ES2249314T3

ES2249314T3 - Bisindolilmaleimidas para la inhibicion de proliferacion celular.

Info

Publication number: ES2249314T3
Application number: ES00983288T
Authority: ES
Inventors: Nader Fotouhi; Emily Aijun Liu; Allen John Lovey; John Guilfoyle Mullin, Jr.; Guiseppe Federico Weber
Original assignee: F Hoffmann La Roche AG
Current assignee: F Hoffmann La Roche AG
Priority date: 1999-12-16
Filing date: 2000-12-12
Publication date: 2006-04-01
Anticipated expiration: 2020-12-12
Also published as: RU2264398C2; YU43302A; EP1242408A1; KR100507422B1; RU2002119209A; CO5050293A1; CN1229374C; HRP20020513A2; DE60023182D1; PE20011034A1; MA26856A1; TWI274752B; UY26485A1; HRP20020513B1; CN1409709A; KR20020063215A; BRPI0016329B8; MXPA02005560A; ATE306484T1; US6313143B1

Abstract

El invento se refiere a pirroles sustituidos que tienen la fórmula (Ver fórmula) y sales farmacéuticamente aceptables de los compuestos precedentes, en donde: R se elige del grupo constituido por -CHR3 OCOR4 , -CHR3 OCO2R4 , -CHR3 OCONHR4 y -COR4 ; R3 se elige del grupo constituido por H o metilo; R4 se elige del grupo constituido por alquilo inferior, que puede estar opcionalmente sustituido por uno o mas sustituyentes elegidos del grupo constituido por -CO2R5 , -NR6 R7 y polietilenglicol. arilo que opcionalmente puede estar sustituido por uno o mas sustituyentes elegidos del grupo constituido por alcoxilo, y alquilo inferior que puede de por sí estar sustituido por amino sustituido; R5 se elige del grupo constituido por H, Na, o alquilo inferior, R6 y R7 se eligen cada uno, independientemente, entre H, alquilo inferior y -COR8 , o alternativamente, el grupo -NR6 R7 forma un anillo heterocíclico de 5 o 6 miembros. Los compuestos de este invento tienen actividad antiproliferativa, especialmente inhiben la división celular en fase G2/M del ciclo celular y se les denomina generalmente como inhibidores de ¿ciclo celular de fase G2/M¿. Estos compuestos son profármacos solubles de un metabolito activo de un agente terapéutico anticáncer, y son por tanto apropiados para suministro de infusión continua. El presente invento se dirige adicionalmente a composiciones farmacéuticas que comprenden una cantidad farmacéuticamente efectiva de cualquiera de uno o mas de los compuestos antes descritos y un vehículo o excipiente farmacéuticamente aceptable.

Description

Bisindolilmaleimidas para la inhibición de proliferación celular.

El presente invento se refiere a ciertos pirroles sustituidos que son agentes antiproliferativos. Estos compuestos y sus sales farmacéuticamente aceptables son útiles en el tratamiento o control de trastornos proliferativos celulares, en particular cáncer.

Origen del invento

La proliferación celular incontrolada es el distintivo de cáncer. Las células tumorales cancerosas tienen, típicamente, cierta forma de lesión para los genes que directa o indirectamente regulan el ciclo de división celular. Se han llevado a cabo muchas investigaciones en el estudio de agentes antiproliferativos. Si bien muchos agentes se han identificado como poseedores de actividad antiproliferativa deseada, muchos de estos agentes tienen varios inconvenientes, incluyendo pobre solubilidad, complejidad molecular, etc., que los puede volver inapropiados o inconvenientes para uso terapéutico en pacientes humanos. Sigue siendo una necesidad para compuestos de pequeña molécula que puedan sintetizarse fácilmente, que sean efectivos como agentes terapéuticos de cáncer y sean apropiados para suministro por infusión continua a pacientes. Constituye pues un objeto de este invento el proporcionar estos compuestos así como composiciones farmacéuticas que contengan estos compuestos.

Definiciones

Como aquí se utiliza los términos siguientes tendrán las definiciones que siguen.

"Alquenilo" significa un hidrocarburo insaturado alifático de cadena lineal o ramificada con 1 a 15 átomos de carbono, de preferencia 1 a 10 átomos de carbono, mas preferentemente 1 a 6 átomos de carbono.

"Alcoxilo" significa un grupo de alquilo o alquenilo que está unido al resto de la molécula mediante oxígeno (por ejemplo RO-, tal como metoxilo, etoxilo, etc.).

"Arilo" significa un anillo aromático que tiene 5 a 10 átomos y constituido por 1 o 2 anillos, que opcionalmente pueden incluir uno o mas heteroátomos que son iguales o diferentes. Para los fines de esta definición, arilo incluye heteroarilo. Heteroátomos preferidos incluyen nitrógeno, azufre u oxígeno, solo o en cualquier combinación, en lugar de uno o mas de los carbonos. Ejemplos de grupos arilo dentro de esta definición son fenilo, piridina, imidazol, pirrol, triazol, furano, pirimidina.

"Cicloalquilo" significa un grupo hidrocarbónico alifático cíclico parcial o completamente saturado conteniendo 3 a 8 átomos. Ejemplos de grupos cicloalquilo incluyen ciclopropilo, ciclopentilo y ciclohexilo.

"Cantidad efectiva" significa una cantidad de por lo menos un compuesto de fórmula I o una sal respectiva farmacéuticamente aceptable que inhibe significativamente proliferación y/o previene la diferenciación de una célula tumoral humana, incluyendo líneas de células tumorales humanas.

"Hetero átomo" significa un átomo elegido entre nitrógeno, azufre y oxígeno. Heteroátomos se eligen, independientemente y pueden sustituir uno o mas átomos de carbono.

"Heterociclo" significa un grupo hidrocarbónico de 3 a 10 miembros no aromático, parcial o completamente saturado que contiene por lo menos un heteroátomo. Sistemas de anillo de esta índole incluyen, morfolina, pirrolidina, piperidina, piperacina.

"IC_{50}" se refiere a la concentración de un compuesto particular de conformidad con el invento requerido para inhibir el 50% de una actividad medida específica. IC_{50} puede medirse, entre otros, como se describe en el ejemplo 15, infra.

"Alquilo inferior" denota un hidrocarbono alifático saturado de cadena lineal o ramificada que tiene 1 a 6 átomos de carbono, de preferencia 1 a 4. Grupos de alquilo inferior pueden sustituirse como se proporciona específicamente infra. En adición la cadena de alquilo puede incluir uno o mas heteroátomos en lugar de uno o mas átomos de carbono. Grupos de alquilo inferior típicos incluyen, metilo, etilo, propilo, isopropilo, butilo, t-butilo, 2-butilo, pentilo, hexilo y similares.

"Sal farmacéuticamente aceptable" se refiere a sales de adición de ácido o sales de adición de base convencionales que conservan la efectividad biológica y propiedades de los compuestos de fórmula I y se forman a partir de ácidos orgánicos o inorgánicos o bases orgánicas o inorgánicas atóxicos apropiados. Las sales de adición de ácido ejemplificativas incluyen las derivadas de ácidos inorgánicos tal como ácido clorhídrico, ácido bromhídrico, ácido yodhídrico, ácido sulfúrico, ácido fosfórico y ácido nítrico, y los derivadas de ácidos orgánicos tal como ácido acético, ácido tartárico, ácido salicíclico, ácido metansulfónico, ácido succínico, ácido cítrico, ácido málico, ácido láctico, ácido fumárico y similares. Sales de adición de base ejemplificativas incluyen las derivadas de amonio, potasio, sodio e hidróxidos amónicos cuaternarios, tal como, por ejemplo, hidróxido de tetrametilamonio.

"Farmacéuticamente aceptable", tal como vehículo, excipiente farmacéuticamente aceptables, etc., significa farmacológicamente aceptable y sustancialmente atóxico para el objeto al que se administra el compuesto particular.

"Metabolito farmacéuticamente activo" significa un producto metabólico de un compuesto de fórmula I que es farmacéuticamente aceptable y efectivo.

"Polietilenglicol" o grupos "PEG" representan estructuras de la fórmula general R^{9}(OCH_{2}CH_{2})_{n}OH, en donde n es de media entre 2 y 1500, de preferencia 15 a 150, con un peso molecular medio de 500 a 5000 Daltons, y en donde R^{9} es carboxilo o alquilo inferior, de preferencia metilo o etilo.

"Profarmaco" se refiere a un compuesto que puede convertirse bajo condiciones fisiológicas o mediante solvólisis en un compuesto farmacéutico activo. Un profarmaco puede ser inactivo cuando se administra a un sujeto, pero se convierte in vivo en un compuesto activo.

"Sustituido", como en alquilo sustituido, significa que la sustitución puede producirse en una o mas posiciones y, a menos que se indique de otro modo, que los sustituyentes en cada sitio de sustitución se eligen, independientemente, de las opciones especificadas.

"Amino sustituido" significa un grupo amino, que está mono- o di-sustituido con otro grupo, de preferencia alquilo inferior (por ejemplo metilo o etilo).

Detallada descripción del invento

Específicamente el invento se refiere a pirroles sustituidos que tienen la fórmula:

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y sales farmacéuticamente aceptables de los compuestos precedentes, en donde:

R se elige del grupo constituido por -CHR^{3}OCOR^{4}, -CHR^{3}OCO_{2}R^{4}, -CHR^{3}OCONHR^{4} y -COR^{4};

R^{3} se elige del grupo constituido por H o metilo;

R^{4} se elige del grupo constituido por

alquilo inferior, que puede estar opcionalmente sustituido por uno o mas sustituyentes elegidos del grupo constituido por -CO_{2}R^{5}, -NR^{6}R^{7} y polietilenglicol.

arilo que opcionalmente puede estar sustituido por uno o mas sustituyentes elegidos del grupo constituido por alcoxilo, y alquilo inferior que puede de por sí estar sustituido por amino sustituido;

R^{5} se elige del grupo constituido por H, Na, o alquilo inferior,

R^{6} y R^{7} se eligen cada uno, independientemente, entre H, alquilo inferior y -COR^{8}, o alternativamente, el grupo -NR^{6}R^{7} forma un anillo heterocíclico de 5 o 6 miembros.

Los compuestos de este invento tienen actividad antiproliferativa, especialmente inhiben la división celular en fase G2/M del ciclo celular y se les denomina generalmente como inhibidores de "ciclo celular de fase G2/M". Estos compuestos son profarmacos solubles de un metabolito activo de un agente terapéutico anticáncer dentro de la patente estadounidense 5.057.614 (Davis et al.), y son por tanto apropiados para suministro de infusión continua.

El presente invento se dirige adicionalmente a composiciones farmacéuticas que comprenden una cantidad farmacéuticamente efectiva de cualquiera de uno o mas de los compuestos antes descritos y un vehículo o excipiente farmacéuticamente aceptable.

El presente invento se dirige además al uso de cualquiera de uno o mas de los compuestos antes descritos para la preparación de medicamentos para el tratamiento de trastornos de proliferación celular, en particular cáncer, por ejemplo tumores sólidos, cáncer de mama, colon o pulmón.

El presente invento se dirige también a un método para el tratamiento de tumores sólidos, en particular tumores de pecho o colon, mediante administración a un paciente humano que precise una terapia de esta índole una cantidad efectiva de un compuesto de fórmula I y/o sus sales farmacéuticamente aceptables.

En una modalidad preferida de los compuestos de fórmula I, R es -CHR^{3}OCOR^{4}. Mas preferentemente R^{3} es H y R^{4} es alquilo inferior que está sustituido por polietilenglicol.

En otra modalidad preferida de los compuestos de fórmula I, R es -COR^{4}. Mas preferentemente, R^{4} se elige del grupo constituido por heterociclo y alquilo inferior, mas preferentemente alquilo inferior que está sustituido por -NR^{6}R^{7}.

En otra modalidad preferida de los compuestos de fórmula I, el polietilenglicol tiene un peso molecular de alrededor de 750 a alrededor de 5000 Daltons, mas preferentemente de alrededor de 2000 Daltons.

A continuación se ofrecen ejemplos de compuestos preferidos de fórmula I:

éster 3-[4-(1-metil-6-nitro-1H-indol-3-il)-2,5-dioxo-2,5-dihidro-1H-pirrol-3-il]-indol-1-ilmetílico del ácido 3-[2-(2-metoxi-etoxi)-etoxi]-propiónico;

O-[2-[[2,5-dihidro-3-[4-(1-metil-6-nitro-1H-indol-3-il)-2,5-dioxo-2,5-dihidropirrol-3-il]-indol-1-il]metoxicarbo-
nil]-etil]-O'-metilpolietilenglicol 2000;

éster 3-[4-(1-metil-6-nitro-1H-indol-3-il)-2,5-dioxo-2,5-dihidro-1H-pirrol-3-il]-indol-1-ilmetílico de ácido 2,3-dimetoxi-benzoico;

clorhidrato de éster 3-[4-(1-metil-6-nitro-1H-indol-3-il)-2,5-dioxo-2,5-dihidro-1H-pirrol-3-il]-indol-1-ilmetílico del ácido 3-dietilaminometil-benzoico;

3-(1H-indol-3-il)-4-(1-metil-6-nitro-1H-indol-3-il)-1-octadec-9-enoil-pirrol-2,5-diona;

ácido {3-[4-(1-metil-6-nitro-1H-indol-3-il)-2,5-dioxo-2,5-dihidro-1H-pirrol-3-il]-indol-1-il}-fosfónico;

3-(1-acetil-1H-indol-3-il)-4-(1-metil-6-nitro-1H-indol-3-il)-pirrol-2,5-diona;

3-(1-metil-6-nitro-1H-indol-3-il)-4-[1-(piperidin-4-carbonil)-1H-indol-3-il]-pirrol-2,5-diona del ácido trifluoroacético;

clorhidrato de 3-(1-aminoacetil-1H-indol-3-il)-4-(1-metil-6-nitro-1H-indol-3-il)pirrol-2,5-diona;

éster 3-[4-(1-metil-6-nitro-1H-indol-3-il)-2,5-dioxo-2,5-dihidro-1H-pirrol-3-il]-indol-1-ilmetílico del ácido acético;

mono-{3-[4-(1-metil-6-nitro-1H-indol-3-il)-2,5-dioxo-2,5-dihidro-1H-pirrol-3-il]-indol-1-ilmetil}éster del ácido pentandioico;

éster 1-{3-[4-(1-metil-6-nitro-1H-indol-3-il)-2,5-dioxo-2,5-dihidro-1H-pirrol-3-il]-indol-1-il}-etílico del ácido
2,3-dimetoxi-benzoico; y

clorhidrato de éster 1-{3-[4-(1-metil-6-nitro-1H-indol-3-il)-2,5-dioxo-2,5-dihidro-1H-pirrol-3-il]-indol-1-il}-etí-
lico del ácido 3-dietilaminometil-benzoico.

Los compuestos aquí descritos y cubiertos por las fórmulas anteriores pueden exhibir tautomerismo o isomerismo estructural. El invento tiene por objeto abarcar cualquier forma isomérica tautomérica o estructural de estos compuestos, o mezclas de estas formas, y no se limita a cualquier forma isomérica tautomérica o estructura dentro de las fórmulas antes expuestas.

Síntesis de compuestos de conformidad con el invento

Los compuestos del invento pueden prepararse con procedimientos conocidos en el arte. Procedimientos apropiados para sintetizar estos compuestos se proporcionan en los ejemplos. En general, estos compuestos pueden prepararse como se expone en la reivindicación 18.

Los compuestos de fórmula I, en donde R significa -COR^{4}, pueden prepararse de conformidad con el esquema II que sigue.

Esquema II

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Típicamente, se desprotona 3-(1H-indol-3-il)-4-(1-metil-6-nitro-1H-indol-3-il)-pirrol-2,5-diona (compuesto 1, preparado como se ha descrito antes en el Esquema I) en un disolvente aprótico tal como TYHF a -60ºC utilizando una base fuerte tal como bis(trimetilsilil)amida de litio. El anión resultante se trata luego con cloruro de ácido conocido o un cloruro de ácido preparado con métodos conocidos. Alternativamente el compuesto 1 puede acoplarse a un ácido carboxílico conocido, o un ácido carboxílico preparado con métodos conocidos, utilizando procedimientos de formación de enlace amídico corrientes, tal como diisopropilcarbodiimida y HOBt. El compuesto 5, en donde R^{4} contiene un carboxilo, hidroxialquilo, amino o monoalquilamino apropiadamente protegido, puede modificarse adicionalmente separando el grupo protector con métodos conocidos, y luego modificando opcionalmente el carboxilo, hidroxilo, o grupo amino resultante en la amida deseada o éster con métodos conocidos por los expertos en el arte.

Los compuestos de la fórmula general I, en donde R significa -CHR^{3}OCOR^{4}, pueden prepararse de conformidad con el esquema III que sigue.

Esquema III

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3

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Como se indica en el Esquema III anterior, el derivado de hidroxi alquilo 6 se esterifica utilizando procedimientos conocidos. Típicamente, el compuesto 6 se trata con un ácido carboxílico conocido o un ácido carboxílico preparado con métodos conocidos, en un disolvente tal como cloruro de metileno en presencia de EDC y dimetilaminopiridina durante varias horas a temperatura ambiente. Alternativamente, el intermedio hidroxi 6 puede tratarse con un cloruro de ácido conocido o un cloruro de ácido preparado a partir de métodos conocidos. Alternativamente el intermedio hidroxi 6 puede tratarse con un anhídrido de ácido conocido o un anhídrido de ácido preparado con métodos conocidos.

Para preparar el compuesto 7, en donde R^{4} contiene un anillo heteroaromático, el heteroátomo, tal como N, puede modificarse adicionalmente mediante reacción con un yoduro de alquilo, tal como -CH_{3}I, en un disolvente tal como acetonitrilo.

Alternativamente, el compuesto 7, en donde R^{4} contiene un carboxilo, hidroxialquilo, amino o monoalquilamino apropiadamente protegido, puede modificarse adicionalmente separando el grupo protector con métodos conocidos, y luego modificando opcionalmente el carboxilo hidroxilo, o grupo amino resultante en la amida o éster deseados con métodos conocidos por los expertos en el arte.

El material de partida 6, en donde R^{3} significa H, puede prepararse también como se describe en la patente estadounidense 09/268.887 (Compuesto II), cuyas porciones relevantes se incorporan aquí como referencia.

El material de partida 6, en donde R^{3} significa metilo, puede prepararse siguiendo el Esquema IV que sigue.

Esquema IV

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4

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El compuesto 8 se encuentra en el comercio (por ejemplo de Aldrich).

Los compuestos de la fórmula general I, en donde R significa -CHR^{3}OCO_{2}R^{4}, y en donde R^{3} y R^{4} son como se ha descrito antes, pueden prepararse siguiendo el esquema V que sigue.

Esquema V

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Típicamente, el derivado de hidroxi alquilo 6 se trata con un cloroformato conocido o un cloroformato preparado utilizando procedimientos conocidos, en un disolvente tal como diclorometano a temperaturas de -78 a 20, en presencia de dimetilaminopiridina para dar el carbonato deseado 14.

Los compuestos de la fórmula general I, en donde R significa -CHR^{3}OCONHR^{4}, y en donde R^{3} y R^{4} son como se ha descrito antes, pueden prepararse de conformidad con el esquema VI que sigue.

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Esquema VI

6

Típicamente se desprotona el intermedio de hidroximetilo 6 utilizando una base fuerte tal como bis(trimetilsilil)amida lítica en un disolvente tal como THF a 0ºC. El anión generado se trata luego en el mismo disolvente con bis(p-nitrofenil)carbonato, seguido de una amina conocida o una amina preparada utilizando procedimientos conocidos.

Compuestos acídicos de la fórmula I pueden convertirse en una sal farmacéuticamente aceptable mediante tratamiento con una base apropiada con procedimientos conocidos por los expertos en el arte. Las sales apropiadas son las derivadas no solo de bases inorgánicas, por ejemplo, sales de sodio, potasio o calcio, sino también bases tal como etilendiamina, monoetanolamina o dietanolamina. La conversión de un tratamiento básico con un ácido apropiado en forma conocida. Las sales apropiadas son las derivadas no solo de ácidos inorgánicos, por ejemplo, clorhidratos, bromhidratos, fosfatos o sulfatos, sino también de ácidos orgánicos, por ejemplo acetatos, citratos, fumaratos, tartratos, maleatos, metansulfonatos o p-toluensulfonatos.

Composiciones/Formulaciones

En una modalidad alternativa el presente invento se dirige a composiciones farmacéuticas que comprenden, por lo menos, un compuesto de fórmula I o una sal farmacéuticamente aceptable respectiva.

Estas composiciones farmacéuticas pueden administrarse oralmente, por ejemplo, en forma de comprimidos, comprimidos revestidos, grageas, cápsulas de gelatina dura o blanda, soluciones, emulsiones o suspensiones. Pueden administrarse también rectalmente, por ejemplo, en forma de supositorios. Sin embargo, en particular, los compuestos del presente invento son apropiados para administración parenteral, por ejemplo, en forma de soluciones de inyección.

Las composiciones farmacéuticas del presente invento que comprenden compuestos de la fórmula I, profarmacos de estos compuestos, o sus sales, pueden prepararse en forma que es conocida en el arte, por ejemplo, por medio de procedimientos de mezclado, encapsulado, disolución, granulado, emulsión, entrapamiento, obtención de grageas o liofilización convencionales. Estos preparados farmacéuticos pueden formularse con vehículo inorgánico u orgánicos terapéuticamente inertes. Lactosa, almidón de maíz o sus derivados, talco, ácido estérico o sus sales pueden utilizarse como tales vehículos para comprimidos, comprimidos revestidos, grageas y cápsulas de gelatina dura. Vehículos apropiados para cápsulas de gelatina blanda incluyen aceites vegetales, ceras y grasas. Dependiendo de la naturaleza de la sustancia activa no se requieren generalmente vehículos en el caso de cápsulas de gelatina blanda. Vehículos apropiados para la preparación de soluciones y jarabes son agua, polioles, sacarosa, azúcar se inversión y glucosa. Vehículos apropiados para inyección son agua, alcoholes, polioles, glicerina, aceites vegetales, fosfolípidos y tensoactivos. Vehículos apropiados para supositorios son aceites naturales o endurecidos, ceras, grasas y polioles semi-líquidos.

Los preparados farmacéuticos pueden contener también agentes conservantes, agentes solubilizantes, agentes estabilizantes, agentes humectantes, agentes emulgentes, agentes edulcorantes, agentes colorantes, agentes saborizantes, sales para variar la presión osmótica, tampones, agentes de revestimiento o antioxidantes. Pueden contener también otras sustancias terapéuticamente valiosas, incluyendo ingredientes activos adicionales a partir de los de fórmula I.

Dosis

Como se ha indicado antes los compuestos del presente invento son útiles en el tratamiento o control de trastornos de proliferación de células, en particular trastornos oncológicos. Estos compuestos y formulaciones que contienen dichos compuestos son particularmente útiles en el tratamiento o control de tumores sólidos, tal como, por ejemplo, tumores de pulmón y colon.

Una cantidad terapéuticamente efectiva de un compuesto de conformidad con este invento significa una cantidad de compuesto que sea efectiva para prevenir, aliviar o mejorar síntomas de enfermedad o prolongar la supervivencia del sujeto que se trata. La determinación de una cantidad terapéuticamente efectiva está dentro del experto en el arte.

La cantidad o dosificación terapéuticamente efectiva de un compuesto de conformidad con este invento puede variar dentro de límites y se ajustará a las exigencias individuales en cada caso particular. En general, en el caso de administración oral o parenteral a humanos adultos con un peso apropiado de 70 kg deberá ser apropiada una dosis diaria de alrededor de 10 mg a alrededor de 10.000 mg, de preferencia de alrededor de 200 mg a alrededor de
1.000 mg, si bien el límite superior puede excederse cuando esté indicado. La dosis diaria puede administrarse como una sola dosis o en dosis divididas, o para administración parenteral puede administrarse como infusión continua.

Ejemplos

Los compuestos del presente invento pueden sintetizarse de conformidad con técnicas conocidas, tal como, por ejemplo, los esquemas generales dados antes. Los ejemplos que siguen ilustran métodos preferidos para sintetizar los compuestos y formulaciones del presente invento.

Ejemplo 1 Éster 3-[4-(1-metil-6-nitro-1H-indol-3-il)-2,5-dioxo-2,5-dihidro-1H-pirrol-3-il]-indol-1-ilmetílico del ácido 3-[2-(2-metoxi-etoxi)-etoxi]-propiónico

Una suspensión de 1-etil-3-(3-dimetilaminopropil)-carbodiimida.HCl ("EDC\cdotHCL"; Aldrich, 77 mg, 0,40 mmol) en THF seco (12 ml) se trató con DMAP (Aldrich) (55 mg, 0,45 mmol) durante 2 minutos a 22ºC. A esto se adicionó 3-(1-hidroximetil-1H-indol-3-il)-4-(1-metil-6-nitro-1H-indol-3-il)-pirrol-2,5-diona (110 mg, 0,26 mmol) (preparado a continuación). Se agitó la mezcla durante 20 minutos y a esto se adicionó ácido 2-(2-metoxi-etoxi)-etoxi]-propiónico (CAS: 209542-49-4) (120 mg, 0,62 mmol). Se prosiguió la agitación a 22ºC durante 4 horas. Se vaporó todo el disolvente y se purificó el producto mediante cromatografía de gel de sílice para dar 130 mg de éster 3-[4-(1-metil-6-nitro-1H-indol-3-il)-2,5-dioxo-2,5-dihidro-1H-pirrol-3-il]-indol-1-ilmetílico del ácido 3-[2-(2-metoxi-etoxi)-etoxi]-propiónico. (Rendimiento 80%).

Se preparó 3-(1-hidroximetil-1H-indol-3-il)-4-(1-metil-6-nitro-1H-indol-3-il)-pirrol-2,5-diona como se describe en USSN 09/268.887 (Compuesto II), cuyas porciones relevantes se incorporan aquí como referencia.

Ejemplo 2 O-[2-[[2,5-dihidro-3-[4-(1-metil-6-nitro-1H-indol-3-il)-2,5-dioxo-2,5-dihidro-pirrol-3-il]-indol-1-il]metoxicarbonil]etil]-O'-metilpolietilenglicol 2000

A una solución de 3-(1-hidroximetil-1H-indol-3-il)-4-(1-metil-6-nitro-1H-indol-3-il)-pirrol-2,5-diona (200 mg, 0,5 mol) (preparado como se ha descrito antes en el ejemplo 1) en diclorometano se adicionó a -78ºC, trietilamina (0,6 mmol) seguido de cloruro de ácido de O-(2-carboxietil)-O'-metil polietilen glicol 2000 (0,6 mmol) (preparado con métodos corrientes a partir de ácido propanoico de mono-metil polietilen glicol 2000). Se agitó la solución a temperatura ambiente durante 3 horas, y se evaporó el disolvente. Se purificó el residuo mediante cromatografía instantánea de gel de sílice para dar 1 gm de O-[2-[[2,5-dihidro-3-[4-(1-metil-6-nitro-1H-indol-3-il)-2,5-dioxo-2,5-dihidro-pirrol-3-il]-indol-1-il]metoxicarbonil]etil]-O'-metilpolietilenglicol 2000. (Rendimiento 80%).

Ejemplo 3

Utilizando el mismo procedimiento que en el ejemplo 2 se prepararon los compuestos siguientes:

a) éster 3-[4-(1-metil-6-nitro-1H-indol-3-il)-2,5-dioxo-2,5-dihidro-1H-pirrol-3-il]-indol-1-ilmetílico del ácido 2,3-dimetoxi-benzoico;

b) clorhidrato del éster 3-[4-(1-metil-6-nitro-1H-indol-3-il)-2,5-dioxo-2,5-dihidro-1H-pirrol-3-il]-indol-1-ilmetílico del ácido 2,3-dietilaminometil-benzoico.

Ejemplo 7 3-(1-metil-6-nitro-1H-indol-3-il)-4-[1-(piperidin-4-carbonil)-1H-indol-3-il]-pirrol-2,5-diona de ácido trifluoro-acético

Se adicionó 1,5 equivalentes de ácido N-(ter-butoxicarbonil)-piperidin-4-carboxílico (Bachem, CA) a una solución de 3-(1H-indol-3-il)-4-(1-metil-6-nitro-1H-indol-3-il)-pirrol-2,5-diona (preparado como se describe en USSN 09/268.887) (Compuesto 1), cuyas porciones relevantes se incorporan aquí como referencia) en THF. Se adicionó 1,3 equivalentes cada uno de diisopropil carbodiimida y N-hidroxibenzotriazol. Esta solución se agitó a temperatura ambiente durante 6 horas y media. Se adicionó una pequeña cantidad de carbonato de cesio y 0,5 ml de DMF. Se agitó la reacción durante 20 minutos. Luego se diluyó la mezcla reaccional con CH_{2}Cl_{2} y se lavó con NH_{4}Cl saturado y agua. Se purificó el producto mediante cromatografía instantánea. (Rendimiento 92%). Se disolvió la amina protegida BOC resultante en CH_{2}Cl_{2} y trató con ácido trifluoroacético a temperatura ambiente durante 1 hora. Se evaporó el disolvente y se purificó el residuo mediante HPLC dando ácido trifluoro-acético; 3-(1-metil-6-nitro-1H-indol-3-il)-4-[1-(piperidin-4-carbonil)-1H-indol-3-il]-pirrol-2,5-diona. (Rendimiento 54%).

Ejemplo 8 Clorhidrato de 3-(1-aminoacetil-1H-indol-3-il)-4-(1-metil-6-nitro-1H-indol-3-il)-pirrol-2,5-diona

Se disolvió en THF 1,05 equivalentes de N-(ter-butoxicarbonil)glicina (Bachem, CA) y 1 equivalente de 3-(1H-indol-3-il)-4-(1-metil-6-nitro-1H-indol-3-il)-pirrol-2,5-diona (preparado como antes). Se adicionó 1,3 equivalente cada uno de N-hidroxibenzotriazol y diisopropilcarbodiimida y se agitó la reacción durante 5 horas. Se adicionó una pequeña cantidad de carbonato de cesio y DMF. Se agitó la reacción durante 30 minutos. Se diluyó la mezcla reaccional con acetato de etilo y éter, se lavó con agua y se secó sobre sulfato sódico. Se purificó la 3-[N-butiloxicarbonil-(1-aminoacetil-1H-indol-3-il)]-4-(1-metil-6-nitro-1H-indol-3-il)-pirrol-2,5-diona sobre una placa de TLC Prep. (Rendimiento del 53%). El producto BOC-protegido se disolvió en THF y se adicionó a gotas HCl 12N. Se agitó la reacción a temperatura ambiente durante 2 horas. Se concentró la reacción bajo una corriente de N_{2} y se purificó mediante HPLC, lo que dió 0,026 g de 3-(1-aminoacetil-1H-indol-3-il)-4-(1-metil-6-nitro-1H-indol-3-il)-pirrol-2,5-diona. (Rendimiento del 95%).

Ejemplo 9 Éster 3-[4-(1-metil-6-nitro-1H-indol-3-il)-2,5-dioxo-2,5-dihidro-1H-pirrol-3-il]-indol-1-ilmetílico de ácido acético

Una suspensión de 3-(1-hidroximetil-1H-indol-3-il)-4-(1-metil-6-nitro-1H-indol-3-il)-pirrol-2,5-diona (120 mg, 0,288 mmol) (preparado como se describe en USSN 09/268.887 (Compuesto II)) en 3 ml de anhídrido acético (Aldrich) se agitó a temperatura ambiente durante 19 horas, y a 100ºC durante 2 horas y media. Se enfrió la solución resultante, diluyó con agua, y extrajo con EtOAc. Se lavó la fase de EtOAc con agua, salmuera, se secó sobre sulfato de magnesio y se evaporó. Se purificó el residuo mediante cromatografía instantánea utilizando EtOAc/hexano, lo que dió 77,1 mg de éster 3-[4-(1-metil-6-nitro-1H-indol-3-il)-2,5-dioxo-2,5-dihidro-1H-pirrol-3-il]-indol-1-ilmetílico de ácido acético. (Rendimiento del 53%).

Ejemplo 10 Éster mono-{3-[4-(1-metil-6-nitro-1H-indol-3-il)-2,5-dioxo-2,5-dihidro-1H-pirrol-3-il]-indol-1-ilmetílico} de ácido pentandioico

Una solución de 3-(1-hidroximetil-1H-indol-3-il)-4-(1-metil-6-nitro-1H-indol-3-il)-pirrol-2,5-diona (103 mg,
0,248 mmol), (preparado como se ha descrito antes en el ejemplo 1), anhídrido de glutarilo (35,1 mg, 0,308 mol) (Aldrich), y trietilamina (0,03 ml, 0,924 mmol) en 5 ml de EtOAc se calentó en reflujo durante 6 horas. Se enfrió la solución, diluyó con EtOAc, lavó con HCl 0,5 N, agua, salmuera, se secó sobre sulfato de magnesio y se evaporó. Se purificó el residuo mediante cromatografía instantánea utilizando EtOAc/acetona, lo que dió 35 mg de éster mono-{3-[4-(1-metil-6-nitro-1H-indol-3-il)-2,5-dioxo-2,5-dihidro-1H-pirrol-3-il]-indol-1-ilmetílico} de ácido
pentandioico.

Ejemplo 11 Éster 1-{3-[4-(1-metil-6-nitro-1H-indol-3-il)-2,5-dioxi-2,5-dihidro-1H-pirrol-3-il]-indol-1-il-etílico} del ácido 2,3-dimetoxi-benzoico

a) A una suspensión de NaH (1,92 g de una dispersión al 60% en aceite) en 75 ml de DMF se adicionó indol ( 4,68 g, 40 mmol) (Aldrich). Se agitó la mezcla durante 15 minutos a 0ºC, y se adicionó a gotas 1-cloroetil metiléter (4 ml). Se agitó la mezcla resultante a 0ºC durante 1 hora y se virtió sobre hielo/agua, y se extrajo con tolueno. Se secó la fase orgénica sobre sulfato de magnesio y se evaporó. Se purificó el residuo mediante cromatografía instantánea utilizando EtOAc/hexanos, lo que dió 4 g de 1-[metoxietil]indol. (Rendimiento del 58%).

b) A una solución de 1-(1-metoxietil)indol (4 gm, 23 mmol) (preparado como en la etapa a) anterior) en éter dietílico anhidro a 0ºC se adicionó cloruro de oxalilo (4,2 ml, 48 mmol) durante 5 minutos. Se agitó la suspensión resultante a 0ºC durante 5 horas y se filtró, lo que dió 1,9 gm de cloruro de [1-(1-metoxi-etil)-1H-indol-3-il]-oxo-acetilo. (Rendimiento del 31%). El material se utilizó sin ulterior purificación.

c) A una suspensión de cloruro de [1-(1-metoxi-etil)-1H-indol-3-il]-oxo-acetilo (1,9 gm, 7,15 mmol) (de la etapa b) anterior y clorhidrato de éster 1-metiltílico de ácido [1-metil-6-nitro-1H-indol]-3-etenimídico (2,3 gm, 7,3 mmol) (Compuesto 15 en el Esquema 2 de USSN 09/268.887) en 75 ml de CH_{2}Cl_{2} a 0ºC, se adicionó trietilamina (3,6 ml, 25,8 mmol) durante 3 minutos. Se agitó la mezcla a 0ºC durante 4 horas y se extrajo con HCl 0,5 N. Se extrajo la fase acuosa con CH_{2}Cl_{2} y se lavaron las fases de CH_{2}Cl_{2} con agua, salmuera, se secó sobre sulfato de magnesio y se evaporó. Se disolvió el residuo en 70 ml de tolueno y se enfrió la solución resultante hasta 0ºC. Se adicionó hidrato de ácido p-toluensulfónico (1,4 gm, 7,36 mmol) y se agitó la mezcla a 0ºC durante 1 hora. Se lavó la suspensión con NaHCO_{3} saturado y se extrajo con 2 x 50 ml de EtOAc. Las fases de EtOAC combinadas se secaron sobre sulfato de magnesio y se evaporaron, lo que dió 4,1 gm. (Rendimiento del 100%) de 3-[1-(1-metoxi-etil)-1H-indol-3-il]-4-(1-metil-6-nitro-1H-indol-3-il)-pirrol-2,5-diona en forma de un sólido gomoso rojo que se utilizó sin purifica-
ción.

d) A una solución de 3-[1-(1-metoxi-etil)-1H-indol-3-il]-4-(1-metil-6-nitro-1H-indol-3-il)-pirrol-2,5-diona
(3,75 gm) (de la etapa c) anterior) en 100 ml de THF se adicionó HCl 2 N (75 ml). Se agitó la solución a temperatura ambiente durante 3 horas y vertió en EtOAc y salmuera. Se separaron las fases, y se extrajo la fase acuosa con EtOAc. Se secaron las fases de EtOAc combinadas sobre sulfato de magnesio y se evaporó. Se purificó el residuo mediante cromatografía instantánea utilizando EtOAc/hexanos, lo que dió 1,1 gm. (Rendimiento del 33%) de 3-[1-(1-hidroxi-etil)-1H-indol-3-il]-4-(1-metil-6-nitro-1H-indol-3-il)-pirrol-2,5-diona.

e) A una solución de 3-[1-(1-hidroxi-etil)-1H-indol-3-il]-4-(1-metil-6-nitro-1H-indol-3-il)-pirrol-2,5-diona
(165,3 mg, 0,678 mmol) (de la etapa d) anterior), EDC\cdotHCL (284,5 mg, 1,484 mmol), y dimetilaminopiridina
(185,5 mg, 1,58 mmol) en 20 ml de CH_{2}Cl_{2} se adicionó ácido 2,3-dimetoxibenzoico (287,4 mg, 0,668 mmol). Se agitó la solución a temperatura ambiente durante media hora, se lavó con NaHCO_{3} saturado, salmuera, se secó sobre sulfato de magnesio y se evaporó. Se purificó el residuo mediante cromatografía instantánea utilizando EtOAc/hexanos, lo que dió 203 mg de éster 1-{3-[4-(1-metil-6-nitro-1H-indol-3-il)-2,5-dioxo-2,5-dihidro-1H-pirrol-3-il]-indol-1-il}-etílico de ácido 2,3-dimetoxi-benzoico. (Rendimiento del 50%).

Ejemplo 12 Clorhidrato de éster 1-{3-[4-(1-metil-6-nitro-1H-indol-3-il)-2,5-dioxo-2,5-dihidro-1H-pirrol-3-il]-indol-1-il}-etílico de ácido dietilaminometil-benzoico

Se preparó clorhidrato de éster 1-{3-[4-(1-metil-6-nitro-1H-indol-3-il)-2,5-dioxo-2,5-dihidro-1H-pirrol-3-il]-indol-1-il}-etílico de ácido 3-dietilaminometil-benzoico de conformidad con el procedimiento del ejemplo 11 e anterior utilizando ácido 3-dietilaminometilbenzoico (CAS:137605-77-7) como un material de partida. (Rendimiento
50%).

Ejemplo 15 Actividad antiproliferativa

A continuación se demuestra la actividad antiproliferativa de los compuestos del invento. Estos efectos indican que los compuestos del presente invento son útiles en tratamiento de cáncer, en particular tumores sólidos tal como tumores de pecho y colon.

Ensayo basado en células MDAMB-435

Se adquirió de ATCC (American Type Cell Culture Collection) la línea celular de carcinoma de pecho epitelial y se desarrolló en cultivo en medio recomendado por ATCC. Para análisis del efecto de varios compuestos de fórmula I sobre el crecimiento de estas células se plaquearon las células a una concentración de 1500 células/pocillo en una placa de cultivo de tejido de 96 pocillos ("placa de prueba"). El día después de plaquearse las células se disolvieron los compuestos que deben analizarse en 100% de DMSO (sulfóxido de dimetilo) para dar una solución stock de 10 mM. Cada compuesto se diluyó en H_{2}O a 1 mM y se adicionó a pocillos triplicados en la primera fila de una placa maestra de 96 pocillos conteniendo medio para dar una concentración final de 40 \muM. Luego se diluyeron serialmente los compuestos en medio en la "placa maestra". Luego se transfirió el(los) compuesto(s) diluido(s) a placas de prueba conteniendo células. Una fila de "células de control" de vehículo recibió DMSO. La concentración final de DMSO en cada pocillo fue de 0,1%. 5 días después de la adición de fármaco se analizó la placa como se ha descrito
antes.

Se adicionó MTT (bromuro de (3-(4-5 metil tiazol-2-il)-2,5-difenil tetrazolio; azul de tiazolilo) a cada pocillo para dar una concentración final de 1 mg/ml. La placa se incubó luego a 37ºC durante 2 ½ a 3 horas. El MTT, conteniendo medio, se separó luego y se adicionaron 50 \mul de etanol al 100% a cada pocillo para disolver el formazan. Luego se leyeron las absorbencias utilizando un lector de placas automático (lector de microplacas Biotek). Se calcularon las mediciones IC_{50} utilizando la ecuación Reed and Munsh, véase Am. J. Hygiene Vol. 27 pags. 493-497,
1938.

Los resultados de los experimentos in vitro se exponen en la Tabla I que sigue.

Cada uno de los compuestos en la Tabla I tiene un IC_{50} ó 0,3 \muM.

TABLA I

7

Estos compuestos son apropiados para administración a pacientes mediante infusión continua.

Ejemplo 16 Formulación de comprimido

Producto	Ingredientes	Mg/comprimido
1	Compuesto A*	5	25	100	250	500	750
2	Lactosa anhidra	103	83	35	19	38	57
3	Croscarmellosa sodio	6	6	8	16	32	48
4	Povidone K30	5	5	6	12	24	36
5	Estearato de magnesio	1	1	1	3	6	9
	Peso total	120	120	150	300	600	900
*Compuesto A representa un compuesto del invento.

Procedimiento de preparación

1.: Se mezclan los productos 1, 2 y 3 en una mezcladora apropiada durante 15 minutos.

2.: Se granula la mezcla de polvo de la etapa 1 con solución de Pividone K30 al 20% (producto 4).

3.: Se seca el granulado de la etapa 2 a 50ºC.

4.: Se pasa el granulado de la etapa 3 a través de un equipo de molturación apropiado.

5.: Se adiciona el producto 5 a la etapa de granulación molida y se mezcla durante 3 minutos.

6.: Se comprime el granulado de la etapa 5 en una prensa apropiada.

Ejemplo 17 Formulación de cápsulas

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Producto	Ingredientes	Mg/comprimido
1	Compuesto A*	5	25	100	250	500
2	Lactosa anhidra	159	123	148	- -	- -
3	Almidón de maíz	25	35	40	35	70
4	Talco	10	15	10	12	24
5	Estearato de magnesio	1	2	2	3	6
	Peso total	200	200	300	300	600
*Compuesto 1 representa un compuesto del invento.

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Procedimiento de preparación

2.: Se adicionan los productos 4 y 5 y se mezcla durante 3 minutos.

3.: Se envasa en una cápsula apropiada.

Ejemplo 18 Solución de inyección/preparación de emulsión

Producto	Ingrediente	mg/ml
1	Compuesto A*	1 mg
2	PEG 400	10-50 mg
3	Lecitina	20-50 mg
4	Aceite de soja	1-5 mg
5	Glicerol	8-12 mg
6	Agua c.s.	1 ml
*Compuesto A representa un compuesto del invento

Procedimiento de preparación

1.: Se disuelve el producto 1 en el producto 2.

2.: Se adicionan los productos 3, 4 y 5 al producto 6 y se mezcla hasta que se dispersa, luego de homogeniza.

3.: Se adiciona la solución de la etapa 1 a la mezcla de la etapa 2 y se homogeniza hasta que la dispersión es translúcida.

4.: Se filtra para esterilidad a través de un filtro de 0,2 \mum y se envasa en viales.

Ejemplo 19 Solución de inyección/Preparación de emulsión

Producto	Ingrediente	mg/ml
1	Compuesto A*	1 mg
2	Glicofurol	10-50 mg
3	Lecitina	20-50 mg
4	Aceite de soja	1-5 mg
5	Glicerol	8-12 mg
6	Agua c.s.	c.s. 1 ml
*Compuesto A representa un compuesto del invento.

Claims

1. Un compuesto que tienen la fórmula

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9

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y sus sales farmacéuticamente activas de dichos compuestos, en donde:

R se elige del grupo constituido por

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10

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11

12

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2. Un compuesto elegido del grupo constituido por:

clorhidrato de éster 3-[4-(1-metil-6-nitro-1H-indol-3-il)-2,5-dioxo-2,5-dihidro-1H-pirrol-3-il]-indol-1-ilmetílico del ácido 3-dietilaminometil-benzoico.

3. Un compuesto elegido del grupo constituido por:

3-(1-metil-6-nitro-1H-indol-3-il)-4-[1-(piperidin-4-carbonil)-1H-indol-3-il]-pirrol-2,5-diona del ácido trifluoro-acético;

4. Una composición farmacéutica que comprende como ingrediente activo una cantidad efectiva de un compuesto de cualquiera de las reivindicaciones 1-3 y un vehículo o excipiente farmacéuticamente aceptable.

5. La composición farmacéutica de la reivindicación 4, que es apropiada para administración parenteral.

6. Procedimiento para la preparación de los compuestos como se define en cualquiera de las reivindicaciones 1-3, que comprende

a) cuando R en la fórmula I es 13 o 14 introducir este grupo en el compuesto de partida de fórmula

15

mediante tratamiento con agentes que dan dicho grupo, o

b) cuando R en la fórmula I es distinto de los grupos bajo a) antes expuesto, introducir este grupo en el compuesto de partida de la fórmula general

16

en donde R^{3} es hidrógeno o metilo, mediante tratamiento con agentes que dan dicho grupo, o

c) convertir un compuesto de fórmula I en una sal respectiva farmacéuticamente aceptable.

7. Compuestos, de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones 1-3 siempre que se preparen con el procedimiento de la reivindicación 6.

8. El empleo de un compuesto como se ha definido en cualquiera de las reivindicaciones 1-3 para la preparación de medicamentos para el tratamiento de trastornos de proliferación de células.

9. El empleo de un compuesto como se ha definido en cualquiera de las reivindicaciones 1-3 para la preparación de medicamentos para el tratamiento de cáncer.