PL207642B1 - Przeciwciało wiążące IL-1ß, konstrukt DNA, wektor ekspresyjny, kompozycja farmaceutyczna, sposób wytwarzania przeciwciała oraz zastosowanie przeciwciała - Google Patents
Przeciwciało wiążące IL-1ß, konstrukt DNA, wektor ekspresyjny, kompozycja farmaceutyczna, sposób wytwarzania przeciwciała oraz zastosowanie przeciwciałaInfo
- Publication number
- PL207642B1 PL207642B1 PL356297A PL35629701A PL207642B1 PL 207642 B1 PL207642 B1 PL 207642B1 PL 356297 A PL356297 A PL 356297A PL 35629701 A PL35629701 A PL 35629701A PL 207642 B1 PL207642 B1 PL 207642B1
- Authority
- PL
- Poland
- Prior art keywords
- amino acid
- antibody
- human
- ser
- tyr
- Prior art date
Links
- 238000009739 binding Methods 0.000 claims abstract description 100
- 230000027455 binding Effects 0.000 claims abstract description 99
- 108090000193 Interleukin-1 beta Proteins 0.000 claims abstract description 65
- 102000003777 Interleukin-1 beta Human genes 0.000 claims abstract description 65
- 125000003275 alpha amino acid group Chemical group 0.000 claims abstract description 54
- 101001033249 Homo sapiens Interleukin-1 beta Proteins 0.000 claims abstract description 36
- 102000000589 Interleukin-1 Human genes 0.000 claims abstract description 30
- 108010002352 Interleukin-1 Proteins 0.000 claims abstract description 30
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 claims abstract description 26
- 201000010099 disease Diseases 0.000 claims abstract description 20
- 230000001404 mediated effect Effects 0.000 claims abstract description 14
- 206010003246 arthritis Diseases 0.000 claims abstract description 13
- 208000035475 disorder Diseases 0.000 claims abstract description 6
- 230000002757 inflammatory effect Effects 0.000 claims abstract description 5
- 201000008482 osteoarthritis Diseases 0.000 claims abstract description 3
- 108020004705 Codon Proteins 0.000 claims description 31
- 150000001413 amino acids Chemical class 0.000 claims description 30
- 239000000427 antigen Substances 0.000 claims description 20
- 108091007433 antigens Proteins 0.000 claims description 20
- 102000036639 antigens Human genes 0.000 claims description 20
- 239000012634 fragment Substances 0.000 claims description 18
- 239000013604 expression vector Substances 0.000 claims description 17
- 230000002401 inhibitory effect Effects 0.000 claims description 14
- 238000000034 method Methods 0.000 claims description 13
- 230000000890 antigenic effect Effects 0.000 claims description 12
- 206010020751 Hypersensitivity Diseases 0.000 claims description 11
- 230000001154 acute effect Effects 0.000 claims description 11
- 206010028980 Neoplasm Diseases 0.000 claims description 9
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 claims description 9
- 206010061218 Inflammation Diseases 0.000 claims description 8
- 206010040070 Septic Shock Diseases 0.000 claims description 8
- 230000001419 dependent effect Effects 0.000 claims description 8
- 230000004054 inflammatory process Effects 0.000 claims description 8
- 208000023275 Autoimmune disease Diseases 0.000 claims description 7
- 108060003951 Immunoglobulin Proteins 0.000 claims description 7
- 102000018358 immunoglobulin Human genes 0.000 claims description 7
- 208000015181 infectious disease Diseases 0.000 claims description 7
- 230000002265 prevention Effects 0.000 claims description 7
- 206010006895 Cachexia Diseases 0.000 claims description 6
- 102000006496 Immunoglobulin Heavy Chains Human genes 0.000 claims description 6
- 108010019476 Immunoglobulin Heavy Chains Proteins 0.000 claims description 6
- 208000001132 Osteoporosis Diseases 0.000 claims description 6
- 206010067584 Type 1 diabetes mellitus Diseases 0.000 claims description 6
- 208000023328 Basedow disease Diseases 0.000 claims description 5
- 206010065687 Bone loss Diseases 0.000 claims description 5
- 230000007815 allergy Effects 0.000 claims description 5
- 208000007502 anemia Diseases 0.000 claims description 5
- 230000001363 autoimmune Effects 0.000 claims description 5
- 201000011510 cancer Diseases 0.000 claims description 5
- 239000003814 drug Substances 0.000 claims description 5
- 201000004681 Psoriasis Diseases 0.000 claims description 4
- 208000006673 asthma Diseases 0.000 claims description 4
- 206010023332 keratitis Diseases 0.000 claims description 4
- 239000008194 pharmaceutical composition Substances 0.000 claims description 4
- 206010039073 rheumatoid arthritis Diseases 0.000 claims description 4
- 210000001519 tissue Anatomy 0.000 claims description 4
- 208000030507 AIDS Diseases 0.000 claims description 3
- 206010001052 Acute respiratory distress syndrome Diseases 0.000 claims description 3
- 206010027654 Allergic conditions Diseases 0.000 claims description 3
- 208000032467 Aplastic anaemia Diseases 0.000 claims description 3
- 206010008909 Chronic Hepatitis Diseases 0.000 claims description 3
- 206010014561 Emphysema Diseases 0.000 claims description 3
- 206010014824 Endotoxic shock Diseases 0.000 claims description 3
- 206010018364 Glomerulonephritis Diseases 0.000 claims description 3
- 208000015023 Graves' disease Diseases 0.000 claims description 3
- 206010021245 Idiopathic thrombocytopenic purpura Diseases 0.000 claims description 3
- 206010065390 Inflammatory pain Diseases 0.000 claims description 3
- 208000029523 Interstitial Lung disease Diseases 0.000 claims description 3
- 201000009906 Meningitis Diseases 0.000 claims description 3
- 206010035664 Pneumonia Diseases 0.000 claims description 3
- 201000001263 Psoriatic Arthritis Diseases 0.000 claims description 3
- 208000036824 Psoriatic arthropathy Diseases 0.000 claims description 3
- 208000013616 Respiratory Distress Syndrome Diseases 0.000 claims description 3
- 206010039710 Scleroderma Diseases 0.000 claims description 3
- 206010052779 Transplant rejections Diseases 0.000 claims description 3
- 208000011341 adult acute respiratory distress syndrome Diseases 0.000 claims description 3
- 201000000028 adult respiratory distress syndrome Diseases 0.000 claims description 3
- 208000026935 allergic disease Diseases 0.000 claims description 3
- 201000003710 autoimmune thrombocytopenic purpura Diseases 0.000 claims description 3
- 206010006451 bronchitis Diseases 0.000 claims description 3
- 238000012258 culturing Methods 0.000 claims description 3
- 239000003085 diluting agent Substances 0.000 claims description 3
- 230000003073 embolic effect Effects 0.000 claims description 3
- 210000003527 eukaryotic cell Anatomy 0.000 claims description 3
- 230000009610 hypersensitivity Effects 0.000 claims description 3
- 208000016036 idiopathic nephrotic syndrome Diseases 0.000 claims description 3
- 208000002551 irritable bowel syndrome Diseases 0.000 claims description 3
- 208000017169 kidney disease Diseases 0.000 claims description 3
- 201000006417 multiple sclerosis Diseases 0.000 claims description 3
- 206010028417 myasthenia gravis Diseases 0.000 claims description 3
- 210000000056 organ Anatomy 0.000 claims description 3
- 230000004768 organ dysfunction Effects 0.000 claims description 3
- 208000028169 periodontal disease Diseases 0.000 claims description 3
- 239000000546 pharmaceutical excipient Substances 0.000 claims description 3
- 206010035653 pneumoconiosis Diseases 0.000 claims description 3
- 230000000750 progressive effect Effects 0.000 claims description 3
- 210000001236 prokaryotic cell Anatomy 0.000 claims description 3
- 230000010076 replication Effects 0.000 claims description 3
- 230000000241 respiratory effect Effects 0.000 claims description 3
- 201000000306 sarcoidosis Diseases 0.000 claims description 3
- 230000036303 septic shock Effects 0.000 claims description 3
- 201000000596 systemic lupus erythematosus Diseases 0.000 claims description 3
- 208000002691 Choroiditis Diseases 0.000 claims description 2
- 206010010741 Conjunctivitis Diseases 0.000 claims description 2
- 206010016654 Fibrosis Diseases 0.000 claims description 2
- 206010019755 Hepatitis chronic active Diseases 0.000 claims description 2
- 206010022941 Iridocyclitis Diseases 0.000 claims description 2
- 208000003971 Posterior uveitis Diseases 0.000 claims description 2
- 208000016807 X-linked intellectual disability-macrocephaly-macroorchidism syndrome Diseases 0.000 claims description 2
- 201000004612 anterior uveitis Diseases 0.000 claims description 2
- 230000004097 bone metabolism Effects 0.000 claims description 2
- 230000007882 cirrhosis Effects 0.000 claims description 2
- 208000019425 cirrhosis of liver Diseases 0.000 claims description 2
- 201000001981 dermatomyositis Diseases 0.000 claims description 2
- 208000007475 hemolytic anemia Diseases 0.000 claims description 2
- 201000010666 keratoconjunctivitis Diseases 0.000 claims description 2
- 208000011580 syndromic disease Diseases 0.000 claims description 2
- 208000023661 Haematological disease Diseases 0.000 claims 1
- 208000017604 Hodgkin disease Diseases 0.000 claims 1
- 208000010747 Hodgkins lymphoma Diseases 0.000 claims 1
- 210000003743 erythrocyte Anatomy 0.000 claims 1
- 208000028774 intestinal disease Diseases 0.000 claims 1
- 230000003902 lesion Effects 0.000 claims 1
- 208000023504 respiratory system disease Diseases 0.000 claims 1
- 235000013351 cheese Nutrition 0.000 description 62
- 108020004414 DNA Proteins 0.000 description 29
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 description 23
- 102000005962 receptors Human genes 0.000 description 19
- 108020003175 receptors Proteins 0.000 description 19
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 description 15
- 241001529936 Murinae Species 0.000 description 9
- 238000003556 assay Methods 0.000 description 9
- 210000004408 hybridoma Anatomy 0.000 description 9
- 241000699670 Mus sp. Species 0.000 description 8
- 102000019223 Interleukin-1 receptor Human genes 0.000 description 7
- 108050006617 Interleukin-1 receptor Proteins 0.000 description 7
- 206010037660 Pyrexia Diseases 0.000 description 7
- 241000700159 Rattus Species 0.000 description 7
- 230000005764 inhibitory process Effects 0.000 description 7
- 239000002773 nucleotide Substances 0.000 description 7
- 125000003729 nucleotide group Chemical group 0.000 description 7
- 102000004889 Interleukin-6 Human genes 0.000 description 6
- 108090001005 Interleukin-6 Proteins 0.000 description 6
- 108091028043 Nucleic acid sequence Proteins 0.000 description 6
- 239000013078 crystal Substances 0.000 description 6
- XEYBRNLFEZDVAW-ARSRFYASSA-N dinoprostone Chemical compound CCCCC[C@H](O)\C=C\[C@H]1[C@H](O)CC(=O)[C@@H]1C\C=C/CCCC(O)=O XEYBRNLFEZDVAW-ARSRFYASSA-N 0.000 description 6
- 229960002986 dinoprostone Drugs 0.000 description 6
- 208000037765 diseases and disorders Diseases 0.000 description 6
- 210000002950 fibroblast Anatomy 0.000 description 6
- XEYBRNLFEZDVAW-UHFFFAOYSA-N prostaglandin E2 Natural products CCCCCC(O)C=CC1C(O)CC(=O)C1CC=CCCCC(O)=O XEYBRNLFEZDVAW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 description 6
- 239000013598 vector Substances 0.000 description 6
- 241000699660 Mus musculus Species 0.000 description 5
- 229960004669 basiliximab Drugs 0.000 description 5
- 239000003623 enhancer Substances 0.000 description 5
- 238000006386 neutralization reaction Methods 0.000 description 5
- 108090000765 processed proteins & peptides Proteins 0.000 description 5
- 229940115586 simulect Drugs 0.000 description 5
- 239000006228 supernatant Substances 0.000 description 5
- 241000282693 Cercopithecidae Species 0.000 description 4
- 108091026890 Coding region Proteins 0.000 description 4
- 238000002965 ELISA Methods 0.000 description 4
- 108010065920 Insulin Lispro Proteins 0.000 description 4
- FBOZXECLQNJBKD-ZDUSSCGKSA-N L-methotrexate Chemical compound C=1N=C2N=C(N)N=C(N)C2=NC=1CN(C)C1=CC=C(C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(O)=O)C=C1 FBOZXECLQNJBKD-ZDUSSCGKSA-N 0.000 description 4
- 241000699666 Mus <mouse, genus> Species 0.000 description 4
- 102100040247 Tumor necrosis factor Human genes 0.000 description 4
- ANHVRCNNGJMJNG-BZSNNMDCSA-N Tyr-Tyr-Cys Chemical compound C1=CC(=CC=C1C[C@@H](C(=O)N[C@@H](CC2=CC=C(C=C2)O)C(=O)N[C@@H](CS)C(=O)O)N)O ANHVRCNNGJMJNG-BZSNNMDCSA-N 0.000 description 4
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 4
- 239000002299 complementary DNA Substances 0.000 description 4
- 239000003636 conditioned culture medium Substances 0.000 description 4
- 238000010494 dissociation reaction Methods 0.000 description 4
- 230000005593 dissociations Effects 0.000 description 4
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 4
- 230000003993 interaction Effects 0.000 description 4
- 210000004962 mammalian cell Anatomy 0.000 description 4
- 229960000485 methotrexate Drugs 0.000 description 4
- 238000010561 standard procedure Methods 0.000 description 4
- LSLIRHLIUDVNBN-CIUDSAMLSA-N Ala-Asp-Lys Chemical compound C[C@H](N)C(=O)N[C@@H](CC(O)=O)C(=O)N[C@H](C(O)=O)CCCCN LSLIRHLIUDVNBN-CIUDSAMLSA-N 0.000 description 3
- BFMIRJBURUXDRG-DLOVCJGASA-N Ala-Phe-Asp Chemical compound OC(=O)C[C@@H](C(O)=O)NC(=O)[C@@H](NC(=O)[C@@H](N)C)CC1=CC=CC=C1 BFMIRJBURUXDRG-DLOVCJGASA-N 0.000 description 3
- IZSMEUDYADKZTJ-KJEVXHAQSA-N Arg-Tyr-Thr Chemical compound [H]N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](CC1=CC=C(O)C=C1)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(O)=O IZSMEUDYADKZTJ-KJEVXHAQSA-N 0.000 description 3
- VDCIPFYVCICPEC-FXQIFTODSA-N Asn-Arg-Ala Chemical compound [H]N[C@@H](CC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](C)C(O)=O VDCIPFYVCICPEC-FXQIFTODSA-N 0.000 description 3
- BIGRHVNFFJTHEB-UBHSHLNASA-N Asn-Trp-Asp Chemical compound [H]N[C@@H](CC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CC1=CNC2=C1C=CC=C2)C(=O)N[C@@H](CC(O)=O)C(O)=O BIGRHVNFFJTHEB-UBHSHLNASA-N 0.000 description 3
- MJJIHRWNWSQTOI-VEVYYDQMSA-N Asp-Thr-Arg Chemical compound OC(=O)C[C@H](N)C(=O)N[C@@H]([C@H](O)C)C(=O)N[C@@H](CCCN=C(N)N)C(O)=O MJJIHRWNWSQTOI-VEVYYDQMSA-N 0.000 description 3
- SZQCDCKIGWQAQN-FXQIFTODSA-N Cys-Arg-Ala Chemical compound [H]N[C@@H](CS)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](C)C(O)=O SZQCDCKIGWQAQN-FXQIFTODSA-N 0.000 description 3
- CIVXDCMSSFGWAL-YUMQZZPRSA-N Cys-Lys-Gly Chemical compound C(CCN)C[C@@H](C(=O)NCC(=O)O)NC(=O)[C@H](CS)N CIVXDCMSSFGWAL-YUMQZZPRSA-N 0.000 description 3
- 102000004127 Cytokines Human genes 0.000 description 3
- 108090000695 Cytokines Proteins 0.000 description 3
- 241000701022 Cytomegalovirus Species 0.000 description 3
- 101150074155 DHFR gene Proteins 0.000 description 3
- 102000053602 DNA Human genes 0.000 description 3
- PAQUJCSYVIBPLC-AVGNSLFASA-N Glu-Asp-Phe Chemical compound OC(=O)CC[C@H](N)C(=O)N[C@@H](CC(O)=O)C(=O)N[C@H](C(O)=O)CC1=CC=CC=C1 PAQUJCSYVIBPLC-AVGNSLFASA-N 0.000 description 3
- ULZCYBYDTUMHNF-IUCAKERBSA-N Gly-Leu-Glu Chemical compound NCC(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(O)=O ULZCYBYDTUMHNF-IUCAKERBSA-N 0.000 description 3
- OLIFSFOFKGKIRH-WUJLRWPWSA-N Gly-Thr Chemical compound C[C@@H](O)[C@@H](C(O)=O)NC(=O)CN OLIFSFOFKGKIRH-WUJLRWPWSA-N 0.000 description 3
- NVTPVQLIZCOJFK-FOHZUACHSA-N Gly-Thr-Asp Chemical compound [H]NCC(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)N[C@@H](CC(O)=O)C(O)=O NVTPVQLIZCOJFK-FOHZUACHSA-N 0.000 description 3
- MREVELMMFOLESM-HOCLYGCPSA-N Gly-Trp-Val Chemical compound [H]NCC(=O)N[C@@H](CC1=CNC2=C1C=CC=C2)C(=O)N[C@@H](C(C)C)C(O)=O MREVELMMFOLESM-HOCLYGCPSA-N 0.000 description 3
- XBGGUPMXALFZOT-VIFPVBQESA-N Gly-Tyr Chemical compound NCC(=O)N[C@H](C(O)=O)CC1=CC=C(O)C=C1 XBGGUPMXALFZOT-VIFPVBQESA-N 0.000 description 3
- 241000282412 Homo Species 0.000 description 3
- ZRHDPZAAWLXXIR-SRVKXCTJSA-N Leu-Lys-Ala Chemical compound [H]N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H](C)C(O)=O ZRHDPZAAWLXXIR-SRVKXCTJSA-N 0.000 description 3
- AIXUQKMMBQJZCU-IUCAKERBSA-N Lys-Pro Chemical compound NCCCC[C@H](N)C(=O)N1CCC[C@H]1C(O)=O AIXUQKMMBQJZCU-IUCAKERBSA-N 0.000 description 3
- 241000283973 Oryctolagus cuniculus Species 0.000 description 3
- NYQBYASWHVRESG-MIMYLULJSA-N Phe-Thr Chemical compound C[C@@H](O)[C@@H](C(O)=O)NC(=O)[C@@H](N)CC1=CC=CC=C1 NYQBYASWHVRESG-MIMYLULJSA-N 0.000 description 3
- KLYYKKGCPOGDPE-OEAJRASXSA-N Phe-Thr-Leu Chemical compound [H]N[C@@H](CC1=CC=CC=C1)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(O)=O KLYYKKGCPOGDPE-OEAJRASXSA-N 0.000 description 3
- UIMCLYYSUCIUJM-UWVGGRQHSA-N Pro-Gly-Lys Chemical compound NCCCC[C@@H](C(O)=O)NC(=O)CNC(=O)[C@@H]1CCCN1 UIMCLYYSUCIUJM-UWVGGRQHSA-N 0.000 description 3
- 108700008625 Reporter Genes Proteins 0.000 description 3
- DGDCHPCRMWEOJR-FQPOAREZSA-N Thr-Ala-Tyr Chemical compound C[C@@H](O)[C@H](N)C(=O)N[C@@H](C)C(=O)N[C@H](C(O)=O)CC1=CC=C(O)C=C1 DGDCHPCRMWEOJR-FQPOAREZSA-N 0.000 description 3
- 108060008682 Tumor Necrosis Factor Proteins 0.000 description 3
- VNYDHJARLHNEGA-RYUDHWBXSA-N Tyr-Pro Chemical compound C([C@H](N)C(=O)N1[C@@H](CCC1)C(O)=O)C1=CC=C(O)C=C1 VNYDHJARLHNEGA-RYUDHWBXSA-N 0.000 description 3
- SYSWVVCYSXBVJG-RHYQMDGZSA-N Val-Leu-Thr Chemical compound C[C@H]([C@@H](C(=O)O)NC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)[C@H](C(C)C)N)O SYSWVVCYSXBVJG-RHYQMDGZSA-N 0.000 description 3
- GVRKWABULJAONN-VQVTYTSYSA-N Val-Thr Chemical compound CC(C)[C@H](N)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(O)=O GVRKWABULJAONN-VQVTYTSYSA-N 0.000 description 3
- 230000009471 action Effects 0.000 description 3
- 108010050025 alpha-glutamyltryptophan Proteins 0.000 description 3
- 210000003719 b-lymphocyte Anatomy 0.000 description 3
- 230000006957 competitive inhibition Effects 0.000 description 3
- XBGGUPMXALFZOT-UHFFFAOYSA-N glycyl-L-tyrosine hemihydrate Natural products NCC(=O)NC(C(O)=O)CC1=CC=C(O)C=C1 XBGGUPMXALFZOT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 108010089804 glycyl-threonine Proteins 0.000 description 3
- 108010087823 glycyltyrosine Proteins 0.000 description 3
- 238000002347 injection Methods 0.000 description 3
- 239000007924 injection Substances 0.000 description 3
- 230000017306 interleukin-6 production Effects 0.000 description 3
- 108010064235 lysylglycine Proteins 0.000 description 3
- 238000009117 preventive therapy Methods 0.000 description 3
- 230000009257 reactivity Effects 0.000 description 3
- 230000028327 secretion Effects 0.000 description 3
- 210000001626 skin fibroblast Anatomy 0.000 description 3
- 230000000638 stimulation Effects 0.000 description 3
- 108010061238 threonyl-glycine Proteins 0.000 description 3
- 108010020532 tyrosyl-proline Proteins 0.000 description 3
- MZOFCQQQCNRIBI-VMXHOPILSA-N (3s)-4-[[(2s)-1-[[(2s)-1-[[(1s)-1-carboxy-2-hydroxyethyl]amino]-4-methyl-1-oxopentan-2-yl]amino]-5-(diaminomethylideneamino)-1-oxopentan-2-yl]amino]-3-[[2-[[(2s)-2,6-diaminohexanoyl]amino]acetyl]amino]-4-oxobutanoic acid Chemical compound OC[C@@H](C(O)=O)NC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)[C@H](CCCN=C(N)N)NC(=O)[C@H](CC(O)=O)NC(=O)CNC(=O)[C@@H](N)CCCCN MZOFCQQQCNRIBI-VMXHOPILSA-N 0.000 description 2
- MAZZQZWCCYJQGZ-GUBZILKMSA-N Ala-Pro-Arg Chemical compound [H]N[C@@H](C)C(=O)N1CCC[C@H]1C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(O)=O MAZZQZWCCYJQGZ-GUBZILKMSA-N 0.000 description 2
- OTOXOKCIIQLMFH-KZVJFYERSA-N Arg-Ala-Thr Chemical compound C[C@@H](O)[C@@H](C(O)=O)NC(=O)[C@H](C)NC(=O)[C@@H](N)CCCN=C(N)N OTOXOKCIIQLMFH-KZVJFYERSA-N 0.000 description 2
- AOHKLEBWKMKITA-IHRRRGAJSA-N Arg-Phe-Ser Chemical compound C1=CC=C(C=C1)C[C@@H](C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)O)NC(=O)[C@H](CCCN=C(N)N)N AOHKLEBWKMKITA-IHRRRGAJSA-N 0.000 description 2
- RGGVDKVXLBOLNS-JQWIXIFHSA-N Asn-Trp Chemical compound C1=CC=C2C(C[C@H](NC(=O)[C@H](CC(N)=O)N)C(O)=O)=CNC2=C1 RGGVDKVXLBOLNS-JQWIXIFHSA-N 0.000 description 2
- MNQMTYSEKZHIDF-GCJQMDKQSA-N Asp-Thr-Ala Chemical compound [H]N[C@@H](CC(O)=O)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)N[C@@H](C)C(O)=O MNQMTYSEKZHIDF-GCJQMDKQSA-N 0.000 description 2
- 206010009900 Colitis ulcerative Diseases 0.000 description 2
- 208000011231 Crohn disease Diseases 0.000 description 2
- 101000599048 Homo sapiens Interleukin-6 receptor subunit alpha Proteins 0.000 description 2
- IITVUURPOYGCTD-NAKRPEOUSA-N Ile-Pro-Ala Chemical compound CC[C@H](C)[C@H](N)C(=O)N1CCC[C@H]1C(=O)N[C@@H](C)C(O)=O IITVUURPOYGCTD-NAKRPEOUSA-N 0.000 description 2
- 108700005091 Immunoglobulin Genes Proteins 0.000 description 2
- 102000013463 Immunoglobulin Light Chains Human genes 0.000 description 2
- 108010065825 Immunoglobulin Light Chains Proteins 0.000 description 2
- 102100037792 Interleukin-6 receptor subunit alpha Human genes 0.000 description 2
- 108091092195 Intron Proteins 0.000 description 2
- HXWALXSAVBLTPK-NUTKFTJISA-N Leu-Ala-Trp Chemical compound C[C@@H](C(=O)N[C@@H](CC1=CNC2=CC=CC=C21)C(=O)O)NC(=O)[C@H](CC(C)C)N HXWALXSAVBLTPK-NUTKFTJISA-N 0.000 description 2
- NFNVDJGXRFEYTK-YUMQZZPRSA-N Leu-Glu Chemical compound CC(C)C[C@H](N)C(=O)N[C@H](C(O)=O)CCC(O)=O NFNVDJGXRFEYTK-YUMQZZPRSA-N 0.000 description 2
- OTXBNHIUIHNGAO-UWVGGRQHSA-N Leu-Lys Chemical compound CC(C)C[C@H](N)C(=O)N[C@H](C(O)=O)CCCCN OTXBNHIUIHNGAO-UWVGGRQHSA-N 0.000 description 2
- SBANPBVRHYIMRR-GARJFASQSA-N Leu-Ser-Pro Chemical compound CC(C)C[C@@H](C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)N1CCC[C@@H]1C(=O)O)N SBANPBVRHYIMRR-GARJFASQSA-N 0.000 description 2
- SBANPBVRHYIMRR-UHFFFAOYSA-N Leu-Ser-Pro Natural products CC(C)CC(N)C(=O)NC(CO)C(=O)N1CCCC1C(O)=O SBANPBVRHYIMRR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 108060001084 Luciferase Proteins 0.000 description 2
- 241000282553 Macaca Species 0.000 description 2
- 241000282567 Macaca fascicularis Species 0.000 description 2
- IIHMNTBFPMRJCN-RCWTZXSCSA-N Met-Val-Thr Chemical compound CSCC[C@H](N)C(=O)N[C@@H](C(C)C)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(O)=O IIHMNTBFPMRJCN-RCWTZXSCSA-N 0.000 description 2
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 description 2
- 206010035226 Plasma cell myeloma Diseases 0.000 description 2
- FELJDCNGZFDUNR-WDSKDSINSA-N Pro-Ala Chemical compound OC(=O)[C@H](C)NC(=O)[C@@H]1CCCN1 FELJDCNGZFDUNR-WDSKDSINSA-N 0.000 description 2
- AJBQTGZIZQXBLT-STQMWFEESA-N Pro-Phe-Gly Chemical compound C([C@@H](C(=O)NCC(=O)O)NC(=O)[C@H]1NCCC1)C1=CC=CC=C1 AJBQTGZIZQXBLT-STQMWFEESA-N 0.000 description 2
- 108020004511 Recombinant DNA Proteins 0.000 description 2
- BIYXEUAFGLTAEM-WUJLRWPWSA-N Thr-Gly Chemical compound C[C@@H](O)[C@H](N)C(=O)NCC(O)=O BIYXEUAFGLTAEM-WUJLRWPWSA-N 0.000 description 2
- YOOAQCZYZHGUAZ-KATARQTJSA-N Thr-Leu-Ser Chemical compound [H]N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CO)C(O)=O YOOAQCZYZHGUAZ-KATARQTJSA-N 0.000 description 2
- SPVHQURZJCUDQC-VOAKCMCISA-N Thr-Lys-Leu Chemical compound [H]N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(O)=O SPVHQURZJCUDQC-VOAKCMCISA-N 0.000 description 2
- UYKREHOKELZSPB-JTQLQIEISA-N Trp-Gly Chemical compound C1=CC=C2C(C[C@H](N)C(=O)NCC(O)=O)=CNC2=C1 UYKREHOKELZSPB-JTQLQIEISA-N 0.000 description 2
- QZOSVNLXLSNHQK-UWVGGRQHSA-N Tyr-Asp Chemical compound OC(=O)C[C@@H](C(O)=O)NC(=O)[C@@H](N)CC1=CC=C(O)C=C1 QZOSVNLXLSNHQK-UWVGGRQHSA-N 0.000 description 2
- 201000006704 Ulcerative Colitis Diseases 0.000 description 2
- PZTZYZUTCPZWJH-FXQIFTODSA-N Val-Ser-Ser Chemical compound CC(C)[C@@H](C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)O)N PZTZYZUTCPZWJH-FXQIFTODSA-N 0.000 description 2
- 208000002205 allergic conjunctivitis Diseases 0.000 description 2
- 230000003321 amplification Effects 0.000 description 2
- 230000020411 cell activation Effects 0.000 description 2
- 238000004113 cell culture Methods 0.000 description 2
- 239000003795 chemical substances by application Substances 0.000 description 2
- 230000001143 conditioned effect Effects 0.000 description 2
- 230000002500 effect on skin Effects 0.000 description 2
- 239000002158 endotoxin Substances 0.000 description 2
- 230000004927 fusion Effects 0.000 description 2
- 230000036541 health Effects 0.000 description 2
- 210000002216 heart Anatomy 0.000 description 2
- 208000014951 hematologic disease Diseases 0.000 description 2
- 230000016784 immunoglobulin production Effects 0.000 description 2
- 238000001727 in vivo Methods 0.000 description 2
- 230000004968 inflammatory condition Effects 0.000 description 2
- 208000027866 inflammatory disease Diseases 0.000 description 2
- 238000001802 infusion Methods 0.000 description 2
- 108010034529 leucyl-lysine Proteins 0.000 description 2
- 210000004072 lung Anatomy 0.000 description 2
- 239000003550 marker Substances 0.000 description 2
- 108020004999 messenger RNA Proteins 0.000 description 2
- 230000035772 mutation Effects 0.000 description 2
- 201000000050 myeloid neoplasm Diseases 0.000 description 2
- 238000003199 nucleic acid amplification method Methods 0.000 description 2
- 210000000287 oocyte Anatomy 0.000 description 2
- 230000007170 pathology Effects 0.000 description 2
- 210000003819 peripheral blood mononuclear cell Anatomy 0.000 description 2
- 108010024607 phenylalanylalanine Proteins 0.000 description 2
- 229920001184 polypeptide Polymers 0.000 description 2
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 description 2
- 102000004196 processed proteins & peptides Human genes 0.000 description 2
- 230000000069 prophylactic effect Effects 0.000 description 2
- 238000011552 rat model Methods 0.000 description 2
- 230000004044 response Effects 0.000 description 2
- 238000012163 sequencing technique Methods 0.000 description 2
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 2
- 238000006467 substitution reaction Methods 0.000 description 2
- 230000009261 transgenic effect Effects 0.000 description 2
- 108010038745 tryptophylglycine Proteins 0.000 description 2
- 208000018464 vernal keratoconjunctivitis Diseases 0.000 description 2
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Chemical compound O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- LOGFVTREOLYCPF-KXNHARMFSA-N (2s,3r)-2-[[(2r)-1-[(2s)-2,6-diaminohexanoyl]pyrrolidine-2-carbonyl]amino]-3-hydroxybutanoic acid Chemical compound C[C@@H](O)[C@@H](C(O)=O)NC(=O)[C@H]1CCCN1C(=O)[C@@H](N)CCCCN LOGFVTREOLYCPF-KXNHARMFSA-N 0.000 description 1
- NFGXHKASABOEEW-UHFFFAOYSA-N 1-methylethyl 11-methoxy-3,7,11-trimethyl-2,4-dodecadienoate Chemical compound COC(C)(C)CCCC(C)CC=CC(C)=CC(=O)OC(C)C NFGXHKASABOEEW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- FWMNVWWHGCHHJJ-SKKKGAJSSA-N 4-amino-1-[(2r)-6-amino-2-[[(2r)-2-[[(2r)-2-[[(2r)-2-amino-3-phenylpropanoyl]amino]-3-phenylpropanoyl]amino]-4-methylpentanoyl]amino]hexanoyl]piperidine-4-carboxylic acid Chemical compound C([C@H](C(=O)N[C@H](CC(C)C)C(=O)N[C@H](CCCCN)C(=O)N1CCC(N)(CC1)C(O)=O)NC(=O)[C@H](N)CC=1C=CC=CC=1)C1=CC=CC=C1 FWMNVWWHGCHHJJ-SKKKGAJSSA-N 0.000 description 1
- ZDILXFDENZVOTL-BPNCWPANSA-N Ala-Val-Tyr Chemical compound [H]N[C@@H](C)C(=O)N[C@@H](C(C)C)C(=O)N[C@@H](CC1=CC=C(O)C=C1)C(O)=O ZDILXFDENZVOTL-BPNCWPANSA-N 0.000 description 1
- 108010088751 Albumins Proteins 0.000 description 1
- 102000009027 Albumins Human genes 0.000 description 1
- PQBHGSGQZSOLIR-RYUDHWBXSA-N Arg-Phe Chemical compound NC(N)=NCCC[C@H](N)C(=O)N[C@H](C(O)=O)CC1=CC=CC=C1 PQBHGSGQZSOLIR-RYUDHWBXSA-N 0.000 description 1
- UVTGNSWSRSCPLP-UHFFFAOYSA-N Arg-Tyr Natural products NC(CCNC(=N)N)C(=O)NC(Cc1ccc(O)cc1)C(=O)O UVTGNSWSRSCPLP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- LUJQEUOZJUWRRX-BPUTZDHNSA-N Asn-Trp-Met Chemical compound [H]N[C@@H](CC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CC1=CNC2=C1C=CC=C2)C(=O)N[C@@H](CCSC)C(O)=O LUJQEUOZJUWRRX-BPUTZDHNSA-N 0.000 description 1
- 241000894006 Bacteria Species 0.000 description 1
- 208000008439 Biliary Liver Cirrhosis Diseases 0.000 description 1
- 208000033222 Biliary cirrhosis primary Diseases 0.000 description 1
- 208000018083 Bone metabolism disease Diseases 0.000 description 1
- 108091003079 Bovine Serum Albumin Proteins 0.000 description 1
- 239000008000 CHES buffer Substances 0.000 description 1
- 230000006820 DNA synthesis Effects 0.000 description 1
- 201000004624 Dermatitis Diseases 0.000 description 1
- 206010012434 Dermatitis allergic Diseases 0.000 description 1
- 108700039691 Genetic Promoter Regions Proteins 0.000 description 1
- AVZHGSCDKIQZPQ-CIUDSAMLSA-N Glu-Arg-Ala Chemical compound C[C@H](NC(=O)[C@H](CCCNC(N)=N)NC(=O)[C@@H](N)CCC(O)=O)C(O)=O AVZHGSCDKIQZPQ-CIUDSAMLSA-N 0.000 description 1
- MFVQGXGQRIXBPK-WDSKDSINSA-N Gly-Ala-Glu Chemical compound NCC(=O)N[C@@H](C)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(O)=O MFVQGXGQRIXBPK-WDSKDSINSA-N 0.000 description 1
- GNNJKUYDWFIBTK-QWRGUYRKSA-N Gly-Tyr-Asp Chemical compound [H]NCC(=O)N[C@@H](CC1=CC=C(O)C=C1)C(=O)N[C@@H](CC(O)=O)C(O)=O GNNJKUYDWFIBTK-QWRGUYRKSA-N 0.000 description 1
- 201000005569 Gout Diseases 0.000 description 1
- 208000009329 Graft vs Host Disease Diseases 0.000 description 1
- 208000031886 HIV Infections Diseases 0.000 description 1
- 208000037357 HIV infectious disease Diseases 0.000 description 1
- 108091006905 Human Serum Albumin Proteins 0.000 description 1
- 102000008100 Human Serum Albumin Human genes 0.000 description 1
- WKSHBPRUIRGWRZ-KCTSRDHCSA-N Ile-Trp-Gly Chemical compound CC[C@H](C)[C@@H](C(=O)N[C@@H](CC1=CNC2=CC=CC=C21)C(=O)NCC(=O)O)N WKSHBPRUIRGWRZ-KCTSRDHCSA-N 0.000 description 1
- 102000001706 Immunoglobulin Fab Fragments Human genes 0.000 description 1
- 108010054477 Immunoglobulin Fab Fragments Proteins 0.000 description 1
- 208000022559 Inflammatory bowel disease Diseases 0.000 description 1
- 102100026018 Interleukin-1 receptor antagonist protein Human genes 0.000 description 1
- 101710144554 Interleukin-1 receptor antagonist protein Proteins 0.000 description 1
- 108090001007 Interleukin-8 Proteins 0.000 description 1
- HGCNKOLVKRAVHD-UHFFFAOYSA-N L-Met-L-Phe Natural products CSCCC(N)C(=O)NC(C(O)=O)CC1=CC=CC=C1 HGCNKOLVKRAVHD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- CQQGCWPXDHTTNF-GUBZILKMSA-N Leu-Ala-Glu Chemical compound CC(C)C[C@H](N)C(=O)N[C@@H](C)C(=O)N[C@H](C(O)=O)CCC(O)=O CQQGCWPXDHTTNF-GUBZILKMSA-N 0.000 description 1
- OGUUKPXUTHOIAV-SDDRHHMPSA-N Leu-Glu-Pro Chemical compound CC(C)C[C@@H](C(=O)N[C@@H](CCC(=O)O)C(=O)N1CCC[C@@H]1C(=O)O)N OGUUKPXUTHOIAV-SDDRHHMPSA-N 0.000 description 1
- 239000005089 Luciferase Substances 0.000 description 1
- 241000282560 Macaca mulatta Species 0.000 description 1
- 101001033286 Mus musculus Interleukin-1 beta Proteins 0.000 description 1
- WUGMRIBZSVSJNP-UHFFFAOYSA-N N-L-alanyl-L-tryptophan Natural products C1=CC=C2C(CC(NC(=O)C(N)C)C(O)=O)=CNC2=C1 WUGMRIBZSVSJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- MKWKNSIESPFAQN-UHFFFAOYSA-N N-cyclohexyl-2-aminoethanesulfonic acid Chemical compound OS(=O)(=O)CCNC1CCCCC1 MKWKNSIESPFAQN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 125000001429 N-terminal alpha-amino-acid group Chemical group 0.000 description 1
- 108091007491 NSP3 Papain-like protease domains Proteins 0.000 description 1
- 229930193140 Neomycin Natural products 0.000 description 1
- 206010029164 Nephrotic syndrome Diseases 0.000 description 1
- 108091034117 Oligonucleotide Proteins 0.000 description 1
- 238000012408 PCR amplification Methods 0.000 description 1
- CKJACGQPCPMWIT-UFYCRDLUSA-N Phe-Pro-Phe Chemical compound C([C@H](N)C(=O)N1[C@@H](CCC1)C(=O)N[C@@H](CC=1C=CC=CC=1)C(O)=O)C1=CC=CC=C1 CKJACGQPCPMWIT-UFYCRDLUSA-N 0.000 description 1
- 206010065159 Polychondritis Diseases 0.000 description 1
- 229920000604 Polyethylene Glycol 200 Polymers 0.000 description 1
- 229920001030 Polyethylene Glycol 4000 Polymers 0.000 description 1
- 208000012654 Primary biliary cholangitis Diseases 0.000 description 1
- 241000288906 Primates Species 0.000 description 1
- IWNOFCGBMSFTBC-CIUDSAMLSA-N Pro-Ala-Glu Chemical compound [H]N1CCC[C@H]1C(=O)N[C@@H](C)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(O)=O IWNOFCGBMSFTBC-CIUDSAMLSA-N 0.000 description 1
- HFZNNDWPHBRNPV-KZVJFYERSA-N Pro-Ala-Thr Chemical compound [H]N1CCC[C@H]1C(=O)N[C@@H](C)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(O)=O HFZNNDWPHBRNPV-KZVJFYERSA-N 0.000 description 1
- VYWNORHENYEQDW-YUMQZZPRSA-N Pro-Gly-Glu Chemical compound OC(=O)CC[C@@H](C(O)=O)NC(=O)CNC(=O)[C@@H]1CCCN1 VYWNORHENYEQDW-YUMQZZPRSA-N 0.000 description 1
- 239000012980 RPMI-1640 medium Substances 0.000 description 1
- 101001076393 Rattus norvegicus Interleukin-1 beta Proteins 0.000 description 1
- 208000002200 Respiratory Hypersensitivity Diseases 0.000 description 1
- 208000025747 Rheumatic disease Diseases 0.000 description 1
- 241000283984 Rodentia Species 0.000 description 1
- 240000004808 Saccharomyces cerevisiae Species 0.000 description 1
- 206010040047 Sepsis Diseases 0.000 description 1
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M Sodium chloride Chemical compound [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 102100036865 Solute carrier family 52, riboflavin transporter, member 3 Human genes 0.000 description 1
- 101710102466 Solute carrier family 52, riboflavin transporter, member 3 Proteins 0.000 description 1
- 208000006011 Stroke Diseases 0.000 description 1
- VPZKQTYZIVOJDV-LMVFSUKVSA-N Thr-Ala Chemical compound C[C@@H](O)[C@H](N)C(=O)N[C@@H](C)C(O)=O VPZKQTYZIVOJDV-LMVFSUKVSA-N 0.000 description 1
- LUMXICQAOKVQOB-YWIQKCBGSA-N Thr-Ile Chemical compound CC[C@H](C)[C@@H](C(O)=O)NC(=O)[C@@H](N)[C@@H](C)O LUMXICQAOKVQOB-YWIQKCBGSA-N 0.000 description 1
- 239000007983 Tris buffer Substances 0.000 description 1
- 102000000852 Tumor Necrosis Factor-alpha Human genes 0.000 description 1
- GULIUBBXCYPDJU-CQDKDKBSSA-N Tyr-Leu-Ala Chemical compound [O-]C(=O)[C@H](C)NC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)[C@@H]([NH3+])CC1=CC=C(O)C=C1 GULIUBBXCYPDJU-CQDKDKBSSA-N 0.000 description 1
- BMPPMAOOKQJYIP-WMZOPIPTSA-N Tyr-Trp Chemical compound C([C@H]([NH3+])C(=O)N[C@@H](CC=1C2=CC=CC=C2NC=1)C([O-])=O)C1=CC=C(O)C=C1 BMPPMAOOKQJYIP-WMZOPIPTSA-N 0.000 description 1
- JAQGKXUEKGKTKX-HOTGVXAUSA-N Tyr-Tyr Chemical compound C([C@H](N)C(=O)N[C@@H](CC=1C=CC(O)=CC=1)C(O)=O)C1=CC=C(O)C=C1 JAQGKXUEKGKTKX-HOTGVXAUSA-N 0.000 description 1
- JKHXYJKMNSSFFL-IUCAKERBSA-N Val-Lys Chemical compound CC(C)[C@H](N)C(=O)N[C@H](C(O)=O)CCCCN JKHXYJKMNSSFFL-IUCAKERBSA-N 0.000 description 1
- YMTOEGGOCHVGEH-IHRRRGAJSA-N Val-Lys-Lys Chemical compound CC(C)[C@H](N)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(O)=O YMTOEGGOCHVGEH-IHRRRGAJSA-N 0.000 description 1
- HTONZBWRYUKUKC-RCWTZXSCSA-N Val-Thr-Val Chemical compound CC(C)[C@H](N)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)N[C@@H](C(C)C)C(O)=O HTONZBWRYUKUKC-RCWTZXSCSA-N 0.000 description 1
- 208000010399 Wasting Syndrome Diseases 0.000 description 1
- JLCPHMBAVCMARE-UHFFFAOYSA-N [3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[5-(2-amino-6-oxo-1H-purin-9-yl)-3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[5-(2-amino-6-oxo-1H-purin-9-yl)-3-[[5-(2-amino-6-oxo-1H-purin-9-yl)-3-hydroxyoxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxyoxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(5-methyl-2,4-dioxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxyoxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(5-methyl-2,4-dioxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(4-amino-2-oxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(5-methyl-2,4-dioxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(5-methyl-2,4-dioxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(4-amino-2-oxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(4-amino-2-oxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(4-amino-2-oxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(4-amino-2-oxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methyl [5-(6-aminopurin-9-yl)-2-(hydroxymethyl)oxolan-3-yl] hydrogen phosphate Polymers Cc1cn(C2CC(OP(O)(=O)OCC3OC(CC3OP(O)(=O)OCC3OC(CC3O)n3cnc4c3nc(N)[nH]c4=O)n3cnc4c3nc(N)[nH]c4=O)C(COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3CO)n3cnc4c(N)ncnc34)n3ccc(N)nc3=O)n3cnc4c(N)ncnc34)n3ccc(N)nc3=O)n3ccc(N)nc3=O)n3ccc(N)nc3=O)n3cnc4c(N)ncnc34)n3cnc4c(N)ncnc34)n3cc(C)c(=O)[nH]c3=O)n3cc(C)c(=O)[nH]c3=O)n3ccc(N)nc3=O)n3cc(C)c(=O)[nH]c3=O)n3cnc4c3nc(N)[nH]c4=O)n3cnc4c(N)ncnc34)n3cnc4c(N)ncnc34)n3cnc4c(N)ncnc34)n3cnc4c(N)ncnc34)O2)c(=O)[nH]c1=O JLCPHMBAVCMARE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000004913 activation Effects 0.000 description 1
- 238000007792 addition Methods 0.000 description 1
- 239000002671 adjuvant Substances 0.000 description 1
- 238000001042 affinity chromatography Methods 0.000 description 1
- 108010005233 alanylglutamic acid Proteins 0.000 description 1
- 230000000735 allogeneic effect Effects 0.000 description 1
- 125000000539 amino acid group Chemical group 0.000 description 1
- BFNBIHQBYMNNAN-UHFFFAOYSA-N ammonium sulfate Chemical compound N.N.OS(O)(=O)=O BFNBIHQBYMNNAN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229910052921 ammonium sulfate Inorganic materials 0.000 description 1
- 235000011130 ammonium sulphate Nutrition 0.000 description 1
- 238000011091 antibody purification Methods 0.000 description 1
- 239000008135 aqueous vehicle Substances 0.000 description 1
- 108010069205 aspartyl-phenylalanine Proteins 0.000 description 1
- 208000037979 autoimmune inflammatory disease Diseases 0.000 description 1
- 238000004166 bioassay Methods 0.000 description 1
- 230000004071 biological effect Effects 0.000 description 1
- 210000004369 blood Anatomy 0.000 description 1
- 239000008280 blood Substances 0.000 description 1
- 230000036760 body temperature Effects 0.000 description 1
- 230000037396 body weight Effects 0.000 description 1
- 238000010322 bone marrow transplantation Methods 0.000 description 1
- 239000007975 buffered saline Substances 0.000 description 1
- 230000015556 catabolic process Effects 0.000 description 1
- 230000005754 cellular signaling Effects 0.000 description 1
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 description 1
- 230000001684 chronic effect Effects 0.000 description 1
- 101150076615 ck gene Proteins 0.000 description 1
- 238000010367 cloning Methods 0.000 description 1
- 238000012875 competitive assay Methods 0.000 description 1
- 238000010276 construction Methods 0.000 description 1
- 230000009260 cross reactivity Effects 0.000 description 1
- 238000002425 crystallisation Methods 0.000 description 1
- 230000008025 crystallization Effects 0.000 description 1
- 238000009109 curative therapy Methods 0.000 description 1
- 238000007405 data analysis Methods 0.000 description 1
- 238000006731 degradation reaction Methods 0.000 description 1
- 238000012217 deletion Methods 0.000 description 1
- 230000037430 deletion Effects 0.000 description 1
- 238000009792 diffusion process Methods 0.000 description 1
- 238000011979 disease modifying therapy Methods 0.000 description 1
- 231100000673 dose–response relationship Toxicity 0.000 description 1
- 238000005516 engineering process Methods 0.000 description 1
- 239000012894 fetal calf serum Substances 0.000 description 1
- 108700010758 gag-pro Proteins 0.000 description 1
- 101150081889 gag-pro gene Proteins 0.000 description 1
- 101150089730 gly-10 gene Proteins 0.000 description 1
- 208000024908 graft versus host disease Diseases 0.000 description 1
- 230000012010 growth Effects 0.000 description 1
- 208000006454 hepatitis Diseases 0.000 description 1
- 210000005260 human cell Anatomy 0.000 description 1
- 208000033519 human immunodeficiency virus infectious disease Diseases 0.000 description 1
- 238000009396 hybridization Methods 0.000 description 1
- 230000001900 immune effect Effects 0.000 description 1
- 230000028993 immune response Effects 0.000 description 1
- 210000000987 immune system Anatomy 0.000 description 1
- 238000000338 in vitro Methods 0.000 description 1
- 230000006698 induction Effects 0.000 description 1
- 230000028709 inflammatory response Effects 0.000 description 1
- 239000003978 infusion fluid Substances 0.000 description 1
- 238000003780 insertion Methods 0.000 description 1
- 230000037431 insertion Effects 0.000 description 1
- 238000001990 intravenous administration Methods 0.000 description 1
- 238000010253 intravenous injection Methods 0.000 description 1
- 238000011835 investigation Methods 0.000 description 1
- 208000028867 ischemia Diseases 0.000 description 1
- 238000005304 joining Methods 0.000 description 1
- 210000003734 kidney Anatomy 0.000 description 1
- 210000004185 liver Anatomy 0.000 description 1
- 241001515942 marmosets Species 0.000 description 1
- 201000001441 melanoma Diseases 0.000 description 1
- 108010068488 methionylphenylalanine Proteins 0.000 description 1
- 238000000520 microinjection Methods 0.000 description 1
- 239000000203 mixture Substances 0.000 description 1
- 230000002969 morbid Effects 0.000 description 1
- 238000002703 mutagenesis Methods 0.000 description 1
- 231100000350 mutagenesis Toxicity 0.000 description 1
- 239000013642 negative control Substances 0.000 description 1
- 229960004927 neomycin Drugs 0.000 description 1
- 238000010899 nucleation Methods 0.000 description 1
- 235000015097 nutrients Nutrition 0.000 description 1
- 230000036961 partial effect Effects 0.000 description 1
- 230000002093 peripheral effect Effects 0.000 description 1
- 230000000144 pharmacologic effect Effects 0.000 description 1
- 230000004962 physiological condition Effects 0.000 description 1
- 239000002504 physiological saline solution Substances 0.000 description 1
- 229920001223 polyethylene glycol Polymers 0.000 description 1
- 239000002243 precursor Substances 0.000 description 1
- 238000012545 processing Methods 0.000 description 1
- 230000002250 progressing effect Effects 0.000 description 1
- 230000001737 promoting effect Effects 0.000 description 1
- 238000000159 protein binding assay Methods 0.000 description 1
- 230000005180 public health Effects 0.000 description 1
- 238000012205 qualitative assay Methods 0.000 description 1
- 210000002345 respiratory system Anatomy 0.000 description 1
- 238000002741 site-directed mutagenesis Methods 0.000 description 1
- 210000003491 skin Anatomy 0.000 description 1
- 239000011780 sodium chloride Substances 0.000 description 1
- 238000002415 sodium dodecyl sulfate polyacrylamide gel electrophoresis Methods 0.000 description 1
- 239000002904 solvent Substances 0.000 description 1
- 238000001179 sorption measurement Methods 0.000 description 1
- 125000006850 spacer group Chemical group 0.000 description 1
- 210000004989 spleen cell Anatomy 0.000 description 1
- 238000007655 standard test method Methods 0.000 description 1
- 239000008227 sterile water for injection Substances 0.000 description 1
- 239000011550 stock solution Substances 0.000 description 1
- 239000000758 substrate Substances 0.000 description 1
- 238000002198 surface plasmon resonance spectroscopy Methods 0.000 description 1
- 230000002194 synthesizing effect Effects 0.000 description 1
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 1
- 238000002560 therapeutic procedure Methods 0.000 description 1
- 238000013518 transcription Methods 0.000 description 1
- 230000035897 transcription Effects 0.000 description 1
- 238000012546 transfer Methods 0.000 description 1
- 238000011830 transgenic mouse model Methods 0.000 description 1
- LENZDBCJOHFCAS-UHFFFAOYSA-N tris Chemical compound OCC(N)(CO)CO LENZDBCJOHFCAS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 108010044292 tryptophyltyrosine Proteins 0.000 description 1
- 108010035534 tyrosyl-leucyl-alanine Proteins 0.000 description 1
- 108010003137 tyrosyltyrosine Proteins 0.000 description 1
- 108010073969 valyllysine Proteins 0.000 description 1
- 210000003462 vein Anatomy 0.000 description 1
- DGVVWUTYPXICAM-UHFFFAOYSA-N β‐Mercaptoethanol Chemical compound OCCS DGVVWUTYPXICAM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
- C07K16/18—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans
- C07K16/24—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against cytokines, lymphokines or interferons
- C07K16/244—Interleukins [IL]
- C07K16/245—IL-1
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
- C07K16/18—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans
- C07K16/24—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against cytokines, lymphokines or interferons
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P11/00—Drugs for disorders of the respiratory system
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P11/00—Drugs for disorders of the respiratory system
- A61P11/06—Antiasthmatics
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P13/00—Drugs for disorders of the urinary system
- A61P13/12—Drugs for disorders of the urinary system of the kidneys
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P19/00—Drugs for skeletal disorders
- A61P19/02—Drugs for skeletal disorders for joint disorders, e.g. arthritis, arthrosis
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P19/00—Drugs for skeletal disorders
- A61P19/08—Drugs for skeletal disorders for bone diseases, e.g. rachitism, Paget's disease
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P25/00—Drugs for disorders of the nervous system
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P25/00—Drugs for disorders of the nervous system
- A61P25/08—Antiepileptics; Anticonvulsants
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P27/00—Drugs for disorders of the senses
- A61P27/02—Ophthalmic agents
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P29/00—Non-central analgesic, antipyretic or antiinflammatory agents, e.g. antirheumatic agents; Non-steroidal antiinflammatory drugs [NSAID]
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P3/00—Drugs for disorders of the metabolism
- A61P3/08—Drugs for disorders of the metabolism for glucose homeostasis
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P3/00—Drugs for disorders of the metabolism
- A61P3/08—Drugs for disorders of the metabolism for glucose homeostasis
- A61P3/10—Drugs for disorders of the metabolism for glucose homeostasis for hyperglycaemia, e.g. antidiabetics
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P35/00—Antineoplastic agents
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P37/00—Drugs for immunological or allergic disorders
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P37/00—Drugs for immunological or allergic disorders
- A61P37/02—Immunomodulators
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P37/00—Drugs for immunological or allergic disorders
- A61P37/02—Immunomodulators
- A61P37/06—Immunosuppressants, e.g. drugs for graft rejection
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P37/00—Drugs for immunological or allergic disorders
- A61P37/08—Antiallergic agents
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P43/00—Drugs for specific purposes, not provided for in groups A61P1/00-A61P41/00
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P7/00—Drugs for disorders of the blood or the extracellular fluid
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P9/00—Drugs for disorders of the cardiovascular system
- A61P9/10—Drugs for disorders of the cardiovascular system for treating ischaemic or atherosclerotic diseases, e.g. antianginal drugs, coronary vasodilators, drugs for myocardial infarction, retinopathy, cerebrovascula insufficiency, renal arteriosclerosis
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K2039/505—Medicinal preparations containing antigens or antibodies comprising antibodies
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
- C07K2317/20—Immunoglobulins specific features characterized by taxonomic origin
- C07K2317/24—Immunoglobulins specific features characterized by taxonomic origin containing regions, domains or residues from different species, e.g. chimeric, humanized or veneered
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
- C07K2317/50—Immunoglobulins specific features characterized by immunoglobulin fragments
- C07K2317/56—Immunoglobulins specific features characterized by immunoglobulin fragments variable (Fv) region, i.e. VH and/or VL
- C07K2317/565—Complementarity determining region [CDR]
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Veterinary Medicine (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- General Chemical & Material Sciences (AREA)
- Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
- Pharmacology & Pharmacy (AREA)
- Animal Behavior & Ethology (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Public Health (AREA)
- Immunology (AREA)
- Diabetes (AREA)
- Pulmonology (AREA)
- Hematology (AREA)
- Rheumatology (AREA)
- Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Biophysics (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Physical Education & Sports Medicine (AREA)
- Obesity (AREA)
- Endocrinology (AREA)
- Neurology (AREA)
- Neurosurgery (AREA)
- Pain & Pain Management (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- Urology & Nephrology (AREA)
- Orthopedic Medicine & Surgery (AREA)
- Emergency Medicine (AREA)
- Ophthalmology & Optometry (AREA)
- Heart & Thoracic Surgery (AREA)
- Vascular Medicine (AREA)
- Cardiology (AREA)
- Transplantation (AREA)
Description
Opis wynalazku
Niniejszy wynalazek dotyczy przeciwciał wiążących ludzką interleukinę 1 beta (IL-1 β) i stosowania takich przeciwciał do leczenia chorób i zaburzeń z udziałem IL-1.
Interleukina 1 (IL-1) jest wytwarzana przez komórki układu odpornościowego, która działa jako mediator ostrej fazy odpowiedzi zapalnej. Nieodpowiednie lub nadmierne wytwarzanie IL-1, szczególnie IL-1 β, jest związane z patologią różnych chorób i zaburzeń takich jak posocznica, szok septyczny lub endotoksyczny, alergie, astma, utrata tkanki kostnej, niedokrwienie, udar, reumatoidalne zapalenie stawów i inne zaburzenia zapalne. Zaproponowano przeciwciała wiążące IL-1 β do stosowania w terapii chorób i zaburzeń z udziałem IL-1; patrz na przykład, WO 95/01997 i dyskusja w jego wstępie.
Wynalazek przedstawia ulepszone przeciwciała wiążące ludzką IL-1 β do stosowania w leczeniu chorób i zaburzeń z udziałem IL-1.
Przedmiotem wynalazku jest przeciwciało wiążące IL-1 β wykazujące specyficzność wiązania antygenu do epitopu antygenowego dojrzałej ludzkiej IL-1 β, obejmującego pętlę zawierającą reszty Gly 22, Pro 23, Tyr 24 i Glu 25, i zdolne do hamowania wiązania IL-1 β do jej receptora, przy czym przeciwciało wiążące IL-1 β zawiera miejsce wiążące antygen zawierające przynajmniej jedną domenę zmienną (VH) ciężkiego łańcucha immunoglobuliny, która obejmuje kolejno regiony hiperzmienne CDR1, CDR2 i CDR3 jak przedstawiono w sekwencji aminokwasów jak przedstawiono w SEQ ID No. 1, przy czym CDR1 ma sekwencję aminokwasów Ser-Tyr-Trp-Ile-Gly, CDR2 ma sekwencję aminokwasów Ile-Ile-Tyr-Pro-Ser-Asp-Ser-Asp-Thr-Arg-Tyr-Ser-Pro-Ser-Phe-GIn-Gly, zaś CDR3 ma sekwencję aminokwasów Tyr-Thr-Asn-Trp-Asp-Ala-Phe-Asp-Ile, oraz przeciwciało wiążące IL-1 β zawiera miejsce wiążące antygen zawierające przynajmniej jedną domenę zmienną (VL) lekkiego łańcucha immunoglobuliny, która zawiera kolejno regiony hiperzmienne CDR1', CDR2' i CDR3' jak przedstawiono w sekwencji aminokwasów jak przedstawiono w SEQ ID No. 2, przy czym CDR1' ma sekwencję aminokwasów Arg-Ala-Ser-GIn-Ser-Val-Ser-Ser-Tyr-Leu-Ala, CDR2' mają sekwencję Asp-Ala-Ser-AsnArg-Ala-Thr, zaś CDR3' ma sekwencję GIn-GIn-Arg-Ser-Asn-Trp-Met-Phe-Pro.
W korzystnym wariancie przeciwciało wiążące IL-1 β stanowi ludzkie przeciwciało.
Przeciwciało wiążące IL-1 β według wynalazku stosuje się jako lek.
Wynalazkiem jest również pierwszy konstrukt DNA kodujący ciężki łańcuch lub jego fragment, zawierający:
pierwszą część, która koduje domenę zmienną, zawierającą naprzemiennie regiony zrębowe i regiony hiperzmienne, przy czym regiony hiperzmienne stanowią kolejno CDR1, CDR2 i CDR3, których sekwencje aminokwasów są przedstawione w SEQ ID No 1, przy czym ta pierwsza część zaczyna się od kodonu kodującego pierwszy aminokwas domeny zmiennej i kończy się kodonem kodującym ostatni aminokwas domeny zmiennej, oraz drugą część kodującą stałą część łańcucha ciężkiego, który zaczyna się od kodonu kodującego pierwszy aminokwas domeny stałej łańcucha ciężkiego i kończy się kodonem kodującym ostatni aminokwas domeny stałej, po czym następuje kodon stop oraz drugi konstrukt DNA kodujący łańcuch lekki, który zawiera pierwszą część, która koduje domenę zmienną zawierającą naprzemiennie regiony zrębowe i regiony hiperzmienne, przy czym regiony hiperzmienne stanowią CDR3' i ewentualnie CDR1' i CDR2', których sekwencje aminokwasów są przedstawione w SEQ ID No. 2, przy czym ta pierwsza część zaczyna się od kodonu kodującego pierwszy aminokwas zmiennej domeny i kończy się kodonem kodującym ostatni aminokwas zmiennej domeny oraz drugą część kodującą część stałą łańcucha lekkiego, która zaczyna się od kodonu kodującego pierwszy aminokwas domeny stałej łańcucha lekkiego i kończy się kodonem kodującym ostatni aminokwas części stałej, po czym następuje kodon stop.
Przedmiotem wynalazku jest również wektor ekspresyjny zdolny do replikacji w prokariotycznej lub eukariotycznej linii komórkowej, obejmujący konstrukty DNA określone powyżej.
Wynalazkiem jest również kompozycja farmaceutyczna zawierająca przeciwciało wiążące IL-1 β, określone powyżej, w kombinacji z farmaceutycznie akceptowalną zaróbką, rozcieńczalnikiem lub nośnikiem.
Wynalazek dotyczy również sposobu wytwarzania przeciwciała wiążącego IL-1 β obejmującego hodowanie organizmu, który jest transformowany wektorem ekspresyjnym określonym powyżej oraz odzyskiwanie przeciwciała wiążącego IL-1 β z hodowli.
PL 207 642 B1
Wynalazkiem jest ponadto zastosowanie przeciwciała IL-1 β opisanego powyżej do wytwarzania leku do leczenia lub zapobiegania choroby lub zaburzenia, w którym pośredniczy IL-1, ostrej lub nadostrej reakcji zapalnej, ostrych infekcji, wstrząsu septycznego, wstrząsu endotoksycznego, zespołu ostrego wyczerpania oddechowego dorosłych, zapalenia opon mózgowo-rdzeniowych, zapalenia płuc, poważnych poparzeń, kacheksji albo syndromu wyczerpania, raka, zaburzenia czynności narządu, kacheksji związanej z AIDS, lub do zapobiegania lub leczenia stanów zapalnych, alergii i stanów alergicznych, reakcji nadwrażliwościowych, chorób autoimmunizacyjnych, ostrych zakażeń, odrzucenia przeszczepów narządów lub tkanek, artretyzmu, reumatoidalnego zapalenia stawów, postępujące przewlekłe zapalenie stawów i zniekształcającego zapalenia stawów, chorób reumatoidalnych, bólu o podłożu zapalnym, nadwrażliwości dróg oddechowych, jak i nadwrażliwości skórnej, autoimmunizacyjnego zaburzenia hematologicznego, anemii hemolitycznej, anemii aplastycznej, anemii czystoczerwonokrwinkowej, małopłytkowości idiopatycznej, ogólnoustrojowego tocznia rumieniowatego, zapalenia wielorzęstkowego, twardziny skóry, ziarnicy Wegenera, zapalenia skórno-mięśniowego, przewlekłego czynnego zapalenia wątroby, miastenii rzekomoporaźnej, łuszczycy, zespołu StevenaJohnsona, idiopatycznej psylozy, autoimmunizacyjnej choroby zapalnej jelit, wrzodziejącego zapalenia jelita, choroby Crohn'a, zespołu nadwrażliwego jelita, wytrzeszczu w chorobie Basedowa, choroby Gravesa, sarkoidozy, stwardnienia rozsianego, żółciowej pierwotnej marskości wątroby, cukrzycy młodzieńczej, cukrzycy typu I, zapalenia błony naczyniowej przedniego i tylnego odcinka oka, suchego zapalenia rogówki i spojówki, wiosennego zapalenia rogówki i spojówki, śródmiąższowego zwłóknienia płuc, łuszczycowego zapalenia stawów, zapalenia kłębuszków nerkowych, idiopatycznego zespołu nefrotycznego, nefropatii z minimalnymi zmianami, astmy, zapalenia oskrzeli, pylicy płuc, rozedmy płuc, i innych zatorowych lub zapalnych chorób dróg oddechowych, chorób metabolizmu kości, zapalenia kości i stawów, osteoporozy i innych zapaleń stawów, oraz zaniku tkanki kostnej, zaniku tkanki kostnej związanego z wiekiem, choroby przyzębia, raka, guzów zależnych od IL-1.
O ile nie jest wskazane inaczej, dowolny polipeptydowy łańcuch tu opisywany ma sekwencję aminokwasów rozpoczynającą się N-końcem i kończącą się na C-końcem. Gdy miejsce wiązania antygenu zawiera obie domeny VH i VL, mogą być one umieszczone na tej samej cząsteczce polipeptydu lub korzystnie każda domena może być na innym łańcuchu; domena VH jest częścią fragmentu łańcucha ciężkiego immunoglobuliny lub jego fragmentu i VL częścią fragmentu łańcucha lekkiego immunoglobuliny lub jego fragmentu.
Przez „przeciwciało wiążące IL-1 β rozumie się dowolną cząsteczkę zdolną do wiązania antygenu IL-1 β albo samą lub w połączeniu z innymi cząsteczkami. Reakcja wiązania może być wykazana standardowymi metodami (oznaczenia jakościowe) obejmującymi na przykład, biooznaczenie do wyznaczania inhibicji wiązania IL-1 β do jej receptora lub dowolny rodzaj oznaczeń wiązania, z odniesieniem do negatywnego testu kontrolnego, w którym stosowane jest przeciwciało o niepokrewnej specyficzności, ale o tym samym izotypie np. przeciwciało anty-CD25. Korzystnie wiązanie przeciwciała wiążącego IL-1 β według wynalazku do IL-1 β może być wykazane w kompetytywnym oznaczeniu wiązania.
Przykłady przeciwciała wiążącego antygen obejmują przeciwciała, takie jak wytwarzane przez komórki B lub hybrydomę i chimerowe, z przeszczepionym CDR i ludzkie lub ich dowolny fragment, np. fragmenty F(ab')2 i Fab.
Przeciwciało o pojedynczym łańcuchu jest złożone z domen zmiennych łańcuchów ciężkich i lekkich przeciwciała, kowalencyjnie związanych przez „linker peptydowy, zazwyczaj złożony z 10 do 30 aminokwasów, korzystnie od 15 do 25 aminokwasów. A więc taka struktura nie obejmuje części stałej łańcuchów ciężkich i lekkich, i uważa się, że mały „spacer peptydowy powinien być mniej antygenowy niż cała część stała. Przez chimerowe przeciwciało rozumie się przeciwciało, w którym regiony stałe łańcuchów ciężkich lub lekkich lub obu są pochodzenia ludzkiego, podczas gdy domeny zmienne obu łańcuchów ciężkich i lekkich są pochodzenia innego niż ludzkie (np. mysie) lub pochodzenia ludzkiego, ale pochodzą z innego ludzkiego przeciwciała.
Przez „przeciwciało z przeszczepionym CDR rozumie się przeciwciało, w którym regiony hiperzmienne (CDR) pochodzą od przeciwciała dawcy, takiego jak niepochodzące od człowieka przeciwciało (np. mysie) lub z innego ludzkiego przeciwciała, podczas gdy wszystkie lub zasadniczo wszystkie inne części immunoglobuliny np. regiony stałe i wysoce konserwatywne części domen zmiennych, tj. regiony zrębowe, pochodzą od przeciwciała akceptorowego, np. przeciwciała pochodzenia ludzkiego. Przeciwciało o przeszczepionym CDR może jednak zawierać kilka aminokwasów z sekwencji dawcy w regionie zrębowym, na przykład w częściach regionu zrębowego przylegających do regionów hiperzmiennych.
PL 207 642 B1
Przez „ludzkie przeciwciało rozumie się przeciwciało, w którym stałe i zmienne części obu łańcuchów ciężkich i lekkich są pochodzenia ludzkiego lub zasadniczo identyczne do sekwencji pochodzenia ludzkiego, niekoniecznie z tego samego przeciwciała, i obejmuje przeciwciała wytworzone przez myszy, w których geny mysie części zmiennej i stałej immunoglobuliny zostały zastąpione przez ich ludzkie odpowiedniki np. jak ogólnie ujawniono w EP 0546073 B1, USP 5545806, USP 5569825,
USP 5625126, USP 5633425, USP 5661016, USP 5770429, EP 0 438474 B1 i EP 0 463151 B1.
Szczególnie korzystne przeciwciała wiążące IL-1 β według wynalazku są przeciwciałami ludzkimi, szczególnie przeciwciałem AAL 160, jak dalej opisano w przykładach.
W korzystnych chimerowych przeciwciałach domeny zmienne obu łańcuchów ciężkich i lekkich są pochodzenia ludzkiego, na przykład te z przeciwciała AAL 160, które są przedstawione w SEK ID NR 1 i SEK ID NR 2. Domeny regionu stałego korzystnie też zawierają odpowiednie domeny stałych regionów ludzkich, na przykład jak opisano w Sequences of Proteins of Immunological Interest, Kabat E.A. i wsp., US Department of Health and Human Services, Public Health Service, National Institute of Health.
Regiony hiperzmienne mogą być związane z dowolnym rodzajem regionów zrębowych, choć korzystnie są pochodzenia ludzkiego. Odpowiednie regiony szkieletowe są opisane w Kabat E.A. i wsp. Korzystny zrąb łańcucha ciężkiego jest zrębem ludzkiego łańcucha ciężkiego, na przykład przeciwciała AAL 160, które jest przedstawione w SEK ID NR 1. Składa się z sekwencji regionów FR1, FR2, FR3 i FR4. W podobny sposób, SEK ID NR 2 przedstawia korzystny zrąb łańcucha lekkiego AAL 160, który składa się kolejno z regionów FR1', FR2', FR3' i FR4'.
Wynalazek dostarcza także przeciwciało wiążące IL-1 β, które zawiera przynajmniej jedno miejsce wiążące antygen zawierające albo pierwszą domenę mającą sekwencję aminokwasów zasadniczo identyczną z tą przedstawioną w SEK ID NR 1, zaczynając od aminokwasu w pozycji 1 i kończąc aminokwasem w pozycji 118 lub pierwszą domenę jak opisano powyżej i drugą domenę mającą sekwencję aminokwasów zasadniczo identyczną z przedstawioną w SEK ID NR 2, zaczynając od aminokwasu w pozycji 1 i kończąc aminokwasem w pozycji 107.
Monoklonalne przeciwciała wytworzone przeciwko białku naturalnie spotykanemu u wszystkich ludzi są typowo opracowywane w systemach nie pochodzących od ludzi np. u myszy. W bezpośredniej konsekwencji przeciwciało ksenogenne takie jak wytworzone przez hybrydomę, gdy jest podawane ludziom, wywołuje niepożądaną odpowiedź odpornościową, w której przede wszystkim bierze udział część stała ksenogennej immunoglobuliny. To wyraźnie ogranicza stosowanie takich przeciwciał, jako że nie mogą być podawane przez dłuższe okresy. Dlatego też jest szczególnie korzystne stosowanie przeciwciał jednołańcuchowych, chimerowych, z przeszczepionym CDR lub szczególnie ludzkich, które nie powinny wywoływać znaczącej odpowiedzi allogenicznej po podaniu ludziom.
Z powyższych względów, przeciwciało wiążące IL-1 β według wynalazku jest wybrane z ludzkiego przeciwciała IL-1 β, które zawiera przynajmniej
a) łańcuch ciężki immunoglobuliny, który zawiera (i) domenę zmienną zawierającą kolejno regiony hiperzmienne CDR1, CDR2 i CDR3 i (ii) część stałą lub jej fragment ludzkiego łańcucha ciężkiego; wymienione CDR1 mają sekwencję aminokwasów Ser-Tyr-Trp-lle-Gly, wymienione CDR2 mają sekwencję aminokwasów lle-lle-Tyr-Pro-Ser-Asp-Ser-Asp-Thr-Arg-Tyr-Ser-Pro-Ser-Phe-Gln-Gly, a wymienione CDR3 mają sekwencję aminokwasów Tyr-Thr-Asn-Trp-Asp-Ala-Phe-Asp-lle i
b) łańcuch lekki immunoglobuliny lub jego fragment, który zawiera (i) domenę zmienną zawierającą region hiperzmienny CDR3' i także regiony hiperzmienne CDR1', CDR2' i (ii) część stałą lub jej fragment ludzkiego łańcucha lekkiego, wymienione CDR1' mają sekwencję aminokwasów Arg-AlaSer-Gln-Ser-Val-Ser-Ser-Tyr-Leu-Ala, wymienione CDR2' mają sekwencję aminokwasów Asp-AlaSer-Asn-Arg-Ala-Thr, a wymienione CDR3' mają sekwencję aminokwasów Gln-GIn-Arg-Ser-Asn-TrpMet-Phe-Pro.
Alternatywnie, przeciwciało wiążące IL-1 β według wynalazku może być wybrane z pojedynczego łańcucha przeciwciała, które zawiera miejsce wiążące antygen zawierające:
a) jedną domenę zawierającą kolejno regiony hiperzmienne CDR1, CDR2 i CDR3, wymienione regiony hiperzmienne mają sekwencje aminokwasów jak przedstawiono w SEK ID NR 1,
b) jedną domenę zawierającą regiony hiperzmienne CDR3' i CDR1' i CDR2', wymienione regiony hiperzmienne mają sekwencje aminokwasów jak przedstawiono w SEK ID NR 2 oraz
c) linker peptydowy, który jest związany albo do N-końca pierwszej domeny i do C-końca drugiej domeny lub do C-końca pierwszej domeny i do N-końca drugiej domeny.
PL 207 642 B1
Jak wiadomo, niewielkie zmiany w sekwencji aminokwasów takie jak delecja, addycja lub substytucja jednego, paru lub nawet kilku aminokwasów może doprowadzić do formy allelicznej oryginalnego białka, która ma zasadniczo identyczne właściwości.
Przez ich bezpośrednie odpowiedniki rozumie się albo dowolne jednodomenowe przeciwciało wiążące IL-1 β (cząsteczka X):
i) w którym regiony hiperzmienne CDR1, CDR2 i CDR3 są w całości homologiczne w przynajmniej 80%, korzystnie homologiczne w przynajmniej 90%, bardziej korzystnie homologiczne w przynajmniej 95%, do regionów hiperzmiennych jak przedstawiono w SEK ID NR 1 oraz ii) które jest zdolne do hamowania wiązania IL-1 β do jej receptorów, zasadniczo w tym samym stopniu jak cząsteczka odniesienia mająca regiony zrębowe identyczne z tymi w cząsteczce X, ale mająca regiony hiperzmienne CDR1, CDR2 i CDR3 identyczne do tych przedstawionych na SEK ID NR 1, lub dowolne przeciwciało wiążące IL-1 β mające przynajmniej dwie domeny na miejsce wiążące (cząsteczka X'),
i) w którym regiony hiperzmienne CDR1, CDR2, CDR3, CDR3' oraz ewentualnie CDR1' i CDR2' są w całości homologiczne w przynajmniej 80%, korzystnie homologiczne w przynajmniej 90%, bardziej korzystnie homologiczne w przynajmniej 95%, do regionów hiperzmiennych jak przedstawiono w SEK ID NR 1 i 2 oraz ii) które jest zdolne do hamowania wiązania IL-1 β do jej receptorów zasadniczo w tym samym stopniu jak cząsteczka odniesienia mająca regiony szkieletowe identyczne z tymi w cząsteczce X', ale mająca regiony hiperzmienne CDR1, CDR2, CDR3, i CDR3' oraz ewentualnie CDR1' i CDR2' identyczne do tych przedstawionych na SEK ID NR 1 i 2.
W obecnym opisie sekwencje aminokwasów są homologiczne do siebie w przynajmniej 80%, jeśli mają przynajmniej 80% identycznych reszt aminokwasów w podobnej pozycji, gdy sekwencje są optymalnie porównane, przy czym przerwy lub wstawienia w sekwencji aminokwasów są liczone jako reszty nieidentyczne.
Hamowanie wiązania IL-1 β do jej receptora może być badane w różnych oznaczeniach, wliczając oznaczenia, jakie opisano dalej w tym tekście. Stosowany receptor IL-1 β jest korzystnie receptorem IL-1 β typu 1. Przez określenie w tym samym stopniu rozumie się, że cząsteczka odniesienia i ekwiwalentna wykazują, na zasadzie statystycznej, zasadniczo identyczne krzywe hamowania wiązania IL-1 β w jednym z oznaczeń wymienionych powyżej.
Na przykład, stosowane oznaczenie może być oznaczeniem kompetytywnego hamowania IL-1 β przez rozpuszczalne receptory IL-1 i przeciwciało IL-1 β według wynalazku.
Najbardziej korzystnie ludzkie przeciwciało IL-1 β zawiera przynajmniej
a) jeden łańcuch ciężki, który zawiera domenę zmienną mającą sekwencję aminokwasów identyczną do tej przedstawionej w SEK ID NR 1, zaczynając od aminokwasu w pozycji 1 i kończącej się aminokwasem w pozycji 118 i część stałą ludzkiego łańcucha ciężkiego; oraz
b) jeden łańcuch lekki, który zawiera domenę zmienną mającą sekwencję aminokwasów identyczną do tej przedstawionej w SEK ID NR 2, zaczynając od aminokwasu w pozycji 1 i kończącej się aminokwasem w pozycji 107 i część stałą ludzkiego łańcucha lekkiego.
Część stała ludzkiego łańcucha ciężkiego może być typu γ1(γ2, γ3, γ4, μ, α1, α2, δ lub ε, korzystnie typu γ, bardziej korzystnie typu γ1, podczas gdy część stała łańcucha lekkiego może być typu κ lub λ, (który obejmuje podtypy λ1, λ2 i λ3) ale jest korzystnie typu κ. Sekwencje aminokwasów całej tej części stałej są podane w Kabat i inni, tamże.
Przeciwciało wiążące IL-1 β według wynalazku może być wytworzone za pomocą technik rekombinacji DNA. Ze względu na to trzeba skonstruować jedną lub więcej cząsteczek DNA, kodujących przeciwciało wiążące IL-1 β, umieszczonych pod odpowiednimi sekwencjami kontrolnymi i przenieść do odpowiedniego organizmu gospodarza w celu ekspresji. Ogólnie ujmując, wynalazek dotyczy:
(i) cząsteczki DNA kodującej przeciwciało wiążące IL-1 β o pojedynczym łańcuchu, według wynalazku, łańcucha ciężkiego oraz lekkiego lub jego fragmentu przeciwciała wiążącego IL-1 β oraz (ii) wytwarzania przeciwciała wiążącego IL-^, przy zastosowaniu wektora ekspresyjnego, obejmującego konstrukty DNA.
Zgodnie z obecnym stanem wiedzy specjalista jest w stanie syntetyzować cząsteczki DNA według wynalazku na podstawie podanej tu informacji tzn. sekwencji aminokwasów regionów hiperzmiennych i kodujących je sekwencji DNA. Sposób konstrukcji genu domeny zmiennej jest opisany na przykład w EPA 239 400 i może być pokrótce streszczony w sposób następujący: Klonuje się gen kodujący domenę zmienną MAb o dowolnej specyficzności. Określa się odcinki DNA kodujące regiony
PL 207 642 B1 zrębowe i regiony hiperzmienne i usuwa się odcinki DNA kodujące regiony hiperzmienne tak, że odcinki DNA kodujące regiony zrębowe są razem połączone za pomocą odpowiednich miejsc restrykcyjnych na stykach. Miejsca restrykcyjne mogą być wygenerowane w odpowiednich pozycjach przez mutagenezę cząsteczki DNA procedurami standardowymi. Przygotowuje się dwuniciowe syntetyczne kasety CDR za pomocą syntezy DNA według sekwencji podanych w SEK ID NR 1 lub 2. Tym kasetom nadaje się lepkie końce tak, że mogą być ligowane na stykach szkieletu.
Co więcej, nie jest konieczny dostęp do mRNA z wytwarzającej linii komórkowej hybrydomy, aby uzyskać konstrukt DNA kodujący przeciwciało wiążące IL-1 β według wynalazku. Tak więc zgłoszenie PCT WO 90/07861 podaje pełne instrukcje wytwarzania przeciwciała za pomocą technik rekombinacji DNA, posiadając wyłącznie informację pisemną o sekwencji nukleotydów tego genu. Sposób obejmuje syntezę pewnej ilości oligonukleotydów, ich amplifikację za pomocą techniki PCR i ich łączenie, aby uzyskać pożądaną sekwencję DNA.
Wektory ekspresyjne, obejmujące odpowiedni promotor lub geny kodujące części stałe łańcucha ciężkiego i lekkiego, są ogólnie dostępne. Tak więc gdy cząsteczka DNA według wynalazku jest przygotowana, może być dogodnie przeniesiona do odpowiedniego wektora ekspresyjnego. Cząsteczki DNA kodujące przeciwciała o pojedynczym łańcuchu mogą być też przygotowane za pomocą technik standardowych, na przykład jak opisano w WO 88/1649.
Ze względu na powyższe nie jest konieczne deponowanie hybrydomy czy linii komórkowej, aby spełnić kryteria wystarczającego ujawnienia.
Wynalazek obejmuje pierwsze i drugie konstrukty DNA do produkcji przeciwciała wiążącego IL-1 β, jak opisano poniżej.
Pierwszy konstrukt DNA koduje łańcuch ciężki lub jego fragment i zawiera:
a) pierwszą część, która koduje domenę zmienną zawierającą naprzemiennie regiony zrębowe i regiony hiperzmienne, wymienione regiony hiperzmienne stanowią kolejno CDR1, CDR2 i CDR3, których sekwencje aminokwasów są przedstawione w SEK ID NR 1, ta pierwsza część zaczyna się od kodonu kodującego pierwszy aminokwas domeny zmiennej i kończy się kodonem kodującym ostatni aminokwas domeny zmiennej, oraz
b) drugą część kodującą część stałą łańcucha ciężkiego lub jego fragment, który zaczyna się od kodonu kodującego pierwszy aminokwas domeny stałej łańcucha ciężkiego i kończy się kodonem kodującym ostatni aminokwas domeny stałej lub jej części, po czym następuje kodon stop.
Korzystnie, ta pierwsza część koduje domenę zmienną mającą sekwencję aminokwasów zasadniczo identyczną do sekwencji aminokwasów, jak przedstawiono w SEK ID NR 1, zaczynając od aminokwasu w pozycji 1 i kończącą się aminokwasem w pozycji 118. Korzystnie pierwsza część ma sekwencję nukleotydów jak przedstawiono w SEK ID NR 1 zaczynając od nukleotydu w pozycji 1 i kończąc nukleotydem w pozycji 354. Także korzystnie, druga część koduje część stałą ludzkiego łańcucha ciężkiego, bardziej korzystnie część stałą ludzkiego łańcucha γ1. Ta druga część może być fragmentem DNA pochodzenia genomowego (zawierającą introny) lub fragmentem cDNA (bez intronów).
Drugi konstrukt DNA koduje łańcuch lekki lub jego fragment i zawiera:
a) pierwszą część, która koduje domenę zmienną zawierającą naprzemiennie regiony zrębowe i regiony hiperzmienne, te regiony hiperzmienne stanowią CDR3' i ewentualnie CDR1' i CDR2', których sekwencje aminokwasów są przedstawione w SEK ID NR 2, ta pierwsza część zaczyna się od kodonu kodującego pierwszy aminokwas domeny zmiennej i kończy się kodonem kodującym ostatni aminokwas domeny zmiennej, oraz
b) drugą część kodującą część stałą łańcucha lekkiego lub jego fragment, który zaczyna się od kodonu kodującego pierwszy aminokwas domeny stałej łańcucha lekkiego i kończy się kodonem kodującym ostatni aminokwas części stałej lub jej fragmentu, po czym następuje kodon stop.
Korzystnie, ta pierwsza część koduje domenę zmienną mającą sekwencję aminokwasów zasadniczo identyczną do sekwencji aminokwasów, jak przedstawiono w SEK ID NR 2, zaczynając od aminokwasu w pozycji 1 i kończąc aminokwasem w pozycji 107. Bardziej korzystnie, pierwsza część ma sekwencję nukleotydów jak przedstawiono w SEK ID NR 2 zaczynając od nukleotydu w pozycji 1 i kończąc nukleotydem w pozycji 321. Także korzystnie druga część koduje część stałą ludzkiego łańcucha lekkiego, bardziej korzystnie część stałą ludzkiego łańcucha κ.
Opis obejmuje także przeciwciała wiążące IL-1 β, w których jedna lub więcej z reszt CDR1,
CDR2, CDR3, CDR1', CDR2' lub CDR3' są zmienione w stosunku do reszt przedstawionych w SEK ID
NR 1 i SEK ID NR 2; na przykład przez mutację np. mutagenezę ukierunkowaną odpowiednich sekwencji DNA. Ujawnienie obejmuje sekwencje DNA kodujące takie zmienione przeciwciała wiążące IL-1 β.
PL 207 642 B1
W szczególności ujawnienie obejmuje przeciwciała wiążące IL-1 β, w których jedna lub więcej reszt
CDR1' lub CDR2' były zmienione w stosunku do reszt przedstawionych w SEK ID NR 2.
W pierwszych i drugich konstruktach DNA, pierwsze i drugie części mogą być oddzielone przez intron, a enhancer może być dogodnie zlokalizowany w intronie między pierwszą i drugą częścią. Obecność takiego enhancera, który ulega transkrypcji ale nie translacji, może pomóc w wydajnej transkrypcji. W szczególnych wykonaniach pierwsze i drugie konstrukty DNA zawierają enhancer genu łańcucha ciężkiego korzystnie pochodzenia ludzkiego.
Każdy z konstruktów DNA jest umieszczony pod kontrolą odpowiednich sekwencji kontrolnych, w szczególności pod kontrolą odpowiedniego promotora. Może być stosowany dowolny rodzaj promotora pod warunkiem, że jest przystosowany do organizmu gospodarza, do którego będą przeniesione konstrukty DNA w celu ekspresji. Jednak jeśli ekspresja ma się odbywać w komórce ssaka, szczególnie korzystne jest stosowanie promotora genu immunoglobuliny lub promotora wirusa cytomegalii (CMV), jak np. promotor ludzkiego CMV.
Pożądane przeciwciało może być produkowane w hodowli komórkowej lub w zwierzęciu transgenicznym. Odpowiednie zwierzę transgeniczne można uzyskać według metod standardowych, które obejmują mikroiniekcję do komórek jajowych pierwszych i drugich konstruktów DNA umieszczonych pod odpowiednimi sekwencjami kontrolnymi, przeniesienie tak przygotowanych komórek jajowych do odpowiednich samic pseudociężarnych i wybranie potomka do ekspresji pożądanego przeciwciała.
Gdy łańcuchy przeciwciała są produkowane w hodowli komórek, konstrukty DNA muszą być najpierw wstawione albo do pojedynczego wektora ekspresyjnego albo do dwóch oddzielnych, ale kompatybilnych wektorów ekspresyjnych, przy czym korzystna jest ta druga możliwość.
Wynalazek dotyczy także wektora ekspresyjnego zdolnego do replikacji w linii komórkowej prokariotycznej lub eukariotycznej, który zawiera konstrukty DNA opisane powyżej.
Wektor ekspresyjny zawierający konstrukt DNA następnie przenosi się do odpowiedniego organizmu gospodarza. Gdy konstrukty DNA są oddzielnie wstawione na dwóch wektorach ekspresyjnych, mogą być przenoszone oddzielnie, tzn. jeden typ wektora na komórkę lub przenoszone razem, ta druga możliwość jest korzystna. Odpowiedni organizm gospodarza może być bakterią, drożdżami lub linią komórkową ssaka, ten ostatni jest korzystny. Bardziej korzystnie, linia komórkowa ssaka jest pochodzenia limfoidalnego, jak np. szpiczak, hybrydoma lub normalne immortalizowane komórki B, które dogodnie nie wyrażają żadnego endogennego łańcucha lekkiego lub ciężkiego przeciwciała.
Dla ekspresji w komórkach ssaka korzystne jest, żeby sekwencja kodująca przeciwciało wiążące IL-1 β była włączona do DNA komórki gospodarza w obrębie położenia, które pozwala lub sprzyja ekspresji przeciwciała wiążącego IL-1 β na wysokim poziomie. Komórki, w których sekwencja kodująca przeciwciało wiążące IL-1 β jest włączona w takie korzystne położenia, mogą być zidentyfikowane i wyselekcjonowane na podstawie poziomów przeciwciała IL-^. Dowolny odpowiedni marker selekcyjny może być stosowany do przygotowania komórek gospodarza zawierających sekwencje kodujące przeciwciało wiążące IL1 β; na przykład może być stosowany system selekcji gen dhfr/metotreksat lub równoważny. Korzystne systemy ekspresji przeciwciał wiążących IL-1 β według wynalazku obejmują systemy amplifikacji/selekcji oparte na GS, takie jak te ujawnione w EP 0256055 B, EP 0323997 B oraz w europejskim zgłoszeniu patentowym 89303964.4. Korzystnie także wektor może zawierać inne sekwencje według życzenia do ułatwiania ekspresji, obróbki i eksportu białka, na przykład, wektor może typowo zawierać sekwencję lidera związaną z sekwencją kodującą.
Wynalazek dotyczy sposobu wytwarzania przeciwciała wiążącego IL-1 β, który obejmuje (i) hodowlę organizmu, który jest transformowany wektorem ekspresyjnym jak zdefiniowano powyżej i (ii) odzyskanie przeciwciała wiążącego IL-1 β z hodowli.
Zgodnie z obecnym wynalazkiem stwierdzono, że przeciwciało AAL160 ma specyficzność wiązania do epitopu antygenowego ludzkiej IL-1 β, który obejmuje pętlę zawierającą reszty Gly 22, Pro 23, Tyr 24 i Glu 25 dojrzałej ludzkiej IL-1 β. (reszty Gly 22, Pro 23, Tyr 24 i Glu 25 dojrzałej ludzkiej IL-1 β odpowiadają resztom 138, 139, 140 i 141, odpowiednio, prekursora ludzkiej IL-1 β). Ten epitop wydaje się być poza miejscem rozpoznawania receptora IL-1 i jest więc szczególnie zadziwiające, że przeciwciała wiążące ten epitop, np. przeciwciało AAL160, są zdolne do hamowania wiązania IL-1 β do jej receptora. Przeciwciała zwłaszcza chimerowe przeciwciała z przeszczepionym CDR i szczególnie ludzkie przeciwciała, które mają specyficzność wiązania się do epitopu antygenowego dojrzałej ludzkiej IL-1 β, co obejmuje pętlę zawierającą reszty Gly 22, Pro 23, Tyr 24 i Glu 25, i które są zdolne do hamowania wiązania IL-1 β do jego receptora oraz stosowanie takich przeciwciał do terapii chorób i zaburzeń zostało ujawnione.
PL 207 642 B1
Tak więc w dalszym aspekcie opis obejmuje przeciwciało na IL-1 β, które ma specyficzność wiązania antygenu do antygenowego epitopu ludzkiej IL-1 β, który obejmuje pętlę zawierającą reszty Gly 22, Pro 23, Tyr 24 i Glu 25 dojrzałej ludzkiej IL-1 β, i który jest zdolny do wiązania IL-1 β do jej receptora.
W dalszych aspektach ujawnienie obejmuje:
i) zastosowanie przeciwciała wiążącego IL-1 β, które ma specyficzność wiązania antygenu do epitopu antygenowego dojrzałej ludzkiej IL-1 β, który obejmuje pętlę zawierającą reszty Gly 22, Pro 23, Tyr 24 i Glu 25, i które jest zdolne do hamowania wiązania IL-1 β do jej receptora do terapii choroby lub zaburzenia z udziałem IL-1;
ii) sposób leczenia choroby lub zaburzeń z udziałem IL-1 u pacjenta, który obejmuje podanie pacjentowi skutecznej ilości przeciwciała wiążącego IL-1 β, które ma specyficzność wiązania antygenu do epitopu antygenowego dojrzałej ludzkiej IL-1 β, który obejmuje pętlę zawierającą reszty Gly 22, Pro 23, Tyr 24 i Glu 25, i które jest zdolne do hamowania wiązania IL-1 β do jej receptora;
iii) kompozycję farmaceutyczną zawierającą przeciwciało wiążące IL-1 β, która ma specyficzność wiązania antygenu do epitopu antygenowego dojrzałej ludzkiej IL-1 β, który obejmuje pętlę zawierającą reszty Gly 22, Pro 23, Tyr 24 i Glu 25, i które jest zdolne do hamowania wiązania IL-1 β do jej receptora w kombinacji z dopuszczalną farmaceutycznie zaróbką, rozcieńczalnikiem lub nośnikiem; oraz iv) zastosowanie przeciwciała wiążącego IL-1 β, które ma specyficzność wiązania antygenu do epitopu antygenowego dojrzałej ludzkiej IL-1 β, który obejmuje pętlę zawierającą reszty Gly 22, Pro 23, Tyr 24 i Glu 25, i które jest zdolne do hamowania wiązania IL-1 β do jej receptora, do przygotowania leku do leczenia choroby lub zaburzenia z udziałem IL-1.
W niniejszym opisie, przeciwciało jest zdolne do hamowania wiązania IL-1 β jeśli przeciwciało jest zdolne do hamowania wiązania IL-1 β do jej receptora, zasadniczo w tym samym stopniu jak przeciwciało AAL160, gdzie w tym samym stopniu ma znaczenie jak zdefiniowano powyżej.
W obecnym opisie wyrażenie choroba z udziałem IL-1 obejmuje wszystkie choroby i stany medyczne, w których IL-1 odgrywa rolę, bezpośrednią czy pośrednią, w chorobie lub stanie medycznym obejmujące powodowanie, rozwój, postęp, utrzymywanie lub patologię choroby lub stanu.
W obecnym opisie określenia terapia lub leczenie dotyczą terapii zarówno profilaktycznej lub zapobiegającej, jak i terapii leczniczej lub modyfikującej chorobę, w tym leczenie pacjenta zagrożonego zachorowaniem lub podejrzewanego o nabawienie się choroby, jak i pacjentów, którzy są chorzy lub zostali zdiagnozowani jako cierpiący na chorobę lub stan medyczny i obejmuje zahamowanie nawrotu klinicznego.
Przeciwciała według wynalazku mają specyficzność wiązania do epitopu antygenowego dojrzałej ludzkiej IL-1 β, który obejmuje pętlę zawierającą reszty Gly 22, Pro 23, Tyr 24 i Glu 25, i są zdolne do hamowania wiązania IL-1 β do jej receptora. Korzystnie przeciwciała według wynalazku mają specyficzność wiązania tego epitopu ludzkiej IL-1 β gdy ludzka IL-1 β jest w warunkach natywnych, np. normalnych warunkach fizjologicznych, nie w warunkach denaturowanych np. bez czynnika denaturującego takiego jak SDS. Przeciwciała według wynalazku mogą reagować krzyżowo z IL-1 β niepochodzącym od człowieka, które mają epitopy antygenowe, które obejmują reszty Gly 22, Pro 23, Tyr 24 i Glu 25 i które są bardzo podobne do odpowiedniego ludzkiego epitopu. Na przykład, przeciwciała według wynalazku mogą reagować krzyżowo z IL-1 β naczelnych takich jak małpa rezus, małpa Macaca fasciculans lub IL-1 małpy marmoset (mała szerokonosa małpa Ameryki tropikalnej).
Korzystne przeciwciała według wynalazku są ludzkimi przeciwciałami, najbardziej korzystnie przeciwciałem AAL160. Przeciwciała według wynalazku blokują oddziaływania IL-1 β z jej komórkami docelowymi, stąd są wskazane do stosowania w terapii chorób i zaburzeń z udziałem IL-1. Te i inne aktywności farmakologiczne przeciwciał według wynalazku mogą być wykazane w standardowych metodach testowych na przykład jak opisano poniżej:
1. Neutralizacja aktywacji promotora IL-8 z udziałem ludzkiej IL-1 β
Potencjał neutralizacji sygnalizacji komórkowej zależnej od IL-1 β określa się w oznaczeniu z genem reportera.
Linia komórkowa czerniaka ludzkiego G361 jest stabilnie transfekowana konstruktem genu reportera lucyferazy opartym na ludzkim promotorze IL-1 β. Ekspresja i aktywność genu reportera zależy od IL-1 β lub TNFa w tej linii komórkowej. Komórki stymuluje się 300 pg/ml zrekombinowanej ludzkiej IL-1 β lub odpowiednikiem 100 pg/ml w podłożu kondycjonowanym w obecności różnych stężeń przeciwciała według wynalazku lub antagonisty receptora IL-1 w zakresie między 6 i 18000 pM. Chimerowe przeciwciało Simulect® (basiliximab) jest stosowane jako dopasowana kontrola izotypu. Aktywność
PL 207 642 B1 lucyferazy określa się ilościowo w oznaczeniu z chemiluminescencją. Przeciwciała według wynalazku typowo wykazują IC50 około 1 nM (np. od około 0,2 do około 5 nM) gdy są testowane w tym oznaczeniu.
2. Neutralizacja wytwarzania PGE2 i interleukiny-6 zależnej od IL-1 β przez pierwotne ludzkie fibroblasty.
Wytwarzanie PGE2 i IL-6 w pierwotnych ludzkich skórnych fibroblastach zależy od IL-1 β. Sam TNF-α nie może skutecznie indukować tych mediacji zapalnych, ale synergizuje z IL-1. Pierwotne fibroblasty skórne są stosowane jako model zastępczy dla aktywacji komórkowej indukowanej przez IL-1.
Pierwotne ludzkie fibroblasty są stymulowane zrekombinowaną IL-1 β lub podłożem kondycjonowanym uzyskanym ze stymulowanych LPS ludzkich PBMC w obecności różnych stężeń przeciwciała według wynalazku lub IL-1RA w zakresie od 6 do 18000 pM. Chimerowe przeciwciało anty-CD25 Simulect® (basiliximab) jest stosowane jako dopasowana kontrola izotypu. Supernatant pobiera się po 16 godz. stymulacji, oznacza w nim 1L-6 za pomocą ELISA, lub PGE2 za pomocą RIA. Przeciwciała według wynalazku typowo mają IC50 dla hamowania produkcji IL-6 około 1 nM lub mniej (np. od około 0,1 do około 1 nM) i do hamowania produkcji PGE2 około 1nM (np. od około 0,1 do około 1 nM), gdy są testowane jak powyżej.
Jak wskazano w powyższych oznaczeniach przeciwciała według wynalazku silnie blokują efekty lL-1 β. Tak więc przeciwciała według wynalazku mają następującą użyteczność farmaceutyczną:
Przeciwciała według wynalazku są pożyteczne dla profilaktyki i terapii chorób lub stanów medycznych z udziałem IL-1, np. stanów zapalnych, alergii i stanów alergicznych, reakcji nadwrażliwości, chorób autoimmunizacyjnych, ostrych zakażeń i odrzucaniu przeszczepów narządów lub tkanek.
Na przykład, przeciwciała według wynalazku mogą być pożyteczne do leczenia biorców przeszczepów serca, płuc, łączonych serca i płuc, wątroby, nerki, skóry lub rogówki i do zapobiegania choroby przeszczep-przeciw-gospodarzowi takiej jak po przeszczepie szpiku kostnego.
Przeciwciała według wynalazku są szczególnie pożyteczne do terapii, zapobiegania lub poprawy stanu w chorobach autoimmunizacyjnych, a także chorobach typu: stanów zapalnych, w szczególności stanów zapalnych z etiologią mającą komponentę autoimmunizacyjną taką jak zapalenie stawów (na przykład reumatoidalne zapalenie stawów, postępujące przewlekłe zapalenie stawów i zniekształcającego zapalenia stawów) i choroby reumatoidalne, w tym stany zapalne i choroby reumatyczne obejmujące utratę tkanki kostnej, ból zapalny, nadwrażliwość (obejmujące zarówno nadwrażliwość dróg oddechowych jak i nadwrażliwość skórną) i alergie. Specyficzne choroby autoimmunizacyjne, dla których mogą być stosowane przeciwciała według wynalazku obejmują autoimmunizacyjne zaburzenia hematologiczne (włączając np. anemię hemolityczną, anemię aplastyczną, anemię czystoczerwonokrwinkową i idiopatyczną małopłytkowość), ogólnoustrojowy toczeń rumieniowaty, zapalenie wielochrząstkowe, twardzinę skóry, ziarnicę Wegenera, zapalenie skórno-mięśniowe, przewlekle czynne zapalenie wątroby, ciężką miastenię, łuszczycę, zespół Stevena-Johnsona, idiopatyczną psylozę, autoimmunizacyjną zapalną chorobę jelit (w tym np. wrzodziejące zapalenie jelita, choroba Crohna i zespół nadwrażliwego jelita), wytrzeszcz w chorobie Basedowa, chorobę Gravesa, sarkoidozę, stwardnienie rozsiane, marskość wątroby żółciową pierwotną, cukrzycę młodzieńczą (cukrzyca typu I), suche zapalenie rogówki i spojówki (przedniego i tylniego odcinka), wiosenne zapalenie rogówki i spojówki, śródmiąższowe zwłóknienie płuc, artropatię łuszczycową i zapalenie kłębuszków nerkowych (z i bez zespołu nefrotycznego tzn. obejmując idiopatyczny zespół nefrotyczny lub nefropatię z minimalnymi zmianami).
Przeciwciała według wynalazku są także pożyteczne do terapii, zapobiegania lub poprawy stanu w przebiegu astmy, zapalenia oskrzeli, pylicy płuc, rozedmy płuc i innych zatorowych lub zapalnych chorób dróg oddechowych.
Przeciwciała według wynalazku są pożyteczne do leczenia niepożądanych ostrych i nadostrych reakcji zapalnych z udziałem IL-1 lub obejmujących wytwarzanie IL-1, szczególnie IL-1 β, lub pobudzania uwalniania TNF przez IL-1, np. ostre zakażenia, na przykład wstrząs septyczny (np. wstrząs endotoksynowy i zespół zaburzeń oddechowych dorosłych), zapalenie opon mózgowych, zapalenie płuc i ciężkie oparzenia i do leczenia kacheksji lub zespołu wyniszczenia związanego z chorobliwym uwalnianiem TNF w efekcie zakażenia, raka lub dysfunkcji narządu, szczególnie kacheksji związanej z AIDS np. związanej lub wynikającej z zakażenia HIV.
Przeciwciała według wynalazku są szczególnie użyteczne do leczenia chorób metabolizmu kości, w tym gośćca zwyrodniającego, osteoporozy i innych zapaleń stawów oraz ogólnie utraty tkanki kostnej, w tym utraty tkanki kostnej związanej z wiekiem i w szczególności choroby przyzębia.
PL 207 642 B1
Przeciwciała według wynalazku mogą być stosowane do leczenia nowotworów, szczególnie guzów zależnych od IL-1.
Dla tych wskazań odpowiednia dawka będzie się oczywiście zmieniała w zależności na przykład, od danego przeciwciała według wynalazku, które ma być stosowane, gospodarza, sposobu podania, natury i powagi stanu, który jest leczony. Jednak w stosowaniu profilaktycznym na ogół można uzyskać zadowalające wyniki przy dziennych dawkach od około 0,1 mg do około 5 mg na kilogram masy ciała. Przeciwciało według wynalazku jest dogodnie podawane pozajelitowo, dożylnie, np. do żyły zgięcia łokciowego lub innej żyły obwodowej, domięśniowo lub podskórnie. Terapia profilaktyczna typowo obejmuje podawanie cząsteczki według wynalazku raz dziennie do raz na tydzień przez 2 do 4 tygodni.
Kompozycje farmaceutyczne według wynalazku mogą być wytwarzane w sposób konwencjonalny. Kompozycja według wynalazku jest korzystnie dostarczana w postaci liofilizowanej. Do bezpośredniego podania jest rozpuszczana w odpowiednim nośniku wodnym, na przykład sterylnej wodzie do iniekcji lub sterylnej buforowanej soli fizjologicznej. Jeśli jest uważane za pożądane przyrządzenie roztworu o większej objętości do podawania w formie wlewu, np. wlewu dożylnego, raczej niż iniekcji dużej dawki np. iniekcji dużej dawki podskórnej, korzystne jest włączenie ludzkiej albuminy surowiczej lub własnej heparynizowanej krwi pacjenta do soli fizjologicznej w czasie przygotowywania formuły. Obecność nadmiaru takiego fizjologicznie biernego białka zapobiega stratom przeciwciała przez adsorpcję na ścianach pojemnika i rurek stosowanych z roztworem wlewu. Jeśli jest stosowana albumina, odpowiednie stężenie wynosi od 0,5 do 4,5% wagowo względem roztworu soli fizjologicznej.
Wynalazek jest dalej opisany na zasadzie ilustracji w następujących przykładach, które odnoszą się do załączonych fig.:
fig. 1, która jest wykresem przedstawiającym inhibicję kompetytywną wiązania AAL160 do IL-1 β przez rozpuszczalne receptory IL-1 typu I i typu II;
fig. 2, która jest wykresem przedstawiającym hamowanie gorączki indukowanej przez IL-1 β w modelu szczura przez AAL160, oraz fig. 3, która jest wykresem przedstawiającym czas działania AAL160 w gorączce indukowanej przez IL-1 β u szczura.
P r z y k ł a d y
Transgeniczne myszy otrzymano do ekspresji ludzkiego repertuaru IgG/κ, zamiast mysiego repertuaru immunoglobulin (Fishwild i inni, 1996, Nat BiotechnoL, 14, 845-851), użyto do wytworzenia przeciwciał na ludzką IL-1 β. Komórki B z tych myszy unieśmiertelniono za pomocą standardowej technologii hybrydyzacji komórkowej i uzyskano komórki mysich hybrydom, które wydzielają ludzkie przeciwciało IgG1/K AAL160.
P r z y k ł a d 1: Uzyskanie hybrydomy i oczyszczenie przeciwciała
Uzyskaną z pomocą inżynierii genetycznej mysz 66 (Medarex Inc. Annadale, NJ) immunizowano zrekombinowaną ludzką IL-1 β (50 μg) w adiuwancie, podskórnie w kilku miejscach. Myszy wzmagano dodatkowo pięć razy, z ostatnią iniekcją trzy dni przed fuzją. W dniu fuzji mysz 66 zabijano przez wdychanie CO2, a komórki śledziony (4,1 x 107) poddawano fuzji za pomocą rutynowej metody stosując PEG 4000 z równą ilością komórek PAI-O, linii komórkowej szpiczaka myszy. Komórki po fuzji wysiewano w 624 studzienkach (1 ml/studzienkę) zawierających warstwę odżywczą komórek otrzewnej myszy (myszy Balb C) w RPMI 1640 uzupełnionym HAT, 10% inaktywowaną termicznie płodową surowicą cielęcą i 5 x 10-5 M β-merkaptoetanolem. Zebrano supernatanty i badano w teście ELISA pod kątem monoklonalnych przeciwciał reagujących z IL-1 β. Zidentyfikowano pięć reagujących przeciwciał monoklonalnych podklasy IgG/K. Przeprowadzono klonowanie stosując płytki mikrotytracyjne 4 x 96 wysiewając 0,5 komórek na studzienkę. Po dwóch tygodniach oglądano studzienki pod mikroskopem odwróconym. Supernatant zebrano ze studzienek dodatnich pod kątem wzrostu i oceniano wytwarzanie monoklonalnych przeciwciał anty-IL-1 β za pomocą testu ELISA. Przygotowano 1-2 I kondycjonowanego supernatantu z czterech subklonów oryginalnie zidentyfikowanej hybrydomy #476, a przeciwciała oczyszczono za pomocą chromatografii powinowactwa na kolumnie z białkiem A.
Czystość i częściowe sekwencje aminokwasów łańcucha ciężkiego i lekkiego
Sekwencjonowanie aminokwasów
Lekki i ciężki łańcuch oczyszczonego przeciwciała AAL160 oddzielono za pomocą SDS-PAGE i określono aminokwasy N-końcowe za pomocą degradacji Edmana. Czystość przeciwciała stosowanego w tych badaniach wynosi >90% na podstawie sekwencjonowania. Sekwencje cDNA kodujące domeny zmienne ciężkiego i lekkiego łańcucha uzyskano za pomocą amplifikacji PCR cDNA uzyskanego z mRNA ze sklonowanych komórek hybrydomy i w pełni zsekwencjonowano. Amino-końcowe
PL 207 642 B1 sekwencje domen zmiennych ciężkiego i lekkiego łańcucha i odpowiednie sekwencje DNA są podane poniżej, gdzie CDR są wytłuszczone.
Seq. Id no. 1 30 60
| GAG Glu | GTG Val | CAG Gin | CTG Leu | GTG Val | CAG TCT | GGA GCA GAG | GTG Val | AAA Lys | AAG Lys | CCC Pro | GGG Gly | GAG Glu | TCT Ser | CTG Leu | AAG Lys | ATC Ile 20 | |||
| Gin | Ser | Gly | Ala | Glu 10 | |||||||||||||||
| 90 | CDR1 | 120 | |||||||||||||||||
| TCC | TGT | AAG | GGT | TCT | GGA | TAC | AGC | TTT | ACC | AGC | TAC | TGG | ATC | GGC | TGG | GTG | CGC | CAG | ATG |
| Ser | Cys | Lys | Gly | Ser | Gly | Tyr | Ser | Phe | Thr | Ser | Tyr | Trp | Ile | Gly | Trp | Val | Arg | Gin | Met |
| 30 | 40 | ||||||||||||||||||
| 150 | CDR2 | 180 | |||||||||||||||||
| CCC | GGG | AAA | GGC | CTG | GAG | TGG | ATG | GGG | ATC | ATC | TAT | CCT | AGT | GAC | TCT | GAT | ACC | AGA | TAC |
| Pro | Gly | Lys | Gly | Leu | Glu | Trp | Met | Gly | Ile | Ile | Tyr | Pro | Ser | Asp | Ser | Asp | Thr | Arg | Tyr |
| 50 | 60 | ||||||||||||||||||
| 210 | 240 | ||||||||||||||||||
| AGC | CCG | TCC | TTC | CAA | GGC | CAG | GTC | ACC | ATC | TCA | GCC | GAC | AAG | TCC | ATC | AGC | ACC | GCC | TAC |
| Ser | Pro | Ser | Phe | Gin | Gly | Gin | Val | Thr | Ile | Ser | Ala | Asp | Lys | Ser | Ile | Ser | Thr | Ala | Tyr |
| 70 | 80 | ||||||||||||||||||
| 270 | 300 | ||||||||||||||||||
| CTG | CAG | TGG | AGC | AGC | CTG | AAG | GCC | TCG | GAC | ACC | GCC | ATG | TAT | TAC | TGT | GCG | AGA | TAT | ACC |
| Leu | Gin | Trp | Ser | Ser | Leu | Lys | Ala | Ser | Asp | Thr | Ala | Met | Tyr | Tyr | Cys | Ala | Arg | Tyr | Thr |
| 90 | 100 | ||||||||||||||||||
| CDR3 | 330 | ||||||||||||||||||
| AAC | TGG | GAT | GCT | TTT | GAT | ATC | TGG | GGC | CAA | GGG | ACA | ATG | GTC | ACC | GTC | TCT | TCA | ||
| Asn | Trp | Asp | Ala | Phe | Asp | Ile | Trp | Gly | Gin | Gly | Thr | Met | Val | Thr | Val | Ser | Ser | ||
| Seq | . Id no. 2 | ||||||||||||||||||
| 30 | 60 | ||||||||||||||||||
| GAA | ATT | GTG | TTG | ACA | CAG | TCT | CCA | GCC | ACC | CTG | TCT | TTG | TCT | CCA | GGG | GAA | AGA | GCC | ACC |
| Glu | Ile | Val | Leu | Thr | Gin | Ser | Pro | Ala | Thr | Leu | Ser | Leu | Ser | Pro | Gly | Glu | Arg | Ala | Thr |
| 10 | 20 | ||||||||||||||||||
| CDR1 | 90 | 120 | |||||||||||||||||
| CTC | TCC | TGC | AGG | GCC | AGT | CAG | AGT | GTT | AGC | AGC | TAC | TTA | GCC | TGG | TAC | CAA | CAG | AAA | CCT |
| Leu | Ser | Cys | Arg | Ala | Ser | Gin | Ser | Val | Ser | Ser | Tyr | Leu | Ala | Trp | Tyr | Gin | Gin | Lys | Pro |
| 30 | 40 |
150 CDR2 180
GGC CAG GCT CCC AGG CTC CTC ATC TAT GAT GCA TCC AAC AGG GCC ACT GGC ATC CCA GCC
PL 207 642 B1
| Gly Gin | Ala | Pro | Arg | Leu | Leu | Ile | Tyr | Asp 50 | Ala | Ser | Asn | Arg | Ala | Thr | Gly | Ile | Pro Ala 60 | ||
| 210 | 240 | ||||||||||||||||||
| AGG | TTC | AGT | GGC | AGT | GGG | TCT | GGG | ACA | GAC | TTC | ACT | CTC | ACC | ATC | AGC | AGC | CTT | GAG | CCT |
| Arg | Phe | Ser | Gly | Ser | Gly | Ser | Gly | Thr | Asp | Phe | Thr | Leu | Thr | Ile | Ser | Ser | Leu | Glu | Pro |
| 70 | 80 | ||||||||||||||||||
| 270 | CDR3 | 300 | |||||||||||||||||
| GAA | GAT | TTT | GCA | GTT | TAT | TAC | TGT | CAG | CAG | CGT | AGC | AAC | TOG | ATG | TTC | CCT | TTT | GGC | CAG |
| Glu | Asp | Phe | Ala | Val | Tyr | Tyr | Cys | Gin | Gin | Arg | Ser | Asn | Trp | Met | Phe | Pro | Phe | Gly | Gin |
| 90 | 100 |
| GGG | ACC | AAG | CTG | GAG | ATC | AAA |
| Glv | Thr | Lvs | Leu | Glu | Ile | Lvs |
Sekwencje DNA kodujące domeny zmienne ciężkiego i lekkiego łańcucha i odpowiednie sekwencje aminokwasów AAL160 są także podane w załączonej liście sekwencji jako SEK ID NR 1 do 4.
Konstrukcja wektorów ekspresyjnych dla ciężkiego i lekkiego łańcucha
Sklonowane sekwencje kodujące VL i VH zamplifikowano za pomocą PCR i wstawiono poprzez odpowiednie miejsca restrykcyjne do wektorów kasetowych zapewniających promotor immunoglobuliny, sekwencje lidera przeciwciała RFT2 (Heinrich i WSP., (1989), J. Immunol., 143, 3589-97), część odcinków J i miejsce donorowe do składania. Kasetę łańcucha lekkiego zawierającą cały region VL, promotor i sekwencję lidera do sekrecji przeniesiono do wektora ekspresyjnego zawierającego ludzki gen Ck, enhancer łańcucha ciężkiego immunoglobuliny i cDNA zmodyfikowanego mysiego dhfr do selekcji na metotreksacie (MTX).
Kasetę łańcucha ciężkiego przeniesiono odpowiednio do wektora ekspresyjnego kodującego ludzki gen IgG1, enhancer łańcucha ciężkiego immunoglobuliny i gen oporności na neomycynę do selekcji.
Zarówno ciężki jak i lekki łańcuch są w konfiguracji w wektorach ekspresyjnych, która przypomina konfigurację genomową rearanżowanych genów immunoglobuliny, co jest uważane za bardzo istotne dla ekspresji na wysokim poziomie.
Dla wytwarzania przeciwciał, powyższe wektory ko-transfekowane do odpowiedniej linii komórkowej gospodarza np. linii komórkowej SP2/0, komórki zawierające sekwencje wektora selekcjonowano za pomocą metotreksatu i wybrane linie komórkowe hodowano do ekspresji przeciwciała AAL160. Alternatywnie można stosować system amplifikacji/selekcji oparty na GS taki jak ujawniono w EP 0256055 B, EP 0323997 B lub europejskim zgłoszeniu patentowym 89303964,4; wówczas selekcyjny marker dhfr jest zastąpiony przez sekwencję kodującą GS.
P r z y k ł a d 2: Dane biochemiczne i biologiczne
Stwierdzono, że monoklonalne przeciwciało AAL160 neutralizuje aktywność interleukiny-1 β in vitro. Monoklonalne przeciwciało dalej scharakteryzowano pod kątem jego wiązania do zrekombinowanej ludzkiej IL-1 β za pomocą analizy Biacore. Sposób neutralizacji oceniano za pomocą badania wiązania kompetycyjnego z rozpuszczalnymi receptorami IL-1, aktywność biologiczną przeciwciała AAL160 w stosunku do zrekombinowanej i naturalnie produkowanej IL-1 β określono w pierwotnych komórkach ludzkich (przykład 3), reagujących na stymulację przez IL-1 β.
2.1 Ustalenie stałej równowagi dysocjacji
Stałą tempa asocjacji i dysocjacji wiązania rekombinowanej ludzkiej IL-1 β do AAL160 określono za pomocą analizy BIAcore. AAL160 immobilizowano i mierzono wiązanie zrekombinowanej IL-1 β w zakresie stężeń od 0,5 do 12 nM za pomocą powierzchniowego rezonansu plazmonowego. Wybrany format pozwala na traktowanie zdarzenia wiązania IL-1 β do AAL160 według stechiometrii 1:1.
Analizę danych przeprowadzono stosując oprogramowanie BIAevaluation.
PL 207 642 B1
| Stała tempa asocjacji [M'1s'1] | (n=15) | (3,91 ± 0,14)x105 | średnia ± SEM |
| Stała tempa dysocjacji [s-1] | (n=15) | (1,53 ± 0,05)x10-4 | średnia ± SEM |
| Stała równowagi dysocjacji KD[M] | (n=15) | (396,6 ± 19,5)x10-12 | średnia ± SEM |
AAL160 wiąże zrekombinowaną ludzką IL-1 β z wysokim powinowactwem.
2.2. Kompetycyjne hamowanie wiązania do rozpuszczalnych receptorów IL-1
Badania kompetycyjnego wiązania z rozpuszczalnymi receptorami IL-1 typu I i II
Współzawodnictwo między AAL160 i rozpuszczalnymi receptorami IL-1 typu I i II mierzono za pomocą Biacore. AAL160 immobilizowano na powierzchni chipu i wstrzyknięto zrekombinowaną ludzką IL-1 β (8 nM) w celu wiązania do AAL160 w braku lub obecności zwiększających się stężeń rozpuszczalnego receptora I (0-10nM) lub receptora II (0-80nM). Uzyskane wyniki przedstawiono na fig. 1. Wiązanie NVP AAL160 NX-1 do IL-1 β jest współzawodniczące z obydwoma typami receptora IL-1 typu I i typu II.
2.3 Profil reaktywności ludzkiej IL-Ια, ludzkiej IL-1RA I IL-1 β z gryzoni i gatunków małp
Profil reaktywności AAL160 wiążącej ludzką IL-1a, IL-1 RA, i IL-1 β myszy, szczura, królika i małpy Macaca fasicularis określono za pomocą analizy Biacore. AAL160 immobilizowano i nakładano badane cytokiny w stężeniu 8 nM (lub 20 nM dla IL-1 β).
| Procent całkowitego wiązania ± SEM | |
| Ludzka IL-1 β | 100 |
| Ludzka IL-1a | 0,7 ± 0,7(n=3) |
| Ludzka IL-1Ra | 1,2 ± 1,2(n=3) |
| IL-1 β myszy | 2,8 ± 1,5(n=3) |
| IL-1 β szczura | 3,0 ± 2,5(n=3) |
| IL-1 β Macaca fascicularis | 96,4 ± 6,8 (n=3) |
| IL-1 β królika | 12,1 ± 2,3(n=4) |
AAL160 nie reaguje znacząco krzyżowo z ludzką IL-1a, ludzką IL-1Ra, lub IL-1 β myszy, szczura czy królika. Reaktywność w stosunku do IL-1 β małpy Macaca fascicularis jest zasadniczo identyczna jak do ludzkiej cytokiny.
P r z y k ł a d 3: Neutralizacja produkcji PGE2 i interleukiny 6 zależnej od IL-1 β przez pierwotne ludzkie fibroblasty
Wytwarzanie PGE2 i IL-6 w pierwotnych ludzkich fibroblastach skóry zależy od IL-1 β. Pojedynczy TNF-α nie może skutecznie indukować tych zapalnych mediatorów, ale synergizuje z lL-1. Pierwotne fibroblasty skóry są stosowane jako model zastępczy dla indukowanej przez IL-1 aktywacji komórek.
Pierwotne ludzkie fibroblasty stymulowano zrekombinowaną IL-1 β lub kondycjonowaną pożywką uzyskaną ze stymulowanych LPS ludzkich PBMC w obecności różnych stężeń AAL160 lub IL-1RA w zakresie od 6 do 18000 pM. Chimerowe przeciwciało anty-CD25 Simulect® (basiliximab) stosowano jako kontrolę o dopasowanym izotypie. Supernatant zebrano 16 godzin po stymulacji i oznaczano w nim IL-6 za pomocą testu ELISA lub PGE2 za pomocą RIA.
| AAL160 IC50 ± SEM(n>3) | IL-1 Ra IC50 ± SEM(n>3) | |
| sekrecja IL-6 rekombinant | 0,34 ± 0,037 nM | nie oznaczano |
| sekrecja IL-6 kondycjonowane podłoże | 0,6 ± 0,09 nM | 0,03 + 0,001 nM |
| wytwarzanie PGE2 kondycjonowane podłoże | 0,79 ± 0,17 nM | nie oznaczano |
AAL160 skutecznie blokuje wytwarzanie IL-6 i PGE2 w ludzkich fibroblastach skóry z IC50 podobnym zarówno dla zrekombinowanej jak i naturalnej IL-1 β.
PL 207 642 B1
P r z y k ł a d 4: Skuteczność in vivo I czas trwania działania AAL160
Skuteczność
Skuteczność in vivo przeciwciała anty-hulL-^ AAL 160 badano na modelu szczura, gdzie indukowano gorączkę przez iniekcję i.v. hulL-1 β (100 ng/szczura). Przeciwciało powoduje zależne od dawki hamowanie odpowiedzi gorączki w zakresie dawki 1,3 i 10 μg/kg i.v. (n=6 szczurów) - patrz fig. 2. CHI 621 (Simulect®, basiliximab) jest stosowany jako przeciwciało kontrolne.
Czas działania:
Czas działania AAL-160 badano w gorączce szczura indukowanej przez IL-1 β jak następuje: Przeciwciało wstrzykiwano i.v. albo 24 godziny albo 30 minut (protokół standardowy) przed indukcją gorączki przez iniekcję i.v. ludzkiej IL-1 β, i mierzono temperaturę ciała 2 i 4 godziny później. Podobny stopień zahamowania reakcji gorączki jest widoczny dla obu czasów (patrz fig. 3). Jak oczekiwano, kontrolne przeciwciało CHI 621 (Simulect®, basiliximab) jest nieskuteczne w obu punktach czasowych. Ten wynik wskazuje, że ludzkie przeciwciało AAL160 jest obecne w formie aktywnej przez przynajmniej 24 godziny u szczura i nie jest metabolizowane, wydalane lub wiązane w tkankach w tym czasie.
P r z y k ł a d 5: Badania AAL160 Fab i jego kompleksu z IL-1 β za pomocą promieni rentgenowskich
Określenie struktury AAL160 Fab przy rozdzielczości 2,0 A:
Zestaw danych przy rozdzielczości 2,0 A bardzo dobrej jakości (Rsym = 0,051, całkowitość = 99,9%, redundancja = 8,2) zebrano z kryształu Fab hodowanego przez dyfuzję pary w technice wiszącej kropli w pH 9,5 w 50% PEG 200, 0,1 M CHES. Kryształ odpowiadał grupie przestrzennej P212121 z wymiarami pojedynczych komórek: a=62,17 A, b=89,83 A, c=123,73 A i z jedną cząsteczką Fab na jednostkę symetrii (współczynnik Matthews'a: 3,6 A3/Da, oszacowana zawartość rozpuszczalnika: 66%). Strukturę określono przez zastępowanie molekularne i doprecyzowano do ostatecznego czynnika krystalograficznego R 0,209 (swobodny czynnik R = 0,261). Ostateczny model obejmuje reszty 1-213 łańcucha lekkiego, 1-131 i 138-218 łańcucha ciężkiego, 387 cząsteczek wody i 1 cząsteczkę PEG. Ostateczna gęstość elektronów jest dobrze zdefiniowana dla wszystkich reszt CDR, z wyjątkiem Trp 94 (CDR3) łańcucha lekkiego. Pozycja łańcucha bocznego tej reszty jest słabo zdefiniowana w dwóch badanych dotychczas formach kryształu, sugerując, że jest ona wysoce mobilna w nieobecności związanego antygenu.
Krystalizacja kompleksu Fab z 1L-1 β i wstępny model doświadczalny kompleksu: uzyskano kilka kryształów AAL160 Fab w kompleksie z antygenem IL-1 β z roztworu wyjściowego 76 mg/ml kompleksu 1:1 w 2,0M siarczanie amonu, 0,1 M Tris pH 8,5. Kryształy rosły bardzo wolno przez okres kilku tygodni. Słabo ulegały dyfrakcji do około 3,2 A na źródle pierwotnym. Zebrano wstępny zestaw danych i spróbowano robić substytucje molekularne stosując struktury o wysokiej rozdzielczości wolnego Fab i ludzkiej IL-1 β (J.P. Priestle i wsp., EMBO J., 7, 339 (1988)) jako modele wyjściowe. Obliczenia dały bardzo jasne i niedwuznaczne rozwiązanie, gdy zastosowano części Fv i Fc Fab jako oddzielne moduły (korelacja 67,1%, czynnik R 0,354 po etapie AMORE FITTING, stosując dane między 8,0 i 3,5 A). Następne porównanie wolnych i związanych form Fab wykazało, że kąt zagięcia jest bardzo odmienny w tych dwóch strukturach. Wyniki obliczeń z zastępowaniem molekularnym dostarczają pierwszy model molekularny interakcji między antygenem IL-1 β i monoklonalnym przeciwciałem AAL160. Wstępna analiza tych interakcji wskazuje, że 1) IL-1 β wykazuje ścisłe interakcje ze wszystkimi CDR ciężkiego łańcucha i CDR3 lekkiego łańcucha. Przeciwnie, nieliczne ewentualne interakcje obejmują CDR1 i CDR2 łańcucha lekkiego. 2) Pętla zawierająca reszty Gly 22, Pro 23, Tyr 24 i Glu 25 dojrzałej IL-1 β wiąże się w środku miejsca kombinacji antygenu i wydaje się być kluczowym komponentem epitopu. Jest dość ciekawe, że ta pętla nie jest zlokalizowana w regionie cząsteczki, który najbardziej różni się od mysiej IL-1 β. Pro 23, Tyr 24 i Glu 25 są konserwatywne, ale reszta 22 stanowi Gly w ludzkiej IL-1 β i Asp w mysiej IL-1 β. Porównanie struktur kryształów ludzkiej (PDB zapis 2i1b) i mysiej IL-1 β (PDB zapis 8i1b) wykazuje, że ta mutacja punktowa daje bardzo różne konformacje głównego łańcucha wokół Pro 23. Ta lokalna różnica struktury jest zgodna z obserwowanym brakiem reaktywności krzyżowej AAL160 w stosunku do cytokiny myszy.
PL 207 642 B1
LISTA SEKWENCJI <110> Novartis AG < 120> PRZECIWCIAŁA NA LUDZKĄ IL-1 BETA <130> 4-31289A <160> 4 <170> Patentln version 3.0 <210> 1 <211> 354 <212> DNA <213> Mus musculus <220>
<221> CDS <222> (1)..(354)
| <400> 1 | gtg Val 5 | cag Gin | tct Ser | gga Gly | gca gag gtg aaa | aag Lys | ccc Pro | ggg Gly 15 | gag Glu | 48 | ||||||
| gag Glu 1 | gtg cag ctg | |||||||||||||||
| Val Gin | Leu | Ala | Glu 10 | Val | Lys | |||||||||||
| tct | ctg | aag | atc | tcc | tgt | aag | ggt | tct | gga | tac | agc | ttt | acc | agc | tac | 96 |
| Ser | Leu | Lys | Ile | Ser | Cys | Lys | Gly | Ser | Gly | Tyr | Ser | Phe | Thr | Ser | Tyr | |
| 20 | 25 | 30 | ||||||||||||||
| tgg | atc | ggc | tgg | gtg | cgc | cag | atg | ccc | ggg | aaa | ggc | ctg | gag | tgg | atg | 144 |
| Trp | Ile | Gly | Trp | Val | Arg | Gin | Met | Pro | Gly | Lys | Gly | Leu | Glu | Trp | Met | |
| 35 | 40 | 45 | ||||||||||||||
| ggg | atc | atc | tat | cct | agt | gac | tct | gat | acc | aga | tac | agc | ccg | tcc | ttc | 192 |
| Gly | Ile | Ile | Tyr | Pro | Ser | Asp | Ser | Asp | Thr | Arg | Tyr | Ser | Pro | Ser | Phe | |
| 50 | 55 | 60 | ||||||||||||||
| caa | ggc | cag | gtc | acc | atc | tca | gcc | gac | aag | tcc | atc | agc | acc | gcc | tac | 240 |
| Gin | Gly | Gin | Val | Thr | Ile | Ser | Ala | Asp | Lys | Ser | Ile | Ser | Thr | Ala | Tyr | |
| 65 | 70 | 75 | 80 | |||||||||||||
| ctg | cag | tgg | agc | agc | ctg | aag | gcc | teg | gac | acc | gcc | atg | tat | tac | tgt | 288 |
PL 207 642 B1
| Leu | Gin | Trp | Ser | Ser 85 | Leu | Lys | Ala | Ser | Asp 90 | Thr | Ala | Met | Tyr | Tyr 95 | Cys | |
| gcg | aga | tat | acc | aac | tgg | gat | gct | ttt | gat | atc | tgg | ggc | caa | ggg | aca | 336 |
| Ala | Arg | Tyr | Thr | Asn | Trp | Asp | Ala | Phe | Asp | Ile | Trp | Gly | Gin | Gly | Thr |
100 105 110 atg gtc acc gtc tct tca Met Val Thr Val Ser Ser
| 115 | |
| <210> | 2 |
| <211> | 118 |
| <212> | PRT |
| <213> | Mus musculus |
| <400> | 2 |
| Glu 1 | Val | Gin | Leu | Val 5 | Gin | Ser Gly | Ala | Glu 10 | Val | Lys | Lys | Pro | Gly 15 | Glu | |
| Ser | Leu | Lys | Ile | Ser | Cys | Lys | Gly | Ser | Gly | Tyr | Ser | Phe | Thr | Ser | Tyr |
| 20 | 25 | 30 | |||||||||||||
| Trp | Ile | Gly | Trp | Val | Arg | Gin | Met | Pro | Gly | Lys | Gly | Leu | Glu | Trp | Met |
| 35 | 40 | 45 | |||||||||||||
| Gly | Ile | Ile | Tyr | Pro | Ser | Asp | Ser | Asp | Thr | Arg | Tyr | Ser | Pro | Ser | Phe |
| 50 | 55 | 60 | |||||||||||||
| Gin | Gly | Gin | Val | Thr | Ile | Ser | Ala | Asp | Lys | Ser | Ile | Ser | Thr | Ala | Tyr |
| 65 | 70 | 75 | 80 | ||||||||||||
| Leu | Gin | Trp | Ser | Ser | Leu | Lys | Ala | Ser | Asp | Thr | Ala | Met | Tyr | Tyr | Cys |
| 85 | 90 | 95 |
Ala Arg Tyr Thr Asn Trp Asp Ala Phe Asp Ile Trp Gly Gin Gly Thr 100 105 110
Met Val Thr Val Ser Ser 115 <210> 3 <211> 321 <212> DNA <213> Mus musculus <220>
<221> CDS <222> (1)..(321) <400> 3 gaa att gtg ttg aca cag tct cca gcc acc ctg tct ttg tct cca ggg 48
PL 207 642 B1
| Glu 1 | Ile | Val | Leu | Thr 5 | Gin | Ser | Pro | Ala |
| gaa | aga | gcc | acc | ctc | tcc | tgc | agg | gcc |
| Glu | Arg | Ala | Thr 20 | Leu | Ser | Cys | Arg | Ala 25 |
| tta | gcc | tgg | tac | caa | cag | aaa | cct | ggc |
| Leu | Ala | Trp 35 | Tyr | Gin | Gin | Lys | Pro 40 | Gly |
| tat | gat | gca | tcc | aac | agg | gcc | act | ggc |
| Tyr | Asp 50 | Ala | Ser | Asn | Arg | Ala 55 | Thr | Gly |
| agt | ggg | tct | ggg | aca | gac | ttc | act | ctc |
| Ser 65 | Gly | Ser | Gly | Thr | Asp 70 | Phe | Thr | Leu |
| gaa | gat | ttt | gca | gtt | tat | tac | tgt | cag |
| Glu | Asp | Phe | Ala | Val 85 | Tyr | Tyr | Cys | Gin |
| cct | ttt | ggc | cag | ggg | acc | aag | ctg | gag |
| Pro Phe Gly Gin Gly 100 <210> 4 <211> 107 <212> PRT <213> Mus musculus | Thr | Lys | Leu | Glu 105 |
Thr Leu Ser Leu Ser Pro Gly
15 agt cag agt gtt agc agc tac 96
Ser Gin Ser Val Ser Ser Tyr cag gct ccc agg ctc ctc atc 144
Gin Ala Pro Arg Leu Leu Ile atc cca gcc agg ttc agt ggc 192
Ile Pro Ala Arg Phe Ser Gly '
| acc Thr | atc Ile 75 | agc Ser | agc Ser | ctt Leu | gag Glu | cct Pro 80 | 240 |
| cag | cgt | agc | aac | tgg | atg | ttc | 288 |
| Gin | Arg | Ser | Asn | Trp | Met | Phe | |
| 90 | 95 | ||||||
| atc | aaa | 321 | |||||
| Ile | Lys |
| <400> 4 | l | |||||||
| Glu 1 | Ile | Val | Leu | Thr 5 | Gin | Ser | Pro | Ala |
| Glu | Arg | Ala | Thr 20 | Leu | Ser | Cys | Arg | Ala 25 |
| Leu | Ala | Trp 35 | Tyr | Gin | Gin | Lys | Pro 40 | Gly |
| Tyr | Asp 50 | Ala | Ser | Asn | Arg | Ala 55 | Thr | Gly |
| Ser 65 | Gly | Ser | Gly | Thr | Asp 70 | Phe | Thr | Leu |
| Glu | Asp | Phe | Ala | Val 85 | Tyr | Tyr | Cys | Gin |
| Pro | Phe | Gly | Gin | Gly | Thr | Lys | Leu | Glu |
100 105
Thr Leu Ser Leu Ser Pro Gly 10 15
Ser Gin Ser Val Ser Ser Tyr 30
Gin Ala Pro Arg Leu Leu Ile 45
Ile Pro Ala Arg Phe Ser Gly 60
Thr Ile Ser Ser Leu Glu Pro 75 80
Gin Arg Ser Asn Trp Met Phe 90 95
Ile Lys
PL 207 642 B1
Claims (8)
1. Przeciwciało wiążące IL-1 β wykazujące specyficzność wiązania antygenu do epitopu antygenowego dojrzałej ludzkiej IL-1 β, obejmującego pętlę zawierającą reszty Gly 22, Pro 23, Tyr 24 i Glu 25, i zdolne do hamowania wiązania IL-1 β do jej receptora, przy czym przeciwciało wiążące IL-1 β zawiera miejsce wiążące antygen zawierające przynajmniej jedną domenę zmienną (VH) ciężkiego łańcucha immunoglobuliny, która obejmuje kolejno regiony hiperzmienne CDR1, CDR2 i CDR3 o sekwencji aminokwasów jak przedstawiono w SEQ ID No. 1, przy czym CDR1 ma sekwencję aminokwasów Ser-Tyr-Trp-lle-Gly, CDR2 ma sekwencję aminokwasów lle-lle-Tyr-Pro-Ser-Asp-Ser-Asp-Thr-Arg-Tyr-Ser-Pro-Ser-Phe-GIn-Gly, zaś CDR3 ma sekwencję aminokwasów Tyr-Thr-Asn-Trp-Asp-Ala-Phe-Asp-lle, oraz przeciwciało wiążące IL-1 β zawiera miejsce wiążące antygen zawierające przynajmniej jedną domenę zmienną (VL) lekkiego łańcucha immunoglobuliny, która zawiera kolejno regiony hiperzmienne CDR1', CDR2' i CDR3' o sekwencji aminokwasów jak przedstawiono SEQ ID No. 2, przy czym CDR1' ma sekwencję aminokwasów Arg-Ala-Ser-Gln-Ser-Val-Ser-Ser-Tyr-Leu-Ala, CDR2' mają sekwencję Asp-Ala-Ser-Asn-Arg-Ala-Thr, zaś CDR3' ma sekwencję GIn-GIn-Arg-Ser-Asn-Trp-Met-PhePro.
2. Przeciwciało wiążące IL-1 β według zastrz. 1, znamienne tym, że stanowi ludzkie przeciwciało.
3. Przeciwciało wiążące IL-1 β według zastrz. 1 albo 2 do zastosowania jako lek.
4. Pierwszy konstrukt DNA kodujący ciężki łańcuch lub jego fragment, zawierający:
(i) pierwszą część, która koduje domenę zmienną, zawierającą naprzemiennie regiony zrębowe i regiony hiperzmienne, przy czym regiony hiperzmienne stanowią kolejno CDR1, CDR2 i CDR3, których sekwencje aminokwasów są przedstawione w SEQ ID No 1, przy czym ta pierwsza część zaczyna się od kodonu kodującego pierwszy aminokwas domeny zmiennej i kończy się kodonem kodującym ostatni aminokwas domeny zmiennej, oraz (ii) drugą część kodującego stałą część łańcucha ciężkiego, który zaczyna się od kodonu kodującego pierwszy aminokwas domeny stałej łańcucha ciężkiego i kończy się kodonem kodującym ostatni aminokwas domeny stałej, po czym następuje kodon stop oraz drugi konstrukt DNA kodujący łańcuch lekki, który zawiera (iii) pierwszą część, która koduje domenę zmienną zawierającą naprzemiennie regiony zrębowe i regiony hiperzmienne, przy czym regiony hiperzmienne stanowią CDR3' i ewentualnie CDR1' i CDR2', których sekwencje aminokwasów są przedstawione w SEQ ID No. 2, przy czym ta pierwsza część zaczyna się od kodonu kodującego pierwszy aminokwas zmiennej domeny i kończy się kodonem kodującym ostatni aminokwas zmiennej domeny oraz (iv) drugą część kodującą część stałą łańcucha lekkiego, która zaczyna się od kodonu kodującego pierwszy aminokwas domeny stałej łańcucha lekkiego i kończy się kodonem kodującym ostatni aminokwas części stałej, po czym następuje kodon stop.
5. Wektor ekspresyjny zdolny do replikacji w prokariotycznej lub eukariotycznej linii komórkowej, obejmujący konstrukty DNA określone w zastrz. 4.
6. Kompozycja farmaceutyczna zawierająca przeciwciało wiążące IL-1 β określone w zastrz. 1 w kombinacji z farmaceutycznie akceptowalną zaróbką, rozcieńczalnikiem lub nośnikiem.
7. Sposób wytwarzania przeciwciała wiążącego IL-1 β, znamienny tym, że obejmuje:
(i) hodowanie organizmu, który jest transformowany wektorem ekspresyjnym określonym w zastrz. 5 i (ii) odzyskiwanie cząsteczki wiążącej IL-1 β z hodowli.
8. Zastosowanie przeciwciała wiążącego IL-1 β jak określono w zastrz. 1 albo 2 do wytwarzania leku do leczenia lub zapobiegania choroby lub zaburzenia, w którym pośredniczy IL-1, ostrej lub nadostrej reakcji zapalnej, ostrych infekcji, wstrząsu septycznego, wstrząsu endotoksycznego, zespołu ostrego wyczerpania oddechowego dorosłych, zapalenia opon mózgowo-rdzeniowych, zapalenia płuc, poważnych poparzeń, kacheksji albo syndromu wyczerpania, raka, zaburzenia czynności narządu, kacheksji związanej z AIDS, lub do zapobiegania lub leczenia stanów zapalnych, alergii i stanów alergicznych, reakcji nadwrażliwościowych, chorób autoimmunizacyjnych, ostrych zakażeń, odrzucenia przeszczepów narządów lub tkanek, artretyzmu, reumatoidalnego zapalenia stawów, postępującego przewlekłego zapalenia stawów i zniekształcającego zapalenia stawów, chorób reumatoidalnych, bólu o podłożu zapalnym, nadwrażliwości dróg oddechowych, jak i nadwrażliwości skórnej, autoimmunizaPL 207 642 B1 cyjnego zaburzenia hematologicznego, anemii hemolitycznej, anemii aplastycznej, anemii czystoczerwonokrwinkowej, małopłytkowości idiopatycznej, ogólnoustrojowego tocznia rumieniowatego, zapalenia wielorzęstkowego, twardziny skóry, ziarnicy Wegenera, zapalenia skórno-mięśniowego, przewlekłego czynnego zapalenia wątroby, miastenii rzekomoporaźnej, łuszczycy, zespołu StevenaJohnsona, idiopatycznej psylozy, autoimmunizacyjnej choroby zapalnej jelit, wrzodziejącego zapalenia jelita, choroby Crohn'a, zespołu nadwrażliwego jelita, wytrzeszczu w chorobie Basedowa, choroby Gravesa, sarkoidozy, stwardnienia rozsianego, żółciowej pierwotnej marskości wątroby, cukrzycy młodzieńczej, cukrzycy typu I, zapalenia błony naczyniowej przedniego i tylnego odcinka oka, suchego zapalenia rogówki i spojówki, wiosennego zapalenia rogówki i spojówki, śródmiąższowego zwłóknienia płuc, łuszczycowego zapalenia stawów, zapalenia kłębuszków nerkowych, idiopatycznego zespołu nefrotycznego, nefropatii z minimalnymi zmianami, astmy, zapalenia oskrzeli, pylicy płuc, rozedmy płuc, i innych zatorowych lub zapalnych chorób dróg oddechowych, chorób metabolizmu kości, zapalenia kości i stawów, osteoporozy i innych zapaleń stawów, oraz zaniku tkanki kostnej, zaniku tkanki kostnej związanego z wiekiem, choroby przyzębia, raka, guzów zależnych od IL-1.
Applications Claiming Priority (2)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| GBGB0001448.0A GB0001448D0 (en) | 2000-01-21 | 2000-01-21 | Organic compounds |
| PCT/EP2001/000591 WO2001053353A2 (en) | 2000-01-21 | 2001-01-19 | Recombinant antibodies to human interkleukin-1 beta |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| PL356297A1 PL356297A1 (pl) | 2004-06-28 |
| PL207642B1 true PL207642B1 (pl) | 2011-01-31 |
Family
ID=9884137
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| PL356297A PL207642B1 (pl) | 2000-01-21 | 2001-01-19 | Przeciwciało wiążące IL-1ß, konstrukt DNA, wektor ekspresyjny, kompozycja farmaceutyczna, sposób wytwarzania przeciwciała oraz zastosowanie przeciwciała |
Country Status (33)
| Country | Link |
|---|---|
| US (4) | US20030124617A1 (pl) |
| EP (1) | EP1248804B2 (pl) |
| JP (2) | JP3978338B2 (pl) |
| KR (1) | KR100697126B1 (pl) |
| CN (1) | CN1395581B (pl) |
| AR (1) | AR027253A1 (pl) |
| AT (1) | ATE346868T1 (pl) |
| AU (1) | AU772949B2 (pl) |
| BR (1) | BR0107661A (pl) |
| CA (1) | CA2396212C (pl) |
| CO (1) | CO5261584A1 (pl) |
| CY (1) | CY1107989T1 (pl) |
| CZ (1) | CZ302738B6 (pl) |
| DE (1) | DE60124863T3 (pl) |
| DK (1) | DK1248804T4 (pl) |
| ES (1) | ES2274865T5 (pl) |
| GB (1) | GB0001448D0 (pl) |
| HK (1) | HK1050013A1 (pl) |
| HU (1) | HUP0204156A3 (pl) |
| IL (2) | IL150551A0 (pl) |
| MX (1) | MXPA02007091A (pl) |
| MY (1) | MY155269A (pl) |
| NO (1) | NO329816B1 (pl) |
| NZ (1) | NZ519936A (pl) |
| PE (1) | PE20011219A1 (pl) |
| PL (1) | PL207642B1 (pl) |
| PT (1) | PT1248804E (pl) |
| RU (1) | RU2264413C2 (pl) |
| SI (1) | SI1248804T2 (pl) |
| SK (1) | SK288054B6 (pl) |
| TR (1) | TR200201780T2 (pl) |
| WO (1) | WO2001053353A2 (pl) |
| ZA (1) | ZA200205659B (pl) |
Families Citing this family (40)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| GB0001448D0 (en) * | 2000-01-21 | 2000-03-08 | Novartis Ag | Organic compounds |
| EP2042518A3 (en) | 2000-06-29 | 2009-04-08 | Abbott Laboratories | Dual specificity antibodies and methods of making and using |
| GB0020685D0 (en) | 2000-08-22 | 2000-10-11 | Novartis Ag | Organic compounds |
| BR0307216A (pt) * | 2002-01-28 | 2005-12-20 | Medarex Inc | Anticorpos monoclonais humanos para antìgeno de membrana especìfica de próstata (psma) |
| GB0303337D0 (en) | 2003-02-13 | 2003-03-19 | Celltech R&D Ltd | Biological products |
| CA2537818A1 (en) * | 2003-09-15 | 2005-03-31 | Oklahoma Medical Research Foundation | Method of using cytokine assays to diagnose, treat, and evaluate inflammatory and autoimmune diseases |
| NZ580828A (en) | 2004-02-06 | 2011-09-30 | Univ Massachusetts | Antibodies against clostridium difficile toxin B and uses thereof |
| EP1851245B1 (en) * | 2005-01-26 | 2012-10-10 | Amgen Fremont Inc. | Antibodies against interleukin-1 beta |
| PE20061324A1 (es) * | 2005-04-29 | 2007-01-15 | Centocor Inc | Anticuerpos anti-il-6, composiciones, metodos y usos |
| PL2163562T3 (pl) * | 2005-06-21 | 2014-03-31 | Xoma Us Llc | Przeciwciała wiążące IL-1 beta i ich fragmenty |
| EP3332807B1 (en) * | 2005-10-26 | 2023-02-22 | Novartis AG | Use of anti il-1beta antibodies |
| PL1971366T3 (pl) * | 2005-12-29 | 2015-01-30 | Janssen Biotech Inc | Ludzkie przeciwciała skierowane przeciw IL-23, kompozycje, sposoby i zastosowanie |
| US7943328B1 (en) | 2006-03-03 | 2011-05-17 | Prometheus Laboratories Inc. | Method and system for assisting in diagnosing irritable bowel syndrome |
| KR20080109093A (ko) * | 2006-04-14 | 2008-12-16 | 노파르티스 아게 | 안과 장애 치료를 위한 ｉｌ－1 항체의 용도 |
| US20080085524A1 (en) * | 2006-08-15 | 2008-04-10 | Prometheus Laboratories Inc. | Methods for diagnosing irritable bowel syndrome |
| CN103405768A (zh) * | 2006-12-20 | 2013-11-27 | 爱克索马技术有限公司 | 用于治疗IL-1β相关疾病的方法 |
| WO2008082651A2 (en) * | 2006-12-29 | 2008-07-10 | Abbott Laboratories | Dual-specific il-1a/ il-1b antibodies |
| JP5337055B2 (ja) | 2007-02-28 | 2013-11-06 | メルク・シャープ・アンド・ドーム・コーポレーション | 免疫性障害の処置のための組合せ治療 |
| CA3080328C (en) * | 2007-05-29 | 2022-06-21 | Novartis Ag | New indications for anti-il-1-beta therapy |
| US8637029B2 (en) | 2007-12-20 | 2014-01-28 | Xoma Technology Ltd. | Methods for the treatment of gout |
| EP2293816B1 (en) * | 2008-06-06 | 2012-11-07 | XOMA Technology Ltd. | Methods for the treatment of rheumatoid arthritis |
| EP2341936A4 (en) | 2008-09-05 | 2012-07-25 | Xoma Technology Ltd | METHOD FOR TREATING OR PREVENTING IL-1ß-CONTAINED ILLNESSES |
| ES2622366T3 (es) | 2009-10-26 | 2017-07-06 | F. Hoffmann-La Roche Ag | Procedimiento para la producción de una inmunoglobulina glucosilada |
| SG2014014724A (en) * | 2010-05-07 | 2014-07-30 | Xoma Technology Ltd | METHODS FOR THE TREATMENT OF IL-1ß RELATED CONDITIONS |
| DE102010033565B4 (de) * | 2010-07-27 | 2012-06-21 | Tetec Tissue Engineering Technologies Ag | Marker zur Bestimmung von Chondrozyten |
| US9516868B2 (en) | 2010-08-02 | 2016-12-13 | Regeneron Pharmaceuticals, Inc. | Mice that make VL binding proteins |
| NZ607510A (en) * | 2010-09-10 | 2014-10-31 | Apexigen Inc | Anti-il-1 beta antibodies and methods of use |
| KR101387377B1 (ko) | 2011-02-25 | 2014-04-21 | 리제너론 파아마슈티컬스, 인크. | Ａｄａｍ６ 마우스 |
| PL3572517T3 (pl) | 2011-08-05 | 2021-10-04 | Regeneron Pharmaceuticals, Inc. | Myszy z humanizowanym uniwersalnym łańcuchem lekkim |
| DE102011083595A1 (de) | 2011-09-28 | 2013-03-28 | Bayer Pharma AG | Inhibition der Wirkung von Interleukin 1 beta zur Behandlung der Endometriose |
| CN104144946A (zh) | 2011-12-19 | 2014-11-12 | 爱克索马美国有限责任公司 | 治疗痤疮的方法 |
| RU2664181C2 (ru) | 2011-12-20 | 2018-08-15 | Регенерон Фармасьютикалз, Инк. | Мыши с гуманизированной легкой цепью |
| RS60583B1 (sr) | 2012-02-13 | 2020-08-31 | Agency Science Tech & Res | Ljudska monoklonalna antitela koja vrše neutralizaciju il-ss |
| NZ717848A (en) | 2012-06-12 | 2019-03-29 | Regeneron Pharma | Humanized non-human animals with restricted immunoglobulin heavy chain loci |
| BR112016021679A2 (pt) | 2014-03-21 | 2018-12-04 | Regeneron Pharmaceuticals, Inc. | proteína de ligação ao antígeno, métodos de produção de uma proteína de ligação ao antígeno e de identificação de uma ou mais proteínas de ligação ao antígeno, hibridoma, ácido nucleico, célula, e, animal não humano geneticamente modificado. |
| KR20210088756A (ko) | 2014-03-21 | 2021-07-14 | 리제너론 파마슈티칼스 인코포레이티드 | 단일 도메인 결합 단백질을 생산하는 비-인간 동물 |
| CN107438622A (zh) | 2015-03-19 | 2017-12-05 | 瑞泽恩制药公司 | 选择结合抗原的轻链可变区的非人动物 |
| CN110818793A (zh) * | 2018-08-14 | 2020-02-21 | 中山康方生物医药有限公司 | 抗IL-1β的抗体、其药物组合物及其用途 |
| CN113395979A (zh) | 2018-11-20 | 2021-09-14 | 詹森生物科技公司 | 用抗il-23特异性抗体治疗银屑病的安全且有效的方法 |
| AU2020279987A1 (en) | 2019-05-23 | 2021-11-18 | Janssen Biotech, Inc. | Method of treating inflammatory bowel disease with a combination therapy of antibodies to IL-23 and TNF alpha |
Family Cites Families (11)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US4772685A (en) | 1985-10-02 | 1988-09-20 | Merck & Co., Inc. | Immunogenic peptides of human interleukin-1 and the corresponding anti-peptide antibodies |
| US4935343A (en) * | 1986-08-08 | 1990-06-19 | Syntex (U.S.A.) Inc. | Monoclonal antibodies for interleukin-1β |
| FR2640146B1 (fr) * | 1988-12-08 | 1993-12-24 | Commissariat A Energie Atomique | Anticorps monoclonaux anti-interleukines 1(alpha) et 1(beta), leur procede de production et applications desdits anticorps a la detection des interleukines 1(alpha) et 1(beta) et en therapeutique |
| GB8928874D0 (en) | 1989-12-21 | 1990-02-28 | Celltech Ltd | Humanised antibodies |
| US5859205A (en) * | 1989-12-21 | 1999-01-12 | Celltech Limited | Humanised antibodies |
| GB9014932D0 (en) | 1990-07-05 | 1990-08-22 | Celltech Ltd | Recombinant dna product and method |
| JP3714683B2 (ja) * | 1992-07-30 | 2005-11-09 | 生化学工業株式会社 | 抗リウマチ剤 |
| US5429614A (en) | 1993-06-30 | 1995-07-04 | Baxter International Inc. | Drug delivery system |
| WO1995001997A1 (en) * | 1993-07-09 | 1995-01-19 | Smithkline Beecham Corporation | RECOMBINANT AND HUMANIZED IL-1β ANTIBODIES FOR TREATMENT OF IL-1 MEDIATED INFLAMMATORY DISORDERS IN MAN |
| US6051228A (en) | 1998-02-19 | 2000-04-18 | Bristol-Myers Squibb Co. | Antibodies against human CD40 |
| GB0001448D0 (en) * | 2000-01-21 | 2000-03-08 | Novartis Ag | Organic compounds |
-
2000
- 2000-01-21 GB GBGB0001448.0A patent/GB0001448D0/en not_active Ceased
-
2001
- 2001-01-18 CO CO01003434A patent/CO5261584A1/es active IP Right Grant
- 2001-01-18 MY MYPI20010226A patent/MY155269A/en unknown
- 2001-01-19 DE DE60124863T patent/DE60124863T3/de not_active Expired - Lifetime
- 2001-01-19 CA CA2396212A patent/CA2396212C/en not_active Expired - Fee Related
- 2001-01-19 US US10/181,324 patent/US20030124617A1/en not_active Abandoned
- 2001-01-19 AU AU33697/01A patent/AU772949B2/en not_active Ceased
- 2001-01-19 ES ES01905671T patent/ES2274865T5/es not_active Expired - Lifetime
- 2001-01-19 CN CN018039529A patent/CN1395581B/zh not_active Expired - Fee Related
- 2001-01-19 PT PT01905671T patent/PT1248804E/pt unknown
- 2001-01-19 SI SI200130698T patent/SI1248804T2/sl unknown
- 2001-01-19 MX MXPA02007091A patent/MXPA02007091A/es active IP Right Grant
- 2001-01-19 PE PE2001000065A patent/PE20011219A1/es not_active Application Discontinuation
- 2001-01-19 SK SK1035-2002A patent/SK288054B6/sk not_active IP Right Cessation
- 2001-01-19 EP EP01905671A patent/EP1248804B2/en not_active Expired - Lifetime
- 2001-01-19 JP JP2001553825A patent/JP3978338B2/ja not_active Expired - Fee Related
- 2001-01-19 IL IL15055101A patent/IL150551A0/xx unknown
- 2001-01-19 WO PCT/EP2001/000591 patent/WO2001053353A2/en active IP Right Grant
- 2001-01-19 KR KR1020027009374A patent/KR100697126B1/ko not_active IP Right Cessation
- 2001-01-19 CZ CZ20022531A patent/CZ302738B6/cs not_active IP Right Cessation
- 2001-01-19 DK DK01905671.2T patent/DK1248804T4/da active
- 2001-01-19 PL PL356297A patent/PL207642B1/pl unknown
- 2001-01-19 BR BR0107661-2A patent/BR0107661A/pt not_active IP Right Cessation
- 2001-01-19 AR ARP010100247A patent/AR027253A1/es active IP Right Grant
- 2001-01-19 AT AT01905671T patent/ATE346868T1/de active
- 2001-01-19 NZ NZ519936A patent/NZ519936A/en not_active IP Right Cessation
- 2001-01-19 HU HU0204156A patent/HUP0204156A3/hu not_active Application Discontinuation
- 2001-01-19 TR TR2002/01780T patent/TR200201780T2/xx unknown
- 2001-01-19 RU RU2002121649/13A patent/RU2264413C2/ru not_active IP Right Cessation
-
2002
- 2002-07-02 IL IL150551A patent/IL150551A/en not_active IP Right Cessation
- 2002-07-05 NO NO20023266A patent/NO329816B1/no not_active IP Right Cessation
- 2002-07-16 ZA ZA2002/05659A patent/ZA200205659B/en unknown
-
2003
- 2003-03-19 HK HK03102022.5A patent/HK1050013A1/zh unknown
-
2006
- 2006-07-11 US US11/484,472 patent/US7491392B2/en not_active Expired - Fee Related
- 2006-12-29 CY CY20061101860T patent/CY1107989T1/el unknown
-
2007
- 2007-01-04 JP JP2007000148A patent/JP2007097598A/ja active Pending
-
2009
- 2009-01-09 US US12/351,007 patent/US20090232803A1/en not_active Abandoned
-
2011
- 2011-03-10 US US13/044,918 patent/US20110182894A1/en not_active Abandoned
Also Published As
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| US7491392B2 (en) | Antibodies to human IL-1β | |
| JP4271936B2 (ja) | ヒトＩＬ−１βに対する抗体 | |
| ES2487533T7 (es) | Anticuerpos antagonistas de IL-17 | |
| AU2001295490A1 (en) | Antibodies to human IL-1beta |