 13, 21, 23 ó 24, ó alternativamente la secuencia de aminoácidos de las SEQ ID Nos: 12, 13 ó 21, ó alternativamente la secuencia de aminoácidos de las SEQ ID Nos: 13 ó 21, ó alternativamente la secuencia de aminoácidos de las SEQ ID Nos: 8, 14 ó 15, ó alternativamente la secuencia de aminoácidos de SEQ ID Nos: 8 ó 15. Típicamente, el anticuerpo o fragmento de anticuerpo comprende la región variable de cadena ligera, preferentemente comprende la secuencia de aminoácidos de la SEQ ID No: 9, SEQ ID No: 10, ó SEQ ID No: 11. Como un ejemplo, un anticuerpo preferido comprende una región variable de cadena pesada que incluye la secuencias de aminoácidos de SEQ ID No: 8 y una región variable de cadena ligera que comprende la secuencias de aminoácidos de la SEQ ID No: 11. La invención también proporciona un anticuerpo que se enlaza a IL-lß o el fragmento que se enlaza a IL-lß del mismo que comprende una de las secuencias de aminoácidos de la SEQ ID No: 28. Preferentemente, el anticuerpo o fragmento comprende además una de las secuencias de aminoácidos de la SEQ ID No: 27. La invención también proporciona un anticuerpo que se enlaza a IL-lß o el fragmento que se enlaza a IL-lß del mismo que comprende, consiste esencialmente de o consiste de la SEQ ID No: 29. Preferentemente, el anticuerpo o fragmento de anticuerpo comprende, consiste esencialmente de, o consiste de la secuencia de aminoácidos de las SEQ ID Nos: 31-35, o alternativamente la secuencia de aminoácidos de las SEQ ID Nos: 31, 32 ó 33, o alternativamente, la secuencia de aminoácidos de las SEQ ID Nos: 32 ó 33. Preferentemente, el anticuerpo o fragmento de anticuerpo incluye además una región variable de cadena ligera que comprende una de las secuencias de aminoácidos de la SEQ ID No: 27, alternativamente una de las secuencias de aminoácidos de las SEQ ID No: 9, SEQ ID No: 10, ó SEQ ID No: 11. Las figuras 2, 3 y 4 describen las regiones variables de cadena pesada y ligera de los anticuerpos ejemplares de la invención, cuyas secuencias corresponden a los anticuerpos referidos en la presente como ABl, AB2, AB3, AB4, AB5, AB5.1, AB5.2, AB5.3, y AB5.4. Las secuencias AB5.1, AB5.2, AB5.3, y AB5.4 contienen posiciones variables, designadas como XI y X2, en la región CDR3 de cadena pesada. Estas posiciones variables pueden ser cualquiera de los aminoácidos indicados. Preferentemente, XI y X2 son, respectivamente, alanina y arginina, valina y arginina, fenilalanina y arginina, lisina y lisina, o asparagina y arginina . AB5.1 comprende una región variable de cadena pesada que comprende la secuencia de aminoácidos de la SEQ ID No: 12 y una región variable de cadena ligera que comprende la secuencia de aminoácidos de la SEQ ID No: 10. AB5.2 comprende una región variable de cadena pesada que comprende la secuencia de aminoácidos de SEQ ID No: 13 y una región variable de cadena ligera que comprende la secuencia de aminoácidos de SEQ ID No: 11. AB5.3 comprende una región variable de cadena pesada que comprende la secuencia de aminoácidos de la SEQ ID No: 23 y una región variable de cadena ligera que comprende la secuencia de aminoácidos de la SEQ ID No: 10. AB5.4 comprende una región variable de cadena pesada que comprende la secuencia de aminoácidos de la SEQ ID No: 24 y una región variable de cadena ligera que comprende la secuencia de aminoácidos de la SEQ ID No: 11. La presente invención abarca los fragmentos de anticuerpo que se enlazan a IL-lß, que comprenden cualquiera de las secuencias de cadena pesada o ligera anteriormente mencionadas, y que se enlazan a IL-lß. El término fragmentos como se utiliza en la presente, se refiere a cualesquiera tres o más aminoácidos contiguos (por ejemplo, 4 o más, 5 o más 6 o más, 8 o más, o incluso 10 o más aminoácidos contiguos) del anticuerpo y abarca los fragmentos Fab, Fab', F(ab')2, y F(v), o las regiones variables individuales de cadena ligera y pesada o una porción de las mismas. Los fragmentos que se enlazan a IL-lß incluye, por ejemplo, Fab, Fab1, F(ab')2, Fv y scFv. Estos fragmentos carecen del fragmento Fc de un anticuerpo intacto, se despejan más claramente de la circulación, y pueden tener menos enlace a tejido no específico que un anticuerpo no intacto. Ver Wahl et al. (1983), J. Nucí. Med., 24: 316-25. Estos fragmentos pueden ser producidos a partir de anticuerpos intactos utilizando métodos bien conocidos, por ejemplo, mediante escisión proteolítica con enzimas tales como papaína (para producir el fragmento Fab) o pepsina (para producir fragmentos F(ab')2). La presente invención abarca los anticuerpos que se enlazan a IL-lß y los fragmentos que se enlazan a IL-lß de los mismos que se enlazan selectivamente al ligando de IL-lß, pero permiten o sustancialmente permiten el enlace del ligando de IL-lß enlazado al receptor tipo 1 de IL-1 (IL-1RI) (ver ejemplo 14 y figuras 19 y 20) . En contraste a muchos anticuerpos, incluyendo varios anticuerpos de enlace a IL-lß conocidos, los anticuerpos designados AB5 y AB7 se enlazan selectivamente al ligando IL-lß, pero éstos no bloquean o sustancialmente bloquean el enlace de IL-lß a IL-1RI, como es demostrado en el ejemplo 14. Por ejemplo, el anticuerpo designado AB7 se enlaza a un epitopo de IL-lß pero todavía permite que la IL-lß enlazada se enlace a IL-1RI. De este modo, la presente invención abarca los anticuerpos o fragmentos de enlace a IL-lß que se enlazan a un epitopo de IL-lß, tal que el anticuerpo o fragmento enlazado permite o sustancialmente permite que IL-lß se enlace al receptor I de IL-1 (IL-1RI), y el anticuerpo o fragmento se enlaza a la IL-lß humana con una constante de disociación menor de 3 pM. Los ensayos basados in vi tro y en células son bien descritos en la técnica y para el uso en la determinación del enlace de IL-lß al receptor tipo I de IL-1, incluyendo los ensayos que determinan la presencia de moléculas (tales como anticuerpos, antagonistas u otros inhibidores) que se enlazan a IL-lß o IL-IRI. (ver por ejemplo Evans et al., (1995), J. Biol. Chem. 270:11477-11483; Vigers et al., (2000), J. Biol. Chem. 275:36927-36933; Yanofsky et al., (1996), Proc. Natl.

Acad. Sci. USA 93:7381-7386; Fredericks et al., (2004), Protein Eng. Des. Sel. 17:95-106; Slack et al., (1993), J. Biol. Chem. 268:2513-2524; Smith et al., (2003), Immunity 18:87- 96; Vigers et al., (1997), Nature 386:190-194; Ruggiero et al., (1997), J. Immunol . 158:3881-3887; Guo et al., (1995), J. Biol. Chem. 270:27562-27568; Svenson et al., (1995), Eur. J. Immunol. 25:2842-2850; Arend et al., (1994), J. I munol. 153:4766-4774). El receptor tipo I de IL-1 recombinante, incluyendo el receptor tipo I de IL-1 humana para tales ensayos es fácilmente disponible de una variedad de fuentes comerciales (ver por ejemplo R&D Systems, SIGMA). El receptor tipo I de IL-1 puede ser también expresado a partir de una construcción de expresión o vector introducido dentro de una célula hospedera apropiada utilizando técnicas estándares de biológica molecular y de transfección conocidas en la materia. El receptor tipo I de IL-1 expresado puede ser luego aislado y purificado para el uso en los ensayos de enlace, o alternativamente utilizado directamente en una forma asociada a la célula. Por ejemplo, el enlace de IL-lß al receptor tipo I de IL-1 puede ser determinado mediante la inmovilización de un anticuerpo que se enlaza a IL-lß, poniendo en contacto IL-lß con el anticuerpo inmovilizado y determinando si la IL-lß se enlazó o no al anticuerpo y poniendo en contacto una forma soluble de IL-1RI con el complejo IL-lß/anticuerpo enlazado, y determinando si el IL-1RI soluble se enlazó o no al complejo. El protocolo puede también incluir poner en contacto el IL-lß soluble con el anticuerpo inmovilizado antes del contacto con IL-lß, para confirmar que el IL-1RI soluble no se enlaza al anticuerpo inmovilizado. Este protocolo puede ser realizado utilizando un instrumento Biacore® para análisis cinético de las interacciones de enlace. Tal protocolo puede ser también empleado para determinar si un anticuerpo u otra molécula permite o bloquea el enlace de IL-lß al receptor tipo I de IL-1. Para otros ensayos de enlace de IL-lß/IL-lRI , la permisión o bloqueo del enlace de IL-lß al receptor tipo I de IL-1 puede ser determinada por comparación del enlace de IL-lß a IL-1RI, en presencia o ausencia de los anticuerpos que se enlazan a IL-lß o los fragmentos que se enlazan a IL-lß de los mismos. El bloqueo es identificado en la lectura de ensayo con la reducción designada de IL-lß al receptor tipo I de IL-1 en presencia de anticuerpos anti-IL-lß o fragmentos de enlace a IL-lß de los mismos, en comparación a una muestra control que contiene el amortiguador o diluyente correspondiente, pero no un anticuerpo para IL-lß o el fragmento que se enlaza a IL-lß del mismo. La lectura de ensayo puede ser cualitativamente observada como indicadora de la presencia o ausencia del bloqueo, o pueden ser cuantitativamente consideradas como una indicación de una reducción porcentual o proporcional en el enlace debido a la presencia del anticuerpo o del fragmento. Alternativa o adicionalmente, cuando un anticuerpo que se enlaza a IL-lß o el fragmento que se enlaza a IL-lß bloquea sustancialmente en enlace de IL-lß a IL1RI, el enlace de IL-lß a IL1RI es reducido por al menos 10 veces, alternativamente al menos aproximadamente 20 veces, alternativamente al menos aproximadamente 50 veces, alternativamente al menos aproximadamente 100 veces, alternativamente al menos aproximadamente 1000 veces, alternativamente al menos aproximadamente 10000 veces, ó más, en comparación al enlace de las mismas concentraciones de IL-Iß e IL1RI en ausencia del anticuerpo o del fragmento. Como otro ejemplo más, cuando un anticuerpo que se enlaza a IL-lß o el fragmento que se enlaza a IL-lß permite sustancialmente el enlace de IL-lß a IL1RI, el enlace de IL-lß a IL1RI es al menos de aproximadamente 90%, alternativamente al menos de aproximadamente 95%, alternativamente al menos de aproximadamente 99%, alternativamente al menos de aproximadamente 99.9%, alternativamente al menos de aproximadamente 99.99%, alternativamente al menos de aproximadamente 99.999%, alternativamente al menos de aproximadamente 99.9999%, alternativamente sustancialmente idéntico al enlace de la mismas concentraciones de IL-lß e IL1RI en ausencia del anticuerpo o el fragmento. La presente invención abarca los anticuerpos que se enlazan a IL-lß o los fragmentos que se enlazan a IL-lß que se enlazan al mismo epitopo o sustancialmente al mismo epitopo que uno o más de los anticuerpos ejemplares descritos aquí. Alternativa o adicionalmente, los anticuerpos que se enlazan a IL-lß o los fragmentos que se enlazan a IL-lß compiten con el enlace de un anticuerpo que tiene la región variable de cadena ligera de la SEQ ID No: 11 y la región variable de cadena pesada de la SEQ ID No: 15. Alternativa o adicionalmente, la presente invención abarca los anticuerpos y los fragmentos que se enlazan a IL-lß que se enlazan a un epitopo contenido en la secuencia de aminoácidos ESVDPKNYPKKKMEKRFVFNKIE (SEQ ID No: 36) , un epitopo al que se enlazan los anticuerpos designados AB5 y AB7. Como se contempla en la presente, se puede determinar fácilmente si un anticuerpo o el fragmento que se enlaza a IL-lß se enlaza al mismo epitopo o sustancialmente al mismo epitopo que uno o más de los anticuerpos ejemplares, tales como por ejemplo el anticuerpo designado AB7, utilizando cualquiera de los diversos métodos conocidos en la técnica. Por ejemplo, los residuos de aminoácidos clave (epitopo) enlazados por un anticuerpo o el fragmento que se enlaza a IL-lß puede ser determinado utilizando un arreglo peptídico similar al método descrito en el ejemplo 11. Un arreglo peptídico, tal como por ejemplo, un arreglo de péptido PepSpotMR (JPT Peptide Technologies, Berlin, Alemania), en donde una exploración de péptido de doce aminoácidos, que abarcan la secuencia completa de los aminoácidos de IL-lß, cada péptido traslapándose por 11 aminoácidos a aquel previo, es sintetizado directamente sobre una membrana. La membrana que posee los péptidos es luego sondeada con el anticuerpo para el cual se busca la información de enlace al epitopo, por ejemplo, a una concentración de 2 µg/ml, por 2 horas a temperatura ambiente. El enlace del anticuerpo a los péptidos enlazados a la membrana puede ser detectado utilizando un anticuerpo secundario de cabra anti-humano conjugado a HRP (o de ratón, cuando sea apropiado) , seguido por la quimioluminiscencia aumentada (ECL) . El o los puntos peptídicos correspondientes a los residuos de aminoácidos particulares o las secuencias de la proteína IL-lß madura, y que califican como positivos para el enlace al anticuerpo, son indicadores del epitopo enlazado por el anticuerpo particular. Alternativamente o en adición, pueden ser realizados experimentos de competencia de anticuerpo y tales ensayos son conocidos en la técnica. Por ejemplo, para determinar si un anticuerpo o fragmento se enlaza a un epitopo contenido en una secuencia peptídica que comprende los aminoácidos ESVDPKNYPKKKMEKRFVFNKIE, que corresponde a los residuos 83-105 de la proteína IL-lß madura, un anticuerpo de especificidad desconocida puede ser comparado con cualquiera de los anticuerpos ejemplares (por ejemplo, AB7) de la presente invención que se sabe se enlazan a un epitopo contenido dentro de esta secuencia. Los ensayos de competencia de enlace pueden ser realizados, por ejemplo, utilizando un instrumento Biacore® para el análisis cinético de las interacciones de enlace o mediante ELISA. En tal ensayo, el anticuerpo de la especificidad desconocida del epitopo es evaluado para su habilidad de competir el enlace contra el anticuerpo comparador conocido (por ejemplo, AB7). La competencia para el enlace a un epitopo particular es determinada por una reducción en el enlace al epitopo IL-lß de al menos aproximadamente 50%, o al menos aproximadamente 70%, o al menos aproximadamente 80%, o al menos aproximadamente 90%, o al menos aproximadamente 95%, o al menos aproximadamente 99% o aproximadamente 100% para el anticuerpo comparador conocido (por ejemplo, AB7) y es indicador del enlace sustancialmente al mismo epitopo. En vista de la identificación en esta descripción de las regiones de enlace a IL-lß en los anticuerpos ejemplares y/o los epitopos reconocidos por los anticuerpos descritos, se contempla que anticuerpos adicionales con características de enlace similares y utilidad terapéutica o diagnóstica similares puedan ser generados, que estén en paralelo a las modalidades de esta descripción. Además, los anticuerpos y fragmentos para IL-lß de la presente invención abarcan cualquiera de las secuencias de aminoácidos anteriores de las cadenas ligeras o pesadas con una o más sustituciones conservadoras (por ejemplo, 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, ó 15 sustituciones conservadoras) . A la luz de la presente descripción, se pueden determinar las posiciones de una secuencia de aminoácidos que son candidatas para las sustituciones conservadoras, y se pueden seleccionar los aminoácidos sintéticos y de origen natural que efectúan sustituciones conservadoras para cualesquiera aminoácidos particulares. La consideración para la selección de sustituciones conservadoras incluyen el contexto en el cual cualquier sustitución de aminoácido particular es realizada, la hidrofobicidad o la polaridad de la cadena lateral, el tamaño general de la cadena lateral, el valor de pK de las cadenas laterales con carácter ácido o básico bajo condiciones fisiológicas. Por ejemplo, la lisina, arginina, e histidina son a menudo adecuadamente sustituidas una por la otra. Como es conocido en la técnica, esto es debido a que los tres aminoácidos tienen cadenas laterales básicas, en donde el valor de pK para las cadenas laterales de la lisina y arginina son mucho más cercanos uno al otro (aproximadamente 10 y 12) que a la histidina (aproximadamente 6) . Similarmente, la glicina, alanina, valina, leucina, e isoleucina son a menudo adecuadamente sustituidas una por la otra, con la condición de que la glicina sea frecuentemente no adecuadamente sustituida por los otros miembros del grupo. Esto es debido a que cada uno de estos aminoácidos son relativamente hidrofóbicos cuando son incorporados en un polipéptido, pero las glicinas carecen de un carbono a que permita ángulo fi y psi de rotación (alrededor del carbono a) de modo que mucha libertad conformacional de los residuos de glicinilo puede disparar cambios en la conformación o en la estructura secundaria que a menudo no ocurren cuando los otros aminoácidos son sustituidos uno por el otro. Otros grupos de aminoácidos frecuentemente adecuadamente sustituidos uno por el otro incluyen, pero no están limitados a, el grupo que consiste de ácidos glutámico y aspártico; el grupo que consiste de fenilalanina, tirosina y triptofano; y el grupo que consiste de serina, treonina, y, opcionalmente tirosina. Mediante la realización de modificaciones conservadoras a la secuencia de aminoácidos o a las modificaciones correspondientes a los nucleótidos de modificación, se pueden producir los anticuerpos que se enlaza a IL-lß o el fragmento que se enlaza a IL-lß que tienen características funcionales y químicas similares a aquellas de los anticuerpos y fragmentos ejemplares descritos en la presente. En contraste, modificaciones sustanciales en las características funcionales y/o químicas de los anticuerpos que se enlazan a IL-lß o los fragmentos que se enlazan a IL-lß pueden ser logradas mediante selección de sustituciones que difieren significativamente en su efecto sobre el mantenimiento de (a) la estructura de la cadena principal molecular en el área de la sustitución, por ejemplo, como una conformación de lámina o de hélice, (b) la carga o la hidrofobicidad de la molécula en el sitio objetivo, o (c) el volumen de la cadena lateral. Los fragmentos de un anticuerpo que se enlazan al antígeno incluyen fragmentos que conservan la habilidad para enlazarse específicamente a un antígeno mediante la retención de la porción de enlace al antígeno del anticuerpo. Es bien establecido que la función de enlace al antígeno de un anticuerpo puede ser realizado por fragmentos de un anticuerpo de longitud completa. Los ejemplos de porciones de enlace al antígeno, incluye (i) un fragmento Fab, el cual es el fragmento monovalente consistente con los dominios de VL, VH, CL y CH1; (ii) un fragmento F(ab')2, el cual es un fragmento bivalente que comprende dos fragmentos Fab enlazados por un puente disulfuro en la región de bisagra; (iii) un fragmento Fd que es los dominios VH y CH1; (iv) un fragmento Fv que es los dominios VL y VH de un brazo simple de un anticuerpo, (v) un fragmento dAb (Ward et al., (1989) Nature 341:544-546), que es un dominio de VH; y (vi) una región aislada de determinación de la complementariedad (CDR) . Los anticuerpos de cadena simple son también abarcados dentro del término porción de enlace al antígeno de un anticuerpo. Los anticuerpos y fragmentos que se enlazan a IL-lß de la presente invención también abarcan los dominios monovalentes o multivalentes, o monoméricos o multiméricos (por ejemplo, tetraméricos, de enlace derivado de CDR con o sin un andamio (por ejemplo, el andamiaje proteico o de carbohidrato. Los presentes anticuerpos o fragmentos que se enlazan a IL-lß pueden ser parte de una molécula de inmunoadhesión más grande, formada por asociación covalente o no covalente del anticuerpo o la porción del anticuerpo con una o más de estas proteínas o péptidos. Los ejemplos de tales moléculas de inmunoadhesión incluyen el uso de la región núcleo de la estreptavidina para elaborar una molécula scFv tetramérica (Kipriyanov, S. M., et al. (1995) Human Antibodies and Hybridomas 6:93-101) y el uso de un residuo de cisteína, un péptido marcador y un marcador de polihistidina C-terminal para elaborar moléculas de scFv bivalentes y biotiniladas (Kipriyanov, S. M., et al. (1994) Mol. Immunol. 31:1047-1058). Los anticuerpos y fragmentos que comprenden moléculas de inmunoadhesión pueden ser obtenidos utilizando técnicas estándares de ADN recombinante, como se describe en la presente. Las porciones de enlace al antígeno preferidas son dominios completos o pares de dominios completos. Los anticuerpos o fragmentos que se enlazan a IL-lß de la presente invención también abarcan los fragmentos de anticuerpo de dominio (dAb) (Ward-et al, Nature 341:544-546, 1989) que consisten de un dominio VH. Los anticuerpos o fragmentos que se enlazan i IL-lß de la presente invención también abarcan los diacuerj. os que son anticuerpos bivalentes en los cuales los dominios VH y VL son expresados sobre una cadena polipeptídica simple, mediante el uso de un ligador que es demasiado corto para permitir el apareamiento entre los dos dominios sobre la misma cadena, con lo cual se fuerzan a los dominios a aparearse con dominios complementarios de otra cadena y crear dos sitios de enlace al antígeno (ver por ejemplo la patente Europea No. EP 404,097; el documento WO 93/11161; Holliger et al, Proc. Natl Acad. Sci. USA 90:6444-6448, 1993, y Poljak et al, Structure 2: 1121-1123, 1994). Los diacuerpos pueden ser biespecíficos o monoespecíficos. Los anticuerpos o fragmentos que se enlazan a IL-lß de la presente invención también abarcan fragmentos de anticuerpo de cadena simple (scFv) que se enlazan a IL-lß. Un scFv comprende una región variable de cadena pesada de anticuerpo (VH) operablemente enlazada a una región variable de cadena ligera de anticuerpo (VL) en donde la región variable de cadena pesada y la región variable de cadena ligera, conjunta o individualmente, forman un sitio de enlace que se enlaza a IL-lß. Un scFv puede comprender una región VH en el extremo amino-terminal y una región VL en la región carboxilo-terminal. Alternativamente, scFv puede comprender una región VL en el extremo amino-terminal y una región VH en la región carboxilo-terminal. Además, aunque los dos dominios del fragmento Fv, VL y VH, son codificados por genes separados, éstos pueden ser unidos, utilizando métodos recombinantes, por un ligador sintético que hace posible que sean elaborados como una cadena peptídica simple, en la cual las regiones VL y VH se aparean para formar moléculas monovalentes (conocidas como Fv de cadena simple (scFv); ver por ejemplo, Bird et al. (1988) Science 242:423-426; y Huston et al. (1988) Proc. Natl. Acad. Sci. USA 85:5879-5883). Un scFv puede comprender opcionalmente además un ligador polipeptídico entre la región variable de cadena pesada y la región variable de cadena ligera. Tales ligadores polipeptídicos comprenden en general entre 1 y 50 aminoácidos, alternativamente entre 3 y 12 aminoácidos, alternativamente 2 aminoácidos. Un ejemplo de un péptido ligador para el enlace de las cadenas pesadas y ligeras en un scFv comprende la secuencia de 5 aminoácidos Gly-Gly-Gly-Gly-Ser (SEQ ID No: 37). Otros ejemplos comprenden una o más repeticiones en tándem de esta secuencia (por ejemplo, un polipéptido que comprende dos a cuatro repeticiones de Gly-Gly-Gly-Gly-Ser (SEQ ID No: 37)) para crear ligadores. Los anticuerpos o fragmentos que se enlazan a IL-lß de la presente invención también abarcan anticuerpos de cadena pesada (HCAb) . Las excepciones a la estructura H2L2 de los anticuerpos convencionales ocurren en algunos isotipos de las inmunoglobulinas encontradas en camélidos (camellos, dromedarios y llamas; Hamers-Casterman et al, 1993 Nature 363: 446; Nguyen et al, 1998 J. Mol. Biol. 275: 413), tiburones wobbegong (Nuttall et al, Mol Im unol. 38:313-26, 2001), tiburones nodriza (Greenberg et al, Nature 374:168-73, 1995; Roux et al, 1998 Proc. Nat. Acad. Sci. USA 95: 11804), y el pez rata moteado (Nguyen, et al, "Heavy-chain antibodies in Camelidae; a case of evolutionary innovation, " 2002 Immunogenetics 54(1): 39-47). Estos anticuerpos pueden formar aparentemente regiones de enlace al antígeno utilizando únicamente la región variable de cadena pesada, ya que estos anticuerpos funcionales son dímeros de cadenas pesadas únicamente (denominados como "anticuerpos de cadena pesada" o "HCAbs"). En consecuencia, algunas modalidades de los presentes anticuerpos o fragmentos que se enlazan a IL-lß pueden tener anticuerpos de cadena pesada (HCAb) que se enlazan específicamente a IL-lß. Por ejemplo, un anticuerpos de cadena pesada que son una clase de IgG y desprovistos de cadenas ligeras son producidos por animales del género Camelidae que incluyen camellos, dromedarios y llamas (Haraers-Casterman et al, Nature 363:446-448 (1993)). Los HCAbs tienen un peso molecular de aproximadamente 95 kDa en vez de aproximadamente el peso molecular de 160 kDa de los anticuerpos IgG convencionales. Sus dominios de enlace consisten únicamente de los dominios variables de cadena pesada, a menudo denominados como VHH para distinguirlos de los VH convencionales. Muyldermans et al, J. Mol. Recognit. 12:131-140 (1999). El dominio variable de los anticuerpos de cadena pesada es algunas veces denominado como un nanocuerpo (Cortez-Retamozo et al, Cáncer Research 64:2853- 57, 2004). Una biblioteca de nanocuerpo puede ser generada a partir de un dromedario inmunizado como se describe en Conrath et al, (Antimicrob Agents Chemother 45: 2807-12, 2001) o utilizando métodos recombinantes. Ya que el primer dominio constante (CH?) está ausente (desempalmado durante el procesamiento del mARN debido a la pérdida de una señal de consenso de empalme) el dominio variable (VHH) es inmediatamente seguido por la región de bisagra, los dominios CH2 y CH3 (Nguyen et al, Mol. Immunol. 36:515-524 (1999); Woolven et al, Immunogenetics 50:98-101 (1999)) . VHH de camélido al parecer se recombina con las regiones constantes de IgG2 e IgG3 que contienen los dominios de bisagra, CH2, y CH3 y carecen de un dominio CH1 (Haraers-Casterman et al, supra) . Por ejemplo, IgGl de llama es un isotipo de anticuerpo convencional (H2L2) en el cual VH se combina con una región constante que contiene los dominios de bisagra, CH1, CH2 y CH3, mientras que la IgG2 e IgG3 de llama son isotipos únicamente de cadena pesada que carecen de los dominios de CH1 y no contienen cadenas ligeras. Aunque los HCAbs están desprovistos de cadenas ligeras, éstos tienen un repertorio de enlace al antígeno. El mecanismo de generación ger ética de los HCAbs es revisado en Nguyen et al. Adv. Immunol 79:261-296 (2001) y Nguyen et al, Immunogenetics 54:39-47 (2002). Los tiburones, incluyendo el tiburón nodriza, muestran dominios V monoméricos simples que contienen el receptor de artígeno similar. Irving et al, J. Immunol. Methods 248:31-45 (2001); Roux et al, Proc. Natl. Acad. Sci. USA 95:11804 (1998). Los VHHS comprenden fragmentos de enlace al antígeno, intactos, pequeños (por ejemplo, fragmentos que son de aproximadamente 15 kDa, de 118-136 residuos) . Se ha encontrado que los dominios VHH de camélidos se enlazan al antígeno con alta afinidad (Desmyter et al, J. Biol. Chem. 276:26285-90, 2001), con las afinidades de VHH típicamente en el intervalo nanomolar y comparables con aquellas de los fragmentos Fab y scFv. Los VHHS son altamente solubles y más estables que los derivados correspondientes de los fragmentos scFv y Fab. Los fragmentos de VH han sido relativamente difíciles de producir en forma soluble, pero pueden ser obtenidos mejoramientos en la solubilidad y en enlace específico cuando los residuos estructurales son alterados para ser más similares a VHH- (Ver por ejemplo, Reichman et al, J Immunol Methods 1999, 231:25-38.). Los VHHS llevan sustituciones de aminoácidos que los hacen más hidrofílicos y previenen la interacción prolongada con BiP (proteína que se enlaza a la cadena pesada de la inmunoglobulina) , que normalmente se enlaza a la cadena H en el retículo endoplásmico (ER) durante el plegamiento y el ensamblaje, hasta que es desplazado por la cadena L. Debido a la hidrofilicidad incrementada de los VHHS, la secreción a partir del ER es mejorada. Los VHHS funcionales pueden ser obtenidos mediante escisión proteolítica de HCAb de un camélido inmunizado, mediante clonación directa de los genes de VHH a partir de las células B de un camélido inmunizado dando como resultado VHHS recombinantes, o de bibliotecas intactas o sintéticas. Los VHHS con especificidad de antígeno deseada pueden ser también obtenidos a través de la metodología de visualización de fago. El uso de los VHHS en la visualización de fago es mucho más simple y más eficiente en comparación a los Fabs o scFvs, ya que únicamente necesita ser clonado y expresado un dominio para obtener un fragmento funcional de enlace al antígeno. Muyldermans, Biotechnol. 74:277-302 (2001); Ghahroudi et al, FEBS Lett. 414:521-526 (1997); y van der Linden et al, J. Biotechnol. 80:261-270 (2000). Los métodos para generar anticuerpos que tienen cadenas pesadas de camélido son también descritos en las Publicaciones de Patentes de los Estados Unidos Nos. 20050136049 y 20050037421. Los métodos de visualización de ribosoma pueden ser utilizados para identificar y aislar las moléculas de scFv y/o VHH que tienen la actividad de enlace y afinidad deseadas.

Irving et al, J. Immunol. Methods 248:31-45 (2001). La visualización del ribosoma tiene el potencial para generar y visualizar bibliotecas grandes (1014). Otras modalidades proporcionan moléculas similares a VHH generadas a través del proceso de camelización, mediante la modificación de los VHHS no de Camelidae, tales como los VHHS humanos para mejorar su solubilidad y prevenir el enlace no específico. Esto es logrado por el reemplazo de los residuos sobre el lado VLs de VHs con los residuos similares a VHH, con lo cual se imitan los fragmentos de VHH más solubles. Los fragmentos de VH camelisados, particularmente aquellos basados en la estructura humana, se espera que muestren una respuesta inmune reducida en gran medida, cuando se administren in vivo a un paciente, y en consecuencia, se espera que tengan ventajas significativas para aplicaciones terapéuticas. Davies et al, FEBS Lett. 339:285-290 (1994); Davies et al, Protein Eng. 9:531-537 (1996); Tanha et al, J. Biol. Chem. 276:24774-24780 (2001); y Riechmann et al, Immunol. Methods 231:25-38 (1999). Una amplia variedad de sistemas de expresión son disponibles para la producción de los fragmentos de IL-lß incluyendo los fragmentos Fab, scFv, y VHHs . Por ejemplo, los sistemas de expresión de origen procariótico y eucariótico pueden ser utilizados para la producción en gran escala de los fragmentos de anticuerpo y proteínas de fusión al anticuerpo.

Particularmente ventajoso son los sistemas de expresión que permiten la secreción de grandes cantidades de los fragmentos de anticuerpo hacia el medio de cultivo. La producción de Fab-scFv específico ("bicuerpo") y Fab-(scFv) (2) triespecífico ( "tricuerpo" ) son descritos en Schoonjans et al. (J Immunol 165:7050-57, 2000) y Willems et al. (J Chromatogr B Analyt Technol Biomed Life Sd. 786:161 -76, 2003) . Para los bicuerpos o tricuerpos, una molécula de scFv es fusionada a una o ambas de las cadenas de VL-CL (L) y VH-CHi (Fd), por ejemplo, para producir un tricuerpo son fusionados dos scFvs al extremo C del Fab mientras que en un bicuerpo un scFv es fusionado al extremo C de Fab. Un "minicuerpo" que consiste de scFv fusionado a CH3 vía un ligador peptídico (sin bisagra) o vía una bisagra de IgG ha sido descrito en Olafsen, et al, Protein Eng Des Sel. 2004 Abril; 17 (4) :315-23. Los intracuerpos son anticuerpos de cadena simple que demuestran la expresión intracelular y pueden manipular la función de la proteína intracelular (Biocca, et al, EMBO J. 9:101-108, 1990; Colby et al, Proc Natl Acad Sci USA. 101:17616-21, 2004). Los intracuerpos, los cuales comprenden secuencias de señal celular que conservan la construcción del anticuerpo en las regiones intracelulares, pueden ser producidos como se describe en Mhashilkar et al [EMBO J 14:1542-51, 1995) y Wheeler et al. (FASEBJ. 17:1733-5. 2003).

Los transcuerpos son anticuerpos permeables a las células en los cuales los dominios de transducción de proteína (PTD) están fusionados con los anticuerpos del fragmento variable de cadena simple (scFv) Heng et al, (Med Hypotheses. 64:1105-8, 2005) . Los anticuerpos o fragmentos que se enlazan a IL-lß de la presente invención también abarcan los anticuerpos que son SMIPs o las proteínas de fusión de inmunoglobulina de dominio de enlace específicas para la proteína objetivo. Estas construcciones son polipéptidos de cadena simple que comprenden dominios de enlace al antígeno fusionados a los dominios de inmunoglobulina necesarios para llevar a cabo funciones efectoras de anticuerpo. Ver por ejemplo, WO03/041600, Publicación de Patente de los Estados Unidos No. 20030133939 y Publicación de Patente de los Estados Unidos No. 20030118592. Los anticuerpos o fragmentos que se enlazan a IL-lß de la presente invención también abarcan la inmunoadhesinas. Una o más CDRs pueden ser incorporadas dentro de una molécula ya sea covalente o no covalentemente para hacerla una inmunoadhesina . Una inmunoadhesina puede incorporar la CDR(s) como parte de una cadena polipeptídica más grande, puede enlazar covalentemente las CDRs a otra cadena polipeptídica o puede incorporar la CDRs no covalentemente. Las CDRs descritas aquí permiten que las inmunoadhesinas se enlacen específicamente a la IL-lß. Los anticuerpos o fragmentos que se enlazan a IL-lß de la presente invención también abarcan miméticos de anticuerpo que abarcan una o más porciones de enlace a IL-lß construidas sobre un andamiaje orgánico o molecular (tal como un andamiaje de proteína o de carbohidratos) . Las proteínas que tienen estructuras tridimensionales relativamente definidas, comúnmente denominadas como andamiajes de proteína, pueden ser utilizadas como reactivos para el diseño de miméticos de anticuerpo. Estos andamiajes contienen típicamente una o más regiones que son adecuadas para la variación de secuencia específica o aleatoria, y tal aleatorización de secuencia es a menudo llevada a cabo para producir bibliotecas de proteínas a partir de las cuales pueden ser seleccionados productos deseados. Por ejemplo, un mimético de anticuerpo puede comprender un polipéptido que se enlaza a no inmunoglobulina quimérica que tiene un dominio similar de inmunoglobulina que tiene el andamiaje dos o más bucles expuestos al solvente, que contienen una CDR diferente de un anticuerpo progenitor insertado dentro de cada uno de los bucles y que muestra actividad de enlace selectiva hacia un ligando enlazado por el anticuerpo progenitor. Los andamiajes proteicos no inmunoglobulina han sido propuestos para obtener proteínas con nuevas propiedades de enlace (Tramontano et al, J. Mol. Recognit. 7:9, 1994; McConnell y Hoess, J. Mol. Biol. 250:460, 1995). Otras proteínas han sido probadas como estructuras y han sido utilizadas para mostrar residuos aleatorizados sobre superficies alfa-helicoidales (Nord et al, Nat. Biotechnol. 15:772, 1997; Nord et al, Protein Eng. 8:601, 1995), los bucles entre las hélices alfa en los cúmulos de hélices alfa (Ku y Schuitz, Proc. Natl. Acad. Sci. USA 92:6552, 1995), y los bucles constreñidos por puentes disulfuro, tales como aquellos de los inhibidores de proteasa pequeño (Markland et al, Biochemistry 35:8045, 1996; Markland et al, Biochemistry 35:8058, 1996; Rottgen y Collins, Gene 164:243, 1995; Wang et al, J. Biol. Chem. 270:12250, 1995) . Los métodos para emplear andamiajes para miméticos de anticuerpos son descritos en la Patentes de los Estados Unidos No. 5,770,380 y Publicaciones de Patentes de los Estados Unidos No. 2004/0171116, 2004/0266993, y 2005/0038229. De este modo, una variedad de anticuerpos y fragmentos que se enlazan a IL-lß que comprenden una, dos y/o tres CDRs de una región variable de cadena pesada o una región variable de cadena ligera de un anticuerpo (preferentemente una o más CDRs de las SEQ ID Nos: 1-26) pueden ser generados. Los anticuerpos o fragmentos preferidos de la presente invención se enlazan a IL-lß con (i) una IC5o de aproximadamente 0.5 nM o menor (por ejemplo, aproximadamente 0.4 o menor, aproximadamente 0.3 o menor, o incluso aproximadamente 0.2 o menor), como es determinado por el ensayo inmunosorbente ligado a enzima (ELISA), (ii) al menos aproximadamente 100 veces (por ejemplo, al menos aproximadamente 150 veces, al menos aproximadamente 200 veces, o incluso al menos aproximadamente 250 veces) mayor afinidad con relación a su enlace de IL-la (por ejemplo, tiene una selectividad para IL-lß sobre IL-la de al menos aproximadamente 100 veces (por ejemplo, al menos aproximadamente 150 veces, al menos aproximadamente 200 veces, o incluso al menos aproximadamente 250 veces)), y/o (iii) una constante de disociación de enlace en el equilibrio (KD) para IL-lß de aproximadamente 20 pM o menor (por ejemplo, aproximadamente 15 pM o menor, aproximadamente 10 pM o menor, o incluso aproximadamente 5 pM o menor) . También son preferidos los anticuerpos o fragmentos de la invención que pueden inhibir la expresión inducida por IL-lß de IL-6 en suero en un animal por al menos 50% (por ejemplo, al menos 60%, al menos 70%, o incluso al menos 80%) en comparación al nivel de IL-6 en suero en un animal estimulado con IL-lß que no ha sido administrado con un anticuerpo o fragmento de la invención. En consecuencia, la invención proporciona, en un aspecto relacionado, un anticuerpo de enlace a IL-lß o fragmento de anticuerpo de enlace a IL-lß que tiene al menos una de las características anteriormente mencionadas. Aunque la invención ha sido descrita en la presente con respecto a los anticuerpos o fragmentos que se enlazan a IL-lß de la misma (por ejemplo, que comprende una cadena ligera y pesada) , la invención también proporciona los polipéptidos diferentes de los anticuerpos o fragmentos de anticuerpos que se enlazan a IL-lß, tales como los polipéptidos de cadena simple (incluyendo polipéptidos de fusión, polipéptidos quiméricos, conjugados y similares) . De este modo, la invención proporciona, en este aspecto, un polipéptido que comprende una secuencia de aminoácidos de cualquiera de las SEQ ID Nos: 1-26, o un fragmento o variante funcionalmente equivalente de los mismos. La invención también proporciona un polipéptido que comprende una secuencia de aminoácidos de cualquiera de las SEQ ID Nos: 27-35 ó 42-57, o un fragmento o variante funcionalmente equivalente de los mismos . Los anticuerpos y fragmentos de anticuerpos descritos aquí pueden ser preparados mediante cualquier método adecuado. Los métodos adecuados para preparar tales anticuerpos y fragmentos de anticuerpos son conocidos en la técnica. Otros métodos para preparar los anticuerpos y fragmentos de anticuerpos son como se describen en la presente, como parte de la invención. El anticuerpo, el fragmento de anticuerpo o el polipéptido de la invención, como se describe en la presente, puede ser aislado o purificado a cualquier grado. Como se utiliza en la presente, un compuesto aislado es un compuesto que ha sido removido de su ambiente natural. Un compuesto purificado es un compuesto que ha sido incrementado en pureza, tal que el compuesto existe en una forma que es más pura de la que existe (i) en su ambiente natural, o (ii) cuando se sintetiza inicialmente y/o es amplificado bajo condiciones de laboratorio, en donde la "pureza" es un término relativo y no necesariamente significa una "pureza absoluta". Cualquiera de los anticuerpos, fragmentos de anticuerpos, o polipéptidos anteriormente mencionados de la invención pueden ser humanizados o manipulados por ingeniería humana, como se describe en la presente.

Métodos para Preparar Anticuerpos o Fragmentos para IL-lß La invención proporciona un método para preparar un polipéptido que se enlaza a IL-lß, madurado por afinidad, tal como un anticuerpo o fragmento de anticuerpo, incluyendo una región de anticuerpo (por ejemplo, una región variable de cadena ligera o pesada o cualquier parte de la misma, tal como una CDR) , cuyo método comprende (a) proporcionar un primer ácido nucleico que comprende una secuencia de ácido nucleico que codifica para un polipéptido que se enlaza a IL-lß, que comprende la secuencia de aminoácidos de cualquiera de las SEQ ID No: 1-26 y un segundo ácido nucleico que comprende una secuencia de ácido nucleico que difiere de la primera secuencia de ácido nucleico por al menos un nucleótido, (b) la realización del entremezclado de ácido nucleico para proporcionar dos o más ácidos nucleicos mutados, y (c) seleccionar un ácido nucleico mutado que codifica para un polipéptido que (i) se enlaza a IL-lß con una mayor afinidad que el polipéptido codificado por el primer ácido nucleico, (ii) tiene una selectividad para IL-lß sobre IL-la que es mayor que aquella del polipéptido codificado por el primer ácido nucleico, (iii) tiene una constante de disociación de enlace en el equilibrio (KD) para IL-lß que es menor que aquella del polipéptido codificado por el primer ácido nucleico, y (iv) inhibe la expresión inducida por IL-lß de IL-6 en suero en un animal, a un grado mayor que el polipéptido codificado por el primer ácido nucleico, y (d) que expresa el ácido nucleico mutado seleccionado para proporcionar un polipéptido de IL-lß madurado por afinidad. Preferentemente, el polipéptido es un anticuerpo o fragmento de anticuerpo, tal como cualquier anticuerpo o fragmento de anticuerpo descrito en la presente como parte de la invención. El método para preparar un polipéptido de IL-lß madurado por afinidad, comprende además opcionalmente la repetición de los pasos (b) y (c) una o más veces, en donde el entremezclado del ácido nucleico del paso (b) es realizado utilizando (i) al menos un ácido nucleico mutado seleccionado del paso (c) y (ii) al menos un ácido nucleico que tiene una secuencia de ácido nucleico que difiere del ácido nucleico mutado, seleccionado por al menos un nucleótido. Preferentemente, los pasos (b) y (c) son repetidos hasta que se selecciona un ácido nucleico optimizado. Un ácido nucleico optimizado es seleccionado cuando ya no es posible seleccionar un ácido nucleico que codifica para un polipéptido que tenga las características de enlace con respecto a IL-lß (por ejemplo, las características (i)-(iv) del paso (c) ) que son superiores a aquellas de un polipéptido codificado por un ácido nucleico previamente seleccionado. De manera deseable, los pasos (b) y (c) son repetidos hasta que es seleccionado un ácido nucleico que codifica para un polipéptido que tiene al menos una de las siguientes propiedades: (i) se enlaza a IL-lß con una IC50 de aproximadamente 0.5 mM o menor (por ejemplo, aproximadamente 0.4 o menor, aproximadamente 0.3 o menor, o incluso aproximadamente 0.2 o menor), como es determinado por el ensayo inmunosorbente ligado a enzima (ELISA), (ii) se enlaza a IL-lß con al menos aproximadamente 100 veces (por ejemplo, al menos aproximadamente 150 veces, al menos aproximadamente 200 veces, o incluso al menos aproximadamente 250 veces) mayor afinidad con relación a su enlace de IL-la (por ejemplo, tiene una selectividad para IL-lß sobre IL-la de al menos aproximadamente 100 veces (por ejemplo, al menos aproximadamente 150 veces, al menos aproximadamente 200 veces, o incluso al menos aproximadamente 250 veces)), (iii) se enlaza a IL-lß con una constante de disociación de enlace del equilibrio (KD) para IL-lß de aproximadamente 20 pM o menor (por ejemplo, aproximadamente 15 pM o menor, aproximadamente 10 pM o menor, 5 pM o menor, 3 pM o menor, 2 pM o menor, 1 pM o menor, 0.7 pM o menor, 0.5 pM o menor, 0.3 pM o menor, o 0.2 pM o menor), o (iv) inhibe la expresión inducida por IL-lß de IL-6 en suero animal por al menos 50% (por ejemplo, al menos 60%, al menos 70%, o incluso al menos 80%) en comparación al nivel de la IL-6 en suero en un animal estimulado con IL-lß que no ha sido administrado con un anticuerpo o fragmento de la invención. La selección para un ácido nucleico mutado que codifica para un polipéptido que tiene propiedades deseadas, puede ser realizada mediante cualquier método adecuado. Los procedimientos para expresar los polipéptidos codificados y el evaluar los polipéptidos para la afinidad enlace, la selectividad de enlace, las constantes de enlace en el equilibrio, y la inhibición de la expresión de IL-6 inducida por IL-lß se describen en la presente (ver ejemplos) . Otros métodos adecuados son conocidos en la técnica. Cuando el polipéptido codificado por el ácido nucleico mutado proporcionado por el paso (b) no es un anticuerpo o fragmento de anticuerpo completo (por ejemplo, Fab) puede ser necesario proporcionar un anticuerpo que comprende el polipéptido, con el fin de determinar si el polipéptido cumple o no con los criterios de selección. De este modo, el método para preparar un polipéptido de IL-lß madurado por afinidad, pueden comprender además un paso de proporcionar un anticuerpo que comprende el polipéptido codificado por el ácido nucleico mutado, en donde el paso de selección para el ácido nucleico mutado que codifica para un polipéptido que tiene las propiedades deseadas, es realizado mediante la evaluación del anticuerpo . El entremezclado de ácido nucleico, como se utiliza en la presente, significa la fragmentación de dos o más secuencias de ácido nucleico para proporcionar un combinado de fragmentos aleatorios de ácido nucleico y el reensamblaje de los fragmentos para crear dos o más ácidos nucleicos mutados. A este respecto, un ácido nucleico mutado es meramente un ácido nucleico que tiene una secuencia de ácido nucleico que ha sido cambiada. El entremezclado de ácido nucleico puede ser realizado mediante cualquier método adecuado. Muchos métodos adecuados son conocidos en la técnica, tales como aquellos descritos en las Patentes de los Estados Unidos Nos. 6,489,145 6,773, 900; 6,764,835 6,740,506 6,713,282; 6,713,281 6,713,279; 6,709,841 6, 696,275 6,677,115; 6,673,552 6,656, 677; 6,605,449 6,566,050 6,562,594: 6,555,315 6,537,776; 6,528,249 6,479,258 6,455,254; 6,440,668 6,368,798; 6,361,974 6,358,709 6,352,842; 6,344,328; 6,335,179 6,280,926; 6,238,884; 6,174,673; 6,171,820; 6,168, 919 6,057,103; 6,054,267; 6,030,779 6,001,574; 5,965,408 5,958, 672; 5, 939,250; 5,763,239 6,395,547; 6,376,246 6,372,497; 6,368,861; 6,365,408 6,365,377; 6,358,740 6,358,742; 6,355,484 6,344,356 6,337,186; 6,335,160 6,323,030; 6,319,714 6,319,713 6,303,344; 6,297,053 6,291,242; 6,287,861 6,277,638 6,180,406; 6,165,793 6,132,970; 6,117,679 5,834,252 5,830,721; 5,811,238; 5,605,793 Ácidos nucleicos Los anticuerpos, fragmentos de anticuerpo y polipéptido de la invención pueden ser codificados por un ácido nucleico simple (por ejemplo, un ácido nucleico simple que comprende las secuencias nucleotídicas que codifican para los polipéptidos de cadena ligera y pesada del anticuerpo) , o por dos o más ácidos nucleicos separados, cada uno de los cuales codifican para una parte diferente del anticuerpo o del fragmento del anticuerpo. A este respecto, la invención proporciona uno o más ácidos nucleicos que codifican para cualquiera de los anticuerpos anteriores, fragmentos de anticuerpos o polipéptidos (por ejemplo, cualquiera de las regiones variables de cadena ligera o de cadena pesada anteriormente mencionadas). De acuerdo a un aspecto de la invención, la invención proporciona un ácido nucleico que codifica una región variable de cadena pesada de un anticuerpo o una porción del mismo. Las secuencias de ácido nucleico ejemplares son proporcionadas en las SEQ ID Nos: 39 y 40, las cuales respectivamente codifican para la región variable de cadena pesada de la SEQ ID No: 15 y la región variable de cadena ligera de la SEQ ID No: 11. A este respecto, la invención proporciona un ácido nucleico que codifica para un polipéptido (por ejemplo, una región variable de cadena pesada de un anticuerpo) que comprende la secuencia de aminoácidos de la SEQ ID No: 2, alternativamente la secuencia de la SEQ ID No: 28, y deseablemente codifica para un polipéptido que comprende la secuencias de aminoácidos de la SEQ ID No: 21 (por ejemplo, un polipéptido que comprende las secuencias de aminoácidos de cualquiera de las SEQ ID Nos: 4-8). Las secuencias de ácido nucleico más preferidas son las que codifican para un polipéptido (por ejemplo, una región variable de cadena pesada) que comprende la secuencia de aminoácidos de la SEQ ID No: 12 o la SEQ ID No: 13 (por ejemplo, un polipéptido que comprende la secuencia de aminoácidos de cualquiera de las SEQ ID Nos: 14-15), o que comprende la secuencia de aminoácidos de la SEQ ID No: 23 o la SEQ ID No: 24 (por ejemplo, la SEQ ID No: 25 o la SEQ ID No: 26) . Alternativamente, o en además, el ácido nucleico de la invención puede comprender una secuencia de ácido nucleico que codifica para una región variable de cadena ligera de un anticuerpo o una porción del mismo. A este respecto, la invención proporciona un ácido nucleico que codifica para un polipéptido (por ejemplo, una región variable de cadena ligera) que comprende la secuencia de aminoácidos de la SEQ ID No: 1. Por ejemplo, la secuencia de ácido nucleico puede codificar para un polipéptido que comprende la secuencia de aminoácidos de la SEQ ID No: 9. Más preferentemente, el ácido nucleico codifica para un polipéptido (por ejemplo, una región variable de cadena ligera) que comprende la secuencia de aminoácidos de las SEQ ID Nos: 10 u 11. También abarcados por la invención están los ácidos nucleicos que codifican para cualquiera de la secuencias de aminoácidos anteriores de las cadenas ligeras o pesadas que comprenden una o más sustituciones conservadoras (por ejemplo, 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, ó 15 sustituciones conservadoras), como se discute con respecto al anticuerpo y al fragmento de anticuerpo de la invención, donde el anticuerpo o fragmento que comprende la sustitución tiene la misma o sustancialmente la misma afinidad y especificidad de enlace al epitopo que uno o más de los anticuerpos ejemplares, fragmentos y secuencias descritas aquí. Las secuencias de ácido nucleico pueden ser determinadas a partir de las secuencias de aminoácidos de los anticuerpos, fragmentos de anticuerpo y regiones variables de cadena ligera y pesada descritas en la presente, mediante cualquier método adecuado, tales como mediante la conversión de tales secuencias de aminoácidos a las secuencias de ácido nucleico correspondientes utilizando el código genético. Los ácidos nucleicos que codifican para esas secuencias de aminoácidos (tales como las secuencias de aminoácidos descritas en la presente) pueden ser preparadas (por ejemplo, las secuencias de ácido nucleico aisladas o sintetizadas) utilizando métodos conocidos en la materia, tales como aquellos descritos por ejemplo, en Sambrook et al., Molecular Cloning, a Laboratoiy Manual, 3a edición, Cold Spring Harbor Press, Cold Spring Harbor, NY, 2001; Ausubel et al., Current Protocols in Molecular Biology, Greene Publishing Associates and John Wiley & Sons, New York, NY, 1994; y Herdewijn, ed., Oligonucleotide Synthesis: Methods and Applications (Methods in Molecular Biology), Humana Press, Totowa, NJ, 2004. Los ácidos nucleicos descritos en la presente pueden ser aislados o purificados a cualquier grado. Como se utiliza en la presente, un compuesto aislado es un compuesto que ha sido removido de su ambiente natural. Un compuesto purificado es un compuesto que ha sido incrementado en pureza, tal que el compuesto existe en una forma que es más pura que la que ésta existe (i) en su ambiente natural o (ii) cuando es inicialmente sintetizado y/o amplificado bajo condiciones de laboratorio, en donde la "pureza" es un término relativo y no necesariamente significa "pureza absoluta". Los ácidos nucleicos pueden ser purificados utilizando cualquiera de una variedad de técnicas que incluyen, pero no están limitadas a, electroforesis preparativa en gel o enfoque isoeléctrico, cromatografía de afinidad, de inmunoafinidad o de intercambio iónico, cromatografía de tamices moleculares, cromatoenfoque o cromatografía líquida de alta presión.

Vectores Los ácidos nucleicos descritos en la presente pueden ser insertados dentro de los vectores, por ejemplo, los vectores de expresión de ácido nucleico y/o vectores de dirección al objetivo. Tales vectores pueden ser utilizados en diversas formas, por ejemplo, para la expresión de un anticuerpo o fragmento de anticuerpo que se enlaza a IL-lß en una célula o animal transgénico. En consecuencia, la invención proporciona un vector que comprende uno o más de los ácidos nucleicos de la invención. Un "vector" es cualquier molécula o composición que tiene la habilidad para llevar una secuencia de ácido nucleico dentro de una célula hospedera adecuada, donde puede tener lugar la síntesis del polipéptido codificado. Típica y preferentemente, un vector es un ácido nucleico que ha sido manipulado por ingeniería, utilizando técnicas de ADN recombinante que son conocidas en la materia, para incorporar una secuencia de ácido nucleico deseable (por ejemplo, un ácido nucleico de la invención) . De manera deseable, el vector está comprendido de ADN. Los ejemplos de vectores de transferencia de genes basados en ADN, adecuados, incluyen plásmidos y vectores virales. Los vectores virales adecuados incluyen, por ejemplo, vectores basados en parvovirus (por ejemplo, vectores basados en virus adeno-asociados (AAV)), vectores retrovirales, vectores basados en el virus del herpes simple (HSV) , vectores quiméricos adenovirales de AAV, vectores basados en virus del HIV, y vectores basados en adenovirus. Cualquiera de estos vectores pueden ser preparados utilizando técnicas de ADN recombinantes descritas en, por ejemplo, Sambrook et al., supra, y Ausubel et al., supra. No obstante, los vectores que no están basados en ácidos nucleicos tales como liposomas, son también conocidos en la técnica y pueden ser utilizados en conexión con la invención. El vector de la invención puede estar basado en un tipo simple de ácido nucleico (por ejemplo, un plásmido) o molécula no de ácido nucleico (por ejemplo, un lípido o un polímero) . Alternativamente, el vector puede ser una combinación de un ácido nucleico y un ácido no nucleico (por ejemplo, un vector "quimérico"). Por ejemplo, un plásmido que alberga el ácido nucleico puede ser formulado con un lípido o un polímero como un vehículo de distribución. Tal vector es denominado en la presente como un "complejo plásmido y un lípido" y un complejo "plásmido-polímero", respectivamente. El vector de transferencia del gen de la invención puede ser integrado dentro del genoma de la célula hospedera o puede estar presente en la célula hospedera en la forma de un episoma. Los ácidos nucleicos de la invención pueden ser insertados dentro de vectores de expresión de inmunoglobulina, por ejemplo, los vectores descritos en McLean et al., Mol. Immunol., 37: 837-45 (2000); Walls et al., Ácidos nucleicos Res., 21: 2921-9 (1993); y Norderhaug et al., J. Immunol . Metk, 204: 77-87 (1997) . Los vectores son típicamente seleccionados para ser funcionales en la célula hospedera en la cual será utilizado el vector (el vector es compatible con la maquinaria de la célula hospedera tal que la amplificación del gen y/o la expresión del gen pueden ocurrir) . Una molécula de ácido nucleico que codifica para un anticuerpo o fragmento que se enlaza a IL-lß puede ser amplificado/expresado en células hospederas procarióticas, de levadura, de insecto (sistemas baculovirales) y/o eucarióticas. La selección de la célula hospedera dependerá en parte de si el anticuerpo o fragmento que se enlaza a IL-lß va a ser post-traduccionalmente modificado (por ejemplo, glucosilado y/o fosforilado) . Si es así, las células hospederas de levadura, de insecto o de mamífero son preferibles. Información adicional respecto a los vectores de expresión puede ser encontrada en Meth. Enz. v. 185 (1990; Goeddel, ed.), Academic Press Inc., San Diego, California . Los vectores de expresión contienen típicamente uno o más de los siguientes componentes: un promotor, una o más secuencias aumentadoras, un origen de replicación, una secuencia de terminación de la transcripción, una secuencia de intrón completa que contiene un sitio de empalme donador y aceptor, una secuencia guía para la secreción, un sitio de enlace al ribosoma, una secuencia de poliadenilación, una región poliligadora para insertar el ácido nucleico que codifica para el polipéptido que va a ser expresado, y un elemento marcador seleccionable. Los componentes vectores pueden ser homólogos (provenientes de la misma especie y/o cepa que es la célula hospedera) , heterólogos (provenientes de una especie diferente de la especie o cepa de célula hospedera) , híbridos (una combinación de secuencias diferentes provenientes de más de una fuente) , sintéticos o secuencias nativas que normalmente funcionan para regular la expresión de la inmunoglobulina. Las fuentes de componentes vectores pueden ser cualquier organismo procariótico o eucariótico, cualquier organismo vertebrado o invertebrado, o cualquier planta, con la condición de que los componentes sean funcionales en y puedan ser activados por la maquinaria de la célula hospedera. Un origen de replicación es seleccionado con base en el tipo de célula hospedera que se utiliza para la expresión. A manera de ejemplo, el origen de replicación proveniente del plásmido pBR322 (Producto No. 303-3s, New England Biolabs, Beverly, Mass.) es útil para la mayoría de las bacterias Gramnegativas, mientras que diversos orígenes provenientes de SV40, polioma, adenovirus, virus de la estomatitis vesicular (VSV) o papilomavirus (tales como HPV o BPV) son útiles para clonar vectores en las células de mamífero. En general, el origen del componente de replicación no es necesario para vectores de expresión de mamífero (por ejemplo, el origen SV40 es a menudo utilizado debido a que éste contiene el promotor temprano) . Una secuencia de terminación de la transcripción está típicamente localizada 3' del extremo de un polipéptido que codifica para las regiones y sirve para terminar la transcripción. La secuencia de terminación de la transcripción en las células procarióticas a menudo comprenden un fragmento rico en G-C seguido por una secuencia poli T. Las secuencias de terminación de la transcripción pueden ser clonadas a partir de una biblioteca, adquiridas comercialmente como parte de un vector, o sintetizadas utilizando métodos para la síntesis de ácido nucleico tales como aquellas descritas anteriormente.

Un elemento de gen marcador seleccionable codifica para una proteína necesaria para la supervivencia y desarrollo de una célula hospedera desarrollada en un medio de cultivo selectivo. Los genes marcadores de selección típicos codifican para proteínas que, (a) confieren resistencia a antibióticos u otras toxinas, por ejemplo, ampicilina, tetraciclina, o kanamicina para células hospederas procarióticas, (b) complementan deficiencias auxotróficas de la célula; o (c) suministran nutrientes críticos no disponibles a partir de los medios complejos. Los marcadores seleccionables preferidos son el gen de resistencia a la kanamicina, resistencia a la ampicilina, y el gen de resistencia a la tetraciclina. Un gen de resistencia a la neomicina puede ser también utilizado para la selección en células hospederas procarióticas y eucarióticas. Otros genes de selección pueden ser utilizados para amplificar el gen que será expresado. La amplificación es un proceso donde los genes que están en mayor demanda para la producción de una proteína crítica para el crecimiento, son reiterados en tándem dentro de los cromosomas de generaciones sucesivas de células recombinantes. Los ejemplos de marcadores seleccionables para células de mamífero incluyen la dihidrofolato-reductasa (DHFR) y la timidina-cinasa . Los transformantes de células de mamífero son colocados bajo presión selectiva que únicamente los transformantes están únicamente adaptados para sobrevivir en virtud del marcador presente en el vector. La presión de selección es impuesta por el cultivo de las células transformadas bajo condiciones en las cuales la concentración del agente de selección en el medio es sucesivamente cambiada, con lo cual se conduce a la amplificación del gen de selección y el ADN que codifica un anticuerpo o fragmento para IL-lß. Como resultado, cantidades incrementadas de un anticuerpo son sintetizadas a partir del ADN amplificado. Un sitio de enlace al ribosoma está en general presente para iniciar la traducción del mARN. Por ejemplo, tal sitio está caracterizado por una secuencia de Shine-Dalgarno (procariotes) o una secuencia Kozak (eucariotes) . El elemento está típicamente localizado 3' hacia el promotor 5' hacia la secuencia de codificación del polipéptido que va a ser expresado. La secuencia Shine-Dalgarno es variada pero es típicamente una polipurina (que tiene un alto contenido de A-G) . Han sido identificadas muchas secuencias Shine-Dalgarno, cada una de las cuales puede ser fácilmente sintetizada utilizando métodos descritos anteriormente y utilizados en un vector procariótico. Una secuencia guía o de señal, puede ser utilizada para dirigir la secreción de un polipéptido. Una secuencia de señal puede ser colocada dentro o directamente en el extremo 5' de una región que codifica para el polipéptido. Muchas secuencias de señal han sido identificadas y pueden ser seleccionadas con base en la célula hospedera utilizada para la expresión. Una secuencia de señal puede ser homologa (de origen natural) o heteróloga para una secuencia de ácido nucleico que codifica para la proteína que va a ser expresada (tal como un anticuerpo o fragmento de enlace al antígeno) . Una secuencia de señal heteróloga seleccionada debe ser una que sea reconocida y procesada (escindida por una peptidasa de señal) por la célula hospedera. Para células hospederas procarióticas que no reconocen y procesan una secuencia de señal de anticuerpo nativo, la secuencia de señal es sustituida por una secuencia de señal procariótica seleccionada, por ejemplo, del grupo de la fosfatasa alcalina, penicilinasa, o guías de enterotoxina II estables al calor. Para la secreción, en levadura, una secuencia de señal de anticuerpo nativo puede ser sustituida por la invertasa de levadura, el factor alfa o los guías de fosfatasa acida. En la expresión de células de mamífero la secuencia de señal nativa es en general satisfactoria, aunque pueden ser adecuadas otras secuencias de señal de mamífero. En la mayoría de los casos, la secreción de un anticuerpo o fragmento de enlace al antígeno a partir de una célula hospedera dará como resultado la eliminación del péptido de señal del anticuerpo o fragmento. De este modo, el anticuerpo maduro o el fragmento carecerá de cualquier secuencia de guía o de señal. En algunos casos tales como la glucosilación es deseable en un sistema de expresión de célula hospedera eucariótica, se pueden manipular las diversas presecuencias para mejorar la glucosilación o el rendimiento. Por ejemplo, se puede alterar el sitio de escisión de peptidasa de un péptido de señal, o agregar prosecuencias, las cuales pueden afectar también la glucosilación. El anticuerpo o fragmento final puede tener, en la posición -1 (con relación al primer aminoácido de la proteína madura) uno o más aminoácidos adicionales incidentes a la expresión, que pueden no haber sido totalmente removidos. Por ejemplo, el anticuerpo o fragmento final puede tener uno o dos aminoácidos encontrados en el sitio de escisión con peptidasa, enlazados al extremo N. Alternativamente, el uso de algunos sitios de escisión con enzima puede dar como resultado una forma ligeramente truncada del anticuerpo o fragmento deseado, y la enzima corta en tal área dentro del anticuerpo o fragmento maduro. Los vectores de expresión contendrán típicamente un promotor que es reconocido por el organismo hospedero y operablemente enlazado a una molécula de ácido nucleico que codifica para un anticuerpo que se enlazan a IL-lß, o un fragmente de enlace al antígeno. Puede ser utilizado ya sea un promotor nativo o heterólogo dependiendo de la célula hospedera utilizada para la expresión y el rendimiento deseado. Los promotores para el uso con los hospederos procarióticos incluyen los sistemas promotores de beta-lactamasa y lactosa; fosfatasa alcalina, un sistema promotor de triptofano (trp) ; y promotores híbridos tales como el promotor tac. Otros promotores bacterianos conocidos son también adecuados. Sus secuencias han sido publicadas, y éstos pueden ser ligados a una o varias secuencias deseadas de ácido nucleico, utilizando ligadores o adaptadores como se desee para suministrar sitios de restricción. Los promotores para el uso con hospederos de levadura son también conocidos en la técnica. Los aumentadores de levadura son ventajosamente utilizados con promotores de levadura. Los promotores adecuados para el uso con las células hospederas de mamífero son bien conocidos e incluyen aquellos obtenidos a partir de los genomas de los virus tales como el virus del polioma, el virus de la viruela aviar, adenovirus (tal como el adenovirus 2), virus del papiloma bovino, virus del sarcoma aviar, citomegalovirus, un retrovirus, virus de la hepatitis-B y lo más preferentemente el virus 40 de simio (SV40) . Otros promotores de mamífero adecuados incluyen promotores de mamífero heterólogos, por ejemplo, los promotores de choque térmico y el promotor de actina . Los promotores adicionales que pueden ser utilizados para expresar los agentes de enlace selectivos de la invención incluyen, pero no están limitados a: la región promotora temprana del SV40 (Bernoist and Chambón, Nature, 290:304-310, 1981) ; el promotor del CMV; el promotor contenido en la repetición terminal larga 3' del virus del sarcoma de Rous (Yamamoto et al. (1980), Cell 22: 787-97); el promotor de la timidina-cinasa del herpes (Wagner et al. (1981), Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A. 78: 1444-5); las secuencias reguladoras del gen de la metalotioneína (Brinster et al, Nature, 296; 39-42, 1982); los vectores de expresión procarióticos tales como el promotor de la beta-lactamasa (Villa-Kamaroff , et al., Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A., 75; 3727-3731, 1978); o el promotor tac (DeBoer, et al. (1983), Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A., 80: 21-5) . También de interés son las siguientes regiones de control transcripcionales de animales, las cuales muestran especificidad de tejido y han sido utilizadas en animales transgénicos. La región de control del gen de la elastasa I que es activa en células acinares pancreáticas (Swift et al. (1984), Cell 38: 639-46; Ornitz et al. (1986), Cold Spring Harbor Symp. Quant . Biol. 50: 399-409; MacDonald (1987), Hepatology 7: 425-515); la región de control del gen de la insulina que es activa en células beta pancreáticas (Hanahan (1985), Nature 315: 115-22); la región de control del gen de la inmunoglobulina que es activa en células linfoides (Grosschedl et al. (1984), Cell 38; 647-58; Adames et al. (1985), Nature 318; 533-8; Alexander et al. (1987), Mol. Cell. Biol. 7: 1436-44); la región de control del virus de tumor mamario de ratón que es activa en células testiculares, de mama, linfoides y mastocitos (Leder et al. (1986), Cell 45: 485-95), la región de control del gen de la albúmina que es activa en hígado (Pinkert et al. (1987), Genes and Devel. 1: 268-76); la región de control del gen de la alfa-fetoproteína que es activa en hígado (Krumlauf et al. (1985), Mol. Cell. Biol. 5: 1639-48; Hammer et al. (1987), Science, 235: 53-8); la región de control del gen de la alfa-1-antitripsina que es activa en hígado (Kelsey et al. (1987), Genes and Devel. 1: 161-71); la región de control del gen de la beta-globina que es activa en células mieloides (Mogram et al., Nature, 315 338-340, 1985; Kollias et al. (1986), Cell 46: 89-94); la región de control del gen de la proteína básica de mielina que es activa en células de oligondendrocitos en el cerebro (Readhead et al. (1987), Cell, 48: 703-12); la región de control del gen de la cadena ligera 2 de miosina que es activa en el músculo esquelético (Sani (1985), Nature, 314: 283-6); y la región de control del gen de la hormona de liberación de gonadotropina, que es activa en el hipotálamo (Masón et al. (1986), Science 234: 1372-8). Una secuencia aumentadora puede ser insertada dentro del vector para incrementar la transcripción en células hospederas eucarióticas. Varias secuencias aumentadoras de genes mamíferos son conocidas (por ejemplo, globina, elastasa, albúmina, alfa-feto-proteína e insulina) . Típicamente, no obstante, se ha utilizado un aumentador proveniente de un virus. El aumentador del SV40, el aumentador del promotor temprano del citomegalovirus, el aumentador de polioma, y los aumentadores de adenovirus son elementos de mejoramiento ejemplares para la activación de promotores eucarióticos. Mientras que un aumentador puede ser empalmado dentro del vector en una posición 5' o 3' a la región de codificación del polipéptido, ésta está típicamente localizada en un sitio 5' desde el promotor. Los vectores para expresar ácidos nucleicos incluyen aquellos que son compatibles con las células hospederas bacterianas, de insecto y de mamífero. Tales vectores incluyen, entre otros pCRII, pCR3, and pcDNA3.1 (Invitrogen Company, San Diego, Calif.), pBSII (Stratagene Company, La Jolla, Calif.), pET15 (Novagen, Madison, Wis.), pGEX (Pharmacia Biotech, Piscataway, N.J.), pEGFP-N2 (Clontech, Palo Alto, Calif.), pETL (BlueBacII; Invitrogen), pDSR- alpha (PCT Publication No. WO90/14363) y pFastBacDual (Gibco/BRL, Grand Island, N.Y. ) . Los posibles vectores adicionales incluyen, pero no están limitados a, cósmidos, plásmidos o virus modificados, pero el sistema vector debe ser compatible con la célula hospedera seleccionada. Tales vectores incluyen, pero no están limitados a plásmidos tales como derivados del plásmido Bluescript® (un fagémido basado en ColEl con alto número de copias, Stratagene Cloning Systems Inc., La Jolla Calif.), plásmidos de clonación por PCR diseñados para clonar los productos de PCR amplificados por Taq (por ejemplo, TOPOMR. TA Cloning® Kit, derivados del plásmido PCR2.1, Invitrogen, Carlsbad, Calif.), y vectores de mamífero, de levadura o virus tales como el sistema de expresión baculoviral (derivados del plásmido pBacPAK, Clontech, Palo Alto, Calif.). Las moléculas recombinantes pueden ser introducidas en las células hospederas por medio de transformación, transfección, infección, electroporación, u otras técnicas conocidas.

Células Hospederas y Usos de las Mismas La invención proporciona además una célula (por ejemplo, una célula aislada purificada) que comprende un ácido nucleico o vector de la invención. La célula puede ser cualquier tipo de célula capaz de ser transformada con el ácido nucleico o vector de la invención para producir así un polipéptido codificado por ésta. La célula es preferentemente la célula de un mamífero, tal como un humano, y es más preferentemente una célula de hibridoma, una célula madre embrionaria o un huevo fertilizado. Para expresar el enlace a IL-lß o el fragmento, los ADNs que codifican para las cadenas ligera y pesada de longitud parcial o completa, obtenidas como se describe anteriormente, son insertadas dentro de los vectores de expresión tal que los genes son operativamente enlazados a las secuencias de control transcripcional y traduccional . En este contexto, el término "operativamente enlazado" se pretende que signifique que un gen de anticuerpo es ligado dentro de un vector tal que las secuencias de control transcripcional y traduccional dentro del vector, sirven su función pretendida de regulación de la transcripción y traducción del gen del anticuerpo. El vector de expresión de las secuencias de control de expresión son elegidas para ser compatibles con la célula hospedera de expresión utilizada. El gen de la cadena ligera del anticuerpo y el gen de la cadena pesada del anticuerpo puede ser insertado dentro de un vector separado o, más típicamente, ambos genes son insertados dentro del mismo vector de expresión. Los genes del anticuerpo son insertados dentro del vector de expresión mediante métodos estándares (por ejemplo, ligadura de los sitios de restricción complementarios sobre el fragmento de gen del anticuerpo y el vector, y la ligadura de extremo romo si no están presentes sitios de restricción) . Antes de la inserción de las secuencias de cadena ligera y pesada, el vector de expresión puede ya llevar las secuencias de la región constante del anticuerpo. Por ejemplo, un procedimiento para convertir las secuencias VH y VL seleccionadas a los genes de anticuerpo de longitud completa, es insertarlas dentro de un vector de expresión que ya codifica para las regiones constantes de cadena pesada y regiones constantes de cadena ligera, respectivamente, tal que el segmento VH es operativamente enlazado al o a los segmentos de CH dentro del vector y el segmento VL es operativamente enlazado en segmento CL dentro del vector. Adicional o alternativamente, el vector de expresión recombinante puede codificar para un polipéptido de señal que facilita la secreción de la cadena de anticuerpo desde una célula hospedera. El gen de la cadena de anticuerpo puede ser clonado dentro del vector, tal que el péptido de señal es enlazado intra-estructuralmente al extremo amino del gen de la cadena del anticuerpo. El péptido de señal puede ser un péptido de señal de inmunoglobulina o un péptido de señal heterólogo (por ejemplo, un péptido de señal proveniente de una proteína no inmunoglobulina) . Además de los genes de la cadena del anticuerpo, los vectores de expresión recombinantes de la invención pueden llevar secuencias reguladoras que controlan la expresión de los genes de la cadena del anticuerpo en una célula hospedera. El término secuencia reguladora está destinado a incluir promotores, aumentadores y otros elementos de control de la expresión (por ejemplo, señales de poliadenilación) que controlan la transcripción o traducción de los genes de la cadena del anticuerpo. Tales secuencias reguladoras son descritas, por ejemplo, en Goeddel; Gene Expression Technology: Methods in Enzymology 185, Academic Press, San Diego, Calif. (1990). Se apreciará que el diseño del vector de expresión, incluyendo la selección de la secuencia reguladora puede depender de factores tales como la elección de la célula hospedera que va a ser transformada, el nivel de expresión de la proteína deseada, así como de otras consideraciones. Las secuencias reguladores preferidas para la expresión en células hospederas de mamífero, incluyen elementos virales que dirigen altos niveles de expresión de proteína en las células de mamífero. Además de los genes de la cadena del anticuerpo y las secuencias reguladoras, los vectores de expresión recombinantes de la invención pueden llevar secuencias adicionales, tal como secuencias que regulan la replicación del vector en las células hospederas (por ejemplo, orígenes de replicación) y genes marcadores seleccionables. El gen marcador seleccionable facilita la selección de las células hospederas dentro de las cuales ha sido introducido el vector (ver, por ejemplo, las Patentes de los Estados Unidos Nos. 4,399,216, 4,634,665 y 5,179,017, todas por Axel et al.). Por ejemplo, típicamente el gen marcador seleccionable confiere resistencia a fármacos, tales como G418, higromicina o metotrexato, en una célula hospedera dentro de la cual ha sido introducido el vector. Los genes marcadores seleccionables preferidos incluyen el gen de la dihidrofolato-reductasa (DHFR) (para el uso en las células hospederas dhfr- con selección/amplificación con metotrexato) y el gen neo (para la selección de G418) . Los métodos de introducción de los ácidos nucleicos y los vectores dentro de las células aisladas y el cultivo y selección de las células hospederas transformadas in vi tro, son conocidos en la técnica e incluyen el uso de transformación mediada por cloruro de calcio, transducción, conjugación, acoplamiento de tres progenitores, DEAE, transfección mediada por dextrano, infección, fusión membranal con liposomas, bombardeo de alta velocidad con microproyectiles recubiertos con ADN, microinyección directa dentro de las células simples, y electroporación (ver, por ejemplo, Sambrook et al., supra; Davis et al., Basic Methods in Molecular Biology , 2nd ed., McGraw-Hill Professional, 1995; and Neumann et ui, EMBO J. , 1: 841 (1982)). La célula que comprende el ácido nucleico o el vector de la invención puede ser utilizada para producir el anticuerpo que se enlaza a IL-lß, el fragmento del mismo, o una porción del mismo (por ejemplo, una secuencia de cadena pesada, o una secuencia de cadena ligera codificada por el ácido nucleico o el vector) . Después de introducir el ácido nucleico o el vector de la invención dentro de la célula, la célula es cultivada bajo condiciones adecuadas para la expresión de la secuencia codificada. El anticuerpo, el fragmento de enlace al antígeno, o la porción del anticuerpo entonces pueden ser aislados de la célula. En ciertas modalidades, dos o más vectores que conjuntamente codifican para un anticuerpo que se enlaza a IL-lß, o el fragmento de enlace al antígeno del mismo, pueden ser introducidos dentro de la célula. Por ejemplo, un primer vector que codifica para una región variable de cadena pesada o una secuencia de la cadena pesada completa, puede ser introducido dentro de una célula hospedera, y un segundo vector que codifica para una región variable de cadena ligera, o la secuencia de cadena ligera completa, es también introducido dentro de la célula hospedera. La célula es luego cultivada bajo condiciones adecuadas para la expresión de las dos secuencias codificadas por el primero y segundo vectores, y los polipéptidos codificados pueden ser aislados de la célula hospedera. Si es necesario, los polipéptidos aislados pueden ser luego introducidos bajo condiciones que promueven su asociación y organización dentro de un anticuerpo que se enlaza a IL-lß, o el fragmento que se enlaza al antígeno, del mismo. Alternativamente, el primero y segundo vectores pueden ser introducidos dentro de células separadas, y los productos pueden ser aislados de las células respectivas y combinados para proporcionar un anticuerpo que se enlaza a IL-lß, o el fragmento de enlace al antígeno del mismo. Los métodos para promover la asociación y la organización de los constituyentes del anticuerpo dentro de los polipéptidos que se enlazan al antígeno, han sido descritos en la materia. Similarmente, los métodos para aislar un anticuerpo, fragmentos de enlace al antígeno del mismo, o los fragmentos de cadena pesada y de cadena ligera, son conocidos para las personas de experiencia ordinaria en la técnica. Las células madre embrionarias o los huevos fertilizados que comprenden un ácido nucleico o vector de la invención, pueden ser utilizados para generar un animal no humano transgénico. Los métodos para elaborar animales transgénicos son descritos en Hofker et al., Transgenic Mouse: Methods and Portocols (Methods in Molecular Biology) , Humana Press, Clifton, NJ, 2002. Los animales no humanos transgénicos que comprenden un ácido nucleico o vector descrito en la presente pueden ser utilizados para expresar el anticuerpo codificado, el fragmento de enlace al antígeno, o la porción del anticuerpo. El anticuerpo, el fragmento de enlace al antígeno, o la porción puede ser entonces aislado del animal. Las porciones de un anticuerpo pueden ser subsecuentemente reconstituidas (en combinación con porciones de anticuerpo adicionales) dentro de un anticuerpo que se enlaza a IL-lß o el fragmento de anticuerpo de la invención. Las células hospederas pueden ser células hospederas procarióticas (tales como E . coli ) o células hospederas eucarióticas (tales como una célula de levadura, una célula de insecto, o una célula de vertebrado) . La célula hospedera, cuando es cultivada bajo condiciones apropiadas, expresa un anticuerpo o fragmento que se enlaza a IL-lß, que puede ser subsecuentemente recolectado del medio de cultivo (si la célula hospedera lo secreta hacia el medio) o directamente desde la célula hospedera que lo produce (si no es secretado) . La selección de una célula hospedera apropiada dependerá de diversos factores, tales como los niveles de expresión deseados, las modificaciones del polipéptido que son deseables o necesarias para la actividad, tales como la glucosilación o fosforilación, y la facilidad de plegamiento en una molécula biológicamente activa. Un número de células hospederas adecuadas son conocidas en la materia y pueden ser disponibles de la American Type Culture Collection (ATCC), Manassas, Va. Los ejemplos incluyen células de mamífero, tales como las células de ovario de hámster Chino (CHO) (ATCC No. CCL61), células CHO DHFR (Urlaub et al. Proc. Natl. Acad. Sci. USA 97, 4216-4220 (1980)), células 293 ó 293T de riñon embrionario humano (HEK) (ATCC No. CRL1573), células 3T3 (ATCC No. CCL92), o células PER.C6. La selección de las células hospederas de mamífero adecuadas y los métodos para la transformación, cultivo, amplificación, selección y producción del producto y la purificación del mismo, son conocidos en la técnica. Otras líneas celulares de mamífero adecuadas son las líneas celulares COS-I de mono (ATCC No. CRL1650) y las líneas celulares COS-7 (ATCC No. CRL1651), y la línea celular CV-I (ATCC No. CCL70). Las células hospederas de mamífero, ejemplares, adicionales, incluyen líneas celulares de primate, líneas celulares de ave, y líneas celulares de roedor, incluyendo líneas celulares transformadas. Las células diploides normales, las cepas celulares derivadas del cultivo in vi tro del tejido primario, así como explantes primarios, son también adecuadas. Las células candidatas pueden ser genotípicamente deficientes en el gen de selección, o pueden contener un gen de selección dominantemente activo. Otras líneas celulares de mamífero adecuadas, incluyen pero no están limitadas a, las células N2A de neuroblastoma de ratón, HeLa, células L-929 de ratón, líneas 3T3 derivadas de ratones Swiss, Balb-c o NIH, líneas celulares de hámster BHK o HaK, que son disponibles de la American Type Culture Collection, Manassas, Va. Cada una de estas líneas celulares es conocida por y disponible para aquellos expertos en la técnica de la expresión de proteínas. Similarmente útiles como células hospederas adecuadas para la presente invención son las células bacterianas. Por ejemplo, las diversas cepas de E . coli (por ejemplo, HB101, (ATCC No. 33694) DH5 , DH10, y MC1061 (ATCC No. 53338)) son bien conocidas como células hospederas en el campo de la biotecnología. Diversas cepas de B. subtilis, Pseudomonas spp., otras Bacillus spp., Streptomyces spp., y similares, pueden también ser empleadas en este método. Para la expresión de las cadenas ligeras y pesadas, el o los vectores de expresión que codifican para las cadenas pesadas y ligeras son transfectados dentro de una célula hospedera mediante técnicas estándares. La transfección abarca una amplia variedad de técnicas comúnmente utilizadas para la introducción de ADN exógeno dentro de una célula hospedera procariótica o eucariótica, por ejemplo, la electroporación, precipitación con fosfato de calcio, transfección con DEAE-dextrano y similares. Aunque es teóricamente posible expresar los anticuerpos o fragmentos de enlace a IL-lß ya sea en células hospederas procarióticas o eucarióticas, la expresión de los anticuerpos o fragmentos en las células eucarióticas, y lo más preferentemente células hospederas de mamífero, es lo más preferido debido a que tales células eucarióticas, y en particular las células de mamífero, son más adecuadas que las células procarióticas para ensamblar y secretar un anticuerpo adecuadamente plegado e inmunológicamente activo. Las células hospederas de mamífero para la expresión de los anticuerpos recombinantes de la invención incluyen las células de ovario de hámster Chino (células CHO) (incluyendo células dhfr-CHO, descritas en Urlaub y Chasin, (1980) Proc. Natl. Acad. Sci. USA 77: 42164220, utilizadas con un marcador seleccionable por DHFR, por ejemplo, como se descrioe en R. J. Kaufman y P. A. Sharp (1982) Mol. Biol. 159: 6C1-621), células de mieloma NSO, células COS y células SP2. Cuando los vectores de expresión recombinantes que codifican para los genes del anticuerpo son introducidos dentro de las células hospederas de mamífero, los anticuerpos son producidos mediante cultivo de las células hospederas por un periodo de tiempo suficiente para permitir la expresión del anticuerpo en las células hospederas o, más preferentemente, la secreción del anticuerpo dentro del medio de cultivo en el cual son desarrolladas las células hospederas. Los anticuerpos pueden ser recuperados del medio de cultivo utilizando métodos estándares de purificación de proteínas . Muchas cepas de células de levadura conocidas en la técnica son también disponibles como células hospederas para la expresión de los anticuerpos y los fragmentos. Las células de levadura preferidas incluyen, por ejemplo, Saccharomyces cerivisae. Además, donde se desea, pueden ser utilizados sistemas de células de insecto. Tales sistemas son descritos por ejemplo en Kitts et al. (Biotechniques, 14, 810-817 (1993)), Lucklow (Curr. Opin. Biotechnol., 4, 564-572 (1993) y Lucldow et al. (J. Virol., 67, 4566-4579 (1993)). La transformación o transfección de una molécula de ácido nucleico que codifica para un anticuerpo o fragmento que se enlaza a IL-lß dentro de una célula hospedera seleccionada, puede ser lograda mediante métodos bien conocidos incluyendo los métodos con cloruro de calcio, métodos de electroporación, métodos de microinyección, métodos de lipofección o métodos con DEAE-dextrano. El método seleccionado dependerá en parte del tipo de célula hospedera que va a ser utilizada. Estos métodos y otros métodos adecuados son bien conocidos, y son descritos, por ejemplo, en Sambrook et al. supra. Los animales transgénicos pueden también ser utilizados para expresar anticuerpos glucosilados y fragmentos. Por ejemplo, se puede utilizar un animal transgénico productor de leche (una vaca o cabra, por ejemplo) y obtener agentes de enlace glucosilados en la leche del animal. Alternativamente, se pueden utilizar plantas para producir agentes de enlace selectivos, glucosilados. Las células hospederas que comprenden un vector de expresión que codifica para un anticuerpo o fragmento que se enlaza a IL-lß, pueden ser cultivadas utilizando medios conocidos en la materia. Los medios usualmente contendrán todos los nutrientes necesarios para el crecimiento y supervivencia de las células. Los ejemplos de medios para el cultivo de las células de E . coli incluyen Caldo Luria (LB) y/o Caldo Terrific (TB) . Los medios adecuados para cultivar células eucarióticas son RPMI 1640, MEM, DMEM, que pueden ser suplementados con suero y/o factores de crecimiento como se desea para la línea celular particular que es cultivada. Un medio ejemplar para cultivos de insecto es el medio de Grace suplementado con levadurolato, hidrolizado de lactalbumina, y/o suero fetal de ternera como sea necesario. Un antibiótico u otro compuesto útil para el crecimiento selectivo de las células transfectadas o transformadas, puede ser agregado como un suplemento al medio. El compuesto será elegido con base en el elemento marcador seleccionable presente sobre el plásmido con el cual fue transformada la célula hospedera. Por ejemplo, donde el elemento marcador seleccionable es la resistencia a la kanamicina, el compuesto agregado al medio de cultivo será la kanamicina. Otros compuestos para el crecimiento selectivo incluyen ampicilina, tetraciclina y neomicina. La cantidad de anticuerpo o fragmento que se enlaza a IL-lß, producido por una célula hospedera, puede ser evaluada utilizando métodos conocidos en la materia. Tales métodos incluyen, sin limitación, análisis de transferencia de Western, electroforesis en gel de SDS-poliacrilamida, electroforesis en gel no desnaturalizante, separación por HPLC, inmunoprecipitación, y/o ensayos de actividad. La purificación de un anticuerpo o fragmento que se enlaza a IL-lß que ha sido secretado hacia el medio celular, puede ser lograda utilizando una variedad de técnicas incluyendo afinidad, inmunoafinidad o cromatografía de intercambio iónico, cromatografía de tamices moleculares, electroforesis en gel preparativo o enfoque isoeléctrico, cromatoenfoque, y cromatografía líquida de alta presión. Por ejemplo, los anticuerpos que comprenden una región Fc pueden ser purificados mediante cromatografía de afinidad con la Proteína A, que se enlaza selectivamente a la región Fc . Las formas modificadas de un anticuerpo o fragmento de enlace al antígeno pueden ser preparadas con marcadores de afinidad, tales como hexahistidina u otro péptido pequeño tal como FLAG (Eastman Kodak Co., New Haven, Conn.) o myc (Invitrogen) ya sea en su extremo carboxilo o amino y purificado con una columna de afinidad de un solo paso. Por ejemplo, la polihistidina se enlaza con gran afinidad y especificidad al níquel, de este modo puede ser utilizada una columna de afinidad de níquel (tal como las columnas de níquel Qiagen®) para la purificación de los agentes de enlace selectivos marcados con polihistidina. (Ver por ejemplo, Ausubel et al, eds., Current Protocols in Molecular Biology, Section 10.11.8, John Wiley & Sons, New York (1993)). En algunos casos, puede ser empleado más de un paso de purificación. Los anticuerpos o fragmentos que se enlazan a IL-lß que son expresados en células hospederas procarióticas pueden estar presentes en forma soluble, ya sea en el espacio periplásmico o en el citoplasma o en una forma soluble como parte de los cuerpos de inclusión intracelulares. Los anticuerpos que se enlazan a IL-lß o los fragmentos de los mismos pueden ser extraídos de la célula hospedera utilizando cualquier técnica apropiada conocida en la materia. Por ejemplo, las células hospederas pueden ser lisadas para liberar los contenidos del periplasma/citoplasma por French press, homogeneización y/o sonicación seguida por centrifugación. Las formas solubles de un anticuerpo o fragmento que se enlaza a IL-lß presentes ya sea en el citoplasma o liberadas del espacio periplásmico, pueden ser además purificadas utilizando métodos conocidos en la técnica, por ejemplo, los fragmentos Fab son liberados desde el espacio periplásmico bacteriano mediante técnicas de choque osmótico. Si los cuerpos de inclusión que comprenden un anticuerpo o fragmento se han formado, éstos pueden a menudo enlazarse a las membranas celulares interna y/o externa y de este modo serán encontrados principalmente en el material del botón o pella después de la centrifugación. El material del botón puede ser luego tratado a pH extremos o con un agente caotrópico tal como un detergente, guanidina, derivados de guanidina, urea, o derivados de urea en presencia de un agente reductor tal como ditiotreitol a pH alcalino, o tris-carboxietil-fosfina a pH ácido para liberar, romper y solubilizar los cuerpos de inclusión. El anticuerpo o fragmento soluble puede ser luego analizado utilizando electroforesis en gel, inmunoprecipitación o similares. Si se desea aislar un anticuerpo solubilizado o el fragmento de enlace al antígeno, el aislamiento puede ser llevado a cabo utilizando métodos estándares tales como aquellos descritos más adelante y en Marston et al. (Meth. Enz., 182: 264- 275 (1990) ) . En algunos casos, un anticuerpo o fragmento de enlace a IL-lß puede no ser biológicamente activo después del aislamiento. Diversos métodos para el "replegamiento" o la conversión de un polipéptido a su estructura terciaria y la generación de enlace disulfuro, puede ser utilizado para restaurar la actividad biológica. Tales métodos incluyen la exposición del polipéptido solubilizado a un pH usualmente por arriba del 7, y en presencia de una concentración particular de un caótropo. La selección del caótropo es muy similar a las elecciones utilizadas para la solubilización de cuerpos de inclusión, pero usualmente el caótropo es utilizado a una menor concentración y no es necesariamente el mismo que los caótropos utilizados para la solubilización. En la mayoría de los casos, la solución de replegamiento/oxidación, contendrá también un agente reductor o el agente reductor más su forma oxidada en una proporción específica para generar un potencial redox particular permitiendo que ocurra el entremezclado de disulfuro en la formación del o de los puentes de cisteína de la proteína. Algunos de los pares redox comúnmente utilizados incluyen cisteína/cistamina, glutatión (GSH/ditiobis GSH, cloruro cúprico, ditiotreitol ( DTT) /ditiano DTT, y 2-mercaptoetanol (bMe) /di-tio-b (ME) . En muchos casos, puede ser utilizado un cosolvente para incrementar la eficiencia del replegamiento, y reactivos comunes utilizados para este propósito incluyen glicerol, polietilenglicol de diversos pesos moleculares, arginina y similares. Los anticuerpos o fragmentos que se enlazan a IL-lß de la presente invención pueden también ser preparados mediante métodos de síntesis química (tales como la síntesis peptídica en fase sólida) utilizando técnicas conocidas en la materia tales como aquellas descritas por Merrifield et al. (1963), J. Am. Chem. Soc, 85: 2149, Houghten et al. (1985), Proc Natl Acad. Sci. USA, 82: 5132, y Stewart y Young (1984), Solid Phase Peptide Synthesis, Pierce Chemical Co . , Rockford, III. Tales anticuerpos o fragmentos pueden ser sintetizados con o sin una metionina en el extremo amino. Los anticuerpos químicamente sintetizados y los fragmentos de enlace al antígeno pueden ser oxidados utilizando métodos descritos en estas referencias, para formar puentes disulfuro. Los anticuerpos y fragmentos preparados así conservarán al menos una actividad biológica asociada con un anticuerpo o fragmento que se enlaza a IL-lß, nativo o recombinantemente producido.

Composiciones Farmacéuticas Los anticuerpos que se enlazan a IL-lß, los fragmentos de anticuerpo, los ácidos nucleicos, o los vectores de la invención pueden ser formulados en composiciones, especialmente composiciones farmacéuticas. Tales composiciones comprenden una cantidad terapéutica o profilácticamente efectiva de un anticuerpo que se enlaza a IL-lß, el fragmento de anticuerpo, el ácido nucleico, o el vector de la invención en mezcla con un portador adecuado, por ejemplo, un agente farmacéuticamente aceptable. Típicamente, los anticuerpos que se enlazan a IL-lß, los fragmentos de anticuerpo, los ácidos nucleicos o los vectores de la invención son suficientemente purificados para la administración a un animal antes de la formulación en una composición farmacéutica. Los agentes farmacéuticamente aceptables para el uso en las presentes composiciones farmacéuticas incluyen, portadores, excipientes, diluyentes, antioxidantes, conservadores, agentes colorantes, saborizantes y diluyentes, agentes emulsificantes, agentes suspensores, solventes, rellenadores, agentes de volumen, amortiguadores, vehículos de distribución, agentes de tonicidad, cosolventes, agentes humectantes, agentes formadores de complejos, agentes amortiguadores, antimicrobianos y surfactantes. La solución salina amortiguada neutra o solución salina mezclada con albúmina sérica, son portadores ejemplares apropiados. Las composiciones farmacéuticas pueden incluir antioxidantes tales como ácido ascórbico; polipéptidos de bajo peso molecular; proteínas, tales como albúmina sérica, gelatina o inmunoglobulinas; polímeros hidrofílicos tales como polivinilpirrolidona; aminoácidos tales como glicina, glutamina, asparagina, arginina o lisina; monosacáridos, disacáridos, y otros carbohidratos que incluyen glucosa, mañosa o dextrinas; agentes quelantes tales como EDTA; alcoholes de azúcar tales como manitol o sorbitol; iones contrarios formadores de sales tales como sodio; y/o surfactantes no iónicos tales como Tween, pluronics o polietilenglicol (PEG) . También a manera de ejemplo, los agentes aumentadores de la tonicidad, adecuados incluyen haluros de metal alcalino (preferentemente cloruro de sodio o de potasio), manitol, sorbitol, y similares. Los conservadores adecuados incluyen cloruro de benzalconio, timerosal, alcohol fenetílico, metilparabeno, propilparabeno, clorhexidina, ácido sórbico y similares. El peróxido de hidrógeno puede también ser utilizado como conservador. Los cosolventes adecuados incluyen glicerina, propilenglicol, y PEG. Los agentes formadores de complejos, adecuados, incluyen cafeína, polivinilpirrolidona, beta-ciclodextrina o hidroxi-propil-beta-ciclodextrina . Los surfactantes adecuados o agentes humectantes incluyen esteres de sorbitan, polisorbatos tales como polisorbato 80, trometamina, lecitina, colesterol, tiloxapal y similares. Los amortiguadores pueden ser amortiguadores convencionales tales como acetato, borato, citrato, fosfato, bicarbonato, o Tris-HCl. El amortiguador de acetato puede ser aproximadamente de pH 4-5.5, y el amortiguador de Tris puede ser de aproximadamente pH 7-8.5. Los agentes farmacéuticos adicionales son descritos en Remington 's Pharmaceutical Sciences, 18a Edición, A. R. Gennaro, ed. , Mack Publishing Company, 1990. La composición puede estar en forma líquida o en una forma liofilizada o secada por congelamiento, y pueden incluir uno o más lioprotectores, excipientes, surfactantes, aditivos estructurales de alto peso molecular y/o agentes de volumen (ver por ejemplo Patentes de los Estados Unidos Nos. 6,685,940, 6,566,329 y 6,372,716). En una modalidad, es incluido un lioprotector, el cual es un azúcar no reductor tal como sucrosa, lactosa o trehalosa. La cantidad de lioprotector incluido en general es tal que, después de la reconstitución, la formulación resultante será isotónica, aunque las formulaciones hipertónicas o ligeramente hipotónicas pueden ser también adecuadas. Además, la cantidad de lioprotector debe ser suficiente para prevenir que una cantidad inaceptable de degradación y/o agregación de la proteína después de la liofilización. Las concentraciones ejemplares del lioprotector para los azúcares (por ejemplo, sucrosa, lactosa, trehalosa) en la formulación pre-liofilizada, son de aproximadamente 10 mM hasta aproximadamente 400 mM. En otra modalidad más, es incluido un surfactante, tal como por ejemplo, surfactantes no iónicos y surfactantes iónicos tales como polisorbatos (por ejemplo, polisorbato 20, polisorbato 80); poloxámeros (por ejemplo poloxámero 188); éteres fenílicos de poli (etilenglicol (por ejemplo Tritón); dodeciisulfato de sodio (SDS), laurilsulfato de sodio; octilglucósido de sodio; lauril-, miristil-, linoleil- o estearil-sulfobetaína; lauril-, miristil-, linoleil- o estearil-sarcosina; linoleil-, miristil- o cetil-betaína; lauroamidopropil-, cocamidopropil-, linoleamidopropil-, miristamidopropil-, palmidopropil-, o isostearamidopropil-betaína (por ejemplo lauroamidopropilo) ; miristamidopropil-, palmidopropil-, o isostearamidopropil-dimetilamina; metilcocoil-taurato de sodio o metil-ofeil-taurato disódico; y la serie M0NAQUATMR (Mona Industries, Inc., Paterson, NJ. ) , polietilglicol, polipropilglicol, y copolímeros de etileno y propilenglicol (por ejemplo Pluronics, PF68 etc) . Las cantidades ejemplares del surfactante que pueden estar presentes en la formulación pre-liofilizada son de aproximadamente 0.001-0.5%. Los aditivos estructurales de alto peso molecular (por ejemplo, rellenadores, aglutinantes) pueden incluir por ejemplo, acacia, albúmina, ácido algínico, fosfato de calcio (dibásico) , celulosa, carboximetilcelulosa, carboximetilcelulosa de sodio, hidroxietilcelulosa, hidroxipropilcelulosa, hicroxipropilmetilcelulosa, celulosa microcristalina, dextrano, dextrina, dextratos, sucrosa, tilosa, almidón pregelatinizado, sulfato de calcio, amilosa, glicina, bentonita, maltosa, sorbitol, etilcelulosa, fosfato ácido disódico, fosfato disódico, pirosulfito disódico, alcohol polivinílico, gelatina, glucosa, goma guar, glucosa líquida, azúcar compresible, silicato de magnesio y aluminio, maltodextrina, óxido de polietileno, polimetacrilatos, povidona, alginato de sodio, tragacanto, celulosa microcristalina, almidón, y zeína. Las concentraciones ejemplares de derivados estructurales de alto peso molecular son de 0.1% a 10% en peso. En otras modalidades, puede ser incluido un agente de volumen (por ejemplo, manitol, glicina). Las composiciones pueden ser adecuadas para la administración parenteral. Las composiciones ejemplares son adecuadas para la inyección o infusión dentro de un animal mediante cualquier ruta adecuada para el experto en la materia, tales como las vías intraarticular, subcutánea, intravenosa, intramuscular, intraperitoneal, intracerebral (intraparenquimal) , intracerebroventricular, intramuscular, intraocular, intraarterial o intralesional . Una formulación parenteral será típicamente una solución acuosa estéril, libre de pirógenos e isotónica, que contiene opcionalmente conservadores farmacéuticamente aceptables. Los ejemplos de solventes no acuosos son propilenglicol, polietilenglicol, aceites vegetales tales como aceite de oliva, y esteres orgánicos inyectables tales como oleato de etilo. Los portadores acuosos incluyen agua, soluciones alcohólicas/acuosas, emulsiones o suspensiones, incluyendo solución salina y medios amortiguados. Los vehículos parenterales incluyen solución de cloruro de sodio, dextrosa de Ringer, dextrosa y cloruro de sodio, Ringer lactatado, o aceites fijos. Los vehículos intravenosos incluyen reabastecedores de fluidos y de nutrientes, reabastecedores de electrolitos, tales como aquellos basados en dextrosa de Ringer, y similares. Los conservadores y otros aditivos pueden estar también presentes, tales como, por ejemplo, anti-microbianos, antioxidantes, agentes quelantes, gases inertes y similares. Ver en general, Remington's Pharmaceutical Science, 16a Ed., Mack Eds., 1980, que se incorpora por referencia en la presente. Las composiciones farmacéuticas descritas en la presente pueden ser formuladas para la distribución controlada o sostenida de una manera que proporciona concentración local del producto (por ejemplo, bolo, efecto de depósito) , y/o estabilidad incrementada o vida media en un ambiente local particular. Las composiciones pueden incluir la formulación de los anticuerpos de enlace a IL-lß, fragmentos de anticuerpo, ácidos nucleicos, o vectores de la invención con preparaciones particulares de compuestos poliméricos tales como ácido poliláctico, ác^do poliglicólico, etc., así como agentes tales como una matriz biodegradable, microesferas inyectables, partículas microcapsulares, microcápsulas, esferas de partículas bioerosionables, liposomas y canales piloto comunes de distribución implantables que proporcionan la liberación controlada o sostenida del agente activo, que puede ser luego distribuido como una inyección de depósito. Las técnicas para formular tales medios de distribución sostenida o controlada, son conocidas y han sido desarrollados una variedad de polímeros, y utilizados también para la liberación y distribución controlada de los fármacos. Tales polímeros son típicamente biodegradables y biocompatibles. Los hidrogeles poliméricos, incluyendo aquellos formados mediante la complejación del polímero enantiomérico o los segmentos polipeptídicos, y los hidrogeles con propiedades sensibles a la temperatura o el pH, pueden ser deseables para proporcionar el efecto de depósito del fármaco debido a las condiciones leves y acuosas involucradas en el atrapamiento de los agentes proteicos bioactivos (por ejemplo, anticuerpos). Ver, por ejemplo, la descripción de las micropartículas poliméricas porosas de liberación controlada para la distribución de las composiciones farmacéuticas de la Solicitud del PCT Publicación WO 93/15722. Los materiales adecuados para este propósito incluyen poliláctidos (ver, por ejemplo, la Patente de los Estados Unidos No. 3,773,919), polímeros de poli- (ácidos a-hidroxicarboxílicos) , tales como el ácido poli-D- (-) -3-hidroxibutírico (Patente Europea EP-133, 988A) , copolímeros de ácido L-glutámico y gama-etil-L-glutamato (Sidman et al., Biopolimers, 22: 547-556 (1983)), poli (2-hidroxietil-metacrilato) (Langer et al., J. Biomed. Mater. Res., 15: 167-277 (1981), y Langer, Chem. Tech., 12: 98-105 (1982)), acetato de etilenvinilo, o ácido poli-D (-) -3-hidroxibutírico . Otros polímeros biodegradables incluyen poli (lactonas) , poli (acétales) , poli (ortoésteres) , y poli (ortocarbonatos) . Las composiciones de liberación sostenida pueden también incluir liposomas, que pueden ser preparados mediante cualquiera de los diversos métodos conocidos en la materia (ver, por ejemplo, Eppstein et al, Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 82: 3688-92 (1985)). El portador mismo, o sus productos de degradación, deben ser no tóxicos en el tejido objetivo y no deben agravar adicionalmente la condición. Esto puede ser determinado mediante selección rutinaria en modelos animales del trastorno objetivo o, si tales modelos no son obtenibles, en animales normales. El microencapsulamiento de las proteínas recombinantes para la liberación sostenida ha sido realizado exitosamente con la hormona humana del crecimiento (rhGH) , interferón- (rhIFN--) , interleucina 2, y MN rgp 120, Johnson et al., Nat. Med., 2: 795-799 (1996); Yasuda, Biomed. Ther., 27: 1221-1223 (1993); Hora et al., Bio/Technology. 8: 755-758 (1990); Cleland, "Design and Production of Single Immunization Vaccines Using Polilactide Poliglycolide Microsphere Systems," in Vaccine Design: The Subunit and Adjuvant Approach, Powell and Newman, eds, (Plenum Press: New York, 1995), pp. 439-462; WO 97/03692, WO 96/40072, WO 96/07399; y Patente de los Estados Unidos No. 5,654,010. Las formulaciones de liberación sostenida de estas proteínas fueron desarrolladas utilizando el polímero de ácido poli-láctico-coglicólico (PLGA) debido a su biocompatibilidad y amplia gama de propiedades biodegradables. Los productos de degradación de PLGA, los ácidos láctico y glicólico pueden ser rápidamente despejados dentro del cuerpo humano. Además, la capacidad de degradación de este polímero puede ser dependiente del peso molecular y de la composición. Lewis, "Controlled reléase of bioactive agents from lactide/glycolide polimer, " en: M. Chasin y R. Langer (Eds.), Biodegradable Polimers as Drug Delivery Systems (Marcel Dekker: New York, 1990), pp. 1-41. Los ejemplos adicionales de composiciones de liberación sostenida incluyen, por ejemplo, la Patente Europea EP-58,481A, Patente de los Estados Unidos No. 3,887,699, Patente Europea EP-158,277A, Patente Canadiense No. 1176565, U. Sidman et al., Biopolimers 22, 547

[1983], R. Langer et al., Chem. Tech. 12, 98

[1982], Sinha et al., J. Control. Reléase 90, 261

[2003], Zhu et al., Nat. Biotechnol. 18, 24

[2000], y Dai et al., Colloids Surf B Biointerfaces 41, 117

[2005] . Los polímeros bioadhesivos son también contemplados para el uso en o con las composiciones de la presente invención. Los bioadhesivos son materiales sintéticos y de origen natural capaces de adherirse a sustratos biológicos por periodos prolongados de tiempo. Por ejemplo, el Carbopol y policarbofil son ambos derivados reticulados sintéticos del poli (ácido acrílico) . Los sistemas de distribución bioadhesivos basados en sustancias de origen natural incluyen por ejemplo ácido hialurónico, también conocido como hialuronano. El ácido hialurónico es un mucopolisacárido de origen natural que consiste de residuos de ácido D-glucurónico y N-acetil-D-glucosamina . El ácido hialurónico es encontrado en la matriz tisular extracelular de los vertebrados, incluyendo en tejidos conectivos, así como en el fluido sinovial y en el humor vitreo y acuoso del ojo. Los derivados esterificados del ácido hialurónico han sido utilizados para producir microesferas para el uso en la distribución que son biocompatibles y biodegradables (ver por ejemplo, Cortivo et al., Biomaterials (1991) 12:727-730; Publicación Europea No. 517,565; Publicación Internacional No. WO 96/29998; Ilium et al., J. Controlled Reí. (1994) 29:133-141). Las composiciones ejemplares que contienen ácido hialurónico de la presente invención comprenden un polímero de éster de ácido hialurónico en una cantidad de aproximadamente 0.1% a aproximadamente 40% (p/p) de un anticuerpo o fragmento de enlace a IL-lß al polímero de ácido hialurónico. Las matrices poliméricas biodegradables y no biodegradables pueden ser utilizadas para distribuir composiciones de la presente invención, y tales matrices poliméricas pueden comprender polímeros naturales o sintéticos. Las matrices biodegradables son preferidas. El periodo de tiempo sobre el cual ocurre la liberación, está basado en la selección del polímero. Típicamente, la liberación en un periodo que va entre unas pocas horas y tres a doce meses es más deseable. Los polímeros sintéticos ejemplares que pueden ser utilizados para formar el sistema de distribución biodegradable incluyen: polímeros de ácido láctico y ácido glicólico, poliamidas, policarbonatos, polialquilenos, polialquilenglicoles, óxidos de polialquileno, tereftalatos de polialquileno, alcoholes polivinílicos, éteres de polivinilo, esteres de polivinilo, haluros de poli-vinilo, polivinilpirrolidona, poliglicólidos, polisiloxanos, polianhídridos, poliuretanos y copolímeros de los mismos, poli (ácido bútico) , poli (ácido valérico), alquilcelulosa, hidroxialquilcelulosas, éteres de celulosa, esteres de celulosa, nitrocelulosas, polímeros de esteres acrílicos y metacrílicos, metilcelulosa, etilcelulosa, hidroxipropilcelulosa, hidroxi-propilmetilcelulosa, hidroxibutilmetilcelulosa, acetato de celulosa, propionato de celulosa, butirato de acetato de celulosa, ftalato de acetato de celulosa, carboxiletilcelulosa, triacetato de celulosa, sal sódica de sulfato de celulosa, poli (metacrilato de metilo), poli (metacrilato de etilo), poli (metacrilato de butilo), poli (metacrilato de isobutilo), poli (metacrilato de hexilo), poli (metacrilato de isodecilo), poli (metacrilato de laurilo), poli (metacrilato de fenilo), poli (acrilato de metilo), poli (acrilato de isopropilo), poli (acrilato de isobutilo), poli (acrilato de octadecilo), polietileno, polipropileno, poli (etilenglicol ) , poli (óxido de etileno), poli (tereftalato de etileno), poli (alcoholes vinílicos), acetato de polivinilo, cloruro de polivinilo, poliestireno y polivinilpirrolidona. Los polímeros naturales ejemplares incluyen alginato y otros polisacáridos que incluyen dextrano y celulosa, colágeno, derivados químicos de los mismos (sustituciones, adiciones de grupos químicos, por ejemplo, alquilo, alquileno, hidroxilaciones, oxidaciones, y otras modificaciones rutinariamente realizadas por aquellos expertos en la materia) , albúmina y otras proteínas hidrofílicas, zeína y otra prolaminas y proteínas hidrofóbicas, copolímeros y mezclas de los mismos. En general, estos materiales se degradan ya sea mediante hidrólisis enzimática o exposición al agua in vivo, mediante erosión superficial o a granel. El polímero opcionalmente está en la forma de un hidrogel (ver por ejemplo WO 04/009664, WO 05/087201, Sawhney, et al., Macromolecules, 1993, 26, 581-587), que puede absorber hasta aproximadamente 90% de su peso en agua y además, opcionalmente es reticulado con iones multi-valentes u otros polímeros. Los sistemas de distribución también incluyen sistemas no poliméricos que son lípidos incluyendo esteróles tales como colesterol, esteres de colesterol y ácidos grasos o grasas neutras tales como mono-, di- y tri-glicéridos; sistemas de liberación de hidrogel; sistemas silásticos; sistemas basados en péptidos; recubrimientos de cera; tabletas comprimidas utilizando aglutinantes y excipientes convencionales; implantes parcialmente fusionados, y similares. Los ejemplos específicos incluyen, pero no están limitados a: (a) sistemas erosiónales en los cuales el producto está contenido en una forma dentro de una matriz tales como aquellas descritas en las Patentes de los Estados Unidos Nos. 4,452,775, 4,675,189 y 5,736,152 y (b) sistemas difusionales en los cuales un producto se permea a una velocidad controlada desde un polímeros tal como se describe en las Patentes de los Estados Unidos Nos. 3,854,480, 5,133,974 y 5,407,686. Los liposomas que contienen el producto pueden ser preparados mediante los métodos conocidos, tales como por ejemplo (DE 3,218,121; Epstein et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 82: 3688-3692 (1985); Hwang et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 77: 4030-4034 (1980); EP 52,322; EP 36,676; EP 88,046; EP 143,949; EP 142,641; solicitud de patente Japonesa 83-118008; Patentes de los Estados Unidos Nos. 4,485,045 y 4,544,545; y EP 102,324). Alternativa o adicionalmente, las composiciones pueden ser administradas localmente vía la implantación dentro del área afectada de una membrana, esponja u otro material apropiado sobre el cual ha sido absorbido o encapsulado un anticuerpo que se enlaza a IL-lß, fragmento de anticuerpo, ácido nucleico o vector de la invención. Donde es utilizado un dispositivo de implantación, el dispositivo puede ser implantado dentro de cualquier tejido u órgano adecuado, y la distribución de un anticuerpo que se enlaza a IL-lß, fragmento de anticuerpo, ácido nucleico, o vector de la invención, puede ser directamente a través del dispositivo vía un bolo, o vía la administración continua, o vía un catéter utilizando infusión continua. Una composición farmacéutica que comprende un anticuerpo que se enlaza a IL-lß, fragmento de anticuerpo, ácido nucleico o vector de la invención, puede ser formulada para la inhalación, tal como por ejemplo como un polvo seco. Las soluciones de inhalación también pueden ser formuladas en un propelente licuado para la distribución de aerosol. En otra formulación más, las soluciones pueden ser nebulizadas. La composición farmacéutica adicional para la administración pulmonar incluye aquellas descritas por ejemplo, en la Solicitud del PCT Publicación WO 94/20069, que describe la distribución pulmonar de proteínas químicamente modificadas. Para la distribución pulmonar, el tamaño de partícula debe ser adecuado para la distribución al pulmón distal. Por ejemplo, el tamaño de partícula puede ser de 1 µm a 5 µm; no obstante, pueden ser utilizadas partículas más grandes, por ejemplo, si cada partícula es claramente porosa. Ciertas formulaciones que contienen anticuerpos que se enlazan a IL-lß, fragmentos de anticuerpo, ácidos nucleicos o vectores de la invención, pueden ser administradas oralmente. Las formulaciones administradas de esta manera pueden ser formuladas con o sin aquellos portadores rutinariamente utilizados en la composición de formas de dosis sólida tales como tabletas y cápsulas. Por ejemplo, una cápsula puede ser diseñada para liberar la porción activa de la formulación en el punto en el tracto gastrointestinal cuando la biodisponibilidad es elevada al máximo y la degradación pre-sistémica es reducida al mínimo. Pueden ser incluidos agentes adicionales para facilitar la absorción de un agente de enlace selectivo. Pueden ser también empleados diluyentes, saborizantes, ceras de bajo punto de fusión, aceites vegetales, lubricantes, agentes suspensores, agentes de desintegración de tabletas, y aglutinantes. Otra preparación puede involucrar una cantidad efectiva de un anticuerpo que se enlaza a IL-lß, fragmento de anticuerpo, ácido nucleico o vector de la invención, en una mezcla con excipientes no tóxicos que son adecuados para la fabricación de tabletas. Mediante la disolución de las tabletas en agua estéril, u otro vehículo apropiado, pueden ser preparadas las soluciones en forma de dosis unitaria. Los excipientes adecuados incluyen, pero no están limitados a, diluyentes inertes, tales como carbonato de calcio, carbonato de sodio o bicarbonato de sodio, lactosa o fosfato de calcio; o agentes de enlace tales como almidón, gelatina, o acacia; o agentes lubricantes tales como estearato de magnesio, ácido esteárico o talco. Las formulaciones farmacéuticas adecuadas y/o preferidas pueden ser determinadas en vista de la presente descripción y del conocimiento general de la tecnología de formulaciones, dependiendo de la vía de administración pretendida, el formato de distribución y la dosis deseada. No obstante de la manera de administración, una dosis efectiva puede ser calculada de acuerdo al peso corporal de un paciente, al área de la superficie corporal o al tamaño del órgano. El refinamiento adicional de los cálculos para determinar la dosis apropiada para el tratamiento que involucra cada una de las formulaciones descritas en la presente, son rutinariamente realizadas en la técnica y están dentro del ámbito de las tareas rutinariamente realizadas en la técnica. Las dosis apropiadas pueden ser averiguadas a través del uso de los datos de dosis-respuesta apropiados.

Las formulaciones adicionales serán evidentes a la luz de la presente descripción, incluyendo la formulación que involucra anticuerpos de enlace a IL-lß, fragmentos de anticuerpo, ácidos nucleicos o vectores de la invención, en combinación con uno o más de otros agentes terapéuticos. Por ejemplo, en algunas formulaciones, un anticuerpo que se enlaza a IL-lß, fragmento de anticuerpo, ácido nucleico o vector de la invención es formulado con un segundo inhibidor de una vía de señalización de IL-1. Los segundos inhibidores representativos incluyen, pero no están limitados a anticuerpos, fragmentos de anticuerpo, péptidos, polipéptidos, compuestos, ácidos nucleicos, vectores y composiciones farmacéuticas, tales como por ejemplo, aquellos descritos en las Patentes US 6899878, US 2003022869, US 20060094663, US 20050186615, US 20030166069, WO/04022718, WO/05084696, WO/05019259. Por ejemplo, una composición puede comprender un anticuerpo que se enlaza a IL-lß, fragmento de anticuerpo, ácido nucleico o vector de la invención en combinación con un anticuerpo que se enlaza a IL-lß, fragmento o un ácido nucleico o vector que codifica para tal anticuerpo o fragmento. Las composiciones farmacéuticas pueden comprender anticuerpos o fragmentos de enlace a IL-lß en combinación con otros agentes activos. Tales combinaciones son aquellas útiles para su propósito pretendido. Los agentes activos descritos más adelante son ilustrativos para los propósitos y no se pretende que sean limitantes. Las combinaciones que son parte de esta invención pueden ser los presentes anticuerpos y fragmentos, y al menos un agente adicional seleccionado de las listas siguientes. La combinación puede también incluir más de un agente adicional, por ejemplo dos o tres agentes adicionales si la combinación es tal que la composición formada puede realizar su función pretendida. Los agentes activos o combinaciones con los presentes anticuerpos o fragmentos incluyen un fármaco antiinflamatorio no esteroide (NSAID) tal como aspirina, ibuprofeno, y otros derivados de ácido propiónico (aminoprofeno, benoxaprofeno, ácido bucloxico, carprofeno, fenbufeno, fenoprofeno, fluprofeno, flurbiprofeno, indoprofeno, cetoprofeno, miroprofeno, naproxeno, oxaprozina, pirprofeno, pranoprofeno, suprofeno, ácido tiaprofénico, y tioxaprofeno) , derivados de ácido acético (indometacina, acemetacina, alclofenaco, clidanaco, diclofenaco, fenclofenaco, ácido fenclozico, fentiazac, fuirofenaco, ibufenaco, isoxepaco, oxpinaco, sulindaco, tiopinaco, tolmetina, zidometacina, y zomepiraco) , derivados del ácido fenámico (ácido flufenámico, ácido meclofenámico, ácido mefenámico, ácido niflúmico y ácido tolfenámico) , derivados del ácido bifenilcarboxílico (diflunisal y flufenisal) , oxicams (isoxicam, piroxicam, sudoxicam y tenoxican) , salicilatos (ácido acetilsalicílico, sulfasalazina) y las pirazolonas (apazona, bezpiperilona, feprazona, mofebutazona, oxifenbutazona, fenilbutazona) . Otras combinaciones incluyen inhibidores de la ciclooxigenasa-2 (COX-2) . Otros agentes activos para combinación incluyen esteroides tales como prednisolona, prednisona, metilprednisolona, betametasona, dexametasona, o hidrocortisona. Tal combinación puede ser especialmente ventajosa, ya que pueden ser reducidos uno o más efectos colaterales del esteroide o incluso éstos pueden ser eliminados mediante disminución de la dosis del esteroide requerida cuando se tratan pacientes en combinación con los presentes anticuerpos y fragmentos. Los ejemplos adicionales de agentes activos para las combinaciones con los agentes que se enlazan a IL-lß o los fragmentos para artritis reumatoide incluyen uno o varios fármacos anti-inflamatorios supresores de citocina (CSAIDs); anticuerpos para o antagonistas otras citocinas humanas o factores de crecimiento, por ejemplo TNF, LT, IL-lß, IL-2, IL-6, IL-7, IL-8, IL-15, IL-16, IL-18, EMAP-II, GM-CSF, FGF, o PDGF. Los anticuerpos y fragmentos de enlace a IL-lß pueden ser combinados con anticuerpos para las moléculas de superficie celular tales como CD2, CD3, CD4, CD8, CD25, CD28, CD30, CD40, CD45, CD69, CD80 (B7.1), CD86 (B7.2), CD90, o sus ligandos incluyendo CD 154 (gp39 o CD40L) . Las combinaciones preferidas de los agentes activos pueden interferir en diferentes puntos en la cascada inflamatoria autoinmune y subsiguiente; los ejemplos preferidos incluyen antagonistas de TNF como los anticuerpos para TNF quiméricos, humanizados o humanos, D2E7, cA2 (Remicade™) , CDP 571, fragmentos de anticuerpo anti-TNF (por ejemplo, CDP870) , y receptores de TNF p55 o p75 solubles, derivados de los mismos, (p75TNFRIgG (Enbrel™) o p55TNFRlgG (Lenercept), el receptor de IL-13 soluble (sIL-13), y también los inhibidores de la enzima de conversión de TNFa (TACE) ; similarmente, pueden ser efectivos los inhibidores de IL-1 (por ejemplo los inhibidores de la enzima de conversión de interleucina 1, tales como Vx740, o IL-IRA etc.) por la misma razón. Otras combinaciones preferidas incluyen interleucina 11, el ligando glucoproteico anti-P7s y p-selectina (PSGL) . Otra combinación más son otros jugadores clave de la respuesta autoinmune que pueden actuar paralelos a, dependientes de o en concierto con la función de IL-lß. Los agentes activos para la enfermedad de Crohn en la cual un anticuerpo o una porción de enlace al antígeno puede ser combinada, incluyen antagonistas de TNF, por ejemplo, anticuerpos anti-TNF D2E7, cA2 (Remicade™), CDP 571, fragmentos de anticuerpo anti-TNF (por ejemplo, CDP870) , construcciones de TNFR-Ig (p75TNFRIgG (Enbrel™) y p55TNFRIgG (Lenercept)), anti-P7s, ligando de glucoproteína de p-selectina (PSGL), receptor de IL-13 soluble (sIL-13), e inhibidores de PDE4. Los anticuerpos o fragmentos que se enlazan a IL-lß pueden ser combinados con corticosteroides, por ejemplo, budenosida y dexametasona. Los anticuerpos o fragmentos que se enlazan a IL-lß pueden ser también combinados con agentes tales como sulfasalazina, ácido 5-aminosalicílico y olsalazina, y agentes que interfieren con la síntesis o acción de las citocinas proinflamatorias tales como IL-1, por ejemplo, los inhibidores de la enzima de conversión de IL-1 (por ejemplo, Vx740) e IL-lra. Los anticuerpos o fragmentos que se enlazan a IL-lß pueden también ser utilizados con inhibidores de la señalización de célula T, por ejemplo, inhibidores de la tirosina-cinasa 6-mercaptopurinas . Los anticuerpos o fragmentos que se enlazan a IL-lß pueden ser combinados con IL-11. Otros ejemplos de agentes activos para la esclerosis múltiple con la cual los anticuerpos o fragmentos que se enlazan a IL-lß pueden ser combinados incluyen corticosteroides, prednisolona; metilprednisolona; azatioprina; ciclofosfamida; ciclosporina; metotrexato; 4-aminopiridina; tizanidina; interferón-ßla (Avonex; Biogen) ; interferón- ßlb (Betaseron; Chiron/Berlex) ; Copolímero 1 (Cop-1; Copaxone; Teva Pharmaceutical Industries, Inc.); oxígeno hiperbárico; inmunoglobulina intravenosa; clabribina; anticuerpos para o antagonistas de otras citocinas humanas o factores de crecimiento, por ejemplo, TNF, LT, IL-I, IL-2, IL- 6, IL-7, IL-8, IL-15, IL-16, IL-18, EMAP-II, GM-CSF, FGF, y PDGF. Los anticuerpos o fragmentos que se enlazan a IL-lß pueden ser combinados con anticuerpos para las moléculas de la superficie celular tales como CD2, CD3, CD4, CD8, CD25, CD28, CD30, CD40, CD45, CD69, CD80, CD86, CD90 o sus ligandos. Los anticuerpos o fragmentos que se enlazan a IL-lß pueden ser combinados con agentes, tales como metotrexato, ciclosporina, FK506, rapamicina, icofenolato-mofetil, leflunomida, NSAIDs, por ejemplo, ibuprofeno, corticosteroides tales como prednisolona, inhibidores de fosfodiesterasa, agonistas de adensosina, agentes antitrombóticos, inhibidores del complemento, agentes adrenérgicos, agentes que interfieren con la señalización por citocinas proinflamatorias tales como TNFa; o IL-1 (por ejemplo inhibidores de IRAK, NIK, IKK, p38 o cinasa MAP) , inhibidores de la enzima de conversión de IL-lß (por ejemplo, Vx740) , anti-P7s, ligando de la glucoproteína p-selectina (PSGL), inhibidores de TACE, inhibidores de la señalización de células T tales como inhibidores de cinasa, inhibidores de metaloproteinasa, sulfasalazina, azatioprina, 6-mercaptopurinas, inhibidores de la enzima de conversión de angiotensina, receptores de citocina solubles y derivados de los mismos (por ejemplo receptores de TNF p55 o p75 solubles, sIL-1 Rl, sIL-1 RII, sIL-6R, receptor de IL-13 soluble (sIL-13)) y citocinas antiinflamatorias (por ejemplo IL-4, IL-10, IL-13 y TGFß) .

Los ejemplos preferidos de agentes activos para la esclerosis múltiple en la cual pueden ser combinados los anticuerpos o fragmentos que se enlazan a IL-lß incluyen interferón ß, por ejemplo, INFßla e IFNßlb; copaxone, corticosteroides, inhibidores de IL-1, inhibidores de TNF y anticuerpos del ligando CD40 y CD80. Las composiciones farmacéuticas pueden incluir una cantidad terapéuticamente efectiva o una cantidad profilácticamente efectiva de los presentes anticuerpos o fragmentos que se enlazan a IL-lß. Una cantidad terapéuticamente efectiva se refiere a una cantidad efectiva, a dosis y por periodos de tiempo necesarios, para lograr el resultado terapéutico deseado. Una cantidad terapéuticamente efectiva del anticuerpo o porción del anticuerpo puede variar de acuerdo a factores tales como el estado de enfermedad, la edad, el sexo y el peso del individuo, y la habilidad del anticuerpo o de la porción de anticuerpo para promover una respuesta deseada en el individuo. Una cantidad terapéuticamente efectiva es también una en la cual cualesquiera efectos tóxicos o dañinos del anticuerpo o la porción del anticuerpo son superados por los efectos terapéuticamente benéficos. Una cantidad profilácticamente efectiva se refiere a una cantidad efectiva, a dosis y por periodos de tiempo necesarios, para lograr el resultado profiláctico deseado. Típicamente, ya que es utilizada una dosis profiláctica en sujetos antes de o en una etapa temprana de la enfermedad, la cantidad profilácticamente efectiva será menor que la cantidad terapéuticamente efectiva. Los anticuerpos que se enlazan a IL-lß, los fragmentos de anticuerpo, los ácidos nucleicos o los vectores de la invención, pueden ser empleados solos o en combinación con otros agentes activos, los cuales pueden estar en la misma composición farmacéutica o en una composición farmacéutica diferente. Por ejemplo, otros de tales agentes activos pueden comprender (i) antagonista de IL-1 (por ejemplo, IL-IRa recombinante o una trampa de IL) , (ii) un antagonista del receptor de interleucina 1, (iii) un receptor 1 de TNF soluble, (iv) un receptor 2 de TNF soluble (por ejemplo, etanercept), (iv) inhibidor de TNF (por ejemplo, un anticuerpo tal como D2E7), y/o (v) un agente de terapia para el cáncer. De este modo, por ejemplo, uno o más de estos componentes pueden ser incluidos en la composición de la invención con un anticuerpo que se enlaza a IL-lß, fragmento de anticuerpo, ácido nucleico o vector de la invención. Puede ser deseable en algunos casos utilizar una composición farmacéutica que comprende un anticuerpo que se enlaza a IL-lß, fragmento de anticuerpo, ácido nucleico o vector de la invención de una manera ex vivo . En este caso, las células, tejidos u órganos que han sido removidos de un paciente son expuestos a composiciones farmacéuticas que comprenden un anticuerpo que se enlaza a IL-lß, fragmento de anticuerpo, ácido nucleico, o vector de la invención, después de lo cual, las células, tejidos y/u órganos son subsecuentemente implantados nuevamente en el paciente. En ciertas situaciones, una composición que comprende un anticuerpo que se enlaza a IL-lß, fragmento de anticuerpo, ácido nucleico o vector puede ser distribuida mediante la implantación dentro de las células del paciente que han sido manipuladas por ingeniería genética, como se describe en la presente, para expresar y secretar los polipéptidos, agentes de enlace selectivos, fragmentos, variantes o derivados. Tales células pueden ser células animales o humanas, y pueden ser derivadas del tejido propio del paciente o de otra fuente, ya sea humana o no humana. Opcionalmente, las células pueden ser células inmortalizadas. No obstante, con el fin de disminuir la oportunidad de una respuesta inmunológica, se prefiere que las células sean encapsuladas para evitar la infiltración de los tejidos circunvecinos. Los materiales de encapsulamiento son típicamente alojamientos o membranas poliméricas semipermeables, biocompatibles, que permiten la liberación del o de los productos proteicos pero previenen la destrucción de las células por el sistema inmune del paciente o por otros factores dañinos provenientes de los tejidos circunvecinos. Los métodos utilizados para el encapsulamiento membranal de las células son conocidos, y la preparación de las células encapsuladas y su implantación en pacientes han sido descritos, por ejemplo, en las Patentes de los Estados Unidos Nos. 4,892,538, 5,011,472, y 5,106,627. Un sistema para encapsular células vivas es descrito en la Solicitud del PCT Publicación WO 91/10425. Las técnicas para formular una variedad de otros medios de distribución sostenida o controlada, tales como portadores liposomales, partículas bioerosionables, o esferas, son también conocidos por aquellos expertos en la materia, y son también descritos. Las células, con o sin encapsulamiento, pueden ser implantadas dentro de tejidos corporales u órganos adecuados del paciente. Una cantidad terapéutica o profilácticamente efectiva de una composición farmacéutica que comprende un anticuerpo que se enlaza a IL-lß, fragmento de anticuerpo, ácido nucleico o vector de la invención dependerá, por ejemplo, de los objetivos terapéuticos tales como la indicación para la cual está siendo utilizada la composición, la vía de administración, y la condición del sujeto. Las composiciones farmacéuticas son administradas en una cantidad terapéutica o profilácticamente efectiva para tratar una condición relacionada a IL-1. Una "cantidad terapéutica o profilácticamente efectiva" de un anticuerpo que se enlaza a IL-lß, fragmento de anticuerpo, ácido nucleico o vector de la invención es aquella cantidad que puede tratar o prevenir uno o más síntomas de una enfermedad relacionada a IL-1 en un sujeto . En consecuencia, puede ser deseable titular la dosis del anticuerpo que se enlaza a IL-lß, fragmento de anticuerpo, ácido nucleico o vector de la invención y modificar la vía de administración como se requiera, para obtener el efecto terapéutico óptimo. Los intervalos de dosis incluyen de aproximadamente 0.1 ng/kg hasta aproximadamente 100 mg/kg o más (en términos de la cantidad del agente activo por unidad de peso corporal del sujeto administrado con el agente activo) , dependiendo de los factores mencionados anteriormente. En otras modalidades, los intervalos de dosis de aproximadamente 0.1 µg/kg hasta aproximadamente 100 mg/kg, de aproximadamente 1 µg/kg hasta aproximadamente 100 mg/kg, de aproximadamente 5 µg/kg hasta aproximadamente 100 mg/kg, de aproximadamente 0.5 mg/kg hasta aproximadamente 100 mg/kg, o de aproximadamente 1 mg/kg hasta aproximadamente 100 mg/kg. Otras dosis pueden ser apropiadas. La composición puede ser administrada como una dosis simple o como dos o más dosis (las cuales pueden o no contener la misma cantidad de un anticuerpo que se enlaza a IL-lß, fragmento de anticuerpo, ácido nucleico o vector de la invención) sobre el tiempo, o como una infusión continua vía, por ejemplo un dispositivo de implantación o catéter.

Métodos de Uso Los anticuerpos, fragmentos de anticuerpo, ácidos nucleicos, vectores, células y composiciones de la invención (colectivamente "los compuestos y composiciones de la invención") pueden ser utilizados para cualquier propósito. Por ejemplo, los compuestos y composiciones de la invención pueden ser utilizados para buscar mecanismos relacionados a IL-1, así como las enfermedades y condiciones asociadas con mecanismos relacionados a IL-1. No obstante, los compuestos y composiciones de la invención son especialmente útiles para tratar a un sujeto (por ejemplo, un mamífero o un humano) en necesidad de tratamiento para una condición relacionada a IL-1, por ejemplo una enfermedad o trastorno autoinmune o inflamatorio. En consecuencia, la invención proporciona un método de tratamiento o prevención de una enfermedad en un mamífero, que comprende administrar una cantidad efectiva del anticuerpo o fragmento de anticuerpo, ácido nucleico o vector de la invención a un mamífero en necesidad del mismo, mediante el cual la enfermedad es tratada o prevenida en el mamífero. El término "cantidad efectiva" se refiere a la cantidad del anticuerpo o fragmento de anticuerpo, ácido nucleico o vector de la invención necesario para establecer un efecto profiláctico o terapéutico. Como se utiliza en la presente, el tratamiento de una enfermedad o condición es definido como la reducción o eliminación temporal o permanente de los síntomas o progresión de una enfermedad o condición. Similarmente, la prevención de una enfermedad o condición significa inhibir, retardar o prevenir temporal o permanentemente el inicio de una enfermedad o condición (o los síntomas de una enfermedad o condición) . El método de la invención puede ser utilizado para tratar o prevenir cualquier enfermedad o condición relacionada a IL-1. Por ejemplo, los presentes anticuerpos y fragmentos son contemplados para el uso en la profilaxis y tratamiento de enfermedades o condiciones médicas mediadas por IL-1, por ejemplo, condiciones inflamatorias, alergias y condiciones alérgicas, cánceres, reacciones de hipersensibilidad, enfermedades autoinmunes, infecciones severas, y rechazo de transplante de órganos o tejidos. Las condiciones relacionadas a IL-1 incluyen artritis reumatoide (RA) , osteoartritis, enfermedad de Crohn, colitis ulcerativa (UC) , choque séptico, enfermedad pulmonar obstructiva crónica (COPD), asma, enfermedad de injerto versus hospedero, ateroesclerosis, leucemia de células T del adulto, mieloma múltiple, esclerosis múltiple, apoplejía, enfermedad de Alzheimer. Los presentes anticuerpos y fragmentos pueden ser también utilizados para tratar o prevenir el Trastorno Inflamatorio de Sistemas Múltiples de Inicio Neonatal (NOMID/CINCA) , artritis idiopática juvenil de inicio sistémico, enfermedad de Still, CAPS o síndrome de Muckle- Wells. En general, una enfermedad o condición puede ser considerada una enfermedad o condición relacionada a IL-lß si ésta está asociada con niveles elevados de IL-lß en los fluidos o tejidos corporales, o si las células o tejidos tomados del cuerpo producen niveles elevados de la IL-lß en cultivo . Por ejemplo, los presentes métodos pueden ser utilizados para tratar o prevenir el Trastorno Inflamatorio de Sistemas Múltiples de Inicio Neonatal (NOMID/CINCA) , la artritis idiopática juvenil de inicio sistémico, el Síndrome Periódico Asociado a CIAS1 (CAPS), enfermedad de Stills, o síndrome de Muckle-Wells . Como otro ejemplo más, los presentes métodos pueden ser utilizados para tratar o prevenir artritis reumatoide, osteoartritis, enfermedad de Crohn, colitis ulcerativa, choque séptico, enfermedad pulmonar obstructiva crónica, asma, enfermedad de injerto versus hospedero, ateroesclerosis, leucemia de células T del adulto, mieloma múltiple, esclerosis múltiple, apoplejía o enfermedad de Alzheimer. Como otro ejemplo más, los presentes métodos pueden ser utilizados para tratar o prevenir la artritis idiopática juvenil de inicio sistémico, artritis reumatoide, osteoartritis, ateroesclerosis o miastenia gravis. Otros ejemplos de condiciones relacionadas a IL-lß son pancreatitis aguda; ALS; caquexia/anorexia, incluyendo caquexia inducida por el SIDA; asma y otras enfermedades inflamatorias; vasculitis autoinmune; Síndromes Periódicos Asociados a CIAS1 (CAPS); síndrome de fatiga crónica; enfermedad asociada a Clostridium, incluyendo diarrea asociada a Clostridium; condiciones e indicaciones coronarias, incluyendo insuficiencia cardiaca congestiva, restenosis coronaria, infarto al miocardio, disfunción miocardiaca (por ejemplo, relacionada a la sepsis), e injerto de derivación de arteria coronaria; cánceres, tales como mieloma múltiple y mielogénico (por ejemplo, AML y CML) y otras leucemias, así como metástasis tumoral, diabetes (por ejemplo, diabetes dependiente de insulina); endometriosis; Síndrome Autoinflamatorio por Resfriado familiar (FCAS); fiebre mediterránea familiar (FMF); fiebre; fibromialgia; glomerulonefritis; enfermedad inj erto/versus hospedero/rechazo de trasplante; choque hemorrágico; hiperalgesia; enfermedad inflamatoria del intestino; condiciones inflamatorias de una articulación, incluyendo artritis psoriática (así como osteoartritis y artritis reumatoide) ; enfermedad ocular inflamatoria, como puede estar asociada con, por ejemplo, trasplante de córnea; isquemia; incluyendo isquemia cerebral (por ejemplo, daño cerebral como resultado de trauma, epilepsia, hemorragia o apoplejía, cada uno de los cuales puede conducir a neurodegeneración) ; enfermedad de Kawasaki; deterioro del aprendizaje; enfermedades pulmonares (por ejemplo, ARDS) ; miopatías (por ejemplo, metabolismo de proteínas musculares, especialmente en sepsis) ; neurotoxicidad (por ejemplo, inducida por HIV) ; osteoporosis; dolor, incluyendo dolor relacionado al cáncer; enfermedad de Parkinson; enfermedad periodontal; labor a pre-término; soriasis; daño por reperfusión; efectos colaterales de terapia por radiación; perturbaciones del sueño; enfermedad de la articulación mandibular temporal; síndrome de fiebre periódica asociada al receptor del factor de necrosis tumoral (TRAPS) ; uveitis; o una condición inflamatoria que resulta de torcedura, luxación, daño en cartílago, trauma, cirugía ortopédica, infección u otros procesos de enfermedad. Los presentes anticuerpos y fragmentos son también contemplados para el uso en el tratamiento de recipientes de trasplantes de corazón, pulmón, corazón-pulmón combinados, hígado, riñon, páncreas, piel o córnea, incluyendo rechazo de aloinjerto o rechazo de xenoinjerto, o para la prevención de la enfermedad injerto versus hospedero, tal como después del trasplante de médula ósea, o la arterioesclerosis asociada a trasplante. Los presentes anticuerpos o fragmentos son contemplados para el uso en el tratamiento o prevención de enfermedades autoinmunes o condiciones inflamatorias, en particular condiciones inflamatorias con una etiología que incluye un componente autoinmune tal como artritis (por ejemplo artritis reumatoide, artritis crónica progrediente y artritis y enfermedades reumáticas, incluyendo condiciones inflamatorias y enfermedades reumáticas que involucran pérdida del huesos, dolor inflamatorio, hipersensibilidad (incluyendo hipersensibilidad de las vías respiratorias e hipersensibilidad dérmica) o alergias. Las enfermedades autoinmunes específicas para las cuales pueden ser empleados los siguientes anticuerpos y fragmentos, incluyen trastornos hematológicos autoinmunes (incluyendo por ejemplo anemia hemolítica, anemia aplástica, anemia de células rojas puras y trombocitopenia idiopática) , lupus eritematoso sistémico, policondritis, esclerodermia, granulomatosis de Wegener, hepatitis activa crónica, miastenia gravis, psoriasis, síndrome de Steven-Johnson, esprue idiopática, enfermedad inflamatoria del intestino autoinume (incluyendo por ejemplo colitis ulcerativa, enfermedad de Crohn y Síndrome del Intestino Irritable) , enfermedad de Graves endocrina, sarcoidosis, esclerosis múltiple, cirrosis biliar primaria, diabetes juvenil (diabetes mellitus tipo I) , uveitis (anterior y posterior) , queratoconjuntivitis sicca y queratoconjuntivitis vernal, fibrosis pulmonar intersticial, artritis psoriática o glomerulonefritis (con y sin síndrome nefrótico, por ejemplo incluyendo síndrome nefrótico idiopático o nefropatía de cambio mínimo) .

Los presentes anticuerpos y fragmentos son también contemplados para el uso en el tratamiento, prevención o mejoramiento de asma, bronquitis, neumoconiosis, enfisema pulmonar, y otras enfermedades obstructiva o inflamatorias de las vías respiratorias. Los anticuerpos o fragmentos para tratar reacciones inflamatorias agudas e hiperagudas indeseables que son mediadas por IL-1 o involucran la producción, especialmente o la promoción de la liberación de TNF por IL-1, por ejemplo infecciones agudas, por ejemplo choque séptico (por ejemplo, choque endotóxico y síndrome de insuficiencia respiratoria del adulto), meningitis, neumonía; y quemaduras severas; y para el tratamiento de caquexia o síndrome de desgaste o debilitamiento asociado con liberación mórbida de TNF, consecuente a la infección, cáncer o disfunción de órgano, especialmente caquexia relacionada al SIDA, por ejemplo asociada con o consecuencial a la infección por el HIV. Los presentes anticuerpos y fragmentos son también contemplados para el uso en el tratamiento de enfermedades de metabolismo de los huesos que incluyen osteoartritis, osteoporosis y otras artritis inflamatorias, y pérdida de hueso en general, incluyendo pérdida de hueso relacionada a la edad, y en particular enfermedad periodontal. Los presentes anticuerpos y fragmentos son también contemplados para el uso en el tratamiento o prevención de Síndromes Periódicos Asociados a CIAS1 (CAPS) , incluyendo cada Trastorno Inflamatorio de Sistemas Múltiples de Inicio Neonatal (NOMID) , Síndrome de Muckle-Wells (MWS) , y Síndrome Autoinflamatorio de Resfriado Familiar (FCAS). Mutaciones en el gen CIAS1 son ahora reconocidas como posibles responsables para como posibles responsables para tres síndromes genéticos raros: Trastorno Inflamatorio de Sistemas Múltiples de Inicio Neonatal (NOMID) , Síndrome de Muckle-Wells (MWS) , y Síndrome Autoinflamatorio de Resfriado Familiar (FCAS). (Hoffman et al. 2001 Naure 29:301-305; Feldmann et al. 2002 Am J Hum Genet 71:198-203; Aksentij evich et al. 2002 Arthritis Rheum 46:3340-3348). En resumen, estas condiciones son conocidas como "CAPS". CIAS1 codifica para una proteína llamada NALP3 que es un componente del "inflamasoma" , un complejo de enzimas subcelulares que regula la actividad de la caspasa 1. La caspasa 1 es la enzima que rompe la pro-forma inactiva de la citosina proinflamatoria, IL-1, en su forma biológicamente activa (Agostini et al. 2004 supra). Las mutaciones en CIAS1 conducen a producción incrementada de IL-1. El anticuerpo o fragmento de anticuerpo, ácido nucleico o vector de la invención es típicamente administrado al mamífero o humano como una composición farmacéutica que comprende un anticuerpo o fragmento de anticuerpo, ácido nucleico o vector de la invención y un portador farmacéuticamente aceptable. Las composiciones farmacéuticas adecuadas para el uso en conjunto con el método de tratamiento o prevención de una enfermedad, son como se describieron previamente en la presente. El anticuerpo o fragmento de anticuerpo, ácido nucleico o vector de la invención puede ser administrado al mamífero como el único agente activo, o en conjunto con uno o más de otros agentes que perturban la señalización del receptor de IL-1. Un agente que perturba la señalización del receptor de IL-1 puede ser cualquier compuesto o composición que inhiba una interacción entre IL-lß y el receptor de IL-1. Por ejemplo, los agentes que perturban la señalización del receptor de IL-1 incluyen anticuerpos que se enlazan a IL-lß o al recetor de IL-1, IL-IRa recombinante (por ejemplo, de Amgen Inc., Thousand Oaks, CA) , y los péptidos de "trampa" del receptor de IL-1 (por ejemplo, de Regeneron Inc., Tarrytown, NY) . Cuando dos o más agentes que perturban la señalización del receptor de IL-1 son utilizados, éstos pueden ser administrados conjuntamente (por ejemplo, en una composición farmacéutica simple) , o pueden ser cada uno administrado separadamente (por ejemplo, en composiciones farmacéuticas separadas) . El anticuerpo, fragmento, ácido nucleico o vector de la invención puede ser administrado a un mamífero en combinación o en conjunto con uno o más de otros agentes activos para tratar o prevenir condiciones o enfermedades mediadas por IL-1 como se describen anteriormente.

Usos de Diagnóstico Además de los usos terapéuticos, los presentes anticuerpos y fragmentos pueden ser utilizados en métodos de diagnóstico para detectar IL-lß (por ejemplo, en una muestra biológica, tal como suero o plasma) , utilizando un inmunoensayo convencional, tal como un ensayo inmunosorbente ligado a enzima (ELISA) , un radioinmunoensayo (RÍA) o inmunohistoquímica tisular. Un método para detectar IL-lß en una muestra biológica puede comprender los pasos de poner en contacto una muestra biológica con uno o más de los presentes anticuerpos o fragmentos, y detectar ya sea el anticuerpo o el fragmento enlazado a IL-lß o el fragmento o anticuerpo no enlazado, para detectar con esto IL-lß en la muestra biológica. El anticuerpo o fragmento puede ser directa o indirectamente marcado con una sustancia detectable para facilitar la detección del anticuerpo enlazado o no enlazado. Las sustancias detectables adecuadas incluyen diversas enzimas, grupos prostéticos, materiales fluorescentes, materiales luminiscentes, y materiales radioactivos. Los ejemplos de enzimas adecuadas incluyen peroxidasa de rábano, fosfatasa alcalina, ß-galactosidasa, o acetilcolinesterasa; ejemplos de complejos de grupos prostéticos adecuados incluyen estreptavidina/biotina y avidina/biotina; los ejemplos de materiales fluorescentes adecuados incluyen umbeliferona, fluoresceína, isotiocianato de fluoresceína, rodamina, diclorotriazinilamino-fluoresceína, cloruro de dansilo o ficoeritrina; un ejemplo de un material luminiscente incluye luminol; y los ejemplos de materiales radioactivos adecuados incluyen 1251, 1311, 35S o 3H . En vez de marcar el anticuerpo, la IL-lß puede ser evaluada en fluidos biológicos mediante un inmunoensayo de competencia utilizando estándares de IL-lß marcados con una sustancia detectable y un anticuerpo anti-IL-lß no marcado. En este ensayo, la muestra biológica, los estándares de rIL-lß marcados y el anticuerpo anti-IL-lß son combinados y la cantidad de estándar de IL-lß marcado enlazado al anticuerpo no marcado, es determinada. La cantidad de IL-lß en la muestra biológica es inversamente proporcional a la cantidad de estándar de IL-lß marcado, enlazado al anticuerpo anti-IL-lß.

EJEMPLOS Los siguientes ejemplos ilustran adicionalmente la invención pero, por supuesto, no deben ser considerados de ningún modo como limitantes de su alcance. En los siguientes Ejemplos, se hace referencia a diversos anticuerpos de la presente invención, incluyendo los anticuerpos designados ABl, AB5, y AB7. Como se mencionó anteriormente, ABl comprende una región variable de cadena pesada que comprende la secuencia de aminoácidos de la SEQ ID NO: 4 y una región variable de cadena ligera que comprende la secuencia de aminoácidos de la SEQ ID NO: 9. AB5 comprende una región variable de cadena pesada que comprende la secuencia de aminoácidos de la SEQ ID NO: 8 y una región variable de cadena ligera que comprende la secuencia de aminoácidos de la SEQ ID NO: 9. AB7 comprende una región variable de cadena pesada que comprende la secuencia de aminoácidos de la SEQ ID NO: 15 y una región variable de cadena ligera que comprende la secuencia de aminoácidos de la SEQ ID NO: 11. Para diversas comparaciones en los siguientes Ejemplos, se hace referencia a un anticuerpo designado AB-control, un anticuerpo comercialmente disponible con afinidad relativamente alta para IL-lß. AB-control es un anticuerpo murino que se cree tiene una cadena pesada que comprende la secuencia de la SEQ ID NO: 40 y una cadena ligera que comprende la secuencia de la SEQ ID NO: 41. Estas secuencias murinas son descritas en la Solicitud de Patente de los Estados Unidos Publicación No. 2003/0026806, en las Figuras 6A y 6B. En varios de los Ejemplos siguientes, se muestra que AB5 y AB7 tienen afinidad inesperadamente más alta para IL-lß humana AB-control.

EJEMPLO 1 Este ej emplo ilustra las afinidades de enlace de ciertos anticuerpos de la invención para IL-l ß . Los anticuerpos designados ABl y AB5 fueron evaluados para las propiedades de enlace a IL-l ß utili zando un dispositivo KINEXAMR ( de Sapidyne Instruments Inc . , Boise , ID) . Las secuencias de aminoácidos de las regiones variables de cadena pesada y ligera de los anticuerpos ABl y AB5, son proporcionadas en las Figuras 2 y 3. Un anticuerpo comercialmente disponible con afinidad relativamente alta para IL-lß (aquí AB-control) fue evaluado para comparación. Los resultados del ensayo de enlace de IL-lß son resumidos en la Tabla 1. Los valores de KD representan las constantes de disociación de enlace para los complejos respectivos ant i cuerpo- I L-l ß . KD fue calculado como la proporción de la "proporción apagada" (proporción de disociación para el complejo anticuerpo-IL-lß) a la "proporción encendida" (proporción de asociación para el complejo anticuerpo-IL-lß) . Una proporción KD menor es indicadora de mayor afinidad del anticuerpo.

Tabla 1 : Resultados de Enlace de IL-l ß Los resultados de estos experimentos muestran que ABl y AB5 se enlazan a IL-lß con alta afinidad. Las afinidades para IL-lß de los anticuerpos de la invención son comparables a, o mejores que la afinidad de enlace de AB-control para IL-lß.

EJEMPLO 2 Este ejemplo ilustra la inhibición in vi tro de IL-lß utilizando anticuerpos de la invención. Las potencias inhibitorias de IL-lß de los anticuerpos ABl y AB5 (ver Ejemplo 1) fueron evaluadas utilizando un bioensayo que mide la liberación de IL-6 estimulada por IL-lß a partir de fibroblastos humanos. Como en el Ejemplo 1, el AB-control fue utilizado como una muestra comparativa. Los detalles del ensayo son descritos en Dinarello et al., Current Protocols in Immunology, Ch. 6.2.1-6.2.7, John Wiley and Sons Inc., Hoboken, NJ, 2000. En resumen, los fibroblastos humanos MRC5 provenientes de la American Type Culture Collection (ATCC) Manassas, Va (ATCC # CCL-171) fueron desarrollados hasta la confluencia en placas de pozos múltiples. Las células fueron tratadas con dosis tituladas del anticuerpo AB5. Las células fueron subsecuentemente puestas en contacto con (i) 100 pg/ml de IL-lß o (ii) 100 pg/ml de IL-lß y el anticuerpo ABl o AB5 (del Ejemplo 1) . Las células control negativo no fueron estimuladas con IL-lß. Las cantidades de IL-6 liberadas en cada grupo de células tratadas fueron medidas utilizando un equipo de ELISA IL-6 de BD Pharmingen (Franklin Lakes, NJ) de acuerdo a las instrucciones del fabricante. Los resultados de ELISA son descritos en la Figura 5 y resumidos en la Tabla 2. La IC50 es la concentración del anticuerpo requerida para inhibir 50% de la IL-6 liberada por la estimulación con IL-lß.

Tabla 2 : Resultados de ELISA Estos resultados demuestran que la potencia in vi tro de los anticuerpos de la invención para inhibir IL-lß. Además, la inhibición de la liberación de citocina estimulada por IL-lß en MRC 5, ha mostrado que correlaciona con la habilidad del agente para inhibir la actividad mediada por IL-1 in vivo. De este modo, estos resultados indican que los anticuerpos de la invención tendrán eficacia inhibitoria de IL-lß in vivo.

EJEMPLO 3 Este ej emplo ilustra la inhibición in vivo de IL-l ß utilizando anticuerpos de la invención . Para confirmar la ef icacia in vivo de AB5 , se probó en ratones su habilidad para bloquear la actividad biológica de IL-lß humana. Los detalles del ensayo son descritos en Economides et al., Nature Med., 9: 47-52 (2003). En resumen, ratones C57/B16 macho (Jackson Laboratory Bar Harbor, Maine) fueron inyectados intraperitonealmente con dosis tituladas de AB5 (Ejemplo 1), AB-control (Ejemplo 1), o IgG (Jackson ImmunoResearch Laboratories, West Grove, PA) . Veinticuatro horas después de la inyección del anticuerpo, los ratones fueron inyectados subcutáneamente con la IL-lß humana recombinante (rhIL-lß) (de PeproTech Inc., Rocky Hill, NJ) a una dosis de 1 µg/kg. Dos horas después de la inyección de rIL-lß (tiempo de respuesta pico de IL-6) , los ratones fueron sacrificados, y la sangre fue recolectada y procesada para el suero. Los niveles de IL-6 en suero fueron evaluados mediante ELISA (BD Pharmingen, Franklin Lakes, NJ) de acuerdo al protocolo del fabricante. La inhibición porcentual fue calculada a partir de la proporción de IL-6 detectada en el suero de animales experimentales para IL-6 detectada en el control (multiplicado por 100). Los resultados son descritos en la Figura 6. La habilidad para inhibir la actividad in vivo de IL-lß es evaluada como una función de los niveles de IL-6 estimulados con IL-lß, en suero. Como se ilustra por la Figura 6, el anticuerpo AB5 fue tan efectivo, si no es que más efectivo, que AB-control para inhibir la actividad in vivo de IL-lß humana. 3 µg de AB5 fueron tan efectivos como 10 µg de AB-control en este ensayo. De este modo, los resultados indican que los anticuerpos probados son útiles para la inhibición de la actividad de IL-lß in vivo . Estos resultados también muestran que una inyección simple de AB5 puede bloquear la acción sistémica de la estimulación de IL-lß en un periodo de tiempo prolongado .

EJEMPLO 4 El siguiente ejemplo ilustra la preparación de un anticuerpo de acuerdo con la invención. Un número de secuencias de anticuerpo manipuladas por ingeniería humana fueron generadas utilizando la tecnología HUMAN ENGINEERINGMR como se describe en Studnicka et al., Protein Engineering, 7: 805-814 (1994), y las Patentes de los Estados Unidos Nos. 5,766,886, 5,770,196, 5,821,123, y 5,869,619, la Solicitud del PCT Publicación WO 93/11794. Las secuencias de anticuerpo manipuladas por ingeniería humana incluyen AB5.1, AB5.2, AB5.3 y AB5.4. Como se muestra en las Figuras 3 y 4, cada una de estas secuencias comprenden dos posiciones variables en la región CDR-3H indicadas por Xi y X2. De este modo, en ciertos ejemplos de cada uno de estos anticuerpos manipulados por ingeniería humana, Xi y X2 de la CDR3 corresponden a alanina y arginina, valina y arginina, fenilalanina y arginina, lisina y lisina, o asparagina y arginina, respectivamente.

EJEMPLO 5 Los anticuerpos designados AB5 y AB7 (una secuencia de anticuerpo manipulada por ingeniería humana) fueron evaluados para las propiedades de enlace a IL-lß utilizando un ensayo de exclusión cinética realizado sobre un dispositivo KINEXAMR de una manera similar a aquella descrita en el Ejemplo 1. La descripción adicional respecto a los dispositivo KINEXAMR y la operación para la caracterización del anticuerpo, es disponible del fabricante, y puede ser encontrada en la literatura publicada, por ejemplo, la Patente de los Estados Unidos No. 6,664,114 (Sapidyne, Inc.); y Darling et ah, "Kinetic Exclusión Assay Technology: Characterization of Molecular Interactions" . ASSAY and Drug Development Technologies, 2004, 2, 647-657. El dispositivo KINEXAMR realiza un ensayo de exclusión cinética, y ajusta los datos a diversas curvas teóricas y de este modo determina la KD así como otras propiedades, tal como los intervalos de confianza de 95% para cada KD. El dispositivo KINEXAMR es en general más sensible que otros dispositivos (por ejemplo, un dispositivo BiaCore) para el análisis de las características de afinidad tales como las constantes de disociación y las proporciones de apagado.

Las secuencias de aminoácidos de las regiones variables de cadena pesada y ligera de AB5 y AB7 son proporcionadas en las Figuras 3 y 4A, respectivamente. Los resultados del ensayo de enlace de IL-lß son resumidos en la Tabla 3. Como en el Ejemplo 1, la KD fue calculada como la proporción de "proporción de apagado" a "proporción de encendido" y una proporción de KD menor es indicadora de más alta afinidad del anticuerpo.

Tabla 3 Los resultados de estos experimentos muestran que AB5 (consistente con los resultados observados en el Ejemplo 1) y AB7 se enlaza a IL-lß con afinidad inesperadamente alta, que es representada por los valores inesperadamente bajos para sus constantes de disociación. Las Figuras 7, 8 y 9 muestran las afinidades de enlace de los anticuerpos designados ABl, AB5 y AB7, respectivamente, determinados a partir de un experimento representativo cada uno utilizando el análisis KINEXA. La Figura 7 refleja los resultados descritos en la Tabla 1, mientras que las Figuras 8 y 9 reflejan los resultados descritos en la Tabla 3. Además de los valores descritos en la Tabla 3, los resultados del ensayo de KINEXA también indican intervalos de confianza de 95% bajos y altos (KD-baja y KD-alta) . Para AB5, la KD-baja fue 0.07 pM, y KD-alta fue 0.72 pM. Para AB7, KD-baja fue 0.11 pM y KD-alta fue 0.74 pM. Valores de KD-baja y KD alta similares fueron encontrados en el ensayo descrito en el Ejemplo 1. Para AB-control, la KD-baja fue de 1.62 pM, y KD-alta fue de 5.23 pM. Para ABl, KD-baja fue de 13.38 pM, y KD-alta fue de 24.84 pM. Para AB5, KD-baja fue de 0.11 pM y KD-alta fue de 0.56 pM. Los resultados del ensayo KINEXA indican que AB5 y AB7 tuvieron una constante de disociación inesperadamente más baja que el AB-control.

EJEMPLO 6 Este ejemplo ilustra la inhibición in vi tro de la liberación de IL-6 estimulada por IL-lß. La IC50 para inhibir la liberación de IL-6 estimulada por IL-lß a partir de fibroblastos humanos, fue evaluada para varios anticuerpos de la presente invención como sigue. La potencia inhibitoria de IL-lß de AB5 y AB7 fue evaluada de una manera similar a aquella descrita en el Ejemplo 2, utilizando un bioensayo que mide la liberación de IL-6 estimulada por IL-lß, a partir de fibroblastos humanos. Las Figuras 10-12 muestran las curvas de enlace para ensayos individuales sobre diversos anticuerpos. La Figura 10 muestra la inhibición de la liberación de IL-6 a partir de fibroblastos humanos por anticuerpos designados ABl, AB2 y AB3, y los resultados de estos tres ensayos individuales indicaron que ABl tuvo una IC50 DE 0.029 nM (29 pM) , AB2 tuvo una IC50 de 0.076 nM (76 pM) , y AB3 tuvo una IC50 de 0.214 nM (214 pM) . La Figura 11 muestra la inhibición de la liberación de IL-6 a partir de fibroblastos humanos por anticuerpos designados ABl y AB7 en un ensayo adicional. La Figura 12 muestra la inhibición de la liberación de IL-6 a partir de fibroblastos humanos por los anticuerpos AB5 y AB7, así como la Kineret® comercialmente disponible. Los resultados indicaron que AB5 y AB7 tuvieron sustancialmente mejor potencia con respecto a la inhibición de IL-lß que Kineret®, con base en las determinaciones de IC50 en los ensayos. Kineret® es una proteína hecha por el hombre que es similar a una proteína de origen natural llamada antagonista del receptor de interleucina 1 (IL-lra) encontrado en el cuerpo. Las Figuras 10-12 muestran los resultados de ensayo individuales para la potencia de los anticuerpos o Kineret® en términos de la inhibición porcentual de IL-6 sin el anticuerpo, y la Tabla 4 muestra la IC50 calculada a partir de esos ensayos individuales. La IC50 es la concentración del anticuerpo o Kineret® requerida para inhibir 50% de la IL-6 liberada por la estimulación con IL-lß.

Tabla 4 Además de los resultados de ensayo individuales reportados en las Tablas 2 y 4 y mostrados en las Figuras 6, 10, 11 y 12, otros ensayos individuales fueron conducidos para cada uno de ABl, AB7 y AB-control. Una IC50 media puede ser calculada a partir de los resultados de ensayo individuales. Una IC50 media para ABl de 66.7 pM fue calculada a partir de los resultados de ensayo individuales de 35 pM, 30 pM, 150 pM (este valor es también mostrado en la Tabla 2), y 52 pM. Una IC50 media para AB7 de 5.6 pM fue calculada a partir de los resultados de ensayo individuales de 7.3 pM, 4.2 pM, 4.5 pM, 4.4 pM (este valor es también mostrado en la Tabla 4), 6.0 pM, 5.0 pM, y 7.8 p . Una IC50 media para AB-control de 8.9 pM fue calculada a partir de los resultados de ensayo individuales de 5.0 pM, 17.0 pM (este valor es también mostrado en la Tabla 2), y 4.9 pM . Estos resultados demuestran la potencia in vi tro de ABl, AB5 y AB7 para inhibir IL-lß. Además, la inhibición de la liberación de citocina estimulada por IL-lß en fibroblastos humanos, ha mostrado que correlaciona con la habilidad del age ite inhibitorio para inhibir la actividad in vi vo mediada por IL-1. De este modo, estos resultados indican que los anticuerpos de la invención tendrán eficacia inhibitoria de IL-lß in vi vo .

EJEMPLO 7 Este ejemplo ilustra la inhibición in vivo de IL-lß utilizando los anticuerpos que se enlazan a IL-lß. La eficacia in vi vo de AB5, ABl y AB7 y su habilidad para bloquear la actividad biológica de IL-lß humana fueron probadas en ratones de una manera similar a aquella descrita en el Ejemplo 3. Los resultados de la prueba de AB5 y ABl son descritos en la Figura 13, y los resultados de la prueba de AB5 y AB7 son descritos en la Figura 1 . La habilidad para inhibir la actividad in vivo de IL-lß fue evaluada como una función de los niveles de IL-6 estimulados por IL-lß, en suero. Como se ilustra por las Figuras 13 y 14, los anticuerpos ABl, AB5 y AB7 fueron efectivos para inhibir la actividad in vivo de la IL-lß humana. Estos resultados indican que los anticuerpos probados son útiles para la inhibición de la actividad de IL-lß in vivo.

EJEMPLO 8 Este Ejemplo ilustra que al menos algunos anticuerpos que se enlazan a IL-lß de acuerdo a la presente invención son de reactividad cruzada con IL-lß proveniente de otros mamíferos diferentes de los humanos, y no son de reactividad cruzada con la IL-lß proveniente de otros mamíferos no humanos. El anticuerpo designado AB7 (un anticuerpo que se enlaza a IL-lß con alta afinidad) fue evaluado para el enlace a IL-lß proveniente de mamíferos no humanos, a saber el macaco rhesus, el mono cinomolgus, perro, cobayo y conejo. La sangre completa heparinizada fresca proveniente de macaco rhesus, mono cinomolgus, perro, cobayo y conejo fue obtenida de Charles River Labs. La sangre completa fue separada mediante centrifugación en gradiente de densidad de Ficoll y fueron aisladas las células mononucleares de sangre periférica (PBMC's). Para las PBMC de cada especie, fueron incubadas 2.5 x 105 células/ml en medio RPMI periférico con y sin 50 ng/ml de lipopolisacárido LPS (E. coli 0.55:B5), y los sobrenadantes se recolectaron a las 24 horas después de la estimulación. Se pretende que LPS estimule la producción de IL-lß por las PBMC's. 2 ml de cada sobrenadante fueron incubados por 3 horas con 2 µg de AB7 seguido por la adición de 50 µl de suspensión de esferas de proteína A-Sepharose para inmunoprecipitar el complejo AB7/IL-lß. IL-lß humana (Peprotech) fue introducida dentro de RPMI y corrida como controles de inmunoprecipitación/transferencia de Western.

Después de la centrifugación y lavado de las esferas de Proteína A-Sepharose, todas las muestras fueron cargadas sobre un gel de SDS-PAGE y corridas a 120V por 1 hora. Después de la transferencia a la membrana Immobilon-P a 22V toda la noche y bloqueo con 5% de leche sin grasa, se incubó AB7 a 2 µg/ml con la membrana por 2 horas. Un anticuerpo secundario IgG de cabra anti-humano, conjugado con la peroxidasa de rábano (HRP) fue agregado después de los pasos de lavado y la detección fue con una solución de tetrametil-bencidina de un solo paso (TMB) . Las Figuras 15 y 16 muestran las transferencias de Western obtenidas a partir de este procedimiento. Sobre el lado izquierdo de la mancha mostrada en la Figura 15 (bandas 1-3) están los controles en los cuales fueron agregadas al medio RPMI, cantidades variantes (5 ng, 10 ng, y 20 ng) de la IL-lß humana. Cerca del fondo de la mancha, pueden ser observadas bandas en cada uno de los carriles en una región correspondiente a un peso molecular de aproximadamente 17 kDa. Estas bandas son indicadoras del enlace de AB7 a la IL-lß humana. La banda intermedia (banda 4) es el medio RPMI . Sobre el lado derecho de la mancha mostrada en la Figura 15 (carriles 5-8), se muestran los resultados para las muestras del mono cinomolgus y el macaco rhesus. Los carriles 5 y 6 son las muestras de mono cinomolgus sin LPS y con 50 ng de LPS agregados al medio RPMI, respectivamente. Los carriles 7 y 8 son las muestras de macaco rhesus sin LPS y con 50 ng de LPS agregado al medio RPMI, respectivamente. Cerca del fondo de la mancha de Western, pueden ser observadas bandas en los Carriles 6 y 8 (las muestras a las cuales se agregó LPS) en una región correspondiente a un peso molecular de aproximadamente 17 kDa. Estas bandas en los Carriles 6 y 8 son indicadoras de reactividad cruzada de AB7 con la IL-lß de primate, a saber IL-lß proveniente del mono cinomolgus y macaco rhesus. La Figura 16 muestra las transferencias de Western para los controles y las muestras provenientes de PBMC's de perro, cobayos y conejos. Sobre el lado izquierdo de las transferencias o manchas mostradas en la Figura 16 (carriles 1-4) están los controles en los cuales fueron agregadas cantidades variantes (5 ng, 10 ng, 50 ng y 200 ng) de la IL-lß humana al medio RPMI. Cerca del fondo de la mancha, pueden ser observadas bandas en cada una de los carriles en una región correspondiente a un peso molecular de aproximadamente 17 kDa. Estas bandas son indicadoras del enlace de AB7 a la IL-lß humana. El carril 5 en la Figura 15 es el medio RPMI . Los carriles 6-8 son los resultados para las muestras de PBMC's de perro, sin LPS, 50 ng de LPS y 200 ng de LPS, respectivamente. Los carriles 9 y 10 son los resultados de las muestras de PBMC's de cobayo, sin LPS y 50 ng de LPS, respectivamente. Los carriles 11 y 12 son los resultados para las muestras de PBMC's de conejo, sin LPS y 50 ng, respectivamente. Cerca del fondo de la mancha o transferencia de Western, pueden ser observadas bandas en los carriles 7, 8 6 12 (las muestras de perro y conejo a las cuales se agregó LPS) en una región correspondiente a un peso molecular de aproximadamente 17 kDa. Estas bandas en los carriles 7, 8 y 12 son indicadoras de reactividad cruzada de AB7 con IL-lß de perro e IL-lß de conejo. La ausencia de una banda visible en el carril 10 (PBMC de cobayo con 50 ng de LPS agregado) indica que AB7 no fue de reactividad cruzada con IL-lß de cobayo. Estos resultados indican que AB7 es reactivo cruzadamente con la IL-lß proveniente de varios mamíferos no humanos, a saber macaco rhesus, mono cinomolgus, perro y conejo, pero no es de reactividad cruzada con IL-lß proveniente de al menos otro mamífero no humano, a saber cobayo.

EJEMPLO 9 Este Ejemplo ilustra adicionalmente que al menos algunos anticuerpos que se enlazan a IL-lß de acuerdo a la presente invención, son reactivos cruzadamente con IL-lß proveniente de otros mamíferos no humanos. El anticuerpo AB7 fue evaluado para el enlace a IL-lß proveniente de mamíferos no humanos, a saber ratón y rata. La IL-lß recombinante de humano, de ratón y de rata (Preprotech) fueron cargadas en condiciones reductoras y no reductoras sobre un gel de SDS-PAGE y corridas a 120V por 1 hora. Después de la transferencia a la membrana Immobilon-P a 22V toda la noche y bloqueo con 5% de leche sin grasa, se incubó AB7 a 2 µg/ml con la membrana por 2 horas. Un anticuerpo IgG conjugado HRP, de cabra anti-humano, secundario, fue agregado después de los pasos de lavado y la detección fue con una solución de TMB de un paso. La Figura 17 muestra la transferencia de Western obtenida por los siguientes procedimientos. Los carriles 1 y 2 son para IL-lß humana no reducida y reducida, respectivamente. Los carriles 3 y 4 son para la IL-lß de ratón no reducida y reducida, respectivamente. Los carriles 5 y 6 son para la IL-lß de rata no reducida y reducida, respectivamente. En el fondo de la mancha, pueden ser observadas bandas en cada uno de los carriles en una región correspondiente a un peso molecular de aproximadamente 17 kDa. Estas bandas son indicadoras de la presencia de IL-lß, que a su vez es indicadora del enlace de AB7 a la IL-lß humana, IL-lß de ratón e IL-lß de rata. Estos resultados indican que AB7 es reactivo cruzadamente con IL-lß de roedor.

EJEMPLO 10 Este Ejemplo ilustra adicionalmente que al menos algunos anticuerpos que se enlazan a IL-lß de acuerdo a la presente invención son inhibidores de IL-lß proveniente de humanos, y al menos algunos mamíferos no humanos. El anticuerpo AB7 fue evaluado para la inhibición de la proliferación de las células DIO estimuladas por IL-lß de humano, de macaco rhesus, de ratón y de rata. Las células D10.G4.1 (DIO) son células T cooperadoras murinas con especificidad para el antígeno con albúmina de clara de huevo. Esta linea celular fue derivada del ratón AKR/J (haplotipo H-2k MHC) y requiere IL-1 y activación del receptor de antígeno para el crecimiento, proliferación y supervivencia. La línea celular DIO es altamente sensible a la IL-1 y puede responder a IL-1 de varias especies (incluyendo humano, mono, ratón y rata) que permite la prueba del potencial de neutralización de reactividad cruzada de un anticuerpo o fragmento que se enlaza a IL-lß, tal como AB7. La proliferación de DIO no es afectada por LPS o por citocinas derivadas de macrófagos tales como IL-6 y TNF-a. Como resultado, los ensayos de DIO pueden ser utilizados para evaluar la actividad específica de IL-1 a partir de fuentes endógenas (por ejemplo, macrófagos activados por LPS) . Las células DIO fueron activadas con Concanavalina A (Con A) y un nivel constante de fuente recombinante o nativa de IL-1 en presencia o ausencia de varias concentraciones de AB7. Las células fueron sembradas en placa a 2xl0 /pozo y estimuladas con 2.5 µg/ml de Con A y diferentes concentraciones de IL-lß. Las células fueron cultivadas por 72 horas y la proliferación fue medida mediante la adición del colorante de viabilidad redox Azul Alamar, durante las ultimas 8-14 horas del cultivo y evaluando la O.D.570-6oo- Para probar la potencia y la reactividad cruzada de especie de AB7, se realizó el bioensayo de DIO utilizando las siguientes concentraciones de IL-lß recombinante o nativa: 10 pg/ml de IL-lß humana recombinante; 10 pg/ml de IL-lß recombinante de rhesus; 10 pg/ml de IL-lß de ratón; y 100 pg/ml de IL-lß de rata. Para el ensayo de DIO que emplea IL-lß humana endógena, se utilizó una dilución 1:360 del sobrenadante proveniente de las PBMC's humanas activadas con LPS. Fueron probadas diferentes concentraciones de AB7 con cada IL-lß. Las mediciones de IC50 fueron determinadas utilizando Graphpad Prism. Se calcularon la media, la desviación estándar (SD) , y el error estándar (SEM) para la IC50 utilizando Microsoft Excel. Los resultados provenientes del ensayo DIO fueron resumidos en la Tabla 5, que incluye la IC50 media y la SEM (con base en 4 experimentos para la IL-lß humana recombinante y 3 experimentos para la IL-lß proveniente de otras fuentes).

AB7 fue altamente potente en neutralizar la IL-lß recombinante y la IL-lß endógenamente producida (nativa) . AB7 fue también altamente potente para neutralizar la IL-lß recombinante de macaco rhesus. AB7 también neutralizó la IL-lß recombinante de ratón con menor potencia, teniendo una IC50 que fue 1000 más alta en comparación a la humana. AB7 no tuvo actividad significativa contra IL-lß de rata en este ensayo.

Tabla 5: Resultados de ELISA Estos resultados indican que el AB7 es un anticuerpo neutralizador altamente potente contra IL-lß humana, con potencia similar contra las formas recombinante y nativa de la citocina. La actividad contra la IL-lß de primate no humano de macaco rhesus, fue similar a aquella contra la IL-lß humana. De este modo, al menos algunos anticuerpos y fragmentos de la presente invención abarcan anticuerpos y fragmentos que tienen sustancialmente la misma potencia contra la IL-lß human e IL-lß de primate y/o que tiene sustancialmente la misma potencia contra la IL-lß humana recombinante y la IL-lß humana endógena. Estos resultados también indican que AB7 también neutraliza IL-lß de ratón.

E. EMPLO 11 Este Ejemplo ilusira el mapeo del epitopo de IL-lß al cual se enlazan algunos anticuerpos de la presente invención (por ejemplo, el anticuerpo designado de AB7). El arreglo pectídico PepSpotMR (JPT Peptide Technologies, Berlin, Alemania) fue utilizado para identificar los residuos de aminoácido clave de IL-lß (epitopo) involucrados en el enlace de AB7. Una exploración de péptidos de doce aminoácidos, que abarcan la secuencia de aminoácidos completa de IL-lß, cada péptido que se traslapa por 11 aminoácidos al previo, fueron sintetizados directamente sobre una membrana. La membrana que poseen los péptidos fue sondeada con AB7 a una concentración de 2 µg/ml, por 2 horas a temperatura ambiente. El enlace de AB7 a los péptidos enlazados a la membrana, fue detectado utilizando un anticuerpo de cabra anti-humano, conjugado a HRP, secundario, seguido por la quimioluminiscencia aumentada (ECL) . Las manchas de péptidos correspondientes a los residuos 83-105 de IL-lß calificaron positivas para el enlace a AB7. Este mapeo indica que AB7 se enlaza a un epitopo dentro de la secuencia correspondiente a los residuos 83-105 de la proteína IL-lß madura. La secuencia comprende los aminoácidos ESVDPKNYPKKKMEKRFVFNKIE, y AB7 es ejemplar de los anticuerpos que se enlazan a un epitopo dentro de esta secuencia. Se espera que los anticuerpos designados AB6, AB8, AB9 y otros, tales como los anticuerpos que tienen la cadena pesada de la SEQ ID NO: 29 y la cadena ligera de la SEQ ID NO: 27, también se enlacen a un epitopo contenido en esta secuencia .

EJEMPLO 12 Este ejemplo ilustra la inhibición in vi tro de IL-lß utilizando un anticuerpo de la invención en un ensayo de IL-8 basado en células. Sangre periférica heparinizada, fresca, fue recolectada de donadores saludables. 180 µl de sangre entera fueron sembrados en placa en una placa de 96 pozos e incubada con varias concentraciones de el anticuerpo AB7 y 100 pM de rhIL-lß. Para las muestras tratadas con Kineret®, Kineret® y rhIL-lß fueron combinados 1:1 antes de mezclarse con sangre. Las muestras fueron incubadas por 6 horas a 37 °C con 5% de C02. Las células sanguíneas enteras fueron luego lisadas con 50 µl de Tritón X-100 al 2.5%. La concentración de interleucina 8 (IL-8) en los lisados aclarados fue evaluada mediante ELISA (equipo de ELISA para IL-8 humana Quantikine, R&D Systems) de acuerdo a las instrucciones del fabricante. Las concentraciones de IL-8 en las muestras tratadas con AB7 y Kineret® fueron comparadas a una muestra control tratada con el control anti-KLH. Los resultados son descritos en la Figura 18 y resumidos en la Tabla 6. La IC50 es la concentración del anticuerpo requerida para inhibir 50% de la IL-8 liberada por la estimulación de IL-lß.

Tabla 6 Estos resultados demuestran la potencia in vi tro del AB7, como se mide por la inhibición de la liberación de IL-8 estimulada por IL-lß. Estos resultados muestran mayor potencia en comparación con Kineret® indican que los anticuerpos de la invención tendrán eficacia inhibitoria de IL-lß in vivo .

EJEMPLO 13 Este ejemplo ilustra que los anticuerpos de la invención tienen una afinidad sorprendentemente alta en comparación a un anticuerpo que tiene una secuencia similar. AB5 fue comparado al AB-control en términos de secuencia y afinidad de enlace. AB5 comprende la región variable de cadena pesada descrita en la SEQ ID NO: 8 y la región variable de cadena ligera descrita en la SEQ ID NO: 9. Se cree que AB-control comprende la región variable de cadena pesada descrita en la SEQ ID NO: 38 y la región variable de cadena ligera descrita en la SEQ ID NO: 39. Aquellas secuencias descritas en la Solicitud de Patente de los Estados Unidos Publicación No. 2003/0026806, en las Figuras 6A y 6B. AB5 y AB-control tienen las mismas regiones de determinación de la complementariedad en sus regiones variables de cadena pesada y ligera. Sus cadenas pesadas difieren por tres residuos de aminoácidos en la región estructural 3, localizadas en las posiciones 68, 74 y 86 en las SEQ ID NOs: 8 y 38. Sus respectivas cadenas ligeras difieren por un residuo de anteriormente mencionado en la región estructural 3, localizada en la posición 72 en las SEQ ID NOs: 9 y 39. A pesar de las similitudes en las secuencias de sus regiones variables de cadena pesada y ligera, incluyendo las mismas CDRs, AB5 y AB-control difieren significativamente inesperadamente en su afinidad de enlace. Como se discute en los Ejemplos 1 y 5 anteriores, se encontró que AB5 tiene una constante de disociación de menos de 0.3 pM (con una KD-baja de 0.11 pM, y una KD-alta de 0.56 pM) , y se encontró que AB-control tiene una constante de disociación de 3 pM (con una KD-baja de 1.62 pM, y una KD-alta de 5.23 pM) . Dadas las similitudes en la secuencia de aminoácidos, es sorprendente que AB5 tenga mayor afinidad por un orden de magnitud. AB7 fue generada utilizando la tecnología HUMAN ENGINEERINGMR, como se describe en el Ejemplo 4. Las regiones variables de cadena ligera y pesada de AB7 incluyen las posiciones de riesgo bajo y moderado en las secuencias de las regiones variables de cadena ligera y pesada de AB5. AB7 comprende la región variable de cadena pesada descrita en la SEQ ID NO: 15, y la región variable de cadena ligera descrita en la SEQ ID NO: 11. AB7 fue comparado al AB-control y AB5 en términos de la secuencia y afinidad de enlace. AB7 y AB-control tienen las mismas regiones de determinación de la complementariedad en sus regiones variables de cadena pesada y ligera. Sus cadenas pesadas difieren en dos de las posiciones en la región estructural 3 (posiciones 74 y 86 en las SEQ ID NOs: 15 y 38) donde AB5 difirió de AB-control. No obstante, en la posición 68 en la SEQ ID NO: 15, AB7 tiene el mismo aminoácido que AB-control. En la cadena ligera de AB7, la posición 62 en la SEQ ID NO: 11 difiere del AB-control y de AB5. AB7 incluye otras diversas diferencias en las regiones variables de cadena ligera y pesada, cuando se comparan a AB-control y AB5 en virtud del proceso de HUMAN ENGINEERINGMR. A pesar de la inclusión de cambios en posiciones de riesgo moderado, y particularmente en vista de los cambios en AB7 en comparación a AB5 en la posición 68 en la región variable de cadena pesada y en la posición 72 en la región variable de cadena ligera, AB7 y AB5 tienen constantes de disociación similares, y AB7 difiere significativamente e inesperadamente de AB-control con respecto a la afinidad de enlace. Como se discute en el Ejemplo 5 anterior, se encontró que AB7 tiene una constante de disociación de 0.3 pM (con una KD-baja de 0.11 pm, y una KD-alta de 0.74 pM) . Se encontró que AB5 tiene una constante de disociación de 0.24 pM (con una KD-baja de 0.07 pm, y una KD-alta de 0.72 pM) . Dados los cambios realizados en las posiciones de riesgo moderado, y las similitudes completas en la secuencia de aminoácidos, particularmente en las CDRs, es sorprendente que AB7 tenga afinidad similar a AB5 y mayor afinidad que AB-control por un orden de magnitud.

EJEMPLO 14 Este ejemplo muestra que al menos un anticuerpo de la presente invención se enlaza a un epitopo de IL-lß tal que el anticuerpo enlazado no previene sustancialmente que la IL-lß enlazada al anticuerpo se enlace al receptor tipo 1 de IL-lß. Este ejemplo emplea un instrumento de análisis cinético Biacore® para examinar si IL-lß enlazada a uno de los presentes anticuerpos (AB7) puede todavía enlazarse al receptor tipo 1 de IL-1. Para este ejemplo, AB7 fue inmovilizado sobre la superficie de un chip sensor de CM-5 en un instrumento Biacore como sigue. Utilizando HBS-EP (Biacore®, Inc.) como amortiguador de corrida, la temperatura fue ajustada a 25°C, la velocidad de flujo fue ajustada a 10 µ/minuto, y la trayectoria de flujo fue dirigida a la celda de flujo 2 únicamente. 135 µl de cada una de las soluciones de NHS y ECD (Biacore®, Inc.) fueron mezcladas, y se inyectaron inmediatamente 70 µl de la solución de NHS/ECD en la trayectoria de flujo. Luego se inyectaron 91 µl de una solución de AB7 (aproximadamente 20 µg/ml en amortiguador de acetato de sodio 10 mM (Biacore®, Inc.)), seguido por 70 µl de etanolamina 1 M (Biacore®, Inc.). Se inmovilizaron de este modo aproximadamente 5650 RU de AB7. Para preparar una superficie de referencia, la trayectoria de flujo fue cambiada a la celda de flujo 1 únicamente. Se mezclaron 135 µl de cada una de las soluciones NHS y ECD (Biacore®, Inc.), y 70 µl de la solución de NHS/ECD fueron inmediatamente inyectados en la trayectoria de flujo, seguido por 70 µl de etanolamina 1 M (Biacore®, Inc. ) . El instrumento Biacore® estuvo luego listo para el análisis respecto a si la IL-lß enlazada a AB7 podría todavía enlazarse al receptor tipo I de IL-1. Para este análisis, se utilizó el receptor tipo I de IL-1 soluble (IL-1 sRI) y el enlace de IL-1 sRI a un complejo de AB7/IL-lß fue probado como sigue. La IL-1 sRI (RnDSystems cat#269-lR-100/CF) y la IL-lß (Peprotech, cat#200-01B) fueron separadamente diluidas a 10 µg/ml en HBS-EP. La velocidad de flujo fue ajustada a 10 µl/minuto. La trayectoria de flujo para el instrumento Biacore® fue ajustada a las celdas de flujo 1 y 2, y la sustracción de referencia de la celda de flujo 2 de la celda de flujo 1 fue utilizada para determinar una diferencial de respuesta. La Figura 19 muestra la diferencial de respuesta medida a partir del instrumento Biacore® sobre el curso del análisis. La Figura 20 proporciona una ilustración de los pasos utilizados en el análisis, indicando las adiciones separadas a la celda de flujo de (A) IL-1 sRI, (B) IL-lß y (C) IL-1 sRI, en ese orden. A los 200 segundos, se inyectaron 20 µl de IL-1 sRI para verificar la ausencia del enlace directamente al AB7 inmovilizado (inyección de A en las Figuras 19 y 20) . Como se muestra en la Figura 19, IL-1 sRI no incrementó las unidades de respuesta, lo cual indica que IL-1 sRI no se enlazó directamente al AB7 inmovilizado. A los 600 segundos, aproximadamente 1000 RU de IL-lb fueron enlazados por AB7, formando un complejo AB7/IL-lß sobre la superficie del chip (inyección B en las Figuras 19 y 20). El incremento en las unidades de respuesta indica que la IL-lß se enlazó al AB7 inmovilizado. 20 µl de IL-1 sRI fueron enseguida inyectados a 1200 segundos para probar el enlace de IL-1 sRI al complejo de AB7 e IL-lß. Aproximadamente 1500 RU de IL-1 sRI se enlazaron al complejo AB7/IL-lß (inyección C en las Figuras 19 y 20). Este incremento en las unidades de respuesta indica que IL-1 sRI se enlazó al complejo IL-lß/AB7. Este Ejemplo indica que IL-1 sRI se enlaza a IL-lß pero no se enlaza al AB7, y que el AB7 se enlaza a un epitopo de IL-lß tal que el AB7 enlazado no previene sustancialmente que IL-lß se enlace a IL-1 sRI. Todas las referencias, incluyendo las publicaciones, solicitudes de patente, y patentes, citadas en la presente, son incorporadas por referencia en la presente al mismo grado como si cada referencia fuera individual y específicamente indicada para ser incorporada por referencia y se describiera en su totalidad aquí. El uso de los términos "un, uno, una", "el, la" y referentes similares en el contexto de la descripción de la invención (especialmente en el contexto de las siguientes reivindicaciones) deben considerarse que cubren el singular y el plural, a no ser que se indique de otro modo en la presente o sea claramente contradicho por el contexto. Los términos "que comprende", "que tiene", "que incluye" y "que contiene" deben ser considerados como términos de extremo abierto (por ejemplo, significando "que incluye, pero no limitado a") a no ser que se indique de otro modo. Donde quiera que se utilice un término de extremo abierto para describir una característica o elemento de la invención, se contempla específicamente que un término de extremo cerrado pueda ser utilizado en lugar del término de extremo abierto sin apartarse del espíritu y alcance de la invención. La indicación de los intervalos de valores en la presente está meramente destinada a seguir como un método breve de referirse individualmente a cada valor separado que caiga dentro del intervalo, a no ser que se indique de otro modo aquí, y cada valor separado es incorporado en la especificación como si fuera individualmente indicado en la presente. Todos los métodos descritos en la presente pueden ser realizados en cualquier orden adecuado, a no ser que se indique de otro modo en la presente o sea de otro modo claramente contradicho por el contexto. El uso de cualesquiera y todos los ejemplos, o lenguaje ejemplar (por ejemplo, "tal como ") proporcionado en la presente, está destinado meramente a iluminar mejor la invención y no impone una limitación sobre el alcance de la invención, a no ser que se reclame de otro modo. Ningún lenguaje en la especificación debe ser considerado como indicador de algún elemento no reclamado como esencial para la práctica de la invención. Las modalidades preferidas de esta invención son descritas en la presente, incluyendo la mejor modalidad conocida para los inventores para llevar a cabo la invención. Las variaciones de estas modalidades preferidas pueden volverse aparentes para aquellos que trabajen en la técnica después de leer la descripción anterior. Los inventores esperan que los expertos en la técnica empleen tales variaciones como sean apropiadas, y los inventores pretenden que la invención sea practicada de otra manera a la que se describe específicamente en la presente. En consecuencia, esta invención incluye todas las modificaciones y equivalentes de la materia de ínteres indicada en las reivindicaciones anexas a la presente, co o sean permitidas por la ley aplicable. Además, cualquier combinación de los elementos anteriormente descritos en todas las posibles variaciones de la misma, es abarcada por la invención, a no ser que se indique de otro modo en la presente y sea de otro modo claramente contradicho por el contexto. Se hace constar que con relación a esta fecha el mejor método conocido por la solicitante para llevar a la práctica la citada invención, es el que resulta claro de la presente descripción de la invención.

Claims

REIVINDICACIONES Habiéndose descrito la invención como antecede, se reclama como propiedad lo contenido en las siguientes reivindicaciones : 1. Un anticuerpo que se enlaza a IL-lß o fragmento del mismo que se enlaza a IL-lß, caracterizado porque comprende la secuencia de aminoácidos de la SEQ ID NO: 28. 2. El anticuerpo o fragmento de anticuerpo de conformidad con la reivindicación 1, caracterizado porque el anticuerpo o fragmento comprende la secuencia de aminoácidos de la SEQ ID NO: 2, SEQ ID NO: 23 o SEQ ID NO: 24. 3. Un anticuerpo que se enlaza a IL-lß o fragmento del mismo que se enlaza a IL-lß, caracterizado porque el anticuerpo o fragmento se enlaza a la IL-lß humana con una constante de disociación de aproximadamente 1 pM o menos. . El anticuerpo o fragmento de anticuerpo de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones 1-3, caracterizado porque el anticuerpo o fragmento se enlaza a IL-lß humana con una constante de disociación de aproximadamente 0.3 pM o menos. 5. El anticuerpo o fragmento de anticuerpo de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones 1-3, caracterizado porque el anticuerpo o fragmento se enlaza a IL-lß humana con una constante de disociación de aproximadamente 0.24 pM o menos. 6. El anticuerpo o fragmento de anticuerpo de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones 1-3, caracterizado porque el anticuerpo o fragmento se enlaza a IL-lß humana con una constante de disociación de aproximadamente 0.11 pM o menos. 7. Un anticuerpo que se enlaza a IL-lß o un fragmento del mismo que se enlaza a IL-lß, caracterizado porque el anticuerpo o fragmento se enlaza a un epitopo de IL-lß tal que el anticuerpo enlazado o el fragmento permite sustancialmente el enlace de IL-lß al receptor I de IL-1 (IL-1RI), y el anticuerpo o fragmento se enlaza a IL-lß humana con una constante de disociación menor de 1 pM. 8. Un anticuerpo que se enlaza a IL-lß o un fragmento del mismo que se enlaza a IL-lß, caracterizado porque el anticuerpo o fragmento se enlaza a la IL-lß humana con una constante de disociación menor de 1 pM, y el anticuerpo o fragmento se enlaza sustancialmente al mismo epitopo que se enlaza un anticuerpo que tiene la región variable de cadena ligera de la SEQ ID NO: 11 y la región variable de cadena pesada de la SEQ ID NO: 15. 9. Un anticuerpo que se enlaza a IL-lß o un fragmento del mismo que se enlaza a IL-lß, caracterizado porque el anticuerpo o fragmento se enlaza a la IL-lß humana con una constante de disociación menor de 1 pM, y el anticuerpo o fragmento compite con el enlace de un anticuerpo que tiene la región variable de cadena ligera de la SEQ ID NO: 11 y la región variable de cadena pesada de la SEQ ID NO: 15. 10. El anticuerpo o fragmento de conformidad con la reivindicación 8, caracterizado porque el anticuerpo o fragmento de anticuerpo se enlaza a un epitopo contenido en la secuencia ESVDPKNYPKKKMEKRFVFNKIE (SEQ ID NO: 36). 11. El anticuerpo o fragmento de anticuerpo de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones 1-9, caracterizado porque el anticuerpo o fragmento de anticuerpo es humanizado o manipulado por ingeniería humana. 12. El anticuerpo o fragmento de anticuerpo de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones 1-9, caracterizado porque el anticuerpo o fragmento de anticuerpo es humano. 13. El anticuerpo o fragmento de anticuerpo de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones 1-12, caracterizado porque el anticuerpo o fragmento de anticuerpo es un anticuerpo neutralizador. 14. El anticuerpo o fragmento de anticuerpo de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones 1-13, caracterizado porque el anticuerpo o fragmento de anticuerpo comprende una cadena ligera lambda. 15. El anticuerpo o fragmento de anticuerpo de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones 1-13, caracterizado porque el anticuerpo o fragmento de anticuerpo comprende una región de IgG2. 16. El anticuerpo o fragmento de anticuerpo de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones 1-13, caracterizado porque el anticuerpo o fragmento de anticuerpo es Fab, un F(ab')2, un Fv, un fragmento de anticuerpo de cadena simple, o una variante o derivado de cualquiera de estos anticuerpos o fragmentos. 17. El anticuerpo o fragmento de anticuerpo de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones 1-13, caracterizado porque el anticuerpo o fragmento de anticuerpo es un anticuerpo multiespecífico, un diacuerpo, un triacuerpo, un tetracuerpo, un minicuerpo, un anticuerpo lineal, un anticuerpo recombinante de quelación, un tricuerpo, un bicuerpo, un intracuerpo, un nanocuerpo, un producto inmunofarmacéutico modular pequeño (SMIP) , una proteína de fusión de inmunoglobulina de dominio de enlace, un anticuerpo camelizado, un anticuerpo que contiene VHH, O una variante o un derivado de cualquiera de estos anticuerpos o fragmentos. 18. El anticuerpo o fragmento de anticuerpo de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones 1-17, caracterizado porque el anticuerpo o fragmento comprende una región variable de cadena ligera que incluye la secuencia de aminoácidos de la SEQ ID NO: 27. 19. El anticuerpo o fragmento de anticuerpo de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones 1-17, caracterizado porque el anticuerpo o fragmento de anticuerpo comprende una región variable de cadena pesada que incluye una de las secuencias de aminoácidos de las SEQ ID NOs: 8, 14 y 15, y una región variable de cadena ligera que incluye una de las secuencias de aminoácidos de las SEQ ID NOs: 9, 10 y 11. 20. El anticuerpo o fragmento de anticuerpo de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones 1-17, caracterizado porque el anticuerpo o fragmento de anticuerpo comprende una región variable de cadena pesada que incluye la secuencia de aminoácidos de la SEQ ID NO: 8 y una región variable de cadena ligera que incluye la secuencia de aminoácidos de la SEQ ID NO: 9. 21. El anticuerpo o fragmento de anticuerpo de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones 1-17, caracterizado porque el anticuerpo o fragmento de anticuerpo comprende una región variable de cadena pesada que incluye la secuencia de aminoácidos de la SEQ ID NO: 15, y la región variable de cadena ligera que comprende la secuencia de aminoácidos de la SEQ ID NO: 11. 22. El anticuerpo o fragmento de anticuerpo de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones 1-17, caracterizado porque el anticuerpo o fragmento de anticuerpo comprende una región variable de cadena pesada comprende la secuencia de aminoácidos de la SEQ ID NO: 14, y una región variable de cadena ligera que comprende la secuencia de aminoácidos de la SEQ ID NO: 10. 23. El anticuerpo o fragmento de anticuerpo de conformidad con las reivindicaciones 1 ó 2, caracterizado porque el anticuerpo o fragmento de anticuerpo tiene una constante de disociación menor de 3 pM. 24. El anticuerpo o fragmento de anticuerpo de conformidad con las reivindicaciones 1 ó 2, caracterizado porque el anticuerpo o fragmento de anticuerpo tiene una constante de disociación de aproximadamente 2 pM o menos. 25. Un anticuerpo que se enlaza a IL-lß o un fragmento del mismo que se enlaza a IL-lß, caracterizado porque el anticuerpo o fragmento de anticuerpo (i) tiene una IC50 de aproximadamente 0.5 nM o menor para inhibir la liberación de IL-6 estimulada por IL-lß a partir de fibroblastos humanos, (ii) se enlaza a IL-lß con una constante de disociación de aproximadamente 1 pM o menor, y (iii) inhibe la expresión de IL-6 en suero inducida por IL-lß, en un animal por al menos 50% cuando el anticuerpo o fragmento de anticuerpo es administrado al animal en una cantidad efectiva, en comparación al nivel de IL-6 en suero en un animal estimulado con IL-lß que no ha sido administrado con un anticuerpo o fragmento de anticuerpo. 26. Un anticuerpo que se enlaza a IL-lß o un fragmento del mismo que se enlaza a IL-lß, caracterizado porque el anticuerpo o fragmento de anticuerpo se enlaza a la IL-lß humana con una constante de disociación entre aproximadamente 6 pM y aproximadamente 50 pM, y en donde el anticuerpo tiene una IC50 para inhibir la liberación de IL-6 estimulada por IL-lß a partir de fibroblastos humanos entre aproximadamente 5 pM y aproximadamente 200 pM. 27. El anticuerpo o fragmento de anticuerpo de conformidad con la reivindicación 26, caracterizado porque el anticuerpo o fragmento de anticuerpo se enlaza a la IL-lß humana con una constante de disociación entre aproximadamente 13 pM y aproximadamente 25 pM. 28. El anticuerpo o fragmento de anticuerpo de conformidad con las reivindicaciones 26-27, caracterizado porque la región variable de cadena pesada comprende la secuencia de aminoácidos de la SEQ ID NO: 4. 29. El anticuerpo o fragmento de anticuerpo de conformidad con las reivindicaciones 26-28, caracterizado porque el anticuerpo o fragmento de anticuerpo comprende una región variable de cadena ligera que incluye la secuencia de aminoácidos de la SEQ ID NO: 9. 30. El anticuerpo o fragmento de anticuerpo de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones 1-28, caracterizado porque el anticuerpo o fragmento de anticuerpo no se enlaza detectablemente a IL-la. 31. El anticuerpo o fragmento de anticuerpo de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones 1-30, caracterizado porque el anticuerpo o fragmento de anticuerpo no reacciona cruzadamente con un objetivo diferente de IL-lß. 32. El anticuerpo o fragmento de anticuerpo de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones 1-31, caracterizado porque el anticuerpo o fragmento de anticuerpo se enlaza a uno o más de IL-lß de roedor, IL-lß de primate, IL-lß de perro, e IL-lß de conejo. 33. El anticuerpo o fragmento de anticuerpo de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones 1-31, caracterizado porque el anticuerpo o fragmento de anticuerpo se enlaza a la IL-lß de ratón con mayor afinidad que a la IL-lß de rata. 34. El anticuerpo o fragmento de anticuerpo de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones 1-33, caracterizado porque el anticuerpo o fragmento de anticuerpo no se enlaza a la IL-lß de cobayo. 35. Un anticuerpo que se enlaza a IL-lß o un fragmento del mismo que se enlaza a IL-lß, caracterizado porque el anticuerpo o fragmento comprende una o más sustituciones, supresiones o adiciones a la secuencia de aminoácidos de la SEQ ID NO: 28, y el anticuerpo o fragmento tiene la misma o sustancialmente la misma afinidad y especificidad del enlace al epitopo que la secuencia de aminoácidos descrita en la SEQ ID NO: 28. 36. Un anticuerpo que se enlaza a IL-lß o un fragmento del mismo que se enlaza a IL-lß, caracterizado porque el anticuerpo o fragmento comprende una o más sustituciones, supresiones o adiciones a la secuencia de aminoácidos de la SEQ ID NO: 27, y el anticuerpo o fragmento tiene la misma o sustancialmente la misma afinidad y especificidad del enlace al epitopo que la secuencia de aminoácidos descrita en la SEQ ID NO: 27. 37. Un ácido nucleico, caracterizado porque codifica para el anticuerpo o fragmento de anticuerpo de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones 1-35. 38. El ácido nucleico de conformidad con la reivindicación 37, caracterizado porque el ácido nucleico comprende la secuencia de la SEQ ID NO: 38. 39. El ácido nucleico de conformidad con la reivindicación 37, caracterizado porque el ácido nucleico comprende la secuencia de la SEQ ID NO: 39. 40. Un ácido nucleico que comprende una secuencia de ácido nucleico que codifica para una región variable de cadena pesada de un anticuerpo, caracterizado porque la región variable de cadena pesada comprende la secuencia de aminoácidos de la SEQ ID NO: 28. 41. La secuencia de ácido nucleico de conformidad con la reivindicación 40, caracterizada porque el ácido nucleico codifica para una región variable de cadena pesada que comprende la secuencia de aminoácidos de la SEQ ID NO: 2, 23 ó 24. 42. Un ácido nucleico que comprende una secuencia de ácido nucleico que codifica para una región variable de cadena ligera de un anticuerpo, caracterizado porque la región variable de cadena ligera comprende la secuencia de aminoácidos de la SEQ ID NO: 27. 43. Un vector, caracterizado porque comprende el ácido nucleico de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones 37 a 41. 44. Una célula, caracterizada porque comprende el ácido nucleico de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones 37 a 41 o el vector de conformidad con la reivindicación 42. 45. La célula de conformidad con la reivindicación 44, caracterizada porque la célula es una célula madre embrionaria o un huevo fertilizado. 46. Un animal transgénico, caracterizado porque comprende la célula de conformidad con la reivindicación 44 ó 45. 47. Un hibridoma, caracterizado porque produce el anticuerpo o fragmento de anticuerpo de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones 1-34. 48. Una composición, caracterizada porque comprende (a) el anticuerpo o fragmento de anticuerpo de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones 1-34, el ácido nucleico de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones 37-41, o el vector de conformidad con la reivindicación 42, y (b) un portador adecuado. 49. La composición de conformidad con la reivindicación 48, caracterizada porque el portador es un portador farmacéuticamente aceptable. 50. La composición de conformidad con la reivindicación 49, caracterizada porque la composición está en una forma adecuada para la administración intraarticular, subcutánea, intravenosa, intraperitoneal, intracerebral (intraparenquimal) , intracerebroventricular, intramuscular, intraocular, intraarterial, intralesional, oral o inhalación. 51. La composición de conformidad con la reivindicación 49, caracterizada porque la composición comprende un lioprotector, un surfactante, un rellenador, un aglutinante y/o un agente de volumen. 52. La composición de conformidad con la reivindicación 49, caracterizada porque la composición es una composición farmacéutica de liberación controlada o de liberación sostenida. 53. Un método para tratar o prevenir una enfermedad o condición relacionada a IL-1 en un mamífero, caracterizado el método porque comprende administrar una cantidad efectiva de (a) el anticuerpo o fragmento de anticuerpo de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones 1-34, (b) el ácido nucleico de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones 37-41, (c) el vector de conformidad con la reivindicación 42, o (d) la composición de conformidad con las reivindicaciones 48-54 a un mamífero en necesidad de la misma, con lo cual es tratada o prevenida una enfermedad en el mamífero. 54. El método de conformidad con la reivindicación 53, caracterizado porque la enfermedad o condición relacionada a IL-1 es una enfermedad inflamatoria, enfermedad autoinmune o un cáncer. 55. El método de conformidad con las reivindicaciones 53 ó 54, caracterizado porque la enfermedad o condición relacionada a IL-1 se selecciona de artritis reumatoide, osteoartritis, enfermedad de Crohn, colitis ulcerativa, choque séptico, enfermedad pulmonar obstructiva crónica, asma, enfermedad de injerto versus hospedero, aterosclerosis, leucemia de células T del adulto, mieloma múltiple, esclerosis múltiple, apoplejía o enfermedad de Alzheimer . 56. El método de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones 53-55, caracterizado porque la enfermedad o condición relacionada a IL-1 es trastorno inflamatorio de sistemas múltiples de inicio neonatal (NOMID/CINCA) , artritis idiopática juvenil de inicio sistémico, síndrome periódico asociado a CIAS1 (CAPS) , enfermedad de Stills o síndrome de Muckle-Wells. 57. El método de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones 53-56, caracterizado porque la enfermedad o condición relacionada a IL-1 es la artritis idiopática juvenil de inicio sistémico, artritis reumatoide, osteoartritis, ateroesclerosis o miastenia gravis. 58. El método de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones 53-56, caracterizado porque el mamífero es un humano . 59. El método de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones 54-58, caracterizado porque la cantidad efectiva del anticuerpo o fragmento de anticuerpo es efectiva para inhibir la expresión de IL-6 en suero inducida por IL-lß, en un animal, por al menos 50% en comparación al nivel de IL-6 en suero en ausencia del anticuerpo. 60. Un método para preparar un polipéptido que se enlaza a IL-lß madurado por afinidad caracterizado porque comprende: (a) la provisión de un primer ácido nucleico que comprende una secuencia de ácido nucleico que codifica para un polipéptido que se enlaza a IL-lß, que comprende la secuencia de aminoácidos de la SEQ ID NO: 22 y un segundo ácido nucleico que comprende una secuencia de ácido nucleico que difiere de la primera secuencia de ácido nucleico por al menos un nucleótido, (b) realizar el entremezclado de ácido nucleico para proporcionar dos o más ácidos nucleicos mutados, (c) seleccionar el ácido nucleico mutado que codifica para un polipéptido que (i) se enlaza a IL-lß con una mayor afinidad que el polipéptido codificado por el primer ácido nucleico, (ii) tiene una selectividad para IL-lß sobre IL-la que es mayor que aquella del polipéptido codificado por el primer ácido nucleico, (iii) tiene una constante de disociación de enlace en el equilibrio para IL-lß que es menor que aquella del polipéptido codificado por el primer ácido nucleico, o (iv) inhibe la expresión inducida por IL-lß de IL-6 en suero en un animal, a un grado mayor que el polipéptido codificado por el primer ácido nucleico, y (d) expresar el ácido nucleico mutado seleccionado, con lo cual es producido un polipéptido de IL-lß madurado por afinidad. 61. El método de conformidad con la reivindicación 60, caracterizado porque comprende además la provisión de un anticuerpo que comprende el polipéptido codificado por el ácido nucleico mutado antes de seleccionar el ácido nucleico mutado, en donde la selección para el ácido nucleico mutado es realizada por la evaluación del anticuerpo. 62. El método de conformidad con la reivindicación 60 ó 61, caracterizado porque los pasos (b) y (c) son repetidos, en donde el entremezclado del ácido nucleico del paso (b) es realizado utilizando (i) al menos un ácido nucleico mutado seleccionado, del paso (c) y (ii) al menos un ácido nucleico que tiene una secuencia de ácido nucleico que difiere del ácido nucleico mutado seleccionado, por al menos un nucleótido. 63. El método de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones 60-62, caracterizado porque los pasos (b) y (c) son repetidos hasta que es seleccionado el ácido nucleico optimizado . 64. El método de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones 60-63, caracterizado porque el primer ácido nucleico codifica para un polipéptido que comprende la secuencia de aminoácidos de cualquiera de las SEQ ID NOs: 1-26. 65. El método de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones 60-64, caracterizado porque el primer ácido nucleico codifica para un polipéptido que comprende la secuencia de aminoácidos de cualquiera de las SEQ ID NOs: 27-35 ó 42-57. 66. El método de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones 60-65, caracterizado porque los pasos (b) y (c) son repetidos hasta que es seleccionado un ácido nucleico que codifica para un polipéptido que (i) tiene una IC50 de aproximadamente 0.5 nM o menor para inhibir la liberación de IL-6 estimulada por IL-lß, a partir de fibroblastos humanos, (ii) se enlaza a IL-lß con una constante de disociación para IL-lß menor de 3 pM, y (iii) inhibe la expresión de IL-6 en suero inducida por IL-lß en un animal, por al menos 50% en comparación al nivel de IL-6 en suero en un animal estimulado con IL-lß que no ha sido administrado con un anticuerpo o fragmento.