ES2235206T3 - Utilizacion de lipidos complejos como aditivos estabilizantes de preparados farmaceuticos de mezclas de enzimas digestivas. - Google Patents
Utilizacion de lipidos complejos como aditivos estabilizantes de preparados farmaceuticos de mezclas de enzimas digestivas.Info
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Abstract
SE DESCRIBE LA UTILIZACION DE LIPIDOS COMPLEJOS, EN PARTICULAR LECITINA, COMO ESTABILIZANTES FRENTE A LA DISMINUCION DE ACTIVIDAD LIPOLITICA BAJO LA INFLUENCIA DE LA HUMEDAD EN PREPARADOS FARMACEUTICOS HIDROSOLUBLES DE MEZCLAS DE ENZIMAS DIGESTIVOS QUE CONTIENEN LIPASAS Y PROTEASAS, EN PARTICULAR MEZCLAS DE ENZIMAS DIGESTIVOS QUE CONTIENEN PANCREATINA, ADECUADOS PARA LA PREPARACION DE SOLUCIONES ACUOSAS PARA LA INTRODUCCION CONTINUADA EN EL TRACTO GASTROINTESTINAL MEDIANTE SONDA.
Description
Utilización de lípidos complejos como aditivos
estabilizantes de preparados farmacéuticos de mezclas de enzimas
digestivas.
El presente invento concierne a la utilización de
lípidos complejos como aditivos que estabilizan contra una
disminución de la actividad lipolítica bajo la influencia de la
humedad a preparados farmacéuticos solubles en agua de mezclas de
enzimas digestivas, que contienen mezclas de proteasas y lipasas,
especialmente pancreatina, y que son apropiados para la preparación
de soluciones acuosas destinadas a su introducción continua del
tracto gastrointestinal mediante sondas. Además, el invento
concierne a preparados farmacéuticos solubles en agua de mezclas de
enzimas digestivas que contienen lipasas y proteasas, especialmente
de mezclas de enzimas digestivas que contienen pancreatina, los
cuales son estabilizados mediante lípidos complejos contra una
disminución de la actividad lipolítica bajo la influencia de la
humedad, y que son apropiados para la preparación de soluciones
acuosas que se pueden introducir en el tracto gastrointestinal en el
caso de animales mamíferos o seres humanos mediante sondas.
En el caso de animales mamíferos, especialmente
seres humanos, puede aparecer una carencia de enzimas digestivas,
provocada por ejemplo por una alteración enfermiza del páncreas como
consecuencia de una pancreatitis crónica, una insuficiencia
digestiva después de operaciones del estómago, y de enfermedades
hepáticas o biliares. Ya es conocido que tales fenómenos de carencia
se pueden tratar mediante la administración de mezclas de enzimas
digestivas que contienen pancreatina, que no son propias del cuerpo,
tales como p. ej. enzimas del páncreas, especialmente pancreatina,
que eventualmente puede contener además adiciones de lipasas. Las
enzimas del páncreas son administradas usualmente en forma de
preparados sólidos por vía oral. Para que en el caso de la ingestión
por vía oral, las mezclas de enzimas administradas no sean
desnaturalizadas irreversiblemente de manera indeseada ya en el
estómago por el ácido gástrico allí presente y las enzimas
proteolíticas, tales como pepsina, es necesario proveer a las
mezclas de enzimas de un revestimiento resistente a los jugos
gástricos. Tal revestimiento hace posible el paso de las mezclas de
enzimas intactas a través del estómago hasta su lugar de acción, es
decir el duodeno, en donde por medio de las condiciones desde
neutras hasta ligeramente alcalinas que allí predominan es degradada
la capa protectora y son liberadas las enzimas. Al
igual que las enzimas del páncreas propias del cuerpo de un ser humano sano, las enzimas aportadas por vía oral pueden desarrollar allí sus efectos enzimáticos, especialmente actividades amilolíticas, lipolíticas así como proteolíticas.
igual que las enzimas del páncreas propias del cuerpo de un ser humano sano, las enzimas aportadas por vía oral pueden desarrollar allí sus efectos enzimáticos, especialmente actividades amilolíticas, lipolíticas así como proteolíticas.
Tales formulaciones sólidas de pancreatina en
forma de microgránulos, que pueden ser revestidas con una película
resistente a los jugos gástricos, se describen p. ej. en el
documento de publicación de solicitud de patente alemana
DE-OS 42 27 385.4.
Además, en la bibliografía se describe la
utilización de fosfolípidos para la protección de enzimas frente a
agentes oxidantes. Así, el documento JP 59 169 491 da a conocer la
envoltura o el revestimiento de enzimas puras a considerar por
separado en cada caso, por ejemplo de una proteasa, lipasa o
amilasa, con un fosfolípido. En la mezcla de enzima/fosfolípido seca
obtenida las enzimas están protegidas frente a la oxidación. En
particular, como posible estrés de oxidación se indica el contacto
de las enzimas con un peróxido.
Para pacientes con insuficiencia digestiva,
especialmente pacientes que yacen en la cama con insuficiencia
digestiva prolongadamente persistente, tal como por ejemplo
insuficiencia crónica del páncreas, sería deseable la administración
de las enzimas digestivas que no sean propias del cuerpo también
durante un prolongado período de tiempo en forma líquida, por
ejemplo por aplicación continua mediante una sonda, en lugar de
formas de presentación sólidas.
Las formas de presentación líquidas de mezclas de
enzimas digestivas que contienen pancreatina, especialmente las de
pancreatina, no pudieron ser puestas a disposición hasta ahora,
puesto que los preparados acuosos líquidos de tales mezclas de
enzimas no son estables durante un período de tiempo prolongado. Se
pone de manifiesto que especialmente la actividad de las lipasas
contenidas en la mezcla disminuye rápidamente en presencia de agua,
mediante el ataque proteolítico de las proteasas contenidas también
en la mezcla, tales como tripsina o quimiotripsina. Así, dependiendo
de las condiciones externas (temperatura, valor del pH) en
preparados acuosos de pancreatina se puede llegar en el transcurso
de un período brevísimo de tiempo a una amplia pérdida de la
actividad de lipasas.
A fin de ser apropiadas para la introducción
continua en el tracto gastrointestinal por aplicación mediante una
sonda, las soluciones acuosas de mezclas de enzimas digestivas que
contienen lipasas y proteasas, especialmente de mezclas de enzimas
digestivas que contienen pancreatina, deben de ser estables durante
un período de tiempo de varias horas, por ejemplo de 8 horas.
Especialmente, en las soluciones no deben resultar, ni estar
contenidas, partículas de ningún tipo, que obstruyan a la sonda. Un
requisito esencial planteado a tales soluciones consiste en que debe
de conservarse una actividad lo más alta y uniforme que sea posible
de todas las enzimas digestivas allí contenidas, durante todo el
período de tiempo de la administración. Además, para la aplicación
continua por vía gastrointestinal de soluciones apropiadas, es
necesario que éstas puedan ser puestas a disposición de un modo
exento de crecimiento de los gérmenes, es decir conservadas por
ejemplo contra el crecimiento de los gérmenes, preferiblemente en
condiciones estériles.
Fue misión del invento, por lo tanto, poner a
disposición preparados farmacéuticos solubles en agua de mezclas de
enzimas digestivas, que contengan lipasas y proteasas, estabilizados
contra la pérdida de actividad lipolítica bajo la influencia de la
humedad, que permanezcan estables durante un período de tiempo
prolongado en estado disuelto en un medio acuoso.
Es objeto del invento la utilización de lípidos
complejos como aditivos estabilizadores contra una disminución de la
actividad lipolítica bajo la influencia de la humedad, en preparados
farmacéuticos solubles en agua de mezclas de enzimas digestivas que
contengan lipasas y proteasas, especialmente mezclas de enzimas
digestivas que contengan pancreatina, los cuales son apropiados para
la preparación de soluciones acuosas a la introducción en régimen
continuo dentro del tracto gastrointestinal mediante una sonda,
eligiéndose los péptidos complejos del grupo de los fosfolípidos,
glicolípidos y sus mezclas. Son objeto del invento, además, los
preparados farmacéuticos solubles en agua, estabilizados de este
modo, de mezclas de enzimas digestivas. Asimismo son objeto del
invento estuches para la preparación de soluciones acuosas de
mezclas de enzimas digestivas, que sean apropiadas para la
aplicación continua mediante sondas.
Los lípidos complejos, que se adecuan conforme al
invento como aditivos estabilizadores, son por regla general
insolubles en acetona. Entre ellos se cuentan especialmente los
fosfolípidos que contienen fósforo y exentos de hidratos de carbono
así como los glicolípidos que contienen hidratos de carbono y no
contienen fósforo, y sus mezclas. Convenientemente, se utilizan
solamente fosfolípidos o mezclas que contengan fosfolípidos y
glicolípidos.
Como fosfolípidos, que se pueden utilizar
conforme al invento como aditivos estabilizadores a mezclas de
enzimas digestivas que contienen lipasas y proteasas, especialmente
mezclas de enzimas digestivas que contienen pancreatina, se adecuan
en especial sales de aniones de la fórmula general I
en la
que
- R^{1}
- significa hidrógeno o un radical alcanoílo con 10 - 25 átomos de carbono, cuyo radical de hidrocarburo puede contener eventualmente 1 - 4 dobles enlaces,
- R^{2}
- significa hidrógeno o un radical alcanoílo con 10 - 25 átomos de carbono, cuyo radical de hidrocarburo puede contener eventualmente 1 - 4 dobles enlaces, o cuando R^{1} no representa hidrógeno, también puede significar hidrógeno,
- R^{3}
- significa hidrógeno, un grupo alquilo inferior, el cual puede estar sustituido con amino, trialquilamonio inferior, un grupo carboxilo unido a un átomo de carbono portador de una función amino, o un grupo cicloalquilo sustituido con hidroxi,
- R^{4}
- significa hidrógeno o una cadena de hidrocarburo con 10 - 25 átomos de carbono, que eventualmente puede contener 1 - 4 dobles enlaces,
- A
- representa oxígeno o NH,
con un catión fisiológicamente
compatible
Como cationes fisiológicamente compatibles se
adecuan iones de amonio, iones de metales alcalinos o
alcalino-térreos, preferiblemente sodio, potasio o
calcio, así como otros cationes univalentes o plurivalentes
fisiológicamente compatibles. Si R^{3} contiene un átomo de
nitrógeno, éste puede formar un ion de amonio cuaternario, el cual
también puede servir como catión, de manera tal que se
forman sales internas no cargadas hacia el exterior.
Si en los compuestos de la fórmula I los
radicales R^{1} y/o R^{2} representan un radical alcanoílo,
éste puede ser lineal o ramificado y está por regla general sin
ramificar y contiene 10 - 25 preferiblemente 16 - 20 átomos de
carbono. Eventualmente, el radical alcanoílo puede contener hasta 4
dobles enlaces. Como radicales alcanoílo pueden presentarse
especialmente radicales de ácidos grasos de cadena larga, tales como
ácido nervónico, ácido lignocérico, ácido palmítico, ácido
palmitoleico, ácido esteárico, ácido oleico, ácido linoleico, ácido
linolénico, ácido araquídico o ácido araquidónico.
Si el sustituyente R^{3} significa o contiene
un grupo alquilo inferior, éste puede ser lineal o ramificado y
contener especialmente de 1 a 4, preferiblemente de 1 a 2 átomos de
carbono. Si R^{3} significa un grupo cicloalquilo sustituido con
hidroxi, éste puede contener de 3 a 6 átomos de carbono y estar
sustituido con hidroxi una o múltiples veces. Preferiblemente, el
grupo cicloalquilo contiene de 5 a 6 átomos de carbono, los cuales
en cada caso pueden estar sustituidos con hidroxi.
El radical R^{3}O representa preferiblemente
hidroxi o un radical alcoxi que se ha formado por esterificación de
un alcohol univalente o plurivalente con el grupo fosfato, estando
seleccionado el alcohol univalente o plurivalente entre el grupo que
consta de aminoetanol, colina, serina, glicerol y
mio-inositol.
Si el radical R^{4} representa una cadena de
hidrocarburo, ésta puede ser lineal o ramificada y por regla general
no es ramificada y contiene 10 - 25, preferiblemente 12 - 20, de
modo especialmente preferido 15 átomos de carbono. Eventualmente,
la cadena de hidrocarburo puede contener hasta 4, preferiblemente 2,
de modo especialmente preferido 1 doble enlace.
El radical A puede representar oxígeno o el grupo
NH.
Como fosfolípidos entran en cuestión
preferiblemente ácido fosfatídico (ácido
1,2-diacil-sn-glicerol-3-fosfónico),
fosfatidil-colina
(1,2-diacil-sn-glicerol-3-fosforil-colina),
fosfatidil-etanolamina
(1,2-diacil-sn-glicerol-fosforil-etanolamina),
fosfatidil-serina
(1,2-diacil-sn-glicerol-3-fosforil-serina)
y fosfatidil-inosita
(1,2-diacil-sn-glicerol-3-fosforil-inosita),
y en el caso de que los fosfolípidos procedan de fuentes de origen
animal, tal como por ejemplo de un huevo de gallina, también
esfígomielina, así como mezclas de estos compuestos. Los mencionados
1,2-diacil-fosfolípidos pueden ser
hidrolizados parcialmente en ciertas condiciones, por ejemplo bajo
la influencia enzimática de una fosfolipasa. Dependiendo de la
naturaleza de la fosfolipasa, en tal caso los radicales R^{1},
R^{2}, R^{3} o también [R^{3}OPO_{2}]- de los
1,2-diacil-fosfolípidos pueden haber
sido reemplazados por hidrógeno. Cuando sea hidrolizado por lo menos
uno de los mencionados radicales de la molécula por cada molécula de
fosfolípido, entonces resultan los denominados
liso-fosfolípidos, especialmente
liso-fosfatidil-colina,
liso-fosfatidil-etanolamina,
liso-fosfatidil-inosita,
liso-fosfatidil-serina y ácido
liso-fosfatídico. También estos
liso-fosfolípidos se adecuan como aditivos
estabilizadores a mezclas de enzimas digestivas que contienen
lipasas y proteasas, especialmente mezclas de enzimas digestivas que
contienen pancreatina, en el sentido del invento.
Como glicolípidos se pueden utilizar sobre todo
los denominados fitoglicolípidos, presentes en las plantas, de la
fórmula general II
en la
que
- R^{5} y R^{6}
- independientemente uno de otro, designan en cada caso un radical alcanoílo con 10 - 25 átomos de carbono, cuyo radical de hidrocarburo puede contener eventualmente 1 - 4 dobles enlaces,
- \quad
- o significan hidrógeno, no pudiendo R^{5} y R^{6} sin embargo representar simultáneamente hidrógeno, y
- R^{7}
- significa un radical de monosacárido o disacárido, cuyos eslabones sacáridos están seleccionados del grupo que consta de D-fructosilo, D-galactosilo, D-glucosilo y D-manosilo,
así como sus
mezclas.
Si en los compuestos de la fórmula II R^{5} y
R^{6} representan un radical alcanoílo, éste está ramificado o sin
ramificar y por regla general está sin ramificar y contiene 10 - 25,
preferiblemente 16 - 20 átomos de carbono. Eventualmente, el radical
alcanoílo puede contener hasta 4 dobles enlaces. Como radicales
alcanoílo entran en cuestión especialmente radicales de ácidos
grasos de cadena larga, tales como los de ácido palmítico, ácido
palmitoleico, ácido esteárico, ácido oleico, ácido linoleico, ácido
linolénico o ácido araquídico.
Los radicales R^{7} representan radicales de
monosacáridos o disacáridos, que pueden estar constituidos a base de
las moléculas de azúcares D-galactosa,
D-glucosa, D-manosa o
D-fructosa. De modo especialmente preferido,
R^{7} tiene el significado de D-galactosa
(entonces se trata de monogalactosil-diglicéridos,
MGDG) o de digalactosa (entonces se trata de
digalactosil-diglicéridos, DGDG;
1,2-diacil-[\alpha-D-galactosil-(1
\rightarrow
6)-\beta-D-galactosil-(1
\rightarrow 3)]-sn-gliceroles).
Los fosfolípidos de la fórmula general I y los
glicolípidos de la fórmula general II poseen en el átomo de carbono
central del entramado de base del glicerol en cada caso un centro de
quiralidad y pueden estar configurados R ó S. Para la finalidad del
invento, se pueden utilizar las formas estereoisómeras individuales
de los compuestos de la fórmula I y/o de la fórmula II, así como las
correspondientes mezclas.
Para la estabilización, efectuada conforme al
invento, de los preparados farmacéuticos de mezclas de enzimas
digestivas que contienen lipasas y proteasas, especialmente mezclas
de enzimas digestivas que contienen pancreatina, se han manifestado
como favorables aquéllas mezclas de lípidos que se pueden obtener a
partir de fuentes naturales y que constituyen mezclas de diferentes
fosfolípidos y eventualmente de diferentes glicolípidos. Como
ejemplos preferidos de tales mezclas de lípidos naturales se
mencionarán las lecitinas. Las fuentes de tales lecitinas naturales
pueden ser especialmente plantas, tales como soja, girasol, colza,
maíz o cacahuetes, así como animales o productos animales, tales
como yema de huevo o sustancia cerebral, pero también
microorganismos. Las lecitinas de procedencia natural son obtenibles
comercialmente por regla general de diferentes vendedores.
De las lecitinas obtenidas de fuentes vegetales
es especialmente apropiada para la finalidad del invento la lecitina
de soja, especialmente la lecitina de soja enriquecida con
fosfolípidos, tal como por ejemplo lecitina de soja con un contenido
en fosfolípidos de aproximadamente 98%, para la finalidad conforme
al invento. Las lecitinas vegetales no enriquecidas y sin tratar
contienen por regla general una cierta proporción de
fitoglicolípidos. Las lecitinas obtenidas de fuentes naturales son
mezclas de diferentes fosfolípidos y, en el caso de tratarse de un
origen vegetal, también de glicolípidos, cuya composición no es
uniforme, sino que puede fluctuar dependiendo de su procedencia.
Así, junto con los constituyentes ya mencionados anteriormente
pueden estar contenidos además otros fosfolípidos en cantidades
secundarias. La Tabla 1 sirve para representar las composiciones
promedias de algunas lecitinas de origen natural no enriquecidas y
sin tratar, y usuales en el comercio.
Los preparados farmacéuticos estabilizados
conforme al invento contienen preferiblemente mezclas de enzimas
digestivas que poseen un cierto contenido de pancreatina.
Dentro del marco del presente invento se entiende
por pancreatina la pancreatina aislada a partir de los páncreas de
mamíferos, cuyo contenido en proteasas activas había sido aumentado
eventualmente por disociación autolítica de los zimógenos de
proteasas contenidos originalmente en ellas.
Preferiblemente, al referirse a las mezclas de
enzimas digestivas que contienen pancreatina en los preparados
farmacéuticos estabilizados conforme al invento, puede tratarse de
pancreatina obtenida a partir de los páncreas de mamíferos,
especialmente pancreatina de cerdo, que constituye una mezcla de
diferentes enzimas digestivas. La pancreatina de animales mamíferos,
que se adecua como agente coadyuvante de la digestión para la
alimentación humana, especialmente la pancreatina procedente de un
páncreas de cerdo, no siempre contiene las lipasas en cantidad
suficientes para las necesidades humanas. Por lo tanto, a tales
preparados de pancreatina se les pueden añadir lipasas adicionales
obtenidas por ejemplo a partir de microorganismos. También las
mezclas de pancreatina y lipasas, obtenidas de tal manera,
constituyen apropiadas mezclas de enzimas.
En la pancreatina aislada a partir de animales
mamíferos, las proteasas, cuando la pancreatina no hubo sido
sometida a ningún tratamiento previo adicional, se presentan
usualmente en su mayor parte en forma de un precursor
proteolíticamente inactivo, el zimógeno. Por lo tanto, puede ser
conveniente para finalidades farmacéuticas someter a la pancreatina
bruta, que se había obtenido de manera en sí conocida por apropiados
procesos de precipitación a partir de un páncreas, todavía a un
tratamiento hidrolítico (autolisis). En el caso de este tratamiento,
los zimógenos son transformados en proteasas activas. En esta
pancreatina previamente tratada por eutolisis (en lo que sigue
designada abreviadamente como F-pancreatina) se
presenta un contenido especialmente alto de proteasas activas, de
modo que estas F-pancreatinas están especialmente
expuestas a peligro en lo que se refiere a su actividad lipolítica.
La utilización conforme al invento de lípidos complejos se adecua
especialmente bien para la estabilización de la actividad
lipolítica en preparados farmacéuticos que contienen
F-pancreatina. En este contexto, es sorprendente
que la estabilización de la actividad de las lipasas no se efectúe
por medio de una desactivación de las proteasas activas contenidas
en la mezcla y que las mezclas de enzimas estabilizadas de tal modo
tengan por consiguiente actividad tanto amilolítica y lipolítica
como también proteolítica.
Las mezclas de enzimas digestivas que contienen
pancreatina en los preparados farmacéuticos que se han de proteger
conforme al invento, pueden contener, junto con pancreatina,
adicionalmente aquellas lipasas, como las que están contenidas en
plantas o microorganismos. Las lipasas procedentes de
microorganismos pueden ser aquéllas que se obtienen a partir de
bacterias o cultivos de hongos tales como mohos, especialmente de la
cepa Rhizopus.
Como adicionales constituyentes proteasas se
pueden añadir a las mezclas de enzimas digestivas que contienen
pancreatina en los preparados farmacéuticos que se han de proteger
conforme al invento, todavía otras proteasas animales y vegetales,
así como especialmente proteasas obtenibles a partir de
microorganismos tales como bacterias o cultivos de hongos tales
como mohos, por ejemplo de la cepa Aspergillus.
Las mezclas de enzimas digestivas exentas de
pancreatina pueden contener como lipasas las obtenidas a partir de
plantas o microorganismos. Las lipasas procedentes de
microorganismos pueden ser las que se obtienen a partir de bacterias
o cultivos de hongos tales como mohos, por ejemplo de la cepa
Rhizopus. Como proteasas contenidas en mezclas de enzimas
digestivas exentas de pancreatina entran en cuestión proteasas
animales o vegetales, así como especialmente las proteasas
obtenibles a partir de microorganismos tales como bacterias o
cultivos de hongos tales como mohos, por ejemplo de la cepa
Aspergillus.
Los preparados farmacéuticos conformes al invento
pueden contener, junto con mezclas de enzimas digestivas y lípidos
complejos, eligiéndose los péptidos complejos del grupo de los
fosfolípidos, glicolípidos y sus mezclas, adicionalmente sustancias
coadyuvantes y/o sustancias aditivas farmacéuticas solubles en agua.
Por ejemplo, pueden estar contenidas sustancias de vehículo tales
como hidratos de carbono, por ejemplo manita, o proteínas solubles
así como agentes conservantes.
Los preparados farmacéuticos de enzimas
digestivas que contienen pancreatina en el sentido del invento
pueden ser polvos solubles en agua, los cuales, junto con
pancreatina, especialmente F-pancreatina, contienen
lípidos complejos eligiéndose los péptidos complejos del grupo de
los fosfolípidos, glicolípidos y sus mezclas, en una cantidad
suficiente para la estabilización de la actividad lipolítica bajo la
influencia de la humedad y eventualmente de modo adicional
sustancias coadyuvantes y/o aditivas solubles en agua, en sí
conocidas.
Para la preparación de polvos solubles en agua,
las mezclas de enzimas pueden ser liberadas ampliamente de
constituyentes insolubles en agua. Para esta finalidad, un preparado
acuoso de F-pancreatina puede ser liberado de
materiales sólidos sin disolver mediante procedimientos apropiados,
en si conocidos, destinados a la separación de materiales sólidos,
por ejemplo por centrifugación o filtración, y las soluciones
obtenidas, eventualmente después de haber añadido otras sustancias
coadyuvantes y/o aditivas, pueden ser esterilizadas de acuerdo con
métodos en sí conocidos, por ejemplo por filtración en condiciones
estériles. A continuación, las sustancias constitutivas de las
soluciones transparentes, eventualmente estériles, que se han
obtenido, se pueden obtener nuevamente como materiales sólidos
mediante procedimientos en sí conocidos de secado, por ejemplo por
liofilización (secado por congelación). Los preparados obtenidos de
esta manera se adecuan para la preparación de soluciones estables a
lo largo de varias horas, p. ej. hasta durante ocho horas,
eventualmente exentas de crecimiento de gérmenes, que se adecuan
para la aplicación continua uniforme por vía gastrointestinal a los
pacientes, p. ej. mediante una sonda.
Por una aplicación continua se entiende una
administración en lo esencial ininterrumpida de soluciones acuosas
que contienen los preparados farmacéuticos conformes al invento,
eventualmente estériles, durante un período de tiempo de desde
aproximadamente una hora hasta de varias horas, por ejemplo de 8
horas, aproximadamente durante una noche. La aplicación continua de
las soluciones puede efectuarse ventajosamente a través de sondas
introducidas en el tracto digestivo, por ejemplo en el estómago o
en el intestino delgado.
La eficacia de la adición de lecitina es
ampliamente independiente de la relación relativa de las lipasas a
las proteasas en la mezcla de enzimas. Son apropiadas por ejemplo
mezclas de enzimas, en las que la relación de las lipasas a las
proteasas totales - medida por la relación de las respectivas
actividades que se habían determinado de acuerdo con las
estipulaciones de la "Fédération Internationale
Pharmaceutique" (a continuación designada abreviadamente por
FIP) (véase R. Ruyssen y A. Lauwers, Pharmaceutical Enzymes,
Scientific Publishing Company, Gante, 1978, páginas
74-82, citada a continuación como "Lauwers"), y
que a continuación se indica en unidades relativas de actividad,
abreviadamente por FIP-U/g. puede ser de
aproximadamente 5:1 hasta aproximadamente 30:1.
Fundamentalmente, la adición, efectuada conforme
al invento, de lípidos complejos, eligiéndose los péptidos complejos
del grupo de los fosfolípidos, glicolípidos y sus mezclas a
preparados farmacéuticos de mezclas de enzimas digestivas que
contienen lipasas y proteasas, especialmente de mezclas de enzimas
digestivas que contienen pancreatina, produce una estabilización
contra una disminución de la actividad lipolítica bajo la influencia
de la humedad. Por "humedad" ha de entenderse en lo esencial la
humedad acuosa, que puede fluctuar entre un contenido muy pequeño
muy humedad del polvo de la mezcla de enzimas digestivas y hasta
llegar al de un preparado acuoso de este polvo.
Una adición, conforme al invento, de lípidos
complejos, eligiéndose los péptidos complejos del grupo de los
fosfolípidos, glicolípidos y sus mezclas se manifiesta, ya al
realizar la obtención y la elaboración de las mezclas de enzimas
digestivas que contienen pancreatina, utilizadas en los preparados
farmacéuticos, como conveniente para la estabilización de la
actividad lipolítica durante aquellas etapas del proceso de
preparación u obtención, en las cuales se pueda llegar a la
inactivación de las lipasas, tal como por ejemplo un tratamiento en
condiciones húmedas de la mezcla de enzimas.
En una solución acuosa de un preparado
farmacéutico que contiene una mezcla de enzimas digestivas, el
efecto estabilizador de los lípidos complejos añadidos,
especialmente de la lecitina, es dependiente, entre otras cosas,
también del valor del pH que reina en el preparado. Conforme al
invento, se han manifestado como favorables unos valores de pH
situados en el margen de pH de 3,5 - 9,0, preferiblemente en el
margen de pH de 4,0 - 7,0, de modo especialmente preferido en el
margen de pH de 5,0 - 6,5.
Para conseguir una apreciable estabilización de
la actividad lipolítica en los preparados farmacéuticos solubles en
agua de las mezclas de enzimas digestivas y en las soluciones
acuosas para la aplicación mediante una sonda, que se pueden
producir a partir de estos preparados, es necesario añadir una
determinada cantidad mínima de lípidos complejos, eligiéndose los
péptidos complejos del grupo de los fosfolípidos, glicolípidos y sus
mezclas. Usualmente, las mezclas de enzimas digestivas utilizadas en
los preparados conformes al invento pueden tener un contenido en
lipasas de por ejemplo 2.000 hasta 200.000 FIP-U/g,
expresado en unidades de actividad, cuando solamente contienen
lipasas procedentes de la secreción del páncreas de un mamífero, y
un contenido de 2.000 hasta 500.000 FIP-U/g, cuando
contienen lipasas procedentes de microorganismos, o bien a solas o
bien en combinación con lipasas procedentes del páncreas. Una
cantidad de por lo menos 1% en peso de lípidos complejos, referida a
la cantidad empleada de una mezcla sólida de enzimas digestivas que
contiene pancreatina, por ejemplo una cantidad de 1 hasta 10% en
peso, es entonces apropiada para la consecución de una apreciable
estabilización. Una adición de mayores cantidades de lípidos
complejos es asimismo posible, pero ya no origina ya ninguna mejoría
digna de mención de la estabilización de la actividad lipolítica.
Así, por ejemplo para la estabilización de mezclas que contienen
pancreatina, o bien pancreatina y lipasas adicionales, con lípidos
complejos, especialmente lecitina, es apropiada una adición de por
lo menos 1% en peso, preferiblemente de 2 a 5% en peso, de modo
especialmente preferido de alrededor de 3% en peso.
Con ayuda de la utilización, conforme al invento,
de lípidos complejos, eligiéndose los péptidos complejos del grupo
de los fosfolípidos, glicolípidos y sus mezclas, las soluciones
acuosas que se pueden producir a partir de preparados farmacéuticos
de mezclas de enzimas digestivas que contienen pancreatina, las
cuales soluciones tienen tendencia a una rápida disminución de la
actividad lipolítica, se pueden estabilizar de tal manera que la
actividad lipolítica de las lipasas contenidas en la mezcla
disminuya sólo insignificantemente durante un prolongado período de
tiempo. Así, la solución acuosa de una F-pancreatina
estabilizada por adición de lecitinas tiene después de un período de
tiempo de incubación durante 8 horas a la temperatura ambiente, una
actividad lipolítica restante, determinada con ayuda del método
FIP/Far. Eur., de 85% de la actividad de partida original. En una
solución acuosa de F-pancreatina, estabilizada
mediante lípidos complejos, se pudo detectar, incluso después de un
período de tiempo de incubación de 24 horas, todavía un 50% de la
actividad lipolítica inicial determinada con ayuda del método
FIP/Far. Eur. Por el contrario, en una solución comparativa no
estabilizada, en condiciones por lo demás idénticas, la actividad
lipolítica había disminuido después de 8 horas hasta por debajo de
20% de la actividad de partida.
La estabilización efectuada conforme al invento,
de preparados farmacéuticos solubles en agua de mezclas de enzimas
digestivas que contienen lipasas y proteasas, contra una disminución
de la actividad lipolítica en un medio acuoso, abre la posibilidad
de abastecer a los pacientes con tales mezclas de enzimas digestivas
en forma de una solución acuosa, en régimen continuo, mediante
introducción en el tracto gastrointestinal. Las soluciones acuosas
empleadas para ello deberán estar naturalmente exentas de
crecimiento de gérmenes y preferiblemente deberán ser incluso
estériles. Las soluciones exentas de crecimiento de gérmenes pueden
ser por ejemplo soluciones en las que mediante adición de agentes
conservantes se impide la reproducción de gérmenes
autorreproducibles.
Conforme al invento se pone a disposición un
estuche para la preparación de soluciones acuosas de mezclas de
enzimas digestivas, exentas de gérmenes, que han sido estabilizadas
contra la disminución de la actividad lipolítica, y que son
apropiadas para la introducción en régimen continuo dentro del
tracto gastrointestinal mediante una sonda cuyo estuche está
caracterizado porque contiene como constituyentes:
- a)
- un preparado farmacéutico sólido, soluble en agua, exento de crecimiento de gérmenes, de una mezcla de enzimas digestivas que contiene lipasas y proteasas, la cual eventualmente puede contener una cantidad de lípidos complejos, que se eligen del grupo de los fosfolípidos, glicolípidos y sus mezclas, que sea suficiente para la estabilización contra una disminución de la actividad lipolítica de la solución acuosa que se ha de preparar,
- y
- b)
- una cantidad, suficiente para la preparación de la solución acuosa, de un disolvente acuoso exento de crecimiento de gérmenes, el cual junto con agua puede contener sales y sustancias coadyuvantes fisiológicamente compatibles, y, en el caso de que en el preparado farmacéutico sólido mencionado en el apartado a) no esté contenida ninguna cantidad de lípidos complejos que sea suficiente para una estabilización contra una disminución de la actividad lipolítica de la solución acuosa que se ha de preparar, contiene adicionalmente una cantidad de lípidos complejos que es suficiente para la estabilización contra una disminución de la actividad lipolítica de la solución acuosa que se ha de preparar.
Especialmente, el preparado sólido a) utilizado
en el estuche, puede constituir una mezcla de enzimas digestivas,
liofilizada, que contiene lipasas y proteasas, la cual contiene
eventualmente lípidos complejos. Preferiblemente, la mezcla de
enzimas digestivas consiste en una mezcla de enzimas digestivas que
contiene pancreatina.
Las soluciones acuosas, que están exentas del
crecimiento de gérmenes, se pueden obtener por adición de agentes
conservantes en sí conocidos, por ejemplo parabenos. Las soluciones
estériles, que también constituyen soluciones exentas de crecimiento
de gérmenes, se pueden obtener mediante procedimientos de
esterilización en sí conocidos, por ejemplo mediante la filtración
en condiciones estériles.
Los lípidos contenidos en el estuche pueden
presentarse preferiblemente como aditivos ya contenidos en la
mezcla de enzimas digestivas (componente a)). Con el fin de preparar
un polvo de la mezcla de enzimas digestivas, que ya contenga los
lípidos complejos, por ejemplo una solución de los lípidos
complejos, eventualmente exenta de crecimiento de gérmenes, se puede
mezclar con una solución de la mezcla de enzimas digestivas,
eventualmente exenta de crecimiento de gérmenes, y a continuación se
puede secar según procedimientos en sí conocidos, por ejemplo de
liofilización. Con el fin de obtener a partir de ello una solución
aplicable mediante sondas, el polvo que contiene los lípidos
complejos así como la mezcla de enzimas digestivas, se puede mezclar
con el disolvente asimismo contenido en el estuche, eventualmente en
condiciones pobres en gérmenes o exentas de gérmenes. Sin embargo,
los lípidos complejos pueden presentarse también ya disueltos en el
disolvente (componente b)), por ejemplo como un coloide. Con el fin
de
obtener soluciones aplicables por sondas, en este caso la solución acuosa que contiene los lípidos complejos o el coloi-
de, se puede mezclar, eventualmente en condiciones estériles, con la mezcla de enzimas digestivas (componente a)).
obtener soluciones aplicables por sondas, en este caso la solución acuosa que contiene los lípidos complejos o el coloi-
de, se puede mezclar, eventualmente en condiciones estériles, con la mezcla de enzimas digestivas (componente a)).
Con el fin de determinar las diferentes
modificaciones de la actividad lipolítica con y sin adición de
lípidos complejos en preparados acuosos de pancreatina, se
prepararon previamente correspondientes muestras y se incubaron a
30ºC. A partir de las muestras de incubación se determinó la
modificación en función del tiempo de las actividades de lipasas de
acuerdo con el método de la "Fédération Internationale
Pharmaceutique/Europeaan Pharmacopeia" (a continuación
designado abreviadamente por FIP/Ph.Eur., véase Lauwers, páginas 74
- 82). En este método patrón de determinación, la muestra que ha de
ser investigada en cuanto a actividad lipolítica se hace actuar en
condiciones hidrolíticas sobre triglicéridos de aceite de oliva y se
valoran los ácidos carboxílicos que se liberan con hidróxido de
sodio al valor de pH de 9. La actividad de lipasas de la muestra es
determinada en tal caso mediante la comparación de la velocidad, con
la que la muestra hidroliza una emulsión de aceite de oliva, con la
velocidad, con la que una suspensión de un polvo de referencia de
páncreas hidroliza al mismo substrato en las mismas condiciones.
Se disolvieron 79,35 mg de una
F-pancreatina liofilizada, soluble en agua, con una
actividad lipolítica de 50.473 FIP-U/g, en 4,0 ml de
agua purísima enfriada por hielo (Nanopur® de la entidad Barnstead),
el valor del pH se ajustó a 6,2 con CHl 1 N, y a continuación la
tanda se completó con agua purísima hasta 5,0 ml. A partir de esta
tanda se extrajo inmediatamente una muestra para la determinación de
la actividad de partida lipolítica ("muestra de cero minutos").
La tanda restante se incubó a 30ºC en un baño de agua. Para la toma
de muestras, la tanda se mezcló bien a fondo, la muestra se extrajo
con una pipeta apropiada y se diluyó inmediatamente con un
disolvente para lipasas, enfriado por hielo, de manera tal que para
la determinación de las lipasas estaban a disposición entre 0,5 y
1,5 ml de una solución de investigación con una actividad lipolítica
de 8 hasta 16 FIP-U. Como disolvente para lipasas
se utilizó, según FIP/Ph.Eur., una solución de 10,0 g de NaCl, 6,06
g de tris-(hidroximetil)-aminometano (designado a
continuación abreviadamente como "TRIS") y 4,9 g de anhídrido
de ácido maleico en 900 ml de agua purísima, cuyo valor de pH había
ajustado a pH 7 con lejía de sosa 4 N, y que a continuación había
sido completado con agua purísima hasta 1.000 ml.
Con el fin de determinar la evolución en el curso
del tiempo de la actividad de lipasas se extrajeron, después de 15,
30, 60, 120 y 180 minutos, muestras adicionales a partir de la tanda
regulada termostáticamente y se determinó en ellas, en cada caso en
el transcurso de 30 minutos, la actividad de lipasas de acuerdo con
el método de FIP/Ph. Eur. (Lauwers, página 78).
La actividad de lipasas en unidades de
FIP-U/ml, determinada en la "muestra de cero
minutos", se estableció como valor de 100%, y los valores de
actividad medidos durante el período ulterior de incubación se
refieren porcentualmente a este valor. Los resultados se exponen en
la Tabla 2.
Para la preparación de una solución de lecitina
se empastaron primeramente 100 mg de lecitina de soja (contenido en
fosfolípidos aproximadamente 98%, de la entidad Roth) a la
temperatura ambiente con un poco de agua purísima y luego se
completaron hasta 20,0 ml. La mezcla se irradió con ultrasonidos
bajo agitación durante aproximadamente 2 minutos hasta conseguir una
solución coloidal homogénea. Luego se disolvieron 80,0 mg de una
F-pancreatina soluble en agua, liofilizada, con una
actividad lipolítica de 54.694 FIP-U/gramo en 4,0
ml de agua purísima y el valor del pH en la solución se ajustó a 6,2
con HCl 1 N. Se añadieron 0,4 ml de la solución de lecitina (2,5% de
lecitina, referido al polvo empleado de
F-pancreatina) y la tanda se completó hasta 5,0 ml
con agua purísima enfriada por hielo, mediando buena mezcladura a
fondo. La toma de muestras y la determinación de las actividades
lipolíticas en los respectivos períodos de tiempo de incubación se
efectuaron tal como se ha descrito en el apartado 1.1. Los
resultados se exponen en la Tabla 2.
En preparados acuosos de pancreatina aparecen
pérdidas en la actividad lipolítica, dependiendo de diferentes
factores, tales como temperatura, valor del pH y actividad
proteolítica de las proteasas contenidas. Por adición de lípidos
complejos, tales como lecitina, la actividad de lipasas puede ser
estabilizada claramente a 25ºC durante una incubación a lo largo de
8 horas. En el experimento siguiente, se compararon por lo tanto
durante 8 horas las actividades lipolíticas en suspensiones y
soluciones acuosas de F-pancreatina en cada caso con
y sin adición de lípidos complejos.
Como comparación se investigaron soluciones
transparentes de pancreatina y suspensiones transparentes de
pancreatina a base de F-pancreatina con y sin
adición de lecitina.
Se produjeron los siguientes preparados
acuosos:
- Se disolvieron en agua purísima enfriada por hielo 77,5 mg de un polvo de F-pancreatina liofilizado, soluble en agua, tal como se describe en el apartado 1.1, siendo ajustado el valor del pH a 6,2 con HCl 1 N.
- Se mezclaron 81,0 mg de un polvo de F-pancreatina, liofilizado, soluble en agua, tal como se describe en el apartado 1.2 después de haber ajustado el valor del pH a 6,2, con 0,94 ml de una solución de lecitina y se completaron hasta 5,0 ml con agua purísima enfriada por hielo.
- Se agitaron 2,0 g de F-pancreatina en 100 ml de agua purísima enfriada por hielo durante 30 minutos. Se obtuvo una suspensión turbia.
- Se mezclaron 2,0 g de F-pancreatina con 100 mg de lecitina de soja (entidad Roth) y se agitaron durante 30 minutos en 100 ml de agua purísima enfriada por hielo. Se obtuvo una suspensión turbia.
A partir de las soluciones y respectivamente
suspensiones enfriadas por hielo, que se prepararon en el apartado
2.1, se extrajeron, inmediatamente después de su preparación,
muestras para la determinación de la actividad lipolítica de partida
("muestras de cero minutos"). Luego, el resto de las tandas se
incubó en tubos de ensayo durante 8 horas a 25ºC. Durante este
período de tiempo se tomaron otras muestras después de 30 minutos, y
a continuación cada hora. La toma de muestras, la dilución y la
determinación de la actividad de lipasas se efectuaron en principio
tal como se describe en el aparato 1.1, pero la temperatura del
experimento, a diferencia de la prescripción anterior, fue ahora de
25ºC.
La actividad del lipasas (indicada en
FI-U/ml) de las "muestras de cero minutos" de
una tanda de incubación fue establecida como valor de 100% y los
valores de actividad, medidos durante el ulterior período de tiempo
de incubación, se refirieron porcentualmente a este valor. Los
resultados están reproducidos en las siguientes Tablas 3 y 4.
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip1.000000\baselineskip
(Tabla pasa a página
siguiente)
\newpage
\dotable{\tabskip\tabcolsep#\hfil\tabskip0ptplus1fil\dddarstrut\cr}{ \cr}
En el experimento siguiente se puso de manifiesto
que también la actividad de lipasas microbianas se podría
estabilizar en presencia de proteasas microbianas activas mediante
la adición de lípidos complejos. Para ello, se prepararon tres
soluciones de investigación, las cuales contenían respectivamente
lipasa microbiana, lipasa microbiana más proteasa microbiana, así
como lipasa microbiana con una adición de lecitina más proteasa
microbiana. A continuación, se determinaron las actividades
lipolíticas en estas soluciones de investigación y se compararon
entre sí mediante una tabla.
Se prepararon las siguientes soluciones:
- Se disolvieron 245 mg de una lipasa procedente de Rhizopus oryzae (Lipase 7-AP 15, Amano Pharmaceutical Co., LTD Nagoya, Japon), con una actividad de 170.000 FIP-U/g, en 50 ml de una solución de cloruro de sodio al 1%, enfriada por hielo.
- Se disolvieron 390 mg de una proteasa procedente de Aspergillus (Prozyme 6; Amano Pharmaceutical Co., LTD Nagoya, Japon), con una actividad de 7.600 FIP-U/g, en 25 ml de una solución de cloruro de sodio al 1%, enfriada por hielo.
- Se recogió 1 g de una lecitina (lecitina pura de soja con un contenido en fosfolípidos de aproximadamente 98%, de la entidad Roth) en 40 ml de agua purísima ("Nanopure®" de la entidad Barnstead) y se disolvió para formar un coloide durante aproximadamente 2 minutos con ultrasonidos mediando sacudimiento.
A partir de estas soluciones se prepararon en un
baño de hielo las siguientes soluciones de incubación con un volumen
total de 5 ml:
El valor del pH de todas las soluciones de
incubación fue, después de la preparación, de 6,5 a 37ºC.
A partir de las soluciones de incubación I, II y
III, enfriadas por hielo, se extrajeron, inmediatamente después de
su preparación, muestras para la determinación de las actividades de
partida ("muestras de cero minutos"), el resto de las tres
tandas se incubó en tubos de ensayo a 37ºC en un baño de hielo.
Para la toma de muestras, la tanda se mezcló bien
a fondo, la muestra se extrajo con una apropiada pipeta y se diluyó
inmediatamente con un disolvente para lipasas, enfriado por hielo,
tal como se describe en el apartado 1.1. De estas soluciones de
muestras se extrajeron en cada caso determinadas cantidades
(caracterizadas con "X" en la Tabla 6) y se diluyeron hasta 5
ml con una solución al 1% de cloruro de sodio. De estas soluciones
de investigación se emplearon en cada caso 0,5 ml en el ensayo de
actividad de lipasas.
La actividad catalítica de la lipasa procedentes
de Rhizopus se midió por determinación de la cantidad de ácidos
grasos libres, que se habían formado a lo largo de un definido
período de tiempo a pH 7,0 y 37ºC a partir de una emulsión de aceite
de oliva en presencia de 0,025% de taurocolato de sodio. Con el fin
de garantizar que hubieran sido abarcados todos los ácidos grasos,
se efectuó a continuación una valoración hasta pH 9,0. Una
determinación del valor a ciegas por valoración de la emulsión de
substrato sirvió para la averiguación de sustancias valorables, que
no se han formado por la actividad de lipasas.
La actividad de lipasa procedente de Rhizopus de
una sustancia sometida a investigación fue determinada mediante la
comparación de la velocidad, con la que una suspensión de la
sustancia hidrolizaba a una emulsión de aceite de oliva, con la
velocidad, con la que una suspensión de un patrón de referencia de
lipasa de Rhizopus hidrolizaba a la misma emulsión de aceite de
oliva en las mismas condiciones
Se utilizó agua purísima "Nanopure®" de la
entidad Barnstead. Ésta es designada a continuación como "agua
purísima".
Se disolvieron 110 g de goma arábiga y 12,5 g de
cloruro de calcio mediando agitación (durante aproximadamente 3
horas) en agua purísima, se completó hasta 1.000 ml y se
centrifugó. La solución se envasó en recipientes de material
plástico de 250 ml de capacidad y se almacenó a -20ºC.
Goma arábiga (Acaciae-Gummi, DAB
10/Ph. Eur), cloruro de calcio p.a.
Se emulsionaron en un aparato agitador apropiado
con elevado número de revoluciones, 130 ml de aceite de oliva y 400
ml de una solución de goma arábiga (2) durante 15 minutos. La
temperatura se mantuvo por debajo de 30ºC. Por lo menos un 90% de
las gotitas de la emulsión poseían un diámetro menor que 3 \mum y
ninguna de ellas era mayor que 10 \mum. La emulsión se preparó
recientemente cada día.
Aceite de oliva (almacenado en un frigorífico),
calidad para DAB.
Se disolvieron 0,5 g de taurocolato de sodio
(mezcla activadora de lipasas, mezcla de ácidos biliares conjugados
entre otros de taurocolato de sodio) con agua purísima hasta 100,0
ml. La solución se preparó recientemente cada
día.
día.
Taurocolato de sodio (mezcla activadora de
lipasas), FIP.
Se disolvieron 2 g de cloruro de sodio y 9,2 g de
dihidrogenofosfato de sodio en aproximadamente 950 ml de agua
purísima, se ajustaron a pH 4,5 con ácido clorhídrico y se
completaron hasta 1.000 ml con agua purísima.
Cloruro de sodio p.a., dihidrogenofosfato de
sodio, NaH_{2}PO_{4} X H_{2}O.
El patrón de referencia de lipasa procedente de
Rhizopus se agitó en una solución tamponadora (6) y se diluyó
con una solución de cloruro de sodio (5) hasta tanto que la solución
de enzima contuviese de 12 a 18 unidades de actividad de lipasa de
Rhizopus FIP-U/ml. En el caso de un patrón
con 55.000 FIP-U por 1 g se disolvieron 63 mg en 20
ml de la solución tamponadora (6) en el transcurso de 15 minutos en
un baño de hielo. Se diluyeron 10 ml de esta solución con una
solución de cloruro de sodio (5) hasta 100 ml en el baño de hielo.
Se emplearon en el ensayo 0,5 ml de esta solución.
Patrón de referencia de lipasa de Rhizopus
FIP (Fungi-Lipase, patrón FIP).
Se utilizaron las soluciones de investigación I,
II y III.
En un autovalorador de un sistema de valoración
"pH-Stat" de la entidad Radiometer, se ajustó
a pH 7,0 el punto final para la valoración con el
Ph-Stat. En el recipiente de reacción se
introdujeron:
12,0 ml de una emulsión de aceite, FIP (3)
6,5 ml de agua purísima (1)
1,0 ml de una solución de taurocolato de sodio
(4).
La mezcla se llevó a 37,0ºC. El valor del pH se
ajustó a pH 7,0 con lejía de sosa 0,1 N (7). Después de ello la
pureza se ajustó a "0".
La reacción fue iniciada por adición de 0,5 ml de
la suspensión de referencia, cuando tenía que medirse el valor de
referencia, o de 0,5 ml de la solución de investigación, cuando
tenía que medirse la actividad de lipasas en la solución de
investigación. Después de 10 minutos, el punto final para la
valoración en el pH-Stat se ajustó a pH 9,0. Cuando
se hubo llegado al valor de pH 9,0 (este proceso duró menos de 30
segundos), se interrumpió la valoración y se leyó el consumo de
lejía de sosa 0,1 N.
Para la determinación de los valores a ciegas,
para la suspensión de referencia y para la solución de investigación
se ajustaron inmediatamente a pH 9,0 los puntos finales de la
valoración en un aparato valorador. Después de haber ajustado
manualmente el valor del pH en la tanda de reacción a pH 7,0 y
después de haber añadido 0,5 ml de la suspensión de referencia o de
la solución de investigación, se valoró inmediatamente a pH 9,0. A
partir del consumo leído de lejía de sosa 0,1 N se calculó la
actividad de lipasas de Rhizopus en FIP-U/ml
de la solución de inves-
tigación.
tigación.
Las actividades de lipasas iniciales,
determinadas en las soluciones de investigación I, II y III en
unidades de FIP-U ml, se establecen como valores de
100%. Los valores de actividad medidos durante el subsiguiente
período de tiempo de incubación de 1 hora, se refirieron luego en
cada caso porcentualmente a estos valores de partida, y se exponen
en la Tabla 7.
- A)
- Se recogen 20,0 g de F-pancreatina en 400 ml de agua y el valor del pH se ajusta rápidamente a 6,2 por adición de HCl 1 N. En estas condiciones se extrae durante 1 hora a 4ºC. El material sobrenadante transparente, que contiene extracto de pancreatina, se centrifuga a 53.000 xg y se filtra éste a continuación en condiciones estériles a través de un filtro con un tamaño de poros de 2 \mum.
- B)
- Se disuelve 1,0 g de lecitina de soja (al 98% en fosfatidil-colina) en 50 ml de agua y se esteriliza a 140ºC durante 45 minutos en una ampolla de vidrio cerrada por fusión.
- C)
- Se mezclan 400 ml del extracto de pancreatina preparado en A) con 25 ml de la solución de lecitina preparada en B), en frío y mediando condiciones estériles. La mezcla se liofiliza, obteniéndose 16 g de un polvo, que se envasa en condiciones estériles, en porciones cada una de 2,5 g, dentro de frascos para infusión de 100 ml de capacidad.
- A)
- Se recogen 40,0 g de F-pancreatina en 400 ml de agua y el valor del pH se ajusta rápidamente a 6,2 por adición de HCl 1 N. En estas condiciones se extrae durante 1 hora a 4ºC. El material sobrenadante transparente, que contiene el extracto de pancreatina, es centrifugado a 53.000 xg y se filtra éste a continuación en condiciones estériles a través de filtros con un tamaño de poros de 2 \mum. El extracto es envasado mediando condiciones estériles en porciones de 25 ml dentro de frascos para infusión de 100 ml de capacidad y es liofilizado.
- B)
- Se disuelven 2,0 g de lecitina de soja (al 98% en fosfatidil-colina) en 20 ml de agua y se homogeneizan por ultrasonidos. Esta solución coloidal se esteriliza a 140ºC durante 45 minutos en una ampolla de vidrio cerrada por fusión. Se extrae de ésta una porción de 12,5 ml, la cual se mezcla con 1.600 ml de agua esterilizada y se envasa en porciones de 100 ml dentro de frascos para infusión.
Para la aplicación, el contenido en un frasco del
material sólido obtenido en A) se disuelve en el contenido en un
frasco de la solución obtenida en B).
- A)
- Se recogen 40,0 g de F-pancreatina en 800 ml de agua y el valor del pH se ajusta rápidamente a 6,2 por adición de HCl 1 N. En estas condiciones se extrae durante 1 hora a 4ºC. El material sobrenadante transparente, que contiene el extracto de pancreatina, es centrifugado a 53.000 xg, y se desecha el precipitado.
- B)
- Se disuelven 32,0 g de manita en 200 ml de agua, se mezclan con 800 ml del extracto de pancreatina obtenido en A) y las soluciones reunidas se filtran mediando condiciones estériles.
- C)
- Se disuelven 5,0 g de lecitina de soja (al 98% en fosfatidil-colina) en 50 ml de agua y se homogeneizan con ultrasonidos. Esta solución coloidal es esterilizada a 140ºC durante 45 minutos dentro de una ampolla de vidrio cerrada por fusión.
- D)
- Se mezclan 1.000 ml del extracto de pancreatina obtenido en B), mediando condiciones estériles, con 16 ml de la solución de lecitina obtenida en C) y se liofilizan. El polvo obtenido es envasado en condiciones estériles en porciones de 10,0 g dentro de frascos de 200 ml de capacidad.
- E)
- Un agua desionizada y filtrada en condiciones estériles se envasa en condiciones estériles dentro de frascos de 200 ml de capacidad.
Para la aplicación, el contenido en un frasco del
polvo obtenido en D) se disuelve en el contenido en un frasco del
agua envasada en E).
Claims (20)
1. Utilización de lípidos complejos como aditivos
que estabilizan contra una disminución de la actividad lipolítica
bajo la influencia de la humedad en preparados farmacéuticos
solubles en agua de mezclas de enzimas digestivas que contienen
lipasas y proteasas, los cuales son apropiados para la preparación
de soluciones acuosas destinadas a la introducción continua en el
tracto gastrointestinal mediante sondas, eligiéndose los lípidos
complejos del grupo de los fosfolípidos, glicolípidos y sus
mezclas.
2. Utilización de lípidos complejos según la
reivindicación 1, en la que las mezclas de enzimas digestivas que
contienen lipasas y proteasas son mezclas de enzimas digestivas que
contienen pancreatina.
3. Utilización de lípidos complejos según la
reivindicación 2, caracterizada porque éstos se emplean como
aditivos estabilizadores a preparados farmacéuticos de mezclas de
enzimas digestivas que contienen pancreatina, las cuales, junto a
pancreatina, contienen lipasas adicionales, seleccionadas entre el
grupo que consta de lipasas vegetales, lipasas bacterianas y lipasas
procedentes de cultivos de hongos.
4. Utilización de lípidos complejos según una de
las reivindicaciones precedentes, caracterizada porque como
lípidos complejos se utilizan fosfolípidos o mezclas de lípidos que
contienen a éstos.
5. Utilización de lípidos complejos según la
reivindicación 4, caracterizada porque como fosfolípidos se
utilizan sales de aniones de la fórmula general I
en la
que
- R^{1}
- significa hidrógeno o un radical alcanoílo con 10 - 25 átomos de carbono, cuyo radical de hidrocarburo puede contener eventualmente 1 - 4 dobles enlaces,
- R^{2}
- significa un radical alcanoílo con 10 - 25 átomos de carbono, cuyo radical de hidrocarburo puede contener eventualmente 1 - 4 dobles enlaces, o cuando R^{1} no representa hidrógeno, también puede significar hidrógeno,
- R^{3}
- significa hidrógeno, un grupo alquilo inferior, el cual puede estar sustituido con amino, trialquilamonio inferior, un grupo carboxilo unido a un átomo de carbono portador de una función amino, o un grupo cicloalquilo sustituido con hidroxi,
- R^{4}
- significa hidrógeno o una cadena de hidrocarburo con 10 - 25 átomos de carbono, que eventualmente puede contener 1 - 4 dobles enlaces,
- A
- representa oxígeno o NH,
con cationes fisiológicamente
compatibles, o sus
mezclas.
6. Utilización de lípidos complejos según la
reivindicación 5, caracterizada porque en los fosfolípidos de
la fórmula general I, el radical R^{3} está seleccionado del grupo
que consta de hidrógeno, aminoetilo, colilo, serilo, glicerilo o
mio-inositilo.
7. Utilización de lípidos complejos según la
reivindicación 6, caracterizado porque se utilizan
fosfolípidos tomados del grupo que consta de ácido fosfatídico,
fosfatidil-colina,
fosfatidil-serina,
fosfatidil-etanol-amina,
fosfatidil-inosita y esfingomielina, o mezclas de
lípidos que contienen a éstos.
8. Utilización de lípidos complejos según la
reivindicación 1, caracterizada porque como lípidos complejos
se utilizan lecitinas procedentes de soja, colza, maíz, girasol,
cacahuetes, huevo de gallina o microorganismos.
9. Utilización de lípidos complejos según la
reivindicación 8, caracterizada porque como lípidos complejos
se utilizan lecitinas procedentes de soja.
10. Utilización de lípidos complejos según una de
las reivindicaciones 2 a 9, caracterizada porque los lípidos
se añaden a la pancreatina empleada en los preparados farmacéuticos
ya al obtenerse ésta o al tratarla para la estabilización contra una
disminución de la actividad lipolítica, durante etapas del proceso
que están vinculadas con un tratamiento en condiciones húmedas.
11. Preparados farmacéuticos solubles en agua, de
mezclas de enzimas digestivas que contienen lipasas y proteasas, los
cuales son apropiados para la preparación de soluciones acuosas
destinadas a la introducción continua en el tracto gastrointestinal
mediante aplicación por una sonda, caracterizados porque
contienen una cantidad de lípidos complejos según una de las
reivindicaciones 1 a 9, que es suficiente para la estabilización
contra una disminución de la actividad lipolítica bajo la influencia
de la humedad.
12. Preparados farmacéuticos según la
reivindicación 11, caracterizados porque las mezclas de
enzimas digestivas que contienen lipasas y proteasas consisten en
mezclas de enzimas digestivas que contienen pancreatina.
13. Preparados farmacéuticos según la
reivindicación 12, caracterizados porque las mezclas de
enzimas digestivas contienen, junto a pancreatina, lipasas
adicionales seleccionadas del grupo que consta de lipasas vegetales,
lipasas bacterianas y lipasas procedentes de cultivos de hongos.
14. Preparados farmacéuticos según una de las
reivindicaciones 11 a 13, caracterizados porque contienen una
cantidad tal de lípidos complejos, que se estabiliza la actividad
lipolítica de soluciones acuosas de los preparados de manera tal,
que la actividad de partida lipolítica de una solución acuosa
disminuye en a lo sumo 20% durante un período de tiempo de 8 horas,
determinándose la actividad lipolítica con ayuda del método según
FIP/Far. Eur.
15. Preparados farmacéuticos según la
reivindicación 14, caracterizados porque contienen una
cantidad tal de lípidos complejos que la actividad lipolítica de
partida de soluciones acuosas de los preparados disminuye en a lo
sumo 50% durante un período de tiempo de 24 horas, determinándose
la actividad lipolítica con ayuda del método según FIP/Far.Eur.
16. Preparados farmacéuticos según una de las
reivindicaciones 11 a 13, caracterizados porque contienen
lípidos complejos para la estabilización contra una disminución de
la actividad lipolítica en una concentración de 1 a 10% en peso,
preferiblemente de 2 a 5% en peso, referida a la mezcla de enzimas
digestivas.
17. Preparados farmacéuticos según una de las
reivindicaciones 11 a 16, caracterizados porque la
pancreatina contenida en ellos es pancreatina previamente tratada
por autolisis.
18. Estuche para la preparación de soluciones
acuosas de mezclas de enzimas digestivas exentas de crecimiento de
gérmenes, estabilizadas contra la disminución de la actividad
lipolítica, que son apropiadas para la introducción continua en el
tracto gastrointestinal mediante sondas, caracterizado
porque contiene como constituyentes:
- a)
- un preparado farmacéutico sólido, soluble en agua, exento de crecimiento de gérmenes, de una mezcla de enzimas digestivas que contiene lipasas y proteasas, la cual eventualmente puede contener una cantidad de lípidos complejos según una de las reivindicaciones 1 a 9, que sea suficiente para la estabilización contra una disminución de la actividad lipolítica de la solución acuosa que se ha de preparar,
- y
- b)
- una cantidad, suficiente para la preparación de la solución acuosa, de un disolvente acuoso exento de crecimiento de gérmenes, el cual junto con agua puede contener sales y sustancias coadyuvantes fisiológicamente compatibles y, en el caso de que en el preparado farmacéutico sólido mencionado en el apartado a) no esté contenida ninguna cantidad de lípidos complejos que sea suficiente para una estabilización contra una disminución de la actividad lipolítica de la solución acuosa que se ha de preparar, contiene adicionalmente una cantidad de lípidos complejos según una de las reivindicaciones 1 a 9, que es suficiente para la estabilización contra una disminución de la actividad lipolítica de la solución acuosa que se ha de preparar.
19. Estuche según la reivindicación 18,
caracterizado porque el preparado sólido a) constituye una
mezcla de enzimas digestivas, liofilizada, que contiene lipasas y
proteasas, la cual contiene eventualmente lípidos complejos.
20. Estuche según la reivindicación 19,
caracterizado porque la mezcla de enzimas, liofilizada, contiene
pancreatina.
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