KR101226787B1 - 포스파티딜세린의 안정화된 제제 - Google Patents
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Abstract
본원은 분말, 액체 및 분산액 형태의 안정한 PS 제제 및 이의 제조 방법을 기재한다. 가장 중요하게는, 안정한 PS 제제는 특히 잔여 포스포리파제 D 활성이 결여되어 있으며, 본원은 이러한 활성을 제거하는 방법을 또한 기술한다. 마지막으로, 본원은 상기 PS 제제의 영양약학 제품에서의 또는 제약 조성물의 활성제로서의 용도 또한 제공한다.
포스파티딜세린 (PS), PS 조성물, PS 분말 제제, PS 액체 제제, PS 분산액
Description
본 발명은 안정화된 포스파티딜세린 제제 및 이의 제조 방법에 관한 것이다. 본 발명의 안정화된 포스파티딜세린 제제는 분말, 액체 또는 분산액의 형태일 수 있다. 포스파티딜세린 제제는 영양약학 제품 (nutraceuticals)으로서 또는 기능성 식품 또는 제약 조성물에 대한 영양약학적 첨가제로서 이용될 수 있다.
명세서 전체에 언급된 모든 문헌은 문헌에 인용된 모든 참고문헌을 포함하여 본원에 참고로 도입되어 있다.
인지질 영양소인 포스파티딜세린 (PS)은 세포막에서 활성이고, 뇌 세포막에서의 주요 산성 인지질 성분이다. PS는 많은 막-관련 신경 세포 과정에서 결정적인 역할을 수행한다. PS의 주요 목적은 대부분의 막 기능에 대해 주요 관련을 갖는 적합한 막 유동성의 유지를 돕는 것이다.
PS는 기억 상실, 기분, 인지 수행 및 학습 능력에서의 다수의 인간 임상 시험의 주제가 되고 있다. 많은 연구는 PS가 연령-관련 기억 장애를 가진 이들에게 도움이 될 수 있다는 것을 제시한다. 추가로, PS는 인지 장애가 없는 이들에서의 인지를 최적화하는 것도 도울 수 있다.
식이성 PS는 효과적으로, 빠르게 장에서 흡수되고, 혈액에 용해되고, 혈뇌 장벽을 용이하게 가로질러 뇌에 있는 신경 세포에 도달한다.
PS는 소의 뇌, 식물로부터 추출될 수 있거나, 대두 레시틴으로부터 생촉매 작용을 이용하여 제조될 수 있다. 포스포리파제 D (PLD)와의 트랜스포스파티딜화 반응을 이용함으로써, 인지질의 머리기 (head group)가 쉽게 개질될 수 있다. 따라서, 포스파티딜세린은 포스파티딜콜린 또는 임의의 다른 인지질과 세린과의 혼합물로부터 PLD 촉매작용을 통해 제조될 수 있다.
현재는, PS가 10％ 내지 90％ 범위의 상이한 농도에서 분말 및 유체 형태로 제조되고 시판되고 있다. 유체 형태의 PS는 통상적으로, 일반적으로 중쇄 트리글리세리드 (MCT) 또는 콩 트리글리세리드의 오일성 매질에서 포스파티딜세린의 맑고 투명한 용액으로 이루어져 있다. 상기 형태는 연질젤 캡슐제 형태의 식이 보충물로 통상적으로 이용된다. PS 보충물은 식품, 또는 식품의 일부이고 질환의 예방 및 치료를 비롯한 의학 및(또는) 건강 이익을 제공하는 특정 물질로 정의되는 영양약학 제품의 범주 내에 있다. 넓은 범위의 정의에서, 식이 보충물 및 기능성 식품 둘 모두는 영양약학 제품으로 간주된다.
포스파티딜세린 제제에서 주요 난점들 중 하나는, 특히 액체 형태에서, 빠른 분해로 인한 그의 낮은 안정성이다. 이 분해의 정확한 원인은 완전히 이해되어 있지 않다. 대부분 과학적으로 입증되거나 증명되지는 않지만, 이 현상의 원인에 관한 많은 가설이 있다. 통상적인 의견은 잔여 생촉매 활성 및(또는) 수분 또는 글리세롤 및 다른 알코올 성분과의 부반응에 의해 분해가 주로 야기된다는 것이다. 이들 반응은 PS 제제가 유체이고, 연질젤 캡슐제로 캡슐화된 경우 특히 중요할 수 있다. 연질젤 캡슐화는 일반적으로 낮은 수준의 수분 및(또는) 글리세롤의 캡슐제 내용물로의 이동 및 후속적인 혼입을 야기한다.
PLD 잔여 생촉매 활성이 존재하는 PS 제제, 및 특히 유체 제제는 세린 머리기를 제거하고, PS 활성 성분의 손실을 야기하는 트랜스포스파티딜화에 의한 PS 생촉매 분해에 민감할 수 있다. 이러한 트랜스포스파티딜화 활성은 유체 PS 제제 자체 또는 캡슐화한 유체 제제에서 발견되는 수분을 이용한 가수분해를 야기시킬 수 있다. 가수분해는 포스파티드산 (PA)의 형성을 유도할 것이다. 트랜스포스파티딜화가 유체 PS 제제 자체 또는 캡슐화한 유체 제제에서 발견되는 글리세롤 또는 다른 알코올 성분을 이용하는 경우에, 이는 포스파티딜글리세롤 (PG) 또는 다른 상응하는 인지질 유도체를 제공하는, 세린 머리기의 다른 알코올로의 치환을 유도할 수 있다.
다른 분해 경로가 또한 가능하다. 이것은 예를 들어 포스파티딜에탄올아민 (PE) 또는 기타 유도체와 같은 생성물을 제공하는, 세린 카르복실기의 탈카르복실화 반응과 같은 화학적인 분해를 포함한다. 지질 과산화는 또한 PS 분해에서 역할을 수행한다. PS는 상응하게 탈아실화된 PS (GPS) 또는 리소-PS (LPS)를 제공하는, 인지질 지방산의 완전 또는 부분 가수분해에 의해 분해될 수 있다. PS 인산염 제거의 경우에서, 포스포리파제 C (PLC)-유사 활성을 갖는 효소에 의해 효소적으로 또는 화학적으로 디글리세리드가 생성될 수 있으며, 이는 PS 활성 성분의 감소를 야기한다.
인지질을 경질 또는 페이스트-유사 매트릭스에 매봉하는, 분해를 해결하기 위한 하나의 방법이 WO 03/088949호에서 제안되었다.
상기에서 제시되는 것 이외에, 다른 분해 경로가 실행가능하며 시판용 제제에서의 PS의 외관상 분해를 초래할지 모른다.
따라서, 본 발명의 목적은 안정화된 PS 제제를 분말, 액체 또는 분산액으로서 제공하는 것이다.
본 발명의 추가의 목적은 상기 안정화된 PS 제제의 제조 방법을 제공하는 것이다.
본 발명의 이외의 추가의 목적은 통상적인 식이 보충 응용물, 특별히 연질젤 캡슐제에서 사용하기 위한 상기 안정화된 제제를 제공하는 것이다.
본 발명의 이외의 추가의 목적은 독립형 영양약학 제품으로서 또는 식품 또는 제약 조성물에 대한 첨가제로서 사용하기 위한 상기 안정화된 제제를 제공하는 것이다.
본 발명의 이들 및 다른 목적은 설명이 진행됨에 따라 명백해질 것이다.
[발명의 요약]
포스파티딜세린 불안정성의 문제를 해결하기 위하여, 본 발명자들은 더 안정한 PS 조성물을 개발하여 본원에 제시한다. 상기 안정한 PS의 용도 및 제조 방법도 제시한다.
따라서, 제1 국면에서, 본 발명은 약 1 내지 약 99％ (w/w)의 포스파티딜세린을 포함하는 안정한 PS 조성물을 제공한다.
본 발명의 조성물의 한 실시양태에서, 상기 조성물은 약 1 내지 약 99％ (w/w), 바람직하게는 약 2.5 내지 80％ (w/w)의 PS, 약 1 내지 약 99％ (w/w), 바람직하게는 약 5 내지 90％ (w/w)의 기타 기능성 성분, 약 1 내지 약 99％ (w/w), 바람직하게는 약 1 내지 25％ (w/w)의 포스파티딜콜린 (PC), 바람직하게는, 약 1 내지 약 99％ (w/w), 바람직하게는 약 1 내지 10％ (w/w)의 포스파티딜에탄올아민 (PE), 약 0.1 내지 약 99％ (w/w), 바람직하게는 약 0.5 내지 10％ (w/w)의 포스파티딜이노시톨 (PI), 약 1 내지 약 99％ (w/w), 바람직하게는 약 10 내지 90％ (w/w)의 오메가-3 공급원, 약 1 내지 약 99％ (w/w), 바람직하게는 약 10 내지 90％ (w/w)의 오메가-6 공급원, 및(또는) 약 1 내지 약 99％ (w/w), 바람직하게는 약 1 내지 65％ (w/w)의 스테롤 또는 스테롤 에스테르를 포함한다.
또한, 본 발명의 조성물은 포스파티드산 (PA)의 함량이 15％를 초과하지 않는 것을 특징으로 한다. 바람직하게는 PA 함량은 10％ 이하, 더 바람직하게는 1 내지 7％이다.
또 다른 실시양태에서, 본 발명의 조성물은 6개월 이상, 바람직하게는 12개월 이상, 더 바람직하게는 24개월 이상의 저장 기간 후에 포스파티딜세린의 약 1 내지 5％ 이하가 분해되는 것을 특징으로 한다.
본 발명의 특별한 한 실시양태에서, 조성물은 포스포리파제 활성, 특히 포스포리파제 D 활성이 실질적으로 결여된다.
또 다른 특별한 실시양태에서, 본 발명의 포스파티딜세린 조성물은 분말 형태이다.
추가의 실시양태에서, 본 발명의 조성물에 포함되는 PS는 유기 용매 중에 실질적으로 가용성인 염, 특히 1가 이온의 염, 바람직하게는 나트륨염의 형태이다.
추가의 실시양태에서, 본 발명의 조성물에 포함되는 PS는 유기 용매 중에 실질적으로 불용성인 염, 특히 2가 이온의 염, 바람직하게는 칼슘염의 형태이다. 달리, 그것은 또한 마그네슘염일 수도 있다.
본 발명의 조성물은 추가로 희석제, 부형제 및 담체뿐만 아니라 생리학상/제약상 허용되는 첨가제, 예컨대 자유-유동화제, 유화제, 안정화제, 방부제, 착색제, 소포제 및 고결 방지제를 임의로 포함할 수 있다.
이외의 추가의 실시양태에서, 본 발명의 포스파티딜세린 조성물은 식이 보충물, 영양약학 식품 및(또는) 약물 첨가제로서 사용된다.
제2 국면에서, 본 발명은 PS가 오일, 바람직하게는 중쇄 트리글리세리드에 용해된, 유기 용매 중에 실질적으로 가용성인 염의 형태로 존재하는, 본 발명의 포스파티딜세린 조성물을 포함하는 안정한 포스파티딜세린 액체 제제를 제공한다. 바람직하게는 상기 오일에 용해된 PS는 나트륨염의 형태이다.
제1 실시양태에서, 본 발명의 액체 제제는 약 1 내지 약 90％ (w/w), 바람직하게는 약 2.5 내지 약 55％ (w/w)의 포스파티딜세린을 포함한다.
또 다른 실시양태에서, 본 발명의 액체 포스파티딜세린 제제는 6개월 이상, 바람직하게는 12개월 이상, 더 바람직하게는 24개월 이상의 저장 기간 후에 포스파티딜세린의 약 1 내지 약 5％ 이하가 분해되는 것을 특징으로 한다.
추가의 실시양태에서, 본 발명의 액체 포스파티딜세린 제제는 부가의 생체- 기능성 성분, 바람직하게는 레시틴, 인지질, 비타민, 산화방지제, 무기질, 영양 단백질 또는 펩티드, 스테롤 및 기타 유도체, 영양 탄수화물 및 이의 유도체, 아미노산, 식물 추출물, 발효 산물, 글리세리드 유도체 (모노- 및 디-글리세리드), 다중불포화 지방산, 및 오메가-3 및(또는) 오메가-6 지질 중 하나 이상을 추가로 포함한다.
이외의 추가의 실시양태에서, 본 발명의 포스파티딜세린 액체 제제는 식이 보충물, 영양약학 식품 및(또는) 약물 첨가제로서 사용된다.
제3 국면에서, 본 발명은 PS가 액체 기제에 분산된, 유기 용매 중에 실질적으로 불용성인 염의 형태로 존재하는, 본 발명의 안정한 포스파티딜세린 조성물을 포함하는 안정한 포스파티딜세린 분산액을 제공한다. 바람직하게는, 상기 염은 칼슘염이다. 따라서, 안정한 PS 분산액은 바람직하게는 지질, 더 바람직하게는 오일 기제인 액체 기제에 분산된 PS의 칼슘염이다. 달리, 안정한 PS 분산액은 바람직하게는 지질, 더 바람직하게는 오일 기제인 액체 기제에 분산된 PS의 마그네슘염이다.
한 실시양태에서, 지질 기제는 오일, 지방산 에스테르, 유리 지방산 및 기타 유도체일 수 있다.
바람직하게는, 본 발명의 상기 포스파티딜세린 분산액은 약 1 내지 약 70％(w/w), 가장 바람직하게는 약 5 내지 45％ (w/w)의 포스파티딜세린을 포함한다.
본 발명의 포스파티딜세린 분산액의 바람직한 한 실시양태에서, 상기 오일 기제는 트리글리세리드 기제, 특히 중쇄 트리글리세리드 기제 또는 식물성 오일이 다.
또 다른 실시양태에서, 본 발명의 포스파티딜세린 분산액은 부가의 생체-기능성 성분, 바람직하게는 레시틴, 인지질, 비타민, 산화방지제, 무기질, 영양 단백질 또는 펩티드, 스테롤 및 기타 유도체, 영양 탄수화물 및 이의 유도체, 아미노산, 식물 추출물, 발효 산물, 글리세리드 유도체 (모노- 및 디-글리세리드), 다중불포화 지방산, 및 오메가-3 및(또는) 오메가-6 지질 중 하나 이상을 추가로 포함한다.
추가의 실시양태에서, 본 발명의 상기 포스파티딜세린 분산액은 식이 보충물, 영양약학 식품 및(또는) 약물 첨가제로서 사용된다.
또 다른 국면에서, 본 발명은 본 발명에 의해 제공된 어느 하나의 형태, 즉 포스파티딜세린 조성물, PS 액체 제제 또는 PS 분산액으로서 PS를 포함하는 식료품을 제공한다.
한 실시양태에서, 상기 식료품은 임의로 하나 이상의 부가의 생체-기능성 성분, 예를 들어 상기에서 기술된 바와 같은 생체-기능성 성분을 추가로 포함한다.
하기 국면에서, 본 발명은 활성제로서 PS를 본 발명에 의해 제공된 어느 하나의 형태, 즉 포스파티딜세린 조성물, PS 액체 제제 또는 PS 분산액으로서 포함하고, 임의로 하나 이상의 추가 활성제 및(또는) 하나 이상의 제약상 허용되는 첨가제, 희석제, 담체 또는 부형제를 추가로 포함하는 제약 조성물을 제공한다. 본 발명의 제약 조성물은 부가의 제약상 활성제를 포함할 수 있다.
이외의 또 다른 국면에서, 본 발명은 PS를 본 발명에 의해 제공된 어느 하나 의 형태, 즉 포스파티딜세린 조성물, PS 액체 제제 또는 PS 분산액으로서 함유하는 캡슐제를 제공한다. 상기 캡슐제는 바람직하게는 연질 젤라틴 캡슐제이다.
본 발명은 또한 본 발명에 기술된 임의의 PS 제제, 즉 포스파티딜세린 조성물, PS 액체 제제 또는 PS 분산액의 인지 수행 및 학습 능력의 증강제로서의 용도를 제공한다.
본 발명의 후속 국면은 기억 상실, 특히 연령-관련 기억 상실을 예방하는데 사용하기 위한, 본 발명에 의해 제공된 어느 하나의 형태, 즉 포스파티딜세린 조성물, PS 액체 제제 또는 PS 분산액으로서 PS를 제공하는 것이다.
추가의 국면에서, 본 발명은
(a) L-세린 및 임의로 적절한 유기 용매와 레시틴의 수성 혼합물을 고정화 포스포리파제의 존재하에서 적합한 기간의 시간 동안 인큐베이션하여 포스파티딜세린을 수득하는 단계;
(b) 포스파티딜세린을 함유하는 상층을 제거하는 단계;
(c) 상기 제거된 상층으로부터 포스파티딜세린을 표준 수단에 의해 수득하는 단계;
(d) 단계 (c)에서 수득된 포스파티딜세린을 적절한 수용액으로 세척하여 과량의 L-세린을 제거하는 단계;
(e) 임의로, 단계 (d)에서 수득된 포스파티딜세린을 승온에서 적합한 유기 용매, 바람직하게는 에탄올로 세척하는 단계; 및
(f) 단계 (e)에서 수득된 포스파티딜세린을 건조시키는 단계
를 포함하는, 안정한 포스파티딜세린 조성물의 제조 방법을 제공한다.
본 발명의 방법의 한 특정한 한 실시양태에서, 상기 포스포리파제는 바람직하게는 포스포리파제 D이다.
본 발명의 방법의 또 다른 실시양태에서, 상기 방법은 수득된 포스파티딜세린에서 임의의 잔여 포스포리파제 활성을 적합한 수단에 의해 탈활성화시키는 단계를 추가로 포함할 수 있다.
본 발명의 방법의 또 다른 바람직한 실시양태에서, 상기 포스포리파제를 불용성 매트릭스 상에 고정화시키고, 임의로 계면활성제 코팅시키고, 단계 (a) 이후, 반응 혼합물을 포스포리파제가 침전될 때까지 방치한다.
추가의 국면에서 본 발명은 본 발명의 포스파티딜세린 조성물을 적합한 오일 기제에 용해시키는 단계를 포함하며, PS가 오일, 바람직하게는 중쇄 트리글리세리드에 용해된, 유기 용매 중에 실질적으로 가용성인 염의 형태로 존재하는, 안정한 포스파티딜세린 오일-기제 액체 제제의 제조 방법을 제공한다. 바람직하게는, 상기 오일에 용해된 PS는 나트륨염의 형태이다. 바람직하게는, 상기 오일 기제는 중쇄 트리글리세리드 또는 식물성 오일이다.
마지막 국면에서, 본 발명은 본 발명의 포스파티딜세린 조성물을 분산시키는 단계를 포함하며, PS가 오일, 바람직하게는 중쇄 트리글리세리드에 용해된, 유기 용매 중에 실질적으로 불용성인 염의 형태로 존재하고, 바람직하게는 상기 오일에 용해된 PS가 적합한 오일 기제, 바람직하게는 트리글리세리드 기제 및 특히 중쇄 트리글리세리드 또는 식물성 오일 중의 칼슘염 형태인, 포스파티딜세린의 안정한 액체-기제 분산액의 제조 방법을 제공한다. 혼합물을 증강시키기 위해, 추가 성분을 상기 액체 제제에 첨가할 수 있다는 것을 주목해야 한다.
본 발명은 또한 상기에 기술되는 방법 중 어느 하나에 의해 제조된, 안정한 포스파티딜세린 조성물을 제공한다.
하기의 약어가 본 명세서 전체에서 사용된다.
- EDTA: 에틸렌디아민테트라아세트산
- GC: 기체 크로마토그래피
- GPS: 탈아세틸화 PS
- HPLC: 고성능 액체 크로마토그래피
- HPTLC: 고성능 박층 크로마토그래피
- LPS: 리소-PS
- MCT: 중쇄 트리글리세리드
- NMR: 핵 자기 공명
- PA: 포스파티드산
- PC: 포스파티딜콜린
- PE: 포스파티딜에탄올아민
- PG: 포스파티딜글리세롤
- PI: 포스파티딜이노시톨
- PLC: 포스포리파제 C
- PLD: 포스포리파제 D
- PS: 포스파티딜세린
- RH: 상대 습도
- RT: 실온
상기에 언급된 바와 같이, 포스파티딜세린 (PS)은 기억, 기분, 인지 수행, 및 학습 능력에 대해 알려진 링크와 함께 뇌세포가 제대로 기능하는데 특히 중요한 세포막의 필수 성분이다. 이러한 모든 중요한 기능을 위해, 인간의 규정식에 PS를 보충하는 것이 바람직하다. 보충물이 시장에 존재함에도 불구하고, 현재 일반 대중이 이용할 수 있는 조성물에서의 PS의 변성 및 분해의 고유한 문제가 있으므로 소비자에게 사실상 전달되는 양과 관련하여 매우 불확실하다.
PS는 일반적으로 불안정한 것으로 알려져 있다. 저온 조건하에서 저장된 순수한 건조 분말조차 빠른 속도로 분해되기 쉽다. 더구나, 고농도 PS 조성물 및 순수한 PS는 보통 불안정성 문제가 더 심하다. 순수한 PS는 하루에 0.5 ％w/w의 속도로 분해되는 경향이 있다고 기술되어 있다 [시그마 카탈로그 (Sigma Catalog)]. 이러한 분해의 정확한 원인 또는 메카니즘은 완전히 알려져 있지는 않다. 많은 경우에, 가수분해 또는 트랜스포스파티딜화 반응이 원인인 것으로 간주되지만, 많은 경우에 그러한 반응의 생성물이 단리될 수 없다.
이러한 불안정성 문제를 해결하기 위해, 본 발명자들은 더 안정한 PS 조성물을 개발하여 본원에 제시하였다. 이러한 안정한 PS의 용도 및 제조 방법 또한 제시된다. 이러한 증강된 안정성은 특히 PS 탈안정화에 대한 몇 가지 잠재적인 원인에 초점을 맞춘 본원 하기에 상술되는 다양한 수단에 의해 제공된다.
"안정화된" 및 "안정한"이라는 용어는 본원에서 동의어로 사용된다.
따라서, 제1 국면에서, 본 발명은 약 1 내지 약 99％ (w/w)의 포스파티딜세린을 포함하는 안정한 PS 조성물을 제공한다.
이미 언급된 바와 같이, PS 불안정성의 알려진 주원인은 PS의 화학적 분해, 예를 들어 탈카르복실화, 지질 과산화, 및 인지질 지방산의 가수분해뿐만 아니라 PS 제제에서의 잔여 효소 활성이다.
그러므로, 본 발명에 의해 제공된 안정한 PS 조성물은 효소 활성이 결여되거나 최소한의 효소 활성을 가지며, 이는 화학적으로 안정하고 저장 안정성이다. 이러한 속성은 하기 실시예에서 명확하게 나타난다.
본 발명의 조성물의 한 실시양태에서, 상기 조성물은 약 1 내지 약 99％ (w/w), 바람직하게는 약 2.5 내지 80％ (w/w)의 PS, 약 1 내지 약 99％ (w/w), 바람직하게는 약 5 내지 90％ (w/w)의 기타 기능성 성분, 약 1 내지 약 99％ (w/w), 바람직하게는 약 1 내지 25％ (w/w)의 포스파티딜콜린 (PC), 바람직하게는, 약 1 내지 약 99％ (w/w), 바람직하게는 약 1 내지 10％ (w/w)의 포스파티딜에탄올아민 (PE), 약 0.1 내지 약 99％ (w/w), 바람직하게는 약 0.5 내지 10％ (w/w)의 포스파티딜이노시톨 (PI), 약 1 내지 약 99％ (w/w), 바람직하게는 약 10 내지 90％ (w/w)의 오메가-3 공급원, 약 1 내지 약 99％ (w/w), 바람직하게는 약 10 내지 90％ (w/w)의 오메가-6 공급원, 및(또는) 약 1 내지 약 99％ (w/w), 바람직하게는 약 1 내지 65％ (w/w)의 스테롤 또는 스테롤 에스테르를 포함한다.
또한, 본 발명의 조성물은 포스파티드산 (PA)의 함량이 15％를 초과하지 않는 것을 특징으로 한다. 바람직하게는 PA 함량은 10％ 이하, 더 바람직하게는 1 내지 7％이다.
또 다른 실시양태에서, 본 발명의 조성물은 6개월 이상, 바람직하게는 12개월 이상, 더 바람직하게는 24개월 이상의 저장 기간 후에 포스파티딜세린의 약 1 내지 약 5％ 이하가 분해되는 것을 특징으로 한다.
다시 말하자면, 본 발명의 조성물의 최초 PS 함량의 95％ 이상이 6개월 이상, 바람직하게는 12개월 이상, 더 바람직하게는 24개월 이상의 저장 기간 후에 보존된다. 바람직하게는 최초 PS 함량의 97％ 이상이 상기 저장 기간 후에 보존되며, 더 바람직하게는 최초 PS 함량의 99％ 이상이 보존된다.
본 발명의 특별한 한 실시양태에서, 조성물은 포스포리파제 활성, 특히 포스포리파제 D 활성이 실질적으로 결여된다. "실질적으로 결여된"이란 1 유닛/mL 미만, 바람직하게는 0.1 유닛/mL 미만, 또는 심지어 0.05 유닛/mL가 본 발명의 조성물에서 발견될 수 있는 최대 잔여 효소 활성임을 의미한다. 실재적인 의미로, 이 정도의 잔여 효소 활성은 무시할 정도여서 표 3에서 제시하는 결과에서 나타난 바와 같이, 거의 측정 가능한 한계이다.
기술된 바와 같은 PS의 제조에 사용된 포스포리파제 D (PLD) (포스파티딜콜린 포스파티도히드로라제, EC 3.1.4.4)는 동물, 미생물, 진균류, 또는 식물 공급원으로부터 얻을 수 있다. 그 예는 양배추 PLD, 스트렙토마이세스 종 (Streptomyces sp.) PLD, 스트렙토마이세스 크로모푸스쿠스 (Streptomyces chromofuscus) 등이다. 고정화 PLD 제제를 사용함으로써, 본 발명자들은 최종 PS 생성물 제제에서 이러한 효소의 존재를 최소화하거나 또는 피할 수 있어서, 효소 과정에 의한 계속적인 PS 분해의 위험을 최소화하거나 방지할 수 있었다.
또 다른 특별한 실시양태에서, 본 발명의 포스파티딜세린 조성물은 분말 형태이다. 실시예 1에서 나타낸 바와 같이, 본 발명자들에 의해 사용된 합성 방법을 통하여 수득된 PS 제제는 분말 형태이다.
추가의 실시양태에서, 본 발명의 조성물에 포함되는 PS는 유기 용매 중에 실질적으로 가용성인 염, 특히 1가 이온의 염, 바람직하게는 나트륨염의 형태이다.
효소적으로 제조된 포스파티딜세린 제제는 일반적으로 2가 금속, 가장 바람직하게는 Ca+2의 염으로서 제조된다. 상기 염은 다수의 유기 용매, 예를 들어 오일, 헥산, 및 심지어 알코올 중에서 가용성이 아니다. 2가 염은 복잡한 용매 혼합물의 사용, 상이한 첨가제의 이용 및 염 교환과 같은 상이한 기술을 이용하여 유기 용매 중에서 가용성이 될 수 있다. 후자의 경우에 2가 금속 이온은 1가 금속 이온, 예컨대 Na+과 교환된다. 이것은 교환에 유리한 조건하에서 PS 2가 염을 과량의 1가 이온에 노출함으로써 이루어진다. 또한, 선택적인 금속 킬레이트제, 예컨대 에틸렌디아민테트라아세트산 (EDTA) 또는 EGTA를 사용할 수 있다. 이러한 킬레이트제는 2가 금속, 특히 Ca+2에 대한 높은 회합 계수로 인해 평형을 이동시킨다. 킬레이트제는 과량의 나트륨 이온의 존재하에서 Ca+ 2이온을 제거하고 나트륨 이온이 PS 염에서 자리를 차지한다. 이는 주변 조건, 및 임의로 승온에서 1 내지 3 당량의 금속 킬레이트제를 사용하여 수성 환경에서 수행된다. 생성된 나트륨염은 유기 용매에 더 쉽게 용해된다.
"유기 용매 중에 실질적으로 가용성"이란 1 ％w/w 내지 40％ 및 심지어는 60％의 PS 용액이 가능하고 투명한 용액을 형성한다는 것을 의미한다.
유기 용매는, 예를 들어 헥산, 석유 에테르, 톨루엔, 에탄올, 오일 및 지방 (트리글리세리드), 지방산 에틸 에스테르 등이다.
추가의 실시양태에서, 본 발명의 조성물에 포함되는 PS는 유기 용매 중에 실질적으로 불용성인 염, 특히 2가 이온의 염, 바람직하게는 칼슘염의 형태이다. 달리, PS는 마그네슘염일 수도 있다.
본 발명의 조성물은 추가로 희석제, 부형제 및 담체뿐만 아니라 생리학상/제약상 허용되는 첨가제, 예컨대 자유-유동화제, 유화제, 안정화제, 방부제, 착색제, 소포제 및 고결 방지제를 임의로 포함할 수 있다.
이외의 추가의 실시양태에서, 본 발명의 포스파티딜세린 조성물은 식이 보충물, 영양약학 식품 및(또는) 약물 첨가제로서 사용된다.
제2 국면에서, 본 발명은 PS가 오일, 바람직하게는 중쇄 트리글리세리드에 용해된, 유기 용매 중에 실질적으로 가용성인 염의 형태로 존재하는, 본 발명의 포스파티딜세린 조성물을 포함하는 안정한 포스파티딜세린 액체 제제를 제공한다. 바람직하게는, 상기 오일에 용해된 PS는 나트륨염의 형태이다.
제1 실시양태에서, 본 발명의 액체 제제는 약 1 내지 약 90％ (w/w), 바람직하게는 약 2.5 내지 약 55％ (w/w)의 포스파티딜세린을 포함한다.
또 다른 실시양태에서, 본 발명의 액체 포스파티딜세린 제제는 6개월 이상, 바람직하게는 12개월 이상, 더 바람직하게는 24개월 이상의 저장 기간 후에 포스파티딜세린의 약 1 내지 약 5％ 이하가 분해되는 것을 특징으로 한다.
"본 발명의 조성물과 유사하게"란 6개월 이상, 바람직하게는 12개월 이상, 더 바람직하게는 24개월 이상의 저장 기간 후에 본 발명의 액체 PS 제제의 최초 PS 함량의 95％ 이상이 보존된다는 것을 의미한다. 바람직하게는 최초 PS 함량의 97％ 이상, 더 바람직하게는 최초 PS 함량의 99％ 이상이 상기 저장 기간 후에 보존된다.
추가의 실시양태에서, 본 발명의 액체 포스파티딜세린 제제는 부가의 생체-기능성 성분, 바람직하게는 레시틴, 인지질, 비타민, 산화방지제, 무기질, 영양 단백질 또는 펩티드, 스테롤 및 기타 유도체, 영양 탄수화물 및 이의 유도체, 아미노산, 식물 추출물, 발효 산물, 글리세리드 유도체 (모노- 및 디- 글리세리드), 다중불포화 지방산, 및 오메가-3 및(또는) 오메가-6 지질 중 하나 이상을 추가로 포함한다.
이외의 추가의 실시양태에서, 본 발명의 포스파티딜세린 액체 제제는 식이 보충물, 영양약학 식품 및(또는) 약물 첨가제로서 사용된다.
제3 국면에서, 본 발명은 PS가 액체 기제에 분산된, 유기 용매 중에 실질적으로 불용성인 염의 형태로 존재하는, 본 발명의 안정한 포스파티딜세린 조성물을 포함하는 안정한 포스파티딜세린 분산액을 제공한다. 바람직하게는, 상기 염은 칼슘염이다. 따라서, 안정한 PS 분산액은 바람직하게는 지질, 더 바람직하게는 오일 기제인 액체 기제에 분산된 PS 칼슘염이다. 달리, 안정한 PS 분산액은 바람직하게는 지질, 더 바람직하게는 오일 기제인 액체 기제에 분산된 PS 마그네슘염이다.
한 실시양태에서, 지질 기제는 오일, 지방산 에스테르, 유리 지방산 및 기타 유도체일 수 있다.
지질 또는 유기 담체 중 포스파티딜세린의 분산액은 상기 유형의 담체가 PS의 완전 용해를 불가능하게 함을 특징으로 한다. 이러한 담체는 식용유 (예컨대 식물성 오일, 어유 등의 트리글리세리드-기제 산물), 유기 중합체, 탄수화물 및 이의 유도체, 단백질 및 펩티드 제제 등일 수 있다.
상기 담체 중에서 가용성이 아닌 PS는 상이한 입자 크기의 결정질 형태로 발견된다. 이러한 형태에서 PS는 분해 인자, 예컨대 수분, 글리세롤, 잔여 효소, 및 분자적 수준에서 PS 분자 또는 이의 치환기 중 하나와의 반응을 요하는 임의의 다른 인자에 덜 영향을 받는다.
PS 분산액은 또한 고체 또는 반-고체 (매우 높은 점성 형태) 형태로서 수득될 수 있다. 단지 고체상에서 임의의 화학적 또는 촉매적 분해 과정의 반응속도론적 프로파일은 실질적으로 보다 낮은 속도 계수를 갖는다는 사실로 인하여, 고체 성질은 PS 활성 성분의 수준을 감소시킬 수 있는 상기 임의의 과정을 추가로 억제 또는 지연시킨다.
별법으로, 액체 기제는 지질이 아니며 유기 또는 무기 액체 중합체, 액체 탄수화물 등일 수 있다.
바람직하게는, 본 발명의 상기 포스파티딜세린 분산액은 약 1 내지 약 70％ (w/w), 더 바람직하게는 약 5 내지 45％ (w/w)의 포스파티딜세린을 포함한다.
본 발명자들은 실시예에서 제시한 바와 같이, PS 40％를 함유하는 PS 분산액 또는 유체 PS를 제조하였다.
식이 보충물에 대한 통상적인 제품은 PS 20 ％w/w를 함유한, MCT 오일 중 유체 PS이다. 이것은 현재 시판되는 PS의 표준량 및 가장 통상적인 일일 1회분인 100mg PS를 함유한 500 mg 연질젤 캡슐제의 제조를 허용한다. 오늘날 가장 대중적인 캡슐제의 형태 중 하나인 연질젤 캡슐화를 위해서, 주변 조건 또는 35℃를 초과하지 않는 온도에서 유체 제제를 제조하여야만 한다. 이러한 한계는 연질젤 캡슐화 기술 및 장치에 기인한다. 현재까지 PS 함량이 20％를 초과하는 유체 PS를 제조하는 것은 가능하지 않았다. 보다 높은 농도의 PS를 함유한 유체 PS를 제조하는 것은 캡슐제를 크게 하거나 한 사람이 섭취할 필요가 있는 일일 캡슐제의 수를 증가시키지 않으면서 캡슐제에 다른 성분을 추가하거나 보다 작은 크기의 캡슐제를 가능하게 하기 때문에 유리하다. 이것은 소비자에게 좀 더 복용하기 쉽게 하며 경제적인 관점에서도 유리하다.
본 발명자들은 PS의 안정성을 희생시키지 않으면서 상기에 언급한 장점을 갖는 유체 PS를 개발하였다. 본 발명에서 PS 나트륨염은 헥산에 용해되며 오일 담체, 바람직하게는 MCT에 첨가된다. PC 또는 레시틴은 첨가되지 않으며 사용된 MCT의 양이 변화되어 훨씬 더 농축된 형태의 PS를 생성한다. 이 농도는 MCT 중 PS 나트륨염의 용해도 이상이므로, PS의 일부는 침전한다. 결론적으로, 수득된 제형 중 PS는 부분적으로 가용성이고 부분적으로 분산되어, 높은 안정성뿐만 아니라 유체 특성, 손쉬운 취급 및 투여를 가능케 한다.
본 발명의 포스파티딜세린 분산액의 바람직한 한 실시양태에서, 상기 오일 기제는 트리글리세리드 기제, 특히 중쇄 트리글리세리드 기제 또는 식물성 오일이다.
또 다른 실시양태에서, 본 발명의 포스파티딜세린 분산액은 부가의 생체-기능성 성분, 바람직하게는 레시틴, 인지질, 비타민, 산화방지제, 무기질, 영양 단백질 또는 펩티드, 스테롤 및 기타 유도체, 영양 탄수화물 및 이의 유도체, 아미노산, 식물 추출물, 발효 산물, 글리세리드 유도체 (모노- 및 디- 글리세리드), 다중불포화 지방산, 및 오메가-3 및(또는) 오메가-6 지질 중 하나 이상을 추가로 포함한다.
추가의 실시양태에서, 본 발명의 상기 포스파티딜세린 분산액은 식이 보충물, 영양약학 식품 및(또는) 약물 첨가제로서 사용된다.
또 다른 국면에서, 본 발명은 본 발명에 의해 제공된 어느 하나의 형태, 즉 포스파티딜세린 조성물, PS 액체 제제 또는 PS 분산액으로서 PS를 포함하는 식료품을 제공한다.
한 실시양태에서, 상기 식료품은 임의로 하나 이상의 부가의 생체-기능성 성분, 예를 들어 상기에서 기술된 바와 같은 생체-기능성 성분을 추가로 포함한다.
하기 국면에서, 본 발명은 활성제로서 PS를 본 발명에 의해 제공된 어느 하나의 형태, 즉 포스파티딜세린 조성물, PS 액체 제제 또는 PS 분산액으로서 포함하고, 임의로 하나 이상의 추가 활성제 및(또는) 하나 이상의 제약상 허용되는 첨가제, 희석제, 담체 또는 부형제를 추가로 포함하는 제약 조성물을 제공한다. 본 발명의 제약 조성물은 부가의 제약상 활성제를 포함할 수 있다.
제약 조성물의 제조 방법은 당업계에서 잘 공지되어 있고 많은 논문 또는 교재 (예를 들어, 문헌[Remington's Pharmaceutical Science, Gennaro A. R. ed., Mack Publishing Company, Eastom, Pennsylvania, 1990, pages 1521-1712] 참조)에 기술되어 있다.
본 발명의 제약 조성물은 투여 단위 형태로 제조될 수 있다. 투여 형태는 서방형 장치도 포함할 수 있다. 조성물은 제약 분야에서 잘 공지된 임의의 방법에 의해 제조될 수 있다. 이러한 투여 형태는 본질적으로 비-독성이고 비-치료적인 생리학상 허용되는 담체를 포함한다. 이러한 담체의 예는 이온 교환제, 알루미나, 알루미늄 스테아레이트, 레시틴, 혈청 단백질, 예컨대 인간 혈청 알부민, 완충 물질, 예컨대 포스페이트, 글리신, 소르브산, 포타슘 소르베이트, 불포화 식물성 지방산의 부분 글리세리드 혼합물, 수분, 염, 또는 전해질, 예컨대 프로타민 술페이트, 인산수소이나트륨, 인산수소칼륨, 염화나트륨, 아연염, 콜로이드 실리카, 마그네슘 트리실리케이트, 폴리비닐 피롤리돈, 셀룰로오스-기제 물질, 및 PEG를 포함한다.
다른 경로가 또한 가능할지라도, 경구 투여가 본 발명의 제약 조성물을 전달하는 바람직한 경로이다.
제약 조성물은 필요로 하는 대상체에 단일 또는 다중 투여될 수 있다. 본 발명의 조성물의 "치료 유효량"은 치료 대상과 관련한 증상의 중증도, 투여 경로 및 환자의 일반적인 상태 (연령, 성별, 체중 및 주치의에게 알려진 다른 고려사항)에 의해 결정된다. 따라서, 치료자는 최적의 치료 효과를 얻기 위해서 투여량을 정하고 필요한 투여 경로를 조절할 필요가 있다.
이외의 또 다른 국면에서, 본 발명은 PS를 본 발명에 의해 제공된 어느 하나의 형태, 즉 포스파티딜세린 조성물, PS 액체 제제 또는 PS 분산액으로서 함유하는 캡슐제를 제공한다. 상기 캡슐제는 바람직하게는 연질 젤라틴 캡슐제이다.
상기에서 언급된 바와 같이, PS는 기분 및 기억의 향상뿐만 아니라 인지 수행 및 학습 능력과도 연관이 있다.
그러므로, 본 발명은 또한 본 발명에 기술된 임의의 PS 제제, 즉 포스파티딜세린 조성물, PS 액체 제제 또는 PS 분산액의 인지 수행 및 학습 능력의 증강제로서의 용도를 제공한다.
본 발명의 후속 국면은 기억 상실, 특히 연령-관련 기억 상실을 예방하는데 사용하기 위한, 본 발명에 의해 제공된 어느 하나의 형태, 즉 포스파티딜세린 조성물, PS 액체 제제 또는 PS 분산액으로서 PS를 제공하는 것이다.
추가의 국면에서, 본 발명은
(a) L-세린 및 임의로 적절한 유기 용매와 레시틴의 수성 혼합물을 고정화 포스포리파제의 존재하에서 적합한 기간의 시간 동안 인큐베이션하여 포스파티딜세린을 수득하는 단계;
(b) 포스파티딜세린을 함유하는 상층을 제거하는 단계;
(c) 상기 제거된 상층으로부터 포스파티딜세린을 표준 수단에 의해 수득하는 단계;
(d) 단계 (c)에서 수득된 포스파티딜세린을 적절한 수용액으로 세척하여 과량의 L-세린을 제거하는 단계;
(e) 임의로, 단계 (d)에서 수득된 포스파티딜세린을 승온에서 적합한 유기 용매, 바람직하게는 에탄올로 세척하는 단계; 및
(f) 단계 (e)에서 수득된 포스파티딜세린을 건조시키는 단계
를 포함하는, 안정한 포스타티딜세린 조성물의 제조 방법을 제공한다.
본 발명의 방법의 한 특정한 실시양태에서, 상기 포스포리파제는 바람직하게는 포스포리파제 D이다.
본 발명의 방법의 또 다른 실시 양태에서, 상기 방법은 수득된 포스파티딜세린에서 임의의 잔여 포스포리파제 활성을 적합한 수단에 의해 탈활성화시키는 단계를 추가로 포함할 수 있다.
상기 적합한 수단은 (a) EDTA 처리, (b) 유기 용매, 바람직하게는 메탄올, 에탄올 또는 프로판올과 함께 추가 인큐베이션, (c) 열에 의한 탈활성화, 및 (또는) (d) PLD 억제제의 첨가일 수 있다.
본 발명의 방법 이외의 또 다른 바람직한 실시양태에서, 상기 포스포리파제를 불용성 매트릭스 상에 고정화시키고, 임의로 계면활성제 코팅시키고, 단계 (a) 이후, 반응 혼합물을 포스포리파제가 침전될 때까지 방치한다.
고정화 PLD 제제는 유기 매질 또는 수성 매질, 또는 2-상 계로서 공지된 이들의 혼합물 중에서 공정을 수행하는 경우에 사용할 수 있다.
상기 기술된 방법의 단계 (a)에서, 레시틴은 임의로 반응 혼합물 내 레시틴 원료의 분산 및(또는) 용해를 보조하는 적합한 유기 용매의 존재하에서 L-세린의 수용액에 첨가한다. 혼합물은 인지질을 반응 매질에 균질 분산시키기 위해 적합한 기간의 시간, 바람직하게는 약 1시간 동안 교반한다.
효소 반응 자체는 적합한 기간의 시간, 바람직하게는 12시간 이상 동안 교반하에 수행하며, 이어서 반응 혼합물을 방치한다.
인지질 분획물을 함유하는 반응의 상층은 표준 기술, 예를 들어 원심분리, 여과, 압력 여과, 경사분리 등에 의해서 수득한다. 생성된 포스파티딜세린은 적절한 수용액으로 추가로 세척하여 임의의 과량의 L-세린을 제거하고, 건조시켜 포스포리파제 활성이 실질적으로 결여된 포스파티딜세린을 수득한다.
고정화 PLD 제제가 분말 또는 유체 제형 PS의 제조에 사용되는 경우, 최종 PS 제형은 최소의 잔여 효소 활성으로 입증되는 바와 같이 시판용 PS 제형에 비해서 우수한 안정성을 나타내었다. 매트릭스의 기계적 분해 또는 불충분한 고정화로 인한 고정화 PLD 제제부터의 효소 누출은 대단히 통상적인 현상이다. 이러한 문제를 방지하기 위해서, 본 발명자들은 최종 PS 중에 존재하는 임의의 효소 활성을 탈활성화시키는 추가 단계를 이용하였다. 이러한 추가 단계는 (i) 유기 용매, 바람직하게는 메탄올, 에탄올 또는 프로판올, 또는 효소를 불활성화시킬 수 있는 임의의 다른 유기 용매와의 승온 (120℃ 정도)에서 인큐베이션을 통해 효소의 탈활성화; (ii) 열에 의한 탈활성화; (iii) 예를 들어 EDTA 처리와 같이 효소를 불활성화시키는 첨가제의 첨가; (iv) PLD 억제제의 첨가를 포함한다.
효소 억제제, 또는 효소 보조-인자, 예컨대 Ca+ 2이온을 제거하는 선택적 시약으로의 PS 제제의 처리는 바람직하게는 잔여 효소 또는 수용성 보조-인자에 대한 상기 억제제 또는 시약의 접근성을 확보하기 위해 수성 매질에서 수행된다.
선택적 금속-이온 킬레이트제, 예컨대 비제한적으로 에틸렌디아민테트라아세트산 (EDTA) 및 이의 상응하는 염 및 유도체에 의한 처리는 Ca+2 이온을 선택적으로 결합하여 이들이 임의의 잔여 효소에 접근할 수 없게 만든다. 따라서, 잔여 효소가 제제 중에 존재하더라도 필수 보조-인자의 결여로 인하여 트랜스포스파티딜화 또는 가수분해 활성을 발휘할 수 없을 것이다.
적절한 EDTA 염으로 처리된 PS 제제는 새로운 수용액으로 추가로 세척되고 여과 및 후속 건조에 의해 수득된다. 바람직하게는, PS 제제는 유기 매질에 대한 추출에 의해 수득된다. 상기 유기 매질은 유기 용매 또는 유기 용매의 혼합물 또는 지질계, 예컨대 오일, 지방산 에틸 에스테르, 유리 지방산, 부분 가수분해된 트리글리세리드 등으로 구성될 수 있다. 또한, 상기 유기 매질은 다양한 비율로 유기 용매와 지질 담체를 둘 다 함유할 수 있다. 통상적으로 MCT가 지질 담체로서 사용된다. 이 경우에, 유기 용매, 예컨대 탄화수소 유기 용매가 처리된 PS 제제의 추출에 사용되며, 상기 용매는 추가로 표준 기술에 의해 제거된다.
추가의 국면에서, 본 발명은 본 발명의 포스파티딜세린 조성물을 적합한 오일 기제에 용해시키는 단계를 포함하며, PS가 오일, 바람직하게는 중쇄 트리글리세리드에 용해된, 유기 용매 중에 실질적으로 가용성인 염의 형태로 존재하는, 안정한 포스파티딜세린 오일-기제 액체 제제의 제조 방법을 제공한다. 바람직하게는, 상기 오일에 용해된 PS는 나트륨염의 형태이다. 바람직하게는, 상기 오일 기제는 중쇄 트리글리세리드 또는 식물성 오일이다.
마지막 국면에서, 본 발명은 본 발명의 포스파티딜세린 조성물을 분산시키는 단계를 포함하며, PS가 오일, 바람직하게는 중쇄 트리글리세리드에 용해된, 유기 용매 중에 실질적으로 불용성인 염의 형태로 존재하고, 바람직하게는 상기 오일에 용해된 PS가 적합한 오일 기제, 바람직하게는 트리글리세리드 기제, 특히 중쇄 트리글리세리드 또는 식물성 오일 중의 칼슘염 형태인, 포스파티딜세린의 안정한 액체-기제 분산액의 제조 방법을 제공한다. 혼합물을 증강시키기 위해, 추가 성분을 상기 액체 제제에 첨가할 수 있다는 것을 주목해야 한다. 예를 들어, 보다 많은 레시틴을 첨가하여 포스파티딜콜린 함량을 증가시킬 수 있다.
따라서, 본 발명의 방법에 의해 제조된 PS는 포스포리파제 활성이 실질적으로 결여된, 포스파티딜세린의 안정화된 분말 형태 또는 안정화된 오일-기제 액체 제제로서 수득된다.
본 발명은 또한 상기 기술된 방법 중 어느 하나에 의해 제조된 안정한 포스파티딜세린 조성물을 제공한다.
결국, 공지된 그리고 공지되지 않은 다양한 메카니즘이 PS 분해의 원인으로 간주된다. 공지된 메카니즘 중, (1) PA 또는 PG가 산출되는 효소 가수분해 및 트랜스포스파티딜화; (2) 상응하게 리소-PS 또는 탈아실화-PS (GPS)가 산출되는 인지질 지방산의 부분 또는 완전 가수분해; (3) 디글리세리드 (DAG)가 산출되는 포스페이트기의 제거; (4) PE 또는 다른 더욱 복잡한 생성물이 산출되는 L-세린 카르복실레이트기의 탈카르복실화; (5) 인지질 과산화수소화; 및 (6) 공기, 빛 등에 의해 발생되는 L-세린 머리기의 1급 아민기의 산화가 강조될 수 있다.
아민, 특히 1급 아민이 산화에 매우 민감하다. 이와 같은 산화 생성물은 많이 있으며, 이들을 확인하는 것은 거의 불가능하다. 따라서, 아민-산화를 견딜 수 있는 안정화된 PS를 산화로부터 민감한 화학기를 보호하기 위한 그들의 능력을 특징으로 하는 첨가제를 혼입함으로써 제조하였다. 산화방지 특성을 지닌 이들 첨가제를 분말 PS뿐만 아니라 유체 PS, 특히 연질젤 캡슐제로 캡슐화된 유체 PS에 첨가하였다. 후자는 PS 분해될 가능성이 매우 크다. 사용된 산화방지제는 0-5000 ppm 수준의 로즈마리 (Rosemary) 추출물, 토코페롤 (Tocopherol) 및 아스코르빌 팔미테이트 (Ascorbyl palmitate), 및 0-200 ppm 수준의 BHA, BHT 및 TBHQ로 구성되었다. 합성 또는 천연인, 다른 산화방지제 또는 산화방지제들의 블렌드가 본 발명에 도입된다. 분해로부터 PS를 보호하기 위해 사용되는 산화방지제의 수준은 100 ppm 이상, 바람직하게는 1000-3000 ppm이다. 이들 캡슐제뿐만 아니라 이들의 벌크 물질도 이들의 안정성에 대해 실온 및 가속 시험에서 분석하였다. 벌크 물질은 실온의 어두운 장소에서 밀봉 용기에 보관하였다.
결국, 본 발명의 안정화된 PS 제제는 효소 분해 측면에서 특히 안정하며, 이는 고정화 생촉매의 사용, 잔여 효소 탈활성화 및 효소 억제제의 사용에 의해서 달성된다는 것이 밝혀졌다.
본원에서 기술된 방법에 의해 생성된 PS의 안정성은 상기에 나열한 각각의 분해 과정의 상이한 분해 생성물의 모니터링을 통해 분석하였다. 이들 생성물의 존재는 31P-NMR, 및 일반적인 크로마토그래피 방법 (HPTLC, HPLC-ELSD, 및 GC)으로 측정하였다. 모든 경우에서, 상기 분해 마커의 존재하에서는 상승이 검출되지 않았으며, 이는 상기 분해 경로 중 어느 것도 발생할 수 없었으며, 고도로 안정한 PS가 산출되었다는 결론에 이르게 한다.
따라서, 본 발명은 하기 과정, 즉 효소 가수분해 및 트랜스포스파티딜화, 인지질 지방산의 부분 또는 완전 가수분해, 포스페이트기의 제거, L-세린 카르복실레이트 기의 탈카르복실화, 인지질 과산화수소화, L-세린 머리기의 1급 아민기의 산화 중 하나 이상에 의한 분해에 대해 내성이 있는, 조성물, 액체 또는 분산액, 셋 중 어느 하나의 형태인 안정한 포스파티딜세린 제제를 제공한다.
기재 및 기술된 바와 같이, 본 발명은 제조 단계 및 재료는 다소 다양할 수 있기 때문에 본원에 기재되는 특별한 실시예, 제조 단계, 및 재료로 제한되지 않는다는 것을 이해하여야 한다. 또한, 본 발명의 범위는 첨부된 청구의 범위 및 이들의 동등물에 의해서만 제한되기 때문에 본원에 사용된 용어는 단지 특별한 실시양태를 기술할 목적으로 사용된 것이지 제한의 의도가 아니라는 것을 이해하여야 한다.
본 명세서와 첨부된 청구의 범위에서 사용되는 단수형 "하나" 및 "그"는 내용이 명확하게 달리 지시되지 않는 한 복수 지시 대상을 포함하는 것임을 주목해야만 한다.
본 명세서와 이어지는 청구의 범위 전반에 걸쳐, 문맥상 달리 해석되지 않는 한, 용어 "포함한다", "포함하고" 및 "포함하는"과 같은 변형은 언급한 실체 또는 단계 또는 실체 또는 단계의 군을 포함하나 임의의 다른 실체 또는 단계 또는 실체 또는 단계의 군을 배제하는 것은 아닌 것을 의미하는 것으로 해석될 것이다.
하기 실시예는 본 발명의 국면을 수행함에 있어 본 발명자에 의해 이용되는 대표적인 기술이다. 이 기술은 발명의 실시를 위한 바람직한 실시양태의 예시이지만, 당업자는 본 기재에 비추어, 본 발명의 의도하는 범위 및 취지를 벗어나지 않으면서 많은 변형을 실시할 수 있음을 인지할 것이라는 것을 이해하여야 한다.
[실시예 1 - 고정화 효소 제제를 이용한 분말 형태의 안정한 포스파티딜세린의 제조]
1. 고정화 효소의 제조
본 발명에서, 본 발명자들은 스트렙토마이세스 종, 양배추, 및 스트렙토마이세스 크로모푸스쿠스로부터의 포스포리파제 D와 같은 다양한 시판용 PLD를 이용하였다. 모든 경우에서, 이들 효소는 높은 반응성을 나타내었으며, 고품질 PS가 합성되었다. 가장 중요하게는, 포스파티드산의 수준은 일반적으로 낮았다 (데이타는 제시하지 않음).
다양한 PLD를 상이한 기술로 고정화시켰고 담체로서 상이한 불용성 매트릭스를 사용하였다. 매트릭스-고정화, 바람직하게는 계면활성제-코팅된 포스포리파제 를 전문이 참고로 본원에 도입된 WO00/56869에 기술된 방법에 따라 제조하였다. 효소 공유결합 고정화를 위해 고안된 시판용 불용성 매트릭스, 예컨대 유페르기트 (Eupergit) 에폭시 활성화 매트릭스 (롬 앤 하스 (Rohm and Haas), 독일 소재)를 또한 사용하였다.
요컨대, 조 PLD 효소 (300 mg/l 단백질)를 4 g의 불용성 무기 또는 유기 매트릭스 (셀라이트, 실리카 겔, 알루미나 또는 폴리프로필렌)를 함유하는 pH 6.5 트리스 (Tris) 완충액 1 L에 용해시켰다. 용액을 25℃에서 자석 교반기로 30분 동안 격렬하게 교반하였다. 계면활성제-코팅된 고정화 효소의 제조를 위하여, 비이온성 계면활성제를 교반되는 효소 용액에 적가하였다. 계면활성제-코팅된 고정화 포스포리파제 및 고정화 조 포스포리파제 둘 모두를 10분 동안 초음파처리한 후, 25℃에서 8시간 동안 교반하였다. 생성된 침전물은 여과 또는 원심분리 (12,000 rpm, 4℃)로 수집하고, 이어서 -20℃로 냉동하여 밤새 동결건조시켰다.
표 1에 제시한 바와 같이, 이들 PLD 고정화 제제는 L-세린과 레시틴의 트랜스포스파티딜화에 의해 포스파티딜세린을 성공적으로 생성하였다. D-세린도 또한 상기 제제에 사용될 수 있다. PS 수율은 항상 30％를 초과하였다. 레시틴 출발 물질에 따라 상이한 등급의 PS를 생산할 수 있다. 가장 중요하게는, 고정화 PLD 제제는 공정에 사용된 레시틴 출발 물질에 상관없이 높은 활성을 나타내었다 (데이타는 제시하지 않음).
2. 안정한 PS 제제
200 mM의 CaCl2를 함유하는 적절한 750 ml의 완충액 (pH 3.5-7), 예를 들어 시트르산염 완충액으로 충전된 1 리터 반응기에 250 g의 L-세린 (렉심 (Rexim), 프랑스 소재)을 넣었다. 세린이 완전히 용해된 후, 임의로는 인지질의 분산을 보조하는 기타 유기 용매, 예컨대 헥산, 에틸 아세테이트, 디에틸 에테르 등과 함께, 53 g의 분별 대두 레시틴 (솔래 컴퍼니 (Solae Company), 미국 소재)을 첨가하였다. 혼합물을 20-60℃의 온도에서 0.5-2시간 동안 교반하여 반응 매질에 인지질을 균일하게 분산시켰다. 1.25 g의 효소 제제 (반응 2, PLD2, 표 1)를 반응 매질에 첨가하였다. 반응 혼합물을 24시간 동안 교반한 후, 반응기의 바닥에 효소 제제가 침전될 때까지 교반없이 방치하였다. 인지질 분획물을 함유하는 상층을 반응기로부터 제거하였다. 포스파티딜세린을 상기 분획물로부터 수득하고 적절한 수용액으로 세척하여 과량의 세린을 제거하였다. 수득한 포스파티딜세린에는, 주로 효소가 고정화된다는 사실 때문에, 실질적으로 효소 흔적이 없었다.
상기 제법으로부터, 47 g의 포스파티딜세린을 30％를 초과하는 순도로 수득하였다. 이러한 절차를 표 1에 제시한 효소 제제 (각각 1, 2, 3 및 4)로 반복하였다. 수율은 제1 배치 (Batch)에 대해 나타낸 바와 같았다. 고정화 효소 제제를 추가의 배치 (각각 제2, 제3, 및 제4)에서 재사용하였고, 수득 결과를 또한 표 1에 요약하였다.
| 반응 |
효소 |
매트릭스 |
반응 온도 (℃) |
모든 배치에서의 ％PS | |||
| 제1 | 제2 | 제3 | 제4 | ||||
| 1 | PLD1 | 유페르기트 1014F | 42 | 31 | 61 | ||
| 2 | PLD2 | 듀오라이트 (Duolite) A568 | 42 | 39 | 45 | 47 | 43 |
| 3 | PLD1 | 듀오라이트 A568 | 42 | 46 | 45 | 44 | 55 |
| 4 | PLD1 | 듀오라이트 A568 | 37 | 39 | 44 | 43 | 44 |
[실시예 2 - 효소 탈활성화]
A. 유기 용매
불용성 매트릭스로부터 누출될 수 있는 임의의 잔여 효소를 탈활성화시키기 위하여, 실시예 1에서 기술한 바와 같이 수득한 PS를 탈활성화 유기 용매, 바람직하게는 메탄올 또는 에탄올의 존재하에 20℃ 내지 120℃의 온도에서, 0.5 내지 10시간의 적절한 기간의 시간 동안 격렬하게 교반하였다.
PS에서 발견되는 임의의 잔여 효소에 용매를 완전히 접근할 수 있도록, 유기 용매는 PS를 용해시킬 수 있다. 선택된 유기 용매는 PS를 완전히 용해시키지 못하고, 따라서 단지 소량의 PS만을 용해시킬 수 있는 연마처리-유사 공정을 야기하고, 이는 임의의 잔여 효소의 탈활성화를 보장한다. 이러한 조건하에서, 탈활성화 공정의 완료 후, PS를 여과하고 건조시켰다. 탈활성화에서 사용되는 유기 용매가 상당량의 PS를 용해시키는 경우, 용매 제거 및 건조, 임의로는 분무 건조와 같은 표준 기술에 의한 탈활성화 처리를 완료한 후 PS를 수득하였다. 이들 처리는 분말 및 액체 PS 제제 둘 다의 분해를 상당히 감소시켰다. 분말 PS의 경우, 초기 PS 농도는 약 22％였고, 4개월 저장 후 유의한 변화가 관찰되지 않았다. 액체 PS의 경우, 초기 PS 농도는 약 22.67％였고, 4개월 저장 후 유의한 변화 (0.02％ 감소)가 또한 관찰되지 않았다.
표 2는 가열로 유기 용매 (에탄올)를 탈활성화시킨 후, 탈활성화 시간의 함수로서 효소 활성의 감소를 기술한다.
| 가열 (80℃) 기간 (시간) | 잔여 효소 활성 (유닛/ml) |
| 1 | 0.0458 |
| 2 | 0.0248 |
| 4 | 0.0088 |
| 4.5 | 0.0082 |
| 5 | 0.0067 |
표 3은 매우 낮은 잔여 효소 활성을 보이는, 본 발명자들에 의해 제조된 3개의 PS 배치를 기술한다.
| PS 제제 번호 | 엔지모테크 (Enzymotec) 제제에서의 잔여 효소 활성 (유닛/ml)* |
| 1 | 0.0054 |
| 2 | 0.0058 |
| 3 | 0.0042 |
| *방법의 검출 한계: 0.002-0.003 유닛/ml. | |
다음으로, 본 발명자들은 상이한 PS 제조업자에 의해 생성된 다른 PS 제제를 분석하였다. 본 발명자들은 본 발명에 의해 제조된 PS의 잔여 효소 활성과 비교하여 PLD의 잔여 효소 활성이 상당히 크다는 것을 발견하였다. 예를 들면, 이러한 한 "외래" PS 제제는 유사한 등급의 PS 제제의 2개 배치에서 0.0242 및 0.0196 유닛/ml를 나타내었다.
B. EDTA를 통한 효소 탈활성화 - 안정한 액체 포스파티딜세린의 제조
실시예 1에서 수득한 분말 PS를 1:1 물:에탄올 혼합물의 0.2M EDTA 용액에 분산시킨 후, 25℃에서 10시간 동안 교반하였다. 다음으로, 포스파티딜세린을 250 ml의 n-헥산으로 추출하였다. n-헥산 층을 물로 2회 세척하였다. MCT (95 g)를 n-헥산 용액에 첨가하고 n-헥산을 증발시킨 후, 포스파티딜세린 제형의 맑은 오일성 유체를 수득하였다.
분말 PS를 유기 용매 중에 가용성이지 않은 칼슘염으로서 실시예 1의 방법으로 수득하였다. EDTA로의 처리는 상기 PS에서 두 가지 역할을 한다. 한편으로, 상기 처리는 Na+에 의해 치환되는 Ca+2 이온을 제거하여 결과적으로 PS를 가용성으로 만들어, 유기 용매에 PS가 용해될 수 있게 하고, 따라서 액체 형태가 수득된다. 동시에, Ca+2가 PLD 촉매 활성에 대한 보조-인자이기 때문에, Ca+2 고갈은 잔여 효소의 불활성화를 유발한다.
적절한 EDTA 염으로 처리된 PS 제제를 새로운 수용액으로 추가로 세척하고, 여과에 이어 건조시켜 PS를 수득하였다.
생성된 PS는 포스파티딜세린의 안정화된 분말 형태 또는 안정화된 오일-기제 액체 제제로서 수득할 수 있으며, 둘 다 실질적으로 포스포리파제 활성이 결여되어 있다.
EDTA로 처리된 유체 PS는 서늘하고 어두운 장소에서 밀봉 용기에 보관하였다. PS 농도는 ELS 검출기 장착 HPLC 및 31P-NMR을 통해서 분석하였다.
표 4는 PS를 제조한 후 바로 측정한 PS 농도 및 모니터링한 저장 4개월 후 측정한 PS 농도를 제시한다.
| 생성물 종류 | 저장 기간 | 제조된 직후 PS 농도 (％) | 저장 후 PS 농도 (％) |
| 유체 PS | 4개월 | 22.67 | 22.65 |
[실시예 3 - 포스포리파제 D 활성의 측정]
포스포리파제 D 활성은 에스. 가토 (S. Kato) 등 [Kato, S. et al. (1984) Agric. Biol . Chem ., 48, 2181-2188]에 의해 보고된 개질된 방법을 이용하여 분광광도법으로 평가하였다.
(1) 효소 유닛의 정의
포스포리파제 D의 1개 효소 유닛은 하기에 명시된 조건 하에서 기질로부터 1분 내에 1 마이크로 몰의 콜린을 유리하는 효소의 양으로 정의한다.
(2) 시약
1. 5％ 대두 레시틴 (에피쿠론 200 (Epikuron 200), 포스파티딜콜린 95％) 에멀젼
2. 5％ 포스파티딜세린 제제 에멀젼
3. 0.1 mol/l 트리스-말레에이트-NaOH 완충액, pH 5.5
4. 0.1 mol/l 염화칼슘 용액
5. 7.5％ 트리톤 (Triton) X-100 용액
6. 1 mol/l 트리스-HCl 완충액 중의 0.05 mol/l EDTA, pH 8.0
7. 착색 시약: 4 ml의 50 mmol/l 헤페스 (Hepes)-NaOH 완충액 (pH 7.4) 중의 3 유닛의 콜린옥시다제 (알칼리제네스 종 (Alcaligenes sp .) 유래), 6 유닛의 퍼옥시다제 (고추냉이 (Horseradish) 유래), 1 mg의 페놀 및 0.6 mg의 4-아미노-안티피린
8. 1.43 μmol/ml (0.2 g/l) 염화콜린 표준 용액
9. 0.01％ 효소 용액
(3) 절차
하기 용액을 제조하였다.
용액 A: 시험관에, 0.1 ml의 5％ 대두 레시틴 에멀젼 및 5％ 포스파티딜세린 에멀젼, 0.1 ml의 0.1 mol/l 트리스-말레에이트-NaOH 완충액 (pH 5.5), 0.05 ml의 0.1 mol/l 염화칼슘 용액 및 0.15 ml의 7.5％ 트리톤 X-100 용액을 충분히 혼합하고 37℃의 수조에서 5분 동안 인큐베이션하였다. 상기 용액에, 0.1 ml의 효소 용액을 첨가하고, 정확히 10분 후, 0.2 ml의 EDTA 용액을 첨가하고 인큐베이션한 시험관을 끓는 물에 5분 동안 두었다. 그 후에 시험관을 제거하고 실온으로 냉각하였다.
용액 B: 시험관에, 0.1 ml의 5％ 포스파티딜세린 에멀젼, 0.1 ml의 0.1 mol/l 트리스-말레에이트-NaOH 완충액 (pH 5.5), 0.05 ml의 0.1 mol/l 염화칼슘 용액 및 0.15 ml의 7.5％ 트리톤 X-100 용액을 충분히 혼합하고 37℃의 수조에서 5분 동안 인큐베이션하였다. 0.1 ml의 효소 용액을 상기 용액에 첨가하고, 정확히 인큐베이션 10분 후, 0.2 ml의 EDTA 용액을 첨가하였고 시험관을 끓는 물에 5분 동안 두었다. 그 후에 시험관을 제거하고 실온으로 냉각하였다.
바탕 용액: 증류수
표준 용액 - 효소 용액 대신 각각의 염화콜린 표준 용액.
이후에 4 ml의 착색 시약을 4개의 용액 각각에 첨가하여, 충분히 혼합하고 37℃에서 20분 동안 인큐베이션하였다. 표준 용액 및 반응물의 광학 밀도를 500 nm (광경로 1 cm)에서 바탕 용액에 대하여 판독하였다.
(4) 효소 유닛 계산
포스포리파제 D 활성 (ml 당 유닛) = (용액 A의 ΔE - 용액 B의 ΔE)/표준물의 ΔE × 0.143. ΔE : 바탕 용액에 대한 500 nm에서의 광학 밀도.
[실시예 4 - 비고정화 효소 및 효소 탈활성화를 이용한 분말 형태의 안정한 포스파티딜세린의 제조]
200 mM의 CaCl2를 함유하는 적절한 750 ml의 완충액 (pH 3.5-7), 예를 들어 시트르산염 완충액으로 충전된 1 리터 반응기에 250 g의 L-세린을 넣었다. 세린이 완전히 용해된 후, 임의로는 인지질의 분산을 보조하는 다른 유기 용매와 함께 53 g의 분별 대두 레시틴을 첨가하였다. 혼합물을 20-60℃의 온도에서 0.5-2시간 동안 교반하여 반응 매질에 인지질을 균일하게 분산시켰다. 1.25 g의 효소 (PLD)를 반응 매질에 첨가하였다. 반응 혼합물을 24시간 동안 교반하였다. 인지질을 함유하는 상층을 반응기로부터 제거하였다. 포스파티딜세린을 상기 층으로부터 수득하여 수용액으로 세척하였다. 포스파티딜세린을 유기 용매, 바람직하게는 메탄올 또는 에탄올로 승온하에서 0.5시간 이상 동안 추가로 처리하여, 임의의 미량의 효소를 탈활성화하였다. 포스파티딜세린을 여과 또는 용매 제거로 수득하여 건조시켰다. 최종 인지질 분획물 수율은 47 g이었으며, 이 중 60％ 초과가 PS로 이루어졌다. 생성된 PS를 또한 유체 제제의 제조에 사용하였다 (하기 참조). 유체 및 분말 제제 둘 다 생성물 안정성에 대해 분석하였다.
효소 탈활성화 후, 유체 (MCT 중에 용해되어 있음) 및 분말 PS를 서늘하고 어두운 장소에서 밀봉 용기에 보관하였다. PS 농도는 ELS 검출기가 장착된 HPLC, 및 또한 31P-NMR을 사용하여 저장 전 및 후에 분석하였다. 저장 7개월 (유체 PS) 또는 7.5개월 (분말 PS) 후, 탈활성화 처리 (유기 용매 및 승온을 통하여)에 따른 분해가 실질적으로 전혀 발생하지 않았다 (또는 1％ 미만으로 발생함).
[실시예 5 - PS 분산액]
실온 내지 80℃ 이하의 온도에서 적합한 오일 기제, 바람직하게는 트리글리세리드 기제 및, 특히 중쇄 트리글리세리드 (예컨대, MCT 또는 어유 에틸 에스테르) 또는 식물성 오일에 안정화된 포스파티딜세린 (바람직하게는 실질적으로 포스포리파제 활성이 결여됨)을 분산시킴으로써 안정화된 PS 분산액을 제조하였고, 이로써 안정화된 오일-기제 PS 분산액이 생성되었다. 분산액은 격렬한 교반, 균질화, 압력-균질화, 및 다른 산업적인 블렌딩 방법으로 달성하였다.
이들 제형을 포스파티딜세린의 벌크 활성 성분으로서의 및 연질젤 캡슐제에서의 안정성에 대해 조사하였다.
- 연질젤 캡슐제의 제조
분산된 PS를 상기에 기술한 바와 같이 제조하고, 연질젤 캡슐제의 제조에 사용하며, 이는 연질젤 캡슐제 제조를 위한 통상적인 방법으로 제조하였다. 분산된 PS를 함유하는 캡슐제를 3가지 다른 조건: (1) 실온의 어두운 장소에서 밀봉 용기에, (2) 35℃ 및 60％ RH (가속 조건)에서 밀봉 용기에, 및 (3) 35℃ 및 60％ RH (가속 조건)에서 개방 용기에 저장하였다. 실온에 저장한 캡슐제 (조건 1)를 제조 과정의 마지막 및 4주의 저장 기간 후 이들의 PS 농도에 대해 분석하였다. 가속 조건에 저장한 캡슐제 (2 및 3)를 제조 과정의 마지막 및 1, 2, 3 및 4주의 저장 기간 후 이들의 PS 농도에 대해 분석하였다. PS 농도는 ELS 검출기 장착 HPLC 및(또는) HPTLC, 및 31P-NMR을 사용하여 분석하였다. 표 5는 상이한 캡슐제에서의 PS 농도를 제시한다.
| 샘플 및 저장 조건 | 저장 전 PS 농도* |
저장 후 PS 농도* | |||
| 1주 | 2주 | 3주 | 1개월 | ||
| 실온에서의 분산액 캡슐제 | 13.26 | 미측정 | 미측정 | 미측정 | 13.15 |
| 밀봉 용기 내 가속 조건에서의 분산액 캡슐제 | 13.26 | 13.04 | 미측정 | 미측정 | 13.28 |
| 실온에서의 비-안정화된 유체 캡슐제 | 18.67 | 미측정 | 미측정 | 미측정 | 17.56 |
| 폐쇄 용기 내 가속 조건에서의 비-안정화된 유체 캡슐제 | 18.67 | 17.87 | 미측정 | 17.04 | 15.07 |
| 개방 용기 내 가속 조건에서의 비-안정화된 유체 캡슐제 | 18.67 | 미측정 | 17.9 | 17.3 | 미측정 |
| (*) PS 농도는 ％단위임. | |||||
PS 농도 이외에, 캡슐제에서 수분 및 글리세롤의 함량을 또한 제조의 말기에 분석하였다. 상기에서 언급한 바와 같이, 캡슐제의 내용물에 의해 흡수된 수분 및 글리세롤은 PS의 분해를 촉진시킬 수 있다. 수분 함량은 표준 칼-피셔 (Karl-Fischer) 방법으로 분석하였다. 글리세롤 함량은 표준 AOCS (미국 유지 화학회 (American Oil Chemists Society)) 방법에 따른 적정으로 분석하였다. 표 6은 분산액으로부터 제조된 캡슐제 및 유체 PS로부터 제조된 캡슐제 중의 수분 및 글리세롤 함량을 제시한다.
| 샘플 (로부터의 캡슐제) | 수분 함량 (％) | 글리세롤 함량 (％) |
| 분산액 PS | 0.5 | 0.12 |
| 유체 PS | 1.7 | 1.43 |
실제로 분산액 제제가 캡슐제의 PS 내용물을 이루는 수분 및 글리세롤의 이동 및 흡수를 최소화하는데 또한 효율적임을 알 수 있었다. 이는 상기에 기술한 다른 수단 이외에, 캡슐제 중의 안정화된 PS를 산출한다.
[실시예 6 - 기타 고체상 PS]
안정화된 포스파티딜세린은 또한 승온에서만 유체이고 실온에서 고체인 PS 제제를 생성함으로써 제공된다. 이 방법으로 모든 분해 반응이 억제된다.
이는 하기 상이한 수단에 의해 달성된다:
(a) 반-분산액을 생성하는 칼슘 또는 나트륨염과 같은 PS의 상이한 염의 사용;
(b) 실온에서는 고체이고 캡슐화 공정이 가능하도록 하기에 승온에서는 충분히 유체인 식용 오일의 사용; 또는
(c) 상이한 경화 첨가제의 사용.
상기 실시예들에서 수득한 포스파티딜세린 제제 (2 g)를, 상기에 기술한 바와 같이 EDTA 용액으로 처리하고 n-헥산 (80 g)으로 세척한 포스파티딜세린과 혼합하였다. 대두 레시틴 (12.26 g) 및 PKO (26.45 g)를 용액에 첨가하였다. n-헥산을 45℃에서 증발시켰다. 최종 물질은 45℃에서 유체이고 실온에서 고체인 혼탁한 오일이었다.
[실시예 7 - 안정화된 첨가제/ 산화방지제/ 광감작제]
상기에서 언급한 바와 같이, 각종 메카니즘 또는 현상, 그 중에서도
1. PA 또는 PG가 산출되는 효소 가수분해 및 트랜스포스파티딜화;
2. 상응하게 리소-PS 또는 탈아실화 PS (GPS)가 산출되는 인지질 지방산의 부분 또는 완전 가수분해;
3. 디글리세리드 (DAG)가 산출되는 포스페이트기의 제거;
4. PE 또는 다른 더욱 복잡한 생성물이 산출되는 L-세린 카르복실레이트기의 탈카르복실화;
5. 인지질의 과산화수소화;
6. L-세린 머리기의 1급 아민기의 산화 (공기, 빛 등에 의함)
가 PS 분해의 원인이 되는 것으로 간주된다.
- 리소-PS, DAG 및 PE를 야기하는 분해
예를 들어, 본 발명의 방법에 의해 생성된 안정화된 PS를 함유하는 연질젤 캡슐제를 주변 조건 (즉, 실온 및 조절하지 않은 습도)에서 4개월 저장 후 상이한 분해 마커에 대해 분석하였다. 리소-PS (0.68 w/w％), DAG (0.35 w/w％) 및 PE (0.79 w/w％)의 수준은 무시할 수 있을 정도였으며, 이는 상기 부산물의 발생을 유도하는 어떠한 분해 경로도 일어나지 않음을 나타낸다.
- PA 및 PG 부산물을 야기하는 분해
상기 언급한 분석 방법은 또한 효소 분해에 대한 본 발명의 방법으로 생성된 PS 제제의 안정성을 입증하기 위해 사용되었다. 이 분해 경로는 PA 및 PG와 같은 부산물을 산출할 것으로 예상된다. 주변 조건에서 4개월 저장 후 PA 및 PG의 수준은 각각 2.58 및 0.2 w/w％로 저장 전의 수준 (PS 생성 이후)과 동일하였다. 이들 생성물에서 어떠한 증가도 검출되지 않았기 때문에, 본 발명의 PS는 그것의 분해를 유도할 수 있는 임의의 효소 활성이 사실상 결여된 것으로 결론지을 수 있었다.
- 과산화수소화
낮은 등급 생성물의 또 다른 원인은 PS와 같은 민감한 화합물의 분해를 유도하는 지질의 과산화수소화이다. 이 산화는 물질이 겪는 물질 생성 및 처리 방법에 매우 의존한다. 이 산화의 주요 표시는 물질의 샘플 중의 과산화물의 당량으로 적정하여 통상적으로 측정한 과산화물 값 (Peroxide Value: PV)으로 불리는 값이다.
본 발명의 PS 제제는 그의 초기 과산화물 값 및 진행되는 과산화물 값에 대해서 철저히 분석하였다. 이러한 분석은 효소 탈활성화에 대해 처리되고 임의로는 EDTA와 같은 효소 억제제로 처리된 제제, 및 고정화 효소를 사용하여 생성된 2개의 PS 제제에 대해 수행하였다. 하기에 제시한 결과 (표 7)는 PS 제조 방법의 결과 및 후속적으로 효소 탈활성화 처리의 결과로서, 산화 안정성 측면에서 본 발명의 PS의 높은 안정성을 증명한다.
| 샘플 | 저장 전 PV (meqO2/Kg) | 저장 시간 | 저장 후 PV (meqO2/Kg) |
| 유체 PS로부터의 캡슐제 | 0 | 42 | 0 |
| 유체 PS | 0 | 296일 | 0.58 |
| 분말 PS | 2.16 | 178일 | 2.18 |
본 발명에서 기술한 제조 방법 및 다양한 후속 처리를 따를 경우, 과산화물 값의 증가가 검출되지 않았음을 알 수 있었으며, 이는 과산화수소화에 대한 본 발명의 PS 제제의 안정성을 확증한다.
Claims (44)
1 내지 70％ (w/w)의 포스파티딜세린(PS)을 포함하고, 상기 포스파티딜세린의 1 내지 5％ 이하가 6개월 이상의 저장 기간 후에 분해되며, 상기 포스파티딜세린이 오일에 불용성인 2가 금속염 형태인 것인, 안정한 오일중 포스파티딜세린 분산액 형태의 조성물.
제1항에 있어서, 포스파티딜세린 (PS)의 1 내지 5％ 이하가 12개월 이상의 저장 기간 후에 분해되는 것인 조성물.
제1항에 있어서, 포스파티딜세린 (PS)의 1 내지 5％ 이하가 24개월 이상의 저장 기간 후에 분해되는 것인 조성물.
제1항에 있어서, 1 내지 99％ (w/w)의 포스파티딜콜린 (PC), 1 내지 99％ (w/w)의 포스파티딜에탄올아민 (PE), 1 내지 99％ (w/w)의 포스파티딜이노시톨 (PI), 1 내지 99％ (w/w)의 오메가-3 공급원, 1 내지 99％ (w/w)의 오메가-6 공급원, 및 1 내지 99％ (w/w)의 스테롤 또는 스테롤 에스테르 중 하나 이상을 더욱 포함하는 조성물.
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제1항에 있어서, 상기 염이 칼슘염 또는 마그네슘염인 것인 조성물.
삭제
제1항에 있어서, 5 내지 45％ (w/w)의 포스파티딜세린을 포함하는 것인 조성물.
제1항에 있어서, 상기 오일 기제가 식용성 트리글리세리드 기제, 식물성 오일 또는 어유인 조성물.
제1항에 있어서, 상기 오일 기제가 중쇄(medium-chain) 트리글리세리드 기제 (MCT)인 조성물.
제1항에 있어서, 실온에서는 고체이고 승온에서는 유체이며, 연질 젤 캡슐화에 적합한 것을 특징으로 하는 조성물.
제1항에 있어서, 식이 보충물, 영양약학 식품 또는 약물 첨가제로서 사용하기 위한 조성물.
제1항의 조성물, 및 임의로 하나 이상의 부가의 활성 성분을 추가로 포함하는 식료품.
제1항의 조성물을 포함하고, 임의로 부가의 생체-기능성 성분, 및 하나 이상의 제약상 허용되는 첨가제, 희석제, 담체 및 부형제로 구성된 군으로부터 선택된 하나 이상을 추가로 포함하는, 인지 수행 및 학습 능력의 증강 및 기억 상실 예방 중 하나 이상을 위한 제약 조성물.
제14항에 있어서, 상기 기억 상실이 연령-관련 기억 상실인 제약 조성물.
제1항의 조성물을 함유하는 캡슐제.
제16항에 있어서, 연질 젤라틴 캡슐인 캡슐제.
제1항에 있어서, 인지 수행 및 학습 능력의 증강에 사용하기 위한 조성물.
제1항에 있어서, 기억 상실의 예방에 사용하기 위한 조성물.
제19항에 있어서, 상기 기억 상실이 연령-관련 기억 상실인 조성물.
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| US20120171303A1 (en) * | 2009-09-11 | 2012-07-05 | Nestec S.A. | Compositions and methods for ehnancing cognitive and related functions in animals |
| US8399432B2 (en) * | 2009-10-27 | 2013-03-19 | Lipogen Ltd. | Compositions and methods of treatment for alleviating premenstrual syndrome symptoms |
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| ITMI20121784A1 (it) * | 2012-10-22 | 2014-04-23 | Velleja Res Srl | Composizioni galattogeniche a base di fosfatidilserina |
| US9101580B2 (en) * | 2012-12-18 | 2015-08-11 | Matthew Bennett | Compositions and methods for treating traumatic brain injury |
| DK2769725T3 (en) * | 2013-02-22 | 2016-08-22 | Lipogen Ltd | PREPARATIONS FOR USE AT relief of symptoms associated with premenstrual syndrome and premenstrual dysphoric disorder |
| CN106714569A (zh) * | 2014-07-25 | 2017-05-24 | 恩兹莫特克有限公司 | 含有磷脂酰丝氨酸粉末的营养组合物 |
| CN104327114A (zh) * | 2014-11-06 | 2015-02-04 | 江南大学 | 一种磷脂酰丝氨酸的制备方法 |
| US20190015435A1 (en) * | 2016-01-21 | 2019-01-17 | Enzymotec Ltd. | Methods using phosphatidylserine powder |
| CN110129299B (zh) * | 2016-06-02 | 2021-08-03 | 天津科技大学 | 磷脂酶d及其应用 |
| CN107125752B (zh) * | 2017-06-14 | 2020-06-30 | 安徽省芬格欣生物药业有限公司 | 一种增进记忆功能的磷脂酰丝氨酸口服液及制备方法 |
| CN107034248A (zh) * | 2017-06-19 | 2017-08-11 | 成都新柯力化工科技有限公司 | 一种连续高效酶转化合成食品用磷脂酰丝氨酸的方法 |
| CN107722051B (zh) * | 2017-08-24 | 2020-08-14 | 南通励成生物工程有限公司 | 制备磷脂酰丝氨酸盐的方法 |
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| CN112314949A (zh) * | 2020-11-04 | 2021-02-05 | 上海欧睿生物科技有限公司 | 一种磷脂酰丝氨酸液体配制方法 |
Citations (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US5700668A (en) * | 1995-12-08 | 1997-12-23 | Italfarmaco Sud S.P.A. | Process for the industrial preparation of phosphatidylserine |
| US6514973B1 (en) * | 1998-10-30 | 2003-02-04 | Merck Patent Geseilschaft Mit Beschrankter Haftung | Compositions for the treatment and prevention of neurological and pathopsychological diseases |
Family Cites Families (17)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US3357918A (en) | 1964-05-27 | 1967-12-12 | Central Soya Co | Fluidized lecithin composition and method |
| US5015483A (en) * | 1989-02-09 | 1991-05-14 | Nabisco Brands, Inc. | Liposome composition for the stabilization of oxidizable substances |
| IL129086A0 (en) | 1999-03-22 | 2000-02-17 | Enzymotec Ltd | Surfactant-lipase complex immobilized on insoluble matrix |
| DE19917249C2 (de) | 1999-02-26 | 2001-09-27 | Meyer Lucas Gmbh & Co | Verfahren zur Herstellung von Phosphatidylserin-Produkten |
| US6323060B1 (en) * | 1999-05-05 | 2001-11-27 | Dense-Pac Microsystems, Inc. | Stackable flex circuit IC package and method of making same |
| JP4306899B2 (ja) | 1999-10-26 | 2009-08-05 | 株式会社ヤクルト本社 | ホスファチジルセリン含有油溶組成物の製造法 |
| AU2001259295A1 (en) * | 2000-04-28 | 2001-11-12 | Zengen, Inc. | Method and composition for rapid delivery of bioactive compounds to the systemiccirculation via the nasal membrane |
| US7226916B1 (en) * | 2000-05-08 | 2007-06-05 | N.V. Nutricia | Preparation for the prevention and/or treatment of vascular disorders |
| JP2001354680A (ja) | 2000-06-08 | 2001-12-25 | Nof Corp | 高安定性酸性リン脂質および製造方法 |
| IT1319679B1 (it) * | 2000-12-05 | 2003-10-23 | Chemi Spa | Processo di purificazione di fosfatidilserina. |
| JP4009066B2 (ja) | 2001-02-15 | 2007-11-14 | 株式会社ヤクルト本社 | ホスファチジルセリンの分画法 |
| ES2227479T3 (es) * | 2001-03-26 | 2005-04-01 | Giventis Gmbh | Alimento destinado a aumentar la capacidad cognitiva. |
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| US7935365B2 (en) * | 2003-10-22 | 2011-05-03 | Enzymotec, Ltd. | Glycerophospholipids for the improvement of cognitive functions |
| US20050130937A1 (en) * | 2003-10-22 | 2005-06-16 | Enzymotec Ltd. | Lipids containing omega-3 and omega-6 fatty acids |
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|---|---|---|---|---|
| US5700668A (en) * | 1995-12-08 | 1997-12-23 | Italfarmaco Sud S.P.A. | Process for the industrial preparation of phosphatidylserine |
| US6514973B1 (en) * | 1998-10-30 | 2003-02-04 | Merck Patent Geseilschaft Mit Beschrankter Haftung | Compositions for the treatment and prevention of neurological and pathopsychological diseases |
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